SA515360489B1 - استهداف عناصر bcl11a التنظيمية البعيدة لإعادة حث هِيمُوجلُوبِين جَنِينِيّ - Google Patents

استهداف عناصر bcl11a التنظيمية البعيدة لإعادة حث هِيمُوجلُوبِين جَنِينِيّ Download PDF

Info

Publication number
SA515360489B1
SA515360489B1 SA515360489A SA515360489A SA515360489B1 SA 515360489 B1 SA515360489 B1 SA 515360489B1 SA 515360489 A SA515360489 A SA 515360489A SA 515360489 A SA515360489 A SA 515360489A SA 515360489 B1 SA515360489 B1 SA 515360489B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
cell
cells
dna
expression
chromosome
Prior art date
Application number
SA515360489A
Other languages
English (en)
Inventor
زو جيان
اي. باوير دانييل
اتش. اوركين ستوارت
Original Assignee
تشلدرينز ميدكال سينتر كوربوريشن
ذي تشلدرينز ميدكال سينتر كوربوريشن
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by تشلدرينز ميدكال سينتر كوربوريشن, ذي تشلدرينز ميدكال سينتر كوربوريشن filed Critical تشلدرينز ميدكال سينتر كوربوريشن
Publication of SA515360489B1 publication Critical patent/SA515360489B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/795—Porphyrin- or corrin-ring-containing peptides
    • C07K14/805—Haemoglobins; Myoglobins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بتقديم طرق وتركيبات لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني fetal hemoglobin في خلية بواسطة اضطراب التعبير عن BCL11A على المستوى الجينومي genomic. كما يتم في الطلب الحالي تقديم طرق وتركيبات تتعلق بعلاج حالات اعتلال الهيموجلوبين hemoglobinopathies عن طريق إعادة حث مستويات الهيموجلوبين الجنيني. شكل 1.

