PT2282994E - Composto 3-aminocarbazol, composição farmacêutica contendo o referido composto e método para a preparação do mesmo - Google Patents

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DESCRIÇÃO "COMPOSTO 3-AMINOCARBAZOL, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA CONTENDO O REFERIDO COMPOSTO E MÉTODO PARA A PREPARAÇÃO DO MESMO" Área da Invenção A presente invenção relaciona-se com novos compostos de 3-aminocarbazol, com uma composição farmacêutica contendo os referidos compostos, com um método para os preparar, e com a utilização de tais compostos para a produção de um medicamento que seja útil no tratamento de perturbações associadas à produção da prostaglandina E2 (PGE2) , por exemplo processos inflamatórios, dor, febre, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose.

Mais em particular, a presente invenção relaciona-se com novos derivados benzoilo do 3-aminocarbazol que sejam úteis para tratar ou prevenir perturbações associadas à produção da prostaglandina E2 (PGE2) , por exemplo processos inflamatórios, dor, febre, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose.

Estado da Técnica 0 valor da prostaglandina E2 (PGE2) deve-se ao papel que ela desempenha como bioreguladora, conjuntamente com outros prostanoides produzidos metabolicamente a partir do ácido araquidónico, e como mediadora da inflamação.

Os prostanoides são uma classe de compostos que incluem as prostaglandinas, os tromboxanos e as prostaciclinas. Os prostanoides são mediadores lipídicos que atuam como hormonas locais nas células adjacentes ao local da sua libertação. Os prostanoides são principalmente produzidos a 2 partir do ácido araquinódico por oxidação enzimática ativada pela ciclo-oxigenase. As ciclo-oxigenases (prostaglandinas G/H sintases) catalisam a formação sequencial da PGG2 e PGH2 a partir do ácido araquidónico. A PGH2 é então convertida por meio de enzimas especificas em vários prostanoides. A prostaglandina D2 (PGD2) , a prostaglandina E2 (PGE2) , a prostaglandina F2a (PGF2a) , a prostaglandina I2 (PGI2) e o tromboxano A2 (TXA2) são formados desta maneira.

Com a exceção do fluido seminal, os prostanoides não se acumulam. Seguindo vários estímulos (inflamatórios, imunológicos, hormonais, luz ultravioleta, agentes tumorais e também agitação mecânica), eles são sintetizados e libertados no espaço extracelular, de onde passam para o plasma, a urina e outros fluídos biológicos.

Os prostanoides desempenham um papel importante nos mecanismos de defesa do funcionamento dos órgãos e na integridade do corpo. Isto é demonstrado pela função citoprotetora no trato gastrointestinal, pela regulação da função renal e da circulação capilar, pela regulação da agregação plaquetária e da coagulação do sangue, pelo envolvimento na diferenciação das células imunitárias e na cicatrização de feridas, no metabolismo dos ossos e na ovulação.

Em particular, deve salientar-se a ação vasoprotetora da PGI2, que é essencial para manter o tónus vascular e para prevenir tromboembolismos e a aterosclerose ao nível endotelial, e a ação anti-inflamatória e antiproliferativa da PGD2, cujo metabolito, 15d-PGJ2, é capaz de exercer efeitos anti-inflamatórios por meio da ativação dos recetores nucleares PPARy (recetor ativado pelo 3 proliferador do peroxissoma gama) (Inoue et al., 2000, "Feedback control of cyclooxygenase-2 expression through PPARgamma" J. Biol. Chem. 2000, 275 (36): 28028-28032).

Os prostanoides são assim bioreguladores, mas também importantes mediadores das inflamações e outras patologias.

Em particular, a PGE2 é abundante nos locais de inflamação e é responsável por vários aspetos patológicos da inflamação aguda e crónica, por exemplo edemas, formação de eritemas, dor inflamatória, inflamação articular e febre. De fato, a PGE2 representa um potente agente pró-inflamatório e algogénico. Anticorpos anti-PGE2 têm atividade anti-inflamatória, e animais com falta de recetores PGE2 mostram uma reduzida resposta a estímulos inflamatórios (Portanova et al., "Selective neutralization of prostaglandin E2 blocks inflammation, hyperalgesia, and interleukin 6 production in vivo", J. Exp. Med. 1996, 184 (3): 883; Ueno et al., "Major roles of prostanoid receptors IP and EP(3) in endotoxin-induced enhancement of pain perception" Biochem. Pharmacol. 2001, 62 (2): 157-160) e nenhuma resposta febril a estímulos pirogénicos (Ushikubi et al., "Impaired febrile response in mice lacking the prostaglandin E receptor subtype EP3" Nature 1998, 395: 281-284) .

Os medicamentos anti-inflamatórios não esteroides (NSAIDs) e medicamentos seletivos à COX-2 atualmente em utilização reduzem os sintomas relacionados com a inflamação através da inibição não seletiva da produção de eicosanoides (PGE2, PGD2, PGF2c(, PGI2 e TXA2) devido à sua ação inibidora das ciclo-oxigenases 1 e 2 (Fitzgerald and Patrono, 2001) . 4

Em particular, os medicamentos seletivos à COX-2 atualmente comercializados têm toxicidade gastrointestinal reduzida quando comparados com medicamentos anti-inflamatórios não esteroides (NSAIDs) convencionais. No entanto, os referidos medicamentos seletivos à COX-2 reduzem a produção de prostaciclina vascular (PGI2, que é produzida predominantemente a partir da COX-2), alterando o equilíbrio normal entre os eicosanoides pró-trombóticos e antitrombóticos a favor dos pró-trombóticos (TXA2, que é predominantemente produzido a partir da COX-1), e dão origem a um aumento do risco de situações trombótico- cardiovasculares (S. Malhotra, MD, DM; N. Shafiq, MD; P. Pandhi, MD Medscape General Medicine 6 (D, 2004; D.

Mukherjee and E.J. Topol Cardiovascular risk and COX-2 inhibitors, Arthritis Res. Ther., 2003, 5:8-11-2002). Vários compostos 3-aminocarbazol foram estudados quanto à sua capacidade para se ligarem seletivamente ao recetor humano Y5 e para modularem a sua atividade. Esta capacidade torna-os úteis no tratamento de distúrbios do apetite e metabólicos, por exemplo da obesidade, bulimia nervosa, anorexia nervosa, perturbações do sono, dependência da morfina e ataques epiléticos (patentes WO 01/07409 Al, WO 02/051806, WO 02/096902 e US 6 399 631). O pedido de patente WO 2006/122 680 descreve a utilização de uma série de compostos de 3-aminocarbazol para tratar distúrbios relacionados com a produção da prostaglandina E2 (PGE2) . Para além disso, o pedido de patente WO 2007/014 687 descreve um número de novos compostos de 3-aminocarbazol e a sua utilização para tratar distúrbios relacionados com a produção da prostaglandina E2 (PGE2) . 5

Sumário da Invenção

Foi agora descoberto, surpreendentemente, que certos compostos novos de 3-aminocarbazol, para além de serem capazes de inibir seletivamente a produção da prostaglandina E2 (PGE2) , mostraram, surpreendentemente, melhores propriedades de biodisponibilidade e de farmacocinética.

Estes compostos são capazes de reduzir a produção da PGE2 e são assim ativos em todas as condições patológicas em que a PGE2 atue como um mediador, por exemplo em processos inflamatórios, dor, febre, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose.

Para além disto, estes compostos mostraram, surpreendentemente, elevada estabilidade metabólica, elevada absorção in vitro e elevada biodisponibilidade.

Exemplos tipicos de tais processos inflamatórios são os edemas, eritemas, inflamações articulares, artrite reumatoide e artroses.

Exemplos tipicos de tais tumores são o carcinoma colorretal e pulmonar, e o adenocarcinoma.

