DE69935249T2

DE69935249T2 - Verwendung von at-1 rezeptorantagonisten oder at-2 rezeptormodulatoren zur behandlung von erkrankungen, die mit einer erhöhung an at-1 oder at-2 rezeptoren verbunden sind

Info

Publication number: DE69935249T2
Application number: DE69935249T
Authority: DE
Inventors: Rosemary Gillian Rosemary Maresfield Uckfield BULLOCK; Rosemary Marc DE GASPARO; Rosemary Sabina Maria GANTER
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1998-12-23
Filing date: 1999-12-22
Publication date: 2007-10-31
Anticipated expiration: 2019-12-23
Also published as: ATE354364T1; CA2622805C; NO20013143L; CN1331590A; CA2622805A1; NO20100041L; IL179015A0; TR200805741T2; NZ587909A; CZ293257B6; AU2003266433B2; TR200805740T1; TR200605472T1; PT1140071E; CZ20012306A3; HK1038888B; ES2281978T3; SK9132001A3; JP2010090169A; EP1588706A2

Description

Angiotensinogen, ein α2-Makroglycoprotein, wird durch das Reninenzym in das Decapeptid Angiotensin I gespalten, das selbst biologisch nur sehr schwach aktiv ist. Der nächste Schritt in der Kaskade ist die Entfernung von weiteren zwei Aminosäuren durch die Wirkung des Angiotensin-umwandelnden Enzyms (ACE), das hauptsächlich im Endothel gebunden ist, wobei Angiotensin II gebildet wird. Das Letztere wird für einen der stärksten natürlichen Vasokonstriktoren gehalten.
Angiotensin II wechselwirkt mit spezifischen Rezeptoren auf der Oberfläche der Zielzelle. Es gelang nun, die Rezeptorsubtypen zu identifizieren, die beispielsweise AT₁- und AT₂-Rezeptoren genannt werden. Studien bezüglich des Renin-Angiotensinsystems, insbesondere in Bezug auf Bluthochdruck, haben über das letzte Jahrzehnt fast exponentiell zugenommen. Als Ergebnis wurde die Anzahl an Rezeptoren für Angiotensin II nun identifiziert und einige von ihnen wurden kloniert und analysiert. Es wurden kürzlich große Anstrengungen unternommen, um Substanzen zu identifizieren, die an AT₁-Rezeptoren binden, wobei Wirkstoffe dieser Art oft als Angiotensin-II-Antagonisten bezeichnet werden. Aufgrund der Hemmung des AT₁-Rezeptors können solche Antagonisten beispielsweise als Antibluthochdruckmittel oder zur Behandlung des kongestiven Herzversagens verwendet werden.
Die AT₁ und AT₂ Rezeptoren wurden auch bezüglich ihrer Verteilung und biologischen Eigenschaften untersucht und es wurde gezeigt, dass sie trotz einer Homologie von 30% eine sehr unterschiedliche Verteilung und Aktivität haben.
Der AT₁ Rezeptor, der eine Hauptrolle bei der Regulation des Blutdrucks spielt, wurde im Nebennierencortex, der Niere, dem Uterus usw. gefunden. Auf zellulärer Ebene wurde er auf Fibroblasten, Makrophagen und glatten Muskelzellen (SMC) gefunden.
Im Gegensatz dazu wurde der AT₂ Rezeptor hauptsächlich im fetalen Gewebe gefunden, aber auch bei Erwachsenen, speziell in pathologischem Gewebe, wie bei ischämischem Herzversagen. Hier wurde er auf Fibroblasten und Endothelzellen lokalisiert.
Das Ziel der hierin später beschriebenen Studien ist es, die Verteilung von AT₁ und AT₂ Rezeptoren in der humanen Lunge mittels im wesentlichen immuncytochemischer und in situ Hybridisierungsverfahren zu evaluieren.
Es wurden kürzlich spezifische Antikörper gegen Epitope des AT₁ Rezeptors hergestellt, es existierten aber keine spezifischen Werkzeuge für den AT₂ Rezeptor. Histologische Studien hingen daher von radioaktiv markierten Rezeptorantagonisten zusammen mit einer Autoradiographie ab, die nur eine relativ grobe Gewebelokalisierung ergibt. In den letzten zwei Jahren wurden jedoch spezifische, gut charakterisierte Antikörper gegen den Humanrezeptor zugänglich und wurden daher in den hierin folgenden Studien verwendet.
Methoden und Materialien
1. Spezifität und Titration der Antikörper und in situ Hybridisierungssonde (ISH)
Um die Spezifität der immuncytochemischen (ICC) und ISH Studien zu bestätigen, werden in Paraffin eingebettete Blöcke der normalen, humanen Nebenniere (Cortex und Medulla) aus den Archiven der Pathology Dept., University Hospital, Ghent, Belgien erhalten und als Testmaterial verwendet. Von den AT₁ Rezeptoren ist bekannt, dass sie vorwiegend im Nebenierencortex lokalisiert sind und AT₂ in der Medulla.
Für die humanen Lungenstudien wird Kontrollmaterial aus Autopsien erhalten, worin die Patienten an Ursachen gestorben sind, die nichts mit einer Lungenerkrankung zu tun haben, beispielsweise fatale Unfälle. Ein Teil des Materials kommt von Ghent wie oben und einiges aus den Archiven des Pathology Departments of the Pennsylvania Hospital, Philadelphia, USA. Gewebe, das kleine Atemwege enthält, wird ausgewählt, da es gegenüber eine Verletzung empfindlicher zu sein scheint.
Alle Proben wurden in 10% gepuffertem Formalin so schnell wie möglich nach dem Tod fixiert, dehydriert und in Paraffinwachs eingebettet. Es werden 3-5 μm Schnitte geschnitten und auf Silanbeschichtete Glasobjektträgern aufgebracht.
Um alle Variationen in der Verarbeitung zu minimieren, werden Paare aus sequenziellen Schnitten auf jeden Objektträger aufgebracht, einer für AT₁ und der andere für die AT₂ Antikörperexposition. Bis zu 20 Objektträger werden dann zur selben Zeit so behandelt, dass mit Ausnahme des primären Antikörpers alle Reagenzien einschließlich des Chromogens identisch sind. Die Schnittdicke ist daher die einzige Variable, die nicht vollkommen kontrolliert werden kann.
2. Antikörper
Zwei AT₁ Rezeptorantikörper von Santa Cruz Inc., San Diego, CA, USA (Klone N 10 und 306) werden getestet und ergeben eine identische Rezeptorverteilung im Nebennierencortex.
Der Hauptteil der Studie wird mit einem AT₂ Rezeptorantikörper ausgeführt, der von Santa Cruz erhältlich ist (Klon C18), der getestet wird und das identische Färbemuster in der Nebenierenmedulla und der Lunge ergibt, wie der erste.
Alle Antikörper wurden rigoros durch die kommerziellen und einzelnen Lieferanten auf Spezifität und Kreuzreaktivität getestet.
3. ISH Sonden
Die Produkte der PCR (Polymerasekettenreaktion) werden folgendermaßen hergestellt und verwendet: Oligonukleotide, die für den humanen Angiotensin II Rezeptor Typ I (GenBank Hinterlegungsnummer M93394) und den Angiotensin II Rezeptor Typ II (GenBank Hinterlegungsnummer U15592) spezifisch sind, werden mittels des Oligo 5.0 Softwareprogramms auf homologe Regionen aus beiden Sequenzen entworfen (Tabelle 1). cDNA aus humanem Knochengewebe wird mittels Standardverfahren hergestellt (J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. Ausgabe, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989). Für die PCR werden folgende Oligonukleotidprimerpaare verwendet: Angiotensin II Rezeptortyp I 5'-CTggCTgACTTATgCTTTTTACTgACT-3' und 5'-gATgCAggTgACTTTggCTACA-3' (PCR Produktgröße 236 Basenpaare) und für den Angiotensin II Rezeptortyp II 5'-ATTTACTCCTTTTggCTACTCTTCCTC-3' und 5'-ggTCACgggTTATCCTgTTCTTC-3' (PCR Produktgröße 489 Basenpaare). Die PCR Amplifikationen werden mit 10 ng Matrizen cDNA mittels einer MJ Research PCR Zyklusmaschine und der folgenden PCR Zyklen ausgeführt: 1) 94°C/2 Minuten, 2) 94°C/10 Sekunden, 60°C/30 Sekunden, 72°C/15 Sekunden für 35 Zyklen mittels der High Fidelity Taq Polymerase (Boehringer Mannheim) mit den Komponenten, die im Kit des Herstellers bereitgestellt werden. Die Produkte der PCR Amplifikationen werden durch Elektrophorese durch ein 0,8% Agarose/TBE Gel (J. Sambrook, E.F. Fritsch, T. Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. Ausgabe, Cold Spring Harbor, Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989) identifiziert. Um die Identität der PCR Amplifikationsprodukte zu bestätigen, wird die DNA aus dem Gel eluiert und in den A/T Klonierungsvektor pMOSBlue (Amersham) kloniert. Kolonien, die ein DNA Insert der korrekten Größe enthalten (Tabelle 1) werden vollkommen sequenziert auf beiden Strängen, um ihre Identität zu bestätigen.
Jede Sonde, sowohl Sinn als auch Antisinn für den AT₁ und nur Antisinn wie oben beschrieben, werden mit Fluoreszein (FITC) markiert und das Vorkommen von mRNA in den Zellen wird nach einer Hybridisierung mit der Sonde und der Verwendung einer Maus anti-FITC Sonde plus des alkalische Phosphatase-anti-alkalische Phosphatase (APAAP) Detektionssystems detektiert. Diese Markierungstechnik verstärkt die Detektion von sehr geringen Kopiezahlen.
4. Immuncytochemie
Für alle Antikörper ist das Verfahren folgendes. 5 μm Schnitte werden zuerst durch Antigenfindungstechniken zusammen mit Mikrowellenbehandlung in Citratpuffer (pH 6,0) behandelt.
Die Exposition läuft für 20 Minuten und die Objektträger werden zum Abkühlen im Puffer gelassen. Wenn die Antikörper polyklonale von der Ziege sind, wird das Peroxidase-anti-Peroxidase (PAP) Verfahren mit Diaminobenzidin (DAB) als Chromogen verwendet und ansonsten wird für polyklonale vom Kaninchen das APAAP System mit neuem Fuchsin verwendet. Die Schnitte werden zuerst mit 1% Rinderserumalbumin (BSA) für 30 Minuten verwendet, um unspezifische Rezeptoren zu blockieren, wonach eine Inkubation mit dem primären Antikörper für 30 Minuten bei Raumtemperatur erfolgt. Jeder Antikörper wird austitriert und die optimalen Verdünnungen sind wie folgt:
Als Negativkontrolle wird für die polyklonalen Antikörper aus dem Kaninchen ein negatives Serum von Dako (Prosan, Ghent, Belgien) verwendet, für die polyklonalen Antikörper aus der Ziege wird der primäre Antikörper weggelassen.
ISH
5 μm Schnitte werden vom Paraffin befreit und dann einer in situ Hybridisierung gemäß gut etablierter Techniken exponiert. Die Schnitte werden zuerst mit Prähybridisierungslösung für 20 Minuten bei 55°C behandelt. Sie werden dann vor der Exposition gegenüber den Sonden über Nacht bei 55°C gewaschen. Nach weiterem Waschen werden sie mit einem Maus-anti-FITC Antikörper und dem APAAP Detektionssystem zur Lokalisation der spezifischen Information behandelt. Für den AT₁ Rezeptor ist die Sinnsonde die Negativkontrolle, für den AT₂ Rezeptor wird die Sonde weggelassen.
Bildanalyse
Um die Farbintensität quantitativ zu messen werden die Schnitte im Leica MR500 betrachtet und die Menge an Farbstoff pro Flächeneinheit an Gewebe wird in Pixel gemäß der Anleitung von Leica aufgezeichnet. Dies wird ausgeführt, um die Verhältnisse des AT₁ zum AT₂ Rezeptor in verschiedenen Regionen zu etablieren. Diese sind a) Atemwegsepithel, b) das Subepithelinterstitium, c) SMC um Blutgefäße herum und d) Schleimdrüsen.
Ergebnisse
Nebennierenverteilungsstudien

