PT98229A - Processo de preparacao de inibidores 1,5-diamino-2,4-di-hidroxi-pentano da proteases retroviral e de composicoes farmaceuticas - Google Patents
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Description
72 877 SB CASE 14516
MEMÓRIA.....DESCRITIVA ANlECEDEj^li.S....DQ.....INVENTO. O presente invento refere-se ao processo de preparação de compostos que são inibidores das aspártico-proteases, particular-mentes de retrovírus-
Os retrovírus, isto é, os vírus da família Retrovíridae, são uma classe de vírus que transportam o seu material genético como ácido ribonucleico em vez de ácido desoxirribonucleico- Também conhecidos como vírus de ARN de tumor, a sua presença tem sido associada a uma grande variedade de doenças em humanos e em animais- Crê-se que são os agentes causadores de estados patológicos associados a infecções pelo vírus do sarcoma de Rous (RSV), vírus da leucémia de murino (HLV), vírus do tumor mamário de ratinho (MMTV) , vírus da leucemia de felino (FeLV), vírus da leucémia de bovino (BLV), vírus de macaco Mason-Pfizer (MPMV), vírus do sarcoma de símio (SSV), vírus da síndroma da imuno-deficiência adquirida de símio (SIDAS), vírus T-linfotrópíco humano (HTLV-I, -II) e o vírus da Imuno-deficiência humana (HIV-1, HIV-2) que é o agente etíológíco da SIDA (síndroma da imuno-deficiência adquirida) e de complexos relacionados com a SIDA, e muitos outros- Ainda que os patogénios tenham, em muitos destes casos, sido isolados, não foi ainda desenvolvido qualquer método satisfatório para o tratamento deste tipo de ínfecção- De entre estes vírus, o HTLV e o HIV tem sido especialmente bem caracterizados- A produção de proteínas virais funcionais é crítica para a replicaçâo de retrovírus- A síntese de proteínas é realizada por tradução das estruturas de leitura abertas em construções de po-liproteína, correspondentes às estruturas de leitura gag., pol e env- As proteínas precursoras gag e pol são processadas por urna protease virai nas proteínas funcionais- A protease do HIV-l tem sido classificada como um ácido aspártico-protease (Meek et al-, Proc. Natl. Acad. Sei- USA, 88, 1841 (1989))- A actividade proteolítica proporcionada pela protease virai no processamento das poliproteínas não pode ser fornecida pelo hospedeiro e é essencial ao ciclo de vida do retrovírus- De facto, demonstrou-se 72 877 SB CASE 14516 4-
que falta infecciosidade aos retrovírus que não possuem a protease ou que contem uma forma mutada de protease. Ver Katoh et al„, Viroloqy. 145, 280-92 (1985), Crawford, et al,, J. Virol,, 53, 899-907 (1985), Debouck, et al-, Proc- Natl. Acad. Sei- USA, 84, 8903-6 (1987)- Deste modo, a inibição da protease retroviral parece ser um método de terapia para doenças retrovirais» Jã foram descritos processos para exprimir proteases retro-virais em E„........çolj, (Debouck, et al-, 8903-06 (1987) e Tomasselli et al., Biochemistrv. 29. 264-9 (1990), e referências aí citadas)» Têm sido descritos inibídores de protease de HIV racombinan-te (Dreyer et a 1. , Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 86, 9752-56 (1989); Tomasselli et al-, supra;; Roberts et al-, Science- 248-358 (1990); Rich et al -, J- tied- Chem-- 33, 1285-88 (1990); Sigal et al-. Pedido de Patente Europeia NQ- 337714; Dreyer et al-, Pedido de Patente Europeia nQ. 352 000)„ Além disso, mostrou-se que alguns destes inibidores são ínibidores potentes do processamento proteolítico virai em culturas de linfócitos T infectados com HIV-1 (Meek et al-, Nature (London), 343- 90 (1990) e Roberts et al- supra)-
As limitações das estratégias actuais para a inibição da aspártico-protease incluem (1) biodisponíbilidade oral, (2) tempos de depuração ("clearance") no plasma (p-e-, por excreção biliar ou degradação);: (3) selectividade da inibição; e (4) no caso de alvos intracelulares, permeabilidade de membrana ou incorporação nas células- 0 presente invento refere-se a novos inibidores de aspártico-proteases e proteases retrovirais- Ao contrário dos inibidores anteriormente descritos, os compostos do presente invento não são análogos de substratos peptídicos possuindo um dipéptído mimétioo cindível- Desviam-se também, substancialmente, de uma estrutura do tipo substrato de péptido pelo facto de não possuírem uma orientação convencional, terminal amino para terminal carboxilo.
72 877 SB CASE 14516
SUMARIO DO INVENTO O presente invento refere-se ao processo de preparação de compostos possuindo as estruturas particularmente indicadas nas reivindicações e que aqui depois se descrevem, que se ligam a proteases retrovirais. Estes compostos são inibidores da protease virai e são úteis no tratamento de doenças relacionadas com a infecção por vírus» 0 presente invento refere-se também ao processo de preparação de uma composição farmacêutica que compreende um dos compostos anteriormente referidos e um seu transportador farmacêutica-mente aceitável» O presente invento descreve ainda um método para o tratamento de doenças virais que compreende a administração, a um mamífero que o necessite, de uma quantidade eficaz de um dos compostos inibidores anteriormente .referidos»
DESCRICftO.....DETALHADA DO INVENTO
Os compostos do invento têm a estruturas R1 R2
na qual X1 e X2 são iguais ou diferentes e são A-(B)n~, onde n~0~ -2 5 e B é, índependentemente, um tx-aminoácido escolhido de entre o grupos Ala, Asn, Cys, Trp, Qly, Gin, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr, Vai, His ou trifluoroalanína, no qual o grupo amí-no de B está ligado a A ou ao grupo carboxilo do resíduo B adjacente, conforme apropriado, e o grupo carboxilo de B está ligado ao grupo amíno do resíduo B adjacente ou à estrutura, conforme apropriados e A está ligado covalentemente ao grupo amíno do resíduo B adjacente ou ao grupo amíno da estrutura se n~0, e és 1) tritilo, 2) hidrogénio, -6- '72 877 SB CASE 14516 3) alquiloC^-C^, 4) R^-CQ-, onde és a) hidrogénio, b) alquiloC1-C6s não substituído ou substituído, com um ou mais grupos hidroxilo, átomo® cloro ou átomos de flúor, c) fenílo ou naftilo, não substituído ou substituído, com um ou mais substituintes R4» oncl® i) alquí 1oC^~C4!> íí} halogéneo, onde halogeneo e P, Cl, Br ou 1, iii) hidroxilo, ív) nitro, v) alcoxiloC^-Cg» ou vi) -C0-NCR^®)2!' onc^e R’^ independentemente, H ou alquíloC^-C^; ou d) um heterociclo de 5-7 membros, tal como piridilo, furilo ou benzisoxazolilos 5) ftaloílo no qual o anel aromático está não substituído ou substituído com um ou mais substituintes 6) R5(R6R7C)m-CC-„ onde m~l~3 e R5, R6 e R7 são, independen-tementes a) hidrogénio, b) cloro ou flúor, c) alquiloC^-Cg, não substituído ou substituído, com um ou mais átomos de cloro ou flúor ou grupos hidroxilo, d) hidroxilo, e) fenilo ou naftilo, não substituído ou substituído, * * ά com um ou mais substituintes R , f) alcoxiloC^-Cg, g) um heterociclo de 5-7 membros, ou h) Rs, R^ e R' podem estar, independentemente, ligados para formar um sistema de anel monocíclico, bicíclico ou tr-icí-clico, sendo cada um dos seus anais cicloalquiloCg-C^; 7) R5(R6R7C)mW~, onde rn~l~3 e W é OCO ou S02, e R5, R6 e pJ são definidos como anteriormente, com excepção de R^, e p/ não serem cloro, flúor ou hidroxilo, se forem adjacentes a Wj 8) R8"~W~, onde R8 é um heterociclo de 5-7 membros, tal como piridilo, furilo ou benzisoxazolilo·,' 9) R9-W~? onde R9 é fenilo ou naftilo, não substituído ou 72 S77 SB CASE 14516 ~7
