MX2007004770A - Anticuerpos anti-il-22ra y moleculas y metodos para usarlos en inflamacion. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de moleculas de polipeptido IL-22, IL-20, o tanto IL-20 como IL-22. IL-20 e IL-22 son citocinas que estan implicadas en procesos inflamatorios y enfermedad humana. IL-22RA (zcytor11) es un receptor comun para IL-20 e IL-22. La presente invencion incluye anticuerpos anti-IL-22RA y moleculas, asi como metodos para antagonizar IL-22 o tanto IL-20 como IL-22 usando estos anticuerpos y moleculas.

Description

ANTICUERPOS ANTI-IL-22RA Y MOLÉCULAS Y MÉTODOS PARA USARLOS EN INFLAMACIÓN ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las citocinas son pequeñas proteínas solubles que median una variedad de efectos biológicos, incluyendo la regulación del crecimiento y diferenciación de muchos tipos de células (véase, por ejemplo Arai et al . , Annu Rev Biochem . 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Op . Immunol . 3 : 311 (1991); Paul y Seder, Cell 76: 241 (1994)). Las proteínas que constituyen el grupo de las citocinas incluyen interleucinas, interferones, factores inhibidores de colonia, factores de necrosis tumoral, y otras moléculas reguladoras. Por ejemplo, la interleucina-17 humana es una citocina que estimula la expresión de interleucina-6, molécula de adhesión intracelular 1, interleucina 8, factor estimulador de colonia de granulocitos y macrófagos y la expresión de prostaglandina E2, y juega un papel en la mutación preferente de precursores hematopoyéticos CD34+ en neutrófilos (Yao et al . , J. Immunol . 255:5483 (1993); Fossiez et al . , J. Exp . Med. 183 : 2593 (1996) ) . Los receptores que se unen a citocinas están compuestos típicamente de una o más proteínas de membrana integrales que se unen a la citocina con alta afinidad y producen este evento de unión a la célula a través de las porciones citoplásmicas de ciertas subunidades receptoras. REF.: 181378 Los receptores de citocina han sido agrupados en varias clases con base en las similitudes en los dominios de unión a ligandos extracelulares. Por ejemplo, las cadenas receptoras responsables de unión y/o transducción el efecto de interferones son miembros de la clase II de la familia del receptor de citocina, con base en un dominio extracelular de 200 residuos característicos. Las actividades in vivo demostradas de las citocinas y sus receptores ilustran el potencial clínico de, y la necesidad de, otras citocinas, receptores de citocinas, agonistas de citocinas y antagonistas de citocinas. Por ejemplo, las actividades in vivo demostradas de la familia de citocinas pre-inflamatorias ilustran el enorme potencial clínico de, y la necesidad de antagonistas de moléculas pro-inflamatorias. La presente invención resuelve estas necesidades al proporcionar antagonistas para citocinas pro-inflamatorias IL-20 e IL-22. Estos antagonistas de la presente invención, los cuales pueden bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-22, IL-20, o tanto IL-20 como IL-22, incluyen receptores IL-22RA solubles y anticuerpos anti-IL-22RA neutralizantes. La invención proporciona además usos de los mismos en enfermedades inflamatorias, asi como composiciones y métodos relacionados .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN 1 . Vista general Entre otras invenciones, la presente invención porporciona usos nuevos para un receptor soluble, designado "Zcytorll" o "IL-22RA" y anticuerpos neutralizantes para receptores de citocina IL-22RA. La presente invención proporciona también fragmentos de polipéptidos IL-22RA solubles y proteínas de fusión, para usarse en enfermedades inflamatorias o autoinmunes humanas. Los anticuerpos anti-IL-22RA y receptores IL-22RA solubles de la presente invención, incluyendo anticuerpos anti-IL-22RA neutralizantes de la presente invención, se pueden usar para bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad ya sea de IL-22 o IL-20, o tanto IL-20 como IL-22 en el tratamiento de enfermedades humanas especificas tales como psoriasis, artritis psoriásica, artritis, endotoxemia, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), colitis y otras condiciones inflamatorias descritas en la presente. Una secuencia de nucleótidos ilustrativa que codifica para Zcytorll (IL-22RA) se proporciona por SEQ ID N0:1; el polipéptido codificado se muestra en SEQ ID NO: 2. IL-22RA es una subunidad receptora tanto para IL_20 como para IL-22. Zcytorll (IL-22RA) se describe en la patente de E.U.A. de propiedad común No. 5,965,704, publicación de WIPO de propiedad común WO 02/072607. El análisis de un clon de ADNc humano que codifica para IL-22RA (SEQ ID NO : 1 ) reveló un marco de lectura abierto que codifica para 574 aminoácidos (SEQ ID NO: 2) que comprende un dominio de unión a ligando extracelular de aproximadamente 211 residuos de aminoácido (residuos 18-228 de SEQ ID N0:2; SEQ ID N0:3), un dominio de transmembrana de aproximadamente 23 residuos de aminoácido (residuos 229-251 de SEQ ID N0:2) y un dominio intracelular de aproximadamente 313 residuos de aminoácido (residuos 252 a 574 de SEQ ID N0:2). Asi, las moléculas de la presente invención incluyen polipéptidos que incluyen un dominio de unión a citocinas que comprenden residuos de aminoácido 18-228 de SEQ ID N0:2; SEQ ID N0:3. En una modalidad del receptor soluble de la presente invención, la IL-22R soluble se fusiona a la región constante de la cadena pesada (mostrada representativamente en SEQ ID NO:4). Los expertos en la técnica reconocerán que estos limites de dominio son aproximados. La eliminación de residuos de los extremos de los dominios es posible. Como se describe abajo, la presente invención proporciona polipéptidos aislados que comprenden una secuencia de aminoácidos que es al menos 70%, al menos 80% o al menos 90%, o más de 95%, tal como 96%, 97%, 98%, o más de 99% o más idéntica a una secuencia de aminoácidos de referencia de 18-228 de SEQ ID NO: 2, la cual también se muestra como SEQ ID NO: 3, en donde el polipéptido aislado se une específicamente a un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Los polipéptidos ilustrativos incluyen polipéptidos que comprenden ya sea residuos de aminoácido SEQ ID NO: 3 o residuos de aminoácido SEQ ID NO: 3. Más aún, la presente invención proporciona también polipéptidos aislados como los descritos arriba que se unen a IL-22 (por ejemplo, secuencia de polipéptidos de IL-22 humana como la mostrada en SEQ ID NO: 6) . La secuencia de polinucleótidos de IL-22 humana se muestra en SEQ ID NO: 5. La secuencia de polinucleótidos de IL-22 de ratón se muestra en SEQ ID NO: 10, y el polipéptido correspondiente se muestra en SEQ ID NO: 11. La presente invención proporciona también polipéptidos aislados como los descritos arriba que se unen a IL-20 (por ejemplo, secuencia de polipéptidos de IL-20 humana como la mostrada en SEQ ID NO: 8; publicación de WIPO No. WO 99/27103). La secuencia de polinucleótidos de IL-20 humana se muestra en SEQ ID NO: 7. La presente invención proporciona también polipéptidos aislados y epitopes que comprenden al menos 15 residuos de aminoácido contiguos de una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO.3. Los polipéptidos ilustrativos incluyen polipéptidos que ya sea comprende, o consisten en un epitope antigénico del mismo, o un fragmento de unión a IL-20 o IL-22 funcional del mismo. Más aún, la presente invención proporciona también polipéptidos aislados como los descritos arriba que se unen a, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan la actividad de IL-22 o IL-20. La presente invención incluye también polipéptidos IL-22RA variantes, en donde la secuencia de aminoácidos de los polipéptidos variantes comparte una identidad con los residuos de aminoácido de SEQ ID NO: 3 seleccionados del grupo que consiste en por lo menos 70% de identidad, al menos 80% de identidad, al menos 90% de identidad, al menos 95% de identidad, o más de 95% de identidad, tal como 96%, 97%, 98%, o más de 99% o más de identidad, y en donde cualquier diferencia entre la secuencia de aminoácidos del polipéptido variante y la secuencia de aminoácidos correspondiente de SEQ ID NO: 3 se debe a una o más sustituciones de aminoácido conservadoras. Estas sustituciones de aminoácido conservadoras se describen en la presente. Además, la presente invención proporciona también polipéptidos aislados como los descritos arriba que se unen a, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan la actividad de IL-22 o IL-20. La presente invención proporciona además anticuerpos y fragmentos de anticuerpo que se unen específicamente con estos polipéptidos. Los anticuerpos ejemplares incluyen anticuerpos neutralizantes, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales de murino, anticuerpos humanizados derivados de anticuerpos monoclonales de murino, y anticuerpos monoclonales humanos. Los fragmentos de anticuerpo ilustrativos incluyen F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv, scFv, y unidades de reconocimiento mínimas. Los anticuerpos neutralizantes se unen de preferencia a IL-22RA de tal forma que la interacción de IL-20 e IL-22 con IL-22RA sea bloqueada, inhibida, reducida, antagonizada o neutralizada; los anticuerpos neutralizantes anti-IL-22RA de tal manera que la unión de ya sea IL-20 o IL-22 o IL-22RA sea bloqueada, inhibida, reducida, antagonizada o neutralizada también son abarcadas por la presente invención. Es decir, los anticuerpos anti-IL-22RA neutralizantes de la presente invención pueden ya sea unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar cada uno de IL-20 o IL-22 individualmente, o unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar IL-20 e IL-22 juntas. La presente invención incluye además composiciones que comprenden un vehículo y un péptido, polipéptido o anticuerpo descrito en la presente. Además, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y por lo menos un vector de expresión o virus recombinante que comprende estos vectores de expresión. La presente invención incluye además composiciones farmacéuticas que comprenden un vehículo farmacéuticamente aceptable y un polipéptido o anticuerpo descrito en la presente. La presente invención contempla también anticuerpos anti-idiotipo, o fragmentos de anticuerpo anti-idiotipo, que se unen específicamente a un anticuerpo o fragmentos de anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 o un fragmento de la misma. Un anticuerpo anti-idiotipo ejemplar se une con un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido que consiste en SEQ ID NO: 3. La presente invención proporciona también proteínas de fusión, que comprenden un polipéptido de IL-22RA y una porción de inmunoglobulina. En estas proteínas de fusión, la porción de inmunoglobulina puede ser una región constante de la cadena pesada de inmunoglobulina, tal como un fragmento Fc humano. La presente invención incluye además moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican para estas proteínas de fusión . La presente invención también proporciona anticuerpos policlonales y monoclonales que se unen a polipéptidos que comprenden un dominio extracelular de IL-22RA, tales como receptores monoméricos, homodiméricos, heterodiméricos y multiméricos, incluyendo receptores solubles. Más aún, estos anticuerpos pueden usarse para antagonizar a unión de IL-22RA a ligandos, IL-22 (SEQ ID NO: 6), e IL-20 (SEQ ID NO: 8), individualmente o junto con el receptor IL-22RA. Además, la sobre-expresión o subregulación de IL-22 e IL-20 se mostró en lesiones psoriásicas humanas y en muestras de piel de dermatitis atópica humana, sugiriendo que IL-22, al igual que IL-20 también está implicada en psoriasis humana, dermatitis atópica u otras enfermedades inflamatorias de la piel y tejidos epiteliales. Más aún, como se describe en la presente, la sobre-expresión de IL-20 o IL-22 en ratones transgénicos mostró un engrosamiento epidérmico y una implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo psoriásico; y además la inyección de IL-22 en ratones normales mostró engrosamiento epidérmico y une una implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo psoriásico que fue destruido por el antagonista de receptor soluble IL-22RA2 (zcytorld; publicación de WIPO No. WO 01/40467. Estos datos in vivo sugieren además que la IL-22 probatoria esté implicada en psoriasis, dermatitis atópica u otras enfermedades inflamatorias de la piel y tejidos epiteliales. De esta manera, los antagonistas para la actividad IL-22 e IL-20, tales como receptores solubles IL-22RA y anticuerpos contra los mismos que incluyen los anticuerpos monoclonales y neutralizantes anti-humano-IL-22RA de la presente invención, son útiles en el tratamiento terapéutico de enfermedades inflamatorias, particularmente como antagonistas tanto de IL-22 e IL-20 individualmente o juntos en el tratamiento de psoriasis. Más aún, los antagonistas para la actividad de IL-22, tales como receptores solubles IL-22RA y anticuerpos contra los mismos que incluyen los anticuerpos monoclonales y neutralizantes anti-humanos-IL-22RA de la presente invención, son útiles en el tratamiento terapéutico de otras enfermedades inflamatorias por ejemplo ya que se unen, bloquean, reducen, antagonizan o neutralizan IL-22 e IL-20 (ya sea individualmente o juntos) en el tratamiento de dermatitis atópica, IBD, colitis, endotoxemia, artritis, artritis reumatoide y artritis psoriásica, enfermedades respiratorias del adulto, choque séptico, insuficiencia orgánica múltiple, lesión pulmonar inflamatoria tal como asma o bronquitis, neumonía bacteriana, psoriasis, eczema, dermatitis atópica y por contacto y enfermedad inflamatoria del intestino tal como colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. Estos y otros aspectos de la invención serán evidentes después de la referencia a la siguiente descripción detallada. Además, varias referencias se identifican abajo y están incorporadas a manera de referencia en su totalidad. 2. Defini ciones En la siguiente descripción, se usa extensamente un número de términos. Las siguientes definiciones se proporcionan para facilitar el entendimiento de la invención.

Según se usa en la presente, "ácido nucleico" o "molécula de ácido nucleico" se refiere a polinucleótidos, tales como ácido desoxirribonucleico (ADN) o ácido ribonucleico (ARN) , oligonucleótidos, fragmentos generados por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y fragmentos generados por cualquiera de ligación, escisión, acción de endonucleasas y acción de exonucleasas . Las moléculas de ácido nucleico pueden estar compuestas de monómeros que sean nucleótidos que ocurran naturalmente (tales como ADN y ARN) , o análogos de nucleótidos que ocurran naturalmente (por ejemplo, formas a-enantioméricas de nucleótidos que ocurren naturalmente) o una combinación de ambos. Los nucleótidos modificados pueden tener alteraciones en porciones de azúcar y/o en porciones a base de pirimidina o purina. Las modificaciones en azúcar incluyen, por ejemplo, el reemplazo de uno o más grupos hidroxilo con halógenos, grupos alquilo, aminas y grupos azido, o azúcares que pueden ser funcionalizados como éteres o esteres. Más aún, la porción de azúcar completa puede ser reemplazada con estructuras estérica y electrónicamente similares, tales como azúcares aza y anáogos de azúcar carbociclica . Ejemplos de modificaciones en una porción de base incluyen purinas y pirimidinas alquiladas, purinas y pirimidinas aciladas u otros sustitutos heterociclicos bien conocidos. Los monómeros de ácido nucleico pueden ser enlazados por enlaces de fosfodiéster o análogos de estos enlaces. Los análogos de enlaces de fosfodiéster incluyen fosfotioato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiselenoato, fosforoanilotioato, fosforanilidato, fosforamidato, y similares. El término "molécula de ácido nucleico" incluye también los llamados "ácidos nucleicos péptidos", los cuales comprenden bases de ácido nucleico modificadas o que ocurren naturalmente unidas a una estructura de base de poliamida. Los ácidos nucleicos pueden ser ya sea de una sola hebra o de doble hebra. El término "complemento de una molécula de ácido nucleico" se refiere a una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótido complementaria y orientación inversa en comparación con una secuencia de nucleótidos de referencia. Por ejemplo, la secuencia 5' ATGCACGGG 3' es complementaria a 5' CCCGTGCAT3' . El término "secuencia de nucleótidos degenerada" denota una secuencia de nucleótidos que incluye uno o más codones degenerados en comparación con una molécula de ácido nucleico de referencia que codifica para un polipéptido. Los codones degenerados contienen diferentes tripletes de nucleótidos, pero codifican para el mismo residuo de aminoácido (es decir, tripletes GAU y GAC codifican cada uno Asp) . El término "gen estructural" se refiere a una molécula de ácido nucleico que es transcrita en ARN mensajero (ARNm) , la cual es a su vez traducida en una secuencia de aminoácidos característica de un polipéptido especifico. Una "molécula de ácido nucleico aislada" es una molécula de ácido nucleico que no está integrada en el ADN genómico de un organismo. Por ejemplo, una molécula de ADN que codifica para un factor de crecimiento que ha sido separado del ADN genómico de una célula es una molécula de ADN aislada. Otro ejemplo de una molécula de ácido nucleico aislada es una molécula de ácido nucleico sintetizada químicamente que no está integrada en el genoma de un organismo. Una molécula de ácido nucleico que ha sido aislada de una especie particular es más pequeña que la molécula de ADN completa de un cromosoma de esa especie. Una "construcción de molécula de ácido nucleico" es una molécula de ácido nucleico, ya sea de una o de doble hebra, que ha sido modificada a través de intervención humana para contener secretos de ácido nucleico combinados y yuxtapuestos en una disposición que no existe en la naturaleza. "ADN lineal" significa moléculas de ADN no circulares que tienen extremo 5' y 3' libres. El ADN lineal puede prepararse a partir de moléculas de ADN circulares cerradas, tales como plásmidos, mediante digestión enzimática o ruptura fisica.

"ADN complementario (ADNc)" es una molécula de ADN de una sola hebra que se forma a partir de una plantilla de ARNm mediante la enzima transfectasa inversa. Típicamente, un cebador complementario a porciones de ARNm se emplea para el inicio de la transcripción inversa. Los expertos en la técnica también usan el término "ADNc" para referirse a una molécula de ADN de doble hebra que consiste en esta molécula de ADN de una hebra y su hebra de ADN complementaria. El término "ADNc" se refiere también a un clon de una molécula de ADNc sintetizado de una plantilla de ARN. Un "promotor" es una secuencia de nucleótidos que dirige la transcripción de un gen estructural. Típicamente, un promotor se localiza en la región de no codificación 5' de un gen, cerca del sitio de inicio de transcripción de un gen estructural. Los elementos de secuencia dentro de promotores que funcionan en el inicio de transcripción comúnmente son caracterizados por secuencias de nucleótidos de consenso. Estos elementos promotores incluyen sitios de unión a ARN polimerasa, secuencias TATA, secuencias CAAT, elementos específicos de diferenciación (DSEs; McGehee et al . , Mol . Endocrinol . 7:551 (1993)), elementos de respuesta a AMP cíclico (CREs) , elementos de respuesta a suero (SREs; Treisman, Seminars in Cáncer Biol . . 1:47 (1990)), elementos de respuesta a glucocorticoides (GREs), y sitios de unión para otros factores de transcripción, tales como CRE/ATF (O'Reilly et al . , J. Biol . . Chem . 267: 1993 (1992)), AP2 (Ye et al . , J. Biol . Chem . 269 : 25128 (1994)), SPI, proteina de unión a elemento de respuesta cAMP (CREB; Loeken, Gene Expr . 3 : 253 (1993)) y factores octámeros (véase, en general, Watson et al . , eds., Molecular Biology of the Gene, 4a ed. (The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. 1987), y Lemaigre and Rousseau, Biochem . J. 303:1 (1994)). Si un promotor es un promotor inducible, entonces la velocidad de transcripción se incrementa en respuesta a un agente inductor. En contraste, la velocidad de transcripción no es regulada por un agente inductor si un promotor es un promotor constitutivo. Se conocen también los promotores reprimibles. Un "promotor nuclear" contiene secuencias de nucleótidos esenciales para la función de un promotor, incluyendo la caja TATA y el inicio de transcripción. Mediante esta definición, un promotor nuclear puede o no tener actividad detectable en ausencia de secuencias especificas que pudieran incrementar la actividad o conferir actividad especifica de tejidos. Un "elemento regulador" es una secuencia de nucleótidos que modula la actividad de un promotor central. Por ejemplo, un elemento regulador puede contener una secuencia de nucleótidos que se una a factores celulares haciendo posible la transcripción exclusivamente o preferentemente en células, tejidos u organelos particulares.

Estos tipos de elementos reguladores están asociados normalmente con genes que son expresados de una manera "especifica de células", "especifica de tejidos" o "especifica de organelos". Un "potenciador" es un tipo de elemento regulador que puede incrementar la eficiencia de transcripción, no obstante la distancia u orientación del potenciador en relación al sitio de inicio de transcripción. "ADN heterólogo" se refiere a una molécula de ADN, o a una población de moléculas de ADN, que no existen naturalmente dentro de una célula huésped dada. Las moléculas de ADN heterólogas a una célula huésped particular pueden contener ADN derivado de una especie de célula huésped (es decir, ADN endógeno) siempre y cuando el ADN huésped se combine con un ADN huésped (es decir, ADN exógeno) . Por ejemplo, una molécula de ADN que contenga un segmento de ADN no huésped que codifique para un polipéptido enlazado operablemente a un segmento de ADN huésped que comprenda un promotor de transcripción se considera que es una molécula de ADN heteróloga. De manera inversa, una molécula de ADN heteróloga puede comprender un gen endógeno enlazado operablemente a un promotor exógeno. Como otra ilustración, una molécula de ADN que comprende un gen derivado de una célula tipo silvestre se considera que es ADN heterólogo si esa molécula de ADN se introduce en una célula mutante que carezca del gen tipo silvestre. Un "polipéptido" es un polímero de residuos de aminoácido unidos por enlaces péptidos, ya sea producido naturalmente o sintéticamente. Los polipéptidos de aminoácido son conocidos comúnmente como "péptidos". Una "proteina" es una macromolécula que comprende una o más cadenas de polipéptidos. Una proteina también puede comprender componentes que no sean péptidos, tales como grupos carbohidratos. Los carbohidratos y otros sustituyentes no peptidicos pueden añadirse a una proteina por la célula en la cual se produzca la proteina, y variarán con el tipo de célula. Las proteínas se definen en la presente en términos de sus estructuras de base de aminoácidos; sustituyentes tales como grupos carbohidratos generalmente no se especifican, pero pueden estar presentes no obstante. Un péptido o polipéptido codificado por una molécula de ADN no huésped es un péptido o polipéptido "heterólogo" . Un "vector de clonación" es una molécula de ácido nucleico, tal como un plásmido, cósmido o bacteriófago, que tiene la capacidad de réplicas autónomamente en una célula huésped. Los vectores de clonación típicamente contienen uno o un número pequeño de sitios de reconocimiento de endonucleasas de restricción que permiten la inserción de una molécula de ácido nucleico en una forma determinable sin pérdida de una función biológica esencial del vector, asi como secuencias de nucleótidos que codifican para un gen marcador que es adecuado para usarse en la identificación y selección de células transformadas con el vector de clonación. Los genes marcadores incluyen típicamente genes que proporcionan resistencia a tetraciclina o resistencia a ampicilina . Un "vector de expresión" es una molécula de ácido nucleico que codifica para un gen que es expresado en una célula huésped. Típicamente, un vector de expresión comprende un promotor de transcripción, un gen y un terminador de transcripción. La expresión génica es normalmente puesta bajo el control de un promotor, y este gen se dice que está "enlazado operablemente al" promotor. En forma similar, un elemento regulador y un promotor central están enlazados operablemente si el elemento regulador modula la actividad del promotor central. Un "huésped recombinante" es una célula que contiene una molécula de ácido nucleico heteróloga, tal como un vector de clonación o vector de expresión. En el presente contexto, un ejemplo de un huésped recombinante es una célula que produce IL-22RA a partir de un vector de expresión. En contraste, IL-22RA puede producirse por una célula que sea una "fuente natural" de IL-22RA, y que carezca de un vector de expresión. "Transformantes integradores" son células huésped recombinantes, en las cuales ADN heterólogo ha sido integrado en el ADN genómico de las células. Una "proteina de fusión" es una proteina hibrida expresada por una molécula de ácido nucleico que comprende secuencias de nucleótidos de al menos dos genes. Por ejemplo, una proteina de fusión puede comprender al menos parte de un polipéptido IL-22RA fusionada con un polipéptido que se una a una matriz de afinidad. Esta proteina de fusión proporciona un medio para aislar grandes cantidades de IL-22RA usando cromatografia de afinidad. El término "receptor" significa una proteina asociada a células que se unen a una molécula bioactiva llamada un "ligando". Esta interacción media el efecto de ligando de la célula. Los receptores pueden ser unidos a membrana, citosólicos o nucleares; monoméricos (por ejemplo, receptor de hormona estimuladora de tiroides, receptor ß-adrenérgico) o multiméricos (por ejemplo, receptor de PDGF, receptor de hormona de crecimiento, receptor de IL-2, receptor de GM-CSF, receptor de G-CSF, receptor de eritropoyetina y receptor de IL-6) . Los receptores unidos a membrana se caracterizan por una estructura de varios dominios que comprende un dominio de unión a ligando extracelular y un dominio efector intracelular que está implicado típicamente en la traducción de señales. En ciertos receptores unidos a membrana, el dominio de unión a ligando extracelular y el dominio efector intracelular se localizan en los polipéptidos separados que comprenden receptor celular completo. En general, la unión de ligando a receptor da como resultado un cambio en conformación en el receptor que causa una interacción entre el dominio efector y otras moléculas en la célula, lo cual a su vez lleva a una alteración del metabolismo de la célula. Los eventos metabólicos que comúnmente están ligados con las interacciones receptor-ligando incluyen la transcripción génica, fosforilación, desfosforilación, incrementos en la producción de AMP cíclico, movilización de calcio celular, movilización de lipidos de membrana, adhesión celular, hidrólisis de lipidos de inositol e hidrólisis de fosfolipidos. Un "receptor soluble" es un polipéptido receptor que no está unido a una membrana celular. Los receptores solubles son muy comúnmente polipéptidos receptores de unión a ligando que carecen de dominios transmembranares y citoplásmicos, y otro enlace a la membrana de la célula tal como mediante glicofosfoinositol (gpi). Los receptores solubles pueden comprender residuos de aminoácido adicionales, tales como marcadores de afinidad que proporcionan la purificación del polipéptido o proporcionen sitios para la fijación de polipéptidos fosfato, o secuencias de región constante de inmunoglobulina. Muchos receptores de superficie celular tienen contrapartes solubles que ocurren naturalmente que son producidas por proteólisis o son traducidas a partir de moléculas de ARNm empalmadas alternativamente. Los receptores solubles pueden ser monoméricos, homodiméricos, heterodiméricos o multiméricos, con receptores multiméricos generalmente no comprendiendo más de 9 subunidades, de preferencia no comprenden más de 6 subunidades y muy preferiblemente no comprenden más de 3 subunidades. Se dice que los polipéptidos receptores están sustancialmente libres de segmentos de polipéptidos de transmembrana e intracelulares cuando carecen de porciones suficientes de estos segmentos para proporcionar el anclaje a membrana o transducción de señales, respectivamente. Los receptores solubles de receptores de citocina clase I y clase II generalmente comprenden el dominio de unión a citocina extracelular libre de un dominio de transmembrana y dominio intracelular. Por ejemplo, los receptores solubles representativos incluyen receptores solubles para CRF2-4 (a.k.a., IL-10RB) (Genbank No. de registro Z17227) como los mostrados en SEQ ID NO: 44 y SEQ ID NO: 45; un receptor soluble para IL-10RA (Genbank Nos. de registro U00672 y NM_001558) como el mostrado en SEQ ID NO: 46; un receptor soluble para pDIRSl (alias IL-20RB) (Genbank No. de registro AY358305) como el mostrado en SEQ ID NO: 47; y un receptor soluble para IL-22RA (patente de E.U.A. No. 5,965,704) como el mostrado en SEQ ID NO: 3. Está dentro del nivel de alguien capacitado en la técnica delinear qué secuencias de una secuencia de citocinas clase I o clase II conocidas comprenden el dominio de unión a citocinas extracelular libre de un dominio transmembranar y dominio intracelular. Además, alguien de capacidad en la técnica usando el código genético puede determinar fácilmente polinucleótidos que codifiquen para estos polipéptidos receptores solubles. El término "secuencia de señal secretora" significa una secuencia de ADN que codifica para un péptido (un "péptido secretor") que, como un componente de un polipéptido más grande, dirige al polipéptido más grande a través de una via secretora de una célula en la cual es sintetizado. El polipéptido más grande es comúnmente cortado para remover el péptido secretor durante su tránsito a través de la via secretora . Un "polipéptido aislado" es un polipéptido que está esencialmente libre de componentes celulares contaminantes, tales como carbohidratos, lipidos u otras impurezas proteináceas asociadas con el polipéptido en la naturaleza. Típicamente, una preparación de polipéptido aislado contiene el polipéptido en una forma altamente purificada, es decir, al menos aproximadamente 80% puro, al menos aproximadamente 90% puro, al menos alrededor de 95% puro, más de 95% puro tal como 96%, 97% ó 98% o más de 99% puro. Una manera de mostrar que una preparación de proteínas particular contiene un polipéptido aislado es mediante la aparición de una sola banda después de electroforesis en gel de dodeciisulfato de sodio (SDS) -poliacrilamida de la preparación de proteínas y tinción con azul brillante de Coomassie del gel. Sin embargo, el término "aislado" no excluye la presencia del mismo polipéptido en formas físicas alternativas, tales como dimeros o como alternativa formas glicosiladas o derivadas. Los términos "amino-terminal" y "carboxiloterminal" se usan en la presente para indiciar posiciones dentro de polipéptidos. Cuando el contexto lo permita, estos términos se usan con referencia a una secuencia particular o porción de un polipéptido para indicar proximidad o posición relativa. Por ejemplo, cierta secuencia colocada carboxiloterminal a una secuencia de referencia dentro de un polipéptido se localiza cerca del término carboxilo de la secuencia de referencia, pero no necesariamente está en el término carboxilo del polipéptido completo. El término "expresión" se refiere a la biosintesis de un producto génico. Por ejemplo, en el caso de un gen estructural, la expresión incluye la transcripción del gen estructural en ARNm y la traducción e ARNm en uno o más polipéptidos.

El término "variante de empalme" se usa en la presente para indicar formas alternativas de ARN transcrito de un gen. La variación de empalme se origina naturalmente a través del uso de sitios de empalme alternativos dentro de una molécula de ARN transcrita, o menos comúnmente entre moléculas de ARN transcritas por separado, y puede dar como resultado varias moléculas de ARNm transcritas del mismo gen. Las variantes de empalme pueden codificarse para polipéptidos que tengan secuencias de aminoácidos alterada. El término variante de empalme se usa también en la presente para indicar un polipéptido codificado por una variante de empalme de un ARNm transcrito de un gen. Según se usa en la presente, el término "inmunomodulador" incluye citocinas, factores de crecimiento de células madre, linfotoxinas, moléculas co-estimuladoras, factores hematopoyéticos, y similares, y análogos sintéticos de estas moléculas. El término "par complemento/anti-complemento" significa porciones no idénticas que forman un par estable y asociado no covalentemente bajo condiciones adecuadas. Por ejemplo, biotina y avidina (o estreptavidina) son miembros proteotipicos de un par complemento/anti-complemento. Otros pares complemento/anti-complemento ejemplares incluyen pares receptor/ligando, pares anticuerpo/antigeno (o hapteno o epitope) , pares polinucleótido de sentido/antisentido y similares. Cuando la disociación subsecuente del par complemento/anticomplemento es deseable, el par complemento/anticomplemento tiene de preferencia una afinidad de unión de menos de 109 M"1. Un "anticuerpo anti-idiotipo" es un anticuerpo que se une con el dominio de región variable de una inmunoglobulina. En el presente contexto, un anticuerpo anti-idiotipo se une con la región variable de un anticuerpo anti-IL-22RA y de esta manera un anticuerpo anti-idiotipo imita un epitope de IL-22RA. Un "fragmento de anticuerpo" es una porción de un anticuerpo tal como F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, y similares. No obstante su estructura, un fragmento de anticuerpo se une con el mismo antigeno que es reconocido por el anticuerpo intacto. Por ejemplo, un fragmento de anticuerpo monoclonal anti-IL-22RA se une con un epitope de IL-22RA. El término "fragmento de anticuerpo" incluye también un polipéptido sintético o genéticamente manipulado que se une a un antigeno especifico, tal como polipéptidos que consisten en la región variable de cadena ligera, fragmentos "Fv" que consisten en las regiones variables de las cadenas pesada y ligera, moléculas de polipéptidos de cadena individual recombinantes en las cuales las regiones variables ligeras y pesadas se conectan por un enlazador péptido ("proteínas scFv"), y unidades de reconocimiento mínimas que consisten en los residuos de aminoácido que imitan la región variable. Un "anticuerpo quimérico" es una proteina recombinante que contiene los dominios variables y regiones de determinación de complementariedad derivadas de un anticuerpo de roedor, mientras que el resto de la molécula de anticuerpos se deriva de un anticuerpo humano. Los "anticuerpos humanizados" son proteínas recombinantes en las cuales regiones de determinación de complementariedad de murinos de un anticuerpo monoclonal han sido transferidas de cadenas variables pesadas y ligeras de la inmunoglobulina de murino a un dominio variable humano.

La construcción de anticuerpos humanizados para uso terapéutico en humanos que se derivan de anticuerpos de murino, tales como aquellos que se unen a o neutralizan de una proteina humana, está dentro de la capacidad de alguien en la técnica. Según se usa en la presente, un "agente terapéutico" es una molécula o átomo que se conjuga a una porción de anticuerpo para producir un conjugado que es útil para terapia. Ejemplos de agentes terapéuticos incluyen fármacos, toxinas, inmunomoduladores, queladores, compuestos de boro, agentes fotoactivo o colorantes y radioisótopos. Un "marcador detectable" es una molécula o átomo que puede conjugarse a una porción de anticuerpo para producir una molécula útil para el diagnóstico. Ejemplos de marcadores detectables incluyen queladores, agentes fotoactivos, radioisótopos, agentes fluorescentes, iones para magnéticos u otras porciones marcadoras. El término "marcador de afinidad" se usa en la presente para indicar un segmento polipéptido que puede ser unido a un segundo polipéptido para proporcionar la purificación o detección del segundo polipéptido o proporcionar sitios para la fijación del segundo polipéptido a un substrato. En principal, cualquier péptido o proteina para la cual un anticuerpo u otro agente de unión especifico esté disponible se puede usar como un marcador de afinidad. Los marcadores de afinidad incluyen un tracto de poli-histidina, proteina A (Nilsson et al., EMBO J. 4 : 1015 (1985); Nilsson et al., Methods Enzymol . 198: 3 (1991)), glutationa S-transferasa (Sith y Jonson, Gene 67: 31 (1988)), marcador de afinidad Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc . Na ti . Acad . Sci . USA 82 : 1952 (1985)), sustancia P, péptido FLAG (Hopp et al., Biotechnology 6:1204 (1988)), péptido de unión a estreptavidina u otro epitope antigénico o dominio de unión. Véase, en general, Ford et al., Protein Expresión and Purifica tion 2 : 95 (1991). Las moléculas de ADN que codifican para marcadores de afinidad están disponibles de proveedores comerciales (por ejemplo, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) . Un "anticuerpo desnudo" es un anticuerpo completo, a diferencia de un fragmento de anticuerpo, el cual no está conjugado con un agente terapéutico. Los anticuerpos desnudos incluyen anticuerpos tanto policlonales como monoclonales, asi como ciertos anticuerpos recombinantes, tales como anticuerpos quiméricos y humanizados. Según se usa en la presente, el término "componente de anticuerpo" incluye tanto un anticuerpo completo como un fragmento de anticuerpo. Un "inmunoconjugado" es un conjugado de un conjugado de anticuerpo con un agente terapéutico o un marcador detectable. Según se usa en la presente, el término "proteina de fusión de anticuerpo" se refiere a una molécula recombinante que comprende un componente de anticuerpo y un componente polipéptido IL-22RA. Ejemplos de una proteina de fusión a anticuerpo incluyen una proteina que comprende un dominio extracelular IL-22RA, y ya sea un dominio Fe o una región de unión a antigeno. Un "polipéptido objetivo" o un "péptido objetivo" es una secuencia de aminoácidos que comprende un epitope, y que es expresada sobre una célula objetivo, tal como una célula tumoral, o una célula que porte un antigeno de agente infeccioso. Las células T reconocen epitopes péptidos presentados por una molécula de complejo de histocompatibilidad mayor a un polipéptido objetivo o péptido objetivo y típicamente Usan la célula objetivo o reclutan otras células inmunes al sitio de la célula objetivo, de esta manera matando la célula objetivo. Un "péptido antigénico" es un péptido que se unirá a una molécula de complejo de histopatibilidad mayor para formar un complejo MHC-péptido que sea reconocido por una célula T, induciendo asi una respuesta a linfocitos citotóxica después de su presentación a la célula T. Asi, los péptidos antigénicos son capaces de unirse a una molécula de complejo de histocompatibilidad mayor adecuada y de inducir respuestas a células T citotóxicas, tales como lisis de células o la liberación de citocinas especifica contra la célula objetivo que se une o exprese el antigeno. Este péptido antigénico puede ser unido en el contexto de una molécula de complejo de histocompatibilidad mayor clase I o clase II, sobre una célula presentadora de antigenos o sobre una célula objetivo. En eucariontes, la ARN polimerasa II cataliza la transcripción de un gen estructural para producir ARNm. Una molécula de ácido nucleico puede ser diseñada para contener una plantilla de ARN polimerasa II en la cual el transcripto de ARN tenga una secuencia que esté complementaria a aquella de un ARNm especifico. El transcripto de ARN es llamado un "ARN anti-sentido" y una molécula de ácido nucleico que codifica para el ARN anti-sentido es llamado un "gen anti- sentido". Las moléculas de ARN anti-sentido son capaces de unirse a moléculas de ARNm, dando como resultado una inhibición de la traducción del ARNm. Un "oligonucleótido antisentido especifico para IL-22RA" o "oligonucleótido antisentido IL-22RA" es un oligonucléotido que tiene una secuencia (a) capaz de formar un triples estable con una porción del gen IL-22RA o (b) capaz de formar un dúplex estable con una porción de un transcripto de ARNm del gen IL-22RA. Una "ribozima" es una molécula de ácido nucleico que contiene un centro catalítico. El término incluye enzimas de ARN, moléculas de ARN de autoempalme, moléculas de ARN de autocorte y moléculas de ácido nucleico que llevan a cabo estas funciones catalíticas. Una molécula de ácido nucleico que codifica para un ribozima es llamada un "gen de ribozima" . Una "secuencia guia externa" es una molécula de ácido nucleico que dirige la ribozima endógena, ARNasa P, a una especie particular de ARNm intracelular, dando como resultado el corte de ARNm por ARNasa P. Una molécula de ácido nucleico que codifica para una secuencia guia externa es llamada un "gen de secuencia guia externa". El término "gen IL-22RA variante" se refiere a moléculas de ácido nucleico que codifican para un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es una modificación de SEQ ID NO: 3. Estas variantes incluyen polimorfismos que ocurren naturalmente de genes IL-22RA, asi como genes sintéticos que contienen sustituciones de aminoácido conservadoras de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Las formas variantes adicionales de genes IL-22RA son moléculas de ácido nucleico que contienen inserciones o supresiones de las secuencias de nucleótidos descritas en la presente. Un gen IL-22RA variante puede ser identificado, por ejemplo, al determinar si el gen hibrida con una molécula de ácido nucleico que tenga la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N0:1, o su complemento, bajo condiciones severas. Como alternativa, los genes IL-22RA variantes pueden identificarse mediante comparación de secuencias. Dos secuencias de aminoácidos tienen "100% de identidad de secuencia de aminoácidos" si los residuos de aminoácido de las dos secuencias de aminoácidos son los mismos cuando se alinean para correspondencia máxima. De manera similar, dos secuencias de nucleótidos tienen "100% de identidad de secuencia de nucleótidos" si los residuos de nucleótido de las dos secuencias de nucleótidos son los mismos cuando se alinean para correspondencia máxima. Las comparaciones de secuencias pueden llevarse a cabo usando programas de software estándares tales como aquellos incluidos en la suite de cómputo de bioinformática LASERGENE, la cual se produce or DNASTAR (Madison, Wisconsin) . Otros métodos para comparar dos secuencias de nucleótidos o aminoácidos al determinar la alineación óptima se conocen bien por aquellos expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Peruski y Peruski, The Internet and the New Biology: Tools for Genomi c and Molecular Research (ASM Press, Inc. 1997), Wu et al. (eds.), "Information Superhighway and Computer Databases of Nucleic Acids and Proteins", in Methods in Gene Biotechnolgy, páginas 123-151 (CRC Press, Inc. 1997), y Bishop (ed.), Guide to Human Genome Computing, 2a edición (AcademicPress, Inc. 1998)). Los métodos particulares para determinar la identidad de una secuencia se describen abajo. No obstante el método particular usado para identificar un gen IL-22RA variante o polipéptido IR-22RA variante, un gen o polipéptido variante codificado por un gen variante puede ser caracterizado funcionalmente para la capacidad a unirse específicamente a un anticuerpo anti-IL22RA. Un gen IL-22RA variante o polipéptido IL-22RA variante también puede ser caracterizado funcionalmente para la capacidad para unirse a su ligando, IL-22, usando un ensayo biológico bioquímico descrito en la presente. El término "variante alélica" se usa en la presente para indicar cualquiera dos o más formas alternativas de un gen que ocupan el mismo locus cromosómico. La variación alélica se origina naturalmente a través de mutación, y puede ser el resultado de un polimorfismo fenotipico dentro de poblaciones. Las mutaciones génicas pueden ser silenciosas (sin cambio en el polipéptido codificado) o pueden codificar para polipéptidos que tengan secuencias de aminoácido alteradas. El término variante alélica se usa también en la presente para indicar una proteina codificada por una variante alélica de un gen. El término "ortólogo" significa un polipéptido o proteina obtenido de una especie que es la contraparte funcional de un polipéptido o proteina de una especie diferente. Las diferencias de secuencia entre ortólogos son el resultado de la especiación. "Parálogos" son proteínas distintas pero estructuralmente emparentadas hechas por un organismo. Se cree que los parálogos se originan a través de la duplicación génica. Por ejemplo, a-globina, ß-globina y mioglobina son parálogos unos de otros. La presente invención incluye fragmentos funcionales de genes IL-22RA. Dentro del contexto de esta invención, "fragmento funcional" de un gen IL-22RA se refiere a una molécula de ácido nucleico que codifica para una porción de un polipéptido IL-22RA el cual es un dominio descrito en la presente o se une al menos específicamente a un anticuerpo anti-IL-22RA. Debido a la imprecisión de los métodos analíticos estándares, los pesos moleculares y longitudes de polímeros se entiende que son valores aproximados. Cuando este valor se expresa como "aproximadamente" X, o "alrededor de" X, el valor indicado de X se entenderá que es preciso a ± 10%. 3. Producción de polinucleótidos o genes IL-22RA . Las moléculas de ácido nucleico que codifican para el gen IL-22RA humano pueden obtenerse al tamizar una biblioteca de ADNc humano o genómica usando sondas de polinucleótidos con base en SEQ ID NO:l. Estas técnicas son estándares y bien establecidas, y se pueden lograr usando kits de clonación disponibles por proveedores comerciales. Véase, por ejemplo, Ausubel et al. (eds.), Short Protols ín Molecular Biology, 3a edición, John Wiley & Sons 1995; Wu et al., Methods in Gene biotechnology, CRC Press, Inc. 1997; Aviv y Leder, Proc . Na t ' 1 Acad. Sci . USA 69:1408 (1972); Huynh et al., "Construting and Screening ADNc Librarles in ?gtlO and ?gtll", in DNA Cloning: A Pra ctical Approach , vol. 1, glover (ed. ) , página 49 (IRL Press, 1985); Wu (1997) páginas 47-52. Las moléculas de ácido nucleico que codifican para un gen IL-22RA humano también pueden obtenerse usando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores de oligonucleótidos que tengan secuencias de nucleótidos que se basen en las secuencias de nucleótidos del gen IL-22RA o ADNc. Los métodos generales para tamizar bibliotecas con PCR se proporcionan por, por ejemplo Yu et al., "Use of the Polymerase Chain Reaction to Screen Phage Librarles", en Methods in Molecular Biology, vol. 15: PCR Protocols : Curren t Methods and Applica tions, White (ed.), Humana Press, Inc., 1993. Más aún, las técnicas para usar PCR para aislar genes relacionados se describen por, por ejemplo, Preston, "Use of Degenerate Oligonucleotide Primers and The Polymerase Chain Reaction to Clone Gene Family Members", en Methods in Molecular Biology, vol. 15 : PCR Protocols : Curren t Methods and Applica tions, White (ed.), Humana Press, Inc. 1993. Como una alternativa, un gen IL-22RA puede obtenerse al sintetizar moléculas de ácido nucleico usando oligonucleótidos largos mutuamente cebadores y las secuencias de nucleótidos descritas en la presente (véase, por ejemplo, Ausubel (1995)). Las técnicas establecidas usando la reacción en cadena de la polimerasa proporcionan la capacidad de sintetizar moléculas de ADN al menos dos kilobases de largo (Adang et al., Plan t Molec . Biol . . 21:1131 (1993), Bambot et al., PCR Methods and Appli ca tions 2:266 (1993), Dillon et al., "Use of the Polymerase Chain Reaction for the Rapid Construction of Synthetic Genes", en Methods in Molecular Biology, vol. 15: PCR Protocols : Curren t Methods and Appli ca tions, White (ed.), páginas 263-268, (Humana Press, Inc. 1993) y Holowachuk et al., PCR Methods Appl . 4 : 299 (1995)). Para revisiones acerca de sintesis de polinucleótidos, véase, por ejemplo, Glick y Pasternak, Molecular Biotechnology, Principies and Applications of Recombinant DNA (ASM Press 1994), Itakura et al., Annu. Rev. Biochem. 53:323 (1984) y Cumie et al., Proc. Nat' 1 Acad. Sci. USA 87:633 (1990) . 4. Producción de variantes génicas de IL-22RA La presente invención proporciona una variedad de moléculas de ácido nucleico, incluyendo moléculas de ADN y ARN, que codifican para los polipéptidos IL-22RA descritos en la presente. Los expertos en la técnica reconocerán fácilmente que, en vista de la degeneración del código genético, variación de secuencia considerable es posible entre estas moléculas de polinucleótidos. Más aún, la presente invención proporciona también polipéptidos receptores monoméricos, homodiméricos , heterodiméricos y multiméricos solubles y aislados que comprenden al menos una subunidad de receptor IL-22RA que es sustancialmente homologa al polipéptido receptor de SEQ ID NO: 3. Asi, la presente invención contempla moléculas de ácido nucleico que codifican para polipéptido IL-22RA que comprende nucleótidos degenerados de SEQ ID NO: 1, y sus equivalentes de ARN. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La tabla 1 muestra los códigos de una letra para indicar posiciones de nucleótido degeneradas. Las "resoluciones" son los nucleótidos indicados por el código de una letra. "Complemento" indica el código para los nucleótidos complementarios. Por ejemplo, el código Y significa ya sea C o T, y su complemento R significa A o G, A siendo complementario a T y G siendo complementario a C. Tabla 1 Los codones degenerados, que abarcan todos los codones posibles para un aminoácido dado, se muestran en la tabla 2.

