RU2567053C2

RU2567053C2 - Состав, ускоряющий продукцию адипонектина

Info

Publication number: RU2567053C2
Application number: RU2012154820/15A
Authority: RU
Inventors: Шаньхуа СЮЙ
Original assignee: Файнел Фьюча Интернешнл, Инк.
Priority date: 2010-05-21
Filing date: 2011-05-13
Publication date: 2015-10-27
Also published as: BR112012028054A2; TWI474829B; US8883138B2; CA2798556A1; JP2012121812A; HK1176876A1; TW201200148A; CN102892423A; JP4750213B1; RU2012154820A; BR112012028054B1; WO2011145307A1; MX2012013383A; US20130089532A1; CA2798556C; MY160509A; CN102892423B

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к составу, способствующему продукции адипонектина и обладающему промоторной активностью в отношении продукции адипонектина. Состав, способствующий продукции адипонектина и обладающий промоторной активностью в отношении продукции адипонектина, содержащий экстракты молоки лосося, пивных дрожжей, птичий коллаген и минерализованные дрожжи, характеризующиеся определенным составом. Вышеописанный состав для перорального приема способствует продукции адипонектина, обладает промоторной активностью в отношении продукции адипонектина и не имеет побочных эффектов и токсичности. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 2 пр.

Description

[0001]

Настоящее изобретение относится к составу, способствующему продукции адипонектина, более конкретно, к промотору продукции адипонектина, состоящему из экстракта молоки лосося, экстракта пивных дрожжей, птичьего коллагена (куриного коллагена) и минерализованных дрожжей (содержащих Zn, Se и Cu).

Предшествующий уровень техники

[0002]

Адипонектин представляет собой гормон, состоящий из 244 аминокислот, который секретируется жировой тканью. Он был выделен из жировой ткани человека в 1996 г. Адипонектин является секреторным белком, специфичным для жировой ткани (непатентный документ 2), и присутствует не только в жировой ткани, но также и в крови в большом количестве (у здоровых людей 5-10 мкг/мл) (непатентный документ 3). Известно, что адипонектин способствует сжиганию жира и повышает поглощение сахара скелетными мышцами и печенью за счет активизации АМФ-зависимой киназы (АМФ-активируемого белка киназы: АМФК). Известно, что этот адипонектин секретируется в большом количестве малыми адипоцитами; однако объем секреции сокращается при увеличении адипоцитов.

[0003]

Адипонектин также известен как полезный адипоцитокин, который подавляет артериосклероз. Что касается адипоцитокинов, помимо упомянутых выше полезных адипоцитокинов, существуют также вредные адипоцитокины, например, PAI-1 (ингибитор активатора плазминогена 1 типа) и ФНО-α (фактор некроза опухоли-альфа), которые способствуют развитию артериосклероза. В норме объемы секреции полезных и вредных адипоцитокинов сбалансированы. Но когда адипоциты увеличиваются вследствие ожирения и т.п., объем секреции полезных адипоцитокинов снижается, в то время как вредные адипоцитокины секретируются в избытке. В результате нарушается баланс между указанными видами адипоцитокинов, что предположительно приводит к развитию заболеваний, обусловленных образом жизни, таких как сахарный диабет 2 типа и артериосклероз.

[0004]

Как описано выше, адипонектин связан с ожирением и обусловленными образом жизни заболеваниями, вызванными ожирением. Считается, что активация данного адипонектина эффективна для профилактики или лечения заболеваний, обусловленных образом жизни. Кроме того, известно также, что адипонектин оказывает ингибирующее действие на фиброз печени. Адипонектин показан как имеющий широкое разнообразие эффектов, таких как положительная динамика в отношении гипертензии, жирового обмена и чувствительности к инсулину, противовоспалительное действие, подавление фиброза печени, способствование пролиферации нормальных гепатоцитов (патентный документ 1) и противовоспалительный эффект (патентный документ 2) (патентные документы 2-5), что позволяет предположить, что лекарственное средство, напиток или пищевой продукт, повышающий концентрацию адипонектина в крови, будет оказывать профилактическое или улучшающее действие на метаболический синдром.

