PT2125810E - Inibidores da mapk/erk quinase - Google Patents

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PT2125810E
PT2125810E PT78694221T PT07869422T PT2125810E PT 2125810 E PT2125810 E PT 2125810E PT 78694221 T PT78694221 T PT 78694221T PT 07869422 T PT07869422 T PT 07869422T PT 2125810 E PT2125810 E PT 2125810E
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pyrimidine
dione
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methylpyrido
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PT78694221T
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Qing Dong
Xianchang Gong
Stephen W Kaldor
Nicholas Scorah
Michael B Wallace
Toufike Kanouni
Feng Zhou
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Takeda Pharmaceutical
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Description

1
DESCRIÇÃO "INIBIDORES DA MAPK/ERK QUINASE"
DOMÍNIO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos que podem ser utilizados para inibir Proteína quinases Ativadas por Mitogénios (também conhecidas como MEK e MAPK/ERK quinases), como a Proteína Quinase Quinase 1 Ativada por Mitogénios (também conhecida como MAPKKl, MAPK/ERK Quinase 1 e MEK1) e Proteína Quinase Quinase 2 Ativada por Mitogénios (também conhecida como MAPKK2, MAPK/ERK Quinase 2 e MEK2), bem como composições de matéria, estojos e artigos fabricados compreendendo estes compostos. A invenção também se refere a compostos de acordo com a presente invenção para utilização em métodos de tratamento. Adicionalmente, são aqui descritos métodos de preparação dos compostos da presente invenção, bem como intermediários úteis nesses métodos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
As vias de sinalização de proteína quinases ativadas por mitogénios (MAPK) estão envolvidas em eventos celulares tais como crescimento, diferenciação e respostas a "stress" (J. Biol. Chem. (1993) 268, 14553-14556). Até à data foram
identificadas quarto vias paralelas de MAPK: ERK1/ERK2, JNK, p38 e ERK5. Estas vias são cascatas lineares de quinases, pois a MAPKKK fosforila e ativa a MAPKK, e a MAPKK fosforila e ativa a MAPK. Até à data foram identificados sete homólogos da MAPKK (MEK1, MEK2, MKK3, MKK4/SEK, MEK5, MKK6 e MKK7) e quatro famílias da MAPK 2 (ERK1/2, JNK, p38 e ERK5). A ativação destas vias regula a atividade de alguns substratos através de fosforilação. Estes substratos incluem: fatores de transcrição, tais como TCF, c-myc, ATF2 e os componentes AP-1, fos e Jun; componentes da superfície celular EGF-R; componentes citosólicos, incluindo PHAS-I, p90rsk, cPLA2 e c-Raf-1, e componentes citoesqueléticos, tais como tau e MAP2. As cascatas de sinalização de MAPK estão envolvidas no controlo de processos celulares, incluindo proliferação, diferenciação, apoptose e respostas a "stress".
Das vias conhecidas de sinalização de MAPK, a via RAF-MEK-ERK medeia a sinalização proliferativa e antiapoptótica a partir de fatores de crescimento e fatores oncogénicos, tais como fenótipos mutantes de Ras e Raf que promovem o crescimento, progressão e metástases tumorais. Em virtude do seu papel central na mediação da transmissão de sinais promotores do crescimento a partir de múltiplos recetores de fatores de crescimento, a via RAF-MEK-ERK proporciona alvos moleculares com aplicações terapêuticas potencialmente amplas, por exemplo, em perturbações hiperproliferativas cancerosas e não cancerosas, imunomodulação e inflamação. A MEK ocupa uma posição estratégica a jusante na via RAF-MEK-ERK, catalisando a fosforilação dos seus substratos de MAPK, ERK1 e ERK2. Anderson et al. "Requirement for integration of signals from two distinct phosphorilation pathways for activation of MAP kinase". Nature 1990, volume 343, páginas 651-653. Na via de ERK, a MAPKK corresponde à MEK (MAP quinase ERK Quinase) e a MAPK corresponde à ERK (Quinase Regulada de modo Extracelular). Não foram identificados substratos da MEK diferentes de ERK1 e ERK2. 3
Seger et al. "Purification and characterization of mitogen-activated protein kinase activator(s) from epidermal growth factor-stimulated A431 cells". J. Biol. Chem., 1992, volume 267, páginas 14373-14381. Esta seletividade estreita, para além da capacidade única de atuar como uma quinase de especificidade dual, é consistente com o papel central da MEK na integração de sinais na via da MAPK. A MEK também aparenta estar fortemente associada à MAP quinase antes de a fosforilar, sugerindo que a fosforilação da MAP quinase pela MEK pode requerer uma forte interação prévia entre as duas proteinas. Este requisito e a especificidade invulgar da MEK sugerem que o seu mecanismo de ação pode ser suficientemente diferente de outras proteína quinases para que possam ser encontrados inibidores seletivos da MEK, possivelmente operando através de mecanismos alostéricos em vez do bloqueio habitual do sítio de ligação de ATP. A ação constitutiva de MAPKs foi relatada em > 30% de linhas de células de tumores primários, incluindo linhas de células derivadas do cólon, pulmão, mama, pâncreas, ovário e rim. Hoshino et al. "Constitutive activation of the 41-/43-kDa mitogen-activated protein kinase signaling pathway in human tumors". Oncogene, 1999, volume 18, páginas 813-822. Foram detetadas concentrações mais elevadas de MAPK/ERK ativas (pMAPK/pERK) em tecido tumoral em comparação com tecido adjacente normal. Sivaraman et al. "Hiperexpression of mitogen-activated protein kinase in human breast câncer". J. Clin. Invest., 1997, volume 99, páginas 1478-1483. Há uma necessidade continuada de descobrir novos agentes terapêuticos para tratar doenças humanas. As MAPK/ERK quinases, especificamente mas não se limitando à MEKl e 4 ΜΕΚ2, são alvos especialmente atrativos para a descoberta de novas terapêuticas devido ao seu importante papel em perturbações hiperproliferativas cancerosas (por exemplo, cancro do cérebro, pulmão, células escamosas, bexiga, gástrico, pancreático, mama, cabeça, pescoço, renal, rim, ovário, próstata, colorretal, próstata, cólon, epidermoide, esofágico, testicular, ginecológico ou tiroide); perturbações hiperproliferativas não cancerosas (por exemplo, hiperplasia benigna da pele (por exemplo, psoríase), restenose e hipertrofia prostática benigna (BPH)); pancreatite; doença renal; dor; prevenção da implantação de blastócitos; tratamento de doenças relacionadas com vasculogénese ou angiogénese (por exemplo, angiogénese tumoral, doença inflamatória aguda e crónica, como artrite reumatoide, aterosclerose, doença inflamatória do intestino, doenças da pele, tais como psoríase, eczema e escleroderma, diabetes, retinopatia diabética, retinopatia da prematuridade, degenerescência macular relacionada com a idade, hemangioma, glioma, melanoma, sarcoma de Kaposi e cancro do ovário, mama, pulmão, pancreático, próstata, cólon e epidermoide); asma; quimiotaxia de neutrófilos; coque sético; doenças mediadas por células T onde seria importante a supressão imunológica (por exemplo, a prevenção da rejeição de transplantes de órgãos, doença enxerto versus hospedeiro, lúpus eritematoso, esclerose múltipla e artrite reumatoide); condições em que o influxo de neutrófilos conduz a destruição de tecidos (por exemplo, lesão de reperfusão em enfarte do miocárdio e acidente vascular cerebral e artrite inflamatória); aterosclerose; inibição de respostas de queratinócitos a "cocktails" de fatores de crescimento; doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) e outras doenças. 0 documento EP-A-1894932 descreve derivados 5-amino-2,4,7-trioxo-3,4,7,8-tetra-hidro-2H- 5 pirido[2,3-d]pirimidina e a sua utilização no tratamento de cancro.
RESUMO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos que têm atividade de inibição de MAPK/ERK quinases. A presente invenção também proporciona composições, artigos fabricados e estojos compreendendo estes compostos, bem como compostos de acordo com a presente invenção para utilização em métodos de tratamento. São aqui descritos métodos de preparação dos compostos da presente invenção, bem como intermediários úteis nesses métodos.
Numa forma de realização é proporcionada uma composição farmacêutica que compreende um inibidor da MEK de acordo com a presente invenção como ingrediente ativo. As composições farmacêuticas de acordo com a invenção podem opcionalmente compreender 0,001%-100% de um ou mais inibidores desta invenção. Estas composições farmacêuticas podem ser administradas ou coadministradas por uma grande variedade de vias, incluindo, por exemplo, oral, parentérica, intraperitoneal, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, retal, transbucal, intranasal, lipossómica, via inalação, vaginal, intraocular, via distribuição local (por exemplo, por cateter ou endoprótese), subcutânea, intra-adiposa, intra-articular ou intratecalmente. As composições também podem ser administradas ou coadministradas em formas galénicas de libertação lenta. 6 A invenção também é dirigida a estojos e outros artigos fabricados para o tratamento de estados de doença associados à MEK.
Numa forma de realização é proporcionado um estojo que compreende uma composição compreendendo pelo menos um inibidor da MEK da presente invenção em combinação com instruções. As instruções podem indicar o estado de doença para o qual a composição deve ser administrada, informação de armazenamento, informação da dosagem e/ou instruções respeitantes ao modo como administrar a composição. 0 estojo também pode compreender materiais de empacotamento. 0 material de empacotamento pode compreender um recipiente para conter a composição. 0 estojo também pode opcionalmente compreender componentes adicionais, como seringas, para administração da composição. 0 estojo pode compreender a composição numa única ou em múltiplas formas galénicas.
Noutra forma de realização é proporcionado um artigo fabricado que compreende uma composição compreendendo pelo menos um inibidor da MEK da presente invenção em combinação com materiais de empacotamento. 0 material de empacotamento pode compreender um recipiente para conter a composição. 0 recipiente pode opcionalmente compreender uma etiqueta indicando o estado de doença para o qual a composição deve ser administrada, informação de armazenamento, informação da dosagem e/ou instruções respeitantes ao modo como administrar a composição. 0 estojo também pode opcionalmente compreender componentes adicionais, como seringas, para administração da composição. 0 estojo pode compreender a composição numa única ou em múltiplas formas galénicas. 7
Também são descritos métodos de preparação de compostos, composições e estojos de acordo com a presente invenção. Por exemplo, são aqui descritos vários esquemas de síntese para sintetizar compostos de acordo com a presente invenção.
Também são proporcionados compostos, composições, estojos e artigos fabricados de acordo com a presente invenção para utilização em métodos de tratamento.
Os compostos, composições, estojos e artigos fabricados são utilizados para inibir a atividade da MEK e/ou ERK. Em particular, os compostos, composições, estojos e artigos fabricados podem ser utilizados para inibir a atividade da MEK1. Adicionalmente, os compostos, composições, estojos e artigos fabricados podem ser utilizados para inibir a atividade da MEK2. Além disso, os compostos, composições, estojos e artigos fabricados podem ser utilizados para inibir a atividade da ERK1. Os compostos, composições, estojos e artigos fabricados também podem ser utilizados para inibir a atividade da ERK2.
Os compostos, composições, estojos e artigos fabricados são utilizados para tratar um estado de doença para o qual a MEK e/ou ERK possuem atividade que contribui para a patologia e/ou sintomatologia do estado de doença.
Um composto de acordo com a presente invenção é administrado a um sujeito no qual a atividade da MEK e/ou ERK no sujeito está alterada, preferivelmente reduzida.
De notar, relativamente a todas as formas de realização acima, que a presente invenção se destina a abranger todas as formas ionizadas farmaceuticamente aceitáveis (por exemplo, sais) e solvatos (por exemplo, hidratos) dos compostos, independentemente de essas formas ionizadas e solvatos serem especificados, pois é bem conhecida na área a administração de agentes farmacêuticos numa forma ionizada ou solvatada. Também é de notar que, a menos que seja especificada uma estereoquimica particular, a recitação de um composto se destina a abranger todos os possíveis estereoisómeros (por exemplo, enantiómeros ou diastereómeros, dependendo do número de centros quirais), independentemente de o composto estar presente como um isómero individual ou uma mistura de isómeros. Além disso, a menos que especificado em contrário, a recitação de um composto destina- se a abranger todas as possíveis formas de ressonância e tautómeros. No que se refere às reivindicações, a linguagem "composto compreendendo a fórmula", "composto possuindo a fórmula" e "composto de fórmula" destina-se a abranger o composto e todas as formas ionizadas e solvatos farmaceuticamente aceitáveis, todos os possíveis estereoisómeros e todas as possíveis formas de ressonância e tautómeros, a menos que seja especificamente indicado em contrário na reivindicação particular.
DESCRIÇÃO BREVE DAS FIGURAS A Figura 1 ilustra as SEQ ID NOS: 1-6 referidas neste pedido.
DEFINIÇÕES 9 A menos que afirmado em contrário, os seguintes termos usados na especificação e reivindicações terão os significados seguintes para as finalidades deste Pedido.
De notar que, como usados na especificação e nas reivindicações adjuntas, as formas singulares "um", "uma", "o" e "a" incluem referentes plurais, a menos que o contexto claramente imponha o contrário. Além disso, definições de termos comuns de química podem ser encontradas em manuais de referência, incluindo Carey e Sundberg "ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4a ED" . Volumes A (2000) e B (2001), Plenum Press, Nova Iorque. A menos que indicado em contrário, também são empregues métodos convencionais de espetroscopia de massa, RMN, HPLC, química de proteínas, bioquímica, técnicas de DNA recombinante e farmacologia, no âmbito da técnica. "Alicíclico" significa uma fração compreendendo uma estrutura em anel não aromático. Frações alicíclicas podem ser saturadas ou parcialmente insaturadas com uma, duas ou mais ligações duplas ou triplas. Frações alicíclicas também podem opcionalmente compreender heteroátomos, tais como azoto, oxigénio e enxofre. Os átomos de azoto podem estar opcionalmente quaternizados ou oxidados e os átomos de enxofre podem estar opcionalmente oxidados. Exemplos de frações alicíclicas incluem mas não estão limitadas a frações com (C3-s) anéis, tais como ciclopropilo, ciclo-hexano, ciclopentano, ciclopenteno, ciclopentadieno, ciclo-hexano, ciclo-hexeno, ciclo-hexadieno, ciclo-heptano, ciclo-hepteno, ciclo-heptadieno, ciclo-octano, ciclo-octeno e ciclo-octadieno. 10 "Alifático" significa uma fração caraterizada por uma disposição em cadeia linear ou ramificada de átomos de carbono constituintes e pode ser saturado ou parcialmente insaturado com uma, duas ou mais ligações duplas ou triplas. "Alcenilo" significa uma cadeia carbonada linear ou ramificada que contém pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono (-CR=CR'- ou -CR=CR'R", em que R, R' e R" são, cada um independentemente, hidrogénio ou outros substituintes). Exemplos de alcenilo incluem vinilo, alilo, isopropenilo, pentenilo, hexenilo, heptenilo, 1-propenilo, 2-butenilo, 2-metil-2-butenilo e afins. Em formas de realização particulares, "alcenilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2-20) alcenilo, um (C2-15) alcenilo, um (C2-io) alcenilo, um (C2-5) alcenilo ou um (C2-3) alcenilo. Alternativamente, "alcenilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2)alcenilo, um (C3) alcenilo ou um (C4) alcenilo. "Alcenileno" significa uma cadeia carbonada divalente linear ou ramificada possuindo uma ou mais ligações duplas carbono-carbono (-CR=CR'-, em que R e R' são, cada um independentemente, hidrogénio ou outros substituintes). Exemplos de alcenileno incluem eteno-1,2-di-ilo, propeno-1,3-di-ilo, metileno-1,1-di-ilo e afins. Em formas de realização particulares, "alcenileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2_ 20) alcenileno, um (C2-15) alcenileno, um (C2_io) alcenileno, um (C2-5) alcenileno ou um (C2-3) alcenileno. Alternativamente, "alcenileno", isoladamente ou 11 representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2) alcenileno, um (C3) alcenileno ou um (C4) alcenileno. "Alcoxi" significa uma fração com oxigénio possuindo um substituinte alquilo adicional. Os grupos alcoxi da presente invenção podem estar opcionalmente substituídos. "Alquilo", representado por si próprio, significa um radical alifático linear ou ramificado, saturado ou insaturado possuindo uma cadeia de átomos de carbono, opcionalmente com um ou mais dos átomos de carbono estando substituídos por oxigénio (ver "oxa-alquilo"), um grupo carbonilo (ver "oxoalquilo"), enxofre (ver "tioalquilo") e/ou azoto (ver "aza-alquilo"). São tipicamente usados (Cx) alquilo e (CX_Y) alquilo, em que X e Y indicam o número de átomos de carbono da cadeia. Por exemplo, (Ci_6) alquilo inclui alquilos que têm uma cadeia possuindo entre 1 e 6 carbonos (por exemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, isobutilo, tert-butilo, vinilo, alilo, 1-propenilo, isopropenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 2-metilalilo, etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo e afins). Alquilo representado juntamente com outro radical (por exemplo, como em arilalquilo, heteroarilalquilo e afins) significa um radical divalente alifático linear ou ramificado, saturado ou insaturado, possuindo o número de átomos indicado ou, quando não forem indicados átomos, significa uma ligação (por exemplo, (Cê-io ) aril (C1-3) alquilo inclui benzilo, fenetilo, 1-feniletilo, 3-fenilpropilo, 2-tienilmetilo, 2-piridinilmetilo e afins). Em formas de realização particulares, "alquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (Ci_ 20) alquilo, um (C1-15) alquilo, um (C1-10) alquilo, um (Ci_ 5) alquilo ou um (C1-3) alquilo. Alternativamente, "alquilo", 12 isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (Ci) alquilo, um (C2) alquilo ou um (C3) alquilo. "Alquileno", a menos que indicado em contrário, significa um radical divalente alifático linear ou ramificado, saturado ou insaturado. São tipicamente usados (Cx) alquileno e (CX_Y) alquileno, em que X e Y indicam o número de átomos de carbono da cadeia. Por exemplo, (Ci_ ε)alquileno inclui metileno (-CH2-) , etileno (-CH2CH2-) , trimetileno (-CH2CH2CH2-) , tetrametileno (-CH2CH2CH2CH2-) 2-butenileno (-CH2CH=CHCH2-) , 2-metiltetrametileno (-CH2CH (CH3) CH2CH2-) , pentametileno (-CH2CH2CH2CH2CH2-) e afins. Em formas de realização particulares, "alquileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (Ci_2o) alquileno, um (Ci_i5) alquileno, um (Ci_ 10) alquileno, um (C1-5) alquileno ou um (C1-3) alquileno. Alternativamente, "alquileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2) alquileno, um (C2) alquileno ou um (C3) alquileno . "Alquilideno" significa um radical alifático linear ou ramificado, saturado ou insaturado, ligado à molécula paterna por uma ligação dupla. São tipicamente usados (Cx) alquilideno e (Cx-Y) alquilideno, em que X e Y indicam o número de átomos de carbono da cadeia. Por exemplo, (Ci-6)alquilideno inclui metileno (=CH2) , etilideno (=CHCH3) , isopropilideno (=C(CH3)2), propilideno (=CHCH2CH3) , alilideno (=CH-CH=CH2) e afins. Em formas de realização particulares, "alquilideno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (Ci_ 20) alquilideno, um (C1-15) alquilideno, um (C1-10) alquilideno, um (C1-5) alquilideno ou um (Ci_3) alquilideno.
Alternativamente, "alquilideno", isoladamente ou 13 representado juntamente com outro radical, pode ser um (Ci)alquilideno, um (C2)alquilideno ou um (C3)alquilideno. "Alcinilo" significa uma cadeia carbonada linear ou ramificada que contém pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono (-C=C- ou -C=CR, em que R é hidrogénio ou outro substituinte). Exemplos de alcinilo incluem etinilo, propargilo, 3-metil-l-pentinilo, 2-heptinilo e afins. Em formas de realização particulares, "alcinilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2-20) alcinilo, um (C2-15) alcinilo, um (C2-io) alcinilo, um (C2-5) alcinilo ou um (C2-3) alcinilo. Alternativamente, "alcinilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2) alcinilo, um (C3) alcinilo ou um (C4) alcinilo. "Alcinileno" significa uma cadeia carbonada divalente linear ou ramificada possuindo uma ou mais ligações triplas carbono-carbono (-CR^CR'-, em que R e R' são, cada um independentemente, hidrogénio ou outros substituintes). Exemplos de alcinileno incluem etino-1,2-di-ilo, propino-1,3-di-ilo e afins. Em formas de realização particulares, "alcinileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2-20) alcinileno, um (C2-15) alcinileno, um (C2-10) alcinileno, um (C2-5) alcinileno ou um (C2-3) alcinileno. Alternativamente, "alcinileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C2) alcinileno, um (C3) alcinileno ou um (C4) alcinileno. "Amido" significa o radical -C(=0)-NR-, -C(=0)-NRR', -NR-C (=0) — e/ou -NR-C(=0)R', em que cada R e R' é, independentemente, hidrogénio ou outro substituinte. 14 "Amino" significa uma fração com azoto possuindo dois outros substituintes em que, por exemplo, um átomo de hidrogénio ou carbono está ligado ao azoto. Por exemplo, grupos amino representativos incluem -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NH ( (C1-10) alquilo) , -N ( (C1-10) alquilo) 2, -NH(arilo), -NH (heteroarilo), -N(arilo)2r -N(heteroarilo)2 e afins. Opcionalmente, os dois substituintes em conjunto com o azoto também podem formar um anel. A menos que indicado em contrário, os compostos da invenção contendo frações amino podem incluir respetivos derivados protegidos. Grupos protetores adequados para frações amino incluem acetilo, tert-butoxicarbonilo, benziloxicarbonilo e afins. "Animal" inclui humanos, mamíferos não humanos (por exemplo, cães, gatos, coelhos, gado, cavalos, ovelhas, cabras, suínos, veados e afins) e não mamíferos (por exemplo, pássaros e afins). "Aromático" significa uma fração em que os átomos constituintes perfazem um sistema em anel insaturado, em que todos os átomos do sistema em anel têm hibridização sp2 e o número total de eletrões pi é igual a 4n+2. Um anel aromático pode ser tal que os átomos de anel são apenas átomos de carbono ou pode incluir átomos de carbono e diferentes de carbono (ver "heteroarilo").
"Arilo" significa uma disposição em anel monocíclico ou policíclico em que cada anel é aromático ou, quando fundido a um ou mais anéis, forma uma disposição de anel aromático. Se um ou mais átomos de anel forem diferentes de carbono (por exemplo, N, S), o arilo é um heteroarilo. São tipicamente usados (Cx) arilo e (CX^Y) arilo, em que X e Y 15 indicam o número de átomos de carbono do anel. Em formas de realização particulares, "arilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C3-14) arilo, um (C3-10) arilo, um (C3-7) arilo, um (Cs-io) arilo ou um (C5-7)arilo. Alternativamente, "arilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C5) arilo, um (Cê) arilo, um (C7) arilo, um (Cs) arilo, um (Cg)arilo ou um (Cio)arilo. "Aza-alquilo" e "aminoalquilo" significam um alquilo, como definido acima, com a exceção de um ou mais dos átomos de carbono que formam a cadeia alquilo estarem substituídos por átomos de azoto substituídos ou não substituídos (-NR-ou -NRR', em que R e R' são, cada um independentemente, hidrogénio ou outros substituintes) . Por exemplo, um (Ci-10) aza-alquilo refere-se a uma cadeia compreendendo entre 1 e 10 carbonos e um ou mais átomos de azoto. "Bicicloalquilo" significa uma disposição bicíclica em anel saturada ou parcialmente insaturada, fundida, espiro ou em ponte. Em formas de realização particulares, "bicicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C4-15) bicicloalquilo, um (Chio) biciclo-alquilo, um (Cê-io) bicicloalquilo ou um (Cs-io) bicicloalquilo. Alternativamente, "bicicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (Cs)bicicloalquilo, um (C9)bicicloalquilo ou um (Cio) bicicloalquilo ·
"Bicicloarilo" significa uma disposição bicíclica em anel fundida, espiro ou em ponte em que pelo menos um dos anéis compreendendo a disposição é aromático. São tipicamente usados (Cx) bicicloarilo e (Cx-Y) bicicloarilo, em que X e Y 16 indicam o número de átomos de carbono na disposição biciclica em anel e diretamente ligados ao anel. Em formas de realização particulares, "bicicloarilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C4-15) bicicloarilo, um (C4-10) bicicloarilo, um (Ce-10) bicicloarilo ou um (Cg-io) bicicloarilo. Alternativamente, "bicicloarilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (Cs)bicicloarilo, um (Cg) bicicloarilo ou um (C10) bicicloarilo . "Anel que forma ponte" e "anel em ponte", como usados aqui, referem-se a um anel que está ligado a outro anel formando um composto possuindo uma estrutura biciclica ou policiclica na qual dois átomos de anel que são comuns a ambos os anéis não estão diretamente ligados entre si. Exemplos não exclusivos de compostos comuns possuindo um anel em ponte incluem borneol, norbornano, 7-oxabiciclo[2.2.1]heptano e afins. Um ou os dois anéis do sistema bicíclico também podem compreender heteroátomos. "Carbamoílo" significa o radical -0C(0)NRR', em que R e R' são, cada um independentemente, hidrogénio ou outros substituintes. "Carbociclo" significa um anel que consiste em átomos de carbono. "Carbonilo" significa o radical -C(=0)- e/ou -C(=0)R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte. De notar que o radical carbonilo pode estar adicionalmente substituído com uma variedade de substituintes, formando diferentes grupos carbonilo, incluindo ácidos, haletos de ácidos, aldeídos, amidas, ésteres e cetonas. 17 "Carboxi" significa o radical -C(=0)-0- e/ou -C(=0)-0R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte. De notar que compostos da invenção contendo frações carboxi podem incluir os respetivos derivados protegidos, isto é, em que o oxigénio está substituído com um grupo protetor. Grupos protetores adequados para frações carboxi incluem benzilo, tert-butilo e afins. "Ciano" significa o radical -CN. "Cicloalquilo" significa uma disposição em anel não aromática, saturada ou parcialmente insaturada, monocíclica, bicíclica ou policíclica. São tipicamente usados (Cx) cicloalquilo e (CX_Y) cicloalquilo, em que X e Y indicam o número de átomos de carbono da disposição em anel. Por exemplo, (C3_i0) cicloalquilo inclui ciclopropilo, ciclo-butilo, ciclopentilo, ciclo-hexilo, ciclo-hexenilo, 2,5-ciclo-hexadienilo, biciclo[2.2.2]octilo, adamantan-1-ilo, deca-hidronaftilo, oxociclo-hexilo, dioxociclo-hexilo, tiociclo-hexilo, 2-oxobiciclo[2.2.1]hept-l-ilo e afins. Em formas de realização particulares, "cicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C3-14) cicloalquilo, um (C3-10) cicloalquilo, um (C3-7) cicloalquilo, um (Cs-io) cicloalquilo ou um (C5-7) cicloalquilo. Alternativamente, "cicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C5)cicloalquilo, um (C6)cicloalquilo, um (C7)cicloalquilo, um (Cg) cicloalquilo, um (Cg) cicloalquilo ou um (Cio) cicloalquilo. "Cicloalquileno" significa uma disposição em anel divalente monocíclica, bicíclica ou policíclica saturada ou 18 parcialmente insaturada. São tipicamente usados (Cx) ciclo-alquileno e (CX_Y) cicloalquileno, em que X e Y indicam o número de átomos de carbono na disposição em anel. Em formas de realização particulares, "cicloalquileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C3-14) cicloalquileno, um (C3-10) cicloalquileno, um (C3-7) cicloalquileno, um (Cs-io) cicloalquileno ou um (C5_ 7)ciclo-alquileno. Alternativamente, "cicloalquileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um (C5) cicloalquileno, um (Ce)cicloalquileno, um (C7)ciclo-alquileno, um (Cs)cicloalquileno, um (Cg)cicloalquileno ou um (Ci0)cicloalquileno. "Doença" inclui especificamente qualquer condição não saudável de um animal, ou parte deste, e inclui uma condição não saudável que pode ser causada ou estar ligada a terapia médica ou veterinária aplicada a esse animal, isto é, os "efeitos secundários" dessa terapia. "Anel fundido", como usado aqui, refere-se a um anel que está ligado a outro anel formando um composto que possui uma estrutura biciclica, em que os átomos de anel que são comuns a ambos os anéis estão diretamente ligados entre si. Exemplos não exclusivos de anéis fundidos comuns incluem decalina, naftaleno, antraceno, fenantreno, indolo, furano, benzofurano, quinolina e afins. Compostos possuindo sistemas de anéis fundidos podem ser saturados, parcialmente saturados, carbociclicos, heterocíclicos, aromáticos, heteroaromáticos e afins. "Halo" significa fluoro, cloro, bromo ou iodo. 19 "Heteroalquilo" significa alquilo, como definido neste Pedido, desde que um ou mais dos átomos na cadeia alquilo sejam um heteroátomo. Em formas de realização particulares, "heteroalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero (C1-20) alquilo, um hetero (Ci-15) alquilo, um hetero (C1-10) alquilo, um hetero (Ci-5) alquilo, um hetero (C1-3) alquilo ou um hetero (C1-2) alquilo . Alternativamente, "heteroalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero(Ci)alquilo, um hetero(C2)alquilo ou um hetero(C3)alquilo. "Heteroarilo" significa um grupo aromático monocíclico, biciclico ou policiclico em que pelo menos um átomo de anel é um heteroátomo e os restantes átomos de anel são carbono. Grupos heteroarilo monociclicos incluem mas não estão limitadas a grupos aromáticos ciclicos possuindo cinco ou seis átomos de anel, em que pelo menos um átomo de anel é um heteroátomo e os restantes átomos de anel são carbono. Os átomos de azoto podem estar opcionalmente quaternizados e os átomos de enxofre podem estar opcionalmente oxidados. Grupos heteroarilo desta invenção incluem mas não estão limitados aos derivados de furano, imidazolo, isotiazolo, isoxazolo, oxadiazolo, oxazolo, 1,2,3-oxadiazolo, pirazina, pirazolo, piridazina, piridina, pirimidina, pirrolina, tiazolo, 1,3,4-tiadiazolo, triazolo e tetrazolo. "Heteroarilo" também inclui mas não está limitado a anéis biciclicos ou triciclicos, em que o anel heteroarilo está fundido a um ou dois anéis independentemente selecionados do grupo que consiste num anel arilo, um anel cicloalquilo, um anel cicloalcenilo e outro anel monocíclico heteroarilo ou heterocicloalquilo. Estes heteroarilos biciclicos ou triciclicos incluem mas não estão limitados aos derivados 20 de benzo[b]furano, benzo[b]tiofeno, benzimidazolo, imidazo [4, 5-c]piridina, quinazolina, tieno[2,3-c]piridina, tieno [3,2-b]piridina, tieno[2,3-b]piridina, indolizina, imidazo [1,2a]piridina, quinolina, isoquinolina, ftalazina, quinoxalina, naftiridina, quinolizina, indolo, isoindolo, indazolo, indolina, benzoxazolo, benzopirazolo, benzotiazolo, imidazo[1,5-a]piridina, pirazolo[1,5-a] piridina, imidazo[1,2-a]pirimidina, imidazo[1,2-c] pirimidina, imidazo[1,5-a]pirimidina, imidazo[1,5-c] pirimidina, pirrolo[2,3-b]piridina, pirrolo[2,3-c]piridina, pirrolo[3,2-c]piridina, pirrolo[3,2-b]piridina, pirrolo [2,3-d]pirimidina, pirrolo[3,2-d]pirimidina, pirrolo[2,3-b] pirazina, pirazolo[1,5-a]piridina, pirrolo[1,2-b] piridazina, pirrolo[1,2-c]pirimidina, pirrolo[1,2-a] pirimidina, pirrolo[1,2-a]pirazina, triazo[1,5-a]piridina, pteridina, purina, carbazolo, acridina, fenazina, fenotiazeno, fenoxazina, 1,2-di-hidropirrolo[3,2,1-hi] indolo, indolizina, pirido[1,2-a]indolo e 2(1H)-piridinona. Os anéis heteroarilo biciclicos ou triciclicos podem estar ligados à molécula paterna através do próprio grupo heteroarilo ou do grupo arilo, cicloalquilo, cicloalcenilo ou heterocicloalquilo ao qual estão fundidos. Os grupos heteroarilo desta invenção podem estar substituídos ou não substituídos. Em formas de realização particulares, "heteroarilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero (Ci_i3) arilo, um hetero (C2-13) arilo, um hetero (C2-6) arilo, um hetero (C3-9) arilo ou um hetero (C5-9) arilo. Alternativamente, "heteroarilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero (C3) arilo, um hetero (C4) arilo, um hetero(C5)arilo, um hetero (C6)arilo, um hetero(C7)arilo, um hetero(Cs)arilo ou um hetero(C9)arilo. 21 "Heteroátomo" refere-se a um átomo que não é um átomo de carbono. Exemplos particulares de heteroátomos incluem mas não estão limitados a azoto, oxigénio e enxofre. "Fração heteroatómica" inclui uma fração em que o átomo pelo qual a fração está ligada não é um carbono. Exemplos de frações heteroatómicas incluem -NR-, -N+(CT)=, -0-, -Ξου — S (0)2~r em que R é hidrogénio ou outro substituinte. "Heterobicicloalquilo" significa bicicloalquilo, como definido neste Pedido, desde que um ou mais dos átomos no anel sejam um heteroátomo. Por exemplo hetero (C9-12) bicicloalquilo, como usado neste pedido, inclui mas não está limitado a 3-aza-biciclo[4.1.0]hept-3-ilo, 2-aza-biciclo [3.1.0]hex-2-ilo, 3-aza-biciclo[3.1.0]hex-3-ilo e afins. Em formas de realização particulares, "heterobicicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero(Ci_ 14) bicicloalquilo, um hetero (C4_i4) bicicloalquilo, um hetero (C4_9) bicicloalquilo ou um hetero (C5_g) bicicloalquilo . Alternativamente, "heterobi-cicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero(C5)bicicloalquilo, hetero(Ce)bicicloalquilo, hetero (C7)bicicloalquilo, hetero (Cg)bicicloalquilo ou um hetero(Cg)bicicloalquilo. "Heterobicicloarilo" significa bicicloarilo, como definido neste Pedido, desde que um ou mais dos átomos no anel sejam um heteroátomo. Por exemplo, hetero (C4-42) bicicloarilo, como usado neste Pedido, inclui mas não está limitado a 2-amino-4-oxo-3,4-di-hidropteridin-6-ilo, tetra-hidroisoquinolinilo e afins. Em formas de realização particulares, "heterobicicloarilo", isoladamente ou representado juntamente com 22 outro radical, pode ser um hetero (Ci_i4) bicicloarilo, um hetero (C4-14) bicicloarilo, um hetero (C4-9) bicicloarilo ou um hetero(C5-9)bicicloarilo. Alternativamente, "heterobiciclo-arilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero(C5) bicicloarilo, hetero(C6) bicicloarilo, hetero(C7)bicicloarilo, hetero(Cs) bicicloarilo ou um hetero(Cg) bicicloarilo. "Heterocicloalquilo" significa cicloalquilo, como definido neste Pedido, desde que um ou mais dos átomos que formam o anel sejam um heteroátomo selecionado independentemente de N, 0, ou S. Exemplos não exclusivos de heterocicloalquilo incluem piperidilo, 4-morfolilo, 4-piperazinilo, pirrolidinilo, per-hidropirrolizinilo, 1, 4-diazaper-hidroepinilo, 1,3-dioxanilo, 1, 4-dioxanilo e afins. Em formas de realização particulares, "heterocicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero (C1-13) cicloalquilo, um hetero (Ci_g) cicloalquilo, um hetero (Ci^6> cicloalquilo, um hetero (C5_9) cicloalquilo ou um hetero (C2_6) cicloalquilo. Alternativamente, "heterocicloalquilo", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero (C2) cicloalquilo, um hetero(C3) cicloalquilo, um hetero(C4)ciclo-alquilo, um hetero(C5)cicloalquilo, um hetero(C6)ciclo-alquilo, hetero(C7) cicloalquilo, hetero(Cs) cicloalquilo ou um hetero(Cg) cicloalquilo. "Heterocicloalquileno" significa cicloalquileno, como definido neste Pedido, desde que um ou mais dos átomos de carbono membros de anel estejam substituídos por um heteroátomo. Em formas de realização particulares, "heterocicloalquileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero(C1- 23 ΐ3) ciclo-alquileno, um hetero (C1-9) cicloalquileno, um hetero(Ci_6) cicloalquileno, um hetero (C5-9) cicloalquileno ou um hetero (C2-6) cicloalquileno. Alternativamente, "heterociclo-alquileno", isoladamente ou representado juntamente com outro radical, pode ser um hetero(C2) cicloalquileno, um hetero(C3) cicloalquileno, um hetero (C4)cicloalquileno, um hetero(C5)cicloalquileno, um hetero (Ce)cicloalquileno, hetero(C7) cicloalquileno, hetero(Cg) cicloalquileno ou um hetero(C9)cicloalquileno. "Hidroxi" significa o radical -OH. "IC50" significa a concentração molar de um inibidor que produz 50% de inibição da enzima alvo. "Imino" significa o radical -CR(=NR') e/ou -C(=NR')-, em que Re R' são, cada um independentemente, hidrogénio ou outro substituinte. "Isómeros" significa compostos possuindo fórmulas moleculares idênticas mas diferindo na natureza ou sequência da ligação dos seus átomos ou na disposição espacial dos seus átomos. Isómeros que diferem quanto à disposição especial dos seus átomos são denominados "estereoisómeros". Estereoisómeros que não são imagens no espelho um do outro são denominados "diastereómeros" e estereoisómeros que não são imagens no espelho sobreponiveis são denominados "enantiómeros" ou, por vezes, "isómeros óticos". Um átomo de carbono ligado a quatro substituintes diferentes é denominado um "centro quiral". Um composto com um centro quiral tem duas formas enantioméricas de quiralidade oposta. Uma mistura das duas formas enantioméricas é denominada uma "mistura racémica".
