SU1059002A1 - Способ иммобилизации @ -лизиндекарбоксилазы - Google Patents
Способ иммобилизации @ -лизиндекарбоксилазы Download PDFInfo
- Publication number
- SU1059002A1 SU1059002A1 SU823488923A SU3488923A SU1059002A1 SU 1059002 A1 SU1059002 A1 SU 1059002A1 SU 823488923 A SU823488923 A SU 823488923A SU 3488923 A SU3488923 A SU 3488923A SU 1059002 A1 SU1059002 A1 SU 1059002A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- enzyme
- immobilizing
- immobilized
- lysine decarboxylase
- lysine
- Prior art date
Links
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
СПОСОБ ИММОБИЛИЗАЦИИ L-ЛИЭИНДЕКАРБОКСНЛАЗЫ путем св зывани фермента с водонерастворимым носителем/ отличающийс тем, что, с целью упрощени процесса, в качестве носител используют аминопропилсилохром , модифицированный монобромуксусной кислотой и N,N -дициклогексилкарбодиимидом , вз тыми в зквивалентных количествах. а Jo т90ea-j 70W сл со ю JsP Фиг.1
Description
Изобретение относитс к биотехнологии , а именно к способам иммобилизации фермента L-лизиндекарбок силазы, и предназначено дл исполь зовани в микробиологической промышленности и в производстве биохи мических реактивов. Известен способ иммобилизации L-лизиндекарбоксилазы путем нанесени на поверхиоать СО - селектив ных электродов раствора бычьего сывороточного альбумина, растворени в нем фермента и обработки смеси глутаральдегидом l . Однако такой.способ иммобилизации пригоден только дл получени иммобилизованной Ь-лизиндекарбоксил зы, локализованной на поверхность COj - селективного электрода. Полученна этаким способом иммобилизованна L-лизиндекарбоксилаза не может быть использована в установках других типов (кроме тех, где исполь зуетс СО - селективный электрод) это ограничивает область ее применени . Наиболее близким к предлагаемому . по технической сущности вл етс способ иммобилизации L-лизиндекарбо силазы путем св зывани фермента с водонерастворимым носителем, в качестве которого используют внутреннюю поверхчость стекл нной трубки, силанизированную винилтриэтоксисиланом (используетс смесь вйнилтризтоксисилана , метанола и воды). Иммобилизацию осуществл ют,нанос на силанизированную поверхность сте л нной трубки раствор фермента, содержащий бензоинизобутиловый эфир {растворенный в полипропиленгликоле и преполимер эмульсионного типа, состо щий из поливинилацетата, поливинилового спирта и гидроксиметил акриламида. Смесь освещают ультрафи летовым светом в атмосфере азота. Слой иммобилизованного фермента еще дважды покрывают смесью бензоинизоб тилового эфира и преполимера, каждый раз повтор освешение ультрафиолетовым светом в атмосфере азота 2 . Недостатком известного способа вл етс то, что он технологически сложен и трудоемок, требует большог ассортимента реактивов, в том числе такого труднодоступного как бензоинизобутилсвый- эфир. Целью изобретени вл етс упрощение способа получени иммобилизованной L-лизйндекарбоксилазы. Указанна цель достигаетс способом иммобилизации L-лизиндекарбок силазы путём св зывани фермента с водонерастворимым носителем, в каче ве носител используют аминопропилсилохром , модифицированный монобром уксусной кислотой и N,N-дициклогек силкарбодиимидом, вз тыми в эквивалентных количествах В. качестве водонерастворимого носител использован модифицированный бромацетаьаддными группами силохром и фермент св зывают с таким силохромом .при помощи реакции алкилировани нуклёофильных групп фермента. Предлагаемый способ вл етс достаточно простым по технологии и, кроме того, позвол ет получить иммобилизованную L-лизиндекарбоксилазу с довольно высокой удельной активностью (3000-3500.