SU576959A3 - Способ получени водонерастворимых протеиновых препаратов - Google Patents

Description

Л (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОНЕРАСТВОРИМЫХ ПРОТЕИНОВЫХ ПРЕПАРАТОВ 1ственно этиленоксид и проп окись стирола, преимущ  ть продукты взаимодейств леноксид. Можно примеь соединений, по крайней мере, с двум  актив1Ш1МИ 1И водорода, которые берут по Церевитинову фенолов, с вышеназванныначало не от спиртов или I получени  ДИ- и/или полими алкиленоксидами- дш и метакрилаты ди- и/или метакрилатов. Ди- и/и; по данному способу, полуполиолы , примен емые например взаимодейчают известными методами сгнием да- и/или полно :ов с хлорангидридом метаприсутствии примерно эквикриловой кислоты в носителыю хлорангидрида, мол рных количеств, о на|фимер триэтиламина, при третичных аминов в бензоле. Примен ют дитемпературах ниже 20 и/или полиолы по мере с 2 атомами нно с 2-12 атомами углеуглерода , преимуществ пропандиол- 1,2, этилеь гликоль. рода, например пропандаол- 1,3, , особенно бутандиолбутандиолы -1,4, гександиолы, дек ндиолы, глицерин, тримесорбит , сукроза и протилолпропан пентазритэит, взаимодейс ви  дукты их с указанными выше алкиленоксидами. При одны также полибисхлорметилоксациклобутан , юлистиролоксид или смесь ДИ- и/или полиолов. П зеимущественно примен ют диолов с 2-4 атодимет; крилаты диакрилаты или мами углерода и/или продукты взаимодействи  с 1 - 10 мол ми алкиленодного мол  этого оксида с 2-4 aTOMoMv углерода или триметилолПредпочтительны диметапропантриметакрилат крилаты этиленглико;  , диэтиленгликол , тритетраэ -иленгликол  этиленгликол , или высил1х полиалкиленгликолей с молекул рным весом до 500 или их смеси. реть  группа компонентов сопо имеризации соек ит из простых ненасыщенных , гидрофильных м iHOMepOB. В качестве таких ационноспособные простые примен ют полимери; ненасыщенные соедин :ни , которые не имеют функциональных групг активных по отношению к и образуют гидрофильные ангидридным группам полимеры Гидрофильные мо омеры имеют преимущесткарбокси , гьную аминокарбогшльную, венно одну сульфо- или сульфамицную группу, причем амин в аминокарбонильной сульфамидной группе может быть замещен алк: лами с 1-4 атомами углероюй группой с 1-4 атомами да или алкоксиметиль В качестве примера алкоксира шкале углерода в следует привести &кр1 ловую кислоту, метакрилоВуЮ кислоту, МОНОЭФ1 малеиновой кислоты с 1-8 С иртовой группе, N - винилатомами углерода в лактамы, например Г винилпирролидон, метакриламид , N замеще ные метакршгамиды, например N - метил- и N метоксиметилметакриламид илтаурин. Их добавл ют в и N - акрилоилдимет эт общей смеси мономеров, количестве 5-60 вес.% ебуемой гидрофильности и в зависимости от TJ набухаемости получае ых сополимеров и от длины ЮПИ (и) MHOrOOCHOBHOrOi , полиалкиленоксидпой метакрилата, Добавка этих мономеров вли ет не только на гидрофит но:ть, но и на структуру ономера, что имеет значительное преимущество ри получении полимера, так как при этом виде олимеризации выбор разбавител  сильно ограниен из-за условий нерастворимости смеси мономеов в парафиновых углеводородах и его инертности к нгидридным группам. Изменением состава моноерной смеси можно в широких пределах мен ть идрофильность, густоту сетки, набухаемость и соержание ангидрид1п Х групп в предлагаемых сопоимерах , пригодных дл  соответствующих цепей. ар ду с ДИ- и/или полиметакрилатами добавл ют акже обычные средства дл  сшивани , по крайней ере с 2 несопр же1шыми двойными св з ми, наример дивиниладипат, метиленбисакриламид, трикрилформа .г1ь или триаллилцианурат в количестве римерно 0,01-ЗОвес.% относительно мономерной смеси. Полимеризацию провод т в органическом растворителе в виде осадительной полимеризации, причем полимер начинает вьшадать вскоре после начала полимеризации. Используют растворители, инертные к ангидридным группам: алифатические, циклоалифатнческие и ароматические углеводороды , а также галоидзамещенные углеводороды, алкилароматику и эфиры карбоновых кислот, например гептан, октан, изооктан, беизиновые фракции с точками кипени  от 60 до 200° С, циклогексан, бензол , толуол, ксилол, хлорбензол, дихлорбензолы, этилацетат, бутилацетат. Растворитель должен иметь температуру кипени  выик 60° С и хорошо удал тьс  в вакууме из полимера, полученного осадительной полимеризацией. На 1 ч. мономерной смеси примен ют примерно 2-50, предпочтительно 5-20 вес.ч. растворител . На свойства сополимера, особенно на насыпной вес и удельную поверхность, оказывает значительное вли ние вид и количество растворител . Во многих случа х примен ют смесь Бышеназва1пп,1х растворителей, или начинают полимеризацию в растворителе дл  полимера и в процессе полимеризации непрерьшно ввод т осадитель дп  полимера. Осадитель можно добавл ть также в определенные моменты одной или несколькими порци ми. Кроме того, мономерную смесь слодход щим инициатором можно подавать в виде раствора или без растворител  в рассчитанное количество растворител , так, чтобы во врем  полимеризации сохран лась равномерна  незначительш  концентраци  мономеров. Благодар  применению метакриловых мономеров различной гидрофильности и вариацией условий полимеризации получают 1фодукты хорошей механической стабильности с широкой областью .набухаемости, плотности и удельной поверхности . Сополимеры преимущественно получают суспензионной полимеризацией. В известном виде бисерной полимеризации, в котором мономеры с добавкой opraiwHecKoro растворител  суспендируют в иоде, ангидрид очень быстро гидролизуетс , возникающа  дикарбонова  кислота переходит в водную фазу и лишь незначительна  часть входит s полимер, поэтому суспензионную полимеризацию