Um composto que tem mais do que um centro quiral tem 2n_1 pares enantioméricos, em que n é o número de centros quirais. Compostos com mais do que um centro quiral podem existir como um diastereómero individual ou como uma mistura de diastereómeros, denominada uma "mistura diastereomérica". Quando estiver presente um centro quiral, um estereoisómero pode ser caracterizado pela configuração absoluta desse centro quiral. Configuração absoluta refere-se à disposição espacial dos substituintes ligados ao centro quiral. Os enantiómeros são caraterizados pela configuração absoluta dos seus centros quirais e são descritos pelas regras de sequenciação R e S de Cahn, Ingold e Prelog. Convenções de nomenclatura estereoquimica, métodos de determinação da estereoquimica e separação de estereoisómeros são bem conhecidos na área (por exemplo, ver "Advanced Organic Chemistry", 4a edição, March, Jerry, John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1992). "Grupo abandonante" refere-se ao grupo com o significado que convencionalmente lhe é atribuído em quimica orgânica sintética, isto é, um átomo ou grupo que pode ser deslocado em condições reacionais (por exemplo, alquilação). Exemplos de grupos abandonantes incluem mas não estão limitados a halo (por exemplo, F, Cl, Br e I), alquilo (por exemplo, metilo e etilo) e sulfoniloxi (por exemplo, mesiloxi, etanossulfoniloxi, benzenossulfoniloxi e tosiloxi), tio-metilo, tieniloxi, di-halofosfinoiloxi, tetra-halofosfoxi, benziloxi, isopropiloxi, aciloxi e afins.
"Fração que proporciona uma separação de X átomos" e "agente de ligação que proporciona uma separação de X átomos" entre outras duas frações significa que a cadeia de átomos que liga diretamente as outras duas frações tem X 25 átomos de comprimento. Quando X é apresentado como um intervalo (por exemplo, X1-X2) , então a cadeia de átomos tem pelo menos Xi e não mais do que X2 átomos de comprimento. É entendido que a cadeia de átomos pode ser formada a partir de uma combinação de átomos incluindo, por exemplo, átomos de carbono, azoto, enxofre e oxigénio. Além disso, cada átomo pode opcionalmente estar ligado a um ou mais substituintes, como permitido pelas valências. Adicionalmente, a cadeia de átomos pode fazer parte de um anel. Em conformidade, numa forma de realização, uma fração que proporciona uma separação de X átomos entre duas outras frações (R e R') pode ser representada por R-(L)X-R', em que cada L é independentemente selecionado do grupo que consiste em CR"R"', NR"", 0, S, CO, CS, C=NR""', SO, S02 e afins, em que quaisquer dois ou mais de R", R" ', R"" e R""' podem ser tomados em conjunto para formar um anel substituído ou não substituído. "Nitro" significa o radical -N02. "Oxa-alquilo" significa um alquilo, como definido acima, com a exceção de um ou mais dos átomos de carbono que formam a cadeia alquilo estarem substituídos por átomos de oxigénio (-0- ou -0R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte) . Por exemplo, um oxa (C1-10) alquilo refere-se a uma cadeia compreendendo entre 1 e 10 carbonos e um ou mais átomos de oxigénio. "Oxoalquilo" significa um alquilo, como definido acima, com a exceção de um ou mais dos átomos de carbono que formam a cadeia alquilo estarem substituídos por grupos carbonilo (-C(=0)- ou - C(=0)-R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte). 0 grupo carbonilo pode ser um aldeído, 26 cetona, éster, amida, ácido ou haleto de ácido. Por exemplo, um oxo (Ci-io) alquilo refere-se a uma cadeia compreendendo entre 1 e 10 átomos de carbono e um ou mais grupos carbonilo. "Oxi" significa o radical -O- ou -OR, em que R é hidrogénio ou outro substituinte. Em conformidade, é de notar que o radical oxi pode estar adicionalmente substituído com uma variedade de substituintes, formando diferentes grupos oxi, incluindo hidroxi, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi ou carboniloxi. "Farmaceuticamente aceitável" significa que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que geralmente é segura, não tóxica e que não é indesejável do ponto de vista biológico ou outro, e inclui as que são aceitáveis para utilização veterinária, bem como utilização farmacêutica humana. "Sais farmaceuticamente aceitáveis" designa sais de compostos da presente invenção que são farmaceuticamente aceitáveis, como definido acima, e que possuem a atividade farmacológica desejada. Esses sais incluem sais de adição de ácidos formados com ácidos inorgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e afins; ou com ácidos orgânicos, tais como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido heptanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido o-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, 27 ácido 1,2-etanodissulfónico, ácido 2-hidroxi-etanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido p-clorobenzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido canforsulfónico, ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]oct-2-eno-l-carboxílico, ácido gluco-heptónico, ácido 4,4'-metilenobis(3-hidroxi-2-eno-l-carboxílico), ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetil-acético, ácido tert-butilacético, ácido laurilsulfúrico, ácido glucónico, ácido glutâmico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicilico, ácido esteárico, ácido mucónico e afins.
Sais farmaceuticamente aceitáveis também incluem sais de adição de bases que podem ser formados quando protões acídicos presentes são capazes de reagir com bases inorgânicas ou orgânicas. Bases inorgânicas aceitáveis incluem hidróxido de sódio, carbonato de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de alumínio e hidróxido de cálcio. Bases orgânicas aceitáveis incluem etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina e afins. "Anel policíclico" inclui anéis bicíclicos e multicíclicos. Os anéis individuais que compreendem o anel policíclico podem ser anéis fundidos, espiro ou em ponte. "Derivados protegidos" significa derivados de inibidores nos quais um sítio ou sítios reativos estão bloqueados com grupos protetores. Derivados protegidos são úteis na preparação de inibidores ou, por si próprios, podem ser ativos como inibidores. Uma lista extensa de grupos protetores adequados pode ser encontrada em T.W. Greene, "Protecting Grupos in Organic Synthesis", 3a edição, John Wiley & Sons, Inc. 1999. 28 "Anel" e "disposição em anel" significa um sistema carbociclico ou heterocíclico e inclui sistemas aromáticos e não aromáticos. 0 Sistema pode ser monocíclico, biciclico ou policiclico. Adicionalmente, para sistemas biciclicos e policiclicos, os anéis individuais que compreendem o anel policiclico podem ser anéis fundidos, espiro ou em ponte. "Sujeito" e "paciente" inclui humanos, mamíferos não humanos (por exemplo, cães, gatos, coelhos, gado, cavalos, ovelhas, cabras, suínos, veados e afins) e não mamíferos (por exemplo, pássaros e afins). "Substituído ou não substituído" significa que uma dada fração pode consistir apenas em substituintes de hidrogénio nas valências disponíveis (não substituído) ou pode adicionalmente compreender um ou mais substituintes diferentes de hidrogénio nas valências disponíveis (substituído) que não são especificados pelo nome da fração determinada. Por exemplo, isopropilo é um exemplo de uma fração etileno que está substituído com -CH3. Em geral, um substituinte diferente de hidrogénio pode ser qualquer substituinte que possa estar ligado a um átomo da fração determinada que é especificada como estando substituída. Os substituintes são selecionados do Grupo A, que consiste em halo, nitro, ciano, tio, oxi, hidroxi, carboniloxi, (Ci_ io)alcoxi, (C4-12) ariloxi, hetero (C1-10) ariloxi, carbonilo, oxicarbonilo, aminocarbonilo, amino, (C1-10) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (C1-10) alquilo, halo (C1-10) alquilo, hidroxi (C1-10) alquilo, carbonil (C1-10) alquilo, tiocarbonil (C1-10) alquilo, sulfonil (C1-10) alquilo, sulfinil (Ci-10) alquilo, (C1-10) aza-alquilo, imino (C1-10) alquilo, (C3-12) cicloalquil (C1-5) alquilo, hetero (C3-12) ciclo- 29 alquil (Ci-io) alquilo, aril (Ci_i0) alquilo, hetero (Οχ_χ0) aril (C4_ 5) alquilo, (C9-12) bicicloaril (C1-5) alquilo, hetero (C5_i2) bicicloaril (Cx-5) alquilo, (C3-12) cicloalquilo, hetero (C3-12) cicloalquilo, (C9-12) bicicloalquilo, hetero (C3-12) biciclo-alquilo, (C4-12) arilo, hetero (C1-10) arilo, (C9-12) bicicloarilo e hetero (C4-12) bicicloarilo. Adicionalmente, o próprio substituinte está opcionalmente substituído com outro substituinte. 0 outro substituinte é selecionado do Grupo B, que consiste em halo, nitro, ciano, tio, oxi, hidroxi, carboniloxi, (C1-10) alcoxi, (C4_i2) ariloxi, hetero (Ci_i0) aril-oxi, carbonilo, oxicarbonilo, aminocarbonilo, amino, (C1-10) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (Ci_ xo) alquilo, halo (Ci_10) alquilo, hidroxi (Cx-10) alquilo, carbonil (Cx-χο) alquilo, tiocarbonil (Cχ-χο) alquilo, sulf onil (Cx-χο) alquilo, sulfinil (Cx-10) alquilo, (Cx-10)aza-alquilo, imino (Cx-10) alquilo, (C3-x2) cicloalquil (Cx_5) alquilo, hetero (Cx_x2) cicloalquil (Cx_10) alquilo, aril (Cx_xo) alquilo, hetero (Ci_io) aril (Ci_5) alquilo, (C9_12) bicicloaril (Cx_ 5)alquilo, hetero (Cg-x2) bicicloaril (Cx_5) alquilo, (C3_ x2) cicloalquilo, hetero (C3_12) cicloalquilo, (C9_ 12) bicicloalquilo, hetero (C3_12) biciclo-alquilo, (C4^12) arilo, hetero (Cx-χο) arilo, (C9-x2) bicicloarilo e hetero (C4- x2) bicicloarilo. "Sulfinilo" significa o radical -S0- e/ou -SO-R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte. De notar que o radical sulfinilo pode estar adicionalmente substituído com uma variedade de substituintes, formando diferentes grupos sulfinilo, incluindo ácidos sulfínicos, sulfinamidas, ésteres de sulfinilo e sulfóxidos. "Sulfonilo" significa o radical -S02- e/ou -S02-R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte. De notar que o radical 30 sulfonilo pode estar adicionalmente substituído com uma variedade de substituintes, formando diferentes grupos sulfonilo, incluindo ácidos sulfónicos, sulfonamidas, ésteres sulfonato e sulfonas. "Quantidade terapeuticamente eficaz" significa aquela quantidade que, quando administrada a um animal para o tratamento de uma doença, é suficiente para efetivar esse tratamento da doença. "Tio" designa a substituição de um oxigénio por um enxofre e inclui mas não está limitado a grupos contendo -SR, -S- e = S. "Tioalquilo" significa um alquilo, como definido acima, com a exceção de um ou mais dos átomos de carbono que formam a cadeia alquilo estarem substituídos por átomos de enxofre (— S — ou -S-R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte) . Por exemplo, um tio (Ci-io) alquilo refere-se a uma cadeia compreendendo entre 1 e 10 carbonos e um ou mais átomos de enxofre. "Tiocarbonilo" significa o radical -C(=S)- e/ou -C(=S)-R, em que R é hidrogénio ou outro substituinte. De notar que o radical tiocarbonilo pode estar adicionalmente substituído com uma variedade de substituintes, formando diferentes grupos tiocarbonilo, incluindo tioácidos, tioamidas, tioésteres e tiocetonas. "Tratamento" ou "tratar" significa qualquer administração de um composto da presente invenção e inclui: 31 (1) prevenir a ocorrência da doença num animal que pode ter predisposição para a doença mas que ainda não sofre da mesma nem exibe a patologia ou sintomatologia da doença, (2) inibir a doença num animal que sofre ou exibe a patologia ou sintomatologia da doença (isto é, travar o desenvolvimento suplementar da patologia e/ou sintomatologia) , ou (3) melhorar a doença num animal que sofre ou exibe a patologia ou sintomatologia da doença (isto é, inverter a patologia e/ou sintomatologia). É pretendido que um composto possuindo uma fórmula que é representada com uma ligação tracejada inclua as fórmulas opcionalmente possuindo zero, uma ou mais ligações duplas, como exemplificado e mostrado em baixo: 0 representa r 8 o of
D
O etc.
Adicionalmente, é pretendido que átomos que constituem os compostos da presente invenção incluam todas as formas isotópicas desses átomos. Isótopos, como usado aqui, incluem aqueles átomos que têm o mesmo número atómico mas números de massa diferentes. A titulo de exemplo geral e sem limitação, isótopos do hidrogénio incluem tritio e , , , , | _ 13/-, _ 14/-1 deuterio e isotopos do carbono incluem c e c. 32
DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos que podem ser utilizados para inibir Proteína Quinases Ativadas por Mitogénios (aqui designadas MEK) e, em particular, MAPK/ERK Quinase 1 (aqui designada MEK1) e/ou MAPK/ERK Quinase 2 (aqui designada MEK2). A presente invenção também se refere a composições farmacêuticas, estojos e artigos fabricados compreendendo esses compostos. São aqui descritos métodos e intermediários úteis para a preparação dos compostos. Além disso, a presente invenção refere-se a esses compostos para utilização em métodos de tratamento. De notar que os compostos da presente invenção também podem possuir atividade para outros membros da mesma família de proteínas e, assim, podem ser utilizados para abordar estados de doença associados a estes diferentes membros da família. A MEK pertence à família de enzimas proteína quinases. As vias de proteína quinases ativadas por mitogénios (MAPK) estão evolutivamente conservadas, desde a levedura até ao homem, e respondem a uma variedade de sinais extracelulares, induzindo diferenciação e proliferação celulares. A cascata da quinase regulada de modo extracelular (ERK) é uma das três grandes vias de sinalização de MAPK e é a cascata predominante que controla a proliferação, migração, divisão e diferenciação celulares (Schaeffer, H. J. e Weber, M. J. (1999) Mol. Cell Biol. 19, 2435-2444). Nesta via, a ligação de GTP à proteína Ras inicia uma cascata de três proteína quinases, que conduz à ativação da ERK através das proteína quinases intervenientes Raf-1 e MEK1/2. As quinases MEK1/2 são treonina/tirosina quinases de especificidade dual que ativam a ERK quinase a jusante por fosforilação de resíduos 33 treonina e tirosina específicos de ERK, e são elas próprias ativadas por fosforilação de resíduos serina da MEK pela RAF quinase a montante. A MEK1 e MEK2 partilham um grau elevado de semelhança de sequências de aminoácidos, particularmente nos seus domínios de quinase, e ambas são capazes de fosforilar a ERK (Zheng, C-F. e Guan, K. (1993) J. Biol. Chem. 268, 11435-11439). Múltiplos estudos ligaram a via de sinalização da RAF/MEK/ERK ao crescimento e sobrevivência de muitos tumores humanos diversos, incluindo mas não se limitando a cancros do cólon, pâncreas, ovários e cancros do pulmão de células não pequenas (revisto em: Sebolt-Leopold, J.S. e Herrera R. (2004) Nature Reviews: Câncer, 4, 937-947). Por estes motivos tem havido interesse considerável no desenvolvimento de inibidores farmacêuticos, de moléculas pequenas, desta via.
De notar que os compostos da presente invenção também podem possuir atividade inibidora para outros membros da família de proteína quinases e, assim, podem ser utilizados para abordar estados de doenças associados a estes outros membros da família.
Estrutura Cristalina da MEEK2
Takeda San Diego, Inc. resolveram a estrutura cristalina da MEK2. O conhecimento da estrutura cristalina foi utilizado para orientar a conceção dos inibidores aqui proporcionados. A arquitetura global das proteínas MEK assemelha-se ao dobramento de proteína quinases conservado de dois 34 domínios, que consiste num grande terminal C, compreendido maioritariamente por um domínio em hélice a, e um lobo N-terminal menor, compreendido principalmente por uma folha β. 0 N-lobo contém tipicamente uma única hélice a, denominada hélice de Controlo ou C-hélice, que influencia a ligação produtiva de nucleótidos na região ativa, que está localizada na fenda entre os dois domínios. Adicionalmente, a ligação produtiva de nucleótidos e substratos pode depender de uma Alça de Ativação, ou A-Alça, que está numa conformação estendida quando ativa, mas muitas vezes numa conformação inativa dobrada que procede à oclusão, pelo menos parcialmente, da região ativa. A fosforilação de resíduos específicos na A-Alça pode ajudar a estabilizar a conformação ativa estendida. Mecanismos comuns inibidores de quinases abordam tipicamente alterações estruturais na C-Hélice ou A-Alça.
Inibidores da MEKl e/ou MEK2 e Processos para a Sua Preparação
Num dos seus aspetos, a presente invenção refere-se a compostos que são úteis como inibidores da MEK. Numa forma de realização, inibidores da MEK da presente invenção compreendem:
em que ou um polimorfo, solvato, tautómero, enantiómero ou respetivo sal farmaceuticamente aceitável,
Xi é CR6; 35 X5 é CR6;
Ri é selecionado do grupo que consiste em (C3_ 12) cicloalquilo, hetero (C3-12) cicloalquilo, (C9_ 12) bicicloalquilo, hetero (C3-12) bicicloalquilo, (C4-12) arilo, hetero (Ci-10) arilo, (C9-12) bicicloarilo e hetero (C4_ 12)bicicloarilo, cada um substituído ou não substituído; R2 é hidrogénio; R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, oxi, hidroxi, carboniloxi, alcoxi, hidroxialcoxi, ariloxi, heteroariloxi, carbonilo, amino, (Ci_i0) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (Ch-io) alquilo, halo (Ci-10) alquilo, hidroxi (C1-10) alquilo, amino (C1-10) alquilo, carbonil (C1-3) alquilo, tiocarbonil (C1-3) alquilo, sulfonil(Ci_ 3) alquilo, sulfinil (C1-3) alquilo, amino (Ci_i0) alquilo, imino (C1-3) alquilo, (C3_i2) cicloalquil (Ci_5) alquilo, hetero (C3_i2) cicloalquil (Ci_5) alquilo, aril (C1-10) alquilo, heteroaril (Ci_5) alquilo, (C9_i2) bicicloaril (Ci_5) alquilo, hetero (C8- 12) biciclo-aril (C1-5) alquilo, (C3_i2) cicloalquilo, hetero(C3_ 12) ciclo-alquilo, (C9_i2) bicicloalquilo, hetero(C3_ 12) bicicloalquilo, (C4_i2) ) arilo, hetero (Ci_i0) arilo, (C9_ 12) bicicloarilo e hetero (C4_i2) bicicloarilo, cada um substituído ou não substituído; R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, oxi, hidroxi, carboniloxi, alcoxi, ariloxi, heteroariloxi, carbonilo, oxicarbonilo, amino, (C1-10) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (C1-10) alquilo, halo (C1-10) alquilo, carbonil (Ci_3) alquilo, tiocarbonil (C1-3) alquilo, sulfonil (C1-3) alquilo, sulfinil (Ci_3) alquilo, amino (C1-10) alquilo, imino (Ci_3) alquilo, (C3_i2) cicloalquil (C1-5) alquilo, hetero (C3-12) cicloalquil (C1-5) alquilo, aril(Ci-io) alquilo, heteroaril (C1-5) alquilo, (C9-12) bicicloaril (C1-5) alquilo, hetero (C8-12) bicicloaril (C1-5) alquilo, (C3-12) cicloalquilo, hetero (C3-12) cicloalquilo, (C9-12) bicicloalquilo, 36 hetero (C3-12) bicicloalquilo, (C4-12) arilo, hetero (C1-10) arilo, (C9-12) bicicloarilo e hetero (C4-12) bicicloarilo, cada um substituído ou não substituído; R-6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, ciano, heteroariloxi, carbonilo, oxicarbonilo, amino-carbonilo, amino, (C1-10) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (C1-10) alquilo, halo (C1-10) alquilo, carbonil (C1-3) alquilo, tiocarbonil (C1-3) alquilo, sulfonil(Ci_ 3) alquilo, sulfinil (C1-3) alquilo, amino (Ci_i0) alquilo, imino (C1-3) alquilo, (C3_i2) cicloalquil (Ci_5) alquilo, hetero (C3_i2) cicloalquil (Ci_5) alquilo, aril (Ci_i0) alquilo, heteroaril (Ci_5) alquilo, (C9-12) bicicloaril (Ci_5) alquilo, hetero(Cs- 12) biciclo-aril (Ci_5) alquilo, (C3_i2) cicloalquilo, hetero(C3_ 12) ciclo-alquilo, (C9_i2) bicicloalquilo, hetero(C3_ 12) bicicloalquilo, (C4_i2) arilo, hetero (C1-10) arilo, (C9_ 12) bicicloarilo e hetero (C4_i2) bicicloarilo, cada um substituído ou não substituído; em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Noutra forma de realização, inibidores da MEK da presente invenção compreendem:
Numa variação de cada uma das formas de realização acima, Xi é -CR6= e R6 é halo. Ainda noutra variação, Xi é -CH=.
Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, X5 é -CR6= e R6 é halo e, mais 37 particularmente, fluoro. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, X5 é -CR6= e R6 é um (Ci-5) alquilo substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, X5 é -CR6= e R6 é um amino substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, X5 é -CH=.
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri é selecionado do grupo que consiste em (C3_i2) cicloalquilo, hetero (C3_i2) cicloalquilo, (C4_i2) arilo e hetero (Ci^io) arilo, cada um substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri é selecionado do grupo que consiste em (C4_i2) arilo e hetero (Ci_i0) arilo, cada um substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R4 é um (C4_ 12)arilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R4 é um fenilo substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R4 é um 2-halofenilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R4 é um 2,4-dihalofenilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R4 é um 4-cianofenilo substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R4 é um 2-halo-4-cianofenilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas 38 de realização e variações acima, Ri é um (C9-12) bicicloarilo substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri é um naftilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri é um hetero (C4-12) bicicloarilo substituído ou não substituído. Acima, os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri está substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em hidrogénio, halo, ciano, tio, alcoxi, (Ci_3) alquilo, hidroxi (Ci_3) alquilo e (C3_8) cicloalquilo, cada um substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri está substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em hidrogénio, fluoro, cloro, bromo, iodo, ciano, metiltio, metoxi, trifluorometoxi, metilo, etilo, trifluorometilo, etinilo, n-propanolilo e ciclopropilo.
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri compreende:
em que 39
Ri4aI Ri4b, Ri4c, Ri4d e Ri4e são, cada um independentemente, selecionados do grupo que consiste em hidrogénio, halo, ciano, tio, alcoxi, (Ci^3) alquilo e hidroxi (Ci-3) alquilo.
Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, hidroxi, (Ci-io) alcoxi, aminoalcoxi, (Ci-io) alquilo, hidroxi (Ci-io) alquilo, amino (Ci-io) alquilo, (C3-12) cicloalquilo, hetero (C3_i2) cicloalquilo e hetero (Ci_i0) arilo, cada um substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um hidroxialquilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um hidroxialcoxi substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um aminoalquilo substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um arilalquilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um (Ci_i0) alquilo substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um (C3-6) cicloalquilo substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um aminoalcoxi substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R3 é um heterocicloalquilalquilo substituído ou não substituído. Acima, os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R5 é selecionado do grupo que consiste 40 em hidrogénio, (C1-5) alquilo, amino (C1-10) alquilo, hidroxi(Ci_ 10) alquilo e (C3-12) cicloalquilo, cada um substituído ou não substituído. Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R5 é um (C1-6) alquilo substituído ou não substituído. Acima, os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, amino e (Ci_5) alquilo, cada um substituído ou não substituído. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R6 é um halo e, mais particularmente, cloro ou fluoro. Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R6 é um (Ci_5) alquilo substituído ou não substituído e, mais particularmente, metilo. Acima, os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri4a é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo e um (C1-5) alquilo substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri4b é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, carbonilo, alcoxi, (C1-3) alquilo e (C3-12)cicloalquilo, cada um substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima. 41
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri4C é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, ciano, tio, (Ci 3)alquilo e hidroxi(Ci-3)alquilo, cada um substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, Ri4d é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, carbonilo, alcoxi, (C1-3) alquilo e (C3-12)cicloalquilo, cada um substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Ainda noutra variação de cada uma das formas de realização e variações acima, R44e é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, carbonilo, alcoxi, (C1-3) alquilo e (C3_ 12)cicloalquilo, cada um substituído ou não substituído, em que os substituintes nos grupos substituídos são selecionados do Grupo A, definido acima.
Exemplos particulares de compostos de acordo com a presente invenção incluem mas não estão limitados aos seguintes: 5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-8-metil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 2-(5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metil-4,7-dioxo-7, 8-di-hidropirido[2,3-d]pirimidin-3(4H)-il)acetato de metilo; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,6,8-trimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; 42 (R) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d] pirimidino-4, 7 (3ff, 8//) -diona; (S) -6-Cloro-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (R) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2, 3-d]pirimidino-4,7(3//,8//)-diona; (S) -5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-6,8-dimetilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona; (77)-5-( 4-Bromo-2-f luorof enilamino) -3-(2,3-di-hidroxi-propil)-6,8-dimetilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7(3H, QH)-diona; 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, QH)-diona; 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H, QH)-diona; (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-6, 8-dimetilpirido [ 2,3-d] pirimidino-4, 7 (37/, 8/7) -diona; 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5- (2-Fluorofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-6,8-dimetilpirido [ 2 , 3-d] pirimidino-4,7(3H, QH)-diona; (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofenilamino) -6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3//,8/7)-diona; 6- Fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-f enilamino) - 8-metilpirido [ 2,3-d] pirimidino-4, 7(3//,8//)-diona; (5)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino) - 8-metilpirido [2,3-d] pirimidino-4, 7(3//,8//)-diona; 43 (R) -5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,Ί (3H, QH) -diona; (S) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofenilamino) -6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, QH)-diona; (R)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofenilamino) -6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; (R) -N- (4-(3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-8-metil-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3 —d]pirimidin-5-ilamino)-3-fluorofenil)metanossulfonamida; 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) -8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4, 7 (3ií, 8íí) -diona; 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,Ί (3H, 8H) -diona; 5- (2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietoxi)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropoxi)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) -8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropoxi)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί {3H, QH) -diona; (R)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-6-cloro-3-(2,3-di-hidroxipropil ) -8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, QH)-diona; 6- Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5- (2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido [ 2 , 3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 6- Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; 44 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(3-hidroxipropil)-8-metil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-6-cloro-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,Ί {3H, QH)-diona; 5-(4-Bromo-2-clorofenilamino)-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido [ 2 , 3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5-(4-Bromo-2-clorofenilamino)-6-cloro-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,1(3H,8H)-diona; 3-(2-(Dimetilamino)etil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; 5- (2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxipropil)-8-metilpirido [ 2 , 3-d] pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; (S)-3-(2,4-Di-hidroxibutil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,Ί(3H,8H)-diona; 6- Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; (S)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-β-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί (3H, QH) -diona; 3-Benzi1-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) -6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona; (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etini1-2-fluorofenilamino )-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; 2- fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetil-2-(metilamino) pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-2,3,8-trimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 3- ciclopropil-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; 45 (5)-5-(4-bromo-2-clorofenilamino )-3-(2,3-di-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (5) -3-(2,3-di-hidroxipropoxi)-5-(2-fluoro-4-iodofenil-amino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; 3-(2-aminoetoxi)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [ 2 , 3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 3-(3-aminopropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [ 2 , 3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 3-(2-aminoetil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-meti1-3-(pirrolidin-3-il-metil)pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (5)-5-(2-cloro-4-iodofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; e (5)-5-(4-bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona.
Adicionalmente, exemplos particulares de compostos de acordo com a presente invenção incluem mas não estão limitados aos seguintes: (R) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)- 6.8- dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (5)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)- 6.8- dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona; (5)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-β-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona; 46 (5)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etini1-2-fluorofenil-amino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(35,85)-diona; (R)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofenil-amino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (35, 85) -diona; 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(35,8H)- diona, e (R) -3-(2,3-Di-hidroxipropoxi)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (35, 85) -diona.
De notar que os compostos da presente invenção podem estar na forma de um respetivo sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato.
Também é de notar que o composto pode estar presente como uma mistura de estereoisómeros, ou o composto pode estar presente como um único estereoisómero.
Noutro dos seus aspetos, é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo, como ingrediente ativo, um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização e variações acima. Numa variação particular, a composição é uma formulação sólida adaptada para administração oral. Noutra variação particular, a composição é uma formulação liquida adaptada para administração oral. Ainda noutra variação particular, a composição é um comprimido. Ainda noutra variação particular, a composição é uma formulação liquida adaptada para administração parentérica.
Noutro dos seus aspetos é proporcionada uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização e variações acima, em que a composição é adaptada para administração por uma via selecionada do grupo que consiste em oral, parentérica, intraperitoneal, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, retal, transbucal, intranasal, lipossómica, via inalação, vaginal, intraocular, via distribuição local (por exemplo, por cateter ou endoprótese), subcutânea, intra-adiposa, intra-articular e intratecal.
Ainda noutro dos seus aspetos é proporcionado um estojo compreendendo um composto de qualquer uma das formas de realização e variações acima, e instruções que compreendem uma ou mais formas de informação selecionadas do grupo que consiste em indicar um estado de doença para o qual a composição deve ser administrada, informação de armazenamento para a composição, informação da dosagem e instruções respeitantes ao modo como administrar a composição. Numa variação particular, o estojo compreende o composto numa forma galénica múltipla.
