PT100631B - Antagonistas biciclicos de fibrinogenio, seu uso e composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

DA

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 100 631

REQUERENTE: SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION, norte-americana (Estado de Pennsylvania), com sede em One Franklin Plaza, Philadelphia, Pennsylvania 19101, Estados Unidos da América

EPÍGRAFE: Antagonistas bicíclicos de fibrinogãnio, seu uso e composições farmacêuticas que os contêm

INVENTORES:^{w 11 liam} Edward Bondinell, James Francis Callaham, William Francis Huffman, Richard McCul . loch Keenan, Thomas Wen-Fu Ku e Kenneth Allen Newlander

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883, ,

Estados Unidos da América em 28 de Junho de 1991 sob o l· ne 07/723 009 ' “ ' inpi moo ιη r f ira

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PATENTE N^a 100 631

Antagonistas bicíclicos de fibrinogénio, seu uso e composições farmacêuticas que os contêm¹

RESUMO

O presente invento refere-se a compostos possuindo a fórmula:

na qual

A¹ a A§ formam um anel acessível, substituído, de sete membros, que pode estar saturado ou não saturado, contendo opcionalmente até dois heteroátomos escolhidos de entre o grupo que consiste em O, S e N, em que S e N podem estar opcionalmente oxidados;

D¹ a D⁴ formam um anel acessível, substituído, de seis membros, contendo opcionalmente até dois átomos de azoto;

Ré pelo menos um substituinte escolhido de entre o grupo que consiste em R⁷, Q-alquilo C1-4, Q-alcenilo C1-4, Q-alquileno ^c2-4' Q-alcinilo C2_₄, Ar e Het, opcionalmente substituído com “0 ou R⁷:

R* é H, Q-alquilo Cj-.g, Q-oxoalquilo , Q-alcenilo C₂_₆ ou Q-alcinilo C₂_₄, cicloalquilo C₃_₆, Ar ou Het, opcionalmente substituído com um ou mais de R¹¹; ^r

Q é H, cicloalquilo C₃_₆, Het ou Ar;

R⁶ é W-(CR'2)q-Z-(CR'R¹⁰)r-U-(CR'₂)_s-V-;

R⁷ é -COR⁸, -COCR'2R⁹, -C(S)R⁸, -S(O)mOR', -S(O)_mNR'R, -PO(OR^Z), -PO(OR^Z)2, -BOR^Z2, -N0₂ e Tet;

R⁸ é -0R^z, -NR^ZR, -NR^zS02R^z, -NR^zOR^z, -0CR^z2C(0)0R^zouAA;

R⁹ é -0R^z, -OC(O)R^Z, -CN, -S(O)mR^z, -C(O)R^Z OU -CO2R^Z;

R¹⁰ é H, alquilo C·^^- ou -NR^ZR;

R¹¹ é H, halo,-0R, -CN, -NR^ZR,-N02, -CF3, -CF3S, R^ZRN-, -C02R^z, -CONR^z ₂, Q, Q-C(O)-, Q-alquÍloC-^θ-, Q-

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-2-alceniloC₂_g-, Q-alquiloxiC-j^.g-, Q-alquilC₁_g-CONR^/-, Q-alquilC₁_gCO₂-, Q-alquilC^.gCÍO)-, Q-alquilC₁_gS(O)_n-, Q-alquilC₁_g-SO₂NR^z

R' é H, alquilo C^g, cicloalquilC₃_₇-alquilo C₀_₄ ou Ar-alquilo C_Q_₄;

R é R' ou -C(O)R';

AA é um aminoácido com o grupo carboxilo opcionalmente protegido;

U e V estão ausentes ou são CO, CR^/2, S(0)n, O, NR', CR^/OR^/, CR'0RCR'2, COCR'₂, CONR', NR'CO, 0C(0), C(0)0, C(S)O, OC(S), C(S)NR^Z, NR'C(S), S(O)_nNR', NR'S(O)_n, N=N, NR'NR', CR'₂O, C=C ou CR'=CR', desde que U e V não estejam simultaneamente ausentes;

W é R'₂N-, R'₂NR'N-, R'₂NR'NCO-, R'₂NC(=NR')-,

R^/2NC(=NR^z)O-, R^/2NC(=NR^/)S-, R'₂NR'NC(=NR')-,

R'N=CR'NR'-

R'ONR'C(=NR')-, R'₂NCR'=N-,

z	* e	(CH2)t, Het, Ar ou cicloalquilo
m	* e	1	ou	2;
ri	é	0	a 3	• 9	....
P	A e	0	ou	1;	- . ---------
q	é	0	a 3	• · 9
r	é	0	a 2	·. 9
s	é	0	a 2	•	- -
t	é	1	ou	2;	ou .

seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

invento refere-se ainda ao seu uso na inibição da agregação das plaquetas e a composições farmacêuticas que os contêm.

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MEMÓRIA DESCRITIVA

Âmbito do Invento

Este invento refere-se a novos compostos bicíclicos, os quais inibem a agregação plaquetária, a composições farmacêuticas contendo os compostos, e a processos de utilização dos compostos.

Antecedentes do Invento

Acredita-se que a agregação plaquetária sej a primariamente mediada através do receptor de fibrinogénio ou complexo receptor θ' plaquetário GPIIb-IIIa, o qual é membro de uma família de receptores de adesão designados por integrinas. Verificou-se que, frequentemente, os ligandos naturais dos receptores de integrina são proteínas que contêm uma sequência Arg-Gly-Asp. O factor de von Willebrand e o fibrinogénio, que são considerados ligandos naturais do receptor GPIIb-IIIa, possuem uma sequência Arg-Gly-Asp (RGD, no código de letra única para aminoácidos) na sua estrutura primária. Funcionalmente, estas proteínas são capazes de ligar e reticular receptores GPIIb-IIIa em plaquetas adjacentes e, desse modo, originar a agregação de plaquetas.

A fibronectina, a vitronectina e a trombospondina são proteínas contendo RGD, as quais se demonstrou também se ligarem à GPIIb-IIIa. A fibronectina encontra-se no plasma e como uma proteína estrutural na matriz intracelular. A ligação entre as proteínas estruturais e a GPIIb-IIIa pode funcionar a fim de condicionar a adesão de plaquetas às paredes vasculares danificadas. “ - 1

Péptidos lineares e cíclicos que se ligam à vitronectina e contêm uma sequência RGD encontram-se descritos na WO 89/05150 (PCT US88/04403). A EP 0 275 748 descreve tetra- a hexapéptidos lineares e hexa- a octapéptidos cíclicos que se ligam ao receptor GPIIb-IIIa e inibem a agregação plaquetária. Outros péptidos lineares e cíclicos, cuja descrição é aqui incorporada por referência, encontram-se descritos na EP-A 0 341 915. No entanto, as estruturas semelhantes a péptidos dos referidos inibidorés

levantam muitas vezes problemas, tais como na distribuição da droga, estabilidade metabólica e selectividade. Inibidores do receptor de fibrinogénio, que não são construídos a partir de sequências de aminoácidos naturais, encontram-se descritos nas EP-A 0 372 486 e EP-A 0 381 033. A WO 92/07568 (PCT/US 91/08166) descreve antagonistas do receptor de fibrinogénio que mimetizam uma espira conformacional % na sequência RGD por formação de uma estrutura em anel de sete membros monocíclica. Persiste, no entante, a necessidade de novos antagonistas do receptor de fibrinogénio (por ex., inibidores da proteína GPIIb-IIIa) que apresentem efeitos potentes in vivo e in vitro e não possuam a O estrutura de suporte principal peptídica de sequências de aminoácidos.

presente invento descreve novos compostos bicíclicos, incluindo benzazepinas e benzodiazepinas, os quais são inibidores do receptor GPIIb-IIIa e inibem a agregação plaquetária. Certas 5-fenil-l,4-benzodiazepinàs são conhecidas como uma classe de drogas que afectam o sistema nervoso central, e têm sido utilizadas como ansiolíticos. Ver Sternbach, L.H., J. Med. Chem., 22, 2 (1979). Também foi descrito que certas 5-fenil-l,4-benzodiazepinas antagonizam os efeitos da colecistoquinina. Ver Friedinger, Med. Res. Rev., 9 , 271 (1989) i No entanto, nenhum dos referidos compostos bicíclicos foi descrito como possuindo actividade anti-plaquetária.

Sumário do Invento

Num aspecto, este invento refere-se a um composto bicíclico compreendendo um anel de seis membros substituído fundido com um anel de sete membros substituído, tal como descrito seguidamente como fórmula (I).

Este invento também se refere a uma composição farmacêutica para inibição da agregação plaquetária ou da formação do coágulo, a qual compreende um composto de fórmula (I) e um portador farmaceuticamente aceitável.

Este invento ainda se refere a um processo para inibição da

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agregação plaquetária num mamífero necessitado da mesma, o qual compreende a administração, internamente, de uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I).

Num outro aspecto, este invento proporciona um processo para inibição da re-oclusão de uma artéria ou veia num mamífero após terapia fibrinolítica, o qual compreende a administração, internamente, de uma quantidade eficaz de um agente fibrinolítico e de um composto de fórmula (I). Este invento também se refere a um processo para o tratamento de acidentes vasculares cerebrais, acidentes isquémicos transitórios, ou enfarte de miocárdio.

Descrição Detalhada do Invento

Este invento descreve novos compostos bicíclicos os quais inibem a agregação plaquetária. Os novos compostos bicíclicos compreendem um anel de sete membros fundido com um anel de seis membros aromático, e possuindo um substituinte contendo azoto no anel de seis membros e um substituinte alifático ou arilo, preferivelmente contendo uma porção ácida, no anel de sete membros. 0 anel de sete membros pode conter heteroátomos,. tais como azoto, oxigénio ou enxofre, e o anel de seis membros pode ser carbocíclico ou conter até dois átomos, de azoto. Acredita-se que o sistema de anéis 6-7 fundidos interaja favoravelmente com o receptor GPIIb-IIIa e oriente as cadeias laterais dos substituintes nos anéis de seis e sete membros de modo que também possam interagir favoravelmente com o receptor.

Embora sem pretender estabelecer ligação com qualquer mecanismo de acção específico, acredita-se que estes compostos inibam a ligação do fibrinogénio ao receptor de fibrinogénio ligado às plaquetas, GPIIb-IIIa, e possam interagir com outras proteínas de adesão por meio de antagonismo em relação a um local de ligação RGD putativo.

Os compostos deste invento são compostos de fórmula (I):

(segue fórmula)

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R⁶

(D na qual

A³· a A⁵ formam um anel acessível, substituído, de sete membros, que pode estar saturado ou não saturado, contendo opcionalmente até dois heteroátomos escolhidos de entre o grupo que consiste em 0, S e N, em que S e N podem estar opcionalmente oxidados;

D¹ a D⁴ formam um anel acessível, substituído, de seis membros, contendo opcionalmente até dois átomos de azoto;

R é pelo menos um substituinte escolhido de entre o grupo que consiste em R⁷, ou Q-alquilo C1-4, Q-alcenilo C1-4, Q-alquileno C2_4, Q-alcinilo C2_4, Ar e Het, opcionalmente substituído com =0 ou R⁷; ;

R* é H, Q-alquilo C^_g, Q-oxoalquilo Cj_g, Q-alcenilo C₂_g ou Q-alcinilo C₂_₄, cicloalquilo C₃_₆, Ar ou Het, opcionalmente substituído com um ou mais de R¹¹;

Q é H, cicloalquilo C₃_₆, Het ou Ar;

R⁶ é W-(CR'2)q-Z-(CR'R¹⁰)r-U-(CR'₂)_s-V-;

O R⁷ é -COR⁸, -COCR'2R⁹, -C(S)R⁸,—S(O)mOR', -S(O)_mNR'R,

-PO(OR'), -PO(OR')₂, -BOR'₂, -N0₂ e Tet; . ç

R⁸ é OR', -NR'R”, -NR'SO₂R', -NR'OR', -OCR^0(0)OR' ou AA;

R⁹ é -OR', -OC(O)R', -CN, -S(O)_mR', -C(O)R' ou -CO₂R';

R¹⁰ é H, alquilo C1-4 ou -NR'R; R¹¹ é H, halo, -OR, -CN, -NR'R, -N02, -CF₃,-CF3S, R'RN-, -CÒ₂R', -CONR'₂, Q, Q-C(O)-, Q-alquiloCj_₆-, Q-alcenil°C2-6”' Q-alquiloxiC^_g-, ..Q-alquilC₁’_g-CONR·'-, Q-alquilCj.gC0₂-, Q-alquilC₁«gC(O)-,-TQ-alquilC₁_gS(D)_n-,- .Q-alquilCx.g-, -SO₂NR'-;

R' é H, alquilo C-^g, cicloalquilC₃_₇-alquilo C₀_₄ ou Ar-alquilo C₀_₄;

R é R' ou -C(0)R';

AA é um aminoácido com o grupo carboxilo opcionalmente protegido; _ —

U e V estão ausentes ou são CO, CR'₂, S(0)_n, 0, NR' ,

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-7CROR', CR'ORCR'₂, COCR'₂, CONR', NR^ZCO, OC(O) , C(O)O, C(S)O, OC(S), C(S)NR^Z, NR^ZC(S), S(O)nNR^z, NR^zS(O)n, N=N, NR^ZNR^Z, CR^Z ₂O, C=C ou CR^Z=CR^Z, desde que U e V não estejam simultaneamente ausentes;

W é r^z2n-, R^z2NR^zN-, R^z2NR^zNCO-, R^z2NC(=NR^z)-, R ^z 2NC(=NR·)-0-, R'2NC(=NR')S-, R^z 2NR^z NC(=NR ^z)-,

R^ZONR^ZC(=NR^Z)-, R^z2NCR^z=N-, R^zN=CR^zNR^z- OU Z é (CH2)_t, Het, Ar ou cicloalquilo C₃_₇ m é 1 ou 2;

n é 0 a 3;

p é 0 ou 1;

q é 0 a 3;

ré0a2;

s é 0 a 2;

t é 1 ou 2; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Também se encontram incluídos neste invento sais de adição de ácido, complexos ou pró-drogas farmaceuticamente aceitáveis dos compostos deste invento. São considerados pró-drogas quaisquer portadores covalentemente ligados que libertem a droga activa original, de acordo.com a fórmula (II in vivo.

Nos casos em que os compostos deste invento podem possuir um ou mais centros quirais, excepto se especificado doutro modo, este invento inclui cada um dos compostos não racémicos únicos que podem ser sintetizados e resolvidos por ±écnicas convencionais. 0 significado de qualquer substituinte em qualquer uma das ocorrências é independente do seu significado ou do significado de qualquer outro substituinte, em qualquer outra ocorrência, excepto se especificado doutro modo.

Com referência à fórmula-(I), adequadamente,

A¹ é CRV, CR¹, NR¹, N, 0 OU S(0)_t;

A² é CR²R²', CR², CR², NR²;

A³ é CR³R³', CR³, CR³, NR³, N,0 ou S(0)_t;

A⁴ é CR⁴R⁴', CR⁴, NR⁴, ou N;

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-8A⁵ é CR⁵R⁵', CR⁵z NR⁵, N, O OU S(O)t;

D¹-D⁴ São CR¹¹, CR⁶ OU N;

R é (CR¹⁴R¹⁵)U-(T)V-(CR¹⁴R¹⁵)W-R⁷ OU =CR'-(T)_V-

(CR¹⁴R¹⁵)_w-R⁷ em que T é CR¹⁴R¹⁵-CR¹⁴R¹⁵, CR'=CR' ou C=C, e R¹⁴ e R¹⁵ são R', OR', NR'Rⁿ ou juntos são =0, desde que R¹⁴ e R¹⁵ não sejam simultaneamente OR' ou NR'R' quando ligados ao mesmo carbono;

R^x-R⁵ e R^-R⁵' são R*, R ou =0;

R⁶ é W-(CR'2)q-Z-(CR'R¹¹)r-U-(CR'₂)_s; t é 0 a 2; e

u, v e w são 0 ou 1.

Mais adequadamente,

A1 é CR^1', CR1, NR1, N, 0 OU S;

A2 é CR2R2', NR2 ou CR2;

A3 é CR3R3';

A4 é CR4R4', CR4, NR4, OU N=;

A5 é CR5R5', CR5, NR5, N, 0;

D1 e D4 são CH;

D² ou D³ é CR⁶;

R² ou R⁴ são R;

R³,R³' e R⁵,R⁵'são =0 ou R*,H; e

R⁶ é W-(CR'2)q-Z-(CR'R¹¹)r-U.

Adequadamente, (CR'R¹⁰)_r-U-(CR'₂)_S-Vé CONR', NR'CO, CH(NR'R)CONH, CH₂CONH, CONR'CH₂, CONHCH₂, CH₂CHOH, CHOHCH₂, conhchr'ch₂, ch₂nhco₂ch₂, CH₂CH₂NHC02, conhch₂co, conhch₂choh, CH=CHCONH, NHCO₂CH=CH, SO₂NR'CHR'CH₂ ou CH=CH. _r Compostos representativos deste invento são dados por cada uma das fórmulas (II)— (VIII):

(IV)

Preferivelmente, A¹ é CH₂/ NH ou S; A² é CR² ou CR²R^2Z; A³ é CR³R^3/; A⁴ é CR⁴R⁴' ou NR⁴; e A⁵ é CR⁵R⁵'.

Preferivelmente, (CK^zR¹⁰)r-U-(CR^z2)_s é CH₂NHCO, CH(NR'R)CONH, CONH OU NHCO.

Preferivelmente, Z é fenilo ou (CH₂)^..

Preferivelmente, W é RR'N-,RR'NC(=NH) ou RR'NC(=NR')NR^Z-, em que R^z e R são preferivelmente H.

NR'CO

O mais preferivelmente,-

CONR¹

NR’R

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-10Preferivelmente, R¹ e/ou R¹' são H.

Preferivelmente, R² é R⁷, -CH2R⁷ ou -CH2CH₂R⁷. Mais preferivelmente, R² é CH2-R⁷. Muito preferivelmente, R⁷ é CO2H.

Preferivelmente, R³ e R³' são =0.

Preferivelmente, R⁴ é H, alquilC₁_₄-Ar ou -CH2CH₂CO₂H;

Preferivelmente, R⁵ e R^5/ são H.

Num grupo de compostos preferidos, R¹ é H; R² é CH2CO2H; R³,R³' é =0 ou.H,H; R⁴ é alquilC1_₄-Ar; Z é fenilo ou (CH₂)_t; W é H₂N-, H₂NC(=NH)- ou H₂NC(=NH)NH-; e (CR'R¹⁰)_r-U-(CR'₂)_s-V é CH₂NHCO, CH(NR'R)C0NH, CONH OU NHCO.

Concretizações específicas deste invento são:

7- [ [- [ 4- (amino-iminometil) fenil]carbonil] -amino]-2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina;

trifluoroacetato de 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil] -amino]-2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil) -4,5-di-hidro-3H-l,4-benzodiazepina; . . -------

7-[ [ [4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]-amino]-3-oxo-4-(2-feniletiT)-4,5-di-hidro-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo;

ácido (R,S)-7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-ΟΧΟ-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

7-[ [ [4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]-amino]-3-oxo-4-(2-feniletil)-4,5-di-hidro-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de ciclo-hexilo;1 ácido 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético; .“ ácido 7-[(N^ametil-N^0!acetil-arginil)amino]-l,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

ácido (R,S)-4-fenetil-7-[(4-amidino-fenil)carbonil]amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5-ona-2-acético;

ácido (R,S)-l-acetil-4-fenetil-7-carbobenziloxi-amino-

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-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepin-5-ona-2-acético;

ácido (R,s)-7-[ [ [4-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil] -4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

ácido (R,S)-7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]~ -l-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

di-hidrocloreto do ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]-carbonil-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-1,4-benzodiazepina-2-acético;

trifluoroacetato de ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-1,4-benzodiazepina-2-acético;

ácido 7-[[ [4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-1,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-4-propanóico;

ácido (R,S)—[7-[ [ 4 — (amino-iminometil)fenil]amino]carbonil]-l-metil-4-(2-fenil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acético;

ácido (R,S)-[7-[ [ [3-(aminometil)fenil]metil]amino]carbonil] -4-(2-f eniletil )-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético; _ ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]-amino]carbonil ] -tetra-hidro-l-benzazepina-2-acético ;

ácido (R,S)-[7-[[4-(amino-iminometil)benzoil]amino]-2,3,4,

5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-l,4-benzotiazepina-2-acéti- co; 7 ácido (R,S)-7-[ [ [4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,4-benzoxazepina-2-acético;

ácido (R,S)-8-[[4-(amino-iminometilJbenzoil]amino]-2,3,4,5tetra-hidro-3-oxo-2-(2-feniletil)-lH-2-benzazepina-4-acético; e ácido (R,S)-8-[[4-(amino-iminometil)benzoilJamino]-2,3-di-hidro-3-oxo-2-(2-feniletil)-lH-2-benzazepina-4-acético.

Nã descrição anterior da fórmula (I), W representa um grupo contendo azoto, o qual é capaz de. formar uma ligação de

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hidrogénio. R⁷ representa um grupo com um par de electrões de não-ligação o qual é capaz de formar uma ligação de hidrogénio ou de quelação com um metal. Preferivelmente R⁷ é ácido. Preferivelmente, existirão 11-16 ligações covalentes, intervenientes por meio do trajecto intramolecular mais curto, entre o grupo R⁷ e W para espaçamento óptimo entre estes grupos., e as porções T, U, V e Z, e os espaçadores de alquilo representados por q, r, s, u, v e w, são escolhidos concordantemente.

As abreviaturas e os símbolos habitualmente utilizados nas artes dos péptidos e da química são aqui utilizados para descrever os compostos deste invento. Em geral, as abreviaturas dos aminoácidos seguem a IUPAC-IUB Joint Comission on Biochemical Nomenclature tal como descrita em Eur, J. Biochem., 158. 9 (1984).

Arg refere-se a arginina, MeArg refere-se a N^a-metil-arginina, HArg refere-se a homo-arginina, NArg refere-se a norarginina, (Me₂)Arg refere-se a N',N-dimetil arginina, (Et₂)Arg refere-se a N',N-dietil arginina, e Orn refere-se a ornitina. Estes radicais são adequados para o substituinte R⁴. Os derivados substituídos em N^a destes aminoácidos também são úteis neste invento. Os processos representativos para a preparação dos derivados substituídos em α encontram-se descritos na Patente dos E.U.A. N^B. 4 687 758; Cheung e colab., Can. J. Chem., 55, 906 (1977); Freidinger e colab., J. Orq. Chem., 48, 77(1982); e Shuman e colab. , PEPTIDES: PROCEEDINGS OF THE 7TH AMERICAN PEPTIDE SYMPOSIUM. Rich, D., Gross, E., Ed. Pierce Chemical Co., Rockford, 111., 617 (1981), os quais são aqui incorporados para referência.

AlquiloC₁_₄ tal como aqui aplicado inclui metilo, etilo, npropilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo e t-butilo. Alquilo-^ci-6 inclui adicionalmente pentilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo e hexilo, e os seus isómeros alifáticos simples. Alquil°Co_4 e alquiloC₀_₆ indicam adicionalmente que não necessita encontrar-se presente qualquer grupo alquilo (por ex., que se

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-13encontra presente uma ligação covalente).

OxoalquiloC₁_₄ refere-se a um grupo alquilo de até quatro carbonos no qual um átomo de carbono se encontra duplamente ligado a um átomo de oxigénio para formar um carbonilo. São representativos os grupos formilo, acetilo, 1-propanal, 2-propanona, 3-propanal, 2-butanona, 3-butanona, 1- e 4-butanal substituídos. OxoalquiloC₁_₆ inclui adicionalmente os análogos e isómeros mais elevados de cinco e seis carbonos substituídos com um grupo carbonilo.

Ar, ou arilo, tal como aqui aplicado, significa fenilo ou naftilo, ou fenilo ou naftilo substituído com uma a três porções R¹¹. Em particular, R¹¹ pode ser alquiloC₁_₄, alcoxiC₁_₄, alquiltioC-|__₄, trifluoroalquilo, OH, Cl, Br ou I .

Het ou heteroarilo, indica um anel aromático de cinco ou seis membros opcionalmente substituído, ou um anel aromático de nove ou dez membros contendo um a três heteroátomos escolhidos de entre o grupo constituído por azoto, oxigénio e enxofre, os quais são estáveis e disponíveis por síntese química, convencional. Heterociclos ilustrativos são imidazole, benzimidazole, pirrol, indol, piridinilo, quinolina, benzofurilo, furilo, benzopiranilo, benzotiofeno, ou tiòfeno. Qualquer?combinação acessível de até três substituintes, tal como-escolhidos a partir de R¹¹, no anel Het, que seja acessível através de síntese química e que seja estável, encontra-se dentro do âmbito deste invento.

CicloalquiloC₃_₇ refere-se a um sistema carbocíclico opcionálmente substituído de três a sete átomos de carbono, o qual pode conter até duas ligações- carbono-carbono não saturadas. Exemplos típicos de cicloalquiloC₃..₇ incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclo-hexilo, ciclo-hexenilo e ciclo-heptilo. Qualquer combinação de até três substituintes, tal como escolhidos a partir de R¹¹, no anel cicloalquilo, que seja acessível através de síntese química e que seja estável, encontra-se dentro do âmbito deste invento.

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SB CASE P50020—1

Um anel acessível, substituído, de sete membros, tal como aqui referido, é qualquer anel de sete membros saturado ou não saturado que (i) possua até cinco substituintes, tais como R ou R*, no qual os substituintes podem encontrar-se presentes em qualquer átomo ou heteroátomo que resulte numa estrutura estável, e (ii) contenha até dois heteroátomos seleccionados de entre o grupo que consiste em N, 0 e S, em que S e O podem estar opcionalmente oxidados, e (iii) seja estável e possa ser sintetizado por qualquer perito nas artes da química, numa forma fundida por meio de dois átomos de carbono do anel adjacentes, com um anel fenilo, piridilo, pirazinilo, piridazinilo ou pirimidinilo. Anéis acessíveis de sete membros típicos são os anéis comuns saturados e não saturados de ciclo-heptano, tiepina, oxapina, azepina, diazepina, tiazepina, oxazepina, diozepina, oxatiepina e ditiepina.

Um anel acessível, substituí do, de seis membros, tal como aqui referido, é um anel de seis membros não saturado (por ex., aromático), que (i) possua um a três substituintes, tal como escolhidos de entre R⁶ e R¹¹, (ii) opciónalmente contenha até dois azotos, (iii) se encontre fundido por meio de dois átomos de carbono adjacentes com um anel acessível, substituído, de sete membros, e (iv) seja estável e possa ser preparado por qualquer perito nas artes da química. Anéis acessíveis de seis membros típicos são anéis fenilo, piridilo, pirazinilo, piridazinilo ou pirimidinilo.- Anéis bicíclicos representativos formados pela combinação de anéis acessíveis de seis e sete membros são: compostos de 1,2-benzo-l-ciclo-hepteno, 1,2-benzo-1,3-ciclo-heptádieno e l,2-benzo-l,4-ciclo-heptadieno; compostos de 1-, 2- e 3-benzazepina, di-hidróbenzazepina e tetra-hidrobenzazepina; compostos de 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 2,3- e 2,4benzodiazepina, di-hidrobenzodiazepina e tetra-hidrobenzodiazepina; compostos de 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 2/1-, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 3,1, 3,2- e 4,1-benzoxazepina, di-hidrobenzoxazepina e tetrabenzoxazépina; compostos de 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 2,1-,

2,3-, 2,4-, 2,5-, 3,1-, 3,2- e 4,1-benzotiazepina, di-hidrotiazepina e tetra-hidrotiazepina; e outros compostos de piridazepina, pirazazepina, piridazinazepina, pirimidinazepina, mono- e

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SB CASE P50020-1

di-oxo-benzotiazepina, benzodioxepina e benzoxatiepina estáveis, saturados e não saturados, semelhantes. Fenilo é um anel acessível de seis membros preferido e di- ou tetra-hidroazepina, diazepina, tiazepina e oxazepina são anéis acessíveis de sete membros preferidos.

Deverá compreender-se que, em relação a A-^-A⁵, CR¹R^1,« -CR⁵R^5# e NR-^-NR⁵ são átomos de carbono sp³ e azoto saturados respectivamente, os quais se encontram individualmente ligados a átomos do anel adj acentes, excepto que, quando R-L/R¹', R²/R² *, r³/r³', r⁴/r4' _e r5/_R5' _rep_reSentam um constituinte exo dupla mente ligado ao anel (por ex., tal como =0 ou uma cadeia lateral alquileno), CR^-R¹'-CR⁵R⁵' também pode representar um átomo de carbono sp². Deverá ainda compreender-se que, em relação a A¹A⁵, CR-L-CR⁵ e N representam um átomo de carbono sp² ou azoto não saturado, o qual pode estar conectado por uma ligação dupla endocíclica a um átomo adjacente no anel, desde que o referido arranjo resulte na criação dum composto estável.

tal como aqui utilizado indica um heterociclo de azoto, o qual pode ser um anel monocíclico de cinco ou seis membros, estável, saturado ou não saturado, contendo até três átomos de azoto ou contendo um átomo de azoto e um heteroátomo escolhido de entre oxigénio e enxofre, e o qual pode estar substituído em qualquer átomo que origine uma estrutura estável representativos são: imidazole, imidazolina, imidazolidina, pirazole, pirazolina, pirazolidina, triazole, oxazole, isoxazole, tiazole, isotiazole, piperidina, piperazina, piridina, tetra-hidropiridina, pirazina, piridazina, pirimidina, triazina, morfoliná, oxazina e isoxazina.

AA tal como aqui referido é um aminoácido com o seu grupo carboxilo opcionalmente protegido, em que o aminoácido pode ser qualquer um dos aminoácidos naturais ou penicilamina. o grupo carboxilo não protegido é um grupo ácido carboxílico livre.

Grupos protectores para o carboxilo são ésteres óu amidas, os quais são formados, por exemplo, guando o OH do grupo carboxi é substituído por R⁸.

