KR101508728B1 - New microorganism bacillus amyloliquefaciens naas-1, and microbial agent and biopesticide containing the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1와 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약에 관한 것이다.
본 발명의 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P)균주는 서열번호 1로 표현되며, 배추 무름병 발생 병원균의 생육을 억제하는 것이 특징이다.
본 발명에 의해, 배추 무름병에 대하여 우수한 방제효과를 갖는 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1와, 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약이 제공됨으로써, 배추 무름병 발생을 억제함으로 인해 작물 생육이 가능하여 작물의 수량을 증대시킬 수 있게 된다.The present invention relates to a novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1, a microorganism preparation containing the microorganism, and a microbial pesticide.
The new microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 (KACC 91751P) of the present invention is represented by SEQ ID NO: 1 and is characterized by inhibiting the growth of pathogenic bacteria caused by Chinese cabbage blight.
According to the present invention, by providing a new microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 having excellent control effect against Chinese cabbage blight, a microorganism preparation containing them and microbial pesticides, it is possible to grow crops by suppressing the occurrence of Chinese cabbage blight disease So that the number of crops can be increased.
Description
본 발명은 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1과 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 배추 무름병 발생 병원균의 생육을 억제하여 작물 생육을 가능하게 하는 균주를 분리동정하고 이 균주를 유효성분으로 함유하는 미생물제제 및 미생물농약에 관한 것이다.
The present invention relates to a novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1, a microorganism preparation containing the microorganism, and a microbial pesticide containing the same. More particularly, the present invention relates to a method for isolating and isolating a strain capable of inhibiting the growth of pathogenic microbes, And a microbial agent and a microbial pesticide containing the strain as an active ingredient.
식물에서 발병되는 세균성 무름병(soft rot disease)은 채소재배에서 가장 문제가 되는 병으로서 신선한 저장기관을 형성하는 거의 모든 채소, 과채류, 감자, 구근 등 약 50종의 식물에서 발견되고 있으며, 재배기간 중에는 물론 수확물의 수송도중 또는 저장 중에도 큰 피해를 초래하는 병이다. Bacterial soft rot disease in plants is the most problematic disease in vegetable cultivation. It is found in almost 50 kinds of plants, including vegetables, fruit vegetables, potatoes and bulbs, which form a fresh storage organ. During the cultivation period Of course, it is a disease that causes great damage during transportation or storage of harvest.
특히 배추에서는 잎, 줄기, 뿌리에 발생하는데 상처부위에서 처음 시작하여 좌우상하로 발전하며, 마지막에는 조직이 크림처럼 변하여 악취를 발산하고 배추의 일부 또는 전체가 시들어 죽게 한다. Especially in Chinese cabbage, it occurs in leaves, stems and roots. It develops from left to right in the wound starting from scratch. Finally, the tissue turns into a cream, which emits a bad smell and causes some or all of the cabbage to die.
배추 무름병은 우리나라 배추에서 매년 발생하여 큰 피해를 주고 있으며, 특히 여름철 배추 생산에 가장 큰 제한요인 중 하나이다.Chinese cabbage rot was caused by Chinese cabbage every year and it caused great damage, and it is one of the biggest limit factors in the production of cabbage in summer.
현재 이 병의 방제를 위한 농약으로 스트렙토마이신(streptomycin: 농용신수화제)과 옥소리닉산(oxolinic acid: 일품)이 농약으로 등록되어 있으나, 여름철 배추 및 배추 포장에서 병원균의 밀도가 높아지게 되면 이들의 방제효과는 매우 낮은 실정이다.Currently, streptomycin and oxolinic acid are registered as pesticides for the control of this disease. However, when the density of pathogenic bacteria increases in the cabbage and cabbage packages in summer, Is very low.
또한 식물병 방제를 위해 사용하는 항생제 또는 화학물질은 농업생태계에서 항생제저항성의 유발 및 환경에 대한 오염 및 잔류독성의 문제 때문에 선진국을 중심으로 1980년대 이후 환경친화적인 생물농약의 개발에 몰두하게 되었다.In addition, antibiotics or chemicals used for controlling plant diseases have been devoted to the development of environmentally friendly biocides since the 1980s, mainly in developed countries, due to the generation of antibiotic resistance in agricultural ecosystems and pollution and residual toxicity to the environment.
특히, 이러한 생물농약을 이용한 방제법은 환경에 대해 안전하고, 인축에 대한 독성이 거의 없으며, 일반적으로 이미 자연계에 널리 존재하는 미생물을 이용하기 때문에 농약사용에 대한 거부감 및 자연생태계의 변이 등을 최소화할 수 있는 장점이 있다.Particularly, such a pesticide-based control method is environmentally safe, has almost no toxicity to human body, and generally uses microorganisms that are already widely available in the natural world, minimizing the resistance to use of pesticides and variations in natural ecosystems There are advantages to be able to.
