PT88375B

PT88375B - Processo para a preparacao de derivados glucosidicos da 3'-demetoxiepipodofilotoxina e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT88375B
Application number: PT88375A
Authority: PT
Inventors: Mark G Saulnier; Dolatrai M Vyas
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1987-08-31
Filing date: 1988-08-30
Publication date: 1995-03-31
Also published as: AU2166688A; DK482488A; IL87586A0; EP0305972A2; NZ225879A; FI883959A0; AU620561B2; CA1311472C; PT88375A; NO168040B; ZA883763B; US4888419A; FI88168C; FI88168B; NO883857D0; KR900006236B1; FI883959A; DK482488D0; KR890003793A; JPS6471898A

Description

BRI3T0L-T/T3R3 ΟΟΓΡΑΝΥ

Processo para a preparação de derivados glucosidicos da 3*-demetoxiepipodofilotoxina e de composições farmacêuticas que os contêm»

Antecedentes da Invenção

1. Âmbito da invenção

A presente invenção diz respeito a derivados glucosídicos da 3’-demetoxiepipodofilotoxina, à sua acção terapêutica anti-tumoral e às composições farmacêuticas que os contêm.

2. Descrição do3 trabalhos anteriores

A fórmula geral

H

(I)

H₃ co

OH engloba os compostos etoposido (VP-16) de fórmula geral Ia na qual R^ representa um grupo metilo e teniposido (VT6-26) de fórmula geral lb na qual R^ representa um grupo 2-tienilo. Estes compostos são agentes anti-cancerosos úteis clinicamente e derivados do produto podofilotoxina de fórmula

OH «

que ocorre naturalmente no lignano. 0 sistema de numeração utilizado na nomenclatura é o que se pode observar na fórmula II, citada antes. 0 etoposido e o teniposido são derivados da 4’-demetilepipodofilotoxina sendo a epipodofilotoxina o ep_í mero d-a podof ilotoxina na posição 4. 0 etoposido e o teniposido são activos no tratamento de uma grande variedade de cancros incluindo cancros do pulmão do tipo células pequenas, leucémia não linfocítica e cancro testicular não seminomatoso +-y, (ΑΓΑ Drug Evaluation 5 Edition, American ICedical Association, 1983, Chicago, Illinois, p. 1554-5 )·

Na patente de invenção norte-americana N23.524.844

Keller-Justen et al. descrevera o etoposido e o teniposido e raétodos para a preparação destes corapostos. Na patente de in venção norte-acericana N^ 4.609·644 Josef Neraec descreve a preparação da quinona de fórraula geral

Illa = CH₃; Rg = H por oxidação quíraica. Holthuis J.J.E., et al, era J. Electroanal. Chera. Interfacial Electrochera, 1985, 184 (2) : 317-29, descrevera a preparação da etoposido—3 *,4’-quinona de fórraula III A, substituindo na fórraula geral III R^ por ura grupo CHj e Rg por ura átorao de hidrogénio. Os derivados da epipodofilotoxina-34*-quinona de fórraula geral III na qual e Rg têm 0 significado que a seguir se apresenta para a fórraula geral IV utilizara-se como corapostos iniciais para a preparação de derivados da 3’-demetoxi-epipodofilotoxina de acordo cora a presente invenção

A presente invenção diz respeito a derivados glucosídicos da 3*-demetoxi-epipodofilotoxina de fórmula geral

Sumário da Invenção

IV na qual

B2 representa um átomo de hidrogénio, e

Rj representa um grupo alquilo alcenilo ^ci^c^°~^al⁽l^uil^{0 C}3_7» tienilo,pir/ dilo, pirrolilo, arilo Cg_qQ θ aralquilo comportando os núcleos arilo e aralquilo citados antes, eventualmente, um ou mais substituinte(s) escolhido(s) entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo C^_^, nitro, hidroxi, alcoxi alcanoiloxi ciano, amino, alquil (C^_^ )-amino, di-alquil )-amino, carboxilo, alquil(C^_^ )-5-

C£_4 ou carbamoílo; ou e representam, cada um, um grupo alquilo i ou e Rj e o áto.

mo de carbono adjacente formam um grupo ciclo-alqui^ 1° θ5_5*

Um aspecto preferido da presente invenção é 0 que diz respeito a compostos de fórmula geral IV na qual R2 repr£ senta um átomo de hidrogénio e R^ representa um grupo alquilo ou tienilo, preferindo-se um grupo metilo.

