DD232557A5 - REAGENT FOR DETERMINING THE THROMBOCYTE AND LEUKOCYTE NUMBER - Google Patents

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DD232557A5
DD232557A5 DD26685584A DD26685584A DD232557A5 DD 232557 A5 DD232557 A5 DD 232557A5 DD 26685584 A DD26685584 A DD 26685584A DD 26685584 A DD26685584 A DD 26685584A DD 232557 A5 DD232557 A5 DD 232557A5
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Laszlo Muszbek
Roza Adany
Ilona Harsanyi
Gabriella Zajka
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Reanal Finomvegyszergyar,Hu
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Abstract

Die Erfindung betrifft ein Reagens zur gleichzeitigen Bestimmung der Thrombozyten- und Leukozytenzahl auf lichtmikroskopischem Wege, das dadurch gekennzeichnet ist, dass es 0,1-5 Gew. Teile Aceton, 0,05-2,0 Gew. Teile Formaldehyd oder Glutaraldehyd, 0,001-0,1 Gew. Teile eines Thiazinfarbstoffes, insbesondere Toluidinblau, 0,1-2,0 Gew. Teile eines Mineralsalzes, vorzugsweise Natriumchlorid und ad 100 Gew. Teile Wasser enthaelt.The invention relates to a reagent for the simultaneous determination of the platelet and leukocyte count by light microscopy, which is characterized in that it contains 0.1-5 parts by weight of acetone, 0.05-2.0 parts by weight of formaldehyde or glutaraldehyde, 0.001% Parts of a thiazine dye, in particular toluidine blue, 0.1-2.0 parts by weight of a mineral salt, preferably sodium chloride and ad 100 parts by weight of water.

Description

(ι)(Ι)

CLCL

Cn)cn)

ClCl

(III)(III)

Gegenstand der Erfindung ist daher ein Reagens zur gleichzeitigen Bestimmung der Thrombozyten- und Leukozytenzahl auf normalem lichtmikroskopischem Weg, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es O,1-5Gew.-Teile Formaldehyd und/oder Glutaraldehyd, 0,001-0,1 Gew.-Teile eines Thiazinfarbstoffes, vorzugsweise Toluidinblau, 0,1-2,0Gew.-Teile eines Mineralsalzes, vorzugsweise Natriumchlorid und ad 100 Gew.-Teile Wasser enthält Nach einer vorteilhaften Ausführungsform der Erfindung enthält das Reagens 0,1-5,0 Gew.-Teile Aceton, 0,05-2,0Gew.-Teile Aceton, 0,05-2,0Gew.-Teile Formaldehyd, 0,001-0,1 Gew.-Teile Toluidinblau, 0,1-2Gew.-Teile Natriumchlorid und ad 100Gew.-Teile Wasser.The invention therefore provides a reagent for the simultaneous determination of the platelet and leukocyte count by a normal light microscopic route, characterized in that it comprises 0.1-5 parts by weight of formaldehyde and / or glutaraldehyde, 0.001-0.1 parts by weight of a thiazine dye, preferably toluidine blue, 0.1-2.0 parts by weight of a mineral salt, preferably sodium chloride, and containing 100 parts by weight of water. According to an advantageous embodiment of the invention, the reagent contains 0.1-5.0 parts by weight Acetone, 0.05-2.0 parts by weight of acetone, 0.05-2.0 parts by weight of formaldehyde, 0.001-0.1 parts by weight of toluidine blue, 0.1-2 parts by weight of sodium chloride and ad 100 wt. Parts of water.

Der besondere Vorteil der erfindungsgemäß verwendeten Farbstoffe besteht darin, daß diese auch gegenüber den sauren Makromolekülen der Thrombozyten und Leukozyten eine sehr große Affinität aufweisen und dementsprechend eine sehr intensive und markante Visualität zur Folge haben.The particular advantage of the dyes used according to the invention is that they also have a very high affinity for the acidic macromolecules of the platelets and leukocytes and accordingly result in a very intensive and striking visuality.

