SE454566B - Farmaceutisk komposition innehallande en verksam mengd av vattenlosliga proteinaser som extraherats fran ett vattenlevande djur valt av ordningen euphausiaceae eller slektet mallotus - Google Patents

Description

454 566 2 - Om patienten lider av achlorhydria eller hypochlorhydria i ventrikeln störs omvandlingen av proteiner till sura albumoser och peptoner vilket gör matsmältningsprocessen ofullständig. Detsamma gäller om pepsinutsöndringen från magsäcksväggen är försämrad.

- Om gallan från gallblásan inte när lipiderna i duodenum, blir emulgeringen av fett ofullständig och nedbrytningen medelst enzymer av lipiderna blir försvârad.

- Om pankreaskörteln är sjukligt förändrad utsöndras ej enzymerna för digestion av lipider, proteiner och kolhydrater i tillräcklig mängd för en adekvat matsmält- ningsprocess. Exempel på detta är när pankreas är avlägsnad på grund av olika typer av kancer; pankreas- insufficiens förorsakad av kronisk pankreatit efter alkoholmissbruk; pankreasfibros; hyperparathyroidism; gallstenar; medfödd pankreasinsufficiens.

- Om maten mycket snabbt passerar genom duodenum på grund av kirurgiskt ingrepp i ventrikeln, blir stimuleringen av pankreas otillräcklig.

- Om genom shuntoperationer av typen Bilroth II maten passerar direkt från ventrikeln till de distala delarna av tunntarmarna blir pankreas otillräckligt stimulerad och enzymproduktionen alltför làg för en adekvat digestion.

- Otillräcklig enzymutsöndring i tunntarmarnas nedre del, jejunum eller ileum, kan resultera i defekt slutned- brytning av exempelvis proteiner.

- Om bakteriefloran i colon är starkt reducerad, genom t ex oralt givna bredspektrum antibiotika, försämras matsmâltningsprocessen i colon och blir otillräcklig.

Detta gäller också när, av funktionella eller organiska s 454 566 skäl (nervositet, colitis av olika former, tumörer, colonresektion), maten passerar alltför snabbt genom denna del av matsmältningskanalen.

För närvarande finns det många farmaceutiska enzymkomposi- tioner som är avsedda att verka som hjälp för matsmältningen vid pankreasinsufficiens, d v s att förbättra digestionen i duodenum. Pankreatin är ett exempel (GB-1561613). Enzymer från fisktarmar och andra vattenlevande djur har också beskrivits som hjälpmedel för digestionen (FR-1015566).

Kommersiellt tillgängliga produkter är t ex CombizymR, CombizymR comp, FestalR, LuizymR - alla av dem innehållande ett extrakt från Asgergillus oryzae. Alla utom LuizymR innehåller pankreatin och två av dem, CombizymR comp och FestalR, innehåller gallsyror. PankreonR, PankreonR forte och PankreonR comp är alla pankreatínkompositioner och den sista innehåller även gallsyror. De tillsatta gallsyrcrna verkar som emulgatorer vilka ökar effekten av lipaserna.

Problemen med de tidigare använda enzymerna är att de, i ventrikelns sura miljö, är labila och har en mycket dålig nedbrytningseffekt på de normala beståndsdelarna i mat.

Många av de tidigare använda kompositionerna har därför överdragits med magsaftsresistent material så att enzymerna först frisättes i duodenum. Inaktivering kan till en viss grad förhindras om de tas tillsammans med mat eller in- mundigas som kompositioner innehållande vissa neutrali- serande salter, men för det mesta har sådana kombinationer visat sig otillfredsställande. Vissa av de tidigare använda kompositíonerna har också befunnits vara skadliga för magslemhinnan.