Tabla 2 Alguien de capacidad ordinaria en la técnica apreciará que cierta ambigüedad se produce al determinar un codón degenerado, representativo de todos los codones posibles que codifican para un aminoácido. Por ejemplo, el codón degenerado para serina puede, en algunas circunstancias, codificar para arginina (AGR) , y el codón degenerado para arginina (MGN) puede, en algunas circunstancias, codificar para serina (AGY) . Existe una relación similar entre codones que codifican para fenilalanina y leucina. Asi, algunos polinucleótidos abarcados por la secuencia degenerada pueden codificar para secuencias de aminoácidos variantes, pero alguien de capacidad ordinaria en la técnica puede identificar fácilmente estas secuencias variantes mediante referencia a las secuencias de aminoácido de SEQ ID NO: 3. Las secuencias variantes pueden probarse fácilmente para funcionalidad como se describe en la presente. Las diferentes especies pueden exhibir "uso de codón preferente". En general, véase Grantham et al., Nucí . Acis Res . 8:1893 (1980), Haas et al . , Curr . Biol . . 6: 315 (1996), Wain-Hobson et al., Gene 13 : 355 (1981), Grosjean y Fiers, Gene 18:199 (1982), Holm Nuc . Cids . Res . 14 : 3015 (1986), Ikemura, J. Mol . Biol . . 158 : 513 (1982), Sharp y Matassi, Curr . Opin . Genet . Dev. 4 : 851 (1994), Kane, Curr .

Opin . Biotechnol . 6:494 (1995), and Makrides, Microbiol . Rev. 60 : 512 (1996) . Según se usa en la presente, el término "uso de codón preferente" o "codones preferentes" es un término en la técnica que se refiere a codones de traducción dé proteínas que se usan muy frecuentemente en células de cierta especie, favoreciendo asi uno o pocos representativos de los codones posibles que codifiquen para cada aminoácido (véase tabla 2). Por ejemplo, el aminoácido de treonina (Thr) puede ser codificado por ACÁ, ACC, ACG o ACT pero en células de mamífero ACC es el codón más comúnmente usado; en otras especies, por ejemplo, células de insecto, levadura, virus o bacterias, diferentes codones Thr pueden ser preferentes. Los codones que se prefieren por una especie particular pueden ser introducidos en los polinucleótidos de la presente invención mediante una variedad de métodos conocidos en la técnica. La introducción de secuencias de codones preferentes en ADN recombinante puede, por ejemplo, incrementar la producción de la proteina al hacer la traducción dé proteínas más eficiente con un tipo o especie de célula particular. Por lo tanto, las secuencias de codones degenerados descritas en la presente sirven como una plantilla para utilizar la expresión de polinucleótidos en varios tipos de células y especies usados comúnmente en la técnica y descritos en la presente. Las secuencias que contienen codones preferentes pueden probarse y optimizarse para su expresión en varias especies, y probarse para funcionalidad como se describe en la presente.

Un ADNc que codifica para IL-22RA puede ser aislado mediante una variedad de métodos, tales como sondeo con un ADNc humano completo o parcial o con uno o más conjuntos de sondas degeneradas con base en las secuencias descritas. Un ADNc también se puede clonar usando la reacción en cadena de la polimerasa con cebadores diseñados a partir de las secuencias IL-22RA humanas representativas descritas en la presente. Además, una biblioteca de ADNc puede usarse para transformar o transfectar células huésped, y la expresión del ADNc de interés puede detectarse con un anticuerpo contra polipéptido IL-22RA. Aquellos expertos en la técnica reconocerán que la secuencia descrita en SEQ ID NO: 1 representa un solo alelo de IL-22RA humano, y que variación alélica y empalme alternativo se espera que ocurran. Las variantes alélicas de esta secuencia pueden clonarse mediante sondeo de ADNc o bibliotecas genómicas a partir de diferentes individuos de acuerdo con los procedimientos estándares. Las variantes alélicas de las secuencias de nucleótidos descritas en la presente, incluyendo aquellas que contienen mutaciones silenciosas y aquellas en las cuales mutaciones resultan en cambios en la secuencia de aminoácidos, están dentro del alcance de la presente invención, al igual que las proteínas que son variantes alélicas de las secuencias de aminoácidos descritas aqui. Las moléculas de ADNc generadas a partir de moléculas de ARNm empalmadas alternativamente, las cuales conservan las propiedades del polipéptido IL-22RA están incluidas dentro del alcance de la presente invención, al igual que los polipéptidos codificados por estas moléculas de ADNc y ARNm. Las variantes alélicas y variantes de empalme de estas secuencias pueden clonarse al sondear ADNc o bibliotecas genómicas de diferentes individuos o tejidos de acuerdo con procedimientos estándares conocidos en la técnica . Usando los métodos descritos arriba, alguien de capacidad ordinaria en la técnica puede preparar una variedad de polipéptidos que comprendan una subunidad de receptor IL-22RA soluble que sea sustancialmente homologa a SEQ ID NO:l, o que codifique para los aminoácidos de SEQ ID NO: 3, o variantes alélicas de los mismos y conserven las propiedades de unión a ligando del receptor IL-22RA tipo silvestre. Estos polipéptidos también pueden incluir segmentos de polipéptido adicionales como los descritos generalmente en la presente . Dentro de ciertas modalidades de la invención, las moléculas de ácido nucleico aisladas pueden hibridar bajo condiciones severas a moléculas de ácido nucleico que comprendan secuencias de nucleótidos descritas en la presente. Por ejemplo, estas moléculas de ácido nucleico pueden hibridar bajo condiciones severas a moléculas de ácido nucleico que comprendan la secuencia de nucleótidos de SEQ ID N0.1, o a moléculas de ácido nucleico que comprendan una secuencia de nucleótidos complementaria a SEQ ID NO: 1, o fragmentos de las mismas. En general, las condiciones severas se seleccionan para ser aproximadamente 5°C más bajas que el punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia especifica a una potencia iónica definida y pH . La Tm es la temperatura (bajo fuerza iónica definida y pH) a la cual 50% de la secuencia objetivo hibrida a una sonda perfectamente acoplada. Después de la hibridación, las moléculas de ácido nucleico pueden ser lavadas para remover moléculas de ácido nucleico no hibridadas bajo condiciones severas, o bajo condiciones altamente severas. Véase, por ejemplo, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Labora tory Manual , segunda edición (Cold Spring Harbor Press 1989); Ausubel et al., (eds.), Curren t Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Inc. 1987); Berger and Kimmel (eds.) Guide to Molecular Cloning Techniques, (Academic Press, Inc. 1987) y Wetmur, Cri t . Rev. Biochem . Mol . Biol . 26: 221 (1990)). Sofware de análisis de secuencia tal como OLIGO 6.0 (LSR; Long Lake, MN) and Primer Premier 4 . 0 (Premier Biosoft International; Palo Alto, CA) , asi como sitios en Internet, son herramientas disponibles para analizar una secuencia dada y calcular la Tm con base en criterios definidos por el usuario. Está dentro de la capacidad de alguien experto en la técnica la adaptación de hibridación en condiciones de lavado para usarse con un híbrido de polinucleótido particular. La presente invención proporciona también polipéptidos IL-22RA aislados que tienen una identidad de secuencia sustancialmente similar a los polipéptidos de SEQ ID NO: 3, o sus ortólogos. El término "identidad de secuencias sustancialmente similar" se usa en la presente para indicar péptidos que tengan al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, tal como 96%, 97%, 98%, o más de 95% de identidad de secuencia con las secuencias mostradas en SEQ ID NO: 3, o sus ortólogos. Por ejemplo, receptores IL-22RA variantes u ortólogos pueden usarse para generar una respuesta inmune y desarrollar anticuerpos de reacción cruzada para IL-22RA humana. Estos anticuerpos pueden ser humanizados, y modificados como se describe en la presente, y usados terapéuticamente para tratar p soriasis, artritis psoriásica, IBD, colitis, endotoxemia, asi como en otras aplicaciones terapéuticas descritas en la presente. La presente invención contempla también moléculas de ácido nucleico variantes IL-22RA que pueden ser identificadas usando dos criterios: Una determinación de la similitud entre el polipéptido codificado con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, y un ensayo de hibridación. Estas variantes de IL-22RA incluyen moléculas de ácido nucleico (1) que permanecen hibridadas con una molécula de ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID No:l (o su complemento) bajo condiciones de lavado severas, las cuales la severidad de lavado es equivalente a 0.5x -2x SSC con 0.1% de SDS a 55-65°C, y (2) que codifican para un polipéptido que tiene al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95% o más de 95% tal como 96%, 97%, 98% ó 99%, de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. Como alternativa, las variantes de IL-22RA pueden caracterizarse como moléculas de ácido nucleico (1) que permanecen hibridadas con una molécula de ácido nucleico que tiene la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:l (o su complemento) bajo condiciones de lavado altamente severas, en la cual la severidad de lavado es equivalente a O.lx - 0.2x SSC con 0.1% de SDS a 50-65°C, y (2) que codifican para un polipéptido que tiene al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 9% o más de 95%, tal como 96%, 97%, 98% ó 99%, o más, de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. La identidad de secuencia porcentual se determina mediante métodos convencionales. Véase, por ejemplo, Altschul et al., Bull Ma th . Bío . 48 : 603 (1986) y Henikoff and Henikoff, Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 89:10915 (1992). Brevemente, dos secuencias de aminoácidos son alineadas para optimizar las puntuaciones de alineación usando una penalidad de apertura de espacio de 10, una penalidad de extensión de espacio de 1 y la matriz de puntuación "BLOSUM62" Henikoff y Henikoff (ibid) . como se muestra en la tabla 3 (aminoácidos se indican por los códigos de una letra estándares) . La identidad porcentual es después calculada como: ([número total de coincidencias idénticas] / [longitud de la secuencia más larga más el número de espacios introducidos en la secuencia más larga para alinear las dos secuencias]) (100). Tabla 3 A R N D C H K M W V A 4 R -1 5 N -2 0 6 D -2 -2 1 6 C 0 -3 -3 -3 9 Q -1 1 0 0 -3 5 E -1 0 0 2 -4 2 5 G 0 -2 0 -1 -3 -2 -2 H -2 0 1 -1 -3 0 0 -2 8 I -1 -3 -3 -3 -1 -3 -3 -4 -3 4 •4 -1 -2 -3 -4 -3 2 4 K -1 2 0 -1 -3 1 1 -2 -1 -3 -2 M -1 -1 -2 -3 -1 0 -2 -3 -2 1 2 5 F -2 -3 -3 -3 -2 -3 -3 -3 -1 0 0 0 6 P -1 -2 -2 -1 -3 -1 -1 -2 -2 -3 -3 1 -2 -4 7 S 1 -1 1 0 -1 0 0 0 -1 -2 -2 0 -1 -2 1 4 T 0 -1 0 -1 -1 -1 -1 -2 -2 -1 -1 -1 -1 -2 -1 1 -3 -3 -4 -4 -2 -2 -3 -2 -2 -3 -2 -3 -1 1 -4 -3 -2 11 Y -2 -2 -2 -3 -2 -1 -2 -3 2 -1 -1 -2 -1 3 -3 -2 -2 2 7 V 0 -3 -3 -3 -1 -2 -2 -3 -3 3 1 -2 1 -1 -2 -2 0 -3 -1 4 Los expertos en la técnica aprecian que existen muchos algoritmos establecidos disponibles para alinear dos secuencias de aminoácidos. El algoritmo de búsqueda de similitud "FASTA" de Pearson y Lipman es un método de alineación de proteínas adecuado para examinar el nivel de identidad compartido por una secuencia de aminoácidos descrito en la presente y la secuencia de aminoácidos de una variante IL-22RA putativa. El algoritmo FASTA se describe por Pearson y Lipman, Proc . Na t ' 1 Acad. Sci . USA 85:244 (1988), y por Pearson, Meth . Enzymol . 183:63 (1990). Brevemente, FASTA caracteriza primero la similitud de secuencia al identificar regiones compartidas por la secuencia de consulta (por ejemplo, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3) y una secuencia de prueba que tiene ya sea la densidad más alta de densidades (si la variable ktup es 1) o pares de identidades (si ktup=2), sin considerar sustituciones, inserciones o supresiones de aminoácidos conservadoras. Las diez regiones con la densidad más alta de identidades son después recalificadas al comparar la similitud de todos los aminoácidos apareados usando una matriz de sustitución de aminoácidos, y los extremos de las regiones son "recortados" para incluir sólo aquellos residuos que contribuyan a la puntuación más alta. Si existen varias regiones con puntuaciones mayores que el valor de "limite" (calculado por una fórmula predeterminada con base en la longitud de la secuencia y el valor ktup) , entonces las regiones iniciales recortadas son examinadas para determinar si las regiones pueden ser unidas para formar una alineación aproximada con espacios. Finalmente, las regiones de puntuación más alta de las dos secuencias de aminoácidos son alineadas usando la modificación del algoritmo de Needleman-Wunsch-Sellers (Needleman y Wunsch, J. Mol . Biol . . 48:444 (1970); Sellers, SIAM J. Appl . Ma th . 26: 181 (1974)), el cual permite inserciones y supresiones de aminoácidos. Parámetros ilustrativos para el análisis FASTA son: ktup=l, penalidad de apertura de espacio = 10, penalidad de extensión de espacio = 1 y matriz de sustitución = BLOSUM62. Estos parámetros pueden introducirse en un programa FASTA al modificar el archivo de matriz de puntuación ("SMATRIX"), como se explica en el apéndice 2 de Pearson, Meth . Enzymol . 183:63 (1990) . FASTA también se puede usar para determinar la identidad de secuencia de moléculas de ácido nucleico usando una relación como la descrita arriba. Para comparaciones entre secuencias de nucleótidos, el valor ktup puede variar entre uno a seis, de preferencia tres a seis, muy preferiblemente tres, con otros parámetros establecidos como se describió arriba. La presente invención incluye moléculas de ácido nucleico que codifican para un polipéptido que tienen un cambio de aminoácido conservador, en comparación con una secuencia de aminoácidos descrito en la presente. Por ejemplo, las variantes pueden obtenerse que contienen uno o más opciones de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, en las cuales un aminoácido alquilo es sustituido por un aminoácido de alquilo en una secuencia de aminoácidos de IL-22RA, un aminoácido aromático es sustituido por un aminoácido aromático en una secuencia de aminoácidos de IL-22RA, un aminoácido que contiene azufre sustituye a un aminoácido que contiene azufre en una secuencia de aminoácidos de IL-22RA, un aminoácido que contiene hidroxi sustituye un aminoácido que contiene hidroxi en una secuencia de aminoácidos de IL-22RA, un aminoácido ácido sustituye un aminoácido ácido en una secuencia de aminoácidos de IL-22RA, un aminoácido básico sustituye un aminoácido básico en una secuencia de aminoácidos de IL-22RA o un aminoácido monocarboxilico dibásico sustituye un aminoácido monocarboxilico dibásico en una secuencia de aminoácidos de IL-22RA. Entre los aminoácidos comunes, por ejemplo, una "sustitución de aminoácidos conservadora" es ilustrada por una sustitución entre aminoácidos dentro de cada uno de los siguientes grupos: (1) glicina, alanina, valina, leucina, e isoleucina, (2) fenilalanina, tirosina y triptófano, (3) serina y treonina, (4) aspartato y glutamato, (5) glutamina y asparagina y (6) lisina, arginina e histidina. La tabla BLOSUM62 es una matriz de sustituciones de aminoácido derivada de aproximadamente 2,000 alineaciones múltiples locales de segmentos de secuencias de proteínas, que representan regiones altamente conservadas de más de 500 grupos de proteínas emparentadas (Henikoff y Henikoff, Proc. Na t ' l Acad. Sci . USA 89:10915 (1992)). En consecuencia, las frecuencias de sustitución BLOSUM62 pueden usarse para definir sustituciones de aminoácido conservadoras que pueden introducirse en las secuencias de aminoácido de la presente invención. Aunque es posible diseñar sustituciones de aminoácido con base únicamente en propiedades químicas (como se describió arriba) , la frase "sustitución de aminoácidos conservadora" se refiere de preferencia a una sustitución presentada por un valor BLOSUM62 de más de menos 1. Por ejemplo, una sustitución de aminoácido es conservadora si la sustitución se caracteriza por un valor BLOSUM62 de 0,1 , 2 ó 3. De acuerdo con este sistema, las sustituciones de aminoácido conservadoras que se prefieren se caracterizan por un valor BLOSUM62 de al menos 1 (por ejemplo, 1, 2 ó 3), aunque las sustituciones de aminoácido conservadoras que más se prefieren se caracterizan por un valor BLOSUM62 de al menos 2 (por ejemplo, 2 ó 3) . Las variantes particulares de IL-22RA se caracterizan por tener al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95% o más de 95% tal como 96%, 97%, 98% ó 99% o más de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos correspondiente (por ejemplo, SEQ ID NO:3), en donde la variación en la secuencia de aminoácidos se debe a una o más sustituciones de aminoácido conservadoras.

