SE453301B - ANTIHYPERCOLESTEROLEMIC MEDICINE, MONACOLINE K, PROCEDURES FOR PREPARING THEREOF, AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING THE SAME - Google Patents

Description

55 453 301 2 Föreliggande uppfinning avser vidare ett förfarande för fram- ställning av ett antihyperkolestrolemiskt medel benämnt monakolin K, vilket förfarande omfattar odling av en monakolin K-alstrande mikroorganism av släktet Monascus i ett därför avsett odlingsmedi- um. The present invention further relates to a process for the preparation of an antihypercholesterolemic agent called monacolin K, which process comprises culturing a monacolin K-producing microorganism of the genus Monascus in a culture medium intended for that purpose.

Föreliggande uppfinning avser likväl vidare en farmaceutisk komposition, som omfattar monakolin K i blandning med en farmaceu- tiskt godtagbar bärare eller ett farmaceutiskt godtagbart spädnings- medel.However, the present invention further relates to a pharmaceutical composition comprising monacoline K in admixture with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.

Höga kolesterolhalter i blodet är erkända såsom varande en av huvudorsakerna till kardiopati, såsom hjärtinfarkt eller arterio- skleros. Såsom resultat har átskillig forskning företagits med av- sikt att hämma kolesterolbiosyntesen och sålunda minska kolesterol- halterna i blodet. En sådan förening är ML-236, som är föremål för den brittiska patentskriften l 455 425. ML-236 alstras genom att od- la mikroorganismer av släktet Penícillium.High blood cholesterol levels are recognized as being one of the leading causes of cardiopathy, such as heart attack or arteriosclerosis. As a result, numerous studies have been conducted with the intention of inhibiting cholesterol biosynthesis and thus reducing cholesterol levels in the blood. One such compound is ML-236, which is the subject of British Patent Specification 1,455,425. ML-236 is produced by culturing microorganisms of the genus Penicillium.

Vid undersökning av svampar av släktet Monascus visade det sig, att dessa, speciellt Monascus ruber stam 1005 (FERM 4822), alstrade ett antihyperkolesteroiemiskt medel med väsentligt bätt- re aktivitet ün den för ML-236. Detta medel benämndes monakolin K.Examination of fungi of the genus Monascus showed that these, especially Monascus ruber strain 1005 (FERM 4822), produced an antihypercholesterolemic agent with significantly better activity than that of ML-236. This agent was called monacolin K.

Alla mikroorganismer av släktet Monascus, som är i stånd att alstra monakolin K,kan användas i förfarandet enligt föreliggande uppfinning. Speciellt användbara är stammar av Monascus ruber, speciellt Monascus ruber stam 1005 (FERM 4822 Monascus ruber stam l005 (FERM 4822) är en nyligen isolerad mikroorganism med följande mikrobiologiska egenskaper. Den isole- rades frän födoämnen, som alstrats i Thailand,och deponerades den l 16 februari 1979 under tillträdesnumret FERM 4822 i Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japan och under tillträdesnumret NRRL 12075 i the Agricultural Research Service, Northern Regional Research Laboratory, USA. 1. Tillväxt Å Tillväxten på ett potatis-glukos-agar-medium vid 25 OC är É snabb och diametern av kolonien uppnår 6 - 6,5 cm 10 dagar efter ympningen. kolonien är plan och ett relativt tunt grundskikt av hyfer utvecklas. Utveckling av lufthyfer är dålig; lufthyferna är vita och de flesta av dem är ulliga. Många cleistothecia bildas på grundskiktet av hyfer och blir rödaktigt bruna vid mognad. Både 40 ° 453 301 ytan och baksidan av kolonien är brun till rödaktigt brun i färg.All microorganisms of the genus Monascus capable of producing monacolin K can be used in the process of the present invention. Particularly useful are strains of Monascus ruber, especially Monascus ruber strain 1005 (FERM 4822 Monascus ruber strain l005 (FERM 4822) is a newly isolated microorganism with the following microbiological properties. It was isolated from foodstuffs produced in Thailand and deposited on February 16, 1979 under accession number FERM 4822 in the Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japan and under accession number NRRL 12075 in the Agricultural Research Service, Northern Regional Research Laboratory, USA. on a potato-glucose-agar medium at 25 ° C, É is fast and the diameter of the colony reaches 6 - 6.5 cm 10 days after inoculation.The colony is flat and a relatively thin base layer of hyphae develops.Development of air hyphae is poor; are white and most of them are woolly.Many cleistothecia form on the base layer of hyphae and turn reddish brown at maturity.Both 40 ° 453 301 the surface and back of the colony are brown to reddish brown in color.

