PT3013799T - N-(4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-fenil-benzenossulfonamidas e n-(4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-(2-piridil)benzenossulfonamidas e a sua utilização terapêutica - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO N—(4—HIDROXI—4—METIL—CICLOHEXIL)-4-FENIL-BENZENOSSULFONAMIDAS E N- (4-HIDROXI-4-METIL-CICLOHEXIL)-

4—(2—PIRIDIL)BENZENOSSULFONAMIDAS E A SUA UTILIZAÇÃO

TERAPÊUTICA

CAMPO DA TÉCNICA A presente invenção refere-se geralmente ao campo dos compostos terapêuticos. Mais especificamente a presente invenção refere-se a determinados compostos de N-(4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-fenil-benzenossulfonamida e N- (4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(2- piridil)benzenossulfonamida (coletivamente referidos no presente documento como compostos HMC) que são úteis, por exemplo, no tratamento de distúrbios (por exemplo, doenças) incluindo, inflamação e/ou destruição das articulações e/ou perda óssea; distúrbios mediados por ativação excessiva e/ou inadequada e/ou prolongada do sistema imune; distúrbios inflamatórios e autoimunes, por exemplo, artrite reumatoide; psoríase; artrite psoriásica; doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD); asma; aterosclerose; doença inflamatória do intestino; espondilite anquilosante; esclerose múltipla; lúpus eritematoso sistémico; sindrome de Sjõgren; um distúrbio associado com perda óssea, tal como perda óssea associada com atividade osteoclástica excessiva na artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, ou doença de Paget; cancro, tal como uma malignidade hematológica, tal como um mieloma múltiplo, leucemia, ou linfoma, ou um cancro tumoral sólido, tal como cancro da bexiga, cancro da mama (feminino e/ou masculino), cancro do cólon, carcinoma de células renais, cancro renal, cancro pulmonar, cancro pancreático, cancro gástrico, cancro da próstata, cancro cerebral, cancro da pele, cancro da tiroide, ameloblastoma de células basais, ou melanoma; um distúrbio associado com fibrose, tal como esclerose sistémica ou escleroderma; ou uma vasculite rara, tais como doença de Behçet. A presente invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, e à utilização de tais compostos e composições, por exemplo, em terapêutica.

ANTECEDENTES São citadas uma série de publicações são citadas no presente documento de modo a descrever de forma mais completa e divulgar a invenção e o estado da técnica ao qual a invenção se refere. Cada uma destas publicações é incorporada no presente documento por referência na sua totalidade na presente divulgação, na mesma medida em que se cada publicação fosse especificamente e individualmente indicada como sendo incorporada por referência.

Ao longo desta memória descritiva, incluindo as reivindicações que se seguem, a menos que o contexto exija o contrário, a palavra "compreender", e variações tais como "compreende" e "compreendendo", serão entendidas como implicando a inclusão de um número inteiro indicado ou etapa ou grupo de números inteiros ou etapas mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou etapa ou grupo de números inteiros ou etapas.

Deve ser notado que, conforme utilizado na memória descritiva e nas reivindicações em anexo, as formas singulares "um", "um", e "o/a" incluem os respetivos plurais a menos que o contexto claramente dite o contrário. Consequentemente, por exemplo, referência a "um portador farmacêutico" inclui misturas de dois ou mais tais portadores, e semelhantes.

Os intervalos são frequentemente expressos no presente documento como desde "cerca" de um valor particular, e/ou até "cerca" de outro valor particular. Quando um tal intervalo é expresso, outra forma de realização inclui a partir do valor particular e/ou até ao outro valor particular. De forma semelhante, quando os valores são expressos como aproximações, através da utilização do antecedente "cerca", será entendido que o valor particular forma outra forma de realização.

Esta divulgação inclui informação que pode ser útil na compreensão da presente invenção. Não constitui uma admissão de que qualquer da informação proporcionada no presente documento seja técnica anterior ou relevante para a invenção presentemente reivindicada, ou de que qualquer publicação especificamente ou implicitamente referida seja técnica anterior.

Doença Inflamatória Crónica A inflamação é a resposta imune dos tecidos devida a lesão corporal. A inflamação aguda é uma resposta protetora normal que protege e cura o organismo após lesão fisica ou infeção, caracterizada por calor, inchaço, e vermelhidão no local da lesão. Contudo, se a inflamação persistir durante um período prolongado, torna-se crónica. A inflamação crónica é um marco de, e um fator contribuinte para, um intervalo de condições de doença incluindo artrite reumatoide, doença inflamatória do intestino, lúpus eritematoso sistémico, esclerose múltipla e psoríase. 0 processo inflamatório é complexo e envolve uma cascata biológica de sinais moleculares e celulares que alteram as respostas fisiológicas. No local da lesão, as células libertam sinais moleculares tais como citocinas e interleucinas que causam uma"série de alterações na área afetada incluindo dilatação dos vasos sanguíneos, pressão sanguínea aumentada, permeabilidade vascular aumentada, invasão por leucócitos (glóbulos brancos), e exsudação de fluidos contendo proteínas como imunoglobulinas (anticorpos). Vários tipos diferentes de leucócitos, incluindo granulócitos, monócitos, e linfócitos, estão envolvidos na cascata inflamatória. Contudo, a inflamação crónica é primariamente mediada por monócitos e macrófagos de longa vida; os monócitos maturam em macrófagos após abandonarem a corrente sanguínea e entrarem nos tecidos. Os macrófagos envolvem e digerem os microrganismos, invasores estranhos, e células senescentes e os macrófagos libertam vários mediadores químicos diferentes, incluindo Fator de Necrose Tumoral alfa (TNFa), interleucinas (por exemplo, IL-1, IL-6, IL-12 e IL-23) e prostaglandinas que perpetuam a resposta inflamatória. Em estádios posteriores, outras células, incluindo linfócitos, invadem os tecidos afetados.

Existe como tal uma patologia comum subjacente a uma ampla variedade de condições inflamatórias crónicas.

Adicionalmente, são também observadas caracteristicas de inflamação crónica noutras doenças incluindo cancro e doenças metabólicas tais como obesidade e diabetes.

Uma das condições inflamatórias crónicas mais comuns é a artrite reumatoide (RA), uma condição que afeta até 2% da população mundial. Embora seja uma doença complexa, existem uma série de fatores fisiológicos, celulares, e bioquímicos associados com a progressão da RA que são comuns a uma gama de outras doenças, incluindo aquelas com um componente de autoimunidade (por exemplo, esclerose múltipla, inflamação (por exemplo, aterosclerose e cancro), perda óssea (por exemplo, osteoporose) e proliferação (por exemplo malignidades hematológicas). Isto torna o entendimento da RA importante não só pelo estudo de uma gama muito mais ampla de doenças, mas também sugere que os agentes farmacêuticos que funcionam por meio da modificação destes processos comuns podem ter utilidade mais além da RA. Este último é suportado pela prática clínica onde fármacos para RA foram mostrados como tendo ampla utilizada ao longo de uma variedade de outras condições. Artrite Reumatoide e Doenças Autoimunes/Inflamatórias Relacionadas A artrite reumatoide (RA) é um distúrbio autoimune caracterizado por inflamação crónica no revestimento sinovial de várias articulações acoplado a degradação progressiva das articulações, a RA afecta comumente as articulações do pulso e mãos e pode também afetar os cotovelos, ombros, ancas, pescoço e joelhos levando a dor grave e incapacidade (veja-se, por exemplo, Scott et al., 2010) . A Organização Mundial de Saúde prevê que 23,7 milhões de pessoas sofrem de RA, com aumento da incidência devido à associação entre a condição e o aumento da idade. A causa exata da RA, tal como para todos os distúrbios autoimunes, permanece pouco clara, embora possíveis desencadeantes incluam auto-tolerância reduzida, uma reposta anormal a fatores ambientais, agentes infeciosos, e estímulos hormonais (veja-se, por exemplo, Klareskog et al., 2006; Firestein et al., 2005).

Ao nível celular, o desenvolvimento da RA começa habitualmente com as células T infiltrando a membrana sinovial revestindo a articulação afetada; isto leva então à ativação de monócitos, macrófagos e fibroblastos sinoviais por meio de contacto célula-célula e a subsequente libertação de várias citocinas, incluindo o fator de necrose tumoral alfa (TNFa) e interleucinas pró-inflamatórias tais como IL-1, IL-6, IL-12 e IL-23 (veja-se, por exemplo, Astry et al., 2011) . Estas citocinas pró-inflamatórias são então fundamentais para orquestrar várias cascadas de transdução de sinal complexas, incluindo a NFkB, Fator de Regulação de Interferão (IRF), recetor de tipo Toll (TLR), e vias Jak/STAT (veja-se, por exemplo, Malemud et al., 2010) que levam à indução de genes codificando para vários produtos que propagam a resposta inflamatória e também promovem a destruição dos tecidos. Estes produtos incluem enzimas de degradação de tecidos tais como colagenases, metaloproteinases de matriz (MMPs), catepsinas, e outros fatores pró-inflamatórios tais como selectinas, integrinas, leucotrienos, prostaglandinas, quimiocinas, e outras citocinas (veja-se, por exemplo, Mclnnes et al., 2007;

Smolen et al., 2003). Adicionalmente, estas células também aumentam a produção de MMPs, levando à degradação da matriz extracelular e perda de cartilagem dentro da articulação (veja-se, por exemplo, Sun, 2010), um processo que também envolve uma classe especializada de células conhecidas como osteoclastos e um fator conhecido como Ativador do Recetor do Ligando Capa-B de Fator Nuclear (RANKL) (veja-se, por exemplo, Takayanagi, 2009) . RAN KL é um fator essencial para a geração de osteoclastos, e a produção regulada positivamente de RANKL leva ao aumento da diferenciação de osteoclastos e finalmente à destruição óssea (veja-se, por exemplo, Long et al., 2012) . A resposta inflamatória na RA leva a acumulação de linfócitos, células dendriticas, e macrófagos, todos operando localmente para produzir citocinas e outros mediadores pró-inflamatórios tais como TNFa e IL-6 que potenciam adicionalmente os efeitos de RANKL sobre a destruição óssea. Adicionalmente, a cascata inflamatória leva à hiperplasia dos sinoviócitos (veja-se, por exemplo, Takayanagi, 2009), que por sua vez leva ao espessamento e vascularização do sinóvio num tecido destrutivo e agressivo conhecido como um pannus. O pannus contém tanto osteoclastos, que destroem o osso, como metaloproteinases, que estão envolvidas na destruição da cartilagem. Como tal, o eixo de RANLK é essencial para a progressão e patologia da RA bem como para o sistema osteoimune (a interação entre os sistemas imune e ósseo), que é central para a patologia de uma série de diferentes condições de doença, descritas abaixo.

0 Papel de TNFa na RA A superfamilia TNF de recetores e ligandos desempenha um papel chave no causamento de inflamação e perda óssea local e sistémica associada. TNFa é um agente pró-inflamatório potente que regula várias facetas da função dos macrófagos. É rapidamente libertado após o trauma, infeção, ou exposição a LPS derivados de bactérias e foi mostrado como sendo um dos mediadores precoces mais abundantes no tecido inflamado. Entre as suas várias funções está o seu papel central de orquestrar a produção de uma cascata de citocinas pró-inflamatórias. Para além de citocinas pró-inflamatórias, TNFa também aumenta mediadores de transdução de sinal lipídico tais como prostaglandinas. Com base nestes papéis, TNFa foi proposto como atuador central na ativação e recrutamento de células inflamatórias e é sugerido como desempenhando um papel critico no desenvolvimento de várias doenças inflamatórias crónicas incluindo artrite reumatoide (veja-se, por exemplo, Liu, 2005; Feldmann et al., 2001; Brennan et al., 1996; Brennan et al., 1992). A importância de TNFa na RA é destacado pela constatação de que os anticorpos bloqueando TNFa podem prevenir a inflamação em modelos animais de RA, e que a terapêutica anti-TNFa é atualmente o tratamento mais eficaz para a RA (veja-se, por exemplo, Pisetsky, 2012, e detalhes adicionais proporcionados abaixo). 0 próprio TNFa instiga uma cascata de sinalização que leva à ativação dos fatores de transcrição NFkB e AP-1 (veja-se, por exemplo, Parameswaran et al., 2010). A ligação de TNFa e IL-1 aos seus respetivos recetores leva ao recrutamento de transdutores de sinal a jusante denominados TRAFs. São recrutadas quinases adicionais por parte dos TRAFs, e o complexo de quinases resultante ativa a via da MAP-quinase, finalmente levando à ativação de AP-1, e à fosforilação da IkB quinase. IkB é o inibidor de NFkB, que atua prevenindo a translocação de NFkB para o núcleo. A fosforilação de IkB por IkB quinase leva à degradação de IkB. Após IkB ter sido degradado, NFkB migra para o núcleo, onde promove a transcrição de genes anti-apoptóticos, que promovem a sobrevivência das células B e T, como tal prolongando a resposta imune. Este prolongamento da resposta inflamatória é fundamental para a natureza crónica da RA. A importância da ativação de NFkB é demonstrada pelo facto de que a inibição da atividade de NFkB por péptidos inibitórios pode prevenir a artrite em modelos animais de RA (veja-se, por exemplo, Jimi et al., 2004).

Outros Fatores Chave na Artrite Reumatoide

Conforme descrito anteriormente, uma série de fatores para além de TNFa e NFkB atuam para promover a inflamação na RA e noutras doenças inflamatórias crónicas. Entre estes estão IL-6 e os Fatores Regulatórios do Interferão (IRFs) . A Interleucina-6 (IL-6) é uma citocina pró-inflamatória cujos níveis são aumentados após a ativação de várias células do sistema imune durante a inflamação na RA, predominantemente macrófagos e células T. Tem efeitos pleiotrópicos na doença por meio do seu papel chave na resposta de fase aguda e está significativamente envolvida na gestão da transição de inflamação aguda a crónica. Realiza isto modificando a composição do infiltrado de glóbulos brancos no espaço inflamatório, movendo-o de neutrófilos a monócitos/macrófagos (veja-se, por exemplo, Gabay, 2006) . Adicionalmente, IL-6 exerce efeitos estimulatórios sobre as células T e B, consequentemente favorecendo respostas inflamatórias crónicas, bem como sobre os osteoclastos, consequentemente promovendo a renovação do osso. Estes efeitos estão envolvidos na patologia de uma ampla gama de doenças autoimunes/inflamatórias para além de RA, incluindo lúpus eritematoso sistémico, aterosclerose, psoriase, artrite psoriásica, asma, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), sindrome de Sjõgren, aterosclerose, e doença intestinal inflamatória, bem como em cancros tais como mieloma múltiplo e cancro da próstata.

Adicionalmente, IL-6 foi implicada em doenças envolvendo perda óssea (por exemplo, osteoporose), doenças mediadas por fibrose (por exemplo, esclerose sistémica), diabetes, rejeição de transplantes, vários cancros (incluindo por exemplo, mieloma múltiplo, linfoma, cancro da próstata) , doenças neurodegenerativas (por exemplo, doença de Alzheimer), distúrbios psiquiátricos (por exemplo, depressão),e determinadas vasculites raras (por exemplo, doença de Behçet). Para uma revisão completa, veja-se, por exemplo, Rincon, 2012.

Os fatores regulatórios do interferão consistem numa família de fatores de transcrição com várias funções na regulação transcricional de respostas celulares na saúde e doenças. Os IRFs contêm comumente um domínio de ligação a ADN no terminal N, com a maioria dos membros contendo também um domínio C-terminal associado a IRF que medeia as interações proteína-proteína. Foram identificados dez IRFs e vários homólogos de IRF codificados por vírus em mamíferos. Os IRFs são ativados em resposta a estímulos endógenos e microbianos durante uma resposta imune, e modulam seletivamente e cooperativamente a expressão de citocinas e fatores de transcrição chave envolvidos numa variedade de processos inflamatórios. Por exemplo, a estimulação do recetor para o lipopolissacarídeo bacteriano, TLR-4 ativa uma cascata de sinalização que ativa tanto NFkB como IRF-5, enquanto IRF-7 é ativado por um processo envolvendo a família STAT de fatores de transcrição, que são também, mas independentemente, ativados por IL-6. A ativação dos IRFs leva a uma série de efeitos a jusante incluindo a especificação do destino dos macrófagos (veja-se, por exemplo, Krausgruber et al., 2011), diferenciação de células T auxiliares (veja-se, por exemplo, Zhang et al., 2012) e proliferação de células B (veja-se, por exemplo, Minamino et al., 2012). Estes diversos papéis na doença que são delineados por dados a partir de modelos de inativação de animais que mostram, por exemplo, níveis reduzidos de IL-6 e TNFa em resposta a estímulos inflamatórios (veja-se, por exemplo, Takaoka et al., 2005).

Para além dos papéis biológicos dos IRFs descritos acima, vários membros da família dos IRFs foram geneticamente associados com predisposição a condições inflamatórias. Por exemplo, os polimorfismos em IRF-3 e IRF-7 são associados com suscetibilidade a lúpus eritematoso sistémico (veja-se, por exemplo, Akahoshi et al., 2008; Fu et al., 2011). Adicionalmente, IRF-5, que controla o destino dos macrófagos, está associado com a suscetibilidade à RA, lúpus eritematoso sistémico, Granulomatose de Wegener, sindrome de Sjõgren, e esclerose sistémica (veja-se, por exemplo, Sharif et al., 2012; Hu et al., 2011) .

Tratamento da Artrite Reumatoide

As terapêuticas precoces para RA foram focadas no controlo dos sintomas da doença, principalmente através de redução da inflamação, em vez de atraso da progressão da doença. Estes fármacos incluíram AINEs tais como aspirina, diclofenaco, e naproxeno. A inflamação foi adicionalmente controlada por glucocorticoides, e a sua combinação com AINEs proporcionou controlo a curto prazo razoavelmente eficaz da inflamação. Mais recentemente, foi introduzida uma abordagem mais agressiva do tratamento de RA iniciando no início da doença, utilizando os denominados fármacos anti-reumáticos de modificação da doença (DMARDs), que atuam para abrandar ou inclusive prevenir a progressão da doença. Estes incluem uma série de fármacos mais antigos, incluindo sais de ouro; sulfasalazina; antimaláricos tais como hidroxicloroquina; D-penicilamina; imunossupressores tais como ácido micofenólico, azatioprina, ciclosporina A, tacrolimo e sirolimo; minociclina; leflunomida; e de forma mais importante, metotrexato (veja-se, por exemplo, Smolen et al., 2003). O metotrexato é atualmente a terapêutica padrão de ouro para comparações de ensaio clínico, e é geralmente utilizado em combinação com terapêuticas mais recentes. É eficaz na maioria dos pacientes mas, em comum com todos os agentes acima, tem efeitos gastrointestinais significativos, gue levam a gue aproximadamente 50% dos pacientes tenham que interromper o tratamento (veja-se, por exemplo, Mount et al., 2005). Uma desvantagem adicional destes DMARDs mais antigos é a quantidade de tempo necessária para que o fármaco comece a atuar, variando desde semanas com metotrexato, até meses com sais de ouro. Enquanto somente ocorrem remissões completas em cerca de um quarto dos pacientes, para aqueles não mostrando qualquer efeito não é geralmente possível parar a terapêutica sem sofrer o risco de uma recaída mais violenta da doença (veja-se, por exemplo, Smolen et al., 2003).

Em anos recentes, o tratamento de RA tem sido revolucionado pela aparição de agentes biológicos que visam vias inflamatórias específicas. Encontram-se aprovados vários agentes biológicos para utilização em RA incluindo agentes biológico anti-IL-6 e IL-1 tais como tocilizumab (Actemra®) e anakinra (Kineret®) (veja-se, por exemplo, Scott et al., 2010) . Contudo, o primeiro e mais importante dos agentes biológicos são as terapêuticas anti-fator de necrose tumoral (anti-TNF) .

As terapêuticas anti-TNFa são o tratamento líder no mercado para a RA. Encontram-se disponíveis uma variedade de agentes anti-TNFa incluindo anticorpos neutralizantes tais como infliximab (Remicade®; J&J and Schering Plough) e adalimumab (Humira®; Abbott), ou recetores-chamariz tais como etanercept (Enbrel®; Amgen and Wyeth), dos quais ambos representam tratamentos validados e altamente eficazes para RA bem como outras doenças tais como doença de Crohn e psoríase. Estão também a ser investigadas uma série de outras doenças inflamatórias e autoimunes como potenciais alvos. Outras abordagens ao bloqueamento da ação de TNFa incluem o fragmento anti-TNFa peguilado certolizumab (Cimzia®, UCB). Todas estas terapêuticas atuam, em última análise, para prevenir a ativação dos efetores a jusante de TNFa descritos acima, incluindo NFkB. Contudo, apesar do seu sucesso comercial, as terapêuticas anti-TNFa sofrem de uma série de efeitos secundários incluindo risco aumentado de determinadas malignidades tais como linfoma e infeções sérias tais como Legionella e Listeria, bem como risco aumentado de insuficiência cardíaca, reativação de Hepatite B, e doença desmielinizante.

Finalmente, e mais recentemente, um inibidor de JAK quinase, tofacitinib (Xeljanz®, Pfizer) suplementou a gama de tratamentos de RA. Contudo, o tofacitinib sofre de uma série de problemas de segurança incluindo risco aumentado de infeções sérias bem como risco aumentado de perfurações gastrointestinais, dano hepático, e determinados cancros, que são suscetíveis de limitar a sua utilização no ser humano (veja-se, por exemplo, O'Shea et al., 2013).

Como tal, permanece uma necessidade de terapêuticas novas e melhoradas para a RA e outras doenças inflamatórias com um foco particular em segurança melhorada. O Sistema Osteoimune e Distúrbios Ósseos O sistema osteoimune é o termo para a interação combinada e relacionada entre o sistema imune e o sistema esquelético.

Sob condições fisiológicas normais, o sistema esquelético proporciona suporte, mobilidade, proteção aos órgãos vitais, e um reservatório mineral para cálcio e fosfato. De modo a alcançar e adaptar-se a estas funções, o esqueleto existe num equilíbrio dinâmico caracterizado por reabsorção óssea mediada por osteoclastos e deposição óssea mediada por osteoblastos continuas (veja-se, por exemplo, Karsenty et al., 2002). Este processo biológico foi denominado "remodelação" óssea e ocorre de forma acoplada com a produção por parte dos osteoblastos dos fatores de diferenciação chave dos osteoclastos, incluindo RANKL, descrito acima, e a promoção por parte dos osteoclastos da formação óssea através da produção de mediadores osteoblásticos à medida que estes degradam o osso.

As células imunes tanto inatas como adaptativas exercem efeitos sobre os osteoclastos e osteoblastos através de uma variedade de mediadores de superfície celular e mediadores segregados (veja-se, por exemplo, Takayanagi, 2009) . A ativação do recetor de RANKL (RANK) sobre os precursores dos osteoclastos começa numa cascata de alterações transcricionais que resulta na formação de osteoclastos e na expressão da maquinaria necessária para a reabsorção óssea incluindo moléculas necessárias para adesão ao osso, secreção de ácidos, e proteólise. Muitos dos fatores de transcrição importantes para a diferenciação dos osteoclastos são reguladores chave das respostas imunes, tais como NFkB e fator nuclear de células T cl ativadas (NFATcl) e este processo é também potenciado por fatores envolvidos na inflamação t TNFa e IL-6.

