PT1588706E - Comprimido de valsartan - Google Patents

Description

ΡΕ1588706 2 DESCRIÇÃO "COMPRIMIDO DE VALSARTAN" O angiotensinogénio, uma a2-macroglicoproteína, é clivado pela enzima renina para dar o decapéptido angiotensina I, que é ele próprio só muito pouco biologicamente activo. No passo seguinte da cascata, dois outros aminoácidos são clivados pela acção da enzima conversora de angiotensina (ACE), que está principalmente ligada no endotélio, com a formação de angiotensina II. Esta última é considerada como sendo um dos vasocons-tritores naturais mais potentes. A angiotensina II interactua com receptores específicos na superfície da célula alvo. Conseguiu-se agora, com sucesso, a identificação de subtipos de receptores que são designados, por exemplo, por receptores ATi e receptores AT2. Estudos do sistema da renina-angiotensina, particularmente em relação à hipertensão, aumentaram quase exponencialmente durante a última década. Como resultado, foi agora identificado o número de receptores da angiotensina II e alguns deles foram clonados e analisados. Recentemente, foram feitos esforços consideráveis para identificar as substâncias que se ligam ao receptor ATi, com os compostos activos desta natureza a ser frequentemente denominados antagonistas de angiotensina II. 3 ΡΕ1588706

Como consequência da inibição do receptor ATi, estes antagonistas podem ser utilizados, por exemplo, como anti-hipertensores ou para tratamento da insuficiência cardíaca congestiva.

Os receptores ATi e AT2 também foram estudados relativamente à sua distribuição e propriedades biológicas e demonstrou-se terem, apesar de uma homologia de 30%, uma distribuição e actividade muito diferentes. O receptor ATi, que desempenha um papel principal na regulação da pressão sanguínea, foi encontrado no córtex supra-renal, rim, útero, etc. Ao nível celular, foi encontrado em fibroblastos, macrófagos e células do músculo liso (SMC).

Em contraste, o receptor AT2 foi encontrado principalmente em tecidos fetais mas também em adulto, especialmente em tecido patológico, como na doença cardíaca isquémica. Aqui foi localizado em fibroblastos e células endoteliais. O objectivo dos estudos descritos aqui a seguir é o de avaliar a distribuição de receptores ATi e AT2 no pulmão humano utilizando essencialmente as metodologias imunocitoquímicas e de hibridação in situ.

Anteriormente, foram preparados anticorpos específicos contra epitopos do receptor ATi, mas não existiam 4 ΡΕ1588706 essas ferramentas especificas para o receptor AT2. Os estudos histológicos dependiam assim dos antagonistas de receptores radiomarcados conjuntamente com auto-radio-grafia, que só deu uma localização nos tecidos relativamente imperfeita. No entanto, nos últimos dois anos, foram disponibilizados anticorpos bem caracterizados específicos para o receptor humano e foram assim utilizados nos estudos aqui apresentados a seguir. Métodos e Materiais 1. Anticorpo e especificidade da sonda de hibri-dação ín situ (ISH) e titulação

De modo a confirmar a especificidade dos estudos imunocitoquímicos (ICC) e de ISH, são obtidos blocos embebidos em parafina de supra-renal (córtex e medula) humana normal a partir dos arquivos do Departamento de Patologia do University Hospital, Ghent, Bélgica, e utilizados como material de ensaio. Os receptores ATi são conhecidos por estarem predominantemente localizados no córtex suprarrenal e os de AT2 na medula.

Para os estudos em pulmão humano, o material de controlo é obtido de autópsias em que os doentes morreram de causas que não doença pulmonar, e.g., acidentes fatais. Algum deste material provém de Ghent, como acima, algum dos arquivos do Departamento de Patologia do Pennsylvania Hospital, Filadélfia, EUA. É seleccionado tecido contendo 5 ΡΕ1588706 vias respiratórias inferiores uma vez que parecem ser mais sensíveis a lesão.

Todas as amostras foram fixadas em formol tampo-nado a 10% tão rapidamente quanto possível post-mortem, desidratadas e encastradas em cera parafínica. São cortadas secções de 3-5 pm e montadas em lâminas de vidro revestidas com silano.

De modo a minimizar quaisquer variações no processamento, são colocados pares de secções sequenciais em cada lâmina, uma para exposição do anticorpo a ATi e outra para exposição a AT2. São tratadas até 20 lâminas ao mesmo tempo de modo a que, com excepção do anticorpo primário, todos os reagentes, incluindo o cromogénio, são idênticos. A espessura de secção é, assim, a única variável que não pode ser totalmente controlada. 2. Anticorpos

Dois anticorpos de receptor ATi, de Santa Cruz Inc., San Diego, CA, EUA, (clones N 10 e 306) são ensaiados e demonstraram dar distribuição idêntica de receptores do córtex suprarrenal. A maior parte do estudo é feita com um anticorpo de receptor AT2 disponível de Santa Cruz (clone C18), que é testado e se verificou que dá padrão de coloração idêntico em medula suprarrenal e pulmão, como o primeiro. 6 ΡΕ1588706

Todos os anticorpos foram rigorosamente testados pelos fornecedores comerciais e individuais quanto à especificidade e reactividade cruzada.

3. Sondas de ISH

Os produtos de PCR (Reacção em Cadeia da Poli-merase) foram preparados e utilizados como se segue:

Foram desenvolvidos oligonucleótidos específicos para receptor de angiotensina II humano do tipo I (GenBank, número de acesso M93394) e receptor de angiotensina II do tipo II (GenBank, número de acesso U15592) utilizando o programa de software Oligo 5.0 para regiões homólogas de ambas as sequências (Tabela 1). Foi preparado ADNc de tecido ósseo humano seguindo métodos correntes (Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989). Para PCR, foram utilizados os seguintes pares de iniciadores oligonucleótidos: receptor de angiotensina II do tipo I, 5'- CTggCTgACTTATgCTTTTTACTgACT-3' e 5'-gATgCAggTgACTTTggCTACA-3'; (tamanho do produto de PCR 236 pares de bases) e para receptor de angiotensina II do tipo II, 5'-ATTTACTCCTT-TTggCTACTCTTCCTC-3’ e 5'-ggTCACgggTTATCCTgTTCTTC-3' (tamanho do produto de PCR 489 pares de bases) . As amplificações por PCR foram realizadas com 10 ng de ADNc molde utilizando um aparelho MJ Research PCR Cycle e os seguintes 7 ΡΕ1588706 ciclos de PCR: 1) 94°C/2 min, 2) 94°C/10 s, 60°/30 s, 72°C/15 s durante 35 ciclos, utilizando polimerase Taq de alta fidelidade (Boehringer Mannheim) com componentes proporcionados no kit do fabricante. Os produtos das amplificações de PCR foram identificados por electroforese através de um gel de agarose a 0, 8%/TBE (Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989). Para confirmar a identidade dos produtos de amplificação por PCR, o ADN foi eluido do gel e clonado no vector de clonagem A/T pMOSBlue (Amersham). Colónias contendo uma inserção de ADN do tamanho correcto (Tabela 1) foram completamente sequenciadas em ambas as cadeias para confirmar as suas identidades.

Cada sonda, sense e anti-sense para o ATi e anti-sense apenas, como descrito acima, são marcadas com fluoresceína (FITC) e a presença de ARNm nas células detectada após hibridação com a sonda e utilização de uma sonda anti-FITC de murganho mais o sistema de detecção fosfatase alcalina anti-fosfatase alcalina (APAAP). Esta técnica de marcação melhorou a detecção de números de cópias muito baixos. 4. Imunocitoquímica

Para todos os anticorpos, o procedimento é como se segue. São primeiro tratadas secções de 5 pm por técnicas de recuperação de antigénio, em conjunto com ΡΕ1588706 tratamento por microondas, em tampão citrato (pH 6,0). A exposição é durante 20 minutos e as lâminas são deixadas arrefecer no tampão. Quando os anticorpos são policlonais de cabra, é utilizado o método da peroxidase anti-peroxidase (PAP) com diaminobenzidina (DAB) como cro-mogénio, de resto para policlonais de coelho é utilizado o sistema APAAP com fucsina nova. As secções são primeiramente bloqueadas com albumina de soro bovina (BSA) a 1% (BSA) durante 30 minutos para bloquear receptores não específicos, a que se segue incubação com o anticorpo primário durante 30 minutos à temperatura ambiente. Cada anticorpo é titulado e as diluições óptimas são como se segue:

Anticorpos utilizados Tecido de pulmão Suprarrenal ATi Clone N 10 1:200 1:500 Clone N 306 1:200 1:500 AT2 Clone C 18 1:150 1: 500

Como controlo negativo, para o policlonal de coelho, é utilizado um soro negativo da Dako (Prosan, Ghent, Bélgica), para o policlonal de cabra é omitido o anticorpo primário.