[0005]

Из такого уровня техники известно производное тиазолидина в качестве лекарственного средства, способствующего продукции адипонектина. Однако это производное тиазолидина может вызвать побочные эффекты, например расстройство пищеварения, такое как диарея, запор, тошнота, а также дисфункция печени.

[0006]

Кроме того, предложен ряд соединений или компонентов, которые способствуют продукции адипонектина. Например, в патентном документе 6 раскрыто, что N-ацетилцистеин повышает уровень экспрессии адипонектина в адипоцитах под действием, а апоцинин повышает концентрацию адипонектина в плазме и также уровень экспрессии адипонектина в жировой ткани. Патентный документ 7 раскрывает то, что соединение гингерола усиливает продукцию адипонектина, а патентный документ 8 раскрывает то, что плод алмы или его экстракт усиливает продукцию адипонектина. Помимо этого еще требуются высокоэффективные вещества, способствующие продукции адипонектина. Соответственно в современных условиях, когда борьба с метаболическим синдромом стала социальной проблемой, потребовалась разработка безопасного вещества, способствующего и усиливающего продукцию адипонектина in vivo.

Документы-аналоги

Патентные документы

[0007]

Патентный документ 1:. Опубликованная японская нерассмотренная патентная заявка №2002-363094

Патентный документ 2: Опубликованная японская нерассмотренная патентная заявка №2000-256208

Патентный документ 3: Патент Японии №3018186

Патентный документ 4: Опубликованная патентная заявка US 2002/0132773

Патентный документ 5: Опубликованная японская нерассмотренная патентная заявка №2005-325072

Патентный документ 6: Опубликованная японская нерассмотренная патентная заявка №2005-232059

Патентный документ 7: Опубликованная японская нерассмотренная патентная заявка №2006-45210

Патентный документ 8: Опубликованная японская нерассмотренная патентная заявка №2006-56836

Непатентные документы

[0008]

Непатентный документ 1: Kimie Baba et al., Foods & Food Ingredients Journal of Japan, N 178, pp.52-60 (1998)

Непатентный документ 2: Maeda К et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 221: 286 (1996)

Непатентный документ 3: Arita Y et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 257: 79-83 (1999)

Сущность изобретения

Цель, достигаемая изобретением

[0009]

Целью настоящего изобретения является обеспечение состава для перорального приема, который способствует продукции адипонектина, и у которого нет проблем с безопасностью, таких как побочные эффекты или токсичность.

Средства достижения цели изобретения

[0010]

Автор настоящего изобретения исследовал различные виды пищевого сырья на предмет продукции адипонектина. В результате она обнаружила, что смесь, приготовленная путем сочетания экстракта молоки лосося, экстракта пивных дрожжей, птичьего коллагена (куриного коллагена) и минерализованных дрожжей (содержащих Zn, Se и Cu), обладает превосходной способностью способствовать продукции адипонектина, что завершилось настоящим изобретением.

[0011]

То есть настоящее изобретение относится к [1] составу, способствующему продукции адипонектина, содержащему экстракт молоки лосося, экстракт пивных дрожжей, птичий коллаген и минерализованные дрожжи и обладающему промоторной активностью в отношении продукции адипонектина, [2] к составу, способствующему продукции адипонектина, в соответствии с [1], в котором экстракт молоки лосося содержит компоненты с низкой молекулярной массой, полученные в результате обработки молоки лосося ферментом для расщепления на олигонуклеотиды и олигопептиды, [3] к составу, способствующему продукции адипонектина, в соответствии с [1] или [2], в котором экстракт пивных дрожжей содержит 50-80% РНК, [4] к составу, способствующему продукции адипонектина, в соответствии с любым из [1]-[3], в котором минерализованные дрожжи содержат от 2 до 3% цинка, от 0,3 до 0,5% меди и от 0,01 до 0,02% селена в сухих дрожжах, и [5] к составу, способствующему продукции адипонектина, в соответствии с любым из [1]-[4], который содержит 16-17 мас. частей экстракта пивных дрожжей, 33-34 мас. части птичьего коллагена и 22-23 мас. части минерализованных дрожжей на 100 мас. частей экстракта молоки лосося.

