Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania mie¬ szaniny izomerów nowych pepstatyn przy uzyciudrobnou¬ strojów, wytwarzajacych pepstatyne. Stwierdzono, zepep- statyna jest skutecznym srodkiem przeciwko owrzodze- niom zoladkowym. Jako drobnoustroje, wytwarzajace pe¬ pstatyne, zidentyfikowano Streptomyces testaceus Hama- da i Okami, oznaczony jako Streptomyces testaceus ATCC nr 21469. Pepstatyna jest pentapeptydem, zawierajacym po stronie grupy aminowej N-zacylowany kwas izowale- rianowy i po stronie grupy karboksylowej - wolny kwas karboksylowy (J. Antibiotics, 23, 259-262, 1970, ibid., 23, 263-265, 1970).Pepstatyne mozna otrzymywac przez hodowle szczepu, •wytwarzajacego pepstatyne w odzywczym srodowisku, zawierajacym peptony i inne substancje dostarczajace azo¬ tu, oraz przez ekstrakcje z rozczynu hodowlanego i oczysz¬ czenie. Pepstatyne mozna równiez otrzymywac w postaci jej soli z metalami amidów lub estrów, jak to opisal Umezwa i wspólpracownicy w japonskim opisie patento¬ wym nr 659 783. Przeprowadzono badania inhibitorów pepsyny w rozczynie hodowli powyzszych szczepów, wy¬ twarzajacych pepstatyne. Na podstawiedoswiadczen,pro¬ wadzonych w róznych warunkach, stwierdzono wiecej, niz dwie substancjepodobnedo pepstatynyitak,jak pepstaty¬ na, wykazujace dzialanie antypepsynowe. Substancje te równia sie jednak od pepstatyny na chromatogramie cien¬ kowarstwowym na silikazelu oraz grupa kwasu tluszczo¬ wego pepstatyny w chromatografii gazowej, po hydrolizie w srodowisku kwasnym.Jedna z nowych pepstatyn, nazwanych pepstatyna B, mozna krystalizowac z roztworu metanolu jako jej ester metylowy w postaci drobnych igiel. Pepstatyna B topi sie w temperaturze okolo 254-255°C, jej sklad elementarny C-60,4, N-9,74, i H-9,38%, wartosci obliczone dla C„H67N50,: C-60,6, H-9,40 i H-9,28%, skrecalnosc optycz¬ na (a)"D = 95,5 (C = 0,5, kwas octowy). Podobnie, jak pepstatyna, daje ona niebieskie zabarwienie w reakcji Rydona Smitha oraz czerwone zabarwienie w reakcji z chlorkiem zelazowym hydroksyloaminy. Ester metylowy pepstatyny B jest umiarkowanie rozpuszczalny w dwume- tyloformamidzie, sulfotlenku dwumetylu i kwasie octo¬ wym oraz znacznie rozpuszczalny w wodzie, chloroformie, benzenie, octanie etylu i eterze. Jest on lepiej rozpuszczal¬ ny w metanolu, niz ester metylowy pepstatyny (5-10 mg/cm3).Produkty hydrolizy w srodowisku kwasnym estru mety¬ lowego pepstatyny B, prowadzonej, przy uzyciu 20%- owego kwasu solnego w ciagu 16 godzin w temperaturze 105°C, ekstrahowano eterem i badano metoda chromato¬ grafii gazowej i dwumiarowej chromatografii cienkowars¬ twowej. W ekstrakcie eterowym stwierdzono obecnosc kwasu n-kapronowego. W warstwie wodnej, oprócz kwasu 3-hydroksy-4-amino-6-metyloheksanokarboksylowego stwierdzono obecnosc waliny i alaniny w stosunku 2:1. Na tej podstawiemozna oszacowac, ze pepstatyna B zbudowa¬ na jest z podstawionej grupy kwasu tluszczowego pepsta¬ tyny o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R oznacza reszte n-kaproilowa wprzypadkupepstatyny B, a R oznacza reszte izo-kaproilowa w przypadku pepstaty¬ ny C, a R1 oznacza atom wodoru, nizsza grupe alkilowalub 88 96888 968 3 atom metalu alkalicznego i kwasu n-kapronowego.W chromatografii cienkowarstwowej na