PT1802625E

PT1802625E - Pirazolobenzodiazepinas di-substituídas, úteis como inibidores de cdc2 e de angiogénese e para o tratamento de cancro da mama, do cólon, do pulmão e da próstata

Info

Publication number: PT1802625E
Application number: PT05792946T
Authority: PT
Inventors: Giacomo Pizzolato; Peter Michael Wovkulich; Jin-Jun Liu; Kshitij Chhabilbhai Thakkar; Kin-Chun Luk; Yi Ren; Zhuming Zhang
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2004-10-13
Filing date: 2005-10-04
Publication date: 2008-08-06
Also published as: PL1802625T3; JP2008515939A; CN101899049A; IL182423A0; CN101039946A; HRP20080429T3; HK1108284A1; AU2005293818A1; ES2308551T3; DK1802625T3; DE602005007623D1; EP1802625B1; KR100858262B1; BRPI0518152A; MX2007004464A; TW200628469A; ATE398619T1; US7524840B2; NZ554353A; TWI309652B

Description

DESCRIÇÃO

PIRAZOLOBENZODIAZEPINAS DI-SUBSTITUÍDAS, ÚTEIS COMO

INIBIDORES DE CDC2 Ξ DE ANGIOGÉNESE E PARA O TRATAMENTO DE CANCRO DA MAMA, DO CÓLON, DO PULMÃO E

DA PRÓSTATA A presente invenção tem por objecto pirazolobenzodiaze-pinas di-substituldas que inibem a angiogénese e/ou a activi-dade da cinase. Estes compostos são úteis no tratamento de tumores cancerosos, especialmente, tumores da mama, do cólon, do pulmão e da próstata; A angiogénese é a formação de novos vasos sanguíneos num tecido ou num órgão. Em condições fisiológicas normais, os seres humanos e os animais sofrem angiogénese apenas em situações muito específicas e restritas. Por exemplo, observa-se normalmente a angiogénese na cura de feridas, no desenvolvimento fetal e embriónico e na formação do corpus luteum, endométrío e placenta.

Os vasos sanguíneos capilares são compostos por células endoteliais e perícitos, rodeados por uma membrana basal. A angiogénese começa com a erosão da membrana basal por meio de enzimas libertadas das células endoteliais e dos leucócitos. As células endoteliais, que revestem o lúmen dos vasos sanguíneos, passam depois através da membrana basal. Os estimu-lantes angiogénicos induzem as células endoteliais a migrar através da membrana basal desgastada. As células que migram formam um "rebento" do vaso sanguíneo que lhe deu origem, em que as células endoteliais sofrem mitose e proliferam. Os rebentos endoteliais fundem-se uns com os outros para formar os anéis capilares, criando um novo vaso sanguíneo. 2 A angiogénese incontrolada é uma marca do cancro. Em 1971, o Dr. Judah Folkman sugeriu que o crescimento do tumor era independente da angiogénese. Ver, por exemplo, Folkman, New England Journal of Medicine, 285: 1182-86 (1971). De acordo com o Dr. Folkman, um tumor pode crescer apenas até a uma certa dimensão sem o crescimento de vasos sanguíneos adicionais que alimentem o tumor. Em termos mais simples, isto significa que: "uma vez ocorrida a 'fase de formação de células cancerosas' do tumor, cada aumento da população das células do tumor deve ser precedido de um aumento de novos capilares que convirjam para o tumor". A 'fase de formação de células cancerosas' do tumor é normalmente entendida como indicando uma fase pré-vascular do crescimento do tumor, em que uma população de células do tumor que ocupam um volume de alguns milímetros cúbicos e não excede alguns milhões de células, pode sobreviver com os micro-vasos existentes no hospedeiro. A expansão do volume do tumor para além desta fase requer a indução de novos vasos sanguíneos capilares. Por exemplo, as micro-metástases pulmonares, · na fase pré-vascular precoce,· em ratos, não seriam detectáveis a não ser através de um microscópio de alta potência, em lâminas histológicas.

No início de 1945, Algire, et al., J. Nat. Câncer Inst., 6: 73-85 (1945), mostraram que a taxa de crescimento de tumores implantados nas câmaras transparentes subcutâneas, em ratos, era lenta e linear antes da neovascularização e rápida e praticamente exponencial após a neovascularização. Em 1966, o Dr. Folkman referiu que os tumores cresciam em órgão per-fundidos isolados em que os vasos sanguíneos não proliferam e se limitavam a 1-2 mm3 mas que se expandiam rapidamente para um volume 1.000 vezes superior quando eram transplantados para ratos e se tornavam neovascularizados. Ver, por exemplo, Folkman, et al., Anais of Surgery, 164: 491-502 (1966). 3 0 crescimento do tumor numa córnea não vascularizada progride lentamente e a uma taxa linear, mas passa para um crescimento exponencial após a neovascularização. Ver, por exemplo,· Gimbrone, Jr., et al., J. Nat. Câncer Inst., 52: 421-27 (1974). Os tumores suspensos no fluido aquoso da cama-ra anterior do olho de coelho permanecem viáveis, avasculares e com uma dimensão limitada < 1 mm3. Uma vez implantados na cama vascular da íris, tornam-se neovascularizados e crescem rapidamente atingindo 16.000 vezes o seu volume original no prazo de duas semanas. Ver, por exemplo, Gimbrone, Jr. et al., J. Exp. Med., 136: 261-76.

Quando os tumores são implantados na membrana corioalan-tóica de embriões de galinhas> crescem lentamente durante a fase não vascular, durante mais de 72 horas, mas não excedem um diâmetro médio de 0,93 + 0,29 mm. A expansão rápida do tumor ocorre no prazo de 24 horas após o início da neovascularização e ao 7o dia os tumores vascularizados atingem um diâmetro médio de 8,0 + 2,5 mm. Ver, por exemplo, Knighton, British, J. Câncer, 35: 347-56 (1977).

Os cilindros vasculares das metástases no fígado de coelhos revelam heterogeneidade na dimensão das metástases, mas mostram um ponto de corte relativamente uniforme para a dimensão à qual está presente a vascularização·. Os tumores geralmente não são vascularizados até 1 mm de diâmetro, mas são neovascularizados para além desse diâmetro. Ver, por exemplo, Lien, et al·., Surgery, 68: 334-40 (1970).

Em ratos transgénicos que desenvolvem carcinomas nas células beta nos ilhéus pancreáticos, os ilhéus hiperplásicos pré-vasculares limitam-se a uma dimensão inferior a 1 mm. Às 6-7 semanas de idade, 4-10 % dos ilhéus tornam-se neovascularizados e a partir destes ilhéus aparecem grandes tumores 4 vascularizados com um volume superior a mais de 1.000 vezes o dos ilhéus pré-vasculares. Ver, por exemplo, Folkman, et al., Nature, 339: 58-61 (1989).

Tem vindo a ser demonstrado que os tumores podem ser tratados por inibição da angiogénese em vez da inibição da proliferação das próprias células do tumor. Por exemplo, Kim et al., Nature, 362: 841044 (1993), mostra que um anticorpo especifico contra o factor de crescimento vascular endotelial (FCVE, VEGF na terminologia inglesa), reduz a densidade dos microvasos e causa uma inibição "significativa ou dramática" do crescimento de três tumores humanos que contavam com o FCVE como o único mediador da angiogénese (em ratos pelados). Q anticorpo não inibe o crescimento das células do tumor in vitro. Além disso, Hori, et al., Câncer, Resp. 51: 6180-84 (1991), mostram que os anticorpos monoclonais anti-FCFb causam 70 % de inibição do crescimento de um tumor de um rato que está dependente da secreção de FCFb como o seu único mediador de angiogénese. 0 anticorpo não inibe o crescimento das células de tumor in vitro. A injecção intraperitonial de FCFb também tem demonstrado que aumenta o crescimento de um tumor primário e das suas metástases por meio da estimulação do crescimento das células endoteliais capilares no tumor. As próprias células do tumor têm falta de receptores para o FCFb e o FCFb não é mitogénico para as células de tumor in vitro. Ver, por exemplo, Gross, et al., Proc. Am. Assoe. Caricer Res., 31: 79 (1990). Um inibidor especifico da angiogénese (AGM-1470) inibe o crescimento do tumor e as metástases in vivo, mas é menos activo na inibição da proliferação das células de tumor in vitro. Inibe a proliferação das células endoteliais vasculares até a um ponto semi-máximo numa concentração inferior a 4 logs que inibe a proliferação de células de tumor. Ver, por exemplo, Ingber, et al., Nature, 48: 555-57 (1990)1 5 Há também evidências clinicas indirectas de que o crescimento do tumor é dependente da angiogénese. Por exemplo, os retinoblastomas humanos que são metastásicos para o vítreo desenvolvem-se em espiróides não vasculares que se restringem a dimensões menores que 1 mm3 apesar do facto de serem viáveis e de incorporarem 3H-timidina (quando retirados de um olho enucleado e analisados in vitro) . 0 carcinoma do ovário metastisa para a membrana peritonial sob a forma de sementes brancas avasculares minúsculas (1-3 mm3) . Estes implantes raramente se tornam maiores até que um ou mais deles se tornam neovascularizados. A intensidade da neovas-cularização no cancro da mama (ver, por exemplo, Weidner, et al., New Eng.. J. of Med., 324: 1-8 (1991); Weidner, et al., J. Nat. Câncer Inst., 84: 1875-87 (1992)) e no cancro da próstata (Weidner, et al., Am. J. Pathol., 143 (2): 401-09 (1993) estão altamente relacionadas com o risco de metástases futuras.

As metástases do melanoma cutâneo em seres humanos são raras antes da neovascularização. 0 início da neovasculari-zação leva a um espessamento aumentado da lesão e a um aumento do risco de metástases. Ver, por exemplo, Srivastava, et al., Am. J. Pathol., 133: 419-23 (1988). No cancro da bexiga, ao nível urinário de uma proteína angiogénica, o FCFb é um indicador mais sensível do estado e da extensão da doença do que a citologia. Ver, por exemplo, Nguyen, et al., J. Nat. Câncer, Inst., 85: 241-42 (1993). A angiogénese tem sido associada com um certo número de tipos de cancro diferentes, incluindo tumores sólidos e tumores que têm origem no sangue. Os tumores sólidos com os quais' a angiogénese tem sido associada incluem, mas não se limitam a, rabdomiossarcomas, retinoblastoma, sarcoma de Ewing, neuroblastoma e osteosarcoma. A angiogénese também tem 6 sido ligada ao cancro da mama, cancro da próstata, cancro do pulmão e cancro do cólon. A angiogénese está também associada a tumores com origem no sangue, tal como, leucemias, linfornas, mielomas múltiplos e qualquer uma das várias doenças neoplásicas agudas ou crónicas da medula óssea, em que ocorre uma proliferação e restrita das células brancas do sangue, normalmente acompanhadas de anemia, coagulação defeituosa do sangue e alargamento dos nódulos linfáticos, figado e baço. Crê-se também que á angiogénese desempenha um papel nas anomalias da medula óssea, que dão origem a leucemia e tumores de linfoma e múltiplas doenças do mieloma.

Uma das doenças angiogénicas mais frequentes da infância é o hemangíoma. Um hemangioma é um tumor composto por vasos sanguíneos recentemente formados. Na maior parte dos casos os tumores são benignos e regridem sem intervenção. Nos casos mais severos, os tumores progridem até cavernas grandes e formas infiltrantes e criam complicações, clinicas. As formas sistémicas de hemangiornas, hemangiomatoses, têm uma. taxa elevada de mortalidade. Existem hemangiomas resistentes à terapia que não podem ser tratados com as terapias que estão correntemente em uso.

Assim, é claro que a' angiogénese desempenha um papel principal nas metástases do cancro. Se esta actividade angiogénica puder ser reprimida ou eliminada, então o tumor, embora presente, não irá crescer. No estado da doença, a prevenção da angiogénese pode abortar os danos causados pela invasão do novo sistema microvascular. As terapias dirigidas ao controlo dos processos angiogénicos podem levar ao desaparecimento ou à mitigação destas doenças.

Estão a ser investigadas várias classes de compostos que inibem a angiogénese e funcionam como agentes terapêuticos. 7

Trata-se, por exemplo, de talidomida e análogos de talidomida (patentes de invenção norte-americanas USP 6.235.756 (The Children^s Medicai Center Corporation); 6.420.414 (The Children's Medicai Center Corporation); 6.476.052 (Celgene Corporation); quinolinonas (patente de invenção norte-americana USP 6.774.237 (Chiron Corporation)); proteases de serinas e calicreinas (patente de invenção norte-americana USP 6.544.947 (EntreMed Inc.)); análogos e antagonistas de FCVE (patentes de invenção norte-americanas USP 6.783.953 (Janssen Pharmaceutica N.V.);' 6.777.534 (Children^s Medicai Center Corporation)); péptidos e proteínas que se ligam a Angiostatina™ ou Endostatina™ (patente de invenção norte-americana USP 6.201.104 (EntreMed Inc.)); polipéptidos semelhantes a catepsina V (patente de invenção norte-americana' USP 6.783.969 (Kuvelo Inc.)); outros péptidos anti-angiogénicos (patente de invenção norte-americana USP 6.774.211 (Abbott Laboratories); 4-anilino-quinazolinas (patentes de invenção WO 2002/092578, WO 2002/092577, W O 2002/016352, WO 2001/032651, WO 2000/047212 (Astrazeneca)); ftalazinas (patentes de invenção WO 2004/033042 (Novartis), WO 2003/0.22282 (Novartis), WO 2002/012227 (Astrazeneca), WO 2001/010859 (Bayer), WO 98/35958 (Novartis)); isotiazoles (patente de invenção WO 99/62890 (Pfizer)); e indolinonas (WO 2001/037820, WO 2000/008202, WO 98/50356, WO 96/40116 (Sugen Inc.)). Vários artigos de revisão reportam a utilização de ini-bidores de angiogénese como agentes terapêuticos. Estes artigos incluem Mazitschek et al., Current Opinion in Chemical Biology, 8 (4): 432-441 (2004); Underiner, et al., Current Medicinal Chemistry, 11 (6); 731-745 (2004); Manley, et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1697 (1-2): 17-27 (2004) ; Alessi, et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1654 (1): 39- 8 49 (2004); Tortora, et al., Current Pharmaceutical Design, 10 (1): 11-26 (2004). A proliferação descontrolada das células é uma das outras marcas do cancro. As células de tumores cancerosos normalmente têm alguma maneira de danificar os genes que directa ou indirectamente regulam o ciclo de divisão das células.

As cinases dependentes de ciclina (CDCs) são enzimas que são criticas para o controlo do ciclo das células. Ver, por exemplo, Coleman et- al., Annual Reports in Medicinal Chemistry, 32: 171-179 (1997). Estas enzimas regulam as transições entre as diferentes fases dos ciclos das células, tal como a progressão desde a fase Gi até à fase S (o período da síntese do ADN activo) ou a progressão da fase G2 até à fase M, em que ocorre a mitose activa e a divisão das células. Ver, por exemplo, os artigos sobre este assunto que aparecem na Science, 274: 1643-1677 (6 de Dezembro de 1996).

As CDCs são compostas por uma sub-unidade catalítica de CDC e uma subunidade de ciclina reguladora. A subunidade de ciclina é o regulador chave da actividade de CDC, com cada CDC interagindo com um sub-conjunto específico de ciclinas: por exemplo, ciclina A (CDC1, CDC2). Os diferentes pares de cinase/ciclina regulam a progressão através de estados específicos do ciclo das células. Ver, por exemplo, Coleman, supra.

As aberrações no sistema de controlo do ciclo das células têm sido implicadas no crescimento descontrolado das células cancerosas. Ver, por exemplo, Kamb, Trends in Genetics, 11: 136-140 (1995); e Coleman, supra. Além disso, as alterações na expressão dos genes que codificam as CDCs ou 9 os seus reguladores têm sido observadas num certo número de tumores. Ver, por exemplo, Webster, Exp. Opin. Invest. Drugs, 7: 865-887 (1998) e as referências ai citadas. Assim, há um extenso corpo de literatura que valida a utilização de compostos que inibem as CDCs como agentes terapêuticos anti-proliferativos. Ver, por exemplo, a patente de invenção norte-americana U.S. N°. 5.621.082; a patente de invenção europeia EP 0 666 270 A2; a patente de invenção WO 97/16447; e as referências citadas em Coleman, supra, em particular, a referência n°. 10. Assim, é desejável identificar inibidores químicos da actividade das cinases CDC. É particularmente desejável identificar compostos de moléculas pequenas que possam ser facilmente sintetizados e sejam eficazes na inibição de um ou mais complexos de CDCs ou CDC/ciclina, para o tratamento de um ou mais tipos de tumores. Várias classes de compostos, que inibem as cinases dependentes de ciclinas, têm sido identificadas e estão a ser investigadas como agentes terapêuticos. Trata-se, por exemplo, de análogos de Flavopiridol (patente de invenção norte-americana USP 5.733.920 (Mitotix); patentes de invenção WO 98/1344 (Bristol-Myers Squibb); WO 97/42949 (Bristol-Meyers Squibb))·; derivados de purina (patentes de invenção WO 98/05335 (CV Therapeutics); WO 97/20842 (CNRS)}; acridonas e benzotiadiazinas (patente de invenção WO 98/49146 A2 ' (US Dept. of Health and Human Services)); e anti-paralelos (patente de invenção norte americana USP 5.821.234 (Stanford University)). Além disso, certas di-hidropirazolobenzo-diazepinas substituídas em N,N já foram descritas num artigo que discute os compostos que actuam no SCN (sistema nervoso central) . Ver, Μ. A. Berghot, . Arch. Pharm. 325: 285-289 (1992). 10

Continua a existir a necessidade de compostos de moléculas pequenas facilmente sintetizados para o tratamento de um ou mais tipos de tumores, em particular, através da regulação da angiogénese e/ou das CDCs. A presente invenção tem por objecto novas pirazolobenzodiazepinas di-substituidas nas posições 7 e 8 e os sais destes compostos, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. Os compostos da presente invenção são inibi-dores da angiogénese e/ou cinases, tais como, cinases dependentes de ciclina (CDCs), em particular, CDC2. Estes compostos e os ésteres e sais destes compostos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico são agentes anti-prolife-rativos, úteis no tratamento ou no controlo de distúrbios proliferativos das células, em particular, do cancro. A presente invenção também tem por objecto composições farmacêuticas que contêm esses compostos e os processos para o tratamento e/ou a prevenção de cancro, particularmente, no tratamento ou no controlo de tumores sólidos. Os compostos da presente invenção são especialmente úteis no tratamento ou no controlo de tumores da mama, do cólon, do pulmão e da próstata. A presente invenção tem também por objecto novos produtos intermédios úteis na preparação das pirazolobenzodiazepinas di-substituidas nas posições 7 e 8, tal como, os compostos de fórmula IV, que se descrevem a seguir.