Description

"١
SES ‏التنظيمية البعيدة لإعادة حث هِيمُوجلوبين‎ BCLITA ‏استهداف عناصر‎
Targeting BCL1 1A distal regulatory elements for fetal hemoglobin reinduction ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع‎ ‏في الكبار على أربع بروتينات جلوبين‎ Normal hemoglobin ‏يشتمل الهيموجلوبين الطبيعي‎ beta ‏منها بروتينات بيتا‎ oily alpha (a) proteins ‏منها بروتينات ألفا‎ ol, globin proteins ‏لاسيما في‎ mammalian fetal development ‏أثناء التطور الجنيني الثديي‎ . (B) proteins ‏والذي يشتمل على اثنين بروتينات‎ fetal hemoglobin ‏البشر, ينتج الجنين الهيموجلوبين الجنيني‎ © 8 - ‏-جلوبين‎ B ‏من اثتين بروتينات‎ Ya: gamma (y)-globin proteins ‏جاما (لا)-جلوبين‎ ‏فترة ما بعد الولادة, يحدث تحول الجلوبين, المشار إليه بالاسم "التحول‎ oi globin proteins ‏الجنيني”, وعند هذه النقطة, تتبدل المواد المنتجة للكريات الحُمر من تصنيع على نحو سائد لا-جلوبين‎ ‏إلى تصنيع على نحو سائد 8 -جلوبين. يبدأ التحول التطوري من إنتاج الهيموجلوبين الجنيني على‎ ‏عند من حوالي‎ (HOA ((X2P2 ‏((272)ل) إلى إنتاج الهيموجلوبين في الكبار أو‎ HOF ‏نحو سائد أو‎ ٠ ‏سائداً. ينتج هذا‎ HDA ‏أسبوعاً من الحمل ويستمر لفترة وجيزة بعد الولادة حتى يصبح‎ YE ‏إلى‎ YA ‏وزيادة‎ gamma-—globin genes ‏التحول على نحو أولي من انخفاض انتساخ جينات جاما-جلوبين‎ ‏في المتوسط, يحتوي دم الشخص البالغ الطبيعي‎ beta-globin 98085 ‏انتساخ جينات بيت -جلوبين‎ ٠١ ‏المتبقية تكون متباينة بأكثر من‎ HOF ‏على الرغم من أن مستويات‎ (HOF 7١ ‏على أقل من‎ ‏ضعف في الكبار الأصحاء ويتم التحكم فيها وراثياً.‎ V0 ‏يضم اعتلال الهيموجلوبين عدد من أمراض فقر الدم ذات الأصل الجيني والتي فيها يوجد إنتاج‎ .red blood cells (RBCs) ‏منخفض و / أو إتلاف متزايد (انحلال الدم) لخلايا الدم الحمراء‎ ‏تشتمل هذه أيضاً على العيوب الجنينية التي ينتج عنها إنتاج هيموجلوبينات شاذة مع ضعف القدرة‎ ‏تشتمل بعض الاضطرابات المذكورة على فشل‎ oxygen ‏مصاحب في الحفاظ على تركيز الأكسجين‎ ‏بكميات كافية, في حين تشتمل الأخرى على‎ normal 8. —globin awk ‏إنتاج 8 -جلوبين‎ ٠ slam 8 ‏الفشل في إنتاج 8 -جلوبين طبيعي كلياً. يشار إلى هذه الاضطرابات المرتبطة ببروتين‎
© عموماً بالاسم 8 -اعتلال الهيموجلوبين. على سبيل المثال, تتتج 8 -الثلاسيميا من عيب جزئي أو ‎IS‏ في التعبير عن جين 8 -جلوبين, مما يؤدي إلى نقص ‎HDA‏ أو عدم تواجده. ينتج فقر الدم المنجلي عن طافرة نقطة في الجين البنيوي 8 -جلوبين, مما يؤدي إلى إنتاج هيموجلوبين ‎sickle ais) hemoglobin (HbS)‏ ) شاذ. يكون ‎HBS‏ عرضة للبلمرة, لاسيما في ‎Jb‏ ظروف © نزع الأكسجين. يكون ‎HDS RBCs‏ أكثر هشاشة من ‎RBCS‏ الطبيعي ويخضع لانحلال ‎pall‏ بسرعة أكبر, ممما يؤدي تدريجياً إلى فقر الدم. ‎chase‏ يركز البحث عن علاج يستهدف تقليل اختلال توازن سلسلة الجلوبين في مرضى يعانون من اعتلال الهيموجلوبين ] على المعالجة الدوائية للهيموجلوبين الجنيني ‎hereditary ¢02y2)‏ ‎(persistence fetal HbF‏ يتم اقتراح الإمكانية العلاجية لهذه الطرق بواسطة ملاحظات خاصة ‎٠‏ بالنمط الظاهري المعتدل للأفراد الذين لديهم صفات وراثية مشتركة من فقر الدم البحري م المتجانسة والاستدامة الوراثية للهيموجلوبين الجيني ‎hereditary persistence of fetal hemoglobin‏ ‎(HPFH)‏ بالإضافة إلى المرضى الذين لديهم فقر الدم البحري م المتجانسة والتي لا نتتج هيموجلوبين لدى البالغين» ولكن تتم ملاحظة مطلب منخفض لحالات نقل الدم في وجود تركيزات عالية من الهيموجلوبين الجيني. علاوة على ذلك؛ تمت ملاحظة أن مجموعة معينة من المرضى ‎Vo‏ البالغين الذين لديهم تشوهات في سلسلة ‎B‏ يكون لديهم مستويات ‎(Aol‏ من الطبيعية من الهيموجلوبين الجيني ‎hemoglobin (HF)‏ 16181؛ وتمت ملاحظة أن لديهم مسار سريري لمرض أكثر اعندالاً من المرضى الذين لديهم مستويات طبيعية من ال ‎HEF‏ لدى البالغين. على سبيل المثال؛ يكون لمجموعة من المرضى السعوديين الذين يعانون من فقر الدم المنجلي ويعبرون وراثياً على ما يتراوح من ‎770-7١‏ من ال ‎HOF‏ مظاهر سريرية معتدلة فقط للمرض ‎«et al. (Pembrey)‏ .ل ‎Br.‏ ‎(Haematol. 40: 415-429 (1978) ٠‏ . يعتبر مقبولاً الآن أن يتم تحسين اضطرابات الهيموجلوبين؛ ‎Jie‏ فقر الدم المنجلي وفقر ‎pall‏ البحري ‎off‏ بواسطة إنتاج ال ‎HOF‏ المتزايد. كما تم ذكره أعلاه؛ ‎Sale‏ ما يستمر التحويل من هيموجلوبين جنيني إلى هيموجلوبين لدى البالغين (0272؛ ‎(HDA‏ في خلال ستة أشهر بعد الولادة. مع ذلك؛ في غالبية المرضى الذين يعانون من اعتلال الهيموجلوبين ل تعتبر جينات الجلوبين 7 القبلية سليمة وتعمل بشكل كامل؛ بحيث إذا تمت © إعادة تتشيط هذه الجينات؛ يمكن الحفاظ على تخليق الهيموجلوبين الوظيفي أثناء سن البلوخ؛ وبالتالي
و تحسين خطورة المرض. على نحو غير ملاتم؛ تعتبر الآليات الجزيئية داخل الجسم الحي والتي تعتبر أساس تحويل الجلوبين غير مفهومة بصورة جيدة. يتم الحصول على الدليل الذي يدعم إمكانية ‎sale)‏ تنشيط إنتاج الهيموجلوبين الجيني من التجارب التي تظهر أن الدم المحيطي؛ الذي يحتوي على خلايا مولدة للنسائل؛ عند توفير توليفة مناسبة من عوامل 0 النموء ينتج مستعمرات ‎WAL‏ شبيهة بالكريات الحمراء ودفقات في مزرعة نصف صلبة. يمكن للخلايا الفردية في هذه المستعمرات أن تراكم هيموجلوبين جنيني ‎(HDF)‏ أو هيموجلوبين بالغين ‎adult‏ ‎hemoglobin (HbA)‏ أو توليفة منها. في المزارع من دم البالغين»؛ تراكم الخلايا الحمراء المنواة إما ‎(F-A+) HbA‏ فقط أو توليفة من ‎HbA; HOF‏ (++]). على نحو ‎cage‏ تشتمل المستعمرات المستقلة على الخلايا + ‎(Fog‏ الأمر الذي يدل على أن كلا النوعين عبارة عن نسل من نفس ‎٠‏ > الخلايا الجذعية الجائلة. بالتالي؛ أثناء المراحل الأولى للتطور في المزرعة؛ تتفذ الخلايا ‎OLE)‏ عن طريق آليات معروفة الآن؛ سواء أن تعبر وراثياً عن ال ‎HBF‏ أم لا. من الواضح أن نسبة خلايا ال ‎Ft‏ في البالغين غير مبرمجة مسبقاً في الجسم الحي؛ ولكن من الواضح أنها تعتمد على ظروف المزرعة: ‎(Say‏ إجراء تعديل في مسار التعبير الوراثي ‎HBF‏ و15/8ا؛ على سبيل ‎(Jill‏ في المعمل بواسطة تركيزات ‎Alle‏ في المصلء نتيجة لنشاط مركب غير محدد يمكن امتصاصه على فحم منشط. عموماً؛ يكون تحديد الجزيئات التي تلعب دوراً في تحويل الجلويين مهماً في تطوير الاستراتيجيات العلاجية الحديثة التي تتداخل مع هيموجلوبين البالغين وتحث تخليق الهيموجلوبين الجنيني. ستوفر هذه الجزتيات أهداف جديدة لتطوير التداخلات العلاجية للعديد من حالات اعتلال الهيموجلوبين والتي يؤدي ‎Led‏ إعادة تنتشيط تخليق الهيموجلوبين الجنيني إلى تحسين خطورة المرض ومسبباته إلى حدٍ كبير . ‎٠‏ الوصف العام للاختراع يتم في الطلب الحالي تقديم طرق وتركييات ‎sa)‏ مستويات 8 -جلوبين ‎fetal 8 -globin cual‏ في خلية بواسطة اضطراب التعبير عن 8061118 على المستوى الجينومي. يتم أيضاً في الطلب الحالي تقديم طرق وتركيبات تتعلق بعلاج اعتلال الهيموجلوبين بواسطة إعادة حث مستويات 8 - جلوبين جنيني. ‎CAR‏
—o—
تتعلق أحد الجوانب الموصوفة في الطلب الحالي بطريقة لإنتاج خلية أولية تشتمل على تعبير متخفض
عن 0088 801118 أو البروتين, تشتمل الطريقة على تلامس خلية أولية معزولة مع عامل يربط
حمض ‎genomic «sual DNA‏ للخلية على الكرموسوم ‎chromosome‏ " الموقع
‎TY AY‏ لقف الس افد (طبقاً لتجميعة 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ الجينومية
‏© البشرية ‎human genome‏ ), وبناءً عليه خفض تعبير ‎MRNA‏ أو البروتين عن ‎BCL11A‏
‏يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب الحالي بطريقة لإنتاج خلية بشرية مهندسة وراثياً بها تعديل
‏جيني واحد على الأقل تشتمل على تلامس خلية معزولة مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل
‎Deoxyribo Nucleic acid (DNA) ‏يستهدف حمض نوري‎ endonuclease ‏على إندونيوكلياز‎
‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يشطر ‎٠‏ إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية في الكرموسوم ‎Y‏ الموقع
‏10771/62171574 ويتسبب في تعديل جيني ‎genetic modification‏ واحد على
‏الأقل فيه.
‏يتم أيضاً تقديم في الطلب الحالي في جانب آخر خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة بها تعديل جيني
‏واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع 10077/0117-7507131061894. في أحد النماذج, تعديل جيني واحد على الأقل يكون حذف في حمض ‎DNA‏ الجينومي في الموقع المحدد. في أحد النماذج,
‎isolated ‏معزولة‎ genetic engineered human cell Lil); ‏يكون ل خلية بشرية مهندسة‎
‏تعبير منخفض أو أقل ل ‎MRNA‏ أو البروتين عن 801118 مقارنة بخلية مقارنة لا تشتمل على
‏تعديل جيني واحد في الكرموسوم ؟ الموقع ‎SOYTACTI Y= VY TO AR‏
‏يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب الحالي باستخدام خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة بها تعديل ‎٠‏ جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع 100776517-75697156184 الموصوف في
‏الطلب الحالي بغرض زيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني5ا678١ ‎fetal hemoglobin‏ .في ثديي
‎.mammal
‏يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب ‎Mall‏ باستخدام خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة بها تعديل
‏جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع ‎TH YYACH Y=T0 eV TO AS‏ الموصوف في ‎Yo‏ الطلب الحالي لعلاج اعتلال الهيموجلوبين/ا051000810ا1610009 .في ثديي .
‎h —_‏ _ يتعلق جانب ‎AT‏ موصوف في الطلب الحالي باستخدام خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة بها تعديل جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع 007700117-75071106184 الموصوف في الطلب الحالي لتصنيع دواء لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي والتي بواسطتها تتم زيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في تديي. © يكون جانب آخر موصوف في الطلب ‎Mall‏ تركيبة تشتمل على خلايا بشرية مهندسة ‎Us‏ معزولة بها تعديل جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع 10077/117-55067156184. في أحد النماذج, تشتمل التركيبة علاوة على ذلك على ‎sabe‏ حاملة ‎carrier‏ مقبولة صيدلانياً. يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب الحالي باستخدام تركيبة تشتمل على ‎WDA‏ بشرية مهندسة ‎Lis‏ ‏معزولة بها تعديل جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع ‎VTA‏ 0778217-56 ‎Ye‏ بغرض زيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في تديي. يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب الحالي باستخدام تركيبة تشتمل على ‎WDA‏ بشرية مهندسة ‎Lis‏ ‏معزولة بها تعديل جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع ‎VTA‏ 0778217-56 يتعلق جانب ‎AT‏ موصوف في الطلب الحالي باستخدام تركيبة تشتمل على خلايا بشرية مهندسة ‎Lis‏ ‎٠‏ معزولة بها تعديل جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع ‎Y= Te VY TOA‏ لتم لتصنيع دوا ءِِ لعلاج ‎f‏ عتلال الهيموجلوبين في تديي والتي بواسطتها تتم زياد ‎IS‏ مستويات الهيموجلوبين يكون جانب آخر موصوف في الطلب الحالي تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي ‎٠‏ بواسطتها يشطر إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية البشرية في الكرموسوم ؟ الموقع 10077/6117-7507156184 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه. في أحد النماذج, تشتمل التركيبة علاوة على ذلك على مادة حاملة مقبولة صيدلانياً. يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب الحالي باستخدام تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير ‎coding sequence‏ لإندونيوكلياز ‎YO‏ يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يشطر إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض ‎DNA‏ ‎CAR‏
ل
الجينومي للخلية البشرية في الكرموسوم 7 الموقع ‎Y=T0 VV TOA‏ 10077771 ويتسبب في تعديل
جيني واحد على الأقل فيه بغرض زيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في تديي.
يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب الحالي باستخدام تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز
يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏
© والتي بواسطتها يشطر إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية البشرية في
الكرموسوم ؟ الموقع 1007776717-76071106184 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه
لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في تديي.
يتعلق جانب آخر موصوف في الطلب الحالي باستخدام تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز
يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ ‎Ve‏ والتي بواسطتها يشطر إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية البشرية في
الكرموسوم ؟ الموقع 1007776717-76071106184 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه
لتصنيع دواء لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في تثديي والتي بواسطتها تتم زيادة مستويات الهيموجلوبين
الجنيني في تديي.
في أحد النماذج, يتم في الطلب ‎Jal)‏ تقديم استخدام عامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية في ‎VO‏ الكرموسوم ؟ الموقع 1007780717-75071566184 (طبقاً لتجميعة | ‎UCSC Genome‏
‎Browser hg 9‏ البشرية الجينومية) لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال
‏الهيموجلوبين في الثديي أو لخفض التعبير عن التعبير عن ‎MRNA‏ أو 806111/8, حيث ينخفض
‏تعبير ‎MRNA‏ أو البروتين عن 86111/8.
‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على ‎٠‏ إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف
‏حمض ‎DNA‏ لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي أو
‏لخفض التعبير عن ‎MRNA‏ أو 80111/8, حيث يشطر إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض
‎DNA‏ الجينومي للخلية في الكرموسوم ¥ الموقع 100777717-75071501845 ويتسبب في تعديل
‏جيني واحد على الأقل فيه.
‎CAN
-- في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ لزيادة الهيموجلوبين ‎al)‏ في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلويين في الثديي أو لخفض التعبير عن ‎mRNA‏ أو ‎,BCL11A‏ حيث ينتج إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ تعديل لا جيني واحد على الأقل في © حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية في الكرموسوم ‎,١‏ وبناءً عليه يؤثتر على التعبير عن ‎MRNA‏ أو 80178 . في أحد النماذج, يكون تعديل لا جيني واحد على الأقل في الموقع ‎=I AS‏ 7 . في نموذج آخر, إحداتث تعديل لا جيني واحد يكون خفض تعبير 0401/8 أو البروتين عن ‎.BCL1IA‏ في أحد النماذج, يؤثر تعديل لا جيني واحد على الأقل في حمض ‎DNA‏ ‏الجينومي للخلية في الكرموسوم ‎١‏ على نحو غير مباشر أو مباشرةً على الموقع 70071366184- ‎10727/8021970٠‏ للكرموسوم 7. في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام أي الخلايا المعزولة الموصوفة في الطلب الحالي لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي. في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام تركيبة تشتمل على ‎WA‏ بشرية مهندسة ‎Lys‏ ‏معزولة لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي, حيث يكون ‎١‏ بالخلايا تعديل جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع ‎Y= Te VY TOA‏ لتمت ‎١‏ ‏(طبقاً لتجميعة 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ البشرية الجينومية) تم إجرائه بواسطة ‎lee‏ ‏تلامس الخلايا بكمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض 0118 أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يشطر إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية في الكرموسوم * الموقع ‎ToYYACTIY=Te VY TYAY - ٠‏ (طبقاً لتجميعة 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ البشرية الجينومية) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه. في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام تركيبة تشتمل على ‎WA‏ بشرية مهندسة ‎Lys‏ ‏معزولة لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي, حيث يكون بالخلايا تعديل لا جيني واحد على الأقل في الكرموسوم 7. في أحد النماذج, تعديل لا جيني واحد على ‎YO‏ الأقل في الكرموسوم 7 يكون في الموقع ‎ToeYYACIY=T0 eV TVA‏ (طبقاً لتجميعة ‎UCSC‏ ‎Genome Browser hg 9‏ الجينومية البشرية). في نموذج ‎AT‏ , يتم إجراء تعديل لا جيني واحد ١ه‏
على الأقل في الكرموسوم 7 بواسطة عملية تلامس الخلايا بكمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها ينتج إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ تعديل لا جيني واحد على الأقل في حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية في الكرموسوم ¥ المؤثر على الموقع 00774717-7507156184 (طبقاً © لتجميعة 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ البشرية الجينومية) ويحدث فيه. في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام أي الخلايا المعزولة الموصوف في الطلب الحالي أو أي من التركيبات الموصوفة في الطلب الحالي لتصنيع دواء لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في ‎dala‏ إليه أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي. يكون جانب آخر موصوف في الطلب الحالي طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في خلية, ‎٠‏ تشتمل الطريقة على خطوات: تلامس خلية معزولة بكمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎(Alls DNA‏ بواسطتها يشطر إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية في الكرموسوم ‎١‏ الموقع ‎TeeV TAC Y=T0 eV TOA‏ ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الخلية المذكورة, أو سليفتها, ‎Vo‏ بالنسبة إلى الخلية قبل التلامس. يكون جانب ‎AT‏ موصوف في الطلب الحالي طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على خطوات تلامس خلية أولية معزولة مكونة للدم في الثديي المذكور مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يشطر إندونيوكلياز ‎٠‏ - يستهدف حمض ‎DNA (mes DNA‏ الجينومي للخلية في الكرموسوم ؟ الموقع ‎“TI TOA‏ 77 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي المذكور, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس المذكور. يكون جانب آخر موصوف في الطلب الحالي طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على غرس خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة بها تعديل جيني واحد ‎YO‏ على الأقل في الكرموسوم ؟ الموقع ‎ET TAC Y= TeV TO AS‏ الثديي.
CAR
I. ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة‎ ‏إليه, تشتمل الطريقة على خطوات توفير مجموعة معزولة من خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية‎ ‏لتكوين الدم من الثديي في خارج الجسم الحي, وتلامس مجموعة من خلايا أولية أو خلايا جذعية‎ ‏لتكوين الدم مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض 0118 أو‎ ‏والتي بواسطتها يستهدف‎ DNA ‏يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ joes ‏ناقل‎ © , ٠١ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏إندونيوكلياز حمض‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والذي بواسطته يزيد‎ TY YYA LTS VAS 3 ‏التعبير عن الهيموجلويين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس.‎ ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة‎ ‏أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين‎ WIA ‏إليه, تشتمل الطريقة على خطوات عزل مجموعة من‎ ٠ ‏الدم من الثديي, وتلامس في خارج الجسم الحي مجموعة من خلايا أولية أو خلايا جذعية لتكوين الدم‎ ‏أو ناقل تعبير‎ DNA ‏مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ ‏بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز‎ (Alls DNA ‏يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ -١184 ,7176 ,60 ‏الموقع‎ ١ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏حمض‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن‎ 117 ,778 ,10 NO ‏الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس.‎ ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة‎ ‏إليه, تشتمل الطريقة على خطوات توفير عزل مجموعة من خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية‎ ,716 680 ‏الجينومي للخلايا على الكرموسوم الموقع‎ DNA ‏لتكوين الدم من الثديي وحذف حمض‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير‎ 1١7 LYYA ‏840ا-:ة,‎ YS ‏عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس.‎ ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة‎ ‏إليه, تشتمل الطريقة على خطوات عزل مجموعة من خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين‎ ‏الجينومي للخلايا على الكرموسوم ؟ الموقع‎ DNA ‏حذف حمض‎ all ‏الدم من الثديي وخارج الجسم‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها‎ 117 ,7748 ,1:-184 ITT YO ‏يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس.‎
CAR
-١١- ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات:‎ ‏خارج‎ WA ‏جذعية لتكوين الدم أو 105©5: (ب) تلامس‎ WIA ‏(أ) توفير خلايا أولية لتكوين الدم أو‎ ‏الجسم الحي أو في المعمل مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف‎ ‏والتي‎ DNA ‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ DNA ‏حمض‎ ‏الجينومي للخلية على‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض‎ © ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل‎ 117 ,778 Tam AL VY ‏الكرموسوم ؟ الموقع‎ ‏فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل‎ ‏التلامس: و (ج) إعطاء من الخطوة (ب) في الثديي.‎ ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات:‎ ‏من الثديي: (ب) تلامس الخلايا خارج‎ pall ‏خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين‎ Jie )( ٠ ‏الجسم الحي أو في المعمل مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف‎ ‏والتي‎ DNA ‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ DNA ‏حمض‎ ‏الجينومي للخلية على‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل‎ 117 ,778 Tam AL VY ‏الكرموسوم ؟ الموقع‎ ‏بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل‎ lly ‏فيه,‎ VO ‏التلامس: و (ج) إعطاء من الخطوة (ب) في الثديي.‎ ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات:‎ ‏(ب) خارج الجسم الحي‎ SIPSCs ‏جذعية لتكوين الدم أو‎ WA ‏(أ) توفير خلايا أولية لتكوين الدم أو‎
TY ‏خالا‎ Te AT TT ‏الجينومي للخلايا على الكرموسوم ؟ المرقع‎ DNA (mea ‏حذف‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني‎ ٠٠ ‏في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس: و (ج) إعطاء الخلايا من الخطوة (ب)) في الثديي.‎ ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات:‎ ‏جذعية لتكوين الدم من الثديي: (ب) خارج الجسم الحي‎ LDA ‏خلايا أولية لتكوين الدم أو‎ Je ‏(أ)‎ ‎TY ‏خالا‎ Te AT TT ‏الجينومي للخلايا على الكرموسوم ؟ المرقع‎ DNA (mea ‏حذف‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني‎ YO ‏في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس: و (ج) إعطاء من الخطوة (ب) في الثديي.‎
CAR
_— \ \ _ في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي (على سبيل المثال إنسان) تشتمل على إدخال تركيبة الموصوف في الطلب الحالي تشتمل على خلايا معالجة بالهندسة الوراثية معزلة وراثياً بها تعديل جيني واحد على الأقل على الكرموسوم ؟ الموقع ‎IAT NTT‏ ‎١١" ,74 ٠‏ والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي. © في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي ‎Ao)‏ سبيل المثال
إنسان) تشتمل على زيادة التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي بواسطة الطريقة الموصوفة في الطلب الحالي. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, الخلية المعزولة أو المجموعة المعزولة من الخلايا تكون الخلية (الخلايا) البشرية.
‎٠‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, الخلية المعزولة أو المجموعة المعزولة من الخلايا تكون خلية (خلايا) أولية. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, الخلية البشرية خلية أولية لتكوين الدم. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, الخلية البشرية
‎VO‏ خلية جذعية مستحثة متعددة القدرات. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, الخلية الجذعية المستحثة متعددة القدرات تكون خلية أولية لتكوين الدم. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, الخلية الأولية لتكوين الدم عبارة عن خلية ‎ADL‏ إريترويد.
‎٠‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم أو المعزولة خارج الجسم الحي أو في المعمل أو في الكائن الحي. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يكون التعديل الجيني الواحد على الأقل حذف.
‎CAR
— \ _ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يزيل الحذف كامل المنطقة بين الكرموسوم ؟ الموقع ‎LYYA Tam VAS ,7/15 Te‏ 117 أو يزيل جزء من المنطقة مما يترتب عليه تمزق واحد أو أكثر من مواقع مفرطة الحساسية ل ‎hypersensitive sites - ١‏ ‎.(DHS)‏ ‏© في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يشتمل الحذف على واحد أو أكثر من من المواقع مفرطة الحساسية ل 1 ‎laa, oot, 0A+ ,17+ (DHS) DNAse‏ للموصوف في الطلب الحالي في قسم الأمثلة . في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يشتمل الحذف على واحد أو أكثر من مرقمات صور بلورية انيكليوتيد واحد مشترك | ‎single nucleotide‏ ‎polymorphism (SNP) | ٠‏ الموصوفة في الجدول ‎XY‏ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يشتمل الحذف على واحد أو أكثر من الشظايا المدرجة في الجدول 7. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يزيل الحذف كامل المنطقة بين الكرموسوم 7 الموقع ‎LT AG ,715 Te‏ 7748, 117 أو يزيل جزء من المنطقة ‎٠‏ مما يترتب عليه تمزق واحد أو أكثر من مواقع مفرطة الحساسية ل 1 ‎DNAse‏ (0115). في أحد النماذج, وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير "جزء” في سياق الحذف الجينومي يبلغ على الأقل ‎2/0٠‏ _من المنطقة المحددة. في نموذج إضافي من أية طريقة علاج, تشتمل الطريقة على علاج ‎chemotherapy ils‏ و أو علاج ‎radiation eles)‏ لإزالة ‎remove‏ أو تخفيض خلايا أولية أو خلايا جذعية5|ا06 ‎stem‏ ‎٠‏ داخلية المنشاً لتكوين الدم في الثديي. في أحد النماذج من أية طريقة, الخلايا المتلامسة التي تتسم بتعديل جيني واحد على الأقل يمكن ‎HL Lela‏ 335 وتخزينها حتى يتم احتياج الخلايا للإعطاء في ثديي. في أحد النماذج على أية طريقة موصوفة, الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو الخلايا المعزولة يمكن توزيعها باستخدام ‎IPSCs‏ الموصوف في الطلب الحالي. ‎CAR‏
_— ¢ \ _ في أحد النماذج على أية طريقة موصوفة, الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو ‎iPSCs‏ ‏أو الخلايا المعزولة تكون ذاتية إلى الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا تكون مشتقة من نفس الثديي. في نموذج آخر على الطريقة الموصوفة, الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو 105605 أو الخلايا المعزولة تكون غير ‎BE BD‏ إلى الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا لا تكون مشتقة من نفس الثديي , ولكن تديي آخر من نفس النوع . على سبيل المثال, الثديي يكون إنسان . في أحد النماذج من أية طريقة علاج, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء تديي في حاجة إلى تعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني . في أحد النماذج من أية طريقة علاج, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء ثديي في حاجة إلى علاج اعتلال الهيموجلوبين. ‎٠‏ في أي نموذج من أية طريقة علاج موصوفة, يكون اعتلال الهيموجلوبين 8 -اعتلال الهيموجلوبين ‎B —hemoglobinopathy‏ . في أي نموذج من أية طريقة علاج موصوفة, يكون اعتلال الهيموجلوبين 8 -ثلاسيميا- 8( ‎.thalassemia‏ ‏في أي نموذج من أية طريقة علاج موصوفة, يكون اعتلال الهيموجلويين فقر الدم المنجلي ‎sickle‏ ‎.cell anemia ١٠‏ شرح مختصر للرسومات الشكل رقم ١أ‏ يعرض توزيع 776+ ‎SNPs‏ المنشور سابقاً ليكون مرتبط بسمات شبيهة بالكريات الحمراء عند ‎8٠١ X 5 > P‏ بالنسبة إلى المعزز, متعلق بالإكسون0016*© , متعلق بالإنترون ‎intronic‏ 1477 لا, ومتواليات بين الجينات. للمقارنة, يتم عرض التوزيع الجينومي ‎genomic‏ ‎distribution | ٠‏ لهذه المناطق. الشكل رقم ١ب‏ رسم بياني يخطط التوزيع المتراكم لمسافات من 163706 ‎SNPs‏ مرتبطة بالسمات شبيهة بالكريات الحمراء بالنسبة إلى أقرب محسن شبيه بالكريات الحمراء. تم تمييز المحسنات الشبيهة بالكريات الحمراء بواسطة متواليات أكثر من ؟ كيلو بايت من 1958 لجينات موضحة ب ‎Refseq‏ ‎CAR‏ yoo ‏وعدم وجود‎ ,H3K9ac ‏أو‎ H3K27ac ‏إما‎ ,H3K4mel ‏وجود‎ , DNase | ‏ذات حساسية مفرطة‎ ‏مجموعة من 176 بصورة عشوائية‎ 5٠ ‏ل‎ SD + ‏و13/270163. بدلت مسافة متوسط‎ H3K4me3 ‏وتم‎ ,) GWAS ‏مرتبطة بالسمات شبيهة بالكريات الحمراء (من قاعدة بيانات‎ SNPs ‏أنواع غير‎ ‏العشوائية أيضاً.‎ SNPs ‏للتنتميط الجيني, أو‎ Affy 6.0 ‏من مصفوفة‎ SNPS ‏تخطيط‎ ‏تلاه عمل متواليات متوازي بصورة شاملة منفذ بالمواد المنتجة للكريات‎ ChIP ‏الشكل رقم ؟أ يعرض‎ © (H3K4me3 (H3K27me3 ‏الحُمر المشتقة من 0034+-خلية- مع الأجسام المضادة ل‎ ‏النواة المعزولة من المواد المنتجة للكريات‎ L Poll 5, TALI «GATAL (H3K27ac (H3K4mel ‏بحيث تكون مواضع‎ DNase | ‏الحُمر, مخ الجنين, و8- و1-الخلايا اللمفاوية الخاضعة إلى علاج‎ ‏تلك‎ FIDF ‏المرتبطة ب‎ SNPS ‏الانشطار محددة بواسطة عمل متواليات متوازي بصورة شاملة. تتضمن‎ ‏تلك ذات أعلى‎ SNPs ‏وتحرس‎ 8-٠١ x 0 > © ‏عند‎ F ‏خلية‎ sae ‏أو‎ FIDF ‏المرتبطة بمستوى‎ ٠ ‏متجاورة شبيهة بالكريات‎ DHS ‏معينة. يتم ترميز ثلاث‎ GWAS ‏في‎ F ‏ارتباط ب 05ا أو عدد خلية‎ .86111/8 TSS ‏و+0ه بناءً على المسافة بالكيلو بايت من‎ ,0A+ ,67+ ‏ب‎ DHS ‏الحمراء‎ ‎8611178 ‏الشكل رقم "ب يعرض 6010-9008 لمواد منتجة للكريات الحُمر بشرية رئيسية عند‎ ‏مظللة.‎ TY ‏من الشكل‎ 00+, 0A+ ,17+ DHS ‏كروماتين مدخلة.‎ 7١ ‏ل‎ Lida ‏إنترون-7, معايرة‎
LCR HS3 ‏ومواضع مقارن موجب (0-جلوبين‎ (GAPDH, OCT4) ‏الإثراء عند مقارن سالب‎ Vo ‏معروضة للمقارنة.‎ (HS=40 ‏وألفا-جلوبين‎ ‏الشكل رقم "ج يعرض التقاط توافق الكرموسوم منفذ في المواد المنتجة للكريات الحُمر البشرية الرئيسية‎ ‏باستخدام معزز 8011178 كمثبت. تتم معايرة تكرار التفاعل طبقاً لتفاعل‎ BCLIIA ‏عبر موضع‎ . LCR-HBB ‏يعرض متبرعين أصحاء مجهولي الاسم توفرت منهم خلايا جذعية / خلايا أولية مكونة‎ IV ‏الشكل رقم‎ ٠ ‏للدم تم إجراء التتميط الجيني لها عند 181427407 لتمييز أفراد متغايرة الزيجوت. تم تمييز خمسة‎ ‏متبرعين. تم إخضاع الخلايا الجذعية / الخلايا الأولية مكونة للدم إلى مستعمرة تمايز شبيهة بالكريات‎
TALL ‏الحمراء. تم عزل الكروماتين من الأرومة الحمراء, وتم ترسيبها مناعياً بواسطة 687781 أو‎ ‏المدخلة إلى تفاعل تسلسل بالحرارة لتحديد كمية الوفرة النسبية‎ DNA ‏أو‎ ChIP DNA ‏إخضاع‎ ‎rs 1427407 G ‏ليل‎ Yo
CAR
_ أ \ _ الشكل رقم "ب يعرض بيانات من متبرعين أصحاء مجهولي الاسم توفرت منهم خلايا جذعية / خلايا أولية مكونة للدم تم إجراء التتميط الجيني لها عند ‎,rsT606173 rsl427407‏ 5 57569946 لتمييز أفراد متغايرة الزيجوت ‎Lill‏ القزدانيٌ ‎rs1427407-rsT606173‏ وكذلك 157569946 تم تمييز ثلاثة متبرعين. كشف ‎(asl bill‏ أن أليل © 57569946”كان على نفس الكرموسوم كما © أليل ‎G‏ 51427407 وأليل © 157606173 في كلٍ. تم إخضاع الخلايا الجذعية / الخلايا الأولية مكونة للدم إلى مستعمرة تمايز شبيهة بالكريات الحمراء. تم عزل حمض ‎RNA‏ وحمض ‎DNA‏ ‏جينومي, وتم إنتاج ‎CDNA‏ بواسطة الانتساخ العكسي. تم إخضاع حمض ‎DNA‏ المتزاوج وعينات ‎cDNA‏ إلى تفاعل تسلسل بالحرارة لتحديد كمية الوفرة النسبية لأليل 1758144847 6-. الشكل “ج يعرض متوسط ‎HDF‏ للأنماط الفردانية 151427407-57606173 في منتخب إحصائي ‎lS.
CSSCD ٠‏ متوسط مستوى ‎HbF‏ 74,05 )3.10 50) في ‎YAY‏ فرد ‎rsl427407-‏ ‏6-6 7606173ي ,11018 )4.50 50) في ‎rs1427407-rs7606173 T-G/G-T Yet‏ متغايرة الزيجوت, و711,71 )4.37 ‎(SD‏ في 60 فرد 7-6 ‎rsl427407-rsT606173‏ . نتاظر قيم © اختبارات 1 ‎student‏ مفردة النتجة. تكون تكرارات النوع الفرداني في ‎CSSCD‏ هي: ‎TG‏ : ‎TC ,‏ صما ‎GC‏ اا 66 ‎٠١‏ ‎Vo‏ الأشكال ؛أ-؛ ‎z‏ توضح بيانات من شظية ؛,"١-كيلو‏ بايت من 8011178 إنترون-؟ تضم 01155 +57 +/ه 0045 (تضم +0 ‎£-0Y,‏ ,14 كيلو بايت من ‎(TSS‏ المستتسخ قبل 15068 أدنى معزز وجين مبلغ 862 محاط بعناصر عازل 119 . ولدت الأجنة الفأرية المحورة ‎Lis‏ العابرة بواسطة حقن نووي عند مرحلة الخلية الواحدة. الشكل رقم ‎it‏ يعرض جنين متحور ‎Wis‏ عابر ‎E12.5‏ مبقع ب ‎X-gal‏ ‎٠‏ الشكل رقم ؛ب يعرض معلقات ‎WIA‏ معزولة من الدم المحيطي وكبد جنيني من أجنة محورة ‎Lis‏ ‏ثابتة 12.5 . تم ‎Cytospins adi‏ ب ‎X-gal‏ وتم التبقيع المضاد لها باستخدام ‎Nuclear Red‏ الشكل رقم ؛ ج يعرض بيانات من الأرومات الحمراء لنخاع العظم (19 ‎(+CDT71+/Terl‏ والخلايا اللمفاوية الطحالية (19 000+ ل 8-الخلايا اللمفاوية 5 ‎+CD3‏ ل1-الخلايا اللمفاوية) التي تم عزلها وفرزها من محورات وراثياً ثابتة من صغار بالغين. تم إخضاع الخلايا إلى تبقيع ‎X-gal‏ أو ‎dye‏ ‎CAR‏
ل \ — ‎RNA‏ تلاه ‎.RT-qPCR‏ تمت معايرة التعبير الجيني طبقاً ل 5/0011 , وتم إظهاره بالنسبة إلى 1-الخلايا اللمفاوية, التي لا تعبر عن أي من ‎BCL11A‏ ولا 862ا1. الأشكال ‎zo-lo‏ توضح خلايا ابيضاض الدّم الاحْمِرَاريٌ ‎mouse erythroleukemia Lally‏ ‎(MEL)‏ والخلايا اللمفاوية المؤازرة ل ‎B=‏ المنقول إليها العدوى بزوجين من ‎TALENS‏ كل منها © مصمم لتوليد 058 على إما نهاية متشابهة عند الموضع أورثو ‎٠١‏ كيلو بايت 801117 محسن إنترون-7 شبيهة بالكريات الحمراء من +10,44-55,4 كيلو بايت. تم عزل النسائل (التي يُطلق عليها ‎(AS50.4-60.4‏ باستخدام حذف ‎al‏ الأليل لقسم ‎٠١‏ كيلو بايت. الشكل رقم ‎fo‏ يعرض 1-0068 منفذ من ‎Bell la‏ مع أزواج بادئة تتعرف على متواليات قبل, تمتد, وبعد ‎ARTS‏ ‎Ve‏ الشكل رقم دب يعرض لطخة مناعية من 850.4-60.4 مع مضاد ل ‎BCL 11 A‏ الشكل رقم ٠ج‏ يعرض جلوبين التعبير الجيني في نسائل ‎AS50.4-60.4 MEL‏ . يتعرف زوج بادئ مشترك على جلوبينات ‎oP‏ بالغين ‎P2‏ وأم, في حين تتعرف بادئات مستقلة على جلوبينات ‎oP‏ ‎PHI sy‏ الجنينية. الشكل رقم 7 يعرض ‎dalla‏ ثّواة الزيجوت من الفأر المحقونة ببنية مبلغ 1862 . تم عزل أجنة محورة ‎Lily, ١5‏ عند 512.5. تم تتميط ظاهري للأجنة بواسطة ‎PCR‏ 1862. تم إظهار جزء من أجنة محورة وراتياً ‎fraction of transgenic embryos‏ بالتبقيع ب ‎X-gal‏ لكبد ‎fetal liver aus‏ . الشكل رقم ‎١‏ يعرض من واحدة إلى شظيتي متوالية كيلو بايت مستنسخة في بنية محسن ‎TKS‏ لأدنى معزز ‎.GFP‏ تم نقل بنيات مبلغ محسن بواسطة ناقلات تعبير فيروسة عدسية إلى المواد المنتجة للكريات الحُمر البشرية الرئيسية. تم انتقاء الخلايا المصابة بالعدوى بواسطة مقاومة بوروميسين. تم ‎٠‏ قياس متوسط شدة التألق الفلوري ‎GFP‏ ‏الشكل رقم ‎A‏ يعرض البيانات التي ‎Blan‏ بتحديد خواص الكروماتين للفأر لخلايا شبيهة بالكريات الحمراء تكشف بصمة محسن متشابهة عند الموضع أورثو عند 18 ‎Bell‏ إنترون-". مسحات الفأر التي تم الحصول عليها من تحديد خواص كروماتين كلي تم نشره من قبل من ‎HU‏ شبيه بالكريات الحمراء , بتعديلات هستون وانشطار ‎DNase-|‏ من و ‎GATAL‏ ومن 0010-5680 ‎TALI‏ .
م \ — المستطيل المنقط يربط بصمة محسن متشابهة عند الموضع أورثو تحدد عنصر 50.4-60.4م مستهدف لحذف يتوسط فيه لاطا 1. الشكل رقم 19 ‎Jag‏ مخطط من استراتيجية هندسة جينوم يتوسط فيها 1/81-1مستخدمة في الطلب الحالي. تمثل 181115 إنزيمات نيوكلياز محددة بالمتوالية. تمت معالجة زوجين من ‎TALENS‏ ‏© بالهندسة الوراثية لتوليد فواصل جديلة مزدوجة, إحداها على 50.4+ ‎Bell la‏ والأخرى عند ‎Set‏ ‏تم عزل النسائل التي قومت اثنين من ‎DSBS‏ بواسطة ‎NFFEJ‏ باستتصال القسم المتداخل ‎٠١‏ كيلو بايت. تم فحص النسائل بواسطة ‎PCR‏ بالبادئات ©', "', وحذف ‎46-٠١‏ الداخلي والممتد. الشكل رقم 8 يعرض لطخة سوذرن لحمض ‎DNA‏ جينومي مهتضم ب ‎1110011١‏ من نسائل -50.4م 4 مما أكد أن هذه النسائل قد توقعت أليل الاستئصال وافتقرت إلى الأليل غير المستأصل. ‎٠‏ الشكل رقم ‎٠١‏ يعرض عمل متواليات ‎Sanger‏ لنواتج ‎PCR‏ من نسائل 50.4-60.4. يتم توضيح متواليات ‎"V5 (00,64) To‏ (+10,4) يسرى ويمنى للتعرف على ‎TALEN‏ مع مباعدات تدخل. أظهرت بعض الآلائل دليل على الارتباط عند الطرف مباشرةً من كل متوالية مباعدة مهتضمة بينما أظهرت الآلائل الأخرى فقد مئات من النيوكليوتيدات الإضافية. تم عزل أليل واحد فقط لكل من نسيلة ‎١# MEL‏ وطليعة نسيلة #2 ‎P‏ ‎V0‏ الشكل ‎١١‏ يعرض بيانات النمط الجيني التي تم الحصول عليها في ‎١78 ,١‏ فرد من 055600 ل ‎YA‏ صورة مغايرة داخل 861118 +17, +8/ه أو +5 ‎.DHSs‏ تتسق معظم الارتباطات ذات الدلالة بدرجة أعلى مستوى 0]7ا7 بين (1 > ‎SNPs (MAF‏ (ع = ‎(V+‏ قبل ‎(rs1427407)‏ أو بعد ‎(rs7606173)‏ التحليل الشرطي ‎SNP‏ .00551427407 للكرموسوم ؟, ‎buildingl9‏ ‏الشكل ١١أ‏ يعرض بيانات النمط الجيني التي تم الحصول ‎lee‏ في ‎١78 ,١‏ فرد من 05500 ل ‎YA Yo‏ صورة مغايرة داخل 861118 +17, ‎oA+‏ أو +5 ‎.DHSs‏ تتسق معظم الارتباطات ذات الدلالة بدرجة أعلى مستوى 0]7ا7 بين (1 > ‎SNPs (MAF‏ (ع = ‎(V+‏ قبل ‎(rs1427407)‏ أو
بعد ‎(rs7606173)‏ التحليل الشرطي ‎SNP‏ .00551427407 للكرموسوم ؟, ‎buildingl9‏ ‏الشكل ١١ب‏ يحلل ارتباط 107 عند /806111. يعرض بيانات النمط الجيني التي تم الحصول عليها ‎١78 ,١‏ فرد من 65560 ل ‎YA‏ صورة مغايرة داخل 861118 +17, ‎of oA+‏ +00
.DHSs vo
ه١‎
‎q —_‏ \ _ تكون ‎SNPs‏ الحارسة هي تلك التي لها أعلى ارتباط بمستوى ‎HOF‏ أو عدد خلية ‎GWAS iF‏ القبلي ‎L(V Y-V)‏ يتم توضيح ‎SNPS‏ هذه بالنسبة إلى ‎BCLIIA‏ إنترون-؟ مع بيان ¥ 01155 +17, +/ه 4 +00 . الوصف التفصيلى: © تتعلق الطرق والتركيبات الموصوفة في الطلب الحالي, جزثياً, باكتشاف منطقة تنظيمية بعيدة قبل جين 118 ا80 يمكن أن ينظم التعبير عن بروتين 8011178 . يؤتر بروتين 8011178 في صورة منظم محدد بالمرحلة للتعبير عن الهيموجلوبين الجنيني بواسطة إخماد حث جلوبين-لا. وعلى هذا النتحو, تكون الطرق والتركيبات المقدمة في الطلب الحالي طرق جديدة لتتظيم التعيير عن جلوبين-لا في خلايا شبيهة بالكريات الحمر. بمزيد من التحديد, يمكن اقتران هذه الأنشطة في طرق لعلاج م - ‎٠‏ اعتلال الهيموجلوبين بواسطة حث جلوبين-لا عن طريق تثبيط منتج جين ‎BCLIIA‏ ‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم طريقة لإنتاج خلية أولية معزولة تتسم بتعبير منخفض عن ‎BCL1IIA mRNA‏ أو البروتين, تشتمل الطريقة على تلامس خلية أولية معزولة بعامل يربط ‎DNA (mea‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع ‎IY ,7748 Tem A TT‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري), وبناءً عليه خفض التعبير عن ‎BCL1 1A ١ 5‏ أو بروتين ‎MRNA‏ . في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم طريقة لإنتاج خلية أولية معزولة تتسم بتعبير منخفض عن ‎mRNA‏ 801118 أو البروتين, تشتمل الطريقة على توفير خلية أولية معزولة وتلامس الخلية الأولية المعزولة مع عامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع ‎IVT,‏ ‏كص ات رغلا ‎TYY‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري), ‎Yo‏ وبناءً عليه خفض التعبير عن ‎BCL1 1A‏ أو بروتين ‎MRNA‏ . في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم طريقة لإنتاج خلية أولية معزولة تتسم بتعبير منخفض عن ‎mRNA‏ 801118 أو البروتين, تشتمل الطريقة على تلامس خلية أولية معزولة بعامل يرتبط ليحدث تعديل لا جيني في حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ وبناءً عليه خفض التعبير عن /80111 أو بروتين ‎MRNA‏ . في أحد النماذج, يكون التعديل اللا جيني في حمض ‎CAR‏
١١
UCSC ‏(طبقاً ل‎ 1١7 ,778 Tem A IT Te ‏الجينومي عند الكرموسوم ؟ الموقع‎ DNA .(human genome ‏بشري‎ asin ‏مجموعة‎ Genome Browser hg 19 ‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم طريقة لإنتاج خلية أولية معزولة تتسم بتعبير منخفض‎ ‏أو البروتين, تشتمل الطريقة على توفير خلية أولية معزولة وتلامس الخلية‎ 801118 mRNA ‏عن‎ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟‎ DNA ‏الأولية المعزولة مع عامل ينتج تعديل لا جيني في حمض‎ © ‏في أحد النماذج, يكون التعديل‎ . MRNA ‏أو بروتين‎ BCLIIA ‏وبناءً عليه خفض التعبير عن‎
TAY ‏خالا‎ Tem A YT Te ‏للكرمروسوم‎ ١ ‏الجينومي عند موقع‎ DNA ‏اللاجيني في حمض‎ ‏مجموعة جينوم بشري).‎ UCSC Genome Browser hg 19 ‏(طبقاً ل‎ ‏الكشف الموصوف في الطلب الحالي, في نموذج مفضل, لا يتعلق بعملية لاستتساخ كائنات بشرية,‎ ‏عمليات لتعديل الهوية الجينية للسلالة الجرثومية للكائنات البشرية, واستخدامات الأجنة البشرية‎ ٠ ‏لأغراض صناحية أو تجارية أو عمليات لتعديل الهوية الوراثية للحيوانات التي يحتمل أن تجعلها تعاني‎ ‏دون أي فائدة أساسية طبية للإنسان أو الحيوان, وأيضاً الكائنات الناتجة من مثل هذه العمليات.‎ ‏أحد جوانب الموصوف في الطلب الحالي يتعلق بطريقة لإنتاج خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة تتسم‎ ‏بتعديل جيني واحد على الأقل تشتمل على تلامس الخلية مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل‎ ‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز‎ DNA ‏على إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ ٠
DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض‎ DNA ‏يستهدف حمض‎
UCSC ‏(طبقاً ل‎ 11 ,778 ,10-184 ,7136 Te ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع‎ ‏مجموعة جينوم بشري) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه.‎ Genome Browser hg 9 ‏يتعلق جانب آخر تم تقديمه في الطلب الحالي بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في خلية‎ ‏أو التعبير عن البروتين في الخلية. في‎ 801118 MRNA ‏معزولة, تشتمل الطريقة على تخفيض‎ Yo ‏أو البروتين بواسطة ويتسبب في‎ 801118 MRNA ‏أحد الجوانب, يتم تحقيق تخفيض التعبير عن‎ , ٠١ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع‎ DNA ‏تعديل جيني واحد على الأقل عند حمض‎ ‏مجموعة جينوم‎ UCSC Genome Browser hg 19 ‏(طبقاً ل‎ TYY ‏لماص اتمبغالا,‎ LY ‏أو البروتين بواسطة‎ 801118 MRNA ‏بشري). في جانب آخر, يتم تحقيق تخفيض التعبير عن‎ ١ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم‎ DNA ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل عند حمض‎ YO yy ‏يترتب عليه تعديل لا جيني للوظيفة الجينية عند‎ 117 ,778 ,10-184 VT ,10 ‏الموقع‎ ‏في هذا الجانب, يتم تخفيض نشاط محسن‎ .117 ,774 Tem A YY ‏الكرموسوم ؟ الموقع‎ ‏بواسطة‎ IY LYYA 1-184 VY Te 7 ‏الموجود داخل موقع هذا الكرموسوم‎ 861118 ‏أو التعبير عن‎ 801118 MRNA ‏التخفيض في هذا الجانب, تكون فعالية المحسن في تحسين‎ ‏أقل, على الأقل 770 أقل,‎ 77١0 ‏أقل, على الأقل‎ 7٠١ ‏البروتين في الخلية أقل بنسبة 75 على الأقل‎ ‏أقل, على الأقل .75 أقل, على الأقل 7760 أقل, على الأقل 79760 أقل, على الأقل‎ Zee ‏على الأقل‎ ‏أقل, على الأقل 790 أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل‎ ٠ فعض-٠٠٠١ ‏ضعف أقل, على الأقل‎ ٠٠١ ‏ضعف أقل, على الأقل‎ ٠١ ‏أقل, على الأقل‎ فعض-٠‎ ‏أقل, أو أكثر مقارنة بخلية مقارنة لم تتم معالجتها في أية طريقة تم الكشف عنها في الطلب الحالي.‎ ‏أو التعبير عن البروتين في الخلية أن التعبير عن البروتين‎ 801118 MRNA ‏المقصود بتخفيض‎ ٠ ‏أقل, على الأقل 7780 أقل,‎ 77١8 ‏أقل, على الأقل‎ 7٠١ ‏على الأقل على الأقل‎ Te ‏يكون أقل بنسبة‎ ‏أقل, على الأقل .75 أقل, على الأقل 7760 أقل, على الأقل 79760 أقل, على الأقل‎ 74٠0 ‏على الأقل‎ ‏أقل, على الأقل 790 أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل‎ ٠ فعض-٠٠٠١‎ JY) ‏ضعف أقل, على‎ ٠٠١ ‏ضعف أقل, على الأقل‎ ٠١ ‏أقل, على الأقل‎ ano ‏في الطلب الحالي.‎ lee ‏أقل, أو أكثر مقارنة بخلية مقارنة لم تتم معالجتها في أية طريقة تم الكشف‎ ١٠ ‏يتعلق جانب آخر تم تقديمه في الطلب الحالي بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في خلية‎ 8061118 MRNA ‏معزولة, تشتمل الطريقة على توفير خلية بشرية أو خلية أولية معزولة وتخفيض‎ ‏عن البروتين في الخلية.‎ uel) ‏أو‎ ‏يتعلق جانب آخر تم تقديمه في الطلب الحالي بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في خلية,‎ ‏تشتمل الطريقة على خطوات: _تلامس خلية بشرية معزولة مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على‎ Yo ‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز‎ DNA ‏الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض‎
DNA ‏يشطر حمض‎ DNA ‏بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض‎ (Ally DNA ‏يستهدف حمض‎ 0656 ‏(طبقاً ل‎ 11 ,778 ,10-184 VT ,60 ‏جينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع‎ ‏مجموعة جينوم بشري) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه,‎ Genome Browser hg 9 ‏والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الخلية, أو سليفتها, بالنسبة إلى الخلية قبل‎ YO ‏التلامس.‎ ‎CAR
و يتعلق جانب آخر تم تقديمه في الطلب الحالي بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في خلية, تشتمل الطريقة على خطوات توفير خلية بشرية أو خلية أولية معزولة, تلامس خلية بشرية أو خلية أولية معزولة مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض 0108 أو ناقل تعبير ‎Jang‏ متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف © إندونيوكلياز ‏ حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع ‎٠١‏ , ‎LY‏ لماص اتمبغالا, ‎TYY‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الخلية, أو سليفتها, بالنسبة إلى الخلية قبل التلامس. جانب آخر موصوف في الطلب الحالي يتعلق بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي ‎٠‏ في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على تخفيض ‎mRNA‏ 8011/8 أو التعبير عن البروتين في خلية أولية لتكوين الدم في الثتديي. في أحد الجوانب, يتم تحقيق تخفيض التعبير عن ‎MRNA‏ 861118 أو البروتين بواسطة ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع 66 ‎VTA, T= AG VAT‏ 117 (طبقاً ل ‎UCSC Genome‏ ‎Browser hg 9‏ مجموعة جينوم بشري). في جانب آخر, يتم تحقيق تخفيض التعبير عن ‎BCLIIA mRNA ١‏ أو البروتين بواسطة ويتسبب في تعديل لا جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟. في جانب آخر, يتم تحقيق تخفيض التعبير عن ‎mRNA‏ 861118 أو البروتين بواسطة ويتسبب في تعديل لا جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم > الموقع ‎TAS YY TT‏ خالا 117 جانب آخر موصوف في الطلب الحالي يتعلق بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي ‎٠‏ في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على توفير خلية بشرية أو خلية أولية معزولة من ثديي وتخفيض ‎mRNA‏ 801118 أو التعبير عن البروتين في الخلية. في أحد الجوانب, تشتمل الطريقة ‎Lad‏ على انتقاء ثديي في حاجة إلى زيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني فيه. جانب آخر موصوف في الطلب الحالي يتعلق بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على خطوات تلامس خلية أولية لتكوين الدم في ‎(til)‏ مع كمية فعالة ‎YO‏ من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ‎CAR‏
‎Ad —‏ \ — ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ المروقع 0, ‎YA TIAL YT‏ 17 (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس. © جانب ‎AT‏ موصوف في الطلب الحالي يتعلق بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلويين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على خطوات توفير خلية بشرية معزولة أو خلية أولية أو مجموعة معزولة ‎LDA‏ أولية لتكوين ‎pall‏ من ثديي تلامس ‎the‏ الخلية البشرية أو خلية أولية أو خلية أولية لتكوين ‎pal‏ مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف ‎٠‏ إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع ‎٠١‏ , ‎LY‏ لماص اتمبغالا, ‎TYY‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في ‎ail)‏ المذكور, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس. يتعلق جانب آخر تم تقديمه في الطلب الحالي بطريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي ‎Vo‏ في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على زرع خلية بشرية مهندسة وراثياً وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في التديي. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, تشتمل الطريقة أيضاً على توفير خلية معزولة أو خلية أولية معزولة أو مجموعة معزولة من الخلايا التي يمكن أن تكون خلية أولية أو خلية أولية لتكوين الدم ‎.hematopoietic progenitor cell‏ ‎٠‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, تكون الخلية المعزولة خلية أولية معزولة ‎.isolated progenitor cell‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, تكون الخلية الأولية المعزولة خلية بشرية معزولة ‎.isolated human cell‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, الخلية البشرية ‎YO‏ المعزولة تكون خلية أولية لتكوين الدم.
_ \ ¢ —_ في نموذج ‎AT‏ من هذا الجانب وجميع الجوانب ‎(AY)‏ الموصوف في الطلب الحالي, تكون الخلية المكونة للدم عبارة عن خلية لسلالة إريثرويد. تعرف طرق ‎Je‏ خلية أولية لتكوين الدم جيداً في المجال, على سبيل المثال, بواسطة تتقية قياس التدفق الخلوي لخلايا ‎+CD34‏ أو 00133+ , الخرزات الدقيقة المترافقة مع الأجسام المضادة ضد ‎CD34‏ أو 133 ‎,CD‏ مرقمات خلية أولية لتكوين © الدم. تتوفر كذلك الأطقم التجارية, على سبيل المثال, ‎MACS® Technology CD34‏
STEMCELL™ Technology ‏البشرية, و‎ , 21034 MultiSort Kit ‏البشرية, و‎ ,MicroBead Kit . 501100009801 Kit ‏خلية أولية لتكوين الدم‎ EasySep™ Mouse في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, الخلية البشرية تكون خلية جذعية مستحثة متعددة القدرات ‎.induced pluripotent stem cell (IPSC)‏ ‎٠‏ في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, يمكن أن يكون تلامس أية خلية موصوف في الطلب الحالي خارج الجسم الحي أو في المعمل أو في الكائن الحي. أية خلية موصوف في الطلب الحالي يشتمل على تلامس بعامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ‎Yo‏ ويحدث تعديل لا جيني في الجينوم للخلية على الكرموسوم , وبناءً عليه خفض ‎Vo‏ التعبير عن 806111 أو بروتين ‎MRNA‏ . في أحد النماذج, يكون التعديل اللا جيني على الكرموسوم 7 الموقع ,خالا ‎TYY LVYALT— YA‏ (طبقاً ل ‎UCSC Genome Browser‏ ‎hg 9‏ مجموعة جينوم بشري). في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, التعديل اللا جيني واحد على الأقل في حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ‎١‏ على نحو غير مباشر أو ‎.١ ‏للكرموسوم‎ 1١7 ,748 STA YT Te ‏مباشرةٌ يؤثر على الموقع‎ Ye ,1 0-1894 YT Te ‏وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, 'يؤثر على نحو غير مباشر على الموقع‎
DNA ‏للكرموسوم 7" يشير إلى تأثيرات المسافة الطويلة على تعديل لا جيني في حمض‎ 117 ,774 ‏للكرموسوم ا‎ TYY ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم للموقع دا خالا تغناص ا بكار‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, تلامس أية‎ ‎Yo‏ خلية موصوف في الطلب الحالي يشتمل على تلامس بعامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية ‎CAR
اج \ _ على الكرموسوم ؟ الموقع ‎VAT,‏ 0-184 1, 72748, 117 (طبقاً ل ‎UCSC Genome‏ ‎Browser hg 9‏ مجموعة جينوم بشري), ويحدث تعديل لا جيني على الكرموسوم ‎,١‏ وبناءً عليه في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, تلامس أية © خلية موصوف في الطلب الحالي يشتمل على تلامس مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ‎BU‏ تعبير يحمل متوالية التشفير لإنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ ‎All‏ بواسطتها ‎the‏ إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ يحدث تعديل لا جيني على الكرموسوم ‎,١‏ وبناءً في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوف في الطلب الحالي, تلامس أية ‎٠‏ خلية موصوف في الطلب الحالي يشتمل على تلامس مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ‎BU‏ تعبير يحمل متوالية التشفير لإنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ ‏والتي بواسطتها ‎the‏ إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ يحدث تعديل لا جيني على الكرموسوم ؟ الموقع مال تاللا كخناص اتمبغالا, ‎TYY‏ (طبقاً ‎UCSC Genome Browser hg 19 J‏ مجموعة جينوم بشري) وبناءً عليه خفض التعبير عن ‎BCLIIA‏ أو بروتين ‎MRNA‏ . في أحد الجوانب, يزيد ‎VO‏ التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم, الخلية البشرية المعزولة, أو خلية معزولة خارج الجسم الحي أو في المعمل في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون التعديل ‎Yo‏ الجيني الواحد على الأقل حذف. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, التعديل اللا جيني واحد على الأقل. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يشتمل الحذف على واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل 1 ‎,0A+ ,17+ (DHS) DNAse‏ ,+00 وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في قسم الأمثلة. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب ‎YO‏ الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف في الأساس من واحد أو أكثر من المواقع مفرطة ‎CAR‏
Cyne ‏وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في قسم‎ 0045 ,0A+ ,17+ (DHS) DNAse 1 ‏الحساسية ل‎
DNAse 1 ‏الأمثلة. في نموذج آخر, يتكون الحذف من واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل‎ ‏وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في قسم الأمثلة.‎ 00+, 0A+ ,17+ (DHS) ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, التعديل اللا‎ hypersensitive sites ‏جيني يشتمل على أو يؤثر على واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية‎ © ‏وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في قسم الأمثلة. وفقاً‎ 0045 ,0A+ ,17+ (DHS) DNAse 1 ‏ل‎ ‏لاستخدامه في الطلب الحالي, العبارة 'يؤثر على واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل‎
DNAse 1 ‏يعني أنه يتم تخفيض الوظيفة الطبيعية لهذه المواقع مفرطة الحساسية ل‎ "DNAse 1 ‏على سبيل المثال, الوصول إلى عوامل الانتساخ أو إنزيمات انحلال‎ , 00+ 5 ,0A+ ,17+ (DHS) ‏هي‎ (DHSs) DNase | ‏بصفة عامة؛ تكون مواضع مفرطة الحساسية ل‎ .001856 | Ji ‏ملالا‎ ‏في هذه‎ . DNase | ‏التي تكون حساسة لانشطار بواسطة إنزيم‎ chromatin ‏مناطق الكروماتين‎ ‏مما يجعل من‎ (DNA ‏المناطق المحددة من الجينوم, فقد الكروماتين بنيته المكثفة؛ كاشفاً حمض‎
Jie ‏للانحلال بواسطة الإنزيمات؛‎ DNA ‏الممكن الوصول إليه. الأمر الذي يثير إتاحة حمض‎ ‏تكون مناطق الكروماتين هذه القابلة للوصول إليها مرتبطة وظيفياً بنشاط انتساخي؛ ونظراً‎ . DNase ‏ا لأن هذه الحالة المعاد نمذجتها تكو ضرورية لارتباط البروتينات مثل عوامل الانتساخ. وعلى هذا‎ ‏النحو, يترتب على التعديل اللا جيني المتوقع في الطلب الحالي إمكانية وصول منخفض لإنزيمات‎ ‏أقل,‎ 77١0 ‏أقل, على الأقل‎ 7٠١ ‏تكون يكون أقل بنسبة 75 على الأقل على الأقل‎ DNA ‏انحلال‎ ‏أقل, على الأقل 7460 أقل, على الأقل .75 أقل, على الأقل 7760 أقل, على الأقل‎ 77٠0 ‏على الأقل‎ -١ ‏أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل‎ Za ‏أقل, على الأقل‎ TA ‏أقل, على الأقل‎ 7٠ ‏ضعف أقل,‎ ٠٠١ ‏ضعف أقل, على الأقل‎ ٠١ ‏ضعف أقل, على الأقل ٠-ضعف أقل, على الأقل‎ Ye ‏على الأقل ١٠٠٠-ضعف أقل, أو أكثر مقارنة بخلية مقارنة لم تتم معالجتها في أية طريقة تم‎ ‏الكشف عنها في الطلب الحالي.‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يشتمل الحذف‎ ‏الموصوفة في الجدول 7. في نموذج آخر من هذا‎ SNP markers ‏على واحد أو أكثر من مرقمات‎ ‏الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف في الأساس من واحد أو‎ Yo ‏من هذا الجانب وجميع الجوانب‎ HAT ‏الموصوفة في الجدول 7. في نموذج‎ SNP ‏أكثر من مرقمات‎
