SK11842000A3 - Prostriedok obsahujúci vírus, spôsob jeho koncentrácie a purifikácie - Google Patents
Prostriedok obsahujúci vírus, spôsob jeho koncentrácie a purifikácie Download PDFInfo
- Publication number
- SK11842000A3 SK11842000A3 SK1184-2000A SK11842000A SK11842000A3 SK 11842000 A3 SK11842000 A3 SK 11842000A3 SK 11842000 A SK11842000 A SK 11842000A SK 11842000 A3 SK11842000 A3 SK 11842000A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- virus
- composition
- concentration
- preparation
- viral
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 113
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 83
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 81
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims abstract description 43
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims abstract description 43
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims abstract description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 93
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 58
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 45
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 18
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 18
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 17
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 15
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 13
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 11
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 claims description 10
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M sodium;dihydrogen phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].OP(O)([O-])=O VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 8
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 6
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 4
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 4
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000003825 pressing Methods 0.000 claims description 3
- 238000007711 solidification Methods 0.000 claims description 3
- 230000008023 solidification Effects 0.000 claims description 3
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 17
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 16
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 16
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 14
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 14
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 12
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 12
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 8
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 229960002337 magnesium chloride Drugs 0.000 description 5
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 description 5
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 3
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701372 Iridovirus Species 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 150000001923 cyclic compounds Chemical group 0.000 description 2
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- ZWEVPYNPHSPIFU-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentahydroxy-n-[3-[3-(2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoylamino)propyl-[4-(3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl)pentanoyl]amino]propyl]hexanamide Chemical compound OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(=O)N(CCCNC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)CO)CCCNC(=O)C(O)C(O)C(O)C(O)CO)C)C1(C)C(O)C2 ZWEVPYNPHSPIFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 241001440741 CHER virus Species 0.000 description 1
- 235000013175 Crataegus laevigata Nutrition 0.000 description 1
- 102100036227 Cysteine and histidine-rich protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101000947448 Homo sapiens Cysteine and histidine-rich protein 1 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700025701 Retinoblastoma Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002942 anti-growth Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 108010079785 calpain inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012560 cell impurity Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 159000000006 cesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000002607 heparin antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940091250 magnesium supplement Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002599 prostaglandin synthase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10351—Methods of production or purification of viral material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Predmetný vynález sa týka prostriedkov obsahujúcich vírusy, špeciálne vírusových vektorov s významne zlepšenou stabilitou. Prostriedky predmetného vynálezu sú využiteľné na udržanie stability vírusov počas skladovania a vírus obsahujúce prostriedky prezentovaného vynálezu sú zvlášť využiteľné na terapeutické použitie ako je génová terapia. Sú tu tiež poskytované nové metódy pre koncentrované a purifikované vírusové preparáty.
Doterajší stav techniky
Vírusy sa stali veľmi dôležitými na terapeutické využitie ako sú vakcíny a génová terapia a sú potrebné na vývoj a prípravu stabilných vírus obsahujúcich prostriedkov, ktoré môžu byť lepšie skladované a transportované so zachovaním dostačujúcej bezpečnosti a účinnosti. Predovšetkým značné použitie vírusových vektorov existujúcich v génovej terapii je dôležité pre vývoj a prípravu prostriedkov, ktoré môžu stabilne zachovať živé rekombinantné vírusy, keď nesú terapeutické transgény.
Je ale veľmi potrebné nájsť zloženie, ktoré môže stabilizovať vírusové preparáty na predĺžený čas pri teplote vyššej ako - 80 °C. Vírus obsahujúce prostriedky normálne požadujú uchovávanie pri -80 °C a nemôžu byť skladované pri štandardnej teplote chladničiek (asi od 2 °C do 8 °C alebo vyššej) na dlhší čas. Toto obmedzenie reprezentuje vážnu hrozbu nielen na skladovanie, ale tiež na prípravu, distribúciu a široké klinické použitie.
Nutné je tiež vyvinúť vírus obsahujúce prostriedky, ktoré môžu udržať pH okolo 7 až okolo 8,5 na dlhší čas napriek tomu, že sú vystavované teplotám chladničky a napriek tomu, že sú podrobované drsným podmienkam ako sú:
a) prídavok polyhydroxylovaných uhľovodíkov k vírusovému preparátu vo finálnej koncentrácii polyhydroxylovaných uhľovodíkov asi 20 % alebo viac; a
b) podrobenie sa vírusovej preparácii pomocou filtra, zatiaľ čo je virus zachovaný.
Tiež je tu popísaná metóda na koncentrovanie vírusových preparátov obsahujúcich:
a) centrifugáciu prostriedku, ktorý má v prvej vrstve obsiahnuté polyhydroxylované uhľovodíky v koncentrácii 35 % až 80 % (obj./obj.), prvá vrstva je prekrytá druhou vrstvou obsahujúcou polyhydroxylované uhľovodíky v koncentrácii od 5 % do 30 % (obj./obj.), druhá vrstva je prekrytá treťou vrstvou obsahujúcou vírus; a
b) odber vírusu z prvej vrstvy.
Avšak teraz bolo zistené, že nová metóda zvýšenia vírusovej koncentrácie podľa vynálezu má ďalšie využitie na zlepšenie ďalších procesov (napr. redukciu alebo elimináciu problematických častí počas nasledujúcej purifikácie ponúkajúcej výrazne zvýšenú výkonnosť počas takých krokov procesu, ako je veľkostná vylučovacia chromatografia). V preferovanej podstate je metóda koncentrácie vírusových preparátov v súlade s predloženým vynálezom ďalej obsahujúcom nasledujúce kroky (napr. veľkostná vylučovacia chromatografia). V tomto ohľade je metóda prezentovaného vynálezu zvlášť užitočná, keď krok veľkostnej vylučovacej chromatografie je vykonávaný do nasledujúcej iónovýmennej chromatografie a vírusové preparáty sú koncentrované (podľa prezentovaného vynálezu) po iónovýmennej chromatografii, ale pred veľkostnou vylučovacou chromatografiou. Vírusové frakcie získané z iónovýmennej chromatografie obsahujú napríklad typicky vyššiu hladinu solí a možno iné nečistoty, ktoré tiež znižujú vírusovú stabilitu počas koncentračných procedúr. Vo zvlášť preferovanom uskutočnení poskytuje prezentovaný vynález metódu purifikácie vírusového preparátu obsahujúcu:
a) podrobenie vírusového preparátu aniónvýmennej chromatografii, kde je vírus eluovaný ako produkt vírusového preparátu z aniónvýmenného chromatografického média;
b) prídavok polyhydroxylovaných uhľovodíkov k produktu vírusového preparátu z kroku a) tak, že koncentrácia polyhydroxylovaného uhľovodíka v preparáte dosahuje finálnu koncentráciu asi 25 % alebo viac; a
c) zvýšenie koncentrácie vírusu v produkte vírusového preparátu z kroku b) tlakom na preparát tak, že je rozpúšťadlo odstránené z vírusového preparátu cez filter, zatiaľ čo je vírus zadržaný; a
d) podrobenie koncentrovaného produktu vírusového preparátu z kroku c) jedného alebo viac prídavných krokov procesu.
Prezentovaný vynález tiež poskytuje vírusové preparáty koncentrované a purifikované inými metódami.
Podstata vynálezu
Ako bolo spomínané predtým, predkladaná prihláška opisuje nové prostriedky obsahujúce vírusy, rovnako tak nové metódy koncentrácie a purifikácie prostriedkov obsahujúcich vírus.
S ohľadom na prostriedky je opísané pufrované zoskupenie, ktoré môže uchovať vírusové preparáty so zvýšenou stabilitou. Obzvlášť vhodné zoskupenie môže vírusový preparát dobre udržať pri vyššej teplote ako -80 °C. Viac dôležité sú hlavne prostriedky prezentovaného vynálezu stabilné pri typických teplotách chladničky od 2 °C do 8 °C alebo vyšších na dlhý čas, na niekoľko mesiacov a viac. To je najdôležitejšia prednosť, pretože ako bolo spomínané vyššie, s ohľadom na vyhovenie klinickým potrebám, je nepraktické uchovávať vírusové preparáty zmrazené pri -80 °C počas skladovania a transportu.
Dôležitou vlastnosťou prostriedkov prezentovaného vynálezu je prídavok polyhydroxylovaných uhľovodíkov. Ako je tu použité, polyhydroxylovanými uhľovodíkmi rozumieme vetvené, lineárne alebo cyklické zlúčeniny substituované dvoma alebo viacerými ( lepšie 2 až 6, ešte lepšie 2 až 4) hydroxyskupinami. Polyhydroxylované uhľovodíky majú na použitie v prezentovanom vynáleze najmä polyhydroxylmi substituované alkylové zlúčeniny (vetvené alebo nevetvené), majúce najmä 2 až 7 atómov uhlíka, a môžu zahrňovať napr. glycerol, sorbitol a polypropanol. Glycerol je zvlášť preferovaný. Ako ukazujú údaje uvedené nižšie, vynálezcovia zistili, že glycerol umožňuje prekvapujúco vyšší stupeň stability pre dlhšie časové periódy, taktiež pri štandardných podmienkach v chladničke.
Efektívnym množstvom polyhydroxylovaných uhľovodíkov pre prostriedky prezentovaného vynálezu je množstvo dostatočné na stabilizáciu vírusu v prostriedku prezentovaného vynálezu bez nepriaznivého vplyvu na efektivitu vírusu na iné použitie, najmä v prípadoch, kde vírus obsahuje transgény na použitie v génovej terapii. Polyhydroxylované uhľovodíky sú obsiahnuté vo finálnej koncentrácii najmä asi 20 až 200 mg/ml, výhodne to môže byť 80 až 120 mg/ml. Na dosiahnutie vytúženého množstva polyhydroxylovaného uhľovodíka v prostriedku prezentovaného vynálezu môže byť použitý viac ako jeden polyhydroxylovaný uhľovodík.
