Uprawniony z patentu: Bristol-Myers Company, Nowy Jork (Stany Zjednoczone Ameryki) Sposób wytwarzania nowych antybiotyków Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych antybiotyków o wzorze ogólnym 2, w któ¬ rym R oznacza atom wodoru lub grupe metylowa, a X oznacza grupe o wzorze 3 lub 4, przy czym we wzorach tych n oznacza liczlbe calkowita 1—21, 5 a m oznacza liczbe calkowita 2—21, zas Rl i R2 we wzorze 3 sa jednakowe lub rózne i oznaczaja atomy wodoru lub grupy cykfloheksylowe lub grupy o wzorze 5, w którym R3 i R4 sa jednakowe lufo rózne i kazdy z tych podstawników oznacza atom io wodoru, fluoru, chloru, bromu lufo jodu, grupe trój- fluorometylowa, aminowa, nizsza grupe N,N-dwu- alkiloaminowa, grupe nitrowa, cyjamowa, nizsza grupe alkilowa, alkenylowa, alkinylowa lub alko- ksylowa, grupe wodorotlenowa, karboksylowa, niz¬ sza grupe karboalkoksylowa, grupe acetoksylowa, merkapto, tioacetoksylowa lufo nizsza grupe tioalki- lowa, jak równiez nietoksycznych dopuszczalnych w lecznictwie kationowych soli tych zwiazków.Zwiazki te, bedace pochodnymi ikumeromycyny wy¬ twarzane sposobem wedlug wynalazku nadaja sie do stosowania jako srodka przeciwfoakteryjne, jako dodatki do pasz dla zwierzat, jako srodki do lecze¬ nia schorzen wywolanych przez bakterie Graim-do- datnie i niektóre Gram-ujemne u drobiu, zwierzat i ludzi, oraz do leczenia zapalenia wymion u 'bydla.Istnieje stale zapotrzebowanie na ulepszone srod¬ ki do leczenia schorzen wywolanych pnzez bakte¬ rie Gratm-dodatnie, odporne na dzialanie benzylo- penicyliny oraz przez bakterie Gram-ujemne, do 30 15 20 25 ookazania przedmiotów zakazonych tymi bakteria¬ mi, na przyklad wyposazenia szpitali, scian w sa¬ lach 'operacyjnych itp. Szczególnie zas duze zapo¬ trzebowanie istnieje na srodki przeciwbakteryjne, nadajace sie do doustnego podawania zwierzetom.Z opisu patentowego St. Zjednoczonych nr 3201386 znane sa dwa antybiotyki, a mianowicie kumero- mycyna Ax o wzorze 1, w 'którym R oznacza grupe metylowa i kumeromycyna A2 o wzorze 1, w któ¬ rym R oznacza atom wodoru. Oba te zwiazki ha¬ muja skutecznie wzrost bakterii Gram-dodatnich, nie sa toksyczne i wywieraja dobry skutek leczni¬ czy przy podawaniu myszom zakazonym bakteriami Gram-dodatnimi. Wada tych zwiazków jest to, ze sa zle absorbowane, w zwiazku z czym ich poziomy we 'krwi sa niskie.Wynalazek umozliwia wytwarzanie nowych anty¬ biotyków nie majacych tej wady, jaka przejawiaja znane kumeromycyny. Zwiazki wytwarzane sposo¬ bem wedlug wynalazku, bedace produktami N-acy- lowego rozszczepienia kumeromycyn At ii A2 sa srodkami przeciwbakteryjnyimi, skutecznymi rów¬ niez przeciwko bakteriom Staphylococus aureus Smith.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze zwiazek o wzorze 6, w którym R oznacza atom wodoru lufo grupe metylowa, a R* i R* sa jednako¬ we lufo rózne i oznaczaja atomy wodoru lufo gtrupy o wzorze 7, albo tez mieszanine zwiazków o wzo¬ rze 6, poddaje sie reakcji z co najmniej równo- 80 67980679 I molowa iloscia srodka acyhijacego o wzorze 8, w którym X ma wyzej podane znaczenie, a Z oznacza atom chlorowca lub grupe o wzorze 9, w którym X ma wyzej podane znaczenie lub tez grupe o wzo¬ rze 10. Reakcje prowadzi sie w temperaturze —25°C do 150°C w srodowisku rozpuszczalnika protono- akceptorowego. W wyniku tej reakcji powstaje jako produkt posredni eterowy zwiazek czterowodoropd- ranylu o wzorze 11, w którym R i X maja wyzej podane znaczenie. Zwiazek ten pozostawia sie w srodowisku polarnego rozpuszczalnika w obecnosci katalitycznej ilosci kwasu, w temperaturze powyzej 0°C, w celu rozszczepienia eterowego wiazania, przy czym powstaje zadany zwiazek o wzorze 2.Szczególnie 'korzystne wlasciwosci maja otrzymy¬ wane zgodnie z wynalazkiem zwiazki o wzorze 2, w którym R oznacza grupe metylowa, a X oznacza grupe o wzorze 3, w którym n oznacza liczbe cal¬ kowita 1—8, a oba podstawniki R1 i R2 oznaczaja atomy wodoru. Cenne wlasciwosci maja równiez nietoksyczne sole tych zwiazków. Jeszcze korzyst¬ niejsze wlasciwosci maja zwiazki o wzorze 2, w którym R oznacza rodnik metylowy, a X oznacza grupe o wzorze 12, jak równiez nietoksyczne 60le tych zwiazków.Okreslenie nizszy rodnik alkilowy uzyte w tym opisie oznacza rodniki weglowodorów alifatycznych o lancuchach prostych lub rozgalezionych, zawiera¬ jace 1—8 atomów wegla, takie jak rodnik metylo¬ wy, etylowy, propylowy, izopropylowy, butylowy, izobutylowy, III-rzed.butylowy, amylowy i he- ksylowy. Okreslenie „nizszy" w przypadku ro¬ dników lub grup zlozonych odnosi sie tyl¬ ko do rodnika alkilowego, na przyklad niz¬ szy rodnik alkoksylowy oznacza rodniki takie, jak metoksylowy, etoksylowy, izopropoksylowy, a okre¬ slenie „nizszy rodnik alkenylowy" oznacza nienasy¬ cone rodniki weglowodorowe o lancuchu prostym lub rozgalezionym, o wzorze ogólnym —(cnH2n_i) w którym n oznacza liczbe calkowita 2—8, na przy¬ klad rodniki takie jak —CH2—CH =. C(CH3)8 lub —CH = CH2 itp. Podobnie tez okreslenie „nizszy rodnik alkilowy'' oznacza nienasycony rodnik weglo¬ wodorowy o lancuchu prostym lub rozgalezionym, o wzorze ogólnym —(CnH2n_3), w którym n oznacza liczbe calkowita 2—8, na przyklad —CH2—C = = C—CHS lub —C = C—CHCCHa)* itp.Zwiazki o ogólnym wzorze 2 maja kwasowa gru¬ pe wodorotlenowa w pozycji 4 w fcumarynowej cze¬ sci czasteczki. Kwasowy charakter tej grupy umoz¬ liwia latwe wytwarzanie nietoksycznych, dopu¬ szczalnych w lecznictwie, kationowych soli tych zwiazków, na przyklad soli sodowych, potasowych, wapniowych, glinowych i amonowych oraz podsta¬ wionych soli amoniowych z aminami, takimi jak