Tillväxten på Sabourauds agarmedium vid 25 OC är mycket snabb och koloniens diameter uppnår 6-6,5 cm 10 dagar efter ympningen.The growth of Sabouraud's agar medium at 25 ° C is very fast and the colony diameter reaches 6-6.5 cm 10 days after inoculation.

Koloniens yta är mycket plan, och grundhyfer och lufthyfer ut- vecklas bättre än på potatis-glukos-agar-medlet. Antalet cleisto- thecia är mycket få. Koloniens yta är rödaktigt gul till rödak- tigt brun i färg och baksidan är rödaktigt brun till mörkt brun.The surface of the colony is very flat, and ground hyphae and aerial hyphae develop better than on the potato-glucose-agar agent. The number of cleistothecia is very few. The surface of the colony is reddish yellow to reddish brown in color and the back is reddish brown to dark brown.

OC är långsam och kolo- _ Tillväxten på havremjölsagar vid 25 niens diameter uppnår 1,5 - 2 cm 10 dagar efter ympningen. Kolo- nien är plan. Utveckling av lufthyfer och bildning av cleisto- thecia är båda mycket dåliga. Både ytan och baksidan av kolonien är mörkt röda till rödaktigt bruna i färg.OC is slow and colony- The growth of oatmeal agar at the diameter of the ni reaches 1.5 - 2 cm 10 days after inoculation. The colony is flat. Development of air hyphae and formation of cleistothecia are both very poor. Both the surface and the back of the colony are dark red to reddish brown in color.

Tillväxten på Czapeks agarmedium vid 25 OC är mycket långsam och koloniens diameter uppnår 1,6 - 1,8 cm lO dagar efter ympningen.The growth of Czapek's agar medium at 25 ° C is very slow and the colony diameter reaches 1.6 - 1.8 cm 10 days after inoculation.

Tillväxthastigheterna pa vardera av ovanstående medier vid 37 OC är väsentligen lika med de vid 25 OC. 2- Morfologiska egenskaper Cleistothecia är sfäriska och 30 - 60 um i iiameter: deras väggar är tunna och membranlika; deras stjälkar har skiljeväggar och består vardera av en hyf med diametern 5,5 4,5 um och längden lå - 80 um. Sporsäcken består av S sporer och är nästan sfärisk och försvinnande liten. Askosporerna är färgïösa och äggformiga eller ellipïoída. De har en storlek av 4-5 x 4-7 um och deras ytor är jäm- na. Konidierna är färglösa och sfäriska eller pyramidformiga; deras storlek är 6 - 9 x 6 - ll um, deras baser är stympade och deras väg- gar relativt tjocka och jämna. Konidierna är förenade basipetalt såsom en typ av mcristem atrospor. Konidioforen är lik en vegetativ hyf och är grenad eller ogrenad; konidierna bildas vid toppen. Myce- lierna är färglösa och grenade och har skiljeväggar; de flesta av dem har en diameter av 3-5 um.The growth rates of each of the above media at 37 ° C are substantially equal to those at 25 ° C. 2- Morphological properties Cleistothecia are spherical and 30 - 60 μm in diameter: their walls are thin and membrane-like; their stems have partitions and each consists of a hyphae with a diameter of 5.5 4.5 μm and the length was - 80 μm. The spore sac consists of S spores and is almost spherical and vanishingly small. The ascospores are colorful and ovoid or ellipid. They have a size of 4-5 x 4-7 μm and their surfaces are smooth. The conidia are colorless and spherical or pyramidal; their size is 6 - 9 x 6 - ll um, their bases are truncated and their walls are relatively thick and smooth. The conidia are joined basipetally as a type of Christian atrospore. The conidiophore is similar to a vegetative hyphae and is branched or unbranched; the conidia are formed at the top. The mycelia are colorless and branched and have partitions; most of them have a diameter of 3-5 μm.