관련 선행기술로는 대한민국공개특허 제10-2002-0064386호(공개일: 2002년 08월 09일, 명칭: 세균성 무름병 병원균에 대하여 항균활성을 갖는 신규한 바실러스 에스피균주 및 이를 이용한 세균성 무름병의 방제방법)과 대한민국등록특허 제10-0580336호(등록일: 2006년 05월 09일, 명칭: 배추 세균성 무름병 방제효과를 가지는 신규 바실러스 속 미생물)이 있다.
A related prior art is Korean Patent Publication No. 10-2002-0064386 (published on Aug. 09, 2002, entitled: Novel Bacillus sp. Strain having antimicrobial activity against a bacteriostatic pathogenic pathogen and a method for controlling bacterial blight ) And Korean Patent No. 10-0580336 (registered on May 09, 2006, name: New Bacillus sp. Microorganism having the effect of controlling Chinese cabbage blight).
본 발명의 목적은 배추 무름병 발생 병원균에 대하여 항균활성을 나타내어 작물 생육을 가능하게 하는 신규의 균주인 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1을 분리 동정하고, 이 균주를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약을 제공하기 위한 것이다.DISCLOSURE OF THE INVENTION An object of the present invention is to identify and isolate Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1, a novel strain that exhibits antimicrobial activity against pathogenic bacteria caused by Chinese cabbage blight, thereby enabling the growth of crops, and a microorganism preparation containing the strain and microbial pesticides .
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory and are not intended to limit the invention to the particular embodiments that are described. It is to be understood that both the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and explanatory and are not restrictive of the invention, There will be.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P)균주는 서열번호 1로 표현되며, 배추 무름병 발생 병원균의 생육을 억제하는 것이 특징이다.Novel microorganism of the present invention for achieving the above object Bacillus amyl quinone Lowry Pacific Enschede (Bacillus amyloliquefaciens ) NAAS-1 (KACC 91751P) is represented by SEQ ID NO: 1 and is characterized by inhibiting the growth of pathogenic bacteria caused by Chinese cabbage blight.
상기 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P) 균주는 토양으로부터 분리되는 것으로서, 미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제 중 어느 하나의 유효성분으로 이용되는 것이 특징이다.The novel microorganism Bacillus amyl Lori rake Pacifico Enschede (Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 (KACC 91751P) is isolated from soil and is used as an active ingredient of any one of microbial pesticides, seed coating agents, soil improving agents, composting homework, leaf foliar spraying agents, or traditional spraying agents.
상기 배추 무름병 발생 병원균은 팩토박테리움 카로토보륨(Pectobacterium carotovorum subsp . Carotovorum), 팩토박테리움 시프리페디(Pectobacterium cypripedii), 슈도모나스 비리디프라바(Pseudomonas viridiflava), 슈도모나스 마르기나리스(Pseudomonas marginalis pv . marginalis) 중 어느 하나 이상인 것이 특징이다.The pathogenic bacteria of the Chinese cabbage rot disease include Pectobacterium carotovorum subsp . Carotovorum , Pack tobak Te Solarium Lee Shipman Pedy (Pectobacterium cypripedii), Pseudomonas deep corruption in Ostrava (Pseudomonas viridiflava ) , Pseudomonas sp. marginalis pv . marginalis ) Or more.
또한, 본 발명의 미생물제제는 상기 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P) 균주의 균체 또는 그 배양액을 유효성분으로 함유하는 것이 특징이다.Further, the microorganism preparation of the present invention is the novel microorganism Bacillus amyl quinone Lowry Pacific Enschede (Bacillus amyloliquefaciens ) NAAS-1 (KACC 91751P) or a culture solution thereof as an active ingredient.
상기 배양액에는 탄소원으로 가용성 전분, 질소원으로 효모추출분말, 무기염류로는 소금이 함유되며, 바람직하게는 상기 가용성 전분은 상기 배양액의 중량대비 0.5~3.5중량%, 상기 효모추출분말은 상기 배양액의 중량대비 2.5~7.5중량% 및 상기 소금은 상기 배양액의 중량대비 0.001~0.05중량%로 포함되며, 더욱 바람직하게는 상기 가용성 전분은 상기 배양액의 중량대비 2중량%, 상기 효모추출분말은 상기 배양액의 중량대비 5중량% 및 상기 소금은 상기 배양액의 중량대비 0.01중량%로 포함되는 것이 특징이다.The culture broth contains soluble starch as a carbon source, yeast extract powder as a nitrogen source, and salt as an inorganic salt. Preferably, the soluble starch is contained in an amount of 0.5 to 3.5% by weight based on the weight of the culture solution, And the salt is contained in an amount of 0.001 to 0.05% by weight relative to the weight of the culture liquid. More preferably, the soluble starch is 2% by weight based on the weight of the culture liquid, 5% by weight, and the salt is 0.01% by weight relative to the weight of the culture solution.