Em particular, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV

11 em que R1 representa alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, COOH, COO-alquilo, CN, C(0)N(R6)2 ou (OCH2CH2) 11OCH3; R2·representa alquilo, átomos halogéneo, alquilo substituído por halogéneo,. OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fenilo, N(R6)2,' (OCH2CH2) nOCH3, 0(CH2)mNR7R8 ou OCCH^—CJi r

/ "n C N W representa um heterociclo com 6- átomos no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C(0)GRs; ou R1 e R2, em conjunto, fornam um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R3 representa hidrogénio ou-alquilo; R4 representa hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, N02, alquilo ou alcoxi;· cada R6 representa, indep.endent emente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representam, cada um, independentemente, hidrogénio,, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8 considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um heterocíclico com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; cada n representa, independentemente, 1, 2, ou 3; e m representa 2, 3 ou 4; ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. A presente invenção tem ainda por objecto composições farmacêuticas que contêm qualquer um ou mais do que um dos compostos descritos .antes ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e o veículo aceitável sob o ponto 12 de vista farmacêutico. Os processos para a preparação dessas composições também fazem parte da presente invenção. A presente invenção também tem por objecto processos de utilização dos compostos da presente invenção. Os compostos da presente invenção são inibidores de angiogénese e/ou de cinases. Assim, a presente invenção tem por objecto um processo de inibição da angiogénese. A presente invenção também tem por objecto um processo de inibição das cinases. Além disso, a presente invenção tem por objecto um processo para o tratamento de cancro, especialmente cancros da mama, do cólon, do pulmão e da próstata, por meio da administração de um paciente que tenha o cancro, de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico de um composto de fórmula IV ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

Num dos aspectos, a presente invenção tem por objecto 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]ben-zodiazepinas di-substituídasnas posições 7 e 8 e as composições farmacêuticas que as contêm. Num segundo aspecto, a presente invenção tem por objecto processos para síntese dos compostos da presente invenção e intermédios valiosos para serem utilizados nessas sínteses.

Os compostos da presente invenção são inibidores de angiogénese. Assim, num terceiro aspecto, a presente invenção tem por objecto um processo de inibição da angiogénese, que compreende a administração de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico de um composto da presente invenção. Os compostos da presente invenção são também inibidores de cinases, tal como, da CDC2. Por isso, num quarto aspecto, a presente invenção tem por objecto um processo de inibição da actividade de cinases, que compreende a administração de uma quantidade efectiva sob o ponto de 13 vista terapêutico de um composto da presente invenção. Num quinto aspecto, a presente invenção tem por objecto um processo para o tratamento ou o controlo de cancro, que compreende a administração de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico de um composto dâ presente invenção. Em particular, a presente invenção tem por objecto processos para o tratamento do cancro da mama, da próstata, do cólon e do pulmão.

Tal como se utiliza aqui, os termos que se seguem devem ter as definições seguintes. As definições que se seguem utilizadas aqui, aplicam-se, indiferentemente, quer os termos em questão apareçam isolados ou em combinação. Deve notar-se que, tal como se utiliza na presente memória descritiva e nas reivindicações em anexo, as formas singulares "um", "uma" e "o" incluem as formas plurais, a menos que o contexto claramente o indique de outra forma. "Alquilo", significa um hidrocarboneto alifático saturado, de cadeia linear ou ramificada, substituído ou insubstituído, com 1 a 6, preferencialmente, 1 a 4 átomos de carbono. Os grupos alquilo típicos incluem metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, t-butilo, 2-butilo, pentilo, hexilo e similares. "Alcoxi", significa um grupo hidrocarbonoxi, de cadeia linear ou ramificada, em que a porção "alquilo" é um grupo alquilo, tal como se definiu antes, e o grupo está ligado à molécula por via de um átomo de oxigénio. Grupos alcoxi típicos incluem metoxi, etoxi, propiloxi, i-propiloxi, n-butiloxi, 2-butiloxi, terc-butiloxi, n-pentiloxi, n-hexiloxi e similares. 14 "Halogéneo", significa flúor, cloro, bromo ou iodo. Os halogéneos preferidos são o flúor e o cloro. "Heteroátomo", significa um átomo seleccionado entre N, 0 e S. "Heterocíclico com 6 átomos no núcleo", significa um hidrocarboneto parcialmente ou completamente saturado, não aromático, com 6 átomos no núcleo, que contém um a três heteroátomos, sendo que pelo menos um deles é azoto. Exemplos de heterociclicos com 6 átomos no núcleo incluem piperidina, piperaziha, morfolina, tiomorfolina e similares. "Anel heterocíclico com 5 ou 6 átomos no núcleo", significa um anel com 5 ou 6 átomos no núcleo, contendo de um a três heteroátomos. Exemplos de anéis carbocíclicos incluem pentilo e hexilo e similares. Exemplos de anéis heterociclicos incluem dioxanos, dioxolanos, pirrolidinas, imidazoli-dinas e similares. "CI50", refere-se à, concentração de uma pirazolobenzo-diazepina particular, necessária para inibir 50 % de uma actividade específica medida. [CI50 pode ser medida, inter alia, conforme descrito no Examplo A, infra]. "Ciso"/· refere-se à concentração de uma pirazolobenzo-diazepina particular, necessária para inibir 90 % de uma actividade específica medida. "Aceitável sob o ponto de vista farmacêutico", tal como, veículo, excipiente, etc., aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, significa aceitável sob o ponto de vista farmacêutico e praticamente não tóxico para o indivíduo ao qual se administra o composto particular. 15 "Sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico", refere-se a sais de adição de ácido ou sais de adição de base convencionais, que retêm a eficácia biológica e as propriedades dos compostos de fórmula IV e são formados a partir de ácidos orgânicos ou inorgânicos ou de bases orgânicas ou inorgânicas apropriadas e não tóxicas. Exemplos de sais de adição de ácido incluem os derivados de ácidos inorgânicos, tais como, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodridico, ácido sulfúrico, ácido sulfârtiico, ácido fosfórico e ácido nítrico e os derivados de ácidos orgânicos, tais como, ácido p-tolueno-sulfónico, ácido salicílico, ácido metano-sulfónico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido citrico, ácido málico, ácido láctico, ácido fumárico e similares. Exemplos de sais de adição de bases incluem os derivados de amónio, potássio, sódio e hidróxidos de amónio quaternário, tais como, por exemplo, hidróxido de tetrametil-amónio. "Fenilo" significa um grupo funcional que é um anel de benzeno em que se eliminou um átomo de hidrogénio. Os grupos fenilo da presente invenção podem ser insubstituídos ou substituídos, por exemplo, por . alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, CN, N(R6}2, N02, etc.. "Substituído", tal como. em alquilo substituído, significa que a substituição pode ocorrer em uma ou mais posições e, a menos que seja indicado de outra forma, que os substituintes em cada sítio de substituição se seleccionam, independentemente, das opções especificadas. "Quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico", significa uma quantidade de pelo menos um composto de fórmula IV ou de um seu· sal, éster ou metabolito aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, que iniba significativamente a 16 proliferação de uma célula de tumor, incluindo linhas de células de tumores humanos ou que inibiam significativamente a angiogénese de vasos sanguíneos que fornecem o tumor.ou as suas metástases.

A presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV

em que R1 representa alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, COOH, COO-alquilo,· CN, C(0)N(R6)2 ou {OCH2CH2)nOCH3; R2 representa alquilo, átomos halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fenilo, N(R6)2, (OCH2CH2í„och3, 0(CH2)»NrV ou o r /"N C N w representa um heterociclo com 6 átomos no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C(0)0R6; ou R1 e R2, em conjunto, formam um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R3 representa hidrogénio ou alquilo; 17 R4 representa hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, NO2, alquilo ou alcoxi; cada R6 representa, independentemente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representam, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8 considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formam um heterociclico com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo. cada n representa, independentemente, 1, 2, ou 3; e m representa 2, 3 ou 4; ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Num enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R2 representa

OCHf-O

Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos incluem aqueles em que R1 representa átomos de halogéneo ou ciano.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R2 representa 0(CH2)mNR7R8. Nesses compostos, R7 e Rs podem representar, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados podem formar um heterocíclo com 6 átomos no núcleo. Por exemplo, NR7RS podem formar um anel de morfolina ou de piperazina. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R7 e R8 em conjunto com o azoto ao qual estão ligados, formam um heterocíclo com 6 átomos no núcleo e R1 representa halogéneo ou ciano.

Exemplos desses compostos incluem 18 5- (2-clorofenil) -1,2-di-hidro-7-fluoro-8- (3- (4-morfolinil) -propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)-propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)-propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-(2-(4-metil-l-pipe-razinil)etoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.

Também são preferidos os compostos em que R7 e R8· representam, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo e R1 representa halogéneo ou ciano. Um exemplo desses compostos é 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-(2-(2-metoxi-etil)me-tilamino)-etoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R2 representa N(R6)2, em que cada R6 representa, independentemente, hidrogénio ou alquilo. Dentro deste enquadramento, os compostos em que R1 representa quer um grupo halogéneo ou ciano, são preferidos, por exemplo, o composto 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-N,N-dimetilamino-3-metil-pirazolo[3,4-b]benzodiazepina.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R2 representa halogéneo, alquilo ou alquilo substituído por halogéneo. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R1 representa halogéneo, alquilo ou alcoxi. Exemplos desses compostos incluem 19 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7,8-trimetil-pirazolo-[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 8-cloro-5- (2-clorofenil) -1, 2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-pira-zolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-fluoro-7-metoxi-3-metil-pira- zolo[3,4-b] [1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-8-tri-fluoro-metil-pirazolo [3,4-b] [1., 4] benzodiazepina; e 8-cloro-5-. (2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-pirazolo-[3,4-b][1,4]benzodiazepina.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R2 representa hidroxi, alcoxi ou alcoxi substituído por halogéneo. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles, em que R1 representa alquilo, ciano, ΝΗ2<3(0) ou 0(CH2)nOCH3. Exemplos desses compostos incluem . 5- (2-clorofenil) -1, 2-di-hi.dro-8-metoxi-7-metoxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-píra-zolo-[3,4-b] [1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-8-metoxi-pira-zolo[3,4-b] [1,4]benzodiazepina.

Outros compostos preferidos dentro deste grupo são aqueles em que R1 representa halogéneo. Exemplos desses compostos incluem 7-cloro-5- (2-clorofenil) -l,'2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-pira-zolo-[3,4-b] [1,4]benzodiazepina; 7-bromo-5- (2-clorofenil) -1,2-d.i-hidro-8-metoxi-3-metil-pira-zolo-[3,4-b] [1,4]benzodiazepina; 20 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-3-metil-pira-zolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-etoxi-3-metil-pira-zolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-(1-metiletoxi)-3-me-til-pirazolo[3,4-b] [1,4]benzodiazepina.

Ainda outros compostos preferidos dentro deste grupo são aqueles em que R1 representa alcoxi. Exemplos desses compostos incluem 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-3-metil-pirazolo-[3,4-b]-[1,4]benzodiazepina; 1.2- di-hidro-3,7-dimetil-8-metoxi-5-fenil-pirazolo[3,4-b]-[1,4]-benzodiazepina; 1.2- di-hidro-7,8-dimetoxi-5-(2-metoxifenil)-3-metil-pirazo-lo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-(l-metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-(1-metiletoxi)-3- . metil-pirazo.lo [3,4-b][1,4]benzodiazepina.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R2 representa fenilo. Os compostos preferidos incluem aqueles em que R1 representa alcoxi, por exemplo, o composto 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hi-dro-7-metoxi-3-metil-8-fenil-pirazolo(3,4-b][1,4]-benzodiazepina.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R2 representa (OCH2CH2) nOCH3. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R1 representa halogéneo, alcoxi ou ciano. Exemplos desses compostos incluem 21 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-metoxietoxi“3-metil-pirazo.lo [3,4-b] [1, 4] benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxietoxi-3-metil-pirazolo [3,, 4-b] [1, 4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-metoxietoxi-3-metil-pirazolo [3,4-b] [1,4]benzodiazepina; e 5- (2-clorofenil) -7-ciano-l,. 2-di-hidro-8- (2- (2-metoxi-etoxi)etoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R1 e R2 em conjunto formam um anel de dioxolano. Um exemplo desse composto é a 5-(2-clorofenil)— 8,10-di-hidro-7-metil-l,3-dioxolo[4,5-h]pira-zolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R1 representa hal.ogéneo. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R1 representa R2 representa halogéneo; hidroxi; N(R6)2; 0(CH2)mNR7R3, por exemplo, em que NR7R8 formam um anel de morfolina; alcoxi, por exemplo, metoxi ou etoxi; ou

wnjr-O r em que n representa 1 ou 2.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R1 representa (OCH2CH2) nOCH3. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R2 representa alcoxi. 22

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R1 representa NH2C (O) . Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R2 representa alcoxi.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R1 representa alquilo. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R2 representa alcoxi, halogéneo, alquilo ou alquilo substituído por halogéneo.

Noutro enquadramento', a presente , invenção tem por objecto compostos de fórmula IV/ em que R1 representa alcoxi. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R2 representa alcoxi; halogéneo, por exemplo, cloro; fenilo; ou (OCH2CH2) 11OCH3, em que n representa 1 ou 2.

Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R1 representa ciano. Dentro deste enquadramento, os compostos preferidos são aqueles em que R2 representa hidroxi; alcoxi; 0 (CH2)mNR7R8, em particular, em que NR7R8 formam um anel de morfolina; (OCH2CH2)nOCH3; ou ocay—<0* em que n representa 1 ou 2 e m representa 2.

Noutro enquadramento, a presente, invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, em que R3 representa hidrogénio, isto é, compostos de fórmula XXII. Exemplos desses compostos incluem 23 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-pirazolo[3,4-b]-[1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-metil-pirazolo-[3., 4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-ciano-8-metoxi-pirazolo-[3,4-b] [1,4].benzodiazepina.

Ainda noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, conforme definido aqui na-tes, em que R4 representa orto-cloro; e R1, R2 e R3 têm os significados definidos antes.

Ainda noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula IV, conforme definido aqui antes, em que R3 representa metilo; R4 representa orto-cloro; e R1 e R2 têm· os significados definidos antes.

Ainda noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto. compostos de fórmula IV, conforme definido aqui antes, em que R1 representa halogéneo ou -CN; R3 representa metilo; R4 representa orto-cloro; e R2 tem o significado definido antes. A presente invenção tem por objecto processos para a síntese de pirazolobenzodiazepinas di-substituídas. Os processos apropriados para síntese dos compostos da presente 24 invenção são dados nos exemplos. Geralmente, o composto da presente invenção pode ser preparado de acordo com os esquemas de síntese que se dão a seguir.·

Os esquemas de síntese que se seguem providenciam dois processos gerais para a preparação dos compostos da presente invenção, isto é, compostos de fórmula IV. 0 processo A, ilustrado nos esquemas 1 e 2, uma benzodiazepina de fórmula I é convertida num composto de fórmula IV.

I!

Esquema 1

No processo do esquema 1, a lactama I é convertida na correspondente tiolactama II, de acordo com os processos conhecidos na técnica (patente de invenção WO 2000/064900; Scheíbye, S., et al.,. Bulletin des Societes Chimiques Belges, 87: 229-38 (1978); Jesberger, M., et al., Synthesis, 1929-1958 (2003)). A tiolactama II reage com acetal de dimetilo da N, N-dimetilacetamida, preferencialmente, a uma temperatura elevada, por exemplo, 60 a 130 °C, para formar o produto intermédio III, que ao reagir com hidrazina forma o derivado de pirazole IV. 25

VI IV

Esquema 2

No processo do esquema 2, que é uma variante do esquema 1, a lactama I converte-se no éter de O-metilo V, quer por processos conhecidos na técnica (Walser, A., et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, Vol. 50: 431-543 (1991); Walser, A., et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, vol. 50: 545-629 (1991); Walser, A., et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, vol 50: 631-848 (1991); Walser, A., et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, vol 50: 849-946 (1991); Archer, G. A., et al.,

Chemical Reviews, 68: 747-84 (1968); Sternbach, L. H., et al., Journal, of Organic Chemistry, 27: 3788-96 (1962); patente de invenção norte-americana U.S. N°. 3.681.341) ou por reacção com oxicloreto fosforoso seguido da reacção com metóxido de sódio. A reacção do éter V com o acetal de dimetilo da N,N-dimetilacetamida forma o produto intermédio VI que reage com hidrazina para formar o derivado de pirazole IV. 26

Os processos para a preparação dos compostos de fórmula I são bem conhecidos na literatura sobre benzodiazepina (Walser, A., et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, vol. 50:431-543 (1991); Walser, A., et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, vol. 50: 545-629 (1991); Walser, A., et al.,·

Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, vol O LO 631-848 (1991); Walser, A., et al., Chemistry of Heterocyclic Compounds, Chichester, United Kingdom, vol O LO 849-946 (1991); Archer, G. A., et al., Chemical Reviews, 68: 747- 84 (1968); Sternbach, L. H., et al., Journal of Organic Chemistry, 27: 3788-96 (1962)).

Para exemplos de compostos de fórmula I, em que o modelo de substituição não foi descrito previamente, a preparação segue o processo indicado no esquema 3, em que a condensação 27 de um derivado de anilina VII com um aldeído VIII na presença de um ácido de Lewxs de acordo com o processo descrito em Toyoda, T., et al., Tetrahedron Letters, 21: 173-6 (1980), gera um aminoálcool IX.

Os compostos de fórmula VIII estão disponíveis comercialmente. Os compostos de fórmula VIII estão disponíveis comercialmente ou são compostos conhecidos preparados a partir de materiais disponíveis comercialmente por meio de processos conhecidos na técnica. Os compostos de fórmula VII, com excepção de Vllgg, VTIkk, Vllii, e VTIjj, estão disponíveis comercialmente. Os. compostos de fórmula Vllgg e Vllkk podem ser preparados, por exemplo, pelo processo da patente de invenção francesa FR1573745.· Os compostos de fórmula Vllii e Vlljj podem ser preparados pelo processo que se segue, que está descrito em termos de Vllii. Agítòu-se, vigorosamente, numa atmosfera de hidrogénio de 50 psi, durante 4 horas, uma mistura de 7,34 g (0,0347 moles) de 1-metoxí-4-nitro-2-isopropoxibenzeno e 15 g de níquel de Raney, no seio de 80 mL de. tetra-hidrofurano-etanol (1:1). Depois filtrou-se a mistura através de uma almofada de celite e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 4,57 g de 3-metoxi-4-isopropoxianilina, que se utilizou directamente na etapa seguinte. Pode preparar-se VII jj de uma forma semelhante a partir de 2-metoxi-4-nitro-l-isopropoxibenzeno que se pode preparar a partir de materiais disponíveis comercialmente, utilizando o processo de Castello et al., Tetrahedron Letters, 26:2489-92 (1985).

Pode-se fazer a oxidação de IX na correspondente amino-cetona X por processos conhecidos na técnica (ver, por exemplo, as referências de Walser descritas antes; Sugasawa, T., et al., Journal of Heterocyclic Chemistry, 16 (3): 445-8 (1979); e Leroux, F., et al-, Journal of Organic Chemistry, 28 68: 4593-4699 (2003)). A obtenção de um derivado de X com um equivalente de glicina consegue-se por meio da reacção de X com brometo de bromoacetilo seguida da reacção quer com amónia para se obter XII ou por reacção de azida de sódio seguida de azida, para a redução da amina, para se obter XII, que sofre então uma ciclização, para se obter a lactama I (ver, por exemplo, as referências de Walser descritas antes).

