SE452318B - AMINO ACIDS FOR USE AS INTERMEDIATES IN THE PRODUCTION OF BESTATIN - Google Patents

Description

452 318 3 2 1 2' 1' RI - çn - gu - co - NH - çn - coon (I) NH2 on R2 där R1 är en grupp vald bland en isobutylgrupp, en osubstituerad bensylgrupp eller en bensylgrupp substituerad med en kloratom eller en metylgrupp, och R2 är en grupp vald bland väte, alkylgrupp med 1-6 kolatomer, hydroximetylgrupp, karboxamidoetylgrupp, metylmer- kaptoetylgrupp, karboxietylgrupp, bensylgrupp (se svenska patentskriften 7606736-2). När Él är en bensylgrupp och R2 är en isobutylgrupp är föreningens konfiguration (2S, 3R, 2'R), (2S, 3S, 2'S) eller (2S, 3S, 2'R)- Bestatin är (2S, 3R)-3-amino-2-hydroxi-4-fenyl-butanoyl-(S)- -leucin, som är en förening betecknad med formeln (I), vari R1 är en bensylgrupp och R2 är en isobutylgrupp. Klassen av före- ningar, som inbegriper Bestatin, vilken kan framställas ur ett kulturmedium av Bestatin-producerande svampar tillhörande actinomyces, är nya föreningar och har befunnits ha ovannämnda fysiologiska aktiviteter. Wherein R 1 is a group selected from an isobutyl group, an unsubstituted benzyl group or a benzyl group substituted with a chlorine atom or a carbon monoxide (R) - R 1 - R 1 - gu - co - NH - çn - coon (I) NH 2 on R 2 methyl group, and R 2 is a group selected from hydrogen, alkyl group having 1-6 carbon atoms, hydroxymethyl group, carboxamidoethyl group, methylmercaptoethyl group, carboxyethyl group, benzyl group (see Swedish patent specification 7606736-2). When E 1 is a benzyl group and R 2 is an isobutyl group, the configuration of the compound is (2S, 3R, 2'R), (2S, 3S, 2'S) or (2S, 3S, 2'R) - Bestatin is (2S, 3R) -3 -amino-2-hydroxy-4-phenyl-butanoyl- (S) -leucine, which is a compound represented by formula (I), wherein R 1 is a benzyl group and R 2 is an isobutyl group. The class of compounds, which includes Bestatin, which can be prepared from a culture medium of Bestatin-producing fungi belonging to actinomyces, are new compounds and have been found to have the above-mentioned physiological activities.

Föreningarna med formel (I) framställes på följande sätt: ett nitrilderivat betecknat med formeln (II) R - çn - en - CN NH OH 1 (II) 2 där Rl är en grupp såsom definieras ovan eller ett nitrilderi- vat, vars amínogrupp är skyddad, hydrolyseras med en syra för framställning av aminosyran med formeln (III) Rl - QH - QH - COOH NH2 OH (III) där R1 är en grupp, såsom definierats ovan. Efter att om så är nödvändigt ha skyddat de funktionella grupperna, vilka inte deltar i reaktionen, kondenseras denna aminosyra och aminosyran med formeln (IV) 3 452 318 Na -ca-coon 2 .The compounds of formula (I) are prepared as follows: a nitrile derivative represented by the formula (II) R - çn - en - CN NH OH 1 (II) 2 wherein R 1 is a group as defined above or a nitrile derivative, the amino group of which is protected, hydrolyzed with an acid to produce the amino acid of formula (III) R 1 - QH - QH - COOH NH 2 OH (III) wherein R 1 is a group as defined above. After protecting, if necessary, the functional groups which do not participate in the reaction, this amino acid and the amino acid of formula (IV) Na 45 -Cacoon 2 are condensed.

RZ (rv) där R2 är en grupp, såsom definierats ovan, i den vanliga peptid- bindningsmetoden. När de skyddade grupperna avlägsnas erhålles föreningarna med formeln (I).R 2 (rv) wherein R 2 is a group, as defined above, in the conventional peptide binding method. When the protected groups are removed, the compounds of formula (I) are obtained.

Typiska exempel på nitrilderivat, representerade med formel (II), är 3-amino-2-hydroxi-5-metylhexanonitril, 3-amino-2-hydroxi- -4-p-klorfenyl-butyronitril, 3-amino-2-hydroxi-4-fenylbutyro- nitril, 3-amino-2-hydroxi~4-o-klorfenylbutyronitril och 3-amino- -2-hydroxi-4-p-metylfenylbutyronitril. Vilken känd aminoskyd- dande grupp som helst, såsom de som användes inom peptidkemin, kan användas för skyddande av aminogrupperna. Föredragna exem- pel på aminoskyddande grupper av acyltyp är en formylgrupp, en acetylgrupp, en trifluoroacetylgrupp, substituerad eller osubstitue- rad bensoylgrupp; exempel pá aminoskyddande grupper av uretantyp är substituerade eller osubstituerade bensyloxikarbonyler, alkoxikarbonylgrupp med 1-6 kolatomer och cykloalkanoxikarbony1~ grupp; föredragna exempel pá andra aminoskyddande grupper är substituerad eller osubstituerad arylsulfonylgrupp, ftalylgrupp, o-nitrofenylsulfenylgrupp eller tritylgrupp. Vilken typ som helst av syror, som vanligen användes för hydrolysering av nitriler, kan användas i föreliggande uppfinning för hydrolys.Typical examples of nitrile derivatives, represented by formula (II), are 3-amino-2-hydroxy-5-methylhexanonitrile, 3-amino-2-hydroxy-4-p-chlorophenyl-butyronitrile, 3-amino-2-hydroxy- 4-phenylbutyronitrile, 3-amino-2-hydroxy-4-o-chlorophenylbutyronitrile and 3-amino--2-hydroxy-4-p-methylphenylbutyronitrile. Any known amino protecting group, such as those used in peptide chemistry, can be used to protect the amino groups. Preferred examples of acyl type amino protecting groups are a formyl group, an acetyl group, a trifluoroacetyl group, substituted or unsubstituted benzoyl group; examples of urethane-type amino-protecting groups are substituted or unsubstituted benzyloxycarbonyls, alkoxycarbonyl group having 1 to 6 carbon atoms and cycloalkanoxycarbonyl group; preferred examples of other amino protecting groups are substituted or unsubstituted arylsulfonyl group, phthalyl group, o-nitrophenylsulfenyl group or trityl group. Any type of acids commonly used for hydrolyzing nitriles can be used in the present invention for hydrolysis.

Exempel pà oorganiska syror inbegriper klorvätesyra, bromväte- syra och svavelsyra; exempel på organiska syror inbegriper alkylsulfonsyror, såsom metansulfonsyra, etansulfonsyra, arylsulfonsyra, såsom bensensulfonsyra och toluensulfonsyra.Examples of inorganic acids include hydrochloric acid, hydrobromic acid and sulfuric acid; examples of organic acids include alkylsulfonic acids such as methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, arylsulfonic acid such as benzenesulfonic acid and toluenesulfonic acid.

Koncentrationen av dessa syror kan ligga på vilken nivá som helst, som är användbar för hydrolysering av ordinära nitriler.The concentration of these acids can be at any level useful for hydrolyzing ordinary nitriles.

Emellertid föredrages en koncentration av över lN.However, a concentration of over 1N is preferred.

Till de föreningar, vars aminogrupp skyddats, och vilka inte lätt löses i vattenlösningen av syran, kan ett organiskt lösningsmedel, som kan vara blandbart med vatten, såsom tetra- hydrofuran, dioxan, lägre alkoholer, aceton, dimetylformamid, dimetylacetamid och dimetylsulfoxid, sättas för att främja lösligheten av föreningarna i vattenlösningen. 452 318 4 Om en skyddande grupp användes och den skyddande gruppen avlägsnas under hydrolysen för att bilda elektrofila kroppar, kan ett katjonrengöringsmedel, såsom anisol, tillsättas.To those compounds whose amino group is protected and which do not readily dissolve in the aqueous solution of the acid, an organic solvent which may be miscible with water such as tetrahydrofuran, dioxane, lower alcohols, acetone, dimethylformamide, dimethylacetamide and dimethylsulfoxide may be added. to promote the solubility of the compounds in the aqueous solution. If a protecting group is used and the protecting group is removed during the hydrolysis to form electrophilic bodies, a cation cleaning agent such as anisole may be added.

Hydrolystemperaturen kan vara på vilken nivå som helst inom området från rumstemperatur till den temperatur, vid vilken reaktionsblandningens återflöde inträder. För att isolera den önskade aminosyran från reaktionsblandningen kan en vanlig metod för isolering av aminosyror användas. Exempelvis när hydrolysen genomföres med en flyktig syra, kan överskottet av syra avlägsnas genom koncentrering av reaktionsblandningen under reducerat tryck och återstoden löses i vatten och neutra- liseras med vattenhaltig alkalilösning tills den isoelektriska punkten uppnås. Om så är nödvändigt tillsättes därefter aceton, metanol eller etanol till reaktionsblandningen för att kristal- lisera den avsedda föreningen, betecknad med formel (III), vilken därefter separeras genom filtrering. I annat fall, när en oflyktig syra användes, utspädes reaktionsblandningen med vatten till en koncentration av mindre än 1N syra och får passera genom ett starkt surt jonbytarharts, så att den önskade aminosyran kan adsorberas på jonbytarhartset. Den adsorberade aminosyran elueras från jonbytarhartset med ett flyktigt alkali, såsom ammoniakvatten, och kondenseras under reducerat tryck. Om så är nödvändigt tillsättes aceton, metanol eller etanol för att kristallisera den avsedda föreningen, betecknad med formel (III), vilken därefter separeras genom filtrering.The hydrolystem temperature can be at any level in the range from room temperature to the temperature at which the reflux of the reaction mixture occurs. To isolate the desired amino acid from the reaction mixture, a common method of isolating amino acids can be used. For example, when the hydrolysis is carried out with a volatile acid, the excess acid can be removed by concentrating the reaction mixture under reduced pressure and the residue is dissolved in water and neutralized with aqueous alkali solution until the isoelectric point is reached. If necessary, acetone, methanol or ethanol are then added to the reaction mixture to crystallize the intended compound, represented by formula (III), which is then separated by filtration. Otherwise, when a volatile acid is used, the reaction mixture is diluted with water to a concentration of less than 1N acid and passed through a strongly acidic ion exchange resin, so that the desired amino acid can be adsorbed on the ion exchange resin. The adsorbed amino acid is eluted from the ion exchange resin with a volatile alkali, such as ammonia water, and condensed under reduced pressure. If necessary, acetone, methanol or ethanol are added to crystallize the intended compound, represented by formula (III), which is then separated by filtration.

I ovanstående reaktion erhålles (2RS, 3R)-aminosyra, när ett (R)-nítrilderivat användes som utgångsmaterial; när ett S-nitrilderivat användes erhålles (2RS, 3S)-aminosyra; när ett (RS)-nitrilderivat användes erhålles (ZRS, 3RS)-amino- syra.In the above reaction, (2RS, 3R) -amino acid is obtained, when a (R) -nitrile derivative is used as starting material; when an S-nitrile derivative is used, (2RS, 3S) -amino acid is obtained; when an (RS) -nitrile derivative is used, (ZRS, 3RS) -amino acid is obtained.

Föreningarna med formel (III) enligt uppfinningen kan användas som ett råmaterial i det nedan beskrivna förfarandet.The compounds of formula (III) according to the invention can be used as a raw material in the process described below.

Exempelvis är 3-amino-2-hydroxi-4-fenylbutansyra (nedan förkor- tad till AHPA), som ett föregàngsämne till Bestatin, i (2S, 3R)- ~form. För att erhålla denna förening är det därför nödvändigt att upplösa (ZRS, 3R)-AHPA till (25, 3R)- och (2R, 3R)-AHPA. 5 452 518 (ZRS, 3R)-AHPA kan upplösas optiskt i.etylacetat i form av diastereoisomeren, som erhålles genom att först bensyloxikarbo- nylera (2RS, 3R)-AHPA på vanligt sätt för att framställa bensyloxi- karbonyl-(ZRS, 3R)-AHPA, vilken därefter får reagera med brucin (nedan förkortas bensyloxikarbonylgruppen till Z). Närmare bestämt löses Z-(2RS, 3R)-AHPA och en ekvivalent mängd eller något större mängd brucin i etylacetat under uppvärmning och därefter filtrering, om så är nödvändigt. När filtratet kyls eller får svalna avsättes kristaller. Dessa kristaller separeras genom filtrering och om så är nödvändigt upprepas omkristalliseringsoperationer ur etylacetat för att framställa det optiskt rena brucinsaltet av Z-(28, 3R)-APHA.For example, 3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoic acid (hereinafter abbreviated to AHPA), as a precursor to Bestatin, is in (2S, 3R)-~ form. To obtain this compound, it is therefore necessary to dissolve (ZRS, 3R) -AHPA to (25, 3R) - and (2R, 3R) -AHPA. 5,452,518 (ZRS, 3R) -AHPA can be optically dissolved in ethyl acetate in the form of the diastereoisomer obtained by first benzyloxycarbonylating (2RS, 3R) -AHPA in the usual manner to produce benzyloxycarbonyl- (ZRS, 3R). ) -AHPA, which is then reacted with brucine (hereinafter the benzyloxycarbonyl group is abbreviated to Z). More specifically, Z- (2RS, 3R) -AHPA and an equivalent amount or slightly larger amount of brucine are dissolved in ethyl acetate during heating and then filtration, if necessary. When the filtrate is cooled or allowed to cool, crystals are deposited. These crystals are separated by filtration and, if necessary, repeated recrystallization operations from ethyl acetate to produce the optically pure brucine salt of Z- (28, 3R) -APHA.

När detta brucinsalt behandlas på vanligt sätt erhålles optiskt ren Z(2S, 3R)-AHDA. Annars kan optiskt ren Z-(2R, 3R)-AHPA fram- ställas enligt följande: en lösning av etylacetat innehållande ett brucinsalt av Z-(2R, 3R)-AHPA och en liten mängd Z-(2S, 3R)-AHPA skakas med utspädd klorvätesyra för att avlägsna brucin, etylacetat- skiktet torkas med ett dehydratiseringsmedel, såsom vattenfritt natriumsulfat, och koncentreras under reducerat tryck. Därefter löses återstoden i en liten mängd etylacetat. Efter tillsats av petroleumeter erhålles kristaller, vilka därefter kan separeras genom filtrering för att framställa optiskt ren Z-(2R, 3R)-AHPA.When this brucine salt is treated in the usual way, optically pure Z (2S, 3R) -AHDA is obtained. Otherwise, optically pure Z- (2R, 3R) -AHPA can be prepared as follows: a solution of ethyl acetate containing a brucine salt of Z- (2R, 3R) -AHPA and a small amount of Z- (2S, 3R) -AHPA is shaken with dilute hydrochloric acid to remove brucine, the ethyl acetate layer is dried with a dehydrating agent such as anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. Then the residue is dissolved in a small amount of ethyl acetate. After addition of petroleum ether, crystals are obtained, which can then be separated by filtration to produce optically pure Z- (2R, 3R) -AHPA.

