SU1717052A1 - Fungous strain trichoderma lignorum for production of trichodermin - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, может быть использовано дл  производства биопрепарата триходермина против фитопато- генных грибов и представл ет собой новый штамм дл  получени  триходермина. Целью изобретени   вл етс  получение нового более продуктивного штамма, обладающего более широким спектром действи . Штамм Trichoderma lignorum T13-82 депонирован в коллекции ВНИИ сельскохоз йственной микробиологии, код № 37. Штамм обладает антагонистической активностью по отношению к фитопатогенным грибам Alternaria Brassicae (Berk) Sace, Alternaria radicina M.D. et E.Botrytis cinerea Pers. Зона ингиби- ровани  на 3-4 сутки соответственно равна 46,3-47,3-52,5 мм, грибы вида Fusarium oxysporum Schl, Fusarium moniliforme scheld полностью подавл ет, а зона ингиби- ровани  Bacillus subtilis на 7-8 сутки равна 14,3 мм. Урожай огурцов повышаетс  примерно на 29% по сравнению с контролем, 3 табл. ЁThe invention relates to the microbiological industry, can be used to produce the trichodermine biopreparation against phytopathogenic fungi, and is a new strain for the production of trichodermine. The aim of the invention is to obtain a new, more productive strain with a wider spectrum of action. The strain Trichoderma lignorum T13-82 was deposited in the collection of the All-Russian Research Institute of Agricultural Microbiology, code No. 37. The strain has antagonistic activity against the phytopathogenic fungi Alternaria Brassicae (Berk) Sace, Alternaria radicina M.D. et E..Botrytis cinerea Pers. The inhibition zone for 3-4 days is respectively 46.3-47.3-52.5 mm, the fungi of the species Fusarium oxysporum Schl, Fusarium moniliforme scheld completely suppresses, and the inhibitory zone of Bacillus subtilis for 7-8 days is equal to 14.3 mm. The yield of cucumbers increased by about 29% compared with the control, table 3. Yo

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности и может быть использовано дл  производства биопрепарата триходермина, который примен етс  против фитопатогенных грибов и представл ет собой новый штамм дл  получени  триходермина .The invention relates to the microbiological industry and can be used for the production of the trichodermine biological product, which is used against phytopathogenic fungi and is a new strain for the production of trichodermine.

Целью изобретени   вл етс  получение нового более продуктивного штамма гриба, обладающего более широким спектром дейг стви .The aim of the invention is to obtain a new, more productive strain of the fungus with a broader spectrum of action.

Штамм Trichoderma lignorum T-13-82 получен из штамма Trichoderma lignorum ТК-13 путем многократных пассажей через почву с последующим отбором колоний по признаку антибиотической, ферментативной активностей и продуктивности при выращивании на твердых средах. Штамм хранитс  в коллекции Белорусского научно- исследовательского института защиты растений за № 9. Депонирован в коллекции ВНИИ сельскохоз йственной микробиологии под NJ 37.The Trichoderma lignorum T-13-82 strain was obtained from the Trichoderma lignorum TK-13 strain by repeated passages through the soil with subsequent selection of colonies for antibiotic, enzymatic activity and productivity when grown on solid media. The strain is stored in the collection of the Belarusian Research Institute for Plant Protection for the number 9. Deposited in the collection of the Institute of Agricultural Microbiology under the NJ 37.

Штамм имеет следующую характеристику .The strain has the following characteristic.

Морфолого-культуральные признаки.Morphological and cultural signs.

При выращивании штамма при 26°С на среде Чапека колони  распростерта  зеленого цвета. Дерновники довольно крупные, вначале белые, на 3-4-е сутки зеленые. Обратна  сторона колонии бесцветна .When growing strain at 26 ° C on the environment of čapek colonies prostrate green. Sods are rather large, initially white, on the 3rd or 4th day they are green. The reverse side of the colony is colorless.

vi О СЛ Юvi About SL Yu

На среде сусло-агаре (рН 5,0-6,0), Колони  распростерта  темно-зеленого цвета. Дерновники крупные, вначале белые, на 3- 4-е сутки зеленые, позднее темно-зеленые, бархатистые. Обратна  сторона колонии имеет светло-зеленый цвет.On the medium wort agar (pH 5.0-6.0), Colony prostrate dark green color. Barns are large, initially white, on the 3rd-4th day green, later dark green, velvety. The reverse side of the colony has a light green color.

Конидиеносцы в виде боковых ответвлений гиф воздушного мицели  (77,0x2,5 мк). Фиалиды бутыловидныё, расположены мутовками по 2-3 или одиночно (6,4x1,4 мк). Конидии верхушечные, овальные (3,1x2,6 мк) собраны в сферические головки.Conidiophores as lateral branches of hyphae of aerial mycelium (77.0x2.5 microns). Phialides are butylovidnye, arranged in whorls of 2-3 or single (6.4 x1.4 microns). Conidia apical, oval (3.1x2.6 microns) collected in spherical heads.