Эффект изобретения

[0012]

Промотор продукции адипонектина по настоящему изобретению состоит в основном из экстракта молоки лосося. Несмотря на то, что в отношении каждого самого по себе вещества: экстракта пивных дрожжей, птичьего коллагена и минерализованных дрожжей неизвестно влияние на продуктивность адипонектина, эти вещества, будучи смешанными, обеспечивают превосходное способствование продукции адипонектина. Промотор продукции адипонектина по настоящему изобретению эффективен для улучшения, лечения или профилактики сахарного диабета, ожирения, артериосклероза, симптомов, связанных с этими заболеваниями, например осложнений сахарного диабета (таких как диабетическая ретинопатия, диабетическая нейропатия и диабетическая нефропатия), ишемического инсульта, инфаркта миокарда и нефросклероза.

Краткое описание чертежей

[0013] [Фигура 1]

Фигура 1 представляет собой график, показывающий результаты определения концентрации секретированного адипонектина в супернатанте культуры адипоцитов с использованием состава, способствующего продукции адипонектина, в соответствии с настоящим изобретеним.

Осуществление изобретения

[0014]

Способствующий продукции адипонектина состав по настоящему изобретению не имеет особых ограничений при условии, что он является составом, который содержит экстракт молоки лосося, экстракт пивных дрожжей, птичий коллаген и минерализованные дрожжи и обладает промоторной активностью в отношении продукции адипонектина. В данном случае промоторная активность в отношении продукции адипонектина означает активность способствования секреции адипонектина, представляющего собой важный фактор регулирования сахарного обмена, жирового обмена и т.п., и увеличения количества адипонектина в организме, особенно в крови.

[0015]

Несмотря на то, что упомянутый выше экстракт молоки лосося не имеет особых ограничений при условии, что он может употребляться в пищу, предпочтительным является экстракт молоки лосося, содержащий компоненты с низкой молекулярной массой, которые получают ферментативным расщеплением молоки лосося на олигонуклеотиды и олигопептиды. В частности, предпочтительным является экстракт молоки лосося, содержащий олигонуклеотиды с молекулярной массой от 1000 до 3000 и 20-70% олигопептидов. Такой экстракт молоки лосося можно получить, например, от производителя L-S Factory Co., Ltd.

[0016]

Кроме того, указанный выше экстракт молоки лосося можно также приготовить способом, описанным в опубликованной японской нерассмотренной патентной заявке №2004-16143. А именно, после удаления с молоки лосося кожи, волокнистой ткани, жил и т.п. полученную молоку обезжиривают путем очистки и затем обрабатывают протеазой и нуклеазой. Указанная выше протеаза в основном состоит из трипсина. Трипсин представляет собой высокоспецифичную сериновую протеазу, которая селективно гидролизует пептидную связь со стороны карбоксильной группы аргинина и лизина. Таким образом, она пригодна для гидролиза богатого аргинином протамина. Кроме того, упомянутая протеаза помимо трипсина может также содержать другие протеазы, такие как химотрипсин. Примеры подходящих протеаз могут включать протеазы, выпускаемые Novo Nordisk Bioindustry Ltd. К тому же температура, при которой осуществляется реакция гидролиза с помощью нуклеазы, находится в диапазоне от 60 до 75°C, причем температура 70°C наиболее предпочтительна. Несмотря на то, что порядок обработки протеазой и нуклеазой не имеет особых ограничений, предпочтительно осуществлять сначала обработку протеазой, а затем нуклеазой.

[0017]

Несмотря на то, что упомянутый экстракт пивных дрожжей не имеет особых ограничений при условии, что он может употребляться в пищу, предпочтительным является экстракт пивных дрожжей, содержащий от 50 до 80% РНК. Такой экстракт пивных дрожжей может быть получен, например, от LS Factory Co., Ltd.