Man har noterat, att (ZR, 3R)-formen av Z-AHPA hade mindre löslighet i ett organiskt lösningsmedel än (ZS, 3R)-formen. Z-(2RS, 3R)-AHPA löses 1 ett första lösligt lösningsmedel vid rumstempe- ratur eller under uppvärmning. Därefter tillsättes ett andra olös- ligt lösningsmedel för att utfälla kristaller, vilka därefter sepa- reras genom filtrering. Om så är nödvändigt upprepas föregâende“ operation tills optiskt ren Z-(2R, 3R)-AHPA erhålles.It has been noted that the (ZR, 3R) form of Z-AHPA had less solubility in an organic solvent than the (ZS, 3R) form. Z- (2RS, 3R) -AHPA is dissolved in a first soluble solvent at room temperature or during heating. Then a second insoluble solvent is added to precipitate crystals, which are then separated by filtration. If necessary, repeat the previous operation until optically pure Z- (2R, 3R) -AHPA is obtained.

Det första lösliga lösningsmedlet kan inbegripa lägre alko- ~ holer, såsom metanol, etanol och propanol; etrar såsom dietyleter, diisopropyleter, tetrahydrofuran och dioxan; estrar såsom metyl- acetat och etylacetat; ketoner såsom aceton och metyletylketon; halogenerade kolväten såsom metylenklorid och kloroform; amider såsom dimetylformamid och dimetylacetamid; och nitriler såsom acetonitril etc. Det andra olösliga lösningsmedlet kan inbegripa petroleumkolväten, såsom petroleumeter, petroleumbensen och ligrain; 452 518 6 aromatiska kolväten, såsom bensen och toluen; alkaner, såsom pentan och hexan; och cykloalkaner, såsom cyklopentan och cyklohexan. Med användning av den diastereoisomera metoden med användning av brucin kan den optiskt orena Z-(ZS, 3R)-AHPA, som är närvarande i filtratet, renas till optiskt ren (2R, 3R)- -AHPA.The first soluble solvent may include lower alcohols, such as methanol, ethanol and propanol; ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran and dioxane; esters such as methyl acetate and ethyl acetate; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform; amides such as dimethylformamide and dimethylacetamide; and nitriles such as acetonitrile, etc. The other insoluble solvent may include petroleum hydrocarbons, such as petroleum ether, petroleum benzene and ligrain; Aromatic hydrocarbons such as benzene and toluene; alkanes such as pentane and hexane; and cycloalkanes, such as cyclopentane and cyclohexane. Using the bruaster diastereoisomeric method, the optically impure Z- (ZS, 3R) -AHPA present in the filtrate can be purified to optically pure (2R, 3R) -AHPA.

Z-AHPA, som användes i ovanstående upplösning, kan synte- tiseras genom Schotten-Baumann-metoden i närvaro av ett alkali genom reaktion mellan (2RS, 3R)-APHA och bensyloxikarbonyl- klorid, eller på annat sätt, i närvaro av en organisk tertiär bas, såsom trietylamin och N-metylmorfolin genom reaktion med ett bensyloxikarbonylerande reaktionsmedel, såsom bensyl- oxikarbonyl-p-nitrofenylester, bensyloxikarbonylazid, bensyl- oxikarbonyl-N-hydroxisuccinimidester och bensyloxikarbonyl- -4,6-dimetyl-2-merkaptopyrimidin i ett lösningsmedel, fram- ställt genom blandning av dioxan, tetrahydrofuran, acetonitril eller dimetylformamid med vatten.Z-AHPA, used in the above solution, can be synthesized by the Schotten-Baumann method in the presence of an alkali by reaction between (2RS, 3R) -APHA and benzyloxycarbonyl chloride, or otherwise, in the presence of an organic tertiary base such as triethylamine and N-methylmorpholine by reaction with a benzyloxycarbonylating reactant such as benzyloxycarbonyl-p-nitrophenyl ester, benzyloxycarbonyl azide, benzyloxycarbonyl-N-hydroxysuccinimide ester and benzyloxycarbonylimide , prepared by mixing dioxane, tetrahydrofuran, acetonitrile or dimethylformamide with water.

Trots att optisk upplösning ovan har beskrivits med hänsyn till AHPA, kan en liknande optisk upplösning åstadkom- mas om så är nödvändigt för de andra aminosyrorna.Although the optical resolution above has been described with respect to AHPA, a similar optical resolution can be achieved if necessary for the other amino acids.

För att framställa Bestatin och dess besläktade föreningar, betecknade med formel (I), kondenseras en aminosyra, betecknad med formel (III), med en förening, betecknad med formel (IV), med den vanliga peptidbindningsmetoden och därefter avlägsnas de skyddande grupperna, vilka om så är nödvändigt har använts för skyddande av de funktionella grupperna, som inte deltar i reaktionen.To prepare Bestatin and its related compounds, represented by formula (I), an amino acid, represented by formula (III), is condensed with a compound represented by formula (IV), by the usual peptide binding method, and then the protecting groups are removed, which if necessary have been used to protect the functional groups, which do not participate in the reaction.

Typiska exempel pâ aminosyror är glycin, alanin, 2-amino- -butansyra, valin, norvalin, leucin, norleucin, isoleucin, tertiärleucin, 2-aminoheptansyra, 2-amino-5-metylhexansyra, 2-amino-oktansyra, 2-amino-6-metylheptansyra, serin, glutamin, metionin, glutaminsyra och fenylalanin.Typical examples of amino acids are glycine, alanine, 2-amino-butanoic acid, valine, norvaline, leucine, norleucine, isoleucine, tertiary leucine, 2-aminoheptanoic acid, 2-amino-5-methylhexanoic acid, 2-amino-octanoic acid, 2-amino- 6-methylheptanoic acid, serine, glutamine, methionine, glutamic acid and phenylalanine.

Metoden att kondensera en aminosyra, betecknad med formel (III), och en aminosyra, betecknad med formel (IV), inbegriper en karbodiimidmetod, vari dicyklohexylkarbodiimid eller l-etyl- -3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid användes; en azidmetod, som använder salpetersyra eller alkylnitrit; en blandad anhydrid- 452 318 metod, som använder etylklorformiat eller isobutylklorformiat; en aktiv estermetod, som använder cyanometylester, vinylester, substituerade eller osubstituerade fenylestrar, tiofenylester eller N-hydroxisuccinimidester7 en 0-acylhydroxylaminderivat- metod, som använder O-acylacetoxim eller 0-acylcyklohexanonoxim; en N-acylderivatmetod, som använder karbonyldiimidazol.The method of condensing an amino acid represented by formula (III) and an amino acid represented by formula (IV) comprises a carbodiimide method in which dicyclohexylcarbodiimide or 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) -carbodiimide is used; an azide method using nitric acid or alkyl nitrite; a mixed anhydride method using ethyl chloroformate or isobutyl chloroformate; an active ester method using cyanomethyl ester, vinyl ester, substituted or unsubstituted phenyl esters, thiophenyl ester or N-hydroxysuccinimide ester 7 an O-acylhydroxylamine derivative method using O-acylacetoxime or O-acylcyclohexanone oxime; an N-acyl derivative method, which uses carbonyldiimidazole.

Organiska lösningsmedel, som användes i ovanstående kondensationsreaktion, kan vara etrar, såsom dietyleter, tetrahydrofuran eller dioxan; estrar, såsom etylacetat eller metylacetat; ketoner, såsom aceton eller metyletylketon; halogenerade kolväten, såsom metylenklorid eller kloroform; amider, såsom dimetylformamid eller dimetylacetamid; nitriler, såsom acetonitril.Organic solvents used in the above condensation reaction may be ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran or dioxane; esters such as ethyl acetate or methyl acetate; ketones such as acetone or methyl ethyl ketone; halogenated hydrocarbons such as methylene chloride or chloroform; amides such as dimethylformamide or dimethylacetamide; nitriles such as acetonitrile.

Om en aminosyra, betecknad med formel (III), vars amino- grupp är skyddad, och en aminosyra betecknad med formel (IV), vars karboxylgrupp inte är skyddad, kondenseras i en aktiv estermetod, kan ett blandat lösningsmedel av vatten och vatten- blandbart organiskt lösningsmedel användas i närvaro av en oorganisk bas, såsom natriumvätekarbonat eller magnesiumoxid, få en organisk tertiär bas, såsom trietylamin eller N-metylmorfolin.If an amino acid of formula (III) whose amino group is protected and an amino acid of formula (IV) whose carboxyl group is not protected are condensed in an active ester method, a mixed solvent of water and water-miscible organic solvent used in the presence of an inorganic base such as sodium bicarbonate or magnesium oxide, obtain an organic tertiary base such as triethylamine or N-methylmorpholine.

Skyddande grupper i den resulterande föreningen kan avlägsnas med de inom peptidkemin vanliga metoderna, såsom katalytisk hydrering på palladium, förtválning med ett alkali, surgörning med vätebromid i ättiksyra, med trifluorättiksyra, med klorväte i dioxan, tetrahydrofuran eller etylacetat, med flytande fluorväte, hydrazinolys med hydrazin eller behand- ling med natrium i flytande ammoniak. Sålunda erhålles föreningen med formel (I).Protecting groups in the resulting compound can be removed by the methods customary in peptide chemistry, such as catalytic hydrogenation on palladium, saponification with an alkali, acidification with hydrogen bromide in acetic acid, with trifluoroacetic acid, with hydrogen chloride in dioxane, tetrahydrofuran or ethyl acetate fluoride, with hydrofluorocetyl acetate, hydrazine or treatment with sodium in liquid ammonia. Thus, the compound of formula (I) is obtained.

Nitrilderivaten betecknade med formel (II) och använda som utgángsmaterial vid framställning av föreningen med formeln (III) enligt uppfinningen kan syntetiseras genom reducering av en a-aminosyra, vars aminogrupp skyddas och karboxylgrupp omvandlas till en amid genom reaktion med en sekundär amin, vid låg temperatur under 0°C med en metallhydrid i etrar, såsom dietyleter eller tetrahydrofuran, för framställning av en aminoaldehyd, vars aminogrupp är skyddad. Den resulteran- de aminoaldehyden omvandlas därefter till addukten med natrium- bisulfit och får därefter reagera med en alkalimetallcyanid 452 318 a eller får direkt reagera med cyanväte för framställning av cyanohydrin, eller 3-amino-2-hydroxinitril.The nitrile derivatives represented by formula (II) and used as starting materials in the preparation of the compound of formula (III) according to the invention can be synthesized by reducing an α-amino acid, the amino group of which is protected and the carboxyl group is converted to an amide by reaction with a secondary amine. temperature below 0 ° C with a metal hydride in ethers, such as diethyl ether or tetrahydrofuran, to produce an aminoaldehyde whose amino group is protected. The resulting aminoaldehyde is then converted to the adduct with sodium bisulfite and then reacted with an alkali metal cyanide 452 318 a or reacted directly with hydrogen cyanide to produce cyanohydrin, or 3-amino-2-hydroxynitrile.

Föredragna exempel pá den sekundära aminen är N,N-dimetyl- amin, azilidín, N-metylanilin, karbazol, 3,5-dimetylpyrazol och imidazol. Föredragna exempel på metyllhydrid är litiumaluminium- hydrid, litiumdi- och tri-alkoxíaluminiumhydrid och natrium-bis- -(2-metoxietoxi)-aluminiumhydrid. Exempel på skyddande grupper för aminogruppen är de skyddande grupper, som vanligen användes inom peptidkemin. Skyddande grupper av uretantyp kan företrädes- vis användas och framförallt föredrages bensyloxikarbonylgruppen.Preferred examples of the secondary amine are N, N-dimethylamine, azilidine, N-methylaniline, carbazole, 3,5-dimethylpyrazole and imidazole. Preferred examples of methyl hydride are lithium aluminum hydride, lithium di- and trialkoxyaluminum hydride and sodium bis- (2-methoxyethoxy) aluminum hydride. Examples of protecting groups for the amino group are the protecting groups commonly used in peptide chemistry. Urethane-type protecting groups can be preferably used and the benzyloxycarbonyl group is especially preferred.

Enligt en andra metod reduceras en lägre alkylester av a-aminosyra, vars aminogrupp är skyddad med en aminoskyddande grupp i likhet med dem, som nämnts tidigare, vid en temperatur under -40°C i aromatiska kolväten, såsom toluen eller bensen, och etrar, såsom dietyleter eller tetrahydrofuran, med metall- hydrider, såsom natriumaluminiumhydrid, diisobutylaluminium- hydrid eller natrium-bis-(2-metoxietoxi)aluminiumhydrid, för att därigenom framställa aminoaldehyd, vars aminogrupp är skyddad. När en sådan aminoaldehyd har behandlats på ovan- stående sätt erhålles 3-amino-2-hydroxinitriler.According to a second method, a lower alkyl ester of α-amino acid, the amino group of which is protected with an amino-protecting group similar to those mentioned earlier, is reduced at a temperature below -40 ° C in aromatic hydrocarbons, such as toluene or benzene, and ethers, such as diethyl ether or tetrahydrofuran, with metal hydrides such as sodium aluminum hydride, diisobutylaluminum hydride or sodium bis- (2-methoxyethoxy) aluminum hydride, to thereby produce aminoaldehyde, the amino group of which is protected. When such an aminoaldehyde has been treated in the above manner, 3-amino-2-hydroxynitriles are obtained.

De fyrsiologiska aktiviteterna hos Bestatin och dess besläktade föreningar betecknade med formel (I) bestämdes enligt följande: (A) inhiberande aktivitet mot aminopeptidas B Testmetod: Den metod, som beskrivs av V.K. Hopusu, K-K- Makinen, G.G. Glenner i Archives of Biochemistry and Biophysics 114, 557, (1966), modifierades. Till blandningen av 0,3 ml l mmol argin-B-naftylamid och 0,1 ml 0,lM tris-vätekloridbuffert (pH 7,0), sättes 0,7 ml destillerat vatten med eller utan ett testmaterial och man värmer vid 37°C i 3 min. Reaktionen startas genom till- sats av 0,2 ml aminopeptidas B-lösning, som framställes genom kromatografi pà Sephadex 100, såsom beskrivs av Hopusu et al.The foursiological activities of Bestatin and its related compounds represented by formula (I) were determined as follows: (A) Inhibitory activity against aminopeptidase B Test method: The method described by V.K. Hopusu, K-K- Makinen, G.G. Glenner in Archives of Biochemistry and Biophysics 114, 557, (1966), was modified. To the mixture of 0.3 ml of 1 mmol of argin-B-naphthylamide and 0.1 ml of 0.1 M tris-hydrochloride buffer (pH 7.0) is added 0.7 ml of distilled water with or without a test material and heated at 37 °. C for 3 min. The reaction is started by adding 0.2 ml of aminopeptidase B solution, which is prepared by chromatography on Sephadex 100, as described by Hopusu et al.

