FI77938C - REAGENTS FOR THE CONSTRUCTION OF ANTALET TROMBOCYTER OR LEUKOCYTER. - Google Patents
REAGENTS FOR THE CONSTRUCTION OF ANTALET TROMBOCYTER OR LEUKOCYTER. Download PDFInfo
- Publication number
- FI77938C FI77938C FI843429A FI843429A FI77938C FI 77938 C FI77938 C FI 77938C FI 843429 A FI843429 A FI 843429A FI 843429 A FI843429 A FI 843429A FI 77938 C FI77938 C FI 77938C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- weight
- platelet
- parts
- solution
- count
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 17
- 238000010276 construction Methods 0.000 title 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 claims description 6
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000001016 thiazine dye Substances 0.000 claims description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 41
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 13
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 4
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N (7-aminophenothiazin-3-ylidene)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[NH2+])C=C2SC3=CC(N)=CC=C3N=C21 PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005314 correlation function Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229940053973 novocaine Drugs 0.000 description 1
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/305—Fixative compositions
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
7793877938
Reagenssi trombosyytti- ja leukosyyttimäärän määrittämiseksiReagent for platelet and leukocyte counts
Keksinnön kohteena on reagenssi trombosyytti- ja leukosyyttimäärän määritäämiseksi ja menetelmä sen valmistamiseksi.The invention relates to a reagent for determining the platelet and leukocyte count and to a process for its preparation.
Keksinnön kohteena on trombosyytti- ja leukosyyttimäärän samanaikaista määritystä varten täysverestä normaalin valomik-roskoopin avulla sopiva, asetonia ja formaldehydiä tai glutaarialdehydiä, mineraalisuoloja ja väriaineita sisältävä reagenssi.The present invention relates to a reagent containing acetone and formaldehyde or glutaraldehyde, mineral salts and dyes suitable for the simultaneous determination of platelet and leukocyte counts in whole blood by means of a normal light microscope.
On tunnettua, että trombosyytti- ja leukosyyttimäärä kuuluu kliinisten laboratorioiden standardimenetelmien piiriin. Trombosyyttilaskenta voidaan suorittaa erilaisten menetelmien mukaisesti: 1) Elektroninen hiukkaslaskenta trombosyyttilaskentaa varten kehitetyillä automaateilla. Vaikka tämä menetelmä on nopea ja yksinkertainen, on hankittava hyvin kalliita instrumentteja. Tämä menetelmä ei sovi mikroskooppisen määrityksen korvikkeeksi. Tämän menetelmän toistettavuus on myös huonompi kuin mikroskooppisen laskimen.It is known that platelet and leukocyte counts are within the scope of standard clinical laboratory methods. Platelet counting can be performed according to various methods: 1) Electronic particle counting with automata developed for platelet counting. Although this method is quick and simple, very expensive instruments must be obtained. This method is not a suitable substitute for microscopic determination. The reproducibility of this method is also inferior to that of a microscopic calculator.
2) Trombosyyttilaskenta faasikontrastimikroskoopin avulla käyttämällä kokaiini- tai novokaiinipitoista liuosta tai jotain muuta trombosyyttilaskentaliuosta. Tämän menetelmä suorittamiseksi on faasikontrastimikroskoop-pi välttämätön. Eräs toinen olennainen haitta on se, että tämä menetelmä on kokeita suorittavalle henkilökunnalle väsyttävä, rasittava ja silmiä kuluttava, etenkin kun koemäärä on suuri.2) Platelet count by phase contrast microscopy using a ***e- or novocaine-containing solution or some other platelet-counting solution. To perform this method, a phase contrast microscope is necessary. Another major drawback is that this method is tiring, stressful and eye-consuming for test personnel, especially when the number of tests is large.
3) Trombosyyttimäärän määritys värjäysmenetelmällä. Tämä menetelmä on yksinkertaisin ja se voidaan suorittaa mikroskoopin avulla. Tällä hetkellä käytettyjen menetelmien mukaisesti käytetään väriaineena kristallivio- 2 77938 lettiä (genzianvioletti; kemiallinen nimi heksametyy-li-p-rosaliniliini-hydrokloridi). Näiden menetelmien suhteen esitetään se oikeutettu väite, että nämä vääristävät verrattuna faasikontrastimääritykseen, koska kaikki trombosyytit eivät värjäydy hyvin näkyvällä tavalla.3) Determination of platelet count by staining method. This method is the simplest and can be performed with a microscope. According to the methods currently used, 2,77938 crystals (gentian violet; chemical name hexamethyl-1-p-rosaliniline hydrochloride) are used as a dye. With respect to these methods, a legitimate argument is made that they distort compared to the phase contrast assay because not all platelets stain in a highly visible manner.