Polyhydroxylované uhľovodíky v prostriedkoch prezentovaného vynálezu môžu voliteľne obsahovať aldehydovú skupinu. Zvlášť môže byť polyhydroxylovaným uhľovodíkom disacharid, ako je sacharóza. Ale ak aj polyhydroxylované uhľovodíky vyberané pre prostriedok neobsahujú aldehydovú skupinu, prostriedky môžu prídavné obsahovať disacharid, ako je sacharóza, ako stabilizátor a tonické prídavné činidlo. Ak prostriedok prezentovaného vynálezu už obsahuje vhodný polyhydroxylovaný uhľovodík (ako je glycerol) a disacharid má v podstate funkciu prídavného stabilizátora alebo tonického prídavného činidla, disacharid je obsiahnutý hlavne v množstve okolo 5 až 25 mg/ml, lepšie 20 mg/ml a najlepšie je, keď je disacharidom sacharóza. Farmaceutický akceptovateľný stabilizátor, dvojmocná soľ kovu, ako sú horečnaté soli, zinočnaté soli, vápenaté soli sú použité v preferovaných príkladoch prostriedku prezentovaného vynálezu. Ako soľ sa preferuje chloridová soľ alebo horečnatá soľ, horečnatá soľ je zvlášť preferovaná. Soľ (napr. horečnatá) je prítomná v množstve od asi 0,1 do 1 mg/ml, lepšie v množstve asi 0.4 mg/ml.
Farmaceutický akceptovateľné stabilizátory, jednomocná soľ kovu, ako je draselná, sodná, lítna a cézna soľ, môžu byť obsiahnuté v predmetnom vynáleze ako možné stabilizátory. Soľou je najmä chlorid sodný, ktorý je prítomný v množstve od 0,6 do 10 mg/ml, lepšie v množstve okolo 5,8 mg/ml.
Ďalej môže chlorid sodný pre stabilizáciu prostriedku potlačiť pomer a mieru tvorby vedľajších produktov fermentácie, a môže byť redukovaný antigénny potenciál spôsobený proteínovými zhlukmi. Prídavok chloridu sodného nemá vplyv na pH prostriedku.
Prostriedok prezentovaného vynálezu je schopný udržať pH v oblasti asi 7 až
8,5 počas dlhého trvania a tiež vtedy, keď je vystavený drsným podmienkam takým ako je skladovanie v chladničke alebo mrazenie/rozmrazenie. Avšak prostriedky môžu zostať stabilné a hlavne požadované pH rozmedzie tiež, keď podliehajú relatívne pomalému prechodu mrznutia/topenia, ktoré sa môže objaviť v spojení s produkciou, distribúciou a manipuláciou vo väčšom meradle. Ako bolo skôr spomínané, udržanie pH je dôležité na preparáciu vírusu, pretože pri pH nižšom ako 7 a nad 8,5 sa živé vírusové častice stávajú nestabilnými a degradujú. Časticová skladba vírusov robí vírusy ťažko stabilizovateľnými a konzervovateľnými.
Na dosiahnutie udržania pH v nevhodných podmienkach obsahuje predkladaný vynález pufrovací systém, ktorý môže udržať optimálne pH v oblasti asi od 7 do asi 8,5 i cez udržiavanie medzi -80 °C a 27 °C a napriek podrobeniu sa podmienkam mrznutia/topenia. Zatiaľ čo môže pH rôzne závisieť od teploty, pH v rozmedziach prezentovaného vynálezu je viac špecificky popísané nižšie s odkazmi na špecifické teplotné oblasti. Ako príklad v teplotách chladničky (napr. od 2 °C do 8 °C) je preferované rozmedzie pH asi od 7,7 do 8,3, lepšie asi od 7,9 do 8,2. Za laboratórnej teploty (napr. od 20 °C do 27 °C, lepšie 22 °C až 25 °C) je preferované pH rozmedzie asi 7,3 až 8,2, lepšie asi 7,4 až 7,9.
Preferovaný pufrovací systém prezentovaného vynálezu zahrňuje dihydrát monobázického fosforečnanu sodného s koncentráciou asi 0,5 až 10 mg/ml a trometamín s koncentráciou asi 0,5 až 10 mg/ml. (Trometamín je tiež známy ako TRIS alebo Trisma, distribuovaný Sigma Chemical Co.). Avšak môžu byť tiež použité iné pufrovacie systémy. Napríklad dihydrát dibázického fosforečnanu sodného môže byť použitý v pare s kyslou formou tris pufru. V preferovanej podstate obsahuje pufrovací systém dihydrát monobázického fosforečnanu sodného s koncentráciou asi 1,7 mg/ml a trometamínu s koncentráciou asi 1,7 mg/ml a má schopnosť udržať prostriedok v optimálnom pH rozmedzí asi od 7,3 do asi 7,9 pri 25 °C.
Prostriedok prezentovaného vynálezu má ďalšiu výhodu mať schopnosť stabilizovať vysoké koncentrácie vírusov vo vyššie spomenutých nevhodných podmienkach (ako sú teploty chladničky a proces mrznutia/topenia). Prostriedok prezentovaného vynálezu môže stabilizovať hlavne vírusy v koncentráciách pohybujúcich sa do 1 x 1013 častíc/ml. Preferovaným rozmedzím vírusových koncentrácií na použitie v prezentovanom vynáleze je v množstve od 1 x 109 do 1 x 1013 častíc/ml, lepšie do 1 x 1012 častíc/ml, napr. 1 x 109 (alebo 1 x 1O10) až 1 x 1012.
Termín „rozpúšťadlo ako je tu použité môže byť rozpúšťadlo (napr. voda, preferuje sa sterilná voda) alebo zmes rozpúšťadla a iných ingrediencií ako prídavné rozpúšťadlá, prídavné stabilizátory, prídavné pufry, a iné látky, ktoré nemajú vplyv na bezpečnosť, účinok a stabilitu prostriedku. S ohľadom na rozpúšťadlá, stabilizátory, pufry a podobne môže byť vytvorený odkaz napr. Remington's Pharmaceutical Science, 15th Ed., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.
Surfaktant, najlepšie neiónový detergent ako ester polyoxyetylénovej mastnej kyseliny (napr. polyoxyetylénsorbitany ako sú Polysorbát 20, Polysorbát 40, Polysorbát 60 alebo Polysorbát 80 z ICI Americas, Inc., Wilmington Delaware alebo Tween 20, Tween 40, Tween 60 a Tween 80 zo Sigma, St. Louis, Mo.) môžu byť voliteľne začlenené do prostriedku prezentovaného vynálezu. Neiónovým detergentom je najmä ester polyetylénovej mastnej kyseliny a ester polyoxyetylénovej mastnej kyseliny je najmä Polysorbát 80, ktorý môže pôsobiť ako stabilizátor v prostriedku prezentovaného vynálezu. Koncentrácia neiónového detergentu je hlavne v rozmedzí 0,03 až 0,3 mg/ml; lepšie 0,15 mg/ml.
Predmetný vynález v svojom zložení môže tiež obsahovať jeden alebo viacej „prenos zlepšujúcich činidiel. „Prenos zlepšujúce činidlá sú všetky činidlá, ktoré zlepšujú prenos terapeutického génu ako je tumorový supresorový gén pre rakovinové tkaniny alebo orgány. Príklady takýchto prenos zlepšujúcich činidiel zahrňujú, ale nie sú nimi limitované, detergenty, alkoholy, glykoly, surfaktanty, žlčové soli, heparinové antagonisty, cyklooxygenázové inhibitory, hypertonické roztoky solí a acetáty.
Detergenty (ako termín tu použitý) môžu zahrňovať aniónové, katiónové, zwitteriônové a neiónové detergenty. Príkladné detergenty zahrňujú, ale nie sú nimi limitované, taurochoát, deoxycholát. taurodeoxycholát, cetylpyridium, benzalkonium chlorid, ZWITTERGENT 3-4 detergent, CHAPS (3-(3-cholamidopropyl)dimetylamoniol)-1-propansulfonát hydrát, Aldrich), Big CHÁP, Deoxy Big CHRP, TRITON-X-100 detergent, C12E8, oktyl-B-D-glukopyranozid, PLURONIC-F68 detergent, TWEEN 20 detergent, a TWEEN 80 detergent (CALBIOCHEM Biochemicals).
Použitie prenos zlepšujúcich činidiel je popísané detailne v U.S. patentovej prihláške U.S.S.N. 08/889 335, 8. júl 1997 a v medzinárodnej publikovanej prihláške č. WO 97/25072, 17. júl 1997 a v U.S. patentovej prihláške U.S.S.N. 09/112 074, 8. júl 1998, medzinárodná prihláška PCT/US 98/14241. Ďalej použitie kalpainových inhibítorov v konjugácii s vírusovými vektormi na zlepšenie transdukčnej úspešnosti je popísané v U.S. patentových prihláškach U.S.S.N. 09/172 685 a 60/104321, 15.október 1998.
V prostriedkoch prezentovaného vynálezu môže byť zahrnuté široké spektrum vírusov, zahrňujúcich, ale nimi nelimitujúcich, adenovírusy, pox vírusy, iridovírusy, herpes vírusy, papovavírusy, paramixovírusy, ortomyxovírusy, retrovírusy, adenoasociované vírusy, vakcinačné vírusy, rotavírusy atď. (uvedené napr. v Anderson, Science (1992) 256: 808-813); preferované sú najmä adenovírusy. Vírusmi sú hlavne rekombinantné vírusy, ale môžu zahŕňať klinické izoláty, zoslabené vakcinačné kmene a podobne. Napríklad tento učebnicový rekombinantný adenovírus, ktorý môže byť použitý v prostriedkoch vynálezu je A/C/N/53, ktorý bol opísaný v PCT patentovej prihláške č. WO 95/11984.