substituído, com um ou mais substituintes R4; 10) r5_(R6r7C)^p(0) (OR11)-, oride R11 é alquiloC1”C4 ou fe- ní I03 11) R8”P(0)(OR11)-; ou 12) R9~P(0) ( ΟΡΛ1) -; pl é R2 são iguais ou diferentes e sãoπ 1) “CH^R12* onde R12 é: ã) NH"A, onde A é definido como anteriormente, b) R5~CR6R7C)nr, c) Rs~(R6R7C)rnV"', onde V é 0 ou NH, com excepção de R5, Ró e R7 não serem hidroxilo, cloro ou flúor se forem adjacentes a V» d) R5-CR6R7c)m”SC0)n, onde m=l-~3 e n~0~2, e R5, R6 e R7 são definidos como anteriormente, com excepção de R0, R° e R/ não serem hidroxilo, cloro ou flúor se forem adjacentes ao enxofre, e) R8-S(0)n-, f) R9~S(Q)n~, g) N(R10)2> h) NR-^R^8, onde R'*'8 e R-*~8 estão ligados para formar um heterociclo adotado saturado, de 4-6 membros, incluindo:: i) azetidinilo, íi) pirrolidinilo, iii) piperidinilo, ou iv) morfolinilo, i) Rl7OCHoO, onde R17 é i) alquiloC^-C^, ii) R9, ou iii) CH2Ar, oride Ar é fenilo, naftilo ou um hete-rocíclo de 5-7 membros, j) r17och2ch2och2, k) N-imidazolilo, onde o anel de imidazole está não substituído ou substituído com um substituinte R4, l) N~benzimidazolilo, onde o anel de benzeno condensado está não substituído ou substituído com um ou mais substituintes R , m) alciniloC2-C^, opcionalmente substituído com um ou mais grupos R9; ou n) alceniloC2~C^, opcíonalmente substituído com um ou
72 877 SB CASE 14516 -8- mais grupos R9; 2) hidrogénio, 3) alquiloC^-C^, não substituído ou substituído com um ou rnais átomos de cloro ou de flúor ou grupos hidroxilo, ou 4) cicloalquiloC3~Cy; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis»
Vulgarmente, X-^-X2 e R-^-R2 produzindo-se compostos verdadei~ ramente simétricos; contudo, os procedimentos permitem a preparação de compostos pseudo-simétricos, bem como de compostos nos quais X^· é diferente de X2 e R-*- é diferentes de R2»
Preferem-se os compostos peptídicos da descrição anterior que são simétricos em C-2, nos quais X-^X2 e R^-R2»
Preferem-se também os compostos peptídicos simétricos em C~ -2, nos quais R1 e R2 são alquiloC-^-C^, ou arilalquilo, e X1 e X2 são aminoácidos simples ou mono- ou dipéptidos; estes grupos podem estar substituídos terminalmente por grupos acilo comuns ou por grupos bloqueadores vulgarmente usados em síntese de pépti-dos, tais como t-Boc ou Cbz»
No presente invento incluem-se também os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis, os complexos ou pró-drogas dos compostos do invento» Como pró-drogas consideram-se quaisquer transportadores, ligadas de um modo covalente, que libertam a droga original»
Tal como é aqui usado, e excepto onde se indique, o termo "alquilo" refere-se a um radical alquilo, de cadeia linear ou ramificada, com o número de átomos de carbono indicado, incluindo Ϊ* mas embora não limitado a, metilo, atilo, n-propilo, isopropiio0 n-butilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, l-metilbutilo, 2,2--dimetilbutílo, 2-metilpentilo, 2,2~dimetilprOp:llo, n-hexilo $ similares; “alcoxilo" representa um grupo alquilo com o número átomos de carbono indicado ligado através de um átomo de oxigénio de ponte; pretende-se que "cicloalquilo" inclua grupos de ane} saturado, tais como, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ci-
clo-hexilo e ciclo-heptilos entende-se que "alcenilo" inclui cadeias de hidrocarboneto, quer lineares, quer ramificadas, contendo uma ou maís ligações duplas carbono—carbono, que podem ocorrer em qualquer ponto estável ao longo da cadeia, tais como, etenilo, propenilo, butenilo, peritenilo, 2-metilproperiilo e similares;; o termo “alcinilo" refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto, quer linear, quer ramificada, com o número indicado de átomos de carbono, que contém uma ligação tripla carbono-carbono, que pode ocorrer em qualquer ponto estável ao longo da cadeia, tal como etinilo, 2-propinilo, 2-butinilo, 4-pentinilo, 2-metil.-3-propini-lo e similares»
Tal como é aqui usado, e excepto onde se indique, o termo “heterociclo" representa um anel heterociclico estável, mono- ou biciclico, de 5 a 7 membros, que está quer saturado, quer insatu-rado, e que consiste de átomos de carbono e de um a três heteroátomos seleccionados de entre o grupo consistindo em N, 0 e S, e no qual os heteroátomos de azoto ou de enxofre podem estar opcionalmente oxidados e o átomo de azoto pode estar opcionalmente quaterriizado, e incluindo qualquer grupo biciclico no qual qualquer dos anéis heterocíclicos definidos anteriormente está condensado com um anel de benzeno» Os anéis heterocíclicos podem estar ligados a qualquer heteroátomo ou a qualquer átomo de caí— bono que resulte na criação de uma estrutura estável- Exemplos destes elementos heterocíclicos incluem piperidinilo, piperazini-lo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolodinilo, 2--oxoazepinilo, azepinilo, pirrolilo, 4-piperidonilo, plrrolidinl-lo, pirazolilo, pirazoliriidilo, imidazolílo, pirídilo, pirazini-lo, pirimidinilo, pirídazínílo, oxazolilo, isoxazolilo, morfoli-nilo, tiazolilo, quinuclidinilo, indolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, benzoxazolilo, furilo, tetra-hidrofurilo, tetra-hidropiranilo, tienilo, tiamorfolinilsulfóxido, tiamorfolinilsulfona e oxadiazol.il.o»
Quando qualquer variável (p.e„, A, B, R1, R3, ____ R17, heterociclo, feriilo substituído, etc») ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou na fórmula I, a sua definição em cada caso é independente da sua definição em cada um dos outros casos»
72 877 SB CASE 14516 -10
Também são permitidas combinações de substituintes e/ou de variáveis, apenas se estas combinações resultarem em compostos estáveis. Pela geminai, por e xilo, seja equ convenção aqui utilizada, pretende-se que um diol xemplo quando R6 e R7 são, simultaneamente, hidro-ivaiente a uma ligação dupla carbono-oxigénio.