Efter 30 min vid 37°C tillsättes 0,6 ml 1,0 M acetatbuffert (pH 4,2) innehållande diazoniumsaltet av o-aminoazotoluen vid 1,0 mg/ml och Tween 20 vid l,O%. 15 min vid rumstemperatur därefter mäts absorbansen (a) vid 530 nm medelst spektrofotometer. Som kontroll mäts med liknande medel absorbansen (b) efter reaktio- nen i frânvaro av ett prov. Inhiberingsprocenten beräknas enligt följande: (b-a/b x 100). 452 318 Inhiberingsprocenttalen vid olika koncentrationer mättes och från de mätta inhiberingsprocenttalen beräknades5O % inhibering (IDSO). Resultaten anges i tabell 1.After 30 minutes at 37 ° C, 0.6 ml of 1.0 M acetate buffer (pH 4.2) containing the diazonium salt of o-aminoazotoluene at 1.0 mg / ml and Tween 20 at 1.0% is added. 15 minutes at room temperature then the absorbance (a) is measured at 530 nm by means of a spectrophotometer. As a control, the absorbance (b) is measured by similar means after the reaction in the absence of a sample. The inhibition percentage is calculated as follows: (b-a / b x 100). 452 318 The inhibition percentages at different concentrations were measured and from the measured inhibition percentages, 50% inhibition (IDSO) was calculated. The results are given in Table 1.

TABELL l Inhiberingsaktivítet av Bestatin och dess besläktade föreningar mot aminopeptidas B Nr Förening IDSO gug/ml) 1 (2S, 3R)-AHPA-(S)-Leu 0,10 2 (2S, 3S)-AHPA-(S)-Leu 1,25 3 (2S, 3R)-AHPA-(R)~Leu 0,56 4 (2S, 3S)-AHPA-(R)-Leu 0,04 s (2s, sm-AHPA-Gly 21,5 6 (2S, 3R)-AHPA-(S)-Val 0,55 7 (2S, 3R)-AHPA-(S)~Ile 0,05 8 (2S, 3R)-AHPA-(S)~Met 0,22 9 (2s, 3R)-AHPA-(s)-G1n 1,2 10 (2S, 3R)-AHPA-(S)-Nva 0,17 ll (2S, 3R)-AHPA-(S)-Nle 0,13 12 (2S, 3R)-AHPA-(S)-Phe 4,2 13 (2S, 3R)-AHPA-(S)~Ser 0,72 14 (2S, 3R)~AHPA-(S)-Glu 25 15 (2S, 3R)-AHPA-(RS)-Aoc 3,1 16 (ZRS, 3R)-Me-Ise-(S)~Leu 16 l7 (ZRS, 3R)-iso-Bu-Ise-(S)-Leu l2 18 (ZRS, 3R)~Ph-Ise~(S)~Leu 56 19 (2RS, 3RS)-AHPA(p-Cl)"(S)-Leu 0,07 20 (2RS, 3Rs)-AHPA(o-Cl)-(S)-Leu 0,48 21 (2Rs, 3R5)~AHPA(p-Me)-(S)-Leu 0,01 22 (2S, 3R)-AHPA(p-No2)-(S)-Leu 0,01 23 (ZS, 3R)-AHPA(p-NH2)-(S)~Leu O,lO 24 (2§, 3R)~AHPA(6H)-(S)~Leu 1,05 Anmärkning: I tabellen är Leu = leucin; Gly glycin, Ser = serin; Gln = glutamin; Glu = glutaminsyra; Val II valin; Nva = norvalfin Met = metionin; Ile = isoleucin; Nle = norleucin; Aoc = 2-aminooktansyra; Phe = fenyl~ alanin; Me-Ise = B-metylisoserin (3-amino-2-hydroxi-smörsyra); 452 318 W 10 iso-Bu-Ise = B-isobutylisoserin (3-amino-2-hydroxi-5-metylhexane syra); Ph-Ise = B-fenylisoserin (3-amino-2-hydroXi-3-fenylpropion- syra); AHPA(p-Cl) = 3-amino-2-hydroxi-4-p-klorfenylbutansyra; AHPA(o-Cl) = 3-amino-2-hydroxi-4-o-klorfenyl-butansyra; AHPA(p-Me) = 3-anáno-2-hydroxí-4-p-metylfenylbutansyra; AHPA(p-N02) = 3-amino- -2-hydroxi-4-p-nitrofenylbutansyra; AHPA(p-NH2) = 3-amino-2-hydroxi- -4-p-aminofenylbutansyra; AHPA(6H) = 3-amino-2-hydroxi-4-cyk1o- hexylbutansyra. i (B) Organfördelning av Bleomycin i närvaro av Bestatin. 100 mg/kg Bleomycin 82 administrerades subkutant till var och en av tre ICR-hanmöss (4 veckor gamla) och 100 mg/kg Bleomycin B2 och 100 mg/kg Bestatin administrerades subkutant samtidigt till var och en av tre likadana möss. Dessa 6 möss avlivades l h efter administreringen och mängden Bleomycin B2, som fanns kvar i serum och organ, bestämdes genom en tunnskiktsmetod med användning av Bacillus subtilis PCI2l9 som testmikroorganism. Resultaten anges i tabell 2, vari siffrorna visar medelvärden.TABLE 1 Inhibitory activity of Bestatin and its related compounds against aminopeptidase B No. Compound IDSO gug / ml) 1 (2S, 3R) -AHPA- (S) -Leu 0.10 2 (2S, 3S) -AHPA- (S) -Leu 1.25 3 (2S, 3R) -AHPA- (R) ~ Leu 0.56 4 (2S, 3S) -AHPA- (R) -Leu 0.04 s (2s, sm-AHPA-Gly 21.5 6 (2S, 3R) -AHPA- (S) -Val 0.55 7 (2S, 3R) -AHPA- (S) ~ Ile 0.05 8 (2S, 3R) -AHPA- (S) ~ Met 0.22 9 (2s, 3R) -AHPA- (s) -G1n 1,2 10 (2S, 3R) -AHPA- (S) -Nva 0.17 ll (2S, 3R) -AHPA- (S) -Nle0, 13 12 (2S, 3R) -AHPA- (S) -Phe 4.2 13 (2S, 3R) -AHPA- (S) ~ Ser 0.72 14 (2S, 3R) ~ AHPA- (S) -Glu 25 (2S, 3R) -AHPA- (RS) -Aoc 3.1 16 (ZRS, 3R) -Me-Ise- (S) ~ Leu 16 17 (ZRS, 3R) -iso-Bu-Ise- (S) -Leu l2 18 (ZRS, 3R) ~ Ph-Ise ~ (S) ~ Leu 56 19 (2RS, 3RS) -AHPA (p-Cl) "(S) -Leu 0.07 20 (2RS, 3Rs) -AHPA (o-Cl) - (S) -Leu 0.48 21 (2Rs, 3R5) ~ AHPA (p-Me) - (S) -Leu 0.01 22 (2S, 3R) -AHPA (p-No2) - (S) -Leu 0.01 23 (ZS, 3R) -AHPA (p-NH2) - (S) ~ Leu 0.1, 24 (2§, 3R) ~ AHPA (6H) - (S) ~ Leu 1, Note: In the table, Leu = leucine; Gly glycine, Ser = serine; Gln = glutamine; Glu = glutamic acid; Val II valine; Nva = norval fi n M et = methionine; Ile = isoleucine; Nle = norleucine; Aoc = 2-aminooctanoic acid; Phe = phenyl-alanine; Me-Ise = β-methylisoserine (3-amino-2-hydroxybutyric acid); 452 318 W 10 iso-Bu-Ise = B-isobutylisoserine (3-amino-2-hydroxy-5-methylhexane acid); Ph-Ise = β-phenylisoserine (3-amino-2-hydroxy-3-phenylpropionic acid); AHPA (p-Cl) = 3-amino-2-hydroxy-4-p-chlorophenylbutanoic acid; AHPA (o-Cl) = 3-amino-2-hydroxy-4-o-chlorophenyl-butanoic acid; AHPA (p-Me) = 3-anano-2-hydroxy-4-p-methylphenylbutanoic acid; AHPA (p-NO 2) = 3-amino--2-hydroxy-4-p-nitrophenylbutanoic acid; AHPA (p-NH2) = 3-amino-2-hydroxy--4-p-aminophenylbutanoic acid; AHPA (6H) = 3-amino-2-hydroxy-4-cyclohexylbutanoic acid. i (B) Organ distribution of Bleomycin in the presence of Bestatin. 100 mg / kg Bleomycin 82 was administered subcutaneously to each of three male ICR mice (4 weeks old) and 100 mg / kg Bleomycin B2 and 100 mg / kg Bestatin were administered subcutaneously to each of three identical mice. These 6 mice were sacrificed 1 hour after administration and the amount of Bleomycin B2 remaining in serum and organs was determined by a thin layer method using Bacillus subtilis PCI219 as a test microorganism. The results are given in Table 2, where the figures show averages.

TABELE 2 Effekten av samtidig administration av Bestatin och Bleomycin B 2 eller organfördelning av Bleomycin hos möss._ . I H. .u Serum Lunga Hud Lever Njure §Mjalte Mage Hjärna BLM 1oo mg/kg 110 11,2 4,5 o . 68,0 4.0. 1,6 0 BLM 1oo mg/kg+ 14o 21,2 42,0 o 84,0 5,8 2,5 2,4 BST 100 mg/kg.TABLE 2 Effect of co-administration of Bestatin and Bleomycin B 2 or organ distribution of Bleomycin in mice._. In H. .u Serum Lung Skin Liver Kidney §Malten Stomach Brain BLM 1oo mg / kg 110 11.2 4.5 o. 68.0 4.0. 1.6 0 BLM 100 mg / kg + 14o 21.2 42.0 o 84.0 5.8 2.5 2.4 BST 100 mg / kg.

Anm.: BLM = Bleomycin B2; BST = Bestatin (C) Kontracegtiv förmåga Bestatins antifertilitet Omedelbart efter subkutan administrering av Bestatin (10 mg/kg) på ICR JCL honmöss vid pubertetsâldern placerades dessa möss till- sammans med hanmöss av samma familj. Honmöss, som hade kopulerat, avlivades två dagar efter bildning av vaginalplugg och äggen upp- samlades från deras livmoderkanaler för undersökning om de hade befruktats eller inte. De befruktade äggen befann sig i perioden 8-16 celler. ll 4552 3'l8 Bestatin-administrerad Bona Hona Totalt musgrupp fd' ' nr 1 nr 2 n = 2 - Antal gulkroppar 10 19 Antal uppsamlade ägg 10 19 29 Befruktade ägg 4 (40%) 6 (3l,6%) 10 (34,5%) Obefruktade_ägg .' 6 (60%) 13 (68,4%) l9 (65,S%) Kontroll Hona Hona Totalt ' "" *nr 1 nr 2 n ="2' Antal gulkroppar 13 l3 26 Antal uppsamlade ägg 9- ll 20 Befruktade ägg 6 (66,7%) 8 (72,7%) 14 (70%) obefruxtaae ägg .__ 3 (33,3%). 3 (21,3s) 6 (36%) Experimenten visade att fertiliteten hos ägg, uppsamlade från mössen, som hade kopulerat 4-16 h efter administration av Bestatin, var 34,5 %, medan fertiliteten hos äggen, som uppsamlades från mös- sen ur kontrollgruppen, var 70 %. Av dessa resultat framgår det att Bestatin har en antifertilitetsaktivitet. Å Det nedanstående är en diskussion med hjälp av exempel enbart f* av metoder för genomförande av uppfinningen. Emellertid skall det här noteras, att vilka lämpliga metoder som helst för skyddande av funktionella grupper, metoder för avlägsnande av funktionella grup- per och peptidbindningsbildande metoder förutom dem, som beskrivs ovan, kan användas. Förutom ovannämnda förkortningar användes även följande förkortningar i exemplen: HOBt N-hydroxibensotriazol; DCCD = N,N'-dicyklohexylkarbodiimid; HOSu = N-hydroxisuccinimid; -QBzl.TosOH = bensylester av p-toluen- ll sulfonat; -0Su = N-hydroxisuccinimidester; -0Me = metylester; -0Nb = p-nitrobensylester; Boc = t-butoxikarbonyl; DCHA = dicyklo- hexylamin; -osut = tert-butylester.Note: BLM = Bleomycin B2; BST = Bestatin (C) Contraceptive capacity Bestin antifertility Immediately after subcutaneous administration of Bestatin (10 mg / kg) to female ICR JCL mice at puberty, these mice were placed with male mice of the same family. Female mice that had copulated were sacrificed two days after vaginal plug formation and the eggs were collected from their uterine ducts for examination to see if they had been fertilized or not. The fertilized eggs were in the period 8-16 cells. ll 4552 3'l8 Bestatin-administered Bona Female Total mouse group ex '' no 1 no 2 n = 2 - Number of corpora cavernosa 10 19 Number of collected eggs 10 19 29 Fertilized eggs 4 (40%) 6 (3l, 6%) 10 (34 , 5%) Unfertilized_Eggs. ' 6 (60%) 13 (68.4%) l9 (65, S%) Control Female Female Total '"" * no. 1 no. 2 n = "2' Number of yellow bodies 13 l3 26 Number of collected eggs 9- ll 20 Fertilized eggs 6 (66.7%) 8 (72.7%) 14 (70%) unfertilized eggs .__ 3 (33.3%). 3 (21.3s) 6 (36%) The experiments showed that the fertility of eggs, collected from the mice that had copulated 4-16 hours after administration of Bestatin was 34.5%, while the fertility of the eggs collected from the mice from the control group was 70%, and these results show that Bestatin has an antifertility activity. The following is a discussion by way of example only of methods of carrying out the invention, however, it should be noted here that any suitable methods for protecting functional groups, methods for removing functional groups and peptide bond-forming methods in addition to those described above can be used In addition to the above abbreviations, the following abbreviations were also used in the examples: HOBt N-hydroxybenzotriazole; DCCD = N, N'-dicyclohexylcarbodiimide; HOSu = N-hydroxysuccinimide; -QBzl.TosOH = benzyl ester of p-toluene-11 sulfonate; -OSu = N-hydroxysuccinimide ester; -OMe = methyl ester; -ONb = p-nitrobenzyl ester; Boc = t-butoxycarbonyl; DCHA = dicyclohexylamine; -osut = tert-butyl ester.