Os compostos da presente invenção inibem seletivamente a sintese da PGE2. Esta seletividade tem a vantagem de inibir um potente mediador da inflamação, dor e febre, enquanto deixam inalterada a produção dos outros prostanoides produzidos simultaneamente na cascata do ácido araquidónico, tais como a PGF2a, o TXA2, a PGI2 e a PGD2. Todos os mecanismos de defesa do funcionamento dos órgãos e da integridade do corpo que são tipicos da atividade dos outros prostanoides, permanecem assim inalterados. 6

De maneira semelhante aos medicamentos anti-inflamatórios não esteroides convencionais, os compostos da presente invenção têm propriedades anti-inflamatórias, antipiréticas e analgésicas, e são por isso ativos em patologias tais como inflamação, dor, febre, artrite reumatoide e artroses. Além disso, uma vez que o envolvimento da PGE2 em tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose é conhecido da literatura, os compostos da presente invenção também têm aplicação na prevenção e tratamento destas patologias.

De forma vantajosa, estes compostos mostram no entanto poucos efeitos secundários quando comparados com medicamentos NSAIDs e medicamentos seletivos à COX-2, os quais, ao inibirem as ciclo-oxigenases, não discriminam entre os prostanoides.

Em particular, estes compostos são úteis tanto no tratamento como na prevenção de processos inflamatórios.

Em particular, os compostos da presente invenção mostram reduzida toxicidade gastrointestinal, renal e vascular.

Descrição detalhada da Invenção

Num primeiro aspeto, a presente invenção relaciona-se com um composto 3-aminocarbazol que tem a fórmula geral (I) abaixo:

R2

(O 7 em que RI é um átomo de halogénio, um grupo metilo ou um grupo trihalometilo, um grupo nitro, um grupo ciano ou um grupo triflato, e R2 é um grupo hidroxialquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 8 átomos de carbono ou um grupo carbonilalquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 8 átomos de carbono, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, uma forma cristalina polimórfica do mesmo, um estereoisómero do mesmo ou um enantiómero do mesmo.

Em particular, a presente invenção relaciona-se com compostos 3-aminocarbazol de fórmula geral (I) em que RI é um átomo de flúor ou cloro, ou um grupo trifluorometilo ou triclorometilo, e R2 é um grupo hidroxialquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 6 átomos de carbono ou um grupo carbonilalquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 4 átomos de carbono.

Para os objetivos da presente invenção, o termo "hidroxialquilo" designa um grupo alquilo que compreende entre 1 e 3 grupos hidroxilo (-0H) ligados a um ou mais átomos de carbono, e o termo "carbonilalquilo" designa um grupo alquilo que compreende entre 1 e 3 grupos oxo (=0) ligados a um ou mais átomos de carbono.

De acordo com o aspeto preferido, a presente invenção relaciona-se com compostos 3-aminocarbazol de fórmula geral (I) em que RI e R2 têm o significado dado na Tabela 1 abaixo. TABELA 1

Composto Rl R2 1 cf3 CH2CH2OH 2 cf3 ch2c (CH3)2OH 3 cf3 CH2CH2C(CH3)2OH 4 cf3 ch2coch3 5 Cl ch2ch2oh 6 Cl CH2CH2C(CH3)2OH A fórmula (I) descrita anteriormente compreende compostos em que o grupo fenilo possui, para além de Rl, um ou mais substituintes tais como, por exemplo, um átomo de halogénio, um grupo alquilo que compreende entre 1 e 3 átomos de carbono, um grupo trifluorometilo, um grupo nitro, um grupo triflato (CF3S03~) , um grupo alquilcarboxilo que compreende entre 1 e 3 átomos de carbono (-(CH2) nCOOH), um grupo amida (-CONH2) , um grupo metilsulfoxi (-S02CH3) , um grupo N-metilsulfonamida -S02NHCH3 ou um grupo metanosulfonamida NHS02CH3.

Tal como é sabido pelos peritos da técnica, os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula geral (I) podem ser sais de adição de base. Exemplos de bases farmaceuticamente aceitáveis adequadas são metais alcalinos e metais alcalinoterrosos tais como Na+, K+, Mg++, Ca++ e bases orgânicas tais como trometamina, colina e lisina.

Os compostos de fórmula geral (I) de acordo com a presente invenção podem ter mais de uma estrutura ou forma cristalina, ou podem estar na forma amorfa. Os compostos que têm esta caracteristica são vulgarmente referidos como polimorfos. Diferentes polimorfos deste composto podem 9 exibir diferentes propriedades químicas, físicas e espetroscópicas.

Para além disso, no caso de certos substituintes, os compostos de fórmula geral (I) de acordo com a presente invenção podem ter um ou mais átomos de carbono assimétricos e podem por isso estar na forma de estereoisómeros e enantiómeros.

Deste modo, os compostos da presente invenção também incluem os sais farmaceuticamente aceitáveis, as formas cristalinas polimórficas, os estereoisómeros e os enantiómeros de um composto representado pela fórmula (I) descrita nas reivindicações.

Num segundo aspeto, a presente invenção relaciona-se com uma composição farmacêutica caracterizada por compreender uma dose terapeuticamente eficaz de um composto 3-aminocarbazol que tenha a fórmula geral (I) acima mencionada ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conjuntamente com pelo menos um veículo inerte farmaceuticamente aceitável.

Preferencialmente, as composições farmacêuticas da presente invenção são preparadas em formas de dosagem adequadas.

Exemplos de formas de dosagem adequadas são comprimidos, cápsulas, comprimidos revestidos, grânulos, e soluções e xaropes para administração oral; cremes, pomadas e emplastros antisséticos para administração tópica; supositórios para administração retal e soluções estéreis para administração por injeção, ou administração por aerossol ou oftálmica. 10

De forma vantajosa, estas formas de dosagem são formuladas de modo a assegurarem uma libertação controlada ao longo do tempo de um composto de fórmula geral (I) acima mencionada, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Especificamente, dependendo do tipo de terapia, o tempo de libertação necessário pode ser muito curto, normal ou longo.

As formas de dosagem podem também conter outros ingredientes convencionais, por exemplo: agentes conservantes, estabilizadores, surfatantes, tampões, sais para regular a pressão osmótica, emulsificantes, adoçantes, corantes, aromatizantes e semelhantes.

Adicionalmente, quando necessário para terapias particulares, a composição farmacêutica da presente invenção pode também conter outros ingredientes farmacologicamente ativos cuja administração simultânea seja útil.

Vantajosamente, a composição farmacêutica pode conter uma pró-droga de um composto de fórmula (I). A pró-droga de um composto de fórmula (I) é uma substância numa forna substancialmente inativa que, quando administrada a um ser vivo, é metabolizada em compostos de fórmula (I). Tal como é sabido dos peritos da técnica, a pró-droga dos compostos de fórmula geral (I) pode ser um derivado de um éster obtido fazendo reagir o grupo hidroxi de R2 com um ácido tal como um ácido monocarboxilico, um ácido bicarboxilico, um ácido gordo, um aminoácido, um ácido (alquil)fosfórico, ou um ácido (alquil)tiofosfórico.

Exemplos de pró-drogas adequadas são um éster de acetilo, um éster de propionilo, um éster de succinilo, um éster de estearato, um éster de palmitato, um éster de glicina, um 11 éster de leucina, um éster de lisina, um éster de fosfato, um éster de metilfosfato, um éster de metiltiofosfato, e um éster de fosfonato. Exemplos úteis de pró-drogas adequadas são descritos, por exemplo, em Stella V.J. et al., "Prodrug strategies to overcome poor water solubility", Advance Drug Delivery Reviews 59 (2007) 677-694. A composição da presente invenção também pode incluir os sais farmaceuticamente aceitáveis, as formas cristalinas polimórficas, os estereoisómeros e enantiómeros da pró-droga de um composto representado pela fórmula (I) descrita nas reivindicações. A quantidade do composto da presente invenção na composição farmacêutica pode variar dentro de um largo intervalo em função de fatores conhecidos, por exemplo em função do tipo de doença a ser tratada, da gravidade da doença, do peso corporal do paciente, da forma de dosagem, da via de administração selecionada, do número de administrações diárias e da eficácia do composto selecionado. No entanto, a quantidade ótima pode ser determinada pronta e rotineiramente por um perito na técnica.