Outras abreviaturas e símbolos, vulgarmente usados na arte, aqui usados para descrever os péptidos, incluem os seguintes: Código de Código de Aminoácidos três letras Aminoácido três letras Alanina Ala Leucina Leu Arginina Arg Lisina Lys Asparagina Asn Metionina Met Acido Aspártico Asp Fenilalanina Phe Cisteína Cys Prolína Pro Glutamina Qln Serina Ser Acido Gilutâmico Qlu T reonina Thr Gilicina Gly Triptofano Trp Histidina His Tirosina Tyr Isoleucina Ile Vaiina Va .1. Asparagina ou Asx Acido Aspártico Qlutamina ou Gilx Acido Qlutâmico De acordo com a representação convencional, o terminal amin está à esquerda e o terminal carboxílo está à direita. Todos os aminoácidos (AA) quiraís podem ocorrer como raeematos, misturas racêmicas, ou enantíómeros ou diastereómeros individuais, incluindo-se no presente invento todas as formas isoméricas, β-Ala refere-se ao ácido 3-aminopropanóico, -Boc refere-se ao radical t™ -butíloxicarbonilo, Cbz ou Z refere-se ao radical carbobenziloxilo, i-Bu refere-se a iso-butílo, Ac refere-se a acetilo, Ph refere-se a fenilo, DCC refere-se a diciclo-he- xil-carbodiimida, DMAP refere-se a dimetilaminopiridina, HOBT refere-se a 1-hidroxibenzotriazole, MMM é N-metíImorfolína, OTT é ditiotreitol, EDTA é ácido etilenodiaminatetra-acético, DIEA é
72 877 SB CASE 14516 -11- di-isopropiletilamina, DBU é l,8-diazobíciclQ[S„4„03undec~7-eno, DMSO é dimetilsulfóxido, DMF é dimetilformamida e THF é
te tra-hidrofurano» HF refere-se a ácido fluoridrico e TFA refere-se a ácido trifluoroacético- X2 são, geralmen-péptidos mais com-, são também actí- *1
As porções péptido representadas por X~u e te, dipéptidos ou menores» Contudo, crê-se que prídos, que incluem os resíduos aqui definidos vos e sâo considerados no âmbito do invento» A selecção de resíduos ou de grupos terminais pode ser usada para conferir ao composto propriedades bioquímicas ou físíco--químicas favoráveis» Podem-se usar resíduos hidrofílicos para conferir as propriedades de solubilidade desejáveis ou podem-se usar aminoácidos D no terminal carboxilo para conferir resistência às exopeptidases» A sintese dos compostos com a estrutura é realizada por condensação de aldol de um alfa-amino-aldeído com amino protegido, P2NHCH (R**-)CHO, com uma alf a-ami no-cetona com amino protegido, P^HCHCR^CQCH^, onde P2 e P3 são grupos protectores de amino, usando di-isopropilamina de lítio (LDA), a baixa temperatura, como se descreve detalhadamente nos Exemplos» Reduz--se a 3-hidroxicetona resultante no 1,3-diol usando um reagente redutor de hidreto, tal como Me4NHB(QAc)3 em CH^CN/HOAc (Evans e
Chapman, Tetrahedron......Let»., 5939-42 (1986) ou NaBH4; o primeiro procedimento possuindo a vantagem de produzir 1,3-diois anti com uma diastereo-selectividade elevada» A alfa-amino-cetona com amino protegido, P:3NHCH(R2)C0CH3, é preparada pela adição de MeLi ou de MeHgBr a N-metil-N-metoxi-amidas, P3NHCH(R2)C0NMe(0Me), como se descreve em Fehrentz e Castro, Synthesis. 676 (1983) e em
Na hm e Weirireb, Tetra hedron Let,. 3815-18 (1981)» Esta via é também versátil pelo facto de permitir o acesso a todos os estereoisómeros dos compostos com a estrutura e aos compostos não simétricos, nos quais R1 e R2 são diferentes e X"*· e X2 são diferentes»
Os compostos do presente invento são preparados pela técnica 72 877 SB CASE 14516 12-
de fase sólida de Merrifield (J.„.....Am».....Chem.».....Soe.!,..» 8.5* 2149 ¢1964)) ou„ preferivelmente* por processos em solução conhecidos na arte» Pode-se usar uma combinação da síntese em solução e em fase sólida* tal como numa síntese convergente na qual se podem preparar fragmentos de di-* tri- ou tetra-péptido por síntese em fase sólida* e são quer acoplados quer* ainda* modificados por síntese em solução» Podem-se usar os processos de síntese de péptidos* de um modo geral* descritos em J» M« Stewart e J» D» Young* "Solíd Phase Peotide Svnthesis"» Pierce Chemical Company* Rockford* II (1984)* ou em M» Bodansky* Y„ A» Klauser e M» A» Ondetti* "Pepti.-d e.... S y n. t.h e s i. s", John W i 1 ey & Sons* I n c»* New York* N»Y» (1976)* ou em "The Peptides" Gross e Meienhoffer* eds»s Acad» Press* 1979* Vols I-III, para produzir os péptidos da invento e esses processos são aqui incorporados como referência»
Cada aminoãcido ou péptído é adequadamente protegido* como é conhecido na arte dos péptidos» Por exemplo* prefere-se o grupo Boc- ou carbobenziloxílo (Cbz) para a protecção do grupo amino* especialmente* na posição a» Usa-se um grupo benzi lo ou um grupo benzilo substituído* adequado* para proteger o grupo mercapto da cisteína ou de outros amínoácidos contendo tiols ou o hidroxilo da serina ou da treonína» Podem-se usar o grupo tosilo ou nitro para a protecção da guanidina de Arg ou o imidazole de His* e pode-se usar um grupo carbobenziloxílo ou benzilo* adequadamente substituídos* para o grupo hidroxilo de Tyr* Ser ou Thr* ou para o grupo e-amino da lisina» A substituição adequada dos grupos protectores carbobenziloxílo e benzilo é uma substituição orto e/ou para com cloro* bromo* nitro ou meti lo* e é usada para modificar a reactivídade do grupo protector» Podem-se também proteger a cisteína e outros aminoãcídos contendo enxofre* pela formação de um dissulfureto com um grupo tioalquilo ou tioarilo» Com excepção do grupo Boc* os grupos protectores são* muito conveni-entemente* aqueles que não são removidos por tratamento com ácido moderado» Estes grupos protectores são removidos por métodos tais como a hidrogenação catalítica ou tratamento com sódio em amoníaco líquido ou com HF* tal como é bem conhecido na arte»
Se se usam processos em fase sólida* o péptido é construído
72 877 SB CASE 14516 ”13 sequencialmente a partir do terminal carboxilo no sentido do terminal amino do péptido- A síntese em fase sólida inicia-se ligando,, covalentemente* o terminal C de um aminoácido protegido a uma resina adequada* tal como resina de benzidrilamina (BHA)* resina de metilbenzidrilamina (MBHA) ou resina de clorometilo (CHR)* tal como se descreve* de um modo geral* na Patente dos E-U-A-4 244 946. Usam-se as resinas de suporte BHA ou MBHA se se pretende que o terminal carboxilo do péptido produto seja uma carbo-xamida- Geralmente* usa-se um suporte CMR se se pretende que o terminal carboxilo do péptido produzido seja um grupo carboxilo* embora se possa usar* também* esta resina para produzir uma cai— boxamida ou um éster- A modificação do grupo amino terminal do péptido é realizada por aIquilação ou acetilação* como é geralmente conhecido na ai— te- Estas modificações podem ser realizadas no aminoácido* antes da incorporação no péptido* ou no péptido* após este ter sido sintetizado e o grupo amino terminal ter sido libertado* mas antes da remoção dos grupos protectores-
Tipicamente* a acetilação realiza-se no grupo amino livre usando um halogeneto de acilo* anidrido ou éster activado* do al-quil-ácido correspondente* na presença de uma amina terciária- A mono-alquilação é realizada* muito convenientemente* por alquila-ção redutiva do grupo amino com um aldeído ou cetona alifáticos* apropriados* na presença de um agente de redução moderado* tal como cianoboro-hidreto de lítio ou de sódio- A dialquilação bem como a quaternização, podem ser realizadas por tratamento do grupo amino com um excesso de halogeneto de alquilo na presença de uma base- A síntese em solução de péptidos é realizada usando processos convencionais para formar ligações arnida- Tipicamente* um aminoácido protegido com Boc* que possui um grupo carboxilo livre* é acoplado a um aminoácido protegido* que possui um grupo amino livre* usando um agente de acoplamento de carbodiimida adequado, tal como NaN^-diciclo-hexilcarbodíimida (OCC)* opcionalmente na presença de catalisadores* tais como l~hidroxibenzo~
