MX2013005271A - Terapia de combinacion con dexametasona. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad de (1) un compuesto de fórmula (I), tal como se describe en la presente, y/o un estereoisómero, tautómero o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una cantidad de (2) dexametasona y/o una sal, solvato, metabolito o racemato farmacéuticamente aceptable de esta, de modo de tratar al sujeto. En otro aspecto, se proporciona en la presente un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad de (1) un compuesto de fórmula (I) y una cantidad de (2) dexametasona, de modo de tratar al sujeto; formulaciones farmacéuticas que comprenden la combinación para el tratamiento del mieloma múltiple; y composiciones de estas.

Description

TERAPIA DE COMBINACION CON DEXAMETASONA Antecedentes de la Invención Fosfatidilinositol 3 cinasa (PI3K, por sus siglas en inglés) cumple una función central en el metabolismo celular. PI3K es activada por factores de crecimiento, citocinas y otros factores de estimulación junto con sus receptores. La PI3K activada a su vez inicia la transducción de señales: a Akt-mTOR y lleva a la regulación del crecimiento, proliferación y apoptosis celular. La desregulación de la vía se observa mucho en distintos tipos de cánceres humanos, incluyendo mieloma múltiple (MM) . Por lo tanto, se espera que la inhibición de la PI3K-Akt ejerza amplia actividad anti-MM. El compuesto 5- (2 , 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina (Compuesto A) es un inhibidor de pan-PI3K. Este compuesto ha demostrado una inhibición del crecimiento celular e inducción de la apoptosis significativas en una variedad de líneas celulares tumorales . Actualmente, el compuesto A está siendo investigado en ensayos clínicos de fase I en pacientes con tumores sólidos.

El mieloma múltiple (MM) es un tumor de células B maligno caracterizado por la proliferación de células plasmáticas en la médula ósea (Kylé RA, Rajkumar SV. Múltiple Ref. 240904 myeloma. N Engl J Med. 2004/351 (18) : 1860-1873) . MM conlleva lesiones osteolíticas , alto nivel de producción de inmunoglobulina monoclonal (Ig) y supresión de la producción y hematopoiesis de Ig normal (Dvorak C. Common complaints, difficult diagnosis: múltiple myeloma. J Am Acad Nuirse Pract. 2006;18 (5 ) : 190 -194 ) . La quimioterapia es el tratamiento más convencional para los pacientes con MM (Jagannath S, Kyle RA, Palumbo A, Siegel DS, Cunningham S, Berenson J. The current status and future of múltiple myeloma in the clinic. Clin Lyphoma Myeloma Leuk;10 (l):28-43). Sin embargo, a pesar de la mejora de la quimioterapia y de la introducción de nuevos fármacos, la MM sigue siendo una enfermedad incurable. En los Estados Unidos, la MM representa casi el 10 % de las muertes provocadas por neoplasias malignas hematológicas (Jemal A, Siegel R, Ward E, Hao Y, Xu J, Thun MJ. Cáncer statistics, 2009. CA Cáncer J Clin. 2009;59 (4 ) : 225 -24 ) . Por lo tanto, el desarrollo de nuevos agentes quimioterapéuticos es |un esfuerzo constante en la investigación del MM.

Breve Descripción de la Invención Sigue siendo necesario el desarrollo de nuevos tratamientos quimioterapéuticos para el mieloma múltiple.

Por lo tanto, en un aspecto, se proporciona en ;ia presente un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad de (1) un compuesto de fórmula (I) , y/o un estereoisómero, tautómero o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una cantidad de (2) dexametasona y/o una sal, . solvato, metabolito o racemato farmacéuticamente aceptable de esta, de modo de tratar al sujeto. En otro aspecto, se proporciona en la presente un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad de (1) un compuesto de fórmula (I) y una cantidad de (2) dexametasona, de modo de tratar al sujeto.

En una modalidad de los métodos, el sujeto es humano. En otra modalidad, el tratamiento comprende coadministrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) . En aun otra modalidad, la cantidad de (1) y la cantidad de (2) se encuentran en una formulación o forma de dosificación unitaria única. En aun otra modalidad, la cantidad de (1) y la cantidad de (2) se encuentran en formulaciones o en formas de dosificación unitarias individuales . < En otra modalidad, el tratamiento comprende administrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) básicamente en el mismo momento. En aun otra modalidad, el tratamiento comprende administrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) en distintos momentos. En aun otra modalidad, la cantidad de (1) y/o la cantidad de (2) se administra en dosificaciones que no serian eficaces cuando uno o ambos de (1) y (2) se administran solos, pero cuyas cantidades son eficaces cuando se combinan. ¦ . ¦ En otro aspecto, se proporciona en la presente una formulación farmacéutica que comprende una cantidad de (1) un compuesto de fórmula (I) , y/o un estereoisómero, tautómero, o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una cantidad de (2) dexametasona y/o una sal, solvato, metabolito o racemáto farmacéuticamente aceptable de este, donde la cantidad combinada de (l) y (2) es eficaz para el tratamiento del mieloma múltiple. En aun otro aspecto, se proporciona en la presente una formulación farmacéutica que comprende una cantidad de (1) un compuesto de fórmula (I) , y una cantidad de (2) dexametasona, donde la cantidad combinada de (1) y (2) es eficaz para el tratamiento del mieloma múltiple.

En una modalidad de las formulaciones f rmacéuticas, la cantidad de (1) y la cantidad de (2) se encuentran en una formulación o forma de dosificación unitaria única. En otra modalidad, la formulación o forma de dosificación unitaria es una formulación o forma de dosificación unitaria oral. En aún otra modalidad, la cantidad de (1) y/o la cantidad de (2) no sería eficaz cuando uno o ambos de (1) y (2) se administran solos, pero cuyas cantidades son eficaces cuando se combinan.

En otro aspecto, se proporciona en la presente una composición que comprende (1) un compuesto de fórmula (I) , y (2) dexametasona. En aun otro aspecto, se proporciona en la presente una terapia de combinación que comprende un compuesto de fórmula (I) y dexametasona. En una modalidad de la terapia de combinación, la terapia de combinación es para el tratamiento del mieloma múltiple.

En otro aspecto, se proporciona en la presente un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad de (1) 5-(2¿6-di-morfolin-4 -il-pirimidin-4 -il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, y/o un estereoisómero, tautómero ; o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una cantidad de (2) dexametasona y/o una sal, solvato, metabolito o racemato farmacéuticamente aceptable de esta, de modo de tratar al sujeto. En aun otro aspecto, se proporciona en la presente un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad de (1) 5- (2,6-di-morfolin-4 - il-pirimidin-4 -il) -4 -trifluorometil-piridin-2 -ilamina y una cantidad de (2) dexametasona, de modo de tratar al sujeto.

En una modalidad de los métodos, el sujeto es humano. En otra modalidad, el tratamiento comprende coadministrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) . En aun otra modalidad, la cantidad de (1) y la cantidad de (2) se encuentran en una formulación o forma de dosificación unitaria única. En aun otra modalidad, la cantidad de (1) y la cantidad de (2) 'se encuentran en formulaciones o en formas de dosificación unitarias individuales.

En otra modalidad, el tratamiento comprende administrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) básicamente en el mismo momento. En aun otra modalidad, el tratamiento comprende administrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) en distintos momentos. En aun otra modalidad, la cantidad de (1) y/o la cantidad de (2) se administra en dosificaciones que no serían eficaces cuando uno o ambos de (1) · y (2) se administran solos, pero cuyas cantidades son eficaces cuando se combinan.

En otro aspecto, se proporciona en la presente una formulación farmacéutica que comprende una cantidad de (1) 5-(2, 6 -di -morfolin- - il -pirimidin-4 - il) -4 -trifluorometil-piridin-2-ilamina, y/o un estereoisómero, tautómero, o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una cantidad de (2) dexametasona y/o una sal, solvato, metabolito o racemato farmacéuticamente aceptable de este, donde la cantidad combinada de (1) y (2) es eficaz para el tratamiento del mieloma múltiple.

En aun otro aspecto, se proporciona en la presente una formulación farmacéutica que comprende una cantidad de (1) 5-(2 , 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, y una cantidad de (2) dexametasona, donde la cantidad combinada de (1) y (2) es eficaz para él tratamiento del mieloma múltiple.

En una modalidad de las formulaciones farmacéuticas, la cantidad de (1) y la cantidad de (2) se encuentran en una formulación o forma de dosificación unitaria única. En otra modalidad, la formulación o forma de dosificación unitaria es una formulación o forma de dosificación unitaria oral. En aun otra modalidad, la cantidad de (1) y/o la cantidad de (2) no sería eficaz cuando uno o ambos de (1) y (2) se administran solos, pero cuyas cantidades son eficaces cuando se combinan.

En otro aspecto, se proporciona en la presente una composición que comprende 5- (2 , 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, y dexametasona .

En aun otro aspecto, se proporciona en la presente una terapia de combinación que comprende 5- (2 , 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, y dexametasona. En una modalidad de la terapia de combinación, la terapia de combinación es para el tratamiento del mieloma múltiple.

Breve Descripción de las Figuras Las Figuras 1A-1E muestran que el compuesto A provoca la represión del crecimiento y apoptosis de las células de MM, pero presenta limitada citotoxicidad a PBMC normales.

Las Figuras 2A-2B muestran que la presencia de BMSC o IL-6 no atenúa la apoptosis de células de MM inducida por el. compuesto A.

Las Figuras 3A-3B muestran que el tratamiento con el compuesto A provoca la interrupción del ciclo . celular en la fase Gl.

Las Figuras 4A-4C muestran que el compuesto A provocó la señalización intracelular y la activación de cáspasas en células de MM.

Las Figuras 5A-5F muestran que el compuesto A y dexametasona presentan actividad sinérgica anti-MM.

Las Figuras 6A-6C demuestran los efectos terapéuticos in vivo del compuesto A en el modelo de MM establecido en ratones SCID.

Descripción Detallada de la Invención Se ha descubierto que administrar una combinación de un compuesto de fórmula (I) y dexametasona proporciona efectios sinérgicos sorprendentes para tratar el mieloma múltiple ¡en un sujeto. También se pueden usar estereoisómeros , tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto de fórmula (I) y sales, solvatos, metabolitos o racematos farmacéuticamente aceptables de dexametasona en las terapias de combinación que se describen en la presente. La aproximación, combinación o coadministración de los dos tipos de agentes, es particularmente útil para tratar a los individuos que padecen mieloma múltiple y que no responden' o son resistentes a las terapias actualmente disponibles > y también es útil para mejorar la eficacia y/o reducir lps efectos secundarios de las terapias contra el mieloma múltiple actualmente disponibles para los individuos que no responden a las terapias .

A continuación se describen determinados términos utilizados en la presente. Los compuestos de la presente invención se describen mediante la nomenclatura estándar. A menos que se indique de otro modo, todos los' términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado que entiende normalmente un experto en la técnica a la que pertenece la presente invención.

Se proporciona en la presente una combinación de agentes terapéuticos y métodos de administración para la combinación de agentes para tratar el mieloma múltiple. Tal como se usa en la presente, una "combinación de agentes"1 y términos similares, se refiere a una combinación de dos tipos de agentes: (1) un compuesto de fórmula (I) y/o un estereoisómero, tautómero o sal farmacéuticamente aceptable de este, y (2) dexametasona y/o una sal farmacéuticamente aceptable de esta. También se proporciona el uso de mezclas isoméricas o racémicas de los agentes individuales . Los metabolitos farmacológicamente activos de dexametasona incluyen aquellos que son inactivos pero que se convierten en formas farmacológicamente activas en el cuerpo luego de la administración.

