NO330508B1 - Blanding bestaende av syntetisk fosfodiester-nukleotidsekvens og anvendelse derav. - Google Patents
Blanding bestaende av syntetisk fosfodiester-nukleotidsekvens og anvendelse derav. Download PDFInfo
- Publication number
- NO330508B1 NO330508B1 NO20022820A NO20022820A NO330508B1 NO 330508 B1 NO330508 B1 NO 330508B1 NO 20022820 A NO20022820 A NO 20022820A NO 20022820 A NO20022820 A NO 20022820A NO 330508 B1 NO330508 B1 NO 330508B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- base
- seq
- sequences
- cancer
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 74
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 46
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 30
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 26
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 claims abstract description 16
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 23
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 23
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 23
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 15
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 15
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 11
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 11
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 10
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 9
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 8
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 8
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 6
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 6
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 4
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 claims description 4
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 claims description 4
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 claims description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 208000011646 secondary carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003667 hormone antagonist Substances 0.000 claims description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 145
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 44
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 34
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 26
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 25
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 15
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 15
- 108090000567 Caspase 7 Proteins 0.000 description 14
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 14
- 102100038902 Caspase-7 Human genes 0.000 description 13
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 13
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 12
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 12
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 12
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 11
- 102000008297 Nuclear Matrix-Associated Proteins Human genes 0.000 description 10
- 108010035916 Nuclear Matrix-Associated Proteins Proteins 0.000 description 10
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 10
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 9
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 206010000871 Acute monocytic leukaemia Diseases 0.000 description 7
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 7
- 208000035489 Monocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 5
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 5
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N Fluo-3 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C2=C3C=C(Cl)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(Cl)C=C32)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 4
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 4
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- -1 growth-inhibiting Proteins 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- SUEGWIXYCHISPX-UHFFFAOYSA-N sulfane trihydroxy(sulfanylidene)-lambda5-phosphane Chemical compound OP(O)(O)=S.S SUEGWIXYCHISPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 4
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 3
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 3
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 3
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 3
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 3
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 3
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 2
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 2
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000010094 cellular senescence Effects 0.000 description 2
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 2
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- AOUOVFRSCMDPFA-QSDJMHMYSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-carboxypropanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O AOUOVFRSCMDPFA-QSDJMHMYSA-N 0.000 description 1
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYYARFHFWYKNLF-UHFFFAOYSA-N 4-[(2,4-dimethylphenyl)diazenyl]-3-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound CC1=CC(C)=CC=C1N=NC1=C(O)C(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C12 YYYARFHFWYKNLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015693 Actin Depolymerizing Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010038798 Actin Depolymerizing Factors Proteins 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 102000004580 Aspartic Acid Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010017640 Aspartic Acid Proteases Proteins 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- WTYQNWDZSGLSLW-UHFFFAOYSA-O CC1=CSC(C)=N1.C1=CC=CC=C1[NH+]1C(C=2C=CC=CC=2)=NN=N1 Chemical compound CC1=CSC(C)=N1.C1=CC=CC=C1[NH+]1C(C=2C=CC=CC=2)=NN=N1 WTYQNWDZSGLSLW-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 101100005766 Caenorhabditis elegans cdf-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004041 Caspase 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004068 Caspase-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000572 Caspase-10 Proteins 0.000 description 1
- 102100032616 Caspase-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000552 Caspase-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100025597 Caspase-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710090338 Caspase-4 Proteins 0.000 description 1
- 102100038916 Caspase-5 Human genes 0.000 description 1
- 101710090333 Caspase-5 Proteins 0.000 description 1
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000012746 DNA damage checkpoint Effects 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102100031690 Erythroid transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 101710100588 Erythroid transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 230000010337 G2 phase Effects 0.000 description 1
- 230000004668 G2/M phase Effects 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000573199 Homo sapiens Protein PML Proteins 0.000 description 1
- 101000611023 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000049772 Interleukin-16 Human genes 0.000 description 1
- 101800003050 Interleukin-16 Proteins 0.000 description 1
- 102000006835 Lamins Human genes 0.000 description 1
- 108010047294 Lamins Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 102100021010 Nucleolin Human genes 0.000 description 1
- XVZUMQAMCYSUMS-SIUGBPQLSA-N OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 XVZUMQAMCYSUMS-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 101000708422 Podarcis siculus Tissue- and phase-specific nuclear protein Proteins 0.000 description 1
- 229920000776 Poly(Adenosine diphosphate-ribose) polymerase Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 101000933603 Rattus norvegicus Protein BTG1 Proteins 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 102100040403 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124650 anti-cancer therapies Drugs 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 230000018486 cell cycle phase Effects 0.000 description 1
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002435 cytoreductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000547 effect on apoptosis Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 102000054896 human PML Human genes 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000019189 interleukin-1 beta production Effects 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000005053 lamin Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 101150025333 murA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010044762 nucleolin Proteins 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000003651 pro-proliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003277 telomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N vanadate(3-) Chemical compound [O-][V]([O-])([O-])=O LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7135—Compounds containing heavy metals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/18—Type of nucleic acid acting by a non-sequence specific mechanism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3513—Protein; Peptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
OPPFINNELSESOMRÅDE
Foreliggende oppfinnelse vedrører blanding bestående av en syntetisk fosfodiester-nukleotidsekvens og anvendelse derav. Blandingen kan anvendes for behandling av cancer.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Cancer er en abberant netto-akkumulering av atypiske celler som kan skrive seg fra overskudd av proliferasjon, utilstrekkelig celledød eller en kombinasjon av de to.
Proliferasjon er kulmineringen av en celles progresjon gjennom cellesyklusen som resulterer i deling av én celle i to celler. Cellesyklusens fem hovedfaser er G0, Gi, S, G2 og M. Under Go-fasen er cellene i hvile. De fleste celler i kroppen er til enhver tid på dette trinn. Under Gi-fasen produserer celler som respons på signaler om deling, RNA og de nødvendige proteiner for DNA-syntese. Under S-fasen (SE, tidlig S-fase; SM, middel S-fase; og SL, sen S-fase) replikerer cellene deres DNA. Under G2-fasen dannes proteiner som forberedelse for celledeling. Under den mitotiske (M) fase deler cellen seg i to datterceller. Endringer i cellesyklus-progresjonen forekommer ved alle cancere og kan være resultat av overekspresjon av gener, mutasjon av regulatoriske gener eller opphevelse av kontrollpunkter for DNA-skade (Hochhauser, D. Anti-Cancer Chemotherapeutic Agents 8:903, 1997).
Til forskjell fra cancerceller, kan de fleste normale celler ikke proliferere uendelig som følge av en prosess betegnet cellulær aldring. Cellulær aldring er en programmert celledød-respons som fører til vekststans av celler (Dimri et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 92:20, 1995). DNA-skade, eksponering av kolon-, bryst- og ovariecancerceller for topoisomerase-inhibitorer og eksponering av nasofaryngeale cancerceller for cisplatin, er rapportert å forhindre proliferasjon av disse cellene ved induksjon av aldring (Wang et al., Cancer Res. 58:5019,1998; Poele et al., Br. J. Cancer 80:9, 1999).
Syntetiske oligonukleotider er polyanioniske sekvenser som er internalisert i celler (Vlassov et al., Biochim. Biophys. Acta 1197:95, 1994). Det er rapportert om syntetiske oligonukleotider som binder selektivt til nukleinsyrer (Wagner, R. Nature, 372:333, 1994), til spesifikke celleproteiner (Bates et al., J. Biol. Chem. 274:26369, 1999) og til spesifikke nukleære proteiner (Scaggiante et al., Eur. J. Biochem. 252:207, 1998) til å inhibere proliferasjon av cancerceller.
Syntetiske 27-basesekvenser som inneholder guanin (G) og ulike mengder tymin (T) (oligonukleotid GTn), hvor n er >1 eller <7 og hvor baseantallet er >20 (Scaggiante et al., Eur. J. Biochem. 252:207, 1998) er rapportert å inhibere vekst av cancercellelinjer ved sekvensspesifikk binding til et 45 kDa nukleært protein, mens GTn, hvor baseantallet er <20, er rapportert å være inaktive overfor cancercellelinjer (Morassutti et al., Nucleosides and Nucleotides 18:1711, 1999). To syntetiske GT-rike oligonukleotider på 15 og 29 baser med 3' aminoalkyl-modifikasjoner er rapportert å danne G-kvartetter som binder til nukleolin, og til å inhibere proliferasjon av cancercellelinjer (Bates et al., J. Biol. Chem. 274:26369, 1999). Den syntetiske 6-base TTAGGG-fosfortioat som har en sekvens identisk med den for pattedyrs telomer repetisjonssekvens, er rapportert å inhibere proliferasjon av Burkitts lymfomceller in vitro og in vivo (Mata et al., Toxicol. Applied Pharmacol. 144:189, 1997). Den syntetiske 6-base TTAGGG-fosfodiesteren er imidlertid rapportert å ikke ha anti-telomeraseaktivitet (US-patent 5.643.890).
Celledød bevirkes av immun-mediatorer som fremmer apoptose, og av apoptose-indusere som direkte initierer veier som fører til celledød (Muzio et al., Cell 85:817, 1996; Levine, A. Cell 88:323, 1997). Apoptose er en aktiv celledødprosess som kjennetegnes ved distinkte morfologiske endringer som inkluderer kondensasjon av nukleært kromatin, cellekrymping, kjerne-desintegrasjon, plasmamembran-blebbing og dannelse av membran-bundne apoptotiske legemer (Wyllie et al., Int. Rev. Cytol. 68:251,1980). Et molekylært kjennetegn på apoptose er nedbrytning av cellens nukleære DNA til oligonukleosomal-lange fragmenter som resultat av aktivering av endogen endonuklease (Wyllie, A. Nature 284:555, 1980).
Kaspaser (cystein-aspartyl-spesifikke proteaser) har vært trukket inn som nøkkelenzymer ved gjennomføringen av det sene apoptosetrinn. Kaspase-familien består av minst 14 beslektede cystein-aspartyl-proteaser. Alle kaspasene inneholder et konservert QACXG (hvor X er R, Q eller G) pentapeptid som aktivsete-motiv (Cohen, G. Biochim. Biophys. Acta 1366:139,1997). En rekke kaspaser syntetiseres som inaktive pro-enzymer som aktiveres etter spaltning ved kaspase-spesifikke spaltningsseter (Cohen, G. Biochim. Biophys. Acta 1366:139, 1997) eller som inaktive enzymer som fordrer assosiasjon med regulatoriske molekyler for aktivering (Stennicke et al., J. Biol. Chem. 274:8359, 1999).