silikazelu przy uzyciu ukladu rozpuszczalników chloroform : metanól- i kwas octowy = 95 :-4 : 1, na podstawie barwnej reakcji Rydona-Smitha okresla siedla estru metylowego pepstaty¬ ny B wartosc R( = o,39 i dla estru metylowego pepstatyny Rr = 0,35. Dzialanie antypepsynowe estru metylowego pe¬ pstatyny B jest takie same, jak estru metylowego pepsta¬ tyny.Stwierdzono, ze szczep, wytwarzajacy pepstatyne, moze produkowac pepstatyne B, której grupa kwasu tluszczo¬ wego podstawiona jest dokwasukapronowego zczesteczki pepstatyny. Na tej podstawiemozna spodziewac sie wyste¬ powania wiekszej ilosci substancji podobnych do pepsta¬ tyny, rózniacych siegrupakwasu tluszczowego. Inna peps- tatyna, nazwana pepstatyna C, zawiera kwas izokaprono- wy, której ester metylowy wykazuje wartosc Rf = 0,39, taka sama, jak dla pepstatyny B. Ester metylowy innej jeszcze pepstatyny wykazuje wartosc Rf = 0,42. Tensklad¬ nik o dzialaniu antypepsynowym otrzymuje sie w postaci drobnych igiel; w produktach hydrolizy w srodowisku kwasnym tej substancji stwierdza sie w chromatografii gazowej wystepowanie tych samych aminokwasów ipieciu kwasów tluszczowych C5-C16.Wymienione nowe pepstatyny mozna okreslic jako peps¬ tatyny, zawierajace kwasy tluszczowe C5-C,6, takie, jak kwas n-kapronowy lub kwas izokapronowy, inne niz kwas izowalerianowy pepstatyny.Wedlug wynalazku, nowe pepstatyny wytwarza sie na¬ stepujacymi sposobami: Szczep, produkujacy pepstatyne, zaszczepia sie do odzywczego srodowiska, zawierajacego kazeine, smietanke z mleka i lub odzywke z ziarna sojowe¬ go jako zródlo azotu i w ciagu 3-10 dni poddaje sie inkubacji w zwyczajnych warunkach aerobowych, do chwili uzyskania maksymalnego dzialania antypepsyno- wego rozczynu hodowlanego. Aktywny skladnik mozna ekstrahowac n-butanolem z rozczynu hodowlanego lub jego przesaczu albo metanolem z masy grzybniowej. Uzy¬ skany w ten sposób ekstrakt zateza sie do syropu lub do zóltych osadów. Syrop wkrapla sie do 5-20 objetosci wody w celu utworzenia osadu, który odsacza sie i po wysuszeniu otrzymuje sie nowe pepstatyny w stanie surowym. Surowa pepstatyne rozpuszcza sie w nizszymalkoholu iestryfikuje sie w ciagu kilku godzin w temperaturze pokojowej lub wyzszej przy uzyciu malych ilosci katalizatora estryfikacji takiego, jak kwas solny, kwas siarkowy, kwas p-tolueno- sulfonowy, chlorek tionylu, pieciochlorek fosforu, lub POCl3 itp, W wyniku estryfikacji surowych pepstatyn otrzymuje sie mieszanine ich estrów metylowych, przy " czym glówna czesc estru metylowego pepstatyny mozna wydzielic przez krystalizacje z roztworu metanolu. Na podstawie badania tej krystalicznej frakcji metoda chro¬ matografii cienkowarstwowej stwierdza sie, zeester mety¬ lowy oryginalnej pepstatyny i nowych pepstatyn wystepu¬ je w stosunku 1:1. Tegodrugiego estru wiecej znajdzie sie w lugu macierzystym i mozna go zatezyc nastepujacym sposobem. Krysztaly krystalizuje sie ponownie z roztworu metanolu i oddziela sie od nich lug macierzysty. W lugu tym nie ma juz prawie estru metylowego oryginalnej peps¬ tatyny i mozna z niego krystalizowac oczyszczony ester metylowy nowych pepstatyn w postaci drobnych igiel.Sposób wedlug wynalazku obejmuje otrzymywanie al¬ kalicznych soli nowych pepstatyn na drodze hydrolizy