MXPA06000993A - Inhbidores triciclicos de parp. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere a derivados triciclicos de lactama-indol y derivados triaciclicos de lactama-bencimodol y su uso en la inhibicion de la actividad de la enzima PAR. La invencion tambien se refiere al uso de estos compuestos en la preparacion de medicamentos.

Description

INHIBIDORES TRICÍCLICOS DE PARP Campo de la Invención Esta invención se refiere a una serie de compuestos derivados que son derivados de lactama-Índoles triclclicos y lactama-bencimidazoles triciclicos y que inhiben la poli (ADP-ribosa) -polimerasa (PARP) y su uso en el tratamiento de cáncer, en particular cáncer de mama.

Antecedentes de la Invención Se ha mostrado que la recombinación homologa (HR) juega un papel importante en la reparación de daño que se presenta en las bifurcaciones de la replicación de ADN en células (2) de mamífero. De esta manera, las células deficientes en HR muestran niveles retrasados y exhiben mayores niveles de inestabilidad genética. Se cree que la inestabilidad genética debido a la pérdida de reparación de HR en cánceres humanos contribuye de manera significativa al desarrollo de cáncer en estas células (1) . La modificación post-trascripcional de proteínas nucleares por poli (ADP-ribosil) ación en respuesta a las rupturas de las células de ADN juega un papel importante en la reparación de ADN, la regulación de la apoptosis, y el mantenimiento de la estabilidad genómica. La poli (ADP-ribosa) -polimerasa (PARP-1) es el miembro principal de la familia de enzimas PARP y es una proteína nuclear abundante en células de mamífero. La PARP-1 cataliza la formación de polímeros de poli (ADP-ribosa) (PAR) usando NAD+ como substrato. En el daño al ADN, la PARP-1 se une rápidamente a una ruptura de hebra individual de ADN (SSB) y cataliza la adición de cadenas de PAR negativamente cargadas a sí misma (automodificación) y otras proteínas [ver (3,4) para revisiones]. La unión de PARP-1 a SSB se cree que protege las lesiones de ADN del procesamiento adicional hasta que la PARP-1 se disocia de la ruptura por carga negativa acumulada que resulta de los polímeros de PAR (5,6) . Aunque la PARP-1 se ha implicado en varios procesos nucleares, tal como la modulación de la estructura de cromatina, replicación de ADN, reparación y trascripción de ADN, los ratones con supresión de PARP-1 la desarrollan normalmente (7) . Las células asociadas de estos ratones exhiben un fenotipo de hiper-recombinación e inestabilidad genética en la forma de niveles incrementados de micronúcleos de intercambios cromáticos gemelos (SCE) y tetraploide (8,10). La inestabilidad genética también puede presentarse en estos ratones con supresión de PARP-1 a través del acortamiento de los telómeros, frecuencia incrementada de fusión de cromosomas y aneuploides (11) , aunque todos estos resultados no se pueden repetir en otro conjunto de ratones con supresión de PARP-1 (12) . En la anterior supresión de ratones, la mutación nula de PARP-l rescató la recombinación V (D) J dañada en . ratones SCID (13). Estos resultados soportan la visión sugerida por Lindahl y colaboradores que la PARP-l tiene un papel protector contra la recombinación (5) . Se propuso que la unión de PARP-l a rupturas de ADNs impide que la maquinaria de recombinación reconozca y procese lesiones de ADN o, de manera alternativa, que las cargas negativas acumuladas después de la poli- (ADP-ribosil) ación repelan secuencias de ADN recombinogénicas adyacentes. Sólo este último modelo es consistente con la inhibición de PARP-l misma y la expresión de una PARP-l mutante, negativa, dominante, incluyendo SCE, amplificación génica y recombinación homologa (14-18) . Los estudios basados en el tratamiento de células con inhibidores de PARP-l o células derivadas de ratones con supresión de PARP-l indican que la supresión de la actividad de PARP-l incrementa la susceptibilidad celular a agentes de daño de ADN e inhibe la reunión de la ruptura de hebras (3, 4, 8-11, 19, 20) . Los inhibidores de la actividad de PARP-l se han usado en combinación con regímenes tradicionales de tratamiento de cáncer tal como radioterapia y quimioterapia (21) . Cuando se usaron los inhibidores en combinación con agentes de metilación, venenos de topoisomerasa y radiaciones ionizantes se encontró que mejoran la efectividad de estas formas de tratamiento. Sin embargo, estos tratamientos no son selectivos y como tales provocan daño y muerte a células no cancerosas o "saludables" . Adicionalmente, se conoce que estos tratamientos ocasionan efectos secundarios desagradables . Por lo tanto, es altamente deseable proporcionar un tratamiento para el cáncer que sea tanto efectivo como selectivo en la aniquilación de células de cáncer y que no necesite ser administrado en combinación con los tratamientos de radioterapia o quimioterapia. De manera sorprendente, se ha encontrado que las células deficientes en la recombinación homologa (HR) son hipersensibles a inhibidores de PARP con relación a las células tipo silvestre. De esta manera, de acuerdo a un primer aspecto de la presente invención, - se proporciona un compuesto para inhibir la actividad de PARP que tiene la fórmula I : y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. De acuerdo a un segundo aspecto de la presente invención se proporciona un compuesto para inhibir la actividad de PARP, que tiene la Fórmula II: y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. De acuerdo a un tercer aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto para inhibir la actividad de PARP que tiene la Fórmula III: y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Los compuestos descritos en la presente se pueden preparar por rutas sintéticas basadas en aquellas descritas en la WO 00/42040 y WO 01/16136. Se entenderá que donde se hace referencia en esta especificación a compuestos de las fórmulas I a III la referencia se debe considerar como que se extiende también a sus sales farmacéuticamente aceptables y otros bioprecursores farmacéuticamente aceptables (formas de profármaco) donde es pertinente. El término "profármaco" se usa en la presente especificación para denotar formas modificadas o derivados de un compuesto farmacológicamente activo que se biodegradan o se modifican in vivo para llegar a * ser convertidos en el compuesto activo después de la administración, especialmente administración oral o intravenosa, en el transcurso del tratamiento terapéutico de un mamífero. Estos profármacos se eligen comúnmente debido a una solubilidad mejorada en medios acuosos que ayuda a superar los problemas de formulación, y también en algunos casos da una liberación relativamente lenta o controlada del agente activo. Como se hace referencia en la presente, sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales metálicas, fosfatos y aminas cuaternarias . Las sales metálicas se pueden formar con metales alcalinos tal como litio sodio o potasio. De manera preferente, la fórmula I anterior, se administra en la forma de una sal de fosfato farmacéuticamente aceptable que tiene la siguiente fórmula: Fórmula I - fosfato La presente invención también se refiere a la utilidad terapéutica de los compuestos descritos en la presente. De esta manera, de acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula I, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula II, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica • de un compuesto de la fórmula III, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula I, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la elaboración de un medicamento para la elaboración de una enfermedad o condición que se provoca por un defecto genético en un gen que media la recombinación homologa. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula II en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición que se provoca por un defecto genético en un gen que media la recombinación homologa. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de un compuesto de la fórmula III en la elaboración de un medicamento para el" tratamiento de una enfermedad o condición que se provoca por un defecto genético en un gen que media la recombinación homologa. Las enfermedades y condiciones que se provocan por un defecto genético en un gen que media la recombinación homologa incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, cáncer, en particular cáncer de mama. Como se refiere en la presente "cáncer" o "tumor" incluye, de manera enunciativa y sin limitación, cáncer de pulmón, colon, páncreas, estómago, ovario, cerviz, mama, próstata, hueso, cerebro o piel.