I djur av ordningen Eughausiaceae, t ex krill (Eughausia sugerba) finns en blandning av olika enzymer, som t ex proteinaser (proteolytiska enzymer med surt och neutralt till alkaliskt pH-optimum), peptidaser (exo- och endo- peptidaser), lipaser, fosfolipaser, amylaser och andra 454 566 4 kolhydratspjälkande enzymer, fosfataser, nukleaser, nukleo- tidaser och esteraser (T.E. Ellingsen; Biokjemiske studier over antarktisk krill; dr.ing avhandling, Institutt för Teknisk Biokjemi, Norges Tekniske Högskole, Trondheim, 1982). Den proteolytiska (trypsinliknande) aktiviteten som finns i vattenextrakt från krill har beskrivits (C.-S. Chen et.al.; J. Food Biochem 2(l978) s. 349-66). Olika proteas- aktiviteter i vatten extrakt från djur av släktet Mallotus, speciellt lodde (Mallotus villosus), har också tidigare beskrivits (A. Gildberg: Autolysis of fish tíssue - General Aspects; Thesis; Institute of Fishereies, University of Tromsö, Norge, 1982).

Uppfinningen Ändamálen med uppfinningen är att erbjuda förbättringar vad gäller enzymatiska hjälpmedel som understödjer matsmält- ningen in vivo pà olika lokaler och nivåer. Ändamálen är således att erbjuda ett medel som utövar sin verkan i magtarmkanalens safter.' Uppfinningen använder en verksam mängd av en enzymprepara- tion som härstammar från ett vattenlevande djur valt ur gruppen som består av djur av ordningen Euphausiaceae eller' släktet Mallotus. Mängden är verksam i betydelsen att den är kapabel att understödja matsmältning och/eller sönderdelning av normal mat innehållande kött och naturligt fett = fettvävnad), d v s mat innehållande proteiner och lipider.

Enzymkompositionen som används enligt uppfinningen kännetecknas av att den innehåller proteinasaktivitet från djuren i fråga och kan företrädesvis även innehålla lipas och/eller amylas- aktivitet tillsatt med olika additiver som t ex olika preparatíoner av vätskor från duodenum och ventrikeln och galla. Lipas och/eller amylasaktiviteterna kan härstamma från dessa djur eller från andra källor. 454 566 Kompositionerna kommer att vara en potentiell hjälp för alla metaboliska processer in vivo i hela matsmältningssystemet från munhàlan till anus, d v s för behandling av de störningar i matsmältningen som exemplifierats i introduktionen (sid 1-2).

Enzymblandningar från dessa djur kan erhållas i högt utbyte och på ett enkelt sätt. Användbara källor för enzymberedningen är djur av ordningen Eughausiaceae, t ex antarktisk krill (Euphausia superba), Euphausia crystallorophias, och andra arter av krill inkluderande Meganyctiphanes norvegica, Tysanoessa inermis och andra besläktade arter. I släktet Mallotus är en speciellt viktig art den havslevande fisken Mallotus villosus (lodde).

De viktigaste enzymaktiviteterna för uppfinningen är proteas- aktivitet som härstammar frân djurens matsmältningskanal.

Beroende pà framställningsmetoden kan blandningar av olika enzymaktiviteter erhållas.

Prepareringen av enzymerna från djuren utföres med välkända metoder. Färska eller färskfrusna djur homogeniseras och extraheras således med vattenhaltigt medium (t ex vatten).

Det erhållna extraktet kan frystorkas och lagras. Extraktet kan ytterligare renas t ex genom extraktion med ett lipidupp- lösande lösningsmedel för att avlägsna lipider.

Om ytterligare rening erfordras kan gel-, ultra- eller membranfiltrering utföras. Genom att utföra sådana filtre- ringar kan lågmolekylära föreningar innehållande t ex fluor avlägsnas (krill är känt att vara rikt pà fluor). Andra reningssteg, vilka potentiellt är användbara är jonbytes~ och affinitetskromatografi. Extraktionen och homogenise- ringen bör utföras i kyla under eller nära +5 °C.

