SU576050A3 - Способ получени ингибиторов сахаразы - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к медицине и может быть применено в качестве терапевтических средств при ожирении, гиперлнпемии, диабете.

Известен способ получени  ингибиторов глюкозидаз (в том числе и ингибитора сахаразы) из фильтрата кулыуральной жидкости Actinoplan. сееп SE с последующим выделением целевого продукта 1.

Однако такой способ не обеспечивает высокой активности ингибировани  сахаразы.

С целью повышени  активности ингибировани  сахаразы по предлагаемому способу вьщеленш га целевой продукт подвергают гидролизу, при этом гидролиз осуществл ют водным раствором кислоты или )3-амилазой.

Превращение И1т1битора амилазы в ингибитор сахаразы осуществл ют путем отщеплени  нетормоз щих частиц молекулы (больщей частью моно, ди- или трисахариды) из молекул ингабитора. Это отщеш1е1ше осуществл ют ферментно - гидролитическим или химически - гидролитическим расщеплением , предпочтительно провод т гидролиз в кислой среде при высоких температурах. Дл  этого 1-40%-ные растворы, предпочтительно 2-20%-ные, в юокоспособных ингебиторов в 0,1-5N, предпоч

штельно 0,5-2N, минеральных 1сислотах, предпочтительно HCI и I HZ S04 гидролизуют не более 6 ч, предпочтительно не более 4ч, при 60-110° С, предпочтительно при 80-100° С. .

Изолирование тормоз щего сахаразу компонента из гидролизатов осуществл ют предпочтительно посредством адсорбции на активном угле после предварительной нейтрализации гидролизата и доследующей фракционирующей десорбции ингибитора с угл  водными спиртами или водным ацетоном. Есгш гидролизаты имеют очень темный пзет, их до адсорбции ишибитора;сахаразы на угле обесцвечивают аквшным углем при кислых значени х рН 1-3.

Способность торможени  лучших препаратов Ш1гибитора составл ет 15(ХЮ SiE/r,

Гидролиз осуц сгЕл ют также энзимашчески Э-а№1лазой.

Ингибиторы могут быть, использованы как терапевтические средства при ожирении, пшерлипемии (атериосклероз), диабете, предиабете, кариесе.

Дозировка: 100-10000 SiE/r один или несколько раз в де1сь через рот перед и/или во врем  и/или после еды.

Формы изготовлега1 : таблетки, драже, капсулы , раствор, суспензи , гранулы, жевательна  резинка, зубна  паста и как добавка к содержащим сахарозу пищевым и/или вкусовым продуктам.

Прнмер1.5г И1пт1битора a fflлaзы из актинопланаценового штамма SE 50 с 10 10 AiE/r и 220 раствор ют в 50 мл 0,05 М буфера из ацетата натри  срН 4,5, добавл ют 25 мг -амилазы из  чмен  и инкубируют при 35° С. По истечении 3 ч расп1епление заканчивают. Инкубацио1шую смесь, размещива , вкапывают непосредственно в сухой спирт, белый хлопьевидньш осадок отсасьшают на нутче, промывают зтанолом и эфиром, каждым два раза и сущат в вакууме.

Вьиод 2,5 г с 4,6 10 Ai Е/г и 700SiE/r.

П р и м е р 2. 100 г ингабитора амилазы из штамма SE 50 разбавл ют в 500 мп 2 N H2S04 и гидролизуют 4 ч при 100° С, После охлаждени  черно - коричневый раствор посредством 10 N КОН устанавливают рН 2 и дл  обесцвечивани  2 раза добавл ют 4 г активного угл , каждьш раз размешивают около 10 мин и отсасьшают наиутче. Уголь выкидывают и светло - желтый филырат нейтрализуют 10 N КОН (рНб,6)„ Дл  адсорбции на угле активных в отношении тopмoжe ш  часпщ. добавл ют 20 г акт тированного угл . После 10 мин разк гщивани  отсасывают на нутче, и фильтрат еще раз адсорбируют 10 г активирова шого угл . Остаток угл  объедин ют, фильтрат выбрасывают. Объедине1шые остатки угл  с целью удалени  остаточных солей и глюкозы промывают 1Ю нутче 2 л дистиллированной воды и 2 л 2,5%-ного этанола и затем 3 раза десорбируют 10%-ным и затем 15%-ным этанолом каждьш раз 750 мл. Дл  десорбщш размешивают каждьга раз 10 мкн, отсасывают на нутче и добавл ют свежее десорбщюнное средство. Соответствующие фильтраты из 10%-ной или 15%-ной десорбщш объедин ют, в ротационном вьшарителе сгущают приблизительно до 20 мл и лиофилизируют.

Выход прибгшзительно 2 г 10%-ной фракции и 1,2 г 15%-ной фракщш.

Специфическа  активность 10%-ной фракции 9000SiE/r, 0,2-Ш AiE/r, активность 15%-ной фракции 15000 Si Е/г, 0,5- 10 AiE/r.

П р и м е р 3. 200 г изолированного из актинопланаценового штамма SE 82 ингибитора амилазы (6 10 А1Е/г, 160 SiE/r) раствор ют в 10 мл 0,75 N HCI. Исходный раствор имеет активность 120 10 AiE/л при 3200 SiE/л. Этот раствор инкубируют в течение 30 мин при 100° С в вод ной бане, затем охлаждают и испытывают. Содержание ингибитора амилазы в полученном гидролизате составл ет 8- Ю AiE/л, а ингибитора сахаразы - 21000 SiE/л.

П р и м е р 4. 200 г изолированного из актинопланаценового штамма SB 18 ингибитора амилазы (4-10 А1Е/г, 310 SiE/r) раствор ют в 10 мл 0,75 N HCI. Исходный раствор имеет активность 80- 10 AiE/л и 6200 SiE/л. Этот раствор инкубируют 30 мин при 100° С в вод ной бане, затем охлаждают и испытывают. Содержание ингибитора амилазы в полученном гадролизате составл ет Ю- 10 AiE/л, а ингибитора сахаразы - 28000 SiE/n.

..

Claims (3)

1.Способ получени  ингибиторов сахаразы путем выраищвани  штамма i Actinoplanaceen SE 50, SE 82 или SB 18 на питательной среде с последующим выделением целевого продукта, отличающийс  тем, что, с целью повышени  активности ишибировани  сахаразы, вьщеленный целевой продукт подвергают гидролизу.

2.Способ по ц. 1,отличающийс  тем, что гидролиз осуществл ют водным раствором кислоты.

3.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что гадролиз осуществл ют (З-амилазой.

HcT04tmKH информации, прин тые во внимание при экспертизе;

1. За вка ФРГ Р2064092.0, 1970.