I tillegg til deres rolle ved apoptose, er kaspaser involvert i aktivering og proliferasjon av B- og T-lymfocytter, i cytokin-modning under inflammasjon, ved differensiering av progenitorceller under erytropoiese og ved utvikling av linsefiber (Fadeel et al., Leukemia 14:1514, 2000). Med hensyn til B- og T-lymfocytter, bearbeides kaspase 3 under aktivering av B-lymfocytter og av CD4(+), CD8(+), CD45RA(+) og CD45RO(+) subsett av T-lymfocytter (Alam et al., J. Exp. Med. 190:1879,1999). Stimulering av T-lymfocytter med mitogenerog med interleukin-2 er dessuten assosiert med aktivering av kaspase-veien og med spaltning av PARP (Wilheim et al., Eur. J. Immunol. 28:891, 1998). Med hensyn til cytokiner, er kaspase 3-aktivitet nødvendig for frigjøringen av IL-2 av aktiverte T-lymfocytter (Posmantur et al., Exp. Cell Res. 244:302, 1998) og for bearbeidningen og modningen av det pro-inflammatoriske cytokin interleukin-16 (Zhang et al., J. Biol. Chem. 273:1144, 1998). Med hensyn til erytropoiese, er kaspaseaktivering involvert i erytropoieseregulering og har vært vist å modulere GATA-1, et nukleært regulatorisk protein som er avgjørende for modningen av erytroidforløpere (De Maria, et al., Nature 401:489, 1999).
Cytolyse er den fullstendige eller partielle nedbrytning av en celle og den medieres av immunsystemet. Aktiverte makrofager og monocytter produserer bio-aktive molekyler som innbefatter, men ikke er begrenset til, cytokiner. Cytokiner innbefatter, men er ikke begrenset til, interleukin (IL)-1, IL-1 beta, IL-6, IL-10, IL-12 og TNF-alfa. IL-1 beta reduserer benmargcellers følsomhet for cytoreduktive medikamenter, for bestråling og for in vitro tumorcelle-spyling med medikamenter ved autolog benmargtransplantasjon (Dalmau et al., Bone Marrow Transplant. 12:551, 1993). IL-6 induserer B-celledifferensiering, stimulerer IgG-sekresjon (Taga et al., J. Exp. Med. 166:967,1987), induserer cytotoksisk T-celledifferensiering (Lee et al., Vaccine 17:490, 1999), fremmer megakaryocyttmodning (Ishibashi et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 86:8953, 1989) og virker både som en anti-proliferativ faktor (Mori et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 257:609,1999; Alexandroff et al., Biochem. Soc. Trans. 25:270, 1997; Takizawa et al., Cancer Res. 53:18, 1993; Novick et al., Cytokine 4:6, 1992) og som en pro-proliferativ faktor (Okamoto et al., Cancer Res. 57:141, 1997; Okamoto et al., Int. J. Cancer 72:149, 1997; Chiu et al., Clin. Cancer Res. 2:215, 1996; Lu et al., Clin. Cancer Res. 2:1417, 1996) for cancerceller. IL-10 øker effektiviteten av vaksiner i murine tumormodeller (Kauffman et al., J. Immunother. 22:489, 1999) og oppregulerer anti-cancer autoreaktive T-celle-responser (Alleva et al., Immunobiol. 192:155, 1995). IL-12, alene og i kombinasjon med andre cytokiner, fremmer modningen av leukocytter og induserer sekresjonen av interferon-gamma. IL-12 er rapportert å ha anti-canceraktivitet (Stine et al., Annals NY Academy of Science 795:420, 1996; Chen et al., Journal of Immunol. 159:351, 1997) som inkluderer, men ikke begrenset til, aktivering av spesifikke cytolytiske T-lymfocytter, aktivering av naturlige dreper-(NK) celler og induksjon av de anti-angiogene proteinene IP-10 og MiG.
TNF-alfa forårsaker nekrose av solide tumorer (Porter et al., Trends in Biotech. 9:158,1991), sensibiliserer cancerceller for gammastråle-indusert apoptose (Kimura et al., Cancer Res. 59:1606, 1999) og beskytter benmarg-forløperceller fra virkningene av antineoplastiske midler (Dalmau et al., Bone Marrow Transplant. 12:551, 1993).
De fleste kjente anti-cancer terapier har imidlertid enten de er rettet mot induksjon av cellesyklusarrest, inhibering av proliferasjon, induksjon av apoptose eller stimulering av immunsystemet, vist seg å være mindre enn tilstrekkelig for kliniske anvendelser. Mange av disse terapiene er ineffektive eller toksiske, har vesentlige uheldige bivirkninger, resulterer i utvikling av medikamentresistens eller immunsensibilisering og er svekkende for mottageren.
Det er derfor et stadig behov for nye blandinger og fremgangsmåter som induserer cellesyklusarrest i cancerceller, inhiberer proliferasjon av cancerceller, aktiverer kaspaser i cancerceller, induserer apoptose i cancerceller og stimulerer cytokinproduksjon i immunsystemceller.
SAMMENFATNING AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse oppfyller disse behov ved å tilveiebringe en blanding kjennetegnet ved at den omfatter en isolert 3'-OH, 5'-OH syntetisk fosfodiester-nukleotidsekvens som består av SEKV. ID. NR:45 og videre omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer. Blandingen ifølge oppfinnelsen er videre kjennetegnet ved at den ytterligere består av et kjemoterapeutisk middel.
Det kjemoterapeutiske midlet er valgt fra gruppen bestående av en antimetabolitt, et alkyleringsmiddel og en hormon-antagonist.
Foreliggende oppfinnelse vedrører videre anvendelse av en blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3, for fremstilling av et medikament for å indusere
en respons valgt fra gruppen bestående av induksjon av cellesyklusarrest, inhibering av proliferasjon, aktivering av kaspaser og induksjon av apoptose i cancercellene, og produksjon av cytokiner av immunsystemceller, hvor cytokinene er valgt fra gruppen bestående av IL-1-beta, IL-6, IL-10, IL-12 og TNF-alfa.
Foreliggende oppfinnelse vedrører videre anvendelse av sammensetningen ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3 for fremstilling av et medikament for behandling av cancer. Canceren er valgt fra gruppen bestående av et primært carcinom, et sekundært carcinom, et primært sarcom og et sekundært sarcom. Canceren er videre valgt fra gruppen bestående av leukemi, lymfom, bryst, prostata, colorektal, ovarie og bencancer.
Disse og andre formål, trekk og fordeler ved foreliggende oppfinnelse vil bli åpenbare etter gjennomgang av den etterfølgende detaljerte beskrivelse av den beskrevne utførelsesform og de tilhørende patentkrav.
KORT BESKRIVELSE AV FIGURENE
FIG. 1. Fluorescens [Fluo-3-AM] av Jurkat humane T-leukemiceller inkubert med 0,1 ng/mL og 100 ng/mL av 6-base GT SEKV. ID. NR:25. FIG. 2. Kaspase 3 aktivering i Jurkat humane T-celle leukemiceller inkubert uten 0 ng/mL og 100 ng/mL av GT SEKV. ID. NR:66, 67, 81, 82 og 83 målt cytometrisk (A) og kolorimetrisk (B). FIG. 3. Kaspaseaktivering i Jurkat humane T-celle leukemiceller. (A) Kaspase 3-aktivering i celler inkubert med 0 |xg/mL og 100 |xg/mL av 6-base GT SEKV. ID. NR:25; (B) Kaspase 7-aktivering (a) og PARP-innhold (b) i celler inkubert med 0 ng/mL og 100 ng/mL av 6-base GT SEKV. ID. NR:25.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
En blanding som omfatter en sekvens og en farmasøytisk akseptabel bærer kan administreres til et dyr, inklusivt et menneske, som har cancer, i en effektiv mengde til behandling av cancer hos dyret, inklusivt mennesket. Den uventede og overraskende evne sekvensen har til å indusere cellesyklusarrest, inhibere proliferasjon, indusere apoptose og aktivere kaspaser i cancerceller og til å stimulere cytokinproduksjon av immunsystemceller, løser et lenge følt, uoppnådd behov på det medisinske området og fører til et betydelig gode for dyr, inklusivt mennesket.
Vendingene «terapeutisk behandling» og «effektiv mengde » angir en mengde av en sekvens som er effektiv til å indusere cellesyklusarrest, inhibere proliferasjon, aktivere kaspaser og indusere apoptose i cancerceller og stimulere cytokinproduksjon av immunsystemceller.
Vendingene «suspensjon tumormodell» og «solide tumormodeller» angir primære eller sekundære karsinomer eller sarkomer.
I denne sammenheng er uttrykket «kjemoterapeutikum» et hvilket som helst middel som er godkjent av et lands eller en stats regulerende myndighet eller angitt i U.S. Pharmacopoeia eller andre alminnelig anerkjente farmakopeer til behandling av cancer hos et dyr, inklusivt et menneske.
Administrering av en effektiv mengde av en sekvens heri til et dyr, inklusivt et menneske, er en terapeutisk behandling som forhindrer, behandler eller eliminerer en sykdom så som cancer. Den terapeutiske effekt av en sekvens kan økes ved hjelp av metoder som innbefatter, men ikke er er begrenset til, kjemisk modifisering av base-, sukker- eller fosfatskjelettet, kjemisk supplering eller bioteknologisk amplifisering av sekvensene ved å benytte bakterielle plasmider som inneholder de riktige sekvenser, kompleksering av sekvensene til biologiske eller kjemiske bærere eller kobling av sekvensene til vevstype- eller celletype-rettede ligander eller antistoffer.
Blandinger som omfatter én eller flere sekvenser og en farmasøytisk akseptabel bærer, fremstilles ved jevnt og intimt å bringe sammen sekvensen og den farmasøytisk akseptable bærer. Farmasøytisk akseptable bærere innbefatter flytende bærere, faste bærere eller begge deler. Flytende bærere er vandige bærere, ikke-vandige bærere eller begge deler og innbefatter, men er ikke begrenset til, vandige suspensjoner, oljeemulsjoner, vann-i-olje-emulsjoner, vann-i-olje-i-vann-emulsjoner, stedsspesifikke emulsjoner, emulsjoner med lang oppholdstid, klebrige emulsjoner, mikroemulsjoner og nanoemulsjoner. Faste bærere er biologiske bærere, kjemiske bærere eller begge deler og innbefatter, men er ikke begrenset til, virale vektorsystemer, partikler, mikropartikler, nanopartikler, mikrokuler, nanokuler, minipumper, bakterielle celleveggekstrakter og bionedbrytbare eller ikke bionedbryt bare naturlige eller syntetiske polymerer som muliggjør forsinket frigjøring av sekvensene. Metoder benyttet til å kompleksbinde en sekvens til en fast bærer innbefatter, men er ikke begrenset til, direkte adsorpsjon til overflaten av den faste bæreren, kovalent kobling til overflaten av den faste bæreren, enten direkte eller via en sammenkoblende del; og kovalent kobling til polymeren benyttet til å fremstille den faste bæreren. Eventuelt kan en sekvens stabiliseres ved tilsetning av ikke-ioniske eller ioniske polymerer, som f.eks. polyoksyetylensorbitan-monooleater (Tweens) eller hyaluronsyre.
Foretrukne vandige bærere innbefatter, men er ikke begrenset til, vann, saltvann og farmasøytisk akseptable buffere. Foretrukne ikke-vandige bærere innbefatter, men er ikke begrenset til, en mineralolje og en nøytral olje og blandinger derav. Eventuelt kan hjelpestoffer inkluderes uavhengig av den farmasøytisk akseptable bærer benyttet for å presentere sekvensen for de responderende cellene. Disse hjelpestoffene innbefatter, men er ikke begrenset til, antioksydanter, buffere og bakteriostatika, og kan innbefatte suspenderingsmidler og fortykningsmidler.