ΊΑ 119

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C(0) indica um carbono duplamente ligado a oxigénio (por ex ., carbonilo), C(S) indica um carbono duplamente ligado a enxofre (por ex., tiocarbonilo).

t-Bu refere-se ao radical butilo terciário, Boc refere-se ao radical t-butiloxicarbonilo, Fmoc refere-se ao radical fluorenilmetoxicarbonilo, Ph refere-se ao radical fenilo, Cbz refere-se ao radical o-bromobenziloxicarbonilo, Clz refere-se ao radical o-clorobenziloxicarbonilo, Bzl refere-se ao radical benzilo, 4-MBzl refere-se ao radical 4-metilbenzilo, Me refere-se a metilo, Et refere-se a etilo, Ac refere-se a acetilo, Alk refere-se a alquiloC₁_₄, Nph refere-se a 1- ou 2-naftilo e cHex refere-se a ciclo-hexilo. MeArg é N^a-metil arginina.

.DCC refere-se a diciclo-hexilcarbodiimida, DMAP refere-se a dimetilaminopiridina, DIEA refere-se a diisopropiletilamina, EDC refere-se a N-etil-N'(dimetilaminopropil)-carbodiimidã, HOBt refere-se a 1-hidroxibenzotriazole, THF refere-se a tetra-hidrofurano, DMF refere-se a dimetilformamida, PPA refere-se a ani. drido cíclico do ácido 1-propanofosfónico, DPPA refere-se a azida de difenilfosforilo, BOP refere-se a hexafluorofosfato de benzotriazol-l-iloxitris(dimetilamino)fosfónio, HF refere-se a ácido fluorídrico, TFA refere-se a ácido trifluoroacético, PCC refere-se a clorocromato de piridínio.

Os compostos deste invento, nos quais dois de entre A¹ a A$ são azoto, são benzodiazepinas e são preparados pelos processos gerais ilustrados nos Esquemas 1-6. Processos representativos para a preparação de benzodiazepinas são bem conhecidos na arte (por ex. Hynes, e colab., J. Het. Chem., 1988, 25, 1173; Muller, e colab., Helv, Chim. Acta., 1982. 65, 2118; Mori, e colab., Heterocvcles. 1981, 16, 1491). Nos Esquemas, R^x-R⁷ ou um. seu precursor adequado, em que todos os grupos funcionais estão protegidos tal como é conhecido na arte.

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-17ESOUEMA 1

CO2CH3 h₂nH_r2.

DMSO/TEA

H₂, PcVC (Boc)₂0 ----►

NaOCH₃

H₂,Raney-Ni

TFA

R⁶“-OH

------->

HOBT, EDC

D1EA.DMF

ex. R^g = p-(Cbz-amidino)benzoilo

------ β

R = p-(amidino)benzoilamino

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-18ESOUEMA 2

R⁴' = CH₂CH2-Ph

R¹¹=H

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-19ESOUEMA 3

1) NaCNBH₃

CHO β-Ala-OcHex

2) acoplar

Boc-NHCHR²CO2H

AyR²

NH-t-Boc 1) TF A

2) DMSO DIEA

ex. X = CI . ~

R² = H, CH₃₁ CH₂Ph

R⁶ = Boc-Arg(Tos)-OH, Boc-MeArg(Tos)OH, ácido p-(Cbz-amidino)benzõico

R⁶ = Arg-NH, MeArg-NH, p-(amidino)benzoil-NH

-20ESOUEMA 4

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SB CASE P50020-1

CO₂H h₂n-<_r2.

DMSO ,TEA

H₂, Pd/C

----------->.

Cbz-CI

H₂, Raney-Ni NaOCFb, (Boc)₂O

NH-Boc
Cbz-HN^^te/	DCC
\ T CO2H	-----►
N-X 2..	EtSH
H R2

	NH-Boc	-	NH-Boc |
Cbz-HN^^s,	| COSEt	Et3SiH Cbz-HN^^s.	Γ PH0
	- ^z
	H R2	n-X 2. H R2

1) TFA

CHjOk —---->

2) NaCNBH₃

(Boc)20 Cbz-HN^s	.z^N-Boc	H2 , PcVC
	A )
	N<r2” H R

1) R⁶'-OH “ acoplar ⁷¹ - —-2) desbloquear ex. R^= 0Η₂0θ20Η₃ R^{* 2}=CH₂CO₂H

R⁶ = p-(Cbz-amidino) benzoilo

R⁶ = p-(amidino)benzoilamino

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SB CASE P50020-1

-21ESOUEMA 5

CO2CH3 —CO2CH3

1) H₂,Pd/C —,---->

2) TFA

1) TFA

-

2) acoplar

R⁶'-NH2

1) TFA, H₂, Pd/C

---

2) NaOH

R⁴’=CH₂CH₂Ph

R⁶ = p-(Cbz-amidino) benzilo

R6 = p- (amidinobenzil) aminocarbonilo

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SB CASE P50020-1

-22ESQUEMA 6

CbzHN

1) TF A

-

2) CH₃OH,A

1) CH2N2

-

2) (Boc)₂O)

CO2CH3

NH-Boc )H₂, Pd/C

-

2) CbzCI, TEA

3) NaOH

R-NH^^R⁷· ^CbzH,J

---------► acoplar

NHBoc

CbzHN

1) H₂, PcVC

------►

2) R⁶'-OH acoplar

-23Ί4 119

SB CASE P50020-1

ESQUEMA 7

NH₂-OH

PCI5

ex. R⁶' = p-(Cbz-amidino)benzoilo

- R⁶ = p-amidinobenzoilamino

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SB CASE P50020-1

1) Ph-CH2CH2-NH2	Bocs .,,R4”
2) NaBH4	N
3) BH3 02Ns
4) (Boc)2O	ζΧ
5) MnO2	CHO

--------------*

ZnCI/TEA

ex. R⁴' = CH₂CH₂-Ph

R⁶ = p-(Cbz-amidino)benzoilo

- R =p-araidinobenzoilamino

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SB CASE P50020-1

-25ESOUEMA 9

O Esquema 1 proporciona um processo para a preparação de compostos nos quais X³- é H e X² é =0. Geralmente a síntese inicia-se com um 5-nitro-2-halo-benzonitrilo. A condensação com uma amina de fórmula H2NCHR²CO2R^/ (em-que R' indica um grupo protector para o carboxi) introduz o substituinte R². A redução selectiva e protecção do grupo nitro, tal como com hidrogenação sobre um catalisador de paládio em carbono, proporciona a amina aromática correspondente. A redução do grupo ciano, tal como com níquel de Raney, na presença duma base, tal como metóxido de sódio, induz uma ciclização intramolecular para formar o sistema do anel 1,4-benzazepina. A desprotecção do grupo amino aromático, seguida do acoplamento com um ácido apropriado, tal como R⁴/-OH, origina o produto da 3-oxo-l,2,4,5-tetra-hidro-3H-

1,4-benzazepina Substituída básica. Os grupos protectores, tais

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como para os grupos amino ou carboxilo, podem ser selectivamente removidos por processos conhecidos na arte. Uma 3-oxo-4,5-di-hidro-3H-l,4-benzazepina pode ser preparada por oxidação suave, tal como por passagem de uma corrente de ar através duma solução do composto ou por tratamento da solução com dióxido de manganês. Do tratamento dos referidos compostos de 7-amino-l,4benzodiazepina com uma base pode resultar descarboxilação.

Esquema 2 proporciona um processo alternativo para a preparação de compostos nos quais R³ e R^3# são =0. Geralmente a preparação inicia-se com um halo-benzaldeído apropriadamente substituído com nitro, tal como 2-cloro-5-nitro-benzaldeído ou 2-cloro-3-nitro-benzaldeído. A aminação redutiva com uma amina substituída, R⁴-NH2, introduz o substituinte R^4/. A acilacão/ /acoplamento da amina com um aminoácido protegido, adequadamente substituído, tal como Boc-NHCHR²”co2H, é utilizada para introduzir o substituinte R² na molécula. A desprotecção do grupo amino do aminoácido, tal como por tratamento com ácido no caso dum grupo protector Boc, origina um grupo amino nucleofílico. Após aquecimento na presença de uma base, o grupo amino livre pode ser induzido a sofrer uma ciclização intramolecular por deslocamento do grupo halo do núcleo nitro-fenilo, e desse modo Ό formar a estrutura do anel 1,4-benzodiazepinilo. A redução do grupo nitro aromático numa amina, tal como por hidrogenação sobre um catalisador adequado, a acilação/acoplamento da anilino amina num ácido carboxílico àdequadamente protegido, R^4/-OH, ou em ácido carboxílico activado, e subsequente remoção de todos os grupos protectores, completa a preparação. Tal como anteriormente descrito, a oxidação suave proporciona um composto com o núcleo 3H-4,5-di-hidro-l,4-benzazepina.

Esquema 3 é ilustrativo dum composto no qual R⁴ é um ácido 3-propanóico, e a preparação decorre duma forma no geral análoga à do Esquema 2.

Os compostos nos quais R³R^3/ e R⁵R^5/ são H, podem ser preparados de acordo com o Esquema 4. No sistema do anel 1,3-benzodiazepina, u-(CR'₂)-gV-, a é preferivelmente NHCO quando R⁶ se

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encontra na posição 7; e CONH quando R⁶ se encontra na posição

8.

Os reagentes de acoplamento tal como aqui utilizados assinalam reagentes que podem ser utilizados para formar ligações peptídicas. Os processos de acoplamento típicos empregam carbodiimidas, anidridos activados e ésteres e haletos de acilo. Reagentes típicos são EDC, DCC, DPPA, PPA, reagente BOP, HOBt, N-hidroxi-succinimida e cloreto de oxalilo.

Os processos de acoplamento para formação de ligações peptídicas são na generalidade bem conhecidos na arte. Os processos de síntese peptídica descritos na generalidade por Bodansky e colab., THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS, Springer-Verlag, Berlin, 1984, Alie colab., em J. Med. Chem.. 29, 984 (1986) e J. Med. Chem., 30, 2291 (1987) são no geral ilustrativos da técnica e são aqui incorporados por referência.

A síntese em solução para a formação de ligações amida ou peptídicas é consumada utilizando processos convencionais utilizados para a formação de ligações amida. Tipicamente, o fragmento H-Q-Y é acoplado, por meio do seu grupo amino ou hidroxilo livre, a um Asp da cadeia lateral apropriadamente .protegido utilizando um agente de acoplamento de carbodiimida adequado, tal como Ν,Ν'-diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), opcionalmente na presença dum catalisador, tal como 1-hidroxibenzotriazolo (HOBt) e dimetilaminopiridina (DMAP). Outros processos, tal como a formação de ésteres, anidridos ou haletos de ácido activados, do carboxilo livre de um aminoácido protegido com Boc, e a subsequente reacção com a amina livre dum aminoácido protegido, opcionalmente na presença duma base, também são adequados. Por exemplo, um aminoácido protegido com Boc é tratado num solvente anidro, tal como diclorometano ou tetra-hidrofurano (THF), na presença duma base, tal .como N-metilmorfolina, DMAP ou uma trialquilamina, com cloroformato de isobutilo para formar o anidrido activado”, o qual reage subsequentemente com a amina livre dum segundo aminoácido ou péptido protegido.

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SB CASE P50020-1

Os grupos funcionais reactivos das cadeias laterais de cada fragmento sintético, aminoácido ou péptido, são adequadamente protegidos tal como conhecido na arte. Grupos protectores adequados encontram-se descritos em Greene, PROTECTIVE GROUPS IN

ORGANIC CHEMISTRY, John Wiley and Sons, New York, 1981. Por exemplo, o grupo Boc, Cbz, ftaloíl ou Fmoc pode ser utilizado para a protecção dum grupo amino ou amidino. 0 grupo Boc é geralmente preferido para a protecção dum grupo α-amino. Um éster de benzilo t-Bu ou cHex pode ser utilizado para a protecção do carboxilo da cadeia lateral, tal como para Asp ou Glu. Um grupo benzilo ou um grupo benzilo adequadamente substituído é utilizado para proteger o grupo mercapto ou o grupo hidroxilo. 0 grupo tosilo pode ser utilizado para a protecção do grupo imidazolilo, e o grupo tosilo ou nitro para a protecção do grupo guanidino. Um grupo carbobenziloxi adequadamente substituído ou um grupo benzilo também pode ser utilizado para o grupo hidroxilo ou o grupo amino. A substituição adequada dos grupos protectores carbobenziloxi ou benzilo é uma substituição orto e/ou para com cloro, bromo, nitro ou metilo e é utilizada para modificar a reactividade do grupo protector. Excepto para ó grupo Boc, os grupos protectores para a porção amino são, muito convenientemente, aqueles que não são removidos por um tratamento ácido suave. Estes grupos protectores são removidos por processos tais como hidrogenação catalítica, sódio em amoníaco líquido ou tratamento com HF, tal como é conhecidona arte. :

A modificação dos grupos amino é efectuada por alquilação, sulfonilação, cianação ou acilação, tal como é geralmente conhecido na arte. ' .Os sais de adição de ácido dos péptidos são preparados duma forma padrão, num solvente adequado, a partir do composto de origem e dum excesso dum ácido, tal como clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, maleico, succínico ou metanossulfónico. A formado sal acetato é éspecialmente útil. Alguns dos compostos formam sais internos ou zwiteriões, os quais podem ser aceitáveis. Os sais catiónicos são preparados :por tratamento do composto de origem comum excesso dum reagente alcalino, tal

-2974 119

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-29como um hidróxido, carbonato ou alcóxido, contendo o catião apropriado; ou com uma amina orgânica apropriada. Catiões, tais como Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ e NH₄ ⁺, são exemplos específicos de catiões presentes em sais farmaceuticamente aceitáveis.

Este invento proporciona uma composição farmacêutica, a qual compreende um composto de acordo com a fórmula (I) e um portador farmacêuticamente aceitável. Consequentemente, os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados no fabrico dum medicamento. Composições farmacêuticas dos compostos de fórmula (I), preparados tal como aqui anteriormente descrito, podem ser formuladas como soluções ou pós liofilizados para administração parentérica. Os pós podem ser reconstituídos por adição dum diluente adequado ou outro portador farmacêuticamente aceitável, antes da utilização. A formulação líquida pode ser uma solução aquosa isotónica, tamponada. Exemplos de diluentes adequados são solução salina isotónica normal, dextrose a 5% em água padrão ou solução de acetato de sódioou amónio tamponada. A referida formulação é especialmente adequada para administração parentérica, mas também pode ser utilizada para administração oral ou colocada num nebulizador ou inalador doseável para insuflação. Pode ser desejável a adição de excipientes, tais como polivinilpirrolidona, gelatina, hidroxi, celulose, acácia, polietilenoglicol, manitol, cloreto de sódio ou citrato de sódio.

Alternativamente, estes péptidos podem ser formulados em cápsulas, comprimidos ou preparados numa emulsão ou xarope para administração oral. Portadores sólidos ou líquidos farmacêuticamente aceitáveis podem ser adicionados para potenciar ou estabilizar a composição, ou para facilitar a preparação da composição. Portadores sólidos incluem amido, lactose, sulfato de cálcio di-hidrato, terra ãlba, estearato de magnésio ou ácido esteárico, talco, pectina, acácia, agar ou gelatina. Portadores líquidos incluem xarope, óleo de amendoim, azeite, solução salina e água. 0 portador também pode incluir um material de libertação sustida, tal como mono-estearato.de glicerilo ou di-estearato de glicerilo, só ou com uma cera. A quantidade de portador sólido varia mas, preferivelmente, situar-se-à entre cerca

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-30de 20 mg e cerca de 1 g por unidade de dosagem. As preparações farmacêuticas são preparadas de acordo com as técnicas de farmácia convencionais envolvendo trituração, mistura, granulação e compressão, quando necessária, para as formas em comprimido; ou trituração, mistura e enchimento para as formas em cápsulas de gelatina dura. Quando é utilizado um portador líquido, a preparação encontra-se sob a forma dum xarope, elixir, emulsão ou duma suspensão aquosa ou não aquosa. A referida formulação líquida pode ser administrada directamente p.o. ou colocada dentro de cápsulas de gelatina mole.

Para administração rectal, os péptidos deste invento também podem ser combinados com excipientes, tais como manteiga de cacau, glicerina, gelatina ou polietilenoglicóis, e moldados num supositório.

Este invento também proporciona um processo para inibição da agregação plaquetária e formação dé coágulo num mamífero, especialmente um humano, o qual compreende a administração interna dum péptido de fórmula (I) e dum portador farmacêuticamente aceitável. Indicações para a referida terapia incluem enfarte agudo de miocárdio (EAM), trombose venosa profunda, embolismo pulmonar, aneurisma dissecante,acidente isquémico transitório (AIT), acidente vascular cerebral e outras desordens relacionadas com enfarte, e angina instável. Estados crónicos ou agudos de hiper-agregabilidade, tais como coagulação intravascular disseminada (CID), septicémia, choque cirúrgico ou infeccioso, trauma pés-operatório ou pós-parto, cirurgia de derivação cardiopulmonar , transfusão de sangue incompatível, placenta abruptio, púrpura trombocitopénica trombótica (PTT), veneno de cobra e doenças imunes, serão provavelmente responsivos ao referido tratamento. Além disso, os péptidos deste invento podem ser utilizados num processo para a prevenção de condições metastáticas, para a prevenção ou tratamento da infecção fúngica ou bacteriana, induzindo a imuno-estimulação, e para a prevenção ou tratamento de doenças nas quais a reabsorção óssea é um factor.

péptido é administrado ao doente quer por via oral quer

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-31por via parentérica, duma forma tal que a concentração da droga no plasma é suficiente para inibir a agregação plaquetária. A composição farmacêutica contendo o péptido é administrada numa dose entre cerca de 0,2 e cerca de 50 mg/kg, duma forma consistente com a condição do doente. Na terapia aguda é preferida a administração parentérica. Nos estados persistentes de hiper-agregabilidade, uma infusão endovenosa do péptido em dextrose a 5% em água ou em solução salina normal é muito eficaz, embora possa ser suficiente uma injecção intramuscular em bólus.

Nos estados de agregabilidade plaquetária crónicos, mas não

O - críticos, é adequada a administração oral duma cápsula ou comprimido ou uma injecção intramuscular em bólus. O péptido é administrado uma a quatro vezes ao dia, a um nível de cerca de 0,4 a cerca de 50 mg/kg, para atingir uma dose diária total de cerca de 0,4 a cerca de 200 mg/kg/dia.

Este invento ainda proporciona um processo para a inibição da re-oclusão duma artéria ou veia após terapia fibrinolítica, o qual compreende a administração interna dum péptido de fórmula (I) e dum agente fibrinolítico. Verificou-se que a administração dum péptido na terapia fibrinolítica previne completamente a reΌ oclusão ou prolonga o tempo até à re-oclusão.

Quando utilizado no contexto deste invento, o termo agente fibrinolítico destina-se a significar qualquer composto, quer um produto natural quer sintético, o qual provoca, directa ou indirectamente, alise dum coágulo .de fibrina. Os activadores do plasminogénio são um grupo de agentes fibrinolíticos bem conhecido. Activadores do plasminogénio úteis incluem, por exemplo, anistreplase, uroquinase (UK), pró-uroquinase (pUK), estreptoquinase (SK), activador do plasminogénio tissular (tPA) e mutantes, ou suas variantes, as quais retêm a actividade de activador do plasminogénio, tais como variantes que foram modificadas quimicamente, ou às quais um ou mais aminoácidos foram adicionados, deleccionados ou substituídos, ou às quais um ou mais domínios funcionais foram adicionados, deleccionados ou alterados, tal como por combinação do sítio activo dum activador do

plasminogénio com o domínio de ligação da fibrina doutro activador do plasminogénio ou molécula de ligação da fibrina. Outras variantes ilustrativas incluem moléculas de tPA, nas quais foram alterados um ou mais locais de glicosação. Preferidas entre os activadores do plasminogénio são as variantes de tPA nas quais a sequência de aminoácidos primária foi alterada no domínio do factor de crescimento de modo a aumentar a semi-vida sérica do activador do plasminogénio. Variantes do factor de crescimento de tPA são descritas, por ex., por Robinson e colab., EP-A 0 297 589 e Browne e colab., EP-A 0 240 334. Outras variantes incluem proteínas híbridas, tais como aquelas descritas nas EP 0 028 489, EP 0 155 387 e EP 0 297 882, sendo todas elas aqui incorporadas por referência. A anistreplase é uma proteína híbrida preferida para utilização neste invento. Os agentes fibrinolíticos podem ser isolados a partir de fontes naturais, mas são habitualmente produzidos por processos tradicionais de engenharia genética.

Formulações úteis de tPA, SK, UK e pUK encontram-se descritas, por exemplo, nas EP-A 0 211 592, EP-A 0 092 182 e na Patente dos E.U.A 4 568 543, sendo todas elas aqui incorporadas por referência. Tipicamente o agente fibrinolítico pode ser formulaO do numa solução aquosa isotónica, tamponada, tal como acetato ou adipato de sódio ou amónio, tamponado a um pH de 3,5 a 5,5. Também podem ser adicionados excipientes adicionais, tais como polivinilpirrolidona, gelatina, hidroxicelulose, acácia, polietilenoglicol, manitol e cloreto de sódio. Uma tal composição pode ser liofilizada.

A composição farmacêutica pode ser formulada como composto de fórmula (I) e o agente fibrinolítico no mesmo recipiente, mas é preferida a formulação em recipientes diferentes. Quando ambos os agentes são proporcionados sob a forma de solução, podem ser colocados dentro dum sistema de infusão/injecção para administração simultânea ou num arranjo em série.

As indicações para a referida terapia incluem enfarte de miocárdio, trombose venosa profunda, embolismo pulmonar, aciden-

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-33te vascular cerebral e outras desordens relacionadas com enfarte. O péptido é administrado imediatamente antes, ao mesmo tempo ou imediatamente antes, ao mesmo tempo ou imediatamente após a administração parentérica de tPA ou outro agente fibrinolítico. Poderá revelar-se desejável a continuação do tratamento com o péptido durante um período de tempo conveniente após a reperfusão ter sido estabelecida a fim de inibir ao máximo a re-oclusão pós-terapia. A dose eficaz de tPA, SK, UK ou pUK pode variar entre 0,5 e 5 mg/kg, e a dose eficaz do péptido pode variar entre cerca de 0,1 e 25 mg/kg.

O Para administração conveniente do inibidor e do agente fibrinolítico ao mesmo tempo ou em tempos diferentes, foi preparado um conjunto compreendendo, num recipiente único, tal como uma caixa, caixa de cartão ou outro recipiente, garrafas, sacos, frascos ou outros recipientes individuais, cada um deles possuindo uma quantidade eficaz do inibidor para administração parentérica, tal como anteriormente descrito, e uma quantidade eficaz de tPA, ou outro agente fibrinolítico, para administração parentérica, tal como anteriormente descrito. 0 referido conjunto pode compreender, por exemplo, ambos os agentes farmacêuticos em recipientes separados ou no mesmo recipiente, opcionalmente como tampões liof ilizados„, e recipientes de soluções para reconstituição. Uma variação deste, é a inclusão da solução para reconstituição e do tampão liofilizado em duas câmaras dum recipiente único, os quais podem ser misturados antes da utilização. Com um tal arranjo, o agente fibrinolítico e o péptido podem ser embalados separadamente, tal como em dóis recipientes, ou liofilizados em conjunto como um pó e porporcionados num recipiente único.

Quando ambos os agentes são proporcionados sob a forma de solução, podem ser colocados num sistema de infusão/injecção para administração simultânea ou num arranjo em série. Por exemplo, o inibidor da agregação plaquetária pode encontrar-se sob uma forma injectável i.v., ou sacode infusão, ligado em série, por meio de tubagem, ao agente fibrinolítico num segundo saco de infusão. Utilizando o referido sistema, um doente pode receber

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-34uma injecção em bólus ou infusão inicial do inibidor peptídico, seguida pela infusão do agente fibrinolitico.

A actividade farmacológica dos péptidos foi estabelecida pelos testes seguintes.

Inibição In Vivo da Agregação Plaquetária

A inibição in vivo da formação do trombo é demonstrada pelo registo dos efeitos sistémicos e hemodinâmicos da infusão dos péptidos em cães anestesiados de acordo com os processos descritos em Aiken e colab., Prostaqlandins, 19, 629-43 (1980).

o'

Inibição da Agregação Plaquetária

Foi recolhido sangue (citrado para impedir a coagulação) cães de raça indefinida adultos, nunca submetidos a drogas. Foi preparado plasma rico em plaquetas, PRP, por centrifugação a 150 x g durante 10 min à temperatura ambiente. Foram preparadas plaquetas lavadas por centrifugação de PRP a 800 xg durante 10 min. A pelota de células obtida desse modo foi lavada, duas vezes, em tampão de Tyrode (pH 6,5) sem Ca⁺⁺, e ressuspensa em tampão de tyrode (pH 7,4) contendo Ca⁺⁺ 1,8 mM a 3 x 10⁵ células/ml. Os péptidos foram adicionados 3 min antes do agonista em todos os ensaios de agregação plaquetária. As concentrações finais do agonista foram de 0,1 unidàde/ml de trombina e ADP 2 mM (Sigma). A agregação foi monitorizada num Lumi-Agregómetro Chrono-Log. A transmitância da luz 5 min após ã adição do agonista foi utilizada para calcular a percentagem de agregação de acordo com a fórmula:% de agregação = [(90-CR) + (90-10)] x 100, na qual CR é a leitura do gráfico, 90 é a linha de base, e 10 é a leitura em branco do PRP. As IC₅₀ foram determinadas por representação gráfica de [% de inibição da agregação] vs. [concentração do péptido]. Os péptidos foram analisados a 200 mM e sequencialmente diluídos por um factor de 2 afim de determinar uma curva dose-resposta à adequada.

Os compostos dos Exemplos 4, 5, 9 e 12 apresentam IC₅₀ de 100-200 μΜ para a inibição da agregação plaquetária com plaquetas de cão, e os Exemplos 4 e 5 apresentaram IC₅₀ de 20-30 μΜ

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para a inibição de plaquetas humanas, estimuladas com ADP.

Afim de avaliar a estabilidade do péptido face às proteases do plasma, os péptidos foram incubados durante 3 horas (em vez de 3 min) no PRP antes da adição do agonista.

Os Exemplos que se seguem não se destinam, de forma alguma, a limitar o âmbito deste invento, mas são proporcionados para ilustrar a preparação e utilização dos compostos deste invento. Muitas outras concretizações serão prontamente evidentes e acessíveis para os especialistas na arte.

EXEMPLOS

Nos Exemplos, todas as temperaturas encontram-se em °C. Os espectros de massa foram executados utilizando bombardeamento de átomos rápido (FAB) ou ionização de electro-pulverização (ES ou ESMS). Os pontos de fusão foram determinados num aparelho de ponto de fusão em capilar Thomas-Hoover è não estão corrigidos.

Os RMN foram registos a 250 MHz utilizando um espectrómetro Bruker AM 250, excepto quando indicado doutro modo. Os desvios químicos estão descritos em ppm ($) a jusante do tetrametilsilano no campo. As multiplicidades para os espectros de RMN estão indicadas como: s = singúleto, d = dupleto, t = tripleto, q = quarteto, m = multipleto, dd = dupleto de dUpletos, dt = dupleto de tripletos, etc., e br significa sinal largo. J indica a constante de acoplamento de RMN em Hertz.

Celiteí^ é um auxiliar de filtração composto por sílica diatomácea lavada com ácido, e é uma marca registada por Mansville Corp., Denver, Colorado. Foram utilizadas placas em camada fina de sílica-gel EM e sílica-gel GF Analtech para a cromatografia de camada fina. A cromatografia flash e a cromatografia de gravidade foram executadas sobre sílica-gel Merck 60 (malha 230-400). ODS refere-se a um suporte cromatográfico de sílica-gel derivado de octadecilsililo.

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-36Exemplo 1

Preparação de (S)-7-TΓ4-Γ(aminó-iminometil)fenil]carbonill

-aminol-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-ace tato de metilo

a) éster de dimetilo do ácido N-[[2-ciano-4-nitro)]fenil]-L-aspártico

Uma mistura de 2-fluoro-5-nitro-benzonitrilo (3,32 g, 20 mmol), hidrocloreto do éster de metilo do ácido L-aspártico (4,65 g, 25 mmol) e trietilamina (8 ml, 50 mmol) em dimetilsulfóxido (50 ml), foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura reaccional foi vertida em água gelada (125 ,ml) e tratada com ultra-sons durante lha 0°C. 0 sólido foi filtrado e lavado com água fria, éter dietílico e seco para originar o composto desejado (6 g, 98%). P.f. 86-88°C.

b) Éster de dimetilo do ácido N-[2-ciano-4-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]amino]fenil]-L-aspártico

Uma suspensão do composto do Exemplo l(a) (3 g, 9,8 mmol), paládio sobre carbono a 10% (0,3 g) e dicarbonato de di-t-butilo (4 g, 18 mmol) em acetato de etilo num agitador Parr, foi agitada sob atmosfera-de hidrogénio (344 735 Pa). Após 5 h, a _ Ό mistura foi filtrada, o filtrado foi concentrado e o resíduo foi triturado com hexano para originar o composto do título (3,8 g, 100%). - : .

c) (S)-7-[[(l,l-àimetiletoxi)carbonil]amino]-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Metóxido de sódio (0,54 g, 10 mmol) foi adicionado, de uma só vez, a uma suspensão do composto do Exemplo l(b) (3,7 g, 9,8 mmol) e níquel Raney (10 g, previamente lavado com metanol) em metanol (150 ml) sob atmosfera de hidrogénio. Após agitação à temperatura ambiente durante 18 h, a mistura reaccional foi decantada para remover o catalisador e o filtrado foi concentrado. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano, lavado com solução de cloreto de sódio saturada, seco sobre MgSO₄, e evaporado para produzir o composto do título (2,1 g, 62%). P.f. 167-9°C. ΐ - .

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(d) Trifluoroacetato de (S)-7-amino-l,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma mistura do composto do Exemplo l(c) (1 g, 2,8 mmol) em TFA (20% em CH₂C1₂, 250 ml), foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h, evaporada, e triturada com éter dietílico para originar o composto do título (1 g, 73%). P.f. 117-9^OC.