ISH São desparafinadas secções de 5 pm e, em seguida, expostas a hibridação in situ seguindo técnicas bem estabelecidas. As secções são primeiro tratadas com solução 9 ΡΕ1588706 de pré-hibridação durante 20 minutos a 55°C. Em seguida, são lavadas antes de exposição às sondas de um dia para o outro a 55°C. Após nova lavagem, são tratadas com um anticorpo anti-FITC de murganho e o sistema de detecção APAAP para localização da mensagem especifica. Para o receptor ATi, a sonda de sense é o controlo negativo, para o receptor AT2, a sonda é omitida.

Análise de imagens

De forma a determinar quantitativamente a intensidade da coloração, as lâminas são visualizadas no Leica MR500 e a quantidade de coloração, por unidade de área de tecido, registada em pixels segundo as instruções da Leica. Isto é feito para estabelecer as proporções de receptor ATi para AT2 em diferentes regiões. Estas são a) epitélio das vias respiratórias, b) o interstício subepi-telial, c) SMC em torno de vasos sanguíneos e d) glândulas mucosas.

RESULTADOS

Estudos de distribuição supra-renal

Distribuição de AT2: Os dois anticorpos dão o seguinte padrão de distribuição no córtex supra-renal, que consiste em coloração distinta das células de músculo liso em torno dos vasos sanguíneos e também na rede intersticial nos e em torno dos fibroblastos como previsto. Não há coloração das células endoteliais. 10 ΡΕ1588706

Distribuição de AT2: O anticorpo é testado contra a medula suprarrenal, onde é observada uma forte coloração de células de feocromocitoma adrenal. ISH: Ambas as sondas anti-sense proporcionam um quadro semelhante.

Pulmão de Controlo

Distribuição de ATi: Observa-se coloração muito clara das células intersticiais subjacentes ao epitélio das vias respiratórias (subepitelial) e também as margens da célula de músculo liso (SMC) em torno dos vasos sanguíneos. Além disso, os macrófagos também são positivos.

Distribuição de AT2: Este receptor parece estar fortemente associado a células epiteliais da via respiratória, com coloração intensa da bordadura em escova. As células positivas também são observadas em algumas das glândulas mucosas, em algumas células endoteliais vasculares e em fibroblastos, condrócitos e macrófagos. Não há coloração de SMC. ISH: Novamente as sondas dão um quadro semelhante. Em particular, a sonda de AT2 dá um sinal forte em células endoteliais e apenas em algumas glândulas mucosas. 11 ΡΕ1588706

Análise de Imagens A distribuição da proteína e portanto do receptor, representada pela intensidade de coloração, i.e., pixels por μπι2 de tecido, está apresentada na tabela seguinte .

Anticorpo Epitélio das vias respiratórias Sub- epitelial Glândulas SMC ΑΤχ 0, 00 8 0, 00 10 AT 2 5 0-1 5 0, 00 A presença de receptores de angiotensina II no córtex e medula suprarrenais foi previamente demonstrada tanto por meios bioquímicos como histológicos. Os dados são obtidos com anticorpos disponíveis comercialmente e fornecidos particularmente, ambos confirmando estas constatações, mas também estabelecendo a fiabilidade da presente metodologia imunocitoquímica e metodologia de ISH.

Face aos resultados destes estudos, a distribuição dos receptores ATi e AT2 em tecidos de pulmão normais e doentes tem de ser comparada para determinar as distribuições e proporções específicas de ATi e AT2. A presença de receptores ATi no pulmão foi demonstrada anteriormente bioquimicamente e foi agora demonstrada a sua localização celular exacta. Esta informação é vital para estabelecer as proporções dos receptores ΑΤχ e 12 ΡΕ1588706 AT2 em diferentes regiões do pulmão em condições normais e patológicas.

Os dados da distribuição, especialmente do rece-ptor AT2, são totalmente novos uma vez que não existe quaisquer dados anteriores relativos à sua presença ou distribuição. Vários pontos importantes resultam deste estudo.

Primeiro, a presença do receptor AT2 nas células epiteliais brônquicas das vias respiratórias inferiores. Como já é conhecido, este receptor é considerado como sendo antifibrótico, antiproliferativo e pró-apoptótico. Assim, a sobre- ou sub-regulação nas células epiteliais tem efeitos profundos na substituição de células epiteliais, desenvolvimento de hiperplasia e até mesmo um papel no desenvolvimento de cancro do pulmão.

Em segundo, a presença de quantidades consideráveis da proteína na bordadura em escova das células epiteliais pode estar bem associada à quantidade de secreção mucosa, uma vez que se demonstrou que algumas das células epiteliais das glândulas mucosas também contêm o receptor. A partir dos dados de ISH, algumas glândulas contêm um nível elevado de ARNm.

Finalmente, a presença do receptor AT2 em células endoteliais vasculares foi agora confirmada tanto por imunocitoquímica como por hibridação in situ. Verificou-se 13 ΡΕ1588706 que a sua distribuição é pouco frequente e não em todas as células de um vaso em particular.

Estes estudos confirmam e alarqam os dados existentes sobre a presença e distribuição de ΑΤχ e AT2 do tipo angiotensina II no pulmão humano. A presença de receptor AT2 nas células epiteliais das vias respiratórias inferiores tem consequências consideráveis para a compreensão de doenças que resultam da alteração da função destas células.

Muito pouco se sabe sobre a localização dos receptores AT no pulmão humano e sobre a sua distribuição, sobre- ou sub-regulação e proporção em tecido pulmonar normal e doente. Para este estudo, são recolhidas amostras de pulmão normal e de doentes com doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) ± hipertensão.

Amostras de pulmão

Estas foram obtidas a partir dos grupos de doentes que se seguem, todos definidos clinicamente. NN (n = 3) — não fumadores, tecido normal C (n = 5) - fumadores, mas de resto normais COPD (n = 8) - COPD positiva, BP normal COPD/H (n = 3) - COPD mais hipertensão H (n = 4) — fumadores com BP elevada 14 ΡΕ1588706

As vias respiratórias são cuidadosamente dissecadas dos pulmões imediatamente após a remoção do pulmão do doente para ressecção do tumor ou por outras razões. A região é cuidadosamente seleccionada de modo a ficar isenta de qualquer tecido canceroso. Os pequenos blocos são então fixados em paraformaldeido a 4% durante 2 h à temperatura ambiente, antes de serem emcastrados em cera parafinica. Isto destina-se a assegurar a integridade estrutural óptima e retenção da actividade antigénica. Métodos para estabelecer a localização de receptores a) Imunocitoquímica (ICC). São testados 2 x anticorpos de ATi, Santa Cruz (clones N-10 e 306) . Foi também testado um anticorpo de AT2, Santa Cruz (clone C 18) .

As imagens digitais mostram:

Distribuição do receptor AT2 em células epite-liais bronquiolares incluindo a bordadura em escova e nas células das glândulas mucosas. A secção adjacente corou relativamente ao receptor ATi ilustrando a distribuição muito diferente nas células de músculo liso, fibroblastos/estroma e macrófagos. ΡΕ1588706 15

Análise de pulmão humano de doentes

Todo o material obtido até à data foi seccionado e corado por ICC para localização de ambos os receptores ATi e AT2, com controlos negativos apropriados. A análise de imagens foi iniciada com leituras de uma secção por doente até à data (este é um processo lento visto se tem de aderir rigidamente às linhas de base). Foram feitas medições do epitélio v. subepitélio e vaso sanguíneo. Esta análise está a ser feita de um modo "cego" para que não possa ser feito qualquer comentário a não ser o facto de alguns "doentes" terem claramente níveis muito afastados da média. As discrepâncias devidas à espessura e coloração variáveis das secções foram minimizadas efectuando o ICC de ATi e AT2 simultaneamente com secções sequenciais. Assim, o também foi possível utilizar o mesmo lote de cromogénio.