trójalkiloamuiy, prokaina, dwubenzyloamina, N-ben- zyio-p-fenyloetyloamina, l^fenamina, N,N'-dwulben- zyJoetylenodwuamina, dehydroabietyloamina, N,N'- ^bis^dehydroabietyloetylenodwuamina i nizsze N-al- kilopiperydyny, takie jak N-etylopiperydyna.Wspomniane wyzej srodowisko rozpuszczalnikowe protono-akceptorowe stosowane podczas procesu rozszczepiania, jest srodowiskiem zarówno homo¬ genicznym, jak i heterogenicznym, zawierajacym nieorganiczna lub organiczna zasade, taka jak 4 weglan ^lub wodoroweglan metalu •Mnnl^BTVffgr\ weglan lub wodoroweglan metalu ziem alkafcanych lub trzeciorzedowa amine, taka Jak pfrydyna ks nizsza trójalkiloamina, sama lub razem z obojetnym 5 rozpuszczalnikiem organicznym, takim Jak cztero- wodorofuran, benzen, toluen, ksylen, eter dwuety- lowy lub chloroform. Takim korzystnym «^^Wn jest pirydyna lub nizsza trójalkiloarnina ssma lufo wraz z obojetnym rozpuszczalnikiem organicznym. 10 Reakcje rozszczepiania prowadzi sie w temperaftu- nze —25° do 150°C, a korzystnie w temperaiturze powyzej —5°C do temperatury wrzenia srodowiska reakcji. ( • Polarnymi rozpuszczalnikami, odpowiednimi do 15 stosowania jako srodowisko reakcji rozszczepiania eterowego wiazania czterowodoropiranylowego sa nizsze alkanole, alkohole cykliczne, takie jak cyklo- heksanol i aoralkanole, takie jak alkohol benzylo¬ wy. Ze wzgledów oszczectoosciowych korzystnie jest 20 stosowac nizsze alkanole, takie jak metanol, etanol i propanoi. Reakcje rozszczepiania prowadzi sie zwykle w temperaturze od 0°C do temperatury wrzenia uzytego rozpuszczalnika.Jako srodek acylujacy w procesie acylujacego 25 rozszczepiania wedlug wynalazku stosuje sie halo¬ genki kwasowe, bezwodniki kwasowe lub mieszane bezwodniki kwasowe. Korzystnie stosuje sie chlor¬ ki kwasowe. Stosowane wedlug wynalazku srodki acylujace sa albo zwiazkami dostepnymi w handlu 30 lub wytwarza sie je z odpowiednich kwasów, sto¬ sujac znane sposoby, jak podano nizej. a) Halogenki kwasowe wytwarza sie mieszajac kwas z halogenkiem tionylu i ewentualnie ogrzewa¬ jac, po czym produkt oczyszcza sie przez destylacje 35 iub krystalizacje z obojetnego rozpuszczalnika, na przyklad benzenu lub rozpuszczalnika pod nazwa Skellysolve B, produktu handlowego bedacego mie- szaniina weglowodorów frakcji eterów naftowych zawierajaca glównie n-heksan i majaca temperature 40 wrzenia 60—^80°C. b) Bezwodniki kwasowe wytwarza sie mieszajac kwas z bezwodnikiem kwasu octowego i ewentual¬ nie ogrzewajac, po czym produkt oczyszcza sie przez krystalizacje z obojetnego rozpuszczalnika, takiego « jak benzen, Skellysfifl^feB^jOCtari etylu itp. c) Mieszane bezwodinlkf kwasowe/fw^w^^ sie , mieszajac kwas z chloromrówczanein etyiu w obec- '• mosci pirydyny, ewentualnie 'ogrzewajaca przy czym zwykle produktu nie wyodrebnia sie, lecz bezpo- 50 srednio sljosuje sie do reakcji z czterowodoropira- nylokurneromycyna Ax lub Aj.W celu przeksztalcenia zwiazków o wzorze 11 w zwiazki o wzorze 2 konieczne jest stosowanie odpowiedniego kwasu jako katalizatora reakcji od- szczepiania grupy czterowodoropiranylowej. Kwasa¬ mi odpowiednimi do tego celu sa zwiazki nalezace do nizej podanych grup. 1. Stezone kwasy mdnerallne, takie jak kwas siaa eo kowy, fosforowy, fosforawy i oMorowodorowy. 2. Kwasy arylosulfonowe o wzorze 13, w którym podstawniki A, B i C sa"jednakowe lub rózne i oznaczaja atomy wodoru lub chlorowca, nizsze grupy alkilowe lub alkoksylowe albo grupy nitrowe, « arylowe lub cyjanowi80679 « • 3. Kwasy Lewisa, takie jak SaG^, Ala* BF* ZnCB* lub FeOly. 4. Kwasy zywicznie w postaci -kwasowej takie jak kwasy fenclosulfonowe, polistyrenosulfo- nowe, pOlistyrenofosforawe, poildBtyreiHalbsfonowe, akrylofcarboksylowe, pierscieniowe kwasy podi- styrenosulfonowe, kwasy inetakrylofearboksylowe, a zwlaszcza makrosiaftkowy kwas pojlastyrenosulfo- nowy, znany pod nazwa Amfberlyst 15. 5. Aktywowane kwasy karboksylowe, na przy¬ klad o wzorze FtO—COOH lub F.CHCOOH albo o wzorze 14, w którym podstawniki A', B' i C' sa jednakowe Jub rózne i oznaczaja grupy mitrowe lub cyjanowe albo atomy fluoru lub wodoru. 6. Kwasy alkilosulfonowe o wzorze R(OH2)xSOaH, w którym R oznacza rodnik arylowy, ewentualnie podstawiony lub nizszy rodnik alkilowy, ewentual¬ nie podstawiony, a X oznacza liczbe calkowita 0—6.Jako materialy wyjsciowe wedlug wynalazku sto¬ suje sie 2', 2', 4,4-0,0,0,0-czteroozfterowodoropiryny- lokumeromycyne, 2', 2', 4—0,0,0-trójczterowodoropi- ranylokumeromycyne, 2', 2/-0,0-dwuczterowodoro- piranylotaKneromycyne albo ich mieszaniny. Zwiaz¬ ki te sa znane, a ich sposób wytwarzania i wlasci¬ wosci sa opisane w belgijskim opisie patentowym nr 713746 i w opisie patentowym Stanów Zjedno¬ czonych Ameryki nr 3380994.Proces wedlug wynalazku prowadzi sie w róz¬ nych warunkach, przy czym najbardziej decydujace znaczenie ma temperatura, stosowana podczas fazy acylowania. Jezeli stosuje sie niska temperature, wynoszaca od —25°C do 25°C, wówczas mozna wy¬ dzielac te produkty posrednie, których wyodrebnie¬ nie nie jest mozliwe przy stosowaniu wyzszej tem¬ peratury. Teprodukty posrednie mozna latwo prze¬ prowadzac w zadane zwiazki za pomoca ogrzewania z organicznym zwiazkiem nukleoMowym, takim jak pirydyna.Podane wyzej zwiazki wyjsciowe o wzorze 6 lub ich mieszanine rozpuszcza sie lub miesza w tempe¬ raturze -^25°C do 25°C z organicznym zwiazkiem nuMeofilowym, korzystnie z pirydyna lub nizsza trójaOkfiloamina, taka jak trójmetyloarndna, trójety- loamfina, ewentualnie razem z obojetnym rozpusz¬ czalnikiem, takim jak czterowodorofuran, benzen, toluen, ksylen, chloroform lub eter. Roztwór lub zawiesine chlodzi sie do