WO07/084786 describe derivados de pirimidina, que se ha descubierto que inhiben la actividad de cinasas lípidas, tales como fosf tidilinositol 3-cinasa (PI3K) . Los derivados de pirimidina específicos que son adecuados para la presente invención, su preparación y formulaciones farmacéuticas adecuadas que los contienen se describen en WO07/084786 e incluyen compuestos de fórmula (I) : (I) o un estereoisómero, ' tautómero o sal farmacéuticamente aceptable de estos, donde W es CR„ o N, donde R„ se selecciona del grupo que consiste en: 1 hidrógeno, 2 ciano, 3 halógeno, 4 metilo, 5 trifluorometilo, 6 sulfonamida Ri se selecciona del grupo que consiste en: 1 hidrógeno, 2 ciano, 3 nitro, 4 halógeno, 5 alquilo sustituido e insustituido , 6 alquenilo sustituido e insustituido, (7) alquinilo sustituido e insustituido, (8) arilo sustituido e insustituido, (9) heteroarilo sustituido e insustituido,' (10) heterociclilo sustituido e insustituido, (11) cicloalquilo sustituido e insustituido, (12) -C0Rla, (13) -C02Ria, (14) -C0NRlaRibí (15) -NRlaRib, (16) -NRlaCORlb, (17) - RxaSOaRni, (18) -OCORla, (19) "ORia, (20) - SRia , (21) -SORla, (23) -S02NRiaRib donde Ría y Rib se seleccionan independientemente del grupo que consiste en: (a) hidrógeno, (b) alquilo sustituido o insustituido, (c) arilo sustituido e insustituido, (d) heteroarilo sustituido e insustituido, (e) heterociclilo sustituido e insustituido, y (f) cicloalquilo sustituido e insustituido; ; R2 se selecciona del grupo que consiste en: ' (1) hidrógeno, (2) ciano, (3) nitro, (4) halógeno, (5) hidroxi, (6) amino, (7) alquilo sustituido e insustituido, (8) -C0R2a/ y (9) -NR2aCOR2b, donde R2a y ?b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en: (a hidrógeno, y (b alquilo sustituido o insustituido; se selecciona del grupo que consiste en: (1) hidrógeno, (2) ciano, (3) nitro, (4) halógeno, (5) alquilo sustituido e insustituido, (6) alquenilo sustituido e insustituido, (7) alquinilo sustituido e insustituido, (8) arilo sustituido e insustituido, (9) heteroarilo sustituido e insustituido, (10) heterociclilo sustituido e insustituido, (11) cicloalquilo sustituido e insustituido,, (12) -COR3a, (14) -NR3aR3b (13) -NR3aCOR3b, (15) -NR3aS02R3b( (16) -0R3a, (17) -SR3a, (18) -SOR3a, (19) -S02R3a/ donde 3a y R3b se seleccionan independientemente del grupo que consiste en: (a) hidrógeno, (b) alquilo sustituido o insustituido, (c) arilo sustituido e insustituido, (d) heteroarilo sustituido e insustituido, (e) heterociclilo sustituido e insustituido, y (f) cicloalquilo sustituido e insustituido; y R4 se selecciona del grupo que consiste en (1) hidrógeno, y (2) halógeno.

Tal como se usa en la presente, el término "alquilo" se refiere a grupos alquilo que no contienen heteroátomos . Por lo tanto, la frase incluye grupos alquilo de cadena lineal tales como metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo '; y similares . La frase también incluye isómeros de cadena ramificada de grupos alquiló de cadena lineal, que incluyen de modo no taxativo, los siguientes que se proporcionan a modo de ejemplo: -CH(CH3)2, -CH (CH3) (CH2CH3) , -CH (CH2CH3) 2, -C(CH3)3, -C(CH2CH3)3, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH (CH3) (CH2CH3) , -CH2CH(CH2CH3)2/ -CH2C(CH3)3/ -CH2C (CH2CH3) 3 , -CH(CH3)- CH(CH3) (CH2CH3) , -CH2CH2CH(CH3)2, . -CH2CH2CH(CH3) (CH2CH3) , -CH2CH2CH (CH2CH3 ) 2 , -CH2CH2C (CH3) 3 , -CH2CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH2-CH(CH3)2, -CH (CH3 ) CH (CH3 ) CH (CH3) 2 , -CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3) (CH2CH3) y otros. Por lo tanto, la frase "grupos alquilo" incluye grupos alquilo primarios, grupos alquilo secundarios y grupos alquilo terciarios. Los grupos alquilo preferidos incluyen grupos alquilo de cadena lineal y ramificada que tienen 1 a 12 átomos de carbono o l a 6 átomos de carbono.

El término "alquenilo" se refiere a grupos de cadena lineal, ramificados o cíclicos de 2 a alrededor de ,20 átomos de carbono, tal como los descritos con respecto a los grupos alquilo, tal como se definen anteriormente, salvo con uno o más enlaces dobles carbono-carbono . Los ejemplos incluyen, de modo no taxativo, vinilo, -CH=C (H) (CH3) , -CH=C(CH3)2, ; -C(CH3) =C(H)2, -C (CH3) =C(H) (CH3) , -C (CH2CH3 ) =CH2 , ciclohexenilo, ciclopentenilo, ciclohexadienilo,- butadienilo, pentadienilo y hexadienilo, entre otros. Los grupos alquenilo preferidos incluyen grupos alquenilo de cadena lineal y grupos alquenilo cíclicos que tienen 2 a 12 átomos de carbono o 2 a 6 átomos de carbono .

El término "alquinilo" se refiere a grupos de cadena lineal, ramificados o cíclicos de 2 a 20 átomos de carbono, tal como los descritos con respecto a grupos alquilo como lios que se definen en la presente, salvo con uno o más enlaces triples carbono-carbono . Los ejemplos incluyen, dé modo no taxativo, -CsC(H), -C=C(CH3), -C=C (CH2CH3) , -C (¾) C=C (H) , -C(H) 2CsC(CH3) y -C(H) 2C=C(CH2CH3) , entre otros. Los grupos alquinilo preferidos incluyen grupos alquinilo dé cadena lineal y ramificados que tienen 2 a 12 átomos de carbono o! 2 a 6 átomos de carbono .

Se pueden sustituir los grupos alquilo, alquenilo 1 y alquinilo. "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo como se define anteriormente, donde uno o más enlaces a uno1 o más carbonos o hidrógenos se reemplazan por un , enlace > a átomos que no son de hidrógeno y que no son de carbono, tales como, de modo no taxativo, un átomo de halógeno tal como F, Cl, Br e I ; un átomo de oxígeno en grupos tales como grupos hidroxilo, grupos alcoxi, grupos ariloxi y grupos éster; un átomo de azufre en grupos tales como grupos tiol, grupos alquil y aril sulfuro, grupos sulfona, grupos sulfonilo y grupos sulfóxido; un átomos de nitrógeno en grupos tales como aminas, amidas, alquilaminas , dialquilaminas, arilaminas, alquilarilaminas, diarilaminas , N-óxidos, imidas y enaminas; un átomo de silicio en grupos tales como en grupos trialquilsililo, grupos dialquilarilsililo, grupos alquildiarilsililo y grupos triarilsililo, y otros heteroátomos en varios otros grupos . Los grupos alquilo sustituidos también incluyen grupos en los que uno o más enlaces a uno o más átomos de carbono o hidrógeno se reemplazan con un enlace de orden superior (por ej . , :un enlace doble o triple) a un heteroátomo tal como oxígeno en grupos oxo, carbonilo, carboxilo y éster; nitrógeno en grupos tales como iminas, oximas, hidrazonas y nitrilos. Los grupos alquilo sustituidos también incluyen grupos alquilo en los que uno o más enlaces a uno o más átomos de carbono o hidrógeno se reemplazan con un enlace a un grupo arilo, heteroarilo, heterociclilo o cicloalquilo . Los grupos alquilo sustituidos preferidos incluyen, entre otros, grupos alquilo en los que uno o más enlaces a un átomo de carbono o hidrógeno se reemplazan con uno o más enlaces a grupos fluoro, cloro · o bromo. Otro grupo alquilo sustituido preferido es el grupo trifluorometilo y otros grupos alquilo que contienen el grupo trifluorometilo . Otros grupos alquilo sustituidos preferidos incluyen aquellos en los que uno o más enlaces a un átomo de carbono o hidrógeno se reemplazan con un enlace a un átomo de oxígeno de modo que el grupo alquilo sustituido contiene un grupo hidroxilo, alcoxi o ariloxi. Otros grupos alquilo sustituidos preferidos incluyen grupos alquilo que tienen una amina, o un grupo alquilamina, dialquilamina, arilamina, (alquil) (aril) amina, diarilamina, heterociclilamina, diheterociclilamina, (alquil) (heterociclil) amina o (aril) (heterociclil) amina sustituidos o insustituidos . Aun otros grupos alquilo sustituidos preferidos incluyen aquellos en los que uno o más enlaces a uno o más átomos de carbono o hidrógeno se reemplazan con un enlace a un grupo arilo, heteroarilo, heterociclilo o cicloalquilo . Los ejemplos de alquilo sustituido son: -(CH2)3NH2, - (CH2) 3NH (CH3) , - (CH2) 3NH (CH3) 2 , -CH2C (=CH2) CH2NH2, -CH2C (=0) CH2NH2, -CH2S (=0) 2CH3, -CH20CH2NH2, -C02H. Los ejemplos de sustituyentes de alquilo sustituido son: -CH3, -C2HS, -CH20H, -OH, -0CH3, -OC2H5, -0CF3, -0C(=0)CH3, -0C(=0)NH2, -OC(=0)N(CH3)2, -CN, -N02 , -C (=0) CH3 , . -C02H, -C02CH3, -C0NH2( -NH2, -N(CH3)2, -NHS02CH3, -NHC0CH3, -NHC ( =0) 0CH3 , -NHSO-2CH3, -S02CH3, -S02NH2, halo.

El término "alquenilo sustituido" tiene el mismo significado con respecto a grupos alquenilo que tenían los grupos alquilo sustituidos con respecto a grupos alquilo i insustituidos. Un grupo alquenilo sustituido incluye grup s alquenilo en los que un átomo que no es de carbono o no es de hidrógeno se enlaza a un carbono con enlace doble a otro carbono y aquellos en los que uno de los átomos que no son de carbono o no son de hidrógeno se enlaza a un carbono no implicado en un enlace doble a otro carbono. ; El término "alquinilo sustituido" tiene el mismo significado con respecto a grupos alquinilo que tenían los grupos alquilo sustituidos con respecto a grupos alquilo insustituidos . Un grupo alquinilo sustituido incluye grupos alquinilo en los que un átomo que no es de carbono o no es de hidrógeno se enlaza a un carbono con enlace triple a otro carbono y aquellos en los que un átomo que no es de carbono o no es de hidrógeno se enlaza a un carbono no implicado en un enlace triple a otro carbono.

El término "alcoxi" se refiere a RO- , donde R es alquilo. Los ejemplos representativos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, t-butoxi, trifluorometoxi ; y similares .

El término "halógeno" o "halo" se refiere a grupos cloro, bromo, fluoro y yodo. El término "haloalquilo" se refiere a un radical alquilo sustituido con uno o más átomos i de halógeno. El término "haloalcoxi" se refiere a un radical alcoxi sustituido con uno o más átomos de halógeno.

El término "alcoxialquilo" se refiere al grupo -alcx-O-alc2 donde alcj. es alquilo o alquenilo, y alc2 es alquilo o alquenilo. El término "ariloxialquilo" se refiere al grupo -alquilo 0-arilo. El término "aralcoxialquilo" se refiere (al grupo alquilenilo- O-aralquilo.

El término "carbonilo" se refiere al grupo divalent - ; i C(0)-. ; El término "cicloalquilo" se refiere a un sustituyente alquilo mono o policíclico, heterocíclico o carbocíclico . Los grupos cicloalquilo representativos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y ciclooctilo . y los anillos están sustituidos con grupos alquilo de cadena lineal y ramificada, tal como se define anteriormente. Los sustituyentes cicloalquilo típicos tienen de 3 a 8 átomos de la estructura (es decir, del anilló) , donde cada átomo de la estructura es carbono o un heteroátomo. El término "heterocicloalquilo" se refiere en la presente a sustituyentes cicloalquilo que tienen de 1 a 5, y más típicamente de 1 a 4 heteroátomos en la estructura del anillo. Los heteroátomos adecuados empleados en íos compuestos de la presente invención son nitrógeno, oxígeno y azufre. Los restos heterocicloalquilo representativos incluyen, por ejemplo, morfolino, piperazinilo, piperadinilo y similares. Los grupos carbocicloalquilo son grupos cicloalquilo donde todos los átomos del anillo son carbono. Cuando se utiliza con relación a sustituyentes cicloalquil , el término "policíclico" se refiere en la presente '¦ a estructuras cíclicas de alquilo fusionadas y no fusionadas. I El término "arilo" se refiere a grupos aromáticos monocíclicos y policíclicos opcionalmente sustituidos que tienen 3 a 14 átomos carbono o hetero de la estructura, e incluye tanto grupos arilo carbocíclicos como grupos, arilo heterocíclicos . El término se refiere, de modo no taxativo, a grupos tales como fenilo, bifenilo, antracenilo, naftalenilo, por ejemplo. Los grupos arilo carbocíclico son grupos arilo donde todos los átomos del anillo en el anillo aromático son carbono. El término "heteroarilo" se refiere en la presenté a grupos arilo que tienen de 1 a 4 heteroátomos como átomos del anillo en un anillo aromático, donde el resto de los átomos del anillo son átomos de carbono.

El término "arilo insustituido" incluye grupos que contienen anillos condensados, tales como naftaleno. No incluye grupos arilo que tienen otros grupos, tales como grupos alquilo o halo unidos a uno de los miembros del anillo, ya que en la presente se considera que los grupos arilo, tal como tolilo, son grupos arilo sustituidos, tal como se describe a continuación. Un grupo arilo insustituido preferido es fenilo. Sin embargo, los grupos arilo insustituidos pueden estar unidos a uno o más átomos ¡de carbono, átomos de oxígeno, átomo de nitrógeno y/o :átomos ;de azufre en el compuesto original .