El uso de inhibidores de PARP es particularmente adecuado en el tratamiento de cáncer que se provoca por un defecto genético en un gen en donde el gen media las recombinaciones homologas. Las células de cáncer de este tipo tienden hacer defectuosas en HR. La sensibilidad específica de tumores defectuosos de HR a la inhibición de PARP significa que normalmente las células "saludables" en división en pacientes que tienen cantidades adecuadas de HR estarán en su mayor parte y sin afectar por el tratamiento. Una ventaja adicional del tratamiento que usa inhibidores de PARP es que los inhibidores de PARP no necesitan ser administrados como una terapia de combinación junto con los tratamientos convencionales de radioterapia o quimioterapia, evitando de este modo los efectos secundarios asociados con estas formas convencionales de tratamiento. Un defecto en un gen que media la recombinación homologa puede ser debido a una mutación en, la ausencia de, o expresión defectuosa de, un gen que codifica para una proteína comprendida en HR. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula I en la elaboración de un medicamento para inducir apoptosis en células defectuosas de HR.

De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula II en la elaboración de un medicamento para inducir apoptosis en células defectuosas de HR. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula III en la elaboración de un medicamento para inducir apoptosis en células defectuosas de HR. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula I en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula II en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula III en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer. Las células de cáncer adecuadas para el tratamiento con los compuestos descritos en la presente pueden ser parcial o totalmente deficientes en HR. De manera preferente, las células son totalmente deficientes en HR. Los compuestos descritos en la presente se pueden usar para tratar una forma heredada de cáncer en donde el paciente que se va a tratar tiene una predisposición familiar al cáncer. Sin embargo, estos compuestos son particularmente adecuados para el tratamiento de cáncer hereditario tipo génico, y de manera más particular cáncer de mama, hereditario, tipo génico. En un aspecto preferido, el inhibidor de PARP es útil en el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de un gen comprendido en HR. Los genes con función sugerida en HR incluyen XRCC1, ADPRT (PARP-l) , ADPRTL2, (PARP02) CTPS, RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51ß, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCCR, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, NB51, WRN, BLM KU70, RU80, ATM, ATR CHK1, CHK2, FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, FANCC, FANCD1, FANCD2, - FANCE, FANCF, FANCG, RAD1, RAD9 [Ver (2, 3, 5, 22-28) en las revisiones] . Un gen comprendido en HR puede ser un gen supresor de tumor. La invención proporciona de esta manera el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de un gen supresor de tumor. De manera preferente, el gen supresor de tumor es BRCAl ó BRCA2. El cáncer de mama es el tipo más común de cáncer entre las mujeres en el Mundo Occidental. Ciertas familias tienen una fuerte predisposición para cáncer de mama, que frecuentemente es debido a mutación heredada en un alelo de ya sea BRCAl ó BRCA2. Sin embargo, se mantiene un alelo funcional. De esta manera, los individuos que poseen la mutación desarrollan normalmente y no tienen consecuencia fenotípica de esta mutación. Sin embargo, en una célula, el alelo funcional puede ser perdido, haciendo -a esta célula cancerosa y al mismo tiempo deficiente en HR. Este paso es crítico para el comienzo de un tumor (1) . Por lo tanto, de acuerdo a un aspecto aun adicional de la invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula I en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de BRCAl y/o BRCA . De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula II en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de BRCAl y/o BRCA2. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula II en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de BRCAl y/o BRCA2.