Hematologisessa diagnostiikassa on leukosyyttilaskenta laajimmin käytetty menetelmä. Unkarilaisessa farmakopeassa (Ph.Hg.VI) esitetty turkinliuos on tähän tarkoitukseen yleisimmin sopiva ja se on osoittautunut hyväksi, mutta se ei sovellu kuitenkaan trombosyyttimäärän määrittämiseksi. Tämä on tärkeä haitta, koska molempien laajasti käytettyjen laboratoriokokeiden yhteinen suoritus olisi hyvin usein tarpeen. Trombosyytti- ja leukosyyttimäärän määrittämiseksi täysverestä normaalin valomikroskoopin avulla tarvitaan vä-riaineliuos, joka a) saa aikaan erytrosyyttisen täydellisen hemolyysin vähentämättä trombosyytti- ja leukosyyttimäärää; b) kiinnittää sekä trombosyytit että leukosyytit; ja c) sisältää sellaisen väriaineen, joka ei sitoudu yllä mainittuihin muotokappaleisiin suurella affiniteetillä ja kiinnittää nämä tällä tavalla normaalissa valossa.In hematological diagnostics, leukocyte count is the most widely used method. The fur solution presented in the Hungarian Pharmacopoeia (Ph.Hg.VI) is the most suitable and proven to be suitable for this purpose, but it is not suitable for determining the platelet count. This is an important drawback because joint performance of the two widely used laboratory tests would very often be necessary. To determine the platelet and leukocyte counts in whole blood using a normal light microscope, a dye solution is required which a) causes complete erythrocyte hemolysis without reducing the platelet and leukocyte counts; b) attaches both platelets and leukocytes; and c) contains a dye which does not bind to the above shaped bodies with high affinity and fixes them in this way under normal light.
Liuos, joka täyttää mainitut ensimmäiset kaksi vaatimusta, on tosin tunnettu [Scand. J. Clin. Invest. 121 (197*1)], mutta trombosyyttilaskenta voidaan suorittaa ainoastaan käyttämällä faasikontrastimikroskooppia.Admittedly, a solution which satisfies the first two requirements is known [Scand. J. Clin. Invest. 121 (197 * 1)], but platelet counting can only be performed using a phase contrast microscope.
Keksinnön tavoitteena on väriaineliuoksen valmistus, jolla voidaan suorittaa trombosyytti- ja leukosyyttilaskennan määritys täysverestä käyttämällä normaalia valomikroskooppia ja eliminoimalla tunnettujen reagenssien yllä mainitut haitat.It is an object of the invention to provide a dye solution which can be used to perform platelet and leukocyte counts in whole blood using a normal light microscope and to eliminate the above-mentioned disadvantages of known reagents.
Keksintö perustuu siihen yllättävään havaintoon, että yhdistämällä hemolysoiva-kiinnittävä liuos suureen affiniteetin 3 77938 omaavan emäksisen väriaineen kanssa saadaan trombosyytti- ja leukosyyttimäärän määrittämiseksi normaalia valomikroskoop-pia käyttäen sopiva reagenssiliuos. Yllä olevat molemmat edellytykset voidaan täyttää siinä tapauksessa, mikäli hemo-lysoiva-kiinnittävä liuos ei ole yhteensopimaton väriaineen kanssa, so. ei muodosta sakkaa.The invention is based on the surprising finding that combining a hemolyzing-fixing solution with a high-affinity alkaline dye 3 77938 provides a suitable reagent solution for determining platelet and leukocyte counts using a normal light microscope. Both of the above conditions can be met if the hemolysing-fixing solution is not incompatible with the dye, i. does not form a precipitate.
Mikroskooppisten sakkojen muodostus tulee välttää; tällaisilla sakoilla voi olla nimittäin trombosyyttien luonne ja ne vääristävät siten määrityksen tuloksen.The formation of microscopic fines should be avoided; such fines may be of a platelet nature and thus distort the result of the assay.