целесообразно проводить в органической среде. В качестве дисперсионной среды используют парафиновые углеводороды, например гексан, гептан, октан и высише гомологи, циклошшфатика, например циклогексан, а также смесь парафинов, например гексан, гептан, октан и высшие гомологи циклоалифатика . например циклогексан, а также смесь шрафииов , например бензинова  фракци  или парафиновое масло. Мономеры и инициатор раствор ют в растворителе, (ю смешивающемс  с парафинами и инертном к ангидридным группам, например ацетонитрил , диметилформамид, диметилсульфоксид или триаг,ШД гексаметилфосфорной кислоты и распредел ютс  в дисперсионной среде большей частью при добавке д гспергагоров. Соотношение, объемов дисперсионной среды и мономерной фазы составл ет 1:1 - 10:1, преимуществе1гно от 2:1 до 5:1. Дл  стабилизации суспензии примен ют, например моно- и диолеат глицерина, а также смесь этих соединений, моно- и триолеат или стеарат сорбита, мопоэфиры полиэтилеш-ликол  со стеариловым и лауриловым спиртом или нонилфенолом, моноэфиры полиэтиленгликол  с олеиновой, стеариновой и другими жирными кислотами с числом атомов углерода более 10, а также натриева  соль диоктилового эфира сульфо нтарной кислоты. Эти веш;ества ввод т в количествах, преимущественно 0,1-10% относительно мономерной смеси, и раствор ют в углеводородной фазе. Размер частиц может быть уменьшен не тол1зко увеличением скорости перемешивани , но и добавлением 0,01-2%, относительно мономера, поверхностно- активного вещества, например алкилсульфоната. Полимеризаци  ишщиируетс  радиальными инициаторами. Подход щими инициаторами  вл ютс , например азосоединени  или перекиси. Азоизобутиронитрил  вл етс  наиболее распространенным азосоединением дл  инициировани  полимеризации. Из перекисных соединений приме1шют главным образом диацилперекиси , например перекись бензоила, или перкарбонаты , например диизопропил- и дициклогексилперкарбонат , а также диалкшшерекиси, гидроперекиси и эффективные в органических растворител х редокс- системы. Инициаторы добавл ют в количествах 0,01-10 вес.%, преимущественно 0,1-3 вес.%, относительно мономерной смеси. Полимеризацию проводат при температурах примерно 20-200° С, преимущественно при 50-100° С, в зависимости от скорости распада инициаторов и чаще всего ниже температуры К1тени  растворител , а при бисерной полимеризации ниже температуры смешиваемости обеих фаз. Кроме того, полимеризацию выгодно проводить в инертной атмосфере в отсутствии кислорода . Сополимеры, полученные осадительной полимеризацией ,  вл ютс  бесцветными или светложелтыми порошкообразными веществами с насьшным объемом 1,5-30 мл/г, преимущественно 2-20 мл/1, и удгльной поверхностью 0,1-500 , прешюч-штеньно l-400MVr- Содержание карбонильных групп, опред1 лепных титрованием после

