CS274409B2 - Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number - Google Patents
Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number Download PDFInfo
- Publication number
- CS274409B2 CS274409B2 CS658184A CS658184A CS274409B2 CS 274409 B2 CS274409 B2 CS 274409B2 CS 658184 A CS658184 A CS 658184A CS 658184 A CS658184 A CS 658184A CS 274409 B2 CS274409 B2 CS 274409B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- platelet
- solution
- counting
- parts
- leukocyte
- Prior art date
Links
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 title description 45
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 33
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 claims description 5
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical class [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000001016 thiazine dye Substances 0.000 claims description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N ***e Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 2
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N (7-aminophenothiazin-3-ylidene)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[NH2+])C=C2SC3=CC(N)=CC=C3N=C21 PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical compound N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229960003920 ***e Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229940053973 novocaine Drugs 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/305—Fixative compositions
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká činidla k současnému stanovení počtu trombocytů a leukocytů. jThe invention relates to an agent for the simultaneous determination of platelet and leukocyte counts. j
Předmětem vynálezu je činidlo obsahující aceton a formaldehyd nebo glutaraldehyd, minerální soli a barviva, které je vhodné k současnému stanovení počtu trombocytů a leukocytů z plné krve normální mikroskopickou cestou.The present invention provides an agent comprising acetone and formaldehyde or glutaraldehyde, mineral salts and dyes which is suitable for the simultaneous determination of platelet and leukocyte counts from whole blood by normal microscopic means.
Oe známo, že stanovování počtu trombocytů a počtu leukocytů spadá do rozsahu standardních metod klinických laboratoří. Počítání trombocytů se může provádět různými metodami:The determination of platelet counts and leukocyte counts is well within the scope of standard clinical laboratory methods. Platelet counting can be performed by a variety of methods:
1. Elektronické počítání částic pomocí automatů vyvinutých pro počítání trombocytů. I když je metoda rychlá a jednoduchá, je nutno opatřit velmi drahé přístroje. Tato metoda není vždy vhodná k náhradě mikroskopického stanovování. Reprodukovatelnost tohoto postupu je rovněž horší než reprodukovatelnost mikroskopického počítání.1. Electronic particle counting using automata developed for platelet counting. Although the method is quick and simple, it is necessary to provide very expensive instruments. This method is not always suitable to replace microscopic determination. The reproducibility of this procedure is also worse than the reproducibility of microscopic counting.
2. Počítání trombocytů pomocí mikroskopu s fázovým kontrastem za použití roztoku obsahujícího kokain nebo novokain nebo některého jiného roztoku pro počítání trombocytů. K provádění tohoto postupu je nepostradatelným mikroskop s fázovým kontrastem. Další podstatná nevýhoda spočívá v tom, že,metoda je pro personál provádějící pokusy únavná, namáhavá a škodlivá pro oči, zejména při vysokém počtu pokusů.2. Platelet counting using a phase contrast microscope using a solution containing ***e or novocaine or any other platelet counting solution. A phase contrast microscope is indispensable for carrying out this procedure. A further significant disadvantage is that the method is tedious, laborious and harmful to the eyes of the conducting experimenters, especially with a high number of experiments.
3. Stanovením počtu trombocytů metodou barvení. Tento postup je nejjednodušší a může se provádět pomocí mikroskopu. Podle dnes používaných metod se jako barvivo používá krystalová violet (genciánová violet; chemický název: hexamethyl-p-rosanilin-hydrochlorid).3. Determination of platelet count by staining method. This procedure is the simplest and can be performed using a microscope. According to the methods used today, crystal violet (gentian violet; chemical name: hexamethyl-p-rosaniline hydrochloride) is used as a dye.
Vůči těmto metodám se oprávněně namítá, že ve srovnání se stanovením pomocí fázového kontrastu zkreslují výsledky, protože ne všechny trombocyty se vybarví dobře viditelným způsobem.It is rightly argued against these methods that they distort the results compared to the phase contrast assay, because not all platelets stain well in a visible way.