Enzymberedningarna vilka erhålles genom vattenextraktion kan användas direkt eller, om nödvändigt, efter ytterligare rening. I vissa fall är det fördelaktigt att frystorka en preparation från vilken lipider har extraherats. I sådana 454 566 6 fall kan pulvret man erhåller lagras under lång tid.

Enligt uppfinningen har enzymerna som användes och som härstammar från djuren i fråga en.molekylvikt inom inter- vallet 15 000 - 200 000 daltons. Speciellt proteinaserna har molekylvikter som går från 15 000 till 80 000 daltons, som från 20 000 till omkring 40 000 daltons. Dessa intervall gäller för enzymer i icke-aggregerad form såsom de erhålls vid en vattenextraktion av de homogeniserade djuren. De föredragna proteinaserna är vattenlösliga, t ex som de vilka blir kvar i vattenfasen efter de ovan nämnda extraktions- förfarandena.

Olika typer av beredningsformer har använts för tidigare använda digestionshjälpmedlen. Samma typer kan användas i - uppfinningen och således kan uppfinningens kompositioner vara beredd som en pasta, kräm, gel, olja, lösning, granulat, kapsel, depàdurett, pellet etc. De viktigaste berednings- formerna är tabletter, speciellt dragerade tabletter; kapslar, speciellt magsaftsresistenta kapslar; och pellets, speciellt mikroinkapslade pellets. Beredningsformer som inte är dragerade mot påverkan av magsaft kan emellertid enligt uppfinningen vara av ökat värde för den individ som skall behandlas.

Genom att använda olika typer av drageringar och/eller beredningsformer kan kompositionerna programmeras att frisätta sin aktivitet i mycket specifika lokaler inom mag- tarmkanalen. Kompositionen kan vara belagda med en mag- saftresistent lager och/eller vara av typ som ger fri- sättning under en längre tid. Av praktiska skäl är de kompositioner som föredrages avsedda att ges oralt.

Vid pankreasinsufficiens, den viktigaste indikationen för digestiva hjälpmedel, är magsaftsresistenta beredningsformer att föredraga. Sådana beredningsformer har möjlighet att erbjuda den optimala enzymaktiviteten på den rätta platsen, duodenum eller längre ner i tarmarna. 1 454 566 Enligt denna prefererade typ av formulering frisätts enzymerna huvudsakligen från kompositionerna efter det att de passerat magen, d v s i tarmarna, företrädesvis i duodenum. Enzymet bör alltså frísättas vid pH högre än 6,5.

Framställningen av magsaftsresistenta kapslar, tabletter, pellets etc som har förutbestämda frisättningsegenskaper i tarmsaft är känt i och för sig (The Theory and Practice of Industrial Pharmacy; Lachman L, Lieberman H och Klanig J L; 2nd Edition; Lea Febiger, Philadelphia, USA; (1976) s. 321-465).

En magsaftsresistent beredningsform skall motstå inverkan av simulerad magsaft i fyra timmar (37 0) och inte avge sina aktiva beståndsdelar förrän efter ytterligare 30 minuter i simulerad tarmsaft (US Pharmacopea XX s. 1105 och dess 3:e supplement s. 310-ll).

Kapslar av olika storlekar är kommersiellt tillgängliga. För det mesta består de av gelatin eller något annat material som är skonsamt mot gastrointestinalkanalen. Fyllda kapslar och pressade tabletter göres magsaftsresistenta genom att beläggas med en syraresistent film. Materialet i kapselväggen liksom använt bärarmaterial bestämmer också upplösningshastig- heten. Sålunda är det möjligt att välja vissa typer av gelatin, vilka löses upp vid tarmens pH men inte vid magsäckens.

I detta senare fall är kravet lägre vad avser beläggning med magsaftsresistent film.

När dragering med magsaftsresistent film utföres löses ett magsaftsresistent material i ett lättflyktigt lösningsmedel och sprayas över fyllda kapslar, tabletter eller pellets.