As constatações de uma localização no epitélio pulmonar para o receptor AT2 têm várias consequências. Como se demonstrou que este receptor era antiproliferativo, antifibrótico e pró-apóptico, prevê-se que a sua sobrer-regulação tenha consequências para várias doenças pulmonares; e.g., que fumar por si só tem alguma influência. É um papel nessas condições fibróticas como a síndrome do esforço respiratório no adulto (ARDS), ou mesmo na redução da capacidade proliferativa do epitélio no cancro do pulmão. ΡΕ1588706 16

Resultados

Localização dos receptores

Todos os anticorpos e ribossondas são testados em córtex e medula suprarrenal normal onde se sabe que ambos os tipos de receptores estão presentes em abundância relativa. 0 processo é repetido em tecido pulmonar normal onde é possível detectar ambos os receptores ΑΤχ e AT2 e o seu ARNm. A localização é como se segue: ATi - em células de músculo liso, fibroblas-tos/estroma, macrófagos. Isto é bastante previsível com excepção de a intensidade e número de receptores no pulmão normal serem bastante elevados. AT2 - em células epiteliais brônquicas (especialmente na bordadura em escova), em glândulas mucosas (algumas). Além disso, em células endoteliais vasculares, fibroblastos, macrófagos e células de cartilagem.

Esta é uma constatação totalmente inesperada e nova que requer mais investigação. A localização nas células epiteliais e glândulas mucosas é confirmada tanto pelo teor de proteína como de ARNm, a localização na bordadura em escova relaciona-se com a secreção mucosa. 17 ΡΕ1588706

DISTRIBUIÇÃO DE ANGIOTENSINA ATi E AT2 NOS PULMÕES DE DOENTES COM BRONQUITE CRÓNICA EM COMPARAÇÃO COM CONTROLOS

Grupo Epitelial Sub-epitelial Proporção ATi at2 ATi at2 ATi (Epitelial) /AT2 (Subepitelial) Controlo (1) Fumadores - N=4 0, 02 7,15 4, 07 0, 01 0, 56 Controlo (2) Não Fumadores N=5 0, 02 9, 49 6, 45 1,3 0, 67 Controlo (3) Fumadores Hipertensão 0,1 7,97 11, 02 0, 04 1,38 COPD Fumadores Sem hipertensão N=7 0, 10 6, 84 19, 64 0, 11 2, 87 COPD Fumadores Hipertensão N=3 0,30 6, 01 6, 12 0, 05 1, 01 O equipamento Leica (analisador de imagens MR 500) traduz a intensidade da mancha numa escala cinzenta (0-250), sendo cada unidade um pixel. Isto permite quantificar os dados de forma rigorosa.

Estes dados são baseados na análise de imagens do doente. Os dados são expressos como pixels por unidade de 18 ΡΕ1588706 área de tecido corado positivamente e a média de cinco campos por lâmina.

Como se pode concluir a partir destes resultados, a proporção de distribuição de ATi no sub-epitélio e de AT2 no epitélio, em tecido pulmonar normal, é significativamente inferior a 1, enquanto que esta proporção está próxima ou acima de 1 em tecidos pulmonares doentes. 0 epitélio forma o revestimento interior da traqueia e dos brônquios principais. O aumento da proporção de receptores ATi/AT2 na região subepitelial brônquica do pulmão de doentes com bronquite crónica, em comparação com o controlo, é principalmente devido a níveis aumentados do receptor ATi encontrados nos fibroblastos e macrófagos que rodeiam o epitélio das vias respiratórias e reflecte os níveis acrescidos de inflamação e fibrose observados na COPD.

Os resultados indicados acima demonstram claramente que os receptores ATi que modulam a angiotensina II estão localizados no tecido pulmonar subepitelial e, especialmente, que a distribuição no tecido pulmonar correspondente está aumentada. Em conformidade, a inibição da angiotensina II por meio de antagonistas do receptor ATi conduz a uma diminuição da obstrução das vias respiratórias.

Além disso, as experiências mostram que a distribuição de AT2 no tecido pulmonar epitelial está aumentada, especialmente no tecido doente correspondente, e.g., principalmente nas células epiteliais brônquicas e também em células estruturais dos alvéolos, e.g., em glândulas 19 ΡΕ1588706 mucosas dos alvéolos. Como os receptores AT2 são antiproli-ferativos, antifibróticos e pró-apoptóticos, a sua modulação é útil para o tratamento de formas especificas de patologias e doenças pulmonares, especialmente para o tratamento do sindrome do esforço respiratório no adulto (ARDS) e para redução da capacidade proliferativa do epitélio no cancro do pulmão e da mama e, ainda, para o tratamento da sindrome de sépsia, formas de lesão do pulmão, como pneumonia, aspiração de conteúdo gástrico, traumatismo do tórax, choque, queimaduras, embolia gordurosa, derivação cardiopulmonar, toxicidade ao 02, pancreatite hemorrágica, inflamação intersticial e bron-coalveolar, proliferação de células epiteliais e intersticiais, acumulação de colagénio, fibrose.

Distribuição de receptores em tecido mamário normal e em doentes com cancro da mama

Os espécimes de mama incluídos neste estudo são recrutados aleatoriamente dos ficheiros do Departamento de Patologia, University Hospital, Ghent. Foram todos fixados em formol, processados em cera parafínica e foi realizado um diagnóstico do seu estado patológico pelos patologistas departamentais. Foram incluídos dezasseis casos: 14 carcinomas ductais invasivos, um carcinoma coloidal invasivo e um carcinoma lobular invasivo. A imunocitoquímica é realizada em secções de tecido encastrado em cera parafínica utilizando os anticorpos policlonais para ATI e AT2 utilizados no estudo do 20 ΡΕ1588706 pulmão conjuntamente com o método do complexo de estre-ptavidina-biotina-peroxidase, como anteriormente.

Para proporcionar um possível modelo para testar antagonistas dos receptores, também são estudadas linhas celulares provenientes de tecidos de mama humana quanto ao seu teor de receptores. Isto pode proporcionar um modelo de trabalho in vitro útil para outros estudos bioquímicos e citológicos.

Resultados

Os dados obtidos demonstram claramente a presença de receptores do tipo 1 e 2 da angiotensina II em tecido de mama humana normal, sendo AT2 encontrado no epitélio cuboidal que rodeia os duetos e ATI predominantemente presente nas células mioepiteliais ductais. Toda a coloração foi abolida por omissão do anticorpo primário da incubação.

Em todos os casos o tecido conjuntivo foi positivo para o receptor ATI em conjunto com nenhuma (11/16) a fraca (5/16) coloração das células cancerígenas. Para o receptor AT2 observou-se o oposto, sendo todos os carcinomas positivos e praticamente sem reactividade do estroma (1/16).

Os resultados das linhas celulares testadas foram muito interessantes, sendo observado um padrão diferente de coloração em cada uma. As culturas de curto prazo de células epiteliais de mama normal eram fortemente positivas 21 ΡΕ1588706 para o receptor ATI mas só fracamente coradas para o receptor AT2.

