RU2558293C1 - STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis - Google Patents
STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2558293C1 RU2558293C1 RU2014130109/10A RU2014130109A RU2558293C1 RU 2558293 C1 RU2558293 C1 RU 2558293C1 RU 2014130109/10 A RU2014130109/10 A RU 2014130109/10A RU 2014130109 A RU2014130109 A RU 2014130109A RU 2558293 C1 RU2558293 C1 RU 2558293C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- causative agent
- bacillus anthracis
- activity against
- trichoderma hamatum
- Prior art date
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и биотехнологии.The invention relates to the field of medical microbiology and biotechnology.
Борьба с возбудителем сибирской язвы в природных очагах ее распространения является важнейшей задачей по профилактике заражения бактериальной инфекцией человека и животных. Одной из задач по обеспечению проведения противоэпидемических мероприятий в отношении возбудителя сибирской язвы является внедрение в практику новых дезинфектологических препаратов и технологий их применения [О мерах совершенствования мероприятий по профилактике сибирской язвы в Российской Федерации. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Онищенко №41 от 27 июня 2008 г. ].The fight against the causative agent of anthrax in the natural foci of its spread is the most important task in preventing infection with a bacterial infection of humans and animals. One of the tasks to ensure the implementation of anti-epidemic measures in relation to the causative agent of anthrax is the introduction into practice of new disinfectological drugs and technologies for their use [On measures to improve measures for the prevention of anthrax in the Russian Federation. Resolution of the Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation G.G. Onishchenko No. 41 dated June 27, 2008].
До настоящего времени основными средствами деконтаминации зараженной сибиреязвенным микробом почвы продолжают оставаться химические дезинфицирующие средства [Соколова Н. Ф. Современные средства и методы для дезинфекции при сибирской язве // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: Сб. статей. -М.: Росинэкс. - 2002. - С. 56-57]. Однако химические средства имеют ряд недостатков экологического и санитарно-гигиенического характера [Федорова Л.С. Дезинфицирующие свойства хлорактивиых соединений и средств на их основе (обзор литературы) /Л.С. Федорова, И.М. Цвирова, А.С. Белова, Н.С. Левчук // Ж. Дезинфекционное Дело. - 2011. - №4. - С. 11-19].To date, the main means of decontamination of soil infected with anthrax microbe continue to be chemical disinfectants [Sokolova N. F. Modern means and methods for disinfection in anthrax // Materials of the VIII All-Russian Congress of Epidemiologists, Microbiologists and Parasitologists: Sat. articles. -M .: Rosinex. - 2002. - S. 56-57]. However, chemical agents have a number of environmental and sanitary-hygienic disadvantages [Fedorova LS The disinfecting properties of chloroactive compounds and agents based on them (literature review) / L.S. Fedorova, I.M. Tsvirova, A.S. Belova, N.S. Levchuk // J. Disinfection Business. - 2011. - No. 4. - S. 11-19].
Известно, что в перечне дезинфицирующих средств, используемых для обеззараживания почвы, полностью отсутствуют биологические препараты [Дезинфицирующие средства: Справочник. М.: Торговая компания «БИНГО ГРАНД». - 2007. - 336 с]. Вместе с тем известно, что почва богата микробными антагонистами, выполняющими заметную роль в элиминации бактериальных патогенов [Черкасский, Б.Л. Принципы и перспективы санации почвенных очагов сибирской язвы// Материалы Международ. Симпоз. по дезинфекции и стерилизации. - М.: Медицина, 1972. - С. 54-56].It is known that in the list of disinfectants used for disinfecting the soil, biological preparations are completely absent [Disinfectants: Handbook. M .: Trading company "BINGO GRAND". - 2007. - 336 s]. However, it is known that the soil is rich in microbial antagonists, which play a significant role in the elimination of bacterial pathogens [Cherkassky, B.L. Principles and prospects for the rehabilitation of soil foci of anthrax // Materials International. Symptosis for disinfection and sterilization. - M .: Medicine, 1972. - S. 54-56].
Известно, что в отношении бактерии Bacillus anthracis наибольшим потенциалом антагонистического воздействия обладают культуры Strcptomyces roseus, Bacillus subtilis, Escherichia coli [Семенова С.А., Галиуллин A.K. Микробные антагонисты для биологической санации скотомогильников // Ученые записки КГАВМ. - Казань. - 2010. - Т. 204. - С. 246-251].It is known that in relation to the bacterium Bacillus anthracis, the cultures of Strcptomyces roseus, Bacillus subtilis, Escherichia coli possess the greatest potential for antagonistic effects [S. Semenova, A. Galiullin A. Microbial antagonists for the biological rehabilitation of cattle cemeteries // Uchenye zapiski KGAVM. - Kazan. - 2010. - T. 204. - S. 246-251].