CAR yy ‏الموصوفة‎ SNP ‏الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف من واحد أو أكثر من مرقمات‎ .7 ‏في الجدول‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, التعديل اللا‎ ‏الموصوفة في الجدول 7. وفقاً‎ SNP ‏جيني يشتمل على أو يؤثر على واحد أو أكثر من مرقمات‎ ‏تعني أنه تم‎ " SNP ‏ا لاستخدامه في الطلب الحالي, العبارة 'يؤثر على واحد أو أكثر من من مرقمات‎ ‏على سبيل المثال, الوصول إلى عوامل الانتساخ.‎ , SNPS ‏تخفيض الوظيفة (الوظائف) الطبيعية لهذه‎ ‏إلى تخفيض ارتباط‎ SNPs ‏لهذه‎ methylation ‏على سبيل المثال, يمكن أن تؤدي المعالجة بالميثيل‎ . MRNA ‏عوامل الانتساخ, مما يؤدي إلى التعبير المنخفض عن /80111 أو بروتين‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يشتمل الحذف‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع‎ .١7 ‏على واحدة أو أكثر من الشظايا المدرجة في الجدول‎ ٠ ‏الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف في الأساس من واحدة أو أكثر من‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة‎ .١7 ‏الشظايا المدرجة في الجدول‎ ‏في نموذج‎ .١7 ‏في الطلب الحالي, يتكون الحذف من واحدة أو أكثر من الشظايا المدرجة في الجدول‎ ,٠١ ‏آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون الحذف من‎
YY Te gma, AY ‏الا‎ Te VAT VT Te ‏,من‎ ,778 Te ‏الاق إلى‎ Ye ‏من 10, 5,777 » إلى‎ , +1 1/14 Te ‏اأالا, 11 إلى‎ Te ‏من‎ YY YA LT ‏إلى‎ 7 ‏إلى م‎ 7132 111,٠١ ‏آلا ,من‎ ٠ ‏إلى‎ AVY ‏خالا‎ Te ‏من‎ , 6 VYY ,٠
IVA ‏فده إلى نت‎ TY Te oe, AAR TYE Te ‏1ه إلى‎ 177 ST ‏",من‎ TVA ‏من‎ SAA LYYY Te ‏إلى‎ ١١ YY) ,10 ceo TLV ,10 ‏إلى‎ 779 VY Te ‏من‎ YY ,٠ا١‎ ge, Yo VE ٠ ‏ذلا إلى‎ VY ,1٠ ee, EY) VY ٠ ‏الا يألا إلى‎ Th Yo
AYN ١ ‏أو من‎ ,اد١‎ SAY ,0 ‏,من نا تام 8 إلى‎ VER Te ‏ا إلى‎ EA
LOOT ‏ام‎ Te ‏إلى‎ 4 ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, التعديل‎
Lay .7 ‏اللاجيني يشتمل على أو يؤثر على واحدة أو أكثر من الشظايا المدرجة في الجدول‎ "7 ‏الاستخدامه في الطلب الحالي, العبارة 'يؤثر على واحدة أو أكثر من الشظايا المدرجة في الجدول‎ 5 ‏تعني أنه يتم تخفيض الوظيفة (الوظائف) الطبيعية لهذه الشظايا, على سبيل المثال, الوصول إلى‎
CAR yA ‏عوامل الانتساخ. على سبيل المثال, المعالجة بالميثيل لهذه الشظايا يمكن أن تخفض ارتباط عوامل‎ . MRNA ‏أو بروتين‎ BCL11A ‏الانتساخ, مما يؤدي إلى التعبير المنخفض عن‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون التعديل‎
IIE Te ‏إلى‎ VAT YT Te ‏من‎ ,117 ,78 LT ‏اللا جيني من 184,716,360 إلى‎
See TYNE Te ‏إلى‎ 7756 VY Te ‏رخالا, 117 , من‎ ١ ‏من 10, 77ل, 347 إلى‎ AY. 8
Cle ‏,من‎ YAY ,777 160 ‏إلى‎ 9 VY 4,10 ‏من‎ , 84/77 Te ‏ذ, "الات إلى‎ ,171 01١ ‏,من‎ 1483 TY ET ‏إلى‎ OFT 177 ,٠١ ae, «YY TYAS ‏إلى‎ 12 , ‏إلى‎ 7١١ VY) 10 ‏من‎ , oT Te ‏إلى‎ 1 ,الا١/‎ Te ‏من‎ YY ,174 LT ‏5ه إلى‎ , a ‏إلى‎ YO VY Te نمر,كا١‎ ,2771 ٠ ‏إلى‎ YA« ‏آلا‎ 4,٠١ ‏من‎ ,90A ,/77 ,٠
AYY Te ‏من 875,10 8 إلى‎ , 7/44 Te ‏.لا ,من 60ل 2 إلى‎ Ys
LOOT ‏م‎ Te ‏لام فده إلى‎ JT ‏أو من‎ ,10١ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يزيل الحذف‎ ‏أو يزيل جزء من المنطقة‎ 117 ,7748 LT AG ,715 Te ‏كامل المنطقة بين الكرموسوم 7 الموقع‎
La, (DHS) DNAse 1 ‏مما يترتب عليه تمزق واحد أو أكثر من مواقع مفرطة الحساسية ل‎ ‏الاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير 'تمزيق” يشير إلى تخفيض في انتساخ 861118 شبيه‎ ٠5
DNAse - ‏بالكريات الحمراء في خلية تشتمل على تمزق واحد أو أكثر من مواقع مفرطة الحساسية ل‎
Ste ‏على الأقل‎ ve ‏على الأقل‎ ZY ‏على الأقل (على سبيل المثال, على الأقل‎ 7٠ ‏بنسبة‎ 1 ‏على الأقل‎ Za ‏على الأقل‎ ZA ‏على الأقل‎ Tye ‏الأقل‎ eT ‏على الأقل‎ ,75 ٠. ‏على الأقل‎ ‏(أي, لا يوجد انتساخ قابل للكشف لشبيهة بالكريات الحمراء))‎ 7٠٠0 ‏على الأقل 794 أو حتى‎ 700 ‏مقارنة بخلية لا تتسم بمثل هذا التمزق. في أحد النماذج, يشتمل التمزق على عدم قدرة موضع معدل‎ Yo
GATAL ‏للارتباط بعوامل انتساخه الأصلية (على سبيل المثال,‎ DNAse -1 ‏مفرط الحساسية ل‎ (TALI ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, التعديل اللا‎ ‏جيني الذي يتداخل مع تكوين و / أو المحافظة على البصمة اللاجينية عند منطقة المحسن على‎
UCSC Genome Browser ‏(طبقاً ل‎ TYY LVYALT— YA ‏الكرموسوم 7 الموقع ,خالا‎ Yo
CAR
‎hg 9‏ مجموعة جينوم بشري) وبناءً عليه مما يؤدي إلى التعبير المنخفض عن عن 80111 أو بروتين ‎MRNA‏ , وزيادة التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, التعديل اللا جيني الذي يتداخل مع تكوين و / أو المحافظة على البصمة اللاجينية عند منطقة المحسن على ‎fo‏ الكرموسوم 7 الموقع ,خالا ‎TYY LVYALT— YA‏ (طبقاً ل ‎UCSC Genome Browser‏ ‎hg 19‏ مجموعة جينوم بشري) تتضمن ولكن ليس على سبيل الحصر تعديلات لاجينية تؤثر على حساسية | ‎DNase‏ , تعديلات لاجينية تؤثر على تعديلات الهستونات, تعديلات لاجينية تؤثر على ارتباط ‎GATAL/TALL‏ , وتعديلات لاجينية تؤثر على تفاعل المعزز على المدى البعيد للمعزز من ‎.BCL11A‏ ‏على سبيل المثال, التعديل اللاجيني الذي يتداخل مع تكوين و / أو المحافظة على البصمة اللاجينية عند منطقة المحسن على الكرموسوم ؟ الموقع ‎Tem VA YT Te‏ 774, 117 يتضمن ولكن ليس على سبيل الحصر واحد على الأقل من حذف داخل الكرموسوم ؟ الموقع 60, 715, ‎-١84‏ ‎LTS‏ 1, 117 بحيث تتأثر الوظيفة الكلية لهذه المنطقة والتي بواسطتها تقليل أو تخفيض التعبير عن ‎mRNA‏ أو 801118 . على سبيل المثال, يكون الحذف عند مناطق حساسية ‎DNasel‏ ‎٠‏ الكرموسوم ‎Yo‏ الموقع ‎Tam VAS VY Te‏ 774, 117, على سبيل المثال, +17, ‎L005 0A‏ يمكن أن يكون الحذف عند +67 أو +88 أو ‎cod‏ أو توليفة منه. على سبيل الأمتلة, عند +17 وج ره +00 +17 +00 أو عند جميع الثلاثة من +17, ‎OM‏ 5 +00 كمثال آخر, التعديل اللاجيني الذي يتداخل مع تكوين و / أو المحافظة على البصمة اللاجينية عند منطقة المحسن على الكرموسوم ؟ الموقع ‎Tm YA YT Te‏ 7748, 117 يتضمن ولكن ليس ‎٠‏ على سبيل الحصر تغييرات في تعديلات الهستونات على الكرموسوم ؟ الذي لا يكون في الموقع ‎,٠١‏ ‎LYALL TSA, 7‏ 117, أو تغييرات في تعديلات الهستونات على الكرموسوم ؟ عند الموقع د الا, ‎LYALL TAG‏ 117, أو كل من تعديلات الهستونات على الكرموسوم ؟ ليست عند الموقع 10, ‎YT‏ 184-:1, 774, 117 وكذلك عند عند الموقع ‎LT SIAL TT‏ خالا ‎٠١‏ بحيث تتأثر الوظيفة الكلية لهذه المنطقة والتي بواسطتها تقليل أو تخفيض التعبير عن ‎MRNA‏ ‎Yo‏ أو ‎.BCL1IA‏ ‎CAR‏
=« اذ في نموذج آخر, التعديل اللاجيني الذي يتداخل مع تكوين و / أو المحافظة على البصمة اللاجينية عند منطقة المحسن على الكرموسوم ؟ الموقع ‎Tem VA YT Te‏ 774, 117 يتضمن ولكن ليس على سبيل الحصر إدخال واحد على الأقل من متوالية محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراثية تغير السمات اللاجينية للعناصر غير المشفرة عند الكرموسوم ؟ الموقع ‎YA LTA TT‏ © 117 وبالتالي يترتب على ذلك إخماد التعبير الجيني المستهدف. يتم التركيز من الأول على ‎any‏ ‏التحديد على محسنات فردية للإخماد على نحو لا جيني. بعبارة أخرى؛ يمكن أن يؤدي إدخال متواليات محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراثية في الكروموسوم 7 إلى تداخل على متوقع مع التعديل جين 80111/8. ‎Vo‏ يمكن استخدام أي طرق معروفة في المجال لإنتاج التعديل اللا جيني المتوقع. على سبيل المثال, وفقاً للموصوف في 2013 ‎,Mendenhall E.
M. et al., Nat.
Biotechnol. 06 September‏ و2013 2013 ‎.Maeder ML et al., Nat Biotechnol. 09 October‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, إدخال متوالية محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراثية واحدة على الأقل على أي موقع كرموسوم ؟ يترتب عليه ‎Vo‏ ولكن لا يقتصر على ذلك مناطق منخفضة الحساسية ‎DNasel‏ عند الكرموسوم ” للموقع ‎٠١‏ , , كاحء1, ‎1١7 YYA‏ , على سبيل المثال, +17, ‎0A+‏ ,+00 تعديلات هستونات متزايدة على الكرموسوم ؟ للموقع ‎LVYA ,1 184 VAT Te‏ 117: وعوامل انتساخ منخفض ترتبط ب 1 لمنطقة المحسن على الكرموسوم ؟ للموقع ‎TT‏ كاحت ‎POY LYYA‏ وتفاعل منخفض أو مضعف بين الكرموسوم 7 للموقع ‎Tam YA YT,‏ 274, 117 مع معزز ‎BCL11A ٠٠‏ . في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تكون التأثيرات الكلية لإدخال متوالية محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراثية واحدة على الأقل على أي موقع كرموسوم ‎Y‏ تعبير منخفض أو أقل عن ‎mRNA‏ و ‎BCL 1 1A‏ . في بعض النماذج , وفقاً لما هو مستخدم في سياق ‎MRNA‏ والتعبير عن /80111, التفاعل بين ‎YO‏ الكرموسوم ؟ للموقع ‎VYA ,1:-144 WT,‏ 117 أو محسن 8061118 مع معزز ‎CAR‏
١ ‏لمنطقة المحسن, التعبير 'منخفض” أو‎ GATAL/TALL, ‏وعوامل الانتساخ التي ترتبط‎ , 86118 ‏أقل, على الأقل 770 أقل, على الأقل‎ 7٠١ ‏يشير إلى أقل بنسبة 75 على الأقل على الأقل‎ mead ‏أقل,‎ ye ‏أقل, على الأقل 700 أقل, على الأقل‎ Tee ‏أقل, على الأقل‎ Zee ‏أقل, على الأقل‎ ‏أقل, على الأقل 7960 أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل 7"-ضعف أقل,‎ TA ‏على الأقل‎ ‏ضعف أقل, على الأقل‎ ٠٠١ ‏ضعف أقل, على الأقل‎ ٠١ ‏على الأقل 5٠-ضعف أقل, على الأقل‎ 5 ‏أقل, أو أكثر مقارنة بالموقف المقارن الذي يكون في عدم وجود التعديل اللاجيني أو‎ فعض-٠‎ 861118 | ‏إدخال المتواليات المعالجة بالهندسة الوراثية في الطلب الحالي. المقصود بتخفيض‎ ‏أو التعبير عن البروتين في الخلية يعني أن التعبير عن البروتين يكون أقل بنسبة 75 على‎ MRNA ‏أقل, على‎ Zee ‏أقل, على الأقل 770 أقل, على الأقل‎ 77١0 ‏أقل, على الأقل‎ 7٠١ ‏الأقل على الأقل‎
Za ‏أقل, على الأقل‎ TA ‏الأقل 750 أقل, على الأقل 700 أقل, على الأقل 770 أقل, على الأقل‎ Ys ‏أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل ١-ضعف أقل, على الأقل -- ضعف أقل, على الأقل‎ ‏ضعف أقل, على الأقل ١٠٠٠-ضعف أقل, أو أكثر مقارنة بخلية‎ ٠٠١ ‏ضعف أقل, على الأقل‎ ٠ ‏مقارنة لا تتسم بالتعديل اللا جيني أو إدخال المتواليات المعالجة بالهندسة الوراثية في الطلب الحالي.‎ ‏في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يحدث إدخال‎
DNasel ‏متوالية محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراثية واحدة على الأقل داخل مناطق الحساسية ل‎ ١ 00+ 5 OA ,17+ ‏على سبيل المثال,‎ ,117 VTA Tem VAS VY TT ‏للكرموسوم ؟ الموقع‎ ‏أو +58 أو‎ 1+ YY ‏أو عند الطرف‎ oot ‏أو‎ oA+ ‏يمكن أن يكون الإدخال عند #'الطرف +67 أو‎ ‏و+250, أو بين +00 و+17.‎ OAF ‏بين‎ OAs 7+ ‏أو بين‎ 00+ ‏في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يغير إدخال‎
DNasel ‏متوالية محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراقية واحدة على الأقل مناطق الحساسية ل‎ Yo
SY ‏كاحت خالا‎ VT Te ‏للكرموسوم > الموقع‎ ‏في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تغير التعديلات‎
SOY ‏كاحت خالا‎ YY Te ‏الموقع‎ ١ ‏للكرموسوم‎ DNasel ‏اللاجينية مناطق الحساسية ل‎ ‏في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تغير التعديلات‎ 117 ‏خالا‎ LT AG YT Te ‏اللاجينية تعديلات الهستونات على الكرموسوم > للمرقع‎ YO
CAR
_— \ اذ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يغير إدخال متوالية محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراثية واحدة على الأقل تعديلات الهستونات على الكرموسوم ‎Y‏ للمرقع ‎LTA VT LT‏ خالا ‎CY‏ ‏في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تغير التعديلات © اللاجينية ‎GATAL/TALL Lis)‏ _لمنطقة المحسن على الكرموسوم ؟ للموقع ‎-١84 ,7156 Te‏ ‎IY ,»1 LTS‏ بحيث تتأثر الوظيفة الكلية لهذه المنطقة والتي بواسطتها تقليل أو تخفيض التعبير عن ‎mRNA‏ أو 861118 . على سبيل المثال, ارتباط عوامل الانتساخ ب 687781/1/811. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يحدث إدخال متوالية محددة بالمخمد معالجة بالهندسة الوراثية واحدة على الأقل داخل ‎GATAL/TALL‏ وفقاً ‎Yo‏ للموصوف في الطلب الحالي. يمكن أن يكون الإدخال عند #' الطرف أو الطرف ‎'Y‏ 67/81 أو 1/1 . يمكن أن يكون الإدخال بين 687/81 ‎TALL;‏ يغير الإدخال ارتباط 6/81781/1/811 لمنطقة المحسن على الكرموسوم ¥ للموقع ‎1١7 ,72748 LTA TT‏ بحيث تتأثر الوظيفة الكلية لهذه المنطقة والتي بواسطتها تقليل أو تخفيض التعبير عن ‎mRNA‏ أو 80611178 . على سبيل المثال, ارتباط عوامل الانتساخ ب 7/81/1/11م/6. ‎Vo‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يغير التعديل اللاجيني التفاعل بين محسن 861118 ومعزز 801118 . في أحد النماذج, يتم تخفيض التفاعل أو إضعافه بحيث تتأثر الوظيفة الكلية لهذه المنطقة والتي بواسطتها تقليل أو تخفيض التعبير عن ‎mRNA‏ أر ‎BCL11A‏ . في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تغير التعديلات ‎٠‏ اللاجينية التفاعل بين الكرموسوم ؟ للموقع 60, 715, ‎Tem AG‏ 7748, 117 مع معزز 861118 . في أحد النماذج, يتم تخفيض التفاعل أو إضعافه بحيث تتأثر الوظيفة الكلية لهذه المنطقة والتي بواسطتها تقليل أو تخفيض التعبير عن ‎mRNA‏ أو 801118 . أيضاً يتم في الطلب الحالي تقديم في جانب ‎AT‏ خلية بشرية مهندسة ‎Uy‏ معزولة تتسم بتعديل جيني واحد على الأقل على الكرموسوم ؟ للموقع ‎Tem) A TT‏ 7748, 117 (طبقاً ل ‎UCSC‏ ‎Genome Browser hg 19 Yo‏ مجموعة جينوم بشري) تم بواسطة ‎lee‏ تلامس الخلية مع كمية ‎CAR‏
اخ فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز ‏ حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ للموقع ‎CIAL YT Te‏ ‎1١7 ,74‏ ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, الخلية البشرية
المعالجة بالهندسة الوراثية معزولة تتسم بتعديل لا جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم 7. في جانب من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, الخلية البشرية المعالجة بالهندسة الوراثية معزولة تتسم بتعديل لا جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم للموقع ‎VY‏ تنص ا بلكلا ‎JUYY‏
‎٠‏ في بعض جوانب من أي لهذه خلايا بشرية مهندسة وراثياً معزولة تتسم بتعديل لا جيني واحد على الأقل, يتم زرع الخلايا في ثديي للاستخدام في زيادة الهيموجلوبين الجنيني في الثديي. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتم زرع الخلية البشرية المعالجة بالهندسة الوراثية معزولة تتسم بتعديل جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم للموقع دا خالا تماص ا بكار ‎TYY‏ في ثديي للاستخدام
‎Ve‏ في زيادة الهيموجلوبين الجنيني في الثديي. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتم تخزين الخلية البشرية المعالجة بالهندسة الوراثية معزولة تتسم بتعديل جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم للموقع ا خللا, تباصا مب مكار ‎TYY‏ للاستخدام اللاحق بواسطة الحفظ بالتبريد.
‎٠‏ في بعض جوانب من أي من تلك يتم تخزين خلايا بشرية مهندسة وراثياً معزولة تتسم بتعديل لا جيني واحد على الأقل, الخلايا للاستخدام اللاحق بواسطة الحفظ بالتبريد. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي,يتم حفظ الخلية البشرية المعالجة بالهندسة الوراثية معزولة التي تتسم بتعديل جيني واحد على الأقل عند حمض ‎DNA‏ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم للموقع دا خالا تغناص ا بكار ‎TYY‏ بالتبريد , واذابتها
‎YO‏ وزرعها في ثديي للاستخدام في زيادة الهيموجلوبين الجنيني في الثديي.
‎OY AY
دوم
في بعض جوانب من أي من تلك الخلايا البشرية المهندسة وراثياً المعزولة تتسم بتعديل لا جيني واحد
على الأقل, يتم حفظها بالتبريد, وتتم إذابتها ويتم زرعها في ثديي للاستخدام في زيادة الهيموجلوبين
الجنيني في الثديي.
يتعلق جانب آخر مقدم في الطلب الحالي بتركيبة تشتمل على خلايا بشرية مهندسة وراثياً معزولة,
© حيث تتسم الخلايا بتعديل جيني واحد على الأقل على الكرموسوم ‎Y‏ للموقع ‎CYA TT‏
‎TYY LVYA‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري) تم بواسطة
‏عملية تلامس الخلايا مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض
‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها
‏يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ ‎Ye‏ للموقع ‎TYY LVYALT—YA9 VY,‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏
‏مجموعة جينوم بشري) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه.
‏يتعلق جانب آخر مقدم في الطلب الحالي بتركيبة تشتمل على خلايا بشرية مهندسة وراثياً معزولة,
‏حيث تتسم الخلايا بتعديل لا جيني واحد على الأقل على الكرموسوم ؟. في أحد النماذج, يكون
‏التعديل اللاجيني واحد على الأقل على الكرموسوم ؟ عند الموقع ‎LYALL TA YT Te‏ 7ل ‎yo‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري). في نموذج آخر, يتم تعديل
‏لا جيني واحد على الأقل على الكرموسوم ¥ بواسطة عملية تلامس الخلايا مع كمية فعالة من تركيبة
‏تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإنزيم
‏يستهدف حمض ‎DNA‏ والذي بواسطته يحدث الإنزيم الذي يستهدف حمض ‎DNA‏ تعديل لا جيني
‏واحد على الأقل في حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ‎١‏ مما يؤثر على الموقع ‎,٠١‏ ‎٠‏ الا كتخمناصات بالا ‎TYY‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم
‏بشري) ويتسبب في ذلك.
‏في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تحدث التركيبة
‏زيادة في الهيموجلوبين الجنيني ‎MRNA‏ أو التعبير عن البروتين في خلية التلامس.
‎oY AY
اج اذ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات الموصوفة ذاتية المنشاً, إلى الثديي الذي يكون متلقي للخلايا في إجراء زرع, أي, تكون ‎LS DA‏ مشتقة أو تم حصدها من الثديي قبل أي تعديل موصوف . في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تكون خلايا أي © من التركيبات الموصوفة غير ‎BE Ld‏ إلى الثديي الذي يكون متلقي للخلايا في إجراء زرع, أي, لا تكون خلايا التركيبة مشتقة أو تم حصدها من الثديي قبل أي تعديل موصوف. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات الموصوفة بحد أدنى من نوع ‎HLA‏ المطابق مع الثديي الذي يكون متلقي للخلايا في إجراء زرع. ‎٠‏ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات الموصوفة خلايا أولية معزولة قبل أي تعديل موصوف. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات الموصوفة خلايا أولية معزولة مكونة للدم قبل أي تعديل موصوف. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تكون خلايا أي ‎ge 5‏ التركيبات الموصوفة ‎WDA‏ جذعية معزولة مستحثة متعددة القدرة قبل أي تعديل موصوف. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يشتمل الحذف على واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل 1 ‎,0A+ ,17+ (DHS) DNAse‏ و+ده وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في قسم الأمثلة . في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف في الأساس من واحد أو أكثر من المواقع مفرطة ‎٠‏ الحساسية ل 1 ‎0A+ ,17+ (DHS) DNAse‏ و+هه وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في قسم الأمثلة . في نموذج آخر, يتكون الحذف من واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل ‎DNAse‏ ‎0A+ ,17+ (DHS) 1‏ 0045 وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في قسم ‎AB)‏ . في أحد النماذج, وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير "جزء' في سياق الحذف الجينومي على الأقل ‎7٠١‏ إلى حوالي ل من المنطقة المحددة. في نماذج أخرى, يكون الجزء المحذوف على ‎f‏ لأقل ‎YAR‏ , على ‎CAR‏
Cyr ‏على الأقل‎ Ave ‏على الأقل‎ Ze ‏الأقل‎ edo ‏على الأقل‎ Ze ‏الأقل 770, على الأقل‎ ‏من المنطقة المحددة.‎ 72٠٠١ ‏الأقل 72955, على الأقل 799 أو حتى‎ ea ‏على الأقل‎ TA ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يشتمل الحذف‎ ‏الموصوفة في الجدول 7. في نموذج آخر من هذا الجانب‎ SNP ‏على واحد أو أكثر من مرقمات‎ ‏وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف في الأساس من واحد أو أكثر من‎ © ‏الموصوفة في الجدول ". في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى‎ SNP ‏مرقمات‎ ‏الموصوفة في‎ SNP ‏الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف من واحد أو أكثر من مرقمات‎
NX ‏الجدول‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يشتمل الحذف‎ ‏على واحدة أو أكثر من الشظايا المدرجة في الجدول 7. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع‎ ٠ ‏الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتكون الحذف في الأساس من واحد أو أكثر من‎ ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة‎ .١ ‏الشظايا المدرجة في الجدول‎ ‏في الطلب الحالي, يتكون الحذف من واحدة أو أكثر من الشظايا المدرجة في الجدول 7. في نموذج‎ ,٠١ ‏آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون الحذف من‎
YY Te ‏من‎ AY ‏!آل‎ Te ‏إلى‎ YAR VT Te ‏لالاكذا إلى نتبخالا, ,من‎ Ye
COTLYYY Te eo TLV 0 ‏اأالا, 1 إلى‎ LT ‏رخالا, ,من‎ ١ ‏إلى‎ 7 ‏إلى‎ FATTY LT ‏من‎ YAY VY Te ‏إلى‎ ق٠‎ YY E Te ‏إلى 0, “الاب , من‎
Cle ‏إلى‎ 815 IY Te ‏من‎ AAS TYE Te ‏برخلا ",من نا 177 1 إلى‎
YY Te ‏إلى‎ 7٠١ YY 16 ‏من‎ , TTL, Te ‏الا 735 إلى‎ LT ‏الا من‎ ,1
NOE VE Te ‏قلا إلى‎ 74 Te ‏الاك من‎ VY Te ‏إلى‎ VAL YY E Te ‏دقر من‎ ٠ ‏أو من‎ ,101 SAYY Te ‏إلى‎ ERA LAY Te ‏لاك من‎ Te ‏أ“ إلى‎ YEA LT ‏من‎ ‎LOOT ‏كم‎ Te ‏اك قف إلى‎ TL ‏في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يزيل الحذف‎ 0656 ‏(طبقاً ل‎ 1١7 ,778 Tem A ITT ‏كامل المنطقة بين الكرموسوم ؟ للموقع‎ ‏مجموعة جينوم بشري) أو يزيل جزء من المنطقة مما يترتب عليه‎ Genome Browser hg 19 Yeo .)0115( DNAse 1 ‏تمزق واحد أو أكثر من مواقع مفرطة الحساسية ل‎
CAR
_ 7 اذ في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء ثديي في حاجة إلى زيادة الهيموجلوبين الجنيني. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, تم تشخيص الثديي على أنه مصاب باعتلال الهيموجلوبين. © في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون الثديي
الذي في ‎dala‏ إلى زيادة الهيموجلوبين الجنيني قد تم تشخيصه أنه مصاب باعتلال الهيموجلوبين. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون اعتلال الهيموجلوبين 8 -اعتلال الهيموجلوبين ‎—hemoglobinopathy‏ 8 . في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون اعتلال
‎٠‏ - الهيموجلويين مرض الخلية المنجلية. في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يكون اعتلال الهيموجلويين م8 -ثلاسيميا ‎—thalassemia‏ 8 . في أحد النماذج من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, يتم إعطاء الخلية المتلامسة, الخلية البشرية, خلية أولية لتكوين الدم أو سليفتها إلى الثديي.
‎VO‏ في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على خطوات توفير مجموعة معزولة من خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين الدم من الثديي في خارج الجسم الحي, وتلامس مجموعة من خلايا أولية أو خلايا جذعية لتكوين ‎pall‏ مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف
‎,٠١ ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ للموقع‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏إندونيوكلياز حمض‎ ٠ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد‎ 117 LYYA LTS YAR 7 ‏التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس. في نموذج إضافي من‎ ‏هذه الطريقة, يتم حفظ المجموعة التي تم تلامسها من الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم‎ ‏إدخالها في الثديي.‎ sale] ‏التي تتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني بالتبريد ويتم تخزينها أو‎
‎CAR
‎A —_‏ اذ في نموذج آخر, تتم إذابة المجموعة التي تم حفظها بالتبريد من الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم التي تتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني وبعد ذلك تتم ‎sale)‏ إدخالها في الثديي. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي و / أو علاج إشعاعي لإزالة أو تخفيض خلايا أولية أو خلايا جذعية داخلية المنشاً لتكوين الدم في الثديي. في أي من النماذج © على الطريقة الموصوفة, الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم يمكن توزيعها باستخدام الموصوف في الطلب الحالي. في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على خطوات عزل مجموعة من خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين الدم من الثديي, وتلامس في خارج الجسم الحي مجموعة من خلايا أولية أو خلايا جذعية لتكوين الدم ‎٠‏ مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎(Alls DNA‏ بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ للموقع ‎-١84 ,7156 Te‏ ‎1١7 YYA 7٠4‏ ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والذي بواسطته يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس. في نموذج إضافي من هذه ‎VO‏ الطريقة, يتم حفظ بالتبريد للمجموعة المتلامسة خارج الجسم ‎all‏ من خلايا أولية أو خلايا جذعية لتكوين الدم التي نتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني ويتم تخزينها أو إعادة إدخالها في الثديي. في نموذج آخر, تتم إذابة المجموعة التي تم حفظها بالتبريد من خلايا أولية أو ‎WA‏ جذعية لتكوين الدم والتي تتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني وبعد ذلك تتم إعادة إدخالها في التديي. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي و / أو علاج إشعاعي لإزالة ‎٠‏ أو تخفيض خلايا أولية أو خلايا جذعية داخلية المنشاً لتكوين الدم في الثديي. في أي من النماذج على الطريقة الموصوفة, يمكن توزيع الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم باستخدام ‎IPSCs‏ المشتقة من الثديي. في أي نموذج من الطريقة, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء ثديي في حاجة إلى تعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني. في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة ‎Yo‏ إليه, تشتمل الطريقة على خطوات توفير ‎Jie‏ مجموعة من خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين الدم من الثديي وحذف حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلايا على الكرموسوم ؟ للموقع ‎ITT‏ ‎CAR‏
‎LVYA TYAS‏ 117 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلويين الجنيني في الثديي المذكور, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس المذكور. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, يتم حفظ بالتبريد لمجموعة من خلايا أولية أو خلايا جذعية لتكوين الدم بحمض ‎DNA‏ جينومي تم حذفه وتتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني ويتم تخزينها أو إعادة © إدخالها في الثديي. في نموذج ‎DAT‏ تتم إذابة مجموعة من ‎WDA‏ أولية أو خلايا جذعية لتكوين ‎pall‏ ‏بحمض ‎DNA‏ جينومي تم حذفه وتتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني وبعد ذلك تتم ‎sale)‏ ‏إدخالها في الثديي. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي و / أو علاج إشعاعي لإزالة أو تخفيض ‎WIA‏ أولية أو ‎WIA‏ جذعية داخلية المنشأً لتكوين الدم في الثديي. في أي نموذج من الطريقة الموصوفة, يمكن توزيع الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم ‎٠‏ باستخدام 1050658 الموصوف في الطلب الحالي. في أي من النماذج على الطريقة الموصوفة, تكون الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو ‎IPSCs‏ مناظرة للثديي, الأمر الذي يعني أن ‎Wall‏ ‏تكون مشتقة من نفس الثديي. في نموذج آخر على الطريقة الموصوفة, لا تكون الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو ‎IPSCs‏ مناظرة للثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا لا تكون مشتقة من نفس الثديي, ولكن من ثديي آخر من نفس النوع. على سبيل ‎JB‏ الثديي يكون إنسان. في أي ‎٠‏ نموذج من الطريقة, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء ثديي في حاجة إلى تعبير متزايد عن
‏الهيموجلوبين الجنيني. في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على خطوات عزل مجموعة من خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين الدم من الثديي وخارج الجسم ‎all‏ حذف حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلايا على الكرموسوم ؟ للموقع ‎TY‏ خالا قا ة, ‎LYYA‏ 117 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعيير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي المذكور, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس المذكور. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, يتم حفظ مجموعة من خلايا أولية أو خلايا جذعية لتكوين الدم بحمض ‎DNA‏ جينومي تم حذفه وتتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلويين الجنيني بالتبريد ويتم تخزينها أو إعادة إدخالها في الثديي. في نموذج آخر, تتم إذابة المجموعة التي تم حفظها بالتبريد من خلايا ‎YO‏ أولية أو خلايا جذعية لتكوين ‎pall‏ تتسم بتعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني وبعد ذلك تتم ‎sale)‏ ‏إدخالها في الثديي. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي و / أو
‎CAR
=« _ علاج إشعاعي ‎AY‏ أو تخفيض خلايا أولية أو خلايا جذعية داخلية المنشاً لتكوين الدم في الثديي. في أي من النماذج على الطريقة الموصوفة, يمكن توزيع الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم باستخدام ‎IPSCs‏ المشتقة من الثديي. في أي نموذج من الطريقة, تشتمل الطريقة ‎Lad‏ على انتقاء ثديي في حاجة إلى تعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني. © في أحد النماذج من أية طريقة تم وصفها, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء ثديي في حاجة إلى تعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني. يكون الثديي التمثيلي الذي في حاجة إلى تعبير متزايد عن الهيموجلوبين الجنيني هو الذي تم تشخيص حالته على أنه مصاب باعتلال الهيموجلوبين. في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات: (أ) توفير خلايا أولية لتكوين الدم أو ‎WDA‏ جذعية لتكوين الدم أو 10505: (ب) تلامس الخلايا خارج ‎٠‏ - الجسم الحي أو في المعمل مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم " للموقع ‎TY ,7748 ,1:-1484 TT‏ ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي المذكور, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس ‎NO‏ المذكور: و (ج) إعطاء من الخطوة (ب) في الثديي. في أحد النماذج من أية طريقة, الخلايا بعد الخطوة (ب) يمكن ‎Leta‏ 333500 حتى تكون مطلوبة للإعطاء في الثديي. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي ‎chemotherapy‏ و / أو علاج إشعاعي ‎AY radiation‏ أو تخفيض خلايا أولية أو خلايا جذعية داخلية المنشاً لتكوين ‎pal)‏ في الثديي. في أي من النماذج على الطريقة الموصوفة, الخلايا الأولية أو ‎٠‏ -_ الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو 10565 تكون ذاتية إلى الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا تكون مشتقة من نفس الثديي. في نموذج آخر على الطريقة الموصوفة, الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين ‎aall‏ أو 10565 تكون غير ذائية ‎CE‏ إلى الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا لا تكون مشتقة من نفس التديي , ولكن تديي آخر من نفس النوع . على سبيل المثال, الثديي يكون إنسان . في أحد النماذج من أية طريقة تم وصفها, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء ثديي في حاجة إلى ‎Yo‏ علاج اعتلال الهيموجلوبين . ‎CAR‏ gy ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات:‎ ‏(أ) عزل خلايا أولية لتكوين الدم أو خلايا جذعية لتكوين الدم من الثديي: (ب) تلامس الخلايا خارج‎ ‏الجسم الحي أو في المعمل مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف‎ ‏والتي‎ DNA ‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ DNA ‏حمض‎ ‏الجينومي للخلية على‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض‎ © ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل‎ 117 ,778 Tam AL VY ‏الكرموسوم ؟ للموقع‎ ‏فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل‎ ‏التلامس المذكور: و (ج) إعطاء من الخطوة (ب) في الثديي.‎ ‏البُزوْدَة حتى تكون مطلوبة للإعطاء في‎ Lelia ‏في أحد النماذج, الخلايا بعد الخطوة (ب) يمكن‎ ‏على انتقاء ثديي في حاجة إلى علاج‎ Lad ‏التديي. في أي نموذج من الطريقة, تشتمل الطريقة‎ ٠ ‏اعتلال الهيموجلوبين.‎ ‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات:‎ ‏(ب) خارج الجسم الحي‎ SIPSCs ‏جذعية لتكوين الدم أو‎ WA ‏(أ) توفير خلايا أولية لتكوين الدم أو‎ 17 ‏حال‎ TYAS WATT ‏الجينومي للخلايا على الكرموسوم ؟ للمروقع‎ DNA ‏حذف حمض‎ ‏ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني‎ VO ‏في الثديي المذكور, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس المذكور: و (ج) إعطاء الخلايا من الخطوة‎ ‏(ب)) في الثديي.‎ ‏البُزوْدَة حتى تكون مطلوبة للإعطاء في‎ Lelia ‏في أحد النماذج, الخلايا بعد الخطوة (ب) يمكن‎ ‏الثديي. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي و / أو علاج‎ ‏إشعاعي لإزالة أو تخفيض خلايا أولية أو خلايا جذعية داخلية المنشاً لتكوين الدم في الثديي. في أي‎ ٠
IPSCs ‏من النماذج على الطريقة الموصوفة, تكون الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو‎ ‏مناظرة إلى الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا تكون مشتقة من نفس الثديي. في نموذج آخر على‎ ‏الطريقة الموصوفة, الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو 10565 لا تكون مناظرة إلى‎ ‏الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا لا تكون مشتقة من نفس الثديي, ولكن ثديي آخر من نفس النوع.‎ ‏يكون إنسان. في أي نموذج من الطريقة, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء‎ oi, JB ‏على سبيل‎ YO ‏ثديي في حاجة إلى علاج اعتلال الهيموجلوبين.‎
CAR
_ \ —_
في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي تشتمل على خطوات:
(أ) ‎Je‏ خلايا أولية لتكوين الدم أو ‎LDA‏ جذعية لتكوين الدم من الثديي: (ب) خارج الجسم الحي
حذف حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلايا على الكرموسوم للموقع دا خالا تغناص ا بكار ‎TYY‏
ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني
© في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس المذكور: و (ج) إعطاء من الخطوة (ب) في الثديي.
في أحد النماذج, الخلايا بعد الخطوة (ب) يمكن ‎HL Leki‏ 335 حتى تكون مطلوبة للإعطاء في
الثديي. في نموذج إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي و / أو علاج
إشعاعي لإزالة أو تخفيض خلايا أولية أو خلايا ‎Leda‏ داخلية ‎Land)‏ لتكوين الدم في الثديي. في
أي نموذج من الطريقة, تشتمل الطريقة أيضاً على انتقاء ثديي في حاجة إلى علاج اعتلال ‎٠‏ - الهيموجلوبين.
في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي (على سبيل المثال
إنسان) تشتمل على إدخال تركيبة الموصوف في الطلب الحالي تشتمل على خلايا معالجة بالهندسة
الوراثية معزلة وراثياً بها تعديل جيني واحد على الأقل على الكرموسوم ؟ للموقع 60, 715, 184-
‎TY y YYA y Te‏ والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي . في نموذج ‎١‏ إضافي من هذه الطريقة, تشتمل الطريقة على علاج كيميائي و / أو علاج إشعاعي لإزالة أو تخفيض
‏خلايا أولية أو خلايا جذعية داخلية ‎Land)‏ لتكوين الدم .في الثديي. في أي نموذج من الطريقة,
‏تشتمل الطريقة ‎Lad‏ على انتقاء تديي في حاجة إلى علاج اعتلال الهيموجلوبين.
‏في أحد النماذج, يقدم هذا الكشف طريقة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في ثديي (على سبيل المثال
‏إنسان) تشتمل على زيادة التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي بواسطة الطريقة الموصوفة في ‎٠‏ -_ الطلب الحالي.
‏في أي نموذج من أية طريقة علاج موصوفة, يكون اعتلال الهيموجلوبين 8 -اعتلال الهيموجلوبين.
‏في أي نموذج من أية طريقة علاج موصوفة, يكون اعتلال الهيموجلوبين 8 -ثلاسيميا.
‏في أي نموذج من أية طريقة علاج موصوفة, يكون اعتلال الهيموجلوبين فقر الدم المنجلي.
‎CAR
_ Ad —_
في أحد النماذج على أي من الطرق الموصوفة, تكون الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم
أو ‎iPSCs‏ ذاتية المنشاً إلى الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا تكون مشتقة من نفس الثديي. في
نموذج آخر على أي طريقة موصوفة, تكون الخلايا الأولية أو الخلايا الجذعية لتكوين الدم أو
‎IPSCs‏ تكون غير ‎LE As‏ إلى الثديي, الأمر الذي يعني أن الخلايا لا تكون مشتقة من نفس
‏5 الثديي , ولكن تديي آخر من نفس النوع . على سبيل المثال ‎٠,‏ يكون الثديي إنسان .
‏في أحد النماذج على أي من الطرق الموصوفة, يمكن أن يكون تلامس أية خلية موصوفة في الطلب
‏الحالي خارج الجسم الحي أو في المعمل أو في الكائن الحي.
‏في نموذج آخر من أية طريقة موصوفة, يشتمل تلامس أية خلية موصوفة في الطلب الحالي على
‏تلامس بعامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ ويحدث تعديل لا جيني في
‏في أحد النماذج, يكون التعديل اللاجيني على الكرموسوم ؟ للموقع ‎YA LTA YT,‏
‏17 (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري).
‏في نموذج آخر من أية طريقة موصوفة, يشتمل تلامس أية خلية موصوف في الطلب الحالي على
‏تلامس بعامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ للموقع ‎CIAL YT Te‏ ا ‎WY LYYA‏ (طبقاً ل 19 ‎UCSC Genome Browser hg‏ مجموعة جينوم بشري), ويحدث تعديل
‏لا جيني على الكرموسوم ؟, وبناءً عليه خفض التعبير عن /80111 أو 4555( ‎MRNA‏ .
‏في نموذج آخر من أية طريقة موصوفة, يشتمل تلامس أية خلية موصوف في الطلب الحالي على
‏تلامس مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير
‏يحمل متوالية التشفير لإنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ والذي بواسطته ‎١‏ لإنزيم الذي يستهدف حمض
‎. MRNA ‏بروتين‎
‏في نموذج آخر من أية طريقة موصوفة, يشتمل تلامس أية خلية موصوف في الطلب الحالي على
‏تلامس مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير
‏يحمل متوالية ‎wall‏ لتشفير لإنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ والذي بوا سطته ‎١‏ لإنزيم الذي يستهدف حمض ‎DNA Yo‏ يحدث تعديل لا جيني على الكرموسوم ؟ للموقع ‎VYA Tem AL TT‏ 117 (طبقاً ل
‎CAR
_ _ ‎UCSC Genome Browser hg 9‏ مجموعة جينوم بشري) وبناءً عليه خفض التعبير عن ‎BCL11A‏ أو بروتين ‎MRNA‏ . في أحد الجوانب, يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس. ‏في نموذج آخر من ‎A‏ طريقة موصوفة, يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم, الخلية البشرية ‏المعزولة, أو خلية معزولة خارج الجسم الحي أو في المعمل. ‏في نموذج آخر من أية طريقة موصوفة, يكون التعديل الجيني الواحد على الأقل حذف. في نموذج آخر من هذا الجانب وجميع الجوانب الأخرى الموصوفة في الطلب الحالي, التعديل اللا جيني واحد على الأقل. ‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام عامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على ‎UCSC Genome Browser ‏(طبقاً ل‎ TYY LVYALT— YA ‏الكرموسوم 7 للموقع ,خالا‎ Ye ‏مجموعة جينوم بشري) لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين‎ hg 9
BCL11A ‏في الثديي أو لخفض التعبير عن 00818 أو 56111/8, حيث يتم تخفيض التعبير عن‎ . mRNA ‏أو بروتين‎ ‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على‎ ‎V0‏ إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي أو لخفض التعبير عن ‎MRNA‏ أو 80111/8, حيث يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشقطر حمض ‎NA‏ 9 الجينومي للخلية على الكرموسوم للموقع ‎١ 0 77 A 0 1 += ١ AQ 0 7 ١ 1 0 1 ٠‏ 1 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه. ‎٠‏ في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإنزيم يستهدف حمض ‎DNA‏ لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي أو لخفض التعبير عن ‎mRNA‏ أو 801118, حيث يحدث الإنزيم الذي يستهدف حمض ‎DNA‏ تعديل لا جيني واحد على الأقل في حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ‎,١‏ وبناءً عليه يؤثر على التعبير عن ‎,٠١ ‏في أحد النماذج, يكون التعديل اللا جيني واحد على الأقل عند الموقع‎ BCLIIA ‏أو‎ mRNA Yo ‎CAR gon ‏نموذج آخر, يكون تأثير التعديل اللاجيني الواحد خفض التعبير‎ BL 117 LVYA ,1:- 144 , 7 . MRNA ‏عن 8061118 أو بروتين‎ ‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام أي الخلايا المعزولة الموصوف في الطلب‎ ‏الحالي لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في تديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي.‎
Lys ‏بشرية مهندسة‎ WA ‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام تركيبة تشتمل على‎ © ‏معزولة لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي, حيث تتسم‎
TAY ‏خالا‎ Tem AG YT Te ‏الخلايا بتعديل جيني واحد على الأقل على الكرموسوم للموقع‎ ‏مجموعة جينوم بشري) تم بواسطة عملية تلامس‎ UCSC Genome Browser hg 19 ‏(طبقاً ل‎ ‏أو ناقل‎ DNA ‏الخلايا مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ ‏والتي بواسطتها يستهدف‎ DNA ‏تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ ٠ ,60 ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ للموقع‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏حمض‎ زايلكوينودنإ‎ ‏مجموعة جينوم‎ UCSC Genome Browser hg 19 ‏(طبقاً ل‎ TYY ‏لماص اتمبغالا,‎ LY ‏بشري) ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه.‎
Lys ‏بشرية مهندسة‎ WA ‏في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام تركيبة تشتمل على‎ ‏معزولة لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في ثديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي, حيث تتسم‎ VO ‏الخلايا بتعديل لا جيني واحد على الأقل على الكرموسوم ". في أحد النماذج, يكون التعديل اللاجيني‎ ‏(طبقاً ل‎ 117 VTA, TA TT ‏الواحد على الأقل على الكرموسوم 7 عند الموقع‎ ‏مجموعة جينوم بشري). في نموذج آخر, يتم تعديل لاجيني‎ UCSC Genome Browser hg 9 ‏واحد على الأقل على الكرموسوم ¥ بواسطة عملية تلامس الخلايا مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل‎ ‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير لإنزيم يستهدف‎ DNA ‏على الأقل على إنزيم يستهدف حمض‎ Yo ‏تعديل لا جيني واحد على‎ DNA ‏والتي بواسطتها يحدث الإنزيم الذي يستهدف حمض‎ DNA ‏حمض‎ ‎VT 60 ‏الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ مما يؤثر على الموقع‎ DNA ‏الأقل في حمض‎ ‏مجموعة جينوم بشري)‎ UCSC Genome Browser hg 19 ‏(طبقاً ل‎ TYY ‏صخ اغالا‎ 4 ‏ويتسبب في ذلك.‎
CAR
‎h —_‏ _ في أحد النماذج, يتم في الطلب الحالي تقديم استخدام أي الخلايا المعزولة الموصوف في الطلب الحالي أو أي واحدة من التركيبات الموصوفة في الطلب الحالي لتصنيع دواء لزيادة الهيموجلوبين الجنيني في تديي أو لعلاج اعتلال الهيموجلوبين في الثديي. في أحد النماذج على استخدام تركيبة الموصوف في الطلب الحالي, تحدث التركيبة زيادة في الهيموجلوبين الجنيني ‎MRNA‏ أو التعبير عن البروتين في خلية التلامس. في أحد النماذج على استخدام تركيبة الموصوف في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات الموصوفة ذاتية ‎Lael)‏ , إلى الثديي الذي يكون متلقي للخلايا في إجراء زرع, أي, تكون خلايا التركيبة مشتقة أو تم حصدها من الثديي قبل أي تعديل موصوف . في أحد النماذج على استخدام تركيبة الموصوف في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات ‎٠‏ الموصوفة غير ذاتية ‎TE‏ إلى الثديي الذي يكون متلقي للخلايا في ‎shal‏ زرع, أي, لا تكون خلايا التركيبة مشتقة أو تم حصدها من الثديي قبل أي تعديل موصوف . في أحد النماذج على استخدام تركيبة الموصوف في الطلب الحالي, خلايا أي من التركيبات الموصوفة بحد أدنى من نوع ‎HLA‏ المطابق مع الثديي الذي يكون متلقي للخلايا في إجراء زرع. في أحد النماذج على استخدام تركيبة الموصوف في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات ‎١ 25‏ الموصوفة خلايا أولية معزولة قبل أي تعديل موصوف . في أحد النماذج على استخدام تركيبة الموصوف في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات في أحد النماذج على استخدام تركيبة الموصوف في الطلب الحالي, خلايا أي من التركيبات الموصوفة تكون خلايا جذعية معزولة مستحثة متعددة القدرة قبل أي تعديل موصوف. ‎٠‏ في أحد النماذج على استخدام التركيبة الموصوف في الطلب الحالي, تكون خلايا أي من التركيبات الموصوفة محفوظة بالتبريد قبل الاستخدام. من المعروفة أن هناك صور متغايرة مرتبطة ب ‎HBF‏ في /80111. تم إجراء ست ‎GWAS‏ من مستوى ‎HOF‏ (أو سمة مرتبطة ‎Lay‏ بدرجة عالية عدد خلية ]) في أفراد من ينحدرون من سلالة ‎CAR‏
PV
.)١"-7( BCL11A ‏أوروبية, أفريقية وأسيوية, كل منهم يميزصورة مغايرة مرتبطة بالسمة في نطاق‎
HOF ‏ونتسق مع‎ ,)20 ,٠١ ,9( ‏و5 -ثلاسيميا‎ SCD ‏ترتبط نفس الصور المغايرة بالحدة الإكلينيكية ل‎ ‏كمحدد رئيسي لهذه الاضطرابات. وتم تقدير التباين في 80611178 ليشرح -715 من التباين في‎ ‏بوصفهم الأكثر ارتباطا‎ SNPs ‏وتم تمييز أربع مختلفة‎ (67,07 ,7( HDF ‏السمة في مستوى‎ 5766432 5 (1) 54671393 (A) rsl 18868658 ,)1( rsl427407) ‏بدرجة عالية السمة‎ © ‏إنترون-؟‎ BCLITA ‏من بعضها البعض في‎ kb ¥ ‏الحارسة داخل‎ SNPS ‏تتجمع‎ :))١-٠١(
HOF ‏الحارسة تشرح ارتباط‎ SNPs ‏(الأشكال "أ و١١ب). يبدو أن الأنماط الفردانية التي تتضمن‎ 861118 ‏عند موضع‎ SNPS ‏تم ربط خمسين‎ .)47 ,١١( ‏فردي‎ SNP ‏بصورة أفضل من أي‎ -٠١ x © > P) ‏بدلالة جينوم واسعة‎ HBF ‏داخل إنترون-؟ ربط بمستوى‎ SNPS ‏وسبعة وعشرين‎ ‏على الرغم من جهود إعادة عمل المتواليات على المقياس الكبير, ولم يتم وصف تشفير الصورة‎ (A ٠ (£7) BCL11A ‏المغايرة ل‎ 50111 ‏عند موضع‎ HOF ‏لتعيين إشارة الارتباط مع‎ CSSCD ‏فيما سبق؛ استخدم المخترعون‎ ‏وأفادوا بارتباط قوي مع 14671393 )£7( في تلك الدراسة؛ تم إدخال 51427407. وتم تمييز‎ ‏أيضاً في الدراسات السابقة باعتبار‎ rsl 1886868 ‏هما 18766432 و‎ SNPs ‏اثنين إضافيين من‎ ‏في مجموعة فرعية من‎ .)51 ,1١ ٠١ ,8( ‏الحارسة الأكثر ارتباطا بالسمة بدرجة عالية‎ SNPs ١ ‏الحارسة متوفرة؛ ولم تكن نتيجة‎ SNPS ‏التي كانت الأنماط الجينية لها عند جميع‎ (VYA ‏الأفراد (ع-‎ ‏الارتباط ذات دلالة عند 54671393 8766432 أو 1886868 ل بعد التكييف على الأنماط‎ 51427407 ‏وبالعكس؛ ظل الارتباط ذي دلالة بدرجة عالية بالنسبة ل‎ ¢r81427407 ‏الجينية عند‎ ‏(الجدول 4). بناءً عليه, م‎ rs 18868681 8766432 54671393 ‏عند التكييف على‎ ‏في نطاق 01155 الشبيهة بالكريات‎ HBF ‏الأكثر ارتباطاً بقوة بمستوى‎ SNP ‏تمثل‎ 1427407 ٠ ‏الحارسة الموصوفة فيما سبق.‎ SNPs ‏الحمراء وتفسر ارتباط السمة بصورة أفضل من‎ ‏أظهر التحليل الشرطي ارتباطات ظلت ذات دلالة بعد التكيف على 181427407 وكان الارتباط‎ ‏في‎ 157599488 ;(1\ =) + x 4,11 = P) DHS +55 ‏المتبقي الأكثر دلالة ل 157606173 في‎ -٠١ * 3,47 = P) ‏أقل دلالة بصورة طفيفة فقط‎ GIS, (£F) ‏سبق‎ Led ‏أوردناه‎ 3, DHS +62 ‏النادرة لصورة مغايرة داخل ثلاث 01155 إشارات‎ DNA ‏ولم يعطي تحليل متوالية‎ .)١ ‏(الجدول‎ )٠١ YO .)# ‏(الجدول‎ HBF ‏إضافية مستقلة مرتبطة بإشارات‎
CAR eA تبين للمخترعين أن ارتباط عامل الانتساخ المحدد بالأليل ‎transcription factor (TF)‏ متعلق بالتعبير عن /80111. وتم إجراء دراسات كيميائية حيوية محددة بالأليل باستخدام زيجوت متغايرة الآلائل إخباري للتحكم في الفروق تبادلية التأثير بين العينات لضمان وفرة متساوية لكل من الآلائل؛ وتم إثباتها بالتمثيل المتساوي للآلائل في ‎gDNA‏ المتزاوج (الأشكال "ب ‎(zs‏ تبين ‎asa‏ ا © 1427407 مباشرة عند مركز قمة ارتباط ‎GATAL‏ و ‎TALI‏ عند 62+ ‎DHS‏ (الشكل رقم ‎(RY‏ ‏في تجارب ‎ChIP‏ المجراة؛ تم تعريض الكروماتين للموجات الصوتية إلى ‎50٠0‏ زوج قاعدة تقريباً من الشظايا. وتم عمل متواليات ‎Sanger‏ من خمس عينات بشرية رئيسية من مادة منتجة شبيهة بالكريات الحمراء لزيجوت متغايرة الآلائتل ل 1427407 ‎rs‏ مستخدمة ل 6010-0068 عند 01155 شبيهة بالكريات الحمراء. كان ‎SNP‏ الآخر لزيجوت متغايرة الآلاثل فقط في نطاق ‎Ove‏ زوج قاعدة من 5 ‎٠‏ 1427407 في أي من هذه العينات هو 157599488 (4 ‎١‏ 7-زوج قاعدة ‎'V‏ من ‎(S1427407‏ ‏والتي كانت متغايرة الزيجوت في اثنتين فقط من العينات الخمس. لم يقع ‎SNP‏ هذا داخل محفزات ‎Lis)‏ 67/1 أو ‎TALL‏ . بل بناءً عليه بدا من غير المحتمل أن ‎SNP‏ آخر داخل 62+ ‎DHS‏ يمكن أن يفسر ارتباط ‎TF‏ الملاحظ المحدد بالأليل. إضافة لذلك, اكتشف المخترعون أن هناك ارتباط بين التعبير عن ‎BCLIIA‏ ومستوى ‎HPF‏ توفر ‎Vo‏ دراسات المخترعين تقدير للتغيير في التعبير عن 8011178 يمكن أن يترتب عليه زيادة ذات دلالة إكلينيكياً في مستوى ‎HDF‏ - من بين مجموعة محدودة من سلالات خلية شبيهة بأرومة لمفاوية بشرية أوردت ‎Lad‏ سبق ‎Ale‏ بينية لأليل ‎A‏ مرتبط ب ‎HDF‏ عالي ل 54671393 بتعبير منخفض عن ‎.)١١( 861118‏ أخفق تمديد هذه التجارب على مجموعة أكبر من سلالات ذات نمط جيني في التأكيد على هذه الملاحظة. ومن ثم؛ تبين للمخترعين أن التعبير عن 801117 لتأثير النوع الفرداني ‎٠٠‏ ل ‎1s1427407-rs7606173‏ المرتبط ‎HDF‏ في سياق محدد بشبيه بالكريات الحمراء» ومن الممكن أن يتسق مع نتائج حساسية | ‎DNase‏ اختلف التعبير عن ‎MRNA‏ /806111 في المواد المنتجة الرئيسية الشبيهة بالكريات الحمراء بمقدار ‎٠١"‏ ضعفاً بين -1 ‎rs1427407-1s7606173‏ ‎HOF 6‏ المرتفع والأنماط الفردانية ©-6 المنخفضة في ‎Jal) HBF‏ رقم ‎(FF‏ على نحو مناظر؛ كانت مستويات ‎HBF‏ المتوسطة 796 و 77,1 في متغايرات الزيجوت ‎homozygotes‏ ‎de G-C 4 T-G remains Yo‏ الترتيب (الشكل رقم ‎(ZV‏ من الجدير بالملاحظة؛ تمت ملاحظة النتائج التي تبين التعبير المحدد بالأليل عن /806111 في الخلايا البشرية الرئيسية الشبيهة بالكريات
CAR
الحمراء في الخلايا متغايرة الزيجوت للنمط الفرداني ‎rs1427407-rs7606173‏ وبالتالي تعكس الآثار المتواضعة على التعبير عن /80111 التأثيرات المشتركة لجميع ‎SNPs‏ الوظيفية في نطاق النمط الفرداني. في حين يكون إرث النمط الفرداني 8611178 الواقي مفيد إكلينيكياً على أساس المجموعة (5, ‎,٠١‏ 90), ظل متوسط مستوى ‎HBF‏ في متغايرات الزيجوت 1-6 أدنى من ذلك © المطلوب لمنع الوفاة جراء ‎.SCD‏ ومع ذلك؛ تتوقع حساسية مستوى ‎HBF‏ للتعبير عن ‎(BCL1IA‏ ‏أن تخفيف حدة المرض يمكن أن يتطلب تخفيض متواضع إضافي فقط في التعبير عن 86111/8. درس المخترعون أيضاً التتظيم التطويري لجينات جلوبين و86111/5 . أثناء التطوير البشري؛ تم استبدال جلوبين- 0 مشتق من كيس الصفار في الأشهر الثلاثة الأولى بجلوبين-ا] مشتق من كبد جنين. وبعد الميلاد؛ ‎Ui‏ خروج الكريات الحمر من الكبد إلى نخاع العظم؛ يتم إخماد جلوبين- لا ‎٠‏ تدريجياً ويسود جلوبين-لا. ويحدث تحويل مفرد فقط في التعبير عن جين جلوبين في تطور الجنين. وأثناء هذا التحول؛ الذي يحدث عند منتتصف الحمل؛ تعبر الكريات الحمراء الأولية المشتقة من كيس الصفار الدائرة عن الجلوبينات في المرحلة الجنينية ‎Oy‏ و ‎IHD‏ في حين تعبر الكريات الحمراء المحددة بكبد الجنين عن الجلوبينات في مرحلة البلوخ 1لا و 02( طبقاً لهذا التحول التطوري؛ يتم التعبير عن 806111/8 في السلالة المحددة ولكن ليس في السلالة الشبيهة بالكريات الحمراء في ‎١‏ المرحلة الأولية والمطلوبة للتغيير في التعبير عن جين الجلوبين ‎(OF V1)‏ في سلالات مبلغ 52.0-64.4+ 80111 محورة وراثياً ثابتة عند ‎٠١,5‏ 000, تمت ملاحظة التعبير عن ‎lacZ‏ فقط في منشم الكبد الجنيني وليس في الدم الدائر داخل الجنين, المشيمة أو كيس الصفار (الشكل رقم +أ). هذه النتائج, مجتمعة مع نتيجة التعبير عن 1802 في الأرومات الحمراء المحددة بالكبد الجنيني ‎dpc ١7,5‏ ولكن ليس في الخلايا الحمراء الأولية الدائرة المشتقة من كيس ‎٠٠‏ الصفار (الشكل رقم ؛ب), توضح أن متواليات محسن مركب ‎BCLITA‏ تثير التعبير في نمط محدد على نحو تطويري متسق مع تحويل جين الجلوبين داخلي المنشاً. تم توليد سلسلة من طافرات الحذف لتتقيح أدنى العناصر المطلوبة لنشاط محسن شبيه بالكريات الحمراء. كانت المتواليات التي تحتوي على المركز +58 0115 كافية لنشاط محسن شبيه بالكريات الحمراء. كانت تلك المتواليات التي لا تحتوي سوى على عناصر +67 أو ‎oot‏ المحيطة غير قادرة ‎YO‏ على توجيه التعبير عن جين شبيه بالكريات الحمراء (الشكل رقم 1( لاختبار قدرة ‎DHSs‏ على تحسين التعبير الجيني في المواد المنتجة للكريات الحُمر البشرية الرئيسية, استخدمنا توصيل فيروسة ‎CAR‏
مه عدسية لنظام مبلغ ‎lida GFP‏ لما تم وصفه من قبل (39). على نحو مماثل, التعبير الجيني عن +/ه ‎DHS‏ المحسن في تجربة المبلغ المذكورة (الشكل رقم ‎.)١‏ ‏قرر المخترعون توليد سلالات خلايا مع حذف محسن 18 ‎Bell‏ لبحث متطلبات المحسن المحسن ‎yell‏ عن 806111/8. تم توليد خلايا تابتة شبيهة بالكريات الحمراء مع تمزيق المحسن. نظراً لأنه لم © يكن هناك سلالات خلايا بشرية مناسبة في مرحلة البلوخ شبيهة بالكريات الحمراء, وكدليل على المبدأ, تحول المخترعون إلى النظام الفأري. تعتمد خلايا ابضاض ‎p30‏ الاحْمِرَارِيٌ بالفأر ‎(MEL)‏ على 801118 لجلوبين التعبير الجيني للنمط في مرحلة البلوغ ‎(VE)‏ وحدد المخترعون محسن مركب ‎ages‏ بالكريات الحمراء متشابه عند الموضع أورثو عند ‎Bell ١18.‏ من ‎Ll‏ لإنترون-7. وعلى غرار إنترون-؟" محسن 801118 المرقم ب ‎GWAS‏ بشري, اتسمت هذه المتواليات بسلسلة من خلايا ‎٠‏ شبيهة بالكريات الحمراء محددة ب ‎DHSS‏ إضافة لذلك, تمت زخرفة هذه المتواليات بواسطة ‎,H3K27ac 3 H3K4mel‏ وافتقر ‎,H3K2Tme3 5 H3K4me3‏ وتم شغلها بكل من 68181 ‎TALI‏ في كروماتين من الفأر شبيه بالكريات الحمراء (الشكل رقم ‎(A‏ تبين أن العناصر التتظيمية المركبة التي تتضمن سلسلة من ‎DHSS‏ المتجاورة تعد هامة للتعبير عن الجين عند مواقع متعددة؛ بما في ذلك من بين أخريات منطقة التحكم في موضع جلوبين-بيتا؛ والمتواليات المحافظة للأنواع المتعددة ‎١‏ لجلوبين-ألفاء والمنطقة التتظيمية ل ‎IgH‏ )00-07( ولاحظنا السمات الفريدة المحددة بالنوع للمحسن المركب. على سبيل المثال, حدد المخترعون متواليات الفأر المحافظة لكل واحد من 014158 +17, ‎oot 5 oA+‏ البشرية الثلاث, وتبين لهم أن الحساسية المفرطة ل ‎DNase ١‏ للخلايا شبيهة بالكريات الحمراء عند +7 5 +00 ‎aay,‏ ذلك افتقرت المتواليات المحافظة ‎oA‏ إلى الحساسية المفرطة ل ‎DNase |‏ . ‎٠‏ | تحقق ‎PCR‏ وتلطيخ ‎Southern‏ من استئصال القسم 64 ‎Kb Te fo‏ المتعلق بالإنترون من 98 في ثلاث نسائل ‎MEL‏ فريدة واثنتين من نسائل الخلية اللمفاوية طليعة 8 الفريدة (الشكل رقم ‎٠ (4‏ كانت نقاط الفصل ذات المتوالية طبقاً ل ‎Sanger‏ مميزة لانشطار يتوسط فيه ‎TALEN‏ بإصلاح ‎NHEJ‏ لاحق (الشكل رقم ‎.)٠١‏ عند حذف القسم المتعلق بالإنترون؛ لاحظنا انخفاض كبير في منتسخ /806111 في نسائل خلية ‎MEL‏ بواسطة 41-0068 باستخدام أزواج بادئ تكشف ‎YO‏ وصلات إكسون ‎«JE‏ وبامتداد أو بعد الحذف (الشكل رقم ‎(To‏ ‏التعريفات ‎CAR‏
-ه- للملائمة؛ يتم في هذه الوثيقة تجميع تعبيرات محددة مستخدمة في الطلب بالكامل (بما في ذلك المواصفة؛ ‎(AB‏ وعناصر الحماية المرفقة). ما لم يتم ذكر ما يخالف ذلك؛ يكون لجميع التعبيرات التقنية والعلمية المستخدمة في هذه الوثيقة نفس المعنى وفقاً لما يتم إدراكها بوجه عام بواسطة ذوي المهارة العادية في المجال الذي ينتمي إليه الاختراع. © وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, العبارة "عامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ‎Y‏ للموقع ‎TOY ,7748 TIAL YT Te‏ يشير إلى جزيئات صغيرة؛ أو أحماض نووية؛ بروتينات, ببتيدات؛ أو قليل النيوكليوتيدات التي يمكن ‎of‏ ترتبط بالموقع داخل حمض ‎DNA‏ ‏الجينومي (على سبيل المثال, الكرموسوم ؟ للموقع ‎LYALL TAG TT‏ 117) ويخمد التعبير عن 8061118 أو بروتين ‎mRNA‏ في خلية بنسبة على الأقل 770 مقارنة بحمض ‎MRNA ٠‏ أو مستوى بروتين 80611178 في خلية غير معالجة بمثل هذا العامل. في أحد النماذج, يتداخل العامل " مع تفاعلات 8011178 مع شركاء ربط 8011178 , " وفقاً لاستخدام تلك العبارة في الطلب الحالي. كما هو مستخدم هناء يشير التعبير ‎sin’‏ صغير" إلى عامل كيميائي بما في ذلك؛ على سبيل المثال وليس الحصرء ببتيدات؛ أو شبيهات الببتيد؛ أو أحماض أمينية؛ أو نظائر حمض أميني؛ أو عديد ‎Vo‏ النيوكليوتيدات» أو نظائر عديد النيوكليوتيدات؛ أو أبتامرات؛ أو نيوكليوتيدات» أو نظائر نيوكليوتيدات أو مركبات عضوية أو غير عضوية (أي؛ بما في ذلك مركبات عضوية غير متجانسة أو عضوية فلزية) لها وزن جزيئي أقل من حوالي ‎٠٠٠٠١‏ جم لكل مول؛ مركبات عضوية أو غير عضوية لها وزن جزيئي أقل من حوالي 5080850 جم لكل مول؛ مركبات عضوية أو غير عضوية لها وزن جزيئي أقل من حوالي ‎٠٠٠١‏ جم لكل مول؛ مركبات عضوية أو غير عضوية لها وزن جزيئي أقل من حوالي ‎PRS ٠‏ جم لكل مول» وأملاح» واسترات وأشكال أخرى مقبولة صيدلانياً لهذه المركبات. يمكن أن يكون "الحمض ‎gyal‏ كما تم وصفه هناء عبارة عن ‎RNA‏ أو ‎(DNA‏ ويمكن أن يكون مفرد أو مزدوج الجديلة؛ ويمكن اختياره. على سبيل ‎(JB‏ من مجموعة تشتمل على: حمض نووي يشفر بروتيد ذو فائدة؛ أوليجو نيوكليوتيدات؛ نظائر حمض نووي؛ على سبيل المثال ببتيد--“حمض نووي ‎PNA (peptide— nucleic acid (PNA)‏ متمم -كاذب ‎pseudo-complementary‏ ‎(PNA (pc-PNA) Yo‏ حمض نووي ثابت ‎locked nucleic acid (LNA)‏ إلخ. تشتمل متواليات الحمض الأميني المذكورة؛ على سبيل المثال وليس ‎(oan)‏ متوالية حمض أميني تشفر ‎CAR‏