또한, 본 발명의 미생물농약은 상기 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P) 균주의 균체 또는 그 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로, 상기 미생물농약은 토양에 살포 또는 토양내에 관주하여 배추 무름병을 방제하는 것이 특징이다.
Further, microbial agricultural chemicals of the present invention is the novel microorganism Bacillus amyl quinone Lowry Pacific Enschede (Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 (KACC 91751P) or a culture thereof as an active ingredient. The microbial pesticide is characterized in that the microorganism pesticide is sprayed on the soil or in the soil to control the Chinese cabbage blight.
본 발명에 의해, 배추 무름병에 대하여 우수한 방제효과를 갖는 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1과, 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약이 제공됨으로써, 배추 무름병 발생을 억제하여 작물의 생육이 가능해져 작물의 수량을 증대시킬 수 있게 된다.
The present invention provides a novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 having excellent control effect against Chinese cabbage blight, microorganism preparation containing it, and microbial pesticide containing it, thereby enabling growth of crops to be inhibited It is possible to increase the yield of crops.
도 1은 본 발명의 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1 균주의 동정을 나타낸 도면이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a diagram showing the identification of a novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 strain of the present invention. FIG.
본 명세서에 기재된 용어, 기술 등은 특별한 한정이 없는 한, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 의미로 사용된다.The terms, techniques, and the like described in this specification are used in the meaning commonly used in the technical field to which the present invention belongs, unless otherwise specified.
본 발명의 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 균주는 서열번호 1로 표현되며, 토양에서 분리한 것으로서 배추 무름병 발생 병원균에 대해 항균활성을 나타내는 사실을 하기 실시예를 통해 규명되었다.The new microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 strain of the present invention is represented by SEQ ID NO: 1, and is isolated from soil and exhibits antimicrobial activity against the causative pathogens of cabbage root rot by the following Examples .
이때, 상기 분리된 균주는 단간균이며 포자의 형태는 타원형이고 세포의 양끝에 위치하며 포자낭은 팽창되지 않는 상태이다. 또한, 영양 액체 배지에서 30℃에서 1-2일간 배양 생육이 좋고 펠리클을 형성하지 않으며 균체의 침전현상은 나타나지 않았으며, 생육 온도 범위는 20~50℃이고, 생육 pH 범위는 4~10이며, 염농도 8%까지 생육이 가능하다. 그리고 카탈라제 양성, 옥시다제 음성 및 프로피오네이트 이용성을 나타내며 전분을 가수분해하였으나 혈액 용혈 작용은 나타나지 않는다
At this time, the isolated strain is a staphylococcus, the form of spore is oval, is located at both ends of the cell, and the sporangia is not inflated. In the nutrient broth, the cultivation was good for 1-2 days at 30 ° C, no pellicle was formed, no precipitate of the cells was observed, the growth temperature range was 20 to 50 ° C, the growth pH range was 4 to 10, It can grow up to 8% salt concentration. And catalase positive, oxidase negative, and propionate availability, hydrolysis of starch but no blood hemolysis
본 발명의 상술한 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1 균주의 균체 또는 그 배양액을 함유하는 배추 무름병 발생억제용 미생물제제, 미생물농약을 제공하기도 한다.Microbial pesticides and microbial pesticides for inhibiting the development of Chinese cabbage smut disease containing the microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 strain of the present invention or a culture thereof may be provided.
특히, 상기 배양액에는 본 발명의 상술한 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1 균주의 균체가 잘 배양될 수 있도록 탄소원으로 가용성 전분, 질소원으로 효모추출분말, 무기염류로는 소금이 함유되는 것을 특징으로, 바람직하게는 상기 배양액의 중량대비 0.5~3.5중량%의 상기 가용성 전분, 2.5~7.5중량%의 상기 효모추출분말, 0.001~0.05중량%의 상기 소금을 포함하는 것이 상기 균주의 대량생산을 가능하게 하는 조건이며, 상기 균주 성장에 가장 적합한 최적조건은 상기 가용성 전분은 상기 배양액의 중량대비 2중량%, 상기 효모추출분말은 상기 배양액의 중량대비 5중량% 및 상기 소금은 상기 배양액의 중량대비 0.01중량%로 포함되는 것이다.Particularly, in the culture solution, soluble starch as a carbon source, yeast extract powder as a nitrogen source, and salt as an inorganic salt are contained in the culture solution so that the microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 of the present invention can be cultured well Preferably, 0.5 to 3.5% by weight of the soluble starch, 2.5 to 7.5% by weight of the yeast extract powder and 0.001 to 0.05% by weight of the salt, based on the weight of the culture, The optimal conditions for the growth of the strain are that the soluble starch is 2 wt% based on the weight of the culture, the yeast extract powder is 5 wt% based on the weight of the culture, and the salt is in a weight ratio 0.01% by weight.