72 877 SB CASE 14516 --14-triazole ÇHOBT) e dimetilaminopiridina (OMAP)- São também adequados outros processos, tais como a formação de ésteres, anidridos e halogenetos de ácido, activados, do carboxilo livre de um aminoãcido protegido com Boe, e subsequente reacção com a amina livre de um aminoãcido protegido, opcionalmente, na presença de uma base» Por exemplo, trata-se um aminoãcido ou péptido, protegido com Boc, num solvente anidro, tal como diclorometano ou te-tra-hidrofurano (THF), na presença de uma base, tal como N-metil-morfolína ou uma trialquilamina, com cloroformato de ísobutilo, para formar o anidrido misto que se faz reagir, subsequentemente, com a amina livre de um segundo aminoãcido ou péptido protegido» 0 péptido formado por estes processos pode ser desprotegido se-lectivamente, usando técnicas convencionais, no terminal amino ou carboxilo, e acoplado a outros péptidos ou aminoãcidos usando técnicas similares» Após o péptido estar completo, podem-se remover os grupos protectores, como aqui anteriormente se descreveu, por exemplo, por hidrogenação na presença de um catalisador de paládio ou de platina, por tratamento com sódio em amoníaco líquido, ácido fluorídrico, acido trifluoroacético ou com um alcali»
Frequentemente, usam-se os ésteres para proteger o grupo carboxilo terminal de péptidos na síntese em solução. Estes podem ser convertidos em ácidos carboxílicos por tratamento com um hidróxido ou carbonato de metal alcalino, tal como hidróxido de potássio ou carbonato de sódio, numa solução alcoólica aquosa» Podem-se converter os ácidos noutros ésteres, através de um intermediário de acilo activado como anteriormente se descreveu»
As amidas e atnídas substituídas do invento são preparadas a partir de ácidos carboxílicos dos péptidos de um modo semelhante» Assim, pode-se fazer reagir amoníaco ou uma amina substituída com um intermediário de acilo activado de um α-aminoãcido ou de um oligopêptido, com amino protegido, para produzir a amida. é conveniente usar agentes de acoplamento, tais como DCC, para formar amidas substituídas a partir do próprio ácido carboxílico e de uma amina adequada» 72 877 SB CASE 14516 -15-
Adicionalmente, podem-se converter os ésteres de meti lo do invento nas amidas ou nas amídas substituídas, directamente por tratamento com amoníaco ou com uma amina substituída, em solução de metanol- Satura-se uma solução metanólica, do éster de metílo do péptido com amoníaco e agita-se num reactor pressurizado para se obter a carboxamida simples dos péptidos.
Descrevem-se, na arte, procedimentos para a determinação da constante de inibição (Ki) por análise de Dixon, p.s. em Dreyer, et al. Proc. Natl. Acad. Sei- U.S-A·. 86, 9752-9756 (1989)- Utiliza-se um ensaio peptidolítico usando o substrato Ac-Arg-Ala--Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH^ e HlV-protease recombínante, tal como se descreve em Strickler, et al., Proteins. 6., 134-154 (1989). Um valor de Ki menor indica uma maior afinidade de ligação.
As composições farmacêuticas dos compostos do invento, ou dos seus derivados, podem ser formuladas como soluções ou pós li-ofilizados para administração parentérica. Os pós podem ser reconstituídos, antes do uso, por adição de um diluente adequado ou de outro transportador farmaceuticamente aceitável. A formulação líquida é, geralmente, uma solução aquosa, ísotónica, tamponada. Exemplos de diluentes adequados incluem solução salina isotónica normal, dextrose, padrão a 5% em água ou solução de acetato de sódio ou de amónio tamponada. Esta formulação é especialmente adequada para administração parentérica, mas pode também ser usada para administração oral ou pode estar contida num inalador ou nebulizador de dose controlada, para insuflação. Pode ser desejável adicionar excipientes tais como polívinilpírrolido-na, gelatina, hídroxícelulose, goma arábica, polietilenoglicol, manitol, cloreto de sódio ou citrato de sódio.
Uma composição preferida para administração parentérica pode conter, adicionalmente, uma quantidade de composto capsulada num transportador lipossómico. 0 lípossoma pode ser preparado por dispersão dos compostos numa fase aquosa com fosfolípidos, com ou sem colesterol, usando uma variedade de técnicas, incluindo agitação manual convencional, extrusão a alta pressão, evaporação
72 877 SB CASE 14516 de fase inversa e microfluidifi cação» Um melo cl o adequado para preparar estas composições é descrito, rnaís detalhadamente, no Pedido de Patente copendente nô - 06/763484 que é aqui incorporado como referência» Um tal transportador pode ser opcionalmente dirigido ao seu local de aoção por uma imunoglobulina ou por uma proteína reactiva, com a partícula virai ou com as células infectadas» Claro que a escolha destas proteínas estará dependente dos determinantes antigénicos do vírus ínfectante» Um exemplo de uma tal proteína é a glicoproteína de células T, CD-4, ou um seu derivado, tal como a sCD-4 (CD-4 solúvel), que é reactiva com o revestimento glicoproteico do vírus da imuno—deficiencia humana (HIV). Estas proteínas estão descritas no Pedido de Patente copendente nS« 07/160463 que é aqui incorporado como referência» Podem-se conceber proteínas alvejantes similares, por métodos conhecidos na arte, para outros vírus a estas são também consideradas no âmbito do invento» AIternativamente, estes compostos podem ser capsulados, preparados na forma de comprimido ou na forma de uma emulsão ou xarope para administração oral» Podem~se adicionar transportadores sólidos ou líquidos, farmaceuticamente aceitáveis, para melhorar ou estabilizar a composição, ou para facilitar a preparação da composição- Os transportadores líquidos incluem xarope, óleo de amendoim, óleo de oliva, glicerina, solução salina e água» Os transportadores sólidos incluem amido, lactose, sulfato de cálcio di-hidratado, caulino, estearato de magnésio ou ácido esteárico, talco, pectína, goma arábica, ãgar ou gelatina» 0 transportador pode também incluir um material de libertação sustida, tal como monoestearato de glicerol ou diestearato de glicerol, sozinho ou conjuntamente com uma cera» A quantidade de transportador sólido varia mas, preferivelmente, estará compreendida entre cerca de 20 mg e cerca de 1 g por unidade de dosagem-As preparações farmacêuticas são preparadas seguindo as técnicas convencionais da farmácia envolvendo trituração, mistura, granulação e prensagem, conforme necessário, para formas de comprimido; ou trituração, mistura e enchimento, para formas de cápsula de gelatina dura» Quando se usa um transportador líquido, a composição estará na forma de um xarope, elixir, emulsão ou
72 877 SB CASE 14516 -17- suspensão aquosa ou não aquosa- Uma tal formulação líquida pode ser administrada directamente p.o. ou pode ser usada para enchi" mento de uma cápsula de gelatina mole-
Para administração rectal pode-se combinar um pó pulverizado dos compostos do invento com um excipiente* tal como manteiga de cacau* glicerina* gelatina ou polietilenoglicois* e molda~se na forma de um supositório- Podem-se também preparar pós pulverizados com uma preparação oleosa* gel* pomada ou emulsão* tamponada ou não tamponada* e administram-se através de um emplastro trans-dêrmico.