اج بروتينات؛ على سبيل المثال التي تعمل ككوابت للاستنساخ؛ وجزيئات مضادة لاتجاه النسخ؛ وجزيئات مضادة لاتجاه النسخ» والريبوسومات 805855005 ؛ ومتواليات حمض نووي صغيرة ‎antisense‏ ‎molecules‏ مثبطة؛ على سبيل المثال وليس الحصر ‎RNAi siRNA shRNAi (RNAI‏ دقيقة ‎«(MRNAI)‏ أوليجو نيوكليوتيدات ‎oligonucleotides‏ مضادة لاتجاه النسخ إلخ. © المقصود بعبارة 'يتداخل مع تفاعلات ‎BCLITA‏ مع شركاء ربط ‎BCL11A‏ " أن كمية من التفاعل لبروتين 861117 مع شريك رابط ‎BCL11A‏ على الأقل 75 أقل في المجموعات المعالجة بمثبط 861118 , وبعد ذلك المجموعة المقارنة, ومجموعة المقارنة, حيث لا يكون هناك أي مثبط 806178 موجود. من المفضل أن كمية من التفاعل من البروتين 861118 مع شريك رابط 806118 في مجموعة معالجة بمثبط ‎IA‏ 8611 على الأقل ‎7٠١‏ أقل, على الأقل 770 أقل, على ‎Ys‏ الأقل 770 أقل, على الأقل 746 أقل, على الأقل ‎75٠‏ أقل, على الأقل 700 أقل, على الأقل 1776 أقل, على الأقل ‎ZA‏ أقل, على الأقل ‎Za‏ أقل, على الأقل ١-ضعف‏ أقل, على الأقل ١-ضعف‏ أقل, على الأقل ١-ضعف‏ أقل, على الأقل ‎٠١‏ ضعف أقل, على الأقل ‎٠٠١‏ ضعف أقل, على الأقل ٠-ضعف‏ أقل, أو أكثر من مجموعة معالجة بمجموعة مقارنة لم تتم فيها إضافة أي مثبط ‎BCL11A‏ . عند أدتى حد, يمكن اختبار تفاعل 8011178 بواسطة تحديد كمية من 8611178 ‎Yo‏ ترتبط بشريك رابط 801117 باستخدام التقنيات القياسية في المجال, بما في ذلك, ولكن ليس على سبيل الحصر, قياس الطيف الكتلي, الترسيب المناعي, أو اختبارات الترشيح بالجل. بصورة بديلة, أو إضافة لذلك, يمكن اختبار فعالية 861118 بواسطة قياس التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني عند ‎MRNA‏ أو مستوى بروتين بعد العلاج باستخدام مثبط 8611178 المرشح. في أحد النماذج, تمثل فعالية 11/8 801 تفاعل 11/8 861 مع شركاء الربط الخاصة به: ‎(GATA-1 ٠‏ 06-1 مكونات معقد ‎.RBBP7; MTA2 0210-3 « NURD‏ وعلى هذا النحو, يمكن اعتبار أي جسم مضاد أو شظية منه, جزيء صغير, أو عامل كيميائي أو مركب يمكن أن يعوق هذا التفاعل ‎Lie‏ لنشاط 8011178 . وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير "خلية معالجة بالهندسة الوراثية" يشير إلى خلية تشتمل على تعديل جيني واحد على الأقل, وفقاً لاستخدام هذا التعبير في الطلب الحالي. ‎CAR‏
سجن وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير 'تعديل جيني" يشير إلى تمزيق على المستوى الجينومي يترتب عليه تخفيض في التعبير عن 806111/8 أو نشاط في خلية. يمكن أن تتضمن التعديلات الجينية التمثيلية عمليات حذف, تطفيرات بإزاحة الإطار , طافرات نقطة, إزالة الإكسون, إزالة واحد أو أكثر من مواقع مفرطة الحساسية ل 1 ‎(DHS) DNAse‏ (على سبيل المثال, ‎LY‏ “, ؛ أو المزيد من © مناطق ‎(DHS‏ إلخ. المقصود من التعبير 'يثبط التعبير عن ‎'BCLIIA‏ أن كمية من التعبير عن 86111/8 تكون على الأقل 75 أقل في خلية أو مجموعة خلايا معالجة بإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ عن خلية قابلة للمقارنة, خلية مقارنة أو مجموعة خلايا, حيث لا يوجد أي إندونيوكلياز يستهدف حمض 8/لا0 . ومن المفضل أن تبلغ النسبة المئوية من التعبير عن 8611178 في مجموعة معالجة على الأقل ‎2٠0 Ye‏ أقل, على الأقل ‎77١0‏ أقل, على الأقل 770 أقل, على الأقل 7460 أقل, على الأقل ‎75٠‏ أقل, على الأقل 7650 أقل, على الأقل ‎Tye‏ أقل, على الأقل 780 أقل, على الأقل 790 أقل, على الأقل ١-ضعف‏ أقل, على الأقل ١"-ضعف‏ أقل, على الأقل ٠--ضعف‏ أقل, على الأقل ‎٠١‏ ضعف أقل, على الأقل ‎٠٠١‏ ضعف أقل, على الأقل ١٠٠٠-ضعف‏ أقل, أو أكثر من مجموعة معالجة مقارنة قابلة للمقارنة لا تتم ‎Led‏ إضافة أي إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ . ‎Vo‏ المقصود من التعبير 'يثبط نشاط /80111 " أن كمية من النشاط الوظيفي ل 861117 على الأقل 2 أقل في خلية أو مجموعة ‎WIA‏ معالجة بالطرق الموصوفة في الطلب الحالي, من الخلية القابلة للمقارنة, الخلية أو المجموعة المقارنة, حيث لا يوجد أي إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ . ومن المفضل أن تكون النسبة المئوية من نشاط 801117 في مجموعة معالجة بمتبط ‎IA‏ 8061-1 على الأقل ‎7٠١‏ أقل, على الأقل ‎77١0‏ أقل, على الأقل 7760 أقل, على الأقل 740 أقل, على الأقل 756 ‎٠‏ أقل, على الأقل 760 أقل, على الأقل 7970 أقل, على الأقل 780 أقل, على الأقل 7960 أقل, على الأقل ‎-١‏ ضعف أقل, على الأقل ١-ضعف‏ أقل, على الأقل 5- ضعف أقل, على الأقل ‎٠١‏ ضعف أقل, على الأقل ‎٠٠١‏ ضعف أقل, على الأقل ١٠٠٠-ضعف‏ أقل, أو أكثر من مجموعة معالحة بمقارن قابل للمقارنة لا تتم ‎Led‏ إضافة أي إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ . على أدنى تقدير, يمكن اختبار نشاط 8011178 بواسطة تحديد كمية التعبير عن 118 ‎BCL‏ على مستويات ‎Yo‏ البروتين أو ‎MRNA‏ , باستخدام التقنيات القياسية في المجال. بصورة بديلة, أو إضافة لذلك, يمكن تحديد نشاط ,861117 باستخدام بنية مبلغ, حيث تكون بنية المبلغ حساسة لنشاط 861118 . ‎CAR‏
دوه
تكون متوالية موقع جلويين-7 قابلة للتعرف عليها بواسطة محفز ارتباط الحمض النووي 01061666
.BCL11A ‏لبنية‎ acid-binding motif
في أحد النماذج, وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير ‎DNA‏ يستهدف إندونيوكلياز
‎endonuclease‏ يشير إلى إنزيم إندونيوكلياز يولد فاصل مزدوج الجديلة عند موضع مطلوب في © الجينوم (على سبيل المثال, الكرموسوم ؟ للموقع 60, ‎(VY ,774 ,1 0-184 NT‏ دون إنتاج
‏فواصل مزدوجة الجديلة غير مستهدفة غير مرغوب فيها. يمكن أن يكون حمض ‎DNA‏ الذي يستهدف
‏إندونيوكلياز إنزيم إندونيوكلياز حادث بصورة طبيعية (على سبيل المثال, ميجا نيوكلياز بكتيري
‎(bacterial meganuclease‏ أو يمكن توليده بصورة اصطناعية (على سبيل المثال, إنزيمات ميجا
‏نيوكلياز ‎meganuclease‏ معالجة بالهندسة الوراثية, 18105 , أو ‎,ZFNs‏ من بين أخريات).
‎٠‏ في نموذج آخر, وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير ‎DNA"‏ يستهدف إندونيوكلياز ‎endonuclease‏ " يشير إلى إنزيم إندونيوكلياز يولد فاصل مفرد الجديلة أو "شق" أو فاصل على إحدى جدائل الجزء الأساسي لسكر فوسفات ‎phosphate sugar‏ حمض ‎DNA‏ عند موضع مطلوب في الجينوم ‎genome‏ (على سبيل المثال, الكرموسوم 7 للموقع ‎٠‏ خالا كتناصن ات مب الا ‎(TOY‏ دون إنتاج فواصل بجديلة حمض ‎DNA‏ غير مستهدفة غير مرغوب فيها.
‎Vo‏ وقفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير 'ناقل تعبير” يشير إلى جزيء الحمض النووي القادر على نقل حمض نووي ‎HAT‏ يرتبط به. ويكون أحد أنواع الناقل عبارة عن ‎Fuad‏ مما يشير إلى حلقة ‎DNA‏ مجدولة مزدوجة دائرية يمكن ربط قطاعات الحمض النووي الإضافية بها. يكون نوع آخر من الناقل عبارة عن ناقل فيروسي؛ حيث يمكن ربط قطاعات الحمض النووي الإضافية في الجينوم الفيروسي. وتكون نواقل محددة قادرة على التكاثر التلقائي في الخلية العائلة التي يتم إدخاله ‎led‏ (متل
‎٠٠‏ النواقل البكتيرية ‎bacterial vectors‏ التي يكون لها أصل تكاثر بكتيري ونواقل ثديية لجسيمات ملحقة بالكروموسومات). يتم دمج النواقل الأخرى (النواقل الثديية من غير الجسيمات الملحقة بالجسيمات) في مجموعة العوامل الوراثية للخلية العائلة عند الإدخال في الخلية العائلة؛ وبذلك يتم تكائره مع مجموعة العوامل الوراثية للخلية العائلة. علاوة على ذلك» تكون نواقل محددة قادرة على توجيه التعبير الوراثي للجينات التي ترتبط بها بصورة فعالة. يتم الإشارة إلى تلك النواقل في هذه الوثيقة
‎YO‏ بتعبير 'ثواقل التعبير الوراثي الناتجة عن عودة الارتباط الجيني"؛ أو بصورة بسيطة أنواقل التعبير الوراثي". بوجه ‎cole‏ تكون نواقل التعبير الوراثي النافعة في تقنيات ‎DNA‏ الناتجة عن عودة الارتباط
‎OY AY
هه الجيني في صورة بلازميدات. في المواصفة الحالية؛ يتم استخدام تعبيرات 'بلازميد " وناقل" بصورة متبادلة حيث يكون البلازميد مستخدم بصورة متكررة من الناقل. مع هذاء يتضمن الاختراع صور أخرى من نواقل التعبير الوراثي؛ مثل النواقل الفيروسية ‎J)‏ فيروسات النسخ العكسي المعيبة للتكاثر, والفيروس البطيء ‎ lentiviruses‏ ¢ والفيروس الغدي ‎«adenoviruses‏ والفيروسات المرتبطة © بالغدد ‎adeno-associated viruses‏ .)؛ التي تقوم بوظائف مكافئة. في نطاق ناقل التعبير الوراتي» يعني تعبير "مرتبط بصورة فعالة” أن متوالية النيوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‏8008 محل الأهمية ترتبط بالمتواليات المنتظمة بطريقة تسمح بالتعبير الوراثي عن متوالية النيوكليوتيد (على سبيل المثال, في نظام الانتساخ / الترجمة في المعمل أو في الخلية المستهدفة عند إدخال الناقل في الخلية المستهدفةاا6©© ]18096 ). يتضمن تعبير 'متوالية منتظمة ‎regulatory‏ ‎Yo‏ 56006068 ' المعززات؛ والمعززات؛ وعناصر التحكم في التعبير ‎sl‏ الأخرى (على سبيل المثال, إشارات المعالجة ببولي ‎signals Juul‏ 007 ). ويتم وصف المتواليات التتظيمية المذكورة» على سبيل المثال؛ في ‎Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in‏ ‎Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)‏ تتضمن المتواليات التتظيمية تلك التي تتعلق بالتعبير الوراثي التكويني المباشر لمتوالية النيوكليوتيد في العديد من أنواع ‎١‏ الخلية العائلة وتلك التي ترتبط بالتعبير الوراثي المباشر لمتوالية النيوكليوتيد فقط في خلايا عائلة محددة (مثل المتواليات التتظيمية المحددة بالنسيج 115506). علاوة على ذلك؛ يمكن توصيل إنزيم إندونيوكلياز الذي يستهدف ‎DNA‏ بواسطة الناقل الذي يشتمل على متوالية نتظيمية لإجراء عملية تخليق مباشرة لإنزيم إندونيوكلياز الذي يستهدف ‎DNA‏ عند فترات زمنية محددة؛ أو على فترة زمنية محددة. ويدرك الماهرون في المجال أن تصميم ناقل التعبير الوراثي يمكن أن يعتمد على تلك العوامل ‎٠‏ | كاختيار للخلايا المستهدفة؛ ومستوى التعبير الوراثي المطلوب؛ وما شابه ذلك. وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي التعبير 'يشطر” عموماً يشير إلى توليد فاصل مزدوج الجديلة في جينوم ‎ye DNA‏ موضع مطلوب. وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير "كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎"DNA‏ يشير إلى كمية من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ ينتج نشاط ‎Yo‏ إندونيوكلياز كافي لتوليد فاصل مزدوج الجديلة في موقع الجينوم المطلوب. في أحد النماذج, تولد كمية فعالة من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ فاصل مزدوج الجديلة عند الموقع الجيني المطلوب في
على الأقل 770 من الخلايا في مجموعة متلامسة مع تركيبة (على سبيل المثال, على الأقل ‎JX‏ ‏على الأقل ‎Tee‏ على الأقل ‎Tee‏ على الأقل ‎Te‏ على الأقل 770, على الأقل ‎TA‏ على الأقل ‎,٠‏ على الأقل 790 على الأقل 799, أو حتى ‎7٠٠١‏ للخلايا في المجموعة التي تشتمل على تعديل جيني منتج بواسطة تركيبة إندونيوكلياز تستهدف حمض ‎(DNA‏ ‏© وققاً لاستخدامه في الطلب الحالي التعبير 'زيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني” في خلية يشير إلى أن الهيموجلوبين الجنيني يكون على الأقل 75 أعلى في المجموعات المعالجة بعامل يمزق ‎BCLIIA mRNA‏ أو التعبير عن البروتين (على سبيل المثال, إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎(DNA‏ بواسطة الارتباط بحمض ‎DNA‏ جينومي عند الكرموسوم ‎١‏ للموقع 60, ‎SYA LVN‏ ‎LVYA‏ 117 , عنه في مجموعة ‎ALE‏ للمقارنة, مقارنة, حيث لا يوجد عامل. ويفضل أن تكون النسبة ‎٠‏ المئوية للتعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في مجموعة معالجة بمثل هذا العامل الذي يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي عند الكرموسوم ؟ للموقع ‎LT VAS YT LT‏ 7748, 117 على الأقل ‎12٠‏ ‏أعلى, على الأقل ‎77١0‏ أعلى, على الأقل 770 أعلى, على الأقل 7460 أعلى, على الأقل ‎Tow‏ ‏أعلى, على الأقل 72700 أعلى, على الأقل 770 أعلى, على الأقل 7860 أعلى, على الأقل 1790 أعلى, على الأقل ١-ضعف‏ أعلى, على الأقل ١-ضعف‏ أعلى, على الأقل ‎cameo‏ أعلى, على ‎No‏ الأقل ‎٠١‏ ضعف أعلى, على الأقل ‎٠٠١‏ ضعف أعلى, على الأقل ‎-٠٠٠١‏ ضعف أعلى, أو أكثر من المجموعة المعالجة بمقارن من حجم ‎LB‏ للمقارنة وظروف المزرعة. يُستخدم التعبير 'مجموعة معالجة بمقارن” في الطلب الحالي ليصف مجموعة من الخلايا تمت معالجتها باستخدام أوساط مطابقة, حث فيروسي, متواليات الحمض الأميني, درجة الحرارة؛ نسبة تشابك النسيج الخلوي؛ حجم الدورق» الرقم الهيدروجيني؛ إلخ؛ مع استثناء أنه تتم إضافة عامل يربط حمض ‎DNA‏ جينومي عند ‎٠‏ الكرموسوم ؟ للموقع ‎TAG VT Te‏ 774, 117. في أحد النماذج, يمكن استخدام أية طريقة معروفة في المجال لقياس زيادة في التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني, على سبيل المثال؛ تحليل لطخة وسترن ‎Western Blot‏ لبروتين جلوبين- ‎y‏ جنيني ‎fetal y —globin protein‏ وتحديد كمية ‎MRNA‏ لبروتين جلوبين- 7 جنيني. التعبير "خلية معزولة ‎isolated cell‏ " وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي يشير إلى خلية تمت إزالتها ‎YO‏ من كائن توجد فيه أصلاً, أو تتحدر من ‎Jie‏ هذه الخلية. اختيارياً تم اسنتبات الخلية ‎cell has‏ ‎been cultured‏ في المعمل, على سبيل المتال, في وجود ‎Wal‏ الأخرى. اختيارياً يتم إدخال الخلية ‎CAR‏
7ه لاحقاً في كائن ثاني أو تتم إعادة إدخالها في الكائن الذي تم عزل الخلية منه (أو الذي تتحدر منه الخلية). التعبير 'مجموعة معزولة” بالنسبة إلى مجموعة معزولة من ‎WA‏ وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي يشير إلى مجموعة من الخلايا تمت إزالتها وتم فصلها من مجموعة مختلطة أو غير متجانسة ‎heterogeneous ©‏ من الخلايا. في بعض النماذج, تكون المجموعة المعزولة هي مجموعة نقية من الخلايا إلى حد بعيد مقارنة بالمجموعة غير المتجانسة التي تم عزل الخلايا منها أو إثراؤها بها. في بعض النماذج, تكون المجموعة المعزولة مجموعة معزولة من خلايا أولية بشرية لتكوين الدم, على سبيل المثال, مجموعة نقية إلى حد بعيد من ‎LDA‏ أولية بشرية لتكوين ‎pall‏ مقارنة بمجموعة غير متجانسة من الخلايا التي تشتمل على خلايا أولية بشرية لتكوين الدم والخلايا التي تم منها اشتقاق ‎Vy‏ الخلايا الأولية البشرية لتكوين الدم. التعبير 'نقي إلى حد بعيد, " بالنسبة إلى مجموعة خلايا معينة, يشير إلى مجموعة من ‎WAN‏ تبلغ على الأقل حوالي ‎Ve‏ ويفضل على الأقل حوالي ‎ZA‏ ويفضل أكثر على الأقل حوالي ‎Jae‏ ‏والأفضل على الأقل حوالي 795 نقي, بالنسبة إلى الخلايا التي تشكل إجمالي مجموعة الخلايا. أي, التعبيرات 'نقي إلى حد بعيد" أو 'متقى بصورة أساسية, ' فيما يتعلق بمجموعة من الخلايا الأولية ‎١‏ _لتكوين الدم, يشير إلى مجموعة من الخلايا التي تحتوي على أقل من حوالي ‎TY‏ ويفضل أكثر أقل من حوالي 715, ‎,71١‏ 78, 71, والأفضل أقل من حوالي 75, ‎BVA SIVA S/S‏ 21, أو أقل من ‎,7١‏ ‏ومن الخلايا التي لا تكون خلايا أولية لتكوين الدم طبقاً لما تم تعريفه بواسطة التعبيرات في الطلب الحالي. وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير ‎pe‏ يتضمن خفض أو تخفيف واحد على الأقل من ‎Yo‏ تأثير غير ملائم أو عرض حالة, مرض أو اضطراب. على سبيل المثال, التعبير ‎Tallady Ee‏ يشير إلى إعطاء إلى خاضع كمية فعالة من تركيبة, على سبيل المثال, كمية فعالة من تركيبة تشتمل على مجموعة من خلايا أولية لتكوين الدم بحيث يكون لدى الخاضع تخفيض في عرض واحد على الأقل من المرض أو تحسين في المرض, على سبيل المثال, نتائج مفيدة أو إكلنيكية مطلوبة. لأغراض هذا الكشف, تتضمن النتائج المفيدة أو الإكلينيكية المطلوبة, ولكن ليس على سبيل الحصر, تخفيف © واحد أو أكثر من الأعراض, وتقليل مدى المرض, ثبات المرض (على سبيل المثال, عدم ازدياد الحالة سوءا), تأخير أو إبطاء تطور المرض, تخفيف أو تسكين ‎Alla‏ المرض, وهجوع (سواء جزئي أو كلي), ‎CAN‏
-مه- سواء قابل للكشف أو غير قابل للكشف. في بعض النماذج, يمكن أن يشير العلاج إلى إطالة البقاء مقارنة بالبقاء المتوقع في حالة عدم تلقي العلاج. بالتالي, يدرك ذو المهارة في المجال أن العلاج يمكن أن يحسن حالة المرض, ولكن يمكن ألا يكون شفاء كامل من المرض. في بعض النماذج, يمكن أن يتضمن العلاج الوقاية. ومع ذلك, في نماذج بديلة, لا يتضمن العلاج الوقاية. © تستخدم العبارة "مقبول صيدلانياً”؛ في الطلب الحالي لتشير إلى تلك المركبات, المواد, والتركيبات, و / أو صور الجرعات التي تكون, في نطاق مجال الحكم الطبي الصائب, ومناسبة للاستخدام في تلامس مع أنسجة الكائنات البشرية والكائنات دون سمية مفرطة؛ وتهيج؛ واستجابة تحساسية؛ أو مشكلة أو تعقيد آخر بما يتتاسب مع نسبة الفائدة/ الخطر المعقولة. ‎La,‏ لاستخدامه في الطلب الحالي, التعبير "'مقبول صيدلانياً”؛ ‎LF‏ للتحمل فسيولوجيا” والصور ‎٠‏ النحوية المتتوعة منهاء إلى تركيبات» ومواد ناقلة ‎carriers‏ ؛ ومواد مخففة ‎diluents‏ ومواد ‎(Jeli‏ ‏يتم استخدامها بشكل متبادل وتوضح أن المواد قابلة للإعطاء لكائن ثديي بدون إنتاج تأثيرات فسيولوجية مثل الغثيان ‎nausea‏ ¢ والدوار0122107655© واضطراب المعدة ‎gastric upset‏ وما شابه. لن تؤدي المادة الناقلة المقبولة صيدلانياً إلى تعزيز ارتفاع الاستجابة المناعية تجاه عامل يتم خلطها معه؛ إلا عند الحاجة. يعتبر تحضير تركيبة دوائية تحتوي على مكونات فعالة مذابة أو مشتته ‎Vo‏ فيها معروفة في المجال ولا تحتاج إلى تقييد ‎sly‏ على الصيغة. تشتمل الصيغة الصيدلانئية على مركب الاختراع في توليفة مع واحد أو أكثر من المكونات المقبولة صيدلانياً. يمكن أن تكون المادة الناقلة في صورة صلبة؛ أو نصف صلبة أو مادة مخففة سائلة؛ أو كريم أو كبسولة. نمطياً؛ يتم تحضير هذه التركيبات بحيث تكون ‎ALE‏ للحقن ‎Le)‏ في صورة محاليل سائلة أو معلقات؛ مع ذلك يمكن أيضاً تحضير الصور الصلبة للمحلول أو المعلقات في سائل قبل الاستخدام. يمكن أيضاً أن ‎Yo‏ يكون المستحضر في صورة مستحلب أو موجود في تركيبة دهنية. يمكن خلط المكون الفعال مع سواغات مقبولة صيدلانياً ومتوافقة مع المكون الفعال وبكميات مناسبة للاستخدام في الطرق العلاجية التي تم وصفها هنا. ‎Jian‏ السواغات ‎excipients‏ المناسبة؛ على سبيل المثال؛ في الماء؛ أو محلول ملحي ‎saline‏ ؛ أو ديكستروز ‎dextrose‏ ؛ أو جليسرول ‎glycerol‏ أو إيثانول ‎ethanol‏ أو ما شابه وتوليفات منها. بالإضافة إلى ذلك؛ عند الحاجة؛ يمكن أن تشتمل التركيبة على كميات ثانوية من مواد ‎YO‏ مساعدة مثل عوامل الترطيب ‎wetting‏ أو الاستحلاب ‎emulsifying agents‏ « وعوامل منظمة ‎buffering agents‏ للرقم الهيدروجيني ‎PH‏ وما شابه ‎Ally‏ يمكنها تعزيز فاعلية المكون الفعال. ‎CAR‏
-4ه8-
يمكن أن تشتمل التركيبة العلاجية الخاصة بالاختراع الحالي على أملاح مقبولة صيدلانياً للمكونات الواردة هنا. تشتمل الأملاح المقبولة صيدلانياً على أملاح إضافة الحمض (التي يتم تشكيلها بواسطة مجموعات الأمين الحرة ‎free amino‏ للبولي ببتيد ‎(polypeptide‏ التي يتم تشكيلها بواسطة أحماض غير عضوية ‎inorganic acids‏ ؛ على سبيل المثال» أحماض الهيدروكلوريك ‎hydrochloric‏ ‏© والفسفوريك ‎phosphoric acids‏ « وتتمتل الأحماض العضوية المذكورة في حمض الأسيتيك ‎acetic‏ ‏» والترتريك ‎tartaric‏ « والمندليك ‎mandelic‏ وما شابه. يمكن أيضاً اشتقاق الملاح المتكونة باستخدام مجموعات الكربوكسيل الحرة ‎free carboxyl‏ من قواعد غير عضوية؛ مثل هيدروكسيدات ‎hydroxides‏ من الصوديوم ‎sodium‏ » أو البوتاسيوم ‎potassium‏ ¢ أو الأمونيوم ‎ammonium‏ ‏» أو الكالسيوم ‎calcium‏ أو الحديديك ‎ferric‏ ؛ وتتمثل القواعد العضوية المذكورة في الأيزو ‎٠‏ بروبيلامين ‎isopropylamine‏ » وتراي ميثيلامين ‎trimethylamine‏ ¢ و؟-ايقيل أمينو ‎Jeli‏ ‎ethylamino ethanol‏ ؛ وهيستدين ‎histidine‏ ¢ وبروكاين ‎procaine‏ وما شابه. تعتبر المواد الناقلة المقبولة فسيولوجياً معروفة في المجال. تكون المواد الناقلة التمثيلية ‎ALLY‏ عبارة عن محاليل مائية معقمة والتي لا تحتوي على مواد بالإضافة إلى المكونات الفعالة والماء؛ أو تحتوي على محلول منظم ‎Jie‏ فوسفات الصوديوم ‎sodium phosphate‏ عند ‎ded‏ رقم هيدروجيني فسيولوجية؛ أو ‎Vo‏ محلول ملحي فسيولوجي أو ‎Jie (Lads‏ محلول ملحي منظم بالفوسفات ‎phosphate-buffered‏ ‎saline‏ بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن للمواد الناقلة المائية أو تشتمل على أكثر من ملح منظم واحد؛ بالإضافة إلى أملاح مثل كلوريدات الصوديوم والبوتاسيوم ‎sodium and potassium chlorides‏ « وديكستروز ‎dextrose‏ ؛ وبولي إيتيلين جليكول ‎polyethylene glycol‏ ومواد مذابة أخرى. يمكن أيضاً أن تشتمل التركيبات السائلة على أطوار سائلة بإضافة الماء أو استبعاده. ‎Ab ian‏ الأطوار ‎٠‏ السائلة ‎liquid phases‏ الإضافية المذكورة في الجليسرين» أو الزيوت النباتية ‎Jie‏ زيت بذر القطنء ومستحلبات الماء والزيت. ستعتمد كمية العامل الفعال المستخدم في الاختراع والذي سيكون فعالاً في علاج اضطراب أو ‎Ala‏ محددة على طبيعة الاضطراب أو الحالة؛ ويمكن تحديده بواسطة تقنيات
سريرية قياسية. وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, 'وقاية" أو "للوقاية, " عند استخدامها في الإشارة إلى مرض, أو ‎Yo‏ اضطراب أو أعراض منها, يشير إلى تخفيض في احتمالية أن يتكون لدى الفرد مرض أو اضطراب, على سبيل المثال, اعتلال الهيموجلوبين. يتم تقليل احتمالية تكوين مرض أو اضطراب, على سبيل qa ‏يعاني فرد ما من واحد أو أكثر من عوامل الخطر لمرض ما أو اضطراب إما يخفق في‎ Lovie, JE ‏هذا المرض أو الاضطراب في وقت لاحق أو بحدة أقل, من الناحية‎ Jie ‏تكوين الاضطراب أو تكوين‎ ‏الإحصائية, بالنسبة إلى مجموعة تعاني من نفس عوامل الخطر ولا تتلقى علاج وفقاً للموصوف في‎ ‏الطلب الحالي. يتم اعتبار الإخفاق في تقليل تطور أعراض مرض ما, أو تطور أعراض مخفضة‎ ‏على الأقل على مقياس مقبول إكلينيكياً لذلك المرض أو الاضطراب)‎ 7٠١ ‏(على سبيل المثال, بنسبة‎ © ‏أو تم تأخيرها (على سبيل المثال, بأيام, أسابيع, أو شهور أو أعوام) وقاية فعالة.‎ ,50111/ ‏لتخفيض التعبير عن‎ DNA ‏يتعلق بتلامس الخلية مع إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ Lod ‏العبارة 'زيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في خلية” تشير إلى أن الهيموجلويين الجنيني في خلية أو‎ ‏مجموعة من الخلايا يكون على الأقل 75 أعلى في الخلية أو مجموعة من الخلايا المعالجة بحمض‎ ‏من مجموعة قابلة للمقارنة, مقارنة, حيث لا يوجد إنزيم‎ DNA ‏يستهدف إندونيوكلياز حمض‎ ٠ ‏ويفضل أن يكون التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في خلية‎ . DNA ‏إندونيوكلياز يستهدف حمض‎ ‏أعلى, على‎ 77١ ‏أعلى, على الأقل‎ 7٠١ ‏على الأقل‎ DNA ‏بإندونيوكلياز يستهدف حمض‎ dallas ‏الأقل 730 أعلى, على الأقل 7460 أعلى, على الأقل 756 أعلى, على الأقل 71650 أعلى, على الأقل‎
JN ‏أعلى, على الأقل 780 أعلى, على الأقل 7960 أعلى, على الأقل ١-ضعف أعلى, على‎ ٠ ٠٠١ ‏ضعف أعلى, على الأقل‎ ٠١ ‏أعلى, على الأقل‎ Geese ‏7-ضعف أعلى, على الأقل‎ | 5 ‏ضعف أعلى, على الأقل ١٠٠٠-ضعف أعلى, أو أكثر من مجموعة معالحة بمقارن قابل للمقارنة.‎ ‏يُستخدم التعبير 'مجموعة معالجة بمقارن" في الطلب الحالي ليصف مجموعة من الخلايا تمت‎ ‏معالجتها باستخدام أوساط مطابقة, حث فيروسي, متواليات الحمض الأميني, درجة الحرارة؛ نسبة‎
BCL1IA ‏تشابك النسيج الخلوي؛ حجم الدورق» الرقم الهيدروجيني؛ إلخ؛ مع استثناء إضافة متبط‎ ‏ثديي" واحد أو مجموعة من "الثدييات”؛ ويشتمل على‎ AS ‏ثديي" أن يضم‎ GIS ‏يقصد بمصطلح‎ ٠ ‏سبيل المثال وليس الحصرء؛ على البشر؛ والحيوانات الرئيسة مثل القرود؛ والنسانيس والسعلات‎ ‏الهرة والأسود والنمور؛ وفصيلة‎ Jie ‏والشمبانزي؛ وفصيلة الكلبيات متل الكلاب والذئاب ؛فصيلة القطط‎ ‏الخيول مثل الحصان؛ والحمار والحمار الوحشي؛ والحيوانات التي تؤكل مثل البقر؛ والخنازير‎ ‏والخراف؛ والحافريات مثل الغزال والزرافات؛ والقوارض مثل الفئران؛ والجرذان والهمستر والخنازير‎ ‏الغينية؛ والدببة. في بعض النماذج المفضلة؛ يتمثل الكائن الثديي في البشر.‎ Yo
CAR
‏في أحد النماذج؛ تم تشخيص أن الكائن البشري يعاني من اعتلال الهيموجلوبين. في نموذج‎ colin ‏وفقاً‎ ‏آخرء يكون اعتلال الهيموجلوبين عبارة عن اعتلال الهيموجلوبين ]. في أحد النماذج المفضلة؛ يكون‎ ‏اعتلال الهيموجلوبين عبارة عن مرض الخلية المنجلية. كما هو مستخدم هناء يمكن أن يكون 'مرض‎ sickle-hemoglobin ‏الخلية المنجلية" عبارة عن فقر الدم المنجلي؛ ومرض الهيموجلوبين المنجلي‎ ‏وثلاسيمية الخلية المنجلية‎ (HDS B+) ‏©؛ وتلاسيمية الخلية المنجلية بيتا بلس‎ disease )155©( ©
PB ‏مفضل؛ يكون اعتلال الهيموجلوبين عبارة عن ثلاسيمية‎ AT ‏بيتا صفر (105/]0). في نموذج‎ ‏وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, يشير المصطلح "اعتلال الهيموجلوبين" إلى أي خلل في هيكل أو‎ ‏وظيفة أي هيموجلويين خاص بفرد؛ ويتضمن حالات الخلل في الهيكل الأولي؛ أو الثانوي؛ أو الثلاثي‎ ‏فرات الحذف أو طفرات الاستبدال في مناطق‎ Jie ‏والرباعي للهيموجلوبين الذي يحدث بسبب أي طفرة؛‎ ‏أو طفرات أو حالات حذف في محفزات أو معززات هذه الجينات التي تتسبب‎ I ‏تثشفير جين الجلوبين‎ I
Lad ‏في تقليل كمية الهيموجلوبين الذي يتم إنتاجه مقارنة بحالة عادية أو قياسية. يشتمل المصطلح‎ ‏على أي انخفاض في كمية أو فاعلية الهيموجلوبين» سواء طبيعي أو غير طبيعي؛ والذي يحدث‎ ‏شابه.‎ Los 107005 ‏المرض؛ أو العلاج الكيميائي؛ والسموم‎ Jie ‏بواسطة عوامل خارجية‎ ‏كما هو مستخدم هناء إلى كمية من تركيبة الخلية‎ Clad ‏في أحد النماذج, يشير المصطلح "كمية‎ ‏تكون آمنة وفعالة لعلاج؛ أو تقليل احتمالية أو تأخير تطور اعتلال الهيموجلوبين. بالتالي يمكن للكمية‎ Vo ‏أن تعالج أو تؤدي إلى تحسين أعراض اعتلال الهيموجلوبين؛ أو إبطاء تقدم مرض اعتلال‎ ‏أو تثبيط عرض اعتلال الهيموجلوبين؛ أو إبطاء أو تثبيط ظهور أعراض‎ clad ‏الهيموجلوبين؛ أو‎ ‏ثانوية لاعتلال الهيموجلوبين أو تثبيط تطور العرض الثانوي لاعتلال الهيموجلوبين. تعتمد الكمية‎ ‏الفعالة لعلاج اعتلال الهيموجلوبين على نوع اعتلال الهيموجلوبين المراد علاجه؛ وخطورة الأعراض؛‎ ‏ونمط الإعطاء وهكذا. بالتالي؛ ليس‎ cad ‏عمر الخاضع والحالة العامة‎ candle ‏والخاضع الذي تتم‎ ٠ ‏بالضرورة تحديد "كمية فعالة' دقيقة. مع ذلك؛ بالنسبة لأي حالة معينة؛ يمكن تحديد "كمية فعالة"‎ ‏مناسبة بواسطة صاحب المهارة العادية في المجال باستخدام التجارب الروتينية فقط.‎ ‏وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي يتم استخدام المصطلح 'يشتمل" أو 'يشتمل على" بالإشارة إلى‎ ‏تركيبات, طرق, ومكون مناظر منه, والتي تكون أساسية للاختراع, ولا تزال مفتوحة لإدراج عناصر‎ ‏غير محددة؛ سواءً أساسية أو لا.‎ YO
CAR
‎h \ —_‏ _ وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي يشير المصطلح ‎Gall)‏ بشكل أساسي من" إلى تلك العناصر المطلوبة لنموذج محدد. يسمح المصطلح بوجود عناصر إضافية لا تؤثر مادياً على السمة الأساسية والمبتكرة أو الوظيفية لذلك النموذج من الاختراع. يشير المصطلح "التي تتكون من" إلى تركيبات, طرق, ومكونات مناظرة منه وفقاً للموصوف في الطلب 0 الحالي, والتي تستثني أي عنصر غير مستشهد به في وصف النموذج. كما هو مستخدم في هذه المواصفة وعناصر الحماية المرفقة؛ تتضمن أدوات النكرة والمعرفة الإشارة إلى الجمع ما لم يتم الإشارة إلى ما يخالف ذلك بوضوح في السياق. بالتالي؛ وعلى سبيل المثال؛ تتضمن الإشارة إلى "الطرق" واحد أو أكثر من الطرق»؛ و/ أو الخطوات من النوع المذكور في هذه الوثيقة و/أو الذي يتضح للماهرين في المجال عند الإطلاع على الكشف وما إلى ذلك. يتم إدراك أن ‎٠٠‏ الوصف التفصيلي السابق والأمثلة التالية تكون لغرض التوضيح فقط ولا تكون مقيدة لمجال الاختراع. يمكن إجراء العديد من التغيرات والتعديلات على النماذج التي تم الكشف عنهاء والتي تتضح للماهرين في المجال؛ دون الابتعاد عن مجال الاختراع الحالي. علاوة على ذلك؛ يتم تضمين جميع البراءات؛ وطلبات البراءة؛ والنشرات المحددة بوضوح في هذه الوثيقة بواسطة الإشارة إلى أغراض الوصف والكشف؛ على سبيل المثال؛ المنهجيات المذكورة في النشرات المذكورة والتي يمكن استخدامها ‎١٠‏ بالاشتراك مع الاختراع الحالي. ويتم توفير تلك النشرات فقط للكشف عنها قبل تاريخ الإيداع للطلب الحالي. ويجب عدم تقبيد أي شيء في هذا المنطلق باعتباره نص على أن المخترع يكون له الحق في التسجيل بتاريخ سابق للكشف المذكور بموجب الاختراع السابق أو لأي سبب آخر. تعتمد جميع البيانات حتى تاريخ أو تقديم محتويات تلك الوثائق على المعلومات المتوفرة لمقدمي الطلب ولا تشكل أي قبول بتصحيح تواريخ أو محتويات تلك الوتائق. ‎Yo‏ اعتلال الهيموجلوبين يكون الهيموجلوبين الجنيني ‎Fetal hemoglobin (HF)‏ عبارة عن تترامير ‎fy‏ من بولي ببتيدات الجلويين © لدى البالغين واثنين من بولي ببتيدات الجلوبين ‎globin polypeptides‏ .8 الشبيهة ببولي ببتيدات الجلوبين 7. أثناء الحملء تُنشاً جينات الجلوبين98065 ‎globin‏ 7 المزدوجة الجينات السائدة التي تم نسخها من موضع الجلوبين ‎B‏ بعد الولادة؛ يتم استبدال الجلوبين ‎y‏ بشكل تدريجي ‎YO‏ بالجلوبين | للبالغين» وهي عملية يشار إليها ب"التحويل الجنيني” (7). ظلت الآليات الجزيئية التي ‎CAR‏
ا يعتبر أساسها هذا التحويل غير محدد على نحو كبير وتخضع لأبحاث مكثفة, يبدا التحويل التطويري من إنتاج هيموجلوبين جنيني سائد أو ‎HDF‏ (0272) إلى إنتاج هيموجلوبين لدى البالغين أو ‎HDA‏ ‏(0202) عند حوالي 78 إلى ‎TE‏ أسبوع من الحمل ويستمر لفترة قصيرة بعد الولادة عند النقطة التي يصبح ‎Led‏ ال ‎HDA‏ سائداً. ينتج هذا التحويل بشكل أساسي من الاستتساخ المنخفض لجينات 0 الجلوبين جاما والاستتساخ المتزايد لجينات الجلوبين بيتا. في المتوسط؛ يحتوي دم البالغ الطبيعي على حوالي 77 ‎HOF‏ فقط» على الرغم من أن مستويات وحدة ال ‎HBF‏ البنائية يكون بها اختلاف أكثر من ‎٠٠‏ مرة في البالغين الأصحاء ‎.(Semin.
Hematol. 38(4):367-73 (2001) «Atweh)‏ تتضمن حالات اعتلال الهيموجلوبين عدد من حالا الأنيميا من أصل وراثي والتي يكون فيها إنتاج منخفض و/أو هدم متزايد (انحلال الدم) لخلايا الدم الحمراء ‎.red blood cells (RBCs)‏ وتشتمل ‎٠‏ أيضاً هذه الاضطرابات على عيوب جينية والتي تؤدي إلى إنتاج هيموجلوبينات غير عادية مع قدرة ضعيفة مصاحبة على الحفاظ على تركيز الأكسجين. تتضمن بعض هذه الاضطرابات الفشل في إنتاج جلوبين ] طبيعي بكميات كافية؛ بينما تتضمن أخرى الفشل في إنتاج جلوبين ] طبيعي بشكل كلي. يتم بصفة عامة الإشارة إلى الاضطرابات المصاحبة لبروتين جلوبين ‎B‏ بحالات اعتلال الهيموجلوبين . على سبيل ‎JB‏ تنتج فقر الدم البحري | من الخلل الجزئي أو الكلي في التعبير الوراثي لجين ‎١‏ الجلوبين ‎«ff‏ مما يؤدي إلى ‎HDA‏ ناقص أو غير موجود. ينتج فقر الدم المنجلي من طفرة نيوكليوتيد واحد في جين الجلوبين 3] الهيكلي؛ مما يؤدي إلى إنتاج هيموجلوبين غير طبيعي منجلي ‎(HBS)‏ ‏تكون ‎HBS RBCs‏ أكثر هشاشة من ال ‎RBCs‏ الطبيعية وتخضع لانحلال الدم بسهولة؛ مما يؤدي في النهاية إلى الأنيميا ‎(Semin.
Hematol. 38(4):367-73 (2001) Atweh)‏ علاوة على ذلك» يؤدي وجود البديل الجيني ل ‎BCLITA‏ والصور المنتوعة ل ‎HBSIL-MYB‏ إلى تحسين ‎٠‏ الخطورة السريرية في فقر الدم البحري بيتا. وجد أن هذا البديل يكون مصاحب لمستويات ال ‎HOF‏ ‏هنا توضيح أنه يوجد نسبة فرق تبلغ © لصورة ثلاسيمية بيتا أقل خطورة مع بديل ‎HEF‏ عالي ‎.(in press «Blood 2009 «Galanello 5. et al.)‏ يركز البحث عن علاج يستهدف تقليل اختلال توازن سلسلة الجلوبين في مرضى يعانون من اعتلال الههموجلوبين ] على المعالجة الدوائية للهيموجلوبين الجنيني (0272؛ ‎(HOF‏ يتم اقتراح الإمكانية ‎Yo‏ العلاجية لهذه الطرق بواسطة ملاحظات خاصة بالنمط الظاهري المعتدل للأفراد الذين لديهم صفات وراثية مشتركة من فقر الدم البحري ‎B‏ المتجانسة والاستدامة الوراثية للهيموجلوبين الجيني ‎hereditary‏ ‎CAR‏
— أ — ‎persistence fetal hemoglobin (HPFH)‏ بالإضافة إلى المرضى الذين لديهم فقر ‎pall‏ البحري ‏3 المتجانسة والتي لا تتتج هيموجلوبين لدى البالغين؛ ولكن تتم ملاحظة مطلب منخفض لحالات نقل ‏الدم في وجود تركيزات عالية من الهيموجلوبين الجيني. علاوة على ذلك؛ تمت ملاحظة أن مجموعة معينة من المرضى البالغين الذين لديهم تشوهات في سلسلة م يكون لديهم مستويات أعلى من ‏5 الطبيعية من الهيموجلوبين الجيني ‎H bF)‏ ( » وتمت ملاحظة أن لديهم مسار سريري لمرض أكثر ‎Vise!‏ من المرضى الذين لديهم مستويات طبيعية من ال ‎HPF‏ لدى البالغين. على سبيل ‎JED‏ ‏يكون لمجموعة من المرضى السعوديين الذين يعانون من فقر الدم المنجلي ويعبرون وراثياً على ما يتراوح من ‎770-7١‏ من ال ‎HBF‏ مظاهر سريرية معتدلة فقط للمرض ‎Br. «et al. (Pembrey)‏ ‎Haematol. 40: 415-429 )1978(‏ .ل). يعتبر مقبولاً الآن أن يتم تحسين اضطرابات ‎٠‏ الهيموجلوبين» مثل فقر الدم المنجلي وفقر الدم البحري ‎off‏ بواسطة إنتاج ال 107 المتزايد. ‎Reviewed in Jane and Cunningham Br. J. Haematol. 102: 415-422 (1998))‏ ‎.(N. Engl. J. Med. 328: 129-131 (1993) Bunn ‏على الرغم من أن الآليات الجزيئية التي تتحكم في التحويل التطويري في الجسم الحي من التعبير‎ ‏الوراثي عن جين جلوبين 7 إلى م تعتبر معروفة حالياً؛ يوجد دليل تراكمي على أن العوامل الخارجية‎ ‏.يمكنها أن تؤثر على التعبير الوراثي عن جين جلوبين 7.كانت مجموعة المركبات الأولى التي تم‎ ١ ‏كانت عبارة عن عقاقير مسممة للخلايا. القدرة على إحداث‎ HBF ‏تتشيط‎ sale) ‏اكتشاف أن بها نشاط‎ -٠ ‏التي تم إظهارها أولاً باستخدام‎ Algal) ‏بواسطة المعالجة‎ HEF ‏عملية تخليق من البداية لل‎
Proc Natl Acad Sci ‏لا‎ 5 A. (DeSimone) ‏آزاسيتيدين في حيوانات التجارب‎ ‏)1982( 79)14(:4428-31). بشكل لاحق للدراسات التي تأكد على قدرة ال © -آزاسيتيدين ‎azacytidine | ٠‏ على زيادة ال ‎HDF‏ في المرضى الذين يعانون من فقر الدم ‎Bad)‏ ومرض الخلية المنجلية ‎et Ley, 307: 1469-1475 (1982) «N. Engl. J. Medicine cet al. (Ley)‏ ‎(Blood 62: 370-380 (1983) «al.‏ توضح تجارب إضافية أن حيوانات السعدان التي تم علاجها باستخدام جرعات مسممة للخلايا من أرابينو سيل سيتوزسين ‎(Ch)‏ استجابت للارتفاعات الكبيرة في الخلايا الشبكية ‎Science. 224(4649):617-9 Papayannopoulou et al.) F‏ ‎Yo‏ (1984))؛ وأدى العلاج باستخدام الهيدروكسي ‎hydroxyurealy sy‏ إلى حث الجلوبين 7 في القرود أو حيوانات السعدان ‎et. al.)‏ صأساعاء )1984( 310(14):869-73 ‎Engl J Med.‏ ل١).‏
—vo- تم التحقق من قدرة مجموعة المركبات الثانية على إحداث نشاط ‎HBF Lisi sale)‏ مع أحماض دهنية قصيرة السلسلة05 86 ‎short chain fatty‏ . أدت الملاحظة الأولية في الخلايا الأصلية لدم الحبل السري الجنيني ‎fetal cord blood progenitor cells‏ إلى اكتشاف أن حمض الأمينو بيوتريك ‎y aminobutyric‏ يمكن أن يعمل كمحدث للهيموجلوبين الجنيني ‎Biochem (Perrine et al.)‏ ‎yell. (Biophys Res Commun. 148)2(:694-700 )1987( ©‏ الدراسات اللاحقة أن البوتيرات تحث إنتاج الجلوبين في حيوانات السعدان البالغة ‎Blood. 000518010018165 et al.)‏ ‎¢Dec‏ )1988( 72)6(:1961-7) كما أنها تحث الجلوبين 7 في الخلايا الأصلية الشبيهة بالكريات الحمراء في الحيوانات البالغة أو المرضى الذين يعانون فقر الدم المنجلي ‎Blood. (Perrine et al.)‏ (1989) 74)1(:454-9). أظهرت أيضاً مشتقات الأحماض الدهنية قصيرة السلسة ‎Jie‏ الفينيل (Br J Haematol. 83(3):555-61 (1994) Dover et al.) ‏بوتيرات1/816ا5الا080م‎ ٠ 1: Blood. 186(8):3227-35 «Liakopoulou et al.) valproic acid ‏وحمض الفالبرويك‎ ‏في الجسم الحي. بمعرفة العدد الكبير لنظائر أو مشتقات الأحماض‎ HBF ‏أنها تحث ال‎ ((1995) ‏الدهنية قصيرة السلسة الخاصة بهذه العائلة؛ فإنه يوجد عدد من المركبات المحتملة الخاصة بهذه‎ ‏العائلة والتي تكون أكثر فاعلية من البوتيرات 50173816 . تم إعتبار أن أحماض الفينيل أسيتيك‎
Blood Cells Mol Dis. 101461500 et al.) phenylalkyl ‏والفينيل ألكيل‎ Phenylacetic Yo ‏محتملة‎ HBF ‏الدراسات اللاحقة؛ أنها محدثات‎ Ui ‏والتي تم اكتشافها‎ ¢(22(2):150-8. (1996) ‏يظل استخدام البوتيرات أو‎ Jal ‏حيث أنها تتتمي لهذه العائلة من المركبات. مع ذلك؛ في الوقت‎ ‏الخاصة به في فقر الدم المنجلي أو فقر الدم البحري م قيد التجربة ولا يمكن تزكيته في‎ sual ‏العلاج خارجة التجارب السريرية.‎ ‎٠‏ تتضمن التجارب السريرية التي تهدف إلى إعادة تنشيط تخليق الهيموجلويين الجنيني في فقر الدم المنجلي وفقر الدم ‎Bad)‏ الإعطاء قصير المدى وطويل المدى لهذه المركبات ‎Jie‏ © -آزاسيتيدين ‎azacytidine‏ « والهيدروكسي ‎hydroxyurealyys‏ ومكون كرات الدم الحمراء البشري الناتج عن عودة الارتباط الجيني ونظائر حمض البيوتيريك؛ بالإضافة إلى توليفات منها. بعد هذه الدراسات؛ تم استخدام الهيدروكسي يوريا لحث ال ‎HDF‏ في البشر وأصبح الأخير العقار الأول والوحيد الموافق علية ‎Yo‏ بواسطة ‎(FDA) Food and Drug Administration‏ لعلاج حالات اعتلال الهيموجلوبين. مع ‎cell‏ يدل التفاوت في العيوب على وجود خطأً في الاستخدام طويل الأجل لهذه العوامل أو العلاجات؛
-؟-
بما في ذلك التأثيرات الجانبية غير المرغوب فيها والتغير يف استجابات المريض. على سبيل ‎(JO‏ ‏على الرغم من أن الهيدروكسي يوريا يحث إنتاج ال ‎HBF‏ وأنه أظهر أنه يقلل أزمة تكون الخلايا المنجلية في الدم سريرياً؛ ويتم الحد منه بشكل ممكن بواسطة السمية النقيية وخطر التسرطن. يمكن أيضاً أن يتواجد التسرطن المحتمل طويل الأجل في العلاجات التي أساسها ©-آزاسيتيدين. لم تثبت 0 العلاجات التي أساسها مكون كرات الدم الحمراء أنها ثابتة ضمن نطاق من مجموعات مرضى. أظهرت أنصاف الأعمار القصيرة لحمض البيوتيريك ‎butyric acid‏ في الجسم ‎all‏ عائق محتمل في ملائمة هذه المركبات للاستخدام في التداخلات العلاجية. علاوة على ذلك؛ تكون الجرعات المرتفعة جداً من حمض البيوتريك لازمة لحث التعبير الوراثي عن جين الجلوبين ‎oy‏ الأمر الذي يتطلب قسطرة للانتشار المتواصل للمركب. علاوة على ‎cells‏ يمكن أن تكون الجرعات المرتفعة من ‎٠‏ حمض البيوتريك مصحوبة بسمية عصبية وتلف أكثر من عضو ‎Blood 81: «et al.
Blau)‏ (1993) 529-537). على الرغم من أن حتى أدنى زيادة في مستويات ال ‎HBF‏ تكون مفيدة في مرض الخلية المنجلية؛ تتطلب فقر ‎pal‏ البحري م زيادة أعلى بكثير وهو ما لا يمكن تحقيقه على نحو موثوق به أو آمن بواسطة أي من العوامل المستخدمة حالياً ‎Seminars 0 Olivier)‏
‎.(Hematology 33: 24-42 (1996)‏ ‎٠‏ يمكن ‎of‏ يوفر تحديد المنظمات الطبيعية لحث وإنتاج ال ‎HPF‏ وسائل لاستتباط تداخلات علاجية ‎lam‏ على العيوب المتعددة للمركبات التي تم وصفها أعلاه. نتج عن الدراسات الحالية المكثخف لارتباط الجينوم رؤى تتعلق بالأساس الجيني لأمراض معقدة متعددة وأثارها ‎(McCarthy et al.)‏ ‎Manolio et. al.
J Clin Invest 118356 (2008) «Nat Rev Genet 9‏ « 1590 ‎xe. ((2008)‏ ذلك؛ في غالبية الحالات؛ لم يتم الكتشف عن الوصلة بين الارتباط الجيني وفسيولوجيا ‎٠‏ الأمراض التي تشكل الأساس. يكون مستوى الهيموجلوبين الجنيني ‎(HEF)‏ متأصل في صورة أثر كمي ويعتبر مهم من الناحية السريرية؛ بمعرفة دوره المذكور أعلاه والمميز جيداً في تحسين خطورة حالات اعتلال الهيموجلوبين الرئيسية رء؛ ومرض الخلية المنجلية ‎sickle cell disease‏ وفقر الدم البحري ‎-thalassemia‏ لم ‎Nathan and 0505 hematology of (Nathan et. al.)‏ ‎(XI 0. «1864 «xiv) pp. 2 v. «infancy and childhood ed. 6th‏ 2003)). قامت دراسات ‎YO‏ مكثفة لاثنين من الجينوم بتحديد ثلاث مواقع رئيسية تشتمل على مجموعة من خمس صور بلورية لنيكليوتيد واحد مشترك ‎single nucleotide polymorphisms (SNPs)‏ والتي تبلغ قيمتها حوالي
‎٠‏ من الصور المتتوعة في مستويات ال 167 ‎Proc Natl Acad Sci U 5 «Lettre et al.)‏ ‎Menzel ¢1620 (2008) «Proc Natl Acad Sci U 5 A 105 Uda et al. «A (2008)‏ ‎«Nat Genet 39 cet al.‏ )2007( 1197( علاوة على ذلك؛ يظهر أن العديد من هذه الصور المتتوعة تتوقع الخطورة السريرية لمرض الخلية المنجلية ‎Proc Natl Acad Sci «Lettre et al.)‏ ‎A )2008( ©‏ 5 لا) ويمكن لواحد على الأقل من هذه ال ‎SNPs‏ أن تؤثر على الحصيلة السريرية في فقر الدم البحري م ‎«Proc Natl Acad Sci U 5 A 105 Uda et al.)‏ )2008( 1620). يتم وضع ال ‎SNP‏ التي لها أكبر تأثير؛ والتي تفسر أكثر من ‎7٠١0‏ من الصور المنتوعة في ال ‎HOF‏ في الانترون الثاني للجين على الكروموسوم ‎¢F‏ 80111/8. حيث تم التحقق من دور 80111/8؛ عامل استتنساخ إصبع زنك من نوع ‎«C2H2‏ في تطور الخلايا اللمفية ‎«Nat Immunol 4 «Liu et al.)‏ ‎«Mol Cancer 5 Liu et 81. 525 )2003( ٠‏ )2006( 18)»؛ ولم يتم تحديد دورها في إنتاج خلايا الدم الحمراء أو تتظيم جين الجلوبين. في بداية عهد ‎DNA‏ الناتج عن عودة الارتباط الجيني؛ قدمت الدراسات الخاصة بهيكل جين الجلوبين أساس جزيئي قوي لفحص تحويل الجلوبين الجنيني. تم تركيز مجهود كبير على تحديد عناصر عند الموضع سيس في موضع الجلويين ‎B‏ ضرورية للتتظيم المناسب للجينات في مجموعة الجلوبين ‎١‏ المشابهة ‎BJ‏ تعتمد هذه الدراسات على الطفرات الموجودة في الطبيعة وحالات الحذف التي تؤثر على نحو مفاجئ على مستويات ال ‎HOF‏ لدى البالغين» والتي تم إلحاقها بواسطة توليد ‎ly‏ متحورة ورائياً تشتمل على جزء من المجمرعة ‎Nathan and Oski's hematology «Nathan et. al.)‏ ‎(Xli p. 1864 xiv) pp. 2 v. «of infancy and childhood ed. 6th‏ 2003) و( ‎G.‏ ‎«Exp Hematol 33 «Stamatoyannopoulos‏ )2005( 259( على الرغم من عناصر سيس ‎٠‏ الدقيقة المطلوبة لتحويل الجلوبين تظل غير محددة؛ تشير النتائج في الفئران المتحورة وراثياً إلى أن جينات الجلوبين 7 تعتبر ساكنة تلقائياً في مرحلة البالغين؛ وهي نتيجة تعتبر متوافقة جداً مع غياب المنشطات المعينة للمرحلة الجنينية أو وجود جين كبت معين لمرحلة. توفر النتائج الخاصة بالارتباط الجيني جينات مرشحة لفحص تدخلها في التحكم في جينات الجلوبين ‎oy‏ متل 80111/8. خلايا أولية لتكوين الدم ‎Yo‏ في أحد النماذج؛ يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم خارج الجسم الحي أو في المعمل. في نموذج محدد؛ تكون الخلية التي يتم تلامسها عبارة عن خلية لسلالة خلوية شبيهة بالكريات الحمراء ‎cell of‏
م+- ‎-the erythroid lineage‏ في أحد النماذج, تركيبة الخلية تشتمل على الخلايا التي لها تعبير منخفض عن ‎.BCL1IA‏ ‏يشير المصطلح "خلية أصلية لتكون ‎all‏ كما هو مستخدم هناء إلى خلايا سلالة خلوية لخلية جذعية والتي تؤدي إلى ارتفاع جميع أنواع ‎WA‏ الدم ‎Ly‏ في ذلك الخلايا النخاعية ‎myeloid‏ (كريات بيضاء © وحيدة النواة ‎monocytes‏ ؛ الخلايا الملتهمة الكبيرة ‎macrophages‏ ؛ خلايا متعادلة بيضاء ‎neutrophils‏ ؛ خلايا تتلون بالملونات القاعدية ‎WIA « basophils‏ يوزينية ‎eosinophils‏ ¢ كريات دموية حمراء ‎erythrocytes‏ ؛ الكريات الكبيرة غير المنواة ‎megakaryocytes‏ /الصفائح الدموية ‎platelets‏ « خلايا متعلقة بالزوائد العصبية ‎(dendritic cells‏ وسلالات خلوية ليمفاوية ‎lymphoid‏ ‎(NK BT WDA) lineages‏ يشير مصطلح "خلية لسلالة خلوية شبيهة بالكريات الحمراء"” إلى ‎٠‏ خلية تتلامس مع خلية تخضع لتكون كرات الدم الحمراء والتي بعد التمايز النهائي تشكل كرية حمراء أو خلية دم حمراء ‎ax .80 blood cell (RBC)‏ تلك الخلايا إلى واحدة من ثلاث سلالات خلوية؛ وخلايا شبيهة بالكريات الحمراء؛ وخلايا ليمفاوية وخلايا نخاعية؛ ‎Law‏ من الخلايا الأصلية لتكون الدم لنخاع العظم. بمجرد التعرض لعوامل نمو محددة ومكونات أخرى لبيئة تكون الدم بحجم الميكرو» يمكن أن تتضج الخلايا الأصلية لتكون ‎pall‏ من خلال مجموعة من الأنواع الخلوية الوسيطة ‎٠‏ للتتمايزء والمركبات الوسيطة لسلالة خلوية لخلايا شبيهة بالكريات الحمراء في 4805. بالتالي؛ يشتمل المصطلح ‎ADL‏ خلوية لخلايا شبيهة بالكريات الحمراء» كما هو مستخدم هناء على خلايا أصلية لتكون الدم» وأرومات المُضرجة ‎rubriblasts‏ » وسليفة المُضرجة ‎prorubricytes‏ » والأرومات الحمراء ‎erythroblasts‏ ؛ والخليفة المُضرجة ‎٠ metarubricytes‏ والخلايا الشبكية ‎reticulocytes‏ والكريات الحمراء ‎erythrocytes‏ . ‎٠‏ في بعض نموذج, تشتمل الخلية الأصلية لتكون الدم على واحد على الأقل من توصيف مرقم سطح الخلية لخلايا أولية لتكوين الدم: ‎,+Thyl/CD90 ,+00059 ,+CD34‏ -/ 003810 , و ‎C-kit/CDI‏ ‏+17. على نحو مفضل, تشتمل الخلايا الأصلية لتكون الدم على العديد من هذه المرقمات. في بعض النماذج, تشتمل الخلايا الأصلية لتكون الدم لسلالة الخلايا شبيهة الكريات الحُمر على توصيف مرقم سطح الخلية لسلالة الخلايا شبيهة الكريات الحُمر: 1071© و19 160.
ve
تكون الخلايا الجذعية ‎Stem cells‏ ؛ مثل الخلايا الأصلية لتكون الدم ‎hematopoietic‏ ‎progenitor cells‏ ¢ قادرة على التكاثر وتؤدي إلى زيادة الخلايا الأصلية التي يكون لديها القدرة على
توليد عدد كبير من الخلايا الأم والتي بدورها تؤدي إلى زيادة خلايا بنت متمايزة أو قابلة للتمايز. يمكن
حث خلايا البنت نفسها لتكاثر ‎lly‏ نسل الذي ‎Lad‏ بعد يتمايز إلى واحدة أو أكثر من أنواع خلية
© ناضجة ‎mature cell‏ ؛ ‎Law‏ يتم ‎Lad‏ احتجاز واحدة أو أكثر من الخلايا مع إمكانية تطوير الأم. بالتالي» يشير المصطلح "خلية جذعية؛ إلى خلية لها القدرة أو الإمكانية؛ في ظل ظروف محددة؛ على
التمايز إلى نمط ظاهري أكثر تخصصاً أو ‎dia‏ والتي تحتجز القدرة» في ظل ظروف محددة؛ على
التكاثر بدون التمايز إلى حدٍ كبير. في أحد النماذج» يشير التعبير خلية أصلية أو جذعية إلى خلية أم
عامة والتي يتخصص السليل (النسل) الخاص بهاء ‎Sale‏ اتجاهات مختلفة؛ بواسطة ‎«pall‏ على
‎Vs‏ سبيل المثال بواسطة اكتساب صفات فردية بالكامل؛ مما يؤدي إلى تعدد متقدم للخلايا والأنسجة الجنينية. يعتبر التمايز الخلوي عبارة عن عملية معقدة تحدث بشكل نمطي من خلال العديد من اتقسامات الخلية. يمكن اشتقاق خلية متمايزة من خلية متعددة القدرات والتي يتم اشتقاقها من خلية متعددة القدرات» وهكذا. بينما يمكن اعتبار كل خلية من الخلايا متعددة القدرات المذكورة عبارة عن
‏خلايا جذعية؛ يمكن أن يتفاوت مدى كل نوع من أنواع الخلايا الذي يؤدي إلى زيادة الخلايا المتمايزة.
‎٠‏ يكون لبعض الخلايا المتمايزة أيضاً القدرة على زيادة خلايا لها إمكانية أكبر على التطور. يمكن أن تكون هذه القدرة طبيعية أو يمكن ‎Lia‏ طبيعياً عند العلاج بواسطة عوامل متعددة. في العديد من الحالات البيولوجية؛ تكون الخلايا الجذعية أيضاً 'متعددة القدرات" لأنه يمكنها أن تنتج نسل له أكثر
‏من نوع خلية مميزء ولكن لا يعتبر ذلك مطلوباً "للجذوعية”. يعتبر التجديد الذاتي جزء تقليدي آخر لتعريف الخلية الجذعية؛ وتعتبر أساسية كما هي مستخدمة في هذه الوتيقة. نظرياً؛ يمكن أن يحدث
‎٠‏ . التجديد الذاتي بأي من آليتين أساسيتين. يمكن أن تتقسم الخلايا الجذعية لا ‎Bla‏ مع وجود خلية بنت تحتجز الحالة الجذعية والأخرى تعبر وراثياً عن بعض الوظائف المحددة الأخرى المميزة والنمط الظاهري. على نحو بديل؛ يمكن أن تتقسم بعض الخلايا الجذعية في مجموعة بشكل متماثل إلى
‏خليتين جذعيتين؛ وبالتالي الحفاظ على بعض ‎WAN‏ الجذعية في المجموعة ‎(JSS‏ بينما تؤدي الخلايا الأخرى الموجودة في المجموعة إلى زيادة النسل المتمايز فقط. بصفة عامة؛ يكون ‎DAL‏ الأصلية"
‎YO‏ نمط ظاهري خلوي يكون أكثر بدائية (أي؛ أنها خطوة أقدم بامتداد مسار تطوري أو تقدمي أكثر من خلية متمايزة بالكامل). ‎dale‏ يكون للخلايا الأصلية إمكانية تكاتر كبيرة أو عالية جداً. يمكن أن ترتفع
‎CAR
‎١ «=‏ الخلايا الأصلية إلى أنواع خلايا متمايزة مميزة متعددة أو إلى نوع خلية واحد متمايز؛ بناءً على المسار التطوري والبيئة التي تتطور وتتمايز فيها الخلايا. في سياق نشأة الخلية؛ تعتبر الصفة 'متمايز” أو ‎"lal‏ مصطلح نسبي. تعتبر "خلية متمايزة ‎"differentiated cell‏ عبارة عن خلية تقدمت في مسار التطور أبعد من الخلية التي تتم مقارنتها © بها. بالتالي؛ يمكن أن تتمايز الخلايا الجذعية إلى خلايا منتجة لغيرها مقيدة بسلاسة خلوية ‎Jia)‏ ‏خلايا أصلية مكونة ‎opal‏ والتي بدورها يكن أن تتمايز إلى أنواع أخرى من الخلايا المنتجة لغيرها أبعد من المسار (متل مادة منتجة لكرية حمرا ‎Arig ¢ ( s‏ ذلك مرحلة ‎dale‏ لخلية متمايزة؛ مثل كرية حمرا و والتي تلعب دوراً ‎ase‏ في نوع معين من الأنسجة ويمكنها أن تحتجز أو لا تحتجز القدرة على التكاثر. الخلايا الجذعية متعدد الإمكانات المحفزة ‎٠‏ في بعض النماذج, تكون الخلايا البشرية المهندسة ‎Las‏ الموصوفة في الطلب الحالي المشتقة من الخلايا الجذعية متعدد الإمكانات المعزولة. تتمتل ميزة استخدام 105605 في إمكانية أن تكون الخلايا مشتقة من نفس الخاضع الذي يتم إعطاء الخلايا الأولية له. بمعنى أنه, يمكن الحصول على الخلية الجسمية من خاضع, تمت إعادة برمجته إلى خلية جذعية مستحثة متعددة القدرات, وبعد ذلك تمت ‎sale)‏ تمايزه في خلية أولية لتكوين الدم سيتم إعطائها إلى خاضع (على سبيل المثال, الخلايا ذاتية ‎١‏ المنشاً). نظراً ‎oF‏ الخلايا السليفة تكون على نحو أساسي مشتقة من مصدر ذاتي المنشاً, يقل خطر رفض الطعم أو الاستجابات التحساسية مقارنة باستخدام الخلايا من خاضع آخر أو مجموعة من الخاضعين. في بعض النماذج, تكون الخلايا السليفة المكونة للدم مشتقة من مصادر غير ذاتية المنشاً. إضافة لذلك, استخدام ‎iPSCs‏ ينفي الحاجة إلى الخلايا التي تم الحصول عليها من مصدر جنيني. بالتالي, في أحد النماذج, لا تكون الخلايا الجذعية المستخدمة في الطرق التي تم الكشف عنها ‎Yo‏ الخلايا الجذعية الجنينية ‎.embryonic stem cells‏ على الرغم من أن التمايز يكون عموماً غير قابل للعكس في ظل السياقات الفسيولوجية,تم تطوير عدة طرق مؤخراً لإعادة برمجة الخلايا الجسمية إلى الخلايا الجذعية متعدد الإمكانات المحفزة. الطرق التمثيلية تكون معروفة لأولئك المهرة في المجال وتكون موصوفة بإيجاز في الطلب الحالي ما يلي. وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, يشير المصطلح "إعادة البرمجة' إلى عملية ‎Jad‏ أو تعكس حالة ‎Yo‏ تتمايز خلية متمايزة ‎Jo)‏ سبيل المثال, الخلية الجسمية ‎(somatic cell‏ . بطريقة أخرى, تشير إعادة ‎CAR‏ yy ‏البرمجة إلى عملية توجيه تمايز الخلية إلى الخلف إلى خلية من نوع أولي غير متمايزة أو أكثر. ينبغي‎ ‏ملاحظة أن وضع الكثير من الخلايا الأولية في مستتبت قد يؤدي إلى بعض الفقد في السمات‎ ‏المتمايزة بالكامل. بالتالي, وببساطة لا يجعل استتبات الخلايا المذكورة المتضمنة في مصطلح الخلايا‎ ‏سبيل المثال, الخلايا غير المتمايزة‎ (Ho) ‏المتمايزة من هذه الخلايا خلايا غير متمايزة‎ ‏أو الخلايا متعددة الإمكانات. يتطلب انتقال خلية متمايزة إلى تعدد‎ (undifferentiated cells © ‏الإمكانات مثير إعادة برمجة أبعد من المثير الذي يؤدي إلى فقد جزئي في صفة التمايز في مستتبت.‎ ‏تتمتع خلايا تمت إعادة برمجتها أيضاً بمواصفات القدرة على التمرير الموسع دون فقد إمكانيات النمو,‎ ‏بالنسبة إلى آباء الخلية الأولية, والتي تتمتع عموماً بالقدرة على عدد من الانقسامات المحدودة فقط في‎ culture ‏مسنتبت‎ ‏أو طرفياً قبل إعادة البرمجة. في بعض‎ Lia ‏برمجتها إما متمايزة‎ sale] ‏قد تكون الخلية التي سنتم‎ ٠ ‏النماذج, تضم إعادة البرمجة قلب كامل لحالة تمايز خلية متمايزة (على سبيل المثال, الخلية الجسمية)‎ ‏إلى حالة متعددة الإمكانات أو حالة متعدد الفعاليات. في بعض النماذج, تضم إعادة البرمجة قلب تام‎ ‏أو جزئي لحالة تمايز خلية متمايزة (على سبيل المثال, الخلية الجسمية) إلى خلية غير متمايزة (على‎ ‏يمكن أن ينتج عن إعادة البرمجة‎ ٠. (embryonic-like cell ‏سبيل المثال, خلية شبيهة بالجنين‎ sale) ‏التعبير عن جينات محددة بواسطة الخلايا, والتي يساهم التعبير عنها علاوة على ذلك في‎ VO ‏البرمجة. في نماذج محددة موصوفة في الطلب الحالي, تتسبب إعادة برمجة خلية متمايزة (على سبيل‎ ‏الجسمية) في أن تتخذ الخلية المتمايزة حالة غير متمايزة (على سبيل المثال, تكون خلية‎ Ada), JA ‏برمجتها, " أو "الخلايا الجذعية‎ sale) ‏غير متمايزة). الخلايا الناتجة يشار إليها بالاسم "خلايا تمت‎ "(iPS ‏أو‎ IPSCs ‏متعدد الإمكانات المحفزة (خلايا‎ ‏قد تشتمل إعادة البرمجة على تبديل, على سبيل المثال, قلب, بعض على الأقل من الأنماط الموروثة‎ Yo ais, (methylation ‏(على سبيل المثال, المعالجة بالميثيل‎ nucleic acid ‏لتعديل حمض نووي‎ ‏التغيرات اللاجينية, الطباعة الجينومية, إلخ, التي تحدث أنثناء التمايز‎ chromatin ‏الكروماتين‎ ‏الخلوي. تكون إعادة البرمجة مميزة عن الحفاظ المبسط على الحالة القائمة غير المتمايزة للخلية تكون‎ ‏متعددة الإمكانات فعلياً أو المحافظة على أقل من الحالة المتمايزة القائمة لخلية تكون بالفعل خلية‎ ‏تكون إعادة البرمجة مميزة أيضاً عن‎ (pall ‏متعددة الفعاليات (على سبيل المتال, خلية جذعية مكونة‎ YO ‏تعزيز التجديد الذاتي ل أو تكاثر الخلايا التي تكون بالفعل متعددة الإمكانات أو متعددة الفعاليات, على‎
CAR
7ل الرغم من أن التركيبات والطرق الموصوفة في الطلب الحالي يمكن استخدامها أيضاً للغرض المذكور, في بعض النماذج. لا تكون المنهج أو الطريقة الخاصة المستخدمة لتوليد الخلايا الجذعية متعددة الإمكانات من الخلايا الجسمية (مشار ‎led]‏ على نطاق واسع بالاسم "إعادة ‎(aad‏ ذات أهمية حرجة للاختراع المطلوب © حمايته. بالتالي, ستكون آية طريقة تعيد برمجة الخلية الجسمية إلى النوع النظير متعدد الإمكانات مناسبة للاستخدام في الطرق الموصوفة في الطلب الحالي. تم وصف مناهج إعادة البرمجة لتوليد الخلايا متعددة الإمكانات باستخدام توليفات محددة من عوامل انتساخ الخلايا الجذعية متعددة الإمكانات المحفزة. حول ‎Yamanaka‏ و ‎Takahashi‏ الخلايا الجسمية في الفتران إلى الخلايا شبيهة الخلية ‎ES‏ مع احتمال التطور الموسع بواسطة التحويل المباشر ‎٠‏ ل ‎.(Takahashi and Yamanaka, 2006) c-Myc ,KIf4 ,Sox2 ,Oct4‏ 5 تشبه الخلايا ‎ES‏ لأنها تستعيد مجموعة دوائر الانتساخ المرتبطة بتعدد الإمكانات 5 ‎MUC‏ للسطح اللاجيني. إضافة لذلك, تفي 10505 بجميع التجارب القياسية لتعدد الإمكانات: تحديداً, التمايز في المعمل في أنواع الخلية لثلاث طبقات جرثومية, تكوين ‎teratoma‏ المساهمة في الخلايا الخيمرية ‎,chimeras‏ ‏نقل السلالة الجرثومية ‎,(Maherali and Hochedlinger, 2008) germline transmission‏ ‎diss; Vo‏ رباعي الصيغة الصبغية )2009 ‎.(Woltjen et al.,‏ أوضحت الدراسات التالية أن خلايا ‎IPS‏ البشرية يمكن الحصول عليها باستخدام طرق تحويل مشابهة ‎Lowry et al., 2008; Park et al., 2008; Takahashi et al., 2007; Yu et al., (‏ ‎Jules ,(2007b‏ الانتساخ ‎,SOX2 ,0CT4 trio‏ و ‎,]NANOG‏ المحدد كالمجموعة القلب لعوامل الانتساخ التي تحكم تعدد الإمكانات )2008 ‎(Jaenisch and Young,‏ يمكن إنتاج الخلايا ‎IPS‏ ‎daly Yo‏ تقديم متواليات الحمض الأميني التي تشفر جينات مرتبطة بخلية جذعية في شخص بالغ, الخلية الجسمية, تاريخياً باستخدام نواقل التعبير الفيروسية. يمكن توليد الخلايا ‎IPS‏ أو تكون مشتقة من الخلايا الجسمية المتمايزة طرفياً, وكذلك من الخلايا الجذعية البالغة, أو الخلايا الجذعية الجسمية. بمعنى أن, يمكن جعل خلية أولية غير متعددة الإمكانات متعددة الإمكانات أو متعددة الفعاليات بواسطة إعادة البرمجة. في الحالات المذكورة, قد لا ‎YO‏ يكون من الضروري تضمين الكثير من عوامل إعادة البرمجة المطلوبة لإعادة برمجة خلية متمايزة
السلا
طرفياً. على نحو إضافي, يمكن تحفيز إعادة البرمجة بواسطة تقديم عوامل إعادة البرمجة غير الفيروسية, على سبيل المثال, بواسطة إدخال البروتينات ذاتها, أو بواسطة إدخال أحماض نووية تشفر عوامل إعادة البرمجة, أو بواسطة إدخال ‎RNAS‏ مرسل والذي بمجرد ترجمته وراثياً ينتج عوامل ‎sale)‏ ‏البرمجة (انظر على سبيل المثال, ‎Warren et al.,, Cell Stem Cell, 2010 Nov‏ ‎o(5;7(5):618-30 ©‏ يمكن أن تتحقق إعادة البرمجة بواسطة إدخال توليفة من أحماض نووية تشفر جينات مرتبطة خلية جذعية بما في ذلك, على سبيل ‎Jia)‏ 00-4 (أيضاً معروفة بالاسم ‎Oct=3/4‏ ‏أو ‎,Sox 18 ,Sox 15 ,Sox3 ,Sox2 ,Soxl ,(Pouf51‏ و ااحظلا, , ‎KIfl‏ 12لا 4آلها, ‎-LIN28 , , 161 ,Rem2 ,n-Myc ,Myc-) ,c-Myc ,NR5A2 5‏ في أحد النماذج, تشتمل ‎sale)‏ البرمجة باستخدام الطرق والتركيبات الموصوفة في الطلب الحالي علاوة على ذلك على إدخال ‎٠‏ واحد أو أكثر من 001-3/4, عضو من عائلة ‎,SOX‏ عضو من عائلة ‎KIf‏ وعضو من عائلة ‎Myc‏ ‏في الخلية الجسمية. في أحد النماذج, تشتمل الطرق والتركيبات الموصوفة في الطلب الحالي علاوة على ذلك على إدخال واحد أو أكثر من كل من 4 ‎c-MYC ,Nanog ,Sox2 ,0ct‏ و 14لا لإعادة البرمجة. وفقاً للملاحظ سابقاً, الطريقة المحددة المستخدمة لإعادة البرمجة لا تكون حرجة بالضرورة للطرق والتركيبات الموصوفة في الطلب الحالي. مع ذلك, حيث يكون من المطلوب استخدام الخلايا ‎١‏ المتمايزة من خلايا تمت ‎sale)‏ برمجتها في, على سبيل المثال, علاج البشر, في أحد النماذج لا يتم ‎sale) das‏ البرمجة بواسطة طريقة تبدل الجينوم. بالتالي, في النماذج المذكورة, تتحقق إعادة البرمجة,
على سبيل المثال, دون استخدام بلازميد ناقل تعبير أو بلازميد فيروسي ‎plasmid vectors‏ يمكن تحسين كفاءة إعادة البرمجة (أي, عدد خلايا تمت إعادة برمجتها) المشتقة من مجموعة من الخلايا البادئة بواسطة إضافة العديد من جزيئات صغيرة وفقاً للموضح بواسطة ‎Shi, Y., et al‏ ‎Cell-Stem Cell 2:525-528, Huangfu, D., et al (2008) Nature ٠‏ )2008( ‎Biotechnology 26(7): 195-7191, and Marson, A., et al (2008) Cell-Stem Cell‏ 3:132-5. بالتالي, يمكن استخدام عامل أو توليفة من العوامل التي تحسن كفاءة أو معدل إنتاج خلية جذعية متعددة الإمكانات محفزة في إنتاج ‎IPSCs‏ خاصة بالمريض أو بالمرض. تشتمل بعض أمثلة العوامل غير الحصرية التي تحسن كفاءة ‎sale]‏ البرمجة على ‎Wit‏ قابل للذوبان, وسط مهيا بت ‎BIX-01294 (G9a Wnt Yo‏ هيستون ميثيل ترانسفيراز 1805781856 الإ 00810 ‎,(histone‏ ‏1 (متبط ‎(MEK‏ مثبطات ميثيل ترانسفيراز ‎DNA methyltransferase‏ , متبطات