Carcinomas da mama

Doente ATi AT 2 Carcinoma da mama Carcinoma Estroma Carcinoma Estroma 1 carcinoma ductal invasivo, diferenciado interm., - classificação de Bloom-Richardson de grau 2 ++ ++ 2 adenocarcinoma ductal invasivo, diferenciado interm. - +++ ++ focal - 3 carcinoma ductal invasivo, fracamente diferenciado, - carcinoma ductal in situ - ++ + - 4 carcinoma ductal invasivo,diferenciado interm. - carcinoma ductal in situ - + ++ - 5 carcinoma coloidal invasivo - ++ ++ - 6 carcinoma ductal invasivo, diferenciado interm. - carcinoma ductal in situ + + +++ - 7 carcinoma ductal invasivo, bem diferenciado - carcinoma ductal grande in situ - ++ ++ - 8 carcinoma ductal invasivo fracamente diferenciado - carcinoma ductal in situ + ++ +++ - 9 carcinoma ductal invasivo, bem diferenciado - + ++ focal - 10 carcinoma ductal invasivo, fracamente diferenciado - carcinoma ductal in situ - + + - 11 carcinoma ductal invasivo fracamente diferenciado, - carcinoma muitifocal in situ - ++ ++ - 12 carcinoma ductal invasivo, fracamente diferenciado - +++ ++ + 13 carcinoma invasivo, invasivo fracamente diferenciado + ++ ++ - 14 carcinoma ductal invasivo, fracamente diferenciado - vários carcinomas ductais in situ - -H-focal ++ - 15 carcinoma ductal invasivo, fracamente diferenciado - vários carcinomas ductal in situ + +++ + - 16 carcinoma lobular invasivo - carcinoma no interior do canal cribri forme + + + - ΡΕ1588706 22

Conclusões

Como se pode observar a partir destes resultados, a presença de receptor ATI em células epiteliais normais parece ser muito diferente para o pulmão. No entanto, o tipo de célula epitelial é mioepitelial enquanto o receptor AT2 em ambos os tecidos é encontrado em células epiteliais cuboidais. Ao mesmo tempo, a coloração positiva do estroma para o receptor ATI é a mesma para ambos os tecidos. Esta última está claramente relacionada com a presença de fibroblastos na matriz extracelular. A presença do receptor AT2 nas células de carcinoma e de forma tão generalizada e reprodutível é surpreendente. Os tipos de células aqui descritos contendo os receptores específicos proporcionam um modelo in vitro ideal para esses estudos.

Estas experiências demonstram claramente o efeito surpreendente que, no presente modelo, utilizando células de carcinoma da mama, os receptores ATi estão principalmente distribuídos no estroma enquanto que os receptores AT2 puderam ser principalmente verificados nas células de carcinoma.

Todos estes resultados surpreendentes demonstram claramente que qualquer antagonista do receptor ATi ou modulador do receptor AT2 pode ser utilizado para o tratamento de patologias ou doenças associadas ao aumento de 23 ΡΕ1588706 receptores ATi na área subepitelial, ou ao aumento de receptores AT2 nos epitélios, especialmente para o tratamento de doenças obstrutivas das vias respiratórias. As doenças obstrutivas das vias respiratórias são uma classificação das doenças respiratórias caracterizadas pelo tamanho diminuído das vias respiratórias e por secreção aumentada das vias respiratórias, resultando em ventilação alveolar reduzida. As doenças obstrutivas das vias respiratórias compreendem patologias reversíveis e irreversíveis e são seleccionadas, por exemplo, de doença pulmonar obstrutiva crónica, como bronquite, e.g., bronquite crónica e enfisema, também de asma, fibrose quística, doença pulmonar intersticial, cancro do pulmão invasivo, doença vascular pulmonar, e resistência acrescida ao fluxo do ar durante a expiração forçada. Qualquer desses tratamentos pode também estar, mas não necessariamente, associado ao tratamento da hipertensão, bem como de não fumadores e de fumadores.

Estes resultados surpreendentes demonstram claramente que qualquer modulador do receptor AT2 pode ser utilizado para o tratamento de patologias ou doenças associadas a um aumento de receptores AT2 em tecido epitelial pulmonar, especialmente para o tratamento de formas específicas de patologias e doenças dos pulmões, especialmente para o tratamento da síndrome do esforço respiratório nos adultos (ARDS) e para reduzir a capacidade proliferativa do epitélio no cancro do pulmão invasivo e, além disso, para o tratamento do síndrome de sépsia, formas de lesão pulmonar, como pneumonia, aspiração do conteúdo 24 ΡΕ1588706 gástrico, traumatismo do tórax, choque, queimaduras, embolia gordurosa, derivação cardiopulmonar, toxicidade por O2, pancreatite hemorrágica, inflamação intersticial e bronco-alveolar, proliferação de células epiteliais e intersticiais, acumulação de colagénio, fibrose.

Os antagonistas do receptor ATi ou modulador do receptor AT2 são agentes que modificam a resposta biológica do hospedeiro a células tumorais com a resultante vantagem terapêutica. A expressão aumentada do receptor ATi em mioepitélio do dueto mamário e do receptor AT2 em epitélio cuboidal mamário demonstra que qualquer antagonista de receptor ATi ou modulador de receptor AT2 pode ser utilizado para o tratamento de carcinoma da mama invasivo. Estes incluem cancros da mama cirrosos, infiltrativos, papilares, ductais, medulares e lobulares, bem como metástases nos pulmões, pleura, esqueleto e fígado. O tratamento deve ser considerado como terapêutica adjuvante em associação com cirurgia, radioterapia ou como terapêutica paliativa com terapêutica hormonal ou outros modificadores da resposta biológica, como interferões, interleucinas, factores de necrose tumoral, anticorpos monoclonais, etc.

Embora o exame clínico e a mamografia sugiram cancro da mama, só o exame da biópsia de tecido é que permite fazer o diagnóstico. O padrão de distribuição de receptores ΑΤχ e AT2 pode ser utilizado como marcador de hiperplasia (localização de receptores ATi) e de cancro invasivo (localização de receptores AT2) e portanto para o diagnóstico da malignidade do tumor. 25 ΡΕ1588706

Os antagonistas de receptor ATi incluem compostos que têm caracteristicas estruturais diversas. Por exemplo, pode ser feita menção aos compostos que estão listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação 443983 (EP443983), em particular nas reivindicações de produto e os produtos finais dos exemplos de aplicação, sendo a matéria das referidas reivindicações aqui incorporada no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência a (S)-N-(l-carboxi-2-metil-prop-l-il)-N-pentanoil-N-[2'(lH-tetrazol-5-il)bifenil-4-ilmetil]amina [Valsartan] de fórmula

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos que estão listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação 253310 (EP253310), em particular nas reivindicações de produto e os produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. 26 ΡΕ1588706 É dada preferência ao composto [Losartan] de fórmula seguinte

Cl

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos que estão listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação 403159 (EP403159), em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [Eprosartan] de fórmula seguinte

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis. 27 ΡΕ1588706

Além disso, os compostos que estão listados no pedido de patente PCT com o n° de publicação W091/14679, em particular, nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [Irbesartan] de fórmula seguinte

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação 420237 (EP420237), em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [E—1477] de fórmula seguinte 28 ΡΕ1588706

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos que estão listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação EP502314 (EP502314), em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [Telmisartan] de fórmula sequinte

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos listados no pedido de 29 ΡΕ1588706 patente europeia com o n° de publicação 459136 (EP459136), em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [Candesartan] de fórmula seguinte

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação 504888 (EP504888), em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [SC-52458] de fórmula seguinte 30 ΡΕ1588706

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação 514198 (EP514198), em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [Saprisartan] da seguinte fórmula

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos listados no pedido de patente europeia com o n° de publicação 475206 (EP475206), em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. ΡΕ1588706 31 É dada preferência ao composto de fórmula se- guinte

COOH

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis.

Além disso, os compostos listados no pedido de patente PCT com o n° de publicação WO93/20816, em particular nas reivindicações de produto e produtos finais dos exemplos de aplicação, são aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação. É dada preferência ao composto [ZD-8731] de fórmula seguinte

e os seus sais farmaceuticamente utilizáveis. 32 ΡΕ1588706

Os ligandos de receptor AT2 (moduladores) incluem compostos que têm diferentes caracteristicas estruturais. Por exemplo, pode ser feita menção aos compostos que estão listados no W094/13651, em particular nas reivindicações de produto e nos produtos finais dos exemplos de aplicação, cuja matéria das reivindicações está aqui incorporada no presente pedido por referência a esta publicação.

Além disso, os compostos listados no W094/13642, em particular nas reivindicações de produto e nos produtos finais dos exemplos de aplicação, estão aqui incorporados no presente pedido por referência a esta publicação.