temperatury okolo 10°C za pomoca wody z lodem i starannie mieszajac, dodaje w nadmiarze nie podstawionego lub podstawionego halogenku kwasowego, bezwodnika kwasowego lub zwiazku o równowaznym dzialaniu, korzystnie w stosunku 2—4 mciii srodka acylujacego na 1 mol eteru czterowodoropiranylowego kumeromycyny.Miesza sie w ciagu kolku godzin, po czym roztwór odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem w tem¬ peraturze ponizej 25°C, do konsystencji syropu.Otrzymany w ten sposób zwiazek jest bds-amidem o wzorze 15, w którym R oznacza atom wodoru lub rodnik metylowy, a X ma wyzej podane zna¬ czenia Produkt ten ogrzewa sie w srodowisku zwil¬ zonego woda organicznego rozpuszczalnika protono- akceptorowego, utrzymujac w temperaturze powy¬ zej 50°C w ciagu nocy lub w stanie wrzenia pod chlodnica zwrotna w ciagu co najmniej 3 godzin.Otrzymany zwiazek o wzorze 11 miesza sie z po¬ larnym rozpuszczalnikiem, takim jak nizszy alkanol, na przyklad metanoli, etanol lub propanol, z dodat- tóem katalitycznej ilosci kwasu, ewentualnie ogrze¬ wajac. 5 Proces wedlug wynalazku mozna tez prowadzic w ten sposób, ze zwiazki wyjsciowe o wzorze 6 lub ich mieszanine rozpuszcza sie allbo miesza z orga¬ nicznym rozpuszczalnikiem protono-akceptorowym w temperaturze od 25° do temperatury wrzenia uzytego rozpuszczalnika. Jako organiczny rozpusz¬ czalnik nukleoMowy stosuje sie zwykle pirydyne hib nizsza trójaflkflJtoamdne, taka jak trójmetyloami- na, teójetygoamina, ewentualnie razem z obojetnym roz^iszpzaMaeni, takim jak czterowodorofuran, benzen, toluen, ksylen, chloroform lub eter. Do otrzymanego roztworu lub zawiesiny dodaje sie w nadmiarze nie podstawionego lub podstawionego chlorku alkano- lub alkenokwasowego, bezwodnika kwasowego lub jego funkcjonalnego równowaznika, korzystnie w stosunku 2-^4 moda srodka acylujacego na 1 mol eteru czterowodoropiiranylowego kumero¬ mycyny i energicznie miesza. (Mieszanine ogrzewa sie powoli dio temperatury wrzenia rozpuszczalnika, zwykle w ciagu okresu czasu od 30 minut do 40 go¬ dzin, przy czym barwa roztworu z pomaranczowej staje sie brazowa. Roztwór odparowuje sie nastep¬ nie pod zmniejszonym cisnieniem do konsystencji syropu i wlewa do wody z lodem, mieszajac ener¬ gicznie. Oddzielony produkt krystaliczny stanowi mieszanine zwiazku o wzorze 11 i malych ilosci zwiazku o wzorze 16 i/lub o wzorze 17 oraz o wzo¬ rze 18, w których R i X maja wyzej podane zna¬ czenie, a R7 oznacza atom wodoru lub grupe o wzo¬ rze 7.Otrzymana mieszanine rozdziela sie na skladniki na drodze frakcjonowanej krystalizacji, metoda Chromatografii lub inna. Zwiazek o wzorze 11 roz¬ puszcza sie nastepnie w polarnym lozpuszczalniku, takim jak nizszy alkanol, na przyklad metanol, eta¬ nol lub .propanol, w obecnosci katalitycznych ilosci 'kwasu i ewentualnie ogrzewa, otrzymujac zwiazek o wzorze 2.Aczkolwiek proces rozszczepiania zachodzi latwo przy stosowaniu obu wyzej opisanych sposobów, to jednak stwierdzono, ze najwyzsza wydajnosc pro¬ duktu, przy najmniejszej ilosci oksazolowych pro¬ duktów rozkladu, zabarwiajacych mieszanine, otrzy¬ muje sie jezeli tuz przed dodaniem srodka acyluja¬ cego, do mieszandny zawierajacej eter czterowodoro- p&ranylowy kumeromycyny dodaje sie mala ilosc wodyu Poza tym stwierdzono, ze jezeli stosunek srodka acylujacego do eteru czterowodoropiranylo^ wego kumeromycyny jest mniejszy niz 5:1, wówczas powstaja tylko minimalne mosci oksazoiu o wzo¬ rze 18.Zwiazki o wzorze 2 mozna równiez wytwarzac metoda polegajaca na tym, ze 3-ainfino-4-hydrofcsy- -8Hmetylo-7-[3-0-(5-me1y(k-2-pip^ Hnowiosyloksy]^kumeryne o wzorze 19, w którym R ma wyzej podane znaczenie, rozpuszcza sie w piry¬ dynie i acyluje bezposrednio za pomoca niewielkie¬ go molowego nadmiaru odpowiedniego srodka acy¬ lujacego o wzorze 20, w którym X ma znaczenie podane wyzej, a hal oznacza atom chlorowca, ta¬ kiego jak chlor, brom lub jod albo funkcjonalnie 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6080679 T równowaznego zwiazku, przy czyim otrzymuje sie zwiazki o wzorze 2. Zwiazki o wzorze 19 sa zwiaz¬ kami znanymi na przyklad z belgijskiego opisu pa¬ tentowego nr 711686.ZwiazM wytwarzane sposobem wedlug wynalazku mozna latwo przeprowadzac w zwiazki o wzorze 2 zawierajace w pierscieniu fenylowym grupy inne niz omówione wyzej grupy X. Wytwarzanie takich zwiazków wchodzi równiez w zakres wynalazku.Jezeli zwiazki o wzorze 2 zawieraja w grupie X grupe nitrowa, cyjanowa, acetoksyiowa, tioacetoksy- lowa —S—CO—CH, lulb nizsza grupe karboalkoksy- lowa, wówczas grupy te mozna przeprowadzac w inne.Na przyklad za pomoca lagodnej hydrolizy grup acetoksylowych, tioacetoksylowych lub nizszych grup karboalkoksylowych wytwarza sie grupy X zawierajace grupy funkcyjne wodorotlenowe, mer- kapto lub karboksylowe. Podobnie przez redukcje grup nitrowych wytwarza sie grupy aminowe. Na drodze aminowania otrzymanej grupy karboksylo¬ wej mozna wytworzyc w grupie X podstawione przy azocie lub nie podstawione grupy amidokarbo- ksylowe. Za pomoca alkilowania przy azocie grupy aminowej mozna wytworzyc nizsze grupy N-aflMlo- aminowe lub nizsze grupy N,N-dwuailJkiloammowe.