Der wichtigste Vorteil der erfindungsgemäßen Reagenzien besteht darin, daß sie die Empfindlichkeit der bekannten Reagenzien ~ wesentlich übertreffen. Diese Tatsache kann durch die folgenden Versuche nachgewiesen werden:The most important advantage of the reagents according to the invention is that they substantially exceed the sensitivity of the known reagents. This fact can be demonstrated by the following experiments:

Die aus Proben mit einer unbekannten thrombozyten- und Leukozytenzahl gewonnenen Ergebnisse werden im Laufe von zwanzig nacheinanderlaufenden Thrombozyten- und Leukozytenzahlbestimmungen erhalten. Die Genauigkeit der Zellenzählungsmethode ist dann befriedigend, wenn die zulässige Abweichung unter 10% liegt. Bei einer Th rombozytenzahl von 218,9G/l ist SD = ±5,0 und unter Anwendung dieser Werte beträgt der Variationskoeffizient (als zulässige Abweichung in % ausgedrückt) 2,28 (Fig. 1). Es soll noch erwähnt werden, daß der G/I-Wert die im Sl-System angegebene Thrombozyten- und Leukozytenzahl bedeutet [G/l = Giga[Zellenzahl] 1 = Zellenzahl χ 109] (Fig. 1).The results obtained from samples with an unknown platelet and leukocyte count are obtained over twenty consecutive platelet and leukocyte count determinations. The accuracy of the cell count method is satisfactory if the allowable deviation is less than 10%. At a platelet count of 218.9G / l, SD = ± 5.0, and using these values, the coefficient of variation (expressed as% permissible deviation) is 2.28 (Figure 1). It should also be mentioned that the G / I value means the platelet and leucocyte number indicated in the SI system [G / l = Giga [cell number] 1 = cell number χ 10 9 ] (FIG. 1).

Der optimale Fehler der Leukozytenzählung beträgt bei einem Durchschnitt von 5,08 G/l, SD ±0,042, was einem Variationskoeffizienten von 0,8% entspricht (Fig.3).The optimum leukocyte count error, at an average of 5.08 G / L, is SD ± 0.042, which corresponds to a coefficient of variation of 0.8% (Figure 3).

Zum Vergleich wird die erfindungsgemäße Reagenslösung auf dem Gebiet der Thrombozytenzählung mit dem unter dem Handelsnamen THROMBOFIX" in den Verkehr gebrachten Thrombozytenzählerpräparat und auf dem Gebiet der Leukozytenzählung mit einer Türklösung verglichen. Die Vergleichsversuche werden mit dem Blut von 41 Patienten (Thrombozyten- und Leukozytenzahlbestimmung) durchgeführt.For comparison, the reagent solution according to the invention in the field of platelet counting is compared with the platelet counter preparation marketed under the trade name THROMBOFIX®, and in the field of leukocyte counting with a door solution The comparative experiments are carried out with the blood of 41 patients (platelet and leukocyte count determination) ,

Die Ergebnisse sind im kartesischen Koordinatensystem angegeben (Fig. 2 und 4). Die Korrelation zwischen den beiden Methoden und die Parameter (a, b) der bei Korrelationen beschreibenden Funktion y = ax + b werden mit Hilfe eines Rechners vom Typ HP90 der Fa. Hewlett-Packard/USA bestimmt.The results are given in the Cartesian coordinate system (Figures 2 and 4). The correlation between the two methods and the parameters (a, b) of the function describing correlations y = ax + b are determined with the aid of an HP90 computer from Hewlett-Packard / USA.