En eller flere blandinger kan administreres alene eller i kombinasjon med andre terapeutiske modaliteter som innbefatter, men ikke er begrenset til, kjemoterapeutiske midler, immunterapeutiske midler, antimikrobielle midler, antivirale midler, eller i kombinasjon med strålebehandling. Kjemoterapeutiske midler innbefatter, men er ikke begrenset til, anti-metabolitter, DNA-nedbrytende, mikrotubuli destabiliserende, mikrotubuli stabiliserende, aktin-depolymeriserende, vekst-inhiberende, topoisomerase-inhiberende, HMG-CoA-inhiberende, purin-inhiberende, pyrimidin-inhiberende, metalloproteinase-inhiberende, CDK-inhiberende, angiogenese-inhiberende og differensieringsforsterkende midler.
Administrasjonsmåter innbefatter, men er ikke begrenset til, peroral, topisk, subkutan, transdermal, subdermal, intramuskulær, intraperitoneal, intravesikulær, intraartikulær, intraarteriell, intravenøs, intradermal, intrakranial, intralesjonal, intratumoral, intraokulær, intrapulmonal, intraspinal, intraprostatisk administrering, anbringelse i kroppshulrom, nasal inhalasjon, pulmonal inhalasjon, impresjon i hud og elektroporering.
Avhengig av administrasjonsmåte utgjør volumet per dose fortrinnsvis ca. 0,001 til 100 ml_ per dose, mer foretrukket ca. 0,01 til 50 ml_ per dose og mest foretrukket ca. 0,1 til 30 ml_ per dose. Fortrinnsvis utgjør den sekvensmengde som administreres per dose fra ca. 0,001 til 100 mg/kg, mer foretrukket fra ca. 0,01 til 10 mg/kg og mest foretrukket fra ca. 0,1 til 5 mg/kg. Blandingen omfattende sekvensen eller sekvensen pluss et terapeutisk middel, kan administreres ved en enkelt dosebehandling, ved flerdosebehandlinger eller etter en kontinuerlig infusjonsplan og over et tidsrom egnet for sykdommen som behandles, mottagerens tilstand og administrasjonsmåten. Den kan dessuten administreres før, samtidig med eller etter administrering av det terapeutiske middel.
Blandingen i kombinasjon med kjemoterapeutisk middel kan administreres til et dyr som har cancer, i en mengde som effektivt potenserer den antineoplastiske effekt av det kjemoterapeutiske middel. Fortrinnsvis utgjør den mengde terapeutisk middel som administreres per dose, fra ca. 0,001 til 1000 mg/m<2>eller fra ca. 0,01 til 1000 mg/kg, mer foretrukket fra ca. 0,01 til 500 mg/m<2>eller fra ca. 0,01 til 500 mg/kg og mest foretrukket fra ca. 0,1 til 100 mg/m<2>eller fra ca. 0,1 til 100 mg/kg. Blandingen og det eventuelt bestemte terapeutiske middel som administreres, mengden per dose, doseringsplanen og administrasjonsmåten bør bestemmes av brukeren ved å benytte metoder kjent for fagmannen, og vil avhenge av cancertype, alvoret av canceren, lokaliseringen av canceren og andre kliniske faktorer, så som mottagerens størrelse, vekt og fysiske tilstand. Det kan dessuten eventuelt benyttes in vitro tester for å bidra til identifisering av optimale områder for administrering og for administrering av blanding pluss terapeutisk middel.
Uten noe ønske om å være bundet av den følgende hypotese, antas det at blandingene ifølge foreliggende oppfinnelse danner en ny familie av strukturer og at de ikke virker som antisense RNA, antisense DNA, trippelheliks-dannende DNA, telomerase-inhibitorer, transkripsjons-aktivatorer eller transkripsjons-inhibitorer.
De etterfølgende eksempler vil tjene til ytterligere å illustrere foreliggende oppfinnelse.
Eksempel 1
Fremstilling av sekvenser
Fosfodiester- og fosfortioatsekvenser ble fremstillet av HUKABEL Scientific Ltd., (Montréal, Québec, Canada) ved å benytte EXPEDITE™ 8900 automatisert DNA-syntesesystem (PersSeptive Biosystems, Inc., Farmingham, MA) og av Sigma-Genosys (Woodlands, TX) ved å benytte Abacus Segmented Synthesis Technology. Om intet annet er angitt var anvendte sekvenser fosfodiestersekvenser. Om intet annet er angitt ble sekvensene umiddelbart før bruk dispergert i autoklavert deionisert vann eller i en autoklavert farmasøytisk akseptabel buffer, som f.eks., men ikke begrenset til, saltvann.
Eksempel 2
Celler og reagenser
Alle cellelinjer ble anskaffet fra the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) og ble dyrket i det mediet som er anbefalt av ATCC. Tabell 1 viser cellelinjer, deres opprinnelse og deres egenskaper.
Celler ble utsådd i 6 (1 mL/brønn), 24 (0,5 mL/brønn) eller 96 (0,1 mL/brønn) flatbunnede mikroplater og ble holdt ved 37°C i en 5% C02-atmosfære. Om intet annet er angitt, ble 2,5 x 10<5>celler/ml_ inkubert med 0 |ig/ml_ (kontroll) og 100 jig/mL (behandlet) av 2- til 45-basesekvenser inneholdende A, C, G og T i 48 timer.
Eksempel 3
Måling av celleproliferasjon
Celleproliferasjon ble målt ved å benytte dimetyltiazol-difenyl-tetrazolium (MTT) reduksjon (Mosman et al., J. Immunol. Methods 65:55, 1983). MTT ble målt ved en bølgelengde på 570 nm under bruk av en multiplate spektrometerleser (ELX800, Bio-TEK Instruments, Inc., Winooski, VT).
Eksempel 4
Inhibering av Jurkat human leukemi T-celleproliferasjon
Jurkat human leukemi T-celler er en atypisk multi-medikament resistent human suspensjon tumorcellemodell. Jurkatceller ble inkubert med 27-base GT- og CT-sekvenser (Tabell 2).
Som vist i Tabell 2, ble Jurkat T-celleproliferasjon inhibert med de testede GT-sekvensene, men ikke med den testede CT-sekvens.
Jurkat T-celler ble inkubert med 3-, 6-, 9-, 12-, 14-, 15-, 18-, 21- og 24-base GT-sekvenser (Tabell 3).
Som vist i Tabell 3, inhiberte 3-, 6-, 9-, 12-, 14-, 15- og 18-basesekvenser Jurkat T-celleproliferasjon like effektivt som 21- og 24-base GT-sekvenser.
Jurkat T-celler ble inkubert med 6-base GT-, AG-, CG-, GG-, AGT- og CGT-sekvenser (Tabell 4).
Som vist i Tabell 4, inhiberte 6-base GT-sekvenser Jurkat T-celleproliferasjon. GT SEKV. ID. NR:25 inhiberte proliferasjon 60% og AGT SEKV. ID. NR:49 inhiberte proliferasjon 45%. Sammenligning av den relative styrke av GT SEKV. ID. NR:25 og AGT SEKV. ID. NR:49 ved bruk av PHARM/PCS-4 programvare (Microcomputer Specialists, Philadelphia, PA) viste at styrken av GT SEKV. ID. NR:25 var 3,4 ganger den for AGT SEKV. ID. NR:49. AGT SEKV. ID. NR:49-fosfortioat er rapportert å inhibere telomeraseaktivitet og til å indusere apoptose i Burkitts lymfomceller (Mata et al., Toxicol. Appl. Pharmacol. 144:189, 1997).
For å bestemme telomeraseaktivitet, ble ekstrakter fra 2 x 105 Jurkat T-celler analysert ved å benytte den PCR-telomere repetisjons-amplifikasjonsprotokoll
(TRAP) (Roche, Laval, Québec, Canada). Ved konsentrasjoner mellom 1 og 100 ng/mL, oppviste GT SEKV. ID. NR:25-fosfodiester mellom 0 og 10% anti-telomeraseaktivitet, mens AGT SEKV. ID. NR:49-fosfortioat oppviste mellom 30 og 75% anti-telomeraseaktivitet. Verken GT SEKV. ID. NR:25-fosfortioat eller GT SEKV.
ID. NR:49-fosfodiester oppviste noen anti-telomeraseaktivitet.
Jurkat T-celler ble inkubert med 2-, 3-, 4-, 5-, 6- og 7-base GT-sekvenser (Tabell 5).
Som vist i Tabell 5, inhiberte 2-, 3-, 4-, 5-, 6- og 7-base GT-sekvenser Jurkat T-celleproliferasjon.
Eksempel 5
Inhibering av HL-60 human promyelocytisk leukemi celleproliferasjon
HL-60 promyelocytiske leukemiceller er en p53 mutert human suspensjon tumormodell. HL-60-celler ble inkubert med 6-base GT-sekvenser (Tabell 6).
Som vist i Tabell 6, inhiberte 6-base GT-sekvenser HL-60 celleproliferasjon.
Eksempel 6
Inhibering av MCF-7 human brystcancer celleproliferasjon
MCF-7 humane brystcancerceller er en kaspase-3-negativ, østrogenavhengig human modell på solid tumor. MCF-7-celler (5 x 10<5>celler/mL) ble inkubert med 3-og 6-base GT-sekvenser (Tabell 7).
Som vist i Tabell 7, inhiberte 6- og 7-base GT-sekvenser MCF-7 celleproliferasjon.
Eksempel 7
Inhibering av PC-3 human prostatacancer celleproliferasjon
PC-3 prostatacancerceller er en p53 mutert, androgen-uavhengig human solid tumormodell. PC-3-celler (5 x 10<5>celler/mL) ble inkubert med 3- og 6-base GT-sekvenser (Tabell 8).
Som vist i Tabell 8, inhiberte 3- og 6-base GT-sekvenser PC-3 celleproliferasjon.
Eksempel 8
Inhibering av LNCaP human prostatacancer celleproliferasjon
LNCaP prostatacancerceller er en TGF-beta 1 reseptor-negativ, androgen-uavhengig, metastatisk human solid tumormodell. LNCaP-celler (5 x 10<5>celler/mL) ble inkubert med 6-base GT-sekvenser (Tabell 9).
Som vist i Tabell 9, inhiberte 6-base GT-sekvenser LNCaP celleproliferasjon.
Eksempel 9
Inhibering av THP-1 human akutt monocytisk leukemi celleproliferasjon
THP-1 akutt monocytisk leukemiceller er en p53 null human suspensjon tumormodell. THP-1-celler (1,6 x 106 celler/mL) ble inkubert med 6-base GT-sekvenser (Tabell 10).
Som vist i Tabell 10, inhiberte 6-base GT-sekvenser THP-1 celleproliferasjon.
