MX2015005441A - Letalidad sintetica y el tratamiento de cancer. - Google Patents

Letalidad sintetica y el tratamiento de cancer.

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Abstract

En la presente se describen compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de cáncer. También se describen métodos y usos para identificar un sujeto con cáncer que son adecuados para el tratamiento con los compuestos, composiciones y métodos que se describen en la presente. En un aspecto de la presente invención, se proporciona un método para tratar un sujeto que tiene un cáncer deficiente en NMT2, que comprende: administrar al sujeto un inhibidor de NMT.

Description

SINTETICA Y EL TRATAMIENTO DE CANCER Campo de la Invención
[0001] El campo de la invención está relacionado en general a compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento del cáncer.
Antecedentes de la Invención
[0002] El cáncer es una causa principal de muerte en Canadá. La sociedad canadiense de cáncer estima que habrá aproximadamente 170000 nuevos casos de cáncer en 2011, y aproximadamente 75000 muertes como resultado del cáncer.
[0003] Un planteamiento emergente para el tratamiento de cáncer se refiere al concepto de letalidad sintética. Dos genes (o dos productos génicos) son letales sintéticos si la mutación de cualquiera, sólo es compatible con la viabilidad, pero la mutación de ambos conduce a muerte. Dicho de otro modo, "letalidad sintética" describe situaciones en donde una mutación y un fármaco (a manera de ejemplo) provocan conjuntamente la muerte de una célula de cáncer, ya sea la mutación o el fármaco no darán por resultado la muerte de célula. La selección como diana de un gen (o producto génico) que es letal sintético a una mutación pertinente a cáncer debe aniquilar solo células de cáncer e indultar a células normales. Por lo tanto, la letalidad sintética proporciona un marco para el desarrollo de agentes específicos anti-cáncer.
[0004] El planteamiento de la letalidad sintética al tratamiento de cáncer está emergiendo, no es todavía un planteamiento de rutina debido en gran parte a la ausencia de la identificación de genes (y productos génicos) letales sintéticos.
[0005] La N-miristoilación de las proteínas es una modificación en la cual se une covalentemente miristato (un ácido graso saturado de 14 carbonos) a la glicina NH2-terminal de una variedad de proteínas celulares, virales, y onco-proteínas (por ejemplo, tirosina-cinasas oncogénicas relacionadas a Src, subunidades alfa G heterotriméricas, etcétera).
[0006] Las proteínas miristoiladas celulares tienen diversas funciones biológicas en la transducción de señales y en la oncogénesis. Se requiere la modificación de proteínas mediante miristoilación para la selección de dianas subcelulares, para la conformación de proteínas y la actividad biológica de muchas proteínas importantes en las células eucarióticas, incluyendo aquellas requeridas para la transducción de señales y para las funciones reguladoras importantes en el crecimiento celular. Las tirosina-cinasas de la familia Src (proto-oncogenes) están entre las proteínas miristoiladas más extensamente estudiadas.
[0007] La miristoilación de las proteínas se cataliza por N-miristoiltransferasa (NMT). La NMT es responsable de esta actividad en las células eucarióticas y trabaja al modificar su sustrato polipeptídico después de la remoción del residuo iniciador de metionina mediante metionil-aminopeptidasa. Esta modificación se presenta principalmente como un proceso co-traduccional, aunque la miristoilación también puede presentarse de manera post-traduccional después de la escisión proteolítica de las proteínas, típicamente durante la apoptosis. Se han clonado dos isozimas de las enzimas NMT mamíferas y se designan NMT1 y NMT2. Las NMT juegan un papel de pro-supervivencia en las células. Las dos NMT están presentes en todas las células normales.
[0008] Permanece la necesidad de compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de cáncer.
[0009] Esta información antecedente se proporciona para el propósito de producir información conocida que se cree por el solicitante que es pertinencia posible a la presente invención. No se propone necesariamente admisión, ni se debe considerar, que cualquier información precedente constituye téenica anterior contra la presente invención.
Breve Descripción de la Invención [00010] De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporcionan compuestos y composiciones para el tratamiento de un sujeto con cáncer. También se proporcionan métodos para identificar el sujeto con cáncer que son adecuados para el tratamiento con los compuestos, en la presente se describen composiciones y métodos. [00011] De acuerdo con un aspecto, se proporciona un método para tratar un sujeto que tiene un cáncer deficiente en NMT2, que comprende: administrar al sujeto un inhibidor de NMT. [00012] En un aspecto específico, este inhibidor NMT comprende un inhibidor de NMT1. [00013] En un aspecto específico, el inhibidor de NMT1 comprende una molécula pequeña, un anticuerpo, un fragmento peptídico, un ácido nucleico, o combinaciones de estos. [00014] En un aspecto específico, la molécula pequeña comprende Tris-DBA, HMA, o DDD85646, DDD86481, o un derivado de esto. [00015] En un aspecto específico, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal. [00016] En un aspecto específico, el ácido nucleico comprende una molécula de ARNds, un molécula de ARNi, una molécula de ARNmi, una ribozima, una molécula de ARNsh, o una molécula de ARNsi. [00017] En un aspecto específico, el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00018] En un aspecto específico, el sujeto es un sujeto humano. [00019] De acuerdo con otro aspecto, se proporciona un método para tratar un sujeto con un cáncer o sospechoso de tener un cáncer, que comprende: pedir una prueba que proporcione los resultados de un análisis para determinar si una muestra del sujeto expresa NMT2, y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto si la muestra es deficiente en NMT2. [00020] De acuerdo con otro aspecto, se proporciona un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto con un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína de NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo de complejo; en donde la administración de un inhibidor de N T1 del sujeto se indica cuando la cantidad de proteína de NMT2 en la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control. [00021] De acuerdo con otro aspecto, se proporciona un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a la proteína de NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína de NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto cuando la cantidad de proteína de N T2 en la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control. [00022] En un aspecto específico, el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa N T2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo. [00023] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación. [00024] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la N T2 en la muestra se usa para determinar una cantidad de complejo en la muestra. [00025] En un aspecto específico, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00026] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CIVIL), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00027] En un aspecto específico, el sujeto es humano. [00028] En otro aspecto, se proporciona un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de MT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de NMTl al sujeto es indicativa cuando la cantidad de ácido nucleico a NMT2 en el muestra es baja o ausente, opcionalmente en comparación a un control. [00029] En otro aspecto, se proporciona un método, que comprende: obtener de una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectadle que se une al ácido nucleico a NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico a NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; y administrar un inhibidor de NMTl al sujeto cuando la cantidad al ácido nucleico a NMT2 en la muestra es baja o ausente, opcionalmente en comparación a un control. [00030] En un aspecto específico, el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al nucleico ácido de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo. [00031] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende, un ensayo de hibridación que usa sondas de ADN o ARN detectablemente marcadas. [00032] En un aspecto específico, el ensayo de hibridación es cuantitativo o semi-cuantitativo. [00033] En un aspecto específico, el ensayo de hibridación es RT-PCR, hibridación in sítu, ensayo de protección de ARN ( "RPA"), microarreglo de ADNc y oligonucleótidos, análisis de diferencia de representación ( "RDA"), visualización diferencial, análisis de secuencia de EST, análisis serial de expresión génica ("SAGE"), y amplificación múltiplex mediada por ligación con la Luminex FlexMAP ( "LMF"). [00034] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de N T2 presente en la muestra, se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra. [00035] En un aspecto específico, el instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluoró etro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00036] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00037] En un aspecto específico, el sujeto es humano. [00038] En otro aspecto, se proporciona un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo al cual se une la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectable y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de N T1 al sujeto es indicativa cuando el perfil de miristoilación indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control [00039] En otro aspecto, se proporciona un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo al cual se une a la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectable y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo del complejo; y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto cuando el perfil de miristoilación indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control. [00040] En un aspecto específico, el procesamiento comprende tratar la muestra con alquinil-miristato y destiobiotina-azido-PEG-biotina. [00041] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía por resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación. [00042] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra. [00043] En un aspecto específico, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00044] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00045] En un aspecto específico, el sujeto es humano. [00046] En otro aspecto, se proporciona un uso de un inhibidor de NMT para tratar un sujeto que tiene un cáncer deficiente en NMT2. [00047] En un aspecto específico, el inhibidor de NMT comprende un inhibidor de NMT1. [00048] En un aspecto específico, el NMT1 de inhibidor comprende una molécula pequeña, un anticuerpo, un fragmento peptídico, un ácido nucleico, o combinaciones de esto. [00049] En un aspecto específico, la molécula pequeña comprende Tris-DBA, HMA, o DDD85646, DDD86481, o un derivado de esto. [00050] En un aspecto específico, la molécula pequeña comprende DDD86481. [00051] En un aspecto específico, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal. [00052] En un aspecto específico, el ácido nucleico comprende una molécula de ARNds, una molécula de ARNi, una molecula ARNmi, una ribozima, una molécula de ARNsh, o una molécula de ARNsi. [00053] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfo a folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial. carcinoma escamoso esofágico. [00054] En un aspecto específico, el sujeto es un sujeto humano. [00055] En otro aspecto, se proporciona un uso de un inhibidor de N T1 para tratar un sujeto con un cáncer, o sospechoso de tener un cáncer, en donde el inhibidor de NMT1 es indicativo del uso cuando la cantidad de proteína de NMT2 en una muestra del sujeto es baja o ausente, opcionalmente en comparación a un control, en donde un ensayo de unión que comprende poner en contacto una muestra procesada del sujeto con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína de NMT2 presente en la muestra procesada genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; en donde el resultado del ensayo es indicativo de la cantidad de proteína de NMT2 en la muestra. [00056] En un aspecto específico, el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la MT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo. [00057] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación. [00058] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar la cantidad de complejo en la muestra. [00059] En un aspecto específico, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00060] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocito a/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma- CLL , carcinoma de mama adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00061] En un aspecto específico, el sujeto es humano. [00062] En otro aspecto, se proporciona un uso de un inhibidor de NMT1 para tratar a un sujeto con cáncer, o sospechoso de tener un cáncer, en donde el inhibidor de NMT1 es indicativo del uso cuando la cantidad de ácido nucleico de NMT2 en una muestra del sujeto es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control, en donde un ensayo de unión que comprende poner en contacto una muestra procesada del sujeto con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de N T2 en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo. [00063] En un aspecto específico, el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa de NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo. [00064] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende, un ensayo de hibridación que usa sondas de ADN o ARN detectablemente marcadas. [00065] En un aspecto específico, el ensayo de hibridación es cuantitativo o semi-cuantitativo. [00066] En un aspecto específico, el ensayo de hibridación es RT-PCR, hibridación in situ, ensayo de protección de ARN ( "RPA"), microarreglo de ADNc y oligonucleótidos, análisis de diferencia de representación ( "RDA"), visualización diferencial, análisis de secuencia de EST, análisis serial de expresión génica ( "SAGE"), y amplificación múltiplex mediada por ligación con el Luminex FlexMAP ( "LMF"). [00067] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra se usa para determinar una cantidad de complejo en la muestra. [00068] En un aspecto específico, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00069] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia ieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endo etrial, carcinoma escamoso esofágico. [00070] En un aspecto específico, el sujeto es humano. [00071] En un aspecto, se proporciona el uso de un inhibidor de NMT1 para tratar un sujeto con un cáncer, o sospechoso de tener un cáncer, en donde el uso del inhibidor de NMT1 es indicativo cuando un perfil de miristoilación de una muestra del sujeto indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control, en donde la realización de un ensayo de unión comprende poner en contacto una muestra procesada con un anticuerpo que se une a la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectadle y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo del complejo. [00072] En un aspecto específico, el procesamiento comprende tratar la muestra con alquinil-miristato y destiobiotina-azido-PEG-biotina. [00073] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación. [00074] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra. [00075] En un aspecto específico, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00076] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de celulas B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00077] En un aspecto específico, el sujeto es humano. [00078] En otro aspecto, se proporciona un método para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: obtener una muestra del sujeto con un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a MT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína de NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado del ensayo indicativo del complejo; en donde el tratamiento con el inhibidor de NMT1 es indicativo cuando la cantidad de proteína de N T2 en la muestra es baja o ausente, opcionalmente en comparación a un control. [00079] En un aspecto específico, el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo. [00080] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, comple entación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación. [00081] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad de complejo en la muestra. [00082] En un aspecto específico, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00083] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoa-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00084] En un aspecto específico, el sujeto es humano. [00085] En otro aspecto, se proporciona un método para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado del ensayo indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de NMT1 al sujeto es indicativa cuando la cantidad al ácido nucleico de NMT2 en la muestra es baja o ausente, opcionalmente en comparación a un control. [00086] En un aspecto específico, el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo. [00087] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende, un ensayo de hibridación que usa sondas de ADN o ARN detectablemente marcadas. [00088] En un aspecto específico, el ensayo de hibridación es cuantitativo o semi-cuantitativo. [00089] En un aspecto específico, el ensayo de hibridación es RT-PCR, hibridación ín si tu, ensayo de protección de ARN ( "RPA"), microarreglo de ADNc y oligonucleótidos, análisis de diferencia de representación ( "RDA"), visualización diferencial, análisis de secuencia de EST, análisis serial de expresión génica ("SAGE"), y amplificación múltiplex mediada por ligación con el Luminex FlexMAP ( "LMF"). [00090] En un aspecto específico, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra se usa para determinar una cantidad de complejo en la muestra. [00091] En un aspecto específico, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00092] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [00093] En un aspecto específico, el sujeto es un humano. [00094] En otro aspecto, se proporciona un método para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT de, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo al cual se une a la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectable y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de MT1 al sujeto es indicativa cuando el perfil de miristoilación indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control. [00095] En un aspecto específico, el procesamiento comprende tratar la muestra con alquinil-miristato y destiobiotina-azido-PEG-biotina. [00096] En un aspecto específico, el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación. [00097] En un aspecto específico, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra. [00098] En un aspecto específico, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico. [00099] En un aspecto específico, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CIVIL), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [000100] En un aspecto específico, en donde el sujeto es humano. [000101] En otro aspecto, se proporciona un equipo para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: un anticuerpo a NMT2; instrucciones para identificar el sujeto de acuerdo al método de cualquiera de las reivindicaciones 68-74. [000102] En un aspecto específico, el equipo que comprende además un control. [000103] En otro aspecto, se proporciona un equipo para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: un ácido nucleico para la unión a NMT2; instrucciones para identificar el sujeto de acuerdo al método de cualquiera de las reivindicaciones 75-83. [000104] En un aspecto específico, el equipo que comprende además un control. [000105] El equipo de la reivindicación 93, en donde el ácido nucleico es ARN o ADN. [000106] En otro aspecto, se proporciona un equipo para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: NeutrAvidinTM-HRP; e instrucciones para identificar el sujeto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 84-90. [000107] En un aspecto específico, el equipo que comprende además un control. [000108] En un aspecto específico, el equipo que comprende además alquinil-miristato o destiobiotina-azido-PEG-biotina.
Breve Descripción de las Figuras [000109] Ahora se describirán las modalidades de la presente invención, solo a manera de ejemplo, con referencia a las figuras anexas, en donde: [000110] La figura 1 representa el análisis por inmunotransferencia de la expresión de NMT1 y NMT2 en un tipo de células B normales (LO) y varios linfomas de células B y leucemias de células T; [000111] La figura 2 es una gráfica que ilustra la sensibilidad de varias células normales y varios linfomas de células B y leucemias de células T a los inhibidores de NMT tris-dibencilidenacetona-dipaladio (Tris-DBA); [000112] La figura 3 es una gráfica de barras que ilustra la inhibición de N-miristoiltransferasa (NMT) por tris-dibencilidenacetona-dipaladio (Tris-DBA); y [000113] La figura 4A-4B son inmunotransferencias que representan lineas de células de linfoma sondeadas con anticuerpos contra NMT1 y NMT2; [000114] La figura 5 es un gráfica lineal que muestra la sensibilidad de los inhibidores de NMT en una línea de células de linfoma de Burkitt en comparación a una línea de células linfocíticas B normales inmortalizadas; [000115] La figura 6A-6B representa los resultados de la transfección de células de linfoma B Ramos con pcDNA3.1-V5-NMT2 que muestra supervivencia incrementada a TrisDBA (5 ug/ml) 2.5 veces vs células de control transíectadas con vector de plásmido vacío (Fig.6A) que muestra la viabilidad celular, y (Fig.6B) una inmunotransferencia; [000116] La figura 7A-7B representa las diferencias en los niveles de la proteína NMT2 presentes en varias líneas de células linfocíticas y tumores sólidos de linfoma; [000117] Las figuras 8A y 8B representa las diferencias en los niveles de proteína de NMT2 presentes en varios tumores sólidos de linfoma analizados por inmunohistoquímica; tinción inmunohistoquímica de NMT de nodulos linfáticos normales, linfoma de Burkitt (BL) y linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), en la fig.8C, el log2 (microarreglo de intensidad de fluorescencia NMT) para NMT1 y NMT2 se gráfica para todas las líneas celulares de la base de datos CCLE, en la fig.8D el log2 (microarreglo de intensidad de fluorescencia NMT) para NMTl y NMT2 se gráfica para las 100 líneas de células 100 de la base de datos CCLE con el nivel de expresión más bajo de NMT2, (fig.8E) se analizó la expresión de NMT2 en el linfoma folicular y de células B grandes difuso de Burkitt por inmuno-histoquímica y la tinción con peroxidasa se cuantificó usando el contenido de nodulos linfáticos normales de Imagen J en NMT2 es 0.,392 +/- 0.3 (unidad relativa, datos no mostrados); [000118] La figura 9A-9E representa la viabilidad residual de varias líneas de células linfocíticas B tratadas con DDD85646 (fig.9A), DDD86481 (fig.9B), y DDD73226 (fig.9C) durante 72 horas, la fig.9D representa la confirmación de la inhibición de la miristoilación por DDD86481 en los linfocitos IM9 (i) y (ii) BL2, la fig.9E representa la dosis mínima de DDD86481 requerida para inhibir la miristoilación en IM-9 y BL2 y líneas de células Ramos; [000119] La figura 10A representa la sensibilidad de varios linfocitos B LO normales inmortalizados, células B malignas de linfoma (Ramos y BL2), y leucemia de células T (CEM) al inhibidor de NMT TrisDBA durante 24 horas, FIG.10B representa la transfección de células B Ramos de linfoma con pcDNA3.1-V5-NMT2 incrementó la supervivencia a TrisDBA (5 ug/ml) 2.5 veces vs células de control transfectadas con plásmido vacío; [000120] La figura 11A-11C representa los niveles de expresión NMT en las 967 líneas de células de cáncer base de datos enciclopédica (CCLE) (fig.llA), expresión de NMT2 en selección de cáncer usando una gráfica de caja y bigotes (fig.llB), las 50 líneas de células CCLE con la expresión más baja de NMT2 se listan y clasifican por tipo de cáncer; [000121] La figura 12A-12F representa que las NMT se escinden durante la apoptosis, pero permanecen activas; [000122] La figura 13A-13D representa la purificación de GST y His6 marcadas con HNMT1 y hNMT2 recombinantes; [000123] La figura 14 representa la comparación de las actividades enzimáticas entre His6-NMT1 de longitud completa recombinante purificada y ct-His6-3STMT1 "truncada con caspasa" recombinante; [000124] La figura 15 representa la comparación de la EC50 e IC50 de varios inhibidores de NMT y diferentes líneas de células; [000125] La figura 16 representa la inducción con DDD86481 de la apoptosis; [000126] La figura 17A-17B representa (fig. 17A) una inmunotransferencia con las líneas de células linfoides indicada, sondeadas para la presencia de NMT2, y (fig.l7B) el nivel de expresión del ARNm de NMT2 mostrado como log2 (microarreglo de intensidad de fluorescencia NMT2) para las líneas celulares indicadas de los datos de CCLE; [000127] La figura 18A-18B representa el uso de una sonda de destiobiotina-PEG-azida para jalar de manera post-trasduccional las proteínas w-alquinil-miristoiladas en células T Jurkat leucémicas usando cuentas de estreptavidina-Sefarosa; [000128] La figura 19A-19B representa el uso a mayor escala de una sonda de destiobiotina-PEG-azida para jalar de manera post-transduccional las proteínas w-alquinil-miristoiladas en células T Jurkat leucémicas usando cuentas magnéticas de estreptavidina; [000129] La figura 20 representa los perfiles de miristoilación de células B inmortalizadas "normales" (IM9) y células BL (BL2 y Ramos) marcadas con alquinil-miristato; [000130] La figura 21A-21B representa gráficas de citotoxicidad dependiente de la dosis y tiempo de la combinación de DDD86481 y doxorrubicina; [000131] La figura 22A-22B representa la inmunotransferencia llevada a cabo con células incubadas con DMSO, Estaurosporina, a-FAS, o portador solo; [000132] La figura 23 representa que la NMT2 truncada con caspasa es 3-4 veces más activa que la MT2 de longitud completa; [000133] La figura 24 representa las inmunotransferencias de células B "normales" (IM9) y células BL malignas (Ramos, BL2) tratadas con SAHA 1 mM (inhibidor de HDAC clase I/II) durante 24 h; [000134] La figura 25 representa que los niveles de la proteína de NMT2 se reducen en varias líneas de células de BL; [000135] La figura 26 representa que la degradación proteosómica no es la causa del agotamiento de NMT2 en células BL; la figura 27A-27B representa que la NMT1 se escinde por caspasa-8, pero no NMT2 [000136] La figura 28A-28B representa tanto NMT1 como NMT2 que se escinden por caspasa-3; [000137] La figura 29 representa los sitios de escisión por caspasa de NMT1 de NMT2 y como se identifica por degradación Edman mostrado en negritas y la secuencia de Usina positivamente cargada (K) se resalta en las secuencias de aminoácidos de NMT1 y NMT2 (aminoácidos 1 a 80); [000138] La figura 30 representa la confirmación de los sitios de escisión de NMT por mutagénesis dirigida al sitio; [000139] La figura 31 representa los sitios de escisión por caspasa de NMT1 y NMT2 como se identifica por degradación Edman mostrada en negritas y la secuencia de lisinas positivamente cargada (K) se resalta en las secuencias de aminoácidos de NMT1 y NMT2 (aminoácidos 1 a 80); [000140] La figura 32 representa los cambios a los niveles de NMT conforme las células experimentan apoptosis; [000141] La figura 33 representa la actividad inicial de NMT en los lisados de células C0S7 transfectadas de manera tranciente; [000142] La figura 34 representa la actividad inicial de NMT en los lisados de células COS7 transfectadas de manera tranciente; [000143] La figura 35 representa la actividad de NMT en células C0S7 que expresan de manera tranciente V5-NMT1 y V5-NMT2 incubadas con estaurosporina (2.5 mM) y cicloheximida (5 mg/mL); [000144] La figura 36 representa la purificación de hNMTl escindida con caspasa y de longitud completa marcada con hexahistidina (His) recombinante; [000145] La figura 37 representa la purificación de hNMT2 escindida con caspasa y de longitud completa, marcada con hexahistidina (His) recombinante; [000146] La figura 38 representa la actividad de NMT de la histidina (His)-NMT escindidas con caspasa y de longitud completa, purificadas, valoradas usando un ensayo de miristoilación peptídica; [000147] La figura 39 representa el fraccionamiento subcelular de las NMT endógenas en células HeLa durante la apoptosis; [000148] La figura 40A-40B representa la cuantificación de la cantidad de NMT en diferentes fracciones después del fraccionamiento subcelular de las NMT endógenas en células HeLa durante la apoptosis; y [000149] La figura 41A-41B representa el fraccionamiento subcelular de células HeLa que someten a apoptosis marcadas con alquinil-miristato; y [000150] La Figura 42 representa el efecto del ácido 2-hidroximirístico (HMA) en la inducción de la apoptosis. Se trataron células T Jurkat con o sin HMA (1 mM) y se indujo la apoptosis con anti-Fas (150 ng/ml) y cicloheximida (5 mg/ml). [000151] En la descripción detallada que sigue, los números en negritas sirven para identificar las partes componentes que se describen y refieren con relación a las figuras que representan varias modalidades de la invención. Se debe señalar que al describir varias modalidades de la presente invención, se han usado los mismos números de referencia para identificar los mismos elementos similares. Además, por cuestiones de simplicidad, se han omitido partes de algunas figuras de los dibujos.