Um outro aspecto diz respeito a um método para inibir tumores num mamífero que consiste em administrar a um hosi pedeiro portador de um tumor uma quantidade de um composto de fórmula geral IV capaz de inibir esse tumor.

Um outro aspecto diz ainda respeito a composições farmacêuticas que contêm um composto de fórmula geral IV misturado com um veículo aceitável em farmácia.

Descrição detalhada da invenção

Os compostos de acordo com a presente invenção podem preparar-se mediante uma sequência reaccional apresentada no Esquema I em que R^ representa um grupo alquilo ou aril-alquilo e 0 termo EPIPODO representa o fragmento seguin te

-Ί

EPIPODO

H₇NOR³—-y

III

EPIPODO

NOR³

V ro

Ch e

o

DU

O s/

VII

VI ro α

(0 •O

0)1

O

IV

Como se afirmou antes as orto-quinonas de formula geral III são compostos conhecidos e podem preparar-se por oxidação dos glucosidos 4’-dimetilepipodofilotoxínicos de acordo com a técnica descrita por J. Nemec, 1986 na patente de invenção norte-americana N^s 4.609.644. A reacção de orto-quinonas de fórmula geral III com uma hidroxilamina 0—substituída ou com um seu sal de adição de ácido, no seio de um solvente orgânico inerte dá origem ao correspondente 3’-oxima-óter de fórmula geral V. Esta reacção realiza-se de prefe. rência, à temperatura ambiente durante o tempo suficiente para obter o mono-óxima-óter, por exemplo durante um período compreendido éntre cerca de 30 minutos e cerca de uma hora. Os produtos resultantes podem isolar-se e purificar-se, por exem pio, por cromatografia rápida; ou alternativamente, podem reduzir-se directamente, sem separação inicial, dando origem ao composto amínico correspondente de fórmula geral VI. A redução do óxima-óter até à obtenção do composto 3’-amínico correspondente pode realizar-se por métodos convencionais como, por exem pio, utililizando um agente redutor suave ou mediante uma hidrogenação na presentça de um catalisador apropriado como, por exemplo, platina, paládio, níquel, ruténio ou ródio. De preferência utiliza—se uma hidrogenação catalítica. Os compostas amínicos de fórmula geral VI podem também preparar-se directamente a partir de um orto-quinona de fórmula geral III mediante tratamento com amoníaco ou com uma alquilamina à temperatura ambiente; a reacção com esta última dá origem quer a aminas de fórmula geral VI quer às correspondentes aminas alquil substituídas. 0 método de preparação que se prefere

-9é a redução do óxima-éter de fórmula geral V. A diazotação dos compostos de fórmula geral VI no seio de um solvente inerte a temperaturas reduzidas seguida por reacção em meio aquoso dá origem a um sal de diazónio de fórmula geral VII.

A redução de sais de diazónio utilizando reagentes conhecidos e apropriados como por exemplo, o ácido hipofosforoso, o hidreto de boro e sódio ou um excesso-de tiofenol permite a obtenção da 3*-demetoxi-4*-demetilepipodofilotoxina de fórmula geral IV.

Actividade biológica

Avaliou-se a acção anti-tumoral do 3’-âemetoxi-etoposido face à leucémia P388 murina transplantável.

Pôr via intraperitoneal implantou-se em murganhos CDF^ fêmeas um inóculo tumoral de 10^ células ascíticas de leucémia murina P388 e trataram-se os murganhos com doses diferentes de um composto de ensaio; para cada nível posológico utilizaram-se 4 murganhos como grupo testemunha tratado com soro fisiológico utilizaram-se 10 murganhos. Os compostos administraram-se, por via intraperitoneal, no 5- e 8s dias, considerando-se o l² dia aquele em que se implantou o tumor.