[0018]

Несмотря на то, что упомянутый птичий коллаген (куриный коллаген) не имеет особых ограничений, предпочтительно используется пищевой коллаген. Предпочтительные примеры могут включать птичий коллаген, выпускаемый LS Factory Co., Ltd.

[0019]

Несмотря на то, что упомянутые минерализованные дрожжи не имеют особых ограничений при условии, что это пекарские дрожжи с повышенным содержанием минералов, предпочтительными являются дрожжи, содержащие в сухом состоянии от 2 до 3% цинка, а среди таких дрожжей можно использовать минерализованные дрожжи, содержащие в сухом состоянии от 2 до 3% цинка, от 0,3 до 0,5%) меди и от 0,01 до 0,02% селена. Такие минерализованные дрожжи могут быть получены от LS Factory Co., Ltd и т.п. Кроме того, такие минерализованные дрожжи могут быть приготовлены смешиванием дрожжей с повышенным содержанием цинка, дрожжей с повышенным содержанием меди и дрожжей с повышенным содержанием селена. Каждые из упомянутых дрожжей с повышенным содержанием минералов могут быть получены от L·S Factory Co., Ltd и т.п.

[0020]

Что касается соотношения в смеси экстракта молоки лосося, экстракта пивных дрожжей, птичьего коллагена и минерализованных дрожжей в способствующем продукции адипонектина составе согласно настоящему изобретению предпочтительные примеры могут включать состав, содержащий от 10 до 25 мас. частей, предпочтительно от 16 до 17 мас. частей, экстракта пивных дрожжей, от 25 до 40 мас. частей, предпочтительно от 33 до 34 мас. частей, птичьего коллагена и от 15 до 30 мас. частей, предпочтительно 22 до 23 мас. частей, минерализованных дрожжей на 100 мас. частей экстракта молоки лосося.

[0021]

Способствующий продукции адипонектина состав по настоящему изобретению может содержать различные дополнительные компоненты для рецептуры, такие как обычный фармацевтически приемлемый носитель, связующее, стабилизатор, наполнитель, разбавитель, pH-буферный агент, разрыхлитель, солюбилизирующий агент, вспомогательное солюбилизирующее средство или изотонический агент, либо может использоваться в комбинации с терапевтическим лекарственным средством, таким как другие промоторы адипонектина.

[0022]

Способствующий продукции адипонектина состав по настоящему изобретению может использоваться как фармацевтический продукт, добавка, пищевой продукт, еда и т.д., которые полезны для лечения или профилактики заболеваний, вызванных сниженной продукцией адипонектина. Суточная доза или принимаемое количество для взрослого составляет предпочтительно от 0,1 до 10 г, более предпочтительно от 0,5 до 5 г.

[0023]

Пищевые продукты или пищевое сырье, в которых может применяться способствующий продукции адипонектина состав по настоящему изобретению, не имеют особых ограничений. Их примеры могут включать различные напитки, такие как йогурт, йогуртовый напиток, сок, молоко, соевое молоко, алкогольные напитки, кофе, чай, сенча (зеленый чай), чай улун и спортивный напиток, хлеб и кондитерские изделия, например выпечка, такая как пудинги, печенье, булки, пирожные, а также джем и рисовый крекер, традиционные японские кондитерские изделия, такие как йокан (сладкий мармелад из бобов адзуки), охлажденные или замороженные кондитерские изделия и жевательная резинка, лапша, такая как удон (лапша из пшеничной муки) и соба (лапша из гречневой муки), продукт из переработанной рыбной пасты, такой как камабоко (отвержденная рыбная паста), ветчина, рыбные или мясные колбаски, приправы, такие как мисо (соевая паста), соевый соус, соусы, майонез и подсластители, молочные продукты, такие как сыр и масло, тофу, желе конжак, а также разнообразные готовые к употреблению продукты, например, цукудани (пищевые продукты, сваренные в соевом соусе с сахаром), тефтели, крокеты и салат. Также к пищевым продуктам и пищевому сырью, в которых применен способствующий продукции адипонектина состав по настоящему изобретению, при необходимости могут быть добавлены другие питательные компоненты, такие как витамины и минералы. Когда в пищевом продукте или еде применяется способствующий продукции адипонектина состав по настоящему изобретению, на упаковке или приложенной листовке с инструкцией для пищевого продукта или пищевого сырья, еды или сырья, из которого приготовлена еда, может быть указано, что данный продукт обладает промоторной активностью в отношении адипонектина.