V hematologické diagnostice představuje počítání leukocytů nejrozšířeněji používanou metodu. Pro tento účel je obecně vhodný Turkův roztok, který se popisuje v maďarském lékopisu (Ph. Hg. VI) a který se dobře uchovává, není však vhodný ke stanovení počtu trombocytů. To je značná nevýhoda, protože velmi často je nutné společné provádění obou těchto rozšířených laboratorních pokusů. Ke stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů z plné krve pomocí normálního světelného mikroskopu je potřebný roztok barviva, kterýIn hematological diagnostics, leukocyte counting is the most widely used method. The Turk solution, which is described in the Hungarian Pharmacopoeia (Ph. Hg. VI) and which is well preserved, is generally suitable for this purpose, but is not suitable for the determination of platelet counts. This is a considerable disadvantage, because very often both joint extended laboratory experiments are required. A dye solution is required to determine platelet counts and whole blood leukocyte counts using a normal light microscope.
a) vyvolá úplnou hemolýzu erythrocytů bez snížení počtu trombocytů a počtu leukocytů;(a) induces complete haemolysis of erythrocytes without reducing the platelet count and leukocyte count;
b) fixuje jak trombocyty, tak i leukocyty a(b) fixes both platelets and leukocytes; and
c) obsahuje takové barvivo, které je na shora uvedené částice vázáno s vysokou afinitou a tímto způsobem je fixováno v normálním světle.c) it contains a dye which is bound to the above particles with high affinity and in this way is fixed under normal light.
Roztok, který splňuje první dva ze shora uvedených požadavků, je sice znám (srov.Although a solution which meets the first two of the above requirements is known (cf.
Scand. 0. Clin. Invest. 33, 121 (1974)), počítání trombocytů se však může provádět jen za použití mikroskopu s fázovým kontrastem.Scand. 0. Clin. Invest. 33, 121 (1974)), however platelet counting can only be performed using a phase contrast microscope.
Cílem vynálezu byla výroba roztoku barviva, jehož pomocí je možno provádět stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů z plné krve za použití normálního světelného mikroskopu a za odstranění shora uvedených nevýhod známých činidel.SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to provide a dye solution which can be used to determine platelet counts and leukocyte counts from whole blood using a normal light microscope and to overcome the above-mentioned disadvantages of known agents.
Vynález spočívá na překvapivém poznatku, že kombinací hemolýzujícího a fixujícího roztoku s bázickým barvivém vysoké afinity se získá roztok činidla, který je vhodný pro společné stanovování počtu trombocytů a počtu leukocytů za použití normálního světelného mikroskopu. Shora uvedené podmínky mohou být splněny v tom případě, když hemolyzující a fixující roztok není s barvivém inkompatibilní, tzn. že nevytváří žádnou sraženinu.The invention is based on the surprising discovery that by combining a hemolysis and fixative solution with a basic high affinity dye, a reagent solution is obtained which is suitable for co-determining platelet count and leukocyte count using a normal light microscope. The above conditions can be fulfilled if the hemolyzing and fixing solution is not incompatible with the dye, i. that it does not form any clot.
Vzniku mikroskopických sraženin se má zamezit; takové sraženiny mohou mít totiž charakter trombocytů a tím mohou zkreslovat výsledek stanovení.Microscopic clots should be avoided; in fact, such clots may have the character of platelets and thus distort the result of the assay.
Dosud používané roztoky barviva typu kresolové violeti odpovídají shora uvedeným požadavkům jen částečně. Složky barviva kresolové violeti v roztoku, který je určen pro počítání, mají totiž slabě bázický charakter. Tím se trombocyty zbarvují jen velmi málo a leukocyty se nejeví jednoznačně.The cresol violet dye solutions used hitherto only partially meet the above requirements. The dye components of cresol violet in the solution to be counted are of a slightly basic character. As a result, platelets stain very little and leukocytes do not appear unambiguous.
Nyní bylo podle vynálezu zjištěno, že pro tento účel se výtečně hodí tzv. thiazinováIt has now been found according to the invention that the so-called thiazine is excellent for this purpose
CS 274 409 B2 barviva. Barviva thiazinového typu se vyznačují přítomností dvou chromofořových skupin. Sloučeniny thiazinového typu již byly v lékařské praxi používány v různých oborech (například k barvení bakterií, v histochemii), avšak v odborné a patentové literatuře neexistu je žádný údaj o poznatku podle vynálezu. Nejdůležitějšími zástupci této skupiny sloučenin j toluidinová modř vzorce ICS 274 409 B2 dyes. Thiazine-type dyes are characterized by the presence of two chromophore groups. Thiazine-type compounds have already been used in medical practice in various fields (e.g., for staining bacteria, in histochemistry), but there is no indication in the scientific and patent literature of the invention. The most important representatives of this group of compounds are toluidine blue of formula I
thionin vzorce IIthionine of formula II
(II)(II)
Cl a methylenová modř vzorceCl and methylene blue of formula
III (CH3)2» fIII (CH 3 ) 2 f
(III).(III).