ل هيستون دي أسيليتاز ‎histone deacetylase (HDAC)‏ حمض فالبوريك ‎—'s , valproic acid‏ أزاسيتيدين ‎azacytidine‏ , دكساميثازون ‎dexamethasone‏ , سوبرويل أنيليد 50061080118 , حمض هيدروكساميك ‎hydroxamic acid‏ (/1ا/5), فيتامين ‎,C‏ وتراي كوستاتين 110051817 ‎(TSA)‏ , من بين غيرها أخرى. © تشتمل الأمثلة الأخرى غير الحصرية لعوامل تحسين إعادة البرمجة على: حمض سوبرويل أنيليد هيدروكساميك 610 ‎Ae) (SAHA) Suberoylanilide Hydroxamic‏ سبيل المثال, 3, فورينوستات ‎vorinostat‏ ) وأحماض هيدروكساميك ‎hydroxamic acids‏ الأخرى), ‎Depudecin ,BML-210‏ (على سبيل المثال, ‎Depudecin), HC Toxin, Nullscript (4-(1,3-Dioxo-IH,3H—(-)‏ ‎J a4, (benzo[de]isoquinolin-2-yl)-N-hydroxybutanamide | ٠‏ بوترات ‎Ae) Phenylbutyrate‏ سبيل المثال, فينيل بوتيرات الصوديوم ‎(sodium phenylbutyrate‏ وحمض فالبوريك ‎(VPA) Valproic Acid‏ والأحماض الدهنية ‎fatty acids‏ الأخرى قصيرة السلسلة ‎,Scriptaid (short chain‏ سورامين الصوديوم ‎Sodium‏ 207 , تريكوستاتين ‎A (TSA)‏ 10000518110, المركب ‏ م ‎Apicidin , APHA‏ بوتيرات الصوديوم ‎Sodium‏ ‎Vo‏ 817/1816 , بيفالويل أوكسي ميثيل بوتيرات ‎,(Pivanex, AN-9) pivaloyloxymethyl butyrate‏ ‎Trapoxin 8‏ , 001800700610 , ببتيد ديبسي ‎Depsipeptide‏ (أيضاً معروف بالاسم ‎FR901228‏ أو ‎(FK228‏ , بنز أميدات (على سبيل المثال, 1-994 ‎(He)‏ سبيل المثال, ل١-‏ أسيتيل دينالين ‎NVP-LAQ-824, ,MGCDO0103 ,(MS-27-275 (N-acetyl dinaline‏ ‎CBHA‏ (حمض ١٠-كربوكسي‏ سيناميك بيس ‎carboxycinnaminic acid‏ حمض هيدروكساميك ‎—A ,Tubacin ,JNJ16241199 ,(bishydroxamic acid VY.‏ 17 1, بروكساميد ‎,proxamide‏ أوكسامفلاتين ‎3-C1-UCHA ,oxamflatin‏ (على سبيل المقال, -3)-6 ‎CHAP31 , (chlorophenylureido)caproic hydroxamic 0‏ و50 ‎.CHAP‏ تشتمل عوامل تحسين إعادة البرمجة الأخرى, على سبيل المتال, على الصور السالبة السائدة من ‎HDACS‏ ‏(على سبيل المثال, الصور غير النشطة حفزياً), ممقبطات ‎siRNA‏ ل ‎,HDACs‏ والأجسام المضادة © التي ترتبط تحديداً ب 10/05. تكون المثبطات المذكورة متوفرة, على سبيل المثال, من ‎BIOMOL‏ ‎International, Fukasawa, Merck Biosciences, Novartis, Gloucester‏ ‎oY AY‏
١7
Pharmaceuticals, Aton Pharma, Titan Pharmaceuticals, Schering AG, .Sigma Aldrich 4 ,Pharmion, MethylGene ‏لتأكيد حث الخلايا الجذعية متعددة الإمكانات للاستخدام في الطرق الموصوفة في الطلب الحالي,‎ ‏يمكن اختبار نسائل معزولة للتعبير عن مرقم خلية جذعية. يعرف التعبير المذكور في خلية مشتقة من‎ ‏كخلايا جذعية متعددة الإمكانات محفزة. يمكن انتقاء مرقمات الخلية الجذعية‎ DAY ‏الخلية الجسمية‎ © ,Ecatl ‏ذلسط,‎ ,Nanog ,CD9 ,SSEA4 ,SSEA3 ‏من المجموعة غير الحصرية بما في ذلك‎ ‏في أحد‎ ٠ Natl 5 ,Utfl ,Rex| ,Slc2a3 ,Zpf296 ,Daxl ,Cripto ,Fgf4 , 5013 ,Eras ,Esgl ‏النماذج, يتم تعريف الخلية التي تعبر عن 0014 أو 8009 بالاسم متعددة الإمكانات. قد تشتمل‎ ‏وطرق مناعية ترصد‎ RT-PCR ‏طرق كشف التعبير عن المرقمات المذكورة, على سبيل المثال, على‎ ‏أو تحليلات تدفق‎ Westen ‏مثل لطخ‎ , encoded polypeptides: sic ‏وجود بولي ببتيدات‎ ٠ ‏رصد مرقمات البروتين.‎ Lad ‏فقط, بل‎ RT-PCR ‏الخلايا. في بعض النماذج, لا يشتمل الرصد على‎ ‏عن طريق 81-068 , في حين يتم تعريف‎ did) ‏يمكن تعريف المرقمات بين الخلايا على النحو‎ ‏مرقمات سطح الخلية سريعاً, على سبيل المثال, بواسطة كيمياء الخلايا المناعية‎ .Immunocytochemistry ‏تأكيد صفات خلية جذعية متعددة الإمكانات للخلايا المعزولة بواسطة الاختبارات التي تقيم قدرة‎ (Kg ١ ‏على التمايز إلى خلايا كل من الطبقات الجرثومية الثلاث. كأحد الأمثلة, يمكن استخدام‎ 5 ‏تكوين الورم المسخي في الفثران العارية من الشعر لتقييم الصفة متعددة الإمكانات لنسائل معزولة. يتم‎ ‏تقديم الخلايا إلى الفئران العارية من الشعر ويتم إجراء تحليل النسيج و / أو كيمياء النسيج المناعي‎ ‏على الورم الناشئ من الخلايا. يشتمل نمو الورم على الخلايا من جميع الطبقات الجرثومية الثلاث,‎ ‏على سبيل المثال, ويشير علاوة على ذلك إلى أن الخلايا تكون الخلايا الجذعية متعددة الإمكانات.‎ Yo ‏الخلايا الجسمية لإعادة البرمجة‎ ‏الخلايا الجسمية, وفقاً لاستخدام المصطلح في الطلب الحالي, غلى أي الخلايا التي تكون جسم الكائن‎ — mammalian body ill ‏الحي, باستثناء خلايا السلالة الجرثومية. كل نوع خلية في جسم‎ ‏والخلايا التي يتم تكوينها منها (الخلايا المشجية‎ , sperm ‏بعيداً عن البويضات والحيوانات المنوية‎ ‏والخلايا الجذعية غير المتمايزة --تكون الخلية الجسمية المتمايزة. على سبيل‎ (gametocytes Yo
SRV
‏المتال, الأعضاء الداخلية والجلد والعظام والدم والنسج الضام المصنوعة جميعها من الخلايا الجسمية‎ . differentiated somatic cells ‏المتمايزة‎ ‏تشتمل أنواع الخلية الجسمية الإضافية للاستخدام مع التركيبات والطرق الموصوفة في الطلب الحالي‎ ‏خلية العضلات‎ (primary fibroblast ‏على: الخلية الليفية (على سبيل المثال, الخلية الليفية الأولية‎ ‏خلية عصبية‎ «cumulus ‏)؛ خلية ركاميةاا8©‎ myocyte ‏سبيل المثال, خلية عضلية‎ lo) © ‏وخلية جزيرة البنكرياس‎ hepatocyte ‏خلية كبدية‎ « mammary cell ius ‏خلية‎ ¢ neural cell ‏بعض النماذج, تكون الخلية الجسمية سلالة الخلية الأولية أو تكون‎ 4. pancreatic islet cell ‏سليفة سلالة خلية أولية أو ثانوية. في بعض النماذج, الخلية الجسمية يتم الحصول عليها من عينة‎ ‏؛ خزعة‎ blood sample ‏من الدم‎ due ‏؛‎ hair follicle ‏بشرية, على سبيل المتال, بصيلات الشعر‎ «(adipose biopsy ‏أو خزعة دهنية‎ skin biopsy ‏سبيل المثال, خزعة الجلد‎ le) biopsy ~~ ٠ ‏وتكون بالتالي الخلية‎ (oral swab sample ‏وعينة مسحة (على سبيل المثال, عينة مسحة الفم‎ ‏الجسمية البشرية.‎ ‏تشتمل بعض الأمثلة غير الحصرية للخلايا المتمايزة الجسمية, على سبيل المثال لا الحصر, على‎ ‏ء‎ adipose ‏؛ الشحمية‎ neuronal ‏؛ العصبية‎ endothelial ‏؛ البطانية‎ epithelial Adal ‏الخلية‎ ‎immune cells ‏؛ الخلايا المناعية‎ skeletal muscle ‏عضلات الهيكل العظمي‎ ¢ cardiac ‏القلبية‎ Yo circulating blood ‏؛ خلايا الدم‎ lung ‏الرئة‎ WA « splenic ‏الطحال‎ « hepatic ‏خلايا الكبد‎ « ‏؛ خلايا نخاع العظام‎ renal ‏؛ خلايا الكلى‎ gastrointestinal ‏الجهاز الهضمي‎ LDA ‏؛‎ cells ‏في بعض النماذج, قد تكون الخلية الجسمية الخلية‎ pancreatic ‏وخلايا البنكرياس‎ bone marrow , brain ‏الأولية المعزولة من أي نسيج جسمي بما في ذلك, على سبيل المثال وليس الحصر المخ‎ ‏العضلات‎ ¢ fat ‏الدهون‎ » intestine ‏والأمعاء‎ stomach ‏القناة الهضمية, المعدة‎ , liver ‏الكبد‎ Yo endocrine ‏؛ الغدد الصماء الجهازية‎ spleen ‏الطحال‎ ¢ skin ‏؛ الجلد‎ uterus ‏الرحم‎ « muscle ‏إلخ. على نحو إضافي, قد تكون الخلية الجسمية من أي أنواع تدبية, مع‎ bone ‏والعظام‎ 7 ‏القرود؛ الخنازير؛ الخيول؛ الأغنام أو الخلية‎ «JEN yall ‏اشتمال الأمثلة غير الحصرية على خلايا‎ ‏البشرية. في بعض النماذج, الخلية الجسمية تكون الخلية الجسمية البشرية.‎ ‏عند استخدام الخلايا المعاد برمجتها المستخدمة لتوليد خلايا أولية لتكوين الدم تستخدم في العلاج‎ YO ‏العلاجي للمرض, يكون من المرغوب فيه, وليس ضروري, استخدام الخلايا الجسمية المعزولة من‎
—yy— ‏المريض الخاضع للعلاج. على سبيل المثال, يمكن استخدام الخلايا الجسمية المشاركة في الأمراض,‎ ‏والخلايا الجسمية المشاركة في العلاج العلاجي للأمراض وما شابه. في بعض النماذج, يمكن إجراء‎ ‏برمجتها من مجموعة غير متجانسة تشتمل على خلايا تمت إعادة‎ Sale] ‏طريقة لانتقاء خلايا تمت‎ ‏برمجتها وخلايا جسمية مشتقة أو متولدة بواسطة أي الوسائل المعروفة. على سبيل المثال, يمكن‎ ‏تمت إعادة برمجتها‎ LDA ‏استخدام جين مقاوم للعقار أو ما شابه, مثل جين مرقم قابل للانتقاء لعزل‎ © ‏باستخدام المرقم القابل للانتقاء كمؤشر.‎ ‏برمجتها وفقاً لما تم الكشف عنه في الطلب الحالي عن أي‎ sale) ‏يمكن أن تعبر خلايا جسمية تمت‎ alkaline phosphatase ‏عدد من مرقمات الخلية متعددة الإمكانات, بما في ذلك: فوسفاتيز قلوي‎ ٠- stage specific embryonic antigen ‏مولد ضد جنيني محدد المرحلة‎ JABCG2 (AP) ;Tra—2-49/6E ;TRA-1-81 ;1.-TRA-1 ;SSEA-4 ;SSEA-3 ;(SSEA-1) ٠ smooth ‏2-أكتين العضلة الملساء‎ tubulin ‏0)-م-تيوبولين‎ ;E—cadherin , ERas/ECATS ,Cripto, (Fof4) ¢ fibroblast growth factor ‏عامل النمو الليفي‎ : (a-SMA) muscle actin ‏ترانسفيراز‎ ليتيسأ-١١‎ :)210296( 77 206 finger protein ‏بروتين إصبع الزنك‎ ; Dax ;(ECATI) ES 1) ‏منتسخ مرتبط بالخلية‎ j(Natl) ١٠- acetyltransferase ,ECAT10 ‏ام : والم:‎ 4 ;ECATT : ‏امنا‎ 6 ;ECAT3 ;ESG1/DPPAS/ECAT2 ٠ ‏عامل انتساخ الخلية الجنينية غير المتمايزة (ا17لا):‎ ;Sall4 : 1017 ;ECAT15-2 ;ECAT15-1 ‏بما في ذلك 141 : جينات الكرموسوم الصامت‎ telomerase ‏53م: 53011 : تيلوميراز‎ Rex ‏يحتوي على‎ F-box ;TRIM28 ;Dnmt3b ;Dnmt3a ;silent X chromosome genes ;TDGF1 ;Esrb ;c-Myc ;KIf4 ;Sox2 ;Oct3/4 ;Nanog/ECAT4 ;(FbxI5) ١١ ‏بروتين‎ ‏تعدد الإمكانات المتطروة المرتبط ب ؟‎ ;CYP25A1 ;GDF3 ;FoxD3 ,Zfp42 ;GABRB3 ٠ 000 8 :) ‏للخلية 11 (ال18‎ lymphoma ‏نقطة انفصال الورم اللمفي‎ ;(DPPA2) ‏المرقمات العامة الأخرى لتعدد الإمكانات, إلخ. قد تشتمل المرقمات الأخرى على‎ : 0004 ‏المذكورة أيضاً‎ WAY ‏يمكن توصيف‎ .Bmil 5 ,p—catenin ;Grb2 ;Stat3 ;Sox|5 ;Dnmt3L ‏بواسطة التنظيم التنازلي للمرقمات المميزة للخلية الجسمية التي يتم اشتقاق الخلية الجذعية المستحثة‎
Jee ‏متعددة القدرات‎ YO
DNAS mes ‏التعديل الجينومي واندونيوكلياز يستهدف‎
VA
‏وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, يشير المصطلح "التعديل الجينومي" إلى طريقة علم الوراثة العكسي‎ ‏المستخدمة لنيوكلياز المهندس وراثياً صناعياً لقطع وتكوين انفصالات مزدوجة الجديلة محددة في‎ ‏الموقع (المواقع) المطلوبة في الجينوم, والتي يتم إصلاحها بعد ذلك بواسطة عمليات خلوية ذاتية‎ ‏الإصلاح الموجه بالتتاظر‎ homologous recombination (FR) ‏المتجانس‎ seal), Jie ‏المنشاً‎ ‎non-homologous ‏والتوصيل الطرفي غير المتجانس‎ homology directed repair )104( 2 ‏في فصل مزدوج الجديلة, في حين‎ DNA ‏مباشرةً أطراف‎ NHEJ ‏يوصل‎ .end—joining (NFfEJ) ‏المفقودة عند نقطة الانفصال.‎ DNA ‏توليد متوالية‎ soley ‏المتوالية المتجانسة كقالب‎ HDR ‏يستخدم‎ ‏يتعذر إجراء التعديل الجينومي باستخدام إندونيوكلياز التقييد التقليدي نظراً لتعرف معظم إنزيمات التقييد‎ ‏كهدف لها وترتفع الاحتمالية للغاية بحيث يتم العثور على توليفة‎ DNA ‏على أزواج قاعدية قليلة في‎ ‏زوج القاعدة التي تم التعرف عليها في الكثير من المواقع عبر الجينوم مما ينتج عنه قطعات عديدة‎ Vo ‏(أي, لا تقتصر على الموقع المطلوب). للتغلب على هذا التحدي وتكوين انفصالات مزدوجة الجديلة‎ ‏محددة الموقع, تم اكتشاف العديد من الفئات المميزة من نيوكلياز والمهندسة حيوياً ووراثياً حتى اليوم.‎ ola, Zinc finger nucleases (ZFNs) ‏هذه هي ميجا نيوكلياز, نيوكلياز إصبع الزنك‎ ‏شبيه بمنشط الانتساخ‎ effector nucleases ‏ومستجيب نيوكلياز‎ , 0859/0415 .(TALENSs)transcription-activator yo ‏على نحو شائع في أربع مجموعات: مجموعة‎ Meganucleases ‏يتم تصنيف ميجا نيوكلياز‎ ‏تمتاز هذه‎ .18[١[ ‏ومجموعة‎ His—Cys box ‏مجموعة‎ ,GIY-YIG ‏مجموعة‎ ,LAGLIDADG ‏المجموعات بعناصر بنيوية, تؤثر على النشاط الحفزي ومتوالية الإدراك. على سبيل المثال, يمتاز‎ ‏بالاشضتمال على إما نسخة أو نسختين من عنصر‎ LAGLIDADG ‏أعضاء المجموعة‎
Chevalier et al. (2001), Nucleic Acids Res. 29( 18): ‏المحافظ (انظر‎ LAGLIDADG ٠ ‏مع نسخة واحدة من صورة عنصر‎ LAGLIDADG ‏تم العثور على ميجانيوكلياز‎ .)3757-4 ‏كدايمرات متجانسة, بينما تم العثور على أعضاء من مع نسختين من‎ LAGLIDADG ‏في صورة مونمرات. على نحو مماثل, يشتمل أعضاء مجموعة 617-716 على‎ LAGLIDADG ‏وحدة بنائية في الطول وتشتمل على أربع أو خمس‎ ٠٠١-7١ ‏والتي نتراوح من‎ GIY-YIG ‏وحدة‎ ‎Van Roey ‏عناصر متواليات محافظة مع أربع وحدات بنائية ثابتة, اثنين منها مطلوبة للنشاط (انظر‎ YO ‏يتميز ميجانيوكلياز‎ .)©] al. (2002), Nature Struct. Biol. 9: 806-811 oY AY
١4 histidines ‏بتسلسلات محافظة للغاية من مركبات هيستيدين‎ His—Cys box Meganucleases ‏فوق منطقة تضم عدة مئات من الوحدات البنائية للحمض الأميني (انظر‎ CYStEINeS ‏وسيستين‎ ‏في حالة‎ (Chevalier et al. (2001), Nucleic Acids Res. 29(18): 3757-4 ‏يتم تعريف الأعضاء بواسطة عناصر تحتوي على زوجين من مركبات هيستيدين‎ NHN ‏مجموعة‎ ‎Chevalier et al. (2001), ‏(انظر‎ asparagine ‏المحافظة المحاطة بالوحدات البنائية أسبراجين‎ © ‏المجموعات الأربع من ميجانيوكلياز تكون‎ (Nucleic Acids Res. 29(18): 3757-3774 ‏مستقلة على نطاق واسع عن بعضها البعض فيما يتعلق بالعخاصر البنيوة المحافظة و, بالتالي,‎ . catalytic activity gall ‏والتشاط‎ DNA ‏خصوصية متوالية إدراك‎ ‏يتم العثور على ميجانيوكلياز على نحو شائع في الأنواع الميكروبية ويشتمل على الخاصية الفريدة‎ ‏مم يجعلها بالتالي شديدة الخصوصية‎ (bp VE<) ‏الاشتماله على متواليات الإدراك الطويلة للغاية‎ ٠ ‏طبيعياً للقطع عند الموقع المطلوب. يمكن استغلالها هذا لصنع انفصالات مزدوجة الجديلة محددة‎ ‏الموقع في التعديل الجينومي. يمكن لذا المهارة في المجال استخدام ميجانيوكلياز هذا الذي يحدث‎ ‏طبيعياً, ومع ذلك يكون عدد من ميجانيوكلياز يحدث طبيعياً المذكور محدود. للتغلب على هذا‎ ‏التحدي, تم استخدام طرق التطفير وفحص الإنتاجية العالية لتكوين صور مغايرة من ميجانيوكلياز‎ ‏تتعرف على المتواليات الفريدة. على سبيل المثال, تم دمج العديد من ميجانيوكلياز لتكوين إنزيمات‎ ٠ ‏هجينة تتعرف على متوالية جديدة. على نحو بديل, يمكن تبديل الأحماض الأمينية المتفاعلة‎
A ‏لميجانيوكلياز لتصميم ميجانيوكلياز خاص بالمتوالية (انظر على سبيل المثال, البراءة الأمريكية رقم‎
Certo, ‏يمكن تصميم ميجانيوكلياز باستخدام الطرق الموصوفة في على سبيل المثال,‎ (ATY ,07١ :777 ,70 4 A ‏البراءات الأمريكية أرقام‎ MT et al. Nature Method (2012) 9: 073-975
VEY OA ‏كر‎ ITY ‏كد ع‎ IY AYIA NYE JA GYAY NYA LA GATY ‏زلف‎ JAY ‏والتي تم إدراج محتوياتها كمرجع في‎ , 24,117 A ‏تا زه 18 ار 8 »: أو‎ VEY A Ye ‏الطلب الحالي في مجملها. على نحو بديل, يمكن الحصول على ميجانيوكلياز بخصائص القطع محدد‎
Precision Biosciences’ Directed ‏الموقع باستخدام التقنيات المتوفرة تجارياً على سبيل المتثال,‎ .Neoclease Editor™ Gemnomeic Editing technology ‏يكون مرتبط‎ DNA ‏من إنزيم قطع غير محدد‎ TALENS 5 2215 ‏تستفيد تقنية تقييد إندونيوكلياز‎ YO zinc fingerselsyll ‏أصابع‎ Jie peptide ‏محددة تتعرف على الببتيدات‎ DNA ‏بمتوالية‎
“Aa . transcription activator-like effectors (TALEs) ‏ومستجيبات شبيهة منشط الانتساخ‎ ‏وموقع الانشطار له منفصلين‎ DNA ‏نمطياً يتم اختيار الإندونيوكلياز الذي يكون موقع التعرف على‎ ‏عن بعضهم البعض ويتم فصل جزء الانشطار له وبعد ذلك ربطه بببتيد يتعرف على المتوالية, وبناءً‎ ‏عليه نحصل على إندونيوكلياز بخصوصية مرتفعة للغاية للمتوالية المطلوبة. إنزيم التقييد التمثيلي‎ ‏على نحو إضافي بمزية الحاجة إلى الدايمرة ليكون له‎ Fokl ‏بالخواص المذكورة يكون 4ا0. يتمتع‎ © ‏نشاط نيوكلياز وهذا يعني زيادة الخصوصية بدرجة كبيرة مع تعرف كل شريك نيوكلياز على متوالية‎ ‏وراثياً والذي يمكن أن يقوم فقط بوظيفة‎ Fokl ‏فريدة. لتعزيز هذا التأثير, تمت هندسة نيوكلياز‎ DNA ‏وله نشاط حفزي متزايد. يتجنب نيوكلياز يقوم بوظيفة‎ homodimer ‏الدايرمات غير المتجانسة‎ ‏الدايمر غير المتجانس إمكانية نشاط الدايمر المتجانس غير المطلوب وبالتالي زيادة خصوصية فصل‎ ‏مزدوج الجديلة.‎ ٠ ‏تتمتع بخواص متشابهة إلا أن الفرق‎ TALENS ‏و‎ ZFNs ‏على الرغم من أن أجزاء نيوكلياز لكل من‎ ‏على أصابع الزنك‎ ZFNs ‏يعتمد‎ DNA ‏يكمن في ببتيد التعرف على‎ Lys ‏بين نيوكلياز هذا المهندس‎ ‏هذه بأنه‎ DNA ‏في 18155 . تمتاز كل من مجالات ببتيد يتعرف على‎ TALENSs ; Cys2-His2
Cys2-His2 ‏يتم العثور عليها على نحو طبيعي في توليفات في بروتيناتها. تحدث أصابع الزنك‎ ‏في توليفات متتوعة في‎ Lede ‏نمطياً في التكرارات التي تكون متباعدة على مسافة 3 50 ويتم العثور‎ ١ ‏على‎ stall ‏مجموعة منتوعة من البروتينات المتفاعلة مع حمض نووي مثل عوامل الانتساخ. يتم‎ ‏من جهة أخرى في التكرارات مع نسبة تعرف واحد إلى واحد بين الأحماض الأمينية وأزواج‎ TALES ‏في أنماط متكررة,‎ TALES 5 ‏النيوكليوتيد التي تم التعرف عليها. نظراً لحدوث كل من أصابع الزنك‎ ‏يمكن تجربة التوليفات المختلفة لتكوين مجموعة واسعة النطاق من خصوصيات المتوالية. تشتمل طرق‎ ‏تصنيع إصبع زنك إندونيوكلياز المحدد بالموقع, على سبيل المثال, على تجميعة نموذجية (حيث ترتبط‎ ٠ ‏منخفض‎ lial) OPEN ‏أصابع الزنك بمتوالية ثلاثية متصلة في صف لتغطية المتوالية المطلوبة),‎ ‏الصرامة لمجالات الببتيد مقابل النيوكليوتيدات الثلاثية يليها الاختيارات مرتفعة الصرامة لتوليفة الببتيد‎ ‏مقابل الهدف النهائي في النظم البكتيرية), والمسح الهجين الواحد البكتيري لمجموعات إصبع الزنك,‎ ‏للاستخدام مع الطرق والتركيبات الموصوفة في الطلب‎ ZFNs ‏من بين أخرى. يمكن الحصول على‎ .(Richmond, CA)Sangamo Biosciences™ ‏الحالي تجارياً من على سبيل المثال,‎ Yo
CAN
‏للتعديل الجينومي مع الطرق‎ Cas9/CRISPR ‏من المتوقع في الطلب الحالي استخدام نظام‎ ‏والتركيبات الموصوفة في الطلب الحالي. نظم التكرارات التي تتجمع بشكل منتظم والمتباعدة بينياً‎ ‏تكون مفيدة في التعديل‎ (Cas) ddaiyal-CRISPR)/CRISPR) ‏المتتاوبة القصيرة التكرارات‎
Jinek, M. et al. Science ‏على سبيل المثال,‎ hil) RNA ‏الجينومي القابل للبرمجة لجمض‎ .)2012( 337 (6096): 816-821 © ‏على نحو بديل, يمكن إجراء التعديل الجينومي باستخدام الهندسة الوراثية لجينوم بناءًٌ على فيروس‎ ‏والذي يكون منصة التعديل الجينومي حول نواقل‎ ,(FAAV) ‏غدي لناتج معاودة الارتباط الجيني‎ ‏في‎ DNA ‏المستخدمة والتي تساعد على إدراج, حذف أو استبدال متواليات حمض‎ AAV ‏تعبير‎ ‏جينومات الخلايا الثديية الحية. يكون جزيء جينوم حمض نووي ديوكسي ريبو أحادي الجديلة‎ ‏موجب الشعور أو سالب الشعور,‎ We, single-stranded deoxyribonucleic acid (ssDNA) ٠ ‏مفردة الجديلة‎ DNA ‏طوله حوالي 4,7 كيلو قاعدة. تشتمل نواقل التعبير الفيروسية لحمض‎ aly ‏والذي‎ ‏الاندماج ذاتي المنشأً‎ sole) ‏هذه على معدلات تحويل مرتفعة وتتمتع بخاصية فريدة تتمثل في تحفيز‎ ‏مزدوج الجديلة في الجينوم. يمكن لذي المهارة في المجال‎ DNA ‏المتجانس في عدم وجود انفصالات‎
Lindl ‏لاستهداف الموقع الجينومي وإجراء كل من تبديلات الجين ذاتي‎ TAAV ‏تصميم ناقل تعبير‎ ‏بميزة استهداف أليل‎ FAAV ‏حذف. يتمتع التعديل الجينومي ل‎ Jie, dda ‏الكلية و / أو المطلقة في‎ Vo ‏تكون‎ TAA ‏فردي ولا ينتج عنه أي تبديلات جينومية بعيدة عن الهدف. تقنية التعديل الجينومي‎
Cambridge, ) Horizon™ rAAV Genes IS™ system ‏متوفرة تجارياً, على سبيل المثال,‎ (UK ‏مواد حاملة مقبولة صيدلانياً‎ ‏تشتمل طرق إعطاء الخلايا السليفة المكونة للدم البشرية إلى خاضع وفقاً للموصوف في الطلب الحالي‎ ٠ ‏على استخدام تركيبات علاجية تشتمل على خلايا أولية لتكوين الدم. تحتوي التركيبات العلاجية على‎ ‏مادة حاملة يمكن تحملها فسيولوجياً إضافة إلى تركيبة الخلية واختيارياً عامل فعال حيوياً إضافي واحد‎ ‏على الأقل وفقاً للموصوف في الطلب الحالي, مذاب أو مشنتت فيه كمكون فعال. في نموذج مفضل,‎ ‏لا تكون التركيبة العلاجية مولدة للمناعة بدرجة كبيرة عند الإعطاء إلى ثديي أو مريض إنسان‎ ‏لأغراض علاجية, ما لم يكن ذلك مطلوباً.‎ Yo
CAR
-7م- عموماً, يتم إعطاء الخلايا الأصلية لتكون الدم الموصوفة في الطلب الحالي كمعلق مع مادة حاملة مقبولة صيدلانياً. سيدرك ذا المهارة في المجال أن المادة الحاملة المقبولة صيدلانياً التي سيتم استخدمها في تركيية خلية لن تشتمل على محاليل منظم, مركبات, عوامل الحفظ بالتبريد, مواد حافظة, أو عوامل أخرى بكميات تتداخل على نحو أساسي مع حيوية الخلايا المطلوب توصيلها إلى الخاضع. © قد تشتمل صيغة تشتمل على الخلايا على سبيل المثال, على محاليل منظمة أوزموسية تسمح بالحفاظ على تكامل غشاء الخلية, واختيارياً, للمغذيات بالحفاظ على حيوية الخلية أو تعزيز الطعم عند الإعطاء. الصيغ المذكورة والمعلقات تكون معروفة لأولئك المهرة في المجال و / أو يمكن تهيأتها للاستخدام مع الخلايا الأصلية لتكون الدم وفقاً للموصوف في الطلب الحالي باستخدام التجارب الروتينية. ‎Vs‏ يمكن أن تكون تركيبة خلية أيضاً مستحلب أو يتم تقديمها كتركيبة دهنية ما, بشرط ألا يؤثر إجراء الاستحلاب عكسياً على حيوية الخلية. الخلايا ويمكن خلط أي مكون فعال آخر مع السواغات التي تكون مقبولة صيدلانياً وتتوافق مع المكون الفعال وبكميات مناسبة للاستخدام في الطرق العلاجية الموصوفة في الطلب الحالي. قد تشتمل العوامل الإضافية المتضمنة في تركيبة خلية وفقاً للموصوف في الطلب الحالي على أملاح ‎VO‏ مقبولة صيدلانياً من مكونات فيها. تشتمل أملاح مقبولة صيدلانياً على أملاح إضافة الحمض (المتكونة باستخدام مجموعات الأمينو الحرة ‎free amino‏ للبولي ببتيد 0017060106 ) والتي تتكون باستخدام الأحماض غير العضوية مثل, على سبيل ‎(mea, JU‏ الهيدروكلوريك ‎hydrochloric‏ أو الفوسفوريك | ‎«phosphoric‏ أو تلك الأحماض العضوية متل حمض ‎aceticeldall‏ « الطرطريك ‎tartaric‏ « المندليك ‎mandelic‏ وما ‎Yo‏ شابه. يمكن أن تكون الأملاح التي تتكون مع مجموعات الكربوكسيلي الحرة ‎free carboxyl‏ أيضاً مشتقة من قواعد غير عضوية مثل, على سبيل المتال, الصوديوم ‎sodium‏ البوتاسيوم ‎potassium‏ ‏؛ الأمونيوم ‎ammonium‏ ء الكالسيوم ‎calcium‏ أو هيدروكسيدات الحديد ‎ferric hydroxides‏ « والقواعد العضوية هذه مثل أيزوبروبيل أمين ‎isOpropylamine‏ » ثلاشي ‎Siva‏ أمين ‎trimethylamine‏ » “-إيقيل أمينو ايشانول ‎ethylamino ethanol‏ « هيستيدين ‎histidine‏ , ‎YO‏ بروكايين ‎procaine‏ وما شابه. تكون مواد حاملة يمكن تحملها فسيولوجياً معروفة جيداً في المجال. تكون المواد الحاملة السائلة النموذجية محاليل مائية معقمة لا تحتوي على مواد إضافة إلى مكونات ‎OY AY‏
ام فعالة وماء, أو تحتوي على محلول منظم مثل فوسفات الصوديوم ‎sodium phosphate‏ عند قيم رقم هيدروجيني فسيولوجي, محلول ملحي فسيولوجي أو كلاهما, مثتل محلول ملحي منظم بالفوسفات 00016 . لا يزال على نحو إضافي, يمكن أن تشتمل المواد الحاملة المائية على أكثر من محلول منظم ملحي واحد, وكذلك أملاح مثل الصوديوم وكلوريدات البوتاسيوم ‎potassium chlorides‏ « © وسكر العنب» بولي إيثيلين جليكول ‎polyethylene glycol‏ والذوابات الأخرى. يمكن أن تحتوي التركيبات السائلة أيضاً على أطوار سائلة إضافة إلى وباستثناء الماء. أمثلة الأطوار السائلة الإضافية المذكورة الجلسرين والزيوت النباتية ‎Jie‏ زيت بذرة القطن, ومستحلبات تحتوي على الماء. ستعتمد كمية المركب الفعال المستخدم في تركيبات الخلية وفقاً للموصوف في الطلب الحالي والفعالة في علاج اضطراب أو حالة محددة على طبيعة الاضطراب أو الحالة, ويمكن تحديدها بواسطة ‎٠‏ التقنيات الإكلينيكية القياسية. الإعطاء والفعالية وفقاً لاستخدامها في الطلب الحالي, يتم استخدام المصطلحات "إعطاء, " "إدخال" و"غرس" بالتبادل في سياق وضع الخلايا, على سبيل ‎JE)‏ خلايا أولية لتكوين الدم, وفقاً للموصوف في الطلب الحالي في خاضع, بواسطة طريقة أو مسار ينتج عنه تحديد موضع ‎Sia‏ على الأقل للخلايا المقدمة في الموقع ‎١‏ المطلوب, مثل موضع الإصابة أو الإصلاح, بحيث ينتج التأثيرات المطلوب. يمكن إعطاء الخلايا على سبيل المثال خلايا أولية لتكوين الدم, أو الخلايا السليفة المتمايزة منها بواسطة أي مسار مناسب ينتج عنه التوصيل إلى الموقع المطلوب في خاضع حيث يظل جزء على الأقل من الخلايا المنغرسة أو مكونات الخلايا حياً. مدة حيوية الخلايا بعد الإعطاء إلى خاضع يمكن أن تكون قصيرة قدر بضع ساعات, على سبيل المثال, أربع وعشرين ساعة؛ بضعة ‎(ald‏ أو تدوم لعدة سنوات, أي, طعم طويل ‎٠‏ الأمد. على سبيل المثال, في بعض نماذج الجوانب الموصوفة في الطلب الحالي, يتم إعطاء كمية فعالة من خلايا أولية لتكوين الدم عن طريق المسار الجهازي للإعطاء, مثل في الغشاء البريتوني أو في الوريد . عند التقديم وقائياً, يمكن إعطاء خلايا أولية لتكوين الدم الموصوفة في الطلب الحالي إلى خاضع قبل أي عرض لاعتلال ‎usta sal)‏ على سبيل المثال, قبل التحول من 7 -جلوبين جنيني إلى على ‎CAR‏
CAE
‏نحو سائد 8 -جلوبين. وعلى هذا النحو, يعمل الإعطاء الوقائي لمجموعة خلية أولية لتكوين الدم‎ ‏على منع اعتلال الهيموجلوبين, وفقاً لما تم الكشف عنه في الطلب الحالي.‎ ‏عند التقديم علاجياً, يتم توفير خلايا أولية لتكوين الدم عند (أو بعد) بداية العرض أو مؤشر اعتلال‎ ‏الهيموجلوبين, على سبيل المتال, عند بداية مرض الخلية المنجلية.‎ ‏في بعض النماذج للجوانب الموصوفة في الطلب الحالي, يتم إعطاء مجموعة الخلية الأصلية لتكون‎ © ‏الدم طبقاً للطرق الموصوفة في الطلب الحالي وتشتمل على خلايا أولية لتكوين الدم خيقية تم الحصول‎ ‏عليها من واحد أو أكثر من المتبرعين. وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي, "خيفي" يشير إلى خلية‎ ‏أولية لتكوين الدم أو عينات حيوية تشتمل على خلايا أولية لتكوين الدم تم الحصول عليها من واحد أو‎ ‏أكثر من المتبرعين المختلفين من نفس الأنواع, حيث لا تتطابق الجينات في واحد أو أكثر من‎ ‏المواضع. على سبيل المثال, يمكن إعطاء مجموعة خلية أولية لتكوين الدم إلى الخاضع وتكون مشتقة‎ ٠ ‏من دم الحبل السري الذي تم الحصول عليه من واحد أو أكثر من المتبرعين الخاضعين غير ذي‎ ‏الصلة, أو من واحد أو أكثر من الأخوة والأخوات غير المتماثلين. في بعض النماذج, يمكن استخدام‎ ‏مجموعات خلية أولية لتكوين الدم تآزرية, مثل تلك التي تم الحصول عليها من الحيوانات المتماثلة‎ ‏وراثياً, أو من توائم متماتلة. في نماذج أخرى من هذا الجانب, تكون الخلايا الأصلية لتكون الدم خلايا‎ ‏يتم الحصول عليها أو عزلها من خاضع وإعطائها‎ pall ‏ذاتية المنشاً: بمعنى أن, الخلايا الأصلية لتكون‎ Vo ‏إلى نفس الخاضع, أي, المتبرع والمتلقي متشابهين.‎ , ‏للاستخدام في الجوانب المتتوعة الموصوفة في الطلب الحالي, كمية فعالة من خلايا أولية لتكوين الدم‎ ‏خلايا أولية لتكوين الدم,‎ ٠١١ x 5 ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١١ ‏على الأقل على‎ Jas ‏خلايا أولية مكونة للدم, على الأقل‎ ٠١ x 0 ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١7 ‏على الأقل‎ ‏خلايا‎ Veo ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ Veg xo ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١4 ٠
Adsl ‏خلايا‎ ٠١5 x ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل ؟‎ Yeo x Y ‏أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ‏خلايا أولية لتكوين‎ ٠١5 xo ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١5 x ‏لتكوين الدم, على الأقل ؛‎ ‏خلايا أولية لتكوين الدم,‎ Yeo xv ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١5 xT ‏الدم, على الأقل‎ ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على‎ Yeo x 9 ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ Yeo x A ‏على الأقل‎ ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١6 * Y ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١١ xy ‏الأقل‎ Ye x 5 ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١6 x ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل ؛‎ ٠١ 7 ‏؟‎ ‎CAR
—Ao—
Vel x 7 ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١6 xT ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠ ‏خلايا‎ Tx 9 ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ٠١١ x A ‏خلايا أولية لتكوين الدم, على الأقل‎ ‏أولية لتكوين الدم, أو مضاعفاتها. قد تكون الخلايا الأصلية لتكون الدم مشتقة من واحد أو أكثر من‎ ‏المانحين, أو يمكن الحصول عليها من مصدر ذاتي المنشاً. في بعض النماذج للجوانب الموصوفة في‎ ‏الطلب الحالي, يتم توسيع نطاق الخلايا الأصلية لتكون الدم في مستتبت قبل الإعطاء إلى خاضع في‎ 5 ‏حاجة إليها.‎ ‏في أحد النماذج, المصطلح 'كمية فعالة' وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي يشير إلى كمية مجموعة‎ ‏من خلايا أولية لتكوين الدم بشرية أو الخلايا السليفة لها المطلوبة للتخلص من عرض واحد على الأقل‎ ‏أو أكثر من أعراض اعتلال الهيموجلوبين, وتتعلق بكمية كافية من تركيبة لتوفير التأثير المطلوب,‎ ‏فعالة علاجياً”‎ Le ‏على سبيل المثال, علاج خاضع مصاب باعتلال الهيموجلوبين. يشير المصطلح‎ ٠ ‏تكون كافية‎ pall ‏عليه إلى كمية خلايا أولية لتكوين الدم أو تركيبة تشتمل على خلايا أولية لتكوين‎ SL ‏لتعزيز تأثير محدد عند الإعطاء إلى خاضع نمطي, مثل ذلك المصاب ب أو المعرض لخطر اعتلال‎ ‏الهيموجلوبين. يضم المصطلح كمية فعالة وفقاً لاستخدامه في الطلب الحالي أيضاً كمية كافية لمنع أو‎ ‏تأخير تطور عرض المرض, تبديل مسار عرض المرض (على سبيل المثال وليس الحصر, إبطاء‎ ‏تطور عرض المرض), أو قلب عرض المرض. ينبغي إدراك أنه في أية حالة محدد, يمكن تحديد‎ Ve ‏صحيحة بواسطة ذا المهارة العادية في المجال باستخدام التجارب الروتينية.‎ "dled ‏"كمية‎ ‏كما هو مستخدم هناء يشير المصطلح "إعطاء” إلى وضع تركيبة خلية جذعية لتكوين الدم وفقاً‎ ‏للموصوف في الطلب الحالي في خاضع بواسطة طريقة أو مسلك يترتب عليه تحديد موضع تركيبة‎ ‏على الأقل في الموقع المطلوب. يمكن إعطاء تركيبة الخلية بواسطة أي مسار مناسب‎ Lipa ‏الخلية‎ ‏علاج فعال في الخاضع, أي إعطاء ينتج عنه التوصيل إلى الموقع المطلوب في الخاضع‎ aie ‏ينتج‎ Yo ‏خلايا إلى‎ Ex) ‏حيث يتم توصيل جزء على الأقل من التركيبة التي تم توصيلها, أي على الأقل‎ ‏الموقع المطلوب لفترة من الزمن. تشتمل أوضاع الإعطاء على الحقن؛ التسريب»؛ التقطير» أو الابتلاع.‎ intramuscular ‏أو في العضلات‎ intravenous ‏ويتضمن "الحقن"؛ دون حصر؛ الحقن في الوريد‎ ¢ intraventricular ‏البطين‎ Jala ¢ intrathecal ‏القراب‎ Jala ¢ intra-arterial ‏داخل الشرايين‎ » ‏؛ عبر‎ intracardiac ‏القلب‎ Jala « intraorbital ‏؛ داخل الحجاج‎ intracapsular ‏داخل المحفظة‎ Yo « transtracheal ‏عبر الرغامى‎ « intraperitoneal ‏في الغشاء البريتوني‎ ¢ intradermal ‏الأدمة‎
“At ¢ intraarticular ‏المفصل‎ Jala ¢ subcuticular ‏تحت البشرة‎ ¢ subcutaneous ‏تحت الجلد‎ intraspinal ‏النخاع‎ Jala « subarachnoid ‏؛ تحت العنكبوتية‎ sub capsular ‏المحفظة الفرعية‎ intrasternal ‏القص والتسريب‎ Jala ‏والحقن‎ ¢ intracerebro spinal ‏الدماغي الشوكي‎ Jada » ‏لتوصيل الخلايا, يكون الإعطاء بواسطة الحقن أو التسريب مفصل‎ injection and infusion ‏عموماً.‎ © ‏في أحد النماذج, يتم إعطاء الخلايا وفقاً للموصوف في الطلب الحالي جهازياً. تشير العبارات"إعطاء‎ ‏"إعطاء محيطي"” وايتم إعطائه محيطياً” وفقاً لاستخدامه في الطلب‎ "les ‏جهازي, " 'يتم إعطائه‎ ‏الحالي إلى إعطاء مجموعة من خلايا أولية لتكوين الدم على نحو غير مباشر في الموقع المستهدف,‎ ‏في النسيج, أو العضو, بحيث يدخل, بدلاً من ذلك, في الجهاز الدوري للخاضع و, بالتالي, يكون‎ ‏عرضة للأيض والعمليات الأخرى.‎ ٠ ‏يمكن تحديد فعالية علاج يشتمل على تركيبة وفقاً للموصوف في الطلب الحالي لعلاج اعتلال‎ ‏الهيموجلوبين بواسطة الطبيب الإكلينيكي الماهر. مع ذلك, يعد العلاج "علاج فعال, " وفقاً لاستخدام‎ ‏المصطلح في الطلب الحالي, إذا تغيرت أي المؤشرات أو جميعها أو أعراض, كمثال واحد, مستويات‎ ‏0-جلوبين جنيني بطريقة مفيدة, وتحسنت أعراض أو مرقمات المرض المقبولة إكلينيكياً أو تم التخفيف‎ ‏عقب العلاج بالمثبط. يمكن قياس الفعالية أيضاً‎ 7٠١ ‏على سبيل المثال, بواسطة على الأقل‎ Lie YO ‏بواسطة فشل الفرد في التفاقم وفقاً للتقييم بواسطة العلاج في المستشفيات أو الحاجة إلى التدخلات‎ ‏الطبية (على سبيل المثال, توقف تطور المرض أو إبطائه على الأقل). طرق قياس هذه المؤشرات‎ ‏تكون معروفة لأولئك المهرة في المجال و / أو موصوفة في الطلب الحالي. يشتمل العلاج على أي‎ ‏علاج لمرض في فرد أو حيوان (تشتمل بعض الأمثلة غير الحصرية على إنسان, أو ثديي) وتشتمل‎ ‏التخفيف من‎ (Y) ‏تثبيط المرض, على سبيل المثال, إيقاف, أو إبطاء تطور الإنتان: أو‎ )١( ‏على:‎ Yo ‏المرض, على سبيل المثال, مما ينتج عنه تراجع الأعرض: و (7) منع أو خفض احتمال تطور العدوى‎ ‏أو الإنتان.‎ ‏يعمل العلاج وفقاً للاختراع الحالي على تحسين عرض واحد أو أكثر من الأعراض المصاحبة‎ ‏للاضطراب جلوبين-بيتا عن طريق زيادة كمية الهيموجلوبين الجنيني في الفرد. نمطياً تكون الأعراض‎ ‏الأنيمياء ونقص الأكسجين في‎ (JU ‏مصحوبة باعتلال الهيموجلوبين؛ بما في ذلك على سبيل‎ YO ‏الأنسجة؛ وقصور وظائف الأعضاءء» وقيم الراسب الدموي غير الطبيعية؛ وتكون كريات الحمراء غير‎
— A 7 —
الفعال» وعدد الكريات الشبكية (الكريات الحمراء) غير الطبيعي؛ وحمل حديد غير طبيعي ‎abnormal‏
‎iron load‏ » ووجود أرومات جانبية حلقية ‎sideroblasts‏ 9 ؛ وتضخم الطحال
‎impaired ‏؛ وتدفق الدم الطرفي الضعيف‎ hepatomegaly ‏وتضخم الكبد‎ « splenomegaly
‎increased ‏وانحلال الدم المتزايد‎ « dyspnea ‏؛ وضيق التنفس‎ peripheral blood flow
‎hemolysis ©‏ ؛ واليرقان ‎jaundice‏ ؛ وأزمات الألم المتعلقة بالأنيميا ‎pain crises‏ 306016
‏متلازمة الصدر الحادة ‎chest syndrome‏ 80016 ؛ والاحتجاز الطحالي ‎splenic‏
‎hand-foot ‏؛ وداء اليد والقدم‎ stroke ‏؛ والسكتة الدماغية‎ priapism ‏والقساح‎ « sequestration
‎.angina pectoris ‏والألم 7 متثل الذبحة الصدرية‎ syndrome
‏في أحد النماذج, يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم خارج الجسم الحي أو في المعمل مع حمض ‎DNA Vy‏ يستهدف إندونيوكلياز, ويتم إعطاء الخلية أو سليفتها إلى الثديي (على سبيل المثال, إنسان).
‏في نموذج إضافي, الخلية الأصلية لتكون الدم عبارة عن خلية لسلالة إريترويد. في أحد النماذج, يتم
‏إعطاء تركيبة تشتمل على خلية أولية لتكوين الدم تم تلامسها مسبقاً مع إندونيوكلياز يستهدف حمض
‎DNA‏ ومادة حاملة مقبولة صيدلانياً إلى تديي.
‏في أحد النماذج, يمكن استخدام أية طريقة معروفة في المجال لقياس الزيادة في التعبير عن ‎Vo‏ الهيموجلوبين الجنيني, على سبيل المثال, تحليل لطخة ‎Westen‏ لبروتين الهيموجلويين الجنيني
‏وتحديد كمية ‎TMRNA‏ لا-جلوبين جنيني.
‏في أحد النماذج, يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون ‎pall‏ مع إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ في
‏المعمل, أو خارج الجسم الحي. في أحد النماذج, تكون الخلية من أصل بشري (على سبيل المثال,
‏خلية ذاتية المنشاً أو غيروية المنشاً). في أحد النماذج, تتسبب التركيبة في زيادة في التعبير عن ‎٠‏ الهيموجلوبين الجنيني.
‏يمكن تعريف الاختراع الحالي في أي من الفقرات المرقمة أبجدياً التالية:
‏]1[ طريقة لإنتاج خلية أولية تشتمل على تعبير منخفض عن ‎MRNA‏ .118 801 أو البروتين,
‏تشتمل الطريقة على تلامس خلية أولية معزولة مع عامل يربط حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على
‎UCSC Genome ‏(طبقاً لتجميعة‎ 117 ,778 Tom A WITT ‏الكرموسوم 7 الموقع‎
_ A A —_
‎Browser hg 19‏ البشرية الجينومية), وبناءً عليه خفض تعبير ‎MRNA‏ أو البروتين عن 11 ‎BCL‏
‎A
‏[ب] طريقة لإنتاج خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة تشتمل على تعديل جيني واحد على الأقل تشتمل
‏على تلامس خلية معزولة مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف © حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي
‏بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم
‏" الموقع 60, ‎Tem AS YT‏ 748ل7, 117 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه.
‏[ج] الطريقة وفقاً للفقرة )| أو [ب], حيث خلية أولية معزولة أو خلية معزولة تكون خلية أولية لتكوين
‏الدم.
‎٠‏ [د] الطريقة وفقاً للفقرة [ج], حيث الخلية الأولية لتكوين ‎pal‏ تكون عبارة عن خلية لسلالة إريثرويد. ‎[a]‏ الطريقة وفقاً للفقرة [آ] أو [ب], حيث خلية أولية معزولة أو خلية معزولة تكون خلية جذعية مستحثة متعددة القدرات.
‏[و] الطريقة وفقاً للفقرة [ج], حيث يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم خارج الكائن الحي أو في المعمل.
‎Ve‏ ([ز] الطريقة وفقاً ‎GY‏ الفقرات [آ]-[و], حيث تعديل جيني واحد على الأقل يكون حذف.
‏[ح] الطريقة وفقاً للفقرة [ز], حيث يتخلص الحذف من المنطقة بالكامل بين الكرموسوم ؟ الموقع 60, 7 , 0-184 1, 774, 117 أو يتخلص من جزء من المنطقة مما ينتج عنه مقاطعة واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل 1 ‎.(DHS) DNAse‏
‏[ط] خلية بشرية مهندسة وراثياً معزولة تشتمل على تعديل جيني واحد على الأقل في الكرموسوم ؟
‎٠‏ الموقع ‎YA Tem A TT‏ 117 وفقاً للفقرات [ب]-[ح]. [ي] تركيية تشتمل على ‎WA‏ بشرية مهندسة وراثياً معزولة من الفقرة [ط].
‏[ك] طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في خلية, تشتمل الطريقة على خطوات: تلامس خلية معزولة مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل ‎CAR‏
‎A q —_‏ _ تعبير يحمل متوالية التشفير لإندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع ‎Cie‏ ‎LYYA LTS YAR 7‏ 117 ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الخلية المذكورة, أو سليفتها, بالنسبة إلى الخلية المذكورة قبل ‎oo‏ التلامس المذكور. [ل] الطريقة وفقاً للفقرة [ك], حيث الخلية المعزولة تكون خلية أولية لتكوين الدم. [م] الطريقة وفقاً للفقرة [ك] أو [ل], حيث الخلية الأصلية لتكون الدم تكون خلية لسلالة إريثرويد. أن] الطريقة وفقاً للفقرة [ك], حيث الخلية المعزولة تكون خلية جذعية مستحثة متعددة القدرات. [س] الطريقة وفقاً للفقرة [ل] أو ‎[a]‏ حيث يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم خارج الجسم الحي أو ‎Yo‏ في المعمل. [ع] ‎The‏ طريقة وفقاً لأي الفقرات [ك]-[س], حيث يكون التعديل الجيني الواحد على الأقل حذف. [ف] الطريقة وفقاً للفقرة [ع], حيث يتخلص الحذف من المنطقة بالكامل بين الكرموسوم ؟ الموقع ‎٠١‏ , 7 , 0-144 1, 774, 117 أو يتخلص من جزء من المنطقة مما ينتج عنه مقاطعة واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل 1 ‎.(DHS) DNAse‏ ‎VO‏ [ص] طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين الجنيني في ثديي في حاجة إليه, تشتمل الطريقة على خطوات تلامس خلية أولية معزولة مكونة للدم في الثديي المذكور مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز يستهدف حمض ‎lly DNA‏ بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي للخلية على الكرموسوم ؟ الموقع 10, ‎WT‏ كاحت ‎LYYA‏ 17 ‎٠‏ ويتسبب في تعديل جيني واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين الجنيني في الثديي المذكور, بالنسبة إلى التعبير قبل التلامس. يتم توضيح الاختراع علاوة على ذلك بواسطة الأمثلة التالية التي ينبغي عدم اعتبارها مقيدة. يتم إدراج محتويات جميع المراجع المستشهد بها على مدار هذا التطبيق, وكذلك الأشكال والجدول في الطلب الحالي كمرجع. ‎CAR‏
‎q «=‏ — المتال اكتشف المخترعون وقاموا بوصف العناصر التظيمية للجين 80111 والتي تعتبر حاسمة في التعيير عنه في سلالة خلايا الكريات الحمراء. ترتبط البدائل الجينية الشائعة ضمن هذه المتواليات بمستوى الهيموجلوبين الجنيني وشدة اضطراب بيتا - جلوبين. تشتمل هذه المتواليات على عناصر © تنظيمية بعيدة ببصمة كروماتين معزّزة؛ حيث تضم كروماتين يمكن الوصول إليه؛ علامات هيستون نشطة؛ والإشغال بواسطة عوامل نسخ الكريات الحمراء. تتفاعل هذه العناصر مع معزّز 80611178 وتعزز التعبير الجيني في خلايا الكريات الحمراء لكن ليس السلالات الأخرى التي تعبر عن ‎BCL11A‏ مثل الخلايا اللمفية 8. ويمكن استهداف هذه العناصر النتظيمية لأغراض ‎Ladle‏ ‎BCLITA layin‏ واعادة حث الهيموجلوبين الجنيني . يمكن أن يتم هذا بأليات لا تقتصر على التعديل ‎٠‏ الجينومي»؛ ربط الأحماض النووية أو البروتينات» والتعديل بالتخلق المتوالي. تضم مزايا هذه الطريقة : قطع عامل تنظيم فسيولوجي لمستوى الهيموجلوبين الجنيني مما يؤدي إلى زيادة إنتاج جاما-جلوبين وخفض إنتاج بيتا - جلويين؛ أدنى أثر على إجمالي خرج الجلويين أو على إنتاج خلايا الدم الحمراء أو وظيفتها؛ الحد من الأثر الذي يقع على الخلايا خارج سلالة الكريات الحمراء ومن ثم تقليل السمية المحتملة. ‎Vo‏ المواد والطرق مزارع الخلايا تم الحصول على خلايا +6034 بشرية من دم طرفي مسال لمانحين أصحاء من ‎Centers of‏ ‎Excellence in Molecular Hematology at Yale University, New Haven,‏ ‎Fred Hutchinson Cancer Research Center, Seattle, Connecticut ‏تم إخضاع الخلايا لإنضاج الكريات الحمراء خارج جسم الكائن الحي باستخدام‎ Washington ٠ ‏بروتوكول مزارع سائلة خالية من المصل ثثائية الطور على النحو المبين فيما سبق (79). تم الحصول‎
Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) ‏على خلايا أحادية النواة من الدم الطرفي‎ ‏من مانحين أصحاء من ‎Children’s Hospital‏ 805100. تم إجراء تمايز الكريات الحمراء من ‎PBMCs‏ النحو المبين في السابق (40). تمت زراعة ‎WIA‏ ابيضاض الدم الاحمراري في ‎Yo‏ الفثران ‎Mouse erythroleukemia (MEL)‏ و7957 خلية ‎T‏ على النحو المبين في السابق ‎(V9)‏
‏(المشتقة‎ v-Abl ‏تمت زراعة خلايا لمفاوية جرذية سابقة على الخلايا 8 محوّلة بشكل ثابت بواسطة‎ « penicillin—streptomycin ‏زائد 707 بنسيلين -استريبتومايسين‎ RPMI ‏كما هو مبين ))£(( في‎ sodium ‏بيريوقات الصوديوم‎ 7١ ‏أحماض أمينية غير أساسية؛‎ 72١ (HEPES 77 (FCS 5 ‏ميكرومولار 8 -ميركابتو إيثتانول‎ ٠٠١١و‎ 9ا01800176نيماتولج-‎ انن١‎ » pyruvate .mercaptoethanol ©
DNase ١و‎ ChIP ‏حساسية‎ ‎.)39( ‏تم إجراء الترسيب المناعي للكروماتين وتحديد المتواليات الموازي بشكل هائل على النحو المبين‎
H3K4me3 «(£¢4 - «Vv Millipore) 13/270083 : ‏تم استخدام الأجسام المضادة التالية‎ «Abcam) 132786 (ab8895 Abcam) H3K4mel (vie - .¢ Millipore) «(sc-899 (Santa Cruz «Polll) Polymerase ١١ ‏إنزيم بوليميراز‎ RNA ((ab4729 | ٠ ‏تم تحديد كثافة‎ .)50-12984 «Santa Cruz) TALL, ) abl1852:Abcam)GATA1 ‏تم‎ «ChIP-gPCR ‏وتم تحليلها على النحو المبين في السابق (47). بالنسبة ل‎ DNase | ‏انقسام‎ ‏تم‎ ACH ‏من كروماتين مُدخل بطريقة‎ 7 ١ ‏مع‎ CHIP ‏تحديد الإثراء النسبي بمقارنة تكبير مادة‎ ‏و‎ GATAL ‏استخدام المواضع المسجلة في السابق باعتبارها مشغولة وغير مشغولة بواسطة‎ (79) ‏11ظاكمواد مقارنة موجبة وسالبة على الترتيب‎ ٠ (3C) Chromosome ‏توافق الكروموسومات‎ Jalil ‏على النحو المبين في السابق )¥9( باستثثناء ما هو موضح أدناه. تم اهتضام‎ 3C ‏تم إجراء اختبار‎ formaldehyde ‏الأنوية من مواد منتجة للكريات الحمراء بشرية أولية مرتبطة تشابكياً بالفورمالديهايد‎ ‏كمي في الزمن الفعلي‎ PCR ‏قبل الربط وعكس الروابط التشابكية. وتم إجراء‎ Hind ‏باستخدام‎ ‏تم استخدام شظية محتوية‎ .)0 ١7. (Bio-Rad) iQ SYBR Green Supermix ‏باستخدام‎ ٠ ‏يتعلق بكفاءة التكبير للبادئات المختلفة؛ تم‎ Lad ‏على معزّز 801117 كمنطقة تثبيت. للتصحيح‎ ‏تحضير قالب مقارنة باهتضام وربط خليط مولاري متكافئ من اثنين من الكروموسومات الصناعية‎ 501118 ‏المشتملة على موضع‎ bacterial artificial chromosomes (BACs) ‏البكتيرية‎ ‎CTD-) ‏-جلوبين بشري‎ J ‏وواحد من‎ (RP11-139C22 5 RP11-606L8) ‏البشري الكامل‎ -١١ ‏وكان التفاعل بين الشظايا في 1151/1152 و 1153 من منطقة مقارنة موضع‎ .)3055511 © qv
LCR ‏كعينة مقارنة. تم التعبير عن تكرار التفاعل كتكبير بالنسبة لتفاعل‎ (LCR) ‏جلوبين البشري‎
BAC ‏المعروف» مقرباً إلى قالب مقارنة‎ ‏موضع /806111 للتخطيط المنفّح‎ 861118 ‏الثلاثة من إنترون ؟ ل‎ DHSS ‏كافة الإحداثيات) من بين‎ hg19) ‏تم اختيار العلامات‎ - Te ‏له (عع كت ل‎ (AT ‏خالا‎ Te ‏كح‎ YY ‏من النوع +17 (2نو: عت‎ ©
YY ‏تم التعرف على‎ (AE VY Te — AY YY EL :chr2) ‏5ه‎ + (ve RARE AR (CEU) ‏علامة من قاعدة بيانات مشروع الألف جينوم باستخدام مجموعات مرجعية من شمال أوروبا‎ 055110135 ‏بديل إضافي في‎ YA ‏(جدول 51). جد‎ (ASW) ‏والأفارقة الأمريكان‎ (YRI) ‏نيجيريا‎ ‏من‎ DNA ‏في‎ DHS ‏لثلاثة فواصل‎ Sanger ‏قام المخترعون بتحديد المتواليات بكيمياء‎ L(Y ‏(جدول‎ ‏نتسم‎ CSSCD ‏من مجموعة‎ (SCD) ‏و1؟ من مرضى مصابين بمرض الخلايا المنجلية‎ OY Yo ‏على الترتيب. من جهد تحديد‎ (HBF ‏ومنخفضة (أقل من 77) من‎ (ZA ‏بمستويات عالية (أكبر من‎ ‏المتواليات هذاء تم تحديد سبع بدائل متواليات جديدة (جدول 7). ولأن معظم العلامات تتكتل في‎ 676 ‏فواصل جينومية صغيرة؛ لم يكن ممكناً تصميم اختبارات لتحديد الأنماط الجينية لبعضها. من بين‎ ‏تم إجراء اختبارات تحديد النمط الجيني ل‎ (DHSS ‏غير تكراري يتم التعرف عليها في ثلاثة من‎ Jay ‏علامة في 1,717 مشارك من 655©60؛ يمتلون مجموعة 5060 من الأفارقة الأمريكان‎ 46 5 ‏تم تحديد‎ .)7١( ‏لديهم معروفة‎ HOF ‏الخاص بهم ومستويات‎ (DNA) ‏المتاح /1ا0الجينومي‎ ‏تم استبعاد الأفراد وبدائل متواليات‎ . 569080007 IPLEX ‏الأنماط الجينية للعلامات باستخدام منصة‎ ‏نجاح في تحديد النمط الجيني أقل من 90 7. بلغت النسبة الإجمالية لتوافق الأنماط‎ Jaze DNA ‏في جدولي‎ (YA =n ¢QC) SNPs ‏يتم بيان التحكم في جودة مرور‎ .7٠٠0 ‏الجينية من نسخ ثلاثية‎ ‏أ و١١ ب أسفل 00155 الثلاثة. ويعتبر جزء كبير‎ ١١ ‏و" ويتم توضيح ذلك تخطيطياً في شكلي‎ * Yo ‏محددة الأنماط الجينية نادراً في المجموعات المرجعية ومن ثم تكون بشكل غير مثير‎ SNPs ‏من‎ ‎SNPS ‏بقي 178 فرد و١7 من‎ «QC ‏بعد‎ .)١8- 0( CSSCD ‏للدهشة أحادية الشكل في‎
AEF 04) ‏على النحو المبين في السابق‎ HPF ‏متعددة الأشكال للتحليل. تمت نمذجة مستويات‎ ‏أكبر من )1( باستخدام >ال510(؟؛) من خلال‎ MAF) ‏إجراء الربط وتحليلات التهيئة لبدائل أحادية‎ ‏من‎ ST MAF) ‏الارتداد الخطي تحت نموذج جيني يتميز بالإضافة. كشفت تحليلات البدائل الشائعة‎ Yo
X 1,79 =P ( HbF ‏تمتع بأقوى مستوى ارتباط ب‎ DHS +62 ‏عن أن 51427407 في‎ (7)
CAR
او 0-0 شكلي ‎١١‏ أ و ب). أظهرت تحليلات التهيئة أنه بعد التهيئة على 251427407 و57606173 لم تكن أية ‎SNPs‏ أخرى ذات بال (شكل ؟ ب). أدى تعديل المكونات الأساسية ‎(PCs)‏ على ‎Aco‏ فرداً متاح بيانات تحديد النمط الجيني على مستوى الجينوم لديهم لتعويض الاختلاط وغير ذلك من حالات الاندماج إلى نتائج متماثلة. © بالنسبة للبدائل النادرة ومنخفضة التكرار ‎MAF)‏ أقل من 0 7( قام المخترعون تحليلات على أساس المجموعات باستخدام كل من 62+ ‎(DHSS‏ 58+ و55+ الثلاثة كوحدة اختبار. لهذه التحليلات؛ استخدمنا برنامج )45( اختبار ربط أنوية المتواليات ‎(SKAT-0)‏ بالمتغيرات الافتراضية. اختار المخترعون قيمة 0 7 الحدية ل ‎MAF‏ من أجل تعظيم القدرة الإحصائية في ضوء حجم عيننتا المحدود؛ لكن لاحظ أنه تم أيضاً تحليل العلامات التي لها ‎MAF‏ بين 71 و75 في تحليلات البدائل ‎٠‏ الأحادية المبينة أعلاه.يتم تبرير هذا التراكب في البدائل باستخدام تحليلات التهيئة بالبدائل الشائعة المرتبطة على حدة بمستويات ‎(HBF‏ وجد أن هناك مجموعتان هامتين ‎(fleas)‏ تحديداً 62+ ‎DHS‏ ‏و55+ ‎(DHS‏ لكن بعد التهيئة على 151427407 و57606173؛ لم تعد النتائج هامة ‎laa‏ ‏بشكل يوحي بضعف ‎LD‏ بين البدائل نادرة/ منخفضة التكرار و5005 الشائعة (جدول ©( لم يجد المخترعون دليلاً على أن بدائل المتواليات النادرة ومنخفضة التكرار في 01155 ‎BCL11A‏ تؤثر على ‎V0‏ مستويات ‎HBF‏ في من يعانون من ‎(SCD‏ على الرغم من إعادة تحديد المتواليات بواسطة ‎Sanger‏ ‏ل 01155 هذه في ‎AA‏ خاضع للعلاج يعانون من النمط الظاهري الشديد ل ‎HOF‏ ‏نسب تكرار النمط الفردي من 51427407-57606173) في ‎CSSCD‏ هي: 1-6 4.5 1-717 ‎.777,١ 6-6 147,2 6-06 6‏ متوسط مستوى ‎HOF‏ عبارة عن 74.8 ‎).٠050(‏ في ‎7١١‏ من أفراد 6-6 ‎r81427407-rs7606173‏ املا ( 5050 ) في ‎Yo£ ٠‏ من اللواقح المخالفة من ‎rS1427407-rs7606173 T-G/G-T‏ و١211,7‏ ( 7750) في 60 من أفراد 1-6 ‎rS1427407-rs7606173‏ (شكل 7 ج). لمقارنات مستويات ‎HOF‏ بين الأنماط الجينية؛ تم تحديد قيم © بواسطة اختبارات ستيودينت تي أحادية التذييل. تحديد النمط الفردي الجزيئي لاثنين من ‎SNPS‏ متغايرة اللاقحة على نفس الكروموسوم؛ هناك طوران محتملان: ‎Blab‏ حم ‎Yo‏ (النموذج ‎)١‏ و5/8-8-م (النموذج ‎(Y‏ ل ‎SNPs‏ في شظية ‎١١‏ كيلو قاعدة من إنترون ‎IY‏ ‎CAR‏
18 ا80من + ‎oY,‏ - 144 كيلو قاعدة؛ تم تحديد الطور باستتساخ منتجات ‎PCR‏ وتحديد determine phase 57569946 ‏ولتحديد طور الأليلين‎ (SNP ‏التوزيع المشترك ل‎ dav ‏دمج‎ PCR ‏كيلو قاعدة على الكروموسوم ؟)» تم إجراء‎ Vo) ‏ا(االمفصولين بواسطة‎ 7 ‏الدمج منطقتين‎ PCR ‏المستحلب على النحو المبين في السابق (74؛ 75) مع تعديل بسيط. يجلب‎ ‏معنيتين» من أجزاء منفصلة من نفس الكروموسوم؛ معاً في منتج واحد. بإحراء التفاعل في المستحلب‎ © ‏بقطيرات دقيقة مائية محاطة بالزيت؛ يتم اشتقاق تفوق منتجات التكبير من جزيء أحادي القالب. كان‎ ‏غير متجانسي اللواقح بشكل مزدوج بالنسبة ل 57569946 و‎ aed ‏من أفراد معروف‎ esa lIDNA ‏التالي (بالتركيزات النهائية المبين): . إنزيم‎ 100 18١ تالعافتلا ‏مث قالباً في‎ 7
KOD ‏,لا 14)؛ المحلول المنظّم‎ Novagen, 71086) KOD Hot Start ‏بوليميراز 8لا0 ل‎ ‎MgSO4 (1X) Ve.‏ (١5,_مللي‏ مولار)ء ‎A oY) dNTPs‏ مولار لكل منها)؛ بادئات ‎SFr) 187569946-R ‏لكل منهما)؛ بادئات‎ i&M Y) rS1427407-R 457569946-F ‏مولار)؛‎ $Y) rs7569946-R-reveomp-rS1427407-F ‏مولار)؛ بادئة التجسير الداخلية‎ ‏نانوجم). تمت إضافة التفاعل المائي |8 100 بالتتقيط مع التقليب إلى طور‎ Yeo) gDNA ‏الزيت ا8أ 200 لتكوين مستحلب. تم تكبير جزئين 0&1 125 من المستحلب تحت الظروف التالية : ‎Vo ‏ثانية؛‎ Ve ‏درجة‎ Ve ‏ثواني؛‎ ٠١ ‏درجة‎ Te ‏ثانية؛‎ Ye ‏درجة دقيقتين؛ £0 دورة من 15 درجة‎ 40 VO ‏متداخل في25‎ PCR ‏ل‎ Hexane ‏اندماج مستخلص بالهكسان‎ PCR ‏درجة دقيقتين . تم إخضاع منتج‎ ‏محلول‎ ¢(0.5 U) KOD Hot Start ‏ل‎ Polymerase DNA ‏اا كما يلي : إنزيم بوليميراز‎ ‏مللي مولار لكل منها)؛‎ +,Y) dNTPs ‏مولار)؛‎ Ak ,5( 109504 ‏(©17)؛‎ KOD ‏من‎ alii (Logie ‏نانو مولار لكل‎ Yoo) 1S1427407-nested-R ; rs7569946-nested-F ‏البادئتين‎ ‏ثانية؛‎ ٠١ ‏دورة من 90 درجة‎ YO ‏نانولتر)؛ 40 درجة دقيقتين؛‎ VO) ‏اندماج مستخلص‎ PCR ‏منتج‎ ٠ ‏المنتج المتداخل با لاستشراد‎ ash ‏درجة دقيقتين. تم‎ Ve ‏ثانية؛‎ Fe ‏درجة‎ Ve ‏ثواني»‎ ٠١ ‏درجة‎ ٠ ‏_لتكوين نطاق أحادي بالحجم المتوقع. تم‎ agarose ‏في جل أجاروزا©9‎ electrophoresis es!
Life Technologies, ) Zero Blunt PCR Cloning ‏استنساخ المنتج المنقٌّى بمجموعة أدوات‎ ‏لنواتج التكبير بالاندماج إلى تحديد نسائل ؛‎ Sanger ‏أدى تحديد المتواليات بطريقة‎ L(K2700-20 ‏؛ © و8-8. تم حساب احتمال كل طور على أساس افتراض توزيع‎ a-bA-B: ‏متواليات ممكنة‎ YO ‏متعدد الحدود (جدول 1). تم حساب نسبة احتمال التصميمين كمقياس للأهمية الإحصائية لنموذج‎
اج ‎q‏ _ النمط الفردي بمطابقة البيانات ‎١‏ (مقارنة بالنموذج. ؟). توحي النسبة التي تقترب من ما لا نهاية بالنموذج ١ء‏ وتوحي نسبة عبارة عن ‎١‏ بالتوازن وتوحي نسبة تقترب من الصفر بالنموذج 7. تحديد المتواليات الحراري تم فحص مانحي خلايا +0034 أصحاء للتعرف على خمسة مانحين متغايري اللواقح بالنسبة ل © 51427407. تم إخضاع خلايا +0034 هذه لتمايز الكريات الحمراء خارج جسم ‎BEY‏ الحي. وتم عزل الكروماتين واجراء ‎ChIP‏ بالأجسام المضادة ‎GATAL‏ و1811 . تم إخضاع كروماتين ‎JA‏ ‏مقارنة ‎sales‏ 67/1 أو ‎TALL‏ المترسبة لتحديد المتواليات الحراري من أجل تحديد التوازن الأليلي ل 14277407 ‎.rS‏ ثم فحص مانحي ‎CD34+‏ أصحاء للتعرف على ثلاثة مانحين متغايري اللواقح بالنسبة للنمط الفردي من0/1-6-© 57606173--51427407. تم إخضاع خلايا +0034 ‎٠‏ هذه لتمايز الكريات الحمراء خارج جسم الكائن الحي. تم ‎(CDNA) Zaidi DNA glad)‏ و هلا 0 ولتحديد المتواليات الحراري من أجل تحديد التوازن الأليلي ل 157569946 كانت ظروف ‎PCR‏ كما يلي : خليط ‎2X ١11015181180‏ الرئيسي ‎(Qiagen)‏ 47 ١٠):012واا‏ (تركيز نهائي “ مللي مولار)» ‎DNA‏ القالب ‎(ans 1-0,١(‏ وبادئات أمامية وعكسية معالجة ببيوثين خاصة = ‎Yeo ) SNP‏ نانو مولار لكل منها ( . وكانت ظروف دورات ‎PCR‏ كما يلي : ‎١5 40/941 ١٠‏ دقيقة؛ ‎fo‏ دورة من ؛ م ‎٠‏ ثانية؛ ‎٠‏ م ‎٠‏ ثانية؛ "لام ‎٠‏ ثانية؛ ‎a VY‏ ° دقائق. تمت معالجة بادئة واحدة من كل زوج من ببيوتين ‎(biotinylated‏ وتم ربط جديلة منتج ‎PCR‏ ‏المحتوية على البادئة المعالجة ببيوتين بخرزات استريبتاقيدين ‎streptavidin beads‏ ودمجها مع بادئة تحديد متواليات معينة. تم تحديد متواليات ‎DNA‏ أحادي الجديلة المحضّر وتم تحليل نمطه الجيني باستخدام ‎(Qiagen Pyrosequencing) PSQ96 HS System‏ وفقاً لتعليمات الجهة ‎٠‏ المصتئعة. الفئران المحورة وراثياً تم الحصول على التركيبة المبلغة المعزّزة ‎pWHERE-Dest‏ من دكتور ‎William Pu.‏ معدّلة من ‎(Invitrogen, pwhere)pWHERE‏ على النحو المبين في السابق )£7( حيث تحتوي التركيية على بديل 1119 جرذي يحيط ‎lacZ Jus‏ 6086-1468 مشتق بالحد الأدنى من 15068 الأدنى ‎YO‏ معزّز باستخدام شريط وجهة ‎Gateway‏ عند ‎MCS‏ القبلي. تم تكبير الشظايا المعززة من ‎IDNA‏ ‎OY AY‏
— أ ‎q‏ — فأري؛ وتمت إعادة دمجه في ناقل ‎(Invitrogen, 12536-017) pDONR221‏ بواسطة إنزيم ‎BP‏ ‏كلوناز ‎(Invitrogen, 11789020) clonase‏ وتمت إعادة دمجها في ناقل ‎PWHERE-Dest‏ ‏مع إنزيم ‎LR‏ كلوناز )11791020 ‎(Invitrogen,‏ .25 اهتضام البلازميدات باستخدام ‎Pacl‏ لإزالة السلسلة الرئيسية للناقل. تمت تتقية شظايا ‎lacZ‏ المبلّغة المعزّزة بالاستشراد الكهربي خلال الجل ثم تم © تركيزها ‎(Promega, A7280) Wizard DNA Clean-Up System‏ تم توليد الفئران المحورة وراثياً بالحقن بطليعة النواة في بويضات 1/8 مخصبة. تم استخدام حوالي ‎٠١‏ نانوجم/ ميكرولتر من محلول ‎DNA‏ لسلسلة من الحقن. تم استخدام ‎aly‏ 60-1 كأفراد متلقية للأجنة المحقونة. تم إخراج أجنة أعمارها بين 14,0 16,05 يوماً منذ تاريخ الحقن من الأمهات البديلة مع إجراء التبقيع الكامل والنسيجي ب ‎X-gal‏ على النحو المبين في السابق (17). تم بشكل مضاد ‎ads‏ عناصر التدويم ‎٠‏ الخلوي المبقعة ب ‎X-gal‏ باستخدام ‎.(Vector Laboratories, H-3403) Nuclear Fast Red‏ تم استخدام التذييلات لتحديد النمط الجيني ل ‎PCR‏ تمت إجازة إجراءات الحيوانات بواسطة ‎.Children’s Hospital Instititutional Animal Care and Use Committee‏ اختبار تعزيز المواد المنتجة للكريات الحمراء البشرية تم استتساخ شظايا ‎DNA‏ الجينومية المحتوية على عناصر معزَّزة مفترضة إلى ‎pLVX-Puro‏ ‎J# (Clontech, 632164) ٠‏ أدنى ‎TK 332s‏ وجين ‎am GFP‏ على النحو المبين (79). تمت إصابة 97 خلية ‎T‏ باستخدام عامل التفاعل ‎(Promega, E2691) FuGene6‏ وفقاً لبروتوكول الجهة المصنّعة. تم تغيير الأوساط بعد 4 7 ساعة وسط ‎SFEM‏ مزوّد ب 77 بنسيلين-استريبتومايسين ‎penicillin-streptomycin‏ « وبعد ‎١‏ ساعة؛ تم تجميع المادة الطافية وتم ترشيحها. تم حث مزارع الكريات الحمراء المشتقة من خلايا +6034 باستخدام القيروس البطيء في يومي التوسع ؛ وه ‎٠‏ بالعدوى الدورية على النحو المبين في ‎(FA) Glad)‏ تمت إعادة تعليق الخلايا في أوساط تمايز الكريات الحمراء بعد ‎YE‏ ساعة من العدوى الثانية. بدأ الانتقاء باستخدام بيرومايسين ‎١ PUrOMYCIN‏ ميكرو جم/ مل بعد 8؛ ساعة من العدوى. تم تحليل الخلايا المستحثة بعد خمسة ‎ald‏ في أوساط التمايز بقياس التدفق الخلوي لمتوسط شدة التألق الفلوري ل ‎GFP‏ ‏قياس التدفق التدفق الخلوي ‎oY AY‏
_qy_ 7-AAD, BD Pharmingen, ) aminoactinomycin ‏نا‎ -١ ‏تم فتح الخلايا الحية باستبعاد‎ ‏تم عزل معلقات نخاع العظم (للأرومة الحمراء) والطحال (للخلية اللمفية) من صغار‎ ..)5 ‏البالغة. بعد الانحلال منخفض الضغط لخلايا الدم الحمراء الناضجة؛ تم فرز‎ Uy ‏الفئران المحورة‎ «(BD, 550992( biotin-CD71 ‏على أساس التبقيع باستخدام‎ (7-AAD-) ‏الخلايا الحية‎
CD19-APC (BD, 553673) Ter-119-PE (BD, 554067) APC - streptavidin © ‏و‎ CD19+ «CD71+Ter119+ ‏تم فرز‎ .(BD, 100308) CD3-PE ‏أو‎ (BD, 550992)
RNA ‏+003من المجموعات المستخدمة باستخدامها في التدويم الخلوي وعزل‎
TALEN ‏الحذف الكروموسومي بفعل‎ ‏لإحداث انقسامات في‎ (TALENS) ‏تم تصميم إنزيمات نيوكلياز المؤثّرة الشبيهة بمنشط النسخ الوراثي‎ ‏الإنترون ؟ من 801118 الفأري في موضعي 64 00 كيلو قاعدة (يطلق عليه الموضع 5( و‎ ٠ : ‏على المتواليات التالية‎ TALENS ‏(الموضع 37( بالنسبة ل 155. تتعرف‎ sacl ‏كيلو‎ 0,4+ ‏أيمن)؛‎ 5°) CCATGCCTTTCCCCCCCT( ‏ه66 ههه 5011/0866 يسار‎ 61 ‏أيسر). تم‎ 3:( CTGACTAATTGATCAT ‏أيسر)ء‎ 3°)GAGTTAAAATCAGAAATCT ‏!8لا للتعرف على 6. تم‎ RVD ‏باستخدام‎ (£4) Golden Gate ‏تخليق 181115 باستتساخ‎ ‏بنطاق إنزيم‎ (Invitrogen, V790-20)pcDNA3.1 ‏المخلّقة في‎ DNA ‏استتساخ نطاقات ربط‎ Vo ‏؛ نطاق 8152 في الطرف لا ونطاق 63+ في الطرف © المبين في السابق‎ Fokl nuclease 0.5 89 0012*670 ‏الأربعة مع‎ TALEN ‏تم توصيل 89 2.5 من كل من البلازميدات‎ .(£9) ‏سابقة على 8 بالاستشراد الكهربي وفقاً لبروتوكول الجهة‎ WDA ‏أو‎ MEL Voix ‏إلى ؟‎ (Lonza)