(e) Ácido 4-[ [ (benziloxi)carbonil]amino-iminometil]benzóico

Uma mistura de ácido p-amidinobenzóico (0,385 g, 2,35 mmol) e cloroformato de benzilo (0,51 g, 3 mmol), numa solução de hidróxido de sódio (10%, 5 ml) e metanol (5 ml), foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura foi concentrada, acidificada com ácido acético, diluída com água, e filtrada para originar o composto do título.

(f) (S)-7-[[4-[[[benziloxi)carbonil]amino-iminometil]fenil]car-

- bonil]amino]-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma mistura de ácido 4-[ [benziloxi)carbonil]amino-iminometil]benzóico (0,2 g, 0,68 mmol), hidrato de HOBT (0,T g, 0,79 mmol), o composto do Exemplo l(d) (0,28 g, 0,6 mmol) e N,N-di-isopropiletilamina (0,4 ml, 2,3 mmol) em DMF (3 ml), foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura reaccional foi vertida em água gelada, extractada com EtOAc, seca sobre MgSO₄, e evaporada para produzir o composto do título. .

g) (S)-7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]-carbonil]amino]-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo l(f) (0,26 g, 0,5 mmol) em metanol (50 ml), contendo ácido p-tolueno-sulfónico mono-hidrato (o,15 g, 0,5 mmol), foi hidrogenada sobre Pd/C (10%, 0,1 g) durante 2 h. 0 catalisador foi removido por filtração, o filtrado foi evaporado e filtrado para originar o composto do título.

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-38—

Exemplo 2

Preparação de (S)-7-ΓΓ4-Γ(amino-iminometil)fenil]carbonil]-amino!-4,5-di-hidro-3H-3-oxo-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo composto do Exemplo l(g) é dissolvido em metanol, e é borbulhado ar através da solução durante toda a noite. A filtração da mistura reaccional e a evaporação do solvente originam o composto do título.

Exemplo 3

Preparação do ácido (S)-7-ΓΓ4-Γ(amino-iminometil)fenil!carbonillaminol-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético composto do Exemplo l(g) (0,2 g, 0,5 mmol) é dissolvido numa solução de K₂CO₃ (5 ml, IN) e metanol (5 ml). Após 3 h à temperatura ambiente, a mistura é concentrada até metade do seu volume original, acidificada até pH9, e filtrada para originar o composto do título. _

Exemplo 4

Preparação da 7-Γ Γ r4-(amino-iminoitietil)fenil]carbonil!amino-2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-l,3,4, 5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina

a) 2-cloro-5-nitro-[N-(2-feniletil)]-benzilamina

2-Cloro-5-nitro-benzaldeído (5 g, 27 mmol) e 2-feniletilamina (4,1 g, 33,75 mmol) foram dissolvidos em metanol, arrefecidos até 0°C, e foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (2,1 g, 33,75 mmol). A reacção foi ajustada até pH 6 com ácido acético e aquecida até à temperatura ambiente durante 6 h. A mistura reaccional foi extinta com gelo e diluída com água, 0 pH foi ajustado até 11 com hidróxido de sódio, e a mistura foi extractada com diclorometano. Os extractos orgânicos foram lavados.com água e salmoura, e secos brevemente sobre sulfato de sódio. A filtração da mistura e a concentração do filtrado in vacuo produziram o composto do título (82%).

b) N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-L-alanil[(N¹ -(2-cloro-5-nitro-benzil),N'-(2-feniletil)]amida

Uma solução do composto do Exemplo 4(a) (3,12 g, 10,25 mmol) em DMF (30 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon. Foram adicionados diisopropiletilamina (1,88 ml, 10,75 mmol) e HOBT (1,60 g, 11,83 mmol), seguidos por Boc-L-alanina (2,04 g, 10,78 mmol) e EDC (2,27 g, 11,84 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante toda a noite à temperatura ambiente, e vertida em água gelada (350 ml). A mistura foi extractada com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com KHSO₄ 1M, água, NaHCO₃ a 5% e salmoura, e secos sobre sulfato de sódio. A filtração da mistura e evaporação do filtrado in vacuo produziram o composto do título (3,56 g, 72%).

c) L-alanil[Ν'-(2-cloro-5-nitro-benzil) ,N'-(2-feniletil)amida composto do Exemplo 4(b) (1,0 g) foi agitado com TFA a 50%/diclorometano (22 ml) durante 18 h. A evaporação dos solventes in vacuo produziu o composto do título.

d) 2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-7-nitro-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-1,4-benzodiazepina u A uma solução do composto do Exemplo 4(c) (5,27 mmol) em

DMSO (65 ml) foi adicionada dietilisopropilamina (9,1 ml,50,6 mmol), e a reacção foi aquecida a 100°C durante toda a noite. Após 21 h, a solução reaccional foi vertida em água (600 ml) e extractada com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com KHSO₄ 1M aquoso, NaHC0₃ a 5% e salmoura, e secas sobre sulfato de sódio. A filtração e concentração dos extractos orgânicos in vacuo produziu o composto dó título (1,28 g, 75%). _

e) 2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-7-amino-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-1,4-benzodiazepina

Uma solução do composto do Exemplo 4(d) (1,5 g, 4,62 mmol) em etanol:acetato de etilo 1:1 (200 ml) e catalisador de óxido de platina (0,35 g) foram misturados num agitador Parr sob hidrogénio (275 788 Pa) durante 24 h. 0 catalisador foi filtrado φ 74 119

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a partir da solução, e o solvente foi evaporado in vacuo para produzir o composto do título.

f) 7-[[[4-(benziloxicarbonil-amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina

Uma mistura do composto do Exemplo 4(e) (1,4 g, 4,2 mmol) em DMF (12 ml) foi agitada sob árgon e arrefecida até 0°C. Adicionaram-se dietilisopropilamina (1,1 ml, 6,0 mmol) e HOBT (0,755 g, 5,59 mM), e, à solução, foi adicionado ácido 4-N-(benziloxicarbonil)amidino-benzóico (1,65 g, 5,54 mmol). Após ι min, foi adicionado EDC (1,02 g, 5,32 mmol), o banho de arrefecimento foi removido e a reacção foi agitada durante toda a noite sob atmosfera de árgon. A solução foi vertida numa mistura de água gelada (160 ml) e NaHCO₃ a 5% (14 ml), e o precipitado resultante foi filtrado. 0 sólido filtrado foi dissolvido em diclorometano, seco sobre-sulfato de sódio, filtrado, e o filtrado foi concentrado in vacuo até um sólido (2,60 g, 98%). este material foi recristalizado em metanol, e cromatografado (sílica-gel, metanol a 3%/diclorometano) para produzir o composto do título. Pf 120°. Anal. (C₃₄H₃₃N₅Õ₄.H₂0) calculada: C, 68,79; H, 5,94; N, 11,80. Encontrada: C, 68,81; H, 5,89; N, 11,67. . ; - -V ; -

g) 7-[ [ [4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina

A uma solução do composto do Exemplo. 4(f) (1,2 g, 2,1 mmol) em et ano 1: acetato de etilo 1:1 (20 ml) e ácido clorídrico concentrado (0,175 ml), foi adicionado o catalisador de paládio a 10% em carbono (0,28 g,activado por agitação em água com algumas gotas de HC1 concentrado), e a mistura foi hidrogenada num agitador Parr (275 788 Pa) durante 4 h. A mistura reaccional foi filtrada, o filtrado foi evaporado até um resíduo sólido, e o resíduo foi triturado com éter dietílico para originar o composto do título como o sal hidrocloreto. Pf 230° (dec); MS(ES);422 (M+H]⁺, 440 [M-H]”.

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-41Exemplo 5

Preparação de trifluoroacetato de 7-rrr4-(amino-iminometil)fenil~l carbonil] amino ]-2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-4,5-di-hidro

-3H-1,4-benzodiazepina composto do Exemplo 4(g) foi dissolvido em DMSO, e borbulhou-se uma corrente de ar através da solução durante toda a noite. A mistura foi extinta com água gelada e filtrada para produzir um resíduo em bruto, o qual foi submetido a cromatografia flash (sílica-gel octadecilsilano, MeOH a 45%/H₂O-TFA a 0,1%) para produzir o composto do título. MS(ES) 440 [M+H]⁺, 438 [M-H]“; Anal. (C₃₄H₃₃N₅O₄«1,5 TFA«2,25 H₂O) calculada: C, 53,49; H, 4,80; N, 10,76. Encontrada: C, 53,47; H, 4,67; N, 10,96.

Exemplo 6

Preparação de (S)-9-Γ Γ4-Γ(amino-iminometil)fenil1carbonil1aminol-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo ~

Utilizando o processo do Exemplo 1, excepto substituindo o 2-fluoro-5-nitro-benzonitrilo do Passo l(a), por 2-fluoro-3-nitro-benzonitrilo foi preparado o composto do título.

Exemplo 7

Preparação de ácido (S1-7-Γ (N^ametil-N^Q!acetil-arginil) amino] -1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

O composto do título foi preparado utilizando o processo do Exemplo 1, excepto substituindo o ácido 4-[[(fenilmetoxi)carbonil]amino-iminometil]benzóico do passo l(f), por N^tt-acetil-MeArg(Tos)-OH e desbloqueaando com HF em vez de hidrogenação do passo l(gj.

Exemplo 8

Preparação de 7-Γ Γ Γ4-í amino-iminometil)fenil1carbonil1amino1-3-oxo-4-(2-feniletil)-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo composto do título foi preparado utilizando o processo do Exemplo 4, excepto substituindo o Boc-alanina por éter de ^-metilo do ácido Boc-aspártico.

θ ^{74 119}

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Exemplo 9

Preparação de 7-Γ Γ r4-(amino-iminometil)fenilTcarbonillaminol-3-oxo-4-(2-feniletil)-4,5-di-hidro-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo composto do Exemplo 8 foi dissolvido em DMSO e foi borbulhado ar através da solução durante toda a noite. A mistura foi extinta com água gelada e filtrada para originar um sólido em bruto, o qual foi submetido a cromatografia flash (sílica-gel octadecilsilano, CH₃CN a 60%/H₂O/TFA a 0,1%) para produzir o composto do título. MS(ES) 498 [M+H]⁺, 496 Anal. (C₂₈H₂₇N₅O₄«1,85 TFA‘0,25 H₂0) calculada: C, 53,40; H, 4,15; N, 9,82. Encontrada: C, 53,52; H, 4,42; N, 9,72.

Exemplo 10

Preparação de ácido (R,S)-7-fΓr4-(amino-iminometil)fenillcarbonil1-amino1-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

a) (RS)—N-[(1,1-dimetiletoxi)carboni1]-0-benz i1-asparti1 [ (N' - (2 -cloro-5-nitro-benzil),Ν'-(2-feniletil)]amida

Uma solução de 2-cloro-5-nitro-[N-(2-feniletil)]benzilamina (13,0 g, 45 mmol) em diclorometano (TOO ml) foi agitada àtemperatura ambiente sob atmosfera de árgon. Foram adicionados trietilamina (12,2 ml) e reagente BOP (19,8 g, 45 mmol), seguidos por (RS)-N-Boc-aspartato dej8-benzilo (14,5 g, 45 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante toda a noite à temperatura ambiente, e vertida em água gelada. A mistura foi extractada com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com KHSO₄ 1M, água, NaHC0₃ a 5% e salmoura, e secos sobre MgSO₄. A filtração da mistura, evaporação do filtrado in vacuo, e cromatografia flash produziram o composto do título (18 g, 67%). MS m/e 596 [M+H]⁺.

b) (RS)-benzil-aspartil[(N'-(2-cloro-5-nitro-benzil),N'-(2-feniletil)]amida composto do Exemplo 10(a) (6,0 g, 10,1 mmol) foi agitado com HC1 4M/dioxano (23 ml) durante 2 h. A evaporação dos solventes in vacuo produziu o composto do título.

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c) (RS)-7-nitro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,.4-benzodiazepina-2-acetato de benzilo

A uma solução do composto do Exemplo 10(b) em DMSO (65 ml), foi adicionado DIEA (6,2 ml). A mistura reaccional foi agitada a 105°c durante toda a noite, vertida em água, e extractada com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre sulfato de sódio. A filtração e concentração dos extractos orgânicos in vacuo, seguida por cromatografia flash produziram o composto do título (1,6 g, 35%). MS m/e 460 [M+H}⁺.

e) 7-amino-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de benzilo

Uma solução do composto do Exemplo 10(c) (1,6 g, 3,5 mmol) em acetato de etilo (100 ml) foi agitada num agitador Parr com óxido de platina (0,35 g) sob hidrogénio (275 788 Pa) durante 24 h. 0 catalisador foi filtrado da solução e o solvente foi evaporado in vacuo para produzir o composto do título. (1,3 g, 87%). . .

f) 7-[[[4-(benziloxicarbonil-amino-iminometil)fenil]carbonil]amino] -l-metil-3-oxo-4-( 2-f.eniletil) -1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l, 4-benzodiazepina-2-acetato de benzilo

Uma mistura do composto do Exemplo 10(e) (1,3 g, 3,0 mmol), ácido p-(benziloxicarbonilamidino)benzóico (1,2 g, 4,0 mmol), HOBT (0,53 g, 3,9 mmol), EDC (0,75 g, 3,9 mmol) e DIEA (0,84 ml,

4,8 mmol) em DMF (15 ml) foi agitada durante toda a noite sob atmosfera de árgon. A solução foi vertida numa mistura de água gelada e NaHC0₃ a 5% (14 ml), e a mistura resultante foi extractada com diclorornetano. 0 extracto orgânico foi seco sobre sulfato de sódio, filtrado e o solvente foi evaporado. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna (sílica-gel, metanol a 2%/diclorometano) para originar o composto do título (150 mg). MS m/e 710 [M+H]⁺.

g) ácido 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético - — - ·

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-44O catalisador de paládio a 10% em carbono

do) foi adicionado a uma solução de composto do Exemplo 10(f) (150 mg, 2,1 mmol) em ácido acético glacial:acetato de etilo 1:1 (30 ml) e ácido clorídrico concentrado (0,5 ml). A mistura foi hidrogenada num agitador Parr (310 261,5 Pa) durante 25 h. A mistura reaccional foi filtrada, o filtrado foi concentrado in vacuo e purificado por HPLC (YMC Pack, AQ-313-10P. S-10 120A ODS) RT 5, 18 min (CH3CN a 35%/H₂O/TFA a 0,1%, 1,5 ml/min, coluna de 27 cm, detecção por UV 220 nM) para produzir o composto do título. ^XH RMN (250 MHz, DMSO-dg) 6 10,24 (s, 1H) , 9,55 (s, 2H) , 9,32 (S, 2H), 8,14 (d, 2H), 7,96 (d, 2H) , 7,10-7,40 (m, 7H) ,

6,57 (d, 1H), 5,78 (br s, 1H), 5,40 (d, 1H), 4,98 (m, 1H), 3,88 (d, 1H), 3,60 (m, 2H), 2,72-2,87 (dd, 1H), 2,70 (m, 2H), 2,50-2,60 (dd, 1H). ESMS m/e 460 [M+H]⁺.

Exemplo 11

Preparação de 7-Γ Γ r4-famino-iminometil)fenillcarbonil]amino]-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro--2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de ciclo-hexilo

O composto do título foi preparado utilizando o processo do Exemplo 4, excepto substituindo Boc-alanina por éster de -ciclo-hexilo do ácido Boc-aspártico.

- ----- < · ”. >·

Exemplo 12

Preparação de 7-Γ Γ r4-(amino-iminometil)fenillcarbonil1aminol-3-oxo-4-(2-feniletil)-4,5-di-hidro-3H-l,4-benzodiazepina~2-acetato de ciclo-hexilo

O composto do Exemplo 11 foi dissolvido em DMSO, e borbulhou-se ar através da solução durante toda a noite. A mistura foi extinta com água gelada, filtrada, e submetida a cromatografia flash (octadecilsilano, CH₃CN a 60%/H₂o TFA a 0,1% para produzir o composto do título. Anal, para C₃₃H₃₅N₅O₄.2 TFA.l H₂O calculada: C, 54,75; H, 4,84; N, 8,63. Encontrada: C, 54,87; H, 4,86; N, 8,44. ESMS 566 [M+H]⁺,564 [M-H]”.

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Exemplo 13

Preparação de ácido 7-ΓΓΓ(amino-iminometillfenillcarbonillamino ]-l , 3 ,4 ,5-tetra-hidro-l-f 4-nitrofenil)-5-oxo-2H-l,4-benzodiazepína-4-propiónico

a) éster de etilo do ácido 7-nitro-l,3,4,5-tetra-hídro-l-(4-nitrofenil)-5-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-4-propiónico

7-Nitro-l,3,4,5-tetra-hidro-l-(4-nitrofenil)-5-oxo-2H-l,4-benzodiazepina (preparada pelo processo descrito por Bagolini e colab., J. Med. Chem., 21, 476 (1978)) é tratada com etóxido de sódio em tolueno e um excesso de acrilato de etilo para originar O o produto do título.

b) éster de etilo do ácido 7-amino-l,3,4,5-tetra-hidro-l-(4-nitrofenil)-5-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-4-propiónico composto do Exemplo ll(a)é tratado com cloreto estanoso em metanol-ácido acético para originar o “composto do título.

c) ácido 7-[[[(amino-iminometil]fenilJcarbonil]amino]-1,3,4,5-

-tetra-hidro-1-(4-nitrofenil)-5-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-4-propiónico _ —

Utilizando o processo do Exemplo 4, excepto substituindo 2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-7-amino-l,2,4,5-tetra-hidro-3H-l,4-benzodiazepina por éster de etilo do ácido 7-amino-l,3,4,5-tetra-hidro-l-(4-nitrofenil)-5-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-4-propiónico, origina o produto do título.

Exemplo 14 ? j

Preparação de ácido (R,S)-4-fenetil-7-r(4-amidinofenir)carbonillamino-1,3,4, 5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5-ona-2-acético _ '

a) éster de metilo do ácido 5-nitro-antranílico “ ·

A uma solução agitada de ácido 5-nitroantranílico (10 g, 55 mmol) em metanol (300 ml) a 0°C, foi adicionado, gota a gota, diazometano etéreo gerado a partir de Diazald^ (34,5 g, 110 mmol). Após agitação durante 2 h, a reacção foi evaporada para originar o produto analiticamente; puro como um sólido amarelo

-4674 119

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(10,77 g, 100%). TLC Rf 0,81 (MeOH a 5%/CHCl₃); ^H RMN (CDCl₃/DMSO-d₆) 8 3,9 (3H, s), 6,84 (1H, d, J=9Hz), 7,6 (2H, br s), 8,7 (1H, dd), 8,72 (1H, d, J=3 Hz)

b) éster de metilo do ácido N-t-butoxicarbonil-5-nitro-antranílico

A uma solução agitada do composto do Exemplo 14(a) (10,77 g, 55 mmol) em diclorometano (200 ml), foi adicionado DMAP (1,3 g, 10,6 mmol) seguido por dicarbonato de di-terc-butilo (12 g, 55 mmol). A reacção foi colocada ao refluxo durante 2 h e, em seguida, evaporada até à secura, retomada em acetato de etilo, ' - lavada com HC1 IN aq., salmoura, seca sobre MgSO₄ e evaporada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 10-30%/hexano) para originar o composto do título (13,68 g, 88%). TLC R_f 0,53 (acetato de etilo a 10%/ /hexano); ^XH RMN (CDC1₃) 8 1,56 (9H, s), 4,0 (3H, s), 8,37 (1H, dd), 8,72 (1H, d, J=9 Hz), 8,92 (1H,,d, J=3 Hz), 10,65 (1H, s).

c) éster de metilo do ácido N-t-butoxicarbonil-5-(benziloxicarbonilamino)antranílico

Uma solução do-composto do Exemplo 14(b) (13,68 g, 48,5 mmol) em metanol (300 ml) foi hidrogenada num agitador Parr, a 344 735 Pa de H₂, sobre Pd a 5%/C (2 g) durante 4 h. Após filtração através de uma almofada de Celite® e evaporação do solvente, o resíduo foi dissolvido em THF anidro (300 ml) ao qual foi adicionado Et₃N (8,8 ml). Foi adicionado cloroformato de benzilo (8,3 ml) em THF (16,7 ml), gota a gota, com agitação à temperatura ambiente durante 30 min. Após agitação durante toda a noite, a mistura reaccional foi evaporada, dissolvida em acetato de etilo, lavada com HC1 IN aq. e salmoura, seca sobre MgSO₄ e evaporada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo 15-20%/hexano) para originar o composto dotítulo (11,85 g, 61%). TLCRf 0,42 (acetato de etilo a 20%/hexano); ¹H-RMN (CDC1₃) 8 1,5 (9H, s), 3,87 (3H, s), 5,2 (2H, s), 6,9 (1H, s), 7,4 (5H, s), 7,4 (1H, dd), 8,15 (1H, d, J=3Hz), 8,4 (1H, d, J=9Hz), 10,15 (1H, s).

d) ácido N-t-butoxicarboni1-5-(benziloxicarbonilamino)antra-

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A uma solução agitada do composto do Exemplo 14(c) (4,03 g, 10 mmol) em dioxano (100 ml), foi adicionado NaOH IN aq. (20 ml). Após agitação durante toda a noite à temperatura ambiente, a reacção foi neutralizada com HC1 1N aq. (20 ml), extractada com acetato de etilo, lavada com salmoura, seca sobre MgSO₄ e evaporada para originar o composto do título como um sólido branco (3,86 g, 100%). TLC R_f 0,42 (95:4:1 CHC1₃:MeOH:HOAc); ^XH RMN (CDCl₃/DMSO-d₆) 8 1,5 (9H, s), 5,2 (2H, S), 7,4 (5H, br s), 7,65 (1H, dd), 8,2 (1H, d, J=3 Hz), 8,4 (1H, d, J=9 Hz), 8,5 (1H, br s), 10,4 (1H, s).

e) 4-(fenetilamino)crotonato de metilo

A uma solução agitada de fenetilamina (20 ml, 160 mmol) em THF anidro (250 ml), foi adicionado NaHCO₃ (7 g), seguido por 4-bromocròtonato de metilo._(10 ml, 84 mmol). Após agitação durante 4 h, a reacção foi concentrada até aproximadamente metade do volume e filtrada através duma almofada de sílica-gel, e eluída com MeOH a 2%/CHCl₃ para retirar o produto por lavagem. 0 produto em bruto obtido após evaporação do filtrado foi purificado por cromatografia.flash (sílica-gel, MeOH a 2%/CHCl₃) para originar o composto do titulo como um líquido ligeiramente amarelo (16,5 g, 81%). TLC R_f 0,53 (MeOH a 5%/CHCl₃); ^XH RMN (CDC1₃) <5 1,2 (1H, Sj, 2,8 (4H, br s), 3,35 (2H, dd), 3,7 (3H, s), 5,95 (1H, dt)_, 7,0 (1H, dt), 7,25 (5H, br s).

f) N- [N-t-butoxicarbonil-5- (benziloxicarbonilamino) antranil ] -4-(fenetilamino)crotonato demetilo - _ ^T

A uma solução agitada do composto do Exemplo 14(d) (3,86 g, 10 mmol) em DMF (50 ml), foi adicionado o composto do Exemplo 14(e) (4,0 g), Et₃N (7 ml), HOBt (2_y7 g), seguido pelo reagente BOP (5,3 g). A reacção foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente, evaporada e purificada, duas vezes, por cromatografia flash (sílica-gel, MeOH a 1%/CHC1₃; e sílica-gel, acetato de etilo a 35%/hexano) para originar o composto do título como um sólido branco (5,40 g,91%). TLC R_f 0,27 (acetato de etilo a 30%/hexano); ^XH-RMN (CDC1₃) 8 1,5 (9H, s), 2,9 (2H, br m), 3,55

Ί4 119

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(2H, brm), 3,7 (3H, S), 4,1 (2H, br S), 7-7,6 (14H, m), 7,9 (1Ή, d, J=9 Hz); MS rn/e 588 [M+H]⁺.

g) (R,S)-4-fenetil—7-(benziloxicarbonil)amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5-ona-2-acetato de metilo

A uma solução agitada do composto do Exemplo 14(f) (5,40 g,

9,2 mmol) em CH₂C1₂ (10 ml) foi adicionado TFA (90 ml). Após agitação durante 45 min, a reacção foi evaporada até à secura, retomada em éter etílico, lavada com Na₂CO₃ IN aq., salmoura, seca sobre Na₂SO₄ anidro e evaporada. O resíduo foi retomado em MeOH (100 ml) e colocado ao refluxo sob Ar durante 18 h. A evaporação do solvente deixou o produto em bruto que foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 70%/hexano) para originar o composto do título com um sólido branco (4,26 g, 95%). TLC R_f 0,57 (acetato de etilo a 60%/hexano); ^XH RMN (CDC1₃) S 2,32 (1H, dd), 2,49 (1H, dd), 2,88 (2H, - t), 3,04 (1H, dd), 3,27 (1H, dd), 3,37 (1H, dt), 3,72 (3H, s),

3,87 (1H, m), 4,04 (1H, dt), 5,14 (2H, s), 6,64 (1H, d, J=8,6 _ Hz), 7,17-7,37 (11H, m) , 7,60 (1H, d, J=2,5 Hz), 7,71 (2H, br

S); MS(CI?) 488,2 [M+H]⁺.

h) (R,S)-4-fenetil-7-[(4-benziloxicarbonilamidinofenil)carbo- nil]amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l., 4-benzodiazepina-5-ona-2-acetato de metilo

Uma solução do composto do Exemplol4(g) (0,5 g, 1 mmol) em MeOH (100 ml) foi hidrogenada num agitador Parr, a 344 735 Pa de H₂, sobre Pd a 5%/C (0,2 g) durante 4 h, filtrada através duma almofada deCelite^, enxaguada com metanol e evaporada. 0 resíduo foi dissolvido em DMF anidra (30 ml), e com agitação à temperatura ambiente, foram adicionados ácido 4-(benziloxicarbonilamidino)benzóico (360 mg), DMAP (123 mg), seguidos por DCC (260 mg), A reacção foi agitada durante 16 h, evaporada e purificada por cromatografia flash (sílica-gel, MeOH a 2%/CHCl₃) para originar o composto do título como um sólido amarelo (402 mg, 63%). TLC R_f 0,34 (MeOH a 5%/CHCl₃); ^ΧΗ RMN (CDC1₃) δ 2,3 (1H, dd), 2,46 (1H, dd), 2,8 _(2H, t), 3,04 (1H, dd), 3,27 (1H, dd), 3,37 (1H, dt), 3,72 (3H, s), 3,88 (2H, m), 4,4 (1H, s), 5,15 (2H, s), 6,5 (1H, d, J=9 Hz), 7,05-7,7 (16H, m), 9,4 (1H,

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-49br s), 9,6 (1H, s); MS m/e 634,2 [M+H]⁺.

i) ácido (R,S)-4-fenetil-7-[(4-amidinofenil)carbonil]amino-l,3,

4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5-ona-2-acético

Uma solução do composto do Exemplo 14(h) (402 mg, 0,63 mmol) em ácido acético (75 ml) foi hidrogenada num agitador Parr a 344 735 Pa de H₂, sobre Pd a 5%/C (0,2 g) durante 5 h, filtrada através duma almofada de Celite^R, enxaguada com ácido acético e evaporada. O resíduo sólido foi dissolvido em ácido acético aquoso a 20% (50 ml) e colocado ao refluxo durante 48 h sob Ar. Após evaporação, o produto em bruto foi purificado por O HPLC preparativa (PRP-1®, CH₃CN a 25%/água-TFA a 0,1%) para originar o composto do título como um sólido amarelo pálido. TLC Rf 0,46 (4:1:1 n-butanol:H0Ac:H₂O), Rf 0,59 (15:3:12:10 n-butanol:HOAc: :H₂O:piridina); HPLC K'=3,76 (PRP-1®, 22% acetonitrilo/água-TFA a 0,1%); 1h-RMN (MeOH-d₄) δ 2,5 (2H, d), 2,95 (2H, m), 3-3,7 (3Ή, m), 4,0 (2H, m), 6,84(1H, d), 7,2 (1H, m), 7/3 (4H, br s), 7,7 (1H, d), 7,87 (1H, s), 7,95 (2H, d), 8,15 (2H, d); MS m/e 486,2 [M+H]⁺.

Exemplo 15

Preparação de ácido (R,S)-l-acetil-4-fenetil-7-carbobenziloxiamino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5-ona-2-acético

a) (R,S)-l-acetil-4-fenetil-7-(benziloxicarbonil)amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5-ona-acetato de metilo

Ácido trifluoroacético (45 ml) foi adicionado a uma solução agitada do composto do Exemplo 14(f) (1,24 g, 2 mmol) em CH₂C1₂ (5 ml), Após agitação durante 45 min, a reacção foi evaporada até à secura, dissolvida em éter etílico, lavada com Na₂CO₃ IN, salmoura, seca sobre Na₂S0₄ anidro, eos solventes foram evaporados . Foi adicionado ácido acético (30 ml) a amina livre (0,95 g) e a solução resultante íoi agitada sob árgon ao refluxo durante 16 h. Os solventes foram evaporados, e o resíduo foi puriTLC R_f 0,34 [M+H]⁺. ficado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo

60-90%/hexano) para produzir o composto do título (0,63 g, 61%).

(acetato de etilo a 60%, n-hexano)

MS m/e 530,2

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-50encontrava-se presente como um

composto do Exemplo 14(g) subproduto (0,19 g, 20%).