Ainda noutro dos seus aspetos é proporcionado um artigo fabricado compreendendo um composto de qualquer uma das formas de realização e variações acima, e materiais de empacotamento. Numa variação, o material de empacotamento compreende um recipiente para conter o composto. Numa variação particular, o recipiente compreende uma etiqueta que indica um ou mais membros do grupo que consiste num estado de doença para o qual o composto deve ser administrado, informação de armazenamento, informação da dosagem e/ou instruções respeitantes ao modo como 48 administrar o composto. Noutra variação, o artigo fabricado compreende o composto numa forma galénica múltipla.
Noutro dos seus aspetos é proporcionado um composto de qualquer uma das formas de realização e variações acima para utilização como medicamento.
Num aspeto é proporcionado um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização e variações acima para utilização no tratamento de um estado de doença selecionado do grupo que consiste em perturbações hiperproliferativas cancerosas (por exemplo, cancro do cérebro, pulmão, células escamosas, bexiga, gástrico, pancreático, mama, cabeça, pescoço, renal, rim, ovariano, próstata, colorretal, epidermoide, esofágico, testicular, ginecológico ou tiroide); perturbações hiperproliferativas não cancerosas (por exemplo, hiperplasia benigna da pele (por exemplo, psoríase), restenose e hipertrofia prostática benigna (BPH)); pancreatite; doença renal; dor; prevenção da implantação de blastócitos; tratamento de doenças relacionadas com vasculogénese ou angiogénese (por exemplo, angiogénese tumoral, doença inflamatória aguda e crónica, como artrite reumatoide, aterosclerose, doença inflamatória do intestino, doenças da pele, tais como psoríase, eczema e escleroderma, diabetes, retinopatia diabética, retinopatia da prematuridade, degenerescência macular relacionada com a idade, hemangioma, glioma, melanoma, sarcoma de Kaposi e cancro do ovário, mama, pulmão, pancreático, próstata, cólon e epidermoide); asma; quimiotaxia de neutrófilos (por exemplo, lesão de reperfusão em enfarte do miocárdio e acidente vascular cerebral e artrite inflamatória); choque sético; doenças mediadas por células T onde seria importante a supressão imunológica (por exemplo, a 49 prevenção da rejeição de transplantes de órgãos, doença enxerto versus hospedeiro, lúpus eritematoso, esclerose múltipla e artrite reumatoide); aterosclerose; inibição de respostas de queratinócitos a "cocktails" de fatores de crescimento; doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) e outras doenças.
Noutro dos seus aspetos é proporcionado um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização e variações acima para utilização no tratamento de um estado de doença selecionado de melanomas, cancro do pulmão, cancro do cólon e outros tipos de tumores.
Ainda noutro dos seus aspetos, a presente invenção refere-se à utilização de um composto de qualquer uma das formas de realização e variações acima como medicamento.
Ainda noutro dos seus aspetos, a presente invenção refere-se à utilização de um composto de acordo com qualquer uma das formas de realização e variações acima na preparação de um medicamento para o tratamento de perturbações hiperproliferativas; pancreatite; doença renal; dor; doenças envolvendo implantação de blastócitos; doenças relacionadas com vasculogénese ou angiogénese; asma; quimiotaxia de neutrófilos, e choque sético.
Sais e Hidratos de Inibidores da MEK
Deve ser reconhecido que os compostos da presente invenção podem estar presentes e ser opcionalmente administrados na forma de sais e hidratos que são convertidos in vivo nos compostos da presente invenção. Por exemplo, pertence ao âmbito da presente invenção converter os compostos da 50 presente invenção e utilizá-los na forma dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis derivados de vários ácidos e bases orgânicos e inorgânicos de acordo com procedimentos bem conhecidos na área.
Quando os compostos da presente invenção possuem uma forma de base livre, os compostos podem ser preparados como um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável por reação da forma de base livre do composto com um ácido inorgânico ou orgânico farmaceuticamente aceitável, por exemplo, hidro-haletos, tais como cloridrato, bromidrato, hidroiodeto; outros ácidos minerais e seus sais correspondentes, tais como sulfato, nitrato, fosfato, etc., e alquil- e monoarilsulfonatos, tais como etanossulfonato, toluenossulfonato e benzenossulfonato, e outros ácidos orgânicos e seus sais correspondentes, tais como acetato, tartarato, maleato, succinato, citrato, benzoato, salicilato e ascorbato. Além disso, sais de adição de ácidos da presente invenção incluem mas não estão limitados aos seguintes: adipato, alginato, arginato, aspartato, bissulfato, bissulfito, brometo, butirato, canforato, canforsulfonato, caprilato, cloreto, clorobenzoato, ciclopentanopropionato, digluconato, di-hidrogenofosfato, dinitrobenzoato, dodecilsulfato, fumarato, galacterato (do ácido múcico), galacturonato, gluco-heptonato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, hemissuccinato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, hipurato, cloridrato, bromidrato, hidroiodeto, 2-hidroxietanossulfonato, iodeto, isetionato, iso-butirato, lactato, lactobionato, malato, malonato, mandelato, metafosfato, metanossulfonato, metilbenzoato, mono-hidrogenofosfato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, oleato, pamoato, pectinato, persulfato, fenilacetato, 3-fenilpropionato, fosfato, fosfonato e 51 ftalato. Deve ser reconhecido que as formas de base livre irão tipicamente diferir um pouco das suas respetivas formas de sais em propriedades físicas tais como solubilidade em solventes polares, mas em tudo o mais os sais são equivalentes às suas respetivas formas de base livre para as finalidades da presente invenção.
Quando os compostos da presente invenção possuem uma forma de ácido livre, pode ser preparado um sal de adição de base farmaceuticamente aceitável por reação da forma de ácido livre do composto com uma base inorgânica ou orgânica farmaceuticamente aceitável. Exemplos dessas bases são hidróxidos de metais alcalinos, incluindo hidróxidos de potássio, sódio e lítio; hidróxidos de metais alcalinoterrosos, tais como hidróxidos de bário e cálcio; alcóxidos de metais alcalinos, por exemplo, etanolato de potássio e propanolato de sódio, e várias bases orgânicas, tais como hidróxido de amónio, piperidina, dietanolamina e N-metilglutamina. Também estão incluídos os sais de alumínio dos compostos da presente invenção. Além disso, sais de bases da presente invenção incluem mas não estão limitados a: sais de cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânico, manganoso, potássio, sódio e zinco. Sais de bases orgânicas incluem mas não estão limitados a sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas de permuta iónica básicas, por exemplo, arginina, betaína, cafeína, cloroprocaína, colina, N,N'-dibenziletilenodiamina (benzatina), diciclo-hexilamina, dietanolamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, iso- 52 propilamina, lidocaína, lisina, meglumina, N-metil-D-glucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliaminas, procaína, purinas, teobromina, trietanolamina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina e tris-(hidroximetil)-metilamina (trometamina). Deve ser reconhecido que as formas de ácidos livres irão tipicamente diferir um pouco das suas respetivas formas de sais em propriedades físicas tais como solubilidade em solventes polares, mas em tudo o mais os sais são equivalentes às suas respetivas formas de ácidos livres para as finalidades da presente invenção.
Compostos da presente invenção que compreendem grupos contendo azoto básico podem ser quaternizados com agentes tais como haletos de (Ci_4) alquilo, por exemplo, cloretos, brometos e iodetos de metilo, etilo, isopropilo e tert-butilo; sulfatos de di (Ci_4) alquilo, por exemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo e diamilo; haletos de (Cio-is) alquilo, por exemplo, cloretos, brometos e iodetos de decilo, dodecilo, laurilo, miristilo e estearilo, e haletos de aril (Ci_4) alquilo, por exemplo, cloreto de benzilo e brometo de fenetilo. Esses sais permitem a preparação de compostos da presente invenção solúveis em água e solúveis em óleo. N-óxidos de compostos de acordo com a presente invenção podem ser preparados por métodos conhecidos dos profissionais. Por exemplo, N-óxidos podem ser preparados tratando uma forma não oxidada do composto com um agente oxidante (por exemplo, ácido trifluoroperacético, ácido permaleico, ácido per-benzoico, ácido peracético, ácido meta-cloroperoxibenzoico ou afins) num solvente orgânico inerte adequado (por exemplo, um hidrocarboneto halogenado, tal como diclorometano) a aproximadamente 0°C. 53
Alternativamente, os N-óxidos dos compostos podem ser preparados a partir do N-óxido de um material de partida apropriado.
Também podem ser preparados derivados protegidos de compostos da presente invenção. Exemplos de técnicas aplicáveis à criação de grupos protetores e sua remoção podem ser encontrados em T.W. Greene, "Protecting Grupos in Organic Synthesis", 3a edição, John Wiley & Sons, Inc. 1999 .
Compostos da presente invenção também podem ser convenientemente preparados, ou formados durante o processo da invenção, na forma de solvatos (por exemplo, hidratos). Hidratos de compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados por recristalização a partir de uma mistura de solventes aquosos/orgânicos, utilizando solventes orgânicos tais como dioxina, tetra-hidrofurano ou metanol.
Um "sal farmaceuticamente aceitável", como usado aqui, destina-se a abranger qualquer composto de acordo com a presente invenção que é utilizado na forma de um sal respetivo, especialmente quando o sal confere ao composto propriedades farmacocinéticas melhoradas em comparação com a forma livre do composto ou uma forma de sal diferente do composto. A forma de sal farmaceuticamente aceitável também pode conferir inicialmente ao composto propriedades farmacocinéticas desejáveis que previamente não possuía e pode mesmo afetar positivamente a farmacodinâmica do composto relativamente à sua atividade terapêutica no corpo. Um exemplo de uma propriedade farmacocinética que pode ser favoravelmente afetada é o modo como o composto é 54 transportado através de membranas celulares, o que, por sua vez, pode afetar direta e positivamente a absorção, distribuição, biotransformação e excreção do composto. Não obstante a via de administração da composição farmacêutica ser importante e vários fatores anatómicos, fisiológicos e patológicos poderem afetar criticamente a biodisponibilidade, a solubilidade do composto depende habitualmente do caráter da respetiva forma de sal particular que é utilizada. 0 profissional apreciará que uma solução aquosa do composto irá proporcionar a absorção mais rápida do composto no corpo de um sujeito a ser tratado, ao passo que soluções e suspensões lipídicas, bem como formas galénicas sólidas, darão origem a uma absorção menos rápida do composto.
Composições Compreendendo Inibidores da MEK
Uma grande variedade de composições e métodos de administração pode ser utilizada em conjunção com os compostos da presente invenção. Essas composições podem incluir, para além dos compostos da presente invenção, excipientes farmacêuticos convencionais e outros agentes convencionais farmaceuticamente inativos. Adicionalmente, as composições podem incluir agentes ativos para além dos compostos da presente invenção. Estes agentes ativos adicionais podem incluir compostos adicionais de acordo com a invenção e/ou um ou mais agentes farmaceuticamente ativos diferentes.
As composições podem estar em forma gasosa, liquida, semilíquida ou sólida, formulada de um modo adequado para a via de administração a ser utilizada. Para administração oral são tipicamente utilizadas cápsulas e comprimidos. 55
Para administração parentérica é tipicamente utilizada a reconstituição de um pó liofilizado, preparado como descrito aqui.
Composições compreendendo compostos da presente invenção podem ser administradas ou coadministradas pela via oral, parentérica, intraperitoneal, intravenosa, intra-arterial, transdérmica, sublingual, intramuscular, retal, transbucal, intranasal, lipossómica, via inalação, vaginal, intraocular, via distribuição local (por exemplo, por cateter ou endoprótese), subcutânea, intra-adiposa, intra-articular ou intratecal. Os compostos e/ou composições de acordo com a invenção também podem ser administrados ou coadministrados em formas galénicas de libertação lenta.
Os inibidores da MEK e composições compreendendo-os podem ser administrados ou coadministrados em qualquer forma galénica convencional. Pretende-se que coadministração, no contexto desta invenção, signifique a administração de mais do que um agente terapêutico, um dos quais inclui um inibidor da MEK, durante um tratamento coordenado para se obter um resultado clínico melhorado. Essa coadministração também pode ser coextensiva, isto é, ocorrer durante períodos de tempo sobrepostos.
Soluções ou suspensões utilizadas para aplicação parentérica, intradérmica, subcutânea ou tópica podem opcionalmente incluir um ou mais dos seguintes componentes: um diluente esterilizado, tal como água para injeção, solução salina, óleo fixo, polietilenoglicol, glicerina, propileno-glicol ou outro solvente sintético; agentes antimicrobianos, tais como álcool benzílico e metilparabenos; antioxidantes, tais como ácido ascórbico e 56 bissulfito de sódio; agentes quelantes, tais como ácido etilenodiaminotetra-acético (EDTA); tampões, tais como acetatos, citratos e fosfatos; agentes para o ajustamento da tonicidade, tais como cloreto de sódio ou dextrose, e agentes para ajustar a acidez ou alcalinidade da composição, tais como agentes alcalinos ou acidificantes ou tampões como carbonatos, bicarbonatos, fosfatos, ácido clorídrico e ácidos orgânicos, tais como ácido acético e cítrico. Preparações parentéricas podem ser opcionalmente encerradas em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de doses individuais ou múltiplas feitos de vidro, plástico ou outro material adequado.
Quando compostos de acordo com a presente invenção exibem solubilidade insuficiente podem ser utilizados métodos de solubilização dos compostos. Esses métodos são conhecidos dos profissionais e incluem mas não estão limitados à utilização de cossolventes, tais como dimetilsulfóxido (DMSO), utilização de surfactantes, tais como TWEEN, ou dissolução em bicarbonato de sódio aquoso. Derivados dos compostos, como pró-fármacos dos compostos, também podem ser utilizados na formulação de composições farmacêuticas eficazes.
Por mistura ou adição de compostos de acordo com a presente invenção a uma composição pode ser formada uma solução, suspensão, emulsão ou afins. A forma da composição resultante dependerá de alguns fatores, incluindo o modo de administração pretendido e a solubilidade do composto no transportador ou veículo selecionado. A concentração eficaz necessária para melhorar a doença a ser tratada pode ser determinada empiricamente. 57
Composições de acordo com a presente invenção são opcionalmente proporcionadas para administração a humanos e animais em formas galénicas unitárias, tais como comprimidos, cápsulas, pílulas, pós, pós secos para inaladores, grânulos, soluções ou suspensões parentéricas esterilizadas e soluções ou suspensões orais e emulsões óleo-água contendo quantidades adequadas dos compostos, particularmente os sais farmaceuticamente aceitáveis, preferivelmente os respetivos sais de sódio. Os compostos farmacêutica e terapeuticamente ativos e respetivos derivados são tipicamente formulados e administrados em formas de dosagem unitária ou formas de múltipla dosagem. Formas de dosagem unitária, como usado aqui, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas para sujeitos humanos e animais e empacotadas individualmente, como é conhecido na área. Cada dose unitária contém uma quantidade predeterminada do composto terapeuticamente ativo, suficiente para produzir o efeito terapêutico desejado, associada ao requerido transportador, veículo ou diluente farmacêutico. Exemplos de formas de dosagem unitária incluem ampolas e seringas individualmente empacotadas, comprimido ou cápsula. Formas de dosagem unitária podem ser administradas em frações ou seus múltiplos. Uma forma de múltiplas dosagens é uma pluralidade de formas de dosagem unitária idênticas empacotadas num único recipiente a serem administradas em formas de dosagem unitária separadas. Exemplos de formas de múltipla dosagem incluem frascos, garrafas de comprimidos ou cápsulas ou garrafas de meio litro ou litros. Assim, uma forma de múltipla dosagem é um múltiplo de doses unitárias que não são separadas no empacotamento. 58
Para além de um ou mais compostos de acordo com a presente invenção, a composição pode compreender: um diluente, tal como lactose, sucrose, fosfato dicálcico ou carboximetil-celulose; um lubrificante, tal como estearato de magnésio, estearato de cálcio e talco, e um aglutinante, tal como amido, gomas naturais, tais como goma de acácia, gelatina, glucose, melaço, polvinilpirrolidina, celuloses e respetivos derivados, povidona, crospovidonas e outros aglutinantes afins conhecidos dos profissionais. Composições líquidas que podem ser farmaceuticamente administradas podem ser preparadas, por exemplo, por dissolução, dispersão ou então mistura de um composto ativo como definido acima e adjuvantes farmacêuticos opcionais num transportador, tal como, por exemplo, água, solução salina, dextrose aquosa, glicerol, glicóis, etanol e afins, para formar uma solução ou suspensão. Se desejado, a composição farmacêutica a ser administrada também pode conter quantidades muito pequenas de substâncias auxiliares, tais como agentes humedecedores, agentes emulsionantes ou agentes solubilizadores, agentes de tamponamento do pH e afins, por exemplo, acetato, citrato de sódio, derivados de ciclodextrina, monolaurato de sorbitano, acetato de sódio de trietanolamina, oleato de trietanolamina e outros agentes afins. Métodos de preparação dessas formas galénicas são conhecidos na área, ou serão claros para os profissionais desta área; por exemplo, ver "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Company, Easton, Pa., 15a Edição, 1975. A composição ou formulação a ser administrada conterá, em qualquer caso, uma quantidade suficiente de um inibidor da presente invenção para reduzir a atividade da MEK in vivo, desse modo tratando o estado de doença do sujeito. 59
Formas galénicas ou composições podem opcionalmente compreender um ou mais compostos de acordo com a presente invenção no intervalo de 0,005% até 100% (peso/peso), equilibradas com substâncias adicionais como as descritas aqui. For oral administração, uma composição farmaceuticamente aceitável pode opcionalmente compreender qualquer um ou mais excipientes habitualmente empregues, tais como, por exemplo, qualidades farmacêuticas de manitol, lactose, amido, estearato de magnésio, talco, derivados de celulose, croscarmelose sódica, glucose, sucrose, carbonato de magnésio, sacarina de sódio, talco. Essas composições incluem soluções, suspensões, comprimidos, cápsulas, pós, pós secos para inaladores e formulações de libertação prolongada, tais como mas não se limitando a implantes e sistemas de distribuição microencapsulados e polímeros biodegradáveis e biocompatíveis, tais como colagénio, acetato de etilenovinilo, polianidridos, ácido poliglicólico, poliortoésteres, ácido poliláctico e outros. Métodos de preparação destas formulações são conhecidos dos profissionais. As composições podem opcionalmente conter 0,01%-100% (peso/peso) de um ou mais inibidores da MEK, opcionalmente 0,1-95% e opcionalmente 1-95%.
Sais, preferivelmente sais de sódio, dos inibidores podem ser preparados com transportadores que protegem o composto de eliminação rápida do corpo, tais como formulações ou revestimentos de libertação temporal. As formulações também podem incluir outros compostos ativos para se obterem combinações desejadas de propriedades.
Formulações para Administração Oral 60
Formas galénicas farmacêuticas orais podem consistir num sólido, gel ou liquido. Exemplos de formas galénicas sólidas incluem mas não estão limitadas a comprimidos, cápsulas, grânulos e pós em volume. Exemplos mais específicos de comprimidos orais incluem rebuçados que foram comprimidos e comprimidos para mastigar que podem ter um revestimento entérico, revestimento de açúcar ou revestimento de filme. Exemplos de cápsulas incluem cápsulas de gelatina endurecida ou mole. Grânulos e pós podem ser proporcionados em formas não efervescentes ou efervescentes. Cada um pode ser combinado com outros ingredientes conhecidos dos profissionais.
Em certas formas de realização, compostos de acordo com a presente invenção são proporcionados como formas galénicas sólidas, preferivelmente cápsulas ou comprimidos. Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e afins podem opcionalmente conter um ou mais dos seguintes ingredientes, ou compostos de natureza semelhante: um aglutinante; um diluente; um agente de desintegração; um lubrificante; um agente deslizante; um agente edulcorante, e um agente aromatizante.
Exemplos de aglutinantes que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a celulose microcristalina, goma de tragacanto, solução de glucose, mucilagem de acácia, solução de gelatina, sucrose e pasta de amido.
Exemplos de lubrificantes que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a talco, amido, estearato de magnésio ou cálcio, licopódio e ácido esteárico. 61
Exemplos de diluentes que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a lactose, sucrose, amido, caulino, sal, manitol e fosfato dicálcico.
Exemplos de agentes deslizantes que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a dióxido de silício coloidal.
Exemplos de agentes de desintegração que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a croscarmelose sódica, glicolato de amido sódico, ácido algínico, amido de milho, amido de batata, bentonite, metilcelulose, agar e carboximetilcelulose.
Exemplos de agentes corantes que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a quaisquer dos corantes FD e C solúveis em água certificados e aprovados, suas misturas, e corantes FD e C insolúveis em água suspensos em alumina hidratada.
Exemplos de agentes edulcorantes que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a sucrose, lactose, manitol e agentes edulcorantes artificiais, tais como ciclamato de sódio e sacarina e qualquer número de aromas liofilizados.
Exemplos de agentes aromatizantes que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a aromas naturais extraídos de plantas, como frutos, e misturas sintéticas de compostos que produzem uma sensação agradável, tais como mas não se limitando a hortelã-pimenta e salicilato de metilo.
Exemplos de agentes humedecedores que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a monoestearato de 62 propilenoglicol, mono-oleato de sorbitano, monolaurato de dietilenoglicol e éter de laurilo de polioxietileno.
Exemplos de revestimentos antieméticos que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a ácidos gordos, gorduras, ceras, goma-laca, goma-laca amoniacal e ftalatos de acetato de celulose.
Exemplos de revestimentos de filme que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a hidroxietilcelulose, carboximetilcelulose sódica, polietilenoglicol 4000 e ftalato de acetato de celulose.
Se for desejada administração oral, o sal do composto pode opcionalmente ser proporcionado numa composição que o protege do ambiente acidico do estômago. Por exemplo, a composição pode ser formulada num revestimento entérico que mantém a sua integridade no estômago e liberta o composto ativo no intestino. A composição também pode ser formulada em combinação com um antiácido ou outro ingrediente afim.
Quando a forma galénica unitária é uma cápsula, pode opcional e adicionalmente compreender um transportador liquido, como um óleo gordo. Adicionalmente, formas galénicas unitárias podem opcional e adicionalmente compreender outros materiais variados que modificam a forma fisica da unidade de dosagem, por exemplo, revestimentos de açúcar e outros agentes entéricos.
Compostos de acordo com a presente invenção também podem ser administrados como um componente de um elixir, suspensão, xarope, hóstia, borrifo, pastilha elástica ou afins. Um xarope pode opcionalmente compreender, para além 63 dos compostos ativos, sucrose como agente edulcorante e certos conservantes, pigmentos e corantes e aromas.
Os compostos da presente invenção também podem ser misturados com outros materiais ativos que não enfraquecem a ação desejada, ou com materiais que suplementam a ação desejada, tais como antiácidos, bloqueadores de H2 e diuréticos. Por exemplo, se um composto for utilizado para o tratamento de asma ou hipertensão, pode ser utilizado com outros broncodilatadores e agentes anti-hipertensivos, respetivamente.
Exemplos de transportadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser incluídos em comprimidos compreendendo compostos da presente invenção incluem mas não estão limitados a aglutinantes, lubrificantes, diluentes, agentes de desintegração, agentes corantes, agente aromatizantes e agentes humedecedores. Comprimidos revestidos de modo entérico, devido ao revestimento entérico, resistem à ação do ácido estomacal e dissolvem-se ou desintegram-se nos intestinos neutros ou alcalinos. Comprimidos revestidos com açúcar podem ser comprimidos que sofreram compressão aos quais são aplicadas diferentes camadas de substâncias farmaceuticamente aceitáveis. Comprimidos revestidos com filme podem ser comprimidos que sofreram compressão que foram revestidos com polímeros ou outro revestimento adequado. Comprimidos com múltiplas compressões podem ser comprimidos que sofreram compressão preparados por mais do que um ciclo de compressão utilizando as substâncias farmaceuticamente aceitáveis previamente mencionadas. Agentes corantes também podem ser utilizados em comprimidos. Agentes aromatizantes e edulcorantes podem ser utilizados comprimidos e sao especialmente úteis na formação de comprimidos e rebuçados mastigáveis.
Exemplos de formas galénicas orais liquidas que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a soluções aquosas, emulsões, suspensões, soluções e/ou suspensões reconstituídas a partir de grânulos não efervescentes e preparações efervescentes reconstituídas a partir de grânulos efervescentes.
Exemplos de soluções aquosas que podem ser utilizados incluem mas não estão limitados a elixires e xaropes. Como usado aqui, elixires referem-se a preparações hidroalcoólicas límpidas e adoçadas. Exemplos de transportadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser utilizados em elixires incluem mas não estão limitados a solventes. Exemplos particulares de solventes que podem ser utilizados incluem glicerina, sorbitol, álcool etílico e xarope. Como usado aqui, xaropes referem-se a soluções aquosas concentradas de um açúcar, por exemplo, sucrose. Os xaropes também podem opcionalmente compreender um conservante.
Emulsões referem-se a sistemas de duas fases nos quais um líquido é disperso, na forma de pequenos glóbulos, noutro líquido. As emulsões podem opcionalmente ser emulsões óleo-em-água ou emulsões água-em-óleo. Exemplos de transportadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser utilizados em emulsões incluem mas não estão limitados a líquidos não aquosos, agentes emulsionantes e conservantes.
Exemplos de substâncias farmaceuticamente aceitáveis que podem ser utilizados em grânulos não efervescentes, a serem 65 reconstituídos numa forma galénica oral líquida, incluem diluentes, edulcorantes e agentes humedecedores.
Exemplos de substâncias farmaceuticamente aceitáveis que podem ser utilizados em grânulos efervescentes, a serem reconstituídos numa forma galénica oral líquida, incluem ácidos orgânicos e uma fonte de dióxido de carbono.
Agentes corantes e aromatizantes podem ser opcionalmente utilizados em todas as formas galénicas acima.
Exemplos particulares de conservantes que podem ser utilizados incluem glicerina, metil- e propilparabeno, ácido benzoico, benzoato de sódio e álcool.
Exemplos particulares de líquidos não aquosos que podem ser utilizados em emulsões incluem óleo mineral e óleo de sementes de algodão.
Exemplos particulares de agentes emulsionantes que podem ser utilizados incluem gelatina, acácia, tragacanto, bentonite e surfactantes, como mono-oleato de polioxietileno sorbitano.
Exemplos particulares de agentes de suspensão que podem ser utilizados incluem carboximetilcelulose sódica, pectina, tragacanto, Veegum e acácia. Diluentes incluem lactose e sucrose. Agentes edulcorantes incluem sucrose, xaropes, glicerina e agentes edulcorantes artificiais, tais como ciclamato de sódio e sacarina.
Exemplos particulares de agentes humedecedores que podem ser utilizados incluem monoestearato de propilenoglicol, mono-oleato de sorbitano, monolaurato de dietilenoglicol e éter de laurilo de polioxietileno.
Exemplos particulares de ácidos orgânicos que podem ser utilizados incluem ácido cítrico e tartárico.
Fontes de dióxido de carbono que podem ser utilizadas em composições efervescentes incluem bicarbonato de sódio e carbonato de sódio. Agentes corantes incluem quaisquer dos corantes FD e C solúveis em água certificados e aprovados e suas misturas.
Exemplos particulares de agente aromatizantes que podem ser utilizados incluem aromas naturais extraídos de plantas, como frutos, e misturas sintéticas de compostos que produzem uma sensação agradável ao palato.
Para uma forma galénica sólida, a solução ou suspensão, por exemplo, em carbonato de propileno, óleos vegetais ou triglicéridos, é preferivelmente encapsulada numa cápsula de gelatina. Essas soluções e a sua preparação e encapsulação são divulgadas nas Patentes U.S. N°s 4,328,245; 4,409,239, e 4,410,545. Para uma forma galénica líquida, a solução, por exemplo, em polietilenoglicol, pode ser diluída com uma quantidade suficiente de um transportador líquido farmaceuticamente aceitável, por exemplo, água, a ser facilmente medido para administração.
Alternativamente, formulações orais líquidas ou semissólidas podem ser preparadas dissolvendo ou dispersando o composto ativo ou sal em óleos vegetais, glicóis, triglicéridos, ésteres de propilenoglicol (por exemplo, carbonato de propileno) e outros transportadores 67 afins, e encapsulando estas soluções ou suspensões em invólucros de cápsulas de gelatina endurecida ou mole. Outras formulações úteis incluem as apresentadas nas Patentes U.S. N°s Re 28,819 e 4,358,603.
Injetáveis, Soluções e Emulsões A presente invenção também é dirigida a composições concebidas para a administração dos compostos da presente invenção por administração parentérica, geralmente caracterizada por injeção subcutânea, intramuscular ou intravenosa. Os injetáveis podem ser preparados em qualquer forma convencional, por exemplo, como soluções ou suspensões líquidas, formas sólidas adequadas para solução ou suspensão em líquido antes da injeção, ou como emulsões.
Exemplos de excipientes que podem ser utilizados em conjunção com injetáveis de acordo com a presente invenção incluem mas não estão limitados a água, solução salina, dextrose, glicerol ou etanol. As composições injetáveis também podem opcionalmente compreender quantidades muito pequenas de substâncias auxiliares não tóxicas, tais como agentes humedecedores ou emulsionantes, agentes de tamponamento do pH, estabilizadores, intensificadores da solubilidade e outros agentes afins, tais como, por exemplo, acetato de sódio, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina e ciclodextrinas. Também é contemplada aqui a implantação de um sistema de libertação lenta ou libertação prolongada, de modo a ser mantido um nível constante de dosagem (ver, por exemplo, Patente U.S. N° 3,710,795). A percentagem de composto ativo contida nessas composições parentéricas depende muito da sua natureza 68 específica, bem como da atividade do composto e das necessidades do sujeito. A administração parentérica das formulações inclui as administrações intravenosa, subcutânea e intramuscular. Preparações para administração parentérica incluem soluções esterilizadas prontas para injeção, produtos solúveis secos esterilizados, como os pós liofilizados descritos aqui, prontos a serem combinados com um solvente imediatamente antes da utilização, incluindo comprimidos hipodérmicos, suspensões esterilizadas prontas para injeção, produtos insolúveis secos esterilizados prontos a serem combinados com um veículo imediatamente antes da utilização e emulsões esterilizadas. As soluções podem ser aquosas ou não aquosas.
Quando administrados intravenosamente, exemplos de transportadores adequados incluem mas não estão limitados a solução salina fisiológica ou solução salina tamponada com fosfato (PBS) e soluções contendo agentes espessantes e solubilizadores, tais como glucose, polietilenoglicol e polipropilenoglicol e misturas destes.
Exemplos de transportadores farmaceuticamente aceitáveis que podem ser opcionalmente utilizados em preparações parentéricas incluem mas não estão limitados a veículos aquosos, veículos não aquosos, agentes antimicrobianos, agentes isotónicos, tampões, antioxidantes, anestésicos locais, agentes de suspensão e dispersão, agentes emulsionantes, agentes sequestrantes ou quelantes e outras substâncias farmaceuticamente aceitáveis. 69
Exemplos de veículos aquosos que podem opcionalmente ser utilizados incluem Injeção de Cloreto de Sódio, Injeção de Ringer, Injeção de Dextrose Isotónica, Injeção de Água Esterilizada, Injeção de Dextrose e Ringer Lactada.
Exemplos de veículos parentéricos não aquosos que podem ser opcionalmente utilizados incluem óleos fixos de origem vegetal, óleo de sementes de algodão, óleo de milho, óleo de sésamo e óleo de amendoim.
Agentes antimicrobianos em concentrações bacteriostáticas ou fungistáticas podem ser adicionados a preparações parentéricas, particularmente quando as preparações são empacotadas em recipientes de múltiplas doses e, assim, concebidas para serem armazenadas e para serem removidas múltiplas alíquotas. Exemplos de agentes antimicrobianos que podem ser utilizados incluem fenóis ou cresóis, mercuriais, álcool benzílico, clorobutanol, ésteres de metilo e propilo do ácido p-hidroxibenzoico, timerosal, cloreto de benzalcónio e cloreto de benzetónio.
Exemplos de agentes isotónicos que podem ser utilizados incluem cloreto de sódio e dextrose. Exemplos de tampões que podem ser utilizados incluem fosfato e citrato. Exemplos de antioxidantes que podem ser utilizados incluem bissulfato de sódio. Exemplos de anestésicos locais que podem ser utilizados incluem cloridrato de procaína. Exemplos de agentes de suspensão e dispersão que podem ser utilizados incluem carboximetilcelulose sódica, hidroxipropilmetil-celulose e polivinilpirrolidona. Exemplos de agentes emulsionantes que podem ser utilizados incluem Polissorbato 80 (TWEEN 80). Um agente sequestrante ou quelante de iões metálicos inclui EDTA. 70
Transportadores farmacêuticos também podem opcionalmente incluir álcool etílico, polietilenoglicol e propilenoglicol para veículos miscíveis com água, e hidróxido de sódio, ácido clorídrico, ácido cítrico ou ácido láctico para ajustamento do pH. A concentração de um inibidor na formulação parentérica pode ser ajustada de modo que uma injeção administre uma quantidade farmaceuticamente eficaz suficiente para produzir o efeito farmacológico desejado. A concentração exata de um inibidor e/ou dosagem a serem utilizados acabará por depender da idade, peso e condição do paciente ou animal, como é conhecido na área.
Preparações parentéricas de dose unitária podem ser empacotadas numa ampola, num frasco ou numa seringa com uma agulha. Todas as preparações para administração parentérica devem ser esterilizadas, como é conhecido e praticado na área.