Prostriedok prezentovaného vynálezu je dobre vybavený na stabilizáciu rekombinantného vírusu takého ako žijúci rekombinantný adenovírus (alebo „vírusový vektor), na terapeutické použitie v génovej terapii. Napríklad vírus použitý v prezentovanom vynáleze môže zahŕňať tumorové supresorové gény také ako divoký typ p53 gén alebo Rb gén (napr. p110RB alebo p56RB) a s transgénmi takými ako divoký typ p53 vložený do vírusového vektoru, prostriedok prezentovaného vynálezu môže byť použitý ako farmaceutický prostriedok na liečenie rakoviny.
V tomto ohľade prostriedky prezentovaného vynálezu majú pozoruhodnú schopnosť udržať životaschopnosť živého vírusu, najmä vírusového vektoru, do ktorého bude vložená nukleotidová sekvencia kódujúca transgény také ako p53. Tieto vlastnosti dovoľujú vírusu udržať ich schopnosť injektovať sa priamo do buniek a tak sú terapeutické proteíny kódované inzertnými transgénmi adekvátne produkované.
So špecifickým ohľadom na p53 a jeho použitím môže byť poznamenané, že mutácia p53 génu je najviac prípustnou genetickou zmenou v ľudských rakovinách (Bartek (1991) Oncogene, 6: 16991703, Hollstein (1991) Science, 253: 49-53). Vnesenie divokého typu p53 v nádorových bunkách cicavcov postrádajúcich endogénny divoký typ proteínu p53 oslabuje neoplastický fenotyp týchto buniek) uvedené napr. v U.S. patente 5 532 220).
Príklady uskutočnenia vynálezu
V príkladoch je vírusom živý rekombinantný adenovirus obsahujúci divoký typ p53 gén. Konkrétny vírusový vektorový konštrukt použitý v týchto príkladoch je tu uvedený ako „A/C/N/53. „A/C/N/53 (tiež ako „ACN53) je zvlášť preferovaný vírusový vektorový konštrukt popísaný v prihláške USSN 08/328 673, 25. október 1994 a vo WO 95/11984 (4. máj 1995) expresne zahrnuté tu v odkazoch.
Reprezentatívne zloženie pre preferované predmety prezentovaného vynálezu, ktoré obsahujú Polysorbát 80, sú uvedené nižšie:
| Reprezentatívne zloženie | ||
| Aktívna látka | A/C/N/53 | 1x10a až 1x10lJ častíc/ml |
| Pufor | monobázický fosforečnan sodný | 0,5 až 10 mg/ml |
| Trometamín | 0,5 až 10 mg/ml | |
| Stabilizátor/tónické činidlo | Sacharóza | 5 až 25 mg/ml |
| Stabilizátory | Glycerol | 20 až 200 mg/ml |
| Chlorid horečnatý | 0,1 až 1 mg/ml | |
| Polysorbát 80 | 0,03 až 0,3 mg/ml | |
| Rozpúšťadlo | Voda po injektovaní q.s. ad | 1 ml |
(Prostriedky sú bežne skladované v 1 ml fľaštičkách, „q.s. ad v zložení vyššie spomínanom znamená primeraný prídavok rozpúšťadla na dosiahnutie 1 ml totálneho objemu).
Štyri zvlášť preferované príklady sú uvedené nižšie. (Polysorbát 80 je v prezentovaných príkladoch 1 a 2, ale chýba v príkladoch 3 a 4).
| Príklad 1 | Príklad 2 | |
| A/C/N/53 | 7,5 x 10^častíc/ml | 7,5 x 1011 častíc/ml |
| Dihydrát monobázického fosforečnanu sodného | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Trometamín | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Hexahydrát chloridu horečnatého | 0,4 mg/ml | 0,4 mg/ml |
| Sacharóza | 20 mg/ml | 20 mg/ml |
| Polysorbát 80 | 0,15 mg/ml | 0,15 mg/ml |
| Glycerol | 100 mg/ml | 100 mg/ml |
| Voda po injektovaní q.s.ad | 1 ml | 1 ml |
| pH | 7,4 až 7,8 | 7,4 až 7,8 |
| Príklad 1 | Príklad 2 | |
| A/C/N/53 | 7,5 x 10nčastíc/ml | 7,5 x 1011 častíc/ml |
| Dihydrát monobázického fosforečnanu sodného | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Trometamín | 1,7 mg/ml | 1,7 mg/ml |
| Hexahydrát chloridu horečnatého | 0,4 mg/ml | 0,4 mg/ml |
| Sacharóza | 20 mg/ml | 20 mg/ml |
| Glycerol | 100 mg/ml | 100 mg/ml |
| Voda po injektovaní q.s.ad | 1 ml | 1 ml |
| pH | 7,4 až 7,9 | 7,3 až 7,8 |
Nasledujúce ingrediencie: monobázický dihydrát fosforečnanu sodného, trometamín, hexahydrát chloridu horečnatého, sacharóza a glycerol môžu byť získané od napr. EM Industries, INC., 7 Skyline Drive, Hawthorne, New York 10532. Polysorbát 80 je k dostaniu od napr. ICI Americas, Inc., Wilmington Delaware, 19897.
Prostriedky prezentovaného vynálezu môžu byť pripravené počas purifikácie vírusov na gélovej filtračnej chromatografickej kolóne kombináciou ingrediencií (okrem Polysorbátu-80) v žiadaných koncentráciách v gélovej filtračnej kolóne. (S ohľadom na gélové filtračné metódy, odkazy môžu byť vytvorené napr. v sekcii 5 nižšie). Ak je požadované riedenie koncentrácie vírusu alebo ínkorporovanie Polysorbátu-80, potom môžu byť rozpúšťadlá pripravené štandardnými technikami. Ilustratívny príklad je uvedený nižšie:
Pridaj a rozpusť monobázický dihydrát fosforečnanu sodného, trometaminu, sacharózy, hexahydrátu chloridu horečnatého a glycerolu v približne 75 % vstupného objemu vody na injektovanie pri laboratórnej teplote v nádobe z nehrdzavejúcej ocele vybavenej miešadlom. Vykonaj výsledné riedenie na finálny objem vody na injektovanie. Skontroluj pH. Spočítaj požadovaný objem A/C/N/53 (adenovírus s divokým typom p53 ako transgén) drogovej substancie v suspenzii a požadovaný objem rozpúšťadla na tvorbu A/C/N/53 injekcie. Ak finálna A/C/N/53 injekcia bude obsahovať Polysorbát 80, priprav zásobný roztok tak, aby obsahoval 10 % prebytku Polysorbátu 80 v rozpúšťadle. Pridaj spočítané množstvo A/C/N/53 drogovej substancie v suspenzii a zrieď v nehrdzavejúcej oceľovej nádobe a premiešaj. Pridaj roztok Polysorbátu 80, skôr ako pridáš celé rozpúšťadlo, do 10 % totálneho A/C/N/53 injekčného vsádkového objemu, keď to je požadované. Aseptický filtruj suspenziu cez sterilný filter (0,22 pm alebo ekvivalentne). Testuj neporušenosť filtra po filtrácii. Spoj a naplň sterilnú suspenziu do ampuliek majúcich vhodný objem. Uzatvor a utesni ampulky.
Údaje stability pre príklady 1, 2, 3 a 4 sú uvedené v tabuľkách 1, 2, 3 a 4 nižšie.
V tabuľkách nižšie je antirastovou skúškou bioskúška používaná na meranie schopnosti produktu zastavovať rakovinové bunky a je založená na procedúrach používaných Wills, et al., 1994, Human Gene Therapy, 5:1079-1088. Zostavené čísla naznačujú aktivity, kde kontrola nemá aktivitu.
Plagova skúška meria vírusové častice v kultúre počtom vírusových plagov ako funkcia riedenia a na základe všeobecných procedúr popísaných v Graham, F.L., a Prevec, L., Methods in Molecular Biology, vol. 7: Gene Transfer and Expresion Protocols, E.J. Murray, ed. (Humana Press Inc., Clifton NJ) 109-128 (1991); uvedené taktiež v Graham, F.L., Smiley, J., Russal, W.C., a Nairn, R., J. Gen. Virol. vol. 36, pp 59-74 (1977).
FACS skúška ukazuje schopnosť vírusu injektovať bunky a meranie je všeobecne založené na metódach popísaných napr. v medzinárodnej patentovej prihláške PCT/US97/11865 (WO 98/01 582, publikovanej 15. februára 1998). V ďalšom stĺpci vpravo reprezentuje počet prezentovaný pod hlavičkou Koncentrácie koncentráciu celkového počtu vírusových častíc. Nakoniec čísla pod hlavičkou Častice/FACS pomer reprezentuje pomer celkového počtu vírusových častíc k počtu infekčných vírusových častíc, čo určuje relatívny potenciál vírusového preparátu.
Údaje pod hlavičkou UV určujú agregáciu vírusových častíc, ak je určené UV absorbčným pomerom pri vlnových dĺžkach A320/A260 a ako je určené rozptylom svetla. Absorbcia pri 320 nm meria v podstate množstvo svetelného rozptylu, kde absorbcia pri 260 nm vlnovej dĺžky súvisí s množstvom DNA.
Teplota uvedená v druhom stĺpci tabuliek pod podmienkami určuje teplotu skladovania. Fyziologické skúšky sú vykonané pri 37 °C a pH v poslednom stĺpci je merané za laboratórnej teploty, asi 25 °C.