Os antagonistas de receptor ATi ou ligandos de receptor AT2, respectivamente, que possuem, por exemplo, pelo menos um centro básico, podem formar sais de adição de ácidos. Estes são formados, por exemplo, utilizando ácidos inorgânicos fortes, como ácidos minerais, e.g., ácido sul-fúrico, um ácido fosfórico ou um halogenoácido, utilizando ácidos carboxilicos orgânicos fortes, como ácidos alcanoCi-C4carboxílicos, que estão não substituídos ou substituídos, por exemplo, por halogéneo, e.g., ácido acético, como ácidos dicarboxílicos saturados ou não saturados, e.g., ácido oxálico, malónico, succínico, maleico, fumárico, ftálico ou tereftálico, como ácidos hidroxicarboxílicos, e.g., ácido ascórbico, glicólico, láctico, málico, tartá-rico ou cítrico, como aminoácidos, e.g., ácido aspártico ou glutâmico, ou como ácido benzóico, ou utilizando ácidos 33 ΡΕ1588706 sulfónicos orgânicos, como ácidos alcanoCi-C4sulfónicos ou ácidos arilsulfónicos que estão não substituídos ou substituídos, por exemplo, por halogéneo, e.g., ácido metanossulfónico ou ácido p-toluenossulfónico. Exemplos de sais adequados com bases são sais de metais, tais como sais de metais alcalinos ou metais alcalino-terrosos, e.g., sais de sódio, potássio ou magnésio, ou sais com amoníaco ou uma amina orgânica, como morfolina, tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, uma mono-, di- ou tri-alquilamina inferior, e.g., etil-, terc-butil-, dietil-, diisopropil-, trietil-, tributil- ou dimetilpropil-aminas, ou uma mono-, di- ou tri-hidroxialquilamina inferior, e.g., mono-, di- ou tri-etanolamina. Além disso, podem ser formados os sais internos correspondentes. 0 WO 00/02543 A2 descreve um método de tratamento e uma composição farmacêutica para tratar várias doenças, em que uma combinação de valsartan, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um bloqueador dos canais de cálcio, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, é utilizado como uma associação de agentes activos. O WO 00/44378 AI refere-se à utilização de um antagonista de receptor de angiotensina II, ou um seu farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de medicamento para o tratamento de MI aguda e para prevenção secundária de MI aguda. O WO 97/49394 A2 está relacionado com formas de 34 ΡΕ1588706 dosagem oral sólidas compreendendo a) um agente activo seleccionado de valsartan e, opcionalmente, hidrocloro-tiazida, e b) aditivos farmaceuticamente aceitáveis adequados para a preparação de formas de dosagem oral sólidas por métodos de compressão. A US3146168 refere-se ao fabrico de preparações farmacêuticas que têm nelas presentes agregados de cristalite de celulose ou determinados derivados de agregados de cristalite de celulose. O WO 01/97805 A2 refere-se a formas de dosagem oral sólidas compreendendo quantidades farmacologicamente eficazes de valsartan, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou de um seu hidrato, em que as composições são pelo menos 1,2 vezes mais biodisponiveis do que uma cápsula de valsartan convencional. A presente invenção está descrita na reivindicação 1. As formas de realização preferidas da invenção estão apresentadas nas reivindicações dependentes e nesta descrição.

Os comprimidos da presente invenção, como comprimidos revestidos, comprimidos, são preparados de um modo que é conhecido per se, por exemplo, utilizando processos convencionais de mistura, granulação, revestimento, solubilização ou liofilização. Assim, os comprimidos podem ser obtidos por combinação do composto activo com 35 ΡΕ1588706 excipientes sólidos, se desejado por granulação de uma mistura que foi obtida e processamento da mistura ou granulado em comprimidos ou núcleos de comprimidos revestidos depois de se ter adicionado substâncias auxiliares adequadas. A dosagem do composto activo pode depender de uma variedade de factores, como o modo de administração, espécie homeotérmica, idade e/ou estado individual. Normalmente, no caso de administração oral, deve estimar-se, para um doente com aproximadamente 75 kg de peso, uma dose diária desde cerca de 10 mg até cerca de 360 mg, por exemplo no caso de Valsartan, e.g., cerca de 40 mg, 80 mg, 160 mg ou 320 mg.

Os comprimidos da presente invenção podem ser utilizados para o tratamento de doenças e patologias, e.g., como aqui descrito acima. O WO 97/49394 descreve formas de dosagem oral sólidas comprimidas, e.g., por compactação, de valsartan (opcionalmente na forma de sal) opcionalmente combinado com hidroclorotiazida (HCTZ). No WO 97/49394, a gama preferida de celulose é indicada como sendo de 10 a 30%, e.g., 21%, para composições de valsartan/HCTZ e 5% de Valsartan só. A gama preferida de polivinilpirolidona reticulada (Crospovi-dona) é indicada como sendo de 10 a 20%, e.g., 13%.

Após testes exaustivos, constatou-se surpreenden- 36 ΡΕ1588706 temente que é possível melhorar as características de biodisponibilidade de formulações sólidas conhecidas de valsartan por aumento da proporção de celulose microcris-talina. Surpreendentemente, constatou-se também que é possível melhorar a qualidade, e.g., melhor uniformidade de peso e melhor compressão para os comprimidos, das referidas formulações sólidas conhecidas de Valsartan por diminuição da proporção de crospovidona PVP reticulada.

Assim, a presente invenção refere-se a um comprimido compreendendo valsartan como o agente activo, e mais de 30% em peso de celulose microcristalina, com base no peso total dos componentes do núcleo da referida forma de dosagem oral sólida, e.g., 31 a 65%, e.g., 50%.

Na presente invenção, a proporção em peso de valsartan em relação à celulose microcristalina é, preferencialmente, de 2,5:1 a 0,3:1, e.g., de 2:1 a 1:1, e.g., 1,4:1.

Noutras formas de realização, o comprimido da invenção compreende menos de 13% de crospovidona, e.g., 2 a 10%, em peso com base no peso total dos componentes do núcleo do comprimido.

Preferencialmente, a proporção em peso de valsartan para a crospovidona é de 7:1 a 3:1, e.g., 6:1 a 4:1, e.g., 5,3:1. 37 ΡΕ1588706

Preferencialmente, a proporção em peso de celulose microcristalina para crospovidona é de 7:1 a 1:1, e.g., 4:1 a 2:1, e.g., 3,6:1. 0 comprimido de acordo com a invenção pode compreender de 20 a 360 mg de valsartan, e.g., 40, 80, 160, 32 0 mg. Com esta gama de dosagens pode ser aumentada a flexibilidade e eficácia do tratamento, e.g., na redução da tensão arterial.

Num outro aspecto, a invenção refere-se a uma forma de dosagem oral sólida que compreende 20 a 65% de valsartan 31 a 65% de celulose microcristalina 2 a 13% de crospovidona.

Uma composição típica pode compreender: 20 a 65% de valsartan 31 a 50% de celulose microcristalina 2 a 10% de crospovidona 1 a 10% de estearato de magnésio 0,5 a 5% de sílica anidra coloidal.

Se desejado, pode ser adicionado 1 a 10% em peso da composição do núcleo, e.g., 5 a 10% de Cutina, ou 1 a 10% em peso da composição de núcleo, e.g., 5a 10% de ácido esteárico. 38 ΡΕ1588706

Preferencialmente, os comprimidos da invenção estão na forma de um comprimido prensado.

Noutra forma de realização, a invenção refere-se a um comprimido, e.g., um comprimido prensado compreendendo mais de 250 mg e até 360 mg, e.g., 320 mg, de Valsartan como um agente activo.

Podem ser utilizados outros excipientes, como lubrificantes e deslizantes correntemente utilizados em formulações orais sólidas e é feita referência à extensa bibliografia sobre substâncias adequadas, ver em particular Fiedler's "Lexicon der Hilfstoffe", 4th Edition, ECV Aulendorf 1996 e "Handbook of Pharmaceutical Excipients" Wade and Weller Ed. (1994) .