El término "grupo arilo sustituido" tiene el mismo significado con respecto a grupos arilo insustituidos que tenían los grupos alquilo sustituidos con respecto a grupos alquilo insustituidos. Sin embargo, un grupo arilo sustituido también incluye grupos arilo donde uno de los carbonos aromáticos está unido a uno de los átomos que de carbono o que no es de hidrógeno descritos anteriormente y también incluye grupos arilo donde uno o más carbonos aromáticos del grupo arilo está unido a un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo sustituido y/o insustituido, tal como se define en la presente. Esto incluye las disposiciones de unión en las que dos átomos de carbono de un grupo arilo están unidos a dos átomos de un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo para definir un sistema del anillo fusionado (por ej . , dihidronaftilo o tetrahidronaftilo) . Por lo tanto, la frase "arilo sustituido" incluye, de modo no taxativo, tolilo e hidroxifenilo, entre otros.

El término, "heteroarilo sustituido", tal como se usa en la presente, se refiere a un grupo heteroarilo tal como se define en la presente sustituido por reemplazo independiente de uno, dos o tres de los átomos de hidrógeno allí con Cl, Br, F, I, -OH, -CN, alquiloCi-C3- , alcoxiCi-C6- , alcoxiCi-C6-sustituido con arilo, haloalquilo, tioalcoxi, amino, alquilamino, dialquilamino, mercapto, nitro, carboxaldehído, carboxi , alcoxicarbonilo y carboxamida . Además, cualquier sustituyente puede ser un grupo arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo .

El término "heterociclo sustituido", "grupo heterocíclico", "heterociclo" o "heterociclilo" , tal como se usa en la presente, se refiere a cualquier anillo de 3 o 4 miembros que contiene un heteroátomo que se selecciona de nitrógeno, oxígeno y azufre o un anillo de 5 o 6 miembros que contiene de uno a tres heteroátomos que se seleccionan del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno o azufre; donde el anillo de 5 miembros tiene 0-2 enlaces dobles y el anillo de 6 miembros tiene 0-3 enlaces dobles; donde el átomo de nitrógeno y azufre puede estar opcionalmente oxidado; donde los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente cuaternizados; y que incluye cualquier grupo bicíclico donde cualquiera de los anillos heterocíclicos que anteceden está fusionado a un. anillo benceno u otro anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros que se define independientemente anteriormente. Los ejemplos de grupos heterociclilo incluyen, de modo no taxativo: anillos insaturados de 3 a 8 miembros que contienen 1 a 4 átomos de nitrógeno, tales como, de modo no taxativo, pirrolilo, dihidropiridilo, pirimidilo, pirazinilo, tetrazolilo, (por ej . , lH-tetrazolilo, 2H- etrazolilo) ; grupos heterocíclicos condensados insaturados que contienen l a 4 átomos de nitrógeno, tales como, de modo no taxativo, isoindolilo, indolinilo, indolizinilo, quinolilo, indazolilo; anillos insaturados de 3 a 8 miembros que contienen 1 a 2 átomos de. oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno, tales como, de modo no taxativo, oxadiazolilo (por e . , 1, 2, 4-oxadiazoliló/ 1, 3, 4-oxadiazolilo, 1 , 2 , 5 -oxadiazolilo) ; anillos saturados de 3 a 8 miembros que contienen 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a; 3 átomos de nitrógeno, tales como, de modo no taxativo, morfolinilo; grupos heterocíclicos condensados insaturados que contienen 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a .3 átomos de nitrógeno, por ejemplo, benzoxadiazolilo, benzoxazinilo (por ej . , 2H-1, 4 -benzoxazinilo) ; anillos insaturados de 3 a 8 miembros que contienen 1 a 3 átomos de azufre y 1 a 3 átomos de nitrógeno, tales como, de modo no taxativo, tiadiazolilo (por ej . , 1, 2, 3 -tiadiazolilo, 1 , 2 , -tiadiazolilo, 1, 3 , 4-tiadiazolilo, 1 , 2 , -tiadiazolilo) ; anillos saturados de 3 a 8 miembros que contienen 1 a 2 átomos de azufre y 1 a 3 átomos de nitrógeno, tales como, de modo no taxativo, tiazolodinilo; anillos saturados e insaturados de 3 a 8 miembros que contienen 1 a 2 átomos de azufre, tales como, de modo no taxativo, dihidroditienilo, dihidroditionilo, tetrahidrotiofeno, tetra-hidrotiopiran; anillos heterocíclicos condensados insaturados que contienen 1 a. 2 átomos de azufre y 1 a 3 átomos de nitrógeno, tales como, :de modo no taxativo, benzotiadiazoiilo, benzotiazinilo (por ej.., 2H-1, 4-benzotiazinilo) , dihidrobenzotiazinilo (por e . , 2H-3 , 4 -dihidrobenzotiazinilo) , anillos insaturados de 3 a: 8 miembros que contienen átomos de oxígeno, tales como, de modo no taxativo, furilo; anillos heterocíclicos condensados insaturados que contienen 1 a 2 átomos de oxígeno, tales como, benzodioxoilo (por ej . , 1, 3 -benzodioxoilo) ; anilíos insaturados de 3 a 8 miembrois que contienen un átomo ide oxígeno y 1 a 2 átomos de azufre, tales como de modo no taxativo, dihidrooxatienilo; anillos saturados de 3 a 8 miembros que contienen 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 á 2 átomos de azufre, tales como, 1,4-oxatiano; anillos condensados insaturados que contienen 1 a 2 átomos de azufre, tales como, benzoditienilo; y anillos heterocíclicos condensados insaturados que contienen un átomo de oxigeno y 1 á 2 átomos de oxígeno, tales como, benzoxatienilo . Los heterociclos preferidos incluyen, por ejemplo: diazapinilo, pirrilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazoilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piridilo, piperidinilo, pirazinilo, piperazinilo, N-metil piperazinilo, azetidinilo, N-metilazetidinilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, oxazolidinilo , isoxazolilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, indolilo, quinoliniío, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, tienilo, triazolilo y benzotienilo . Los grupos heterociclilo también incluyen los que se describen anteriormente donde uno o más átomos S en el anillo está unido por un enlace doble a uno o dos átomos de oxígeno (sulfóxidos y sulfonas).. Por ejemplo, los grupos heterociclilo incluyen tetrahidrotiofeno, tetrahidrotiofeno óxido y tetrahidrotiofeno 1,1-dióxido. Los grupos heterociclilo preferidos contienen 5 o 6 miembros dél anillo.

Los grupos heterociclilo más preferidos incluyen piperazina, 1, 2, 3-triazol, 1, 2, 4-triazol, tetrazol, tiomorfolina, homopiperazina, oxazolidin-2-ona, pirrolidin-2-ona, quinuclidina y tetrahidrofurano .

Los restos heterocíclicos pueden estar insustituidos o monosustituidos o disustituidos con varios sustituyentes seleccionados independientemente de hidroxi, halo, óxo (C=0) , alquilimino (R =, donde R es un grupo alquilo o alcoxi) , amino, alquilamino, dialquilamino, acilaminoalquilp, alcoxi, tioalcoxi, polialcoxi, alquilo, cicloalquilo o haloalquilo. "Heterociclilo insustituido" incluye anillos heterocíclicos c'ondensados tales como benzimidazolilo, no incluye grupos heterociclilo que tienen otros grupos tales como grupos alquilo o halo unidos a uno de los miembros del anillo como compuestos tales como 2 -metilbenzimidazolilo son grupos heterociclilo sustituidos. | i Los grupos heterocíclicos pueden estar unidos en varias posiciones, tal como será claro para los que tienen experiencia en las técnicas de la química orgánica y medicinal junto con la descripción en la presente. Los ejemplos no taxativos de grupos heterocíclicos también incluyen lo siguiente: 1 donde R es H o un sustituyente heterocíclico, tal como se describe en la presente.

Los heterocíclicos representativos incluyen, por ejemplo, imidazolilo, piridilo, piperazinilo, azetidiniio, tiazolilo, furanilo, triazolilo, benzimidazolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, i quinazolinilo, quinoxalinilo, ftalazinilo, indolilo, naftpiridinilo, indazolilo y quinolizinilo .

El término "opcionalmente sustituido" o "sustituido" se refiere al reemplazo de hidrógeno con uno o más radicales monovalentes o divalentes. Los grupos de sustitución adecuados incluyen, por ejemplo, hidroxilo, nitro, amirio, i imino, ciano, halo, tio, sulfonilo, . tioamido, amidiiio, imidino, oxo, oxamidino, metoxamidino, imidino, guanidirio, sulfonamido, carboxilo, formilo, alquilo, alquilo sustituido, haloalquilo, alquilamino, haloalquilamino , alcoxi, haloalcoxi, alcoxi-alquilo, alquilcarbonilo, aminocarbonilo, arilcarbonilo, aralquilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroaralquil-carbonilo, alquiltio, aminoalquilo, cianoalquilo, arilo, bencilo, piridilo, pirazolilo, pirrol, tiofeno, imidazolilo y similares.

El propio grupo de sustitución puede ser sustituido. El grupo sustituido en el grupo de sustitución puede ser carboxilo, halo, nitro, amino, ciano, hidroxilo, alquilo, alcoxi, aminocarbonilo, -SR, tioamido, -S03H, -S02R, o cicloalquilo, donde R en general es hidrógeno, hidroxilo o alquilo. ' Cuando el sustituyente sustituido incluye un grupo de cadena lineal, la sustitución puede ocurrir dentro de la cadena (por ej . , 2 -hidroxipropilo, 2-aminobutilo y similares) o en el extremo de la cadena (por ej . , 2 -hidroxietilo, 3 -cianopropilo y similares) . Los sustituyentes sustituidos pueden ser disposiciones de cadena lineal, ramificadas o cíclicas de átomos de carbono o heteroátomos unidos covalentemente .

Los grupos aminocarbonilo sustituidos representativos incluyen, por ejemplo, los que se muestran a continuación.

Estos se pueden sustituir adicionalmente con grupos i heterociclilo y grupos heteroarilo, tal como será claro para los que tienen experiencia en las técnicas de la química orgánica y medicinal junto con la descripción en la presente. Los grupos aminocarbonilo preferidos Incluyen: N- (2-cianoetil) carboxamida, N- (3 -metoxipropil) carboxamida, N-ciclopropilcarboxamida, N- (2-hidroxi-isopropil) carboxamida, 2-carbonilamino-3-hidroxipropanoato de metilo, N- (2-hidroxipropil) carboxamida, N- (2-hidroxi-isopropil) carboxamida, N- [2-hidroxit1- (hidroximetil) etil] carboxamida, N- (2-carbonilaminoetil) acetamida, N- (2- (2-piridil) etil) carboxamida, N- (2 -piridilmetil) carboxamida, N- (oxolan-2-ilmetil) carboxamida, N- (4-hidroxipirrolidin-2-il) carboxamida, N- [2- (2-hidroxietoxi) etil] carboxamida, N- (4-hidroxiciclohexil) carboxamida, N- [2-- (2-oxo 4-imidazolinil) etil] carboxamida, N- (carbonilaminometil) acetamida, N- (3-pirrolidinilpropil) carboxamida, N- [1- (carbonilaminometil)pirrolidin-3-il] acetamida, N- (2-morfolin-4 -iletil) carboxamida, N-[3-(2-oxopirrolidinil) propil] carboxamida, 4 -metil-2-oxopiperazin-carbaldehído, N- (2-hidroxi-3-pirrolidinilpropil) carboxamiela, N- (2-hidroxi-3-morfolin-4-ilpropil) carboxamida, N-{2-[(5-ciano-2-piridil) amino] etil} carboxamida, 3-(dimetil-amino) pirrolidinacarbaldehído, N- [ (5-metilpirazin-2-il) metil] carboxamida, 2 , 2 , 2-trifluoro-N- (l-formilpirrolidin- 3 -il) acetamida, NH2 Los grupos alcoxicarbonilo sustituidos representativos incluyen, por ejemplo, los que se muestran a continuación. Estos grupos alcoxicarbonilo se pueden sustituir adicionalmente , tal como será claro para los que tienen experiencia en las técnicas de la química orgánica ¡ y medicinal junto con la descripción en la presente.

Los grupos alcoxicarbonilo sustituidos representativos incluyen, por ejemplo, los que se muestran a. continuación. Estos grupos alcoxicarbonilo se pueden sustituir adicionalmente, tal como será claro para los qué tienen experiencia en las técnicas de la química orgánica medicinal junto con la descripción en la presente. término "amino" se refiere en la presente al grupo ÑH2. El término "alquilamino" se refiere en la presente grupo -N R 1 donde R es alquilo y R' es hidrógeno o alqu El término " de fórmula (I) es el inhibidor de pan- fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) , 5- (2 , 6-di-morfolin-4 -il- pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2 -ilamina (en ló sucesivo, "compuesto A" ) .