Alternativamente, os derivados de pirazole de fórmula IV podem formar-se pelo processo B indicado no esquema 4. O produto intermédio X reage com o derivado de amino-cloro-pirazole XIII para formar o produto intermédio XIV. A eliminação do grupo alilo de XIV consegue-se por meio do processo geral descrito em Taniguci, T., et al., Tetrahedron Letters, 39:4679-4682 (1998), em que o produto intermédio XIV reage, na presença de hidreto de di-isobutilalumínio· e um catalisador de níquel para gerar o derivado de pirazole IV. O derivado de amino-cloro-pirazole XIII prepara-se pelos processos indicados no esquema 5 e no esquema 6. 29

Esquema 5

Esquema 6

No esquema 5, etil-2-ciano-3-etoxi-2-butenoato reage com 2-propenil-hidrazina para formar o produto intermédio de pi-razole XV. 0 et.il-2-ciano-3-etoxi-2-butenoato pode ser preparado a partir de materiais disponíveis comercialmente por via do processo descrito na patente de invenção norte- 30 americana U.S. N°. 2.824.121. 0 éster de amino XV converte-se no correspondente derivado de cloro XVI por diazotização e reacção com cloreto na presença de sais de cobre. A hidrólise do éster em condições básicas origina o produto intermédio de ácido de pirazole XVII. 0 ácido XVII reage com cloroformato de metilo seguido de azida para formar o produto intermédio carbonil-azida-pirazole XVTII que, com aquecimento, seguido de tratamento, origina o derivado de amino-cloro-pirazole XIII. Alternativamente, o derivado de amino-cloro-pirazole XIII pode ser preparado por alilação do nitropirazole XIX {formando XX), seguido da redução do grupo nitro para se obter amino (esquema 6) .

As substituições adicionais para R1 e R2 podem obter-se quando tanto R1 ou R2 representam um grupo funcional que pode sofrer mais transformações. Por exemplo, nos casos em que Rz e R2 representam flúor, é possivel a mono-substituição por meio da reacção com um álcool ou uma amina na presença de uma base. Estas reacções estão, ilustradas nos esquemas 7, 8 e 9.

Esquema 7

Esta reacção pode ser utilizada para converter compôs-tos, tais como, (2-amino-4,5-difluorofenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xmm) em compostos, tais como, (2-amino-5-fluoro-4-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xa) e (2-am.ino-5-fluo-ro-4-(3-(4-morfolinil)propoxi)fenil)-(2-clorofe-nil)-metanona (Xi). 31

Esquema 8

Esta reacção pode ser utilizada para converter compôs-tos, tais como, 5-(2-clorofenil)-7,8-difluoro-l,3-di-hidro-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Imm) em compostos, tais como, 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-2H-l,4-benzo-diazepín-2-ona (Ia) e 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ib). R2 H yS ΙΪ1 R2 -nH RI RI or Esquema 9 Or Esta reacção pode ser utilizada para converter tos, tais como, 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-difluoro-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilmm) em compostos, tais como, 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-2H-l,4-benzo-diazepin-2-tiona (lia), 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7- fluoro-8-metoxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilf), 5- (2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-etoxi-7-fluoro-2H-l,4-benzodia-zepin-2-tiona (Ilg) e 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-(1-metiletoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilh).

Nos exemplos em que R2 representa um grupo metoxi, o produto intermédio pode ser desmetilado no correspondente 32 derivado de hidroxi, que podem então ser depois alquilados. Isto está esquematizado no esquema 10. B1 R2

Esquema 10

Esta reacção pode ser utilizada para converter compôs-tos, tais como, 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1, 3-di-hidro-8-metoxí-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Id) em compostos, tais como, 7-bromo-5-- (2-clorofenil) -1,3-di-hidro-8- (3- (4-morfoli-nil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ij), 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Inn), 7-bromo-5-(2-clorofenil)-Í,3-di-hidro-8-(2-{2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ioo) e 7-bro-mo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l, 4-benzodiaze-pin-2-ona (Ipp). Esta reacção pode também ser utilizada, para converter um composto de fórmula 5-(2-clorofenil)-7-ciano-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ib) em compostos, tais como, 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ik), 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-metoxi-etil)-metilamino)-etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Iv), 5-(2-clorofenil) -7-ciano-l,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzo-diaze-pin-2-ona (Iqq), 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(1- t-butoxicarbonil-4-piperidinil)metoxi-2H-l,4-benzodiaze-pin-2-ona (Irr) e 8-(2-cloroetoxi)-5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iss). 33

Os compostos de fórmula IV em que R1 representa CN ou C (0) N (R6) 2 podem ser convertidos em compostos em que R1 representa COOH ou COO-alquilo por via de processos conhecidos na técnica, por exemplo, os. descritos na patente de invenção norte-americana U.S. 6.440.959.

Para os compostos de fórmula IV em que R3 representa H (compostos de fórmula XXII), os compostos podem ser preparados de acordo com o processo geral apresentado no esquema ,11-

Esquema 11

Este processo já foi descrito previamente para os exemplos em que R2 representa H na patente de invenção norte-americana U.S. N°. . 6.440.959 também da requerente. A tiolactama II reage com acetal de dimetilformamida e dietilo, para produzir o produto intermédio XXI, que depois é então tratado com hidrazina, para se obter as ·pirazoloben-zodiazepinas XXII. Exemplos específicos desta reacção podem ser encontrados nos exemplos 90 a 92, que se seguem. 34

TABELR DE SUBSTITUIÇÃO R1 R^ rΓ R4 a F OCH3 CH3 Cl b CN OCH3 ch3 Cl c h2nco OCH3 ch3 Cl d Br . OCH3 ch3 Cl e ch3 OCH3 ch3 H f F OCH2CH2OCH3 ch3 Cl g F OCH2CH3 ch3 Cl h F OCH(CH3)2 ch3 Cl i F OCH2CH2CH2N (CH2CH2) 20 ch3 Cl j Br OCH2CH2CH2N (CH2CH2) 2-0 ch3 Cl k CN OCH2CH2CH2N (CH2CH2) 2o ch3 cl 1 F N(CH3}2 ch3 Cl rrt CN och2ch2och3 ch3 Cl - n CN OCH2CH20CH2CH20CH3 ch3 Cl o F 0CH2CH (CH2CH2)2NCH3 ch3 Cl . P CN och2ch (CH2CH2) 2nch3 ch3 Cl q F OCH2CH2N(CH2CH2}20 ch3 Cl r CN OCH2CH2N(CH2CH2}20 ch3 Cl. s F OCH2CH2N {CH2CH2} 2nch3 ch3 Cl t CN OCH2CH2N (CH2CH2) 2NCH3 ch3 Cl u F OCH2CH2N (CH3) CH2CH2OCH3 ch3 Cl V CN OCH2CH2N (CH3) CH2CH20CH3 ch3 Cl w ch3 CH3 ch3 Cl X OCH3 0CH3 ch3 Cl i OCH3 Cl ch3 Cl z ch3 0CH3 ch3 Cl aa och3 0CH3 ch3 0C3 bb -OCH2O- C3 CHI cc Cl 0CH3 ch3 Cl dd OCH3 F ch3 Cl ee OCH3 cf3 ch3 Cl 35 ff 0CH3 Ph CH3. Cl gg OCH3 OCH2CH2OCH3 ch3 Cl hh ch3 • Cl ch3 Cl ii och3 OCH{CH3)2 ch3 Cl jj OCH(CH3)2 0CH3 ch3 Cl kk och2ch2och3 ÒCH3 ch3 Cl mm F F ch3 Cl nn Br OCH2CH2OCH3 ch3 Cl oo Br och2ch2och2ch2oc h3 ch3 Cl PP Br OH CHb Cl qq CN OH ch3 Cl rr CN OCH2CH (CH2CH2) 2NCOOC (CH3) 3 ch3 Cl ss CN 0CH2CH2C1 . ch3 Cl

Os compostos de fórmula XIV

em que R1 representa alquilo, alcoxi, halogéneo, COOH, COO-alquilo, CN, C(0)N(R6)2 ou (OCH2CH2)nOCH3; R2 representa alquilo, halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fe-nil, N(R6)2, (OCH2CH2) nOCH3, 0 (CH2) mNR7R8 ou

OiCKJ—CJ } 36 representa um heterociclo com 6 átomos· no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C{0)0RÊ; ou R1 e R2 em conjunto formam um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R4 representa hidrogénio, halogéneo, CN, NO2/ alquilo ou alcoxi; cada R6 representa, independentemente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representam, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8 considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual. estão ligados, formam um heterociclo com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; cada n representa, independentemente, 1, 2 ou 3; e m representa 2, 3, ou 4,· são compostos novos, úteis como produtos intermédios na preparação de compostos de fórmula IV. Num enquadramento, a presente invenção tem por objecto compostos de fórmula XIV. Noutro enquadramento, a presente invenção tem por objecto os compostos de fórmula XIV específicos: 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7,8-trimetil-l-(2-prope-nil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-3-metir-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 8-cloro-5-(2-clorofenilj -1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo [3,4-b] [1, 4].benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3,7-dimetil-l-(2-propenil) -pirazolo [3,4-b] [1,4]benzodiazepina,· 1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-5-(2-metoxifenil)-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 37 5-{2-clorofenil)-8,lO-di-hidro-7-metil-l,3-dioxolo[4,5-h]pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 7- cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-{2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-fluoro-7-metoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-mefoxi-3-metil-l-(2-propenil) -8-trifluorometil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5- (2-clorofenil) -1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-8-feni.l-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-metoxietoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 8- cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-(1-metiletoxi)-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; . 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-(1-metiletoxi)-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-metoxietoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina. A presente invenção tem por objecto composições farmacêuticas que compreendem, pelo menos, um composto da presente invenção, por exemplo, um composto de fórmula IV ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico e um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas oralmente, por exemplo, sob a forma de comprimidos, comprimidos revestidos, drageias, cápsulas de gelatina dura ou mole, soluções, emulsões ou suspensões. As 38 composições também podem ser administradas rectalmente, por exemplo, sob a forma de supositórios ou parentericamente, por exemplo, sob a forma de soluções injectáveis.

As composições farmacêuticas da presente invenção compreendem um ou mais compostos de fórmula IV e/ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. Essas composições podem ser produzidas de uma forma conhecida na técnica, por exemplo, por meio de uma mistura convencional, encapsulação, dissolução, granulação, emulsão, produção de drageias ou processos de liofilização. Estas composições farmacêuticas podem ser formuladas com veículos orgânicos ou inorgânicos, inertes sob o ponto de vista terapêutico. A lactose,, o amido de milho ou os seus derivados, o. talco, o ácido esteárico ou os seus sais, podem ser utilizados como esses veículos para comprimidos, comprimidos revestidos, drageias e cápsulas de gelatina dura. Os veículos apropriados para as. cápsulas de gelatina mole incluem óleos vegetais, ceras e gorduras. Consoante a natureza da substância activa, normalmente não são necessários veículos no caso das cápsulas de gelatina mole. Os veículos apropriados para a produção de soluções e xarope são água, polióis, sacarose, açúcar invertido e glicose. Os veículos apropriados para injecção são água, álcoois, polióis, glicerina, óleos vegetais, fosfolípidos e tensioactivos. Os veículos apropriados para supositórios são óleos naturais ou endurecidos, ceras, gorduras e polióis semi-líquidos.

As composições farmacêuticas podem também conter agentes conservantes, agentes de solubilização, agentes estabilizan-tes, agentes de molhagem, agentes emulsionantes, agentes de adoçamento, agentes corantes, agentes aromatizantes, sais para fazer variar a pressão osmótica, tampões, agentes de revestimento ou antioxidantes. Podem também conter outras 39 substâncias com valor sob o ponto de' vista terapêutico, incluindo outros ingredientes activos diferentes dos de' fórmula IV.

Tal como se mencionou antes, os compostos de fórmula IV e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e as composições que contêm estes compostos, são úteis no tratamento ou- no controlo de distúrbios proliferativos das células, em particular, distúrbios oncológicos. Estes compostos e formulações que contêm os referidos, compostos são particularmente úteis no tratamento ou no controlo de tumores sólidos, tal como, por exemplo, tumores da mama, próstata, pulmão e cólon.

Uma quantidade ou' dosagem efectiva sob o ponto de vista terapêutico de um composto de fórmula IV, podem variar dentro de amplos limites e ' serão ajustadas às necessidades individuais em cada caso particular. Em geral, no caso de administração oral ou parentérica a adultos humanos, pesando aproximadamente 70 kg, uma dose diária de cerca de 10 mg até cerca de 10.000 mg, preferencialmenté, de cerca de 200 mg até cerca de 1.000 mg, será apropriada, embora o limite superior possa, ser excedido quando indicado. A dose diária pode ser administrada como uma dose única ou em doses divididas ou para administração parentérica, pode ser dada como uma infusão continua.

Os exemplos que se seguem têm por objecto ajudar à compreensão da presente invenção e não pretendem limitar de nenhuma forma o seu âmbito. 40

Exemplos;

Geral: Nos exemplos as temperaturas estão indicadas em graus C. Para os dados de massa espectral, os valores são dados como o MH+/ião Z obtidos no modo positivo, medidos por electropulverização . num espectrómetro de massa Micromass Platform II.

Quando se diz que um exemplo é realizado de uma forma análoga a outro exemplo, todas as condições são iguais às especificadas no exemplo original excepto, nalguns casos, as quantidades diferentes dos materiais que são utilizados. Quando se dá uma quantidade diferente de material inicial, os outros ingredientes utilizados no exemplo são utilizados numa quantidade com a mesma proporção em relação ao material inicial, tal como, no exemplo original.

Preparação dos produtos intermédios X de aminobenzofenona (esquema 3)

EXEMPLO 1

Preparação de (2-amino-5~fluoro-4-metoxifen.il) - (2-clorofe-nil)-metanona (Xa) 41

Adicionou-se, gota a gota, uma solução de 2,0 g (0,0142 moles) de 4-f luoro-3-metoxi-anilina, no seio de 20 mL de diclorometano a 2,24 g (0,0142 moles) de diclorofenilborano, no seio de 20 mL de diclorometano, a -20 até -30 °C, seguida da adição de 3,59 g (0, 0355 moles) de trietilamina, no seio de 10 mL de diclorometano. Agitou-se a mistura durante 30 minutos; depois, adicionou-se 2,0 g (0,0142 moles) de 2-clorobenzaldeido, no seio de 30 mL de diclorometano. Retirou-se o banho de arrefecimento e agitou-se a mistura à temperatura ambiente, durante 4 horas. Com uma agitação rápida, adicionou-se à mistura reaccional 100 mL de água fria, seguido de 150 mL de salmoura. Separou-se a camada de diclorometano, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Agitou-se o residuo (4,5 g sob a forma de um óleo castanho), à temperatura ambiente, durante 1 hora com 10 mL de éter de dietilo e 30 mL de hidróxido, de sódio 2 M. extraiu-se a mistura reaccional com acetato de 'etilo e secou-se a camada de acetato de etilo sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 3,6 g do amino-álcool correspondente IXa (R1 = F, R2 = OCH3, R4 = Cl) , gue se utilizou directamente na etapa seguinte.

Dissolveu-se o amino-álcool (3,6 g) , obtido na reacção anterior, no seio de 60 mL de diclorometano e agitou-se com 6,09 g (0,071 moles) de dióxido de manganês. Passadas 4 horas, filtrou-se a mistura e concentrou-se a pressão reduzida,· para se obter 4,2 g dè cetona impura, (2-amino-5-fluoro-4-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xa), sob a 42 forma de um óleo castanho. Purificou-se a cetona impura por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-hexanos, para se obter 2,03 g de (2-amino-5-fluoro-4-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xa). MH+/Z = 280. EXEMPLO 2

Preparação de (2-aniino-5-bromo-4-metoxifenil) - t2-clorofenil) -metanona (Xd)

Preparou-se (2-amino-5-bromo-4-metoxifenil)-(2-clorgfe-nil)-metanona (Xd) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,086 moles de 4-bromo-3-metoxi-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z = 340. EXEMPLO 3

Preparação de (2-amino-4,5-dimetilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xw)

Preparou-se (2-amino-4,5-dimetilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xw) fazendo reagir 2-clorobenzaldexdo com 0,123 moles de 3,4-dimetil-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. 43 EXEMPLO 4

Preparação de (2-amino-4,5-dimetoxifenil)-(2-clorofenil)-me-tanona (Xx)

Preparou-se (2-amino-4,5-dimetoxifenil.) - (2-clorofenil) -metanona (Xx) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,0196 moles de 3,4-dimetoxi-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z = 292. EXEMPLO 5

Preparação de (2-amino-4-cloro-5-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xy)

Preparou-se (2-amino-4-cloro-5-metoxifenil)-(2-clorofenil ) -metanona (Xy) fazendo reagir 2-çlorobenzaldeído com 0,019 moles de 3-cloro-4-metoxi-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z =296. EXEMPLO 6

Preparação de (2-amino-4-metoxi-5-metilf'enil) - (2-clorofenil)-metanona (Xz) 44

Preparou-se (2-amino-4-metoxi-5-metilfenil)-(2-clorofe-nil)-metanona (Xz) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,0226 moles de 3-metoxi-4-metil-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z =276. EXEMPLO 7

Preparação de (2-amlno-4,5-dimetoxlfenil) - (2-metoxifenil) -metanona (Xaa)

Preparou-se (2-amino-4,5-dimetoxifenil)-(2-metoxifenil)-metanona (Xaa) fazendo reagir 2-metoxibenzaldeído com 0,0196 moles de 3,4-dimetoxi-anilina de uma forma análoga à do

Exemplo 1. MH+/Z =288. EXEMPLO 8

Preparação de (6-amino-l,3-benzodioxol-5-il)-(2-clorofenil)-metanona (Xbb)

45

Preparou-se (6-amino-l,3-benzodioxol-5-il)-(2-clorofe-nil)-metanona (Xbb) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,020 moles de 3,4-metilendioxí-anilina de uma forma análoga· à do Exemplo 1. MH+/Z = 276. EXEMPLO 9

Preparação de (2-amino-5-c;loro-4-ntetoxifenil) - (2-cloro£enil) -metanona (Xcc)

Preparou-se (2-amino-5-cloro-4-metoxifenil)-(2-clorofe-nil)--metanona (Xcc) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,019 moles.de 3-metoxi-4-cloro-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z =296. EXEMPLO 10

Preparação de (2-amino-4-fluoro-5-metoxifenil)-(2^clorofe-nil)-metanona (Xdd)

F

HjCO

Preparou-se (2-amino-4-fluoro-5-metoxifenil)-(2-clorofe-nil)-metanona (Xdd) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,0223 moles de 3-fluoro-4-metoxi-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1, MH+/Z = 280. 46 EXEMPLO 11

Preparação de {2-amino-5-metoxi-4-trxfluorometilfen±l)- (2-clorofenil)-metanona (Xee)

Preparou-se (2-amino-5-metoxi-4-trifluorometilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xee) fazendo reagir 2-clorobenzaldeido com 0,0263 moles de 4-metoxi-3-trifluorometil-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z - 330. EXEMPLO 12

Preparação de (2-amino-5-in.etox3.-4-fenilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xff)

