RU2620971C1 - Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application - Google Patents
Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application Download PDFInfo
- Publication number
- RU2620971C1 RU2620971C1 RU2015154354A RU2015154354A RU2620971C1 RU 2620971 C1 RU2620971 C1 RU 2620971C1 RU 2015154354 A RU2015154354 A RU 2015154354A RU 2015154354 A RU2015154354 A RU 2015154354A RU 2620971 C1 RU2620971 C1 RU 2620971C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- metabolites
- trichoderma asperellum
- producer
- complex
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к области медицины, биологии, сельского хозяйства, животноводства. Штамм грибка Trichoderma asperellum F-1087 может быть использован в биотехнологиях как продуцент комплекса гидролитических ферментов и биологически активных метаболитов, как штамм, обладающий антибактериальной, противоопухолевой, фунгицидной, ферментативной активностями. Кроме указанного экспериментально выявлена возможность использования в области медицины, в качестве перспективного лекарственного средства для подавления активности противоопухолевых клеток человека, в биотехнологии, в сельском хозяйстве и животноводстве.The present invention relates to the field of medicine, biology, agriculture, animal husbandry. The strain of the fungus Trichoderma asperellum F-1087 can be used in biotechnology as a producer of a complex of hydrolytic enzymes and biologically active metabolites, as a strain with antibacterial, antitumor, fungicidal, enzymatic activities. In addition to the indicated experimentally, the possibility of using in the field of medicine, as a promising drug for suppressing the activity of antitumor human cells, in biotechnology, in agriculture and animal husbandry, has been identified.
Известно изобретение [1], в основе которого находится штамм микромицета Trichoderma hamatum, обладающий антибактериальной активностью в отношении возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis. Недостатком [1] является происходящее через некоторое время проявление резистентности к возбудителю сибирской язвы Bacillus anthracis, вследствие чего полученный с применением этого штамма лекарственный препарат теряет свои свойства, т.е. не может быть применен в качестве продуцента гидролитических ферментов и пептидных метаболитов и, как следствие, не пригоден для производства указанных гидролитических ферментов в промышленных масштабах. Недостаток ограничивает область применения [1].The invention is known [1], which is based on a strain of micromycete Trichoderma hamatum, which has antibacterial activity against the causative agent of anthrax Bacillus anthracis. The disadvantage [1] is the manifestation of resistance to the causative agent of anthrax Bacillus anthracis after some time, as a result of which the drug obtained using this strain loses its properties, i.e. cannot be used as a producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and, as a result, is not suitable for the production of these hydrolytic enzymes on an industrial scale. The disadvantage limits the scope [1].
Известен [2] штамм Trichoderma harzianum rifai - продуцент ингибитора вируса кольцевой пятнистости табака. Указанный штамм предназначен исключительно для производства одного вида фермента, и, как следствие, не может быть применен в биотехнологиях как продуцент комплекса гидролитических ферментов и биологически активных метаболитов, в лабораторных и промышленных масштабахKnown [2] strain Trichoderma harzianum rifai - producer of the tobacco ring spot virus inhibitor. The specified strain is intended solely for the production of one type of enzyme, and, as a result, cannot be used in biotechnology as a producer of a complex of hydrolytic enzymes and biologically active metabolites, on a laboratory and industrial scale
Известен [3] штамм Trichoderma asperellum 302, выделенный при археологических раскопках и проявляющий противоопухолевые свойства, открывающий новые возможности и перспективы использования активных веществ, получаемых из грибов. Недостатком [3] является ограниченность его применения как продуцента комплекса гидролитических ферментов и биологически активных метаболитов, в лабораторных и промышленных масштабах. Недостаток существенно ограничивает область применения аналога [3].Known [3] is a strain of Trichoderma asperellum 302, isolated during archaeological excavations and exhibiting antitumor properties, opening up new possibilities and prospects for the use of active substances obtained from mushrooms. The disadvantage [3] is the limited use of it as a producer of a complex of hydrolytic enzymes and biologically active metabolites, on a laboratory and industrial scale. The disadvantage significantly limits the scope of the analogue [3].
Наиболее близким по существу заявленного технического решения, выбранного заявителем в качестве прототипа, является штамм гриба Trichoderma lignorum [4], используемый для производства триходермина, применяемого в растениеводстве для борьбы с фитопатогенами. Недостатком известного технического решения является низкая эффективность получения целевого продукта-триходермина, вследствие чего указанный штамм не пригоден в качестве продуцента комплекса гидролитических ферментов и биологически активных метаболитов, в лабораторных и промышленных масштабах. Кроме того, недостатками являются: ограниченность перечня используемых в производстве питательных сред - штамм [4] культивируют с использованием только твердофазной питательной среды культивирования; штамм не обладает активностью против распространенного среди сельхозкультур фитопатогена Pseudomonas corrugata. Недостатки ограничивают область применения прототипа [4].The closest to the essence of the claimed technical solution, selected by the applicant as a prototype, is a strain of the fungus Trichoderma lignorum [4], used for the production of trichodermin, used in crop production to combat phytopathogens. A disadvantage of the known technical solution is the low efficiency of obtaining the target product trichodermin, as a result of which the specified strain is not suitable as a producer of a complex of hydrolytic enzymes and biologically active metabolites, on a laboratory and industrial scale. In addition, the disadvantages are: the limited list used in the production of culture media - strain [4] is cultivated using only solid-phase culture medium; the strain does not have activity against the common pathogen Pseudomonas corrugata. Disadvantages limit the scope of the prototype [4].