Sådant material är kommersiellt tillgängligt från en mängd företag. Det kan bestå av icke-toxiska cellulosa etrar eller syntetiska polymerer. 454 566 s Kompositionerna kan framställas genom att man kombinerar en enzymberedning, som är härledd från djuren i fråga, med olika i och för sig kända fysiologiskt acceptabla bärare eller additiver. Lämpliga bärare är konventionella konsti- tuentia för tabletter, kapslar, granulat etc; organiskt och oorganiskt material såsom silikonoljor eller andra substanser och blandningar som ger de önskade egenskaperna åt komposi- tionen. Till och med vattenlösningar framställda genom att kombinera enzympreparationen med destillerat vatten eller fysiologisk koksaltlösning kan vara användbara enligt uppfinningen. Bland tillsatsmedlen av den aktiva typen har redan nämnts gallsalter och gallsyror, såväl som olika preparationer av ventrikel- och tarmsaft. Färgämnen, smak- ämnen, konserveringsmedel, emulgatorer, milt alkaliskt reagerande salter etc kan också tillsättas. Additiver och använda bärare bör vara valda så att de ej har några signi- fikanta sidoeffekter på det avsedda underlättandet av matsmältningen.

Uppfinningens komposition kan framställas i olika dosenheter.

I fall av tabletter, kapslar etc är vikten av varje enhet för det mesta under 0,5 gram och enheterna är avsedda att tagas t ex som 1-2 tabletter, under eller efter måltider, t ex 2-3 gånger per dag.

I uppfinningens slutliga komposition finns det normalt från 0,000l till 100 % (w/w), som från 0,001 till 90 % (w/w), protein från djuren i fråga. Den exakta mängden beror pà den specifika kompositionen och pà den specifika enzymaktiviteten per mg av animalt protein i enzympreparationen.

Proteinasaktiviteten i slutkompositionen kan variera från 0,1 - 0,000l enzymenheter per mg. Beroende på den använda enzympreparationens renhet kan andra intervall tillämpas.

Enzymenheterna ovan är givna som /umol tyrosinekvivalenter per min med kasein som substrat. a 454 566 Olika utföringsformer av uppfinningen kommer nu att illustre- ras av efterföljande exempel och framgår också av kraven som härmed bifogas den beskrivande delen av ansökan. I nâgra av exemplen har vätskor från magtarmkanalen använts. Sådana vätskor har uppsamlats från friska individer.

I exemplen är effekten av den enzymatiska digestionen på substratet uttryckt i procent av den initiala substratvikten.

Under varje experiment minskar substratvikten på grund av enzymatisk nedbrytning och ökar på grund av vattenadsorption.

Denna adsorption av vatten beror på graden av nedbrytning.

Positiva (+) värden står för en vätskande effekt ("liquefac- tion", viktsökning av vävnaden), under det att negativa (-) värden representerar en nedbrytningseffekt ("digestive effect", viktsminskning av vävnaden). Inkuberingstemperaturen var 37 OC. Substraten som valdes var kött (proteinrik vävnad) och fett (fettvävnad, adipos vävnad).

Beteckn Typ av effekt Degraderingsintervall ---- viktsminskning 76 - 100 % av vävnaden --- " 51 - 75 % "- -- " 26 - 50 % "- - " 1 - 25 % "- status quo 0 viktsökning 1 - 25 % "- ++ " 26 - 50 % "- +++ " 51 - 75 % “- ++++ " 76 - 100 % “- 454 566 10 EXEMPEL 1 A. Framställning av krillextrakt Krill, Eughausia sugerba, fångad under den antarktiska sommaren och omedelbart frusen och lagrad i omkring två år vid -80 OC, placeras i ett rum av +5 °C. När krillen nästan är upptinad blandas 25 g av krillen med 50 ml avjoniserat vatten som har en temperatur av O °C. Blandningen homogeni- seras och centrifugeras sedan i kyla (omkring 0 °C) i en halvtimma vid 12 500 g. Den röda överfasen dekanteras och sparas. Sedimentet âtersuspenderas i 50 ml avjoniserat vatten och centrifugeras som ovan. Den nya överfasen dekan- teras av och kombineras med överfasen från den första extraktionen.