Tabuľka 1: Údaje stability pre Príklad 1
| Stabilita | Podmie | Antirast. | Plagova | FACS | Koncentr. | Cast./ | UV | pH |
| čas | nky °C | skúška | skúška | x1011 | X 1011 | FACS | A320/A260 | |
| x 105 | x 1010 | U/ml | čast./ml | pomer | ||||
| SPU/ml | PFU/ml |
| Začiatok | 3,3 | 5,8 | 3,86 | 7,95 | 21 | 0,23 | 7,53 | |
| 1 týždeň | 25 | 4,9 | 10 | 2,27 | 8,06 | 36 | 0,24 | 7,53 |
| 2 týždeň | 4 | 3,1 | 6,6 | 3,41 | 7,84 | 23 | 0,23 | 7,49 |
| 4 týždeň | 4 | 3,4 | 17 | 3,91 | 7,79 | 20 | 0,23 | 7,63 |
| 8 týždeň | 4 | 5.8 | 8,8 | 3,38 | 7,80 | 23 | 0,24 | 7,61 |
| 12 týždeň | 4 | 3,9 | 36 | 2,24 | 7,80 | 35 | 0,24 | 7.72 |
| 5 mesiacov | 4 | nt. | nt | 1,57 | 8,21 | 52 | 0,26 | 7,60 |
| 6 mesiacov | 4 | 3,0 | 7,6 | 2,74 | 7,68 | 28 | 0,28 | 7,58 |
| 9 mesiacov | 4 | 3,1 | 19 | 3,47 | 7,19* | 21 | 0,28 | 7,58 |
| 11 mesiacov | 4 | nt | nt | nt | 6,71 | 0,29 | Nt | |
| 12 mesiacov | 4 | 2,6 | 10 | 0,81 | 6,13 | 76 | 0,30 | 7,62 |
* Opakované testovanie UV vzorky po 9 mesiacoch: 6,89 x 1011 častíc/ml:
Ä32o/A26O=O.28.
Tabuľka 2: Údaje stability pre príklad 2
| Stabilita čas | Podmie nky°C | Antirast. skúška x104 SPU/ml | Plagova skúška x 107 PFU/ml | FACS x109 U/ml | Koncentr. X10w čast./ml | Cast./ FACS pomer | UV A320/A260 | PH |
| Začiatok | 3,3 | 4,8 | 1,99 | 10,0 | 50 | 0,24 | 7,36 | |
| 1 týždeň | 25 | 2,4 | 7,1 | 1,64 | nd* | - | 0,46 | 7,42 |
| 2 týždeň | 4 | 2,4 | 6,9 | 2,13 | 9,79 | 46 | 0,24 | 7,51 |
| 4 týždeň | 4 | 3,2 | 8,4 | 2,50 | 9,24 | 37 | 0,22 | 7,55 |
| 8 týždeň | 4 | 6,9 | 8,6 | 2,60 | 8,10 | 31 | 0,25 | 7,54 |
| 12 týždeň | 4 | 5,5 | 8,3 | 1,09 | 8,60 | 79 | 0,24 | 7,64 |
| 5 mesiacov | 4 | nt | nt | 1,74 | 8,03 | 46 | 0,27 | 7,55 |
| 6 mesiacov | 4 | 3.3 | 7,3 | 2,10 | 8,25 | 39 | 0,23 | 7,52 |
| 9 mesiacov | 4 | 2,3 | 13 | 1,97 | 7,59 | 39 | 0,24** | 7,53 |
| 11 mesiacov | 4 | nt | nt | nt | 7,48 | - | 0,23 | Nt |
| 12 mesiacov | 4 | 1.8 | 9,4 | 0,60 | 4,94 | 82 | 0,26 | 7,59 |
★*
Nie je určené z dôvodu skúškovej interferencie
Opakované testovanie UV vzorky po 9 mesiacoch: 7,37 x 1O10 častic/ml:
A32o/A26O=O,24.
Tabuľka 3. Údaje stability pre príklad 3
| Stabilita čas | Podmie nky °C | Antirast. skúška x 105 SPU/ml | Plagova skúška x 10® PFU/ml | FACS x1O10 U/ml | Koncentr. X 1011 čast./ml | Cast./ FACS pomer | uv A320/A260 | PH |
| Začiatok | 3,2 | 6,3 | 2,59 | 7,45 | 29 | 0,24 | 7,67 | |
| 1 týždeň | 25 | 4,4 | 4,3 | 1,65 | 7,49 | 45 | 0,24 | 7,68 |
| 2 týždeň | 4 | 2,3 | 8,0 | 3,62 | 7,27 | 20 | 0,24 | 7,49 |
| 4 týždeň | 4 | 2,7 | 7,6 | 4,08 | 6,97 | 17 | 0,24 | 7,75 |
| 8 týždeň | 4 | 5,9 | 8,7 | 2,69 | 7,00 | 26 | 0,25 | 7,82 |
| 12 týždeň | 4 | 3,0 | 15 | 0,70 | 7,10 | 101 | 0,25 | 7,80 |
| 6 mesiacov | 4 | 2,4 | 6,4 | 2,45 | 7,12 | 29 | 0,25 | 7,76 |
| 9 mesiacov | 4 | 2,8 | 9,4 | 2,51 | 7,06 | 28 | 0,26 | 7,81 |
| 11 mesiacov | 4 | nt | nt | nt | 6,71 | - | 0,25 | nt |
| 12 mesiacov | 4 | 2,2 | 9,8 | 0,74 | 6,75 | 91 | 0,26 | 7,81 |
Tabuľka 4: Údaje stability pre príklad 4
| Stabilita čas | Podmie nky °C | Antirast. skúška x 104 SPU/ml | Plagova skúška x 107 PFU/ml | FACS x109 U/ml | Koncentr. X1O10 čast./ml | Cast./ FACS pomer | UV A320/A260 | pH |
| Začiatok | 3,3 | 4,7 | 2,36 | 8,91 | 38 | 0,23 | 7,37 | |
| 1 týždeň | 25 | 2,3 | 9,3 | 1,40 | 8,25 | 59 | 0,24 | 7,37 |
| 2 týždeň | 4 | 2,8 | 8,0 | 2,16 | 8,80 | 41 | nd* | 7,37 |
| 4 týždeň | 4 | 2,9 | 6,6 | 2,54 | 9,35 | 37 | 0,20 | 7,63 |
| 8 týždeň | 4 | 6,9 | 7,2 | 2,56 | 7,60 | 30 | 0,24 | 7,60 |
| 12 týždeň | 4 | 4,4 | 8,6 | 1,45 | 7,20 | 50 | 0,23 | 7.73 |
| 6 mesiacov | 4 | 3,6 | 7,1 | 2,85 | 7,92 | 28 | 0,21 | 7,58 |
| 9 mesiacov | 4 | 2,9 | 11 | 1.87 | 7,26 | 39 | 0,20 | 7,60 |
| 11 mesiacov | 4 | nt | Nt | 6,93 | - | 0,22 | nt | |
| 12 mesiacov | 4 | 2,4 | 22 | 0,70 | 7,15 | 102 | 0,23 | 7,61 |
Nie je určené z dôvodu skúškovej interferencie
Príklad 5
Zloženie pre príklad 5: A/C/N/53 (7,5 x 1011 častíc/ml), trometamín (TRIS) (1,7 mg/ml), dihydrát monobázického fosforečnanu sodného (1,7 mg/ml), sacharóza (20 mg/ml), hexahydrát chloridu horečnatého (0,4 mg/ml), glycerol (100mg/ml), chlorid sodný (5,8 mg/ml), finálny objem = 10 ml.
Tabuľka 5: Údaje stability pre príklad 5
| Stabilita čas | Podmie nky °C | Antirast. skúška x 105 SPU/ml | FACS x1010 U/ml | Koncentr. X 1011 čast./ml | Cast./ FACS pomer | UV A320/A260 | PH |
| Začiatok | 4,5 | 1,87 | 7,81 | 42 | 0,23 | 7,80 | |
| 1 mesiac | 25 | 8,0 | 1,67 | 7,83 | 47 | 0,23 | 7,80 |
| 4 mesiace | 4 | 13,0 | 1,58 | 7,84 | 50 | 0,23 | 7,70 |
V niektorých prípadoch môže byť pozorovaná tvorba častíc počas skladovania pri 4 °C. Analýza častíc SDS-PAGE naznačuje, že častice sú zložené z malých nečistôt (napr. prídavných proteínov a nejakých nezrelých vírusových častíc), a tak tieto častice neovplyvňujú použiteľnosť zloženia. V preferovanej podstate na ďalšie objasnenie zloženia (na prevenciu možných časticových formácií), možný krok mikrofiltrácie môže viesť k odstráneniu všetkých možných častíc s malou stratou vírusových častíc. (Keď je vykonaná mikrofiltrácia, malo by byť poznamenané, že dostatočná mikrofiltračná povrchová plocha membrány na filtračný objem je kritická na vyhnutie sa straty vírusov pri odstraňovaní častíc.)
Ďalej bolo vynálezcami zistené, že rozrušovanie, ako je miešanie, môže urýchliť tvorbu častíc a je preto ďalším možným krokom v objasnení procesu. Teda opatrné miešanie (napr. cez noc, 10 °C, použitie magnetického miešadla) následnou mikrofiltráciou vykázalo odstránenie takých častíc, že sa nebude tvoriť viac častíc do ďalšieho miešania.