Целью заявленного технического решения является получение штамма-продуцента расширенного комплекса гидролитических ферментов и/или комплекс вторичных пептидных метаболитов широкого спектра действия при культивировании на целевых питательных средах, повышение выхода целевого продукта, расширение области применения продуктов жизнедеятельности микроорганизмов.The purpose of the claimed technical solution is to obtain a producer strain of an expanded complex of hydrolytic enzymes and / or a complex of secondary peptide metabolites of a wide spectrum of activity when cultured on target nutrient media, increasing the yield of the target product, expanding the range of application of microorganism vital products.
Сущностью заявленного технического решения является штамм Trichoderma asperellum F-1087 - продуцент гидролитических ферментов и пептидных метаболитов, обладающий антибактериальной, противоопухолевой, фунгицидной, ферментативной активностями, штамм Trichoderma asperellum F-1087 по п. 1 - применяемый в области медицины в качестве перспективного лекарственного средства для подавления активности противоопухолевых клеток человека.The essence of the claimed technical solution is a strain of Trichoderma asperellum F-1087 - a producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites with antibacterial, antitumor, fungicidal, enzymatic activities, the strain Trichoderma asperellum F-1087 according to claim 1 - used in the field of medicine as a promising drug for suppressing the activity of human antitumor cells.
Указанный штамм депонирован в ФГУП ГоссНИИ Генетика, во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ВКПМ под регистрационным номером F-1087.The specified strain was deposited in the Federal State Unitary Enterprise State Research Institute of Genetics, in the All-Russian collection of industrial microorganisms VKPM under registration number F-1087.
Штамм Trichoderma asperellum F-1087 выделен из внутренней части человеческого черепа, обнаруженного во время археологических раскопок на Мурзихинском II могильнике в почве Алексеевского района республики Татарстан. Хранится в музее лаборатории сельскохозяйственной биохимии и биотехнологии Института фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета (сокращ. - КФУ), г. Казань и в ВКПМ, г. Пущино, Московская область.The strain Trichoderma asperellum F-1087 was isolated from the inner part of the human skull, discovered during archaeological excavations at the Murzikhinsky II burial ground in the soil of the Alekseevsky district of the Republic of Tatarstan. It is stored in the Museum of the Laboratory of Agricultural Biochemistry and Biotechnology of the Institute of Fundamental Medicine and Biology of the Kazan (Volga Region) Federal University (abbreviated as KFU), Kazan and in VKPM, Pushchino, Moscow Region.
Штамм Trichoderma asperellum F-1087 охарактеризован в лаборатории молекулярно-генетического анализа кафедры биохимии КФУ.The strain Trichoderma asperellum F-1087 was characterized in the laboratory of molecular genetic analysis of the Department of Biochemistry of Kazan Federal University.
Штамм Trichoderma asperellum F-1087 характеризуется приведенным далее способом (методом) выращивания и отличительными свойствами:The strain Trichoderma asperellum F-1087 is characterized by the following method (method) of cultivation and distinctive properties:
Культурально-морфологические особенности штаммаCultural and morphological features of the strain
Колонии гриба, выращенные на питательной среде картофельно-глюкозного агара, при температуре плюс 30°С растут быстро, достигая из центра до краев чашки Петри диаметром 100 мм за 4-5 суток. При росте образуют до 5 цилиндрических колец с интенсивным спороношением. Мицелий бесцветный, стелющийся, паутинистый. Цвет мицелия от зеленого до темно-желтого. Спороношение появляется на 4-6 сутки роста, в центральной части колонии более темные концентрические кольца, по мере удаления от центра к краю кольца становятся светлее. Обратная сторона колонии бесцветная или слабовато-желтая. Пигмент в питательную среду не выделяется. Экссудат обычно отсутствует. Запах слабый грибной. Гифы бесцветные, гладкие, 2-4 мкм в диаметре, со вздутиями и толстостенными клетками. Хламидоспоры терминальные, интеркалярные, сферические или яйцевидные, бледно-зеленые, гладкие, от 4,5 до 15,0 мкм в диаметре. Спорангиеносцы бутылевидные, прямые, древовидно-разветвленные, чаще формируются в подушечках и редко в воздушном мицелии. Спорангиеносцы симметричные и завершаются двумя или более фиалидами. Ширина спорангиеносца преимущественно от 2,8 до 4,0 мкм. Конидии имеют темно-зеленый цвет, формы от шаровидных до сферических, или яйцевидных, мелко-шиповатые, размером 3,4-3,6 на 3,0-4,0 мкм. На питательной среде Чапека и SNA наблюдается бедный рост колонии.The fungal colonies grown on the nutrient medium of potato-glucose agar at a temperature of + 30 ° C grow rapidly, reaching from the center to the edges of the Petri dish 100 mm in diameter in 4-5 days. With growth, they form up to 5 cylindrical rings with intensive sporulation. The mycelium is colorless, creeping, cobwebby. The color of the mycelium is from green to dark yellow. Sporulation appears on the 4th-6th day of growth, in the central part of the colony darker concentric rings, with the distance from the center to the edge of the ring become lighter. The reverse side of the colony is colorless or slightly yellow. The pigment is not secreted into the nutrient medium. Exudate is usually absent. The smell is weak mushroom. Hyphae are colorless, smooth, 2-4 microns in diameter, with swellings and thick-walled cells. Chlamydospores are terminal, intercalary, spherical or ovoid, pale green, smooth, from 4.5 to 15.0 microns in diameter. Sporangiophores are bottle-shaped, straight, tree-branched, more often formed in pads and rarely in aerial mycelium. Sporangiophores are symmetrical and terminate in two or more phialids. The width of the sporangien bearer is preferably from 2.8 to 4.0 microns. Conidia are dark green in color, spherical to spherical, or ovoid in shape, finely spiky, 3.4-3.6 in size, 3.0-4.0 microns in size. On the nutrient medium of Czapek and SNA, poor colony growth is observed.