омылени  ашидридных групп составл ет 0,01 - 14 мэкв/г, преимущественно 0,01 - 11 мэкв/г. Суспензионный полимер представл ет собой белый или слегка окращенный бисер, который в некоторых случа х может быть неправильной формы и имеет диаметр 0,03 - 3 мм, преимущественно 0,05-0,5 мм, и насыпной объем примерно 1,4-8 мл/г, преимущественно 1,4-5мг/г. Содержание Kap6oHHjn Hbix групп в нем, (шределенных после гидролиза ангидридных групп, составл ет 0,01 - 14 мэкв/г, преимущественно 0,0211 мзкв/г. В сопо;шмерах мономерные едшшцы в основном распределен. статистически. Из-за . высокой плотности сетки в сополимерах, они растворимы не во всех растворител х, поэтому нельз  определить их молекул рньш вес. Сополимеры набухают в воде до 1,1-3-х кратного насьшного объема и могут быть использованы в качестве смолы-носител  дл  фиксировани  веществ, способных реагировать с ангидридными группами сополимера . Кроме того, они обладают отличной механической стабильностью, и следовательно практически не изнашиваемы. Вьшкописанные смолыносители образуют св зи со всеми веществамн,

которые имеют функциональные группы, способные реагировать с ангидридными группами полимера . У протеинов и пептидоВ это прежде всего концевые аминогруппы лизина и свободные аминогруппы на концах-пептидных цепей. Реакцию провод т путем добавлени  к перемещиваемому водному раствору протеина при 0-30°С необходимого количества полимера. Весовое соотношение протеина к смоле-носителю может мен тьс  в широких пределах. Хорошие выходы получают прн соотношении 1 вес.ч. протеина и 4-10 вес.ч. полимерного носител . Однако оптимальное соотношение зависит как от состава и структуры полимера, так и от вида протеина. Дл  многочисленных ферментов целесообразно добавл ть стабилизаторы. В качестве

таковых примен ют полиэтиленгликоли и неионный смачиватель дл  ослаблени  денатурации на поверхности, а также известные сульфогидрильные реагенты или ионы металлов дл  специальных ферментов . рН-метром поддерживают оптимальное дл 

соответствующей св зи значение рН 2-9, преимущественно 5-7. При использовании пенициллннацилазы целесообра:но значение рН 5,7-6,8. Причем дл  посто нного поддержани  рН добавл ют неорганические (раствор едкого натра) или органические (органические амины) основани . О ходе реакции суд т по количеству основани , необходимого дл  поддержани  посто нного рН. При комнатной температуре дл  завершени  реакции необходимо примерно 16ч, при 4° С- до 40ч. Затем смолу