Seguindo os processos do Exemplo 14(h)-14(i), com a excepção de se ter utilizado o composto do Exemplo 15(a), foram preparados os seguintes compostos:

b) (R,S)-l-acetil-4-fenetil-7-[(4-benziloxicarbonilamidinofenil)carbonil]amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5—ona-2-acetato de metilo (CDC1₃) d 1,32 (3H, s), 2,29 (1H, dd) , 2,49 (1H, dd), 2,7-3,0 (2H, m), 3,07 (1H, dd), 3,40 (1H, dd), 3,65 (1H, m), 3,68 (3H, s), 3,93 (1H, m), 5,20 (2H, s), 5,49 (1H, dt) , 7,1-7,5 (11H, m), 7,73 (1H, d), 7,93 (1H, d), 8,09 (1H, d), 8,58 (1H, dd), 9,5 (1H, br s), 10,0 (1H, s); MS m/e 676,2 [M+H]⁺.

c) ácido (R,S)-l-acetil-4-fenetil-7-[(4-amidinofenil)carbonil]amino-1,2,3,4-tetra-hidro-l, 4-benzodiazepina-5-ona-2-acético

TLC Rf 0,40 (n-butanol;H0Ac:H₂0 4:1:1), Rf 0,55 (n-butanol-HOAC:H₂ ^0:PÍridina 15:3:12:10); HPLC k' 3,10 (PRP-1®, acetonitrilo a 22%/água-TFA a 0,1%); MS m/e 528,0 [M+H]⁺.

Exemplo 16 _ - .

Preparação de ácido (R,S)-r7-rT4-(amino-iminometil)fenillamino1carbonil)-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético r

a) 3-metil-4-nitro-benzoato de t-butilo - _

Cloreto de benzeno-sulfonilo (12,8 ml, 100 mmol)-foi rapidamente adicionado a uma solução de ácido 3-metilo-4-nitrobenzóico (9,06 g, 50 mmol) em piridina seca- (25 ml) a 40°C. A reacção foi fracamente exotérmica. A solução cor de laranja nebulosa foi agitada durante 5 min e; em seguida, foi adicionado t-butanol (4,7 ml, 50 mmol, 1 eq.). Após 1 h, a mistura laranjaavermelhada foi vertida em gelo/água (200 ml) e a mistura resultante foi vivamente agitada durante 1 h. 0 sólido foi recolhido por filtração por sucção, lavado com H₂0, e dissolvido em tolueno (200 ml), A solução foi seca (MgS0₄) e filtrada através

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duma almofada de sílica-gel eluindo com tolueno. A concentração originou o composto do título como um óleo amarelo, o qual cristalizou sob vácuo (9,67 g, 82%). TLC R_f 0,65 (4:1 toluenohexano); ^H RMN (250 MHz, CDC1₃) δ 7,85-8,10 (m, 3H), 2,61 (s, 3H), 1,60 (s, 9H); IV (CC1₄) 1724, 1531, 1372, 1308, 1295, 1164, 1120, 843 cm^-1; MS(ES) m/e 260,0 [M+H]⁺, 238,0 [M+H]⁺.

b) 4-nitro-3-[N-(2-feniletil)aminometil]benzoato de t-butilo

Uma mistura do composto do Exemplo 16(a) (4,75 g, 20 mmol), N-bromo-succinimida (3,92 g, 22 mmol) e peróxido de benzoílo (0,24 g, 1 mmol) em CC1₄ (50 ml), foi aquecida ao refluxo. Após 16 h, a mistura foi filtrada para remover a succinimida, e o filtrado foi concentrado até um óleo amarelo. 0 brometo de benzilo foi utilizado sem purificação. O brometo de benzilo em bruto anteriormente obtido foi dissolvido em THF seco (50 ml), e foi adicionado NaHCO₃ sólido (2,52 g, 30 mmol). A mistura foi agitada vivamente, e foi adicionada fenetilamina (3,8 ml, 30 mmol). A cor da solução escureceu levemente até um amarelo mais forte. Passados alguns min, a mistura tornou-se muito nebulosa. Após 4 h, a reacção foi concentrada e o resíduo foi submetido a partição entre H₂0 (50 ml) e Et₂O (100 ml). A separação das fases, extracção com Et₂O, secagem (MgSO₄), e concentração originaram um óleo amarelo. A cromatografia (sílica-gel, EtOAc a 20%/hexano) originou o composto do título (2,86 g, 40%) como um óleo amarelo. TLC (EtOAc a 30%/hexano) Rf 0,62; Λη RMN (250 MHz, _ CDC1₃) δ 8,19 (d, J=l,7 Hz, 1H), 7,98 (dd, J=8,4, 1,7 Hz, 1H), 7,90 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,10-7,40 (m, 5H), 4,06 (s, 2H), 2,753,00 (m, 4H), 1,61 (S, 9H); IV (CC1₄) 1721, 1532, 1371, 1303, 1164, 1118, 843, 700 cnT¹; MS(ES) m/e 357,2 -[M+H] ⁺ , 301,0 [M+H^CA^]+· / ·- _L \ - ’ .·

c) 4-nitro-3-[N-(t-butiloxicarbonil)-N-(2-feniletil)aminometil)benzoato de t-butilo

Dicarbonato de di-terc-butilo (2,10 g, 9,62 mmol) foi adicionado de uma só vez a uma solução do composto do Exemplo 16(b) (2,86 g, 8,02 mmol) em CHC1₃ (30 ml) à temperatura ambiente. A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 h e, em seguida, foi colocada ao refluxo durante 0,5 h. A concentração e

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SB CASE P50020-1 cromatografia (sílica-gel, EtOAc a 15%/hexano) originou o composto do título (3,70 g) como um óleo amarelo. TLC 0,39 (EtOAc a 10%/hexano); ^XH RMN (250 MHz, CDC1₃) 8 7,85-8,10 (m, 3H), 7,05-7,40 (m, 5H), 4,55-4,85 (m, 2H), 3,35-3,60 (m, 2H) , 2,75-3,00 (m, 2H), 1,20-1,80 (m, 18H ) ; IV (CC1₄) 2980, 1724, 1699, 1533, 1481, 1458, 1420, 1397, 1371, 1307, 1253, 1165, 1121, 845, 701 cm^-1; MS(ES) rn/e 479,2 [M+Na]⁺, 457,2 [M+H]⁺,

401,2 [M+H-C₄H₈]⁺, 345,2 [M+H-2xC4H8]⁺, 301,0 [M+H-2xC4Hg-CO₂]⁺.

d) 4-amino-3-[N-(t-butiloxicarbonil)-N—(2-feniletil)aminometil]benzoato de t-butilo

Uma mistura do composto do Exemplo 16(c) (2,66 g, 5,83 mmol), Pd a 10%/C (0,62 g, 0,58 mmol de Pd) e EtOAc (60 ml) foi agitada sob H₂ (344 735 Pa). Após 3 h, a mistura foi filtrada para remover o catalisador, e o filtrado foi concentrado até à secura. A cromatografia (sílica-gel, EtOAc. a 20%/hexano) originou o composto do título como um óleo espumoso amarelo, o qual solidificou lenta e parcialmente (2,26 g, 91%). TLC (EtOAc a 10%/hexano) R_f 0,33; ^XH RMN (250 MHz, CDC1₃) δ 7,74 (dd,

J=8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,67 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,05-7,40 (m, 5H),

6,57 (d, J=8,4 Hz, 1H), 5,00 (br s, 2H), 4,30 (s, 2H), 3,32 (m, 2H), 2,69 (app. t, 2H), 1,59 (s, 9H) , 1,46 (s, 9H); IV (CC1₄) 3480, 3340, 3230, 2980, 1701, 1672, 1643, 1611, 1478, 1469, 1456, 1420, 1369, 1310, 1290, 1257, 1170, 1156, 1108, 701 cm^-1; MS(ES) rn/e 449,2 [M+Na]⁺, 427,2 [M+H]⁺, 371,2 [M+H-C4Hq]⁺, 327,0 (M+H-C4H₈-CO₂)⁺, 315 [M+H-2 X C4Hg]⁺, 271,0 [M+H-2 X C4Hq-C0₂] ⁺ , 206,0. ... -

e) (R,S)-4-[2- (1,4-dimetoxi-1,4-dioxo-2-butil) amino ] -3- [ N- (t-butiloxicarbonil )-N-(2-feniletil)aminometil]-benzoato de t-butilo

Uma mistura do composto do Exemplo 16(d) (1,98 g, 4,64 mmol), dicarboxilato de dimetil-acetileno (1,14 ml, 9,28 mmol) e MeOH (9,3 ml) foi aquecida ao refluxo sob árgon. Resultou uma solução homogénea. Após 1 h,’ a solução foi concentrada até um óleo-amarelo. A cromatografia (sílica-gel, EtOAc:hexano 1:1) originou um óleo amarelo. Este foi utilizado sem purificação adicional TLC (EtOAc a 30%/hexano) R_f 0,61 (produto principal); Rf 0,41 (produto secundário).

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óleo amarelo anteriormente obtido foi dissolvido em EtOAc (93 ml), e foi adicionado Pd a 10%/C (1,48 g, 1,39 mmol de Pd, 0,3 eq.). A mistura foi agitada a TA sob H₂ (310 261,5 Pa) durante 5 h e, em seguida, foi filtrada para remover o catalisador. A concentração do filtrado originou um óleo incolor, o qual foi cromatografado (sílica-gel, EtOAc a 20%/hexano) para proporcionar o composto do título como um óleo incolor (2,49 g, 94%). TLC R_f 0,55 (EtOAc a 30%/hexano); ¹H RMN (250 MHz, CDC1₃) <5 7,83 (dd, J=8,6, 1,9 Hz, 1H), 7,67 (d, J=l,9 Hz, 1H), 7,007,40 (m, 5H), 6,63 (d, J=8,6 Hz, 1H), 6,48 (brs, 1H), 4,56-4,73 (m, 1H), 4,38 (d, J=15,l Hz, 1H), 4,22 (d, J=15,l Hz, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,20-3,40 (m, 2H), 2,97 (dd, J=16,2, 6,7 HZ, 1H), 2,83 (dd, J=16,2, 6,9 Hz, 1H), 2,55-2,78 (m, 2H), 1,58 (S, 9H), 1,46 (S, 9H); IV (CC1₄) 3310, 1749, 1703, 1670, 1613, 1369, 1299, 1274, 1254, 1155 cm^-rMS(ES) m/e 593,2 [M+Na]⁺,

571,2 [M+H] ⁺ , 515,2 [M+H-C4H8]⁺485,2 [M+H-C4H₈-CH₂O] ⁺ , 471 [M+H-C₄H₈-CO₂]⁺, 350,0. i

f) ácido (R,S)-7-carboxi-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidrp-3-OXO-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético

Ácido trifluoroacético (9 ml) foi adicionado, duma só vez, a uma solução do composto do Exemplo 16(e) (2,11 g, 3,70 mmol) em CH₂C1₂ seco (9 ml) a 0°C sob árgon..A solução amarela clara resultante foi aquecida até à temperatura ambiente, agitada durante 2 h, e concentrada. Ό resíduo foi dissolvido e reconcentrado a partir de tolueno para remover o TFA residual. O óleo amarelo claro resultante foi dissolvido em MeOH anidro (18,5 ml) e a solução foi arrefecida até 0°C sob árgon. NaOMe/MeOH (l,0M;

18,5 ml, 18,5 mmol) recentemente preparado foi adicionado, gota a gota, durante 5 min. 0 banho de gelo foi removido, e a solução amarela foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 10 min, e foi aquecida ao refluxo sob árgon. Após 1,5 h, a reacção foi arrefecida em gelo e extinta com ácido acético glacial (2,1 ml, 37 mmol). Amistura foi concentrada e o resíduo foi submetido a partição entre EtOAc (50 ml) e H₂0 (50 ml). As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi exaustivamente extractada com EtOAc (em porções de 50 ml) até todos os sólidos se terem dissolvido. As camadas orgânicas combinadas foram secas

-54concentradas até a cristalização se ter iniciado. A

Ί4 119

SB CASE P50020-1 (MgSO₄) mistura resultante foi cuidadosamente arrefecida em gelo. A

filtração por sucção proporcinou o composto do título como cristais incolores ...(1,0 g, 71%). As águas-mãe foram concentradas, e o resíduo foi cromatografado (sílica-gel, MeOH a 10%/CHCl₃ - vestígios de ácido acético) para proporcionar mais material em bruto. A recristalização a partir de EtOAc contendo um pouco de MeOH produziu uma quantidade adicional do composto do título puro (1,23 g, 87%, rendimento isolado total). Pf 221-223°C; TLC (MeOH a 10%/CHCl₃) R_f 0,49; ^H RMN (250 MHz, CDC1₃) δ 7,76 (br d, 1H), 7,53 (br s, 1H), 7,00-7,35 (m, 5H) , 6,50 (d, J=8,4 Hz, 1H), 5,28 (d, J=16,5 Hz, 1H), 5,00-5,14 (m, 1H), 4,64 (br s, 1H), 3,65-3,85 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,65 (d, J=16,5 Hz, 1H), 3,01 (dd, J=15,9, 6,6 Hz, 1H), 2,73-2,90 (m, 2H), 2,68 (dd, J=15,9, 6,5 Hz, 1H); MS(ES) m/e 405,0 [M+Na] ⁺,

383,2 [M+H]⁺, 351,0 [M+HCH₃OH]⁺. -

g) (R,S)-[7-[[4-[N-(benziloxícarbonil)amino-iminometil)]fenil]amino]carbonil]-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo composto do Exemplo 16(f) (95,6 mg, 0,25 mmol) foi colocado ao refluxo com.SOClj (2,5 ml) durante 15 min, e a solução amarela foi concentrada até à secura. 0 sólido oleoso amarelo foi dissolvido em CH₂C1₂ seco (2,5 ml), e foi adicionada 4-[N—(benziloxicarbonil)amino-iminometil]anilina' (134,7 mg, 0,5 mmol). A mistura foi arrefecida em gelo/H₂0sob árgon, e foi adicionada piridina anidra (0,061 ml, 0,75 mmol), gota a gota. A mistura amarela-alaranjada resultante foi aquecida até à temperatura ambiente. Após 1,5 h, a reacção foi extinta com NaHCO₃ a 5% (5 ml) e cuidadosamente extractada com EtOAc. A secagem (Na₂SO₄), concentração, cromatografia (sílica-gel, EtOAc:CHC1₃ -MeOH a 0,5% 3:2), e a TLC preparativa das fracções misturadas a partir da cromatografia (mesmo sistema de solventes) originaram o composto do título como um óleo amarelo pálido (110,2 mg, 70%). TLC R_f 0,30 (MeOH a 0,5% em 3:2 EtOAc/CHCl₃); ^XH RMN (250 MHZ, CDC1₃) δ 8,08 (br s, 1H), 7,85 (d, J=8,7 Hz, 2H), 7,67 (d, J=8,7 Hz, 2H), 7,00-7,55 (m, 12H), 6,48 (d,J=8,5 Hz, 1H),5,155,30 (m,3H), 4,97-5,10 (m, 1H), 4,62 (br d, J=4,2 Hz, 1H), 3,74

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(S, 3H), 3,55-3,80 (m, 3H), 2,97 (dd, J=16,0, 6,7 Hz, 1H), 2,702,85 (m, 2H), 2,65 (dd, J=16,0, 6,3 Hz, 1H); IV (CHC1₃) 35503140 (br), 3490, 1734, 1654, 1610, 1490, 1317, 1269, 1145 cm^-1; MS(ES) 634,2 [M+H]⁺.

h) ácido (R,S)-[7-[[4-(amino-iminometi1)feni1]amino]carboni1]-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético.

Uma solução do composto do Exemplo 16(g) (87,0 mg, 0,1373 mmol) em EtOAczMeOH 1:1 (4,6 ml) contendo Pd a 10%/C (29,2 mg, 0,0275 mmol) e TFA (0,011 ml, 0,137 mmol) foi vivamente agitada o sob H₂. Após 1 h, a mistura foi filtrada para remover o catalisador, e a almofada de filtro foi cuidadosamente lavada com EtOAc e EtOAc/MeOH. A concentração da solução proporcionou um sólido oleoso amarelo (83,0 mg). Este foi dissolvido em Me OH (4,6 ml), e foi adicionado NaOH 1,0 N (0,41 ml, 0,41 mmol). A solução amarela clara foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite, arrefecida até 0°C, e acidificada com TFA (0,106 ml, 1,-373 mmol). A solução foi concentrada até à secura para proporcionar um óleo amarelo-alaranjado. Este material foi purificado por HPLC preparativa (a amostra foi dissolvida em AcOH aquoso a 50%):PRP-1®, eluição por gradiente (caudal: 14 Ό ml/min):CH₃CN a 5%/H₂0 (TFA a 0,1%) durante 5 min, aumentado até CH₃CN a 23%/H₂O (TFA a 0,1%), durante 24 min até à saídado produto desej ado e, em seguida, aumentado para CH₃CN a 90%/H₂O (TFA a 0,1%) durante 10 min, e depois mantido até a coluna estar limpa. As fracções contendo o produto puro foram combinadas e concentradas até ocorrer precipitação. Osólido foi dissolvido por adição de um mínimo de CH₃CN, e a solução foi liofilizada para originar o composto do título como um pó tenuamente amarelo (50%). HPLC k' 4,2 (PRP-1®, CH-jCN a 25%/H₂O-TFA a 0,1%); ¹H RMN (250 MHz, CD₃OD) 5 7,97 (d, J=8,8 Hz, 2H), 7,81 (d, J=8,8 Hz,

2H), 7,65 (dd, J=8,6, 2,1 Hz, 1H), 7,49 (d, J=2,l HZ, 1H), 7,057,25 (m, 5H) , 6,63 (d, J=8,6 Hz, 1H), 5,48 (d, J=16,6 Hz, 1H),

5,19 (dd, J=9,0, 5,2 Hz, 1H), 3,83 (d, J=16,6 Hz, 1H), 3,62-3,90 (m, 2H), 2,96 (dd, J=16,8, 9,0 Hz, 1H), 2,70-2,90 (m, 2H),2,65 (dd, J=16,8, 5,2 Hz, 1H); MS(ES) 486,4 [M+H]⁺, 440,4 [M+HHCO2H]⁺, 309,1; Anal. (C27H₂₇N₅O₄.2(CF₃CO₂H) calculada: C,

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52,18; H, 4,10; N, 9,81. Encontrada: C, 52,40; H,

Exemplo 17

Preparação de ácido (RS)-7-rΓΓ4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]-aminol-l-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético

a) (RS)-N-metil-aspartato de ^-benzilo composto do título foi preparado de acordo com o procedimento de Benoiton, L., Can J. Chem.. 40. 570 (1962). Ácido sulfúrico (3,5 ml) foi adicionado a éter dietílico anidro O (35 ml), seguido por álcool benzilico (35 ml). O éter foi removido sob vácuo, e foi adicionado ácido (RS)-N-metilaspártico finamente moído (5 g, 34 mmol), em porções, enquanto a mistura foi agitada magneticamente. Apôs 24 h, foi adicionado etanol (70 ml),, seguido pela adição gota a gota de_piridina (17 ml). A mistura foi arrefecida durante toda a noite, e filtrada para originar o composto do título (6,6 g, 82%). Pf 219-220°c.

b) N-Boc-N-metil-aspartato de (RS)-jB-benzílo (RS)-N-metil-aspartato de β-benzilo (6,6 g, 27,8 mmol), trietilamina (3,9 ml) e dicarbonato de di-t-butilo (6,1 g, 27,8 mmolj foram suspensos em DMF (45 ml). Após dissolução, a mistura reaccional foi tratada com solução de KHSO₄ fria, extractada com EtOAc, seca sobre MgSO₄, e evaporada para originar o composto do título (6,8 g, 72%). MS m/e 338 [M+H]⁺.

c) 2-fluoro-5-nitro-[N-(2-feniletil)]-benzilamina

2-Fluoro-5-nitro-benzaldeído (11,9 g, 70 mmol) e 2-feniletilamina (13 ml, 0,1 mol) foram dissolvidos em metanol (150 ml) e ácido acético glacial (15 ml).A solução foi arrefecida até 0°C, e foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (6,6 g, 0,1 mol), em porções. A reacção foi ajustada até pH 6 com ácido acético e agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura reaccional foi extinta com gelo e diluída com água. 0 pH foi ajustado até 11 com hidróxido de sódio, e a mistura foi extractada com EtOAc. Os extractos orgânicos foram lavados com solução de HC1 diluída fria, e um sólido precipitou. A filtração produ-

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ziu o composto do título (15,6 g, 82%). Pf 235-6°C; MS m/e 275

d) (RS)-N-[(1,1-dimetiletoxi)carbonil]-N-metil-O-benzil-aspartil[(N'-(2-fluoro-5-nitro-benzil),N'-(2-feniletil)]amida

Uma solução do composto do Exemplo 17(c) (4,0 g, 11,9 mmol) em CH₂C1₂ (45 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon. Foram adicionados trietilamina (3,0 ml) e reagente BOP (3,3 g, 11,9 mmol), seguidos pelo composto do Exemplo 17(b) (6,0 g, 17,8 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante toda a noite à temperatura ambiente, e vertida em u água gelada (350 ml). A mistura foi extractada com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com KHSO₄ 1M, água, NaHCO₃ a 5% e salmoura, e secos sobre MgSO₄. A filtração da mistura, evaporação do filtrado e cromatografia flash produziram o composto do título (2,0 g, 29%). MS m/e 594,2 [M+H] ⁺ . : . \ ^: ;

e) (RS)-N-metil-O-benzil-aspartil[(N'-(2-fluoro-5-nitrobenzil), Ν'-(2-feniletil)]amida

O composto do Exemplo 17(d) (2,0 g, 3,4 mmol) foi agitado com HC1 4M/dioxano (9 ml) durante 18 h. A evaporação dos solventes in vacuo produziu o composto do título.

f) í-metil-7-nitro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3^4,5-tetra-hidro-2H-1,4-benzodiazepina-2-acetato de benzilo .

A uma solução do composto do Exemplo 17(e) (2,0 g, 3,4 mmol) em DMSO (50 ml), foi adicionada trietilamina (2,4 ml). A mistura reaccional foi agitada durante todaanoite, vertida em água e extractada com acetato de etilo. As fases-orgânicas . combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre sulfato de sódio. A filtração e concentração dos extractos orgânicos in vacuo produz iram o composto do título (1.6 q. 98%). MS m/e 474,2 [M+H] ⁺ . 7

g) 7-amino-l-metil-3-oxó-4-(2-feniletil)-l,3,4,5-tetra-hídro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de benzilo

Uma solução do composto do Exemplo 17(f) (1,6 g,3,38 mmol)

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em acetato de etilo (100 ml) e catalisador de óxido de platina (0,6 g) foram agitados num agitador Parr sob hidrogénio (275 788 Pa) durante 24 h. 0 catalisador foi filtrado a partir da solução e o solvente foi evaporado in vacuo para produzir o composto do título (1,5 g, 98%), MS m/e 444,2 [M+H]⁺.

h) 7-[[[4-(benziloxicarbonil-amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-l-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de benzilo

Uma mistura do composto do Exemplo 17(g) (1,5 g, 3,4 mmol), ácido p-(benziloxicarbonilamidino)benzóico (1,01 g, 3,4 mmol), <y reagente BOP (1,5 g, 3,4 mmol) e trietilamina (1,0 ml) em DMF (12 ml) foi agitada durante toda a noite sob atmosfera de árgon. A solução foi vertida numa mistura de água gelada (160 ml) e NaHCO₃ a 5% (14 ml), e o precipitado resultante foi filtrado. O sólido filtrado foi dissolvido em diclorometano, seco sobre sulfato de sódio, filtrado, e o filtrado foi concentrado in vacuo até um sólido (3,2 g). Este material foi cromatografado (sílica-gel, EtOAc a 65%/hexano) para produzir o composto do título (1,5 g, 61%). MS m/e 724 [M+H]⁺.

i) éster de benzilo do ácido 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]- vJ -carbonil]amino]-l-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra

-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético, e ácido 7~[[[4-(amino-iminometil)fenil]-carbonil]amino-l-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

A uma solução do composto do Exemplo 17(h) (1,5 g, 2,1 mmol) em ácido acético glacial:acetato de etilo 1:1 (30 ml) e ácido clorídrico concentrado (0,5 ml), foi adicionado catalisador de paládio a 10% em carbono (1,3 g, activado). A mistura foi hidrogenada num agitador Parr (310 261,5 Pa) durante 6 h. A mistura reaccional foi filtrada, o filtrado foi evaporado e uma porção (0,36 g) do resíduo resultante foi purificada por HPLC (CH₃CN a 32%/H₂O/TFA a 0,1%, 84 ml/min, coluna de 5x25 cm YMC RAQ-353-10P S10 120P AQ ODS, detecção por UV 220 nM) para produzir o éster de benzilo e o ácido do título. Para o éster de benzilo: Anal. (C₃₅H₃₅N₅O₄.TFA.H₂O) calculada: C, 61,58; H,

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5,31; N, 9,70. Encontrada: C, 61,52; Ή, 5,00; N, 9,45. Para o ácido: ESMS m/e 590 [M+H]⁺.

Exemplo 18

Preparação de di-hidrocloreto do ácido (R,S)-8-fΓr4-(amino-iminometil)fenillaminolcarbonill-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-1.4-benzodiazepina-2-acético

a) 3-nitro-4-[N-(2-feniletilJaminometilJbenzoato de t-butilo, e 3-nitro-4-[N-(t-butoxicarbonil)-N-(2-feniletil)aminometiljbenzoato de t-butilo '·· Uma solução de 4-bromometil-3-nitrobenzoato de t-butilo [preparado pelo método de Int. J. Peptide Res., 36, 31 (1990)] (1,6 g, 0,005 mol) em diclorometano (10 ml) foi adicionada, gota a gota, durante 15 min, a uma solução de fenetilamina (1,89 g, 0,015 mol) em diclorometano (50 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob árgon durante 24 h e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em tetra-hidrofurano (50 ml) é tratado com uma solução de trietilamina (2,5 g, 0,025 mol) e dicarbonato de di-t-butilo (4,4 g, 0,02 mol) em tetra-hidrofurano (50 ml). A mistura resultante foi agitada durante toda a noite à temperatura ambiente sob árgon e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, lavado com água e seco com sulfato de sódio. A fase orgânica foi concentrada in vacuo e o resíduo foi triturado com acetato de etilo:hexano : (15:85) para produzir o composto do título (0,87 g, 37%). Pf 110-113°C. .

O filtrado foi cromatografado (sílica-gel, acetato de etilo:hexano 15:85) para produzir composto adicional (0,5 g, 21%). Pf 113-115°C.

b) 3-amino-4-[N-(t-butoxicarbonil)-N-(2-feniletilJaminometilJbenzoato de t-butilo

Uma mistura do composto do Exemplo 18(a) (1,3 g, 0,0028 mol), etanol (125 ml) e Pd a 10%/C (0,32 g) foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (275 788 Pa) durante 50 min. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo para originar

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o composto do título. Pf 105-106’C.

c) (E/Z)-3-[2-(l,4-dimetoxi-l, 4-dioxo-2-butenil) amino] -4- [N-(t-butoxicarbonil)-N-(2-feniletil) aminometil ]benzoato de t-butilo

Uma solução do composto do Exemplo 18(b) (1,15 g, 0,0027 mol) em metanol (50 ml) foi tratada com acetilenodicarboxilato de dimetilo (0,45 g, 0,0032 mol), e a solução resultante foi aquecida ao refluxo sob árgon durante 1 h. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo foi cromatografado (sílica-gel, acetato de etiloíhexano 20:80) para originar o composto do título (1,3 g, 85%).

d) (R,S)-3-[2-(1,4-dimetoxi-l,4-dioxo-2-butil)amino]-4-[N-(t-butoxicarbonil) -N-(2-feniletil) aminometil]benzoato de t-butilo

Uma solução do composto do Exemplo 18(c) (1,3 g, 0,0023 mol) em metanol (100 ml) contendo Pd a 10%/C (0,38 g) foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (275 788 Pa) durante 4,5 h. A mistura foi filtrada e o filtrado concentrado in vacuo para originar o composto do título.

e) (R,S)-8-carboxi-l,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo 18(d) (1,3 g, 0,003 mol) em diclorometano (50 ml) e TFA (50 ml) foi mantida à temperatura ambiente, sob árgon, durante toda a noite. A mistura foi concentrada in vacuo para originar um resíduo contendo ácido (R, S) — 3 — [ 2-( 1,4-dimetoxi-l, 4-dioxo-2-butil) amino] -4- [N-( 2-f eniletil)aminometil]benzóico em bruto. 0 resíduo foi dissolvido em metanol anidro (70 ml)/tratado, com metóxido de sódio metanólico (1,6 ml, 0,007 mol) e aquecido ao refluxo durante 8 h. A mistura foi mantida à temperatura ambiente durante 14 h, tratada com HC1 IN em éter dietílico (7,5 ml), concentrada in vacuo, tratada com metanol (3 x 20 ml) e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol:diclorometano:ácido acético (10:90:0,4, 15 ml), filtrado e cromatografado (sílica-gel, metanol: diclorometano: ácido acético 10:90:0,4) para originar o composto do título (0,66 g, 70%).

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-βίο sólido foi dissolvido em diclorometano (30 ml) e tratado com HC1 IN em éter dietilico (3 ml) para originar hidrocloreto de (R,S)-8-carboxi-l,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo.

f) hidrocloreto de (R,S)-8-clorocarbonil-l,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma mistura do sal hidrocloreto do composto do Exemplo 18(e) (0,2 g, 0,5 mmol) e cloreto de tionilo (6 ml) foi aquecida ao refluxo sob árgon durante 15 min. A mistura foi concentrada in vacuo, tratada com diclorometano (3x20 ml) e concentrada in vacuo para originar hidrocloreto de (R,S)-8-clorocarbonil-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-1,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo como um sólido amarelo.

g) (R,S-8-[[[4-[N-(benziloxicarbonil)amino-iminometil]fenil]amino]carbonil]-12,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

A uma solução de 4-[N-(benziloxicarboriil)amino-iminometil]~ anilina (0,13 g, 0,5 mmol) e di-isopropiletilamina (0,062 g, 0,5 mmol) em diclorometano (25 ml) foi adicionada uma solução do composto do Exemplo 18(f) êm diclorometano (5 ml). A mistura foi mantida à temperatura ambiente durante 20 h, tratada com di-isopropiletilamina (0,15 g) e lavada com água. A fase orgânica foi seca com sulfato de sódio e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por TLC preparativa (sílica-gel, metanol:diclorometano 5:95) e eluído com metanol:diclorometano:di-isopropileti.lamina para originar o composto do título (0,14 g, 46%).

h) (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil] -1,2,4,5-

-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo ..