Normalmente, a quantidade de composto da presente invenção na composição farmacêutica será tal que assegure um nivel de administração entre 0,0001 e 100 mg/kg/dia e ainda mais preferencialmente, entre 0,01 e 10 mg/kg/dia.

As formas de dosagem da composição farmacêutica da presente invenção podem ser preparadas de acordo com técnicas que são bem conhecidas dos químicos farmacêuticos, incluindo técnicas de mistura, granulação, formação de comprimidos, dissolução, esterilização e semelhantes.

Num terceiro aspeto, a presente invenção relaciona-se com um método para tratar ou prevenir processos inflamatórios, 12 dor, febre, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose em mamíferos, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto 3-aminocarbazol que tenha a fórmula geral (I) acima mencionada, de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de uma forma cristalina polimórfica do mesmo, de um estereoisómero do mesmo ou de um enantiómero do mesmo, a uma pessoa com necessidade do mesmo.

Preferencialmente, o processo inflamatório é escolhido do grupo que compreende edemas, eritemas, inflamação articular, artrite reumatoide e artroses, e o tumor é escolhido do grupo que compreende o carcinoma colorretal ou pulmonar e o adenocarcinoma.

Os 3-aminocarbazolos de fórmula geral (I) acima mencionados podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos, por exemplo fazendo reagir um ácido ou um derivado reativo do mesmo, com a amina selecionada (pedidos de patente WO 02/096902 Al, WO 02/051806, J. Med. Chem., 2002, vol. 45, pp. 3509-3523). Exemplos típicos de derivados reativos são os halogenetos de acilo, anidridos ou ésteres.

Num quarto aspeto, a presente invenção relaciona-se assim com um método para preparar um 3-aminocarbazol com a fórmula geral (I) acima mencionada, caracterizado por compreender as seguintes fases: a) reação de uma amina de fórmula (II)

m 13 em que R2 tem o significado dado previamente, com um composto de fórmula (III)

em que RI tem o significado dado previamente, e Z é escolhido do grupo que compreende Cl, Br, OH, OR e 0C(0)R, em que R é um alquilo linear ou ramificado contendo entre 1 e 6 átomos de carbono, para dar um composto 3-aminocarbazol de fórmula (I)

em que RI e R2 têm os significados dados previamente, e b) formação opcional de um sal farmaceuticamente aceitável, de uma forma cristalina polimórfica, de um estereoisómero ou de um enantiómero do composto de fórmula (I) assim obtido.

Normalmente, o passo (a) é efetuado na presença de um diluente adequado a uma temperatura no intervalo de 0 a 140 °C, por um período de tempo dentro do intervalo de 0,5 a 24 horas. Preferencialmente, a temperatura reacional encontra-se no intervalo de 15 a 40 °C. De forma vantajosa, o tempo de reação varia entre 2 e 18 horas. 14

Preferencialmente, o diluente é aprótico, polar ou apoiar. Ainda mais preferencialmente, é um diluente polar aprótico. Exemplos de diluentes polares apróticos adequados são a dimetilformamida e o diclorometano.

Na forma de realização em que Z é Cl ou Br, a reação é levada a cabo de forma vantajosa na presença de um aceitador ácido orgânico ou inorgânico adequado. Exemplos de aceitadores orgânicos adequados são a diisopropiletilenodiamina, a trietilenoamina, a piridina e a dimetilaminopiridina. Exemplos de aceitadores inorgânicos adequados são os carbonatos ou bicarbonatos de metais alcalinos.

Na forma de realização em que Z é OH, a reação é preferencialmente levada a cabo na presença de um agente de acoplamento adequado, por exemplo a diciclo-hexilcarbodiimida (também suportada numa resina de poliestireno) ou o carbonildiimidazol.

Os exemplos que se seguem são fornecidos para ilustrarem a invenção mais em detalhe sem, no entanto, a limitarem.

Exemplo 1

Preparação do Composto 1 RI = CF3, R2 = CH2CH2OH a) 2- (3-nitro-9H-carbazol-9-il)etanol

A uma solução de 2-(9H-carbazol-9-il)etanol (25 g; 0,12 mol) em ácido acético glacial (374 mL) foi adicionada gota-a-gota durante 30 minutos com agitação vigorosa, uma solução contendo ácido nitrico (6,8 mL; 0,17 mol) em ácido acético glacial (20 mL) . Cinco minutos após se ter completado a adição, separou-se um precipitado verde. A 15 mistura reacional foi vertida lentamente para cima de H2O e gelo (1 L) , agitada durante 1 hora, filtrada e finalmente lavada com H20. 0 sólido separado foi dissolvido primeiro em H20 (500 mL) tendo-se depois adicionado uma solução de carbonato de sódio a 10% para obter um pH de 7, e finalmente filtrou-se a solução. O sólido obtido foi cristalizado de uma solução de acetona/etanol absoluto (1:1) para dar 20 g de 2-(3-nitro-9H-carbazol-9-il)etanol. RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,16 (d, J= 2,34 Hz, 1H) , 8,40 (d, J = 7,75 Hz, 1H) , 8,33 (dd, J = 2,34, 9,21 Hz, 1H) , 7,79 (d, J= 9,06 Hz, 1H) , 7,73 (d, J= 8,33 Hz, 1H) , 7,57 (ddd, J = 1,24, 7,13, 8,29 Hz, 1H) , 7,33 (ddd, J = 0,95, 7,13, 7,86 Hz, 1H) , 4,89 (t, J= 5,90 Hz, 1H) , 4,54 (t, J = 5,41 Hz, 2H), 3,82 (q, J= 5,41 Hz, 2H). b) hidrocloreto de 2-(3-amino-9H-cabazol-9-il)etanol 0 produto obtido tal como descrito no passo a) anterior (10 g; 0,04 mol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (550 mL). Foi então adicionado cloreto estanoso di-hidratado (87 g; 0,4 mol) . A mistura assim obtida foi refluxada durante 16 horas.

Deixou-se a mistura reacional arrefecer à temperatura ambiente e removeu-se então o solvente sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em H20 e diclorometano, e agitado vigorosamente. Ajustou-se o pH a 7,5 adicionando uma solução saturada de bicarbonato de sódio, filtrou-se a mistura através de Celite e transferiu-se o filtrado para uma ampola de decantação. A fase orgânica foi separada e seca com Na2SC>4. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido (9 g) foi dissolvido em etanol e convertido no correspondente 16 hidrocloreto por adição de uma solução etanólica de cloreto de hidrogénio 5 M. 0 sólido precipitado foi filtrado para dar hidrocloreto de 2-(3-amino-9H-cabazol-9-il)etanol (9 g) · RMN (300 MHz, DMSO-de) δ O \—1 41 (s alargado, 3H) , 8 ,17 (d, J = : 7, 76 Hz, 1H) , 8,12 (d, J = 1 , 98 Hz, 1H), 7,73 (d , J = 8 :, 75 Hz, , 1H) , 7, 66 (d, J = 8, 26 Hz, 1H) , 7,38-7,56 (m, 2H) , 7, 23 (t , J = 7, 27, 1H), 4, 70 (s alargado, 1H) , 4 ,47 (t, J = : 5, 53 Hz, 2H) , 3, 78 (t, J = 5 ,45 Hz, 2H) . c) N-[9-(2-hidroxietil)-9H-carbazol-3-il]-2-(trifluorometil)benzamida 0 produto obtido tal como descrito no passo b) anterior (26 g; 0,1 mol) foi suspenso em diclorometano (300 mL). Adicionou-se então à solução trietilamina (28 mL; 0,2 mol) e cloreto de 2-trifluorometilbenzoílo (15,6 mL; 0,11 mol). A mistura assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida, o residuo foi dissolvido numa solução de NaOH 2N (200 mL) , e a solução resultante foi refluxada durante 2 horas. A suspensão assim obtida foi vertida para cima de água e o produto foi filtrado, seco e cristalizado de uma mistura de éter isopropilico/isopropanol (1:1).