Eksempel 10
Inhibering av OVCAR-3 human ovariecancer celleproliferasjon
OVCAR-3 ovariecancerceller er en p53 mutert, p21/waf-1/Cip deletert, metastatisk human solid tumormodell. OVCAR-3-celler (5 x 105 celler/ml_) ble inkubert med 2-, 6- og 18-base GT-sekvenser og med en 6-base AGT-sekvens (Tabell 11).
Som vist i Tabell 11, inhiberte 2-, 6- og 18-base GT-sekvenser og en 6-base AGT-sekvens OVCAR-3 celleproliferasjon.
Eksempel 11
Inhibering av SK-OV-3 human ovariecancer celleproliferasjon
SK-OV-3 ovariecancerceller er en p53 mutert, p21/waf-1/Cip deletert, p15<ink4B>deletert, p16'<nk4>deletert, metastatisk human solid tumormodell. SK-OV-3-celler (5 x 10<5>celler/ml_) ble inkubert med 2-, 6- og 18-base GT-sekvenser (Tabell 12).
Som vist i Tabell 12, inhiberte 2-, 6- og 18-base GT-sekvenser SK-OV-3 celleproliferasjon.
Eksempel 12
Inhibering av celleproliferasjon med fosfodiester- og fosfortioatsekvenser
Modifikasjon av naturlige fosfodiestersekvenser ved å benytte et svovelatom i stedet for et ikke-brodannende oksygenatom på én eller flere av fosfatgruppene har vært rapportert å øke stabiliteten av oligonukleotidsekvenser til endonukleaser i biologiske væsker og celler (Crooke et al. Anticancer Drugs 6:609, 1991).
Jurkat humane leukemi T-celler (Tabell 13), LNCaP humane prostatacancerceller (5 x 10<5>celler/mL) (Tabell 14) og MCF-7 humane brystcancerceller (5 x 10<5>celler/mL) (Tabell 15) ble inkubert med 6-base GT-sekvenser som enten hadde oksygen (fosfodiester) eller svovel (fosfortioat) som et ikke-brodannende atom på fosfatgruppen.
Som vist i Tabell 13, 14 og 15, inhiberte 6-base GT-fosfodiestersekvenser Jurkat T, LNCaP og MCF-7 celleproliferasjon mer effektivt enn 6-base GT-fosfortioatsekvenser.
Eksempel 13
Inhibering av celleproliferasjon med blandede fosfodiester- og fosfortioatsekvenser
Jurkat human leukemi T-celler (Tabell 16) og MCF-7 humane brystcancerceller (5 x 105 celler/mL) (Tabell 17) ble inkubert med 6-base GT SEKV. ID. NR:25, hvor enten oksygen (fosfodiester) eller svovel (fosfortioat) var det ikke-brodannende atom på fosfatgruppen.
Som vist i Tabell 16 og 17 resulterte anvendelse av et svovelatom i stedet for et ikke-brodannende oksygenatom på én eller flere fosfatgrupper av 6-base GT SEKV. ID. NR:25, i en signifikant minsket inhibering av Jurkat T og MCF-7 celleproliferasjon.
Eksempel 14
Inhibering av murin cancercelleproliferasjon
EL-4 murine lymfom T-celler er en suspensjon tumormodell. EL-4 murine lymfom T-celler ble inkubert med 6-, 18-, 27- og 33-base GT-sekvenser og med en 15-base ACG-sekvens (Tabell 18).
Som vist i Tabell 18, inhiberte ikke 6-, 18-, 27- og 33-base GT-sekvenser og en 15-base ACG-sekvens EL-4 murin celleproliferasjon.
A20 murin leukemi B-celler er en suspensjon tumormodell. A20 murine leukemi B-celler ble inkubert med 6-base GT-sekvenser (Tabell 19).
Som vist i Tabell 19, inhiberte 6-base GT-sekvenser proliferasjon av A20 murine B-leukemiceller.
Eksempel 15
Inhibering av hunde-cancercelleproliferasjon
D-17 hunde-osteosarkomceller og CF-51 hunde-brystkjertel-cancerceller er modeller på solide tumorer. D-17 hunde-osteosarkomceller (5 x 10<5>celler/ml_)
(Tabell 20) og CF-51 hunde-brystkjertel-cancerceller (5 x 10<5>celler/mL (Tabell 21) ble inkubert med 6-, 9-, 17-, 27- og 33-base GT-sekvenser og med en 15-base ACG-sekvens.
Som vist i Tabell 20 og 21, inhiberte 6-, 9-, 17-, 27- og 33-base GT-sekvenser og en 15-base ACG-sekvens både D-17 og CF-51 hunde-celleproliferasjon.
Eksempel 16
Inhibering av cancercelleproliferasjon
Inhibering av human-, murin- og hunde-cancer celleproliferasjon med 6-base GT SEKV. ID. NR:25 er sammenfattet i Tabell 22.
Som vist i Tabell 22, er humane cancerceller mer følsomme enn hunde-cancerceller og murine cancerceller overfor inhibering av proliferasjon med 6-base GT SEKV. ID. NR:25.
Eksempel 17
Synergistisk effekt av to 6-base GT-sekvenser på inhibering av proliferasjon
Jurkat human leukemi T-celler ble inkubert med sub-optimale konsentrasjoner (5,0 |xg/mL) av 6-base GT-sekvenser (Tabell 23).
Som vist i Tabell 23, hadde samtidig anvendelse av to 6-base GT-sekvenser en synergistisk effekt på inhibering av Jurkat T-celleproliferasjon.
Eksempel 18
Potensering av antineoplastisk effekt av kjemoterapeutiske midler
Jurkat human leukemi T-celler ble inkubert med 1,0 ng/mL 6-base GT SEKV.
ID. NR:25 og av 27-base GT SEKV. ID. NR:1 i nærvær av 0, 0,1, 1,0 eller
10,0 ng/ml_ 5-fluoruracil eller Cisplatin (Tabell 24). 5-fluoruracil er en anti-metabolitt som interfererer med DNA- og RNA-syntese. Cisplatin er et alkyleringsmiddel som krysskobler DNA og inhiberer DNA-forløpere.
Som vist i Tabell 24, potenserte 6-base GT SEKV. ID. NR:25 og 27-base GT SEKV. ID. NR:1 den antineoplastiske effekt av 0,1 og 1,0 jig/mL 5-fluoruracil på Jurkat T-celleproliferasjon og GT SEKV. ID. NR:25 potenserte den antineoplastiske effekt av 0,1 og 1,0 ng/ml_ Cisplatin på Jurkat T-celleproliferasjon.
MCF-7 humane brystcancerceller (5 x 10<5>celler/ml_) ble inkubert med
1,0 ng/mL av 6-base GT SEKV. ID. NR:25 og av 27-base GT SEKV. ID. NR:1 i nærvær av 0, 0,1,1,0 eller 10,0 ng/ml_ 5-fluoruracil eller tamoxifen (Tabell 25). Tamoxifen er en østrogen-antagonist.
Som vist i Tabell 25, potenserte 6-base SEKV. ID. NR:25 den antineoplastiske effekt av 0,1 ng/mL 5-fluoruracil og av 0,1 ng/mL tamoxifen på MCF-7 celleproliferasjon. 27-base SEKV. ID. NR:1 potenserte ikke den antineoplastiske aktivitet av 5-fluoruracil eller av tamoxifen på MCF-7 celleproliferasjon.
Eksempel 19
Inhibering av proliferasjon med repetisjoner av 6-base GT SEKV. ID. NR:25
Jurkat human leukemi T-celler ble inkubert med 1, 2, 3 og 4 repetisjoner av 6-base GG(GT)1GG (SEKV. ID. NR:25) (Tabell 26).
Som vist i Tabell 26, var inhibering av Jurkat T-celleproliferasjon 60% med 6-base GT SEKV. ID. NR:25 og avtok med 12-base GT SEKV. ID. NR:68, 18-base GT SEKV. ID. NR:69 og 24-base GT SEKV. ID. NR:70. Smeltetemperaturen (Tm) av 6- base GT SEKV. ID. NR:25 var 2,5°C og økte til 56,8°C med GT SEKV. ID. NR:68, til 76,3°C med GT SEKV. ID. NR:69 og til 86,3°C med GT SEKV. ID. NR:70.
Eksempel 20
Inhibering av proliferasjon av Bacillus Calmette- Guerin (BCG) avledede sekvenser BCG-avledede sekvenser er rapportert å inhibere tumorvekst in vivo (Kataoka et al., Jpn. J. Cancer Res. 83:244, 1992). Dessuten er A-2 (SEKV. ID. NR:72) og BCG A-4 (SEKV. ID. NR:74) når de ble forblandet med IMC-celler og injisert i CDF-1 mus, rapportert å inhibere IMC-tumorvekst med henholdsvis 88% og 37%.
Jurkat human leukemi T-celler ble inkubert med 45-basesekvenser avledet fra BCG (Tabell 27).
Som vist i Tabell 27, inhiberte BCG-avledede sekvenser Jurkat T celleproliferasjon £24%.
Eksempel 21
Induksjon av cellesyklusarrest
Cellesyklustilstand ble bestemt ved å benytte et kommersielt sett CYCLETEST™ PLUS DNA kit (Becton Dickinson). I korte trekk ble cellekjerner opp-nådd ved å løse cellemembranen i et ikke-ionisk overflateaktivt middel, eliminere cellens cytoskjelett og nukleære proteiner med trypsin, oppslutte den cellulære RNA med RNase og stabilisere det nukleære kromatin med spermin. Propidiumjodid ble tilsatt til cellekjernene, og deres fluorescens ble analysert i et strømningscytometer forsynt med mulighet for elektronisk dublettdiskriminering (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, CA). Akkumulering av celler i G0/G1, tidlig S (SE), midt S (SM), sen S (SL) eller G2/M-fasene av cellesyklusen ble analysert ved å benytte MODFIT LT programvare (Verity Software House, Inc, Topsham, MA).
Eksponensielt voksende Jurkat human leukemi T-celler (Tabell 28) og MCF-7 humane brystcancerceller (5 x 10<5>celler/mL) (Tabell 29) ble inkubert i 24 timer med 2-, 6-, 15-, 18-, 27- og 45-basesekvenser inneholdende A, C, G og T. Cellene ble oppsamlet og sentrifugert og cellesyklustilstanden bestemt.
Som vist i Tabell 28, induserte 2-, 6- og 27-base GT-sekvenser stans i Jurkat T-celler i cellesyklusens SE-fase, 6-base CG og AGT, 18-base GT og 45-base
BCG A-1 sekvenser induserte stans i cellesyklusens SM-fase, og en 6-base AG-sekvens induserte stans i cellesyklusens Go/Gi-fase.
I MCF-7-celler induserte som vist i Tabell 29, 2- og 6-base GT-sekvenser stans i cellesyklusens SE-fase, en 6-base AGT-sekvens og en 18-base GT-sekvens induserte stans i cellesyklusens SM-fase.