La síntesis del compuesto A se describe en el Ejemplo 10 de WO 2007/084786, cuyo contenido se incorpora a la presente mediante esta referencia.

PI3K cumple una función central en el metabolismo celular (Sasaki T, Takasuga S, Sasaki J, et ál . :Mammalian phosphoinositide kinases and phosphatases-. Prog Lipid Res. 2009;48 ( 6) : 307-343 ; Di Paolo G, De Camilli :P . Phosphoinositides in cell regulation and membrane dynamics . Nafcure. 2006/443 (7112) : 651-657) . PI3 es activada por factores de crecimiento, citocinas y otros factores de estimulación junto con sus receptores. La PI3K activada a 'su vez inicia la transducción de señales a Akt-mTOR y lleva a la regulación del crecimiento, proliferación y apoptosis celular (Engelman JA, Luo J, Cantley LC. The evolution of phosphatidylinositol 3-kinases as regulators of growth and metabolism. Nat Rev Genet . 2006;7 (8) : 606-619) . La desregulación de la vía se observa mucho en distintos tipos de cánceres humanos (Bunney TD, Katan M. Phosphoinositide signaling in cáncer: beyond PI3K and PTEN. Nat Rev Cáncer,110 (5) : 342-352 ; Engelman JA. Targeting PI3 signaling in cáncer: opportunities , challenges and limitations. Nat Rev Cáncer. 2009/9 (8.) : 550-562) . En particular en el mieloma múltiple (MM) , una cantidad de factores de crecimiento de mieloma, tal como el factor de crecimiento 1 tipo insulina (IGF-1, por sus siglas en inglés) e interleucina- 6 (IL6) , activan la vía PI3K-Akt luego de la interacción con sus receptores en las células de MM, y promueven la proliferación, supervivencia y resistencia al -fármaco de MM (Harvey RD, Lonial S. PI3 kinase/AKT pathway as a therapeutic targe in múltiple myeloma. Future Oncol . 2007;3 (6):639-647; Younes H, Leleu X, Hatjiharissi E, et ál . Targeting the phosphatidylihositol 13-kinase pathway in múltiple myeloma. Clin Cáncer Res. 2007,-13 (13) :3771-3775; Hideshima T, Nakamura N, Chauhan D, Anderson KC. Biologic sequelae of interleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling in múltiple myeloma. Oncogene. 2001;20 (42):5991-6000; Descamps G, Pellat-Deceunynck C, Szpak Y, Bataille R, Robillard N, Amiot M. The magnitude ;of Akt/phosphatidylinositol 3 ' -kinase proliferating signaling ¡is relatéd to CD45 expression in human myeloma cells. J Iwmunol. 2004;173 ( 8 ) : 4953 -4959) . Por lo tanto, la inhibición de PI3K-Akt espera ejercer una amplia actividad anti-MM, y varios compuestos inhibidores de PI3K-Akt se encuentran en investigación pre-clínica o en ensayos de fase I y II (Harvey RD, Lonial S. PI3 kinase/AKT pathway as a therapeutic target in múltiple myeloma. Future Oncol. 2007;3 (6) : 639-647) . El compuesto A ha demostrado inhibición del crecimiento celular e inducción de la apoptosis significativas en una variedad de líneas celulares tumorales, y actualmente se está investigando en ensayos clínicos de fase I en pacientes con tumores sólidos.

Dexametasona se designa (8-3, 9R, IOS, US, 13S, 14S, 16R, 11R) -9- Fluoro-11 , 17 -dihidroxi-17 - (2-hidroxiacetil ) -10, 13 , 16- trimetil-6,7, 8,9, 10, 11, 12,13, 14, 15,16, 17-dodecahÍdro-3Jí-ciclopenta [a] fenantren-3 -ona . Es un fármaco esteroide glucocorticoide sintético potente que tiene actividad antiinflamatoria e inmunosupresora. La dexametasona :se utiliza para tratar determinadas afecciones inflamatorias1 y autoinmunitarias , tal como artritis reumatoide. También se utiliza para contrarrestar determinados efectos secundarios que resultan de tratamiento antitumoral, y también se utiliza como agente quimioterapéutico en determinadas neoplasias malignas hematológicas . Ver, por ej . , Martindale: The Complete Drug Reference, 37a edición, publicado por Pharmaceutical Press.

La administración de la combinación (por ej . , una combinación de un compuesto de fórmula (I) y dexametasoria, por ej . , una combinación de compuesto A y dexámetasona) incluye la administración de la combinación en una formulación o forma de dosificación unitaria única, administración de los agentes individuales de la combinación simultáneamente pero de forma individual, o administración de los agentes individuales de la combinación de forma secuencial mediante cualquier vía adecuada. La dosificación de los agentes individuales de la combinación puede requerir una administración más frecuente de uno de los agentes, en comparación con los otros agentes en la combinación. Por lo tanto, para permitir la apropiada dosificación, los productos farmacéuticos envasados pueden contener una o más formas de dosificación que contienen la combinación de agentes, y una o más formas de dosificación que contienen uno de los agentes de la combinación pero no el o los otros agentes de la combinación.

Los agentes pueden contener uno o más elementbs asimétricos, tales como centros estereogénicos o ejes estereogénicos, por ej . , átomos de carbono asimétricos, de modo que los compuestos puedan existir en distintas formas estereoisoméricas . Estos compuestos pueden ser, por ejemplo, racematos o formas ópticamente activas. Para los compuestos con dos o más elementos asimétricos, estos compuestos adicionalmente pueden ser mezclas de diastereómeros. Para los compuestos que tienen centros asimétricos, se debé entender que están comprendidos todos los isómeros ópticos y mezclas de estos. Además, los compuestos con enlaces dobles carbono-carbono pueden ocurrir en las formas Z y E; todas las formas isoméricas de los compuestos se incluyen en la presente invención. En estas situaciones, los enantiómeros simples (formas ópticamente activas) se pueden obtener mediante síntesis asimétrica, síntesis a partir de precursores ópticamente puros o mediante resolución de los racematos . La resolución de los racematos también se puede lograr, por ejemplo, mediante métodos convencionales tales como cristalización en presencia de un agente de resolución 1 o cromatografía utilizando, por ejemplo, una columna quiral de HPLC. ¦ ; A menos que se especifique de otro modo o que se indique específicamente en el texto, la referencia a los compuestos útiles en la terapia de combinación de la invención incluye tanto la base libre de los compuestos como todas las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos.

Tal como se usa en la presente, el término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere al ácido no tóxico ¡ o a sales de metales alcalinotérreos de los compuestos de piriraidina de la invención. Estas sales se pueden preparar in si tu durante el aislamiento y la purificación finales de los compuestos de pirimidina, o haciendo reaccionar individualmente las funciones de. base o ácido con un ácido o base orgánico o inorgánico adecuado, respectivamente. Las sales representativas incluyen, de modo no taxativo, las siguientes: acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, ciclopentanopropionato, dodecilsulfato, etanosulfonato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemi- sulfato , heptanoato, hexanoato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, nicotinato, 2 -naft-alenosulfonato, . oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3 -fenilproionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, sulfato, . tartrato, tiocianajto, i p-toluenosulfonato y undecanoato. Además, los grupos básicos que contienen nitrógeno se pueden cuaternizar con agentes tales como haluros de alquilo, tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo, sulfatos . de dialquilo, tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros; de aralquilo, tales como bromuros de bencilo y fenetilo y otros.

De esta manera, se obtienen productos solubles o dispersables en agua o aceite.

Los ejemplos de ácidos que se pueden emplear para formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen los ácidos inorgánicos como ácido clorhídrico, ácido hidrobórico, ácido nítrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico, y los ácidos orgánicos como ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido metanosulfónico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanosulfónico, ácido bencenosulfónico y ácido p-toluenosulfónico, ácido cítrico y aminoácidos ácidos tales como ácido aspártico y ácido glutámico.

Las sales de adición de base se pueden preparar in s¿fcu durante el aislamiento y la purificación final de los compuestos de pirimidina, o individualmente mediante la reacción de restos de ácido carboxílico con una base adecuada i tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable o con amoníaco o lina amina orgánica primaria, secundaria o terciaria. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, de modo no taxativo, cationes con base en los metales alcalinos y alcalinotérreos , como sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, sales ^de aluminio y similares, así como cationes de amonio, amonio cuaternario y amina no tóxicos, incluyendo, de; modo ¡no taxativo, amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonío, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, etilamina y similares. Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de base incluyen dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, piridina, picolina, trietanolamina y similares, y aminoácidos básicos como arginina, lisina y ornitina. El término "formulación única", tal como se usa en la presente, se refiere a un único portador o vehículo formulado para administrar cantidades eficaces de ambos agentes terapéuticos a un paciente. El único vehículo está diseñado para administrar una cantidad eficaz de cada uno de los agentes, junto con cualquier portador o excipiente farmacéuticamente aceptable. En algunas modalidades, el vehículo es un comprimido, cápsula, pildora o un parche. En otras modalidades, el vehículo es una solución o una suspensión.

El término "dosis unitaria", se utiliza en la presente para' referirse a la administración simultánea de ambos agentes, en una forma de dosificación, a un paciente que está siendo tratado. En algunas modalidades, la dosis unitaria es una formulación única. En determinadas modalidades, la dosis unitaria incluye uno o más vehículos, de modo que cada vehículo incluya una cantidad eficaz de al menos uno de los agentes junto con portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables. En algunas modalidades, la dosis unitaria es uno o más comprimidos, cápsulas, pildoras o parches administrados al paciente al mismo tiempo.

El término "intervalo de dosis", tal como se usa en la presente, se refiere a un límite superior e inferior de úna variación aceptable de la cantidad de agente especificado. En general, una dosis del agente en cualquier cantidad dentro del intervalo especificado se puede administrar a íos pacientes que están siguiendo un tratamiento.

El término "tratar" se usa en la presente para aliviar, reducir o mitigar al menos un síntoma de una enfermedad en ¡ un sujeto. Según el significado de la presente invención, el término "tratar" también denota detener, retrasar el inicio (es decir, el período antes de la manifestación clínica de una enfermedad o síntoma de una enfermedad) y/o reducir el riesgo de desarrollar o empeorar un síntoma de una enfermedad.

El término "sujeto" pretende incluir animales. Los ejemplos de sujetos incluyen mamíferos, por ej . , seres humanos, perros, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, gatos, ratones, conejos, ratas, y animales transgénicos no humanos. En determinadas modalidades, el sujeto es un ser humano, por ej . , un ser humano que padece mieloma múltiple, está en riesgo de padecerlo o es potencialmente capaz j de padecerlo.

El término "alrededor de" o "aproximadamente" 1 en general significa dentro del 20 %, más preferentemente dentro del 10 % y más preferentemente aun dentro del 5 % de un valor o intervalo determinado. De manera alternativa, especialmente en sistemas biológicos, el término "alrededor de" significa dentro de alrededor de un logaritmo (es decir, una orden : de magnitud) preferentemente dentro de un factor de dos de un valor determinado.

El término "efecto sinérgico", tal como se usa en la presente, se refiere a la acción de dos agentes como, por ejemplo, un compuesto de fórmula (I), por ej . , compuesto Á y dexametasona, que produce un efecto, por ejemplo, retrasar la evolución sintomática del mieloma múltiple o los síntomas de este, que es mayor que la simple adición de los efectos de ca.da fármaco administrado individualmente. Un efecto sinérgico se puede calcular, por ejemplo, utilizando métodos adecuados como la ecuación Sigmoid-Emax (Holford, N. H. G. and Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet . 6: 429-453 (1981)), la. ecuación de suma de Loewe (Loewe, S. y Muisc nek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926)) y la ecuación del efecto medio (Chou, T. C. and Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)). Cada una de las ecuaciones mencionadas anteriormente se puede aplicar a los datos experimentales para generar un gráfico correspondiente que ayude a evaluar los efectos de la combinación de fármacos . Las gráficas correspondientes asociadas a las ecuaciones a las que se hace referencia con anterioridad son curva efecto- concentración, isobolograma y curva de índice de combinación*, respectivamente .

Una "cantidad eficaz" de una combinación de agentes (por ej . , un compuesto de fórmula (I), por ej . , un compuesto A y dexametasona) es una cantidad suficiente para proporcionar una mejora observable con respecto a los signos y síntomas iniciales clínicamente observables del trastorno depresivo tratado con la combinación.

Una "forma de dosificación oral" incluye una forma 1 de dosificación unitaria indicada o prevista para administración oral .

Métodos de tratamiento La invención proporciona un método para tratar el mieloma múltiple en un individuo mediante la administración al individuo de una combinación de un compuesto de fórmula (I) , por ej . , compuesto A, y dexametasona.