ClCl
Předmětem předloženého vynálezu je činidlo k současnému stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů obvyklou mikroskopickou cestou, které se vyznačuje tím, že obsahuje 0,1 až 5 dílů hmotnostních acetonu, 0,05 až 2,0 dílu hmotnostního formaldehydu nebo/a glutaraldehydu, 0,001 až 0,1 dílu hmotnostního thiazinového barviva, výhodně toluidinové modři, 0,1 až 2,0 dílu hmotnostního minerální soli, výhodně chloridu sodného a do 100 dílů hmotnostních vody.The present invention provides an agent for the simultaneous determination of platelet count and leukocyte count by a conventional microscopic method, characterized in that it contains 0.1 to 5 parts by weight of acetone, 0.05 to 2.0 parts by weight of formaldehyde and / or glutaraldehyde, 0.001 to 5 parts by weight. 0.1 parts by weight of a thiazine dye, preferably toluidine blue, 0.1 to 2.0 parts by weight of a mineral salt, preferably sodium chloride, and up to 100 parts by weight of water.
Podle výhodného provedení vynálezu se činidlo skládá z 0,1 až 5,0 dílu hmotnostního acetonu, 0,05 až 2,0 dílu hmotnostního formaldehydu, 0,001 až 0,1 dílu hmotnostního toluidi nové modři a 0,1 až 2 dílů hmotnostních chloridu sodného.According to a preferred embodiment of the invention, the reagent comprises 0.1 to 5.0 parts by weight of acetone, 0.05 to 2.0 parts by weight of formaldehyde, 0.001 to 0.1 parts by weight of toluidine blue and 0.1 to 2 parts by weight of sodium chloride .
Zvláštní výhoda barviv používaných podle vynálezu spočívá v tom, že tato barviva mají velmi vysokou afinitu také vůči kyselým makromolekulám trombocytů a leukocytů, což má odpovídajícím způsobem za následek velmi intenzivní a markantní viditelnost.A particular advantage of the dyes used according to the invention is that these dyes also have a very high affinity for the acid macromolecules of platelets and leukocytes, which accordingly results in very intense and striking visibility.
Nejdůležitějši výhoda činidel podle vynálezu spočívá v tom, že citlivost činidel je podstatně vyšší ve srovnání se známými činidly. Tuto skutečnost lze prokázat následujícímiThe most important advantage of the agents of the invention is that the sensitivity of the agents is substantially higher compared to the known agents. This can be demonstrated by the following
CS 274 409 82 pokusy.CS 274 409 82 experiments.
Výsledky dosažené ze vzorků s neznámým počtem trombocytů a leukocytů se získají během dvaceti po sobě probíhajících stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů. Přesnost metody počítání buněk je uspokojující tehdy, jestliže standardní odchylka je menší než 10 %. Při počtu trombocytů 218,8 G/1 činí standardní odchylka (SO) - 5,0 a za použití těchto hodnot činí variační koeficient (jako standardní odchylka, vyjádřená v %) 2,28 (srov. obr. 1). Nutno ještě uvést, že hodnota G/1 znamená počet trombocytů a počet leukocytů udávaný v systému SI [G/1 = giga(počet buněk)/litr = počet buněk x 10J , viz srovnání s obr.Results from samples with unknown platelet and leukocyte counts are obtained over twenty consecutive platelet counts and leukocyte counts. The accuracy of the cell counting method is satisfactory if the standard deviation is less than 10%. At a platelet count of 218.8 G / l, the standard deviation (SO) is 5.0 and using these values the coefficient of variation (as standard deviation, expressed as%) is 2.28 (cf. Figure 1). It should also be noted that the G / 1 value is the platelet count and leukocyte count reported in the SI system [G / 1 = giga (cell count) / liter = cell count x 10J, see comparison with FIG.
1.1.