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku wystepuja w róznych stopniach uwodnienia, a mia¬ nowicie jako bezwodne, jednowodziany i poliwo- dziany. W celu uproszczenia w opisie nie omawia sie oddzielnie tych postaci zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku.Ponizej podano przyklady wykonania wynalazku.Do oznaczen aktywnosci biologicznej stosowano próbki zmodyfikowanej kumeromycyny Alf wpro¬ wadzane na plytki Petrfego z podlozem skladaja¬ cym sie z 10 mg agaru (Baltimore Biological Labo¬ ratories BBL) i 4 ml agaru nasiennego BBL za¬ szczepionego Staph, aureus ATCC 6538P, Hodowle na plytkach prowadzono w ciagu 18 godzin w tem¬ peraturze 30°C. W próbach porównawczych stoso¬ wano 3-»benzamido-4-hydroksy-8-metylo-7-[3-0-(5- -metylo-2-piirolHlokaribonylo)-nowiosyloklsy]-ikumary- ne, oznaczona symbolem BIC3, imajaca wzorcowa aktywnosc 1000 mikrograrnów na 1 mg i aktywnosc badanych zwiazków wyrazano w stosunku do tej aktywnosci.Przyklad I. 3-ilzc4Duityroamido-4-hydroksy-8- -metylo-7- [3^H5-metylo-2-pcrólilo^ -nowio- syfloksy]-kumaryna o wzorze 21. 50 g (39,11 milimola) 2,2'-dwuczterowoodoropira- nylo-kumeromycyny A* rozpuszcza sie w 6001 ml czterowodorofuranu mieszajac w temperaturze 25°C i do roztworu dodaje 19,7 g (27,15 ml to jest 195,5 miilirnola) trójetyloaminy i 24,7 g (26,05 ml to jest 156,4 milimola) bezwodnika kwasu izomaslowego, mieszajac w temperaturze 25°C, po czyrn mieszani¬ ne ogrzewa sie w tempieraiturze 65°C pod chlodnica zwrotna w ciagu 7-rr6 godzin. Mieszanine odparo¬ wuje sie pod zmniejszonym cisnieniem dlo objetosci okolo 200 ml i wlewa do 2000 ml energicznie mie¬ szanego SkeHyisolve-B i suszy. Otrzymuje sie 72 g produktu, stanowiacego mieszanine imidów.Mieszanine te rozpuszcza sie w 1440 ml (20 ml na 1 g produktu) pirydyny i miesza na lazni ole- * jowej w temperaturze 55—60°C w ciagu 24r—36 go¬ dzin. Nastepnie odparowuje sie pod zmniejszonym cisnieniem do objetosci okolo 200—300 ml i wlewa do 3000 nil silnie mieszanej wody z lodem, a na- 5 stepnie dodaje tyle 6 n roztworu kwasu solnego, aby wartosc pH mlieszaniny wynosila 1,9. Miesza sie w ciagu 30—45 minut, odsacza stoly produkt, przemywa woda i suszy. Otrzymuje sie 65—70 g produktu, bedacego mieszanina amidów. Ten suro- 10 wy produkt rozpuszcza sie w 1400—1500 mil meta¬ nolu i dodaje tyle acetonu (okolo 150 ml), aby otrzy¬ mac klarowny roztwór. Do roztworu tego dodaje sie 14,0 g (0,2 równowaznika) jednowodzianu kwasu p-toLuenosulfonowego i miesza w temperaturze 25°C 15 w ciagu 48 godzin. Roztwór przesacza sie w celu oddzielenia substancji nierozpuszczonych i przesacz ¦zateza pod zmniejszonym dsniendem do okolo Vs—Vt objetosci. Stezony produkt przesacza sie ewentualnie i wlewa do 3000 ml wody z lodem 20 silnie mieszajac w ciagu 30—15 minut, po czym odsacza sie wydzielony osad, przemywa woda i su¬ szy. Otrzymuje sie okolo 35 g produktu, który roz¬ puszcza sie w 1500 ml ogrzanego octanu etylu i przesacza, a nastepnie ekstrahuje raz za pomoca 25 1000 ml i dwukrotnie za pomoca 500 ml 5% roz¬ tworu wodnego wodoroweglanu sodowego. Zadany produkt jest rozpuszczony w fazie organicznej. Roz¬ twór ten suszy sie nad bezwodnym siarczanem so¬ dowym, odl^arowuje do okolo 300-^500 ml i pod- 30 daje frakcjonowanemu stracaniu za pomoca Skelly- solve-B. Otrzymuje sie 4,5—5,0 g bialego, krysta¬ licznego produktu^ który topnieje w temperaturze 173^175°C z objawami rozkladu. Próba na plytce daje aktywnosc 450 jednostek BL-C3. 35 Analiza produktu Obliczono dla wzoru C28HMO10N2 : 60,20% C, 6,14% H i 5,01% N, a znale¬ ziono 60,15% C, 6,31% H i 4,80% N.Przyklad II. 3-(N^benzoilo-P-aQanarnido)-4-hy- diroksy-8-metylo-7-[3-0- (5-metylo-2-piiroMokarbony- 40 lo)-nowiosyloksy]-kumaryna. 1 g (2,05 milimola) 3-amino-4-hydroksy-8Hmety!l^ ix^lokarbonylo)-nowiosyloksy]^kum oznaczo¬ nej w skrócie PNC-hNHj, rozpuszcza sie w 20 ml acetonu, dodaje 0,31 g (3,06 milimola) trójetyloami- 45 ny i chlodzi do temperatury 0—5°C. 0,735 g (4,1 milimola) N^benzilo gadaniny roz¬ puszcza sie w 20 ml acetonu, chlodzi do temperatu¬ ry 0—5°C i do ollrzynianego roztworu dodaje mie¬ szajac w temperaturze 0—5°C 0,752 g (7,43 mdiM- 50 mola) trójetyloaminy, a nastepnie 0,673 g (6,20 mili¬ mola) cMoromrówczanu etylu. Przy dodawaniu tego ostatniego zwiazku powstaje niezwlocznie ciezki, bialy osad i w celu rozpuszczenia go dodaje sie 2,0 ml wody i miesza w temperaturze 0-^5°C 55 w ciagu 45 minut, po czym do roztworu dodaje sie w temperaturze 0—5°C przygotowany uprzednio roztwór PNO^NHj i miesza w lemperaturze 0—5°C w ciagu 1 godziny, a nastepnie w ciagu 2 godzin w temperaturze 25°C. 60 Otrzymana mieszanine reakcyjna wlewa sie do 500 ml lodowatej wody, miesza intensywnie i do¬ daje 6 n roztworu kwasu solnego w celu uzyskania wartosci pH mieszaniny okolo 1—2. Po uplywie 1 godziny odsacza sie osad o barwie fioletowej, 65 przemywa i suszy. Otrzymuje sie 1,123 g surowego80679 9 produktu, który oczyszcza sie przez frakcjonowania krystalizacje z octanu etylu i SikelllyBolve-B. Otrzy¬ muje sie 562 g czystego produktu.Analiza. Obliczono dla wzoru C^H^OnNg • V2H20: : 60,71% C, 5,69% H i 6,25% N, a znaleziono 60,68% C, 6,0(5% H l 6,09% N.Aktywnosc prioduktu wynosi 50 jednostek BL—C3, a budowe zwiazku potwierdzaja wyniki badan widma absarbcyjnego w podczerwieni i widma ja¬ drowego rezonansu magnetycznego.Przyklad III, 3-<(3,3^dwumetylobutyroaimido)- -44iydrokisy-8-fnety(lo-7-[3-0J(5nnetyló-2-piiroililokar- bonylo)-nowiosy!lokisy]-kunTaryna. Roztwór 10,81 ml (78,2 milimola) chlorku 3,3^dwumetylobutyrylu w 45 ml czterowodorofuranu wkrapla sie powoli mieszajac do roztworu 25,0 g (19,55 miiliimdla) 2,2- -dwuczterowodoropiii^ At w 500 ml pirydyny w temperaturze 25°C i miesza w tlej temperaturze w ciagu 94 godzin. Nastepnie mieszanine wlewa sie do 2500 ml wody z lodem, dodaje 6 n roztworu kwalsu solnego do wartosci pH 1,5 i miesza w dafeu 1 godziny. Odsacza sie powitaly osad, przemywa go 1 suszy, a nastepnie ponownie rozpuszcza w 750 ml pirydyny, umieszcza w lazni olejowej o temperaturze 55—60°C i miesza