A acção antitumoral exprimiu-se, em %, sob a forma de T/C que representa a razão entre o tempo médio de sobrevivência (KST) do grupo tratado com o composto em ensaio e o tempo médio de sobrevivência (KST) do grupo testemunha tratado com soro fisiológico. Considera-se que um composto que exibe um valor de T/C, em %, de 125 ou superior tem uma acção anti-tumoral

significativa no ensaio que utiliza leucémia P388. 0 ensaio decorreu durante 31 dias, ao fim dos quais se registou o nú mero de sobreviventes. No Quadro I podem observar-se os resul tados da avaliação descrita antes; só se relataram o valor má ximo de T/C em % e a dose que exibiu acção máxima.

Quadro 1. Acção anti-tumoral contra leucémia P388

Composto	Dose (mg/Kg/inj. )	T/C máx.(%)
3’-demetoxi-
-etoposido	>40	245
Etoposido	60	260

Os resultados, citados antes, provenientes dos ensaios com animais demonstram que os compostos de fórmula geral IV possuem acção inibidora contra tumores nos mamíferos. Consequentemente a presente invenção diz respeito a um método para inibir tumores nos mamíferos que consiste em administrar a um hospedeiro que exibe um tumor, uma dose eficaz de um com posto anti-tumoral de fórmula geral IV, susceptível de inibir esse tumor.

Um outro aspecto de acordo com a presente invenção diz respeito a composições farmacêuticas constituídas por uma quantidade susceptível de inibir um tumor, de um composto anti—tumoral de fórmula geral IV, e por um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Estas composições podem preparar-se sob uma forra galénica qualquer apropriada para administrar através da via pretendida. Exemplos destas composições incluem composições sólidas para administração por via oral como, por exemplo, comprimidos, cápsulas, pílulas, pós e grâ nulos; composições líquidas para administração por via oral como, por exemplo, soluções, suspensões, xaropes ou elixires e composições para administração por via parentêrica como,por exemplo, soluções, suspensões ou emulsões estéreis. Também se podem preparar sob a forma de composições sólidas estéreis que se podem, dissolver em água estéril, soro fisiológico ou outros meios injectáveis estéreis imediatamente antes da utilização.

Ós especialistas na matéria facilmente podem determinar as doses e as posologias óptimas a administrar a um mamífero. Deverá ter-se em atenção que a dose utilizada depende, rá da forma salénica da composição farmacêutica utilizada, do composto utilizado, do modo de aplicação, do sítio, do hospedeiro e da doença a tratar. Euitos factores que modificam a acção do composto devem ser tomados em consideração, incluindo a idade, o peso, o sexo, a alimentação, a duração da administração, a via de administração, a velocidade de exerção, o estado do doente, a associação com outros medicamentos, a sensibilidade à reacção e a gravidade da doença.

Os exemplos seguintes ilustram a presente invenção mas não a limitam.

Nos exemplos seguintes todas as temperaturas são for necidas em graus centígrados. Os pontos de fusão que são valores não corrigidos determinaram-se num dispositivo de Thomas-Hoover que utiliza um tubo capilar. 0 espectro de BEN re-12-

gistou-se cora um espectrofotómetro de Bruker ou com um Varian Vx2 200, utilizando DCl^ como padrão interno. Os desvios químicos estão apresentados em unidades d* e constantes concordantes em Hertz. Modelos de cisão em grupos designam-se do se. guinte modo: s, singuleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quart_e to; m, multipleto; bp, pico largo; e dd, dupleto de dupleto.

Os espectros no infra-verirelho foram determinados utilizando um aparelho Beckman Bfodel 4240 ou um Perkin-Elmer l800 Pourier Transform Infrared Spectrophotometer e estão registados em cm^_\ A cromatografia em camada fina (CCF) realizou-se sobre placas previamente revestidas com gel de sílica (60F-254) ut/ lizando luz ultra-violeta e/ou vapores de iodo como agentes de revelação. Com um espectro fotometro Kratos MS 50 e Kratos MS 25RFA registou-se o espectro de massa de alta e baixa reso. lução respectivamente. Por ‘'cromatografia rápida entende-se um método descrito por Still, W. C. et al em J. Org. Chem.,

1978, 43 : 2923 e realizou-se utilizando quer gel de sílica E. Merck (200-400 malhas) quer gel de sílica Woelm (32-63/lm). Sempre que foi necessário evaporar um solvente trabalhou-se sob pressão reduzida.