Tähän asti käytetyt kresyyliviolettityyppiset väriaineliuok-set vastaavat vain osittain yllä olevia vaatimuksia; lasken-taliuoksen kresyyliviolettiväriainekomponenteilla on nimittäin heikosti emäksinen luonne; tästä syystä trombosyytit värjätään vain heikosti ja leukosyyttejä ei esitetä selvästi .The cresyl violet type dye solutions used so far only partially meet the above requirements; namely, the cresyl violet dye components of the counting solution have a weakly basic nature; for this reason, platelets are only weakly stained and leukocytes are not clearly displayed.
Keksinnön mukaisesti havaittiin, että nk. tiatsiiniväriai-neet soveltuvat erinomaisesti tähän tarkoitukseen. Tiatsii-nityyppisille väriaineille on tunnusomaista kahden kromofo-riryhmän läsnäolo. Tiatsiinityyppisiä yhdisteitä on käytetty lääketieteellisessä käytännössä jo eri aloilla (esim. bakteerien värjäys histokemiassa), ammatti- ja patenttikinjal-lisuus ei kuitenkaan sisällä mitään viitettä keksinnön mukaiseen havaintoon. Tämän yhdisteryhmän tärkeimpiä edustajia on toluidiinisininen (kaaval), tioniini (kaava II) ja mety-leenisininen (kaava III).According to the invention, it has been found that so-called thiazine dyes are excellently suitable for this purpose. Thiazine-type dyes are characterized by the presence of two chromophore groups. Thiazine-type compounds have already been used in medical practice in various fields (e.g. bacterial staining in histochemistry), however, professional and patent literature do not contain any reference to the finding according to the invention. The main representatives of this group of compounds are toluidine blue (formula), thionine (formula II) and methylene blue (formula III).
77938 3hcv X 1* 5 =1 <^[-NH2 SHC n ch3 (l) 2HN^Lv^/^ 5'Χ^χ^ΝΗ277938 3hcv X 1 * 5 = 1 <^ [- NH2 SHC n ch3 (1) 2HN ^ Lv ^ / ^ 5'Χ ^ χ ^ ΝΗ2
w· MaJw · MaJ
(»)( »)
(0Η3)2Κ^^^5^^^Ν(ςΗ V(0Η3) 2Κ ^^^ 5 ^^^ Ν (ςΗ V
I "* $I "* $
Cl (III) 5 77938Cl (III) 5 77938
Keksinnön kohteena on reagenssi trombosyytti- ja leukosyyttimäärän määrittämiseksi samanaikaisesti normaalin valomik-roskoopin avulla, tunnettu siitä, että se sisältää 0,1-5 paino-osaa asetonia, 0,05 - 2,0 paino-osaa formaldehydiä ja/tai glutaarialdehydiä, 0,001 - 0,1 paino-osaa tiatsiini-väriainetta - edullisesti toluidiinisinistä —0,1 - 2,0 paino-osaa mineraalisuolaa, edullisesti natriumkloridia ja 100 paino-osaan asti vettä.The invention relates to a reagent for the simultaneous determination of platelet and leukocyte counts by means of a normal light microscope, characterized in that it contains 0.1 to 5 parts by weight of acetone, 0.05 to 2.0 parts by weight of formaldehyde and / or glutaraldehyde, 0.001 to 0.1 part by weight of a thiazine dye - preferably toluidine blue - 0.1 to 2.0 parts by weight of a mineral salt, preferably sodium chloride and up to 100 parts by weight of water.
Erään keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaisesti reagenssi koostuu 0,1 - 5,0 paino-osasta asetonia, 0,05 - 2,0 paino-osasta formaldehydiä, 0,001 - 0,1 paino-osasta toludiinisinistä ja 0,1-2 paino-osasta natriumkloridia.According to a preferred embodiment of the invention, the reagent consists of 0.1 to 5.0 parts by weight of acetone, 0.05 to 2.0 parts by weight of formaldehyde, 0.001 to 0.1 part by weight of toludine blue and 0.1 to 2 parts by weight of sodium chloride. .