Биохимические особенности штаммаBiochemical features of the strain
Отношение к источникам углерода: хорошо усваивает глюкозу, крахмал. Растет на средах, содержащих галактозу, лактозу, сахарозу, крахмал. Не усваивает целлюлозу и хитин. Отношение к источникам азота - усваивает аммонийные формы азота и органический азот аминокислот. Восстанавливает нитраты.Attitude to carbon sources: well absorbs glucose, starch. It grows on media containing galactose, lactose, sucrose, starch. Does not absorb cellulose and chitin. Relation to nitrogen sources - assimilates ammonia forms of nitrogen and organic nitrogen of amino acids. Restores nitrates.
Оптимальные условия и состав среды для культивирования штаммаOptimal conditions and composition of the medium for the cultivation of the strain
Гриб растет в интервале значений рН от 2,5 до 9,5. Оптимальное значение рН 5,0. В более кислых условиях (рН 2,5-5,0) и в более щелочных (рН 7,0-9,5) изменяются морфологические характеристики культуры: замедлено спорообразование. Для культивирования штамма применимы плотные питательные среды: агар, сусло-агар, Чапека, SNA. Аэроб. Оптимальная температура для роста культуры гриба плюс 28-30°С, длительность культивирования до массовой споруляции - от 5 до 7 суток, в зависимости от состава среды и температуры культивирования. Нетоксичен для человека, теплокровных животных, пчел и земляных червей.The fungus grows in the range of pH values from 2.5 to 9.5. The optimum pH value is 5.0. Under more acidic conditions (pH 2.5-5.0) and more alkaline (pH 7.0-9.5), the morphological characteristics of the culture change: spore formation is slowed down. For cultivation of the strain, dense nutrient media are applicable: agar, wort agar, Chapek, SNA. Aerobe. The optimum temperature for the growth of the fungus culture is plus 28-30 ° С, the duration of cultivation before mass sporulation is from 5 to 7 days, depending on the composition of the medium and the temperature of cultivation. Nontoxic to humans, warm-blooded animals, bees and earthworms.
Условия хранения штаммаThe storage conditions of the strain
Штамм хранят в виде конидиальных спор на питательной среде PDA с добавлением 10-20%-го глицерина, при температуре минус 70°С.The strain is stored in the form of conidial spores on PDA nutrient medium with the addition of 10-20% glycerol, at a temperature of minus 70 ° C.
Технический результат жизнедеятельности штамма гриба Trichoderma asperellum F-1087 заключается в его способности активно продуцировать комплекс гидролитических ферментов и пептидов, обладающих антибактериальной, противоопухолевой, ферментативной, фунгицидной активностями. Штамм гриба Trichoderma asperellum F-1087 хорошо растет на жидкой питательной среде, выделяет комплекс вторичных пептидных метаболитов широкого спектра действия, что является его преимуществом в сравнении с прототипом [4].The technical result of the activity of the strain of the fungus Trichoderma asperellum F-1087 lies in its ability to actively produce a complex of hydrolytic enzymes and peptides with antibacterial, antitumor, enzymatic, fungicidal activities. The strain of the fungus Trichoderma asperellum F-1087 grows well in a liquid nutrient medium, secrete a complex of secondary peptide metabolites with a wide spectrum of action, which is its advantage in comparison with the prototype [4].
Заявляемый штамм Trichoderma asperellum F-1087 может быть использован для промышленного получения гидролаз и вторичных метаболитов, обладающих антибиотической, противоопухолевой, ферментативной, фунгицидной активностями, а также в качестве кормовой добавки для животных и птиц, для переработки послеспиртовой зерновой барды в корма для животных. Исследование ферментов из культуральной жидкости и мицелия плесневого гриба Trichoderma asperellum F-1087 показали, что они (ферменты) обладают ксиланазной, протеазной, целлюлазной активностями. Изучением механизмов действия определено, что выделенный комплекс вторичных пептидных метаболитов напрямую воздействует на клеточную стенку патогенных микроорганизмов, подавляя ее (микроорганизма) жизнедеятельность, что существенно отличает его (механизм действия штамма) от действия классических антибиотиков. Кроме указанного, следует акцентировать факт отсутствия у заявленного технического решения (выделенного комплекса вторичных пептидных метаболитов) образующейся со временем резистентности (устойчивости), в отличие от традиционно используемых антибиотиков.The inventive strain Trichoderma asperellum F-1087 can be used for the industrial production of hydrolases and secondary metabolites with antibiotic, antitumor, enzymatic, fungicidal activities, as well as a feed additive for animals and birds, for processing post-alcohol grain stillage in animal feed. The study of enzymes from the culture fluid and mycelium of the fungus Trichoderma asperellum F-1087 showed that they (enzymes) have xylanase, protease, cellulase activities. By studying the mechanisms of action, it was determined that the isolated complex of secondary peptide metabolites directly affects the cell wall of pathogenic microorganisms, suppressing its (microorganism) vital activity, which significantly distinguishes it (the mechanism of action of the strain) from the action of classical antibiotics. In addition to the above, it should be emphasized that the claimed technical solution (isolated complex of secondary peptide metabolites) does not form resistance (resistance) with time, in contrast to the traditionally used antibiotics.
Заявляемое изобретение иллюстрируется примерами.The invention is illustrated by examples.