Obteve-se assim a N-[9-(2-hidroxietil)-9H-carbazol-3-il]-2-(trifluorometil)benzamida (24 g). p.f.: 176-177 °C.

Análise elementar para C22H17F3N2O2 17 C H N Encontrado % 66, 14 4,06 6, 85 Calculado % 66, 33 4,30 7,03 RMN (30 0 MHz, DMSO -d6) δ 10 , 52 (s, 1H) , 8, 50 (d, J = 1, 75 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 7, 31 Hz, 1H) , 7,54- -7, 93 (m, 7H) , 7, 44 (t, J = 7,02 Hz, 1H) , 7, ,18 (t, J = 7,45 Hz r 1H) , 4,85 (t, J= 5,45 Hz, 1H), 4,43 (t, J= 5,70 Hz, 2H) , 3,79 (q, J = 5,75 Hz, 2H).

Exemplo 2

Preparação do Composto 2 RI = CF3, R2 = CH2C(CH3)2OH a) 1-(9H-carbazol-9-il)-2-metilpropan-2-ol A uma solução contendo carbazol (20 g; 0,12 mol) em DMSO (300 mL) foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio a 50% (300 mL), cloreto de benziltrimetilamónio (5,5 g; 0,024 mol) e, gota-a-gota, 2-cloro-2-metilpropan-2-ol (39,1 g; 0,36 mol). A mistura assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi vertida para cima de H20 e gelo (3 L) , agitada durante 1 hora e filtrada, e o sólido obtido foi cristalizado de uma mistura de hexano/acetato de etilo (9:1) para dar 1-( 9H-carbazol-9-il)-2-metilpropan-2-ol (15 g) · XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,07-8,15 (m, 2H) , 7,68 (d, J = 8, 33 Hz, 2H) , 7,40 (ddd, J = 1,24, 7,13, 8,29 Hz, 2H) 7, 13-7.20 (m, 2H) , 4,64 (s, 1H) , 4,26 (s, 2H) , 1,21 (s 6H) . 18 b) 1-(3-nitro-9H-cabazol-9-il)-2-metilpropan-2-ol A uma solução do produto obtido tal como descrito no passo a) anterior (21 g; 0,088 mol) em ácido acético glacial (400 mL) foi adicionada gota-a-gota durante 30 minutos com agitação vigorosa, uma solução contendo ácido nítrico (5 mL; 0,123 mol) em ácido acético glacial (15 mL; 0,263 mol). 5 minutos após a adição estar completa, separou-se um precipitado verde. A mistura reacional foi vertida lentamente para cima de H20 e gelo (1 L), agitada durante 1 hora, filtrada e finalmente lavada com H20. O sólido separado foi dissolvido primeiro em H20 (500 mL) e depois numa solução de carbonato de sódio a 10% até se ter obtido um pH de 7, e finalmente filtrada. O sólido obtido foi cristalizado de uma mistura de acetato de etilo/etanol (8:2) para dar 1-(3-nitro-9H-cabazol-9-il)-2-metilpropan-2-ol (19 g) . 2H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 9,15 (d, J = 2,05 Hz, 1H) , 8,38 (d, J = 7,31 Hz, 1H) , 8,30 (dd, J = 2,48, 9,21 Hz, 1H) , 7,87 (d, J = 9,06 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 8,48 Hz, 1H) , 7,54 (ddd, J = 1, 17, 7,16, 8,33 Hz, 1H) f 7,31 (td, J = 0,88, 7,60 Hz, 1H) , 4,73 (s, 1H), 4,37 (s, 2H) , 1,21 (s, , 6H) ♦ c) hidrocloreto de 1-(3-amino-9H-carbazol)-9-il]-2- metilpropan-2-ol O produto obtido tal como descrito no passo b) anterior (7,9 g; 0,028 mol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (350 mL) . Foi então adicionado cloreto estanoso di-hidratado (62,8 g; 0,28 mol). A mistura assim obtida foi refluxada durante 16 horas. 19

Deixou-se a mistura reacional arrefecer à temperatura ambiente e removeu-se então o solvente sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em H20 e diclorometano, e sujeito a agitação vigorosa. 0 pH foi ajustado a 7,5 adicionando uma solução saturada de bicarbonato de sódio, a mistura foi filtrada através de Celite e o filtrado transferido para uma ampola de decantação. A fase orgânica foi separada e seca com Na2SC>4. 0 solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido (9 g) foi dissolvido em etanol e convertido no correspondente hidrocloreto por adição de uma solução etanólica 5 M de cloreto de hidrogénio. 0 sólido obtido foi cristalizado de uma mistura de isopropanol/água (8:2) para dar hidrocloreto de 1-(3-amino-9H-carbazol-9-il)-2-metilpropan-2-ol (6 g). XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,32 (s alargado, 3H) , 8,16 (d, J = 7, 60 Hz, 1H) , 8,10 (d, J = 2,31 Hz, 1H), 7,81 (d, = 8,92 Hz, 1H) , 7,74 (d, J = 8,26 Hz, 1H) , 7,47 (ddd , J 0,99, 7,10, 8,42 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 2,15 , 8,75 Hz, 1H) 7,22 (t, J = 7,43 Hz, 1H), 4,70 (s alargado, 1H) , 4,30 (s, 2H), 1,20 (s, 6H). d) N-[9-(2-hidroxi-2-metilpropil)-9H-carbazol-3-il]-2-(trifluorometil)benzamida 0 produto obtido tal como descrito no passo c) anterior (3,3 g; 0,011 mol) foi suspenso em diclorometano (30 mL). Adicionou-se então à solução trietilamina (3 mL; 0,022 mol) e cloreto de 2-trifluorometilbenzoílo (1,7 mL; 0,012 mol). A mistura assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido numa solução de NaOH 2N (20 mL), e a solução 20 resultante foi refluxada durante 2 horas. A suspensão assim obtida foi vertida para cima de água e o produto foi filtrado, seco e cristalizado de uma mistura de éter isopropilico/isopropanol (1:1).

Obteve-se assim a N-[9-(2-hidroxi-2-metilpropil)-9H-carbazol-3-il]-2-(trifluorometil)benzamida (2,7 g). p.f.: 179-181 °C.

Análise elementar para C24H21F3N2O2 C H N Encontrado % 67,51 4,82 6, 52 Calculado % 67, 60 4,96 6, 57 XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,50 (s, 1H) , 8,49 (s, 1H) , 8,06 (d, J= 7,93 Hz, 1H) , 7,56-7, 92 (m, 7H) , 7,42 (t, J = 7,76 Hz, 1H), 7,17 (t, J= 7,43 Hz, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,26 (s, 2H) , 1,21 (s, 6H) .