Para além do seu papel crítico na progressão e patogénese de RA, o sistema osteoimune desempenha um papel crítico numa série de outras doenças incluindo osteoporose e outros distúrbios ósseos e cancro (veja-se, por exemplo, Dallas et al., 2011). A osteoporose é uma doença comum caracterizada por densidade óssea reduzida, deterioração do tecido ósseo, e um risco aumentado de fratura. Vários fatores contribuem para a patogénese da osteoporose incluindo dieta pobre, falta de exercício, fumar, e ingestão excessiva de álcool. A osteoporose também surge em associação com doenças inflamatórias tais como artrite reumatoide, doenças endócrinas tais como tirotoxicose, e com determinados tratamentos com fármacos tais como tratamento com glucocorticoides. Com efeito, as fraturas de fragilidade associada com osteoporose representam uma das complicações mais importantes que podem ocorrer em pacientes com doenças reumáticas tais como RA, lúpus eritematoso sistémico, e espondilite anquilosante. A doença de Paget dos ossos é uma condição comum de causa desconhecida, caracterizada por renovação óssea aumentada e remodelação óssea desorganizada, com áreas de atividade osteoclástica e osteoblástica aumentada. Embora um osso de Paget seja frequentemente mais denso do que o normal, a arquitetura anormal causa que o osso seja mecanicamente frágil, resultando em deformidade dos ossos e aumento da suscetibilidade a fratura patológica. A sinalização por IL-6, TNFa, e RANKL foram mostradas como desempenhando um papel principal no excesso de atividade dos osteoclastos e um consequente aumento da perda óssea (veja-se, por exemplo, Tanaka et al., 2003; Roodman, 2006) . A utilização de fármacos que afetam estas vias foi validada pela conclusão de ensaios clínicos do anticorpo monoclonal contra RANKL, AMG-162 (Denosumab®, Amgen), para o tratamento de osteoporose/mieloma múltiplo, bem como por um conjunto de evidências que mostram que as terapêuticas anti-TNFcx e anti-IL-6 também previnem a perda óssea em doenças artríticas (veja-se, por exemplo, Ogata et al., 2012; Billau, 2010). 0 Sistema Osteolmune e o Cancro Vários tipos de cancro afetam os ossos. A doença óssea associada com o cancro pode ser manifestada pela ocorrência de hipercalcemia ou pelo desenvolvimento de metástases osteolíticas e/ou osteoscleróticas. A reabsorção óssea osteoclástica aumentada desempenha um papel chave na patogénese de ambas condições. Enquanto praticamente qualquer cancro pode ser complicado por metástases ósseas, as fontes mais comuns são mieloma múltiplo, carcinoma da mama, e carcinoma da próstata. Os tumores mais comuns associados com hipercalcemia são mieloma múltiplo, carcinoma da mama, e carcinoma do pulmão.

Conforme descrito anteriormente, a sinalização de RANK/RANKL é essencial para a formação de osteoclastos e reabsorção óssea que ocorre durante a remodelação esquelética. Enquanto os níveis fisiológicos de sinalização de RANK/RANKL estimulam a proliferação e sobrevivência celular das células epiteliais da mama, a sinalização de RANK/RANKL aberrante nestes tecidos foi recentemente mostrada como influenciando o início e a progressão da tumorigénese da mama e o bloqueamento da sinalização de RANKL utilizando denosumab (Xgeva®, Amgen) foi mostrado como sendo eficaz na prevenção das complicações secundárias das metástases ósseas, tais como fratura patológica, e hipercalcelmia em pacientes com cancro da mama (veja-se, por exemplo, Steger et al., 2011) .

As terapêuticas que bloqueiam a sinalização de RANK/RANKL podem também reduzir a capacidade dos cancros osteotrópicos de metastizarem para o osso. A sinalização através de RANK sobre a superfície das células tumorais epiteliais humanas bem como células de melanoma foi mostrada como induzindo uma resposta quimiotáctica nestas células tumorais enquanto num modelo de ratinho de metástase de melanoma, o tratamento terapêutico de ratinhos com osteoprotegrina, que neutraliza o recetor de RANKL, RANK, reduziu significativamente a carga tumoral dentro dos ossos mas não noutros órgãos.

Para além de um papel para RANKL no cancro, existe evidência em aumento de que a ativação de NFkB por meio de moléculas tais como TNFa pode desempenhar um papel principal na promoção e progressão tanto de malignidades hematológicas, tais como mieloma e linfomas, como de tumores sólidos, tais como cancro da mama, próstata, e pulão (veja-se, por exemplo, Baud et al., 2009). Existe também conhecimento crescente do papel e importância da inflamação e do sistema osteoimune no cancro e no desenvolvimento de resistência a radioterapêutica e a agentes quimioterapêuticos. Adicionalmente, foi sugerido que a inflamação é de facto um dos principais marcos do cancro (veja-se, por exemplo, Mantovani, 2009). A melhoria da eficácia dos tratamentos anti-cancro através da prevenção da ativação de NFkB é como tal uma estratégia prometedora para aumentar os regimes terapêuticos existentes e encontra-se atualmente sob investigação, mais notavelmente para o tratamento do mieloma múltiplo.

Os defeitos das vias apoptóticas normais estão também implicados no desenvolvimento e progressão do crescimento celular tumoral bem como na inflamação. A apoptose (morte celular programada) desempenha um papel chave na remoção de células anormais; os defeitos nas cascatas de sinalização, que levariam normalmente à sua indução, desempenham um papel chave na oncogénese. A radioterapêutica e muitos agentes terapêuticos atuam causando dano celular, que induziria normalmente a apoptose; os defeitos na via irão como tal reduzir também a eficácia de tais agentes. As moléculas efetoras mais importantes na via de sinalização levando à apoptose são conhecidas como as caspases, que podem ser desencadeadas por uma série de estímulos, incluindo ligação de TNFa ao seu recetor. Foram encontrada mutações os genes que codificam para as caspases numa série de tipos de tumor, incluindo cancros gástrico, da mama, de células renais, e do colo do útero bem como comumente em linfoma linfoblástico de células T e ameloblastomas de células basais (veja-se, por exemplo, Philchenkov et al., 2004). Compostos que ativam as caspases, e consequentemente sensibilizam as células à apoptose, seriam altamente eficazes como terapêuticas de cancro quer como agentes únicos ou potenciando a eficácia de quimioterapêutica e radioterapêutica contra o cancro existente.

Os Agentes que Previnem a Inflamação Interrompem o Sistema Osteoimune

Os inventores identificaram novos compostos que, por exemplo, previnem a inflamação e/ou perda óssea, e consequentemente podem ser utilizados no tratamento de doenças com um componentes inflamatório ou autoimune, incluindo, por exemplo, artrite reumatoide, doença inflamatória do intestino, lúpus eritematoso sistémico, aterosclerose, asma, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), uveite, doença inflamatória pélvica, endometriose, psoríase e artrite psoriásica; doenças que envolvem perda óssea, incluindo, por exemplo, perda óssea associada com artrite reumatoide, osteoporose, doença de Paget dos ossos, e mieloma múltiplo; bem como cancro associado com a ativação de NFkB, com sinalização de NFkB aberrante, ou com inflamação ou sobreprodução de IL-6, incluindo malignidades hematológicas tais como mieloma múltiplo, leucemia, linfoma linfoblástico de células T, e outros linfomas (por exemplo, linfoma não Hodgkin) e tumores sólidos tais como cancro da bexiga, cancro da mama (feminino e/ou masculino), cancro do cólon, cancro renal, cancro pulmonar, cancro pancreático, cancro da próstata, cancro cerebral, cancro da pele, cancro da tiroide, e melanoma; cancro associado com a inativação ou comprometimento da morte celular mediada por caspases, tal como cancro gástrico, cancro da mama, cancro renal, cancro do colo do útero, e ameloblastomas das células basais; condições associadas com atividade modulada de IRF-5 incluindo granulomatose de Wegener e esclerose sistémica; fibrose associada com sobreprodução de IL-6, tal como esclerose sistémica ou escleroderma; doenças neurodegenerativas associadas com a sobreprodução de IL- 6, tais como doença de Alzheimer; distúrbios psiquiátricos também associados com a sobreprodução de IL-6, tais como depressão; doenças de angiogénese associadas com a sobreprodução de IL-6 tais como degeneração macular relacionada com a idade e retinopatia diabética, hiperplasias associadas com IL-6 tais como doença de Castleman e determinadas vasculites raras associadas com a sobreprodução de IL-6, tais como doença de Behçet.

Sem desejar estar ligado por qualquer teoria particular, os inventores acreditam que esta ação possa ser por meio de um mecanismo que envolve o bloqueamento de TNFa, e/ou sinalização de RANKL e/ou atividade de IRF e/ou inibição da produção de IL-6.

Compostos Conhecidos

Wang et al., 2010, descreve determinados compostos que aparentemente são agonistas totais do recetor D3 de dopamina de afinidade elevada e seletivos. Exemplos de compostos mostrados no mesmo incluem os seguintes (veja-se, por exemplo, páginas 18-19 e 48-50 no mesmo):

Chen et al., 2012 descreve compostos semelhantes.

Tsutsumi et al., 2005, descreve determinados compostos que aparentemente mostram atividade inibitória de DPP-IV e aparentemente são úteis no tratamento de diabetes de tipo II e obesidade. O seguinte composto é mostrado como Exemplo 89 na página 192 no mesmo:

Hadida et al., 2007 descreve determinados compostos que alegadamente são úteis como moduladores dos transportadores de cassete de ligação a ATP ("ABC") ou fragmentos dos mesmos, incluindo o Regulador da Condutância Transmembranas da Fibrose Quistica ("CFTR") . O seguinte composto é mostrado como Exemplo 208 na página 77 no mesmo:

Ralston et al., 2005, descreve determinadas amidas bifenil-4-sulfónicas para utilização: para inibir a sobrevivência, formação, e/ou atividade de osteoclastos; para inibir condições mediadas por osteoclastos e/ou caracterizadas por reabsorção óssea; no tratamento de distúrbios ósseos tais como osteoporose, artrite reumatoide, doença óssea associada a cancro, e doença de Paget; e no tratamento de condições associadas com inflamação ou ativação do sistema imune. Exemplos de compostos mostrados no mesmo incluem os seguintes:

Greig et al., 2006, descreve compostos semelhantes.

Greig et al., 2008, descreve determinadas amidas de ácido bifenil-4-sulfónico para o tratamento de inflamação e/ou destruição das articulações e/ou perda óssea; distúrbios mediados por ativação excessiva e/ou inadequada e/ou prolongada do sistema imune; distúrbios inflamatórios e autoimunes, por exemplo, artrite reumatoide, psoríase, artrite psoriásica, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), aterosclerose, doença inflamatória do intestino, e espondilite anquilosante; e distúrbios associados com perda óssea, tal como perda óssea associada com atividade osteoclástica excessiva na artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, e doença de Paget. Exemplos de compostos mostrados no mesmo incluem os seguintes:

Greig et al., 2010b, descreve determinadas amidas de ácido bifenil-4-sulfónico para o tratamento de inflamação e/ou destruição das articulações e/ou perda óssea; distúrbios mediados por ativação excessiva e/ou inadequada e/ou prolongada do sistema imune; distúrbios inflamatórios e autoimunes, por exemplo, artrite reumatoide, psoríase, artrite psoriásica, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), aterosclerose, doença inflamatória do intestino, e espondilite anquilosante; distúrbios associados com perda óssea, tal como perda óssea associada com atividade osteoclástica excessiva na artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, e doença de Paget; e cancro, tal como uma malignidade hematológica e um tumor sólido. Exemplos de compostos mostrados no mesmo incluem os seguintes:

Greig et al., 2013 descreve compostos semelhantes.

Greig et al., 2010a, descreve determinadas amidas de ácido bifenil-4-sulfónico para o tratamento de inflamação e/ou destruição das articulações e/ou perda óssea; distúrbios mediados por ativação excessiva e/ou inadequada e/ou prolongada do sistema imune; distúrbios inflamatórios e autoimunes, por exemplo, artrite reumatoide, psoriase, artrite psoriásica, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) , aterosclerose, doença inflamatória do intestino, e espondilite anquilosante; distúrbios associados com perda óssea, tal como perda óssea associada com atividade osteoclástica excessiva na artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, e doença de Paget; e cancro, tal como uma malignidade hematológica e um tumor sólido. Exemplos de compostos mostrados no mesmo incluem os seguintes:

Novos Compostos com Propriedades Melhoradas

Os compostos HMC descritos no presente documento são protegidos contra várias suscetibilidades tóxicas que estão presentes nos compostos conhecidos, especialmente aqueles mostrados em Greig et al., 2010a e mostram eficácia melhorada em exemplos de doença.

Sem pretender estar ligado a qualquer teoria particular, os inventores acreditam que as combinações particulares de substituintes e as suas posições na estrutura de anel de biarilo dão origem a propriedades extraordinárias. Para além de melhorias substanciais da toxicologia aguda in vivo, estas combinações protegem os compostos contra suscetibilidades de citotoxicidade, genotoxicidade, e segurança cardiovascular gerais vistas nos compostos conhecidos. Especificamente, os compostos HMC descritos no presente documento são negativos para genotoxicidade, mostram uma melhoria substancial da citotoxicidade geral, e estão substancialmente protegidos contra a inibição do gene relacionado com Ether-a-go-go (hERG), que representa uma suscetibilidade se segurança cardiovascular principal.

Se um fármaco se destinar a ser utilizado na clinica, deve ter um perfil de segurança e eficácia adequado. Deve mostrar segurança aguda adequada para permitir dosagem a seres humanos sem a expetativa de efeitos secundários gerais sérios. Adicionalmente, não deve causar dano genético (genotoxicidade) dado que os agentes que são genotóxicos podem atuar como carcinogénicos em seres humanos. Um fármaco clinicamente aceitável não deve também inibir hERG, um canal iónico que, quando inibido, pode causar um distúrbio cardíaco fatal conhecido como síndrome QT longo. Juntamente com estas propriedades de segurança, o fármaco deve ser suficientemente potente contra o alvo biológico para dar o efeito terapêutico desejado; deve ser uma solubilidade suficiente para ser absorvido a partir do trato gastrointestinal; e deve ter estabilidade suficiente para permanecer na circulação tempo suficiente para alcançar o alvo biológico.

Os compostos HMC descritos no presente documento demonstram eficácia melhorada em modelos de artrite reumatoide, por exemplo, conforme comparado com os compostos mostrados em Greig et al, 2010a. Isto é demonstrado tanto por uma maior magnitude de efeito sobre a doença, bem como maior potência, ambos os quais são observados, de maneira importante, quando os compostos HMC são administrados quando a doença está já estabelecida. Isto reflete o contexto clinico para a utilização destes compostos. Além disso estes efeitos são vistos sem toxicidade evidente. A redução das propriedades toxicológicas (efeitos adversos) de um fármaco é uma barreira de desenvolvimento de igual desafio e importância conforme comparado com a otimização das propriedades farmacodinâmicas (ação do fármaco sobre o organismo) e farmacocinéticas (ação do organismo sobre o fármaco). Os compostos HMC descritos no presente documento proporcionam vantagens substanciais como agentes terapêuticos orais (conforme comparado com os compostos conhecidos) melhorando a toxicologia geral aguda in vivo, segurança genotóxica e citotóxica, e segurança cardiovascular, com pouca ou nenhuma alteração da farmacocinética in vivo ou perda de potência contra o alvo biológico.

Os compostos HMC descritos no presente documento combinam as caracteristicas requeridas de agentes oralmente ativos para o tratamento de, por exemplo, condições inflamatórias crónicas, perda óssea, e cancro.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 mostra seis gráficos, cada um de índice artrítico médio como uma função do tempo (dia de dosagem) para composto de teste doseado a 10 mg/kg/dia através de gavagem oral (círculos abertos) e controlo (círculos sólidos), para cada um de: (A) HMC-C-02-A (superior esquerdo), (B) HMC-C-01-A (superior central), (C) HMC-N- Ο2-A (superior direito), (D) HMC-N-01-A (inferior esquerdo), (E) HMC-C-01-A (inferior central), (F) HMC-N-01-B (inferior direito), conforme descrito no Estudo Biológico 6 abaixo. A Figura 2 mostra dois gráficos, cada um de índice artrítico como uma função do tempo (dia de dosagem) para composto de teste (círculos abertos, quadrados abertos), controlo (círculos sólidos) e controlo positivo, o fármaco comercializado etanercept (triângulos), para cada um de (A) ABD899 a 10 mg/kg/dia (esquerda), (B) HMC-C-01-A a 0.3 mg/kg/dia e 3 mg/kg/dia (direita), conforme descrito no Estudo Biológico 6 abaixo. A Figura 3 mostra seis gráficos, cada um de índice artrítico médio como uma função do tempo (dia de dosagem) para composto de teste (círculos abertos), controlo (círculos sólidos), e controlo positivo, metotrexato (triângulos) para cada um de: (A) ABD899 doseado a 3 mg/kg/dia (superior esquerdo), (B) HMC-C-01-A doseado a 3 mg/kg/dia (superior central) , (C) HMC-N-01-A doseado a 3 mg/kg/dia (superior direito), (D) ABD899 doseado a 10 mg/kg/dia (inferior esquerdo), (E) HMC-C-01-A doseado a 10 mg/kg/dia (inferior central), e (F) HMC-N-01-A doseado a 10 mg/kg/dia (inferior direito), conforme descrito no Estudo Biológico 11 abaixo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Um aspeto da invenção refere-se a determinados compostos de N- (4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-fenil-benzenossulfonamida e N- (4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(2-piridil)benzenossulfonamida (coletivamente referidos no presente documento como compostos HMC), conforme descrito no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo um composto HMC, conforme descrito no presente documento, e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

Outro aspeto da presente refere-se a um método de preparar uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo a etapa de misturar um composto HMC, conforme descrito no presente documento, e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um composto HMC, conforme descrito no presente documento, para utilização num método de tratamento do corpo humano ou animal por meio de terapêutica, por exemplo, para utilização num método de tratamento de um distúrbio (por exemplo, uma doença) conforme descrito no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se à utilização de um composto HMC, conforme descrito no presente documento, no fabrico de um medicamento para o tratamento, por exemplo, tratamento de um distúrbio (por exemplo, uma doença) conforme descrito no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um método de tratamento, por exemplo, de um distúrbio (por exemplo, uma doença) conforme descrito no presente documento, compreendendo administrar a um paciente com necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto HMC, conforme descrito no presente documento, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um kit compreendendo (a) um composto HMC, conforme descrito no presente documento, preferentemente proporcionado como uma composição farmacêutica e num recipiente adequado e/ou com uma embalagem adequada; e (b) instruções para utilização, por exemplo, instruções escritas sobre como administrar o composto.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um composto HMC obtenível através de um método de síntese conforme descrito no presente documento, ou um método compreendendo um método de síntese conforme descrito no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um composto HMC obtido através de um método de síntese conforme descrito no presente documento, ou um método compreendendo um método de síntese conforme descrito no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a novos intermediários, conforme descrito no presente documento, que são adequados para utilização nos métodos de síntese descritos no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se à utilização de tais novos intermediários, conforme descrito no presente documento, nos métodos de síntese descritos no presente documento.

Como será apreciado por um perito na especialidade, caracteristicas e formas de realização preferidas de um aspeto da invenção também se referirão a outros aspetos da presente invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Compostos

Um aspeto da presente invenção refere-se a determinados compostos que podem convenientemente ser descritos como compostos de N-(4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-fenil-benzenossulfonamida e N-(4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-(2-piridil)benzenossulfonamida substituídos.

N- (4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-fenil-benzenossulfonamida

N- (4-hidroxi-4-metil-ciclohexil)-4-(2-piridil)benzenossulfonamida

Consequentemente, um aspeto da presente invenção é um composto selecionado a partir de compostos das seguintes fórmulas, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo (para conveniência, coletivamente referidos no presente documento como "compostos HMC"):

É notado que os substituintes num lado do anel de ciclohexilo (isto é, -OH and -CH3 no lado direito) podem ser posicionados "trans" / "eis” ou "eis” / "trans" com respeito ao resto da molécula (isto é, no anel de ciclohexilo ao qual estão unidos, com respeito ao resto do composto que está unido na posição para do anel de ciclohexilo).

A menos que indicado de outro modo, é pretendido que todas tais conformações sejam abrangidas por uma referência a um composto que não especifica uma conformação particular.

Numa forma de realização, o composto está na conformação "trans-OH", como, por exemplo, os seguintes compostos:

Numa forma de realização, o composto está na conformação "cis-OH", como, por exemplo, os seguintes compostos:

E também notado que o anel de ciclohexano pode tomar uma conformação de "cadeira", "barco" ou "torcida", e que é possível interconversão entre as conformações. A menos que indicado de outro modo, é pretendido que todas tais conformações (por exemplo, "cadeira", "barco", "torcida", "OH é axial", "OH é equatorial", etc.) sejam abrangidas por uma referência a um composto que não especifica uma conformação particular.

Formas Substancialmente Purificadas

Um aspeto da presente invenção refere-se a compostos HMC, conforme descrito no presente documento, em forma substancialmente purificada e/ou numa forma substancialmente isenta de contaminantes.

Numa forma de realização, a forma substancialmente purificada é pelo menos 50% em peso, por exemplo, pelo menos 60% em peso, por exemplo, pelo menos 70% em peso, por exemplo, pelo menos 80% em peso, por exemplo, pelo menos 90% em peso, por exemplo, pelo menos 95% em peso, por exemplo, pelo menos 97% em peso, por exemplo, pelo menos 98% em peso, por exemplo, pelo menos 99% em peso. A menos que especificado, a forma substancialmente purificada refere—se ao composto em qualquer forma conformacional. Por exemplo, numa forma de realização, a forma substancialmente purificada refere-se a uma mistura de formas conformacionais, isto é, purificadas em relação a outros compostos. Numa forma de realização, a forma substancialmente purificada refere-se a uma forma conformacional. Numa forma de realização, a forma substancialmente purificada refere-se a uma mistura de formas conformacionais. Numa forma de realização, a forma substancialmente purificada refere-se a uma mistura equimolar de formas conformacionais.

Numa forma de realização, os contaminantes representam não mais do que 50% em peso, por exemplo, não mais do que 40% em peso, por exemplo, não mais do que 30% em peso, por exemplo, não mais do que 20% em peso, por exemplo, não mais do que 10% em peso, por exemplo, não mais do que 5% em peso, por exemplo, não mais do que 3% em peso, por exemplo, não mais do que 2% em peso, por exemplo, não mais do que 1% em peso. A menos que especificado, os contaminantes referem-se a outros compostos, isto é, para além de formas convencionais. Numa forma de realização, os contaminantes referem-se a outros compostos e outras formas conformacionais.

Numa forma de realização, a forma substancialmente purificada é pelo menos 60% conformacionalmente pura (isto é, 60% do composto, numa base molar, é a conformação desejada, e 40% é(são) a(s) forma (s) conformacional (is) não desejada(s)), por exemplo, pelo menos 70% conformacionalmente puro, por exemplo, pelo menos 80% conformacionalmente puro, por exemplo, pelo menos 90% conformacionalmente puro, por exemplo, pelo menos 95% conformacionalmente puro, por exemplo, pelo menos 97% conformacionalmente puro, por exemplo, pelo menos 98% conformacionalmente puro, por exemplo, pelo menos 99% conformacionalmente puro.