Počítání trombocytů a leukocytů se provádí pomocí reagenčního roztoku podle příkladu 1 způsobem popsaným v příkladu 2. K měření se používá téhož roztoku žilní krve a jednotlivá měření se dvacetkrát opakují. Hodnoty počtu buněk získané při jednotlivých měřeních vyjádřené v jednotkách G/1 (G/1 = giga /10 / počet buněk/litr) byly vyneseny na obr. 1. Jak lze z tohoto obr. odečíst, kolísají naměřené hodnoty mezi 210 G/1 a 230 G/1; z těchto údajů vypočtená průměrná hodnota (x) činí 218,8 G/1. Standardní odchylka (SD) měření činí í 5,0; variační koeficient (CV) vyjádřený v % standardní odchylky Činí 2,28. Číselné údaje uvedené na ose pořadnic na obr. 1 znamenají hodnoty počtu buněk v G/1; na ose pořadnic jsou uvedeny odchylky, které odpovídají dvojnásobku hodnoty standardní odchylky (+2 SD, popř. -2 SD) a trojnásobku hodnoty standardní odchylky (+3 SD, popř. -3 SD).Platelet and leukocyte counting is performed using the reagent solution of Example 1 as described in Example 2. The same venous blood solution is used for measurements and the measurements are repeated 20 times. The cell count values obtained in each measurement, expressed in G / 1 (G / 1 = giga / 10 / cell count / liter) were plotted in Figure 1. As can be read from this Figure, the measured values vary between 210 G / 1 and 230 G / L; from these data, the calculated mean value (x) is 218.8 G / l. The standard deviation (SD) of the measurement is 5,0 5.0; coefficient of variation (CV), expressed in% of standard deviation, is 2.28. The numerical data on the ordinate in Fig. 1 represent the number of cells in G / 1; the ordinate shows deviations that correspond to twice the standard deviation value (+2 SD or -2 SD) and three times the standard deviation value (+3 SD or -3 SD).
Optimální chyba při počítání leukocytů činí při střední hodnotě 5,08 G/1, SD = -0,042, což odpovídá variačnímu koeficientu 0,8 %, viz srovnání s obr. 3.The optimal leukocyte counting error is a mean value of 5.08 G / l, SD = -0.042, which corresponds to a coefficient of variation of 0.8%, see comparison with Figure 3.
Hodnoty získané při 20 paralelních měřeních počtu leukocytů jsou znázorněny na obr. 3. Interpretace symbolů x, SD, CV a číselných hodnot uvedených na ose pořadnic na obr. 3 je stejná jako v případě obr. 1.The values obtained with 20 parallel leukocyte counts are shown in Fig. 3. The interpretation of the x, SD, CV symbols and numerical values on the ordinate of Fig. 3 is the same as in Fig. 1.
Pro srovnání se v případě počítání trombocytů roztok činidla podle vynálezu porovnáváFor comparison, in the case of platelet counting, the reagent solution of the invention is compared
P s přípravkem známým na trhu pod obchodním názvem THROMBOFIX určeným pro počítání trombo·· R cytů a v případě počítání leukocytů se porovnává s Turkeho roztokem. THROMBOFIX je výrobkem firmy Gódecke, NSR a jeho chemické složení není známo. Pod tímto označením se však běžně vyskytuje na trhu. Srovnávací pokusy se provádějí za použití krve 41 pacientů, přičemž se paralelně stanovuje počet trombocytů a počet leukocytů.P with a preparation known under the trade name THROMBOFIX intended for the counting of thrombocyte R cells and, in the case of the counting of leukocytes, it is compared with Turke solution. THROMBOFIX is a product of Gódecke, Germany and its chemical composition is unknown. However, it is commonly found on the market under this name. Comparative experiments were performed using the blood of 41 patients, in which the platelet count and leukocyte counts were determined in parallel.
Výsledky se uvádějí v Descartesově souřadnicovém systému, viz srovnání s obr. 2 a 4. Korelace mezi oběma metodami a standardní parametry (a,b) funkce y = ax + b, popisující korelace, se určují pomocí počítače (Hewlett-Packard HP-90).The results are reported in the Descartes coordinate system, see comparison with Figures 2 and 4. The correlations between the two methods and the standard parameters (a, b) of the function y = ax + b describing the correlations are determined using a computer (Hewlett-Packard HP-90). ).
Při počítání trombocytů je korelace (r) = 0,927; lineární funkční závislost mezi oběma metodami se může vyjádřit rovnicí y = 1,05 x - 0,94; y = výsledek získaný s roztokem určeným pro počítání trombocytů podle vynálezu; x = výsledek získaný za použití přípravku THR0MB0FIXR, viz obr. 2.In platelet counting, the correlation (r) = 0.927; linear functional dependence between the two methods can be expressed by the equation y = 1.05 x - 0.94; y = the result obtained with the platelet counting solution of the invention; x = result obtained with THR0MB0FIX R , see Figure 2.