Os injetáveis podem ser concebidos para administração local e sistémica. Tipicamente, uma dosagem terapeuticamente eficaz é formulada de modo a conter uma concentração de pelo menos cerca de 0,1 % p/p até cerca de 90% p/p ou mais, preferivelmente mais do que 1% p/p, do inibidor da MEK para o(s) tecido(s) tratado(s). O inibidor pode ser administrado de uma só vez, ou pode ser dividido nalgumas doses mais pequenas a serem administradas em determinados intervalos de tempo. Deve ser entendido que a dosagem e a duração precisas do tratamento serão uma função do local onde a composição é parentericamente administrada, do transportador e outras variáveis, que podem ser 71 determinadas empiricamente utilizando protocolos de teste conhecidos ou por extrapolação de dados de teste in vivo ou in vitro. De notar que concentrações e valores de dosagem também podem variar com a idade do indivíduo tratado. Também deve ser entendido que, para qualquer sujeito particular, pode ser necessário ajustar regimes de dosagem específicos ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e a avaliação profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das formulações. Assim, os intervalos de concentração apresentados aqui destinam-se a serem exemplificativos, não se pretendendo que limitem o âmbito ou prática das formulações reivindicadas. 0 inibidor da MEK pode opcionalmente ser suspenso em forma micronizada ou outra adequada ou pode ser derivatizado para preparar um produto ativo mais solúvel ou para produzir um pró-fármaco. A forma da mistura resultante depende de alguns fatores, incluindo o modo de administração pretendido e a solubilidade do composto no transportador ou veículo selecionado. A concentração eficaz é suficiente para melhorar os sintomas do estado de doença e pode ser determinada empiricamente. Pós Liofilizados
Os compostos da presente invenção também podem ser preparados como pós liofilizados, que podem ser reconstituídos para administração na forma de soluções, emulsões e outras misturas. Os pós liofilizados também podem ser formulados como sólidos ou géis. 72
Um pó liofilizado esterilizado pode ser preparado por dissolução do composto numa solução tampão de fosfato de sódio contendo dextrose ou outro excipiente adequado. A subsequente filtração esterilizada da solução seguida de liofilização em condições padrão conhecidas dos profissionais proporciona a formulação desejada. Em resumo, o pó liofilizado pode opcionalmente ser preparado por dissolução de dextrose, sorbitol, frutose, xarope de milho, xilitol, glicerina, glucose, sucrose ou outro agente adequado, cerca de 1-20%, preferivelmente cerca de 5 até 15%, num tampão adequado, como citrato, fosfato de sódio ou potássio ou outro tampão afim conhecido dos profissionais, tipicamente a cerca de pH neutro. Em seguida, um inibidor da MEK é adicionado à mistura resultante, preferivelmente acima da temperatura ambiente, mais preferivelmente a cerca de 30-35 °C, e é agitado até se dissolver. A mistura resultante é diluída por adição de mais tampão para uma concentração desejada. A mistura resultante é filtrada de modo esterilizado ou é tratada para remover partículas e para assegurar a esterilidade, e é dividida em frascos para liofilização. Cada frasco pode conter uma única dosagem ou múltiplas dosagens do inibidor.
Administração Tópica
Os compostos da presente invenção também podem ser administrados na forma de misturas tópicas. Misturas tópicas podem ser utilizadas para administração local e sistémica. A mistura resultante pode ser uma solução, suspensão, emulsões ou afins, e é formulada como cremes, géis, unguentos, emulsões, soluções, elixires, loções, suspensões, tinturas, pastas, espumas, aerossóis, irrigações, pulverizações, supositórios, ligaduras, 73 emplastros dérmicos ou quaisquer outras formulações adequadas para administração tópica.
Os inibidores da MEK podem ser formulados como aerossóis para aplicação tópica, tal como por inalação (ver as Patentes U.S. N°s 4,044,126, 4,414,209 e 4,364,923, que descrevem aerossóis para distribuição de um esteroide útil para o tratamento de doenças inflamatórias, particularmente asma). Estas formulações para administração no trato respiratório podem estar na forma de um aerossol ou solução para um nebulizador, ou como um pó microfino para insuflação, isoladamente ou em combinação com um transportador inerte, tal como lactose. Neste caso, as partículas da formulação terão tipicamente diâmetros inferiores a 50 mícrones, preferivelmente inferiores a 10 mi crones.
Os inibidores também podem ser formulados para aplicação local ou tópica, como para aplicação tópica na pele e membranas mucosas, como no olho, na forma de géis, cremes e loções e para aplicação no olho ou para aplicação intracisterna ou intraespinal. A administração tópica é contemplada para distribuição transdérmica e também para administração nos olhos ou mucosa, ou para terapias de inalação. Também podem ser administradas soluções nasais do inibidor da MEK isoladamente ou em combinação com outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
Formulações para Outras Vias de Administração
Dependendo do estado de doença a ser tratado, também podem ser utilizadas outras vias de administração, tais como aplicação tópica, emplastros transdérmicos e administração 74 retal. Por exemplo, formas de dosagem farmacêutica para administração retal são supositórios retais, cápsulas e comprimidos para um efeito sistémico. Supositórios retais, como usado aqui, significam corpos sólidos para inserção no reto que fundem ou amolecem à temperatura do corpo, libertando um ou mais ingredientes farmacológica ou terapeuticamente ativos. Substâncias farmaceuticamente aceitáveis utilizadas em supositórios retais são bases ou veiculos e agentes para aumentar o ponto de fusão. Exemplos de bases incluem manteiga de cacau (óleo de theobroma), glicerina-gelatina, Carbowax, (polioxietilenoglicol) e misturas apropriadas de mono-, di- e triglicéridos de ácidos gordos. Podem ser utilizadas combinações das várias bases. Agentes para aumentar o ponto de fusão de supositórios incluem espermacete e cera. Supositórios retais podem ser preparados pelo método comprimido ou por moldagem. 0 peso típico de um supositório retal é cerca de 2 até 3 g. Podem ser preparados comprimidos e cápsulas para administração retal utilizando a mesma substância farmaceuticamente aceitável e pelos mesmos métodos empregues para formulações destinadas a administração oral.
Exemplos de Formulações
Seguem-se exemplos particulares de formulações orais, intravenosas e de comprimidos que podem opcionalmente ser utilizadas com compostos da presente invenção. De notar que estas formulações podem variar, dependendo do composto particular a ser utilizado e da indicação para a qual a formulação se destina a ser utilizada.
FORMULAÇÃO ORAL 75 75 10-100 mg 105 mg 18 mg
q.s. para 100 mL
Composto da Presente Invenção Ácido Cítrico Mono-hidratado
Hidróxido de Sódio
Aroma Água
FORMULAÇÃO INTRAVENOSA
Composto da Presente Invenção Dextrose Mono-hidratada Ácido Cítrico Mono-hidratado Hidróxido de Sódio Água para Injeção
0,1-10 mg q.s. para tornar isotónico 1,05 mg 0,18 mg q.s. para 1,0 mL FORMULAÇÃO DE COMPRIMIDOS Composto da Presente Invenção 1% Celulose Microcristalina 73% Ácido Esteárico 25% Sílica Coloidal 1%
Estojos Compreendendo Inibidores da MEK A invenção também é dirigida a estojos e outros artigos fabricados para o tratamento de doenças associadas à MEK. De notar que as doenças se destinam a abranger todas as condições para as quais a MEK possui atividade que contribui para a patologia e/ou sintomatologia da condição.
Numa forma de realização é proporcionado um estojo que compreende uma composição compreendendo pelo menos um inibidor da presente invenção em combinação com instruções. As instruções podem indicar o estado de doença para o qual a composição deve ser administrada, informação de armazenamento, informação da dosagem e/ou instruções 76 respeitantes ao modo como administrar a composição. 0 estojo também pode compreender materiais de empacotamento. 0 material de empacotamento pode compreender um recipiente para conter a composição. 0 estojo também pode opcionalmente compreender componentes adicionais, como seringas, para administração da composição. 0 estojo pode compreender a composição numa única ou em múltiplas formas galénicas.
Noutra forma de realização é proporcionado um artigo fabricado que compreende uma composição compreendendo pelo menos um inibidor da presente invenção em combinação com materiais de empacotamento. 0 material de empacotamento pode compreender um recipiente para conter a composição. 0 recipiente pode opcionalmente compreender uma etiqueta indicando o estado de doença para o qual a composição deve ser administrada, informação de armazenamento, informação da dosagem e/ou instruções respeitantes ao modo como administrar a composição. 0 estojo também pode opcionalmente compreender componentes adicionais, como seringas, para administração da composição. 0 estojo pode compreender a composição numa única ou em múltiplas formas galénicas.
De notar que o material de empacotamento utilizado em estojos e artigos fabricados de acordo com a presente invenção pode formar uma pluralidade de recipientes divididos, como uma garrafa dividida ou uma embalagem dividida de lâminas. 0 recipiente pode ter qualquer configuração ou forma convencional como é conhecido na área, feito de um material farmaceuticamente aceitável, por exemplo, uma caixa de papel ou cartão, uma garrafa ou jarro de vidro ou plástico, um saco apto a ser novamente selado 77 (por exemplo, para conter uma "recarga" de comprimidos a serem colocados num recipiente diferente) , ou uma embalagem alveolar com doses individuais a serem empurradas para fora da embalagem de acordo com um calendário terapêutico. 0 recipiente que é empregue dependerá da forma galénica exata envolvida; por exemplo, uma caixa de cartão convencional não será geralmente utilizada para conter uma suspensão liquida. É exequível que mais do que um recipiente possam ser utilizados em conjunto numa única embalagem para comercializar uma única forma galénica. Por exemplo, comprimidos podem estar contidos numa garrafa que por sua vez está contida numa caixa. Tipicamente, o estojo inclui orientações para a administração dos componentes separados. A forma de estojo é particularmente vantajosa quando os componentes separados são preferivelmente administrados em diferentes formas galénicas (por exemplo, oral, tópica, transdérmica e parentérica) , são administrados com diferentes intervalos de dosagem ou quando a titulação dos componentes individuais da combinação é desejada pelo médico que a prescreve.
Um exemplo particular de um estojo de acordo com a presente invenção é uma denominada embalagem alveolar. Embalagens alveolares são bem conhecidas na indústria do empacotamento e são amplamente utilizadas para o empacotamento de formas farmacêuticas de dosagem unitária (comprimidos, cápsulas e afins). As embalagens alveolares consistem geralmente numa folha de material relativamente rígido recoberta com uma lâmina de um material plástico preferivelmente transparente. Durante o processo de empacotamento são formadas reentrâncias na lâmina de plástico. As reentrâncias têm a dimensão e forma de comprimidos ou cápsulas individuais a serem embalados ou podem ter a 78 dimensão e forma para acomodar múltiplos comprimidos e/ou cápsulas a serem empacotados. Em seguida, os comprimidos ou cápsulas são colocados nas reentrâncias respetivas e a folha de material relativamente rigido é selada contra a lâmina de plástico na face da lâmina oposta à direção onde foram formadas as reentrâncias. Em resultado, os comprimidos ou cápsulas são individualmente selados ou coletivamente selados, consoante o desejado, nas reentrâncias entre a lâmina de plástico e a folha. Preferivelmente, a resistência da folha é tal que os comprimidos ou cápsulas podem ser removidos da embalagem alveolar por aplicação manual de pressão nas reentrâncias, de modo que se forma uma abertura na folha no local da reentrância. 0 comprimido ou cápsula pode então ser removido através dessa abertura.
Outra forma de realização especifica de um estojo é um distribuidor concebido para distribuir as doses diárias uma de cada vez, pela ordem da sua utilização pretendida. Preferivelmente, o distribuidor é equipado com um auxiliar de memória, de modo a facilitar adicionalmente a concordância com o regime. Um exemplo de um desses auxiliares de memória é um contador mecânico que indica o número de doses diárias que foram distribuídas. Outro exemplo de um desses auxiliares de memória é uma memória de "microchip" alimentada com uma bateria acoplada a um monitor de cristais líquidos, ou um sinal audível de lembrete que, por exemplo, lê a data na qual a última dose diária foi tomada e/ou recorda quando a dose seguinte deve ser tomada.
Dosagem, Hospedeiro e Segurança 79
Os compostos da presente invenção são estáveis e podem ser utilizados com segurança. Em particular, os compostos da presente invenção são úteis como inibidores da MEK para uma variedade de sujeitos (por exemplo, humanos, mamíferos não humanos e não mamíferos) . A dose ótima pode variar dependendo de condições tais como, por exemplo, o tipo de sujeito, o peso corporal do sujeito, a via de administração e propriedades específicas do composto particular a ser utilizado. Em geral, a dose diária para administração oral a um adulto (peso do corpo de cerca de 60 kg) é cerca de 1 até 1000 mg, cerca de 3 até 300 mg ou cerca de 10 até 200 mg. Será apreciado que a dose diária pode ser tomada numa única administração ou em múltiplas (por exemplo, 2 ou 3) porções ao longo do dia.
Terapias de Combinação
Uma grande variedade de agentes terapêuticos pode ter um efeito terapêutico aditivo ou sinergético com inibidores da MEK de acordo com a presente invenção. Esses agentes terapêuticos podem ser combinados, de modo aditivo ou sinergético, com os inibidores da MEK para inibir o crescimento celular indesejável, tal como crescimento celular inapropriado resultante em condições benignas indesejáveis ou crescimento tumoral.
Numa forma de realização é proporcionado um método de tratamento de um estado de doença proliferativa celular, que compreende tratar células com um composto de acordo com a presente invenção em combinação com um agente antiproliferativo, em que as células são tratadas com o composto de acordo com a presente invenção antes, ao mesmo tempo e/ou após as células serem tratadas com o agente 80 antiproliferativo, aqui designado de terapia de combinação. De notar que o tratamento com um agente antes de outro é designado aqui de terapia sequencial, mesmo que os agentes também sejam administrados em conjunto. De notar que terapia de combinação se destina a abranger os casos em que agentes são administrados antes ou depois uns dos outros (terapia sequencial) bem como quando os agentes são administrados ao mesmo tempo.
Exemplos de agentes terapêuticos que podem ser utilizados em combinação com inibidores da MEK incluem mas não estão limitados a agentes anticancerigenos, agentes alquilantes, agentes antibióticos, agentes antimetabólicos, agentes hormonais, agentes derivados de plantas e agentes biológicos.
Agentes alquilantes são compostos polifuncionais que têm capacidade de substituir iões hidrogénio por grupos alquilo. Exemplos de agentes alquilantes incluem mas não estão limitados a biscloroetilaminas (mostardas de azoto, por exemplo, clorambucilo, ciclofosfamida, ifosfamida, mecloretamina, melfalano, mostarda de uracilo), aziridinas (por exemplo, tiotepa), sulfonatos de alquilalcona (por exemplo, bussulfano), nitrosoureias (por exemplo, carmustina, lomustina, estreptozocina), agentes alquilantes não clássicos (altretamina, dacarbazina e procarbazina), compostos de platina (carboplastina e cisplatina). Estes compostos reagem com grupos fosfato, amino, hidroxilo, sulfidrilo, carboxilo e imidazolo. Em condições fisiológicas, estes fármacos ionizam e produzem um ião de carga positiva que ataca ácidos nucleicos e proteínas suscetíveis, conduzindo a paragem do ciclo celular e/ou morte celular. Uma terapia de combinação incluindo um 81 inibidor da MEK e um agente alquilante pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em cancro e reduz efeitos secundários associados a estes agentes quimioterapêuticos.
Agentes antibióticos são um grupo de fármacos produzidos de um modo semelhante a antibióticos, como uma modificação de produtos naturais. Exemplos de agentes antibióticos incluem mas não estão limitados a antraciclinas (por exemplo, doxorrubicina, daunorrubicina, epirrubicina, idarrubicina e antracenodiona), mitomicina C, bleomicina, dactinomicina, plicatomicina. Estes agentes antibióticos interferem no crescimento celular por abordagem seletiva de diferentes componentes celulares. Por exemplo, crê-se geralmente que antraciclinas interferem na ação da DNA topoisomerase 11 nas regiões de DNA ativo do ponto de vista da transcrição, o que conduz a cisões em filamentos de DNA. Crê-se geralmente que a bleomicina procede à quelação de ferro e forma um complexo ativado que então se liga a bases de DNA, causando cisões em filamentos e morte celular. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e um agente antibiótico pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em cancro e reduz efeitos secundários associados a estes agentes quimioterapêuticos.
Agentes antimetabólicos são um grupo de fármacos que interferem em processos metabólicos vitais para a fisiologia e proliferação de células cancerosas. Células cancerosas que proliferam ativamente requerem a síntese contínua de grandes quantidades de ácidos nucleicos, proteínas, lípidos e outros constituintes celulares vitais. Muitos dos antimetabolitos inibem a síntese de nucleósidos purina ou pirimidina ou inibem as enzimas de replicação de DNA. Alguns antimetabolitos também interferem na síntese de 82 ribonucleósidos e RNA e/ou metabolismo de aminoácidos e também síntese de proteínas. Ao interferir na síntese de constituintes celulares vitais, os antimetabolitos podem retardar ou travar o crescimento de células cancerosas. Exemplos de agentes antimetabólicos incluem mas não estão limitados a fluorouracilo (5-FU), floxuridina (5-FUdR), metotrexato, leucovorina, hidroxiureia, tioguanina (6-TG), mercaptopurina (6-MP), citarabina, pentostatina, fosfato de fludarabina, cladribina (2-CDA), asparaginase e gencitabina. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e um agente antimetabólico pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em cancro e reduz efeitos secundários associados a estes agentes quimioterapêuticos.
Agentes hormonais são um grupo de fármacos que regulam o crescimento e desenvolvimento dos seus órgãos alvo. A maior parte dos agentes hormonais são esteroides sexuais e seus derivados e respetivos análogos, tais como estrogénios, androgénios e progestinas. Estes agentes hormonais podem atuar como antagonistas de recetores dos esteroides sexuais, regulando negativamente a expressão dos recetores e a transcrição de genes vitais. Exemplos desses agentes hormonais são estrogénios sintéticos (por exemplo, dietilestibestrol), antiestrogénios (por exemplo, tamoxifeno, toremifeno, fluoximesterol e raloxifeno), antiandrogénios (bicalutamida, nilutamida, flutamida), inibidores de aromatase (por exemplo, aminoglutetimida, anastrozolo e tetrazolo), cetoconazolo, acetato de goserelina, leuprolida, acetato de megestrol e mifepristona. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e um agente hormonal pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em cancro e reduz efeitos secundários associados a estes agentes quimioterapêuticos. 83
Agentes derivados de plantas são um grupo de fármacos que são derivados de plantas ou modificados com base na estrutura molecular dos agentes. Exemplos de agentes derivados de plantas incluem mas não estão limitados a alcaloides de vinca (por exemplo, vincristina, vimblastina, vindesina, vinzolidina e vinorelbina), podofilotoxinas (por exemplo, etoposido (VP-16) e teniposido (VM-26)), taxanos (por exemplo, paclitaxel e docetaxel). Estes agentes derivados de plantas atuam geralmente como agentes antimitóticos que se ligam à tubulina e inibem a mitose. Crê-se que podofilotoxinas, como etoposido, interferem na síntese de DNA por interação com a topoisomerase II, conduzindo a cisão de filamentos de DNA. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e um agente derivado de plantas pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em cancro e reduz efeitos secundários associados a estes agentes quimioterapêuticos.
Agentes biológicos são um grupo de biomoléculas que induzem regressão de cancros/tumores quando utilizados isoladamente ou em combinação com quimioterapia e/ou radioterapia. Exemplos de agentes biológicos incluem mas não estão limitados a proteínas imunomoduladoras, tais como citoquinas, anticorpos monoclonais contra antigénios tumorais, genes supressores tumorais e vacinas contra cancro. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e um agente biológico pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em cancro, aumentar as respostas imunológicas do paciente a sinais tumorigénicos e reduzir potenciais efeitos secundários associados a este agente quimioterapêutico. 84
As citoquinas possuem atividade imunomoduladora profunda. Algumas citoquinas, tais como interleuquina-2 (IL-2, aldesleuquina) e interferão, demonstraram atividade antitumoral e foram aprovadas para o tratamento de pacientes com carcinoma metastático de células renais e melanoma maligno metastático. A IL-2 é um fator de crescimento de células T que é central para respostas imunológicas mediadas por células T. Crê-se que os efeitos antitumorais seletivos da IL-2 nalguns pacientes se devem a uma resposta imunológica mediada por células que distingue os próprios dos estranhos. Exemplos de interleuquinas que podem ser utilizados em conjunção com um inibidor da MEK incluem mas não estão limitados a interleuquina 2 (IL-2) e interleuquina 4 (IL-4), interleuquina 12 (IL-12).
Os interferões incluem mais de 23 subtipos relacionados com atividades sobrepostas, e todos os subtipos de IFN pertencem ao âmbito da presente invenção. 0 IFN demonstrou atividade contra muitas malignidades sólidas e hematológicas, em que as últimas aparentam ser particularmente sensíveis.
Outras citoquinas que podem ser utilizadas em conjunção com um inibidor da MEK incluem aquelas citoquinas que exercem efeitos profundos na hematopoiese e funções imunológicas. Exemplos dessas citoquinas incluem mas não estão limitados a eritropoietina, CSF de granulócitos (filgrastina) e CSF de granulócitos, macrófagos (sargramostim). Estas citoquinas podem ser utilizadas em conjunção com um inibidor da MEK para reduzir toxicidade mielopoiética induzida por quimioterapia. 85
Outros agentes imunomoduladores diferentes de citoquinas também podem ser utilizados em conjunção com um inibidor da MEK para inibir o crescimento celular anormal. Exemplos desses agentes imunomoduladores incluem mas não estão limitados a bacilo Calmette-Guerin, levamisole e octreótido, um octapéptido de atuação prolongada que imita os efeitos da hormona de ocorrência natural somatostatina.
Anticorpos monoclonais contra antigénios tumorais são anticorpos induzidos contra antigénios expressos por tumores, preferivelmente antigénios especificos de tumores. Por exemplo, o anticorpo monoclonal HERCEPTIN® (Trastruzumabe) é dirigido contra o recetor do fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2) que é superexpresso nalguns tumores da mama, incluindo cancro da mama metastático. A superexpressão da proteína HER2 está associada a doença mais agressiva e pior prognóstico na clinica. 0 HERCEPTIN® é utilizado como agente isolado para o tratamento de pacientes com cancro da mama metastático cujos tumores superexpressam a proteína HER2. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e HERCEPTIN® pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em tumores, especialmente em cancros metastáticos.
Outro exemplo de anticorpos monoclonais contra antigénios tumorais é RITUXAN® (Rituximabe), que é dirigido contra CD20 em células de linfoma e procede à depleção seletiva de células pré-B e B maduras CD20+ normais e malignas. 0 RITUXAN ® é utilizado como agente isolado para o tratamento de pacientes com linfoma não de Hodgkin de células B CD20+ de baixa agressividade ou folicular com recidiva ou refratário. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e RITUXAN® pode ter efeitos terapêuticos 86 sinergéticos nao só em linfoma mas também noutras formas ou tipos de tumores malignos.
Genes supressores tumorais são genes cuja função é inibir os ciclos de crescimento e divisão celulares, desse modo prevenindo o desenvolvimento de neoplasia. Mutações em genes supressores tumorais fazem com que a célula ignore um ou mais dos componentes da rede de sinais inibidores, ultrapassando os pontos de verificação do ciclo celular e resultando numa taxa mais elevada de crescimento celular-cancro controlados. Exemplos dos genes supressores tumorais incluem mas não estão limitados a DPC-4, NF-1, NF-2, RB, p53, WT1, BRCA1 e BRCA2. 0 DPC-4 está envolvido em cancro pancreático e participa numa via citoplasmática que inibe a divisão celular. 0 NF-1 codifica uma proteína que inibe a Ras, uma proteína inibidora citoplasmática. 0 NF-1 está envolvido em neurofibroma e feocromocitomas do sistema nervoso e leucemia mieloide. 0 NF-2 codifica uma proteína nuclear que está envolvida em meningioma, schwanoma e ependimoma do sistema nervoso. 0 RB codifica a proteína pRB, uma proteína nuclear que é um inibidor importante do ciclo celular. 0 RB está envolvido em retinoblastoma, bem como em cancro ósseo, da bexiga, do pulmão de células pequenas e da mama. 0 P53 codifica a proteína p53 que regula a divisão celular e pode induzir apoptose. A mutação e/ou inação da p53 encontra-se numa gama larga de cancros. 0 WT1 está envolvido em tumor de Wilms dos rins. 0 BRCA1 está envolvido em cancro da mama e do ovário e o BRCA2 está envolvido em cancro da mama. 0 gene supressor tumoral pode ser transferido para as células tumorais, onde exerce as suas funções de supressão tumoral. Uma terapia de combinação incluindo um inibidor da MEK e um 87 supressor tumoral pode ter efeitos terapêuticos sinergéticos em pacientes que sofrem de várias formas de cancros.
As vacinas contra cancro são um grupo de agentes que induzem a resposta imunológica especifica do corpo a tumores. A maior parte das vacinas contra cancro em investigação e desenvolvimento e ensaios clínicos consiste em antigénios associados a tumores (TAAs) . Os TAAs são estruturas (isto é, proteínas, enzimas ou hidratos de carbono) que estão presentes em células tumorais e relativamente ausentes ou diminuídas em células normais. Em virtude de serem bastante únicos da célula tumoral, os TAAs proporcionam alvos para o sistema imunológico reconhecer e proceder à sua destruição. Exemplos de TAAs incluem mas não estão limitados a gangliósidos (GM2), antigénio específico da próstata (PSA), alfa-fetoproteína (AFP), antigénio carcinoembrionário (CEA) (produzido por cancros do cólon e outros adenocarcinomas, por exemplo, cancros da mama, pulmão, gástrico e pâncreas), antigénios associados a melanoma (MART-1, gplOO, MAGE 1,3 tirosinase), fragmentos E6 e E7 do vírus papiloma, células completas ou porções/lisados de células tumorais autólogas e células tumorais alogeneicas.
Pode ser utilizado um adjuvante para aumentar a resposta imunológica a TAAs. Exemplos de adjuvantes incluem mas não estão limitados a bacilo Calmette-Guerin (BCG), lipopolissacáridos endotoxinas, hemocianina de lapa californiana (GKLH), interleuquina-2 (IL-2), fator estimulador de colónias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF) e citoxano, um agente quimioterapêutico que se crê reduzir a supressão induzida por tumores quando administrado em doses baixas.
Outros exemplos de agentes terapêuticos que podem ser utilizados em combinação com inibidores da MEK incluem mas não estão limitados a inibidores da sinalização de P13/Akt. Exemplos de inibidores de P13/Akt que podem ser utilizados em combinação com inibidores da MEK incluem mas não estão limitados a inibidores do recetor do fator de crescimento epidérmico humano (HER2). Exemplos de inibidores de HER2 incluem mas não estão limitados a Herceptin® (Trastruzumabe) e Tykerb® (Lapatinibe). 0 Tykerb®, uma molécula pequena que pode ser administrada oralmente, inibe os componentes de tirosina quinase de recetores ErbBl e ErbB2. A estimulação de ErbBl e ErbB2 está associada a proliferação celular e com múltiplos processos envolvidos na progressão, invasão e metástases tumorais. A superexpressão destes recetores foi relatada numa variedade de tumores humanos e está associada a mau prognóstico e sobrevivência global reduzida.
Ainda outros exemplos de agentes terapêuticos que podem ser utilizados em combinação com inibidores da MEK incluem mas não estão limitados a inibidores da histona desacetilase (HDAC). Exemplos de inibidores da HDAC que podem ser utilizados em combinação com inibidores da MEK incluem mas não estão limitados a ácido suberoilanilida-hidroxâmico (SAHA).
EXEMPLOS
Preparação de Inibidores da MEK 89
Podem ser desenvolvidos vários métodos para sintetizar compostos de acordo com a presente invenção. Métodos representativos para sintetizar estes compostos são proporcionados nos Exemplos. No entanto, é de notar que os compostos da presente invenção também podem ser sintetizados por outras vias de síntese que outros possam conceber.
Será facilmente reconhecido que certos compostos de acordo com a presente invenção têm átomos com ligações a outros átomos que conferem ao composto uma estereoquímica particular (por exemplo, centros quirais). É reconhecido que a síntese de compostos de acordo com a presente invenção pode levar à criação de misturas de diferentes estereoisómeros (isto é, enantiómeros e diastereómeros). A menos que seja especificada uma estereoquímica particular, pretende-se que a recitação de um composto abranja todos os possíveis estereoisómeros diferentes. São conhecidos na área vários métodos de separação de misturas de diferentes estereoisómeros. Por exemplo, uma mistura racémica de um composto pode reagir com um agente de resolução oticamente ativo para formar um par de compostos diastereoisoméricos. Os diastereómeros podem então ser separados para recuperar os enantiómeros oticamente puros. Complexos dissociáveis também podem ser utilizados para resolver enantiómeros (por exemplo, sais diastereoisoméricos cristalinos). Os diastereómeros têm tipicamente propriedades físicas suficientemente distintas (por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, solubilidades, reatividade, etc.) e podem ser facilmente separados tirando partido destas diferenças. Por exemplo, diastereómeros podem ser tipicamente separados por 90 cromatografia ou por técnicas de separação/resolução baseadas em diferenças de solubilidade. Uma descrição mais pormenorizada de técnicas que podem ser utilizadas para resolver estereoisómeros de compostos a partir da sua mistura racémica pode ser encontrada em Jean Jacques Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley & Sons, Inc. (1981).
Compostos de acordo com a presente invenção também podem ser preparados como um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável, por reação da forma de base livre do composto com um ácido inorgânico ou orgânico farmaceuticamente aceitável. Alternativamente, um sal de adição de base farmaceuticamente aceitável de um composto pode ser preparado por reação da forma de ácido livre do composto com uma base inorgânica ou orgânica farmaceuticamente aceitável. Ácidos e bases inorgânicos e orgânicos adequados para a preparação dos sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos são apresentados na secção de definições deste Pedido. Alternativamente, as formas de sais dos compostos podem ser preparadas utilizando sais dos materiais de partida ou intermediários.
As formas de ácido livre ou base livre dos compostos podem ser preparadas a partir da correspondente forma de sal de adição de base ou sal de adição de ácido. Por exemplo, um composto numa forma de sal de adição de ácido pode ser convertido na correspondente base livre por tratamento com uma base adequada (por exemplo, solução de hidróxido de amónio, hidróxido de sódio e afins). Um composto numa forma de sal de adição de base pode ser convertido no correspondente ácido livre por tratamento com um ácido adequado (por exemplo, ácido clorídrico, etc.). 91
Os N-óxidos de compostos de acordo com a presente invenção podem ser preparados por métodos conhecidos dos profissionais. Por exemplo, N-óxidos podem ser preparados por tratamento de uma forma não oxidada do composto com um agente oxidante (por exemplo, ácido trifluoroperacético, ácido permaleico, ácido perbenzoico, ácido peracético, ácido meta-cloroperoxibenzoico ou afins) num solvente orgânico inerte adequado (por exemplo, um hidrocarboneto halogenado, tal como diclorometano) a aproximadamente 0 °C. Alternativamente, os N-óxidos dos compostos podem ser preparados a partir do N-óxido de um material de partida apropriado.
Compostos numa forma não oxidada podem ser preparados a partir de N-óxidos de compostos por tratamento com um agente redutor (por exemplo, enxofre, dióxido de enxofre, trifenilfosfina, boro-hidreto de litio, boro-hidreto de sódio, tricloreto, tribrometo de fósforo ou afins) num solvente orgânico inerte adequado (por exemplo, acetonitrilo, etanol, dioxano aquoso ou afins) a 0 até 80 °C.
Derivados protegidos dos compostos podem ser preparados por métodos conhecidos dos profissionais. Uma descrição pormenorizada das técnicas aplicáveis à criação de grupos protetores e sua remoção pode ser encontrada em T. W. Greene, "Protecting Grupos in Organic Synthesis", 3a edição, John Wiley & Sons, Inc. 1999.
Compostos de acordo com a presente invenção podem ser convenientemente preparados, ou formados durante o processo da invenção, como solvatos (por exemplo, hidratos). 92
Hidratos de compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados por recristalização a partir de uma mistura de solventes aquosos/orgânicos, utilizando solventes orgânicos tais como dioxano, tetra-hidrofurano ou metanol.
Compostos de acordo com a presente invenção também podem ser preparados na forma dos seus estereoisómeros individuais por reação de uma mistura racémica do composto com um agente de resolução oticamente ativo, para formar um par de compostos diastereoisoméricos, separação dos diastereómeros e recuperação do enantiómero oticamente puro. Não obstante a resolução de enantiómeros poder ser efetuada utilizando derivados diastereoméricos covalentes de compostos, são preferidos complexos dissociáveis (por exemplo, sais diastereoisoméricos cristalinos). Os diastereómeros têm propriedades físicas distintas (por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, solubilidades, reatividade, etc.) e podem ser facilmente separados tirando partido destas diferenças. Os diastereómeros podem ser separados por cromatografia ou, preferivelmente, por técnicas de separação/resolução baseadas em diferenças de solubilidade. 0 enantiómero oticamente puro é então recuperado, juntamente com o agente de resolução, por qualquer meio prático que não dê origem a racemização. Uma descrição mais pormenorizada das técnicas aplicáveis à resolução de estereoisómeros de compostos a partir da sua mistura racémica pode ser encontrada em Jean Jacques Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley & Sons, Inc. (1981).