[0024]

Ниже настоящее изобретение будет подробно описано со ссылками на примеры; тем не менее объем изобретения не ограничивается этими примерами.

Примеры

Пример 1

[0025]

[Приготовление образцов]

В буферном растворе PBS суспендировали 60 мг экстракта молоки лосося ("Nuclegen" производства L·S Factory Co., Ltd), 10 мг экстракта пивных дрожжей ("Brewer's yeast extract RNA" производства LS Factory Co., Ltd), 20 мг коллагена ("Chicken collagen" производства L·S Factory Co., Ltd) и 13,5 мг минерализованных дрожжей ("Mix mineral yeast С" производства LS Factory Co., Ltd) и получили при концентрации 2,5 мг/мл, полученный раствор профильтровали через фильтр с порами 0,45 мкм. Используя полученный таким образом фильтрат, оценили образцы при концентрациях, приведенных в Таблице 1.

[0026]

Таблица 1
Компонент	Образец 1 (мкг/мл)	Образец 2 (мкг/мл)	Образец 3 (мкг/мл)
Экстракт молоки лосося	0	29	145
Экстракт пивных дрожжей	0	4,8	24
Коллаген	0	9,7	48,5
Минерализованные дрожжи	0	6,5	32,5
Всего	0	50	250

[0027]

[Способствование продукции адипонектина]

(1) Культура и субкультура клеток 3T3-L1.

После культивирования клеток 3T3-L1 (мышиные фибробласты) в среде Игла в модификации Дульбекко, содержащей 10% сыворотки новорожденных телят (CS-DMEM), до достижения конфлюэнтности, среду удалили из колбы с культурой, затем дважды промыли буферным раствором PBS (-). Далее клетки отделили от дна колбы путем добавления 0,1%-ного раствора трипсин-ЭДТА и отделенные клетки с 0,1%-ным раствором трипсин-ЭДТА перенесли в трубку для центрифугирования. К этому добавили равное количество 10% CS-DMEM, после чего проводили центрифугирование при 1500 об/мин в течение 5 мин. Далее клетки гомогенизировали в 10% FCS- DMEM, отсеяли в колбу, а затем поместили в CO₂-инкубатор. После этого клетки культивировали в условиях 5% CO₂ при 37°C.

[0028]

(2) Индукция дифференциации в адипоциты

Клетки 3T3-L1 культивировали в 10% CS-DMEM и через два дня после достижения конфлюэнтности клеток среду заменили на среду для дифференциации 1, после чего культивировали еще два дня. Далее среду заменяли на среду для дифференциации 2 и культивировали еще два дня. Для индукции дифференциации в адипоциты использовали среды для дифференциации 1 и 2.

[0029]

Среда для дифференциации 1 представляет собой DMEM с добавками 10%) FBS, 0,5 мМ изобутил-1-метилксантина (IBMX), 1 мкМ дексаметазона (DEX) и 10 мкг/мл инсулина. Среда для дифференциации 1 была приготовлена путем разбавления смеси 10 мг/мл инсулина, 500 мМ IBMX и 1 мМ DEX 10%-ным FCS-DMEM. Среда для дифференциации 2 представляет собой DMEM с добавками 10% FCS и 1 мкМ инсулина. Среда для дифференциации 2 была приготовлена путем разбавления 10 мг/мл инсулина 10%-ным FCS-DMEM. [0030]

(3) Оценка способствования продукции адипонектина

После дифференциации в адипоциты среду заменили на 0,1% BSA-DMEM и культивировали 24 часа. Далее добавили смесь так, чтобы ее концентрация составила 0 мкг/мл (Образец 1), 50 мкг/мл (Образец 2) или 250 мкг/мл (Образец 3), и далее инкубировали при 37°C в течение 48 часов. Собрали супернатант культуры и определили в нем количество адипонектина с помощью набора для иммуноферментного анализа адипонектина (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.). Полученные таким образом результаты показаны на фиг.1, а численные данные приведены в Таблице 2.