Eksempel 22
Induksjon av cellesyklusarrest med GT SEKV. ID. NR:25, AC SEKV. ID. NR:79 og GT SEKV. ID. NR:25 + AC SEKV. ID. NR:79
Jurkat humancelle leukemi T-celler (1 x 10<6>celler/mL) ble inkubert i 24 timer med 6-base GT SEKV. ID. NR:25, komplementær 6-base AC SEKV. ID. NR:79 og 6-base GT SEKV. ID. NR:25 + 6-base AC SEKV. ID. NR:79. GT SEKV. ID. NR:25 og AC SEKV. ID. NR:79 ble hybridisert ved blanding av oligonukleotidene (1:1) og oppvarming i 10 minutter til 65X. Som kontroller ble GT SEKV. ID. NR:25 og AC SEKV. ID. NR:79 oppvarmet i 10 minutter til 65°C (Tabell 30).
Som vist i Tabell 30, induserte 6-base GT SEKV. ID. NR:25 stans ved slutten av cellesyklusens SE-fase, mens den komplementære 6-base AC SEKV. ID. NR:79 ikke hadde noen effekt på cellesyklusen. Hybridisering av GT SEKV. ID. NR:25 og AC SEKV. ID. NR:79 nøytraliserte GT SEKV. ID. NR:25-induksjon av cellesyklusarrest. Disse dataene demonstrerer at sekvensene ifølge foreliggende oppfinnelse må være enkeltkjedet for å være effektive.
Eksempel 23
Induksjon av apoptose
Omfordeling av plasmamembran-fosfatidylserin og frigjøring av nukleært matriksprotein (NuMA) er karakteristisk for celler som gjennomgår apoptose (Martin et al., J. Exp. Med., 182:1545, 1995; Miller et al., Biotechniques, 15:1042, 1993).
Omfordelingen av fosfatidylserin i plasmamembranen under apoptose ble målt ved strømningscytometri under bruk av FITC-konjugert annexin V (BD Pharmingen, San Diego, CA). NuMA-frigjøring i supernatanten ble bestemt ved å benytte et kommersielt ELISA-sett (Oncogen/Calbiochem, Cambridge, MA).
Jurkat human leukemi T-celler ble inkubert med 50 \ iM av 3-, 4-, 5-, 6- og 7-GT basesekvenser, en 5-base ACGT-sekvens, 6-base AG-, GG-, AGT- og CGT-sekvenser og en 7-base GG-sekvens. Tabell 31 viser % celler i apoptose (positive for fosfatidylserin/annexin V farving (PS/A-V)) og % NuMA-frigjort fra cellene.
Som vist i Tabell 31, induserte 3-, 4-, 5- og 6-base GT-, AG-, CG- og AGT-sekvenser apoptose av Jurkat T-celler. 5-base ACGT- og 6-base CGT- og GG-sekvenser induserte ikke apoptose av Jurkat T-celler.
Eksempel 24
Økning av intracellulært kalsium (Ca<2+>)i
Økninger i intracellulært kalsium (Ca<2+>)ier rapportert assosiert med apoptose-induksjon (Lam et al., Mol. Endocrinol. 7:686, 1993). (Ca<2+>)ible fulgt ved å benytte fluorescens-proben Fluo-3-AM (Cell Permaant, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR). En økning i Fluo-3-AM fluorescens tyder på en økning i (Ca<2+>)i.
Jurkat human leukemi T-celler ble inkubert i 24 timer med 6-base GT SEKV. ID. NR:25. Celler ble oppsamlet ved sentrifugering, suspendert i PBS inneholdende 1% FBS og ladet med 10 \ iM Fluo-3-AM i 1 time ved 37<0>C. Cellefluorescens ble målt ved 488 nm eksitasjon og 530 nm emisjon (FL1 detektor). Data ble analysert på en FACSCALIBUR ved å benytte programmet CellQUEST (Becton Dickinson).
Som vist i Figur 1, forårsaket inkubering av Jurkat T-celler med 6-base GT SEKV. ID. NR:25 en 88% økning i cellefluorescens, hvilket tyder på en økning i (Ca<2+>)i.
Eksempel 25
Induksjon av apoptose
Apoptose kan initieres av ligander som binder til celleoverflatereseptorer, inklusivt, men ikke begrenset til, Fas (CD95) og tumornekrosefaktor (TNF). Fas-binding til Fas-ligand og TNF-binding til TNF-reseptor 1 initierer intracellulær signalisering som resulterer i aktiveringen av cystein-aspartyl-proteaser (kaspaser). Kaspaser initierer den letale proteolytiske kaskade av apoptose-eksekvering assosiert med nukleær DNA-fragmentering, frigjøring av nukleære matriksproteiner (NuMA) og tap av cellesubstratkontakt.
Jurkat human leukemi T-celler (1 x 10<6>/ml_) ble inkubert med 6- og 27-GT basesekvenser (Tabell 32). NuMA ble bestemt som i Eksempel 23.
Som vist i Tabell 32, var % NuMA -frigjøring med 6-base GT SEKV. ID. NR:25 større enn % NuMA-frigjøring med 27-base GT SEKV. ID. NR:1, 2, 3 og 4.
Eksempel 26
Induksjon av apoptose med 6-base GT SEKV. ID. NR:25 og 6-base AC SEKV. ID.
NR:79
Jurkat humancelle leukemi T-celler ble inkubert i 24 timer med 6-base GT SEKV. ID. NR:25, komplementær 6-base AC SEKV. ID. NR:79 og 6-base GT SEKV. ID. NR:25 + 6-base AC SEKV. ID. NR:79. GT SEKV. ID. NR:25 og AC SEKV. ID. NR:79 ble hybridisert ved blanding av sekvensene (1:1) og oppvarming i 10 minutter ved 65°C. Som kontroller ble GT SEKV. ID. NR:25 og AC SEKV. ID. NR:79 oppvarmet i 10 minutter til 65°C (Tabell 33). Apoptose ble evaluert som i Eksempel 23.
Som vist i Tabell 33, induserte 6-base GT SEKV. ID. NR:25 apoptose av Jurkat T-celler, mens den komplementære AC SEKV. ID. NR:79 ikke hadde noen effekt på apoptose. Hybridisering av GT SEKV. ID. NR:25 og AC SEKV. ID. NR:79 nøytraliserte dessuten GT SEKV. ID. NR:25's induksjon av apoptose. Disse dataene viser at sekvensen ifølge foreliggende oppfinnelse må være enkeltkjedet for å være effektiv.
Eksempel 27
Inhibering av proliferasjon, cellesyklusarrest og induksjon av apoptose med GT-rike og AC-rike sekvenser avledet fra Mycobacterium phlei
Jurkat human leukemi T-celler ble inkubert med GT-rike eller AC-rike sekvenser avledet fra murA-genet av Mycobacterium phlei (GenBank: tilgangs-nummer X99776). Inhibering av proliferasjon ble målt ved reduksjonen av MTT som i Eksempel 3, cellesyklusarrest ble påvist ved strømningscytometri ved å benytte propidiumjodid som i Eksempel 21, og apoptose ble evaluert ved strømnings-cytometri ved bruk av annexin-V-FITC som i Eksempel 23.
Som vist i Tabell 34, inhiberte SEKV. ID. NR:81, 82 og 83 som var rike på GT, proliferasjon av, induserte cellesyklusarrest i, og induserte apoptose av Jurkat T-celler, mens SEKV. ID. NR:15, rik på AC, ikke inhiberte proliferasjon av, induserte ikke cellesyklusarrest i, eller induserte ikke apoptose i Jurkat T-celler.
Eksempel 28
Modulering av kaspase-aktivering med GT-sekvenser
Kaspaser gjenkjenner tre hovedpeptid-substratsekvenser: 1) Tyr-Val-Ala-Asp (YVAD, kaspase-1, -4 og -5) (SEKV. ID. NR:84); 2) Asp-Glu-Val-Asp (DEVD, kaspase-2, -3 og -7) (SEKV. ID. NR:85); og 3) lle-(Leu)-Glu-X-Asp (l(L)EXD; kaspase-8 og -10) (SEKV. ID. NR:86) (Thornberry et al., J. Biol. Chem. 272:17907, 1997). Sekvens-gjenkjenning i et proteinmål resulterer i en begrenset og spesifikk proteolyse av målet som, i et første eksempel, moduleringen av kaspase 7 aktivering med kaspase 3 eller, som i et annet eksempel, nedbrytningen av strukturelle proteinmål inklusivt, men ikke begrenset til, laminer, eller som i et tredje eksempel, aktiveringen av enzymer inklusivt, men ikke begrenset til, PARP.
NH2-XXXD-COO-GT-sekvens-konstruksjoner utvikles ved kjemisk konjugasjon av en kjemisk beskyttet GT-sekvens eller av en kjemisk beskyttet AC-sekvens til et kjemisk beskyttet peptid valgt fra gruppen bestående av NH2-YVAD-COOH (SEKV. ID. NR:84), NH2-DEVD-COOH (SEKV. ID. NR:85) og NH2-IEGD-COOH (SEKV. ID. NR:87) ved å benytte et oligonukleotid syntetisert med en 5'-C2-amid-avstandsarm og standard amid-karboksyl vannløselige karboheksimid-konjugasjonsteknikker (Guy et al., J. Chromatography, B. Biomed. Sei. Appl. 706:149, 1998). Reaktive karboksylat- og reaktive amingrupper avbeskyttes etter konjugasjon.
Peptid-GT (heretter PGT) sekvenskonstruksjoner inklusivt, men ikke begrenset til, NH2-YVAD-COO-GT; NH2-DEVD-COO-GT og NH2-l(L)EXD-COO-GT, spaltes ved karboksylatfunksjonen mellom D- og GT-sekvensen av enzymer som innbefatter, men ikke er begrenset til, kaspaser, cancermetastase-assosierte enzymer, kollagenaser og metalloproteinaser. Slik spaltning resulterer i frigjøringen av den kaspase-aktiverende GT-sekvens fra PGT. Den resulterende økning i intracellulær kaspase-aktivitet kan for eksempel forsterke den terapeutiske effekt av kjemoterapeutiske midler i multi-medikamentresistente cancerceller eller immun-responsen på svakt antigene stimuli.
For å bestemme kaspase-aktivering blir kontroll og behandlede celler vasket, fiksert, permeabilisert og inkubert med et FITC-konjugert antistoff som gjenkjenner den aktive form av kaspasen (Pharmingen, San Diego, CA) ved å benytte de betingelser som er anbefalt av produsenten. Fluorescens assosiert med aktiv kaspase 3 analyseres ved strømningscytometri på en FACSCALIBUR ved å benytte programmet CellQUEST (Becton Dickinson). Alternativt bestemmes kaspase-aktiveringen kolorimetrisk ved å benytte en test basert på spaltningen av et kaspase-spesifikt peptid konjugert til farverapportør-molekylet p-nitroanilid, som kan kvantifiseres spektrofotometrisk ved en bølgelengde på 405 nm.