Como usados aqui, os símbolos e convenções usados nestes processos, esquemas e exemplos são consistentes com os 93 usados na literatura científica contemporânea, por exemplo, o Journal of the American Chemical Society ou o Journal of Biological Chemistry. São geralmente utilizadas abreviaturas comuns de uma letra ou de três letras para designar resíduos de aminoácidos, que se presume estarem na configuração L a menos que indicado em contrário. A menos que indicado em contrário, todos os materiais de partida foram obtidos de fornecedores comerciais e utilizados sem purificação adicional. Especificamente, as seguintes abreviaturas podem ser utilizadas nos exemplos e ao longo da especificação: pL (microlitros) Ac (acetilo) atm (atmosfera) ATP (Adenosina Trifosfatase) BOC (tert- BOP (cloreto bis(2-oxo-3- butiloxicarbonilo) oxazolidinil)fosfínico) BSA (Albumina de Soro CBZ (benziloxicarbonilo) Bovino) CDI (1,1-carbonildi- DCC (diciclo-hexilcarbodi- imidazolo) imida) DCE (dicloroetano) DCM (diclorometano) DMAP (4-dimetilamino- DME (1,2-dimetoxietano) piridina) DMF (N,N-dimetil- DMPU (N,N'- formamida) dimetilpropilenoureia) DMSO (dimetilsulfóxido) EDCI (cloridrato de etilcarbodi-imida) EDTA (Ácido etileno- Et (etilo) diaminotetra-acético) Et20 (éter dietílico) EtOAc (acetato de etilo) FMOC (9-fluorenilmetoxi- g (gramas) carbonilo) 94 h (horas) HOAc ou AcOH (ácido acético) HOBT (1-hidroxibenzo- HOSu (N-hidroxissuccinimida) triazolo) HPLC (cromatografia Hz (Hertz) líquida de alta pressão) i.v. (intravenoso) IBCF (cloroformato de isobutilo) i-PrOH (isopropanol) L (litros) M (molar) mCPBA (ácido meta-cloro- perbenzoico) Me (metilo) MeOH (metanol) mg (miligramas) MHz (megaHertz) min (minutos) mL (mililitros) mM (milimolar) mmol (milimoles) mol (moles) MOPS (Ácido morfolino- propanossulfónico) pf (ponto de fusão) NaOAc (acetato de sódio) OMe (metoxi) psi (libras por polegada quadrada) RP (fase reversa) TA (temperatura ambiente) SPA (Ensaio de Proximidade TBAF (fluoreto de tetra-n- de Cintilações) butilamónio) TBS (t-butildimetil- tBu (tert-butilo) sililo) TEA (trietilamina) TFA (ácido trifluoroacético) TFAA (anidrido trifluoro- THF (tetra-hidrofurano) acético) TIPS (tri-isopropil- TLC (cromatografia de camada sililo) fina) TMS (trimetilsililo) TMSE (2-(trimetilsilil)etilo) Tr (tempo de retenção) 95
Todas as referências a éter ou Et20 são referências a éter de dietilo, e solução salina refere-se a uma solução aquosa saturada de NaCl. A menos que indicado em contrário, todas as temperaturas estão expressas em °C (graus Centígrados). Todas as reações são conduzidas numa atmosfera inerte à TA a menos que indicado em contrário.
Espetros de 1H RMN foram registados num aparelho Bruker Avance 400. Os desvios químicos estão expressos em partes por milhão (ppm). As constantes de acoplamento estão em unidades de Hertz (Hz) . Os padrões de separação descrevem multiplicidades aparentes e são designados s (singleto), d (dupleto), t (tripleto), q (quarteto), m (multipleto), lrg (largo).
Os dados de espetros de massa (MS) de baixa resolução e de pureza dos compostos foram adquiridos num sistema LC/MS Waters ZQ de quadripolo simples equipado com fonte de ionização por eletropulverização (ESI), detetor de UV (220 e 254 nm) e detetor evaporativo de dispersão de luz (ELSD). A cromatografia de camada fina foi realizada em placas de sílica gel de 0,25 mm E. Merck (60F-254), visualizada com luz UV, 5% ácido fosfomolíbdico etanólico, Ninidrina ou solução de p-anisaldeído. A cromatografia em coluna "flash" foi realizada em sílica gel (230-400 de malha, Merck).
Os materiais de partida e reagentes utilizados na preparação destes compostos são disponibilizados por fornecedores comerciais, como a Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI), Bachem (Torrance, CA), Sigma (St. Louis, MO) , ou podem ser preparados por métodos bem conhecidos do profissional, seguindo procedimentos descritos em referências comuns tais como "Fieser and Fieser's Reagents 96 for Organic Synthesis", volumes 1-17, John Wiley and Sons, Nova Iorque, NY, 1991; "Rodd's Chemistry of Carbon Compounds", volumes 1-5 e suplementos, Elsevier Science Publishers, 1989; "Organic Reactions", volumes 1-40, John Wiley and Sons, Nova Iorque, NY, 1991; March J.: "Advanced Organic Chemistry", 4a edição, John Wiley and Sons, Nova Iorque, NY, e Larock: "Comprehensive Organic
Transformations", VCH Publishers, Nova Iorque, 1989.
As divulgações completas de todos os documentos citados neste pedido são incorporadas aqui por referência.
Esquemas de Síntese para Compostos da Presente Invenção
Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser sintetizados de acordo com os esquemas reacionais mostrados em baixo. Outros esquemas reacionais podem ser facilmente concebidos pelos profissionais. Também deve ser apreciado que uma variedade de diferentes solventes, temperaturas e outras condições reacionais pode ser alterada para otimizar os rendimentos das reações.
Nas reações aqui descritas a seguir pode ser necessário proteger grupos funcionais reativos, por exemplo, grupos hidroxi, amino, imino, tio ou carboxi, quando estes forem desejados no produto final, para evitar a sua participação indesejada nas reações. Grupos protetores convencionais podem ser utilizados de acordo com a prática comum, quanto a exemplos ver T.W. Greene e P. G. M. Wuts em "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley and Sons, 1991.
Esquema 1: 97
Compostos da presente invenção também podem ser preparados como mostrado no Esquema 1. A dessulfurização do composto J com Níquel Raney proporciona o composto C (X5=CH; R4=H), que então é submetido a ciclização (por exemplo, numa reação em micro-ondas) com composto D para produzir o composto E (X!=CH; X5=CH; R4=H) . A reação do composto E com o composto F dá origem ao composto G (Xi= CH; X5=CH; R4=H) . Uma reação de deslocamento do composto G com o composto H produz o composto I (Xi=CH; X5=CH; R4=H) .
Esquema 2:
'N H jm
B2, H
98
Uma via de síntese geral para produzir compostos da presente invenção está mostrada no Esquema 2. 0 composto C é submetido a ciclização (por exemplo, numa reação em micro-ondas ou condições de aquecimento) com o composto ID para produzir o composto L (R6= alquilo) . A reação do composto L com POX3, (por exemplo, X é Cl ou Br) dá origem ao composto M. Uma reação de deslocamento entre o composto M e o composto H produz o composto N. Em formas de realização particulares, Ri do composto N é um arilo substituído ou não substituído.
Esquema 3:
Quando R3' é um grupo protetor (por exemplo, PMB), o composto N pode ser desprotegido por remoção de R3' para dar origem ao composto O que, por aquecimento com 1-cloro-2,4-dinitro-benzeno na presença de uma base, como CS2CO3, K2C03 ou afins, dá origem ao composto P. 0 composto P pode então ser tratado com a amina primária Q, em condições de aquecimento, para proporcionar o composto R. 99
Os componentes quirais podem ser separados e purificados utilizando qualquer uma de uma variedade de técnicas conhecidas dos profissionais. Por exemplo, componentes quirais podem ser purificados utilizando cromatografia com fluido supercritico (SFC). Numa variação particular, análises de SFC analítico quiral/MS são conduzidas utilizando um sistema SFC analítico Berger (AutoChem, Newark, DE), que consiste num módulo de controlo de fluidos com bomba dual de SFC Berger com uma bomba de fluido supercritico Berger FCM 1100/1200 e bomba de fluido modificador FCM 1200, um forno Berger TCM 2000 e um dispositivo de autoamostragem Alcott 718. 0 sistema integrado pode ser controlado por "software" BI-SFC Chemstation versão 3.4. A deteção pode ser realizada com um detetor Waters ZQ 2000 operado em modo positivo com uma interface ESI e um intervalo de varrimento entre 200-800 Da com 0,5 segundos por varrimento. As separações cromatográficas podem ser realizadas numa coluna ChiralPak AD-H, ChiralPak AS-H, ChiralCel OD-H ou ChiralCel OJ-H (5 μ, 4,6 x 250 mm; Chiral Tecnologies, Inc. West Chester, PA) com 10 até 40% metanol como modificador e com ou sem acetato de amónio (10 mM). Pode ser utilizada qualquer uma de uma variedade de taxas de fluxo incluindo, por exemplo, 1,5 ou 3,5 mL/minuto, com uma pressão de admissão fixada em 100 bar. Adicionalmente, pode ser utilizada uma variedade de condições de injeção de amostras, incluindo, por exemplo, injeções de amostras de 5 ou 10 pL em metanol a 0,1 mg/mL de concentração.
Noutra variação, separações quirais preparativas são realizadas utilizando um sistema de purificação SFC Berger MultiGram II. Por exemplo, as amostras podem ser carregadas numa coluna ChiralPak AD (21 x 250 mm, 10 μ). Em variações 100 particulares, a taxa de fluxo para a separação pode ser 70 mL/minuto, o volume de injeção até 2 mL e a pressão de admissão fixada em 130 bar. Podem ser realizadas injeções empilhadas para aumentar a eficiência.
Em cada um dos procedimentos ou esquemas reacionais acima, os vários substituintes podem ser selecionados de entre os vários substituintes ensinados aqui. São aqui apresentadas descrições das sínteses de compostos particulares de acordo com a presente invenção com base no esquema reacional acima.
Exemplos de Inibidores da MEK A presente invenção é adicionalmente exemplificada, mas não limitada, pelos seguintes exemplos que descrevem a síntese de compostos particulares de acordo com a invenção.
Exemplo 1: 5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
101
Referindo-nos ao esquema 1,3-metil-6-(metilamino)-2-(metil-tio)pirimidin-4(3H)-ona (composto IA; 650 mg, 0,35 mmol, 1 eq) foi suspenso em metanol (5 mL). Adicionou-se um grande excesso de Níquel Raney feito em pasta em água (aproximadamente 5 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, dando origem ao composto 1B. O produto foi confirmado por LC-MS. A mistura foi filtrada e o sólido foi lavado várias vezes com metanol. Em seguida, o filtrado foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por cromatografia "flash", com 1:10 MeOH:DCM, dando origem a 3-metil-6-(metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (composto 1B) na forma de um sólido amarelo/verde (380 mg, 86%). ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 2,78 (s, 3 H) 3,35 (s, 3 H) 5,22 (s. largo, 1 H) 8,10 (s. largo, 1 H) ; [M+H] calculado para C5H7N3O, 126; experimental, 126. 3-Metil-6-(metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (composto 1B; 400 mg, 2,88 mmol, 1 eq) , malonato de dietilo (873 pL, 5,76 mmol, 2 eq) e éter de fenilo (915 pL, 5,76 mmol, 2 eq) foram dissolvidos em l-metil-2-pirrolidinona (2 mL, 20 mmol) . A mistura foi colocada num reator de micro-ondas a 240 °C durante 30 minutos, dando origem a 5-hidroxi-3,8-dimetil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona (composto 1C). O produto foi confirmado por LC-MS e isolado por HPLC, dando origem a 125 mg (21%) de composto 1C. [M+H] calculado para C9H9N3O3, 208; experimental, 208 . 5-Hidroxi-3,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (composto 1C, 125 mg, 0,60 mmol, 1 eq), cloreto de p-toluenossulf onilo (138 mg, 0,72 mmol, 1,2 eq) e trietilamina (126 pL, 0,90 mmol, 1,5 eq) foram dissolvidos em acetonitrilo (2 mL) . A mistura foi aquecida no refluxo (banho de óleo a 110°C) durante 3 horas, dando origem a 4- 102 metilbenzenos-sulfonato de 3,8-dimetil-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidro-pirido[2,3-d]pirimidin-5-ilo (composto 1D) . O produto foi confirmado por LC-MS. O solvente foi removido in vacuo e o produto em bruto 4-metilbenzenossulfonato de 3,8-dimetil-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3-d]pirimidin-5-ilo foi utilizado na reação seguinte. 4-Metilbenzenossulfonato de 3,8-dimetil-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3-d]pirimidin-5-ilo (composto 1D, 80 mg de material 60% puro) e 2-fluoro-4-iodoanilina (300 mg, excesso grande) foram aquecidos a 125°C durante 2 horas, dando origem a 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetil-pirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (Exemplo 1). O produto foi confirmado por LC-MS e isolado por HPLC, dando origem ao composto do título na forma de um sólido cor de bronze (17 mg) . ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,57 (s, 3 H) 3,64 (s, 3 H) 5,76 (s, 1 H) 7,30 (t, J=8,34 Hz, 1 H) 7,61 (dt, J=8,34, 1,01 Hz, 1 H) 7,66 (dd, J=9,85, 1,77 Hz, 1 H) 8,48 (s, 1 Η) ; [M+H] calculado para C15H12FIN402, 427; experimental, 427.
Exemplo 2: 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona 103
tNHS3,TNF
Uma mistura de 6-(metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (composto 1B, 0,5 g, 4 mmol, 1 eq) , 2-(2-bromoetoxi)tetra-hidro-2H- pirano (composto 2B, 0,836 g, 4 mmol, 1 eq) e K2CO3 (0,5 g, 3,62 mmol) em DMF (15 mL) foi aquecida por micro-ondas a 85°C durante 90 minutos. DMF foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia "flash", utilizando 0-5% CH3OH/CH2CI2 ao longo de 30 minutos. O composto 2C foi obtido na forma de um líquido pegajoso incolor (0,8 g, 57%). [M+H] calculado para C12H19N3O3, 254; experimental, 254. O composto 2C (0,8 g, 3,16 mmol, 1 eq) e malonato de dietilo (composto 2D, 1,01 g, 7,32 mmol, 2 eq) foram misturados em éter de difenilo (2 mL) e adicionou-se uma gota de NMP. A mistura foi aquecida por micro-ondas a 240°C durante 30 minutos. O composto 2E (0,41 g, 40%) foi isolado na forma de um sólido branco por cromatografia "flash", utilizando 0-5% CH3OH/CH2CI2 ao longo de 30 minutos. [M+H] calculado para C15H19N3O5, 322; experimental, 322. 104 O composto 2Ε (0,41 g, 1,28 mmol, 1 eq) e cloreto de p-toluenossulfonilo (0,267 g, 1,40 mmol, 1,1 eq) foram dissolvidos em CH3CN (5 mL). Adicionou-se trietilamina (0,2 mL). A mistura foi então aquecida a 120°C durante 30 minutos. CH3CN foi removido sob vácuo e o produto em bruto foi purificado por cromatografia "flash", utilizando 0-5% CH30H /CH2CI2 ao longo de 30 minutos, dando origem ao composto 2F (250 mg, 41%) na forma de um sólido branco. [M+H] calculado para C22H25N307S, 476; experimental, 476. O composto 2F (0,25 g, 0,53 mmol, 1 eq) e 2-fluoro-4-iodo-anilina (0,125 g, 0,53 mmol, 1 eq) foram misturados em THF (2 mL). A solução foi arrefecida para -78°C e adicionou-se 1.8 M LDA (0,877 mL, 3 eq). A mistura foi mantida a -78°C durante 30 minutos e depois foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O solvente foi removido e o produto em bruto foi purificado por cromatografia "flash", utilizando 0-5% CH3OH /CH2C12 ao longo de 30 minutos. O composto 2G (60 mg, 21%) foi isolado na forma de um sólido branco. [M+H] calculado para C21H22FIN4O4, 541; experimental, 541. A uma solução de composto 2G (60 mg, 0,11 mmol) em THF (3 mL) adicionou-se 1 N HC1 (1 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O exemplo 2 (12,6 mg, 25%) foi purificado por HPLC preparativa. XH RMN (400 MHz, Clorof órmio-di) δ 8,17 (s, 1 H) 7,52 (m, 2 H) 7,25 (t, J= 8.08 Hz, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 4,11 (t, J= 5,04 Hz, 2 H) 4,00 (t, J= 5,04 Hz, 2 H) 3,54 (s, 3 H) . [M+H] calculado para Ci6Hi4FIN403, 457; experimental, 457. 105
Exemplo 3: 2-(5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-8-metil-4,7- dioxo-7,8-di-hidropirido[2,3-d]pirimidin-3(4H)-il)acetato de metilo
O composto do título foi sintetizado utilizando um procedimento análogo ao descrito em conexão com o Exemplo 2. ΤΗ RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,47 (s, 1 H) 7,63 (m, 2 H) 7,28 (t, J= 8,32 Hz, 1H) 5,74 (s, 1H) 4,84 (s, 3 H) 3,79 (s, 3 H) 3,66 (s, 3 Η) . [M+H] calculado para Ci7H14FIN404, 485; experimental, 485.
Exemplo 4: 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,6,8-trimetil- pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
40 4 6-(Metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (0,2 g, 1,6 mmol, 1 eq) e 2,0 M iodometano (0,8 mL, 1,6 mmol, 1 eq) , K2CO3 (0,1 g, 0,72 mmol) foram misturados em DMF (5 mL) . A reação foi aquecida por micro-ondas a 85°C durante 90 minutos. DMF foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa. O composto 4B foi obtido na forma de um 106 líquido pegajoso incolor (0,22 g, 98%) . [M+H] calculado para C6H9N30, 140; experimental, 140. O composto 4B (0,22 g, 1,58 mmol, 1 eq) e malonato de 2-metildietilo (0,275 g, 1,58 mmol, 1 eq) foram misturados em éter de difenilo (2 mL) e adicionou-se uma gota de NMP. A mistura foi aquecida a 240°C durante 30 minutos utilizando micro-ondas. Purificação por HPLC preparativa deu origem ao composto 4C (0,1 g, 28,5%) na forma de um sólido branco. [M+H] calculado para C10H11N3O3, 222; experimental, 222. O composto 4C (0,02 g, 0,09 mmol, 1 eq) e cloreto de p-toluenossulfonilo (18,9 mg, 0,1 mmol, 1,1 eq) foram dissolvidos em CH3CN (2 mL) . Adicionou-se trietilamina (3 gotas). A mistura foi aquecida a 120°C durante 30 minutos. CH3CN foi removido sob vácuo e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa, dando origem a 4D (17 mg, 50%) na forma de um sólido branco. [M+H] calculado para C17H17N3O5S, 376; experimental, 376. 0 composto 4D (10 mg, 0,027 mmol, 1 eq) e 2-fluoro-4-iodo-anilina (6,3 mg, 0,027 mmol, 1 eq) foram misturados em THF (2 mL). A solução foi arrefecida para -78°C e adicionou-se 1,8 M LDA (0,04 mL, 3 eq). A mistura foi mantida a -78 °C durante 30 minutos e depois foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. THF foi removido e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa, dando origem ao Exemplo 4 (1,1 mg, 9,4%) na forma de um sólido branco. ΤΗ RMN (400 MHz, Clorofórmio-di) δ 8,11 (s, 1 H) 7,34 (m, 2 H) 6,48 (t, J= 8,56 Hz, 1 H) 3,74 (s, 1 H) 3,58 (s, 3 H) 1,78 (s, 1 H) . [M+H] calculado para Ci6Hi4FIN402, 441; experimental, 441. 107
Exemplo 5: (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona
3-Benzil-6-(metilamino) pirimidin-4 (3Jí)-ona (composto 5A) : 6-(Metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (composto 1B; 3 g, 24 mmol, 1 eq), brometo de benzilo (5,7 mL, 48 mmol, 2 eq) e carbonato de potássio (6,96 g, 50,4 mmol, 2,1 eq) foram agitados em etanol (30 mL) à TA durante a noite. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, dando origem a 2,25 g do composto do título (43%) . 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 2,64 (d, J=4,29 Hz, 3 H) 4,92 - 5,01 (m, 2 H) 6,96 (q, J=4,63 Hz, 1 H) 7,22 - 7,30 (m, 3 H) 7,30 - 7,37 (m, 2 H) 8,24 (s, 1 H). [M+H] calculado para Ci2H13N30, 216; experimental, 216. 3-Benzil-5-hidroxi-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)diona (composto 5B) : 3-Benzil-6-(metilamino) pirimidin-4 (3H) -ona (composto 5A) (2 g, 9,3 mmol, 1 eq) e 108 malonato de dietilo (2 mL, 14,5 mmol, 1,55 eq) foram aquecidos em éter de fenilo (3 mL, 19 mmol, 2 eq) a 240 °C num reator de micro-ondas durante 6 horas. Por arrefecimento formou-se um precipitado que foi filtrado e lavado com éter, dando origem a 1,5 g do composto do título na forma de um sólido cor de bronze (57%) . 1H RMN (400 MHz, DMS0-d6> δ ppm 3,51 (s, 3 H) 5,20 (s, 2 H) 5,72 (s, 1 H) 7,31 (s. largo, 1 H) 7,38 (d, J=3,03 Hz, 4 H) 8,93 (s, 1 H) 11,61 (s, 1 Η) . [M+H] calculado para C15H13N3O3, 284; experimental, 284. 3-Benzil-5-cloro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona (composto 5C) : 3-Benzil-5-hidroxi-8-metilpirido[2,3-d] pirimidino-4, 7 (3H, QH) -diona (1,1 g, 3,88 mmol) foi dissolvido em POCI3 em excesso (5 mL) e sujeito a irradiação com micro-ondas a 70 °C durante 30 minutos. O POCI3 foi removido in vacuo e o resíduo foi dissolvido em DCM, depois foi rapidamente lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio até ser observado pH neutro. A camada orgânica foi seca em MgS04 e evaporada até à secura, dando origem a 1,5 g do composto do título na forma de um sólido castanho avermelhado (94%). [M+H] calculado para C15H12CIN3O, 302; experimental, 302. 3-Benzil-5-(2-fluoro-4-nitrofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona (composto 5D): 3-Benzil-5-cloro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, QH)-diona (950 mg, 3,15 mmol, 1 eq), 2-fluoro-4-nitroanilina (540 mg, 3,46 mmol, 1,1 eq) , tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (58 mg, 0,06 mmol, 0,02 eq) , 9,9-dimetil-4,5- bis (difenilfosfino) xanteno (36 mg, 0,06 mmol, 0,02 eq) e tert-butóxido de sódio (453 mg, 4,7 mmol, 1,5 eq) foram misturados em dioxano anidro desgaseifiçado (7 mL) e 109 sujeitos a irradiação com micro-ondas a 100 °C durante 30 minutos. Por arrefecimento formou-se um precipitado que foi filtrado e lavado com dioxano frio (3 mL) , dando origem a 910 mg do composto do titulo (69%). XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,55 (s, 3 H) 5,23 (s, 2 H) 6,14 (s, 1 H) 7,29 -7,41 (m, 5 H) 7,81 - 7,94 (m, 1 H) 8,14 (d, J=10,86 Hz, 1 H) 8,25 (d, J=11,12 Hz, 1 H) 8,96 (s, 1 Η) 1 1,23 (s, 1 H) [M+H] calculado para C2iHi6FN504, 422; experimental, 422. 5-(4-Amino-2-fluorofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona (composto 5E) : 3-Benzil-5-(2-fluoro-4-nitrofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona (900 mg, 2,1 mmol), hidróxido de paládio (20% em carbono, 500 mg) e formato de amónio (500 mg, 7,93 mmol, 3,7 eq) foram agitados em dioxano (10 mL) a 90 °C durante 4 horas. A suspensão foi filtrada e o sólido refluiu em DMF (20 mL) durante 1 hora, depois foi filtrado. Repetiu-se este procedimento 3 vezes. Os filtrados foram combinados e evaporados, dando origem a 420 mg do composto do titulo na forma de um sólido branco (65%) . ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,56 (s. largo, 3 H) 5,38 (s, 1 H) 6,51 (s, 1 H) 6,54 (t, J=1,89 Hz, 1 H) 7,07 (t, J=8,46 Hz, 1 H) 8,17 (s, 1 H) [M+H] calculado para C14H12FN5O2, 302; experimental, 302. 5-(4-Amino-2-fluorofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona (composto 5F) : 5-(4-Amino-2- fluorofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, 8H)-diona (580 mg, 1,9 mmol, 1 eq) foi dissolvido numa mistura 1:1 de ácido acético e água (10 mL) a 0 °C. Adicionou-se nitrito de sódio (133 mg, 1,9 mmol, 1 eq) em água (200 pL) e a solução foi agitada durante 20 minutos. Adicionaram-se gota a gota iodeto de potássio (1,59 g, 9,6 110 mmol, 5 eq) e iodo (20 mg, cat. ) em água (4 mL) e a reação foi deixada aquecer para a TA, depois foi agitada durante a noite. A solução foi diluída com água (100 mL) e extraída para 10% metanol/DCM. Os orgânicos foram secos em sulfato de magnésio e evaporados e o óleo resultante foi triturado com metanol, dando origem ao composto do título na forma de um sólido cor de bronze que foi filtrado com 266 mg de rendimento (29%). [M+H] calculado para C14H10FIN4O2, 413; experimental, 413. (S) -3-((2,2-Dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (composto 5G): Hidreto de sódio (89 mg, 4,7 mmol, 5 eq) foi agitado em DMF anidro (1 mL) durante 10 minutos. Adicionou-se 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-6,8-dimetil- pirido [2,3-d] pirimidino-4, 7 (3.H, 8.H)-diona (400 mg, 0,94 mmol, 1 eq) em DMF anidro (400 pL) e a mistura foi agitada durante 10 minutos. Adicionou-se {R)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano (260 pL, 1,88 mmol, 2 eq) e a mistura foi sujeita a irradiação com micro-ondas a 150 °C durante 35 minutos. 0 solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por HPLC. TH RMN (400 MHz, MeOD; ) δ ppm 1,37 (S, 3 H) 1,47 (s, 3 H) 3,70 (S, 3 H) 3,85 (dd, J=8,97, 5,68 Hz, 1 H) 4,13 (dd, J=13,89, 7,07 Hz, 1 H) 4,20 (dd, J= 8, 72, 6,69 Hz, 1 H) 4,38 (dd, J=113,89 , 3,03 Hz, 1 H) 4,50 - 4,59 (m, 1 H) 5,81 (s, 1 H) 7,36 (t, J=8,2 Hz, 1 H) 7,62 - 7, 74 (m, 2 H) 8,49 (s, 1 H) . [M+H] calculado para C20H20FIN4O4, 52 7; experimental, 527. (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (Exemplo 5): Composto 5G (em bruto, -0,12 mmol) foi dissolvido em H20 (1 mL) e THF (1 mL) . Adicionou-se 1 N HC1 (1 mL) e a 111 solução foi agitada à TA durante 1 hora. Após evaporação in vácuo, o resíduo foi purificado por HPLC, dando origem ao composto do título (22 mg, 37%, dois passos). XH RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,34 (s, 3 H) 3,79 (dd, J=13,26, 8,72 Hz, 2 H) 3,93 - 4,00 (m, 2 H) 4,43 (dd, J=L3,01, 2,91 Hz, 2 H) 5,75 (s, 1 H) 7,30 (t, J=8,34 Hz, 1 H) 7,61 (dd, J=8,21, 1,89 Hz, 1 H) 7,65 (dd, J=10,23, 1,89 Hz, 1 H) 8,41 (s, 1 Η) [M+H] calculado para Ci7Hi6FIN404, 487; experimental, 487.
Exemplo 6: (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodo- fenilamino) -8-met ilpirido [2,3 —d] pirimidino-4, 7 (3H, 8ff) -diona
O composto do título foi preparado de acordo com o procedimento esboçado na síntese do Exemplo 5, utilizando o material de partida (S)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-l,3-dioxolano para a alquilação do composto 5F. ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,65 (s, 3 H) 3,75 - 3,85 (m, 2 H) 3,90 -4,02 (m, 2 H) 4,43 (dd, J=13,14, 2,78 Hz, 2 H) 5,75 (s, 1 H) 7,30 (t, J=8,3 4 Hz, 1 H) 7,61 (dd, J=8,59, 1,52 Hz, 1 H) 7,65 (dd, J= 9,85, 1, 77 Hz, 1 H) 8,41 (s, 1 H) [M+H] calculado para C17H16FIN4O4, 487; experimental, 487.
Exemplo 7: (S)-6-Cloro-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(2- fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3Hr8H)-diona 112
(S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (composto 5G) (60 mg, 0,1 mmol, 1 eq) e N-clorossuccinimida (15 mg, 0,1 mmol, 1 eq) foram agitados em DMF (2 mL) à TA durante 1 hora. O produto foi purificado por HPLC, dando origem a 85 mg de um óleo amarelo claro. O óleo foi recolhido em H2O (2 mL) e THF (2 mL) . Adicionou-se 1 N HC1 (1 mL) e a solução foi agitada à TA durante 2 horas. A solução foi neutralizada com trietilamina e foi purificada por HPLC, dando origem a 6 mg do composto do titulo. ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,33 (s, 3 H) 3,77 (dd, J=13,26, 8,72 Hz, 2 H) 3,92 - 4,00 (m, 2 H) 4,45 (dd, J=13,01, 2,91 Hz, 2 H) 7,26 (t, J=8,3 4 Hz, 1 H) 7,55 (dd, J=8,21, 1,89 Hz, 1 H) 7,65 (dd, J=10,23, 1, 89 Hz, 1 H) 8,41 (s, 1 Η) [M+H] calculado para C17H15CIFIN4O4, 521; experimental, 521.
Exemplo 8: (P)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodo- fenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona 113
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Exesraplo $ 3- (4-Metoxibenzil) -6- (metilamino) piriniidin-4 (3H) -ona (composto 8A) : 6-(Metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (100 g, 800 mmol, 1 eq) , cloreto de p-metoxibenzilo (124,8 g, 800 mmol, 1 eq) , iodeto de potássio (13,3 g, 80 inmol, 0,1 eq) e carbonato de césio (260 g, 800 mmol, 1 eq) foram agitados à TA em DMF anidro (1 L) durante 8 horas. O DMF foi removido in vacuo e o resíduo foi agitado durante a noite em 20% metanol/DCM. O sólido foi removido por filtração e foi lavado com 20% metanol/ DCM. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo resultante foi recolhido em DCM e depois foi lavado com água. A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio e foi evaporada, dando origem a 102 g do composto do título (59%) . ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,63 (d, J=4,29 Hz, 3 H) 3,72 (s, 3 H) 4,87 (s, 2 H) 6,88 (d, J=8,84 Hz, 2 H) 7,25 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 8,22 (s, 1 H) . [M+H] calculado para Ci3H15N302, 246; experimental, 246. 114 5-Hidroxi-3-(4-metoxibenzil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7 (3Jí, 8Jí) -diona (composto 8B) : 3- (4-Metoxi- benzil)-6-(metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (14,8 g, 60,2 mmol, 1 eq, composto 8A) e metilmalonato de dietilo (61,6 mL, 361 mmol, 6 eq) foram misturados em éter de fenilo (25 mL) e aquecidos a 240 °C durante 2 dias. A solução foi deixada atingir a TA e permaneceu em repouso durante a noite. O precipitado cor de bronze que se formou foi recolhido e lavado com éter, dando origem a 15,2 g do composto do titulo na forma de um sólido cor de bronze (78%). XRMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,89 (s, 3 H) 3,55 (s, 3 H) 3,74 (s, 3 H) 5,14 (s, 2 H) 6,93 (d, J= 8,59 Hz, 2 H) 7,37 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 8,89 (s, 1 H) 11,82 (s, 1 H) . %) . [M+H] calculado para C17H17N3O4, 328; experimental, 328. 5-Cloro-3-(4-metoxibenzil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (composto 8C) : 5-Hidroxi-3-(4-metoxibenzil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (10 g, 30,6 mmol, composto 8B) foi suspenso em oxicloreto de fósforo (28 mL, 306 mmol) e foi aquecido a 80 °C durante 5 horas. A solução foi evaporada in vacuo e o resíduo foi recolhido em DCM e lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio até ser observado pH neutro. A camada orgânica foi seca em sulfato de magnésio e evaporada até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, utilizando !% metanol em DCM como eluente, dando origem a 9,28 g do composto do título (89%). [M+H] calculado para C17H16CIN3O3, 346; experimental, 346. 5-Cloro-6,8-dimetilpirido[|2,3-d]pirimidino-4,7(3Η,8H) -diona (composto 8D) : 5-Cloro-3-(4-metoxibenzil)-6,8- 115 dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, QH)-diona (8,75 g, 23,9 mmol, composto 8C) foi dissolvido em ácido trifluoroacético (15 mL) e sujeito a irradiação com micro-ondas a 150 °C durante 1 hora. O TFA foi evaporado in vacuo e o resíduo foi submetido a destilação azeotrópica com tolueno (2 x 20 mL) e depois DCM (2 x 20 mL) , dando origem a 9,24 g do composto do título na forma de um material em bruto, que foi utilizado sem purificação adicional. [M+H] calculado para C9HgClN302, 226; experimental, 226. (R)-5-Cloro-3-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3Η, 8H) -diona (composto 8E): 5-Cloro-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona (8,3 g, 36,8 mmol, 1 eq, composto 8D) , carbonato de césio (47,9 g, 147,5 mmol, 4 eq) e iodeto de potássio (30 mg, cat. ) foram agitados em DMF anidro (180 mL, 0,4 M) contendo crivos moleculares de 4 Ã (2,49 g) sob N2. Passados 15 minutos adicionou-se (S)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano (25,1 mL, 184 mmol, 5 eq) e a mistura foi agitada a 120 °C durante 12 horas. Adicionou-se DCM (150 mL) e a camada orgânica foi lavada com água (150 mL), foi seca em sulfato de magnésio e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, utilizando 0-70% EtOAc/Hexano como eluente, dando origem a 4,8 g de produto. [M+H] calculado para C15H18CIN3O4, 340; experimental, 340. (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3Η, 8H) -diona (Exemplo 8): (F)-5-Cloro-3-((2,2-dimetil-l, 3-dioxolan-4- il)metil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7{3H,8H)-diona (9,2 g, 27,1 mmol, 1 eq, composto 8E) , 2-fluoro-4-iodoanilina (12,9 g, 54,2 mmol, 2 eq) , tris(dibenzilideno-acetona) dipaládio (0) (1,99 g, 2,17 mmol, 0,08 eq) , 9,9- 116
Dimetil-4,5-bis(difenilfosfino)xanteno (1,25 g, 2,17 mmol, 0,08 eq) e tert-butóxido de sódio (7,81 g, 81,4 inmol, 3 eq) foram aquecidos em 1,4-dioxano anidro desgaseifiçado (80 mL) a 100 °C durante 1 hora. Por arrefecimento, a solução foi filtrada e o sólido foi lavado com DCM. O filtrado foi evaporado in vacuo e o resíduo (8F em bruto) foi recolhido em H2O (20 mL) e THF (20 mL). Adicionou-se 1 N HC1 (15 mL) e a solução foi aquecida a 70 °C durante 30 minutos. Por arrefecimento precipitou um sólido quase branco que foi recolhido por filtração, lavado com água e seco. O sólido foi purificado por HPLC, dando origem a 4,2 g do composto do título (31%) na forma de um sólido branco. XH RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 1, 63 (s, 3 H) 3,38 (t, 7=6,06 Hz, 1 H) 3,41 - 3,51 (m, 1 H) 3,61 (s, 3 H) 3, 62 - 3,68 (m, 1 H) 3,75 (s. largo, 1 H) 4, 81 (t, 7=5,5 6 Hz, 1 H) 5,11 (d, J=5,31 Hz, 1 H) 6, 60 (t, J= =8,72 Hz, 1 H) 7,45 (d, 7=9,60
Hz, 1 H) 7,66 (d, <7=10,61 Hz, 1 H) 8,48 (s, 1 H) 10,16 (s, 1 Η) . [M+H] calculado para Ci8H18FIN404, 501; experimental, 501.