Rf-värdet mäts på en silikagelplatta GF254 framställd av Merck' Corp. med användning av n BuOH:AcOH:H2O (4:l:l) som framkallande lösningsmedel.The Rf value is measured on a silica gel plate GF254 manufactured by Merck 'Corp. using n BuOH: AcOH: H 2 O (4: 1: 1) as the developing solvent.

Ett fåtal 3-amino-2-hydroxikarboxylsyror och peptider inne- hållande dessa besitter tvâ Rf-värden p g a att de är blandade av treo- och erytrokonfigurationer.A few 3-amino-2-hydroxycarboxylic acids and peptides containing these possess two Rf values because they are mixed by threo and erythro configurations.

EXEMPEL 1 Steg l 12 452 318 35,4 g oljig Z-(2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxi~4-fenylbutyrcnitril löses i en blandning av 300 ml koncentrerad klorvätesyra och 300 .ml dioxan. Efter tillsats av 21,2 g anisol hålls reaktionsbland- ningen under âterflöde i 12 h. Därefter destilleras dioxan av under reducerat tryck, den resulterande lösningen av klorvätesyra tvättas med eter och vattenskiktet koncentreras under reducerat tryck och indunstas till torrhet. Därefter tillsättes 200 ml vatten till res- ten av ämnet och det olösliga ämnet separeras genom filtrering.EXAMPLE 1 Step I 12 452 318 35.4 g of oily Z- (2RS, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutyronitrile are dissolved in a mixture of 300 ml of concentrated hydrochloric acid and 300 ml of dioxane. After the addition of 21.2 g of anisole, the reaction mixture is kept under reflux for 12 hours. Then the dioxane is distilled off under reduced pressure, the resulting solution of hydrochloric acid is washed with ether and the aqueous layer is concentrated under reduced pressure and evaporated to dryness. Then 200 ml of water are added to the rest of the substance and the insoluble matter is separated by filtration.

Efter tillsats av en lika stor mängd aceton justeras blandningens PH-värde till 5,5 med ammoniakvatten. Blandningen får stå i ett kylskåp. De avsatta kristallerna separeras genom filtrering, var- vid 13,66 g av den avsedda (zns, alu-Anm erhålles. [ajsšš + l6,a° (c 1,25, N Hcl), Rf 0,23 och 0,26 Analys för Cl0Hl3N03: Funnet C: 61,06, H: 6,55, N: 6,80; Beräknat C: 61,52, H: 6,71, N: 7,18.After adding an equal amount of acetone, the pH of the mixture is adjusted to 5.5 with ammonia water. The mixture is allowed to stand in a refrigerator. The deposited crystals are separated by filtration to give 13.66 g of the intended (zns, alu-Anm. [Ajsšš + 16, a ° (c 1.25, N Hcl), Rf 0.23 and 0.26 Analysis for C 10 H 13 NO 3: Found C: 61.06, H: 6.55, N: 6.80; Calculated C: 61.52, H: 6.71, N: 7.18.

Steg 2 ' 13,66 g (ZRS, 3R)-AHPA, erhâllen i steg 1, löses i 70 ml lN natriumhydroxídlösning. Medan lösningen utsättes för kraftig omröring under kylning med is tillsättes 15 ml Z-Cl och 70 ml lN natriumhydroxidlösning i tre portioner under en period av 30 min.Step 2 13.66 g of (ZRS, 3R) -AHPA, obtained in step 1, are dissolved in 70 ml of 1N sodium hydroxide solution. While the solution is subjected to vigorous stirring under ice-cooling, 15 ml of Z-Cl and 70 ml of 1N sodium hydroxide solution are added in three portions over a period of 30 minutes.

Därefter omröres reaktionsblandningen kraftigt i l h under kylning med is och i 3 h vid rumstemperatur.Then the reaction mixture is stirred vigorously for 1 hour under ice-cooling and for 3 hours at room temperature.

När reaktionen har avslutats tillsättes GN klorvätesyra för att justera reaktionsblandningens pH-värde till l. Som ett resul- tat härav separeras ett oljigt material, vilket därefter extra- heras 2 ggr med 100 ml etylacetat. Etylacetatskiktet tvättas med vatten och dehydratiseras till torrhet genom användning av vatten- fritt magnesiumsulfat. Efter separering av magnesiumsulfatet genom filtrering koncentreras filtratet under reducerat tryck och åter- stoden kristalliseras i etylacetat-petroleumeter för framställning av 8,48 g optiskt oren Z-(2R, 3R)-AHPA. Å andra sidan erhålles, när modervätskan koncentreras under reducerat tryck och återstoden kristalliseras i petroleumeter, 8,07 g optiskt oren Z-(ZS, 3R)-AHPA. smp l42°c-l43°c, [ajsšâw 7o,2° (c 1,44, Aeon). _ 8,00 g optiskt oren Z-(ZS, 3R)-AHPA och 10,35 g brucin-dihydrat ' löses under uppvärmning i en lösningsmedelsblandning av 300 ml 3 etylacetat och 10 ml metanol och filtreras. När filtratet har fått svalna separeras brucinsaltet av Z-(28, 3R)-AHPA. Därefter.om- kristalliseras de genom filtrering separerade kristallerna 2 ggr ur etylacetat för framställning av 13,51 g rent brucinsalt av z-(2s, :sm-AHPA. p! 13 452 sus smp 144°c, ¿"q;75§å + 33,s°_(c 1,12, Aeon» 13,5 g av de erhållna kristallerna suspenderas i 150 ml etyl- acetat och brucin avlägsnas med 30 ml_lN klorvätesyra. Därefter tvättas etvlacetatskiktet med vatten och dehydratiseras till torr- het genom användning av vattenfritt magnesiumsulfat. Därefter sepa- reras magnesiumsulfat genom filtrering och etylacetat destilleras av under reducerat tryck. När återstoden återutfälles ur etylacetat- -petroleumeter erhålles 6,21 g Z-(28, 3R)-AHPA. smp 1s4,s°c, ¿"u_75§â + s3,s° (C 1,34, Aeon) Steg 3 2,25 g Z-(ZS, 3R)-AHPA och 945 mg HOBt löses i 70 ml tetra- hydrofuran. Efter tillsats av 2,75 g Leu-OBzl.TosOH neutraliseras blandningen med o,9a nl triefy1am1n een kyls till -s°c. Därefter tillsättes 1,40 g DCCD och reaktionsblandningen får stå över natten för reaktion. Tetrahydrofuran destilleras av under reducerat tryck och 200 ml etylacetat tillsättes. Efter avfiltrering av de olösliga ämnena tvättas filtratet med lN svavelsyra, vatten, 5 % vatten-_ haltig natriumvätekarbonatlösning och vatten i denna ordning och dehydratiseras därefter till torrhet med vattenfritt magnesium- sulfat. Den återstod som erhålles genom koncentrering av filtratet under reducerat tryck, görs fast i etylacetat-petroleumeter. Om- kristallisation ur samma lösningsmedel ger 3,26 g Z-(2S, 3R)-AHPA- -(S)-Leu-OBzl. smp 122°c-123°c, ¿fu_75§§ + 14,2° (C 1, Aeon), Analys för C3lH36N2O6: Funnet C: 69,66, H: 7,01, N: 5,13; Beräknat C: 69,90, H: 6,81, N: 5,26.When the reaction is complete, GN hydrochloric acid is added to adjust the pH of the reaction mixture to 1. As a result, an oily material is separated, which is then extracted twice with 100 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate layer is washed with water and dehydrated to dryness using anhydrous magnesium sulfate. After separating the magnesium sulfate by filtration, the filtrate is concentrated under reduced pressure and the residue is crystallized from ethyl acetate-petroleum ether to give 8.48 g of optically crude Z- (2R, 3R) -AHPA. On the other hand, when the mother liquor is concentrated under reduced pressure and the residue is crystallized in petroleum ether, 8.07 g of optically crude Z- (ZS, 3R) -AHPA are obtained. mp 144 ° C-143 ° C, [α] 25 D, 2 ° (c 1.44, Aeon). 8.00 g of optically crude Z- (ZS, 3R) -AHPA and 10.35 g of brucine dihydrate are dissolved under heating in a solvent mixture of 300 ml of ethyl acetate and 10 ml of methanol and filtered. When the filtrate has been allowed to cool, the brucine salt is separated by Z- (28, 3R) -AHPA. Thereafter, the crystals separated by filtration are recrystallized twice from ethyl acetate to give 13.51 g of pure brucine salt of z- (2s,: sm-AHPA. P! 13 452 sus mp 144 ° c, ¿"q; 75§ 13.5 g of the crystals obtained are suspended in 150 ml of ethyl acetate and the brucine is removed with 30 ml of 1N hydrochloric acid. Then the ethyl acetate layer is washed with water and dehydrated to dryness by then anhydrous magnesium sulfate, then magnesium sulfate is separated by filtration and ethyl acetate is distilled off under reduced pressure, when the residue is reprecipitated from ethyl acetate-petroleum ether, 6.21 g of Z- (28, 3R) -AHPA are obtained, m.p. ¿"U_75§â + s3, s ° (C 1,34, Aeon) Step 3 2.25 g of Z- (ZS, 3R) -AHPA and 945 mg of HOBt are dissolved in 70 ml of tetrahydrofuran. After the addition of 2, 75 g of Leu-OBzl.TosOH, the mixture is neutralized with 0,9a nl of triphylamine and cooled to -s ° C. Then 1.40 g of DCCD are added and the reaction mixture is allowed to stand overnight for reaction. Tetrahydrofuran d is distilled off under reduced pressure and 200 ml of ethyl acetate are added. After filtering off the insolubles, the filtrate is washed with 1N sulfuric acid, water, 5% aqueous sodium bicarbonate solution and water in this order and then dehydrated to dryness with anhydrous magnesium sulfate. The residue obtained by concentrating the filtrate under reduced pressure is fixed in ethyl acetate-petroleum ether. Recrystallization from the same solvent gives 3.26 g of Z- (2S, 3R) -AHPA- - (S) -Leu-OBzl. mp 122 ° C-123 ° C, δ fu + 75§§ + 14.2 ° (C 1, Aeon), Analysis for C 31 H 36 N 2 O 6: Found C: 69.66, H: 7.01, N: 5.13; Calculated C: 69.90, H: 6.81, N: 5.26.

Steg 4 3,22 g Z-(ZS, 3R)-AHPA-(S)~Leu-OBzl löses i 100 ml metanol och hydreras i 3 h med 100 mg palladiumsvart. Katalysatorn fil- treras av och lösningsmedlet koncentreras under reducerat tryck.Step 4 3.22 g of Z- (ZS, 3R) -AHPA- (S) -Leu-OBzl are dissolved in 100 ml of methanol and hydrogenated for 3 hours with 100 mg of palladium black. The catalyst is filtered off and the solvent is concentrated under reduced pressure.

När en omkristalliseringsoperation genomföres med metanol-etyl- acetat erhålles 889 mg (28, 3R)-3-amino-2-hydroxi-4-fenylbutanoyl- -(S)-leucin. snp zos°c-z13°c (neanrytn.), ¿fq_75§å - 23,s° (C 0,48, Aeon), Rf 0,48 - Analys för C H N O ' Funnet C: 62,61, H: 7,86, N: 8,83; 16 24 2 4' Beräknat C: 62,31, H: 7,85, N: 9,09. 452 318 614 -EXEMPEE 2 Steg 1 _ 11,0 g av vätekloriden av (2RS, 3R)-3-amino-2-hydroxi-4- -fenylbutyronitril hålles under âterflöde i 4 h i 200 ml 6N klorvätesyra. Klorvätesyra avdestilleras under reducerat tryck. 200 ml vatten tillsättes och reaktionsblandningen koncentreras ännu en gång under reducerat tryck. 100 ml vatten tillsättes till å det fasta materialet, det olösliga ämnet filtreras av, 100 ml aceton tillsättes och reaktionsblandningen justeras till pH 5,5 med ammoniakvatten och får stå över natten i kylskåp. De sepa- rerade kristallerna filtreras av och tvättas med en vatten/aceton~ lösning (lzl) för framställning av 6,19 g av den avsedda (ZRS, 3R)¿ -AHPA. 2 Steg 2 Pâ samma sätt som i exempel l, steg 2, bensyloxikarbonyleras (2RS, 3R)-AHPA och upplöses med brucin för framställning av ' Z-(2S, 3R)-AHPA. När den resulterande Z-(ZS, 3R)-AHPA får reagera med en ekvimolär mängd av HOSu och DCCD erhålles Z-(25, 3R)-AHPA- -0Su. I smp 111°c-112°c, ¿fq_75§â + s7,7° (e o,s2, Aeon) Analys för c22H22N2o7= funnet c= 61,27, H: 5,25, N: 6,47; , 9* Beräknat C: 61,96, H: 5,20, N: 6,57.When a recrystallization operation is performed with methanol-ethyl acetate 889 mg (28, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -leucine are obtained. snp zos ° c-z13 ° c (neanrytn.), ¿fq_75§å - 23, s ° (C 0.48, Aeon), Rf 0.48 - Analysis for CHNO 'Found C: 62.61, H: 7 , 86, N: 8.83; Calculated C: 62.31, H: 7.85, N: 9.09. 452 318 614 -EXEMPEE 2 Step 1 - 11.0 g of the hydrogen chloride of (2RS, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutyronitrile are kept under reflux for 4 hours in 200 ml of 6N hydrochloric acid. Hydrochloric acid is distilled off under reduced pressure. 200 ml of water are added and the reaction mixture is concentrated once more under reduced pressure. 100 ml of water are added to the solid, the insoluble matter is filtered off, 100 ml of acetone are added and the reaction mixture is adjusted to pH 5.5 with ammonia water and allowed to stand in the refrigerator overnight. The separated crystals are filtered off and washed with a water / acetone solution (Izl) to give 6.19 g of the intended (ZRS, 3R) ¿-AHPA. Step 2 In the same manner as in Example 1, Step 2, benzyloxycarbonylate (2RS, 3R) -AHPA and dissolve with brucine to give Z- (2S, 3R) -AHPA. When the resulting Z- (ZS, 3R) -AHPA is reacted with an equimolar amount of HOSu and DCCD, Z- (25, 3R) -AHPA- -OSu is obtained. Mp 111 ° c-112 ° c, ¿fq_75§â + s7,7 ° (e o, s2, Aeon) Analysis for c22H22N2o7 = found c = 61.27, H: 5.25, N: 6.47; Calculated C: 61.96, H: 5.20, N: 6.57.