Isómeros

Determinados compostos podem existir numa ou mais formas geométricas, ótico, enantioméricas, diastereoisoméricas, epiméricas, atrópicas, estereoisoméricas, tautoméricas, conformacionais, ou anoméricas particulares, incluindo mas não limitadas a, formas cis e trans; formas E e Z; formas c, t, e r; formas endo e exo; formas R, S, e meso; formas D e L; formas del; formas ( + ) e (-) ; formas ceto, enol, e enolato; formas sin e anti; formas sinclinal e anticlinal; formas α e β; formas axial e equatorial; formas de barco, cadeira, torcida, formas de envelope e de meia cadeira; e combinações das mesmas, doravante no presente documento coletivamente referidas como "isómeros" (ou "formas isoméricas").

Uma referência a uma classe de estruturas pode também incluir formas estruturalmente isoméricas incluídas dentro dessa classe (por exemplo, alquilo Ci-7 inclui n-propilo e iso-propilo; butilo inclui n-, iso-, sec-, e terc-butilo; metoxifenilo inclui orto-, meta-, e para-metoxifenilo) . No entanto, a referência a um grupo ou padrão de substituição específico não se destina a incluir outros isómeros estruturais (ou constitucionais) que diferem em relação às conexões entre os átomos em vez de em relação às posições no espaço. Por exemplo, uma referência a um grupo metoxi, -OCH3, não deve ser entendida como uma referência ao seu isómero estrutural, um grupo hidroximetilo, -CH2OH. De forma semelhante, uma referência a orto-clorofenilo não deve ser entendida como uma referência ao seu isómero estrutural, meta-clorofenilo. A exclusão anterior não se refere a formas tautoméricas, por exemplo, formas ceto, enol, e enolato, como, por exemplo, os seguintes pares tautoméricos: ceto/enol (ilustrado abaixo), imina/enamina, álcool amida/imino, amidina/amidina, nitroso/oxima, tiocetona/enetiol, N-nitroso/hidroxiazo, e nitro/aci-nitro.

É notado que especificamente incluídos no termo "isómero" estão compostos com uma ou mais substituições isotópicas. Por exemplo, H pode estar em qualquer forma isotópica, incluindo 3Η, 2H (D) , e 3H (T) ; C pode estar em qualquer forma isotópica, incluindo nC, 12C, 13C, e 14C; 0 pode estar em qualquer forma isotópica, incluindo 150, 160 e 180; N pode estar em qualquer forma isotópica incluindo 14N e 15N; F pode estar em qualquer forma isotópica incluindo 18F e 19F e semelhantes. A menos que especificado de outro modo, uma referência a um composto particular inclui todas as tais formas isoméricas, incluindo misturas (por exemplo, misturas racémicas) das mesmas. Métodos para a preparação (por exemplo, síntese assimétrica) e separação (por exemplo, meios de cristalização fracionada e cromatográficos) de tais formas isoméricas são conhecidos na técnica ou são prontamente obtidos através da adaptação dos métodos ensinados no presente documento, ou métodos conhecidos, de uma forma conhecida.

Sais

Pode ser conveniente ou desejável preparar, purificar, e/ou manipular um sal correspondente do composto, por exemplo, um sal farmaceuticamente aceitável. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são discutidos em Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J.

Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19.

Por exemplo, se o composto foi aniónico, ou tiver um grupo funcional que possa ser aniónico (por exemplo, COOH pode ser -COO”) , então um sal pode ser formado com um catião adequado. Exemplos de catiões inorgânicos adequados incluem, mas não são limitados a, iões de metais alcalinos tais como Na+ e K+' catiões alcalino-terrosos tais como Ca2+ e Mg2+, e outros catiões tais como Al3+. Exemplos de catiões orgânicos adequados incluem, mas não são limitados a, ião amónio (isto é, NH4+) e iões amónio substituídos (por exemplo, NH3R+, NH2R2+í NHR3+, NR4+) . Exemplos de alguns iões amónio substituídos adequados são aqueles derivados a partir de: etilamina, dietilamina, diciclohexilamina, trietilamina, butilamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilbenzilamina, colina, meglumina, e trometamina, bem como aminoácidos, tais como lisina e arginina. Um exemplo de um ião amónio quaternário comum é N(CH3)4+.

Se o composto foi catiónico, ou tiver um grupo funcional que possa ser catiónico (por exemplo, -NH2 pode ser -NH3+) , então um sal pode ser formado com um anião adequado. Exemplos de aniões inorgânicos adequados incluem, mas não são limitados a, aqueles derivados a partir dos seguintes ácidos inorgânicos: clorídrico, bromídrico, iodídrico, sulfúrico, sulfuroso, nítrico, nitroso, fosfórico, e fosforoso. Exemplos de aniões orgânicos adequados incluem, mas não são limitados a, aqueles derivados a partir dos seguintes ácidos orgânicos: 2-acetioxibenzoico, acético, ascórbico, aspártico, benzoico, canforossulfónico, cinâmico, cítrico, edético, etanodissulfónico, etanossulfónico, fumárico, glucoheptónico, glucónico, glutâmico, glicólico, hidroximaleico, hidroxinaftaleno carboxílico, isetiónico, lático, lactobiónico, láurico, maleico, málico, metanossulfónico, múcico, oleico, oxálico, palmítico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fenilsulfónico, propiónico, pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico, toluenossulfonico e valérico. Exemplos de aniões orgânicos poliméricos adequados incluem, mas não estão limitados a, aqueles derivados a partir dos seguintes ácidos poliméricos: tânico, carboximetilcelulose. A menos que especificado de outro modo, uma referência a um composto particular também inclui formas de sal do mesmo.

Solvatos e Hidratos

Pode ser conveniente ou desejável preparar, purificar, e/ou manipular um solvato correspondente do composto. 0 termo "solvato" é utilizado no presente documento no sentido convencional para se referir a um complexo de soluto (por exemplo, composto, sal do composto) e solvente. Se o solvente for água, o solvato pode ser convenientemente referido como um hidrato, por exemplo, um monoidrato, um diidrato, um triidrato, etc. A menos que especificado de outro modo, uma referência a um composto particular também inclui formas de solvato e hidrato do mesmo.

Formas Quimicamente Protegidas

Pode ser conveniente ou desejável preparar, purificar, e/ou manipular o composto numa forma quimicamente protegida. 0 termo "forma quimicamente protegida" é utilizado no presente documento no sentido químico convencional e refere-se a um composto no qual um ou mais grupos funcionais reativos são protegidos de reações químicas indesejáveis sob condições especificadas (por exemplo, pH, temperatura, radiação, solvente, e semelhantes). Na prática, métodos químicos bem conhecidos são empregues para tornar um grupo funcional não reativo de forma reversível, que de outra forma seria reativo, sob condições especificadas. Numa forma quimicamente protegida, um ou mais grupos funcionais reativos estão na forma de um grupo protegido ou protetor (também conhecido como um grupo mascarado ou de mascaramento ou um grupo bloqueado ou de bloqueio). Ao proteger um grupo funcional reativo, as reações que envolvem outros grupos funcionais reativos não protegidos podem ser realizadas, sem afetar o grupo protegido; o grupo protetor pode ser removido, normalmente numa etapa subsequente, sem afetar substancialmente o restante da molécula. Veja-se, por exemplo, Protective Groups in Organic Synthesis (T. Green and P. Wuts; 4a Edição; John Wiley and Sons, 2006).

Uma ampla variedade de tais métodos de "proteção," "bloqueamento", ou "mascaramento" é amplamente utilizada e bem conhecida na síntese orgânica. Por exemplo, um composto que tem dois grupos funcionais reativos não equivalentes, ambos os quais seriam reativos sob condições especificadas, podem ser derivatizados para tornar um dos grupos funcionais "protegido", e como tal não reativo, sob as condições especificadas, de modo a que protegido, o composto possa ser utilizado com um reagente que tem eficazmente somente um grupo funcional reativo. Depois da reação desejada (envolvendo o outro grupo funcional) estar concluída, o grupo protegido pode ser "desprotegido" para devolvê-lo à sua funcionalidade normal.

Por exemplo, um grupo amina pode ser protegido, por exemplo, como uma amida (-NRCO-R) ou um uretano (-NRC0-OR) , por exemplo, como: uma metilamida (-NHC0-CH3) ; uma benziloxiamida (-NHCO-OCH2C6H5, -NH-Cbz); como uma t-butoxiamida (-NHCO-OC(CH3) 3, -NH-Boc); uma 2-bifenil-2-propoxiamida (-NHC0-0C (CH3) 2C6H4C6H5, -NH-Bpoc) , como uma 9-fluorenilmetoxiamida (-NH-Fmoc), como uma 6- nitroveratriloxiamida (-NH-Nvoc), como uma 2-trimetilsililetiloxiamida (-NH-Teoc), como uma 2,2,2-tricloroetiloxiamida (-NH-Troc), como uma aliloxiamida (-NH-Alloc), como uma 2 (-fenilsulfonil)etiloxiamida (-NH-Psec); ou, em casos adequados (por exemplo, aminas cíclicas), como um radical nitróxido (>N-0·).

Profármacos

Pode ser conveniente ou desejável preparar, purificar, e/ou manipular o composto na forma de um profármaco. 0 termo "profármaco", conforme utilizado no presente documento, refere-se a um composto que, quando metabolizado (por exemplo, in vivo), rende o composto ativo desejado. Tipicamente, o profármaco é inativo, ou menos ativo do que o composto ativo desejado, mas pode proporcionar manipulação, administração, ou propriedades metabólicas vantajosas. Síntese Química São descritos no presente documento métodos para a síntese química de compostos HMC. Estes e/ou outros métodos bem conhecidos podem ser modificados e/ou adaptados de formas conhecidas de modo a facilitar a síntese de compostos HMC adicionais descritos no presente documento.

Composições

Um aspeto da presente invenção refere-se a uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo um composto HMC, conforme descrito no presente documento, e um portador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Numa forma de realização, a composição compreende adicionalmente um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, conforme descrito no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um método de preparar uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo misturar um composto HMC, conforme descrito no presente documento, e um portador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um método de preparar uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo misturar um composto HMC, conforme descrito no presente documento; uma combinação de um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, conforme descrito no presente documento; e um portador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Utilizações

Os compostos HMC, conforme descrito no presente documento, são úteis, por exemplo, no tratamento de distúrbios (por exemplo, doenças) incluindo, por exemplo, os distúrbios (por exemplo, doenças) descritos no presente documento.

Utilização em Métodos de Terapêutica

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um composto HMC, conforme descrito no presente documento, para utilização num método de tratamento do corpo humano ou animal por meio de terapêutica, por exemplo, para utilização num método de tratamento de um distúrbio (por exemplo., uma doença) conforme descrito no presente documento.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um composto HMC, conforme descrito no presente documento, em combinação com um ou mais por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, conforme descrito no presente documento, para utilização num método de tratamento do corpo humano ou animal por meio de terapêutica, por exemplo, para utilização num método de tratamento de um distúrbio (por exemplo., uma doença) conforme descrito no presente documento.

Utilização no Fabrico de Medicamentos

Outro aspeto da presente invenção refere-se à utilização de um composto HMC, conforme descrito no presente documento, no fabrico de um medicamento para o tratamento, por exemplo, tratamento de um distúrbio (por exemplo., uma doença) conforme descrito no presente documento.

Numa forma de realização, o medicamento compreende o composto HMC.

Outro aspeto da presente invenção refere-se à utilização de um composto HMC, conforme descrito no presente documento; e uma combinação de um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, conforme descrito no presente documento, no fabrico de um medicamento para o tratamento, por exemplo, tratamento de um distúrbio (por exemplo., uma doença) conforme descrito no presente documento.

Numa forma de realização, o medicamento compreende o composto HMC e o um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais. Métodos de Tratamento

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um método de tratamento, por exemplo, de um distúrbio (por exemplo., uma doença) conforme descrito no presente documento, compreendendo administrar a um paciente com necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto HMC, conforme descrito no presente documento, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica.

Outro aspeto da presente invenção refere-se a um método de tratamento, por exemplo, de um distúrbio (por exemplo., uma doença) conforme descrito no presente documento, compreendendo administrar a um paciente com necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto HMC, conforme descrito no presente documento, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica, e um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, conforme descrito no presente documento, preferivelmente na forma de uma composição farmacêutica.

Condições Tratadas

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio inflamatório ou uma doença autoimune.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio associado com inflamação e/ou ativação do sistema imune.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio mediado por ativação excessiva e/ou inadequada e/ou prolongada do sistema imune.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de inflamação.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio associado com inflamação ou ativação do sistema imune.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de artrite reumatoide; psoriase; artrite psoriásica; doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD); asma; aterosclerose; doença inflamatória do intestino; ou espondilite anquilosante.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de artrite reumatoide.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de psoriase.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de artrite psoriásica.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD).

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de asma.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de aterosclerose.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de espondilite anquilosante.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de doença inflamatória intestinal.

Numa forma de realização, o tratamento é prevenção de uma resposta imune levando a rejeição de órgãos ou enxertos após transplante.

Numa forma de realização, o tratamento é prevenção de uma condição inflamatória na qual a expressão ou atividade de IRF-5 é aberrante.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um tumor que sobreexpressa TNFa, IL-1, IL-6, RANKL, e/ou NFkB .

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um tumor para o qual a inibição de TNFa, IL-1, RANKL, NFkB, IRFs tais como IRF-3, -5 ou -7 e/ou a expressão ou atividade ou sinalização de IL-6 facilita ou melhora a ação de agentes tumoricidas citotóxicos.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de uma malignidade hematológica.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de mieloma múltiplo.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de leucemia; por exemplo, leucemia linfoblástica aguda.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de

linfoma; por exemplo, linfoma não Hodgkin, linfoma de células T (por exemplo, linfoma linfoblástico T, linfoma de células T extranodal, linfoma de células T cutâneo, linfoma de células T anaplásico, linfoma de células T angioimunoblástico),e linfoma de células B (por exemplo, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin) (por exemplo, linfoma de células B grandes difuso, linfoma folicular, linfoma do tecido linfoide associado às mucosas, linfoma linfocitico de células pequenas, linfoma de células do manto, linfoma de células pilosas e linfoma de Burkitt)

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um cancro tumoral sólido, por exemplo, cancro da bexiga, cancro da mama (feminino e/ou masculino), cancro do cólon, carcinoma de células renais, cancro renal, cancro pulmonar, cancro pancreático, cancro gástrico, cancro da próstata, cancro cerebral, cancro da pele, cancro da tiroide, ameloblastoma de células basais, ou melanoma.

Numa forma de realização, a malignidade hematológica (pQr exemplo, mieloma múltiplo, leucemia, linfoma, etc.) e 0 cancro de tumor sólido (por exemplo, cancro da bexiga etc.) está associado com a ativação de NFkB, com sinalização de NFkB aberrante, ou com inflamação.

Numa forma de realização, a malignidade hematológica (po^ exemplo, mieloma múltiplo, leucemia, linfoma, etc.) e 0 cancro de tumor sólido (por exemplo, cancro da bexiga etc.) está associado com inativação ou comprometimento indução de caspases ou com sinalização de caspases aberrante.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio proliferativo; por exemplo, doença de Castleman.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de uma doença ou distúrbio selecionados a partir de: doenças tendo um componente inflamatório ou autoimune, incluindo asma, aterosclerose, doenças alérgicas, tais como atopia, rinite alérgica, dermatite atópica, anafilaxia, aspergilose broncopulmonar alérgica, e pneumonite por hipersensibilidade (doença do criador de pombos, doença de pulmão do agricultor, doença de pulmão do humidificador, doença pulmonar do trabalhador do malte); alergias, incluindo dermatite por alergia a pulgas em mamíferos tais como animais domésticos, por exemplo, cães e gatos, alergénios de contacto incluindo picadas de mosquito ou outras alergias por picada de insetos, hera venenosa, carvalho venenoso, sumagre venenoso, ou outros alergénios da pele; distúrbios autoimunes, incluindo diabetes de tipo I e complicações associadas, esclerose múltipla, artrite, lúpus eritematoso sistémico, tiroidite autoimune (de Hasimoto), doenças hepáticas autoimunes tais como hepatite e cirrose biliar primária, hipertiroidismo (doença de Graves; tirotoxicose), diabetes resistente à insulina, insuficiência renal autoimune (doença de Addison), ooforite autoimune, orquite autoimune, anemia hemolítica autoimune, hemoglobinuria fria paroxística, doença de Behçet, trombocitopenia autoimune, neutropenia autoimune, anemia perniciosa, anemia de glóbulos vermelhos puros, coagulopatias autoimunes, endometriose, miastenia grave, encefalomielite alérgica experimental, polineurite autoimune, pênfigo e outros doenças bolhosas, cardite reumática, sindrome de Goodpasture, sindrome pós-cardiotomia, sindrome de Sjogren, polimiosite, dermatomiosite, e escleroderma; estados de doença resultando a partir de inflamação inadequada, local ou sistémica, por exemplo, sindrome do intestino irritável ou inflamatório (Mazzucchelli et al., 1996), doenças da pele tais como líquen plano, hipersensibilidade de tipo retardado, inflamação pulmonar crónica, por exemplo, alveolite pulmonar e granuloma pulmonar, inflamação gengival ou outra doença periodontal, e inflamação óssea associada com lesões de origem endodôntica (Volejnikova et al., 1997), doenças de hipersensibilidade pulmonar tais com pneumonite por hipersensibilidade (Sugiyama et al., 1995), e inflamação relacionada com libertação de histamina a partir de basófilos (Dvorak et al., 1996), tal como febre dos fenos, libertação de histamina a partir de mastócitos (Galli et al., 1989), ou tumores mastocíticos, tipos de reação de hipersenibilidade de tipo 1 (anafilaxia, alergia da pele, urticária, gota, rinite alérgica, e gastroenterite alérgica); colite ulcerativa ou doença de Crohn; doença renal poliquística induzida por TNFa (Li et al., 2008); ou Síndromes Periódicos Associados com Criopirina, incluindo Sindrome de Muckle-Wells.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio mediado por osteoclastos.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio caracterizado por reabsorção óssea excessiva.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio associado com perda óssea.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de perda óssea.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de perda óssea associada com inflamação.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de perda óssea não associada com inflamação.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de perda óssea associada com ativação osteoclástica excessiva.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de destruição das articulações.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de destruição das articulações associada com inflamação.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de destruição das articulações associada com ativação osteoclástica excessiva.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de perda óssea associada com ativação osteoclástica excessiva na artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, ou doença de Paget.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de perda óssea associada com artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, ou doença de Paget dos ossos.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, ou doença de Paget dos ossos.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de neoplasia dos ossos, guer como um tumor primário ou como metástases, incluindo osteossarcoma e osteoma (veja-se, por exemplo, Zheng et al., 1998) e doença óssea associada com cancro (por exemplo, hipercalcemina de malignidade, metástases ósseas, metástases ósseas osteoliticas, mieloma múltiplo, carcinoma da mama).

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de hipercalcemia causada por condições associadas com aumento da reabsorção óssea, incluindo: intoxicação por vitamina D, hiperparatiroidismo primário ou terciário, imobilização, e sarcoidose.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de afrouxamento asséptico de implantes prostéticos (por exemplo, as articulações artificiais, por exemplo, joelhos, ancas, etc., podem sofrer afrouxamento devido à atividade dos osteoclastos acionada por inflamação local) (veja-se, por exemplo, Childs et al., 2001).

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de osteopetrose, osteoartrite, ou formação ectópica dos ossos.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de um distúrbio associado com fibrose, tal como esclerose sistémica ou escleroderma.

Numa forma de realização, o tratamento é tratamento de uma vasculite rara, tais como doença de Behçet.

Tratamento 0 termo "tratamento", conforme utilizado no presente documento no contexto do tratamento de uma condição, pertence geralmente ao tratamento e terapêutica, quer de um ser humano ou um animal (por exemplo, em aplicações veterinárias), nos quais algum efeito terapêutico desejado é alcançado, por exemplo, a inibição do progresso da condição, e inclui uma redução da taxa de progresso, uma paragem na taxa de progresso, alivio dos sintomas da condição, melhoria da condição, e cura da condição. É também incluído tratamento como uma medida profilática (isto é, profilaxia). Por exemplo, utilização com pacientes que ainda não desenvolveram a condição, mas que estão em risco de desenvolver a condição, está englobada pelo termo "tratamento".

Por exemplo, o tratamento da inflamação inclui a profilaxia da inflamação, redução da incidência de inflamação, redução da gravidade da inflamação, alivio dos sintomas de inflamação, etc. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz," conforme utilizado no presente documento, refere-se àquela quantidade de um composto, ou um material, composição ou forma farmacêutica que compreende um composto, que é eficaz para produzir algum efeito terapêutico desejado, comensurável com uma razão de risco/beneficio razoável, quando administrada de acordo com um regime de tratamento desejado.

Terapêuticas de Combinação 0 termo "tratamento" inclui tratamentos e terapêuticas de combinação, nos quais dois ou mais tratamentos ou terapêuticas são combinados, por exemplo, sequencialmente ou simultaneamente. Por exemplo, os compostos descritos no presente documento também podem ser utilizados em terapêuticas de combinação, por exemplo, em conjunto com outros agentes, por exemplo, agentes anti inflamatórios, etc. Exemplos de tratamentos e terapêuticas incluem quimioterapia (a administração de agentes ativos, incluindo, por exemplo, fármacos, anticorpos (por exemplo, como uma imunoterapia), profármacos (por exemplo, como uma terapêutica fotodinâmica, GDEPT, ADEPT, etc.); cirurgia; terapêutica de radiação; terapêutica fotodinâmica; terapêutica génica; e dietas controladas.

Um aspeto da presente invenção refere-se à utilização de um composto conforme descrito no presente documento, em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais. A combinação particular estaria à descrição do médico que selecionaria dosagens utilizado o seu conhecimento geral comum e regimes de dosagem conhecidos para um perito na especialidade.

Os agentes (isto é, o composto descrito no presente documento, mais um ou mais outros agentes) pode ser administrado simultaneamente ou sequencialmente, e pode ser administrado em regimes de dose variáveis individualmente e por meio de diferentes vias. Por exemplo, quando administrados sequencialmente, os agentes podem ser administrados em intervalos estreitamente espaçados (por exemplo, durante um período de 5-10 minutos) ou em intervalos mais longos (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou mais horas de distância, ou períodos ainda mais espaçados onde requerido), o regime de dosagem preciso sendo comensurado com as propriedades do(s) agente(s) terapêutico(s).

Os agentes (isto é, o composto descrito no presente documento, mais um ou mais outros agentes) pode ser formulado em conjunto numa única forma farmacêutica, ou alternativamente, os agentes individuais podem ser formulados separadamente e apresentados em conjunto na forma de um kit, opcionalmente com instruções para a sua utilização.

Outras Utilizações

Os compostos HMC descritos no presente documento também podem ser utilizados como parte de um ensaio in vitro, por exemplo, de modo a determinar se um hospedeiro candidato é suscetível de beneficiar do tratamento com o composto em questão.

Os compostos HMC descritos no presente documento também podem ser utilizados como um padrão, por exemplo, num ensaio, de modo a identificar outros compostos, outros agente anti inflamatórios, etc.