Preparou-se (2-amino-5-metoxi-4-fenilfenil)-(2-clorofe-níl)-metanona (Xff) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,0226 moles de 4-metoxi-3-feníl-anílina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z = 338. 47 EXEMPLO 13

Preparação de (2-amino-5-metoxi~4- (2-metoxietoxi) fen.il) - (2-clorofenil)-metanona (Xgg)

Preparou-se (2-amino-5-metoxi-4-(2-metoxietoxi) fenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xgg) fazendo reagir 2-clorobenzal-deido com 0,0296 moles de 4-metoxi^3-(2-metoxietoxi)-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z = 336.; EXEMPLO 14

Preparação de (2-amino-4-cloro-5-metilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xhh)

Preparou-se (2-amino-4-cloro-5-metilfenil)-(2-clorofenil) -metanona (Xhh) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,0318 moles de 3-cloro—4-metil-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH-f/Z = 280. EXEMPLO 15

Preparação de (2-amino-5-metoxi-4-(l-metiletoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona {Xii) 48

Preparou-se (2-amino-5-metoxi-4-(1-metiletoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona. (Xii) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,0252 moles de 3-isopropoxi-4-metoxi-anilina de uma forma análoga à. do Exemplo 1. IMH+/Z = 320. EXEMPLO 16

Preparação de (2-amino-4-ntetoxi-5-(1-metiletoxi) fenil) - (2-clorofenil)-metanona (Xjj)

Preparou-se (2-amino-4-metoxi-5--(l-metiletoxi) fenil) - (2-clorofenil)-metanona (Xjj) fazendo reagir 2-clorobenzaldeído com 0,0267 moles de 4-isopropoxi-3-metoxi-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z = 320. EXEMPLO 17

Preparação de (2-amino-4-metoxi-5-(2-metoxietoxi)fenil)- (2-clorofenil)-metanona (Xkk) 49

HaCO^^NHj

Preparou-se (2-amino-4-metoxi-5-(2-metoxietoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xkk) fazendo reagir 2-clorobenzal-deído com 0,.0242 moles de 3-metoxi-4-(2-metoxietoxi)-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z = 336. EXEMPLO 18

Preparação de (2-amino-4,5-difluorofenil)-(2-clorofenil)-me-tanona (Xmm)

Cl

Preparou-se (2-amino-4,5-difluorofenil).- (2-clorofenil) -me-tanona (Xmm) fazendo reagir 2-clorobenzaldeido com 0,30 moles de 3,4-difluoro-anilina de uma forma análoga à do Exemplo 1. MH+/Z = 268. EXEMPLO 19

de {2-aminO“5-fl.uoro-4-metOÍiifenil) - (2-ο1ορο£θ- nil)-metanona (Xa) a partir de (2-amino-4,5-diflviorofenil) -(2-elorofenil)-metanona (Xmm)

Xntm Xa 50

Aqueceu-se à temperatura de refluxo, em atmosfera inerte, durante 80 minutos, uma solução de 2,01 g (0,0075 moles) de (2-amino-4,5-difluorofenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xmm), 24 mL de metanol e 2,08 mL de uma solução de metóxido de sódio a 25 %. Depois arrefeceu-se a mistura, recolheu-se em acetato de etilo e lavou-se duas vezes com salmoura. Secou-se ò extracto de acetato de etilo sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 2,04 g de aminobenzofenona, (2-amino-5-fluoro-4-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xa), sob a forma de um sólido amarelo cristalino. MH+/Z = 280. EXEMPLO 20

Preparação de (2-amino-5-£luoro-4-(3-(4-morfolinil)propoxi)-fenil)~<2-clorofenil)-metanona (Xi)

a Ámni

Agitou-se à temperatura ambiente, durante 4 horas, 'uma mistura de 1,4 g (0,035 moles) de hidreto de sódio a 60 %, 25 mL de dioxano, 2,68 g (0,01 moles) de (2-amino-4,5-difluorofenil) - (2-clorofenil) -metanona (Xmm) e 2,23 g (0,016 moles) de 4-morfolinopropanol. Parou-se a reacção por meio da adição de 50 mL de água. Extraiu-se a mistura com acetato de etilo e lavou-se o extracto com água, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Triturou-se o resíduo no seio de hexano e depois recristalizou-se em hexano-acetato de etilo para se obter 51 2,55 g de (2-amino-5-fluoro-4-(3-(4-morfolinil)propoxi)fe-nil)-(2-clorofenil)-metanona (Xi). MH+/Z = 393.

Preparação das lactamas I a partir de aminobenzofeneonas X (esquema 3)

EXEMPLO 21

Preparação de 7-bromo-5- (2-clorofenil) -1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Id)

Adicionou-se uma solução de 3,5 mL (0,04 moles) de brometo de bromoacetilo, no seio de 3,5 mL de diclorometano, a uma solução arrefecida (0 °C) de 11,8 g (0,035 moles) de (2-amino-5-bromo-4-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xd), 2,94 mL de piridina e 350 mL de diclorometano, durante 30 minutos. Agitou-se a mistura mais 1 hora, à temperatura 52 ambiente e depois repartiu-se entre água e diclorometano. Lavou-se a camada de diclorometano com uma solução saturada de sulfato de cobre, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 16,5 g de anilida de bromoacetilo Xld.

Dissolveu-se a bromoacetanilida impura (Xld) obtida an-teriormente (16,5 g, 0, 0357 moles) no seio de 250 mL de tetra-hidrofurano e 80 mL de metanol. Arrefeceu-se a mistura para -78 °C e adicionou-se 35 mL de amónia destilada. Agitou-se a mistura durante 1,5 horas, depois, retirou-se o banho de arrefecimento e agitou-se a mistura à temperatura ambiente, durante mais 2 horas, tempo durante o qual se deixou, o excesso de amónia evaporar-se. Concentrou-se a mistura a pressão reduzida e repartiu-se o resíduo entre acetato de etilo e água. Lavou-se a camada de acetáto de etilo sucessivamente com água e depois com salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 13,6 g da amino-anilida Xlld impura. A Xlld impura obtida na reacção anterior foi suspensa em 375 mL de etanol, fez-se o seu refluxo durante 24 horas e depois arrefeceu-se. Recolheu-se o produto por filtração, para se obter 9,2 g de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Id). MH+/Z - 379. EXEMPLO 22

Preparação de 5- (2-clorofen.il) -1,3-di-hidro-7-f luoro-8-me-toxi-2H-l, 4-benzodiazepin-2-on.a (Ia)

53

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-me-toxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ia) fazendo reagir 0,125 moles de (2-amino-5-fluoro-4-metoxifenil)(2-clorofenil)-meta-nona (Xa) com brometo de bromoacetilo de uma forma análoga à do Exemplo 21.MH+/Z =319. EXEMPLO 23

Preparação de 5-(2-Glorofenil)-l,3-di-hidro-7-£luoro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (li)

Η O

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-l,3-di-hidro-7-fluoro-8-{3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (li) fa-zendo reagir 0,0062 moles.de (2-amino-5-fluoro-4-(3-(4-morfo-linil)propoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xi) com brometo de bromoacetilo de uma forma análoga à do Exemplo 21. MH+/Z = 432. EXEMPLO 24

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-h.idro-8-ntetoxi-7-m®til-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Iz)

Cl 54

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-7-me-til-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iz) fazendo reagir 0,13 moles de (2-amino-4-metoxi-5-metilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xz) com brometo de bromoacetilo de uma forma análoga à do Exemplo 21. EXEMPLO 25

Preparação de 5-(2-clorofenil)-7,8-difluoro-l,3-di-hidro-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Imm)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7,8-difluoro-l,3-di-hidro-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Imm) fazendo reagir 0,019 moles de (2-amino-4,5-difluorofenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xmm) com brometo de bromoacetilo de uma forma análoga à do Exemplo 21. MH+/Z =307.

Conversão de lactamas (esquema 8)

EXEMPLO 26

Conversão de 5-(2-clorofenil)-7,8-difluoro-l,3-di-hidro-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Imm) em 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hi-dro-7-fl~uoro-8-metoxi-2H-l, 4-benzodiazepin-2-ona (Ia) 55

F F

Imm

la

Aqueceu-se a 100 °C, durante 40 minutos, utilizando um aquecimento por micro-ondas, num recipiente de reacção selado, uma mistura de 0,10 g (0,00033 moles) de 5-(2-cloro-fenil)-7,8-difluoro-l,3-di-hidro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Imm), 2 mL de metanol e 0,03 g de hidreto de sódio. Arre-feceu-se então a mistura, diluiu-se com acetato de etilo e lavou-se sucessivamente com' água. e depois com salmoura. Secou-se a mistura sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 0,103 g de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-2H-l,4-benzo-diazepin-2-ona (Ia), sob a forma de um sólido, branco. MH+/Z = 319. EXEMPLO 27

Conversão de 5-{2-clorofenil)-7,8-difluoro-l,3-di-hidro-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Imm) em 5-(2-clorofenil)-8-N,N-dime-tilamino-1,3-di-hidro-7-fluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (IP

Aqueceu-se a 150 °C, durante 40 minutos, utilizando um aquecimento por micro-ondas, uma mistura de 0,9201 g (0,003 moles) de 5-(2-clorofenil)-7,8-difluoro-l, 3-di-hidro-2H-l,4- 56 benzodiazepin-2-ona (Imm) e 3 mL de uma solução de dime-tilamina 2,0 M, no seio de tetra-hidrofurano. Arrefeceu-se a mistura e depois concentrou-se a pressão reduzida. Triturou-se o resíduo com acetato de etilo-hexano, para se obter 0,63 g de 5-(2-clorofenil}-8-N,N-dimetilamino-1,3-di-hidro-7“fluo-ro-2H-l,4-benzodiazepín-2-ona (II), sob a forma de um sólido amarelo. MH+/Z = 332.

Conversão de lactamas (esquema 10)

I EXEMPLO 28

Conversão de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Id) em 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinfl)propoxi))-2H-1,4-benzodiaze-pin-2-ona (Ij)

H

57 I]

Agitou-se, durante a noite, uma solução de 1,00 g (0,0263 moles) de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-me-toxi-2H-l, 4-benzodiazepin-2-ona (Id), no seio de 85 mL de 1,2-dicloroetano com 1,053 g (0,0079 moles) de tricloreto de alumínio. Adicionou-se mais 1,00 g de tricloreto de alumínio e agitou-se a mistura durante a noite, tempo ao fim do qual se verteu a mistura em água com gelo. Extraiu-se a mistura com diclorometano-metanol e lavou-se a camada orgânica duas vezes com água e depois secou-se sobre sulfato dè sódio anidro. Concentrou-se a solução a pressão reduzida, para se obter 0,700 g de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ipp) (MH+/Z =465), que tinha pureza suficiente para ser utilizada na etapa seguinte.

Agitou-se a 50 °C, em atmosfera de árgon, durante 73 horas, uma mistura de 1,8281 g (0,005 moles) de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ipp) da etapa anterior, 0,636 g de carbonato de sódio, 0,9818 g (0,006 moles) de 4-(3-cloropropil)-morfolina e 50 mL de dimetilformamida. Arrefeceu-se então a mistura e repartiu-se entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado. Voltou a extrair-se então a camada aquosa com acetato de etilo. Lavaram-se as camadas de acetato de etilo sucessí-vamente com bicarbonato de sódio saturado, água, salmoura e depois secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodíazepín-2-ona (Ij) impura. Obteve-se 7-bromo-5-(2-clorofenil) -1,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi)}-2H-1,4-be.nzodiazepih-2-ona (Ij) pura (1,721 g) por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-metanol (90:10). MH+/Z = 492. 58 EXEMPLO 29

Conversão de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxi-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ib) em 5-(2-clorofenil)-7-ciano-1,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiaze-pin-2-ona (Ik)

Agitou-sè uma solução de 1,2 g (0,0037 moles) de 5— (2— clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-berizodiaze-pin-2-ona (Ib, preparada no Exemplo 30), no seio de 100 mL de 1,2-dicloroetano, com 2,5 g (0,0187 moles) de . tricloreto de alumínio, a 42 -°C, durante '8 horas, depois do que se adicionou mais 2,5 g. de tricloreto alumínio. Continuou-se o aquecimento e a agitação durante mais 48 horas, tempo ao fim do qual., se adicionou mais 2,5 g de tricloreto· de alumínio. Passadas 6 horas,. arrefeceu-se a mistura e depois verteu-se em água com gelo. Extraiu-se- a água com dicloroinetano-metanol-tetra-hidrofurano (80:10:10) e lavou-se o extracto com água,, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 1,6 g de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzo-diazepín-2-ona (Iqq) impura. A purificação por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-metanol (90:10), originou 1,17 g de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l, 3-di- 59 hidrò-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iqq) (MH+/Z = 312), que tinha pureza suficiente para ser utilizada na etapa seguinte.

Agitou-se a 50 °C, em atmosfera de árgon, durante 24 horas, uma mistura de 0,322 g (0,00103 moles) de 5-(2-cloro-fenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiaze-pin-2-ona (Iqq) , 6 mL de dimetilformamida, 0,132 g (0,00124 mo les) de carbonato de sódio e 0,2028 g (0,00124 moles) de 4-(3-cloropropil)-morfolína. Arrefeceu-se então a mistura e repartiu-se entre acetato de etilo e água. Voltou a extrair-se a fase aquosa com acetato de etilo e secou-se os extractos de acetato de etilo sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com aceto-nitrilo-metanol (90:10), para se obter 0,199 g de- 5 — (2 — clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)pro-poxi) ) -2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ik) . MH+/Z = 439.. EXEMPLO 30

Conversão da 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-1,4-benzodiazepi.n.-2-ona (Id) em 5- (2-clorofenil) -7-ciano-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ib)

Id

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-me-toxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ib) a partir de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2- 60 ona (Id) por reacção cora cianeto de zinco, na presença de um catalisador de paládio (tetraquistrifenil-fosfina-paládio), de acordo com condições semelhantes às descritas por Tschaen et al., Synthetic Communications, 24: 887-90 (1994). Aqueceu-se a 110 °C, em atmosfera de árgon, durante 24 horas, uma mistura de 0,9491 g {0,0025 moles) de 7-bromo-5-(2-cloro-fenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Id), 0,176 g (0,0015 moles) de cianeto de zinco, 4 mL de dimetilformamida e 0,289 g (0,00025 moles) de tetraquis-tri-fenil-fosfina-paládio. Arrefeceu-se então a mistura, recolheu-se no seio de acetato de etilo e lavou-se com uma solução de carbonato de sódio 0,2 M. Voltou a extrair-se a fase aquosa com acetato de etilo, e lavaram-se as camadas de acetato de etilo com água, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Fez-se a cromatografia do resíduo em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (4:1), para se obter 0,620 g de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiaze-pin-2-ona (Ib). MH+/Z = 326. EXEMPLO 31

Conversão de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-l,3-di-hidro-8-nietoxi-etoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Inn) em 5-(2-clorofenil)-7-ciano-1, S-di-hidro-S-metoxietoxi^H-l, 4-benzodiazepin-2-ona (Im)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-me-toxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Im) fazendo reagir 61 0,001 moles de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-me-toxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Inn) com cianeto de zinco, na presença de tetraquistrifenil-fosfina-paládio, de uma forma análoga à do Exemplo 30. MH+/Z = 370. . EXEMPLO 32

Conversão de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-l,3-di-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi) etoxi.)-2H-1,4-bengodiazepÍn-2-ona (Ioo) em 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (In)

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-(2-metoxíetoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (In) fazendo reagir 0,0017 moles de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-dí-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ioo) com cianeto de zinco, na presença de tetraquistrifenil-fosfina-paládio, de uma forma análoga à do Exemplo 30. MH+/Z = 414. EXEMPLO 33

Preparação de 7~bramo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-etoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Inn) a partir de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ipp) 62

A uma mistura agitada de 0,300 g (0,00082 moles) de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzo-diazepin-2-ona (Ipp) preparada no Exemplo 28, 60 mL de tetra-hidrofurano, 0,070 mL de 2-metoxietanol, e 0,2586 g de trifenilfosfina, adicionou-se 0,194 mL (0,00099 moles) de azodicarboxilato de di-isopropilo. Agitou-se â mistura durante a noite, depois, adicionou-se mais 0,2586 g de trifenilfosfina, 0,070 mL de 2-metoxietanol e 0,194 mL de azodicarboxilato de di-isopropilo. Agitou-se . a mistura durante mais 1 hora e depois concentrou-se a pressão reduzida. Fez-se a cromatogxafia do residuo em gel de sílica, eluindo-se com diclorometano-metanol (98:2), para se obter 0,212 g de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-etoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Inn). MH+/Z = 423. EXEMPLO 34

Preparação de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ioo) a partir de_7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di~hidro-8-hidroxi-2H-l,4- benzodiazepin-2-ona (Ipp)

63

Preparou-se 7-bromo-S-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ioo) fazendo reagir 0,00238 moles de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Ipp) com 2-(2-me-toxietoxi)etanol de uma forma análoga à do Exemplo 33. MH+/Z - 467. EXEMPLO 35

Preparação de 8-(2-cloroetoxi)-5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iss) a partir de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiaze-pin-2-ona (Iqq)

Preparou-se 8-(2-cloroetoxi)-5-(2-clorofenil)-7-ciano-1,3-di-hidro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iss) fazendo reagir 0,0031 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-hidroxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iqq) com 2-cloroetanol de uma forma análoga à do Exemplo 33. MH+/Z =374. EXEMPLO 36

Preparação de 5-(2-clorofenil)-7-oiano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-metoxiet.il)metilamino) -etoxi) -2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Iv) 64

Aqueceu-se num banho de óleo, a 83 °C, em atmosfera de árgon, durante 20 horas, uma mistura de 1,2 g {0,0032 moles) de 8-(2-cloroetoxi)-5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-2H— 1,4-benzodiazepin-2-ona (Iss, preparada no Exemplo 35), 2,85 g (0,032 moles) de 2-( (2-metoxietil)metilamino) etanol, 20 mL de tetra-hidrofurano e 4,8 g (0,032 moles) de iodeto de sódio. Arrefeceu-se a mistura e depois repartiu-se entre acetato de etilo e uma solução de bicarbonato de sódio 0,6 M. Lavou-se a camada de acetato de etilo com salmoura,' secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Fez-se a cromatografia do resíduo em gel de-sílica, eluindo-se com acetonitrilo-metanol (80:20), para se obter 0,233 g de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-metoxietil)metilamino)-etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Iv) . MH+/Z = 427.. EXEMPLO 37

Preparação de 5- (2-clorofenil) -7-ciano-l. 3-di.-hidro-8- {2- ((2-(4-ntetil-l-piperazinil) etoxi)) -2Η-1,4-fr°nzodiazepin-2-ona (It)

65

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-(4-metil-l-piperazinil)etoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (It) fazendo reagir 0,00414, moles de 8-(2-cloroetoxi)-5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iss) com N-metil-piperazina de uma forma análoga à do Exemplo 36.