отсасывают и дл  отделени  незначительной доли ионносв занного протеина промьшают буферным раствором или раствором поваренной соли концентрацией от 0,2 до 1 М. Присоединенное вешество определ ют элементарным анализом или дл  ферментов и ингибиторов ферментативной активферментативной активностыо , или подавлением ности. Выход на npHcoewi енное вещество завис т юстава полимера. Так, от породы вещества и например а «нокислоты и ннзкомолекул рные пептиды практически полюстью расходуютс  в П}жсоединении, но у проте 10В выход по присоеди вности лежит от 20 до юшюй ферментативной а свыше 90% первоначально активности, Пример 1а. 70 г тет метилеигликольдиметакрилата , 20 г метакрилов

кислоты, 20 г 0леиноазоиз обутиронитрнла вого анпщф да и 1 г раствор ют в 1 л бензолами сна|1ала полимернзуют при 60° С 4 ч. Затем добавл ют

г азоизобутиронитрила Ю-140°С) и полимерии 200 мл бензина (Т.кнп прн 80° С. Порошкообраззуют 2чпри 70С н 2ч

промывают петролейшли полимер основатель} -50°С) и. сушат в ваным эфиром (Т.кип. 3 шной объем 8,8 мл/г. кууме. Выход 96 г. На

12,4 мл/г. Удельна  Объем набухани  в вод поверхность 8,. С держание кислоты после пп 3,85 мэкв/г. омылени  ангидридных гр П р н м е р 16.6 г смот ii-носител , полученного /ют в растворе бШедипо примеру 1 а, суспенди

в 150 мл воды. Добавниц (и) пенициллинацилаэ. ющью рН-метра поддеркой раствора N NaOH с по ию перемешнвают 20ч живают рН6,3 и суспен при 25° С. Затем через стекл нный

отсасы ают о 300 мл сначала 0,05 М фильтр N 3 и промывают 17,5, содержащий 1 М фосфатным буфером с

затем тем же буфером раствор хлортстого натри без хлористого натри .

Слив и промьшные

астворы объедин ют и ощ едел ют их ферментати ную актнвность. В аликвотном количестве и мер ют ферментативную активность влажной смоль Ферментативна  акти

ность ( НИФАК-т«ст),и Исходный раствф

610 Слив и промьшные р

створы112 Смола-носитель поел

присоедииени  92% исходной

ктивиости561 Ферментативную акти

ность пешщнллинацнлазы измер ют колорнмет чески или титрованием М раствором 6 - ни ю - 3 (N- фенилацетил) ы (НИФАБ) в качестве аминобензойной кисло субстрата арн pH7,S н 1 С Мол рный козффитвующей 6 - нитро 3 ииент экстинкцни соотве -амннобензойной кнслот равен E4osHM 9090. 1 единица (U) соответств т превращению 1 ммол  субстрата в мин.

Пример 1 в. В рас

ор 40 мл уреазы в 32 мл воды, суспендируют 400j смолы-носител , полученной по примеру 1 а. П и посто нном перемешит{емпературе величину рН вании при комиатнш 6,0 добавлением 1 N поддерживают посто ми Ъакци  оканчиваетс  чераствора едкого натри  рез 16 ч, смолу отсасыва т и промывают буфером как в примере 1 б. Ферментативна 

активность, U Исходный раствор

168

Слив и промьшные растворы64,5

Смола-носите ль после прнсоедннеки  52% исходной активности87

Ферментатнвную активность уреазы определ ют итрованием 0,17 М раствором мочевины при 25° С pH6,lil единица (U) соответствует количеству ермента, который расходуетс  на 1 ммоль мочевиы , на 2 ммол  сол ной кислоты в минуту.

Пример г. В раствор 100 мг трипсина в 32 мл 0,02 М растворе хлорида калыщ  суспендируют 500 мг смолы-носител , полученной по примеру а. Прн посто нном перемещивании при 4° С

велнчину рН поддерживают посто нной 6,3 добавой N раствора едкого натри . Через 16 ч смолу тсасьшают и промывают буфером как в примере 16.