Je možno zjistit, že počet trombocytů získaný s roztokem činidla podle vynálezu, je asi o 5 % vyšší než počet trombocytů, který byl zjištěn ze stejného vzorku za použití přípravku THR0MB0FIXR.The platelet count obtained with the reagent solution of the invention is found to be about 5% higher than the platelet count found from the same sample using THR0MB0FIX R.
Vzhledem k charakteru stanovení nepřichází naměření vyšších hodnot v úvahu. Získaný rozdíl je možno připsat na vrub skutečnosti, že složka barviva roztoku činidla podle vynálezu má ke kyselým skupinám makromolekul trombocytů podstatně vyšší afinitu a tím má obraz výraznější kontrasty a může se lépe postřehnout. Za použití roztoku činidla podle vynálezu je možno rovněž eliminovat nižší hodnoty, systematicky dosahované při používání známých roztoků barviv.Due to the nature of the determination, the measurement of higher values is out of the question. The difference is due to the fact that the dye component of the reagent solution of the invention has a significantly higher affinity for the acid groups of the platelet macromolecules, and thus the image has more contrasts and can be perceived better. By using a solution of the agent according to the invention, it is also possible to eliminate the lower values systematically obtained using known dye solutions.
pp
Nutno uvést, že při použití přípravku THROMBOFIX se i při práci s mikroskopem s fázovým kontrastem dosahuje podobně nižších výsledků oproti výsledkům skutečným.It should be noted that when using THROMBOFIX, even when using a phase contrast microscope, similar results are obtained compared to the actual results.
Při počítání leukocytů vykazuje metoda podle vynálezu s Turkeho roztokem korelaci r = 0,959. Vztah lze vyjádřit lineární funkcí y = 0,97 x + 0,23. To ukazuje na skutečnost,When counting leukocytes, the method of the invention shows a correlation of r = 0.959 with the Turke solution. The relation can be expressed by linear function y = 0.97 x + 0.23. This shows that
CS 274 409 B2 že mezi oběma postupy neexistuje statisticky významnější rozdíl.EN 274 409 B2 that there is no statistically significant difference between the two procedures.
Další podrobnosti výroby a použití roztoku činidla podle vynálezu jsou obsaženy v následujících příkladech. Uvedené příklady však rozsah vynálezu v žádném směru neomezují·Further details of manufacture and use of the reagent solution of the invention are provided in the following examples. However, the examples given do not limit the scope of the invention in any way.
Účinnost činidla podle vynálezu je znázorněna pomocí výkresů, kde na obr. 1 číselné údaje uvedené na ose pořadnic znamenají údaje počtu buněk v G/1; na ose pořadnic se uvádějí odchylky, které odpovídají dvojnásobku hodnoty standardní odchylky (+2 SD, popř. -2 SD) a trojnásobku hodnoty standardní odchylky (+3 SD, popř. -3 SD), na obr. 2 na ose pořadnic se udává počet trombocytů (G/1) zjištěný pomocí roztoku k počítání podle vynálezu; na ose úseček se udává počet trombocytů (G/1) zjištěný pomocí známého srovnávacího přípravku THROMBOFIX^, obr. 3 znázorňuje hodnoty získané z 20 paralelních měření při počítání leukocytů, přičemž číselné údaje uvedené na ose pořadnic označují počet buněk v G/1; CV znamená variační koeficient, SD standardní odchylku a x označuje průměrnou hodnotu, na obr. 4 na ose pořadnic se udává počet leukocytů (G/1) zjištěný pomocí roztoku k počítání podle vynálezu; na ose úseček se udává počet leukocytů (G/1) zjištěný pomocí Tiirkeho roztoku.The activity of the agent of the invention is illustrated by the drawings, wherein in Fig. 1 the numerical data on the ordinate indicate the number of cells in G / 1; the ordinate shows deviations that correspond to twice the standard deviation value (+2 SD or -2 SD) and three times the standard deviation value (+3 SD or -3 SD); platelet count (G / L) detected with the counting solution of the invention; the abscissa axis shows the platelet count (G / 1) detected by the known comparator THROMBOFIX®, Fig. 3 shows values obtained from 20 parallel leukocyte counts, with numerical data on the ordinate indicating the number of cells in G / 1; CV is the coefficient of variation, SD is the standard deviation, and x is the mean value, in FIG. 4 the ordinate shows the number of leukocytes (G / 1) detected by the counting solution according to the invention; on the abscissa axis is the number of leukocytes (G / 1) detected by Tiirke solution.