Eksempel 29
Aktivering av kaspase 3 med GT SEKV. ID. NR:66, 81, 82 og 83 og med AGC-sekvens SEKV. ID. NR:67
Jurkat T-celle leukemiceller ble inkubert i 72 timer med 33-base GT SEKV. ID. NR:66; 11-base GT SEKV. ID. NR:81 (baser 1-11 av GT SEKV. ID. NR:66), 11-base GT SEKV. ID. NR:82 (baser 12-22 av GT SEKV. ID. NR:66), 11-base GT SEKV. ID. NR:83 (baser 23-33 av GT SEKV. ID. NR:66) og 15-base ACG SEKV. ID. NR:67. Aktiv kaspase 3 (17-22 kDa) ble bestemt ved å benytte FITC konjugert antistoff (klon:C92-605) som i Eksempel 28.
Som vist i Figur 2A, induserte 33-base GT SEKV. ID. NR:66 og 11-base GT SEKV. ID. NR:81, 82 og 83, prosessering av inaktiv pro-kaspase 3 til aktiv kaspase 3, mens 15-base ACG SEKV. ID. NR:67 ikke induserte prosessering av inaktiv pro-kaspase 3 til aktiv kaspase 3.
Kaspase 3 aktivering ble også bestemt kolorimetrisk som i Eksempel 28. Som vist i Figur 2B var kaspase 3 aktivitet i 33-base GT SEKV. ID. NR:66 og 11-base GT SEKV. ID. NR:81, 82 og 83 behandlede celler 105%, 77%, 100% og 60% høyere enn den i kontrollceller, mens i 15-base ACG SEKV. ID. NR:67 behandlede celler var kaspase 3 aktiveringen omtrent den samme som i kontrollceller.
Eksempel 30
Aktivering av kaspase 3 aktivitet med 6-base GT SEKV. ID. NR:25
Jurkat T-celle leukemiceller ble inkubert i 72 timer med 6-base GT SEKV. ID. NR:25. Kaspase 3 aktivering ble bestemt kolorimetrisk som i Eksempel 28. Som vist i
Figur 3A var kaspase 3 aktiveringen i 6-base GT SEKV. ID. NR:25 behandlede celler 323% større enn i kontrollceller.
Eksempel 31
Aktivering av kaspase-7 og PARP-spaltning med GT SEKV. ID. NR:25
Jurkat T-celle leukemiceller ble inkubert i 72 timer med 6-base GT SEKV. ID. NR:25. Cellene ble vasket 3X med PBS, lysert med 10 mM HEPES, pH 7,5, inneholdende 5 mM MgCb, 1 mM ditiotreitol, 1,5 nM aprotinin, 10 mM leupeptin og 2,5 nm Na-ortovanadat, og proteininnholdet av lysatet ble bestemt (Bradford, J. Anal. Biochem. 72:248, 1976).
Aktivert kaspase 7 og PARP-spaltning ble påvist ved western blotting. Lysatet ble blandet med Laemmli-buffer (Laemmli, U. Nature 15:680, 1970), ristet og oppvarmet til 100°C i 4 minutter. 50 jxg protein ble tilsatt til hver bane, og proteiner ble separert ved elektroforese i en 10% (kaspase) eller en 17% (PARP) natrium-dodekylsulfat-polyakrylamidgel (SDS-PAGE) ved en konstant spenning på 100V i ca. 1,5 timer. De separerte proteiner ble elektroblottet over på en PVDF-membran. Lik protein-lading ble overvåket ved Ponceau-rødt farving av membranen.
Membranen ble blokkert over natten ved 4°C med en buffer inneholdende 1% Tris-buffret saltvann (2 mM Tris-HCI, 13,7 mM NaCI, pH 7,6, og 0,1% polyetylen-sorbitan-monolaurat (TWEEN 20) (TBST) + 5% fettfri tørrmelk. Membranen ble vasket og inkubert i 1 time ved RT med et monoklonalt muse IgG anti-kaspase 7 antistoff (Pharmingen) (fortynnet 1:1000 i TBST + 1% BSA) eller med et monoklonalt muse IgG anti-PARP antistoff (fortynnet 1:1000 i TBST + 1% BSA) (Pharmingen). IgG bundet til kaspase 7 eller til PARP ble påvist med sau anti-mus IgG konjugert til pepperrotperoksydase (fortynnet 1:1000 i TBST + 5% fettfri tørrmelk) (Pharmingen). Blott ble fremkalt ved å benytte et forbedret kjemiluminescens påvisningssystem (ECL, Amersham, Corp., Amersham, UK).
Som vist i Figur 3B, indusert 6-base GT SEKV. ID. NR:25 prosessering av inaktiv pro-kaspase 7 (30 kDa) til aktiv kaspase 7 (19-20 kDa) og aktivt PARP til dets inaktive 85 kDa nedbrytningsprodukt.
Eksempel 32
Positiv feedback amplifikasjon av kaspase-aktivering
Jurkat human leukemi T-celler inkuberes i 72 timer med
Kaspase 3- og kaspase 7-aktivering bestemmes.
NH2-YVAD-CO-GT, NH2-DEVD-CO-GT og NH2-IEGD-COO-GT induserte hver prosessering av inaktiv kaspase 3 til aktiv kaspase 3 og av inaktiv kaspase 7 til aktiv kaspase 7, mens NH2-YVAD-CO-ACG, NH2-DVED-CO-ACG og NH2-IEGD-CO-ACG ikke induserte prosessering av inaktiv pro-kaspase 3 til aktiv kaspase 3 eller av inaktiv kaspase 7 til aktiv kaspase 7.
Uten noe ønske om å bindes av den følgende hypotese, antas det at basal kaspase-aktivitet i kaspase-holdige celler, medierer frigjøringen av kaspase-aktiverende GT-sekvenser fra NH2-XXXD-COO-GT-konstruksjoner ved proteolyse/hydrolyse. Dette resulterer i positiv amplifikasjon av kaspase-aktivitet (økte nivåer av kaspase 3 og kaspase 7) i cellene, av de frigjorte kaspase-aktiverende GT-sekvensene.
Eksempel 33
Induksjon av cytokinproduksjon
Om intet annet er angitt, ble 1 x 10<6>celler inkubert med 100 ng/mL av hver av sekvensene testet i 48 timer ved 37°C i 5% CO2. Produksjon av cytokin IL-6, IL-10, IL-12, IL-1 beta og TNF-alfa ble bestemt i pg/mL i 100 jiL kultursuspernatant ved å benytte den relevante kommersielle ELISA (BioSource, Camarillo, CA). IL-12 ELISA måler både IL-12 p70 kompleks og fri p40-subenhet. Resultater uttrykkes som «ganger» (x) økning i cytokinproduksjon i behandlede celler sammenlignet med kontrollceller.
THP-1 humane akutt monocytisk leukemiceller ble inkubert med 2-, 3-, 6-, 9-, 12-, 14-, 15- og 18-base GT-sekvenser, og produksjon av cytokinet IL-6 ble bestemt.
(Tabell 35).
Som vist i Tabell 35, økte 2-, 3-, 6-, 9-, 12-, 14-, 15- og 18-base GT-sekvenser THP-1 celleproduksjon av cytokinet IL-6.
THP-1 humane akutt monocytisk leukemiceller ble inkubert med 6-base GT-, AG-, CG-, GG-, AGT- og CGT-sekvenser, og produksjon av cytokinene IL-12 og IL-6 ble bestemt (Tabell 36).
Som vist i Tabell 36, økte 6-base GT-, AG-, CG-, GG-, AGT- og CGT-sekvenser THP-1 celleproduksjon av cytokinene IL-12 og IL-6.
Tabell 37 sammenfatter induksjonen av IL-12 og IL-6 syntese med 6-basesekvenser.
BCG-avledede sekvenser A-3 (SEKV. ID. NR:73), A-4 (SEKV. ID. NR:74), A-6 (SEKV. ID. NR:75), A-7 (SEKV. ID. NR:76), M3 (SEKV. ID. NR:77) og alfa 1 (SEKV.
ID. NR:78) er rapportert å aktivere NK-celler in vivo (Kataoka et al., Jpn. J. Cancer Res. 83:244, 1992). THP-1 humane akutt monocytisk leukemiceller ble inkubert med 45-base BCG-avledede sekvenser, og produksjon av cytokinene IL-12 og IL-6 ble bestemt (Tabell 38).
Som vist i Tabell 38, økte 45-base BCG-avledede sekvenser THP-1 celleproduksjon av IL-12 og IL-6 minimalt.
Eksempel 34
Induksjon av IL-12 produksjon med fosfodiester- og fosfortioatsekvenser
THP-1 humane akutt monocytisk leukemiceller ble inkubert med 6-base GT-sekvenser som enten hadde et oksygen (fosfodiester) eller et svovel (fosfortioat) som det ikke-brodannende atom på fosfatgruppene, og produksjon av cytokinet IL-12 ble bestemt (Tabell 39).
Som vist i Tabell 39, resulterte anvendelse av et svovelatom (fosfortioat) i stedet for et ikke-brodannende oksygenatom (fosfodiester) på fosfatgruppene i en signifikant nedgang i THP-1 celleproduksjon av IL-12.
THP-1 humane akutt monocytisk leukemiceller ble inkubert med 6-base GT SEKV. ID. NR:25 som enten hadde et oksygen (fosfodiester) eller et svovel (fosfortioat) som det ikke-brodannende atom på fosfatgruppene, og produksjon av cytokinet IL-12 ble bestemt (Tabell 40).
Som vist i Tabell 40, resulterte anvendelse av et svovelatom (fosfortioat) i stedet for et ikke-brodannende oksygenatom (fosfodiester) i 6-base GT SEKV. ID. NR:25 i en signifikant nedgang i THP-1 celleproduksjon av IL-12.
Eksempel 35
Stimulering av cytokinsyntese i humane perifere mononukleære blodceller
Perifere mononukleære blodceller (heretter «PBMC») ble isolert fra 7 friske personer ved Ficoll-Hypaque (Amersham Pharmacia Biotech. Baie d'Urfée, Québec, Canada) ved tetthets gradientsentrifugering av helblod. PBMC ble inkubert med 6-base GT-, AGT-, CGT-, AG-, CG- og GG-sekvenser, og produksjon av cytokinene IL-1beta, IL-6, IL-10 og IL-12 ble bestemt.
Som vist i Tabell 41, økte 6-base GT-, AGT-, CTG-, AG-, CG- og GG-sekvenser human PBMC celleproduksjon av cytokinene IL-1 beta, IL-6, IL-10 og IL-12.
Eksempel 36
Cytokinsyntese med sjimpanse perifere mononukleære blodceller
PBMC ble isolert fra 4 friske sjimpanser som i Eksempel 35. Sjimpanse PBMC ble inkubert med 6-base GT-, AGT-, CGT-, AG-, CG- og GG-sekvenser, og produksjon av cytokinene IL-10, IL-12 og TNF-alfa ble bestemt (Tabell 41).
Som vist i Tabell 41, økte 6-base GT-, AGT-, CGT-, AG-, CG- og GG-sekvenser sjimpanse PBMC celleproduksjon av cytokinene IL-10 og IL-12 og TNF-alfa.