Bolo tiež zistené, že cykly tuhnutia/topenia by mohli podporovať tvorbu častíc počas opakovaného miešania. V ďalšom preferovanom spôsobe môže byť jeden alebo viacej cyklov tuhnutia/topenia uskutočnené voliteľne, nasledované miešaním a potom mikrofiltráciou na prevenciu tvorby častíc počas skladovania vírusových finálnych produktov v teplotách chladničky (napr. 4 °C). Prezentovaná prihláška tiež . otvára nové metódy stabilne koncentrovať existujúci vírusový preparát využitím sekundárnej prietokovej filtrácie (neskôr občas uvedené ako „TFF), dovoľujúcej ' ľahkú selekciu a prípravu klinických dávok v širokom spektre žiadaných koncentrácií.
Nová metóda koncentrovania vírusových preparátov zahŕňa:
a) prídavok polyhydroxylovaných uhľovodíkov k vírusovému preparátu na finálnu koncentráciu polyhydroxylovaných uhľovodíkov asi 20 % alebo viac; a
b) podrobenie vírusového preparátu filtračnému procesu, kde koncentrácie vírusu vzrastie po podrobení tlaku na taký preparát, pri ktorom je roztok odstránený z vírusového preparátu cez filter, zatiaľ čo je vírus zachovaný.
Metódy terajšieho vynálezu sú prístupné k širokému spektru vírusov zahrňujúcich, ale nelimitujúcich adenovírusy, pox vírusy, iridovírusy, herpes vírusy, papovavírusy, paramyxovírusy, ortomyxovírusy, retrovírusy, adenoasociované vírusy, vakcinačné vírusy, rotavírusy, atď.; preferované sú najmä adenovírusy. Vírusy sú najmä rekombinantné vírusy, ale môžu zahŕňať klinické izoláty, zoslabené vakcinačnými vírusmi a podobne. Prezentovaný vynález je použiteľný na koncentrované rekombinantné vírusy nesúce heterológne transgény na použitie v génovej terapii. Takéto vírusy sú citlivé najmä na potencionálne destabilizačné vplyvy také, ako prídavné sily doprevádzajúce metódy koncentrácie vírusových » preparátov. Príkladným rekombinantným adenoví rusom, ktorý môže byť koncentrovaný metódou vynálezu je A/C/N/53, ktorý je popísaný v PCT patentovej prihláške č. WO 95/1984.
Filtračný proces používaný na koncentráciu vírusov podľa metódy prezentovaného vynálezu môže zahŕňať všetky filtračné procesy (napr. ultrafiltráciu), kde koncentrácia vzrastie zosilnením rozpúšťadla, ktoré má prejsť cez filter takým spôsobom, že rozpúšťadlo je odstránené z vírusového preparátu, kde je vírus neschopný prejsť filtrom a preto teda zostáva v koncentrovanej forme vo vírusovom preparáte. Ultrafiltrácia je popísaná detailne napr. v Microfiltration and Ultrafiltration: Principles and Applications, Ľ. Zeman and A. Zydney (Marcel Dekkar, Inc., New York, NY, 1996). Obzvlášť preferovaný filtračný proces je tangentová prietoková filtrácia (TFF) ako je popísané napr. v Millerorom katalógu nazvanom Pharmaceutical Process Filtration Cataloque pp. 177-202 (Bredford, Massachutsatts, 1995/96). Preferované TFF aparatúry zahrňujúce tiež Pellicon II alebo Pellicon XI. filtračný systém z Millipore Corporation, 80 Ashby Rd., Bedford, Massachusatts (intemetová adresa: www.millipore.com), a Pellicon XL systém je obzvlášť preferovaný. V preferovanej podstate sú metódy prezentovaného vynálezu vykonávané pri teplotách v rozmedzí od 2 °C do 27 °C.
Iné koncentračné procesy môžu byť použité na koncentráciu vírusových preparátov v súlade s prezentovaným vynálezom. Ako príklad použitia polyhydroxylovaných uhľovodíkov môže byť vhodné použitie na koncentráciu vírusového preparátu eentrifugáciôu. Prezentovaný vynález tiež poskytuje metódu na koncentráciu vírusového preparátu zahrňujúceho:
a) centrifugáciu prípravku, ktorý zahrňuje prvú fázu obsahujúcu polyhydroxylované uhľovodíky v koncentrácii 35 % až 80 % (obj./obj.), prvá fáza je prekrytá druhou fázou obsahujúcou polyhydroxylované uhľovodíky v koncentrácii 5 % až 30 % (obj./obj.), druhá fáza je prekrytá treťou fázou obsahujúcou vírus; a
b) odber vírusu z prvej fázy
Ako príklad môže byť adenovírusový preparát koncentrovaný nižšou rýchlosťou centrifugácie pri 3 200 g použitím točivých rotorov centrifúgy Beckman. Na dosiahnutie tohoto môže byť vírusový preparát umiestnený do rovnakých 5 ml skúmaviek, každá skúmavka obsahuje 6,25 objemu 70% glycerolu v prvej fáze na dne skúmavky, prekryté 2,5 % objemu 20% glycerolu s vírusovým preparátom daným na povrch. Preparát je potom centrifugovaný pri 3 200 g pri 4 °C asi 16 hodín na usadenie koncentrovaného vírusu v glycerolových fázach a potom je následne opäť získaný koncentrovaný vírusový preparát z prvej fázy. Vírus koncentrovaný procedúrami popísanými vyššie má dobré schopnosti rozptyľovať svetlo a má vhodné infekčné vlastnosti.
S ohľadom na použitie polyhydroxylovaných uhľovodíkov v metódach prezentovaného vynálezu polyhydroxylovanými uhľovodíkmi sú myslené vetvené, lineárne alebo cyklické zlúčeniny substituované 2 alebo viacerými (najmä 2 až 6, lepšie 2 až 4) hydroxy skupinami a efektívne množstvo polyhydroxylovaných uhľovodíkov je množstvo dostatočné na stabilizáciu vírusov proti potencionálnym destabilizačným silám takým ako sú mechanické strihové sily, ktoré sa objavujú počas koncentračného procesu. Najmä polyhydroxylované uhľovodíky vo vírus koncentračných metódach prezentovaného vynálezu sú predkladané v minimálnej koncentrácii 20 %, lepšie 25 %. Polyhydroxylované uhľovodíky na použitie v prezentovanom vynáleze sú hlavne polyhydroxylmi substituované alkylové zlúčeniny (vetvené alebo nevetvené), majúce 2 až 7 atómov uhlíka a môžu zahrňovať glycerol, sorbitol a polypropanol. Najmä preferovaným je glycerol.
Novátorská nová metóda zvýšenia vírusovej koncentrácie má prídavný úžitok na zlepšenie spracovania, napr. eliminácie problematických úskalí pripustením významne vyššieho výkonu počas rôznych krokov procesu takých ako je veľkostná vylučovacia chromatografia. V preferovanej podstate môže byť metóda na koncentráciu vírusových preparátov v súlade s prezentovaným vynálezom aplikovaná na metódy purifikácie vírusov, kde krok veľkostnej vylučovacej chromatografie (napr. gélová filtrácia) je vykonaný následne po aniónvýmennej chromatografii. V tejto podstate tu sú prídavné ohrozenia vírusovej stability prameniace len z mechanických síl potrebných na koncentráciu vírusu pred pomer limitujúcim krokom veľkostnej vylučovacej chromatografie, ale tiež následkom faktu, že vírusový preparát eluovaný z aniónvýmennej chromatografie obsahuje typicky vysoké hladiny solí a iných nečistôt, ktoré tiež oslabujú vírusovú stabilitu. V obzvlášť preferovanom vynáleze poskytuje prezentovaný vynález metódu purifikácie a vírusovej preparácie zahrňujúcej:
a) podrobenie vírusového preparátu aniónvýmennej chromatografii, kde je vírus eluovaný ako produkt vírusovej preparácie z aniónvýmenného chromatografického média;
b) prídavkom polyhydroxylovaných uhľovodíkov k produktu vírusového preparátu kroku a) tak, že koncentrácie polyhydroxylovaných uhľovodíkov v preparáte dosahujú finálnu koncentráciu asi 25 % alebo viac; a
c) zväčšením koncentrácie vírusu vo vírovom preparačnom produkte kroku b) aplikovaním tlaku na preparát tak, že je rozpúšťadlo odstránené z vírusového preparátu cez filter, zatiaľ čo je vírus zachovaný; a
d) podrobenie koncentrovaného produktu vírusového preparátu z kroku c) jedným alebo viacerým prídavným procesným krokom.
V preferovanej podstate v spojení s aniónvýmennou chromatografiou sa stanovuje vyššie, že minimálna hladina glycerolu je 25 % (lepšie než 20% minimálna hladina vo všeobecných aplikáciách koncentračných metód prezentovaného vynálezu), pretože táto konkrétna prihláška musí brať do úvahy prípadné ohrozenie stability predstavovanej vysokými koncentráciami solí v produkte eluovanom z aniónvýmennej chromatografie. Prídavok 25% glycerolu (lepšie 30%) spôsobuje stabilitu soľ obsahujúci DEAE kúpeľ na viac než 10 dní pri napr. 4 °C; preto dodatočné kroky koncentrácie vírusov a /alebo gélovej filtrácie môžu byť vykonané v oddelených dňoch so značnou flexibilitou v perióde 10 dní. Ako bude zhodnotené, použitie polyhydroxylovaných uhľovodíkov vo vyššej koncentrácii 25 % alebo viac môže byť tiež použité v metódach prezentovaného vynálezu, kde vírusový preparát obsahuje vysoký obsah solí následkom iných procesných podmienok. Nasledujúce príklady ilustrujú preferované podstaty prezentovaného vynálezu; rámec vynálezu nie je konštruovaný ako týmto limitovaný.