Los cambios de aminoácido conservadores en un gen IL-22RA pueden introducirse, por ejemplo, al sustituir nucleótidos por los nucleótidos descritos en SEQ ID NO: 1. Estas "variantes de aminoácido conservadoras" pueden obtenerse mediante mutagénesis dirigida por oligonucleótidos, mutagénesis de barrido por enlazador, mutagénesis usando la reacción en cadena de la polimerasa y similares (véase Ausubel (1995) y McPherson (ed.), Directed Mutagenesis : A Pra cti cal Approach (IRL Press 1991)). Un polipéptido IL-22RA variante puede identificarse por la capacidad para unirse específicamente a anticuerpos anti-IL-22RA. Las proteínas de la presente invención también pueden comprender residuos de aminoácido que no ocurran naturalmente. Los aminoácidos que no ocurran naturalmente incluyen, sin limitación, trans-3-metilprolina, 2,4-metanoprolina, cis-4-hidroxiprolina, trans-4-hidroxprolina, N-metilglicina, a o-treonina, metiltreonina, hidroxietilcisteina, hidroxietilhomocisteina, nitroglutamina, homoglutamina, ácido pipecólico, tiazolidina, ácido carboxilico, deshidroprolina, 3- y 4-metilprolina, 3,3-dimetilprolina, ter-leucina, norvalina, 2-azafenilalanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalanina y 4-fluorofenilalanina . Se conocen en la técnica varios métodos para incorporar residuos de aminoácido que no ocurran naturalmente en proteínas. Por ejemplo, un sistema in vi tro puede emplearse en el que las mutaciones que no sean de sentido se supriman usando moléculas de ARNt supresoras químicamente aminoaciladas . Los métodos para sintetizar aminoácidos y aminoacilar moléculas de ARNt se conocen en la técnica. La transcripción y traducción de plásmidos que contienen mutaciones que no son de sentido se lleva a cabo típicamente en un sistema libre de células que comprende un extracto de E . coli S30 y enzimas disponibles comercialmente y otros reactivos. Las proteínas se purifican mediante cromatografia. Véase, por ejemplo, Robertson et al., J. Am . Chem . Soc . 113 : 2122 (1991); Ellman et al., Methods Enzymol . 202:301 (1991), Chung et al., Science 259:806 (1993), y Chung et al., Proc . Na t ' 1 Acad . Sci . USA 90:10145 (1993). En un segundo método, la traducción se lleva a cabo en oocitos de Xenopus mediante microinyección de ARNm mutado y moléculas de ARNt supresoras químicamente aminoaciladas (Turcatti et al., J. Bio . Chem . 271:1991 (1996)). En un tercer método, células de E . col i se cultivan en ausencia de un aminoácido natural que va a ser reemplazado (por ejemplo, fenilalanina) y en presencia de los aminoácidos que no ocurren naturalmente deseados (por ejemplo, 2-azafenilalanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalanina o 4-fluorofenilalanina) . El aminoácido que no ocurre naturalmente se incorpora en la proteina en lugar de su contraparte natural. Véase, Koide et al., Biochem . 33:7470 (1994). Los residuos de aminoácido que ocurren naturalmente pueden convertirse en especies que no ocurren naturalmente mediante modificación química in vi tro . Las modificaciones químicas pueden combinarse con mutagénesis dirigida a sitio para expandir más la gama de sustituciones (Wynn y Richards, Protein Sci . 2 : 395 (1993)). Un número limitado de aminoácidos no conservadores, aminoácidos que no son codificados por el código genético, aminoácidos que no ocurren naturalmente y aminoácidos no naturales pueden sustituir los residuos de aminoácido de IL-22RA. Los aminoácidos esenciales en los polipéptidos de la presente invención pueden identificarse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica, tales como mutagénesis dirigida a sitio o mutagénesis por barrido con alanina (Cunningham y Wells, Science 244 : 1081 (1989), Bass et al . , Proc . Na t ' 1 Acad. Sci . USA 88:4498 (1991), Coombs y Corey, "Site-Directed Mutagenesis and Protein Engineering" in Proteins : Analysis and Design, Angeletti (ed.), páginas 259-311 (Academic Press, Inc. 1998)). En la última técnica, mutaciones de alanina individuales se introducen en cada residuo de molécula, y las moléculas mutantes resultantes se prueban para actividad biológica para identificar residuos de aminoácido que sean críticos para la actividad de la molécula. Véase también Hilton et al., J. Biol . . Chem . 271:4699 (1996) . Aunque se puede usar análisis de secuencia para definir más la región de unión a ligando de IL-22RA, los aminoácidos que juegan un papel en la actividad de unión a IL-22RA (tales como la unión de IL-22RA al ligando IL-22, o a un anticuerpo anti-IL22RA) también se pueden determinar mediante el análisis fisico de la estructura, como se determina por técnicas tales como resonancia magnética nuclear, cristalografía, difracción electrónica o marcador por fotoafinidad, en conjunto con la mutación de aminoácidos de sitio de contacto putativos. Véase, por ejemplo, de Vos et al., Science 255 : 306 (1992), Smith et al., J. Mol . Biol . 224 : 899 (1992) y Wlodaver et al., FEBS Let t . 309 : 59 (1992). Pueden hacerse y probarse varias sustituciones de aminoácido usando métodos de mutagénesis y tamizado conocidos, tales como aquellos descritos por Reidhaar-Olson y Sauer ( Science 241 : 53 (1988)) o Bowie y Sauer ( Proc . Na t ' 1 Acad. Sci . USA 86: 2152 (1989)). Brevemente, estos autores describen métodos para aleatorizar simultáneamente dos o más posiciones en un polipéptido, seleccionar un polipéptido funcional y después secuenciar los polipéptidos mutagenizados para determinar el espectro de sustituciones permisibles en cada posición. Otros métodos que pueden usarse incluyen despliegue de fagos (por ejemplo Lowman et al . , Biochem . 30:10832 (1991), Ladner et al., patente de E.U.A. No. ,223,49 Huse; publicación internacional No. WO 92/06204, y mutagénesis dirigida a región (Derbyshire et al., Gene 46: 145 (1986) y Ner et al., DNA 7:127, (1988)). Más aún, IL-22RA marcado con biotina o FITC puede usarse para la clonación por expresión de ligandos de IL-22RA. Las variantes de las secuencias de nucleótidos y polipéptidos de IL-22RA descritas también se pueden generar a través de entremezclado de ADN como la descrita por Stemmer, Na ture 370:389 (1994), Stemmer, Proc . Na t ' 1 Acad . Sci . USA 91:10747 (1994), y la solicitud internacional No. WO 97/20078. Brevemente, se generan moléculas de ADN variantes mediante recombinación homologa in vi tro por fragmentación aleatoria de un ADN progenitor seguida por el reensamble usando PCR, dando como resultado mutaciones por punto introducidas aleatoriamente. Esta técnica puede modificarse usando una familia de moléculas de ADN progenitoras, tales como variantes alélicas o moléculas de ADN de diferentes especies, para introducir variabilidad adicional en el proceso. La selección o tamizado para la actividad deseada, seguida por iteraciones adicionales de mutagénesis y ensayo proporciona una rápida "evolución" de secuencias al seleccionar mutaciones deseables mientras se selecciona simultáneamente contra cambios dañinos. Los métodos de mutagénesis como los descritos en la presente pueden obtenerse con alta emisión, métodos de tamizado automatizados para detectar la actividad de polipéptidos clonados y mutagenizados en células huésped. Las moléculas de ADN mutagenizadas que codifican para polipéptidos biológicamente activos, o polipéptidos que se unen con anticuerpos anti-IL-22RA, pueden recuperarse de las células huésped y secuenciarse rápidamente usando kit moderno. Estos métodos permiten la rápida determinación de la importancia de residuos de aminoácido individuales en un polipéptido de interés, y se pueden aplicar a polipéptidos de estructura desconocida. La presente invención incluye también "fragmentos funcionales" de polipéptidos y moléculas de ácido nucleico IL-22RA que codifican para estos fragmentos funcionales. Análisis de supresión de rutina de moléculas de ácido nucleico pueden llevarse a cabo para obtener fragmentos funcionales de una molécula de ácido nucleico que codifique para un polipéptido IL-22RA. Como una ilustración, moléculas de ADN que tienen la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO : 1 pueden digerirse con nucleasa Bal31 para obtener una serie de supresiones anidadas. Los fragmentos son después insertados en vectores de expresión en marco de lectura adecuado, y los polipéptidos expresados se aislan y prueban para la capacidad de unirse a anticuerpos anti-IL22RA. Una alternativa para la digestión con nucleasa es la de usar mutagénesis dirigida por oligonucleótidos para introducir supresiones o codones de detención para especificar la producción de un fragmento deseado. Como alternativa, fragmentos particulares del gen IL-22RA pueden ser sintetizados usando la reacción en cadena de la polimerasa. Este enfoque general se ejemplifica por estudios sobre el truncado ya sea en uno o en ambos términos de interferones que ha sido resumido por Horisberger y Di Marco, Pharmac . Ther. 66:507 (1995). Más aún, las técnicas estándares para el análisis funcional de proteínas se describen por ejemplo por, Treuter et al., Molec . Gen . Genet . 240 : 113 (1993), Content et al., "Expresión and preliminary deletion analysis of the 42 kDa 2-5A synthetase induced by human interferon", en biologi cal In terferon Sys tems Proceedings of ISIR-TNO Meeting on In terferon Sys tems, Cantell (ed.), páginas 65-72 (Nijhoff 1987), Herschman, "The EGF Receptor", en Control of Animal Cell Prolif ra tion , vol . 1 , Boynton et al., (eds.), páginas 169-199 (Academic Press 1985), cournailleau et al., J. Biol . Chem . 270 : 29210 (1995); Fukunaga et al., J. Biol . Chem . 270:25291 (1995); Yamaguchi et al., Biochem Pharma col 50 : 1295 (1995), y Meisel et al., Plan t Molec . Biol . 30 : (1996). El análisis de las secuencias particulares descritas en la presente proporciona un conjunto de fragmentos funcionales ilustrativos presentados en la tabla 4. Los nucleótidos que codifican para los dominios variantes funcionales de IL-22RA adicionales descritos en la presente, no mostrados en la tabla 4, puede determinarse con referencia a SEQ ID N0:1. Estos fragmentos funcionales incluyen, por ejemplo, las siguientes secuencias de nucleótidos de SEQ ID N0:1: nucleótidos 85-381, 206-717 y 85-717 de SEQ ID NO:l y secuencias de aminoácidos correspondientes codificadas por las mismas como se muestra en SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 3 respectivamente . Tabla 4 La presente invención contempla también fragmentos funcionales de un gen IL-22RA que tienen cambios de aminoácido, en comparación con una secuencia de aminoácidos descrita en la presente. Un gen IL-22RA variante puede identificarse con base en la estructura al determinar el nivel de identidad con secuencias de nucleótidos y aminoácidos descritas, como se describió arriba. Un enfoque alternativo para identificar un gen variante sobre la base de su estructura es determinar si una molécula de ácido nucleico que codifica para un gen IL-22RA variante potencial puede hibridar a una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos, tal como SEQ ID N0:1. La presente invención también incluye el uso de fragmentos funcionales de polipéptidos IL-22RA, epitopes antigénicos, porciones portadoras de epitopes de polipéptidos IL-22RA y moléculas de ácido nucleico que codifican para estos factores funcionales, epitopes antigénicos, porciones portadoras de epitopes de polipéptidos IL-22RA. Esos fragmentos se usan para generar polipéptidos que se usarán en la generación de anticuerpos y moléculas que se unen, bloqueen, inhiban, reduzcan, antagonicen o neutralicen la actividad de IL-22 o tanto IL-20 como IL-22. Un polipéptido IL-22RA "funcional" o fragmento del mismo como el definido en la presente se caracteriza por su capacidad para bloquear, inhibir, antagonizar o neutralizar actividad inflamatoria, proliferativa o diferenciadora de IL-22 o IL-20, por su capacidad para inducir o inhibir funciones celulares especializadas o por su capacidad para unirse específicamente a un anticuerpo anti-IL-22RA, célula, IL-20 o IL-22. Como se describió anteriormente en la presente, IL-22RA se caracteriza por una estructura receptora de citocinas clase II y dominios como los descritos en la presente. Asi, la presente invención contempla además usar proteínas de fusión que abarcan: (a) moléculas de polipéptidos que comprenden uno o más de los dominios descritos arriba y (b) fragmentos funcionales que comprenden uno o más de estos dominios. La otra porción de polipéptido de la proteina de fusión puede contribuirse por otro receptor de citocinas clase II, tal como IL-10R, IL-13R, IL-20RA, IL-20RB, IL-10RB (CRF2-4), IL-22RA2, o por un péptido de señal secretora no nativo y/o no emparentado que facilite la secreción de la proteina de fusión . La presente invención proporciona también fragmentos de polipéptido o péptidos que comprenden una porción portadora de epitope de un polipéptido IL-22RA descrito en la presente. Estos fragmentos o péptidos pueden comprender un "epitope inmunogénico", el cual sea una parte de una proteina que desarrolle una respuesta a anticuerpo cuando la proteina completa se use como un inmunógeno. Los péptidos portadores de epitopes inmunogénicos pueden identificarse usando métodos estándares (véase, por ejemplo, Geysen et al., Proc . Na t ' 1 Acad. Sci . USA 81 : 3998 (1983)). En contraste, fragmentos de polipéptido o péptidos pueden comprender un "epitope antigénico", el cual es una región de una molécula de proteina a la cual se puede unir específicamente u anticuerpo. Ciertos epitopes consisten en un tramo lineal o contiguo de aminoácidos, y la antigenicidad de este epitope no es rota por agentes desnaturalizantes. Se conoce en la técnica que péptidos sintéticos relativamente que pueden imitar epitopes de una proteina se pueden usar para estimular la producción de anticuerpos contra la proteina (véase, por ejemplo, Sutcliffe et al., Science 219 : 660 (1983)). En consecuencia, los péptidos portadores de epitopes antigénicos, péptidos antigénicos, epitopes y polipéptidos de la presente invención son útiles para desarrollar anticuerpos que se unan con los polipéptidos descritos en la presente, asi como para identificar y tamizar anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA que sean neutralizadores, y que puedan unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-22 e IL-20 (individualmente o juntos) . Estos anticuerpos monoclonales neutralizadores de la presente invención pueden unirse a un epitope antigénico IL-22RA. Perfiles de hidrofilicidad de Hopp/Woods pueden usarse para determinar regiones que tengan el potencial antigénico mayor dentro de SEQ ID NO:3 (Hopp et al., Proc. Nati. Acad. Sci. 78: 3824-3828, 1981; Hopp, J. Immun. Meth. 88:1-18, 1986 y Triquier et al., Protein Engineering 11:153-169, 1998). El perfil se basa en una ventana de seis residuos de deslizamiento. Los residuos G, S y T ocultos y los residuos H, Y y W expuestos fueron ignorados. En IL-22RA estas regiones pueden determinarse por alguien de capacidad en la técnica. Además, epitopes antigénicos de IL-22RA dentro de SEQ ID NO: 3 como se predice por una gráfica de Jameson-Wolf, por ejemplo, usando el programa DNASTAR Protean (DNASTAR, Inc., Madison, Wl) sirven como epitopes antigénicos preferidos, y pueden determinarse por alguien de capacidad en la técnica. Estos epitopes antigénicos incluyen (1) residuos de aminoácido 1 (Pro) a 6 (Asp) de SEQ ID NO: 3; (2) residuos de aminoácido 26 (Ser) a 32 (Pro) de SEQ ID NO: 3; (3) residuos de aminoácido 41 (Lys) a 47 (Asp) de SEQ ID NO: 3; (4) un residuo de aminoácidos 41 (Lys) a 62 (Cys) de SEQ ID NO: 3; (6) residuos de aminoácido 84 (Ala) a 97 (Ser) de SEQ ID NO: 3 (7) residuos de aminoácido 103 (Thr) a 108 (Asp) de SEQ ID NO: 3; (8) residuos de aminoácido 130 (Arg) a 135 (His) de SEQ ID NO: 3; (9) residuos de aminoácido 164 (Gly) a 166 (Lys) de SEQ ID NO:3; (10) residuos de aminoácido 175 (Tyr) a 179 (Glu) de SEQ ID NO: 3; (11) residuos de aminoácido 193 (Lys) a 196 (Ala) de SEQ ID NO: 3; (12) residuos de aminoácido 203 (Lys) a 209 (Thr) de SEQ ID NO: 3. Los epitopes adicionales incluyen los siguientes péptidos son generados potencialmente a partir de IL-22RA humano de longitud completa no reducido cortado con CnBr: péptido 6 (SEQ ID NO: 56) , péptido 7 (SEQ ID NO: 57); péptido 8 (SEQ ID NO: 58); péptido 9 (SEQ ID NO: 59); péptido 10 (SEQ ID No: 60); y péptido 11 (SEQ ID NO: 61). Las cisteinas son enlazadas por disulfuro, lo cual da como resultado un posible enlace entre los péptidos 7 (SEQ ID NO:57) y 10 (SEQ ID NO: 60. Específicamente, SEQ ID NO:56 corresponde a los residuos de aminoácido 1 (Pro) a 92 (Met) de SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 57 corresponde a los residuos de aminoácido 93 (Thr) a 120 (Met) de SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:58, que corresponden a residuos de aminoácido 121 (lie) a 160 (Met) de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 59, corresponde a los residuos de aminoácido 161 (His) a 185 (Met) de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 60, corresponde a los residuos de aminoácido 186 (He) a 199 (Met) de SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 61 corresponde a los residuos de aminoácido 200 (Cys) a 211 (Thr) de SEQ ID NO: 3. Además, los residuos de SEQ ID NO:2 (y residuos correspondientes de SEQ ID NO: 3) que son importantes para la unión de receptor a ligando comprende Tyr-60 y Phe-164, Tyr-93, Arg-112, Lys-210 y Glu-211 de SEQ IDNO:2 y (residuos correspondientes de SEQ ID NO:3). Más aún, los residuos primarios de SEQ ID NO: 2 (y residuos correspondientes de SEQ ID NO: 3) que son importantes para dirigir la unión de ligando a receptor comprenden Tyr-60 y Phe-164 de SEQ ID NO: 2 (y residuos correspondientes de SEQ ID NO: 3), y los residuos secundarios comprenden los residuos Tyr-93, Arg-112, Lys-210 y Glu-211 DE SEQ ID NO: 2 y (Y residuos correspondientes de SEQ ID NO: 3). En modalidades preferidas, los epitopes antigénicos a los cuales se unen los anticuerpos neutralizantes de la presente invención podrían contener residuos de SEQ ID NO: 2 (y residuos correspondientes de SEQ ID NO: 3) que sean importantes para la unión de ligando-receptor, por ejemplo, IL-22RA e IL-22 (individualmente o juntos) . Los péptidos y polipéptidos portadores de epitopes antigénicos pueden contener al menos cuatro a diez aminoácidos, al menos diez a 15 aminoácidos o alrededor de 15 a aproximadamente aminoácidos de una secuencia de aminoácidos descrito en la presente. Estos péptidos y polipéptidos portadores de epitopes pueden producirse al fragmentar un polipéptido IL-22RA, o mediante sintesis de péptidos química como se describe en la presente. Además, los epitopes pueden seleccionarse mediante el despliegue de fagos de bibliotecas de péptidos aleatorias (véase, por ejemplo, Lañe y Stephen, Curr. Opin . Immunol . 5268 (1993), y Córtese et al . , Curr Opin . Biotechnol . 7:616 (1996)). Los métodos estándares para identificar epitopes y producir anticuerpos a partir de péptidos pequeños que comprenden un epitope se describen, por ejemplo, por Mole, "Epitope Mapping" en Methods in Molecular Biology, vo . 10, Manson (ed.), páginas 105-116 (The Humana Press, Inc. 1992), Price, "Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies", en Monoclonal Antibodies : Production , Engineering and Clínical Applica tion, Ritter and Ladyman (eds.), páginas 60-84 (Cambridge University Press 1995) y Coligan et al . (eds.), Curren t Protocols in Immunology, páginas 9.3.1-9.3.5 y páginas 9.4.1-9.4.11 (John Wiley & Sons 1997). Para cualquier polipéptido IL-22RA, incluyendo variantes y proteínas de fusión, alguien de capacidad ordinaria en la técnica puede generar fácilmente una secuencia de polinucleótidos degenerada completamente que codifique para es variante usando la información mostrada en las tablas 1 y 2 arriba. Además, los expertos en la técnica pueden usar software estándar para vislumbrar variantes IL-22RA con base en las secuencias de aminoácidos y nucleótidos descritas en la presente. 5. Producción de polipéptidos IL-22RA Los polipéptidos de la presente invención, incluyendo polipéptidos de longitud completa; receptores monoméricos, homodiméricos, heterodiméricos y multiméricos soubles; receptores de longitud completa; fragmentos de receptores (por ejemplo, fragmentos de unión a ligando y epitopes antigénicos), fragmentos funcionales y proteínas de fusión, se pueden producir en células huésped recombinantes siguiendo técnicas convencionales. Para expresar un gen IL-22RA, una molécula de ácido nucleico que codifica para el polipéptido debe enlazarse operablemente a secuencias reguladoras que controlen la expresión transcripcional en un vector de expresión y después, introducirse en una célula huésped. Además de las secuencias reguladoras de transcripción, tales como promotores y potenciadores, los vectores de expresión pueden incluir secuencias reguladoras de traducción y un gen marcador que sea adecuado para la selección de células que porten el vector de expresión. Los vectores de expresión que son adecuados para la producción de una proteina foránea en células eucarióticas contienen típicamente (1) elementos de ADN procarióticos que codifican para un origen de replicación bacteriano y un marcador de resistencia a antibióticos para proporcionar el crecimiento y selección del vector de expresión en un huésped bacteriano; (2) elementos de ADN eucariótico que controlan el inicio de transcripción, tal como un promotor y (3) elementos de ADN que controlan el procesamiento de transcriptos, tales como una secuencia de terminación de transcripción/poliadenilación . Como se describió arriba, los vectores de expresión también pueden incluir secuencias de nucleótidos que codifiquen para una secuencia secretora que dirija al polipéptido heterólogo al interior de la via secretora de una célula huésped. Por ejemplo, un vector de expresión de IL-22RA puede comprender un gen IL-22RA y una secuencia secretora derivada de cualquier gen secretado. Las proteínas IL-22RA pueden ser expresadas en células de mamífero. Ejemplos de células huésped de mamífero adecuadas incluyen células de riñon de mono verde africano (Vero; ATCC CRL 1587), células de riñon embrionario humano (BHK-21, BHK-570; ATCC CRL HEK; ATCC CRL 1573), células de riñon de hámster bebé (BHK-21, BHK-570; ATCC CRL 8544, ATCC CRL 10314), células de riñon caninas (MDCK; ATCC CCL 34), células de ovario de hámster chino (CH0-K1; ATCC CCL61; CHO DG44 (Chasin et al. Som . Cell . Molec . Genet . 12 : 555 , 1986)), células de rata (GH1; ATCC CCL82), células HeLa S3 (ATCC CCL2.2), células de hepatoma de rata (H-4-II-E; ATCC CRL 1548) células renales de mono transformado SV40 (COS-1; ATCC CRL 1650) y células embrionarias de murino (NIH-3T3; ATCC CRL 1658) . Para un huésped mamífero, las señales reguladoras de transcripción y traducción pueden derivarse de fuentes virales mamiferas, por ejemplo, adenovirus, virus de papiloma bovino, virus simiano o similares, en las cuales las secuencias reguladoras estén asociadas con un gen particular que tenga un alto nivel de expresión. Las secuencias reguladoras de transcripción y traducción adecuadas también pueden obtenerse de genes de mamíferos, por ejemplo, genes de actina, colágeno, miosina y metalotioneina . Las secuencias reguladoras de transcripción incluyen una región promotora suficiente para dirigir el inicio de la sintesis de ARN. Los promotores eucarióticos adecuados incluyen el promotor del gen de metalotioneína I de ratón (Hamer et al., J. Molec . Appl . Genet . 1:273 (1982)), el promotor TK de virus del Herpes (McKnight, Cell 31 : 355 (1982)), el promotor temprano SV40 (Benoist et al., Na ture 290:304 (1981)), el promotor del virus del sarcoma de Rous (Gorman et al., Proc . Na t ' 1 Acad. Scí . USA 79:6777 (1982)), el promotor de citomegalovirus (Foecking et al., Gene 45:101(1980)), y el promotor del virus de tumor mamario de ratón (véase, generalmente, Etcheverry, "Expression of Engineered Proteins in Mammalian Cell Culture", en Protein engineering: Principies and Practice, Cleland et al. (eds.), páginas 163-181 (John Wiley & Sons, Inc. 1996)). Como alternativa, un promotor procariótico, tal como el baceriófago T3 promotor de ARN polimerasa, se puede usar para controlar la expresión del gen IL-22RA en células de mamíferos si el promotor procariótico es regulado por un promotor eucariótico (Zhou et al., Mol . Cell . Biol . . 10:4529 (1990) y Kaufman et al., Ncl . Acids . Rs . 19:4485 (1991)). En ciertas modalidades, una secuencia de ADN que codifica para un polipéptido receptor soluble IL-22RA como un fragmento de polipéptido IL-22RA es enlazado operablemente a otros elementos genéticos requeridos para su expresión, que incluyen generalmente un promotor y un terminador de transcripción, dentro de un vector de expresión. El vector también contendrá comúnmente uno o más marcadores seleccionables y uno o más orígenes de replicación, aunque los expertos en la técnica reconocerán que dentro de ciertos sistemas marcadores seleccionables pueden proporcionarse sobre vectores separados, y la replicación del ADN exógeno puede proporcionarse por la integración en el genoma de la célula huésped. La selección de promotores, terminadores, marcadores seleccionables, vectores y otros elementos es un asunto de diseño de rutina dentro del nivel de capacidad ordinaria en la técnica. Muchos de estos elementos se describen en la literatura y están disponibles a través de proveedores comerciales. Varios componentes de un complejo de receptor soluble pueden ser co-transfectados en vectores de expresión individuales o pueden estar contenidos en un solo vector de expresión. Estas técnicas para expresar varios componentes de complejos de proteínas se conocen bien en la técnica. Un vector de expresión puede introducirse en células huésped usando una variedad de técnicas estándares incluyendo transfección con fosfato de calcio, transfección mediada por liposomas, suministro mediado por microproyectiles, electroporación y similares. Las células transfectadas pueden ser seleccionadas y propagadas para proporcionar células huésped recombinantes que comprendan el vector de expresión integrado establemente en el genoma de la célula huésped. Las técnicas para introducir vectores en células eucarióicas y las técnicas para seleccionar estos transformantes estables usando un marcador seleccionable dominante se describen, por ejemplo, por Ausubel (1995) y por Murray (ed. ) , Gene Transfer and Expresión Protocols (Humana Press 1991) . Por ejemplo, un marcador seleccionable adecuado es un gen que proporciona resistencia al antibiótico neomicina. En este caso, la selección se lleva a cabo en presencia de un fármaco tipo neomicina, tal como G-481 o similar. Los sistemas de selección también pueden usarse para incrementar el nivel de expresión del gen de interés, un proceso referido como "amplificación". La amplificación se lleva a cabo al cultivar transfectantes en presencia de un bajo nivel del agente selectivo y luego incrementando la cantidad de agente selectivo para seleccionar células que produzcan altos niveles de los productos de los genes introducidos. Un marcadores seleccionable y amplificable adecuado es dihidrofolato reductasa (DHFR), que confiere resistencia a metotrexato. Otros genes de resistencia a fármacos (por ejemplo, resistencia a higromicina, resistencia a varios fármacos, puromicina acetiltransferasa) también pueden usarse. Como alternativa, marcadores que introduzcan un fenotipo alterado, tal como una proteina fluorescente verde, o proteínas de superficie celular tales como CD4, CD8, MHC clase I, fosfatasa alcalina de placenta se pueden usar para clasificar células transfectadas de células no transfectadas mediante medios tales como clasificación FACS o tecnología de separación con esferas magnéticas. Los polipéptidos IL-22RA también se pueden producir por células de mamífero cultivadas usando un sistema de suministro viral. Los virus ejemplares para este propósito incluyen adenovirus, retrovirus, virus del herpes, virus de la vaccinia y virus adenoasociados (AAV). Los adenovirus, un virus de ADN de doble hebra, es actualmente el mejor vector de transferencia génica estudiado para el suministro de ácido nucleico heterólogo (para una revisión, véase Becker et al., Meth Cellbiol . 43:161(1994) y Douglas y Curiel, Science & Medicine 4:44 (1997)). Las ventajas del sistema de adenovirus incluyen el acumulado de insertos de ADN relativamente grandes, la capacidad de crecer hasta altos títulos, la capacidad de infectar una amplia gama de tipos de células de mamífero y la flexibilidad que permite usarlo con un gran número de vectores disponibles que contienen diferentes promotores. Al suprimir porciones del genoma del adenovirus, pueden recibirse insertos más grandes (de hasta 7 kb) del ADN heterólogo. Estos insertos pueden incorporarse en el ADN viral mediante ligación directa o mediante recombinación homologa con un plásmido co-transfectado. Una opción es la de suprimir el gen El esencial del vector viral, lo cual da como resultado la incapacidad de replicar a menos que el gen El sea provisto por la célula huésped. Las células 293 humanas infectadas con vector de adenovirus (ATCC Nos. CRL-1573, 45504, 45505), por ejemplo, pueden cultivarse como células adherentes o en cultivo de suspensión a una densidad celular relativamente alta para producir cantidades significativas de proteina (véase Garnier et al., Cytotechnol . 15:145 (1994)). IL-22RA también puede ser expresado en otras células eucarióticas superiores, tales como células de ave, fúngicas, insecto, levadura o vegetales. El sistema de baculovirus proporciona un medio eficiente para producir genes IL-22RA clonados en células de insecto. Los vectores de expresión adecuados se basan en el virus de la poliedrosis nuclear múltiple de Autographa cali fornica (AcMNPV) , y contienen promotores bien conocidos tales como el promotor 70 ( hsp) de la proteina de choque térmico de Drosophila , el promotor del gen inmediato-temprano del virus de la poliedrosis nuclear de Autographa cali fornica (ie-1) y el promotor 39K temprano retrasado, promotor plO de baculovirus y el promotor de metalotioneína de Drosophila . Un segundo método para elaborar baculovirus recombinante utiliza un sistema a base de transposones descrito por Luckow (Luckow, et al., J. virol . 67:4566(1993)). Este sistema, el cual utiliza vectores de transferencia, se vende en el kit BAC-to-BAC (Life Technologies, Rockvie, MD) . Este sistema utiliza un fector de transferencia PFASTBAC (Life Technologies) que contiene un transposón Tn7 para mover el ADN que codifica para el polipéptido IL-22RA a un genoma de baculovirus mantenido en E . coli como un plásmido grande llamado un "bácmido". Véase, Hill-Perkins and Posee, J. Gen Virol . 71:971 (1990), Bonning, et al., J. Gen . Virol . 75:1551 (1994) y Chazenbalk y Rapoport, J. Biol . Chem . 270:1543 (1995). Además, vectores de transferencia pueden incluir una fusión en cuadro con ADN que codifique para un marcador epitipe en el término C o N del poipéptido IL-22RA expresado, por ejemplo, un marcador epitope Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Na t ' 1 Acad. Sci . 82 : 1952 (1985)). Usando una técnica conocida en la técnica, un vector de transferencia que contenga un gen IL-22RA se transfiere en E . coli , y se tamiza para bácmidos que contienen un gen lacZ interrumpido indicador de baculovirus recombinante. El ADN del bácmido que contiene el genoma de baculovirus recombinante es luego aislado usando técnicas comunes. El vector PFASTBAC ilustrativo puede modificarse hasta un grado considerable. Por ejemplo, el promotor de poliedrina puede removerse y sustituirse con el promotor de proteina básica de baculovirus (también conocido como el promotor Peor, p 6.9 o MP) el cual es expresado antes en la infección de baculovirus, y ha demostrado ser adecuado para expresar proteínas secretadas (véase, por ejemplo Hill-Perkins y Possee, J. Gen . Virol . 71:971 (1990), Bonning et al., J. Gen . Virol . 75:1551 (1994) y Chazenbalk y Rapoport, J. Biol . Chem . 270 : 1543 (1995). En estas construcciones de vectores de transferencia, se puede usar una versión corta o larga del promotor de proteina básico. Más aún, pueden construirse vectores de transferencia que reemplacen las secuencias de señal secretora de IL-22RA nativas con secuencias de señal secretoras derivadas de proteínas de insecto. Por ejemplo, una secuencia de señal secretora de glucosiltransferasa ecdisteroide (EGT) , melitina de abeja melífera (Invitrogen Corporation; Carlsbad, CA) o gp67 de baculovirus (PharMingen: San Diego, CA) se pueden usar en construcciones para reemplazar la secuencia de señal secretora IL-22RA nativa. El virus o bácmido recombinante usado para transfectar células huésped. Las células huésped de insecto adecuadas incluye lineas de células derivadas de IPLB-Sf-21, una linea de células ováricas de crias de Spodoptera frugiperda , tales como Sf9 (ATCC CRL 1711), Sf21AE y Sf21 (Invitrogen Corporation; San Diego, CA) asi como células Drosophila Schneider-2, y la linea de células HIGH FIVEO (Invitrogen) derivada de Trichopl usia ni (patente de E.U.A. No. 53,00,435). Medios libres de suero disponibles comercialmente pueden usarse para cultivar y mantener las células. Los medios adecuados son Sf900 II™ (Life Technologies) o ESF 921™ (Expresión Systems) para las células Sf9; y Excell0405™ (JRH biosciences, Lenexa, KS) o Express FiveO™ (Life Technologies) para las células T. ni . Cuando se usa un virus recombinante, las células se cultivan típicamente a partir de una densidad de inoculación de alrededor de 2-5 x 105 células hasta una densidad de 1-2 x 106 células tiempo en el cual un grupo viral recombinante se añade a una multiplicidad de infección (MOI) de 0.1 a 10, más típicamente casi 3. Las técnicas establecidas para producir proteínas recombinantes en sistemas de baculovirus son provistas por Bailey et al., "Manipulation of Baculovirus Vectors" en Methods in Molecular Biolgy, vol umen 7 : Gene Trans fer and Expression Protocols , Murray (ed.) páginas 147-168 (The Humana Press, Inc. 1991), por Patel et al., "The baculovirus expression system", en DNA Cloning 2: Expresión Sys tems, 2a edición, Glover et al. (eds.), páginas 205-244 (Oxford University Press 1995), por Ausubel (1995) páginas 16-57, por Richardson (ed.), Ba culovirus Expression Protocol s (The Humana Press, Inc. 1995) y por Lucknow, "Insect Cell Expression Technology", en Protein Engineering: Principies and Pra ctice, Cleland et al. (eds.), páginas 183-218 (John Wiley& Sons, Inc. 1996) . Células fúngicas, incluyendo células de levadura, también se pueden usar para expresar los genes descritos en la presente. Especies de levadura de interés particular en este aspecto son Sa ccharomyces cerevisiae , Pichia pastoris y Pichia methanoli ca . Los promotores adecuados para la expresión en levadura incluyen promotores de GAL1 (galactosa), PGK (fosfoglicerato cinasa), ADH (alcohol deshidrogenasa) , AOXI (alcohol oxidasa) , HIS4 (histidinol deshidrogenasa) y similares. Muchos vectores de clonación de levadura han sido diseñados y están fácilmente disponibles. Estos vectores incluyen los vectores a base de YIp, tales como los vectores YIp5, YRp, tales como vectores YRpl7, vectores YEp tales como los vectores YP13 y YCp tales como YCpl9. Los métodos para transformar células de S . cerevisiae con ADN exógeno y producir polipéptidos recombinantes a partir de los mismos se describen por ejemplo por Kawasaki, patente de E.U.A. No. 4,599,311, Kawasaki et al., patente de E.U.A. No. 4,931,373, Brake, patente de E.U.A. No. 4,870,008, Welch et al., patente de E.U.A. No. 5,037,743 y Murray et al., patente de E.U.A. No. 4,845,075. Las células transformadas se seleccionan mediante fenotipo determinado por el marcador seleccionable, resistencia a fármaco comúnmente o la capacidad para crecer en ausencia de un nutriente particular (por ejemplo, leucina). Un sistema de vector adecuado para usarse en Saccharomyces cerevisiae es el sistema de vector POT1 descrito por Kawasaki et al. (patente de E.U.A. No. 4,931,373), el cual permite que células transformadas se seleccionen por crecimiento en medios que contienen glucosa. Promotores y terminadores adecuados para usarse en levadura incluyen aquellos genes de enzimas glicoliticas (véase, por ejemplo, Kawasaki, patente de E.U.A. No. 4,599,311, Kingsman et al., patente de E.U.A. No. 4,615,974 y Bitter, patente de E.U.A. No. 4,977,092) y genes de alcohol deshidogenasa . Véanse también las patentes de E.U.A. Nos. 4.990,446, 5,063,154, 5,139,936 y ,661,454. Los sistemas de transformación para otras levaduras, incluyendo Hansenula polymorpha , Schizosaccharomyces pombe , Kluyveromyces la ctis , Kluyveromyces fagilis , Ustilagomaydis , Pi chia pastoris , Pichia methanoli ca , Pi chia guillermondii y Candida mal tosa se conocen en la técnica. Véase, por ejemplo, Gleeson et al . , J. Gen . Mi crobiol . 132 : 3459 (1986) y Cregg, patente de E.U.A. No. 4,882,279. Pueden utilizarse células de Aspergill us de acuerdo con los métodos de McKnight et al., patente de E.U.A. No. 4,935,349. Los métodos para transformar Acremoni um chrysogenum se describen por Sumino et al., patente de E.U.A. No. 5,162,228. Los métodos para transformar Neurospora se describen por Lambowitz, patente de E.U.A. No. 4,486,533. Por ejemplo, el uso de Pi chia methanoli ca como un huésped para la producción de proteínas recombinantes se describe por Raymond, patente de E.U.A. No. 5,716,808, Raymond, patente de E.U.A. No. 5,736,383, Raymond et al., Yeast 14:11-23 (1998) y en las publicaciones internacionales Nos. WO 97/17450, WO 97/17451, WO 98/02536 y WO 98/02565. Las moléculas de ADN para usarse en transformar P. methanolica se prepararán comúnmente como plásmidos de doble hebra y circulares los cuales son de preferencia linearizados antes de la transformación. Para la producción de polipéptidos en P. methanolica , el promotor y terminador en el plásmido puede ser aquél de un gen de P. methanoli ca , tal como un gen de utilización de alcohol de P. methanoli ca ( AUG1 o AUG2) . Otros promotores útiles incluyen aquellos útiles de los genes de dihidroacetona sintasa (DHAS), formiato deshidrogenasa (FMD) y catalasa (CAT) . Para facilitar la integración del ADN en el cromosoma del huésped, se prefiere tener el segmento de expresión completo del plásmido flanqueado en ambos extremos por secuencias de ADN huésped. Un marcador seleccionable adecuado para usarse en Pi chia methanolica es el gen ADE2 de P. methanolica , el cual codifica para fosforribosil-5-aminoimidazolcarboxilasa (AIRC; EC 4.1.1.21), y el cual permite que células huésped a e2 crezcan en ausencia de adenina. Para procesos a gran escala e industriales en donde es deseable minimizar el uso de metanol, pueden usarse células huésped en las cuales ambos genes de utilización de metanol (AUG1 y AUG2) sean suprimidos. Para la producción de proteínas secretadas, las células huésped pueden ser deficientes en genes de proteasa vacuolar ( PEP4 y PRB1 ) . Se usa electroporación para facilitar la introducción de un plásmido que contiene ADN que codifica para un polipéptido de interés en células P. methanolica . Las células P. methanolica se pueden transformar mediante electroporación usando un campo eléctrico pulsado que caiga exponencialmente que tenga una potencia de campo de 2.5 a 4.5 kV/cm, de preferencia alrededor de 3.75kV/cm y una constante de tiempo (t) de 1 a 40 milisegundos, muy preferiblemente alrededor de 20 milisegundos. También se pueden introducir vectores de expresión en protoplastos vegetales, tejidos vegetales intactos o células vegetales aisladas. Los métodos para la introducción de vectores de expresión en tejido vegetal incluyen la infección directa o co-cultivo de tejido vegetal con Agroba cteri um tumefa ciens, suministro mediado por microproyectiles, inyección de ADN, electroporación y similares. Véase, por ejemplo, Horsch et al., Science 221 : 1229 (1985), Klein et al., biotechnology 1 0 : 268 (1992) y Miki et al., "Procedres for Introducing Foregn DNA into Plants", en Methods in Plan t Molecular Biology and biotechnology, Glick et al. (eds.), páginas 67-88 (CRC Press, 1993) . Como alternativa, los genes IL-22RA pueden ser expresados en células huésped procarióticas. Los promotores adecuados que se pueden usar para expresar polipéptidos IL-22RA en un huésped procariótico se conocen bien por aquellos expertos en la técnica e incluyen promotores capaces de reconocer las polimerasas T4, T3, Sp6 yT7, los promotores PR y PL de bacteriófago lambda, los promotores trp, recA, choque térmico, lacUV5 , ta c, lpp-la c-Spr, phoA y la cZ de E . coli , promotores de B . subtilis, los promotores de los bacteriófagos de promotores de Ba cill us , Streptomyces, el promotor in t de bacteriófago lambda, el promotor jla de pBR322 y el promotor CAT del gen de cloranfenicol acetiltransferasa. Los promotores procarióticos han sido revisados por Glick, J. Ind. Microbiol . 1 : 211 (1987) , Watson et al., Molecular Biology of the Gene , 4a edición (Benjamín Cummins 1987) y por Ausubel et al. (1995). Los huéspedes procarióticos adecuados incluyen E . coli y Bacillus subtilus . Las cepas adecuadas de E. coli incluyen BL21(DE3), BL21 (DE3) pLysS, BL21 (DE3) pLysE, DH1, DH4I, DH5, DH5I, DH5IF', DH51MCR, DH10B, DH10B/p3, DH11S, C600, HB101, JM101, JM105, JM109, JM110, K38, RR1, Y1088, Y1089, CSH18, ER1451 Yerl647 (véase, por ejemplo, Brown (ed. ) , Molecular Biology Labfax (Academic Press 1991)). Las cepas adecuadas de Ba cill us subtil us incluyen BR151, YB886, MI119, MI120, y B170 (véase, por ejemplo, Hardy, "Bacillus Cloning Methods", en DNA Cloning: A Pra cti cal Approa ch, Glover (ed.) (IRL Press 1985)). Cuando se expresa un polipéptido IL-22RA en bacterias tales como E . coli , el polipéptido puede ser retenido en el citoplasma, típicamente como granulos insolubles, o puede ser dirigido al espacio periplásmico por una secuencia de secreción bacteriana. En el primer caso, las células son Usadas, y los granulos se recuperan y se desnaturalizan usando, por ejemplo, isotiocianato de guanidina o urea. El polipéptido desnaturalizado puede ser después redoblado y dimerizado al diluir el desnaturalizante, tal como mediante diálisis contra una solución de urea y una combinación de glutationa reducida u oxidada, seguida por diálisis contra una solución salina de pH regulado. En el último caso, el polipéptido puede recuperarse del espacio periplásmico en una forma soluble y funcional al romper las células (mediante, por ejemplo, sonificación o choque osmótico) para liberar los contenidos del espacio periplásmico y recuperar la proteina, obviando entonces la necesidad de desnaturalización y redoblamiento. Los métodos para expresar proteínas en huéspedes procarióticos se conocen bien por aquellos de capacidad en la técnica (véase, por ejemplo, Williams et a l . , "Expresión of foreign proteins en E . coli using plasmid vectors and purification of specific polyclonal antibodies", en DNA Cloning 2 : Expression Systems 2a edición , Glover et al . (eds.), página 15 (Oxford University Press 1995), Ward et al.

"Genetic Manipulation and Expression of Antibodies", en Monoclonal An tibodies : Principies and Appli ca tions página 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995) yGeorgiou, "Expression of Proteins in Bacteria", en Protein Engineering: Principies and Pra cti ce, Cleland et al. (eds.) página 101 (John Wiley&Sons, Inc. 1996) ) . Los métodos estándares para producir vectores de expresión en células bacterianas, de levadura, insecto y vegetales son provistos, por ejemplo, por Ausubel (1995) . Los métodos generales para expresar y recuperar proteínas foráneas producidas por un sistema de células de mamífero se proporcionan por, por ejemplo, Etcheverry, "Expression of Engineered Proteins in Mammalian CellCulture", en Protein Engineering: Principies and Practi ce, Cleland et al. (eds.), páginas 163 (Wiley-Liss, Inc. 1996). Las técnicas estándares para recuperar proteínas producidas por un sistema bacteriano se proporcionan por, por ejemplo, Grisshammer et al., "Purification of over-produced proteins from E . coli cells", in DNA Cloning 2 : Expression Systems, 2a edición, Glover et al. (eds.), páginas 59-92 (Oxford University Press 1995). Los métodos establecidos para aislar proteínas recombinantes de un sistema de baculovirus se describen por Richardson (ed. ) , Ba culovirus Expression Potocols (the Humana Press, Inc. 1995). Como una alternativa, los polipéptidos de la presente invención pueden sintetizarse mediante sintesis de fase sólida exclusiva, métodos de fase sólida parciales, condensación de fragmentos o sintesis en solución clásica. Estos métodos de sintesis se conocen bien por aquellos expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Merrifield, J.

Am . Chem . Soc . 85 : 214 9 (1963), Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis", (2a edición), (Pierce Chemical Co. 1984), Bayer y Rapp, Chem . Pept . Prot . 3:3 (1986), Atherton et al., Solid Phase Peptide Synhesis : A Practi cal Approa ch (IRL Press 1989), Fields y Colowick, "Solid-Phase Peptide Synthesis", Methods in Enzymology vol umen 289 (Academic Press 1997) y Lloyd-Williams et al., Chemical Approa ches to the Syn thesis of Peptides adn Proteins (CRC Press, Inc. 1997)). Las variaciones en las estrategias de sintesis química totales, tales como "ligación química nativa" y "ligación de proteínas expresadas" también son estándares (véase, por ejemplo, Dawson et al., Science 266: 116 (1994), Hackeng et al., Proc. ?Jat'l Acad. Sci . USA 94:7845 (1997), Dawson, Methods Enzymol . 287: 34 (1997), Muir et al., Proc . Na t ' 1 Acad . Sci . USA 95:6705 (1998) y Severinov y Muir, J. Biol . . Chem . 273:16205 (1998) ) . Los péptidos y polipéptidos de la presente invención comprenden al menos seis, al menos nueve o al menos 15 residuos de aminoácido contiguos de SEQ ID NO.3. Como una ilustración, los polipéptidos pueden comprender al menos seis, al menos nueve o al menos 15 residuos de aminoácido contiguos de SEQ ID NO: 3. Dentro de ciertas modalidades de la invención, los polipéptidos comprenden 20, 30, 40, 50, 100, o más residuos contiguos de estas secuencias de aminoácidos. Las moléculas de ácido nucleico que codifican para estos péptidos y polipéptidos son útiles como sondas y cebadores para la reacción en cadena de la polimerasa. Más aún, los polipéptidos IL-22RA y fragmentos de los mismos pueden expresarse como monómeros, homodimeros, heterodimeros o multimeros con células eucarióticas superiores. Estas células pueden usarse para producir polipéptidos IL-22RA monoméricos, homodiméricos, heterodiméricos y multiméricos receptores que comprendan al menos un polipéptido IL-22RA ("receptores que comprenden IL-22RA" o "polipéptidos receptores que comprenden IL-22RA") , o se pueden usar como células de ensayo en sistemas de tamizado. Dentro de un aspecto de la presente invención, un polipéptido de la presente invención que comprende el dominio extracelular de IL-22RA se produce por una célula cultivada, y la célula se usa para tamizar para ligandos para el receptor, incluyendo el ligando natural, IL-22, asi como agonistas o antagonistas del ligando natural. Para resumir este enfoque, un ADNc o gen que codifica para el receptor se combina con otros elementos genéticos requeridos para su expresión (por ejemplo, un promotor de transcripción), y el vector de expresión resultante se inserta en una célula huésped. Las células que expresan el ADN producen receptor funcional se selecciona y usan dentro de una variedad de sistemas de tamizado. Cada componente del complejo de receptor monomérico, o homodimérico, heterodimérico y multimérico puede expresarse en la misma célula. Además, los componentes del complejo receptor monomérico, homodimérico, heterodimérico y multimérico también se pueden fusionar a un dominio de transmembrana o a otra porción de fusión a membrana para permitir el ensamble del complejo y tamizar los transfectantes como se describió arriba. Para ensayar los polipéptidos antagonistas de IL-20 e IL-22 y anticuerpos de la presente invención, células de mamífero adecuadas para usarse en expresar receptores que comprenden IL-22RA u otros receptores que se sepa se unan a IL-20 o IL-22 (por ejemplo, células que expresen IL-22RA/CRF2-4; e IL-20RA, IL-20RB, IL-22RA/IL-20RB o IL-20RA/IL-20RB) y transducir una señal mediada por receptor incluyen células que expresan otras subunidades receptoras que pueden formar un complejo funcional con IL-22RA (o IL-20RA) . Estas subunidades pueden incluir aquellas de la familia de receptores de interferón (o de otros receptores de citocinas clase II o clase I, por ejemplo, CRF2-4 (Genbank No. de registro Z17227), IL-10R (Genbank Nos. de registro U00672 y NM_001558), IL-22RA (patente de E.U.A. en copropiedad No. 5,965,704) zcytor7 (IL-20RA) (patente de E.U.A. en copropiedad No. 5,945,511), IL-20RA/IL-20RB (publicación de WIPO No. WO 01/46232) e IL-9R. Se prefiere también usar una célula de la misma especie que la del receptor a ser expresado. Dentro de una modalidad preferida, la célula depende de un factor de crecimiento hematopoyético suministrado exógenamente para su proliferación. Las lineas de células que se prefieren de este tipo son la linea de células TF-1 humanas (número ATCC CRL-2003) y las lineas de células AML-193 (número ATCC CRL-9589) , las cuales son lineas de células leucémicas humanas dependientes de GM-CSF y BaF3 (Palacios y Steinmetz, Cell 41 : 727-734, (1985)) la cual es una linea de células pre-B de murino dependientes de IL-3. Otras lineas de células incluyen células BHK, COS-1 y CHO. Las células huésped adecuadas pueden ser manipuladas para producir las subunidades receptoras necesarias u otro componente celular requerido para la respuesta celular deseada. Este enfoque es adecuado porque lineas de células pueden manipularse para expresar subunidades receptoras de cualquier especie, de esta manera superando limitaciones potenciales que se originan de la especificidad de especies. Los ortólogos especies del ADNc receptor humano pueden clonarse y usarse dentro de lineas de células de la misma especie, tales como un ADNc de ratón en las lineas de células BaF3. Las lineas de células que dependen de un factor de crecimiento hematopoyético, tales como GM-CSF o IL-3, pueden entonces manipularse para hacerse dependientes una de otra citocina que actúen a través del receptor IL-22RA, tales como IL-22. Las células que expresan un receptor funcional se usan dentro de ensayos de tamizado. Una variedad de ensayos adecuados se conocen en la técnica. Estos ensayos se basan en la detección de una respuesta biológica en una célula objetivo. Uno de estos ensayos es un ensayo de proliferación de células. Las células se cultivan en presencia o ausencia de un compuesto de prueba, y la proliferación celular se detecta al, por ejemplo, medir la incorporación de timidina tritiada o por ensayo colorimétrico a base de la degradación metabólica de bromuro de 3- (4 , 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazolio (MTT) (Mosman, J. Immunol . Meth . 65 : 55- 63 , (1983)). Un formato de ensayo alternativo usa células que se manipulan más para expresar un gen reportero. El gen reportero es enlazado a un elemento promotor que responde a la via enlazada a receptor, y el ensayo detecta la activación de transfección del gen reportero. Un elemento promotor que se prefiere a este respecto es un elemento de respuesta a suero, o SER. Véase, por ejemplo, Shaw et al., Cell 56:563-572, (1989: Uno de estos genes reporteros que se prefiere es un gen de luciferasa (de Wet et al., Mol . Cell . Biol . . 7:725, (1987)). La expresión del gen de luciferasa se detecta mediante luminiscencia usando métodos conocidos en la técnica (por ejemplo, Baumgartner et al. J. Biol . . Chem . 269 : 29094 - 29101, (1994); Schenborn y Goiffin, Promega Notes 41 : 11 , 1993) . Kits de ensayo de actividad de luciferasa están disponibles comercialmente de, por ejemplo, Promega Corp.

Madison, Wl . Las lineas de células objetivo de este tipo pueden usarse para tamizar bibliotecas de químicos, medios de cultivo acondicionados con células, caldos fúngicos, muestras de suelo, muestras de agua y similares. Por ejemplo, un banco de muestras de medios acondicionados con células puede ensayarse en una célula objetivo para identificar células que produzcan ligandos. Células positivas se usan después producir una biblioteca de ADNc en un vector de expresión de mamífero, el cual se divide en grupos, transfectados en células huésped, y expresados. Las muestras de medios provenientes de las células transfectadas son después ensayadas, con división subsecuente de grupos, re-transfección, subcultivo y reensayo de células positivas para aislar un ADNc clonado que codifique para ligando. Varias lineas de células que responden a IL-22 se conocen en la técnica o pueden construirse, por ejemplo, la linea de células Baf3/DIRSl/cytoRll (publicación de WIPO No. WO 02/072607) . Más aún, lineas de células que responden a IL-22 varias se conocen (Dumontier et al., J. Immunol 164:1814-1819, 2000; Dumoutier, L. et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. 97: 10144-10149, 2000; Xie MH et al., J. Biol. Chem. 275:31335-31339, 2000; Kotenko SV et al., J. Biol. Chem. 276 : 2725-2732, 2001), asi como aquellas que expresan la subunidad IL-22RA del receptor IL-22. Por ejemplo, las siguientes células responden a IL-22: TK-10 (Xie MH et al., citado arriba) (carcinoma renal humano); SW480 (ATCC No. CCL- 228) (adenocarcinoma de colon humano); HepG2 (ATCC No. HB- 8065) (hepatoma humano); PC12 (ATCC No. CRL-1721) (modelo de células neuronales de murino; feocromocitoma de rata) y MES13 (ATCC No. CRL-1927) (linea de células mesangiales de riñon de murino) . Además, algunas lineas de células expresan IL-22RA (receptor de IL-22) también son candidatas para lineas de células que responden a IL-22: A549 (ATCC No. CCL-185) (carcinoma pulmonar humano); G-361 (ATCC No. CRL-1424) (melanoma humano) y Caki-1 (ATCC No. HTB-46) (carcinoma renal humano) . Además, lineas de células que respondan a IL-22 pueden construirse, por ejemplo, la linea de células Baf3/cytoRll/CRF2-4 descrita en la presente (publicación de WIPO No. WO 02/12345) . Estas células pueden usarse en ensayos para evaluar la funcionalidad de IL-22RA como un antagonista o factor anti-inflamatorio de IL-20 o IL-22. Un enfoque de tamizado adicional provisto por la presente invención incluye el uso de polipéptidos receptores híbridos. Estos polipéptidos híbridos entran en dos clases generales. Dentro de la primera clase, el dominio intracelular de IL-22RA, es unido al dominio de unión a ligando de un segundo receptor. Una segunda clase de polipéptidos receptores híbridos comprende el dominio extracelular (de unión a ligando) de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) con un dominio intracelular de un segundo receptor, de preferencia un receptor de citocinas hematopoyéticas, y un dominio de transmembrana. Los monómeros, homodimeros, heterodimeros y multimeros IL-22RA híbridos de la presente invención receptores de esta segunda clase se expresan a células conocidas como capaces de responder a señales traducidas por el segundo receptor. Juntas, estas dos clases de receptores incluidos hacen posible la identificación de un tipo de célula responsiva para el desarrollo de un ensayo para detectar IL-22 o IL-20. Más aún, estas células pueden usarse en presencia de 1-22 o IL-20 para ensayar los antagonistas receptores solubles de la presente invención en un ensayo tipo competencia. En este ensayo, una reducción en la proliferación o actividad de transducción de señal de IL-22 o IL-20 en presencia de un receptor soluble de la presente invención demuestra actividad antagónica. Más aún, los ensayos de unión a receptor soluble IL-22RA, un ensayo a base de células, también se puede usar para evaluar si un receptor soluble se une, bloquea, inhibe, reduce, antagoniza o neutraliza la actividad de IL-22 o IL-20. 6. Producción de proteínas de fusión y conj ugados IL-22RA Otra clase general de análogos de IL-22RA son variantes que tienen una secuencia de aminoácidos que es una mutación de la secuencia de aminoácidos descrita en la presente. Otra clase general de análogos de IL-22RA es provista por anticuerpos anti-idiotipo, y fragmentos de los mismos, como los descritos abajo. Más aún, anticuerpos recombinantes que comprenden dominios de variable anticuerpo-idiotipo pueden usarse como análogos (véase, por ejemplo, Monfardini et al., Proc . Assoc . Am . Physi cans 1 08 : 420 (1996)). Ya que los dominios variables de los anticuerpos IL-22RA idiotipo imitan IL-22RA, estos dominios pueden proporcionar actividad de unión a IL-22RA. Los métodos para producir anticuerpos catalíticos anti-idiotipicos se conocen por aquellos expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Joron et al., Ann . N. Y Acad. Sci . 672 : 216 (1991), Friboulet et al., Appl . Biochem . Biotechnol . 47:229 (1994), y Avalle et al. Ann . N Y Acad . Sci . 864 : 118 (1998)). Otro enfoque para identificar análogos IL-22RA se proporciona por el uso de bibliotecas combinatorias. Los métodos para construir y tamizar bibliotecas de despliegue de fagos y otras bibliotecas combinatorias son provistos, por ejemplo, por Kay et al., Phage Di splay of Peptides and Proteins (Academic Press 1996), Verdine, patente de E.U.A. No. 5,783,34, Kay et al., patente de E.U.A. No. 5,747,334 y Kauffman et al., patente de E.U.A. No. 5,723,323. Los polipéptidos IL-22RA tienen usos tanto in vivo como in vi tro . Como una ilustración, una forma soluble de IL-22RA puede añadirse a medio de cultivo de células para inhibir los efectos de ligando IL-22RA producido por las células cultivadas. Proteínas de fusión de IL-22RA pueden usarse para expresar IL-22RA en un huésped recombinante, y para aislar IL-22RA producido. Como se describe abajo, las proteínas de fusión IL-22RA particulares también tienen usos en diagnóstico y terapia. Un tipo de proteina de fusión comprende un péptido que guia un polipéptido IL-22RA desde una célula huésped recombinante. Para dirigir un polipéptido IL-22RA al interior de la via secretora de una célula huésped eucariótica, una secuencia de señal secretora (también conocida como un péptido de señal, una secuencia lider, secuencia prepro o secuencia pre) se proporciona en el vector de expresión IL-22RA. Aunque la secuencia de señal secretora puede derivarse de IL-22RA, una secuencia de señal secretora adecuada también se puede derivar de otra proteina secretada o sintetizarse de nuevo. La secuencia de señal secretora está enlazada operablemente a una secuencia de codificación de IL-22RA de tal forma que las dos secuencias sean unidas en el marco de lectura correcto y colocadas para dirigir al polipéptido recién sintetizado al interior de la via secretora de la célula huésped. Las secuencias de señal secretoras se colocan comúnmente 5' a la secuencia de nucleótidos que codifica para el polipéptido de interés, aunque ciertas secuencias de señal secretoras pueden colocarse en cualquier lugar en la secuencia de nucleótidos de interés (véase, por ejemplo, Romanos et al., "Expresión of Cloned Genes in Yeast" en DNA Cloning 2: A Practi cal Approach , 2a edi ción, Glover y Hames (eds.), páginas 123-167 (Oxford University Press 1995) . Aunque la secuencia de señal secretora de IL-22RA u otra proteina producida por células de mamífero (por ejemplo, secuencia de señal activadora de plasminógeno tipo tejido, como la descrita, por ejemplo, en SEQ ID NO: 3, es útil para la expresión de IL-22RA en huéspedes mamíferos recombinantes, se prefiere una secuencia de señal de levadura para la expresión en células de levadura. Ejemplos de secuencias de señal de levadura adecuadas son aquellas derivadas del factor alfa de feromona de copulación de levadura (codificada por el gen MFal ) , invertasa (codificada por el gen SUC2) o fosfatasa acida (codificada por el gen PH05) . Véase, por ejemplo, romanos et al., "Expresión of cloned Genes in yeast", en DNA Cloning 2 : A practical Approach, 2a edi, Glover y Hames (eds.), páginas 123-167 (Oxford University Press 1995). Los polipéptidos receptores solubles IL-22RA pueden prepararse al expresar un ADN truncado que codifique para el dominio extracelular, por ejemplo un polipéptido que contenga SEQ ID NO: 3, o la región correspondiente de un receptor no humano. Se prefiere que los polipéptidos de dominio extracelular se preparen en una forma sustancialmente libre de segmentos de polipéptido de transmembrana e intracelular.

