SE431643B - Terapeutiskt aktiva halogensubstituerade prolinderivat innehallande svavel och forfarande for deras tillverkning - Google Patents

Description

?9o151ß-s L-konfigurationen för prolingruppen är speciellt föredragen.

De lägre alkylgrupperna representerade av Vilken S0m helst av variablerna omfattar raka och grenade kolvätegrupper från metyl till heptyl, exempelvis metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, isopentyl och liknande. Cl-C4-grupperna, särskilt Cl- och C2-grupperna föredrages.

De lägre alkanoylgrupperna utgöres av acylgrupperna av de lägre (CZ-C7)-fettsyrorna, exempelvis acetyl, propionyl, butyryl och liknande. Likaledes har dessa lägre alkanoylgrupoer upp till 4 kolatomer och speciellt acetyl föredrages.

Halogenerna utgöres av de fyra vanliga halogenerna, varvid klor, brom och fluor föredrages, särskilt fluor.

Produkterna med formeln I kan framställas via olika syntes- metoder.

I allmänhet kan dessa föreningar syntetiseras genom kopnlinq av syran med formeln (II) e Ra Ta R- s -- (CH) 5- cH coon till aminosyran med formeln _ R R' (III) 2 2 X / ///'c\\\\ H2? CF2 HN än cooRl enligt vilken metod som helst som kan användas för bildning av amidbindningar. Se exempelvis “Methoden der Organischen Chemie", (Houben-Weyl), del I, p. 376 och följande, del III, p. l och följande (l974). 7901510-3 3 Syrorna med formeln 11, vari n är l kan erhållas genom tillsats av en tiosyra R~SH till en lämpligt substituerad akrylsyra.

Såsom temporärt skydd av merkaptogruppen i föreningarna med formeln II, kan R vara en p-metoxibensylgrupp. Denna grupp avlägsnas sedan med trifluorättíksyra och kvicksilveracetat.

Syrorna med formeln II, vari n är O, erhålles genom en utbytes- reaktion med användning av en tiosyra R-SH och en 2-halogensyra.

När R7 är lägre alkyl, för bildning av en produkt med formeln V R: Rlz R 1* h C [än I4 V3 3. 2 = L alkyl -co-s-(cH>-¿-c.~;-co-N-- cooal kan produkten överföras till produkten l Rz R 2 vr R4 1813 Hzflï CHZ Hs-- (CH) n- c1z- co -N C°°R1 genom sedvanlig alkalisk hydrolys eller ammonolys. När Rl är en estergrupp (dvs. Rl är lägre alkyl, erhållen när en ester av utgångssyran V användes), kan estergruppen avlägsnas på känt sätt. Exempelvis, när Rl är tert-butoxi eller tert~amyloxi, ger behandling av estern med formeln V eller VI med trifluor- ättiksyra och anisol motsvarande fria syra. När andra alkoxi~ grupper är närvarande ger alkalisk hydrolys motsvarande syra.

När en syra med formelnll användes såsom utgångsmaterial eller när den slutliga produkten erhålles i form av den fria karbon- syran, kan denna syra överföras till sin ester, exempelvis genom förestring med en diazoalkan, såsom diazometan, 1-alkyl-3- p-tolyl-triazen, såsom l-n-butyl-3-p-tolyltriazin och liknande. 7901950-3 Erxligtz en variation av förfarandet behandlas en ester, företrädesvis metyl- eller t-butylestern med formeln V, i ett vattenfritt medium, såsom diklormetan, tetrahydrofuran, dioxan eller liknande med en acyltioalkansyra med formeln Ra TB alkyl - C0-5-(CH);-C--~CGOH i närvaro av dicyklohexylkarbodiimid, N,N'-karbonylbisimidazol, etoxiacetylen, difenylfosforylazid eller liknande kopplingsmedel vid en temperatur inom intervallet ungefär O-lO°C. Estergruopen kan därefter avlägsnas, exempelvis genom behandling med tri- fluorättiksyra och anisol vid ungefär rumstemneratur för bildning av den fria syran (Rl = H).

Ett sätt, föredraget när n är l, R är CF3 och R3 är H, är att omsätta en tiosyra med formeln alkyl-COSH med ett akrylsyra- derivat med formeln VIII R2 // R R4 R3 O i I 'I H2' CHR6)m ca ecfl- c ~._ N _--L~ cooRl och därefter fort- sätta enligt ovan. Föreningarna med formeln.VqI1erhålleS ur 3-trifluormetylakrylsyra och en ester med formelnlllenküfi metoden beskriven i exempel lneëflh '79G1510-3 š Halogenerade föreningar med formeln V, vilka användes såsom utgångsmaterial kan framställas enligt kända metoder, exempelvis Biochemistry 3, 2509 (1965), Aust. J. Chem. 29, 1493 (1967), J. Amer. Chem. Soc. §§, 4709 (1964), J. Med. Chem. gg, ll76 (1977).

Produkterna med formeln I har ett eller flera asymmetriska Centraq varvid det grundläggande indikeras ned en asterisk i fonneln I.

Föreningarna föreligger således i stereoisomera former eller i racemiska blandningar därav. Samtliga ligger inom ramen för upp- finningen. De ovan beskrivna synteserna kan utnyttja raoematet eller en av enantiomererna såsom utgångsmaterial. När det race- miska utgångsmaterialet användes vid syntesförfarandet, kan de erhållna stereoisomererna separeras genom konventionella kromato- grafiska eller fraktionella kristallisationsmetoder. I allmänhet utgör L-isomeren med avseende på den grundläggande asymmetriäæakol- atomen den föredragna isomerformen.