Steg 3 85 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-0Su och 86 mg (S)-Leu-OBzl.TosOH får reagera i 12 h i 5 ml dioxan vid rumstemperatur i närvaro av 0,03 ml trietylamin. Därefter koncentreras reaktionsblandningen under reducerat tryck. Återstoden extraheras med etylacetat och tvättas med lN svavelsyra, vatten, 5 % vattenhaltig natríumväte- karbonatlösning och vatten i denna ordning. Därefter torkas åter- stoden över vattenfritt magnesiumsulfat och lösningsmedlet destil- leras av för framställning av ett fast material. När det fasta materialet omkristalliseras ur etylacetat-petroleumeter erhålles 90 mg av den avsedda z-(zs, an)-AHPA-(s)-Leu-oszl. ' smp 122°c, ¿fe_75§g A+ 1s,1° (e 0,77, Aeon). 76 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Leu-OBzl behandlas därefter på samma sätt som i exempel 1, steg 4, för framställning av 33 mg (ZS, 3R)-3-amino-2-hydroxi~4-fenylbutanoyl-(S)-leucin. ¿fe;75šâ ¿- 21,8° (e 0,45, Aeon), Rf 0,48 -(S)-Leu-0Me. _ ' 15 452 318 EXEMEL 3 Steg l g _ 330 mg z-(2S, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel 1, steg 2, 162 mg HOBt, 217 mg av vätekloriden av (S)-Leu-0Me, 0,17 ml trietylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som 1 exempel l, steg 3, för framställning av 293 mg Z-(25, 3R)-AHPA- smp l2o°c, ¿"a_75§â - 22,l° (e 1,09, Aeon) Analys för C25H32N206: Funnet C: 65,91, H: 7,16, N: 6,28; Beräknat C: 65,77, H: 7,07, N: 6,14.Step 3 85 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA-OSu and 86 mg of (S) -Leu-OBzl. TosOH is reacted for 12 hours in 5 ml of dioxane at room temperature in the presence of 0.03 ml of triethylamine. Then the reaction mixture is concentrated under reduced pressure. The residue is extracted with ethyl acetate and washed with 1N sulfuric acid, water, 5% aqueous sodium bicarbonate solution and water in this order. The residue is then dried over anhydrous magnesium sulphate and the solvent is distilled off to give a solid. When the solid is recrystallized from ethyl acetate-petroleum ether, 90 mg of the intended z- (zs, an) -AHPA- (s) -Leu-oszl are obtained. mp 122 ° C, ¿fe_75§g A + 1s, 1 ° (e 0.77, Aeon). 76 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Leu-OBzl are then treated in the same manner as in Example 1, step 4, to prepare 33 mg of (ZS, 3R) -3-amino-2-hydroxy ~ 4-phenylbutanoyl- (S) -leucine. ¿Fe; 75šâ ¿- 21.8 ° (e 0.45, Aeon), Rf 0.48 - (S) -Leu-0Me. EXAMPLE 3 Step 1g _ 330 mg of z- (2S, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 162 mg of HOBt, 217 mg of the hydrogen chloride of (S) -Leu-OMe , 0.17 ml of triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 293 mg of Z- (25, 3R) -AHPA- mp 120 ° C, ¿"a_75§â - 22, 10 ° (e 1.09, Aeon) Analysis for C 25 H 32 N 2 O 6: Found C: 65.91, H: 7.16, N: 6.28; Calculated C: 65.77, H: 7.07, N: 6, 14.

Steg 2 250 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Leu-0Me löses i 10 ml metanol och 0,6 ml 1N natriumhydroxidvattenlösning sättes till lösningen och den resulterande blandningen omröres i 6 h vid rumstemperatur.Step 2 250 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Leu-OMe are dissolved in 10 ml of methanol and 0.6 ml of 1N aqueous sodium hydroxide solution are added to the solution, and the resulting mixture is stirred for 6 hours at room temperature.

Därefter destilleras metanol av under reducerat tryck och vatten tillsättes till den återstående vätskan, vilken därefter justeras till pH 2 med lN svavelsyra. De separerade fällningarna extraheras med etylacetat, tvättas med vatten, dehydratiseras till torrhet I över vattenfritt magnesiumsulfat och lösningsmedlet avlägsnas.Then methanol is distilled off under reduced pressure and water is added to the remaining liquid, which is then adjusted to pH 2 with 1N sulfuric acid. The separated precipitates are extracted with ethyl acetate, washed with water, dehydrated to dryness I over anhydrous magnesium sulfate and the solvent is removed.

Det resulterande fasta materialet kristalliseras ur etylacetat- P -petroleumeter. När kristallerna omkristalliseras ur samma lösnings- medel erhàlles 150 mg z-(zs, 3R)-AHPA-(s)-Lea. ' smp 2o9°c, ¿"a_75šå 24H30N2O6: Funnet C: 65,29, H: 6,75, N: 6,33; Beräknat C: 65,14, H: 6,75, N: 6,46. + 27,2° (e 0,71, Aeon) Analys för C Steg 3 120 mg Z-(2S, 3R}-AHPA-(S)-Leu löses i 30 ml metanol och hydreras i 3 h med 50 mg palladiumsvart. Därefter filtreras kata- lysatorn av och metanol destilleras av för att kristallisera 54 mg (2S, 3R)-3-amino-2-hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)-leucin ur metanol- etylacetati I ¿'q;75§â -22,v° (e o,9s, Aeon), af o,4a EXEMEL 4 _ 85 mg Z-(ZS, 3R)-AHPA-OSu, framställd på samma sätt som 1 lexempel 2, steg 2, får reagera med S4 mg (S)-Leu i två dagar vid rumstemperatur i 5 ml dioxan och S ml vatten i närvaro av 0,03 ml g trietylamin. Reaktionsblandningen koncentreras under reducerat tryck. «“452 318 ' 16 30 ml vatten tillsättes till återstoden och lösningen justeras därefter till pH.2 med lN svavelsyra och extraktion genomföres ' _ med 50 ml etylacetat, Etylacetatskiktet tvättas med lN svavelsyra, vatten, 5 3 vattenhaltig natriumvätekarbonatlösning och vatten 1 denna ordning och dehydratiseras till torrhet med vattenfritt magnesiumsulfat. Etylacetat avlägsnas och det resulterande fasta _materialet kristalliseras ur etylacetat-petroleumeter. När kris- tallerna återutfälles ur samma lösningsmedel erhålles 63 mg av den avsedda Zj(2S, 3R)-AHPA-(S)-Leu. smp 20900, [ujsšâ + 2s,7° (c 0,55, Aeon).The resulting solid is crystallized from ethyl acetate-P-petroleum ether. When the crystals are recrystallized from the same solvent, 150 mg of z- (zs, 3R) -AHPA- (s) -Lea are obtained. mp 209 ° C, δ "75 ° C 24 H 30 N 2 O 6: Found C: 65.29, H: 6.75, N: 6.33; Calculated C: 65.14, H: 6.75, N: 6.46. 27.2 ° (e 0.71, Aeon) Analysis for C Step 3 120 mg of Z- (2S, 3R} -AHPA- (S) -Leu are dissolved in 30 ml of methanol and hydrogenated for 3 hours with 50 mg of palladium black. the catalyst is filtered off and methanol is distilled off to crystallize 54 mg (2S, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -leucine from methanol-ethyl acetate I 22, v ° (eo, 9s, Aeon), af o, 4a EXAMPLE 4 - 85 mg Z- (ZS, 3R) -AHPA-OSu, prepared in the same manner as in Example 2, step 2, is reacted with S4 mg (S) -Leu for two days at room temperature in 5 ml of dioxane and 5 ml of water in the presence of 0,03 ml of triethylamine. The reaction mixture is concentrated under reduced pressure. '' 452 318 '16 ml of water are added to the residue and the solution is then adjusted to pH.2 with 1N sulfuric acid and extraction is carried out with 50 ml of ethyl acetate, the ethyl acetate layer is washed with 1N sulfuric acid, water, aqueous sodium bicarbonate solution and in this order and dehydrated to dryness with anhydrous magnesium sulfate. Ethyl acetate is removed and the resulting solid is crystallized from ethyl acetate-petroleum ether. When the crystals are reprecipitated from the same solvent, 63 mg of the intended Zj (2S, 3R) -AHPA- (S) -Leu are obtained. mp 20900, [ujsšâ + 2s, 7 ° (c 0.55, Aeon).

När 45 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Leu behandlas på samma sätt som i exempel 3, steg 3, erhålles 15 mg Bestatin. ~ [ajsšá -22,3° (c 0,52, Aeon), Rf 0,48.When 45 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Leu are treated in the same manner as in Example 3, step 3, 15 mg of Bestatin are obtained. ~ [α] 25 D -22.3 ° (c 0.52, Aeon), Rf 0.48.

EXEMEL 5 330 mg Z-(25, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exemf pel 1, steg 2, behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 3, med 472 mg (R)-Leu-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0,l4 ml trietylamín och 206 mg Dccn för framställning av 450 mg z-(zs, sm-AHPA-(Rh -Leu-OBzl. ¥q smp 11s°c-119°c,' [a 7 23 + 43,0° (c 1,23, Aeon). - 578 När 430 mg av den resulterande Z-(2S, 3R)-AHPA-(R)-Leu-OBzl behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 4, erhålles 144 mg (25, 3R)-3-andno-2-hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)-leucin. [ajsšâ + 0,90 (c 0,41, Aeon), Rf 0,49J Analys för Cl6H24N2O4: Funnet C: 62,47, H: 7,89, N: 9,09; Beräknat C: 62,31, H: 7,85, N: 9,09.EXAMPLE 5 330 mg of Z- (25, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, are treated in the same manner as in Example 1, step 3, with 472 mg of (R) -Leu-OBzl. TosOH, 162 mg HOBt, 0.4 ml triethylamine and 206 mg Dccn to give 450 mg z- (zs, sm-AHPA- (Rh -Leu-OBzl. ¥ mp 11s ° c-119 ° c, + 23.0 ° (c 1.23, Aeon) - 578 When 430 mg of the resulting Z- (2S, 3R) -AHPA- (R) -Leu-OBzl is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 144 mg (25, 3R) -3-andno-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -leucine are obtained. [α] 25 D = 0.90 (c 0.41, Aeon), Rf 0.49J Analysis for C 16 H 24 N 2 O 4: Found C: 62.47, H: 7.89, N: 9.09; Calculated C: 62.31, H: 7.85, N: 9.09.

EXEMPEL 6 Steg 1 Z-(2RS, 3S)-AHPA framställes genom bensyloxikarbonylering av (2RS, 3S)-AHPA, som har framställts på samma sätt som i exemr pel'l, steg l. 7,75 g Z-(2RS, 38)-AHPA och 6,69 g dehydroabietyl- amin får reagera för framställning av en diastereoisomer, vilken därefter löses i eter för avfiltrering av det knappast lösliga dehydroabietylaminsaltet av Z-(2R, BÉ)-AHPA. Den filtrerade eter- lösningen koncentreras under reducerat-tryck och det resulterande oljiga materialet behandlas med etylacetat-lN klorvätesyra för framställning av rå Z-(28, 3S)-AHPA. När kristallerna återutfälles _>smp 17s°c-17s°c, ¿" 4552 3”l8 2 ggr ur etylacetat-petroleumeter erhålles 2,16 g ren Z-(28, 35)- -AHPA. '- 25 a_/578 + s,6° (C 1,39, Aeon) Steg 2 660 mg z-(zs, 35)-AHPA, 944 mg (S)-Leu-oBz1,TøsoH, 324 mg Host, 0,34 ml trietylamin och 412 mg DCCD behandlas på samma sätt som Ii exemel 1, steg 3, för framställning av 710 mg Z-(25, 35)-AHPAf -(S)~Leu-0Bz1. smp 12s°c, ¿"u_7¿§â -3s,o° (C 0,81, Aeon). 500 mg Z-(25, 3S)-AHPA-(S)-Leu-0Bz1 behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 4, för framställning av 270 mg (ZS, 3S)-3famino- -2-hydrox1-4-feny1bu:anay1-(s)-leuein. ' ¿“q¿75§§ -e1,3°(c o,s6, Aeon), Rf o,37.EXAMPLE 6 Step 1 Z- (2RS, 3S) -AHPA is prepared by benzyloxycarbonylation of (2RS, 3S) -AHPA, which has been prepared in the same manner as in Example Pel'l, step 1. 7.75 g of Z- (2RS, 3S, 38) -AHPA and 6.69 g of dehydroabietylamine are reacted to produce a diastereoisomer, which is then dissolved in ether to filter off the sparingly soluble dehydroabietylamine salt of Z- (2R, BÉ) -AHPA. The filtered ether solution is concentrated under reduced pressure and the resulting oily material is treated with ethyl acetate-1N hydrochloric acid to produce crude Z- (28, 3S) -AHPA. When the crystals are reprecipitated -> mp 17s ° c-17s ° c, "4552 3" 18 times from ethyl acetate-petroleum ether, 2.16 g of pure Z- (28, 35) - -AHPA are obtained. '- 25 a_ / 578 + s, 6 ° (C 1.39, Aeon) Step 2,660 mg z- (zs, 35) -AHPA, 944 mg (S) -Leu-oBz1, TøsoH, 324 mg Host, 0.34 ml triethylamine and 412 mg DCCD is treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 710 mg of Z- (25, 35) -AHPAf - (S) -Leu-OBz1. Mp 12s ° c, ¿"u_7¿§â -3s, o ° (C 0.81, Aeon). 500 mg of Z- (25, 3S) -AHPA- (S) -Leu-OBz1 are treated in the same manner as in Example 1, step 4, to prepare 270 mg of (ZS, 3S) -3famino--2-hydrox1-4 -feny1bu: anay1- (s) -leuein. '¿“Q¿75§§ -e1,3 ° (c o, s6, Aeon), Rf o, 37.

Analys för Cl6H24N204: Funnet C: 61,99, H: 7,71, N: 9,13; Beräknat C: 62,31, H: 7,85, N: 9,09.Analysis for C 16 H 24 N 2 O 4: Found C: 61.99, H: 7.71, N: 9.13; Calculated C: 62.31, H: 7.85, N: 9.09.

EXEMEL 7 _ 165 mg Z-(2S, 35)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel 6, steg 1, 237 mg (R)-Leu-0Bzl.Tos0H, 81 mg HOBt, 0,08 ml trietyl- amin och 103 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning aj 180 mg Z-(25, 3S)-AHPA-(R)-Leu-0Bzl. smp 12s°c-129°c, ¿“a_75§â -11,o° (c 1,02, Aeon) 155 mg Z-(2S, 3S)-AHPA-(R)-Leu-0Bzl behandlas på samma sättd som i exempel 1, steg 4, för framställning av 72,1 mg (2S, 3S)~3- -amino-2-hydroxi-4-feny1butanoyl-(R)-leucin. ¿"u_7 ÉÉ8 -31,4° (C o,47, Aeon), Rf o,s2.EXAMPLE 7 165 mg Z- (2S, 35) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 6, step 1, 237 mg (R) -Leu-OBzl.TosOH, 81 mg HOBt, 0.08 ml triethylamine and 103 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare aj 180 mg of Z- (25, 3S) -AHPA- (R) -Leu-OBzl. mp 12s ° c-129 ° c, ¿“a_75§â -11, o ° (c 1.02, Aeon) 155 mg Z- (2S, 3S) -AHPA- (R) -Leu-0Bzl are treated in the same way as in Example 1, step 4, to prepare 72.1 mg of (2S, 3S) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (R) -leucine. ¿"U_7 ÉÉ8 -31.4 ° (C o, 47, Aeon), Rf o, s2.