Para dirigir la exportación del dominio receptor de la célula huésped, el ADN receptor se liga a un segundo segmento de ADN que codifica para un péptido secretor, tal como un péptido secretor t-PA. Para facilitar la purificación del dominio receptor secretado, una extensión C-terminal, tal como un marcador de poli-histidina, sustancia P, péptido Flag™ (Hopp et al., Biotechnology 6:1204-1210, (1988), disponible de Eastman Kodak Co., New Haven, CT) u otro polipéptido o proteina para el cual un anticuerpo u otro agente de unión especifico esté disponible, se puede fusionar al polipéptido receptor. Más aún, epitopes antigénicos IL-22RA de los dominios de unión a citocina extracelulares también se prepararon como se describió arriba. En un enfoque alternativo, un dominio extracelular receptor de IL-22RA otro componente receptor de citocina clase I o II puede expresarse en una fusión con regiones constantes de la cadena pesada de inmunoglobulina, típicamente un fragmento Fc, el cual contiene dos dominios de región constantes y una región de pivote pero carece de la región variable (véase, Sledziewski, AZ et al., patentes de E.U.A. Nos. 6,018,026 y 5,750,375). Los polipéptidos IL-22RA solubles de la presente invención incluyen estas fusiones. Una de estas fusiones se muestra en SEQ ID NO: 4. Estas fusiones se secretan típicamente como moléculas multiméricas en las que las porciones Fc son enlazadas por disulfuro unas a otras y dos polipéptidos receptores son dispuestos en proximidad cercana uno al otro. Las fusiones de este tipo pueden usarse para purificar por afinidad el ligando cognado de la solución, como una herramienta de ensayo in vi tro, para bloquear, inhibir o reducir señales in vi tro al titular específicamente ligandos, y como antagonistas in vivo al administrarlos parenteralmente para unirse a ligando circulante y depurarlo de la circulación. Para purificar ligando, una quimera IL-22RA-Ig se añade a una muestra que contiene ligando (por ejemplo, medio de cultivo acondicionado con células o extractos de tejido) bajo condiciones que faciliten la unión receptor-ligando (típicamente temperatura casi fisiológica, pH y potencia iónica) . El complejo quimera-ligando es luego separado por la mezcla usando proteina A, la cual es inmovilizada sobre un soporte sólido (por ejemplo, esferas de resina insolubles). El ligando es después eluido usando técnicas químicas convencionales, tales como con sal o gradiente de pH. En la alternativa, la propia quimera puede unirse a un soporte sólido, con unión y elución llevadas a cabo como arriba. Las quimeras pueden usarse in vivo para regular respuestas inflamatorias incluyendo respuestas en fase aguda tales como amiloide de suero A (SAA) , proteina reactiva C (CRP) y similares. Las quimeras con alta afinidad de unión se administran parenteralmente (por ejemplo, mediante inyección intramuscular, subcutánea o intravenosa). Las moléculas circulantes se unen a ligando y son depuradas de la circulación mediante procesos fisiológicos normales. Para uso en ensayos, las quimeras se unen a un soporte por medio de la región Fc y usan un formato de ELISA. Para ayudar a aislar anti-IL-22RA y moléculas de la presente invención, un sistema de ensayo que usa receptor de unión a ligando (o un anticuerpo, un miembro de un par complemento/anticomplemento) o un fragmento de unión al mismo, y un instrumento biosensor disponible comercialmente (BIAcore, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ) pueden emplearse adecuadamente. Este receptor, anticuerpo, miembro de un par complemento/anti-complemento o fragmento es inmovilizado sobre la superficie de un chip receptor. El uso de este instrumento se describe por Karlsson, J. Immunol . Methods 145:229-40, 1991 y Cunningham y Wells, J. Mol. Biol. 234 : 554-63, 1993. Un receptor, anticuerpo, miembro o fragmento se fija covalentemente, usando química de amina o sulfihidrilo, a fibras de dextrano que están unidas a una película de oro dentro de la célula de flujo. Una muestra de prueba se pasa a través de la celda. Si un ligando, epitope o miembro opuesto del par complemento/anti-complemento está presente en la muestra, se unirá al receptor inmovilizado, anticuerpo o miembro, respectivamente, causando un cambio en el Índice refractivo del medio, el cual se detecta como un cambio en resonancia plasmónica de superficie de la película de oro. Este sistema permite la determinación de velocidades encendidas y apagadas, a partir de las cuales se puede calcular la afinidad unión y la evaluación de la estequiometria de unión. Como alternativa, la unión ligando/receptor puede analizarse usando tecnología SELDI (TM) (Ciphergen, Inc., Palo Alto, CA) . Más aún, tecnología BIACORE, descrita arriba, se puede usar para utilizarse en experimentos de competencia para determinar si anticuerpos monoclonales diferentes se unen al mismo o diferentes epitopes en el polipéptido IL-22RA, y como tal, pueden usarse para ayudar en el mapeo de epitopes de anticuerpos neutralizantes de la presente invención que se unen, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan IL-22 o tanto IL-20 como IL-22. Los polipéptidos receptores de unión a ligando también se pueden usar dentro de otros sistemas de ensayo conocidos en la técnica. Estos sistemas incluyen el análisis Scatchard para determinación de afinidad de unión (véase Scatchard, Ann NY Acad. Sci. 51: 660-72, 1949) y ensayos calorimétricos (Cunningham et al., Science 253:545-48, 1991; Cunningham et al., Science 245:821-25, 1991). La presente invención proporciona además una variedad de otras funciones de polipéptidos y proteínas multiméricas relacionadas que comprenden una o más fusiones de polipéptidos. Por ejemplo, un receptor de IL-22RA soluble se puede preparar como una fusión o una proteina de dimerización como la descrita en las patentes de E.U.A. Nos. 5,155,027 y5, 567, 584. Las proteínas de dimerización que se prefieren a este respecto incluyen dominios de la región constante de inmunoglobulina, por ejemplo, IgG?l, y la cadena ligera K humana. Las fusiones IL-22RA solubles en inmunoglobulina pueden expresarse en células genéticamente manipuladas para producir una variedad de análogos del receptor IL-22RA multimérico. Los dominios auxiliares pueden fusionarse al receptor IL-22RA soluble para dirigirlos a células, tejidos o macromoléculas específicos (por ejemplo, colágeno, o células que expresen los ligandos IL-22RA IL-22 o IL-20) . Un polipéptido IL-22RA puede fusionarse a dos o más porciones, tales como un marcador de afinidad para la purificación y un dominio de dirección. Las fusiones de polipéptidos también pueden comprender uno o más sitios de corte, particularmente entre dominios. Véase Tuan et al., Conective Tissue Research 34: 1-9, 1996. En células bacterianas, es deseable expresar una proteina heteróloga como una proteina de fusión para reducir la toxicidad, incrementar la estabilidad y para recuperar la expresión de la proteina expresada. Por ejemplo, IL-22RA puede ser expresada como una proteina de fusión que comprenda un polipéptido de glutationa S-transferasa . Las proteínas de fusión a glutationa S-transferasas son típicamente solubles, y fácilmente purificables en lisados de E . coli sobre columnas de glutationa inmovilizadas. En enfoques similares, una proteina de fusión IL-22RA que comprende un polipéptido de proteina de unión a maltosa se pueden aislar con una columna de resina de amilosa, mientras que una proteina de fusión que comprenda el extremo C-terminal de un gen de proteina A truncado puede purificarse usando IgG-sefarosa . Las técnicas establecidas para expresar un polipéptido heterólogo como una proteina de fusión en una célula bacteriana se describen, por ejemplo, por Williams et al., "Expession of Foreign Proteins in E. coli Using Plasmid Vectors and Purification of Specific Polyclonal Antibodies", en DNA Cloning 2 : A Practical Approach, 2a edición, Glover and Hames (Eds.), páginas 15-58 (Oxford University Press 1995). Además, están disponibles sistemas de expresión comercialmente. Por ejemplo, el sistema de purificación de proteínas PINPOINT Xa (Promega Corporation; Madison, Wl) proporciona un método para aislar una proteina de fusión que comprenda un polipéptido que se hace biotilinado durante la expresión c una resina que comprende avidina. Los marcadores péptidos que son útiles para aislar polipéptidos heterólogos expresados ya sea por células procarióticas o eucarióticas incluyen marcadores de polihistidina (los cuales tienen una afinidad para resina quelante de níquel) , marcadores c-myc, proteina de unión a calmodulina (aislada mediante cromatografia de afinidad a calmodulina) , sustancia P, el marcador RYIRS (el cual se une a anticuerpos anti-RYIRS) , el marcador Glu-Glu y el marcador FLAG (el cual se une a anticuerpos anti-FLAG) . Véase, por ejemplo, Luo et al., Arch . Biochem . Biophys . 329 : 215 (1996), Morganti et al., Biotechnol . Appl . Biochem . 23:67 (1996) y Zheng et al. Gene 186: 55 (1997). Las moléculas de ácido nucleico que codifican para estos marcadores péptidos están disponibles, por ejemplo, de Sigma-Aldrich Corporation (St. Louis, MO) . Otra forma de proteina de fusión comprende un polipéptido IL-22RA y una región constante de la cadena pesada de inmunoglobulina, típicamente un fragmento Fc, el cual contiene dos o tres dominios de región constante y una región de pivote pero carece de la región variable. Como una ilustración, Chang et al., patente de E.U.A. No. 5,723,125, describen una proteina de fusión que comprende un fragmento Fc de interferón humano y de inmunoglobulina humana. La terminal C del interferón es enlazada a la terminal N del fragmento Fc por una porción enlazadora de péptidos. Un ejemplo de un enlazador de péptidos es un péptido que comprende principalmente una secuencia inerte de células T, la cual es inmunológicamente inerte. Un enlazador de péptidos ejemplar tiene la secuencia de aminoácidos: GGSGG SGGGG SGGGG S (SEQ ID NO: 9). En esta proteina de fusión, una porción Fc ilustrativa es una cadena ?4 humana, la cual es estable en solución y tiene muy poca o ninguna actividad activadora de complemento. En consecuencia, la presente invención contempla una proteina de fusión IL-22RA que comprende una porción IL-22RA y un fragmento Fc humano, en donde el término C de la porción IL-22RA es unido al término N del fragmento Fc por medio de un enlazador de péptidos, tal como un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4. La porción IL-22RA puede ser una molécula IL-22RA o un fragmento de la misma. Por ejemplo, una proteina de fusión puede comprender el aminoácido de SEQ ID NO: 3 y un fragmento Fc (por ejemplo, un fragmento Fc humano) (SEQ ID NO: 4) . En otra variación, una proteina de fusión IL-22RA comprende una secuencia de IgG, una porción IL-22RA unida covalentemente al extremo amino terminal de la secuencia de IgG, y un péptido de señal que es unido covalentemente a la terminal amino de la porción de IL-22RA, en donde la secuencia de IgG consiste en los siguientes elementos en el siguiente orden: una región de pivote, un dominio CH2 y un dominio CH3. En consecuencia, la secuencia IgG carece de un dominio CHi. La porción IL-22RA despliega una actividad IL-22RA, como la descrita en la presente, tal como la capacidad para unirse a un ligando IL-22RA. Este enfoque general para producir proteínas de fusión que comprenden porciones tanto de anticuerpo como no de anticuerpo ha sido descrito por LaRochelle et al., EP 742830 (WO 95/21258). Pueden usarse proteínas de fusión que comprendan una porción IL-22RA y una porción Fc, por ejemplo, como una herramienta de ensayo in vi tro . Por ejemplo, la presencia de un ligando IL-22RA en una muestra biológica puede detectarse usando una proteina de fusión IL-22RA-inmunoglobulina, en la cual la porción de IL-22RA se use para unirse al ligando, y una macromolécula, tal como Proteina A o anticuerpo anti-Fc, se une para unir la proteina de fusión a un soporte sólido. Estos sistemas pueden usarse para identificar agonistas y antagonistas que interfieran con la unión de un ligando IL-22RA, por ejemplo, IL-22 o tanto IL-20 como IL-22 a su receptor. Otros ejemplos de proteínas de fusión a anticuerpos incluyen tanto péptidos que comprenden un dominio de unión a antigeno y un fragmento IL-22RA que contiene un dominio extracelular de IL-22RA. Estas moléculas pueden usarse para dirigir tejidos particulares para el beneficio de actividad de unión IL-22RA. La presente invención proporciona además una variedad de otras fusiones de polipéptidos. Por ejemplo, parte o todo de un dominio que confiera una función biológica puede cambiarse ente IL-22RA de la presente invención con los dominios funcionalmente equivalentes de otro miembro de la familia de receptores de citocina. Las fusiones de polipéptidos pueden expresarse en células huésped recombinantes para producir una variedad de análogos de fusión a IL-22RA. Un polipéptido IL-22RA puede fusionarse a dos o más porciones o dominios, tales como un marcador de afinidad para purificación y un dominio de dirección. Las fusiones de polipéptidos pueden comprender también uno o más sitios de corte, particularmente entre dominios. Véase, por ejemplo, Tuan et al., Connective Tissue Research 34 : 1 (1996). Las proteínas de fusión pueden prepararse mediante métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica al preparar cada componente de la proteina de fusión y conjugarlo químicamente. Como alternativa, un polinucleótido que codifique para ambos componentes de la proteina de fusión en el marco de lectura adecuado puede generarse usando técnicas conocidas y expresarse mediante los métodos descritos en la presente. Los métodos generales para corte enzimático y químico de proteínas de fusión se describen, por ejemplo, por Ausubel (1995) páginas 16-19 a 16-25. Los dominios de unión a IL-22RA pueden caracterizarse más mediante análisis fisico de estructura, como se determina por técnicas tales como resonancia magnética nuclear, cristalografía, difracción electrónica o marcación por fotoafinidad, en conjunto con la mutación de aminoácidos de sitio de contacto putativos de los agonistas de ligando IL-22RA. Véase, por ejemplo, de Vos et al., Science 255 : 306 (1992), Smith et al., J. Mol . Bio . 224 : 899 (1992) y Wlodaver et al., FEBS Lett . 309 : 59 (1992). La presente invención contempla también composiciones de IL-22RA químicamente modificadas, en las cuales un polipéptido IL-22RA es enlazado a un polímero. Los polipéptidos IL-22RA ilustrativos son polipéptidos solubles que carecen de un dominio de transmembrana funcional, tales como un polipéptido que consiste en los residuos de aminoácido de SEQ ID NO: 3. Típicamente, el polímero es hidrosoluble de tal forma que el conjugado IL-22RA no se precipite en un ambiente acuoso, tal como un ambiente fisiológico. Un ejemplo de un polímero adecuado es uno que ha sido modificado para tener un solo grupo reactivo, tal como un éster activo para acilación, o un aldehido para alquilación. De esta forma, el grado de polimerización puede ser controlado. Un ejemplo de aldehido reactivo es propionaldehido de polietilenglicol, o derivados mono-alcoxi de C1-C10 o ariloxi de los mismos, (véase, por ejemplo, Harris et al . , patente de E.U.A. No. 5,252,714). El polímero puede ser ramificado o no ramificado. Además, se puede usar una mezcla de polímeros para producir conjugados IL-22RA. Los conjugados de IL-22RA usados para terapia pueden comprender porciones de polímero hidrosoluble farmacéuticamente aceptables. Los polímeros hidrosolubles adecuados incluyen polietilenglicol (PEG), monometoxi-PEG, mono-PEG-alcoxi de C1-C10, ariloxi-PEG, poli- (N-vinilpirrolidona) PEG, monometoxi tresil PEG, propionaldehido de PEG, bis-succinimidil carbonato de PEG, homopolimeros de propilenglicol, un copolimero de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polioles polioxietilados (por ejemplo, glicerol) , alcohol polivinilico, dextrano, celulosa u otros polímeros a base de carbohidratos. El PEG adecuado puede tener un peso molecular de alrededor de 600 a aproximadamente 60,000, incluyendo, por ejemplo, 5,000, 12,000, 20,000 y 25,000. Un conjugado IL-22RA también puede comprender una mezcla de estos polímeros hidrosolubles. Un ejemplo de un conjugado de IL-22RA comprende una porción de IL-22RA y una porción de óxido de polialquilo unida al término N de la porción de IL-22RA. PEG es un óxido de polialquilo adecuado. Como una ilustración, IL-22RA puede modificarse con PEG, un proceso conocido como "PEGilación". La PEGilación de IL-22RA puede llevarse a cabo mediante cualquiera de las reacciones de PEGilación conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, EP 0 154 316, Delgado et al . , Cri tical Reviews in Therapeuti c Drug Carrier Sys tems 9:249 (1992), Duncan y Spreafico, Clin . Pharmacokinet . 27:290 (1994) y Francis et al . , In t . J. Hema tol . 68:1 (1998)). Por ejemplo, la PEGilación puede llevarse a cabo mediante una reacción de acilación o mediante una reacción de alquilación con una molécula de polietilenglicol reactiva. En un enfoque alternativo, conjugados IL-22RA se forman al condensar un PEG activado, en el cual un grupo hidroxi o amino terminal de PEG ha sido reemplazado por un enlazador activado (véase, por ejemplo, Karasiewicz et al . , patente de E.U.A. No. 5,382, 657) . La PEGilación mediante acilación típicamente requiere hacer reaccionar un derivado de éster activo de PEG con un polipéptido IL-22RA. Un ejemplo de un éster de PEG activado es PEG esterificado a iV-hidroxisuccinimida . Según se usa en la presente, el término "acilación" incluye los siguientes tipos de enlaces entre IL-22RA y un polímero hidrosoluble: amida, carbamato, uretano y similares. Los métodos para preparar IL-22RA PEGilado mediante acilación típicamente comprenderán las etapas de (a) hacer reaccionar un polipéptido IL-22RA con PEG (tal como un éster reactivo de un derivado aldehido de PEG) bajo condiciones con las cuales uno o más grupos PEG se unan a IL-22RA y (b) obtener los productos de reacción. Generalmente, las condiciones de reacción óptimas para reacciones de acilación se determinará con base en parámetros y resultados deseados conocidos. Por ejemplo, entre mayor sea la relación de PEG:IL-22RA, mayor será el porcentaje de producto IL-22RA poliPEGilado . El producto de la PEGilación por acilación es típicamente un producto IL-22RA poliPEGilado, en donde los grupos e-amino de lisina son PEGilados por medio de un grupo de enlace acilo. Un ejemplo de un enlace conector es una amida. Típicamente, el IL-22RA resultante será al menos 95% mono-, di- o tri-PEGilado, aunque algunas especies con grados más altos de PEGilación pueden formarse dependiendo de las condiciones de reacción. Las especies PEGiladas pueden separarse de polipéptidos IL-22RA no conjugados usando métodos de purificación estándares, tales como diálisis, ultrafiltración, cromatografia de intercambio iónico, cromatografia de afinidad y similares. La PEGilación por alquilación generalmente implica hacer reaccionar un derivado aldehido terminal de PEG con IL-22RA en presencia de un agente reductor. Los grupos PEG pueden unirse al polipéptido mediante un grupo -CH2-NH. Más aún, los anticuerpos anti-IL-22RA o fragmentos de anticuerpo de la presente invención pueden ser PEGilados usando métodos conocidos en la técnica y descritos en la presente . La derivación mediante alquilación reductora para producir un producto monoPEGilado toma ventaja de la reactividad diferencial de tipos diferentes de grupos amino primarios disponibles para derivación. Típicamente, la reacción se lleva a cabo a un pH que permita que se tome ventaja de las diferencias de pKa entre los grupos e-amino de los residuos de lisina y el grupo a-amino del residuo N-terminal de la proteina. Mediante esta derivación selectiva, se controla la fijación de un polímero hidrosoluble que contiene un grupo reactivo tal como un aldehido a una proteina. La conjugación con el polímero ocurre predominantemente en el término N de la proteina sin modificación significativa de otros grupos reactivos tales como los grupos amino de cadena lateral de lisina. La presente invención proporciona una preparación sustancialmente homogénea de conjugados de monopolimero IL-22RA. La alquilación reductora para producir una población sustancialmente homogénea de molécula conjugada de IL-22RA monopolimérica pueden comprender las etapas de: (a) hacer reaccionar un polipéptido IL-22RA con un PEG reactivo bajo condiciones de alquilación reductora a un pH adecuado para permitir la modificación selectiva del grupo a-amino en el término amino del IL-22RA y (b) obtener los productos de reacción. El agente reductor usado para la alquilación reductora debe ser estable en solución acuosa y capaz de reducir sólo la base de Schiff formada en el proceso inicial de alquilación reductora. Los agentes reductores ilustrativos incluyen borohidruro de sodio, cianoborohiduro de sodio, dimetilamina borano, trimetilamina borano y piridina borano. Para una población sustancialmente homogénea de conjugados de IL-22RA monopoliméricos, las condiciones de reacción de alquilación reductora son aquellas que permitan la fijación selectiva de la porción de polímero hidrosoluble al término N de IL-22RA. Estas condiciones de reacción generalmente proporcionan diferencias en pKa entre los grupos amino de lisina y el grupo a-amino en el término N. El pH también afecta la relación de polímero a proteina que se usará. En general, si el pH es más bajo, un mayor exceso de polímero a proteina se deseará ya que entre menos reactivo sea el grupo a-amino N terminal, mayor polímero se requerirá para lograr condiciones óptimas. Si el pH es más alto, el polímero : IL-22RA no tiene que ser tan grande ya que están disponibles más grupos reactivos. Típicamente, el pH estará dentro de la escala de 3 a 9, o 3 a 6. Este método puede emplearse para hacer conjugados receptores solubles homodiméricos, heterodiméricos o multidiméricos que comprendan IL-22RA. Otro factor a considerar es el peso molecular del polímero hidrosoluble. Generalmente, entre más alto el peso molecular del polímero, menor el número de moléculas de polímero que pueden ser unidas a la proteina. Para reacciones de PEGilación, el peso molecular típico es de aproximadamente 2 kDa a alrededor de 100 kDa, aproximadamente 5 kDa a aproximadamente 50 kDa o alrededor de 12 kDa a aproximadamente 25 kDa. La relación molar de polímero hidrosoluble a IL-22RA generalmente está en la escala de 1:1 a 100:1. Típicamente, la relación molar de polímero hidrosoluble a IL-22RA será de 1:1 a 20:1 para poliPEGilación y de 1:1 a 5:1 para monoPEGilación . Los métodos generales para producir conjugados que comprenden un polipéptido y porciones de polímeros hidrosolubles se conocen en la técnica. Véase, por ejemplo, Karasiewicz et al . , patente de E.U.A. No. 5,382,657, Greenwald et al . , patente de E.U.A. No. 5,738,846, Nieforth et al . , Clin . Pharmacol . Ther . 59:636 (1996), MOnkarsh et al . , Anal . Biochem . 247:434 (1997)). Este método puede emplearse para hacer conjugados receptores solubles homodiméricos, heterodiméricos o multidiméricos que comprendan IL-22RA. La presente invención contempla composiciones que comprenden un péptido o polipéptido, tal como un receptor o anticuerpo soluble descrito en la presente. Estas composiciones pueden comprender además un vehículo. El vehículo puede ser un vehículo orgánico o inorgánico convencional. Ejemplos de vehículos incluyen agua, solución reguladora de pH, alcohol, propilenglicol, macrogol, aceite de ajonjolí, aceite de maiz y similares. 7. Aislamiento de polipéptidos IL-22RA Los polipéptidos de la presente invención pueden purificarse hasta al menos aproximadamente 80% de pureza, hasta por lo menos alrededor de 90% de pureza, hasta por lo menos aproximadamente 95% de pureza o más de 95%, tal como 96%, 97%, 98% o más de 99% de pureza con respecto a macromoléculas contaminantes, particularmente otras proteínas y ácidos nucleicos, y libres de agentes infecciosos y pirógenos. Los polipéptidos de la presente invención también se pueden purificar hasta un estado farmacéuticamente puro, el cual sea de más de 99.9% puro. En ciertas preparaciones, el polipéptido purificado está sustancialmente libre de otros polipéptidos, particularmente otros polipéptidos de origen animal . El fracionado y/o métodos de purificación convencionales pueden usarse para obtener preparaciones de IL-22RA purificados de fuentes naturales (por ejemplo, fuentes de tejido humano), polipéptidos IL-22RA sintéticos y polipéptidos IL-22RA recombinantes y polipéptidos IL-22RA de fusión purificados a partir de células huésped recombinantes. En general, la precipitación con sulfato de amonio y la extracción con ácido o caotropo pueden usarse para el fraccionado de las muestras. Las etapas de purificación ejemplares pueden incluir cromatografia de hidroxiapatita, extrusión de tamaño, FPLC y cromatografia de líquidos de alto rendimiento de fase inversa. Los medios cromatográficos adecuados incluyen dextranos derivados, azarosa, celulosa, poliacrilamida, sílices especializadas y similares. Los derivados de PEÍ, DEAE, QAE y Q son adecuados. Los medios cromatográficos ejemplares incluyen aquellos medios derivados con grupos fenilo, butilo u octilo, tales como Phenyl-Sepharose F F (Pharmacia), Toyopearl butyl 650 (Toso Haas, Montgomeryville, PA) , Octyl-Sepharose (Pharmacia) y similares; o resinas poliacrilicas, tal como Amberchrom CG 71 (Toso Haas) y similares. Los soportes sólidos adecuados incluyen esferas de vidrio, resinas a base de silice, resinas celulósicas, esferas de agarosa, esferas de agarosa entrelazadas, esferas de poliestireno, resinas de poliacrilamida entrelazadas y similares que son insolubles bajo las condiciones en las cuales van a ser usadas. Estos soportes pueden modificarse con grupos reactivos que permitan la fijación de proteínas por grupos amino, grupos carboxilo, grupos sulfhidrilo, grupos hidroxilo y/o porciones de carbohidrato . Ejemplos de químicas de acoplamiento incluyen activación con bromuro de cianógeno, activación con N-hidroxisuccinimida, activación con epóxidos, activación con sulfhidrilo, activación con hidrazida y derivados carboxilo y amino para químicas de acoplamiento a carbodiimida. Estos y otros medios sólidos se conocen bien y se usan ampliamente en la técnica, y están disponibles de proveedores comerciales. La selección de un método particular para el aislamiento y purificación de polipéptidos es un asunto de diseño de rutina y se determina en parte por las propiedades del soporte seleccionado. Véase, por ejemplo, Affini ty Chroma tography: Principies & Methods (Pharmacia LKB Biotechnology 1988) y Doonan, Protein Purifi ca tion Protocols (The Humana Press 1996) . Variaciones adicionales en el aislamiento y purificación de IL-22RA pueden vislumbrarse por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, anticuerpos anti-IL-22RA, obtenidos como se describe abajo, se pueden usar para aislar grandes cantidades de proteina mediante purificación por inmunoafinidad. Los polipéptidos de la presente invención también se pueden aislar mediante la explotación de propiedades particulares. Por ejemplo, se puede usar la cromatografia de adsorción iónica metálica inmovilizada (IMAC, por sus siglas en inglés) para purificar proteínas ricas en histidina, incluyendo aquellas que comprendan marcadores de polihistidina. Brevemente, un gel se carga primero con iones metálicos divalentes para formar un quelato (Sulkowski, Trends in Biochem. 3: 1 (1985)). Las proteínas ricas en histidina serán adsorbidas a esta matriz con diferentes afinidades, dependiendo del ion metálico usado, y serán eluidas mediante elución competitiva, reducción del pH o el uso de agentes quelantes fuertes. Otros métodos de purificación incluyen purificación de proteínas glicosiladas mediante cromatografia de afinidad a lectina y cromatografia de intercambio iónico (M. Deutscher, (ed.), Meth. Enzymol. 182:529 (1990)). Dentro de modalidades adicionales de la invención, una fusión del polipéptido de interés y un marcador de afinidad (por ejemplo, proteina de unión a maltosa, un dominio de inmunoglobulina) pueden construirse para facilitar la purificación. Más aún, las propiedades de unión a ligando del dominio extracelular IL-22RA pueden explotarse para purificación, por ejemplo, de receptores solubles que comprendan IL-22RA; por ejemplo, mediante el uso de cromatografia de afinidad en la que el ligando IL-22 se una a una columna y el receptor que comprenda IL-22RA se una y posteriormente sea eluido usando métodos de cromatografia estándares . Los polipéptidos IL-22RA o fragmentos de los mismos también se pueden preparar a través de sintesis química, como se describió arriba. Los polipéptidos IL-22RA pueden ser monómeros o multimeros; glicosilados o no glicosilados; PEGilados o no PEGilados; y pueden o no incluir residuo de aminoácido metionina inicial. 8. Producción de anticuerpos con tra proteínas IL-22RA Pueden obtenerse anticuerpos contra IL-22RA por ejemplo, usando el producto de vector de expresión IL-22RA o IL-22RA aislado de una fuente natural como un antigeno. Los anticuerpos anti-IL-22RA particularmente útiles se "unen específicamente" a IL-22RA. Los anticuerpos se considera que se unen específicamente si los anticuerpos exhiben al menos una de las siguientes dos propiedades: (1) los anticuerpos se unen a IL-22RA con un nivel umbral de actividad de unión y (2) los anticuerpos no reaccionan de manera cruzada significativamente con polipéptidos relacionados con IL-22RA. Con respecto a la primera característica, los anticuerpos se unen específicamente si se unen a un polipéptido, péptido o epitope IL-22RA con una afinidad de unión (Ka) de 106 M"1 o más, de preferencia 107 M"1 o más, muy preferiblemente 108 M"1 o más, y más preferiblemente 109 M"1 o más. La afinidad de unión de un anticuerpo puede determinarse fácilmente por alguien de capacidad ordinaria en la técnica, por ejemplo, mediante el análisis de Scatchard (Scatchard, Ann. NY Acad. Sci. 51:660 (1949)). Con respecto a la segunda característica, los anticuerpos no reaccionan en forma cruzada significativamente con moléculas de polipéptido relacionadas, por ejemplo, si detectan IL-22RA, pero no polipéptidos actualmente conocidos usando un análisis de Western blot estándar. Ejemplos de polipéptidos relacionados incluyen los receptores de citosina conocidos. Los anticuerpos anti-IL-22RA pueden producirse usando péptidos y polipéptidos portadores de epitope IL-22RA antigénico. Los péptidos y polipéptidos portadores de epitopes antigénicos de la presente invención contienen una secuencia de al menos 9, o entre 15 a aproximadamente 30 aminoácidos contenidos dentro de SEQ ID NO: 3 u otra secuencia de aminoácidos descrita en la presente. Sin embargo, los péptidos o polipéptidos que comprendan una porción más grande de una secuencia de aminoácidos de la invención, que contiene de 30 a 50 aminoácidos, o cualquier longitud hasta e incluyendo la secuencia de aminoácidos completa de un polipéptido de la invención, también son útiles para inducir anticuerpos que se unan a IL-22RA. Es deseable que la secuencia de aminoácidos del péptido portador de epitopes se seleccione para proporcionar solubilidad sustancial en solventes acuosos (es decir, que la secuencia incluya residuos relativamente hidrofilicos, mientras que los residuos hidrofóbicos se eviten típicamente) . Más aún, las secuencias de aminoácidos que contienen residuos de prolina también pueden ser deseables para la producción de anticuerpos . Como una ilustración, los sitios antigénicos potenciales en IL-22RA fueron identificados usando el método de Jameson-Wolf, Jameson y Wolf, CABIOS 4:181, (1988), como el implementado por el programa PROTEAN (versión 3.14) de LASERGENE (DNASTAR; Madison, Wl) . Los parámetros de omisión se usaron en este análisis. El método de Jameson-Wolf predice los determinantes antigénicos potenciales al combinar seis subrutinas mayores para la predicción estructural de proteínas. Brevemente, el método de Hopp-Woods, Hopp et al . , Proc . Na t ' l Acad. Scí . EUA 75:3824 (1981), se usó primero para identificar secuencias de aminoácidos que representan áreas de mayor hidrofilicidad local (parámetro: siete residuos promediados). En la segunda etapa, se usó el método de Emini, Emini et al . , J. Virology 55:836 (1985), para calcular probabilidades de superficie (parámetro: umbral de decisión de superficie (0.6) = 1). Tercero, el método de Karplus-Schultz, Karplus y Schultz, Na turwissenschaften 72:212 (1985), se usó para predecir la flexibilidad de la cadena de estructura de base (parámetro: umbral de flexibilidad (0.2) = 1) . En la cuarta y quinta etapa del análisis, se aplicaron predicciones de estructura secundaria a los datos usando los métodos de Chou-Fasman, Chou, "Prediction of Protein Structural Classes from Amino Acid Composition, " en Prediction of Protein Structure and the Principies of Protein Conf orma tion, Fasman (ed.), páginas 549-586 (Plenum Press 1990), y Garnier-Robson, Garnier et al . , J. Mol . Biol . 120:97 (1978) (parámetros de Chou-Fasman: tabla de conformación = 64 proteínas; umbral de región a = 1036; umbral de región ß = 105; parámetros de Garnier-Robson: constantes de decisión a y ß = 0) . En la sexta subrutina, los parámetros de flexibilidad y los factores de accesibilidad por hidropatía/solvente se combinaron para determinar un valor de contorno de superficie, designado como el "Índice antigénico". Finalmente, una función de ampliamiento de pico se aplicó al Índice antigénico, la cual amplia picos superficiales mayores al añadir 20, 40, 60 u 80% del valor pico respectivo para compensar la energía libre adicional derivada de la movilidad de regiones superficiales en relación a regiones interiores. Este cálculo no se aplicó, sin embargo, a ningún pico principal que reside en una región helicoidal, toda vez que las regiones helicoidales tienden a ser menos flexibles. Los resultados de este análisis indicaron que las siguientes secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 podrían proporcionar péptidos antigénicos adecuados: los perfiles de hidrofilicidad de Hopp/Woods pueden usarse para determinar regiones que tengan el potencial más antigénico dentro de SEQ ID NO:3 (Hopp et al . , Proc. Nati. Acad. Sci. 78:3824-3828, 1981; Hopp, J. Immun. Meth. 88:1-18, 1986 y Triquier et al . , Protein Engineering 1_1_:153- 169, 1998). El perfil se basa en una ventana de seis residuos de deslizamiento. Los residuos G, S y T cubiertos y los residuos H, Y y W expuestos fueron ignorados. Además, los epitopes antigénicos IL-22RA dentro de SEQ ID NO: 3 como los predichos por una gráfica de Jameson-Wolf, por ejemplo, usando programa DNASTAR Protean (DNASTAR, Inc., Madison, Wl) sirven como epitopes antigénicos preferidos, y se pueden determinar por alguien de capacidad en la técnica. Estos epitopes antigénicos incluyen (1) residuos de aminoácido 1 (Pro) a 6 (Asp) de SEQ ID NO: 3; (2) residuos de aminoácido 26 (Ser) a 32 (Pro) de SEQ ID NO: 3; (3) residuos de aminoácido 41 (Lys) a 47 (Asp) de SEQ ID NO: 3; (4) residuos de aminoácido 49 (Val) a 62 (Cys) de SEQ ID NO: 3; (5) residuos de aminoácido 41 (Lys) a 62 (Cys) de SEQ ID NO: 3; (6) residuos de aminoácido 84 (Ala) a 97 (Ser) de SEQ ID NO: 3; (7) residuos de aminoácido 103 (Thr) a 108 (Asp) de SEQ ID NO: 3; (8) residuos de aminoácido 130 (Arg) a 135 (His) de SEQ ID NO:3; (9) residuos de aminoácido 164 (Gly) a 166 (Lys) de SEQ ID NO: 3; (10) residuos de aminoácido 175 (Tyr) a 179 (Glu) de SEQ ID NO:3; (11) residuos de aminoácido 193 (Lys) a 196 (Ala) de SEQ ID NO:3; (12) residuos de aminoácido 203 (Lys) a 209 (Thr) de SEQ ID NO.3. La presente invención contempla el uso de cualquiera de los péptidos antigénicos 1 a 12 para generar anticuerpos contra IL-22RA o como una herramienta para tamizar o identificar anticuerpos monoclonales neutralizantes de la presente invención. La presente invención contempla también polipéptidos que comprendan al menos uno de los péptidos antigénicos 1 a 10. La presente invención contempla el uso de cualquier péptido o epitope antigénico descrito en la presente para generar anticuerpos contra IL-22RA, asi como para identificar y tamizar anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA que sean neutralizantes, y que puedan unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-22 e IL-20 (individualmente o juntos) . Más aún, los antigenos adecuados también incluyen los polipéptidos IL-22RA que comprenden una unión a citosina IL-22RA o dominio extracelular descrito arriba en combinación con otro dominio extracelular de citosina clase I o II tal como aquellos que forman polipéptidos heterodiméricos o multiméricos IL-22RA solubles, tales como IL-22RA/CRF2-4 , IL-22RA/zcytorll, IL-22RA/zcytor7 solubles y similares. Los anticuerpos policlonales contra proteina IL- 22RA recombinante o contra IL-22RA aislado de fuentes naturales pueden prepararse usando métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Green et al . , "Production of Polyclonal Antisera," en Immunochemical Protocols (Manson, ed.), páginas 1-5 (Humana Press 1992) y Williams et al . , "Expression of foreign proteins in E . coli using plasmid vectors and purification of specific polyclonal antibodies," en DNA Cloning 2 : Expression Systems , 2a Edición , Glover et al . , (eds.), página 15 (Oxford University Press 1995). La inmunogenicidad de un polipéptido IL-22RA puede incrementarse a través del uso de un adyuvante, tal como alumbre (hidróxido de aluminio) o adyuvante completo o incompleto de Freund. Los polipéptido útiles para la inmunización incluyen también polipéptidos de fusión, tales como fusiones de IL-22RA o una porción del mismo con un polipéptido de inmunoglobulina o con una proteina de unión a maltosa. El inmunógeno del polipéptido puede ser una molécula de longitud completa o una porción de la misma. Si la porción de polipéptido es "tipo hapteno", esta porción puede unirse o enlazarse adecuadamente a un portador macromolecular (tal como hemocianina (KLH) , albúmina de suero bovino (BSA) o toxoide tetánico) para inmunización. Aunque los anticuerpos policlonales se desarrollan típicamente en animales tales como caballos, vacas, perros, pollos, ratas, ratones, conejos, conejillos de indias, cabras o borregos, un anticuerpo anti-IL-22RA de la presente invención también puede derivarse de un anticuerpo de primate subhumano. Las técnicas generales para desarrollar anticuerpos útiles en diagnóstico y terapia en babuinos pueden encontrarse, por ejemplo, en Goldenberg et al . , publicación de patente internacional No. WO 91/11465 y en Losman et al . , In t . J. Cáncer 46:310 (1990). Como alternativa, se pueden generar anticuerpos anti-IL-22RA monoclonales. Anticuerpos monoclonales de roedor contra antigenos específicos pueden obtenerse mediante métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica (véase, por ejemplo, Kohler et al . , Na ture 256:495 (1975), Coligan et al . (eds.), Curren t Protocols in Immunology, Vol . 1 , páginas 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991) ["Coligan"], Picksley et al . , "Production of monoclonal antibodies against proteins expressed in E . col i" in DNA Cloning 2 : Expression Sys tems , 2a Edi ción, Glover et al . (eds.), página 93 (Oxford University Press 1995)). Brevemente, pueden obtenerse anticuerpos monoclonales al inyectar ratones con una composición que comprenda un producto génico IL-22RA, verificando la presencia de la producción de anticuerpos al remover una muestra de suero, removiendo el bazo para obtener linfocitos B, fusionando los linfocitos B con células de mieloma para producir hibridomas, clonando los hibridomas, seleccionando clones positivos que produzcan anticuerpos contra el antigeno, cultivando los clones que produzcan anticuerpos contra el antigeno y aislando los anticuerpos de los cultivos de hibridoma. Además, un anticuerpo anti-IL-22RA de la presente invención puede derivarse de un anticuerpo monoclonal humano. Los anticuerpos monoclonales humanos se obtienen de ratones transgénicos que han sido manipulados para producir anticuerpos humanos específicos en respuesta a un ataque antigénico. En esta técnica, elementos de locus de la cadena pesada y ligera humana se introducen en cepas de ratones derivadas de lineas de células madre embrionarias que contienen rupturas seleccionadas de los locus de la cadena ligera y cadena pesada endógenas. Los ratones transgénicos pueden sintetizar anticuerpos humanos específicos para antigenos humanos, y los ratones pueden usarse para producir hibridomas de secreción de anticuerpos humanos. Los métodos para obtener anticuerpos humanos a partir de ratones transgénicos se describen, por ejemplo, por Green et al , Na ture Genet . 7:13 (1994), Lonberg et al , Na ture 365:856 (1994) y Taylor et al , Int . lmmun . 6:579 (1994). Los anticuerpos monoclonales pueden ser aislados y purificados de cultivos de hibridoma mediante una variedad de técnicas bien establecidas. Estas técnicas de aislamiento incluyen cromatografia de afinidad con proteina A Sefarosa, cromatografia de exclusión de tamaño y cromatografia de intercambio iónico (véase, por ejemplo, Coligan en páginas 2.7.1-2.7.12 y páginas 2.9.1-2.9.3; Baines et al . , "Purification of Immunoglobulin G (IgG)," en Methods in Molecular Biology, Vol. 10, páginas 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992) ) . Para usos particulares, puede ser deseable preparar fragmentos de anticuerpos anti-IL-22RA. Estos fragmentos de anticuerpo pueden obtenerse, por ejemplo, mediante hidrólisis proteolitica del anticuerpo. Los fragmentos de anticuerpo pueden obtenerse mediante digestión con pepsina o papaina de anticuerpos completos mediante métodos convencionales. Como una ilustración, pueden producirse fragmentos de anticuerpo mediante corte enzimático de anticuerpos con pepsina para proporcionar un fragmento 5S indicado como F(ab')2. Este fragmento puede cortarse más usando un agente reductor tiol para producir fragmentos monovalentes 3.5S Fab'. Opcionalmente, la reacción de corte puede llevarse a cabo usando un grupo de bloqueo para los grupos sulfhidrilo que resulte del corte de enlaces de disulfuro. Como una alternativa, un corte enzimático usando pepsina produce dos fragmentos Fab monovalentes y un fragmento Fc directamente. Estos métodos se describen, por ejemplo, por Goldenberg, patente de E.U.A. No. 4,331,647, Nisonoff et al . , Arch Biochem . Biophys . 89 : 230 (1960), Porter, Biochem . J. 73:119 (1959), Edelman et al . , en Methods in Enzymology Vol. 1, página 422 (Academic Press 1967) y por Coligan en las páginas 2.8.1-2.8.10 y 2.10.-2.10.4. También se pueden usar otros métodos para cortar anticuerpos, tales como la separación de cadenas pesadas para formar fragmentos de cadena pesada-ligera monovalentes, el corte adicional de fragmentos u otras técnicas enzimáticas, químicas o genéticas, siempre y cuando los fragmentos se unan al antigeno que sea reconocido por el anticuerpo intacto. Por ejemplo, los fragmentos Fv comprenden una asociación de cadenas VH y VL. Esta asociación puede ser no covalente, como se describe por Inbar et al , Proc . Na t ' 1 Acad. Sci . EUA 69:2659 (1972). Como alternativa, las cadenas variables pueden enlazarse por un enlace de disulfuro intermolecular o entrelazarse mediante químicos tales como glutaraldehido (véase, por ejemplo, Sandhu, Cri t . Rev. Biotech . 12 : 431 (1992) ) . Los fragmentos Fv pueden comprender cadenas VH y VL que estén conectadas por un enlazador de péptidos. Estas proteínas de unión a antigeno de cadena individual (scFv) se preparan al construir un gen estructural que comprende secuencias de ADN que codifican para los dominios VH y VL los cuales están conectados por un oligonucleótido. El gen estructural es insertado en un vector de expresión que posteriormente se introduce en un célula huésped, tal como E . coli . Las células huésped recombinantes sintetizan una sola cadena de polipéptidos con un péptido enlazador que puentea los dos dominios V. Los métodos para producir scFvs se describen, por ejemplo, por Whitlow et al , Methods : A Companion to Methods in Enzymology 2 : 91 (1991) (también véase, Bird et a l , Science 242 : 423 (1988), Ladner et al , patente de E.U.A. No. 4,946,778, Pack et al , Bio/Technology 11 : 1211 (1993) y Sandhu, citado arriba). Como una ilustración, un scFV puede obtenerse al exponer linfocitos a polipéptido IL-22RA in vi tro, y seleccionando bibliotecas de despliegue de anticuerpos en vectores de fagos o similares (por ejemplo, a través del uso de proteina o péptido IL-22RA inmovilizado o marcado) . Los genes que codifican para polipéptidos que tienen dominios de unión a polipéptido IL-22RA potenciales pueden obtenerse al tamizar bibliotecas de péptidos aleatorias desplegadas sobre fagos (despliegue de fagos) o en bacterias, tales como E . coli . Las secuencias de nucleótidos que codifican para los polipéptidos pueden obtenerse de un número de formas, tales como a través de mutagénesis aleatoria y sintesis de polinucleótidos aleatoria. Estas bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias pueden usarse para tamizar péptidos que interactúen con un objetivo conocido que puede ser una proteina o polipéptido, tal como un ligando o receptor, una macromolécula sintética o biológica, o sustancias orgánicas o inorgánicas. Las técnicas para crear y tamizar estas bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias se conocen en la técnica (Ladner et al , patente de E.U.A. No. 5,223,409, Ladner et al , patente de E.U.A. No. 4,946,778, Ladner et al , patente de E.U.A. No. 5,403,484, Ladner et al , patente de E.U.A. No. 5,571,698, y Kay et al , Phage Display of Peptides and Proteins (Academic Press, Inc. 1996)) y las bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias y kits para tamizar estas bibliotecas están disponibles comercialmente, por ejemplo de CLONTECH Laboratories, Inc. (Palo Alto, CA) , Invitrogen Inc. (San Diego, CA) , New England Biolabs, Inc.

(Beverly, MA) y Pharmacia LKB Biotechnology Inc. (Piscataway, NJ) . Las bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias pueden tamizarse usando las secuencias de IL-22RA descritas en la presente para identificar proteínas que se unan a IL-22RA.