AT₁ Verteilung: Alle beiden Antikörper ergeben das folgende Verteilungsmuster im Nebennierencortex, das deutlich um die glatten Muskelzellen färbt, die die Blutgefäße umgeben und auch auf dem interstitiellen Netzwerk und um die Fibroblasten herum, wie dies vorhergesagt wurde. Es findet keine Färbung von Endothelzellen statt.
AT₂ Verteilung: Der Antikörper wird gegen die Nebennierenmedulla getestet, wo eine starke Färbung der Nebennierenphaeochromozytomzellen beobachtet wird.
ISH: Beide Antisinnsonden ergeben ein ähnliches Bild.

Kontrolllunge

AT₁ Verteilung: Es wird eine sehr deutliche Färbung der interstitiellen Zellen beobachtet, die unter dem Atemwegsepithel liegen (subepithelial) und auch die Grenzen der glatten Muskelzellen (SMC), die die Blutgefäße umgeben. Zusätzlich sind auch Makrophagen positiv.
AT₂ Verteilung: Dieser Rezeptor scheint stark mit den Atemwegsepithelzellen assoziiert zu sein mit einer starken Färbung der Bürstengrenze. Man beobachtet auch positive Zellen in einigen Schleimdrüsen, auf einigen vaskulären Epithelzellen und auf Fibroblasten, Chrondrozyten und Makrophagen. Es findet kein Färbung von SMC statt.
ISH: Die Sonden ergeben erneut ein ähnliches Bild. Insbesondere ergibt die AT₂ Sonde nur ein starkes Signal auf den Endothelzellen und auf einigen Schleimdrüsen.