Föreningarna enligt uppfinningen bildar basiska salter med olika oorganiska eller organiska baser, vilket även ligger inom ramen för uppfinningen. Sådana salter omfattar ammoniumsalter, alkalimetallsalter, såsom natrium- och kaliumsalter (vilka före- drages), alkaliska jordartsmetallsalter, såsom kalcium- och magnesiumsalter, salter med organiska baser, t.ex. dicyklohexyl- aminsalter, bensatin, N-metyl-D-glukamin, hydrabaminsalter, salter med aminosyror, såsom arginin, lysin och liknande. De icke-toxiska, fysiologiskt godtagbara salterna föredrages, även om andra salter även är användbara, t.ex. vid isolering och rening av produkten.

Salterna bildas nå konventionellt sätt genom att man omsätter den fria syraformen av produkten med en eller flera ekvivalenter av den lämpliga basen, för bildning av den önskade saltjonen, i ett lösningsmedel eller medium vari saltet är olösligt, eller i vatten och avlägsnar vattnet genom frystorkning. Genom _'Z'901E10-3 6 att neutralisera saltet med en olöslig syra, såsom ett katjon- bytarharts i väteformen (exempelvis polystyrensulfonsyraharts, såsom Dowex 50) eller med en vattenhaltig syra och extraktion med ett organiskt lösningsmedel, exempelvis etylacetat, diklor- metan eller liknande, kan den fria syraformen erhållas och, om så önskas, ett annat salt bildas.

Ytterligare experimentella detaljer beskrives i exemnlen, vilka utgör föredragna utföringsformer och även tjänar såsom modeller för framställning av andra medlemmar av gruppen.

Föreningarna enligt uppfinningen är användbara såsom hypoten- siva medel. De förhindrar omvandlingen av dekapeptiden angioten- sin I till angiotensin II och är därför användbara för reduktion eller lindring av angiotensinberoende hypertension. Verkan av enzymet renin på angiotensinogen, ett pseudoglobulin i blod- plasma, ger angiotensin I. Angiotensin I omvandlas genom angio~ gensinomvandlande enzym (ACE) till angiotensin II. Den senare är en aktiv pressorsubstans, som har ansetts vara det förorsakande medlet vfliolfleaformer av hypertension hos olika däggdjursarter, exempelvis råttor och hundar. Föreningarna enligt uppfinningen ingriper i angiotensinogen~9(renin)syangiotensin I-a(ACE)~9 angiotensin II-sekvensen genom att förhindra angiotensinomvand- lande enzym och genom att reducera eller eliminera bildningen av pressorsubstansen angiotensin II. Således vid administrering av en komposition innehållande en eller en kombination av föreningar med formeln I eller ett fysiologiskt godtagbart salt därav, lindras angiotensinberoende hypertension hos däggdjursarter som .lider därav. En enkeldos, eller företrädesvis två till fyra uppdelade dagliga doser, framställd på basis av ungefär 0,1 till 100 mg/kg/dag, företrädesvis ungefär l-50 mg/kg/dag, är lämplig för att reducera blodtrycket såsom visas vid djurförsöken beskrivna av S.L. Engel, T.R. Schaeffer, M.H. Waugh och B. Rubin, Proc.

Soc. Exp. Biol. Med. lå; (1973). Substansen administreras före- trädesvis oralt, men parenteral administration, såsom subkutant, intramuskulärt, intravenöst eller intraperitonealt, kan även användas. 7901510-3 Föreningarna enligt uppfinningen kan användas för att åstadkomma reduktion av blodtrycket genom framställning av kompositioner, såsom i form av tabletter, kapslar eller elixir för oral administra- tion eller i sterila lösningar eller suspensioner för parenteral administration. Ungefär 10-500 mg av en förening eller blandning av föreningar med formeln I eller deras fysiologiskt godtagbara salter, blandas med en fysiologiskt godtagbar vehikel, bärare, excipient, bindemedel, konserveringsmedel, stabiliseringsmedel, aromämne, etc. i en enhetsdoseringsform enligt sedvanlig farma~ ceutisk praxis. Mängden aktiv substans i dessa kompositioner eller preparationer är sådan att en lämplig dos inom det angivna intervallet erhålles.

Exempel på adjuvanter som kan införlivas i tabletterna, kapslarna eller liknande är de följande: ett bindemedel, såsom tragakant~ gummi, akacia, majsstärkelse eller gelatin; en excinient, såsom dikaloiumfosfat eller mikrokristallin cellulosa; ett desinte- greringsmedel, såsom majsstärkelse, notatisstärkelse, algin- syra eller liknande, ett smörjmedel, såsom magnesiumstearat; ett sötningsmedel, såsom sackaros, laktos eller sackarin; ett smaksättningsmedel, såsom pepparmint, olja av vintergröna eller körsbär. När doseringsenhetsformen är en kapsel, kan den förutom de ovan nämnda materialen innehålla en flytande bärare, såsom en fet olja. Olika andra material kan förekomma såsom beläggningsmaterial eller för att på annat sätt modifiera den fysiska formen av doseringsenheten. Exempelvis kan tabletterna beläggas med shellack, socker eller bådadera. En syrup eller elixir kan innehålla den aktiva föreningen, sackaros såsom söt- ningsmedel, metyl- och propylparabenser såsom konserverings- medel, ett färg- och ett smaksättningsmedel, såsom körsbärs- eller apelsin~arom.

Sterila kompositioner för injektion kan framställas enligt konventionell farmaceutisk praxis genom att upplösa eller suspendera den aktiva substansen i en vehikel, såsom vatten för injektion, en naturligt förekommande vegetabilisk olja, såsom sosamolja, kokosnötolja, jordnötsolja, bomullsfröolju, etc. '1901519-3 9 Uppfinningen åskådliggöres närmare medelst följande exempel och uppvisar speciellt föredragna utföringsformer. Samtliga temperaturer anges i Celsius-grader.