Analys för Cl6H24N20 : Funnet C: 62,07, H: 7,63, N: 8,80; Beräknat C: 62,31, H: 7,85, N: 9,09.Analysis for C 16 H 24 N 2 O: Found C: 62.07, H: 7.63, N: 8.80; Calculated C: 62.31, H: 7.85, N: 9.09.

EXEMPEL 8 330 mg Z-(2S, 3R)-AHPA framställd på samma sätt som i exempel 1, steg 2, 405 mg Gly-0Bzl.Tos0H, 162 mg HOBt, 0,14 ml trietylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av oljig Z-(2S, 3R)-AHPÅ-Gly-OBz1. När den under- söktes med tunnskiktskromatografi visade det sig, att denna oljiga produkt var ren. _ När den oljíga produkten behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 4, erhålles 117 mg (25, 3R)-3-amino-2-hydroxi-4-fenylbuta- noyl-glycin. 18 452 318V ¿f}¿jg§â - 7,49 (C o,4e, Aeon), Af o,2s.EXAMPLE 8 330 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 405 mg of Gly-OBzl.TosOH, 162 mg of HOBt, 0.14 ml of triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, for the preparation of oily Z- (2S, 3R) -AHPÅ-Gly-OBz1. When examined by thin layer chromatography, it was found that this oily product was pure. When the oily product is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 117 mg (25, 3R) of -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl-glycine are obtained. 18 452 318V ¿f} ¿jg§â - 7,49 (C o, 4e, Aeon), Af o, 2s.

Analys för cl2Hi6o4n2.cH3oà= vunnet c= 54,33, H: 6,87, N: 9,69; Beräknat C: 54,92, H: 7,09, N: 9,87.Analysis for C 12 H 16 O 4 N 2 .cH 3 O = = c = 54.33, H: 6.87, N: 9.69; Calculated C: 54.92, H: 7.09, N: 9.87.

ExEMæEL 9' 330 mg Z-(23, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel 1, steg 2, 440 mg av vätekloriden av (S)-Ser(B;l)-0Nb, 162 mg HOBt, 0,14 ml trietylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av 540 mg Z-(2S, 3R)-AHPA- -(S)-Ser(Bz1-0No. smp 121,s°c, ¿“a¿75§š + 17,7° (C 1,07, Aeon).EXAMPLE 9 330 mg of Z- (23, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 440 mg of the hydrogen chloride of (S) -Ser (B; 1) -ONb, 162 mg of HOBt, , 14 ml of triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 540 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA- - (S) -Ser (Bz1-0No. Mp 121, p. ° c, ¿“a¿75§š + 17,7 ° (C 1,07, Aeon).

När 500 mg Z-(2S, 3R)-AHPA(S)-Ser(Bz1)-0Nb behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 4, erhålles 147 mg (28, 3R)-3-amino-2-hydroxi- -4-fenylbutanoy1-(S)-serin. ["q;75šg'~9,o° (C o,5o, Aeon), Rf 0,20.When 500 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA (S) -Ser (Bz1) -ONb are treated in the same manner as in Example 1, step 4, 147 mg of (28, 3R) -3-amino-2-hydroxy are obtained. - -4-phenylbutanoyl- (S) -serine. [α] 25 D;

Analys för Cl3Hl805N2.H20: Funnet C: 51,39, H: 6,74, N: 8,97; Beräknat C: 51,99, H: 6,71, N: 9,33.Analysis for C 13 H 18 O 5 N 2 .H 2 O: Found C: 51.39, H: 6.74, N: 8.97; Calculated C: 51.99, H: 6.71, N: 9.33.

EXEMEL 10 ' 330 mg Z-(2S, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel l, steg 2, 400 mg av vätekloriden av (S)-Gln-0Bzl, 162 mg HOBt, 0,14 ml trietylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av 200 mg Z-(2S, 3R)-AHPA~ -(s)-Gln-oszl. A ljåš smp 1ss°c, ¿"q¿75§â + sz,3° (C o,7s, Aeon). när lao mg z-(zs, 3R)-AHPA-(s)-oln-oBz1 behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 4, erhålles 61 mg (ZS, 3R)-3-amino~2- -hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)-glutamin. ¿fu;75§š -9,9° (C o,37, Aeon), Rf 0,17.EXAMPLE 10 330 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 400 mg of the hydrogen chloride of (S) -Gln-OBzl, 162 mg of HOBt, 0.14 ml of triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 200 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA - - (s) -Gln-oszl. A ljåš mp 1ss ° c, ¿"q¿75§â + sz, 3 ° (C o, 7s, Aeon). When lao mg z- (zs, 3R) -AHPA- (s) -oln-oBz1 is treated on In the same manner as in Example 1, step 4, 61 mg of (ZS, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -glutamine are obtained. C o, 37, Aeon), Rf 0.17.

Analys för Cl5H2l05N3.2H20: Funnet C: 50,64, H: 6,32, N: 11,61; - Beräknat C: 50,13, H: 7,01, N: 11,69.Analysis for C 15 H 21 O 5 N 3 .2H 2 O: Found C: 50.64, H: 6.32, N: 11.61; Calculated C: 50.13, H: 7.01, N: 11.69.

EXEMPEL 11 6 . ' 330 mg Z-(26, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel 1, steg 2, 600 mg (S)-Glu(OBzl)~OBzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0,14 ml tríetylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av 605 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Glu- (OBzl)-OBzl. smp 119°c-12o°c, ¿"a;75§ä + 2s,6° (C 1,04, Aeon). 19 i 4525518 När 250 mg Z-(ZS, 3R)-AHPA-(S)-Glu(OB:l)~0Bzl behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 4, erhålles 166 mg (2S, 3R)-3- -amino-2-hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)-glutaminsyra. A ' ¿'e_75§â -1s,4° (e 0,51, Aeon), Rf o,27.EXAMPLE 11 6. 330 mg of Z- (26, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 600 mg of (S) -Glu (OBzl) -OBzl.TosOH, 162 mg of HOBt, 0.14 ml of triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 605 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Glu- (OBzl) -OBzl. mp 119 ° C-120 ° C, δ "a; 75§ä + 2s, 6 ° (C 1.04, Aeon). 19 i 4525518 When 250 mg Z- (ZS, 3R) -AHPA- (S) - Glu (OB: 1) -OBzl is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 166 mg of (2S, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -glutamic acid are obtained. ¿'E_75§â -1s, 4 ° (e 0,51, Aeon), Rf o, 27.

Analys för CISHZOOGNZ: Funnet C: 55,20, H: 5,90, N: 8,20; Beräknat C: 55,55, H: 6,22, N: 8,64.Analysis for CISHZOOGNZ: Found C: 55.20, H: 5.90, N: 8.20; Calculated C: 55.55, H: 6.22, N: 8.64.

Exsmænn 12 ' 330 mg Z-(2S, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel 1, steg 2, 455 mg (S)-Val-0Bzl.Tos0H, 162 mg HOBt, 0,14 ml tri- etylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, eéeg 3, för framställning av 397 mg z-(zs, 3R)-AHPA-(s)-vel-oszi. smp 96,5°c-97°c, ["e;75§š + 19,2° (e 0,99, Aeon) När 376 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Val-0Bzl behandlas på samma sätt som i exemel l, steg 4, erhålles 104 mg (28, 3R)-3-amino-2-hydroxi- -4-fenylbutanoyl-(S)-valin. ¿"q;75§g -1,4° (e o,ss, Aeon), Rf o,42.Example 12 '330 mg Z- (2S, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 455 mg (S) -Val-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0.14 ml triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, eéeg 3, to prepare 397 mg of z- (zs, 3R) -AHPA- (s) -vel-oszi. mp 96.5 ° c-97 ° c, ["e; 75§š + 19.2 ° (e 0.99, Aeon) When 376 mg Z- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Val- OBzl is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 104 mg (28, 3R) -3-amino-2-hydroxy--4-phenylbutanoyl- (S) -valine are obtained. , 4 ° (eo, ss, Aeon), Rf o, 42.

Analys för C H 0 N Funnet C: 60,98, H: 7,59, N: 9,28; 22 4 2” Beräknat C: 61,20, H: 7,53, N: 9,52. 15 EXEMPEL 13 330 mg Z-(2S, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel 1, steg 2, 455 mg (s)-Nva-osz1.TesoH, 162 mg Host, 0,14 m1 tri- etylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av 310 mg Z-(25, 3R)-AHPA-(S)-Nva-0Bzl. 24 578 När 250 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Nva-OBzl behandlas på samma sätt som i exemel 1, steg 4, erhålles 110 mg (ZS, 3R)-3-amino-2- smp 114°c-11s°c. ¿'u¿7 + 22,o° -hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)-norvalin. ¿fa_75šå -14,s° (e o,so, Aeon), af o,41.Analysis for C H 0 N Found C: 60.98, H: 7.59, N: 9.28; Calculated C: 61.20, H: 7.53, N: 9.52. EXAMPLE 13 330 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 455 mg (s) -Nva-osz1.TesoH, 162 mg of Host, 0.14 ml of triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 310 mg of Z- (25, 3R) -AHPA- (S) -Nva-OBzl. When 250 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Nva-OBzl are treated in the same manner as in Example 1, step 4, 110 mg of (ZS, 3R) -3-amino-2-m.p. 114 ° C-11 ° C. 7 'u¿7 + 22, o ° -hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -norvaline. ¿Fa_75šå -14, s ° (e o, so, Aeon), af o, 41.

Analys för Cl5H22O4N2: Funnet C:59,42, H: 7,58, N: 9,09; Beräknat C:59,33, H: 7,64, N: 9,23 EXEMEL 14 När (28, 3R)-AHPA är t-butoxikarbonylerad på det vanliga sättet med användning av t-butyl-S-4,6-dimetylpyrimidin-2-yl- -tiolkarbonat, erhålles DCHA-saltet av Boc-(2S, 3R)-AHPA. smp 1sa°c-1s§°c, ¿fh " 25 _/578 + s1,9° (e o,s9, Aeon). 4.52 318 20 När DCHA avlägsnas från 952 mg av denna produkt genom behand- ling med lN svavelsyra och etylacetat erhålles den oljiga Boc- -(2S, 3R)-AHPA. Det oljiga materialet och 440 mg av vätekloriden av (S)-Met-OMe suspenderas i 20 ml tetrahydrofuran och neutrali- seras med 0,308 ml trietylamin. Den resulterande lösningen kyls till -5°C och omrörs efter tillsats av 412 mg DCCD i 4 h vid rums- temperatur. K : De avsatta kristallerna avfiltreras, moderlutan koncentreras under reducerat tryck och återstoden löses i 200 ml etylacetat, tvättas med lN svavelsyra, vatten, 5 % vattenhaltig natriumväte- karbonatlösning och vatten i denna ordning och dehydratiseras till torrhet över vattenfritt magnesiumsulfat. ' Den återstod, som erhålles genom koncentrering av moderluten under reducerat tryck, löses. i en etylacetat-bensenblandning (2:5) och införes i en kolonnkromatograf med användning av silika- gel G (handelsnamn för ett adsorptionsmedel för användning i kolonn- kromatografi, framställt av Merck Inc.). Den fraktion, som inne- håller det avsedda materialet, uppsamlas och lösningsmedlet destil- leras av under reducerat tryck för att ge ett fast material. När det fasta materialet omkristalliseras ur eter-petroleumeter er- hålles 38O mg Boc-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Met-OMe. - - 24 smp 11s°c, ¿ a_/578 när zao mg soc-(zs, 3R)-AHPA-(s)-Met-one behandlas på samma sätt som i exempel 3, steg 2, erhålles 200 mg Boc-(2S, 3R)~AHPA- -(S)-Met. + s1,4° (C o,se, Aeon) smp 11e°c (škumning), ¿"q;75šâ +44,1° (C o,s4, AcoH)._ 0,2 ml tioglykolsyra och 50 % vattenhaltig trifluorättiksyra- lösning sättes till l5O mg Boc-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Met och blandningen omröres i 1 h vid rumstemperatur.Analysis for C 15 H 22 O 4 N 2: Found C: 59.42, H: 7.58, N: 9.09; Calculated C: 59.33, H: 7.64, N: 9.23 EXAMPLE 14 When (28, 3R) -AHPA is t-butoxycarbonylated in the usual manner using t-butyl-S-4,6-dimethylpyrimidine -2-yl thiol carbonate, the DCHA salt of Boc- (2S, 3R) -AHPA is obtained. mp 1sa ° c-1s§ ° c, ¿fh "25 _ / 578 + s1.9 ° (eo, s9, Aeon). 4.52 318 20 When DCHA is removed from 952 mg of this product by treatment with 1N sulfuric acid and ethyl acetate gives the oily Boc- (2S, 3R) -AHPA, the oily material and 440 mg of the hydrogen chloride of (S) -Met-OMe are suspended in 20 ml of tetrahydrofuran and neutralized with 0.308 ml of triethylamine, the resulting solution is cooled to -5 ° C and stirred after adding 412 mg of DCCD for 4 hours at room temperature K: The deposited crystals are filtered off, the mother liquor is concentrated under reduced pressure and the residue is dissolved in 200 ml of ethyl acetate, washed with 1N sulfuric acid, water, 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution and water in this order and dehydrated to dryness over anhydrous magnesium sulfate. The residue obtained by concentrating the mother liquor under reduced pressure is dissolved in an ethyl acetate-benzene mixture (2: 5) and introduced into a column chromatograph using silica gel G (trade name for an adsorption m noble for use in column chromatography, manufactured by Merck Inc.). The fraction containing the intended material is collected and the solvent is distilled off under reduced pressure to give a solid. When the solid is recrystallized from ether-petroleum ether, 380 mg of Boc- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Met-OMe are obtained. - mp 11s ° c, ¿a_ / 578 when zao mg soc- (zs, 3R) -AHPA- (s) -Met-one is treated in the same manner as in Example 3, step 2, 200 mg of Boc- ( 2S, 3R) ~ AHPA- - (S) -Met. + s1.4 ° (C o, se, Aeon) mp 11e ° c (foam), ¿"q; 75šâ + 44.1 ° (C o, s4, AcoH) ._ 0.2 ml thioglycolic acid and 50% aqueous trifluoroacetic acid solution is added to 150 mg of Boc- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Met and the mixture is stirred for 1 hour at room temperature.