Las células de cáncer que se van a tratar pueden ser parcial o totalmente deficientes en la expresión de BRCAl o BRCA2. Estas deficiencias se pueden identificar usando técnicas de PCR múltiplex, técnicas de arreglo (29, 30), o usando otras detecciones conocidas por los expertos en la técnica. Las técnicas particularmente útiles incluyen RT-PCR cuantitativa en tiempo real, Transferencia Northern, inmunohistoquímica y Transferencia Western (31, 32) . Por consiguiente, los compuestos de la presente invención son de interés particular, para el tratamiento de una variedad de tumores seleccionados de cáncer, la invención proporciona además un método para el tratamiento de un paciente que sufre de cáncer. Los compuestos descritos en la presente se pueden administrar en una cantidad no tóxica terapéuticamente efectiva mediante cualquier ruta adecuada, para seleccionar como objetivo de forma efectiva las células de cáncer. Las rutas de administración adecuada incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, cualquiera de las siguientes: oral, intravenosa, intramuscular, intradérmica, intranasal ó tópica. Una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos descritos en la presente es típicamente una que es suficiente para lograr el efecto deseado y puede variar de acuerdo a la naturaleza y severidad de la condición de la enfermedad, y la potencia del compuesto. Se apreciará que se pueden emplear diferentes concentraciones para profilaxis que para el tratamiento de una enfermedad activa. Para la administración a mamíferos, y particularmente humanos, se espera que el nivel de dosis diaria del agente activo será de 0.01 a 50 mg/kg en ratones y 0.01 mg/m2 a 50 mg/m2 de área superficial corporal en humanos. Finalmente, sin embargo, la cantidad de ingrediente activo administrado y la frecuencia de administración estarán a la discreción de un facultativo. Provechosamente, se necesitan sólo dosis muy bajas de compuestos inhibidores de PARP para tener un efecto terapéutico en el tratamiento de cáncer, reduciendo de este modo la acumulación sistémica de los compuestos y reduciendo al mínimo de esta manera cualquier efecto tóxico asociado. En tanto que puede ser posible que los compuestos descritos en la presente se administren solos como el compuesto "natural" se prefiere presentar los compuestos en una composición farmacéutica. Todos los métodos de formulación en la elaboración de estas composiciones farmacéuticas incluirán en general el paso de poner en asociación uno de los compuestos descritos en la presente con un portador que constituye uno o más ingredientes auxiliares. Usualmente, las formulaciones se preparan al poner en asociación de forma uniforme e íntima el compuesto de la fórmula I con un portador líquido o con un portador sólido finamente dividido o con ambos, y entonces, si es necesario, formar el producto en las formulaciones deseadas. Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral se pueden presentar como unidades discretas tal como cápsulas, sobrecitos, tabletas o pastillas, cada uno que contiene una cantidad predeterminada de uno de los compuestos descritos en la presente; como un polvo o granulos; o una suspensión en un líquido acuoso o líquido no acuoso tal como un jarabe, un elixir, una emulsión o un trago. Cualquiera de los compuestos descritos en la presente también se puede presentar como un bolo, electuario o pasta. Se puede elaborar una tableta por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes auxiliares. Se pueden preparar tabletas comprimidas al comprimir, en una máquina adecuada, cualquiera de los compuestos descritos en la presente en una forma fluida tal como un polvo o granulos, opcionalmente mezclados con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, agente dispersante o activo en la superficie. Las tabletas moduladas se pueden elaborar al moldear, en una máquina adecuada, una mezcla de cualquiera del compuesto en polvo descrito en la presente con cualquier portador adecuado.

Se puede elaborar un jarabe al adicionar cualquiera de los compuestos descritos en la presente a una solución acuosa concentrada de un azúcar, por ejemplo, sacarosa, al cual se puede adicionar cualquier ingrediente auxiliar deseado. Estos ingredientes auxiliares pueden incluir saborizantes, un agente para retardar la cristalización del azúcar o un agente para incrementar la solubilidad de cualquier otro ingrediente, tal como un alcohol polihídrico, por ejemplo, glicerol o sorbitol. Las formulaciones para administración rectal se pueden presentar como un supositorio, con un portador usual tal como manteca de cacao. Las formulaciones adecuadas para administración parenteral comprenden de manera conveniente una preparación acuosa, estéril, de cualquiera de los compuestos descritos en la presente que es de manera preferente isotónica con la sangre del receptor. Además de los ingredientes mencionados anteriormente, las formulaciones de esta invención, por ejemplo, ungüentos, cremas y similares, pueden incluir uno o más ingredientes auxiliares, por ejemplo, un diluyente, amortiguador, agente saborizante, aglutinante, agente activo en la superficie, espesante, lubricante y/o un conservador, (incluyendo un antioxidante) u otro excipiente farmacéuticamente inerte.