Rýchly prehľad - Koncentrovaná vsádka sa začína surovým vírusovým materiálom pochádzajúcim z fermentácie. V jednej podstate je adenovírusový produkt najprv purifikovaný aniónvýmennou chromatografiou. Ďalej pred pridaním preparátu do veľkostnej vylučovacej kolóny, môže byť ionovýmenná náplň * koncentrovaná sekundárnou prietokovou filtráciou (TFF) v prítomnosti 30% (obj./obj.) glycerolu. Alternatívne v inej podstate môže byť TFF koncentračný krok vykonaný v prítomnosti 20% (obj./obj.) alebo viac (najmä 25%) glycerolu po veľkostnej vylučovacej chromatografii.
V preferovanej podstate adenovirusová ionovýmenná náplň je pripravená na koncentráciu ako v nasledujúcom. Zmrznuté vírusové materiály z fermentácie a zo znovu naberajúcich kovov sú rozmrazené a filtrované cez 0,45 pm hydrofilnú membránu. Koncentrácia solí vo filtráte je upravovaná 4 M chloridom sodným. Tento nasýtený roztok je potom aplikovaný do Fractogel EMD DERE-650M kolóny ekvilibrovanej 50 mM fosforečnanom sodným pH 7,5, 260 mM chloridom sodným, 2 mM chloridom horečnatým, 2% (hmotn./obj.) sacharózou (pufr A). Adenovírusové väzby k aniónvýmennej živici, kde väčšina média a nečistoty hostiteľských buniek prechádzajú cez kolónu, sú vyčerpané spotrebovaním náboja. Kolóna je na začiatku * umytá 4 objemami pufru A, nasleduje druhé umytie 94% pufrom A s objemom 8 výplní a 6% pufrom B (50 mM fosforečnan sodný pH 7,5; 600 mM chlorid sodný, 2 mM chlorid horečnatý, 2% (hmotn./obj.) sacharóza) na odstránenie prídavných nečistôt. Vírus je eluovaný z kolóny 30 objemu výplne lineárneho gradientu od 6 % do 100 % pufru B. Adenovírusový pík elučného profilu ako je určené A280, je odobratý. Potom je do DEAE pridaný glycerol vo finálnej koncentrácii 30 % (obj./obj.) na ďalšie spracovanie.
DEAE (pripravené v súlade s skôr popísaným) je 10 krát až 20 krát koncentrované použitím Millipore TFF jednotky (Pellicon XĽ Systém) pre molekulovú hmotnosť 1 000, uzatvorené Biomax membránami. Proces je uskutočnený pri 2 až 10 °C alebo za laboratórnej teploty (25 °C). Následné filtračné parametre sú použité v tejto procedúre: priemerný prietokový tlak = 14 psi; priemerný permanentný tlak = 0 psi; priemerná prietoková rýchlosť =13 l/h*m2. Finálna koncentrácia adenovírusu dosahuje asi 1 až 2 x 1013 častíc na ml, založené na Resource Q-HPLC a UV absorbanci (Α2βο) analýze, znovu nabitie v koncentračnom kroku je >80 % s nevýznamnou agregáciou (skúška rozptylu svetla pri A320/A260).
Koncentrovaný adenovírusový preparát je aplikovaný do Superdex-200 veľkostnej vylučovacej kolóny ekvilibrovanej 20 mM fosforečnanom sodným pH 8, 100 mM chloridom sodným, 2 mM chloridom horečnatým, 2% (hmotn./obj.) f sacharózou, 10% glycerolom (pufr C) alebo 11 mM fosforečnanom sodným, 14 mM
Tris, 2 mM chloridom horečnatým, 2% (hmot./obj.) sacharózou, 10% glycerolom, pH 7,8 (pufor D). Kolóna je eluovaná ekvilibračným pufrom. Elučný profil adenovírusového piku je určený A280 odobraný a kompletovaný. Koncentrovaný adenovírusový preparát je filtrovaný cez 0,2 pm hydrofilnú membránu s odolnými pórmi (Stericup, Millipore) pri 2 až 10 °C, a môže byť skladovaný pri -80 °C alebo pri vyšších teplotách (ako je 2 až 10 °C).
Ako bolo už skôr spomínané, preferovaná podstata prezentovaného vynálezu obsahuje koncentrovanie vírusu po aniónvýmennej chromatografii, ale pred gélovou filtráciou. Avšak v inej podstate môže byť tiež použitá zistená metóda koncentrovaných vírusových preparátov po gólovom filtračnom kroku (taktiež ak nevírusový koncentračný krok bol použitý medzi aniónvýmenným krokom a gólovou filtráciou). V tomto prípade sú filtračné parametre rovnaké ako tie pre koncentráciu DEAE bez toho, že môžu byť pridané polyhydroxylované uhľovodíky (napr. glycerol) do Superdex-200 vo finálnej koncentrácii 20 % (obj./obj.), v prípade, že nie je ďalej nutné zaoberať sa vyššou koncentráciou solí v DEAE. V súvislosti s týmto musí byť poznamenané, že v prípade, kde prídavok poly hyd roxylovaných uhľovodíkov je odložený na čas až po gólovej filtrácii, DEAE by mal byť aplikovaný okamžite po gólovej filtračnej kolóne (z dôvodu zraniteľnosti DEAE s jej vysokou koncentráciou solí). Môže sa zdať, že prídavným vplyvom pridaných polyhydroxylovaných uhľovodíkov k DEAE (v súlade s prezentovaným vynálezom) je zvýšenie flexibility v časovom intervale a skladovacích podmienkach počas časovej periódy medzi aniónvýmennou chromatografiou a ďalšími procesmi.
Metódy koncentrácie vírusových preparátov môžu byť aplikované v spojení s rôznymi purifikačnými metódami. Pre prídavné informácie o purifikačných metódach môžu byť pridané odkazy, napr. Huyghe et al., Human Gene Therapy, Vol. 6, pp. 1403-1416 (1995) a U. S. patentová prihláška č. 08/989 227, expresne zahrnuté tu v odkazoch.
Ako je ukázané v experimentoch nižšie, metódy prezentovaného vynálezu ponúkajú zlepšenú vírusovú stabilitu napriek mechanickým silám koncentrovaného vírusu a napriek drsným podmienkam ako je hladina solí v DEAE kúpeli. Metódy prezentovaného vynálezu ponúkajú spolu s ďalšími vecami 1) rýchlu prípravu klinických nádob pre všetky žiadané koncentrácie (tiež keď je začínané s materiálom majúcim nižšiu koncentráciu), 2) zvýšení efektivity (napr. dovolenú významne vyššiu výkonnosť počas veľkostnej vylučovacej chromatografie) a 3) stabilitu soľ obsahujúceho DEAE kúpeľa na Viac ako 10 dní pri 2 až 10 °C (je to dovolené pre nasledujúce kroky vírusovej koncentrácie a/alebo gólovej filtrácie vykonanej v oddelených dňoch s následnou flexibilitou v perióde 10 dní.
V nasledujúcich troch príkladoch sú uvedené stabilné koncentrácie adenovírusu preparovaného koncentrovanými DEAE kúpeľmi v 30% glycerolu (v súlade s metódami prezentovaného vynálezu). Preparáty boli potom podrobené ďalšej purifikácii Superdex-200 gélovou filtračnou chromatografiou na získanie konečného zloženia na testovanie.
Príklad 6:
Finálne zloženie:
mM NaPi, 100 mM NaCI, 2 mM MgC12, 2% sacharóza, 10% glycerol, pH 8 pri 2 až 10 °C.
Výsledky: Častice/FACS=24
Svetelné lúče (A32o/A26o)=O,22 Koncentrácia = 1,6 x 1013 častíc/ml
Príklad 7:
Finálne zloženia:
mM Tris báza, 11 mM NaPi, 2 mM MgC12, 2% sacharóza, 10% glycerol, pH 7,8 pri 2 až 10 °C
Výsledky: Častice/FACS=17
Svetelné lúče (A32O/A26o) =0,25
Koncentrácia = 1,5 x 1013 častíc/ml
Príklad 8:
Finálne zloženia:
mM NaPi, 100 mM NaCI, 2 mM MgC12, 2% sacharóza, 10% glycerol, pH 8 pri 2 až 10 °C.
Výsledky: Častice/FACS=24
Svetelné lúče (A32O/A26o)=O,25 Koncentrácia = 1,3 x 1013 častíc/ml
Príklad 9:
V nasledujúcom príklade bol vírusový preparát koncentrovaný v 20% glycerolu následne po gélovej filtrácii.
Finálne zloženie:
| 16 mM NaPi, 80 mM NaCI, 1,6 mM MgC12, 1,6% sacharóza, 20% glycerol, pH 8 pri 2 až 10 °C. | |
| Výsledky: | Častice/FACS = 72 Svetelné lúče (A320/A260) = 0,26 Koncentrácia = 1,66 x 1013 častíc/ml |
e
Všetky publikácie, patenty a patentové prihlášky tu citované sú obsiahnuté * ako celok v odkazoch v rovnakom rozsahu ako individuálne publikácie, patenty alebo patentové prihlášky boli špecifikované a individuálne uvedené v referenciách.
Modifikácie a variácie tohto vynálezu budú jasné pre odborníkov v danej technike. Špecifické podstaty tu popísané sú ponúknuté touto cestou len v príkladoch a vynález nie je zostavený ako limitujúci.
Claims (28)
1. Prostriedok obsahujúci vírus v zložení zahrňujúcim polyhydroxylované uhľovodíky pufrované na udržanie pH v rozmedzí od asi 7 do asi 8,5 pri i teplote v rozmedzí od 2 °C do 27 “C.
2. Prostriedok podľa nároku 1, kde vírusom je rekombinantný vírus.
*
3. Prostriedok podľa nároku 1, kde polyhydroxylovaným uhľovodíkom je glycerol.
4. Prostriedok podľa nároku 1 ďalej obsahujúci disacharid.
5. Prostriedok podľa nároku 1, kde kompozícia obsahuje pufrovací systém obsahujúci dihydrát monobázického fosforečnanu sodného s koncentráciou asi 0,5 až 10 mg/ml a trometamín s koncentráciou asi 0, 5 až 10 mg/ml.