Os comprimidos de acordo com a presente invenção podem estar na forma de drageias, caso em que o comprimido é proporcionado com um revestimento, tipicamente um revestimento de película de açúcar, goma-laca ou outro inteiramente convencional na arte. É feita referência aos vários métodos de revestimento utilizados na arte, e.g., revestimento por pulverização num leito fluidizado, e.g., pelos métodos conhecidos utilizando equipamento disponível de Aeromatic, Glatt, Wurster ou Huttlin, num tambor perfurado pelo método de Accela Cota, ou pelo método de revestimento de lâmina submersa. Os aditivos correntemente utilizados no fabrico são utilizados nesses métodos. Por 39 ΡΕ1588706 exemplo, os revestimentos que podem ser utilizados são os apresentados no WO 97/49394, Opadry e outros semelhantes.

Os comprimidos da presente invenção são úteis nas indicações conhecidas do agente activo especifico nelas incorporado. A dose exacta de agente activo e a formulação especifica a ser administrada dependem de vários factores, e.g., da patologia a ser tratada, da duração desejada do tratamento e da velocidade de libertação do agente activo. Por exemplo, a quantidade do agente activo necessária e a sua velocidade de libertação podem ser determinadas com base em técnicas in vitro ou in vivo conhecidas, determinando quanto tempo uma concentração de agente activo especifica permanece a um nível aceitável no plasma sanguíneo para um efeito terapêutico.

Por exemplo, a composição da invenção em ensaios clínicos tem uma biodisponibilidade comparável à da forma comercial de Diovan®.

Preferencialmente a velocidade de dissolução da forma sólida de acordo com a presente invenção é superior a 90% durante 30 minutos.

Por exemplo podem ser utilizadas dosagens na gama de 10 mg a 360 mg de valsartan por dia para um mamífero com 755 quilogramas, e.g., seres humanos, e em modelos animais 40 ΡΕ1588706 correntes. Pode ser observada uma excelente tolerabilidade de valsartan proporcionada pelas composições em ensaios correntes com animais e em ensaios clínicos.

Os comprimidos da invenção podem ser produzidos por processamento dos componentes como no WO 97/49394, e.g., como aqui definido acima, em quantidades adequadas, para formar formas de dosagem unitárias.

Por exemplo, existe um processo para preparar comprimidos, tal como aqui descrito acima, compreendendo os passos de i) triturar o agente activo e aditivos farma-ceuticamente aceitáveis, ii) submeter uma mistura do agente activo e aditivos triturados a compressão para formar um coprimato (a massa compactada) iii) converter o coprimato para formar um granulado e iv) comprimir o granulado para formar a forma de dosagem oral sólida. O processo é realizado na ausência de água, i.e., é um método de compressão seca. O processo pode ser 41 ΡΕ1588706 realizado em condições ambientes de temperatura e humidade; não é necessário assegurar que o processo seja realizado numa atmosfera seca. 0 passo inicial de trituração i) pode ser realizado de acordo com métodos correntes de trituração ou métodos de micronização. 0 agente activo e os aditivos podem ser moídos individualmente ou conjuntamente até tamanhos das partículas desde cerca de 0,1 micrometros (μ) até cerca de 1500 μ, e.g., de 1,0 μ a 900 μ, e.g., de 60 μ a 600 μ. Pelo menos 90% dos cristais do agente activo e dos aditivos estão presentes nestas gamas. As partículas deste tamanho são obtidas por métodos de fragmentação correntes, e.g., trituração num moinho de jacto de ar, moinho de martelos e peneiro, moinho de impacto fino, moinho de bolas ou moinho de vibração. A micronização é preferencialmente realizada por métodos conhecidos utilizando um desintegrador ultrassónico, e.g., do tipo BRANSON Sonifier, ou por agitação de uma suspensão com um agitador de alta velocidade, por exemplo com um agitador do tipo HOMOREX.

As partículas moídas podem opcionalmente nesta fase ser peneiradas e misturadas de acordo com métodos conhecidos. 42 ΡΕ1588706 A compressão para formar um coprimato necessita da compactação dos componentes triturados secos. A compac-tação pode ser realizada utilizando uma técnica de granulação ou preferencialmente compactação com cilindros. 0 aparelho de compactação com cilindros é corrente e utiliza essencialmente dois cilindros que rolam um na direcção do outro. Um êmbolo hidráulico força um dos cilindros contra o outro para exercer uma força de compactação contra as partículas trituradas alimentadas ao rolo compactador por meio de um sistema de transporte por parafuso sem-fim.

Pode ser utilizada uma força de compactação entre 25 e 65 kN, e.g., entre 25 e 45 kN. Nesta gama de forças de compactação constatou-se surpreendentemente que para cada formulação em particular deve ser utilizada uma força de compactação mínima de modo a obter-se uma forma de dosagem oral sólida em que o granulado se desintegra em partículas primárias discretas a uma velocidade desejável, e.g., a desintegração ocorre aproximadamente seis vezes mais rápido para uma forma de dosagem oral sólida comprimida acima de uma força de compactação mínima. Essa velocidade de desintegração rápida não é usual para comprimidos e é semelhante à velocidade de desintegração de uma formulação em cápsula. A força de compactação mínima específica está dependente do teor de agente activo em qualquer formulação dada e assim também depende da quantidade e da natureza dos aditivos presentes. 43 ΡΕ1588706

Dada esta informação, o perito destinatário seria claramente capaz de determinar a força de compactação mínima para outras formulações utilizando experimentação de rotina e sem excessiva dificuldade. A velocidade dos cilindros pode ser fixada entre 1 e 20 rpm e preferencialmente 9 e 15 rpm. Após passagem através dos cilindros, a massa compactada (o coprimato) assemelha-se a uma fita delgada em segmentos. 0 coprimato pode ser peneirado e ou moído para produzir o granulado. A passagem pelo peneiro na sua forma mais simples envolve a passagem do coprimato que emerge dos cilindros através de um peneiro sob pressão mecânica. Mais preferencialmente, faz-se passar o coprimato pelo peneiro utilizando um moinho oscilante, e.g., um Frewitt MGI 624 (Key International Inc.). A compressão dos granulados em núcleos de comprimidos pode ser realizada numa máquina de comprimidos convencional, e.g., numa máquina de comprimidos excêntrica Korsch EK-0 ou numa máquina de compressão rotativa, e.g. a uma compressão superior a 2 kN. Os núcleos dos comprimidos podem variar na forma e ser, por exemplo, redondos, ovais, oblongos, cilíndricos ou de qualquer outra forma adequada, e podem também variar em tamanho dependendo da concentração dos agentes terapêuticos. Uma característica dos comprimidos de acordo com a invenção é o seu tamanho 44 ΡΕ1588706 pequeno tendo em conta a quantidade de agente activo neles contida.

Numa forma de realização preferida da invenção, os comprimidos obtidos pelo método de compressão descrito acima são ligeiramente ovais. As arestas dos comprimidos podem ser biseladas ou arredondadas.

Numa forma de realização particularmente preferida da invenção uma forma de dosagem oral sólida é comprimida na forma de um comprimido com uma forma oblonga, em que a proporção das dimensões comprimento:largura:altura é de, e.g. 2,5-5,0:0,9-2,0:1,0 e preferencialmente em que a base e a face superior do comprimido são, independentemente uma da outra, planares ou curvas de forma convexa em torno do eixo longitudinal; as faces laterais são planares, as faces das extremidades podem ser de qualquer forma e as arestas são opcionalmente biseladas ou arredondadas.

Numa forma de realização particularmente preferida da invenção, uma forma de dosagem oral sólida é comprimida, a partir do granulado, num comprimido de forma oblonga em que o comprimento é de aproximadamente 10,0 a 15,0 mm, a largura é de aproximadamente 5,0 a 6,0 mm e a altura é de aproximadamente 3,0 a 4,0 mm.

Noutra forma de realização particularmente preferida da invenção, uma forma de dosagem oral sólida é 45 ΡΕ1588706 comprimida, a partir dos granulados, num comprimido de forma oblonga, em que o comprimento é de aproximadamente 15,0 a 18,0 mm, a largura é de aproximadamente 6,0 a 9,0 mm e a altura é de aproximadamente 3,5 a 5,0 mm.