Los compuestos de esta invención también se pueden elaborar por administración en formulaciones liposomales que se pueden preparar por métodos bien conocidos en la técnica. De esta manera, de acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un agente activo. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un agente activo. De acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula III, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un agente activo . La composición farmacéutica puede comprender además al menos otro ingrediente que proporciona un aditivo compatible farmacéuticamente aceptable, diluyente portador, portador o excipiente y se puede presentar en una forma de dosis unitaria. El (los) portador (es) debe ser farmacéuticamente aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y no deteriorar el receptor del mismo. Las posibles formulaciones incluyen aquellas adecuadas para administración oral, rectal, tópica y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular e intravenosa) o para administración al pulmón u otro sitio absorbente tal como los pasajes nasales. Los compuestos referidos en la presente se pueden ilustrar en combinación con otros compuestos anti-cáncer. La presente invención también incluye un método para tratar cáncer en mamífero al administrar los compuestos descritos en la presente y sus sales farmacéuticamente aceptables. De esta manera, de acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento de cáncer en mamíferos que comprenden administrar un compuesto de la fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. De esta manera, de acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento de cáncer en mamíferos que comprenden administrar un compuesto de la fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. De esta manera, de acuerdo a un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método para el tratamiento de cáncer en mamíferos que comprende administrar un compuesto de la fórmula III, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención ahora se describirá a manera de ejemplo únicamente con referencia a las figuras anexas, en donde: La Figura 1 es una gráfica que muestra la supervivencia celular en la presencia del inhibidor de PARP de la fórmula III en la línea celular AA8, línea celular IsrISF y línea celular CxR3; La Figura 2 es una gráfica que muestra la supervivencia celular en la presencia del inhibidor de PARP de la fórmula III en la línea celular V79, línea celular VC8 y línea celular VC8B2. La Figura 3 es una gráfica que muestra la supervivencia celular en la presencia de inhibidor de PARP de la fórmula I en la línea celular V79, línea celular VC8 y línea celular VC8B2; La Figura 4 es un diagrama de barras que muestra la actividad de PARP en las líneas celulares VC8, V79, VC8#13 y VC8, VC8#13 y VC8+B2 en la presencia de inhibidor de PARP de la fórmula III; La Figura 5 es un par de gráficas que muestran la inhibición de la actividad de PARP celular en la presencia de inhibidor de PARP de la fórmula I y III en células L1210, permeabilizadas (gráfica superior) e intactas (gráfica inferior) . La Figura 6 es un par de diagramas de barra que muestra la farmacocinética y farmacodiná ica en sangre y tumor con fosfato de la fórmula I a 1 mg/kg (superior) y 10 mg/kg (inferior) en ratones que tienen los xenoinjertos SW620; La Figura 7 es un diagrama de barras que muestra la farmacocinética y farmacodinámica con la fórmula III en ratones que tienen los xenoinjertos SW620; La Figura 8 es una gráfica que muestra crecimiento de tumor (volumen de tumor relativo medio) en ratones que tienen los xenoinjertos SW620 después del tratamiento con la fórmula III en combinación con temozolomida (TMZ) y con TMZ solaz- La Figura 9 es una gráfica que muestra el crecimiento de tumor (volumen de tumor, relativo, medio) de ratones que tienen los xenoinjertos SW620 después del tratamiento con fosfato de la fórmula I en combinación con temozolomida (TMZ) y fosfato de la fórmula I y TMZ sola; La Figura 1 muestra el porcentaje de supervivencia de las líneas celulares AA8, IrS ISF y CxR3 cuando se tratan con varias concentraciones del compuesto de la fórmula III. La fórmula III se encontró que es más activa contra IrS ISF, que carece de XRCC3, que tiene una LC50 (la concentración del componente activo que aniquila 50 % de las células) de 100 nM. La Figura 2 muestra el porcentaje de supervivencia de las líneas celulares V79-Z, VC8 y VC8B2 cuando se tratan con varias concentraciones del compuesto de la fórmula III. La fórmula III se encontró que es más efectiva contra la línea celular VC8, que carece de BRCA2, que tiene una LC50 de 43 nM y un valor de LV90 (concentración del componente activo que aniquila 90 % de las células) fue de 1200 nM. La Figura 3 muestra el porcentaje de supervivencia de las líneas celulares V79-Z, VC8 y VC8B2 cuando se tratan con varias concentraciones del compuesto de la fórmula I. La Fórmula I se encontró que es más efectiva contra la línea celular VC8 que carece de BRCA2, que tiene un valor de LC50 de 12 nM, un valor de LC90 de 27 nM. La Figura 4 muestra la actividad de PARP de varias líneas celulares cuando se tratan con varias concentraciones del compuesto de la fórmula III.' La gráfica de la Figura 3 se divide en cuatro conjuntos de resultados para cada línea celular respectiva. La primera barra de cada conjunto muestra la actividad de PARP de fondo (no oligo presentes, de modo que la actividad de PARP es dependiente de las rupturas de ADN endógeno) , la segunda barra es la actividad de PARP estimulable total (por oligo) y la tercera y cuarta barras muestran la actividad de PARP en la presencia del compuesto de la fórmula III . La Figura 5 muestra el efecto de los compuestos de la fórmula I y III en la actividad de PARP. Las células usadas para obtener los resultados mostrados en la Figura 5 fueron ya sea permeabilizadas con digitonina y luego se ensayaron para actividad de PARP es'timulable total (por oligo) en la presencia y ausencia de inhibidor de PARP de la fórmula I y fórmula III o se expusieron a uno de los inhibidores de PARP durante 20 minutos antes de la permeabilización y se valoraron para actividad total de PARP estimulable . No hubo diferencia en la actividad inhibitoria de PARP de los compuestos de la fórmula I y la fórmula III cuando las células se permeabilizaron antes de la adición del compuesto inhibidor pero el compuesto de la fórmula I fue más potente en células intactas, posiblemente debido a que se acumula dentro de las células a un mayor grado. La Figura 6 son las concentraciones en plasma y tumor del compuesto de la fórmula I, y su efecto farmacocinético en los linfocitos periféricos de ratón (pbl parp) y xenoinjertos SW620 (PARP de tumor) , a varias veces después de la administración intraperitoneal de la sal de fosfato del compuesto de la fórmula I. La sal de fosfato del compuesto de la fórmula I incrementa la solubilidad de la fórmula I. Sin embargo, en la administración a un animal (incluyendo humano), las fosfatasas en plasma descomponen la sal de fosfato de la fórmula I (fosfato de la fórmula I) al compuesto de origen, es decir, de la fórmula I. Es evidente de la figura 6 que treinta minutos después de la administración del fosfato de la fórmula I a 10 mg/kg se detectaron altos niveles del compuesto de origen tanto en plasma como en tumor. La concentración de la fórmula I disminuyó con el tiempo más preferible de rápidamente en el plasma que en el tumor y a las 24 horas después de la administración fueron detectables niveles significativos en el tumor pero ninguno se puede detectar en el plasma. Hubo una inhibición profunda y sostenida de actividad de PARP tanto en pbls y tumor: < 50 % control hasta 24 horas. Después de la administración del fosfato de la fórmula I a 1 mg/kg, se pueden encontrar niveles menores del compuesto de la fórmula I tanto en plasma como en tumor y en consecuencia hubo un efecto menos pronunciado en la actividad de PARP. La Figura 7 muestra las concentraciones en plasma y tumor del compuesto de la fórmula III, y su efecto farmacocinético en xenoinjertos SW620 (act de PARP de tumor) , en varios momentos, después de la administración intraperitoneal de 10 mg/kg del compuesto de la fórmula III. Este compuesto también se distribuye bien en el tumor y de manera preferente se retiene con el tiempo e inhibe de manera similar la actividad de PARP en el tumor. La Figura 8 muestra que durante 20 días desde la administración de temozolomida (68 mg/kg diariamente x5) , el xenoinjerto de tumor redujo progresivamente su tamaño. Sin embargo, brevemente después de este tiempo, el tamaño de tumor empieza a incrementarse. Cuando se administra un compuesto de la fórmula III (5 mg/kg diariamente x 5) en unión con temozolomida, el tumor se encoge significativamente durante aproximadamente 15 días, a un tamaño indetectable, el tamaño de tumor permanece indetectable durante 50 días adicionales posteriormente cuando empieza a incrementarse en tamaño. Cuando se administra una dosis mayor de la fórmula III (15 mg/kg diariamente x 5) el tamaño de tumor permanece indetectable durante 80 días adicionales hasta el final del experimento cuando no se detectó tumor en la autopsia, es decir, regresión completa de tumor. " La Figura 9 muestra un patrón similar a aquel visto en la figura 8 después de la administración del fosfato de la fórmula I (a 0.1 mg/kg y 1.0 mg/kg) en combinación con temozolomida.