Keksinnön mukaisesti käytettyjen väriaineiden erityisenä etuna on, että niillä on myös trombosyyttien ja leukosyyttien happamien makromolekyylien suhteen hyvin suuri affiniteetti ja siten ne saavat aikaan erittäin intensiivisen ja huomattavan visualisoinnin.A particular advantage of the dyes used according to the invention is that they also have a very high affinity for the acidic macromolecules of platelets and leukocytes and thus provide a very intense and considerable visualization.
Keksinnön mukaisten reagenssien tärkeimpänä etuna on, että ne ylittävät olennaisesti tunnettujen reagenssien herkyyden. Tämä tosiasia voidaan osoittaa seuraavilla kokeilla:The main advantage of the reagents according to the invention is that they substantially exceed the sensitivity of the known reagents. This fact can be demonstrated by the following experiments:
Tuntemattoman trombosyytti- ja leukosyyttimäärän omaavista näytteistä saadut tulokset saadaan kahdenkymmenen peräkkäisen trombosyytti- ja leukosyyttimäärän määrityksen kuluessa. Solujen laskumenetelmän tarkkuus on silloin tyydyttävä, kun vakio poikkeama on alle 10%. Trombosyyttimäärän ollessa 218.8 G/l on SD = ±5,0 ja käytettäessä näitä arvoja on variaatiokerroin (vakiona poikkeamana %:ssa ilmaistuna) 2,28 (kuvio 1). Mainittakoon vielä, että G/l merkitsee SI- järjestelmässä esitettyä trombosyytti- ja leukosyyttimäärää [G/l = giga [solumäärä]/1 = solumäärä x 10^] (kuvio 1).Results from samples with unknown platelet and leukocyte counts are obtained during twenty consecutive platelet and leukocyte counts. The accuracy of the cell count method is satisfactory when the standard deviation is less than 10%. At a platelet count of 218.8 G / l, SD = ± 5.0 and using these values, the coefficient of variation (expressed as a standard deviation in%) is 2.28 (Figure 1). It should also be mentioned that G / l denotes the platelet and leukocyte count shown in the SI system [G / l = giga [cell count] / 1 = cell count x 10 ^] (Figure 1).
Leukosyyttilaskennan optimaalinen virhe on keskimäärin 5.08 G/l, SD s ± 0,042, mikä vastaa 0,8%:n variaatiokerroin-ta (kuvio 3).The optimal error of the leukocyte count averages 5.08 G / l, SD s ± 0.042, which corresponds to a coefficient of variation of 0.8% (Figure 3).
6 779386 77938
Vertailua varten keksinnön mukaista reagenssiliuosta verrataan trombosyyttilaskennassa nimellä THROMBOFIXR markkinoilla olevaan trombosyyttilaskentavalmisteeseen, jota valmistaa firma Gödecke, ja leukosyyttilaskennassa turkinliuok-sen (Tiirklösung) kanssa. Vertailukokeet suoritetaan i| 1 potilaan verellä rinnakkaisissa trombosyytti- ja leukosyyttimää-rän määrityksissä.For comparison, the reagent solution according to the invention is compared in a platelet count under the name THROMBOFIXR with a platelet count preparation marketed by Gödecke and in a leukocyte count with a fur solution (Tiirklösung). Comparative experiments are performed i | In the blood of 1 patient in parallel platelet and leukocyte counts.
Tulokset on esitetty Descartesin koordinaattijärjestelmässä (kuvat 1 ja 2). Molempien kahden menetelmän välinen korrelaatio ja korrelaatiota kuvaavan funktion y = ax + b vakiot parametrit (a, b) määritetään Hewlett-Packard HP-90-laskuko-neella.The results are presented in the Cartesian coordinate system (Figures 1 and 2). The correlation between the two methods and the constant parameters (a, b) of the correlation function y = ax + b are determined on a Hewlett-Packard HP-90 calculator.
Trombosyyttilaskennassa on korrelaatio (r) = 0,927; molempien menetelmien välinen lineaarinen funktionaalinen yhteys voidaan esittää yhtälöllä y = 1,05 - 0,94; y = keksinnön mukaisella trombosyyttilaskentaliuoksella saatu tulos; x = THR0MB0FIXR:llä saatu tulos (kuva 2).In platelet count, the correlation is (r) = 0.927; the linear functional relationship between the two methods can be represented by the equation y = 1.05 to 0.94; y = result obtained with the platelet counting solution according to the invention; x = result obtained with THR0MB0FIXR (Figure 2).