w tej temiperaturze w oiajgu 24 igodzin, po czym za¬ teza pod zmniejszonym tósnieniem. do konsystencji syropu-, miesza z acetonem i ponownie odlparowuje pod zmniejszonym dsnienlem. Pozostalosci roz¬ puszcza sie w 300 ml acetonu i 1000 ml metanolu, dodaje 6,0 g kwasu p-toluenosuflJxxnowego i miesza w temperaturze 25°C w ciagu 24 godzin, odsacza i przesacz zateza do Va objetosci i wHewa do 2500 ml BOnlie mieszanej wody. Po uplywie 45 minut od¬ sacza sie otrzymany osad, przemywa go i suszy.Otrzymuje sie 17,2 g surowego piroduktou, który roz¬ puszcza sie w 400 ml goracego octanu etylu, prze- sacza i przesacz ekstrahuje czterokrotnie porcjami po 500 ml 5% roztworu wodmelgo NaHCOs. Roztwór suszy sie nad bezwodnym Na2S04 j. odparowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem, pozostalosc rozpuszcza sie w 60 ml chloroformu i wytraca n-heksanem, otrzymujac 6 stalych frakcji. Frakcje 5 i 6 wykazuja silne wartosci szczytowe w widmie w podczerwieni przy dlugosci fali 2950 om.-4, cha- raklterystyczne dla (CH8)8 B/Lub czterowodoropirany- lowej grupy ochronnej. Frakcje te rozpuszcza sie ponownie w 200 ml metanolu z 500 mg kwasu p-toluenosulfonowego i imiesza w temperaturze 25°C w ciagu 24 godzin. Roztwór wlewa sie nastepnie do 700 ml wody, miesza, odsacza, przemywa osad i su¬ szy, otrzymujac 2,0 g stalego produkltuL Produkt ten rozpuszcza sie ponownie w 40 ml chloroformu i wy¬ traca n-heksanem, otrzymujac 4 frakcje. Ostatnia z tych frakicji, stanowiaca 1,15 g, ma aktywnosc 950—1100 jednostek Bl-C3.Analiza. Obliczono dla wzoru C80H88O10N2 : 61,42% C, 6,53% H i 4,77% N, a znalezlibno 61,50% C, 6,62% H i 4,83% N. Widmo w podczerwieni i widmo magne¬ tycznego rezonansu jadrowego potwierdzaja budowe zwiazku.Przyklad IV. 3-(3^metylo-2-butenamidlo)-4- -hydrokisy-8-metylo-7-[3-0-(5-metylo-2-pirolilokaiiibo- nylo)-nowiosylokisy]-kumaryna. Roztwór 4,64 g (39,12 milimola) chlorku 3,3-dwumetyloakryloilu w 10 50 ml czterowodorofuranu wkrapla sie mieszajac do roztworu 25,0 g (19,56 miltomola) 2,2Hdwuczterowodo- ropiranylokumeromycyny At w 500 ml pirydyny w temperaturze 25°C, po czym mieszanine ogrzewa 5 sie pod chlodMca zwrotna w temperaturze 115°C w ciagu 1 godziny. Natetepmie chlodzi sie do tempe¬ ratury pokojowej w ciagu 30—45 minut i wlewa mieszanine do 2500 ml wody z lodem, miesza, do¬ daje 6 n roztworu kwasu Solnego w celu otrzyma¬ lo nia wartosci pH 1,5 i miebza w dajgu 1 godziny, a nastepnie odsacza, przemywa i suszy. Produkt rozpuszcza sie ponownie w 800 ml pirydyny, miesza w lazni olejowej w temperaturze 50—60°C w ciagu 25 godzin, steza pod zmniejszonym cisnieniem do 15 Vs objetosci, miesza kilkakrotnie z acetonem, odJpa- rowujac kazdorazowo do sucha. Pozostalosc roz¬ puszcza sie w 600 ml acetonu i 1400 ml metanolu.Do roztworu dodaje sie 7 g kwasu p-tottuenosulfo- nowego i miejsza w temperaturze 25°C w ciagu 29 72 godzin. Nastepnie zateza sie roztwór pod zmniej¬ szonym cisnieniem do okolo V* objetosci, przesacza i dodaje do 2500 ml wody. Miesza sie w ciagu 30 mi¬ nut, odsacza wydzielony osad, przemywa go woda i suszy. Produkt irozpuszcza sie w 500 ml goracego 25 octanu etylu, odsacza i przesacz ekstrahuje .piecio¬ krotnie porcjami po 500 ml 5% roztworu wodnego NaHC03, po czym suszy roztwór nad bezwodnym NasSO^ zateza pod zmniejszonym cisnieniem do sucha, rozpuszcza ponownie w 200 ml goracego so octanu etylu, przesacza i z przesaczu straca za po¬ moca n-heksanu, otrzymujac 5 frakicji. Produkt w ilosci 780 mg jest zawarty w 3 frakcji. Badanie widma w podczerwieni i widma magnetycznego re¬ zonansu jadrowego potwierdzaja budowe zwiazku. 35 Analiza. Obliczono dla wzoru C29H84O10Ns : 61,04% C, 6,01% H i 4,91% N, podczas gdy znaleziono 61,27% C, 6,36% H i 4,56%i N.Przyklad V. 3-(2^butenamido)-4-hydiroksy-8- Hmetylo-7-[3^-(5-meitylo-2-pi!rolilokarbonylo)-nowio- 40 syloksyl-kumaryna. Roztwór 6,55 g (62,6 milimola) chlorku krotonylu w 50 ml czterowodorofuranu wkrapla sie mieszajac do roztworu 20,0 g (15,65 mi¬ limola) 2,2HdwuHczterowodoropiranylo-kumeromycy- ny At w 400 ml pirydyny w temperaturze 25°C 45 i miesza w tej temperaturze w dagu 70 godzin, po czym steza pod zmniejszonym cisnieniem do okolo Vs objetosci i wlewa mieszajac do 2000 ml lodowa¬ tej wody. Po dodaniu 6 n roztworu kwasu solnego az do uzyiskania wartosci pH 1,5, miesza sie w dagu 50 1 godiziny, odsacza, przemywa osad woda i suszy.Otrzymany surowy produkt w ilosci 28,0 g rozpusz¬ cza sie 560 ml pirydyny, miesza w lazni olejowej w temperaturze 50—60°C w ci^gu 24 godzin i za¬ teza pod zmniejszonym cisnieniem do konsystencji 55 syropu. Syrop ten miesza sie kilkakrotnie z aceto¬ nem, odparowujac kazdorazowo pod zmniejszonym cisnieniem. Stala pozostalosc rozpuszcza Sie ponow¬ nie w 250 ml acetonu i 100 iml metanolu i do roz¬ tworu dodaje 5,6 g kwasu p-itoluehosulfonowego oo i miesza w temperaturze 25°C w ciagu 24 godzin.Roztwór zateza sie nastepnie pod zmniejszonym cisnieniem do V* objetosci, odsacza i przesacz mie¬ sza z 2000 ml wody z lodem..Po uplywie 1 godziny odsacza sie otrzymany osad, przemywa go woda 65 i suszy, otrzymujac 15,7 g produktu. Produkt ten8067* li l* 10 15 20 rozpuszcza sie w 500 ml goracego octanu etylu, od¬ sacza i przesacz ekstrahuje czterokrotnie porcjami po 500 ml 5% roztworu wodnego NaHCOt. Faze organiczna suszy sie nad NajS04, odparowuje do sucha pod zmniejszonym cisnieniem i rozpuszcza w 100 ml goracego cMoroformu. Roztwór przesacza sie i z przesaczu Isltraca za pomoca Sk«lIysolve-!B 4 frakcje. Trzecia frakcja w ilosci 526 mg stanowi zadany produkt.Analiza1. Obliczono dla wzoru CwHsj0lftNf : 60,42% C, 5,80% H i 5,03% N, podczas gkiy znaleziono 60,64% C, 5,92% H i 4,80% N. Produkt ma aktyw¬ nosc 730 jednostek BL-C3, a wyniiki badan widma w podczerwienii widma magnetycznego rezonansu jadrowego potwierdzaja budowe zwiazku.Przyklad VI. 3-undekanoamlido-4^hydroksy-8- ^metylo-7- [3-0^(SHmetylo^npiifrollilokai^bonylo)-nowio- syfloksyl-teumaryna. 