Bildanalyse
Die Verteilung des Proteins und daher des Rezeptors, wie dies durch die Färbeintensität dargestellt wird, das heißt Pixel pro μm² Gewebe, wird in der folgenden Tabelle angegeben.
Das Vorkommen von Angiotensin II Rezeptoren im Nebennierencortex und der Medulla wurde kürzlich sowohl durch biochemische als auch histologische Mittel gezeigt. Die Daten werden sowohl mit im Handel erhältlichen als auch privat gelieferten Antikörpern erhalten, die beide diese Feststellungen bestätigen, aber auch die Verlässlichkeit der vorliegenden Immuncytochemiemethodik und ISH Methodik zeigen.
In Anbetracht der Ergebnisse dieser Studien müssen die Verteilung der AT₁ und AT₂ Rezeptoren in normalen und erkrankten Lungengeweben verglichen werden, um die spezifischen AT₁ und AT₂ Verteilungen und Verhältnisse zu bestimmen.
Das Vorkommen der AT₁ Rezeptoren in der Lunge wurde kürzlich biochemisch gezeigt und nun wurde ihre exakte zelluläre Lokalisation demonstriert. Diese Information ist zur Etablierung der Anteile an AT₁ und AT₂ Rezeptoren in unterschiedlichen Regionen der Lunge unter normalen und pathologischen Zuständen entscheidend.
Die Daten über die Verteilung speziell des AT₂ Rezeptors sind vollkommen neu da vorher keine Daten bezüglich des Vorkommens oder der Verteilung existierten. Es leiten sich mehrere wichtige Punkte von dieser Studie ab.
Der Erste ist das Vorkommen des AT₂ Rezeptors auf den bronchialen Epithelzellen auf den kleinen Atemwegen. Es ist bereits bekannt, dass dieser Rezeptor als antifibrotisch, antiproliferativ und proapoptotisch betrachtet wird. Daher hat die Herauf- oder Herabregulierung auf den Epithelzellen tiefgreifende Effekte auf den Epithelzellersatz, die Entwicklung von Hyperplasie und sogar eine Rolle bei der Entwicklung von Lungenkrebs.
Zweitens kann das Vorkommen von beträchtlichen Mengen des Proteins auf der Bürstengrenze der Epithelzellen gut mit der Menge an Schleimsekretion assoziiert werden, da von einigen der Epithelzellen der Schleimdrüsen gezeigt wurde, dass sie den Rezeptor tragen. Gemäß der ISH Daten enthalten manche Drüsen große Mengen an mRNA.
Schließlich wurde nun das Vorkommen des AT₂ Rezeptors auf vaskulären Endothelzellen sowohl durch Immuncytochemie als auch in situ Hybridisierung bestätigt. Es wurde festgestellt, dass die Verteilung hiervon sowohl selten als auch nicht auf allen Zellen eines bestimmten Blutgefäßes vorhanden ist.
Die Studien bestätigen und erweitern existierende Daten bezüglich des Vorkommens und der Verteilung des Angiotensin II Typs AT₁ und AT₂ in der menschlichen Lunge. Das Vorkommen des AT₂ Rezeptors auf den Epithelzellen der kleinen Atemwege hat beträchtliche Konsequenzen für das Verständnis der Erkrankungen, die aus der Veränderung der Funktion dieser Zellen entstehen.
Es ist sehr wenig über die Lokalisation der AT Rezeptoren in der menschlichen Lunge und über ihre Verteilung, die Herauf- und Herabregelung und das Verhältnis in normalem und erkranktem Lungengewebe bekannt. Für diese Studie werden Proben aus der normalen Lunge und aus Patienten mit chronisch obstruktiver pulmonaler Erkrankung (COPD) ± Hypertension gewonnen.
Lungenproben
Diese wurden aus den folgenden Patientengruppen erhalten, die alle klinisch definiert sind.

NN (n = 3) – Nichtraucher, normales Gewebe
C (n = 5) – Raucher, aber ansonsten normal
COPD (n = 8) – COPD positiv, aber normales BP
COPD/H (n = 3) – COPD plus Hypertension
N (n = 4) – Raucher mit erhöhtem BP

Die Atemwege werden sorgfältig aus den Lungen unmittelbar nach Entfernung der Lungen aus dem Patienten für eine Tumorresektion oder anderen Gründen herausgeschnitten. Die Region wird sorgfältig so ausgewählt, dass sie frei von allem krebsartigen Gewebe ist. Die kleinen Blöcke werden dann in 4% Paraformaldehyd für 2 Stunden bei Raumtemperatur fixiert, bevor sie in Paraffinwachs eingebettet werden. Dies dient dazu, die optimale strukturelle Integrität und Aufrechterhaltung der antigenen Aktivität sicherzustellen.
Verfahren zur Etablierung der Rezeptorlokalisation

a) Immuncytochemie (ICC). 2 × AT₁ Antikörper werden getestet, Santa Cruz (Klone N-10 und 306). Ein AT₂ Antikörper wurde ebenfalls getestet, Santa Cruz (Klon C 18).

Die Digitalbilder zeigen:
Die Verteilung des AT₂ Rezeptors in bronchiolaren Epithelzellen einschließlich der Bürstengrenze der Schleimdrüsenzellen.
Der benachbarte Schnitt, der auf AT₁ gefärbt ist, zeigt die sehr unterschiedliche Verteilung auf glatten Muskelzellen, Fibroblasten/Stroma und Makrophagen.
Analyse von Humanlungen aus Patienten
Das gesamte Material, was bisher erhalten wurde, wurde geschnitten und durch ICC sowohl auf AT₁ als auch AT₂ Rezeptorlokalisation mit geeigneten Negativkontrollen gefärbt. Es wurde eine Bildanalyse mit Auswertungen von einem Schnitt pro Patienten bis heute gestartet (dies ist ein langsamer Prozess, da die Grundlinien konsequent daran festgemacht werden müssen). Es müssen Messungen des Epithels gegen das Subepithel und die Blutgefäße ausgeführt werden. Diese Analyse wird in einer "blinden" Weise ausgeführt, so dass kein Kommentar bis auf die Tatsache gemacht werden kann, dass manche "Patienten" deutlich Werte aufweisen, die weit vom Mittel abweichen. Diskrepanzen aufgrund variierender Schnittdicke und Färbung wurden minimiert indem die AT₁ und AT₂ ICC simultan mit sequenziellen Schnitten ausgeführt wird. So kann auch derselbe Ansatz des Chromogens verwendet werden.
Die Erkenntnis der Lungenepithellokalisation für den AT₂ Rezeptor hat viele Konsequenzen. Da von diesem Rezeptor gezeigt wurde, dass er sowohl antiproliferativ, antifibrotisch und proapoptotisch ist, kann geschlossen werden, dass dessen Neraufregulierung Konsequenzen für mehrere Lungenerkrankungen hat, beispielsweise dass Rauchen alleine einen Einfluss hat. Er spielt eine Rolle in solchen fibrotischen Zuständen, wie dem Atemstresssyndrom beim Erwachsenen (ARDS) oder sogar bei der Verringerung der proliferativen Kapazität des Epithels beim Lungenkrebs.
Ergebnisse
Rezeptorlokalisation
Alle Antikörper und Ribonukleotidsonden werden auf normalem Nebenierencortex und der Medulla getestet, wo bekannt ist, dass beide Rezeptortypen relativ häufig vorkommen.
Das Verfahren wird auf normalem Lungengewebe wiederholt, wo sowohl AT₁ als auch AT₂ Rezeptoren und ihre mRNA detektiert werden können. Die Lokalisation ist folgende:

AT₁ – Auf glatten Muskelzellen, Fibroblasten/Stroma und Makrophagen. Dies ist ziemlich vorhersagbar außer dass die Intensität und Anzahl an Rezeptoren in normalem Lungengewebe ziemlich hoch ist.
AT₂ – Auf bronchialen Epithelzellen (speziell der Bürstengrenze), auf Schleimdrüsen (einigen). Zusätzlich auf vaskulären Endothelzellen, Fibroblasten, Makrophagen und Knorpelzellen.

Dies ist eine vollkommen unerwartete und neue Feststellung, die weiter untersucht werden muss. Die Lokalisierung auf den Epithelzellen und der Schleimdrüsen wird sowohl durch Protein als auch mRNA Gehalt bestätigt, wobei die Lokalisierung an der Bürstengrenze mit der Schleimsekretion zusammenhängt. Verteilung von Angiotensin AT₁ und AT₂ in den Lungen von Patienten mit chronischer Bronchitis im Vergleich zu den Kontrollen
Die Leicaausstattung (Bildanalysegerät MR 500) übersetzt die Farbintensität in Graustufen (0 bis 250), wobei jede Einheit ein Pixel ist. Dies erlaubt es, die Daten genau zu quantifizieren.
Die Daten basieren auf der Bildanalyse des Patienten. Die Daten werden als Pixel pro Einheitsfläche an positiv gefärbtem Gewebe und dem Mittel aus 5 Feldern pro Schnitt ausgedrückt.
Wie es aus diesen Ergebnissen ersichtlich ist, liegt das Verhältnis der AT₁ Verteilung im Subepithel und AT₂ im Epithel in normalem Lungengewebe signifikant unter 1, während dieses Verhältnis in erkrankten Lungengeweben nahe an oder über 1 liegt. Das Epithel bildet die innere Auskleidung der Trachea und der Hauptbronchien. Die Erhöhung im Verhältnis des AT₁/AT₂ Rezeptorverhältnisses in der bronchialen Subepithelregion der Lunge aus chronisch bronchitischen Patienten im Vergleich zur Kontrolle beruht hauptsächlich auf den erhöhten Mengen des AT₁ Rezeptors, der auf den Fibroblasten und Makrophagen gefunden werden, die das Atemwegsepithel umgeben und reflektiert das erhöhte Ausmaß an Entzündung und Fibrose, das bei COPD gesehen wird.
Die obigen Ergebnisse zeigen deutlich, dass die AT₁ Rezeptoren, die Angiotensin II modulieren, im subepithelialen Lungengewebe liegen und es ist speziell die Verteilung im entsprechenden Lungengewebe erhöht. Demnach führt die Hemmung von Angiotensin II durch AT₁ Rezeptorantagonisten zu einer Verringerung der Atemwegsobstruktion.
Ferner zeigen die Experimente, dass die Verteilung von AT₂ im Epithellungengewebe, speziell im entsprechend erkrankten Gewebe, beispielsweise hauptsächlich auf den Bronchialepithelzellen und auch den strukturellen Zellen der Alveolen, beispielsweise der Schleimdrüsen der Alveolen erhöht ist. Da die AT₂ Rezeptoren antiproliferativ, antifibrotisch und proapoptotisch sind, ist ihre Modulation zur Behandlung von spezifischen Formen von Lungenzuständen und Lungenerkrankungen brauchbar, speziell zur Behandlung des Atemstresssyndroms beim Erwachsenen (ARDS) und zur Verringerung der proliferativen Kapazität im Epithel der Lunge und Brustkrebs, ferner zur Behandlung von Sepsissyndrom, Lungenverletzungsformen, wie Pneumonie, Aspiration des Mageninhalts, Brusttrauma, Verbrennungen, Fettembolie, kardiopulmonalem Bypass, O₂ Toxizität, hämorrhagischer Pankreatitis, interstitieller und bronchoalveolarer Entzündung, Proliferation von Epithelzellen und interstitiellen Zellen, Kollagenakkumulation und Fibrose.
Rezeptorverteilung in normalem Brustgewebe und bei Patienten mit Brustkrebs
Die in der Studie enthaltenen Brustproben werden aus dem Archiv des Pathology Departments, University Hospital, Ghent zufällig entnommen. Alle werden in Formalin fixiert, in Paraffinwachs verarbeitet und es wird eine Diagnose ihres pathologischen Status durch den Abteilungspathologen ausgeführt. Es werden 16 Fälle aufgenommen: 14 invasive Duktalcarzinome, ein invasives Kolloidcarzinom und ein invasives Lobularcarzinom.
Die Immuncytochemie wird auf in Paraffinwachs eingebetteten Schnitten mittels polyklonaler Antikörper für AT₁ und AT₂ mittels der Lungenstudie zusammen mit dem Streptavidin-Biotin-Peroxidase-Komplexverfahren, wie vorher ausgeführt.
Um ein mögliches Modell zum Testen von Rezeptorantagonisten bereitzustellen, werden Zelllinien, die aus humanem Brustgewebe stammen, auch auf ihren Rezeptorgehalt untersucht. Dies kann ein brauchbares in vitro Arbeitsmodell für weitere biochemische und cytologische Studien bereitstellen.
Ergebnisse
Die erhaltenen Daten zeigen deutlich, das Vorkommen von Angiotensin II Typ 1 und 2 Rezeptoren in normalem, humanem Brustgewebe, wobei AT2 auf dem kuboidalen Epithel gefunden wird, das die Milchgänge auskleidet und AT1 vorwiegend auf den duktalen Myoepithelzellen vorkommt. Die ganze Färbung wird aufgehoben, wenn der primäre Antikörper aus der Inkubation weggelassen wird.
In allen Fällen ist das Bindegewebe für den AT1 Rezeptor positiv zusammen mit keiner (11/16) bis schwachen (5/16) Färbung der Krebszellen. Für den AT2 Rezeptor wird das Gegenteil beobachtet, wobei alle Carzinome positiv sind und fast keine Stromaaktivität (1/16) auftritt.
Die Ergebnisse aus den getesteten Zelllinien sind sehr interessant, wobei jeweils ein unterschiedliches Färbemuster beobachtet wird. Die Kurzzeitkulturen von normalen Brustepithelzellen sind für den AT1 Rezeptor stark positiv, aber färben für den AT2 Rezeptor nur schwach. Brustcarzinome
Schlussfolgerungen
Wie es aus diesen Ergebnissen ersichtlich ist, scheint das Vorkommen des AT1 Rezeptors auf normalen Epithelzellen für die Lunge sehr unterschiedlich zu sein. Jedoch ist der Epithelzelltyp myoepithelial, während der AT2 Rezeptor in beiden Geweben auf kuboidalen Epithelzellen gefunden wird. Zur selben Zeit ist die positive Stromafärbung für den AT1 Rezeptor dieselbe für beide Gewebe. Die letztere ist deutlich mit dem Vorkommen der Fibroblasten in der extrazellulären Matrix verbunden.
Das Vorkommen des AT2 Rezeptors auf den Carzinomzellen und das in einer so weitverbreiteten und reproduzierbaren Weise ist überraschend. Die hierin beschriebenen Zelltypen, die die spezifischen Rezeptoren tragen, liefern ein ideales in vitro Modell für solche Studien.
Diese Experimente zeigen deutlich den überraschenden Effekt, dass im vorliegenden Modell mittels Brustcarzinomzellen die AT₁ Rezeptoren vor allem im Stroma verteilt sind, während die AT₂ Rezeptoren vor allem in den Carzinomzellen festgestellt werden können.
Alle diese überraschenden Ergebnisse zeigen deutlich, dass jeder AT₁ Rezeptorantagonist oder AT₂ Rezeptormodulator zur Behandlung von Zuständen oder Erkrankungen verwendet werden kann, die mit der Erhöhung der AT₁ Rezeptoren im subepithelialen Bereich oder der Erhöhung der AT₂ Rezeptoren im Epithel assoziiert sind, speziell zur Behandlung von obstruktiven Atemwegserkrankungen. Obstruktive Atemwegserkrankungen sind eine Klassifizierung von Atemwegserkrankungen, die durch eine verringerte Atemwegsgröße und eine erhöhte Atemwegssekretion charakterisiert sind, was zu einer verringerten alveolaren Ventilation führt. Obstruktive Atemwegserkrankungen umfassen reversible und irreversible Zustände und sind ausgewählt beispielsweise aus chronisch obstruktiver Lungenerkrankung, wie Bronchitis, beispielsweise chronische Bronchitis und Emphysem, wie auch aus Asthma, cystischer Fibrose, interstitieller Lungenerkankung, invasivem Lungenkrebs, pulmonaler vaskulärer Erkrankung und erhöhtem Widerstand des Luftstroms während einer forcierten Expiration. Eine solche Behandlung kann auch, aber nicht notwendigerweise, mit der Behandlung von Hypertension, wie auch sowohl Nichtrauchern und Rauchern assoziiert sein.
Diese überraschenden Ergebnisse zeigen deutlich, dass jeder AT₂ Rezeptormodulator zur Behandlung von Zuständen oder Erkrankungen verwendet werden kann, die mit einer Erhöhung der AT₂ Rezeptoren im epithelialen Lungengewebe assoziiert sind, speziell zur Behandlung von spezifischen Formen von Lungenzuständen und Lungenerkrankungen, speziell zur Behandlung von Atemstresssyndrom beim Erwachsenen (ARDS) und zur Verringerung der proliferativen Kapazität des Epithels bei invasivem Lungenkrebs, ferner zur Behandlung von Sepsissyndrom, Lungenverletzungen, wie Pneumonie, Aspiration von Mageninhalt, Brusttrauma, Schock, Verbrennungen, Fettembolie, kardiopulmonalem Bypass, O₂ Toxizität, hämorrhagischer Pankreatitis, interstitieller und broncheoalveolarer Entzündung, Proliferation von Epithelzellen und interstitiellen Zellen, Kollagenakkumulation und Fibrose.
AT₁ Rezeptorantagonisten oder AT₂ Rezeptormodulatoren sind Mittel, die die biologische Reaktion des Wirts gegen Tumorzellen unter Bildung eines therapeutischen Nutzens modifizieren. Die erhöhte AT₁ Rezeptorexpression im Duktalmyoepithel der Brust und des AT₂ Rezeptors im kuboiden Epithel der Brust zeigen, dass jeder AT₁ Rezeptorantagonist oder AT₂ Rezeptormodulator zur Behandlung des invasiven Brustcarzinoms verwendet werden kann. Diese umfassen scirrhöse, infiltrative, papilläre, duktale, medulläre und lobulare Brustkrebsarten wie auch Metastasen in den Lungen, der Pleura, des Skeletts und der Leber. Die Behandlung sollte als Adjuvanstherapie in Kombination mit Operation, Radiotherapie oder als palliative Therapie mit Hormontherapie oder anderen biologischen Reaktionsmodifizierern, wie Interferonen, Interleukinen, Tumornekrosefaktoren, monoklonalen Antikörpern usw. beobachtet werden.
Während die klinische Untersuchung und Mammographie einen Brustkrebs nahelegen, ist es nur die Untersuchung der Gewebebiopsie, die es erlaubt, die Diagnose zu stellen. Das Verteilungsmuster der AT₁ und AT₂ Rezeptoren kann als Marker für die Hyperplasie (Lage der AT₁ Rezeptoren) und für invasiven Krebs (Lage der AT₂ Rezeptoren) und daher zur Diagnose der Malignität des Tumors verwendet werden.
Daher betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Valsartan oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes hiervon zur Herstellung einer pharmazeutischen Präparation zur Behandlung von invasivem Lungenkrebs und invasivem Brustkrebs.
(S)-N-(1-Carboxy-2-methylprop-1-yl)-N-pentanoyl-N-[2'-(1H-tetrazol-5-yl)biphenyl-4-ylmethyl]amin [Valsartan] hat die Formel
und kann in der Form der pharmazeutisch brauchbaren Salze vorliegen.
Beispiele für geeignete Salze von Valsartan mit Basen sind Metallsalze, wie Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalze, beispielsweise Natrium-, Kalium- oder Magnesiumsalze, oder Salze mit Ammoniak oder einem organischen Amin, wie Morpholin, Thiomorpholin, Piperidin, Pyrrolidin, einem Mono-, Di- oder Triniederalkylamin, beispielsweise Ethyl-, tert-Butyl, Diethyl-, Diisopropyl-, Triethyl-, Tributyl- oder Di-methylpropylamin, oder einem Mono-, Di- oder Trihydroxyniederalkylamin, beispielsweise Mono-, Di- oder Triethanolamin. Ferner können entsprechende innere Salze gebildet werden.
Die Erfindung verwendet pharmazeutische Präparationen, die Valsartan oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz hiervon zur Behandlung von Zuständen oder Erkrankungen umfassen, die mit der Zunahme von AT1 Rezeptoren im subepithelialen Bereich oder der Zunahme von AT₂ Rezeptoren im Epithel assoziiert sind, nämlich invasiver Lungenkrebs und invasiver Brustkrebs.
Die pharmazeutischen Präparationen sind für die enterale, wie orale und auch rektale oder parenterale Verabreichung an Warmblüter geeignet, wobei die Präparationen den pharmakologischen Wirkstoff entweder alleine oder zusammen mit den gewöhnlichen pharmazeutischen Hilfsstoffen enthalten. Beispielsweise bestehen die pharmazeutischen Präparationen aus 0,1% bis 100%, vorzugsweise 1% bis 80% des Wirkstoffs. Pharmazeutische Präparationen für eine enterale oder parenterale wie auch für eine Okulare Verabreichung sind beispielsweise die in Einheitsdosierungsformen, wie beschichtete Tabletten, Tabletten, Kapseln oder Zäpfchen und auch Ampullen. Diese werden auf eine an sich bekannte Weise hergestellt, beispielsweise durch herkömmliche Misch-, Granulierungs-, Beschichtungs-, Lösungs- oder Lyophilisierungsverfahren. Daher können pharmazeutische Präparationen zur oralen Verwendung durch Kombinieren des Wirkstoffs mit festen Trägern, wahlweise Granulierung des entstehenden Gemisches und Verarbeiten des Gemisches oder Granulats, falls gewünscht oder erforderlich nach der Zugabe geeigneter Hilfsstoffe unter Bildung von Tabletten oder beschichteten Tablettenkernen erhalten werden.
Die Dosierung des Wirkstoffs kann von einer Vielzahl an Faktoren abhängen, wie der Verabreichungsart, der Art des Warmblüters, dem Alter und/oder dem individuellen Zustand. Normalerweise liegt die ungefähre Tagesdosis im Fall einer oralen Verabreichung bei 10 mg bis 360 mg, beispielsweise im Fall von Valsartan 40 mg, 80 mg, 160 mg oder 320 mg für einen Patienten mit einem Gewicht von etwa 75 kg.
Ein weiterer Aspekt sind feste orale Dosierungsformen von Valsartan, die zur Behandlung der Erkrankungen und Zustände verwendet werden können, wie sie beispielsweise hierin vorher beschrieben sind.
Es wird Bezug genommen auf die WO 97 49 394 A, die verpresste feste orale Dosierungsformen beispielsweise durch Verpressen von Valsartan (wahlweise in Salzform), wahlweise in Kombination mit Hydrochlorthiazid (HCTZ) beschreibt. In der WO 97 49 394 A wird der bevorzugte Bereich an Cellulose mit 10 bis 30%, beispielsweise 21% für Valsartan/HCTZ Zusammensetzungen und 5% Valsartan alleine angegeben. Der bevorzugte Bereich an quervernetztem Polyvinylpyrrolidon (Crospovidon) wird mit 10 bis 20%, beispielsweise 13% angegeben.
Nach ausgiebigem Testen wurde überraschenderweise festgestellt, dass es möglich ist, die Bioverfügbarkeitscharakteristiken von bekannten festen Formulierungen von Valsartan durch die Erhöhung des Anteils an mikrokristalliner Cellulose zu verbessern. Es wurde ebenfalls überraschenderweise fest gestellt, dass es möglich ist, die Qualität, beispielsweise bessere Gewichtsuniformität und bessere Verpressung für die Tabletten dieser bekannten festen Formulierungen von Valsartan durch die Verringerung des Anteils an quervernetztem PVP Crospovidon zu verbessern.
Daher verwendet die vorliegende Erfindung in einem weiteren Aspekt eine feste orale Dosierungsform, die Valsartan als Wirkstoff und mehr als 30 Gewichtsprozent mikrokristalline Cellulose bezogen auf das Gesamtgewicht der Kernkomponenten der festen oralen Dosierungsform verwendet, beispielsweise 31 bis 65%, beispielsweise 50%.
In einem weiteren Aspekt verwendet die vorliegende Erfindung eine feste orale Dosierungsform, die Valsartan als Wirkstoff und mikrokristalline Cellulose umfasst, worin das Gewichtsverhältnis von Valsartan zu mikrokristalliner Cellulose 2,5:1 bis 0,3:1, beispielsweise 2:1 bis 1:1, beispielsweise 1,4:1 beträgt.
In einer weiteren Ausführungsform umfasst die feste orale Dosierungsform der Erfindung weniger als 13% Crospovidon, beispielsweise 2 bis 10 Gewichtsprozent basierend auf dem Gesamtgewicht der Kernkomponenten der festen oralen Dosierungsform.
Vorzugsweise beträgt das Gewichtsverhältnis von Valsartan zu Crospovidon 7:1 bis 3:1, beispielsweise 6:1 bis 4:1, beispielsweise 5,3:1.
Vorzugsweise beträgt das Gewichtsverhältnis an mikrokristalliner Cellulose zu Crospovidon 7:1 bis 1:1, beispielsweise 4:1 bis 2:1, beispielsweise 3,6:1.
Die feste orale Dosierungsform, die in der Erfindung verwendet wird, kann 20 bis 360 mg Valsartan, beispielsweise 40, 80, 160 und 320 mg umfassen. In diesem Dosierungsbereich kann die Behandlungsflexibilität und -effizienz, beispielsweise bei der Blutdruckverringerung, erhöht werden.
In einem weiteren Aspekt verwendet die Erfindung eine feste orale Dosierungsform, die umfasst

20 bis 65% Valsartan,
31 bis 65% mikrokristalline Cellulose,
2 bis 13% Crospovidon.

Eine typische Zusammensetzung kann umfassen:

20 bis 65% Valsartan,
31 bis 50% mikrokristalline Cellulose,
2 bis 10% Crospovidon,
1 bis 10% Magnesiumstearat,
0,5 bis 5% kolloidales, wasserfreies Siliciumdioxid.

Falls gewünscht werden 1 bis 10 Gewichtsprozent der Kernzusammensetzung, beispielsweise 5 bis 10% Cutina oder 1 bis 10 Gewichtsprozent der Kernzusammensetzung, beispielsweise 5 bis 10 Stearinsäure zugegeben.
Vorzugsweise liegen feste orale Dosierungsformen der Erfindung in Form einer verpressten Tablette vor.
In einem weiteren Aspekt der Erfindung verwendet eine feste orale Dosierungsform, beispielsweise eine verpresste Tablette, mehr als 250 mg und bis zu 360 mg, beispielsweise 320 mg an Valsartan als Wirkstoff.
Andere Hilfsstoffe als Schmiermittel und Gleitmittel, die herkömmlich in festen oralen Formulierungen verwendet werden, können verwendet werden und es wird Bezug auf die ausgiebige Literatur für geeignete Substanzen genommen, siehe beispielsweise Fiedler's "Lexikon der Hilfsstoffe", 4. Ausgabe, ECV Aulendort 1996 und "Handbook of Pharmaceutical Excipients", Herausgeber Wade und Weller (1994).
Die festen oralen Dosierungsformen gemäß der vorliegenden Erfindung können in Form von Dragees vorliegen, wobei die feste orale Dosierungsform dann mit einer Beschichtung bereitgestellt wird, typischerweise einer Beschichtung aus Zucker, Schellack oder einem anderen Film, was in der Technik vollkommen herkömmlich ist. Es wird auf mehrere bekannte Beschichtungsverfahren hingewiesen, die in der Technik verwendet werden, beispielsweise Sprühbeschichtung in einem Wirbelbett, beispielsweise durch die bekannten Verfahren mittels eines Geräts, das von Aeromatic, Glatt, Wurster oder Hüttlin erhältlich ist, in einer perforierten Pfanne durch das Accela Cota Verfahren oder durch das submerse Schwertbeschichtungsverfahren. Die bei der Konfektionierung herkömmlich verwendeten Zusätze werden in solchen Verfahren verwendet. Beispielsweise sind die Beschichtungen, die verwendet werden können jene, die in WO 97 49 394 A beschrieben sind, wie Opadry.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, sind in den bekannten Indikationen des hierin im einzelnen eingearbeiteten Wirkstoffs brauchbar.
Die exakte Dosis des Wirkstoffs und die im einzelnen zu verabreichende Formulierung hängen von mehreren Faktoren ab, beispielsweise dem zu behandelnden Zustand, der gewünschten Dauer der Behandlung und der Geschwindigkeit der Freisetzung des Wirkstoffs. Beispielsweise kann die Menge an erforderlichem Wirkstoff und die Freisetzungsgeschwindigkeit hiervon auf der Basis von bekannten in vitro oder in vivo Techniken, der Bestimmung, wie lange eine bestimmte Wirkstoffkonzentration im Blutplasma in einem annehmbaren Spiegel für einen therapeutischen Effekt verbleibt, bestimmt werden.
Beispielsweise hat die Zusammensetzung der Erfindung in klinischen Versuchen eine vergleichbare Bioverfügbarkeit zur im Handel erhältlichen Form von Diovan^®.
Vorzugsweise liegt die Auflösungsgeschwindigkeit der festen Form gemäß der vorliegenden Erfindung über 90% über 30 Minuten.
Beispielsweise können Dosierungsbereiche von 10 mg bis 360 mg Valsartan pro Tag für einen 75,5 kg Säuger, beispielsweise Menschen, und in Standardtiermodellen verwendet werden. Es kann eine ausgezeichnete Tolerierbarkeit von Valsartan, das durch die Zusammensetzungen bereitgestellt wird, in Standardtiertests und in klinischen Versuchen beobachtet werden.
Die Erfindung liefert in einem weiteren ihrer Aspekte ein Verfahren zur Herstellung einer festen oralen Dosierungsform, wie dies hierin beschrieben ist. Eine solche orale Dosierungsform kann durch die Aufarbeitung von Komponenten wie in WO 97 49 394 A, wie sie beispielsweise oben definiert sind, in geeigneten Mengen unter Bildung von Einheitsdosierungsformen hergestellt werden.
Beispielsweise wird ein Verfahren zur Herstellung der festen oralen Dosierungsformen bereitgestellt, das die folgenden Schritte umfasst

i) Mahlen des Wirkstoffs und pharmazeutisch annehmbarer Zusätze,
ii) Unterziehung des Gemisches aus gemahlenen Wirkstoff und Zusätzen einer Verpressung unter Bildung eines Coprimats (der verdichteten Masse),
iii) Umwandlung des Coprimats unter Bildung eines Granulats und
iv) Verpressen des Granulats unter Bildung der festen oralen Dosierungsform.

Das Verfahren wird in Abwesenheit von Wasser ausgeführt, das heißt es ist ein Trockenverpressverfahren. Das Verfahren kann unter Umgebungsbedingungen bezüglich Temperatur und Luftfeuchtigkeit ausgeführt werden und es ist nicht erforderlich sicherzustellen, dass das Verfahren in einer trockenen Atmosphäre ausgeführt wird.
Der anfängliche Vermahlungsschritt i) kann mittels herkömmlicher Mahlverfahren oder Mikronisierungsverfahren ausgeführt werden.
Der Wirkstoff und die Zusätze können entweder einzeln oder zusammen zu Partikelgrößen von 0,1 Mikrometer (μm) bis 1500 μm, beispielsweise 1,0 μm bis 900 μm, beispielsweise 60 μm bis 600 μm vermahlen werden. Mindestens 90% der Kristalle sowohl des Wirkstoffs als auch der Zusätze sind in diesen Bereichen vorhanden. Partikelgrößen dieser Größe werden durch herkömmliche Zerkleinerungsverfahren erhalten, beispielsweise durch Vermahlen in einer Luftstrahlmühle, einer Hammer und Sieb Mühle, einer Feinstoßmühle, einer Kugelmühle oder einer Vibrationsmühle.
Die Mikronisation wird vorzugsweise durch bekannte Verfahren mittels eines Ultraschallzerkleinerers, beispielsweise vom Branson Beschallungstyp oder durch Rühren einer Suspension mit einem Hochgeschwindigkeitsrührer, beispielsweise mit einem Rührer vom Homorex Typ bewirkt.
Die vermahlenen Partikel können an dieser Stufe dann optional gesiebt und gemäß bekannter Verfahren gemischt werden.
Das Verpressen unter Bildung eines Coprimats erfordert das Verpressen der gemahlenen Komponenten. Das Vermahlen kann mittels einer Perlentechnik oder vorzugsweise Walzenverdichtung ausgeführt werden. Das Walzenverdichtungsgerät ist herkömmlich und verwendet im wesentlichen zwei Walzen, die gegeneinander rollen. Ein hydraulischer Kolben presst eine der Walzen gegen die andere, um einer Verdichtungskraft gegen die gemahlenen Partikel auszuüben, die in den Walzenverdichter über einen Schneckentransportsystem gefüllt werden.
Es kann beispielsweise eine Verdichtungskraft zwischen 25 und 65 kN, beispielsweise 25 und 45 kN verwendet werden. Innerhalb dieses Bereichs der Verdichtungskräfte wurde überraschenderweise festgestellt, dass für jede einzelne Formulierung eine minimale Verdichtungskraft verwendet werden soll, um eine feste orale Dosierungsform zu erhalten, worin das Granulat in diskrete Primärpartikel mit einer gewünschten Geschwindigkeit zerfällt, beispielsweise findet der Zerfall einer festen oralen Dosierungsform etwa sechsmal schneller statt, die über einer minimalen Verdichtungskraft verpresst wurde. Eine solche schnelle Zerfallsgeschwindigkeit ist für Tabletten unüblich und ist zur Zerfallsgeschwindigkeit einer Kapselformulierung ähnlich. Die einzelne minimale Verdichtungskraft hängt vom Wirkstoffgehalt in einer gegebenen Formulierung ab und hängt daher auch von der Menge und Art der vorhandenen Zusätze ab.
Mit dieser Information ist der Fachmann in der Lage, die minimale Verdichtungskraft für andere Formulierungen mittels Routineexperimenten und ohne übermäßigem Aufwand zu bestimmen.
Die Walzengeschwindigkeit kann zwischen 1 und 20 Upm und vorzugsweise 9 bis 15 Upm eingestellt werden. Nach der Passage durch die Walzen ähnelt die verpresste Masse (das Coprimat) einem dünnen Band in Segmenten.
Das Coprimat kann dann unter Bildung des Granulats gesiebt oder gemahlen werden. Das Mahlen in der einfachsten Form umfasst die Passage des aus den Walzen herauskommenden Coprimats durch ein Sieb und einem mechanischen Druck. Bevorzugter wird das Coprimat mittels einer oszillierenden Mühle gesiebt, beispielsweise einer MGI 624 Frewitt (Key International Inc.).
Das Verpressen der Granulate zu Tablettenkernen kann in einer herkömmlichen Tablettiermaschine ausgeführt werden, beispielsweise in einer EK-0 Korsch exzentrischen Tablettiermaschine oder einer rotierenden Verpressmaschine, beispielsweise mit einer Verpeeseung von mehr als 2 kN. Die Tablettenkerne können in der Form variieren und können beispielsweise rund, oval, länglich, zylindrisch oder anders geformt sein und können auch in der Größe in Abhängigkeit der Konzentration der therapeutischen Mittel variieren. Ein Merkmal der Tabletten gemäß der Erfindung ist ihre kleine Größe in Bezug auf die Menge an hierin enthaltenem Wirkstoff.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind Tabletten, die durch das oben beschriebene Verpressverfahren erhalten werden, leicht oval. Die Ecken der Tabletten können abgeschrägt oder abgerundet sein.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird eine feste orale Dosierungsform in Form einer Tablette mit einer länglichen Form verpresst, worin das Verhältnis der Dimensionen Länge : Breite : Höhe beispielsweise 2,5 bis 5,0 : 0,9 bis 2,0 : 1 beträgt und worin vorzugsweise der Boden und die Oberseite der Tablette unabhängig voneinander planar oder konvex über die Längsachse gebogen sind, die Seitenflächen planar sind und die Endflächen jede Form haben können und die Ecken optional abgeschrägt oder abgerundet sind.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird eine feste orale Dosierungsform aus dem Granulat in Form einer Tablette mit länglicher Form verpresst, worin die Länge etwa 10,0 bis 15,0 mm beträgt, die Breite etwa 5,0 bis 6,0 mm beträgt und die Höhe etwa 3,0 bis 4,0 mm beträgt.
In einer anderen besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird eine feste orale Dosierungsform aus Granulaten unter Bildung einer Tablette mit länglicher Form verpresst, worin die Länge etwa 15,0 bis 18,0 mm beträgt, die Breite etwa 6,0 bis 9,0 mm beträgt und die Höhe etwa 3,5 bis 5,0 mm beträgt.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird eine Tablette bereitgestellt, die im wesentlichen scheibenförmig ist, wobei die Unter- und Oberseiten eine leicht konvexe Oberfläche aufweisen. Vorzugsweise hat die Tablette einen Durchmesser von etwa 8 bis 8,5 mm und eine Tiefe von etwa 3 bis 3,5 mm oder einen Durchmesser von etwa 16 mm und eine Tiefe von etwa 6 mm. Die Tabletten können ein Volumen von etwa 0,1 cm³ bis etwa 1 cm³, beispielsweise 0,1 cm³ bis etwa 0,45 cm³, beispielsweise 0,2 bis 0,3 cm³, beispielsweise etwa 0,125 cm³ oder 0,25 cm³ aufweisen.
Sie können ferner transparent, farblos oder gefärbt sein und auch so vermarktet werden, um dem Produkt ein individuelles Aussehen zu geben und sie sofort erkennbar zu machen. Die Verwendung von Farbstoffen kann zur Verbesserung des Aussehens wie auch zur Identifizierung der Zusammensetzungen dienen. Farbstoffe, die zur Verwendung in der Pharmazie typisch sind, umfassen Carotinoide, Eisenoxide und Chlorophyll.
Die folgenden Beispiele erläutern die oben beschriebene Erfindung, jedoch ist es nicht beabsichtigt, den Umfang der Erfindung auf irgendeine Weise zu beschränken. Formulierungsbeispiel 1: Filmbeschichtete Tabletten:

*) Entfernung während der Verarbeitung

Die filmbeschichtete Tablette wird beispielsweise folgendermaßen hergestellt:
Ein Gemisch aus Valsartan, mikrokristalliner Cellulose, Crospovidon, ein Teil des kolloidalen wasserfreien Silica/kolloidalen Siliciumdioxids/Aerosils 200, Siliciumdioxid und Magesiumstearat wird in einem Diffusionsmischer vorgemischt und dann durch eine Siebmühle gesiebt. Das entstehende Gemisch wird dann erneut in einem Diffusionsmischer vorgemischt, in einem Walzenverdichter verdichtet und dann durch eine Siebmühle gesiebt. Zum entstehenden Gemisch wird der Rest des kolloidalen wasserfreien Silica/kolloidalen Siliciumdioxids/Aerosils 200 gegeben und die schließliche Mischung wird in einem Diffusionsmischer hergestellt. Das gesamte Gemisch wird in einer Rotationstablettenmaschine verpresst und die Tabletten werden mit einem Film mittels Diolack Pale Red in einer perforierten Pfanne beschichtet. Formulierungsbeispiel 2: Filmbeschichtete Tabletten:
Die filmbeschichtete Tablette wird hergestellt, wie dies beispielsweise in Formulierungsbeispiel 1 beschrieben ist. Formulierungsbeispiel 3: Filmbeschichtete Tabletten:

*) Die Zusammensetzung des Opadry^® Brown OOF 16711 Farbstoffs wird unten angegeben
**) Entfernung während der Verarbeitung

^®

Die filmbeschichtete Tablette wird hergestellt, wie dies beispielsweise in Formulierungsbeispiel 1 beschrieben ist. Formulierungsbeispiel 4: Kapseln:
Die Tablette wird folgendermaßen hergestellt:
Granulierung/Trocknung:
Valsartan und mikrokristalline Cellulose werden in einem Wirbelschichtgranuliergerät mit einer Granulierungslösung sprühgranuliert, die aus Povidon und Natriumlaurylsulfat gelöst in gereinigtem Wasser besteht. Das erhaltene Granulat wird in einem Wirbelschichttrockner getrocknet.
Mahlen/Mischen:
Das getrocknete Granulat wird zusammen mit Crospovidon und Magnesiumstearat vermahlen. Die Masse wird dann in einem konischen Schneckenmischer für etwa 10 Minuten vermischt.
Verkapselung:
Die leeren Hartgelatinekapseln werden mit den vermischten Bulkgranula unter kontrollierten Temperatur- und Luftfeuchtigkeitsbedingungen gefüllt. Die gefüllten Kapseln werden entstaubt, visuell untersucht, gewichtskontrolliert und bis zur Qualitätssicherung unter Quarantäne gehalten. Formulierungsbeispiel 5: Kapseln:
Die Formulierung wird beispielsweise wie in Formulierungsbeispiel 4 beschrieben hergestellt. Formulierungsbeispiel 6: Hartgelatinekapsel:
Beispiele 7 bis 11:
Beispiel 12: Auflösung von filmbeschichteten Tabletten (FCT)
Die annehmbaren Auflösungskriterien sind Q = 75% in 30 Minuten (Paddelrührer 50 Upm, Phosphatpuffer pH 6,8).

Claims

Verwendung von Valsartan der Formel
oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung für die Behandlung von invasivem Lungenkrebs und invasivem Brustkrebs.