EA ‏بقياس التدفق الخلوي بعد‎ GFP ‏تم فرز الخلايا الموجبة ل‎ .)10028, VCA-1005) ‏المصنّعة‎ ‏ساعة. تم اسنتبات الخلايا بالحد من التخفيف في أطباق مكونة من 96 عيناً لعزل النسائل الفردية.‎ Yo ‏ل 9011/8 لاكتشاف تكبير منتج قصير من موضع سابق‎ PCR ‏بينت النسائل التي تم فحصها بواسطة‎ ‏على الموضع ”5 وموضع تال على الموضع ”3 حذف القطاع المقحّم. تم إخضاع النسائل أحادية‎ ‏للحصول على نسائل محذوفة ثنائية الأليل. تم‎ TALEN ‏الأليل المحذوفة لدورة ثانية من الحذف بفعل‎ ‏من الشظية المحذوفة. بلغ‎ ual ‏التعرف على النسائل التي بها حذف ثنائي الأليل باكتشاف غياب‎
DNA ‏اهتضام‎ 235. Southem ‏أليل. تم التحقق من الحذف بتبقيع‎ ٠٠ ‏تكرار الحذف تقريباً واحداً في‎ Yo ‏قبل الموضع‎ gDNA ‏من‎ Ss) 561-50 probe jl ‏ويتم تهجين‎ ¢Bmtl ‏الجينومي باستخدام‎
CAR
Cap
5°( إلى شظية 3,76 كيلو قاعدة من الأليل غير المعالج وشظية ‎AQ‏ كيلو قاعدة من أليل-50.4م
4 المحذوف.
1-005 والتبقيع المناعي
تم ‎RNA (ie‏ بأعمدة ‎(Qiagen, 74106) RNeasy‏ النسخ العكسي باستخدام مجموعة أدوات iQ SYBR Green ‏باستخدام‎ qPCR (Bio-Rad, 170-8890) cDNA ‏لتخليق‎ iScript ©
‎(Bio-Rad, 170-8890)Supermix‏ والتبقيع المناعي على النحو المبين ‎L(Y)‏ بالنسبة لجينات
‏التكتل ١١-جلوبين‏ الفأري يتعرف زوج بادئات مشترك على جلوبينات ‎١“‏ البالغة من النوعين ‎VY‏
‏و١١‏ بينما تتعرف بادئات مستقلة على جلوبينات ‎١١“‏ من النوعين ‎13H 5 ey‏ تم استخدام الأجسام
‎Santa Cruz, ) GAPDH (Abcam, ab19487) 58011178 : ‏المضادة التالية للتبقيع المناعي‎ .)50-25778 ٠
‏النتائج
‏أدت دراسات الربط الشاملة للجينوم ‎(GWAS)‏ إلى التأكد من البدائل الجينية المتتوعة المرتبطة
‏بالسمات؛ والتي كثيراً ما يكون موقعها في ‎DNA‏ التتظيمي. ولقد خضعت النظرية القائلة بأن التباين
‏التتظيمي يمكن أن يفسر القابلية للوراثة بدرجة كبيرة لتقييم تجريبي ضئيل. هنا يظهر المخترعون أن ‎Ls Vo‏ جينياً شائعاً في ‎BCLITA‏ مرتبط بمستوى الهيموجلوبين الجنيني ‎(HPF)‏ يبين متواليات غير
‏تشفيرية مزينة بصمة كروماتين ‎335m‏ للكريات الحمراء. يكشف التخطيط المنفّح في ‎DNA‏ التتظيمي
‏المفترض عن بديل مشترك قاطع للموتيفة مرتبط بانخفاض ربط عامل النسخ الوراثي؛ تضاؤل التعبير
‏عن 80111/8,؛ وارتفاع ‎HBF‏ تعمل المتواليات المحيطة في جسم الكائن ‎jas all‏ تطوري نوعي
‏المرحلة محدد السلالة. وباهندسة الوراثية للجينوم؛ اتضح أن هذا المعزّز مطلوب للتعبير عن ‎BCLITA ٠‏ الكريات الحمراء إلا أنه لا فائدة له خارج سلالة الكريات الحمراء. توضح هذه النتائج كيفية
‏يمكن أن تبرز ‎GWAS‏ البدائل الوظيفية ذات الأثر المتواضع في العناصر السببية الأساسية للتعبير
‏الجيني السليم. ‎Jay‏ معزّز 801118 المعلّم بواسطة ‎Ladle as GWAS‏ محبِّذاً في اضطرابات
‏| -جلوبين.
‎asl‏ كان | 0/85ا6 ناجحاً بشكل هائل في التعرف على آلاف مؤلّفة من الأشكال المتعددة ‎Yo‏ النيوكليوتيدية الأحادية ‎(SNPs)‏ الشائعة المرتبطة بسمات وأمراض البشر. ومع ذلك كان التقدم من
‎CAR
الربط الجيني إلى العملية الحيوية السببية في الغالب صعباً. تضم التحديات العدد الضخم من البدائل المتطابقة التي يمكن ربطها بالسمات الفردية (نظراً ‎Baad‏ اتزان الارتباط ‎(LD)‏ الأثر المتواضع لكثير من عمليات ربط البديل بالسمة؛ وموقع الكثير من البدائل المرتبطة في الجينوم غير التشفيري. ولقد أبرزت الدراسات الحديثة لتخطيط الكروماتين على مستوى الجينوم ثراء بدائل ‎GWAS‏ في ‎DNA ile ©‏ التتظيمية؛ بشكل يوحي بأن كثيراً من البدائل السببية يمكن أن يؤثر على تتظيم الجينات. ومع ذلك؛ لم تظهر التجارب إلا بضعة أمثلة تؤكد أهمية البدائل أو العناصر السببية. ‎ail‏ كان ‎GWAS‏ لمستوى ‎HOF‏ مدهشاً بشكل خاص. يبرر التباين الجيني عند ثلاثة مواضع فقط ‎(BCL11A 5 (HBS1L-MYB (HBB)‏ نسبة ‎5٠‏ 7 من التباين الموروث في مستوى ‎HDF‏ كذلك يتم ربط نفس البدائل بالشدة السريرية في مرض الخلايا المنجلية باعتلالات ]-جلوبين الرئيسية ‎٠‏ والتثلاسيمية 8؛ ربما بشكل غير مثير للدهشة لأن ‎Jane HBF‏ رئيسي لهذه الاضطرابات. أكد العمل من معمل المخترع والآخرين أن 801118 عبارة عن منظّم مباشر لمستويات ‎.HbF‏ 8011178 عبارة عن عامل كبت نسخ وراثي يكمن في المعقدات متعددة البروتينات التي تشغل تكتل ‎Gusta‏ ‏الجيني. وبينما يؤدي نقص /80111 التكويني إلى موت الأجنة وضعف تطور الخلايا اللمفية؛ يؤدي العجز الخاص بالكريات الحمراء في /80111 إلى معادلة الكبت التطوري لجينات جلوبين الأجنة ‎٠‏ ويكون كافياً لعلاج السمات المتعلقة بالدم والمرضية في مرض الخلايا المنجلية في النماذج الفأرية. لذا ظهر 801116 كهدف علاجي جديد في اضطرابات ]-جلوبين. ويعتبر فهم تبعات ضعف 801118 ضرورياً. لم يتم وصف بدائل التشفير البشرية من 8011178 على الرغم من جهود إعادة تحديد المتواليات واسعة النطاق. وتكمن بدائل ‏ 801118 المرتبطة بمستويات ‎HDF‏ في المناطق غير التشفيرية من 806111/8. لمزيد من فهم كيفية تأثير التباين الجيني الشائع على 86111/8؛ ‎٠‏ على مستوى ‎(HBF‏ وشدة اضطراب ]|-جلوبين؛ تم اختبار دور البدائل المرتبطة ب ‎HEF‏ بالتفصيل. البدائل المرتبطة بالسمات بالقرب من ‎ely fre‏ الكريات الحمراء تم إجراء العديد من دراسات ‎GWAS‏ بالإضافة إلى التخطيط المنفّح للمتابعة على سمات الكريات الحمراء ‎La)‏ في ذلك الأنماط الظاهرية مثل عدد وحجم الكريات الحمراء؛ تركيز الهيموجلوبين» ومستوى ‎((HDF‏ للتعرف على ‎SNPs‏ مرتبطة ب 1776 سمة بأهمية تشمل الجينوم ‎P)‏ أقل من-58 ‎Yo‏ 8). يتم الإثراء ب ‎SNPs‏ في المعزّزات ومناطق التشفير مقارنة ب ‎SNPs‏ عشوائية (شكل ‎.)١‏ ‏كذلك تكمن غالبية ‎SNPs‏ في مكان آخر في الجينوم. تم وصف سمات الكروماتين العامة للخلايا ‎CAR‏ eam ‏المنتتجة للكريات الحمراء البشرية الأولية؛ وأدى ذلك إلى التعرف على مجموعة كبيرة من معزّزات‎
DNase ‏الكريات الحمراء البعيدة التي يتم التعرف عليها بتعديلات هيستون المميّزة وفرط الحساسية ل‎ ‏غير‎ SNPs ‏الكريات الحمراء بالمعزّزات مقارنة ب‎ GWAS SNPS ‏لوحظ تكون قوي لمستعمرات‎ ‏مرتبطة بسمات الكريات الحمراء» 581058 الموجودة على مصفوفة تحديد أنماط جينية شائعة» أو‎ ‏المرتبطة بسمات الكريات الحمراء بشكل‎ SNPS ‏المبدّلة عشوائياً. سقطت نسبة 71,5 من‎ SNPs © مباشر في معزّزات الكريات الحمراء؛ بإثراء يبلغ ‎lanza VY,‏ مقارنة بالمعززات المبدّلة عشوائياً ‎P)‏ ‎J‏ من ‎))4-٠١ * ١‏ مقارنة بنسبة 71,4 من ‎SNPS‏ غير المرتبطة بسمات الكريات الحمراء؛ والتي ‎Jia‏ إثراء بنسبة 1,4 ضعفاً ‎=P)‏ 017 0,0( ولقد وجد أن الكثير من ‎SNPs‏ في تقارب وثيق مع معززات الكريات الحمراء (شكل ‎١‏ ب). كانت المسافة المتوسطة إلى معزّز الكريات الحمراء عبارة عن 47,1 7786 ‏المرتبطة بسمات الكريات الحمراء» مقارنة ب‎ SNPs ‏ل‎ (kb) ‏كيلو قاعدة‎ ١,6 0٠ ‏غير المرتبطة بسمات الكريات الحمراء؛ الخاصة‎ SNPs ‏و87,4؛ كيلو قاعدة على الترتيب ل‎ ‏بمصفوفة تحديد النمط الجيني؛ والمبدّلة عشوائياً.تبين هذه النتائج أن جزءاً كبيراً من البدائل الشائعة‎ ‏المرتبطة بسمات الكريات الحمراء يكمن في أو بالقرب من معززات الكريات الحمراء» وتتفق مع النظرية‎ ‏القائلة بأن البدائل السببية تؤثر غالباً في التنتظيم الجيني المعتمد على السياق.‎ ‎Vo‏ علامة 610/85 ‎HBF‏ على ‎Laas‏ معزّز الكريات الحمراء تم إجراء ستة ‎GWAS‏ على مستوى ‎HOF‏ (أو عدد ‎FADIA‏ متوافقة السمات بدرجة كبيرة)؛ بما في ذلك مجموعات من أصل أوروبي» أفريقي» وآسيوي. تعرف كل منها على البدائل المرتبطة بالسمات في 8061-118. يتم تقييم التباين في 8011178 لتفسير -715 من تباين السمات. تم التعرف على أربعة ‎SNPs‏ مختلفة باعتبارها مرتبطة بأعلى درجة ممكنة بالسمة (51427407؛ ‎٠ ‏التي يطلق عليها "الخافرة” في‎ SNPs ‏تتكتل‎ ¢rs766432 5 54671393 511886868 ٠ ‏أ). يبدو أن الأنماط الفردية‎ Y ‏كيلو قاعدة من بعضها البعض في الإنترون ¥ من 8061118 (شكل‎ ‏فردي. ولقد تم ربط خمسين‎ SNP ‏مقارنة بأي‎ HBF ‏خافرة تفسر بشكل أفضل ربط‎ SNPs ‏التي تضم‎
HOF ‏ضمن إنترون ؟ بمستوى‎ SNPS ‏من 50005 في الموضع 801118 وسبعة وعشرين من‎ (AY Xo ‏من‎ JETP) ‏بأهمية تضم الجينوم بالكامل على الأقل‎ ‎YO‏ تمت مقارنة توزيع ‎SNPs‏ المرتبطة ب ‎HPF‏ في 8011178 مع الحساسية ل | ‎«DNase‏ وهي مؤشر على حالة الكروماتين التي توحي بقدرة تتظيمية. في الخلايا المنتجة للكريات الحمراء البشرية؛ لوحظت ‎CAR
“yer ‏بجوار وبشكل متراكب مع البدائل المرتبطة‎ oF ‏في الإنترون‎ DNase | ‏ثلاث قمم من فرط الحساسية ل‎ ‏62+؛‎ (DHSs) DNase | ‏والتي يطلق عليها مواضع فرط الحساسية ل‎ (AY ‏(شكل‎ HOF ‏ب‎ ‏يظهر المخ والخلايا اللمفية‎ .BCL1IA 12155 ‏و55+ على أساس المسافة بالكيلو قاعدة من‎ +58 ‏ولا يعبران عن‎ oT ‏/80111؛ والخلايا اللمفية‎ le ‏وهما نسيجان يعبران عن مستويات‎ 8 ‏بندرة‎ (BCL11A ‏في الموضع‎ DNase | ‏بدرجة كبيرة» عن أنماط فريدة من الحساسية ل‎ 801118 ٠ ‏المرتبطة بالسمات (شكل ؟ أ).‎ SNPs ‏المتراكبة مع‎ DNase ١ ‏في الحساسية ل‎ ‏تم تحليل بصمة الكروماتين حول موقع /80111 بشكل أكبر بواسطة الترسيب المناعي للكروماتين‎ ‏من المواد المنتجة للكريات‎ ChIP-seq ‏مع تحديد متواليات مواز بشكل هائل (0510-560). كشف‎ ‏المرتبطة بالسمة في‎ SNPS ‏الحمراء البشرية الأولية عن تعديلات هيستون ببصمة معزّز متراكبة مع‎ ‏العلامتين‎ les H3K27ac ‏و‎ H3KAmel ‏الإنترون ؟ من 80111/8؛ بما في ذلك وجود‎ Vo 6787781 ‏أ). وتشغل عوامل نسخ الكريات الحمراء الرئيسية‎ ١ ‏63و 13/627003 (شكل‎ ‏أظهرت تجارب 6010-9068 ثلاث قمم متمايزة لربط‎ (TY ‏منطقة المعزز هذه (شكل‎ TALL
DHS ‏في الإنترون ¥ من 861118 حيث يسقط كل منها في كرية حمراء‎ TALL 1 ‏(شكل ؟ ب).‎ ‏السمات المشتركة للعناصر التتظيمية البعيدة في التفاعل طويل المدى مع المعزّزات التي‎ gaa) ‏تتمتل‎ Vo ‏كيلو قاعدة من‎ You ‏تنظم التعبير عنها. تم تقييم التفاعلات بين المعزّز 8011178 والشظايا عبر‎ ‏بما في ذلك المتواليات قبل؛ بعدء وداخل الجينات. لوحظ أكبر تفاعل معزّز في‎ BCL1IA ‏موضع‎ ‏المرتبطة بالسمات (شكل ¥ ج).‎ SNPs ‏منطقة الإنترون ؟ المحتوية على 0115 الكريات الحمراء و‎ ‏تبين هذه النتائج أن لهذه المتواليات قدرة تتظيمية.‎ ‏البدائل التتظيمية‎ ٠ ‏السببية المرتبطة بالسمات يمكن أن تعمل بتعديل عناصر سيس‎ 5005 of ‏كان من المقترض‎ 01155 ‏في‎ SNPs ‏التتظيمية الحاسمة. لذا تم إجراء تحديد الأنماط الجينية على نطاق واسع ل‎ ‏في الدراسة التعاونية‎ DNA ‏من عينات‎ ١767 ‏و55+ في‎ «+58 +62 LDU ‏الكريات الحمراء‎ ‏بمجموعة من الأفارقة الأمريكان المصابين بمرض الخلايا‎ ((CSSCD) ‏لمرض الخلايا المنجلية‎ ‏لديهم. تم التعرف على 17 من بدائل‎ HOF ‏الجينومي لهم ومعروف مستويات‎ DNA ‏المنجلية متاح‎ Yo
CAR yay ¢ YRICCEU ‏الثلاثة من 005110 من المجموعات المرجعية‎ DHSS ‏الموجودة في‎ DNA ‏متواليات‎ ‎CSSCD ‏فرداً من‎ AA ‏ل‎ Sanger ‏في مشروع الألف جينوم؛ وبتحديد المتواليات بطريقة‎ ASW
VA ‏علامة في تصميم اختبار النمط الجيني وكان‎ YT ‏أخفقت‎ (HBF ‏يعانون من نمط ظاهري شديد ل‎ ‏متعددة‎ SNPS ‏فرداً و١7 من‎ VIVA ‏و7). بعد التحكم في الجودة؛ بقي‎ ١ ‏أحاديي الشكل (جدولي‎ ‏أكبر‎ minor allele frequency (MAF) ( ‏الأشكال لاختبار الربط. كشف تحليل البدائل الشائعة‎ © *» 1,13 =P) HOF ‏كان له أقوى ارتباط بمستوى‎ DHS +62 ‏عن أن 51427407 في‎ )7١ ‏من‎ ‎.)١ ‏جدول‎ ؛0-٠‎ ‏في الموضع‎ HDF ‏للتخطيط المنفّح لإشارة الارتباط مع‎ CSSCD ‏في السابق؛ استخدم المخترعون‎ ‏في الدراسة» كان 51427407 مقدّراً. تم أيضاً‎ ersd671393 ‏80118وسجلوا أقوى ارتباط ب‎ ‏الدراسات المسبقة‎ 3 rS11886868 5 5766432 ‏الإضافية»‎ SNPs ‏التعرف على اثنين من‎ ٠ ‏وفي‎ (FDA ‏(أو عدد‎ HDF ‏الخافرة التي ترتبط بأعلى درجة ممكنة بمستوى‎ SNPs ‏باعتبارهما من‎ ‏الخافرة الأربعة لهم‎ SNPs ‏مجموعة فرعية من الأفراد ( اا 778) كانت الأنماط الجينية عند كل‎ ‏الارتباط ذات بال عند‎ dam ‏معروفة؛ عند التهيئة على الأنماط الجينية عند 51427407 لم تكن‎ ‏بقي الارتباط عالياً بدرجة كبيرة‎ «Sally; ‏أو 1511886868؛‎ crs766432 «rsd671393 ‏ل 51427407 عند التهيئة على 54671393 5766432 أو 511886868 (جدول 9). لذا‎ Vo ‏في 0115 الكريات الحمراء ويفسر بشكل‎ HBF ‏الأكثر ارتباطاً‎ SNP ‏فإن 151427407 يمثل‎ ‏الخافرة الأخرى المبينة في السابق.‎ SNPs ‏أفضل الارتباط بالسمات مقارنة ب‎ ‏ضمن 01155 الثلاثة‎ HBF ‏وجدت الارتباطات الأخرى بمستوى‎ «rs1427407 ‏عند تهيئتها على‎ ‏كان الارتباط الباقي الأكثر دلالة إحصائية 176061733 في‎ .)١ ‏التي لم يتم فقدها بالكامل (جدول‎ ‏التي تم الابلاغ عنها‎ coA+ DHS ‏كان 57599486 في‎ ؛)٠١-٠١‎ x 0,3) =P) 58+ 0015 | ٠ ‏في هذا التحليل الشرطي. بعد تهيئة كل‎ )1-٠١ XV, YY) = P) ‏مسبقًاء دلالة إحصائية أقل قليلاً فقط‎ ‏ضبط‎ .)١ ‏دلالة إحصائية (جدول‎ SNPs ‏من 151427407 و 157606173 لم يعد لأي من‎ hs ‏بعدد 8505 فرد المتوفر بيانات النمط‎ principal components (PCs) ‏المكونات الأساسية‎ ‏ذو جينومات واسعة النطاق لهم للأخذ في الاعتبار المزيج الدوائي والمواد المدمجة الأخرى التي أدت‎ rs1427407-rs7606173 ‏يتم توضيح البيانات). تم تحديد النمط الأحادي ل‎ ol) ‏إلى نتائج مشابهة‎ YO
HBF ‏على أنه ذاك المرتبط بشدة بمستوى‎ 1-6
CAR
س١‏ تم أيضنًا تحليل الصور المتغايرة النادرة ومنخفضة التردد ‎MAF)‏ > 75) للكشف عن ارتباطها بمستوى ‎HbFs‏ باستخدام كل من 00155 الثلاثة +217 ‎(OA+‏ و +00 كمجموعة اختبار. وجدت اثثنتين من المجموعات أنهما ذات دلالة إحصائية»؛ أي ‎DHS‏ +67 و0115 +55,؛ لكن بعد تهيئة ‎(rs7606173 5 rs1427407‏ لم تعد النتائج ذات دلالة إحصائية؛ مما يشير إلى ‎LD‏ ضعيف بين © الصور المتغايرة النادرة/ منخفضة التردد 5 ‎SNPs‏ المشتركة (جدول 4 ). بالتالي؛ لا يوجد دليل على وجود الصور المتغايرة المتسلسلة النادرة ومنخفضة التردد ضمن 01155 /80111 التي ‎sisi‏ على مستوى ‎HbFs‏ في المرضى بلا50 ؛ على الرغم من إعادة ترتيب ‎Sanger‏ لعدد ‎AA‏ فرد من ‎CSSCD‏ مصابين بالنوع الظاهري ‎HOF‏ المفرط. يقع 51427407 ‎SNP‏ ضمن ذروة ارتباط 67/81 و1811 كما هو محدد بواسطة -0510 ‎٠‏ 580 0010-0065 (الأشكال ‎(Ys IY‏ يمزق ‎T-allele‏ الثانوي ‎G-nucleotide‏ لعنصر متسلسل يشابه بشدة تتابع نتظيمي مركب لنصف 5-50«/6/81/8 ‎aay .[CTG(N9)GATA]‏ هذا التتابع التتظيمي أنه غني للغاية بمعقدات 687781 و1811 في ‎LDA‏ الكريات الحمراء بواسطة تجارب ‎.ChlP-seq‏ تم تحديد عينات الكريات الحمراء الأولية من فرد متباين الزيجوت ‎allele Gl‏ الرئيسي 5 ‎T-allele‏ الثانوي عند 151427407 وتم تعريض هذه العينات ‎ChIP‏ يتبع ذلك إحداث ‎V0‏ تسلسل حسب التخليق. حدد المخترعون توازن متساوي من مركبات الأليل ‎allele‏ في ‎DNA‏ المُدخل. على الرغم من ذلك تمت ملاحظة الارتباط الأكثر تكرارًا ب ‎allele=G‏ مقارنة ب1-أليل الذي يساوي ‎yy‏ 40:75 في كل من عينات الكروماتين المرسبة مناعيًا ‎GATAL J‏ و1811 (الشكل ‎(Iv‏ ‏تم من قبل الابلاغ عن أن ‎ allele-A‏ المرتبط ‎HOF,‏ المرتفع ل54671393/ كان مرتبطَا بالتعبير عن 8061118 في سلالات خلايا الأرومات الليمفية البشرية. لم يتمكن المخترعون من ‎sale)‏ إنتاج ‎Yo‏ ارتباط ذي دلالة إحصائية بين النمط الوراثي 861118 ومستوى التعبير الذي يحلل مجموعة أكبر من سلالات خلايا الأرومات الليمفية (لم يتم توضيح البيانات). تم التكهن بأن النمط الأحادي ‎1s1427407-rs7606173‏ المرتبط ‎HOF‏ المرتفع يؤثتر على التعبير عن 8611178 في السياق الخاص بالكريات الحمراء. يقع المرادف الشائع ل 57569946 ‎SNP‏ ضمن ‎exon—4‏ ل/80111 ويمكن أن يعمل كمرقم للتعبير عن الأليل. تم تحديد أن ثلاث عينات أولية من الكريات الحمراء ‎Yo‏ البشرية كانت مزدوجة تباين الزيجوت للنمط الأحادي ‎rs1427407-rsT606173‏ و157569946. تم تعريض العينات لعملية تحويل إلى نمط أحادي جزيئي بواسطة الدمج في مستحلب ‎PCR‏ ‎CAR‏ yee ‏رئيسي ل 157569946 في‎ allele-G ‏أوضحت عملية التحويل إلى نمط أحادي أنه كان لكل عينة‎ ‏المنخفض. تم تقييم‎ HBF ‏المرتبط‎ /51427407-+57606173 G-C ‏الطور مع النمط الأحادي‎ ‏الجينومي بواسطة إحداث تسلسل حسب التخليق 187569946 لتحديد توازن‎ CDNA 3 DNA ‏الجينومي؛ تمت ملاحظة انعدام التوازن ذي‎ DNA ‏في‎ allele ‏بينما تمت موازنة مركبات‎ .6 ‏المنخفض‎ HOF, ‏الذي يفضل التعبير المتزايد عن 8166-6 المرتبط‎ cDNA ‏الدلالة الإحصائية في‎ ©
HOF 51427407ب ‏المرتبط‎ T-allele ‏تشير هذه النتائج إلى أن‎ (oF ‏(الشكل‎ r$7569946. ‏المرتفع» الذي يمزق نصف التتابع التتظيمي 5-50«*/6/8778؛ يكون مرتبضًا بالارتباط المخفض‎ ‏والتعبير المخفض عن 8061118 في المواد المنتجة للكريات الحمراء. مستوى‎ TALL; GATALL 457 1s1427407- ‏الأساسي في 60 من الأفراد متجانسو الزيجوت ذوي النمط الأحادي‎ HBF ‏من الأفراد متجانسو الزيجوت‎ 7١“ ‏في‎ 74,٠» ‏مقارنة ب#‎ 211,7١ ‏المرتفع كان‎ 87606173 1-6 ٠ )١-١ X Y,0 = P) ‏المنخفض‎ HBF 1s1427407-rs7606173 1-6 ‏ذوي النمط الأحادي‎ ‏اعتيادي لمستوى‎ SNP ‏(الشكل *ج). في المجمل؛ يشير الدليل التالي إلى أن 151427407 يكون‎ ‏له أعلى ارتباط بالنمط الظاهري لأي صورة متغيرة معروفة»؛ يأخذ في الاعتبار الارتباطات التي‎ :HOF ‏تؤثر على التتابع التتظيمي اللازم لارتباط‎ (Blu ‏الخافرة الموصوفة‎ SNPS ‏تمت ملاحظتها مع‎ ‏وتكون متصلة بارتباط 681/1 و1811 بالإضافة إلى مع التعبير عن‎ «TALL; GATAL ١٠ ‏على الرغم من ذلك؛ تكون الصورة المتغايرة عند هذا الموضع في ضبط الأنماط الأحادية‎ .861118 .86111/8 ‏المشتركة مرتبطة بأقل اضطراب فقط في التعبير عن‎ ‏فعالية المحسن للتعبير عن الخلايا الشبيهة بالكريات الحمر‎ ‏الظاهرة المنظمة المرتبطة بالسمات هذه دورهاء تم اكتشاف‎ SNPs ‏لفهم السياق الذي ضمنه تلعب‎ ‏كيلو‎ TE £207, 4) ‏نوظيفة إيواء العناصر المنظمة لسيس. استتتسخ المخترعون -"١-كيلو قاعدة‎ ٠ ‏وقيموا جهد المعزز في‎ (DHSS ‏التي احتوت على ثلاث من الكريات الحمراء‎ (TSS ‏قاعدة من‎ ‏اختبار مرسل التحول الجيني. في هذا الاختبار يتم وضع متواليات المعزز المفترضة قبل محفز ثانوي‎ ‏مرتبط بمتواليات عازلة. تم إدخال البْنىَ إلى الزيجوت الفأري بحيث‎ (18CZ) ‏وجين مرسل‎ (HSP6S) ‏تتم مراقبة التعبير عن الجين المرسل على مدار التطور. أظهر 8011/8 الفأري داخلي المنشاً تعبير‎ ‏فائض على مدار تكوين الجهاز العصبي المركزي مع ملاحظة تعبير أقل بكثير في الكبد الجنيني.‎ Yo ‏على أنه‎ Gia ‏على العكس من ذلك؛ تمت ملاحظة التعبير عن الجين المرسل في الأجنة المتحولة‎
CAR
ف ‎-١‏ ‏مقتصر بشكل كبير على الكبد الجنيني؛ موقع تكوّن الكريات الحمراء المحدد؛ مع ملاحظة تعبير أقل في الجهاز العصبي المركزي (الشكل ؛أ). السمة المميزة لجينات الجلوبين هي التتظيم المتتامي لهم. أثناء النمو البشري؛ بيتا ‎Gusta‏ المشتق من كيس الصفار يتم تعليق في أول ثلاثة أشهر بواسطة ‎Lala‏ جلوبين ‎y —globin‏ المشتق من الكبد © الجنيني ‎liver‏ ا1618. قرب حلول موعد الولادة؛ يتم إغلاق جاما جلوبين ‎Gayot‏ ويصبح بيتا جلوبين ‎globin‏ منشطًا. يوجد فقد تحول مفرد في التعبير عن الجين أثناء نمو الفأر. أثناء هذا التحول؛ الذي يحدث عند منتصف فترة الحمل؛ يعبر تدوير خلايا الكريات الحمراء البدائية المشتقة من كيس الصفار عن جلوبينات المرحلة الجنينية #* و ‎Lan BEE‏ تعبر الأرومات الحمراء المحددة بالكبد الجنيني عن جلوبينات مرحلة البلوغ ‎BL‏ و82. بالتوافق مع هذا التحول المتنامي؛ يتم التعبير عن ‎٠‏ 8611180 في سلالة الكريات الحمراء محددة المرحلة وليست بدائية المرحلة. تم اشتقاق السلالات ذات التحول الجيني المستقر من 861118 ‎14,4-207,٠+‏ الفأرية المرسلة. في هذه الفئران عند تدوير ‎LDA‏ الكريات الحمراء لا يلطخ ‎X-gal‏ بينما تلطخ أرومات الكريات الحمراء بالكبد بشدة بشكل موجب (الشكل ؛ب). عند ‎(E10.5‏ تمت ملاحظة ‎uel)‏ عن ‎lacZ‏ فقط في بداية الكبد الجنيني وليس في الدورة الدموية للجنين؛ المشيمة؛ أو كيس الصفار (الشكل ١أ).‏ تشير هذه النتائج ‎Vo‏ إلى أن المتواليات المنظمة 8061118 إنترون-؟ المرقمة ب85//ا6 كافية لتحديد التعبير المتتامي المناسب عن الجين. ‎Jala‏ الحجيرة المكونة للدم, يوجد التعبير عن 11/8 ‎BCL‏ في المواد المنتجة للكريات الحُمر والخلايا اللمفاوية-8. تم عزل المواد المنتجة للكريات الحُمر والخلايا اللمفاوية-8 من حيوانات بالغة صغيرة محورة وراثياً وتم تقبيم التعبير عن جين مبلغ 1862 . تم التعبير عن 8011178 داخلي المنشأ عند ‎٠‏ - مستويات ‎lef Cae) o,f‏ في الخلايا اللمفاوية-8 الطحالية ‎splenic B-lymphocytes‏ مقارنة بالمواد المنتجة للكريات الحُمر بنخاع العظم. مع ذلك, تم تقييد التعبيير عن 1802 على المواد المنتجة للكريات الحُمر ‎aly‏ تتم ملاحظته في الخلايا اللمفاوية-8 ( الشكل ؛ ج). تشير هذه النتائج إلى تحديد بخلايا شبيهة بالكريات الحمراء لهذه المتواليات التتظيمية. تم توليد سلسلة من طافرات الحذف لتتقيح أدنى العناصر المطلوبة لنشاط محسن شبيه بالكريات © الحمراء. كانت المتواليات التي تحتوي على المركز +58 ‎DHS‏ كافية لنشاط محسن شبيه بالكريات الحمراء. كانت تلك المتواليات التي لا تحتوي سوى على عناصر +67 أو ‎oot‏ المحيطة غير قادرة ‎CAR‏
Nate ‏على توجيه التعبير عن جين شبيه بالكريات الحمراء (الشكل رقم 7ب). تم اختبار 01155 هذه للتأكد‎ ‏من قدرتها على تحسين التعبير الجيني في المواد المنتجة للكريات الحُمر البشرية الرئيسية. استخدم‎ ‏طبقاً لما تم وصفه من قبل.‎ TK ‏بأدنى معزز‎ GFP ‏المخترعون توصيل فيروسة عدسية لنظام مبلغ‎ ‏ولكن ليس +00 أو +67 هي القادرة على تحسين التعبير‎ oA+ DHSs ‏على نحو مماثل, فقط‎ (VY ‏الجيني في تجربة المبلغ المذكورة (الشكل رقم‎ © ‏متطلبات المحسن للتعبير عن الخلايا شبيهة الكريات الحمر‎ 861118 ‏بعد ذلك اختار المخترعون تحديد متطلبات هذه المتواليات التنتظيمية للتعبير المناسب عن‎ ‏في تحديد خواص الكروماتين الكلي المنشور مسبقاً‎ Bell la ‏وجينات الجلوبين. كشف فحص موقع‎ ‏لخلايا شبيهة بالكريات الحمراء أن هذه المنطقة من إنترون-؟ تتسم ببصمة محسن متشابهة عند‎ lal
H3K27me3 ‏و‎ H3K4me3 ‏وعدم وجود‎ ,H3K2Tac ; H3KAMel ‏الموضع أورثو مع وجود‎ ٠ ‏(الشكل رقم 8). علاوة على ما سبق, تمت ملاحظة شبيهة بالكريات‎ TALL; 67/81 ‏وشغل بواسطة‎ ‏عند هذه المتواليات. عند كل واحدة من الخلايا‎ DNase ١ ‏الحمراء-المحددة بالحساسية المفرطة ل‎ ‏ملاحظة دليل على حفظ‎ cai, 00+ 5 DHSS +62, +58 ‏البشرية الشبيهة بالكريات الحمراء‎ ‏المتوالية التطورية, لاسيما داخل +17 5 +00 لتحديد متطلبات لهذه المتواليات التتظيمية المتشابهة‎ ‏عند الموضع أورثو للتعبير عن 86111/8, تم استخدام سلالة خلية ابيضاض الدم الاحمراري من‎ Vo ‏تعتمد هذه الخلايا على التعبير عن‎ . (mouse erythroleukemia cell line (MEL ‏الفأر‎ ‏لنمط جلوبين التعبير الجيني المناسب في مرحلة البلوغخ. يمكن أن يترتب على إنزيمات‎ 8601118
TALENS ‏نيوكلياز محددة بالمتوالية إنتاج عمليات حذف صغيرة الكروموزومات. تمت معالجة‎ ‏متشابهة عند‎ 10-kb 801118 ‏بالهندسة الوراثية لإدخال فواصل مزدوجة الجديلة لإحاطة متواليات‎ ‏الموضع أورثو إنترون-؟ تحمل بصمة كروماتين محسن خلايا شبيهة بالكريات الحمراء. تم فحص‎ ٠ ‏ثلاث نسائل فريدة خضعت لاستئصال ثنائي الأليل. تم‎ Jie ‏وتم‎ NHEJ ‏النسائل لإصلاح يتوسط فيه‎ ‏من الاستئصال لقسم متعلق بالإنترون داخل النسائل‎ Southem ‏ولطخة‎ PCR ‏التحقق من خلال‎ ‏مميزة لانشطار يتوسط فيه‎ Sanger ‏(الشكل رقم 3( كانت نقاط الفصل ذات المتوالية طبقاً ل‎ .)٠١ ‏لاحق (الشكل رقم‎ NHEJ ‏بإصلاح‎ TALEN ‏متعلق بالإنترون | 10-45 ثنائي‎ Gada ‏ذات‎ MEL ‏"تم تحليل التعبير عن 8611178 .في خلايا‎ 5 ‏الأليل. تمت ملاحظة تخفيض هائل للتعبير عن 8011178 إلى مستويات -77 من مستويات القيمة‎
CAR
-١ ‏ل‎
الأولية (الشكل رقم #أ). تمت ملاحظة تخفيضات مماثلة مع أزواج بادئة تكشف وصلات الإكسون قبل, بامتداد, أو بعد الحذف. بتلطيخ ‎Western‏ , لم يكن التعبير عن 8011178 قابل للكشف في النسائل ذات ‎05-٠١‏ محسن ملغى (الشكل رقم ‎(wo‏ تعبر ‎MEL LDA‏ نمطياً عن مستويات مرتفعة من جينات الجلويين 01 و52 البالغة ومستويات منخفضة من جينات الجلوبين الجنينية ‎sy‏ ‎.PHI, ©‏ في عدم وجود محسن ‎»©-٠١‏ لبروتين 50111/8, تم تخفيض التعبير عن جينات الجلوبين في البالغين بنسبة -09-7-ضعف, بينما تم تخفيض جينات الجلويين الجنينية بدرجة كبيرة. تمت زيادة نسبة ‎sy‏ الجنينية إلى 1/2 من الكبار بواسطة متوسط ‎Canam VRE‏ في ثلاث نسائل تفتقر إلى
خلايا متشابهة لمحسن عند الموضع أورثو ‎BCLIIA‏ شبيهة بالكريات الحمراء (الشكل رقم #٠ج).‏ لتحديد ما إذا كانت متواليات +؛ ,60,45 ‎Kb‏ المتعلقة بالإنترون مطلوبة بصورة كلية للتعبير عن ‎٠‏ 8611180 , تم تقييم فقدها في سياق من غير خلايا شبيهة بالكريات الحمراء. تم استخدام نفس الاستراتيجية لتقديم زوجين من ‎TALENS‏ للحصول على النسائل ذات حذف يتوسط فيه ‎NHEJ‏ ‎AS50.4-60.4‏ في سلالة خلية طليعة لخلية لمفاوية-8. تم عزل اثنتين من النسائل الفريدة -850.4/ 60.4 وتم التحقق منها بواسطة ‎PCR‏ , التلطيخ بلطخة 5001078177 , وعمل متواليات ‎Sanger‏ ‏(الأشكال 9 و١٠).‏ على النتقيض من ‎LOA‏ شبيهة بالكريات الحمراء, تم الاحتفاظ بالتعبير عن ‎١‏ 861118 في نسائل خلية طليعة 8 ملغاة محسن ‎A50.4-60.4KD‏ عند كل من مستويات ‎RNA‏ ‏والبروتين (الشكلان ا ودب). تشير هذه النتائج إلى أن متواليات المحسن للخلية المتشابهة عند الموضع أورثو الشبيهة بالكريات الحمراء لا تكون مطلوبة لتكامل انتساخ من موضع 801118 ولكن
تكون ضرورية فقط للتعبير عن جين خلية شبيهة بالكريات الحمر. تم العثور على بصمة كروماتين محسن عند إنترون-؟ ل 80111/8, يغطي مباشرةً ‎SNPs‏ مرتبطة ب ‎٠‏ | 405 . تضم المنطقة العديد من السمات الحيوية الكيميائية للمحسنء بما في ذلك الشغل بواسطة الهستون الذي يميز ‎H3K27ac H3KAmMel‏ في عدم وجود 1314407163 لو ‎(H3K2Tme3‏ وربط ‎TALI TFs GATAL‏ الشبيهة بالكريات الحمرء ومواضع مفرطة الحساسية ل ‎011856-١‏ المحددة بالخلايا الشبيهة بالكريات الحمرء وتفاعل المعزز على المدى البعيد بواسطة “ج. علاوة على ما سبق؛ تمكن المخترعون من تعيين خريطة لهذا الموقع؛ باستخدام 01155 كدليل. لتمييز ‎SNP rs‏ ‎Yo‏ 1424707 باعتباره الأعلى ارتباطاً بالسمة؛ ويسفر تماما ارتباط السمة ب ‎SNPS‏ الحارس الموصوف فيما سبق والمرتبطة بدرجة عالية. بالإضافة إلى ما سبق؛ تبين في الطلب الحالي أن 1427407 ‎rs‏ ‎CAR‏ yA ‏و1811 .في المواد المنتجة‎ GATAL ‏بعوامل الانتساخ‎ GATA ‏يعطل محفز نصف-5- مربع/‎ ‏عديدة‎ SNPs ‏للكريات الحُمر. مع ذلك, حتى بعد التكيف على 51427407 يظل الارتباط مع‎ ‏أخرى في 01155 متجاورة مما يشير إلى تأثير نمط فرداني. وتبين أن الأنماط الفردانية التي تتسم‎ ‏في العناصر المتجاورة أن كل وظيفة تتظيمية معدلة تتعاون لتعطي‎ SNP ‏بتوليفة من أنماط جينية‎ ‏النمط الظاهري الكلي للتعبير عن 86111/8. باستخدام متبرعين متغايري الزيجوت؛ تبين وجود تأثير‎ © .86111/8 ‏والتعبير عن‎ TF ‏عالي على كل من ارتباط‎ HBF ‏متواضع للنمط الفرداني المرتبط ب‎ ‏تساعد هذه الدراسات في تقييم التغيير في التعبير عن /80111 المطلوب ليترتب عليه زيادة ذات‎ ‏الفرق في التعبير عن‎ pm uss ‏في مرضى ذوي اضطرابات‎ HDF ‏دلالة إكلينيكياً في مستوى‎
HbF ‏و6-6‎ 57606173 T-G illal-HbF rsl427407- ‏بين الأنماط الفردانية‎ BCL11A ) ‏و6©-6 كان 711,7 و74,1‎ T-G ‏من متغاير الزيجوت‎ HBF ‏المنخفضة 7,١-ضعف ومستوى‎ ٠ ‏النتائج العكسية ل 500. من‎ 770> HBF ‏تم توقع أن تمنع مستويات‎ (2 V5 oF ‏الشكلان‎ ‏هذا.‎ HBF ‏أضعاف هدف‎ sae ‏المحتمل أن يقترب التخفيض في التعبير عن 8011178 من‎ ‏تحدد هذه الدراسة التباين التتظيمي عند 801117 الذي يؤثر على محسن خلايا شبيهة بالكريات‎ ‏المرتبطة بالسمة مشفرة وتتسم بحجم تأثير صغير نسبيا. ونتيجة‎ SNPS ‏الحمر. ولا يكون الكثير من‎ ‏هذه ذات أهمية إكلينيكية طفيفة. وتوضح هذه الدراسة أن‎ SNPs ‏ا لهذه السمات؛ أحيانا يتم اعتبار‎ ‏حجم تأثير صغير تم توليده بواسطة فرد غير مشفر لصورة مغايرة لا يحول دون حجم تأثير كبير‎
SNPs ‏للعنصر التتظيمي الضمني. على سبيل المثال؛ على الرغم من التأثير الضعيف نسيياً ل‎ ‏وظيفي على التعبير عن 8011178 المستهدف للجين الضمني؛ تكون العناصر التتظيمية السببية‎ ‏أساسية للتعبي عن جينات 801117 والجلوبين في مواد منتجة للخلايا الشبيهة بالكريات الحمر في‎ ‏مرحلة البلوخ. ولا يمكن الاستغناء عن نفس العنصر التتظيمي للتعبير عن 8011178 في سلالات‎ Yo ‏غير شبيهة بالكريات الحمر. يتمتل الهدف من دراسة الألائل الواقية في فهم الآليات الجزيئية الضمنية‎ ‏في مجهود لانتساخ هذا التأثير الحيوي في الأفراد المعرضين للخطر. وبالتالي؛ تبقى الكثير من‎ ‏الصور المتعددة الشكل البلوري المرتبطة بالسمة في العناصر التنتظيمية الهامة المحددة بالسياق والتي‎ ‏يمكن أن تكمن وظيفتها في توضيح البيولوجيا الضمنية بصورة إضافية للسمة التي تتجاوز مجرد تمييز‎ ‏الجين المنتظم. على سبيل المثال, في حين يترتب على فقد 801117 تحويل ضعيف للهيموجلوبين‎ Yo ‏تكوين ضعيف للأوعية وتكوين للأوعية اللمفاوية ويترتب إهلاك جنيني. في النهاية يمكن أن يميز‎
CAR
_ \ ٠ q —_ ‏الفهم الأفضل للعناصر التتظيمية المسببة والشبكات التتظيمية المرتبطة سمات ضمنية للأهداف‎ ‏العلاجية الجديدة. يمكن أن يشكل محسن شبيه بالكريات الحمر ل 801118 ذاته هدف محبذ للجينوم‎ ‏العلاجي المحرر في أن الاجتثاث يمكن أن يعوق التعبير عن 8611178 في المواد المنتجة لخلايا‎ ‏ناتج بينما تتم المحافظة على التعبير عن 801118 في‎ HDF ‏شبيهة بالكريات الحمر مع تخفيض‎ ‏سلالات من غير الخلايا الشبيهة بالكريات الحمر.‎ © ‏المراجع‎ ‎1. ‏.ا‎ Fugger, 6. McVean, J. I. Bell, N. Engl. J. Med. 367, 2370-2371 (2012). 2. J. Emst et al., Nature. 473, 43-49 (2011). 3. D. 5. Paul et al., PLoS Genet. 7, el002139 (2011). Yo 4. M. T. Maurano et al., Science. 337, 1190-1195 (2012). 5. P. van der Harst et al., Nature. 492, 369-375 (2012). 6. ENCODE Project Consortium et al., Nature. 489, 57-74 (2012). 7. S. Menzel et al., Nat. Genet. 39, 1197-1199 (2007). 8. M. Uda et al., Proc. Natl. Acad. Sci. ‏.ل‎ 5. A. 105, 1620-1625 (2008). ٠ 9. 6. Lettre et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. 5. A. 105, 11869-11874 (2008). 10. M. Nuinoon et al., Hum. Genet. 127, 303-314 (2010). 11. N. Solovieffetal., Blood. 115, 1815-1822 (2010). 12. ©. Bhatnagar et al., J. Hum. Genet. 56, 316-323 (2011). ٠ 13. V. G. Sankaran et al., Science. 322, 1839-1842 (2008).
OY AY
Ny 14. J. Xu et al., Genes Dev. 24, 783-798 (2010). 15. J. Xu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 110, 6518-6523 (2013). 16. V. 6. Sankaran et al., Nature. 460, 1093-1097 (2009). 17. J. Xu et al., Science. 334, 993-996 (2011). 18. F. Esteghamat et al., Blood. 121, 2553-2562 (2013). © 19. ©. Liu et al., Nat. Immunol. 4, 525-532 (2003). 20. Y. Yu et al., J. Exp. Med. 209, 2467-2483 (2012). 21. M. D. Farber, M. Koshy, T. R. Kinney, J. Chronic Dis. 38, 495-505 (1985). 22. E. Soler et al., Genes Dev. 24, 277-289 (2010). ٠ 23. M. T. Kassouf et al., Genome Res. 20, 1064-1083 (2010). 24. D. J. Tumer, M. E. Hurles, Nat. Protoc. 4, 1771-1783 (2009). 25. J. Tyson, J. A. Armour, BMC Genomics. 13, 693-2164-13-693 (2012). 26. M. Leid et al., Gene Expr. Patterns. 4, 733-739 (2004). yo 27. M. S. Kowalczyk et al., Mol. Cell. 45, 447-458 (2012). 28. H. J. Lee, E. Kim, J. 5. Kim, Genome Res. 20, 81-89 (2010). 29. D. E. Bauer, S. C. Kamran, S. H. Orkin, Blood. 120, 2945-2953 (2012). 30. A. John et al., Development. 139, 1831-1841 (2012). ٠
SY AY
-١١١- 31. R. 0. Patwardhan et al., Nat. Biotechnol. 30, 265-270 (2012). 32. A. Melnikov et al., Nat. Biotechnol. 30, 271-277 (2012). 33. K. A. Frazer, S. S. Murray, N. J. Schork, E. J. Topol, Nat. Rev. Genet. 10, 241-251 (2009). 34. A. N. Koehler, Curr. Opin. Chem. Biol. 14, 331-340 (2010). 2 35. F. 0. Umov, E. J. Rebar, M. C. Holmes, H. 5. Zhang, P. D. Gregory,
Nat. Rev. Genet. 11, 636-646 (2010). 36. J. K. Joung, J. D. Sander, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 14, 49-55 (2013). 37. J. van der Oost, Science. 339, 768-770 (2013). 38. Thanks to A. Woo, A. Cantor, M. Kowalczyk, S. Bums, J. Wright, J. Ye
Snow, J. Trowbridge and members of the Orkin laboratory, particularly C. Peng, P. Das, G. Guo, M.
E. Baena, for Kerenyi,
W. Pu the SF. Alt provided the pre-B cell line, A. He discussions. C. Guo pWHERE lacZ reporter Yo 1. Kutyavin sM. Nguyen technical assistance, D. Bates sconstruct, C. Currie expertise with sequence analysis, R. 39. J. Xu et al., Dev. Cell. 23, 796-811 (2012). 40. E. van den Akker, T. J. Satchwell, S. Pellegrin, G. Daniels, A. M. Toye, Yo
Haematologica. 95, 1594-1598 (2010). 04 AY
-١١- 41. A. ‏.ا‎ Bredemeyer et al., Nature. 442, 466-470 (2006). 42. R. E. Thurman et al., Nature. 489, 75-82 (2012). 43. G. Galameau et al., Nat. Genet. 42, 1049-1051 (2010). 44. 5. Purcell et al., Am. J. Hum. Genet. 81, 559-575 (2007). 45. M. ©. Wu et al., Am. J. Hum. Genet. 89, 82-93 (2011). ٠ 46. A. He, S. W. Kong, Q. Ma, W. T. Pu, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 108, 5632-5637 (2011). 47. M. A. McDevitt, Y. Fujiwara, R. A. Shivdasani, S. H. Orkin, Proc. Natl.
Acad. Sci. U. 5. A. 94, 7976-7981 (1997). 48. T. Cermak et al., Nucleic Acids Res. 39, e82 (2011). ٠ 49. J. C. Miller et al., Nat. Biotechnol. 29, 143-148 (2011). 50. R. Galanello et al., Blood. 114, 3935-3937 (2009). 51. H. T. Bae et al., Blood. 120, 1961-1962 (2012). 52. K. E. McGrath et al., Blood. 117, 4600-4608 (2011). 53. 0. Noordermeer, W. de Laat, IUBMB Life. 60, 824-833 (2008). ٠ 54. D. R. Higgs, D. Vemimmen, B. Wood, Adv. Genet. 61, 143-173 (2008). 55. E. Pinaud et al., Adv. Immunol. 110, 27-70 (2011). ‏ل‎
١1 - ‏و‎ ١48 /// rs rs ‏شرطى على‎ ‏لأا ارمق علا /خالك .حلا‎
DH
MAF ‏مرقم‎ ‎5 ‎rs ‎YY vag +, 00A oA ve dy A oo ال١‎ +
A AT 3 oY Ty Y¢ oy oive Ty rs ٠ 257 1٠ ‏ا ا لال او ا أ‎ + 7 2549 7 vv ‏هه‎ Ao Yo 1 rs +, Yo) vA ve Ye SYA XY, v4 +, 71 ‏محقلا 1م‎ +
A vy £) YA -١٠ V¢ 1 ‏فاخا‎ 1 rs
XY, Y¥ | ott ‏تكد‎ videa| + ‏.رةه‎ Ye 1 VY Ty
OY AN
-١؟-‎ rs
Yot ‏ال ا م‎ +4) vou 7) vodag + 7 ‏ادا‎ اء-٠‎ YY 1 Ly A AA TY rs +, 140 oY A) ١ ‏ال الت ره‎ ٠ 71317 +
Y £) aA A 5-٠ yy Ad 4 TY rs +, TAA oY Xo, 1¢ +34 XY, Yo +, YA YY 174 7 yy 1-٠ Yo YAY Y ve to | OAT rs ٠ ‏ا 0 دا‎ +, Yo 0 vY + ¥1 oo ١٠7941 ١ ‏دلا‎ to A q¢ 24 ‏+ده | لأك نظ‎ rs +, 40. ‏بي م‎ Ye EE «Yo oo ١٠ ‏عل‎ ‎١ aA A yy ve AR 3 ‏+ده | 7ه‎ rs
Xq,11 A XY, AT 1 A Yi.) ‏مواحاا‎ 77١ (٠ a) YA YY | oo+
OY AY
-١ \ ‏اج‎ ‏أو +50 من‎ ,oA+ ,17+ SNPsmBCLIIA DHSs ‏شائع‎ (7) < MAF) ‏تحليل ارتباط‎ ,MAF .DNase | ‏موقع مفرط الحساسية ل‎ ,DHS ‏متاح للتحليل.‎ CSSCD ‏فرد من‎ ١١7 ‏ترددد أليل ثاتوي.‎ ‏أو +ده‎ oA+ 7+ 8601118 DHSs Jala SNPs :¥ ‏الجدول‎ ‏ألليل‎ 0
DH
MAF ‏رئيس ألليل 5 نمط جيني‎ H ‏أحادي الشكل‎ | + 5 ‏م‎ C| 7/7844 " ‏البلوري‎ | 7 ١قلدجكتم‎ 0" + a ’ ‏نعم‎ T C TeViVood | ١ ‏ان‎ wy YYYovosy + 9 ‏م تصميم تجربة معيب‎ C TeVIVIEY | ١ wy YEAYYY YY ‏أحادي الشكل‎ | + 5 6 Al ‏كلأكاخفاضح‎ | ١ ‏البلوري‎ | 7 YAYYYYYo ‏أحادي الشكل‎ ١ * 5
Ty T Cl w.vivvia| ١ ‏البلووري‎ VAAY ‏ف‎ ‎+ rs ٠, ‏أ"‎ ٍ ‏,ب أنعم‎ 6 Al ‏حلأاكاحفاخح‎ | ١ $0 YE90AYY
OV AY
-١١١-
Ye + ‏نعم‎ T G Te YYA LY Y ١ ١3 » ‏ا‎ ‎7 TY + rs ‏؟ لحخاصعي فد لم 3 تجربة‎ ‏ب تصميم تجربةه معيب‎ ٠721772 + rs ‏تجربة‎ 3 T Al TovyAvY | Y ‏ب تصميم تجربةه معيب‎
YAVYA) OA ‏أحادي الشكل‎ ١ i. A G| ‏لمعا‎ Y ‏ل البلوري‎ EYAOY + rs 11 ١ 3 A G| ‏اماف‎ ¥ nl ‏جو‎ ‎‘0 YAY) Lov) + rs aa 3 T C| ‏لعي‎ ¥ f= ay £9 ‏ع‎ ‎+ rs re ; T C| ‏صما‎ | ¥ nl ‏جو‎ ‎7 ‏تكح‎ ‎+ Y rs ‏تحرية‎ 2 T C T+ YYAcoo ‏تصميم تجربةه معيب‎ + ٠-4 9. + Y rs
Aaya 2 6 A T«YYAOT14 ‏تصميم تجربةه معيب‎ + 1١1١1110
SV AY
-١١- ‏ل | أحادي الشكل‎ ‏م‎ 6 ٠١4
SRR ay ‏جوري‎ 0/77 + rs ‏ب تصميم تجربة معيب‎ 1 C ‏ادي فد‎ ‏)ار /الا‎ 0/6 + rs ‏د لأارفاخ ا 6 م + تصميم تجربة معيب‎ ١1178 + rs ‏لقص فدح 6 م ب تصميم تجربة معيب‎ 01711٠٠ + rs ‏ب تصميم تجربة معيب‎ 1 C Te VYAVAY ١64 + rs ‏ال اغا 6 م ب تصميم تجربة معيب‎ 11171458 ‏ل | أحادي الشكل‎ ‏ب‎ C Al TYYAAWY ‏اف البلوري‎ + rs ‏الغ اما 6 م ب تصميم تجربة معيب‎ 1١1779361 + rs ‏وي م م 6 ب تصميم تجربة معيب‎ ‏مسي ا‎
-١١- + rs ‏م ب تصميم تجربة معيب‎ T+ VYAAYT
YATAYY
0 + Y rs ; 71 G| ‏متا‎ ‎AA fy ‏,م7‎ 4 "0 re ‏تصميم تجربة معيب‎ C T Te YYYOAY oA ‏مال‎ ‏أحادي الشكل‎ ١ 7 ‏ل‎ 9 0 C G ‏اده قفد‎ ‏لبلوري‎ f YAoYo Nov + Y rs ‏مه أنعم‎ C 71 75
Yo TYY AYA + Y rs ‏نعم‎ oA A G ‏لاني‎ ‎vt Wag + Y rs ‏نمط جيني معيب‎ oA C T ‏اا‎ ‎17 ‎+ rs ‏د انعم‎ C 71 777
A 7 ‏أحادي الشكل‎ ١ 7 Y rs oA T| ‏اا‎ ‏البلوري‎ 6477841 e] | | © ' } 1
OV AY
-١١- + v re ‏تصميم تجربة معيب‎ oA A G ‏امفففح‎ ‎176 ‎xy + v re ; G| Al 77776١
YY ‏هم ا‎ 7 ‏ل | أحادي الشكل‎ ‏الى‎ Al 6 ‏بص‎ ‏4م البلوري‎ + v re ‏م 0 نعم‎ 6 77721 "" ١819771 ‏ل | أحادي الشكل‎ ‏ل اق ال‎ evry ‏78م البلوري‎ ‏ل | أحادي الشكل‎ ‏ل‎ Toc ‏صصح‎ ‏البلوري‎ ١175601
A 1 0 rd ‏نعم‎ 0 +71 7 vy 58 7 LAS ‏أحادي الشكل‎ | TF ‏ل‎ ‎0 71 ‏ل6م )اي‎ ‏بم البلوري‎ ,' + v re ‏انعم‎ |G A 77447 ¢ ١6م7‎ ‏ار اد‎
-١ \ «= + ¥ I's ‏تصميم تجربة معيب‎ oo G T ‏اسك فح‎
YAAEY Tey + ¥ I's ‏تصميم تجربة معيب‎ oo G A ١646 117/784 ‏أحادي الشكل‎ ١ 7 ‏ل‎ 9 oo C G ‏عفد‎ LY ‏البلوري‎ 1174 + I's ‏تصميم تجربة معيب‎ co C T IXRAL-ERAY 2594469١ + I's ‏تصميم تجربة معيب‎ oo G ‏م ماي‎ ‏لصف كين‎ + I's ‏تصميم تجربة معيب‎ oo A G ‏قد عفد‎
YAAYo VO + ¥ I's ‏تصميم تجربة معيب‎ oo A C ‏ره اعفد‎ ‏اما‎ 84 ‏أحادي الشكل‎ ١ 7 ‏ل‎ 9 oo A C ‏العف‎ ‏البلوري‎ 17 ‏أحادي الشكل‎ ١ 7 Y rs oo G C ‏ارح فد‎ ‏سبي البلوري‎ YS
CAR
-١؟١-‎ + Y re 1 ‏نعم‎ oo C G TaYYo ‏ام‎ ‎vo YI Y + Y re ‏تصميم تجربة معيب‎ oo T C ٠١04 ٠ ‏ل | أحادي الشكل‎ os Tl G| ٠ 4 ‏البلوري‎ 15118751 ‏أحادي الشكل‎ | TF ‏ل‎ ‎os C 7 .vvevyy ‏البلوري‎ ١١74831 + Y re ‏نمط جيني معيب‎ oo A G ١4 18119971 ٠٠٠١ ‏أو‎ ADSNP Ly ‏أو +00 وتوجد في‎ oA+ 17+ 801118 DHSS ‏ضمن‎ aii SNPS
Lis ‏المنمط‎ SNPS ‏و//ا85. تم تعريف‎ CEU YRI ‏ليانات جينومية للمجموعات المرجعية‎ ‏الإحداثيات الجينومية 9او.‎ .CSSCD ‏ضمن‎ MAF ‏[تسجيل‎ ‎Sanger ‏متوالية‎ shal ‏الجدول 17 المرقمات الإضافية التي تم العثور عليها بواسطة إعادة‎ ‏ألليمل | أليمل‎ CH
MAF ‏نمط جينى‎ | DHS ' ‏أتانوي‎ | POS| R ‏قم‎ ‎٠ 0 * ‏هه‎ *٠ ‏أ"‎ ٠ 7 ١ ‏ما‎ Y 5 ‏م + 17 نعم‎ T
AS ١ ‏اد‎ ‎oN AY
—\YY-
Af S$ ‏ار تصميم‎ ‏اختبار فاشل‎ A
Af S$
T+V¥YYY 0
Cont ‏م +56 انعم‎ G . VY) oA
Yi ‏بره‎ 7 55 ‏مقف‎ ‎Cea ‏نعم‎ T c ‏د‎ VY) oA
Ao « ‏بره‎ 7 55 ‏مقف تصميم‎ ‏ل"‎ T 0 7 ‏اختبار فاشل‎ A \
Af S$ ‏7671ل"‎ ‎Co ‏انعم‎ 55+ T G VY) oA 0 ١
S$ ‏اف‎ ‎Ce ‏انعم‎ 00% A 0 : 7 7 ١
Banger ‏الأقصى إلى إعادة إجراء متوالية‎ HOF ‏مع النوع النظير‎ CSSCD ‏فرداً من‎ AA [
AR
‎١ 73-‏ اث 01155 داخل ‎.BCL11A‏ المرقمات المبتكرة المحددة المدرجة. تم تعريف ‎SNPs‏ المنمطة ‎MAF, Lud‏ ضمن ‎CSSCD‏ المسجل. الإحداثيات الجينومية ‎hgl9‏ ‏الجدول 4 . التحليلات الشرطية لأربع سنتينيل ‎SNPs‏ ‎rs rs rs rs Ae‏ ‎LAVIYAY[ YYAATATA 71177 ١٠7/١‏ ‎M| Mar
AF | ker rs ‎٠ ٠‏ اام 2 ‎Y, YA ٠‏ ,. الاب ‎٠‏ تيا ‎Y¢ VEY‏ “> ا ‎-١‏ “> ا ‎-١ 41 -١ >“ -١‏ ‎Ye ١ 1 1 Ya a 0] 6‏ 1 1 ‎rs‏ ‎ty ty Y, EA *, *,‏ و و ‎٠, -١ ov Yv 71‏ 7 34 م ‎-١‏ ‎a] ory ve| af of gry‏ 1 اه ‎NA‏ | حلا ‎rs‏ ‏لا ‎٠ ٠‏ الح ‎٠ ٠‏ ,. ‎Yo ATA‏ .25 ا ‎-١‏ م ‎YY \Y +, YA ١١ 951١‏ ‎AR a Af TA‏ اح . ‎Y Al‏ 3 3
-4؟١-‏ ‎rs‏ ‎٠ -| ev] | + | fv‏ 0 ‎٠, -١ ov Yv 73‏ 5 1 لبا ‎o—\. 1 NA NA ١ +o Y¢ 1 3 7‏ التحليلات الشرطية لأربع سنتينيل ‎SNPs‏ شائعة المرتبطة سابقاً بمستويات ‎HPF‏ (44: 17170 37 210)). تمت تحديد النمط الجيني لجميع الأربعة في ‎YYA‏ فرداً من 05500. تعذر حساب © ل 18766432 عند الشرط على 184671393 (والعكس) لأن هذاين المرقمين مرتبطين بقوة (2 - ‎AEA - 2 .) ٠,157‏ بين 151427407 و15766432: ‎Ved - ١2‏ ,+ بين © 51427407 5 1886868 ا5: ‎AS - ١2‏ ,+ بين 51427407 و54671393: 2 - الخلا بين ‎+,YoA - 2 ;rsl 1886868 5 rs766432‏ بين 1886868 |5 5 ‎Jsaall.rsd671393‏ © تحليل الصورة المتغيرة نادرة ومنخفضة التردد ‎rs le ays‏ شرطي ‎rs le‏ ‎rsYEYVeayY‏ ‎YEYYEWY‏ ‏17 حل ‎SY AY‏
اج \ \ — ينتج عن تحليل الصورة المتغيرة نادرة ومنخفضة التردد ‎(MAF‏ > 75). تم إجراء التحليل باستخدام خوارزم ‎SKAT-O‏ بناءً على المجموعة باستخدام ‎,١7+ DHSs‏ ‎0A‏ ,+00 الفردي كثلاث مجموعات مختلفة. الصف الأدنى "الكل" يعرض نتائج الاختبارات عند طي ثلاث مناطق معاً. الجدول ‎:١‏ متوالية ‎PCR‏ للتتميط الفردي لدمج المستحلب تحليل ‎PCR‏ النوع الفردي 157569946-51427407 لدمج المستحلب. تم الزيجوت المتغاير ل 187569946 و51427407, وتوليد أمبليكون دمج يضم كل من ‎a3. SNPs‏ استتساخ أمبليكون الدمج, وتم إجراء متوالية ‎Sanger‏ ‏للتسائل الفردية . تم إدراج عدد من النسائل لكل نوع جيني. تم حساب نسبة الاحتمالية ل ‎G-G/A-T‏ مقارنة بالطور 6-1/8-6. الجدول 7: إحداثيات شظايا تجارب المرسل ‎Distance from‏ ‎BCL11A TSS (kb) 9019, 2‏
‏الطول‎ ‎(bp) ‏انهاية‎ a ‏مرسل | الاسم بداية نهاية‎ ١١ ARERR 16064 Ta dYYACHY ١ ‏بضصت‎ - ٠ 7 q 1¢,¢| LacZ
YTAD 1 16064 ٠١ YYYAY ١ ‏بضصت‎ -2 7 ٠ a 1¢,¢ 21٠ SAFRAN 57241 Te VYACTH ٠ 4 - 6
Y Y oY,1 ‏اأقف لي ييل‎ Tvvay ITA ARTA BR YTA ARTA) 67+ 1 1
Yee OY oYovo SAIYY ‏بره فى كاكلا أي مب ا‎
A 1 ١٠ 575١ 77 TeeVYTYA[ TeeYY ad 5354 7 ‏ا‎ ٠٠ ١ أ١تالاغعت‎ | Teethers ١٠١6+ ١ v Y 1 GFP ٠م‎ Yoo 64 ١٠١74 TaeAV EAA] ٠١كم‎ ١٠51+ 3 7 a 1 ١ ٠١١م‎ ١١ ٠١ ‏غات‎ ١ ‏حف ا اكت‎ YoY+ 1 A 7 2 ‏اأقف لي ييل‎ Tvvay ITA ARTA BR YTA ARTA) 67+ 1 1
—\YV-
Yer ovivoe 545471 TecYYYd0 ‏بره اكد مل ا‎
A Y
Yea) 17 oo(AoY TeeVYTtV TeYY EVA 5354 ١ ٠ ٠١4 74 ٠مم ‏و لا او لي‎ 3 2 6١+
Yer ‏بئات ني مح عات أي 771 رض‎ q Y 7+ ‏أخن ك٠ لس ”نت الى |= - ا‎ 1 ‏مي متق‎ ١ A 1- yay - - ١ ‏الى‎ ١ ‏دم‎ ١ ‏دض الى‎ 5,577 | 57 1 35 oy-— ‏المعزز المفترضة المستتسخة في تجارب ناقل المعزز. إحداثيات الكرموسوم ؟‎ Was ‏إحداثيات‎ ‎.80111/8 TSS ‏وكذلك بالإشارة إلى‎ hgl9 ‏المردجة في‎ ‏متواليات قليل النيوكليوتيد‎ A ‏الجدول‎ ‏الاسم المتوالية التجربة‎ 1 ‏نحنف لاعام‎ AAAGAGCTGTCCGAAGTCCA 0082118-53 -+ 1 ‏نحنف لاعام‎ GGGCACTTCCTAGTCCCTCT 0082118-35 -4 1 ‏طحنفى لاعام‎ 04 TTTGAGCAGGAGGGAATTTG mBcllla—dell-F © 1 ‏وام 04 طحنف لاعام‎ 61661 00016١6611 mBcellla—-dell-R
AR
—\YA-
TALENGWPCR GCAAGGCAGGTACCAAACAT mBcllla-del2-F
TALENGWPCR TAGAGATTCCAGGCCCCTTT mBcllla—-del2-R
TALENGWPCR AGCAAGGAAAGGTGAAGCAG mBcll1a-3'-F
TALENGWPCR CCCAATGTCTTCCGAACTGT mBcllla-3'-R
TALENGWPCR AGGCTGGTCTTGGGATTTTT mBcllla- © upstreamTALEN-F
TALENGAWPCR GCCTTTAACAAGGGTGTCCA mBcllla- downstreamTALEN-R ‎CATAGACCTGGGTCCTGGAA mBcl11a-5'probe-F‏ مسبار ‎'٠‏ للطغخة ‎٠‏ ويسترن ‎TTGCAGAGTGACTCCTGTGG mBcl11a-5'probe-R‏ مسبار ‎'٠‏ للطغخة ‏ويسترن ‎lacZ Ju ye ‏استتساخ‎ CCAGCCATACCCAAAACAAA hBCL11A-52.0-F ‎lacZ Ju ye ‏استتساخ‎ CTTTCCCTCTTGCCACTCAG hBCL11A-64.4-R lacZ Ju ye ‏استتساخ‎ GGCAGAGAAGGCACAGTGA hBCL11A-56.8-F ١٠ ‎lacZ Ju ye ‏استتساخ‎ GGCTGTCCTGGCATGTAAGT hBCL11A-57.6-R ‎GFP ‏ااستتساخ مرسل‎ 202 AACAGACCCATGTGCTAGGC hBCL11A-63.4-F ‎GFP Ju je ‏/02ااستتساخ‎ TGTGTGGACTGCCTTTTCTG hBCL11A-61.6-R ‎lacZ Ju je ‏اسنتساخ‎ GGGAAAAGGGAGAGGAAAAA hBCL11A-58.6-F lacZ Ju ye ‏استتساخ‎ CTCAGAAAAATGACAGCACCA hBCL11A-57.6-R 0 ٠ ‎oY AY
-١؟4-‎ lacZ Jui ye ‏استتساخ‎ GGACTCAGTGGCCTCTTTTG hBCL11A-55.7-F lacZ Ju ye ‏استتساخ‎ GAAGATAATGGCAGCCCAGA hBCL11A-54.4-R
GFP Jue ‏استتساخ‎ TGTGTGGCCAACCTGTAAAA hBCL11A-164.2-F
GFPJuy ‏اسنتساخ‎ CTCGCTCTGTTTCCCAGTTC hBCL11A-162.6-R
GFPJuje ‏استتساخ‎ CTCTCCGACGACCTCTTTTG hBCL11A-157.1-F ‏ه‎ ‎GFP Ju # Lil GTAGGGAAGGGGCTACTTGG hBCL11A-155.6-R
GFP ‏اسمتتساخ مرسل‎ AGAGCCAAACTCCGTCTCAA hBCL11A-154.1-F
GFP Ju ‏اسنتساخ‎ AAATACCACAGCCCAACAGC hBCL11A-152.5-R 61 ‏اسنتساخ مرسل‎ GAACAGAGACCACTACTGGCAAT hBCL11A-59.4-F
GFP Jue ‏استتساخ‎ 66666/86666111 68116 0680111-57. 7-4 ٠ ‏استتساخ مرسل61©‎ CTTCCACTGGATGGCACTTT hBCL11A-55.9-F
GFP Jue lus) ACTTCAGCCTCCAGCACTGT hBCL11A-54.2-R
GFP Jue ‏استتساخ‎ CCTCCCAGCAATGTAGGTGT hBCL11A-41.6-F
GFP Jue ‏استتساخ‎ TGGTGTGGTCCACTGTGACT hBCL11A-40.5-R ©] ‏اسمتتساخ مرسل‎ GCAAGCTTAGCCCCTTCTTT hBCL11A-32.6-F ١٠
GFP ‏استتساخ مرسل‎ TGAGGCAGAGTCAGATGTGG hBCL11A-31.6-R
GFP Jui ‏استتساخ‎ CCCCGCTCAGAGTAAGTGAG hBCL11A-n45.8-F
GFP Ju ‏اسنتساخ‎ GGAAACTGCCTATCCCATGA hBCL11A-n47.0-R
GFP Jue ‏استتساخ‎ CAACACCCCGATTTCAGACT hBCL11A-n51.0-F
OVA
يدا ‎GAATGGTCCCGATCTCTTGA hBCL11A-n52.9-R‏ استتساخ مرسل ]© ‎RT-gPCR (Gapdh) TGGTGAAGGTCGGTGTGAAC mGapdh-RT-F‏ ‎RT-gPCR CCATGTAGTTGAGGTCAATGAAGG mGapdh-RT-R‏ ‎(Gapdh)‏ ‏ه ‎RT-gPCR AACCCCAGCACTTAAGCAAA mBcl11a-RT-ele2-F‏ (Bcllla exon-1/2)
RT-gPCR ACAGGTGAGAAGGTCGTGGT mBcl11a-RT-ele2-R (Bcllla exon-1/2)
RT-gPCR GCCCCAAACAGGAACACATA mBcll11a-RT-e2e3-F (Bcl 11a exon-2/3) Yo
RT-gPCR GGGGCATATTCTGCACTCAT mBcl11a-RT-e2e3-R (Bcllla exon-2/3)
RT-gPCR ATGCGAGCTGTGCAACTATG mBcll11a-RT-ed4e4-F (Bcl 11a exon-4/4, xLisoform)
RT-gPCR GTAAACGTCCTTCCCCACCT mBcll11a-RT-e4e4-R ١٠٠ (Bcl 11a exon-4/4, xLisoform)
RT-gPCR CAGCTCAAAAGAGGGCAGAC mBcll11a-RT-e4e5-F (Bcl 11a exon-4/5, Lisoform)
RT-gPCR GAGCTTCCATCCGAAAACTG mBcll11a-RT-e4e5-R Y. (Bcl 11a exon-4/5, Lisoform)
RT-gPCR (eY)TGGCCTGTGGAGTAAGGTCAA mHbby-RT-F 04 AY
—V ry -
RT-qPCR (eY) GAAGCAGAGGACAAGTTCCCA mHbby-RT-R
RT-qPCR (bH1) TGGACAACCTCAAGGAGACC mHbb-bh1-RT-F
RT-qPCR (bH1) ACCTCTGGGGTGAATTCCTT mHbb-bh1-RT-R
RT-qPCR (b1/b2) TTTAACGATGGCCTGAATCACTT mHbb-b1-RT-F
RT-qPCR (b1/b2) CAGCACAATCACGATCATATTGC mHbb-b1-RT-R ©
RT-gqPCR (lacZ) GCCAACATTGAGACACATGG lacZ-RT-F
RT-gPCR (lacZ) TGTCTCTCTGCACCATCCTG lacZ-RT-R
PCR genotyping (lacZ) TTCAATGCTGTCAGGTGCTC lacZ-F
PCR genotyping (lacZ) GCCATGTGTCTCAATGTTGG lacZ-R ‏دمج النمط الفردي‎ 04+ GTCTGCCCTCTTTTGAGCTG rs7569946-F ٠ ‏الفردي‎ ball PCR GACTCCAGACAATCGCCTTT rs7569946-R ‏الرابطة‎ , , AAAGGCGATTGTCTGGAGTCAACCTT rs7569946-R-rc— , haplotyping fusion y.all
PCR CTTAGCACCCACAAAC rs1427407-F ‏النمط‎ «PCR CATGTTACTGCAACTTGCTTTTT rs1427407-R ١٠ ‏الفردي‎ ‎bail) ‏"دمج‎ AGATCCCTCCGTCCAGCTC rs7569946-nested-F ‏الفردي‎ ‎z=sTGAAAGTTCAAGTAGATATCAGAAGG PCR rs1427407-nested-R ‏النمط الفردي‎ - ٠٠
AGCAAACCACACAGACTGAAGA 3C-hBCL11A-150.6-F oY AY
-١»7-
CCAGAGCCATTTACGTCACA 3C-hBCL11A-140.9-F 3C CAGAAGGGAATAAGGTACTCTGGA 3C-hBCL11A-114.1-F 30 GTTTGGGCCTCAAGGTCTTT 3C-hBCL11A-111.5-F 30 GAGGTTGGGAGTAAGCATTCTG 3C-hBCL11A-109.1-F 3C ACGCATCAGAATGCCCATAG 3C-hBCL11A-100.7-F ه٠‎ 3C TTTTGAAAGAAAACGCTGACA 3C-hBCL11A-92.3-F 30 TTCCAGCTGGTTAAATTTAGGG 3C-hBCL11A-80.2-F 3CAGAAGGGGCCAGAAGAACAG 3C-hBCL11A-T717.2-F 30 CCTTCTTTTTICTTTCTTGGTTGC 3C-hBCL11A-72.5-F 3C CCCTGCGTGCCATTAAAATA 3C-hBCL11A-66.8-F ٠ 3C AAAGGCCTTGGGAAGAAAGA 3C-hBCL11A-61.2-F 3C GCAAGTCAGTTGGGAACACA 3C-hBCL11A-59.1-F 3C GGACTCAGTGGCCTCTTTTG 3C-hBCL11A-57.1-F 3C CTGTCTCTGTCTCCCCCAAG 3C-hBCL11A-52.2-F 3CCCAATGCTCCTGTAACAAAGG 3C-hBCL11A-47-F ١ 3CAATGCAGTAGGCAAAGAAGCA 3C-hBCL11A-43.5-F 3C GAAATTTGGAAGGCCACAGA 3C-hBCL11A-38.6-F 30 GCTTGCAACAATTAAAAGATGG 3C-hBCL11A-29.3-F 3C GGTGACAAGGGAGAACCACT 3C-hBCL11A-27.1-F
OVA
-١؟-‎
TGATTTCCTTGCAGCCTTTT 3C-hBCL11A-20.9-F 3C CACACCCACAGCAACAAATG 3C-hBCL11A-8.6-F 3C TGCAGAGATCCCCCAAAGTA 3C-hBCL11Apromoter-R 3C CTCAGGGAGCAAGGGAAATA 3C-hBCL11A-n8.3-F 3C CCCTCCCAACAGGGATTTAT 3C-hBCL11A-n12.6-F ‏ه‎ ‎3C CAAAATTGAACACCTATGGTCTGA 3C-hBCL11A-n19.5-F 3C AGGAAGACTTTGGCCTCCAT 3C-hBCL11A-n29.8-F 3C-hBCL11A-n34.6-F TTCCAAACAATTATACACCAACAAA 3C 3C TTTCATGGGGAATAGCCAAC 3C-hBCL11A-n54-F 3C CCCTACTTGTTATTTGCTTCTGC 3C-hBCL11A-n78.2-F ٠ 30 3C-hBCL11A-n104.4-F AGCTGAAGTTTCAGGGACCA 3C CCACACCTGCCTTCCTTAGA 3C-LCR-HS1-F 3C TGCATATGATGGGGTAGCAG 3C-LCR-HS3-F
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-68.7-F AAGAGAAGGGGGAATTTGGA
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-68.7-R TGGTGATAAGGGCAGGAAAC ٠١
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-65.5-F AGGAAGCTGCAGAAAGGTGA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-65.5-R TGCTTCCCCAGGTTTAGATG
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-64.7-F CCACTGCTACCCAAAACGAT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-64.7-R CAAGAGCGAAACTCCACCTC ه١‎
-١»6- 010-004 ChIP-hBCL11A-63.9-F ACTGTGTGCCAAGTGACCAG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-63.9-R CAGCTTCCTTCAGGTGCTTC
ChIP-gPCR CATGCTGCCTTTGTCTTCTG ChIP-hBCL11A-63.1-F
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-63.1-R TGTGGAGCTCTGGAATGATG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-63.0-F GAGCTCCACAATCCAACTCC ©
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-63.0-R CCAGGAAGGAAATGAGAACG
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-62.5-F ACCCACAAACATTTCCCTTCT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-62.5-R TTTGCTCTTCTCCAGGGTGT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-62.4-F TTTAAACAGCCACCCCACAC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-62.4-R ACCACGTAGTTGGGCTTCAC ٠٠
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-62.2-F TTTCAACCATGGTCATCTGC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-62.2-R CCCTCTGGCATCAAAATGAG
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.8-F GAACCTGGGAGGCAGAAGAT
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.8-R TTTTTGGTGAGACGGAGATTT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.7-F CCGGGCAACAAGAGTAAATC ١
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.7-R ATGCCTAGGGTGTTTTGACG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.5-F CTCCGTGTTGAGAGCCAAGT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.5-R TGTGTGGACTGCCTTTTCTG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.3-F CAGAAAAGGCAGTCCACACA
OVA
—\yo-
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.3-R CCTCTCCAGATTCCCTCTCA
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.0-F AGCGAGACCCTGTCTCAAAA
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-61.0-R TCCAGCAGGCTTCAAAAAGT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.8-F GGTGGATAACCCCATCTCAG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.8-R GGAAATGAGAATGCCCTITG ©
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.5-F CAGTCTAGAAAGCCCCCTCA
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.5-R GTGGGGGTTCAGTGGTTAGA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.3-F TCCATGGTGTGGAGTGTGTT
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.3-R ACCCACATGGCAACCAATAG
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.0-F CCATTCCCTGGAGAGTTCAA ٠
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-60.0-R GGGGTCTCTTCCCATCATTT
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-59.9-F ATGGGAAGAGACCCCAAAAC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-59.9-R GGACTCCGAACACCACACTT
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-59.5-F GGGATCAGAGGTGAACAGGA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-59.5-R TTTAATCAGCTTCCGCCACT ٠٠
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-59.0-F TGGGGAGAGAAGAGTGGAAA
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-59.0-R TTGCCAATTGGAGATTAGGG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-58.7-F TGCTCCGAGCTTGTGAACTA
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-58.7-R GGGAAAGGGCCTGATAACTT
OVA
-؟١-‎
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-58.3-F GAGAGTGCAGACAGGGGAAG
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-58.3-R CCTCTTTCGGAAGGCTCTCT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-58.0-F TGGACTTTGCACTGGAATCA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-58.0-R GATGGCTGAAAAGCGATACA
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-57.3-F GGGGAGATGATTGAAAGCAA ‏ه‎ ‎ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-57.3-R AGAACTTTCCCGGTTCTGGT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-57.0-F GCTCTGGACACACAGCAAAA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-57.0-R TCAAATCCTTGCCTTGAACC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-56.6-F CCTCAAATCTCCCTCACTGG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-56.6-R GGGAAATGGGTCCTGCTTTA ٠
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-56.3-F AGGGAGTACACCGCAGACAC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-56.3-R AAGGAAGGCTGCAAGGAAAT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-55.9-F GACTTAAACTGCCGCTCCTG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-55.9-R TGACTGGTAAGAGCCGATTG
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-55.3-F GCTGGGGTGAGTCAAAAGTC ١٠
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-55.3-R GGTCACCTTAAGGAGCCACA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-54.8-F GCACCTGCATTTGTTTTTCA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-54.8-R GGGTCAGATCACCTCTGCTC
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-54.4-F AGGCATCCAAAGGGAAGAAT ه١‎
١ ‏لا‎ ‎010-004 ChIP-hBCL11A-54.4-R GAAGATAATGGCAGCCCAGA
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-54.0-F TGGGAAAGGTTGCACATTCT
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-54.0-R GGGCCTCAGGCTCTTTATCT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-53.4-F CCACTGCCAGGCTGTTTACT
ChIP-gPCR ChIP-hBCL11A-53.4-R GACCGAAAGGAGGAGAGGAG ©
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-53.1-F CAGTTCCCCCATTATGCACT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-53.1-R CCCTTCTCTGAAGGCACATC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-52.7-F TTCAAGCCTTGGTGGATAGG
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-52.7-R GCCAGGAAATTGGTGGTAGA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-52.3-F TGCCCACATGAGACATCTTT ٠
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-52.3-R AAATTGGCTGCCATTGAATC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-51.3-F CCACCAGAAGTCCTGGAAAA
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-51.3-R TTGGAGGGACCTGATCTCTG
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-50.2-F CCAAGATGGAGAAGCCACAT
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-50.2-R TCTGTCTTGGGTCTCCTGGT ٠
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-49.8-F GAGAAGCCCTCAGCAAACAC
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-49.8-R GGTTGCATCTTGGCTCCTAA
ChlP-gPCR ChIP-hBCL11A-49.5-F GAAATGCAGGAAAGGAACGA
ChlIP-gPCR ChIP-hBCL11A-49.5-R TCTAGCAGATGGGGTTTTGG
OVA
—\YA-
ChIP-gPCRAGTCTGGGCAACAAAGTGAGA ChIP-hOct4-prom-F
ChIP-qPCR AGAAACTGAGGAGAAGGATG ChIP-hOct4-prom-R
ChIP-gPCRATAGACCATGAGTAGAGGGCAGAC ChIP-hHS3-F
ChIP-gPCR TGATCCTGAAAACATAGGAGTCAA ChIP-hHS3-R
ChIP-gPCR CAGATAACTGGGCCAACCAT ChIP-hHS-40-F ‏ه‎ ‎ChIP-gPCR ATTCACCCCTTTCCCTTGTC ChIP-hHS-40-R
ChIP-gPCR CGTAGCTCAGGCCTCAAGAC ChIP-hGAPDH-F
ChIP- CGAACAGGAGGAGCAGAGAG ChIP-hGAPDH-R qPCR aad) ‏قليل النيوكليوتيد المستخدم في التجارب‎ ٠
OY AY