Физиолого-биохимические признаки.Physiological and biochemical signs.

Штамм растет при температуре 4-30°С, рН среды 3,2-7,2, оптимальна  температура 24-26°С, рН 5,5-6,5.The strain grows at a temperature of 4-30 ° С, pH of the medium is 3.2-7.2, the optimum temperature is 24-26 ° С, pH 5.5-6.5.

Отношение к источнику углерода.Relation to carbon source.

Хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, ксилозу, лактозу. Удовлетворительно - сор- бит и дульцит. Соли органических кислот (щавелевокислый натрий и лимоннокислый натрий) оказывают ингибирующее вли ние на рост гриба в культуре.Well absorbs glucose, sucrose, xylose, lactose. Satisfactory and dulcite are satisfactory. Salts of organic acids (sodium oxalate and sodium citrate) have an inhibitory effect on fungal growth in culture.

Отношение к источнику азота.Relation to the source of nitrogen.

Хорошо усваивает пептон, аспарагин, а также аминокислоты Д-лейцин. Д-валин, фосфорно-кислый аммоний, сернокислый аммоний, хлористый аммоний, удовлетворительно - азотнокислый натрий и азотно- кислый калий.Well absorbs peptone, asparagine, as well as the amino acids D-leucine. D-valine, ammonium phosphate, ammonium sulfate, ammonium chloride, satisfactory - sodium nitrate and potassium nitrate.

Крахмал и клетчатку гидролизует, желатину разжижает, молоко пептонизирует. Нитраты восстанавливает в нитриты.Starch and fiber hydrolyzes, liquefies gelatin, peptonized milk. Nitrates restores to nitrites.

Антагонистические свойства.Antagonistic properties.

Антагонистическую активность штамма по отношению к фитопатогенным грибам определ ли на 4%-ном сусло-агаре при рН 6,0 и температуре 26°С в течение 15 дней.Antagonistic activity of the strain with respect to phytopathogenic fungi was determined on 4% wort agar at pH 6.0 and temperature of 26 ° C for 15 days.

Штамм Т13-82 обладает антагонистической активностью по отношению к Alternaria Brassicae (Berk) Sace., Alternarla radicina M.D. et. E., Botrytls clnerea Pers, образу  при совместном выращивании на 3-4-е сутки зоны ингибировани , соответственно равные 46,3-47,3-52,5, у известного штамма Б-10-17,5 мм.Strain T13-82 has antagonistic activity against Alternaria Brassicae (Berk) Sace., Alternarla radicina M.D. et. E., Botrytls clnerea Pers, form when co-cultivated for 3-4 days, inhibition zones, respectively, equal to 46.3-47.3-52.5, in a known strain B-10-17.5 mm.

По отношению к Fusarium oxysperum schl., Fusarium moniliform scheld имеет место полное нарастание колоний триходер- мы на колонии фитопатогенов.In relation to Fusarium oxysperum schl., Fusarium moniliform scheld, there is a complete growth of trichodermal colonies on phytopathogen colonies.

Штамм Т13-82 обладает антагонистической активностью по отношению к Bacillus subtilis, зона ингибировани  соответствует 14,3 мм, у штаммов Б-10 и М-10 отсутствует, а у штамма ТК-13 - 2,6 мм. Данную активность определ ли на м со-пептонном агаре при 26°С в течение 7-8 дней.Strain T13-82 has antagonistic activity against Bacillus subtilis, the zone of inhibition is 14.3 mm, in strains B-10 and M-10 is absent, and in strain TK-13 - 2.6 mm. This activity was determined on m-co-peptone agar at 26 ° C for 7-8 days.

Ферментативна  (целлюлолитическа ) активность штамма соответствует d Enzymatic (cellulolytic) activity of the strain corresponds to d

3,4, в то врем  как Б-10 - 1,5. 3.4, while the B-10 - 1.5.

Штамм маркерных признаков не имеет .Strain marker has no signs.

Штамм хран т на агаровых кос ках при температуре +3-4°С.The strain is stored on agar plates at a temperature of + 3-4 ° C.

Штамм пересевают один раз в 3 мес.Strain subcultured once every 3 months.

Получение биопрепарата триходермина на основе штамма Trichoderma llgnorum Т-13-82.Obtaining a biological product Trichodermin based on the strain Trichoderma llgnorum T-13-82.

Дл  получени  триходермина маточную культуру гриба выращивают в бутыл х по 0,5 л на стерильных отходах  чмен  три- хограммного производства. Затем в пластмассовые контейнеры, содержащие простерилизованные в автоклаве отходы  чмен , внос т маточную культуру из расчета 0,1 кг на 10 кг среды (производственна  культура). Производственную и маточную культуру триходермы выращивают при температуре 24-26°С и увлажнении 60% в течение 3-4 сут. Получают препарат с содержанием 36 500 млрд спор с 1 кг среды, продуктивность известных штаммов 15 200-30 400.To obtain Trichodermine, the uterine culture of the fungus is grown in 0.5 L bottles on sterile waste of barley trichogram production. Then, plastic containers containing sterilized barley waste sterilized in an autoclave are introduced into a uterine culture at the rate of 0.1 kg per 10 kg of medium (production culture). Industrial and uterine culture of trichoderma is grown at a temperature of 24-26 ° C and humidification of 60% for 3-4 days. Get the drug with a content of 36 500 billion spores with 1 kg of medium, the productivity of known strains 15 200-30 400.