이때, 상기 가용성 전분은 0.5 중량% 미만으로 함유될 경우 에너지를 만들어주는 요소가 너무 적어 상기 균주의 증식속도를 더디게 하며, 3.5중량%초과로 함유될 경우 다른성분과의 적절한 혼합이 이루어지지 않아 오히려 상기 균주의 증식속도를 더디게 한다.When the soluble starch is contained in an amount of less than 0.5% by weight, the energy-producing ingredient is too small to slow the growth rate of the strain. When the soluble starch is contained in an amount of more than 3.5% by weight, Thereby slowing the growth rate of the strain.
또한, 상기 효모추출분말은 2.5 중량% 미만으로 함유될 경우 균주의 생장과 생식을 더디게 하여 선택적으로 촉매하는 기질의 특이성이 떨어지게 되며, 7.5 중량%를 초과할 경우 과도한 촉매제가 첨가됨으로서 다른성분과의 적절한 혼합이 이루어지지 않음과 동시에 균주의 변형을 일으킬 우려가 있다.In addition, when the yeast extract powder is contained in an amount of less than 2.5% by weight, the growth and reproduction of the strain are slowed down, and the specificity of the catalyst to be selectively catalyzed is deteriorated. When the yeast extract powder is more than 7.5% by weight, excessive catalyst is added, There is a possibility that proper mixing is not achieved and at the same time strain of the strain is caused.
또한, 상기 소금은 0.001 중량% 미만으로 함유될 경우 물질대사에서 중추적인 역할의 효력이 떨어지므로 상기 균주의 증식속도가 떨어지게 되며, 0.05 중량%초과로 함유될 경우에는 다른성분과의 적절한 혼합이 이루어지지 않아 오히려 상기 균주의 증식속도를 더디게 한다.When the salt is contained in an amount of less than 0.001% by weight, the effect of a central role in metabolism is deteriorated, so that the growth rate of the strain is lowered. When the salt is contained in an amount exceeding 0.05% by weight, But rather slows the growth rate of the strain.
이와 같은 미생물제제와 미생물농약은 상기와 같은 균주들을 상기와 같은 배양조건에서 배양하여 제조된 배양액을 포함하는 것으로서 활성세균의 생존 유지기간, 생존발아율, 항균 활성유지, 항균물질 생성 능력이 우수하므로, 항균 미생물농약, 종자코팅제, 미생물영양제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제 등에 이용될 수 있다.
Such microbial agents and microbial pesticides include a culture solution prepared by culturing the above-mentioned strains under the above-mentioned culture conditions, and are excellent in survival survival period, survival rate, antimicrobial activity retention, Antimicrobial microbial pesticides, seed coating agents, microbial nutrients, soil amendments, composting homework, foliar spraying agents or cross-linked spraying agents.
하기 실시예 및 실험예에 의해서 보다 구체적으로 설명하지만 보호범위가 하기 실시예 및 실험예에 국한되는 것은 아니다.The present invention will be described in more detail with reference to the following examples and experimental examples, but the scope of protection is not limited to the following examples and experimental examples.
<실시예 1> 본 발명의 신규 길항 미생물의 분리 및 동정Example 1 Isolation and Identification of the Novel Antagonistic Microorganism of the Present Invention
1) 토양 미생물의 분리1) Isolation of soil microorganisms
본 발명의 신규 미생물은 배추 재배지(강원도 화천 유기배추 재배농가) 토양으로부터 분리하여 도 1과 같이 동정되었다.
The novel microorganism of the present invention was isolated from the soil of the Chinese cabbage cultivation area (Gangwon Province Hwacheon Organic Cabbage Cultivator) and identified as shown in Fig.
2) 본 발명의 미생물 균주의 선별2) Selection of the microorganism strain of the present invention
화천의 유기농배추재배지에서 채취한 토양을 증류수에 백금이로 현탁시킨 후 NB 평판배지 (육즙 0.3%, 펩톤 0.5%, 한천 1.2%)에 도말하고 30℃에서 1-2일 배양하여 균주를 분리하였다. The soil collected from the organic cabbage cultivation area of Hwacheon was suspended in distilled water and platinum, and then plated on NB plate medium (juice 0.3%, peptone 0.5%, agar 1.2%) and cultured at 30 ° C. for 1-2 days to isolate the strain .
영양 액체 배지(NB배지) 10ml에 분리한 균주를 백금이로 1회 접종하여 30℃에서 76시간 동안 진탕배양하였다. The strains isolated in 10 ml of nutrient broth (NB medium) were inoculated once with platinum and cultured at 30 ° C for 76 hours with shaking.