Uma solução do composto do Exemplo 18(g) (0,13 g, 0,2 mmol) e Pd a 10%/C (0,1 g) em metanol (50 ml) e HC1 IN em éter dietilico (1,0 ml) foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (206 841Pa) à temperatura ambiente durante 30 min. A mistura foi filtrada e o filtrado concentrado in vacuo para produzir o composto do título. . ~ “ ----- -74 119

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-62í) di-hidrocloreto de (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]amino ]carbonil]-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-1,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo 18(h) (0,1 g, 0,175 mmol) numa mistura de metanol (20 ml), água (2 ml) e NaOH IN (1 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 19 h. A mistura foi acidificada até pH 1 com HC1 3N, concentrada in vacuo e purificada por HPLC-TR 21,19 min (YMC ODS-AQ^R, 50x250 mm, 1,5 ml/min, acetonitrilo:água:TFA 33:77:0,1, detecção por UV a 220 nm). As fracções contendo o produto foram combinadas e liofilizadas, re-dissolvidas em água (70 ml), HC1 6N (2 ml) e acetonií trilo, e liofilizadas para produzir o composto do título (0,37 g, 40%). MS(EI) m/e 486 [M+H]⁺.

. Exemplo 19

Preparação de trifluoroacetato do ácido (R,S)-8-rrr4-(amino-iminometil)fenil!-carbonillamino1-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-1,4-benzodiazepina-2-acético

a) (R,S)-8-azidocarbonil-l,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

O composto do Exemplo 18(f) (0,6 g, 1,3 mmol) foi dissolviO do em acetona seca (6 ml) e adicionado, gota a gota, a uma solução de azida de sódio (120 mg, 1,8 mmol) em água (3 ml) agitada num banho de gelo. A mistura foi agitada durante 1 h, diluída com água (15 ml) e extractada com acetato de etilo. A fase orgânica foi seca sobre MgSO₄ e concentrada in vacuo para produzir o composto do título (0,55 g, 90%).

b) (R,S)-8-amino-l,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo 19(a) (0,55 g, 1,1 mmol) em tolueno seco (12 ml) foi aquecida até 80°C sob atmosfera de árgon durante 2 h. A mistura foi concentrada in vacuo para produzir (R,S)-8-isocianato-l,2.,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo.

resíduo foi agitado em HC1 3N (6 ml) e tetra-hidrofurano

Ί4 119

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-63(10 ml) durante 1 h. A mistura foi concentrada in vacuo e foi adicionado bicarbonato de sódio sólido até pH 8. A mistura foi extractada com acetato de etilo e a fase orgânica foi seca com MgSO₄ e concentrada in vacuo para originar (R,S)-8-amino-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil) -3H-1,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo (0,3 g, 67%).

c) (R,S)-8-[[[4-[N-(benziloxicarbonil)amino-iminometil]fenil]carbonil]amino]-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma mistura de ácido 4-[N-benziloxicarbonil)-(amino-iminometil)Jbenzóico (0,23 g, 1,0 mmol) e cloreto de tionilo (3 ml) em diclorometano (3 ml) foi aquecida ao refluxo durante 10 min, concentrada in vacuo, tratada com tolueno e concentrada in vacuo, várias vezes, para originar cloreto de 4-[N-(benziloxicarbonil)-(amino-iminometil)benzoilo. Uma solução deste cloreto de ácido em diclorometano (3 ml) fõi adicionada, gota a gota, a uma solução do composto do Exemplo 19(b) (0,3 g, 0,9 mmol) e di-isopropiletilamina (130 mg, 1,0 mmol) em diclorometano seco (5 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente, sob árgon, durante 5 h, diluída com diclorometano (20 ml) e extractada com água, HC1 3N, bicarbonato de sódio a 5% e salmoura. A fase orgânica foi seca com MgSO₄ e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi cromatografado (sílica-gel, metanol:diclorometano 2:98) para produzir o composto do título (0,77 g, 32%). .

d) (R,S)-8-[ [ [4-(amino-iminometil)'fenil]carbonil]amino-l,2,4>5-

-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3Η-1,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo . : 2 Uma solução do composto do Exemplo 19(c) (0,1 g, 0,15 mmol) e Pd a 10%/C (20 mg) em metanol (40 ml)e HC1 3N (8 gotas), foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (310 261,5 Pa) durante 30 min. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado in vacuo para produzir o composto do título (65 mg, 87%).

e) Ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-1,4-benzodiazepina-2-acético .

Uma solução do composto do Exemplo 19(d) (65 mg, 0,12 mmol)

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em metanol (15 ml), água (2 ml) e NaOH IN (1 ml), foi agitada à temperatura ambiente, sob árgon durante toda a noite. A mistura foi tratada com HC1 3N (1 ml) e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo:água (33:67) e purificado por HPLC TR 11,2 min (YMC ODS-A(^, 50x250 mm, 85 ml/min, acetonitrilo: água:TFA 33:77:0,1, detecçâo por UV a 220 nm) para produ zir o composto do título (26 mg, 33%). MS (EI) m/e 486 [M+H]⁺.

Exemplo 20

Preparação de ácido7-rrr4-famino-iminometil^,)fenillcarbonil1aminol -3-oxo-l ,2,3,5-tetra-hidro-4H-l, 4-benzodiazepina-4-propanóico

a) 2-fluoro-5-nitro-[N-(3-t-butilcarboxietil)]benzilamina

Éster de t-butilo do ácido 3-aminopropiónico (9,7 g, 53,3 mmol) e 2-fluoro-5-nitro-benzaldeído (9,0 g, 53,3 mmol) foram adicionados a uma suspensão de acetato de sódio (6,5 g, 78,3 mmol) em metanol (150 ml),seguidospela adição,emporções, de cianoboro-hidreto de sódio (6,5 g, 0,1 mol). Após 2 h à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi extinta com gelo, e diluída com solução de bicarbonato de-sódio. A mistura foi extractada com EtOAc, e os extractos orgânicos combinados foram Ό secos sobreMgso₄. A filtração e evaporação do solvente in vacuo produziram o composto do título como um óleo amarelo (15,7 g, 99%). MS m/e 299 [M+H]⁺. L ' '

b) N-[(l,l-dimetiletoxi)carbonil]-N-metil-o-benzil-aspartil[(N^z-(2-fluoro-5-nitro-benzil) ,N'-(2-feniletil) ]amida

Uma solução do composto do Exemplo 20(a) (17,3 g, 58,1 mmol) em CH₂C1₂ (250 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob atmosfera de árgon. Foram adicionados trietilamina (18 ml, 128 mmol) e reagente BOP (28,2 g, 63,9 mmol), seguidos por Bocglicina (11,2 g, 63,9 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante toda a noite à temperatura ambiente, e vertida em água gelada (300 ml). A mistura foi extractada com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com KHSO₄ 1M, água, NaHCOg a 5% e salmoura,e secos sobre MgSO₄. A filtração da mistura e evaporação do filtrado in vacuo produziram o

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-65composto do título (26,4 g, 100%).

c) glicinil-[(N'-(2-fluoro-5-nitro-benzil),N'-(3-t-butiloxicarbonilpropanil)]amida composto do Exemplo 20(b) (26,4 g, 58 mmol) foi agitado em CH₂C1₂ (250 ml) e HC1 4M/dioxano (25 ml) a 0“C durante 3 h. A evaporação dos solventes in vacuo produziu o composto do título (20,0 g, 100%). MS m/e 356 [M+H]⁺.

d) 7-nitro-3-oxo-l,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-2-propanoato de t-butilo

A uma solução do composto do Exemplo 20(c) (12,0 g, 30,7 mmol) em DMSO (400 ml), foram adicionados trietilamina (15 ml) e água (5 ml), e a reacção foi agitada durante toda a noite. A mistura reaccional foi vertida em água (500 ml) e extractada com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura aquosa, e secas sobre sulfato de sódio. A filtração e concentração dos extractos orgânicos in vacuo produziram o composto do título (1,8 g, 18%). MS m/e 336 [M+H]⁺.

e) 7-amino-3-oxo-1,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-2-propanoatode t-butilo

Uma solução do composto do Exemplo 20(d) (2,2 g, 6,6 mmol) e catalisador de óxido de platina (0,6 g) em acetato de etilo (100 ml)_r foi agitada num agitador Parr sob hidrogénio (275 788 Pa) durante 1 h. 0 catalisador foi filtrado a partir da solução, e o solvente foi evaporado in vacuo para produzir o composto do título (2,0 g, 98%). MS m/e 306 [M+H] ⁺ . ' ~

f) 7- [[[4-(N-benziloxicarbonilamino-imínometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-1,2,3,5-tetra-hidro-4H-l, 4-benzodiazepina-4-propanoato de t-butilo ~

Uma mistura do composto do Exemplo 20(e) (2,0 g, 6,6 mmol), ácido p-(benziloxicarbonilamidino)benzóico (2 g, 6,6 mmol), reagente BOP (2,9 g, 6,6 mmol) e trietilamina (1,6 ml, 13,2 mmol), foi agitada durante toda a noite sob atmosfera de árgon.

A solução foi vertida numa mistura de água gelada (150 ml), e extractada com EtOAc. Os extractos combinados foram lavados com

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solução de NaHCO₃ a 5%, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados in vacuo até um sólido amarelo. Este sólido foi cromatografado (sílica-gel, metanol a 3%/CH₂Cl₂) para produzir o composto do título (150 mg, 4%). MS m/e 586 [M+H]⁺.

g) ácido 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-1,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-4-propanóico

Paládio a 10% em carbono (150 mg, activado) foi adicionado a uma solução do composto do Exemplo 20(f) (150 mg, 0,26 mmol) em ácido acético glacial:acetato de etilo (1:1, 30 ml) e ácido clorídrico concentrado (0,5 ml). A mistura foi hidrogenada num agitador Parr (310 261,5 Pa) durante 24 h. A mistura reaccional foi filtrada, o filtrado foi evaporado, e uma porção (0,36 g) do resíduo resultante foi purificada por HPLC (YMC ODS-AÇ^, 50x250 mm, 85 ml/min, CH₃CN a 15%/H₂0-TFA a.0,1%, detecção por UV a 220 nm), para produzir o composto do título (15 mg). MS m/e 362 [M+H]⁺; Anal. (C₂₀H₂₁N₅0₄.1,1 TFA.0,25 H₂0) calculada: C, 47,46; H, 4,23; N, 12,47. Encontrada: C, 47,76; H, 4,05; N, 12,17.

Exemplo 21

Preparação de ácido (R,S)-r7-rr4-(amino-iminometil)fenil]amino1carbonilt-l-metil-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético (SB208167)

a) (R,S)-7-benziloxicarbonil-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Exemplo 16(f) (0,44 g, 1,15 mmol) foi colocado ao refluxo com SOC1₂ (11,5 ml) durante 15 min e, em seguida, a solução amarela foi concentrada até à secura. 0 resíduo foi concentrado uma vez a partir de tolueno seco (5 ml) para remover o SOC1₂ residual, e o material resultante foi dissolvido em CH₂C1₂ seco (11,5 ml). A solução foi arrefecida até 0°C sob árgon, e foram sequenciálmente adicionados álcool benzílico seco (0,24 ml, 2,30 mmol, 2 eq.), piridina seca (0,28 ml, 3,45 mmol, 3 eq.) e DMAP (14 mg, 0,12 mmol, 0,1 eq.). A reacção foi, em seguida, aquecida até à TA. Após 5 min, foi adicionado mais álcool benzílico (0,24 ml,2,30 mmol, 2 eq.). A solução foi agitada à TA durante 2 h e, em seguida, foi diluída com EtOAc (50 ml) e lavada com H₂O (2x25

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SB CASE P50020-1 ml). As camadas aquosas combinadas foram extractadas com EtOAc (25 ml), e os extractos orgânicos combinados foram secos (Na₂SO₄) e concentrados. A cromatografia em sílica-gel (EtOAc/hexano 1:1) originou o composto do título (0,42 g, 77%) como um sólido amarelo pálido. TLC (EtOAc/hexano 1:1) R_f 0,44; ^XH RMN (250 MHz, CDC1₃) d 7,75 (dd, J=8,5, 1,9 Hz, 1 H), 7,51 (d, J=l,9 Hz, 1 H), 7,00-7,50 (m, 10H), 6,48 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 5,18-5,40 (m, 3 H), 4,99-5,11 (m, 1 H), 4,55 (br s, 1 H) , 3,55-3,87 (m, 3 H) , 3,75 (S, 3 H), 2,99 (dd, J=16,0, 6,7 Hz, 1 H), 2,72-2,90 (m, 2 H), 2,65 (dd, J=16,0, 6,5 Hz, 1 Η); IV (CHC1₃) 3230-3450 (br), 1735, 1702, 1664, 1654, 1612, 1288, 1187 cm¹; MS(ES)495,2 (M + Na)⁺, 473,2 [M+H]⁺, 441,2 (M + H-MeOH)⁺.

b) (R,S)-7-benziloxicarbonil-l-metil-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-

-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Foi adicionado NaH (dispersão a 60% em óleo mineral, 71 mg, 1,78 mmol, 2 eq.) a uma solução do Exemplo 21(a) (0,42 g, 0,89 mmol, 1 eq.) e iodeto de metilo (1,1 ml, 17,8 mmol, 20 eq.) em THF seco (8 ml) e DMF seca (0,8 ml) à TA sob árgon.Após 10 min foi adicionado mais NaH (107 mg, 2,67 mmol, 3 eq.). A mistura resultante foi agitada à TA durante 2 h, em seguida foi arrefecida até 0°C, e foi cuidadosamente adicionado ácido acético glacial (0,5 ml, 8,9 mmol, 10 eg.). Quando a libertação de gás diminuiu, foi adicionado H₂O (10 ml), e a mistura foi extractada com EtOAc. A secagem (Na₂SO₄) e concentração originaram um óleo . amarelo. A cromatografia em sílica-gel (EtOAc/hexano 141) proporcionou o composto do título (0,33 g, 76%) como um óleo amarelo. TLC (1:1 EtOAc/hexano) Rf 0,55; ^XH RMN (250 MHz, CDC1₃) d 7,85 (dd, J=8,7, 2,0 Hz, 1 H), 7,55 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,28-7,50 (m, 4 H), 6,87-7,20 (m, 6 H), 6,82 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 5,34 (s, 2 H), 5,21 (d, J=17,0 Hz, 1 H), 4,85 (dd, J=9,2, 5,0 Hz, 1 H), 3,96-4,15 (m, 1 H), 3,88 (d, J=17,0 Hz, 1 H), 3,69 (s, 3 H), 3,40-3,62 (m, 1 H), 3,13 (dd, J=16,3, 9,2 Hz, 1 H), 2,70-2,90 (m, 2H), 2,70 (S, 3 H), 2,64 (dd, J=16,3,5,0 Hz, 1 H); IV (CC1₄) 1743, 1715, 1671, 1612, 1279, 1218, 1185, 1115, 700 cm^-1; MS(ES) 487,2 [M+H]⁺, 449,2, 411,2.

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c) (R,S)-7-carboxi-l-metil-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro

-3-OXO-2H-1,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma mistura do Exemplo 21(b) (0,33 g, 0,68 mmol, 1 eg.),

Pd a 10%/C (0,22 g, 0,20 mmole, 0,3 eq.), EtOAc (7 ml), e MeOH (7 ml) foi agitada à TA sob H₂ (pressão de balão). Após 1 hora, a mistura foi filtrada para remover o catalisador, e o filtrado foi concentrado até uma espuma incolor. A recristalização (EtOAc/MeOH) originou o composto do título (128,3 mg, 47%) como cristais incolores. As águas-mãe foram concentradas, e o resíduo foi cromatografado em sílica-gel (MeOH a 10%/EtOAc contendo ácido acético glacial (5 gotas/100 ml de solvente)) para proporcionar mais composto do título (86,0 mg, 32%;- rendimento total 214 mg, 79%). Os dados analíticos foram recolhidos a partir do material recristalizado. Pf 192-196°C; TLC (MeOH a 10%/EtOAc) Rf 0,71;-¾ RMN (250 MHz), CDClg) d 7,87 (dd, J=8,7,

1,9 Hz, 1 H), 7,59 (d, J=l,9 Hz., 1 H), 6,90-7,30 (m, 5H) , 6,84 (d, J=8,7 HZ, 1 H), 5,25 (d,>=16,9Hz), 1 H), 4,90 (dd, J=9,l,

5,1 HZ), 4,01-4,20 (m, 1 H), 3,85 (d, J=16,9 Hz, 1 H), 3,70 (s, 3 H), 3,45-3,60 (m, 1 H), 3,15 (dd, J=16,3, 9,1 Hz, 1 H) , 2,75-2,90 (m, 2 H) , 2,73 (S, 3 H), 2,67 (dd, J=16,3, 5,1 Hz, 1 H); MS(ES) 419,2 (M + Na)⁺, 397,2 [M+H]⁺, 369,2, 323,2.

d) (R,S)-[7-[[4-[N-bénziloxicarbonil)amino-iminometil)]fenil]amino]carbonil]-T-metil-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Exemplo 21(c) (99,1 mg, 0,25 mmol, 1 eq.) foi colocado ao refluxo com SOC1₂ (2,5 ml) durante 15 min e, em seguida, a solução amarela foi concentrada até à secura. 0 resíduo foi dissolvido em CH₂C1₂ seco (2,5 ml), foi adicionada 4-[N-(benziloxicarbonil)amino-iminometil)]anilina (134,7 mg, 0,5 mmol, .2 eq.), e a solução foi arrefecida ate 0°C sob árgon. Foi, de seguida, adicionada piridina anidra (0,061 ml, 0,75 mmol, 3 eq.), gota a gota, é a mistura amarela resultante foi aquecida até à TA. Após 1 h, a reacção foi extinta com NaHCO₃ a 5% (5 ml) e cuidadosamente extractada com EtOAc. A secagem (Na₂SO₄) e concentração originaram um sólido amarelo. A recristalização (EtOAc/MeOH) originou o composto do título (71,2 mg, 44%) como um sólido amarelo. As águas-mãe foram concentradas até um semi-

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-69-sólido amarelo, o qual foi cromatografado em sílica-gel (EtOAc/tolueno 3:1) para proporcionar mais composto do título (51,3 mg, 32%; rendimento total 122,5 mg, 76%). PF largo e indefinido, cerca de 150-160°C (possível decomposição). TLC (3:1 EtOAc/tolueno) R_f 0,4; ^XH RMN (250 MHz, CDC1₃) d 7,95 (br s, 1

H), 7,91 (d, J=8,7 HZ, 2 H), 7,75 (d, J=8,7 Hz, 2 H), 7,64 (dd,

J=8,6, 2,1 HZ, 1 H) , 6,92-7,50 (m, 11 H), 6,88 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 5,15-5,29 (m, 3 H), 4,85 (dd, J=9,l, 5,0 Hz, 1 H), 3,98-4,18 (m, 1 H), 3,82 (d, J=17,l Hz, 1 H), 3,70 (s, 3 H), 3,44-3,58 (m,

H), 3,14 (dd, J=16,4, 9,1 Hz, 1 H), 2,75-2,85 (m, 2 H), 2,72 (s, 3 H), 2,66 (dd, J=16,4, 5,0 Hz, 1 H); MS(ES) 648,2 [M+H]⁺.

e) ácido (R,S)-[7-[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil]-l-metil-4 - (2-f enil )-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l, 4-benzodiazepina-2-acético

Uma mistura contendo o Exemplo 21(d).(122,5 mg, 0,019 mmol, 1 eq.), TFA (0,015 ml, 0,19 mmole, 1 eqí), Pd a 10%/C (40 mg, 0,038 mmole, 0,2 eq.), MeOH (3 ml), e EtOAc (3 ml) foi vivamente agitada, à TA sob H₂ (pressão de balão) . Após 1,5 h, a reacção foi filtrada através de Celite para remover o catalisador, e o filtrado foi concentrado deixando um sólido amarelo (112,0 mg). Este sólido foi dissolvido em MeOH (6 ml), e foi adicionado NaOH 1,0 N (0,57 ml, 0,57 mmol, 3 eq. ) . A reacção foi agitada à TA durante toda a noite e, em seguida, foi concentrada até à secura no rotavapor. 0 resíduo foi retomado em H₂0 (2 ml) para proporcionar uma solução ligeirãmente nebulosa, e foi adicionado TFA (0,15 ml, 1,9 mmol,10 eq.). A solução resultante foi concentrada, deixando um resíduo amarelo. Os materiais combinados a partir desta experiência e duma experiência separada (escala de 0,1062 mmol) foram purificados por HPLC preparativa (a amostra foi dissolvida em AcOH aquoso a 50%; coluna: Hamilton PRP-1® preparativa; solvente: CH₃CN a 23%/H₂O/TFA a 0,1% durante 14 min até à saída do produto desejado,e de seguida aumentado para CH₃CN a 90%/H₂0/TFA a 0,1% durante 5' min, e mantido até a coluna estar limpa; caudal 14 ml/min). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e concentradas até cerca de 50 ml no rotavapor. Os.sólidos foram dissolvidos pela adição de um pouco de CH₃CN (TFA a 0,1%), e a solução foi liofilizada para

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-70originar o composto do título (0,1 g, 48%) como um sólido amarelo pálido. HPLC (coluna PRP-1®; CH₃CN a 25%/H₂0/TFA a 0,1%) k^z 9,3 (TR 11,91 min); ¹H RMN (250 MHz, CDgOD) d 7,96-8,06 (m, 2 H), 7,73-7,87 (m, 3 H), 7,57 (d, J=2,2 Hz, 1 H) , 6,91-7,15 (m, 6 H), 5,33 (d, J=17,2 HZ, 1 H), 4,95 (dd, J=9,2, 4,9 Hz, 1 H, parcialmente obscurecido por pico de H₂O), 4,08-4,22 (m, 1 H), 4,07 (d, J=17,2 HZ, 1 H), 3,43-3,60 (m, 1 H) , 3,04 (dd, J=16,5,

9,2 Hz, 1 H), 2,73-2,85 (m, 2 H), 2,69 (s, 3 H), 2,65 (dd, J=16,5, 4,9 Hz, 1 H, parcialmente obscurecido por ressonância de N-metilo); MS(ES) 500,2 [M+H]⁺; Anal, calculada para ^C28^H29^N5°4·¹·⁸ (CF₃CO₂H): C, 53,85; H, 4,40; N, 9,94. Encontrada: C, 53,93; H, 4,69; N, 9,83.

Exemplo 22

Preparação de ácido (R,S)-8-rΓr4-(amino-iminometil)fenillcarbonillamino1-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acético

a) 7-nitro-2-oximino-tetralina

-Uma solução de 7-nitrotetralona (4,20 g, 22,0 mmol) em metanol (100 ml) foi arrefecida até 0°C, e foram adicionados hidroxilamina (1,68 g, 23,2 mmol) e acetato de sódio (3,69 g,

46,4 mmol). A reacção foi, em seguida, agitada à temperatura ambiente durante 12 h. 0 metanol-foi evaporado sob pressão reduzida, e foi adicionado diclorometano (100 ml). A mistura foi ílavada com água, seca sobre NaSO₄ e evaporada sob pressão reduzida para produzir o composto do título (4,37 g, 97%). MS (DCI/NH3) m/e 207 [M+H]⁺.

b) 2-oxo-8-nitro-l,2,4,5-tetra-hídro-3H-l,4-benzoazepina

Uma solução do composto do Exemplo 22(a) (2,49 g, 12,1 mmol) em éter dietílico(50 ml) foi tratada com pentacloreto de fósforo (3,21 g, 20,9 mmol). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 4 h. A mistura reaccional foi vertida em água gelada e extractada com éter dietílico. A fase orgânica foi, então, seca sobre MgSO₄ e evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi recristalizado em tolueno para produzir o composto do título (1,30 g, 52%). MS (DCI/NH₃) m/e 207 [M+H]⁺.

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c) 4-(4-nitro-2-amino-fenil)butanoato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo 22(b) (3,55 g, 17,2 mmol) em etanol (100 ml) foi tratada com HC1 6N (10 ml). A reacção foi aquecida ao refluxo durante 12 h. A mistura foi, de seguida, neutralizada com NaOH IN e extractada com diclorometano. A fase orgânica foi seca sobre MgSO₄. O solvente foi removido sob pressão reduzida para produzir o composto do título (3,24 g, 86%). MS (DCI/NH3) m/e 239 [M+H]⁺.

d) 4-[4-nitro-2-(t-butiloxicarbonil)amino-fenil]butanoato de metilo

O Uma solução do composto do Exemplo 22(c) (3,12 g, 13,1 mmol) em diclorometano (100 ml) foi arrefecida até 0°C. Foram adicionados 4-dimetilaminopiridina (1,60 g, 13,1 mmol) e dicarbonato de di-terc-butilo (8,57 g, 39,3 mmol). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 4 h. A mistura foi, de seguida, evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 30%/hexano) para produzir o composto do título (3,67 g, 83%). MS (DCI/NH3) m/e 339 [M+H]⁺. - v

e) 4-[4-amino-2-(t-butíloxicarbonil)amiho-fenil]butanoato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo 22(d) (1,00 g, 2,95 mmol) em metanol (30 ml) foi misturada com Pd a 5%/C(150 mg), seguida por hidrogenação num agitador Parr (344 735 Pa) durante 2 h. A misutra foi filtrada através de Celite® e evaporada sob pressão reduzida para produzir o composto do título (0,87 g, 96%). / ' -- -· · . '7^ -

f) 4-[4-benziloxicarbonil)amino-2-(t-butiloxicarbonil)amino-feniljbutanoato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo 22(e) (0,93 g, 2,75 mmol) em diclorometano (50 ml) foi misturada com di-isopropiletilamina (0,54 ml, 4,61 mmol), e foi adicionado cloroformato de benzilo (0,50 g, 2,93 mmol). A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h. A mistura foi lavada com água, seca sobre

MgSO₄ e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado

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por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 30%/hexano) para produzir o composto do título (0,90 g, 76%). MS (DCI/NH3) m/e 443 [M+H]⁺.

g) 4-[4-(benziloxicarbonil)amino-2-(t-butiloxicarbonil)amino-feniljbutanol

Uma solução do composto do Exemplo 22(f) (0,80 g, 1,81 mmol) em THF (20 ml) foi arrefecida até 0°C e tratada com boro-hidreto de lítio (0,12 g, 5,5 mmol). A reacção foi subsequentemente aquecida ao refluxo durante 1 h. A reacção foi arrefecida até 0’C e foi adicionada água (1 ml). A mistura foi evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi extractado com diclorometano, lavado com Na₂CO₃ (aquosa, saturada) e água, seco sobre Na₂SO₄ e evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash fsílica-gel, acetato cie etilo a 50%/hexano) para produzir o composto do título (0,67 g, 89%).

h) 4-[4-(benziloxicarbonil)amino-2-(t-butiloxicarbonil)amino-feniljbutanal

Uma solução do composto do Exemplo 22(g) (0,15 g, 0,36 mmol) em diclorometano (10 ml) foi tratada com clorocromato de piridínio (0,24 g, 1,11 mmol). A reacção foi agitada sob árgon durante 3 h, e foi adicionado éter dietílico (20 ml). A mistura foi filtrada através de Florosil®. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida para produzir o composto do título (0,11 g, 74%).

i) 6-[4-(benziloxicarbonil)amino-2-(t-butiloxicarbonil)amino

-fenil]-hex-2-enoato de -etilo”

Uma solução do composto do Exemplo.22(h) (0,68 g, 1,65 mmol) em diclorometano (10 ml) foi tratada com carboetoximetilenotrifenilfosforano (0,57 g, 1,64 mmol). A reacção foi agitada sob árgon durante 12 h. A mistura foi evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 30%/hexano) para produzir o composto do título (0,39 g, 50%). MS (DCI/NH3) m/e 483 [M+H]⁺.

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j) 6-[4-(benziloxicarbonil)amino“2-amino-fenil]-hex-2-enoato de etilo composto do Exemplo 22(i) (0,47 g, 0,96 mmol) foi tratado com ácido trifluoroacético (5ml) durante 1 h. A mistura foi evaporada sob pressão reduzida para produzir o composto do título (0,35 g, 95%).

k) (R,S)-8-(benziloxicarbonil)amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acetato de etilo

O composto do Exemplo 22(j) (0,32 g, 0,84 mmol) foi dissolvido em ácido acético (10 ml). A reacção foi colocada ao refluxo durante 8 h, e evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi retomado em diclorometano, lavado com Na₂CO₃ a 5% (aquoso), seco sobre Na₂SO₄ e evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 35%/hexano) para produzir o composto do título (0,18 g, 55%. MS (ES) m/e 383 [M+H]⁺.

1) (R,S)-8-amino-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazeplna-2-acetato de etilo

Uma solução do composto do Exemplo 22(k) (0,29 g, 0,76 mmol) em metanol (10 ml) foi misturada com Pd a 5%/C (0,1 g). A mistura foi tratada com H₂ (Parr, 344 735 Pa) até estar concluída. A mistura foi filtrada e evaporada sob pressão reduzida para produzir o composto dotítulo (0,14 g, 76%).

m) (R,S)-8-[[[4-(benziloxicarbonilamino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acetato de etilo - ----- . ~ Uma solução do composto do Exemplo 22(1) (0,14 g, 0,56 mmol) em dimetilformamidà (3 ml) foi tratada com 4-dimetilaminopiridina (0,083 g, 0,68 mmol), N,N'-diciclo-hexilcarbodiimida (0,128 g, 0,59 mmol) è ácido p-(benziloxicarbonilamidino)benzóico (0,202 g, 0,68 mmol). A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 60-75%/hexano) para produzir o composto do título (0,121 g, 41%). MS (DCI/NH₃) m/e 529 [M+H]t.