Известно также, что среди микробов, подавляющих развитие возбудителя сибирской язвы, наиболее изучены актиномицеты [Калюжная Л.Д. Изучение антагонистического действия актиномицетов на бациллы сибирской язвы / Л.Д. Калюжная, А.М. Брянская, А.С.Коротич, В.П.Касавченко // Ж. Антибиотики. -1975. - №7. - С. 617-623]. Микромицеты как антагонисты возбудителя сибирской язвы не известны.It is also known that among the microbes that suppress the development of the causative agent of anthrax, the most studied actinomycetes [Kalyuzhnaya L.D. Studying the antagonistic action of actinomycetes on anthrax bacilli / L.D. Kalyuzhnaya, A.M. Bryansk, A.S. Korotich, V.P. Kasavchenko // J. Antibiotics. -1975. - No. 7. - S. 617-623]. Micromycetes as antagonists of the causative agent of anthrax are not known.
Задачей изобретения является получение нового штамма микромицета Trichoderma hamatum (Bonordcn) Bainicr с выраженными антибактериальными свойствами в отношении возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis.The objective of the invention is to obtain a new strain of micromycete Trichoderma hamatum (Bonordcn) Bainicr with pronounced antibacterial properties against the causative agent of anthrax Bacillus anthracis.
Поставленная задача решается тем, что предложен штамм микромицета Trichoderma hamatum FX-1714/2 (Bonorden) Bainier с выраженными антибактериальными свойствами в отношении возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis.The problem is solved by the fact that the proposed strain of micromycete Trichoderma hamatum FX-1714/2 (Bonorden) Bainier with pronounced antibacterial properties against the causative agent of anthrax Bacillus anthracis.
Штамм гриба Trichoderma hamatum VL-1714/2 выделен с поверхности паука (Acarina), найденного на берегу реки Самары в селе Андреевка, Новомосковского района, Днепропетровской области, Украина Штамм депонирован в Государственную коллекцию патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск». Справка о депонировании №349 от 12.03.2012. Штамму присвоен регистрационный номер F-l 1. Штамм характеризуется следующими признаками.The strain of the fungus Trichoderma hamatum VL-1714/2 was isolated from the surface of a spider (Acarina) found on the banks of the Samara River in the village of Andreevka, Novomoskovsk District, Dnipropetrovsk Region, Ukraine. The strain was deposited in the State Collection of Pathogenic Microorganisms and Cell Cultures “GKPM-Obolensk”. Certificate of deposit No. 349 of 03/12/2012. The strain is assigned a registration number F-l 1. The strain is characterized by the following characteristics.
Культурально-морфологические особенности штамма: Колонии на стандартной среде Чапека при 22°С растут быстро, достигая краев чашки Петри за 5 дней. Мицелий бесцветный, стелющийся, паутинистый. Спороношение появляется на S -12 день роста в мелких выпуклых сливающихся подушечках 2-4 мм в диаметре, расположенных равномерно или концентрическими зонами, часто только по краю колонии. Цвет серо-зеленый, синевато-серый до свинцово-серого, иногда грязно-зеленый или темно-зеленый. Обратная сторона колонии бесцветная. Пигмент в среду не выделяется. Экссудат обычно отсутствует. Запах слабый грибной. Гифы бесцветные, гладкие, 2-8 µм в диаметре. Погруженный мицелий более толстый, до 8-12 µм шириной, с вздутиями и анастомозами. Хламидоспоры обычно обильные, терминальные или интеркалярные, круглые, овальные или яйцевидные, бесцветные, гладкие, 8-15 µм в диаметре. Конидиеносцы неокрашенные, гладкие, прямые, толстые 18 µм в диаметре. Разветвленные через равные промежутки, веточки короткие и толстые, расположены по 2-4, иногда по одной, расходятся под прямым углом к конидиеносцу. Верхушка конидиеносца оканчивается длинным, извилистым, разветвленным, иногда загнутым на конце стерильным отростком, имеющим гладкую поверхность. Фиалиды расположены на коротких веточках плотными мутовками по 5-8, редко по одной или две. Яйцевидные, широкие и короткие, с короткой вытянутой шейкой, вздутые в середине 3,5-5,5×2,5-4,5 µм. Конидии