Exemplo 3

Preparação do Composto 3 RI = CF3, R2 = CH2CH2C (CH3) 2OH a) 3-( 9H-carbazol-9-il)propanoato de etilo A uma solução contendo carbazol (20 g; 0,12 mol) em DMF (130 mL) foi adicionado em pequenas porções hidreto de sódio (suspensão a 50%) (6,7 g; 0,14 mol); a suspensão assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois aquecida a 60 °C. Uma solução contendo 3-bromopropanoato de etilo (17,9 mL; 0,14 mol) em DMF (20 mL) 21 foi adicionada gota-a-gota e a mistura foi agitada durante 16 horas. A mistura foi vertida para cima de H20 (0,5 L) e filtrada. O sólido obtido foi purificado por cromatografia flash em silica, utilizando como eluente uma mistura de hexano/acetato de etilo (8:2) para dar 16 g de 3-(9H-carbazol-9-il)propanoato de etilo, produto este que foi utilizado na reação seguinte sem purificação adicional. b) 4-(9H-cabazol-9-il)-2-metilbutan-2-ol A uma solução do produto obtido no passo a) anterior (15,2 g; 0,057 mol) em tetra-hidrofurano (200 mL) foi adicionada uma solução 3 M de iodeto de metilmagnésio em éter dietilico (57 mL; 0,171 mol). A mistura assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Uma solução 1 M de NH4C1 (500 mL) foi então adicionada à mistura. A mistura resultante foi transferida para uma ampola de decantação e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi seca com Na2S04 e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi cristalizado de uma mistura de hexano/acetato de etilo (8:2) para dar 4-(9H-cabazol-9-il)-2-metilbutan-2-ol (9 g) , produto este que foi utilizado na reação seguinte sem purificação adicional. c) 2-metil-4-(3-nitro-9H-carbazol-9-il]butan-2-ol O produto obtido no passo b) anterior (7,2 g; 0,028 mol) foi posto a reagir procedendo de maneira semelhante à descrita no Exemplo la). O produto obtido foi cristalizado de acetato de etilo para dar 2-metil-4-(3-nitro-9H-carbazol-9-il]butan-2-ol (6 g). 22 2H RMN (300 ΜΗζ, DMSO-de) δ 9,17 (d, J= 2,34 Hz, 1H) , 8,41 (d, J = 7,60 Hz, 1H) , 8,36 (dd, J = 2,34, 9, 35 Hz, 1H) , 7,73 (d, J= 9,35 Hz, 1H) , 7,66-7,71 (m, 1H) , 7,56-7, 64 (m, 1H) , 7,31-7,38 (m, 1H) , 4,62 (s, 1H) , 4,48-4,58 (m, 2H) , 1,79-1,89 (m, 2H) , 1,24 (s, 6H) . d) hidrocloreto de 4-(3-amino-9H-carbazol-9-il)-2- metilbutan-2-ol A uma suspensão do produto obtido no passo c) anterior (5,9 g; 0,020 mol) em etanol a 95° (80 mL) foi adicionado 10% de Pd/C (0,5 g; 0,0005 mol) e a mistura foi sujeita a hidrogenação num hidrogenador Parr (30 psi) durante 4 horas. A mistura reacional foi filtrada, a solução foi evaporada sob pressão reduzida e o produto obtido foi dissolvido em acetato de etilo e convertido no correspondente hidrocloreto por adição de uma solução etanólica 5 M de cloreto de hidrogénio. 0 sólido assim obtido foi cristalizado de uma mistura de éter isopropilico/isopropanol (1:1) para dar hidrocloreto de 4-(3-amino-9H-carbazol-9-il)-2-metilbutan-2-ol (5,5 g). 1R RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,34 (s alargado, 3H) , 8,19 (d, J= 7,60 Hz, 1H) , 8,13 (d, J= 1,98 Hz, 1H) , 7,68 (d, J = 8,92 Hz, 1H), 7,62 (d, J= 8,20 Hz, 1H) , 7,44-7,58 (m, 2H) , 7,25 (t, J = 6,94 Hz, 1H) , 4,08-4,83 (m, 3H) , 1,73- 1,88 (m, 2H), 1,23 (s, 6H). e) N-[9-(3-hidroxi-3-metilbutil)-9H-carbazol-3-il]-2-trifluorometil-benzamida O produto obtido tal como descrito no passo d) anterior (3,9 g; 0,013 mol) foi posto a reagir procedendo de maneira semelhante à descrita no Exemplo lc). 23 0 sólido obtido foi cristalizado de etanol para dar N-[9-(3-hidroxi-3-metilbutil)-9H-carbazol-3-il] -2-trifluorometil-benzamida (2,3 g). p.f.: 188-189 °C.

Análise elementar para C25H23F3N2O2 C H N Encontrado % 67,75 5, 31 6, 23 Calculado % 68,17 5,26 6,36 RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,53 (s, 1H) , 8,52 (d, J = 1,98 Hz, 1H) , 8,10 (d, J= 7,60 Hz, 1H) , 7, 68-7, 90 (m, 4H) , 7,66 (dd, J= 2,00, 8,70 Hz, 1H), 7,52-7,59 (m, 2H), 7,47 (t, J= 7,10 Hz, 1H) , 7,19 (t, J= 7,43 Hz, 1H) , 4,55 (s, 1H) , 4,38-4,51 (m, 2H) , 1,71-1,91 (m, 2H), 1,23 (s, 6H) .

Exemplo 4

Preparação do Composto 4 RI = CF3, R2 = CH2COCH3 a) 9H-carbazol-9-ilacetato de etilo A uma solução contendo carbazol (20 g; 0,12 mol) em DMF (130 mL) foi adicionado em pequenas porções hidreto de sódio (suspensão a 50%) (6,9 g; 0,14 mol); a suspensão assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois aquecida a 60 °C. Uma solução contendo 2-bromoacetato de etilo (24 g; 0,14 mol) em DMF (20 mL) foi adicionada gota-a-gota e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas. A mistura foi vertida para cima de H2O (0,5 L) e filtrada, e o sólido obtido foi cristalizado de hexano para dar 9H-carbazol-9-ilacetato de etilo (20 g). XH RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 8,15 (d, J = 7, 60 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 8,20 Hz, 2H), 7,43 (td, , J = 1,02, 7,67 Hz, 2H) , 7,11-1, ,27 (m, 2H) , 5,33 (s, 2H) , 4,14 (q, J = 7,02 Hz, 2H) , 1,20 (t, J = 7,16 Hz, 3H) . b) 1-( 9H-cabazol-9-il)acetona A uma solução do produto obtido no passo a) anterior (14,1 g; 0,056 mol) em tetra-hidrofurano (130 mL) foi adicionada uma solução 3 M de iodeto de metilmagnésio em éter dietilico (28 mL; 0, 084 mol) . A mistura assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. Uma solução 1 M de NH4C1 (100 mL) foi então adicionada à mistura. A mistura resultante foi transferida para uma ampola de decantação e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi seca com Na2S04 e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia flash com sílica, utilizando uma mistura de hexano/acetato de etilo (95:5) como eluente para dar 1-(9H-cabazol-9-il)acetona (8 g), produto este que foi utilizado na reação seguinte sem purificação adicional. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,15 (d, J= 7,89 Hz, 2H) , 7,49 (d, J= 8,20 Hz, 2H) , 7,41 (ddd, J= 1,10, 7,00, 8,20 Hz, 2H), 7,21 (ddd, J= 1,10, 7,00, 7,89 Hz, 2H), 5,39 (s, 2H), 2,24 (s, 3H). c) 1-(3-nitro-9H-carbazol-9-il)acetona O produto obtido no passo b) anterior (5 g; 0,022 mol) foi posto a reagir procedendo de maneira semelhante à descrita no Exemplo la). O resíduo obtido foi purificado por cromatografia flash com sílica, utilizando uma mistura de hexano/acetato de etilo (8:2) como eluente para dar 1-(3- 25 nitro-9H-carbazol-9-il)acetona (4,5 g), produto este que foi utilizado na reação seguinte sem purificação adicional. 2H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ 9,20 (d, J= 2,34 Hz, 1H) , 8,42 (d, J = 7,89 Hz, 1H) , 8,33 (dd, J = 2,34, 9, 06 Hz, 1H) , 7,70 (d, J= 9,35 Hz, 1H) , 7, 60-7, 67 (m, 1H) , 7,54 (td, J = 1,17, 7,75 Hz, 1H), 7,30-7,39 (m, 1H), 5,57 (s, 2H), 2,32 (s, 3H). d) hidrocloreto de 1-(3-amino-9H-carbazol-9-il)acetona A uma suspensão do produto obtido no passo c) anterior (1,3 g; 0,005 mol) em etanol a 95° (80 mL) foi adicionado 10% de Pd/C (0,5 g; 0,0005 mol) e a mistura foi sujeita a hidrogenação num hidrogenador Parr (30 psi) durante 4 horas. A mistura reacional foi filtrada e a solução foi evaporada sob pressão reduzida. O produto obtido foi dissolvido em acetato de etilo e convertido no correspondente hidrocloreto por adição de uma solução etanólica 5 M de cloreto de hidrogénio. O sólido precipitado foi filtrado para dar hidrocloreto de 1-(3- amino-9H-carbazol-9-il)acetona (1,1 g). XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (s alargado, 3H) , 8,19