Tabla 1 Genotipo y origen de líneas celulares usadas en este estudio ce?Slar fenotipo Defecto Origen Referencia Comentarios Línea de AA8 t wt CHO [41] células de ovario de hámster chino Línea celular sensible a XRCC3", radiación derivada de irslSF XRCC3" deficiente AA8 [41] AA8 que en HR carece de XRCC3 en componente de ruta de HR irslSF CXR3 XRCC3" + hXRCC3 wt irslSF [41] transfectado con gen hXRCC3 V79 son V79-Z wt wt V79 [42] fibroblastos de pulmón de hámster VC8 son BRCA2", derivados sensibles a VC8 BRCA2- deficie nte en V79-Z [42] radiación de HR V79 que son deficientes en BRCA2 VC8 con VC8#13 BRCA2" cromosoma 13 +hBRCA2 wt VC8 [42] que contiene HBRCA2 VC8+B2 BRCA2- VC8 +hBRCA2 wt VC8 [42] transfectado con ÜBRCA2 Materiales y Métodos Citotoxicidad de inhibidores de PARP a células deficientes en HR (XRCC3 ó BRCA2) Cultivo Celular Las líneas celulares AA8, irslSF y CXR3 se proporcionaron por Larry Thompson [41] . Las VC-8, VC-8+B2, VC-8#13 fueron un obsequio de Malgorzata- Zdienicka [42] . Todas las línea celulares en este estudio se cultivaron en Medio de Eagle's modificado de Dulbecco's (DMEM) con suero Bovino fetal al 10 % y penicilina (100 U/ml) y sulfato de estreptomicina (100 µg/mL) a 37°C bajo una atmósfera que contiene C02 al 5 %.

Ensayo de Toxicidad - ensayo de supervivencia clonogénica Se expusieron células que crecen de . forma exponencial en placas de 6. cavidades al compuesto de la fórmula III a las concentraciones indicadas en la Figura 2 en DMSO al 1 % ó DMSO al 1 % solo en el medio durante 24 horas . Las células se recolectaron por tripsinización, se contaron y se sembraron a varias densidades en cajas de 10 cm en medio fresco en la ausencia de fármaco para formación de colonias. 7-10 días después las cajas se fijaron con metanol : ácido acético 3:1 y se tiñeron con violeta cristal al 0.4 %. Las colonias se contaron y se calculó la supervivencia relativa a las células tratadas con control DMSO al 1 %.