серо-зеленые, собраны в слизистые головки, эллиптические, довольно крупные, 3,5-5,7×2,2 -3,3 µм, гладкие. На сусло-агаре колонии образуют более обильный воздушный мицелий, позже начинают спороносить, кроме подушечек появляется спороношение в воздушном мицелии.Cultural and morphological features of the strain: Colonies on standard Chapek medium at 22 ° C grow rapidly, reaching the edges of the Petri dish in 5 days. The mycelium is colorless, creeping, cobwebby. Sporulation appears on S -12 day of growth in small convex confluent pads 2-4 mm in diameter, arranged uniformly or in concentric zones, often only along the edge of the colony. The color is gray-green, bluish gray to lead gray, sometimes dirty green or dark green. The reverse side of the colony is colorless. Pigment on Wednesday is not allocated. Exudate is usually absent. The smell is weak mushroom. The hyphae are colorless, smooth, 2-8 µm in diameter. The submerged mycelium is thicker, up to 8-12 μm wide, with swelling and anastomoses. Chlamydospores are usually abundant, terminal or intercalary, round, oval or ovoid, colorless, smooth, 8-15 μm in diameter. Conidiophores unpainted, smooth, straight, thick 18 µm in diameter. Branched at equal intervals, the branches are short and thick, located 2-4, sometimes one at a time, diverge at right angles to the conidiophore. The apex of the conidiophore ends with a long, winding, branched, sometimes bent at the end, sterile process having a smooth surface. The phialids are located on short branches with dense whorls of 5-8, rarely one or two. Ovoid, wide and short, with a short elongated neck, swollen in the middle 3.5-5.5 × 2.5-4.5 μm. Conidia are gray-green, collected in mucous heads, elliptical, rather large, 3.5-5.7 × 2.2 -3.3 μm, smooth. On wort agar, the colonies form a more abundant aerial mycelium, later they begin to spore, except for pads, sporulation appears in the aerial mycelium.
Биохимические особенности штаммаBiochemical features of the strain
Отношение к источникам углерода: хорошо усваивает глюкозу, глицерин маннит. Может расти на средах, содержащих галактозу, лактозу, сахарозу, крахмал. Не усваивает целлюлозу и хитин. Отношение к источникам азота: усваивает аммонийные формы азота и органический азот аминокислот. Восстанавливает нитраты. Attitude to carbon sources: well absorbs glucose, glycerin mannitol. It can grow on media containing galactose, lactose, sucrose, starch. Does not absorb cellulose and chitin. Attitude to nitrogen sources: assimilates ammonia forms of nitrogen and organic nitrogen of amino acids. Restores nitrates.
Оптимальные условия и состав среды для культивированияOptimal conditions and composition of the medium for cultivation
Гриб растет в интервале значений pH от 2.5 до 9,5. Оптимальное значение pH 5,5-6,5. В более кислых условиях (pH 2,5-5,0) и в более щелочных (pH 7,0-9,5) изменяются морфологические характеристики культуры: замедлено спорообразование. Плотные питательные среды: агар Чапека, агар Сабуро, сусло-агар. Аэроб. Оптимальная температура для роста культуры гриба 22-25°C, длительность культивирования до массовой споруляции - 5-7 суток, в зависимости от состава среды и температуры культивирования.The fungus grows in the range of pH values from 2.5 to 9.5. The optimal pH value is 5.5-6.5. Under more acidic conditions (pH 2.5-5.0) and more alkaline (pH 7.0-9.5), the morphological characteristics of the culture change: spore formation is slowed down. Dense nutrient media: апapek agar, Saburo agar, wort agar. Aerobe. The optimum temperature for the growth of the fungus culture is 22-25 ° C, the duration of cultivation before mass sporulation is 5-7 days, depending on the composition of the medium and the temperature of cultivation.
Антагонистические свойства Antagonistic properties
Штамм гриба Trichoderma hamatum F-11 обладает антагонистической активностью в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий.The strain of the fungus Trichoderma hamatum F-11 has antagonistic activity against gram-positive and gram-negative bacteria.