Exemplo 9: (S)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di- hidroxipropil)-6,8-dimetilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona 117
3-Benzil-6- (metilamino) pirimidin-4 (3H) -ona (composto 5A) : 6-(Metilamino)pirimidin-4(3H)-ona (composto 1B) (3 g, 24 mmol, 1 eq), brometo de benzilo (5,7 mL, 48 mmol, 2 eq) e carbonato de potássio (6,96 g, 50,4 mmol, 2,1 eq) foram agitados em etanol (30 mL) à TA durante a noite. O solvente foi removido in vacuo e o residuo foi purificado por cromatografia em sílica, dando origem a 2,25 g do composto do título (43%). XH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,64 (d, J=4,29 Hz, 3 H) 4,92 - 5,01 (m, 2 H) 6,96 (q, J=4,63 Hz, 1 H) 7,22 - 7, 30 (m, 3 H) 7, 30 - 7,37 (m, 2 H) 8,24 (s, 1 H) . [M+H] calculado para Ci2H13N30, 216; experimental, 216. 3-Benzil-5-hidroxi-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3Hr8H)-diona (composto 9B) : 3-Benzil-6-(metilamino) pirimidin-4(3H)-ona (composto 5A) (10 g, 46,5 mmol, 1 eq) e met ilmalonato de dietilo (16 mL, 93 mmol, 2 eq) foram 118 aquecidos em éter de fenilo (20 mL, 127 mmol) a 240 °C durante 3 horas. A solução foi arrefecida e adicionou-se éter de dietilo (100 mL). Formou-se um precipitado que foi filtrado e lavado com éter, dando origem a 10,5 g do composto do titulo na forma de um sólido cor de bronze (76%). [M+H] calculado para C16H15N3O3, 298; experimental, 298 . 3-Benzil-5-cloro-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona (composto 9C) : 3-Benzil-5-hidroxi-6,8- dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona (5,5 g, 18,5 mmol) foi dissolvido em P0C13 em excesso (50 mL) e aquecido no refluxo durante 1 hora. O POCI3 foi removido in vacuo e o resíduo foi dissolvido em DCM, depois foi rapidamente lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio até ser observado pH neutro. A camada orgânica foi seca em MgS04 e evaporada até à secura, dando origem a 7,3 g do composto do título na forma de um sólido castanho avermelhado impuro. [M+H] calculado para Ci6Hi4C1N302, 315; experimental, 315. 3-Benzil-5-(2-fluoro-4-nitrofenilamino)-6,8-dimetilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (composto 9D): 3-Benzil-5-cloro-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (7 g, 22,2 mmol, 1 eq) , 2-fluoro-4-nitroanilina (53,8 mg, 24,4 mmol, 1,1 eq) , tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0) (407 mg, 0,44 mmol, 0,02 eq) , 9,9-dimetil-4,5-bis(difenil- fosfino)xanteno (257 mg, 0,44 mmol, 0,02 eq) e tert-butóxido de sódio (3,2 g, 0,33 mmol, 1,5 eq) foram misturados em dioxano anidro desgaseifiçado (50 mL) e sujeitos a irradiação com micro-ondas a 115 °C durante 40 minutos. Por arrefecimento adicionou-se éter de dietilo (50 mL). Formou-se um precipitado que foi filtrado e lavado com 119 éter, dando origem a 4,1 g do composto do título (42%). [M+H] calculado para C22H18FN5O4, 436; experimental, 436. 5-(4-Amino-2-fluorofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona (composto 9E) : 3-Benzil-5-(2-fluoro-4-nitrofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona (4,1 mg, 9,42 mmol), hidróxido de paládio (20% em carbono, 4 g) e formato de amónio (4 g, 63,4 mmol) foram agitados em dioxano (200 mL) a 90 °C durante 4 horas num reator de pressão selado. A suspensão foi filtrada e o sólido refluiu em DMF (20 mL) durante 1 hora, depois foi filtrado. Repetiu-se este procedimento 3 vezes. Os filtrados foram combinados e evaporados. O resíduo foi dissolvido em DMF (50 mL) e adicionou-se agente de remoção de paládio Quadrapure (20 g) e a mistura foi agitada a 60 °C durante a noite. A mistura foi filtrada e evaporada, adicionou-se éter e formou-se um precipitado. Este sólido foi filtrado, dando origem a 2 g do composto do título (67%) . [M+H] calculado para C15H14FN5O2, 316; experimental, 316. 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3—d] pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona (composto 9F) : 5-(4-Amino-2- fluorofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (1,15 g, 3,65 mmol, 1 eq) foi dissolvido numa mistura 1:1 de ácido acético e água (50 mL) a 0°C. Adicionou-se lentamente HC1 concentrado (1,6 mL) em água (2 mL) e a mistura foi agitada durante 20 minutos. Adicionou-se nitrito de sódio (252 mg, 3,65 mmol, 1 eq) em água (800 pL) e a solução foi agitada durante 20 minutos. Adicionou-se brometo de cobre(I) (2,62 g, 18,2 mmol, 5 eq) e deixou- se a reação atingir a TA, depois foi agitada durante 1 hora a 90 °C. Após arrefecimento, a mistura foi evaporada in 120 vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, eluindo com 10% metanol em DCM, dando origem a 754 mg do composto do título (54%). [M+H] calculado para
Ci5Hi2BrFN4C>2, 380; experimental, 380. (S)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (Exemplo 9): Hidreto de sódio (25 mg, 1,32 mmol, 5 eq) foi agitado em DMF anidro (200 pL) durante 10 minutos. Adicionou-se 5-(4-amino-2-fluorofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona (250 mg, 0,66 mmol, 1 eq) em DMF anidro (100 pL) e a mistura foi agitada durante 10 minutos. Adicionou-se (R)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano (180 pL, 1,32 mmol, 5 eq) e a mistura foi sujeita a irradiação com micro-ondas a 150°C durante 45 minutos. O solvente foi removido in vacuo. O resíduo (composto em bruto 9G) foi recolhido em H20 (1 mL) e THF (1 mL). Adicionou-se 1 N HC1 (1 mL) e a solução foi agitada à TA durante 1 hora. Após evaporação in vacuo, o resíduo foi purificado por HPLC, dando origem a 23 mg do composto do titulo (7%) . XH RMN (400 MHz, CDC13) δ ppm 1,74 (s, 3 H) 3,52 - 3,66 (m, 2 H) 3, 71 (s, 3 H) 3,82 (dd, J=13,64, 8,34 Hz, 1 H ) 3,94- 4,00 (m, 1 H) 4,28 (dd, J=13,52, 3,16 Hz, 1 H) 6,74 (t, J=Q, 7 2 Hz, 1 H) 7,16 (d, J=9, 09 Hz, 1 H) 7, 28 (dd, J= 10,23, 2,15 Hz, 1 H) 8,30 (s, 1 H) 10,13 (s, 1 H) [M+H] calculado para Ci8Hi8BrFN404, 454; experimental, 454.
Exemplo 10: (R)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di- hidroxipropil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona 121
0 composto do título foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para a síntese do Exemplo 9 por reação de (S)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano com o composto 9F, seguido de hidrólise com 1 N HC1. ΧΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 1,71 (s, 3 H) 3,44 - 3,51 (m, 1 H) 3,59 (d, J=5,31 Hz, 2 H) 3,74 (s, 3 H) 3,76 - 3,82 (m, 1 H) 3,91 - 4,01 (m, 1 H) 4,41 (dd, J=L3,64, 3,28 Hz, 1 H) 6,77 (t, J= 8,59 Hz, 1 H) 7,26 (d, J=9, 09 Hz, 1 H) 7,39 (d, J= 2,02 Hz, 1 H) 8,38 (s, 1 Η) [M+H] calculado para
CigHigBrFN404, 454; experimental, 454.
Exemplo 11: 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2-hidroxi- etil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
0 composto do título foi preparado de acordo com o procedimento utilizado para o Exemplo 9 por reação de 2-bromoetanol com o composto 9F. ΧΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 1,70 (s, 3 H) 3,74 (s, 3 H) 3,82 (t, J=5,05 Hz, 2 H) 4,13 (t, J=5,05 Hz, 2 H) 4,53 (s, 1 H) 6,78 (t, J=8, 72 Hz, 1 H) 7,26 (dd, J=8,21, 1,39 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=10,48, 2,15 Hz, 1 H) 10,27 (s, 1 H) [M+H] calculado para Ci7Hi6BrFN403, 424; experimental, 424. 122
Exemplo 12: 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido [2,3-d]pirimidino-4,Ί(3H,8H)-diona
0 composto do título foi sintetizado a partir do composto 9E (1,74 g, 5,5 mmol), que foi primeiramente dissolvido numa mistura 1:1 de ácido acético e água (10 mL) a 0 °C. Adicionou-se lentamente HC1 concentrado (1,2 mL) em água (2 mL) e a mistura foi agitada durante 20 minutos. Adicionou-se nitrito de sódio (381 mg, 5,5 mmol, 1 eq) em água (800 pL) e a solução foi agitada durante 20 minutos. Adicionaram-se iodeto de potássio (4,58 g, 27,6 mmol, 5 eq) e iodo (20 mg, cat. ) e deixou-se a reação atingir a TA, depois foi agitada durante 1 hora a 90 °C. Após arrefecimento, a mistura foi evaporada in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica, eluindo com 10% metanol em DCM, dando origem a 1,21 g do composto do título (51%) . [M+H] calculado para C15H12FIN4O2, 427; experimental, 427.
Exemplo 13: (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4- iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona
Hidreto de sódio (67 mg, 3,5 mmol, 5 eq) foi agitado em DMF anidro (500 pL) durante 10 minutos. Adicionou-se 5-(2- 123
fluoro-4-iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H,QH)-diona (300 mg, 0,70 mmol, 1 eq, Exemplo 12) em DMF anidro (300 pL) e a mistura foi agitada durante 10 minutos. Adicionou-se (R)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano (180 pL, 1,32 mmol, 5 eq) e a mistura foi sujeita a irradiação com micro-ondas a 135 °C durante 1 hora. O solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi recolhido em H20 (1 mL) e THF (1 mL) . Adicionou-se 1 N HC1 (1 mL) e a solução foi agitada à TA durante 1 hora. Após evaporação in vacuo, o resíduo foi purificado por HPLC, dando origem a 88 mg (25%) do composto do título. XH RMN (40 0 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,64 (s, 3 H) 2,11 (s, 3 H) 3,18 (d, J=5,31 Hz , 1 H) 3, 32 - 3,42 (m r 1 H ) 3 ,63 - 3,70 (m, 1 H) 3, 70 - 3, 82 (m , i H) 4,24 - 4, 38 (m, 1 H) 4,78 (t, J=5 f 56 Hz, 1 H) 5, 09 (d, J= 5,56 H z, 1 H) 6,62 (t, J=8,72 Hz, 1 H) 7 ,45 (dd, J=1 , 71, , 2,15 Hz, 1 • H) 7, 66 (dd ., J=10,61, 2,0 2 Hz, 1 H) 8, 48 (s, 1 H) 10,16 (s , 1 H) [M+H] calculado para Ci8H18FIN404, 501; experimental, 501.
Exemplo 14: 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxi- etil)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
O composto do título foi preparado de acordo com o procedimento esboçado no composto 9G, a partir da reação de 2-bromoetanol com o exemplo 12, seguido de purificação por HPLC. XH RMN (400 MHz , MeOD) δ ppm 1,71 (s, 3 H) 3, 09 - 3, 16 (m, 1 H) 3,44 - 3,51 (m , 1 H) 3,74 (s, 3 H) 3, 78 - 3, 86 (m, 2 H) 4,13 (t, J=4,93 Hz, 2 H) 6,62 (t, J=8,46 Hz, 1 H) 7, 43 (dd, J= 8,34, 1,01 Hz , 1H) 7,52 (dd, J=10,23, 1,89 124
Hz, 1 Η) 8,38 (s, 1 Η). [M+H] calculado para Ci7H16FIN403, 471; experimental, 471.
Exemplo 15: 5-(2-Fluorofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-6, 8- dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
0 composto do título foi isolado na forma de um produto secundário sem iodo a partir da mistura reacional do exemplo 14. ΧΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 1,68 (s, 3 H) 3,45 - 3,51 (m, 1 H) 3,74 (s, 3 H) 3, 78 - 3,89 (m, 2 H) 4,13 (t, J=5, 18 Hz, 2 H) 6,81 - 6,95 (m, 1 H) 6, 96 - 7, 20 (m, 3 H) 8,38 (s, 1 H) 10,32 (s, 1 H) [M+H] calculado para
Ci7H17FN403, 345; experimental, 345
Exemplo 16: (.R)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2- fluorofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7 (3H, 8H) -diona
(-R) -3- (2,3-Di-hidroxipropil) -5- (2-fluoro-4-iodofenilamino) -6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona (200 mg, 0,4 mmol, Exemplo 8), trimetilsililacetileno (66 yL, 0,6 mmol), trietilamina (84 pL, 0,6 mmol), iodeto de cobre (14 mg, cat.) e diclorobis(trifenilfosfina) paládio(II) (14 mg/· 0,02 mmol) foram misturados em THF (2 mL) . A mistura 125 foi sujeita a irradiação com micro-ondas a 120 °C durante 20 minutos. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi dissolvido em metanol. Adicionou-se carbonato de potássio (50 mg) e a solução foi agitada à TA durante 1 hora. Após filtração e evaporação, o resíduo foi purificado por HPLC, dando origem a 119 mg do composto do título. ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ ppm 1,79 (s, 3 H) 3,11 (s, 1 H) 3,54 - 3,66 (m, 3 H) 3,82 - 3,90 (m, 1 H) 3,94 - 4,02 (m, 1 H) 4,30 (dd, J=114,15, 3,79 Hz, 1 H) 6,67 (t, J=8,46 Hz, 1 H) 7,19 (dd, J=8,21, 0,88 Hz, 1 H) 7,21 - 7,25 (m, 1 H) 8,27 (s, 1 Η) [M+H] calculado para C20H19FN4O4, 399; experimental, 399 .
Exemplo 17: 6-Fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2- hidroxietil)-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4,Ί (3H, QH) - diona
t?B H41O Exej4.pl ci 1:7 A uma mistura de 3-benzil-5-(2-fluoro-4-nitrofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona (42 mg, 0,1 mmol, 1 eq, composto 5D) em acetonitrilo (1 mL) adicionou-se Selectfluor (35 mg, 0,1 mmol, 1 eq). A mistura reacional foi irradiada com micro-ondas a 82 °C durante 10 minutos. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia "flash" com 1:9 MeOH:DCM, dando origem ao 126 produto desejado 17A (10 mg, 23% de rendimento) . [M+H] calculado para C21H15F2N5O4, 440; experimental, 440. A uma mistura de 3-benzil-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-nitrofenil-amino)-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona 17A (1,1 g, 2,5 mmol, 1 eq) e hidróxido de paládio em carbono (20% por peso, 1,29 g) em 1,4-dioxano (30 mL) , num tubo selado, adicionou-se formato de amónio (1,19 g, 18,8 mmol, 7,5 eq). A mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 1 hora. Após arrefecimento, o sólido foi removido por filtração e foi aquecido em DMF a 90 °C durante 30 minutos, para libertar mais produto. Repetiu-se este processo até o DMF não conter mais produto. Depois adicionou-se QuadraPure TU (1 g) à solução combinada contendo o produto e a mistura foi aquecida a 60 °C durante 3 horas. Após arrefecimento, o sólido foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo, dando origem ao produto desejado 17B (541 mg, 68% de rendimento). [M+H] calculado para C14H11F2N5O2, 320; experimental, 320. A uma mistura de 5-(4-amino-2-fluorofenilamino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona 17B (529 mg, 1,66 mmol, 1 eq) em ácido acético (5 mL) e água (5 mL) adicionou-se uma solução de ácido clorídrico concentrado (0,7 mL) em água (0,9 mL) a 0°C. Depois adicionou-se nitrito de sódio (116 mg, 1,66 mmol, 1 eq) em água gota a gota e a mistura reacional foi agitada durante 30 minutos a 0 °C. Adicionaram-se rapidamente iodeto de potássio (1,4 g, 8,3 mmol, 5 eq) e iodo (17 mg) em água e a reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente, seguido de aquecimento a 70°C durante 30 minutos. A mistura foi depois extraída com 5%:5%:90% Me0H:DCM:H20 e a camada orgânica foi concentrada in vacuo. O resíduo foi triturado em metanol e 127 foi purificado por cromatografia "flash" com 5:95 MeOH:DCM, dando origem ao produto desejado 17C (186 mg, 26% de rendimento). [M+H] calculado para C14H9F2IN4O2, 431; experimental, 431. A uma mistura de 6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona 17C (60 mg, 0,14 mmol, 1 eq) e iodeto de potássio (39 mg) em DMF (3 mL) adicionou-se carbonato de césio (135 mg, 0,42 mmol, 3 eq) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois adicionou-se 2-bromoetanol (0,1 mL, 1,4 mmol, 10 eq) e a mistura reacional foi irradiada com micro-ondas a 140 °C durante 20 minutos. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi purificado por LC/MS preparativa (30-55% CH3CN em H20), dando origem a 6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-8-metil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (exemplo 17) na forma de um sólido quase branco (25 mg, 38% de rendimento). 1H RMN (400 MHz, DMS0-d6) δ ppm 3,59 (s, 3 H) 3,67 (dd, J=2,53, 1,26 Hz, 2 H) 4,05 (t, J=5,05 Hz, 2 H) 4,98 (s. largo, 1 H) 6,99 (td, J=8,65, 5, 43 Hz, 1 H) 7,53 (dd, J=8,34, 0, 76 Hz, 1 H) 7,68 (dd, J=10,36, 1, 77 Hz, 1 H) 8,55 (s, 1 H) 10,22 (d, J=2,27 Hz, 1 H) . [M+H] calculado para C16H13F2IN4O3, 475; experimental, 475.
Exemplo 18: (.R)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-f luoro-5-(2- fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona
128
A uma solução de (F)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7 (3H, 8H) -diona (exemplo 6) (1 g, 2,06 mmol, 1 eq) em DMF (19 mL) adicionou-se gota a gota uma mistura de Selectfluor (801 mg, 2,26 mmol, 1,1 eq) em acetonitrilo (9 mL) e DMF (5 mL) à temperatura ambiente com agitação sob azoto. A mistura reacional foi agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente e foi filtrada. O filtrado foi purificado por LC/MS preparativa (30-55% CH3CN em H20) , dando origem a (.R)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-6-f luoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,QH)-diona (exemplo 18) na forma de um sólido quase branco. O material de partida recuperado foi sujeito às mesmas condições reacionais, produzindo uma segunda colheita de produto. O rendimento total do produto foi 347 mg (33% de rendimento) . ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-dg) δ ppm 3, 36 - 3 ,40 (m , 1 H) 3,43 - 3,50 (m, 1 H) 3,58 (s, 3 H) 3, 61 - 3, 72 (m, 1 H ) 3 ,72 - 3, 82 (m, . 1 H) 4, 27 - 4,37 (m, 1 H) 4, . 78 - 4 ,87 (m, 1 H) 5 ,14 (d, J= 5 ,8: 1 H z, 1 H) 6 ,93 - 7, 03 (m, 1 H ) 7 , 53 (d, J= 8, 84 Hz, 1 H) 7, 65 - 7,74 (m, 1 H) 8, 52 (s, 1 H) 10,2 5 (d, J-- =1, 01 Hz, 1 h; ) . [M+H] calculado para C17H15F2IN4O4, 505; experimental, 505.
Exemplo 19: (Sj-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2- fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona
A uma solução de (Sj-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino- 129 4, 7 (3Η, 8H) -diona (exemplo 5) (1,25 g, 2,58 mmol, 1 eq) em DMF (26 mL) adicionou-se uma mistura de Selectfluor (1,187 g, 3,35 mmol, 1,3 eq) em acetonitrilo (26 mL) . A mistura reacional foi irradiada com micro-ondas a 82 °C durante 10 minutos e foi filtrada. O filtrado foi purificado por LC/MS preparativa (30-55% CH3CN em H20) , dando origem a (S)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,QH)-diona (exemplo 19) na forma de um sólido quase branco (331 mg, 25% de rendimento). RMN (400 MHz, DMS0-d6) δ ppm 3, 36 - 3,42 (m, 1 H) 3,42 - 3,51 (m, 1 H) 3,59 (s, 3 H) 3, 63 - 3, 72 (m, 1 H) 3,73 - 3,81 (m, 1 H) 4,32 (dd, J=13,14, 3,03 Hz, 1 H) 4,79 (s. largo, 1 H) 5,10 (s. largo, 1 H) 6 ,98 (td, J= 8,46, 5,31 Hz, 1 H) 7,52 (dd, J=8,46, 1,14 Hz, 1 H) 7,68 (dd, J=10,36, 1,77 Hz, 1 H) 8,51 (s, 1 H) 10,24 (d, J= =2,27 Hz, 1 H) . [M+H] calculado para C17H15F2IN4O4, 505; experimental, 505.
Exemplo 20: (R)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di- hidroxipropil )-6-fluoro-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona
130 A uma mistura de 5-(4-amino-2-fluorofenilamino)-8-metil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona 5E (5 g, 16,6 mmol, 1 eq) em acetonitrilo (125 mL) e água (84 mL) adicionou-se uma solução de 1 N ácido bromidrico (35 mL) a 0°C. Depois adicionou-se nitrito de sódio (2,29 g, 33,2 mmol, 2 eq) em água (25 mL) gota a gota e a mistura reacional foi agitada durante 30 minutos a 0 °C. Adicionou-se brometo de potássio (7,14 g, 50 mmol, 3 eq) em água (16 mL) e a reação foi aquecida a 90 °C durante 1 hora. A mistura foi depois concentrada in vacuo. O resíduo foi filtrado, dando origem ao produto sólido desejado 20A que foi utilizado no passo seguinte sem purificação adicional. [M+H] calculado para Ci4HioBrFN402, 365; experimental, 365. A uma mistura de (R)-5-(4-bromo-2-fluorofenilamino)-3-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil)-8-metilpirido[2,3-d] pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona 20A (1,59 g, 4,37 mmol, 1 eq) e iodeto de potássio (50 mg) em DMF (10 mL) adicionou-se carbonato de césio (2,134 g, 6,55 mmol, 1,5 eq). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois adicionou-se (S)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano (1,8 mL, 13,1 mmol, 3 eq) e a mistura reacional foi irradiada com micro-ondas a 140 °C durante 1 hora. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi purificado por LC/MS preparativa (40-90% CH3CN em H20) . 0 resíduo (20B) foi tratado com 2:1 THF:HC1 (1 N) à temperatura ambiente durante a noite, dando origem ao produto desejado 20C. [M+H] calculado para Ci7H16BrFN404, 439; experimental, 439. O exemplo 20 foi preparado na forma de um sólido quase branco utilizando um procedimento análogo ao descrito em conexão com a síntese do Exemplo 19, com a exceção de se 131 ter utilizado (.R)-5-( 4-bromo-2-f luorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H) -diona 20C em vez de (S)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3ff, 8H) -diona. RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,57 (d, 2 H) 3,68 (s, 3 H) 3,76 (dd, J=13, 52, 8,97 Hz, 1 H) 3,89 -3,98 (m, 1 H) 4,38 (dd, J=13,64, 3,03 Hz, 1 H) 7,09 (td, J=8,65, 4,67 Hz, 1 H) 7,28 (dd, J=L0,23, 1,64 Hz, 1 H) 7,36 (dd, J=10,36, 2,27 Hz, 1 H) 8,36 (s, 1 Η) . [M+H] calculado para Ci7Hi5BrF2N404, 457; experimental, 457.
Exemplo 21: (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2- fluorofenilamino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona
TBAF THF
A uma mistura de (S)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 {3H, QH) -diona (exemplo 19) (42 mg, 0,08 mmol, 1 eq) , trifenilfosfina (1 mg, 0,003 mmol, 0,04 eq) , trietilamina (0,017 mL, 0,12 mmol, 1,5 eq) e diclorobis(trifenilfosfina) paládio(II) (3 mg, 0, 004 mmol, 0,05 eq) em THF (3 mL) adicionou-se etiniltrimetilsilano (0,018 mL, 0,12 mmol, 1,5 132 eq). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Depois adicionou-se uma quantidade catalítica de iodeto de cobre(I) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia "flash", com 1:9 MeOH:DCM, dando origem ao produto desejado 21A. [M+H] calculado para C22H24F2N4O4S1, 475; experimental, 475. A uma mistura de (S)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-((trimetilsilil)etinil)fenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona 21A em THF (3 mL) adicionou-se uma solução 1 M de TBAF (0,14 mL, 0,14 mmol, 1,75 eq) . A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia "flash", com 2:8 MeOH:DCM, dando origem ao produto desejado (S)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofenilamino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3— d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (exemplo 21) na forma de um sólido quase branco (10 mg, 30% de rendimento). ΧΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,54 (s, 1 H) 3,60 (d, <J=5, 0 5 Hz, 2 H) 3,72 (s, 3 H) 3,75 - 3 , 83 (m, 1 H) 3,93 - 4,00 (m, 1 H) 4, 41 (dd, J= 13,52, 2,91 Hz, 1 H) 7,11 (td, J=8,15, 5,68 Hz, 1 H) 7,21 - 7,29 (m, 2 H) 8,40 (s, 1 H) . [M+H] calculado para Ci9H16F2N404, 403; experimental, 403.
Exemplo 22: (R)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2- fluorofenilamino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona 133
0 exemplo 22 foi preparado na forma de um sólido quase branco utilizando um procedimento análogo ao descrito em conexão com exemplo 21, com a exceção de se ter utilizado (R)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenil-amino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona em vez de (S)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, SH) -diona. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3,37 - 3, 41 (m, 1 H) 3,43 - 3, 50 (m, 1 H) 3, 59 (s , 3 H) 3, 63 · 3, 72 (m, 1 H) 3, 73 - 3, 83 (m, 1 H) 4, 25 (s , 1 H) 4, 30 4, 38 (m, 1 H) 4, 84 (t , J =5, 56 H [z, 1 H) 5, 14 (d, J= 5, 56 Hz 1 H) 7, 08 - 7, 18 (m 1 H) 7, 29 (dd, J= 8,59, 1,26 Hz r 1 H 7, 43 (dd, J=ll ,49, 1, 64 Hz , 1 H) 8, 53 (s , 1 H) 10, 34 (d J= =2, 02 Hz, 1 H) . [M+H] calcu lado para C19 H16F2N404, r 403 experimental, 403.
Exemplo 23: (R)-N- (4-(3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-8- metil-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3-d]pirimidin-5-ilamino)-3-fluorofenil)metanossulfonamida
, J
es^COa Kl DíwtF
CHaSo^a piridina Η O Χ/Ί
€H3ON DIMF Sxeisplo Z:â 0 composto 23A foi preparado utilizando um procedimento análogo ao descrito em conexão com a síntese do composto 20B, com a exceção de se ter utilizado 5-(4-amino-2-fluoro-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί{3H, 8H)-diona (5E) em vez de 5-(4-bromo-2-fluorofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (20A). [M+H] calculado para C20H22FN5O4 416; experimental, 416.
Uma mistura de (R)-5-(4-amino-2-fluorofenilamino)-3-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-8-metilpirido[2,3-d] pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona 23A (77 mg, 0,19 mmol, 1 eq) e piridina (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,021 mL, 0,19 mmol, 1,45 eq) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por LC/MS 135 preparativa (30-55% CH3CN em H20) , dando origem ao produto desejado 23B (62 mg, 68% de rendimento). [M+H] calculado para C21H24FN5O6S, 494; experimental, 494. O composto 23C foi preparado utilizando um procedimento análogo ao descrito em conexão com a síntese do composto 20C, com a exceção de se ter utilizado (f?) —iV— (4-(3-( (2,2 — dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-8-meti1-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3-d]pirimidin-5-ilamino)-3-fluorofenil) metanossulf onamida (23B) em vez de (.R)-5-(4-bromo-2- fluorofenilamino)-3-((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metil)-8-metilpirido [2,3-d] pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona (20B) [M+H] calculado para Ci8H2oFN506S, 454; experimental, 454. (R)-N- (4-(3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-8-metil-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3-d]pirimidin-5-il-amino)-3-fluorofenil)metanossulfonamida (exemplo 23) foi preparado na forma de um sólido quase branco utilizando um procedimento análogo ao descrito em conexão com a síntese do exemplo 19, com a exceção de se ter utilizado (R)-N-(4-(3-(2,3-di-hidroxipropil)-8-meti1-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3-d]pirimidin-5-ilamino)-3-fluorofenil) metanossulfonamida (23C) em vez de (S)-3-(2,3-di- hidroxipropil )-5-(2—fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,QH)-diona. ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-de) δ ppm 3,04 (s, 3 H) 3,45 (d, J= 4,80 Hz, 1 H) 3,48 (d, J=4, 8 0 Hz, 1 H) 3,57 (s, 3 H) 3,60 - 3,71 (m, 1 H) 3,72 - 3,82 (m, 1 H) 4,32 (dd, J=13,01, 2,65 Hz, 1 H) 6,99 (dd, J=8, 59, 2,02 Hz, 1 H) 7,09 (dd, J=12,38, 2,27 Hz, 1 H) 7,22 (td, J=8, 97, 4, 55 Hz, 1 H) 8,51 (s, 1 H) 9,94 (s, 1 H) 10,20 (d, J=2,53 Hz, 1 H) . [M+H] calculado para C18H19F2N5O6S, 472; experimental, 472. 136
Exemplo 24: 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il) -(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
24A
E>iei«pIo 34 A uma mistura de 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8 metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona 5F (41 mg, 0,1 mmol, 1 eq) e uma quantidade catalítica de iodeto de potássio em DMF (1 mL) adicionou-se carbonato de potássio (21 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. Depois adicionou-se l-cloro-2,4-dinitrobenzeno (22 mg, 0,11 mmol, 1,1 eq) e a mistura reacional foi irradiada com micro-ondas a 80°C durante 30 minutos e depois a 100 °C durante 30 minutos. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi purificado por LC/MS preparativa (50-75% CH3CN em H20), dando origem a 3-(2,4-dinitrofenil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona composto 24A na forma de um sólido amarelo (18 mg, 31 % de rendimento). ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ ppm 3,78 (s, 3 H) 6,09 (s, 1 H) 7,17 - 7,24 (m, 1 H) 7,52 (d, J=8,34 Hz, 2 H) 7,72 - 7,80 (m, 1 H) 8,23 (s, 1 H) 8,75 (dd, J=8,46, 2,65 Hz, 1 H) 9,12 137 (d, J= 2,53 Hz, 1 H) 9,83 (s, 1 Η) . [M+H] calculado para C2oHi2FIN606, 579; experimental, 579. A uma mistura de 3-(2,4-dinitrofenil)-5-(2-fluoro-4-iodo-fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona 24A (18 mg, 0,03 mmol, 1 eq) em DMF (0,3 mL) adicionou-se 2- aminopropano-l, 3-diol (29 mg, 0,3 mmol, 10 eq) . A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 5 horas. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi purificado por LC/MS preparativa (30-55% CH3CN em H20), dando origem a 3- (1,3-di-hidroxipropan-2-il)-5-(2-fluoro-4- iodofenilamino)-8-metil-pirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί(3H, 8H)-diona Exemplo 24 na forma de um sólido quase branco (10 mg, 66% de rendimento). XH RMN (400 MHz, MeOD) δ ppm 3,65 (s, 3 H) 3,87 - 3, 95 (m, 2 H) 4,04 (dd, J=L1,87, 7, 07 Hz, 2 H) 4, 88 - 4, 90 (m, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 7,29 (t, J=8,34 Hz, 1 H) 7,57 - 7,69 (m, 2 H) 8,50 (s, 1 H) . [M+H] calculado para C17H16FIN4O4, 487; experimental, 487.