Voidaan todeta, että keksinnön mukaista reagenssiliuosta käyttämällä saatu trombosyyttimäärä on noin 5% suurempi kuin samasta kokeesta THR0MB0FIXR:ä käyttämällä saatu trombosyyttimäärä.It can be seen that the platelet count obtained using the reagent solution of the invention is about 5% higher than the platelet count obtained using the same experiment THR0MB0FIXR.
Ottaen huomioon määrityksen luonteen ylimittaus ei tule kysymykseen. Saatu ero voidaan laskea vain sen tosiasian ansioksi, että keksinnön mukaisen reagenssiliuoksen väriainekom-ponentilla on olennaisesti suurempi affiniteetti trombosyyt-tien makromolekyylien happamien ryhmien suhteen, kuvassa on tästä syystä vahvemmat kontrastit ja se voidaan havaita paremmin. Käyttämällä keksinnön mukaista reagenssiliuosta voidaan siis eliminoida tunnetuilla väriaineliuoksilla saatu systemaattinen alimittaus.Given the nature of the assay, overestimation is out of the question. The difference obtained can only be calculated due to the fact that the dye component of the reagent solution according to the invention has a substantially higher affinity for the acidic groups of platelet macromolecules, therefore has stronger contrasts and can be better detected. Thus, by using the reagent solution according to the invention, the systematic underestimation obtained with known dye solutions can be eliminated.
Mainittakoon, että THR0MB0FIXR:llä oli myös sama alimittaus käytettäessä faasikontrastimikroskooppia.It should be noted that THR0MB0FIXR also had the same underestimation when using a phase contrast microscope.
Leukosyyttilaskennassa oli keksinnön mukaisella menetelmällä turkinliuoksen (Törklösung) kanssa korrelaatio r = 0,959; 7 77938 yhteys voidaan esittää lineaarisella funktiolla y s 0,97 x + 0,23· Tämä viittaa siihen, että molempien menetelmien välillä ei ole merkittävää eroa.In the leukocyte count, the method according to the invention had a correlation of r = 0.959 with the fur solution (Törklösung); 7 77938 The relationship can be represented by a linear function y s 0.97 x + 0.23 · This suggests that there is no significant difference between the two methods.
Keksinnön mukaisen reagenssiliuoksen muita valmistuksen ja käytön yksityiskohtia on esitetty seuraavissa esimerkeissä rajoittamatta kuitenkaan suojan piiriä näihin esimerkkeihin.Further details of the preparation and use of the reagent solution according to the invention are given in the following examples without, however, limiting the scope of protection to these examples.
Esimerkki 1Example 1
Laskentaliuos 200 ml tislatun veden kanssa muodostettua 0,9f:sta natriumk-loridiliuosta, 5 ml 35%:sta formaldehydiä ja 770 ml ioni-vaihdettua tislattua vettä sekoitetaan keskenään. Voimakkaan sekoittamisen jälkeen liuotetaan liuokseen 100 mg toluidii-nisinistä. Saatu liuos suodatetaan G-4 lasisuodattimen läpi. Sen jälkeen, kun on lisätty 25 ml asetonia, on liuoksen oltava kirkas ja hiukkasista vapaa.Calculation solution Mix 200 ml of 0.9% sodium chloride solution with distilled water, 5 ml of 35% formaldehyde and 770 ml of deionized distilled water. After vigorous stirring, 100 mg of toluidine blue are dissolved in the solution. The resulting solution is filtered through a G-4 glass filter. After the addition of 25 ml of acetone, the solution must be clear and free of particles.