ПРИМЕР 1. Получение гидролитических ферментов и комплекса вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087EXAMPLE 1. Obtaining hydrolytic enzymes and a complex of secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087
Получают посевной материал. Для получения посевного материала культуру гриба Trichoderma asperellum F-1087 ВКМ F-1087 выращивают известным методом глубинного культивирования на питательной среде Чапека состава (г/л): глюкоза - 30; NaNO3 - 3; K2HPO4 - 1; MgSO4 × 7H2O - 0,5; KCl - 0, 5; FeSO4 × 7H2O - 0,01; агар-агар - 15; H2O - остальное.Get the seed. To obtain seed, the culture of the fungus Trichoderma asperellum F-1087 VKM F-1087 is grown by the well-known method of deep cultivation on nutrient medium Capek composition (g / l): glucose - 30; NaNO 3 - 3; K 2 HPO 4 - 1; MgSO 4 × 7H 2 O - 0.5; KCl —0.5; FeSO4 × 7H 2 O — 0.01; agar-agar - 15; H 2 O - the rest.
Культивирование осуществляют при плюс 28°С, в темноте, в течение 168 часов (7 суток).Cultivation is carried out at plus 28 ° C, in the dark, for 168 hours (7 days).
В жидкую питательную среду состава (г/литр): глюкоза - 5,000; KH2PO4 - 0,800; KNO3 - 0,700; CaCO3 - 0,060; 70%-ная H3PO4 - 20 мкл; MgSO4 - 0,500; ZnSO4 - 0,010; CuSO4 - 0,005; FeSO4 - 0,001; MnSO4 - 0,010 помещают агаровый блок с газоном выращенного на среде Чапека гриба. Культивирование осуществляют в качалочных колбах объемом V=1000 мл, содержащих 500 мл среды, например - при температуре +28°С, на подвесной качалке со скоростью вращения платформы 80 об/мин, в течение 288 час (12 суток). В процессе роста культуры контролируют условия (процесса): отсутствие посторонней микрофлоры, рН, продуктивность, морфологическое состояние культуры. При нарушении условий культивирования процесс начинают заново.In a liquid nutrient medium composition (g / liter): glucose - 5,000; KH 2 PO4 - 0.800; KNO 3 - 0.700; CaCO 3 - 0.060; 70% H 3 PO 4 - 20 μl; MgSO 4 - 0.500; ZnSO 4 - 0.010; CuSO 4 - 0.005; FeSO 4 - 0.001; MnSO 4 - 0,010 place the agar block with a lawn grown on Chapek mushroom. Cultivation is carried out in rocking flasks with a volume of V = 1000 ml, containing 500 ml of medium, for example, at a temperature of + 28 ° C, on a hanging rocking chair with a platform rotation speed of 80 rpm, for 288 hours (12 days). In the process of culture growth, the conditions (process) are controlled: the absence of extraneous microflora, pH, productivity, morphological state of the culture. If the cultivation conditions are violated, the process begins anew.
Культуральную жидкость гриба профильтровывают через стерильный марлевый слой и центрифугируют, например - при 5000 об/мин в течение 15 мин. Отобранную часть (надосадок) смешивают с экстрагирующей средой, например этилацетатом, и экстрагируют и получают заявляемый комплекс вторичных пептидных метаболитов.The fungal culture fluid is filtered through a sterile gauze layer and centrifuged, for example at 5000 rpm for 15 minutes. The selected portion (supernatant) is mixed with an extraction medium, for example ethyl acetate, and extracted to obtain the claimed complex of secondary peptide metabolites.
Комплекс вторичных пептидных метаболитов представляет собой подобную воде бесцветную прозрачную жидкость легче воды по плотности, с запахом экстрагирующей среды, нерастворимую в воде. Полученный комплекс вторичных пептидных метаболитов помещают в закрываемую емкость, хранят в холодильной камере при температуре от минус 18 до минус 24°С и используют по потребности, например после предварительного размораживания.The complex of secondary peptide metabolites is a colorless transparent liquid similar to water, lighter than water in density, with the smell of an extracting medium, insoluble in water. The resulting complex of secondary peptide metabolites is placed in a sealed container, stored in a refrigerator at a temperature of minus 18 to minus 24 ° C and used as needed, for example after preliminary thawing.
Комплекс вторичных пептидных метаболитов с помощью гель-фильтрационной хроматографии разделяют на отдельные пептидные компоненты масс-спектрометрическим методом идентифицируют (определяют) выделенные вторичные метаболиты жизнедеятельности штамма Trichoderma asperellum F-1087. Отдельные пептидные компоненты исследуют, хранят и употребляют по целевым назначениям.Using a gel filtration chromatography, the complex of secondary peptide metabolites is separated into individual peptide components by the mass spectrometric method to identify (determine) the isolated secondary metabolites of the vital activity of the strain Trichoderma asperellum F-1087. Individual peptide components are examined, stored and used for their intended purposes.
ПРИМЕР 2. Определение противоопухолевой активностиEXAMPLE 2. Determination of antitumor activity
Совершая действия по ПРИМЕРУ 1, выделяют комплекс вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087.Performing the actions of EXAMPLE 1, a complex of secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087 is isolated.