Claims (1)

  1. -١84- ‏عناصر الحماية‎ BCLIIA ‏تشتمل على تعبير منتخفض عن‎ progenitor cell ‏طريقة لإنتاج خلية أولية‎ .١ isolated progenitor ‏أو بروتين, تشتمل الطريقة على تلامس خلية أولية معزولة‎ mRNA ‏للخلية على الكرموسوم‎ genomic ‏الجينومي‎ DNA ‏مع عامل يربط حمض‎ cell UCSC ‏(طبقاً لتجميعة‎ TYY LVYYA ‏كتخمنصا,‎ VY Te ‏الموقع‎ ١ chromosome ‏عليه خفض‎ ly (human genome ‏البشرية الجينومية‎ Genome Browser hg 19 © .BCL11A ‏أو بروتين عن‎ MRNA ‏تعبير‎ ‏معزولة‎ genetic engineered human cell ‏طريقة لإنتاج خلية بشرية مهندسة وراثياً‎ LY ‏واحد على الأقل تشتمل على‎ genetic modification ‏تشتمل على تعديل جيني‎ isolated ‏مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على‎ 15018180 cell ‏تلامس خلية معزولة‎ Vo ‏أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من‎ DNA ‏يستهدف حمض‎ endonuclease ‏إندونيوكلياز‎ ‏والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز‎ DNA ‏يستهدف حمض‎ endonuclease ‏إندونيوكلياز‎ ‏للخلية على‎ genomic ‏الجينومي‎ DNA ‏ويشطر حمض‎ DNA ‏حمض‎ endonuclease ‏ويتسبب في تعديل‎ 1١7 ,7748 ,1 14 VAT Te ‏؟ الموقع‎ chromosome ‏الكرموسوم‎ ‏واحد على الأقل فيه.‎ genetic modification ‏جيني‎ 5 isolated progenitor ‏أو ؟, حيث الخلية الأولية المعزولة‎ ١ ‏الطريقة وفقاً لعنصر الحماية‎ LY ‏تكون خلية أولية لتكوين الدم.‎ isolated cell ‏أو الخلية المعزولة‎ cell ‏الطريقة وفقاً لعنصر الحماية 3, حيث الخلية الأولية لتكوين الدم تكون خلية لسلالة إريثرويد‎ LEY . erythroid lineage isolated progenitor ‏أو ؟, حيث الخلية الأولية المعزولة‎ ١ ‏الطريقة وفقاً لعنصر الحماية‎ Lo ‏مستحثة متعددة القدرات.‎ Stem cell ‏تكون خلية جذعية‎ isolated cell ‏أو الخلية المعزولة‎ cell oY AY
    -.؟١-‏
    7. الطريقة وفقاً لعنصر الحماية 7, حيث يتم تلامس الخلية الأصلية لتكون الدم خارج الجسم الحي أو في المعمل. ‎Ly‏ الطريقة وفقاً لعنصر الحماية ‎١‏ أو 7, حيث يكون التعديل الجيني ‎genetic modification‏ ‎oo‏ الواحد على الأقل حذف. ‎LA‏ الطريقة وفقاً لعنصر الحماية 7, حيث يتخلص الحذف من المنطقة بالكامل بين الكرموسوم ‎chromosome‏ ؟ الموقع ‎VY‏ 14-:1, 74ل7, 117 أو يتخلص من ‎sda‏ من المنطقة التي ينتج عنها مقاطعة واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل ‎.(DNAse 1 (DHS‏ ‎ye‏
    ‏4. خلية بشرية مهندسة ‎genetic engineered human cell Lil),‏ معزولة ‎isolated‏ ‏تشتمل على تعديل جيني ‎genetic modification‏ واحد على الأقل على الكرموسوم ‎١ chromosome‏ الموقع د الا تفاضا خالا 17 يتم الحصول عليها ‎alg‏ ‏الطريقة وفقاً لعناصر الحماية 8-7. ‎Vo‏ ‎Aug)‏ تشتمل على خلايا بشرية مهندسة وراثياً معزولة وفقاً لعنصر الحماية 4.
    ‎.١‏ طريقة لزيادة مستويات الهيموجلوبين ‎hemoglobin‏ الجنيني في خلية, تشتمل الطريقة على خطوات: تلامس خلية معزولة ‎isolated cell‏ مع كمية فعالة من تركيبة تشتمل على الأقل على ‎٠‏ إندونيوكلياز ‎endonuclease‏ يستهدف حمض ‎DNA‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير من إندونيوكلياز ‎endonuclease‏ يستهدف حمض ‎DNA‏ والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز ‎endonuclease‏ حمض ‎DNA‏ ويشطر حمض ‎DNA‏ الجينومي ‎genomic‏ للخلية على الكرموسوم ‎chromosome‏ ؟ الموقع ‎١١7 ,7748 ,1 14 VAT Te‏ ويتسبب في تعديل جيني ‎genetic modification‏ واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن ‎Yo‏ الهيموجلوبين ‎hemoglobin‏ الجنيني في الخلية المذكورة, أو سليفتها, بالنسبة إلى الخلية المذكورة قبل التلامس المذكور. ‎oY AY‏
    -١؟-‏ ‎VY‏ الطريقة وفقاً لعنصر الحماية ‎,١١‏ حيث الخلية المعزولة ‎cell‏ 15018180 تكون خلية أولية ‎progenitor cell‏ لتكوين الدم. ‎NY‏ الطريقة وفقاً لعنصر الحماية ‎VY‏ حيث الخلية الأصلية ‎progenitor cell‏ لتكون الدم ‎hematopoietic ©‏ تكون خلية لسلالة ‎erythroid lineage ai)‏ .
    4. الطريقة وفقاً لعنصر الحماية ‎,١١‏ حيث الخلية المعزولة ‎isolated cell‏ تكون خلية جذعية ‎stem cell‏ مستحثة متعددة القدرات . ‎No ٠‏ الطريقة وفقاً لعنصر الحماية ‎VY‏ حيث يتم تلامس الخلية الأصلية ‎progenitor cell‏ لتكون الدم خارج الجسم الحي أو في المعمل. . الطريقة وفقاً لأي من عناصر الحماية ‎,١5-١١‏ حيث يكون التعديل الجيني ‎genetic‏ ‎modification‏ الواحد على الأقل حذف. ‎Vo ‏حيث يتخلص الحذف من المنطقة بالكامل بين الكرموسوم‎ ,١١ ‏الطريقة وفقاً لعنصر الحماية‎ YY ‏الموقع 10, 15لا, 1-144 74لا, 117 أو من جزء من المنطقة مما‎ Y chromosome .(DNAse 1 (DHS ‏ينتج عنه مقاطعة واحد أو أكثر من المواقع مفرطة الحساسية ل‎ ‎NA Yo‏ تركيبة تشتمل على خلية أولية بشرية معدلة وراثياً تستخدم في صناعة دواء لزيادة مستويات الهيموجلوبين ‎hemoglobin‏ الجنيني في ثديي في حاجة إليه, حيث يشتمل التعديل الجيني لخلية أولية بشرية على خطوات تلامس خلية أولية معزولة ‎isolated progenitor cell‏ مكونة للدم المذكور مع كمية ‎Aled‏ من تركيبة تشتمل على الأقل على إندونيوكلياز ‎endonuclease‏ ‏يستهدف حمض نووري ‎Deoxyribo Nucleic acid (DNA)‏ أو ناقل تعبير يحمل متوالية التشفير ‎Deoxyribo Nucleic acid ‏يستهدف حمض نووي‎ endonuclease ‏.من إندونيوكلياز‎ Yo Deoxyribo ‏حمض نووي‎ endonuclease ‏والتي بواسطتها يستهدف إندونيوكلياز‎ (DNA) ‎oY AY
    ‎Nucleic acid (DNA)‏ ويشطر الحمض النووي ‎Deoxyribo Nucleic acid (DNA)‏ الجينومي ‎genomic‏ للخلية على الكرموسوم ‎chromosome‏ ؟ المرقع ‎,٠١‏ الا ‎Cem A‏ 778, 117 ويتسبب في تعديل جيني ‎genetic modification‏ واحد على الأقل فيه, والتي بواسطتها يزيد التعبير عن الهيموجلوبين ‎hemoglobin‏ الجنيني في الخلية المذكورة, أو سليفتها , © بالنسبة إلى الخلية المذكورة قبل التلامس المذكور.
    4 . خلية بشرية مهندسة ‎genetic engineered human cell Lil),‏ معزولة ‎isolated‏ ‏وفقاً لعنصر الحماية 9 أو تركيبة وفقاً لعنصر الحماية ‎٠١‏ تستخدم في صناعة دواء لزيادة مستويات الهيموجلوبين ‎hemoglobin‏ الجنيني في ثديي في حاجة إليه. oY AY
    1 ‏ا‎ Fail TSE ‏يح + اج‎ 1: ‏شهة بالكريات الجفراع‎ Agia 5 Hi er 2 A Edn, ORR Na 0 fe 1B ANNE RY ‏ا وام حلا‎ BRR a # ‏قا انب‎ ‏ل‎ ah ‏الا‎ 2 mg ‏رز‎ ‎3 i NRE 5 ‏وح مجح مجح‎ RES, RNR 1 : taal TLE « ‏معد بعيد‎ ‏و‎ SSN BA ‏ا ال ا‎ DIRT. SS Toa Tae I ER ‏ل ا‎ Wg] BE ol A ‏ا ا ا ا ا ا‎ I ; RE a OS CE Da ad ‏الوك‎ ‎86 ‏ا ال‎ ‏ا ا ل ا م‎ : ‏ا الا‎ Oh wv ‏حي رتو بن‎ ‏دعو ااا‎ «« 8 CEES esate RSE IR RR A Rio ‏بين الجينات:‎ ‏دي‎ dab SR Ay sR M RE TR SRY Ww ‏ف‎ ‏اخ‎ » ky a. SRR SER vd RSA SRN RR Sanna NRE oy 3 ‏ضاي لاقي لني ا بت لما ايت لح اح ل ا ا‎ PER Shae 3 Shia #* ‏معز تريب‎ ‏ا‎ : SRR : ‏عا بعد‎ ‏ا‎ Mk § A i i, a RRR ‏ا‎ ‎aR SRE HEH NE Ny ar Ss K SERA ER ‏قوق لدج اجو اي‎ 1 ‏ال يا ال لات ا‎ 5 = fet] 3 RRC An or DIRE eels HR OT RS i NEE ‏خم‎ ‎aa 58 ‏عرو‎ ‎NW ‏اح ل ا ا‎ eh eS ‏ا‎ ‎RR # ® FUTR ‏ال‎ 1. Neh SO - ‏نت‎ A ‏بيد الجينات يا‎ ‏الاي بحت :7 . ا 0 0 ات‎ ‏خا وا لا‎ Fu 2 1 Sk ; OY AY vod . oreo AAS : Ca : Ta 8 ro BARAT : Py & ps 2 ‏الاي ا & 8 لسية شيهة بالكريات الصراء مم‎ 1 ‏ا ل ا‎ ‏ليو ا ل ا ا ل‎ SN ‏بالكريات الخبراع سس‎ AS ‏د" 85 لسجة غير‎ 8 ‏ا‎ wie al & RR PARE ‏ظاهري‎ : fe " 3 ‏م وق‎ 5 i Pe ; & ey > Re 1 hi Cai ‏ا‎ ١ a ai ‏”تي‎ ‏عشرائي ...م‎ SNPS & A : " SF FF ‏ممت‎ ‎ّ ٍ & F og & ‏مر و‎ : F apd ‏ل 7,7 8 ض‎ ‏إٍْ‎ & # Me A 1 & wept & A, ‏ل ل حي‎ ny hi} ’ 1 & K ‏حيتت ل‎ > A 8 & es 1 ‏الل ا‎ 5 8 8 oF ao 0 & & 2 | & 4 A ‏ص‎ te F & ‏ا م‎ : ‏مت‎ ‎i & Fi SR 1 Ca > SRC i oF &F d : ‏اع‎ ‏إ‎ & oF re > & ase oF # Sa oF ‏ا ين‎ ‏ا ا‎ FB ‏ا َ “التي‎ ‏ال ا ا‎ : ral 5 i. " ‏ا‎ Sa ‏الل ا م‎ ‏الا السب‎ Leet fret RRR § 3 8 h! Ea Yan ‏واوا‎ ‎8 ‏ا‎ TE 0 Ey FES ‏المسافة إلى تحن شبية بالكريات التمراء‎ (ny Tt 3 ‏شكل اب‎ AR
    _ \ ¢ ‏اج‎ ‏شكل ؟)‎ 11 wn rn nm hn sn cnn rn = XE ot bn ono sm on i em drs Sn ‏قا تارك يل‎ oa NE Eh ‏لاعت ا يل « حا اك‎ #* kn ‏بام عا بد يلات ادك‎ JR ‏يما ما ايت كاتف ملام تال لهالل جالع لأالعا لتقا ع اهما لعا ل‎ SUF ‏باع لل ملأب‎ SRA ‏حد‎ ١ ‏ماب لأا لايل ات لد يأل ب سألا ب ليا م لماي‎ SPI ‏حاب اسان اك امات‎ 75 ‏اهلا عد انتب سه حا سه سهدت انها سه * ب‎ =e} em en ye om ch lw pe RefSeq Ske WERT 1 BCLTIA ‏موصعم‎ | oo ne ‏سنا‎ & pI NN 8 ‏لع لد مق‎ den sas fn ahs JO RRC 8 § Fa ‏يا‎ JETER 8 [REDEEMER SNE SS | I. H3Kdmes i OU HiKdmel © TRE } Poo 1 i £0 § oa ‏هذ‎ d 1 1 sins J TPR CIEE C1 INR CR PPR FTG | TR § er 1 ET ‏م‎ 8 8 88 : H3K2Tas 154 ) 8 ‏اماع ا‎ AS ST NITY TT wo v1: WF ‏م‎ ‎pot Ul Cy. ‏ل"‎ $a Frm aii, RTE EE WR 8 ‏لأا نات اه لساك بم شاد ماقا‎ JURE HE RN ST CRO cata Ml i} & Free SRG: + J SET: SOS TC UR: NU: | J Tay 7 § : ba 8 ‏ا‎ ee ee i | ‏ا‎ ‎spd Sie Shy ‏جو وززق نيه‎ |] i 0 : i 1 ‏ا ا‎ 0 0 ‏للمخ‎ DNase 0 file NE pce JU PU SI WR. SOUL UII CCI DUS SPRUUT SRE SEN ein: maida Rann or, Lode. Amada: an or WE ara ‏لت نت ل تا‎ Ta naam [RE] 1 5- did Gad DNase | 1 : 8 ‏ف ماقي‎ SN SE: SU SU OU SOP SSR Roa T- ‏هفولا لحلية لنفاوية‎ 0 ‏حل لا لحاس عم‎ md rn ‏عله‎ eam mm ‏بحا ملم لو وج عا ام‎ bmn me ae ‏ب اسم بع اسع عي اج‎ Eat ‏جد عت‎ en ‏ليا بق يفا‎ edn ‏الع‎ mn ‏جيه‎ deme ‏با يدر ليام‎ a ‏عي الي بعلم الح ايع .يلما‎ ae ‏خم الاقف ديم يجي ملفا مل‎ cman ‏لم ايحا‎ van HbF ‏ب‎ du SNPs. 3 ] ! + +! 113 : {1 FREI £515 I SN ‏؛‎ i i ‏حاون‎ SNPs 01 ١ ١ ‏شكل ؟*ب‎ fh SL a 7 : ‏و تدج‎ 3 4 0 = Ty li t : i 1 i 8 : : £1 i FE WA bes ° i : wy HEA 4 0 ‏ا‎ 1 ; IE SA 04 1 8 0 2 ‏إٍْ‎
    ‎; . SHE NE ‏و‎ yo a. : k IE od FE ‏ب‎ H 2 a TE I ed i ; Ng IEEE SE ‏لا‎ ! ; ; ‏لوا 0 0 انم‎ 0 0 i ; A { | bo ‏نوم اليد‎ 3 EOE 3 3 eH ‏ل‎ i 1 i 0 0 1 1 ‏م ا‎ 1 i! i Sp SESE ho - NN - ‏تحط‎ By sf ‏يديرت تعس‎ 3 ; 0 1 8 i 1 i : i HIRE, 3 3 + ‏جيم 0 اسع 0 اسم‎ : I A : 2 ‏بي‎ Pr ‏رم‎ : hy : { Pod TE 4 4 * ‏لال لأسا ا لس ايسا‎ ٍْ 0 ‏لجن‎ Ser ‏دما‎ Yer ‏لهو‎ tes Be + Bam germ tens + 0 Pho bg ‏المسافة من‎ : ES I 3 ~ :
    f . i FO I 80018 TSS (hd) ‏خلخ‎ 3 HE 1 0١ ‏؛‎ ‎: = 0 SE ‏اا ل‎ BCLTIA ‏ببييويور‎ ‏تت‎ : HI fg £0 1 1 | 0 10 ‏ا‎ A : ou BNPs [ LG ‏م ل‎ 1 ! |] 0 ‏ا‎ ‎* ‏الست ب اااي اي ايه‎ & TAPAS LT 3 relly GAPDH 0074 HS3 540 va A 0 a et a San BELTIA 785 (kb) ‏من‎ Bll ‏وتع‎ ‎AR
    EAS FS 143T407 SRE ‏طبر‎ CAACASTRCOCTISTOATATORA Hr - 2 - ِ ‏ا‎ re FY HEF DARCATTICLCTTOTGATATUL 4: 5 HAR Ri 0 ‏الوا‎ 8 : ‏ل أي‎
    AER. ‏مشا لل اسل‎ ‏مقي لح الا‎ i . bil Ga TR 2, LL ‏اس‎ ‎= Fog £5 00H yd 7 bs = i # Bg A LF ad : NE bt i 0 ‏نيا‎ ‏ها اذاه دك‎ as Th TT ‏نه‎ ‎3 i 3 i ‏مدا لما مات ما اا 1 فين‎ A ‏اميت‎ ‎Input GATAY Tala Chip iy ‏شكز‎ ‎(57560048 ‏و‎ ‎ER ‏خبط‎ & 0% ‏عت او‎ & T 1 BOLTIA ‏ههه‎ ‎pa aE An, f i ‏الب‎ Bam ‏اد محا‎ 3 03 3 . 33 ou) ‏ل‎ 0 ly td 1 ws 1 ‏رقا‎ ج٠‎ Te 1 [is 1 TE ‏ده‎ win Bw 3 + ‏ما‎ 0 ie 3 FEE ‏سي سس سنس سسأ‎ ‏إلى ثلاقاج‎ CONA ‏شكل أب‎ 0 Ea ‏دبك ا ا‎ ‏و ل الل‎ ‏ا ا اس ا‎ ‏ل‎ i 1 va 3 ‏و‎ } 8 3 : NN ‏اج‎ i NY) = i NY iw 1 NU a Nie Rok ¢ wg VAN 1 AN a 0 i ke NN NE SS Ee ‏موق عوقف حوعه‎ ‏فم ردي 7508173--427407اا‎ ‏ا‎ ‏شكل اج‎ SAY
    -\Vev- or LL E125 FB ‏ا ا ا ا ااا تا اا حا‎ ‏ا ااا ا‎ : Lo on
    LS . ‏ا الس‎ 4 Lh Coal ‏اا‎ i ‏"للك‎ end tar a : EES. Sk Sa ‏ا ا‎ EE RE 0 a SU eae aan NN ad ‏ا‎ ‏ا « ا‎ a ‏ااه‎ EN Nd ‏رالا > ل‎ yo ‏الح د ان أت ا‎ ON 7 3 EE a oR ‏لي‎ ¥ ‏ا الا‎ CA ‏اا‎ ‏ا ا ا ل‎ i Te ee ‏ا ا‎ ‏ااا ا اا‎ E12 5FL I NaN N 3 ‏ا ا اا‎ 3# i Eo NER DE ae . 1 Pe . oe % on 8 4 *# BN = NTN SR ARE TR NE i. Ta Ne “ LL Lo Ng Be Loo ‏له‎ + CORON = 0%, = SRY LL AN gy BE ‏ب‎ = eA ‏و‎ hat SY 3 ١ 0 fT Lo NE « 1 ‏ا‎ La NN ‏ل‎ Cap 5 » - HER 8 NORE ‏ل ا ا‎ 5 ap we? AE WN Cl ER ‏جا‎ a & ‏يج‎ FS : 1 3 0 ‏ليا اا‎ ١ 1 ‏شكل ب شل‎ 1 ‏ف‎ 8 LacZ EOC 86 ‏ا‎ ‏ا‎ ‎Yes ER Raw Hoe ARE Pea 5 a Si EE 0" NN ae ‏ال‎ ‎bE ta NNN Shas = WERE Sea g a Re } NN San ¥ NN Hi i 3 Nee valuta Ne aw QR es NR Nhe RR ae NN Jay NN. LE" } ‏ال‎ SOR rani Ph RON RIS ‏ال‎ ‎CO71+Ter110+ CD19+ La 8 8 8 Ek ~ ES i ~ ARE : ‏الا‎ ‎SORE ‏ا اموي ا‎ 8 a i) BL i 8 8 0 ‏ا‎ hp Co 2 a | ¥& : 80 2h 7 1 ' 3 5 a 0 8 Se 4 Js © 2 ١ Ae bo Sa. Lh TR Bl al 10 Woe a | . ‏شل‎ X A SE ET 2 Se ) ‏ححا يج‎ > od £ oF SY i i @ * zi ‏شكل‎ ‎OY AY
    -١؟0م‎ ‏ل تن‎ ٍ ! i ‏ا ا‎ ١ ‏0ه‎ 08 MEL ‏ونم‎ ‎IE ; 8 Exan-di (KL ‏قط رق‎ & RK rat Adan 0 i NES ‏عاتن‎ 4504-4 0 : 8 ENON IL ‏طحي‎ db Dt HA LE 14 Ld i.
    YD 4 1 3 3 1 3 CAR RE WN | > ‏ب"‎ 1 Na 8 NY NN 1 a 0 4 a 4 3 0 = PNY NAY NY ~ ‏و‎ ‎= {8 Ry NN 4 aN , 2 N a 2 = HE 3 oy 5 3 AN 3 Ah NR 6 ‏ل ا‎ ee & + TN 2 DH) SN fs al va as a a ‏ال ا‎ ov) Ne APS ‏ا‎ ‎{4 _s NK NY aN BLEHA ENN Fa i: XR PERERA BRA 8 ‏الا م ا‎ Cs \ NY Ne 0 ‏ا‎ mR 1 ‏ل‎ ‎0 8 Sa & pre ERR I ES ‏ب بلا 1 ات مس اتا‎ NY © ‏ل‎ Ee ‏ل‎ ‎١ 7 N - 2 ) 1 ‏ل ااا‎ ‏ا‎ ow ‏مسيم‎ #1 #2 GAPDH. ‏ا ا ال ا‎ ١ 0 ‏ات‎ od ‏م اج ده ب ومسي‎ ‏خاف4 ففخ‎ Bas AST ‏نسيتة 4وفق-4‎ SEE ER ‏تاكاه مشا لاسا ساسا‎ ١ ‏ممما ملأتا اا ااا‎ MEL Pro-B 08 1 Fro-B ‏شكل حاب‎ ‏شكل ما‎ ‏با‎ ‏ب يروك‎ ‏مي‎ | 8 N 4 8“ 0 : SR + 8 1 4 0 ‏ل‎ EX w WHEE ER 4 NN ‏يي‎ ‎5 ‏بد‎ 8 3 Na 1 ‏الجاع‎ ‎3 NY a DY 8# ‏بحي )لزه‎ 0 “8&8 2 Cae 0 ‏ا‎ BE ": Na ZAR AN # Soil NON © d 0 BB nN Nl Br 8 8 8 pe ANN NO NN Se 0 SIRNAS TEE OE CLE ‏د‎ © : 0 ١ Iw IE 3 BY 83 ‏سس لإ يب‎ ieee eee ‏ناخ‎ 4-504 Has MEL rd EN ‏شكل دج‎ CAN
    -١6- EN IR TR RE ‏سس اال‎ ‏ل ا الا‎ RENE ‏ال‎ ‏ااي ا ا‎ ‏ل‎ ‎A NAN aN EE SE Sa 0 an i gla CL as RR ‏ل‎ ‏ا‎ SV NE Loa a oN Cl . ‏ا‎ ‎oo LL ak LE Le 3 0 ‏ل ا‎ ‏ااا‎ ‏ا ا ا‎ SR ‏ا اا‎ ‏لسع اا ا ات ات‎ a 1 ‏ا ل ا ال‎ 0 a Le So NN a RE C0 0 ‏و ا‎ ci 5 os N OA AAR ES Nea SE INE No Bc a ET NN 18 ‏ال ا‎ ‏ب جد ا ل ا‎ oN LF Shi 4 EEE SE NIN NN RE aN A SR SS Na NR REN BIN Ne Ea ON NaN 0 ١ ‏شكل‎ ‏بو ججد بود +ع‎ Yet ‏حت‎ sad avs 5+ set ‏+؟5 +جج جوج‎ kb ‏ل‎ 1 ! 1 1 1 { 1 poe 155 OUI up LEERY I seas W ‏تيع ل يح اس مس‎ NG NN ‏اكد‎ NEN 8 NE Ne Ra 5 8 RE iN . ‏اال ا ال الا‎ ‏اا‎ Lae SB a No ae ea RT Rv ‏الا‎ TNE a ‏لاه‎ Yo ‏دار‎ an 234 ‏اتا 0 ابم اا ا ل م ما‎ i ‏1ل ا‎ ٠٠٠٠٠..٠٠.: Ae ‏وجوش انه‎ ON ‏اللا ال الات ال ا يي يي مسو ص اس‎ ER 8 ‏ل‎ NR ‏ل . ا ل ا‎ RR RN Te NORE des NE TL SRG Ee 5# ONAN ay ‏ا ا ا ا ٍّ ا ا اي‎ ‏ا ال ا ل ا ل 0 ا ل ا د‎ SAY INN 5 Ri a) oN Na NG RUNS aA a BR aa ‏ل‎ ANY ON AEN NE ‏ا ال‎ RR ‏ا‎ ‏ا ل ا ا اد‎ Na Tl Ca aa a? aa Na aa ‏ديد‎ Na 1 ‏ال‎ ‏اللا ااا جار‎ a2 3 rea I TR [RRP TRUE TRNE 4 SN REA a a X Na a 2 ‏اا‎ RA a 0 STIR ey RG vis WN J. : TE YN aaa Ra wr SON eae ‏ال ا ام اا ا ا ل‎ ] AN ER re ‏اد‎ Lose JN) Boo bo hoo SON Ra 9 Ca 3 AN ‏التي‎ Va 3 a.
    TENE MINN AME OD haar ‏ااا‎ ENG ‏ال لأ‎ dE L 0 ‏أ‎ ‎EN SENG aR ROC RE TR Ah al Baa LONE TaN NET ‏ل‎ ‎Sa N aay oa Na ‏سن‎ NG La we CAR
    -١ ‏2م‎ ‎pn RLF ‏وك‎ ‎£2 ‎6 1 0" ‏ل‎ ‎0 ‏بال‎ a 1 a 0 - + 0 1 ‏لم‎ 0 8 Ya a Ho ved i Ih 0 \ A 0 ps : \ Ss aR | ok N ‏ال‎ 8 \ 5# aw ١ 1١!!! HOE ‏لا ذه §& 8 د‎ ١ § 8 BEER BE \ 0 0 A
    * 5. RE : iE. 7 a en ES I. ‏سن‎ Nee 8 ‏نسحي‎ ‎+ ‏م‎ + Tr + Xr ‏م‎ ' PRE ES 1 ow bong ‏نطول‎ BOLTIATSS ‏الساتةت ب‎ La oo 8 V ‏شكل‎ ‎SAY
    — \ o \ — BE i EE EE a 20111 er So. ve L§ SREP ‏امات ينح رع يا يقر‎ ‏ا ل د‎ CA 1 1 Refseq =n Tra HE EL [fe] . 1 1 23 ٍ 1 i fa 1 i i 8 ‏ب‎ ‏ا امس أ ا سس حت ل ل اا‎ han ‏ال‎ ‎I NE ‏اا : اراق‎ 43 ‏ل‎ ro ‏تم مس روأ لالت سان سس نس لأف باتلا اللالمسسسسسست‎ A A ‏تح متا‎ TAR AIA AR FARA AANA ‏اي © 1 تح‎ 41 0 Sal : ‘ — wal ss drag Cr a . ‏ااه ما شاك به اسح سر‎ SRY ‏تت الا‎ SI TN ST PRE SEN [25-0] wl Log! H3KZF ac 8 N 0 ‏ا‎ Ng a aldo RG Ng 3 OR 0 strani EN IR SRA a ‏مص سدع هاا سا1‎ Sos ‏بمج‎ 0 a. ‏ساسح تسج‎ TU SH SEPP A NC ‏ا ا ال ا ل‎ ey 1-1 58 TAL] ‏ا‎ ‏ص"‎ >> aR Ah i A te Sn AT i rai
    6 . Sant] < Seufingd phase | 1 1 ‏ملأتا المشس سس اسه سال ل‎ SE ‏تتح احج رقم من الت ا لتحت‎ NS Pree] ! 1 ‏ا‎ DNase! ‏وا‎ 1 FI = FR WANAN STOWEE 1 ‏ل‎ SETI SAAT SARA. nes B ‏اللاي الشعارية‎ DNasel red id ٠ 1 ‏لسلس ا ساس سا‎ PINOT JOY. = ‏اسمس سس سنس مت ممه سس‎ ‏الست‎ DNassl vo ‏ا‎ ‎: ‏وت الى نط‎ Role. INURL GEL In : 70 ‏!ليا‎ 0 8 ERIE +32 PhasiCons' § 1 Halk ‏بال‎ SL ET LHR 1 8 1 ‏نب‎ 01 ‏حب‎ PhasiCons { EY 0 ‏ا 0 ب‎ 2 fad AS si BEE EE LE Beek JUIN SRN A 4 ‏م‎ 5 0 . 807173 TBE (kh) ‏اا لشناقة من‎ af ‏سدس سا حا‎ ١١١ KE] ‏ا ااا‎ ‏لماعي حورن‎ LTT SN TE ‏يط يرة؟‎ _—— ‏بممبممسالسسسسيسسسس سس‎ ¥ 0 ‏ا ا ا ا ا ا ا ا ل[ لقاع للها‎ 1 13 - ‏العا‎ N A ‏ا‎ : ’ 1 , 1 i 1 os f <8 ‏كن‎ H ‏قُْ د‎ 33 f ion ‏بيج‎ gree t——— ‏ب‎ > aA AMA RATA ATE : ‏الع اسم اس‎ ne . Co NR Re 0 ‏ب‎ ada ‏مخ‎ . Salus te NE Rn ‏اتاد‎ NN SO ‏ا‎ te ‏الا اا‎ TCV TNE. TU ‏ددا ا‎ 3 1 ¥ HAK2 ac sss Need Sw : Soni ‏انف تال‎ EE A EE ne SNR ‏ماح مسمس‎ Tey 1 Irs 8 #81 & 8 ¥ ‏رحج‎ 0 4 0 ‏ام‎ . 8 0" 9 0 ‏اا ا ا المت اس و سا‎ O. WY ‏ا ل‎ : ! ‏شيهة ديات قر‎ DNasged ¥ ' ‏جا‎ َّ ‏ال د ا ا ل اس ا سك ان هل د ا م ل ا‎ ‏حم‎ "
    su. DNased t ‏ل‎ ‎= ‏تم لاس محص‎ visas vin ‏نجل تاق‎ nA FA ES ARS ‏أل‎ nS ‏ماخلا تج‎ Si wean Esa ‏مجح‎ ‎0 ‏.جد ا‎ I
    ‏.الخلا اللمفاوية‎ DNase! : X &. EN ARAN ANRY AREAS ‏تس ا‎ I A ea vee : 3 T ‏اخلارا اللمغاوية‎ DNase red 0 0 aa BE ‏الجا ل مما لد ا‎ AAAI ‏المت ام اح ا تح اتا ال ل‎ NBAAFAAIENY ‏تسن‎ ARRAN SARA ‏يترسح نحتما‎ = oa] i Bo 3 6 Ny F 5 PE 1 ‏الي‎ ‎cst PhastCons § © § 8 1 : : $a 3 : 0 ‏ب‎ IE 1 $3} = 3} 3 CEL SI EET i HNL LUE 8 ‏ا طلا شالع لنت تالت طاللمسلتساةا‎ IEEE : JAN ‏الاي‎ I ‏مط‎ TES (kb) oud Suid ‏اليد‎ ‏حا‎ ‎A ‏شخل‎ ‎CAN
    AEA 3717 ‏ب‎ ‏ا‎ MEL ‏و‎ ‏سويد‎ eH ‏سس ا سس‎ ‏اا اسن‎ REQ4-H04 ‏مدق‎
    ‎. 1 ‏اح د م لات‎ & ‏الس و اا لم نيج شك تو‎ ‏لخن‎ Te ١ ‏ب‎ FOTALEN ‏و او الوه 1 1 1 1 نيج‎ : Woo # i! A J ce Eas | JN ‏ب" وا اام »م‎ 01 5 {kid Hak CE EA SE Te ‏يا‎ ‎Pes JALEN ‏عدم أرج‎ ee: ar Cady ‏رقا نيدت عن الاج‎ AS 4 4 ‏م‎ ‎8 FERC RN RE PRE SE Lg eT 204-004 ‏ا‎ ila Fan Be ‏504804م‎ me, ‏ا‎ as ae a CEs : ‏و ا لا ا ل واي نت‎ ‏سيار‎ = i as Sh Ey an de 8 Lian Ll a fede LIL aE ‏ا‎ ‎Cit “as or Sa ‏ا داواي الي 3 1 تجرد‎ Re as SET a 5 ‏ا د 3 2 خاو‎ Ren hee iq 1 ‏ا كز‎ ‏شكل وب‎ ‏المع دمل ا«‎ 15 ands IT we 103 0 ‏ايكرت ال بكي‎ ‏اف اي "م‎ ofl ! 1 ‏طلا‎ Iman ‏4غ‎ i ‏امنيحو‎ ‎! H { 1 i 1 1 l N : 1 4,0 | ! I SRT ! } EI {i rr { PRE vod Ne ! ‏ا‎ ! yd ‏ولاج 5 1 85 في لاما‎ 1 ! 4 ! ‏الس‎ a WN E NX NN ‏ب"‎ “8 CNN 7 2 No NNER 8 sks a. oN oN NLL I EE 0 ‏ار ا‎ NEN BONY 3 Ey Nola 8 3 2 Br i 1 Nl ar 8 a Ns ‏ب"‎ 0 i 7 Na 2A i EN 1 0 ENN ‏نا‎ J EEE I ‏نا اننا لاا‎ 0 ; 0" ‏د‎ RX EE ; Ou 8 NaN ENE ‏اذ‎ i wf ON an 8 ‏اع ع‎ AN SR ‏ا‎ NN Fr] NE 8 5 8 ‏ا‎ 88 AN 8 NANG 8 ‏ل ا‎ 8 ‏ال ا‎ a Ba NO ‏الل‎ NR pia : Noa 7 ‏ا ا ا‎ HEN EN NE ‏لاا‎ A DN 3 Na ‏ل 8 ا‎ 7 I: 2 ‏اد‎ uE a a BE = Ld ERE oO HE ANN Ba 5 wR NUN NE ‏ا ا‎ 1 3 NRE SAN Se 8 pd 9 Ha ANA Na Co aN a 1 ‏ل ل‎ 2 aN LHe] pi re 8 ANA Na 8 8 Sn NY ‏م‎ ‎: Na NB a LL oe NN =n BE ENS NA ‏نا‎ He IN ON i NaN 0 Ea 5 8 RE A EX NNN Wa NN 8 aN ‏ا ا‎ Ey SS BB BEBE BE = NL EB 2 EE ‏ةق‎ ‎i ANNA AN ‏ا‎ SN ‏الس‎ OER HE AANA Wi fe oN 2 ‏ل ا‎ NR ‏ال‎ a VN 2 ‏دا ال اا‎ a ON 0 iI 321 ه٠‎ EE EE = BE ‏ا‎ ‎+ NRE DB A NN - ‏ل‎ BE ‏مع‎ ‎5 on BERS nS NRE Bc, NESE AN en NR fe ad NF ‏كد حم كد ند" العا ا نود‎ ee ‏لخر‎ ٠١ ‏اا يُسيئد © نسيقة ؟ حسيقة‎ : ’ Ee i ‏أجلي‎ 8 Bid ‏نسيقة؟‎ ‎£50 4-804 ne A ABT A604 NEL ‏انا اانا اانا‎ i ‏ال نا ناا لاا 7 ااانا‎ Fea-8 ! + zh ‏شكل‎ ‎OY AY
    ‎o —‏ \ _ ‎LEFT TALE 7 RIGHT TALEN TLE TALLEY RIGHT THEN GASGGIGARGGTCAACTAAL‏ 5 ‎CRANANTC TORT TIARA ATSRTC RAT TRET CAG 0‏ لت ‎op BRAT‏ 308 ار ال ‎CTY ANRGCARRRAITRACT RIT‏ أي اسيلا ‎TRA‏ 1 1 ل ااا .... ‎MEL“ #1a‏ 17061 ال أ ان ممع أ مت الام ااا ا اتات اماه لاا ا ا ا مانت اناا لني الات الت اا لاا لات ا ا ا ا ل ّ| و سه ‎MEL‏ ‎gf, | !‏ كن ا ا 1 7 ا ا ا ا ل ا ا ‎TACECCTOTOALARGTTALR‏ ‏! #28 لك ‎MEL‏ ‎mm am mt mem pre mre 1010577 AVGATIRATIRGICRS |‏ اا ا كسا 681317 ال #73 سك ‎WEL‏ ‎I‏ أ إ ‎١‏ | 1 للستت ساس اا اام ا ا ا ا 1000107 ‎Gas 1114‏ ب #8 حم ‎MEL‏ ‎Si | | : il‏ ليا ا ل 1 ‎SAY‏ ا ا ا لماه سا ل 1 ‎Er‏ ارا ادي الث الا 5 وم 7 وم ‎Aenea‏ 0300 ااا ا ا ا ا ا ا ا ا اك فق وق 1030 ‎GETTARCLAERLLAG ITTY‏ ‎#1b 0 | hua‏ مه ‎Pod‏ ‏زارفا النففاا الاللاليا بوموموور لجال بس سس ب ا ات ات عو لبخي بف نل ‎FTOACTGOTTACASETTATE‏ ’ ‎Pro-B so 8 ) | a‏ 1 الأ ‎ATGATCEATIRATORG.‏ 032177 .حت ‎ers me nen ese‏ ا ‎mmr memes mes nm am‏ 017 الفا ا شكل ‎٠١‏ ‏ار اد
    ‎o ¢ —_‏ \ _ ‎ATO‏ ااا اليه لأس وها هوا اتا بالا ا يسوي ب ساي يقبا ‎BREE‏ مه ‎ETO‏ ا ل ‎SIV‏ ميتو له ووو جا له اوه مولأ ا عه موه أ و م لح مو موي فا حم لوم اه دج العم ا تأ و لأا ا بح ةا ا ملي جا ام بلا دن تهت بن ل الت هااا لاا باهرا اللا اا للدت مهلا انا ته حت ادل ابه توا ال اتلد المت هل الك نا دق اه نا لها الجا كا ات ‎sey presse‏ ا ل ‎og‏ ال ‎i‏ لحي + ‎{Xie FRR EN‏ ‎drm ind ERS ETRE‏ لم7 ‎is ro N i : vi‏ ‎oma [ENB 0 5 1 184‏ حيقي 3 حا ‎ae WP a‏ الا للا ‎fad 2 < 08 -‏ = يام ‎ft fy‏ رحد 18 ‎Tes BRE oF Eg BAF‏ ‎i 1 08‏ و الب حا ‎a.‏ ب ا الا ل جع ‎TY 0 5‏ يريا ‎ER FELT AETANY Tra YA ALY I Ea CATE‏ ‎gi TE gr o EE i Cig Co vay AY‏ ‎LICE FE Sn ed Pa YY octet a EYAL Fe Rs WE opr an [| (71 fed :‏ قا ا 8 شنا ‎١‏ 1 ن”ن- " ‎CAN‏
    — 00 \ _ لد واج جم وروي موجنب بي ري ول يام بيرت ييه ‎YY, Sy‏ ‎TEA NYL TVA‏ مسقو ال 1 1 ‎bo‏ 1 1 1 1 0 ات اي مل تست لدي تست ااي فا ‎PF TITRE‏ لع ف الا ادي ل لد لا ل لد م ل ب 8 8 118 الست اسح الجحد اي ااي ‎RA‏ ا ل د ‎RS CI Pent i aed‏ و امات حل لير ‎Fonseca‏ # ا سس ‎Cae ad BHP HIE SB 1 HHI‏ ‎ee Gs 1 SE‏ ‎iE HE WHT‏ ‎SHE‏ ‏شكل 11 اب ببح ‎CAR‏
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA515360489A 2012-11-27 2015-05-27 استهداف عناصر bcl11a التنظيمية البعيدة لإعادة حث هِيمُوجلُوبِين جَنِينِيّ SA515360489B1 (ar)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261730323P 2012-11-27 2012-11-27
US201261730369P 2012-11-27 2012-11-27
US201361776144P 2013-03-11 2013-03-11
US201361889174P 2013-10-10 2013-10-10
PCT/US2013/072236 WO2014085593A1 (en) 2012-11-27 2013-11-27 Targeting bcl11a distal regulatory elements for fetal hemoglobin reinduction