Otra forma de un fragmento de anticuerpo es un péptido que codifica para una sola región de determinación de complementariedad (CDR). Los péptidos CDR ("unidades de reconocimiento mínimas") pueden obtenerse al construir genes que codifiquen para la CDR de un anticuerpo de interés. Estos genes se preparan, por ejemplo, al usar la reacción en cadena de la polimerasa para sintetizar la región variable de ARN de células productoras de anticuerpo (véase, por ejemplo, Larrick et al . , Methods : A Companion to Methods in Enzymology 2:106 (1991), Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," en Monoclonal Antibodies : Production , Engineering and Clini cal Appli ca tion , Ritter et al . (eds.), página 166 (Cambridge University Press 1995) y Ward et al . , "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies, " en Monoclonal An tibodies : Principies and Applica tions, Birch et al . , (eds.), página 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995)). Como alternativa, un anticuerpo anti-IL-22RA puede derivarse de un anticuerpo monoclonal "humanizado". Los anticuerpos monoclonales humanizados se producen al transferir regiones de determinación de complementariedad de ratón de cadenas variables pesadas y ligeras de la inmunoglobulina de ratón a un dominio variable humano. Los residuos típicos de anticuerpos humanos son luego sustituidos en las regiones de armazón de las contrapartes de murino. El uso de componentes de anticuerpo derivados de anticuerpos monoclonales humanizados obvia problemas potenciales asociados con la inmunogenicidad de regiones constantes de murino. Las técnicas generales para clonar dominios variables de inmunoglobulina de murino se describen, por ejemplo, por Orlandi et al, Proc. Nat'l Acad. Sci EUA 86:3833 (1989). Las técnicas para producir anticuerpos monoclonales humanizados se describen, por ejemplo, por Jones et al, Nature 321:522 (1986), Cárter et al, Proc. Nat'l Acad. Sci EUA 89:4285 (1992), Sandhu, Crit. Pev. Biotech. 12:431 (1992), Singer et al, J. Immun. 150:2844 (1993), Sudhir (ed. ) , Antibody Engineering Protocols (Humana Press, Inc. 1995), Kelley, "Engineering Therapeutic Antibodies," en Protein Engineering: Principies and Practice, Cleland et al (eds.), páginas 399-434 (John Wiley & Sons, Inc. 1996) y por Queen et al, patente de E.U.A. No. 5,693,762 (1997). Más aún, los anticuerpos anti-IL-22RA o fragmentos de anticuerpo de la presente invención pueden ser PEGilados usando métodos conocidos en la técnica y descritos en la presente . Los anticuerpos anti-IL-22RA pueden prepararse al inmunizar animales con anticuerpos anti-IL-22RA o fragmentos de anticuerpo, usando técnicas estándares. Véase, por ejemplo, Green et al., "Production of Polyclonal Antisera," en Methods In Molecular Biology: Immunochemical Protocols, Manson (ed.), páginas 1-12 (Humana Press 1992). También, véase Coligan en páginas 2.4.1-2.4.7. Como alternativa, los anticuerpos anti-idiotipo monoclonales pueden prepararse usando anticuerpos anti-IL-22RA o fragmentos de anticuerpo como inmunógenos con las técnicas, descritas arriba. Como otra alternativa, anticuerpos anti-idiotipo humanizados o anticuerpos anti-idiotipo de primate subhumanos pueden prepararse usando las técnicas descritas arriba. Los métodos para producir anticuerpos anti-idiotipo se describen, por ejemplo, por Irie, patente de E.U.A. No. 5,208,146, Greene, et. al . , patente de E.U.A. No. 5,637,677, y Varthakavi y Minocha, J. Gen . Virol . 77:1875 (1996). Un anticuerpo anti-IL-22RA puede conjugarse con un marcador detectable para formar un inmunoconjugado anti-IL-22RA. Los marcadores detectables adecuados incluyen, por ejemplo, un radioisótopo, un marcador fluorescente, un marcador quimioluminiscente, un marcador enzimático, un marcador bioluminiscente u oro coloidal. Los métodos para hacer y detectar estos inmunoconjugados marcados detectablemente se conocen bien por aquellos expertos en la técnica, y se describen en más detalle abajo. El marcador detectable puede ser un radioisótopo que sea detectado por autorradiografia . Los isótopos que son particularmente útiles para el propósito de la presente invención son 3H , 125I , 131I , 35S y 14C . Los inmunoconj ugados anti-IL-22RA también pueden marcarse con un compuesto fluorescente. La presencia de un anticuerpo marcado fluorescentemente se determina al exponer el inmunoconjugado a luz de la longitud de onda adecuada y detectando la fluorescencia resultante. Los compuestos de marcado fluorescente incluyen isotiocianato, rodamina, ficoeriterina, ficocianina, aloficocianina, o-ftaldehido y flúorescamina . Como alternativa, los inmunoconjugados anti-IL-22RA pueden marcarse detectablemente al acoplar un componente de anticuerpo a un componente quimioluminiscente. La presencia del inmunoconjugado marcado con quimioluminiscente se determina al detectar la presencia de luminiscencia que se origina durante el curso de una reacción química. Ejemplos de compuestos de marcación quimioluminiscente incluyen luminol, isoluminol, un éster de acridinio aromático, un imidazol, una sal de acridinio y un éster de oxalato. En forma similar, un compuesto bioluminiscente puede usarse para marcar inmunoconjugados anti-IL-22RA de la presente invención. La bioluminiscencia es un tipo de quimioluminiscencia encontrado en sistemas biológicos en los cuales una proteina catalítica incrementa la eficiencia de la reacción quimioluminiscente. La presencia de una proteina bioluminiscente se determina al detectar la presencia de luminiscencia. Los compuestos bioluminiscentes que son útiles para marcación incluyen luciferina, luciferasa y orina . Como alternativa, los inmunoconjugados anti-IL-22RA pueden marcarse detectablemente al enlazar un componente anticuerpo anti-IL-22RA a una enzima. Cuando el conjugado anti-IL-22RA-enzima sea incubado en presencia del substrato adecuado, la porción de enzima reacciona con el substrato para producir una porción química que puede ser detectada, por ejemplo, mediante medios espectrofotométricos, fluorométricos o visuales. Ejemplos de enzimas que pueden usarse para marcar detectablemente inmunoconjugados poliespecificos incluyen ß-galactosidasa, glucosa oxidasa, peroxidasa y fosfatasa alcalina. Aquellos expertos en la técnica sabrán de otros marcadores adecuados que pueden emplearse de acuerdo con la presente invención. La unión de porciones marcadoras a anticuerpos anti-IL-22RA puede lograrse usando técnicas estándares conocidas en la técnica. La metodología típica a este respecto se describe por Kennedy et al , Clin . Chim . Acta 70: 1 (1976), Schurs et al , Clin . Chim . Acta 81 : 1 (1977), Shih et a l , In t ' l J. Cáncer 46: 1101 (1990), Stein et al , Cáncer Res . 50:1330 (1990), y Coligan, citado arriba. Más aún, la conveniencia y versatilidad de detección inmunoquimica puede incrementarse al usar anticuerpos anti-IL-22RA que hayan sido conjugados con avidina, estreptavidina y biotina (véase, por ejemplo, Wilchek et al . (eds.), "Avidin-Biotin Technology," Methods In Enzymology, Vol. 184 (Academic Press 1990) y Bayer et al . , "Immunochemical Applications of Avidin-Biotin Technology," in Methods In Molecular Biology, Vol. 10, Manson (ed.), páginas 149-162 (The Humana Press, Inc. 1992) . Los métodos para llevar a cabo inmunoensayos están bien establecidos. Véase, por ejemplo, Cook and Self, "Monoclonal Antibodies in Diagnostic Immunoassays, " en Monoclonal An tibodies : Production , Engineering , and Clinical Appli ca tion , Ritter and Ladyman (eds.), páginas 180-208, (Cambridge University Press, 1995) , Perry, "The Role of Monoclonal Antibodies in the Advancement of Immunoassay Technology," en Monoclonal An tibodies : Principies and Applica tions, Birch and Lennox (eds.), páginas 107-120 (Wiley-Liss, Inc. 1995) y Diamandis, Immunoassay (Academic Press, Inc. 1996) . La presente invención contempla también kits para llevar a cabo un ensayo de diagnóstico inmunológico para la expresión de genes IL-22RA. Estos kits comprenden al menos un recipiente que comprende un anticuerpo anti-IL-22RA, o fragmento de anticuerpo. Un kit también puede comprender un segundo recipiente que comprenda uno o más reactivos capaces de indicar la presencia de anticuerpo IL-22RA o fragmento de anticuerpo. Ejemplos de estos reactivos indicadores incluyen marcadores detectables tales como un marcador radioactivo, un marcador fluorescente, un marcador quimioluminiscente, un marcador enzimático, un marcador bioluminiscente, oro coloidal y similares. Un kit también puede comprender un medio para transmitir al usuario que los anticuerpos IL-22RA o fragmentos de anticuerpo se usan para detectar proteina IL-22RA. Por ejemplo, instrucciones escritas pueden indicar que el anticuerpo o fragmento de anticuerpo envuelto puede usarse para detectar IL-22RA. El material escrito puede aplicarse directamente a un recipiente, o el material escrito puede ser provisto en forma de un inserto de empaque. 9. Uso de an ti cuerpos an ti -IL-22RA para an tagoni zar la unión de IL-22RA a IL-22 o tanto a IL-20 como a IL-22 Las técnicas alternativas para generar o seleccionar anticuerpos útiles en la presente incluyen la exposición in vi tro de linfocitos o polipéptido receptores IL-22RA solubles o fragmentos de los mismos, tales como epitopes antigénicos, y la selección de bibliotecas de despliegue de anticuerpos en fagos o vectores similares (por ejemplo, a través del uso de polipéptido receptores IL-22RA solubles inmovilizados o marcados o fragmentos de los mismos, tales como epitopes antigénicos) . Los genes que codifican para polipéptidos que tienen dominios de unión potenciales tales como polipéptido receptores IL-22RA solubles o fragmentos de los mismos, tales como epitopes antigénicos pueden obtenerse al tamizar bibliotecas de péptidos aleatorias desplegadas en fagos (despliegue de fagos) o en bacterias, tales como E . coli . Las secuencias de nucleótidos que codifican para los polipéptidos pueden obtenerse en un número de formas, tales como a través de mutagénesis aleatoria y sintesis de polinucleótidos aleatoria. Estas bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias pueden usarse para tamizar péptidos que interactúen con un objetivo conocido que pueda ser una proteina o polipéptido, tal como un ligando o receptor, una macromolécula biológica o sintética, o sustancias orgánicas o inorgánicas. Las técnicas para crear y tamizar estas bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias se conocen en la técnica (Ladner et al , patente de E.U.A. No. 5,223,409, Ladner et al , patente de E.U.A. No. 4,946,778, Ladner et al , patente de E.U.A. No. 5,403,484 y Ladner et al , patente de E.U.A. No. 5,571,698) y las bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias y kits para tamizar estas bibliotecas están disponibles comercialmente, por ejemplo de Clontech (Palo Alto, CA) , Invitrogen Inc. (San Diego, CA) , New England Biolabs, Inc. (Beverly, MA) y Pharmacia LKB Biotechnology Inc. (Piscataway, NJ) . Las bibliotecas de despliegue de péptidos aleatorias pueden tamizarse usando los polipéptidos receptores IL-22RA solubles o fragmentos de los mismos, tales como secuencias de polipéptidos epitopes antigénicas descritas en la presente para identificar proteínas que se unan a polipéptidos receptores que comprendan IL-22RA. Estos "polipéptidos de unión", los cuales interactúan con polipéptidos receptores que comprenden IL-22RA soluble, se pueden usar para marcar células; para aislar polipéptidos homólogos mediante purificación por afinidad; pueden conjugarse directa o indirectamente a fármacos, toxinas, radionúclidos y similares. Estos polipéptidos de unión también se pueden usar en métodos analíticos tales como para tamizar bibliotecas de expresión y actividad neutralizante, por ejemplo, para unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la interacción entre ligando IL-22 y receptor, o la unión viral a un receptor. Los polipéptidos de unión también se pueden usar para ensayos de diagnóstico para determinar niveles circulantes de polipéptidos receptores que comprendan IL-22RA soluble; para detectar o cuantificar receptores que comprendan IL-22RA solubles o no solubles como marcador para patologías o enfermedades subyacentes. Estos polipéptidos de unión también pueden actuar como "antagonistas" para bloquear o inhibir el receptor monomérico IL-22RA soluble o unido a membrana o la unión y transducción de señales del polipéptido IL-22RA homodimérico, heterodimérico o multidimérico (por ejemplo, a ligando) in vi tro e in vivo . De nuevo, estos polipéptidos de unión sirven como un receptor monomérico anti-IL-22RA o polipéptidos anti-IL-22RA homodiméricos, heterodiméricos o multidiméricos y son útiles para inhibir IL-22 o actividad tanto IL-20 y IL-22, asi como actividad de receptor o unión a proteina. Los anticuerpos desarrollados contra los complejos de receptor natural de la presente invención, y los anticuerpos de unión a epitope IL-22RA y los anticuerpos monoclonales neutralizantes anti-IL-22RA pueden ser modalidades preferidas, toda vez que pueden actuar más específicamente contra el IL-22RA y pueden inhibir IL-22 o tanto IL-20 como IL-22. Además, la actividad antagonista y de unión de los anticuerpos de la presente invención puede ensayarse en un ensayo de proliferación de IL-20 y IL-22, de atrape de señal, de luciferasa o unión en presencia de IL-20 o IL-22, respectivamente y los receptores solubles que comprendan IL-22RA, y otros ensayos biológicos o bioquímicos descritos en la presente. Los anticuerpos contra polipéptidos receptores IL-22RA solubles (por ejemplo, anticuerpos contra SEQ ID NO: 3) o fragmentos de los mismos, tales como epitopes antigénicos se pueden usar para inhibir los efectos inflamatorios de IL-20, IL-22 o tanto de IL-20 como IL-22, in vivo, para uso terapéutico contra psoriasis, dermatitis atópica, condiciones inflamatorias de la piel, endotoxemia, artritis, asma, IBD, colitis, artritis psoriásica, artritis reumatoide u otras condiciones inflamatorias inducidas por IL-20 y IL-22; para marcar células que expresan receptores de IL-22RA; para aislar polipéptidos receptores que comprendan IL-22RA soluble mediante purificación de afinidad; para ensayos de diagnóstico para determinar niveles circulantes de polipéptidos receptores que comprendan IL-22RA solubles; para detectar o cuantificar receptores que comprendan IL-22RA solubles como marcador de patología o enfermedad subyacente; en métodos analíticos empleado FACS; para tamizar bibliotecas de expresión; para generar anticuerpos anti-idiotipicos que puedan actuar como agonistas de IL-22 o IL-20; y como anticuerpos neutralizantes o como antagonistas para unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la función del receptor IL-22RA, o para unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-22 y/o IL-20 (ya sea individualmente o juntos) in vi tro e in vivo . Los marcadores o etiquetas directos adecuados incluyen radionúclidos, enzimas, substratos, cofactores, biotina, inhibidores, marcadores fluorescentes, marcadores quimioluminiscentes, partículas magnéticas y similares; etiquetas o marcadores indirectos pueden incorporar el uso de biotina-avidina u otros pares complemento/anti-complemento como intermediarios. Los anticuerpos de la presente también pueden conjugarse directa o indirectamente a fármacos, toxinas, radionúclidos y similares, y estos conjugados usarse para aplicaciones de diagnóstico o terapéuticas in vivo . Más aún, los anticuerpos contra polipéptidos receptores que comprendan IL-22RA solubles, o fragmentos de los mismos pueden usarse in vi tro para detectar polipéptidos receptores que comprendan IL-22RA desnaturalizados o no desnaturalizados o fragmentos de los mismos en ensayos, por ejemplo, Western Blots u otros ensayos conocidos en la técnica. Los anticuerpos para el receptor IL-22RA soluble o polipéptidos receptores IL-22RA solubles homodiméricos, heterodiméricos o multidiméricos son útiles para marcar células que expresen los receptores correspondientes y ensayar sus niveles de expresión, para purificación de afinidad, con ensayos de diagnóstico para determinar niveles circulantes de polipéptidos receptores, métodos analíticos que empleen clasificación de células activada por fluorescencia. Más aún, anticuerpos divalentes y anticuerpos anti-idiotipicos pueden usarse como agonistas para imitar el efecto del ligando IL-22RA, IL-22 y IL-20. Los anticuerpos de la presente también pueden ser conjugados directa o indirectamente a fármacos, toxinas, radionúclidos y similares, y estos conjugados pueden usarse para aplicaciones de diagnóstico o terapéuticas in vivo . por ejemplo, los anticuerpos o polipéptidos de unión que reconocen receptor IL-22RA soluble, o polipéptidos receptores solubles IL-22RA homodiméricos, heterodiméricos o multidiméricos pueden usarse para identificar o tratar tejidos u órganos que expresen una molécula anti- complementaria correspondiente (es decir, un receptor que comprenda IL-22RA soluble o unido a membrana) . Más específicamente, los anticuerpos contra polipéptido receptores que comprendan IL-22RA solubles, o fragmentos bioactivos o porciones de los mismos, pueden acoplarse a moléculas detectables o citotóxicas y suministrarse a un mamífero que tenga células, tejidos u órganos que expresen al receptor que comprenda IL-22RA tales como cánceres que expresen IL-22RA. Las moléculas detectables adecuadas pueden unirse directa o indirectamente a polipéptidos que se unan a polipéptidos receptores que comprendan IL-22RA tales, como "polipéptidos de unión", (incluyendo péptidos de unión descritos arriba), anticuerpos o fragmentos bioactivos o porciones de los mismos. Las moléculas detectables adecuadas incluyen radionúclidos, enzimas, substratos, cofactores, inhibidores, marcadores fluorescentes, marcadores quimioluminiscentes, partículas magnéticas y similares. Las moléculas citotóxicas adecuadas pueden ser unidas directa o indirectamente al polipéptido o anticuerpo, e incluyen toxinas bacterianas o vegetales (por ejemplo, toxina de la difteria, exotoxina de Pseudomonas, ricina, abrina y similares), asi como radionúclidos terapéuticos, tales como yodo-131, renio-188 o itrio-90 (ya sea unidos directamente al polipéptido o anticuerpo, o indirectamente unidos a través de medios de una porción quelante, por ejemplo). Los polipéptidos o anticuerpos de unión también pueden conjugarse a fármacos citotóxicos, tales como adriamicina. Para la fijación indirecta de una molécula detectable o citotóxica, la molécula detectable o citotóxica puede ser conjugada con un miembro de un par complementario/anticomplementario, en donde el otro miembro sea unido al polipéptido o porción de anticuerpo de unión. Para estos propósitos, biotina/estreptavidina es un par complementario/anticomplementario ejemplar. En otra modalidad, las proteínas de fusión polipéptido-toxina o proteínas de fusión anticuerpo-toxina de unión pueden usarse para la inhibición o eliminación de células o tejidos seleccionados (por ejemplo, para tratar células de cáncer o tejidos) . Como alternativa, si el polipéptido de unión tiene varios dominios funcionales (es decir, un dominio de activación o un dominio de unión a ligando, más un dominio de dirección) , una proteina de fusión que incluya sólo el dominio de dirección puede ser adecuada para dirigir una molécula detectable, una molécula citotóxica o una molécula complementaria a un tipo de célula o tejido de interés. En casos en los que la proteina de fusión que incluya únicamente un solo dominio incluye una molécula complementaria, la molécula anti-complementaria puede ser conjugada a una molécula detectable o citotóxica. Estas proteínas de fusión dominio-molécula complementaria representan entonces un vehículo de dirección genérico para el suministro especifico de células/tejido de conjugados genéricos anti-complementario-detectable/molécula citotóxica. En otra modalidad, las proteínas de fusión polipéptido-citocina o anticuerpo-citocina de unión a IL-22RA se pueden usar para incrementar la eliminación in vivo de tejidos objetivo (por ejemplo, cánceres de bazo, pancreático, sanguíneo, linfoide, colón y médula ósea), si el anticuerpo receptor anti-IL-22RA o polipéptido-citocina de unión se dirige a células hiperproliferativas (véase, generalmente, Hornick et al . , Blood 89:4437-47, 1997). Las proteínas de fusión descritas hacen posible la dirección de una citocina a un sitio de acción deseado, proporcionando asi una concentración local elevada de citocinas. Los anticuerpos anti-IL-22RA monoméricos, homodiméricos, heterodiméricos o multiméricos adecuados se dirigen a una célula o tejido indeseable (es decir, un tumor o una leucemia), y la citocina fusionada media la lisis celular dirigida y mejorada por células efectoras. Las citocinas adecuadas para este propósito incluyen interleucina 2 y factor estimulador de colonia de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), por ejemplo. Como alternativa, los polipéptidos de unión a receptor IL-22RA o proteínas de fusión de anticuerpo descritos en la presente se pueden usar para incrementar la eliminación in vivo de tejidos objetivo al estimular directamente una via apoptósica modulada por receptor IL-22RA, dando como resultado la muerte celular de células hiperproliferativas que expresan receptores que comprenden IL-22RA. 10. Usos terapéuticos de polipéptidos que tienen actividad IL-22RA o anticuerpos contra IL-22RA Las secuencias de aminoácidos que tienen actividad IL-22RA soluble pueden usarse para modular el sistema inmune al unirse a ligandos IL-22RA IL-20 e IL-22 (ya sea individualmente o juntos), y asi, prevenir la unión del ligando IL-22RA con receptor IL-22RA endógeno. Antagonistas de IL-22RA, tales como anticuerpos anti-IL-22RA, también se pueden usar para modular el sistema inmunológico al inhibir la unión de ligando IL-22RA con el receptor IL-22RA endógeno. En consecuencia, la presente invención incluye el uso de proteínas, polipéptido y péptidos que tienen actividad IL-22RA (tales como polipéptidos IL-22RA solubles, fragmentos de polipéptidos IL-22RA, análogos de IL-22RA (por ejemplo, anticuerpos anti-idiotipo anti-IL-22RA) y proteínas de fusión IL-22RA) a un sujeto que carezca de una cantidad adecuada de este polipéptido, o que produzca un exceso de ligando IL-22RA. Los antagonistas de IL-22RA (por ejemplo, anticuerpos anti-IL-22RA) también se pueden usar para tratar un sujeto que produzca un exceso ya sea de ligando IL-22RA o IL-22RA.

Los sujetos adecuados incluyen mamíferos, tales como humanos. Por ejemplo, estos polipéptidos IL-22RA y anticuerpos anti-IL-22RA son útiles para unir, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar IL-20 e IL-22 (ya sea individualmente o juntos) en el tratamiento de psoriasis, dermatitis atópica, condiciones inflamatorias de la piel, artritis psoriásica, artritis, endotoxemia, asma, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), colitis y otras condiciones inflamatorias descritas en la presente. Más aún, se ha demostrado que el receptor IL-22RA se une a un ligando llamado Factor inducible por células T (IL-22) (SEQ ID NO: 6; Dumoutier, L. et al., Proc. Nat'l.

Acad. Sci. 97:10144-10149, 2000; la secuencia IL-22 de ratón se muestra en Dumontier et al., J. Immunol. 164:1814-1819, 2000). Además, zcytorll (IL-22RA) en copropiedad (patente de E.U.A. No. 5,965,704) y el receptor CRF2-4 se unen también a IL-22 como un heterodimero (Véase, publicación de la WIPO WO 00/24758; Dumontier et al., J. Immunol. 164:1814-1819, 2000; Spencer, SD et al., J. Exp. Med. 187:571-578, 1998; Gibbs, VC and Pennica Gene 186:97-101, 1997 (CRF2-4 cDNA) ; Xie, MH et al., J. Biol. Chem. 275: 31335-31339, 2000; y Kotenko, SV et al., J. Biol. Chem. 276:2725-2732, 2001). Más aún, el receptor IL-lOß puede estar implicado como un receptor para IL-22RA, y se cree que es sinónimo de CRF2-4 (Dumoutier, L. et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. 97:10144-10149, 2000; Liu Y et al, J. Immunol. 152; 1821-1829, 1994 (IL-10R ADNc). Además, se ha demostrado que el receptor IL-22RA se une a un ligando llamado IL-20 (SEQ ID NO: 8; publicación de la WIPO No. WO 99/27103). En modalidades preferidas, la forma receptora soluble de IL-22RA, SEQ ID NO: 3) es un monómero, homodimero, heterodimero o multimero que se une a, bloquea, inhibe, reduce, antagoniza o neutraliza IL-22 e IL-20 in vivo . Los anticuerpos y polipéptidos de unión a este monómero, homodimero, heterodimero o multimero de IL-22RA también sirven como antagonistas de la actividad de IL-22RA y como antagonistas de IL-20 e IL-22 (individualmente o juntos), como se describió en la presente. Además, se ha descrito en la presente, y se ha demostrado que ambos anticuerpos anti-IL-22 neutralizantes y policlonales y monoclonales se unen a, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan la actividad IL-22 e IL-20 en ensayos de neutralización a base de células. IL-22 ha demostrado ser inducido en presencia de IL-9, y se sospecha que está implicado en promover respuestas inmunes tipo Thl e inflamación. IL-9 estimula la proliferación, activación, diferenciación y/o inducción de la función inmune de una variedad de formas y está implicada en asma, mastocitosis pulmonar y otras enfermedades, asi como también activa las vias STAT. Los antagonistas de la función de IL-22 o IL-9 pueden tener uso benéfico contra estas enfermedades humanas. La presente invención proporciona estos antagonistas nuevos de IL-22. IL-22 ha demostrado estar implicado en subregular la producción de reactivos de fase aguda, tales como amiloide de suero A (SAA), al-antiquimiotripisna y haptoglobina, y que la expresión de IL-22 se incrementa de nuevo de la inyección de lipopolisacáridos (LPS) in vivo sugiriendo que IL-22 está implicada en la respuesta inflamatoria (Dumoutier, L. et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. 97:10144-10149, 2000). La producción de proteínas de fase agudas, tales como SAA, se considera como un mecanismo de supervivencia a corto plazo en el que la inflamación es benéfica; sin embargo, el mantenimiento de proteínas de fase aguda durante periodos más largos contribuye a inflamación crónica y puede ser dañino para la salud humana. Para una revisión, véase Uhlar, CM y Whitehead, AS, Eur. J. Biochem. 265: 501-523, 1999, y Baumann H. y Gauldie, J. Immunology Today 15_:74-80, 1994. Más aún, la proteina de fase aguda SAA está implicada en la patogénesis de varias enfermedades inflamatorias crónicas, está implicada en arterosclerosis y artritis reumatoide, y es el precursor para la proteina A amiloide depositada en amiloidosis (Uhlar, CM y Whitehead, citado arriba) . Asi, ya que IL-22 actúa como una molécula pro-inflamatoria e induce la producción de SAA, los antagonistas serian útiles para tratar enfermedades inflamatorias y otras enfermedades asociadas con proteínas de respuesta de fase aguda inducidas por IL-22. Estos antagonistas se proporcionan por la presente invención. Por ejemplo, un método para reducir la inflamación inducida por IL-22 o inducida por IL-9 comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición de receptor que comprende IL-22RA soluble suficiente para reducir inflamación. Más aún, un método para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación puede comprender: (1) determinar un nivel de proteina amiloide A en suero; (2) administrar una composición que comprenda un polipéptido receptor de citocina IL-22RA soluble como el descrito en la presente en un vehículo farmacéuticamente aceptable; (3) determinar un nivel postadministración de proteina A amiloide en suero; (4) comparar el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa 1 con el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa 3, en donde una falta de incremento o una reducción en el nivel de proteina amiloide A en suero es indicativa de suprimir una respuesta inflamatoria. Evidencia experimental descrita en la presente demuestra que los antagonistas de IL-22, tales como receptores y anticuerpos solubles, de hecho reducen los niveles de SAA en modelos in vivo para enfermedades inflamatorias demostrando que la unión, bloqueo, inhibición, reducción, antagonismo o neutralización de IL-22 tiene efectos anti-inflamatorios.