Ферментативна  активность, U Исходный раствор110

Слив и промьшные растворы15,6

Смола-носите ль после присоединени  58% исходной активности 64 Ферментативную активность измер ют колориетрически по Тушш (Тирру), бензол - аргинин -иитроанилидом (БАПНА) в качестве субстрата. единица (U) соответствует расщеплению ммоль субстрата при 25° С н рН 7,8.

П р и м е р 2 а. fttcraop 80 г тетраэтиленглиольдиметакрилата , 0 г метакриловой кислоты, 0 г маленнового ангидрида и г азобутироннтрила в 1 л бензола пошшеризуют при медленном перемещиванин в течение 4 ч при 60°С, 2 ч при 70°С и ч при 80° С. Полимер отфильтровьшают, трижды перемещивают в бензоле, промьшают в петролейном эфире н сушат в вакууме. Выход составл ет 70 г. Насыпной объем 7,0 мл/г, объем набухани  в воде 8,2 мл/г. Удельна  поверхность 5,3 . Содержание кислоты после омыленн  ангидридных групп 2,55 мэкв/г.

Пример2б. г полимера, полученного по примеру 2 а, взаимодействует аналогично примеру б с пеннщишинацилазой в 33 мл воды прн рН 6,3.

Ферментативна  активность, U Исходный раствор 8

Слив и промьшные растворы21

Смола-носите ль после присоединени  69% исходной активности 82

ПримерЗа. 50г тетраэтиленгликольдиметакрилата , 30 г метакриловой кислоты, 0 г малеинового ангидрида н г азоизобутиронитрила раствор ют в 300 мл ацетонитрила. Раствор суспендируют в л бензина (Т.кип.- 00-140°С), которьш содержит 5 г смеси моно- и диолеата глицерина, и полимеризуют 22 ч прн 60° С, Полимерный бисер отфнльтровьшают, трижды суспендируют в бензоле затем дважды в петролейном эфире (Т.кип.30-50°С) и сушат в вакууме. Выход 94 г белого бисера. Насыпной объем 4,4 мл/г. Объем набухани  в воде 5,5 мл/г. Удельна  поверхность 6,. Средний

диаметр частиц 200 мкм. Содержание кислоты после омылени  ангидридных j-pynn 4,3 мэкв./г.

Примерз 6. 1г полимера, полу1ешюго по примеру 3 а, взаимодействует аналогично примеру 1 б с пенициллинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3.

Ферментативна  активность (НИФАБ-тест) ,U Исходный раствор118

Слив и промьшные растворы43

Смола-носитель после присоединени  81% исходной активности 96 Пример4а. Раствор 2100 г тетраэтиленгликольдиметакрилата , 600 г метакрилозой кислоты, 300 г малеинового ангидрида и 30 г азоизобутиронитрила в 7,5 л ацетонитрила суспендируют в 21 п бензина (Т.кип.ЧОО-140°С), в котором растворено 150 г смеси моно- и диолеата глицерина, и полимеризуют 1ч. при 50° С и 20ч при 60° С. Бисерный полимер отсасьгаают, дважды перемешивают с петролейным эфиром (Т.кш1. 30-50° С) и сушат при 60° С. Выход 2,95 кг. Насьшной объем 4,7 мл/г. Объем набухани  в воде 5,4 мл/г. Средний размер частац примерно 0,3 мм. Содержание кислоты после омылени  ангидридных групп 4,0 мэкв/г.

Пример4б. 1г полимера, полученного по примеру 1 б, взаимодействует с пенициллинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3.

Ферментативна  активность (НИФАБ-тест), и

Исходный раствор107

Слив и промывные растворы27

Смола-носите ль после присоединени  63% исходной активности67 Пример4в. 20г полимера, полученного по примеру 4 а, ввод т при комнатной температуре в 600 мл раствора 1 г неспецифической эластазы из панкреазы свиньи при перемешивании. При этом рН поддерживают посто нной 5,8. Через 16ч смолу отсасьшают и обрабатывают по способу, описанному в примере 1 б.