Příklad 1Example 1
Roztok pro počítáníCounting solution
200 ml 0,9% roztoku chloridu sodného připraveného za použití destilované vody se smísí s 5 ml 35% formaldehydu a se 770 ml deionizované destilované vody. Po intenzivním promíchání se v roztoku rozpustí 100 mg toluidinové modři jako barviva. Získaný roztok se filtruje přes skleněný filtr G-4. Po přidání 25 ml acetonu musí zůstat roztok čirý a prostý částic.200 ml of 0.9% sodium chloride solution prepared using distilled water are mixed with 5 ml of 35% formaldehyde and 770 ml of deionized distilled water. After vigorous stirring, 100 mg of toluidine blue is dissolved in the solution as a dye. The resulting solution was filtered through a G-4 glass filter. After adding 25 ml of acetone, the solution must remain clear and free of particulate matter.
Příklad 2Example 2
Stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů v žilní krvi upravené antikoagulačním prostředkemDetermination of platelet count and leukocyte count in venous blood treated with anticoagulant
Krev se účelně upraví ethylendiamintetraoctovou kyselinou jako antikoagulačním prostředkem, nebot v přítomnosti ethylendiamintetraoctové kyseliny nedochází ani k minimálnímu vylučování trombocytů.. Po odběru krve se pomocí ethylendiamintetraoctové kyseliny upraví koncentrace ethylendiamintetraoctové kyseliny předchozím prikapáním vodného základního roztoku dinatriumethylendiamintetraoctové kyseliny ve zkumavkách z plastické hmoty na 2 mg/ml. Srážení krve lze rovněž zamezit použitím 3,3% roztoku trinatriumcitrátu v destilované vodě. Při odběru krve v kanyle z plastické hmoty činí poměr 9 dílů krve ku 1 dílu citrátu.The blood is expediently treated with ethylenediaminetetraacetic acid as an anticoagulant, since in the presence of ethylenediaminetetraacetic acid there is no minimal excretion of thrombocytes. ml. Blood clotting can also be avoided by using a 3.3% solution of trisodium citrate in distilled water. When taking blood in a plastic cannula, the ratio is 9 parts blood to 1 part citrate.
Provádění postupu:To carry out the procedure:
K 25 /Ji venozní krve upravené prostředkem zabraňujícím srážení se ve zkumavce z plastické hmoty přidá 475 yjl počítacího roztoku a směs se ponechá bez míchání v klidu 15 minut při teplotě místnosti. Počítání trombocytů a leukocytů se musí provést během 6 hodin. Před počítáním se roztok znovu promíchá, nakape se do Burkerovy komůrky a ve vlhké komůrce se nechá sedimentovat 10 minut.To 25 µl of venous blood treated with a clotting agent, 475 µl of the counting solution was added in a plastic tube, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 15 minutes without stirring. Platelet and leukocyte counts must be performed within 6 hours. Before counting, the solution is again mixed, dripped into the Burker chamber and allowed to settle in the humid chamber for 10 minutes.
a) Počítání trombocytůa) Platelet counting
Součet počtu trombocytů napočítaný v 10 obdélnících Burkerovy komůrky se násobí 2 (při použití ethylendiamintetraoctové kyseliny k zabránění srážení), popřípadě 2,2 (při použití citrátu k zabránění srážení). Počet trombocytů se získá v G/1.The sum of platelets counted in the 10 rectangles of the Burker chamber is multiplied by 2 (using ethylene diamine tetraacetic acid to prevent clotting) or 2.2 (using citrate to prevent clotting). The platelet count is obtained in G / L.
b) Počítání leukocytůb) Leukocyte counting
Počet leukocytů, zjištěný ve čtyřech, třemi čarami vymezených čtvercích, se dělí 18 (nebo se násobí 0,055) v případě použití citrátu k zabránění srážení, popřípadě se dělí 20 (nebo násobí 0,05), v případě použiti ethylendiamintetraoctové kyseliny jako prostředkuThe number of leukocytes found in four, three line delineated squares is divided by 18 (or multiplied by 0.055) when using citrate to prevent precipitation, or by 20 (or multiplied by 0.05) by using ethylenediaminetetraacetic acid as a composition
CS 274 409 B2 k zamezení srážení. Počet leukocytů se získá v G/l.CS 274 409 B2 to prevent shrinkage. The leukocyte count is obtained in G / L.