Evidencia indica que un papel de IL-20 y sus receptores están implicados en psoriasis. Esta enfermedad multigénica de la piel se caracteriza por proliferación de queratinocitos incrementada, diferenciación alterada de queratinocitos e infiltración de células inmunes en la piel. La primera linea de evidencia para un papel de IL-20 en psoriasis es la hiperqueratosis y epidermis engrosada observadas en los ratones transgénicos que simulan anormalidades psoriásicas humanas. Números reducidos de tonofilamentos, que se cree están relacionados con una queratinización defectuosa, son una característica avasallante de psoriasis humana. Inclusiones intramitocondriales se han encontrado en condiciones de piel hiperplásicas tanto químicamente inducidas como que ocurren naturalmente en ratones. La causa de las inclusiones y sus efectos en la función mitocondrial, si es que las hay, son desconocidas. Ratones transgénicos IL-20 exhiben muchas de las características observadas en pacientes de psoriasis. Más aún, ARNm de receptor IL-20 (ARNm tanto de IL-20RA como de IL-20RB) es notoriamente sobrerregulado en piel psoriásica humana en comparación con piel normal sugiriendo más un papel para IL-20 en psoriasis. Ambas subunidades receptoras IL-20 se expresan en queratinocitos a lo largo de la epidermis y también son expresadas en un subconjunto de células inmunes y endoteliales. Los presentes inventores proponen que una expresión incrementada de un receptor IL-20 activado puede alterar las interacciones entre células indoteliales, células inmunes y queratinocitos, llevando a desregulación de la proliferación y diferenciación de queratinocitos. Además, datos de supresión de ratones descritos en la presente, en donde el receptor IL-22RA es suprimido en genes, demuestran que IL-22RA fue necesario para los efectos inflamatorios inducidos por IL-20 en piel en animales transgénicos. Estos resultados proporcionaron evidencia de que efectivamente bloquear la actividad IL-22RA, por ejemplo por medio de una supresión de gen IL-22RA, o similarmente por medio de un anticuerpo monoclonal neutralizante contra IL-22RA de la presente invención, similarmente reducirla los efectos en la piel inducidos por IL-20, asi como efectos en la piel inducidos por IL-22, por ejemplo en psoriasis, IBD, colitis y otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-20 y/o IL-22 incluyendo IBD, artritis, asma, artritis psoriásica, colitis, condiciones inflamatorias de la piel y dermatitis atópica. Más aún, IL-20 estimula la transducción de señales en la linea de células HaCaT de queratinocitos humanos, soportando una acción directa de este ligando nuevo en la piel. Además, las proteínas IL-lß, EGF y TNF-a, conocidas como activas en queratinocitos y que están implicadas con señales proliferativas y pro-inflamatorias en piel, incrementan la respuesta a IL-20. En células tanto HaCaT como BHK que expresaban el receptor IL-20, IL-20 señaliza a través de STAT3. Como se indica en la descripción anterior y los ejemplos abajo, IL-20 está implicado en la patología de psoriasis. La presente invención es en particular un método para tratar psoriasis al administrar agentes que se unen, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan IL-20. Los antagonistas para IL-20 pueden ser ya sea un receptor soluble que se una a IL-20, tal como un IL-22RA soluble, o anticuerpos, anticuerpos de cadena individual o fragmentos de anticuerpo que se unan ya sea a IL-20 o al receptor de IL-20, por ejemplo, anticuerpos anti-IL-22RA. Los anticuerpos evitarán entonces la activación del receptor IL-20. Además, debido a que IL-20 e IL-22 comparten IL-22RA como un receptor común, los antagonistas tales como IL-22RA soluble, o anticuerpos, anticuerpos de cadena individual o fragmentos de anticuerpos que se unen al receptor de IL-22RA se pueden usar para unirse concurrentemente a, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar IL-22 o tanto la actividad de IL-20 como IL-22. La psoriasis es una de las enfermedades dermatológicas más comunes, afectando hasta 1 a 2 por ciento de la población mundial. Es un trastorno dérmico inflamatorio crónico caracterizado por pápulas eritematosas y demarcadas fuertemente y placas redondeadas, cubiertas por una costra micácea plateada. Las lesiones en la piel de la psoriasis son muy pruriticas y variablemente pruriticas. Las áreas traumatizadas comúnmente desarrollan lesiones de psoriasis. Adicionalmente, otros factores externos pueden exacerbar la psoriasis incluyendo infecciones, tensiones y medicamentos, por ejemplo, litio, beta bloqueadores y antipalúdicos . La variedad más común de psoriasis es llamada tipo placa. Los pacientes con psoriasis tipo placa tendrán placas estables y de lento crecimiento, las cuales permanecen básicamente sin cambios durante largos periodos de tiempo. Las áreas más comunes para que ocurra la psoriasis de placa son las rodillas, codos, hendidura anal y el cuero cabelludo. La implicación tiende a ser simétrica. La psoriasis inversa afecta las regiones intertriginosas incluyendo la axila, ingles, región submamaria, ombligo y también tiende a afectar el cuero cabelludo, palmas y plantas. Las lesiones individuales son placas fuertemente marcadas pero pueden ser por humedad debido a su ubicación. La psoriasis tipo placa generalmente se desarrolla lentamente y tiene un curso indolente. Raramente remite espontáneamente. La psoriasis eruptiva (psoriasis guttata) es más común en niños y adultos jóvenes. Se desarrolla en forma aguda en individuos sin psoriasis o en aquellos con psoriasis de placa crónica. Los pacientes se presentan con muchas pápulas costrosas eritematosas pequeñas, frecuentemente después de una infección del tracto respiratorio superior con estreptococos beta-hemoliticos . Los pacientes con psoriasis también pueden desarrollar lesiones pustulares. Éstas pueden localizarse en las palmas y plantas o pueden generalizarse y asociarse con fiebre, malestar, diarrea y artralgias. Aproximadamente la mitad de todos los pacientes con psoriasis tienen implicación de las uñas de los dedos, que aparecen como cavidades punteadas, engrosamiento de la uña e hiperqueratosis subungual. Alrededor de 5 a 10% de los pacientes con psoriasis tienen quejas de articulaciones asociadas, y estas se encuentran más comúnmente en pacientes con implicación en dedos de uñas. Aunque algunos tienen la ocurrencia coincidente de artritis reumatoide clásica, muchos tienen enfermedad de articulaciones que cae dentro de uno de cinco tipos asociados con psoriasis: (1) enfermedad limitada a una sola o a pocas articulaciones pequeñas (70% de los casos); (2) una enfermedad tipo artritis reumatoide cero negativa; (3) implicación de las articulaciones interfalangeales distales; (4) artritis destructiva severa con el desarrollo de "artritis mutilans" y (5) enfermedad limitada a la espina. La psoriasis puede ser tratada al administrar agentes que se unan a, bloqueen, inhiban, reduzcan, antagonicen o neutralicen a IL-22, IL-20 o tanto IL-20 como IL-22. Los antagonistas que se prefieren son ya sea un receptor soluble para IL-20 e IL-22 tal como IL-22RA (SEQ ID NO: 3) o anticuerpos, fragmentos de anticuerpo o anticuerpos de cadena individual que se unan al receptor de IL-22RA, tales como los anticuerpos neutralizantes de la presente invención. Estos antagonistas pueden administrarse solos o en combinación con otras terapias establecidas, tales como lubricantes, queratoliticos, corticoesteroides tópicos, derivados de vitamina D tópicos, antralina, antimetabolitos sistémicos tales como metotrexato, terapia de luz ultravioleta-psoraleno (PUVA), etretinato, isotretinoina, ciclosporina, el derivado de vitamina D3 tópico calcipotriol . Además, estos antagonistas pueden administrarse a un individuo subcutáneamente, intravenosamente o transdérmicamente usando una crema o parche transdérmico que contenga el antagonista. Si se administra subcutáneamente, el antagonista puede inyectarse en una o más placas psoriásicas. Si se administra transdérmicamente, los antagonistas pueden administrarse directamente sobre las placas usando una crema, ungüento, pomada, o solución que contenga el antagonista. Los antagonistas para IL-20 o IL-22 pueden administrarse a una persona que tenga asma, bronquitis o fibrosis quistica u otra enfermedad pulmonar inflamatoria para tratar la enfermedad. Los antagonistas pueden administrarse mediante cualquier método adecuado incluyendo intravenoso, subcutáneo, lavado bronquial y el uso de un inhalante que contenga el antagonista. El análisis de la distribución tisular del ARNm que corresponde a ADNc de IL-22RA mostró que el nivel de ARNm fue más alto en placenta y bazo, y que el ligando al cual IL-22RA se una (IL-22) está implicado en inducir respuesta inflamatoria incluyendo inducción de la respuesta de fase aguda (Dumoutier, L. et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. _97: 10144-10149, 2000). Asi, modalidades particulares de la presente invención están dirigidas hacia el uso de IL-22RA y anticuerpos anti-IL-22RA solubles en enfermedades o condiciones inflamatorias inmunes tales como psoriasis, artritis psoriásica, dermatitis atópica, condiciones inflamatorias de la piel, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), enfermedad de Crohn, diverticulosis, asma, pancreatitis, diabetes tipo I (IDDM), cáncer pancreático, pancreatitis, enfermedad de Grave, cáncer de colon e intestinal, enfermedad autoinmune, sepsis, transplante de órganos o médula ósea; inflamación debido a indotoxemia, trauma, cirugía o infección; amiloidosis; esplenomegalia; enfermedad de injerto contra huésped; y en donde la inhibición de inflamación, supresión inmune, reducción de proliferación de células hematopoyéticas, inmunes, inflamatorias o linfoides, macrófagos, células T (incluyendo células Thl y Th2), supresión de la respuesta inmune a un patógeno o antigeno, otros casos en los que la inhibición de citocinas IL-22 o IL-20 se desee. Más aún, los anticuerpos o polipéptidos de unión que se unen a polipéptidos IL-22RA descritos en la presente invención y los propios polipéptidos IL-22RA son útiles para: 1) bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la señalización por medio de receptores IL-20 e IL-22 en el tratamiento de inflamación aguda, inflamación como resultado de trauma, lesión tisular, cirugía, sepsis o infección, y enfermedades inflamatorias crónicas tales como asma, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), colitis crónica, esplenomegalia, artritis reumatoide, episodios inflamatorios agudos recurrentes (por ejemplo, tuberculosis) y tratamiento de amiloidosis y aterosclerosis, enfermedad de Castleman, asma, y otras enfermedades asociadas con la inducción de respuesta en fase aguda. 2) bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la señalización por medio de receptores IL-20 e IL-22 en el tratamiento de enfermedades autoinmunes tales como IDDM, esclerosis múltiple (MS), lupus eritematoso sistémico (SLE), miastenia grave, artritis reumatoide e IBD para prevenir o inhibir la señalización en células inmunes (por ejemplo, linfocitos, monocitos, leucocitos) por medio IL-22RA (Hughes C et al., J. Immunol 153: 3319-3325, 1994). Como alternativa, anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales (MAb) contra receptores que comprenden IL-22RA, también se pueden usar como un antagonista para agotar células inmunes no deseadas para tratar enfermedades autoinmunes. Asma, alergia y otras enfermedades atópicas pueden ser tratadas como un MAb contra, por ejemplo, receptores solubles IL-22RA solubles para inhibir la respuesta inmunológica o para agotar células ofensivas. El bloqueo, inhibición, reducción o antagonismo de la señalización por medio IL-22RA, usando los polipéptidos y anticuerpos de la presente invención, también puede beneficiar enfermedades del páncreas, riñon, glándula pituitaria y células neuronales. IDDM, NIDDM, pancreatitis y carcinoma pancreático pueden beneficiarse. IL-22RA puede servir como un objetivo para terapia del cáncer con MAb en donde un MAb antagonizante inhiba el crecimiento de cáncer y dirija una eliminación mediada por el sistema inmunológico Holliger P y Hoogenboom, H: Nature Biotech. 16: 1015-1016, 1998) . Los MAbs contra IL-22RA soluble también pueden ser útiles para tratar nefropatias tales como glomeruloesclerosis, neuropatía membranosa, amiloidosis (la cual afecta también al riñon entre otros tejidos), arteriosclerosis renal, glomerulonefritis de varios orígenes, enfermedades fibroproliferativas del riñon, asi como disfunción renal asociada con SLE, IDDM, diabetes tipo II (NIDDM), tumores renales y otras enfermedades. 3) agonizar, potenciar, incrementar o iniciar la señalización por medio de receptores IL-20 o IL-22 en el tratamiento de enfermedades autoinmunes tales como IDDM, MS, SLE, miastenia grave, artritis reumatoide e IBD. Los anticuerpos neutralizantes y monoclonales anti-IL-22RA pueden señalizar linfocitos u otras células inmunes para diferenciarse, alterar la proliferación o cambiar la producción de citocinas o proteínas de superficie celular que reduzcan la autoinmunidad. Específicamente, la modulación de una respuesta de células T auxiliares a un patrón alterno de secreción de citocinas podria desviar una respuesta autoinmune para reducir la enfermedad (Smith JA et al., J^ Immunol. 160:4841-4849, 1998). Similarmente, los anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA soluble, anti-heterodimeros y multimeros IL-22RA/CRF2-4 solubles pueden usarse para señalizar, agotar y desviar células inmunes implicadas en asma, alergia y enfermedad atópica. La señalización por medio de IL-22RA también puede beneficiar enfermedades del páncreas, riñon, glándula pituitaria y células neuronales. IDDM, NIDDMA, pancreatitis y carcinoma pancreático se pueden beneficiar. IL-22RA puede servir como un objetivo para terapia con MAb de cáncer pancreático en donde un MAb de señalización inhibe el crecimiento de cáncer y se dirija a eliminar por mediación inmune (Tutt, AL et al., J Immunol. 161 : 3175-3185, 1998). En forma similar, el carcinoma de células renales puede ser tratado con anticuerpos monoclonales contra receptores solubles que comprendan IL-22RA de la presente invención. Los polipéptidos IL-22RA solubles descritos en la presente se pueden usar para unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad IL-22 o IL-20, ya sea individualmente o juntos, en el tratamiento de enfermedades autoinmunes, enfermedades atópicas, NIDDM, pancreatitis y disfunción renal como se describo arriba. Una forma soluble de IL-22RA se puede usar para promover una respuesta de anticuerpo mediada par células Th y/o para promover la producción de IL-4 u otra citocinas por linfocitos u otras células inmunes. Los receptores que comprenden IL-22RA soluble de la presente invención son útiles como antagonistas de las citocinas IL-20 o IL-22. Estos efectos antagonistas pueden lograrse mediante la neutralización directa o unión de IL-20 o IL-22. Además de usos antagonistas, los receptores solubles de la presente invención pueden unirse a IL-22 y actuar como proteínas portadoras para citocinas IL-20 o IL-22, para transportar asi el ligando a diferentes tejidos, órganos y células dentro del cuerpo. De esta forma, los receptores solubles de la presente invención pueden ser fusionados o acoplados a moléculas, polipéptidos o porciones químicas que dirijan el complejo receptor soluble-ligando a un sitio especifico, tal como un tejido, célula inmune especifica o tumor. Por ejemplo, en infección aguda o algunos cánceres, el beneficio podria ser el resultado de la inducción de inflamación y las proteínas de respuesta de fase aguda local por la acción de IL-22. Asi, los receptores solubles de la presente invención pueden usarse para dirigir específicamente la acción de IL-20 o IL-22. Véase, Cosman, D. Cytokine 5: 95-106, 1993 y Fernandez-Botran, R. Exp. Opin. Invest. Drugs 9:497-513, 2000. Más aún, los receptores solubles de la presente invención pueden usarse para estabilizar la IL-22 o IL-20, para incrementar la biodisponibilidad, longevidad terapéutica y/o eficacia del ligando al estabilizar al ligando contra la degradación o eliminación, o al dirigir al ligando a un sitio de acción dentro del cuerpo. Por ejemplo, el complejo IL-6 que ocurre naturalmente/IL-6R soluble estabiliza IL-6 y puede señalizar a través del receptor gpl30. Véase, Cosman, D. Cytokine 5: 95-106, 1993 y Fernandez-Botran, R. , citados arriba). Además, IL-22RA puede combinarse con un ligando cognado tal como IL-22 para comprender un complejo receptor soluble/ligando. Estos complejos pueden usarse para estimular respuestas de células que presenten una subunidad receptora compañera tales como, por ejemplo, pDIRSl (IL-20RB) o CRF2-4 (IL-10RB) . La especificidad celular de los complejos IL-22RA/ligando puede diferir de aquella observada para el ligando administrado solo. Además, los complejos pueden tener diferentes propiedades farmacocinéticas tales como afectar la vida media, dosis/respuesta y especificidad en órganos o tejidos. Los complejos IL-22RA/IL-22 o IL-22RA/IL-20 pueden entonces tener actividad agonista para incrementar una respuesta inmune o estimular células mesangiales o para estimular células hepáticas. Como alternativa, sólo los tejidos que expresen una subunidad de señal que se heterodimericen con el complejo pueden ser afectados análogos a la respuesta a los complejos IL-6/IL-6R (Hirota H. et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. 92:4862-4866, 1995; Hirano, T. en Thomason, A. (Ed.) "The Cytokine Handbook", 3a Ed., p. 208-209). Los complejos receptor soluble/citocina para IL-12 y CNTF despliegan actividades similares . Más aún, la inflamación es una respuesta protectora por un organismo para evitar un agente invasor. La inflamación es un evento en cascada que implica muchos mediadores celulares y humorales. Por un lado, la supresión de las respuestas inflamatorias puede llevar a un huésped inmunocomprometido; sin embargo, si se deja sin revisar, la inflamación puede llevar a serias complicaciones incluyendo enfermedades inflamatorias crónicas (por ejemplo, psoriasis, artritis, artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino y similares), choque séptico y insuficiencia orgánica múltiple. En forma importante, estos diversos estados de enfermedad comparten mediadores inflamatorios comunes. Las enfermedades colectivas que se caracterizan por inflamación tienen un gran impacto en la morbidez y mortalidad humana. Por lo tanto, es claro que las proteínas anti-inflamatorias tales como IL-22RA y anticuerpos anti-IL-22RA, podrían tener un potencial terapéutico crucial para un basto número de enfermedades humanas y animales, de asma y alergia a autoinmunidad y choque séptico. 1. Artritis La artritis, incluyendo osteoartritis, artritis reumatoide, articulaciones artríticas como resultado de lesión, y similares, son condiciones inflamatorias comunes que podrían beneficiarse del uso terapéutico de proteínas anti-inflamatorias, tales como polipéptidos IL-22RA de la presente invención. Por ejemplo, la artritis reumatoide (RA) es una enfermedad sistémica que afecta el cuerpo completo y es una de las formas más comunes de artritis. Se caracteriza por la inflamación de la membrana que recubre la articulación, lo cual causa dolor, rigidez, calentamiento, enrojecimiento e hinchazón. Las células inflamatorias liberan enzimas que pueden digerir hueso y cartílago. Como resultado de la artritis reumatoide, el recubrimiento de articulación inflamado, el sinovio, puede invadir y dañar hueso y cartílago llevando al deterioro de las articulaciones y a un severo dolor entre otros efectos fisiológicos. La articulación implicada puede perder su forma y alineación, dando como resultado dolor y pérdida de movimiento. La artritis reumatoide (RA) es una enfermedad mediada por el sistema inmune particularmente caracterizada por inflamación y subsecuente daño tisular llevando a severa discapacidad y mortalidad incrementada. Una variedad de citocinas se producen localmente en las articulaciones reumatoides. Numerosos estudios han demostrado que IL-1 y TNF-a, dos citocinas pro-inflamatorias prototipicas, juegan un papel importante en los mecanismos implicados en la inflamación sinovial y en la destrucción progresiva de las articulaciones. De hecho, la administración de inhibidores de TNF-a e IL-1 en pacientes con RA ha llevado a una mejora dramática de los signos clínicos y biológicos de inflamación y a una reducción de las señales radiológicas de erosión ósea y destrucción de cartílago. Sin embargo, a pesar de estos resultados alentadores, un porcentaje significativo de pacientes no responden a estos agentes, sugiriendo que otros mediadores también están implicados en la patofisiologia de la artritis. (Gabay, Expert. Opin. Biol. Ther. 2(2) : 135-149, 2002) . Uno de esos mediadores podria ser IL-20 o IL-22, y como tal una molécula que se una o inhiba la actividad de IL-22 o IL-20, tal como polipéptidos IL-22RA o anticuerpos anti-IL-22RA o moléculas, podrían servir como un terapéutico valioso para reducir la inflamación en artritis reumatoide y otras enfermedades artríticas. Existen varios modelos animales para artritis reumatoide conocidos en la técnica. Por ejemplo, en el modelo de artritis inducida por colágeno (CÍA) , los ratones desarrollan artritis inflamatoria crónica que estrechamente simula la artritis reumatoide humana. Ya que CÍA comparte características inmunológicas y patológicas similares con RA, esto la hace un modelo ideal para tamizar potenciales compuestos anti-inflamatorios humanos. El modelo CÍA es un modelo bien conocido en ratones que depende tanto de una respuesta inmune, como de una respuesta inflamatoria, para que pueda ocurrir. La respuesta inmune comprende la interacción de células B y células T CD4+ en respuesta a colágeno, el cual se da como antigeno, y lleva la producción de anticuerpos anti-colágeno . La fase inflamatoria es el resultado de respuestas tisulares de mediadores de inflamación, como una consecuencia de algunos de estos anticuerpos que reaccionan de manera cruzada con el colágeno nativo del ratón y activan la cascada de complemento. Una ventaja de usar el modelo CÍA es que se conocen los mecanismos básicos de patogénesis. Los epitopes relevantes de células T y células B en colágeno tipo II han sido identificados, y varios parámetros inmunológicos (por ejemplo, hipersensibilidad tipo retrasada y anticuerpo anticolágeno) e inflamatorios (por ejemplo, citocinas, quimiocinas y enzimas degradadoras de matriz) que se refieren a artritis mediada por el sistema inmune han sido determinados, y de esta manera se pueden usar para evaluar la eficacia de compuestos de prueba en el modelo CÍA (Wooley, Curr. Opin. Rheum. 3:407-20, 1999; Williams et al., Immunol. 89:9784-788, 1992; Myers et al., Life Sci. 61:1861-78, 1997 y Wang et al., Immunol. 92:8955-959, 1995) . La administración de polipéptidos que comprenden IL-22RA2 soluble (zcytorld), tales como zcytorl6-Fc4 u otras proteínas solubles y de fusión IL-22RA2 a estos ratones de modelo CÍA se usó para evaluar el uso de IL-22RA2 como un antagonista a IL-22 usado para reducir síntomas y alterar el curso de enfermedad. Más aún, los resultados que muestran la inhibición de IL-22 por IL-22RA2 proporcionan una prueba conceptual de que otros antagonistas IL-22, tales como IL-22RA o anticuerpos contra el mismo, también se pueden usar para reducir síntomas y alterar el curso de enfermedad. Ya que el ligando de IL-22RA2, IL-22, induce la producción de SAA, la cual está implicada en la patogénesis de artritis reumatoide, y que IL-22RA2 demostró ser capaz de inhibir la actividad de IL-22 y SAA in vi tro e in vivo, la administración sistémica o local de polipéptidos que comprenden IL-22RA, tales como zcytorl6-Fc4 u otros receptores solubles IL-22 (por ejemplo, IL-22RA; SEQ ID NO: 3) y anticuerpos anti-IL-22RA y proteínas de fusión, puede suprimir potencialmente la respuesta inflamatoria en RA. La inyección de 10 µg de zcytorl6-FC (tres veces a la semana durante 4 semanas) redujo significativamente la puntuación de enfermedad (puntuación de pata, incidente de inflamación o enfermedad) . Otros terapéuticos potenciales incluyen polipéptidos IL-22RA, anticuerpos IL-22RA o anticuerpos anti-IL-22RA o moléculas, y similares. Un grupo ha mostrado que un anticuerpo IL-22 antiratón puede reducir síntomas en un modelo de CÍA de ratón en relación a ratones de control, demostrando asi conceptualmente que los polipéptidos IL-22RA solubles y anticuerpos neutralizantes contra IL-22RA pueden ser benéficos para tratar enfermedades humanas. La administración de un solo anticuerpo monoclonal de rata especifico de ratón IL-22 (P3/1) redujo los síntomas de artritis en los animales cuando se introdujo profilácticamente o después de que artritis inducida por CÍA se indujo en el modelo (publicación de WIPO 02/068476; publicado el 9 de septiembre de 2002) . Por lo tanto, los polipéptidos IL-22RA solubles y anticuerpos anti-IL-22RA de la presente invención, incluyendo los anticuerpos IL-22RA anti-humanos neutralizantes de la presente invención, se pueden usar para neutralizar IL-22 y IL-20 en el tratamiento de enfermedades humanas especificas tales como psoriasis, artritis psoriásica, artritis, endotoxemia, enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), colitis y otras condiciones inflamatorias descritas en la presente. 2. Endotoxemia La endotoxemia es una severa condición que resulta comúnmente de agentes infecciosos tales como bacterias y otros agentes de enfermedades infecciosas, sepsis, síndrome de choque tóxico o en paciente inmunocomprometidos sujetos a infecciones oportunistas y similares. Las proteínas antiinflamatorias terapéuticamente útiles, tales como los polipéptidos y anticuerpos IL-22RA de la presente invención, podrían ayudar a prevenir y tratar endotoxemia en humanos y animales. Polipéptidos IL-22RA, anticuerpos anti-IL-22RA o anticuerpo anti-IL-22 o moléculas, podrían servir como un terapéutico valioso para reducir la inflamación y efectos patológicos en endotoxemia. La endotoxemia inducida por lipopolisacáridos (LPS) abarca muchos de los mediadores pro-inflamatorios que producen efectos patológicos en las enfermedades infecciosas y LPS indujo endotoxemia en roedores es un modelo ampliamente usado para estudiar los efectos farmacológicos de agentes pro-inflamatorios o inmunomoduladores potenciales. LPS, producido en bacterias gram negativas, es un gran agente causante en la patogénesis de choque séptico (Glausner et al., Lancet 338:732, 1991) . Un estado tipo choque puede de hecho inducirse experimentalmente por una sola inyección de LPS en animales. Las moléculas producidas por células que responden a LPS pueden dirigirse a patógenos directa o indirectamente. Aunque estas respuestas biológicas protegen al huésped contra patógenos invasores, también pueden causar daño. Asi, la estimulación masiva de inmunidad innata, que ocurre como resultado de infección bacteriana gram negativa severa, lleva a la producción excesiva de citocinas y otras moléculas, y el desarrollo en un síndrome fatal, síndrome de choque séptico, el cual se caracteriza por fiebre, hipotensión, coagulación intravascular diseminada, y insuficiencia orgánica múltiple (Dumitru et al. Cell 103:1071-1083, 2000) . Estos efectos tóxicos de LPS están principalmente relacionados con la activación de macrófagos que lleva a la liberación de varios mediadores inflamatorios. Entre estos mediadores, TNF parece jugar un papel crucial, como lo indica la prevención de toxicidad LPS por la administración de anticuerpos anti-TNF neutralizantes (Beutler et al., Science 229:869, 1985). Está bien establecido que la inyección de 1 µg de LPS de E . coli en un ratón C57B1/6 dará como resultado incremento significativos en IL-6 circulante, TNF-a, IL-1 y proteínas de fase aguda (por ejemplo, SAA) aproximadamente 2 horas después de la inyección. La toxicidad de LPS parece ser medida por estas citocinas en inmunización pasiva contra estos mediadores puede dar como resultado mortalidad reducida (Beutler et al., Science 229:869, 1985). Las estrategias de inmunointervención potenciales para la prevención y/o tratamiento de choque séptico incluyen anti-TNF mAb, antagonista del receptor IL-1, LIF, IL-10 y G-CSF. La administración de polipéptidos que comprenden IL-22RA2 soluble, tales como Z cytorl6-Fc4 u otras proteínas de fusión y solubles IL-22RA a este modelo inducido por LPS se usó para evaluar el uso de IL-22RA2 para reducir síntomas y alterar el curso de enfermedad inducida por LPS. Además, los resultados que muestra la inhibición de IL-22 por IL-22RA son una prueba conceptual de que otros antagonistas de IL-22, tales como IL-22RA o anticuerpos contra el mismo, se pueden usar también para reducir síntomas en el modelo inducido por LPS y alterar el curso de enfermedad. El modelo mostró la inducción de IL-22 por inyección con LPS y el tratamiento potencial de enfermedad por polipéptidos IL-22RA2. Ya que LPS induce la producción de IL-22 pro-inflamatoria, SAA de otros factores pro-inflamatorios posiblemente contribuyan a la patología de endotoxemia, la neutralización de la actividad de IL-22, SAA u otros factores pro-inflamatorios por un polipéptido IL-22RA antagonista se pueden usar para reducir los síntomas de endotoxemia, tales como los observados en choque endotóxico. Otros terapéuticos potenciales incluyen polipéptidos IL-22RA, anticuerpos anti-IL-22RA o anticuerpos anti-IL-22 o moléculas, y similares. 3. Enfermedad inflamatoria del intestino (IBP) En los Estados Unidos aproximadamente 500,000 personas sufren de Enfermedad Inflamatoria del Intestino (IBD), que puede afectar ya sea el colon y recto (colitis ulcerativa) o ambos, intestino delgado y grueso (Enfermedad de Cronh) . La patogénesis de estas enfermedades no es clara, pero implica inflamación crónica de los tejidos afectados. Los polipéptidos IL-22RA, anticuerpos anti-IL-22RA o anticuerpos anti-IL-22 o moléculas, podrían servir como un terapéutico valioso para reducir la inflamación y efectos patológicos en IBD y enfermedades relacionadas. La colitis ulcerativa (UC) es una enfermedad inflamatoria del intestino grueso, llamado comúnmente el colon, caracterizada por inflamación y ulceración de la mucosa o revestimiento más interior del colon. Esta inflamación hace que el colon se vacie frecuentemente, dando como resultado diarrea. Los síntomas incluyen aflojamiento de las heces y calambres abdominales, fiebre y pérdida de peso asociados. Aunque se desconoce la causa exacta de la UC, recientes investigaciones sugieren que las defensas naturales del cuerpo están operando contra las proteínas en el cuerpo que el cuerpo cree que son foráneas (una "reacción autoinmune") . Tal vez debido a que simulan proteínas bacterianas en el intestino, estas proteínas pueden ya sea instigar o estimular el proceso inflamatorio que empieza a destruir el revestimiento del colon. Al ser destruido el revestimiento del colon, se forman úlceras que liberan moco, pus y sangre. La enfermedad normalmente empieza en el área rectal y puede eventualmente extenderse a través del intestino grueso completo. Episodios repetidos de inflamación llevan al engrosamiento de la pared del intestino y recto con tejido cicatrizante. La muerte de tejido colónico o sepsis puede ocurrir con severa enfermedad. Los síntomas de colitis ulcerativa varian en severidad y su inicio puede ser gradual o repentino. Pueden provocarse ataques por muchos factores, incluyendo infecciones respiratorias o estrés. Aunque actualmente no hay cura para UC disponible, los tratamientos se enfocan en suprimir el proceso inflamatorio anormal en el revestimiento del colon. Los tratamientos que incluyen inmunosupresores corticoesteroides (por ejemplo, azatioprina, mercaptopurina y metotrexato) y aminosalicilatos están disponibles para tratar la enfermedad. Sin embargo, el uso a largo plazo de inmunosupresores tales como corticoesteroides y azatioprina puede dar como resultado serios efectos secundarios incluyendo adelgazamiento de los huesos, cataratas, infección y efectos hepáticos y en médula ósea. En los pacientes a quienes las terapias actuales no han sido exitosas, la cirugía es una opción. La cirugía implica la remoción del colon completo y el recto. Existen varios modelos animales que pueden imitar particularmente colitis ulcerativa crónica. El modelo más ampliamente usado es el modelo de colitis inducida por ácido 2 , 4 , 6-trinitrobencensulfónico/etanol (TNBS) , el cual induce inflamación y ulceración crónica en el colon. Cuando TNBS se introduce en el colon de ratones susceptibles por medio de instilación intrarrectal, induce la respuesta inmune mediada por células T en la mucosa colónica, en este caso llevando a una masiva inflamación mucosa caracterizada por la densa infiltración de células T y macrófagos a lo largo de la pared completa del intestino grueso. Además, esta imagen histopatológica se logra por la imagen clínica de pérdida de peso progresiva (reducción) , diarrea sanguinolenta, prolapso rectal y engrosamiento de las paredes del intestino (Neurath et al. Intern. Rev. Immunol . 19:51-62, 2000). Otro modelo de colitis usa dextrano sulfato de sodio (DSS), el cual induce una colitis aguda manifestada por diarrea sanguinolenta, pérdida de peso, acortamiento del colon y ulceración mucosa con infiltración de neutrófilos. La colitis inducida por DSS se caracteriza histológicamente por infiltración de células inflamatorias en la lámina propia, con hiperplasia linfoide, daño a cripto focal y ulceración epitelial. Estos cambios se cree que se desarrollan debido a un efecto tóxico de DSS en el epitelio y por fagocitosis de células de la lámina propia y la producción de TNF-a e IFN-gamma. A pesar de su uso común, varios aspectos que se refieren a los mecanismos de DSS acerca de la relevancia para la enfermedad humana permanecen sin resolver. DSS es considerado como un modelo independiente de células T toda vez que se observa en animales deficientes en células T tales como ratones SCID. La administración de polipéptidos que comprenden IL-22RA2 solubles, tales como zcytorl6-Fc4 u otras proteínas solubles y de fusión IL-22RA a estos modelos TNBS o DSS se puede usar para evaluar el uso de IL-22RA para reducir los síntomas y alterar el curso de enfermedad gastrointestinal. Más aún, los resultados que demuestran la inhibición de IL-22 por IL-22RA2 son una prueba conceptual de que otros antagonistas de IL-22, tales como IL-22RA o anticuerpos contra el mismo, se pueden usar también para reducir síntomas en los modelos de colitis/IBD y alterar el curso de la enfermedad. Los presentes inventores observaron la expresión incrementada de IL-22 en tejidos de colon de ratones DSS por RT-PCR, y la actividad sinérgica de IL-22 con IL-lbeta en lineas de células intestinales. Esto indica que IL-22 puede jugar un papel en la respuesta inflamatoria en colitis, y la neutralización de la actividad IL-22 al administrar polipéptidos IL-22RA2 es un enfoque terapéutico potencial para IBD. Otros terapéuticos potenciales incluyen polipéptidos IL-22RA, anticuerpos anti-IL-22RA o anticuerpos anti-IL-22 o moléculas, y similares. 4. Psoriasis La psoriasis es una condición crónica de la piel que afecta a más de siete millones de norteamericanos. La psoriasis ocurre cuando nuevas células dérmicas crecen anormalmente, dando como resultado parches de piel inflamada, hinchada y costrosa en donde la piel vieja no se ha mudado lo suficientemente rápido. La psoriasis de placa, la forma más común, se caracteriza por parches inflamados de piel ("lesiones") cubiertos con costras blancas plateadas. La psoriasis puede estar limitada a pocas placas o incluir áreas moderadas a extensas de piel, que aparecen muy comúnmente sobre el cuero cabelludo, rodillas, codos y tronco. Aunque es altamente visible, la psoriasis no es una enfermedad contagiosa. La patogénesis de la enfermedad implica inflamación crónica de los tejidos afectados. Los polipéptidos IL-22RA, anticuerpos anti-IL-22RA o anticuerpos anti-IL-22 y anti-IL-20 o moléculas, podrían servir como un terapéutico valioso para reducir la inflamación y efectos patológicos en psoriasis, otras enfermedades dérmicas inflamatorias, alergias de piel y mucosas y enfermedades relacionadas . La psoriasis es un trastorno inflamatorio mediado por células T de la piel que puede causar incomodidad considerable. Es una enfermedad para la cual no hay cura y afecta a personas de todas las edades. La psoriasis afecta aproximadamente 2% de las poblaciones de Europa y América del norte. Aunque los individuos con psoriasis leve pueden comúnmente controlar su enfermedad con agentes tópicos, más de 1 millón de pacientes a nivel mundial requieren de terapia ultravioleta o inmunosupresora sistémica. Desafortunadamente, la inconveniencia y riesgos de la radiación ultravioleta y las toxicidades de muchas terapias limitan su uso a largo plazo. Más aún, los pacientes normalmente tienen recurrencia de psoriasis y en algunos casos rebote, justo después de detener la terapia inmunosupresora . IL-20 es un nuevo homólogo de IL-10 que mostró causar letalidad neonatal con anormalidades en piel incluyendo diferenciación epidérmica aberrante en ratones transgénicos IL-20 (Blumberg H et al., Cell 104:9-19, 2001). El receptor de IL-20 es dramáticamente subregulado en piel psoriásica. Ya que IL-22 comparte una subunidad receptora (zcytorll) con el receptor de IL-20, y que los ratones transgénicos IL-22 despliegan un fenotipo similar, es posible que IL-22 también esté implicado en las enfermedades inflamatorias de la piel tales como psoriasis. La administración de polipéptido IL-22RA o un antagonista del anticuerpo anti-IL-22RA, ya sea subcutánea o tópicamente, podria reducir potencialmente la inflamación y síntomas. Otros terapéuticos potenciales incluyen polipéptidos IL-22RA, polipéptidos receptores zcytorll/CRF2-4 solubles, o anticuerpos anti-IL-22 o moléculas y similares. Además, la sobre-expresión de IL-22 e IL-20 fue mostrada en lesiones psoriásicas humanas, sugiriendo que IL-22, al igual que IL-20 también está implicada en psoriasis humana. Más aún, como se describe en la presente, la sobre-expresión de IL-20 o IL-22 en ratones transgénicos mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo psoriásico; y además la inyección de IL-22 en ratones normales demostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo psoriásico que fue destruido por el antagonista de receptor soluble IL-22RA2 (zcytorld; publicación de WIPO No. WO 01/40467) . Estos datos in vivo sugieren además que la IL-22 pro-inflamatoria está implicada en psoriasis. Asi, los antagonistas para la actividad de IL-22 e IL-20, tales como receptores solubles IL-22RA y anticuerpos contra los mismos que incluyen los anticuerpos monoclonales y neutralizantes antihumanos IL-22RA de la presente invención, son útiles en el tratamiento terapéutico de enfermedades inflamatorias, particularmente como antagonistas tanto para IL-22 como IL-20 individualmente o juntos en el tratamiento de psoriasis. Más aún, los antagonistas para la actividad de IL-22, tales como receptores solubles IL-22RA y anticuerpos contra los mismos que incluyen los anticuerpos monoclonales y neutralizantes antihumanos-IL-22RA de la presente invención, son útiles en el tratamiento terapéutico de otras enfermedades inflamatorias por ejemplo como agentes que se unen a, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan IL-22 e IL-20 en el tratamiento de dermatitis atópica, IBD, colitis, endotoxemia, artritis, artritis reumatoide, y artritis psoriásica, enfermedad respiratoria del adulto (ARD) , choque séptico, insuficiencia orgánica múltiple, lesión pulmonar inflamatoria tal como asma o bronquitis, neumonía bacteriana, psoriasis, eccema, dermatitis atópica y de contacto y enfermedades inflamatorias del intestino tales como colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn. Más aún, los anticuerpos anti-IL-22RA y receptores solubles IL-22RA de la presente invención se pueden usar en la prevención y terapia contra pérdida de peso asociada con un número de enfermedades inflamatorias descritas en la presente, asi como para cáncer (por ejemplo, quimioterapia y caquexia) y enfermedades infecciosas. Por ejemplo, una severa pérdida de peso es un marcador clave asociado con modelos de septicemia, MS, RA y modelos de tumor. Además, la pérdida de peso es un parámetro clave para muchas enfermedades humanas incluyendo cáncer, enfermedades infecciosas y enfermedades inflamatorias. La pérdida de peso fue mostrada en ratones inyectados con adenovirus IL-22 descrito en la presente. Los anticuerpos anti-IL-22 y antagonistas IL-22 tales como los receptores solubles IL-22RA y anticuerpos contra los mismos de la presente invención, asi como receptores zcytorld (IL-22RA2), se pueden probar para verificar su capacidad para prevenir y tratar pérdida de peso en ratones inyectados con adenovirus IL-22 descritos en la presente. Los métodos para determinar un régimen profiláctico o terapéutico para estos antagonistas IL-22 se conocen en la técnica y pueden determinarse usando los métodos descritos en la presente. Los polipéptidos receptores solubles IL-22RA y anticuerpos contra los mismos también se pueden usar en sistemas de diagnóstico para la detección de niveles circulantes de ligando IL-22 o IL-20, y en la detección de IL-22 asociado con respuesta inflamatoria en fase aguda. En una modalidad relacionada, anticuerpos y otros agentes que se unen específicamente a receptores solubles IL-22RA de la presente invención se pueden usar para detectar polipéptidos receptores circulantes; de forma inversa, los propios receptores solubles IL-22RA se pueden usar para detectar polipéptidos IL-22 o IL-20 circulantes o de acción local.

Los niveles elevados o deprimidos de polipéptidos ligandos o receptores pueden ser indicadores de condiciones patológicas, incluyendo inflamación o cáncer. IL-22 se sabe que induce respuesta inflamatoria en fase aguda asociada. Más aún, la detección de proteínas o moléculas de fase aguda tales como IL-20 o IL-22 puede ser indicadora de una condición inflamatoria crónica en ciertos estados de enfermedad (por ejemplo, psoriasis, artritis reumatoide, colitis, IBD) . La detección de estas condiciones sirve para ayudar en el diagnóstico de enfermedades asi como para ayudar a un médico a seleccionar una terapia adecuada. La administración in útero de anticuerpos IL-22 o IL-20 neutralizantes puede usarse para mostrar la eficacia in vivo en modelos de enfermedad al reducir o eliminar el fenotipo dérmico encontrado en crias transgénicas IL-22 las cuales sobre-expresan IL-22 o crias transgénicas IL-20 que sobre-expresan IL-20. Hay antecedentes en la técnica para el tratamiento en útero con anticuerpos monoclonales neutralizantes (mAbs). En un caso, el desarrollo del subconjunto B-l de células B fue afectado dramáticamente al tratar ratones hembra preñados con un mAb especifico para la molécula especifica de células B, CD19 (por ejemplo, Krop I. Et al., Eur. J. Immunol. 26 (1) :238-42, 1996). Krop et al. inyectaron ratones preñados sincronizados intraperitonealmente con 500 µg de mAb CD19 anti-ratón de rata (o un Ab de control igualada a isotipo de rata) en PBS empezando el dia 9 de la gestación, con inyecciones subsecuentes cada otro dia hasta el nacimiento. Las crias también fueron inyectadas una vez con 500 µg de estos anticuerpos a los 10 dias de edad. En otro caso, Tanaka et al . , encontraron que el tratamiento en útero con anticuerpo monoclonal contra la cadena beta del receptor IL-2 abroga completamente el desarrollo de células epidérmicas dendriticas Thy-1+. Las dos subunidades distintas del receptor IL-2, es decir, la cadena alfa (IL-2R alfa) y la cadena beta (IL-2R beta), son expresadas en una forma casi mutuamente exclusiva a lo largo de una ontogenia de timo fetal. El bloqueo de IL-2R beta, un componente transductor de señales de IL-2R, al administrar un mAb neutralizante contra IL-2R beta, dio como resultado la desaparición completa y selectiva de células epidérmicas dendriticas de piel Thy-1+. El desarrollo de cualquier otro subconjunto de células T no fue comprometido. Esto indicó que IL-2 juega un papel crucial en el desarrollo de células fetales V gamma 5 + y sus descendientes (véase, Tanaka, T. et al., Int Immunol. 4 (4) :487-9, 1992). Además, Schattemann GC et al., demostraron que PDGF-A se requiere para un desarrollo cardiovascular murino normal usando un sistema en útero. Varias lineas de evidencias sugieren que la cadena A del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-A) se requiere para un desarrollo cardiovascular embrionario normal. La introducción de anticuerpos neutralizantes anti-PDGF-A en deciduas de ratones en útero dio como resultado la ruptura selectiva de interacciones ligando-receptor PDGF-A in vivo durante un periodo de 18-24 horas y permitió la evaluación de si se requiere PDGF-A para el desarrollo cardiovascular y cuándo se requiere (véase, Schattemann GC et al., Dev. Biol. 176(1) :133-42, 1996). Estos resultados, asi como otros descritos en la técnica, proporcionan evidencia de que anticuerpos monoclonales neutralizantes pueden desarrollar fuertes efectos en útero. De manera similar, datos que demuestran la eficacia de IL-20 o IL-22 neutralizantes con anticuerpos monoclonales in vivo en modelos de enfermedad para reducir o eliminar el fenotipo de de piel encontrado en crias transgénicas IL-20 y IL-22 que sobre-expresan IL-20 y IL-22 respectivamente pueden ser mostrados. Estos ratones transgénicos crecen con una apariencia de pelaje "brilloso", debido al menos en parte a un engrosamiento de la epidermis como el descrito en la presente. Las crias TG IL-20 que expresan niveles muy bajos de la citocina transgénica pueden recuperarse y de hecho sobreviven a la crianza, pero los ratones TG IL-22 mueren justo después de nacer, generalmente antes de 5 dias de edad. Por ejemplo, los anticuerpos neutralizantes contra IL-20 incluyen anticuerpos, tales como anticuerpos monoclonales neutralizantes que se pueden unir a epitopes antigénicos IL-22 y neutralizar la actividad IL-20. En consecuencia, los péptidos y polipéptidos portadores de epitopes antigénicos de IL-20 son útiles para desarrollar anticuerpos que se unen a los polipéptidos IL-20 descritos aqui, asi como para identificar y tamizar anticuerpos monoclonales anti-IL-20 que sean neutralizantes, y que puedan unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-20. Estos anticuerpos monoclonales neutralizantes de la presente invención pueden unirse a un epitope antigénico IL-20. Estos epitopes en SEQ ID NO: 8 son predichos por una gráfica de Jameson-Wolf, por ejemplo, usando el programa DNASTAR Protean (DNASTAR, Inc., Madison, Wl) sirven como epitopes antigénicos preferidos, y se pueden determinar por alguien de capacidad en la técnica. Estos epitopes antigénicos incluyen: residuos de aminoácidos residuos de aminoácidos 42 (He) a 102 (Asp) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 42 (He) a 60 (He) de SEQ ID NO: 8; los residuos de aminoácido 42 (He) a 69 (Glu) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 42 (He) a 81 (Cys) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 42 (He) a 96 (Lys) de SEQ ID NO: 8 residuos de aminoácido 42 (He) a 102 (Asp) de SEQ ID NO: 8 residuos de aminoácido 60 (He) a 69 (Glu) de SEQ ID NO: 8 residuos de aminoácido 60 (He) a 81 (Cys) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 60 (He) a 96 (Lys) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 60 (He) a 102 (Asp) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 69 (Glu) a 81 (Cys) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 69 (Glu) a 96 (Lys) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 69 (Glu) a 102 (Asp) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 81 (Cys) a 96 (Lys) de SEQ ID NO: 8; residuos de aminoácido 81 (Cys) a 102 (Asp) de SEQ E) NO: 8; y residuos de aminoácido 96 (Lys) a 102 (Asp) de SEQ ID NO: 8. Además de otros modelos de enfermedad descritos en la presente, la actividad de anticuerpos anti-IL-22RA en tejido inflamatorio derivado de lesiones psoriásicas humanas pueden medirse in vivo usando un modelo de ratón deficiente inmune severo combinado (SCID). Varios modelos de ratón han sido desarrollados en los cuales células humanas son implantadas en ratones inmunodeficientes (llamados colectivamente modelos de xenoinjerto) véase, por ejemplo, Cattan AR, Douglas E, Leuk. Res. 18_:513-22, 1994 y Flavell, DJ, Hematological Oncology 1_4: 67-82, 1996. Como un modelo de xenoinjerto in vivo para psoriasis, tejido de piel psoriásica humana se implanta en el modelo de ratón SCID, y se ataca con un antagonista adecuado. Más aún, otros modelos de animales con psoriasis en la técnica pueden usarse para evaluar antagonistas IL-20 e IL-22, tales como injertos de piel psoriásica humana implantados en modelos de ratón AGR129, y atacado con un antagonista adecuado (véase, por ejemplo, Boy an, 0. et al., J. Exp. Med. publicación en linea #20031482, 2004, incorporado en la presente a manera de referencia) . Los anticuerpos anti-IL-22RA que pueden unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-22 o tanto IL-20 como IL-22 son antagonistas preferidos, sin embargo, los anticuerpos IL-20 e IL-22 (solos o en combinación) , IL-22RA soluble, asi como otros antagonistas de IL-20 e IL-22 se pueden usar en este modelo. De manera similar, tejidos o células derivados de colitis humana, IBD, artritis u otras lesiones inflamatorias se pueden usar en el modelo SCID para evaluar las propiedades anti-inflamatorias de los antagonistas de IL-20 e IL-22 descritos en la presente. Las terapias diseñadas a detener, retardar o reducir la inflamación usando anticuerpos anti-IL-22RA o sus derivados, agonistas, conjugados o variantes pueden probarse mediante la administración de anticuerpos anti-IL-22RA o compuestos IL-22RA solubles a ratones SCID que portan tejido inflamatorio humano (por ejemplo, lesiones psoriásicas y similares) u otros modelos descritos en la presente. La eficacia del tratamiento se mide y se evalúa estadísticamente como efecto anti-inflamatorio incrementado dentro de la población tratada con el tiempo usando métodos bien conocidos en la técnica. Algunos métodos ejemplares incluyen, pero no están limitados a medir por ejemplo, en un modelo de psoriasis, grosor epidérmico, el número de células inflamatorias en la dermis superior y los grados de paraqueratosis . Estos métodos se conocen en la técnica y se describen en la presente. Por ejemplo, véase Zeigler, M. et al. Lab Invest 8JL.1253, 2001; Zollner, T. M. et al. J. Clin. Invest. 109: 671, 2002; Yamanaka, N. et al. Microbiol. Immunol. 45_:507, 2001; Raychaudhuri, S. P. et al. Br. J. Dermatol. 144 : 931, 2001; Boehncke, W. H et al. Arch. Dermatol. Res. 291: 104, 1999; Boehncke, W. H et al., J^ Invest. Dermatol. 116: 596, 2001; Nickoloff, B. J. et al. Am. J. Pathol. 146:580, 1995; Boehncke, W. H et al. J. Cutan. Pathol. 24:1; 1997; Sugai, J. , M. et al. J. Dermatol. Sci. 17:85, 1998; Y Villadsen L.S. et al. J. Clin. Invest. 112 : 1571, 2003. La inflamación también puede ser monitoreada con el tiempo usando métodos bien conocidos tales como citometria de flujo (o PCR) para cuantificar el número de células inflamatorias o lesiónales presentes en una muestra, puntuación (pérdida de peso, diarrea, sangrado rectal, longitud de colon) para IBD, puntuación de enfermedad en pata y puntuación de inflamación para el modelo CÍA RA. Por ejemplo, las estrategias terapéuticas adecuadas para pruebas en estos modelos incluyen tratamiento directo usando anticuerpos anti-IL-22RA, otros antagonistas de IL-20 e IL-22 (individualmente o juntos), o conjugados o antagonistas relacionados con base en la interacción de interrupción de los anticuerpos anti-IL-22RA con sus ligandos IL-20 e IL-22, o para terapias a base de células utilizando anticuerpos anti-IL-22RA o sus derivados, agonistas, conjugados o variantes . Más aún, la psoriasis es una enfermedad de la piel inflamatoria crónica que está asociada con queratinocitos epidérmicos hiperplásicos y células mononucleares infiltrantes, incluyendo células T CD4+ con memoria, neutrófilos y macrófagos (Christophers, Int. Arch. Allergy Immunol . , 110:199, 1996). Se cree actualmente que los antigenos ambientales juegan un papel significativo en iniciar y contribuir a la patología de la enfermedad. Sin embargo, es la pérdida de tolerancia a auto-antigenos la que se cree media la patología de la psoriasis. Las células dendriticas y células T CD4+ se cree que juegan un papel importante en la presentación y reconocimiento de antigenos que median la respuesta inmune que lleva a la patología. Los presentes inventores han desarrollado recientemente un modelo de psoriasis con base en el modelo de transferencia CD4+CD45RB (Davenport et al., Internat. Immunopharmacol . , 2:653-672). Anti-IL-20, anti-IL-22 o anticuerpos contra IL-20R y/o IL-22R, tales como los anticuerpos anti-IL-22RA de la presente invención, o IL-22RA soluble, se administran a los ratones. La inhibición de las puntuaciones de enfermedad (lesiones en piel, citocinas inflamatorias) indica la efectividad de los antagonistas de IL-20 e IL-22 en psoriasis, por ejemplo, anticuerpos anti-IL-22RA o receptores solubles IL-22RA, u otros antagonistas tales como anticuerpos contra IL-20 y/o IL-22 o sus receptores. Dermatitis atópica Tanto IL-20 como IL-22 son sobrerregulados en muestras de pacientes con dermatitis atópica humana (AD) . AD es una enfermedad inflamatoria crónica común que se caracteriza por citocinas hiperactivadas del subconjunto 2 de células T auxiliares (Th2). Aunque se desconoce la etiología exacta de AD, se han implicado varios factores, incluyendo respuestas inmunes Th2 hiperactivas, autoinmunidad, infección, alérgenos y predisposición genética. Las características clave de la enfermedad incluyen xerosis (resequedad en la piel), prurito (comezón en la piel), conjuntivitis, lesiones de piel inflamatorias, infección por Staphylococcus a ureus, eosinófilos elevados en sangre, elevación de IgE y IgGl en suero y dermatitis crónica con infiltración de células T, células cebadas, macrófagos y eosinófilos. Se ha reconocido que la colonización o infección con S . a ureus exacerba AD y perpetua la cronicidad de esta enfermedad dérmica. AD se encuentra normalmente en pacientes con asma y rinitis alérgica, y frecuentemente es la manifestación inicial de enfermedades alérgicas. Aproximadamente 20% de la población en los países occidentales sufren de estas enfermedades alérgicas, y la incidencia de AD en países desarrollados se está elevando por razones desconocidas. AD comienza típicamente en la niñez y puede persistir comúnmente a través de la adolescencia y hasta la adultez. Los tratamientos actuales para AD incluyen cortiocosteroides tópicos, ciclosporina A oral, inmunosupresores no corticosteroides tales como tacrolimus (FK506 en forma de ungüento) e interferón gamma. A pesar de la variedad de tratamientos para AD, los síntomas de muchos pacientes no mejoran, o tienen reacciones adversas a medicamentos, requiriendo la búsqueda de otros agentes terapéuticos más efectivos. Los polipéptidos IL-22RA solubles y anticuerpos anti-IL-22RA de la presente invención, incluyendo los anticuerpos anti-IL-22RA humanos neutralizantes de la presente invención, se pueden usar para neutralizar IL-22 e IL-20 en el tratamiento de enfermedades humanas especificas tales como dermatitis atópica, condiciones inflamatorias de la piel y otras condiciones inflamatorias descritas en la presente. Para uso farmacéutico, el IL-22RA soluble o anticuerpos anti-IL-22RA de la presente invención se formulan para suministro parenteral, particularmente intravenoso o subcutáneo, de acuerdo con métodos convencionales. La administración intravenosa se da por inyección de bolo, liberación controlada, por ejemplo, usando minibombas u otra tecnología adecuada, o mediante infusión durante un periodo típico de una a varias horas. En general, las formulaciones farmacéuticas incluirán una proteina hematopoyética en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como solución salina, solución salina de pH regulado, 5% de dextrosa en agua o similares. Las formulaciones pueden incluir además uno o más excipientes, conservadores, solubilizadores, agentes reguladores de pH, albúmina para prevenir la pérdida de proteínas en superficies virales, etc. Cuando se utiliza esta terapia de combinación, las citocinas pueden combinarse en una sola formulación o pueden administrarse en formulaciones separadas. Los métodos de formulación se conocen bien en la técnica y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, ed. , Mack Publishing Co., Easton PA, 1990, la cual se incorpora en la presente a manera de referencia. Las dosis terapéuticas generalmente estarán en la escala de 0.1 a 100 mg/kg de peso del paciente al dia, de preferencia 0.5-20 mg/kg al dia, con la dosis exacta determinada por el médico de acuerdo con estándares aceptados, tomando en cuenta la naturaleza y severidad de la condición que será tratada, rasgos del paciente, etc. La determinación de la dosis está dentro del nivel de capacidad ordinario en la técnica. Las proteínas comúnmente serán administradas durante un periodo de hasta 28 dias después de quimioterapia o transplante de médula ósea o hasta que un conteo de plaquetas de >20,000/mm3, de preferencia >50,000/mm3, se logre. Más comúnmente, las proteínas serán administradas durante una semana o menos, comúnmente durante un periodo de uno a tres dias. En general, una cantidad terapéuticamente efectiva de IL-22RA soluble o anticuerpos anti-IL-22RA de la presente invención es una cantidad suficiente para producir un incremento clínicamente significativo en la proliferación y/o diferenciación de células progenitoras linfoides o mieloides, lo cual se manifestará como un incremento en niveles circulantes de células maduras. (por ejemplo, plaquetas o neutrófilos). El tratamiento de trastornos plaquetarios será entonces continuo hasta que se alcance un conteo de plaquetas de al menos 20,000/mm3, de preferencia 50,000/mm3. La IL-22RA soluble o anticuerpos anti-IL-22RA de la presente invención también se pueden administrar en combinación con otras citocinas tales como IL-3, -6 y -11; factor de células madre; eritropoyetina; G-CSF y GM-CSF. En regímenes de terapia de combinación, las dosis diarias de otras citocinas generalmente serán de: EPO, 150 U/kg, GM-CSF, 5-15 lg/kg; IL-3 1-5 lg/kg; y G-CSF, 1-25 lg/kg. La terapia de combinación con EPO, por ejemplo, es indicada en pacientes anémicos con bajos niveles de EPO.