Ett oljigt material, som erhålles genom koncentrering av bland- ningen under reducerat tryck, löses i vatten och adsorberas på en kolonn (5 ml), som är packad med Dowex SOX4 (H-typ) (handelsnamn för ett jonbytarharts, som framställes och säljes av Dow Chemical Co.).An oily material obtained by concentrating the mixture under reduced pressure is dissolved in water and adsorbed on a column (5 ml) packed with Dowex SOX4 (H-type) (trade name for an ion exchange resin produced and sold). by Dow Chemical Co.).

Därefter elueras adsorberat material med en 2N vattenhaltig ammo- niumhydroxidlösning och indunstas till torrhet för erhållande av ett fast material. När.det fasta materialet omkristalliseras i en vatten-acetonblandning (l:l), erhålles 87 mg (2S, 3R)-3-amino-2- -hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)-metionin. 5 ~ I 21 4552 3'l8 - - 27 o - ¿ a_/578 -20,4 _(c 0,49, Ac0H), Rf 0,37.Thereafter, adsorbed material is eluted with a 2N aqueous ammonium hydroxide solution and evaporated to dryness to give a solid. When the solid is recrystallized from an aqueous acetone mixture (1: 1), 87 mg of (2S, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -methionine are obtained. 5 ~ I 21 4552 3'l8 - - 27 o - ¿a_ / 578 -20.4 _ (c 0.49, AcOH), Rf 0.37.

Analys för c o4N2s.1/2H2o= funnet c= s3,e4,'n; 6,47, N; 8,11; Beräknat C: 53,67, H: 6,91, N: 8,35. l5H22 EXEMPEL.l5 330 mg Z-(25, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exem- pel l, steg 2, 472 mg (S)-Ile-0Bzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0,14 ml trietylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av 466 mg Z-(28, 3R)-AHPA-(S)-Ile-0Bzl. smp 1oo°c-1o1°c, ¿"q_75§ä + 23,6° (c 1,0, Aeon) När 440 mg Z-(25, 3R)-AHPA-(S)-Ile-0Bzl behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 4, erhålles 191 mg (25, 3R)-3-amino- -2-hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)-isoleucin. ¿“u;75§g + 6,4° (C 0,52, Aeon), Rf o,4a.Analysis for c o4N2s.1 / 2H2o = found c = s3, e4, 'n; 6.47, N; 8.11; Calculated C: 53.67, H: 6.91, N: 8.35. 15H22 EXAMPLE 15 330 mg Z- (25, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 472 mg (S) -Ile-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0.14 ml triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 466 mg of Z- (28, 3R) -AHPA- (S) -Ile-OBzl. mp 100 ° C-100 ° C, ¿"q_75§ä + 23.6 ° (c 1.0, Aeon) When 440 mg Z- (25, 3R) -AHPA- (S) -Ile-OBzl are treated in the same manner as in Example 1, step 4, 191 mg (25, 3R) -3-amino--2-hydroxy-4-phenylbutanoyl- (S) -isoleucine are obtained. 75g + 6.4 ° ( C 0.52, Aeon), Rf o, 4a.

Analys för Cl6H2404N2: Funnet C: 62,31, H: 7,73, N: 8,99; Beräknat C: 62,31, H: 7,85, N: 9,09.Analysis for C 16 H 24 O 4 N 2: Found C: 62.31, H: 7.73, N: 8.99; Calculated C: 62.31, H: 7.85, N: 9.09.

EXEMPEL 16 330 mg Z-(ZS, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exem- pel l, steg 2, 472 mg (S)-Nle-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0,14 ml trietylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av 437 mg Z-(25, 3R)-AHPA-(S)-Nle-0Bz1. 24 578 350 mg Z-(25, 3R)-AHPA-(S)-Nle-0Bz1 behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 4, varvid 160 mg (ZS, 3R)-3-amino-2-hydroxi- smp. 114°c-11s°c, ¿fu_7 + 23,3° (C o,94, Acou)._ -4-fenylbutanoyl-(S)-norleucin erhålles. ¿fs;75§š -s,9° (C o,1o, Asos), af o,47.EXAMPLE 16 330 mg of Z- (ZS, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 472 mg of (S) -Nle-OBzl.TosOH, 162 mg of HOBt, 0.14 ml of triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 437 mg of Z- (25, 3R) -AHPA- (S) -Nle-OBz1. 35 578 350 mg of Z- (25, 3R) -AHPA- (S) -Nle-OBz1 are treated in the same manner as in Example 1, step 4, wherein 160 mg of (ZS, 3R) -3-amino-2-hydroxy- m.p. 114 ° C-11 ° C, ¿fu_7 + 23.3 ° (C o, 94, Acou). -4-phenylbutanoyl- (S) -norleucine is obtained. ¿Fs; 75§š -s, 9 ° (C o, 1o, Asos), af o, 47.

H24o4N2.n2o= funnet c= 58,95, H: 1,84, N: a,so{ Analys för C ' Beräknat C: 58,88, H: 8,03, N: 8,58. 16 EXEMPEL 17 330 mg z-(zs, 3R)4AnPA, framställa på samma sätt som 1 exempel l, steg 2, 505 mg (RS)-Aoc-0Bzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0,14 ml tri- etylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 3, varvid 430 mg Z-(25, 3R)-AHPA-(RS)-Aoc-0Bzl erhålles. smp. 9o°c-92°c ¿"u_75§â + 3z,9° (C o,94, Aeon).H24o4N2.n2o = found c = 58.95, H: 1.84, N: a, so {Analysis for C 'Calculated C: 58.88, H: 8.03, N: 8.58. EXAMPLE 17 330 mg z- (zs, 3R) 4AnPA, prepared in the same manner as in Example 1, step 2, 505 mg (RS) -Aoc-OBzl.TosOH, 162 mg HOBt, 0.14 ml triethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, whereby 430 mg of Z- (25, 3R) -AHPA- (RS) -Aoc-OBzl are obtained. m.p. 9o ° c-92 ° c ¿"u_75§â + 3z, 9 ° (C o, 94, Aeon).

När 250 mg Z-(25, 3R)-AHPA-(RS)-Aoc-0Bzl behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 4, erhålles 74 mg (ZS, 3R)-3-amino- -2-hyaroxi-4-fenylbutanoyl-(RS)-2-aminooktansyra. 452 318 22 .. - ¿Tu_75§à -34,9° in 0,53, Aeon), Rf o,5a.When 250 mg of Z- (25, 3R) -AHPA- (RS) -Aoc-OBzl is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 74 mg of (ZS, 3R) -3-amino--2-hyaroxy- 4-Phenylbutanoyl- (RS) -2-aminooctanoic acid. 452 318 22 .. - ¿Tu_75§à -34,9 ° in 0,53, Aeon), Rf o, 5a.

Analys för Cl8H28O4N2: Funnet C: 64,43, H: 8,18, N: 8,02; Beräknat C: 64,26, H: 8,39, N: 8,33. ' EXEMPEL 18 ' - 330 mg Z-(28, 3R)-AHPA, framställd på samma sätt som i exempel, 1, steg 2, 513 mg (s)-Phe-oBz1.Toson, 162 mg Host, o,14_m1 tri- etylamin och 206 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 3, för framställning av 378 mg Z-(ZS, 3R)-AHPA-(S)-Phe-0821. smp. 111°c-112°c, ¿fa_75§â + 39,s° (C 0,97, Aeon). ' När 355 mg Z-(2S, 3R)-AHPA-(S)-Phe-0Bzl behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 4, erhålles 108 mg (25, 3R)-3~amino-2- -hydroxi-4-fenylbutanoy1-(S)-fenylalanin. t / _75šâ + o,4° (c 0,46, Aeon), Rf 0,44.Analysis for C 18 H 28 O 4 N 2: Found C: 64.43, H: 8.18, N: 8.02; Calculated C: 64.26, H: 8.39, N: 8.33. 'EXAMPLE 18' - 330 mg Z- (28, 3R) -AHPA, prepared in the same manner as in Example, 1, step 2, 513 mg (s) -Phe-oBz1.Toson, 162 mg Host, o, 14_m1 tri ethylamine and 206 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to prepare 378 mg of Z- (ZS, 3R) -AHPA- (S) -Phe-0821. m.p. 111 ° C-112 ° C, ¿fa_75§â + 39, s ° (C 0.97, Aeon). When 355 mg of Z- (2S, 3R) -AHPA- (S) -Phe-OBzl is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 108 mg of (25, 3R) -3-amino-2-hydroxy are obtained. -4-phenylbutanoyl- (S) -phenylalanine. t / _75šâ + o, 4 ° (c 0.46, Aeon), Rf 0.44.

Ana1ys för cl9H22o4N2.c)-.3on= runner c: 63,58, n: 6,215, u: 1,57; Beräknat C: 64,15, H: 7,00, N: 7,48.Analysis for C 19 H 22 O 4 N 2 .c) -. 3on = runner c: 63.58, n: 6.215, u: 1.57; Calculated C: 64.15, H: 7.00, N: 7.48.

EXEMPEL 19 2,76 g óljig Z-(ZRS, 3R)-3-amino-2-hydroxi-5-metylhexanonitril löses i 30 ml koncentrerad klorvätesyra och 30 ml dioxan. Efter till- sats av 2,16 g anisol hålles lösningen under återflöde i 4 h.EXAMPLE 19 2.76 g of oily Z- (ZRS, 3R) -3-amino-2-hydroxy-5-methylhexanonitrile are dissolved in 30 ml of concentrated hydrochloric acid and 30 ml of dioxane. After adding 2.16 g of anisole, the solution is kept under reflux for 4 hours.

Dioxan destilleras av under reducerat tryck och den återstående klorvätesyralösningen tvättas med eter. Vattenskiktet koncentre- ras under reducerat tryck till torrhet.Dioxane is distilled off under reduced pressure and the remaining hydrochloric acid solution is washed with ether. The aqueous layer is concentrated under reduced pressure to dryness.

Vatten tillsättes till återstoden och adsorberas på en kolonn packad med Dowex 50x4 (H typ). Efter tvättning med vatten elueras det adsorberade materialet med 4N vattenhaltig_ammoniumhydroxid- lösning. Därefter koncentreras den eluerade lösningen under redu- cerat tryck till torrhet.Water is added to the residue and adsorbed on a column packed with Dowex 50x4 (H type). After washing with water, the adsorbed material is eluted with 4N aqueous ammonium hydroxide solution. The eluted solution is then concentrated to dryness under reduced pressure.

När en vatten-acetonblandning (lzl) tillsättes till återstoden och de resulterande kristallerna separeras genom filtrering, er- hâlles 0,82 g av den avsedda (2RS, 3R)-iso-Bu-Ise. [ajsšš -s,3° (e 1,o, Aeon), nf 0,18. _l,32 g oljig Z-(ZRS, 3R)-iso-Bu-Ise, framställd genom bensyl- oxikarbonylering av (2Rs, 3R)-iso-Bu-Ise, erhâllen i ovannämnda förfarande, l,76 g (S)-Leu-0bzl.Tos0H, 0,60 g HOBt, 0,63 ml tri-7 etylamin och 0,92 g DCCD behandlas på samma sätt som i exempel l, B 452 318 steg 3, för erhållande av en oljig Z-(ZRS, 3R)-iso-Bu-Ise-(S)-Leu- ' -Obzl. När denna oljiga produkt behandlas på samma sätt som i exem- pel l, steg 4, erhålles 0,37 g (ZRS, 3R)-3-amino-2-hydroxi-5-metyl- hexanoyl-(S)-leucin. ¿"q;75§§ -26,6° (o 1,0, Aeon), af o,43 ooh 0,49.When a water-acetone mixture (Izl) is added to the residue and the resulting crystals are separated by filtration, 0.82 g of the intended (2RS, 3R) -iso-Bu-Ise is obtained. [ajsšš -s, 3 ° (e 1, o, Aeon), nf 0,18. 1.32 g of oily Z- (ZRS, 3R) -iso-Bu-Ise, prepared by benzyloxycarbonylation of (2Rs, 3R) -iso-Bu-Ise, obtained in the above process, 1.76 g (S) - Leu-Obzl.TosOH, 0.60 g HOBt, 0.63 ml tri-7 ethylamine and 0.92 g DCCD are treated in the same manner as in Example 1, B 452 318 step 3, to obtain an oily Z- (ZRS , 3R) -iso-Bu-Ise- (S) -Leu- '-Obzl. When this oily product is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 0.37 g of (ZRS, 3R) -3-amino-2-hydroxy-5-methyl-hexanoyl- (S) -leucine is obtained. ¿"Q; 75§§ -26,6 ° (o 1,0, Aeon), of o, 43 ooh 0,49.

Analys för Cl3H26N2O4: Funnet C: 57,01, H: 9,80, N: 10,14; Beräknat C: 56,91, H: 9,55, N: 10,21.Analysis for C 13 H 26 N 2 O 4: Found C: 57.01, H: 9.80, N: 10.14; Calculated C: 56.91, H: 9.55, N: 10.21.

EXBMPEL 20 _ ' När l0,3 g Z-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxi-4-p-klorfenyl-butyro- nitril behandlas på samma sätt som i exempel l, steg l, erhålles 3,10 g (2RS, 3RS)-AHPA (p-Cl).EXAMPLE 20 When 10.3 g of Z- (2RS, 3RS) -3-amino-2-hydroxy-4-p-chlorophenyl-butyronitrile are treated in the same manner as in Example 1, step 1, 3.10 g (2RS, 3RS) -AHPA (p-Cl).

Rf 0,25.Rf 0.25.