Kits

Um aspeto da invenção refere.se a um kit compreendendo (a) um composto HMC conforme descrito no presente documento, ou uma composição compreendendo um composto HMC conforme descrito no presente documento, por exemplo, preferentemente proporcionado num recipiente adequado e/ou com uma embalagem adequada; e (b) instruções para utilização, por exemplo, instruções escritas sobre como administrar o composto ou composição.

Numa forma de realização, o kit compreende adicionalmente um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, 4) agentes terapêuticos adicionais, conforme descrito no presente documento.

As instruções escritas podem também incluir uma lista de indicações para as quais o ingrediente ativo constitui um tratamento adequado.

Vias de Administração 0 composto HMC ou composição farmacêutica compreendendo o composto HMC pode ser administrada a um indivíduo através de qualquer via de administração conveniente, quer sistemicamente/perifericamente ou topicamente (isto é, no local de ação desejada).

Vias de administração incluem oral (por exemplo, por ingestão); bucal; sublingual; transdérmica (incluindo, por exemplo, por um adesivo, emplastro, etc.); transmucosa (incluindo, por exemplo, por um adesivo, gesso, etc.); intranasal (por exemplo, por pulverização nasal, gotas ou a partir de administração por um dispositivo atomizador ou pó seco); ocular (por exemplo, por gotas oculares) ; pulmonar (por exemplo, através de terapêutica de inalação ou insuflação utilizando, por exemplo, um aerossol, por exemplo, através da boca ou nariz); retal (por exemplo, por supositório ou enema); vaginal (e.g., por pessário); parentérica, por exemplo, através de injeção, incluindo subcutânea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intracardiaca, vias de injeção intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intra-articular, subaracnoide, e intrasternal; através de implante de um depósito ou reservatório, por exemplo, subcutânea ou intramuscular.

Numa forma de realização preferida, a via de administração é oral (por exemplo, por ingestão).

Numa forma de realização preferida, a via de administração é parentérica (por exemplo, por injeção). 0 Indivíduo/Paciente 0 individuo/paciente pode ser um cordado, um vertebrado, um mamifero, um mamífero placentário, um marsupial (por exemplo, canguru, wombat), um roedor (por exemplo, um porquinho—da—índia, um hamster, um rato, um ratinho), murino (por exemplo, um ratinho), um lagomorfo (por exemplo, um coelho), aviário (por exemplo, uma ave) , canino (por exemplo, um cão) , felino (por exemplo, um gato) , equino (por exemplo, um cavalo) , suíno (por exemplo, um porco), ovino (por exemplo, uma ovelha), bovino (por exemplo, uma vaca), um primata, símio (por exemplo, um macaco ou primata) , um macaco (por exemplo, sagui, babuíno), um primata (por exemplo, gorila, chimpanzé, orangotango, gibão), ou um ser humano. Adicionalmente, o indivíduo/paciente pode ser qualquer das suas formas de desenvolvimento, por exemplo, um feto.

Numa forma de realização preferida, o sujeito/paciente é um ser humano.

Formulações

Embora seja possível que o compostos HMC seja administrado por si só, é preferível apresentá-lo como uma formulação farmacêutica (por exemplo, composição, preparação, medicamento) compreendendo pelo menos um composto HMC, conforme descrito no presente documento, em conjunto com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos para os peritos na especialidade, incluindo portadores farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, excipientes, adjuvantes, cargas, tampões, conservantes, antioxidantes, lubrificantes, estabilizantes, solubilizantes, tensioativos (por exemplo, agentes humidificantes), agentes de mascaramento, agentes de coloração, agentes aromatizantes, e agentes adoçantes. A formulação pode compreender adicionalmente outros agentes ativos, por exemplo, outros agentes terapêuticos ou profiláticos.

Consequentemente, a presente invenção proporciona adicionalmente composições farmacêuticas, conforme definido acima, e métodos de fabricar uma composição farmacêutica compreendendo misturar pelo menos um composto HMC, conforme descrito no presente documento, em conjunto com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis bem conhecidos para os peritos na especialidade, por exemplo, portadores, diluentes, excipientes, etc. Se formuladas como unidades discretas (por exemplo, comprimidos, etc.), cada unidade compreende uma quantidade predeterminada (dosagem) do composto. 0 termo "farmaceuticamente aceitável," conforme utilizado no presente documento, refere-se a compostos, ingredientes, materiais, composições, formas farmacêuticas, etc., que são, dentro do âmbito do bom julgamento médico, adequados para a utilização em contacto com os tecidos do indivíduo em questão (por exemplo, humano) sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurável com uma razão de risco/benefício razoável. Cada portador, diluente, excipiente, etc. deve também ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação.

Podem ser encontrados portadores, diluentes, excipientes, etc. adequados em textos farmacêuticos padrão, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edição, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990; e Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5a edição, 2005.

As formulações podem ser preparadas através de quaisquer métodos bem conhecidos na técnica farmacêutica. Tais métodos incluem a etapa de colocar em associação o composto com um portador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas associando uniformemente e intimamente o composto com portadores (por exemplo, portadores líquidos, veículos sólidos finamente divididos, etc.), e posteriormente dar forma ao produto, se necessário. A formulação pode ser preparada para proporcionar uma libertação rápida ou lenta; imediata, retardada, temporizada, ou sustentada; ou uma combinação dos mesmos.

As formulações podem adequadamente estar na forma de líquidos, soluções (por exemplo, aquosas, não aquosas), suspensões (por exemplo, aquosas, não aquosa), emulsões (por exemplo, óleo em água, água em óleo), elixires, xaropes, eletuários, colutórios, gotas, comprimidos (incluindo, por exemplo, comprimidos revestidos), grânulos, pós, pastilhas para chupar, pastilhas, cápsulas (incluindo, por exemplo, cápsulas de gelatina moles e duras), cápsulas, pílulas, ampolas, bolus, supositórios, pessários, tinturas, géis, pastas, pomadas, cremes, loções, óleos, espumas, pulverizações, névoas, ou aerossóis.

As formulações podem adequadamente ser proporcionadas como um adesivo, emplastro adesivo, ligadura, venda, ou semelhantes que está impregnado com um ou mais compostos e opcionalmente um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis, incluindo, por exemplo, potenciadores de penetração, permeação, e absorção. As formulações podem também ser proporcionadas adequadamente na forma de um depósito ou reservatório. 0 composto pode ser dissolvido em, suspenso em, ou misturado com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis. 0 composto pode ser apresentado num lipossoma ou outro microparticulado que é concebido para visar o composto, por exemplo, para componentes sanguíneos ou um ou mais órgãos.

Formulações adequadas para administração oral (por exemplo, por ingestão) incluem líquidos, soluções (por exemplo, aquosas, não aquosas), suspensões (por exemplo, aquosas, não aquosa), emulsões (por exemplo, óleo em água, água em óleo), elixires, xaropes, eletuários, comprimidos, grânulos, pós, cápsulas, cápsulas, pílulas, ampolas, bólus.

Formulações adequadas para administração bucal incluem colutórios, pastilhas para chupar, pastilhas, bem como adesivos, emplastros adesivos, depósitos, e reservatórios. As pastilhas para chupar compreendem tipicamente o composto numa base aromatizada, habitualmente sacarose e acácia ou tragacanto. As pastilhas compreendem tipicamente o composto numa matriz inerte, tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia. Os colutórios compreendem tipicamente o composto num portador líquido adequado.

Formulações adequadas para administração sublingual incluem comprimidos, pastilhas para chupar, pastilhas, cápsulas, e pílulas.

Formulações adequadas para administração transmucosa oral incluem líquidos, soluções (por exemplo, aquosas, não aquosa), suspensões (por exemplo, aquosas, não aquosa),

Emulsões, por exemplo, óleo em água, água em óleo), colutórios, pastilhas para chupar, pastilhas, bem como adesivos, emplastros adesivos, depósitos, e reservatórios.

Formulações adequadas para administração transmucosa não oral incluem líquidos, soluções (por exemplo, aquosas, não aquosas), suspensões (por exemplo, aquosas, não aquosa) , Emulsões, por exemplo, óleo em água, água em óleo), supositórios, pessários, géis, pastas, pomadas, cremes, loções, óleos, bem como adesivos, emplastros adesivos, depósitos, e reservatórios.

Formulações adequadas para administração transdérmica incluem géis, pastas, pomadas, cremes, loções, e óleos, bem como adesivos, emplastros adesivos, ligaduras, condimentos, depósitos, e reservatórios.

Podem ser fabricados comprimidos através de meios convencionais, por exemplo, compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Podem ser preparados comprimidos prensados ao comprimir numa máquina adequada o composto numa forma de fluxo livre tal como um pó ou grânulos, opcionalmente misturada com um ou mais ligantes (por exemplo, povidona, gelatina, acácia, sorbitol, tragacanto, hidroxipropilmetilcelulose) ; agentes de preenchimento ou diluentes (por exemplo, lactose, celulose microcristalina, hidrogenofosfato de cálcio); lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco, sílica); desintegrantes (por exemplo, glicolato de amido de sódio, povidona reticulada, carboximetilcelulose reticulada); agentes ativos à superfície ou dispersantes ou humidificantes (por exemplo, laurilsulfato de sódio); conservantes (por exemplo, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, ácido sórbico); aromas, agentes de potenciamento do aroma, e adoçantes. Podem ser fabricados comprimidos moldados por meio de moldagem numa máquina adequada de uma mistura do composto em pó humedecido com um diluente liquido inerte. Os comprimidos podem opcionalmente ser revestidos ou marcados e podem ser são formulados de modo a proporcionar libertação lenta ou controlada do composto nos mesmos utilizando, por exemplo, hidroxipropilmetil celulose em proporções variáveis para proporcionar o perfil de libertação desejado. Podem opcionalmente ser proporcionados comprimidos com um revestimento, por exemplo, para efetuar libertação, por exemplo um revestimento entérico, para proporcionar libertação em partes do sistema digestivo para além do estômago. São tipicamente preparadas pomadas a partir do composto e uma base de pomada parafinica ou miscivel em água. São tipicamente preparados cremes a partir do composto e uma base de creme de óleo em água. Se desejado, a fase aquosa da base de creme pode incluir, por exemplo, pelo menos 30% p/p de um álcool polihídrico, isto é, um álcool tendo dois ou mais grupos hidroxilo como propilenoglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol ou polietilenoglicol e misturas dos mesmos. As formulações tópicas podem desejavelmente incluir um composto que potência a absorção ou penetração do composto através da pele ou outras áreas afetadas. Exemplos de tais potenciadores de penetração dérmica incluem sulfóxido de dimetilo e análogos relacionados. São tipicamente preparadas emulsões a partir do composto e uma fase oleosa, que podem opcionalmente compreender meramente um emulsionante (conhecido de outra forma como um emulgente), ou podem compreender uma mistura de pelo menos um emulsionante com uma gordura ou um óleo ou com tanto uma gordura como um óleo. Preferentemente, é incluído um emulsionante hidrofílico juntamente com um emulsionante lipofílico que atua como um estabilizante. É também preferido incluir tanto um óleo como uma gordura. Em conjunto, o(s) emulsionante(s) com ou sem estabilizante(s) formam a denominada cera de emulsificação, e a cera juntamente com o óleo e a gordura formam a denominada base de pomada de emulsificação que forma a fase dispersa oleosa das formulações de creme.

Emulgentes e estabilizadores de emulsão adequados incluem Tween 60, Span 80, álcool cetoestearílico, álcool miristílico, monoestearato de glicerilo e laurilsulfato de sódio. A eleição dos óleos ou gorduras adequados para a formulação é baseada em obter as propriedades cosméticas desejadas, dado que a solubilidade do composto na maioria dos óleos prováveis de serem utilizados em formulações de emulsão farmacêutica pode ser muito baixa. Consequentemente o creme deve ser um produto não gorduroso, que não mancha e lavável com consistência adequada para evitar o vazamento de tubos ou outros recipientes. Ésteres de alquilo de cadeia linear ou ramificada, mono- ou dibásicos tais como di-isoadipato, estearato de isocetilo, propileno glicol diéster de ácidos gordos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo ou uma mistura de ésteres de cadeia ramificada conhecidos como Crodamol CAP, os últimos três sendo ésteres preferidos. Estes podem ser utilizados em separado ou em combinação dependendo das propriedades requeridas. Alternativamente, lipidos com alto ponto de fusão tais como parafina branca macia e/ou parafina liquida ou outros óleos minerais podem ser utilizados.

Formulações adequadas para administração intranasal, em que o portador é um líquido, incluem, por exemplo, pulverização nasal, gotas nasais, ou através de administração por aerossol através de nebulizador, incluem soluções aquosas ou oleosas do composto.

Formulações adequadas para administração intranasal, em que o portador é um sólido, incluem, por exemplo, aquelas apresentadas como um pó grosso tendo um tamanho de partícula, por exemplo, no intervalo de cerca de 20 a cerca de 500 micra que é administrado da maneira em que é administrado rapé, isto é, por inalação rápida através da passagem nasal desde um recipiente do pó mantido a curta distância do nariz.

Formulações adequadas para administração pulmonar (por exemplo, através de terapêutica de inalação ou insuflamento) incluem aquelas apresentadas como um pulverizador de aerossol a partir de uma embalagem pressurizada, com a utilização de um propulsor adequado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, dicloro-tetrafluoroetano, dióxido de carbono ou outros gases adequados.

Formulações adequadas para administração ocular incluem gotas oculares em que o composto é dissolvido ou suspenso num portador adequado, especialmente um solvente aquoso para o composto.

Podem ser apresentadas formulações adequadas para administração retal como um supositório com uma base adequada compreendendo, por exemplo, óleos naturais ou endurecidos, ceras, gorduras, polióis semi-líquidos ou líquidos, por exemplo, manteiga de cacau ou um salicilato; ou como uma solução ou suspensão para tratamento através de enema.

As formulações adequadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações de pulverização contendo para além do composto, tais portadores conforme são conhecidos na técnica como sendo adequados.

Formulações adequadas para administração parentérica (por exemplo, por injeção), incluindo líquidos estéreis, isotónicos, isentos de pirogénios, líquidos estéreis (por exemplo, soluções, suspensões), nos quais o composto é dissolvido, suspenso, ou de outra forma proporcionado (por exemplo, num lipossoma ou outro microparticulado). Tais líquidos pode adicionalmente conter outros ingredientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como antioxidantes, tampões, conservantes, estabilizantes, bacteriostáticos, agentes de suspensão, agentes espessantes, e solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue (ou outro fluido corporal relevante) do recetor pretendido. Exemplos de excipientes incluem, por exemplo, água, álcoois, polióis, glicerol, óleos vegetais, e semelhantes. Exemplos de portadores isotónicos adequados para utilização em tais formulações incluem Injeção de Cloreto de Sódio, Solução de Ringer, ou Injeção de Lactato de Ringer. Tipicamente, a concentração do composto no liquido é desde cerda de 1 ng/ml até cerca de 10 yg/ml, por exemplo, desde cerca de 10 ng/ml até cerca de 1 pg/ml. As formulações podem ser apresentadas em recipientes selados de dose unitária ou doses múltiplas, por exemplo, ampolas e frascos, e podem ser armazenadas numa condição seca por congelamento (liofilizada) requerendo somente a adição do portador liquido estéril, por exemplo água para injeções, imediatamente antes da utilização. Podem ser preparadas soluções e suspensões de injeção extemporâneas a partir de pós estéreis, grânulos, e comprimidos.

Dosagem

Será apreciado por um perito na especialidade que as dosagens adequadas dos compostos HMC, e composições compreendendo os compostos HMC, podem variar de paciente para paciente. A determinação da dosagem ótima irá geralmente envolver o equilíbrio do nível de benefício terapêutico contra qualquer risco ou efeitos secundários deletérios. O nível de dosagem selecionado irá depender de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto HMC particular, da via de administração, do momento de administração, da taxa de excreção do composto HMC, da duração do tratamento, outros fármacos, compostos, e/ou materiais utilizados em combinação, da gravidade da condição, e da espécie, sexo, idade, peso, condição, saúde geral, e historial médico prévio do paciente. a quantidade de composto HMC e a via de administração serão em último caso à descrição do médico, veterinário, ou clínico, embora geralmente a dosagem será selecionada para alcançar concentrações locais no local de ação que atingem o efeito desejado sem causar efeitos secundários nocivos ou deletérios substanciais. A administração pode ser efetuada numa dose, continuamente ou intermitentemente (por exemplo, em doses divididas em intervalos adequados) ao longo do curso do tratamento. Métodos de determinar o meio e a dosagem de administração mais eficazes são bem conhecidos para os peritos na especialidade e irão variar com a formulação utilizada para terapêutica, o propósito da terapêutica, a(s) célula(s) alvo a serem tratadas, e o indivíduo a ser tratado. Podem ser efetuadas administrações únicas ou múltiplas com o nível e padrão de dose sendo selecionados pelo clínico responsável, veterinário, ou clínico.

Em geral, uma dose adequada do composto HMC está no intervalo de cerca de 50 pg até cerca de 20 mg (mais tipicamente cerca de 100 pg até cerca de 10 mg) por quilograma de peso corporal do indivíduo por dia. Para administração pulmonar (por exemplo, por inalação), uma dosagem adequada está no intervalo de cerca de 50 ng a cerca de 1 mg por quilograma de peso corporal do indivíduo por dia. Onde o composto é um sal, um éster, uma amida, um profármaco, ou semelhantes, a quantidade administrada é calculada com base no composto mãe e, portanto, o peso real a ser utilizado é proporcionalmente aumentado. Síntese Química São descritos no presente documento métodos para a síntese química dos compostos HMC. Estes e/ou outros métodos bem conhecidos (veja-se, por exemplo, Greig et al., 2010a; Bahmanyar et al., 2010) podem ser modificados e/ou adaptados de maneiras conhecidas de modo a proporcionar métodos alternativos ou melhorados de síntese. Síntese 1 (1 r, 4r) -4-Amino-l-metilciclohexan-l-ol

Foi adicionado hidróxido de paládio (50% húmido com água; 2,0 g) a uma solução agitada de (lr, 4rj-4-(dibenzilamino)-1-metilciclohexanol (7,5 g, 24,2 mmol) em metanol (100 ml) num autoclave de 300 ml. O autoclave foi carregado com hidrogénio (50 atm; ~5 MPa) e aquecido a 80°C durante 24 horas. A mistura foi arrefecida e o catalisador removido por filtração. O filtrado foi devolvido ao autoclave e foi adicionado hidróxido de paládio (50% húmido com água; 3,0 g) . O autoclave foi carregado com hidrogénio (50 atm; ~50 MPa) e aquecido a 80°C durante a noite. A mistura foi arrefecida e filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado para dar o composto do título como um sólido gomoso esbranquiçado (3,2 g, quant.). ΧΗ RMN: (400 MHz; CDC13) δ 2,86-2,76 (1H, m) , 1,84-1,76 (2H, m) , 1,75-1, 63 (2H, m) , 1,55-1,43 (2H, m) , 1,30-1,17 (5H, m). Síntese Ia (Is,4s)-4-Amino-l-metilciclohexan-l-ol

Quatro lotes iguais de (Is,4s)-4-dibenzilamino-l- met ilciclohexan-l-ol (cada lote de 15 g, total 60 g) foram separadamente desbenzilados conforme segue: A (ls,4s)-4-dibenzilamino-l-metilciclohexan-l-ol (15 g, 193,9 mmol) em etanol (450 ml) foi adicionado hidróxido de'paládio a 10% (15 g, catalisador húmido 50%) . As misturas de reação foram esguichadas com azoto seguido por gás hidrogénio e agitadas sob uma atmosfera de hidrogénio durante 16 horas à temperatura ambiente. A solução foi filtrada através de celite e foi lavada com acetato de etilo adicional. Os filtrados a partir dos quatro lotes foram combinados e evaporados sob pressão reduzida para render o composto do titulo (23 g, rendimento de 91,8 %). O composto foi utilizado sem purificação adicional na etapa seguinte. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) õ: 2,6 (m, 1H) , 1,74-1,56 (m, 4H) , 1,5-1,3 (m, 7H) , 1,21 (s, 3H) . Síntese 2 4-Bromo-2V( (lr, 4r) -4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida

Foi adicionada diisopropiletilamina (24 ml, 137,8 mmol) a uma solução de (lr,4r)-4-amino-l-metilciclohexanol (3,6 g, 27,86 mmol) em diclorometano (150 ml) e a mistura de reação foi arrefecida até 0°C. Foi adicionado cloreto de 4-bromobenzeno-l-sulfonilo (7,83 g, 30,6 mmol) como um sólido e a mistura de reação foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura de reação foi neutralizada com ácido clorídrico 1 M e o composto foi extraído em diclorometano. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo obtido foi lavado com pentano, filtrado e seco para dar o composto do título (7 g, 72%) . λΕ RMN: (400 MHz; CDC13) δ 7,74 (2H, d), 7,65 (2H, d), 4,77-4,61 (1H, m) , 3,33-3,23 (1 H, m), 1,85-1,75 (2H, m) , 1,63-1,51 (2H, m) , 1,49-1,30 (4H, m) , 1,20 (3H, s) . LCMS: (Tempo de Execução: 3,5 min) : Tempo de retenção: 1,33 min (97%, MS (ESI) m/z 346 (M-H)+). Síntese 3 N-((1r,4r)-4-Hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5, 5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida

Uma solução de 4-bromo-N-((lr,4r)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)benzenossulfonamida (9 g, 25,8 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi (1,3,2-dioxaborolano) (9,87 g, 38,9 mmol) e acetato de potássio (7,6 g, 77,5 mmol), em tolueno (50 ml) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1— Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (1,8 g, 2,5 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos e agitada a 100°C durante 4 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto do título (8 g, 78%) MS (ESI) m/z 394 (M-H)+). Para lotes a grande escala, o composto foi utilizado sem purificação adicional. Quando esta preparação foi realizada a uma escala menor, o resíduo foi tomado em éter, filtrado e o filtrado foi concentrado para dar o produto desejado. Síntese 4 4-(3,5-Dicloropiridin-2-il)-N- ((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida (HMC-N-03-A)

Uma mistura de dioxano e água (3:1; 20 ml) foi desgasifiçada. Foram adicionados 2,3,5-Tricloropiridina (1,65 g, 9,0 mmol) , Λ/'-( (lr, 4_r)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (1,8 g, 4,6 mmol), K2C03 (1,24 g, 9,0 mmol) e [1,1 — bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (257 mg, 0,35 mmol) e a mistura de reação agitada a 120°C num micro-ondas durante 3 horas. A mistura de reação foi concentrada, diluída com acetato de etilo e lavada com água. Os extratos orgânicos foram secos (MgS04) e concentrados para dar um resíduo em bruto que foi purificado por coluna flash (eluente: acetato de etilo a 40 a 50% em heptano) . O produto foi purificado adicionalmente por cristalização três vezes (acetato de etilo/heptano) para dar o composto do título (284 mg, 15%) . XH RMN: (400 MHz; CDC13) δ 8,59 (1H, m) , 7,97 (2H, d), 7, 92-7, 85 (3H, m) , 4, 62-4,55 (1 H, m) , 3, 38-3,28 (1 H, m) , 1, 92-1,76 (2H, m) , 1,8-1,35 (7H, m) , 1,22 (3H, s) . LCMS: fase móvel A: ácido trifluoroacético a 0,05 % em água, fase móvel B: ácido trif luoroacét ico a 0,05 % em acetonitrilo; Coluna: YMC ODS A, C18 (50X4,6 mm) 3uM;