Quando se usam os compostos do invento para induzir activi-dade antiviral em pacientes que estão infectados com vírus susceptíveis e que requerem um tal tratamento* o método de tratamento compreende a administração oralmente* parentericamente* bucalmente* transdermicamente* intravenosamente* intramuscularmente * rectalmente ou por insuflação* de uma quantidade eficaz do composto escolhido* preferivelmente* disperso num transportador farmacêutico- As unidades de dosagem do ingrediente activo são seleccionadas na gama de 0*05 a 15 mg/kg« Para infecção aguda ou crónica* estas unidades de dosagem podem ser administradas de uma a dez vezes ao dia- Incluí-se aqui a terapia de combinação* tal como se descreve no Pedido de Patente Europeia nQ„ 337714* nas páginas 42-47-
Os Exemplos que se seguem servem para ilustrar o presente invento- Não se pretende que os Exemplos limitem* de modo algum* o âmbito do invento* sendo apresentados apenas para mostrar como preparar e usar os compostos do invento-
Nos Exemplos todas as temperaturas estão em graus Celsius-As análises de aminoãcidos foram realizadas num Dionex Autoíon 100« A análise do teor em péptido é baseada na análise de amino-ácidos- Os espectros de massa FAB foram realizados num espectro-metro de massa Vfâ Aab usando bombardeamento de átomo rápido- Os espectros de RMN foram registados a 250 MHz usando um Espectróme-tro Bruker Am 250- As multiplicidades indicadas sãon s-singuleto* 72 877 SB CASE 14516 ”18- d~dupleto, t-tripleto, q-quarteto, sinal largo»
m=multipleto e br indica um
Purificação de HIV-&rotease recombinante
Em Debouck, et aL, Proc» Natl» Acad» Sei- USA;, 84, 8903-6 (1987) descreveram-se métodos para exprimir HlV-protease recombi-nante em E» Coli. A enzima usada para testar os compostos do invento foi produzida deste modo e purificada a partir do sedimento celular, como anteriormente se descreveu por Stickler et al» Prp.te.ins, 6, 139-154 (1989)« EXEMPLO 1 2.,6-di-(rt~butoxicarbonilamino)"3«5-di~hídroxi-l«7-dif enil-heptano (a) f 2S»3RS»6 S)-2«6-d i-(t~bu tox i ca rbon i1ami η o)-3-h i d rox i ~1,7-dl~ fenil-5-heptanona A 1,19 ml de di-isopropilamina (8,49 mrnole) em 10 ml de THE, adicionaram-se 3,38 ml de n-butil~lítio, 2,5 M, em hexeno (8,45 mrnole) a -21°C, e agitou-se a mistura resultante durante 1 hora, seguindo-se arrefecimento até -78°0» A solução de LOA adicionou--se 1,00 g (3,80 mrnole) de (2S)~l~fenil-2-t-butoxicarbonilamino--3-butanona em 4 ml de THF» Agitou-se a mistura durante 15 minutos, seguindo-se a adição de 900 mg (3,61 mrnole) de (2S)-l~fenil-“2-t-butoxicarboriilamíno-3“propanal em 4 ml de THF» Agitou-se a mistura resultante durante 10 minutos extinguiu-se pela adição de 20 ml de ácido clorídrico IN- Após separação da fase orgânica, extraiu-se a fase aquosa três vezes com acetato de etilo» Secou- -se a fase orgânica combinada (Ha2®^4) s concentrou-se ,1.0.......vácuo. obtendo-se 1,89 g de um sólido branco sujo» Separou-se o resíduo por cromatografia "flash" obtendo-se 1,21 g (65,4%) da hidroxicetona» RMN (250 MHz, C0C13) δ 1,35, 1,39, 1,42 (3s, 18H), 2,46 (d, 1H), 2,41 - 3,15 (m, $H), 3,59 - 4,04 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 4,87 - 5,09 (m, 2H), 7,09 - 7,38 (m, 10H) - Espectro de massa m/e 513,2 (M+fH)» b) (2S - 3R»5R - 6S1 ~2.6-di- f t-bUlfeQJ!rÍ^JfeQfí-ÍlaffiÍfí.Q) -¾, 5-dÍ7,hMt.SXÍ.r.