Bei der Thrombozytenzählung beträgt die Korrelation r von 0,927; der lineare funktioneile Zusammenhang zwischen den beiden Methoden kann durch die Gleichung y = 1,05 χ - 0,94 beschrieben werden. Hierin sind y das mit der erfindungsgemäßen Thrombozytenzählerlösung erhaltene Ergebnis und χ das mit THROMBOFIX" erhaltene Ergebnis (Fig.2).In the platelet count, the correlation r is 0.927; the linear functional relationship between the two methods can be described by the equation y = 1.05 χ - 0.94. Here, y is the result obtained with the platelet counter solution according to the invention and "the result obtained with THROMBOFIX" (FIG. 2).

Es wurde festgestellt, daß die beim Arbeiten mit der erfindungsgemäßen Reagenslösung erhaltene Thrombozytenzahl um etwa 5% höher ist als die bei der selben Probe unter Anwendung von THROMBOFIX" erhaltene.It has been found that the platelet count obtained when working with the reagent solution according to the invention is about 5% higher than that obtained with the same sample using THROMBOFIX®.

Unter Berücksichtigung des Charakters der Bestimmung kann ein zu hohes Ergebnis nicht vorliegen. Der erhaltene Unterschied ist also dem Umstand zuzuschreiben, daß die Farbstoffkomponente der erfindungsgemäßen Reagenslösung zu den sauren Gruppen der Makromolekülen der Thrombozyten eine wesentlich größere Affinität zeigt, wodurch das Bild stärkere Kontraste aufweist und besser wahrgenommen werden kann. Beim Arbeiten mit der erfindungsgemäßen Reagenslösung kann also die mit den bekannten Farbstofflösungen erhaltene systematische „Untermessung" vermieden werden.Taking into account the nature of the determination, the result may not be too high. The difference thus obtained is attributable to the fact that the dye component of the reagent solution according to the invention has a significantly greater affinity for the acidic groups of the macromolecules of the platelets, as a result of which the image has stronger contrasts and can be better perceived. When working with the reagent solution according to the invention, therefore, the systematic "under measurement" obtained with the known dye solutions can be avoided.

Es sei noch erwähnt, daß das THROMBOFIX" auch unter Anwendung eines Phasenkontrastmikroskops eine ähnliche „Untermessung" zeigte.It should be noted that the THROMBOFIX "also showed a similar" sub-measurement "using a phase-contrast microscope.

Bei der Leukozytenzählung zeigt die erfindungsgemäße Methode mit der Türklösung eine Korrelation r von 0,959; der Zusammenhang kann durch die lineare Funktion y = 0,97x + 0,23 beschrieben werden.Dies weist darauf hin, daßzwischen den beiden Verfahren kein signifikanter Unterschied vorhanden ist.In the leukocyte count, the method according to the invention with the door release shows a correlation r of 0.959; the relationship can be described by the linear function y = 0.97x + 0.23. This indicates that there is no significant difference between the two methods.

Weitere Einzelheiten der Herstellung und Anwendung der erfindungsgemäßen Reagenslösung sind den nachstehenden Beispielen zu entnehmen, ohne den Schutzumfang auf diese Beispiele zu beschränken.Further details of the preparation and use of the reagent solution according to the invention can be found in the following examples, without limiting the scope of protection to these examples.

Ausführungsbeispiele Beispiel 1 ZählerlösungExemplary embodiments Example 1 counter solution

200 ml einer 0,9%igen Lösung von Natriumchlorid in destilliertem Wasser werden mit 5 ml 35%igen Formaldehyd und 770ml ionenausgetauschtem destilliertem Wasser vermischt. Nach starkem Umrühren werden in der Lösung 100mg Toluidinblaufarbstoff gelöst. Die erhaltene Lösung wird durch ein G—4 Glasfilterfiltriert. Nach Zugabe von 25 ml Aceton muß die Lösung klar und partikelfrei sein.200 ml of a 0.9% solution of sodium chloride in distilled water are mixed with 5 ml of 35% formaldehyde and 770 ml of ion-exchanged distilled water. After vigorous stirring, 100 mg of toluidine blue dye are dissolved in the solution. The resulting solution is filtered through a G-4 glass filter. After adding 25 ml of acetone, the solution must be clear and particle-free.