Exempel l 1-(4,4,4-trifluor-2-butenoyl)-L-nrolin 7,0 g (0,l mol) borsyraanhydrid (framställd genom att man smälter borsyra i en platinasmältdegel och krossar under kväve) kombineras med 32,2 g (o,173 moi) etyi-s-hyaroxi-z:nwl-trifluorbutanoat i en 50 ml-flaska utrustad med en Dean~Stark-fälla och blandningen upphettas vid l80° på ett saltbad tills all anhydrid har löst sig (6 timmar). Värmen ökas till 3500, under vilken tid 23 ml ,destillat ackumuleras i fällan. Destillatet återföres till reaktionsflaskan och upphettningssteget upprepas. Denna process upprepas 4 gånger för tillförsäkrande om fullständig dehydrering av hydroxiestern. Destillatet löses i petroleumeter, torkas över fosforpentoxid och destilleras, varvid man erhåller l0 g 4,4,4- -trifluor-2-smörsyraetylester (kokpunkt ll5-1200) och 650 mg 4,4,4-trifluor-2-smörsyra (kokpunkt 1500, 53-550 omkristallisa- tion ur pentan).

Estern kombineras med 24 ml 10%-ig natriumhydroxid i vatten och omröres vid 250 under 6 timmar. Blandningen utspädes med vatten och extraheras med metylenklorid för avlägsning av _ oreagerat material. Vattenskíktet inställdes på pH 3 med koncentrerad saltsyra och blandningen extraherades med 3 x 50 ml metylenklorid. De organiska skikten kombinerades, torkades över natriumsulfat, koncentrerades och återstoden destillerades för bildning av kristallin 4,4,4-trifluor-2-smörsyra (kokpunkt 145-1530). Omkristalliserad ur pentan smälter syran vid 54-55ê, utbyte 4,6 g.

En blandning av 4,91 g (35 mmol) 4,4,4-trifluor-2-smörsyra, 4,73 g (35 mmol) hydroxibensotriazol, 6,00 g (35 mmol) L-prolin- -t-butylester och 7,22 g (35 mmol) dicyklohexylkarbodiimid i 200 ml metylenklorid omröres under kväve över natten vid rums- temperatur. Blandningen filtreras, filtratet tvättas med 2 x 50 ml 5%-igt natriumvätesulfat och med 2 x 50 ml mättat natriumväte- 7901510-3 9 karbonat, torkas över natriumsulfat och koncentreras för bild- ning av en olja. Denna löses i eter och lösningen kyldes och filtreras fri från fällning. Filtratet koncentreras, vilket ger en fast substans (smäitpunkt 95~ioo°, 3,7 q), vilken enligt TLC (kiselgel EM 50/50, EtOAc/CH2Cl fläck. 2, PF = 0,85) visar en enda En blandning av den ovan erhållna l-(4,4,4-trifluor-2-butenoyl)- -L-prolin-t-butylestern (4,0 g, 13,6 mmol) blandas med 60 ml trifluorättiksyra och 13 ml anisol och omröres under en kväve- ridå en timme. Lösningsmedlen avlägsnas under vakuum och åter- stoden, löst i lO ml eter, hälles i 500 ml pentan. Detta utfäll- ningsförfarande upprepas och återstoden får stå vid Oo 72 timmar, under vilken tid kristallisation uppkommer. l-(4,4,4-trifluor-2- ~butenoyl)-L-prolinen omkristalliseras ur etylacetat/hexan; utbyte 2,48 g, smäitpunkt 119~12o°.

Exemgel 2_¿ 1-(3-merkapto-4,4,4-trifluorbutanoyl)-L-nrolin 1,5 ml tiolättiksyra kombineras med 720 mg (3 mmol) l-(4,4,4- trifluor-2-butenoyl)-L-prolin under argon och blandningen om- röres vid rumstemperatur över natten. överskottet tiolättiksyra avlägsnas under vakuum och den kvarvarande l-(3-acetyltio-4,4,4- trifluorbutanoyl)-L-prolinen blandas med vattenhaltig ammoniak (15 ml koncentrerad NH3 + 15 ml vatten) och omröres 2 timmar vid rumstemperatur. Blandningen utspädes därefter med is och sur- göres med koncentrerad saltsyra. Den sura blandningen extraheras med 3 X 50 ml metylenklorid, extrakten torkas över natriumsulfat och koncentreras till en olja. Denna renas genom upnlösning i vatten (destillerat två gånger), behandling av lösningen med kol och filtrering genom ett míllipor-filter (0,4 m följt av 0,08 m). Lyofilisering av lösningen ger 700 mg l-(3-merkapto- -4,4,4-trifluorbutanoyl)-L-prolin i form av ett färglöst glas.

Rf (bensen:ättiksyra 7:1) 0,24. 7901510-3 10 Exemgel 3.