그 배양액을 원심력을 12,000×g(중력가속도)로 20분간 적용하여 원심분리하고 팩토박테리움 속(Pectobacterium carotovorum subs sp carotovorum KACC 10057)균을 피검균으로 사용하여 페이퍼 디스크(paper disc)법으로 배양 상등액의 항균활성을 측정하였다. The culture was centrifuged by applying centrifugal force at 12,000 × g (gravity acceleration) for 20 minutes and cultured by paper disc method using the bacteria of the genus Pactobacterium carotovorum subsp. Carotovorum KACC 10057 as test specimens The antimicrobial activity of the supernatant was measured.
분리 균주들 중에서 항균 활성이 가장 좋은 균주를 선별하여 동정한 결과 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)의 특징과 유사 하였지만 성장 염농도 및 싸이트레이트 이용성에서 차이를 나타내었다. Among the isolated strains, the strains with the best antimicrobial activity were selected and identified as similar to Bacillus subtilis, but showed differences in growth salt utilization and cyto - rate utilization.
하지만 16s rDNA 분석을 한 결과 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)와 100%의 일치도를 나타내어 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1이라 명명하고, 이 균주를 2012년 11월 1일자로 한국농용미생물 센타(KACC)에 기탁하여 수탁번호 KACC 91751P를 부여받았다.
However, 16s rDNA analysis showed 100% agreement with Bacillus amyloliquefaciens Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1, which was deposited with the Korean Agricultural Microbiology Center (KACC) on Nov. 1, 2012, and received the accession number KACC 91751P.
3) 본 발명의 바실러스속 균주의 동정3) Identification of the Bacillus subtilis strain of the present invention
본 발명의 바실러스 NAAS-1 균주의 동정은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 행하는 동정법에 따라 수행하였으며, 그 결과는 다음의 표 1,2,3에 나타내었다.The identification of the Bacillus NAAS-1 strain of the present invention was carried out according to the identification method which is commonly used in the technical field of the present invention, and the results are shown in the following Tables 1, 2 and 3.
1. 실험방법1. Experimental Method
16s rDNA PCR을 이용한 균주 동정을 위해 먼저 DNA 샘플을 조제하였다.DNA samples were prepared for isolating strains using 16s rDNA PCR.
설명하면, 콜로니에서 DNA를 조제하기 위해, 멸균증류수 100㎕를 마이크로 튜뷰에 넣어 코로니에서 채취한 균체를 현탁하였다. 이 현탁액을 95℃에서 15분간 열처리 한다. 그 후 가볍게 원심분리하여 상등액을 샘플 DNA 용액으로 사용하였다.In order to prepare DNA from the colonies, 100 占 퐇 of sterilized distilled water was placed in a microtubule and the cells collected from the colonies were suspended. This suspension is heat-treated at 95 占 폚 for 15 minutes. The supernatant was then used as a sample DNA solution by gently centrifuging.
이하 16s rDNA 영역 증폭 및 염기서열 정보분석은 일반적인 매뉴얼(TAKARA 회사 발행)에 의하여 시행하였다.
Below 16s rDNA region amplification and nucleotide sequence information analysis were performed by a general manual (published by TAKARA).
2. 실험결과2. Experimental results
'+'는 양성을, '-' 는 음성을 나타낸다
'+' Indicates positive, '-' indicates negative
상기 표 1에 기재되어 있듯이, 본 발명의 바실러스속 NAAS-1 균주는 단간균이며 포자의 형태는 타원형이고 세포의 양끝에 위치하며 포자낭은 팽창되지 않는 상태이었다.
As shown in Table 1, the Bacillus sp. NAAS-1 strain of the present invention is a monocytic bacillus, the spore is oval in shape, and is located at both ends of the cell and the sporangia are not inflated.
상기 표 2에 나타나 있듯이, 영양액체 배지에서 30℃에서 1~2일간 배양 생육이 좋고 펠리클을 형성하지 않으며 균체의 침전현상은 나타나지 않았다.
As shown in the above Table 2, the growth was good in the nutrient liquid medium at 30 ° C for 1 to 2 days, and no pellicle was formed, and no precipitate of cells was observed.
카제인
셀룰로오스
에스쿨린Hydrolysis: starch
Casein
cellulose
Esculin
+
-
++
+
-
+
펩토니제이션Milk reaction: solidified
Peptonization
+-
+
'+'는 양성을, '-' 는 음성을 나타낸다
'+' Indicates positive, '-' indicates negative
상기 표 3에 나타나 있듯이, 본 발명의 바실러스속 NAAS-1균주의 생육 온도 범위는 20~50℃이고, 생육 pH 범위는 4~10이며, 염농도 8중량%까지 생육이 가능하였다. 그리고 카탈라제 양성, 옥시다제 음성 및 프로피오네이트 이용성을 나타내며 전분을 가수분해하였으나 혈액 용혈 작용은 나타나지 않았다.