Ферментативна  активность (казеин-тест), Е

Исходный раствор2180

Слив и промывные растворы993

Смола-носитель после присоединени  56% исходной активности1225 Ферментативную активность неспецифической зластазы определ ют титрованием казеином (концеитраци  11,9мг/мл) при рН8,0 и 25° С. 1 единица (Е) соответствует расходованию 1 ммоль.едкого кали  в .

П ример5а. Раствор 80 г тетраэтиленгликольдиметакрилаха , 10 г метакриловой кислоты, 10 г малеинового ангидрида и 1 г азоизобутиронитрила в 300 мл ацетонитрила полимеризуют по примеру 3 а. Выход 92 г белых,  йцеобразных частиц. Насьтной объем 2,5 мл/г. Объем набухани  в воде 3,2 мл/г. Удельна  поверхность 1,. Средний размер частиц 125 мкм. Содержа1ше кислоты после омылени  ангидридных гру1Ш 3,5 мэкв/г.

10

Пример5б. 1г полимера, полученного по примеру 5 а, взаимодействует с пенициллинацнлазой в 33 мл воды при рН 6,3 аналогично примеру 1 б.

Ферментативна  активность

(НИФАБ-т«ст), и

Исходный раствор118

Слив и промывнь.е растворы34

Смола-носитель после щжсоединени  52% исходной актнвностн61

Примерба. PiCTBOp 50 г этиле нгликольдиметакрилата , 40 г метакриловйй кислоты, Ш г малеииового ангидрида и 1 г азоизобутиронитрила в 300 мл адетонитрила суспендируют в 1 л бензина (Т.кип. 100-140°С), в котором растворено 5 г смеси моно и диолеата глицерина, и полимеризуют 20ч при 60° С. Бисерный полимер отфильтровывают , трижды суспендируют в бензоле и дважды в петролейном эфире (30-50° С) и суиит в вакууме при 50°С. Выход 87г. Насьтной объем 4,8 мл/г. Объем набухани  в воде 5,6 мл/г. Удельна  поверхность 13,2 . Содержание кислоты после омылени  ангидрндных групп 4,2 мэкв/г.

Примербб. 1г полимера, полученного по примеру 6 а, взаимодействует с пенициллинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3 аналогично примеру 1 б.

Ферментативна  активность (НИФАБ-тест), и

Исходный раствор118

Слив и промьшные растворы29

Смола-носите ль после присоединени  47% исходной активности55

П р и м е р 7 а. Раствор 50 г тримелолпропантриметакрилата , 30 г метакриловой кислоты, 20 г малеинового ангидрида и 1 г азоизобутиронигрила в 300 мл ацетонитрила полимеризуют аналогично примеру 6 а. Выход 86 г. Насьшной объем 2,0 мл/г. Объем набухани  в воде 2,2 мл/г. Средшш размер ИСТИЦ 30 мкм. Содержание кислоты после омылени  ангидридных групп 4,1 мэкв/г.

Пример7б. 1г полимера, полученного по

примеру 7 а, при колшатной температуре и посто нном перемешива1ши смешивают с раствором 100 мг лизина в 32 мл воды. Величину рН поддерживают посто нной 6,3. Через 16 ч смолу отсасьшают, суспендируют в 50 мл 1 М раствора хлористого натри , отсасьшают и промывают 100мл воды. Осадок сушат в вакууме при 100° С и определ ют содержание азота по способу Кьельдал . Сухой вес 860 кг. Содержание азота 1,5% (соответственно содержаниш смолы с 65 мг лизина), что соответствует 65% введенного количества лизина.

П р и м е р 8. Полимеризаш1ю провод т аналогично примеру 6 а (в опытах 1-7 измен ют количества малеинового ангидрида). Ргзультаты

опытов приведены в таблице.

Примечание: ТЭГМ тетразтиленгликольдиметакрилат, (г); метакрилова  кислота, (г); МА - малешювый ангидрид, (г) ; АИБН - азоизобутиронитрил , (г) ; эмульгатор-смесь моно- и диолеата глицерина, (г); ацетонитрил и бензин, (мл) ; Ун-насышой объем, (мл/г); Унб объем набухани  в воде, (мл/г); кислота-содержание кислоты после омылени  ангидридных групп.