Formação de tiolactamas (II) a partir de lactamas (I) (esquema 1)

EXEMPLO 38

Preparação de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi 2H-1,4-benzodiagepin-2-'biona (IIcL)

Aqueceu-se a 85 °C, durante 1 hora, uma mistura de 2,0 g (0,0053 moles) de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-me-toxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Id) , 200 mL de 1,2-dimetoxi-etano e 2,13 g (0,0053 moles) de reagente de Lawesson (2,4-bis(4-metoxifenil)-2,4-disulfureto-l,3,2,4-ditiadifosfe-tano) e depois arrefeceu-se e verteu-se em uma solução de bicarbonato de sódio arrefecida com gelo. Extraiu-se a mistura duas vezes com acetato de etilo-metanol (9:1) e 66 lavaram-se as camadas orgânicas sucessivamente com água e salmoura. Secaram-se os extractos combinados sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. A trituração do resíduo com acetato de etilo, originou 1,7 g de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-bem-zodiazepin-2-tiona (Ild). MH+/Z = 395. EXEMPLO 39

Preparação de 5- (2-clorofenil) -1,3-di-hidro-7-fluoro-5-itieto-xi-2H-l, 4-benzodiazepin-2-t:ion.a (lia)

HgCI

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-me-toxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (lia) fazendo reagir 0,0284 moles de, 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ia) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 335.' EXEMPLO 40

Preparação de 5- (2-clorofenil) -7-ciano-l,3-d±-hidro-8-inetoxi-2H-1,4-benzodiazepin-2-txona (Ilb)

Η O

H ,.S

67

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-me-toxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilb) fazendo reagir 0,0019 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxi-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ib) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 342. EXEMPLO 41

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-£luoro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ili)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ili) fazendo reagir 0,0053 moles 'de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi})-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (lactama li) com reagente de Lawesson de uma forma- análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 448. EXEMPLO 42

Preparação de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8"(3-(4-morfolinilipropoaci)) -2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (II j)

68

Preparou-se 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi) ) -2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilj) fazendo reagir 0,0011 moles de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ij) com . reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 508. EXEMPLO 43

Preparação de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di“hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilk)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ik) fazendo reagir 0,00057 moles . de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Ik) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z =455. EXEMPLO 44

Preparação de 5- (2-clorofenil)-8-N,N-dimetilairÍÍno-l,3-d.i-hi-dro-7-fluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (III)

69

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-8-N,N-dimetilamino-1,3-di-hidro-7-fluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (III) fazendo reagir 0, 006 moles de 5-(2-clorofenil)-^8-N,N-dimetilamino-1,3-di-hidro-7-fluoro-2H-l,4-benzodiazepín-2-ona (II) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 348. EXEMPLO 45

Preparação de 5-(2-clorofQnil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxi-etoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilm)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-me-toxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilm) fazendo reagir 0,00081 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Im) com reagente de

Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 386. EXEMPLO 46

Preparação da 5- (2-clorofenil) -7-ciano--l, 3~di-hidro-8- (2- (2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiaaapin-2“tiona (Iln)

70

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi)etoxi}-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Iln) fazendo reagir 0,00089 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-dí-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (lactama In) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38* MH+/Z = 430. EXEMPLO 47

Preparação de 5- (2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-(4-metil-l-piperazinil) etoxi)) -2H-1,4-benzodiazepin.-2-ti.ona (Ilt)

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-(4-metil-l-piperazinil)etoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilt) fazendo reagir 0,00069 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-(4-metil-l-piperazinil)etoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (It) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. EXEMPLO 48

Preparação de 5-{2-ciorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-{(2-metoxietil)metilamino)-etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona

71

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-metoxietil)metilamino)-etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-tio-na (IIv) fazendo reagir 0,00052 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-1,3-di-hidro-8-(2-((2-metoxietil)metilamino)-etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Iv) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/2 = 443. EXEMPLO 49

Preparação de 5-(2-clorofenil)-l,3-di-hidro-7,8-dimet:il-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (IIw)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-dimetil-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (IIw) fazendo reagir 0,0006 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-dimetil-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iw) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 315. EXEMPLO 50

Preparação de 5-(2-clorofen)-1,3-di-hidro-8-metoxi-7-metil-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (IIz)

72

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-7-me-til-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (IIz) fazendo reagir 0,0064 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxi-7-metil-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Iz) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 331. EXEMPLO 51

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-diflttoro-2H-1,4-benzodiazepin-2—tiona (Ilmm)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-difluoro-2Η-Γ, 4-benzodiazepin-2-tiona (Ilmm) fazendo reagir 0,003 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-difluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Imm) com reagente de Lawesson de uma forma análoga à do Exemplo 38. MH+/Z = 332.

Conversão de tiolactamas (esquema 9)

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,S-di-hidro-V-fluoro-B-me-toxietoxi-2H-l, 4-benzodiazepin.-2-tiona (Hf) 73

F F

llmm H-Cs. 3 0

Aqueceu-se num recipiente para micro-ondas, a 120 °C, durante 30 minutos, uma mistura de 1,0 g (0,0031 moles) de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-difluoro-2H-l,4-benzodiaze-pin-2-tiona (llmm), 0,372 g de hidreto de sódio e 20 mL de 2-metoxietanol, arrefeceu-se e depois diluiu-se com acetato de etilo. Lavou-se a mistura sucessivamente com água e salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Triturou-se o resíduo com acetato de etilo, para se obter 0,74 g de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilf), sob a forma de um sólido branco, que se utilizou depois para preparar 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVf), de acordo com o Exemplo 58 sem mais purificação. MH+/Z = 379.

Exemplo 53

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro"8-etoxi-7-£luoro-2H-1,4-benzocLiazepin-2-tiona (Ilg)

llmm

Aqueceu-se à temperatura de refluxo, durante 24 horas, uma mistura de 0,5 g (0,00155 moles) de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-difluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (llmm), 10 74 mL de etanol e 0,62 g de hidreto de sódio a 60 %. Arrefeceu-se a mistura, diluiu-se com acetato de etilo e lavou-se sucessivamente com água e depois com salmoura. Secou-se o extracto de acetato de etilo sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 0,52 g de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-etoxi-7-fluoro-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilg), sob a forma de um sólido amarelo. MH+/Z = 349.

Exemplo 54

Preparação de 5- {2-clorofenil) -1,3-di-hidro-7-flT3.oro-8- (1- metiletoxi)-2H-1,4-benzodiazepip-2—tiona (IXh)

Aqueceu-se ' à temperatura de refluxo, durante 5 horas, uma mistura de. 1,0 g (0,0031 moles) de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-difluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilmm),,10 mL de isopropanol e 0,62 g de hidreto de sódio a 60 %.

Arrefeceu-se a mistura, diluiu-se com acetato de etilo e lavou-se sucessivamente com água e depois com salmoura. Secou-se o extracto de acetato de etilo sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 1,2 g de resíduo que se triturou com hexano e acetato de etilo, para se obter 0,76 g de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-(1-metiletoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilh), sob a forma de um sólido branco. MH+/Z = 363.

Preparação de pirazolobenzodiazepinas IV a partir_das tiolactamas II (esquema 2) 75

II IV

Exemplo 55

Preparação de 7-bromo-5-(2~clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4Ibenzodiazepina (IVd)

Agitou-se à temperatura ambiente, durante 1,5 horas e depois a 110 °C, durante 5 horas, uma mistura de 1,8 g (0,00455 moles) de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-metoxí-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ild), 2,26 ml de 1,1-dímetoxi-N,N-dimetil-etanamína e 20 mL de dimetilformamida. Arrefeceu-se a mistura e concentrou-se a pressão reduzida. Agitou-se o produto intermédio Illd impuro com uma solução de 0,713 ml de hidrazina anidra, 9 ml de metanol e 24 mL de diclorometano, durante 26 horas e depois repartiu-se entre acetato de etilo e água. Lavou-se a camada de acetato de etilo com água, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. A cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo, originou 0,690 g de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,2-dí-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo [3,4-b] [1,4 ] benzodia.zepina (IVd). A recristalização em diclorometano originou 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b]- 76 [1,4]benzodiazepina (IVd) cristalina, pf 210-211 °C. MH+/Z = 417.

Exemplo 56 \

Preparação de 5-(2-Qlorofep.il)-l,2-di-hidro-7-fluoro-8-meto-xi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVa)

Preparou-se 5- {2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-me-toxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVa) fazendo reagir 0,0224 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (lia) com 1,1-dimetoxi-N,TSI-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z = 357.

Exemplo 57

Preparação de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVb)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-me-toxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVb) fazendo 77 reagir 0,0016 moles de 5-(2-clorofen.il)-7-ciano-l, 3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilb) com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55, MH+/Z = 364.

Exemplo 58

Preparação de 5-(2-clorofenil)-2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-etoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVf)

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-me-toxietoxi-3-me.til-pirazolo [3, 4-b] [1,4]benzodiazepína (IVf ) fazendo reagir 0,0026 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxietoxí-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilf) com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z=401.

Exemplo 59

Preparação de 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-7-fluoro-8-etoxi-3-metil-pirazolof3,4-b]f1,4Jbenzodiazepina (IVg) 78

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-etoxi-3-metíl-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVg) fazendo reagir 0,0016 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-8-etoxi-7-fluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilg) com 1,1-di-metoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga â do Exemplo 55. MH+/Z =371.

Exemplo 60

Preparação de 5- (2-clorofenil) -1,2-di-hidro-7-fltioro-8-(1-metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVh)

79

Preparou—se 5-(2-clorofenil)-1^2 di hidro 7 fluoro-8-(l— metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVh) fazendo reagir 0,00198 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-(1-metiletoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilh) com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z = 385.

Exemplo 61

Preparação de 5-(2-clorofeniH -1,2-di-hidro-7-fluoro-8-(3- (4-morfolinil)propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVi)

Iffi Ui N— /

IVI

Preparou-se 5- (2-clorofenil) "1/ 2-di-hidro-7-fluoro—8- (3-(4-morfolinil)propoxi))-3-metil-pirazol°[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVi) fazendo reagir 0,0045 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (tiolactama Ili) com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z = 470. 80

Exemplo 62 rt„di-hidro-8-(3-(4-

Preparação de 7-bromo-5 ----j%A}_ 1,4 j benzodiaze- morfolin.il)propoxi)) -3-metjJL pirazolo[_3,

pina (IVj)

Preparou~se 7~bromo-5-(2-clorofenil) 1/2 di hidro 8 (3 (4-morfolinil)propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodia-zepina (IVj) fazendo reagir 0,0011 moles de 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro~8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (IIj) com 1,l-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z = 530.

Exemplo 63

Preparação de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-lf2-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi)}-3-metil-pirazolo[3,4-bl Γ1,4]benzodiaze-pina (IVlc) 81

«k

Hlk H ,.N ιΛ ki r «Η

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-cÍano-l,2-di-hidro~8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodia-zepina (IVk) fazendo reagir 0,00054 moles de 5-(2-cloro-fenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(3-(4-morfolinil)propoxi))-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (tiolactama Ilk) com 1,l-dimetoxi-N,N-~dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga, à do Exemplo 55. MH+/Z = 4771

Exemplo 64

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-N,N-dimetilamino-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XVI)

82 /

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-N,N-dimetilamino~3-metil~pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IV1) fazendo reagir 0,00187 moles de 5-(2-clorofenil)-8-N,N-dimetilamino-l,3-di-hidro-7-fluoro-2H-l,4-benzodiazepin-2-ti-ona (III) com 1, l-dimetoxi-N,!Sí-dimetíl-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z = 370.

Exentplo 65

Preparação de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-metoxi-etoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVm)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-me-toxietoxi-3-metil-pirazolo[3, 4-b] [1,4]benzodiazepina (IVm) fazendo reagir 0,00048 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxietoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilm) com 1,l-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z = 408.

Exemplo 66 83

Preparação de 5-(2-clorofen.il)-7-ciano-l, 2-dj.-hidro-8-Ç2-(2-metoxietoxi) etoxi) -3-metil-pirazolo [3,4-b] [1, 4] benzoH-i azepina (IVn)

o

Preparou-se 5-(2-çlorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8~(2-' (2-metoxietoxi)etoxi)-3-metil-pirazolo[3, 4-b] [1,4]benzodiaze-pina (IVn) fazendo reagir 0,00067 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)-2H-1,4-benzo-díazepin-2-tiona (Iín) com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z,= 452·.

Exemplo 67

Preparação de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2~di-hidro-8-(2- (4-metil-l-piperazinil)etoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzo~ diazepina (IVt) 84

Hsc-H

«jy

Preparou-se .5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-(2-(.4-metil-l-piperazinil) etoxi) -3-metil-pirazolo [3,4-b] [1, 4] ~ benzodiazepina (IVt) fazendo reagir 0,00062 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-(2-((2-(4-metil-l-pipera-zinil) etoxi) )-2H-l,.4-benzodiazepin-2-tiona (Ilt) com 1,1-di-metoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de- uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z = 476.

Exemplo 68

Preparação de 5- {2-clorofenil) -7-ciano-l ,2-d-i -v.·; A·**-q- (2- {(2-metoxietil)metilamino) -etoxi) -3-metil-pirazol ^ [--a f 4.¾] .[j; 4] _ benzodiazepina (IVv)

85

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-{2-{(2-metoxietil)metilamino)-etoxi)-3-metil-pirazolo[3> 4-b]-[1,4]-benzodiazepina (IVv) fazendo reagir 0,0005 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l, 3-di-hidro-8-(2-((2-metoxietil)me-tilamino)-etoxi)-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (IIv) com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z =465.

Exemplo 69

Preparação de 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-3,7,8-trimet:il-pirazolo[3,4-b][1,43banzodiazepina (IVw)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7,8-trime-til-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVw) fazendo reagir 0,0005 moles de 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-dimetil-2H-1,4-benzodiazepin-2-tiona (IIw) com 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 55. MH+/Z =337.

Exemplo 70

Preparação de 5-{2-clorofenil)-l,2-di-hidro-3,7-diitietil-8-metoxi-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVz) 86

Preparou-se 5-(2-clorofenil.)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-8-metoxi-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVz) fazendo reagir. 0, 0005 moles de 5- (2-clor.ofenil)-1, 3-di^hidrò-8-metoxi-7-mètil-2H-l/4-benzodiazepin-2-tiona (IIz) com 1,l-dimetoxi-. Ν,Ν-dimetil-etanamina e depois com hidrazina de uma forma' análoga à do Exemplo 55. MH+/Z - 353.

Preparação de pirazolobenzodiazepina IV a partir de lactama I (esquema 2)

87

Exemplo 71

Preparação de 5-{2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-flporo-8-me-toxi-3-me-bil-pirazolo [3,4-b] [1,4jbenzodiazepina (XVa)

, A uma mistura .de 3,0 g. (0, 0094 moles) de 5-(2-cl.oro-fenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-2H-l, 4-benzodiazepin-2-ona (Ia), 11,8 mL de di-isopropilamina de etilo, 4,62 g. de 1,.2,4-triazole e 45 mL de tetra-hidrofurano, a .0 °C, adi cionou-se 1,575 mL de oxicloreto fosforoso, Passados 20 minutos, retirou-se o banho de arrefecimento e agitou-se a mistura, à temperatura ambiente durante mais 60 minutos·. Depois., adicionou-se 17 mL de metóxido de sódio 4,37 M, no seio de uma solução de metanol à mistura reaccional. Depois de se agitar durante 2 horas, adicionou-se mais 5 mL de uma solução de metóxido de sódio é agitou-se a mistura durante a noite.. Repartiu-se então a mistura entre acetato de etilo e água. Lavou-se a camada de acetato de etilo sucessivamente com água e salmoura, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 3,2 g de 5-(2-clorofenil)-7-fluoro-2,8-dimetoxi-3H-l,4-benzo-diazepina (produto intermédio Va) , . que tinha pureza suficiente para ser utilizada na etapa seguinte.

Aqueceu-se a 110 °C, durante 24 horas, uma .mistura de 3,0 g do produto intermédio Va preparado antes, 30 mL de dimetilformarnida e 13,2 mL de 1,1-dimetoxi-N,N-dimetil-etanamina e. depois arrefeceu-se. Concentrou-se a mistura a 88 pressão reduzida, para se obter o produto intermédio Via impuro, que se utilizou directamente na etapa seguinte. Dissolveu-se o resíduo no seio de 48 mL de diclorometano e 15 mL de metanol e fez-se reagir com 1,41 mL de hidrazina anidra, durante 30 horas. Repartiu-se a mistura entre água e acetato de etilo. Voltou a extrair-se a fase aquosa com acetato de etilo e lavaram-se as camadas de acetato de etilo com água, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Fez-se a cromatografia do resíduo em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (8:1), para se obter 2,05 g de 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-3-metil-pirazolo [3,4-b] [1,4] benzo-, diazepina (IVa). O material cristalizou no seio de hexano-díclorometano, para se obter IVa, sob a forma de. um sólido amarelo, pf 21.7-218 °C. MH+/Z = 357.

Preparação de pirazolobenzodiazepinas IV a partir de aminobenzofenonas X com pirazole XIII (esquema 4)

89

Preparação de 5-(2-clorofenil) -1,2-d.i-hid.ro-3,7,8-trimetil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVw)

IVw

Aqueceu-se num tubo selado, a 170 °C, durante 90 minutos, uma mistura de 3,0 g (0,0116 moles) de (2-amino-4,5-di-metilfenil)-(2-clorofenil)-metanona. (Xw) , 2,0 g (0,0116 mo les) de 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pirazole (XIII), 2,21 g (0,0116 moles) de mono-hidrato de ácido p-tolueno-sulfónico e 40 mL de isopropanol. Concentrou-se a mistura a pressão reduzida e dil.uiu-se o resíduo com acetato de etilo e depois lavou-se duas vezès com uma solução de bicarbonato de sódio saturado. Voltou a extrair-se as águas de lavagem com acetato de etilo e secou-se as camadas de acetato de etilo combinadas sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e.concentrou-se a pressão reduzida. A trituração do resíduo com hexano, originou o produto intermédio 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,Ί, 8-trimetil-l-(2-propenil)-pira-zolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XIVw), sob a forma de um sólido amarelo. A purificação dos filtrados por cromatografia em gel de silica e eluindo-se com acetato de etilo-diclorometano (1:1), originou mais XIVw e combinou-se com o material. obtido antes, para se obter um rendimento total de' 2,7· g de XIVw, sob a forma de um sólido amarelo, que foi utilizado, directamente na etapa seguinte. A uma solução de 2,7 g (0,00716 moles) de 5-(2-clorofenil) -1,2-di-hidro-3,7,8-trimetíl-l-(2-propenil)-pirazolo-[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XIVw), 0,155 g (0,00029 moles) de 90 cloreto de 1,3-bis(difenilfosfino)propano e níquel (II) e 140 mL de tetra-hidrofurano anidro, a -40 °G, adicionou-se 43 mL de hídreto de di-isobutilalumínio 1 M, no seio de tolueno. AgitoU-se a mistura a 0 °C, durante 6 horas e depois parou-se a reacção por meio da adição cuidadosa de água gelada. Extraiu-se a mistura duas vezes com acetato de etilo. Secaram-se os extractos de acetato de etilo combinados sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-diclorometano (1:1), para se obter 1,5 g de 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-3.,7,8-trimetil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVw), sob a forma de um sólido cor de laranja. MH+/Z =337.