Generalmente, la dosis de IL-22RA soluble administrada (o análogo de IL-22RA o proteina de fusión) o anticuerpos anti-IL-22RA variará dependiendo de factores tales como la edad del paciente, peso, altura, sexo, condición médica general e historial médico previo. Típicamente, es deseable proporcionar el receptor una dosis de IL-22RA soluble o anticuerpos anti-IL-22RA que esté en la escala de alrededor de 1 pg/kg a 10 mg/kg (cantidad de agente/peso corporal de paciente) aunque un nivel más alto o más bajo de dosis también puede administrarse como lo dictan las circunstancias. La administración de IL-22RA soluble o anticuerpos anti-IL-22RA a un sujeto puede ser intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, intrapelural, intratecal, mediante perfusión a través de un catéter regional, o mediante inyección intralesional directa. Cuando se administran proteínas terapéuticas por inyección, la administración puede ser mediante infusión continua o por medio de bolos individuales o múltiples. Las rutas de administración adicionales incluyen oral, mucosal-membrana, pulmonar y transcutánea . El suministro oral es adecuado para microesferas de poliéster, microesferas de zeina, microesferas proteinoides, microesferas de policianoacrilato y sistemas a base de lipidos (véase, por ejemplo, DiBase and Morrel, "Oral Delivery of Microencapsulated Proteins," en Protein Delivery: Physi cal Systems, Sanders and Hendren (eds.), páginas 255-288 (Plenum Press 1997)). La viabilidad de un suministro intranasal es ejemplificada por un modo de administración de insulina (véase, por ejemplo, Hinchcliffe e Ilium, Adv. Drug Deliv. Rev. 35:199 (1999). Partículas secas o liquidas que comprenden IL-22RA pueden prepararse e inhalarse con la ayuda de dispersores de polvo seco, generadores de aerosol liquido, o nebulizadores (por ejemplo, Pettit y Gombotz, TIBTECH 16:343 (1998); Patton et al, Adv. Drug Deliv. Rev. 35 : 235 (1999)). Este enfoque se ilustra por el sistema de manejo de diabetes AERX, el cual es un inhalador electrónico manual que suministra insulina en aerosol a los pulmones. Los estudios han demostrado que las proteínas tan grandes como 48,000 kDa han sido suministradas a través de la piel a concentraciones terapéuticas con la ayuda de ultrasonido de baja frecuencia, lo cual induce la viabilidad de la administración transcutánea (Mitragotri et al, Science 269 : 850 (1995)). El suministro transdérmico usando electroporación proporciona otro medio para administrar una molécula que tiene actividad de unión a IL-22RA (Potts et al, Pharm . Biotechnol . 10 : 213 (1997) ) . Una composición farmacéutica que comprenda una IL-22RA soluble o anticuerpos anti-IL-22RA puede formularse de acuerdo con métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles, con lo cual las proteínas terapéuticas se combinan en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Se dice que una composición es un "vehículo farmacéuticamente aceptable" si su administración puede ser tolerada por un paciente receptor. La solución salina de pH regulado con fosfato estéril es un ejemplo de un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otros vehículos adecuados se conocen bien por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Gennaro (ed.), Remington ' s Pharma ceuti cal Sciences, 19° Edition (Mack Publishing Company 1995) . Para propósitos de terapia, las moléculas IL-22RA solubles o anticuerpo anti-IL-22RA y un vehículo farmacéuticamente aceptable se administran a un paciente en una cantidad terapéuticamente efectiva. Se dice que una combinación de una molécula terapéutica de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable es administrada en una "cantidad terapéuticamente efectiva" si la cantidad administrada es fisiológicamente significativa. Un agente es fisiológicamente significativo si su presencia de como resultado un cambio detectable en la fisiología del un paciente receptor. Por ejemplo, un agente usado para tratar inflamaciones fisiológicamente insignificativo si su presencia alivia la respuesta inflamatoria. Una composición farmacéutica que comprenda IL-22RA (o análogo de IL-22RA o proteina de fusión) o anticuerpo anti-IL-22RA neutralizante puede elaborarse en forma liquida, en un aerosol o en forma sólida. Las formas liquidas, se ilustran por soluciones inyectables y suspensiones orales. Las formas sólidas ejemplares incluyen cápsulas, tabletas y formas de liberación controlada. Esta última forma se ilustra por bombas miniosmóticas e implantes (Bremer et al , Pharm . Biotechnol 10 : 239 (1997); Ranade, "Implants in Drug Delivery, " in Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), páginas 95-123 (CRC Press 1995); Bremer et al , "Protein Delivery with Infusión Pumps," en Protein Del ivery: Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), páginas 239-254 (Plenum Press 1997); Yewey et al , "Delivery of Proteins from a Controlled Reléase Injectable Implant," en Protein Delivery: Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), páginas 93- 117 (Plenum Press 1997)). Los liposomas proporcionan medios para suministrar polipéptidos terapéuticos a un sujeto intravenosamente, intratecalmente, intramuscularmente, subcutáneamente o mediante administración oral, inhalación o administración intranasal. Los liposomas son vesículas microscópicas que consisten en una o más bicapas de lipidos que rodean compartimientos acuosos (véase, generalmente, Bakker-Woudenberg et al , Eur. J. Clin . Microbiol . Infect . Dis . 12 (Suppl . 1) : S 61 (1993), Kim, Drugs 46:618 (1993) y Ranade, "Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes as Carriers," en Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), páginas 3-24 (CRC Press 1995) ) . Los liposomas son similares en composición a membranas celulares y como resultado, los liposomas pueden administrarse en forma segura y son biodegradables. Dependiendo del método de preparación, los liposomas pueden ser unilaminares o multilaminares, y los liposomas pueden variar en tamaño con diámetros que varian de 0.02 µm a más de 10 µm. Una variedad de agentes pueden encapsularse en liposomas: agentes hidrofóbicos se dividen en las bicapas y los agentes hidrofilicos se dividen dentro de los espacios acuosos internos (véase, por ejemplo, Machy et al . , Líposomes In Cell Biology And Pharmacology (John Libbey 1987) y Ostro et a l . , Ameri can J. Hosp . Pharm . 46: 1516 (1989)). Más aún, es posible controlar la disponibilidad terapéutica del agente encapsulado al variar el tamaño de liposoma, el número de bicapas, composición de lipidos, asi como la carga y característica superficiales de los liposomas . Los liposomas pueden adsorberse habitualmente a cualquier tipo de célula y después liberar lentamente el agente encapsulado. Como alternativa, un liposoma adsorbido puede ser endocitosado por células que sean fagociticas. La endocitosis es seguida por la degradación intralisosómica de lipidos liposómicos y la liberación de los agentes encapsulados (Scherphof et al , Ann . N. Y. Acad. Sci . 446:368 (1985) ) . Después de la administración intravenosa, los liposomas pequeños (0.1 a 1.0 µm) son típicamente absorbidos por células del sistema reticuloendotelial, localizado principalmente en el higado y bazo, mientras que los liposomas de más de 3.0 µm son depositados en el pulmón. Esta absorción preferente de liposomas más pequeños por las células del sistema reticulondotelial ha sido usada para suministrar agentes quimioterapéuticos a macrófagos y a tumores del higado. El sistema reticuloendotelial puede ser sorteado por varios métodos incluyendo saturación con grandes dosis de partículas de liposomas, o inactivación de macrófagos selectiva por medios farmacológicos (Claassen et al . , Biochim . Biophys . Acta 802: 428 (1984)). Además, la incorporación de fosfolipidos derivados con glicolipidos o polietilenglicol en membranas de liposomas ha demostrado dar como resultado una absorción significativamente reducida por el sistema reticuloendotelial. (Alien et al , Biochim . Biophys . Acta 1068 : 133 (1991); Alien et al . , Biochim . Biophys . Acta 1150 : 9 (1993)). Los liposomas también pueden prepararse para dirigirse a células u órganos particulares al variar la composición de fosfolipidos o al insertar receptores o ligandos en los liposomas. Por ejemplo, liposomas, preparados con un alto contenido de un agente tensioactivo no iónico, han sido usados para dirigirse al higado (Hayakawa et al., patente japonesa 04-244,018; Kato et al., Bíol. Pharm. Bull. 16:960 (1993)). Estas formulaciones se prepararon al mezclar fosfatidilcolina de soya, a-tocoferol y aceite de ricino hidrogenado etoxilado (HCO-60) en metanol, concentrando la mezcla al vacio y luego reconstituyendo la mezcla con agua. Una formulación liposómica de dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) con una mezcla de esterilglucosido derivado de soya (SG) y colesterol (Ch) también ha mostrado dirigirse al higado (Shimizu et al., Biol. Pharm. Bull. 20:881 (1997)). Como alternativa, varios ligandos de dirección pueden unirse a la superficie de liposoma, tales como anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, carbohidratos, vitaminas y proteínas de transporte. Por ejemplo, los liposomas pueden ser modificados con derivados galactosilipidos tipo ramificado para dirigirse a receptores de asialoglicoproteina (galactosa) , los cuales son expresados exclusivamente sobre la superficie de células hepáticas (Kato y Sugiyama, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 74:281 (1997); Murahashi et al., Biol. Pharm. Bull.20:259 (1997)).

Similarmente, Wu et al., Hepatology 27:112 (1998), ha mostrado que marcar liposomas con asialofetuina llevó a una vida media en plasma de liposomas acortada e incrementó ampliamente la absorción de liposomas marcados con asialofetuina por hepatocitos. Por otro lado, la acumulación hepática de liposomas que comprenden derivados galactosilipidos tipo ramificado puede ser inhibida por pre-inyección de asialofetuina (Murahashi et al , Biol . Pharm . Bull . 20 : 259 (1997)). Liposomas de albúmina de suero humano poliaconitilados proporcionan otro enfoque para dirigir liposomas a células hepáticas (Kamps et al , Proc . Na ti Acad. Sci . EUA 94:11681 (1997)). Más aún, Geho, et al . , patente de E.U.A. No. 4,603,044, describen un sistema de suministro de vesículas de liposomas dirigidos a hepatocitos, el cual tiene especificidad para receptores hepatobiliares asociados con las células metabólicas especializadas del higado. En un enfoque más general a la dirección de tejidos, células objetivo son premarcadas con anticuerpos biotinilados específicos para un ligando expresado por la célula objetivo (Harasym et al , Adv. Drug Deliv. Rev. 32 : 99 (1998)). Después de la eliminación del anticuerpo libre del plasma, se administran liposomas conjugados estreptavidina. En otro enfoque, anticuerpos de dirección son unidos directamente a liposomas (Harasym et al , Adv. Drug Deliv. Rev. 32 : 99 (1998) ) . Polipéptidos y anticuerpos pueden encapsularse dentro de liposomas usando técnicas estándares de microencapsulación de proteínas (véase, por ejemplo, Anderson et al . , Infect . Immun . 31 : 1099 (1981), Anderson et al , Cáncer Res . 50:1853 (1990) y Cohén et al , Biochim . Biophys . Acta 1063 : 95 (1991), Alving et al . , "Preparation and Use of Liposomes in Immunological Studies," en Liposome Technology, 2a Edición, Vol. III, Gregoriadis (ed.), página 317 (CRC Press 1993), Wassef et al , Meth . Enzymol . 149 : 124 (1987)). Como se indicó arriba, los liposomas terapéuticamente útiles pueden contener una variedad de componentes. Por ejemplo, los liposomas pueden comprender derivados lipidos de polietilenglicol (Alien et al . , Biochim . Biophys . Acta 1150 : 9 (1993) ) . Las microesferas poliméricas degradables han sido diseñadas para mantener niveles sistémicos altos de proteínas terapéuticas. Las microesferas se preparan a partir de polímeros degradables tales como polilacturo-co-glicólido (PLG), polianhidridos, poliortoésteres, polímeros de acetato etilvinilo no biodegradables, en los cuales las proteínas son atrapadas en el polímero (Gombotz y Pettit, Bioconj uga te Chem . 6:332 (1995); Ranade, "Role of Polymers in Drug Delivery, " en Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), páginas 51-93 (CRC Press 1995); Roskos y Maskiewicz, "Degradable Controlled Reléase Systems Useful for Protein Delivery, " in Protein Delivery: Physical Systems, Sanders and Hendren (eds.), páginas 45-92 (Plenum Press 1997); Bartus et al , Science 257:1161 (1998); Putney y Burke, Na ture Biotechnology 1 6: 153 (1998); Putney, Curr . Opin . Chem . Biol . 2:548 (1998)). Nanoesferas recubiertas con polietilenglicol (PEG) también pueden proporcionar vehículos para la administración intravenosa de proteínas terapéuticas (véase, por ejemplo, Gref et al , Pharm . Biotechnol . 10:161 (1997)). La presente invención contempla también polipéptidos químicamente modificados que tienen actividad de unión a IL-22RA tales como receptores solubles IL-22RA monoméricos, homodiméricos, heterodiméricos o multiméricos y antagonistas de IL-22RA, por ejemplo, anticuerpos anti-IL-22RA o polipéptidos de unión, o anticuerpos anti-IL-22RA neutralizantes, a los cuales un polipéptido es enlaza con un polímero como se describió arriba. Otras formas de dosis pueden contemplarse por los expertos en la técnica, como se muestra, por ejemplo, por Ansel y Popovich, Pharmaceutícal Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5a Edición (Lea & Febiger 1990), Gennaro (ed. ) , Remington ' s Pharma ceutical Sciences , 19a Edición (Mack Publishing Company 1995) y por Ranade y Hollinger, Drug Delivery Systems (CRC Press 1996) . Como una ilustración, las composiciones farmacéuticas pueden suministrarse como un kit que comprende un recipiente que comprende un polipéptido con un dominio extracelular de IL-22RA, por ejemplo, receptores solubles IL-22RA monoméricos, homodiméricos, heterodiméricos o multiméricos o un antagonista de IL-22RA (por ejemplo, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que se una a un polipéptido IL-22RA, o un anticuerpo anti-IL-22RA neutralizante) . Los polipéptidos terapéuticos pueden ser provistos en forma de una solución inyectable para dosis individuales o múltiples, o como un polvo estéril que será reconstituido antes de inyección. Como alternativa, este kit puede incluir un dispersor de polvo seco, generador de aerosol liquido, o nebulizador para administración de un polipéptido terapéutico. Este kit puede comprender además información escrita sobre indicaciones y uso de la composición farmacéutica. Más aún, esta información puede incluir una indicación de que la composición de IL-22RA esté contraindicada en pacientes con hipersensibilidad a IL-22RA conocida. Una composición farmacéutica que comprenda anticuerpos anti-IL-22RA o moléculas (o fragmentos de anticuerpo anti-IL-22RA, fusiones de anticuerpos anticuerpo humanizados y similares), o receptor soluble IL-22RA, puede elaborarse en forma liquida, en una forma de aerosol o en forma sólida. Las formas liquidas se ilustran por soluciones inyectables, aerosoles, gotas, soluciones topológicas y suspensiones orales. Las formas sólidas ejemplares incluyen cápsulas, tabletas y formas de liberación controlada. Esta última forma se ilustra por bombas miniosmóticas e implantes (Bremer et al , Pharm . Biotechnol . 10 : 239 (1997); Ranade, "Implants in Drug Delivery," en Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), páginas 95-123 (CRC Press 1995); Bremer et al , "Protein Delivery with Infusión Pumps," en Protein Delivery: Physical Sys tems , Sanders and Hendren (eds.), páginas 239-254 (Plenum Press 1997); Yewey et al . , "Delivery of Proteins from a Controlled Reléase Injectable Implant," en Protein Delivery: Physi cal Systems, Sanders and Hendren (eds.), páginas 93-117 (Plenum Press 1997)). Otras formas sólidas incluyen cremas, pastas, otras aplicaciones topológicas y similares. Los liposomas proporcionan un medio para suministrar polipéptidos terapéuticos a un sujeto intravenosamente, intraperitonealmente, intratecalmente, intramuscularmente, subcutáneamente, mediante administración oral, inhalación o administración intranasal. Los liposomas son vesículas microscópicas que consisten en una o más bicapas de lipidos que rodean compartimientos acuosos (véase, generalmente, Bakker-Woudenberg et al , Eur . J. Clin . Microbiol . Infect . Dis . 12 (Suppl . 1 ) :S61 (1993), Kim, Drugs 46:618 (1993) y Ranade, "Site Specific Drug Delivery Using Liposomes as Carriers," en Drug Delivery Systems , Ranade and Hollinger (eds.), páginas 3-24 (CRC Press 1995)). Los liposomas son similares en composición a membranas celulares y como resultado, los liposomas pueden administrarse en forma segura y son biodegradables. Dependiendo del método de preparación, los liposomas pueden ser unilaminares o multilaminares, y los liposomas pueden variar en tamaño con diámetros que varian de 0.02 µm a más de 10 µm. Una variedad de agentes pueden encapsularse en liposomas: agentes hidrofóbicos que se dividen en las bicapas y los agentes hidrofilicos que se dividen dentro de los espacios acuosos internos (véase, por ejemplo, Machy et al . , Liposomes In Cell Biology And Pharmacology (John Libbey 1987) y Ostro et al . , American J. Hosp. Pharm . 46: 1516 (1989)). Además, es posible controlar la disponibilidad terapéutica del agente encapsulado al variar el tamaño de liposoma, el número de bicapas, composición de lipidos, asi como la carga y características superficiales de los liposomas. Los liposomas pueden adsorberse virtualmente a cualquier tipo de célula y después liberar lentamente el agente encapsulado. Como alternativa, un liposoma adsorbido puede ser endocitosado por células que sean fagociticas. La endocitosis es seguida por la degradación intralisosómica de lipidos liposómicos y la liberación de los agentes encapsulados (Scherphof et al , Ann . N. Y. Acad. Scí . 446:368 (1985)). Después de la administración intravenosa, los liposomas pequeños (0.1 a 1.0 µm) son típicamente absorbidos por células del sistema reticuloendotelial, localizado principalmente en el higado y bazo, mientras que los liposomas de más de 3.0 µm son depositados en el pulmón. Esta absorción preferente de liposomas más pequeños por las células del sistema reticulondotelial ha sido usada para suministrar agentes quimioterapéuticos a macrófagos y a tumores del higado. El sistema reticuloendotelial puede ser derivado por varios métodos incluyendo saturación con grandes dosis de partículas de liposomas, o la inactivación de macrófagos selectiva por medios farmacológicos (Claassen et al . , Biochim . Biophys . Acta 802: 428 (1984)). Además, la incorporación de fosfolipidos derivados con glicolipidos o polietilenglicol en membranas de liposomas ha demostrado dar como resultado una absorción significativamente reducida por el sistema reticuloendotelial. (Alien et al , Biochim . Biophys . Acta 1068:133 (1991); Alien et al . , Biochim . Biophys . Acta 1150 : 9 (1993)). Los liposomas también pueden prepararse para dirigirse a células u órganos particulares al variar la composición de fosfolipidos o al insertar receptores o ligandos en los liposomas. Por ejemplo, liposomas, preparados con un alto contenido de un agente tensioactivo no iónico, han sido usados para dirigirse el higado (Hayakawa et al . , patente japonesa 04-244,018; Kato et al . , Biol . Pharm . Bull . 1 6: 960 (1993)). Estas formulaciones se prepararon al mezclar fosfatidilcolina de soya, a-tocoferol y aceite de ricino hidrogenado etoxilado (HCO-60) en metanol, concentrando la mezcla al vacio y luego reconstituyendo la mezcla con agua. Una formulación liposómica de dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC) con una mezcla de esterilglucósido derivado de soya (SG) y colesterol (Ch) también ha mostrado dirigirse al higado (Shimizu et al . , Biol . Pharm . Bull . 20:881 (1997)). Como alternativa, varios ligandos de dirección pueden unirse a la superficie del liposoma, tales como anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, carbohidratos, vitaminas y proteínas de transporte. Por ejemplo, los liposomas pueden ser modificados con derivados galactosilipidos tipo ramificado para dirigirse a receptores de asialoglicoproteina (galactosa) , los cuales son expresados exclusivamente sobre la superficie de células hepáticas (Kato and Sugiyama, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 74:287 (1997); Murahashi et al . , Biol. Pharm. Bull. 20:259 (1997)).

Similarmente, Wu et a l . , Hepatology 27:772 (1998), han mostrado que marcar liposomas con asialofetuina llevó a una vida media en plasma de liposomas acortada e incrementó ampliamente la absorción de liposomas marcados con asialofetuina por hepatocitos. Por otro lado, la acumulación hepática de liposomas que comprenden derivados de galactosilipidos tipo ramificado puede inhibirse por la pre-inyección de asialofetuina (Murahashi et al , Biol. Pharm.

Bull . 2_0:259 (1997)). Liposomas de albúmina de suero humano poliaconitilados proporcionan otro enfoque para dirigir liposomas a células hepáticas (Kamps et al , Proc. Nati Acad. ScL EUA 94_: 11681 (1997)). Además, Geho, et al . , patente de E.U.A. No. 4,603,044, describen un sistema de suministro de vesículas de liposomas dirigidos a hepatocitos, el cual tiene especificidad para receptores hepatobiliares asociados con las células metabólicas especializadas del higado. En un enfoque más general a la dirección hacia tejidos, las células objetivo son premarcadas con anticuerpos biotinilados específicos para un ligando expresado por la célula objetivo (Harasym et al , Adv. Drug Deliv. Rev. 32:99 (1998)). Después de la eliminación del anticuerpo libre del plasma, se administran liposomas conjugados a estreptavidina. En otro enfoque, anticuerpos de dirección son unidos directamente a liposomas (Harasym et al , Adv. Drug Deliv. Rev. 32:99 (1998) ) . Los anticuerpos neutralizantes anti-IL-22RA y los moléculas con actividad de unión a IL-22 o IL-20, o receptor soluble IL-22RA, pueden encapsularse dentro de liposomas usando técnicas estándares de microencapsulación de proteínas (véase, por ejemplo, Anderson et al . , Infect. Immun. 31 : 1099 (1981), Anderson et al , Cáncer Res. 50:1853 (1990) y Cohén et al , Biochim. Biophys. Acta 1063:95 (1991), Alving et al . , "Preparation and Use of Liposomes in Im unological Studies," en Liposome Technology, 2a Edición, Vol. III, Gregoriadis (ed.), página 317 (CRC Press 1993), Wassef et al , Meth . Enzymol . 149 : 124 (1987)). Como se indicó arriba, los liposomas terapéuticamente útiles pueden contener una variedad de componentes. Por ejemplo, los liposomas pueden comprender derivados lipidos de polietilenglicol (Alien et al . , Biochim. Biophys. Acta 1150:9 (1993)). Microesferas poliméricas degradables han sido diseñadas para mantener altos niveles sistémicos de proteínas terapéuticas. Las microesferas se preparan a partir de polímeros degradables tales como polilacturo-co-glicólido (PLG), polianhidridos, poliortoésteres, polímeros de acetato etilvinilo no biodegradables, en los cuales las proteínas son atrapadas en el polímero (Gombotz y Pettit, Bioconjugate Chem. 6:332 (1995); Ranade, "Role of Polymers in Drug Delivery, " en Drug Delivery Systems, Ranade and Hollinger (eds.), páginas 51-93 (CRC Press 1995); Roskos y Maskiewicz, "Degradable Controlled Reléase Systems Useful for Protein Delivery, " en Protein Delivery: Physi cal Systems, Sanders and Hendren (eds.), páginas 45-92 (Plenum Press 1997); Bartus et al , Science 257 : 1161 (1998); Putney y Burke, Nature Biotechnology 16:153 (1998); Putney, Curr. Opin. Chem. Biol. 2_:548 (1998)). Nanoesferas recubiertas con polietilenglicol (PEG) también pueden proporcionar vehículos para la administración intravenosa de proteínas terapéuticas (véase, por ejemplo, Gref et al , Pharm. Biotechnol. 1_0:161 (1997) ) . La presente invención contempla también anticuerpo anti-IL-22RA químicamente modificado o socio de unión, por ejemplo, anticuerpos anti-IL-22RA o receptores solubles IL-22RA enlazado con un polímero, como se describió arriba. Otras formas de dosis pueden contemplarse por aquellos expertos en la técnica, como se muestra, por ejemplo, por Ansel y Popovich, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5a Edición (Lea & Febiger 1990) , Gennaro (ed.), Remington ' s Pharmaceutical Sciences, 19a Edición (Mack Publishing Company 1995) y por Ranade y Hollinger, Drug Delivery Systems (CRC Press 1996) . La presente invención contempla composiciones de anticuerpos anti-IL-22RA, y métodos y usos terapéuticos que comprenden un anticuerpo, péptido o polipéptido descrito en la presente. Estas composiciones pueden comprender además un vehículo. El vehículo puede ser un vehículo orgánico o inorgánico convencional. Ejemplos de vehículos incluyen agua, solución reguladora de pH, alcohol, propilenglicol, macrogol, aceite de ajonjolí, aceite de maiz y similares. 11 . Producción de ra tones transgénicos La sobre-expresión tanto de IL-20 como de IL-22 fue mostrada en lesiones psoriásicas humanas, sugiriendo que tanto IL-20 como IL-22 están implicados en psoriasis humana. Más aún, como se describe en la presente, la sobre-expresión de IL-20 e IL-22 en ratones transgénicos mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo psoriásico; y además la inyección de IL-22 en ratones normales mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo psoriásico que fue destruido por el antagonista de receptor soluble zcytorl6 (IL-22RA2). Estos datos in vivo sugieren además que la IL-22 pro-inflamatoria está implicada en psoriasis. Asi, los antagonistas contra la actividad de IL-22, tales como los anticuerpo neutralizantes anti-humanos-IL-22RA y anticuerpos monoclonales de la presente invención, asi como receptores IL-22RA solubles, son útiles en el tratamiento terapéutico de enfermedades inflamatorias, particularmente como antagonistas para IL-22 e IL-20 en el tratamiento de psoriasis. Más aún, los reactivos que se unen a, bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan IL-22 o actividad tanto de IL-22 como de IL-20, tales como los anticuerpos neutralizantes y monoclonales IL-22RA antihumanos de la presente invención, asi como receptores IL-22RA solubles, son útiles en el tratamiento terapéutico de otras enfermedades inflamatorias por ejemplo como antagonistas contra IL-22RA o tanto IL-20 como IL-22 en el tratamiento de dermatitis atópica, IBD, colitis, endotoxemia, artritis, artritis reumatoide, y artritis psoriásica, enfermedad respiratoria del adulto (ARD) , choque séptico, insuficiencia orgánica múltiple, lesión pulmonar inflamatoria tal como asma o bronquitis, neumonía bacteriana, psoriasis, eccema, dermatitis atópica y por contacto y enfermedades inflamatorias del intestino tal como colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn y similares. En un aspecto, la presente invención proporciona un método para producir un anticuerpo contra un polipéptido que comprende: inocular un animal con un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 1 (Pro), al aminoácido número 6 (Asp); (b) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 26 (Ser), al aminoácido número 32 (Pro); (c) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys), al aminoácido número 47 (Asp); (d) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 del aminoácido número 49 (Val), al aminoácido número 62 (Cys); (e) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 62 (Cys); (f) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 84 (Ala) al aminoácido número 97 (Ser) ; (g) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 103 (Thr) al aminoácido número 108 (Asp) ; (h) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 130 (Arg) al aminoácido número 135 (His); (i) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 164 (Gly) al aminoácido número 166 (Lys); (j) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 175 (Tyr), al aminoácido número 179 (Glu); (k) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 193 (Lys) al aminoácido número 196 (Ala); (1) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 203 (Lys) al aminoácido número 209 (Thr) ; y (m) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 3 ; y (n) un polipéptido que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y en donde el polipéptido desarrolla una respuesta inmune en el animal para producir anticuerpo; y aislar el anticuerpo del animal; y en donde el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido IL-22RA (SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3); y reduce la actividad de tanto IL-20 (SEQ ID NO:8) como de IL-22 (SEQ ID NO:6). En una modalidad, el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo producido por el método reduce la actividad pro-inflamatoria ya sea IL-20 (SEQ ED NO:8) como de IL-22 (SEQ ED NO:6). En otra modalidad, el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo producido por el método neutraliza la interacción ya sea de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL-22 (SEQ ID NO:6) con IL-22RA (SEQ ID NO:2). En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la neutralización por el anticuerpo se mide al mostrar neutralización ya sea de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL-22 (SEQ ID NO: 6) o un ensayo de neutralización a base de células in vi tro . En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo producido por el método reduce la actividad pro-inflamatoria tanto de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de EL-22 (SEQ ID NO: 6). En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo producido por el método neutraliza la interacción tanto de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL-22 (SEQ ID NO:6) con IL-22RA (SEQ ID NO:2). En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la neutralización por el anticuerpo es medida al mostrar la neutralización de tanto IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL- 22 (SEQ ID NO: 6) en un ensayo de neutralización a base de células in vi tro . En otro aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo producido por el método como el descrito en la presente el cual se une a un polipéptido de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3. En una modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo, o (e) un anticuerpo monoclonal humano. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador péptido, partícula magnética o toxina. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además PEGilación. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo, o (e) un anticuerpo monoclonal humano. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador péptido, partícula magnética, fármaco o toxina. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además PEGilación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une a un polipéptido que comprende una secuencia de residuos de aminoácido como la mostrada en SEQ ID NO: 3; y reduce la actividad pro-inflamatoria ya sea de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL-22 (SEQ ID NO: 6). En una modalidad, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo reduce la actividad pro-inflamatoria tanto de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL-22 (SEQ ID NO: 6). En otra modalidad, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo, o (e) un anticuerpo monoclonal humano. En otra modalidad, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador péptido, partícula magnética, fármaco o toxina. En otra modalidad el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además PEGilación. En otra modalidad, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo, o (e) un anticuerpo monoclonal humano. En otra modalidad, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador de péptidos, partícula magnética, fármaco o toxina. En otra modalidad el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además PEGilación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducida ya sea por IL-22 o inducida por IL-20 que comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende una cantidad de un anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir la proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo. En una modalidad, el método es como el descrito arriba, en donde las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde las células linfoides son macrófagos o células T. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir inflamación inducida por IL-22 o IL-20 que comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición de un anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir inflamación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducidas IL-22 e inducidas por IL-20 que comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende una cantidad de un anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir la proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo. En una modalidad, el método es como el descrito arriba, en donde las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde las células linfoides son macrófagos o células T. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir la inflamación inducida por IL-22 e inducida por IL-20 que comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición de un anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir inflamación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducida por IL-22 e inducida por IL-20, que comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende una cantidad de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir la proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo o fragmento de anticuerpo. En una modalidad, el método es como el descrito arriba, en donde las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde las células linfoides son macrófagos o células T. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir la inflamación inducida por IL-22 e inducida por IL-20, que comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir inflamación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducida por IL-22 e inducida por IL- , que comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende una cantidad de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir la proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo. En una modalidad, el método es como el descrito arriba, en donde las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde las células linfoides son macrófagos o células T. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir la inflamación inducida por IL-22 e inducida por IL-20, que comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir inflamación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación, que comprende: (1) determinar un nivel de proteina amiloide A en suero; (2) administrar una composición que comprenda un anticuerpo de acuerdo con un anticuerpo o fragmento de anticuerpo descrito en la presente en un vehículo farmacéuticamente aceptable; (3) determinar un nivel post-administración de proteina A amiloide en suero; (4) comparar el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa 1 con el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa 3, en donde una falta de incremento o una reducción en el nivel de proteina amiloide A en suero es indicativa de suprimir una respuesta inflamatoria. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un mamífero afligido con una enfermedad inflamatoria en la cual IL-22 o IL-20 juega un papel, que comprende: administrar un antagonista de IL-22 o IL-20 al mamífero de tal forma que la inflamación se reduzca, en donde el antagonista comprende (i) un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión que se une específicamente a un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) o (ii) polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) y en donde la actividad inflamatoria de IL-22 (SEQ ID N0:6) o IL-20 (SEQ ID NO:8) es reducida. En una modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica que comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda que comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque séptico o enfermedad infecciosa. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador péptido, partícula magnética, fármaco o toxina. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un mamífero afligido por una enfermedad inflamatoria en la cual IL-22 e IL-20 juegan un papel, que comprende: administrar un antagonista tanto de IL-22 como de IL-20 a un mamífero de tal forma que la inflamación se reduzca, en donde el antagonista comprende (i) un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión que se une específicamente a un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) o (ii) un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-2RA (SEQ ID NO: 3); y en donde la actividad inflamatoria tanto de IL-22 (SEQ ID NO: 6) e IL-20 (SEQ ID NO: 8) se reduce. En una modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica que comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda que comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o enfermedad infecciosa. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador péptido, partícula magnética, fármaco o toxina. En otro aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo que comprende un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un epitope antigénico de IL-22RA humano (SEQ ID NO: 3) seleccionado del grupo que consiste en: (a) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 1 (Pro), al aminoácido número 6 (Asp) ; (b) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 26 (Ser) al aminoácido número 32 (Pro); (c) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 47 (Asp); (d) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 del aminoácido número 49 (Val) al aminoácido número 62 (Cys); (e) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 62 (Cys); (f) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 84 (Ala) al aminoácido número 97 (Ser) ; (g) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 103 (hr) 1 aminoácido número 108 (Asp) ; (h) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 130 (Arg) al aminoácido número 135 (His); (i) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 175 (Tyr) al aminoácido 179 (Glu); (k) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del animoácido número 193 (Lys) al aminoácido número 196 (Ala); (1) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 203 (Lys) al aminoácido número 209 (Thr); y (m) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y (n) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y en donde el anticuerpo reduce o neutraliza la actividad ya sea de IL-22 (SEQ ID NO: 6) o IL-20 (SEQ ID NO: 8) . En una modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo reduce o neutraliza la actividad tanto de IL-22 humano (SEQ ID NO: 6) e IL-20 (SEQ ID NO: 8) . En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en: (a) un anticuerpo monoclonal de murino, (b) un anticuerpo humanizado derivado de (a) , (c) un fragmento de anticuerpo y (d) un anticuerpo monoclonal humano. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además pegilación. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en: (a) un anticuerpo monoclonal de murino, (b) un anticuerpo humanizado derivado de (a) , (c) un fragmento de anticuerpo y (d) un anticuerpo monoclonal humano. En otra modalidad el anticuerpo es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo comprende además PEGilación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar una condición patológica en un sujeto asociada con actividad de IL-22RA que comprende administrar una cantidad efectiva del anticuerpo como el descrito en la presente, tratando de esta manera la condición patológica. En una modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la condición patológica es una condición inflamatoria crónica. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la condición inflamatoria crónica comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la condición patológica es una condición inflamatoria aguda. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la condición inflamatoria aguda comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o enfermedad infecciosa. En otro aspecto, la invención proporciona un método para tratar un mamífero con una enfermedad inflamatoria en la cual IL-22RA juega un papel, que comprende: administrar un antagonista de IL-22RA a un mamífero de tal manera que se reduzca la inflamación, en donde el antagonista comprende un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión que se une específicamente a un polipéptido o fragmento de polipéptido IL-22RA (SEQ ID NO: 3); y en donde la actividad inflamatoria se reduce. En una modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica que comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda que comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choquetóxico o enfermedad infecciosa.

En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marcador péptido, partícula magnética, fármaco o toxina. En otra modalidad el método es como el descrito arriba, en donde el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además, en donde un anticuerpo comprende además PEGilación. En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para reducir inflamación que comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición de un anticuerpo como el descrito en la presente suficiente para reducir inflamación. La invención se ilustra más por los siguientes ejemplos no limitativos. Ejemplo 1 Purificación de polipéptido IL-22RA2-Fc4 a partir de células BHk 570 transfectadas A menos que se indique lo contrario, todas las operaciones se llevaron a cabo a 4°C. El siguiente procedimiento se usó para purificar polipéptido IL-22RA2 (polipéptido receptor soluble maduro de 23 a 231 de SEQ ID NO: 13; polinucleótidos como los mostrados en SEQ ID NO: 12) que contienen una fusión C-terminal a Fc4 humano (SEQ ID NO: 14), designado IL-22RA2-Fc4. Alrededor de 16,500 ml de medio condicionado de células BHK 570 transfectadas con IL-22RA2-Fc4 se filtraron a través de un filtro de esterilización de 0.2 um y luego se complementaron con una solución de inhibidores de proteasa, hasta concentraciones finales de 0.001 mM de leupeptina (Boerhinger-Mannheim, Indianápolis, IN) , 0.001 mM de pepstatina (Boerhinger-Mannheim) y 0.4 mM de Pefabloc (Boerhinger-Mannheim). Una columna Poros protein A50 (volumen de lecho 20 ml, Applied Biosystems) fue empacada y lavada con 400 ml de PBS (Gibco/BRL) . El medio condicionado y complementado se pasó sobre la columna con una velocidad de flujo de 15 ml/minuto, seguida por lavado con 800 ml de PBS (BRL/Gibco) . IL-22RA2-Fc4 fue eluido de la columna con 0.1 M de glicina pH 3.0 y fracciones de 5 ml se recogieron directamente en 0.5 ml de Tris 2M pH 7.8, para ajustar el H final a 7.4 en las fracciones . El rendimiento de la columna se caracterizó a través de western blotting de geles SDS-PAGE en reducción de los medios de partida y el paso de la columna. El Western blotting usó anticuerpo HRP IgG anti-humano (Amersham) , el cual mostró una proteina inmunoreactiva a 60,000 Da en el medio de partida, sin nada en el paso, sugiriendo una captura completa. La proteina A50 eluyó fracciones que se caracterizaron por gel SDS PAGE de reducción. Este gel mostró una banda teñida con Coomassie de reducción. Este gel mostró una banda teñida con Coomassie intensamente a 60,000 Da en fracciones 3 a 11. Las fracciones 3 a 11 se agruparon. El grupo de elución de proteina A50 se concentró de 44 ml a 4 ml usando un concentrador centrifugo Ultrafree Biomax de 30,000 Da (volumen de 15 ml, Millipore). Una columna de filtración en gel Sephacryl S-300 (175 ml de volumen de lecho; Pharamacia) se lavó con 350 ml de PBS (BRL/Gibco) . El grupo concentrado se inyectó sobre la columna con una velocidad de flujo de 1.5 ml/min, seguida por lavado con 225 ml de PBS (BRL/Gibco) . Los picos eluidos se recogieron en fracciones de 2 ml . Las fracciones eluidas se caracterizaron por geles SDS PAGE en reducción y no reducción teñidos con plata (Geno Technology) . Los geles SDS PAGE teñidos con plata en reducción mostraron una banda intensamente teñida a 60,000 Da en fracciones 14-31, mientras que los geles SDS PAGE de no reducción teñidos con plata mostraron una banda intensamente teñida a 160,000 Da en fracciones 14-31. Las fracciones 1-13 mostraron muchas bandas de varios tamaños. Las fracciones 14-31 se agruparon, se concentraron a 22 ml usando un concentrador centrifugo Ultrafree Biomax de 30,000 Ka (volumen de 15 ml, Millipore) . Este concentrado se filtró a través de un filtro de esterilización Acrodisc de 0.2 µm (Pall Corporation).

La concentración de proteínas de las fracciones agrupadas concentradas se llevó a cabo mediante análisis BCA (Pierce, Rockford, IL) y el material se formó en alícuotas, y se almacenó a -80°C de acuerdo con nuestros procedimientos estándares. La concentración de las fracciones agrupadas fue de 1.50 mg/mL. Ejemplo 2 Construcción de células BaF3 que expresan al receptor CRF2-4 (células BaF3/CRF2-4) y células BaF3 que expresan el receptor CRF2-4 con el receptor IL-22RA (células BaF3/CRF2-4/lL-22RA) Se construyeron células BaF3 que expresaban al receptor CRF2-4 de longitud completa, usando 30 µg de un vector de expresión CFR2-4 descrito abajo. Las células BaF3 que expresaban al receptor CFR2-4 se designaron como BaF3/CRF2-4. Estas células se usaron como un control, y fueron transfectadas además con receptor IL-22RA de longitud completa (patente de E.U.A. No. 5,965,704) y se usaron para construir un tamiz para actividad IL-22 como el descrito abajo . A. Construcción de células BaF3 que expresan al receptor CRF2-4 La secuencia de ADNc de longitud completa de CRF2-4 (Genbank No. de Registro Z17227) fue aislada de una biblioteca de ADNc de lineas de células Daudi, y luego se clonó en un vector de expresión pZP7P.

BaF3, una linea de células prelinfoides dependientes de interleucina-3 (IL-3) derivadas de médula ósea de murino (Palacios and Steinmetz, Cell 41: 727-734, 1985; Mathey-Prevot et al., Mol. Cell. Biol.. 6: 4133-4135, 1986) , se mantuvo en medio completo (medio RPMI (JRH Bioscience Inc., Lenexa, KS) complementado con 10% de suero de becerro fetal inactivado con calor, 2 ng/ml de IL-3 de murino (mIL-3) (R & D, Minneapolis, MN) , 2 mM de L-glutaMax-1™ (Gibco BRL) , 1 mM de piruvato de sodio (Gibco BRL) , y antibióticos PSN (GIBCO BRL) ) . Antes de la electroporación, CRF2-4/pZP7P se preparó y se purificó usando un kit Qiagen Maxi prep.