Способ, условия и состав сред для длительного храненияMethod, conditions and composition of media for long-term storage
1. В обезвоженном состоянии на ионообменной смоле, хранение при температуре (4-8)°C, перезакладка через 5 лет.1. In a dehydrated state on an ion-exchange resin, storage at a temperature of (4-8) ° C, re-laying after 5 years.
2. Под минеральным маслом на агаре Чапека, хранение при температуре (4-8)°C, перезакладка через 1 год.2. Under mineral oil on апapek agar, storage at a temperature of (4-8) ° C, re-laying after 1 year.
3. В жидком азоте, срок хранения не ограничен.3. In liquid nitrogen, the shelf life is unlimited.
4. В лиофилизированном виде, хранение при температуре (4-8)°C, не менее пяти лет.4. In lyophilized form, storage at a temperature of (4-8) ° C, at least five years.
Пример 1. Выращивание штамма Trichoderma hamatum F-11 на твердой питательной среде и оценка его антимикробного спектра действияExample 1. Growing a strain of Trichoderma hamatum F-11 on a solid nutrient medium and evaluation of its antimicrobial spectrum of activity
Для определения антимикробного спектра действия грибной культуры Т. hamatum F-l 1 использовали метод блоков, основанный на способности веществ диффундировать в толщу агара и задерживать рост тест-объектов, находящихся в зоне диффузии.To determine the antimicrobial spectrum of action of the fungal culture of T. hamatum F-1, the block method was used, based on the ability of substances to diffuse into the agar and inhibit the growth of test objects in the diffusion zone.
Штамм гриба Т. hamatum F-11 выращивают на плотной питательной микологической модифицированной среде следующего состава (г/л): пептон - 5,0; дрожжевой экстракт - 5,0; агар - 15,0; глюкоза - 10,0; мальтоза-10, NaNO3 - 2,0; KCl - 0,5; FeSO4×7H2O - 0,01; MgSO4×7H2O - 0,5; K2HPO4 - 1,0; гентамицин - мкг/мл.The strain of the fungus T. hamatum F-11 is grown on a dense nutrient mycological modified medium of the following composition (g / l): peptone - 5.0; yeast extract - 5.0; agar - 15.0; glucose - 10.0; maltose-10, NaNO 3 - 2.0; KCl - 0.5; FeSO 4 × 7H 2 O — 0.01; MgSO 4 × 7H 2 O - 0.5; K 2 HPO 4 - 1.0; gentamicin - mcg / ml.
Штамм выращивают в течении 5 -1 3 дней в термостате при температуре (24+0,5)°C. Затем из агара с исследуемой культурой Trichoderma hamatum F-l 1 пробочным сверлом вырезают блоки диаметром 5 мм и помещают на засеянные и подсушенные газоны тест-культур.The strain is grown for 5 -1 3 days in a thermostat at a temperature of (24 + 0.5) ° C. Then, 5 mm diameter blocks are cut out from the agar with the Trichoderma hamatum F-1 culture agar with a test drill and placed on the seeded and dried lawns of the test cultures.
Для приготовления газонов тест-объектов используют суточные культуры, полученные из музея ГНЦПМБ, которые выращивают на чашках Петри со средой ГРМ (гидролизат рыбной муки). Опытным путем подбирают концентрацию микроорганизмов для получения на чашках Петри сплошного, но не густого газона. Стандартизацию проводят по шкале McFarlanda, используют стандарты мутности. Суспензии суточных тест-культур плотностью 106 кл/мл высевали на чашки Петри диаметром 90 мм по 0,2 мл, растирали шпателем для получения однородного газона и оставляли на 30 мин для полного впитывания в агар. Параллельно используют метод глубинного посева. В чашки Петри предварительно разливают по 10 мл питательной среды ГРМ и оставляют на сутки в термостате (для проверки на контаминацию). На следующие сутки в расплавленный агар - 100 мл добавляют 2 мл суспензии суточной тест-культуры плотностью 108 кл/мл, тщательно перемешивают и разливали по 10 мл в чашки Петри. Диски с культурой гриба помещают на поверхность второго слоя агара после застывания.To prepare the lawns of the test objects, daily crops are used, obtained from the Museum of the State Scientific Center for Microbiology, which are grown on Petri dishes with timing medium (fish meal hydrolyzate). Experimentally select the concentration of microorganisms to obtain a solid but not thick lawn on Petri dishes. Standardization is carried out on a McFarlanda scale, using turbidity standards. Suspensions of daily test cultures with a density of 10 6 cells / ml were sown on 0.2 ml diameter Petri dishes 90 cm, ground with a spatula to obtain a uniform lawn and left for 30 minutes to completely absorb into the agar. In parallel, the method of deep sowing is used. 10 ml of the timing medium are previously poured into Petri dishes and left in the thermostat for a day (to check for contamination). The next day, 2 ml of a daily test culture suspension with a density of 10 8 cells / ml was added to molten agar - 100 ml, mixed thoroughly and poured into 10 ml Petri dishes. Mushroom culture discs are placed on the surface of the second agar layer after solidification.