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-74(R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-1,3,4,5n)

-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acetato de etilo

Uma solução do composto do Exemplo 22(m) (0,076 g, 0,14 mmol) em ácido acético (10 ml) foi misturada com Pd a 5%/C (0,050 g). A reacção foi agitada num agitador Parr sob hidrogénio (344 735 Pa) durante 1 h. A mistura foi filtrada através de Celite® e evaporada sob pressão reduzida para produzir o composto do título (0,041 g, 72%). MS (ES) m/e 395 [M+H]⁺.

o) ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]aminoJ-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acético

Uma solução do composto do Exemplo 22(n) (0,023 g, 0,058 mmol) em metanol (4 ml) foi tratada com NaOH IN (0,25 ml). A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 12 h. Foi adicionado HC1 IN aquoso (0,25 ml). A reacção foi evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por HPLC (PRP-1®, água:acetonitrilo-TFA a 0,1% 85:15) para produzir o composto do título (0,015 g, 70%). MS(ES) m/e 367 [M+H]⁺.

Exemplo 23

Preparação de ácido (R,S)-r7-rrr3-(aminometilIfenillmetillamino 1 carbonil 1-4- (2-f eniletil )-l, 3 _T4,5-tetra—hidro—3—OXO-2H—1,4-benzodiazepina-2-acético

a) 3-[N-(t-butiloxicarbonil)aminometil]benzilamina

Dicarbonató de di-terc-butilo (8,29 g, 38 mmol) foi adicio-nado a uma solução de m-xililenodiamina (15 ml, 114 mmol) em CHCI3 (30 ml) à -temperatura ambiente. A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h, diluída com Et₂O e lavada com Na₂CO₃ aquoso a 5%. A fase orgânica foi lavada com HC1 IN e a fase aquosa foi lavada com éter. 0 pH da fase aquosa foi ajustado até 10, extractado com éter, seco e evaporado para produzir o composto do título como um óleo incolor (4,0 g, 45%).

b) (R,S)-[7-[[4-[N-(benziloxicarbonil)amino-iminometil)]fenil]amino]carbonil]-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

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-750 composto do Exemplo 21(f)(153 mg, 0,40 mmol) foi colocado ao refluxo com SOC1₂ (2,5 ml) durante 15 min. A solução amarela foi concentrada até à secura para produzir um sólido oleoso amarelo, o qual foi dissolvido em CH₂C1₂ seco (2,5 ml). Foi adicionado o composto do Exemplo 23(a) (280 mg, 1,20 mmol) em CH₂C1₂ (0,5 ml), e a mistura foi cuidadosamente arrefecida em gelo/H₂0 sob árgon. Foi adicionada piridina anidra (0,097 ml,

1,2 mmol), gota a gota, e a mistura amarelo-alaranjada resultante foi aquecida até à temperatura ambiente. Após 1,5 h, a reacção foi extinta com NaHC0₃ a 5% (8 ml) e cuidadosamente extractada com EtOAc. Os extractos orgânicos combinados foram O secos (Na₂SO₄), concentrados e cromatografados (sílica-gel, EtOc a 50%/CHCl₃) para produzir o composto do título (141 mg, 59%). MS m/e 601 [M+H]⁺.

c) ácido (R,S) -[7 - [ [4.-.(amino-iminometil)fenil] amino]carbonil] -4-(2-feniletil)-1,3;4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

Uma solução do composto do Exemplo 23(b) (141,0 mg, 0,235 mmol) foi dissolvido em MeOH (1,9 ml), e foi adicionado NaOH 1,0 N (0,47 ml, 0,47 mmol). Após 18 h, a solução amarela clara foi concentrada, o resíduo foi diluído com água (2 ml), acidificado com HC1 3N até-pH 4, e extractado com EtOAc. Os extractos combinados foram lavados com água, secos (Na₂SO₄) eevaporados para produzir um sólido amarelo (1'37 mg).

sólido foi dissolvido em TFA e CH₂C1₂ (2,4 ml de cada um). Após agitação à temperatura ambiente durante 3 h, a mistura foi concentrada para originar um produto em bruto (157 mg). Este material foi purificado.por HPLC preparativa, k' 7,4 (PRP- 1®, 14 ml/min, gradiente, A:acetonitrilo B:água-TFA a 0,1%, 21% de A até à eluição do produto desejado (-24 min), 21-90% de À durante 10 min). As fracções contendo o produto puro foram combinadas, concentradas até (- 20 ml), e liofilizadas para proporcionar o composto do título como um pó tenuamente amarelo (83,1 mg, 48%). MS m/e 487 [M+H]⁺; Anal.

(^C28^H30^N4⁰4-^2C2^HF3°2-^H2°) calculada: C, 52,46; H, 4,68; N, 7,65.

Encontrada: C, 52,47; H, 4,48; N, 7,69.

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Exemplo 24

Preparação de ácido 8-ΓΓr4-ramino-iminometill-fenil1amino1carbonil1-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2~acético

a) 4-pent-4-enil-benzoato de metilo

Uma mistura de Mg seco (900 mg, 37 mmol) e ZnBr₂ (5,63 g, 25 mmol) em THF (25 ml) foi tratado com 5-bromopent-l-eno (4,45 ml, 37,6 mmol) e a suspensão subsequente foi aquecida a 56°C durante 18 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, foram adicionados 4-bromobenzoato dé metilo (7,1 g, 33 mmol) e tetraquis-(trifenilfosfina)paladio(0) (1,0 g, 0,865 mmol), e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A mistura foi extinta com HC1 3N (aquoso) e extractada com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram secos sobre MgSO₄ anidro e e evaporados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 5%/hexano) para originar o composto do título em bruto, o qual foi utilizado sem purificação adicional. . :

b) 4-(4-hidroxi-butil)benzoato de metilo

O composto do Exemplo 24(a) foi dissolvido numa mistura de MeOH/CH₂Cl₂, arrefecido até -78°C e tratado com excesso de 0₃.

Depois do excesso de O₃ ter sido purgado, foi adicionado NaBH₄ sólido (2,50 g, 66 mmol), e ã solução foi levada lentamente até à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional foi evaporada sob pressão reduzida, e o resíduo foi retomado em acetato de etilo. De seguida, foi lavado com HC1 IN (aquoso), seco sobre MgSO₄ anidro e evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado _por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 30-40%/hexano) para produzir o composto do título (2,13 g), o qual foi utilizado sem purificação adicional.

c) 4-(4-acetoxi-butil)benzoato de metilo composto do Exemplo 24(b) foi dissolvido em piridina seca (25 ml) e tratado com anidrido acético (1,93 ml, 20,4 ml) à temperatura ambiente durante 24 h. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo dissolvido em acetato de etilo.

esta solução foi lavada com HC1 IN, seca sobre MgSO₄ anidro e

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evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 15%/hexano) para produzir o composto do título.

d) 3-nitro-4-(4-acetoxi-butil)benzoato de metilo

O composto do Exemplo 24(c) foi dissolvido em anidrido acético (5 ml), e a solução foi arrefecida até -12°C. Uma mistura de HNO₃ fumante (4,1 ml) e H₂SO^ conc. (3,4 ml) foi adicionada gota a gota durante 20 min, e a reacção foi agitada durante mais 40 min a -12°C. A mistura reaccional foi então vertida em gelo e extractada com Et₂O. Os extractos de Et₂O foram cuidadosamente lavados com Na₂CO₃ a 5%, secos sobre MgSO^ anidro e evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi, primeiro, purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 15-25%/hexano) e, de seguida, por cromatografia em coluna (sílica-gel, acetato de etilo a 10%/hexano) para produzir o composto do título (1,12 g). RMN (CDC1₃) 61,57-1,90 (m, 4H), 2,03 (S, 3H), 2,77-3,10 (m, 2H) ,

3,93 (s, 3H), 3,97-4,20 (m, -2H) , 7,43 _(d, 1H, J=7,5Hz), 8,13 (dd, 1H, J=7,5, 1,5 Hz), 8,47 (d, 1H, J=1,5 Hz); MS(ES) m/e 296 [M+H]⁺.

e) ácido 3-nitro-4-(4-hidroxi-butil)-benzóico

O composto do Exemplo 24(d) (1,04 g, 3,51 mmol) em dioxano (36 ml) foi tratado com 18 ml de NaOH 1M (aquoso), à temperatura ambiente durante 6 d. A mistura reaccional foi acidificada com HC11N (aquoso) e extractada com acetato de etilo para produzir o composto do título, o qual foi utilizado sem purificação adicional.

f) 3-nitro-4-(4-hidroxi-butil)benzoato de benzilo composto do Exemplo 24(e) foi dissolvido em MeOH aquoso e neutralizado até pH 7,6 com CsHCO₃ sólido. A solução foi, de seguida, evaporada sob vácuo até à secura e, em seguida, evaporada a partir de MeOH/tolueno para remover os traços de H₂0. 0 sal foi então dissolvido em DMF anidra (30 ml) e tratado com brometo de benzilo (1 ml, 8,41 mmol). A suspensão subsequente foi aquecida a 57°C durante 18 h. A mistura reaccional foi eva-

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-78porada sob vácuo, e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo. Á solução foi lavada com HC1 IN, seca sobre MgSO₄ anidro e evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 40%/hexano) para produzir o composto do título (624 mg, 54%). ^XH RMN (CDCI3) S 1,43-1,95 (m, 5H), 2,93 (t, 2H, J=7,5 Hz) , 3,67 (t, 2H, J=6 Hz), 5,37 (s, 2H), 7,37 (S, 5H), 7,40 (d, 1H, j=7,5 hZ), 8,13 (D DE D, lh, j=7,5, 1,5 hZ), 8,74 (D, lh, j=l,S hZ).

g) 4-(2-nitro-4-(benziloxicarbonil)fenil)-butanal composto do Exemplo 24(f) (271 mg, 0,823 mmol) em CH₂C1₂ 'x_J (10 ml) foi tratado com clorocromato de piridínio (355 mg, 1,65 mmol) à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura reaccional foi diluída com Et₂O, filtrada através duma almofada de Florisil®, e evaporada sob pressão reduzida. Ò resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, filtrado novamente através duma almofada de Florisil®, e o solvente foi evaporado para produzir o composto do título. ^XH RMN (CDCI3) δ 1,80-2,20 (m, 2H), 2,53 (t, 2H, J=6 Hz), 2,80-3,10 (m, 2H), 5,37 (s, 2H), 7,37 (s, 5Ή), 7,43 (d, J=7,5 Hz), 8,17 (d de d, 1H, J=7,5, 1,5 Hz), 8,50 (d, 1H,J=l,5 HZ), 9,73 (s, 1H).

h) 6-[2-nitro-4-(benziloxicarbónil)-fenil] -hex-2-enoato de etilo

O composto do Exemplo 24(g) (267 mg, 0,82mmol) em CH₂C1₂ (10 ml) foi tratado com (carboetoximetileno)trifenil-fosforano (344 mg, 0,988 mmol), e agitado à temperatura ambiente durante 3 dias. A mistura reaccional foi evaporada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 20%/hexano) para produzir o composto do título (195 mg, 60%). ^XH RMN (CDCI3) δ 1,27 (t, 3H, J=7,5 Hz), 1,63-2,03 (m, 2H), 2,13-2,47 (m, 2H), 2,80-3,10 (m, 2H), 4,17 (q, 2H, J=7,5 Hz), 5,37 (s,2H), 5,83 (br d, 1H, J=16,5 Hz),

6,93 (d de t, 1H, J=16,5, 7,5 Hz), 7,40 (S, 5H), 7,40 (d, 1H,

J=9 HZ), 8,15 (d, de d, 1H, J=9, 1,5 Hz) , 8,50 (d, 1H, J=1,5

HZ) .

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i) 8-benziloxicarbonil-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acetato de metilo composto do Exemplo 24(h) (195 mg, 0,491 mmol) em MeOH seco (10 ml) foi tratado com SnCl₂ (465 mg, 2,46 mmol), e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 2 dias. A mistura reaccional foi evaporada, e o resíduo retomado em acetato de etilo e NaHCO₃ a 5%. O precipitado resultante foi filtrado e rejeitado. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO₄ anidro e evaporada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado, primeiro, por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 15-50%/hexano) e, em seguida, por HPLC O preparativa (sílica Apex® de 5μ, acetato de etilo a 15%/hexano para produzir o composto do título (37 mg). ^XH RMN (CDC1₃) δ 1,33-2,03 (m, 4H), 2,33-2,53 (m, -2H), 2,67-2,90 (m, 2H),

3,17-3,50 (m, 1H) , 3,67 (s, 3H), 4,27-(br s, 1H), 5,33 (s, 2H), 7,00-7,60 (m, 8H); MS (DCI/CH₄) m/e 354 [M+H]⁺.

j) 8-carboxi-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acetato de metilo

Uma suspensão do composto do Exemplo 24(i) (37 mg, 0,105 mmol) e Pd a 5%/C (20 mg) em MeOH foi agitada, sob H₂ (344 735 Pa), num aparelho Parr à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura reaccional-foi filtrada através dum tampão de Celit^B* e evaporada sob pressão reduzida para' produzir o composto do título. L . . - t__. . :

k) 8-[ [ [4-(benziloxicarbonil)amino-iminometil-fenil]amino]carbonil]-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acetato de metilo

O composto em bruto do Exemplo 24(j) foi dissolvido em SOC1₂ (1 ml) e aquecido a 100°C durante 30 min. 0 SOC1₂ foi evaporado sob pressão reduzida, è o resíduo foi evaporado a partir de tolueno para remover qualquer reagente residual. O cloreto de ácido em bruto em CH₂C1₂ foi tratado com 4-(N-benziloxicarbonilamidino)-anilina (43 mg, 0,158 mmol) e piridina (25 μΐ, 0,315 mmol) à temperatura ambiente durante 70 h. A mistura reaccional foi diluída com CHC1₃, lavado com Na₂CO₃ a 5% (aquoso), seca sobre MgSO₄ anidro e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado porcromatografiaflash

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-80(sílica-gel, MeOH a 2%/CHCl₃) para produzir o composto do título (33 mg, 61%). RMN (CDC1₃) δ 1,10-2,07 (m,5H), 2,37-2,53 (m, 2H), 2,63-2,90 (m, 2H), 3,10-3,43 (m, 1H), 3,67 (s, 3H) , 5,20 (s, 2H), 6,97-7,90 (m, 14H), 8,17 (s, 1H).

1) ácido 8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil]-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acético

Uma suspensão do composto do Exemplo 24(k) (33 mg, 0,064 mmol) e Pd a 5%/C em HOAc foi agitada, sob H₂ (344 735 Pa), num aparelho Parr à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reaccional foi filtrada através dum tampão de Celit^® e evaporada sob vácuo para originar a amidina livre. Este material foi, de seguida, suspenso em HOAc a 20% (aquoso) e aquecido a 110°C durante 24 h. O solvente foi evaporado, e o material residual foi purificado por HPLC de fase inversa de ODS 5μ água:acetonitrilo-TFA a 0_Ύ1% 73:27], e liofilizado a partir de ácido acético aquoso a 1% para produzir o composto do título (11,6 mg) como salde TFA.MS(ES) m/e 367 [M+H]⁺; HPLC k' 2,71 [PRP-1®, água:acetonitrilo-TFA a 0,1% 85:15, detecção por UV a 220 nm); HPLC k' 3,14 (PRP-1®, gradiente, A:água-TFA a 0,1% B:acetonitrilo-TFA a 0,1%, 10-50% de B durante 20 min, detecção por UV a 220 nm); TLC R_f,-0,41 (sílica-gel butanol:ácido acético:água 4:1:1); TLC Rf 0,45 (sílica-gelbutanolrácido acético:água:acetato de etilo 1:1:1:1).

Exemplo 25

Preparação de ácido (R>S)-7-rr4-(amino-iminometil)benzoil]aminol -2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-l,4-benzotÍazepina-2-acétíco

a) ácido 2-[[(4-metoxifenil)metil]tio]-5-nitrobenzóico

Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral, 3,6 g,

0,088 mol) foi adicionado a uma solução fria de ácido 2-cloro-5-nítrobenzóico (16,1 g, 0,08 mol) em dimetilformamida (200 ml), e.a mistura foi agitada durante 5 min. A mistura fria foi tratada, gota a gota, com uma solução de 4-metoxi-a-toluenotiol (13,2 g, 0,08 mol) em dimetilformamida (80 ml), e agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi concentrada in

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-81vacuo, e o resíduo foi diluído com água e acidificado com ácido clorídrico diluído até pH 1. 0 precipitado resultante foi filtrado, lavado com água e azeotropicamente levado até à secura a partir duma mistura de diclorometano-tolueno. 0 resíduo foi suspenso em éter etílico, filtrado e lavado com éter etílico para originar o composto do título como um sólido amarelo (16 g, 63%), o qual foi utilizado sem purificação adicional. Pf 200-204°C.

b) álcool 2—[[(4-metoxifenil)metil]tio]-5—nitrobenzílico

A uma solução de borano (1M, 250 ml), agitada num banho de θ' gelo sob árgon, -foi adicionada uma solução do composto do Exemplo 25(a) (16 g, 0,05 mol) em tetra-hidrofurano (200 ml). A mistura reaccional foi aquecida até à temperatura ambiente e aquecida ao refluxo durante 4 h. A mistura foi arrefecida num banho de gelo e cautelosamente tratada com metanol. A mistura foi aquecida e concentrada num banho de vapor e, em seguida, tratada com metanol e concentrada várias vezes. O resíduo foi cromatografado (sílica-gel, éter de petróleo:éter etílico 6:4) para originar o composto do título como um sólido amarelo (15,2 g, 95%). Pf 101-102°C.

c) brometo de 2-[ [ (4-metoxiféhil)metil]tio]-5-nitrobenzilo

Uma mistura do composto do Exemplo 25(b)(15,2 g, 0,05 mol), tetrabrometo de carbono (25,4 g, 0,077 mol) e trifenilfosfina (24,1 g, 0,09 mol) em diclorometano (250 ml), foi agitada sob árgon à temperatura ambiente durante toda a noite. A mistura foi concentrada in vacuo, e o resíduo gomoso foiextractado com diclorometano. 0 extracto foi concentrado in vacuo e o resíduo foi cromatografado (sílica-gel, éter de petróleo:éter etílico 3:2) para originar o composto do título como um sólido amarelo (11,6 g, 63%). Pf 98-99°C.

d) N-(2-feniletil)-2-[[(4-metoxifenil)metil] tio]-5-nitrobenzilamina - x ó

Uma mistura do composto do Exemplo 25(c) (11,6 g, 0,0315 mol) e fenetilamina (11,4 g, 0,095 mol) em diclorometano (100 ml), foi agitada sob árgon durante toda a noite, concentrada in

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-82vacuo, e o resíduo foi diluído com éter etílico, o sólido gomoso resultante foi extractado com diclorometano, e a fase orgânica foi lavada com água, seca (MgSO₄) e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi cromatografado (sílica-gel, éter de petróleo:éter etílico 3:2) para produzir ó composto do título como um sólido amarelo (10 g, 78%). Pf 80-85°C; MS (ES) 409 [M+H]⁺.

e) hidrofluoreto de N-(2-feniletil)-2-mercapto-5-nitrobenzilamina

Uma mistura do composto do Exemplo 25(c) (10 g, 0,0245 mol) e anisole (8 ml) foi tratada com fluoreto de hidrogénio anidro (80 ml) a 0°C. O HF foi deixado evaporar, e o- resíduo foi agitado com éter etílico até precipitar um sólido cor de laranja. A mistura foi filtrada, e o sólido foi lavado com éter etílico para produzir o composto do título (7,5 g, 88%). Pf 193-194°C; MS (ES) m/e 289 [M+H]⁺.

f) ácido 2,3,4,5-tetra-hidro-7-nitro-3-oxo-4-(2-feniletil)-l,4-benzotiazepina-2-acético

Uma suspensão do composto do Exemplo 25(e) (4 g, 0,013 mol) em tolueno (200 ml) foi tratada com trietilamina (4 ml, 0,028 mol j , agitada, aquecida ao refluxo, e tratada com ácido maleico (1,66 g, 0,014 mol). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 h. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado in vacuo. O resíduoifoi dissolvido em diclorometano, e o sólido que precipitou foi isolado por filtração para produzir o composto do título (4,2 g, 85%). Pf 210-214°C; MS (ES) m/e 387 [M+H]⁺.

g) 2,3,4,5-tetra-hidro-7-nitro-3-oxo-4-(2-feniletil)-l,4-benzotiazepina-2-acetato de metilo

À uma suspensão do composto do Exemplo 25(f) (4 g, 0,01 mol) em diclorometano (25 ml) foi adicionada N,N-di-isopropiletilamina (5,5 ml, 0,031 mol), seguida por sulfato de metilo (2,6 g, 0,021 mol). A mistura foi agitada sob árgon durante toda a noite e lavada com ácido clorídrico 1,5 N e, em seguida, com água. A fase orgânica foi seca (MgS0₄) e concentrada in vacuo para produzir ó composto do título (3,6 g, 85%). Pf 205-208°c.

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h) 7-amino-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,4-benzotiazepina-2-acetato de metilo

Uma suspensão do composto do Exemplo 25(g) (3,6 g, 9 mmol) e Pd a 10%/C (1,5 g) em etanol (50 ml), numa garrafa de Parr, foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (365 419,1 Pa) até a reacção estar concluída. A mistura foi desgaseificada, filtrada, e o filtrado foi concentrado in vacuo. o resíduo foi dissolvido em diclorometano, lavado com água, seco (MgSO₄) e concentrado in vacuo para produzir o composto do título (3,2 g, 96%). Pf 126-129°C.

i) (R,S)-7-[[ 4-[N-(benziloxicarbonil)amino-iminometil)]benzoil]amino]-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,4-benzotiazepina-2-acetato de metilo

A uma solução do composto do Exemplo 25(h) (0,6 g, 1,6 mmol) em dimetilformamida (10 ml) foram adicionados ácido 4-(N-benziloxicarbonil)amino-iminometil-benzóico (2,4 g, 8 mmol), hidrocloreto de l-(3-dimetilaminopropil-)-3-etilcarbodiimida (0,32 g, 1,6 mmol) e 1-hidroxibenzotriazol hidratado (0,22 g, 0,0016 mol), e a mistura foi agitada durante toda a noite à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada in vacuo, o resíduo foi retomado em carbonato dé potássio aquoso a 10%, e o sólido resultante foi isolado por filtração, o sólido foi lavado com água, dissolvido em diclorometano, e a fase orgânica foi seca (MgSO₄), concentrada in vacuo, e o resíduo foi cromatografado (sílica-gel, diclorometano:metanol 19:1) para produzir o composto do título (0,5 g, 45%).

j) (R,S)-7-[[4-(amino-iminpmetil)benzoil]amino]-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,4-benzotiazepina-2-acetato de metilo

Uma mistura do composto do Exemplo 25 (i) (0,5 g, 0,8 mmol) e Pd a 10%/C (0,25 g) em metano, (20 ml, numa garrafa de Parr, foi agitada sob atmosfera de hidrogénio (303 366,8 Pa) até a reacção estar concluída. A mistura foi desgaseifiçada, filtrada, e o filtrado foi concentrado in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano, e a fase orgânica foi filtrada, descorada com carvão vegetal, filtrada e concentrada in vacuo para produzir o

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composto do título (0,4 g, 100%). Pf 150-155°C; MS (ES) m/e 517 [M+H]⁺. ⁷

k) ácido (R,S)-7-[[4-(amino-iminometilJbenzoil]amino]-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,4-benzotiazepina-2-acético

Uma mistura do composto do Exemplo 25(j) (0,4 g, 0,7 mmol), hidróxido de sódio 1N (3 ml) e metanol (10 ml) foi agitada durante toda a noite, diluída com água e acidificada com ácido clorídrico IN. A goma formada foi dissolvida em acetonitrilo :água-TFA a 0,1% 27:73 e cromatografada por HPLC, TR 25,3 min (YMC ODS-AQ ®, 50x250 mm, 80 ml/min, acetonitrilo:água-TFA

O a 0,1% 27:23, detecção por UV a 220 nm), e liofilizada para produzir o composto do título (62 mg). MS (ES) m/e 503 [M+H]⁺; ‘H RMN (DMSO-dg + TFA, 360 MHz) δ 2,45 (dd, 1H, J=16,9, 4,4 Hz), 2,71 (m, 2H), 2,80 (dd, 1H, J=16,9, 9,6 Hz), 3_,5 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 4,0 (d, 1H, J=16,9 HZ), 5,27 (dd, 1H, J=9,6, 4,4 Hz), 5,38 (d, 1H, J=16,9 Hz), 7,08 (d, 1H, J=8,8 Hz), 7,2 (m, 5H),

7,57 (dd, 1H, J=8,8, 2,2 Hz), 7,71 (d, 1H, J=2,2 Hz), 7,9 5 (d, 2H, J=8,l Hz), 8,14 (d, 2H, J=8,1 Hz), 9,16 (s, 2H), 9,45 (s, 2H), 10,47 (s, 1H).

Exemplo 26

Preparação de ácido (R,S)-7-rrr4-(amino-iminometil)feniljcarbonil]amino]-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-!,4-benzoxazepina-2-acético’

Utilizando o processo do Exemplo 25, excepto substituindo 4-metoxi-a-toluenotiol por álcool4-metoxibenzílico, é produzido o composto do título. -~

Exemplo 27

Preparação de ácido (R,8)-8-(Γ4-(amino-iminometil)benzoillamino Ί-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2-(2-feniletil)-ΙΗ-2—benzazepina— -4-acético, e Ácido (R,S)-8-r (4-(amino-iminometill-benzoillamino-2,3-di-hidro-3-oxo- -2-(2-feniletil)-lH-2-benzazepina-4-acétíco (208404) .

a) N-(2-feniletil)-4-nitroftalimida:

Uma mistura de anidrido 4-nitroftálico (18 g, 93,3 mmol) è

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-85fenetilamina (11,5 g, 95 mmol) em tolueno (250 ml) foi aquecida ao refluxo. Após 2,5 h, a mistura foi concentrada até um resíduo sólido, o qual foi triturado e filtrado para produzir o composto do título (24,5 g, 89%). Pf 142-3°C.

b) 2-hidroximetil-5-nitro-N-(2-fenetil)-1-benzamida

A uma solução do composto do Exemplo 27(a) (12,5 g, 42 mmol) em isopropanol(375 ml) e água (64 ml), foi adicionado NaBH₄ (7,94 g, 210 mmol). Após 3,5 h, a mistura foi concentrada até metade do volume original, extinta com solução de NaHCO₃ a 5%, extractada com EtOAc, seca sobre Na₂SO₄, e evaporada para

O originar o produto em bruto (10 g, 79%), o qual foi triturado com isopropanol para originar o composto do título como um regio-isómero puro (5,6 g). Pf 141-2°C; MS m/e 301 [M+H]⁺.

c) 2-hidroximetil-5-nitro[N-(2-feniletil)]-benzilamina

A uma solução de BH₃ TM (235 ml, 235 mmol), à temperatura ambiente, foi adicionada uma solução do Exemplo 27(b) (5,6 g, 18,7 mmol) em THF (75 ml) durante 0,5 h. A mistura foi aquecida ao refluxo. Após 4 h ao refluxo, a mistura foi arrefecida e uma solução de HC1 IN (60 ml) foi cuidadòsamente adicionada. A mistura foi aquecida durante 0,5 h até a libertação do hidrogénio gasoso cessar. A solução foi tornada básica com uma solução de NaOH 2,5N, no frio. A extracção com EtOAc, secagem sobre Na₂SO₄, e evaporação produziram o composto do título (4 g, 75%). MS m/e 287 [M+H]⁺. ₇

d) 2-hidroximetíl-5-nitro[N-(2-feniletil)-Ν'-(t-butiloxicarbonil)Jbenzilamina

Uma mistura do composto do Exemplo 27(c) (2,7 g, 9,5 mmol), dicarbonato de di-t-butilo (2,3 g, T0,5 mmol) e trietilamina (1,3 ml, 10,5 mmol) em diclorometano (50 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A solução foi evaporada até à secura e submetida a destilação azeotrópica duas vezes com diclorometano para produzir o composto do título como um produto em bruto, o qual foi utilizado sem purificação adicional. MS m/e

387,2 [M+H] ⁺ .

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e) 5-nitro-2-[[N-(2-feniletil)-N'-(t-butiloxicarbonil)]benzilaminometiljbenzaldeído

Uma suspensão do composto do Exemplo 27(d) e MnO₂ (12 g) em diclorometano (75 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h, filtrada e concentrada para originar o produto em bruto, o qual foi cromatografado (sílica-gel, EtOAc a 10%/hexano) para originar o composto do título (1,2 g). MS m/e 385,2 [M+H9] ⁺ .

f) ácido γ’-[5-nitro-2-[N-(2-feniletil)-Ν'-(t-butiloxicarbonil)benzilaminometil ] f eniltetra-hidrof urano-2-j3-carboxí lico

Trietilamina (1,5 ml, 11 mmol) foi adicionada, gota a gota, a uma suspensão de cloreto de zinco (1,5 g, 11 mmol, previamente seco à chama sob vácuo), anidrido succínico (1,1 g, 11 mol) e o composto do Exemplo 27(e) (0,8 g, 2,1 mmol) em diclorometano (25 ml). Após agitação sob árgon à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi diluída com diclorometano (100 ml) e lavada com solução de HC1 IN fria, seca sobre Na₂SO₄, e a evaporação originou o composto do título (0,9 g, 90%). MS m/e 485 [M+H]⁺.

g) trans-3a,5,6,10b-tetra-hidro-8-nitro-5-(2-fenilêtil)-2H-furo[3,2-d][2]benzazepin-2,4(3H)-diona

Uma mistura do composto do Exemplo 27(f) (1,0 g, 2,1 mmol) e HC1 4M em dioxano (35 ml) e em diclorometano (45 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h, êfoi evaporada até à secura. 0 resíduo, DMAP (50 mg, 0,4 mmol) e o reagente BOP (1,77 g, 4 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (50 ml) e deixados misturar à temperatura ambiente durante toda a noite. A cromatografia flash em coluna (sílica-gel, ÇH₃OH 0,4%/CH₂Cl₂) proporcionou o composto do título (0,3 g, 38%).

h) trans-3a,5,6,10b-tetra-hidro-8-amino-5-(2-feniletil)-2H-furo[3,2-d][2]benzazepin-2,4(3H)-diona Uma solução do composto do Exemplo 27(g) (0,3 g, 0,78 mmol) em EtOAc (50 ml) foi hidrogenada num agitador Parr (344 735

Pa) sobre catalisador de PtO₂ (80 mg) durante 0,5 h. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado para originar o composto do título (0,26 g, 99%).