Ensayo. de actividad de PARP Se expusieron células que crecen de forma exponencial a DMSO al 1 % en medio de cultivo (control) o un compuesto de la fórmula I ó III en DMSO al 1 % a las concentraciones indicadas en la Figura 4 a células permeabilizadas con digitonina, o células intactas durante 20 minutos antes del lavado y permeabilización con digitonina. Se midió la actividad de PARP por incorporación de un sustrato de NAD+ marcado con [32P] en polímeros precipitables .de TCA . después de la estimulación por la adición de un oligonucleótido de extremos romos y en comparación con células no estimuladas con el oligonucleótido. Se midió la actividad de PARP en ho ogenados de tumor (1 en 40 en amortiguador isotónico) de ratones tratados con la fórmula III de la misma manera. La actividad de PARP en pbls y homogenados de tumor de ratones tratados con fosfato de la fórmula I se midió por detección inmunológica de polímero usando el anticuerpo 10H. De forma breve, los homogenados- de tumor diluidos hasta 1:1000 en amortiguador isotónico se incubaron con NAD 350 µM durante 6 minutos y se transfirieron a membrana de nitrocelulosa. Se cuantificó la formación de poli (ADP-ribosa) (PAR)polímero por detección quimioluminiscente usando un iluminador Fuji LAS3000 UV Illuminator por referencia a diluciones en serie de una norma de PAR, después de la incubación con el anticuerpo 10H a PAR y un anticuerpo secundario anti-ratón. Los resultados se estandarizaron por referencia al contenido medido de proteína del homogenado. Por supuesto, se va a entender que la invención no se propone que se restrinja a los detalles de las modalidades anteriores que se describen a manera de ejemplo únicamente .

Referencias : [1] C. Lundin, . Erixon, C. Arnaudeau, N. Schultz, D.

Jenssen, M. Meuth y T. Helleday, Different roles for nonhomologous end joining and homologous recombination following replication arrest in mammalian cells, Mol Cell Biol 22 (2002) 5869-5878. [2] A.R. Venkitaraman Cáncer susceptibility and the functions of BRCAl and BRCA2, Cell 108 (2002) 171-182. [3] D. D'Amours, S. Desnoyers, I. D' Silva y G.G. Poirier Poly(ADP-ribosyl) ation reactions in the regulation of nuclear functions, Biochem J 342 (1999) 249-268. [4] Z. Herceg and Z.Q. Wang Functions of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) in DNA repair, genomic integrity and cell death, Mutat Res 477 (2001) 97-110. [5] T. Lindahl, M.S. Satoh, G.G. Poirier y A. lungland Post-translatíonal modification of poly(ADP-ribose) polymerase induced by DNA strand breaks, Trends Biochem .. ..-. Sci 20 (1995) 405-411. [6] M.S. Satoh and T. Lindahl Role of poly(ADP-ribose) for ation in DNA repair, Nature 356 (1992) 356-358. [7] S. Shall y G. de Murcia Poly(ADP-ribose) polymerase-1: what have we learned from the deficient mouse model?, Mutat Res 460 (2000) 1-15. [8] Z.Q. Wang, L. Stingl, C. Morrison, M. Jantsch, M. Los, K. Schulze-Osthoff y E.F. Wagner PARP is important for genomic stability but dispensable in apoptosis, Genes Dev 11 (1997) 2347-2358. [9] C.M. Simbulan-Rosenthal, B.R. Haddad, D.S. Rosenthal, Z. Weaver, A..Colemán, R. Luo, H.M. Young, Z.Q. Wang, T. Ried y M.E. Smulson Chromosomal aberrations in PARP(-/-) mice: genome stabilization in immortalized cells by reintroduction of poly(ADP-ribose) polymerase CDNA, Proc Nati Acad Sci ü S A 96 (1999) 13191-13196. [10] J.M. de Murcia, C Niedergang, C. Trueco, M. Ricoul, B. Dutrillaux, M. Mark, F.J. Oliver, M. Masson, A. Dierich, M. LeMeur, C. Walztinger, P. Chambón y G. de Murcia, Requirement of poly(ADP-ribose) polymerase in recovery from DNA damage in mice and in cells, Proc Nati Acad Sci U S A 94 (1997) 7303-7307. [??] F. d'Adda di Fagagna, M.P. Hande, W.M. Tong, P.M.

Lansdorp, Z.Q. Wang y S.P. Jackson Functions of poly (ADP-ribose) polymerase in controlling telomere length and chromosomal stability, Nat Genet 23 (1999) 76-80. [12] E. Samper, F.A. Goytisolo, J. Menissier-de Murcia, E. González-Suarez, J.C. Cigudosa, G. de Murcia and M.A. Blasco Normal telomere length and chromosomal end capping in poly (ADP-ribose) polymerase-deficient miceand primary cells despite increased chromosomal instability, J Cell Biol 154 (2001) 49-60. [13] C. Morrison, G.C. Smith, L. Stingl, S.P. Jackson, E.F. Wagner y Z.Q. a?g Genetic interaction between PARP and DNA-PK in V(D) J . recombination and tumorigenesis, Nat Genet 17 (1997) .479-482. [14] V. Schreiber, D. Hunting, C. Trueco, B. Gowans, D. Grunwald, G. De Murcia y J.M. De Murcia A dominant- negative mutant of human poly (ADP-ribose) polymerase affeets cell recovery, apoptosis, and sister chr?matid exchange following DNA damage, Proc Nall Acad Sci U S A 92 (1995) 4753-4757. [15] J.H. Kupper, M. Muller y A. Burkle Trans-dominant inhibition of poly (ADP-ribosyl) ation potentiates carcinogen induced gene a plification in SV40- transformed Chínese hámster cells, Cáncer Res 56 (1996) 2715-2717.