Каждый опыт проводили в трех повторностях. Активность штамма определяли по среднему значению диаметра зоны подавления роста тест-культур. Диаметры зон подавления роста тест-организмов вокруг блочков измеряли линейкой.Each experiment was carried out in triplicate. The strain activity was determined by the average diameter of the zone of inhibition of growth of test cultures. The diameters of the zones of inhibition of growth of test organisms around the blocks were measured with a ruler.
Из приведенных в табл.1 данных следует, что штамм гриба Trichoderma hamatum F-l 1 оказывает антимикробное воздействие на патогенные микроорганизмы различных таксономических групп.From the data given in table 1, it follows that the strain of the fungus Trichoderma hamatum F-1 has an antimicrobial effect on pathogenic microorganisms of various taxonomic groups.
Пример 2. Выращивание штамма Trichoderma hamatum F-11 в колбах на жидкой питательной среде разного составаExample 2. Growing a strain of Trichoderma hamatum F-11 in flasks on a liquid nutrient medium of different composition
Культуру предварительно оживляют путем засева пробирок с плотной питательной средой (агар Чапека, агар Сабуро, сусло агар). Засеянные косяки выращивают в термостате при температуре +22-25°C в течение 5-7 суток до массовой споруляции в зависимости от состава среды и температуры культивирования. Для культивирования штамма Trichodermahamatum F-l 1 в колбах используют питательную среду двух составов (г/л):The culture is pre-revitalized by inoculation of tubes with a dense nutrient medium (agar Chapek, agar Saburo, wort agar). Inoculated jambs are grown in a thermostat at a temperature of + 22-25 ° C for 5-7 days before mass sporulation, depending on the composition of the medium and the temperature of cultivation. For the cultivation of the strain Trichodermahamatum F-l 1 in the flasks using a nutrient medium of two compositions (g / l):
Среда №1Wednesday №1
Среда №2Wednesday №2
Для засева питательной среды готовят 3-суточный инокулят. Для получения инокулята в среду помещали агаровый блок с газоном гриба, выращенного на среде Чапека+. Для засева питательной среды используют инокулюм в количестве 5 мл. Культивирование осуществляют в качалочных колбах V=750 мл, содержащих 100 мл среды при температуре 25°C на подвесной качалке со скоростью вращения платформы 220 об/мин в течение 72 часов. В процессе роста культуры контролируют отсутствие посторонней микрофлоры, pH, продуктивность, морфологическое состояние культуры. В качестве показателя продуктивности штамма гриба используют значение сухого веса грибной биомассы. В результате культивирования штамма гриба получают культуральную жидкость со следующими значениями сухого веса грибной биомассы (табл.2).For inoculation of the nutrient medium, a 3-day inoculum is prepared. To obtain the inoculum, an agar block with the lawn of the fungus grown on Chapek + medium was placed in the medium. For inoculation of a nutrient medium inoculum is used in an amount of 5 ml. Cultivation is carried out in rocking flasks V = 750 ml, containing 100 ml of medium at a temperature of 25 ° C on a hanging rocking chair with a platform rotation speed of 220 rpm for 72 hours. In the process of culture growth, the absence of extraneous microflora, pH, productivity, and morphological state of the culture are controlled. The dry weight of the mushroom biomass is used as an indicator of the productivity of the fungus strain. As a result of cultivation of the strain of the fungus, a culture fluid is obtained with the following dry weight values of the mushroom biomass (Table 2).
Результаты исследований показали, что состояние развития культуры Trichoderma hamatum F-l 1 на среде №1> и среде №2 одинаково. Однако по показателю продуктивности (сухой вес биомассы гриба) среда №1 значительно превосходит среду №2 на всех фазах роста культуры. Поэтому для культивирования штамма гриба Trichoderma hamatum F-l 1 рекомендована среда №1.The results of the studies showed that the state of development of the Trichoderma hamatum F-1 culture on medium No. 1> and medium No. 2 is the same. However, in terms of productivity (dry weight of the biomass of the fungus), medium No. 1 significantly exceeds medium No. 2 at all phases of culture growth. Therefore, for the cultivation of the strain of the fungus Trichoderma hamatum F-l 1 recommended environment No. 1.