Beispiel 2Example 2 Bestimmung der Thrombozyten- und Leukozytenzahl in mit einem Antigerinnungsmittel behandeltem venösem BlutDetermination of platelet and leukocyte counts in anticoagulant-treated venous blood

Das Blut wird zweckmäßig mit Aethylendiamintetraessigsäure als Antigerinnungsmittel behandelt, weil in Gegenwart von Aethylendiamintetraessigsäure jegliche, auch die geringste Ausscheidung von Thrombozyten vermieden wird. Nach der Abnahme des Blutes mit Äthylendiamintetraessigsäure wird dieÄthylendiamintetraessigsäurekonzentration durch vorherige Eintrocknung einer wäßrigen Dinatriumäthylendiamintetraessigsäure-Stammlösung.in einem Kunstoffröhrchen auf 2 mg/ml eingestellt. Die Blutgerinnung kann auch unter Anwendung einer mit destilliertem Wasser'gebildeten 3,3%igen Trinatriumcitratlösung verhindert werden; bei der Abnahme des Blutes mit einer Kunststoffkanüle beträgt das Verhältnis von BlutzuCitrat9:1.The blood is conveniently treated with ethylenediaminetetraacetic acid as the anticoagulant, because in the presence of ethylenediaminetetraacetic acid, even the slightest excretion of platelets is avoided. After removal of the blood with ethylenediaminetetraacetic acid, the ethylenediaminetetraacetic acid concentration is adjusted to 2 mg / ml by first drying an aqueous disodium ethylenediaminetetraacetic acid stock solution in a plastic tube. Blood clotting can also be prevented by using a distilled water 3.3% trisodium citrate solution; when the blood is taken down with a plastic cannula, the ratio of blood citrate is 9: 1.

Durchführung des VerfahrensImplementation of the procedure

Zu 25μΙ gerinnungsverhinderten venösen Blut werden in einem Kunststoffprobierröhrchen 475μ.Ι der Zählerlösung gegeben, und die Mischung wird ohne umrühren bei Raumtemperatur 15 Minuten lang stehengelassen. Die Zählung der Thrombozyten und Leukozyten muß innerhalb von 6 Stunden durchgeführt werden. Vor der Zählung wird die Lösung umgerührt, tropfenweise in eine Bürker-Kammer gegeben und in der feuchten Kammer 10 Minuten lang sedimentieren gelassen.To 25μΙ anticoagulant venous blood 475μ.Ι are added to the counter solution in a Kunststoffprobierröhrchen, and the mixture is allowed to stand without stirring at room temperature for 15 minutes. The count of platelets and leukocytes must be performed within 6 hours. Before counting, the solution is stirred, added dropwise to a Bürker chamber and allowed to sediment in the humid chamber for 10 minutes.

a) Thrombozytenzählunga) platelet count

Die Summe der in den 10 Rechtecken der Bürker-Kammer gezählten Thrombozytenzahl wird mit 2 (Gerinnung mit Äthylendiamintetraessigsäure verhindert) bzw. 2,2 (Gerinnung mit Citrat verhindert) multipliziert. Die Thrombozytenzahl wird in G/l erhalten.The total number of platelets counted in the 10 rectangles of the Bürker chamber is multiplied by 2 (coagulation with ethylenediaminetetraacetic acid) or 2.2 (coagulation with citrate prevented). The platelet count is obtained in g / l.

b) Leukozytenzählungb) Leukocyte Counting

Die Zahl der in vier durch drei Linien begrenzten Quadraten gefundenen Leukozyten wird durch 18 dividiert (oder mii 0,055 multipliziert) im Falle ier Gerinnungsverhinderung mit Citrat bzw. durch 20 dividiert (oder mit 0,05 multipliziert), falls die Gerinnungsverhinderung mit Äthylendiamintetraessigsäure erfolgte. Die Leukozytenzahl wird in G/l erhalten.The number of leucocytes found in four squares bounded by three lines is divided by 18 (or multiplied by 0.055) in the case of anticoagulation with citrate or divided by 20 (or multiplied by 0.05) if the anticoagulant was with ethylenediaminetetraacetic acid. The leukocyte count is obtained in g / l.