La invención se refiere a métodos para tratar el mieloma múltiple. El término "mieloma", tal como se usa en la presente, se refiere a un tumor compuesto por células del tipo que normalmente se encuentra en la médula ósea. El término "mieloma múltiple", tal como se usa en la presente, se refiere a un neoplasma maligno diseminado de células plasmáticas que está caracterizado por múltiples focos tumorales en la médula ósea y secreción de un componente ; M (un fragmento de inmunoglobulina monoclonal) , asociado ' a lesiones osteolíticas generalizadas que dan como resultado dolor óseo, fracturas patológicas, hipercalcemia y anemia normocítica normocrómica. El mieloma múltiple es incurable mediante el uso de quimioterapias convencionales y de dosis altas .

I En algunas modalidades, se determina que el sujeto que será tratado (por ej . , un humano) no responde o es resistente a una o más terapias contra el mieloma múltiple.

Se proporcionan en la presente métodos para tratar : el mieloma múltiple administrando una cantidad eficaz de ¡ un compuesto de fórmula (I) , por ej . , compuesto A, y dexametasoña a un individuo que padece mieloma múltiple. La cantidad de la combinación de agentes es eficaz para tratar el mieloma múltiple. Es importante destacar los efectos i sinérgicos de la combinación de agentes: aunque uno o más \ de los agentes administrados solos a una dosis particular pueden no ser eficaces, cuando se administran combinados, a la misma dosis de cada agente, el tratamiento es eficaz. Por lo tanto, las dosis de uno o más de los agentes en la combinación pueden ser inferiores a las dosis de cada agente aprobadas por la FDA.

Dosificaciones I La dosis ideal de la combinación de agentes para j el tratamiento del mieloma múltiple se puede determinar empíricamente para cada individuo utilizando métodos conocidos y dependerán de , una variedad factores, incluyendo, de modo no taxativo, el grado de avance de : la enfermedad, la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del individuo, el momento y vía de administración y otras medicinas que esté tomando el individuo. Las dosis ! ideales se pueden establecer utilizando pruebas ; y procedimientos de rutina que se conocen en la técnica. Por ejemplo, las dosis diarias para dexametasona pueden ser 0.25 mg - 9 mg (por ej., 0.25, 0.5, 0.6, 0.75, 2 o 4 mg) . Las dosificaciones diarias para los compuestos de fórmula (I) pueden ser 10 rag a alrededor de 2000 mg. i La cantidad de combinación de agentes que se puede combinar con los materiales portadores para producir úna forma de dosificación unitaria variará dependiendo del individuo tratado y del modo particular de administración. ¡ En algunas modalidades, las formas de dosificación unitarias que contienen la combinación de agentes tal como se describe i en la presente contendrán las cantidades de cada agente de j la f combinación que en general se administran cuando los agentes se administran solos. j La frecuencia de la dosis variará -dependiendo del compuesto utilizado y de la afección particular que deba tratarse o prevenirse. En general, se prefiere el uso de jla dosificación mínima que es suficiente para proporcionar i terapia eficaz. En general, los pacientes se pueden^ controlar ' , ¦ i para determinar la eficacia terapéutica utilizando ensayos adecuados para la afección que se esté tratando o previniendo, que serán conocidos para los expertos en la técnica.

La forma de dosificación se puede preparar mediante varias técnicas convencionales de mezcla, trituración y fabricación evidentes para los expertos en la química de las formulaciones de fármacos.

La forma de dosificación oral que contiene la combinación de agentes o agentes individuales de la combinación de agentes puede estar en forma de microcomprimidos contenidos dentro de una cápsula, por éj . , una cápsula de gelatina. Para esto, se puede usar una cápsula de gelatina tal como las que se emplean en las formulaciones farmacéuticas, tal como la cápsula de gelatina dura conocida como CAPSUGEL, disponible en Pfizer.

Muchas de las formas de dosificación orales útiles en la presente contienen la combinación de agentes o agentes individuales de la combinación de agentes en forma de partículas. Las partículas se pueden comprimir en un comprimido, presente en un elemento central de una forma de dosificación recubierta, tal como una forma de dosificación con enmascaramiento del sabor, una forma de dosificación recubierta y prensada, o una forma de dosificación recubierta entérica o pueden estar contenidos en una cápsula o una forma de dosificación de bomba osmótica u otra forma de dosificación. ; .

Los compuestos de fármaco de la presente invención (por ejemplo, un compuesto de fórmula (I), particularmente ¡el compuesto A y dexametasona) están presentes en las combinaciones, formas de dosificación, composiciones farmacéuticas y formulaciones farmacéuticas descritas en ¡ la presente en una relación en el intervalo de 100:1 a 1: más preferentemente 1:1 a 1:100, y aun más preferentemente 1:10 a 1:100. ' | ¡ Las relaciones, dosis individuales y combinadas, j y concentraciones óptimas de los compuestos de fármaco ideales que proporcionan eficacia sin toxicidad se basan en ¡ la cinética de la disponibilidad . . . . dirigirse a los sitios, y se conocidos por los expertos en la técnica. 1 ' í Composiciones farmacéuticas ¦ j Las composiciones o combinaciones farmacéuticas proporcionadas en la presente (por ej . , un compuesto ¡de ¦ fórmula (I) , particularmente el compuesto A y dexametasona) se pueden analizar en estudios clínicos. Los estudios clínicos adecuados, por ejemplo, pueden ser de incremento de la dosis en pacientes con enfermedades proliferativas . Los estudios prueban en particular jel sinergismo de los ingredientes activos de la combinación !de la invención. Los efectos beneficiosos en las enfermedades i ! i ? proliferativas se pueden determinar directamente a través de los resultados de estos estudios que son conocidos por el experto en la técnica. En particular, los estudios pueden ser adecuados para comparar los efectos de una monoterapia utilizando los ingredientes activos y una combinación de la invención. En una modalidad, se incrementa la dosis de un compuesto de fórmula (I), por ej . , compuesto A, hasta alcanzar la Máxima Dosis Tolerada, y se administra dexametasona con una dosis fija. De manera alternativa, se puede administrar un compuesto de fórmula (I), por ej . , compuesto A, en una dosis fija y se puede incrementar la dosis de dexametasona. Cada paciente puede recibir dosis de un compuesto de fórmula (I), por ej . , compuesto A, ya sea diaria o intermitentemente. La eficacia del tratamiento se puede determinar en los estudios, por ej . , luego de 12, 18 o 24 semanas mediante la evaluación de los valores de los síntomas cada 6 semanas.

La administración de una combinación farmacéutica de la invención puede dar como resultado no solamente un efecto beneficioso, por ej . , un efecto terapéutico sinérgico, por ej . , con relación al alivio, retraso de la evolución o inhibición de los síntomas, sino también otros efectos beneficiosos sorprendentes, por ej . , menos efectos secundarios, una mejor calidad de vida o una disminución de la morbilidad, en comparación con una monoterapia' que aplica solamente uno de los ingredientes farmacéuticamente activos utilizados en la combinación de la invención.

Un beneficio adicional puede ser el uso de dosis menores de los ingredientes activos de la combinación de la invención, por ejemplo, que a menudo las dosis no solamente deben ser menores sino que también se pueden aplicar con menor frecuencia, lo que puede disminuir la incidencia o gravedad de los efectos secundarios. Esto concuerda con los deseos y requisitos de los pacientes que deben ser tratados.

Un objetivo de la presente invención es proporcionar una composición farmacéutica que comprende una cantidad que puede ser conjunta y terapéuticamente eficaz para dirigirse o prevenir el mieloma múltiple. En la presente composición, se pueden administrar juntos un compuesto de fórmula (I) y dexametaspna, uno después del otro o de forma individual en una forma de dosificación unitaria combinada o en dos formas i de dosificación unitarias individuales. La forma ide dosificación unitaria también puede ser una combinación fija.

Las composiciones farmacéuticas para la administración individual de ambos compuestos o para la administración |en una combinación fija, es decir, una única composición galénica que . comprende ambos compuestos de acuerdo con jla invención se puede preparar de manera conocida en sí misma( y son aquellas adecuadas para administración enteral, tal como oral o rectal, y parenteral a mamíferos (animales de sangre caliente) , incluyendo humanos, que comprende una canticlad terapéuticamente eficaz de al menos un agente de combinación farmacológicamente activo solo, por ej . , como se indica anteriormente, o junto con uno o más portadores o diluyentes farmacéuticamente aceptables, especialmente adecuados pára aplicación enteral o parenteral.

Formulaciones ¡ En una modalidad, se proporciona en la presente úna composición farmacéutica que comprende: (1) un compuesto |de fórmula (I) , particularmente el compuesto A, y/o un estereoisómero, tautómero o sal farmacéuticamente aceptable de este, y (2) dexametasona y/o una sal, solvato, metabolito o racemato farmacéuticamente aceptable de esta, dé modo de tratar al sujeto, donde cada uno de los componentes (1) y (2) se formula junto con un adyuvante, diluyente o portador . i farmacéuticamente aceptable.

Las combinaciones de fármacos proporcionadas en la presente se pueden formular mediante varios métodos evidentes para los expertos en la técnica de la formulación i farmacéutica. Las varias propiedades de liberación descritas anteriormente se pueden alcanzar de distintas formas. Las formulaciones adecuadas incluyen, por ejemplo, comprimidas, cápsulas, formulaciones recubiertas y prensadas y otras formulaciones que se administran fácilmente.

Las formulaciones farmacéuticas adecuadas pueden contener, por ejemplo, de alrededor de 0.1 % a alrededor ; de 99.9 %, preferentemente de alrededor de 1 % a alrededor de! 60 %, del/de los ingrediente/s activo/s. Las formulaciones farmacéuticas para la terapia de combinación para la administración enteral o parenteral son, por ejemplo, aquellas en formas de dosificación unitarias, tales cómo comprimidos recubiertos con azúcar, comprimidos, cápsulas o supositorios o ampollas. Si no se indica de otro modo, estos se preparan de manera conocida por sí misma, por ejemplo, mediante procesos convencionales de mezcla, granulación, recubrimiento con azúcar, disolución o liofilización . Será evidente que. el contenido unitario de un agente de combinación contenido en una dosis individual de cada forma de dosificación no necesita constituir en sí mismo úna cantidad eficaz dado que la cantidad eficaz necesaria : se puede obtener mediante la administración de varias unidades de dosificación.

En particular, se puede administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de cada uno de los agentes ; de combinación de la combinación de la invención, simultánea o secuencialmente y en cualquier orden, y los componentes se pueden administrar individualmente o como una combinación fija. Por ejemplo, el método para tratar el m eloma múltiple de acuerdo con la invención puede comprender (i) i la administración del primer agente (a) en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable y (ii) la administración de : un agente (b) en forma libre o de sal farmacéuticamente aceptable, simultánea o secuencialmente en cualquier orden, en cantidades terapéuticamente eficaces conjuntas, preferentemente en cantidades sinérgicamente eficaces, por ej . , en dosificaciones diarias o intermitentes que corresponden a las cantidades descritas en la presente. Los agentes de combinación individuales de la combinación de la invención se pueden administrar individualmente en distintos momentos durante el transcurso de la terapia o simultáneamente en formas de combinación divididas o únicas. Además, el término "administrar" también abarca el uso de un profármaco de un agente de combinación que se convierte in vivo en el agente de combinación como tal. Por lo tanto, la presente invención debe entenderse como que abarca todos estos regímenes de tratamiento simultáneo o alternado y el término "administrar" debe interpretarse en este sentido.

La dosis eficaz de cada uno de los agentes de combinación empleados en la combinación de la invención puede variar dependiendo del compuesto o composición farmacéutica particulares empleados, el modo de administración, la afección que se está tratando, la gravedad de la afección que se está tratando. Por lo tanto, el régimen de dosificación de la combinación de la invención se selecciona de acuerdo con una variedad de factores incluyendo la vía de administración y la función renal y hepática del paciente. Un médico experto puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad eficaz de los ingredientes activos simples requerida para aliviar, contrarrestar o detener la evolución de la afección * Ejemplos La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos. Los ejemplos nó deberían interpretarse como limitación adicional. ' Materiales y métodos Líneas celulares, células de mieloma primarias, células estromales de médula ósea (BMSC, por sus siglas eñ inglés), células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés) , anticuerpos y reactivos Se mantuvieron las líneas celulares de MM ARP1, ARK, MM.1S, MM. IR y U266 en medio RPMI-1640 complementado con 10 % de suero fetal bovino, 100 U/ml de penicilina y 100 yg/ml ;de estreptomicina a 37 °C y 5 % de C02. Se aislaron células de MM primarias y BMSC de MM de aspirados de médula ósea 'de pacientes con mieloma. Se obtuvieron PMBC de voluntarios sanos. El estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional ( Institutional Review Board) de la Universidad de Texas, M.D. Anderson Cáncer Center. Se adquirieron anticuerpos anti-caspasa-3 , caspasa-9, PARP, Bim, XIA;P, ciclina DI, pp70S6K (Thr389) y p27(Kipl) de Cell Signaling. Se adquirieron anticuerpos anti-bcl-2, Bcl-XL, Akt, pAkt (Thr 308), pAkt (Ser 473), p70S6K y ß-actina de Santa Cruz. El compuesto A se disolvió en DMSO a 10 mM como solución madre. Se adquirieron dexametasona y yoduro de propidio (PI) de Sigma-Aldrich. Se adquirió IL6 humana recombinante de R&D Systems. Se obtuvo anexina V conjugada con FITC de Invitrogen.