As shown in Table 3, the growth temperature range of the Bacillus sp. NAAS-1 strain of the present invention ranged from 20 to 50 ° C, the growth pH range was from 4 to 10, and the growth was possible up to a salt concentration of 8% by weight. And catalase positive, oxidase negative and propionate availability, hydrolysis of starch but no blood hemolysis.
<실험예 1> 배추 무름균 항균활성 확인≪ Experimental Example 1 >
1) 배추 무름병 유발규 분양1) Pyrolysis caused by cabbage blight
농업미생물 은행(KACC)로부터 하기 표 4에 나타나있듯이, 배추 무름병 유발균 4종을 분양받았다. 이들 균주는 생육 양호하며, 활성 검사 후 시험균으로 선발하여 사용하였다.From the Agricultural Microbial Bank (KACC), as shown in Table 4 below, four species of cabbage rotivirus inducers were distributed. These strains were well grown and were selected as test bacteria after the activity test.
2) 항균활성 실험2) Antimicrobial activity experiment
배추 무름병을 유발하는 균에 대하여 본 발명의 신규미생물의 항균력을 확인하기 위해 상기와 실시에 1과 같이 분리 동정된 바실러스속 NAAS-1 균주를 100ml 삼각 플라스크에 20ml 분주한 영양 액체배지(Trytic soy broth)에 백금이로 1회 접종한 후 30℃에서 48시간 진탕배양하고, 정지기에 도달한 균주를 본 발명의 종균으로 사용하였다. In order to confirm the antimicrobial activity of the new microorganism of the present invention against the microorganism causing the Chinese cabbage blight, trytic soy broth (20 ml) in a 100 ml Erlenmeyer flask ), Plated on a shaker at a temperature of 30 DEG C for 48 hours, and the strain that reached the stopper was used as the seed of the present invention.
그 결과 하기 표 5와 같이 나타났다.
The results are shown in Table 5 below.
- : 8 mm + ; 8~10mm ++ ; 15mm +++ : 18~20mm -: 8 mm +; 8 to 10 mm ++; 15mm +++: 18 ~ 20mm
mm : 항균력을 나타낸 영역정도(Inhibition zone size)
mm: degree of antibacterial zone (inhibition zone size)
상기 표 5에 나타나 있듯이, 본 발명의 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1 배양액의 활성을 측정한 결과, 배추 무름병 유발균 모두 항균활성을 나타냄을 확인하였으며, 특히 KACC No. 10057균주에 강한 활성을 나타내었음을 확인하였다. 상기 KACC 10057균주는 배추과 작물에 발생하는 대표적인 병원균이다.
As shown in Table 5 above, the activity of the new microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 of the present invention was assayed to show antimicrobial activity against all the Chinese cabbage rot causing bacteria. 10057 strain of the present invention. The KACC 10057 strain is a representative pathogen occurring in cabbage and crops.
<실험예 2> 배추 무름병균 저해 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1의 항균물질 최대생산조건 검토<Experimental Example 2> Inhibition of Chinese cabbage pathogens Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1
본 발명의 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1균주의 대량 배양조건을 검토한 바, 하기 표 6과 같이 조사되었다.The large-scale culture conditions of the novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 strain of the present invention were examined and examined as shown in Table 6 below.
질소원: 효모추출분말 2.5 중량%
무기염류: 소금 0.01 중량%Carbon source: soluble starch 2.0 wt%
Nitrogen source: 2.5 wt% of yeast extract powder
Inorganic salts: 0.01% by weight of salt
교반속도: 120rpm
통기량: 0.2L/min
pH(산도): 7.0Temperature: 35 ℃
Stirring speed: 120 rpm
Aeration: 0.2L / min
pH (acidity): 7.0
<실험예 3> 배지조성에 따른 무름병균에 대한 항균력 확인<Experimental Example 3> Confirmation of antimicrobial activity against rot fungi according to medium composition
배지조성을 달리하여 무름병균의 항균활성을 확인한 바, 하기 표 7과 같이 나타났다. 이때, 72시간 배양 후 항균력 측정하였다.The antimicrobial activity of the rot fungi was confirmed by varying the composition of the medium, as shown in Table 7 below. At this time, the antimicrobial activity was measured after culturing for 72 hours.
(세균용 일반 상업용배지: TSB배지)Control
(General commercial medium for bacteria: TSB medium)
(시험결과 배지: ATBN-1 배지)Treatment
(Test result medium: ATBN-1 medium)
덱스트로즈 2.5 중량%
소금 5.0 중량%
다이포타슘 포스페이트 2.5 중량%Casein 17 wt%
Dextrose 2.5 wt%
Salt 5.0 wt%
2.5 weight% of dipotassium phosphate
질소원: 효모추출분말 2.5 중량%
무기염류: 소금 0.01 중량%Carbon source: soluble starch 2.0 wt%
Nitrogen source: 2.5 wt% of yeast extract powder
Inorganic salts: 0.01% by weight of salt
억제영역 사이즈 표시 : mm (페이퍼 디스크 지름크기 8mm)
Suppression area size indication: mm (paper disk diameter size 8mm)
상기 표 7에 나타나 있듯이, 본 발명의 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1는 탄소원으로 가용성 전분, 질소원으로 효모추출분말 및 무기염류로 소금이 함유된 ATBN-1배지에서 더 높은 항균력을 나타냄을 확인하였다.