Exemplo 25: 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-6-fluoro-5-(2- fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona
O exemplo 24 (65 mg, 0,13 mmol) foi agitado em DMF (0,25 mL) a 80 °C. Adicionou-se gota a gota uma solução em pasta de Selectfluor® (52 mg, 0,15 mmol) em DMF/CH3CN (1:2, 0,75 mL) e a reação foi agitada durante 10 minutos. Purificação por prep-HPLC deu origem a 20,1 mg (30%) do composto do 138 título na forma de um sólido quase branco. ΤΗ RMN (400 MHz,
MeOD-cL?) δ ppm 10,40 (s. largo, 1 H] 1 8,49 (s, 1 H) 7,42- 7,57 (m, 2 H) 6,96 (td, J=8, 72, 5,05 Hz, 1 H) 4,72 - 4,82 (m, 1 H) 4,03 (dd, J=12,00, 7,20 Hz, 2 H) 3,90 (dd, J=12,00, 4 ,80 Hz, 2 H) 3,72 (s, 3 H) . MS (ES) [m+H] calculado para C17H15F2IN4O4, 505; experimental 505.
Exemplo 26: 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxi- etoxi)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
3-(2-tert-Butoxietoxi)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3Η,8H)-diona (composto 26A) : 0 composto 5F (250 mg, 0,61 mmol) , carbonato de potássio (209 mg, 1,51 mmol) e l-cloro-2,4-dinitrobenzeno (307 mg, 1,5 mmol) foram agitados em DMA a 80 °C durante 1,5 horas. Adicionou-se O-(2-tert-butoxi-etil)- hidroxilamina à t.a. e a reação foi agitada durante 1 hora a 80 °C. Purificação por prep-HPLC deu origem a 43 mg (12%) do composto do título na forma de um sólido quase branco. MS (ES) [m+H] calculado para C20H22FIN4O4, 529; experimental 529.
5-(2-Fluoro-4-iodo-fenilamino)-3-(2-hidroxi-etoxi)-8-metil-3H, 8Jí-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7-diona (Exemplo 26): O composto 26A (43 mg, 0,081 mmol) foi dissolvido em TFA (0,8 mL) e foi agitado à t.a. durante 2 horas. Purificação por prep-HPLC deu origem a 10,8 mg (29 %) do composto do título na forma de um sólido quase branco. TH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,92 (s, 1 H) 7,80 (dd, J=10,ll, 2,02 Hz, 1 H) 139 7,62 (dd, J=8,59, 1, 26 Hz, 1 H) 7,36 (t, J=8,46 Hz, 1 H) 5,56 (s, 1 H) 4,99 (s. largo, 1 H) 4 ,29 - 4,38 (m, 2 H) 3,64 - 3,78 (m, 2 H) 3,50 (s, 3 H) 1 . MS (ES) [m+H] calculado para C16H14FIN4O4, 473; experimental 473.
Exemplo 27: (.R)-3-(2,3-Di-hidroxipropoxi)-5-(2-f luoro-4- iodofenilamino) -8-metilpirido [2,3-d] pirimidino-4, 7 (3H, 8ff) -diona
0 composto 5F (1,31 g, 3,17 mmol), carbonato de potássio (1,1 g, 7,92 mmol) e l-cloro-2,4-dinitronbenzeno (1,60 g, 7,92 mmol) foram agitados em DMA a 80 °C durante 2 horas. Adicionou-se (R)-O-((2,2-dimetil-l,3-dioxolan-4-il)metil) hidroxilamina (4,66 g, 31,7 mmol) à t.a. e a reação foi agitada durante 1 hora a 80 °C. Purificação por prep-HPLC deu origem a 210 mg (13%) do composto do titulo na forma de um sólido amarelo límpido (a desproteção ocorreu durante a concentração das frações da purificação contendo 0,5% de TFA) . XH RMN (400 MHz, DMSO- -d6) : δ ppm 10,18 (s, 1 H) 8,93 (s, 1 H) 7,81 (dd, J=10 ,11, 1,77 Hz, 1 H) 7,62 (dd, J=7,58, 1,01 Hz, 1 H) 7,37 (t, J= 8, 46 Hz, 1 H) 5,56 (s, 1 H) 4,39 (dd, J=10,74, 3,16 Hz, 1 H) 4,21 (dd, J=10,61, 7,33 Hz, 1 H) 3, 82 - 3, 88 (m, 1 H) 3,50 (s, 3 H) 3 ,42-3,46 (m, 2H). MS (ES) [m+H] calculado para Ci7Hi6FIN405 , 503; experimental 503.
Exemplo 28: (P)-3-(2,3-Di-hidroxipropoxi)-6-fluoro-5-(2- fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino- 140 4, 7 (3Η, 8Η) -diona 140 Ν
Ο exemplo 27 (110 mg, 0,22 mmol) foi agitado em DMF (0,5 mL) à t.a. Adicionou-se gota a gota uma solução em pasta de Selectfluor® (86 mg, 0,24 mmol) em DMF/CH3CN (1:2, 1,5 mL)
à t.a. e a reação foi agitada durante 15 minutos. Purificação por prep-HPLC deu origem a 78 mg (34%) do composto do titulo na forma de um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) δ ppm 9,88 (d, J=l, 77 Hz, 1 H) 8,95 (s, 1 H) 7,71 (d, J=10,ll Hz, 1 H) 7,54 (d, J=8,34 Hz, 1 H) 7,00 (td, J= 8,65, 5,18 Hz, 1 H) 5,12 (s. largo, 1 H) 4,74 (s. largo, 1 H) 4,39 (dd, J=10,36, 2,78 Hz, 1 H) 4,20 (dd, J=10, 48, 7,20 Hz, 1 H) 3,81 - 3,87 (m, 1 H) 3,58 (s, 3 H) 3,38 - 3,47 (m, 2 H). MS (ES) [m+H] calculado para C17H15F2IN4O5, 521; experimental 521.
Exemplo 29: (R)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-6-cloro-3- (2,3-di-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona
N N 33 Η Η ΊΪ Exemplo 29
20C 0 composto 20C (60 mg, 0,136 mmol) foi dissolvido em 2 mL de DCM. Adicionou-se NCS (22 mg, 0,165 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. O exemplo 141
29 (35,3 mg, 54%) foi isolado por separaçao por HPLC preparativa. 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,50 (s, 1 H) 7,45 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) 7,38 (d, J = 8, MHz, 1 H) 7,10 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) 4,51 (m, 1 H) 4,03 (m, 1 H) 3,88 (m, 1 H) , 3,82 (s, 3 H) 3,68 (d, J = 4 Hz, 2 Η). [M+H] calculado para
Ci7Hi5BrClFN404, 475; experimental, 475.
Exemplo 30: 6-Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2- hidroxietil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,SH)-diona
O composto do titulo foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do Exemplo 29 utilizando o exemplo 2 como material de partida. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,20 (s, 1 H) 7,49 (m, 2 H) 6,75 (t, J= 8,08 Hz, 1 H) 4,11 (t, J= 5,04 Hz, 2 H) 4,00 (t, J= 4,0 Hz, 2 H) 3,66 (s, 3 H) . [M+H] calculado para C16H13CIFIN4O3, 491; experimental, 491.
Exemplo 31: 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(3-hidroxi- propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona
O composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 2 utilizando 2-(3- 142 bromopropoxi) tetra-hidro-2i7-pirano como material de partida em vez do composto 2B. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,19 (s, 1 H) 7,50 (m, 2 H) 7,25 (t, J= 8,08 Hz, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 4,19 (t , J= 5,04 Hz, 2 H) 3,70 (m, 2 H) 3,66 (s, 3 H) 2, 05 (m, 2 H). [M+H] calculado para c17h16fin403, 4 71; experimental, 471.
Exemplo 32: 6-Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(3- hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona
0 composto do titulo foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 29 utilizando o exemplo 31 como material de partida. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,21 (s, 1 H) 7,44 (m, 2 H) 6,74 (t, J= 8,36 Hz, 1 H) 4,19 (t, J= 6,56 Hz, 2 H) 3,69 (t, J= 8,0 Hz, 2 H) 3,77 (s, 3 H) 2,04 (m, 2 Η) . [M+H] calculado para Ci7H15ClFIN403, 505; experimental, 505.
Exemplo 33: 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(3-hidroxi- propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3Η,QH)-diona
O composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 2 utilizando 2-(3- 143 bromopropoxi) tetra-hidro-2fí-pirano como material de partida em vez do composto 2B e 4-bromo-2-fluoroanilina em vez de 2-fluoro-4-iodoanilina para o passo de deslocamento do tosilato. XH RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,48 (s, 1 H) 7,42 (m, 3 H) 5,70 (s, 1 H) 4, 15 (t, J= 6,84 Hz, 2 H) 3,63 (m, 5 H) 2,00 (m, 2 H) . [M+H] calculado para Ci7Hi6BrFN403, 423; experimental, 423.
Exemplo 34: 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-6-cloro-3-(3- hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
0 composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 29 utilizando o exemplo 33 como material de partida. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,22 (s, 1 H) 7,25 (m, 2 H) 6,90 (t, J= 8,0 Hz, 1 H) 4,19 (t, J= 6,32 Hz, 2 H) 3,77 (s, 3 H) 3,70 (t, J= 6,04 Hz, 2 H) 2,04 (m, 2 Η) . [M+H] calculado para Ci7Hi5BrClFN403, 459; experimental, 459.
Exemplo 35: 5-(4-Bromo-2-clorofenilamino)-3-(3-hidroxi- propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona
O composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 2 utilizando 2—(3— 144 bromopropoxi) tetra-hidro-2fí-pirano como material de partida em vez do composto 2B e 4-bromo-2-cloroanilina em vez de 2-fluoro-4-iodoanilina para o passo de deslocamento do tosilato. ΧΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,48 (s , 1 H) 7,74 (s, 1 H) 7,51 (m, 2 H) 5,76 (s, 1 H) 4, 15 (t, J= 6,84 Hz, 2 H) 3,63 (m, 5 H) 2,00 (m, 2 H) . [M+H] calculado para
Ci7Hi6BrClN403, 441; experimental, 441.
Exemplo 36: 5-(4-Bromo-2-clorofenilamino)-6-cloro-3-(3- hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona
0 composto do titulo foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 29 utilizando o exemplo 35 como material de partida. 1H RMN (400 MHz, CDCls) δ 8,22 (s, 1 H) 7,75 (s, 1 H) 7,29 (d, J= 8,6 Hz, 1 H) 6,79 (d, J= 8,6 Hz, 1 H) 4,20 (t, J= 6,6 Hz, 2 H) 3,77 (s, 3 H) 3,70 (t, J= 6,6 Hz, 2 H) 2,05 (m, 2 Η) . [M+H] calculado para Ci7Hi5BrCl2N403, 475; experimental, 475.
Exemplo 37: 3-(2-(Dimetilamino)etil)-5-(2-fluoro-4-iodo- fenilamino)-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
0 composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do composto 5G utilizando o 145 composto 5F e bromidrato de 2-bromo-N,N-dimetiletanamina como material de partida. 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,57 (s, 1 H) 7,68 (m, 2 H) 7,33 (t, J = 8,36 Hz, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 4,51 (t, J= 4,0 Hz, 2 H) 3,69 (s, 3 H) 3,66 (t, J = 8,0 Hz, 2 H) 3,09 (s, 6 Η) . [M+H] calculado para C18H19FIN5O2, 484; experimental, 484.
Exemplo 38: 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxi- propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona
O composto do titulo foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do Composto 5G utilizando o composto 5F e l-bromopropan-2-ol como material de partida. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,17 (s, 1 H) 7,52 (m, 2 H) 7,24 (t, J= 8,84 Hz, 1 H) 5,81 (s, 1 H) 4,39 (m, 1 H) 4,25 (m, 1 H) 3,57 (m, 4 H) , 1,35 (d, J = 6,32 Hz, 3 H) . [M+H] calculado para Ci7Hi6FIN403, 471; experimental, 471.
Exemplo 39: (S)-3-(2, 4-Di-hidroxibutil)-5-(2-fluoro-4-iodo- fenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona
O composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 2 utilizando (S)-4-(bromometil)-2-fenil-l,3-dioxano como material de partida em vez do composto 2B. "h RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,44 (s, 1 146 Η) 7,65 (m, 2 Η) 7,33 (t, J= 8,6 Hz, 1 H) 5,79 (s, 1 H) 4,39 (m, 1 H) 4,11 (m, 1 H) 3,80 (m, 3 H) 3,68 (s, 3 H) , 1,83 (m, 2 Η) . [M+H] calculado para Ci8Hi8FIN404, 501; experimental, 501.
Exemplo 40: 6-Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2- hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona
O composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 29 utilizando o exemplo 38 como material de partida. ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,48 (s, 1 H) 7,55 (m, 2 H) 6,92 (t, J= 8,84 Hz, 1 H) 4,35 (m, 1 H) 4,15 (m, 1 H) 3,81 (m, 4 H) , 1,32 (d, J = 6,32 Hz, 3 H) . [M+H] calculado para C17H15CIFHNUO3, 505; experimental, 505.
Exemplo 41: ( S)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di- hidroxipropil)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7 (3H, 8H) -diona 147
4iB Exes-íplo 41 0 composto 20A (1 g, 2,73 mmol), (R)-4-(clorometil)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano (2 g, 13,3 mmol), CS2CO3 (1,7 g, 5,43 mmol) e Kl (0,45 g, 2,73 mmol) foram misturados em 10 mL de DMF e aquecidos no micro-ondas a 120 °C durante 2 horas. A mistura reacional em bruto foi filtrada, para remover CS2CO3, e o solvente foi removido sob vácuo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia "flash", produzindo 0 composto 41A (200 mg, 15%). [M+H] calculado para C20 H2oBrFN404, 479; experimental, 479. 0 composto 41A (10 0 mg, 0,21 mmo 1) foi tratado com 2:1 THF:HC1 (1 N) à temperatura ambiente durante a noite para produzir o composto 41B. 0 composto 41B (43 mg, 47%) foi isolado por separação por HPLC preparativa. [M+H] calculado para Ci7H16BrFN404, 439; experimental, 439. O composto 41B (43 mg, 0,098 mmol), Selectfluor (31,5 mg, 0, 089 mmol) foram misturados em 1 mL de DMF e 1 mL de CH3CN. A mistura foi aquecida a 80 °C durante 10 minutos. O exemplo 41 (10 mg, 22,3%) foi obtido por purificação empregando HPLC preparativa. ’ή RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,39 148 (s, 1 Η) 7,37 (d, J = 8,OHz, 1 H) 7,30 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) 7,12 (m, 1 H) 4,39 (m, 1 H) 3,96 (m, 1 H) 3,81 (m, 1 H) , 3,71 (s, 3 H) 3,60 (d, J = 4 Hz, 2 Η). [M+H] calculado para
Ci7Hi5BrF2N404, 457; experimental, 457.
Exemplo 42: 3-Benzil-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,Ί(3H,8H)-diona
O composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do composto 2G utilizando o composto 5C em vez do composto 2F como material de partida. ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,62 (s, 1 H) 7,67 (m, 1 H) 7,61 (m, 1 H) 7,37 (m, 6 H) 5,72 (s, 1 H) 5,23 (s, 2 H) 3,63 (s, 3 H) . [M+H] calculado para C21H16FIN4O2, 503; experimental, 503.
Exemplo 43: 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-5-(2-fluoro-4- iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3 —d]pirimidino-4, 7(3Hr8H)-diona
0 composto do título foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 24 utilizando o exemplo 12 como material de partida em vez do composto 5F. ΤΗ RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,45 (s, 1 H) 7,52 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) 7,43 (d, J = 8,0 Hz, 1 H) 6,60 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) 149 4,0 (m, 3 Η) 3,91 (m, 2 Η) 3,73 (s, 3 Η) 1,7 (s, 3 Η).
[M+H] calculado para Ci8H18FIN404, 501; experimental, 501.
Exemplo 44: (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2- fluorofenilamino)-6,8-dimetilpir ido[2,3-d]pir imidino-4,7 (3H, 8H) -diona
1 O composto do titulo foi preparado seguindo o mesmo procedimento para a síntese do exemplo 16 utilizando o exemplo 13 como material de partida. 1H RMN (400 MHz, CDC13 ) δ ppm 1,79 (s, 3 H) 3,11 (s, 1 H) 3,54 - 3,66 (m, 3 H) 3, 82 - 3, 90 (m, 1 H) 3,94 - 4 ,02 (m, 1 H) 4,30 (dd, J=14, 15, 3, 79 hz, 1 h; ) 6,67 (t, J= 8,46 Hz, 1 H) 7,19 (dd, J= 8, 2 1, 0,88 Hz, 1 H) 7,21 - 7, • 25 (m, 1 H) 8 ,27 (s, 1 H) [M+H] calculado para C2oHi9FN404, 399; experimental, 399
Para além do anteriormente exposto, os esquemas reacionais acima e suas variações podem ser utilizados para preparar os seguintes compostos: J55. F N M '0 2-fluoro-5-(2-fluoro-4- 5-(2-fluoro-4- iodofenilamino)-3,8- iodofenilamino)-3,8- dimetilpirido[2,3- dimetil- d]pirimidino-4,7(3H,8H)- 2-(metilamino)pirido[2,3- 150
151 (3H;8H)-diona FYJf! rxr 0 HM h 2n Ή 1 n ' H'0 I 3-(2-aminoetoxi)-5-(2- 3-(3-aminopropil)-5-(2- fluoro-4-iodofenilamino)-8- fluoro-4-iodofenilamino)-8- metilpirido[2,3- metilpirido[2,3- d]pirimidino-4,7(3H,8H)- d]pirimidino-4,7(3H, 8H)- diona diona fxr H2N Lll eXf‘ Hfí M M '0 t 1 3-(2-aminoetil)-5-(2- 5-(2-fluoro-4- fluoro-4-iodofenilamino)-8- iodofenilamino)-8-metil-3- metilpirido[2,3- (pirrolidin-3- d]pirimidino-4,7(3H,8H)- ilmetil)pirido[2,3- diona d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona O 0 HN ^ Η ιΓ^ ÔH t JL ^ 6h W JL H H O f N M O f (S)-5-(2-cloro-4- (S)-5-(4-bromo-2- iodofenilamino)-3-(2,3- fluorofenilamino)-3-(2,3- di-hidroxipropil)-8- di-hidroxipropil)-8- metilpirido[2,3- metilpirido[2,3- d]pirimidino-4,7 d]pirimidino-4, 7 (3H,8H)-diona (3H,8H)-diona 152 fyv' Q MN ''y^N ^ õh oh (S)-3-(2,3-di- (R)-3-(2,3-di- hidroxipropil)-5-(2-fluoro- hidroxipropil)-5-(2-fluoro- 4-iodofenilamino)-6, 8- 4-iodofenilamino) -6, 8- dimetilpirido[4, 3- dimetilpirido[4, 3- d]pirimidino-4,7(3H, 6H)- d]pirimidino-4,7(3H, 6H)- diona diona Frr W <3 n y^o Uj> JL n y o 5-(2-fluoro-4- 5-(2-fluoro-4- iodofenilamino)-3-(2- iodofenilamino)-3-(3- hidroxietoxi)- hidroxipropil)- 6,8-dimetilpirido[4,3- 6,8-dimetilpirido[4,3- d]pirimidino-4,7(3H, 6H)- d]pirimidino-4,7(3H,6H)- diona diona Q MN' w... ftí 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-6,8- dimetilpirido[4,3 —d]pirimidino-4,7(3H,6H)-diona
Realização de Testes Biológicos A atividade dos compostos como inibidores da MEK pode ser avaliada in vitro, in vivo ou numa linha de células. Além 153 disso, os compostos de acordo com a presente invenção podem ser rastreados quanto à atividade contra uma ou mais MEKs. São proporcionados em baixo ensaios quanto à atividade contra a MEK1 e ERK1. A MEK1, MEK2 e ERK1 purificadas podem ser obtidas do modo seguinte.
Para a MEK1, DNA que codifica os resíduos 2-393 (deleção dos aminoácidos 32-51, S218E/S222D) da sequência completa da enzima humana pode ser amplificado por PCR e clonado nos sítios BamHI/Xbal de pFastbac (Invitrogen), que incorpora uma cauda de 6-histidina no terminal N. A deleção dos resíduos 32-51 e as duas mutações, S218E e S222D, podem ser obtidos por PCR Quick Change. A SEQ ID NO: 1 corresponde aos resíduos 2-393, com deleção dos resíduos 32-51 e mutações S218E/S222D e com a cauda de 6-histidina N-terminal. A SEQ ID NO: 2 é a sequência de DNA que foi utilizada para codificar a SEQ ID NO: 1.
Para a MEK2, DNA que codifica os resíduos 1-400 (S222E/S226D) da sequência completa da enzima humana pode ser amplificado por PCR e clonado em pFastbac (Invitrogen), que incorpora uma cauda de 6-histidina no terminal N. As duas mutações, S222E e S226D, podem ser obtidas por PCR Quick Change. A SEQ ID NO: 3 corresponde aos resíduos 1-400 com as mutações S222E/S226D e com a cauda de 6-histidina N-terminal e a SEQ. I.D. No. 4 é a sequência de DNA que foi utilizada para codificar a SEQ ID NO: 3.
Para a ERK1, DNA que codifica os resíduos 1-379 da sequência completa da enzima humana pode ser amplificado por PCR e clonado nos sítios Small/Sall de pGEX-6p-3 (GE 154
Healthcare) , que incorpora uma cauda de GST no terminal N. A SEQ ID NO: 5 corresponde aos resíduos 1-379 com a cauda de GST N-terminal. A SEQ ID NO: 6 é a sequência de DNA que foi utilizada para codificar a SEQ ID NO: 5.
Baculovírus recombinantes incorporando as construções de MEK1 e MEK2 podem ser gerados por transposição utilizando o sistema Bac-to-Bac (Invitrogen). Lotes virais de título elevado podem ser gerados por infeção de células Sf9 de Spodoptera frugiperda; a expressão da proteína recombinante pode ser realizada por infeção de Sf9 de Spodoptera frugiperda (Invitrogen) em Biorreatores Wave de 5 L (Wave Biotech). A proteína recombinante pode ser isolada de extratos celulares por passagem em resina ProBond (Invitrogen). Extratos parcialmente purificados de toda a MEKl podem então ser adicionalmente purificados por cromatografia líquida de alta pressão numa resina de filtração em gel SEC2000. A pureza das proteínas MEKl e MEK2 pode ser determinada em gel de SDS-PAGE desnaturante. A MEKl e MEK2 purificadas podem então ser concentradas para uma concentração final de 3,4 mg/mL e 5,4 mg/mL, respetivamente. As proteínas podem ser armazenadas a -78°C num tampão contendo 50 mM TRIS-HC1 pH 7,6, 250 mM NaCl, 0,1 mM EDTA e 0,125 mM TCEP ou a -20°C na presença de glicerol (concentração final de glicerol a 50%). A proteína recombinante incorporando as construções de ERK1 pode ser gerada por transformação do vetor de expressão numa estirpe de E. coli HD5a (Invitrogen). Para expressar a proteína ERK1, a estirpe de E. coli transformada pode ser cultivada a 37°C até OD0,6 e depois induzida por adição de 155 IPTG para uma concentração final de 0,5 mM e continuação da cultura da célula durante a noite a 25°C. A proteína ERK1 recombinante pode ser isolada de extratos celulares por passagem em Glutationa (Amersham). Os extratos parcialmente purificados de ERK1 podem então ser adicionalmente purificados por cromatografia líquida de alta pressão numa resina de filtração em gel BioSep SEC3000. A pureza da proteína ERK1 pode ser determinada em gel de SDS-PAGE desnaturante. A ERK1 purificada pode depois ser concentrada para uma concentração final de 1,9 mg/mL. As proteínas podem ser armazenadas a -78°C num tampão contendo 25 mM TRIS-HC1 pH 7,6, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA e 0,25 mM TCEP ou a -20°C na presença de glicerol (concentração final de glicerol a 50%).
Deve notar-se que uma variedade de outros sistemas de expressão e hospedeiros também é adequada para a expressão da MEK1 e ERK1, como será facilmente apreciado pelo profissional.
As propriedades inibidoras dos compostos relativamente à MEK1 ou MEK2 podem ser determinadas utilizando um formato de placa preta de 384 cavidades nas seguintes condições reacionais: 50 mM HEPES pH 7,3, 10 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 0,01% Brij35, 1 nM MEK1 ou 4 nM MEK2, 25 nM ERK1, 400 μΜ ATP, 500 nM IPTTPITTYFFFK-5FAM-COOH (FI-Erktide) e 1% DMSO. O produto reacional é determinado quantitativamente por polarização fluorescente utilizando esférulas de IMAP progressivas da Molecular Devices. A reação do ensaio pode ser iniciada do modo seguinte: 2 pL da mistura de 1,5 μΜ FI-Erktide e 75 nM ERK com 2 pL de 156 inibidor (diluições em série de 2 vezes para 11 pontos para cada inibidor) contendo 3% DMSO foram adicionados a cada cavidade da placa, seguido da adição de 2 pL da mistura de 3 nM MEK1 ou 12 nM MEK2 e 1200 μΜ ATP para iniciar a reação (a concentração final da enzima foi 1 nM para a MEK1 ou 4 nM para a MEK2) . A mistura reacional pode depois ser incubada à temperatura ambiente durante 22 minutos e ser rapidamente arrefecida e desenvolvida por adição de 20 pL de diluição 1:200 das esférulas de IMAP progressivas (Molecular Devices) em 80% tampão A, 20% tampão B e 0,003% Tween 20. A polarização de fluorescência das misturas reacionais resultantes pode ser medida passada 1 hora de incubação à temperatura ambiente.