[16] J. Magnusson y C. Ramel Inhibitor of poly (ADP- ribose) transferase potentiates the recombinogenic but not the mutagenic action of alkylating -. agents in somatic cells in vivo in Drosophila melanogaster, Mutagenesis 5 (1990) 511-514. [17] A.S. Waldman y B.C. Waldman Stimulation of intrachromosomal homologous recombination in mammalian cells by an inhibitor of poly(ADP-ribosylation) , Nucleic Acids Res 19 (1991) 5943-5947. [18] A. Semionov, D. Cournoyer and T.Y. Chow Inhibitisn of poly(ADP-ribose)polymerase stimulates extrachromosomal homologous recombination in mouse Ltk-fibroblasts, Nucleic Acids .Res 27 (1999) 4526-4531. [19] F. Dantzer, V. Schreiber, C. Niedergang, C. Trueco,. E. Flatter, G. De La Rubia, J. Oliver, V. Rolli, J. Menissier-de Murcia y G. de Murcia Involvement of poly(ADP-ribose) polymerase in base excisión repair, Biochimie 81 (1999) 69^75. [20] F. Dantzer, G. de La Rubia, J. Menissier-De Murcia, Z. Hostomsky, G. de Murcia y V. Schreiber Base excisión repair is impaired in mammalian cells lacking Poly(ADP- ribose) polymerase-1, Biochemistry 39 (2000) 7559-7569. [21] L. Tentori, I. Portarena and G. Graziani Potential clinical applications of poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitors, Pharmacol Res 45 (2002) 73-85.

[22] T. Lindahl y R.D. Wood Quality control by DNA repair, Science 286 (1999) 1897-1905. [23] .W. Caldecott DNA single-strand break repair and spinocerebellar ataxia, Cell 112 (2003) 7-10. [24] D. D'Amours and S.P. Jackson The Mrel 1 complex: at the crossroads of DNA repair and checkpoint signalling, Nat Rev Mol Cell Biol 3 (2002) 317-327. [25] A.D. D1Andrea y M. Grompe The Fanconi anaemia/BRCA pathway, Nat Rev Cáncer 3 (2003) 23-34. [26] S.P. Jackson Sensing and repairing DNA double-strand breaks, Carcinogenesis 23 (2002) 687-696. [27] R. Kanaar, J.;H. Hoeijmakers y D.C. van Gent Molecular mechanisms of DNA double strand break repair, Trends Cell Biol 8 (1998) 483-489. [28] D.C. van Gent, J.H. Hoeijmakers y R. Kanaar Chromosomal stability and the DNA double-stranded break connection, Nat Rev Genet 2 (2001) 196-206. [29] S.L. Neuhausen y E.A. Ostrander Mutation testing of early-onset breast cáncer genes BRCAl and BRCA2, Genet Test 1 (1997) 75-83. [30] G. Kuperstein, W.D. Foulkes, P. Ghadirian, J. Hakimi y S.A. Narod A rapid fluorescent multiplexed-PCR analysis (FMPA) for founder mutations in the BRCAl and BRCA2 genes, Clin Genet 57 (2000) 213-220. [31] Vissac-Sabatier C, Coxam V, Dechelotte P, Picherit C, Horcajada M-N, Davicco M-J, Lebecque P, Bignon Y-J, y Bernard-Gallon D. Phytoestrogenric diets odulate expression of BRCAl and BRCA2 tumour suppressor genes in mammary glands of female Wistar rats. Cáncer Research vol 63 pp 6607-6612 (2003) . [32] Wu K, Jiang S-W y Couch FJ. p53 mediates repression of the BRCA2 promoter and down regulation of BRCA2 mRNA and protein levéis in response to DNA damage. J. Biol. Chem. Vol 278 pp 15652-15660 (2003) . [33] A. Chiarugi Poly(ADP-ribose) polymerase: killer or conspirator? The ' suicide hypothesis ' revisited, Trends Pharmacol Sci 23 (2002) 122-129. [34] C.R. Calabrese, MA. Batey; H.D. Thomas, B.W. Durkacz,.