w srodowisku alkalicznym estrówtychpepstatynz alkoho¬ lem oraz otrzymywanie wolnych nowych pepstatyn, uzy- 4 skiwanych przez zobojetnienie powyzszych alkalicznych produktów hydrolizy. Hydrolize w srodowisku alkalicz¬ nym mozna przeprowadzic sposobem opisanym w opisie patentowym, dotyczacym oryginalnej pepstatyny, tj. w ja- ponskim opisie patentowym nr 659 783. Alkaliczne sole nowych pepstatyn, a konkretnie sól sodowa pepstatyny B jest bialym, bezpostaciowym proszkiem, rozkladajacym sie w temperaturze 250-255°C i wykazujacym 50%-owe zahamowanie pepsyny (ID)50 przy 0,055 y. W przeciwiens- twie do pepstatyny, pepstatyna B w postaci wolnego zwiazku jest bialym, bezpostaciowym proszkiem, który otrzymuje sie przez krystalizacje z metanolu i wody w sto¬ sunku 2:1. Rozklada sie ona w temperaturze okolo 210- 220°C. Skrecalnosc wlasciwa (a)20D-85° (C = 1,0 metanol), a ID50 pepsyny wynosi 0,05y. Widmo w podczerwieni dla pepstatyny B przedstawiono na fig. 2. Rozpuszcza sie ona rlatwo w metanolu, 100 mg/ml, tj. dziesieciokrotnie lepiej od oryginalnej pepstatyny. Ponadto, pepstatyna B rozpu¬ szcza sie w wodnym roztworze butanolu, w etanolu, alko- holu izopropylowym, dwumetyloformamidzie, sulfotlenku dwumetylu, kwasie octowym lub pirydynie, jest nieznacz¬ nie ropzuszczalna w wodnym roztworze acetonu, lecz trud¬ no rozpuszcza sie wodwodnionym acetonie, odwodnionym butanolu, chloroformie, benzenie, eterze i wodzie.Nizej podane przyklady ilustruja wynalazek, nie ograni¬ czajac jego zakresu.Przyklad I. Wytwarzajacy pepstatyne szczep Strepto- myces testaceus zaszczepia sie do 2900 1 sterylizowanej pozywki, zawierajacej 5,5% glikozy, 2,0% oleju sojowego, 4,5% smietanki z mleka, 5,0% kazeiny mleka, 0,15% K2HPO„ 0,35% NaCl i 0,15% MgS04. 7H20 (pH = 6,45).Pozywke poddaje sie inkubacji w ciagu 112 godzin.w tem¬ peraturze 23-24°C, mieszajac i napowietrzajac. Rozczyn zawiera skladnik antypepsynowy w ilosci równowaznej stezeniu pepstatyny 2260 /cm3. Dodajac rozcienczonego kwasu siarkowego, pH rozczynu doprowadza, sie do 2,5 orza dodaje sie 3600 1 metanolu. Mieszanine miesza sie w ciagu 40 minut w temperaturze 15-20°C, dodaje sie 4% 40 srodka, ulatwiajacego saczenie, przesacza*sie i przemywa.Do 6300 1 uzyskanego w ten sposób eluatu metanolowego dodaje sie lugu, az do pH = 10, metanol odparowuje siepod próznia i otrzymuje sie 1900 1 wodnej pozostalosci. Do tej pozostalosci dodaje sie 800 1 n-butanolu i pH mieszaniny doprowadza sie do 7,0. Mieszanine miesza sie w ciagu 30 minut w temperaturze 20°C i oddziela sie 960 1 ekstraktu butanolowego. pH tego ekstraktu doprowadza sie do war¬ tosci 3,0 i zateza sie go pod próznia do 55 1 syropu. Syrop ten wkrapla sie, mieszajac, w ciagu 60minut, do 8001 wody i wytracony osad odsacza sie. Osad przemywa sie woda, liofilizuje i otrzymuje sie 7990 g zóltego proszku surowych nowych pepstatyn. Proszek ten zawiera 64% skladnika antypepsynowego, równowaznego pepstatynie. 6080 g tego surowego produktu rozpuszcza sie w 33 55 1 metanolu i w celu odbarwienia dodaje 1,25 kg wegla aktywnego. Do 381 odbarwionego roztworu metanolowego dodaje sie 125 cm3stezonego kwasu siarkowego i miesza sie go w ciagu 2,5 godziny w temperaturze 60°C. Mieszanine reakcyjna zobojetnia sie 0,63 1 trójetyloaminy i miesza sie 60 w ciagu 120 minut w temperaturze 50-60°C. Otrzymuje sie bialy, krystaliczny osad, który przemywa sie woda i meta¬ nolem, i suszy pod próznia. Uzyskuje sie 3230 g estrów metylowych nowej pepstatyny o dzialaniu antypepsyno¬ wym (ID)50 przy y 0,056. Temperatura rozkladu: 250-251°C 65 i (a),0D- 90°C (C = 1,0, kwas octowy). Proszek ten zawiera88 968 powyzej 80% estrów metylowych pepstatyny B i C o Rf = 0,39 (chromatografia cienkowarstwowa).Przykladu. 3100 g estru metylowego nowej pepstatyny (uzyskanej wedlug przykladu I) rozpuszcza sie w 130 1 mieszaniny 90% metanolu, zawierajacej 0,2 n wodorotle¬ nek sodowy i hydrolizuje sie w ciagu 2 godzin w temperatu¬ rze 60°C. Z mieszaniny reakcyjnej odparowuje sie pod próznia i uzyskuje sie szlamowaty koncentrat. Koncentrat rozpuszcza sie w 201 wody nasyconej n-butanolem, dodaje sie 151 wody i rozcienczonym kwasem siarkowym ustala sie pH = 3,0. Mieszanine miesza sie w ciagu 60 minut i uzyskany osad odsacza sie, i prze¬ mywa woda. Przemyty osad suszy sie pod próznia i otrzymuje sie 2500 g proszku o temperaturze Wkladu 205-210° (a£° -84° (c= 1,0, metanol), ID50 (50%-owe zahamowanie pepsyny) przy y 0,055. Krzywa miareczkowania wskazuje zazycie 9,7 cm3 0,1 n NaOH na 700 mg próbki.Przyklad III. 100 g estrówmetylowych nowej pepstaty¬ ny (uzyskanej wedlug przykladu I) rozpuszcza sie w 4 1 absolutnego metanolu i odbarwia sie20gwegla aktywne¬ go. Roztwór metanolowy pozostawia sie na nociotrzymuje w pierwszym rzucie 24 g bialych krysztalów. 4,3 1 metano¬ lowego lugu macierzystego zateza sie do objetosci 1,3 1, miesza sie w ciagu 60 minut w temperaturze 60°C w celu przeprowadzenia krystalizacji. Mieszanine pozostawia sie na noc i w drugim rzucie uzyskuje sie 5,5 g bialych krysztalów. Krysztaly tego drugiego rzutu rozpuszcza sie w 1,5 1 goracego metanolu i poddaje dzialaniu wegla aktywnego. Metanolowy roztwór pozostawia sie na noc i otrzymuje sie 12,0 g bialych krysztalów trzsciego rzutu.Fizykochemiczne wlasnosci uzyskanych w ten sposób' substancji krystalicznych: Krysztaly pierwszego rzutu: temperatura rozkladu 250- 251°C (a)20D - 90,5° (C = 0,5, kwas octowy), ID50 przy y 0,05 substancja o Rf 0,35: substancja o Rf 0,39 = 1 : 1 do 1 : 2 (chromatografia cienkowarstwowa), chloroform : meta¬ nol : kwas octowy = 95 : 4 : 1).Krysztaly drugiego rzutu: temperatura rozkladu 253- 254°C,(a)20D-91,5°(C = 0,5, kwas octowy), ID50 przy y 0,05, glównie substancja o Rf 0,39 i slady substancji o Rf 0,42 (chromatografia cienkowarstwowa, chloroform : metanol- : kwas octowy = 95 : 4 : 1).Krysztaly trzeciego rzutu: temperatura rozkladu 254- 255°C, (a)2UD - 95,5° (C = 0,5, kwas octowy, ID50 przy y 0,05, glównie substancja o Rf 0,39 (pepstatyny B) i sladysubstan¬ cji o Rf 0,42 (chromatografia cienkowarstwowa, chloro¬ form : metanol : kwas octowy = 95 : 4 : 1), widmo w pod¬ czerwieni przedstawiono na fig. 1, wartosci oznaczone: C-60,14, H-9,38 i N-9,74%, umiarkowana rozpuszczalnosc w sulfotlenku dwumetylu, dwumetyloformamidzie i kwa¬ sie octowym, mala rozpuszczalnosc w metanolu (5-10 mg/cm3), lecz lepsza, nize estru metylowego pepstatyny.Przyklad IV. Wytwarzajacy pepstatyne szczep zasz¬ czepia sie do 130 1 sterylizowanej pozywki, zawierajacej 6,0% glikozy, 2,0% gliceryny, 