Grundat på observationerna av dessa. kännetecken som rappor- terats ovan, identifierades denna mikroorganísm såsom en stam av Monascus ruber van Tieghem.Based on the observations of these. characteristics reported above, this microorganism was identified as a strain of Monascus ruber van Tieghem.

Nikrobiologiska egenskaper av Nonascus ruber har rapporterats i följande litteratur: Takada, Transactions of the Micological So- ciety of Japan, 2, 125-150 (1969) (Materials for the Fungus Flora of Japan (7)) och van Tieghem, Bull. Soc. Botan. France, ål, 327 (1884). Askosporalstring av stammen har rapporterats av Cole et al i the Canadian Journal of Botany, gg, 987 (1963), "C0flídíUm Ontogeny in hyphomycetes. The imperfect state of Monascus ruber /Ä _ zs 40 453 301 A and its meristem arthrospores." Fastän användningen av Monascus ruber stam 1005 härefter sär- skilt är exemplifierad, kommer det inses, att vilka stammar som helst av släktet Monascus omfattande varieteter och mutanter, som är i stånd att alstra monakolín K kan användas i förfarandet en- ligt föreliggande uppfinning.Nicrobiological properties of Nonascus ruber have been reported in the following literature: Takada, Transactions of the Micological Society of Japan, 2, 125-150 (1969) (Materials for the Fungus Flora of Japan (7)) and van Tieghem, Bull. Soc. Botan. France, eel, 327 (1884). Askosporal strain of the strain has been reported by Cole et al in the Canadian Journal of Botany, gg, 987 (1963), "C0 fl ídíUm Ontogeny in hyphomycetes. The imperfect state of Monascus ruber / Ä _ zs 40 453 301 A and its meristem arthrospores." Although the use of Monascus ruber strain 1005 is particularly exemplified hereinafter, it will be appreciated that any strains of the genus Monascus comprising varieties and mutants capable of producing monacolin K may be used in the process of the present invention.

Monakolin K kan alstras genom att odla den valda mikroorga- nismen i en odlingslösning under aeroba förhållanden under använd- ning av samma förfaranden som är välkända för fackmannen vid od- ling av svamp och andra mikroorganismer. Exempelvis kan den monako- lín K-alstrande mikroorganismen först odlas på ett lämpligt medium och sedan kan de alstrade mikroorganísmerna uppsamlas och inympas och odlas på ett annat odlíngsmedium för att alstra önskat monako- lin K; odlingsmedlet, som användes för mångfaldigande av mikroor- ganismen och för alstring av monakolín K kan vara lika eller olika.Monacoline K can be generated by culturing the selected microorganism in a culture solution under aerobic conditions using the same procedures well known to those skilled in the art of culturing fungi and other microorganisms. For example, the monocoline K-producing microorganism may first be cultured on a suitable medium and then the generated microorganisms may be collected and inoculated and cultured on another culture medium to produce the desired monacoline K; the culture agent used to propagate the microorganism and to generate monacolin K may be the same or different.