-1-7-difenil-heptano e.....f2S.3S nol-3»5-di-hÍdroxi-l-7-dÍfenlkihiiafe8J3jgi.....(Composto..!.! A 3,37 g (12,8 mrnole) de triacetoxiboro-hidrato de 72 877 SB CASE 14516 19-
tetrame-tilamónío em 20 ml de ácido acético-acetonitrilo (121), adicionaram-se 1,31 g (2,56 mmole) da mistura de hídroxícetona, preparada anteriormente em (a), em 12 ml de acetonitrilo-cloreto de metileno-ácido acético (6:5:1), a 5°C, e agitou-se a mistura resultante durante .3 horas com arrefecimento num banho de gelo-ãgua» Extinguiu-se a reacçâo com 40 ml de solução 0,5 N de hidrogenotartarato de potássio» Extraíu-se a mistura com cinco porções de 20 ml de cloreto de metileno» Lavou-se a fase orgânica combinada, com solução saturada de bicarbonato de sódio até à neutralidade, secou-se (Na^SO^.), filtrou-se e concentrou-se in vaçuo.» Separou-se o resíduo, por cromatografia "flash", em duas fracções» Di-hidroxidiamina A: 434 mg (33%), RMN (250 MHz, COCI3) δ 1,38 (s, 18H), 1,71 (m, 2H), 2,86 (d, 4H), 3,78 (m, 4H), 4,79 (m, 2H), 7,15 (m, 10H); Espectro de massa m/e 515,2 (M++H)» Oi-hidroxidiamina B: 410 mg (31%), RMN (250 MHz, CDClg) δ 1,35 (s, 18H), 2,78 (dd, 1H), 2,99 (dd, 2H), 3,88 (m, 2H), 4,01 (M, 2H), 4,53 (m, 2H), 7,28 (m, 10H) 5 Espectro de massa m/e 515,2 (M++H)» Obtiveram-se também 123 mg (9,4%) de uma mistura dos dois compostos anteriores» 0 composto 1 deste exemplo é um composto da estrutura na tabela, no qual pA e R2 são PhCH2 e X*'- e X2 sáo Boc» EXEMPLO.....2 (23,33,53,63)-2» 6-bis£(N~ben z í lox 1 carbori i 1,) alari i 1 am í η o 1-3,5-di-r„b„l^,C2>íÍ»r„l.a„Z::dif,g,Q,iJ,-heptang
Agitou-se uma mistura de 20 mg (39 ptriole) do composto do Exemplo .1 (b) em 0,2 ml de ácido trifluoroacétíco, à temperatura ambiente durante 1 hora, e evaporou-se até à secura in.........vaçuo,»
Dissolveu-se o resíduo em 2 ml de CH2CI2 seco, seguindo-se a adição de 29 mg (84 μ m o 1 e) de N-benziloxilcarbonilala-nina-N-nitrofeniléster e 27 μΐ (194 μιηοίο) de EtgN. Agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente de um dia para o outro» Separou-se a mistura por cromatografia "flash" (1 g de sílica gel, acetato de etilo/hexano) RMN δ 1,20 (d, 6H), 1,57 (m, 2H), 1,78 (br s, 2H), 2,85 (m, 4H), 3,82 (m, 2H), 4,02 (q, 2H), 4,11 (q, 2H), 5,05 (s, 4H), 5,31 (d, 2H), 6,48 (d, 2H), 7,20 (m, 10H), 7,33 (s, 10H). 0 produto era um composto com a estrutura na tabela no qual R1 e R2 são PhCH2 e X1 e X2 são ZAla» 72 877 SB CASE 14516 20 EXEMPLO.....&
f2S»3S-5S.6S)-2-6~bis-rN-ft~butoxicarbon.i..l.)alan.i.lamino1~3,5~di-~hidrQXÍ~l,7~difenil-heptano
Agitou-se uma mistura de 15 mg (29 urnole) do composto do Exemplo 1 (b) em 0,2 ml de ácido trifluoroacético, à temperatura ambiente durante 1 hora e evaporou-se até à secura in vacuo. Dissolveu-se o resíduo em 2 ml de cloreto de metileno seco, seguindo-se a adição de IS mg (63 pmole) de N-t-butoxicarbo- nilalanina-N-hidroxissuccinimida éster e de 20 μΐ (143 umole) de trietilamina. Agitou-se a mistura resultante à temperatura ambiente de um dia para o outro e, depois, separou-se por cromatografia "flash" (1 g de sílica gel, E/H~3) obtendo-se 14 mg (73%) do produto desejado na forma de um sólido branco» RMN (250 MHz, C0C13) õ 1,20 (d, 6H), 1,44 (s, 18H), 1,61 (t, 2H), 2,00 (s, 2H), 2,87 (m, 4H), 3,85 (s, 2H), 4,06 (m, 4H), 5,03 (d, 2H), 6,56 (d, 2H), 7,20 (m, 4H)» 0 produto tinha a estrutura da Tabela na qual R-** e R^ são PhCH2 e X·1· e X2 são BocAla»
INIB.I.ÇÃ.0....DE.....ENZIMA
In.ifel£;l.Q......d.§.....ã£ti„y.I.d.âÇÍ.§......^.§.....HIV~protea.se 0 ensaio de inibição foi anteriormerite descrito em Dreyer et al» P.roç..,____Natl» Acad»_______Sol» USA, 86, 9752-9756 (1989) e Moore et al, Bi.Q.ç.b.,.........Bioph, Res».........Com..,.., 159, 420 (1989)» Um ensaio típico continha 10 ml de tampão MENDT (Mes 50 mM (pH 6,0; ácido 2-(N-morfolino)etanossulfónico), EDTA 1 mH, ditiotreitol lmM, NaCl 200 rriM, TrítonX-100 a 0,1%); N-acetil-L-argiriil-L-ala-nil-L-seril-L-glutaminil-L-asparaginil-L-tirosil-L-prolil-L-valil--L-valinamida 2, 3 ou 6 mM (Ac-Arg-Ala-Sei—Gln-Asn-Tyi—Pro-~Val-Val~NH2S Km ~ 7 mM) 5 e concentrações micromolares e submi-cromolares dos compostos sintéticos» Após incubação, a 37°0 durante vários minutos, iniciou-se a reacção com 0,001-0,10 mg de HIV-protease purificada» Extinguiram-se as misturas reaccionais (37°C) 10-20 minutos depois, com igual volume de ácido tricloro-acético frio 0,6 N e, após centrifugação para remover o material precipitado, analisaram-se os produtos da peptidolise por HPLC de fase inversa (Beckman Ultrasphere 0DS, 4,5 mm x 25 mm; fase móvel; 5- -20% acetonitrilo/H20-0,l% TFA (915 minutos), 20% de acetonitrilo/H20-0,l% TFA (5 minutos) a 1,5 ml/minuto, detecção a ~21 ~21 ίνΦ ,'/7 éa SB CASE 14516 220 nin). As posições de eluição de Ac-Arg-Ala-Sei (ãln-Asn-Tyr--Pro-Val-Val-NH.^ (17-18 mín -) e de Ac-Arg~Ala-Sei Oln-Asri-Tyr-(10-11 min.) foram confirmadas com material autêntico. As velocidades Iniciais de formação de Ac-Arg-Ala-Sei—Gln-Asn-Tyr foram determinadas por integração destes picos e, tipicamente,, determinaram-se as propriedades inibidoras dos compostos sintéticos a partir da análise do declive/ordenada na origem de uma representação 1/v vs. [Inibídor] (análise de Dixon). Os valores de Kj resultantes deste tipo de análise primária são exactos, apenas para inibidores competitivos/ e sob condições nas quais a -constante de Michaelis do substrato usado está bem determinada» É desejável que os compostos do invento tenham valores de K^· menores do que 50 μΜ, preferivelmente, menores do que 10 μΜ e, rnais preferivelmente, menores do que 1 μΜ»