Exemplo 73

Preparação de 5- (2-clorofenil) -1,2-di-liidro-7-fluoro-8-me-toxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVa)

IVa

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hídro-7-fluoro-8-me-toxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepiha (IVa) fazendo reagir 0,0014 moles de (2-amino-5-fluoro-4-TEietoxifenil) (2-clorofenil)—metanona (Xa) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pirazole (XIII.) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxl-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzo-dia-zepina (XlVa), com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 357. 91

Exemplo 7 4

Preparação de 5- (2-clorofenil) -1,2-di-hidro-7,8-dimetaxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVx)

Prepafou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-3-metil^pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVx) fazendo reagir 0,00093 moles de (2-amino-4,5-dimetoxifenil)(2-clorofenil) -metanona (Xx) com 4-amino-5-c.loro-3-metil-l-(2-prope-nil)-lH-pirazole (XIII) e. subsequente desalquilação do produto intermédio, 5- (2-clorofenil) -1,2-di-hidro-7,8-diirietoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XIVx) com hidreto de di-isobutilaluminio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 369.

Exemplo 75

Preparação de 8—cloro-5- (2—clorofenil) -1,2—di—hidro-7-met:oxi-3-metiÍ-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVy)

Preparou-se 8-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-me-toxÍ-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVy) fazendo reagir 0,0012 moles de (2-amino-4-cloro-5-metoxifenil)(2- 92 clorofenil) -metanona (Xi) com 4-amino-5-clorò-3-metil-l- (2-propenil)-lH-pirazole. (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 8-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pi-razolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XlVi) com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 373.

Exemplo 76

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1f2-di-hidro-8-metoxi-3,7-di-metj.l-pirazolo[3f 4-b] [1,4]benzodiazepina (XVz)

IVe

Preparou-se· 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro~-8-metoxi-3,7-dimetil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVz) fazendo reagir 0,0012 moles de (2-amino-4-metoxi-5-metilfenil)-(2-clorofenil) -metanona (Xz) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil) -lH-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3,7-dimetil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XIVz) com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 353.

Além disso, isolou-se 0,4 % de 1,2-di-hidro-3,7-dimetil-8-metoxi-5-fenil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVe) a partir da reacção de desalquilação. MH+/Z = 319.

Exemplo 77 93

Preparação de 1,2-di-hidro--7,8-dimetoxi-5- (2-metoxifenll) -3-metil-pirazolo[3,4 b] [1,4]benzodiazepina (IVaa) H3C—O H3C-0

IVaa

Preparou-se 1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-5-(2-metoxifenil)-3-raetil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVaa) fazendo reagir 0,0023 moles de (2-amino-4,5-dimetoxifenil)-(2-metoxifenil) -metanona (Xaa) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-prope-nil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-5-(2-metoxifenil)-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]ben-zodiazepina (XlVaa) com hidreto de di-isobutilaluminio, de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 365.

Exemplo 78

Preparação de 5-(2-clorofenil)-8,10-di-hidro-7-metil-l,3-di-oxolo[4,5-h]pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVbb)

IVbb

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-8,10-di-hidro-7-metil-l,3-dioxolo[4,5-h]pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina(IVbb) fazendo reagir 0,0023 moles de (6-amino-l,3-benzodioxol-5-il)-(2-clorofenil)-metanona (Xbb) com 4-amíno-5-cloro-3-metil-l-(2- 94 propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-8,10-di-hidro-7-metil-1,3-dioxolo-l-(2-propenil)-[4,5-h]pirazolo-[3,4-b][1,4]benzo-diazepina (XlVbb) com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 353.

Exemplo 7 9

Preparação de 7-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVcc)

IVcc

Preparou-se 7-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-me-toxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4Jbenzodiazepina (IVcc) fazendo reagir 0,0023 moles de (2-amino-5-cloro-4-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xcc) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 7-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pi-razolo[3,4-b][1,4]benzodia-zepina (XIVcc) com hidreto de di-isobutilaluminio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 373.

Exemplo 80

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,2-di -hidro-8-fluoro-7-me-toxi-3-metil-pirazolo[3,4-b](1,4]benzodiazepina (IVdd)

H3C—O F

IVdd 95

Preparou-se 5- (2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-fluoro-7-me-toxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVdd) fazendo reagir 0,0023 moles de (2-amino-4-fluoro-5-metoxifenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xdd) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-fluoro-7-metoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]-benzodiazepina (XlVdd) com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 357.

Exemplo 81

Preparação de 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-7-me-t:oxi-3-inetil-8-trifluorometil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVee)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-me-til-8-trifluorometil-pirazolo [3,4-b] [1,4]benzodiazepina (IVee) fazendo reagir 0,0023. moles de (2-amino-5-metoxi-4-trifluorometilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xee) com 4-ami-no-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-l-(2-propenil)-8-trifluoro-me-til-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XlVee) com hidreto de di-isobutilaluminio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 407.

Exemplo 82 96

Preparação de S-^-clorofenilí-l^-di-liidro^-nietoxi-S-metil-8-fenil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVff)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3- metil-8-fenil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVff) fazendo reagir 0,0023 moles de (2-amino-5-metoxi-4-fenilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xff) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-8-feníl-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]-benzodiazepina {XlVff) com hidreto de di-isobutilaluminio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 415.

Exemplo 83

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-me-•boxietoxi-3-metil-pirazolo [3,4-b] [1,4]benzodiazepina (IVqrg)

Preparou-se 5-(2 clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-me-toxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVggj fazendo reagir 0,0023 moles de (2-amino-5-metoxi-4-(2-me- 97 toxietoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xgg) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-metoxietoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo-[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XlVgg) com hidreto de di-iso-butilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 413.

Exemplo 84

Preparação de 8-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di.-hidro-3,7-d-iTn<&-til-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVhh)

HaC Cl

IVhh

Preparou-se 8-cloro-5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-3,7-dimetil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVhh) fazendo reagir 0,0023 moles de (2-amino-4-cloro-5-metilfenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xhh) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 8-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XlVhh) com hidreto de di-isobutilaluminio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 357.

Exemplo 85

Preparação de 5- (2-clorofen.il) -1,2-di-hidro-7-metoxi-8- (1-metiletoxi) -3-me-til-pirazolo [3,4-b] [1,4] benzodiazepina (IVii) 98

Preparou-se 5- (2-clorofenil) -1,2-di-hid.ro-7-metoxi-8- (1-metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (iVii) fazendo reagir 0,0023 moles de (2~amino-5-metoxi-4-(1-metiletoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xii) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subse^ quente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-(1-metiletoxi)-3-metil-l-(2-prope-nil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XlVii) com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 397.

Exemplo 86

Preparação de 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-matoxi-7-(1-metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVji)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-(1-metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b] [1,4]benzodiazepina (IVjj) fazendo reagir 0,0023 moles de (2-amino-4-metoxi-5-(1-metiletoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xjj) com 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) e subse- 99 quente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-(1-metiletoxi)-3-metil-l-(2-propenil) -pirazolo [3, 4-b] [1, 4] benzodiazepina (XlVjj) com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 397.

Exemplo 87

Preparação de 5- <2-clorofen.il) -1,2-di-h.idro-8-m.etoxi-7~me-toxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVkk)

IVkk

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-me-toxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (IVkk) fazendo reagir 0,0014 moles de (2-amino-4-metoxi-5-(2-metoxi-etoxi)fenil)-(2-clorofenil)-metanona (Xkk) com 4-amino-5-clo-ro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pirazole (XIII) e subsequente desalquilação do produto intermédio, 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-metoxietoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo-[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XlVkk) com hidreto de di-isobutilalumínio de uma forma análoga à do Exemplo 72. MH+/Z = 413.

Exemplo 88

Processo 1 de preparação de 4-amino-5-cloro-3-metil-l~(2-propenil)-lH-pirazole (XIII) (esquema 5) 100

Etapa 1: Preparação de 5-amino-3-itietil-l- (2-propenil) -lH-pi-razoio-4-carboxilato de etilo (XV) A uma solução de 10,3 g (0,056 moles) de 2-ciano-3-etoxi-2-butenoato de etilo, no seio de 250 iaL de metanol, adicionou-se 8,9 g (0,0616 moles) de di-cloridrato de alil-hidrazina e 39 ml de trietilamina. Fez-se o refluxo da mistura reaccional a 8Ò °C, durante 3 horas, e depois concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em gel de silica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (1:1), para se obter 6,7 g de 5-amino-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pirazolo-4-carboxilato de etilo (XV), sob a forma de um óleo amarelo.

Etapa 2: Preparação de 5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pi-razolo-4-carboxilato de etilo (XVI) A uma solução de 6,7 g (0,032 moles) de 5-amino-3-metil-1-(2-propenil)-lH-pirazolo-4-carboxilato de etilo (XV), no seio de 30 mL de ácido clorídrico concentrado, adicionou-se 101 8,6 g (0,064 moles) de cloreto de cobre (II). Arrefeceu-se a mistura para 0 °C e adicionou-se, em porções, 2,65 g (0,038 moles) de nitrito de sódio, durante 20 minutos. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente, durante 1 hora, e depois a 40 °C, durante 2 horas. Diluiu-se a mistura com 50 mL de água e extraiu-se duas vezes com clorofórmio. Secaram-se os extractos de clorofórmio sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o residuo por cromatografia em gel de silica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (1:4), para se obter 5,0 g de 5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pirazolo-4-carboxilato de etilo (XVI), sob a forma de um óleo amarelo claro.

Etapa 3: Preparação do ácido 5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pirazolo-4-carboxílico (XVII) A uma solução de 5,0 g (0,0249 moles) de 5-cloro-3-metíl-1-(2-propeníl)-lH-pirazolo-4-carboxilato de etilo (XVI), no seio de 40 mL de tetra-hidrofurano-água-metanol (3:1:1), adicionou-se 5 mL de uma solução de hidróxido de sódio 10 M. Aqueceu-se a mistura a 65 °C, durante 4 horas e depois concentrou-se até a um volume mais pequeno a pressão reduzida. Ajustou-se o f para 1-2 por meio da adição de ácido clorídrico. Recolheu-se o produto por filtração, lavou-se com água e secou-se para se obter 4,7 g do ácido 5-cloro-3-metil-1-(2-propenil)-lH-pirazolo-4-carboxílico (XVII), sob a forma de um sólido acastanhado.

Etapa 4: Preparação da azida de 5-cloro-3-metil-l-(2-propenil) -lH-pirazolo-4-carbonilo (XVIII) A uma solução de 6,0 g (0,030 moles) do ácido 5-cloro-3-metil-1-(2-propenil)-lH-pirazolo-4-carboxílico (XVII), 4,2 mL (0,030 moles) de trietilamina e 100 mL de acetona, a -10 °C, 102 adicionou-se 2,9 mL (0,030 moles) de cloroformato de etilo. Passados 30 minutos, adicionou-se 5,8 g (0,090 moles) de azida de sódio, no seio de 50 mL de água. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente, durante 1 hora e depois concentrou-se a pressão reduzida até aproximadamente metade do volume original. Extraiu-se a mistura duas vezes com clorofórmio e secaram-se os extractos sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida, para se obter 4,7 g da preparação da azida de 5-cloro-3-metil-l-(2-pro-penil)-lH-pirazolo-4-carbonilo (XVIII), sob a forma de um sólido branco.

Etapa 5: Preparação de 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propendi) -ΙΗ-pirazole (XIII)

Aqueceu-se a 100 °C, durante 1 hora, uma solução de 12,3 g (0,0545 moles) de 5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-lH-pira-zolo-4-carbonilazida (XVIII) , no seio de 1-2-0 mL de tolueno. Adicionou-se 20 mL de ácido clorídrico e aqueceu-se'a mistura a 110 °C, durante 2 horas e depois arrefeceu-se. Concentrou-se a mistura a pressão reduzida e. depois agitou-se à temperatura ambiente com. 50 mL de diclorornetano e 10 mL de trietilamina. Filtrou-se a mistura e concentrou-se o filtrado a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (1:1), para se obter 6,0 g de 4-amino-5-cloro-3-metil-Í- (2-propenil)-IH-pirazole (XIII), sob a forma de um óleo cor de laranja. EM MH+/Z = 172.

Este material tinha pureza suficiente para ser utilizado nas reacções subsequentes. 103

Exemplo 89

Processo 2 de preparação de 4-aroino-5-cloro-3-metil-l-(2-pro-penil)-lH-pirazole (XIII) (esquema 6)

Etapa 1: Preparação de 5“cloro"3“metil-4~nitro-l-(2-prope-nil)-ΙΗ-pirazole (XX) A uma soluçãõ de 5,0 g (0,031 moles) de 5-cloro-3-metil-4-nitro“lH-pirazole, no seio de 100 mL de tetra-hidrofurano anidro, em atmosfera de árgon, adicionou-se 0,37 g (0,0464 moles) de hidreto de litio. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente, durante 15 minutos. Depois, adicionou-se 5,6 g (0,0464 moles) de brometo de alilo e aqueceu-se a mistura a 80 °C, durante 10 horas. Arrefeceu-se a mistura, verteu-se em gelo e extraiu-se duas vezes com acetato de etilo. Secaram-se as camadas de acetato de etilo combinadas sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em gel de silica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (1:2), para se obter, como componente mais polar, 1,36 g de 3-cloro-5-metil-4-ni-tro-1-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole, sob a forma de um óleo incolor e, como componente menos polar, 0,5 g de 5-cloro-3-metil-4-nitro-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XX), sob a forma de um óleo incolor.

Etapa 2: Redução de XX para formar 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil)-ΙΗ-pirazole (XIII) 104

Agitou-se à temperatura ambiente, durante 1 hora, uma mistura de 0,5 g (0,00248 moles) de 5-cloro-3-metil-4-nitro-1-(2-propenil)-lH-pirazole (XX), 1,6 g (0,0198 moles) de cloreto de amónio, 1,6 g de pó de zinco, 20 mL de metanol e 20 mL de água. Filtrou-se a mistura e extraiu-se o filtrado com acetato de etilo. Secou-se a camada de acetato de etilo sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o residuo por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (1:1), o que originou 0,10 g de 4-amino-5-cloro-3-metil-l-(2-propenil) -lH-pirazole (XIII), que era idêntico ao material preparado no Exemplo 88 anterior (processo 1).

Exemplo 90

Preparação de 5-(2-clorofen.il)-1,2-di-hicLro-7-fTuoro-8-me-toxi-pirazolo[3,4 b][1,4]benzodiazepina (XXIIa)

A uma solução de 0,64 g (0,0019 moles) de 5-(2-cloro-fenil)-1,3-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiaze-pin-2-tiona (lia), no seio de 5 mL de diclorometano, adicionou-se 105 5 mL (0r029 moles) de 1,1-dietoxi-N,N-dimetil-metanamina. Agitou-se a mistura durante a noite à temperatura ambiente, depois concentrou-se a pressão reduzida. Agitou-se o resíduo que continha o produto intermédio XXIa, com uma mistura de 18 mL de diclorometano, 5,5 mL de metanol e 0,3 mL de hidrazina, durante 6 horas e depois repartiu-se entre diclorometano e água. Lavou-se a camada de diclorometano duas vezes com água, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, filtrou-se e concentrou-se a pressão reduzida. Purificou-se o produto por cromatografia em gel de sílica, eluindo-se com acetato de etilo-hexano (4:1), para se obter 0,500 g de 5-(2-cloro-fenil) -1, 2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-pirazolo[3,4-b]-[1,4]-benzodiazepina (XXIIa). A recristalização em diclorometano-acetato de etilo originou XXIIa, sob a forma de um sólido vermelho claro, pf 242-243 °C.

Exemplo 91

Preparação de 5-(2-cloro£enil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7—metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XXIIz)

Ite XXIz

Η N

XXtíz 106

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7- metil-pirazolo[3,4 —b] [1,4]benzodiazepina (XXIIz) fazendo reagir 0,003 moles de 5-(2-clorofenil)-1, 3-di-hidro-8-metoxi-7-metil-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (IIz) com 1,1-dietoxi-N,N-dimetil-metanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do Exemplo 90. A recristalizaçâo em acetato de etilo-metanol, originou 5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-8-me-toxi-7-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina, sob a forma de um sólido vermelho claro, pf 275-276 °C.

Exemplo 92

Preparação de 5- (2-clorofenil) -1,2-di.-hidro-7-ciano-8-ine'toxi-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XXIIb)

Preparou-se 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-ciano-8-me-toxi-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XXIIb) fazendo reagir 0,00096 moles de 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,3-di-hidro-8-metoxi-2H-l,4-benzodiazepin-2-tiona (Ilb) com 1,1-dietoxi-N,N-dimetil-metanamina e depois com hidrazina de uma forma análoga à do exemplo anterior. A recristalizaçâo em acetato 107 de etilo, originou 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-ciano-8-metoxi-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina (XXIIb), sob a forma de um sólido vermelho claro, pf 288-290 °C.

Exemplo 93

Formulação de Comprimidos

Item Ingredientes mg/Comprimido 1 Composto I* 5 25 100 250 500 750 2 Lactose Anidra 103 83 35 19 38 57 3 Croscarmelose Sódica 6. 6 8 16 32 48 4 Povidona K30 5 5 6 12 24 36 5 Estearato de Magnésio 1 1 1 3 6 9 Peso Total 120 120 150 300 600 900 *0 composto 1 representa um composto da presente invenção.

Processo de Fabrico:

Misturar os itens 1, 2 e 3 num misturador apropriado durante 15 minutos.

Granular a mistura de pó da etapa 1 com uma solução de Povidona K30 a 20 % (item 4).

Secar a granulação da etapa 2 a 50 °C.

Passar o granulado da etapa 3 através de um equipamento de moagem apropriado.

Adicionar o item 5 ao granulado moldo da etapa 4 e mexer durante 3 minutos.

Comprimir o granulado da etapa 5 numa prensa apropriada^_ -_____ 108

Exemplo 94

Formulação de Cápsulas

Item Ingredientes mg/Cápsula 1 Composto 1* 5 25 100 250 500 2 Lactose Anidra 159 123 148 — — 3' Amido de Milho 25 35 40 35 70 4 Talco 10 15 10 12 24 5 Estearato de Magnésio 1 2 2 . 3 6 Peso Total de Enchimento 200 200 300 300 600 *0 composto 1 representa um composto da presente invenção.

Processo de Fabrico:

Misturar os itens 1, 2 e 3 num misturador apropriado durante 15 minutos.

Adicionar os itens 4 e 5 e misturar durante 3 minutos.

Encher em cápsulas apropriadas._

Exemplo 95

Preparação de uma Solução/Emulsão para Injecção

Item Ingredientes mg/mL 1 Composto 1* 1 mg 2 PEG 400 10 - 50 mg 3 Lecitina 20 - 50 mg 4 Óleo de Soja 1 - 5 mg 5 Glicerol 8 - 12 mg 6 Água q.s. 1 mL *0 composto 1 representa um composto da presente invenção. Processo de Fabrico:

Dissolver o item 1 no item 2.

Adicionar os itens 3, 4 e 5 ao item 6 e misturar até ficarem dispersos e depois homogeneizar.

Adicionar a solução da etapa 1 à mistura da etapa 2 e homogeneizar até que a dispersão esteja translúcida.