Cis-l-[D-3-(acetyltio)-2~metylDropanovl]-4-fluor-L-prolin 4,5 g (0,02l mol) cis-4-fluor-L-prolin-hydrobromid och 4,2 g (Ö,O23 mol) D-3-acetyltio-2-metylpropansyraklorid får reagera i 50 ml vatten i närvaro av natriumkarbonat för stabilisering av pH vid 8,0-8,2 under acyleringen (ungefär 20 minuter). Bland- ningen upparbetas efter ytterligare en timme genom tvättning med 2 x 50 ml etylacetat, överskiktas med etylacetat, surgöres med saltsyra till pH 2, mättas med natriumklorid varefter skikten avsepareras. Vattenfasen extraheras med ytterligare etylacetat och de organiska skikten kombineras, torkas och indunstas. Den fasta återstoden från etylacetatindunstningen gnuggas med eter och indunstningen upprepas; den färglösa produktens vikt, 5,4 g (93 %), smäitpunkt 146-14s° <5. i33°), [a]26 -1320 (c = l, metanol). Dicyklohexylaminsaltet framställes V D genom tillsats av dicyklohexylamin till cis-l-[D-3-(acetyltio)- 7-2-metylpropanoyl-4-fluor~L-prolinen i 70 ml etylacetat. 8,1 g av saltet, vilket utkristalliserar, erhålles, smältpunkt 202- 2o4° (S. 1a7°); talšö -72° ur 80 ml isopropanol ger 7,0 g, smältpunkt 205-2070 (s. l90°). (c = 1, metanol). Kristallisation [m]š6-740. Ett prov omkristalliserat ur etanol visar ingen ytterligare ändring när det gäller smältpunkten av [a]D. 16,9 g av dicyklohexylaminsaltet överföras åter till den fria syran genom fördelning mellan l0 % kaliumvätesulfat och etyl~ acetat (60 ml 10 %-ig KHSO4; 4 x 50 ml etylacetat~extraktioner).

De organiska skikten kombineras och indunstas till torrhet för bildning av 4,1 g (71 %) färglös fri syra, smältpunkt 154-1560 (s. 1400) [a]š6-1420 (c = l, metanol). 7901510-3 H Exemgel 4.

Cis~4-fluor-l-(D-3-merkapto-2-metylnrooanoyl)-L-nrolin 3,9 g (0,0l4 mol) cis-l~[D-3-(acetyltio)-2-metylpropanoyl]- -4-fluor-L-prolin hydrolyseras i 22 ml vatten innehållande 9 ml koncentrerad ammoniumhydroxid. Reaktionsblandningen surgöres med saltsyra och extraheras med etylacetat. Det organiska skiktet koncentreras till torrhet för bildning av 3,3 g glasartad pro- dukt, vilken långsamt kristalliserar när den får torka vid 0,2 mm Hg och 500. Materialet tritureras med 20 ml etylacetat (med lätt uppvärmning under argon), utspädes med 25 ml hexan, gnuggas och kyles över natten (under argon). Efter filtrering under argon, tvättning med hexan och torkning i vakuum väger den färglösa fasta substansen, cis-4-fluor-l-(D-3-merkapto-2- metylpropanoyl)~L~prolin, 2,8 g (85 %), smältpunkt 135-1370 (S. l29o), fdlšó -1160 (c = l; metanol).

Exempel 5- l-[3-(acetvltio)-2~klorprooanoyl]-L-prolin (isomer A) 1,44 g L~prolin och 667 mg natriumkarbonat löses i 17 ml vatten och omröres på ett isbad. Till denna lösning sättes 2 g natriumkarbonat i 8,5 mg vatten och omedelbart därefter tillsättes 2,5 g 3-acetyltio-2-klorpropansyraklorid. Isbadet avlägsnas. Efter 30 minuter bildas en fällning, vilken solubiliseras genom tillsats av 17 ml vatten. Efter en total tidrymd av 1,5 timmar extraheras reaktionsblandningen två gånger med etylacetat. Vattenskiktet kyles, surgöres med koncentrerad esaltsyra, mättas med natriumklorid, extraheras med etylacetat, torkas över magnesiumsulfat och koncentreras till torrhet i vakuum för bildning av produkten i form av en oren olja, utbyte 3,3 g.

Oljan införes i en 100 g kiselgelpelare och elueras med bensen/ ättiksyra, 7:1, för bildning av 2 g av produkten, vilken kri- stalliserar ur vatten för bildning av 450 mg l-[3-(acetyltio)- -2-klorpropanoyl]-L-prolin, smältpunkt lll-1130, [a]D -1700 (c = 1; etanol).

Exemgel 6. l-[3-(acetyltio)-2-klorpropanoyl]-L-prolin (isomer B) 7901510-3 íß De vattenhaltiga moderlutarna från exempel 22 lyofiliseras och kromatograferas på kiselgel med bensen/ättiksyra, 7:1. De frak- tioner som innehåller UV-absorberande material och vilka enligt TLC visar sig vara homogena, sammanslâs, koncentreras till torr- het och kristalliseras ur vatten, utbyte 800 mg, smältpunkt 90- 1090, [a]š5_-40 (c = 2,1; etanol). Moderlutarna koncentreras till torrhet genom frystorkning och den återstående l-[3-(acetyl- tio)-2-kloropropanoyl-L-prolinen (isomer B) kristalliseras ur eter/hexan; utbyte 380 mg, smältpunkt 108-llOO, falâs +l7,60 (c = 1,25; etanol).

Exemgel 7, l-[3-(acetvltio)-2-brompropanoyl]-L-prolin Genom att använda 3-acetyltio-2-brompropansyrakloriden:ístälhflzför 3-acetyltio-2-klorpropansyraklorid vid förfarandet enligt exempel 5 erhåller man l-[3-(acetyltio)-2-brompropanoyl]-L- prolin med smältpunkten 109-ll0°, [m]D “l62° (c = 1,39; eta- nol).

Exemgel 8._ 3-(4-metoxibensyl)-tio-2-trifluormetylpropansyra Énaren blandning av 3,9 g l-trifluormetylakrylsyra och 4,3 g 4-metoxibensyltio omröres vid 100-ll0° under en timme. Bland- ningen får svalna till rumstemperatur och den fasta substansen omkristalliseras ur cyklohexan, smältpunkt 72-740.