Seguindo os procedimentos que aqui se descrevem e os ensinamentos dos exemplos anteriores, podem-se preparar os compostos Indicados na Tabela seguinte, com a estrutura e os grupos substi-tuíntes que al se indicam»
TABELA DE COMPOSTOS R1 R2 ^Y^NHX2 HÕ OH NQ» x·*· R2 R2 X2 101 Cbz-Ala i-Bu i-Bu Cbz-Ala 102 AlaAIa i-Bu i-Bu A1 & A1 & 103 CbzVal i-Bu i-Bu CbzVal 104 β—Ala i-Bu i-Bu B~Ala 105 B-AlaVal I-Bu I-Bu B-AlaVal 106 H i-Bu i-Bu H 107 Cbz-AlaAla i-Bu i-Bu Cbz-AlaAl 108 Boc-Ala i-Bu i-Bu Boc-Ala 109 Ac-AlaAsri i-Bu i-Bu Ac-AlaAsn .110 Ac-ClnAsn i-Bu i-Bu Ac-GlnAsn 72 877 SB CASH 14516 -22- m,, vl A R2 R2 O Xz 111 Cbz-PheAla i-Bu i-Bu Cbz-PheAla .112 trifluorcAlaAla Í-BU i-Bu trifluoro- A1 a A1 a 113 Cbz-trifluoro- i-Bu i-Bu Cbz-trifluo- AlaAla roAlaAla 114 trifluoroAla i-Bu i-Bu trifluoroAla 115 Cbz-trifluoroAla i-Bu i-Bu Cbz-trifluo- roAla 116 Ph(CH2)2C0 i-Bu i-Bu Ph(CH2)2C0 117 Boc i-Bu i-Bu BOC 118 Boc PhCH2 PhCH2 Boc 119 Cbz i-Bu i-Bu Cbz 120 Ac i-Bu i-Bu Ac 121 PhS02 i-Bu i-Bu PhS02 .122 HCO í-Bu i-Bu HCO 123 Propionilo i-Bu i~Bu Propionilo 124 í-Butirilo i-Bu Í-BU í-Butirílo 125 Ph(CH2)2c0 i-Bu i-Bu Ph(CH2)2C0 126 PhS02Val i-Bu i-Bu PhS02Val 127 Fenil-lactoílo i-Bu i-Bu Fenil-lac- toí lo 128 Fenil-lactoil- i-Bu i-Bu Fenil-lac- -Vai toil-Val 129 Cbz-Ala PhCH2 PhCH2 Cbz-Ala 130 Boc-Ala PhCH2 PhCH2 Boc-Ala 131 Cbz-Val i-Butenilo i-Butenilo Cbz-Val .132 Cbz-Val 2-Propenílo 2-Propenilo Cbz-Val 133 Cbz-Val 3-Butenilo 3-Butenilo Cbz-Val 134 Cbz-Val n-Pentilo n-Pentilo Cbz-Val 135 Cbz-Val PhCCH2)2 Ph(CH2}2 Cbz-Val 136 Cbz-Val Ciclo-hexi1- Ciclo-hexi1- Cbz-Val -CH? —ch2 137 Cbz-Val PhCH2 i-Butenilo Cbz-Val .138 Boc PhCHo i-Butenilo Cbz-Val 139 Ac 2~Propenilo PhCH2 Cbz-Val 140 Boc PhCH2 3-Butenilo Cbz-Val 141 Boc PhCHo n-Pentilo Cbz-Val 72 877 SB CASE 14516
m.,.. 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 .152 .153 154 .155 156 157 158 .159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 ~23 Y X. Λ B2 Boc phCH2 Boc PhCH2 Cbz-Val 2-Naf ti l-CI-i? Cbz-Val 3-Maftil-CH2 Cbz-Val 2-Butinilo Cbz-Val 3-Indoílmetilo Cbz-Val trans-3-fenil- -3-propenílo Cbz-Val n-butilo Cbz-Val N-Píperidinil- -ch2 Cbz-Val N-Morfolini'1- -ch2 Cbz-Val (Ch3)2N-Ch2 Cbz-Val t-butil-NH-CH2 Cbz-Val N-Imidazolil- -Ch2 Boc PhCH2 Boc PhCH2 Boc PhCH2 Boc phCH2 Boc PhCH2 Boc PhCH2 Boc PhCH? Boc PhCH2 Boc PhCH2 Boc PhCH2 Cbz-Val PhCH2 Boc PhCH2 Cbz-Val PhC0NHCH2 Cbz-Val N-Indoil-Chb rZ ΧΛ Ph(CH2)2 Cbz-Val Ciclo-hexil- Cbz-Val ~CH2 2-NaftÍl-CH2 Cbz-Val 3-Mafti1-CH2 Cbz-Va1 2-Butinilo Cbz-Val 3-Iridoí lmetilo Cbz-Val trans-3-fenil- Cbz-Val -3-propenílo n-butilo Cbz-Val M-Piperidíní1- Cbz-Val ~”ch2 N~Morfolinil- Cbz-Val “CH2 CCH3)2N“CH2 Cbz-Val t"butxl-NH-CH2 Cbz-Val N-Imídazoil- Cbz-Val -ch2 2-Butínxlo Cbz-Val 3-Indoilmetí1 Cbz-Val trans-3-fanil- Cbz-Val -3-propenílo N-buti1 Cbz-Val N-Píperídinil- Cbz-Val -ch2 N-Morfolinil™ Cbz-Val -ch2 (ch3)2n-ch2 Cbz-Val t-buti1”NH”CM2 Cbz-Val N~Imidazoil~ Cbz-Val -ch2 4-Piridil-CH2 Cbz-Val 4-Piridí1-CH2 Cbz-Val 4-Piridil-CH2 Boc PhC0NHCH2 Cbz-Val N-Indoil-CHU Cbz-Val 72 877 SB CASE 14516 -24- 169 Cb Zr -Vai t-ButilCONH- t-Buti1CGNH- Cbz-Vai •~ch2 -ch2 170 Cbz- -Vai BocNHCH2 BocNHCH2 Cbz-Val 171 Cbz- -Vai nh2ch2 NH2CH2 Cbz-Vai 172 Cbz- -Vai N-Benzimida- N-Benzimida~ Cbz-Val zoilo zoilo 173 Cbz'“ •Vai PhCH20-CH2 PhCH20-CH2 Cbz-Val 174 Cbz- -Vai PhO-CH2 PhO-CH2 Cbz-Val 175 Cbz- -Vai CH3(Ch2)20Ch2 ch3(ch2)2och2 Cbz-Val 176 Cbz- 'Vai ch2o-ch2 Cbz-Val 177 Cbz- -Vai (CH3)2CH°CH2 (ch3)2ch°ch2 Cbz-Ala 178 Cbz· •Vai t-Butil-0-CH2 t-Butil-0-CH2 Cbz-Val 179 Cbz- -Vai (ch3)2chch2och2 CCH3)2chch2“ Cbz-Val och2 180 Cbz· -Vai CH3CH2(CH3)CHO- CH3CH2(CH3)-" Cbz-Val CH2 chqch2 181 Cbz- -Vai Ciclo-hexil-O- Ciclo-hexIl-O- Cbz-Val ~CH2 ”CH2 182 CbZ" -Vai PhCH20CH2Q“CH2 PhCH70CH?0-CH2 Cbz-Val 183 Cbz· -Vai 0Η300Η20“0Η2 CHt0CHo0-CH2 Cbz-Val 184 Cbz- -Vai ch3och2ch2o- CHs0CH2CH20~ Cbz-Val CH20CH2 ch2och2 185 Cbz- -Vai ch3s~ch2 CHtçS-CHo w tw. Cbz-Val 186 Cbz· -Vai PhS-CH2 Ph8-CH2 Cbz-Val 187 Cbz- -Vai (ch3)2chs-ch2 (CH3)2CH3-CH2 Cbz-Val 188 Cbz· -Vai ch3(ch2)2s~ch2 ch3(ch2)2S“Ch2 Cbz-Val 189 Cbz· -Vai ch3Cch2)3s~ch2 ch3(ch2)3s-ch2 Cbz-Val .190 Cbz- -Vai cm3s(o)-ch2 ch3s(o)-ch2 Cbz—Vai 191 Cbz- -Vai ch3s(o)2-ch2 Chi3S (°) 2~Ch2 Cbz-Val 192 Cbz· "Vai PhS(0)2-CH2 PhS(0)2-CH2 Cbz-Val 193 Cbz- -Vai i-PropilS(O)2“ Í-PropÍlS(0)2- Cbz-Val -~ch2 ”CH2 .194 Cbz* ~Val n-Propi1-8(0)2~ n-Propil-S- Cbz-Val -ch2 (o)2-ch2 195 Cbz- ~Val n-ButilS(O)2~ rv-ButilS(0)2- Cbz-Val -CH, -CH*
Claims (7)