Descripción Detallada de la Invención [000152] Como se describirá en más detalle más adelante, se describen en la presente compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de un sujeto con cáncer. También se describen en la presente métodos para identificar un sujeto con cáncer, que son adecuados para el tratamiento con los compuestos, composiciones y métodos que se describen en la presente. También se describen en la presente métodos para identificar un sujeto con cáncer. [000153] La presente invención proporciona métodos y composiciones para el tratamiento de cánceres deficientes de NMT en un sujeto. Los cánceres deficientes de NMT incluyen cánceres deficientes en NMT2 o NMT1. En un ejemplo específico, el cáncer deficiente en NMT es un cáncer deficiente en NMT2. [000154] El término "cáncer", como se usa en la presente, se refiere a una variedad de condiciones provocadas por el crecimiento anormal descontrolado de células. Las células capaces de provocar cáncer, referidas como "células de cáncer", poseen propiedades características tal como proliferación descontrolada, inmortalidad, potencial metastático, crecimiento rápido y velocidad rápida de proliferación, y/o ciertas características morfológicas típicas. Las células de cáncer pueden estar en la forma de un tumor, pero estas células también pueden existir solas dentro de un sujeto, o puede ser una célula de cáncer no tumorigénica. Se puede detectar un cáncer en cualquiera de varias maneras, incluyendo, pero no limitado a, la detección de la presencia de un tumor o tumores (por ejemplo, por medios clínicos o radiológicos), examinando células dentro de un tumor o de otra muestra biológica (por ejemplo, de una biopsia de tejido), midiendo marcadores sanguíneos indicativos de cáncer, y detectando un genotipo indicativo de un cáncer. Sin embargo, un resultado negativo en uno o más de los métodos anteriores de detección no indica necesariamente la ausencia de cáncer, por ejemplo, un paciente quien ha exhibido una respuesta completa a un tratamiento de cáncer aún puede tener un cáncer, como se evidencia por una recaída subsiguiente. [000155] En un ejemplo específico de la presente descripción, el cáncer es linfoma. [000156] El término "linfoma" como se usa en la presente se refiere a un crecimiento maligno de células B o T en el sistema linfático. "Linfoma" incluye numerosos tipos de crecimientos malignos, incluyendo linfoma de Hodgkin y linfoma no de Hodgkin. El término "linfoma no de Hodgkin" como se usa en la presente, se refiere a un crecimiento maligno de células B o T en el sistema linfático que no es un linfoma de Hodgkin (que se caracteriza, por ejemplo, por la presencia de células Reed-Sternberg en el área cancerosa). Los linfornas no de Hodgkin abarcan más de 29 tipos de linfomas, las distinciones entre los cuales se basan en el tipo de células de cáncer. [000157] En un ejemplo más específico de la presente descripción, el cáncer es un linfoma B. [000158] De esta manera, en una modalidad, los compuestos, composiciones y métodos de la descripción son adecuados para el tratamiento de un sujeto con linfoma de células B. [000159] Los ejemplos de linfomas de células B incluyen, pero no se limitan a, por ejemplo, linfoma folicular, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstroma, y linfoma de células B monocitoide/tipo MALT. También se contempla el tratamiento de linfomas pediátricos tal como linfoma de Burkitt, linfoma difuso de células B grandes, linfoma folicular, B-LBL precursor T-LBL precursor, y linfoma anaplástico de células grandes. [000160] En otra modalidad, el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstroma, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes. Leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de Plasma, Adenocarcinoma Intestinal, Carcinoma Adenoescamoso Mezclado de Pulmón, Carcinoma de Células Pequeñas de Pulmón, Pulmón, Carcinoma de Células Escamosas Esofágicas, Hueso, Carcinoma Ductal de Mama, Adenocarcinoma Difuso de Estómago, Carcinoma Medular Tiroide, Carcinoma de Células Transicionales de Tracto Urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, o carcinoma escamoso esofágico. [000161] El término "sujeto", como se usa en la presente, se refiere a un animal, y puede incluir, por ejemplo, animales domesticados, tal como gatos, perros, etc., ganado (por ejemplo, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, etc.), animales de laboratorio (por ejemplo, ratones, conejos, ratas, cobayos, etc.), mamíferos, mamíferos no humanos, primates, primates no humanos, roedores, aves, reptiles, anfibios, peces y cualquier otro animal. En un ejemplo específico, el sujeto es un humano. [000162] El término "tratamiento" o "tratar" como se usa en la presente, se refiere a obtener resultados benéficos o deseados, incluyendo resultados clínicos. Los resultados clínicos deseados o benéficos pueden incluir, pero no se limitan a, alivio o mejora de uno o más síntomas o condiciones, disminución del grado de la enfermedad, estado estabilizado (es decir no empeorado de la enfermedad), prevención de la propagación de la enfermedad, retraso o desaceleración del progreso de la enfermedad, mejora o paliación del estado de la enfermedad, disminución de la recurrencia de la enfermedad, y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" y "que trata" también pueden significan prolongar la supervivencia como lo opuesto la supervivencia esperada si no está recibiendo tratamiento. "Tratamiento" y "que trata" como se usan en la presente también incluyen tratamiento profiláctico. Por ejemplo, un sujeto con cáncer temprano, por ejemplo un linfoma de etapa temprana se puede tratar para prevenir el progreso o de manera alternativa un sujeto en remisión se puede tratar con un compuesto o composición descrito en la presente para impedir la recurrencia. [000163] Se conoce en la presente que las celulas de linfoma de células B expresan NMT1, pero no NMT2. Esto es en contraste a las células leucémicas y otras probadas, que expresan tanto NMT1 como NMT2. (Como se muestra en las Figuras 1 a 4B) [000164] Adicionalmente, se muestra en la presente que las células de linfoma B son sensibles a la inhibición de la viabilidad celular por inhibidores de NMT. [000165] En un ejemplo, el inhibidor de NMT es tris-dibencilideneacetona-dipaladio (Tris-DBA) (Figura 2) [000166] En otros ejemplos, el inhibidor NMT, 2-hidroximiristo (HMA) se usa para inhibir células de linfoma B. [000167] En aún otro ejemplo, el inhibidor de pirazol-sulfonamida de NMT de T. brucie [J.A.Frearson et al (2010) Nature. 464.728-723)] (DDD85646) se usa para inhibir células de linfoma B. (Figura 5). [000168] En otro ejemplo, el inhibidor es DDD86481. [000169] En un ejemplo específico, el tratamiento de un sujeto con linfoma B comprende administrar al sujeto con un inhibidor de NMT. [000170] Los compuestos inhibidores de NMT, o derivados, se pueden usar en la presente invención para el tratamiento de cáncer deficiente en NMT2. [000171] El término "deficiente" como se usa en la presente se refiere ampliamente a inhibición, reducción o eliminación de (en comparación a muestras de control o tipo silvestre, por ejemplo, de la síntesis, niveles, actividad o función de NMT, así como la inhibición de la inducción o estimulación de la síntesis, niveles, actividad, o función de la proteína de NMT (por ejemplo NMT 1 o NMT2). El término también se refiere a cualquier ruta metabólica o reguladora, que pueda regular la síntesis, niveles, actividad, o función de NMT. El término incluye también inhibición, reducción o eliminación que resulta de la unión con otras moléculas y formación de complejos. Por lo tanto, el término "deficiente en NMT" se refiere a lo que da por resultado la inhibición, reducción o eliminación de la función de la ruta de la proteína o la función de la proteína. Sin embargo, el término no implica que todas y cada una de estas funciones se van a inhibir al mismo tiempo. [000172] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como que es deficiente en NMT al determinar la presencia de una mutación en un gen de NMT. Estos métodos de detección de ácidos nucleicos y amplificación son bien conocidos por el trabajador experto. [000173] Por ejemplo, el ácido nucleico que se va a amplificar puede ser de una muestra biológica. Son adecuados varios métodos (tal como extracción con fenol y cloroformo) de extracción para aislar el ADN o ARN. El ácido nucleico extraído de una muestra se puede amplificar usando téenicas de amplificación de ácidos nucleicos, bien conocidos en la técnica. Los ejemplos bien limitantes incluyen reacción en cadena (PCR), reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa invertida (RT-PCR), PCR anidada, reacción en cadena de la ligasa, indicadores de ARN amplificable, de ARN amplificable, replicación Q-beta, amplificación basada en transcripción, amplificación de ADN tipo bumerán, activación de desplazamiento de hebra, tecnología de sonda cíclica, amplificación a base de secuencia de ácido nucleico isotérmica (NASBA), u otros ensayos de replicación de secuencia o ensayos de amplificación de señal también se pueden usar. [000174] En la técnica son bien conocidos los métodos de amplificación. Algunos métodos emplean transcripción inversa de ARNa ADNc. [000175] En un ejemplo, se usa PCR para amplificar una secuencia diana de interés, por ejemplo, una secuencia de NMT2. [000176] Se pueden amplificar ácidos nucleicos antes de la detección o se pueden detectar directamente durante un paso de amplificación, por ejemplo, métodos "tiempo real". En algunas modalidades, la secuencia diana se amplifica usando un cebador marcado tal que el amplicón resultante esté marcado de manera detectable. En algunas modalidades, el cebador se marca de manera fluorescente. En algunas modalidades, la secuencia diana se amplifica y el amplicón resultante se detecta por electroforesis. [000177] El nivel de expresión génica se puede determinar al valorar la cantidad de ARNm de NMT2 en un amuestra. En la téenica se conocen los métodos para medir ARNm en muestras. Para medir los niveles de ARNm, las células en las muestras se pueden U sar y se pueden medir los niveles de ARNm en los U sados o en ARN amplificado o purificado o semi-purificado de lisados mediante cualquier variedad de métodos familiares para aquellos expertos en la técnica. Estos métodos incluyen, sin limitación, ensayos de hibridación usando sondas de ADN o ARN detectablemente marcadas, por ejemplo, transferencia Northern, o metodologías de RT-PCR cuantitativas o semi-cuantitativas usando cebadores apropiados de oligonucleótidos. De manera alternativa, se puede llevar a cabo la hibridación in situ cuantitativa o semi-cuantitativa usando, por ejemplo, secciones de tejido, o suspensiones celulares no U sadas, y detectablemente marcadas, sondas de ADN o ARN marcadas de manera detectable, por ejemplo fluorescentes o marcadas con enzimas. Los métodos adicionales para cuantificar el ARNm incluyen ensayo de protección de ARN ( "RPA"), microensayos de oligonucleótidos y ADNc, análisis de diferencia de representación ( "RDA"), visualización diferencial, análisis de secuencia EST, análisis serial de expresión génica ("SAGE"), y amplificación múltiplex mediada por ligación con el Luminex Flex AP ( "LMF"). [000178] También se puede monitorizar la amplificación usando métodos de "tiempo real". La PCR de tiempo real permite la detección y cuantificación de un ácido nucleico diana. Típicamente, este planteamiento para PCR cuantitativa utiliza un tinte fluorescente, que puede ser un tinte específico de doble hebra, tal como SYBR Verde.RTM. I. De manera alternativa, se pueden conjugar otros tintes fluorescentes, por ejemplo, FAM o HEX, a una sonda de oligonucleótido o un cebador. En la téenica se conocen varios instrumentos capaces de realizar la PCR de tiempo real. La señal fluorescente generada en cada ciclo de PCR es proporcional a la cantidad de producto de PCR. Una gráfica de fluorescencia versus número de ciclos se usa para describir la cinética de amplificación y se usa un nivel de umbral de fluorescencia para definir un número de ciclo fraccional relacionado a la concentración inicial de la plantilla. Cuando se realiza la amplificación y se detecta en un instrumento capaz de leer la fluorescencia usando ciclos térmicos, el producto propuesto de PCR de los productos de PCR no específicos se pueden diferenciar usando análisis de fusión. Al medir el cambio en la fluorescencia en tanto que se incrementa gradualmente la temperatura de la reacción subsiguiente a la amplificación y generación de señal puede ser posible determinar la (Act) de los productos propuestos así como aquella del producto no específico. [000179] Los métodos pueden incluir amplificar múltiples ácidos nucleicos en la muestra, también conocido como "detección "multiplex" o "multiplexación". Como se usa en la presente, el término "PCR multiplex" se refiere a PCR, que comprende adicionar más de un conjunto de cebadores de PCR a la reacción a fin de detectar y cuantificar múltiples ácidos nucleicos, incluyendo ácidos nucleicos de uno o más marcadores génicos diana. Adicionalmente, la multiplexación con un control interno, por ejemplo, 18s rRNA, GADPH, o .beta.-actina) proporciona un control para la PCR sin reacción. [000180] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como que es deficiente en NMT al determinar la inactivación epigenética de un gen de NMT. [000181] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como que es deficiente en NMT al determinar la actividad de NMT (incluyendo NMT1 o NMT2) en una muestra de células en un sujeto. Se puede determinar la actividad con relación a un control, por ejemplo en el caso de defectos de células de cáncer, con relación a células no cancerosas, de manera preferente del mismo tejido. De esta manera, un cáncer deficiente en NMT puede tener expresión y/o actividad reducida o eliminada de NMT. La actividad de NMT se puede determinar al usar téenicas bien conocidas y/o como se describe en la presente. En estos ejemplos, un cáncer deficiente en NMT tiene una actividad reducida o eliminada. [000182] En unos ejemplos, se puede identificar un cáncer como NMT (por ejemplo, NMT1, NMT2, o ambos) deficientes al determinar la cantidad, concentración y/o niveles de proteínas de NMT. [000183] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como deficiente en NMT al determinar la cantidad de proteínas miristoiladas en una muestra biológica de un sujeto con cáncer, lo sospechoso de tener cáncer. En este ejemplo, se puede determinar la presencia, o ausencia o cantidad de la proteína miristoilada, por ejemplo, usando química de click usando análogos apropiados de ácidos grasos. En la presente se describen métodos no limitantes. El experto en la técnica conocerá métodos alternativos para determinar la presencia, ausencia, o cantidad de las proteínas miristoiladas. Una muestra que tiene una cantidad reducida de proteína miristoilada en una muestra (opcionalmente en comparación a un control) es indicativa de una muestra deficiente NMT o un cáncer deficiente en NMT. En algunos ejemplos, una muestra que tiene una cantidad reducida de proteína miristoilada en una muestra es indicativa de una muestra deficiente en NMT2, o un cáncer deficiente en NMT2. [000184] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como deficiente en NMT al determinar la cantidad de acilación de proteínas en una muestra biológica de un sujeto con cáncer, o sospechoso de tener cáncer. En este ejemplo, se puede determinar la presencia, ausencia o cantidad de acilación de proteínas. Estos métodos se conocerán por el experto en la téenica. Una muestra que tiene una cantidad reducida de acilación de proteínas en una muestra (opcionalmente en comparación a un control) es indicativa de una muestra deficiente en NMT, o cáncer deficiente en NMT. En algunos ejemplos, una muestra que tiene una cantidad reducida de acilación de proteínas en una muestra es indicativa de una muestra deficiente en NMT2, o un cáncer deficiente en NMT2. [000185] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como deficiente en NMT al determinar la presencia de una o más variaciones de secuencia tala como mutaciones y polimorfismos puede incluir una supresión, inserción o sustitución de uno o más nucleótidos, con relación a la secuencia de nucleótidos tipo silvestre. La una o más variaciones pueden estar en una región codificadora o no codificadora de la secuencia de ácido nucleico, y pueden reducir o anular la expresión o función de NMT. De esta manera, el ácido nucleico variante se puede codificar por un polipéptido variante que tiene actividad reducida o anulada o puede codificar para un polipéptido tipo silvestre que tiene poca o ninguna expresión dentro de la célula, por ejemplo a través de la actividad alterada de un elemento regulador. [000186] En algún ejemplo, se puede identificar un cáncer como deficiente en NMT al determinar los agentes que afectan o regulan de manera negativa la expresión de NMT. [000187] Se pueden usar una variedad de métodos para determinar la presencia o ausencia de una secuencia particular de ácido nucleico en una muestra obtenida de un sujeto. [000188] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como deficiente en NMT al valorar el nivel de expresión o actividad de un regulador positivo o negativo de NMT de un componente de la ruta de NMT. Se pueden determinar los niveles de expresión, por ejemplo, por inmunoensayos, tal como inmunotransferencias y ELISA, y métodos de detección de ácidos nucleicos, tal como RT-PCR, teenología de nanocadenas, análisis cariotípico o por hibridación de ácidos nucleicos de ARN-seq. [000189] En algunos ejemplos, se puede identificar un cáncer como que es deficiente en NMT1 y/o NMT2 al determinar la presencia en una muestra celular del individuo de una o más variaciones, por ejemplo, polimorfismos o mutaciones en NMT1 y/o NMT2. [000190] También se pueden detectar mutaciones y polimorfismos asociados con cáncer al nivel de proteína al detectar la presencia de una variante (es decir una variante o una variante alélica) al determinar la presencia de un polipéptido variante (es decir, un mutante o variante alélica). [000191] En otro ejemplo, se proporciona un método para tratar un sujeto con cáncer, en donde el cáncer comprende células de cáncer que son deficientes en NMT2, que comprende administrar al sujeto un inhibidor de NMT y/o un inhibidor de NMTl. [000192] El término "inhibir" o "inhibidor" como se usa en la presente, se refiere a cualquier método o téenica que inhiba la síntesis, niveles, actividad o función de las proteínas, así como a métodos para inhibir la inducción o estimulación de síntesis, niveles, actividad o función de la proteína de interés, por ejemplo, NMT2. El término también se refiere a cualquier ruta metabólica o reguladora, que puede regular la síntesis, niveles, actividad o función de la proteína de interés. El término incluye unión con otras moléculas y formación de complejos. Por lo tanto, el término "inhibidor" se refiere a cualquier agente o compuesto, la aplicación de lo cual da por resultados la inhibición de la función de la proteína o la función de la ruta de la proteína. Sin embargo, el término no implica que todas y cada una de estas funciones se deben inhibir al mismo tiempo. [000193] En otro ejemplo, se proporciona un método para tratar un sujeto con cáncer, en donde el cáncer comprende células de cáncer deficientes en NMT1, que comprende administrar al sujeto un inhibidor de NMT y/o un inhibidor de NMT2. [000194] En algunos ejemplos, los métodos de tratamiento comprenden administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto descrito en la presente y que consiste opcionalmente de la administración o aplicación individual, o de manera alternativa comprende de una serie de administraciones o aplicaciones. En un ejemplo específico, el compuesto es un inhibidor de NMT, un inhibidor de NMT1 y/o un inhibidor de NMT2. [000195] En un ejemplo más específico, el inhibidor de NMT es Tris-DBA, HMA, DDD85646, DDD86481, o derivados de esto. [000196] En otros ejemplos, los compuestos y/o composiciones se proporcionan en una cantidad farmacéuticamente efectiva adecuada para la administración a un sujeto. [000197] El término "cantidad farmacéuticamente efectiva" como se usa en la presente se refiere a la cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que producirá la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o humano que se está buscando por un investigador o clínico. La cantidad puede ser una cantidad terapéuticamente efectiva. [000198] Los compuestos y composiciones se proporcionan en una forma farmacéuticamente aceptable. [000199] El término "farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente incluye compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosis (tal como dosis unitarias) que son adecuadas para el uso en el contacto con los tejidos de un sujeto sin toxicidad excesiva, ni irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, en proporción con una relación razonable de beneficio/riesgo. Cada portador, excipiente, etc., también es "aceptable" en el sentido de que es compatible con los otros ingredientes de la formulación. [000200] La cantidad real administrada, y la velocidad y transcurso de tiempo de administración, dependerá de la naturaleza y la severidad de lo que se esté tratando. La prescripción del tratamiento, por ejemplo, decisiones de la dosis, etc., está dentro de la responsabilidad del practicante general y otros doctores médicos, y toma en cuenta típicamente el trastorno que se va a tratar, la condición del paciente individual, el sitio de administración, el método de administración y otros factores conocidos por los practicantes. [000201] Se puede administrar un compuesto o composición solo o en combinación con otros tratamientos, ya sea de manera simultánea o secuencial, dependiendo de la condición que se va a tratar. [000202] Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en la forma de dosis unitaria y se pueden preparar por cualquier método bien conocido en la téenica de farmacia. Estos métodos incluyen el paso de poner en asociación el compuesto activo con un portador, que puede constituir uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan al poner en asociación de manera uniforme e íntima el compuesto activo con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos o ambos, y luego si es necesario formar el producto. [000203] Los compuestos y composiciones se pueden administrar a un sujeto por cualquier ruta conveniente de administración, ya sea de manera sistémica/periférica o en el sitio deseado de acción, incluyendo pero no limitado a, oral (por ejemplo por ingestión); tópica (incluyendo por ejemplo transdérmica, intranasal, ocular, bucal, y sublingual); pulmonar (por ejemplo por inhalación o terapia de insuflación usando, por ejemplo, un aerosol, por ejemplo a través de la boca o nariz); rectal; vaginal; parenteral, por ejemplo, por inyección, incluyendo subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardíaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaraenoide, e intrasterna; por implante de un depósito / por ejemplo, de manera subcutánea o de manera intramuscular. [000204] Las formulaciones adecuadas para administración oral (por ejemplo, por ingestión) se pueden presentar comunidades discretas tal como cápsulas, cápsulas amiláceas o tabletas, cada una que contiene una cantidad predeterminada del compuesto activo; como un polvo o gránulos; como una solución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite; como un bolo; como un eluptuario; o como una pasta. [000205] Las formulaciones adecuadas para administración parenteral (por ejemplo, por inyección, incluyendo cutánea, subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica), incluyen soluciones de inyección estéril libre de pirógenos, isotónicas, acuosas o no acuosas que pueden contener anti-oxidantes, amortiguadores, conservadores, estabilizadores, bacterioestatos y solutos que vuelven isotónica la formulación con la sangre del receptor propuesto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes, liposomas u otros sistemas de micropartículas que se diseñan para dirigir el compuesto a los componentes sanguíneos o uno o más órganos. Los ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para el uso en estas formulaciones incluyen Inyección de Cloruro de Sodio, solución de Ringer, o Inyección de Ringer Lactado. [000206] Las formulaciones se pueden presentar en recipientes sellados de una dosis o de múltiples dosis, por ejemplo, ampolletas y frascos, y se pueden almacenar en una condición secada por congelación (liofilizada) que requiere solo la adición del portador líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes del uso. Se pueden preparar soluciones y suspensiones de inyección extemporánea y de polvos, gránulos y tabletas estériles. Las formulaciones pueden estar en la forma de liposomas u otros sistemas de micropartículas que se diseñan para tener como objetivo el compuesto activo para dirigir el compuesto activo a los componentes sanguíneos o uno o más órganos. [000207] Las composiciones que comprenden los compuestos descritos en la presente se pueden usar en los métodos descritos en la presente en combinación con regímenes quimioterapéuticos normales o en unión con radioterapia. [000208] En el caso del linfoma en un paciente, los tratamientos conocidos son dependientes del sujeto que se trate, del tipo de enfermedad y de su etapa. Las modalidades existentes de tratamiento para linfoma se conocen por el experto en la téenica. Por consiguiente, se pueden usar tratamientos conocidos junto con los inhibidores de MT descritos en la presente. [000209] Las combinaciones comunes de fármaco para el uso en el tratamiento de linfornas incluyen, pero no se limitan a, CHOP (es decir, ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, y prednisona), GAP-BOP (es decir, ciclofosfamida, doxorubicina, procarbazina, bleomicina, vincristina, y prednisona), m-BACOD (es decir, metotrexato, bleomicina, doxorubicina, ciclofosfamida, vincristina, dexametasona, y leucovorin), ProMACE-MOPP (es decir, prednisona, metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, etoposido, leucovorina con MOPP), ProMACE-CytaBOM (prednisona, doxorubicina, ciclofosfamida, etoposido, citarabina, bleomicina, vincristina, metotrexato, y leucovorina), y MACOP-B (metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, vincristina, prednisona, bleomicina, y leucovorina). Para linfoma agresivo no de Hodgkin de recaída, se pueden usar las siguientes combinaciones de fármacos de quimioterapia con los compuestos y composiciones descritas en la presente: IMVP-16 (es decir, ifosfamida, metotrexato, y etoposido), MIME (es decir, metil-gag, ifosfamida, metotrexato, y etoposido), DHAP (es decir, dexametasona, - 16 citarabina de alta dosis, y cisplatina), ESHAP (es decir, etoposido, metilprednisona, citarabina de alta dosis, y cisplatina), CEFF(B) (es decir, ciclofosfamida, etoposido, procarbazina, prednisona, y bleomicina), y CAMP (es decir, lomustina, mitoxantrone, citarabina, y prednisona). [000210] El tratamiento para quimioterapia de salvamento usada para ciertos linfomas tal como para enfermedad de Hodgkin resistente de recaída incluyen pero no se limitan a VABCD (es decir, vinblastina, doxorubicina, dacarbazina, lomustina y