(d, J= 7,60 Hz, 1H) , 8,14 (d, J= 1,98 Hz, 1H) , 7,62 (d, J = 8,59 Hz, 1H), 7,52-7,58 (m, 1H), 7,40-7,52 (m, 2H), 7,25 (ddd, J= 0, 99, 6, 94, 7, 93 Hz, 1H) , 5,46 (s, 2H) , 2,27 (s, 3H) . e) N-[9-(2-oxopropil)-9H-carbazol-3-il]-2-(trifluorometil)benzamida 26 0 produto obtido no passo d) anterior (1,1 g; 0,004 mol) foi posto a reagir procedendo de maneira semelhante à descrita no Exemplo lc). O sólido obtido foi cristalizado de uma mistura de éter isopropilico/isopropanol (1:1) para dar N-[9-(2-oxopropil)-9H-carbazol-3-il]-2-(trifluorometil)benzamida (1,2 g). p.f.: 223-226 °C.

Análise elementar para C23H17F3N2O2 C H N Encontrado % 67,02 3, 91 6, 78 Calculado % 67,31 4, 18 6, 83 RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,52 (s, 1H) , 8,50 (d, J = 1,75 Hz, 1H) , 8,10 (d, J= 7,60 Hz, 1H) , 7,66-7,91 (m, 4H) , 7,61 (dd, J= 2,05, 8,77 Hz, 1H), 7,36-7,53 (m, 3H), 7,20 (t, J= 6,87 Hz, 1H), 5,38 (s, 2H), 2,24 (s, 3H).

Exemplo 5

Preparação do Composto 5 RI = Cl, R2 = CH2CH2OH a) 2-cloro-N-[9-(2-hidroxietil)-9H-carbazol-3-il]benzamida O produto obtido tal como descrito no Exemplo lb) (6,4 g; 0,028 mol) foi suspenso em diclorometano (70 mL) . Adicionou-se então à solução trietilamina (7,9 mL; 0,2 mol) e cloreto de 2-clorobenzoilo (3,95 mL; 0,031 mol). A mistura assim obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. 27 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido numa solução de NaOH 2N (80 mL), e a solução resultante foi refluxada durante 2 horas. A suspensão assim obtida foi vertida para cima de água, e o produto foi filtrado, seco e cristalizado de etanol a 95°.

Obteve-se assim o 2-cloro-N-[9-(2-hidroxietil)-9H-carbazol-3-il]benzamida (5,5 g). p.f.: 168-169 °C.

Análise elementar para C21H17CIN2O2 C H N Encontrado % 68,83 4, 63 7,58 Calculado % 6 9,14 4,70 7, 68 RMN (30 0 MHz, DMSO -d6) δ 10,47 (s, 1H) , 8,55 (d, J = 1, 98 Hz, 1H), 8,08 (d, J = 7,27 Hz, 1H) , 7,39- -7,71 (m, 8H), 7, 18 (t, J = 7,43 Hz, 1H) , 4,86 (t, J = 5, 45 Hz, 1H), 4,43 (t, J= 5,78 Hz, 2H), 3,78 (q, J= 5,83 Hz, 2H).

Exemplo 6

Preparação do Composto 6 RI = Cl, R2 = CH2CH2C(CH3) 2OH a) 2-cloro-N-[9-(3-hidroxi-3-metilbutil)-9H-carbazol-3-il]benzamida O produto obtido tal como descrito no Exemplo 3d) (1,1 g; 0,0037 mol) foi posto a reagir com cloreto de 2-clorobenzoílo (0,52 mL; 0,0041 mol), procedendo de maneira semelhante à descrita no Exemplo lc). 28

0 sólido obtido foi cristalizado de acetato de etilo para dar 2-cloro-N-[9-(3-hidroxi-3-metilbutil)-9H-carbazol-3-il]benzamida (0,63 g). p.f.: 120-124 °C

Análise elementar para C24H23CIN2O2 C H N Encontrado % 70,52 5, 62 6,71 Calculado % 70,84 5,70 6, 88 RMN (300 MHz, DMSO- d6) δ 10 ,48 (s, 1H) , 8, 57 (d, J 1, 98 Hz , 1H) , 8,09 (d, J = 7, 60 Hz, 1H) , 7,41- -7, 73 (m, 8H) 7, 19 (t , J = 7,43 Hz, 1H), 4,55 (s, 1H) , 4,37- -4, 51 (m, 2H) 1, 73- -1, 88 (m, 2H) , 1,23 (s, , 6H) .

Exemplo 7

Preparação do Composto Comparativo A. 0 Composto Comparativo A corresponde ao composto 1 do pedido de patente WO 2006/122 680 e foi preparado tal como descrito no referido pedido de patente. Exemplo 8 Preparação do Composto Comparativo B. 0 Composto Comparativo B corresponde ao composto 6 do pedido de patente WO 2007/014 687 e foi preparado tal como descrito no referido pedido de patente.

Exemplo 9 29

Preparação do Composto Comparativo C. 0 Composto Comparativo C corresponde ao composto 13 do pedido de patente WO 2007/014 687 e foi preparado tal como descrito no referido pedido de patente.

Exemplo 10

Teste da atividade in vitro

Este teste permite a avaliação da capacidade inibidora na produção da PGE2 e a seletividade relativamente à produção da PGE2a.

Utilizou-se a linha celular A549, adenocarcinoma pulmonar humano, a qual é particularmente sensível ao estímulo com citoquinas pró-inflamatórias, por exemplo com a IL-lp, e, em resposta a este estímulo, é particularmente ativa na produção e libertação de dois prostanoides: PGE2 e PGF2a (Thoren S. Jakobsson P-J, 2000).

As células foram estimuladas com a IL-lp (1 ng/mL) e simultaneamente tratadas com o composto teste durante 22 horas num meio de cultura apropriado (DMEM - Dulbecco's Modified Eagle's Médium) suplementado com 5% de soro fetal de vitela e L-glutamina (concentração final 4 mM) numa incubadora a 37 °C e a uma concentração em C02 de 5%.

Após a incubação, a quantidade da PGE2 e PGF2a produzida e libertada para o sobrenadante foi analisada utilizando um kit EIA (produzido e vendido pela Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, EUA). O composto comparativo utilizado foi a indometacina numa concentração de 10 nM (Sigma-Aldrich), um medicamento anti- 30 inflamatório não esteroide que inibe na mesma proporção tanto a PGE2 como a PGF2a.