4,0% smietanki z mleka, 4,5% kazeiny mleka, 0,1% K2HP04, 0,3% NaCl i 0,1% MgS04.7H20 (pH = 6,8) i poddaje sie inkubacjiw ciagu 137 godzin w warunkach, opisanych w przykladzie I. Do 1251 rozczynu hodowlanego, zawierajacego skladnik antypep- synowy w ilosci równowaznej 170 g pepstatyny, dodaje sie 60 1 n-butanolu i mieszanine miesza sie w ciagu 40 minut w temperaturze pokojowej. Nastepnie, warstwe butanolo- wa, warstwe wodna i warstwe stala (mase grzybniowa) 6 rozdziela sie przez odwirowanie. Warstwe butanolowa przemywa sie woda i zateza sie po próznia do 1,51 syropu.Us"tala sie pH syropu na wartosc 3,0, dodaje sie 7,51 n-he- ksanu i miesza w celu uzyskania zóltawo-brazowego osa- du. Mieszanine miesza sie jeszcze w ciagu 60 minut, osad odsacza sie, przemywa i suszy pod próznia, i otrzymuje sie 164 g surowej nowej pepstatyny o dzialaniu antypepsyno- wym ID50 przy y 0,075. 150 g nowej pepstatyny rozpuszcza sie w 1,5 1 90%- io owego metanolu w temperaturze 40-50°C i odbarwia sie 150 g wegla aktywnego. Do 1,6 1 odbarwionego roztworu metanolowego dodaje sie w temperaturze pokojowej 1,0 # 1 wody i uzyskuje sie zelowaty osad. Osad przesacza sie, przemywa 50%-owym metanolem i poliofilizacji otrzymu- je sie 94 g lekko zóltawego proszku, wykazujacegoprzeciw pepsynie ID60 przy 7 0,062. Proszek ten rozpuszcza sie w 90%-owym ^etanolu, dwukrotnie zadaje sie weglem aktywnym tak, jak to powyzej opisano, i uzyskuje sie 45 g bialego proszku nowej pepstatyny. ID50 przy y 0,055, temperatura rozkladu 198 do 205°C, (a)2nD = -79° (C = 1,0, metanol), na cMromatogramie cienkowarstwowym okresla sie R, 0,35 - pepstatyna, Rf 0,39 -pepstatyna B i pepstatyna C oraz Rf 0,42, a proporcje substancji o R( 0,35, 0,39 i 0,42 wynosily 1 : 3 : 0,1.Przyklad V. Wytwarzajacy pepstatyne szczep zaszcze¬ pia sie do 1301 sterylizowanej pozywki, zawierajacej 6,0% - glikozy, 2,0% gliceryny, 1,5% smietanki mleka, 1,5% kaze¬ iny mleka, 5,7% pozywki z ziarna sojowej, 0,1% K2HP04, 0,3% HaCl i MgSO,. 7H20 (pH = 5,5) i poddaje sie inkuba- cji w ciagu 137 godzin w warunkach, opisanych w przykla¬ dzie I. 110 g rozczynu hodowlanego, zawierajacego sklad¬ nik antypepsynowy w ilosci równowaznej 132 g pepstaty¬ ny, przesacza sie z dodatkiem 7 kg srodka, ulatwiajacego saczenie. Dodajac rozcienczonego kwasu siarkowego, ustala sie pH = 2,0 i mieszanine rozdziela sie na 33 kg (masa na mokro) masy grzybniowej i 75 1 przesaczu. Do masy grzybniowej dodaje sie 83 1 absolutnego metanolu i uzyskana szlamowata mieszanine miesza sie w ciagu 40 ' minut. Nastepnie, mieszanine przesacza sie, placek filtra- 40 cyjny przemywa sie dwukrotnie 401 70%-owego metanolu i otrzymuje sie 1401 wodnego, metanolowego eluatu. Do 75 1 przesaczu hodowli dodaje sie 35 1 n-butanolu, miesza sie go w ciagu 15 minut i po rozdzieleniu otrzymuje sie 37 1 warstwy butanolowej i 731 warstwy wodnej. 