Příklad 3Example 3
Stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů z kapilární krveDetermination of platelet count and leukocyte count from capillary blood
Dezinfikovaná špička prstu nebo pata se napíchne, první kapka krve se otře a potom se do pipety nasaje 25 /jl krve pomocí střičky z plastické hmoty (typ: například Finnpipette, Gilson nebo Eppendorf atd.). Toto množství krve se odměří do zkumavky z plastické hmoty, která obsahuje 25/jI roztoku ethylendiamintetraoctové kyseliny o koncentraci 2 mg/ml. Poté se dobře promísí s antikoagulačním prostředkem. Po přidání 450 /Jl počítacího roztoku a po důkladném protřepáni se roztok ponechá v klidu při teplotě místnosti alespoň 15 minut a po opětovném promíchání se nakape do Burkerovy komůrky a ve vlhké komůrce se ponechá 10 minut sedimentovat,The disinfected finger tip or heel is injected, the first drop of blood is wiped and then 25 µl of blood is drawn into the pipette using a plastic syringe (type: Finnpipette, Gilson or Eppendorf, etc.). This amount of blood is measured in a plastic tube containing 25 µl of a 2 mg / ml solution of ethylenediaminetetraacetic acid. It is then well mixed with the anticoagulant. After addition of 450 µl of counting solution and thorough shaking, the solution is allowed to stand at room temperature for at least 15 minutes and, after re-mixing, is dropped into the Burker chamber and left to sediment in the wet chamber for 10 minutes.
Počet trombocytů a počet leukocytů se určuje podobným způsobem jako v případě krve upravené prostředkem proti srážení. Při stanovení počtu trombocytů činí faktor, kterým se násobí, 2. Při počítání leukocytů se musí získaná hodnota dělit 20.Platelet counts and leukocyte counts are determined in a similar manner to blood treated with a clotting agent. When determining the platelet count, the factor by which it is multiplied is 2. When counting leukocytes, the value obtained must be divided by 20.
Příklad 4Example 4
Postupuje se jako v příkladu 1 s tím rozdílem, že se místo formaldehydu použije 80 g 25¾ glutaraldehydu.The procedure is as in Example 1 except that 80 g of 25¾ glutaraldehyde is used instead of formaldehyde.
Claims (1)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU306083A HU186309B (en) | 1983-09-02 | 1983-09-02 | Reagent for determining the thrombacyta and leucocyte number |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS658184A2 CS658184A2 (en) | 1990-09-12 |
| CS274409B2 true CS274409B2 (en) | 1991-04-11 |
Family
ID=10962336
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS658184A CS274409B2 (en) | 1983-09-02 | 1984-08-31 | Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT390844B (en) |
| BE (1) | BE900439A (en) |
| CH (1) | CH665030A5 (en) |
| CS (1) | CS274409B2 (en) |
| DD (1) | DD232557A5 (en) |
| DE (1) | DE3432351A1 (en) |
| FI (1) | FI77938C (en) |
| FR (1) | FR2551551B1 (en) |
| HU (1) | HU186309B (en) |
| IN (1) | IN162894B (en) |
| LU (1) | LU85526A1 (en) |
| NL (1) | NL8402670A (en) |
| PL (1) | PL142043B1 (en) |
| SE (1) | SE455235B (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2685482B1 (en) * | 1991-12-24 | 1994-07-29 | Melet Francois | METHOD FOR DIGITIZING HEMATIES OR THROMBOCYTES AND DEVICE FOR IMPLEMENTING SAME. |
| ES2557125T3 (en) | 2011-12-30 | 2016-01-22 | Abbott Point Of Care, Inc. | Method and apparatus for the automated identification of platelets in a whole blood sample from microscope images |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3916205A (en) * | 1973-05-31 | 1975-10-28 | Block Engineering | Differential counting of leukocytes and other cells |
| CH613523A5 (en) * | 1975-06-27 | 1979-09-28 | Inst Nat Sante Rech Med | Method for displaying basophils |
| US4290769A (en) * | 1980-10-14 | 1981-09-22 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized Romanowsky stain solution |
| US4392864A (en) * | 1982-02-01 | 1983-07-12 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized Romanowsky stain solution |
-
1983
- 1983-09-02 HU HU306083A patent/HU186309B/en not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-27 CH CH407684A patent/CH665030A5/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-28 BE BE1/11080A patent/BE900439A/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-30 FR FR8413421A patent/FR2551551B1/en not_active Expired