500 mg FNC—NHj rozpuszcza sie w 15 ml pkydyny w temperaturze 25°C i do roztworu dodaje 314,5 mg (nadmiar 1,5 molowy) chlorku undekanoilu w 2,0 ml czterowodorofuranu.Roztwór miesza sie w temperaturze pokojowej w ciagu okolo 20 godzin i wlewa do 600 ml silnie mieszanej wody z lodem. Wartosc pH mieszaniny doprowadza sie za pomoca 6 n iroztworu kwasu solnego do 1,5 i miesza w ciagu 20 minut Otrzy¬ many staly produkt odsacza sie, przemywa i suszy, otrzymujac 589 mg stalego produktu surowego, któ¬ ry rozpuszcza sie 10 ml octanu etylu i nasyca n-heksanem az do wystapienia zmetnienia. Odsacza sie stale skladniki i odrzuca, a przesacz ponownie traktuje n-heksanem i odsacza osad, kitóry stanowi zadany produkt. Otrzymuje sie 347 g produktu o temperaturze topnienia 209—210°C i o aktywnosci 63 jednostki BL-C3.Analiza. Obliczono dla wzoru C^H^O^Nj: 64,01% C, 7,37% H i 4,20% N, a znaleziono: 63,62% C, 6,99% H i 4,63% N.Widmo w podczerwieni i widmo magnetycznego rezonansu jadrowego odpowiadaja podanemu na wstepie wzorowi zwiazku.Tablic 30 35 40 Przyklad VII. 3-[3Hn-butyto^-hydróksyfeny^ lo(-proplonamddO]-4-hydroksy-8-metylo-7-[3-0-(5- -metylo-2^pdrcti3okarbony ryna.A. 4,9 g 3-|^4^yflixiD^-3Hx-ine43floa^ -propionamddoM^ydrok^ lo-2-pirolilokBifeonylo)-now$^^ roz¬ puszcza sie w 200 ml bezwodhelgo etanolu i do roz¬ tworu dodaje 550 mg 5% palladu na weglu drzew¬ nym, a nastepnie uwodornia pod cisnieniem 4 atm w ciagu 16 godzin az do spadku dsn&eriia wodoru do 1,05 atm, po czym odsacza sie 1 odparowuje eto- nol pod zmniejszonym cisnieniem.B. Produkt otrzymany po odparowaniu etanolu rozpuszcza sie w cieklym amoniaku i pozostawia do odparowania amoniaku. Otrzymana brazowa po¬ zostalosc rozpuszcza sie w 250 ml goracej wody i odsacza. Otrzymuje sie 3,23 g osadu, kitóry roz¬ puszcza sie w 50 ml octanu etylu i odsacza. Prze¬ sacz rozciencza sie nnheksanem az do wystapienia zmetnienia, odsacza staly produkt, a przesacz jeszcze trzykrotnie rozciencza n4ieksanem, otrzymujac lacz¬ nie 4 frakcje. Ostatni przesacz odparowuje sie, otrzymujac piata frakcje, która stanowi zadany pro¬ dukt o temperaturze topnienia 130—135°C.Analiza. Obfflezono dla wzoru C„H4AOnNt : 64,15% C, 6,40% H 1 4,04% N, a znaleziono 64,13% C, 6,62% H i 4,37% N.Przyklad VIII. Postepujac m sposób opisany w wyzej podanych przykladach, lecz stosujac odpo¬ wiednie srpdM acylujace, otrzymuje sie zwiazki o wzorze 22, w którym X oznacza rodniki podlane w rubryce 1 tablicy 1. W rubryce 2 tej tabKcy po¬ dano numery przykladu, wedlug których postepuje sie przy wytwarzaniu danego zwiazku, w rubryce 3 podano aktywnosc produktu w jednostkach BL-C3, 'w rubryce 4 podano temperature topnienia danego zwiazku, a w rubryce 5 sumaryczny wzór zwiazku, sklad obliczony dla tego wzoru i wyniiki analizy elementarnej danego zwiazku. a 1 PóJsyntetyczne pochodne alifatyczne kumeromycyny X \ 1 -^CH, —CHj-fenyl —CH(CH,)2 —CH2CH8 —CH = (fenyl), Przyklad 2 HI, IV, V I, V I, III i, ra ni, v Aktywnosc 8 200 H20 700 440 330 Temperatura topnienia 4 256°C H20°C 173°C 247°C 145°C Wzór, sklad obMczony i sklad znaleziony 5 | C2«HM0lfN2 58,86% C, 5,70% H, 5,28% N 59,04% C, 5,91% H, 5,34% N | CsjH^OtoNj 63,36% C, 5,65% H, 4,01% N 63,78% C, 5,74% H, 4,26% N | CisHwOtoNj 60,20% C, 6,14% H, 5,01% N 60,15% C, 6,31% H, 4,80% N | 59,55% C, 5,02% H, 5,14% N 59,24% C, 6,06% H, 5,32% N | CjaH^Ot^N, 66,85% C, 5,63% H, 4,11% N 66,54% C, 5,92% H, 4,12% N |8M70 1 1 wzór 23 —CH*CH(CHt)f wfcór 24 —CH^CHCH, 1 —CH=JO(CH8)f 1 1 -C(CH,)8 1 -CH^CCCH,), li MCHACH, -(CHf)7CH8 1 ^(CH^CH, wzótf 25 1 -(CH2)ltCH8 1 -^(CH2)17CH8 1 ^(CHJ^CH, 1 -(CEy.dH, 1 -(CHt)1#CH, wzór 26 •wzór 27 2 ni, v rv ni, v ua, v TV I III, V IV IV rv TV IV *v UV VI VI IV IV 2 2000 ^^ 1400 720 1200 730 a 025 340 700 500 490 ^5 ^5 30 120 1 40 510 260 4 222PC 225°C 145°C 280°C 270°C 165°C 170°C 130°C 156°C 1 195°C 163°C 172°C 200°C 175°C 209°C 207*C 150°C 125°C 5 | 64,34% C, 6,04% H, 4,43% N 64,18% C, 6,18% H, 4,44% N C^HaAoN* 1 64,34% C, 6,04% H, 4,43% N 63,89% C, 6,27% H, 4,23% N | C^H^OuN, 1 60,42% C, 5,80% H, 5,03% N 60,64% C, 5,92% H, 480% N | 61,04% C, 6,01% H, 4,01% N 61,27% C, 6,36% H, 4,5% N | C2»H86OlaNf 60,83% C, 6,33% H, 4,89% N 61,47% C, 6,59% H, 4,42% N [ C3oH38018Ns 61,42% C, 6,53% H, 4,77% N 61,50% C, 6,62% H, 4,83% N C82H42O10N* 62,53% C, 6,99% H, 4,56% N 60,24% C, 6,97% H, 3,94% N C83H44O10Nf 63,04% C, 7,05% H, 4,45% N 62,83% C, 7,03% H, 4,27% N 63,53% C, 7,21% H, 4,36% N 63,35% C, 7,07% H, 4,20% N | C8«H40O10N* 65,44% C, 6J10% H, 4,24% N 65,47% C, 6,49% H, 4,05% N | 65,31% C, 7,79% H, 4,01% N 66,45% C, 8,43% H, 3,72% N | 67,16% C, 8,39% H, 3,04% N 67,19% C, 6,4S% H, 3,80% N • | C48H70OieN* 67,98% C, 8,70% H, 3,45% N 65,34% C, 8,55% H, 3,56% N 64,01% C, 7,37% H, 4,26% N 63,62% C, 6,99% H, 4,63% N | i 1 64,46% C, 7,511% H, 4,17% N 62,75% C, 7,28% H, 4,44% N CjkH^OJST, 60,77% C, 5,39% H, 6,07% N 61,06% C, 5,55% H, 6,09% N C.oH^Ni 1 67,59% C, 5,96% H, 3,94% N 69,50% C, 6,06% H, 3,55% N ]8*«79 1 1 —CHCCHjCHjCHJj wfcór 28 — ^(CHJ&mCHJt wzór 29 wzór 30 4' wzór 31 -^CH(CH2CH8) CHfCH8 1 M(CH)11C5Ha wzór 32 wzór 33 wizór 34 wzór 35 wtzór 36 1 2 1 IV VII IV III, V IV IV IV IV VI II VI VII II VII 1 3 940 720 640 720 ~~ ~~ 1850 1100 30 1300 560 840 70( 800 1 4 1 138°C 1 165°C 140°C 150°C 1 164°C 1 120°C 150°C J 222°C 193°C 122°C 130°C 100°C 145°C 130°C 5 ' | 62,53% C, 6,89% H, 4,56% N 62,50% C, 7,24% H, 4£0% N 61,66% C, 6,36% H, 6J16% N | 61,75% C, 6,41% H, 5,93% N C81H40OieN2 61,99% C, 6,71% H, 4,66% N 60,52% C, 7,20% H, 4,36% N | 61,42% C, 6,53% H, 4,77% N 61,81% C, 6,99% H, 4,34% N CwH84O10N2 61,04% C, 6,01% H, 4,91% N 60,74% C, 6,53% H, 4,79% N | O^O^N, 611,42% C, 6,53% H, 4,77% N 60,85% C, 6,53% H, 4,34% N | C87H5fO10N2 64,89% C, 7,65% H, 4,09% N 62,70% C, 7,20% H, 4,21)% N | C87H42OuN2 64,34% C, 6,13% H, 4,05% N 63,26% C, 6,52% H, 4,17% N | CstH^OhN* 64,34% C, 6,13% H, 4,05% N 62,44% C, 6,22% H, 4,00% N | C87H44OuN2 64,15% C, 6,40% H, 4,04% N 63,09% C, 4,93% H, 3,28% N | C89H46012N2 63,75% C, 6,31% H, 3,81% N 62,89% C, 5,97% H, 5,92% N | C97H4iOnNt 64,15% C, 6,40% H, 4,04% N 64,13% C, 6,62% H, 4,37% N J w ciagu 30 minut. Po uplywie 1 godziny zel zanika i zaczyna wytracac sie chlorowodorek trójetyloami- 55 ny. Zólty roztwór miesza sie nadal w temperaturze 25°C w ciagu 24 godzin, po czym przesacza w celu oddzielenia od chlorowodorku trójeftyloammy i prze¬ sacz zateza pod zmniejszonym cisnieniem do 7io pierwotnej objetosci. Jasny zóltiopomaranczowy roz- 60 twór wlewa sie do 3000 ml SkeUysolve-(B i silnie miesza, przy czym niezwlocznie wyttraca sie kremo¬ wy osad1. Miesza sie nadal w ciagu 1 godziny w temperaturze 25°C, przemywa 4 porcjami po 100 ml n-heksanu i suszy, otrzymujac 77,4 g suro- 65 wej bis-karbobenflcksyimidu kumeromycyny At Przyklad IX. A. Risnkartodbenzoksyiinid ku¬ meromycyny At o wzorze 37. 60 g (0,053 mola) soli sodowej kumeromycyny Ax rozpuszcza sie w 1250 ml czferowodbroifurariie, ogrzewajac lagodnie na lazni wodnej. Otrzymany roztwór o intensywnej barwie zlotozóltej chlodzi sie ¦dJo temperatury 25°C i mieszajac traktuje 44,6 ml (6 równowaznlików) trójetyloaminy. Otrzymana 'mieszanina nabiera niezwlocznie konsystencji zelu, który jednak utrzymuje sie w ruchu za pomoca mieszadla. Do zelu wkrapla sie 36 ml (5 równo¬ wazników) ohloromrówczanu benzylu w 250 ml czterowodorofuranu i miesza w temperaturze 25°C80679 17 o temperaturze topnienia 145—150°C, rozkladajacy sie w temperaturze 190—200°CL iPtrodukt ten sklada sie glównie z zadanego zwiazku oraz malej ilosci trój- i czteropcdstawionych produktów ubocznych, poniewaz jedna lub obie grupy 4-hydroksylowe czlo¬ nu kumairyinowego kumeajcmycyny A4 moga byc podstawione grupami kaibdbenzoksylowyimi. Jed¬ nakze te male domieszki nie sa przeszkoda w dal¬ szej fazie procesu i albo oddziela sie je albo prze¬ ksztalca w zadany produkt Widmo produktu w pod¬ czerwieni wykazuje bardzo slabe pasmo amidowe przy dlugosci fatto 1530 enr-1, co wskazuje na obec¬ nosc bardzo malej ilosci materialu wyjsciowego. Ba¬ danie produktu z Staphylococus aureus wykazuje aktywnosc 2,5—5,0 mdkrogiramów na 1 mg.B. 3-kaibobenzoksyamido^^ydro^ -[3-0-»(5-metylo-2-pirolilo(ka!i^bonylo) -nowioisyloksy]- -kumairyna o wzorze 38. 75 g bis-karbobenzoksyiimidu kuiineromycyny Au otrzymanej w sposób wyzej opisany, rozpuszcza sie w 1200 ml pirydyny w temperaturze 25°C i otrzy¬ many roztwór o barwie jaisnopomaranczowej ogrze¬ wa mfoeszajac w temperaturze 50—55°C w ciagu 24 godzin- Powstaly roztwór o barwie brazowo- pomaranczowej zateza sie pod zmniejszonym cisnie¬ niem do kolo lls pierwotnej objetosci i wlewa do 3000 ml lodowatej wody, mieszajac energicznie.Wartosc pH roztworu doprowadza sie do 1—2 za pomoca 6 n roztworu kwasu solnego, po czyim mie¬ sza sie nadal w ciagu 1 godziny. Odsacza sie po¬ wstaly osad o barwie jasnobrazowej i suszy do 6talej wagi pod zmniejszonym cisnieniem, otrzymu¬ jac 50,0 g produktu.Zadana pochodna kairbobenzdksyatmidowa jest do¬ brze rozpuszczalna w chloroformie, podczas gdy za¬ nieczyszczenia nie irozpuszczaja sie w tym roz¬ puszczalniku. Otrzymany wyzej produklt (50,0 g) umieszcza sie w aparacie ekstrahujacym Sexhlet'a i ekstrahuje chliccoformem. Wyciag dhloroformowy odparowuje sie, otrzymujac okolo 15 g produktu rozpuszczalnego w chloroformie Pozostalosc te roz¬ puszcza sie ponownie w malej ilosci chloroformu i ekstrahuje 5% roztworem wodnym NaHCOs w celu usuniecia kwasowych zanieczyszczen. Roztwór w chlorofomiie suszy sie nad bezwodnym siarczanem sodowym i poddaje frakcjonowanemu stracaniu za pomoca zwiekszanych stopniowo ilosci Skellysolve-B (rozpuszczalnik naftowy, zawierajajcy zasadniczo n-heksan i majacy temperatury wrzenia 60—68°C).Otrzymuje sie 4,5 g czystej 3-karbobenzokByimid6- -4^hydrokisy-8-metylo-7-[3-0(5-meiylo-2-pdrolilokar- bc^ylb)-nowiosyloksyl-kulmaryny w postaci bialych krysztalów o temperaturze mieknienia 110°C, zelu¬ jacy w temperaturze 125°C i topniejacy z rozkladem w temperaturze 155—160°C. Wyniki badan widma w podczerwieni i widma magnetycznego rezonansu jadrowego odpowiadaja podanej wyzej budowie.Analiza. Obliczono dla wzoru C^H^OnN* : 61,73% C, 5,51% H i 4,50% N, a znaleziono 61,14% C, 5,65% H i 4,83% N.CL 3-amino-4-hydroksy-8-metylo-7-[3-0-(5^metylo- -2-pirolilokarbonylo)-nowiosyloksy]-kumaryna o wzorze 39. 1,8 g (2,90 milimola) 3-fca(rbobenzcksyamid6-4-hy- droksy-8-metyio-7-[3-0-(5-metylo-2-piroliiokaiibony- 18 lo)-nowiosyloklsy]4ni*naryny, otrzymanej w sposób opisany w ustepie B, rozpuszcza sie w 150 ml lodo¬ watego kwasu octowego i do otrzymanego roztworu o barwie jasno zóltej dodaje sie 500 mg tlenku ptta- 5 tyny jako katalizatora i uwodornia w aparacie Parra pod poczatkowym dsnieniem 3,7 atm mieszajac w temperaturze pokojowej. Po uplywie 24 godzin cisnienie spada do 1,1 atm. Wówczas odsacza sie od katalizatoita w atmosferze azotu i przesacz nie- io zwlocznie odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem.Pozostalosc traktuje sie 20 ml acetonu i ponownie odparowuje pod zmniejszonym cisnieniem. Zabieg ten powtarza sie 4 razy i pozostalosc suszy pod zmniejszonym cisnieniem nad wodorotlenkiem so- 15 dbwyim, otrzymujac 1,0 g ciala stalego o barwie jasnej, zlotozólttej i o temperaturze topnienia 196—200°C. Badanie widma w podczerwieni i wid¬ ma magnetycznelgo rezonansu jadrowego potwierdza, iz produkt ten jest 3-amino^-hydroksy-8^metylo-7- 20 -[3-0-(5-me^o-2-pirolilokJ^^ -kumaryna. Zwiazek ten ulega latwo utlenieniu, zwlaszcza w roztworze.Analiza. Obliczono dla wzoru C^H^OgNi : 59,01% C, 5,79% H 1 5,74% N, a znaleziono 58,39% C, 6,02% H 25 i 5,70% N. Wzorowi C24H2809N2 • V2 H20 odpowiada sklad: 57,94% C, 5,88% H i 5,63% N.Przyklad X. 3-benzoaimido-4-lhyd!róksy-8-me- tylo-7-[3-0-(5Hme1yló-2-pliiiolilokarbonylo)-nowiosy- loksy]-kumaryna o wzorze 40. 250 mg (0,51 ntili- 30 mola) 3-amino-4-hydroksy-8^metylo-7-[3-0-(5-mety- lo-2-piroMofcarbonylo)-nowiosyloksy]-fcumaryny, otrzymanej w sposób podany w przykladzie IX, roz¬ puszcza sie w 10 ml pirydyny i do otrzymanego roztworu dodaje przy silnym mieszaniu w tempe- 25 raturze 25°C 139 mg (0,613 milimola). Miesza sle w ciagu 70 godzin w tej temperaturze w atmosfc rze azotu i nastepnie wlewa do 150 ml wody lodo¬ wej, zawierajacej 20 ml 6 n roztworu kwasu sol' nego i miesza w ciagu 1 godziny, po czym odsacz? 40 sie i otrzymuje 253 mg osadu o barwie brzoskwi¬ niowej. Produkt ten jest 34enzamido-4-hydroksy- -8-metylo-7-[3-0-(5nmel1yilo-2ipiroMoka!rbony!lo)-no- wiosyloksyl-kumaryna, która pnzy ogrzewaniu ciem¬ nieje i topnieje w temperaturze 190°C, zaczyna bra- 45 zowiec w temperaturze 210°C, a rozklada sie gwal¬ townie i czernieje w temperaturze 230—235°C.W stosunku do StaphylococuB aureus wykazuje aktywnosc 44 milkrogramów/Img. Zwiazek ten sto¬ sowano jako umowny wzorzec przy okresleniu 50 aktywnosci pochodnych kumeromycyny wytwarza¬ nych sposobem wedlug wynalazku.Analiza. Obliczono dla wzoru C81H32O10Ns : 62,83% C, 5,45% H i 4,73% N, a znaleziono 63,49% C, 5,78% H i 0,79% N. 55 Zwiazki wytwarzane sposobem wedhig wynalazku sa aktywne przeciwko róznym bakteriom Gram-do- daltnim i niektórym bakteriom Gratm-ujemnym. Naj¬ skuteczniejsze sa przy podawaniu pozajelitowym, gdyz w ten sposób uzyskuje sie ich najwieksza za- 60 wartosc we krwi. Jednakze zwiazki te sa równiez skuteczne przy podawaniu doustnym. W szczegól¬ nosci 3-izobultyiToamido^-hyd [3-0- - (5-meiylo-2-pirolilokarbonylo)^nowiosyloksy]-kuma¬ ryna, oznaczana symbolem BL-C43, podawana do- 65 ustnie psom, utrzymuje sie we krwi w ciagu dlu-8067t 19 Sfi grupe metylowa, a X onnactta grupe o wzorze 3 lub 4, przy czym we wzuratii tyoh n oauacza liczbe calkowita 1—21, a m oznaicza (Hcdbe caflcowtta 2—21, zas R1 i R1 we wzorze 3 sa jednakowe lub rózne 5 & oznaczaja atomy wodoru, grupy cytatohefcsytowe lub grupy o wzorze 5, w którym R* i R* sa Jedna¬ kowe lub rózne i kazdy z tych podstawników ma¬ cza atom wodoru, fluoru, chloru, taomu lub jodu, grupe trójfluorometylowa, aminowa, nizsza grupe 10 NyN-dwualkiloamkiowa, grupe nitrowa, cyjanowa, nizszy rodnik alkilowy, aBcenylowy, aUkinylowy lub alfcoksylowy, grupe wodorotlenowa, karboksylowa, nizsza grupe karboalkoksytowa, grupe acetokaylowa, merkapto, tioacetoksylowa lub nizsza gruper tioiaUcb- 15 Iowa, jak równiez [nietoksycznych, dopuszczalnych w lecznictwie, kationowych soM tych zwiazków, sna- mienny tym, ze zwiazek o wzorze 6, w którym R ma wyzej podane znaczenie, a R1, R* sa jednakowe lub rózne i oznaczaja atomy wodoru lub grupe 20 o wzorze 7, albo tez mieszanine zwiazków o wzo¬ rze 6, poddaje sie reakcji z co najmniej równomo- lowa iloscia srodka acyiujacego o wzorze 8, w któ¬ rym X ma wyzej ipodane snacaenie, a Z oznacza atom chlorowca lub grupe o wzorze 9, w którym X 25 ma wyzej podane znaczenie lub tez grupe o wzo¬ rze 10, przy czym reakcje te (prowadzi sie w tem¬ peraturze —25°C do 150°C w rozfniszczaBniifcu pro- tono-akceptorowym l wytworzony eter czterowodo- ropiranylbwy o wzorze 11, w którym R i X maja 30 wyzej podane znaczenie pozastawia sie w srodowi¬ sku polarnego rozpuszczalnika w obecnosci katali- litycznej ilosci kwasu, w temperaturze powyzej 0°C, w celu spowodowania rozerwania wiazania eteru czterowodoropirBnylowego. 35 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako rozpuszczalnik pa^cmo-akceptorowy stosuje sie pirydyne lub nizsza trójaflkiloamine, a jako roz¬ puszczalnik polarny stosuje sie nizszy alkanol. 40 3. Sposób wedlug zastrz. 1 albo 2 znamienny tym, ze jako srodek acylujacy stosuje sie halogenek kwa¬ sowy. giego czasu na wysokim poziomie. W tablicy 2 13 podlano zawartosci zwiazku BL-C43 we krwi w po¬ równaniu z nowobiocyna.Tablica 2 Zawartosc BL-C43 w mikrogramach na 1 ml w krwi psów po uplywie czasu podanego ndzej w godzinach i przy dawce 25 mg/kg.Pies nr 1 2 3 4 srednio i 26 45 52 48 4'l 2 33 40 59 52 46 4 35 36 36 34 35 7 14 14 14 A 14 24 1.4 1.6 3,1 <1.0 Tablica 3 Zawartosc nowobiocyny w mikrogramach na 1 ml w krwi psów po uplywie czasu podanego nizej w godzinach i przy dawce 25 mg/kg.Pies nr 1 2 3 4 5 srednio i 39 76 90 88 78 74 2 80 80 82 82 93 83 4 37 36 38 46 31 38 7 6.4 4.4 7.4 8,8 7.5 6.9 24 <0.6 <0.6 <0,6 1.0 <0,6 Przy zwalczaniu zakazen bakteriami u zwierzat i ludzi zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wy¬ nalazku podaje sie doustnie lub pozajelitowe w dawkalch po okolo 5-^125, a korzystnie okolo 5—50 mg/klg dziennie, przy czym przy leczeniu ludzi najbardziej odpowiednie sa dawki po 100—500 mg 3—4 razy dziennie. PL PL PL PL