70 г тетразтиленглиП р н м е р 9 а. акриловой кислоты, 10 г кольдиметакрилата, 20 i 1 г азоизобутиронитрила малеинового ангидрида воздуха и при медленв 1 л бензола в отсутствии реют 4 ч при 60° С, 2ч ном перемешивании при70°С и 2ч при 80°( . Высокцдисперсный полив бензоле и дважды в мер суспендируют трш{ды и сушат в вакууме. Выацетонитриле , отсасьшапт :М 6,8 мл/г. Объем набухаход 94 г, Насьшной обт ни  в воде 7,6 мл/г. Содержание кислоты после

1,64миллизкв/г. омылени  ангидридных групп

Пример9б. 1 полимера, полученного по примеру 9 а, взаимодействует с пенициллинациларН6 ,3 аналогично прйЗОЙ в 32мл воды

щи меру 1 6.

Ферментативна  а1 тивность

(НИФАБ-тест), U

107 26

Исходный раствор

Слив и

1 промьшные растворы

Смола-носите ль по :ле

присоеди38 .

нени  36% исходнс и активности

Пример 10 а. Раствор 50 г тетразтилешликопьди летакрилата , 40 г N-вшшлпирролидона, 10 г малеинового ангидрида и 1 г дициклогексилперкарбонатв в 200 мл адетонитрила суспендируют в 1 л бензина (Т.кип. 100-140°С), когорьш содержит 5 г смеси моно- и диолеата глицерина; и при перемешивании греют 18 ч при 50° С. Затем добавл ют 1 г инициатора и перемешивают 8 ч при 60 С. Полимерные шарики промывают бензолом и петролейным эфиром и сушат в вакуутле. Выход 54 г прозрачного бисера. Насьшной объем 1,6 мл/г. Объем набухани  в воде 2,4 мл/г. Средний диаметр частиц 0,3 мм. Содержание кислоты после омъ1лени  ангидридных групп 3,3 мзкв/г. Содержание азота 3,4% (27% N винилпирролидон).

пример 10 б. 1г полимера, полученного по примеру 10 а, взаимодействует с пеншдшлинацилазой в 33 мл воды при рН 6,3.

Ферментативна  активность

(НИФАБ-тест), U

Исходный растворЮ

13

Слив и промывные растворы26

Смола-носитель после присоединени  77% исходной активности82 Пример 11 а. Раствор 70 г тетраэтиленгликольдиметакрилата , 20г метакриламида, Юг малеинового ангидрида, 1 г азоизобутиронитрила и 200 мл ацетонитрила суспендируют в бензине аналогично примеру 5 а и полимеризуют. Выход 93 г. Насыпной объем 2,0 мл/г. Объем набухани  в воде 3,3 мл/г. Содержание кислоты после омылени  ангидридных групп 1,7 мзкв/г.

ПримерПб. 1г полимера, полученного по примеру 11 а, взаимодействует с пенициллинацилазой в 32 мл воды при рН 6,3 аналогично примеру 1 б.

Ферментативна  активность

(НИФАБ-тест),и

Исходный раствор107

Слив и промывные растворы42

14

Смола-носите ль после присоединени  31% исходной активности33

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  водонерастворимьгх протеиновых препаратов nyieM взаимодействи  полимерного носител  с раствором протеина в водносуспензионной среде, отличающийс  тем, что, с целью получени  протеиновых препаратов с высокой степенью сшивки, в качестве полимерного носител  иотользуют сополимер 0,1-30 вес.% ангидрида а,/3 - моноолефиновой дикарбоновой кнслоты с 35-90 вес.% ди- и/или полнметакрнлата дни/или полиола и с 5-60 вес.% гидрофильного мономера .

   Источники информации, прин тые во внимание при Э1 ;спёртизе:

   1, Biochemist ГУ, 3. 1964. 1905-1909.