Os valores IC5o podem ser calculados por ajustamento não linear da curva das concentrações dos compostos e sinal de polarização de fluorescência à equação padrão de IC50. Os valores IC5o para compostos selecionados são apresentados na Tabela 1. TABELA 1: IC50 de Compostos Exemplificados contra a MEKl
Exemplo IC50 (MEKl, nM) 1 > 16 2 5-15 3 > 16 4 5-15 5 5-5 6 < 5 7 < 5 8 < 5 9 > 16 10 > 16 157 11 > 16 13 < 5 14 < 5 15 > 16 16 5-15 17 5-15 18 < 5 19 < 5 20 > 16 21 5-15 22 < 5 23 > 16 24 5-15 25 < 5 26 5-15 27 5-15 28 < 5 29 5-15 30 < 5 31 < 5 32 < 5 33 > 16 34 5-15 35 > 16 36 > 16 37 > 16 38 > 16 39 > 16 40 5-15 41 5-15 42 > 16 43 5-15 158 44 5-15
Será claro para os profissionais que várias modificações e variações podem ser feitas nos compostos, composições, estojos e métodos da presente invenção sem sair do âmbito da invenção. Assim, pretende-se que a presente invenção abranja as modificações e variações desta invenção desde que pertençam ao âmbito das reivindicações adjuntas.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> Takeda Pharmaceutical Company Limited
<120> INIBIDORES DA MAPK/ERK QUINASE
<130> NEK-5002-WO <150> 60/ 870,913 <151> 2006-12-20 <160> 6 <170> Patent In versão 3.3 <210> 1 <211> 400 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Residuos 2-393 da MEK1 humana com deleção dos resíduos 32-51, mutações S218E e S222D e uma cauda de 6-histidina N-terminal. 159 <220> <221> CARATERÍSTICA_MISTA <222> (1) .. (28) <223> Cauda de 6-histidina N-terminal <220> <221> CARATERÍSTICA_MISTA <222> (29) .. (400)
<223> Resíduos 2-393 da MEK1 humana com deleção dos resíduos 32-51 e mutações S218E e S222D <400> 1 M?sS 1 Ser Tyr Tyr K 8 $ ti s ti s H s H s H s to Asp Tyr Asp i t a Pr o 16 Thr Thr ê ti Aso Ls-u 20 Tyr Bi® O n Oy Ai a £5 Mà5 O y Ser Pr o Lys 30 Lys Lys Ptú Thr Pr o 35 ! 9 0 © n Aso Pr o 40 Ai a Pr o Agp 3 y Ser 45 Ai a y§! .Ase Gy Thr Sé Ser Sèr ai a Q u Thr SS Asa teu <3 u Ai a Ria 60 Leu Thr G n Lys £3 n 85 Lys Vai Qjf O a Leu ?Ú Lys %f> A&p A&p Fhe 7& G u Lys i i @ Sôr 3 ti eo Leu Ο y AI a <3 y Mn m O y 3y Vai Vai Ffta &0 Lys Vai Ssr HS s Lys SS Pres Ser £3 y Lee Vai 100 AI a Mg lys leu tos ! 1 $ H ã leu G w ί 1 8 tio Lys Rro Al a i í @ Afg 1 li Asrs flf» i S e í í a Aíg <3 y ?2Ò teu G a Vai Leu 125 H è Q ts C^s 160 Μπ Ser Pr o Tyr i i e Vai ety Fhe Tyr GE y Ai a Phe Tyr Ser Asp <3 y 130 135 140 Q u í i e Ser !: 9 e Cys L%t 0 U H s top c y Of Ser Leu Asp 8fi *45 150 155 160 Vgí Leu Lys Lys Aí a 105 O y Arg i i e Prp 0 ϋ 170 Q h E i e Leu Q y Lys 175 Vai Ser i j e Aí a Vai i1 s Lys 0 y Leu Thr Tyr Leu Arg 3l! Lys hl e Lys 180 185 ISO 1 S e Mbt H s Arg Asp Vai Lys Pr O Ser Aso i! s Leu Vãí Ase Ser Arg 105 200 206 C y O u t 1 e Lys Leu <5y# Asp Phe a y Vai Ser 0 y 0 o Leu I E B Asp aio 215 2m Q u ai e Asn Asp Phe Vâi O y Thr Aag Ser Tyr Msí Ser PrO 0 U S:3S 230 235 240 Ãrg Lsu O e O y Thr H s Tyr Ser «ai Ou Ser Asp i i e Tf p Ser MM 245 2SQ 255 <3 y Leu Ser Leu Vai O u Lfet AS a vsi <3y Arg Tyr Pio i j @ Pr O Prp 260 265 270 Pr o A$p AS a Lys O u Leu Qu Leu Vfel Phe 0 y Cys 0 e Vai 0 u <3 y 275 280 285 Asp Ai a as a a u Thr Pr ó Pr o Ar g Pr o Arg Thr Rr õ Sy Arg Pro Leu 290 aos 300 Ser Ser Tyr a y MM Asp Ser Arg Prp RfO **í Ai a 1 S e Phs a u Leu 305 310 31S 320 Leu Asp Tyr f i e vai Aso Q u Pt g Pro Pr o Lys Leu Prp Ser 0 V Vai 325 330 335 Phe Ser Leu Q u Fhe 0 ti ASP PftB v&s Ase Lys Cys Leu i i e Lys Ase 340 345 350 Pt p as a Í3 u Arg AS a Asp Leu Lys Sn Leu MM Vai hs s Ai a Phe i i ® 355 360 385 Lys Ara Ser Asp Aí ã Ou O u VaS Asp Pha Ai a 1(3 Ϊ Trp Leu Cfs Ser 370 378 380 Thr s \ e Oy Leu Asn 0: n Fre Ser Thr Pr 0 Thr (4 S Ai a At a Oy Vai 3SS 300 305 400 <210> 2 <211> 1203
<212> DNA 161 <213> Artificial <220> <223> Sequência de DNA que codifica a SEQ ID NO: 1. <400> 2
m gt cgt aet accat eaeca s caceai cac gai t aegai a t cccaacgae cgaaaaecfg eo iai 1M gcgccatggg at eecccaag aagaageega cgcccateca get gamcecg 120 gcccccgacg «etctgcagi t aacgggace agetcfgcgg agaccaací t ggaggccí 11 180 etf acecaga ageagasggt gggagaaetg aaggai gacg act!igagas gat cagt gag 940 ct ggggget g geast ggcgg «gtggi gí tc aaggi ct: cee acaagccit c íggcct QQtc 300 mggecagáa agei aat i ca l et ggagat c aaaeeegeaa t ccggaacca gat cat aagg 36® gaga gcsigg ttetgeai ga gi geaact ct ccgt aeat cg tgggstt cta tggígcgtt ç 430 t acagcgaíg gegaga! eag t at ctgcat g gagcacaígg at ggaggt í e t ct ggat caa 400 gtcctgaaga aagçt ggaag aattccigaa caaat íttag gaaasgtt ag cat t gct gt a 540 at sas:â.gg:ce i gacâf at et gagggagaag cacsagatca tgcacagags t gt caagcec 600 t s caseai ee t agi ca&cf e cegf 9999 S9 aí eaagctct gt gacl11gg ggí cageggg 660 caget cat cg aegasaígge caacgactt e gt gggeacaa ggtcc tacai gt cgccagaa 72Ú agact ecagg ggact cat t a ct ct gt geag t cagaeatet ggageatggg act gt ct ct g mo gt agagat gg cggt ΐ gggag gt at cceat c eet eci ccag atgecaagga gct ggagct g 840 aí gt i l gggt β««99* 99a «9939«*gcg 8«tgsgaceç eaeeçâggçç aaggsccccc 900 gggaggceec í ! agetcata cggaai ggac agccgacctc ccãt ggçaat 11 tt gagtt g 3SG 11 $ga.ttaca tagieaacgá gcet éct cca ãaaet gccca gíggagtgtt cagt ct ggaa 1030 111 caagat t t t gt gaai aa at gct t aat a aaaaaseceg eagagagage agat 11gaag 1Ô&0 caact cat gg t i cãt gel \ I i at e&agaga 1 cí gsi getg âggasgt ggs H 11gesggi 1140 t ggeí et gei ccacca-i egg sei t aaccag eccagcacae eaâceeat gc i gei ggcgt« 1200 S aa 1203 <210> 3 <211> 428 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Resíduos 1- -400 da MEK2 humana com mutações S222E S226D e uma cauda de 6-histidina N-terminal. 162 <220> <221> CARATERÍSTICA_MISTA <222> (1) .. (28) <223> Cauda de 6-histidina N-terminal <220> <221> CARATERÍSTICA_MISTA <222> (29) .. (428) <223> Resíduos 1-400 da MEK2 S226D <400> 3 humana com mutações S222E e 163
Afet 1 Ser Tyr Tyr H s 5 H s H s He Thr d u As Ff Leu 30 Tyr Ph* d o G y Arg Lys Piro 3S Vai Leu Pro AI a Leu 40 Oy Pre 50 Ser Piro Thr Ser Q u 55 C3 y Leu 85 <3 n Lys lys Leu Q U 70 Ou Leu Arg Leu 3ϋ AS a. Phe 85 Leu Thr ân Asp Asp Asp pbe 100 0 y Arg 91 e Ser m Vai Thr 115 lys Vai O n H $ Aro 130 Lys Léu 130 Me H 8 Leu G: u i t e 133 Lys Ara 145 Ou Leu 0 ri Vai Leu 150 W s d u Pfte Tyr <3 y M a Rfoe 165 Tyr Ser Asp Hs Asp Q y 100 Q y Ser Leu Asp i j © Pr o 0 u (95 d u i 1 6 Leu Gy Lys 200 Leu Ata 310 Tyr uw Arg 3« Lys 215 Mi S Piro 22S Ser tefi He Leu Vai 330 Asa Ser Ris ay Vai Ser G y 245 Q n Leu i 1 e
Pi s H s n Asp Tyr Asp ne Pr o 15 Thr Ai a 25 Ifeí Ou Pro &èt Leu 30 ai a Arg Thr 11 s Aso Pro Thr 45 i l a m a G u Ai a Ser G u Aí a 80 Asn Leu Vâí Asp <3 u Leu Asp 75 O u do Qn Lys Lys 80 Lys Aí & m Lys Vai Gy d u Leu 95 Lys 0 u 105 Lau 0y Ai a Gy Ase 110 í3 y α y Pro Ser Gy Leu 9 9 e 125 Lfet Ai a Arg Pro At a i 8 a Arg 140 Aso d n ! t e 9 i 9 €ys Asu Ser 155 Pro Tyr i i e Vai d y 160 d y Ou 179 i S e Ser i 1 a QfS V&í 175 Qu Ú n 185 Vai Leu Lys d u Ala 180 Lys Arg Vai Ser i i e Aí a Vai 205 Leu Arg: Gy 0 n Me mt Hl S 220 Arg Mp V&9 Lys Arg O y Qú 235 Me Lys Leu θ'® Asp 240 Asp O u 250 &tet Ai a Asa Asp poa 255 Vai 164
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Thr Ar çj Leu Leu Leu <3 u Tyr Leu Ou G u Lys Tyr Ou Ou H $ Leu SO 25 30
Tyr Ou Arg: Asp Ou Gy Asp lys Tfp Ar® Asn lys Ly$ Fhe Ou Leu 3S 40 45 G y Leu O u Ph© Pr o Ase Leu Fr o Tyj Tyr fie Asp G y Asp Vai Lys 50 55 ‘ 60
Leu Thr o n Ser H&í Al8 fie Ue Arg Tyr fie Ai a Asp Lys H s Asn 65 70 75 80 167 A&i Leu €3 y fly Oys 85 Pro Lys α y Arg Ala 80 Gu a a« Ser Vfet Leu 05 Gú Gy Ala Vai Leu ioo Asp Π S Arg Tyr G l 105 Vai Ser Arg Me m a 110 Tyr Se? LyS Asp Phe 115 Ou thr Leu Lys Vat 120 Asp Phe Leu Ser Lys 125 Leu Pre G u ÍV^í Leu 130 Lys Mat Phe α u Asp 135 Arg Leu £ys H S Lys 140 Thr Tyr Leu Asn Q y 146 Asp M s vai Thr H s 150 Pro Asp Pha Wfei Leu 155 Tyr Asp A ã Leu Asp i m Va! Vã! Leu Tyr mt m Asp Pre fcfet Q?s teu 170 Asp &a Phe Pr O Lys 176 Leu Vai Cys Hw Lys 180 Lys Arp i t a O u Ai a 185 ta e Pro Qft Me Asp 100 LyS Tyr Leu Lys Sar 195 Ser Lys Tyr i i a ai a 200 Tr p fVo Leu G o d y 205 Tr p G n A) a Thr Phe 210 Gy G y G y Mp H S 215 Pro Pro Lys Ser Asp 220 leu G u Vai Leu Phe 225 G F» O y Ff 0 Leu G y 230 Ser Pro Aso Ser G V 235 M-H A a A a Ai a Ai a 240 AI a <3 a C3 y Õ y G ¥ 240 G y Gy G u Pro Ag 250 Arg Thr G u G y Vai 255 G y Pr» Qf Vai Pro 250 G y G u Vai G u fcèf 265 Vai Lys Gy G e prp 270 Phe Asp Va) Oy Pr o 27$ Af g Tyr Thr G π Leu 230 G n Tyr 11 e Õ y G o 285 G y A a Tyr G y fífet 230 Vat S»r Ser A a Tyr 235 Asp H s Va! Arg Lys 300 Thr Arg Vat Ala 11 a Ly$ 305 Lys Me Ser Pr 0 310 Phe <3 u H s G « Thr 315 Tyr €ys O ή Arg Thr 320' Leu Arg d u 91 a O n 325 a i s Leu Leu Arg phe 330 ΑΓ0 H s O u Aãfi vat 335 1 f e G y ta a Atg Ase 340 Ηβ Leu Ar g A a Ser 345 Thr Leu G u A a tòt 350 Arg Asp 168
Vai Tyr 1 Ê a V«E O n Mp Lpu Lfeí α e Thr Asp Leu Tyr Lys leu leu 355 360 365 Lys Ser α & α rt Léu Ser în Asp H S 9 ! © cys Tyr Phé tau Tyr 0 ó 370 375 380 Ite Lee Ag O y Leu Lys Tyf í I e H s Se# A a Mo Vai Leu H s Ag 305 390 395 400 Μρ Lâu tys Pro Ser Mn leu Leu 1 í © Aso Thr Thr Oys Asp Leu Lys 405 410 415 33 ο Cys Asp Phe Qy Leu Ai a Ag 11 © A a Asp Fr o α ΰ H s Asp Ht S 420 425 430 Thr Qy Ph© Leu Thr a y Ty f Vai AI a Thr Ag Trp Tyr Ag AI a Pr o 435 440 445 0 u Me Rifei Leu Mn Ser Lys Qy Tyr Thr Lys Ser E1 e Asp 9 9 e Trp 450 455 480 Ser VaJ Q y i ) © Leu Aí a ΟΙ u mt leu Ser Aso Ag Pf a 11 © Fh© 485 470 475 480 Pró Oy lys H s Tyr Leu Asp 0 n Leu Mo H 3 9 3 e Leu 0 y S S © Leu 4-85 400 495 Qy Ser Ff o Ser a n 0 u Asp Leu A&rt Oy s 1E ã E E ê Mo Rifes Lys A a 5Q9 SOS S10 Ag Asr Tyr Leu a n Ser Leu Pro Ser Lys Thr Lys v&i Aí a Trp M & 515 sao 525 Lys Leu Ph© Pr o Lys Ser Asp Ser Lyâ M a Leu Mp Leu Leu Asp Ag 530 535 540 Lte! Leu Thr Ph© Mn Ff O Aso Lys Ag Me Thr VaE 0 u Ou M a Leu 545 550 55S 56Θ Aá a H $ Fr o Tyr Leu 0 u α o Tyr Tyr Asp PT a Thr Asp O u Pr o Vai 565 570 575 A a a o Qu Pre Ffee Thr Phè Aí a 6*1 0 U Leu Asp tep leu Pro Lys 555 985 590 O u Ag leu Lyâ 0 U Lee 91 e PP© O tx O u Thr AI a A g Phe O n Pr o 595 500 805 Oy Vai Leu O u A 4 Pro §10 <210> 6 <211> 1845
<212> DNA 169 <213> Artificial <220> <223> Sequência de DNA que codifica a SEQ ID NO: 5. <400> 6 at gt cccet at i act aggí t a ts ggaaaait aagggccii g tgcaacccac t cgact t et t m Hgga&tatc 11 gaagaaaa aã at gaagag cai i t gt at g agcgcgaíga agg? gat aaa tse iggçgaaaca aaaagtii ga at t gggt 11 g gagtt1 ccca ai ct i cct t a 11 at at t gai ISO flt ta aattaaesca §í ¢1 at ggce at caí ãcgí t ai m agci ga caàgcacaac 240 as gt i gggi g gi t gtccaaa agagcgt gea gagai 11 caa tgsitgaagg agcggt 11 i g 300 gat ai 1 agat acggigtttc gagaat t gca i atagi aaag act i t gaaac t ci caaagt i 3SÕ gat tiuue gcaaget aee i gaaat getg aaaaf gt í cg aagat egt í t at gt cat aaa 4£0 acat aí 11 aa at gg* gãt ca f gtãacccst eet gact t «a tgit ígt at ga egct c t t gaí 480 gt tfiHttet âcstggseec aatgt gcctg gal gcgt i ec caaaai t agi ttglf t iaaa S40 aaacgt at t a aagéí aã sçç acaaaiígat aagt act i ga aat ceagt aa gt at at age a SOO t ggecttt gc agggctggca agccãcgt11 gpggt mm accat ccs cc ããããtcggat 660 etggaagite t gssecagss geecet ggga t ccccgaatt ccgggat ggc ggeggeggeg 720 geí caggggg ggagecccgt agaaccgagg gggr cggcce 9SS89<cccg 7S0 eogoaoet90 agat ggt iâa oggocageeg 11 cgaegi gg gcccgcgcta cacgcagit g S4Q cagtacatcg gcgagggcgc gt acggeatg gi cagetcgg cct st gacea egtgcgeaag 300 actcgegtgg ccat caagaa gatcagcccc t i cgaacai c agacet aci g ccagcgcacg 060 d ccgggaga i scagai cct getgegett e cgccatgaga at gt cal cgg cat ccgagac 1020 at t ci gcggg cgt csaeect gg&agccat g agagat gt ci acat t gl gca ggaect gat g 1060 gagact gacc t gt aeâagt! §os gaaaagc cageageiga gcaatgacea t at et get ae 1140 t í çct ctacc agatcct gcg gggcctcaag t acasccact ccgctaacgt getceaeega lâôo gas ct aaagc cctccaacct get cai eaae açcasçt gçg acctt aagaí itgigatUc 1260 ggect ggces ggat tgcçga t ccígagcai gaccacaccg gcí t cct gat ggagt at gt g 1020 get acgegci W aeegggc cccagagat e aí gct gaací ccâagggct a 1 aeeaagt cc 1380 ai egacaí ct ggtctgiggg cí gcat i ei g gcs gagai gt t ct cl aaccg gcccat ct t c 1440 aei ggcaage act secigga i cagcteaae caca?t ci gg gcat cct ggg ct eeceat cc 150-0 caSSãggacg t gaaí t gt aí caí c sacai g aaggcccgaa act accíaça gt ct ct gccc 1560 t scaagacca aggt gget tg ggceaagct t 11ccecaagt cagactceaa agcecitgac 1620 cl get ggaçe ggasgtt aac et11 aacece aataaacgga i eaeagt gga ggaagcgctg 1680 get cacccci ácct ggagca gt act ai flfcc ccgácggatg agccagiggc cgaggagcCC 1740 i 1 cacei i cg eçatggagct ggãi gacct » cciaaggagc ggei gaagga get cat çt t c 1860 caggagacag sacgci I cea geceggagt g ctggaggccc cct ag 1845 170 170 Lisboa, 22de Julho de 2013

Claims (22)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto possuindo a fórmula:
ou um respetivo polimorfo, solvato, tautómero, enantiómero ou sal farmaceuticamente aceitável, em que Xi é CR6; X5 é CRê ; Ri é selecionado do grupo que consiste em (03-12) cicloalquilo, hetero (C3_12) cicloalquilo, (C9-12) biciclo-alquilo, hetero (C3_12) bicicloalquilo, (C4_12) arilo, hetero (C1-10) arilo, (C9-12) bicicloarilo e hetero (C4_ 12)biciclo-arilo, cada um não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A; R2 é hidrogénio; R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, oxi, hidroxi, carboniloxi, alcoxi, hidroxialcoxi, ariloxi, heteroariloxi, carbonilo, amino, (Ci_10) alquil-amino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (C1-10) alquilo, halo (Ci_10) alquilo, hidroxi (Ci_10) alquilo, amino (Ci-10) alquilo, carbonil (Ci_3) alquilo, tiocarbonil (Ci_3) alquilo, sulfonil (Ci_3) alquilo, sulf inil (C1-3) alquilo, amino (C1-10) alquilo, imino (C1-3) alquilo, (C3_12) cicloalquil (Ci_5) alquilo, hetero (C3_i2) cicloalquil (Ci_5) alquilo, aril (C1-10) alquilo, heteroaril (Ci_5) alquilo, (C9_ 12) bicicloaril (C1-5) alquilo, hetero (C8_i2) bicicloaril (Ci_5) 2 alquilo, (C3-12) cicloalquilo, hetero (C3-12) cicloalquilo, (C9-12) bicicloalquilo, hetero (C3-12) bicicloalquilo, (C4-12) arilo, hetero (Ci-10) arilo, (C9-12) bicicloarilo e hetero (C4-12) bicicloarilo, cada um não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A; Rs é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, oxi, hidroxi, carboniloxi, alcoxi, ariloxi, hetero-ariloxi, carbonilo, oxicarbonilo, amino, (Ci_i0) alquil-amino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (Ci_i0) alquilo, halo (Ci_i0) alquilo, carbonil (Ci_3) alquilo, tiocarbonil (Ci_3) alquilo, sulfonil (Ci_3) alquilo, sulfinil (C1-3) alquilo, amino (C1-10) alquilo, imino (Ci_3) alquilo, (C3_i2) cicloalquil (Ci_5) alquilo, hetero (C3_i2) cicloalquil (Ci_5) alquilo, aril (C1-10) alquilo, heteroaril (Ci-15) alquilo, (C9_i2) bicicloaril (Ci_5) alquilo, hetero (C8-12) bicicloaril (Ci_5) alquilo, (C3_i2) cicloalquilo, hetero (C3-12) cicloalquilo, (C9-12) bicicloalquilo, hetero (C3_i2) bicicloalquilo, (C4_i2) arilo, hetero (C1-10) arilo, (C9_i2) bicicloarilo e hetero (C4_i2) bicicloarilo, cada um não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A, e R-6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, ciano, heteroariloxi, carbonilo, oxicarbonilo, aminocarbonilo, amino, (C1-10) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (C1-10) alquilo, halo(Ci-io) alquilo, carbonil (C1-3) alquilo, tiocarbonil (C1-3) alquilo, sulfonil (C1-3) alquilo, sulfinil (Ci_3) alquilo, amino (C1-10) alquilo, imino (C1-3) alquilo, (C3-12) cicloalquil (Ci_5) alquilo, hetero (C3-12) cicloalquil (Ci_5) alquilo, aril (Ci-10) alquilo, heteroaril (C1-5) alquilo, (C9_ 12)bicicloaril (C1-5) alquilo, hetero (C8-12) bicicloaril (Ci-5) alquilo, (C3_12) cicloalquilo, hetero (C3_ 3 ΐ2) cicloalquilo, (¢9-22) biciclo-alquilo, hetero(C3_ 10) bicicloalquilo, (C4-12) arilo, hetero (C1-10) arilo, (Cg-12) bicicloarilo e hetero (C4-12) bicicloarilo, cada um não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A; o Grupo A consiste em halo, nitro, ciano, tio, oxi, hidroxi, carboniloxi, (C1-10) alcoxi, (C4-12) ariloxi, hetero (C1-10) ariloxi, carbonilo, oxicarbonilo, amino-carbonilo, amino, (Ci_i0) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (Ci_i0) alquilo, halo(Ci_ 10) alquilo, hidroxi (C1-10) alquilo, carbonil (Ci_10) alquilo, tiocarbonil (Ci_io) alquilo, sulfonil (Ci_i0) alquilo, sulf inil (Ci_io) alquilo, (Ci_i0) aza-alquilo, imino (Ci_ 10) alquilo, (C3-12) cicloalquil (Ci_5) alquilo, hetero (C3_ 12) cicloalquil (Cí-ío) alquilo, aril (C1-10 ) alquilo, hetero (Ci_io) aril (C1-5) alquilo, (C9_12) bicicloaril (Ci_ 5) alquilo, hetero (Cs_i2) bicicloaril (Ci_5) alquilo, (C3_ 12) cicloalquilo, hetero (C3_12) cicloalquilo, (C9_ 12) bicicloalquilo, hetero (C3-12) bicicloalquilo, (C4_ 12) arilo, hetero (Ci_io) arilo, (C9_12) bicicloarilo e hetero (C4-12) bicicloarilo, cada um opcionalmente substituído com outro substituinte selecionado do Grupo B; o Grupo B consiste em halo, nitro, ciano, tio, oxi, hidroxi, carboniloxi, (C1-10) alcoxi, (C4-12) ariloxi, hetero (C1-10) ariloxi, carbonilo, oxicarbonilo, amino-carbonilo, amino, (Ci_i0) alquilamino, sulfonamido, imino, sulfonilo, sulfinilo, (C1-10) alquilo, halo(Ci-10) alquilo, hidroxi (C1-10) alquilo, carbonil (C1-10) alquilo, tiocarbonil (C1-10) alquilo, sulfonil (C1-10) alquilo, sulf inil (Ci-10) alquilo, (C1-10) aza-alquilo, imino (Ci_ 10) alquilo, (C3-12) cicloalquil (C1-5) alquilo, hetero(C3_ 12) cicloalquil (C1-10) alquilo, aril (C1-10) alquilo, 4 hetero (Ci-io) aril (Ci-5) alquilo, (C9-12) bicicloaril (Ci_ 5) alquilo, hetero (C8-12) bicicloaril (Ci_5) alquilo, (C3-12) cicloalquilo, hetero (C3-12) cicloalquilo, (C9_ 12) bicicloalquilo, hetero (C3-12) bicicloalquilo, (C4_ i2)arilo, hetero (C1-10) arilo, (C9-12) bicicloarilo e hetero (C4-12) bicicloarilo.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Xi é -C (halo) =.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Xi é -CH=.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, em que X5 é -C(halo)=.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, em que X5 é -C ( (Ci_5) alquilo substituído ou não substituído)=, em que os substituintes são selecionados do Grupo A.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, em que X5 é -C(amino substituído ou não substituído)=, em que os substituintes são selecionados do Grupo A.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, em que X5 é -CH=.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, em que Ri é selecionado do grupo que consiste em (C4-12) arilo e hetero (C1-10) arilo, cada um não 5 substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
9. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que Ri está substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em hidrogénio, halo, ciano, tio, alcoxi, (C1-3) alquilo, hidroxi (C1-3) alquilo e (C3-8) ciclo-alquilo, cada um não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
10. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que Ri está substituído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em hidrogénio, fluoro, cloro, bromo, iodo, ciano, metiltio, metoxi, trifluorometoxi, metilo, etilo, trifluorometilo, etinilo, n-propanolilo e ciclopropilo.
11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, em que Ri compreende:
em que Rl4a, Ri4b f Rl4c r Rl4d e Rl4e são, Cada UIU independentemente, selecionados do grupo que consiste em hidrogénio, halo, ciano, tio, alcoxi, (C1-3) alquilo e hidroxi (C1-3) alquilo.
12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-11, em que R3 é hidroxialquilo, não substituído ou 6 substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
13. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-11, em que R3 é hidroxialcoxi, não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-11, em que R3 é (Ci_i0) alquilo, não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, em que R5 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, (Ci_5) alquilo, amino (C1-10) alquilo, hidroxi (Ci-10) alquilo e (C3_i2) cicloalquilo, cada um não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, em que R5 é (Ci-6) alquilo, não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-16, em que R6 é selecionado do grupo que consiste em hidrogénio, halo, amino e (Ci_5) alquilo, cada um não substituído ou substituído com um ou mais substituintes selecionados do Grupo A.
18. Composto de acordo com a reivindicação 1 selecionado do grupo que consiste nos seguintes: 7 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetilpirido[ 2,3-d] pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 2-(5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-meti1-4, 7-dioxo-7, 8-di-hidropirido[2,3-d]pirimidin-3(4if)-il)acetato de metilo; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,6,8-trimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (S)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino )-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; (R) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino ) -8-metilpirido [ 2,3-d] pirimidino-4, 7 (3H, 8ff) -diona; (S) -6-Cloro-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino- 4, 7 (3if, 8if) -diona; (R) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino ) - 6, 8-dimet ilpirido [ 2,3-d] pirimidino-4, 7 (3 ff, 8 ff) -diona; (S) - 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxipropil) -6, 8-dimetilpirido [2,3-d] pirimidino-4, 7 (3H, 8fí) -diona; (R) -5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxipropil) -6, 8-dimetilpirido [2,3-d] pirimidino-4, 7 (3H, 8ff) -diona; 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2-hidroxietil) -6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-6,8-dimetilpirido[2,3— d] pirimidino-4, 7 (3ff, 8H) -diona; (S) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) -6,8-dimetilpirido [2,3-d] pirimidino-4, 7 (3ff, 8ff) -diona; 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-6, 8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(35,85)-diona; 5- (2-Fluorofenilamino)-3-(2-hidroxietil)-6,8-dimetil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(35,85)-diona; (5) - 3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofenil amino)-6, 8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(35,QH)-diona; 6- Fluoro-5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietil) -8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (R) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino- 4, 7 (3H, QH) -diona; (5)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3H, QH) -diona; (5)-5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(35, QH)-diona; (S) -3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofeni1 amino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino- 4, 7 (3H, QH) -diona; (5)-3-(2,3-di-hidroxipropil)-5-(4-etinil-2-fluorofeni1 amino)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (35, QH) -diona; (5)-N-(4-(3-(2,3-Di-hidroxipropil)-6-fluoro-8-metil-4,7-dioxo-3,4,7,8-tetra-hidropirido[2,3-d]pirimidin-5-ilamino)-3-fluorofenil)metanossulfonamida; 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) -8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(35,85)-diona 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (35, 85) -diona; 5- (2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxietoxi)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropoxi)-5-(2-fluoro-4-iodofenil-amino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona (R)-3-(2,3-Di-hidroxipropoxi)-6-fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7 (3Η, 8H) -diona; (R) -5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-6-cloro-3-(2,3-di-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino- 4, 7(3H,8H)-diona; 6- Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxi-etil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί {3H, 8H)-diona; 5- (2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 6- Cloro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3-(3-hidroxipropil) -8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona; 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-6-cloro-3-(3-hidroxi-propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7{3H, 8H)-diona; 5-(4-Bromo-2-clorofenilamino)-3-(3-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; 5-(4-Bromo-2-clorofenilamino)-6-cloro-3-(3-hidroxipropil) -8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί(3H,8H)-diona; 3-(2-(Dimetilamino)etil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) 8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; 5-(2-Fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxipropil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (S) -3-(2,4-Di-hidroxibutil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) -8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona 6-Cloro-5-(2 — fluoro-4-iodofenilamino)-3-(2-hidroxi-propil)-8-metilpirido[ 2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; (S) - 5-(4-Bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-6-fluoro-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; 3-Benzil-5-(2—fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; 3-(1,3-Di-hidroxipropan-2-il)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino) -6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; (5)-3-(2,3-Di-hidroxipropil)-5-(4-etini1-2-fluorofenil amino)-6,8-dimetilpirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί (3H, 8H) -diona; 2- fluoro-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetil-pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-3,8-dimetil-2-(metil-amino)pirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona; 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-2,3,8-trimetilpirido[2,3 d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 3- ciclopropil-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; (S)-5-(4-bromo-2-clorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, Ί(3H, 8H)-diona; (S)-3-(2,3-di-hidroxipropoxi)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino )-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, 8H)-diona 3-(2-aminoetoxi)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metil pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H,8H)-diona; 3-(3-aminopropil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; 3-(2-aminoetil)-5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metilpirido [2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,8H)-diona; 11 5-(2-fluoro-4-iodofenilamino)-8-metil-3-(pirrolidin-3-ilmetil)pirido[2,3-d]pirimidino-4,7(3H, 8H)-diona; (S)-5-(2-cloro-4-iodofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H, QH)-diona, e (5)-5-(4-bromo-2-fluorofenilamino)-3-(2,3-di-hidroxi-propil)-8-metilpirido[2,3-d]pirimidino-4, 7(3H,QH)-diona.
19. Composição farmacêutica que compreende, como ingrediente ativo, um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18 e um excipiente farmacêutico.
20. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18 para utilização como medicamento.
21. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18 no fabrico de um medicamento para o tratamento de perturbações hiperproliferativas cancerosas; perturbações hiperproliferativas não cancerosas; pancreatite; doença renal; dor; prevenção da implantação de blastócitos; tratamento de doenças relacionadas com vasculogénese ou angiogénese; asma; quimiotaxia de neutrófilos; coque sético; doenças mediadas por células T onde seria importante a supressão imunológica; aterosclerose; inibição de respostas de queratinócitos a "cocktails" de fatores de crescimento, e doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD).
22. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18 para utilização no tratamento de perturbações 12 hiperproliferativas cancerosas; perturbações hiperproliferativas não cancerosas; pancreatite; doença renal; dor; prevenção da implantação de blastócitos; tratamento de doenças relacionadas com vasculogénese ou angiogénese; asma; quimiotaxia de neutrófilos; coque sético; doenças mediadas por células T onde seria importante a supressão imunológica; aterosclerose; inibição de respostas de queratinócitos a "cocktails" de fatores de crescimento, e doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD). Lisboa,
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Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1790649A1 (en) * 2005-11-21 2007-05-30 Sanofi-Aventis Substituted bicyclic pyrimidone derivatives
TW200800997A (en) * 2006-03-22 2008-01-01 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US20100204471A1 (en) * 2006-10-23 2010-08-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Mapk/erk kinase inhibitors
JO2985B1 (ar) 2006-12-20 2016-09-05 Takeda Pharmaceuticals Co مثبطات كينازmapk/erk
SA08280783B1 (ar) * 2007-01-11 2011-04-24 استرازينيكا ايه بي مشتقات بيريدوبيريميدين كمثبطات pde4
JP5363350B2 (ja) 2007-03-19 2013-12-11 武田薬品工業株式会社 Ｍａｐｋ／ｅｒｋキナーゼ阻害剤
JP5453290B2 (ja) * 2007-11-12 2014-03-26 武田薬品工業株式会社 Ｍａｐｋ／ｅｒｋキナーゼ阻害剤
US20090246198A1 (en) * 2008-03-31 2009-10-01 Takeda Pharmaceutical Company Limited Mapk/erk kinase inhibitors and methods of use thereof
CN102216274A (zh) * 2008-11-18 2011-10-12 武田药品工业株式会社 (R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮及其中间体的制备方法
US20130315895A1 (en) 2010-07-01 2013-11-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited COMBINATION OF A cMET INHIBITOR AND AN ANTIBODY TO HGF AND/OR cMET
TWI505828B (zh) * 2010-12-20 2015-11-01 葛蘭素史克智慧財產（第二）有限公司 新穎醫藥組成物
AR086656A1 (es) * 2011-06-03 2014-01-15 Millennium Pharm Inc Combinacion de inhibidores de mek e inhibidores selectivos de la quinasa aurora a
ES2857649T3 (es) 2012-03-01 2021-09-29 Array Biopharma Inc Inhibidores de serina/treonina cinasa
US20150126533A1 (en) * 2012-03-30 2015-05-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Administration of a raf inhibitor and a mek inhibitor in the treatment of melanoma
US9868737B2 (en) * 2014-06-17 2018-01-16 Cisen Pharmaceutical Co., Ltd. Pyridino[1,2-A]pyrimidone analogue used as MTOR/P13K inhibitor
WO2016009306A1 (en) * 2014-07-15 2016-01-21 Lupin Limited Heterocyclyl compounds as mek inhibitors
KR101671404B1 (ko) * 2014-09-02 2016-11-02 한국원자력의학원 항암 효과, 방사선 병용치료 효과 및 당뇨병 치료 효과를 갖는 피리미딘 유도체 및 이의 의학적 용도
JP2016155776A (ja) * 2015-02-24 2016-09-01 学校法人兵庫医科大学 抗腫瘍効果増強剤および抗腫瘍剤
KR102580179B1 (ko) * 2017-06-23 2023-09-18 씨스톤 파마슈티컬즈 Mek억제제로서의 쿠마린 고리계 화합물 및 이의 용도
GB201713975D0 (en) 2017-08-31 2017-10-18 Macrophage Pharma Ltd Medical use
CN113473986A (zh) 2018-11-20 2021-10-01 恩福莱克逊治疗有限公司 用于治疗皮肤疾病萘啶酮苯胺化合物
TWI825637B (zh) 2021-03-31 2023-12-11 美商輝瑞股份有限公司 啶－１，６（２ｈ，７ｈ）－二酮
CN117779203A (zh) * 2024-02-28 2024-03-29 西北工业大学 一种n-苄基-2-甲基-4-硝基苯胺单晶及其制备方法和应用

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5430148A (en) 1992-03-31 1995-07-04 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Antiproliferative quinazolines
IL117923A (en) 1995-05-03 2000-06-01 Warner Lambert Co Anti-cancer pharmaceutical compositions containing polysubstituted pyrido¬2,3-d¾pyrimidine derivatives and certain such novel compounds
GEP20032922B (en) 1999-01-13 2003-03-25 Warner Lambert Co Benzoheterocycles and Their Use as MEK Inhibitors
AR030044A1 (es) 2000-01-25 2003-08-13 Warner Lambert Co Pirido (2,3-d ) pirimidin-2,7-diaminas inhibidores de quinasas
AU2001273498B2 (en) 2000-07-19 2006-08-24 Warner-Lambert Company Oxygenated esters of 4-iodo phenylamino benzhydroxamic acids
HU229471B1 (en) 2000-10-23 2014-01-28 Smithkline Beecham Corp 2,4,8-trisubstituted-8h-pyrido[2,3d]pyrimidine-7-one compounds, for the treatment of diseases mediated by csbp/p38 kinase
US6825180B2 (en) 2001-05-18 2004-11-30 Cell Therapeutics, Inc. Pyridopyrimidine compounds and their uses
WO2003077855A2 (en) 2002-03-13 2003-09-25 Array Biopharma, Inc N3 alkylated benzimidazole derivatives as mek inhibitors
TWI343377B (en) 2002-03-13 2011-06-11 Array Biopharma Inc N3 alkylated benzimidazole derivatives as mek inhibitors
NZ544112A (en) 2003-05-23 2010-01-29 Zentaris Gmbh Novel pyridopyrazines and use thereof as kinase modulators
AU2003277715A1 (en) 2003-07-03 2005-01-21 Sunghag Koo Ferment ginseng oil
ATE442847T1 (de) 2003-07-24 2009-10-15 Warner Lambert Co Benzimidazol-derivate als mek-hemmer
AU2004260689B8 (en) 2003-07-29 2008-05-15 Irm Llc Compounds and compositions as protein kinase inhibitors
CA2546486A1 (en) 2003-11-19 2005-06-09 Array Biopharma Inc. Heterocyclic inhibitors of mek and methods of use thereof
US7378423B2 (en) 2004-06-11 2008-05-27 Japan Tobacco Inc. Pyrimidine compound and medical use thereof
RU2364596C2 (ru) 2004-06-11 2009-08-20 Джапан Тобакко Инк. ПРОИЗВОДНЫЕ 5-АМИНО-2,4,7-ТРИОКСО-3,4,7,8-ТЕТРАГИДРО-2Н-ПИРИДО[2,3-d] ПИРИМИДИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ
DE102004054215A1 (de) 2004-11-10 2006-05-11 Merck Patent Gmbh Pyridopyrimidinonderivate
US20070299103A1 (en) 2004-12-01 2007-12-27 Ulrich Abel [1,2,4]Triazolo[4,3-A]Pyridine Derivatives for the Treatment of Hyperproliferative Diseases
CA2657287A1 (en) 2006-07-17 2008-01-24 Merck & Co., Inc. 1-hydroxy naphthyridine compounds as anti-hiv agents
US20100204471A1 (en) 2006-10-23 2010-08-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Mapk/erk kinase inhibitors
JP2010509265A (ja) 2006-11-09 2010-03-25 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー キナーゼ阻害剤としての置換６−フェニル−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン誘導体及びそれの使用方法
JO2985B1 (ar) * 2006-12-20 2016-09-05 Takeda Pharmaceuticals Co مثبطات كينازmapk/erk
JP5453290B2 (ja) 2007-11-12 2014-03-26 武田薬品工業株式会社 Ｍａｐｋ／ｅｒｋキナーゼ阻害剤
US20090246198A1 (en) 2008-03-31 2009-10-01 Takeda Pharmaceutical Company Limited Mapk/erk kinase inhibitors and methods of use thereof
CN102216274A (zh) 2008-11-18 2011-10-12 武田药品工业株式会社 (R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮及其中间体的制备方法

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