Preparación de 5- (2 , 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4 -trifluorometil-piridin-2-ilamina (Compuesto A) A una suspensión de 2 -morfolino-4 , 6-dicloropirimidina (2.0 g, 8.54 mmol) en NMP (14 mL),' se agregó trietilamina (1.43 mL, 10.25 mmol) . La mezcla heterogénea se agitó durante 15 minutos y luego se trató con morfolina (0.75 mL, 8,54 mmol) . Luego de someterla a reflujo a 85 °C en argón durante 2 horas, se enfrió la solución y luego se agregó a EtOAc (160 mL) . La solución orgánica se lavó con 25 mL de NaHC03 (sat.) (2 x) , agua (2 x) y salmuera, se secó sobre Na2S0 , se filtró y concentró. El material crudo se disolvió en 200 mL de EtOAc y se filtró a través de una almohadilla de Si02, se eluyó adicionalmente con EtOAc, proporcionando 2.2 g (93 %) de 2,4-dimorfolino-6-cloropirimidina como un sólido blancuzco. LCMS (m/z) : 285.0 (MH+) , 1H NMR (CDC13): d 5.86 (s, IH) , 3.71-3.76 (m, 12H) , 3.52-3.56 (m, 4H) .

Se burbujeó gas de argón a través de una mezcla heterogénea de 2 , 4-dimorfolino-6-cloropirimidina (4.1 g, 14.3 mmol) y 4- (trifluorometil) -5- (4, 4,5, 5-tetrametil-l, 3,2- dioxaborolan-2-il) piridm-2-amina (16.5 g, 57.3 mmol) en 1,2- dimetoxietano y Na2C93 2M (3:1) durante 20 minutos. Se agregó cloruro de 1, 1 ' -Bis (difenilfosfino) ferroceno paladio (II) (292 mg, 0.36 mmol) y se selló el recipiente de vidrio de alta presión que contiene la mezcla. Luego, la mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 15 horas, se enfrió y se diluyó con EtOAc (300 mL) . La solución orgánica se lavó con 300 mL de una mezcla de agua: Na2C03 (sat . ) : H4OH (conc . ) 5:4:1, luego NH4Cl(sat) y salmuera (2x) , se secó sobre Na2S0 , se filtró y concentró. El material crudo se purificó mediante cromatografía en Si02 (50- 90 % de EtOAc/hexanos con 0.1 % de TEA) lo que da como resultado 5.62 g (95%) de 5-(2,6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4- trifluorometil-piridin-2-ilamina como un sólido blancuzco. LCMS (m/z) : 411.3 (MH+) ; -"? NMR (CDC13) : d 8.27 (s, IH) , 6.78 (s, IH) , 5.97 (s, IH) , 4.77 (bs, 2H) , 3.59-3.80 (ra, 12H) , 3.58-3.61 (m, 4H) .

Ensayo de crecimiento celular j Se evaluaron los efectos de inhibición del crecimiento del compuesto A en líneas celulares de mieloma múltiple (MM) mediante ensayo de MTS siguiendo el protocolo del fabricante (Promega) . En resumen, se colocaron células de MM en placas de 96 pocilios a una concentración de 5,000 células/100 µ1: de medio por pocilio y se trataron con 0 a 1 mM de concentraciones finales del compuesto A durante 24 o 72 horas. Al final del ensayo, se agregaron 20 µ? de solución de MTS/PMS en el medio de cultivo en cada pocilio. Luego, las placas se incubaron durante 4 horas a 37 °C y 5 % de C02. La absorbancia a 490 nm se registró utilizando un lector1 de i placas ELISA. Todos los experimentos se llevaron a cabo i en triplicado.

Ensayos de apoptosis Se ^detectó apoptosis celular provocada por el compuesto A mediante ensayo de unión a anexina V, tal como se describe anteriormente (Zheng Y, Cai Z, Wang S, et l . Macrophages are an abundant component of myeloma microenvironment and protect myeloma cells from chemotherapy drug-induced apoptosis. Blood. 2009;114 (17) : 3625-3628) . En resumen, se cultivaron células de MM en placas de 24 pocilios y se trataron con 0 a 1 mM de concentraciones finales del compuesto A durante 24 o 72 horas . Las células se lavaron dos veces con PBS frío y se volvieron a suspender en amortiguador de unión a anexina V (Invitrogen) . Se tiñeron células de MM con anexina V conjugada con FITC y yoduro de propidio (PI, por sus siglas en inglés) durante 15 min a temperatura ambiente. Se determinaron células apoptóticas como células positivas de anexina V.

Análisis del ciclo celular Se cultivaron las líneas celulares de MM ARP1, MM.1S y MM . IR con o sin 1 µ? de compuesto A durante 24 horas. Luego, se cosecharon y permeabilizaron células en 70 % de etanol a 4 °C durante la noche, y se incubaron con 50 ug/ml de PI y 20 g/ml de R asa A durante 15 rain. Se analizó el contenido de ADN mediante citometría de. flujo y software FlowJo.

Efectos in vivo del compuesto A en el mieloma múltiple establecido ¡ Se albergaron ratones SCID hembras de seis a ocho semanas de edad y se monitorearon en MD. Instalación para ' la investigación animal del Anderson Cáncer Center. Todos los procedimientos y protocolos experimentales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales ( Institutional Animal Care and Use Committee) en la Universidad de Texas M.D. Anderson Cáncer Center. Los ratones SCID fueron inoculados subcutáneamente en el lado derecho con 1 millón de células ARP1 suspendidas en 50 µ? de PBS. Luego de que se desarrolló un tumor palpable (diámetro del tumor = i 5 mm) , los ratones fueron tratados a diario con una inyección intraperitoneal de PBS o del compuesto A (5 µ???? por kg por día) . Se midieron los tamaños de los tumores cada 5 días y se tomaron muestras de sangre en el mismo período. Se evaluó la carga de los tumores midiendo el tamaño del tumor y detectando la cadena kappa humana que circula.

ELISA Se midieron los niveles de cadena kappa humana en suero de ratones mediante ELISA cuantitativo (Bethyl Laboratories Inc) siguiendo el protocolo del comerciante. i Análisis estadístico ' Todos los datos se muestran como promedio + desviación estándar. Se usó la prueba t de Student para comparar varios grupos experimentales . La importancia se determinó cuando P<0.05. : Resultados El compuesto A inhibe el crecimiento de líneas celulares de MM y provoca la apoptosis celular Para evaluar el efecto del compuesto A en las células de mieloma, se trataron las líneas celulares de MM ARP1, ARK, MM.1S, MM.1 y U266 con distintas dosis del compuesto A durante 24 horas o 72 horas. Se midió la apoptosis de las células de MM provocada por el compuesto A, tal como se describe en Materiales y Métodos. Tal como se muestra en la Fig. 1A, el compuesto A provocó la apoptosis de las células de MM de forma dependiente de la dosis y dependiente del tiempo. Las distintas líneas celulares de MM tenían distintas sensibilidades hacia el compuesto A. U266 fue menos sensible al compuesto A en comparación con otras líneas celulares de MM. El compuesto A a una concentración igual o mayor que 10 µ? provocó una apoptosis significativa en todas las líneas I celulares de MM analizadas a las 24 horas (P<0.05, 'en í comparación con el control) . Por lo tanto, en los siguientes experimentos, se usó un tratamiento de 24 horas con 10 µ? del compuesto A.

Se analizó el efecto del compuesto A en el crecimiento de células de MM mediante ensayo MTS. Tal como se muestra en la Fig. IB, el tratamiento con el compuesto A dio como resultado la inhibición del crecimiento dependiente de la dosis en todas las lineas celulares de MM analizadas. La IC50 (concentración a 50 % de inhibición) del compuesto A varió en las células de MM analizadas. A las 24 horas de tratamiento, la IC50 para ARP1, ARK y MM . IR fue de entre 1 µ? y 10 µ?, mientras que la IC50 para MM.1S fue de menos de 1 µ? y la ÍC50 para U266 fue de entre 10 µ? y 100 µ?. En resumen, estos descubrimientos indican que el tratamiento con el compuesto A dio como resultado en la inhibición del crecimiento y apoptosis de las células de MM de manera dependiente de la dosis del compuesto A.

El compuesto A provoca la apoptosis de las células de MM primarias ex vivo Para evaluar la función del compuesto A en las células de MM primarias, el estudio se extendió a células de MM primarias CD138+ recién aisladas de pacientes con mieloma.jDe i acuerdo al descubrimiento anterior, las células de ' MM primarias experimentan apoptosis ex vivo a menos que las células se cocultiven con BMSC (Zheng Y, Caí Z, Wang S, ¡ et ál . Macrophages are an abundant component of myeloma microenvironment and protect myeloma cells from chemotherápy drug-induced apoptosis. Blood. 2009;114 (17) : 3625-3628) . Por lo tanto, las células de MM primarias CD138+ se cocultivaron a una relación de 1:1 con CD138- BMSC aisladas a partir de aspiración de la médula ósea con MM. Las células se trataron con distintas dosis del compuesto A, de .0 a 1 mM, durante 24 horas . Se separaron las células de MM primarias y BMSC mediante tinción con APC-CD138. Tal como se muestra mediante los datos representativos obtenidos de células de mieloma y BMSC de uno de tres pacientes examinados (Fig. 1C) , el compuesto A provocó la apoptosis de las células de ', MM primarias (CD138+) de manera dependiente de la dosis. 10 µ? del compuesto A provocaron más del 70 % de apoptosis de las células de MM primarias. Cabe destacar que el compuesto A presentó una citotoxicidad significativamente inferior hacia las células estromales CD138. La Fig ID muestra que el compuesto A provocó la apoptosis de las células de MM primarias de tres pacientes con MM distintos. En conjunto, estos datos indican que el compuesto A provoca la apoptosis de las células de MM primarias, pero presenta baja toxicidad hacia BMSC no de cúrcuma.

El compuesto A presenta baja toxicidad hacia hematocitos normales de voluntarios sanos Para examinar si el compuesto A provoca la apoptosis de PBMC normales, se incubaron PBMC normales de distintos voluntarios sanos con 0 a 1 mM del compuesto A durante 24 horas. Se midió la tasa de la apoptosis de las células, tal como se describe anteriormente. Tal como se muestra en la Fig 1E, el compuesto A presentó comparablemente baja toxicidad i hacia PBMC normales. La concentración eficaz del compuesto A a células de MM, 10 µ? o 100 µ? solamente dieron como resultado menos de 40 % de apoptosis de PBMC. Por lo tanto, estos descubrimientos indican que el compuesto A presenta baja citotoxicidad hacia PBMC en reposo.

Leyenda de las Figuras 1A-1E (Figura 1A) . Se cultivaron cinco líneas celulares de j MM i ARP1, AR , MM.1S, MM . IR y U266 en presencia de 0 a 1 mM ; de compuesto A. Se cosecharon células luego de 1 día o 3 días : de tratamiento. Se midió la apoptosis de las células de MM provocada por el compuesto A mediante tinción de anexina V, tal como se describe en Materiales y Métodos. (Figura IB) . : Se trataron las mismas líneas celulares de MM con 0 a 1 mM del compuesto A durante 1 o 3 días. Se evaluó el crecimiento celular mediante ensayo de MTS . (Figura 1C) . Histogramas representativos de células de MM primarias tratadas con ; el compuesto A. (Figura ID). Datos de 3 pacientes que muestran una inducción de la apoptosis dependiente de la dosis en células de MM primarias recién aisladas. Las células ¡se Í trataron con distintas dosis del compuesto A durante 1 día. (Figura 1E) . Se trataron PBMC aisladas de 3 voluntarios sanos con el compuesto A durante 1 día.