Exemplo 1

Etoposido-orto-quinona-3 ^Q-met ilóxima de fórmula

Tratou-se uma solução de 350 mg (0,611 mmole) de orto-quinona de fórmula Illa, citada antes, em 20 ml de piri. dina com uma solução de 350 mg (4,19 mmoles) de cloridrato de metoxilamina em 10 ml de piridina. Agitou-se durante 30 minutos a solução cor de laranja resultante à temperatura ambiente e evaporou-se depois a piridina no vácuo. Dissolveu-se o resíduo em 50 ml de cloreto de metileno e repartiu-se em 20 ml de água e 10 ml de ácido clorídrico N. Extraiu-se depois a camada aquosa com 25 ml de cloreto de metileno e secaram-se os extractos orgânicos reunidos sobre sulfato de magnésio. Eva porou-se o solvente no vácuo obtendo-se um óleo cor de laranja escuro. Uma cromatografia rápida sobre 14 g de gel de síli

-14ca utilizando como agente de eluição metanol a 5% ec cloreto de etileno forneceu 243 mg (rendimento 56%) do composto em epígrafe sob a forma de um. sólido cor de laranja. A trituração com éter etílico forneceu uma amostra analítica. Numa pro_ dução em larga escala geralmente não se purifica esta óxima mas hidrogena-se directamente até à obtenção de uma amina de fórmula Via, citada antes, com um rendimento total de cerca de 70%.

I.V (KBr) 3460,1775, 1670/625, 1488, 1237, 1040 cm^-1.

RMN -hí (CDC1₃)<$ 6.82 (s,lH), 6,56 (a,lH), 6,48 (d,lH), 6,07 (d,lH), 6,01 (d,lH) 5,75 (d,lH), 4,92 (d,lH),4,76 (q,lH),

4,65 (d,lH), 4,50 (dd,lH), 4,38 (dd,lH), 4,27 (d,lH), 4,22-4,17 (m,lH), 4,15 (s,3H), 3,79 (s,3H), 3,78-3,74 (m,lH), 3,63-3,58 (m,lH), 3,44 (dd,lH), 3,38-3,30 (m,3H), 2,95-2,87 (m,lH), 1,40 (d,3H).

Análise elementar calculada para ^c29^H31^NO13^:

0,57,90; H, 5,19; N,2,33;

encontrada C, 56,01; H, 5,04; N, 2,41.

Exemplo 2

3-amino-3*-demetoxi-etoposido de fórmula

Η

Dissolveu-se a óxima bruta de fórmula Va obtida a partir de 4,1 g (7,2 mmoles) de orto-quinona de fórmula Illa θ 4,1 g (49 mmoles) de cloridrato de metoxilamina pela técni ca descrita no Exemplo 1, em 275 nl de álcool e tratou-se com 290 mg de hidróxido de paládio a 20% sobre carvão e 1,6 g de paládio a 10% sobre carvão. Hidrogenou-se a mistura à pressão de 40 a 50 psi de hidrogénio. Decorridas 16 horas filtrou-se a mistura através de Celite, lavou-se com acetato de etilo e evaporou-se 0 solvente. Purificou-se 0 produto bruto por cromatografia rápida utilizando 300 g de gel de sílica E. Merck (23O-4OO malhas) e como agente de eluição uma mistura de acetato de etilo/hexano (8 : 2). Obtiveram-se 2,89 g (rendimento 70%) do composto em epígrafe sob a forma de um sólido bran co. A recristalização no etanol forneceu uma amostra analítica.

-16I.V. (KBR): 3455, 1775, 1615, 1490, 930 cm^-1.