Taxa de fluxo: 1,2 ml/min; Temperatura: Ambiente. Tempo de Execução: 4,5 min - o solvente de partida 20:80 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 3 min, mantido a 95:5 B:A durante 0,5 min e posteriormente imediatamente devolvido a 20:80 B:A durante os últimos 1.5 min. Tempo de retenção: 2,50 min, m/z 415 (M+H)+. Síntese 5 4-(3,5-Difluoropiridin-2-il)-N-((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida (HMC-N-02-A)

Uma solução agitada de dioxano: água (9:1; 100 ml), N- ((lr, 4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (20 g, 50,6 mmol), 2-bromo-3,5-difluoropiridina (14,73 g, 75,94 mmol), e carbonato de sódio (10,73 g, 101,2 mmol) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 minutos. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (3,7 g, 5.06 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos e agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica e as frações foram concentradas até ao volume mínimo e posteriormente filtradas. O resíduo obtido foi lavado com acetato de etilo a 20% em hexano seguido por n-pentano para dar o composto do título (8 g, 41%). 1H RMN: (400 MHz; metanol-d4) δ 8,54 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 8,11 (d, J= 8,2 Hz, 2H), 7,99 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 7,74 (m, 1 H) , 3,20 (m, 1 H) , 1,83 - 1,27 (m, 8H) , 1,18 (s, 3H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 10 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 1,75 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1 min, reduzido linearmente

até 30:70 B:A durante 1,25 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 1,88 min, m/z 381 (M-H) + . Síntese 6 4'-Cloro-2'-ciano-N- ((lr,4r)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)bifenil-4-sulfonamida (HMC-C-01-A)

Uma solução agitada de dioxano: água (9:1; 100 ml), N-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (12 g, 30,4 mmol), 2-bromo-5-clorobenzonitrilo (9,86 g, 45,5 mmol), e carbonato de sódio (6,44 g, 60,8 mmol) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 minutos. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (2,21 g, 3,0 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos e agitada a 110°C durante 6 horas. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida seguido por lavagem com n-pentano (duas vezes) e seca sob vácuo a 45-50°C para dar o composto do título (5,7 g, 46,5%). 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) δ 8,01 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 7,95 (m, 1 H), 7,83-7,74 (m, 3H) , 7,64 (d, J= 8,5 Hz, 1 H), 3,25 - 3,17 (m, 1 H) , 1,8-1,54 (m, 4H) , 1,47-1,34 (m, 4H), 1,18 (s, 3H). LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 10 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2,5 mins, mantido a 95:5 B:A durante 0,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 1 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,167 min, m/z 403 (M-H)+. Síntese 6a 4' -Cloro-2' -ciano-JV- ( (lr, 4r) -4-hidroxi-4- metilciclohexil)bifenil-4-sulfonamida (HMC-C-01-A)

Num balão de 10 1 foram carregados (lr,4r)-4-Amino-l- metilciclohexan-l-ol finamente dividido (123,7 g, 0,957 mol) e diclorometano (2400 ml). Foi adicionada trietilamina (534 ml, 3,830 mol) gota a gota. A suspensão foi arrefecida até menos de 5°C e foi adicionado cloreto de 4-(4-Cloro-2-cianofenil)benzeno-l-sulfonilo (298, 9 g, 0,957 mol) em diclorometano (768 ml) gota a gota mantendo a temperatura a menos de 25°C. A mistura de reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 40 horas. A mistura de reação foi arrefecida até menos de 10°C e foi adicionado ácido clorídrico aquoso 2 M (2090 ml) gota a gota enquanto mantendo a temperatura a menos de 25°C adição exotérmica e fumos brancos observados). As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com água (2090 ml). Os orgânicos foram secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados, e o resíduo foi lavado com diclorometano (2 x 50 ml) . OS filtrados combinados foram então combinados com o produto em bruto a partir de uma reação semelhante a menor escala de cloreto de 4-(4-Cloro-2-cianofenil)benzeno-l-sulfonilo 4 (50 g) e (lr,4r)-4-amino-l-metilciclohexan-l-ol, e todos os materiais combinados adsorvidos diretamente em sílica (800 g) . Isto foi purificado através de cromatografia em sílica (8000 g) eluindo inicialmente com acetato de etilo: diclorometano 20:80, e posteriormente sequencialmente com misturas de acetato de etilo: diclorometano 30:70, 40:60, 50:50, seguido por acetato de etilo puro. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas para render um sólido amarelo. Este material foi seco num forno a vácuo durante a noite a 40°C para tender o composto do título (406.8 g; rendimento global de 88 %). A análise por RMN indicou uma pureza de >97 %. RMN: (270 MHz; CDC13) δ 8,02 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 7,78 (d, J = 2 Hz, 1H) , 7,73-7, 63 (m, 3H) , 7,49 (d, J = 8,5

Hz, 1 H) , 4,89 (d, J = 7 Hz, 1 H) , 3,38 (m, 1 H) , 1,98- 1,75 (m, 2H), 1,75-1,3 (m, 7H, m), 1,23 (s, 3H). HPLC: fase móvel A: água purificada + ácido trifluoroacético a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + ácido trifluoroacético a 0,1%; Coluna: Fortis C18 4,6 x 150mm; 3 uM; Taxa de fluxo: 1,0 ml/min. Tempo de

Execução: 30 mins - o solvente de partida 5:95 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 15 mins, mantido a 95:5 B:A durante os 15 min finais. Tempo de retenção 12,0 min. Espetro de Massa: Bruker Esquire 3000 Plus Ion Trap MS; Polaridade iónica positiva, ESI: m/z 403 (M-H)+. Síntese 7 4'-Fluoro-2'-ciano-N- ((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-2’-(trifluorometil)bifenil-4-sulfonamida (HMC-C-02-A)

Uma solução agitada de dioxano: água (9:1; 100 ml), N- ((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida-il)benzenossulfonamida (20 g, 50,6 mmol), l-bromo-4-fluoro-2-(trifluorometil)benzeno (18,45 g, 75,9 mmol), e carbonato de sódio(10,73 g, 101,2 mmol) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 minutos. Foi adicionado [1,1— Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (3,7 g, 5,06 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos e agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica e as frações foram concentradas e posteriormente filtradas. O resíduo obtido foi lavado com um volume mínimo de diclorometano seguido por lavagem com n-pentano (duas vezes) e seco sob vácuo a 45-50°C para dar o composto do título (10,2 g, 47%). 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) δ 7,93 (d, J= 7,9 Hz, 2H) , 7,59 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 7,51 (d, J= 8,1 Hz, 2H) , 7,46 (d, J= 6,6 Hz, 2H), 3,20 (m, 1 H) , 1,79 - 1,51 (m, 4H) , 1,49 - 1,30 (m, 4H) , 1,18 (s, 3H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 10 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 1,75 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 1,25 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,16 min, m/z 430 (M-H) +. Síntese 8 2' , 4' , 6' -Trifluoro-JV- ( (lr, 4r) -4-hidroxi-4- metilciclohexil)bifenil-4-sulfonamida (HMC-C-03-A)

Uma mistura de dioxano: água (3:1; 20 ml) foi desgasifiçada. Foram adicionados l-Bromo-2,4,6-trif luorobenzeno (1,91 g, 9,1 mmol) , N- ( (lr, 4_r) -4- hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (1,8 g, 4,6 mmol), K2C03 (1,24 g, 9,0 mmol) e [1,1- bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (257 mg, 0,35 mmol) e a mistura de reação agitada a 120°C num micro-ondas durante 3 horas. A mistura de reação foi concentrada, diluída com acetato de etilo e lavada com água. Os extratos orgânicos foram secos (MgS04) e concentrados para dar um resíduo em bruto que foi purificado por coluna flash (eluente: acetato de etilo a 40 a 50% em heptano) . O produto foi purificado adicionalmente por cristalização (acetato de etilo/heptano) para dar o composto do título (620 mg, 34%) . XH RMN: (400 MHz; CDC13) δ 7,95 (d, 2H) , 7,58 (d, 2H) , 6.80 (t, 2H) , 4, 62-4,52 (m, 1H) , 3,41-3,30 (m, 1H) , 1,91- 1.81 (m, 2H) , 1, 66-1,34 (m, 6H) , 1,22 (s, 3H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 10 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 5,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado

linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2,5 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 1,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,40 min m/z 400 (M+H)+' Síntese 9 4-Bromo-3-fluoro-W-((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida

Foi adicionada diisopropiletilamina (20 ml, 116,2 mmol) a uma solução de (lr,4r)-4-amino-l-metilciclohexanol (3 g, 23,2 mmol) em diclorometano (150 ml) e a mistura de reação foi arrefecida até 0°C. Foi adicionado cloreto de 4-Bromo-3-fluorobenzeno-l-sulfonilo (6,98 g, 25,5 mmol) como um sólido e a mistura de reação foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura de reação foi neutralizada com ácido clorídrico 1 M e o composto foi extraído em diclorometano. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo obtido foi lavado com n- pentano, filtrado e seco para dar o composto do título (7 g, 82%). MS (ESI) m/z 368 (M+H)+) . Síntese 10 3-fluoro-W-((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida

Uma solução agitada de tolueno (50 ml), 4-bromo-3-fluoro-N-((lr,4r)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)benzenossulfonamida (9 g, 24,6 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2- dioxaborolano) (9.33 g, 36.7 mmol) e acetato de potássio (7,23 g, 73,7 mmol) foi desgasificada utilizando árgon durante 10 minutos. Foi adicionado [1,1-

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (1,8 g, 2,5 mmol) e a mistura de reação foi desgasificada durante outros 10 minutos e agitada a 110°C durante 4 horas. A mistura de reação foi arrefecida até a temperatura ambiente e filtrada através de celite. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para dar o composto do título (10 g, 98%) . Para lotes a grande escala, o composto foi utilizado sem purificação adicional. Quando esta preparação foi realizada a uma escala menor, o resíduo foi tomado em éter, filtrado e o filtrado foi concentrado para dar o produto desejado. MS (ESI) m/z 412 (M-H)+) . Síntese 11 4-(3,5-Difluoropiridin-2-il)-3-fluoro-N-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida (HMC-N-01-A)

Uma solução agitada de dioxano (50 ml) , 3-f luoro-iV- ((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (18 g, 43,6 mmol), 2-bromo-3,5-difluoropiridina (12,68 g, 65,37 mmol), e carbonato de césio (35,52 g, 109,0 mmol) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 minutos. Foi adicionado [1,1—

Bis (difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (3,2 g,

4,4 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos e posteriormente agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de gel de silica seguida por lavagem com n-pentano para dar o composto do titulo (8,19 g, 47%). ΤΗ RMN (400 MHz, metanol-d4) δ 8,55 (d, J = 2,1 Hz, 1 H) , 7,87 - 7,71 (m, 4H) , 3,24 (m, 1 H) , 1,8-1,7 (m, 2H) , 1, 66-1,55 (m, 2H) , 1,51 - 1,34 (m, 4H) , 1,19 (s, 3H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2,5 mins, mantido a 95:5 B:A durante 0,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 1 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 1,88 min, m/z 399 (M-H)+. Síntese 12 4-(3,5-Dicloropiridin-2-il)-3-fluoro-N-((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida (HMC-N-04- A)

Uma solução de 3-fluoro-N-((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (0,338 g, 0,82 mmol) em dimetoxietano (10 ml) foi purgada com árgon durante 15 min. Foram adicionados 2-bromo-3,5- dicloropiridina (0,185 g, 0,82 mmol) e carbonato de sódio (0,175 g, 1,65 mmol) em água e desgasifiçados utilizando árgon durante 30 minutos. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (0,12 g, 0,16 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos e posteriormente agitada a 80°C durante 2 horas. A mistura de reação foi arrefecida e filtrada através de celite. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando acetato de etilo a 50% em hexano para dar o composto do título (0,04 g, 11%). ΧΗ RMN (400 MHz, metanol-d4) δ 1,19 (3H, s) , 1,33 - 1,52 (4H, m) , 1,54-1, 66 (2H, m) , 1, 69 - 1,82 (2H, m) , 3,25 (1 H, m) , 7,68 (1 H, m) , 7,75 (1 H, m) , 7,82 (1 H, m) , 8,20 (1 H, d, J = 2,1 Hz), 8,65 (1 H, d, J = 2,1 Hz). LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 10 mM em água + amónia a 0,1 %, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,2 ml/min. Tempo de Execução: 5 mins - o solvente de partida 35:65 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2,5 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,3 min, reduzido imediatamente até 35:65 B:A durante os 1,2 min finais. Tempo de retenção 2,59 min m/z 431 (M-H)+' Síntese 13 4' -Cloro-2' -ciano-W-((ls,4s)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)-[1,1'-bifenil]-4-sulfonamida (HMC-C-01- B)

Uma solução de N- ( (ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)benzenossulfonamida (17 g, 43,0 mmol), 2-bromo-5-clorobenzonitrilo (14 g, 64,7 mmol), e carbonato de sódio (9,lg, 86 mmol) em dioxano: água (240 ml, 9:1) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (3,14 g, 4,3 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando gel de sílica de malha 100-200 utilizando acetato de etilo a 20-40% em hexano como eluente. As frações foram concentradas até 1/102 do volume (85 ml) e posteriormente filtradas. O resíduo obtido foi lavado com acetato de etilo a 20% em hexano seguido por n-pentano para render o composto do título. Rendimento: 5,8 g, 33% (ao longo de 2 etapas). ΤΗ RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,04 - 7, 97 (m, 2H) , 7,79 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7, 69-7, 64 (m, 3H) , 7,48 (d, J = 8,4 Hz, 1 H) , 4,45 (d, J = 8 Hz, 1 H) , 3,3-3,15 (1, 1 H) , 1,74 - 1,51 (m, 6H) , 1,45-1,35 (m, 2H) , 1,20 (s, 3H) , 1,00 (s, 1 H). LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de

Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,62 min m/z 403,30 [Μ—1]. Síntese 14 4'-Fluoro-2'-ciano-N- ((Is,4s)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)-2'-(trifluorometil) -[1,1'bifenil]-4- sulfonamida (HMC-C-02-B)

Uma solução de N- ( (Is,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2- il)benzenossulfonamida (13,5 g, 34,1 mmol), l-bromo-4-fluoro-2-(trifluorometil)benzeno (12,45 g, 51,2 mmol), e carbonato de sódio(7,24 g, 68,3 mmol) em dioxano: água (230 ml, 9:1) foi desgasificada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (2,49 g, 3,4 mmol) e a mistura de reação foi desgasificada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando gel de sílica de malha 100-200 utilizando acetato de etilo a 20-40% em hexano como eluente. As frações foram concentradas até 1/102 do volume (80 ml) e posteriormente filtradas. O resíduo obtido foi lavado com acetato de etilo a 20% em hexano seguido por n-pentano para render o composto do título. Rendimento: 5,6 g, 20% (ao longo de 2 etapas). 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7, 97 - 7, 88 (m, 2H) , 7,52 - 7,40 (m, 3H), 7,31 (dd, J= 7.0, 2,4 Hz, 2H) , 4,40 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 3,25-3,12 (1, 1H), 1,70-1,50 (m, 6H), 1,45-1,33 (m, 2H) , 1,20 (s, 3H) , 1,00 (s 1, 1H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado

linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,79 min m/z 430 [M-l]. Síntese 15 2' , 4' , 6' -Trifluoro-iV- ( (ls, 4s) -4-hidroxi-4- metilciclohexil)-[l,l'-bifenil]-4-sulfonamida (HMC-C-03- B)

Uma solução de N- ( (ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)benzenossulfonamida (15 g, 37,9 mmol), 2-bromo-l,3,5-trifluorobenzeno (12 g, 56,9 mmol), e carbonato de de sódio (8,03g, 75,8 mmol) em dioxano: água (250 ml, 9:1) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (2,77 g, 3,8 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando gel de sílica de malha 100-200 utilizando acetato de etilo a 20-40% em hexano como eluente. As frações foram concentradas até 1/102 do volume (90 ml) e posteriormente filtradas. O resíduo obtido foi lavado com acetato de etilo a 20% em hexano seguido por n-pentano para render o composto do título. Rendimento: 4,98 g, 18% (ao longo de 2 etapas). ΤΗ RMN (400 MHz, Clorof órmio-d) δ 7,99 - 7, 92 (m, 2H) ,

7,61 - 7,53 (m, 2H) , 6,80 (t, J= 8,2 Hz, 2H) , 4,39 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,25-3,12 (1, 1 H), 1,75 - 1,51 (m, 6H), 1,48 - 1,33 (m, 2H) , 1,20 (s, 3H) , 0,99 (s, 1 H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado

linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,65 min m/z 398 [M-l]. Síntese 16 2,2' , 4' -Trifluoro-N-((ls,4s)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)-[l,l'-bifenil]-4-sulfonamida (HMC-C-04-B)

Uma solução de 3-fluoro-iV-( (ls, 4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (3,1 g, 7,5 mmol), l-bromo-2,4-difluorobenzeno (2,1 g, 10,9 mmol), e carbonato de sódio (1,6 g, 15,0 mmol) em dioxano: água (60 ml, 5:1) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (0,548 g, 0,75 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando gel de sílica de malha 100-200 utilizando acetato de etilo a 20-40 % em hexano como eluente para render o composto do título. Rendimento: 0,6 g, 18% (ao longo de 2 etapas). ΤΗ RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,73-7, 69 (m, 2H) , 7,56- 7,47 (m, 1H) , 7,44-7,32 (m, 1H) , 7,06 - 6,91 (m, 2H) , 4,41 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 3,27-3,14 (1, 1 H) , 1,76 - 1,52 (m, 6H) , 1, 48 - 1,35 (m, 2H) , 1,21 (s, 3H) , 0,97 (s, 1 H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,70 min m/z 398 [Μ—1]. Síntese 17 4-(3,5-Difluoropiridin-2-il)-3-fluoro-N- ((is,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida (HMC-N-01-B)

Uma solução de 3-fluoro-JV-((ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (22 g, 53,2 mmol), 2-bromo-3,5-difluoropiridina (15,5 g, 79,9 mmol), e carbonato de césio (52,Og, 159,6 mmol) em dioxano: água (100 ml) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (3,9 g, 5,3 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando gel de sílica de malha 100-200 utilizando acetato de etilo a 20-40% em hexano como eluente. As frações foram concentradas até 1/102 do volume (110 ml) e filtradas. O resíduo obtido foi lavado com acetato de etilo a 20% em hexano seguido por n-pentano para render o composto do título. Rendimento: 5,6 g, 26% (ao longo de 2 etapas). ΧΗ RMN (400 MHz, Clorof órmio-d) δ 8,50 (m, 1H),7,83 - 7,67 (m, 3H) , 7,41-7,33 (m 1 H) , 4,43 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 3,28-3,13 (m 1 H), 1,74 - 1,52 (m, 6H), 1,46-1,35 (m, 2H), 1,21 (s, 3H), 0,97 (s, 1 H). LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2 mins,

mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,42 min m/z 399 [M-l]. Síntese 18 4-(3,5-Difluoropiridin-2-il)-N- ((ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida (HMC-N-02-B)

A uma solução adicional de JV-((ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (26,5 g, 67,0 mmol), 2-bromo-3,5-difluoropiridina (19,5 g, 100,5 mmol), e carbonato de sódio (14,22g, 134,2 mmol) em dioxano: água (250 ml, 9:1) foi desgasif icada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1-

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (4,90 g, 6,70 mmol) e a mistura de reação foi desgasificada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. O resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando gel de sílica de malha 100-200 utilizando acetato de etilo a 20-40% em hexano como eluente. As frações foram concentradas até 1/102 do volume (100 ml) e posteriormente filtradas. O resíduo obtido foi lavado com acetato de etilo a 20% em hexano seguido por n-pentano para render o composto do título. Rendimento: 5,9 g, 26% (ao longo de 2 etapas). 1h RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,48 (d, J= 2,4 Hz, 1 H) , 8,13 - 8,06 (m, 2H) , 7,98 (d, J= 8,5 Hz, 2H) , 7,39- 7,31 (m 1 H) , 4,39 (d, J = 7,8 Hz, 1 H) , 3,25-3,1 (1, 1 H) , 1,72 - 1,5 (m, 6H), 1,42-1,32 (m, 2H), 1,19 (s, 3H) , 0, 96 (s, 1H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,41 min m/z 381 [M-l]. Síntese 19 4-(3,5-Dicloropiridin-2-il)-N- ((ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)benzenossulfonamida (HMC-N-03-B)

Uma solução de N- ( (ls,4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2- il)benzenossulfonamida (1,5 g, 3,8 mmol), 2-bromo-3,5- dicloropiridina (1,3 g, 5,7 mmol), e carbonato de sódio (0,805 g, 7,6 mmol) em dioxano: água (18 ml, 5:1) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1-

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (0,277 mg, 0,38 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. Uma solução adicional de N-((ls, 4s)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (4 g, 10,1 mmol), 2-bromo-3,5-dicloropiridina (3,44 g, 15,2 mmol), e carbonato de sódio (2,14 g, 20,2 mmol) em dioxano:água (54 ml, 5:1) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1 —

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (0,739 g, 1,0 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. Ambos os lotes acima foram combinados. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida para obter um resíduo. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica utilizando gel de sílica de malha 100-200 com acetato de etilo a 20-40% em hexano como o eluente. As frações foram concentradas até 1/102 do volume (30 ml) e posteriormente filtradas. 0 resíduo obtido foi lavado com acetato de etilo a 20% em hexano seguido por n-pentano para render o composto do título. Rendimento: 0,79 g, 14% (ao longo de 2 etapas). ΧΗ RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,59 (m, 1 H) , 8,02 - 7,94 (m, 2H) , 7, 90 - 7,83 (m, 3H) , 4,47 (d, J = 8 Hz, 1 H), 3,25-3,1 (1, 1 H), 1,73 - 1,5 (m, 6H) , 1,44-1,32 (m, 2H), 1,19 (s, 3H), 1,01 (s, 1 H). LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B: A durante os primeiros 2 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30 : 70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,69 min m/z 413 [M-l]. Síntese 20 2,2' , 4' -Trifluoro-W- ((lr,4r)-4-hidroxi-4- metilciclohexil) [1,1'-bifenil]-4-sulfonamida (HMC-C-04-A)

Uma solução de 3-fluoro-N-((1r,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l, 3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (3,5 g, 8,4 mmol), l-bromo-2,4-difluorobenzeno (2,44 g, 12,7 mmol), e carbonato de sódio (1,79 g, 16,9 mmol) em dioxano: água (60 ml, 5:1) foi desgasificada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1-

Bis (difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (0,619 g, 0,85 mmol) e a mistura de reação foi desgasificada durante outros 10 minutos. A mistura de reação foi agitada a 110°C durante 6 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, foi adicionada água, e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por purificação SFC: Fase Móvel: C02:Metanol (05-50 em 5 min) , Coluna: 2-Etilpiridina de Sílica (250x4, 6 mm, 5μ) , Fluxo: 3 ml/min, Comprimento de onda: 210-400 nm para render o composto do título. Rendimento: 0,7 g, 19% (ao longo de 2 etapas). XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,78-7, 64 (m, 2H) , 7, 62-7,45 (m, 1H) , 7,44-7,34 (m 1 H) , 7,06 - 6,91 (m, 2H) , 4,51 (d, J= 6,8 Hz, 1 H) , 3, 40-3, 35 (1, 1 H) , 1,95 - 1,83 (m, 2H) , 1, 67 - 1,37 (m, 6H) , 1.25 (d, J = 3,3 Hz, 3H), 1,13 (s, 1 H). LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 4,5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado

linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,56 min m/z 398 [M-l]. Síntese 21 5-Cloro-2-fenilbenzonitrilo

2-Bromo-5-cloro-benzonitrilo (297,0 g, 1,372 mol), ácido fenilborónico (184,0 g, 1,509 mol), carbonato de sódio (436,3 g, 4,116 mol), 1,2-dimetoxietano (4455 ml) e água (1485 ml) foram adicionados a um recipiente sob azoto. O balão foi desgasifiçado três vezes com azoto e foi adicionado tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (79,3 g, 0,069 mol). O balão foi desgasifiçado três vezes com azoto e foi agitado e aquecido até 70°C e posteriormente agitado a essa temperatura durante 24 h. Foram adicionados ácido fenilborónico (36,8 g, 0,302 mol), carbonato de sódio (87,3 g, 0,824 mol) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (15,9 g, 0,014 mol) e a mistura agitada durante 16 h adicionais. A reação foi arrefecida até a temperatura ambiente e a suspensão foi filtrada e o sólido lavado com acetato de etilo (2 x 2000 ml) . Os filtrados combinados foram separados e a camada orgânica foi lavada com salmoura saturada (2 x 2000 ml) . A camada orgânica foi seca sob sulfato de magnésio anidro, filtrada e o sólido lavado com acetato de etilo (1000 ml) . Os filtrados combinados foram concentrados enquanto absorvendo em gel de sílica (600 g) . O material em bruto foi purificado em gel de silica (6 Kg) eluindo com tolueno a 25-50% em heptano. As frações puras foram combinadas e concentradas para dar um sólido branco. O sólido foi submetido a azeotropia com heptano (8 x 800 ml) para remover qualquer tolueno residual e dar o composto alvo. Rendimento = 215,9 g (73,6 %) . 1H RMN (270 MHz, DMSO d6) δ 8,18 - 8,12 (m, 1 H) , 7,86 (dd, J = 8,4 Hz, 2,4 Hz, 1H), 7,7 - 7,45 (m, 6 H). Síntese 22 ácido 4-(4-Cloro-2-cianofenil)benzeno-l-sulfónico

Num balão de 5 1 foi carregado 5-cloro-2- fenilbenzonitrilo em bruto (407,8 g, 1,909 mol) e clorofórmio (2325 ml). A solução amarelo pálido foi arrefecida até menos de 5°C e foi adicionado ácido clorossulfónico (343 ml, 5,15 mol), mantendo a temperatura a menos de 10°C. A mistura de reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e a solução castanho escuro foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi concentrada a 20°C e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (2325 ml) - exotermia até 33°C observada. Foi adicionada água (490 ml) (exotermia até 64°C) seguido por salmoura saturada (1920 ml), e a mistura foi arrefecida até 19°C.