La adición o presencia de IL-6 de BMSC NO protege a las células de MM de la apoptosis provocada por el compuesto A¦ i IL-6 es una citocina de supervivencia importante para MM. (Klein B, Zhang XG, Jourdan M, et ál . Interleukin-6 is the central tumor growt factor in vitro and in vivo in múltiple myeloma. Eur Cytokine Netw. 1990;1 (4 ) : 193 -201 ; Gado K, Domjan G, Hegyesi H, Falus A. Role of INTERLEUKIN-6 in the pathogenesis of múltiple myeloma. Cell Biol Int. 2000; 24 (4) : 195-209) . Las obras anteriores han demostrado que IL-6 promueve la supervivencia de las células de MM bajo un tratamiento con el agente quimioterapéutico dexametasona (Frassanito MA, Cusmai A, Iodice G, Dammacco F. Autocrine interleukin-6 production and highly malignant múltiple myeloma: relation with resistance to drug-induced apoptosis. Blood. 2001;97 ( 2 ) : 483 -489 ) . Por lo tanto, se examinó ; la atenuación de la apoptosis de las . células de MM provocada por el compuesto A mediante la adición de IL6. Con este propósito, se cultivaron distintas líneas celulares MM ARP1, MM.1S y MM . IR con o sin hIL-6 recombinahte (concentración final 5 yg/ml) y se trataron con o sin 10 ; µ? del compuesto A durante 2 días. Como control positivo, se trataron células de MM.1S con 40 iq/ l de dexametasona con o sin adición de hIL-6 durante el mismo período de tiempo. Tal como se muestra en la Fig 2A, la adición de IL6 no' afectó' la apoptosis de células de MM provocada por el compuesto A, pero promovió la supervivencia de células de MM.1S en tratamiento con dexametasona .

Las pruebas cada vez más concluyentes han demostrado que las células estromales de médula ósea (BMSC, por sus siglas en inglés) en el lecho del tumor de mieloma proporcionan un microambiente de promoción del tumor! y protegen las células de MM de la apoptosis provocada por los fármacos quimioterapéuticos (De Raeve HR, Vanderkerken ; K. The role of the bone marrow microenvironment in múltiple I myeloma. Histol Histopathol. 2005;20 ( ): 1227 -1250 ; Mitsiades CS, McMillin D , Klippel S, et ál . The role of the bone marrow microenvironment in the pathophysiology of myeloma and its significance in the development of more effective therapies . Hematol Oncol Clin North Am. 2007;21 (6):10Q7-1034, vii-viii) . Por lo tanto, también se analizó si las BMSC de médula ósea de pacientes con MM pueden proteger las células de MM de la apoptosis celular provocada por :el compuesto A. Con este propósito, se cocultivaron BMSC aisladas de pacientes con MM con las líneas celulares de ¡MM ARPl, MM.1S y MM. R. Las células se trataron con o sin 10 ?µ? i i del compuesto A durante 24 horas. Como control positivo, se cocultivaron células de MM.1S con o sin BMSC y se trataron con o sin 40 µg/ml de dexametasona durante 24 horas. Lu go del tratamiento, las células de MM se identificaron como células CD138+ mediante tinción con APC-CD138. Tal como se i muestra en la Fig 2B, BMSC no protegieron la apoptosis ¡de 1 · células de MM provocada por el compuesto A, pero protegieron a las células de MM.IS de la apoptosis celular provocada por dexametasona .

Leyenda de las Figuras 2A-2B (Figura 2A) . Se cultivaron las líneas celulares de MM ARP1, MM.IS y MM . IR con 10 µ? del compuesto A durante 3 días. Se agregó rhíL-6 a una concentración final de 5 ng/ml. Como control positivo, las células de MM.IS se trataron con ¡40 µg/ml de dexametasona en presencia de 5 ng/ml de rhIL6 durante el mismo tiempo. Se midió el índice de apoptosis celular mediante tinción con anexina V. (Figura 2B) . ! Se cocultivaron las mismas células de MM con o sin BMSC de MM y se trataron con 10 µ? del compuesto A durante 1 día. Cómo control positivo, se cocultivaron células de MM.IS con o sin BMSC y se trataron con 40 yg/ml de dexametasona durante 1 día. Se midió el índice de apoptosis celular CD138+ de MM mediante tinción con anexina V.

El compuesto A provoca la detención del ciclo celular en la fase Gl Para estudiar el mecanismo de la inhibición del crecimiento y apoptosis de las células de MM provocadas por el compuesto A, se analizó si el tratamiento con el compuesto A afecta el ciclo celular del MM. Tal como se muestra en ; la Fig 3A, se cultivaron células ARP1 con o sin 1 µ? del compuesto A durante 24 horas . El tratamiento con el compuesto A dio como resultado un aumento de las células en fase Gi y una disminución de las células en fase S. Se observaron descubrimientos similares en las otras líneas celulares de MM MM.1S y MM . IR (Fig. 3B) . , Leyenda de las Figuras 3A-3B (Figura 3A) . Histograma representativo de ARP1 trat'ado con 1 µ? del compuesto A durante 1 día. (Figura 3B) . I Se trataron células de MM ARP1, MM.1S y MM . IR con 1 µ? ' de compuesto A durante 1 día. El ciclo celular se analizó tal como se describe.

El compuesto A provoca, la apoptosis de las células: de MM mediante la activación de caspasas : Para elucidar la apoptosis de células de MM provocada por el compuesto A, se evaluaron las líneas celulares de MM ARP1, MM.1S y MM . IR, tratadas con o sin el compuesto A durante 24 horas, mediante análisis de transferencia Western.

El resultado mostró la escisión de caspasa 3 y caspasa 9 (Fig. 4A) . ; También se detectó la escisión de PARA luego 'del tratamiento con el compuesto A en todas las líneas celulares analizadas. En general, estos descubrimientos indican que el tratamiento con el compuesto A provoca la apoptosis de las células de MM a través de la activación de las caspasas. ¡ La exposición al compuesto A provoca la regulación por aumento de BimS y la regulación por disminución de XIAP : Para analizar adicionalmente las vías de señalización que fueron afectadas por la exposición al compuesto A en células de MM, la inmunotransferencia se extendió a otras moléculas de señalización celular. En primer lugar, se analizó el efecto inhibidor del compuesto A en la vía PI3K-Akt-mTOR en células de MM. Tal como se muestra en la Fig 4B, se reguló por disminución tanto p-Akt en Thr473 como Ser308 luego del tratamiento con el compuesto A. También se disminuyeron los niveles totales de Akt en células ARPl' y MM. IR luego del tratamiento con el compuesto A (Fig 4C) . Probablemente, esto se debe al aumento de las células apoptóticas luego del tratamiento con el compuesto A. También se disminuyeron los niveles de p-P70S6K luego del tratamiento con el compuesto A en las líneas celulares de MM analizadas, mientras que la expresión de P70S6K total permaneció constante. Los descubrimientos indican que el compuesto: A inhibe las vías PI3K-Akt-mT0R en células de MM. ; En segundo lugar, dado que el tratamiento con ¡ el compuesto A provocó la detención del ciclo celular en la fáse Gl, se analizó la expresión de los reguladores del ciclo celular. Tal como se muestra en la .Fig 4B, se reguló por aumento la expresión de la proteína represora del ciclo celular p27 (Kipl) luego del tratamiento con el compuesto A, mientras que la expresión de la ciclina DI se reguló por disminución. . ! Luego, se analizaron las expresiones de los factores reguladores de la apoptosis. Nuestros datos mostraron que se reguló por aumento la expresión de las isoformas citotóxicas pequeñas de Bim, BimS, luego del tratamiento con el compuesto A. Bim es un factor proapoptótico que pertenece a la familia Bcl-2 (O'Connor L, Strasser A, O'Reilly LA, et ál . Bim: i a novel member of the Bcl-2 family that promotes apoptosis. EMBO J. 1998;17 (2 ) : 384 -395 ) . Bim tiene tres isoformas principales generadas mediante empalme alternativo, BimEL, BimL y BimS. La forma más corta, BimS, es la isoforma más citotóxica (Weber A, Paschen SA, Heger K, et ál . La apoptosis provocada por BimS requiere la localización mitocondrial pero no la interacción con proteínas Bcl-2 antiapoptóticas . J" Cell Biol. 2007 ; 17'7 (4) : 625-636) . Las obras anteriores han demostrado que la transcripción de Bim es regulada por el factor de transcripción de cabeza de tenedor FKHR-L1, un I efector corriente abajo de PI3K (Dijkers PF, Medema RH, Lammers J , Koenderman L, Coffer PJ. Expression of the pr -apoptotic Bcl-2 family member Bim is regulated by the forkhead transcription factor FKHR-L1. Curr Biol, 2000,-10 (19) : 1201-1204) . Además de Bim, XIAP y Bcl-XL, ambas spn proteínas antiapoptóticas (Deveraux QL, Roy N, Stennicke HJ¾, et ál . IAPs block apoptotic events induced by caspase-8 and cytochrome c by direct inhibition of distinct caspases. EMBO J. 1998;17 (8 ): 2215-2223 ; Minn AJ, Kettlun CS, Liang H, et ál. Bcl-xL regulates apoptosis by heterodimerizatipn-dependent and -independent mechanisms. EMBO . 1999; 18 (3):632-643) [sic] expresiones se regularon por disminución luego del tratamiento con el compuesto A. Por lo tanto,, la apoptosis de células de MM provocada por el compuesto A puede i ser causada por la regulación por aumento de BimS citotóxicas y por la regulación por disminución de XIAP y Bclj-XL antiapoptóticas .

Leyenda de las Figuras 4A-4C (Figura 4A) . Se trataron las células de MM ARP1, MM.1S y MM. IR con o sin 10 µ? de compuesto A durante' 1 día. Se muestra la activación y escisión provocadas por el compuesto A de caspasa 3, caspasa 9 y PARP. (Figura 4B) . Se lisaron las mismas células de MM tratadas con 10 µ? del compuesto A para transferencia Western. (Figura 4C) se trataron células RP1 con 10. µ? del compuesto A durante 1, 6, 12 y 24 horas-. ¡ Citotoxicidad sinérgica del tratamiento con el compuesto A y dexametasona combinados en células de MM Para analizar si el compuesto A tiene un efecto sinérgico/aditivo con otros agentes quimioterapéuticos contra MM, se trataron células ARP1 con el compuesto A junto con melfalán, dexametasona, lenalidomida y bortezomib. Tal como se muestra en la Fig. 5A, el tratamiento con el compuesto A y dexametasona combinados presentó citotoxicidad sinérgica/aditiva en células ARP1. Luego, el experimento; se extendió a otras líneas celulares de MM, y se trataron con poca cantidad del compuesto A (1 µ?) y dexametasona (40 pg/ml) . Tal como se muestra en la Fig 5B, si bien las dosis bajas del compuesto A o dexametasona solos solamente tuvo; un efecto citotóxico limitado, el tratamiento con dos fármacos combinados provocó apoptosis celular significativa en líneas celulares sensibles a la dexametasona ARP1 y MM.1S, pero j no en células MM . IR resistentes a la dexametasona. El análisis del crecimiento celular también mostró que el compuesto A y dexametasona inhibieron sinérgicamente el crecimiento de células MM.1S (Fig 5C) .

Para examinar las dosis mínimas de cada fármaco para efecto sinérgico, se trataron células MM.1S con distintas dosis del compuesto A y dexametasona durante 24 horas. Tal como se muestra en la Fig 5D, 1 µ? del compuesto A ue necesario para alcanzar un efecto sinérgico, mientras que ¡tan poco como 40 ng/ml de dexametasona fueron suficientes para estimular sinérgicamente la apoptosis celular. El aumento de la dosificación de dexametasona no aumentó la velocidad de muerte celular.

Para elucidar la función del compuesto A y dexametasona en el efecto sinérgico en células MM.1S, las células se trataron con los fármacos en orden. i Específicamente, se trataron células MM.1S con dexametasona durante el primer día, y se cambió al tratamiento con | el compuesto A durante el segundo día, o a la inversa. Se midió la velocidad de la apoptosis celular luego del segundo día. Tal como se muestra en la Fig. 5E, el tratamiento con dexametasona seguida del compuesto A dio como resultado una mayor tasa de apoptosis que cualquier otro tipo de tratamiento. ! Por último, se analizó el efecto sinérgico mediante inmunotransferencia . Tal como se muestra en la Fig. 5F, el tratamiento conjunto con el compuesto A y dexametasona dio como resultado un aumento de la escisión de PARP, escisión de Bcl-2 y activación de caspasa 3. Estos descubrimientos indican una mejora de la apoptosis luego del tratamiento con I dos fármacos. La expresión de BimS se reguló por aumento en el tratamiento combinado, lo que puede ser la causa del efecto sinérgico. En resumen, estos descubrimientos, indican que la combinación del compuesto A y dexametasona presenta citotoxicidad sinérgica en células de M sensibles a la dexametasona .