Beispiel 3Example 3 Bestimmung der Thrombozyten- und Leukozytenzahl aus kapillarem BlutDetermination of the platelet and leukocyte count from capillary blood

Eine desinfizierte Fingerspitze oder Ferse wird angestochen, der erste Blutstropfen wird abgestrichen; woraufhin 25μΙ Blut in eine Pipette mit einer Kunststoffspritze (z. B. Finnpipette, Gilson- oder Eppendorf-Pipette usw.) eingesaugt. Diese Blutmenge wird in ein Kunststoffrohr chen, welches 25μ\ einer 2 mg/ml Äthylendiamintetraessigsäurelösung enthält, eingewogen und mit dem Antigerinnungsmittel gut vermischt. Nach Zugabe von 450μΙ Zählerlösung und gründlichem Schütteln wird die Lösung bei Raumtemperatur mindestens 15 Minuten lang stehengelassen, nach erneutem Umrühren tropfenweise in eine Bürker-Kammer gegeben und in der feuchten Kammer 10 Minuten lang sedimentieren gelassen. Die Thrombozytenzahl und die Leukozytenzahl wirdinähnlicherWeisewiebeidem mit einem Antigerinnungsmittel behandelten Blut bestimmt; bei der Thrombozytenzählung beträgt der Multiplikationsfaktor 2; bei der Leukozytenzählung muß durch 20 divididiert werden.A disinfected fingertip or heel is pierced, the first drop of blood is scraped off; Then 25μΙ of blood is aspirated into a pipette with a plastic syringe (eg, Finnpipette, Gilson or Eppendorf pipette, etc.). This amount of blood is chen in a plastic tube containing 25 μ \ of a 2 mg / ml Äthylendiamintetraessigsäurelösung weighed and mixed well with the anticoagulant. After addition of 450μΙ counter solution and thorough shaking, the solution is allowed to stand at room temperature for at least 15 minutes, added again drop by drop into a Bürker chamber and allowed to sediment in the humid chamber for 10 minutes. The platelet count and leukocyte count are determined in similar ways to anticoagulant treated blood; in the platelet count, the multiplication factor is 2; in the leucocyte count must be divided by 20.

Beispiel 4Example 4

Man verfährt wie im Beispiel 1, mit dem Unterschied, daß man anstelle von Formaldehyd 80g eines 25%igen GlutaraldehydsThe procedure is as in Example 1, with the difference that instead of formaldehyde 80 g of a 25% glutaraldehyde

Claims (3)