För att avlägsna lipider från extraktet adderas 20 ml_CCl4 till den kombinerade överfasen och homogeniseras i kyla (0 OC). Blandningen centrifugeras vid 2 500 g i 15 minuter i kyla. Vattenfasen avlägsnas och extraheras en gäng till med CCl4 och centrifugeras som ovan. Vattenfasen frystorkas slutligen och användes enligt lB där den refereras till som vattenextraktet.

B. Ytterligare rening med gelkromatografi 20 ml av vattenextraktet från A kromatograferas pà SephadexR G-100 (dextran tvärbunden med epiklorhydrin, Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sverige) i en kolonn som har en diameter av 3,1 cm och höjd av 69 cm. Kolonnen jämviktas och elueras (30 ml per timme) med Tris-HCl buffert (0,05 M, pH 7,5) vid +5 OC. Fraktioner uppsamlas. Elueringsförloppet följes spektrofotometriskt genom att mäta UV adsorptionen vid 280 nm och den proteolytiska aktiviteten i fraktionerna bestämmes separat. De enzymatiskt aktiva fraktionerna sammanslås och dialyseras mot avjoniserat vatten. Slutligen frystorkas de sammanslagna fraktionerna och användes 454 566 11 enligt uppfinningen. Den proteolytiska aktiviteten i frak- tionerna och i den frystorkade preparationen bestämmes med hemoglobin och/eller kasein som substrat (Rick, W I: Methods of Enzymatic analysis; Ed Bergmeyer, H U; vol 2, s. 1013-23 (1974); Academic Press, New York). Genom att utföra gelkroma- tografi àtervinnes enzymaktivitet huvudsakligen från frak- tioner som svarar mot molekylvikterna 20 000 till 40 000 daltons. Ingen avgörande proteinolytisk aktivitet kunde upptäckas i fraktionerna svarande mot molekylvikterna lägre än 15 000 och högre än 80 000 daltons.

C. Framställníng av ràextrakt av krill 60 g krill, Euphausia superba, homogeniseras med 100 ml vatten. Krillkvaliteten och metoden är desamma som i exempel 1A. Efter homogeniseringen centrifugeras blandningen i kyla (omkring 0 OC) i en halvtimma vid 12 500 g. Överfasen dekanteras, fryses och användes i exempel 3 och 13.

EXEMPEL 2 Framställning av råextrakt från lodde Lodde (Mallotus villosus) fångad vid kusten av Finnmark (Norge) under september månad frystes och lagrades vid -20 OC i ett år. Den frusna lodden placerades vid +5 OC.

Efter 24 timmar avlägsnades tarmarna inkluderande matsmält- ningskanalen från den delvis upptinade lodden. 60 g av tarmarna blandades med 100 ml avjoniserat vatten och homo- geniserades vid 0 OC. Blandningen centrifugerades sedan vid 12 500 g i en halvtimme. Den delvis grumliga överfasen dekanterades, frystes och användes i exempel 3 och 13. 454 566 n EXEMPEL 3 Bestämning av proteolytisk- (= proteinas), amylas- och ligasaktivitet Dessa tre aktiviteter bestämdes för det råa krillextraktet (Exempel 1C), det råa loddeextraktet (Exempel 2) och Pankreonk (3 g PankreonR upplöst i 60 ml avjoniserat vatten). De erhållna värdena och använda metoderna redovisas i Tabell 1.

Tabell 1 Enzym Proteolytisk aktivitetl) Amylas Lípas beredning aktivitetz) aktivitet3) TAME KASEIN 'nM fettsyra /uM tyr.ekv. /uM tyr.ekv. /uM substrat frisatt min-1 ml_1 ml_1 min_l ml_1 minfil ml'l Kríll 1,69 3,1 0,044 <3 Lodde 1,94 5,2 0,125 184 PankreonR 2,07 29,6 152 93 460 Alla värden har beräknats från lösningar med en proteínkoncen- ) tration av 10 mg per ml mätt med metoden enligt Lowry4 .