Os resultados, expressos como valores de IC50, isto é, como a concentração de composto que inibe 50% da produção da PGE2 e da PGF2a relativamente às células que foram estimuladas, mas não tratadas com o mesmo composto, são apresentados na Tabela 2. A inatividade ou a atividade reduzida do composto na biossintese da PGF2a é uma indicação da seletividade relativamente à produção da PGE2, e assim da inibição seletiva da mPGES-1. TABELA 2

Composto IC50 [ym] pge2 pgf2« 1 2,9 > 100 2 2,3 > 100 (continuação)

Composto IC50 [ym] pge2 PGF2a 3 1,4 > 100 4 LO LO > 100 6 0, 6 > 100 Indometacina 0,005 0,003

Exemplo 11

Teste da atividade in vivo O composto teste foi avaliado no modelo de contorção em ratinhos induzido por ácido acético (Stock J.L. et al., J. Clin. Inv. 2001, 107: 325-331). Este teste permite a 31 avaliação da atividade antinociceptiva dos compostos da invenção num modelo inflamatório de dor.

Ratinhos-fêmea CD-I pesando entre 25 e 30 g foram utilizados para o teste. Os animais foram tratados intraperitonealmente com o composto-teste (0,1 a 10 mg/kg) suspenso em metilcelulose (MTC). Os animais de controlo foram tratados apenas com o veiculo (MTC) através da mesma via.

Meia hora depois do tratamento, foi dada aos animais uma injeção intraperitoneal de ácido acético (0,7% v/v em solução salina fisiológica, 16 yL/g de peso corporal) para induzir dor inflamatória e para verificar os efeitos do composto-teste na resposta nociceptiva.

Imediatamente após a administração do ácido acético e nos 20 minutos seguintes, o número de contorções foi medido, o que representa o parâmetro para avaliação da resposta nociceptiva.

Tal como é apresentado na Tabela 3, o composto da invenção induziu de forma dependente da dose, uma redução no número de contorções nos 20 minutos seguintes à administração do ácido acético, comparativamente aos animais tratados simplesmente com a MTC. TABELA 3

Tratamento Dose (mg/kg) N° de contorções % de inibição Veiculo - 48,4 ± 3,66 - Composto 1 0,1 38,4 ± 3,99 21 1 31,5 ± 5,72 35 10 12,8 ± 2,46 74 32

Exemplo 12

Teste da estabilidade metabólica em microssomas hepáticos humanos e de ratos. Este teste permite a avaliação da estabilidade metabólica dos compostos da invenção e dos compostos comparativos em ratos e no homem.

Os compostos-teste foram incubados em microssomas hepáticos humanos (dadores, Xenotech) e em microssomas hepáticos de ratos da Sprague-Dawley (dadores, Xenotech), e a comparação do composto-teste foi medida de modo a se ter uma estimativa da estabilidade metabólica em várias espécies utilizando um sistema HPLC/MS/MS com um espectrómetro de massa Applied Biosystems 4000 QTrap.

Os compostos a serem analisados, a uma concentração final de 0 e 1 μΜ, foram colocados numa suspensão contendo os microssomas numa concentração final de 0,5 mg/mL num volume final de 200 yL, em placas de 96 cavidades. O teste foi padronizado com tampão fosfato (75 mM, pH 7,4) e com o sistema de regeneração NADPH (MgCl2: 3,3 mM; G6P: 3,3 mM; G6PD: 0,4 U/mL; NADP+: 1,3 mM). Os compostos de referência varfarina, propranolol e testosterona (Sigma) foram incubados como um coquetel e tratados como os compostos-teste. As amostras foram incubadas a 37 °C numa incubadora humidificada. Ao tempo 0 e depois de 60 minutos, adicionaram-se 100 yL de acetonitrilo contendo o padrão interno (0,2 μΜ de metoprolol e 0,4 μΜ de diclofenac) para parar a reação.

As amostras foram centrifugadas antes de serem analisadas. A análise por HPLC/MS/MS foi levada a cabo utilizando uma fonte de ionização por eletrospray no modo positivo e SRM (Single Reaction Mode). As condições cromatográficas implicam a utilização de uma coluna XDB-C18 (2,1 x 50 mm, 33

Agilent) e um gradiente de 5% a 91% de acetonitrilo em água contendo 0,1% de ácido fórmico (tempo total da corrida igual a 6 minutos); a velocidade de fluxo foi de 0,5 mL/minuto.

As áreas dos picos para os compostos-teste foram integradas e os resultados foram expressos como a razão da área do analito/área do padrão interno (PAR). Para cada tempo, foram analisadas duas amostras e calculados os valores médios. A percentagem do valor do composto restante foi calculada como: % de composto não metabolizado = 100 * (PARjf inal média/PAR™ média)

Os resultados para os compostos 1 a 6 são apresentados na Tabela 4, conjuntamente com os resultados para os compostos comparativos A, B e C e para os compostos de referência. Os compostos da presente invenção apresentaram uma melhoria da estabilidade metabólica em relação aos compostos comparativos. TABELA 4

Composto Rato Homem 1 58% 81% 2 68% 82% 3 65% 77% 4 58% 7% 5 63% 76% 6 74% 65% A 0,2% 51% B 0,4% 55% C 4,0% 22% Varfarina 97% 103% Propranolol 0,4% 66% Testosterona 0% 27% 34

Exemplo 13

Teste de absorção in vitro

Este teste permite a avaliação da quantidade absorvida pela barreira intestinal dos compostos da invenção e dos compostos comparativos utilizando a linha celular Caco-2 como um modelo in vitro da barreira intestinal. 0 teste de permeabilidade em células Caco-2 representa um sistema in vitro aprovado para predizer e estimar a absorção intestinal in vivo de um medicamento. Quando as células Caco-2 são cultivadas num filtro poroso durante cerca de 21 dias, elas têm a capacidade de se diferenciarem em eritrócitos. Na prática, durante este período, as células Caco-2 sofrem mudanças morfológicas e bioquímicas espontâneas que resultam na formação de uma monocamada celular polarizada que tem na superfície apical uma "bordadura em escova" bem definida e forma "junções apertadas" entre as células, representando assim um modelo adequado para analisar a permeabilidade intestinal aos medicamentos.

Foram utilizados os seguintes materiais para levar a cabo o teste:

Amarelo Lúcifer (Sigma)

Solução salina balanceada de Hank (HBSS) (Invitrogen)

Padrão radioativo de referência (Perkin Elmer) Células Caco-2 (ATCC)

Placas Caco-2 Multiscreen (Millipore) HPLC/MS/MS com espectrómetro de massa Applied Biosystems 4000 QTrap

Acetonitrilo contendo metoprolol 0,2 μΜ como padrão interno. 35

Os compostos que foram submetidos ao teste foram diluídos a partir de uma solução estoque 10 mM em HBSS até uma concentração final de 10 μΜ. O sistema consistiu numa monocamada celular confluente em cultura durante 21 a 28 dias. Os compostos de referência (amarelo Lúcifer, atenolol, propranolol e digoxina) foram incluídos em cada teste como controladores de qualidade e para comparação com os compostos submetidos a teste.

Cada composto foi testado em triplicado, bidirecionalmente, a pH 7,4, do compartimento apical para o basolateral (A—>B) e do compartimento basolateral para o apical (B—»A) .

As amostras recolhidas ao tempo dado foram analisadas por HPLC-MS/MS, utilizando uma fonte de ionização por electrospray no modo positivo e SRM (Single Reaction Mode). As condições cromatográficas implicaram a utilização de uma coluna XDB-C18 (2,1 x 50 mm, Agilent) com um gradiente de 5% a 91% de acetonitrilo em água contendo 0,1% de ácido fórmico (tempo total de corrida igual a 6,5 minutos) e uma velocidade de fluxo de 0,5 mL/minuto. O metoprolol foi utilizado como padrão interno.