Пример 3. Получение грибной субстанции на основе штамма Trichoderma hamatum F-11 и ее испытание на активность в отношении возбудителя сибирской язвыExample 3. Obtaining a fungal substance based on a strain of Trichoderma hamatum F-11 and its test for activity against the causative agent of anthrax
Для получения грибной субстанции штамм Trichoderma hamatum F-l 1 культивируют на среде №1 по методу, описанному в примере 2. Полученную в результате культивирования штамма-продуцента культуральную жидкость центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин. В результате центрифугирования получают фугат культуральной жидкости (ФКЖ), который используют для определения антибактериальной активности в отношении возбудителя сибирской язвы (вакцинный штамм Bacillus anthracis, СТИ-1). Характеристика штамма представлена в таблице 3.To obtain a fungal substance, the Trichoderma hamatum F-1 strain is cultured on medium No. 1 according to the method described in Example 2. The culture fluid obtained by culturing the producer strain is centrifuged at 6000 rpm for 20 minutes. As a result of centrifugation, a culture fluid centrate (PCF) is obtained, which is used to determine the antibacterial activity against the causative agent of anthrax (vaccine strain Bacillus anthracis, STI-1). The characteristics of the strain are presented in table 3.
В качестве питательной основы для культивирования вакцинного штамма служит ферментативный гидролизат мяса или рыбокостной муки. К питательной основе, содержащей 100-120 мг % аминного азота, вносят агар микробиологический из расчета 15 г/л, доводят pH до 7,2-7,3, разливают по флаконам и стерилизуют 12-20 минут в автоклаве при 0,5 атм. Перед применением в агаризованную питательную среду добавляют полимиксин в концентрации 100 мкг/см3 для предотвращения роста посторонней микрофлоры. Среду разливают в чашки Петри слоем толщиной 2,0-2,5 мм.An enzymatic hydrolyzate of meat or fish meal is used as a nutritional basis for the cultivation of a vaccine strain. Microbiological agar at a rate of 15 g / l is added to a nutrient base containing 100-120 mg% of amine nitrogen, the pH is adjusted to 7.2-7.3, poured into vials and sterilized for 12-20 minutes in an autoclave at 0.5 atm . Before use, polymyxin in a concentration of 100 μg / cm 3 is added to the agarized nutrient medium to prevent the growth of extraneous microflora. The medium is poured into Petri dishes with a layer thickness of 2.0-2.5 mm.
Вакцинный штамм В. anthracis СТИ-1 культивируют в течение 1-2 суток в термостате при температуре (24±0,5)°C. Для засева питательной среды бактериальной культурой опытным путем подбирают концентрацию микроорганизма для получения на чашках Петри сплошного, но не густого газона. Стандартизацию проводят по шкале McFarlanda, используя стандарты мутности. Суспензию суточной культуры плотностью 106 кл/мл высевают на чашки Петри диаметром 90 мм по 0,2 мл, растирают шпателем для получения однородного газона и оставляют на 30 мин для полного впитывания в агар. Чашки с газоном бактериальной культуры выставляют в термостат и инкубируют в течение 1-2 суток при температуре (24±0,5)°C.The vaccine strain B. anthracis STI-1 is cultured for 1-2 days in an incubator at a temperature of (24 ± 0.5) ° C. For the inoculation of the nutrient medium with a bacterial culture, experimentally select the concentration of the microorganism to obtain a solid but not thick lawn on Petri dishes. Standardization is carried out on a McFarlanda scale using turbidity standards. A suspension of a daily culture with a density of 10 6 cells / ml is sown on 0.2 ml petri dishes 90 mm in diameter, triturated with a spatula to obtain a uniform lawn and left for 30 minutes to completely absorb into the agar. Cups with a bacterial culture lawn are placed in a thermostat and incubated for 1-2 days at a temperature of (24 ± 0.5) ° C.