Fazer uma filtração esterilizada através de um filtro de 0,2 μπι e encher em frascos. __ 109

Exemplo 96

Preparação de uma Solução/Emulsão para Injecgão

Item Ingredientes mg/mL 1 Composto 1* 1 mg 2 Glicofurol 10 - 50 mg 3 Lecitina 20 - 50 mg 4 Óleo de Soja 1 - 5 mg 5 Glicerol 8 - 12 mg 6 Água q.s. 1 mL *0 composto 1 representa um composto da presente invenção.

Processo de Fabrico:

Dissolver o item 1 no item 2.

Fazer uma filtração esterilizada através de um filtro de 0,2 pm e encher em frascos._ - _

As actividades anti-angiogénicas e anti-proliferativas dos compostos da presente invenção estão demonstradas a seguir. Estes efeitos indicam que os compostos com interesse são úteis na inibição de angiogénese e no tratamento de cancro, em particular, de tumores sólidos, tais como, q cancro da mama e o cancro do cólon.

Exemplo 97

Ensaio á Pressão de uma Placa de CDC2

Para determinar a actividade de inibição de CDC2, revestiu-se uma proteína recombinante de retinoblastoma (Rb) em placas à pressão de 96 cavidades (New England Nuclear, Boston, MA) . 0 Rb é um substrato . natural para fosforilação 110 por meio de CDC2 (Herwig and Strauss Eur. J. Biochem., Vol. 246 (1997) pp. 581-601 e referências ai indicadas). Os complexos recombinantes de ciclina humana activa E/CDC2 foram parcialmente purificados a partir de extractos de células de insectos. Adicionou-se a ciclina activa E/CDC2 a placas Flash revestidas com Rb em conjunto com 33P-ATP e diluições dos compostos do ensaio. Fez-se a incubação das placas durante 25 minutos à temperatura ambiente, com agitação, depois lavaram-se e contaram-se num contador de cintilação Topcount (Packard Instrument Co., Downers Grove, IL). As diluições dos compôs-tos de ensaio foram analisadas.em duplicado para cada ensaio. A percentagem de inibição da fosforilaçêo de Rb, que é uma medida da actividade de inibição de CDC2, foi determinada de acordo com a seguinte fórmula: 100 x 1 composto de ensaio - não especifico total - não especifico em que "composto de ensaio" refere-se às contagens médias por minuto dos duplicados do ensaio, "não especifico" refere-se às contagens médias por minutos quando não se tinha adicionado a ciclina E/CDC2 e "total" refere-se às contagens médias por minuto quando nenhum composto tinha sido adicionado .

Os compostos da presente invenção têm valores de CI50 de CDC2 inferiores a 10 μΜ, preferencialmente, inferiores a 1 μΜ. Os valores de Ciso de KDR para compostos representativos estão estabelecidos no quadro I a seguir. 111

QUADRO I

Inibição de CDC2 Comp. Número R1 R2 RJ R4 CI50 (μΜ) IVa F och3 ch3 Cl 1,330 ivb CN och3 ch3 Cl 0,184 IVf F och2ch2och3 ch3 Cl 0,395 IVh F OCH(CH3)2 ch3 Cl 0, 247

Exemplo 98 KDR & FCFr (factor do crescimento do flbroblasto, FGF na terminologia inglesa.)

Para determinar a inibição de KDR e FCFr realizaram-se ensaios com cinase utilizando um ensaio FRTH (fluorescência resolvida em tempo homogéneo, HTRF na terminologia inglesa). Este ensaio está descrito em A. J. Kolb et. al., Drug Discovery Today, 1998, 3(7), p 333.

Antes da reacção com a cinase, activou-se EEE recombi-nante marcada com KDR na presença de um tampão de activação (HEPES 50 mM, pH 7,4, DTT 1 mM, glicerol a 10 %, NaCl 150 mM, EDTA 0,1 mM, MgCl2 26 mM e ATP 4 mM) . Incubou-se a enzima a 4 °C, durante 1 hora.

Realizaram-se os ensaios de actividade da cinase em placas de polipropileno de 96 cavidades (Falcon) com um volume total de 90 μΐ em cada cavidade. Cada cavidade continha 1 μΜ de substrato de KDR (Biotina-EEEEYFELVAKKKK), KDR 1 nM activado e um composto de ensaio, com uma das 8 concentrações de ensaio variando de 100 μΜ até 128 pM (diluição em série a 1:5). O ensaio de actividade da cinase foi feito na presença de HEPES 100 mM, pH 7,4, DTT 1 mM, 112

Na2VC>4 0,1 mM, MgCl2 25 mM, NaCl 50 mM (a partir de uma solução concentrada^de KDR), DMSO a 1 % (do composto), ATP 0,3 mM (a uma concentração Km) e ASB a 0,02 %. Fez-se a incubação da mistura reaccional a 37 °C, durante 30 minutos. Para parar a reacção de KDR, transferiu-se 72 pL da mistura reaccional para uma placa de paragem contendo 18 pL de tampão de revelação (EDTA 20 mM, HEPES 50 mM, pH 7,4, ASB a 0,02 %, anticorpo anti-pY marcado com Eu 10 nM (concentração final de 2 nM) e estreptavidina 100 nM (concentração final de 20 nM)). Depois de se misturar, transferiu-se 35 pL de uma solução para cavidades em duplicado de uma placa preta com 384 cavidades (Costar) e leu-se a 615/665 nm num leitor Wallac Victor 5.

Realizaram-se os ensaios de actividade de FCFr tal como descrito antes para o ensaio de actividade de KDR com as seguintes diferenças. A enzima de FCFr marcada com GST foi activada à temperatura ambiente, durante 1 hora, no seguinte tampão de activação: HEPES 100 mM, pH 7,4, NaCl 50 mM, MgCl2 20 mM e ATP 4 mM. Realizou-se ú ensaio de actividade da cinase com substrato 1 pM (Biotina-EEEEYFELV), FCFr activada 1,5 nM e composto de ensaio na presença de HEPES 100 mM, DTT 1 mM, MgCl2 0,4 mM, MnCl2 0,4 mM, NaCl 50 mM, DMSO a 1 %, ATP 10 pM (Kn, = 8,5 pM para FCFr), Na2V04 0, 1 mM e ASB a 0,02 %, num volume total de 90 pL. O resto do ensaio realizou-se da mesma maneira que o ensaio de KDR.

Determinaram-se os valores de CI5o do composto a partir dos conjuntos de dados em duplicado e calcularam-se utilizando EXCEL e dados ajustados com a equação I=[(a-b)/{1+(X/c)d]+b, em que a e b representam a actividade das enzimas na presença de nenhum composto inibidor do composto de ensaio e uma quantidade infinita de composto de ensaio inibidor, respectivamente, c representa CI50 e d representa a 113 constante do pico de resposta do composto. 0 valor de CI50 é a concentração ' do composto de ensaio que reduz em 50 % a actividade da‘enzima nas condições de ensaio descritas.

Os compostos da presente invenção têm valores de CI50 de KDR inferiores a 10 μΜ, preferencialmente, inferiores a 1 μΜ, mais preferencialmente, inferiores a 0,5 μΜ ou valores de CI50 de FCFr inferiores a 10 μΜ, preferencialmente, inferiores a 1 μΜ. Mais preferencialmente, os compostos da presente invenção tenham valores de CI50 de KDR inferiores a 1 μΜ e valores de CI50 de FCFr inferiores a 1 μΜ. Os valores de CI50 de KDR para os compostos representativos estão ilustrados no quadro II a seguir e os valores de CI50 de FCFr para os compostos representativos estão ilustrados nó quadro III a seguir.

QUADRO II

Inibição de KDR Comp. Número R1 R* RJ R4 Ciso (μΜ) IVa F OCH3 ch3 Cl 0, 010 IVc C(0)NH2 0CH3 ch3 Cl 0,022 IVi F OCH2CH2 N(CH2CH2)2o ch3 Cl 0,031 IVkk OCH2CH2 och3 ch3 Cl 0,024

QUADRO XII

Inibição de FCFr Comp. Número R1 R* Rf R4 CI50 (μΜ) IVa F och3 ch3 Cl 0,028 IVc C(0)NH2 och3 ch3 Cl 0,032 IVk CN OCH2CH2 N(CH2CH2)20 ch3 Cl 0,033 IVw ch3 ch3 ch3 Cl 0,038 114

Exemplo 99 MDA-MB-435, SW480 e HCT-116

Comprou-se a linha de carcinoma epitelial da mama, negativa ao receptor de estrogénio (MDA-MB-435), na American Type Cell Culture Collection (ATCC; Rockville, MD) e fez-se crescer num meio recomendado pela ATCC. Para fazer a análise do efeito dos compostos de ensaio no crescimento destas células, colocaram-se as células em placa em número de 2.000 células por cavidade em placas de cultura de tecidos de 96 cavidades e fez-se a sua incubação durante a noite, a 37 °C, em atmosfera de CO2 a 5 %. No dia seguinte, dissolveram-se os compostos do ensaio em sulfóxido de dimetilo a 100 % (DMSO), para se obter uma solução concentrada de 10 mM. Diluiu-se cada um dos compostos com meio esterilizado até 1 mM, numa quantidade suficiente para se obter uma concentração final de 120 μΜ, Depois diluíram-se os compostos em série em meio com DMSO a 1,2 %. Um quarto do volume final dos compostos diluídos foi transferido para placas de 96 cavidades. Fez-se a análise dos compostos de ensaio em duplicado. Adicionou-se DMSO a uma fila de "células de controlo" de tal modo que a concentração final de DMSO em cada cavidade foi de 0,3 %. As cavidades às quais não se tinha adicionado células serviram como "brancas". As cavidades às quais não se tinha adicionado inibidor serviram como "sem controlo do inibidor". As placas voltaram à incubadora e 5 dias após a adição do composto de ensaio foram analisadas tal como se descreve a seguir.

Adicionou-se a cada cavidade brometo de 3-(4,5-dimetil-tiazole-2-il)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (azul de tiazolilo; MTT) até se obter uma concentração final de 1 mg/mL. Fez-se então a incubação das placas a 37 °C, durante 3 horas. Cen-trifugaram-se as plâcas a 1.000 r.p.m., durante 5 minutos 115 antes da aspiração do meio contendo MTT. Depois, eliminou-se o meio contendo MTT e adicionou-se 100 pL de etanol a 100 % a cada cavidade para dissolver o metabólito de formazano resultante. Para assegurar uma dissolução completa, agitaram-se as placas durante 15 minutos, à temperatura ambiente. Leram-se as absorvências num leitor de placa microtituladora (Molecular Dynamics), a um comprimento de onda de 570 nm com uma referência de 650 nm. Calculou-se a percentagem de inibição subtraindo a absorvência das cavidades "brancas" (sem células) de todas as cavidades e subtraindo depois a divisão da densidade óptica média de cada duplicado do ensaio pela média dos controlos de 1,00. Determinaram-se as' concentrações inibidoras (CI5o) a partir de uma análise de regressão linear de um gráfico do logaritmo das concentrações em função da percentagem de inibição.

Os compostos da presente invenção têm valores de CI5o de MDA-MB-435 inferiores a 20 μΜ, preferencialmente, inferiores a 2 μΜ. O valor de CI50 para a inibição do ensaio à base de células de MDA-MB-435 para a 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-dimetil-2H-l,4-benzodiazepin-2-ona (Iw) é de 0,950 μΜ.

Também se obteve uma linha de células do adenocarcinoma do cólon SW480 e uma linha de células do carcinoma do cólon HCT-116 da ATCC e foram feitos os ensaios de acordo com o mesmo protocolo dado antes para o ensaio à base de células MDA-MB-435 com as modificações que se seguem. Colocou-se em placa a linha de células SW480, a uma densidade de 1.000 células por cavidade e analisaram-se 6 dias após a adição do composto de ensaio. Colocou-se em placa a linha de células HCT-116 a uma densidade de 1.000 células por cavidade e analisaram-se 4 dias após a adição do composto de ensaio. 116

Os compostos da presente invenção têm valores de CI50 de SW480 inferiores a 20 μΜ, preferencialmente, inferiores a 2 μΜ. Os valores de CI50 para a inibição no ensaio à base de SW480 (cólon) para 5-(2-clorofenil)-1,3-di-hidro-7,8-dimetil-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona (Iw) é de 0,950 μΜ.

Os compostos da presente invenção têm valores de CI50 de HCT-116 inferior a 20 μΜ, preferencialmente, inferior a 2 μΜ. Os valores de CI50 para a inibição no ensaio à base de HCT-116 (cólon) para os compostos representativos, estão ilustrados a seguir no quadro IV.

QUADRO IV

Actividade Antiproliferativa para 0 Ensaio de HCT116 (cólon) Comp. Número R1 R* R3 R4 CI50 (μΜ) IVgg 0CH3 OCH2CH2OCH3 ch3 Cl 0,197 IVkk OCH2CH20CH3 OCH3 ch3 Cl 0,509 IVa F 0CH3 ch3 Cl 1, 040 IVf F OCH2CH2OCH3 ch3 Cl 0,498

Exemplo 100

Ensaios de Proliferação de CEVUH Estimulada por FCEV e FCF

Avaliou-se a actividade anti-proliferativa dos compostos de ensaio da presente invenção em ensaios à base de células por meio do ensaio BrdU utilizando o kit BrdU (Roche Biochemicals 1-647-229). Fez-se uma cultura de células endo-teliais da veia umbilical humana (CEVUH, HUVEC na terminologia inglesa; Clonetics CC-2519) em meio EGM-2 (Clonetics CC-3162) e semeou-se a uma densidade de 10.000 células por cavidade num volume de 200 pL de meio EGM-2 (Clonetics CC-3162), em placas de fundo plano com 96 cavidades (Costar 117 3595), durante a noite. Após 24 horas de crescimento a 37 °C, em atmosfera de C02 a 5 %, retirou-se o meio de incubação lentamente por aspiração e o conteúdo de cada cavidade foi lavado com 300 pL de EBM-2 (Clonetics CC-3156) pré-aquecido, contendo 50 pg por mL de gentamicina e 50 ng por mL de anfotercina-B (Clonetics CC-4083). Em seguida, o meio remanescente foi novamente aspirado e substituído com 160 pL por cavidade de um meio de inanição do soro (EBM-2 complementado com SBF a 1 % inactivado pelo calor (Clonetics CC-4102), 50 pg por mL de gentamicina e 50 ng por mL de anfotercina-B (Clonetics CC-4083), 10 unidades por mL de heparina da Wieth-Ayerst (NDC0641-0391-25) , e L-glutamina 2 mM (GIBCO 25030-081). Depois do soro matar as células por inanição durante 24 horas, adicionou-se 20 pL do composto de ensaio numa concentração de ensaio de 10X, a um meio de inanição do soro com DMSO a 2,5 % nas cavidades apropriadas. As cavidades de controlo continham 20 pL do meio de inanição do soro com DMSO a 2,5 %. As placas voltaram à incubadora durante 2 horas. Depois da pré-incubação das células com os compostos de ensaio durante 2 horas, adicionou-se 20 pL dos factores de crescimento numa concentração de ensaio de 10X, diluídos em meio de inanição do soro, FCF a 50 ng por mL ou FCEV (R&D systems 293-VE) a 200 ng por mL. A concentração final de FCF no ensaio foi de 5 ng por mL e a concentração final de FCEV no ensaio foi de 20 ng por mL. As cavidades de controlo isentas de factor de crescimento tinham 20 pL por cavidade de meio de inanição de soro com a mesma quantidade de ASB do que as cavidades com factores de crescimento. As placas voltaram à incubadora durante mais 22 horas.

ELISA de BrdU

Passadas 24 horas de exposição aos compostos de ensaio, marcaram-se as células com BrdU (Roche Biochemicals 1-647- 118 229), adicionando 20 pL por cavidade do reagente de marcação BrdU que tinha sido diluído (1:100) em meio de inanição do soro. As placas voltaram então à incubadora durante 4 horas. O meio marcado foi retirado por drenagem do meio com toalhas de papel. Fixaram-se as células e o ADN foi desnaturado por meio da adição de 200 pL de solução de fixação/desnaturação a cada cavidade e incubação à temperatura ambiente, durante 45 minutos. A solução de fixação/desnaturação foi drenada por meio de toalhas de papel e adicionou-se a cada cavidade 100 pL de anti-BrdU-POD e incubaram-se as cavidades durante 2 horas, à temperatura ambiente. Retirou-se a solução de anticorpo e lavaram-se as cavidades 3-4 vezes com 300 pL de SBF. Adicionou-se a cada cavidade 100 pL da solução do substrato de TMB e incubaram-se as cavidades à temperatura ambiente durante 5-8 minutos. Parou-se então a reacção por meio da adição de 100 pL por cavidade de ácido fosfórico 1 M. Leram-se as placas a 450 com um comprimento de onda de referência de 650 nm. A percentagem de inibição para cada composto de ensaio foi calculada subtraindo a densidade óptica nas cavidades dos "brancos" (sem células) de todas as cavidades e subtraindo depois a divisão da densidade óptica média de cada duplicado do ensaio pela média dos controlos de 1. O produto final foi então multiplicado por 100 (% de inibição = (1 - densidade óptica média do duplicado do ensaio/média do controlo)100). O valor de CI50 é a concentração do composto de ensaio que inibe 50 % a marcação de BrdU e é uma medida da inibição da proliferação das células.. A CI50 determina-se a partir de uma análise de regressão linear de um gráfico do logaritmo da concentração versus a percentagem de inibição.

Os compostos da presente invenção têm valores de CI50 do ensaio de CEVUH estimuladas por FÇEV inferiores a 10 pM, preferencialmente, inferiores a 1 pM ou valores de CI50 do 119 ensaio de CEVUH estimulado por FCF inferiores a 10 μΜ, preferencialmente, inferior a 1 μΜ. Mais preferencialmente, os compostos da presente invenção têm valores de Ciso do ensaio de CEUVH estimulado por FCEV inferiores a 1 μΜ e valores de CI50 do ensaio de CEVUH estimulado por FCF inferiores a 1 μΜ. Os valores de CI50 para os compostos representativos no ensaio de CEVUH estimulado por FCEV estão indicados no quadro V e os valores de CI50 para os compostos representativos no ensaio de CEVUH estimulado por FCF estão indicados no quadro VI a seguir.

QUADRO V

Ensaio da Actividade Antiproliferativa de CEVUH Estimuladas por FCEV Comp. Número R1 R2 RJ R4 CI50 <pM) IVa F OCH3 ch3 Cl 0,023 IVw ch3 ch3 ch3 Cl 0, 022 IVi 0CH3 Cl ch3 Cl 0,174 IVz ch3 och3 ch3 Cl 0,012

QUADRO VI

Ensaio da Actividade Antiproliferativa de CEVUH Estimuladas por FCF Comp. Número R1 R* RJ R4 CI50 (pM) IVa F 0CH3 ch3 Cl 0,100 IVb CN 0CH3 ch3 Cl 0,005 IVc C(0)NH2 och3 ch3 Cl <0,001 IVw ch3 ch3 ch3 Cl 0,036

Exemplo 101 H460a 120 A linha de células H460a foi comprada à ATCC; Rockville, MD e cresceu em meio recomendado pela ATCC. Para a análise do efeito dos compostos de ensaio no crescimento desta células, colocaram-se as células em placa numa densidade de 150 células por cavidade, numa placa de cultura de tecidos de 96 cavidades e fez-se a sua incubação durante a noite, a 37 °C, em atmosfera de CO2 a 5 %. No dia seguinte, dissolveram-se os compostos de ensaio em sulfóxido de dimetilo a 100 % (DMSO), para se obter uma solução concentrada 10 mM. Diluiu-se cada composto com meio esterilizado até 1 mM numa quantidade suficiente para originar uma concentração final de 120 μΜ. Depois diluiram-se os compostos em série em meio com DMSO a 1,2 %. Transferiu-se um quarto do volume final dos compostos diluídos para placas de 96 cavidades. Fez-se a análise dos compostos de ensaio em duplicado. Adicionou-se DMSO a uma fila das "células de controlo", de tal modo que a concentração final de DMSO em cada cavidade foi de 0,3 %. As cavidades às quais não se tinha adicionado células serviram como "brancas". As cavidades às quais não se tinha adicionado inibidor serviram como "sem controlo do inibidor". As placas voltaram à incubadora e 5 dias após a adição do composto de ensaio foram analisadas tal como se descreve a seguir.