A suspensão espessa foi filtrada (filtração muito lenta) e o resíduo lavado com água (2x11) e acetato de etilo (2 x 1,5 1). 0 bolo do filtro foi seco in vacuo a 40 £C durante 64 horas para render 435 g de material como um sólido amarelo. Isto foi suspenso em acetato de etilo (1740 ml) à temperatura ambiente durante 20 minutos. A suspensão foi filtrada e o resíduo lavado duas vezes com acetato de etilo (435 ml) . O bolo do filtro foi seco in vacuo a 40-60°C durante duas noites para render um sólido creme (366, 3 g) , contendo 289 g do composto do título (rendimento de 52 %). A análise através de Karl Fischer mostrou que o produto continha 4,3% de água. XH RMN (270 MHz, DMSO d6) δ 8,16 (d, J = 2,3 Hz, 1H) , 7,85 (dd, J = 2,3 Hz, 8,5 Hz, 1 H) , 7,73 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,65 (d, J = 8,2 Hz. 1 H) , 7,54 (d, J= 8,3 Hz, 2H) . Síntese 23

Cloreto de 4-(4-Cloro-2-cianofenil)benzeno-l-sulfonilo

Num balão de 5 1 foi carregado ácido 4-(4-Cloro-2- cianofenil)benzeno-l-sulfónico em bruto (366,3 g, contendo 289 g de ácido 4-(4-Cloro-2-cianofenil)benzeno-1-sulfónico, 0,98 mol) e tolueno (3000 ml). Foi adicionado cloreto de tionilo (423 ml, 5,83 mol) gota a gota seguido por dimetilformamida (5 ml, 0,0646 mol). A mistura de reação foi aquecida até 75°C e agitada durante a noite. A mistura de reação foi arrefecida, concentrada in vacuo, e o resíduo foi dividido entre acetato de etilo (3000 ml) e água (1500 ml) e a camada orgânica lavada com salmoura saturada (1500 ml) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro (50 g) e filtrada. O resíduo foi lavado com acetato de etilo (2 x 100 ml) e as camadas orgânicas combinadas concentradas para render o composto do título (297, 6 g, rendimento de 93%) como um sólido amarelo. A análise por RMN indicou uma pureza de -95%. ΧΗ RMN (270 MHz, DMSO d6) δ 8,16 (d, J = 2 Hz, 1H) , 7,87 (dd, J = 2,1 Hz, 8,2 Hz, 1H) , 7,73 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,64 (d, J = 8,2 Hz. 1 H), 7,54 (d, J= 8,3 Hz, 2H). Síntese 24 2'-Ciano-4'-fluoro-N-((lr,4r)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)-[1,1'-bifenil]-4-sulfonamida (HMC-C-05- A)

Uma solução agitada de JV-((lr,4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (1,6 g, 4,05 mmol), 2-bromo-5-fluorobenzonitrilo (2,03 g, 10,15 mmol), carbonato de sódio (1,07 g, 10,1 mmol) em dioxano: água (30:3 ml) foi desgasifiçada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1—

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (0,296 g, 0,405 mmol) e a mistura de reação foi desgasifiçada durante outros 10 minutos e agitada a 110°C durante 6 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia de coluna de gel de sílica. 0 resíduo obtido foi lavado com hexano seguido por n-pentano para render o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 1,1 g, 70%. XH RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,04 - 7, 97 (m, 2 H) , 7,71 - 7,64 (m, 2 H) , 7,55 - 7,49 (m, 2 H) , 7,39 - 7,46 (m, 1 H), 4,46 (d, J=6, 6 Hz, 1 H) , 3, 45 - 3, 32 (m, 1 H) , 1, 92 - 1,82 (m, 2 H) , 1, 65 - 1,35 (m, 6 H) , 1,23 (s, 3H) , 1, 11 (s 1, 1 H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2,50 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,50 min (ESI) m/z 387 [ΜΙ] · Síntese 25 4'-Ciano-2'-fluoro-N-((lr,4r)-4-hidroxi-4- metilciclohexil)-[l,l'-bifenil]-4-sulfonamida (HMC-C-0 6-

bL

Uma solução agitada de N-((lr, 4r)-4-hidroxi-4-metilciclohexil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2- dioxaborolan-2-il)benzenossulfonamida (1,6 g, 4,05 mmol), 4-bromo-3-fluorobenzonitrilo (2,03 g, 10,1 mmol), carbonato de sódio (1,07 g, 10,1 mmol) em dioxano:água (30/3 ml) foi desgasificada utilizando árgon durante 10 min. Foi adicionado [1,1-

Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(II) (0,296 g, 0. 405 mmol) e a mistura de reação foi desgasificada durante outros 10 minutos e agitada a 110°C durante 6 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o composto foi extraído em acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sob sulfato de sódio e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por meio de cromatografia em coluna de gel de sílica flash. O resíduo obtido foi lavado com hexano seguido por n-pentano para dar o composto do título como um sólido branco. Rendimento: 1,19 g, 75,79%. ΧΗ RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 8,03 - 7, 96 (m, 2 H) , 7,73 - 7, 66 (m, 2 H) , 7, 62 - 7,56 (m, 2 H) , 7,54 - 7,48 (m, 1 H) , 4,51 (d, J=6,65 Hz, 1 H), 3,42 - 3,30 (m, 1 H) , 1, 95 - 1,82 (m, 2 H) , 1, 66 - 1,55 (m, 2 H) 1,53 - 1,37 (m, 4 H) , 1,23 (s, 3H), 1,12 (s 1, 1 H) . LCMS: fase móvel A: formato de amónio a 5 mM em água + amónia a 0,1%, fase móvel B: acetonitrilo + fase móvel A a 5% + amónia a 0,1%; Coluna: YMC Triart, C18 (50X4,6 mm) 3uM; Taxa de fluxo: 1,4 ml/min. Tempo de Execução: 5 mins - o solvente de partida 30:70 B:A é aumentado linearmente até 95:5 B:A durante os primeiros 2,50 mins, mantido a 95:5 B:A durante 1,5 min, reduzido linearmente até 30:70 B:A durante 0,5 min e mantido a 30:70 B:A durante os 0,5 min finais. Tempo de retenção 2,52 min (ESI) m/z 387 [Μ Ι] .

Compostos Adicionais

Os seguintes compostos foram também preparados para utilização como compostos de referência nos estudos biológicos descritos no presente documento:

Estudos Biológicos A potência foi avaliada utilizando um ensaio de viabilidade baseado na sobrevivência da linha celular de macrófagos J774. Os macrófagos estão estreitamente relacionados com os osteoclastos e foram utilizados anteriormente como um sistema modelo para a sobrevivência dos osteoclastos (veja-se, por exemplo, Luckman et al., 1998, "Heterocycle-containing bisphosphonates cause apoptosis and inhibit bone resorption by preventing protein prenylation: evidence from structure-activity relationships in J774 macrophages," J. Bone Miner. Res., Vol. 13, pp. 1668-1678). 0 modelo é indicativo tanto dos efeitos sobre a proteção óssea em doenças tais como osteoporose, osteoartrite e artrite reumatoide, como dos efeitos sobre a inflamação dado que, como os osteoclastos, os macrófagos J774 dependem para a sobrevivência da ativação continuada de NFkB.

Foi medida a estabilidade metabólica determinando a taxa de desaparição do composto na presença de preparações microssómicas de fígado humano, conforme quantificado através de espetrometria de massa de cromatografia líquida e espetrometria de massa padrão (LC-MS/MS).

Foi medida a solubilidade através de equilíbrio do composto em fluido intestinal simulado em estado de jejum (FaSSIF) e quantificada através de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC).

Os efeitos anti-inflamatório foram adicionalmente caracterizados por avaliação da produção de interleucina-6 (IL-6) por macrófagos derivados de Thp-1 humanas estimulados com um lipopolissacárido (LPS) bacteriano de estímulo pró-inflamatório. LPS atua com um recetor de superfície celular, recetor de tipo Toll 4 para ativar as vias de sinalização de NFkB e IRF para produzir IL-6. A redução de IL- neste ensaio estimulado é indicativa de efeitos anti-inflamatórios com utilidade no tratamento de condições nas quais a produção de IL-6 é aberrante.

Foram também levados a cabo estudos in vivo para avaliar o potencial destes compostos como fármacos.

Foi avaliada a farmacocinética em ratos e os efeitos sobre a doença foram avaliados num modelo de ratinho de artrite induzida por colagénio.

Estudo Biológico 1

Ensaio de Viabilidade do Macrófago J774 com resazurina A potência in vitro dos compostos de teste foi avaliada através de incubação com macrófagos J774 e subsequente determinação da viabilidade celular utilizando resazurina. A resazurina é um corante redox comumente utilizado como um indicador de viabilidade em células cultivadas (veja-se, por exemplo, Anoopkumar-Dukie, 2005, British Journal of Radiology, Vol. 78, pp. 945-947). Não é tóxica para as células e é estável em meio de cultura, permitindo a medição continua da proliferação celular in vitro como um ensaio cinético ou de ponto final. O ensaio é baseado na capacidade de células viáveis, metabolicamente ativas de reduzir a resazurina (que é azul e não fluorescente) a resorufina e dihidroresorufina (que são vermelhas e fluorescentes) utilizando eletrões a partir de espécies redutoras, tais como dinucleótido de nicotinamida adenina (NADPH) e dinucleótido de flavina adenina (FADH). Esta transformação, de forma oxidada a forma reduzida, pode ser medida ou colorimetricamente ou fluorimetricamente. As lesões que comprometem a viabilidade e proliferação celular também afetam a capacidade das células de reduzir a resazurina, e a taxa de redução do corante é diretamente proporcional ao número de células viáveis presentes.

Para medições fluorescentes, são tipicamente utilizados comprimentos de onda de excitação de 530-560 nm e de emissão de 590 nm. Para medições colorimétricas, é tipicamente medida a absorvância a 570 nm (forma reduzida) e 600 nm (forma oxidada). É realizado um cálculo simples para determinar as quantidades relativas das duas espécies: uma razão elevada de resorufina (a forma reduzida) para resazurina (a forma oxidada) é um indicador de que as células proliferam e são viáveis. Uma razão baixa indica células que são quiescentes ou não viáveis.

Foram colocadas células J774 em placas a 104 células por poço em 100 μΐ de aMEM (Meio de Eagle α Modificado) em placas de 96 poços e deixadas aderir durante a noite. No dia seguinte, os compostos de teste foram preparados como soluções de 100 mM em DMSO. Estas soluções-mãe foram diluídas em DMSO e posteriormente diluídas lOOOx em meio de cultura (aMEM) antes de serem adicionadas diretamente aos poços de modo a dar a concentração de composto final desejada. Após 72 horas de incubação a 37 2C/C02 a 5%, foi adicionada resazurina (Azul de Alamar, Biosource International) a cada poço (1: 10 v/v, 10 μΐ) . A placa foi então incubada a 37°C durante 3 horas e a fluorescência foi medida a 590 nm, com uma largura de banda de 25 nm.

Os resultados médios para cada composto de teste foram expressos como uma percentagem (%) do valor de controlo médio refletindo a viabilidade celular. Os valores médio ao longo das concentrações testadas foram então representados graficamente e a CI50 foi calculada ajustando os dados a uma equação de CI50 de 4 parâmetros utilizando software da Grafit (Erithacus Software). Cada experiência foi repetida duas vezes e os dados são apresentados como CI50 médio a partir de ambas experiências.

Os resultados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Estes dados demonstram que os compostos HMC descritos no presente documento, e particularmente HMC-C-01-A e HMC-C-01-B; HMC-C-03-A e HMC-C-03-B; HMC-C-04-A e HMC-C-04-B; HMC-C-06-A; HMC-N-01-B; HMC-N-02-B; e HMC-N-03-B mostram excelente potência no ensaio de viabilidade de macrófagos de resazurina e nenhuma perda de potência, em comparação com os compostos de referência.

Estudo Biológico 2

Estabilidade Microssómica de Fígado Humano A estabilidade metabólica dos compostos de teste foi medida através de determinação da taxa de desaparição do composto quando incubado na presença de microssomas de fígado humano. Os microssomas do fígado são preparados a partir do retículo endoplasmático de hepatócitos e são a fonte primária das enzimas mais importantes (citocromo P450s) envolvidas no metabolismo de fármacos. 0 estudo da estabilidade de fármacos na presença de microssomas do fígado é aceite como um modelo valioso permitindo a rápida previsão da estabilidade do fármaco in vivo.

Foram obtidos microssomas de fígado humano a partir de uma fonte comercial. Foram incubados compostos de teste (1 μΜ) com microssomas do fígado agrupados (masculinos e femininos). Foram incubadas amostras durante um período de 60 minutos e removidos a até 6 pontos de tempo e analisados através de LC-MS/MS para a presença/quantidade de compostos de teste.

Foram incubados microssomas (concentração proteica final 0,25 ou 0,5 mg/ml) , tampão fosfato 0,1 M pH 7,4, e composto de teste (concentração final 1 μΜ; diluído a partir de solução-mãe a 10 mM para dar uma concentração em DMSO final de 0,1%) a 37°C antes da adição de Dinucleótido de nicotinamida adenina fosfato (NADPH, concentração final 1 mM) para iniciar a reação. O volume final de incubação foi 100 μΐ. Foi incluída uma incubação de controlo para cada composto testado, onde foi adicionado tampão fosfato 0,1 M pH 7,4 em vez de NADPH. 0 composto de controlo positivo terfenadina foi incluído em cada experiência e todas as incubações foram realizadas uma vez para cada composto.

Cada composto foi incubado durante 0, 5, 15, 30, 45 ou 60 minutos. As reações foram paradas pela adição de 100 μΐ de acetonitrilo gelado contendo padrão interno (glipizida a 0,001 mM) nos pontos de tempo adequados. As placas de incubação foram centrifugadas a 4000 rpm durante 15 minutos a 4°C para precipitar a proteina e foram analisadas alíquotas de 0,1 ml utilizando LC-MS/MS, com as condições mostradas no seguinte quadro.

A partir de um gráfico do logaritmo natural da razão de área de pico (isto é, razão de área de pico do composto: área de pico do padrão interno) contra o tempo, foi determinado o gradiente da linha. Subsequentemente, foram calculadas a semivida (ti/2) e a eliminação intrínseca (CLint) utilizando as seguintes equações, onde V = Volume de Incubação (μΐ/mg proteína microssómica):

Constante de Taxa Eliminada (k) = (- Gradiente) Semivida (11/2) (min) = 0,063 / k Eliminação Intrínseca (CLint) (μΐ/min/milhão de células) = (V x 0, 693) / 11/2

Os dados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Os dados demonstram que os compostos HMC descritos no presente documento mostram estabilidade metabólica equivalente à dos compostos de referência.

Estudo Biológico 3

Solubilidade Aquosa A solubilidade aquosa foi medida por equilíbrio dos compostos com fluido intestinal simulado em estado de jejum (FaSSIF) e quantificado espetrofotometricamente.

Foi preparado FaSSIF conforme descrito abaixo:

Preparação de FaSSIF em branco: Foram dissolvidos 0,21 g de sedimento de hidróxido de sódio (NaOH) , 1,97 g de dihidrogenofosfato de sódio (NaH2PC>4.2H20) e 3,09 g de cloreto de sódio (NaCl) em 400 ml de água desionizada. O pH foi ajustado a 6,5 utilizando ácido clorídrico 1 M e adicionada água desionizada adicional até um volume final de 500 ml.

Preparação de FaSSIF: 0,056 g de Pó SIF (contendo taurocolato de sódio e lecitina) (Phares AG) foram dissolvidos em 25 ml de FaSSIF em branco e agitados até o pó estar completamente dissolvido. A solução foi deixada repousar durante 2 horas durante as quais se tornou opalescente; foi utilizada no prazo de 24 horas. A composição da solução final foi caracterizada conforme segue:

Taurocolato de sódio: 3 mM Lecitina: 0,75 mM Osmolaridade: 270 ± 10 mOsmol pH: 6,5 A solubilidade aquosa foi determinada pela adição de uma concentração conhecida de composto de teste (dissolvido em DMSO) em FaSSIF seguido por incubação durante 16 horas. A densidade ótica foi medida no final do período de incubação para os compostos de teste e foi utilizada uma referência para determinar a solubilidade. De forma breve, foram preparadas duas amostras para cada determinação: uma amostra de referência consistindo numa solução-mãe de composto de teste em DMSO diluído em solução de sistema (um tampão isento de fosfato, de baixa absorção) e propanol; e uma amostra de teste (preparada por triplicado) consistindo em 0,5 ml de FaSSIF inoculado com composto de teste a 0,2 mM. Cada amostra foi incubada à temperatura ambiente durante 16 horas com agitação constante a 250 rpm. No final do período de incubação, foram filtrados 0,3 ml de cada amostra através de uma placa de filtro plON (PION, Woburn MA), diluídos 1: 1 com propanol e rastreados utilizando espetrofotometria UV a Àmáx (190-400 nM) utilizando um Spectra Max Plus - Versão 2.1000 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA), com software de determinação de solubilidade pSOL Explorer (plON, Woburn, MA). A solubilidade de FaSSIF foi calculada utilizando a seguinte fórmula:

em que: "DO" é a densidade ótica; "Cr" é a concentração da referência (33,4 μΜ) ; e "massa molecular" é para o composto de teste (por exemplo, 381,44 para ABD735).

Os dados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Os dados demonstram que os compostos HMC descritos no presente documento mostram solubilidade equivalente à dos compostos de referência.

Estudo Biológico 4

Ensaio de Libertação de Macrófago IL-6 com Thpl A potência in vitro dos compostos de teste em células humanas foi determinada através de incubação com macrófagos Thpl e subsequente estimulação com uma estímulo inflamatório (lipopolissacárido bacteriano (LPS)) seguido por medição da libertação de interleucina-6 (IL-6) celular. 0 ensaio é fortemente indicativo dos efeitos sobre a inflamação. LPS é um ligando para o recetor de tipo Toll 4 (TLR4), que é um membro da família de recetores de tipo Toll de recetores de superfície celular. Este recetor é importante na ativação do sistema imune inato, cujas principais funções são as de: (a) recrutar células imunes a sítios de infeção através da produção de citocinas tais como IL-6; (b) ativar a cascata de complemento, para identificar bactérias, ativar células e eliminar tanto células mortas como complexos de anticorpos; (c) ativar a remoção de substâncias estranhas por parte de células tais como macrófagos e células dendríticas; e (d) ativar a apresentação de antigénios, parte do sistema imune adaptativo. TLR4 exerce os seus efeitos ativando uma cascata de sinalização que resulta na ativação de vários fatores de transcrição incluindo NFkB e os membros 3, 5, e 7 da família de fatores regulatórios do interferão (IFR) (IRF-3, IRF-5, e IRF-7) . A ativação destes fatores de transcrição, e particularmente NFkB e IRF-5 aciona a síntese e secreção de citocinas tais como interleucina 6 (IL-6). A sobreprodução/expressão de IL-6 está associada com uma gama de distúrbios, incluindo autoimunidade, inflamatório e cancro. IL-6 é predominantemente sintetizada por macrófagos e células T e está fortemente envolvida na gestão da transição de inflamação aguda a crónica. Realiza isto modificando a composição do infiltrado de glóbulos brancos no espaço inflamatório, movendo-o de neutrófilos a monócitos/macrófagos (veja-se, por exemplo, Gabay, 2006) . Adicionalmente, IL-6 exerce efeitos estimulatórios sobre as células T e B (consequentemente favorecendo respostas inflamatórias crónicas) bem como sobre os osteoclastos (consequentemente promovendo a renovação do osso). Estes efeitos estão envolvidos na patologia de várias doenças incluindo osteoporose, artrite reumatoide, diabetes, aterosclerose, depressão, doença de Alzheimer, lúpus eritematoso sistémico, doença de Behçet, mieloma múltiplo, e cancro da próstata. Adicionalmente, os pacientes com cancro avançado ou metastático têm níveis mais elevados do que o normal de IL-6 circulante. A diminuição dos níveis de IL-6 em macrófagos é como tal terapeuticamente benéfica.