Referenser 1) Rich, W.

Methods of enzymatic analysis, Vol. 2, s. 1013 Academic Press, New York, 1974. 2) Ceska, M., Hultman, E. and Ingelman, B.

Experientia 25(l969) s. 555. m; u 454 566 3) Fredrikzon, B. and Bläckberg, L.

Pediatric Research l4(l980) s. 1387. 4) Lowry, H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L. and Randall, R.J.

J. Biol. Chem. 193(l95l) s. 265.

EXEMPEL 4 Effekten av krillenzymer på köttdigestion Fruset kött (rätt) skars i smá bitar, tinades och portione- rades upp. Varje portion (0,1-0,2 g) vägdes och sattes till 1 ml nypreparerad enzymlösning (testlösning) innehållande antingen frystorkad krillenzympreparation 0,01 eller 0,001 g/ml (fràn Exempel la) eller venkreenR, o,ol eller o,oo1 g/ml (Kali-Chemie GmbH, Hannover, Germany). Testlösningarna framställdes genom att lösa upp enzympreparationen i fråga i destillerat vatten. De förvägda köttstyckena infördes i testlösningarna och inkuberades för varierande tidsperioder (se Tabell 2). Efter exponeringen lades köttet på ett filtrerpapper under 15 sekunder, varefter dess vikt bestämdes.

Vid okulärbesiktning befanns att krillenzymerna omvandlade köttet pà ett sätt som var skilt från PankreonR. Som kontroller tjänade köttstycken inkuberade i vatten under identiska experimentella förhållanden. 454 566 14 Tabell 2 P Viktsminskning (-) (“digestive effect“) resp viktsökning (+) (“liquefaction Enzym Konc effect“) efter 2-14 timmar som komposition g/ml procent av utgângsvärdena 2 4 6 8 10 12 14 ä? R Pankreon 0.01 +(+) + + + (-) - - 0.001 + + + + + + (+) Krill 0.01 + (+) (_) - -- --- ---(-) 0.001 + + + (+) (-) - - Kontroll ++ ++} ++ ++ ++ +(+) +(+) (vatten) Dessa resultat indikerar att med avseende pà nedbrytning av kött är den studerade krillenzympreparationen mer potent än PankreonR.

EXEMPEL 5 Effekten av krillenzymer på köttdigestion i närvaro av magsaft.

Samma procedur som i Exempel 4 med undantag av att enzym- preparationen löstes upp i magsaft i stället för i vatten. 15 i 454 566 Tabell 3 Viktsminskning (~) ("digestive effect') resp viktsökning (+) ("liquefaction Enzym Konc effect") efter 2-14 timmar som komposition g/ml procent av utgângsvärdena 2 4 6 8 10 12 14 Krill 0.01 + (+) - -- --- ------ -- 0.001 ++ + + - -(-) -- ---(-) Kontroll ++ +(+) + (-) - -(-) -- (magsaft) Resultaten i Exempel 4 och 5 indikerar att nyuppsamlad magsaft potentierar den studerade effekten som utövas av krillenzymerna. Denna synergistiska effekt kvarstår under hela perioden (14 timmar) vilket betyder att krillenzymerna är stabila under dessa förhållanden. Preliminära resultat för PankreonR sammanfaller med informationen från dess tillverkare som säger att dess effekt i magsaft är dålig.

EXEMPEL 6 Effekten av krillenzymer på protein digestion i närvaro av en blandning av magsaft från magen och tolvfingertarmen Samma förfarande som i Exempel 4 med undantag av att enzym- kompositionen löstes upp i en färsk blandning av safter från magen och tolvfingertarmen i stället för vatten. 454 566 16 Tabell 4 Viktsmínskning (-) (“digestíve effect”) resp viktsökning (+) ("1iquefaction Enzym Konc effect") efter 2-14 timmar som komposition g/ml procent av utgångsvärdena 2 4 6 8 10 12 14 Krill 0.01 +(+) (-1 - -- --- ------ -- 0.00l ++ + (-) -(-) -- -- --- Kontroll (mag-/to1vfingertarms- saft) ++ ++ + (+) -(-) -- -- Dessa resultat och slutsatserna därav är analoga med de i Exempel 5.