L.Z. Wang, S. Kyle, D. Skalitzky, J. Li, C. Zhang, T. Boritzki, K. Maegley, A.H. Calvert, Z. Hostorsky, D.R. Newell and N.J. Curtin Identification of Potent Nontoxic Poly(ADP-Ribose) Polymerase-1 Inhibitors: Chemopotentiation and Pharmacological Studies, Clin Cáncer Res 9 (2003) 2711-2718. [35] D. Ferraris, Y.S. Ko, T. Pahutski, R.P. Ficco, L. Serdyuk, C. Alemu, C. Bradford, T. Chiou, R. Hoover, S. Huang, S. Lautar, S. Liang, Q. Lin, M.X. Lu, M. Mooney, L. Morgan, Y. Qian, S. Tran, L.R. Williams, Q.Y. Wu, J. Zhang, Y. Zou and V. Kalish Design and synthesis of poly ADP-ribose polymerase-1 inhibitors. 2. Biological evaluation of aza-5 [H] -phenanthridin-6-ones as potent, aqueous-soluble compounds for the treatment of ischemic injuries, J Med Chem 46 (2003) 3138-3151.. [36] K.J. Dillon, G.C. Smith y N.M. Martin A FlashPlate assay for the identification of PARP-l inhibitors, J Biomol Screen 8 (2003) 347-352. [37] A.J. Pierce, R.D. Johnson, L.H. Thompson y M. Jasin XRCC3 promotes homology-directed repair of DNA da age in mammalian cells, Genes Dev 13 (1999) 2633-2638. [38] R.D. Johnson, N. Liu y M. Jasin Mammalian XRCC2 promotes the repair of DNA double-strand breaks by homologous recombination, Nature 401 (1999) 397-399. [39] G.M. Shah, D. Poirier, S. Desnoyers, S. Saint-Martih, J.C..Hoflack, P. Rong, M. ApSimon, J.B. Kirkland y G.G. Poirier Complete i hibition of poly(ADP-ribose) polymerase activity prevents the recovery of C3H10T1/2 cells from oxidative stress, Biochim Biophys Acta 1312 (1996) 1-7. [40] R.J. Griffin, S. Srinivasan, K. Bow an, A.H. Calvert, N.J. Curtin, D.R. Newell, L.C. Pemberton y B.T. Golding Resistance-modifying agents. 5. Synthesis and biological properties of quinazolinone inhibitors of the DNA repair enzyme poly(ADP-ribose) polymerase (PARP), J Med Chem 41 (1998) 5247-5256. [41] S. Boulton, L.C. Pemberton, J.K. Porteous, N.J. Curtin, R.J. Griffin, B.T. Golding y B.W. Durkacz Potentiation of temozolomide-induced cytotoxicity. a comparative study of the biological effects of. poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors, Br J Cáncer 72 (1995) 849-856. [42] C.S. Griffin, P.J. Simpson, C.R. Wilson y J. Thacker Mammalian recombination-repair genes XRCC2 and XRCC3 promote correct chromosome segregation, Nat Cell Biol 2 (2000) 757-761. [43] R.S. Tebbs, Y. Zhao, J.D. Tucker, J.B. Scheerer, M.J. Siciliano, M. Hwang, N. Liu, R.J. Legerski y L.H.

Thompson Correction of chromosomal instability and sensitivity to diverse mutagens by a cloned cDNA of thé XRCC3. DNA repair gene, Proc Nati Acad Sci U S A 92 (1995) 6354-6358. [44] M. Kraakman-van der Zwet, W.J. Overkamp, R.E. van Lange, J. Essers, A. van Duijn-Goedhart, 1. Wiggers, S. Swaminathan, P.P. van Buul, A. Errami, R.T. Tan, N.G. Jaspers, S.K. Sharan, R. Kanaar y M.Z. Zdzienicka Brca2 (XRCC11) deficiency results in radioresistant DNA synthesis and a higher frequency of spontaneous deletions, Mol Cell Biol 22 (2002) 669-679.

Claims (32)

1. REIVINDICACIONES 1. Compuesto para inhibir la actividad de PARP que tiene la fórmula I y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
2. 2. Compuesto para inhibir la actividad de PARP,' que tiene la fórmula II: y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
3. 3. Compuesto para inhibir la actividad de PARP, que tiene la fórmula m y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.
4. 4. Compuesto según la reivindicación 1, en donde el compuesto está en la forma de una sal de fosfato de la siguiente fórmula: Fórmula I - fosfato
5. 5. Uso de una cantidad terapéutica de .un compuesto de la fórmula I, y sales farmacéuticamente un medicamento.
6. 6. Uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula II, y sales farmacéuticamente 20 aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento. 25
7. 7. Uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula III, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento.
8. 8. Uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula I, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición que se provoca por un defecto genético en un gen que media la recombinación homologa.
9. 9. Uso de una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula II, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición que se provoca por un defecto genético en un gen que media la recombinación homologa.
10. 10. Uso de' una cantidad terapéutica de un compuesto de la fórmula III, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición que se provoca por un defecto genético en un gen que media la recombinación homologa.
11. 11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 1.0, en donde el defecto es un gen que codifica para una proteína comprendida en HR. ~
12. 12. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde el defecto es la ausencia de un gen que codifica para una proteína comprendida en HR.
13. 13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en donde el defecto está en la expresión de un gen que codifica para una proteína comprendida en HR.
14. 14. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para inducir apoptosis en las células defectuosas de HR.
15. 15. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula II, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para inducir apoptosis en las células defectuosas .
16. 16. Uso de una cantidad .terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula III, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para inducir apoptosis en las células defectuosas.
17. 17. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
18. 18. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula II, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
19. 19. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula III, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
20. 20. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en donde el cáncer es cáncer hereditario tipo génico.
21. 21. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de BRCAl y/o BRCA2.
22. 22. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula II, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de BRCAl y/o BRCA2.
23. 23. Uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula III, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de células de cáncer defectuosas en la expresión de BRCAl y/o BRCA2.
24. 24. Uso de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, en donde las células de cáncer que se van a tratar son parcial o totalmente deficientes en la expresión de BRCAl y/o BRCA2.
25. 25. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula I, y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo.
26. 26. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula II, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo.
27. 27. Composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula III, y una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como un ingrediente activo.
28. 28. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 27, en donde la composición comprende además al menos un diluyente y/o un portador junto con al menos un agente de volumen.
29. 29. Composición farmacéutica según la reivindicación 28, en donde el portador y/o diluyente se selecciona de cualquiera de los siguientes ya sea solo o en combinación, solución salina, solución salina amortiguada, dextrosa, agua, glicerol y etanol.
30. 30. Método para el tratamiento de cáncer en mamíferos que comprende administrar un compuesto de la fórmula I como se describe en la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
31. 31. Método para el tratamiento de cáncer en mamíferos que comprende administrar un compuesto de la fórmula II como se describe en la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
32. 32. Método para el tratamiento de cáncer en mamíferos que comprende administrar un compuesto de la" fórmula III como se describe en la reivindicación 3 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.