6. Prostriedok podľa nároku 1 tiež obsahujúci dvojmocnú soľ kovu v koncentrácii asi 0,1 až 1 mg/ml.
7. Prostriedok podľa nároku 1, ktorý tiež obsahuje rozpúšťadlo obsahujúci vodu.
8. Prostriedok podľa nároku 1, kde vírus je prítomný v koncentrácii asi 1 x 109 až 1 x 1013 častíc/ml.
9. Prostriedok podľa nároku 1, kde vírusom je adenovírus.
10. Prostriedok podľa nároku 2, kde rekombinantný vírus obsahuje divoký typ génu p53.
11. Prostriedok podľa nároku 10, kde rekombinantným vírusom je A/C/N/53.
12. Prostriedok podľa nároku 1, kde vírusom je adenovírus; polyhydroxylovaným
5 uhľovodíkom je glycerol; pufrovací systém udržuje pH v rozmedzí od asi 7,3 do asi 7,9 pri teplote v rozmedzí od 20 °C do 27 °C; a prostriedok ďalej obsahuje disacharid.
13. Prostriedok podľa nároku 12, kde adenovírus je A/C/N/53; disacharid je sacharóza; pufrovací systém obsahuje dihydrát monobázického fosforečnanu sodného a trometamín; a prostriedok ďalej obsahuje dvojmocnú soľ kovu a vodu.
14. Spôsob koncentrácie vírusového preparátu, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa:
a) prídavok polyhydroxylovaného uhľovodíka k vírusovému preparátu do konečnej koncentrácie polyhydroxylovaného uhľovodíka asi 20 % alebo viac, a
b) podrobenie vírusového preparátu filtračnému procesu, kde koncentrácia vírusu vzrastie pôsobením tlaku na preparát tak, že je rozpúšťadlo odstránené z vírusového preparátu cez filter, zatiaľ čo je vírus zachovaný.
15. Spôsob koncentrácie podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že filtračný proces zahrňuje ultrafiltráciu.
16. Spôsob koncentrácie podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že filtračný proces zahrňuje sekundárnu prietokovú filtráciu.
17. Spôsob purifikácie vírusového preparátu, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje:
a) podrobenie vírusového preparátu aniónvýmennej chromatografii, kde je vírus eluovaný ako produkt vírusovej preparácie z aniónvýmenného chromatografického média;
b) prídavok polyhydroxylovaných uhľovodíkov k produktu vírusového preparátu kroku a) tak, že koncentrácia polyhydroxylovaných uhľovodíkov v preparáte dosahuje hodnotu asi 25% a viac; a
c) zvýšenie koncentrácie vírusu vo vírusovom preparačnom produkte z kroku b) pôsobením tlaku na preparát tak, že rozpúšťadlo je odstránené z vírusového preparátu cez filter, zatiaľ čo je vírus zachovaný; a
d) podrobenie koncentrovaného vírusového preparačného produktu z kroku c) jednému alebo viacerým prídavným procesným krokom.
18. Spôsob podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že vírusom je rekombinantný vírus.
19. Spôsob podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že vírusom je rekombinantný vírus nesúci terapeutické transgény na použitie v génovej terapii.
20. Spôsob podľa nároku 17, vyznačujúci sa tým, že prídavný procesný krok zahrňuje veľkostnú vylučovaciu chromatografiu.
21. Spôsob podľa nároku 17, vyznačujúci sa tým, že proces kroku c) zahrňuje sekundárnu prietokovú filtráciu.
22. Spôsob podľa nároku 21, vyznačujúci sa tým, že proces kroku c) je vykonaný použitím aparatúry zahrňujúcej Pellicon XL filtračný systém.
23. Vírusový preparát koncentrovaný metódou podľa nároku 14.
24. Vírusový preparát purifikovaný metódou podľa nároku 17.
25. Spôsob koncentrácie vírusového preparátu, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje:
a) centrifugáciu prostriedku, ktorý zahrňuje prvú fázu obsahujúcu polyhydroxylovaný uhľovodík v koncentrácii 35 % až 80 % (obj./obj.), prvá fáza je prevrstvená druhou fázou obsahujúcou polyhydroxylované uhľovodíky s koncentráciou 5 % až 30 % (obj./obj.), sekundárna fáza je prevrstvená treťou fázou zahrňujúcou vírus; a
b) opäť získanie vírusu z prvej fázy.
26. Prostriedok podľa nároku 1, kde je prostriedok podrobený prídavnému procesnému kroku miešania nasledovanom mikrofiltráciou na zamedzenie tvorby častíc počas skladovania prostriedku.
27. Prostriedok podľa nároku 1, kde je prostriedok podrobený jednému alebo viacerým cyklom tuhnutia/topenia nasledovaným miešaním a potom mikrofiltráciou na zamedzenie tvorby častíc počas skladovania kompozície.
28. Prostriedok podľa nároku 12 ďalej obsahujúci jednomocnú soľ kovu s koncentráciou asi 0,6 až 10 mg/ml.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2446298A | 1998-02-17 | 1998-02-17 | |
| US7964398A | 1998-05-15 | 1998-05-15 | |
| PCT/US1999/001873 WO1999041416A2 (en) | 1998-02-17 | 1999-02-12 | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK11842000A3 true SK11842000A3 (sk) | 2001-05-10 |
Family
ID=26698472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1184-2000A SK11842000A3 (sk) | 1998-02-17 | 1999-02-12 | Prostriedok obsahujúci vírus, spôsob jeho koncentrácie a purifikácie |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (4) | EP1054955B1 (sk) |
| JP (3) | JP4358434B2 (sk) |
| KR (5) | KR100912362B1 (sk) |
| CN (2) | CN100374551C (sk) |
| AR (3) | AR020054A1 (sk) |
| AT (3) | ATE478945T1 (sk) |
| AU (1) | AU757976B2 (sk) |
| BR (1) | BR9908015A (sk) |
| CA (2) | CA2723040A1 (sk) |
| CO (1) | CO4820440A1 (sk) |
| DE (3) | DE69933433T2 (sk) |
| DK (1) | DK1054955T3 (sk) |
| ES (2) | ES2272053T3 (sk) |
| HK (3) | HK1073481A1 (sk) |
| HU (1) | HU226015B1 (sk) |
| ID (1) | ID28298A (sk) |
| IL (2) | IL137510A0 (sk) |
| MY (1) | MY141641A (sk) |
| NO (1) | NO20004104L (sk) |
| PE (1) | PE20000265A1 (sk) |
| PL (1) | PL197747B1 (sk) |
| PT (1) | PT1054955E (sk) |
| SK (1) | SK11842000A3 (sk) |
| TW (1) | TWI232107B (sk) |
| WO (1) | WO1999041416A2 (sk) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100503701B1 (ko) | 1996-11-20 | 2005-07-26 | 인트로겐 테라페티스, 인코퍼레이티드 | 아데노바이러스 벡터를 생산하고 정제하는 개선된 방법 |
| US7732129B1 (en) | 1998-12-01 | 2010-06-08 | Crucell Holland B.V. | Method for the production and purification of adenoviral vectors |
| EP1133316B1 (en) * | 1998-11-16 | 2009-01-21 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| US6689600B1 (en) | 1998-11-16 | 2004-02-10 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
| AU4346101A (en) * | 2000-03-07 | 2001-09-17 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
| US7456009B2 (en) | 2000-03-07 | 2008-11-25 | Merck & Co., Inc. | Adenovirus formulations |
| US20020064860A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-05-30 | Schering Corporation | Method for purifying adenoviruses |
| WO2002047726A2 (en) * | 2000-12-12 | 2002-06-20 | Japan Tobacco Inc. | Pharmaceutical composition containing an active with a hemolytic action and a surfactant |
| EP1453536A4 (en) | 2001-12-12 | 2009-08-26 | Mayne Pharma Int Pty Ltd | COMPOSITION FOR PRESERVING VIRUSES |
| US20030153065A1 (en) * | 2002-01-14 | 2003-08-14 | Genvec, Inc. | Composition and method for maintaining non-enveloped viral vectors |
| US20030232018A1 (en) * | 2002-01-18 | 2003-12-18 | Berlex Biosciences | Stabilized formulations of adenovirus |
| AU2005214090B2 (en) | 2004-02-23 | 2008-09-11 | Crucell Holland B.V. | Virus purification methods |
| CA2586107A1 (en) | 2004-11-03 | 2006-05-18 | Introgen Therapeutics Inc. | A novel method for the production and purification of adenoviral vectors |
| JP4621743B2 (ja) | 2004-12-13 | 2011-01-26 | カンジ，インコーポレイテッド | 複製欠損アデノウイルスの産生のための細胞株 |
| CN101155915B (zh) | 2005-04-11 | 2013-12-04 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 利用超滤进行病毒纯化 |
| CN1961961B (zh) * | 2005-11-11 | 2010-05-26 | 深圳市源兴生物医药科技有限公司 | 一种药物制剂及其制备方法 |
| JP5097714B2 (ja) | 2005-12-12 | 2012-12-12 | カンジ，インコーポレイテッド | Ｅ１領域内の発現カセットと不活性化されたｅ２ｂポリメラーゼを有するアデノウイルス発現ベクター |
| AU2007240797B2 (en) * | 2006-04-20 | 2013-05-23 | Wyeth Llc | Purification processes for isolating purified vesicular stomatitis virus from cell culture |
| ES2532015T3 (es) | 2008-11-03 | 2015-03-23 | Crucell Holland B.V. | Método para la producción de vectores adenovíricos |
| JP5879256B2 (ja) | 2009-05-02 | 2016-03-08 | ジェンザイム・コーポレーション | 神経変性障害のための遺伝子治療 |
| WO2011098592A1 (en) | 2010-02-15 | 2011-08-18 | Crucell Holland B.V. | Method for the production of ad26 adenoviral vectors |
| US8771709B2 (en) | 2010-09-20 | 2014-07-08 | Crucell Holland B.V. | Therapeutic vaccination against active Tuberculosis |
| US9168292B2 (en) | 2010-09-27 | 2015-10-27 | Crucell Holland B.V. | Heterologous prime boost vaccination regimen against malaria |
| AU2011336410B2 (en) | 2010-12-02 | 2015-01-22 | Oncolytics Biotech Inc. | Lyophilized viral formulations |
| WO2012075379A2 (en) | 2010-12-02 | 2012-06-07 | Oncolytics Biotech Inc. | Liquid viral formulations |
| EA201391605A1 (ru) * | 2011-04-29 | 2014-02-28 | Онколитикс Байотек Инк. | Способы очистки вирусов с использованием гельпроникающей хроматографии |
| US8932607B2 (en) | 2012-03-12 | 2015-01-13 | Crucell Holland B.V. | Batches of recombinant adenovirus with altered terminal ends |
| CN104379733B (zh) | 2012-03-12 | 2016-01-20 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 具改变末端的重组腺病毒群 |
| US9125870B2 (en) | 2012-03-22 | 2015-09-08 | Crucell Holland B.V. | Vaccine against RSV |