мк моль/мин-г). Полученный по предлагаемому способу уровень активности значительно превышает средний уровень активности иммобилизованных ферментов (по известному способу 300-500 мк моль/мин получени иммобилизованного фермента с максимально высокой активностью (фиг,1 и 2) целесообразно осуществл ть процесс при рН 6,6-7,3 и весовом соотношении белок/носитель 45-55 мг/г. При остальных значени х этих пара1иетров процесс имги{обилизации менее эффективен с точки зрени достигаемого уровн активности. На фиг.1 изображена зависимость активности иммобилизованной L-лизиндекарбоксилазы от рН иммобилизации; на фиг.2 - зависимость активности иммобиЛИЗрванной L-лизиндекарбоксилазы от исходного весового соотношени фермент/носитель при рН иммобилизации 7,2, Пример 1. Способ иммобилиза- ции L-лизиндекарбоксилазы. Получение силохрома, модигЪици-. рованного бромацетамидными группами, 10 г аминопропилсилохрома СХ-2,5 суспендируют в 4-0 мл диоксана, содержащего 1,12 г монобромуксусной кислоты, и прибавл ют раствор эквивалентного количества (1,16. г) N,N-дициклогексилкарбодиимида в 10 мл диоксана. Смесь перемешивают на качалке при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего носитель прозывают путем декантации водой дл удалени побочного продукта реакции - дициклогексилмочевины . . Св зывание L-лизиндекарбоксилазы с носителем, К 10 г модифицированного силохрома прибавл ют 100 мл р.аствора L-лизиндекарбоксилазы Escherichia в 0,05 .М фосфатном буфере рН 7,2 и перемешивают на качалке 10-15 ч. Иммобилизованный фермент фильтруют и промывают на фильтре 0,05 М фосфатным буфаром рН 5,7, содержащим 510 М пиридоксильфосфат , 10- М трилон Б и 0,01% меркаптоэтанол . Полученный препарат хран т в холодильнике (+4-б°С). Активность , иммобилизованного фермента 3400 мк моль/мин-г, выход в процессе иммобилизации 55%.
Использование предлагаемого способа получени иммобилизованной L-лизиндекарбоксилазы обеспечивает по сравнениюс известным способом следующие преимущества: предлагаемый способ технологически проще, поскольку не требует таких трудномасштабируемых операций как силанизаци /стекл нной поверхности, многократное нанэсение смеси реактивов тонким слоем на стекл нную поверхность , исключает необходимость работать в атмосфере азота. Дл реализации способа не требуетс большого ассортимента реактивов, в том числе такого труднодоступного и дорогостощего реактива как бензоиниэобутиловый эфир. Предлагаемый носитель и реактивы дл его активации дешевы и выпускаютс отечественной промышленностью . Остальные реактивы, а именно L-лизиндекарбоксилаза, пиридоксальфосфат , трилон Б и меркаптоэтанол , используют при любом спосо- бе иммобилизации, так как они необходимы дл Про влени и стабилизации ферментивной активности.
Иммобилизованна L-лизиндекарбоксилаза используетс дл определени концентрации L-лизина при микробиологическом его производстве, а также дл анализа L-лизина в пищевом и
0 кормовом сырье и продуктах, в научно-исследовательских работах и других област х. Высока активность иммобилизованного фермента позвол ет достичь полного декарбоксилировани субстрата в течение нескольких
5 минут. Это существенно ускор ет и упрощает определение концентрации L-лизина, в частности позвол ет исключить термостатирование, которое необходимо при использовании мало0 активных иммобилизованных препаратов , работающих в кинетическом режиме .. .