Analys för C1OHl2N03Cl: Funnet C: 52,11, H: 5,17, N: 5,99; Beräknat C: 52,29, H: 5,27, N: 6,10. 1,81 g z-(zns, ans)-AHPA (p-c1) (emp 147°c), frenetä11a genom bensyloxikarbonylering av (2RS, 3RS)-AHPA (p-Cl), 2,37 g (S)-Leu- -oBz1.TosoH, 810 mg Host, o,84 m1 triety1am1n ooh 1,03 g Dcco behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 3, erhålles 2,50 g z-(zns, 3Rs)-AHPA (p-cl)-(s)-Leo-oBz1. sno 1z2°c-1z4°c, ¿'o_75§š -12,3° (o 3.18. Aeon). N När 1,50 g Z-(ZRS, 3RS)-AHPA(p-Cl)-(S)-Leu-0Bzl behandlas på samma sätt som i exempel l, steg 4, erhålles 650 mg (2RS, 3RS)- -3-amino-2-hydroxi-4-p-klorfenylbutanoyl-(S)-leucin. ¿"o_75§§ -11,30 (e 1,33, Aeon), af o,42 oon 0,52.Analysis for C 12 OH 12 NO 3 Cl: Found C: 52.11, H: 5.17, N: 5.99; Calculated C: 52.29, H: 5.27, N: 6.10. 1.81 g z- (zns, ans) -AHPA (p-c1) (emp 147 ° c), frenet11a by benzyloxycarbonylation of (2RS, 3RS) -AHPA (p-Cl), 2.37 g (S) - Leu- -oBz1.TosoH, 810 mg Host, 0.84 ml of triethylamine1 and 1.03 g of Dcco are treated in the same manner as in Example 1, step 3, 2.50 g of z- (zns, 3Rs) -AHPA (p -cl) - (s) -Leo-oBz1. sno 1z2 ° c-1z4 ° c, ¿'o_75§š -12,3 ° (o 3.18. Aeon). N When 1.50 g of Z- (ZRS, 3RS) -AHPA (p-Cl) - (S) -Leu-OBzl are treated in the same manner as in Example 1, step 4, 650 mg (2RS, 3RS) - - 3-Amino-2-hydroxy-4-p-chlorophenylbutanoyl- (S) -leucine. ¿"O_75§§ -11.30 (e 1.33, Aeon), af o, 42 oon 0.52.

Analys för Cl6H23N204Cl: Funnet C: 5S,88,_H: 7,29, N: 8,11; Beräknat C: 56,05, H: 6,76, N: 8,17.Analysis for C 16 H 23 N 2 O 4 Cl: Found C: 5S, 88, _H: 7.29, N: 8.11; Calculated C: 56.05, H: 6.76, N: 8.17.

EXEMPEL 21 När 10,3 g Z-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxi-4-o-klorfenyl-bntyr0- nitril behandlas på samma sätt som i exempel l, steg l, erhålles 4,82 g (ZRS, 3RS)-AHPA (0-Cl).EXAMPLE 21 When 10.3 g of Z- (2RS, 3RS) -3-amino-2-hydroxy-4-o-chlorophenyl-bantyronitrile are treated in the same manner as in Example 1, step 1, 4.82 g ( ZRS, 3RS) -AHPA (0-Cl).

Rf 0,25 och 0,29.Rf 0.25 and 0.29.

Ane1ys för clOal2No3c1= Funnet c= 52,01, H: 5,17, N: 5,91; Beräknat C: 52,29, H: 5,27, N: 6,10. 726 mg z-<2ns, ans)-AnPA(o-cl) (emp 136,s°c), framstä11a genom bensyloxikarbonylering av (2RS, 3RS)-AHPA(o-Cl), 944 mg (S)-Leu- -0Bzl.TosOH, 324 mg HOBt, 0,34 ml trietylamin och 412 mg DCCD be- handlas pâ samma sätt som i exempel l, steg 3, varvid 747 mg z-(zas, ans)-AHPA erhålles.Analysis for clOal2No3c1 = Found c = 52.01, H: 5.17, N: 5.91; Calculated C: 52.29, H: 5.27, N: 6.10. 726 mg z- <2ns, ans) -AnPA (o-cl) (emp 136, s ° c), prepared by benzyloxycarbonylation of (2RS, 3RS) -AHPA (o-Cl), 944 mg (S) -Leu- -Obzl.TosOH, 324 mg HOBt, 0.34 ml triethylamine and 412 mg DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, to give 747 mg z- (zas, ans) -AHPA.

'ExEMæBL'z2 - 452 51,8 7 2,- smp 1z9-13z°<:, [ajsšâ -29.1° (c 1,02. Acom- När 640 mg Z-(2RS, 3RS)-AH?A(o-C1)-(S)-Leu-OBzl behandlas pâ samma sätt som i exenpel l, steg 4, erhålles 107 mg (ZRS, 3RS)- -3-amino-2-hydroxí-4-o-klorfenylbutanoyl-(S)-leucin. ¿"q¿75§š -2o,a° (C o,4a, Aeon), Rf 0,46.'ExEMæBL'z2 - 452 51.8 7 2, - m.p. 1z9-13z ° <:, [ajsšâ -29.1 ° (c 1.02. Acom- When 640 mg Z- (2RS, 3RS) -AH? A (o -C1) - (S) -Leu-OBzl is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 107 mg are obtained (ZRS, 3RS) -3-amino-2-hydroxy-4-o-chlorophenylbutanoyl- (S) -leucine. ¿"q¿75§š -2o, a ° (C o, 4a, Aeon), Rf 0,46.

Analys för C H 16 23N2o4c1{ vunnet c= 56,21, n= 6,56, N: 7,90; Beräknat C: 56,05, H: 6,76, N: 8,17; När 11,2 g Z-(2RS, 3RS)-3-amino-2-hydroxi-4-p-metylfeny1- butyronitril behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 1, erhålles 3,41 g (2ns,d3Rs)-AnPA(p-me).Analysis for C H 16 23N 2 O 4 Cl 1 {found c = 56.21, n = 6.56, N: 7.90; Calculated C: 56.05, H: 6.76, N: 8.17; When 11.2 g of Z- (2RS, 3RS) -3-amino-2-hydroxy-4-p-methylphenyl-butyronitrile are treated in the same manner as in Example 1, step 1, 3.41 g (2ns, d3Rs) are obtained -AnPA (p-me).

Rf 0,20.Rf 0.20.

Analys för c H No - Punnet c= 62,94, H: 7,o1, N: 6,79; ll 15 3' Beräknat C: 63,14, H: 7,23, N: 6,99. _ 1,57 g z-(zxs, sas;-AnpA(p-Me), (smp 166,5-s°c), framställd- genom bensyloxikarbonylerlng av (2RS, 3RS)-AHPA(p-Me), 1,42 g (S)-Leu-0Bzl.TosOH, 486 mg HOBt, 0,50 ml trietylamin och 618 mg DCCD behandlas på samma sätt som i exemel 1, steg 3, varvid oljig Z-(2RS, 3RS)-AHPA-(S)-Leu-0Bzl erhålles.Analysis for c H No - Found c = 62.94, H: 7.10, N: 6.79; Calculated C: 63.14, H: 7.23, N: 6.99. 1.57 g z- (zxs, sas; -AnpA (p-Me), (mp 166.5-s ° c), prepared by benzyloxycarbonylation of (2RS, 3RS) -AHPA (p-Me), 1 42 g of (S) -Leu-OBzl.TosOH, 486 mg of HOBt, 0.50 ml of triethylamine and 618 mg of DCCD are treated in the same manner as in Example 1, step 3, in which oily Z- (2RS, 3RS) -AHPA- (S) -Leu-OBzl is obtained.

När den oljiga produkten behandlas på samma sätt som i exempel 1, steg 4, erhålles 497 mg (ZRS, 3RS)-3-amino-2-hydroxi-4-p-metyl- fenylbutanoyl-(S)jleucin.When the oily product is treated in the same manner as in Example 1, step 4, 497 mg of (ZRS, 3RS) -3-amino-2-hydroxy-4-p-methyl-phenylbutanoyl- (S) -leucine are obtained.

Rf o,sa och o,ss, ¿'q;75§§ -7,2° (C o,96 Aeon). l7H26N2o4= vunnet c= 63,06, H5 6,23, N= s,49; Beräknat C: 63,33, H: 8,13, N: 8,69.Rf o, sa and o, ss, ¿'q; 75§§ -7,2 ° (C o, 96 Aeon). l7H26N2o4 = won c = 63.06, H5 6.23, N = s, 49; Calculated C: 63.33, H: 8.13, N: 8.69.

Analys för C EXEMPEL 23 103 mg Bestatin löses i 5 ml ättiksyra och S ml etanol och hydreras katalytiskt på platinaoxid i 14 h.Analysis for C EXAMPLE 23 103 mg of Bestatin are dissolved in 5 ml of acetic acid and 5 ml of ethanol and catalytically hydrogenated on platinum oxide for 14 hours.

Katalysatorn filtreras av och filtratet koncentreras under 'reducerat tryck till torrhet.The catalyst is filtered off and the filtrate is concentrated under reduced pressure to dryness.

När återstoden finfördelas med etylacetat och uppsamlas genom filtrering erhålles 61 mg (ZS, 3R)-3-amino-2-hydroxi-4-cyklohexyl- butanoyl-(S)-leucin- Rf 0,47, ¿fa_75§å -3o,s° (C 0,67, Aeon).When the residue is triturated with ethyl acetate and collected by filtration, 61 mg of (ZS, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-cyclohexyl-butanoyl- (S) -leucine-Rf 0.47, δ fa_75§å -3o, are obtained. s ° (C 0.67, Aeon).

Analys för Cl6H3ON2O4: Funnet C: 62,12, H: 9,52, N: 8,81; ' Beräknat C: 61,12, H: 9,62, N: 8,91.Analysis for C 16 H 3 ON 2 O 4: Found C: 62.12, H: 9.52, N: 8.81; Calculated C: 61.12, H: 9.62, N: 8.91.

Ei 25 452 318 ExEMPßL 24 g 300 mg Bestatin suspenderas i 10 ml koncentrerad svavelsyra och 0,3 ml rykande salpetersyra vid O°C. Reaktionen får fortsätta i 1 h vid samma temperatur efter det att de suspenderade materi- alen försvunnit. Reaktionsblandningen hålls i 100 ml vatten och adsorberas på en kolonn, packad med Dowex 50x4 (H-typ). Därefter elueras adsorberat material med 2N vattenhaltig ammoniumhydroxid- lösning och indunstas till torrhet. Återstoden löses i 10 ml vatten och filtreras och därefter lyofiliseras filtratet för att _ ge 213 mg (zs, 311)-a-amno-z-hydrøxi-lx-p-nitrofenyibutanoyl-(s)- ' -leucin. [ajsšg + s,2° (c o,s, Aeon), Rf 0,58.Ei 4545 318 ExEMPßL 24 g of 300 mg of Bestatin are suspended in 10 ml of concentrated sulfuric acid and 0.3 ml of fuming nitric acid at 0 ° C. The reaction is allowed to proceed for 1 hour at the same temperature after the suspended materials have disappeared. The reaction mixture is kept in 100 ml of water and adsorbed on a column packed with Dowex 50x4 (H-type). Then adsorbed material is eluted with 2N aqueous ammonium hydroxide solution and evaporated to dryness. The residue is dissolved in 10 ml of water and filtered and then the filtrate is lyophilized to give 213 mg of (zs, 311) -α-amino-2-hydroxy-1x-p-nitrophenylibutanoyl- (s) -1-leucine. [α] 25 D + s, 2 ° (c o, s, Aeon), Rf 0.58.

Analys för Cl6H23N306: Funnet C: 54,28, H: 6,58, N: 11,88; Beräknat C: 54,38, H: 6,56, N: 11,89.Analysis for C 16 H 23 N 3 O 6: Found C: 54.28, H: 6.58, N: 11.88; Calculated C: 54.38, H: 6.56, N: 11.89.

EXEMPEL 2 5 ' 100 mg (ZS, 3R)-AHPA(p-N02)-(S)-Leu, erhållen i exempel 26, löses i 10 ml metanol och hydreras katalytiskt på palladiumsvart 1 5 h. Katalysatorn filtreras och filtratet koncentreras under reducerat tryck. Återstoden löses i 5 ml vatten och filtreras och därefter lyofiliseras filtratet för att ge 81 mg (25, 3R)- -3-anáno-2-hydroxi-4-p-aminofeny1butanoy1-(S)-leucin. [ajsšå -23,2° (c 0,5, Aeon), Rf 0,25.EXAMPLE 2 100 mg (ZS, 3R) -AHPA (p-NO 2) - (S) -Leu, obtained in Example 26, dissolved in 10 ml of methanol and hydrogenated catalytically on palladium black for 5 hours. The catalyst is filtered and the filtrate is concentrated under reduced pressure. The residue is dissolved in 5 ml of water and filtered, and then the filtrate is lyophilized to give 81 mg (25, 3R) -3-anano-2-hydroxy-4-p-aminophenylbutanoyl- (S) -leucine. [α] 25 D -23.2 ° (c 0.5, Aeon), Rf 0.25.

H25N3O4: Funnet C: 59,01, H: 7,91, N: 12,81; Beräknat C: 59,42, H: 7,79, N: 13,00.H 25 N 3 O 4: Found C: 59.01, H: 7.91, N: 12.81; Calculated C: 59.42, H: 7.79, N: 13.00.

Analys för C16Analysis for C16

Claims (5)

452 318 26 PATENTKRAV452 318 26 PATENT REQUIREMENTS 1. Aminosyror till användning som mellanprodukter vid framställning av Bestatiner, k ä n n e t e c k n a d e av att de har formeln RI - CH - CH - COOH I l NH2 OH vari R1 betecknar en isobutylgrupp, en osubstituerad bensyl- grupp eller en bensylgrupp substituerad med en kloratom eller metylgrupp, och en aminogrupp pà C3-kolatomen eventuellt är skyddad.Amino acids for use as intermediates in the preparation of Bestatins, characterized in that they have the formula RI - CH - CH - COOH in NH methyl group, and an amino group on the C3 carbon atom is optionally protected. 2. Aminosyra enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av att den utgöres av (ZS, 3R)-3-amino-2-hydroxi-4-fenyl- smörsyra, vari aminogruppen eventuellt är skyddad.Amino acid according to claim 1, characterized in that it consists of (ZS, 3R) -3-amino-2-hydroxy-4-phenylbutyric acid, wherein the amino group is optionally protected. 3. Aminosyra enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av att den utgöres av (ZRS, 3RS)-3-amino-2-hydroxi-4-p-klor- fenylsmörsyra, vari aminogruppen eventuellt är skyddad.Amino acid according to claim 1, characterized in that it consists of (ZRS, 3RS) -3-amino-2-hydroxy-4-p-chlorophenylbutyric acid, wherein the amino group is optionally protected. 4. Aminosyra enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av att den utgöres av (ZRS, 3RS)-3-amino-2-hydroxi-4~o-k1or- fenylsmörsyra, vari aminogruppen eventuellt är skyddad.Amino acid according to claim 1, characterized in that it consists of (ZRS, 3RS) -3-amino-2-hydroxy-4-o-chlorophenylbutyric acid, wherein the amino group is optionally protected. 5. Aminosyra enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d av att den utgöres av (2RS, 3RS)-amino-2-hydroxi-4-p-metyl- fenylsmörsyra, vari aminogruppen eventuellt är skyddad.Amino acid according to claim 1, characterized in that it consists of (2RS, 3RS) -amino-2-hydroxy-4-p-methyl-phenylbutyric acid, wherein the amino group is optionally protected.