Для определения антибактериальной активности испытывают две дозы ФКЖ (10 и 100 мкл), которые вносят в 4-х повторностях в лунки диаметром 5 мм на газон тест-культуры вакцинного штамма Bacillus anthracis СТИ-1. При этом применяют следующую шкалу активности: высокая активность - диаметр зоны подавления 21-30 мм и более; умеренная активность - диаметр зоны 10-20 мм: низкая активность - диаметр зоны 6-9 мм.To determine the antibacterial activity, two doses of PCF are tested (10 and 100 μl), which are applied in 4 replicates in wells with a diameter of 5 mm on the lawn of the test culture of the vaccine strain Bacillus anthracis STI-1. In this case, the following activity scale is used: high activity — diameter of the suppression zone is 21-30 mm or more; moderate activity — zone diameter 10–20 mm: low activity — zone diameter 6–9 mm.
Для получения более информативных и достоверных данных в отношении активности штамма Trichoderma hamatum F-11 используют для сравнения ФКЖ других штаммов наиболее распространенного в природе гриба Trichoderma asperellum. (табл.4).To obtain more informative and reliable data on the activity of the Trichoderma hamatum F-11 strain, PCG of other strains of the most common in nature Trichoderma asperellum fungus is used to compare. (table 4).
Установлено, при дозах 10 и 100 мкл высокая активность ФКЖ отмечена только для штамма Trichoderma hamatum F-11 соответственно 23-25 и 35-45 мм. Для ФКЖ штаммов Т. asperellum F-1290 высокая активность (соответственно 28-45 и 22-30 мм) наблюдается только при дозе 100 мкл. ФКЖ штамма Т. asperellum F-7 при дозе 100 мкл обеспечивает умеренную активность. Следовательно, ФКЖ штамма гриба Trichoderma hamatum F-11 обладает высокой антибактериальной активностью при различных дозах его использования против сибиреязвенного микроба Bacillus anthracis СТИ-1.It was established that at doses of 10 and 100 μl, high PCF activity was observed only for the Trichoderma hamatum F-11 strain, respectively 23–25 and 35–45 mm. For the PCF of T. asperellum F-1290 strains, high activity (28-45 and 22-30 mm, respectively) is observed only at a dose of 100 μl. The PCF of strain T. asperellum F-7 at a dose of 100 μl provides moderate activity. Therefore, the PCF of the strain of the fungus Trichoderma hamatum F-11 has high antibacterial activity at various doses of its use against the anthrax microbe Bacillus anthracis STI-1.
Таким образом, штамм микромицета Trichoderma hamatum F-11 обладает антибактериальной активностью в отношении возбудителя сибирской язвы и может быть рекомендован в качестве продуцента биологического препарата.Thus, the strain of micromycete Trichoderma hamatum F-11 has antibacterial activity against the causative agent of anthrax and can be recommended as a producer of a biological preparation.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014130109/10A RU2558293C1 (en) | 2014-07-22 | 2014-07-22 | STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014130109/10A RU2558293C1 (en) | 2014-07-22 | 2014-07-22 | STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2558293C1 true RU2558293C1 (en) | 2015-07-27 |
Family
ID=53762788
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014130109/10A RU2558293C1 (en) | 2014-07-22 | 2014-07-22 | STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2558293C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2620971C1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-05-30 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application |
| RU2710783C1 (en) * | 2019-01-29 | 2020-01-13 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Орловский государственный аграрный университет имени Н.В. Парахина" | Trichoderma atrobrunneum strain having antibacterial activity on bacillus anthracis |
| CN112063538A (en) * | 2020-09-25 | 2020-12-11 | 中国农业科学院特产研究所 | Trichoderma hamatum, microbial agent containing trichoderma hamatum and application of trichoderma hamatum |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2122026C1 (en) * | 1997-07-23 | 1998-11-20 | Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт | Strain of bacillus subtilis tpac showing resistance to tetracycline, rifampicin, ampicillin, streptomycin and exhibiting antibacterial activity with respect to microorganism pathogenic species |
-
2014
- 2014-07-22 RU RU2014130109/10A patent/RU2558293C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2122026C1 (en) * | 1997-07-23 | 1998-11-20 | Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт | Strain of bacillus subtilis tpac showing resistance to tetracycline, rifampicin, ampicillin, streptomycin and exhibiting antibacterial activity with respect to microorganism pathogenic species |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LISS S.N. ET AL. Antibiotic activity of an isocyanide metabolite of Trichoderma hamatum against rumen bacteria // Can. J. Microbiol., 1985, 31(9):767-772 * |