Exemgel 9. l-E3-(4-metoxibensyl)-tio-2-trifluormetylpropanoyl]-L-prolin- -tert-butylester 7 En lösning av 6,5 g 3-(4-metoxibensyl)-tio-2-trifluormetylpropan- syra och 3,76 g prolin-tert-butylester i 500 ml diklormetan om- röres vid o° och behandlas med 4,53 g aicykløhexylkarboaiimid.

Efter 30 minuter vid OO och över natten vid rumstemperatur, filtreras blandningen och filtratet tvättas till neutral reak- tion. Det organiska skiktet torkas och koncentreras till torr- het i vakuum. TLC [kiselgelmetylenklorid/etylacetat (9515)] visar två större fläckar Rf 0,46 och 0,51 motsvarande de två diastereoisomererna. 7901510-3 Exemgel lQ_ l-(3-merkapto-2-trifluormetylpropanoy])~L-urolin En lösning av 4,47 g l-[3-(4-metoxibensyl)-tio-2-trifluormetyl- propancyl1-L-prolin-tert-butylesiéflïerhållen i exempel 37 och lo ml anisol kyles till 1o° och loo ml trifluorättiksyra tillsättes, följt av 3,18 g kvicksilveracetat. Badet avlägsnas och blandningen omröres vid rumstemperatur under en timme.

Blandningen koncentreras till torrhet i vakuum och återstoden tritureras med eter/hexan. Det olösliga materialet suspenderas i vatten och vätesulfid bubblas genom under 10 minuter. Fäll- ningen avlägsnas genom filtrering och filtratet frystorkas för bildning av produkten, l-(3-merkapto-2-trifluormetylpropanoyl)- -L-prolin i form av en amorf fast substans. Rf 0,29-0,31 (kisel- gel-bensenzättiksyra, 7:1).

Exemgel ll D-3-acetyltio-2-metyloropansvraklorid En suspension av l50 g (690 mmol) l-(D-3-merkapto-2-metyl- propanoyl)-L-prolin i 1274 ml vatten och 426 ml koncentrerad saltsyra (5,526 mol) âterflödesupphettas under kväve med omröring under 8 timmar. Den erhållna lösningen hålles vid rumstempera- tur över natten och extraheras sedan med 400 ml kloroform (10 gånger). De kombinerade kloroformextrakten torkas över magnesium- sulfat under kväve och indunstas sedan. Till återstoden, 81,2 g, sättes 176 ml (l,809 mol) ättiksyraanhydrid och 180 ml pyridin och blandningen hålles vid rumstemperatur under 20 timmar.

Blandningen indunstas sedan och den oljeartade återstoden löses i 1000 ml etylacetat och tvättas i tur och ordning med 200 ml 5%-ig saltsyra/mättad natriumklorid ( tvätt-pH 2), 200 ml mättad natriumkloridlösning (2 gånger, pH vid andra tvättningen: 7)od1där~ efter avlägsnas lösningsmedlet. Till den klara oljeartade åter- staden, [96,9 q, 86,5 %, ia]š5= -61,80 (cHc13)] sattes as mi (l,l73 mol) nydestillerad tionylklorid och den erhållna lös- ningen omröres vid rumstemperatur med gasutveckling under 18 timmar. Överskottet tionylklorid indunstas under vakuum och ett 500-bad och återstoden destilleras vid reducerat tryck för bildning av 56,9 g D-3-acetyltio-2-metylpropansyraklorid, kok- punkt 40-44° <ø,17-o,2 mm Hg). [a]š5 -42,50 (C 2; metanol). 7901510-3 Exemnel 12.

Trans-l-[D-3-(acetyltio)-2-metvl-l-oxonropvl]-4-fluor-L-orolin A)_Trans-l-karbobensyloxi-4-fluor-L-prolin En lösning av 6,2 g trans-l-karbobensyloxi-4-fluor-L-nrolin- metylester i 50 ml metanol behandlas droppvis vid O-50 med ll,5 ml 2N natriumhydroxidlösning och efter en timme vid OO tillåtes lösningen att värmas till rumstemperatur över natten.

Reaktionsblandningen koncentreras under reducerat tryck till ungefär hälften av den ursprungliga volymen och utspädes sedan med 100 ml vatten. Den vattenhaltiga reaktionsblandningen extra- heras med eter och eterextrakten bortkastas. Vattenlösningen sur- göres, under kylning, med utspädd saltsyra till pH 2 och extra- heras därefter med etylacetat (4 x 50 ml). De kombinerade etyl- acetatextrakten torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och koncentreras därefter under reducerat tryck för bildning av den önskade produkten. Denna renas genom överföring till cyklo- hexylaminsaltet, smältpunkt 194-1960, [m]š5 -440 metanol). (c = l % i Den fria syran erhålles genom suspendering av cyklohexylamin- salt i 25 ml etylacetat med 22 ml lN saltsyra och extraktion av vattenskiktet med 4 x 35 ml etylacetat. De kombinerade etyl- _ acetatextrakten torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och lösningsmedlet koncentreras under reducerat tryck för bildning av den önskade trans-l-karbobensyloxi-4-fluor-L-prolinen.