Varje odlíngsmedium välkänt för fackmannen för odling av svamp kan användas förutsatt att det innehåller, som är välkänt, de nöd- vändiga näringsmaterialen, speciellt en assimilerbar kolkälla och en assimilerbar kvävekälla. Exempel på lämpliga källor med assimilerbart kol är glukos, maltos, dextrin, stärkelse, laktos, sackaros och glycerol. Av dessa källor är glukos, glycerol och stärkelse speci- ellt lämpliga för alstring av monakolín K. Exempel på lämpliga källor av assimilerbart kväve är pepton, köttextrakt, jäst, jäst- extrakt, sojabönmjöl, jordnötsmjöl, majsstöpvatten, riskli och o- organiska kvävekällor. Av dessa kvävekällor är pepton speciellt lämpligt. När man alstrar monakolín K kan ett oorganískt salt och/ eller ett metallsalt, om så är nödvändigt,sättas till odlingsmediet.Any culture medium well known to those skilled in the art for growing fungi can be used provided that it contains, as is well known, the necessary nutrients, in particular an assimilable carbon source and an assimilable nitrogen source. Examples of suitable sources of assimilable carbon are glucose, maltose, dextrin, starch, lactose, sucrose and glycerol. Of these sources, glucose, glycerol and starch are particularly suitable for the production of monacolin K. Examples of suitable sources of assimilable nitrogen are peptone, meat extract, yeast, yeast extract, soybean meal, peanut meal, cornmeal, rice bran and inorganic nitrogen. Of these nitrogen sources, peptone is particularly suitable. When producing monacolin K, an inorganic salt and / or a metal salt may, if necessary, be added to the culture medium.

Dessutom kan om_såenfonhas en mindre mängd av en tungmetall även tillsättas.In addition, if a small amount of a heavy metal is also added, it can also be added.

Mikroorganismen odlas lämpligen under aeroba förhållande un- der användning av odlingsmetoder välkända för fackmannen, t ex odling i fast fas, skakodling eller odling under luftning och omröring. Mikroorganismen kommer att gro över ett brett tempera- turomráde, t ex fràn 7 till 40 OC, men speciellt för alstring av monakolín K ligger den mera lämpliga odlingstemperaturen inom om- rade: från zo :iii ss °c.The microorganism is suitably grown under aerobic conditions using culture methods well known to those skilled in the art, for example solid phase culture, shake culture or culture under aeration and agitation. The microorganism will germinate over a wide temperature range, eg from 7 to 40 ° C, but especially for the production of monacolin K, the more suitable culture temperature is in the range: from zo: iii ss ° c.

Under odling av míkroorganismen kan alstringen av monakolín k' registreras genom provtagning av odlingsmediet och mätning av den fysiologiska verkan av monakolín K i odlingsmediet genom testet, som beskrives härefter. Odling kan sedan fortsättas, till en vä- sentlig ackumulering av monakolín K har uppnåtts i odlingsmediet, 453 501 vid vilken tidpunkt monakolin K kan isoleras och utvinnas från od- lingslösningen genom vilken lämplig kombination av valda ísolerings- metoder som helst med hänsyn till dess fysikaliska och kemiska egen- skaper. Exempelvis kan vilken som helst eller alla av följande iso- leringsmetoder användas: extraktion av vätskan från odlingslösningen med ett hydrofilt lösningsmedel (t ex díetyleter, etylacetat, klo- roform eller bensen); extraktion av organismen med ett hydrofílt lösningsmedel (såsom aceton eller en alkohol); koncentrering: upp- lösning i ett mer polârt lösningsmedel (t ex aceton eller en al- ï0 kohol); borttagande aviïüormfingarmed ett mindre polärt lösningsme- del (såsom petroleumetcr eller hexan); gelfiltrering genom en ko- lonn av ett material såsom Sephadex® (ett olösligt hydrofilt ämne som framställts genom tvärbindning av dextran och som är tillgängligt från Pharmacia, Co. Ltd, USAJ; absorptiv kromatografi med aktivt kol eller silikagel; osv. Genom att använda en lämplig kombination av dessa metoder, kan önskat monakolín K isoleras från odlingsbul- jongen såsom en ren substans.During culture of the microorganism, the generation of monacolin k 'can be recorded by sampling the culture medium and measuring the physiological effect of monacolin K in the culture medium by the test described below. Cultivation can then be continued until a substantial accumulation of monacolin K has been achieved in the culture medium, at which time monacolin K can be isolated and recovered from the culture solution by any suitable combination of selected isolation methods taking into account its physical and chemical properties. For example, any or all of the following isolation methods may be used: extraction of the liquid from the culture solution with a hydrophilic solvent (eg diethyl ether, ethyl acetate, chloroform or benzene); extraction of the organism with a hydrophilic solvent (such as acetone or an alcohol); concentration: dissolving in a more polar solvent (eg acetone or an alcohol); removing aviïüorm fi ngar with a less polar solvent (such as petroleum ether or hexane); gel filtration through a column of a material such as Sephadex® (an insoluble hydrophilic substance prepared by crosslinking dextran and available from Pharmacia, Co. Ltd, USAJ; absorbent chromatography with activated carbon or silica gel; etc. Using a suitable combination of these methods, the desired monacolin K can be isolated from the culture broth as a pure substance.