Ainda noutra forma de realização preferida da invenção, é proporcionado um comprimido que tem essencialmente em forma de disco, tendo as faces superior e inferior uma superfície ligeiramente convexa. Preferencialmente, o comprimido tem um diâmetro de cerca de 8 a 8,5 mm e uma profundidade de cerca de 3 a 3,5 mm, ou um diâmetro de cerca de 16 mm e uma profundidade de cerca de 6 mm. Os comprimidos podem ocupar um volume de cerca de 0,1 cm3 até cerca de 1 cm3, e.g., de 0,1 cm3 até cerca de 0,45 cm3, e.g., de 0,2 a 0,3 cm3, e.g., cerca de 0,12 5 cm3 ou 0,25 cm3.

Podem ainda ser transparentes, incolores ou com cor e também marcados de modo a conferir a este produto um aspecto individualizado e torná-los instantaneamente reconhecíveis. A utilização de corantes pode servir para melhorar o aspecto bem como para identificar as composições. Os corantes adequados para utilização em farmácia incluem tipicamente carotenóides, óxidos de ferro ou clorofila.

Os exemplos seguintes ilustram a invenção descrita acima; no entanto, não se pretende restringir o âmbito desta invenção por qualquer forma. ΡΕ1588706 46

Exemplo de Formulação 1:

Comprimidos revestidos com película: l!:!ÍÍ||ÍÍÍ:|!ÍÍÍ|:||ÍÍ|| ......Padrões Granulação Valsartan [= ingrediente activo] 80, 00 Celulose microcristalina/ Avicel 54, 00 NF, Ph. Eur PH 102 Crospovidona 20, 00 NF, Ph, Eur Sílica anidra coloidal/ dióxido 0,75 Ph. Eur/ NF de silício coloidal /Aerosil 200 Estearato de magnésio 2,5 NF, Ph. Eur Sílica anidra coloidal/ dióxido 0,75 Ph. Eur/ NF de silício coloidal/ Aerosil 200 Estearato de magnésio 2, 00 NF, Ph. Eur Água purificada *’ _ Vermelho pálido DIOLACK 00F34899 7, 00 Massa total do comprimido 167,00 *) Removida durante o processamento. 0 comprimido revestido com película é fabricado, e.g., como se segue:

Uma mistura de valsartan, celulose microcris- 47 ΡΕ1588706 talina, crospovidona, parte da sílica anidra coloi-dal/dióxido de silício coloidal/Aerosile 200, dióxido de silício e estearato de magnésio é pré-misturada num misturador de difusão e depois peneirada num moinho com peneiro. A mistura resultante é novamente pré-misturada num misturador de difusão, compactada num compactador de cilindros e depois peneirada num moinho de triagem. À mistura resultante é adicionado o resto da sílica anidra coloidal/dióxido de silício coloidal/Aerosil 200 e a mistura final é preparada num misturador de difusão. A totalidade da mistura é comprimida numa máquina rotativa de comprimidos e os comprimidos são revestidos com uma película por utilização de vermelho claro Diolack num tambor perfurado.

Exemplo de Formulação 2:

Comprimidos revestidos com película:

Componentes

Composição por unidade (mg) ranulação

Valsartan [= ingrediente activo]

Celulose microcristalina/Avicel PH 160,00 108,00 NF, Ph. Eur 102

Crospovidona O o o NF, Ph. Eur Sílica anidra coloidal/dióxido de silício coloidal/Aerosil 200 1,50 Ph, Eur/NF Estearato de magnésio 5,00 NF, Ph. Eur ΡΕ1588706 48 (continuação)

Componentes

Composição por unidade (mg)

Padr d

Mistura

Silica anidra coloidal/dióxido de silicio coloidal/Aerosil 200 1, 50

Ph. Eur/NF

Estearato de magnésio Ué vestimento

Opadry Castanho claro 00F33172

Massa total do comprimido 4,00 NF, Ph. Eur 10, 00 O comprimido revestido com película é fabricado, e.g., como descrito no Exemplo de Formulação 1.

Exemplo de Formulação 3:

Comprimidos revestidos com película: !!!!!!!!!!!!!!β iiiiiiliiiiiiiilpii!: Padrões de Valsartan [= ingrediente activo] o o o Sílica, anidro coloidal (Dióxido de 1,00 Ph. Eur, silício coloidal) [= Deslizante] USP/NF Estearato de magnésio [= Lubrificante] 2,00 USP/NF Crospovidona [Desintegrante] 20,00 Ph. Eur Celulose microcristalina 124,00 USP/NF [= Agente aglutinante] 49 ΡΕ1588706 (continuação)

Componente 1111111111111111111111)1 Cor 11 nposiçâo lida de (t O i—' ,,,a...........m |li||||li:l Sílica, anidro coloidal (Dióxido de silício coloidal) [= Fluidificante] 1, 00 Ph. Eur, USP/NF Estearato de magnésio [= Lubrificante] 2, 00 USP/NF |||l||||||||||lliii(| Opadry® castanho OOF 16711*) 9,40 Água purificada**) — 199, 44 *’ A composição do agente corante Opadry® castanho OOF16711 está indicada na tabela a seguir. *** Removida durante o processamento

Composição de Opadry®:

Ingrediente Composição % aproximada Óxido de ferro, negro (C.I. N° 77499. E 172) 0, 50 Óxido de ferro, castanho (C.I. N° 77499, E 172) 0, 50 Óxido de ferro, vermelho (C.I. N° 77491, E 172) 0,50 Óxido de ferro, amarelo (C.I. N° 77492, E 172) 0,50 Macrogolum (Ph. Eur) 4, 00 Dióxido de titânio (C.I. N° 77891, E 171) 14,00 Hipromelose (Ph. Eur) co o >* o o 0 comprimido revestido com película é fabricado, e.g., como descrito no Exemplo de Formulação 1. ΡΕ1588706 50

Exemplo de Referência 1: Cápsulas:

Ccmpcrenre

Compo sição unida de (mg) iii

Valsartan [= ingrediente activo]

Celulose microcristalina

Crospovidona

Povidona

Estearato de magnésio

Laurilsulfato de sódio

Revestimento Óxido de ferro, vemelho (C.I. N° 77491, EC N° E 172) Óxido de ferro, amarelo (C.I. N° 77492, EC N° E 172) Óxido de ferro, negro (C.I. N° 77499, EC N° E 172)

Dióxido de titânio

Gelatina 80,00 25,10 13, 00 12,50 1,30 0, 60 0,123 0,123 0,245 1,540 74,969 O comprimido é fabricado, e.g., como se segue: Granulação/Secagem O Valsartan e a celulose microcristalina são granulados por pulverização num granulador de leito fluidizado, com uma solução de granulação consistindo em povidona e laurilsulfato de sódio dissolvidos em água 51 ΡΕ1588706 purificada. O granulado obtido é seco num secador de leito fluidizado.

Moagem/Mistura 0 granulado seco é moído juntamente com crospovidona e estearato de magnésio. A massa é então misturada num misturador do tipo parafuso cónico durante aproximadamente 10 minutos.

Encapsulação

As cápsulas duras de gelatina vazias são cheias com os grânulos da massa misturada em condições temperatura e de humidade controladas. As cápsulas cheias são limpas de pó, inspeccionadas visualmente, verificadas quanto ao peso e garantidas pelo departamento de garantia de Qualidade.

Exemplo de Referência 2: Cápsulas: lllllllllllllllllllllllllllllll Composição por lllitliilllliliiill Valsartan [= ingrediente activo] 160,00 Celulose microcristalina 50,20 Crospovidona 26, 00 Povidona 25, 00 Estearato de magnésio 2,60 Laurilsulfato de sódio 1,20 52 ΡΕ1588706 (continuação)

Componentes Composição por unidade (mg) Revestimento Óxido de ferro, vermelho (C.I. N° 77491, EC N° E 172) 0,123 Óxido de ferro, amarelo (C.I. N° 77492, EC N° E 172) 0,123 Óxido de ferro, negro (C.I. N° 77499, EC N° E 172) 0,245 Dióxido de titânio 1,540 Gelatina 74,969 Massa total do comprimido 342,00 A formulação é fabricada, e.g., como descrito no Exemplo de Formulação 4.