B) Trans-4-fluor-L-orolin-hydrobromid En blandning av 3 g trans-l-karbobensyloxi-4-fluor-L-prolin och 15 ml vätebromid i ättiksyra (30-32 %) omröres under en timme och därefter tillsättes 150 ml vattenfri eter. Lösnings- medlet avdekanteras från fällningen, vilket därefter tritureras med färsk eter och slutligen med metyletylketon. Trans-4-fluor- -L-prolinhydrobromiden smälter vid 162-1640 (sönderdelning), [a]â5 -300 (c = l % i metanol). _C) Trans-l-[D-3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4-fluor-L- Brolin Till en omrörd lösning av 1,9 g trans-4-fluor-L-prolínhydro- bromid i 25 ml kallt vatten sättes l g natriumkarbonat för juste- 7901510-3 :Y ring av pH till 8,2. Därefter tillsättes,under kontinuerlig kylning (50) och omröring, droppvis 1,8 g D~3-acetyltio-2- metylpropionylklorid i 2,5 ml eter, medan man upprätthåller pH vid ungefär 8,2-8,3 genom droppvis tillsats av en 25%-ig vatten- haltig natriumkarbonatlösning. Omröringen och kylningen fort- sättes under en timme efter det att tillsatsen är fullbordad.

Reaktionsblandningen extraheras med etylacetat (2 x 25 ml) och extrakten bortkastas. Till det vattenhaltiga skiktet sättes 50 ml etylacetat och under omröring och kylning tillsättes droppvis koncentrerad saltsyra till ett pH av 2,0. Vattenskiktet mättas med natriumklorid och etylacetatskiktet avskiljes. Vatten- skiktet extraheras med ytterligare etylacetat (3 x 25 ml), de kombinerade etylacetatextrakten torkas över vattenfritt magne- siumsulfat och koncentreras under reducerat tryck för bildning av den önskade produkten. Dicyklohexylaminslatet framställes genom upplösning av produkten i 25 ml etylacetat och tillsats av en lösning av l,8 g dicyklohexylamin i 35 ml etylacetat. Det utfällda saltet filtreras och omkristalliseras ur isopropanol för bildning av dicyklohexylaminsaltet av trans-l~[D-3-(acetyl- tio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4-fluor-L-prolin; smältpunkt 209-2llO, {d]š5 -850 (c = l % i metanol).

Den fria syran återvinnas genom unnlösning av dicyklohexylamin- saltet i 5%-igt vattenhaltigt surt kaliumsulfat och extraktion med etylacetat. Etylacetatlösningen torkas över vattenfritt magne- siumsulfat och koncentreras under reducerat tryck för bildning av den önskade trans-l-[D-3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]- -4-fluor-L-prolinen.

Exemgel 13- Trans-4-fluor-l-(D-3~merkanto-2-metyl-1-oxonronyl)-L-prolin Argon får passera genom en kyld lösning av 4,2 ml koncentrerad ammoniumhydroxid i l6 ml vatten. Till denna lösning sättes, under omröring i argonatmosfär, l,8 g trans-l-[D-3-(acetyltio)- ~2-metyl~l-oxopropyl]-4-fluor-L-prolin. Reaktionsblandningen omröres under ytterligare två timmar och extraheras därefter med etylacetat, vilket sedan bortkastas. Vattenskiktet omröres, 30 ml etylacetat tillsättes och vattenskiktet surgöres med koncentrerad saltsyra. Vattenskiktet mättas med natriumklorid 790151G-3 fe och etylacetatskiktet avskiljes. Vattenskiktet extraheras med etylacetat (3 x 30 ml). De kombinerade etylacetatextrakten torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och koncentreras under reducerat tryck för bildning av den önskade trans-4-fluor-l-[D- -3~merkapto-2-metyl-l-oxopropyl)-L-prolinen; Idlâñ -ll2° (c = l % i metanol).

Exemnel 14 _ l4{D~3-(acetyltio)-2~metyl-1-oxopropyl]-4,4-difluor-L-prolin A)_l-karbobensyloxi-4,4-difluor-L-ørolin~metylester Till en kyld omrörd lösning av 3,3 g l-karbobensyloxi-4-keto- -L-prolin-metylester i 80 ml metylendiklorid sättes droppvis 3,3 ml dietylaminosvaveltrifluorid. Reaktionsblandningen får förbli vid rumstemperatur över natten. Ungefär lOO g krossad is tillsättes under omröring och reaktionsblandningen omröres 45 minuter. Det organiska skiktet separeras och det vattenhaltiga skiktet extraheras med metylenklorid (2 X 40 ml). De kombinerade extrakten torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och koncentre- ras sedan under reducerat tryck för bildning av den önskade l-karbobensyloxi-4,4-difluor-L-prolin-metylestern.

B) l-karbobensyloxi-4,4-difluor-L-prolin I En lösning av 5,6 g l-karbobensyloxi-4,4-difluor-L-prolin- metylester i 50 ml metanol behandlas droppvis med ll,5 ml 2N natriumhydroxidlösning vid 0-50. Reaktionsblandningen lämnas vid O°_under en timme och får sedan antaga rumstemperatur över natten. Reaktionsblandningen koncentreras under reducerat tryck till ungefär hälften av dess ursprungliga volym och ut- snädes sedan med lOO ml vatten. Den vattenhaltiga reaktions- blandningen extraheras med eter och eterextrakten bortkastas.

Vattenlösningen surgöres under kylning med utspädd saltsyra till pH 2 och extraheras sedan med etylacetat (3 x 50 ml). Etylacetat- extrakten kombineras och tvättas med mättad natriumkloridlös- ning, torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och koncentreras för bildning av den önskade produkten, l-karbobensyloxi-4,4- difluor-L-prolin. Denna renas genom omvandling till cyklohexyl~ aminsaltet. smältpunkt 1so-1s5°, [alff = -24° (c = 1 i etanol). 7901510-3 X? Den fria syran erhålles genom behandling av en vattenlösning av cyklohexylaminsaltet med saltsyra och extrahering av bland- ningen med etylacetat (4 x 30 ml). Etylacetatextrakten torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och koncentreras under redu- cerat tryck för bildning av den önskade l-karbobensyloxi-4,4- difluor-L-prolinen.