Ί4 119

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i) S~[[4-(N-benziloxicarbonilamino-iminometil)benzoil]amino] -5-(2-feniletil)-trans-3a,5,6,10b-tetra-hidro-2H-furo[3,2-d][2]benzazepin-2,4(3H)-diona

A uma solução do Exemplo 27(h) (0,26 g, 0,78 mmol) em DMF (10 ml), à temperatura ambiente, foram adicionados ácido p-carbobenziloxiamidinobenzóico (0,28 g, 0,94 mmol), DMAP (98 mg, 0,81 mmol) e DCC (0,19 g, 0,94 mmol). Após agitação durante 18 h, a mistura foi extinta em água gelada, extractada com EtOAc e diclorometano. Os extractos combinados foram lavados com solução de HC1 IN, secos sobre Na₂SO₄, evaporados, e submetidos a cromatografia flash (cromatografia flash em coluna Ό (sílica-gel, CH₃OH a 2%/CH₂Cl₂)) para originar o composto do título (0,13 g, 27%). MS (ES) m/e 617 [M+H]⁺.

j) ácido (R,S)-8-[[4-(amino-iminometil)benzoil]amino]-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2-(2-feniletil)-lH-2-benzazepina-4-acético, e ácido (R,S)-8-[ [4-(amino-iminometil)benzoil]amino]-2,3-di-hidro-3-OXO-2-(2-feniletil)-lH-2-benzazepina-4-acético

Uma solução do Exemplo 27(i) (0,13 g, 0,2 mmol) em HC1 IN (2 ml) e EtOAc (50 ml), foi hidrogenada num agitador Parr (344735 Pa) sobre Pd(OH)₂ (0,13 mg) durante 24 h. 0 catalisador foi removido por filtração, e o filtrado foi concentrado e cromatografado porHPLC (sílica-gel ODS, CHjCN a 32%/H₂O-TFA a 0,1%) para originar o ácido tetra-hidro acético (17 mg) e o

- ácido di-hidro acético (3,1 mg) do título. Ácido tetra-hidro acético: MS(ES) m/e 485,2 [M+H]t; Anal. (C₂₈H₂₈N₄O₄.1,5 TFA.H₂O) calculada: C, 55,28; H, 4,71; N, 8,32. Encontrada: C, 55,08; H, 4,92; N, 8,09. Ácido di-hidro acético: MS(ES) m/e 483 [M+H]⁺; Anal. (C₂₈H₂₆N₄O₄.2,5 TFA.3 H₂0), calculada: C, 48,24; H, 4,23; N, 6,81. Encontrada: C, 47,86; H, 4,34; N, 6,92).

“ Exemplo 28

Preparação de ácido 7-Γ Γ Γ4-(amino-iminometil)fenil1carbonil] - ~ amino]-3-oxo-1,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-4-propanóico, e .

ácido 7-Γ Γ Γ4-(amino-iminometil)fenil]carbonil1amino1-1,2-desidro-3,5-desidro-3-oxo-4H-l,4-benzódiazepina-4-acético

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SB CASE P50020-1

a) 2-fluoro-5-nitro-benzaldeído-etileno-cetal

Uma solução de 2-fluoro-5-nitro-benzaldeído (25,0 g, 148 mmol), etilenoglicol (160 ml, 2,87 mol) em ácido acético (625 ml) foi aquecida até 55°C durante 15 min. A temperatura foi, de seguida, ajustada para 45°C, altura em que foi adicionado, gota a gota, BF₃-Et₂O (20 ml, 20 mmol) (30 min). Depois de mais 60 min a 45°C, a solução foi arrefecida até à temperatura ambiente e, em seguida, vertida em gelo (1 1), e o sólido resultante foi recohido por filtração, pressionado seco, e seco in vacuo para proporcionar o composto do título como flocos brancos (18,81 g, 60%; MH⁺ 213).

b) éster de t-butilo de N-[4-nitro-2-benzaldeído-etileno-cetal)-glicina

Uma solução do composto do Exemplo 28(a) (4,0 g, 18,8 mmol), hidrocloreto de éster de t-butilo de glicina (3,1 g, 19 mmol), trietilamina (.3,6 g, 36 mmol) e DMSO (80 ml) em água (56 ml) foi aquecida até 80°C durante 18 h. A solução escura foi, de seguida, arrefecida até à temperatura ambiente, vertida em gelo (300 ml) e extractada com diclorometano (4x). Os extractos orgânicos foram combinados e, em seguida, lavados com H₂0, salmoura, secos (MgSO₄), e os solventes foram removidos para produzir um sólido amarelo, o qual foi adicionalmente purificado por precipitação das impurezas a partir de EtOAc/hexano, filtração do sólido e remoção dos solventes para proporcionar o composto do título (4,49 g, 78%, MH⁺ 324).

c) éster de t-butilo de N-(4-nitro-2-benzaldeído)-glicina

A uma solução do acetal do Exemplo 28(b) (4,2 g, 13 mmol) em éter (30 ml) e t-butanol (30 ml), foi adicionado HCI IN aquoso (28,6 ml), gota a gota. Após 1 h, a solução foi diluída com éter (50 ml) e lavada com NaHC0₃ a 5%, salmoura e seca (MgSO₄). Os solventes foram removidos para originar o composto do título (3,6 g, 98%, MH⁺ 280).

d) 2-N-(éster de glicil-3-t-butilo)-5-nitro-[N-(3-metilcarboximeti1)benzilamina

A uma suspensão de acetato de sódio (0,836 g, 10,2 mmol) em

119

SB CASE P50020-1 metanol (80 ml), foi

-89adicionado hidrocloreto

de glicina (1,28 g, 10,2 mmol), e o aldeído do Exemplo 28(c) (2,8 g, 10 mmol), seguido pela adição em porções de cianoboro-hidreto de sódio (0,628 g, 10 mmol). Após 4 h à temperatura ambiente, os solventes foram removidos e o resíduo foi retomado em EtOAc/NaHCO₃ a 5%; as camadas foram separadas e, em seguida, lavadas com NaHCO₃ a 5%, salmoura, secas (MgSO₄), e os solventes foram removidos para originar um óleo impuro, o qual foi purificado por cromatografia flash (sílica-gel, CHC1₃ para MeOH a 2%/CHCl₃) para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo (2,43 g, 70%, MH⁺ 353).

e) 2-(glicil)-5-nitro-[N-(3-metilcarboximetil)jbenzilamina

Uma solução do di-éster do Exemplo 28(d) (2,43 g, 6,9 mmol) em TFA a 20%/CH₂Cl₂ (80 ml) foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. O solvente foi removido e o resíduo foi evaporado a partir de CH₂C1₂ (3x). 0 produto foi isolado por trituração com éter e, em seguida, a filtração originou o composto do título como um sólido branco (4,2 g, 90%, MH⁺ 297).

f) 7-nitro-3-oxo-l,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma solução do ácido do Exemplo 28(e) (2,79 g, .5 mmol) e DIEA (0,65 g, 5 mmol) em DMF (50 ml) foi arrefecida até 0°C sob árgon, após o que foram adicionado HOBt.(0,675 g, 5 mmol) e hidrocloreto de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,96 g, 5 mmol). A solução foi, de seguida, deixada atingir a temperatura ambiente durante toda a noite. A maior parte dos solventes foi removida e o resíduo resultante foi tratado com K₂CO₃ a 10%. O precipitado sólido foi recolhido por filtração e bem lavado com H₂O. O produto em bruto foi adicionalmente purificado por recristalização (EtOAc/hexano) para proporcionar o composto do título como um sólido cinzento (1,3 g, 94%, MH⁺ 279). '

g) 7-amino-3-oxo-l,2,3,5-tetra-hidró-4H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Uma solução do composto do Exemplo 28(f) (1,0 g, 3,58 mmol)

em DMF/MeOH (1/1, 30 ml) e catalisador de paládio a 10% em carbono (0,1 g), foram agitados num agitador Parr sob hidrogénio (275 788 Pa) durante 1 h. 0 catalisador foi filtrado a partir da solução (através de Celite) e o solvente foi evaporado in vacuo para originar o composto do título (880 mg, 98%, MH⁺ 249).

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h) 7-[[[4-(N-benziloxicarbonilamino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-l,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-4-acetato de metilo

Uma mistura do composto do Exemplo 28(g) (0,88 g, 3,25 mmol), ácido p-(benziloxicarbonilamidino)benzóico (1,13 g, 3,8 mmol), HOBt (0,51 g, 3,8 mmol) e hidrocloreto de l-(3-dimetil aminopropil)-3-etilcarbodiimida em DMF (25 ml), foi levado até 0°c sob árgon. A mistura foi então deixada atingir a temperatura ambiente, e a agitação continuou durante toda a noite. A maior parte dos solventes foi removida, e o resíduo resultante foi tratado com K₂CO₃ a 10%. 0 sólido precipitado foi recolhido por filtração, bem lavado com H₂O, e seco in vacuo. 0 material foi adicionalmente purificado por trituração com uma pequena quantidade de EtOAc para originar um sólido branco sujo (600 mg, 34%, MH⁺ 529).

i) ácido 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-1,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-4-acéticoe ácido 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-l,2“desidro-3,5-desidro-3-oxo-4H-l,4-benzodiazepina-4-acético

Uma mistura do composto do Exemplo 28(h) (400 mg, 0,76 mmol) e paládio a 10%“em carbono (50 mg) em metanol (30 ml) e HC1 1N/Et₂o (0,76 ml), foi hidrogenada num agitador Parr (310

261,5 Pa) durante 1 h. 0 catalisador foi retirado por filtração através de Celite, e os solventes foram removidos. A trituração com EtOAc/EtOH, e a secagem in vacuo proporcionaram o aminoéster como um sólido dourado (210 mg, 70%). Uma porção do sólido (100 mg, 0,25 mmol) foi, de seguida, directamente retomada numa solução de metanol (15 ml) e NaOH IN aquoso (1,30 ml), e deixada misturar à temperatura ambiente durante 18 h. A solução foi, então, neutralizada com HC13N (pH 6,8), e os solventes foram removidos. O resíduo foi, em seguida, triturado com éter para

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originar um sólido impuro, o qual foi purificado numa coluna de HPLC (RP Sio₂ CH₃CN a 15%/H₂O/TFA a 0,1%) para originar o composto do título (35 mg, MH⁺ 381) como o pico principal, Anal. (CigHigN5O4.3TFA) calculada: C, 59,84; H, 4,02; N, 18,36. Encontrada: C, 59,76; H, 4,05; Ν', 18,17, e o produto secundário (10 mg, NH⁺ 379). Anal. (C19H₁₇N₅0₄.3TFA 1H₂O) calculada: C, 59,68; H, 4,75; N, 14,65. Encontrada: C, 59,33; H, 4,85; N, 14,70.

Exemplo 29

Preparação de ácido (R,S)-r7-r[3-famino-iminometil)fenillaminolcarbonil1-4- (2-fenetil)-3-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

a) 3-amino-(N-t-benziloxicarbonil)benzamidina

Di-hidrocloreto de 3-aminobenzamidina (4,16 g, 20 mmole, 1 equiv.) foi dissolvido em THF (Aldrich Sure-Seal, 80 ml) e H₂0 (20 ml), e a mistura de duas fases foi arrefecida até 0’C.-_Foi adicionado NaOH 5N (12 ml, 60 mmol), gota a gota, durante 4 min, e a mistura resultante foi arrefecida durante mais 5 min. Cloroformato de benzilo (2,9 ml, 20 mmol) foi adicionado, gota a gota, durante 1,5 min, e a reacção foi agitada a 0°C durante 0,5 h. O THF foi removido no rotavapor, e o resíduo foi extractado com CH₂C1₂ (3x50 ml). A secagem Na₂SO₄, concentração e cromatografia em sílica-gel (EtOAc:tolueno 3:2), originaram o composto do título (4,40 g, 82%) como um óleo amarelo pálido, muito viscoso. O material solidificou gradualmente com o repouso in vacuo durante toda a noite, seguido por raspagem. PF

113,5-114, 5 ° C; TLC (3:2 EtOAc:tolueno) R_f 0,42; ¹H RMN (250 MHz, CDC1₃) S 7,05-7,55 (m, 8 H), 6,80 (ddd, J=7,8,2,4, 1,1 Hz, 1 Hz), 5,20 (s, 2 H); IV (CHC1₃) 3490, 3390, 3310, 1654, 1613, 1585, 1518, 1487, 1290, 1260, 1123 cm^-1; MS(ES) 270,0 [M+H]⁺, 226,0 (M+H-44)⁺. ~ .

b) (R,S)-[7-[[3-[N-(benziloxicãrbonil)amino-iminometil)]fenil]amino]carbonil]-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-2Η-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo - ...

Exemplo 21(f) (573,6 mg, 1,5 mmol) foi colocado ao refluxo com SOC1₂ (15 ml) durante 15 min e, em seguida, a

-92solução foi concentrada até à secura no rotavapor. 0 resíduo foi concentrado a partir de tolueno seco (5 ml) para remover o SOC1₂ residual, e o material restante foi dissolvido em CH2CI2 seco (15 ml). Foi adicionado o Exemplo 29(a) (606 mg, 2,25 mmol), e a solução foi arrefecida até 0°C sob árgon. Foi adicionada piridina seca (0,36 ml, 4,5 mmol), gota a gota, e a solução foi aquecida até à temperatura ambiente. Após 1,5 h, a reacção foi extinta com NaHCO₃ a 5% (30 ml) e as camadas foram separadas. A extracção com CH₂C1₂ (2x25 ml), secagem (Na₂SO₄) e concentração, originaram uma espuma amarela. A cromatografia em sílica-gel (EtOAc/CHCl₃ 3:2) originou o composto do título (0,74 g, 78%) como uma espuma amarela clara. TLC (3:2 .EtOAc/CHCl₃); R_f 0,38; ^XH RMN (250 MHz, CDC1₃) d 8,14 (br s, 1 H) , 7,93-8,02 (m, 2 H) , 7,00-7,60 (m, 14 H), 6,45 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 5,10-5,30 (m, 3 H), 4,95-5,08 (m, 1 H) , 4,63 (br d, J=4,5 Hz, 1 H), 3,73 (s, 3 H) , 3,50-3,83 (m, 3 H), 2,9 8 (dd, J=16,1, 6,9 Hz, 1 H) , 2,72-2,85 (m, 2 H) , 2,65 (dd, J=16,l, .6,3 Hz, 1 Η); IV (CHC1₃) 3130-3530 (br), 1735, 1655, 1614, 1589, 1539, 1505,- 1480, 1443, 1382, 1277 cm^-1; MS(ES) 634,2 [M+H]⁺. . ‘

c) ácido (R,S)-[7-[[3-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil]-4-(2-fenetil)-3-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético - .....

Pd a 10%/C (0,25 g, 0,23 mmol) foi adicionado a uma solução do Exemplo 29(b) (0,74 g, 1,17 mmol) e TFA (0,09 ml, T, 17 mmol) em EtOAc/MeOH-lsl (40 ml), e a mistura foi agitada sob H₂ (206 841 Pa). Após 45 min, a reacção foi filtrada para remover o catalisador, e o filtrado foi concentrado até um sólido amarelo. Este foi dissolvido em MeOH (40 ml) e foi adicionado NaOH 1,0 N (3,5 ml, 3,5 mmol). A solução amarela foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite e, em seguida, foi concentrada no rotavapor. 0 resíduo foi dissolvido em CH₃CN/H₂O 1:1 (12 ml), e a solução foi arrefecida até 0°C. Foi adicionado TFA (0,90 ml, 11,7 mmol), e a solução resultante foi concentrada até à secura no rotavapor (azeotropo CH₃CN) deixando uma espuma amarela. A cromatografia flash de fase inversa em sílica-gel C-18 (eluição por gradiente: CH₃CN a 25%/H2O (TFA a 0,1%) 120 ml, seguido de CH₃CN a 3 0%/H₂0/TFA a 0, 1%), a concentração das fracções

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SB CASE Ρ50020-Τ

contendo o produto até ocorrer precipitação e liofilização da mistura resultante, originaram o composto do título (491,3 mg, 66%) como um pó tenuamente amarelo. HPLC (coluna PRP-1 CHgCN a 25%/H₂O/TFA a 0,1%) k' 6,0; ^XH RMN (250 MHz, CD3OD) d 8,28 (t, J=l,8 Hz, 1 H), 7,79-7,88 (m, 1 H), 7,66 (dd, J=8,6, 2,2 Hz, 1 H) , 7/44-7,61 (m, 3 H), 7,00-7,27 (m, 5 H), 6,63 (d, J=8,6 Hz, 1H), 5,48 (d, J=16,7 Hz, 1 H), 5,19 (dd, J=9,0, 5,1 Hz, 1 H) , 3,62-3,90 (m, 3 H), 2,96 (dd, J=16,8, 9,0 Hz, 1 H), 2,73-2,88 (m, 2 H), 2,66 (dd, J=16,8, 5,1 Hz, 1 H); MS(ES) 486,0 [M+H]⁺; Anal, calculada para C27H₂₇N₅0₄.1,33 (CF₃CO₂H): C, 55,91; H, 4,48; N, 10,99. Encontrada: C, 55,82; H, 4,78; N, 10,65.

O . ' .

Exemplo 30

Preparação de ácido (R,S)-8-rΓΓ4-(amino-iminometil)fenil]metilamino] carbonil 1-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1H-1,4-benzodiazepina-2-acético

a) 4-(metilamino)benzonitrilo

Uma solução de 4-aminobenzònitrilo (5,91 g, 50 mmol) e TFA (0,19 ml, 2,5 mmol) em trietilortoformato seco, destilado (100 ml), foi aquecida ao refluxo, sob árgon. À medida que a reacção aquecia, separou-se um sólido, que, no entanto, se dissolveu com o aquecimento?posterior. Após 0,5 h ao refluxo, a solução amarela foi concentrada até à secura no rotavapor (alto vácuo) deixando um óleo amarelo, o qual cristalizou por secagem em alto vácuo. 0 sólido foi dissolvido em EtOH absoluto (100 ml), a solução foi arrefecida até 0°C sob árgon, e foi adicionado NaBH₄ (5,68 g, 150 mmol), duma só vez. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante 0,5 h e, em seguida, foi aquecida ao refluxo. Após 1 hora, a mistura espessa foi concentrada no rotavapor, e o resíduo foi submetido a partição entre H₂0 (100 ml) e Et₂O (100 ml). As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extractada com Et₂O (2x50 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO₄) e concentradas até um sólido amarelo. A cromatografia em sílica-gel (EtOAc a 30%/hexano) originou o composto do título (6,10 g, 92%) como um sólido tenuamente amarelo. TLC (EtOAc a 30%/hexano) Rf 0,45; ^-H RMN (250 MHz, CDC1₃) d 7,43 (appd, 2 H), 6,55 (app d, 2 H) ,

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4,39 (br S, 1 H), 2,88 (s, 3 H) ; IV (CHC1₃) 3460, 2220, 1610, 1528, 1337, 1176, 823 cm¹; MS(ES) 133,0 [M+H]⁺.

b) 4-metilamino-(N-t-benziloxicarbonil)benzamidina

Uma solução de trimetilalumínio em tolueno (2,0 M, 51 ml, 102 mmol) foi adicionada durante 4 min a uma suspensão de NH₄C1 em pó (5,46 g, 102 mmol) em tolueno seco (51 ml), num balão de 500 ml de fundo redondo, seco à chama, a 0°C sob árgon. 0 banho de gelo foi, de seguida, removido e a reacção foi deixada misturar à temperatura ambiente até cessar.a libertação de gás (1 h). Foi adicionado o Exemplo 30(a) (4,49 g, 34 mmol), duma só vez, e a reacção foi aquecida até 80°C (temperatura do banho de óleo). Ocorreu libertação de gás com o aquecimento. Após 23 h a 80°C, a reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e cuidadosamente vertida numa pasta agitada de sílica-gel (170 g) em CHC1₃ (500 ml), ocasionando uma reacção significativamente exotérmica. A mistura resultante foi agitada durante 0,5 h e, em seguida, foi filtrada, e a almofada do filtro foi lavada com MeOH (1 1). O filtrado foi concentrado até um sólido amarelo, o qual foi seco em alto vácuo a 50-60°C durante 0,5 h. ”0 material resultante foi utilizado sem purificação adicional. 0 material foi dissolvido em THF (Aldrich Sure-Sèal, 136 ml) e H₂O (34 ml), e a solução foi arrefecida até 0°C. Foi adicionado NaOH 5N (20 ml, 100 mmol), gota a gota, e a mistura de duas fases resultante foi arrefecida durante mais 5 min. Foi adicionado cloroformato de benzilo (4,85 ml, 34 mmol), gota a gota, e a reacção foi agitada a 0°C durante 0,5 h. 0 THF foi removido no rotavapor e o resíduo foi extractado com CH₂C1₂ (2x200 ml) e, em seguida, com EtOAc (1x100 ml). Os extractos orgânicos combinados foram secos (Na₂SO₄) e concentrados até um sólido branco sujo. A cromatografia em sílica-gel (EtOAc/hexano .3:2; carga com CHC1₃; ocorreu uma pequena quantidade de cristalização na coluna) originou ó composto do título (6,50 g, 67%) como um sólido branco sujo. Para fins de caracterização, foi cristalizada uma pequena amostra em EtOAc/hexano.PF 141-143'C; TLC (3:2 EtOAc/hexano) R_f 0,49; ¹H RMN (400 MHz, CDC1₃) d 7,77 (app d, 2 H), 7,45 (m estreito, 2 H), 7,27-7,38 (m, 3 H), 6,56 (app d, 2 H), 5,20 (s, 2 H), 4,28 (br s, 1 H),2,88 (s, 3 H); IV (CHC1₃)

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-953500, 3450, 3310, 1648, 1608, 1575, 1493, 1263, 1141 cm¹;

MS(ES) 284,2 [M+H]⁺.

c) (R,S)-8-[[[4-[N-(benziloxicarbonil)amino-iminometil]fenil]metilamino]carbonil]-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Exemplo 18(e) (382,4 mg, 1,0 mmol) foi colocado ao refluxo com SOCI2 (10 ml) durante 15 min e, em seguida, a solução foi concentrada até à secura no rotavapor. 0 resíduo foi concentrado a partir de tolueno seco (5 ml) para remover o SOC1₂ residual, e o material restante foi dissolvido em CH₂C1₂ seco (2,5 ml). Esta solução foi adicionada, gota a gota durante 5 min, a uma solução bem agitada do Exemplo 30(b) (0,85 g, 3,0 mmol) e piridina seca (0,40 ml, 5 mmol) em CH₂C1₂ seco (30 ml), a 0°C sob árgon. A mistura amarelo-alaranjada resultante foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 1 h e, em seguida, diluída com EtOAc (100 ml) e lavada com NaHCOj a 5% (2x25 ml)._A secagem (Na₂SO₄), concentração e cromatografia em sílica-gel (EtOAc/tolueno 9:1), originaram o composto do título (441,6 mg, 68%) como uma espuma”amarela. TLC (9:1 EtOAc/tolUeno) Rf 0,38; ¹H RMN (400 MHz, CDCI3) d 7,71 (d, J=8,5 Hz, 2 H), 7,02-7,46 (m, 12 H), 6,62 (d, J=l,4 HZ, 1 H), 6,56 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 6,38 (dd, J=7,8, 1,4 Hz, 1 H), 5,19 (s, 2 H),.....5,18 (d, J=16,8 Hz, 1

H, parcialmente obscurecido pela ressonância de d 5,19), 4,85-4,93 (m, 1 H), 4,17 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 3,71 (s, 3 H) ,

3,57-3,70 (m, 2 H), 3,53 (d, J=16,8 Hz, 1 H), 3,44 (s, 3 H),

2,90 (dd, J=16,l, 6,9 Hz, 1 H), 2,63-2,79 (m, 2 H), 2,58 (dd,

J=16,l, 6,3 Hz, 1 H); IV (CHC1₃) 3160-3540 (br), 3490, 3300,

1733, 1655, 1616, 1577, 1500, 1443> 1380, 1271, 1149, 1110 cm^-1; MS(ES) 648,4 [M+H]⁺.

d) ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminométil)fenil]-metilamino]carbonil]-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1H-1,4-benzodiazepina-2-acético

Uma mistura contendo o Exemplo .30(c) (556,2 mg, 0,86 mmol),

Pd a 10%/C (0,18 g, 0,17 mmol), TFA (0,07 ml, 0,86 mmol), EtOAc (15 ml) e MeOH (15 ml) foi agitada à temperatura ambiente sob H₂ (206 841 Pa). Após 1,5 h, o catalisador foi retirado por

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filtração, e o filtrado foi concentrado até à secura. 0 resíduo foi novamente submetido às condições de hidrogenação anteriormente descritas utilizando catalisador fresco. Após outras 1,5 h, a reacção foi filtrada, a almofada do filtro foi cuidadosamente lavada com EtOAc e com MeOH, e o filtrado foi concentrado até à secura. O resíduo foi dissolvido em MeOH (30 ml), e foi adicionado NaOH 1,0 N (3,4 ml, 3,4 mmol). A solução amarela foi agitada à temperatura ambiente durante toda a noite e, em seguida, foi concentrada no rotavapor. O resíduo foi retomado em CH₃CN/H₂O 1í1 (8,6 ml) e arrefecido até 0°C. Foi adicionado TFA (0,66 ml, 8,6 mmol), e a solução resultante foi concentrada até à secura no rotavapor (azeotropo CH₃CN). A cromatografia flash de fase inversa em sílica-gel C-18 (CH₃CN a 25%/H₂O/TFA a 0,1%), concentração das fracções contendo o produto até 20 ml e liofilização da mistura resultante, originaram o composto do título (403,4 mg, 68%) como um pó tenuamente amarelo. HPLC (coluna-PRP-1 ^R; CH3CN a 25%/H2O (TFA a 0,1%)) TR 8,77 min; k' 9,1 ; ^ΧΗ RMN (400 MHz, CD3OD) d 7,67 (m, 2 H) 7,37 (m, 2 H), 7,06-7,25 (m, 5 H), 6,74 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 6,64 (d, J=l,6 Hz, 1 H), 6,40 (dd, J=7,8, 1,6 HZ, 1 H), 5,33 (d, J=16,9 Hz, 1 H), 5,01 (dd, J=9,0, 5,1 Hz, 1 H), 3,77 (d, J=16,9 Hz , 1 H), 3,53-3,71 (m, 2 H), 3,46 (s, 3 H), 2,88 (dd, J=16,7, 9,0 Hz, 1 H), 2,60-2,75 (m, 2 H), 2,58 (dd, J=16,7, 5,1 Hz, 1 H); MS(ES)

500,2 [M+H]+; Anal, calculada para C₂₈H_2gN₅O₄ _1,5.(CF₃CO₂H).H₂0: C, 54,07; H, 4,76; N, 10,17. Encontrada; C, 53,73; H, 4,94; N, 9,84. ~ ._

Exemplo 31

Preparação de ácido (R,S)-í8-rΓ4-(amino-ímihometil)fenillamino1carbonil1-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético ^T

a) 5-carboxi-2-metoxicarbonil-nitrobenzeno NaOH 1N (50 ml) foi lentamente adicionado, gota a gota, à temperatura ambiente, durante 30 min, a uma solução agitada de nitrotereftalato de dimetilo (12 g, 0,05 mmol) em dioxano (100 ml). Após agitação durante toda a noite à temperatura ambiente, a reacção foi diluída com água, lavada com éter, acidificada com

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HC1 IN (50 ml) e, em seguida, extractada várias vezes com acetato de etilo. Após secagem da fase de acetato de etilo sobre MgSO₄ e evaporação, o resíduo resultante foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (98:2:0,1=CHC13, MeOH, HOAc) para originar o composto do título (8,07 g, 72%).

b) 5-t-butoxicarbonil-2-metoxicarbonil-nitrobenzeno

A uma suspensão agitada do composto do Exemplo 31(a) (7,0 g, 0,3 mmol) em tolueno (25 ml) foi adicionado cloreto de oxalilo (5 ml), seguido por uma gota de DMF seca. Após agitação durante toda a noite (a solução tornou-se límpida após -30 min), a reacção foi evaporada até à secura e re-evaporada a partir de tolueno fresco, duas vezes. Ao cloreto de ácido resultante foi adicionado CHC1₃ (10 ml), t-BuOH (1 ml), seguido por piridina (0,6 mlj. Após agitação durante 6 h, a reacção foi evaporada, retomada em acetato de etilo, lavada com NaHCO₃ IN, salmoura, seca sobre MgSO₄ e evaporada. A purificação por cromatografia flash em sílica-gèl (acetato de etilo a 10% em hexano) originou o produto como um óleo (7,28 g, 83%).

c) N-t-butoxicarbonil-5-t-butoxicarbonil-2-metoxicarbonil-anilina

Uma solução do Exemplo 31 (b) .(7,28 g, 0,027mol) em MeOH (100 ml) foi hidrogenada sobre Pd a 5%/C (0,5 g), sob 344 735 Pa de H₂ , num agitador Parr durante 4 h. Após filtração do catalisador através duma almofada de Celite ®e evaporação do filtrado, o resíduo remanescente foi retomado em CH₂C1₂ (100 ml), ao qual foi adicionado dicarbonato de di-t-butilo (6,2 g, 0,028 mol), seguido por DMAP (0,6 g, 4,9 mmol) com agitação. A reacção foi colocada ao refluxo durante 16 h e, em seguida, foi evaporada até à secura, dissolvida em acetato de etilo, lavada com HC1 1N, salmoura, seca sobre MgSO₄ e evaporada. A purificação por cromatografia flash (sílica-gel, acetato de etilo a 10%/n-hexano) originou o composto do título (3,68 g, 40%). ........

d) N- [N-t-butoxicarbonil-4- (t-butoxicarbonil) antranil ] -4 - (f enetilamino)crotonato de metilo

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A uma solução agitada do Exemplo 31(c) (3,68 g, 11 mmol) em dioxano (50 ml) foi adicionado NaOH IN (12 ml). A reacção foi agitada durante 3 h, acidificada com HC1 IN (12 ml), extractada com acetato de etilo, lavada com salmoura, seca sobre MgSO₄ e evaporada. Ao sólido remanescente foram adicionados DMF (75 ml), 4-fenetilaminocrotonato de metilo (3,7 g, 17 mmol), Et₃N (7,3 ml, 52 mmol) e HOBt (2,8 g, 18 mmol), seguidos por reagente BOP (5,6 g, 12,7 mmol). Após agitação durante toda a noite, a reacção foi evaporada até à secura. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel (CHC1₃:MeOH 99:1) originou o produto como uma espuma sólida (3,59 g, 62%).

e) (R,S)-8-carboxi-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Ao Exemplo 31(d) (3,59 g, 6,7 mmol) foi adicionado TFA a 90% em CH₂C1₂ (50 ml). Após agitação à temperatura ambiente durante 45 min, a reacção foi evaporada até à secura e, em seguida, foi re-evaporada a partir de MeOH anidro, duas vezes. O resíduo que permaneceu foi retomado em MeOH (100 ml) e colocado ao refluxo durante 2 dias sob Ar. A evaporação até à secura originou o produto como um sólido tenuamente amarelo (2,5 g, 100%). MS m/e 383,3 [M+H]⁺. 7 _

.. - . . . . . . / . ~ . -- '

f) 4-amino-(N-t-butiloxicarbonil)benzamidina ⁷

A uma solução agitada de di-hidrocloretode 4-aminobenzamidina (2,1 g, 10 mmol) em NaOH IN(20 ml), H₂0 (10 ml) e THF (10 ml), foi adicionado dicarbonato de di-t-butoxicarbonil (3,6 g, 16,5 mmol). Após agitação durante .5 h, a reacção foi extractada três vezes com acetato de etilo, seca sobre Na₂SO₄ e evaporada. A purificação por cromatografia flash (sílica-gel, CHCl₃:MeOH 96:4) originou o produto do título como um sólido branco (1,31 g, 56%).

g) (R,S)-[8-[[4-(t-butiloxicarbonilamino-iminometil)fenil]amino]carbonil]-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo.