Препарат представл ет крупно-дисперсную массу темно-зеленого цвета, содержащую споры гриба, обрывки мицели  и остатки питательной среды.The preparation is a large-dispersed mass of dark green color containing spores of the fungus, fragments of mycelium, and remnants of the nutrient medium.

Полученный препарат примен ют либо в свежем виде, либо высушивают при 30- 35°С до влажности 10%. Препарат хран т в течение года при 6-8°С.The resulting preparation is applied either fresh or dried at 30–35 ° C to a moisture content of 10%. The drug is stored for a year at 6-8 ° C.

Использование препарата в производственных услови х.Use of the drug under production conditions.

Пример 1. Триходермин испытан в производственных услови х в борьбе с корневыми гнил ми огурцов (закрытый грунт). Его вносили в почву (лунки) перед высадкой рассады на посто нное место из расчета 5 г свежеприготовленного (сырого) препарата под одно растение. Результаты приведены в табл.1.Example 1. Trichodermin is tested under production conditions in the fight against root rot of cucumbers (greenhouse). It was introduced into the soil (well) before planting seedlings on a permanent site at the rate of 5 g of freshly prepared (raw) preparation for one plant. The results are shown in table 1.

На основании многолетных экспериментов установлено, что прибавка урожа  огурца при применении триходермина, изготовленного на основе штамма Т 13-82, составл ет в сравнении со штаммом Б-10 2,9 кг/м , а в сравнении со штаммом ТК- 13 -0,8 кг/м2.On the basis of long-term experiments, it was established that the increase in the yield of cucumber when using Trichodermin, made on the basis of strain T 13-82, is 2.9 kg / m in comparison with strain B-10, and in comparison with strain TK-13-0, 8 kg / m2.

П р и м е р 2. Проведены испытани  предложенного штамма и дана сравнительна  оценка его эффективности по отношению к известным штаммам в борьбе с болезн ми огурца и томата. Результаты представлены в табл.2 и 3 соответственно .EXAMPLE 2. The proposed strain was tested and a comparative assessment was made of its effectiveness against known strains in the control of cucumber and tomato diseases. The results are presented in table 2 and 3, respectively.

Данные свидетельствуют о том, что внесение штамма Т 13-82 в форме биопрепарата в почву позвол ет снизить пораженность огурца корневыми гнил ми на 30,4%. серой гнилью на 85% и обеспечить прибавку урожа  29,3% (табл.2).The data indicate that the introduction of the T 13-82 strain in the form of a biological preparation into the soil allows to reduce the incidence of cucumber with root rot by 30.4%. gray rot by 85% and provide a yield increase of 29.3% (Table 2).

Применение триходермина штамма Т 13-82 в борьбе с болезн ми томатов способствует снижению пораженности растений корневыми и серой гнил ми соответственно на 25,0-40,5% (табл.3).The use of trichodermine strain T 13-82 in the fight against tomato diseases helps to reduce the incidence of root rot and gray rot in plants, respectively, by 25.0-40.5% (Table 3).

В результате исследований установлено , что применение штамма Т 13-82 в форме биопрепарата эффективно не только дл  профилактики и защиты растений от болезней , но и как фактор, стимулирующий ростAs a result of research, it has been established that the use of strain T 13-82 in the form of a biological product is effective not only for the prevention and protection of plants from diseases, but also as a factor stimulating the growth

00

5five

и развитие растений. За счет стимулирующего эффекта штамма получено дополнительно 33 ц/га огурцов.and plant development. Due to the stimulating effect of the strain, an additional 33 kg / ha of cucumbers was obtained.

Таким образом, штамм Т 13-82 обладает более широким спектром действи , т.к. обладает антагонистической активностью не только по отношению к фитопа- тогенным грибам, но и по отношению к Bacillus subtilis, а также позвол ет получить на 0,7 кг/м2 больше урожа  огурцов по сравнению с триходермином на основе штамма ВКПМ-262.Thus, the strain T 13-82 has a wider spectrum of action, since possesses antagonistic activity not only with respect to phytopathogenic fungi, but also with respect to Bacillus subtilis, and also allows you to get 0.7 kg / m2 more crop of cucumbers compared to trichodermine based on the strain VKPM-262.

Claims (1)

Формула изобретени  Штамм гриба Trichoderma lignorum ВНИСХМ Мг 37 дл  производства триходермина .Claims of the invention The strain of the fungus Trichoderma lignorum VNISHM Mg 37 for the production of trichodermin. Таблица 1Table 1 Таблица 2table 2 2020 Таблица 3Table 3