RMN -4 (CDC1₃)<5 6,76 (s,lH), 6,48 (s,lH), 6,37 (d,lH), 5,96 (ABq,2H), 5,65 (d,lH), 4,87 (d,lH), 4,73 (q,lH), 4,61 (d,lH), 4,47 (d,lH), 4,38 (dd,lH), 4,23-4,16 (m,2H), 3,78 (s,3H), 3,76-3,72 (m,lH), 3,60-3,55 (m,lH), 3,42 (dd,lH), 3,37-3,30 (m,2H), 3,21 (dd,lH), 2,97-2,88 (m,lH), 1,37 (d,3H).

Análise elementar calculada para ^28^31^12·

0,58,63; H,5,45; N,2,44;

encontrada 0,57,85; H,5,76; N,2,35«

Exemplo 3

Sal interno do hidróxido de etoposido-3*-diazónio de fórmula

(Vila)

Sob atmosfera de azoto e com agitação à temperatura de 0°C adicionaram-se 3,0 ml (26,2 mmoles) de ácido acáti co glacial e depois 0,15 g (2,17 mmoles) de nitrito de sódio a uma solução de 0,22 g (0,384 mmole) do 3’-aminoetoposido preparado no Exemplo 2 em 17 ml de tetra-hidrofurano. Agitou-se a mistura reaccional durante 3,4 horas à temperatura de 0°C e verteu-se sobre 150 ml de cloreto de metileno. Lavou-se a camada orgânica vermelho escuro com 100 ml de uma solução aquosa de hidrogeno carbonato de sódio. Lavaram-se os extractos orgânicos reunidos com 100 ml de uma solução saturada de hidrogeno carbonato de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnó. sio é concentraram-se no vácuo obtendo-se 0,177 g (rendimento 79%) de um sólido cor de laranja avermelhado. P.F. 150°C (com decomposição lenta).

I.V. (KBr) 3440 (b), 2930, 2160, 2120, 1779 cm”¹.

RMN ¹H (CLCip^ 6,78 (s,lH), 6,73 (s,lH), 6,52 (s,lH), 5,97 (d, J=8,3Hz, 2H), 5,82 (s,lH), 4,86 (d, J=2,2Hz,lH), 4,72 (m,lH), 4,54 (d, J=7,6Hz,lH), 4,43 (t, J=9,0Hz^H), 4,35 (d, J=5,lHz,lH), 4,26 (t, J=8,3Hz,lH), 4,14 (m,lH), 3,71 (s,3H), 3,55 (t,J=9,7Hz,1H), 3,40 (t,J=8,1Hz,1H), 3,3 (bm,4H), 3,02 (m,lH), 1,35 (d, J=4,9Hz,3H).

Dissolveram-se 1,03 g (1,76 mmoles) do sal de etoposido-diazónio bruto preparado no Exemplo 3 em 100 ml de me. tanol absoluto, trataram-se com 400 mg de hidreto de boro e sódio em pó e adicionaram-se, 5 minutos depois, 5 ml de ácido acético glacial. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas, evaporou-se o solvente no vácuo, tratou-se o resíduo com 100 ml de água e extraiu-se com 2x50 ml de cloreto de metileno. Lavaram-se os extractos reunidos com 25 ml de uma solução aquosa saturada de hidrogeno carbonato de sódio e 75 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Uma evaporação rotativa seguida de uma cromatografia rápida sobre 32 g de gel de sílica e

-19utilizando como agente de eluição uma mistura contendo 3 a 4% de metanol em cloreto de metileno forneceram 400 mg (rendimen to 41%) do composto em epigrafe sob a forma de um sólido incolor.

P.F. 19O°-195°C.

I.V. (KBr) 3455, 1775, 1515, 1485, 1388, 1170, 1090, 1075, 1035, 1005, 933, 700 cm^-1.