Противоопухолевую активность исследуют с использованием МТТ-теста на определение жизнеспособности выживания опухолевых (раковых) клеток РС-3 после воздействия на них комплекса вторичных пептидных метаболитов. Опытным путем установлено, что выживаемость раковых клеток РС-3 (раковые клетки предстательной железы человека) при действии на них вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087 в концентрациях 0,02; 0,04; 0,08 и 0,17 мг/мл составляет 0,1%, 2,5%, 32,0%, 66.0% и соответственно. Принимая во внимание идентичность клеток организма человека по строению и свойствам, можно утверждать, что комплекс вторичных пептидных метаболитов действует на все опухолевые клетки человека. То есть, комплекс вторичных пептидных метаболитов обладает существенной противоопухолевой активностью и может быть использован в медицине, в качестве средства подавляющего активность опухолевых клеток не только предстательной железы человека, но и всех остальных опухолевых клеток человека.Antitumor activity is investigated using the MTT test to determine the survival viability of tumor (cancer) cells of PC-3 after exposure to a complex of secondary peptide metabolites. It has been experimentally established that the survival of cancer cells is PC-3 (cancer cells of the human prostate gland) when exposed to secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087 at concentrations of 0.02; 0.04; 0.08 and 0.17 mg / ml is 0.1%, 2.5%, 32.0%, 66.0% and, respectively. Taking into account the identity of the cells of the human body in structure and properties, it can be argued that the complex of secondary peptide metabolites acts on all tumor cells in humans. That is, the complex of secondary peptide metabolites has significant antitumor activity and can be used in medicine as a means of suppressing the activity of tumor cells not only of the human prostate gland, but also of all other human tumor cells.
ПРИМЕР 3. Определение фунгицидной активностиEXAMPLE 3. Determination of fungicidal activity
Совершая действия по ПРИМЕРУ 1, выделяют комплекс вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087. Фунгицидную (противогрибковую) активность заявляемого штамма определяют известным путем [5]. Противогрибковую активность проверяют против фитопатогенов растений: Aspergillus niger, Fusarium oxysporum, как наиболее распространенных возбудителей заболеваний растений в Поволжском регионе. На чашку Петри, засеянную одним из фитопатогенов, помещают пропитанный комплексом вторичных пептидных метаболитов (штамма) диск фильтровальной бумаги диаметром 7 мм. В течение семи суток инкубации при +28°С определяют фунгицидную активность путем измерения величины диаметра d зоны подавляемости патогенных грибов. По истечении 7 суток роста измеряют, например - линейкой, размер диаметра d зоны подавляемости. При этом общепринято считать, что чем больше, например в диаметре, размер зоны подавляемости роста патогенного гриба, тем 
ПРИМЕР 4. Определение антибактериальной активностиEXAMPLE 4. Determination of antibacterial activity
Совершая действия по ПРИМЕРУ 1, выделяют комплекс вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087.Performing the actions of EXAMPLE 1, a complex of secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087 is isolated.
Антибактериальную активность проверяют с использованием наиболее распространенных патогенных в мире грамм-положительных бактерий, например Bacillus subtilis, Mycobacterium sepedonicum (возбудитель картофельной гнили), Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк-возбудитель многих инфекций и заболеваний, например, инфекции кожи и дыхательных путей), а также грамм-отрицательных бактерий, например Pseudomonas syringae (вызывает у растений бурое слизеточение, обморожения, повреждения плодов и пятнистость листьев).Antibacterial activity is tested using the most common gram-positive bacteria pathogenic in the world, for example Bacillus subtilis, Mycobacterium sepedonicum (potato rot pathogen), Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus pathogen of many infections and diseases, for example, skin and respiratory infections), as well as Gram-negative bacteria, for example Pseudomonas syringae (causes brown mucus in plants, frostbite, fruit damage and leaf spotting).
На чашку Петри, засеянную одним из видов бактерий, например Bacillus subtilis, помещают пропитанный фракцией вторичных метаболитов диск фильтровальной бумаги диаметром 7 мм. Содержимое чашки Петри инкубируют, например в темноте, при температуре +28°С, в течение 48 час. После двух суток инкубации определяют антибактериальную активность вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087.A 7 mm diameter filter paper disk impregnated with a fraction of secondary metabolites is placed on a Petri dish seeded with one of the types of bacteria, for example Bacillus subtilis. The contents of the Petri dish are incubated, for example in the dark, at a temperature of + 28 ° C, for 48 hours. After two days of incubation, the antibacterial activity of the secondary peptide metabolites of the Trichoderma asperellum F-1087 strain is determined.
Активность определяют описанным в ПРИМЕРЕ 3 путем. В качестве контроля используют известное средство - диски фильтровальной бумаги [6], пропитанные широко применяемыми антибиотиками - Амфотерицин В (концентрация - 40 мг/мл) и Ампициллин (концентрация - 10 мг/мл).Activity is determined as described in EXAMPLE 3. As a control, a well-known agent is used - filter paper disks [6], impregnated with widely used antibiotics - Amphotericin B (concentration - 40 mg / ml) and Ampicillin (concentration - 10 mg / ml).
По истечении двух суток (через 48 час) роста штамма измеряют, например линейкой, величину зоны (например в виде окружности вокруг пропитанного фракцией вторичных метаболитов штамма диска фильтровальной бумаги диаметром 7 мм) подавляемости бактериальных микроорганизмов. При этом чем 
Сравнение величин зон подавляемости бактериальных микроорганизмов заявляемыми метаболитами и известных антибиотиков показывает, что заявляемый комплекс вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087 в подавлении микроорганизмов не уступает Амфотерицину В с d=10 мм и существенно превосходит Ампициллин с d=12 мм.A comparison of the zones of suppression of bacterial microorganisms by the claimed metabolites and known antibiotics shows that the claimed complex of secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087 in the inhibition of microorganisms is not inferior to Amphotericin B with d = 10 mm and significantly exceeds Ampicillin with d = 12 mm.
Опытами доказано, что выделяемый комплекс вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087 может быть использован для подавления расширенного, по сравнению с прототипом [4], перечня бактериальных болезней сельскохозяйственных культур.The experiments proved that the secreted complex of secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087 can be used to suppress an expanded, compared with the prototype [4], list of bacterial diseases of crops.