Esimerkki 2Example 2
Antikoaguloitumisalneella käsitellyn laskimoveren trombo-syytti- ,1a leukosyyttimäärän määritysDetermination of anticoagulant-treated venous blood thrombocyte, 1a leukocyte count
Veri käsitellään tarkoituksenmukaisesti käyttämällä antiko-aguloitumisaineena etyleenidiamiinitetraetikkahappoa, koska etyleenidiamiinitetraetikkahapon läsnäollessa ei tapahdu edes minimaalista trombosyyttien saostumista. Kun veri on otettu etyleenidiamiinitetraetikkahappoon säädetään etylee-nidiamiinitetraetikkahappokonsentraatio kuivattamalla ensin vesipitoinen dinatriumetyleenidiamiinitetraetikkahappo-kan-taliuos muoviputkessa 2 mg/ml:aan. Veren koaguloituminen voidaan estää myös käyttämällä tislatun veden kanssa muodostettua 3>3%:sta trinatriumsitraattiliuosta; otettaessa verta muovikanyyliin on suhteena 9 osaa verta sitraatin 1 osaa kohden.The blood is suitably treated using ethylenediaminetetraacetic acid as the anticoagulant, since even minimal platelet precipitation does not occur in the presence of ethylenediaminetetraacetic acid. After the blood is drawn into ethylenediaminetetraacetic acid, the ethylenediaminetetraacetic acid concentration is adjusted by first drying the aqueous disodium ethylenediaminetetraacetic acid stock solution in a plastic tube to 2 mg / ml. Blood coagulation can also be prevented by using a 3> 3% trisodium citrate solution formed with distilled water; when drawing blood into a plastic cannula, the ratio is 9 parts blood per 1 part citrate.
8 779388 77938
Menetelmän suorittaminen 25 yl:aan koaguloitumisesta estettyä laskimoverta lisätään muovinäyteputkessa 475 yl laskentaliuosta ja seoksen annetaan seistä sekoittamatta huoneenlämpötilassa 15 minuuttia. Trombosyyttien ja leukosyyttien laskeminen on suoritettava 6 tunnin kuluessa. Ennen laskemista liuosta sekoitetaan jälleen, lisätään tipoittain Biirker-kammioon ja annetaan laskeutua kosteassa kammiossa 10 minuutin ajan.Performing the method To 25 ul of anticoagulated venous blood is added 475 ul of counting solution in a plastic sample tube and the mixture is allowed to stand without stirring at room temperature for 15 minutes. Platelet and leukocyte counts should be performed within 6 hours. Before counting, the solution is stirred again, added dropwise to a Biirker chamber and allowed to settle in a humid chamber for 10 minutes.
a) Trombosyyttilaskentaa) Platelet count
Biirker-kammion 10 suorakulmassa lasketun trombosyytti-määrän summa kerrotaan kahdella (koaguloituminen estetty etyleenidiamiinitetraetikkahapolla) tai vastaavasti luvulla 2,2 (koaguloituminen estetty sitraatil-la). Trombosyyttimäärä saadaan G/l:na.The sum of the platelet count calculated in the rectangle of the Biirker chamber 10 is multiplied by two (coagulation inhibited by ethylenediaminetetraacetic acid) or by 2.2 (coagulation inhibited by citrate), respectively. The platelet count is obtained in G / l.
b) Leukosyyttilaskentab) Leukocyte count
Neljässä, kolmella viivalla rajoitetussa neliössä löydettyjen leukosyyttien määrä jaetaan luvulla 18 (tai kerrotaan luvulla 0,055) kun koaguloituminen on estetty sitraatilla tai vastaavasti jaetaan luvulla 20 (tai kerrotaan luvulla 0,05), mikäli koaguloituminen on estetty etyleenidiamiinitetraetikkahapolla. Leukosyyttimäärä saadaan G/l:na.In four squares bounded by three lines, the number of leukocytes found is divided by 18 (or multiplied by 0.055) when coagulation is inhibited by citrate, or by 20 (or multiplied by 0.05), respectively, if coagulation is inhibited by ethylenediaminetetraacetic acid. The leukocyte count is obtained in G / l.