Foram colocadas células THpl em placas a uma concentração de 1 x 105 células/poço ou 1,7 x 105 em 500 μΐ ou 150 μΐ de meio RPMI completo contendo penicilina-estreptomicina a 1% e soro bovino fetal inativado por calor a 10% em placas de 24 poços ou placas de 96 poços, respetivamente e deixadas aderir durante a noite. No dia seguinte, as células foram estimuladas com ácido forbolmirístico (PMA) a uma concentração final de 100 nM (placas de 24 poços) ou 200 nM (placas de 96 poços) para induzir diferenciação e mantidas durante até 8 dias com uma permuta do meio aos 5 dias de as células foram cultivadas até 8 dias. Os compostos de teste foram preparados como soluções de 100 nM em DMSO e posteriormente diluídos em série em DMSO antes de diluição em meio de cultura.

Os compostos diluídos foram adicionados ás culturas 1 hora antes da estimulação com LPS a 100 ng/ml. Após 16 ou 18 horas de incubação a 37 2C/C02 a 5%, o meio de cultura celular foi recolhido e ensaiado para os níveis de IL-6 humana utilizando o kit de ELISA duo-set para IL-6 humana (R&D Systems). Os resultados médios para cada composto de teste (n=3) foram expressos como uma percentagem (%) do valor de controlo médio. Os valores médio ao longo das concentrações testadas foram então representados graficamente e a CI50 para a inibição de IL-6 foi calculada ajustando os dados a uma equação de CI50 de 4 parâmetros utilizando software da Grafit versão 6.0.12 (Erithacus Software Ltd., pelo Dr Robin Leatherbarrow) ou GraphPad Prism versão 5.04 para Windows (GraphPad Software, La Jolla, Califórnia, EUA, www.graphpad.com). Cada experiência foi repetida duas vezes e os dados são apresentados como CI50 médio a partir de ambas experiências.

Os resultados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Estes dados demonstram que os compostos HMC descritos no presente documento mostram excelente potência na inibição da libertação de IL-6 a partir de macrófagos humanos, indicando a sua utilizada no tratamento de distúrbios nos quais IL-6 é regulado positivamente. Os compostos HMC-C-01-A, HMC-C-03-A, HMC-C-06-A, HMC-C-01-B, HMC-C-03-B, HMC-C-04-B, HMC-N-01-B, HMC-N-02-B e HMC-N-03-B mostram particularmente boa atividade na redução da libertação de IL-6.

Estudo Biológico 5

Estudos Farmacocinéticos em Roedores A absorção e a estabilidade metabólica foram estudadas utilizando um ensaio farmacocinético in vivo.

Três ratinhos Sprague-Dawley macho, de 8-12 semanas de idade, foram doseados com compostos de teste administrados quer por via oral quer intravenosa (nivel de dose de 1 mg/kg de peso corporal por via intravenosa ou 5 mg/kg de massa corporal por via oral) . Os compostos de teste foram formulados em carboximetilcelulose (CMC) a 0,5% / Tween-80 a 0,1% para administração por meio da via oral, ou em DMSO a 5% / solutol a 10% em solução salina para administração por meio da via intravenosa. Para o composto HMC—C—01—A, a administração oral foi formulada em dimetilacetamida a 2%/ hidroxipropil-p-ciclodextrina a 20% em água. Foi dado aos animais acesso livre à comida ao longo do estudo exceto para jejum durante a noite e até 2 horas após a dose no dia da dosagem.

Foram tomadas amostras de sangue a partir de plexo retro-orbital nos seguintes pontos de tempo e colocadas em microtúbulos contendo solução de K2EDTA a 20%:

Dosagem Oral: pré-dose; 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, e 24 horas após a dose.

Dosagem Intravenosa: pré-dose; 0,08, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, e 24 horas após a dose.

As amostras de sangue foram centrifugadas para obter plasma, que foi transferido para um recipiente separado e congelado a -20°C.

Para a análise, as amostras foram descongeladas à temperatura ambiente e preparadas através de precipitação proteica com acetonitrilo inoculado com padrão interno (glipizida a 500 ng/ml) na razão 1: 4 com plasma. As amostras foram então submetidas a vórtice durante 5 minutos e centrifugadas durante 10 minutos a 20.600 χ g a 4°C. Foram recolhidos 100 μΐ do sobrenadante para análise. As amostras padrão foram preparadas de forma semelhante, após inocular amostras de plasma de rato em branco com 10 μΐ de analito. A concentração do composto de teste nas amostras de plasma de rato foi determinada utilizando LC-MS/MS, com as condições mostradas no seguinte quadro.

Os parâmetros farmacocinéticos para os compostos de teste foram calculados por Phoenix WinNonlin versão 6.3 (Pharsight Corp, CA) utilizando métodos não compartimentais padrão. As concentrações de plasma de pico (Cmáx) e o tempo do pico de concentração de plasma (Tmáx) foram os valores observados. A área sobre a curva (AUC) de concentração-tempo de plasma foi determinada através da utilização da regra trapezoidal linear até à última concentração mensurável (AUCiast) e posteriormente através de extrapolação da fase de eliminação terminal até ao infinito (AUCinf) . A constante da taxa de eliminação terminal (kei) foi determinada através de análise de regressão da porção terminal linear da curva de concentração-tempo log do plasma. A semivida de fase de eliminação (11/2) foi calculada como 0, 693 / kei. A biodisponibilidade oral experimental (F) foi calculada dividindo a AUC (0-24 horas) após a administração oral pela AUC ajustada (0-8 horas) após a administração intravenosa (isto é, F = AUC(p.o.) x Dose (i.v.) / AUC(i.v.) x Dose (p.o.)) e relatada como uma percentagem (%) .

Os dados farmacocinéticos encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Os dados demonstram que os compostos HMC descritos no presente documento têm excelentes propriedades farmacocinéticas orais equivalentes às dos compostos de referência. Isto torna-os adequados para utilização como fármacos orais.

Estudo Biológico 6

Artrite Induzida por Colagénio em Ratinhos

Foram utilizados ratinhos DBA/lj macho de sete a oito semanas de idade para todos os procedimentos. Os animais foram alojados em grupos de 10, e foram mantidos a 21 °C ± 2°C num ciclo de luz/escuridão de 12 horas com comida e água ad libitum. Foi preparado Adjuvante Completo de Freund (CFS) através de emulsificação de colagénio bovino de tipo II a 4 mg/ml com uma suspensão de Mycobacterium tuberculosis H37Ra a 4 mg/ml em Adjuvante Incompleto de Freund (IFA) (0,85 ml de óleo de parafina e 0,15 ml monooleato de manida) numa razão 1: 1 (v/v) . Todos os ratinhos foram imunizados por via subcutânea com 200 pg de colagénio bovino de tipo II em CFA. 21 dias depois, todos os ratinhos foram imunizados por via subcutânea com 100 pg de colagénio bovino de tipo II em IFA.

Os ratinhos começaram a desenvolver sinais e sintomas de artrite após a imunização de "reforço".

Para a avaliação macroscópica da artrite, foram monitorizados os seguintes sinais em cada para de cada ratinho três vezes por semana e somados para gerar o índice Artrítico (Al) (o AI máximo para um animal é 16): 0 = sem efeitos visíveis de artrite. 1 = edema e/ou eritema de 1 dedo. 2 = edema e/ou eritema de 2 dedos. 3 = edema e/ou eritema de mais de 2 dedos. 4 = artrite grave de toda a pata e dedos.

Os animais foram sorteados em grupos de tratamento com um índice artrítico médio de 2,5 e posteriormente doseados uma vez por dia durante 14 dias com composto através de gavagem oral para os compostos de teste, ou através de injeção subcutânea a uma dose de 10 mg/kg para o controlo positivo, etanercept. Após a conclusão da experiência, os ratinhos foram sacrificados.

Os dados foram analisados através da geração de uma média do índice artrítico ao longo de cada grupo de tratamento. O índice artrítico médio foi então comparado com o índice artrítico dos animais de controlo (não tratados) utilizando a seguinte fórmula para gerar uma percentagem de inibição da doença.

Os resultados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Os dados para vários dos compostos são também ilustrados nas Figuras 1 e 2. A Figura 1 mostra seis gráficos, cada um de índice artrítico médio como uma função do tempo (dia de dosagem) para composto de teste doseado a 10 mg/kg/dia através de gavagem oral (círculos abertos) e controlo (círculos sólidos), para cada um de: (A) HMC-C-02-A (superior esquerdo), (B) HMC-C-01-A (superior central), (C) HMC-N- 02-A (superior direito), (D) HMC-N-01-A (inferior esquerdo), (E) HMC-C-01-A (inferior central), (F) HMC-N- 01-B (inferior direito). A Figura 2 mostra dois gráficos, cada um de indice artrítico como uma função do tempo (dia de dosagem) para composto de teste (círculos abertos, quadrados abertos), controlo (círculos sólidos) e controlo positivo, o fármaco comercializado etanercept (triângulos), para cada um de (A) ABD899 a 10 mg/kg/dia (esquerda), (B) HMC-C-01-A a 0,3 mg/kg/dia e 3 mg/kg/dia (direita).

Estes dados indicam que os compostos HMC descritos no presente documento mostram excelente atividade oral in vivo na prevenção da progressão da artrite grave estabelecida.

Adicionalmente, os dados mostram a atividade excecional do composto HMC-C-01-A, que mostra maior eficácia do que o tratamento comercializado, etanercept, a baixas doses. Esta atividade é particularmente surpreendente dado que HMC-C-01-A não é o composto mais ativo no Estudo Biológico 1 ou no Estudo Biológico 4. Adicionalmente, a atividade de HMC-C-01-A é maior do que a do composto estreitamente relacionado, HMC-C-01-B, que é mais ativo do que HMC-C-01-A nos Estudos Biológicos 1 e 4, mostrando que a identificação dos compostos com eficácia superior não é trivial nem previsível.

Estudo Biológico 7

Dose Máxima Tolerada A segurança aguda dos compostos foi avaliada em ratos de modo a permitir a determinação da dose máxima tolerada (MTD), uma indicação da segurança de um composto em animais. Quanto mais elevado for o MTD, maior é a segurança potencial do composto a ser testado.

Dois ratos Sprague-Dawley macho e dois fêmea, de 8-12 semanas de idade, foram doseados a cada nível de dose num desenho de estudo de dose ascendente. Os compostos de teste foram administrados por via oral como uma suspensão formulada em carboximetilcelulose (CMC) a 0,5% / Tween-80 a 0,1% numa volume de dose de 10 ml/kg. Foi dado aos animais acesso livre à comida ao longo do estudo.

Os animais foram observados em pelo menos duas ocasiões durante a primeira hora após a dosagem, com aproximadamente 30 minutos de intervalo, e posteriormente em intervalos de uma hora durante o resto do dia de dosagem durante pelo menos 4 horas. Em dias subsequentes, os animais foram observados pelo menos uma vez de manhã e uma vez ao final do dia. A natureza e gravidade, onde adequado, dos sinais clínicos e tempo foram registados em cada observação. As observações incluíram alterações da pele, pêlo, olhos, e membranas mucosas, e também do sistema respiratório, circulatório, autonômico, e nervoso central, bem como atividade somatomotora e padrão de comportamento. Foi prestada particular atenção à observação de tremuras, convulsões, salivação, diarreia, letargia, sono, e coma.

Após a conclusão do estudo, os resultados foram expressos como a dose máxima tolerada para cada composto, esta sendo a mais elevada de cada sem toxicidade inaceitável. A dose máxima sem efeitos secundários inaceitáveis foi determinada como sendo a MTD (expressa em mg/kg).

Os dados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Estes dados demonstram que os compostos HMC descritos no presente documento mostram segurança altamente aumentada conforme comparada com os compostos de referência ABD735, ABD899 e REF001.

Os dados também demonstram que a melhoria da segurança aguda não é trivial nem previsível e que padrões de substituição semelhantes, por exemplos aqueles encontrados em REF001 podem levar a uma diminuição da segurança aguda. Adicionalmente, os dados mostram a segurança excecional dos compostos HMC-C-01A, HMC-C-02-A, HMC—N—01—A, e HMC-N-02-A, e particularmente de HMC-C-01-A.

Os aumentos da dose máxima tolerada observados com os compostos HMC descritos no presente documento proporcionam uma margem de segurança melhorada conforme comparado com os compostos de referência e sublinham o potencial dos compostos HMC como fármacos orais.

Estudo Biológico 8

Ensaio de Genotoxicidade e Citotoxicidade GreenScreen HC GreenScreen HC ié um ensaio á base de células de mamífero para medir a genotoxicidade e citotoxicidade de compostos e misturas químicas. 0 termo genotóxico é utilizado pra descrever substâncias que são capazes de causar dano ao material genético (ADN) dentro de uma célula, que pode ultimamente ter efeitos mutagénicos, carcinogénicos ou teratogénicos em seres humanos. 0 ensaio GreenScreen relata stress genotóxico como um aumento da fluorescência a partir de um derivado geneticamente modificado da linha celular linfoblastoide humana TK6 competente para p53. Nas células modificadas, sequências de ADN regulatório que promovem a transcrição do gene GADD45a controlam a expressão da Proteína Fluorescente Verde (GFP). GADD45a tem um papel central na integridade genómica, e o stress genotóxico induz a sua transcrição. A exposição a um composto genotóxico aumenta como tal a expressão de GFP, que é observada como um aumento da fluorescência e que é monitorizada por deteção fluorescente utilizando um leitor de placas ou citómetro de fluxo. No ensaio GreenScreen HC a fluorescência é normalizada à medição de absorvância ótima para corrigir a variação do rendimento celular causada pela perda de viabilidade celular ou citotoxicidade. 0 limiar estatisticamente definido para um resultado positivo no ensaio GreenScreen HC é 1,5, isto é, 50% de indução por cima da linha de base para o controlo tratado com veiculo. A citotoxicidade é medida no ensaio GreenScreen juntamente com a genotoxicidade e os resultados da avaliação de citotoxicidade são utilizados para normalizar as medições de genotoxicidade conforme descrito acima.

No ensaio GreenScreen HC, a viabilidade celular é avaliada utilizando um ensaio de absorção de iodeto de propidio. O iodeto de propídio é um agente intercalante e uma molécula fluorescente que pode ser utilizada para corar células. È comumente utilizado para avaliar quantitativamente o teor de ADN para avaliar a viabilidade ou o teor de ADN na análise do ciclo celular e pode ser utilizado para diferenciar células necróticas, apoptóticas e normais (veja-se, por exemplo, Dengler et al., 1995, Anticancer Drugs, Vol. 6, N.2 4, pp. 522-532). A exposição a um composto citotóxico aumenta a absorção de iodeto de propidio, que é monitorizada por absorvância ótica e é proporcional à proliferação celular. Compostos citotóxicos são aqueles que mostram uma diminuição observada da sobrevivência relativa da população por debaixo de um limiar significativo estabelecido em 90% em comparação com controlo tratado com veiculo, a uma ou mais concentrações de teste. É gerada uma diluição em série de cada composto de teste em paralelo numa microplaca preta de 96 poços com uma base oticamente transparente. É adicionado um composto genotóxico padrão (metanossulfonato de metilo, MMS) como um verificador de controlo da qualidade intra-placa. As placas são analisadas em pontos de tempo de 24 horas e 48 horas utilizando um leitor de microplacas, que proporciona medições de absorvância da luz e fluorescência para célula e soluções nos poços das microplacas.

Para além de medições da viabilidade celular e genotoxicidade descritas acima, o ensaio GreenScreen incorpora uma avaliação dos efeitos da ativação metabólica no ensaio, o "ensaio GreenScreen HC S9". Para alcançar isto, as células são incubadas tanto na presença como na ausência do extrato de fígado sobrenadante pós-mitocondrial (conhecido como "S9"). S9 é rotineiramente utilizado em toxicologia genética para suplementar as células de teste com metabolismo de fase I de mamífero. Para avaliar a ativação metabólica, os compostos são incubados com a estirpe TK6 na presença de mistura de fração S9 a 1% v/v durante 3 horas com um subsequente tempo de recuperação de 45 horas. Após o período de recuperação, o sinal GFP fluorescente e a viabilidade celular (avaliada através da absorção de iodeto de propídio) são medidos utilizando um citómetro de fluxo. É utilizada ciclofosfamida, um controlo comumente utilizado em estudos de genotoxicidade utilizando ativação metabólica, como um controlo positivo no ensaio. No ensaio GreenScreen HC S9, a genotoxicidade é avaliada através de indução na expressão de GFP quantificada utilizando a fluorescência amostrai média e a citotoxicidade utilizando o ensaio de iodeto de propidio descrito acima. 0 limiar definido estatisticamente para um resultado de genotoxicidade positivo é 1,3, isto é, 30% de indução por cima da linha de base para o controlo tratado com veiculo e o resultado é relatado como positivo ou negativo. Compostos citotóxicos são aqueles que mostram uma diminuição observada da sobrevivência relativa da população por debaixo de um limiar significativo estabelecido em 90% em comparação com controlo tratado com veiculo, a uma ou mais concentrações de teste.

Foram derivadas linhas de células repórter a partir da linha celular TK6 linfoblastoide humana competente para p53. A linha de células repórter porta um plasmídeo replicante mo epissoma portando a região promotora a montante e outras sequências regulatórias do gene GADD45a ligado a um gene de Proteína Fluorescente Verde (GFP) humano otimizado. A linha celular de controlo porta um plasmídeo idêntico exceto pela remoção de 4 pares de bases no início do gene EGFP, tal que não é produzida GFP. Ambos plasmídeos portam também um gene conferindo resistência à higromicina B à linha celular, permitindo seleção contínua para a presença de plasmídeo (higromicina B a 200 pg/ml; Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA) . Ambas linhas celulares foram mentidas em meio de cultura completo (RPMI 1640 com GlutaMAX™ e ácido iV-2-hidroxiet ilpiperazina-iV'-2-etanossulf ónico (Invitrogen Corporation) a 25 mM suplementado com soro de cavalo dador inativado por calor a 10% (v/v) (Lonza

Wokingham Ltd, Wokingham, R.U.), piruvato de sódio a 10 mM (Invitrogen Corporation) e penicilina G sódio a 5000 U/ml com sulfato de estreptomicina a 5000 pg/ml (Invitrogen Corporation)) a 37°C com C02 a 5% numa atmosfera humidificada.

Cada placa de ensaio é preparada para avaliar cada composto de teste ao longo de nova diluições em série de 2 vezes, com a estirpe repórter e uma linha celular de controlo que contém as mesmas modificações genéticas que a estirpe de teste, mas não produz GFP devido a uma pequena alteração da sequência no início do gene GFP inserido. Foram realizadas quarenta e oito exposições em microplacas estéreis de 96 poços de poliestireno de fundo plano oticamente transparentes com paredes pretas. Foram incluídos poços por duplicado de concentrações tanto "elevadas" (50 pg/ml) como "baixas" (10 pg/ml) de metanossulfonato de metilo como controlos positivos intraplaca para proporcionar aceitação dos dados. Outros poços de controlo incluíram células tratadas com veículo DMS a 1% v/v) como controlo negativo, meio de ensaio por si só para verificar contaminação, e composto de teste com meio de ensaio para determinar qualquer fluorescência e/ou absorvância ótica inerente devido a cor ou precipitação.

Foram aplicadas membranas respiráveis (BreathEasy, Diversified Biotech, EUA) às microplacas antes da sua agitação vigorosa (20 segundos) . Isto foi seguido por incubação estática durante 48 horas a 37°C e C02 a 5% numa atmosfera humidificada. Após 48 horas, as microplacas foram vigorosamente agitadas durante 10 segundos para ressuspender as células antes da aquisição de dados espetrofotométricos. Os dados de fluorescência foram normalizados a dados de absorvância para dar um valor de "brilho" relativo à média de controlos tratados com veículo e representados graficamente contra a concentração de composto. Um aumento de brilho de 50% foi classificado como um resultado positivo para a genotoxicidade: isto reflete um aumento de mais de três vezes o desvio padrão nos dados de fluorescência a partir de células tratadas com veículo e não tratadas com genotoxina. Os dados de absorvância foram normalizados para o controlo tratado com veículo e representados graficamente como citotoxicidade. Citotoxicidade de 90% reflete uma queda estatisticamente significativa do rendimento celular e é registada como um efeito tóxico inibitório do crescimento.

Os dados em bruto recolhidos a partir das microplacas de ensaio GreenScreen HC, utilizando a microplaca foram automaticamente analisados utilizando um molde de software GreenScreen HC para produzir um sumário dos resultados para os seguintes parâmetros: concentrações eficazes mais baixas (LECs) que causam resultados positivos no ensaio de exclusão de iodeto de propídio (isto é, perda de viabilidade celular) às 24 horas e 48 horas na presença e ausência da fração S9; efeitos negativos ou positivos sobre a genotoxicidade.

Os resultados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Estes dados indicam que os compostos HMC descritos no presente documento mostram citotoxicidade potenciada ou pelo menos semelhante aos compostos de referência e são marcadamente melhores do que ABD836 e REF001 em particular.

Os dados também demonstram que as alterações requeridas para melhorar o perfil de citotoxicidade ou genotoxicidade não são triviais nem previsíveis. Isto é particularmente destacado pelos perfis dos compostos estreitamente relacionados ABD836 e HMC-N-02-A.

Adicionalmente, os dados mostram a segurança excecional com respeito à citotoxicidade geral dos compostos HMC-C- 02-A, HMC-C-01-A, HMC-N-02-A, e HMC-N-Ol-A.

Estudo Biológico 9

Ensaio de Canal Iónico de Herg A inibição do canal iónico do Gene Relacionado com Ether-à-go-go humano (hERG) medeia a corrente repolarizante IKr no potencial de ação cardíaco, como tal indicando gue este contribui para a atividade elétrica gue coordena o batimento do coração. Quando a capacidade de hERG de conduzir a corrente elétrica através da membrana celular é inibida ou comprometida pode resultar num distúrbio potencialmente fatal denominado síndrome de QT longo. Esta associação entre HERG e o síndrome de QT longo tornou a inibição de HERG num anti-alvo importante que deve ser evitado durante o desenvolvimento do fármaco. A atividade dos compostos contra o canal iónico de HERG foi testada. 0 ensaio foi levado a cabo utilizando o método Q-patch de fixação de membrana utilizando células de Ovário de Hámster Chinês (hERG-CHO) estavelmente transfetadas. As células hERG-CHO foram cultivadas em meio de mistura de Nutrientes de Kaighn F-12 (Invitrogen) +FBS a 10% a 37°C durante 1-3 dias. As células foram mantidas a 30°C durante 24 a 48 horas antes da fixação de membrana de modo a aumentar a amplitude de corrente de hERG. Subsequentemente, as células foram recolhidas por tripsinização, e mantidas em Meio Isento de Soro (SFM) no estado de preparação de células Q-patch durante até 6 horas à temperatura ambiente antes de serem lavadas e ressuspensas em solução extracelular e aplicadas nos sítios de fixação de membrana para registo de dados.

Protocolo de voltagem de fixação de membrana: Após ter sido alcançada configuração de células inteiras, a célula foi mantida a -80 mV. Foi administrado um pulso de 50 milissegundos até -40 mV para medir a fuga de corrente, que foi subtraída a partir da cauda de corrente em linha. Posteriormente a célula foi despolarizada até +20 mV durante 2 segundos, seguido por um pulso se um segundo até -40 mV para revelar a cauda de corrente de hERG. Este paradigma foi administrado uma vez cada 5 segundos para monitorizar a amplitude de corrente.