C) 4,4-difluor-L-prolin-hydrobromid En blandning av 2,4 g 1-karbobensyloxi-4,4-difluor-L-prolin och l2 ml vätebromid i ättiksyra (30-32 %) omröres under 30 minuter vid rumstemperatur och därefter tillsättes 300 ml vatten- fri eter. Blandningen kyles och den utfällda fasta substansen filtreras och torkas under reducerat tryck. Den önskade 4,4- difluor-L-prolin-hydrobromiden smälter vid 163-l65° (sönderdel- nin9); lmlšs = -140 (c = l % i metanol).

D) l-[D-3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxoproovl]-4,4fdifluor~L- Erolin Till en omrörd lösning av 2,7 g 4,4-difluor-L-prolin-hydro- bromid i 30 ml vatten, kyld till 50, sattes fast karbonat för justering av pH till 8,4. Därefter tillsattes under kontinuerlig kylning och omröring droppvis 2,4 g D-3~aoetyltio-2-metylpropio- nylklorid i 3 ml vattenfri eter, medan man upprätthöll pH i lösningen vid 8,1-8,3 genom tillsats av en 25%-ig vattenhaltig natriumkarbonatlösning. Omröringen och kylningen fortsättes under en timme efter att tillsatsen är fullbordad. Reaktionsbland- ningen extraheras med etylacetat (2 x 25 ml) och extrakten bort- kastas. Till det vattenhaltiga skiktet sättes 50 ml etylacetat, under omröring och kylning tillsättes droppvis koncentrerad salt- syra till ett pH av 2,0. Vattenskiktet mättas med natriumklorid och etylacetatskiktet avskiljes. Vattenskiktet extraheras med etylacetat (3 x 25 ml) och de kombinerade etylacetatextrakten torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och koncentreras under reducerat tryck för bildning av den önskade produkten. Dicyklo~ hexylaminsaltet framställes genom upplösning av produkten i 40 ml etylacetat och tillsats av en lösning av 2,3 g dicyklohexylamin i 5 ml etylacetat. Det utfällda saltet filtreras och omkristalli- seras ur etanol. Dicyklohexylaminsaltet av l-[D-3-(acetyltio)- -2-metyl-l~oxopropy1]-4,4~difluor-L-prolin smälter vid 225-2270; 7901519-3 lå 25 D = -70°_(c = 0,5 % i metanol).

[Q] -Den fria syran återvinnas genom upplösning av dicyklohexylamin- saltet i 5%-igtvattenhaltigt kaliumsulfat och extraktion med etylacetat. Etylacetatlösningen torkas över vattenfritt magne- siumsulfat och koncentreras under reducerat tryck för bildning av den önskade l-[D-3-(acetyltio)-2-metyl-l-oxopropyl]-4,4-di- fluor-L-prolinen.

Exemgel l5¿ 4,4-difluor-l-(D-3-merkapto~2-metyl-l-oxonronyl)~L-nrolin Argon får passera genom en kyld lösning av 4,6 ml koncentrerad ammoniumhydroxid i ll ml vatten. Till denna lösning sättes, under omröring i argonatmosfär, 2,1 g l-[D-3-(acetyltio)~2- metyl-l-oxoprooyl]-4,4-difluor-L-prolin. Reaktionsblandningcn omröres ytterligare två timmar och extraheras sedan med etyl- acetat, vilket bortkastas. Vattenskiktet omröres, 30 ml etyl- acetat tillsättes och vattenskiktet surgöres med koncentrerad saltsyra. Vattenskiktet mättas med natriumklorid och etylacetat- skiktet avskiljes. Vattenskiktet extraheras med etylacetat (3 X 25 ml). De kombinerade etylacetatextrakten torkas över vattenfritt magnesiumsulfat och koncentreras under reducerat tryck för bildning av den önskade 4,4-difluor-l-(D-3-merkapto- -2-metyl-l-oxopropyl)-L-prolinen såsom en sirap; optisk rotation jfljšö -§5° (c = l; metanol).

Exemgel l6 cis-4-kloro-l-(3-acetyltio-2-D-metyl-propanoyl)-L-prolin Cis-4-kloro-L-prolin, hydrobromid (3,l5 g) och D-3~acetyltio-~ -2Émetyl-propionylklorid (2,8 g) bringades att reagera i 40 ml vatten innehållande 2,3 g natriumkarbonat (syrakloriden löstes först i 4 ml eter). Reaktionsblandningen hölls vid pH 8,2-8,4 genom tillsats av 8 ml 25%-ig natriumkarbonatlösning under lO minuter. Reaktionsblandningen omrördes en ytterligare timme och produkten extraherades med etylacetat för erhållning av 3,6 g av en viskös olja, som bildade ett dicyklohexylaminsalt i etylace- tat, smältpunkt 189-1920 (sintring vid l85OC), som omkristalli~ scrades ur isopropanol, smältpunkt 190-l92°C (sintring vid 1880). 7991510-3 I? Égempel 17 Cis-4-kloro-l-(3-merkapto-2D-metylpropanoyl}~L~pr0lin Produkten från exempel 16 (1,6 q) hydrolyserades i 9 ml H20 innehållande 4 ml koncentrerad ammoniumhydroxid till bildning av 1,2 g produkt, som efter triturering med hexan gav 1,1 g färglös fast substans, smältpunkt 138-1400; [&]š6 -790 (c = 1, etanol).