| СЕМЕНОВА С.А. Микробные антагонисты для биологической санации почвы контаминированной патогенными микроорганизмами. Автореферат. Казань-2011, с. 1-20. СЕМЕНОВА С.А. И ДР. Микробные антагонисты для биологической санации скотомогильников // Ученые записки КГАВМ, Казань, 2010, т. 204, с. 246-251. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2620971C1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-05-30 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) | Trichoderma asperellum strain - producer of hydrolytic enzymes and peptide metabolites and its application |
| RU2710783C1 (en) * | 2019-01-29 | 2020-01-13 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Орловский государственный аграрный университет имени Н.В. Парахина" | Trichoderma atrobrunneum strain having antibacterial activity on bacillus anthracis |
| CN112063538A (en) * | 2020-09-25 | 2020-12-11 | 中国农业科学院特产研究所 | Trichoderma hamatum, microbial agent containing trichoderma hamatum and application of trichoderma hamatum |
| CN112063538B (en) * | 2020-09-25 | 2022-04-12 | 中国农业科学院特产研究所 | Trichoderma hamatum, microbial agent containing trichoderma hamatum and application of trichoderma hamatum |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104946574B (en) | Bacillus subtilis Baisha2C for inhibiting plant pathogenic fungi | |
| KR102509861B1 (en) | Novel Bacillus amyloliquefaciens strain and composition for controlling Fusarium oxysporum or Phytophthora drechsleri of Astragalus membranaceus Bunge root comprising the same as an active ingredient | |
| CA2957697C (en) | Novel bacterium of bacillus genus and uses thereof | |
| KR101677513B1 (en) | Paenibacillus polymyxa strain effective against Root Rot Pathogen of ginseng and Use Thereof | |
| Basha et al. | Isolation and screening of endophytic fungi from Eritrean traditional medicinal plant Terminalia brownii leaves for antimicrobial activity | |
| KR101508728B1 (en) | New microorganism bacillus amyloliquefaciens naas-1, and microbial agent and biopesticide containing the same | |
| RU2558293C1 (en) | STRAIN OF MICROMYCETE Trichoderma hamatum, HAVING ANTIBACTERIAL ACTIVITY AGAINST ANTHRAX CAUSATIVE AGENT Bacillus anthracis | |
| CN107502565B (en) | One plant of fritillary bulb rhizosphere Paenibacillus polymyxa and its application | |
| Jeganathan et al. | Antimicrobial activity and characterization of marine bacteria | |
| Lipipun et al. | Antimicrobial activity (in vitro) of polysaccharide gel from durian fruit-hulls | |
| CN113604376B (en) | Sugarcane endophytic bacillus subtilis and application thereof | |
| Benaissa et al. | Antagonistic effect of plant growth promoting rhizobacteria associated with Rhus tripartitus on gram positive and negative bacteria. | |
| Cetina et al. | Antimicrobial activity of marine bacteria isolated from Gulf of Mexico | |
| Ebrahimi et al. | Antimicrobial activities of isolated endophytes from some Iranian native medicinal plants | |
| CN103555615A (en) | Bacillus amyloliquefaciens and application thereof | |
| CN114369550B (en) | Bacillus amyloliquefaciens for promoting oat growth and application thereof | |
| KR20090124371A (en) | Streptomyces sporoclivatus cjs-49 kctc 11109bp active against plant fungal pathogens | |
| CN106434403A (en) | Pediococcus pentosaceus strain and application thereof | |
| KR100726864B1 (en) | 10930 A novel Streptomyces griseofuscus VSG-16 KCTC 10930BP active against plant fungal pathogens and preparation of microbial pesticide | |
| RU2612150C2 (en) | Penicillium vulpinum micromycetes strain f-1523 with antibacterial activity on anthrax agent bacillus anthracis | |
| RU2694522C1 (en) | Bacterial strain bacillus pumilus rncim v-13250, having expressed antagonism towards microorganisms escherichia coli, candida albicans, staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis | |
| KR20180091598A (en) | Bacillus amyloliquefaciens strain AK-0 and microbial agent for prevention of ginseng root rot pathogens comprising the same | |
| CN102703353B (en) | Biocontrol strain PA-2 (Pseudomonas Aeruginosa) for preventing and curing tobacco angular leaf spot | |
| KR100732910B1 (en) | 2 A novel Bacillus subtilis FBS-2 active against plant fungal pathogens and preparation of microbial pesticide | |
| CN104232541A (en) | Bacillus for promoting healthy aquaculture of seahorse and cultivating method of bacillus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160723 |