As shown in Table 7, the novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 of the present invention exhibits higher antibacterial activity in ATBN-1 medium containing soluble starch as a carbon source, yeast extract powder as a nitrogen source and salt as an inorganic salt Respectively.
이에, 배추 무름병에 대하여 우수한 방제효과를 갖는 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1과, 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약이 제공되며, 배추 무름병 발생을 억제하여 작물의 생육이 가능해져 작물의 수량을 증대시킬 수 있게 된다.
Accordingly, a novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 having excellent control effect against Chinese cabbage blight is provided, a microorganism preparation containing it and a microbial pesticide are provided, and it is possible to grow a crop by suppressing the occurrence of cabbage blight, It is possible to increase the yield.
상기의 본 발명은 바람직한 실시예 및 시험예를 중심으로 살펴보았으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 본질적 기술 범위 내에서 상기 본 발명의 상세한 설명과 다른 형태의 실시예들을 구현할 수 있을 것이다. 여기서 본 발명의 본질적 기술범위는 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed exemplary embodiments. You can implement the examples. The scope of the present invention is defined by the appended claims, and all differences within the scope of the claims are to be construed as being included in the present invention.
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> NEW MICROORGANISM BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS NAAS-1, AND MICROBIAL AGENT AND BIOPESTICIDE CONTAINING THE SAME <130> P2012-0168 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1438 <212> DNA <213> Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 <400> 1 gctcaggacg aacgctggcg gcgtgcctaa tacatgcaag tcgagcggac agatgggagc 60 ttgctccctg atgttagcgg cggacgggtg agtaacacgt gggtaacctg cctgtaagac 120 tgggataact ccgggaaacc ggggctaata ccggatggtt gtttgaaccg catggttcag 180 acataaaagg tggcttcggc taccacttac agatggaccc gcggcgcatt agctagttgg 240 tgaggtaacg gctcaccaag gcgacgatgc gtagccgacc tgagagggtg atcggccaca 300 ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccgcaat 360 ggacgaaagt ctgacggagc aacgccgcgt gagtgatgaa ggttttcgga tcgtaaagct 420 ctgttgttag ggaagaacaa gtgccgttca aatagggcgg caccttgacg gtacctaacc 480 agaaagccac ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt 540 ccggaattat tgggcgtaaa gggctcgcag gcggtttctt aagtctgatg tgaaagcccc 600 cggctcaacc ggggagggtc attggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggagagtgg 660 aattccacgt gtagcggtga aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga 720 ctctctggtc tgtaactgac gctgaggagc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata 780 ccctggtagt ccacgccgta aacgatgagt gctaagtgtt agggggtttc cgccccttag 840 tgctgcagct aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ctgaaactca 900 aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg 960 aagaacctta ccaggtcttg acatcctctg acaatcctag agataggacg tccccttcgg 1020 gggcagagtg acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1080 gtcccgcaac gagcgcaacc cttgatctta gttgccagca ttcagttggg cactctaagg 1140 tgactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat 1200 gacctgggct acacacgtgc tacaatggac agaacaaagg gcagcgaaac cgcgaggtta 1260 agccaatccc acaaatctgt tctcagttcg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag 1320 ctggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggccttgta 1380 cacaccgccc gtcacaccac gagagtttgt aacacccgaa gtcggtgagg taaccttt 1438 <110> REPUBLIC OF KOREA (MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> NEW MICROORGANISM BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS NAAS-1, AND MICROBIAL AGENT AND BIOPESTICIDE CONTAINING THE SAME <130> P2012-0168 <160> 1 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 1438 <212> DNA <213> Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 <400> 1 gctcaggacg aacgctggcg gcgtgcctaa tacatgcaag tcgagcggac agatgggagc 60 ttgctccctg atgttagcgg cggacgggtg agtaacacgt gggtaacctg cctgtaagac 120 tgggataact ccgggaaacc ggggctaata ccggatggtt gtttgaaccg catggttcag 180 acataaaagg tggcttcggc taccacttac agatggaccc gcggcgcatt agctagttgg 240 tgaggtaacg gctcaccaag gcgacgatgc gtagccgacc tgagagggtg atcggccaca 300 ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccgcaat 360 ggacgaaagt ctgacggagc aacgccgcgt gagtgatgaa ggttttcgga tcgtaaagct 420 ctgttgttag ggaagaacaa gtgccgttca aatagggcgg caccttgacg gtacctaacc 480 agaaagccac ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt 540 ccggaattat tgggcgtaaa gggctcgcag gcggtttctt aagtctgatg tgaaagcccc 600 cggctcaacc ggggagggtc attggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggagagtgg 660 aattccacgt gtagcggtga aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga 720 ctctctggtc tgtaactgac gctgaggagc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata 780 ccctggtagt ccacgccgta aacgatgagt gctaagtgtt agggggtttc cgccccttag 840 tgctgcagct aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ctgaaactca 900 aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg 960 aagaacctta ccaggtcttg acatcctctg acaatcctag agataggacg tccccttcgg 1020 gggcagagtg acaggtggtg catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1080 gtcccgcaac gagcgcaacc cttgatctta gttgccagca ttcagttggg cactctaagg 1140 tgactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat 1200 gacctgggct acacacgtgc tacaatggac agaacaaagg gcagcgaaac cgcgaggtta 1260 agccaatccc acaaatctgt tctcagttcg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag 1320 ctggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggccttgta 1380 cacaccgccc gtcacaccac gagagtttgt aacacccgaa gtcggtgagg taaccttt 1438
Claims (11)
신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P)균주.