Claims (11)

1. 7901510-3 PATENTKRAV ° l. I Föreningar med den allmänna formeln (I) R R' 2 \\\ C //' 2 R4 R3 HZC CH2 n _______¿ _ R-s-(cufilm cH-co -- N *H C°0R1 vari R är väte, lägre alkanoyl eller p-metoxibensyl; n är O eller 1; Rl är väte eller lägre alkyl; R2 och R'2 är var- dera väte eller halogen; R3 är väte, lägre alkyl eller CF3 och kan även vara halogen när n är 1; R4 är väte, lägre alkyl eller trifluormetyl; åtminstone en av R2, R'2, R3 och R4 är halogen eller CF3 såsom representeras av symbolerna och enbart R2 och R'2 kan båda vara halogen samtidigt, och basiska salter därav.

2. Förening enligt patentkravet l med formeln 122 R'2 RI; R3 l R- s - (cmï-CH-CO -N C°°R1 vari R är väte, lägre alkanoyl eller p-metoxibensyl, Rl är väte eller lägre alkyl; R2, R'2 och R6 är vardera väte eller halogen; R3 är väte, lägre alkyl, halogen eller trifluormetyl; R4 är väte, lägre alkyl eller trifluormetyl; och n är O eller l; med de undantagen att åtminstone en av R2, R3, R4 och R5 är en halogensubstituent representerad av symbolen, enbart R2 7901510-3 2| och R'2 kan båda vara halogen och när R3 är halogen måste n vara 1; och basiska salter därav.

3. Förening enligt patentkravet l med formeln R2 R5 R4 T3 R- s -(LH)¿-CH-' CO* N C°°R1 vari R är väte, lägre alkanoyl eller pemetoxibensyl, Rl är väte eller lägre alkyl; R2 och R5 vardera är väte eller fluor; R3 och R4 vardera är väte eller trifluormetyl, varvid en är väte och den andra är trifluormetyl; och n är O eller 1; och basiska salter därav.

4. Förening enligt patentkravet l med formeln R R 2 5 R 4 Rs I R- s- (cHyIT-cn- co- N cooRl vari R och Rl har den i patentkravet 2 angivna betydelsen; R2 och R5 är vardera väte eller fluor; R3 är väte, halogen eller lägre alkyl; R3 är halogen när både R2 och R5 är väte och R3 har annan betydelse än halogen när R2 och R5 är halogen; R4 är väte; och n är O eller l; och basiska salter därav.

5. Förening enligt patentkravet l med formeln R R' 2 2 \ / / C\ H C CH 114 1|23 2' 2 R* s-'ïcrnn cfl- co- N cH-cooR 7901516-3”d 22 vari R är väte, lägre alkanoyl eller p-metoxibensyl; n är O eller l; Rl är väte eller lägre alkyl; R2 och R'2 är vardera väte eller halogen; R3 och R4 är vardera väte, lägre âlkyl eller trifluormetyl, varvid inte mer än en är trifluormetyl, och åtminstone en av R2, R'2, R3 eller R4 är en halogensub- stituent representerad av symbolen; och basiska salter därav.

6. Förfarande för framställning av föreningar med den all- männa formeln m 2\C / 1:4 1:3 Hzrl: N R- S-- (CEÜ-ñr- CH-CO-- vari R är väte, lägre alkanoyl eller pemetoxibensyl; n är O eller 1; Rl är väte eller lägre alkyl; R2 och R'2 är vardera väte eller halogen; R3 är väte, lägre alkyl eller CF3 och kan även vara halogen när n är 1; R4 är väte, lägre alkyl eller trifluor- metyl; åtminstone en av R2. R'2, R3, R4 och R6 är halogen eller CF3 kan båda vara halogen samtidigt, och basiska salter därav, k ä n n e t e c k n a t därav, att man kopplar syran med formeln såsom representeras av symbolerna och enbart R2 och R'2 (IIY R R3 CH---~COOH till aminosyran med formeln 7901510~3 33 (III) ' Rz R 2 \ C »/ z cr: Hzï I 2 HN CH COORI vari R är lägre alkanoyl eller p-metoxibensyl, och eventuellt hydrolyserar produkten till en produkt, vari R är väte.

7. Förfarande enligt patentkravet 6, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är väte eller lägre alkanoyl; Rl är väte eller lägre alkyl; R2 och R'2 är väte eller halogen; R3 är väte eller * lägre alkyl; R4 är väte eller lägre alkyl.

8. Förfarande enligt patentkravet 6, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är väte eller lägre alkanoyl; Rl är väte eller lägre alkyl; R2 och R'2 vardera är väte eller fluor; R3 är väte eller lägre alkyl och R4 är väte eller lägre alkyl.

9. Förfarande enligt patentkravet 6, k ä n n e t e c k n a t därav, att R är väte och R2 och R'2 vardera är fluor.

10. Förfarande enligt patentkravet 6, k ä n n e t e c k n a t därav, att R, R2, R'2 och R4 samtliga är väte och R3 är tri- fluorometyl. i

ll. Förfarande enligt patentkravet 6, k ä n n e t e c k n a t därav, att R och Rl är väte; R2 är väte eller fluor; R'2 är fluor; R3 är metyl; R4 är väte och n är l. 7901510-3 SAMMANDRAG Foreningar med den allmänna formeln (I) R 2 *\\ R4 R3 R-s-4ca)E-cH-co-- ///FIZ C\\\\\\ CH2 c [ I N cm-cooal 'k H2 vari R är väte, lägre alkanoyl eller p-metoxibensyl; n är O eller 1; Rl är väte eller lägre alkyl; R2 och R'2 är var- dera väte eller halogen; R3 är väte, lägre alkyl eller CF3 och kan även vara halogen när n är 1; R4 är väte, lägre alkyl eller trifluormetyl; åtminstone en av R2, R'2, R3 och R4 är halogen eller CF3 såsom representeras av symbolerna och en- bart R2 och R'2 kan båda vara halogen samtidigt, och basiska salter därav. Föreningarna är användbara såsom hypotensiva medel.