RMN -4 (CDCl₃)e£ 6,99 (d, IH, J=l_; 7Hz), 6,79 (s, IH), 6,65 (d,lH,J=8,2Hz), 6,51 (s, IH), 6,01 (dd,lH,J=l,7 e'8,2Hz),

5,96 (d,2H), 5,50 (s, IH), 4,87 (d, IH, J=3,4Hz ), 4,73 (q,lH,J=5Hz), 4,64 (d,lH, J=7, 6Hz ), 4,57 (d, IH, J=5, 2Hz ), 4,39 (dd,lH), 4,21-4,13 (m,2H), 3,85 (s,3H), 3,71 (dd,lH), 3,56 (dd,lH), 3,43 (w,lH), 3,33-3,30 (m,2H), 3,23 (dd,lH,J=5,2 e 14,1Hz), 2,91-2,82 (m,lH), 2,66 (br s, IH), 2,39 (br s,

IH), 1,37 (d,3H,J=5Hz).

Análise elementar calculada para 828^30^12^:

C, 60,21; H, 5,41;

encontrada C, 59,45; H, 5,57.

Exemplo 5

Repetem-se as técnicas descritas nos Exemplos 1 a 4 excepto que em vez de orto-quinonas se utiliza epipodofilotoxina-glucosido-orto-quinonas em que R^ e R2 representam um dos grupos apresentados na lista seguinte, para se obterem os correspondentes derivados 3*-demetoxi.

-20Cr

Η¹

2-tienilo	H
2-furilo	H
ciclohexilo	H
fenilo	H
benzilo	H
4-metilfenilo	H
3-metoxifenilo	H
4-hidroxifenilo	H
4-(N,N-dimetilfenil)	H
2-clorofenilo	H
metilo	metilo
etilo	metilo

^+¾ = (ch₂)₄= (ch₂)₅

-21tf

Claims

Reivindicações

1.- Processo para a preoaracão de ccroostos de fõrnula aeral na qual

Rj representa uin ãtomo de hidrogénio e

R^ representa um grupo alquilo alcenilo

C₂_iq, cicloalquilo · ^^uriI°» tienilo, piridilo, pirrolilo, arilo ^cg_j₀ ^e aralquilo ^C7-14’ comportando os núcleos arilo e aralquilo citados antes, eventualmente, um ou mais substituinte (s) escolhido(s) entre ãtomos de halogéneo ou grupos alquilo C^_₄, nitro, hidroxi, alcoxi C₁_₄, alcanoiloxi C.^, ciano, amino, alquil (C^)-amino, di-alquil<Cj_₄)-amino, carboxilo, alquil (Cj_₄)-tio, mercapto, alcenoil (C₂_₄)-amino,alcenilo C_ . ou carbamoílo; ou R. e R~ representam,’
2-4 l a cada um, um grupo alquilo ^{ou r}j ^{e R}2 ^e ° átomo de carbono adjacente formam um grupo cicloalquilo ^C5_g, caracterizado pelo facto (a) de se fazer reagir um composto de fórmula geral na qual

R^e R₂ têm o significado definido antes, com uma hidroxilamina O-substituída de fórmula geral h₂nor₃ na qual representa um grupo alquilo C^_g, fenilo ou fenil-alquilo ou com um seu sal de adição de ãcido, para se obter um composto oximlnico de formula geral na qual

R^, R₂ e R₃ têm o significado definido antes;

(fa) de se hidrogenar um composto de fórmula geral V na presença de um catalisador para se obter um composto aminado de fórmula geral na qual

R^ e R₂ têm o significado definido antes;

(c) de se fazer reagir um composto de fõrmula geral VI com um nitrito na pres;nça de um ãcido para se obter um sal interno de hidróxido de diazónio de um composto de fórmula geral na qual r^ e R₂ têm o significado definido antes; e (d) de se reduzir o sal de diazónio de fõrmula geral VII.

2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral IV na qual R₂ representa um ãtomo de hidrogénio e representa um grupo metilo ou 2-tienilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral IV na qual R^ representa um grupo metilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

-254.- Processo para a.preparação de composições farmacêuticas com acção anti-tumoral, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade efectiva de um composto de fórmula geral

IV, preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1, como ingrediente activo, com um veículo aceitável em farmácia.

Lisboa, 30

O Àccníc Ofic.;

de Agosto de 1988 ic ; no esfrie·’