Pseudomonas viridiflava , Pseudomonas marginalis pv. Marginalis , having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1 and being isolated from the cabbage cultivation soil, are selected from the group consisting of Pectobacterium cypripedii , Pseudomonas viridiflava , Which inhibits the growth of pathogenic microorganisms of the Chinese cabbage,
New microbial Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 (KACC 91751P) strain.
상기 신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 NAAS-1 균주는
미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제 중 어느 하나의 유효성분으로 이용되는,
신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P)균주.
The method according to claim 1,
The novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 strain
A microbial pesticide, a seed coating agent, a soil improving agent, a compostant homework agent, a foliar spraying agent, or a root spraying agent,
Lori novel microorganism Bacillus amyl quinone Pacifico Enschede (Bacillus amyloliquefaciens ) NAAS-1 (KACC 91751P).
상기 배양액에는 탄소원으로 배양액의 중량대비 0.5~3.5중량%의 가용성 전분, 질소원으로 배양액의 중량대비 2.5~7.5중량%의 효모추출분말, 무기염류로는 배양액의 중량대비 0.001~0.05중량%의 소금이 함유되는 것이 특징인,
배추 무름병 발생억제용 미생물제제.
A culture medium containing the novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 (KACC 91751P) according to any one of claims 1 to 5 as an active ingredient,
0.5 to 3.5% by weight of soluble starch, nitrogen source, 2.5 to 7.5% by weight of the yeast extract powder as a carbon source, 0.001 to 0.05% by weight of salt of the culture medium as the inorganic salt, ≪ / RTI >
Microorganism preparation inhibiting the occurrence of Chinese cabbage blight.
상기 가용성 전분은 상기 배양액의 중량대비 2중량%, 상기 효모추출분말은 상기 배양액의 중량대비 5중량% 및 상기 소금은 상기 배양액의 중량대비 0.01중량%인,
배추 무름병 발생억제용 미생물제제.
The method according to claim 6,
Wherein the soluble starch is 2 wt% based on the weight of the culture, the yeast extract powder is 5 wt% based on the weight of the culture, and the salt is 0.01 wt%
Microorganism preparation inhibiting the occurrence of Chinese cabbage blight.
상기 배양액에 탄소원으로 상기 배양액의 중량대비 0.5~3.5중량%의 가용성 전분, 질소원으로 상기 배양액의 중량대비 2.5~7.5중량%의 효모추출분말, 무기염류로는 상기 배양액의 중량대비 0.001~0.05중량%의 소금을 넣고 혼합하여 대량생산용 배양액을 제조하는 단계;
상기 대량생산용 배양액을 35℃의 온도, 120rpm의 교반속도, 0.2L/min의 통기량, 7.0의 pH의 조건하에 배양하여 상기 신규미생물을 대량생산하는 단계;를 포함하는
신규미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) NAAS-1 (KACC 91751P)균주의 대량생산 방법.Preparing a culture solution containing the microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 (KACC 91751P) strain of any one of claims 1 to 5;
0.5 to 3.5% by weight of soluble starch and nitrogen source based on the weight of the culture medium, 2.5 to 7.5% by weight of yeast extract powder and inorganic salts based on the weight of the culture liquid, 0.001 to 0.05% by weight, Of salt to prepare a culture medium for mass production;
Culturing the culture medium for mass production under the conditions of a temperature of 35 DEG C, a stirring speed of 120 rpm, aeration amount of 0.2 L / min, and a pH of 7.0 to mass-produce the new microorganism
Method for mass production of novel microorganism Bacillus amyloliquefaciens NAAS-1 (KACC 91751P).
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