EXEMPEL 7 Effekten av krillenzymer på digestionen av fettvävnad Samma förfarande som i Exempel 4 med undantag av att köttet har ersatts med naturligt fett (rått, fettvävnad) som substrat för enzymerna. 454 566 17 Tabell 5 Víktsminskning (~) ("digestive effect“) resp viktsökning (+) (”liquefaction Enzym Konc effect") efter 2-14 timmar som komposition g/ml procent av utgângsvärdena 2 4 6 8 10 12 14 Krim olo1 + + (_) _ -(-) --~ _- 0.001 + + + + (+) - - PankreonR 0.01 + + + + + + + 0.001 + + + + + + + Kontroll + + + + + + + (vatten) Dessa resultat demonstrerar krillenzymernas höga effektivi- tet med avseende pâ sönderdelning av fettvävnad.

EXEMPEL 8 Effekten av krillenzymer pà digestion av fettvävnad i närvaro av magsaft Samma förfarande som i Exempel 7 med undantag av att enzym- preparationerna löstes upp i magsaft i stället för i vatten. 454 566 1a Tabell 6 i Viktsminskníng (-) (”digestive effect") resp viktsökning (+) ("liquefaction Enzym Konc effect") efter 2-14 timmar som procent komposition g/ml av utgångsvärdena före exponeringen 2 4 6 8 10 12 14 Krill 0.01 - -- ---(-) ---- ---- ---- ---- o.oo1 - -- --- --- ---- ---- ---- Kontroll (-) - -- --- ---- ---- ---- (magsaft) Resultaten i Exempel 7 och 8 visar att nyuppsamlad magsaft potentierar den studerade effekten som uppvisas av krill- enzymerna. Den synergistiska effekten kvarstår under hela försöksperioden vilket betyder att krillenzymerna är stabila under dessa förhållanden. Preliminära resultat med avseende på PankreonR är liknande dem som erhållits i Exempel 5.

EXEMPEL 9 Effekten av krillenzymer på digestionen av fettvävnad i närvaro av mag-/tolvfingertarmssaft Samma förfarande som i Exempel 7 med undantag av att enzym- preparationerna löstes upp i en färsk blandning av safter fràn magen och tolvfingertarmen i stället för i vatten. 19 454 566 Tabell 7 Viktsminskninq (~) ("digestive effect') resp viktsökning (+) ("liquefaction Enzym Konc effect") på fett efter 2-14 timmar som komposition g/ml procent av utgàngsvärdena 2 4 6 8 10 12 14 xrill 0.01 - -- ---- ---- ---- ---- ---- 0.001 - -- --- --- ---- ---- ---- Kontroll - -- -- --- ---- ---- ---- (mag-/tolvfingertarms- saft) Dessa resultat och slutsatserna därav är analoga med de i Exempel 8. Preliminära resultat med PankreonR gav ingen betydande nedbrytning jämfört med kontrollen.

EXEMPEL 10 Effekten av krillenzymer på köttdigestion i närvaro av saliv Samma förfarande som i Exempel 4 med undantag av att enzym- preparationerna löstes upp i färsk saliv i stället för i vatten. 454 566 20 Tabell 8 Viktsminskning (-) (“digestive effect”) resp viktsökning (+) ('1iquefactíon Enzym Konc effect") på protein efter 2-14 timmar komposition g/ml som procent av initialvärdena 2 4 6 8 10 12 14 Krill 0.01 ++ + (+) - -(-) -- --(-) 0.001 ++ ++ ++ ++ +(+) + + Kontroll ++(+) +++ +++ +++ +++ +++ +++(+) (saliv) Dessa resultat åskådliggör en viktsminskning ("digestive effect") för den studerade krillenzympreparationen. Prelimi- nära resultat för PankreonR pekar bara mot en viktsökning ("liquefaction effect").