Leyenda de las Figuras 5A-5F (Figura 5A) . Se trataron células ARP1 con 10 µ? del compuesto A (BK) , 15 nM de melfalán (Me) , 40 µ?/p?? 'de dexametasona (De) , 100 µ? de lenalidomida (Le) , 10 µ? ;de Bortizomib (BT) , o sus combinaciones durante 1 día. Se midió la apoptosis celular, tal como se describe. (Figura 5B) . Ise trataron las células de MM ARP1, MM.1S y MM . IR con. 1 µ? del compuesto A, 40 g/ml de dexametasona o su combinación durante 1 día. Se midió la apoptosis celular. (Figura 5C) . : Se trataron las mismas líneas celulares de MM con el compuestó A durante 1 día y se midió el crecimiento celular mediante M S . (Figura 5D) . Se trataron células de MM.1S con distintas dosis del compuesto A (10 nM, 100 nM y 1000 nM) , dexametasona (40 ng/ml, 400 ng/ml · y 4000 ng/ml) o su combinación durante 1 día. Se midió la apoptosis celular mediante tinción con anexina V. (Figura 5E) . Se trataron células MM.1S con 1 j µ? del compuesto A o 4 g/ml de dexametasona durante 1 día. Luego, las células se lavaron una vez con PBS y se cambió! al segundo medio acondicionado que contiene 1 µ? del compuesto A o 4 ug/ml de dexametasona durante otras 24 horas. Se midió la tasa de la apoptosis celular mediante tinción con anexina :V. (Figura 5F) . Se trataron células MM.1S con dexametasona! (4 i ug/ml) , compuesto A (1 µ?) o ambos durante 24 horas. ¡ Efectos in vivo del compuesto A en MM establecido ' Para examinar los efectos anti-MM in vivo del compuesto A, se estableció el modelo de MM humano en ratones SCID, tal como se describe en Materiales y Métodos. Cuando se desarrollaron tumores palpables (= 5 mm de diámetro) , los í ratones (10 por grupo) recibieron inyección intraperitonéal del compuesto A (5 µ?t??? por kg por día) o del PBS como vehículo de control, a diario. Tal como se muestra en la Fig. 6A y 6B, los ratones que recibieron tratamiento con el compuesto A presentaron cargas tumorales significativamente menores en comparación con los ratones de control, lo que: se midió según el volumen del tumor (Fig. 6A, P<0.05) y el nivel de la cadena kappa, humana que circula (Fig 6B, P<0.05). Además, el tratamiento con el compuesto A prolongó significativamente la supervivencia de los ratones que padecen un tumor (Fig 6C) . Por lo tanto, estos datos demuestran la capacidad anti-MM del compuesto A in vivo.

Leyenda de las Figuras 6A-6C Se inocularon subcutáneamente ratones SCID en el lado derecho con 1 X 106 células A P1. Tres a 4 semanas después cuando se desarrollaron tumores palpables (> 5 mm de diámetro) , los ratones (10 por grupo) se trataron con inyecciones intraperitoneales de PBS o del compuesto A (100 nmol por ratón por día) , a diario. Las cargas tumorales se midieron como (Figura 6A) volúmenes tumorales y (Figura 6B) niveles de cadena kappa humana que circula en el suero ; de ratones SCID detectadas mediante ELSA, y (Figura 6C) supervivencia de ratones que padecen un tumor.

DISCUSIÓN El mieloma múltiple (MM) continúa siendo una enfermedad incurable con supervivencia media de solamente 5 años (Kuinar SK, Rajkumar SV, Dispenzieri A, et ál . Improved survival in múltiple myeloma and the impact of novel therapies . Blood. 2008;111 (5) : 2516-2520) . Por lo tanto, se necesitan nuevos agentes terapéuticos en el tratamiento del MM. Se : ha informado la activación excesiva de la vía PI3K-Akt en MM (Pene -F, Claessens YE, Muller O, et ál . Role of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt and mTOR/P70S6-kinase pathways in the proliferation and apoptosis in múltiple myeloma. Oncogene. 2002;21 (43) :6587-6597) . IGF-1 e IL6, los dos factores de crecimiento principales en MM, promueven ] la proliferación celular y la resistencia al fármaco del mieloma mediante la activación de la vía PI3K-Akt (Hideshima ¡ T, Nakamura N, Chauhan D, Anderson KC. Biologic sequelae of interleukin- S induced PI3-K/Akt signaling in múltiple I myeloma. Oncogene. 2001/20 (42) : 5991-6000 ; Mitsiades CS, Mitsiades NS, McMullan CJ, et ál . Inhibition of the insulin-like growth factor receptor- 1 tyrosine kinase activity as a therapeutic strategy for múltiple myeloma, other hematologic malignancies , and solid tumors . Cáncer Cell. 2004;5 (3):221-230) . Se ha demostrado que un panel de inhibidores de la vía PI3K-Akt-mTOR exhibe actividades anti-MM in vitro e in vivo (McMillin DW, Ooi M, Delmore J, et ál . Antimyeloma activity I of the orally bioavailable dual phosphatidylinositol 3-kinase/mammalian target of rapamycin inhibitor NVP-BEZ235.

Cáncer Res. 2009;69 (14) : 5835-5842 ; Ikeda H, Hideshima T, Fulciniti M, et ál . PI3K/pll0 {delta} is a novel therapeut target in múltiple myeloma. Blood; Cirstea D, Hideshima T, Rodig S, et ál. Dual inhibition of akt/mammalian target f rapamycin pathway by nanoparticle albumin-bound-rapamycin and perifosine induces antitumor activity in múltiple myeloma. Mol Cáncer Ther,-9 (4) : 963-975) . Por lo tanto, la terapia dirigida a la vía PI3K-Akt-mT0R es una forma prometedora para tratar el MM.

En este estudio, se ha demostrado la actividad anti-MM del compuesto A, un inhibidor de pan-PI3K. El tratamiento con i el compuesto A da como resultado la inhibición del i crecimiento celular y la inducción de la apoptosis en tocias I las líneas celulares de MM y células de MM primarias í analizadas en forma dependiente de la dosis (Fig.lA, IB, 1C, ID y 2A) . El compuesto A solamente presenta citotoxicidad limitada hacia PBMC normales o BMSC no malignas (Fig 1C, 1E) . Además, el compuesto A muestra actividad anti-MM in vivo en un modelo de MM en ratones SCID. Los ratones que padecen MM tratados con el compuesto A presentan represión del crecimiento tumoral y una supervivencia prolongada (Fig. 6A, 6B y 6C) . Cabe destacar que la citotoxicidad de MM provocada por el compuesto A supera la resistencia al fármaco proporcionada por la presencia de BMSC o IL-6 (Fig 2A, 2B) . La investigación anterior ha demostrado que las BMSC i en médula ósea con MM cumplen una función crucial en ' la I j resistencia al fármaco del MM (Epstein J, Yáccoby |S. i Consequences of interactions between the bone marrow stroma and myeloma. Hematol J. 2003;4 (5) : 310-31 ; Dalton S . Drug resistance and drug development in múltiple myeloma. Semin Oncol. 2002;29 (6 Suppl 17):21-25). Un mecanismo de ¦ la resistencia al fármaco mediada por BMSC es que BMSC secretan el factor resistente al fármaco, IL-6, y protegen a. las células de MM de la apoptosis provocada por la quimioterapia (Hideshima T, Nakamura N, Chauhan D, Anderson KC. Biologic sequelae of interleukin-6 induced PI3-K/Akt signaling in múltiple myeloma. Oncogene. 2001;20 (42) : 5991-6000) . Como resultado, los pacientes con MM en general generan tolerancia i al fármaco a los agentes quimioterapéuticos convencionales durante el tratamiento y presentan una recidiva del tumor que es más resistente a los fármacos (Kastritis E, Palumbo A, Dimopoulos MA. Treatment of relapsed/refractory múltiple myeloma. Semin Hematol . 2009/46 (2) : 143-157) . Por lo tanto, estos descubrimientos indican que el compuesto A tiene actividad anti-MM potente y presenta beneficio para aquellos I pacientes con MM que son resistentes a los fármacos quimioterapéuticos convencionales .

La transducción de señalización y los efectores corriente abajo de la vía PI3K-Akt-mTOR se han estudiado, en distintos modelos de células cancerosas. En géneral, ; la inhibición de PI3K-Akt da como resultado la detención 'del i i ciclo celular, represión del crecimiento y apoptosis celular (Sasaki T, Takasuga S, Sasaki J, et ál . Mammalian phosphoinositide kinases and phosphatases . Prog Lipid Res. 2009/48 (6):307-343; Di Paolo G, De Camilli ¡ P.

Phosphoinositides in cell regulation and membrane .

Nature. 2006/443 (7112) : 651-657) . i En los experimentos descritos, se ha demostrado I el efecto inhibidor del compuesto A en la vía PI3K-Akt-mT0RÍ en líneas celulares de M (Fig 3B y 3C) . El compuesto la detención del ciclo celular de las células de fase Gl mediante regulación por aumento de p27 regulación por disminución de ciclina DI (Fig 3A, antiapoptótica, las cuales pueden causar la apdptosis ¡ de células de MM.

Estos descubrimientos indican una actividad antij-MM sinérgica de la combinación (Fig 5A, 5B) . Este efecto células sensibles a la dexam resistentes a la dexameta combinación del compuesto A sinérgico incluso con dosis 5D) . Además, la combinación del tratamiento con compuesto A luego de la exposición a la dexametasona también muestra mejora de la actividad anti-MM, en comparación con tratamiento .con dexametasona o el compuesto A solamente (Fig pequeña necesaria para dar como resultado una buena, respuesta y para minimizar los efectos secundarios. Por lo tanto, estos i descubrimientos demuestran que el tratamiento combinado ton i el compuesto A y dexametasona es una forma eficaz y menos i tóxica de tratar el MM. Los pacientes con MM en tratamiento con dexametasona también pueden recibir el beneficio luego! de-pasar al compuesto A. Estos descubrimientos demuestran quej el tratamiento combinado con dosis comparativamente bajas del ¡ compuesto A y dexametasona es una forma útil para tratar ; el MM. i En resumen, esta descripción demuestra la actividad anti-MM del compuesto A in vitro e in vivo. El compuesto j A, i solo o junto con otros agentes quimioterapéuticos contra ¡ el MM, particularmente dexametasona, es un tratamiento eficaz I para el MM. ¡ Se hace constar que con relación al esta fecha, j el i mejor método conocido por la solicitante para llevar a | la i práctica la citada invención, es el que resulta claro de ¡ la presente descripción de la invención. ¡ ¦

Claims (15)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar al sujeto una cantidad de (1) 5- (2, 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, y/o un estereoisómero, tautómero o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una cantidad de (2) dexaraetasona y/o una sal, solvato, raetabolito o racemato farmacéuticamente aceptable de esta, para tratar al suj eto .

2. Un método para tratar el mieloma múltiple en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar ál sujeto una cantidad de (1) 5- (2 , 6-di-morfolin-4 - il-pirimidin-4 - il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina y una cantidad de (2) dexametasona, para tratar al sujeto.

3. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque comprende coadministrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) .

4. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque la cantidad de (1) y la cantidad de (2) se encuentran en una formulación o forma de dosificación unitaria única.

5. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque la cantidad de (1) y la cantidad| de (2) se encuentran en formulaciones o formas de dosificación unitarias individuales. * '

6. El método de conformidad con las reivindicaciones l j ó 2, caracterizado porque el tratamiento comprende administrar la cantidad de (1) y la cantidad de básicamente al mismo tiempo.

7. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque el tratamiento comprende administrar la cantidad de (1) y la cantidad de (2) ¡en distintos momentos.

8. El método de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque la cantidad de (1) y/o la cantidad de (2) se administra en dosificaciones que no serían eficaces cuando uno o ambos de (1) y (2) se administran solos, pero cuyas cantidades son eficaces cuando se combinan. !

9. Una formulación farmacéutica caracterizada porque comprende una cantidad de (1) 5- (2 , 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4 -il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, y/o iun estereoisómero, tautómero, o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una cantidad de (2) dexametasona y/o una sal, solvato, metabolito o racemato farmacéuticamente aceptable ¡de l esta, donde la cantidad combinada de (1) y (2) es eficaz para el tratamiento del mieloma múltiple. ¡ I

10. Una formulación farmacéutica caracterizada porque comprende una cantidad de (1) 5- (2, 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2-ilamina, y una cantidad de (2) dexametasona, donde la cantidad combinada¡ de I (1) y (2) es eficaz para el tratamiento del mieloma múltiple.

11. La formulación farmacéutica de conformidad con las reivindicaciones 9 ó 10, caracterizada porque la cantidad! de (1) y la cantidad de (2) se encuentran en una formulación o forma de dosificación unitaria única.

12. La formulación farmacéutica de conformidad con las ? reivindicaciones 9 ó 10, caracterizada porque la formulación o forma de dosificación unitaria es una formulación o forma de dosificación unitaria oral. '

13. La formulación farmacéutica de conformidad con las reivindicaciones 9 ó 10, caracterizada porque la cantidad, de (1) y/o la cantidad de (2) no serían eficaces cuando uñó o ambos de (1) y (2) se administran solos, pero cuyas cantidades son eficaces cuando se combinan. ;

14. Una composición caracterizada porque comprende! 5-(2, 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il) -4-trifluorometil-piridin-2 -ilamina y dexametasona. j

15. Una terapia de combinación caracterizada porque comprende 5- (2, 6-di-morfolin-4-il-pirimidin-4-il)|-4-trifluorometil-piridin-2 -ilamina y dexametasona para I el tratamiento del mieloma múltiple.