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA515360489B1 true SA515360489B1 (ar) 2016-12-25

Family

ID=50828461

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA515360489A SA515360489B1 (ar) 2012-11-27 2015-05-27 استهداف عناصر bcl11a التنظيمية البعيدة لإعادة حث هِيمُوجلُوبِين جَنِينِيّ

Country Status (18)

Country Link
US (4) US9822355B2 (ar)
EP (2) EP2925864B1 (ar)
JP (2) JP6542124B2 (ar)
KR (1) KR102240555B1 (ar)
CN (2) CN104955943B (ar)
AU (3) AU2013352156B2 (ar)
BR (1) BR112015011995B1 (ar)
CA (1) CA2892860C (ar)
DK (2) DK2925864T3 (ar)
ES (2) ES2884925T3 (ar)
HK (1) HK1215720A1 (ar)
IL (1) IL238949B (ar)
MX (1) MX361412B (ar)
PT (2) PT3502240T (ar)
SA (1) SA515360489B1 (ar)
SG (3) SG10202110062SA (ar)
WO (1) WO2014085593A1 (ar)
ZA (1) ZA201504004B (ar)

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013066438A2 (en) 2011-07-22 2013-05-10 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
EP2925864B1 (en) * 2012-11-27 2018-10-31 The Children's Medical Center Corporation Targeting bcl11a distal regulatory elements for fetal hemoglobin reinduction
US20150044192A1 (en) 2013-08-09 2015-02-12 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a cas9 nuclease
WO2015033343A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Compositions and methods for expressing recombinant polypeptides
SG11201601570QA (en) * 2013-09-04 2016-04-28 Csir Site-specific nuclease single-cell assay targeting gene regulatory elements to silence gene expression
US9526784B2 (en) 2013-09-06 2016-12-27 President And Fellows Of Harvard College Delivery system for functional nucleases
US9322037B2 (en) 2013-09-06 2016-04-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof
US9228207B2 (en) 2013-09-06 2016-01-05 President And Fellows Of Harvard College Switchable gRNAs comprising aptamers
WO2015059690A1 (en) 2013-10-24 2015-04-30 Yeda Research And Development Co. Ltd. Polynucleotides encoding brex system polypeptides and methods of using s ame
PT3066201T (pt) 2013-11-07 2018-06-04 Massachusetts Inst Technology Métodos e composições relacionadas com crispr com arng reguladores
EP3960856A1 (en) * 2013-11-13 2022-03-02 Children's Medical Center Corporation Nuclease-mediated regulation of gene expression
US11053481B2 (en) 2013-12-12 2021-07-06 President And Fellows Of Harvard College Fusions of Cas9 domains and nucleic acid-editing domains
MX2016013832A (es) 2014-04-25 2017-03-09 Children´S Medical Center Corp Composiciones y metodos para tratar hemoglobinopatias.
WO2016005985A2 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method for reprogramming cells
AU2015298571B2 (en) 2014-07-30 2020-09-03 President And Fellows Of Harvard College Cas9 proteins including ligand-dependent inteins
IL234638A0 (en) 2014-09-14 2014-12-02 Yeda Res & Dev NMDA receptor antagonists for the treatment of Gaucher disease
BR112017017812A2 (pt) 2015-02-23 2018-04-10 Crispr Therapeutics Ag materiais e métodos para tratamento de hemoglobinopatias
US20180200387A1 (en) 2015-02-23 2018-07-19 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of human genetic diseases including hemoglobinopathies
EP4218771A1 (en) 2015-03-27 2023-08-02 Yeda Research and Development Co. Ltd Methods of treating motor neuron diseases
WO2016182917A1 (en) * 2015-05-08 2016-11-17 Children's Medical Center Corporation Targeting bcl11a enhancer functional regions for fetal hemoglobin reinduction
CA2986310A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Editas Medicine, Inc. Optimized crispr/cas9 systems and methods for gene editing in stem cells
KR20170141217A (ko) 2015-05-12 2017-12-22 상가모 테라퓨틱스, 인코포레이티드 유전자 발현의 뉴클레아제-매개된 조절
JOP20160092B1 (ar) * 2015-05-13 2023-03-28 Celgene Corp علاج البيتا ثلاسيميا باستخدام مصطبة لجائنية
AU2016276702B2 (en) 2015-06-09 2022-07-28 Editas Medicine, Inc. CRISPR/CAS-related methods and compositions for improving transplantation
WO2017009843A2 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Biokine Therapeutics Ltd. Compositions, articles of manufacture and methods for treating cancer
JP7109784B2 (ja) 2015-10-23 2022-08-01 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 遺伝子編集のための進化したＣａｓ９蛋白質
US12043843B2 (en) 2015-11-04 2024-07-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies
IL260257B2 (en) * 2015-12-28 2024-05-01 Novartis Ag Preparations and methods for the treatment of hemoglobinopathies
CN108697907A (zh) 2016-01-06 2018-10-23 耶达研究及发展有限公司 用于治疗恶性疾病、自身免疫疾病和炎性疾病的组合物和方法
JP7019580B2 (ja) 2016-01-21 2022-02-15 ザ ステイト オブ イスラエル ミニストリー オブ アグリカルチャー アンド ルーラル ディベロップメント アグリカルチュラル リサーチ オーガニゼイション （エー．アール．オー．） （ボルカニ センター） 単為結実植物およびその製造方法
WO2017130205A1 (en) 2016-01-31 2017-08-03 Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. Autosomal-identical pluripotent stem cell populations having non-identical sex chromosomal composition and uses thereof
BR112018016450A2 (pt) 2016-02-12 2018-12-26 Bluebird Bio Inc composições intensificadoras de vcn e métodos de uso das mesmas
EP3413896B1 (en) 2016-02-12 2021-03-17 Bluebird Bio, Inc. Vcn enhancer compositions and methods of using the same
WO2017138008A2 (en) 2016-02-14 2017-08-17 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of modulating protein exocytosis and uses of same in therapy
WO2017153982A1 (en) 2016-03-06 2017-09-14 Yeda Research And Development Co. Ltd. Method for modulating myelination
CN117802102A (zh) * 2016-03-14 2024-04-02 爱迪塔斯医药公司 用于治疗β-血红蛋白病的CRISPR/CAS相关方法和组合物
SG10202010261YA (en) * 2016-04-18 2020-11-27 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies
CN110214183A (zh) 2016-08-03 2019-09-06 哈佛大学的校长及成员们 腺苷核碱基编辑器及其用途
US11661590B2 (en) 2016-08-09 2023-05-30 President And Fellows Of Harvard College Programmable CAS9-recombinase fusion proteins and uses thereof
IL247368A0 (en) 2016-08-18 2016-11-30 Yeda Res & Dev Diagnostic and therapeutic uses of exosomes
WO2018039438A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
SG11201903089RA (en) 2016-10-14 2019-05-30 Harvard College Aav delivery of nucleobase editors
JP2019535298A (ja) 2016-11-28 2019-12-12 イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッドＹｅｄａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．Ｌｔｄ． 単離ポリヌクレオチドおよびポリペプチドおよび関心のある発現産物を発現させるためにそれらを使用する方法
US10745677B2 (en) 2016-12-23 2020-08-18 President And Fellows Of Harvard College Editing of CCR5 receptor gene to protect against HIV infection
EP3563159A1 (en) 2016-12-29 2019-11-06 Ukko Inc. Methods for identifying and de-epitoping allergenic polypeptides
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
IL250479A0 (en) 2017-02-06 2017-03-30 Sorek Rotem Genetically engineered cells expressing a disarm system that confers resistance to phages and methods for their production
EP3592853A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 President and Fellows of Harvard College Suppression of pain by gene editing
JP2020510439A (ja) 2017-03-10 2020-04-09 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ シトシンからグアニンへの塩基編集因子
WO2018170184A1 (en) 2017-03-14 2018-09-20 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies
IL306092A (en) 2017-03-23 2023-11-01 Harvard College Nucleic base editors that include nucleic acid programmable DNA binding proteins
US11261441B2 (en) 2017-03-29 2022-03-01 Bluebird Bio, Inc. Vectors and compositions for treating hemoglobinopathies
IL252151A0 (en) 2017-05-07 2017-07-31 Fainzilber Michael Treatment of stress disorders
WO2018209158A2 (en) * 2017-05-10 2018-11-15 Editas Medicine, Inc. Crispr/rna-guided nuclease systems and methods
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
WO2018218135A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 The Children's Medical Center Corporation Bcl11a guide delivery
US11866726B2 (en) 2017-07-14 2024-01-09 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for targeted integration and genome editing and detection thereof using integrated priming sites
IL253642A0 (en) 2017-07-24 2017-09-28 Seger Rony Combined treatment for cancer
EP3658573A1 (en) 2017-07-28 2020-06-03 President and Fellows of Harvard College Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (pace)
WO2019038771A1 (en) 2017-08-23 2019-02-28 Technion Research & Development Foundation Limited COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCING ALCOHOL TOLERANCE IN YEAST
EP3676376A2 (en) 2017-08-30 2020-07-08 President and Fellows of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
CN111757937A (zh) 2017-10-16 2020-10-09 布罗德研究所股份有限公司 腺苷碱基编辑器的用途
CN109722414A (zh) * 2017-10-27 2019-05-07 博雅辑因（北京）生物科技有限公司 一种高效制备成熟红细胞的方法以及用于制备成熟红细胞的培养基
IL255664A0 (en) 2017-11-14 2017-12-31 Shachar Idit Hematopoietic stem cells with enhanced properties
WO2019147302A1 (en) * 2018-01-26 2019-08-01 Bauer Daniel E Targeting bcl11a distal regulatory elements with a cas9-cas9 fusion for fetal hemoglobin reinduction
IL257225A (en) 2018-01-29 2018-04-09 Yeda Res & Dev Treatment of sarcoma
MA51787A (fr) 2018-02-05 2020-12-16 Vertex Pharma Substances et méthodes de traitement d'hémoglobinopathies
US11268077B2 (en) 2018-02-05 2022-03-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies
AU2019236209A1 (en) 2018-03-14 2020-10-01 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for the treatment of hemoglobinopathies
AU2019297677A1 (en) 2018-07-04 2021-02-25 Ukko Inc. Methods of de-epitoping wheat proteins and use of same for the treatment of celiac disease
IL262658A (en) 2018-10-28 2020-04-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Prevention of age related clonal hematopoiesis and diseases associated therewith
WO2020112979A2 (en) * 2018-11-30 2020-06-04 Bauer Daniel E Therapeutic gene editing for elane-associated disease
CN109486850B (zh) * 2018-12-04 2021-05-25 厦门大学 Uv-b光下调控染色质长距离相互作用的光遗传学工具
EP3934417A1 (en) 2019-03-05 2022-01-12 The State of Israel - Ministry of Agriculture & Rural Development, Agricultural Research Organization (ARO) (Volcani Center) Genome-edited birds
WO2020191241A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for editing nucleotide sequences
CN111939271A (zh) * 2019-04-30 2020-11-17 博雅辑因（北京）生物科技有限公司 一种血红蛋白病治疗有效性预测方法
CR20210591A (es) * 2019-04-30 2022-03-11 Edigene Inc Método para la predicción de eficacia del tratamiento de hemoglobinopatía
AU2020300101A1 (en) 2019-07-04 2022-02-17 Ukko Inc. De-epitoped alpha gliadin and use of same for the management of celiac disease and gluten sensitivity
IL268111A (en) 2019-07-16 2021-01-31 Fainzilber Michael Methods of treating pain
IL270306A (en) 2019-10-30 2021-05-31 Yeda Res & Dev Prevention and treatment of pre-myeloid and myeloid malignancies
IL271656A (en) 2019-12-22 2021-06-30 Yeda Res & Dev System and methods for identifying cells that have undergone genome editing
WO2021152587A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 Yeda Research And Development Co. Ltd. Treating acute liver disease with tlr-mik inhibitors
CA3177481A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 David R. Liu Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence
CN111705044B (zh) * 2020-05-23 2022-12-27 南京大学 新型可控高活性g四链体dna酶的构建
KR20230113283A (ko) 2020-10-05 2023-07-28 프로탈릭스 리미티드 다이서-유사 넉아웃 식물 세포
EP4228637A1 (en) 2020-10-15 2023-08-23 Yeda Research and Development Co. Ltd Method of treating myeloid malignancies
US20230416314A1 (en) 2020-11-26 2023-12-28 Ukko Inc. Modified high molecular weight glutenin subunit and uses thereof
IL279559A (en) 2020-12-17 2022-07-01 Yeda Res & Dev Controlling the ubiquitination process of mlkl for disease treatment
JP2024500804A (ja) 2020-12-18 2024-01-10 イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド Ｃｈｄ２ハプロ不全の処置における使用のための組成物及びその同定方法
AU2022272489A1 (en) 2021-05-10 2023-11-30 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Pharmaceutical compositions for treating neurological conditions
WO2022240787A1 (en) * 2021-05-13 2022-11-17 The Children's Medical Center Corporation Methods for stratifying subjects for fetal hemoglobin reinduction
CA3230677A1 (en) 2021-06-13 2022-12-22 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Method for reprogramming human cells
CA3226947A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 Muhammad YASSIN Engineered tcr complex and methods of using same
EP4130028A1 (en) 2021-08-03 2023-02-08 Rhazes Therapeutics Ltd Engineered tcr complex and methods of using same
CA3234612A1 (en) 2021-10-14 2023-04-20 Weedout Ltd. Methods of weed control
WO2023240282A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Umoja Biopharma, Inc. Engineered stem cells and uses thereof

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5061620A (en) 1990-03-30 1991-10-29 Systemix, Inc. Human hematopoietic stem cell
US5635387A (en) 1990-04-23 1997-06-03 Cellpro, Inc. Methods and device for culturing human hematopoietic cells and their precursors
US5460964A (en) 1992-04-03 1995-10-24 Regents Of The University Of Minnesota Method for culturing hematopoietic cells
US5409813A (en) 1993-09-30 1995-04-25 Systemix, Inc. Method for mammalian cell separation from a mixture of cell populations
US5677136A (en) 1994-11-14 1997-10-14 Systemix, Inc. Methods of obtaining compositions enriched for hematopoietic stem cells, compositions derived therefrom and methods of use thereof
US5928638A (en) 1996-06-17 1999-07-27 Systemix, Inc. Methods for gene transfer
US5731156A (en) * 1996-10-21 1998-03-24 Applied Imaging, Inc. Use of anti-embryonic hemoglobin antibodies to identify fetal cells
US8101349B2 (en) 1997-12-23 2012-01-24 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Gene products differentially expressed in cancerous cells and their methods of use II
FR2777909B1 (fr) 1998-04-24 2002-08-02 Pasteur Institut Utilisation de sequences d'adn de structure triplex pour le tranfert de sequences de nucleotides dans des cellules, vecteurs recombinants contenant ces sequences triplex
CZ302719B6 (cs) 2000-12-01 2011-09-21 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Izolovaná molekula dvouretezcové RNA, zpusob její výroby a její použití
ATE517992T1 (de) 2002-11-14 2011-08-15 Dharmacon Inc Funktionelle und hyperfunktionelle sirna
WO2004054512A2 (en) 2002-12-13 2004-07-01 Genetix Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic retroviral vectors for gene therapy
EP1752536A4 (en) 2004-05-11 2008-04-16 Alphagen Co Ltd POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME
EP2341135A3 (en) 2005-10-18 2011-10-12 Precision Biosciences Rationally-designed meganucleases with altered sequence specificity and DNA-binding affinity
US20080051431A1 (en) 2006-05-26 2008-02-28 Dominique Verhelle Methods and compositions using immunomodulatory compounds in combination therapy
EP2172547B1 (en) 2007-06-11 2016-01-06 Takara Bio Inc. Method for expression of specific gene
GB0713183D0 (en) 2007-07-06 2007-08-15 King S College London Method
CA2737180C (en) 2008-09-15 2019-02-19 Children's Medical Center Corporation Modulation of bcl11a for treatment of hemoglobinopathies
US20110294114A1 (en) 2009-12-04 2011-12-01 Cincinnati Children's Hospital Medical Center Optimization of determinants for successful genetic correction of diseases, mediated by hematopoietic stem cells
WO2011072086A1 (en) 2009-12-08 2011-06-16 Hemaquest Pharmaceuticals, Inc. Methods and low dose regimens for treating red blood cell disorders
JP2011135864A (ja) * 2009-12-30 2011-07-14 Korea Univ Research & Business Foundation Ｏｃｔ４及びＢｍｉ１、またはその上位調節子を用いて体細胞から胚幹細胞類似細胞への逆分化を誘導する組成物及びこれを用いた胚幹細胞類似細胞の製造方法
LT2561078T (lt) 2010-04-23 2019-01-10 Cold Spring Harbor Laboratory Naujos struktūriškai sukonstruotos shrnr
WO2012073047A2 (en) 2010-12-03 2012-06-07 Genome Research Limited Compositions and methods
EP2648763A4 (en) 2010-12-10 2014-05-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR EXPRESSION INHIBITION OF GENES KLF-1 AND BCL11A
EP3492108A1 (en) 2011-06-10 2019-06-05 Bluebird Bio, Inc. Gene therapy vectors for adrenoleukodystrophy and adrenomyeloneuropathy
AU2012315699B2 (en) 2011-09-30 2017-08-17 Bluebird Bio, Inc. Compounds for improved viral transduction
KR101833589B1 (ko) 2012-02-24 2018-03-02 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 이상혈색소증 치료를 위한 조성물 및 방법
AU2013262700A1 (en) 2012-05-16 2015-01-22 Rana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating hemoglobin gene family expression
GEP20217251B (en) 2012-05-25 2021-04-26 Charpentier Emmanuelle De Emanuel Methods and compositions for rna-directed target dna modification and for rna-directed modulation of transcription
EP2925864B1 (en) 2012-11-27 2018-10-31 The Children's Medical Center Corporation Targeting bcl11a distal regulatory elements for fetal hemoglobin reinduction
CN105121648B (zh) 2012-12-12 2021-05-07 布罗德研究所有限公司 用于序列操纵的***、方法和优化的指导组合物的工程化
US10106816B2 (en) 2012-12-14 2018-10-23 Case Western Reserve University Genomic RNA packaging enhancer element
CN116083487A (zh) 2013-05-15 2023-05-09 桑格摩生物治疗股份有限公司 用于治疗遗传病状的方法和组合物
WO2015065964A1 (en) 2013-10-28 2015-05-07 The Broad Institute Inc. Functional genomics using crispr-cas systems, compositions, methods, screens and applications thereof
EP3960856A1 (en) 2013-11-13 2022-03-02 Children's Medical Center Corporation Nuclease-mediated regulation of gene expression
CN104955119B (zh) 2014-03-26 2019-11-26 南京中兴新软件有限责任公司 一种基于流量的网络切换方法、装置和终端
EP3134434A4 (en) 2014-04-25 2017-10-25 Bluebird Bio, Inc. Kappa/lambda chimeric antigen receptors
DK3689899T3 (da) 2014-04-25 2021-11-22 2Seventy Bio Inc Kimære mnd-promotor-antigenreceptorer
MX2016013832A (es) 2014-04-25 2017-03-09 Children´S Medical Center Corp Composiciones y metodos para tratar hemoglobinopatias.
JP7026440B2 (ja) 2014-05-28 2022-02-28 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ハイブリッドｔＲＮＡ／プレｍｉＲＮＡ分子および使用方法
NZ733025A (en) 2014-12-12 2022-01-28 2Seventy Bio Inc Bcma chimeric antigen receptors
WO2016182893A1 (en) 2015-05-08 2016-11-17 Teh Broad Institute Inc. Functional genomics using crispr-cas systems for saturating mutagenesis of non-coding elements, compositions, methods, libraries and applications thereof
US11535871B2 (en) 2015-05-14 2022-12-27 University Of Southern California Optimized gene editing utilizing a recombinant endonuclease system
CA2996893A1 (en) 2015-08-31 2017-03-09 Bluebird Bio, Inc. Anti-sialyl tn chimeric antigen receptors
GB201522243D0 (en) 2015-12-16 2016-01-27 Ucl Business Plc Treatment
BR112018016450A2 (pt) 2016-02-12 2018-12-26 Bluebird Bio Inc composições intensificadoras de vcn e métodos de uso das mesmas
WO2018218135A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 The Children's Medical Center Corporation Bcl11a guide delivery

Also Published As

Publication number Publication date
JP6633602B2 (ja) 2020-01-22
BR112015011995B1 (pt) 2023-02-07
US11542493B2 (en) 2023-01-03
PT2925864T (pt) 2019-02-06
EP2925864B1 (en) 2018-10-31
US20150307867A1 (en) 2015-10-29
ES2884925T3 (es) 2021-12-13
DK3502240T3 (da) 2021-08-09
AU2013352156B2 (en) 2018-12-06
CA2892860A1 (en) 2014-06-05
MX2015006528A (es) 2016-07-13
DK2925864T3 (en) 2019-02-11
US20200087651A1 (en) 2020-03-19
AU2021218012A1 (en) 2021-09-09
AU2013352156A1 (en) 2015-06-11
EP3502240A1 (en) 2019-06-26
AU2018278850A1 (en) 2019-01-17
JP2015536657A (ja) 2015-12-24
PT3502240T (pt) 2021-08-11
IL238949B (en) 2019-06-30
BR112015011995A2 (pt) 2017-07-11
SG11201504038XA (en) 2015-06-29
ES2708948T3 (es) 2019-04-12
HK1215720A1 (zh) 2016-09-09
AU2018278850B2 (en) 2021-05-27
US9822355B2 (en) 2017-11-21
KR20150107726A (ko) 2015-09-23
JP2018085987A (ja) 2018-06-07
JP6542124B2 (ja) 2019-07-10
SG10202110062SA (en) 2021-11-29
KR102240555B1 (ko) 2021-04-16
US20230348887A1 (en) 2023-11-02
SG10201704008RA (en) 2017-06-29
US20180119130A1 (en) 2018-05-03
CN104955943A (zh) 2015-09-30
EP2925864A1 (en) 2015-10-07
AU2021218012B2 (en) 2023-06-29
IL238949A0 (en) 2015-07-30
CN109554350B (zh) 2022-09-23
US10472619B2 (en) 2019-11-12
ZA201504004B (en) 2016-11-30
WO2014085593A1 (en) 2014-06-05
CA2892860C (en) 2023-01-03
CN104955943B (zh) 2018-09-25
EP3502240B1 (en) 2021-05-05
CN109554350A (zh) 2019-04-02
EP2925864A4 (en) 2016-07-13
MX361412B (es) 2018-12-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA515360489B1 (ar) استهداف عناصر bcl11a التنظيمية البعيدة لإعادة حث هِيمُوجلُوبِين جَنِينِيّ
US20230235285A1 (en) Targeting bcl11a enhancer functional regions for fetal hemoglobin reinduction
US20210047632A1 (en) Targeting bcl11a distal regulatory elements with a cas9-cas9 fusion for fetal hemoglobin reinduction
WO2022240787A1 (en) Methods for stratifying subjects for fetal hemoglobin reinduction
Shannon The Molecular Biology of Sickle Cell Anaemia