Exemplo de Referência 3: Cápsula de gelatina dura:

Componentes Composição Por Unidade (mg) Valsartan [= ingrediente activo] 80, 00 Laurilsulfato de sódio 0, 60 Estearato de magnésio 1,30 Povidona 12,50 Crospovidona 13, 00 Celulose microcristalina 21,10 Massa total do comprimido ,;u, uu ΡΕ1588706 53

Exemplos 4 a 8: 4 5 6 7 8 Ccrrponentes CCMPOSIÇÃO POR UNIDADE (mg) CCMPOSIÇÃO POR UNIDADE (mg) CCMPOSIÇÃO POR UNIDADE (mg) CCMPOSIÇÃO POR UNIDADE (mg) CCMPOSIÇÃO POR UNIDADE (mg) Granulação Substância famacológica Valsartan 80,000 160,000 40,000 320,000 320,000 Celulose microcristalina (NF, Ph.Eur.)/Avicel PH 102 54,000 108,000 27,000 216,000 216,000 Crospovidona (NF, Ph.Eur.) 15,000 30,000 7,500 80,000 60,000 Sílica anidra coloidal (Ph. Eur.)/Dióxido de silício coloidal(NF)/Aerosil 200 1,500 3,000 0,750 3,000 6,000 Estearato de magnésio (NF, Ph.Eur.) 3,000 6,000 1,500 10,000 12,000 Mistura Sílica anidra coloidal (Ph. Eur.)/Dióxido de silício coloidal (NF)/Aerosil 200 ... 3,000 Estearato de Magnésio, NF. Ph.Eur, 1,500 3,000 0,750 8,000 6,000 Peso do núcleo/mg 155,000 310,000 77,500 640,000 620,000 Granulação Revestimento - - 3,800 15,000 16,000

Exemplo 9: Dissolução de comprimidos revestidos com película (FCT)

Os critérios de aceitação da dissolução são Q = 75% em 30 min (pás a 50 rpm, tampão fosfato pH 6,8) 54 ΡΕ1588706 40 mg Concentração 320 mg Concent ração Dissolução FCT nivel - nivel + nivel - nivel + Média [%] 98 97 93 89 Desvio padrão relativo [%] 1, 06 2,48 2,12 2,34 min. [%] 96 94 90 86 Max. [ %] 99 99 95 92

Lisboa, 28 de Novembro de 2011

Claims (9)

1. ΡΕ1588706 1 REIVINDICAÇÕES 1. Comprimido compreendendo 20 a 65% de valsar-tan EM forma livre e mais do que 30% em peso de celulose microcristalina, com base no peso total dos componentes do núcleo do referido comprimido, com exclusão dos seguintes comprimidos: Formulação de comprimido de 8 0 mg de Valsartan + 5 mg de Amlodipina (compactação por cilindros) Dosagem (mg) 80 mg de Valsartan + 5 mg de Amlodipina Diâmetro (mm) 9 Forma redonda Linha de quebra sem Peso do comprimido (mg) 215 Potência da dosagem Função do excipiente na formulação 80 mg de Valsartan + 5 mg de Amlodipina I. Compactado mg: 1. Valsartan DS substância farmacológica 80, 0 2. Amlodipina DS substância farmacológica 5, 0 3. Avicel PH 102 enchimento 104,0 2 ΡΕ1588706 (continuação) Potência da dosagem Função do excipiente na formulação 80 mg de Valsartan + 5 mg de Amlodipina 4. PVPP-XL desintegrante O o CM 5. Aerosil 200 fluidificante 0,75 6. Estearato de magnésio lubrificante 2,5 II. Fase externa 7. Aerosil 200 deslizante 0,75 8. Estearato de magnésio lubrificante 2,0 Total 215, 0 Comprimidos revestidos com película: Componentes Composição por unidade (mg) Padrões Granulação Valsartan [= ingrediente activo] 80, 00 Celulose microcristalina/Avicel PH 54,00 NF, Ph. Eur 102 Crospovidona 20,00 NF, Ph. Eur Sílica anidra coloidal/ dióxido de 0,75 Ph, Eur/NF silício coloidal/ Aerosil 200 Estearato de magnésio 2,5 NF, Ph. Eur Mistura Sílica anidra coloidal/ dióxido de 0, 75 Ph. Eur/NF silício coloidal/ Aerosil 200 Estearato de magnésio 2,00 NF, Ph. Eur 3 ΡΕ1588706 (continuação) Componentes Composição por unidade (mg) Padrões Revestimento DIOLACK vermelho pálido 00F34899 O O Massa total do comprimido 167,00 t Comprimidos revestidos com película: Componentes Composição por unidade (mg) Padrões Granulação Valsartan [= ingrediente activo] 160,00 Celulose microcristalina/Avicel PH 102 108,00 NF, Ph. Eur Crospovidona 40,00 NF, Ph. Eur Silica anidra coloidal/ dióxido de silício coloidal/Aerosil 200 1,50 Ph. Eur/ NF Estearato de magnésio 5,00 NF, Ph. Eur Mistura Silica anidra coloidal/dióxido de silício coloidal/ Aerosil 200 1,50 Ph. Eur/NF Estearato de magnésio 4,00 NF, Ph. Eur Revestimento Opadry castanho claro 00F33172 10,00 Massa total do comprimido 330,00 e ΡΕ1588706 4 Comprimidos revestidos com película: Componentes Composição Por Unidade (mg) Padrões Núcleo: Fase Interna Valsartan [= ingrediente activo] 40, 00 Sílica, anidra coloidal (Dióxido de silício coloidal) [= Deslizante] 1, 00 Ph. Eur, USP/NF Estearato de magnésio [= Lubrificante] 2,00 USP/NF Crospovidona [Desintegrante] 20,00 Ph. Eur Celulose microcristalina [Agente aglutinante] 124,00 USP/NF Fase externa Sílica, anidro coloidal (Dióxido de silício coloidal) [= Deslizante] 1,00 Ph. Eur, USP/NF Estearato de magnésio [Lubrificante] 2,00 USP/NF Revestimento com Película Opadry® castanho OOF 16711 9,40 Massa total do comprimido 199,44
2. 2. Comprimido de acordo com a reivindicação 1, compreendendo até 65% de celulose microcristalina.
3. 3. Comprimido de acordo com a reivindicação 2, compreendendo 50 a 65% de celulose microcristalina. 5 ΡΕ1588706
4. 4. Comprimido de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3, compreendendo menos do que 13% de crospovidona.
5. 5. Comprimido de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 4, em que o ingrediente activo consiste em valsartan.
6. 6. Comprimido de acordo com qualquer das rei vindicações 1 a 5, compreendendo 20 a 360 mg de valsartan.
7. 7. Comprimido de acordo com qualquer das rei vindicações 1, 2, 5 e 6 compreendendo: 20 a 65% de valsartan 31 a 65% de celulose microcristalina e 2 a 13% de crospovidona.
8. 8. Comprimido de acordo com qualquer das rei vindicações 1 a 7, compreendendo mais do que 250 mg e até 360 mg de valsartan.
9. 9. Comprimido de acordo com qualquer das rei vindicações 1 a 8, em que o comprimido é um comprimido revestido. Lisboa, 28 de Novembro de 2011 1 ΡΕ1588706 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição • WG 9320816 PCT * WC ®41·3651 A * WO §413642 A ♦ WQ §602543 A2 • WO £©44378 AI * WQ §749394 A2 • US 3148168  * WQ §197805 Â2 ♦ WD 9749384· A * EF 443963 A * EF2S3310A * EP4&31SSA « WQ 9114879 PCI « EF 420237 A * EF5S2314A « EF 45913®  * EP 504888 A - EF 514198 A * EF 475296 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição * Sambroofc 3 j Ff&scís EF; T» Motec-dar « F®dt»f’Sv eter Hsifstofs. 1988 Cterssrsg: s Labo?ste?y Marató. Doíd SpsSig Hssfesr « Hsrsdbossk <jf PhanínaeesdfeaS Exdpterâs. 1884 LaboraíasY Press, 1989