Monakolin K har visat sig ha följande egenskaper: l. Färg och form: Färglösa kristaller 2. Smältpunkt: 157-159°C (med sönderdelning) 3. Elementaranalysz C, 71,56 %; H, 8,85 %; 0, 19,59 %. 4. Molekylvikt: 404 (genom masspektrometri) . Molekylformelz C H O 24 36 5' 6. Ultraviolett absorptionsspektrum (metanol): Såsom visas i figur 1 i vidföljande ritningar med maxima vid 232, 238 och 246 nm. 7. lnfrarött absorptionsspektrum (KBr): Såsom visas i figur 2 i vidföljande ritningar. 8. Kärmagnetiskt resonansspektrum (60 MHz proton): Såsom visas i figur 3 i vidföljande ritningar i denaturerad kloroform under användning av tetrametylsilan såsom inre standard. 9. Kärnmagnetiskt resonansspektrum (13C): Såsom visas i figur 4 i vidföljande ritningar i denaturerad 40 metanol.Monacolin K has been found to have the following properties: 1. Color and shape: Colorless crystals 2. Melting point: 157-159 ° C (with decomposition) 3. Elemental analysis C, 71.56%; H, 8.85%; 0, 19.59%. Molecular Weight: 404 (by mass spectrometry). Molecular formula C H O 24 36 5 '6. Ultraviolet absorption spectrum (methanol): As shown in Figure 1 of the accompanying drawings with maxima at 232, 238 and 246 nm. 7. Infrared Absorption Spectrum (KBr): As shown in Figure 2 of the accompanying drawings. Nuclear Magnetic Resonance Spectrum (60 MHz Proton): As shown in Figure 3 of the accompanying drawings in denatured chloroform using tetramethylsilane as internal standard. Nuclear Magnetic Resonance Spectrum (13C): As shown in Figure 4 of the accompanying drawings in denatured methanol.

. Löslíghetz Löslig i lågalkoholer (t ex metanol, etanol och propnnol), 40 453 301 aceton, kloroform, etylacetat och bensen.. Soluble heat Soluble in lower alcohols (eg methanol, ethanol and propanol), acetone, chloroform, ethyl acetate and benzene.

Olöslig i petroleumeter och hexan. ll. Specifík vridning: (al äs = + 307,6 (c = l, metanol)._ 12. Tunnskiktskromatografi Rf = O,47(Nr. S715 Kiselgel 60F254 silikagel (Merck & Co., Ltd) framkallad av en 4:1 i volym blandning av metylenklorid och ace- ton, püvisbar såsom en ultraviolett strâlningsabsorberande mas- sa, 50 % volym/volym svavelsyra (en blekt röd till rödaktigt brun färg framkallas vid upphettning) eller med jod).Insoluble in petroleum ether and hexane. ll. Specific rotation: (al ε = + 307.6 (c = 1, methanol) ._ 12. Thin layer chromatography Rf = 0.47 (No. S715 Silica gel 60F254 silica gel (Merck & Co., Ltd) developed from a 4: 1 i volume mixture of methylene chloride and acetone, püvisbar as an ultraviolet radiation-absorbing mass, 50% v / v sulfuric acid (a pale red to reddish brown color is produced on heating) or with iodine).