Esimerkki 3Example 3
Trombosyytti- ja leukosyyttimäärän määritys hiussuoniverestäPlatelet and leukocyte count in capillary blood
Desinfioituun sormenpäähän tai kantapäähän pistetään, ensimmäinen veripisara pyyhitään pois ja 25 yl verta imetään muo-viruiskun pipettiin (tyyppi: esim. Finnpipette, Gilson tai Eppendorf jne.) Tämä verimäärä punnitaan muoviputkeen, joka sisältää 25 μΐ 2 mg/ml:n etyleenidiamiinitetraetikkahappoli-uosta, ja sekoitetaan hyvin antikoaguloitumisaineen kanssa. Sen jälkeen kun on lisätty 450 yl laskentaliuosta ja ravisteltu perusteellisesti, liuos jätetään seisomaan huoneenläm- 9 77938 pötilassa vähintään 15 minuutiksi, sekoitetaan uudelleen ja laitetaan tipoittain Bttrker-kammioon ja annetaan laskeutua kosteassa kammiossa 10 minuutin ajan.Inject the disinfected fingertip or heel, wipe off the first drop of blood and draw 25 ul of blood into a plastic syringe pipette (type: eg Finnpipette, Gilson or Eppendorf, etc.). This volume of blood is weighed into a plastic tube containing 25 μΐ , and mixed well with the anticoagulant. After adding 450 ul of counting solution and shaking thoroughly, the solution is left to stand at room temperature for 9 minutes, stirred again and placed dropwise in a Bttrker chamber and allowed to settle in a humid chamber for 10 minutes.
Trombosyyttimäärä ja leukosyyttimäärä määritetään samalla tavoin kuin antikoaguloitumisaineella käsitellyn veren yhteydessä; trombosyyttilaskennassa on kerrontatekijänä 2; leu-kosyyttilaskennassa on jaettava luvulla 20.Platelet and leukocyte counts are determined in the same manner as for anticoagulant-treated blood; platelet count has a multiplication factor of 2; In the Leu costume calculation, divide by 20.
Esimerkki MExample M
Menetellään esimerkissä 1 esitetyllä tavalla sillä erotuksella, että formaldehydin sijasta käytetään 80 g 25*:sta glutaarialdehydiä.Proceed as described in Example 1, except that 80 g of 25 * glutaraldehyde are used instead of formaldehyde.
Claims (3)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU306083 | 1983-09-02 | ||
| HU306083A HU186309B (en) | 1983-09-02 | 1983-09-02 | Reagent for determining the thrombacyta and leucocyte number |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI843429A0 FI843429A0 (en) | 1984-08-31 |
| FI843429A FI843429A (en) | 1985-03-03 |
| FI77938B FI77938B (en) | 1989-01-31 |
| FI77938C true FI77938C (en) | 1989-05-10 |
Family
ID=10962336
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI843429A FI77938C (en) | 1983-09-02 | 1984-08-31 | REAGENTS FOR THE CONSTRUCTION OF ANTALET TROMBOCYTER OR LEUKOCYTER. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT390844B (en) |
| BE (1) | BE900439A (en) |
| CH (1) | CH665030A5 (en) |
| CS (1) | CS274409B2 (en) |
| DD (1) | DD232557A5 (en) |
| DE (1) | DE3432351A1 (en) |
| FI (1) | FI77938C (en) |
| FR (1) | FR2551551B1 (en) |
| HU (1) | HU186309B (en) |
| IN (1) | IN162894B (en) |
| LU (1) | LU85526A1 (en) |
| NL (1) | NL8402670A (en) |
| PL (1) | PL142043B1 (en) |
| SE (1) | SE455235B (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2685482B1 (en) * | 1991-12-24 | 1994-07-29 | Melet Francois | METHOD FOR DIGITIZING HEMATIES OR THROMBOCYTES AND DEVICE FOR IMPLEMENTING SAME. |
| ES2557125T3 (en) | 2011-12-30 | 2016-01-22 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for the automated identification of platelets in a whole blood sample from microscope images |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3916205A (en) * | 1973-05-31 | 1975-10-28 | Block Engineering | Differential counting of leukocytes and other cells |
| CH613523A5 (en) * | 1975-06-27 | 1979-09-28 | Inst Nat Sante Rech Med | Method for displaying basophils |
| US4290769A (en) * | 1980-10-14 | 1981-09-22 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized Romanowsky stain solution |
| US4392864A (en) * | 1982-02-01 | 1983-07-12 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized Romanowsky stain solution |
-
1983
- 1983-09-02 HU HU306083A patent/HU186309B/en not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-27 CH CH407684A patent/CH665030A5/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-28 BE BE1/11080A patent/BE900439A/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-30 FR FR8413421A patent/FR2551551B1/en not_active Expired