ПРИМЕР 5. Определение ферментативной активностиEXAMPLE 5. Determination of enzymatic activity
Совершая действия по ПРИМЕРУ 1, выделяют комплекс вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087.Performing the actions of EXAMPLE 1, a complex of secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087 is isolated.
Подготовливают буферный раствор [7, стр. 81] в концентрации от 10 до 100 ME мл-1.A buffer solution is prepared [7, p. 81] at a concentration of 10 to 100 ME ml -1 .
Затем стандартный ферментный раствор [7, стр. 81] разбавляют подготовленным буферным раствором до конечной концентрации от 0,20 до 0,70 ME мл-1 для ксиланазы и β-глюканазы и от 0,15 до 0,25 ME мл-1 для целлюлазы, получают разбавленный стандартный ферментный раствор (далее по тексту - РСФР).The standard enzyme solution [7, p. 81] is then diluted with the prepared buffer solution to a final concentration of 0.20 to 0.70 ME ml -1 for xylanase and β-glucanase and 0.15 to 0.25 ME ml -1 for cellulase, get a diluted standard enzyme solution (hereinafter - RSFR).
Подготавливают от 0,2 до 5,0 г образцов (1000-10,000 ME) комплекса вторичных пептидных метаболитов штамма, взвешивают их (образцы) и, помешивая, растворяют в 100 мл РСФР до необходимой концентрации, например от 0,2 до 0,7 ME мл-1 для ксиланазы и β-глюканазы и от 0,15 до 0,25 ME мл-1 для целлюлазы. Контроль - H2O.Prepare from 0.2 to 5.0 g of samples (1000-10,000 ME) of the complex of secondary peptide metabolites of the strain, weigh them (samples) and, stirring, dissolve in 100 ml of RSFM to the required concentration, for example, from 0.2 to 0.7 ME ml -1 for xylanase and β-glucanase and from 0.15 to 0.25 ME ml -1 for cellulase. Control - H 2 O.
Помещают 0,03 мл образца комплекса вторичных пептидных метаболитов штамма или контроля в двухмиллилитровые пробирки Эппендорфа и предварительно инкубируют содержимое пробирок в течение 5 мин при +40°С на водяной бане. Затем в каждую из пробирок Эппендорфа добавляют по 0,3 мл раствора субстрата фермента (РСФР), перемешивают и продолжают инкубацию с погружением пробирок в кипящую водяную баню. Через 20 мин инкубации реакцию прекращают, например путем добавления 0,15 мл стоп-раствора и перемешивания. Содержимое пробирок охлаждают в бане со льдом в течение 5 мин. Добавляют 1,5 мл воды, перемешивают и определяют оптическую плотность раствора ΔOD.Place 0.03 ml of a sample of the complex of secondary peptide metabolites of the strain or control in two-ml Eppendorf tubes and pre-incubate the contents of the tubes for 5 min at + 40 ° C in a water bath. Then, 0.3 ml of the enzyme substrate solution (RSFR) is added to each of the Eppendorf tubes, mixed and the incubation continues, with the tubes immersed in a boiling water bath. After 20 minutes of incubation, the reaction is stopped, for example by adding 0.15 ml of a stop solution and stirring. The contents of the tubes are cooled in an ice bath for 5 minutes. Add 1.5 ml of water, mix and determine the optical density of the solution ΔOD.
Оптическую плотность раствора (поглощение) ΔOD530 измеряют по [7] при длине волны излучения λ=530 нм с использованием двухлучевого спектрофотометра. Удельную активность Уд Акт по отдельным видам фермента Уд Акт считают по формулеThe optical density of the solution (absorption) ΔOD 530 is measured according to [7] at a radiation wavelength of λ = 530 nm using a two-beam spectrophotometer. The specific activity of Ud Act for certain types of enzyme Ud Act is calculated according to the formula
D - коэффициент разбавления, V=100 мл, m - наклон калибровочной кривой (мл ⋅ мкмоль-1), М - масса образца фермента (г - грамм) и t - продолжительность инкубации (мин).D is the dilution coefficient, V = 100 ml, m is the slope of the calibration curve (ml ⋅ μmol -1 ), M is the mass of the enzyme sample (g - gram), and t is the incubation time (min).
Опытным путем установлено, что комплекс вторичных пептидных метаболитов штамма Trichoderma asperellum F-1087 имеет ксиланазную Уд Акт = 8,82 МЕ/мл, целлюлазную Уд Акт = от 1,1 до 1,6 МЕ/мл, протеазную Уд Акт = от 0,02 до 0,03 МЕ/мл.It was experimentally established that the complex of secondary peptide metabolites of the strain Trichoderma asperellum F-1087 has xylanase Od Act = 8.82 IU / ml, cellulase Od Act = 1.1 to 1.6 IU / ml, protease Od Act = from 0, 02 to 0.03 IU / ml.
Приведенные примеры применения предлагаемого изобретения показывают его активность к широкому спектру болезнетворных микроорганизмов растений и человека, что доказывает его полезность в биотехнологиях, для разработки перспективных лекарственных средств для лечения людей, для дезинфекции поверхностей в медицине и в области биологической защиты сельскохозяйственных растений от расширенного (по сравнению с прототипом) перечня фитопатогенов.The examples of application of the present invention show its activity to a wide range of pathogens of plants and humans, which proves its usefulness in biotechnologies, for the development of promising drugs for treating people, for surface disinfection in medicine and in the field of biological protection of agricultural plants from extended (in comparison with prototype) a list of phytopathogens.