Os dados de concentração foram utilizados para calcular os valores da permeabilidade aparente (Papp) , e calcularam-se a média e o desvio padrão da Papp. A razão de fluxo foi calculada como Papp (B—»A) /Papp (A—»B) . A percentagem de recuperação foi calculada como: (quantidade no compartimento recetor + quantidade no compartimento dador)/quantidade nominal 36

Integrou-se a área dos picos dos compostos-teste e exprimiram-se os resultados como a razão da área de analito/área do padrão interno, e corrigiram-se para o fator de diluição utilizado durante a preparação da amostra. Os coeficientes de permeabilidade aparente foram calculados utilizando a seguinte equação: [produto Área x Tompo \pzoduL,/}iU,,,,r em que: VA volume no compartimento recetor (0,25 mL para o teste de A—»B, 0,075 mL para o teste de B—»A) Área área da superfície da membrana (0,11 cm2)

Tempo tempo total de transporte (3600 segundos)

Os valores obtidos foram classificados com base no seguinte critério de avaliação.

Baixos Papp < 2 x 10“6 cm/seg Médios 2 x 10“6 cm/seg < Papp < 20 x 10“6 cm/seg

Elevados Papp > 20 x 10“6 cm/seg

Os resultados para os compostos 1 a 6 estão apresentados na Tabela 4, conjuntamente com os resultados para os compostos comparativos A, B e C e para os compostos de referência. Os compostos da presente invenção mostraram melhoria da expetativa de absorção relativamente aos compostos comparativos. 37 TABELA 4

Composto Absorção 1 Elevada 2 Elevada 3 Elevada 4 Elevada 5 Elevada 6 Elevada A Baixa B Baixa C Média Amarelo Lúcifer Baixa Atenolol Baixa Propranolol Elevada Diqoxina Baixa

Exemplo 14

Teste de biodisponibilidade in vivo

Este teste permitiu a avaliação da biodisponibilidade in vivo dos compostos da invenção, tornando assim possível avaliar e comparar o perfil farmacocinético dos compostos-teste.

Os testes foram levados a cabo utilizando o método-cassete, isto é, administrando oralmente vários produtos simultaneamente ao mesmo animal, a uma dose de 5 mg/kg. Os produtos foram suspensos em metilcelulose (MTC). Os animais tratados foram cateterizados para a recolha em série de amostras de sangue, efetuada por meio de um sistema automático de amostragem. As concentrações plasmáticas dos produtos foram medidas por HPLC/MS/MS. Os perfis das concentrações plasmáticas ao longo do tempo tornaram possível avaliar a biodisponibilidade relativa dos produtos-teste em termos de velocidade ( tmax ® Cmax) ^ espécies (AUC). 0 declive da curva na parte final também 38 permitiu uma avaliação comparativa da velocidade de eliminação dos compostos do plasma: quanto mais lenta a velocidade, mais baixo o declive. Foram tratados três animais para cada combinação de compostos. 0 composto que tinha uma Cmax e AUC e um tmax esperado mais elevados relativamente aos outros, foi selecionado dado que apresentou uma boa velocidade de absorção in vivo. 0 produto comparativo utilizado foi o composto C, que apresentou uma absorção limitada, enquanto que os compostos 1, 2 e 3 da presente invenção apresentaram boas características de biodisponibilidade.

Os resultados, expressos como Cmax, isto é, como a concentração máxima de medicamento atingida no plasma; Tmax, isto é, o tempo necessário para atingir a concentração máxima de medicamento no plasma; e AUC0-7, isto é, a área debaixo da curva das concentrações plasmáticas de medicamento ao longo do tempo, medida nas primeiras sete horas após a administração, são apresentados na Tabela 5. TABELA 5

Composto Cmax ng/mL Tmax h AUC0-7 ng/mL*h 1 1200 1,5 5754 2 984 4,3 5403 3 457 1,8 2668 C 165 1,7 751

Lisboa, 29 de Agosto de 2013

Claims (9)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto 3-aminocarbazol, caracterizado por ter a fórmula geral (I) abaixo:

N R2 <D em que RI é um átomo de halogénio, um grupo metilo ou um grupo trihalometilo, um grupo nitro, um grupo ciano ou um grupo triflato, e R2 é um grupo hidroxialquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 8 átomos de carbono ou um grupo carbonilalquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 8 átomos de carbono, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, uma forma cristalina polimórfica do mesmo, um estereoisómero do mesmo ou um enantiómero dos mesmo ou uma pró-droga na forma de éster do mesmo.

2. Um composto 3-aminocarbazol de acordo com a Reivindicação 1 caracterizado por RI ser um átomo de flúor ou de cloro, ou um grupo trifluorometilo ou triclorometilo, e R2 ser um grupo hidroxialquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 6 átomos de carbono ou um grupo carbonilalquilo linear ou ramificado que compreende entre 1 e 4 átomos de carbono. 2

3. Um composto 3-aminocarbazol de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por RI e R2 terem o significado representado na Tabela 1 abaixo TABELA 1 Composto RI R2 1 cf3 CH2CH2OH 2 cf3 ch2c (ch3) 2oh 3 cf3 ch2ch2c (ch3) 2oh 4 cf3 ch2coch3 5 Cl ch2ch2oh 6 Cl ch2ch2c (CH3) 2oh

4. Uma composição farmacêutica, caracterizada por compreender uma dose terapeuticamente eficaz de um composto 3-aminocarbazol de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 3, um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, uma forma cristalina polimórfica do mesmo, um estereoisómero do mesmo, e um enantiómero do mesmo ou uma pró-droga na forma de éster do mesmo, conjuntamente com pelo menos um veiculo inerte farmaceuticamente aceitável.

5. Um método para preparar um composto 3-aminocarbazol de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 3, caracterizado por compreender os seguintes passos: a) reação de uma amina de fórmula (II)

(II) 3 em que R2 tem o significado dado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 3, com um composto de fórmula (III)

em que RI tem o significado dado em qualquer uma das Reivindicações 1 a 3, e Z é escolhido do grupo que compreende Cl, Br, OH, OR e 0C(0)R, em que R é um alquilo linear ou ramificado contendo entre 1 e 6 átomos de carbono, para dar um composto 3-aminocarbazol de fórmula (I)

(1) em que RI e R2 têm os significados dados previamente, e b) formação opcional de um sal farmaceuticamente aceitável, de uma forma cristalina polimórfica, de um estereoisómero ou de um enantiómero do composto de fórmula (I) assim obtido.

6. A utilização com qualquer uma farmaceuticamente de um composto 3-aminocarbazo das Reivindicações 1 a 3, aceitável do mesmo, de mesmo 1 de de uma acordo um sal forma 4 cristalina polimórfica do mesmo, de um estereoisómero do mesmo, de um enantiómero do mesmo ou de uma pró-droga na forma de éster do mesmo, para a produção de um medicamento para o tratamento preventivo ou terapêutico de um distúrbio escolhido do grupo que compreende processos inflamatórios, dor, febre, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose.

7. A utilização de um composto 3-aminocarbazol de acordo com a Reivindicação 6, caracterizado por os referidos processos inflamatórios serem escolhidos do grupo que compreende edemas, eritemas, inflamação articular, artrite reumatoide e artroses.

8. A utilização de um composto 3-aminocarbazol de acordo com a Reivindicação 6, caracterizado por os referidos tumores serem escolhidos do grupo que compreende o carcinoma colorretal e pulmonar e o adenocarcinoma.

9. Um composto 3-aminocarbazol de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1 a 3, um sal f armaceuticamente aceitável do mesmo, uma forma cristalina polimórfica do mesmo, um estereoisómero do mesmo, um enantiómero do mesmo ou uma pró-droga na forma de éster do mesmo, para utilização no tratamento ou prevenção de processos inflamatórios, dor, febre, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose. Lisboa, 29 de Agosto de 2013