EXEMPEL 1 1 Effekten av krillenzymer på digestíonen av fettvävnad i närvaro av saliv Samma förfarande som i Exempel 10 med undantag av att substratet var fettvâvnad i stället för kött. n 454 566 Tabell 9 Viktsminskning (-) ("digestive effect') resp viktsökning (+) (”líquefaction Enzym _ Konc effect") på fettvävnad efter 2-14 timar komposition g/ml som procent av utgångsvärdena 2 4 6 8 10 12 14 Krill o.o1 + + (-) _ -_ --(-) --- 0.001 + + + + + + (+) Kontroll + + + + + + + (saliv) Dessa resultat är analoga med de i föregående exempel och betonar att de studerade krillenzymerna också kommer att uppvisa sin aktivitet i saliv (d v s i munnen).

EXEMPEL 12 Effekten av krillenzymer_pà fullhud från råtta (keratín, mucopolysackarider, elastine, fettvävnad) Hudbiopsier med vikt på omkring 50 mg exponerades för krillenzymer i koncentrationen av 0,01 g/ml. Efter en 24-tímmarsperiod var skinnbitarna helt nedbrutna och kunde inte längre ses i teströren. Samma koncentration av trypsin resulterade, efter samma tidsperiod, i ungefär 50 % ned- brytning. 454 566 22 EXEMPEL 13 f Nedbrytningseffekt ("digestive effect') utövad av råextrakt från krill och lodde Denna studie utfördes enligt Exempel 4 (för kött) och 7 (för fettvävnad). I testlösningarna hade PankreonR och krill- enzymerna ersatts med 1 ml av extraktet (tinat) som var framställt i Exempel IC respektive 2. Inget destíllerat vatten var tillsatt. Resultat (kött): Efter 8-10 timmar kunde en betydande viktsminskning ("digestive effect“) observeras för råextraktet från krill. Mönstret var liknande men svagare än i Exempel 4 (krillenzymer 0,001 q/ml). Det ràa loddeextraktet gav en lägre viktsminskning (“digestive effect") än motsvarande krillextrakt. I början av varje experiment kunde en viktsökning ("liquefaction“) observeras vilken var starkast för loddeenzymerna. Resultat (fettväv- nad): I början av varje experiment gav båda de studerade extrakten en kontinuerlig period av viktsökning ("lique- faction") (10 timmar för krillenzymerna och 12 timmar för loddeenzymerna). Efter denna tidsperiod kunde en betydande viktsminskning ("digestive effect") observeras, men bara för krillextraktet. Viktsminskningen ("digestive effect") för loddeextraktet befanns vara svag.

Claims (1)

1. 23 454 566 PATENTKRAV Farmaceutisk komposition, k ä n n e t e c k n a d av att den innehåller en verksam mängd av vattenlösliga proteinaser, som är kapabel att understödja sönderdelning av mat innehållande kött och/eller fettvävnad och som extraherats från ett vattenlevande djur valt av ordningen Eughausiaceae eller släktet Mallotus, för användning som hjälp vid nedbrytning av mat i vätskor från magtarm- kanalen. Farmaceutisk komposition enligt krav l, k ä n n e - t e c k n a d av att proteinaserna från djuren i fråga har molekylviker, i icke-aggregerad form, i intervallet från 15 000 till 80 000 daltons. Farmaceutisk komposition enligt krav 1, 2 eller 3, k ä n n e t e c k n a d av att den är formulerad som en tablett, ett granulat, en lösning, en kapsel, en pellet. Farmaceutisk komposition enligt nàgot av kraven l-3, k ä n n e t e c k n a d av att den innehåller ett tillsatsmedel valt ur gruppen som innehåller gallsyror, gallsalter, magsaft, tunntarmssaft och lipas.