Eksempel 37
Cytokinsyntese med rhesusape perifere mononukleære blodceller
PBMC ble isolert fra 4 friske rhesusaper som i Eksempel 35. PBMC ble inkubert med 6-base, GT-, AGT-, CGT-, AG-, CG- og GG-sekvenser, og produksjon av cytokinene IL-6, IL-12 og TNF-alfa ble bestemt (Tabell 42).
Som vist i Tabell 42, økte 6-base GT-, AGT-, CGT-, AG-, CG- og GG-sekvenser rhesusape PBMC celleproduksjon av cytokinene IL-10, IL-12 og TNF-alfa.
Eksempel 38
Effekt av 6-base GT SEKV. ID. NR:25 av 6-base GT SEKV. ID. NR:25 + 5-fluoruracil og av 6-base GT SEKV. ID. NR:25 + tamoxifen på MCF-7 humane brysttumorer
MCF-7 humane brystcancerceller implanteres subkutant som xenografter i nakne BALB/c hunnmus. Musene deles i 6 grupper på 10 mus. På dag 0 får gruppe 1 mus saltvann, gruppe 2 mus får 6-base GT SEKV. ID. NR:25, gruppe 3 mus får 5-fluoruracil, gruppe 4 mus får tamoxifen, gruppe 5 mus får 6-base GT SEKV. ID. NR:25 + 5-fluoruracil og gruppe 6 mus får 6-base GT SEKV. ID.
NR:25 + tamoxifen. Etter 4 ukers behandling avlives musene og tumormassen bestemmes. Gruppe 1 mus har den største tumormasse, gruppe 2, 3 og 4 mus har mindre tumormasse enn gruppe 1 mus og gruppe 5 og 6 mus har mindre tumormasse enn gruppe 1, 2, 3 og 4 mus.
Eksempel 39
Effekt av 3- og 6-base GT-sekvenser og 45-base BCG A-3-sekvens på LNCaP humane prostatacancertumorer
LNCaP humane prostatacancerceller implanteres subkutant, som xenografter, i nakne nu/nu hannmus. Musene fordeles i 5 grupper på 10 mus. På dag 0 får gruppe 1 mus saltvann, gruppe 2 mus får 3-base SEKV. ID. NR:8, gruppe 3 mus får 6-base GT SEKV. ID. NR:25, gruppe 4 mus får 6-base AG SEKV. ID. NR:45 og gruppe 5 mus får 45-base BCG A-3 SEKV. ID. NR:69. Etter 4 ukers behandling avlives musene og tumormassen bestemmes. Gruppe 1 mus har den største tumormasse, gruppe 5 mus har mindre tumormasse enn gruppe 1 mus og gruppe 2, 3 og 4 mus har mindre tumormasse enn gruppe 1 og 5 mus.
Eksempel 41
Effekt av 3-, 6-, 8- og 27-basesekvenser på EL-4 murine T-lymfomer
EL-4 murine T-lymfomceller implanteres i C57/BL6 mus. Musene fordeles på 6 grupper å 10 mus. På dag 0 får gruppe 1 mus saltvann, gruppe 2 mus får 3-base GT SEKV. ID. NR:8, gruppe 3 mus får 6-base SEKV. ID. NR:25, gruppe 4 mus får 6-base AG SEKV. ID. NR:45, gruppe 5 mus får 18-base GT SEKV. ID. NR:18 og gruppe 6 mus får 27-base GT SEKV. ID. NR:1. Etter 4 ukers behandling avlives musene og tumormassen bestemmes. Gruppe 1 mus har den største tumormasse, gruppe 2, 3, 4, 5 og 6 mus har mindre tumormasse enn gruppe 1 mus.
Eksempel 42
Humane koloncancercellelinjer opprettholdes som adherente cellekulturer.
Celler i den eksponensielle vekstfase behandles med 2-20-base GT-, GA-, GC- eller GG-sekvenser i doseringsområdet 0 jig/mL til 100 ng/mL i 24-72 timer. Inhibering av celleproliferasjon måles ved MTT-reduksjon, cellesyklusarrest ved strømningscytometri og apoptose ved annexin-V-binding eller NuMA-frigjøring. GT-, GA-, GC- eller GG-sekvenser inhiberer proliferasjon, induserer cellesyklusarrest og induserer apoptose i koloncancercellelinjene.
SCID-mus som bærer subkutane humane kolorektale cancercellelinjer behandles med saltvann eller med 2-20-base GT-, GA-, GC- eller GG-sekvenser som har anti-canceraktivitet mot humane kolorektale cancercellelinjer in vitro. Mus behandlet med 2-20-base GT-, GA-, GC- eller GG-sekvenser, som har anti-canceraktivitet mot humane kolorektale cancercellelinjer in vitro, oppviser en signifikant reduksjon i tumormasse sammenlignet med mus behandlet med saltvann.
Claims (7)
1. Blanding,karakterisert vedat den omfatter en isolert 3'-OH, 5'-OH syntetisk fosfodiester-nukleotidsekvens som består av SEKV. ID. NR:45 og videre omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer.
2. Blanding ifølge krav 1,karakterisert vedat den ytterligere består av et kjemoterapeutisk middel.
3. Blanding ifølge krav 1 eller 2,karakterisert vedat det kjemoterapeutiske middel er valgt fra gruppen bestående av en antimetabolitt, et alkyleringsmiddel og en hormon-antagonist.
4. Anvendelse av en blanding ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3, for fremstilling av et medikament for å indusere en respons valgt fra gruppen bestående av induksjon av cellesyklusarrest, inhibering av proliferasjon, aktivering av kaspaser og induksjon av apoptose i cancercellene, og produksjon av cytokiner av immunsystemceller, hvor cytokinene er valgt fra gruppen bestående av IL-1-beta, IL-6, IL-10, IL-12 og TNF-alfa.
5. Anvendelse av sammensetningen ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 3 for fremstilling av et medikament for behandling av cancer.
6. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 4 til 5, hvor canceren er valgt fra gruppen bestående av et primært carcinom, et sekundært carcinom, et primært sarcom og et sekundært sarcom.
7. Anvendelse ifølge krav 6, hvor canceren er valgt fra gruppen bestående av leukemi, lymfom, bryst, prostata, colorektal, ovarie og bencancer.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US17032599P | 1999-12-13 | 1999-12-13 | |
US22892500P | 2000-08-29 | 2000-08-29 | |
PCT/CA2000/001467 WO2001044465A2 (en) | 1999-12-13 | 2000-12-12 | Therapeutically useful synthetic oligonucleotides |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO20022820D0 NO20022820D0 (no) | 2002-06-13 |
NO20022820L NO20022820L (no) | 2002-08-08 |
NO330508B1 true NO330508B1 (no) | 2011-05-09 |
Family
ID=26865979
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO20022820A NO330508B1 (no) | 1999-12-13 | 2002-06-13 | Blanding bestaende av syntetisk fosfodiester-nukleotidsekvens og anvendelse derav. |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7157436B2 (no) |
EP (2) | EP1238070B1 (no) |
JP (1) | JP4772245B2 (no) |
KR (1) | KR100829646B1 (no) |
CN (2) | CN100445380C (no) |
AT (2) | ATE455851T1 (no) |
AU (1) | AU785212B2 (no) |
CA (1) | CA2393808A1 (no) |
CZ (1) | CZ20022372A3 (no) |
DE (2) | DE60036019T2 (no) |
DK (2) | DK1238070T3 (no) |
ES (2) | ES2288883T3 (no) |
HU (1) | HUP0300627A3 (no) |
IL (2) | IL150196A0 (no) |
MX (1) | MXPA02005842A (no) |
NO (1) | NO330508B1 (no) |
PT (1) | PT1238070E (no) |
WO (1) | WO2001044465A2 (no) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030032610A1 (en) | 1996-06-03 | 2003-02-13 | Gilchrest Barbara A. | Method to inhibit cell growth using oligonucleotides |
PT1181304E (pt) | 1999-04-08 | 2008-01-23 | Antisoma Res Ltd | Actividade antiproliferativa de oligonucleótidos ricos em g e método de utilização dos mesmos para ligação a nucleolina |
US7960540B2 (en) | 1999-04-08 | 2011-06-14 | Advanced Cancer Therapeutics, Llc | Antiproliferative activity of G-rich oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin |
US8114850B2 (en) | 1999-04-08 | 2012-02-14 | Advanced Cancer Therapeutics, Llc | Antiproliferative activity of G-rich oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin |
US6949520B1 (en) * | 1999-09-27 | 2005-09-27 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon |
CN100445380C (zh) * | 1999-12-13 | 2008-12-24 | 拜昂尼科生命科学有限公司 | 治疗用合成寡核苷酸 |
AU6886301A (en) | 2000-08-29 | 2002-03-13 | Bioniche Life Sciences Inc | Modulation of fas and fasl expression |
ES2307568T3 (es) * | 2000-12-08 | 2008-12-01 | Coley Pharmaceutical Gmbh | Acidos nucleicos de tipo cpg y metodos de uso de los mismos. |
US7087586B2 (en) * | 2001-04-24 | 2006-08-08 | Bioniche Life Sciences, Inc. | Oligonucleotide compositions and their use to induce differentiation of cells |
EP1417307B1 (en) * | 2001-08-17 | 2009-04-15 | Bioniche Life Sciences Inc. | Oligonucleotide compositions and their use to induce apoptosis |
EP1432450B1 (en) * | 2001-10-03 | 2005-12-28 | Bioniche Life Sciences Inc. | Therapeutically useful triethyleneglycol cholesteryl oligonucleotides |
AU2003219383B2 (en) * | 2002-04-22 | 2010-08-26 | Bioniche Life Sciences Inc. | Oligonucleotide compositions and their use for the modulation of immune responses |
WO2004087203A2 (en) * | 2003-04-02 | 2004-10-14 | Coley Pharmaceutical Group, Ltd. | Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations for topical application |
US7569554B2 (en) * | 2003-05-16 | 2009-08-04 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Synergistic treatment of cancer using immunomers in conjunction with therapeutic agents |
CA2598992A1 (en) * | 2005-02-24 | 2006-08-31 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Immunostimulatory oligonucleotides |
EP1863538A4 (en) * | 2005-03-09 | 2009-01-14 | Baylor College Medicine | DIRECT INVERSION OF CD4 + T CELL LYMPHOCYTE INHIBITOR FUNCTION VIA TOLL-TYPE 8 RECEIVER SIGNALING |
GB2443591B (en) * | 2005-09-07 | 2010-04-28 | Secr Defence | Adjuvanted vaccine |
ES2658626T3 (es) * | 2009-02-12 | 2018-03-12 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor neurotrófico derivado de células gliales (GDNF) por inhibición de transcrito antisentido natural a GDNF |
GB0906234D0 (en) | 2009-04-14 | 2009-05-20 | Secr Defence | Vaccine |
KR100998365B1 (ko) | 2009-06-29 | 2010-12-06 | 압타바이오 주식회사 | 치료 효능이 있는 변형핵산 및 구아노신을 함유하는 올리고뉴클레오티드 변형체 |
TW201102073A (en) * | 2009-07-15 | 2011-01-16 | Enzon Pharmaceuticals Inc | RNA antagonists targeting GLI2 for the treatment of leukemia |
WO2013129603A1 (ja) * | 2012-02-28 | 2013-09-06 | 国立大学法人東京農工大学 | Tdp-43細胞内存在量関連疾患の認定方法 |
EP4000597A1 (en) * | 2020-11-17 | 2022-05-25 | The Boots Company plc | Tetrapeptide and compositions comprising tetrapeptides |
CA3242118A1 (en) * | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Alfica Sehgal | Modulation of gene transcription using antisense oligonucleotides targeting regulatory rnas |