bleomicina), ABDIC (es decir, doxorubicina, bleomicina, dacarbazina, lomustina, y prednisona) CBVD (es decir, lomustina, bleomicina, vinblastina, dexametasona), PCVP (es decir, vinblastina, procarbazina, ciclofosfamida, y prednisona), CEP (es decir, lomustina, etoposido, y prednimustina), EVA (es decir, etoposido, vinblastina, y doxorubicina), MOPLACE (es decir, ciclofosfamida, etoposido, prednisona, metotrexato, citaravina, y vincristina), MIME (es decir, metil-gag, ifosfamida, metotrexato, y etoposido), MINE (es decir, mitoquazona, ifosfamida, vinorelbina, y etoposido), MTX-CHOP (es decir, metotrexato y CHOP), CEM (es decir, lomustina, etoposido, y metotrexato), CEVD (es decir, lomustina, etoposido, vindesina, y dexametasona), CAVP (es decir, lomustina, melfalan, etoposido, y prednisona), EVAP (es decir, etoposido, vinblastina, citarabina, y cisplatina), y EPOCH (es decir, etoposido, vincristina, doxorubicina, ciclofosfamida, y prednisona). [000211] Se apreciará que los métodos alternativos para inhibir NMT1 o NMT2 se pueden usar en una estrategia letal sintética para el tratamiento de cáncer y en particular el tratamiento de linfoma de células B. por ejemplo, la expresión de NMT1 o NMT2 se puede inhibir usando teenología anti-sentido o de ARNi. El uso de estos planteamientos para reducir la expresión génica y/o actividad de proteínas se conoce por el experto en la técnica. [000212] En otra modalidad de la presente descripción, se proporciona un método para determinar el beneficio del inhibidor de NMT2 y/o NMT1 inhibidor de del tratamiento de un paciente. [000213] En un ejemplo, un método de la presente descripción comprende determinar, analizar, o medir de manera cualitativa o cuantitativa una muestra de un sujeto con cáncer, o sospechoso de tener cáncer, para la presencia o ausencia, o cantidad o concentración, de NMT1 y/o NMT2. [000214] En otro ejemplo, un método de la presente descripción comprende determinar, analizar o medir de manera cualitativa o cuantitativa una muestra de un sujeto co cáncer o sospechoso de tener cáncer, para la presencia o ausencia, o cantidad o concentración de proteínas miristoiladas. [000215] En otro ejemplo, un método de la presente descripción comprende determinar, analizar o medir de manera cualitativa o cuantitativa una muestra de un sujeto con cáncer, o sospechoso de tener cáncer, para la presencia o ausencia, o cantidad de concentración de proteínas aciladas. [000216] El término "muestra" como se usa en la presente se refiere a cualquier muestra de un sujeto, incluyendo pero no limitado a una muestra de fluido, células o tejido que comprende células de cáncer, o que es sospechosa de contener células de cáncer, que se puede valorar para los niveles de expresión génica, niveles de proteínas, niveles de actividad enziática y similares. La muestra puede incluir, por ejemplo, muestra de sangre, muestra de sangre fraccionada, muestra de médula ósea, una biopsia, una muestra de tejido congelado, un espécimen de tejido fresco, una muestra de células y/o una sección incrustada en parafina, material de lo cual se puede extraer la ARN en cantidades suficientes y con adecuada calidad para permitir la medición de los niveles relativos de ARNm, o material del cual se pueden extraer polipéptidos en cantidades suficientes y con calidad adecuada para permitir la medición de los niveles relativos de polipéptidos. [000217] La determinación, análisis o medición de NMT1 o NMT2, o la presencia o ausencia de NMT1 y/o NMT2 se puede correlacionar con el beneficio del tratamiento con inhibidor de NMT1 o inhibidor NMT2 de cáncer en el paciente. [000218] La determinación, análisis o medición de proteínas miristoiladas, o la presencia o ausencia de proteínas miristoiladas se puede correlacionar con el beneficio del Tratamiento con inhibidor de NMT1 o inhibidor de NMT2 de cáncer en el paciente. [000219] La determinación, análisis o medición de proteínas aciladas, o la presencia o ausencia de proteínas miristoiladas se puede correlacionar con el beneficio del Tratamiento con inhibidor de NMT1 o inhibidor de NMT2 de cáncer en el paciente. [000220] En un ejemplo específico, los anticuerpos de la presente invención son inmunoreactivos o inmunoespecífíeos para, y por lo tanto se unen de manera específica y selectiva a una proteína de interés, por ejemplo, la proteína NMT1 o NMT2. En un ejemplo, se pueden usar anticuerpos que son inmunoreactivos e inmnoespecífíeos para N T1 o NMT2 de humano. Los anticuerpos para NMT1 o NMT2 de humano son preferentemente inmunoespecíficos. El término "anticuerpo" y "anticuerpos" incluye, pero no se limita a, anticuerpos monoclonales y policlonales. [000221] En otro ejemplo, los anticuerpos de la presente invención son inmunoreactivos o inmunospecíficos para, y por lo tanto se unen de manera específica y selectiva tanto a la proteína NMT1 como NMT2. En este ejemplo, se puede usar anticuerpos que son inmunoreactivos e inmunoespecíficos tanto para NMT1 como para NMT2 de humano. Los anticuerpos para NMT1 o NMT2 de humano son preferentemente inmunoespecíficos. En este ejemplo, y debido a la diferente masa molecular de NMT1 y N T2, es posible identificar la presencia o ausencia de ambas proteínas usando un anticuerpo individual, usando, por ejemplo SDS-PAGE e inmunotransferencia. El término "anticuerpo" y "anticuerpos" incluye, pero no se limita a, anticuerpos policlonales y monoclonales. [000222] El término "se une de manera específica" se refiere a alta avidez y/o a unión de unión de alta afinidad de un anticuerpo a un polipéptido específicos, por ejemplo, un epítopo de NMT1 o NMT2. Los anticuerpos que se unen a su epítopo en este polipéptido específico es más fuerte que la unión del mismo anticuerpo a cualquier otro epítopo, particularmente aquellos que pueden estar presentes en moléculas en asociación con, o en la misma muestra, como el polipéptido específico de interés. Los anticuerpos que se unen de manera específica a un polipéptido de interés, pueden ser capaces de unirse a otros polipéptidos a un nivel débil, pero detectable. Esta unión débil, o unión de fondo, es fácilmente discernible de la unión específica del anticuerpo al compuesto o polipéptido de interés, por ejemplo por el uso de controles apropiados, como se conocerá por el experto en la téenica. [000223] En un ejemplo, una muestra que contiene células cancerosas o sospechosa de tener células cancerosas se obtiene de un sujeto con cáncer. La recolección de esta muestra es bien conocida por el experto en la técnica. En un ejemplo específico, la muestra es una muestra de sangre. Los métodos para obtener una muestra, procesar almacenar esta muestra también son bien conocidos por el experto en la técnica. [000224] En un ejemplo específico, la detección, análisis o medición de la proteína NMT1 o NMT2 dentro de una muestra se lleva a cabo usando inmunohistoquímica. En un ejemplo más específico, la detección, análisis, o medición de NMT2 dentro de una muestra se lleva a cabo usando inmunohistoquímica. Será claro para una persona experta en la téenica que en la presente invención se pueden usar otros inmunoensayos, tanto cualitativos como cuantitativos. [000225] En ejemplos adicionales, se puede lograr la inmunohistoquímica (IHC) usando cualquier método o sistema adecuado de inmunohistoquímica. Los ejemplos no limitantes incluyen sistemas automatizados, IHC cuantitativa, IHC semi-cuantitativa y métodos manuales. [000226] El término inmunohistoquímica "cuantitativa" se refiere a un método automatizado para explorar y puntear muestras que han experimentado inmunohistoquímica para identificar cuantificar la presencia de un biomarcador específico, tal como un antígeno u otra proteína. Por ejemplo, para cuantificar NMT1 y/o NMT2. La puntuación dada a la muestra es una representación numérica de la intensidad de la tinción inmunohistoquímica de la muestra, y representa la cantidad de biomarcador diana (tal como NMT1 o NMT2) presente en la muestra. Como se usa en la presente, densidad óptica (OD) es una puntuación numérica que representa la intensidad de la tinción así como el porcentaje de células que se tiñen. Como se usa en la presente, inmunohistoquímica semicuantitativa se refiere a la puntuación de resultados inmunohistoquímicos por el ojo humano, donde un operador entrenado clasifica los resultados numéricamente (por ejemplo, como 0 [tinción débil o ausente], 1 o 2 [tinción fuerte]). [000227] Los sistemas automatizados de procesamiento, exploración y análisis de muestras adecuadas para el uso con la inmunohistoquímica se conocen en la téenica, y se pueden usar con la presente invención. Estos sistemas pueden incluir tinción automatizada y exploración microscópica, análisis computarizado de imágenes, comparación de secciones seriales (para control de la variación en la orientación y tamaño de un amuestra), generación de reportes digitales y archivo y seguimiento de muestras (tal como portaobjetos en los cuales se colocan sistemas de tejido). Los sistemas de formación de imágenes celulares están comercialmente disponibles, los cuales combinan microscopios convencionales de luz con sistemas digitales de procesamiento de imágenes para realizar análisis cuantitativo en células y tejidos, incluyendo muestras inmunoteñidos. [000228] En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que una muestra de paciente tiene baja (por ejemplo débil) en el ejemplo en el cual se determina que una muestra de paciente tiene baja (por ejemplo débil o ausente) tinción tumoral de NMT2 se considera que el paciente es un buen candidato para el tratamiento con inhibidor de N T1. En otro ejemplo específico, un paciente determinado como que tiene alta (por ejemplo, fuerte) tinción tumoral de NMT2 se considera un candidatos pobre para el tratamiento con inhibidor de NMT1. [000229] Se apreciará que el punto de corte para la determinación negativa vs positiva de IHC es una determinación semi-cuantitativa, y hecha por un patólogo experimentado usando métodos semi-cuantitativos y microscopía de luminosa. [000230] Por ejemplo, la IHC se puede clasificar en cualquiera de las siguientes maneras. 1. Cualquier tinción versus ninguna tinción; 2. Fuerte vs tinción débil; 3. Ninguna vs débil vs fuerte; 4. Una puntuación H comprendida de la fórmula (% ninguno x 0) + (% débil x 100); + (% moderado x 200) + (% fuerte x 300); 5. Software de análisis computarizado de imágenes para puntuación cuantitativa asistida. [000231] Los puntos de corte se definen inicialmente como por la sensibilidad de fármaco variable in vitro. Una vez que los fármacos aciertan ensayos clínicos, el punto de corte sensitivo vs no sensitivo se redefinirá y validará adicionalmente. [000232] En un ejemplo, al determinar si hay alta (por ejemplo, fuerte) o baja (por ejemplo, débil o ausente) tinción tumoral NMT2, la muestra del paciente se puede comparar a una o más muestras de control. En un ejemplo, una muestra de control tiene un nivel conocido y/o establecido de tinción tumoral de NMT2. En un ejemplo, una muestra de control es una muestra de paciente que tiene niveles conocidos y/o establecidos de tinción tumoral de NMT2 y/o resultado clínico conocido. En un ejemplo, un control es una línea celular que tiene una cantidad conocida de tinción de NMT2. [000233] Las opciones de tratamiento continuo para pacientes quienes se consideran que son un pobre candidato para el tratamiento con inhibidor de N T1 se conocerán por el experto en la téenica. [000234] Se apreciará que en algunos casos, un paciente quien inicialmente responde al tratamiento con inhibidor de NTM1 puede recaer. Esta recaída puede manifestarse de varias maneras, incluyendo pero no limitado a, re-ocurrencia del tumor primario y desarrollo de metástasis. Además, o de manera alternativa, puede surgir un tumor distinto adicional. [000235] De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un método que comprende: a) obtener una muestra de un sujeto con, o sospechoso de tener, cáncer; b) poner en contacto la muestra con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y NMT2 presente en la muestra; c) medir el complejo para determinar una cantidad o una concentración de NMT2 en la muestra; y d) determinar el beneficio del tratamiento con inhibidor de NMT1 del cáncer en el sujeto, en donde la determinación del beneficio de tratamiento con inhibidor de N T1 se determina por el nivel de NMT2 en la muestra. [000236] En un aspecto específico, la administración de un inhibidor de NMT1 al sujeto se indica cuando la cantidad a NMT2 en la muestra es baja o ausente, opcionalmente en comparación a un control. [000237] De acuerdo con un aspecto de la presente invención, se proporciona un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto cuando la cantidad a NMT2 en la muestra es baja o ausente, opcionalmente en comparación a un control. [000238] En algunos aspectos, la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y NMT2 en la muestra se usa para determinar la cantidad de complejo en la muestra. En algunos ejemplos, la instrumentación es un espectrofotómetro, espectrofluorómetro, dispositivo óptico, dispositivo electroquímico. En algunos ejemplos, el anticuerpo a NMT2 es un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal. [000239] Otros ejemplos que se pueden usar en la detección, análisis o medición de N T1 o NMT2 incluyen, pero no se limitan a, inmunotransferencia, ELISA, inmunofluorescencia indirecta, teenología de cuentas de multiplexión, inmunoprecipitación y espectroscopia de masa de la muestra obtenida del sujeto. En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina una muestra de paciente como que tiene baja o ausente tinción de NMT2, se considera al sujeto como un buen candidato para la terapia con inhibidor de NMT. [000240] En un ejemplo, la muestra se analiza por microscopía luminosa por examen directo o por captura y análisis de imágenes, o por microscopía fluorescente usando examen directo por análisis y captura de imágenes. [000241] En otro ejemplo, un método de la presente descripción comprende determinar, analizar o medir de manera cualitativa o cuantitativa la actividad de la proteína NMT1 y/o NMT2 en una muestra biológica de un sujeto con cáncer, para la presencia o ausencia de o la cantidad de la actividad de NMT1 y/o NMT2. En este ejemplo, los usos de substrato (naturales o sintéticos) de NMT1 o NMT2 se usan para identificar una muestra en la cual la actividad de NMT1 o NMT2 está presente, ausente o la cantidad de la misma. [000242] En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que la muestra de un sujeto es deficiente de NMT2, se considera al sujeto como un buen candidato para la administración de un inhibidor de NMT1. [000243] En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que la muestra del sujeto tiene bajos o ausentes niveles de proteína NMT2, se considera al sujeto como un buen candidato para la administración de un inhibidor de NMT1. [000244] En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que la muestra en el sujeto tiene baja o ausente actividad de NMT2, se considera al sujeto como un buen candidato para la administración de un inhibidor de NMT1. [000245] En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que la muestra en el sujeto tiene baja o ausente cantidad de proteína miristoilada, se considera al sujeto como un buen candidato para la administración de un inhibidor de NMT1. [000246] En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que la muestra al sujeto tiene una cantidad baja o ausente de proteína acilada, se considera al sujeto como un buen candidato para la administración de un inhibidor de NMT2. [000247] En otro ejemplo, un método de la presente descripción comprende identificar una mutación, supresión, o similar, en el gen de NMT1 o NMT2 en una muestra de un sujeto con cáncer o sospechoso de tener cáncer. En donde, la mutación, supresión, o similar, en el gen de NMT1 o NMT2 da por resultado una pérdida o disminución de la actividad de la proteína NMT1 o NMT2 en las células de cáncer dentro de la muestra. Los métodos para identificar las mutaciones, supresiones y similares en NMT1 o NMT2 se conocen por el experto en la téenica incluyen, pero no se limitan a, RFLP, RT-PCT, análisis de microarreglos, y/o cualquier tipo adecuado de secuenciación de ADN. En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que la muestra en el paciente tiene una mutación, supresión o similar, en la cual NMT2 da por resultado una baja o ausente actividad de la proteína NMT2, se considera al sujeto un buen candidato para la terapia con inhibidor de NMT. [000248] En otro ejemplo, un método de la presente descripción comprende identificar una mutación, supresión o similar, en el ARNm de NMT1 o NMT2 en una muestra en un sujeto con cáncer o sospechoso de tener cáncer. En donde, la mutación, supresión o similar en el ARNm de NMT1 o NMT2 da por resultado una pérdida de la disminución de la actividad de la proteína de NMT1 o NMT2 en células de cáncer dentro de la muestra. Los métodos para identificar estas mutaciones, supresiones o similares en el ARNm de NMT1 o NMT2 se conocen por el experto en la técnica incluyen, pero no se limitan a, transferencia Northern, RT-PCR, análisis de microarreglos, y/o cualquier tipo adecuado de secuenciación de ARNm. En la práctica, en el ejemplo en el cual se determina que la muestra de un paciente tiene una mutación, supresión o similar, en el ARNm de NMT2 lo que da por resultado una baja o ausente actividad de la proteína de NMT2, se considera al sujeto como un buen candidato para la terapia con inhibidor de NMT. [000249] En otro ejemplo, un método de la presente descripción, se proporciona un método para el tratamiento de un sujeto que padece de cáncer, asociado con un defecto en NMT1 o NMT2, que comprende administrar al sujeto un inhibidor de NMT. En un ejemplo específico, el cáncer se asocia con un defecto en NMT2, y el inhibidor es un inhibidor de NMT1. [000250] En otro ejemplo, se proporciona un uso de un inhibidor de NMT1 para el tratamiento de un cáncer deficiente en NMT2. [000251] En otro ejemplo, se proporciona el uso de un inhibidor de NMT1 para el tratamiento de un cáncer, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células de manto CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstroma, linfoma de células B onocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células de Plasma, Adenocarcino a Intestinal, Carcinoma Adenoescamoso Mezclado de Pulmón, Carcinoma de Células Pequeñas de Pulmón, Pulmón, Carcinoma de Células Escamosas Esofágicas, Hueso, Carcinoma Ductal de Mama, Adenocarcinoma Difuso de Estómago, Carcinoma Medular Tiroide, Carcinoma de Células Transicionales de Tracto Urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma rectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma de ovario, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, o carcinoma escamoso esofágico. En un ejemplo más específico, el cáncer se determina como que es un cáncer deficiente en NMT2. [000252] Los ejemplos de inhibidores incluyen, pero no se limitan a, molécula pequeñas. Anticuerpos, fragmentos peptídicos y/o moléculas de ácido nucleico. [000253] Los ejemplos específicos de moléculas pequeñas incluyen Tris-DBA, HMA, DDD85646, DDD86481, y sus derivados. El término "derivados" como se usa en la presente incluye, pero no se limita a, sales, complejos de coordinación, ésteres tal como ésteres hidrolizables in vivo, ácidos o bases libres, hidratos, profármacos o lípidos, compañeros de acoplamiento. [000254] Los fragmentos peptídicos se pueden preparar completamente o parcialmente por síntesis química del sitio activo de NMT1. Se pueden preparar fragmentos peptídicos de acuerdo a lo establecido, métodos normales de síntesis peptídicas en fase sólida o líquida, que se conocerán por el experto en la téenica. [000255] Los inhibidores de ácidos nucleicos o los complementos de estos, inhiben la actividad o función por la reducción de la producción del polipéptido activo. Esto se puede monitorizar usando métodos convencionales bien conocidos en la técnica, por ejemplo al examinar usando PCR de tiempo real como se describe en los ejemplo. [000256] Los ejemplos de inhibidores de ácidos nucleicos incluyen tecnología de ARNi o anti-sentido, el uso de la cual es para reducir la expresión génica, está bien establecida en la técnica. Se pueden diseñar oligonucleótidos antisentido para hibridar a la secuencia complementaria de ácidos nucleicos, pre-ARNm o ARNm maduro, que interfiere con la producción del componente base de la ruta de reparación por incisión de modo que su expresión se reduce o se impide completamente o de manera sustancialmente completa. Además de tener como objetivo la secuencia codificadora, se pueden usar técnicas anti-sentido para tener como objetivo las secuencias de control de un gen, por ejemplo, en la secuencia flanqueadora 5', por lo que los oligonucleótidos antisentido pueden diferir con las secuencias de control de expresión. [000257] Una alternativa al antisentido es usar una copia de todo o parte del gen diana insertado en el homosentido, es decir la misma orientación como el gen diana, para lograr la reducción en la expresión del gen diana mediante co- supresión. [000258] Adicionalmente, se puede usar lentificación de ARN de doble hebra (ARNds). La lentificación mediada por ARNds es específica del gen y frecuentemente se llama interferencia de ARN (ARNi). [000259] En otro ejemplo, se usa ácido nucleico que en la transcripción produce una ribosima, capaz de cortar el ácido nucleico en un sitio específico. Por lo tanto también útil en tener influencia en NMT. [000260] En aun otro ejemplo, se pueden emplear moléculas pequeñas de ARN para regular la expresión génica. Estas incluyen la degradación dirigida de los ARNm por ARNs pequeños de interferencia (ARNsi), lentificación génica post-transcripcional (PTG), represión transduccional específica de secuencia regulada por desarrollo del ARNm por micro-ARNs (ARNmi) y lentificación génica transcripcional dirigida. [000261] n aun otro ejemplo, se puede usar la expresión de una molécula de ARN de horquilla, corta (ARNsh) en la célula. Según ARNsh consiste de repeticiones invertidas cortas separadas por una pequeña secuencia circular. Una repetición invertida es complementaria al gen diana. En la célula el ARNsh se procesa por DICER en un ARNsi que degrada el ARNm génico de la NMT diana y suprime la expresión. En una modalidad preferida, el ARNsh se produce de manera endógena (dentro de una célula) por transcripción de un vector. [000262] Un defecto en NMT1 o NMT2, es un fenotipo deficiente en NMT1 o NMT2, respectivamente, que puede ser deficiente en un componente de una ruta mediada por NMT1 o NMT2 es decir, la expresión de la actividad de un componente de la ruta se puede reducir o anular en la célula de cáncer con relación a células de control. En algunas modalidades, la célula de cáncer puede ser deficiente en NMT1 o NMT2 es decir, la expresión de la actividad de NMT1 o NMT2 se puede reducir o anular en la célula de cáncer con relación a células de control. [000263] Por consiguiente, se proporciona el uso de NMT2 como un marcador para uno o más de diagnosis, prognosis, clasificación, o monitorización de cáncer en un sujeto. En algunos ejemplos, se mide NMT2 usando un ensayo seleccionado de inmunoensayos o detección de ácidos nucleicos, o actividad de proteína. [000264] El término "prognosis" como se usa en la presente, se refiere a la predicción de la probabilidad progreso o muerte atribuible al cáncer, incluyendo recurrencia, propagación metastásica, y resistencia a fármacos, de una enfermedad neoplástica, tal como cáncer de mama. [000265] El término "marcador prognosis" como se usa en la presente se refiere a un marcador que informa acerca del resultado de un paciente en la ausencia de terapia sistémica o profetiza un resultado diferente de aquel de pacientes sin el marcador, a pesar de la terapia sistémica empírica (no dirigida al marcador). [000266] El término "marcador predictivo" como se usa en la presente se refiere a un marcador que predice que eficacia diferencial (beneficio) de una terapia particular en base al estado del marcador. [000267] El término "diagnosis" tal como se utiliza en la presente, se refiere a la identificación de un estado, enfermedad o condición molecular y/o patológica, tal como la identificación de cáncer de mama, u otro tipo de cáncer. [000268] También se proporciona el uso de la miristoilación de proteínas como un marcador para uno o más de diagnosis, prognosis, clasificación o monitoreo de cáncer en un sujeto. [000269] También, se proporciona el uso de acilación de proteínas como marcador para uno o más de diagnosis, prognosis, clasificación o monitoreo de cáncer en un sujeto. [000270] En algunos ejemplos, el cáncer es linfoma. En ejemplos más específicos, el linfoma es linfoma de células B. En ejemplos más específicos, el linfoma de células B es el linfoma folicular, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células del manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/ Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, o linforma anaplástico de células grandes. [000271] En algunos ejemplos, el cáncer es leucemia mieloide aguda, linfoma de células B, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, linfoma difuso de células B, grandes, mieloma de células de plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular tiroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario. [000272] En algunos ejemplos, el cáncer es linfoma de células B, linfoma de Burkitt, linfoma difuso de células grandes, leucemia mieloide aguda, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células de transición (cáncer uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de pulmón de células pequeñas, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico. [000273] Los métodos de la invención se practican de manera conveniente al proporcionar los compuestos y/o composiciones usadas en el método en la forma de un equipo. Este equipo contiene de manera preferente la composición. Este equipo contiene de manera preferente instrucciones para el uso del mismo. [000274] Para obtener un mejor entendimiento de la invención descrita en la presente, se exponen los siguientes ejemplos. Se debe entender que estos ejemplos son solo para propósitos ilustrativos. Por lo tanto, no deben limitar el alcance de la invención de ninguna manera. [000275] Ejemplos [000276] En los siguientes ejemplos, se emplearon metodologías normales, como se apreciará por el experto en la téenica. [000277] Materiales y métodos [000278] Anticuerpos y reactivos. [000279] El Tris-dibutilbencinilideno-paladio (TrisDBA) fue un amable obsequio del doctor Arbiser (U. Alabama). Se sintetizó DDD85646 como se describe [JAFrearson et al (2010) Nature. 464.728-723)] y/o se obtuvo DDD86481 del Dr. David Gray y Paul Wyatt, Universidad de Dundee). [000280] Los anticuerpos de ratón anti-NMTl (clon 14; 1:1000) y de ratón anti-NMT2 (clon 30; 1:2000) fueron de BD Biosciences, San José, CA, EUA. Se compró anti-NMTl de conejo (policlonal, 1:3000) de Proteintech, Chicago, IL, EUA. Los anticuerpos de conejo anti-GFP (1:20.000), anti-PARP-1 (1:5000), anti-GAPDH (1:5000) y anti-Pack2 c-terminal (1:2000) fueron de Eusera (www.eusera. com), Edmonton, AB, Canadá. Los anticuerpos de ratón anti-a-tubulina (1:15000) y de conejo anti-V5 (1:10000) se compraron de Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA. El anti-His de ratón (1:2000) fue de Qiagen, Alemania. El anti-caspasa-8 escindida de conejo (1:1000) y anti-caspasa-3 escindida (1:1000) fueron ambos de Cell Signaling, Danvers, EUA. Los equipos de quimioluminescia mejorada (ECL) Plus y de detección por transferencia western ECL Prime se compraron de GE Healthcare, Pittsburgh, PA, EUA. A menos que se señale de otro modo, todos los productos químicos usados se compraron de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA.) y fueron de la pureza más alta disponible. [000281] Las construcciones de ADN. Manejo de construcciones NMT1 y NMT2 marcadas con V5 y His. Los vectores de entrada de NMT1 y NMT2 que son compatibles con el sistema de clonación Gateway (Life Technologies, Grand Island, NY, EUA.) se compraron de Genecopoeia (Rockville, MD, EUA.). Los genes de NMTl y NMT2 se incorporaron en el vector de destino pcDNA3.1/nv5 DEST (Life Technologies) usando la enzima clonasa LR (Life Technologies) de acuerdo a las instrucciones del fabricante para generar los plásmidos NMT N-terminalmente mercados (His-NMTl, HÍS-NMT2, V5-NMT1 y V5-NMT2). Las construcciones de NMT marcada con V5 se usaron para expresión de células de mamíferas, en tanto que se usaron construcciones de His-NMT para expresión bacteriana. Los productos de clonación se confirmaron para secuenciación de ADN (Eurofins GTM Operon, Huntsville, AL, EUA.). [000282] Cultivo celular. El origen de las células B fue un obsequio del doctor Jim Stone, o se obtuvieron de la ATCC. Todos los reactivos del cultivo celular se compraron de Invitrogen. Las células B se cultivaron a 37°C y 5% de CO2 en una incubadora humidificada y se mantuvieron en medio RPMI complementado con suero bovino fetal al 10%, 100 U/ml de penicilina y 0.1 mg/ml de estreptomicina. [000283] Lisis celular. Se lavaron células en PBS fría, se U saron en amortiguador SDS-RIPA al 0.1% [Tris 50 mM, NaCl 150 mM, 1% de Igepal CA-630, 0.5% de NADC, MgCl2 2 mM, y inhibidor de proteasa completo lx (Roche Diagnostics); pH 8.0] y se mecieron durante 15 min a 4°C. El sobrenadante de los U sados celulares se obtuvo después de una centrifugación a 16000 g durante 15 min a 4°C. [000284] Inducción de apoptosis. A menos que se mencione de otro modo, se indujo la apoptosis usando estaurosporina 2.5 mM (STS) (Sigma Aldrich, St. Louise, MO, EUA.) y 5 mg/ml de cicloheximida (ICN Biochemicals Inc. Aurora, IL, USA) a fin de inhibir la traducción de la proteína y mejorar la inducción de la apoptosis. [000285] Incubación con inhibidores de NMT. El Tris-dibutilbencinilideno-acetona-paladio (TrisDBA) fue un amable obsequio del doctor Arbiser. Se incubaron células a concentraciones crecientes durante 24 horas con TrisDBA (o DMSO para control) o durante 24 y 48 horas con DDD85646. [000286] Transfección de células B. Las células B se transíectaron usando el sistema de transfección Neon^* (Life Technologies) siguiendo las instrucciones del fabricante y un protocolo optimizado para la transfección de células B Ramos (voltaje de impulso 1,300V; ancho de pulso 20 ms, 2 pulsos y 7.7.106 células/ml) adaptadas para puntas de 100 pL. De forma clásica, se jalaron dos transíecciones para obtener suficientes células vivas para realizar un ensayo de viabilidad. [000287] Ensayo de viabilidad celular. La viabilidad de las células B y T se midió usando el método de exclusión con azul de tripano. Se cultivaron las células a condiciones de confluencia (2 x 105 células/ml máximo) asegurando la apoptosis basal mínima. Después de la incubación con inhibidores de NMT, se incubaron aproximadamente 20000 células (10 pL) con 10 mL de tinte de azul de tripano TC10MR (Biorad) durante 15 min. Se cuantificó la viabilidad celular usando el contador celular automatizado TCIO^® (Biorad). [000288] Ensayo de actividad de NMT in vitro. El protocolo de ensayo de actividad de N-miristoiltransferasa se adaptó de Raju, R. V., y Sharma, R. K. (1999) Preparation and assay of myristoyl-CoA:protein N-myristoyltransferase. Methods Mol Biol 116, 1 19933--221111.. Se sintetizó de forma fresca [3H] miristoil-CoA para cada experimento, como se describe previamente por Towler, D., y Glaser, L. (1986) Protein fatty acid acylation: enzymatic synthesis of an N-myristoylglycyl peptide. Proc Nati Acad Sel EUA 83, 2812-2816. En resumen, las células se re-suspendieron en amortiguador de sacarosa 0.25 M (NaH2P0450 mM, pH 7.4) y se sometieron a 2 rondas de tratamiento con ultrasonido a un nivel de 6.0 en un sonicador (aparato de ultrasonido) Branson. La mezcla de reacción se compuso de 10 mL de extracto celular (aproximadamente 20 pg de proteínas) incubado en amortiguador de actividad NMT (Tris-HCl 0.26 M, EGTA 3.25 mM, EDTA 2.92 mM y 2-mercaptoetanol 29.25 mM, de Tritón X-100 al 1%, pH 7.4) y decapéptido miristoilable o no miristoilable que corresponde a la secuencia N-terminal de Bid-truncado (0.1 mM disuelto en agua). Se inició la reacción por la adición de 7.4 pL (» 10 pmol) [3H] miristoil-CoA de recién sintetizado (volumen de mezcla final = 25 pL) y se incubó durante 15 min a 30°C. La reacción se detuvo al poner 15 pL de la mezcla de reacción en un papel disco de fosfocelulosa P81 (Whatman, Kent, Reino Unido) y se secó durante 30 segundos. Los discos se lavaron (amortiguador de lavado: amortiguador Tris 25 mM, pH 7.4) para remover la radioactividad residual ([3H]-miristato y [3H]-miristoil-CoA) en tanto que se retiene [3H]-miristoil-péptido en el papel de fosfocelulosa. Se cuantificó la radiactividad por conteo de ecintilación líquida y se convirtió en pMol de péptido miristoilado (Raju, R. V., y Sharma, R. K. (1999) Preparation and assay of myristoyl-CoA:protein Nmyristoyltransferase. Methods Mol Biol 116, 193- 211. [000289] RT-PCR. Se realizó la QRT-PCR con las sondas de NMT1 de NMT2 Taqman usando una sonda 18S como un control interno. La diferencia en el número de tiempos de ciclo (Act) se calculó al sustraer el tiempo de ciclo (ct) en el cual se vio un incremento exponencial en la expresión del control interno 18S para cada tipo de célula del tiempo de ciclo de NMT, nuevamente en un punto donde se vio incremento exponencial de la señal. [000290] Mutación de sitios de escisión de caspasa en V5-NMT por mutagénesis dirigida al sitio [000291] Los sitios de escisión de caspasa de NMT1 y NMT2 identificados por secuenciación por degradación Edman (Alphalyse) se mutaron por mutagénesis dirigida al sitio. Por lo tanto, se usaron los vectores de acceso V5-NMT1 y V5-NMT2 previamente clonados para mutar los sitios identificados de escisión de caspasa. Por lo tanto, el residuo Asp-72 de V5-V5-NMT1 y Asp-25, Asp-67 y ambos residuos Asp-25,67 (doble mutante) de V5-NMT2 se mutaron usando el equipo de mutagénesis dirigida al sitio Quickchange MR (Agilent Technologies) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. [000292] De forma breve, se realizó la mutagénesis dirigida al sitio usando 5 a 50 ng de ADN de s (vector), 5 mL de amortiguador de reacción lOx, 125 ng de cebadores disueltos en agua libre de nucleasa y se llevó a un volumen final de reacción de 50 pLl con agua libre de nucleasa. A la mezcla se adicionaron 2.5 U de ADN-polimerasa PfuTurbo (Agilent Technologies) antes de iniciar la reacción, que se realizó durante 18 ciclos en el termociclador Eppendorf Mastercycler 1. De manera subsiguiente, el ADNds parental se digirió al adicionar 10 U de la enzima de restricción Dpn I a cada reacción incubando durante 1 h a 37°C. Adicionalmente, los cebadores para la mutagénesis dirigida al sitio se diseñaron usando el programa PrimerX (http://www.bioinformatics.org/ primerx/) (listado en tabla 2.6). De manera importante, los residuos de aspartato (D) de los sitios de escisión de caspasa se mutaron a residuos de glutamato (E) para generar los siguientes vectores; V5-NMT1 (D72E), V5-NMT2 (D25E), V5-NMT2 (D67E) y V5-NMT2 (D25,67E). Las mutaciones se confirmaron por secuenciación automatizada de ADN (Eurofins MWG Operon). [000293] Generación de vectores de NMT, truncados, escindidos con caspasa, marcados con His [000294] Las siguientes NMT truncadas, escindidas con caspasa, se generaron por clonación molecular; His-73NMT1, His-26NMT2 y His-68NMT2. Las secuencias de ADN truncadas se clonaron en el vector pET-19b (Novagen™), que tiene una secuencia de hexa-histidina (His)-tag N-terminal. [000295] Los vectores de acceso previamente clonados, GFP-NMT1 y GFP-NMT2 se usaron como plantillas para estas reacciones de PCR. Se realizaron reacciones de PCR usando DNA-polimerasa Platinum Pfx™ (Life Technologies) y las reacciones de PCR se establecieron según las guías del fabricante. Cada reacción de PCR se preparó como sigue; 200 ng de plantilla de ADN, 5 mL de amortiguador de amplificación 10X Pfx, 5 pL de solución intensificadora de PCR 10X PCR, MgSO4 1 mM, mezcla de dNTP 0.3 mM, 0.5 pM de cada uno de los cebadores directos e invertidos (listados en la tabla 2.6), 1 U de DNA-polimerasa Platinum Pfx”1* y agua libre de nucleasa hasta 50 pL. La reacción se estableció en el termocielador Eppendorf Mastercycler 1 según las guías proporcionadas por el equipo de ADN-polimerasa Platinum Pfx™ y las reacciones se realizaron en 30 ciclos. [000296] Inhibición de caspasas [000297] Las células se pre-trataron con 10 pM de inhibidores establecidos de caspasas comprados de Merck Chemicals, 1 hora antes de la inducción de la apoptosis. Los inhibidores de caspasa usados fueron inhibidores generales de caspasa (z-VAD-FMK), caspasa-3 (z-DEVD-FMK), caspasa-8 (z-IETD-FMK), caspasa-9 (z-LEHD-FMK) y control negativo (z-FA- FMK). Las células de control se trataron con DIVISO (1:1000). [000298] Tratamiento de células con MG-132 [000299] Células IM9, KMH2, BL2 y Ramos se colocaron en placa (3xl06 células por concavidad en una caja de 6 concavidades) y se trataron con MG-13210 mM durante 5 horas. Se adicionó una cantidad igual de DMSO a las muestras de control. Las células entonces se lisaron y se sometieron a análisis de transferencia Western/SDS-PAGE. [000300] Tratamiento de células con ácido suberoilanilida-hidroxámico (SAHA) [000301] Células IM9, BL2 y Ramos se colocaron en placa a 3xl06 células por concavidad en una caja de 6 concavidades y se trataron con ácido suberoilanilida-hidroxámico 1 mM (SAHA), que es un inhibidor reversible de histona-desacetilasas la clase I y clase II (HDACs), durante 24 horas. Se adicionó una cantidad igual de DMSO a las células como un control. Las células se lisaron y se sometieron a análisis de transferencia Western/SDS-PAGE. [000302] Inducción de apoptosis [000303] Se usaron 150 o 300 ng/ml de anticuerpo anti-Fas de ratón para estimular la apoptosis a través de la ruta extrínseca y se usó estaurosporina (STS) 2.5 mM para estimular la apoptosis a través de la ruta intrínseca. Donde se indica, se usó cicloheximida (5 mg/mL) para inhibir la traducción de las proteínas y para promover adicionalmente la muerte celular. [000304] Tratamiento de celulas con inhibidor de NMT, ácido 2-hidroximirístico (HMA) [000305] Se saponificó y conjugó HMA a albúmina de suero bovino (BSA) antes de la adición a células para facilitar su captación celular como se describe previamente (Yap et al., 2010). De forma breve, se incubó HMA con un exceso molar de 20% de hidróxido de potasio (KOH) a 65°C durante 15 min. Subsiguientemente, se logró una solución 20X al disolver el HMA saponificado con KOH en medio RPMI libre de suero que contiene 20% de BSA libre de ácido graso a 37°C, seguido por una incubación adicional de 15 min a 37°C. Puesto que como un control se usó miristato de sodio, también se incubó en medio RPMI libre de suero que contiene 20% de BSA libre de ácidos grasos a 37°C antes de la adición a células. Subsiguientemente, se incubaron células T Jurkat (1 x 107 células) con ya sea HMA 1 mM o miristato de sodio 1 mM conjugado a BSA libre de ácidos grasos (concentración final en cultivo celular 1%) durante lh a 37°C en medio RPMI (sin FBS, complementos o antibióticos). Después de la incubación, se indujo la apoptosis usando anti-Fas (150 ng/mL) o STS (2.5 mM) con cicloheximida (5 mg/mL) o vehículo solo (DMSO). Se recolectaron muestras cada 2 h durante un período de 8 h, se lavó con PBS fría y se liso con 0.3 mL de ensayo de radio-inmuno-precipitación de dodecilsulf to de sodio (SDS) al 1% y se sometió a dos rondas de tratamiento con ultrasonido durante 15 segundos a una salida de 5.5 - 6.5 en un sonificador Branson y se colocó en hielo durante 2 min entre cada ciclo. [000306] Tratamiento de líneas de celulas linfocíticas con inhibidor de NMT, Tris DBA [000307] Se cultivaron 2 x 106 células (CEM, LO, BL2 y Ramos) en placas de 6 concavidades y se incubó con cantidades crecientes (0, 1, 2 y 5 mg/ml) de tris (dibencilidenacetona)dipaladio (Tris DBA)(Bhandarkar et al., 2008). La viabilidad de las células tratadas con Tris-DBA se midió con un ensayo de exclusión con azul de tripano (Hudson, 1976). [000308] Tratamiento de líneas de células linfocíticas con inhibidores de NMT, DDD85646 y DDD73226 [000309] Se colocaron en placas de 96 concavidades 1 x 105 células [KMH2 (linfoma de Hodgkin), IM9 (células B inmortalizadas EBV "normales"), BL2, Ramos] (100 mL/ concavidad) y se trataron con cantidades crecientes de inhibidor de NMT basado en sulfonamida DDD85646 [peso molecular (PM) 495,43] (Frearson et al., 2010) y un análogo a base de pirazol-sulfonamida menos potente DDD73228 (PM 362.5) durante 24, 48 y 72 horas. Los fármacos se disolvieron en DMSO para obtener producir soluciones concentradas 100X para cada concentración probada, de modo que el volumen final de DIVISO en cada concavidad fue de 1%. La viabilidad de las células tratadas con estos inhibidores se midió con un ensayo de exclusión con azul de tripano (Hudson, 1976). [000310] Tratamiento de líneas de células linfocíticas con inhibidor de NMT, DDD86481 [000311] Se colocaron en placas de 96 concavidades 1 x 105 células [KMH2 (linfoma de Hodgkin), IM9 (célula B inmortalizada EBV "normal"), BL2, Ramos] (100 mL/concavidad) y se trataron con cantidades crecientes de DDD86481 [MW 610.5]. Los fármacos se disolvieron en DMSO para hacer soluciones concentradas 100X para cada concentración probada, de modo que el volumen final de DMSO en cada concavidad fue 1%. Se usó el ensayo de MTS [(3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfo-fenil)-2H-tetrazolio)] para medir la citotoxicidad del fármaco (Cory et al., 1991). [000312] Lisis celular [000313] Típicamente, las células se lavaron en PBS frío, se recolectaron, se U saron en amortiguador de SDS-RIPA al 0.1% o amortiguador de SDS-RIPA-HEPES al 0.1% (cuando las células se marcaron con ácidos grasos-alquino), que se complementó con inhibidor completo de proteasa IX. La suspensión celular se meció durante 15 min a 4°C. Entonces los lisados celulares se centrifugaron a 16000 g durante 10 min a 4°C y se recolectó el sobrenadante post-nuclear. Se midieron las concentraciones de proteína usando el equipo de ensayo de proteínas de ácido bicinconínico PierceMR (BCA) (BCA) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). [000314] Lisis de muestras de tejido de linfo a [000315] Los tejidos de linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y de linfoma folicular (FL) de humano fueron obsequios amables del Dr. Raymond Lai (Cross Cáncer Institute, Alberta, Canadá). Los tejidos tumorales congelados se cortaron en pequeñas piezas (~ 1 mm3) y se mezclan con SDS-RIPA al 1% con inhibidor de proteasa completo IX. Las muestras se homogenizaron usando un homogenizador pequeño Dounce y luego se trataron con ultrasonido de manera repetida durante 2 minutos con intervalos de 1 min (en hielo) entre una salida de 6.0 (sonificador Branson 450) hasta que los tejidos tumorales se disolvieron en el amortiguador de lisis. Las muestras se centrifugaron entonces a 16000 g durante 10 min a 4°C y el sobrenadante post-nuclear se recolectó para análisis de transferencia Western. [000316] Transferencia Western usando escáner Odysscy [000317] Este método solo se usó para la transferencia de caspasa-3 escindida provista, toda la otra transferencia Western se hizo usando el procedimiento estándar. Después de la electroforesis, se transfirieron los geles a una membrana de nitrocelulosa y se bloquearon en NFM al 5% en PBS con Tween 20 al 0.1% (PBS-T) durante 1 hora. El anticuerpo primario (de conejo anti-caspasa-3 escindida; Cell Signaling) también se diluyó a 1:2000 en NF al 5% en PBS-T, se adicionó a la membrana y se incubó durante 24 h. Entonces, las membranas se sometieron a 6 ciclos de lavado, que duran cada uno 5 min; 2 lavados en PBS, 2 lavados en PBS-T, y finalmente 2 lavados en PBS. El anticuerpo secundario (anti-conejo de cabra Alex Fluor 680 Life Technologies) se adicionó después de diluir en PBS-T (1:5000) y las transferencias se cubrieron en hoja de aluminio y se incubaron con el anticuerpo secundario durante 1 h y se sometieron al mismo Ciclo de lavado 6X con PBS y PBS-T como antes. Las transferencias se exploraron en el sistema de formación de imágenes por fluorescencia Odysscy*® de LI-COR Inc. a una resolución de exploración de 84 mm (Intensidad: 5 a 7) en el canal 700 (para conejo). [000318] Fraccionamiento subcelular [000319] Se cultivaron células HeLa a confluencia en placas de 150 mm y se indujeron para que experimenten apoptosis con anti-Fas (300 ng/ml) (extrínseco) o STS (intrínseco) durante un periodo de 5 h. Las células entonces se marcaron de manera metabólica con alquino-C14 (descrito en detalle en la sección posterior) (Yap et al., 2010) y se sometieron a lisis hipotónica. [000320] De forma breve, se lavaron células con amortiguador de PBS frío, se rasparon las placas usando un arrancador celular, y se recolectaron. Las muestras entonces se centrifugaron a 2000 g durante 5 min, el sobrenadante se aspiró y las células se resuspendieron en 600 mL de amortiguador hipotónico que provoca que las células se hinchen (amortiguador de suspensión de Mg) y se incubó en hielo durante 20 min. La suspensión celular se transfirió a un homogenizador Dounce y se homogenó con 45 corridas usando el pestillo ajustado. En consecuencia, al homogenado se adicionaron 400 pL de amortiguador de homogenización (HB) 2.5X libre de EDTA y las células se homogenizaron con 15 corridas en el homogenizador Dounce usando el pestillo flojo. El homogenado entonces se centrifugó a 1000 g durante 5 min y el sobrenadante post-nuclear (PNS) se recolectó. Entonces, se salvaron 200 pL de PNS y el resto (~ 750 pL) se centrifugó a 100000 g durante 45 min en un rotor Beckman TLA 120.2, que dio por resultado una fracción citosólica (S100) y un sedimento ligero de membrana (P100). [000321] El sedimento P100 se lavó una vez con IX HB y las fracciones de P100 se ajustaron al volumen de la fracción S100 cognada usando IX HB. Después de esto, el sobrenadante post-nuclear resultante (PNS), fracciones citosólicas (S100) y fracciones de membrana (P100) se ajustaron para que contengan 1% de SDS. En consecuencia, el mismo volumen de la fracción se sometió a análisis de transferencia Western y los niveles de proteína se cuantificaron usando el software Image J (http://rsbweb.nih.gov/ij/). [000322] Marcación metabólica de celulas usando química de clic y ácido co-alquinil-mirístico bio-ortogonal [000323] Marcación metabólica de células usando ácido co alquil-miristico [000324] Las células se marcaron con ácido w-alquinil-mirístico de 100 a 25 mM 30 min antes de recolectar las células y se lisaron en amortiguador RIPA SDS-HEPES 0.1%. La proteína (50-30 pg) de los lisados celulares resultantes se hicieron reaccionar con azido-biotina 100 mM usando química clic y se procesó como se describe previamente (Yap et al., 2010). De forma breve, las células se privaron de ácidos grasos al incubar en el medio (RPMI o DMEM) que se complementaron con FBS tratada con carbón revestida con dextrano al 1% (DCC-FBS) durante 1 h antes de la marcación. Entonces, se disolvió ácido co-alquinil-mirístico en DMSO para generar soluciones concentradas de 25 o 100 mM. Típicamente, la captación celular de ácido w-alqunil-mirístico se mejoró típicamente con la saponificación y conjugación a BSA. Por lo tanto, antes de la marcación, el ácido co-alquinil-mirístico se saponificó con un exceso molar de 20% de hidróxido potásico a 65°C durante 15 min. Entonces, el medio de cultivo libre de suero (pre-calentado) que contiene 20% de BSA libre de ácidos grasos a 37°C se adicionó al ácido co-alquinil-mirístico saponificado y se incubó durante 15 min adicionales a 37°C. [000325] De manera subsiguiente, las células privadas de ácidos grasos se lavaron una vez con PBS caliente y se incubaron en RPMI o DMEM fresco sin ningún complemento. Entonces, a las células se adicionó el volumen apropiado de conjugado de ácido graso-BSA 20X en medio libre de suero, para asegurar que la concentración final de BSA fuera de 1% y el ácido w-alquinil-mirístico estuvo a la concentración indicada (25 mM o 100 mM) para cada experimento respectivo. El DMSO o los ácidos grasos no marcados conjugados a BSA se usaron como controles para los experimentos realizados. Las células se marcaron con ácido w-alquinil-mirístico durante 30 min a 37°C en una incubadora humidificada de CO2 al 5% antes de la recolección. Las células se recolectaron en amortiguador SDS-RIPA-HEPES al 0.1% que se complementó con inhibidor de proteasa completo IX (libre de EDTA). [000326] Química clic [000327] Después de marcar las células con ácido co-alquinil-mirístico, los U sados resultantes se sometieron a química clic con azido-biotina para permitir la detección de las proteínas miristoiladas por ECL como se describe previamente (Yap et al., 2010). Típicamente, los U sados celulares (30 -50 mg de proteína) se ajustaron para que contengan 1% de SDS y se incubaron con Tris-(benciltriazolilmetil)amina (TBTA) 100 mM, CuS04 1 mM, Tris-carboxietil-fosfina (TCEP) 1 mM, y azido-biotina 100 mM a 37°C durante 30 minutos en oscuridad, a fin de que prosiga la reacción clic. Entonces, se adicionaron 10 volúmenes de acetona enfriada con hielo para detener la reacción clic y las proteínas se precipitaron a -20°C durante la noche. De manera subsiguiente, las proteínas precipitadas con acetona se centrifugaron a 16000 g durante 10 min, se resuspendieron en amortiguador de muestra SDS-PAGE IX con DTT 20 mM. Entonces se calentaron las muestras a 95°C durante 5 min y se sometieron a SDS-PAGE, y se transfirieron a membranas PVDF para análisis de transferencia Western. [000328] Tratamiento de membranas de PVDF con Tris-HCl o KOH neutral [000329] Las muestras de proteína se cargaron en geles SD-PAGE duplicadas para los experimentos donde las membranas de PVDF se trataron con Tris-HCl neutral o KOH. Después de la electroforesis, las membranas de PVDF tratadas con KOH se incubaron en 100 mi de KOH 0.1 N en metanol [KOH 1 N en H2O: metanol 1:9 (v/v)], en tanto que lo otro se incubó en Tris-HCl 0.1 N pH 7.0 en metanol [Tris-HCl 1N, pH 7.0:metanol 1:9 (v/v)] a temperatura ambiente durante 45 min con agitación suave. De manera subsiguiente, las membranas tratadas se lavaron completamente con PBS, se sondearon con estreptavidina-HRP o Neutravidina-HRP y se detectaron con ECL. [000330] Ensayo de actividad radioactiva de NMT en celulas que experimentan apoptosis [000331] La actividad de NMT se midió al tratar un protocolo desarrollado por el laboratorio Sharma (King y Sharma, 1991; Raju y Sharma, 1999). Se preparó una solución concentrada de [3H]-miristoil-CoA de forma fresca y se sintetizó como se describe previamente (Towler y Glaser, 1986). Para producir una solución concentrada de 200 mL de [3H]-miristoil-CoA, se combinaron 97 pL de amortiguador de generación de miristoil-CoA con 20 pL de ATP 50 mM, 10 pL de LiCoA 20 mM, 60 pL de acil-CoA-sintetasa de pseudomonas y 13 pL de ácido [9,10-3H]-mirístico. La solución se mezcló suavemente y se incubó a 37°C durante 30 min. [000332] Para este ensayo, las células COS-7 transcientemente transíectadas con plás idos que codifican para V5-NMT1 y V5-NMT2 se indujeron para experimentar apoptosis con STS (2.5 pM) y cicloheximida (5 mg/ml) o no, y, se recolectaron en los puntos de tiempo de O, 1, 2, 4 y 8 h. Las células se trataron con ultrasonido usando un sonificador Branson 450 y se usaron ~ 20 mg de lisado (lisado en NaH2P04 50 mM pH 7.4, amortiguador de sacarosa 0.25 M) para cada reacción. Para cada reacción de ensayo de NMT, a un tubo de microcentrífuga se adicionaron 3.85 pL de amortiguador de ensayo de NMT, 1.25 ml de Tritón X-100 al 20% y 2.5 pL (0.1 mM) de decapéptido miristoilable (BID_G: GNRSSHSRLG) o no miristoilable (BID_A: ANRSSHSRLG) (comprado de Peptide 2.0 Inc.) que corresponde a la secuencia N-terminal de ct-Bid (concentración 1 mM en etanol) y se mantuvo en hielo antes de iniciar la reacción. Al inicio de la reacción, a cada tubo de microcentrífuga se adicionaron 7.4 mL (10 pmol) [3H]-miristoil-CoA recién sintetizado a cada tubo de microcentrífuga que contiene la mezcla de ensayo de NMT a intervalos de 15 segundos y se incubaron reacciones de 25 pL durante 15 min a 30°C. La reacción se terminó al verter 15 pL de la mezcla de reacción en un papel disco de fosfocelulosa P81 (Whatman) a intervalos de 15 segundos y se secó con una secadora de cabello durante 30 segundos. [000333] Entonces, los papeles disco de fosfocelulosa p81 se transfirieron a la unidad de lavado y se lavaron 3 veces, de 30 min cada vez, con amortiguador de lavado de ensayo de NMT durante un período total de 90 min. De manera subsiguiente, la radioactividad que permanece en la fosfocelulosa (que corresponde al péptido miristoilado) se cuantificó en 5 mL de mezcla de ecintilación líquida usando un contador de ecintilación LS6500 de Beckman Coulter. La actividad NMT se calculó como fmol/min/pg de proteína. [000334] Uso de un ensayo radiactivo para medir la actividad de NMT en las NMT purificadas, marcadas con His [000335] La actividad NMT de las NMT truncadas y de longitud completa marcadas con His se midió usando el mismo protocolo como se describe anteriormente. Sin embargo, en este ensayo solo se usaron 1 mL de proteína purificada (el volumen se llevó a 10 pL en amortiguador de ensayo de NMT). [000336] Ensayo de escisión de NMT in vitro [000337] El ensayo de escisión de NMT in vi tro se realizó al incubar 10 mg de His-NMTl y HÍS-NMT2 purificada con 1 pg de caspasa-3 o -8 activa humana recombinante en amortiguador de ensayo de escisión de caspasa en reacciones de 100 pL durante 1 hora a 37°C. La reacción se terminó con la adición de inhibidor de caspasa general z-VAD-FMK y se adicionó subsiguientemente amortiguador de carga de muestra 5X. Las muestras que reaccionaron se separaron en un gel SDS-PAGE al 10% y se transfirieron sobre una membrana de PVDF. Las bandas se visualizaron por tinción con azul de Coomassie y los fragmentos de escisión se escindieron de la membrana y se enviaron para degradación Edman a Alphalyse en Palo Alto, CA. [000338] Purificación de proteína de His-NMT recombinantes [000339] Células competentes Lemo21(DE3) pLysS (New England Biolabs) se transformaron con los His-NMTl y His-NMT2 de acuerdo al protocolo del fabricante. Las proteínas NMT1 y NMT2 se prepararon como sigue: un cultivo iniciador de 3 mL se cultivó en caldo LB (1% de triptona, 0.5% de extracto de levadura, 0.5% de NaCl, 100 mg/mL de ampicilina y 34 pg/ml de cloranfenicol) durante 4 horas a 37°C, en tanto que se agita a 225 rpm. El cultivo completo se usó para inocular un cultivo de 50 mL que se cultivó a 37°C durante 16 h.
Entonces, las células bacterianas se sedimentaron por centrifugación a 6000 xg durante 10 min a temperatura ambiente. El sedimento bacteriano se volvió a suspender en 10 mL de LB y 5 mL de la suspensión se usaron para inocular 500 L de LB que se incubó a 37°C con agitación vigorosa (225 rpm) hasta que se alcanzó una D0600 de 0.5-0.6. [000340] Entonces, se indujo la expresión de la proteína por la adición isopropil b-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) 0.5 mM a 30°C con agitación vigorosa (225 rpm) durante 4 h. La suspensión se centrifugó a 6000 xg a 4°C durante 20 min y el sedimento bacteriano se congeló durante la noche. De manera subsiguiente, el sedimento bacteriano congelado se volvió a suspender en 25 mL de amortiguador de lisis bacteriana complementó con inhibidor de proteasa completa (CPI) de Roche y se incubó en hielo durante 30 min. Entonces las muestras se trataron con ultrasonido 3 veces durante 1 min con intervalos de 1 min entre una salida de 5.0 (sonificador Branson 450) y se incubó a 37°C durante 30 min antes de la centrifugación a 15000 xg durante 1 h a 4°C. [000341] Entre tanto, cuentas de agarosa Ni-NTA (resina His-Pura Ni-NTA de Thermo Fisher Scientific) se envasaron en columnas de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se lavaron con amortiguador de columna tres veces. El sobrenadante claro obtenido de la centrifugación previa entonces se cargó en la columna y se incubó con agitación suave a 4°C durante 1 h. La muestra entonces se eluyó de la columna por flujo de gravedad y la columna se lavó dos veces con 5 mL de amortiguador de lavado (amortiguador de columna con imidazol 20 mM, pH 8.0). Entonces, se usaron 2 x 5 mL de amortiguador 1 de elución (amortiguador de columna con imidazol 75 mM, pH 8.0) para eluir las dos primeras fracciones y se usaron 2 x 5 mL de amortiguador de elución 2 (amortiguador de columna con imidazol 150 mM, pH 8.0) para eluir las siguientes dos fracciones. La última fracción se eluyó con amortiguador de elución 3 (amortiguador de columna con imidazol 250 mM, pH 8.0). Finalmente, se adicionó glicerol al 20% a cada una de las fracciones recolectadas antes de la congelación a -80°C. Las muestras de cada paso del proceso de purificación de proteínas se recolectaron, se corrieron en gel SDS-PAGE al 12.5% y se tiñeron con azul de Coomassie a fin de determinar que fracciones tienen la concentración más alta de proteína. [000342] Puesto que las muestras de las primeras cuatro eluciones tienen la concentración más alta de proteína, se mezclaron y dializaron para remover cualquier imidazol presente. Por lo tanto, las muestras mezcladas se cargaron en una tubería de diálisis Spectra/Por 2 (Spectrum Laboratories) con un corte de peso molecular (MWCO) de 12-14 kDa para remover cualquier fragmento de proteína degradado pequeño. Las muestras de proteína entonces se dializaron en 4 mL de amortiguador de diálisis enfriado durante 2 horas a 4°C en tanto que se agita suavemente, seguido por diálisis durante la noche con el mismo amortiguador a 4°C con otros 4 mL de amortiguador enfriado, fresco. Las muestras dializadas de proteína se concentraron por centrifugación en el filtro centrífugo Amicon Ultra-15 con MWCO de 30 kDa (illipore) a 5000 g, 4°C hasta que se lograron los volúmenes deseados. [000343] qRT-PCR de líneas celulas de linfoma de células B [000344] Se aisló el ARN de las células IM9, KMH2, Ramos y BL2 usando el reactivo TRIzol™ de acuerdo a los protocolos del fabricante. Entonces, el equipo de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad con un esquema de cebadores aleatorios de Applied Biosciences se usó para sintetizar ADNc del ARN aislado de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Se establecieron las reacciones de PCR de tiempo real cuantitativo (QRT PCR) usando la mezcla principal universal II TaqMan1® y NMT1, NMT2 y 18 sondas TaqMan*® compradas de Life Technologies (Carlsbad, CA) y tres replicas de cada reacción se establecieron de acuerdo a las guías del proveedor. Se realizó la QRT PCR usando un termocielador Mastercycler*® ep realplex (Eppendorf) y los resultados se analizaron usando el software realplex (Eppendorf). [000345] Ensayo de exclusión con azul de tripano [000346] La viabilidad de las células tratadas con Tris DBA, DDD73228, y DDD85646 se midió al incubar células con tinte de azul de tripano TC10TM (Biorad) (Hudson, 1976), de acuerdo a las instrucciones del fabricante. La viabilidad celular se cuantificó entonces con el contador celular automatizado TC10TM (Biorad). [000347] Ensayo de MTS [(3-(2-Í1-4,5-dimetiltiazol)-5-(3-carboxi-metoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio)] [000348] La viabilidad de las células tratadas con DDD86481 se midió usando el ensayo de proliferación celular no radioactivo acuoso CellTiter 96 (MTS) (Cory et al., 1991) de Promega acuerdo a las instrucciones de fabricante. [000349] Inmunohistoquímica [000350] Los tumores de linfoma de células B se fijaron en formalina y se incrustaron en parafina y se cortaron en un microtomo al espesor deseado (~ 5 micrones o pm) y se fijaron sobre un portaobjetos positivamente cargado SuperFrost* (Fisher Scientific). Antes de la tinción, los portaobjetos que contienen los tejidos tumorales se desparafinaron por inmersión en xileno 3 veces durante 10 min cada uno, una serie de lavados en etanol [20 inmersiones en 100% etanol (repetir 4 veces), 20 inmersiones en etanol al 80%, y 20 inmersiones en etanol al 50%] y un lavado final en agua fría corriente durante 10 minutos. [000351] Para la recuperación del antígeno, los portaobjetos se cargaron en un soporte de portaobjetos y se colocaron en un horno de presión de microondas Nordicware™* y a éste se adicionaron 800 mL de amortiguador de citrato 10 mM pH 6.0. El horno de presión se cerró herméticamente, se colocó en un microondas y se trató con microondas en alto durante 20 min. Entonces, los portaobjetos se lavaron en agua corriente fría durante 10 minutos. Se realizó el bloqueo con peroxidasa al remojar los portaobjetos en H2O2 al 3% en metanol durante 10 min y lavado con agua corriente caliente durante 10 min antes del lavado en PBS durante 3 min. [000352] Entonces, se removió el exceso de PBS y se hizo un círculo hidrófobo alrededor de la muestra con un bolígrafo PAP (Sigma-Aldrich). El anti-NMTl de conejo (Proteintech) o el anti-NMT2 de conejo (Origene) se diluyeron con amortiguador diluyente de anticuerpos Dako (Dako, Agilent Technologies) a una dilución 1:50 y se adicionó con pipeta Pasteur (~ 400 mL por portaobjeto) y se incubó en una cámara de humedad durante la noche a 4°C. De manera subsiguiente, los portaobjetos se lavaron en PBS dos veces durante 5 min cada uno y a cada portaobjeto se adicionaron ~ 4 gotas del polímero marcado DAKO EnVision+Syste -HRP (anti-conejo) (Dako, Agilent Technologies) y se incubó a temperatura ambiente durante 30 min. Los portaobjetos se lavaron nuevamente en PBS dos veces durante 5 min cada vez, se adicionaron 4 gotas de DAB líquida (diaminobenzidina)+ substrato cromógen (preparado de acuerdo a las instrucciones del fabricante; Dako, Agilent Technologies), se arregló durante 5 minutos y se enjuagó bajo agua fría corriente durante 10 min. [000353] Los portaobjetos entonces se remojaron en CuS04 1% durante 5 minutos, se enjuagaron brevemente con agua fría corriente, se contratiñeron con hematoxilina durante 60 segundos y se enjuagaron con agua fría corriente hasta que corrió limpia el agua. Entonces, los portaobjetos se sumergieron en carbonato de litio 3 veces y se enjuagaron con agua de grifo corriente de forma breve. Entonces los portaobjetos se deshidrataron en una serie de pasos; 20 inmersiones en etanol al 50%, 20 inmersiones en etanol al 80% y 20 inmersiones en etanol 100% (repetir 4 veces) y finalmente xileno (3 veces durante 10 min cada uno). Entonces se colocaron los cubreobjetos a los portaobjetos y se realizó la microscopía de las muestras tumorales usando un microscopio Nikon Eclipse 80i. Se crearon imágenes usando una cámara científica Qlmaging (Qimaging). [000354] Ejemplo 1 [000355] La figura 1 representa el análisis de la expresión de NMT1 y NMT2 en células normales y varios linfomas de células B y leucemias de células T. Esta figura muestra la ausencia casi completa de la expresión de NMT2 en líneas de células de linfoma B (BL-2, Ramos), que solo expresan NMT1 en comparación a células B normales (linfocitos B humanos transformados con EBV, LO) y líneas de células T leucémicas humanas (Jurkat, MOLT-4, CEM). [000356] En tanto que no se desea que se una por teoría, aquellas células que expresan solo una isozima NMT, por ejemplo células de linfoma de Burkitt que muestran la ausencia casi completa de NMT2, son probable que tengan perfiles alterados de proteínas miristoiladas. [000357] Una muestra que tiene una cantidad reducida de proteína miristoilada en una muestra (opcionalmente en comparación a un control) es indicativa de una muestra deficiente NMT, o cáncer deficiente en NMT. Este cáncer deficiente en NMT es adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1. [000358] Ejemplo 2 [000359] La figura 2 representa la sensibilidad de varios linfomas de células B y leucemias de células T a los inhibidores de NMT tris-dibencilidenacetona-dipaladio (Tris-DBA). Varias células B y T se incubaron durante 24 horas con concentraciones crecientes de Tris DBA. Se midió la viabilidad celular usando el método de exclusión con azul de tripano y se ajustó a 100% para el control. Las curvas de supervivencia celular medidas por exclusión con azul de tripano muestran que los linfomas de células B son más sensibles al inhibidor de NMT tris-dibencilidenacetona dipaladio (Tris-DBA). [000360] Ejemplo 3 [000361] La figura 3 representa la inhibición de N-miristoiltransferasa (NMT) por tris-dibencilidenacetona-dipaladio (Tris-DBA). [000362] Se valoró la actividad de NMT usando un ensayo de miristoilación de péptidos con NMT1 y NMT2 de recombinante, purificada. La actividad de NMT se calculó de la cantidad de miristoilpéptido radiomarcado producido y detectado en papel de fosfocelulosa (adaptado de Ring et al., 1991, Anal Biochem.). [000363] Esta figura muestra que tris-dibencilidenacetona-dipaladio (Tris-DBA) inhibe NMT in vitro usando enzimas de NMT recombinantes, purificadas. [000364] Ejemplo 4 [000365] La figura 4A-4B representa los resultados de immunotransferencia en las cuales se sondearon líneas de células de linfoma con anticuerpos contra NMT1 (fig.4A) y NMT2 (fig.4B). La lcyenda de la figura 4A-4B corresponde como sigue: IM9: linfoblasto B; BL2: linfoma de Burkitt; CEM: leucemia de células T; Karpas 299: linfoma de células T; Sup-M2: ALCL; UCONN: ALCL (ALCL: Linfoma anaplástico de células grandes); DAUDI: linfoma de Burkitt; Ramos: linfoma de Burkitt BJAB: linfoma de Burkitt; HD-MYZ: linfoma de Hodgkin; KM-H2: linfoma de Hodgkin; L428: linfoma de Hodgkin; Jurkat: leucemia de células T. [000366] Ejemplo 5 [000367] La figura 5 representa la efectividad de los inhibidores de NMT en la línea de células de linfoma de Burkitt, Ramos en comparación a la línea de células linfoblásticas B normales inmortalizadas (IM9) después de 48 horas, a diferentes concentraciones. [000368] Ejemplo 6 [000369] En este ejemplo, la transfección de células de linfoma B Ramos (que, como se muestra en la presente, expresa NMT1) con pcDNA3.1-V5-NMT2 incremento toda la supervivencia a TrisDBA (5 ug/ml) 2.5 veces vs células de control transíectadas con vector de plásmido vacío. En la figura 6A-6B, se transfectaron 20 X 106 células de linfoma B Ramos con 32Ug de ADN (pcDNA3.1-V5-vacío o pcDNA3.1-V5-NMT2) usando el sistema de transfección neón (Invitrogen) siguiendo el protocolo recomendado para la línea de células Ramos (1350 voltios, 30 ms). Las células transíectadas se centrifugan 5 min a 1200 rpm para remover las células muertas y desechos celulares. Las células en el sobrenadante se dejaron recuperar durante 6 horas en RPMI completo. Después de un lavado con PBS, las células se resuspendieron y cultivaron en RPMI que contiene TrisDBA (5 ug/ml) durante 24 horas luego se contaron usando el método de exclusión con azul de tripano (panel A). Las células se U saron y se realizó la transferencia Western (ECL) para confirmar la expresión de NMT2 con anticuerpos contra NMT2, y GAPDH para cargar el control (panel B). [000370] Ejemplo 7 [000371] En este ejemplo, se realizó QRT-PCR con sondas de NMT1 y NMT2 Taqman usando una sonda 18S como un control interno. La diferencia en el número de tiempos de ciclo (Act) se calculó al sustraer el tiempo de ciclo (ct) en el cual se vio un incremento exponencial de la expresión del control interno 18S para cada tipo de célula del tiempo de ciclo de NMT, nuevamente en un punto donde se vio el crecimiento exponencial de la señal. Como se muestra en la tabla 1, posterior, la relación de NMT2 a NMT1 se disminuyó (por hasta 60 veces) la relación de la expresión NMT2 a NMT1 en las líneas de células de linfoma B. En tanto que no se desea que una por teoría, estos resultados pueden sugerir que una reducción en el ARNm que codifica para NMT2 puede ser responsable de la reducción de los niveles de proteína NMT2 valorado por transferencia Western. [000372] Tabla 1: Análisis de la expresión de ARNm de NMT mediante QRT-PCR [000373] Ejemplo 8 [000374] En este ejemplo, en la figura 7A-7B, las diferencias en los niveles de la proteína NMT2 presentes en varias líneas de células linfocíticas y tumores sólidos de linfoma. (A) Los niveles de NMT1 y NMT2 se valoran por transferencia Western en varios tipos de lisados tumorales de linfoma sólido humano (linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y de linfoma folicular (FL). Se detectaron NMT por transferencia Western usando las mismas concentraciones de anticuerpo para ambos paneles mostrados: anti-N Tl de conejo (1:2500), anti-NMT2 monoclonal de ratón (1:2500). Se muestra que numerosas muestras tumorales de cada tipo caen bajo el promedio del nivel de expresión de NMT2 (0.392 +/_0.30). [000375] En la fig.7A, se muestra que las líneas de células BL-2 de linfoma de Burkitt, Daudi, Ramos y BJAB están desprovistas de NMT2. [000376] En la fig.7B, es muestra que 4 de 5 DLBCL y 1 de 6 U sados de tumores humanos FL tienen reducción marcada en NMT2. [000377] Ejemplo 9 [000378] En este ejemplo, en la figura 8A y fig.8B, las diferencias en los niveles de proteína NMT2 presentes en varios tumores sólidos de linfoma se determinaron por inmuno-histoquímica: [000379] Tumores de linfoma de células B se fijaron en formalina y se incrustaron en parafina y se cortaron en un microtomo al espesor deseado (~ 5 micrones o mm) y se fijan sobre un portaobjetos positivamente cargado SuperFrost® (Fisher Scientific). Antes de la tinción, los portaobjetos que contienen tejidos tumorales se desparafinaron por inmersión en xileno 3 veces durante 10 in cada uno, una serie de lavados en etanol [20 inmersiones en etanol al 100% (repetir 4 veces), 20 emersiones en etanol al 80%, y 20 inmersiones en etanol al 50%] y un lavado final en agua fría corriente durante 10 minutos. [000380] Para la recuperación de antígenos, los portaobjetos se cargaron en un soporte de portaobjetos y colocaron en horno de presión de microondas NordicwareMR y a esto se adicionaron 800 mL de amortiguador de citrato 10 mM pH 6.0. El horno de presión se cerró herméticamente y se colocó en un microondas y se irradió con microondas en alto durante 20 min. Entonces, los portaobjetos se lavaron en agua corriente fría durante 10 minutos. Se realizó el bloqueo con peroxidasa al remojar los portaobjetos en H202 al 3% en metanol durante 10 min y lavando con agua caliente corriente durante 10 min antes de lavar en PBS durante 3 min. [000381] Entonces, se removió el PBS en exceso y se trazó un círculo hidrófobo alrededor de la muestra con un bolígrafo PAP (Sigma-Aldrich). El anti-NMTl de conejo (Proteintech) o anti-NMT2 de conejo (Origene) se diluyeron en amortiguador diluyente de anticuerpo Dako (Dako, Agilent Technologies) a una dilución 1:50 y se adicionó con una pipeta Pasteur (~ 400 pL por portaobjeto) y se incubó en una cámara de humedad durante la noche a 4°C. De manera subsiguiente, los portaobjetos se lavaron en PBS dos veces durante 5 min cada vez y a cada portaobjeto se adicionaron ~ 4 gotas de polímero marcado DAKO EnVision+System-HRP (anti-conejo) (Dako, Agilent Technologies) y se incubó a temperatura ambiente durante 30 min. Los portaobjetos se lavaron nuevamente en PBS dos veces durante 5 min cada uno, se adicionaron 4 gotas de DAB líquida (diaminobenzidina)+ substrato cromógen (preparado de acuerdo a las instrucciones del fabricante; Dako, Agilent Technologies), se develaron durante 5 minutos y se enjugaron bajo agua fría corriente durante 10 min. [000382] Los portaobjetos entonces se remojaron en CuS04 al 1% durante 5 minutos, se enjuagaron previamente con agua fría corriente, se contratiñeron con hematoxilina durante 60 segundos y se enjuagaron con agua fría corriente hasta que salió limpia el agua. Entonces, los portaobjetos se sumergieron en carbonato de litio 3 veces y se enjuagaron con de agua de grifo corriente de forma breve. Entonces se deshidrataron los portaobjetos en una serie de pasos; 20 inmersiones en etanol al 50%; 20 inmersiones en etanol al 80% y 20 inmersiones en etanol al 100% (repetir 4 veces) y finalmente en xileno (3 veces durante 10 min cada uno). Entonces se colocaron los cubreobjetos a los portaobjetos y se realizó la microscopía de las muestras tumorales usando un microscopio Nikon Eclipse 80i. Se crearon imágenes usando la cámara científica Qlmaging (Qimaging). [000383] La tinción inmunohistoquímica de NMT de los nodulos linfáticos normales, de linfoma de Burkitt (BL) y linfoma difuso de células B grandes (DLBCL o LCL). A) tinción de NMT1: Ambos nodulos linfáticos normales, y cada uno de tres casos independientes de linfoma de Burkitt no tratado (BL1-3) y DLBCL (LCL1-3) se tiñeron de manera uniforme y fuertemente positivos (color café de producto de reacción de peroxidasa [mostrado en gris oscuro]) para la proteína de NMT1. No se observaron diferencias. El control negativo se obtuvo al omitir el anticuerpo primario. Fila superior: nodulos linfáticos normales NI, N2, control negativo NI, N2 Neg control negativo. Fila intermedia: tres casos de linfoma de Burkitt (BL1-3). Fila inferior: tres casos de DLBCL (LCL1-3). Ambos nodulos linfáticos normales tiñeron de manera uniforme y fuertemente positivo (color café, mostrado en gris oscuro) para la proteína NMT2. En contraste marcado, cada uno de los tres casos independientes de linfoma de Burkitt no tratado y DLBCL solo muestra muy débil tinción para NMT2 (mostrado en azul claro o gris claro). El control negativo se obtuvo al omitir el anticuerpo primario. Fila superior: NI, N2 nodulos linfáticos normales, Neg control negativo. Fila intermedia: tres linfomas de Burkitt (BL1-3); Fila inferior: tres DLBCL (LCL1-3). [000384] La figura 8C y figura 8D demuestran que la expresión de NMT1 no se incrementa de manera significativa en las líneas celulares que carecen de la expresión de NMT2. En la fig.8C el log2 (micro-arreglo de intensidad de fluorescencia NMT) para NMT1 y NMT2 se gráfica para todas las líneas celulares de la base de datos CCLE. En la fig.8D, el log2 (microarreglo intensidad de fluorescencia NMT) para NMT1 y NMT2 se gráfica para las líneas celulares de la base de datos CCLE con el nivel más bajo de expresión de NMT2. [000385] La figura 8E demuestra un ejemplo en el cual se cuantificaron las determinaciones de NTM2 usando mediciones de densitometría asistida con computadora microscópica luminosa. Visualmente, estos números se relacionan bien a la fuerza de la tinción de los linfocitos malignos. Los puntos de corte elegidos fuerte vs ninguna/ débil tinción. [000386] Ejemplo 10 [000387] En este ejemplo, la figura 9A-9E, la viabilidad residual de varias líneas de células linfocíticas B tratadas con DDD85646 durante 72 horas se muestra (figura 9A). Las curvas en la figura 9A se graficaron de acuerdo a una ecuación de 4 parámetros como se describe en Leatherbarrow, RJ (2009) GraFit Versión 6, Erithacus Software Ltd., Horlcy, Reino Unido para el análisis GraFit usando la ecuación: [000388] Intervalo Fondo [000389] donde intervalo es el número no inhibido ajustado menos el fondo, y s es el factor de pendiente. La ecuación asume que y cae con el x creciente. A y B. gráficas combinadas (n = 4). [000390] En la figura 9A, se usaron concentraciones crecientes de DDD85646 para tratar líneas de células BL (BL-2 y Ramos), junto con los controles pertinentes [IM9 (linfocito B "normal") y KMH2 (línea de células HL) que expresa ambos NMT]. Se usó un ensayo de azul de tripano para medir la citotoxicidad del DDD85646 a las 24, 48 y 72 horas. Aunque se recolectaron datos en los puntos de tiempo 24 horas y 48h (datos no mostrados), el efecto más percibible de DDD85646 se observó en el punto de tiempo de 72 h. [000391] Las proporciones de supervivencia se disminuyeron en las líneas de células de linfoma B usadas (Ramos: DDD85646 EC50 = 0.37 +/- 0.05 mM y BL2: DDD85646 EC50 = 0.43 +/- 0.2 mM) de una manera dependiente de la concentración de DDD85646. Las proporciones de supervivencia de las líneas de células de control, IM-9 (DDD85646 EC50 = 7.08 +/- 2.32 mM) y KMH2 (DDD85646 CE50 = 29.6 +/- 10.6 mM) fueron superiores. Los datos de EC50 se resumen como sigue. [000392] Tabla 2: [000393] DDD85646 exhibió una baja EC50 (la concentración que aniquila 50% de las células de cáncer) en células BL, y exhibió una mayor EC50 en células HL (KMH2). De esta manera.
DDD85646 exhibió un alto índice de aniquilación selectiva para células de cáncer. Como se usa en la presente, se define el índice de aniquilación selectiva como la relación de CE50 de células B inmortalizadas "normales"/EC50 de células malignas. El índice de aniquilación selectiva para DDD85646 fue de 16.4 y 19.1 para células BL-2 y Ramos, respectivamente. [000394] En la figura 9B, se usó DDD86481 para tratar células BL y líneas de células de control [IM9 (linfocito B "normal") y KMH2 (línea de células HL) que expresa ambos NMT]. Se midió la viabilidad celular usando el ensayo de MTS a 48h y 72h, aunque no se observó un cambio significativo en la viabilidad celular a las 48 horas (datos no mostrados), se encontró que la proporción de supervivencia de las líneas de células BL probadas disminuyó de manera significativa en el punto de tiempo de 72 h (Ramos: DDD86481 EC50 = 42 nM y BL2: DDD86481 EC50 = 58 nM) de una manera dependiente de la concentración de DDD86481. Las proporciones de supervivencia para las líneas de células de control, IM-9 (DDD86481 EC50 = 2.2 mM) y KMH2 (DDD86481 EC50 = 12.6 mM), fueron superiores. El índice de aniquilación selectiva calculado para DDD86481 fue de 37.9 y 52.3 para las células BL-2 y Ramos, respectivamente. Los datos de EC50 se resumen como sigue. [000395] Tabla 3: [000396] La siguiente tabla, que presenta la descripción del tipo de célula y las EC50 para DDD85646 y DDD864841, células de linfoma B (BL-2 y Ramos) que expresan solo una NMT (NMT1) son ~ 15-72 veces más sensibles a DDD85646 o DDD86481 que las células B "normales" inmortalizas o líneas de células de linfoma no Hodgkin que expresan ambas NMT. [000397] Tabla 4: [000398] La siguiente tabla proporciona un resumen de los datos farmacológicos de EC50 y EC90 para DDD86481 en líneas de células de linfoma de Burkitt (BL-2 y Ramos) y células B inmortalizadas "normales" (datos calculados de la figura 9B). [000399] Los índices de selectividad muestran las relaciones de las ECS0 y EC90 que indican que DDD86481 aniquila preferencialmente células de cáncer por un factor de >300 veces (puesto que la concentración requerida para aniquilar la línea de células B normales es mucho más mayor). [000400] Tabla 5: [000401] En la Figura 9C, se usó DDD73226, para tratar líneas de células BL (BL-2 y Ramos) junto con los controles pertinentes [IM9 (linfocito B "normal") y KMH2 (línea de células HL) que expresan ambas NMTs)]. La citotoxicidad de DDD73226 se midió usando un ensayo de exclusión con azul de tripano a 72 horas. No se observaron cambios significativos a la viabilidad celular a las 24 y 48 horas (datos no mostrados). También, no hubo un cambio significativo a la viabilidad de las células IM9, KMH2 y Ramos cuando las células se trataron con DDD73226 a concentraciones tan altas como 100 mM en el punto de tiempo de 72 horas. Sin embargo, una ligera disminución en la viabilidad celular observada en células BL2 tratadas con 100 mM DDD73226 a las 72 horas, en comparación a otras células. Sin que se desee que se una por teoría, esto puede ser debido a la adición que tiene niveles severamente disminuidos de NMT2, también BL2 tienen niveles inferiores de NMT1 en comparación a Ramos y otras líneas celulares, y por lo tanto puede ser más susceptible a la acción de inhibidores de NMT aún menos potentes. [000402] En la Figura 9D (Paneles i y ii), se presenta un experimento de transcurso de tiempo en donde se marcan células IM-9 y BL2 con w-alquinil-miristato 100 mM durante lh después del tratamiento con DDD86481 (0, 1 y 10 mM) durante 0, l o 4h. Las muestras de proteínas se hicieron reaccionar con ácido-biotina usando química clic y se visualizaron por transferencia western con NeutrAvidin^-HRP. La acción inhibitoria de DDD86481 fue rápida, con inhibición casi completa de la iristoilación en las células (tanto IM-9 como BL2) tratadas con DDD86481 1 mM después de una hora de tratamiento. [000403] En la Figura 9E, la dosis mínima de DDD86481 requerida para inhibir la miristoilación en las líneas de células IM-9, BL2 y Ramos, se determinó. Las células se trataron con DDD86481 a concentraciones de 0, 10, 50, 100, 500 y 1000 nM durante 2h con marcación de células metabólicas con alquinil-miristato en la última hora de tratamiento. DDD86481 inhibió la miristoilación de una manera dependiente de la concentración en todas las líneas celulares probadas. Las líneas celulares BL-2 y Ramos fueron más sensibles a la acción inhibitoria de DDD86481, como una disminución en la incorporación de la marca de alquino-miristato en las proteínas miristoiladas fue aparente partiendo en 50 nM para ambas líneas de células BL en comparación a IM-9 donde la incorporación de la marca de alquino-miristato disminuyó iniciando la concentración de 100 nM. [000404] La Tabla 6 muestra la caracterización pre-clínica preliminar de DDD85646 o DDD86481 - - - - - - - - - - - - - - [000405] Ejemplo 11 [000406] En este ejemplo, en la Figura 10A-10B, la sensibilidad de varios linfocitos B LO normales inmortalizados (obtenidos de Dr. Riabowol, U. de Calgary), células de linfoma B maligno (Ramos y BL2), y leucemia de células T (CEM) se muestra al inhibidor de NMT TrisDBA durante 24 horas (fig.lOA) viabilidad residual de varias líneas celulares tratadas con TrisDBA durante 24 horas (n=9) (fig.lOB) Efecto de TrisDBA en la actividad de N-miristoiltransferasa en células COS7 que expresan de manera transeiente NMT1 o NMT2 incubadas durante 24h con TrisDBA. In vitro la IC50 para TrisDBA es aproximadamente 2 mM para NMT1 y 5 mM para NMT2. Las líneas de células de linfoma de Burkitt Ramos y BL-2 fueron más sensibles al inhibidor de NMT TrisDBA. [000407] Ejemplo 12 [000408] En este ejemplo, en la Figura 11A-11C, se determinaron los niveles de expresión de NMT en la base de datos de enciclopedia de 967 líneas de células de cáncer (CCLE). Fig.llA) se consultó a la base de datos CCLE para la expresión de NMT1 y NMT2 y los niveles respectivos de NMT se graficaron. NMT2 muestra un intervalo grande de expresión (-3-11) en comparación a NMT1 (-6-9). Fig.llB) gráficas de Cajas y Bigotes de líneas de células de cáncer de varios subtipos de cáncer se grafican y comparan a la gráfica de todas las 967 líneas de células de cáncer. Se realizaron pruebas de T de Student que comparan cada grupo a todos los tumores. ** denota valores P < 0.001. Fig.llC) se consultó a la base de datos CCLE para las 50 líneas celulares que expresaron los niveles más bajos de NMT2 y se muestra en un formato de tabla. Las líneas de células tumorales derivadas de varios tejidos Hematopoyéticos y Linfoides representan 76% (38 de 50) de las líneas de células que expresan más bajo a NMT2 y se resaltan en varios colores. [000409] Ejemplo 13 [000410] En este ejemplo, en la Figura 12A-12F, se escinden las NMT durante la apoptosis pero permanecen activas. Fig.l2A y fig.l2B. Los U sados de células Jurkat inducidos a experimentar anti-Fas o apoptosis mediada por estaurosporina, se sondearon con anti-NMTl y anti-NMT2 por transferencia western y muestran una escisión dependiente en el tiempo de ambas enzimas. Se realizó la transferencia Western en las mismas muestras usando anticuerpos contra PAK2 y GAPDH. Fig.l2C y Fig.l2D. La incorporación de w-alquinil-miristato en células Jurkat inducidas para experimentar apoptosis mediada por estaurosporina o anti-Fas ilustra un cambio en los perfiles de miristoilación conforme las células están empezando a morir y sugiere que aunque las NMT se escinden aún están activas. Se marcaron metabólicamente células Jurkat con alquinil-miristato 25mM después de la inducción de la apoptosis con anti-FAS (100ng/ml) y cicloheximida (5 mg/ mi) (fig.l2C) o estaurosporina (2.5mM) y cicloheximida (5 pg/ mi) (fig.l2D). Las muestras de proteínas se hicieron reaccionar con ácido-biotina usando química clic y se visualizó por transferencia western con NeutrAvidinTM-HRP. Antes de la valoración de la incorporación de la marca por transferencia western, las membranas se incubaron en KOH 0.1 M (fig.l2B y 12D). (fig 12E) en los varios momentos indicados, se valoró la actividad de NMT usando decapéptico N-terminal ct-Bid y [3H]-miristoil-CoA. En tanto que ambas enzimas de NMT se escinden ambas permanecen catalíticamente activas y solo NMT1 exhibe una pérdida significativa de actividad. (fig.l2F) Reconstitución de la escisión de NMT1 por caspasas-8 y -3, y la escisión de NMT2 por caspasa-3 in vitro (gel teñido con Coomassie). Se incubaron His-NMTl y His-NMT2 purificadas (5 ug de cada una) con caspasa 3 y 8 activa (500ng de cada una) durante 1 hora a 37°C. Se adicionó un inhibidor de caspasa general (z-VAD-fmk) para impedir que la reacción prosiga adicionalmente al final de la incubación. Las muestras se hirvieron inmediatamente con amortiguador de carga de muestra 5x con Beta-Mercaptoetanol y se cargó en un gel de Acrilamida al 10% y se transfirió sobre una membrana de PVDF. La membrana entonces se tiñó con azul de Coomassie para visualizar las proteínas. Los fragmentos escindidos, que se enviaron para degradación Edman se grafican y se permite la identificación de los sitios de escisión de caspasa en NMT1 después de D72 y NMT2 después de D25 y D67. [000411] Ejemplo 14 [000412] En este ejemplo, en la Figura 13A-13D, se muestra la purificación de hNMTl y hNMT2 marcadas con GST- y His6 recombinantes. (fig.l3A) purificación de GST-NMT1 y (FIG.13B) GST-NMT2 en agarosa de glutationea, y purificación de (FIG.13C) His6-NMT1 y (FIG.13D) His6-NMT2 por cromatografía de Ni-quelación y cromatografía de intercambio iónico Resource S. En la Figura 13C-13D, las sendas so como sigue. (FIG.13C) GelA: Purificación de NMT1: 1) todo el marcador azul, 2) mezcla de columna Ni-NTA, 3) mezcla de filtración en gel, 4) FT de Resource S, 5) Fracción 8 (f8), 6) fl6, 7) fl8, 8) f19, 9) f20, 10) f21, 11) f22, 12) f41, 13) f42, 14) f66, 15) f67. (fig.l3D) Gel B: Purificación de NMT2: 1) todo marcador azul, 2) mezcla de columna Ni-NTA pool, 3) mezcla de filtración de gel, 4) FT de Resource S, 5) Fracción 21 (f21), 6) f28, 7) f38, 8) f39, 9) f40, 10) f41, 11) f42, 12) f44. [000413] Ejemplo 15 [000414] En este ejemplo, en la Figura 14, se muestra la comparación de las actividades enzimáticas entre His6-NMT1 de longitud completa recombinante purificada ct-His6-NMTl "truncada con caspasa" recombinante. His6-NMT1 (aa 73-496) de longitud completa. Se valoró la actividad de NMT usando un ensayo de miristoilación peptídica de King et al.1999, Anal Biochem. Experimentos en duplicado. [000415] Ejemplo 16 [000416] En este ejemplo, en la Figura 15, se muestra la comparación de la EC50 e IC50 de varios inhibidores de NMT y diferentes líneas celulares. La gráfica muestra la correlación entre la potencia bioquímica de 8 inhibidores de NMT en el ensayo enzimático bioquímico (IC50) y su potencia en un ensayo de viabilidad celular con azul de alamar que usa 7 líneas celulares (EC50). Se llevó a cabo el análisis por regresión en cada línea celular y da un valor R2 medio de 0.9 (intervalo 0.82-0.96). Este alto nivel de correlación entre las varias IC50 y EC50 es fuerte evidencia que la actividad de las moléculas en el ensayo de viabilidad celular es debida en su actividad inhibitoria en NMT. Se señala que 2 pares de moléculas tienen potencias similares en el ensayo bioquímico. [000417] Ejemplo 17 [000418] En este ejemplo, en la Figura 16, se muestra la inducción por DDD86481 de la apoptosis de células BL. [000419] Se incubaron linfocitos B inmortalizados "normales" (IM9), KMH2 (linfoma de Hodgkin) y BL (BL2 y Ramos) con concentraciones crecientes (nM) de DDD86481 y se monitorizó la escisión de poli-ADP-ribosa-polimerasa-1 (PARP-1) y caspasa-3 después del punto de tiempo de 72 horas. Se realizó la transferencia Western en los U sados celulares para monitorizar la escisión o PARP-1 y caspasa-3 así como la presencia de GAPDH como control de carga (geles compuestos). Se presentó tanto la escisión de PARP-1 como de caspasa-3 de una manera dependiente de la dosis cuando las líneas de células BL se trataron con el inhibidor, indicando que estas células experimentan apoptosis. No se observó escisión de PARP-1 o caspasa-3 en las células IM9 "normales" tratadas con el inhibidor. La escisión porPARP-1 en células KMH2 (HL) se observó a mayores concentraciones, aunque fue mínima en comparación a la escisión por PARP-1 observada en las células BL. De esta manera, se encontró que las células BL están más inclinadas a experimentar apoptosis que las células B "normales" cuando se tratan con DDD86481. [000420] Ejemplo 18 [000421] En este ejemplo, en la Figura 17A-17B, se proporciona una estimación de un umbral para la pérdida de NMT2 en tumores humanos. En la Tabla 7, se muestra el nivel de expresión de ARNm de NMT2 como log2 (micro-arreglo intensidad de fluorescencia NMT2) para las líneas celulares indicadas del conjunto de datos CCLE donde está disponible.
Tabla 7 [000422] En la Figura 17A, las líneas celulares linfoides indicadas se sondearon para la presencia de NMT2 por transferencia western. En la Figura 17B, al comparar la fig.l7A y la Tabla 7, se demostró a un log2(micro-arreglo intensidad de fluorescencia NMT2) = 5.64 observado en células Toledo, no hay NMT2 detectable por transferencia western. Aunque el umbral real para la pérdida de la expresión de NMT2 puede ser mayor que 5.64, se estuvo usando en este ejemplo este número como un umbral para establecer la prevalencia aproximada de la pérdida de NMT2 en la población humana (fig.l7B). Los datos indican que la pérdida de NMT2 no es solo prevalente en los linfomas de Burkitt y de células B grandes Difuso sino también en una gran variedad de otros tipos de tumores (ver también Figura 11C para una lista de las 50 líneas celulares que expresan lo menos de NMT2 y la tabla para la prevalencia de la pérdida de NMT2 en varios tipos de cáncer). [000423] Por consiguiente, se proporciona en la presente método para identificar aquellos cánceres deficientes en NMT2 adecuados para el tratamiento con uno o más inhibidores de NMT1 . En un ejemplo, una muestra de paciente con niveles de ARNm o concentración por abajo de aproximadamente un valor de umbral indica que el paciente es un buen candidato para el tratamiento con un inhibidor de NMT1. En algunos ejemplos, un nivel de ARNm por abajo de aproximadamente el umbral se refiere como baja expresión. En un ejemplo, una muestra de paciente con niveles o concentración de ARNm por arriba de aproximadamente un valor de umbral, indica que el paciente es un pobre candidato para el tratamiento con un inhibidor de NMT1. En algunos ejemplos, un nivel de ARNm por arriba de aproximadamente el umbral se refiere como alta expresión. [000424] Se apreciará que además, o en lugar de, el valor de umbral establecido con respecto a las células Toledo, fuentes alternativas pueden servir como valores de umbral adecuados. En algún ejemplo, la fuente o control usado para obtener un valor de umbral es el mismo tipo celular como el cáncer que se prueba. En algunos ejemplos, los valores de umbral de control o fuentes se almacenan o encuentran en una base de datos. [000425] Ejemplo 19 [000426] En este ejemplo, en la Figura 18A-18B, el uso de una sonda de edestiobiotin-PEG-azida para jalar de manera pos-transduccional proteínas w-alquinil-miristoiladas en células T Jurkat leucémicas usando cuentas de estreptavidina-sefarosa, se muestra. [000427] La destiobiotina (mostrada en I) es un análogo en la biotina que se une de manera reversible a avidina y proteínas tipo avidina. Se diseñó y ordenó la síntesis de destiobiotina-PEG-azida (I.) y biotina-PEG-azida (II.). [000428] En (fig.l8B) células T Jurkat se cultivaron en la presencia de w-alquinil-miristato y se indujeron a experimentar apoptosis mediada por anti-Fas en la presencia de cicloheximida. Después de la lisis celular, los U sados se hicieron reaccionar con destiobiotina-PEG-azida usando química clic, o no, se mezclaron con cuentas de neutravidina-sefarosa, se lavaron y eluyeron con biotina lOmM. La fig.lSB (i) muestra que la proteína pos-transduccinoalmente miristoilada, destiobiotinilada se puede jalar y recuperar de manera eficiente de las sendas 5, 6, 7 de cuentas de neutrovidina y B (iii). En la fig.l8B (ii), se muestra un control en el cual la destiobiotina-PEG-azida se omitió de la reacción clic. En ese caso, muy pocas proteínas se unieron a las cuentas de neutravidina y se eluyeron (solo una banda débil se puede ver a 75kDa). Estos resultados indican el desarrollo de un método para permitir un análisis proteoico y valorar los contenidos celulares de miristoilomas o proteínas co-y pos-transduccionalmente miristoiladas. [000429] Ejemplo 20 [000430] En este Ejemplo, Figura 19A-19B, se representa el uso en escala de una sonda de destiobiotina-PEG-azida para jalar de manera pos-transduccional proteínas w-alquinil-miristoiladas en células T Jurkat T leucémicas usando cuentas magnéticas de estreptavidina. Se indujeron células Jurkat para experimentar apoptosis con 2.5 mM de estaurosporina durante 3 horas luego se marcaron con miristato 100 mM (C14) (fig.l9A) o alquinil-miristato (Alk C14) (fig.l9B) ambos conjugados a BSA durante 1 hora a 37°C. Las células se recolectaron. U saron, hicieron reaccionar con azido-destiobiotina usando química clic. Las proteínas destiobiotin-alquinil-miristoiladas se unieron a cuentas magnéticas de estreptavidina se lavaron y eluyeron con biotina 50 mM con SDS al 2% a 37°C durante 15 min. La elución 1 (fig 19B) contienen la mayoría de las proteínas destiobiotin-miristoiladas en tanto que se encontró poco en la elución uno de células marcadas con miristato (fig.l9A). Tiempo de exposición: 5 segundos. [000431] Ejemplo 21 [000432] En este ejemplo, en la Figura 20, se muestran los perfiles de miristoilación de células B inmortalizadas "normales" (IM9) y células BL (BL2 y Ramos) marcadas con alquinil-miristato. Las células se marcaron metabólicamente con alquinil-miristato 100 mM durante 1 hora antes de la recolección. Las muestras de proteínas se hicieron reaccionar con azido-biotina usando química clic, 25 mg de proteína de cada U sado celular separado por SDS-PAGE y se visualizaron por transferencia western usando NeutrAvidinTM-HRP. Las flechas indican proteínas biotiniladas alquinil-miristoiladas, que están presentes en el linfocito B inmortalizado "normal" IM9, pero no se ven en células BL (BL2 y Ramos). [000433] Ejemplo 22 [000434] En este ejemplo, en la Figura 21A-21B, se muestran gráficas de citotoxicidad dependiente de la dosis y el tiempo de la combinación de DDD86481 y doxorubixina. Las líneas de células linfocíticas B IM-9 (fig.21A) y BL-2 (fig.21B) se trataron con concentraciones crecientes de DDD86481 (0, 0.001, 0.01, 0.1, 1.0, 10 y 100mM) a 0 (Azul), 17 (Rojo) y 86 nM (Verde) de hidroxidoxorubicina durante 24, 48 o 72 horas (parte superior hacia fondo). Los ensayos de MTS demuestran aniquilación celular inducida por concentraciones de doxorubicina y DDD86481 que de manera individual son mucho menos tóxicas; este efecto es consistente con una interacción sinérgica. Esto se caracteriza por una disminución en 6 veces de la EC50 cuando ambos compuestos se usan conjuntamente en comparación a la EC50 para DDD86481 usado solo en los puntos de tiempo de 24 y 48 horas. [000435] Ejemplo 23 [000436] En este ej emplo, en Tabla 8 , posterior, se proporciona una evaluación de la prevalencia aproximada de la pérdida de NMT2 en múltiples cánceres humanos en Norte América. Se estableció un valor mínimo de corte de 5.64 para el log2(microarreglo intensidad de fluorescencia) que corresponde a las células sin NMT2 (Toledo, ver Ejemplo 18) y se encontró que 114 de las 967 líneas celulares caen bajo este umbral (-12%). Las proporciones de incidencia en Norte América para cada tipo de tumor, número de pacientes que indican beneficio de una terapia con inhibidor de MT (% X de incidencia bajo el umbral) y el fundamento para las necesidades médicas de los cánceres seleccionados, también se muestran.
Tabla 8 [000437] Ejemplo 24 [000438] En este ejemplo, en Figura 22A-22B, se llevó a cabo la inmunotransferencia con células incubadas con DMSO, Estaurosporina, a-FAS, o portador solo. Las inmunotransferencias resultantes se sondearon con anticuerpo anti-NMTl, anticuerpo anti-NMT2, anticuerpo anti-PARP-1, y anticuerpo anti-GAPDH. Estos datos incluyen a la NMT que se escinde en la inducción de la apoptosis. [000439] En particular, en este ejemplo, en la Figura 22A, se investigó los papeles de las NMT en células vivas y secas. Células T Jurkat se indujeron para experimentar muerte celular programada con anti-Fas o STS, se analizaron para su contenido en NMT. Las células T Jurkat se trataron con DMSO, estaurosporina (2.5 mM) o anti-Fas (300 ng/ml) con ciclohexitnida (5 mg/mL) y las muestras se recolectaron en los puntos de tiempo de 0, 2, 4, 6 y 8 horas. Las células se lisaron y se valoró la presencia de NMT1, NMT2, PARP-1 y GAPDH por transferencia Western usando ECL. El tratamiento de células T Jurkat con ya sea anti-Fas o STS dio por resultado escisión dependiente del tiempo de tanto NMT1 y NMT2 (Figura 22A). La escisión de NMT1 empezó 2 horas después de la inducción de la muerte celular, en tanto que aquella de N T2 solo fue detectable después de 4 horas de apoptosis. [000440] La escisión de NMT1 que migra a una proteína aparente de 67 kDa (peso molecular previsto = 56.8 kDa) dio por resultado un fragmento aparente de -46 kDa (Figura 3.1). La escisión de la NMT2 que migra como una proteína aparente de 65 kDa (peso molecular provisto = 56.9) produjo un fragmento aparente de -55 kDa en los puntos de tiempo tempranos, que se convirtió en un fragmento más corto que migra en o por abajo de -46 kDa en puntos de tiempo posteriores (4 y 8 h). Este fragmento más corto de NMT2 se vio que se traslapa con una banda de proteína no específica. Sin embargo, fue más visible en los lisados de células Jurkat tratadas con Fas en las Figuras 3.2 (8h) y 3.4 A (4h y 8h). De esta manera, las escisiones de NMT1 y NMT2 dan por resultado de manera particular e inicial la pérdida de los fragmentos de -11 kDa y ~10kDa, respectivamente. La razón para las discrepancias entre las migraciones aparentes y los pesos moleculares previstos de las NMT, no se muestra. La sincronización de la escisión de las NMT paralela a aquella del marcador apoptótico PARP-1 sugiere que es debido a la acción de las caspasas. [000441] NMT1 es un substrato de las caspasas-3 o -8, y NMT2 es un substrato de caspasa-3. [000442] En el experimento de la Figura 22B, para investigar si están comprendidas las caspasas en la escisión de las NMT, se indujo apoptosis mediada por anti-Fas en células T Jurkat en la presencia o ausencia de inhibidores irreversibles bien caracterizados de caspasas-3, -8, y -9 junto con un inhibidor general de caspasas y se analizaron los contenidos celulares para ambas NMT. Se trataron células T Jurkat con 10 mM inhibidores de caspasas durante una hora y luego se trataron con anti-Fas (300 ng/mL) y cicloheximida (5 mg/mL) para inducir apoptosis. Las muestras se recolectaron en los puntos de tiempo de 0, 4, y 8 h. Las células se U saron y se valoró la presencia de NMT1, NMT2 y PARP-1 por transferencia western usando ECL. Las gráficas entonces se agotaron y resondearon con anti-tubulina (control de carga) (geles compuestos). [000443] La escisión de NMT1 se anuló por los inhibidores generales y específicos de caspasa-8, en tanto que solo se bloqueó parcialmente por el inhibidor específico de caspasa-3 (Figura 22B), lo que sugiere que NMT1 es un substrato de las caspasas-3 o -8. En contraste, la escisión de NMT2 se inhibió de manera notable por todos los inhibidores de caspasas usados (Figura 22B). Esto sugiere que NMT2 es probablemente un substrato de la caspasa-3 puesto que la inhibición del iniciador caspasas-8 o -9, inhibirá a su vez la escisión y la activación del efector caspasa-3. El progreso de la apoptosis inducida por anti-Fas se verificó por transferencia western con anti-PARP-1 Figura 22B). El grado de escisión por PARP-1 es concomitante con y en proporción a aquel de NMT1 y NMT2. [000444] Ejemplo 25 [000445] En este ejemplo, en la Figura 23, se muestra que la NMT2 truncada con caspasa es 3-4 veces más activa que la NMT2 de longitud completa. La actividad de NMT de longitud completa purificada y de hexahistidina(His)-NMT escindidas con caspasas, se valoró usando un ensayo de miristoilación peptídica. Se calculó la actividad de N-Miristoiltransferasa de la cantidad de miristoilpéptido marcado producido y detectado en papel de fosfocelulosa (adaptado de King et al.1991, Anal Biochem.). Cada ensayo de NMT se realizó en triplicado. El control usado es elusión 5 de la purificación de His-NMTl. La NMT2 truncada con caspasa es 3-4 veces más activa que la NMT2 de longitud completa. [000446] Ejemplo 26 [000447] En este ejemplo, en la Figura 24, se muestra que la reducción de los niveles de NMT2 en células BL comprende la acción de histona-desacetilasas. [000448] En los experimentos de la Figura 24, se busca valorar la posible implicación de la lentificación génica en el sitio o locus de NMT2. La acetilación del grupo e-amino de residuos de lisina en histonas por histona-acetilasas (HATs) da por resultado la reducción de la carga positiva de las histonas, lo que relaja la conformación de cromatina y permite que la maquinaria de transcripción tenga mejor acceso al ADN (Barneda-Zahonero, B., y M. Parra. 2012. Histone deacetylases and cáncer. Mol Oncol. 6:579-589.). Por lo tanto, la acetilación con histona se asocia típicamente con activación génica. Por el contrario, la remoción de grupos de acetilo de las histonas por histona-desacetilasas (HDACs) induce condensación de cromatina y da por resultado la represión transcripcional o lentificación de genes. [000449] Para probar si la reducción en el ARNm NMT2 fue debida a la lentificación de cromatina, se trataron células B "normales" (IM9) y células BL malignas con ácido suberoilanilida-hidroxámico (SAHA) (también llamado vorinostat), un inhibidor de histona-desacetilasa clase I y clase II durante 24 horas y se monitorizaron los niveles de NMT1 y NMT2 por transferencia western. En particular, las células B "Normales" (IM9) y las células BL malignas (Ramos, BL2) tratadas con SAHA 1 mM (inhibidor de HDAC clase I/II) durante 24 h. Las células entonces se Usaron, se sometieron a SDS-PAGE y la transferencia western se realizó con anticuerpos de NMT1, NMT2, p21/WAFl y GAPDH. [000450] Se encontró que el uso de SAHA incrementó los niveles de NMT2 en las células BL donde están agotados típicamente los niveles de NMT2, en tanto que los niveles de NMT1 permanecieron relativamente sin cambio. p2l/WAFl, una proteína se une a e inhibe la actividad de los complejos de cinasa 1 dependiente de cielina (CDK1) o de CDK2, se usó como un control para verificar la efectividad de SAHA, que se conoce que incrementa la expresión génica de p21/WAFl en las células. Todas las células tratadas con SAHA contuvieron niveles incrementados de p2l/WAFl. En tanto que no se desea que se una por teoría, estos datos sugieren que un HDAC clase I o clase II lentifica el gen de NMT2 al desacetilar las histonas y compactar de ese modo el sitio de NMT2 en las células BL. [000451] En un ejemplo, se usa un inhibidor de HDAC para tratar cáncer deficiente en NTM2. [000452] Ejemplo 27 [000453] En este ejemplo, en la Figura 25, se muestra que los niveles de la proteína NMT2 están reducidos en varias líneas de células BL. Los Usados de varias líneas de células linfocíticas se obtuvieron de investigadores locales y se analizaron para su contenido de NMT. Los resultados demuestran que los niveles de proteína NMT2 se redujeron en todas las líneas de células de linfoma de Burkitt (BL2, Daudi, Ramos y BJAB) en comparación a las líneas de células B linfoblásticas inmortalizadas "normales", IM9 LOy VDS. [000454] Ejemplo 28 [000455] En este ejemplo, en Figura 26, se muestra que la degradación proteosómica no es la causa del agotamiento de NMT2 en las células BL. En estos experimentos, linfocitos B inmortalizados "Normales" (IM9) y células malignas de linfoma B [linfoma de Hodgkin (KMH2) y BL (Ramos, BL2)] tratada con 10 mM de inhibidor proteosómico (MG-132) durante 5h. Se realizó la transferencia Western en U sados celulares para monitorizar los niveles de NMT1, NMT2, Mcl-1, y GAPDH. [000456] Para investigar si la degradación de NMT2 se incrementó como resultado de una mutación desestabilizadora o de la presencia de un factor desconocido que puede desestabilizar NMT2 en células de cáncer, se trataron linfocitos normales y malignos con el inhibidor de degradación proteosómica MG-132 durante 5h. Se sometieron lisados celulares a transferencia western para analizar la presencia de NMT1, NMT2 y proteína de leucemia 1 de células mieloides (Mcl-1), que se usó como un control para verificar la efectividad de MG-132 puesto que se somete a degradación proteosómica. Los resultados indican que los niveles de NMT2 no se incrementan en las células BL en el tratamiento con MG-132, sugiriendo una mutación desestabilizadora o factor desestabilizador presente en linfomas malignos que conduce a la degradación en el tratamiento con MG-132 sugiriendo que no es está presente una mutación desestabilizadora ni un factor de desestabilización presente en linfomas malignos que conducen a la degradación de NMT2. El tratamiento de células con MG-132 conduce a niveles incrementados de Mcl-1 en todos los tipos de células. [000457] Ejemplo 29 [000458] En este Ejemplo, en Figura 27A-27B, se muestra que NMT1 se escinde por caspasa-8, pero no NMT2. Células T Jurkat (fig.27A) y células T Jurkat que expresan un mutante negativo dominante de caspasa-8 (fig.27B) se trataron con DMSO o anti-Fas (150 ng/mL) y las muestras se recolectaron a 0, 4 y 8 h de punto de tiempo. Las células se U saron y se valoró la presencia de NMT1 , PARP-1 y caspasa-8 escindida por transferencia western usando ECL. * denota bandas no específicas. [000459] La escisión de NMT1 se investigó en células T Jurkat tipo silvestre y células T Jurkat que expresan un mutante negativo dominante de caspasa-8 (C8DN) (Juo et al., 1998). La expresión de C8DN en células T Jurkat apoptóticas anuló la escisión de NMT1 en comparación a niveles vistos en células T Jurkat tipo silvestre (Figuras 27A y 27B). Un contenido mínimo de escisión de NMT2 se observó en células Jurkat-C8DN después de 8 horas de inducción de apoptosis (Figura 27 B). La escisión de PARP-1 y caspasa-8 también se inhibió en células Jurkat T-C8DN. [000460] Ejemplo 30 [000461] En este Ejemplo, en la Figura 28A-28B, tanto NMT1 como NMT2 se escindieron por caspasa-3. MCF7 (fig.28A) y MCF7 que expresa caspasa 3 (MCF7/caspasa 3) (fig.28B) se trataron co DMSO o STS (2.5 mM) con cicloheximida (5 mg/mL) y las muestras se recolectaron en los puntos de tiempo de 0, 4 y 8 h. Las células se lisaron y mediante transferencia western usando ECL se analizó la presencia de NMT2, PARP-1 y caspasa 3 escindida. [000462] Se encontró que tanto NMT1 como NMT2 no se escindieron en células MCF-7 apoptóticas en el punto de tiempo de 8 h (Figura 28A). En contraste, ambas enzimas se escindieron fácilmente en células MCF-7 apoptóticas que expresan de manera estable caspasa-3 (Kagawa et al., 2001) (Figura 28B). La escisión del substrato PARP-1 de caspasa-3/-7 conocido también se confirmó en ambas líneas de células MCF-7 cuando se indujo apoptosis (Figuras 27A y 27B) (Walsh et al., 2008). Por lo tanto, ambas NMT parecieron ser substratos de caspasa-3. [000463] Ejemplo 31 [000464] En este ejemplo, en la Figura 29, los sitios de escisión por caspasa de NMT1 y NMT2 como se identifica por degradación Edman se muestran en negritas y la secuencia de lisina positivamente cargada (K) se resalta en las secuencias de aminoácidos de NMT1 y NMT2 (aminoácidos 1 a 80). [000465] La secuenciación terminal-N reveló que NMT2 se escindió tanto en los sitios D-25 y D-67 (Figura 29). Los sitios de escisión tanto para NMT1 como para NMT2 estuvieron localizados en el N-término de las enzimas y en el dominio catalítico C-terminal, que sugiere que las enzimas escindidas aún pueden ser activas durante la apoptosis. [000466] Ejemplo 32 [000467] En este Ejemplo, en la Figura 30, se representa la confirmación de los sitios de escisión de NMT por mutagénesis dirigida al sitio. Células HeLa que expresan de manera transciente construcciones V5-NMT tipo silvestre mutantes se incubaron con STS (2.5 mM). Las células transfectadas con las construcciones V5-NMT1 o V5-NMT2 se lisaron en los puntos de tiempo de 4 h y 5 h, respectivamente. Se realizó la transferencia western en las muestras usando anticuerpos V5 y oí-tubulinas (control de carga). [000468] Para validar los sitios de escisión de NMT revelados por la secuenciación N-terminal, se construyeron vectores V5-NMT N-terminalmente marcados y se usó el equipo de mutagénesis dirigida al sitio Quickchange1* (Stratagene) para crear mutaciones puntuales en los sitios de escisión de NMT. La mutación de D72E manejada en V5-NMT1 anuló la escisión por caspasa de V5-NMT1 en células HeLa apropiadamente transfectadas inducidas a experimentar apoptosis con STS durante 4 h en tanto que los niveles de V5-NMT1 tipo silvestre disminuyeron severamente en estas células (Figura 30). Esto confirmó a D72 como el sitio de escisión con caspasa en NMT1. [000469] Debido a que la secuenciación N-terminal reveló dos sitios de escisión con caspasa (D25 y D67) para NMT2 (Figura 30), se mutaron ambos residuos de D25 y D67 en residuos de glutamato (E) [V5-NMT2 (D25E), V5- NMT2 (D67E)] y conjuntamente [V5-NMT2 (D25,67E)]. Se observó que la escisión del doble mutante de V5-NMT2 (D25,67E) se anuló severamente en células HeLa apoptóticas apropiadamente transfectadas en tanto que los mutantes individuales [V5-NMT2 (D25E), V5-NMT2 (D67E)] tienen efectos variables (Figura 30) y la V5-NMT2 tipo silvestre se escindió principalmente después de 5 h después de la inducción de la apoptosis (Figura 3.8). En comparación a la integridad de los mutantes individuales durante la apoptosis, se observó que V5-NMT2 (D25E) se escindió reproduciblemente ligeramente menos que V5-NMT2 (D67E) (Figura 30), sugiriendo que D25 puede ser el sitio de escisión primario de NMT2, en tanto que D67 puede ser un sitio de escisión secundaria. [000470] Ejemplo 33 [000471] En este ejemplo, en la Figura 31, se representa los cambios al perfil de miristoilación conforme las células experimentan apoptosis. Células Jurkat se marcaron metabólicamente con 25 mM de alquinil-miristato después de la inducción de la apoptosis con anti-Fas (150 ng/mL) y cicloheximida (5 mg/ mL). Las muestras de proteínas se hicieron reaccionar con azido-biotina usando química clic y se visualizaron por transferencia western con NeutrAvidinTM-HRP. Antes de la valoración de la incorporación de la marca por transferencia western, primero se incubaron en Tris-HCl 0.1 M O KOH 0.1 M. [000472] Células T Jurkat se indujeron a experimentar apoptosis usando anti-Fas y se marcaron metabólicamente durante 30 minutos con ácido w-alquinil-mirístico antes de recolectar las células en varios puntos de tiempo (0, 1, 2, 4 y 8 h). También a las células se adicionó cicloheximida para inhibir la traducción de la proteína como parte del estímulo apoptótico, bloqueando de este modo la miristoilación co-transduccional durante la apoptosis. Se hicieron reaccionar lisados celulares con azido-biotina usando química clic y las proteínas biotiniladas-miristoiladas se visualizaron por análisis de transferencia western usando NeutrAvidinTM-HRP, como se describe previamente (Yap et al., 2010). [000473] El perfil de miristoilación en el tiempo 0 h correlacionó con el patrón de miristoilación co-transduccional observado previamente en células no apoptóticas (Figura 31) (Martin et al., 2008; Yap et al., 2010). La exposición deliberadamente baja muestra solo unas pocas proteínas miristoiladas en los Usados celulares. El tratamiento de las membranas con KOH 0.1M confirmó que el ácido w-alquinil-mirístico se incorpora en proteínas mediante un enlace de amida resistente a álcali, puesto que el tratamiento co álcali removió la marca de solo unas pocas bandas de proteína. Este tratamiento alcalino hidroliza los enlaces de tioéster encontrados en las proteínas palmitoiladas (Armah y Mensa-Wilmot, 1999; Zhao et al., 2000; Vilas et al., 2006). Después de la inducción de la apoptosis con anti-Fas y cicloheximida durante 1 h, se redujo la miristoilación co-transduccional, presumiblemente puesto que la traducción de la proteína se inhibe por cicloheximida. Esto se sigue por un cambio en el contenido celular de proteínas miristoiladas como se ilustra por las diferencias principales en los perfiles electroforéticos de proteínas miristoiladas que inicia a 2 h después de la inducción de la apoptosis y actual para la duración del experimento (Figura 31). [000474] Ejemplo 34 [000475] En este ejemplo, en la Figura 32, se representan los cambios a niveles de NMT conforme a las células se experimenta apoptosis. Células Jurkat se marcaron metabólicamente con alquinil-miristato 25 mM después de la inducción de la apoptosis con anti-Fas (150 ng/mL) y cicloheximida (5 mg/ mL). Se realizó la transferencia western en las mismas muestras como en la Figura 3 usando anticuerpos contra NMT1, NMT2 y GAPDH. (*) denota bandas no específicas. [000476] Estos resultados muestran que aunque las NMT se escindieron a varios grados durante la apoptosis, la actividad de miristoilación parece permanecer en todas las células hasta 8 h después de la inducción de la apoptosis. [000477] Ejemplo 35 [000478] En este ejemplo, en la Figura 33, se representa la inducción de células C0S7 que expresan de manera transciente V5-NMT1 y V5-NMT2 para experimentar apoptosis con estaurosporina y cicloheximida. Se valoró la actividad de NMT usando una miristoilación peptídica usando un ensayo de miristoilación peptídica y se realizó la transferencia western en la muestra usando anticuerpos contra v5 y alfa-tubulina (control de carga). [000479] La Figura 34 representa la actividad inicial de NMT en los U sados de células COS7 transcientemente transíectadas. Las células COS7 que expresan de manera transciente V5-NMT1 y V5-NMT2 se incubaron con STS (2.5 mM) y cicloheximida (5 pg/mL). Se valoró la actividad de NMT usando un ensayo de miristoilación peptídica como se describe en materiales y métodos. Se calculó la actividad de N-Miristoiltransferasa en la cantidad de miristoilpéptido radiomarcado producido y detectado en papel de fosfocelulosa (adaptado de King et al.1991, Anal Biochem.). Los niveles de actividad se normalizaron a la actividad de NMT1 en t=0h. NMT1 representa el promedio de tres experimentos independientes hechos en duplicado. NMT2 representa el promedio de cuatro experimentos independientes hechos en duplicado. [000480] La Figura 35 representa la actividad de NMT en células COS7 que expresan de manera transciente V5-NMT1 y V5-NMT2 incubadas con estaurosporina (2.5 mM) y cicloheximida (5 pg/mL). Se valoró la actividad de NMT usando un ensayo de miristoilación peptídica como se describe bajo materiales y métodos. Se calculó la actividad de N-Miristoiltransferasa de la cantidad de miristoilpéptido radiomarcado producido y detectado en papel de fosfocelulosa (adaptado de King et al.1991, Anal Biochem.). La actividad de NMT se normalizó a 100% en t = 0 h para cada NMT. NMT1 representa el promedio de tres experimentos independientes hechos en duplicado. NMT2 representa el promedio de cuatro experimentos independientes hechos en duplicado. Las diferencias se denotan por (*) y muestran significado estadístico (* < p=0.05, ** < p=0.005) en comparación al punto de tiempo 0 h para ambas NMT. [000481] Para valorar si las NMT escindidas fueron aún catalíticamente activas, se midió la actividad enzimática de V5-NMT de células transcientemente transfectadas que expresan ya sea V5-NMT usando un ensayo de péptido a base de filtro (King y Sharma, 1991; Raju y Sharma, 1999) durante el comienzo de la apoptosis. Células COS-7 transfectadas de manera transciente con V5-NMT1, V5-NMT2 o vector vacío, se indujeron a experimentar apoptosis mediada por STS/cicloheximida y se usaron como una fuente de la enzima. Se midió la actividad de NMT en diferentes momentos de la apoptosis usando decapéptidos Bid truncados miristoilables o no miristoilables (G—>A) y [3H]-miristoil-CoA se usaron como substratos (King y Sharma, 1991; Raju y Sharma, 1999). Se calculó la actividad de NMT en la cantidad de péptido radiomarcado que permaneció unido al papel de fosfocelulosa y se detectó por cuanta de scintilación. [000482] Aunque las células COS-7 transfectadas expresaron niveles similares de NMT quimérica (Figura 32), aquellas que expresan V5-NMT1 mostraron claramente casi una actividad NMT 5 veces superior que aquellas que expresan V5-NMT2 en t=0h (Figura 34). La cantidad de V5 -NMT intacta encontrada en los U sados celulares disminuyó con el paso del tiempo de la inducción de apoptosis (Figura 33) y siguió una tendencia similar como las NMT endógenas (Figura 32), aunque casi todas las NMT1 sobreexpresadas se escindieron después de 4 h y 8 h de la apoptosis y todas las NMT2 sobreexpresadas después de 8 h (Figura 3.33). Aunque más del 90% de V5-NMT1 se escinde (Figura 3.33) a 4 horas después de la inducción de la apoptosis, la actividad de NMT en aquellas células permaneció relativamente sin cambio hasta 8 horas después de que se inició la muerte celular. Hubo una ligera tendencia hacia el incremento (aunque no significativa) en la actividad catalítica de NMT a t=2h y 4h, en los U sados de células COS-7 que sobreexpresan NMT1 en comparación a la actividad en t=0h (Figura 3.35). Esto sugiere que V5-NMT1 escindida es catalíticamente activa durante la apoptosis cuando se inicia loa miristoilación pos-transduccional. Sin embargo, se observó una disminución significativa en la actividad de NMT (20%, p<0.05) a 8h después de la inducción de la apoptosis en comparación al punto de tiempo Oh en las células transíectadas con V5-NMT1 (Figura 35). [000483] La actividad de NMT de células que expresan V5-NMT2 no se afectó de manera significativa de Oh a 4h, hasta que la escisión por caspasa de V5-NMT2 dio por resultado una disminución estadísticamente significativa (p<0.005) (33% de disminución en comparación a la actividad en t=0h) en la actividad enzimática después de 8 h de inducción de apoptosis (Figura 35). De manera interesante, aunque los niveles de NMT2 se redujeron dramáticamente debido a la escisión de caspasa durante la apoptosis (Figura 33), 66% de la actividad de NMT2 aún permanece después de 8h de inducción de la apoptosis (Figura 33), indicando que NMT2 también juega un papel en la miristoilación pos-traduccional de proteínas durante la apoptosis [000484] Ejemplo 36 [000485] En este ejemplo, en la Figura 36, se representa la purificación de hNMTl escindida con caspasa y de longitud completa marcada con hexahistidina(His), recombinante. La purificación se utilizó usando cromatografía de Ni-NTA (ver materiales y métodos). Las proteínas purificadas se visualizaron al teñir geles con tintura de gel azul de coomassie. (FT: flujo de paso, W: lavado y E: fracciones eluidas) [000486] La Figura 37 representa la purificación de hNMT2 escindida con caspasa y de longitud completa marcada con hexahistidina(His) recombinante. La purificación se realizó usando cromatografía de Ni-NTA (ver materiales y métodos). Las proteínas purificadas se visualizaron al teñir geles con tintura de gel de azul de coomassie. (FT: flujo de paso, W: lavado y E: fracciones eluidas). [000487] La Figura 38 representa la actividad de NMT de hexahistidina(His)-NMT escindidas con caspasa y de longitud completa, purificadas, valoradas usando un ensayo de miristoilación peptídica. La actividad de N- Miristoiltransferasa se calculó de la cantidad de miristoilpéptido radiomarcado producido y detectado en el papel de fosfocelulosa (adaptado de Ring et al.1991, Anal Biochetn.). Cada ensayo de NMT se realizó en triplicado. El control usado es elución 5 de la purificación de His-NMTl. [000488] Se generaron vectores de NMT humana de longitud completa (His-NMTl y His-NMT2) marcados con His y truncados con caspasa (HÍS-73NMT1, HÍS-26NMT2 y HÍS-68NMT2) y se usaron estos vectores para expresión bacteriana y purificación de proteínas (Figuras 36 y 37). Usando el ensayo de NMT peptídico a base de filtro (Ring y Sharma, 1991; Raju y Sharma, 1999), se encontró que NMT1 y NMT2 tanto de longitud completa como truncadas y escindidas con caspasas fueron catalíticamente activas en comparación al control en un escenario in vitro (Figura 37). La escisión de NMT2 parece mejorar su actividad puesto que NMT2 truncada escindida con caspasa parece tener ~3 veces (His-26NMT2) y ~4 veces (His-68NMT2) más actividad en comparación a NMT2 de longitud completa (Figura 38). [000489] Ejemplo 37 [000490] En este ejemplo, en la Figura 39 se representa el fraccionamiento subcelular de las NMT endógenas en células HeLa durante la apoptosis. Se trataron células HeLa con DMSO, STS (2.5 mM) o anti-Fas (300 ng/mL) con cicloheximida (5 pg/mL) y las muestras se recolectaron en el punto de tiempo de 5 h y se sometieron a fraccionamiento subcelular como se describe en materiales y métodos. El mismo volumen de las fracciones P100 y S100 se sometió a transferencia western usando anticuerpos de NMT1 y NMT2. [000491] La Figura 40A-40B representa la cuantificación de la cantidad de NMT en diferentes fracciones después del fraccionamiento subcelular de las NMT endógenas en células HeLa durante la apoptosis. Células HeLa se trataron con DMSO, STS (2.5mM) o anti-Fas (300 ng/mL) con cicloheximida (5 pg/mL) y las muestras se recolectaron en el punto de tiempo de 5 horas y se sometieron a fraccionamiento subcelular (Figura 39). Los niveles de NMT1 y NMT2 de longitud completa (Completa) y escindida entre las fracciones P100 (P) y S100 (S) se cuantificaron usando Image J (http://rsbweb.nih.gov/ij/). Los porcentajes mostrados se calcularon como niveles de cada banda sobre el total de las dos fracciones (P100+S100). Las gráficas representan el promedio de tres experimentos independientes, [000492] La Figura 41 representa el fraccionamiento subcelular de células HeLa que experimentan apoptosis marcadas con alquinil-miristato. Antes del fraccionamiento subcelular (Figuras 39 A 40B), células HeLa se marcaron metabólicamente con alquinil-miristato 25 mM después de la inducción de la apoptosis. Después del fraccionamiento, las muestras de proteínas se hicieron reaccionar con azido-biotina usando química clic y se visualizaron por transferencia western con NeutrAvidinTM-HRP. Antes de la valoración de la incorporación de la marca por transferencia western, las membranas se incubaron en Tris-HCl neutral 0.1 M (A) o KOH 0.1 M (B). [000493] La escisión por caspasa de muchas proteínas frecuentemente da por resultado un cambio en la localización celular (Enari et al., 1998; Zha et al., 2000; Jakobi, 2004; Vilas et al., 2006); por lo tanto, para delinear la ubicación de las NMT escindidas durante la apoptosis, se realizaron experimentos de fraccionamiento subcelular (Figura 39) en células normales y apoptóticas. Se encontró que NMT1 se encontró principalmente localizado en la fracción robosómica/de membrana en células HeLa no tratadas (63.9% en sedimento) (Figura 40A-40B). Hubo un incremento discernible de NMT1 truncada con caspasa, escindida en las fracciones citosólicas de células HeLa inducidas para experimentar apoptosis con STS o anti-Fas conjuntamente con cicloheximida (54% en citosol en células tratadas con anti-Fas y 60% en citosol en células tratadas co STS) (Figuras 39 a 40B). Por el contrario, la mayoría de NMT2 (61.7%) localizado al citosol antes de la inducción de la apoptosis (Figuras 39 a 40B). Sin embargo, el fragmento más grande de NMT2 escindido con caspasa (~55 kDa) localizado principalmente al sedimento de membrana (94.7% en tratado con Fas y 80% en tratado con STS) en células apoptóticas (Figura 39 a 40B). No se observa la presencia del fragmento más pequeño escindido de NMT2 (~46 kDa) durante nuestros fraccionamientos, posiblemente debido a que las células se indujeron a experimentar apoptosis durante un máximo de 5 h. [000494] Cuando las células se marcaron metabólicamente con alquinil-miristato antes de la inducción de la apoptosis o no y se sometieron a fraccionamientos subcelular, se observó un cambio en el perfil de miristoilación después de la inducción de la apoptosis como se ve en la Figura 31 y se encontró que la inducción de la apoptosis como se ve en la Figura 31 y se encontró que las proteínas pos-transduccionalmente miristoiladas se localizaron de manera mínima en las membranas (P100) en comparación al citosol (S100) (Figura 40A-40B). Esto sugiere que la adición de una porción de miristoilo a estas proteínas pos-transduccionalmente miristoiladas parece ser suficiente para proporcionar anclaje estable en membrana. [000495] Ejemplo 38 [000496] En este ejemplo, Figura 42 se representa el efecto del ácido 2-hidroximirístico (HMA) en la inducción de la apoptosis. Células T Jurkat se trataron con o sin HMA (1 mM) y se indujo la apoptosis con anti-Fas (150 ng/ml) y cicloheximida (5 mg/ml). Las células de control se trataron con DMSO. Las muestras se recolectaron en los puntos de tiempo de O, 2, 4, 6 y 8 h. Las células se U saron y las muestras se separaron por SDS-PAGE y se inmunotransfirieron con anticuerpos contra PARP-1, PAK2, NMT1 y NMT2 (geles compuestos). [000497] La escisión de PARP-1 se presentó 2 horas más pronto en células tratadas con HMA lmM y anti-Fas en comparación a células tratadas con miristato de sodio lmM y anti-Fas. También se vio una tendencia similar en las células expuestas a HMA/STS pero a un menor grado que aquel que se vio con anti-Fas, en la presencia de células HMA/STS que exhibieron más escisión con PARP-1 y PAK2 a 2 horas después de la incubación de la apoptosis que las células tratadas con STS y miristato de sodio lmM (Figura 42). Una estimulación similar de la escisión de NMT1 y NMT2 también se observó. Esto indica que la inhibición de las NMT acelera la inducción de la apoptosis en células. Puesto que la inhibición de la NMT potenció el comienzo de la apoptosis, parece que las NMT juegan un papel completo de pro-supervivencia en las células. [000498] Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente mencionadas en esta especificación son indicativas del nivel de experiencia de los expertos en la téenica a la cual corresponde esta invención y en la presente se incorporan como referencia al mismos grado como si cada publicación de patente individual o solicitud de patente individual se indicará de manera específica e individual para que se incorpore como referencia. [000499] La invención que se describe de esta manera, será obvia que lo mismo puede variar de muchas maneras. Estas variaciones no se van a considerar como un apartado del espíritu y alcance de la invención y todas esas modificaciones serán obvias para una persona experta en la téenica que se propone que incluya dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims (98)

REIVINDICACIONES
1. Un método para tratar un sujeto que tiene un cáncer deficiente en NMT2, que comprende: administrar al sujeto un inhibidor de NMT.
2. El método de la reivindicación 1, en donde el inhibidor de NMT comprende un inhibidor de NMT1.
3. El método de la reivindicación 2, en donde el inhibidor de NMT1 comprende una molécula pequeña, un anticuerpo, un fragmento peptídico, un ácido nucleico, o combinaciones de esto.
4. El método de la reivindicación 3, en donde la molécula pequeña comprende Tris-DBA, HMA, o DDD85646, DDD86481, o un derivado de esto.
5. El método de la reivindicación 3, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal.
6. El método de la reivindicación 3, en donde el ácido nucleico comprende una molécula de ARNds, una molécula de ARNi, una molécula ARNmi, una ribozima, una molécula de ARNsh, o una molécula de ARNsi.
7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/ Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el sujeto es un sujeto humano.
9. Un método para tratar un sujeto con un cáncer o sospechoso de tener un cáncer, que comprende: pedir una prueba que proporcione los resultados de un análisis para determinar si una muestra del sujeto expresa NMT2, y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto si la muestra es deficiente en NMT2.
10. Un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto con un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína MT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de NMT1 se indica al sujeto se indica cuando la cantidad de proteína NMT2 en la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control.
11. Un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra,- realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a la proteína NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto cuando la cantidad a la proteína NMT2 en la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control.
12. El método de la reivindicación 9, en donde el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo.
13. El método de una cualquiera de las reivindicaciones afirman 11-13, en donde el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación.
14. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad de complejo en la muestra.
15. El método de la reivindicación 14, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
16. El método de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 15, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia ieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, ieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
17. El método de cualquiera de las reivindicaciones 9-16, en donde el sujeto es humano.
18. Un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de NMT1 al sujeto se indica cuando la cantidad al ácido nucleico de NMT2 en la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control.
19. Un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto cuando la cantidad al ácido nucleico de NMT2 en la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control.
20. El método de la reivindicación 9, en donde el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo.
21. El método de la reivindicación 17, 18, 19, o 20, en donde el ensayo de unión comprende, un ensayo de hibridación que usa sondas de ADN o ARN marcadas de manera detectable.
22. El método de la reivindicación 21, en donde el ensayo de hibridación es cuantitativo o semi-cuantitativo.
23. El método de la reivindicación 22, en donde el ensayo de hibridación es RT-PCR, hibridación in si tu, ensayo de protección de ARN ( "RPA"), microarreglo de ADNc y oligonucleótidos, análisis de diferencia de representación ( "RDA"), visualización diferencial, análisis de secuencia de EST, análisis serial de expresión génica ("SAGE"), y amplificación últiplex mediada por ligación con la Luminex FlexMAP ( "LMF").
24. El método de la reivindicación 23, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra.
25. El método de la reivindicación 24, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
26. El método de cualquiera de las reivindicaciones 17 a 25, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
27. El método de cualquiera de las reivindicaciones 18 a 26, en donde el sujeto es un humano.
28. Un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo al cual se une a la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectable y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de NMT1 al sujeto se indica cuando el perfil de miristoilación indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control.
29. Un método, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o es sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo al cual se une a la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectable y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo del complejo; y administrar un inhibidor de NMT1 al sujeto es cuando el perfil de miristoilación indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control.
30. El método de la reivindicación 28 o 29, en donde el procesamiento comprende tratar la muestra con co-alquinil-miristato y destiobiotina-azido-PEG-biotina.
31. El método de las reivindicaciones 28 o 30, en donde el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación.
32. El método de la reivindicación 31, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra.
33. El método de la reivindicación 32, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
34. El método de cualquiera de las reivindicaciones 28 a 34, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CIVIL), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
35. El método de cualquiera de las reivindicaciones 31-35, en donde el sujeto es humano.
36. Uso de un inhibidor de NMT para tratar un sujeto que tiene un cáncer deficiente en NMT2.
37. El uso de la reivindicación 36, en donde el inhibidor de NMT comprende un inhibidor de NMT1.
38. El uso de la reivindicación 36, en donde el inhibidor de NMT1 comprende una molécula pequeña, un anticuerpo, un fragmento peptídico, un ácido nucleico, o combinaciones de esto.
39. El uso de la reivindicación 38, en donde la molécula pequeña comprende Tris-DBA, HMA, o DDD85646, DDD86481, o un derivado de esto.
40. El uso de la reivindicación 38 o 39, en donde la molécula pequeña comprende DDD86481.
41. El uso de la reivindicación 38, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal.
42. El uso de la reivindicación 38, en donde el ácido nucleico comprende una molécula de ARNds, una molécula de ARNi, una molécula ARNmi, una ribozima, una molécula de ARNsh, o una molécula de ARNsi.
43. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 38 a 42, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/ Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
44. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 36 a 43, en donde el sujeto es un sujeto humano.
45. Uso de un inhibidor de NMT1 para tratar un sujeto con un cáncer, o sospechoso de tener un cáncer, en donde el inhibidor de NMT1 se indica su uso cuando la cantidad de proteína NMT2 en una muestra del sujeto es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control, en donde un ensayo de unión que comprende poner en contacto una muestra procesada del sujeto con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína NMT2 presente en la muestra procesada, genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; en donde el resultado de ensayo es indicativo de la cantidad de proteína NMT2 en la muestra.
46. El uso de la reivindicación 45, en donde el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo.
47. El método de cualquiera de las reivindicaciones 45-47, en donde el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación.
48. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 36-47, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad de complejo en la muestra.
49. El uso de la reivindicación 48, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
50. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 36 a 49, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/ Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
51. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 36-50, en donde el sujeto es humano.
52. Uso de un inhibidor de NMT1 para tratar un sujeto con un cáncer, o sospechoso de tener un cáncer, en donde el inhibidor de NMT1 se indica para uso cuando la cantidad de ácido nucleico de NMT2 en una muestra del sujeto es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control, en donde un ensayo de unión que comprende poner en contacto una muestra procesada del sujeto con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo.
53. El uso de la reivindicación 52, en donde el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de MT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo.
54. El uso de la reivindicación 52 o 53, en donde el ensayo de unión comprende, un ensayo de hibridación que usa sondas de ADN o ARN marcadas de manera detectable.
55. El método de la reivindicación 54, en donde el ensayo de hibridación es cuantitativo o semi-cuantitativo.
56. El uso de la reivindicación 55, en donde el ensayo de hibridación es RT-PCR, hibridación in si tu, ensayo de protección de ARN ( "RPA"), microarreglo de ADNc y oligonucleótidos, análisis de diferencia de representación ( "RDA"), visualización diferencial, análisis de secuencia de EST, análisis serial de expresión génica ("SAGE"), y amplificación múltiplex mediada por ligación con la Luminex FlexMAP ( "LMF").
57. El uso de la reivindicación 55, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra.
58. El uso de la reivindicación 55, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
59. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 53 a 58, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/ Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (C L), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
60. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 53 a 59, en donde el sujeto es un humano.
61. Uso de un inhibidor de NMT1 para tratar un sujeto con un cáncer, o sospechoso de tener un cáncer, en donde el uso del inhibidor de NMT1 se indica cuando un perfil de miristoilación de una muestra del sujeto indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control, en donde la realización de un ensayo de unión que comprende poner en contacto una muestra procesada con un anticuerpo que se une a la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectable y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo de complejo
62. El uso de la reivindicación 61, en donde el procesamiento comprende tratar la muestra con alquinil-miristato y destiobiotina-azido-PEG-biotina.
63. El uso de las reivindicaciones 61 o 62, en donde el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-in unoprecipitación.
64. El uso de la reivindicación 63, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra.
65. El uso de la reivindicación 36, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro- fluorómetro, dispositivo óptico, o un dispositivo electroquímico.
66. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 61 a 65, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/ Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
67. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 62 a 66, en donde el sujeto es humano.
68. Un método para identificar un sujeto adecuado para tratamiento con un inhibidor de NMT1 que comprende: obtener una muestra del sujeto con un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y la proteína de NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo; en donde el tratamiento con el inhibidor de NMT1 se indica cuando la cantidad de proteína de NMT2 la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control.
69. El método de la reivindicación 68, en donde el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo a NMT2 para formar un complejo entre el anticuerpo y NMT2 presente en la muestra procesada, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo.
70. El método de las reivindicaciones 68 o 69, en donde el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación.
71. El método de cualquiera de las reivindicaciones 68 a 70, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra.
72. El método de la reivindicación 71, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
73. El método de cualquiera de las reivindicaciones 68 a 72, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CIVIL), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
74. El método de cualquiera de las reivindicaciones 68 a 73, en donde el sujeto es humano.
75. Un método para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de N T2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado del ensayo indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de N Tl al sujeto se indica cuando la cantidad al ácido nucleico de NMT2 en la muestra es baja o está ausente, opcionalmente en comparación a un control.
76. El método de la reivindicación 75, en donde el análisis para determinar si la muestra del sujeto expresa NMT2, comprende realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con una marca detectable que se une al ácido nucleico de NMT2 para formar un complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un resultado de ensayo indicativo del complejo.
77. El método de la reivindicación 76, en donde el ensayo de unión comprende, un ensayo de hibridación que usa sondas de ADN o ARN marcadas de manera detectable.
78. El método de la reivindicación 77, en donde el ensayo de hibridación es cuantitativo o semi-cuantitativo.
79. El método de la reivindicación 78, en donde el ensayo de hibridación es RT-PCR, hibridación in si tu, ensayo de protección de ARN ( "RPA"), microarreglo de ADNc y oligonucleótidos, análisis de diferencia de representación ( "RDA"), visualización diferencial, análisis de secuencia de EST, análisis serial de expresión génica ("SAGE"), y amplificación múltiplex mediada por ligación con la Luminex FlexMAP ( "LMF").
80. El método de la reivindicación 79, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo entre la marca detectable y el ácido nucleico de NMT2 presente en la muestra se usa para determinar una cantidad de complejo en la muestra.
81. El método de la reivindicación 80, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
82. El método de cualquiera de las reivindicaciones 75 - 81, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
83. El método de cualquiera de las reivindicaciones 75 a 82, en donde el sujeto es un humano.
84. Un método para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: obtener una muestra de un sujeto que tiene un cáncer o sospechoso de tener un cáncer; procesar la muestra; realizar un ensayo de unión que comprende poner en contacto la muestra procesada con un anticuerpo al cual se une la proteína miristoilada, o proteínas miristoiladas marcadas con azido-biotina, dentro de la muestra para formar un complejo entre la marca detectable y la proteína miristoilada presente en la muestra, el ensayo de unión que genera al menos un perfil de miristoilación indicativo del complejo; en donde la administración de un inhibidor de NMT1 al sujeto se indica cuando el perfil de miristoilación indica que el cáncer es deficiente en NMT2, opcionalmente en comparación a un control.
85. El método de la reivindicación 84, en donde el procesamiento comprende tratar la muestra con alquinil-miristato y destiobiotina-azido-PEG-biotina.
86. El método de las reivindicaciones 84 o 85, en donde el ensayo de unión comprende clasificación celular activada por fluorescencia, ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas, inmunohistoquímica, inmunohistoquímica cuantitativa, transferencia de energía de resonancia y fluorescencia, transferencia de energía de resonancia Forster, complementación de fluorescencia biomolecular, espectrometría de masa, ensayo de inmunotransferencia o ensayo de co-inmunoprecipitación.
87. El método de la reivindicación 86, en donde la instrumentación que tiene un conjunto detector para detectar el complejo formado entre el anticuerpo y la NMT2 en la muestra se usa para determinar una cantidad del complejo en la muestra.
88. El método de la reivindicación 87, en donde la instrumentación es un espectrofotómetro, espectro-fluorómetro, dispositivo óptico, o dispositivo electroquímico.
89. El método de cualquiera de las reivindicaciones 84 a 88, en donde el cáncer es linfoma, linfoma de células B, linfoma folicular, linfoma de células B grande difuso, linfoma de células de manto, B-CLL/SLL, inmunocitoma/Waldenstrom, linfoma de células B monocitoide/ tipo MALT, linfoma de Burkitt, un linfoma pediátrico, linfoma anaplástico de células grandes, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica de fase explosiva, linfoma de Burkitt, mieloma de células plasma, adenocarcinoma intestinal, carcinoma adenoescamoso mezclado de pulmón, carcinoma de células pequeñas de pulmón, pulmón, carcinoma de células escamosas esofágicas, hueso, carcinoma ductal de mama, adenocarcinoma difuso de estómago, carcinoma medular toroide, carcinoma de células transicionales de tracto urinario, mieloma, carcinoma de células claras ováricas, carcinoma de células en transición (cáncer de uretra y vejiga), leucemia mielógena crónica (CML), linfoma-CLL, carcinoma de mama, adenocarcinoma colorrectal, adenocarcinoma de páncreas, carcinoma ovárico, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, osteosarcoma, melanoma, adenocarcinoma gástrico, adenocarcinoma endometrial, carcinoma escamoso esofágico.
90. El método de cualquiera de las reivindicaciones 84 - 89, en donde el sujeto es humano.
91. Un equipo para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMTl, que comprende: un anticuerpo a NMT2; instrucciones para identificar el sujeto de acuerdo al método de cualquiera de las reivindicaciones 68-74.
92. El equipo de la reivindicación 91, que comprende además un control.
93. Un equipo para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMTl, que comprende: un ácido nucleico para la unión a NMT2; instrucciones para identificar el sujeto de acuerdo al método de cualquiera de las reivindicaciones 75-83.
94. El equipo de la reivindicación 93, que comprende además un control.
95. El equipo de la reivindicación 93, en donde el ácido nucleico es ARN o ADN.
96. Un equipo para identificar un sujeto adecuado para el tratamiento con un inhibidor de NMT1, que comprende: NeutrAvidinTM-HRP; e instrucciones para identifica el sujeto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 84-90.
97. El equipo de la reivindicación 96, que comprende además un control.
98. El equipo de la reivindicación 97, que comprende además w-alquinil-miristato o destiobiotina-azido- PEG-biotina.
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