Ao Exemplo 31(e) (0,52 g, 1,4 mmol) foi adicionado cloreto de tionilo (5 ml). Após ser colocada ao refluxo durante 15 min

119

SB CASE P50020-1

sob árgon, a reacção foi evaporada e, em seguida, re-evaporada, duas vezes, a partir de tolueno fresco. Ao cloreto de ácido resultante em CH₂C1₂ (30 ml) arrefecido até 0°C, com agitação sob Ar, foi adicionada piridina (0,33 ml), seguida pelo Exemplo 31 (f) (0,48 g, 2 mmol). A reacção foi agitada durante 4 h à temperatura ambiente, diluída com clorofórmio, lavada com NaHCO₃ IN, seca sobre Na₂SO₄ e evaporada. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel (98:2=CHC1₃:MeOH) originou o produto como um sólido (585 mg, 71%).

h) ácido (R,S)-[8-[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil]-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2

-acético

Ao Exemplo 31(g) (585 mg, 0,98 mmol) foi adicionado TFA a 90% em CH₂C1₂ (20 ml). Após agitação durante 45 min, a reacção foi evaporada até à secura. 0 resíduo remanescente foi, de seguida, retomado em HOAc a 20% em água, e colocado ao refluxo sob Ar durante 24 h. A evaporação deixou um resíduo, o qual foi purificado por HPLC preparativa numa coluna PRP-1 ® (CH₃CN a 26%, TFA a 0,1%/TFA a 0,1%, H₂0) para originar o produto como um sólido branco (MH⁺=486,2).

Exemplo 32

Preparação de ácido (R,S)-r7-rr4-(amino-iminometil)fenillcarbonillaminol-l-metil-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético (SB208074)

a) (R,S)-7-carbobenziloxiaminó-í-metil-4-fenetil-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Ao Exemplo 14(g) (250 mg, 0,5 mmol) em CHC1₃ (5 ml) foi adicionado iodeto de metilo (100 ml), seguido por Et₃N (150 ml). A reacção foi mantida ao refluxo sob Ar. enquanto mais iodeto de metilo e Et₃N foram adicionados periodicamente até que a TLC ou a HPLC indicaram que não restava qualquer material de partida. A suspensão remanescente foi triturada com acetato de etilo, filtrada, e o filtrado lavado com Na₂CO₃ IN, salmoura, seca sobre Na₂SO₄ e evaporada. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel (acetato de etilo a 50% em n-hexano) originou o

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SB CASE P50020-1

-100-

produto como um sólido branco (221 mg, 88%; MH+=502,2).

b) (R, S) -l-metil-4-fenetil-7-[ (4-carbobenziloxiamidinobenzoil) amino] -5-oxo-1,3,4,5-2H-tetra-hidro-l, 4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Utilizando o processo do Exemplo 14, excepto substituindo o Exemplo 14(g) pelo Exemplo 31(i), foi obtido o produto do título.

c) ácido (R,S) — [7— [ [4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino-l-metil-4- (2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

Utilizando o processo do Exemplo 14, excepto substituindo o Exemplo 14(h) pelo Exemplo 31(j), foi obtido o produto do título. ESMS m/e 500,2 (M+H⁺).

Exemplo 33 ~

Preparação de ácido (R,sy-r8-rr4-(amino-iminometil)fenil]carbonillamino]-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético (SB208073)

a) éster de metilo do ácido N-t-butoxicarbonil-4-nitroantranílico

O Utilizando o processo do Exemplo 14(a) e do Exemplo 14(b), excepto substituindo o ácido 5-nitroantranílico por ácido 4-nitroantranílico (10 g, 55 mmol), foi obtido o produto do título (6,61 g, 43%). -

b) éster de metilo do ácido N-t-butoxicarbonil-4-(carbobenziloxiamino)antranílico

Utilizando o processo do Exemplo 14(c), substituindo o Exemplo 14(b) pelo Exemplo 33(a) (6,6 g, 22,3 mmol) foi obtido o produto do título (8,24 g, 88%).

c) N-[N-t-butoxicarbonil-4-(carbobenziloxiamino)antranil]-4-(fenetilamino)crotonato de metilo

Utilizando o processo do Exemplo 14(d) e do Exemplo 14(f), substituindo o Exemplo 14(d)pelo Exemplo 33(b) (7,91 g, 20 mmol) , foi obtido o produto do título (4,49 g, 76%).

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-101-

d) (R,S)-8-carbobenziloxiamino-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Utilizando o processo do Exemplo 14(g), substituindo o Exemplo 14(f) pelo Exemplo 33(c) (4,49 g, 0,76 mmol), foi obtido o produto do título (3,73 g, 100%; MH⁺=488,3).

e) (R,S)-8—[(4-carbobenziloxi-amidinobenzoil)amino]-4-(2-fenetil )-5-oxo-l,3,4,5-2H-tetra-hidro-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Utilizando o processo do Exemplo 14(h), excepto substituindo o Exemplo 14(g) pelo Exemplo 33(d) (0,5 g, 1 mmol), foi V-2 obtido o produto do título (218 mg, 48%).

f) ácido (R,S)-[8-[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

Utilizando o processo do Exemplo 14(i), excepto substituindo o Exemplo 14(h) pelo Exemplo 33(e) ('218 mg, 0,34 mmol), foi obtido o composto do título (MH⁺=486,2).

Exemplo 34

Preparação de ácido (R,S)-[8-TΓr4-(aminometil)fenillamino]-carboníl]-1,3,4,5-tetra-hidro-5-oxo-4-(2-feniletil)-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético

a.) N-t-butoxicarbonil-4-nitrobenzílamina

A uma solução agitada de hidrocloreto de 4-nitrobenzilamina (5 g, 26,5 mmol) em THF (50 ml) e NaOH IN aq. (27 ml) sob Ar, foi adicionado dicarbonato de di-t-butilo (6,4 g), em porções. Após agitação durante 16 h, a reacção foi diluída com água e extractada com acetato de etilo. A fase de acetato de etilo foi lavada com salmoura, seca sobre MgSO₄ e evaporada até à secura. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel eluída com acetato de etilo a 25% em n-hexano originou o produto (4,48 mg, 67%). ¹H-RMN (CDC1₃) δ 1,48 (9H, s), 4,40 (2H, d,J=6Hz), 5,28 (1H, br s), 7,50 (2H, d, J=8Hz), 8,20 (2H, d, J=8Hz); TLC R_f 0,41 (acetato de etilo a 20%, n-hexano).

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SB CASE P50020-1

-102b) 4-(N-t-butoxicarbonilaminometíl)anilina

O composto do Exemplo 34(a) (4,49 g, 17,8 mmol) foi hidrogenado num aparelho de Parr sobre Pd a 5%/C (0,5 g) em MeOH (100 ml) a 344 735 Pa de H₂ durante 3 h. A filtração do catalisador através de Celite e a evaporação do filtrado originaram o composto do título como um sólido branco (3,95 g, 100%). ^XH-RMN (CDC1₃) 51,46 (9H, s), 3,68 (2H, br s), 4,20 (2H, d, J=6Hz), 4,80 (1H, br s), 6,66 (2H, d, J=8Hz), 7,13 (2H, d, J=8Hz); TLC Rf 0,26 (acetato de etilo a 30%, n-hexano).

c) (R,S)-[8-[ [4-(t-butiloxicarbonilaminometil)fenil]amino]carbonil]-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Ao Exemplo 31(e) (0,40 g, 1,05 mmol) foi adicionado cloreto de tionilo (5 ml). Após ser colocada ao refluxo durante 15 minutos sob Ar, a reacção foi evaporada e, ém seguida, re-evaporada, duas vezes, a partir de tolueno fresco. Ao cloreto de ácido resultante em CH₂C1₂ (30 ml) arrefecido até 0°C, com agitação sob Ar, foi adicionada piridina (0,30 ml), seguida pelo Exemplo 34(b) (0,26 g, 1,2 mmol). A reacção íoi agitada durante 4 h à temperatura ambiente, diluída com clorofórmio, lavada com NaHCO₃ IN aq.,. seca sobre Na₂SO₄ e evaporada. A purificação por cromatografia flash em sílica-gel eluídacom CHC1₃> MeOH (98:2), originou o produto do titulo como um sólido. (350 mg, 57%). ^XH-RMN (CDC1₃) δ 1,47 (9H, s), 2,41 (1H, dd), 2,58 (1H, dd) , _

2,96 (2H, t), 3,17 (1H, dd), 3,33 (1H, dd), 3,52 (1H, dt), 3,71 (3H, S), 3,97 (1H, m), 4,08 (1H, dt), 4,27 (2H, d, J=5,5Hz),

4,94 (1H, br s), 7,10-7,35 (9H, m), 7,66 (3H, m); TLC R_f 0,55 (5% MeOH, CHC1₃).

d) ácido (R,S)-[8-[[ [4-(aminometil)fenil]amino]carbonil]-l,3,4,

5-tetra-hidro-5-oxo-4-(2-feniletil)-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético

Exemplo 34(c) foi desprotegido como no Exemplo 31(h) para originar o composto do título, o qual foi purificado por HPLC preparativa numa coluna Hamilton PRP-1 eluída com CH₃CN a 25%,

TFA a 0,1%, H₂0.. ¹H-RMN (dg-DMSO, TFA a 2%) δ 2,54 (2H, m), 2,90 _; (2H, m), 3,47 (3H, m), 3,94 (2H, m), 4,03 (2H, d), 6,90-7,4 (5H,

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SB CASE P50020-1

-103m) , 7,43 (2H, d), 7,70 (1H, d), 7,80 (2H, d), 8,20 (2H, br s); ESMS (M+H)⁺ = 473,2; análise dos elementos: <^27^Η28^Ν4^Ο4 ·¹'⁵“ CF₃CO₂H.0,5H₂O; HPLC k'=8,7 coluna Hamilton PRP-1 eluída com CH₃CN a 25%, TFA a 0,1%/TFA a 0,1%, H₂O.

Exemplo 35

Preparação de ácido (R,S)-[8-rΓr4-(aminometil)fenillaminoΊcarbonil 1 -1 ,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético

a) (R,S)-[8-[[4-(t-butiloxicarbonilaminometil)fenil]amino]carbonil] -4- ( 2-f enetil )-3-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

Utilizando o processo do Exemplo 34(c), excepto substituindo o Exemplo 31(e) pelo Exemplo 18(e), foi obtido o produto do título.

b) ácido (R,S)-[8-[[[4-(aminometil)fenil]amino]carbonil]-l,3,4,

5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético

O composto do titulo foi preparado utilizando o processo do Exemplo 34(d).

U - “ - - τ / - - - - „„ - ¹< Exemplo 36 preparação de ácido (R,S)-r8-rΓr3-(aminometil)fenillaminoTcarbo- „ nill-1,3,4,5-tetra-hidro-5-oxo-4-(2-feniletil1-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético.

a) N-t-butoxicarbonil-3-nitrobenzilamina'

Hidrocloreto de 3-nitrobenzilamina (5,24 g, 27,8 mmol) foi tratado com NaOH IN aq. (28 ml) e dicarbonato de di-t-butilo, (6,7 g) como no Exemplo 34(a) para originar o composto do título como um sólido branco (6,78 g,96%).^H-RMN (CDC1₃) 8 1,44 (9H, S), 4,40 (2H, d, J=8HZ), 5,15 (1H,br S), 7,40-7,75 (2H, m), 8,05-8,25 (2H, m); TLC Rf 0,41 (acetato de etilo a 20%, n-hexano).

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SB CASE P50020-1

-104-

b) 3-(N-t-butoxicarbonilaminometil)anilina

O Exemplo 36(a) (6,78 g, 26,9 mmol) foi tratado como no Exemplo 34(b) para originar o composto do título como um sólido branco. (6,30 g, 100%). ¹H-RMN (CDC1₃) 8 1,47 (9H, s), 3,70 (2H, br S), 4,20 (2H, d, J=6HZ), 4,98 (1H, br s), 6,5-6,8 (3H, m) , 7,0-7,25 (1H, m); TLC R_f 0,26 (acetato de etilo a 30%, n-hexano)

c) (R,S)-[8-[[3-(t-butiloxicarbonilaminometil)fenil]amino]carbonil]-4-(2-fenetil)-5-oxo-l,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo

O produto do título (0,40 g, 65%) foi obtido como no Exemplo 34(c) utilizando o Exemplo 36(b) (0,26 g, 1,2 mmol). ^H-RMN (CDC1₃) δ 1,45 (9H, S), 2,40 (1H, dd), 2,53 (1H, dd), 2,95 (2H, t), 3,17 (1H, dd), 3,32 (1H, dd), 3,48 (1H, dt), 3,70 (3H, s),

3,94 (1H, m), 4,08 (1H, dt), 4,22 (2H, 2d), 5,0 (1H, br s), 6,55-6,70 (1H, m), 7,0-7,35 (9H, m), 7,50-7,75 (3H, m); TLC R_f 0,61 (MeOH a 5%, CHC1₃).

d) ácido (R,S)-[8-[[[3-(aminometiljfenil]amino]carbonil]-1,3,4,

5-tetra-hidro-5-oxo-4-(2-feniletil)-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético

Exemplo 36(c) foi desprotegido como no Exemplo 34(d) para originar o composto do título, o qual- foi purificado por HPLC O preparativa numa coluna Hamilton PRP-1 eluída com CH₃CN a 25%, TFA a 0,1%, H₂0. l-H-RMN (dg-DMSO, TFA a 2%) δ 2,52 (2H, m), 2,90 (2H, m), 3,48 (3H, m), 3,94 (2H, m), 4,07 (2H, d), 7,1-7,35 (6H, m), 7,41 (1H, t)’, 7,63. (1H, d), 7,70 (-1H, d), 8,02 (1H, s), 8,20 (2H, br s); ESMS (M+H)⁺=473,2; HPLC k'=9,6 coluna Hamilton PRP-1 eluída com CH₃CN a 25%, TFA a 0,1%/TFA a 0,1%, H₂0.

Exemplo 37

Preparação de ácido (R,S)-r8-rΓT3-(aminometil)fenillamino]carbonill -1,3,4,5-tetra-hídro-3-oxo-4-í 2-feniletil)-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético produto do título é obtido como nos Exemplos 34(c) e 34(d), utilizando o composto do Exemplo 18(e) em vez do composto do Exemplo 31(e).

119

SB CASE P50020-1

-105Exemplo 38

Composição para unidade de dosagem parentérica

Uma preparação, que contém 20 mg do composto do Exemplo 1 ou 2 como um pó seco estéril, é preparada como se segue: 20 mg do composto são dissolvidos em 15 ml de água destilada. A solução é filtrada sob condições estéreis para uma ampola multi-dose de 25 ml e liofilizada. 0 pó é reconstituído pela adição de 20 ml de dextrose a 5% em água (D5W) para injecção endovenosa ou intramuscular. A dosagem é, consequentemente, determinada pelo volume de injecção. A diluição subsequente pode ser feita pela adição de um volume medido desta unidade de dosagem a um outro volume de D5W para injecção, ou uma dose medida pode ser adicionada a um outro mecanismo para distribuição da droga, tal como a um frasco ou saco para infusão por gotas IV ou outro sistema de injecção-infusão. Exemplo 39

Composição para unidade de dosagem oral

Uma cápsula para administração oral é preparada por mistura e trituração de 50 mg do composto do Exemplo 3 com 75 mg de lactose e 5 mg de estearato de magnésio. O pó resultante é peneirado e colocado dentro de cápsulas de gelatina dura.

O . . - ... Exemplo 40

Composição para unidade de dosagem oral

Um comprimido para administração x>ral é preparado por mistura e granulação de 20 mg de sacarose, 150 mg de sulfato de cálcio di-hidratado e 50 mg :do composto do Exemplo 3 com uma solução de gelatina a 10%. Os grânulos húmidos são peneirados, secos, misturados com 10 mg de amido, 5 mg de talco e 3 mg de ácido esteárico; e comprimidos sob a forma dum comprimido.

O anterior é ilustrativo da preparação e utilização deste invento. Este invento, no entanto, não se encontra limitado às concretizações precisas aqui descritas, mas abrange todas as modificações que se situam dentro do âmbito das reivindicações que se seguem.

Claims (18)

1. REIVINDICACÕES

   1 - Composto caracterizado por ter a fórmula:

   na qual

   A¹ a A⁵ formam um anel acessível, substituído, de sete membros, que pode estar saturado ou não saturado, contendo opcionalmente até dois heteroátomos escolhidos de entre o grupo que consiste em 0, S e N, em que S e N podem estar opcionalmente oxidados;

   D¹ a D⁴ formam um anel acessível, substituído, de seis membros, contendo opcionalmente até dois átomos de azoto;

   Ré pelo menos um substituinte escolhido de entre o grupo que consiste em R⁷, ou Q-alquilo Cj._₄, Q-alcenilo C_1-4, Q-alquileno C₂_₄, Q-alcinilo C₂_₄, Ar e Het, opcionalmente substituído com =0 ou R⁷:

   R* é H, Q-alquilo Q-oxoalquilo Cj_g, Q-alcenilo C₂_g ou Q-alcinilo C₂„₄, cicloalquilo C₃_₆, Ar ou Het, opcionalmente substituído com um ou mais de R¹¹; / Q é H, cicloalquilo C₃_₆, Het ou Ar;

   R⁶ éW-(CR'2)q-Z-(CR'R¹⁰)r-U-(CR'₂)_s-V-;

   R⁷ é -COR⁸, -COCR'2R⁹, -C(S)R⁸, -S(O)mOR', -S(O)_mNR^zR, -PO(OR'), -PO(OR')₂, -bor'₂, -no₂ e Tet;

   R⁸ é -0R',--NR'R, -NR'SO₂R', -NR'0R', -OCR'₂C(O)OR^Z ou AA;

   R⁹ é -0R', -OC(O)R^Z, -CN, -S(O)mR^z, -C(O)R^Z ou -CO2R^Z ;

   R¹⁰ é H, alquilo 0_τ_₄ ou -NR'R;

   R¹¹ é H, halo, -OR, -CN, -NR^ZR, -NO2, -CF3, -CF3S, R^ZRN-, -CO2R', -CONR'₂, Q, Q-C(O)-, Q-alquÍloC₁_₆-, Q-alceniloC₂_₆-, Q-alquiloxiC₁_g-, Q-alquilCj.g-CONR'-, Q-alquilC₁_₆CO₂-, Q-alquilC^^.gC(0)-, Q-alquilC₁_₆S(O)_n-, QalquilC₁_g-SO₂NR'-;

   R^z é H, alquilo Cj.g, cicloalquilC₃_₇-alquilo C_Q_₄ ou Ar-alquilo C₀_₄;

   R é R^z ou -C(O)R^Z; ~

   74 119

   SB CASE P50020-1

   -107-

   AA é um aminoácido com o grupo carboxilo opcionalmente protegido;

   U e V estão ausentes ou são CO, CR*₂r S(0)_n, 0, NR^Z , CR^ZOR^Z, CR^ZORCR^Z2, COCR^z2, CONR^Z, NR^ZCO, 0C(0), C(0)0, C(S)O, OC(S), C(S)NR^Z, NR^ZC(S), S(O)nNR^z, NR^zS(O)n, N=N, NR^ZNR^Z, CR^Z ₂O, C—C ou CR^Z=CR^Z, desde que U e V não estejam simultaneamente ausentes;

   W é R'₂N-, R^z2NR^zN-, R^z2NR^zNCO-, R^z2NC(=NR^z)-, R^z2NÇ(=NR^z)O-, R^z2NC(=NR^z)S-, R^z2NR^zNC(=NR^z)-,

   R^ZONR^ZC(=NR^Z)-,

   R^z ₂NCR^z=N-,

   R^ZN=CR^ZNR^Z-

   Z é (CH₂)_t, Het, Ar ou cicloalquilo C₃_₇; m é 1 ou 2;

   n é 0 a 3;

   pé 0 ou 1;

   q é 0 a 3;

   r é 0 a 2;

   s é 0 a 2;

   t é 1 ou 2; ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
2. 2 - Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado

   por --· - - - A¹ ser CR^-R¹', CR¹, NR¹, N, 0 ou S(0)_t; A² ser CR²R²', CR², NR², NR²; A³ ser cr³r³', CR³, NR³, NR³, N, 0 ou S(0)_t A⁴ ser CR⁴R⁴', CR⁴, NR⁴, ou N; - A⁵ ser cr⁵r^5/, CR⁵, NR⁵, N, 0 ou S(0)_t; . - D¹· -D⁴ serem CR ¹¹, CR⁵ ou N;

   R ser (CR¹⁴R¹⁵)u-(T)v-(CR¹⁴T¹⁵)w-R⁷ ou =CR^z-(T)v-(CR¹⁴R¹⁵)w_R⁷' em que T é CR¹⁴R¹⁵-CR¹⁴R¹⁵, CR^z=CR^z ou C=C, e R¹⁴ e R¹⁵ serem R^z, 0R^z, NR^ZR ou juntos serem =0, desde que R¹⁴ e R¹⁵ não sejam, simultaneamente, 0R^z ou NR^ZR^Z quando ligados ao mesmo carbono;

   R¹ e R¹' R² e R²' R³ e R^3/ R⁴ e R⁴'

   serem R*, R ou =0. serem R*, R ou =0. serem R*, R ou =0. serem R*, R ou =0.

   Ί4 119

   SB CASE P50020-1

   -108R⁵ e R⁵' serem R*,

   R ou =0.

   R⁶ ser w-(CR'2)q-Z-(CR'R¹¹)r-U-(CR'₂)_s; t ser 0 a 2; e u, v e w serem 0 ou 1.
3. 3 - Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por

   A¹ ser CR¹R¹¹, CR¹, NR¹, N, 0 ou S A² ser CR²R²*, NR² ou CR 2. t A³ ser CR³R³ * ; - A⁴ ser CR⁴R⁴', CR⁴, NR⁴, ou N=; A⁵ ser CR⁵R⁵', CR⁵, NR⁵, N, o; D¹ e D⁴ serem CH; D² ou D³ ser CR⁶; R² ou R⁴ serem R;

   R³, R³' e R⁵,R⁵⁷ serem =0 ou R*, H; e

   R⁶ ser W-(CR^/2jq-Z-(CR^/R¹¹)r-U.
4. 4 - Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por ser

   74 119

   SB CASE P50020-1

   -1095 - Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por

   A¹ ser CH₂, NH ou S;

   A² ser CR² ou CR²R²';

   A³ ser CR³R³;

   A⁴ ser CR⁴R⁴' ou NR⁴; e

   A⁵ ser CR⁵R⁵'.
5. 6 - Composto de acordo com a reivindicação 5, caracterizado por

   R¹ ser H;

   uX R² ser CH₂CO₂H;

   R³,R^3/ ser =0 ou H,H;

   R⁴ ser alquile-Ar;

   Z ser fenilo ou (CH₂)_t;

   W ser H₂N, H₂NC(=NH) ou H₂NC(=NH)NH; e (CR^zR¹⁰)r-U-(CR^z2)_s”^v ser C^NIIC⁰, CH(NR'R )CONH, CONH OU NHCO. ·
6. 7 - Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por .

   (CR^/R¹⁰)_r-U(CR'2)_s-V ser CONR', NR'CO, CH(NR'R”)CONH,

   M CH₂C0NH, C0NR'CH₂, CONHCH₂, CH₂CH0H, CHOHCH₂, CONHCHRfCH₂ ch₂nhco₂ch₂, ch₂ch₂nhco₂, conhch₂co, conhch₂choh, CH=CHCONH, NHC0₂CH=CH, SO₂NR'CHR'CH₂ ou CH=CH.

   por R²

   - Composto de acordo com a reivindicação 2, ser R⁷, CH2R⁷ ou CH2CH₂R⁷. >

   caracteri z ado
7. 9 - Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por R³ e R³' serem =0.
8. 10 - Composto de acordo com a reivindicação 2, caracteriza-do por Z ser fenilo ou (CH₂)_t.
9. 11 - Composto de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por W ser RHN-, RHNC(=NH)- OU RHNC(=NH)NH-.

   74 119

   SB CASE P50020-1

   -110-
10. 12 - Composto de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por R⁴ ser H, alquilC₁_₄-Ar ou CH₂CH₂CO₂H.
11. 13 - Composto de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por (CR^/R¹⁰)r-U-(CR^/2)_s ser CH₂NHCO, CH(NR'R)CONH, CONH ou NHCO.
12. 14 - Composto do por R⁶ ser de acordo com a reivindicação 8, caracteriza-
13. 15 - Composto de acordo com a reivindicação i, caracteriza do por ser

    7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]-amino]-2-

    -metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina trifluoroacetato de 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]-amino]-2-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-4,5-di-hidro-3H-1,4-benzodiazepina;

    7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]-amino]-

    3-OXO-4-(2-feniletil)-4,5-di-hidro-3H-l,4-benzodiazepina-2-acetato de metilo;

    Ácido (R,S)-7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l, 4-benzodiazepina-2-acético;

    7-[[ [4-( amino-iminometil )fenil] carbonil]-amino]-3-oxo-4-(2-feniletil) -4,5-di-hidro-3H-l, 4-benzodiazepina-2-acetato de ciclo-hexilo ;

    Ácido 7-[[ [4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-3-oxo-4—(2-feniletil )-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l, 4-benzodiazepina-2-acético; - i

    74 119

    SB CASE P50020-1

    -111-

    Ácido 7-[(N^ametil-N^aacetil-arginil)amino]-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

    Ácido (R, S)-4-fenetil-7-[(4-amidino-fenil)carbonil]amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepina-5-ona-2-acético;

    Ácido (R,S)-l-acetil-4-fenetil-7-carbobenziloxi-amino-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l,4-benzodiazepin-5-ona-2-acético;

    Ácido (R,S)-7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil ]-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

    Ácido (R,S)-7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-l-metil-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-1,4-benzodiazepina-2-acético;

    Di-hidrocloreto do ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]-carbonil-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil )-3H-1,4-benzodiazepina-2-acético;

    Trifluoroacetato de ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil )fenil]carbonil]amino]-1,2,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil )-3H-l,4-benzodiazepina-2 acético;

    Ácido 7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino] —3—oxo—1,2,3,5-tetra-hidro-4H-l,4-benzodiazepina-4-propanóico;

    Ácido (R,S)—[7—[[4-(amino-iminometil)fenil]amino]carbonil ]-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

    Ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-1,3,4,5-tetra-hidro-2H-l-benzazepina-2-acético;

    Ácido (R,S)-[7-[[[3-(aminometil)fenil]metil]amino]carbonil ]-4-(2-feniletil)-1,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-2H-l,4-benzodiazepina-2-acético;

    Ácido (R,S)-8-[[[4-(amino-iminometil)fenil]-amino] carbonil]-tetra-hidro-l-benzazepina-2-acético;

    Ácido (R,S)-[7-[[4-(amino-iminometil)benzoil]amino]-

    1.3.4.5- tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-2H-1,4-benzotiazepina-2-acético;

    Ácido (R,S)-7-[[[4-(amino-iminometil)fenil]carbonil]amino]-2,3,4,5-tetra-hidro-3-oxo-4-(2-feniletil)-1,4-benzoxazepina-2-acético;

    Ácido (R,S)-8-[[4-(amino-iminometil)benzoil]amino]-

    2.3.4.5- tetra-hidro-3-oxo-2-(2-feniletil)-lH-2-bénzazepina-4-

    Ί4 119

    SB CASE P50020-1

    -112

    -acético; ou

    Ácido (R,S)-8-[[4-(amino-iminometil)benzoil]amino]-2,3-di-hidro-3-oxo-2-(2-feniletil)-lH-2-benzazepina-4-acético.
14. 16 - Composição farmacêutica, caracterizada por compreender um composto de acordo com a reivindicação 1 e um portador farmaceuticamente aceitável.
15. 17 - Composição farmacêutica, caracterizada por compreender um composto de acordo com a reivindicação 15 e um portador farmaceuticamente aceitável.
16. 18 - Composto de acordo com a reivindicação 1 para uso no fabrico de um medicamento.
17. 19 - Composto de acordo com a reivindicação 1 para uso na inibição da agregação de plaquetas.
18. 20 - Composto de acordo com a reivindicação 19 para uso no tratamento de apoplexia ou de ataques de isquemia transiente ou de enfarte do miocárdio.