Family Cites Families (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3172815A (en) * | 1962-04-24 | 1965-03-09 | Warner Lambert Pharmaceutical | Method for preparing reticulo-endo-thelial system stimulant and stimulant thereof |
US4152423A (en) * | 1971-11-19 | 1979-05-01 | Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) | Immunological agents |
FR2160326B1 (no) * | 1971-11-19 | 1975-02-07 | Anvar | |
CH602920A5 (no) * | 1973-02-23 | 1978-08-15 | Wellcome Found | |
US3976544A (en) * | 1973-06-19 | 1976-08-24 | The Agence Nationale De Valorisation De Le Recherche | Water-soluble immunological adjuvants, in particular for vaccines, obtained from mycobacteria and related microorganisms and process for their extraction |
FR2374042A1 (fr) * | 1976-06-04 | 1978-07-13 | Merieux Inst | Nouveau medicament immunostimulant et son procede de preparation |
JPS54140710A (en) * | 1978-03-10 | 1979-11-01 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Anti-tumor substance and its preparation |
DE3011461C2 (de) * | 1980-03-25 | 1986-10-30 | Dr. Madaus & Co, 5000 Köln | Verwendung von Propionibakterien |
US4520019A (en) * | 1982-04-29 | 1985-05-28 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Stable composition and preparation thereof |
US4579941A (en) * | 1982-08-13 | 1986-04-01 | Mitsuitoatsu Chemicals, Inc. | Thermally-denatured deoxyribonucleic acid MD-011 and antitumor agent |
US4663306A (en) * | 1983-09-23 | 1987-05-05 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Pyridine-soluble extract-refined detoxified endotoxin composition and use |
GB8404280D0 (en) * | 1984-02-17 | 1984-03-21 | Stanford J L | Biological preparations |
DE3423234A1 (de) * | 1984-06-23 | 1986-02-06 | Boehringer Ingelheim International GmbH, 6507 Ingelheim | Synergistische mischungen von interferonen und tumor-nekrose-faktor |
US4744984A (en) * | 1985-10-08 | 1988-05-17 | Vetrepharm Research, Inc. | Antiviral immunotherapeutic agent and preparation thereof |
US4877611A (en) * | 1986-04-15 | 1989-10-31 | Ribi Immunochem Research Inc. | Vaccine containing tumor antigens and adjuvants |
DE3723075A1 (de) * | 1987-07-11 | 1989-01-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Eukaryotische expressionsvektoren mit multimeren enhancer-subelementen, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung |
US4958013A (en) * | 1989-06-06 | 1990-09-18 | Northwestern University | Cholesteryl modified oligonucleotides |
CA1340994C (en) * | 1989-09-21 | 2000-05-16 | Rudolf Edgar Dr. Falk | Treatment of conditions and disease |
WO1992007095A1 (en) * | 1990-10-15 | 1992-04-30 | Stratagene | Arbitrarily primed polymerase chain reaction method for fingerprinting genomes |
AU1456092A (en) * | 1991-02-21 | 1992-09-15 | Gilead Sciences, Inc. | Aptamers specific for thrombin and methods of use |
CA2268476A1 (en) * | 1991-07-03 | 1998-04-30 | Hyal Pharmaceutical Corporation | Use of hyaluronan in gene therapy |
US5582981A (en) * | 1991-08-14 | 1996-12-10 | Gilead Sciences, Inc. | Method for identifying an oligonucleotide aptamer specific for a target |
US5474796A (en) * | 1991-09-04 | 1995-12-12 | Protogene Laboratories, Inc. | Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface |
US5523389A (en) * | 1992-09-29 | 1996-06-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of human immunodeficiency virus |
ATE179333T1 (de) * | 1993-01-29 | 1999-05-15 | Vetrepharm Inc | Immunotherapeutische zubereitung |
US5567604A (en) * | 1993-04-23 | 1996-10-22 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-viral guanosine-rich oligonucleotides |
CN1154702A (zh) * | 1994-05-25 | 1997-07-16 | 海布里登公司 | 具有抗巨细胞病毒活性的寡核苷酸 |
US6211431B1 (en) * | 1994-08-30 | 2001-04-03 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization | Plant transcription regulators from circovirus |
US5643890A (en) * | 1995-01-31 | 1997-07-01 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Synthetic oligonucleotides which mimic telomeric sequences for use in treatment of cancer and other diseases |
IN181358B (no) * | 1995-02-14 | 1998-05-30 | Bioniche Inc | |
ZA964446B (en) * | 1995-06-06 | 1996-12-06 | Hoffmann La Roche | Oligonucleotides specific for hepatitis c virus |
US5990299A (en) * | 1995-08-14 | 1999-11-23 | Icn Pharmaceuticals, Inc. | Control of CD44 gene expression for therapeutic use |
EA000841B1 (ru) * | 1995-11-21 | 2000-04-24 | Ай-Си-Эн ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ | Антисмысловые олигонуклеотиды к ил-8 и рецептору ил-8 и способ лечения злокачественных опухолей |
IT1277025B1 (it) * | 1995-12-04 | 1997-11-04 | Cooperativa Centro Ricerche Po | Classe di oligonucleotidi fosfodiesterici ad attivita' citotossica composizioni farmaceutiche che li contengono e loro uso |
US6015710A (en) * | 1996-04-09 | 2000-01-18 | The University Of Texas System | Modulation of mammalian telomerase by peptide nucleic acids |
ATE383172T1 (de) * | 1996-05-20 | 2008-01-15 | Us Gov Health & Human Serv | Oligonukleotide welche spezifisch retrovirale nukleokapsid-proteine binden |
KR100533576B1 (ko) * | 1997-08-05 | 2005-12-05 | 바이오니취 라이프 사이언시즈 인코포레이티드 | 세포증식 및 세포사멸 조절용 조성물 및 방법 |
US6255473B1 (en) * | 1997-08-29 | 2001-07-03 | Duke University | Presenilin-1 gene promoter |
DK1221955T3 (da) * | 1999-09-25 | 2006-01-30 | Univ Iowa Res Found | Immunstimulerende nukleinsyre |
CN100445380C (zh) * | 1999-12-13 | 2008-12-24 | 拜昂尼科生命科学有限公司 | 治疗用合成寡核苷酸 |
US20020091095A1 (en) * | 1999-12-13 | 2002-07-11 | Phillips Nigel C. | Modulation of Fas and FasL expression |
AU784356B2 (en) * | 1999-12-28 | 2006-03-16 | Bioniche Urology Ip Inc. | Hyaluronic acid in the treatment of cancer |
EP1432450B1 (en) * | 2001-10-03 | 2005-12-28 | Bioniche Life Sciences Inc. | Therapeutically useful triethyleneglycol cholesteryl oligonucleotides |
AU2003219383B2 (en) * | 2002-04-22 | 2010-08-26 | Bioniche Life Sciences Inc. | Oligonucleotide compositions and their use for the modulation of immune responses |
-
2000
- 2000-12-12 CN CNB008188580A patent/CN100445380C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-12-12 AT AT07015976T patent/ATE455851T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-12-12 KR KR1020027007557A patent/KR100829646B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-12-12 WO PCT/CA2000/001467 patent/WO2001044465A2/en active IP Right Grant
- 2000-12-12 JP JP2001545542A patent/JP4772245B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-12-12 DK DK00981117T patent/DK1238070T3/da active
- 2000-12-12 CZ CZ20022372A patent/CZ20022372A3/cs unknown
- 2000-12-12 HU HU0300627A patent/HUP0300627A3/hu unknown
- 2000-12-12 ES ES00981117T patent/ES2288883T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-12 EP EP00981117A patent/EP1238070B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-12 IL IL15019600A patent/IL150196A0/xx unknown
- 2000-12-12 MX MXPA02005842A patent/MXPA02005842A/es active IP Right Grant
- 2000-12-12 CA CA002393808A patent/CA2393808A1/en not_active Abandoned
- 2000-12-12 AT AT00981117T patent/ATE370231T1/de active
- 2000-12-12 DE DE60036019T patent/DE60036019T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-12 PT PT00981117T patent/PT1238070E/pt unknown
- 2000-12-12 AU AU18479/01A patent/AU785212B2/en not_active Ceased
- 2000-12-12 US US09/735,363 patent/US7157436B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-12-12 DE DE60043759T patent/DE60043759D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-12 EP EP07015976A patent/EP1867718B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-12-12 DK DK07015976.9T patent/DK1867718T3/da active
- 2000-12-12 CN CN2008101740188A patent/CN101491536B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-12-12 ES ES07015976T patent/ES2340807T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-06-12 IL IL150196A patent/IL150196A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-06-13 NO NO20022820A patent/NO330508B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-12-18 US US11/641,542 patent/US20070213291A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO330508B1 (no) | Blanding bestaende av syntetisk fosfodiester-nukleotidsekvens og anvendelse derav. | |
ES2543710T3 (es) | Oligorribonucleótidos inmunoestimulantes que contienen G y U | |
US7935351B2 (en) | Use of CPG oligodeoxynucleotides to induce angiogenesis | |
Wang et al. | Chemotherapy and chemosensitization of non–small cell lung cancer with a novel immunomodulatory oligonucleotide targeting Toll-like receptor 9 | |
EP2599866A1 (en) | Novel nucleic acid having adjuvant activity and use thereof | |
Gray et al. | CpG-B ODNs potently induce low levels of IFN-αβ and induce IFN-αβ-dependent MHC-I cross-presentation in DCs as effectively as CpG-A and CpG-C ODNs | |
Rayburn et al. | Experimental therapy for colon cancer: anti-cancer effects of TLR9 agonism, combination with other therapeutic modalities, and dependence upon p53 | |
US7662792B2 (en) | Modulation of Fas and FasL expression | |
Mohri et al. | Increased immunostimulatory activity of polypod-like structured DNA by ligation of the terminal loop structures | |
KR101017483B1 (ko) | 올리고뉴클레오타이드 조성물 및 세포사멸을 유도하기위한 그의 용도 | |
Stein et al. | Non-antisense effects of oligodeoxynucleotides | |
AU2007200536A1 (en) | Therapeutically useful synthetic oligonucleotides | |
Erhardt et al. | Transfection of human monocyte‐derived dendritic cells with CpG oligonucleotides | |
ES2383671T3 (es) | Modulación de la expresión de Fas y FasL por un oligonucleótido-fosfodiéster sintético y un anticuerpo anti-Fas | |
CA2420103A1 (en) | Modulation of fas and fasl expression | |
AU2001268863A2 (en) | Modulation of FAS and FASL expression | |
AU2001268863A1 (en) | Modulation of FAS and FASL expression |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |