Przedmiotem wynalazku jest srodek do równoczesnego oznaczania liczby trombocytów i leukocytów w krwi calkowitej, za pomoca zwyklego mikroskopu optycznego.Wiadomo, ze oznaczanie liczby trombocytów i leukocytów nalezy do metod stosowanych zwykle w laboratoriach klinicznych. Liczbe trombocytów mozna oznaczac róznymi metodami, takimi jak nizej opisane. Elektroniczne obliczanie czastek za pomoca automatów, opracowa¬ nych dla liczenia trombocytów. Metoda ta jest wprawdzie szybka i prosta, ale do jej stoso¬ wania sa niezbedne bardzo kosztowne przyrzady i nie zawsze mozna nia zastapic liczenie mikroskopowe. Ebwtarzalnosc tej metody jest takze gorsza od powtarzalnosci liczenia mi¬ kroskopowego.Liczenie trombocytów za pomoca mikroskopu z kontrastem fazowym, przy uzyciu roz¬ tworu zawierajacego kokaine lub nowokaine albo innego roztworu umozliwiajacego takie liczenie. Do stosowania tej metody niezbedny jest mikroskop z kontrastem fazowym, a inna istotna wada tej metody jest to, ze jest ona bardzo meczaca, wyczerpujaca i szkodliwa dla oczu osób prowadzacych obliczanie, zwlaszcza jezeli tych obliczen jest wielei Liczenie trombocytów metoda barwienia. Ta metoda jest najprostsza i moze byc pro¬ wadzona za pomoca mikroskopu. W znanych metodach tego typu jako barwnik stosuje sie fiolet krystaliczny (fiolet gencjanowy), bedacy chlorowodorkiem szesciometylo-p-rozaniliny.Metodom tym stawia sie uzasadniony zarzut, ze w porównaniu z metoda oznaczania przy uzyciu kontrastu fazowego daja wyniki znieksztalcone, poniewaz nie wszystkie trombocyty ulegaja dobrze widocznemu zabarwieniu.2 142 043 Obliczanie leukocytów stanowi najszerzej stosowana metode w diagnostyce hematologicznej i Do tego celu ogólnie nadaje sie i daje dobre wyniki roztwór Turka, opisany w farmakopei wegierskiej (Hi« Hg» VI#)t ale roztwór ten nie nadaje sie do okreslania liczby trombocytów, co stanowi powazna wade, poniewaz bardzo czesto konieczne jest wspólne prowadzenie obu tych szeroko stosowanych prób laboratoryjnyehi Do oznaczania liczby trombocytów i leukocytów w calkowitej krwi za pomoca zwyklego mikroskopu swietlnego niezbedny jest roztwór barwnika, który (a) powoduje calkowita hemoli- ze erytrocytów bez zmniejszania liczby trombocytów i leukocytów, (b) utrwala zarówno trom- bocyty jak i leukocyty i (c) zawiera taki barwnik, który wiaze sie silnie z oboma tymi cia¬ lami i w ten sposób utrwala je w zwyklym swietle* Roztwór, który odpowiada dwóm pierwszym z tych wymagan jest wprawdzie znany /Scand* J* Clin# Eivest. 33, 121 (1974)/, ale przy jego uzyciu trzeba obliczanie trombocytów pro¬ wadzic z zastosowaniem mikroskopu z kontrastem fazowymi Wynalazek ma na celu wytworzenie takiego roztworu barwnika, za pomoca którego mozna oznaczac liczbe trombocytówi leukocytów w pelnej krwi przy uzyciu zwyklego mikroskopu optycz¬ nego, z uniknieciem opisanych wyzej wad znanych odczynnikowi Nieoczekiwanie stwierdzono, ze przez polaczenie roztworu hemolizujacego i utrwala¬ jacego z zasadowym barwnikiem o duzym powinowactwie, uzyskuje sie roztwór srodka, który umozliwia wspólne okreslanie liczby trombocytów i leukocytów przy uzyciu zwyklego mikroskopu optycznego• Oba warunki moga byc spelnione w przypadku, gdy roztwór dzialajacy hemolizujaco i utrwalajaco jest zgodny z barwnikiem, tzn* nie tworzy zadnego osadu* Powstawania mikro¬ skopijnych osadów nalezy unikac, gdyz moga one miec charakter trombocytów i tym samym powodowac blad w obliczaniu.Stosowane dotychczas roztwory barwników typu fioletu krezylowego spelniaja te wa¬ runki tylko czesciowo i Roztwory do obliczania zawierajace skladniki barwnika fioletu krezy¬ lowego maja bowiem odczyn slabo zasadowy, totez trombocyty ulegaja tylko blademu zabarwieniu i nie sa uwidocznione jednoznacznie* Wynalazek jest oparty na stwierdzeniu, ze barwniki zwane tiazynowymi nadaja sie do tego celu bardzo dobrze* Cecha barwników tiazynowych jest obecnosc dwóch grup chromoforowyeh* Zwiazki tiazynowe sa w praktyce lekarskiej stosowane w róznych dziedzinach, np. do barwienia bakterii i w histochemii, ale ani fachowa ani patentowa literatura nie daje zadnej wskazówki, ze moga one byc uzyteczne do wytwarzania srodka bedacego przedmiotem wynalazku* Najwazniej¬ szymi przedstawicielami tej grupy zwiazków sa: blekit toluidynowy o wzorze 1, tionina o wzo¬ rze 2 i blekit metylenowy o wzorze 3. srodek wedlug wynalazku zawiera 0,1-5 czesci wagowych acetonu, 0,05-2,0 czesci wa¬ gowych aldehydu mrówkowego i/albo aldehydu glutarowego, 0,001-0,1 czesci wagowych barwnika tiazynowego, korzystnie blekitu toluidynowego, 0,1-2,0 czesci wagowych soli mineralnej, ko¬ rzystnie chlorku sodowego, zas reszte do 100 czesci wagowych stanowi woda* Korzystnie srodek wedlug wynalazku zawiera w stosunku wagowym 0,1-5,0 czesci acetonu, 0,05-2,0 czesci aldehydu mrówkowego, 0,001-0,1 czesci blekitu toluidynowego i 0,1-2 czesci chlorku sodowego? Szczególna zaleta barwników stosowanych zgodnie z wynalazkiem jest to, ze maja one bardzo duze powinowactwo takze i w stosunku do kwasnych makroczasteczek trombocytów i leuko¬ cytów, dzieki czemu uzyskuje sie bardzo silna i wyrazna widocznosc# Najwazniejsza zaleta srodków wedlug wynalazku jest to, ze sa one znacznie bardziej czule od znanych odczynników* Fakt ten potwierdzaja nizej opisane próby*142 043 3 Z próbek o nieznanej liczbie trombocytów i leukocytów ustala sie w 20 kolejno pro¬ wadzonych obliczeniach liczbe trombocytów i leukocytów* Dokladnosc obliczania komórek jest wtedy zadowalajaca, gdy normalne odchylenie jest mniejsze niz 10#* Wyniki takich prób pro¬ wadzonych przy uzyciu srodka wedlug wynalazku oraz przy uzyciu znanych odczynników podano na rysunku w postaci wykresów, na których liczby trombocytów ileukocytów okreslono zgodnie z systemem 31 jako wartosci G/litr, to jest giga(liczba komórek)/litr, co równa sie liczbie komórek pomnozonej przez 109 w 1 litrze.Figura 1 przedstawia wyniki okreslania liczby trombocytów przy uzyciu srodka wedlug wynalazku. Liczba trombocytów jako srednia z 20 pomiarów wynosi: £ = 218,8 G/litr, przy standardowej dewiacji SD = + 5,0, co odpowiada wspólczynnikowi dewiacji, wyrazonej jako standardowa dewiacja w procentach: CV = 2,28?6.Figura 3 przedstawia wyniki okreslania liczby leukocytów przy uzyciu srodka wedlug wynalazku. Liczba leukocytów jako srednia z 20 pomiarów wynosi: x ¦ 5,08 G/litr, przy stan¬ dardowej dewiacji SD = + 0,042, co odpowiada wspólczynnikowi dewiacji: CV » 0,8#* W celach porównawczych obliczono trombocyty przy uzyciu odczynnika TKROKCFIK pro¬ dukcji firmy Godecke, a leukocyty obliczano przy uzyciu odczynnika znanego pod nazwa roztwór Turk'a. Próby prowadzono z krwia pobrana od 41 pacjentów i równolegle liczono trombocyty i leukocyty. Wyniki w ukladzie wspólrzednych kartezjanskich podano odpowiednio na figi 2 i fig. 4. Korelacje pomiedzy obiema metodami oraz standardowe wspólczynniki (a, b) funkcji opisujacej te korelacje, mianowicie y » ax + b, okreslano za pomoca maszyny do liczenia Hewlett-Packard HP-90* Na obu tych wykresach y przedstawia wyniki uzyskane przy liczeniu w roztworze srodka wedlug wynalazku, zas x oznacza wyniki otrzymane przy uzyciu znanych roztworów.Przy liczeniu trombocytów korelacja r wynosila 0,927* Funkcjonalny zwiazek liniowy pomiedzy obiema metodami mozna ujac równaniem: y a 1,05 x - 0,94* w którym y oznacza wynik obliczania trombocytów uzyskany przy uzyciu srodka wedlug wynalazku, zas x oznacza wynik uzyskany przy uzyciu odczynnika THR0MB0FIX w próbie, której wyniki podano na figi 2i :"alezy stwierdzic, ze liczba trombocytów oznaczona przy uzyciu srodka wedlug wynalazku jest c okolo 5% wyzsza od tej, ktdra w tej samej próbce krwi okreslono przy uzyciu THR0MB0FIX * Uwzgled¬ niajac charakter sposobu oznaczania, uzyskanie wyniku zbyt wysokiego nie wchodzi w rachube.Stwierdzona róznice mozna przypisac temu, ze skladnik barwnika stosowanego w srodku wedlug wynalazku ma znacznie wieksze powinowactwo do kwasnych grup makroczasteczek trombocytów, totez obraz wykazuje silniejszy kontrast i moze byc lepiej odczytany* Stosujac srodek wedlug wynalazku mozna wiec uniknac systematycznie zbyt niskich wyników, otrzymywanych przy sto¬ sowaniu znanych roztworów barwników. Nalezy tez nadmienic, ze THR0MB0FIX równiez i przy stosowaniu mikroskopu z kontrastem fazowym daje wyniki zbyt niskie i W obliczeniach leukocytów przy uzyciu srodka wedlug wynalazku i, przy uzyciu roztworu Turk'a korelacja wynosi: r a 0,959 i zwiazek pomiedzy tymi obiema metodami mozna przedsta¬ wic jako funkcje liniowa: y - 0,97x + 0,23. Wskazuje to, ze pomiedzy obiema tymi metodami nie ma znacznej róznicyi Wynalazek zilustrowano ponizej w przykladach, nie ograniczajac tym jego zakresu* Przyklad I* Roztwór do liczenia 200 ml 0,996 roztworu chlorku sodowego w de¬ stylowanej wodzie miesza sie z 5 ml 3596 aldehydu mrówkowego i 770 ml destylowanej wody, pod¬ danej dzialaniu wymieniacza jonów* R silnym wymieszaniu roztworu rozpuszcza sie w nim 100 mg barwnika bedacego blekitem toluidynowynu Otrzymany roztwór przesacza sie przez szklany filtr G-4# Po dodaniu 25 ml acetonu otrzymany roztwór powinien byc klarowny i pozbawiony czastek* Przyklad II* Okreslenie liczby trombocytów i leukocytów w krwi zylnej, po¬ traktowanej srodkiem przeciw krzepnieniu* Celowe jest traktowanie krwi kwasem etylenodwuami- noczteroooctowym jako srodkiem przeciw krzepnieniu, poniewaz w obecnosci tego srodka nie zachodzi nawet minimalne osadzanie sie trombocytów* Po pobraniu krwi z kwasem etylenocwu-4 142 043 aminoczteroocto wym nastawia sie stezenie tego kwasu na 2 mg/ml przez uprzednie wysuszenie macierzystego roztworu wodnego soli dwusodowej kwasu etylenodwuaminoczterooctowego w rurce z sztucznego tworzywa* Krzepnieniu krwi mozna tez zapobiegac stosujac 3,3% roztwór cytry¬ nianu trójsodowego w destylowanej wodzie, przy czym przy pobieraniu krwi do kaniuli z sztucz¬ nego tworzywa bierze sie 9 czesci krwi na 1 czesc cytrynianu. ' Do 25 Jil krwi zylnej, poddanej zabiegowi zapobiegajacemu krzepnieniu, w probówce z sztucznego tworzywa dodaje sie 475 pi opisanego wyzej roztworu do liczenia i mieszanine pozostawia nie mieszajac w temperaturze pokojowej na okres 15 minut* Liczenie trombocytów i leukocytów nalezy przeprowadzic w ciagu 6 godzin* Przed liczeniem roztwór miesza sie po¬ nownie, wkrapla do komory Burker'a i pozostawia do osadzania sie na okres 10 minut• Liczenie trombocytów. Sume obliczonych trombocytów w 10 katach prostych komory 3urker'a mnozy sie przez 2 w przypadku stosowania kwasu etylenodwuaminoczterooctowego, wzglednie przez 2,2 w przypadku stosowania cytrynianu jako srodka zapobiegajacego krzepnie¬ niu i uzyskuje sie liczbe trombocytów w G/litr.Liczenie leukocytów. Liczbe leukocytów znalezionych w 4 kwadratach ograniczonych 3 liniami dzieli sie przez 18 (lub mnozy przez 0,055) w przypadku stosowania cytrynianu, albo dzieli sie przez 20 (lub mnozy przez 0,05) w przypadku stosowania kwasu etylenodwuamino¬ czterooctowego jako srodka zapobiegajacego krzepnieniu i uzyskuje sie liczbe leukocytów w G/litr.Przykl ad III. Okreslenie liczby trombocytów i liczby leukocytów w krwi wlosniezkowej. Nakluwa sie zdezynfekowany koniec palca lub piete, odgarnia pierwsze krople krwi i zasysa pipeta ze strzykawka z sztucznego tworzywa (np. pipeta Finna, Gilsona lub Eppendorfa) 25/al krwi. Krew te poddaje sie kolysaniu w rurce z sztucznego tworzywa, zawie¬ rajacej 25 jal roztworu kwasu etylenodwuaminoczterooctowego i miesza dobrze z tym srodkiem zapobiegajacym krzepnieciu* R dodaniu 450 ^ul roztworu do liczenia i dokladnym wytrzesieniu roztwór pozostawia sie w pokojowej temperaturze na okres co najmniej 15 minut i po ponownym zmieszaniu podaje do komory Burker'a i pozostawia w wilgotnej komorze na okres 10 minut do osadzenia sie.Liczbe trombocytów i liczbe leukocytów okresla sie w sposób podobny do opisanego wyzej w odniesieniu do krwi potraktowanej srodkiem zapobiegajacym krzepnieciu. Przy oblicza¬ niu trombocytów mnozy sie przez wspólczynnik 2, a przy obliczaniu leukocytów trzeba dzielic przez 20i Przyklad IV. Postepuje sie w sposób podany w przykladzie I, ale zamiast aldehydu mrówkowego stosuje sie 80 g 25% aldehydu glutarowego* Zastrzezenie patentowe srodek do równoczesnego oznaczania liczby trombocytów i leukocytów za pomoca zwyklego mikroskopu optycznego, znamienny tym, ze zawiera 0,1-5 czesci wagowych acetonu, 0,05-2,0 czesci wagowych aldehydu mrówkowego i/albo aldehydu glutarowego, 0,001-0,1 czesci wagowych barwnika tiazynowego, korzystnie blekitu toluidynowego, 0,1-2,0 czesci wagowych soli mineralnej, korzystnie chlorku sodowego, zas reszte do 100 czesci wagowych stanowi woda*142 043 ^W (+) CH, W^N Wzór 1 NH2 CH3 Nhi s * m Wzór 2 Cl Cl N ^ Wzór 3 NICH,),1 .':-2 + 3SD 211 -2SD -3 SD x=218,8G/litT SD=±5,0 CV = 2,28% / r=0,927 a=-0,94 b= 1,05 y=1,05x-0,% 160 180 200 220 2U) 260 280 -300 Liczba trombocytów (G/litr) w roztworze Thrombofix Fig.2\U2 0-C x = 5,08 G/litr SD = 0,042 CV = 0,8% Fig. 3 r=0,959 a-0,23 b=0,97 y=0,97x+0,23 ~—i 1— 12 V. 8 10 Liczba trombocytów (G/litr) w roztworze TLirka 16 18 Fig. A PLThe subject of the invention is a means for the simultaneous determination of the number of thrombocytes and leukocytes in total blood by means of an ordinary optical microscope. It is known that the determination of the number of thrombocytes and leukocytes is one of the methods usually used in clinical laboratories. The number of thrombocytes can be determined by various methods, such as those described below. Electronic particle calculation by automata designed for the counting of thrombocytes. Although this method is quick and simple, its use requires very expensive instruments and cannot always be replaced by microscopic counting. The reproducibility of this method is also inferior to the reproducibility of the microscopic counting. Counting thrombocytes with a phase contrast microscope, using a ***e or novocaine-containing solution or some other solution capable of such counting. A phase contrast microscope is required to use this method, and another significant disadvantage of this method is that it is very tedious, exhausting and harmful to the eyes of the computator, especially if there are many calculations. Counting thrombocytes by staining. This method is the simplest and can be carried out using a microscope. Known methods of this type use crystal violet (gentian violet) as the dye, which is hexamethyl-p-rosaniline hydrochloride. These methods are well-founded that the results are distorted compared to the phase contrast method, as not all thrombocytes undergo clearly visible staining. 2 142 043 The calculation of leukocytes is the most widely used method in hematological diagnostics i For this purpose, the Turk's solution, described in the Hungarian Pharmacopoeia (Hi «Hg» VI #) is generally suitable and gives good results, but this solution is not suitable for determining the number of thrombocytes, which is a serious disadvantage, as it is very often necessary to conduct both these widely used laboratory tests. For the determination of the number of thrombocytes and leukocytes in total blood with an ordinary light microscope, a dye solution is required which causes total hemolysis erythrocytes without reducing the number of thrombocytes and leu cells, (b) fixes both thrombocytes and leukocytes, and (c) contains a dye that binds strongly to both of these bodies and thus fixes them in ordinary light * A solution that meets the first two of these requirements is admittedly known / Scand * J * Clin # Eivest. 33, 121 (1974)), but it is necessary to calculate the thrombocytes with a phase contrast microscope. The aim of the invention is to produce such a dye solution, by means of which the number of thrombocytes and leukocytes in whole blood can be determined using an ordinary optical microscope. and avoiding the above-described disadvantages known to the reagent. It has surprisingly been found that by combining the hemolyzing and fixing solution with a high-affinity alkaline dye, a solution of the medium is obtained which makes it possible to determine the number of thrombocytes and leukocytes together using an ordinary optical microscope. • Both conditions can be satisfied when the haemolysing and fixing solution is compatible with the dye, i.e. it does not form any sediment * The formation of microscopic sediments should be avoided, as they may have the character of thrombocytes and thus cause errors in the calculation. cresyl violet meets These conditions are only partially and The calculation solutions containing the components of the crescent violet dye are slightly alkaline, so that the thrombocytes are only faintly colored and are not clearly visible * The invention is based on the statement that the so-called thiazine dyes are suitable for this very good * Thiazine dyes are characterized by the presence of two chromophore groups * Thiazine compounds are used in medical practice in various fields, e.g. for staining bacteria and in histochemistry, but neither the professional nor patent literature gives any indication that they can be useful for the production of The inventive agent * The most important representatives of this group of compounds are: toluidine block of formula 1, thionine of formula 2 and methylene blue of formula 3. The agent according to the invention contains 0.1-5 parts by weight of acetone, 0.05- 2.0 parts by weight of formaldehyde and / or glutaraldehyde, 0.001-0.1 parts by weight of thiazine dye 0.1-2.0 parts by weight of a mineral salt, preferably sodium chloride, and the remainder up to 100 parts by weight is water. Preferably the agent according to the invention contains 0.1-5.0 parts by weight of acetone , 0.05-2.0 parts of formaldehyde, 0.001-0.1 parts of toluidine block and 0.1-2 parts of sodium chloride? A particular advantage of the dyes used according to the invention is that they have a very high affinity also for the acidic macromolecules of thrombocytes and leucocytes, thanks to which a very strong and clear visibility is obtained # The most important advantage of the agents according to the invention is that they are significantly more sensitive than known reagents * This fact is confirmed by the tests described below * 142 043 3 From samples with an unknown number of thrombocytes and leukocytes, the number of thrombocytes and leukocytes is determined in 20 consecutive calculations * The accuracy of cell counting is satisfactory when the normal deviation is lower than 10% * The results of such tests carried out with the agent according to the invention and with known reagents are given in the figure in the form of graphs in which thrombocyte numbers of ileukocytes are determined according to system 31 as G values / liter, i.e. giga (number of cells) / liter, which is equal to the number of cells multiplied by 109 in 1 liter provides the results of determining the number of thrombocytes using an agent according to the invention. The number of thrombocytes as a mean of 20 measurements is: £ = 218.8 G / liter, with standard deviation SD = + 5.0, which corresponds to the deviation factor, expressed as standard deviation in percent: CV = 2.28 6. shows the results of determining the number of leukocytes using an agent according to the invention. The number of leukocytes as an average of 20 measurements is: x ¦ 5.08 G / liter, with standard deviation SD = + 0.042, which corresponds to the deviation factor: CV »0.8 # * For comparison purposes, thrombocytes were calculated using the TKROKCFIK pro reagent The production by Godecke and leukocytes were calculated using a reagent known as Turk's solution. The tests were carried out with blood drawn from 41 patients and thrombocytes and leukocytes were counted in parallel. The results in the Cartesian coordinate system are given in Figs 2 and 4, respectively. The correlations between both methods and the standard coefficients (a, b) of the function describing these correlations, namely y »ax + b, were determined using a Hewlett-Packard HP- counting machine. 90 * In both these graphs, y represents the results obtained when counting the agent in solution according to the invention, and x represents the results obtained using known solutions. When counting thrombocytes, the correlation r was 0.927 * The functional linear relationship between the two methods can be expressed by the equation ya 1.05 x - 0.94 * where y is the result of the thrombocyte count obtained using the agent according to the invention, and x is the result obtained with the THR0MB0FIX reagent in the test, the results of which are given in Fig. 2i: "Please note that the number of thrombocytes determined using the measure according to the invention, it is about 5% higher than that determined with THR0MB0FIX in the same blood sample. method of determination, obtaining a result too high is not considered. The difference found can be attributed to the fact that the dye component used in the invention has a much greater affinity for the acid groups of thrombocyte macromolecules, so that the image shows stronger contrast and can be better read * Using the measure according to the invention It is therefore possible to avoid systematically the low results obtained with known dye solutions according to the invention. It should also be mentioned that THR0MB0FIX also gives too low results when using a phase contrast microscope and In the calculation of leukocytes using the agent according to the invention and using Turk's solution the correlation is: ra 0.959 and the relationship between these two methods can be presented as linear functions: y - 0.97x + 0.23. This indicates that there is no significant difference between the two methods and the invention is illustrated in the examples below without limiting its scope * Example I * Solution for counting 200 ml of 0.996 sodium chloride solution in distilled water is mixed with 5 ml of 3596 formaldehyde and 770 ml of distilled water, treated with an ion exchanger * R, with vigorous stirring of the solution, dissolve 100 mg of toluidinium blue dye in it. The obtained solution is filtered through a