Предлагаемое изобретение удовлетворяет критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, так как при определении уровня техники не обнаружено средство, которому присущи признаки, идентичные (то есть совпадающие по исполняемой ими функции и форме выполнения этих признаков) всем признакам, перечисленным в формуле изобретения, включая характеристику назначения.The present invention satisfies the criterion of "novelty", presented to the invention, since when determining the level of technology did not find a tool that has features that are identical (that is, matching the function they perform and the form of these features) to all the features listed in the claims, including destination description.
Заявляемый штамм и его применение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, поскольку из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, имеющие признаки, совпадающие с существенными признаками заявленного изобретения, и не установлена известность влияния существенных признаков на указанный технический результат.The inventive strain and its use meets the criterion of "inventive step" for inventions, since the investigated prior art has not identified technical solutions having features that match the essential features of the claimed invention, and the popularity of the influence of essential features on the specified technical result has not been established.
Заявленное техническое решение можно реализовать в промышленном производстве лекарственных средств и биопрепаратов для деятельности организаций здравоохранения, растениеводства посредством использования известных стандартных технических устройств и оборудования. Это соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемому к изобретениям.The claimed technical solution can be implemented in the industrial production of medicines and biological products for the activities of healthcare organizations, crop production through the use of well-known standard technical devices and equipment. This meets the criterion of "industrial applicability" presented to the invention.
Использованные источникиUsed sources
1. Патент RU 2558293. МПК C12N 1/14 (2006.01), A61K 35/74 (2015.01), C12R 1/885 (2006.01). Приоритет от 22.07.2014. Опубл. 27.07.2015.1. Patent RU 2558293. IPC C12N 1/14 (2006.01), A61K 35/74 (2015.01), C12R 1/885 (2006.01). Priority from 07/22/2014. Publ. 07/27/2015.
2. Патент RU 2475528. МПК C12N 1/14 (2006.01), A01N 63/04 (2006.01), C12R 1/885 (2006.01). Приоритет от 24.03.2011. Опубл. 20.02.2013. Описание патента Штамм Trichoderma harzianum Rifai - продуцент ингибитора вируса кольцевой пятнистости табака (Tobacco ringspot virus) депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под № F-180.2. Patent RU 2475528. IPC C12N 1/14 (2006.01), A01N 63/04 (2006.01), C12R 1/885 (2006.01). Priority from 03.24.2011. Publ. 02/20/2013. Patent Description The Trichoderma harzianum Rifai strain, producer of the Tobacco ringspot virus inhibitor, was deposited in the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms under No. F-180.
3. Р.И. Тухбатова, А.Н. Фаттахова, Ф.К. Алимова. Противоопухолевые свойства Trichoderma asperellum 302 из погребенных почв.3. R.I. Tukhbatova, A.N. Fattakhova, F.K. Alimova. Antitumor properties of Trichoderma asperellum 302 from buried soils.
4. Патент СССР SU 1717052. МПК5 A01N 63/04, C12N 11/14. Приоритет от 22.08.1988. Опубл. 07.03.1992. Описание патента. Штамм гриба Trichoderma lignorum ВНИСХМ №37 для производства триходермина. Ж-л «Цитология», 2014. Том 56, №6. - С. 450-452.4. USSR patent SU 1717052. IPC 5 A01N 63/04, C12N 11/14. Priority from 08.22.1988. Publ. 03/07/1992. Patent Description The strain of the fungus Trichoderma lignorum VNISXM No. 37 for the production of trichodermin. Journal of Cytology, 2014. Volume 56, No. 6. - S. 450-452.
5. О.М. Al-Obaidy, М.A. Al-Rijabo, Antagonistic Activity and Production of Antifungal Compound(s) from Selected Trichoderma spp. // J. Edu. & Sci., Vol. (23), No. (3) 2010.5. O.M. Al-Obaidy, M.A. Al-Rijabo, Antagonistic Activity and Production of Antifungal Compound (s) from Selected Trichoderma spp. // J. Edu. & Sci., Vol. (23), No. (3) 2010.
6. V.S. Sadykovaa, A.V. Kurakovb, A.E. Kuvarinab, and E.A. Rogozhin, Antimicrobial Activity of Fungi Strains of Trichoderma from Middle Siberia // ISSN 0003-6838, Applied Biochemistry and Microbiology, 2015, Vol. 51, No. 3, pp. 355-361.6. V.S. Sadykovaa, A.V. Kurakovb, A.E. Kuvarinab, and E.A. Rogozhin, Antimicrobial Activity of Fungi Strains of Trichoderma from Middle Siberia // ISSN 0003-6838, Applied Biochemistry and Microbiology, 2015, Vol. 51, No. 3, pp. 355-361.