Föreningen är neutral och är olöslig i neutralt och surt vat- tenhaltigt medium. Den omvandlas till en sur substans vid behand- ling med ett alkali och kan sedan upplösas i vatten. Denna sura substans kan extraheras med etylacetat eller klorofom vid surt pH-värde och kommer att återgå till monakolin K vid indunstníng av lösningsmedlet.The compound is neutral and is insoluble in neutral and acidic aqueous medium. It is converted to an acidic substance during treatment with an alkali and can then be dissolved in water. This acidic substance can be extracted with ethyl acetate or chloroform at acidic pH and will return to monacoline K on evaporation of the solvent.

Den fysiologiskaveflænravnnnakolin K kan prövas och bestämmas kvantitativt genom följande in vivo försök.The physiologically correct α-rav-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α-α.

In vivo försök med kaniner I detta försök mätes förmågan av monakolin K att minska kole- sterolhalterna i kaninblod. De använda djuren skall väga från 2,5 tíll3ß1qLOmedäbart innan början av försöket uppsamlas blod från venen i ett öra hos varje kanin och kolesterolhalten i blod- serumet mätes med en konventionell metod. En förutbestämd kvan- titet av monakolin K administreras sedan oralt kontinuerligt i 1 till 5 dagar och kolesterolhalten i blodserumet efter administre- ring mätes. Styrkan av monakolin K eller det monakolin K - inne- hållande odlingsmediet kan bestämmas kvantitativt från kolesterol värdena, som erhålles innan och efter administrering av monakolin K.In vivo experiments with rabbits In this experiment, the ability of monacoline K to reduce the cholesterol levels in rabbit blood is measured. The animals used should weigh from 2.5 to 3ß1qLOmedible before the start of the experiment, blood is collected from the vein in an ear of each rabbit and the cholesterol level in the blood serum is measured by a conventional method. A predetermined quantity of monacolin K is then administered orally continuously for 1 to 5 days and the cholesterol level in the blood serum after administration is measured. The potency of monacolin K or the monacolin K-containing culture medium can be determined quantitatively from the cholesterol values obtained before and after administration of monacolin K.

Förmågan av monakolin K att sänka kolesterolhalterna i blod och lever har visats genom olika in vivo-försök.The ability of monacoline K to lower cholesterol levels in the blood and liver has been demonstrated through various in vivo experiments.

Reduktion av kolesterolhalterna i blod hos råttor._ Använda djur var råttor av Wistar Imamichi-stammen, vardera med en kroppsvikt på ca 300 g. Försöken utfördes pà grupper av råttor, varje grupp bestående av 5 djur. Varje djur injicerades intravenöst med 400 mg/kg Triton-WR-l359® (ett material känt att öka kolesterolhalten i blod), under samtidig administrering intra- peritonealt av 10 mg/kg monakolin K. 14 timmar efter intraperito- ,_~ ___* s ra-.fw ~_.-..,.___, UI UI 40 7 _ , _ __ 453 301 neal administrering dodades ráttorna genom förblödning och blodet uppsamlades och dess kolesterolhalt bestämdes på konventionellt blodet hade reducerats med 23,9 % jämfört med en kontrollgrupp av djur, sätt. Såsom resultat fastställdes att kolesterolhalterna i till vilken Triton WR-l339® ensamt hade administrerats.Reduction of blood cholesterol levels in rats. The animals used were rats of the Wistar Imamichi strain, each with a body weight of about 300 g. The experiments were performed on groups of rats, each group consisting of 5 animals. Each animal was injected intravenously with 400 mg / kg of Triton-WR-l359® (a material known to increase blood cholesterol), with co-administration intraperitoneally of 10 mg / kg of monacolin K. 14 hours after intraperitoneal, _ ~ ___ * s ra-.fw ~ _.- .., .___, UI UI 40 7 _, _ __ 453 301 neal administration, the rats were killed by bleeding and the blood was collected and its cholesterol content determined on conventional blood had been reduced by 23.9% compared to a control group of animals, manner. As a result, it was determined that the cholesterol levels to which Triton WR-1333® alone had been administered.

Reduktion av kolesterolhalterna i blod hos kaniner.Reduction of blood cholesterol levels in rabbits.