Patentansprüche:claims: 1) Elektronische Partikelzählung mit speziell zur Thrombozytenzählung entwickelten Automaten. Obwohl diese Methode schnell und einfach ist, müssen sehr kostspielige Instrumente beschafft werden. Diese Methode ist als Ersatz der mikroskopischen Bestimmung nicht immer geeignet. Die Reproduzierbarkeit dieses Verfahrens ist auch schlechter als die der mikroskopischen Zählung.1) Electronic particle counting with vending machines specially developed for platelet counting. Although this method is quick and easy, very expensive instruments must be procured. This method is not always suitable as a substitute for microscopic determination. The reproducibility of this method is also worse than that of the microscopic count. 1. Reagans zur gleichzeitigen Bestimmung derThrombozyten- und Leukozytenzahl auflichtmikroskopischem Wege, gekennzeichnet dadurch, daß es 0,1-5 Gew.-Teile Aceton, 0,05-2,0 Gew.-Teile Formaldehyd und/oder Glutaraldehyd, 0,001-0,1 Gew.-Teile eines Thiazinfarbstoffes, vorzugsweise Toluidinblau, 0,1-2,0Gew.-Teile eines Mineralsalzes, vorzugsweise Natriumchlorid, und ad 100 Gew.-Teile Wasser enthält.1. Reagans for the simultaneous determination of the platelet and leukocyte count by light microscopy, characterized in that it contains 0.1-5 parts by weight of acetone, 0.05-2.0 parts by weight of formaldehyde and / or glutaraldehyde, 0.001-0, 1 part by weight of a thiazine dye, preferably toluidine blue, 0.1-2.0 parts by weight of a mineral salt, preferably sodium chloride, and ad 100 parts by weight of water. 2) Thrombozytenzählung mit Hilfe eines Phasenkontrastmikroskopes unter Anwendung einer kokain- oder novokainhaltigen Lösung oder einer anderen Thrombozytenzählerlösung. Für die Durchführung dieses Verfahrens ist ein kostspieliges Phasenkontrastmikroskop erforderlich. Ein weiterer wesentlicher Nachteil besteht darin, daß diese Methode für das die Versuche durchführende Personal ermüdend und anstrengend ist, insbesondere bei einer hohen Versuchszahl, wo es vor allem zu einer Schädigung der Augen kommen kann.2) Platelet counting using a phase contrast microscope using a ***e or novocaine solution or other platelet counter solution. To perform this method, a costly phase-contrast microscope is required. Another major disadvantage is that this method is tiring and exhausting for the personnel performing the tests, especially at a high number of tests, where it can come especially to damage to the eyes. 2. Verfahren zur Herstellung eines zur gleichzeitigen Bestimmung der Thrombozyten- und Leukozytenzahl auf normalem lichtmikroskopischem Wege geeigneten Reagens, gekennzeichnet dadurch, daß man O,1-5Gew.-Teile Aceton, 0,05-2,0 Gew.-Teile Formaldehyd oder Glutaraldehyd, 0,001-0,1 Gew.-Teile eines Thiazinfarbenstoffes, vorzugsweise Toluidinblau, 0,1-2,0 Gew.-Teiie eines Mineralsalzes mit einer ad 100 Gew.- Teilen notwendigen Menge von Wasser vermischt.2. A method for producing a reagent suitable for the simultaneous determination of platelet and leukocyte count by normal optical microscopy, characterized in that one O, 1-5Gew.-parts of acetone, 0.05-2.0 parts by weight of formaldehyde or glutaraldehyde , 0.001-0.1 parts by weight of a Thiazinfarbenstoffes, preferably toluidine blue, 0.1-2.0 parts by weight of a mineral salt with a ad 100 parts by weight necessary amount of water. 3. Verfahren nach Anspruch 2, gekennzeichnet dadurch, daß man 200ml einer 0,9%igen Natriumschloridlösung, 25ml Aceton, 5ml eines 35%igen Formaldehyds, 770ml ionenausgetauschtes destilliertes Wasser und 100mg Toluidinblaufarbstoff miteinander vermischt.3. The method according to claim 2, characterized in that 200 ml of a 0.9% sodium chloride solution, 25 ml of acetone, 5ml of a 35% formaldehyde, 770ml ion-exchanged distilled water and 100mg Toluidinblaufarbstoff mixed together. Hierzu 4 Seiten ZeichnungenFor this 4 pages drawings Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention Die Erfindung betrifft ein Reagens zur Bestimmung derThrombozyten-und Leukozytenzahl auf normalem lichtmikoskopischem Wege und ein Verfahren zur Herstellung desselben.The invention relates to a reagent for the determination of platelet and leukocyte counts by normal light microscopic means and to a method of making the same. Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions Es ist bekannt, daß die Bestimmung derThrombozyten- und Leukozytenzahl ein in klinischen Laboren häufig durchzuführender Vorgang ist. DieThrombozytenzählung kann nach verschiedenen Methoden erfolgen:It is known that the determination of platelet and leukocyte counts is a common procedure to be performed in clinical laboratories. The platelet count can be done by several methods: 3) Bestimmung derThrombozytenzahl mit einer Färbungsmethode. Dieses Verfahren ist das einfachste und kann mit Hilfe eines normalen Mikroskops durchgeführt werden. Nach den gegenwärtig verwendeten Methoden wird als Farbstoff Kristallviolett (Genzianviolett chemische Bezeichnung: Hexamethyl—p-rosanilin-hydrochlorid) eingesetzt. Gegenüber dieser Methode wird der berechtigte Einwand erhoben, daß sie im Vergleich zur Phasenkontrastbestimmung ungenau ist, weil nicht alle Thrombozyten einwandfrei und damit gut erkennbar gefärbt werden.3) Determination of the platelet count with a staining method. This procedure is the simplest and can be done with the help of a normal microscope. According to the currently used methods is used as a dye crystal violet (Genzianviolett chemical name: hexamethyl-p-rosaniline hydrochloride). Compared to this method, the legitimate objection is raised that it is inaccurate in comparison to the phase contrast determination, because not all platelets are flawlessly and thus easily discernible. In der haematologischen Diagnostik stellt die Leukozytenzählung die am häufigsten angewendete Methode dar. Die im ungarischen Pharmakopia (Ph.Hg.VI.) beschriebene Türklösung ist zu diesem Zweck im allgemeinen geeignet und hat sich gut bewährt, ist jedoch zur Bestimmung derThrombozytenzahl nicht geeignet. Dies ist ein erheblicher Nachteil, weil eine gemeinsame Durchführung der beiden Untersuchungen sehr oft notwendig wäre. Zur Bestimmung derThrombozyten- und Leukozytenzahl aus vollem Blut mit Hilfe eines normalen Lichtmikroskops ist eine Farbstofflösung erforderlich, dieIn hematological diagnostics, the leukocyte count is the most commonly used method. The doorcloth described in the Hungarian Pharmacopia (Ph.Hg.VI.) is generally suitable for this purpose and has been well established, but is not suitable for determining the platelet count. This is a considerable disadvantage, because a joint implementation of the two investigations would very often be necessary. To determine the platelet and leukocyte count from whole blood using a standard light microscope, a dye solution is required a) die vollständige Haemolyse der Erythrozyten ohne Reduktion der Thrombozyten- und Leukozytenzahl hervorruft,a) causes complete hemolysis of the erythrocytes without reduction of the platelet and leukocyte count, b) sowohl die Thrombozyten als auch die Leukozyten fixiert undb) fixed both the platelets and the leukocytes and c) einen solchen Farbstoff enthält, der an den obengenannten Formkörpern mit einer großen Affinität gebunden ist und auf . diesem Wegedieselben in normalem Licht fixiert.c) contains such a dye which is bound to the above shaped articles with a high affinity and on. fixed this way in normal light. Eine Lösung, welche den obigen ersten beiden Forderungen entspricht, ist bekannt [Scand. J. Clin. Invest. 33,121 (1974)], die Thrombozytenzählung kann jedoch nur unter Anwendung eines Phasenkontrastmikroskops durchgeführt werden.A solution which meets the above first two requirements is known [Scand. J. Clin. Invest. 33,121 (1974)], but platelet counting can only be performed using a phase-contrast microscope. Ziel der ErfindungObject of the invention Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung einer Farbstofflösung, mit der die Bestimmung der Thrombozyten- und Leukozytenzahl aus vollem Blut, unter Anwendung eines normalen Lichtmikroskops, unter Behebung der obigen Nachteile der bekannten Reagenzien durchgeführt werden kann.The aim of the invention is to provide a dye solution with which the determination of platelet and leukocyte count from whole blood, using a normal light microscope, while eliminating the above disadvantages of the known reagents can be performed. Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention Die Erfindung beruht auf der überraschenden Erkenntnis, daß durch Kombinierung einer haemolysierenden und fixierenden Lösung mit jinem basischen Farbstoff großer Affinität eine zur gemeinsamen Bestimmung der Thror^b^zyten- und Leukozytenzahl unter Anwendung eines normalen Lichtmikroskopes geeignete Reagenslösung erhalten wird. Die obigen beiden Bedingungen können in jenem Falle erfüllt werden, wenn die haemolysierende und fixierende Lösung mit dem Farbstoff nicht inkompatibel ist, d. h. keinen Niederschlag bildet.The invention is based on the surprising finding that by combining a haemolysing and fixing solution with a high affinity basic dye, a reagent solution suitable for the co-determination of the thrombin and leukocyte counts using a standard light microscope is obtained. The above two conditions can be met in that case if the haemolysing and fixative solution is not incompatible with the dye, i. H. does not precipitate. Die Bildung von mikroskopischen Niederschlägen muß nämlich vermieden werden, da sefeha Niederschläge einen Thrombozytencharakter aufweisen und damit das Ergebnis der Bestimmung verfälschen können.The formation of microscopic precipitates must be avoided because sefeha precipitates have a platelet character and thus can falsify the result of the determination. Die bisher verwendeten Farbstofflösungen vom Kresylvioiett-Typ entsprechen nurteüweise den obigen Forderungen; die Kresylviolettfarbstoffkomponenten der Zählerlösung besitzen nämlich einen schwach basischen Charakter; deshalb werden die Thrombozyten nur blaß gefärbt, und die Leukozyten werden nicht eindeutig erkennbar.The Kresylvioiett type dye solutions used hitherto correspond to the above requirements only in part; Namely, the cresyl violet dye components of the counter solution have a weak basic character; Therefore, the platelets are only pale colored, and the leukocytes are not clearly recognizable. Erfindungsgemäß wurde gefunden, daß die sog. Thiazinfarbstoffe für diesen Zweck ausgezeichnet geeignet sind. Die Farbstoffe vom Thiazintv^sind durch die Gegenwart von zwei Chromophorgruppen gekennzeichnet. Verbindungen vom Thiazintyp wurden in der ärztlichen Praxis bereits auf verschiedenen Gebieten verwendet (z. B. Färbung von Bakterien, in der Histochemie), die Fach-und Patentliteratur enthält jedoch keinerlei Hinweis auf die erfindungsgemäße Erkenntnis. Die wichtigsten Vertreter dieser Verbindungsgruppe sind das Toluidinblau (Formel I), das Thionin (Formel II) und das Methylenblau (Formel III).According to the invention, it has been found that the so-called thiazine dyes are excellently suitable for this purpose. The dyes of thiazine ^ are characterized by the presence of two chromophore groups. Thiazine-type compounds have already been used in medical practice in various fields (eg, staining of bacteria, in histochemistry), but the technical and patent literature contains no indication whatsoever of the finding according to the invention. The most important representatives of this linking group are the toluidine blue (formula I), the thionin (formula II) and the methylene blue (formula III).
DD26685584A 1983-09-02 1984-08-31 REAGENT FOR DETERMINING THE THROMBOCYTE AND LEUKOCYTE NUMBER DD232557A5 (en)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3916205A (en) * 1973-05-31 1975-10-28 Block Engineering Differential counting of leukocytes and other cells
CH613523A5 (en) * 1975-06-27 1979-09-28 Inst Nat Sante Rech Med Method for displaying basophils
US4290769A (en) * 1980-10-14 1981-09-22 Miles Laboratories, Inc. Stabilized Romanowsky stain solution
US4392864A (en) * 1982-02-01 1983-07-12 Miles Laboratories, Inc. Stabilized Romanowsky stain solution

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