Adicionou-se a cada cavidade brometo de 3-(4,5-dimetil-tiazole-2-il)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (azul de tiazolilo; MTT) até se obter uma concentração final de 1 mg/mL. Fez-se então a incubação das placas a 37 °C, durante 3 horas. Centrifugaram-se as placas a 1.000 r.p.m., durante 5 minutos antes da aspiração do meio contendo MTT. Depois, eliminou-se o meio contendo MTT e adicionou-se 100 pL de etanol a 100 % a cada cavidade para dissolver o metabólito de formazano resultante. Para assegurar uma dissolução completa, agitaram-se as placas durante 15 minutos, à temperatura ambiente. Leram-se as absorvências num leitor de placa microtituladora 121 (Molecular Dynamics) , a um comprimento de onda de 57 0 nm com uma referência de 650 nm. Calculou-se a percentagem de inibição subtraindo a absorvência das cavidades "brancas (sem células) de todas as cavidades e subtraindo depois a divisão da densidade óptica média de cada duplicado do ensaio pela média dos controlos de 1,00. Determinaram-se as concentrações inibidoras (CI5q) a partir de uma análise de regressão linear de um gráfico do logaritmo das concentrações em função da percentagem de inibição.

Os compostos da presente invenção têm valores de CI5q de H460a inferiores a 20 μΜ, preferencialmente, inferiores a 2 μΜ. O valor de CI50 para a inibição do ensaio à base de H4 60a para compostos representativos, estão indicados a seguir no quadro VII. Os valores de CI9o para compostos representativos no ensaio de H460a estão dados no quadro 7 a seguir.

QUADRO VII

Ensaio da Actividade Antiproliferativa de H460a Comp. Número R1 R* RJ R4 CI90 (μΜ) IVa 1 F och3 ch3 Cl 1, 570 IVb CN och3 ch3 Cl 0,118 '

Como se fez notar antes, os compostos da presente invenção têm actividade anti-angiogénica e, como tal, são úteis para a inibição da angiogénese num indivíduo. A angio-génese tem estado associada com o cancro. Em particular, os tumores só podem crescer até a uma certa dimensão e não podem crescer mais sem o crescimento de novos vasos sanguíneos para o suprirem e alimentarem. Assim, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento do cancro por meio da inibição do crescimento desses novos vasos sanguíneos. A presente invenção, por isso, providencia um processo para a 122 inibição da angiogénese num paciente, que compreende a administração de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico, isto é, uma quantidade de um composto de fórmula IV que possa inibir a angiogénese.

Além da sua actividade anti-angiogénica, os compostos da presente invenção são inibidores de várias cinases, tais como, CDC2, KDR e FCFr. A inibição destas cinases afecta a proliferação das células do tumor. Assim, a presente invenção também tem por objecto processos de inibição do crescimento de tumores através da inibição directa das cinases. A presente invenção tem por objecto um processo para o tratamento do cancro que compreende a administração a um paciente com cancro de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico de um composto da presente invenção ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Em particular, a presente invenção tem por objecto um processo para o tratamento de cancro da mama, que compreende a administração a um paciente com cancro da mama de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico de um composto da presente invenção ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. A presente invenção também tem por objecto um processo para o tratamento de cancro da próstata que compreende a administração, a um paciente com cancro da próstata, de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico, de um composto da presente invenção ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. A presente invenção ainda tem por' objecto um processo para o tratamento de cancro do cólon que compreende a administração, a um paciente com cancro do cólon, de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico, de um composto da presente invenção ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. A presente invenção tem por objecto um processo 123 para o tratamento de cancro do pulmão que compreende a admi-nistração, a um paciente com cancro do pulmão, de uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico, de um composto da presente invenção ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

Lisboa, 28 de Julho de 2008 124

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula IV

caracterizado pelo facto de R1 representar alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, COOH, COO-alquilo, CN, C(0)N(R6)2 ou (OCH2CH2)nOCH3; R2 representar alquilo, átomos de halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcóxi substituído por halogéneo, fenilo, W(R6)2/· (OCH2CH2) nOCH3, 0 (CH2) mNR7Rs ou occHj^—íQí r C N W representar um heterociclo com 6' átomos no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C(0)0R6; ou R1 e R2, em conjunto, formarem um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R3 representar hidrogénio ou alquilo; R4 representar hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, N02, alquilo ou alcoxi; cada R6 representar, independentemente, hidrogénio ou alquilo; 1 R1 e R2 representarem, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R1 e R2 considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formarem um heterociclo com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; cada n representar, independentemente, 1, 2, ou 3; e m representar 2, 3 ou 4; ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
2.. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de R2 representar otctyr-cQr
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterízado pelo facto de R1 representar halogéneo.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de R'L representar ciano.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterízado pelo facto de R2 representar ' 0 (CH2) mNR1R2.
6. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterízado pelo facto de R1 e R2 em conjunto com o átomo N ao qual estão ligados formarem um heterociclo com 6 átomos no núcleo. 2 1 Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterízado 2 pelo facto de R1 representar halogéneo. 8. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 5- (2-~clorofenil) -1,2-di-hidro-7-fluoro-8- (3- (4-morfoli-nil)propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina e 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-(3-(4-morfoli-nil)propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepi-na.
9. Composto de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo facto de R1 representar ciano.
10.. Composto de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo facto de se.seleccionar entre 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-(3-(4-morfoli-nil)propoxi))-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina e 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-(2-(4-metil-l-piperazinil)etoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina. .
11. Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo, facto de R7 e R8 representarem, cada um, indepen-.dentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo.
12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo facto de R1 representar halogéneo.
13. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo facto de R1 representar ciano. 3 14. Composto de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo facto de representar 5-(2-clorofen.il)-7-ciano-l, 2-di-hidro-8-(2-((2-metoxietil)metilamino)-etoxi)-3-metil-pirazolo [3,4-b] [1,4]benzodiazepina.
15. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R2 representar N(R6)2·
16. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo facto de R1 representar.halogéneo.
17. Composto de acordo com a reivindicação 16 -t caracterizado pelo facto de representar 5-(2-clorofènil)—1,2-di-hidro- 7- fluoro-8-N,N-dimetilamino-3-metil-pirazolo[3,4-b]-[1,4]-benzodiazepina.
18. Composto de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo facto de R1 representar.ciano.
19. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R2 representar halogéneo, alquilo ou alquilo substituído por halogéneo. .
20. Composto de acordo coma reivindicação 19, caracterizado pelo facto de R1 representar alquilo.
21. Composto de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 8- oloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-pira-zolo [3,4-b] [1,4]benzodiazepina e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7,8-trimetil-pirazolo-[3,4-b][1,4]benzodiazepina. 4
22. Composto de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo facto de R1 representar halogéneo.
23. Composto de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo facto de R1 representar alcoxi.
24. Composto de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-fluoro-7-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-inetil-8-tri-fluorometil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 8-cloro-5-(2-clorofenil)-l,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.
25. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R2 representar hidroxi, alcoxi ou alcoxi substituído por halogéneo.
26. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto de R1 representar halogéneo.
27. Composto de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 7-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 7-bromo-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-etoxi-3-metil-pirazolo [3,4-b] [1,4]benzodiazepina; e 5 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-(1-metiletoxi)-3-metil-pirazolo [3, 4-b] [1,4]benzodiazepina.
28. Composto de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo facto de representar 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina. .
29. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto de R1 representar alcoxi.
30. Composto de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 5-(2-clorofenil)^1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-3-mètil-pi- razolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 1.2- di-hidro-3,7-dimetil-8-metoxi-5-fenil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 1.2- di-hidro-7,8-dimetoxi-5-(2-metoxifenil)-3-metil-pirazolo [3, 4-b] [1, 4] benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-(1-metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-(1-metiletoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.
31. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto de R1 representar alquilo.
32. Composto de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo facto de representar 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-8-metoxi-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.
33. Composto de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto de R1 representar 0(CH2)nOCH3. 6 34. Composto de acordo com a reivindicação 33, pelo facto de representar 5-(2-clorofenil)-8-metoxi-7-inetoxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4 zodiazepina.
35. Composto de acordo com a reivindicação 25, pelo facto de R1 representar ciano.
36. Composto de acordo com a reivindicação 35, pelo facto de representar 5-(2-clorofenil) di-hidro-8-metoxi-3-metil-pirazolo[3,4-bJ [1 zepina.
37. Composto de acordo com a reivindicação 25,-pelo facto de R1 representar NH2CCO).
38. Composto de acordo com a reivindicação 1, pelo facto de R2 representar fenilo.
39. Composto de acordo com a reivindicação 38, pelo facto de R1 representar alcoxi.
40. Composto de.acordo com a reivindicação 39, pelo facto de representar 5-(2-clorofenil)-7-metoxi-3-metil-8-fenil-pirazolo[3,4-b][1, pina.
41. Composto de acordo com a reivindicação 1, pelo facto de R2 representar (OCH2CH2) 11OCH3.
42. Composto de acordo com a reivindicação 41, pelo facto de R1 representar halogéneo. caracterizado 1, 2-di-hidro-:-b] [1,4] ben- caracterizado caracterizado -7-ciano-l,2-4]benzodia- caracterizado caracterizado caracterizado caracterizado 1,2-di-hidro-4]benzodiaze- caracterizado caracterizado 7
43. Composto de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo facto de representar 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-,7-fluoro-8-metoxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]ben-zodiazepina.
44. Composto de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo facto de R1 representar alcoxi.
45. Composto de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo facto de representar 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-metoxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina . 46'. Composto de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo facto de R1 representar ciano.
47. Composto de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-metoxietoxi-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina e 5-(2-clorofenil)-7-ciano-l,2-di-hidro-8-(2-(2-metoxi-etoxi)etoxi)-3-metil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.
48. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R1 e R2 formarem, em conjunto, um anel de dioxolano.
49. Composto de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo facto de representar .'5-{2-c.lorofenil)-8,10-di-hi-dro-7-metil-l,3-dioxolo[4,5-h]pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina. 8
50. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R3 representar hidrogénio.
51. Composto de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-pirazo-lo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-metil-pirazo-lo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-{2-clorofenil)-1,2-di-hídro-7-ciano-8-metoxi- pirazo-lo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.
52. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo facto de compreender'uma quantidade efectiva sob o ponto de vista terapêutico de um composto de fórmula IV

caracterizado pelo facto de R1 representar alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, COOH, COO-alquilo, CN, C(0)N(R6)2 ou (OCH2CH2) nOCH3; R2 representar alquilo, átomos de halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fenilo, N(R6)2, {OCH2CH2) nOCH3, 0(CH2)mNR7R8 ou occ^r-cj* 9 /"'•Ν C Ν representar um heterociclo com 6 átomos no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C(0)0R6; ou R1 e R2, em conjunto, formarem um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R3 representar hidrogénio ou alquilo; R4 representar hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, N02, alquilo ou alcoxi; cada R6 representar, independentemente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representarem, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8, considerados em conjunto com o átomo de azoto .ao qual estão ligados, formarem um heterocíclico com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; cada n representar, independentemente,. 1, 2, ou 3; e m representar 2, 3 ou 4; ou os seus sais e veículos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
53.. Processo para a preparação de um composto de fórmula IV

caracterizado pelo facto de R1 representar alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, COOH, COO-alquilo, CN, C(0)N(R6)2 ou (OCH2CH2) nOCH3; 10 R2 representar alquilo, átomos de halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fenilo, N(R6)2, (OCH2CH2) nOCH3, 0(CH2)raNR7R8 OU OtCHjfc-ÇJt r C N W representar um heterociclo com 6 átomos no núcleo, even-tualmente substituído por alquilo ou C(0)0R6; ou R1 e R2, em conjunto, formarem um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R3 representar hidrogénio ou alquilo; R4 representar hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, N02, alquilo ou alcoxi; cada R6 representar, independentemente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representarem, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual. estão ligados, formam um heterocíclico com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; cada n representar, independentemente, 1, 2, ou 3; e m representar 2, 3 ou 4; e por compreender (a) a conversão de uma lactama de benzodiazepina de fórmula I 11

numa tiolactama de fórmula II

(b) a reacção.da tiolactama de fórmula II com um acetal dimetílíco de Ν,Ν-dimetilacetamida, para formar um composto de fórmula III

(c) a reacção do composto de fórmula III com hidrazina, para formar um composto de fórmula IV.
54. Processo para a preparação de um composto de fórmula IV

12 caracterizado pelo facto de R1 representar alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, COOH, COO-alquilo, CN, C(0)N(R6)2 ou (OCH2CH2) nOCH3; R2 representar alquilo, átomos halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fenilo, N(R6)2, (OCH2CH2) 11OCH3, 0 (CH2)mNR7R8 ou C N representar um heterociclo com 6 átomos no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C(0)0R6; ou R1 e R2, em conjunto, formarem um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R3 representar hidrogénio ou alquilo; R4 representar hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, N02, alquilo ou alcoxi; cada R6 representar, independentemente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representarem, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formarem um heterociclo com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; cada n representar, independentemente, 1, 2, ou 3; e m representar 2, 3 ou 4; compreendendo o referido processo (a) a conversão de uma lactama de benzodiazepina de fórmula I 13

no correspondente éter de O-metilo de fórmula V o—

(b) a reacção do éter de fórmula V com acetal dime-tílico de Ν,Ν-dimetilacetamida, para . formar um composto de fórmula VI . O—

(c) a reacção de um composto de fórmula VI com hidra-zina, para formar um composto de fórmula IV.
55. Processo para a preparação de um composto de fórmula IV

caracterizado pelo facto de 14 R1 representar alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, COOH, COO-alquilo, CN, C(0)N(R6)2 ou (OCH2CH2) nOCH3; R2 representar alquilo, átomos de halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fenilo, N(R6)2, (OCH2CH2) nOCH3, 0(CH2)mNR7Rs ou O r c N w representar um heterociclo com 6 átomos no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C(0)0R6; ou R1 e R2, .em conjunto, formarem um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R3 representar hidrogénio ou alquilo; R4 representar hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, N02, alquilo ou alcoxi.; cada R6 representar, independentemente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representarem, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8 considerados em conjunto com o átomo, de azoto ao qual estão ligados, formam ura heterocíclico com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; cada n representar, independentemente, 1, 2, ou 3; e m representar 2, 3 ou 4; compreendendo o referido processo (a) a reacção de um composto de fórmula X 15

com um derivado de amino-cloro-pirazole de fórmula XIII

HaN λ XIII ; para formar um composto de fórmula XIV

(b) a reacção do composto de fórmula XIV, na presença de hidreto de di-isobutilo e alumínio e um catalisador de níquel, para produzir um composto de fórmula IV.
56. Composto de fórmula XIV 16

caracterizado pelo facto de R1 representar alquilo, alcoxi, átomos de halogéneo, CQOH, COO-alquilo, CN, C{0)N(R6)2 ou (OCH2CH2) nOCH3; R2 representar alquilo, átomos halogéneo, alquilo substituído por halogéneo, OH, alcoxi, alcoxi substituído por halogéneo, fenilo, N(R6)2, (OCH2CH2) nOCH3, 0(CH2)mNR7R8 ou occha—cQ^ r /"\ C N W representar um heterociclo com 6 átomos no núcleo, eventualmente substituído por alquilo ou C{0)0R6; ou R1 e R2, em conjunto, formarem um anel heterocíclico com 5 átomos no núcleo; R4 representar hidrogénio, átomos de halogéneo, CN, N02, alquilo ou alcoxi; cada R6 representar, independentemente, hidrogénio ou alquilo; R7 e R8 representarem, cada um, independentemente, hidrogénio, alquilo ou alcoxialquilo ou R7 e R8, considerados em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, formarem um heterociclo com 6 átomos no núcleo, que está eventualmente substituído por alquilo; 17 cada n representar, independentemente, 1, 2, ou 3; e m representar 2, 3 ou 4.
57. Composto de acordo com a reivindicação 56, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro^3,7,8-trimetil-l-(2-prope-nil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5- (2-clorofenil) -1, 2-di-hidro-7-fluoro-8-metoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b] [1,4]benzodiazepina; 8-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3,7-dimetil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][l,4]benzodiazepina; 1,2-di-hidro-7,8-dimetoxi-5-(2-metoxifenil)-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b] [1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-8,10-di-hidro-7-metil-l, 3-dioxolo[4,5-h]pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 7-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina.
58. Composto de acordo com a reivindicação 56, caracterizado pelo facto de se seleccionar entre 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-fluoro-7-metoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-l-(2-propenil) -8-trifluorometil-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina ; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-3-metil-8-fenil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b] [1,4]benzodiazepina; 18 5-{2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-metoxietoxi-3-metil-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 8-cloro-5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-3,7-dimetil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-7-metoxi-8-(1-metiletoxi)-3-meti1-1-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-(1-metiletoxi)-3-metil-l-(2-propenil)-pirazolo[3,4-b][1,4]benzodiazepina; e 5-(2-clorofenil)-1,2-di-hidro-8-metoxi-7-metoxietoxi-3-metil-1-(2-propenil) -pirazolo [3,4-b] [1,.4] benzodinepina.
59. Composto de fórmula IV, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R4 representar orto-cloro; e ' R1, R2 e R3 terem os significados definidos na reivindicação 1.
60. Composto de fórmula IV, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R3 representar metilo; R4 representar orto-cloro; e R1 e R2 terem os significados definidos na reivindicação 1.
61. Composto de fórmula IV, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de R1 representar halogéneo ou -CN; R3 representar metilo; 19 R4 representar orto-cloro; e R2 ter o significado definido na reivindicação 1.
62. Composto de fórmula IV, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se destinar ao tratamento de cancro, em particular, cancro da mama, cancro da próstata, cancro do cólon e cancro do pulmão.
63. Utilização de um composto de fórmula IV, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se destinar à produção de medicamentos para o tratamento de cancro, em particular, cancro da mama, cancro da próstata, cancro do cólon e cancro do pulmão.
64. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender um composto de fórmula IV, de acordo com a reivindicação 1, em conjunto com adjuvantes aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.
65. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 64, caracterizada pelo facto de se destinar ao tratamento de cancro, em particular, cancro da mama, cancro da próstata, cancro do cólon e cancro do pulmão. Lisboa, 28 de Julho de 2008 20