7. J. 
Claims (2)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015154354A RU2620971C1 (en) | 2015-12-18 | 2015-12-18 | Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application |
| EA201600426A EA033116B1 (en) | 2015-12-18 | 2016-06-08 | Use of trichoderma asperellum f-1087 strain as producer of peptide metabolites having antibacterial, antitumor, fungicide activities |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015154354A RU2620971C1 (en) | 2015-12-18 | 2015-12-18 | Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2620971C1 true RU2620971C1 (en) | 2017-05-30 |
Family
ID=59032432
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015154354A RU2620971C1 (en) | 2015-12-18 | 2015-12-18 | Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA033116B1 (en) |
| RU (1) | RU2620971C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2740318C1 (en) * | 2020-03-26 | 2021-01-13 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Trichoderma asperellum f-1395 strain - producer of hydrolytic complex |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1717052A1 (en) * | 1988-08-22 | 1992-03-07 | Белорусский Научно-Исследовательский Институт Защиты Растений | Fungous strain trichoderma lignorum for production of trichodermin |
| RU2475528C2 (en) * | 2011-03-24 | 2013-02-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | STRAIN Trichoderma harzianum Rifai - PRODUCER OF INHIBITOR OF Tobacco ringspot virus |
| RU2558293C1 (en) * | 2014-07-22 | 2015-07-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis |
-
2015
- 2015-12-18 RU RU2015154354A patent/RU2620971C1/en active
-
2016
- 2016-06-08 EA EA201600426A patent/EA033116B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1717052A1 (en) * | 1988-08-22 | 1992-03-07 | Белорусский Научно-Исследовательский Институт Защиты Растений | Fungous strain trichoderma lignorum for production of trichodermin |
| RU2475528C2 (en) * | 2011-03-24 | 2013-02-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | STRAIN Trichoderma harzianum Rifai - PRODUCER OF INHIBITOR OF Tobacco ringspot virus |
| RU2558293C1 (en) * | 2014-07-22 | 2015-07-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| KANCELISTA A., TRIL U. et.al., Application of Lignocellulosic waste materials for the production and stabilization of Trichoderma biomass. Pol. J. Environ. Stud, 2013, v. 22, N4, p. 1083. * |
| ТУХБАТОВА Р.И., ФАТТАХОВА А.Н., АЛИМОВА Ф.К., Противоопухолевые свойства Trichoderma asperellum 302 из погребенных почв, Цитология, 2014, т.56, N 6, стр. 450-452. * |
| ТУХБАТОВА Р.И., ФАТТАХОВА А.Н., АЛИМОВА Ф.К., Противоопухолевые свойства Trichoderma asperellum 302 из погребенных почв, Цитология, 2014, т.56, N 6, стр. 450-452. KANCELISTA A., TRIL U. et.al., Application of Lignocellulosic waste materials for the production and stabilization of Trichoderma biomass. Pol. J. Environ. Stud, 2013, v. 22, N4, p. 1083. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2740318C1 (en) * | 2020-03-26 | 2021-01-13 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Trichoderma asperellum f-1395 strain - producer of hydrolytic complex |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA033116B1 (en) | 2019-08-30 |
| EA201600426A1 (en) | 2017-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fouda et al. | Biotechnological applications of fungal endophytes associated with medicinal plant Asclepias sinaica (Bioss.) | |
| Seema et al. | In vitro evaluation of biological control agents against Rhizoctonia solani. | |
| Jaihan et al. | Selection of entomopathogenic fungus for biological control of chili anthracnose disease caused by Colletotrichum spp. | |
| KR101717137B1 (en) | Bacillus subtilis SCHB1433 strain having siderophore production activity, enzyme secretion activity and antifungal activity against plant pathogen and uses thereof | |
| Safavi | Attenuation of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana following serial in vitro transfers | |
| Jackson et al. | Development of pilot-scale fermentation and stabilisation processes for the production of microsclerotia of the entomopathogenic fungus Metarhizium brunneum strain F52 | |
| Tayung et al. | Antimicrobial endophytic fungal assemblages inhabiting bark of Taxus baccata L. of Indo-Burma mega biodiversity hotspot | |
| Deka et al. | Optimization of culture parameters for improved production of bioactive metabolite by endophytic Geosmithia pallida (KU693285) isolated from Brucea mollis Wall ex. Kurz, an endangered medicinal plant. | |
| Wang et al. | Effect of temperature, pH, physical and chemical factors on germination rate of the chlamydospores of the nematophagous fungus Duddingtonia flagrans | |
| Regassa et al. | Supplementing biocontrol efficacy of Bacillus velezensis against Glomerella cingulata | |
| Benaissa et al. | Antagonistic effect of plant growth promoting rhizobacteria associated with Rhus tripartitus on gram positive and negative bacteria. | |
| RU2620971C1 (en) | Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application | |
| Abdennabi et al. | Antifungal activity of Endophytic fungi isolated from date palm sap (Phoenix dactylifera L.) | |
| Stephan et al. | Development of a fluid‐bed coating process for soil‐granule‐based formulations of Metarhizium brunneum, Cordyceps fumosorosea or Beauveria bassiana | |
| Biswas et al. | Evaluation of biological control agents against sheath blight of rice in Tripura | |
| Sanjotha et al. | An in vitro approach for evaluating antimicrobial activity and production of kojic acid by aspergillus flavus isolated from Karwar region | |
| Mejdoub-Trabelsi et al. | Antagonizing impact of endophytic fungal isolates against potato black scurf (Rhizoctonia solani) | |
| KR20020036265A (en) | The antagonist, Burkholderia gladioli GB-0999 | |
| Mohamed et al. | Mutagenesis and inter-specific protoplast fusion between Trichoderma koningii and Trichoderma reesei for biocontrol improvement | |
| Abdel-Kareem et al. | Biosynthesis of silver nanoparticles by Aspergillus sakultaensis and its antibacterial activity against human pathogens | |
| Sour et al. | Isolation of endophytic fungi from some orchid varieties | |
| RU2422511C1 (en) | Brevibacillus laterosporus BACTERIA STRAIN PRODUCING WIDE SPECTRUM OF BIOLOGICALLY ACTIVE COMPOUNDS | |
| RU2612150C2 (en) | Penicillium vulpinum micromycetes strain f-1523 with antibacterial activity on anthrax agent bacillus anthracis | |
| KR101736326B1 (en) | Bacillus subtilis SCHB1437 strain having auxin production activity, enzyme secretion activity and antifungal activity against plant pathogen and uses thereof | |
| Liao et al. | Biocontrol ability of Bacillus velezensis T9 against Apiospora arundinis causing Apiospora mold on sugarcane |