[0031]

В результате по сравнению с образцом, не содержащим смеси (образец 1), образцы, содержащие смесь в количестве 50 мкг/мл и 250 мкг/мл показали зависящее от концентрации повышение содержания адипонектина. Если принять не содержащий смеси образец (контроль) за 100%, то концентрация адипонектина, секретированного в супернатанте культур, содержащих 50 мкг/мл и 250 мкг/мл смеси, составила соответственно 126% и 183% по отношению к контролю (значимое различие при уровне значимости 1%). В данном эксперименте ни одна из концентраций не влияла на жизнеспособность.

[0032]

Таблица 2
	Степень продукции адипонектина (% от контроля)
Образец 1 (0 мкг/мл): Контроль	100%
Образец 2 (50 мкг/мл)	126%
Образец 3 (250 мкг/мл)	183%

Пример 2 [0033]

Промотор продукции адипонектина для перорального приема (таблетки), приготовили путем смешивания экстракта молоки лосося ("Nuclegen" производства LS Factory Co., Ltd), экстракта пивных дрожжей ("Brewer's yeast extract RNA" производства L-S Factory Co., Ltd), коллагена ("Chicken collagen" производства L·S Factory Co., Ltd), минерализованных дрожжей ("Mix mineral yeast С" производства LS Factory Co., Ltd) в соотношении, приведенном в Таблице 3, с добавлением других витаминов.

[0034]

Таблица 3
Компонент	на 6 таблеток
Экстракт молоки лосося	600 мг
Экстракт пивных дрожжей	100 мг
Коллаген	200 мг
Минерализованные дрожжи	135 мг

Промышленная применимость

[0035]

Промотор продукции адипонектина согласно настоящему изобретению способствует секреции адипонектина, являющегося важным фактором регулирования сахарного обмена, жирового обмена и т.п., посредством чего повышается содержание адипонектина в организме, в частности в крови. Промотор продукции адипонектина согласно настоящему изобретению эффективен для улучшения, лечения или профилактики сахарного диабета, ожирения, артериосклероза, симптомов, связанных с этими заболеваниями, например осложнений сахарного диабета (таких как диабетическая ретинопатия, диабетическая нейропатия и диабетическая нефропатия), ишемического инсульта, инфаркта миокарда и нефросклероза. Способствующий продукции адипонектина состав (промотор продукции адипонектина) по настоящему изобретению может использоваться как фармацевтический препарат, добавка, пищевой продукт и т.д.

Claims

1. Состав, способствующий продукции адипонектина и обладающий промоторной активностью в отношении продукции адипонектина, содержащий экстракт молоки лосося, экстракт пивных дрожжей, птичий коллаген и минерализованные дрожжи, и
в котором экстракт молоки лосося содержит компоненты с низкой молекулярной массой, полученные обработкой молоки лосося ферментом для расщепления на олигонуклеотиды и олигопептиды,
в котором экстракт пивных дрожжей содержит от 50 до 80% РНК,
в котором минерализованные дрожжи содержат от 2 до 3% цинка, от 0,3 до 0,5% меди и от 0,01 до 0,02% селена в сухих дрожжах.

2. Состав, способствующий продукции адипонектина, по п.1, в котором содержится от 16 до 17 мас.ч. экстракта пивных дрожжей, от 33 до 34 мас.ч. птичьего коллагена и от 22 до 23 мас.ч. минерализованных дрожжей на 100 мас.ч. экстракта молоки лосося.