Solução extracelular: NaCl a 137 mM, KCI a 4 mM, CaCl2 a 1,8 mM, MgCl2 a 1 mM, D ( + )-glucose a 10 mM, tampão HEPES a 10 mM (o pH foi ajustado a 7,4 com NaOH).

Após ter sido alcançada a configuração de células inteiras, a solução extracelular (controlo) foi aplicada primeiro e a célula foi estabilizada durante 2 minutos em solução extracelular. O composto de teste foi então aplicado a partir de concentrações baixas até concentrações elevadas de forma cumulativa. A célula foi incubada com cada concentração de teste durante 5 minutos. Durante cada incubação, a célula foi repetidamente estimulada utilizando o protocolo de voltagem descrito acima, e a amplitude de cauda de corrente foi continuamente monitorizada.

Critérios de aceitação: (1) Pico de cauda de corrente >100 pA no controlo. (2) Primeira edução < 30% e a redução para antes da primeira aplicação do composto de teste. (3) Fugas de corrente < 50% dos picos de cauda de corrente de controlo em qualquer momento. (4) rs < 20 MQ ao longo da experiência. O grau de inibição(%) foi obtido medindo a amplitude de cauda de corrente, induzido por um pulso de teste de um segundo até -40 mV após um pulso de dois segundos até +20 mV, antes e após incubação com o composto de teste. A diferença de corrente foi normalizada para o controlo e multiplicada por 100 de modo a obter a percentagem de inibição.

As curvas de resposta à concentração (log) foram ajustadas a uma equação logística (três parâmetros assumindo bloqueamento completo da corrente a concentrações de composto muito elevadas) para gerar estimativas da concentração inibitória a 50% (CI50) . A relação concentração-resposta de cada composto foi construída a partir das percentagens de redução da amplitude de corrente por concentrações sequenciais.

Os resultados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Os dados demonstram que os compostos HMC descritos no presente documento têm propriedades de segurança cardíaca requeridas para um fármaco oralmente ativo, e têm vantagens de segurança em comparação com os compostos de referência, tais como ABD599 e ABD899, com HMC-N-01-A, HMC-N-02-A, e HMC-N-03-A mostrando um perfil particularmente positivo.

Estudo Biológico 10

Estudos de Leucócitos Primários Humanos O sistema imune humano envolve um conjunto complexo de células e órgãos que podem ser adversamente afetados por fármacos ou quimicos. Isto resulta em aumento da suscetibilidade a infeções, tumores, respostas alérgicas, reações autoimunes ou outras formas de doenças do sistema imune. A avaliação da imunotoxicidade é, como tal, um componente importante da avaliação de segurança de novos produtos farmacêuticos, e o perfil ideal para um potencial fármaco anti-inflamatório que atua por meio da modulação do sistema imune é um que demonstra seletividade para determinados conjuntos de células do sistema imune sem quaisquer efeitos sobre outras, desta forma evitando a ativação ou supressão imune geral. Por exemplo, um fármaco que reduz a viabilidade ou atividade de monócitos sem efeitos sobre neutrófilos seria esperado como possuindo propriedades anti-inflamatórias com aplicação numa série de doenças sem comprometer a capacidade de um paciente de responder a, e eliminar, infeções. A capacidade de um composto de referência (ABD735) de influenciar a viabilidade dos leucócitos humanos foi investigada utilizando células derivadas a partir de sangue inteiro humano. Os efeitos de um composto de referência (ABD735) foram testados sobre os seguintes tipos de leucócitos humanos: neutrófilos, monócitos, linfócitos B, e linfócitos T, compreendendo as populações CD4 positivas (T-helper) e CD8-positivas (T-citotóxico). Cada um destes tipos celulares tem uma função diferente no sistema imune humano.

Os neutrófilos são também conhecidos como granulócitos. São os leucócitos mais abundantes no ser humano e formam parte do sistema imune inato. Os neutrófilos atuam como a resposta primária à fase aguda da inflamação causada por infeção bacteriana.

Os monócitos são parte do sistema imune inato encontrado na circulação. Os monócitos do sangue periférico sofrem diferenciação para formar macrófagos, que são os precursores de uma série de células envolvidas na modulação da resposta imune, incluindo células dendriticas. A principal função dos monócitos-macrófagos é atuar como células efetores imunes. Estão fortemente envolvidos na patogénese de várias condições inflamatórias crónicas incluindo artrite reumatoide e esclerose múltipla.

Os linfócitos T são parte do sistema imune adaptativo e desempenham um papel central na imunidade. Existem vários subconjuntos de linfócitos T, cada um dos quais possui uma função diferente no sistema imune. Os linfócitos T citotóxicos são também conhecidos como células T CD8+ devido à presença se uma molécula denominada CD8 na sua superfície. 0 seu papel é destruir células infetadas e células tumorais, mas sob condições inflamatórias, podem também atuar para exacerbar a doença. Os linfócitos T-helper são também conhecidos como células T CD4+ devido à presença se uma molécula denominada CD4 na sua superfície. A função das células T-helper é assistir na maturação dos linfócitos B e ativar células T citotóxicas. os linfócitos B são parte do sistema imune adaptativo. As suas principais funções são fabricar anticorpos e atuar como células apresentadoras de antigénio, o que permite que os linfócitos T reconheçam antigénios estranhos.

Os efeitos do composto de referência (ABD735) sobre a viabilidade dos neutrófilos, monócitos, células T CD4+ e CD8+ e linfócitos B foi avaliada sob condições tanto de repouso como de estimulação. Foram utilizadas condições de repouso para avaliar efeitos prováveis sobre células normais encontradas no sangue humano, e foram utilizadas condições de estimulação para avaliar os efeitos do composto sob condições de doença.

Os efeitos sobre a viabilidade celular foram avaliados utilizando citometria de fluxo. A citometria de fluxo é uma tecnologia biofísica à base de laser empregue na contagem celular, classificação celular, e deteção de biomarcadores, suspendendo as células num fluxo de fluido e passando-as por um aparelho de deteção eletrónica. Permite análise multi-paramétrica simultânea das características físicas e químicas de até milhares de partículas por segundo. A classificação de células utilizando citometria de fluxo requer a utilização de marcadores celulares específicos. Para quantificar os números celulares, são utilizadas microsferas de contagem como um padrão interno. As microsferas de contagem são uma suspensão calibrada de microsferas que são adicionadas a um volume conhecido de amostra de modo a ser conhecido o volume de amostra por microsfera. Isto permite a determinação absoluta do número de células numa amostra. Adicionalmente, para linfócitos B e T, a proliferação celular foi medida utilizando um corante conhecido como Cell Proliferation Dye (eFluor® 450). eFluor® 450 é um corante orgânico que pode ser conjugado com marcadores específicos de células. Emite fluorescência quando excitado por um laser de uma forma proporcionar ao número de células ligadas pelo conjugado. O seu sinal proporciona como tal uma indicação da proliferação de tipos celulares específicos.

Isolamento de neutrófilos e avaliação do impacto sobre a sobrevivência:

Foram isolados neutrófilos a partir de sangue inteiro (recolhido a partir de dadores saudáveis) através de gradiente de densidade de duas etapas Histopaque® 1077 e Histopaque® 1119. Foram lavadas células polimorfonucleares em meio RPMI suplementado com antibióticos (penicilina a 100 U/ml, estreptomicina a 100 yg/ml) e ressuspensas a 2xl06 células/ml em RPMI suplementado com soro de vitelo fetal (FCS) a 10% e antibióticos (penicilina a 100 U/ml, estreptomicina a 100 pg/ml). Posteriormente foram adicionados 50 μΐ da suspensão celular a uma placa de 96 poços, com ou sem composto de referência (ABD735) (a 30, 10, 3, 1, ou 0,3 μΜ) ou controlo (DMSO a 0,3%), com ou sem dexametasona (1 μΜ) e incubadas a 37°C / C02 a 5% durante 24 horas. Após a incubação, as células foram fixas e foi adicionado um volume exato de microsferas de contagem a cada tubo para calcular o número de células vivas.

Isolamento de monócitos e avaliação do impacto sobre a sobrevivência:

Foram recolhidas PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) a partir de dadores saudáveis (todos membros do sexo masculino) e isoladas através de centrifugação numa camada de Ficoll Paque (GE Healthcare, R.U.). As células foram então ressuspensas (3 x 106 células/ml) em RPMI suplementado com FCS a 10% e antibióticos (penicilina a 100 U/ml, estreptomicina a 100 pg/ml e foi adicionado 1 ml da suspensão celular a uma placa de 48 poços, que foi então incubada durante 1 hora a 37°C/CC>2 a 5%. Subsequentemente, o sobrenadante foi aspirado para remover células não aderentes, que foi seguido por duas etapas de lavagem para garantir a remoção de células não aderidas. As células aderidas (monócitos) foram então estimuladas com LPS (10 ng/ml), TNFa (10 ng/ml) ou fator de estimulação de colónias de macrófagos (M-CSF) (10 ng/ml) na ausência (controlo) ou presença de composto de referência (ABD735) (a 30, 10, 3, 1, ou 0,3 μΜ) durante 48 horas a 37°C/C02 a 5%. Subsequentemente, as placas foram centrifugadas e os monócitos lavados em PBS antes da adição de PBS mais EDTA (10 mM) e incubação a 4°C durante 20 minutos para auxiliar a destacar as células, o que foi facilitado por pipetamento. Os monócitos foram adicionados a tubos Falcon e lavados por centrifugação com PBS antes de ser adicionado um volume exato de microsferas de contagem a cada tubo para calcular o número de células vivas.

Isolamento de linfócitos B e avaliação do impacto sobre a sobrevivência:

Foram recolhidas PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) a partir de dadores saudáveis (todos membros do sexo feminino) e isoladas através de centrifugação numa camada de Ficoll Paque (GE Healthcare, R.U.). As células foram então ressuspensas em RPMI suplementado com FCS a 10% e antibióticos (penicilina a 100 U/ml, estreptomicina a 100 yg/ml). A suspensão de células foi adicionada a uma placa de 96 poços com ou sem composto de referência (ABD735) (a 30, 10, 3, 1, ou 0,3 μΜ) ou controlo (DMSO a 0,3%) com ou sem uma combinação de Staphylococcus aureus Cowan I (SAC) e interleucina-2 (SAC/IL-2) (1:10.000 e 2 ng/ml) e incubada a 37°C / CO2 a 5% durante 48 horas. Após a incubação, as células foram coradas com CD19 anti-humano antes de ser adicionado um volume exato de microsferas de contagem a cada tubo para calcular o número de células vivas.

Isolamento de células B e avaliação do impacto sobre a proliferação:

Foram recolhidas PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) a partir de dadores saudáveis (todos membros do sexo feminino) e isoladas através de centrifugação numa camada de Ficoll Paque (GE Healthcare, R.U.) . As células foram então coradas com Cell Proliferation Dye, que mede a proliferação de células (eFluor® 450) e ressuspensas em RPMI suplementado com FCS a 10% e antibióticos (penicilina a 100 U/ml, estreptomicina a 100 pg/ml). A suspensão de células foi adicionada a uma placa de 96 poços com ou sem composto de referência (ABD735) (a 30, 10, 3, 1, ou 0,3 μΜ) ou controlo (DMSO a 0,3%) com ou sem uma combinação de Staphylococcus aureus Cowan I (SAC) e interleucina-2 (SAC/IL-2) (1:10.000 e 2 ng/ml) e incubada a 37 °C / C02 a 5% durante 5 dias. Após a incubação, as células foram coradas com C19 anti-humano, um marcador de linfócitos B, antes de serem analisadas num citómetro de fluxo. As células que foram baixas em e450 foram consideradas como tendo proliferado.

Isolamento de células T e avaliação do impacto sobre a sobrevivência: foram recolhidas PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) a partir de dadores saudáveis (todos membros do sexo feminino) e isoladas através de centrifugação

numa camada de Ficoll Paque (GE Healthcare, R.U.). As células foram então ressuspensas até 2 x 106 células/ml em RPMI suplementado com FCS a 10% e antibióticos (penicilina a 100 U/ml, estreptomicina a 100 pg/ml). A suspensão de células foi adicionada a uma placa de 96 poços com ou sem composto de referência (ABD735) (a 30, 10, 3, 1, ou 0,3 μΜ) ou controlo (DMSO a 0,3%) com ou sem fitohemaglutinina (PHA, 5 pg/ml) e incubada a 37°C / C02 a 5% durante 48 horas. Após a incubação, as células foram coradas com CD8 ou CD4 anti-humano antes de ser adicionado um volume exato de microsferas de contagem a cada tubo para calcular o número de células vivas.

Isolamento de células T e avaliação do impacto sobre a proliferação:

Foram recolhidas PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) a partir de dadores saudáveis (todos membros do sexo feminino) e isoladas através de centrifugação numa camada de Ficoll Paque (GE Healthcare, R.U.). As células foram então coradas com Cell Proliferation Dye (eFluor® 450) e ressuspensas em RPMI suplementado com FCS a 10% e antibióticos (penicilina a 100 U/ml, estreptomicina a 100 pg/ml) . A suspensão de células foi adicionada a uma placa de 96 poços com ou sem composto de referência (ABD735) (a 30, 10, 3, 1, ou 0,3 μΜ) ou controlo (DMSO a 0,3%) com ou sem fitohemaglutinina (PHA, 5 yg/ml) e incubada a 37°C / CO2 a 5% durante 5 dias. Após a incubação, as células foram coradas com CD8 ou CD4 anti-humano antes de serem analisadas num citómetro de fluxo. As células que foram baixas em e450 foram consideradas como tendo proliferado.

Os resultados médios para (n=3) para o composto de referência (ABD735) foram expressos como uma magnitude de alteração contra o valor de controlo médio. Os dados foram então representados graficamente utilizando software da Grafit (Erithacus Software). Cada experiência foi repetida três vezes e os dados são apresentados como a média de todas as experiências.

Os resultados encontram-se resumidos nos seguintes quadros.

São mostrados acima os resultados a partir de uma única concentração elevada (3 μΜ) do composto de referência (ABD735) ao longo dos tipos de leucócitos. Neste ensaio, uma alteração de magnitude de 0,5 ou menos é significativa de perda de viabilidade, e uma alteração de magnitude de 0,6 ou menos é significativa de reduções da proliferação.

Pode ser observado a partir destes dados que o composto de referência (ABD735) reduz seletivamente a viabilidade dos monócitos na presença somente de TNFa. e não na presença de M-CSF ou LPS. Adicionalmente, o composto de referência (ABD735) tem muito pouco efeito sobre a viabilidade das outras populações de leucócitos indicando que os compostos desta série não são geralmente imunossupressores. 0 composto de referência (ABD735) é também mostrado como reduzindo a proliferação de linfócitos, com os efeitos mais profundos observados em linfócitos T CD8+ estimulados. Um perfil tal como este, com redução seletiva na proliferação de subpopulações de linfócitos é um perfil mecanistico atrativo para o tratamento de doenças de inflamação tais como artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistémico, doença de Crohn e esclerose múltipla, bem como para o tratamento de leucemias incluindo: linfoma de células T, tal como linfoma de células T extranodal, linfoma de células T cutâneo, linfoma de células T anaplásico, e linfoma de células T angioimunoblástico; linfoma de células B, tal como linfomas de Hodgkins e não Hodgkins, incluindo linfoma de células B grandes difuso, linfoma folicular, linfoma do tecido linfoide associado às mucosas, linfoma linfocitico de células pequenas, linfoma de células do manto, e linfoma de Burkitt; e outras leucemias, tais como leucemia linfocitica crónica e mieloma múltiplo.

Estudo Biológico 11

Estudo de Artrite Induzida por Pristano em Ratos

Foram utilizados ratos Lewis fêmea para todos os procedimentos. Os animais foram alojados em grupos de 5, e foram mantidos a 21 °C ± 2°C num ciclo de luz/escuridão de 12 horas com comida e água ad libitum. Foi induzida artrite pela administração de 0,3 ml de pristano por via intradérmica na base da cauda. Os ratos começaram a desenvolver sinais e sintomas de artrite aproximadamente sete dias após a injeção de pristano.

Para a avaliação macroscópica da artrite, foram monitorizados os seguintes sinais em cada para de cada ratinho três vezes por semana e somados para gerar o índice Artrítico (Al) (o AI máximo para um animal é 16): 0 = sem efeitos visíveis de artrite. 1 = edema e/ou eritema de 1 dedo. 2 = edema e/ou eritema de 2 dedos. 3 = edema e/ou eritema de mais de 2 dedos. 4 = artrite grave de toda a pata e dedos incluindo deformação dos membros e anquilose da articulação.

Os animais foram classificados em grupos de tratamento antes da administração de pristano e doseados uma vez por dia durante 28 dias com composto de teste a doses de 3 e 10 mg/kg/dia através de gavagem oral, ou por injeção intraperitoneal a uma dose de 0,05 mg/kg para o controlo positivo, metotrexato. Após a conclusão da experiência, os ratos foram sacrificados.

Os dados foram analisados através da geração de uma média do índice artrítico ao longo de cada grupo de tratamento. O índice artrítico médio foi então comparado com o índice artrítico dos animais de controlo (não tratados) utilizando a seguinte fórmula para gerar uma percentagem de inibição da doença.

Os resultados encontram-se resumidos no seguinte quadro.

Os dados para vários dos compostos são também ilustrados na Figura 3. A Figura 3 mostra seis gráficos, cada um de índice artrítico médio como uma função do tempo (dia de dosagem) para composto de teste (círculos abertos), controlo (círculos sólidos), e controlo positivo, metotrexato (triângulos) para cada um de: (A) ABD899 doseado a 3 mg/kg/dia (superior esquerdo), (B) HMC-C-01-A doseado a 3 mg/kg/dia (superior central), (C) HMC-N-01-A doseado a 3 mg/kg/dia (superior direito), (D) ABD899 doseado a 10 mg/kg/dia (inferior esquerdo), (E) HMC-C-01-A doseado a 10 mg/kg/dia (inferior central). (F) HMC-N-01-A doseado a 10 mg/kg/dia (inferior direito).

Estes dados indicam que os compostos HMC descritos no presente documento mostram excelente atividade oral in vivo na prevenção da progressão da artrite induzida por pristano, enquanto o composto ABD899 teve efeito limitado sobre a doença neste modelo, apesar da boa atividade no Estudo Biológico 6. Adicionalmente, os compostos HMC-C-01-A e HMC-N-01-A foram bem tolerados pelos animais durante a dosagem prolongada, enquanto ABD899 foi pobremente tolerado tal que foi necessário interromper a dosagem e remover os animais recebendo o mesmo do estudo (mostrado na Figura 3, painel D). Adicionalmente, o composto HMC-C-01-A mostrou particularmente boa eficácia no modelo, que foi equivalente à da terapêutica de primeira linha comercializada para artrite reumatoide, metotrexato.

Os dados mostram adicionalmente que a identificação dos compostos com eficácia superior não é trivial nem previsível. 0 anterior descreveu os princípios, formas de realização preferidas, e modos de operação da presente invenção. No entanto, a invenção não deve ser interpretada como limitada às formas de realização particulares discutidas. Em vez disso, as formas de realização descritas acima devem ser encaradas como ilustrativas em vez de restritivas. Deve ser apreciado que podem ser realizadas variações nessas formas de realização por parte de trabalhadores peritos na especialidade sem se afastar do âmbito da presente invenção.

REFERÊNCIAS São citadas uma série de publicações são citadas no presente documento de modo a descrever de forma mais completa e divulgar a invenção e o estado da técnica ao qual a invenção se refere. São proporcionadas abaixo citações completas destas referências. Cada uma destas publicações é incorporada no presente documento por referência na sua totalidade na presente divulgação, na mesma medida em que se cada publicação fosse especificamente e individualmente indicada como sendo incorporada por referência.

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Claims (43)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Um composto selecionado a partir de compostos das seguintes fórmulas, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:

   e
2. 2. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
3. 3. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
4. 4. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
5. 5. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
6. 6. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
7. 7. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
8. 8. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
9. 9. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
10. 10. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
11. 11. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
12. 12. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto selecionado a partir de compostos das seguintes fórmulas, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
13. 13. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
14. 14. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
15. 15. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
16. 16. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
17. 17. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
18. 18. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
19. 19. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
20. 20. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
21. 21. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
22. 22. Um composto de acordo com a reivindicação 12, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
23. 23. Um composto de acordo com a reivindicação 1, que é um composto selecionado a partir de compostos das seguintes fórmulas, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:

    e
24. 24. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
25. 25. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
26. 26. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
27. 27. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
28. 28. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
29. 29. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
30. 30. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
31. 31. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
32. 32. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
33. 33. Um composto de acordo com a reivindicação 23, que é um composto da seguinte fórmula, ou um sal, hidrato, ou solvato do mesmo:
34. 34. Uma composição compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
35. 35. Um método para a preparação de uma composição que compreende a etapa de misturar um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33 e um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
36. 36. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33 para utilização no tratamento do corpo humano ou animal por meio de terapêutica.
37. 37. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 36, em que o tratamento é tratamento de: artrite reumatoide; psoríase; artrite psoriásica; doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD); asma; aterosclerose; doença inflamatória do intestino; espondilite anquilosante; esclerose múltipla; lúpus eritematoso sistémico; sindrome de Sjõgren; um distúrbio associado com perda óssea, tal como perda óssea associada com atividade osteoclástica excessiva na artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, ou doença de Paget; cancro, tal como uma malignidade hematológica, tal como um mieloma múltiplo, leucemia, ou linfoma, ou um cancro tumoral sólido, tal como cancro da bexiga, cancro da mama (feminino e/ou masculino), cancro do cólon, carcinoma de células renais, cancro renal, cancro pulmonar, cancro pancreático, cancro gástrico, cancro da próstata, cancro cerebral, cancro da pele, cancro da tiroide, ameloblastoma de células basais, ou melanoma; um distúrbio associado com fibrose, tal como esclerose sistémica ou escleroderma; ou uma vasculite rara, tais como doença de Behçet.
38. 38. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 36, em que o tratamento é tratamento de: artrite reumatoide; psoríase; artrite psoriásica; doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD); asma; aterosclerose; doença inflamatória do intestino; ou espondilite anquilosante.
39. 39. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 36, em que o tratamento é tratamento de: esclerose múltipla; lúpus eritematoso sistémico; ou sindrome de Sjõgren.
40. 40. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 36, em que o tratamento é tratamento de: um distúrbio associado com perda óssea, tal como perda óssea associada com atividade osteoclástica excessiva na artrite reumatoide, osteoporose, doença óssea associada a cancro, ou doença de Paget.
41. 41. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 36, em que o tratamento é tratamento de: cancro, tal como uma malignidade hematológica, tal como um mieloma múltiplo, leucemia, ou linfoma, ou um cancro tumoral sólido, tal como cancro da bexiga, cancro da mama (feminino e/ou masculino), cancro do cólon, carcinoma de células renais, cancro renal, cancro pulmonar, cancro pancreático, cancro gástrico, cancro da próstata, cancro cerebral, cancro da pele, cancro da tiroide, ameloblastoma de células basais, ou melanoma.
42. 42. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 36, em que o tratamento é tratamento de: um distúrbio associado com fibrose, tal como esclerose sistémica ou escleroderma.
43. 43. Um composto para utilização de acordo com a reivindicação 36, em que o tratamento é tratamento de: uma vasculite rara, tais como doença de Behçet. LISBOA, 25 DE SETEMBRO DE 2017