Använda försöksdjur var kaniner med en kroppsvikt från 2,? kg till 2,9 kg. Varje kanin gavs oralt l mg/kg monakolin K två gånger varje dag (morgon och kväll) kontinuerligt i 5 dagar. Innan admi- nístreríngen och 3 till 5 dagar efter administreringen uppsamla- des blod från en Såsom ven i örat och kolesterolhalterna i blodserumet bestämdes. ett resultat visade det sig att kolesterolhalter- och 5 dagar efter administreringen av monakolin K var 15 29 % lagre än halten innan administreringen av monako- na 3 respektive lin K.Experimental animals were rabbits with a body weight of 2 ,? kg to 2.9 kg. Each rabbit was orally given 1 mg / kg monacolin K twice daily (morning and evening) continuously for 5 days. Before administration and 3 to 5 days after administration, blood was collected from a vein in the ear and the cholesterol levels in the blood serum were determined. as a result, it was found that cholesterol levels and 5 days after the administration of monacolin K were 29% lower than the level before the administration of monacons 3 and flax K, respectively.

Förutom dess värdefulla hammande verkan på hiosyntesen av kolesterol har monakolin K en mycket lag toxicitet. Sålunda är den akuta orala toxiciteten (LDSU) av monakolin K för mus l g/kg kropps- vikt eller mera.In addition to its valuable inhibitory effect on the biosynthesis of cholesterol, monacolin K has a very low toxicity. Thus, the acute oral toxicity (LDSU) of monacolin K for mice is 1 g / kg body weight or more.

Monakolin K kan administreras oralt eller parenteralt i form av en kapsel, tablett, injicerbart preparat eller vilken annan känd beredning som helst, fastän man normalt föredrar att administrera den oralt. Dosen kommer att variera, beroende pa patientens ålder och kroppsvikt och tillstândets allvar men i allmänhet skulle den dagliga dosen för en vuxen vara fran 0,5 till 50 mg, antingen som en enda dos eller 2 eller 3 delade doser. Med hänsyn till förening- ens laga toxicitet kan emellertid högre doser användas, om sz behövs.Monacolin K can be administered orally or parenterally in the form of a capsule, tablet, injectable preparation or any other known preparation, although it is normally preferred to administer it orally. The dose will vary depending on the age and body weight of the patient and the severity of the condition but in general the daily dose for an adult would be from 0.5 to 50 mg, either as a single dose or 2 or 3 divided doses. However, due to the legal toxicity of the compound, higher doses may be used if sz is needed.

Föreliggande uppfinning belyses ytterligare med följande inte begränsande exempel.The present invention is further illustrated by the following non-limiting examples.

Exempel Monascus ruber stam 1005 ympades pa ett vatskeformigt od- lingsmedium, som innehöll 6 % vikt/volym glukos, % vikt/volym pepton, 0,5 $ vikt/volym majsstöpvätska och 0,5 $ vikt/volym ammo- níumklorid. Odling fortsattes under aeroba förhållanden vid en V av 28 OC i 10 dagar. Erhallet filtrat (5 liter) av od- 3 genom tillsats , , _,5 temperatur lingslösningen reglerades till ett pH-värde av av 6 N saltsyra och extraherades sedan med en lika volym av etyl- acetat. Lösningsmedlet indunstades under reducerat tryck från ex- traktet och erhållen återstod löstes i 100 ml bensen. Olösliga ma- 40 453 301 terial avfiltrcrades.Example Monascus ruber strain 1005 was inoculated on a liquid culture medium containing 6% w / v glucose,% w / v peptone, 0.5% w / v corn steep liquor and 0.5% w / v ammonium chloride. Cultivation was continued under aerobic conditions at a V of 28 ° C for 10 days. The resulting filtrate (5 liters) of the culture solution was adjusted to a pH of 6 N hydrochloric acid and then extracted with an equal volume of ethyl acetate. The solvent was evaporated under reduced pressure from the extract and the resulting residue was dissolved in 100 ml of benzene. Insoluble material was filtered off.