Л,%
fOO 80504529Ю 20 30 0 , 50
Ферпент носитель, иг/г Фиг.2
Claims (1)
- СПОСОБ ИММОБИЛИЗАЦИИ L-ЛИЗИНДЕКАРБОКСЦЛАЗЫ путем связывания фермента с водонерастворимым носителем; отличающий с.я тем,' что, с целью упрощения процесса, в качестве носителя используют аминопропилсилохром, модифицированный монобромуксусной кислотой и Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимидом, взятыми в эквивалентных количествах.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU823488923A SU1059002A1 (ru) | 1982-06-07 | 1982-06-07 | Способ иммобилизации @ -лизиндекарбоксилазы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU823488923A SU1059002A1 (ru) | 1982-06-07 | 1982-06-07 | Способ иммобилизации @ -лизиндекарбоксилазы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1059002A1 true SU1059002A1 (ru) | 1983-12-07 |
Family
ID=21028339
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU823488923A SU1059002A1 (ru) | 1982-06-07 | 1982-06-07 | Способ иммобилизации @ -лизиндекарбоксилазы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1059002A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107779446A (zh) * | 2016-08-25 | 2018-03-09 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 固定化赖氨酸脱羧酶、其制备、1,5‑戊二胺制备方法及产品 |
CN107779447A (zh) * | 2016-08-25 | 2018-03-09 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 固定化赖氨酸脱羧酶、其制备、1,5‑戊二胺制备方法及产品 |
-
1982
- 1982-06-07 SU SU823488923A patent/SU1059002A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
I. White W.C., GuUbaut G.G. Analyt. Chem. 1978, vol. 50, p.148. 2. Tanaka A. at at. JornaC of Ferment. Technology. 1980, vofc.58, p.391. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107779446A (zh) * | 2016-08-25 | 2018-03-09 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 固定化赖氨酸脱羧酶、其制备、1,5‑戊二胺制备方法及产品 |
CN107779447A (zh) * | 2016-08-25 | 2018-03-09 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 固定化赖氨酸脱羧酶、其制备、1,5‑戊二胺制备方法及产品 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5300564A (en) | Doped sol-gel glasses for obtaining chemical interactions | |
US4007089A (en) | Method for binding biologically active compounds | |
Broun | [20] Chemically aggregated enzymes | |
RU2124052C1 (ru) | Кристалл белка, сшитого многофункциональным сшивающим агентом (варианты), устройство, содержащее этот кристалл, и способ получения аспартама | |
JPH0416156B2 (ru) | ||
Orth et al. | Carrier‐Bound Biologically Active Substances and Their Applications | |
SU1059002A1 (ru) | Способ иммобилизации @ -лизиндекарбоксилазы | |
Araujo et al. | Polyvinyl alcohol-glutaraldehyde network as a support for protein immobilisation | |
EP0153763A2 (en) | Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator | |
US4650758A (en) | Stabilization of enzymes useful in the production of glucosone and other enzymatic processes | |
JPH0611328B2 (ja) | 生理活性物質を固定した多孔性中空繊維を使用した液の処理方法 | |
Cannon et al. | The development of an immobilized lactate oxidase system for lactic acid analysis | |
JPS6331538A (ja) | 固定化用担体 | |
Ishimori et al. | Mechanical control of the activity of glucose oxidase immobilized on porous polyvinylchloride membrane | |
EP0186347B1 (en) | Method for producing high-active biologically efficient compounds immobilized on a carrier | |
EP1132467A3 (en) | Novel creatine amidinohydrolase, production thereof and use thereof | |
EP0092829A2 (en) | Process for semi-synthesis of human insulin and alkaline protease for use therein | |
RU2054481C1 (ru) | Способ получения иммобилизованных ферментов | |
Tong et al. | Optimization of Cephalosporin C Acylase Immobilization | |
SU1696475A1 (ru) | Способ получени иммобилизованной липазы | |
KR100392779B1 (ko) | 고정화 아미노펩티다제를 이용한천연형 재조합단백질의 제조방법 | |
CN115873827A (zh) | 一种高活性固定化脂肪酶及其在塑料降解中的应用 | |
Burnett | Immobilized Enzymes | |
SU1211292A1 (ru) | Способ определени фибринолитической активности | |
SU1472505A1 (ru) | Способ иммобилизации ферментов |