1401 wodne- 45 go, metanolowego eluatu, uzyskanego z masy grzybniowej, zateza sie pod próznia do 27 1 wodnego roztworu i miesza sie z 37 1 butanolowgo ekstraktu uzyskanego z przesaczu hodowli. Mieszanine te odwirowuje sie w celu usuniecia warstwy wodnej i otrzymujesie 351 ekstraktu butanolowe- 50 go. Ustala sie pH tego ekstraktu 3,0 i zateza sie go pod próznia do 1,0 1 syropu. Syrop wkrapla sie do 15 1 wody i miesza sie w ciagu 60 minut, az do wytracenia osadu. Osad odsacza sie, przemywa woda i powysuszeniuw temperatu¬ rze 60-70°C otrzymuje sie 158 g zóltawego proszku nowej 55 pepstatyny o ID50 przeciw pepsynie przy y 0,072.Takuzyskany proszek estryfikuje sie metanolem sposo¬ bem, podanym w przykladzie I i uzyskuje sie 62 g bialego, krystalicznego proszku estru metylowego pepstatyny.IDB0 przy y 0,05, temperatura rozkladu 250-252°C (a)"D - 90,6° 60 (C = 0,5, kwas octowy), na chromatogramie cienkowars¬ twowym stwierdza sie wystepowanie glównie estru mety¬ lowego nowej pepstatyny o Rf 0,39 i sladowych ilosci estru metylowego pepstatyny. g tego estru metylowego nowej pepstatynyhydrolizu- 65 je sie w ciagu 2 godzin w temperaturze 60°C przy uzyciu88 968 450cm3 90%-owego roztworu metanolu, zawierajacego 0,2 nNaOH. Dodajac rozcienczonego kwasu solnego, ustala sie pH mieszaniny reakcyjnej na 8,5 i zateza sie do objetosci 150 cm', przy czym wytraca sie osad. Osad odsacza sie, przemywa metanolem i po wysuszeniu pod próznia otrzy¬ muje sie 17,9 g bialego proszku soli sodowej nowej pepsta- tyny o ID50 przy y 0,05, temperatura rozkladu 245-249°C, (a)20D-84° (C = 1,0, metanol), podczas miareczkowania zuzywa sie 10,1 cm10,1 n kwasu solnego napróbke 700 mg.Przyklad VI. 4,0 g nowej pepstatyny w postaci wolnego kwasu, uzyskanej wedlug przykladu II, rozpuszcza sie, ogrzewajac w 100 cm3 absolutnego etanolu i dodaje sie 0,2 cm3 stezonego kwasu siarkowego. Te mieszanine ogrzewa siew ciagu 6 godzin na lazni z wrzaca woda i zateza sie pod próznia do objetosci 50 cm3. Utworzony osad odsacza sie, przemywa woda, suszy i otrzymuje sie 1,6 g proszjcu.Proszek ten krystalizuje sie ze 100 cm3 roztworu absolutne¬ go metanolu i uzyskuje sie 1,15 g bialego, krystalicznego proszku estru metylowegonowej pepstatyny (estru metylo¬ wego pepstatyny B) o ID50 przy 0,054, temperatura rozkla¬ du 250-252°C i (a)20n- 90°C (C = 0,5, kwas octowy).Przyklad VII. 3,0 g nowej pepstatyny, uzyskanej we¬ dlug przykladu II, rozpuszcza sie, ogrzewajac w 100 cm3 absolutnego alkoholu n-propylowego, dodaje sie 0,2 cm3 stezonego kwasu siarkowego i estryfikuje sie w ciagu 6 godzin w temperaturze 80°C. Mieszanine reakcyjna zateza sie pod próznia do objetosci 20 cm3 i wytracony osad odsacza sie, przemywa alkoholem n-propylowym : po wy¬ suszeniu otrzymuje sie900 mg bialego proszku. Proszekten krystalizuje sie z 40,0 cm3 roztworu absolutnego alkoholu propylowego i uzyskuje sie 48,0 mg bialego proszku estru n-propylowego pepstatyny B o ID51) przy 0,073, temperatu¬ ra rozkladu 218-220°C (a)20t) - 89,5° (C = 0,5, kwas octowy).Przyklad VIII. 3,0 g nowej pepstatyny, uzyskanej we¬ dlug przykladu II, rozpuszcza sie w 100 cm3 goracego, absolutnego n-butanolu i dodaje sie 0,2 cm3 stezonego 8 kwasu siarkowego. Estryfikacje prowadz-i sie w ciagu 6 godzin w temperaturze 80°C, po czym mieszaninezateza sie pod próznia do objetoaci 2,0 cm3. Uzyskany osad odsacza sie, przemywa n-butanolem i po wysuszeniu otrzymuje sie 800,0 mg bialego proszku. Proszek ten krystalizuje sie 15,0 cm3 roztworu n-butanolu i uzyskuje sie 340 mg bialego proszku estru n-butylowego nowej pepstatyny B o ID50przy 0,084, temperatura rozkladu 205-207T i (arn-80°C (C = 0,5, kwas octowy). PL