glass filter G-4 # After adding 25 ml of acetone, the obtained solution should be clear and free of particles * Example II * Determination of the number of thrombocytes and leukocytes in venous blood treated with an anticoagulant * It is advisable to treat the blood with ethylenediaminetetraacetic acid as an anticoagulant, because in the presence of this agent, even minimal deposition of thrombocytes does not occur * After blood is drawn from with ethylene di-4 142 043 amino tetraacetic acid the concentration is adjusted to t of the acid at 2 mg / ml by first drying the stock solution of disodium ethylenediaminetetraacetic acid in a plastic tube. * Blood clotting can also be prevented by using a 3.3% solution of trisodium citrate in distilled water, while drawing blood into the cannula from of synthetic material, you take 9 parts of blood to 1 part of citrate. '' To 25 µl of anti-clotting venous blood, 475 µl of the counting solution described above is added to a plastic tube in a plastic tube and the mixture is left standing at room temperature for 15 minutes * Counting thrombocytes and leukocytes must be performed within 6 hours * Before counting, the solution is mixed again, dropped into the Burker chamber and allowed to settle for 10 minutes. Counting of thrombocytes. The sum of the calculated thrombocytes in the 10 straight angles of the 3urker chamber is multiplied by 2 when using ethylenediaminetetraacetic acid, or by 2.2 when using citrate as an anti-clotting agent, and the number of thrombocytes in G / liter is obtained. Leukocyte counting. The number of leukocytes found in the 4 squares delimited by 3 lines is divided by 18 (or multiplication by 0.055) if citrate is used, or divided by 20 (or multiplied by 0.05) if ethylenediamine tetraacetic acid is used as an anticoagulant, and is obtained number of leukocytes in G / liter Example III. Determination of the number of thrombocytes and the number of leukocytes in the serous blood. A disinfected fingertip or heel is pricked on, the first drops of blood are removed and the pipette is sucked in with a plastic syringe (e.g. Finn, Gilson or Eppendorf pipette) of 25 µl of blood. This blood is rocked in a plastic tube containing 25 µl of ethylenediaminetetraacetic acid solution and mixed well with this anticoagulant, 450 µl of counting solution added, and the solution allowed to shake thoroughly at room temperature for at least 15 minutes and, after remixing, is added to the Burker chamber and allowed to settle in the humid chamber for 10 minutes. The thrombocyte count and the leukocyte count are determined in a similar manner as described above for blood treated with an anticoagulant. When calculating thrombocytes it is multiplied by a factor of 2, and when calculating leukocytes it is necessary to divide by 20i. The procedure is as in example I, but instead of formaldehyde, 80 g of 25% glutaraldehyde are used. acetone, 0.05-2.0 parts by weight of formaldehyde and / or glutaraldehyde, 0.001-0.1 parts by weight of a thiazine dye, preferably toluidine blue, 0.1-2.0 parts by weight of a mineral salt, preferably sodium chloride, and the rest up to 100 parts by weight are water * 142 043 ^ W (+) CH, W ^ N Formula 1 NH2 CH3 Nhi s * m Formula 2 Cl Cl N ^ Formula 3 NICH,), 1. ': - 2 + 3SD 211 - 2SD -3 SD x = 218.8G / litT SD = ± 5.0 CV = 2.28% / r = 0.927 a = -0.94 b = 1.05 y = 1.05x-0,% 160 180 200 220 2U) 260 280 -300 Number of thrombocytes (G / liter) in Thrombofix solution Fig. 2 \ U2 0-C x = 5.08 G / liter SD = 0.042 CV = 0.8% Fig. 3 r = 0.959 a- 0.23 b = 0.97 y = 0.97x + 0.23 ~ —i 1— 12 V. 8 10 Number of thrombocytes (G / liter) in TLi solution rka 16 18 Fig. A PL