Filtratet tvättades sedan tvâ gånger, var gång med 100 ml av en 5 % vikt/volym vattenhaltig lösning av natriumbikarbonat. 100 ml av en 0,2 N vattenhaltig lösning av natriumhydroxid sattes sedan till det tvättade filtratet och blandningen omrördes vid rumstem- peratur. Efter bestämning av försvinnandet av monakolin K från ben- senskíktet genom tunnskiktskromatografí, separerades det vatten- haltiga skiktet_ pH-värdet hos det vattenhaltiga skiktet reglera- des sedan till 5 genom tillsats HVÖN saltsyra och erhàllen lösning extraherades två gånger, var gång med 100 ml etylacetat. Extraktet indunstades till torrhet under reducerat tryck för att ge 260 mg av en olja. Denna olja löstes i bensen och tilläts kristallisera och omkristalliserades sedan frán_en vattenhaltig acetonlösníng för att ge S7 mg färglösa nålar av monakolin K med tidigare be- skrivna egenskaper.The filtrate was then washed twice, each time with 100 ml of a 5% w / v aqueous solution of sodium bicarbonate. 100 ml of a 0.2 N aqueous solution of sodium hydroxide was then added to the washed filtrate and the mixture was stirred at room temperature. After determining the disappearance of monacoline K from the benzene layer by thin layer chromatography, the aqueous layer was separated. The pH of the aqueous layer was then adjusted to 5 by adding HVON hydrochloric acid and the resulting solution was extracted twice, each time with 100 ml of ethyl acetate. . The extract was evaporated to dryness under reduced pressure to give 260 mg of an oil. This oil was dissolved in benzene and allowed to crystallize and then recrystallized from an aqueous acetone solution to give S7 mg of colorless needles of monacolin K with previously described properties.

Claims (5)

9 453 301 Patentkrav9,453,301 Patent claims 1. Förening till awvärdning som ett antihyperkolesterolemiskt medel och ett antihypnrlipemiskt medel, kännetecknad därav, att den utgöres av monakolin K med formeln eller denna förening i form av den fria syran eller ett salt därav.A compound for dehydration as an antihypercholesterolemic agent and an antihyprolipemic agent, characterized in that it is monacoline K of the formula or this compound in the form of the free acid or a salt thereof. 2. Förfarande för framställning av ett antihyperkolesterolemiskt medel betecknat monakolin K med formaln Ä? 7 8\ I i 3 . ° \ \/\\ 5 f] kännetecknat därav, att en monakolin K-alstrande mikroorganism av släktet Monascus odlas i ett lämpligt näringsmedium inne- hållande åtminstone en assimilerbar kolkälla och en assimiler- bar kvävekälla. 102. Process for the preparation of an antihypercholesterolemic agent designated monacolin K with the formula Ä? 7 8 \ I i 3. Characterized in that a monacoline K-producing microorganism of the genus Monascus is grown in a suitable nutrient medium containing at least one assimilable carbon source and one assimilable nitrogen source. 10 3. är en stam av Monascus ruber. Förfarande enligt krav 2, kännetecknat av att mikroorganismen3. is a strain of Monascus ruber. Method according to claim 2, characterized in that the microorganism 4. Förfarande enligt någon av kraven 2-3, kännetecknat därav, att odlingen utföres vid en temperatur från 7 till 4OOC. 5. Förfarande enligt krav 4, kännetecknat därav, att temperaturen är från 20 till 3s°c.Method according to one of Claims 2 to 3, characterized in that the cultivation is carried out at a temperature of from 7 to 40 ° C. Process according to Claim 4, characterized in that the temperature is from 20 to 3 ° C. 5. Farmaceutisk komposition, som omfattar en aktiv beståndsdel i blandning med en farmaceutiskt godtagbar bärare eller ett farmaceutiskt godtagbart spädningsmedel, kännetecknad därav, att den aktiva beståndsdelen är monakolin K med formelnPharmaceutical composition comprising an active ingredient in admixture with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent, characterized in that the active ingredient is monacoline K of the formula