| MY169352A (en) | 2012-03-22 | 2019-03-25 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Vaccine against rsv |
| MX361774B (es) | 2013-04-25 | 2018-12-17 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Polipéptidos f de prefusión del virus sincicial respiratorio (rsv) solubles y estabilizados. |
| PE20160045A1 (es) | 2013-06-17 | 2016-02-18 | Crucell Holland Bv | Polipeptidos f de prefusion del virus sincicial respiratorio (rsv) solubles y estabilizados |
| KR20170004966A (ko) * | 2014-05-28 | 2017-01-11 | 에이전시 포 사이언스, 테크놀로지 앤드 리서치 | 바이러스 감소 방법 |
| US10570417B2 (en) | 2015-04-14 | 2020-02-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Recombinant adenovirus expressing two transgenes with a bidirectional promoter |
| JP6840718B2 (ja) | 2015-07-07 | 2021-03-10 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーＪａｎｓｓｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｂ．Ｖ． | 安定化された可溶性融合前ｒｓｖ ｆポリペプチド |
| WO2017005844A1 (en) | 2015-07-07 | 2017-01-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Vaccine against rsv |
| AU2017248021B2 (en) | 2016-04-05 | 2021-08-12 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized soluble pre-fusion RSV F proteins |
| BR112018070323A2 (pt) | 2016-04-05 | 2019-01-29 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | vacina contra rsv |
| WO2017207480A1 (en) | 2016-05-30 | 2017-12-07 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized pre-fusion rsv f proteins |
| US11001858B2 (en) | 2016-06-20 | 2021-05-11 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Potent and balanced bidirectional promoter |
| WO2018011196A1 (en) | 2016-07-14 | 2018-01-18 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Hpv vaccines |
| WO2018210871A1 (en) | 2017-05-17 | 2018-11-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods and compositions for inducing protective immunity against rsv infection |
| EP3624844A1 (en) | 2017-05-17 | 2020-03-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods and compositions for inducing protective immunity against rsv infection |
| WO2019021305A1 (en) * | 2017-07-24 | 2019-01-31 | Ella Foundation | VACCINE AGAINST FOOT AND MOUTH DISEASE |
| EP3681533A1 (en) | 2017-09-15 | 2020-07-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Method for the safe induction of immunity against rsv |
| CN114173827A (zh) * | 2019-06-28 | 2022-03-11 | 武田药品工业株式会社 | 腺相关病毒纯化方法 |
| JP2023512519A (ja) | 2020-01-31 | 2023-03-27 | ベス イスラエル ディーコネス メディカル センター インコーポレイテッド | コロナウイルス感染症を予防および処置するための組成物および方法－ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２ワクチン |
| WO2022175477A1 (en) | 2021-02-19 | 2022-08-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stabilized pre-fusion rsv fb antigens |
| WO2023020556A1 (zh) * | 2021-08-17 | 2023-02-23 | 上海行深生物科技有限公司 | 病毒制剂、用于配制病毒制剂的溶液及其用途 |
| WO2023020939A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-02-23 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Sars-cov-2 vaccines |
| WO2023111725A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-22 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Sars-cov-2 vaccines |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE299213C (sk) * | ||||
| US4147772A (en) * | 1976-02-03 | 1979-04-03 | Merck & Co., Inc. | Vaccine stabilizer |
| GB1575155A (en) * | 1978-04-11 | 1980-09-17 | Merck & Co Inc | Vaccine stabilizer |
| BE866330A (fr) * | 1978-04-25 | 1978-10-25 | Merck & Co Inc | Procede de fabrication d'un agent de stabilisation de vaccin |
| US5532220A (en) | 1987-08-31 | 1996-07-02 | The Regents Of The University Of California | Genetic mechanisms of tumor suppression |
| DD299213A7 (de) * | 1988-05-04 | 1992-04-09 | Saechsische Landesgewerbefoerderungsgesellschaft M.B.H.,De | Verfahren zur stabilisierung eines lebendvirusimpfstoffes gegen temperatureinwirkung |
| DD295927A5 (de) * | 1988-05-06 | 1991-11-14 | Saechsisches Serumwerk Gmbh Dresden, | Immobilisiertes immunologisch aktives reagens |
| DE69434594T2 (de) | 1993-10-25 | 2006-09-21 | Canji, Inc., San Diego | Rekombinante adenoviren-vektor und verfahren zur verwendung |
| KR100368686B1 (ko) * | 1994-12-29 | 2003-12-01 | 주식회사 엘지생명과학 | 수크로즈를이용한세포와바이러스의분리방법 |
| FR2742756B1 (fr) * | 1995-12-22 | 1998-04-03 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Stabilisants pour vaccins vivants, vaccins les contenant et procedes pour leur preparation |
| US5789244A (en) | 1996-01-08 | 1998-08-04 | Canji, Inc. | Compositions and methods for the treatment of cancer using recombinant viral vector delivery systems |
-
1999
- 1999-02-12 BR BR9908015-0A patent/BR9908015A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-02-12 ES ES99906690T patent/ES2272053T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 JP JP2000531596A patent/JP4358434B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 DE DE69933433T patent/DE69933433T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 EP EP99906690A patent/EP1054955B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 ES ES04030395T patent/ES2290613T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 DE DE69942708T patent/DE69942708D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 EP EP04030394A patent/EP1526173B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 AT AT06019642T patent/ATE478945T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020087008928A patent/KR100912362B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 DK DK99906690T patent/DK1054955T3/da active
- 1999-02-12 AT AT04030395T patent/ATE371020T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 EP EP04030395A patent/EP1526174B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 ID IDW20001574A patent/ID28298A/id unknown
- 1999-02-12 CA CA2723040A patent/CA2723040A1/en not_active Abandoned
- 1999-02-12 SK SK1184-2000A patent/SK11842000A3/sk unknown
- 1999-02-12 CA CA2320419A patent/CA2320419C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 TW TW088102219A patent/TWI232107B/zh not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020097022935A patent/KR101018992B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 AT AT99906690T patent/ATE341614T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 WO PCT/US1999/001873 patent/WO1999041416A2/en active IP Right Grant
- 1999-02-12 CN CNB998050989A patent/CN100374551C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 AU AU26538/99A patent/AU757976B2/en not_active Ceased
- 1999-02-12 PT PT99906690T patent/PT1054955E/pt unknown
- 1999-02-12 CN CN2007101670867A patent/CN101164623B/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-12 KR KR1020087008929A patent/KR100918187B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020097004676A patent/KR100991683B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 KR KR1020007008878A patent/KR100862169B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 HU HU0100670A patent/HU226015B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 PL PL342847A patent/PL197747B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 IL IL13751099A patent/IL137510A0/xx unknown
- 1999-02-12 DE DE69936948T patent/DE69936948T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 EP EP06019642A patent/EP1741777B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-15 MY MYPI99000542A patent/MY141641A/en unknown
- 1999-02-16 CO CO99009282A patent/CO4820440A1/es unknown
- 1999-02-16 PE PE1999000137A patent/PE20000265A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-02-23 AR ARP990100656A patent/AR020054A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-07-25 IL IL137510A patent/IL137510A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-08-16 NO NO20004104A patent/NO20004104L/no not_active Application Discontinuation
- 2000-12-01 HK HK05106734A patent/HK1073481A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-12-01 HK HK00107727A patent/HK1028416A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-02-07 JP JP2006030336A patent/JP2006166925A/ja not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-05-10 HK HK07104995.0A patent/HK1097413A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-10-16 AR ARP070104576A patent/AR063314A2/es unknown
- 2007-10-16 AR ARP070104577A patent/AR063315A2/es unknown
-
2010
- 2010-07-08 JP JP2010156257A patent/JP2010213727A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SK11842000A3 (sk) | Prostriedok obsahujúci vírus, spôsob jeho koncentrácie a purifikácie | |
| US20080293123A1 (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| US20080261289A1 (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| CZ20002864A3 (cs) | Prostředek obsahující virus, způsoby jeho koncentrace a purifikace | |
| ES2349106T3 (es) | Composiciones que comprenden virus y procedimientos para concentrar preparaciones virales. | |
| NZ505952A (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations | |
| MXPA00008008A (en) | Compositions comprising viruses and methods for concentrating virus preparations |