- 72 877 SB CASE 14516 -25- reivindicações 1 - Processo de preparação de urn composto possuindo a estruturas R1 R2 X1HNNHX2 HO OH em que X1 e X2 são iguais ou diferentes e são A~(B)n, em que n=0-”2 s e B é, independentemente do outro, um α-aminoácido escolhido de entre o grupos Ala, Asn, Cys, Trp, Qly, Qln, Ile, Leu, Met, Pha, Pro, Ser, Thr, Tyr, Vai, His, ou trifluoroalanina, em que o grupo amino de B está ligado a A ou ao grupo carboxi do resíduo B adjacente, escolhendo-se o adequado, e o grupo carboxi de B está ligado ao grupo amino do resíduo 8 adjacente ou à estrutura, escolhendo-se o adequado; e A está covalentemente ligado ao grupo amiria do resíduo B adjacente ou ao grupo amina da estrutura, se n=0, e é: 1) tritilo, 2) hidrogénio, 3) alquilo C-^-C^, 4) R3~C0~ em que R3 és a) hidrogénio, b) alquilo C^-C^, não substituído ou substituído com um ou mais grupos hidroxilo, átomos de cloro ou átomos de flúor, c) fenilo ou naftilo, não substituído ou substituído com um ou mais substituintes R^, em que R4 éí i) alquilo C-^-C^, ii) halogéneo, em que halogéneo é F, Cl, Br ou I, III) hidroxilo, iv) nitro, v) alcoxi C:|_-Cg, ou vi) —CQ—N(R1Ci)2, em que R10 é, independentemente do outro, H ou alquilo C^-C^; d) um heterociclo com 5-7 membros, tal como pirídilo, furilo ou benzisoxazolilo, 5) ftaloilo, em que o anel aromático está não substituído ou substituído com um ou mais substituintes R^; „26“ 72 877 SB CASE 14516 6) R5(R6R7C)m-C0-, em que msl-3 e R5, R6 e R7, são uns independentemente dos outros: a) hidrogénio, b) cloro ou flúor» c) alquilo não substituído ou substituído com um ou mais átomos de cloro ou de flúor ou grupos hidroxilo» d) hidroxilo» e) fenilo ou naftilo, não substituído ou substituído com um ou maís substituintes R4, f) alcoxi C^-Cg, g) um heteroeicio com 5“7 membros» ou h) Rb, R1^ e R7b podem ser» uns independentemente dos outros, ligados de modo a formar um sistema de anel monocíclico, bicíclico ou tricíclico, sendo cada um dos seus aneis cicloalquilo 7) R5(R6R7C)mW-, em que m=l-3 e W é OCO ou S02 e R5, R6 e R7 são como acima definidos, excepto que R^, R8 e R7 não são cloro» flúor ou hidroxilo se estiverem adjacentes a W; 8) R8~W~ em que R8 é um heterociclo de 5“?' membros, tal como piridilo, furilo ou benzisoxazolilo; 9) R9~W~ em que R9 é fenilo ou naftilo» não substituído ou substituído com um ou mais substituintes R4; 10) R5~(R6R7c)m~P(0) (0R1X)“ em que R11 é alquilo C·^^ ou fenilo; 11) R8”P(0)(0R11)- ou 12) R9“P(0)(0R11)-; r! e R2 são iguais ou diferentes e são: 1) “Cf^R·^ em que R^ é a) NH-A em que A é como definido acima b) R5(R6R7C)m~; c) Rb(R6R7C)mV~, em que V é 0 ou MH, excepto que Rb, R6 e R7 não são , hidroxilo, cloro ou flúor se estiverem adjaceri" tes a V, m~l“3~3 e n-Q~2 e Rb que R5, R6 e R7 não adjacentes ao enxofre» R6 são d) R5(R6R7C)m-S(0)n, em que e R7 são como acima definidos, excepto hidroxilo, cloro ou flúor se estiverem e) R8“SC0)n“, f) R9-S(0)n~, 72 877SB CASE 14516 -27- 9) N(R10)2, h) |v(r15r16# onde R-*·^ e R1^ estão ligados de modo a formarem um heterociclo azotado com 4-6 membros, saturado, incluindo s í) azetidinilo, ii) pirrolidinilo, iii) piperidinilo, ou iv) morfolinilo, i) R170CH20 onde R17 é: i) alquilo ii) R^, ou iii) CH2Ar onde Ar é fenilo, naftilo ou um heterociclo com 5-7 membros, j) R170CH2CH20CH2!) k) N-imidazolilo, onde o anel imidazol está não substituído ou substituído com um substituinte R4, .1) N-berizimidazolí lo, onde o anel benzeno condensado está não substituído ou substituído com um ou mais substituintes p4 rí tj m) álcinilo C2-C6, opcionalmente substituído com um ou mais grupos R^; ou n) alcenilo C2-C6, opcionalmente substituído com um ou mais grupos R^; 2) hidrogénio, 3) alquilo não substituído ou substituído com um ou mais átomos de cloro ou de flúor ou grupos hidroxílo, ou 4) cicloalquilo C3-C7; e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, caracterízado por compreender 1„) a reacçâo de um composto de fórmula: R1 R2 ^ΗΝ'^^γ^'ΝΗΧ2 HÕ O na qual R1, R2, X1 e X2 são como acima definidos, com um reagente redutor, ou 2») a reacgão de um composto de fórmula: (segue fórmula) 72 877 SB CASE 14516-28”X1 são como acima definidos* e com um reagente de acoplamento* ou 3») a reacçao de um composto de fórmulasHW Y Y ’NH2 HÕ OH com um composto de fórmula X1-01% na qual X^-X2 e e X·^ são como acima definidos e OT* é um grupo deslocável.
- 2 - Processo de acordo com a reivindicação 1» caracterizado por x-*-~x^ e r-*-~r2.
- 3 - Processo de acordo com a reivindicação 1* caracterizado por X2 e X·2 serem seleccionados de entre alquilo fenilal- quilo e alcenilo Cjl“*C6-·
- 4 ~ Processo de acordo com a reivindicação la caracterizado por R1 e R2 serem seleccionados de entre Boca BocAlas ZAlaa ZVal e AlaAla.
- 5 - Processo de acordo com a reivindicação 1„ caracterizado por R"*" e Rz serem benzi lo e X"1· e Xz serem Boc-
- 6 ~ Processo de acordo com a reivindicação 1* caracterizado por o composto preparado ter uma constante de inibição da activi-dade da protease* Kía inferior a cerca de 10 μ,Μ.
- 7 ~ Processo de preparação de uma composição farmacêutica* caracterizado por se associar um composto de acordo com a reivindicação 1* ou um seu sal farmaceuticamente aceitável* com um veículo farmaceuticamente aceitável. Lisboa -5. JUL 1991 72 877 SB CASE 14516 -29- Por SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION ~Q AGENTE OFICIAL™
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