- 1984-08-31 NL NL8402670A patent/NL8402670A/en not_active Application Discontinuation
- 1984-08-31 SE SE8404355A patent/SE455235B/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 LU LU85526A patent/LU85526A1/en unknown
- 1984-08-31 FI FI843429A patent/FI77938C/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 DD DD26685584A patent/DD232557A5/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 CS CS658184A patent/CS274409B2/en unknown
- 1984-08-31 PL PL24942784A patent/PL142043B1/en unknown
- 1984-08-31 AT AT0279984A patent/AT390844B/en not_active IP Right Cessation
- 1984-09-03 DE DE19843432351 patent/DE3432351A1/en not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-02-18 IN IN135/DEL/85A patent/IN162894B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8404355D0 (en) | 1984-08-31 |
| FR2551551A1 (en) | 1985-03-08 |
| SE8404355L (en) | 1985-03-03 |
| CS274409B2 (en) | 1991-04-11 |
| LU85526A1 (en) | 1986-03-11 |
| FI843429A (en) | 1985-03-03 |
| PL249427A1 (en) | 1985-07-30 |
| FI843429A0 (en) | 1984-08-31 |
| HU186309B (en) | 1985-07-29 |
| AT390844B (en) | 1990-07-10 |
| FI77938B (en) | 1989-01-31 |
| CH665030A5 (en) | 1988-04-15 |
| FR2551551B1 (en) | 1987-04-24 |
| DE3432351A1 (en) | 1985-03-21 |
| NL8402670A (en) | 1985-04-01 |
| SE455235B (en) | 1988-06-27 |
| CS658184A2 (en) | 1990-09-12 |
| PL142043B1 (en) | 1987-09-30 |
| BE900439A (en) | 1985-02-28 |
| DD232557A5 (en) | 1986-01-29 |
| IN162894B (en) | 1988-07-16 |
| ATA279984A (en) | 1989-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3886271B2 (en) | Reagent for classification counting of erythroblast and classification counting method | |
| EP1840571B1 (en) | apparatus and method for measuring a hematological sample | |
| US5958776A (en) | Method for classifying and counting immature leukocytes | |
| KR920010294B1 (en) | Hematology control compositions for three populations of leukocytes and methods for their preparation and use in whole bload control systems | |
| JP3783808B2 (en) | Leukocyte classification and counting reagent | |
| JP4324552B2 (en) | Leukocyte classification and counting method | |
| EP1930723B1 (en) | Method for measuring biological sample and measuring apparatus therefor | |
| EP1865318A1 (en) | Reagent for sample analysis, kit for sample analysis and method for sample analysis | |
| JP3075751B2 (en) | Inhibitors for anticoagulant pretreatment of blood samples | |
| JP3451091B2 (en) | Analytical cuvette used for quantification of an analyte present in a whole blood sample, quantification method, and diagnostic test kit | |
| JP2009080122A (en) | Method for discriminating and counting erythroblasts | |
| Manthorpe et al. | Pseudothrombocytopenia: In vitro studies on the underlying mechanism | |
| JP3759512B2 (en) | Automated method for assaying body fluid samples such as cerebrospinal fluid and reagents therefor | |
| FI77938C (en) | REAGENTS FOR THE CONSTRUCTION OF ANTALET TROMBOCYTER OR LEUKOCYTER. | |
| JP3929283B2 (en) | Bone marrow nucleated cell classification and counting method | |
| US3634581A (en) | Pyridazine reagents and means for stabilizing blood platelets therewith | |
| Grann et al. | Polybrene neutralization as a rapid means of monitoring blood heparin levels | |
| Connolly et al. | Potential sources of errors in cation-exchange chromatographic measurement of plasma taurine. | |
| Banfi et al. | Preanalytical phase in haematology | |
| KR100644452B1 (en) | Preservative for body fluid | |
| JP4107441B2 (en) | Reagent for classification counting of erythroblasts | |
| JPS6022295B2 (en) | Aqueous solvent for red blood cell agglutination test | |
| DK169415B1 (en) | Process and reagent for quantitative photometric determination of phosphorus in body fluids | |
| Sakata | Reagent characteristics in the XE-2100 NRBC channel | |
| CN113447423A (en) | Dye solution for detecting reticulocyte, detection reagent, preparation method of detection reagent, detection method of sample analyzer and sample analyzer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: REANAL FINOMVEGYSZERGYAR |