- 1984-08-31 NL NL8402670A patent/NL8402670A/en not_active Application Discontinuation
- 1984-08-31 SE SE8404355A patent/SE455235B/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 LU LU85526A patent/LU85526A1/en unknown
- 1984-08-31 FI FI843429A patent/FI77938C/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 DD DD26685584A patent/DD232557A5/en not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 CS CS658184A patent/CS274409B2/en unknown
- 1984-08-31 PL PL24942784A patent/PL142043B1/en unknown
- 1984-08-31 AT AT0279984A patent/AT390844B/en not_active IP Right Cessation
- 1984-09-03 DE DE19843432351 patent/DE3432351A1/en not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-02-18 IN IN135/DEL/85A patent/IN162894B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8404355D0 (en) | 1984-08-31 |
| FR2551551A1 (en) | 1985-03-08 |
| SE8404355L (en) | 1985-03-03 |
| LU85526A1 (en) | 1986-03-11 |
| FI843429A (en) | 1985-03-03 |
| PL249427A1 (en) | 1985-07-30 |
| FI843429A0 (en) | 1984-08-31 |
| HU186309B (en) | 1985-07-29 |
| AT390844B (en) | 1990-07-10 |
| FI77938B (en) | 1989-01-31 |
| CH665030A5 (en) | 1988-04-15 |
| FR2551551B1 (en) | 1987-04-24 |
| DE3432351A1 (en) | 1985-03-21 |
| NL8402670A (en) | 1985-04-01 |
| SE455235B (en) | 1988-06-27 |
| CS658184A2 (en) | 1990-09-12 |
| PL142043B1 (en) | 1987-09-30 |
| BE900439A (en) | 1985-02-28 |
| DD232557A5 (en) | 1986-01-29 |
| IN162894B (en) | 1988-07-16 |
| FI77938C (en) | 1989-05-10 |
| ATA279984A (en) | 1989-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR920010294B1 (en) | Hematology control compositions for three populations of leukocytes and methods for their preparation and use in whole bload control systems | |
| CA1075608A (en) | Saccharide and formaldehyde containing lysable blood preservative composition | |
| US6664110B1 (en) | Erythroblast diagnostic flow-cytometry method and reagents | |
| CA2367780A1 (en) | Single channel, single dilution detection method | |
| US20050048657A1 (en) | Method of using a hematology control product | |
| JP3451091B2 (en) | Analytical cuvette used for quantification of an analyte present in a whole blood sample, quantification method, and diagnostic test kit | |
| Kojima et al. | An automated optoelectronic reticulocyte counter | |
| JP3523883B2 (en) | How to perform a blood test | |
| US5945340A (en) | Reticulocyte assay control | |
| JP2005233935A (en) | Hematological control of reticulocyte and nucleated red blood cell | |
| WO1996034291A1 (en) | Quality control method of hematology instruments | |
| JP3759512B2 (en) | Automated method for assaying body fluid samples such as cerebrospinal fluid and reagents therefor | |
| US6444471B1 (en) | Reticulocyte containing complete blood control | |
| US6362003B1 (en) | Hematological reference control composition containing leukocyte analogs, methods of making, and uses thereof | |
| Maxie et al. | A comparative study of the diseases in cattle caused by Theileria parva or T. Lawrencei: II. Hematology, clinical chemistry, coagulation studies and complement | |
| CS274409B2 (en) | Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number | |
| Connolly et al. | Potential sources of errors in cation-exchange chromatographic measurement of plasma taurine. | |
| Lewis et al. | Platelet counting‐development of a reference method and a reference preparation | |
| Solanki et al. | Spurious red blood cell parameters due to serum cold agglutinins: Observations on Ortho ELT-8® Cell Counter | |
| Davies et al. | Automated reticulocyte counting: evaluation of the Coulter® STKS Haematology Analyser reticulocyte counting function | |
| Stamminger et al. | Use of the XE-2100 in a Patient with Cold Auto-immune Hemolytic Anemia | |
| Kubiak et al. | The diagnostic pitfalls and challenges associated with basic hematological tests | |
| CN118243911A (en) | Urine physics multiparameter composite quality control material and preparation method thereof | |
| Marinov et al. | Accurate and High Sensitivity Identification of PNH Clones by Flow Cytometry | |
| CN1254094A (en) | Hemolytic agent for blood analyzer |