(Qiagen) según las instrucciones del fabricante. Para electroporación, las células BaF3 se lavaron una vez en medio RPMI libre de suero y luego se resuspendieron en medio RPMI libre de suero a una densidad celular de 107 células/ml. Un ml de células BaF3 resuspendidas se mezcló con 30 µg del ADN plasmidico CRF2-4/pZP7P y se transfirió a cámaras de electroporación desechables separadas (GIBCO BRL) . Después de una incubación de 15 minutos a temperatura ambiente a las células se les dieron dos choques en serie (800 Ifad/300 V; 1180 Ifad/300 V) suministrados por un aparato de electroporación (CELL-PORATOR™; GIBCO BRL) . Después de un tiempo de recuperación de 5 minutos, las células electroporadas fueron transferidas a 50 mL de medio completo y puestas en una incubadora durante 15-24 horas (37°C, 5% de C02) . Las células fueron después centrifugadas y resuspendidas en 50 ml de medio completo que contenia 2 µg/ml de puromicina en un matraz T-162 para aislar el fondo resistente a puromicina. Los fondos de las células BaF3 transf ectados, en adelante llamados células BaF3/CRF2-4, fueron ensayados para capacidad de señalización como se describe abajo. Además estas células se transf ectaron más con receptor IL-22RA como se describe abajo. B . Construcción de células BaF3 que expresan receptores CRF2-4 e IL-22RA Células BaF3 /CRF2 -4 que expresan al receptor IL-22RA de longitud completa se construyeron como se dij o arriba , usando 30 µg de vector de expresión IL-22RA . Después de la recuperación, los trans f ectantes se seleccionaron usando 200 µg/ml de zeocina y 2 µg/ml de puromicina . Las células BaF3 /CRF2 -4 que expresaban al receptor IL-22RA fueron designadas como células BaF3 /CRF2-4 ( IL-22RA . Estas células se usaron para tami zar la actividad IL-22 asi como la actividad antagonista de IL-22RA2 descrita en la presente . Ejemplo 3 Tamizado para la actividad antagonista IL-22 usando células BaF3/CRF2-4/lL-22RA usando un ensayo de proliferación con azul alamar A . Tami zado para la actividad de IL-22 usando células BaF3 /CRF2-4 / IL-22RA utili zando un ensayo de proli feración de azul de alamar IL-22-CEE puri ficado ( ej emplo 4 ) se usó para probar la presencia de actividad de proliferación como se describe abajo. IL-22RA2-Fc4 purificado (ejemplo 1) se usó para antagonizar la respuesta proliferativa del IL-22 en este ensayo como se describe abajo. Células BaF3/CRF2-4/IL-22RA fueron centrifugadas y lavadas en el medio completo (medio RPMI (JRH Bioscience Inc., Lenexa, KS) complementado con 10% de suero de becerro fetal inactivado con calor, 2 ng/ml de IL-3 de murino (mIL-3) (R & D, Minneapolis, MN) , 2 mM de L-glutaMax-1™ (gibco BRL), 1 mM de piruvato de sodio (Gibco BRL) , y antibióticos PSN (GIBCO BRL) , pero sin mIL-3 (en adelante referido como "medio libre de mIL-3"). Las células fueron centrifugadas y lavadas 3 veces para asegurar la remoción del mIL-3. Las células se contaron después en un hemacitómetro . Las células se colocaron en un formato de 96 pocilios a 5,000 células por pocilio en un volumen de 100 µl por pocilio usando el medio libre de mIL-3. La proliferación de las células BaF3/CRF2-4/IL-22RA fue evaluada usando proteina IL-22-CEE diluida con medio libre de mIL-3 hasta concentraciones de 50, 10, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.13, 0.06, ng/ml. 100 µl de la proteina diluida se añadieron a las células BaF3/CRF2-4/IL-22A. El volumen de ensayo total es 200 µl . Las placas de ensayo se incubaron a 37°C, 5% de C02 durante 3 dias tiempo durante el cual Alamar Blue (Accumed, Chicago, IL) se añadió a 20 µl/pocillo. Las placas se incubaron de nuevo 37°C, 5% de C02 durante 24 horas. El Alamar Blue da una lectura fluoromética a base del número de células vivas, y es entonces una medición directa de la proliferación celular en comparación con un control negativo. Las placas fueron incubadas de nuevo a 37°C, 5% de C02 durante 24 horas. Las placas fueron leídas en el lectro de placa Fmax™ (Molecular Devices Snnyvale, Ca) usando el programa SoftMax™ a longitudes de onda de 544 (excitación) y 590 (emisión) . Los resultados confirmaron la respuesta proliferativa dependiende de dosis de las células BaF3/CRF2-4/IL-22RA a IL-22-CEE. La respuesta, según se midió, fue de aproximadamente 15 veces sobre el fondo en el extremo alto de 50 ng/ml hacia una inducción de 2 veces en el extremo inferior de 0.06 ng/ml. Las células tipo silvestre BaF3 y células BaF3/CRF2-4 no proliferaron en respuesta a IL-22-CEE, mostrando que IL-22 es especifico para el receptor heterodimérico CRF2-4/IL-22RA. Para determinar si IL-22RA2 es capaz de antagonizar la actividad de IL-22, se repitió el ensayo descrito arriba usando IL-22RA2/Fc4 soluble purificado. Cuando IL-22 se combinó con IL-22RA2 a 10 µg/ml, la respuesta a IL-22 a todas las concentraciones se llevó al antecedente. Que la presencia de IL-22RA2 soluble eliminó los efectos proliferativos de IL-22 demuestra que es un potente antagonista del ligando IL-22. Ese ensayo se puede usar para probar otros antagonistas de la actividad de IL-22 descritos en la presente, tales como anticuerpos anti-IL-22RA.

Ejemplo 4 Purificación de IL-22-CEE a partir de células BHK 570 A menos que se indique lo contrario, todos las operaciones se llevaron a cabo a 4°C. Se usó el siguiente procedimiento para purificar polipéptido IL-22 que contenia un marcador GluGlu (EE) C-terminal (SEQ ID NO: 15; o SEQ ID NO: 16). Medio acondicionado de células BHK que expresaba IL- 22-CEE se concentró con un cartucho espiral Amicon S10Y3 en un ProFlux A30. Se añadió una solución inhibidora de proteasa al medio acondicionado y concentrado hasta concentraciones finales de 2.5 mM de ácido ' etilendiaminotetraacético (EDTA, Sigma Chemical Co . St. Louis MO) , 0.003 mM de leupeptina (bioehringer-Mannheim, Indianápolis, IN) , 0.001 mM de pepstatina (Boheringer- Mannheim) y 0.4 mM de Pefabloc (Boehringer-Mannheim) . Las muestras se removieron para análisis y el volumen global se congeló a -80°C hasta que iniciara la purificación. Concentraciones de proteina objetivo totales de los medios acondicionados concentrados se determinaron mediante SDS-PAGE y análisis Western blot con el anticuerpo conjugado anti-EE HRP. Aproximadamente 100 ml de columna de anti-EE G- Sepharose (preparado como se describe abajo) se vertió en una columna de vidrio Waters AP-5 de 5 cm x 10 cm. La columna se empacó por flujo y se equilibró en un BioCad Sprint (PerSeptive BioSystems, Framingham, MA) con solución salina de pH regulado con fosfato (PBS) pH 7.4. El medio acondicionado y concentrado se descongeló, se filtró por un filtro estéril de 0.2 mieras, se ajustó el pH a 7.4, después se cargó en la columna durante la noche con aproximadamente 1 ml/minuto de velocidad de flujo. La columna se lavó con 10 volúmenes de columna (CVs) de solución salina de pH regulado con fosfato (PBS, pH 7.4), después se eluyó con tapón con 200 ml de PBS (pH 6.0) que contenia 0.5 mg/ml de péptido (Anaspec, San José, CA) a 5 ml/minuto. El péptido EE se usó como la secuencia EE EYMPME (SEQ ID NO: 15). La columna se lavó para 10 CVs con PBS, después e eluyó con 5 CVs de glicina 0.2M, pH3.0. El pH de la columna eluida con glicina se ajustó a 7.0 con 2 CVs de 5X PBS, después se equilibró en PBS (pH 7.4). Fracciones de 5 ml se recogieron sobre la cromatografia de elución completa y la absorbancia a 280 y 215 nM fueron monitoreadas; el paso y los grupos de lavado también se guardaron y analizaron. Las fracciones del tipo de elución de polipéptido EE se analizaron para la proteina objetivo por medio de tinción con plata SDS-PAGE y Western Blotting con el anticuerpo conjugado anti-EE HRP. Las fracciones de elución de polipéptido de interés se agruparon y concentraron de 60 ml a 5.0 ml usando un concentrador centrifugo de membrana con limite de peso molecular de 10,000 Daltons (Millipore, Bedford, MA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para separar IL-22-CEE de otras proteínas co-purificadoras, las fracciones agrupadas de elución de polipéptido concentradas se sometieron a un POROS HQ-50 (resina de intercambio aniónico fuerte de PerSeptivebioSystems, Framingham, MA) a pH 8.0. Una columna de 1.0 x 6.0 cm fue vertida y empacada en flujo en un BioCad Sprint. La columna fue cargada contra iones y luego equilibrada en 20 mM de TRIS pH 8.0 (Tris (hidroximetilaminometano) ) . La muestra fue diluida 1:13 (para reducir la potencia iónica de PBS) y luego cargada en la columna Poros HQ a 5 ml/minuto. La columna se lavó para 10 CVs con 20 mM de Tris pH 8.0 y luego fue eluida con una gradiente de 40 CV de 20 mM Tris/cloruro de sodio 1 M (NaCl) a 10 ml/minuto. Fracciones de 1.5 ml se recogieron sobre la cromatografia completa y la absorbancia a 280 y 215 nM fueron monitoreadas. Las fracciones de pico de elución se analizaron mediante tinción con plata SDS-PAGE. Las fracciones de interés se agruparon y concentraron a 1.5-2 ml usando un concentrador centrifugo de membrana con limite de peso molecular de 10,000 Daltons (Millipore, Bedford, MA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para separar polipéptido IL-22-CEE de péptido EE libre y cualquier proteina de co-purificación contaminante, las fracciones concentradas y agrupadas se sometieron a cromatografia de exclusión de tamaño en una columna de 1.5 x 90 cm Sephadex S200 (Pharmacia, Piscataway, NJ) y se cargaron en PBS a una velocidad de flujo de 1.0 ml/min usando un BioCad Sprint. Fracciones de 1.5 ml se agruparon a través de la cromatografia completa y la absorbancia a 280 y 215 nM fueron monitoreadas. Las fracciones pico se caracterizaron por una tinción con plata de SDS-PAGE, y sólo las fracciones más puras se agruparon. Este material representó polipéptido IL-22 CEE purificado. Este material purificado se sometió finalmente a una columna ActiClean Etox (Sterogene) de 4 ml para remover cualquier endotoxina restante. La muestra se pasó sobre la columna de gravedad equilibrada con PBS 4 veces y después la columna se lavó con un solo volumen de 3 ml de PBS, el cual se agrupó con "limpiada". El material fue después filtrado en un filtro estéril de 0.2 mieras y se almacenó a -80°C hasta que se formaron los alícuotas. En geles SDS-PAGE sometidos a Western blotting, azul de Coomassie y teñidos con plata, el polipéptido IL-22-CEE fue una banda principal. La concentración de proteínas del material purificado se llevó a cabo mediante análisis BCA (Pierce, Rockford, IL) y la proteina se hizo alícuotas, y se almacenó a -80°C de acuerdo con procedimientos estándares. Para preparar anti-EE Sepharose, un volumen de lecho de 100 ml de proteina G Sepharose (Pharmacia, Piscataway, NJ) se lavó 3 veces con 100 ml de PBS que contenia 0.02% de azida de sodio usando una unidad de filtro de 0.45 mieras Nalgene de 500 ml . El gel se lavó con 6.0 volúmenes de trietanolamina a 200 mM, pH 8.2 (TEA, Sigma, St. Louis, MO) y un volumen igual de solución de anticuerpo EE que contenia 900 mg de anticuerpo se añadió. Después de una incubación nocturna a 4°C, el anticuerpo no unido se removió al lavar la resina con 5 volúmenes de 200 mM de TEA como se describió arriba. La resina fue resuspendida en 2 volúmenes de TEA, transferida a un recipiente adecuado y dimetilpimilimidato-2HCl (Pierce, Rockford, IL) disuelto en TEA, se añadió a una concentración final de 36 mg/ml de gel de proteina G-Sepharose. El gel fue mecido a temperatura ambiente durante 45 minutos y el liquido se removió usando la unidad de filtro como se describió arriba. Los sitios no específicos en el gel fueron después bloqueados al incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente con 5 volúmenes de 20 mM de etanolamina en 200 mM de TEA. El gel se lavó después con 5 volúmenes de PBS que contenia 0.02% de azida de sodio y se almacenó en esta solución a 4°C. Ejemplo 5 Efectos in vivo del polipéptido IL-22 Ratones (hembra, C57BL/6N, 8 semanas de edad; Charles River Labs, Kingston, NY) fueron divididos en tres grupos. Un adenovirus que expresaba un polipéptido IL-22 (SEQ ID NO: 6) se hizo anteriormente usando métodos estándares. El dia 0, adenovirus progenitor o IL-22 se administró a los primeros (n=8), segundo (n=8) grupos, respectivamente, por medio de la vena de la cola, con cada ratón recibiendo una dosis de ~1 x 1011 partículas en -0.1 ml . El tercer grupo (n=8) no recibió tratamiento. Los dias 12, los ratones fueron pesados y se tomó sangre de los ratones. Las muestras fueron analizadas para conteo hemático completo (CBC) y química de suero. Las elevaciones estadísticamente significativas en neutrófilo y conteos de plaquetas se detectaron en las muestras de sangre del grupo al que se le administró adenovirus IL-22 en relación al grupo tratado con adenovirus progenitor. Asimismo, los conteos de linfocitos y glóbulos rojos se redujeron significativamente del grupo administrado con adenovirus IL-22 al grupo tratado con adenovirus progenitor. Además, los ratones tratados con adenovirus IL-22 redujeron su peso corporal, mientras que los ratones tratados con adenovirus progenitor ganaron peso. También el nivel de IL-22 en suero se incrementó y el nivel de glucosa se redujo el dia 3. En resumen, los ratones IL-22 adeno desplegaron una aguda respuesta de fase que también puede iniciarse por otras citocinas pro-inflamatorias tales como citocinas TNF-alfa, IL-lbeta y gpl30. La respuesta de fase aguda se de el parámetro de respuestas inflamatorias inmediata iniciado por moléculas de reconocimiento de patrón.

Las proteínas de fase aguda proporcionan protección incrementada contra microorganismos y modifica respuestas inflamatorias mediante los efectos en el tráfico de células y liberación de mediadores. Por ejemplo, SAA tiene una función activadora de leucocitos incluyendo la inducción de quemotaxis, incremento de la adhesión de leucocitos a células endoteliales y fagocitosis incrementada. En entendimiento los factores que inician y alteran la magnitud y duración de la respuesta de fase aguda representa una etapa importante en el desarrollo de terapias nuevas para enfermedades infecciosas e inflamatorias. Los resultados sugirieron que IL-22 afecta hematopoyesis, es decir, formación de células hemáticas in vivo . Asi, IL-22 podria tener actividades biológicas que afecten diferentes células madre hemáticas, dando como resultado asi un incremento o reducción de ciertas células hemáticas diferenciadas en un linaje especifico. Por ejemplo, IL-22 parece reducir linfocitos, lo cual se debe probablemente a la inhibición de las células progenitoras involucradas que dan origen a células linfoides. IL-22 reduce también los glóbulos rojos, soportando la noción de que IL-22 podriajugar un papel en la anemia, infección, inflamación, y/o enfermedades inmunes al influenciar las células hemáticas implicadas en este proceso. Los antagonistas contra IL-22, tales como anticuerpos o su receptor soluble IL-22RA2, se podrían usar como reactivos terapéuticos en estas enfermedades. Más aún, estos experimentos usando adenovirus IL-22 en ratones sugieren que la sobre-expresión de IL-22 incremente el nivel de neutrófilos y plaquetas in vivo . Es concebible que hayan otros factores (tales como citocinas y genes modificadores) implicados en las respuestas a IL-22 en el sistema animal completo. No obstante, estos datos soportan fuertemente la implicación de IL-22 en hematopoyesis. Asi, IL-22 y sus receptores son adecuados reactivos/objetivos para el diagnóstico y tratamiento en una variedad de trastornos, tales como inflamación, trastornos inmunes, infección, anemia, hematopoyéticos y otros cánceres, y similares. Ejemplo 6 Ratones transgénicos que expresan IL-22 A. Generación de ratones transgénicos que expresan IL-22 de ratón Fragmentos de ADN de un vector transgénico que contenia secuencias de flanqueo 5' y 3' del promotor EµLCK especifico linfoide, IL-22 de ratón (SEQ ID NO: 10; polipéptido mostrado en SEQ ID NO: 11), el intrón de insulina II de rata, ADNc de IL-22 y la secuencia poli A de hormona de crecimiento humano fueron preparados usando métodos estándares, y usados para microinyección en oocitos de murino B6C3fl (Taconic, Germantown, NY) fertilizados, usando un protocolo de microinyección estándar. Véase, Hogan, B. et al., Manipulating the Mouse Embryo. A. Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1994. Veinticinco ratones transgénicos para IL-22 de ratón con el promotor EµLCK especifico de linfoide fueron identificados entre 154 crias. Once de las crias transgénicas murieron a las horas de nacidas, 9 crias transgénicas con una apariencia brillante fueron necropsiadas el dia del nacimiento y 2 crecieron hasta la adultez. Los niveles de expresión fueron bajos en un animal adulto. Los tejidos de las crias sometidas a necropsia se prepararon y se examinaron histológicamente como se describe abajo. La apariencia brillosa de las crias neonatas pareció estar asociada con un endurecimiento en la piel, como si se estuvieran secando, dando como resultado una educción del cuidado adecuado. Sus movimiento se hicieron endurecidos en general. B. Análisis genotipico y de expresión para ratones transgénicos De la linea transgénica IL-22 de ratón conducida por el promotor EµLck descrito arriba, se observaron las crias recién nacidas para anormalidades el dia uno (dia de nacimiento) y se sacrificaron para recolección de tejido. A todas las crias se les dio un número de etiqueta de oreja único, y aquellas designadas como con un fenotipo de piel brillante en el momento de sacrifico fueron indicadas. De las doce crias, seis fueron observadas que tenían un fenotipo de piel brillante, con dos designadas como fenotipos "severos". Los fenotipos severos se definieron como crias pequeñas con muy poca movilidad cuya piel era especialmente brillante y muy seca. La piel se recogió del lado lateral izquierdo de cada cria, y se congeló en medio de incrustación Tissue-Tek. La genotipificación confirmó que la piel brillante era un buen indicador de el estado transgénico, aunque no se tomaron datos de expresión. Bloques de piel congelados fueron seccionados a 7 mieras en un criostato, y teñidos para ver la presencia de CD3, CD4, CD8, macrófagos de ratón, células B, CD80 y MHC clase II. El protocolo de tinción implicó la unión de anticuerpos disponibles comercialmente al tejido, detección con un anticuerpo secundario marcado con peroxidasa y reacción en cromógeno DAB para visualizar la tinción. Se encontró que los animales transgénicos estaban más altos en MHC clase II y CD80, las cuales tiñen para células presentadoras de antigenos y células dendriticas respectivamente. El marcador macrófago también detectó más células en los transgénicos severos y no severos que en los animales tipo silvestre, aunque la distribución de estas células fue muy localizada en la dermis alta. Los animales clasificados como genotipos severos tuvieron la tinción más robusta con los tres de estos marcadores mostrando un incremento diagramático en la intensidad de células y número cuando se comparó con el tipo silvestre. Esta variabilidad puede deberse a una diferencia en el nivel de expresión de IL-22 en estas crias transgénicas. Las células positivas MHC clase II se localizaron en la dermis inferior dispuestas en racimos abiertos flojos, mientras que las células CD80 positivas estaban predominante debajo de la dermis ya sea en o justo arriba de la capa músculo/grasa. Estas dos poblaciones de células no parecen traslaparse. Todos los demás marcadores tuvieron una tinción equivalente en todos los animales. La tinción con azul de toluidina para células cebadas reveló una diferencia ligera a ninguna entre animales tipo silvestre transgénicos. C. Evaluación microscópica de tejidos de ratones transqénicos : IL-22 TG con promotor EuLck como histología letal neonatal El dia del nacimiento, las crias de las carnadas que contenían transgénicos IL-22 fueron eutanizadas humanamente y la inmersión corporal completa fijada en formalina regular en pH al 10%. Seis crias transgénicas y dos no transgénicas fueron sometidas a un tratamiento adicional. Cuatro de los seis transgénicos se notó que tenían piel brillante en el momento de la eutanasia. Los tejidos fijos fueron recortados en 5 secciones (sección longitudinal de la cabeza y cortes transversales del tórax superior e inferior y abdomen superior e inferior) . Los tejidos se incrustaron en parafina, se procesaron rutinariamente, se cortaron a 5 um (Jung 2065 Supercut microtome, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania) y se tiñeron con H&E. Los tejidos teñidos se evaluaron bajo un microscopio de luz (Nikon Eclipse E600, Nikon Inc., Melville, NY) por un patólogo veterinario certificado por una institución (ACVP) . Después del examen microscópico, se observó que la epidermis de dos de las crias transgénicas era más gruesa que la epidermis de los otros seis ratones incluyendo los controles. No se notaron otras anormalidades en la piel y otros tejidos de cualquiera de los ratones. Las áreas representativas de piel de las regiones correspondientes del tórax y abdomen se formaron en imágenes con el lente objetivo 40 X y con una cámara digital CoolSnap (Roper Scientific, Inc. , San Diego, CA) que estaba unida al microscopio. El grosor de la epidermis se determinó después usando sofware para his tomorf omet ria (Scion Image for Windows (NIH Image) , Scion Corp. Frederick, MD, v. B4.0.2) . Los resultados se muestran en la tabla 5 como sigue: Tabla 5 Hubieron números insuficientes de ratones para determinar significatividad estadística; sin embargo, los transgénicos, especialmente aquellos con piel brillosa, tendieron a tener epidermis más gruesa que los transgénicos no brillosos y los controles no transgénicos. Los transgénicos brillosos pueden tener un nivel de expresión más alto que IL-22 que los transgénicos no brillosos; sin embargo, los niveles de expresión no se determinaron para estos ratones. Esto sugirió un papel para IL-22 en psoriasis, artritis psoriásica y otras condiciones inflamatorias de la piel u otras enfermedades inflamatorias. Ejemplo 7 Efectos in vivo de polipéptido IL-22 A. Ratones infectados con adenovirus IL-22 muestran la inducción SAA Ratones (hembra, C57BL/6N, 8 semanas de edad; Charles River Labs, Kingston, NY) se dividieron en tres grupos. Un adenovirus que expresaba un polipéptido IL-22 (SEQ ID NO: 6) se hizo anteriormente usando métodos estándares. El dia 0, adenovirus progenitor o IL-22 se administró al primero (n=8) y segundo (n=8) grupos, respectivamente, por medio de la vena de la cola, cada ratón recibiendo una dosis de ~1 x 1011 partículas en -0.1 ml de volumen. El tercer grupo (n=8) no recibió tratamiento. El dia 12, los ratones fueron pesados y se tomó sangre de los ratones. El dia 20 del estudio, los ratones fueron sacrificados, se registró el peso corporal y se colectaron sangre y tejidos para análisis. Todas las muestras de sangre se analizaron para conteo hemático completo (CBC) y química de suero. Tanto en dia 12 como en 20, elevaciones estadísticamente significativas en los conteos de neutrófilos y plaquetas se detectaron en las muestras de sangre de el grupo al que se le administró adenovirus IL-22 en relación con el grupo tratado con adenovirus progenitor. Asimismo, los conteos de linfocitos fueron reducidos significativamente del grupo al que se le administró adenovirus IL-22 en relación al grupo tratado con adenovirus progenitor el dia 12, pero el dia 20 el efecto opuesto fue observado. Además, los ratones tratados con adenovirus IL-22 redujeron en peso corporal, mientras que los ratones tratados con adenovirus progenitor ganaron peso. La glucosa fue reducida significativamente en ambos puntos de tiempo en las muestra de suero del grupo al que se le administró adenovirus IL-22 en relación al grupo tratado con adenovirus progenitor. Albúmina de suero también se redujo significativamente en ambos puntos de tiempo. los niveles de nitrógeno de urea en sangre se redujeron significativamente el dia 20. Los niveles de globulina en suero se incrementaron significativamente en el grupo al que se le administró adenovirus IL-22 en relación al grupo tratado con adenovirus progenitor en ambos puntos de tiempo, microscópicamente, un cambio histomorfológico observado atribuido a IL-22 fue la regeneración tubular en el riñon. Aunque no es poco común en ratones, hubo una incidencia incrementada y severidad en este grupo de animales. La nefropatia se caracteriza como áreas multifocales de basófilos de células epiteliales tubulares corticales. Un experimento adicional, idéntico en diseño al descrito arriba, se llevó a cabo para verificar los resultados y colectar muestras adicionales. En este estudio, el peso corporal se registró cada tres dias, se tomó sangre de los ratones 3 dias después de la inyección del adenovirus y los ratones fueron sacrificados para recolección de sangre y tejidos el dia 10 (n=4 por grupo) y dia 20 (n= 4 por grupo) . Conteos elevados de neutrófilos y plaquetas fueron nuevamente detectados en muestras de sangre del grupo al que se le administró adenovirus IL-22 en relación al grupo tratado con adenovirus progenitor. Este efecto fue evidente para neutrófilos el dia 3, pero el conteo de plaquetas no fue significativamente diferente hasta el dia 10. Asimismo, los conteos de linfocitos fueron reducidos significativamente del grupo al que se le administró adenovirus IL-22 en relación al grupo tratado con adeovirus progenitor en 3 y 10, pero no fueron elevados el dia 20 como en el estudio anterior. De nuevo, los ratones a los que se les administró el adenovirus IL-22 perdieron peso durante el curso del estudio, mientras que los ratones tratados con virus de control y no tratados ganaron peso. Los parámetros de química de suero fueron consistentes con el estudio anterior. Los descubrimientos histológicos de la regeneración tubular en riñon asociado con el tratamiento con adenovirus IL-22 también se confirmaron en este estudio. Esto concordó con el descubrimiento adicional de proteina urea moderada en ratones a los que se les administró adenovirus IL-22 (dia 20). Los resultados sugirieron que IL-22 afecta la hematopoyesis, es decir, la formación de glóbulos de células hemáticas in vivo . De esta manera, IL-22 podria tener actividades biológicas que afecten diferentes células madre hematopoyéticas, dando como resultado entonces un incremento en reducción de ciertas células hemáticas diferenciadas en un linaje especifico. Por ejemplo, IL-22 parece reducir linfocitos, lo cual es muy probablemente debido a la inhibición de las células progenitoras involucradas que dan origen a células linfoides, soportando la noción de que IL-22 podria jugar un papel en la anemia, infección, inflamación y/o enfermedades inmunes al influenciar células hemáticas implicadas en estos procesos. Antagonistas contra IL-22, tales como anticuerpos o su receptor soluble IL-22RA2, podrían usarse como reactivos terapéuticos en estas enfermedades . Además, estos experimentos usando adenovirus IL-22 en ratones sugieren que la sobre-expresión de IL-22 incremente el nivel de neutrófilos y plaquetas in vivo . Es concebible que hayan otros factores (tales como citocinas y genes modificadores) implicados en las respuestas a IL-22 en el sistema animal completo. No obstante, esos datos soportan fuertemente la implicación de IL-22 en hematopoyesis. Asi, IL-22, anticuerpos anti-IL-22, receptores solubles IL-22RA (por ejemplo SEQ ID NO: 3) y anticuerpos anti-IL-22RA son reactivos/objetivos adecuados para el diagnóstico y tratamiento de una variedad de trastornos, tales como inflamación, trastornos inmunes, infección, anemia, hematopoyéticos y otros cánceres, y similares. La asociación de la expresión de IL-22 con pérdida de peso, aparición de proteina SAA de fase aguda y perturbaciones metabólicas evidenciadas por glucosa, nitrógeno de urea y albúmina en suero reducidos, sugieren que IL-22 es una citocina que actúa temprano en ciertas respuestas inflamatorias. Los ratones administrados con adenovirus IL-22 pueden representar un estado de inflamación crónica, tal como aquél observado en IBD, colitis ulcerativa, artritis, psoriasis, artritis psoriásica, asma y similares. Ciertos procesos inflamatorios dañinos podrían ser inhibidos mediante el uso de un antagonista para IL-22, tal como anticuerpos anti-IL-22 y sus receptores, tales como receptores solubles IL-22RA (por ejemplo SEQ ID NO: 3), y anticuerpos anti-IL-22RA y similares. B . IL-22 es una citocina pro-inflamatoria: nivel en suero de SAA en ratones Adeno-IL-22 Se llevó a cabo un ELISA para determinar el nivel de SAA en ratones IL-22-adeno, usando un kit y protocolo Mouse SAA Immunoassay (Biosource International, California, E.U.A.). Las normas diluidas y los desconocidos fueron colocados junto con SAA anti-ratón HRP en placas de ensayo pre-recubiertas con un anticuerpo anti-ratón SAA. Las placas fueron incubadas durante una hora a 37 grados C y luego lavadas de acuerdo con las instrucciones del kit. Las placas se revelaron durante 15 minutos a temperatura ambiente usando TMB y se detuvieron con H2S04 2M. La absorbancia a 450 nm fue leida usando un Spectromax 190 (Molecular Devices, California, E.U.A.). Los datos resultantes se analizaron usando Softmax Pro (Molecular Devices, California, E.U.A.) y Excel (Microsoft Corp., Washington, E.U.A.).

Los ratones infectados con adenovirus IL-22 que tuvieron niveles altamente elevados de mSAA, más de 10 veces, en relación al control progenitor-adenovirus . C. Análisis de citometria de flujo de ratones infectados con adenovirus IL-22 Para analizar los efectos de la expresión de IL-22 ín vivo por adenovirus, se aisló sangre periférica, bazo y médula ósea de ratones C57BL/6N infectados con IL-22-adenovirus, el dia 10 y dia 20 después de la inyección. Aproximadamente 100 µl de sangre se tomaron en tubos heparinizados, después se agotaron de glóbulos rojos mediante lisis hipotónica (las células fueron Usadas en 4.5 ml de d H20 durante -5 segundos antes de añadir 1.5 ml de NaCl al 3.6%). Los bazos fueron triturados entre dos portaobjetos de vidrio y las células liberadas fueron pasadas sobre una membrana Nytex (tensador de células) y granuladas. La médula ósea se obtuvo al triturar un fémur en un mortero y pestero y pasar las células sobre un tensador de células (Falcon) . Las células fueron resuspendidas en regulador de pH de lavado en FACS (WB = HBSS/1%BSA/10 mM de hepes) , contado en azul de tripano y lxlO6 células viables de cada tipo se hicieron alícuotas en tubos de poliestireno de 5 ml . Las células se lavaron y granularon, luego se incubaron durante 20 minutos sobre hielo con cocteles de anticuerpos monoclonales marcados fluorescentemente (FITC, PE y CyChrome) (PharMingen, San Diego, CA) que reconocían varios marcadores de superficie celular usados para identificar subconjuntos de células inmunes particulares. Estos marcadores incluyen los siguientes: (listados en los grupos de 3 fueron probados). Para tinsión hemática: CD3, Grl y B220; para tinsión de bazo: CD62L, CD44 y CD3; CD21, CD23 y B220; IgD, IgM Yb220; cdllB, Grl y CD8, para tinsión de médula ósea: CDllb, Grl, CD3; IgD, IgM y B220. Las células fueron lavadas con 1.5 ml de WB y granuladas, luego resuspendidas en 0.4 ml de WB y analizadas en un FACScan usando software CellQuest (Becton Dickinson, Mountain View, CA) . Se encontró que la fracción de neutrófilos en la sangre de los ratones IL-22-adenotratados fue elevada 4-13 veces el dia 10 y 2-3 veces el dia 20. El dia 10, esta diferencia dio como resultado una reducción concomitante en la fracción de linfocitos y monocitos en la sangre. En la médula ósea, se encontró que el número total de células B se redujo - 1.5 veces mientras que el porcentaje de células B recirculantes maduras se incrementó y el número total de células B inmaduras cayó ligeramente el dia 10. El dia 20, muchas de estas diferencias no fueron aparentes, aunque se encontró un ligero incremento en la fracción de células B recirculantes maduras. En el bazo, el número total de células B se redujo ligeramente (1.5-2 veces) en ambos dias probados, mientras que el dia 20, la fracción de células B de zona marginal ( CD21+CD23-B220+ ) se incrementó 2 veces y el número de células B foliculares ( CD21+CD23+B220+ ) cayó dos veces . Las células B de zona marginal se considera que son la primera linea de defensa contra patógenos toda ve z que son más sensibles a mitógenos de células B (por ej emplo LPS ) , que las células B foliculares más comunes , y cuando encuentran su antigeno cognado se di ferencian muy rápidamente en células secretoras de anticuerpos . Es posible que IL-22 ya sea que incremente la conversión de células B foliculares a zona marginal , o que agote selectivamente las células foliculares menos maduras . Los cambios en los números de células B encontrados en la médula ósea pueden reflejar una diferenciación incrementada de células pre /pro y/o inmaduras, o un influjo incrementado de células B recirculantes del bazo/sangre, y tal vez un incremento coincidente en la exportación de células B inmaduras a la periferia . El número real de células B BM maduras no se incrementa , por lo que IL-22 podria no incrementar su proliferación . Como alternativa , IL-22 puede bloquear , reducir o inhibir la diferenciación de células B inmaduras y de esta manera incrementar la representación relativa de células B maduras . D . IL-22RA2 -Fc4 neutrali za la actividad de IL-22 in vivo : ELISA de SAA que muestra la expresión de SAA inducida por IL-22 es inhibida por inyección de IL-22RA2-Fc4 Para evaluar si IL-22RA2 podria inhibir la inducción de SAA por ratones IL-22 ( hembra ) , C3H/HEJ, 8 semanas de edad; Jackson Labs. Bar Harbor, ME) se dividieron en cinco grupos de tres animales cada uno y se trataron mediante inyección IP de proteínas como se muestra en la siguiente tabla 6: Tabla 6 Las inyecciones de IL-22RA2 precedieron la infección de IL-22 por 15 minutos. Ambas inyecciones de proteina se dieron por la ruta intraperitoneal. Una muestra de sangre se tomó de cada ratón antes del tratamiento, después 2 y 6 horas luego del tratamiento. Se preparó suero de cada una de las muestras para la medición de SAA e IL-22. Se llevó a cabo un ELISA como se describió anteriormente para determinar el nivel de SAA en ratones tratados con IL-22 y un receptor soluble para IL-22RA2-Fc4 descrito en la presente. Los ratones tratados con 3 µg de IL-22 en conjunto con IL-22RA2-Fc4 a concentraciones de entre 20-100 ug mostraron una reducción en el nivel de SAA inducido por IL-22 solo a niveles de fondo, demostrando que IL-22 RA Inhibió la actividad de inducción SAA de la IL-22 in vivo . Ejemplo8 Expresión de IL-22 en un modelo de ratón de enfermedad inflamatoria del intestino La enfermedad inflamatoria del intestino (IBD) es una enfermedad multifactorial, dividida en dos tipos, colitis ulcerativa (UC) y enfermedad de Crohn (CD) . La teología de estas enfermedades es actualmente desconocida y las manifestaciones clínicas difieren. UC está restringida al colon, y los síntomas incluyen diarrea sanguinolenta, pérdida de peso y dolor abdominal. Las características macroscópicas de UC incluyen úlceras salpicadas y un colon acortado. En contraste, la enfermedad de Crohn También puede afectar otras partes del intestino. Los síntomas incluyen diarrea (la cual es comúnmente menos sanguinolenta que la observada en UC) , una fiebre de grado bajo y dolor, las caraceristicas macroscópicas incluyen intestino fibrótico y estenótico con estructuras, úlceras profundas, fisuras y fístulas. Varios modelos animales están disponibles que imitan estas enfermedades humanas. Tres modelos comúnmente usado de colitis, para tamizado de fármacos nuevos son el modelo de rata inducido por ácido 2,4,6-trinitrobencensulfónico (DSS), el modelo de transferencia a células T de ratón y el sulfato de sodio dextrano, o modelo de ratón inducido por DSS. El modelo de DSS se derivó de un modelo por . usando un sistema de puntuación por Índice de actividad de enfermedad. En el presente estudio, una colitis aguda fue el resultado cuando los ratones se alimentaron con DSS en su agua potable durante 6 dias. Los animales exhibieron pérdida de peso y diarrea sanguinolenta, imitándola condición de patentes UC . El mecanismo de la lesión DSS no está bien caracterizado, pero se cree que induce una respuesta inmune inflamatoria no específica e imite efectos ambientales en el intestino. Es posible que H2S se produzca, lo cual puede ser tóxico para las células. Además, los cambios en la flora bacteriana luminar ocurren monocitos activados, macrófagos y células cebadas han sido demosradas en el coro. Los mediadores para todos los tres modelos animales incluyen prostaglandinas inflamatorias, metabolitos de leucotrieno y citocinas . A. Método La colitis fue inducida mediante ingestión de DSS en ratones hembra Swiss Webster de Charles River Laboratories. Los ratones tenían 10 y 11 semanas de edad en el inicio de su estudio. A los ratones se les dio 4% de DSS en el agua de beber durante un periodo de 6 dias (ratones tratados), o se les dio únicamente agua para beber normal (ratones de control) . Una puntuación clínica de Índice de actividad de enfermedad Swiss Webster Charles River Laboratories se usó, la cual comprende una combinación de mediciones que incluyen calidad de heces, sangre oculta y pérdida de peso. DAI se obtuvo diariamente para cada ratón empezando un dia después del tratamiento con DSS. Luego de 6 dias, se removió el DSS del agua para beber de los ratones tratados. Todos los ratones se monitorearon mediante puntuación clínica DAI hasta el sacrificio ya sea los dias 2, 7 ó 10 desde el inicio del estudio. En cada uno de los dias 2 y 7, cuatro ratones tratados con DSS ratón de control fueron sacrificados. El dia 10, cuatro ratones con DSS y dos ratones de control fueron sacrificados. Para todos los animales después del sacrificio, se midió la longitud del colon. Secciones del colon fueron fijadas en formalina de pH regulado neutro al 10% para análisis histológico o se congelaron para la extracción de ARNm. B . Puntuación histológica y puntuación de Índice de actividad de enfermedad (DAI) Las puntuaciones del Índice histológico se obtuvieron siguiendo el método en la referencia 1. Generalmente, las secciones de colon se calificaron en forma ciega por un patólogo para puntuaciones de cripta, epitelio hierplásico, distorsión de cripta e inflamación. Diariamente, cada ratón fue evaluado en cuanto a una puntuación clínica con base en la pérdida de peso, consistencia de heces y sangrado intestinal. Las puntuaciones más altas se asignaron para cantidades cada vez más altas de pérdida de peso, diarrea y sangrado. La puntuación diaria para cada ratón fue el grado medio obtenido a partir de los tres resultados /obervaciones . C . Resultados Las longitudes de colon para los ratones tratados con DSS fueron un poco más cortas los dias 7 y 10 que para los controles no tratados; pero los resultados podrían no haber sido significativos (no revisados por una aplicación estadística. Las puntuaciones DAI clínicas reflejaron una elevación de los síntomas de la enfermedad en los ratones tratados con DSS similar a los mostrados en estudios pasados usando este modelo. La sangre oculta fue la mayor aproximadamente los dias 4 y 5, mientras que heces flojas fueron más prevalentes los días 6 y 7. Los resultados de hi s t opat ologia muestran que puntuaciones de enfermedad fueron diferentes de los controles en todos los dias de sacrificio, especialmente días 7 (pico) y 10. Las puntuaciones de puntuaciones de tamizado de hi stopatologia fueron: controles = 0.5, dia 2 ratones tratados con DSS = 8.8, dia 7 ratones tratados con DSS=21, dia 10 ratones tratados con DSS=18. Las puntuaciones clínicas y de histopatología muestran que los ratones tratados con DSS tuvieron enfermedad crónica significativa en relación con los controles no tratados. Las muestras de tejido congeladas se usaron después para las determinaciones de RNm como se describe abajo. D . Expresión tisular del ARNn de IL-22 en muestras de colon IBP de murino usando RT-PCR Para determinar la expresión relativa de ARN de IL-22 de ratón (SEQ ID NO:10; SEQ ID NO: 11) en un modelo de enfermedad inflamatoria del intestino, los colones distales de ratones tratados con DSS se recogieron y se congelaron en ni t rógenol i quido . En este experimento los ratones fueron tratados con DSS y se tomaron muestras los dias 2, 7 y 10 después del tratamiento. Las muestras de los ratones no tratados normales se recogieron también. El ARN se aisló después de las muestras usando el kit estándar Rneasy Midiprep™ (Qiagen, Valencia, CA) según las instrucciones del fabricante . Las reacciones de RT-PCR usaron el sistema Superscrpitp One-Step RT-PCR System with Platinum Taq' (Life Technologies, Gaithersburg, MD) . Cada reacción de 25 µl consistía en lo siguiente: 12.5 µl de regulador de pH de reacción 2X 0.5 ul (20pmol/µl) ZC39, 289 (SEQ IP NO:17), 0.5 µl (20pmol/ul) ZC39,290 (SEQ IP NO:18), 0.4 DI RT/Taq mezcla de polimerasa, 10 µl de agua libre de RNAsa, 1.0 µl de ARN total (lOOng/µl) . La amplificación se llevó a cabo como sigue: Un ciclo a 50° durante 30 minutos seguido por 35 ciclos de 94°, 30 segundos; 58°, 30 segundos; 72°, 60 segundos después concluyó con una extensión final a 72° durante 7 minutos. Ocho a 10 µl del producto de reacción de PCR se sometieron a electroforesis en gel de agarosa estándar usando un gel de agarosa en 2%. El tamaño del fragmento de APNc predicho correcto se observó como sigue: hubo una débil banda en ambas muestras del dia 2. Pos de las tres muestras del dia 7 generaron una fuerte banda mientras quela tercera muestra del dia 7 generó una banda muy fuerte. Las tres muestras del dia 10 generaron una banda fuerte. Finalmente, las dos muestras de control (normales) no generaron ninguna banda. Estos resultados sugieren que puede haber una sobre-regulación de IL-22 en ciertos tipos de respuestas inflamatorias en el colon, incluyendo aquellas asociadas con IBP, UC yCP. Los datos se resumen en la tabla 7 abajo en donde la expresión relativa se calificó como sigue: 0 = sin banda, 1 = banda débil, 2 = banda fuerte, 3 = banda muy fuerte .

Tabla 7 Ejemplo 9 IL-22RA2 reduce niveles de IL-6 SAA en el modelo de artritis inducida por colágeno en ratón (CÍA) A. Modelo de Artritis inducida por colágeno (CÍA) en ratón Ratones PBA/1J macho de diez semanas de edad (Jackson Labs) se dividieron en 3 grupos de 13 ratones/grupo. El dia 21, a los animales se les dio una inyección subcutánea de 50-100 µl de colágeno tipo II de pollo a 1 mg/ml formulado en adyuvante de Freund completo (preparado por Chondrex, Redmond, WA) y tres semanas más tarde el dia 0 se les aplicó una inyección de 100 µl (25 µg) de LPS de 0111:B4 de E. coli , preparada como 250 µg/ml a partir de una alícuota liofilizada (Sigma, St. Louis, MO) . Se administró IL-22RA2 como una inyección intraperitoneal 3 veces a la semana durante 4 semanas, del dia 0 al dia 25. Los primeros dos grupos recibieron ya sea 100 ó 10 µg de IL-22RA2 por animal por dosis, y el tercer grupo recibió el control de vehículo, PBS (Life Technologies, Rockville, MP) . Los animales empezaron a mostrar síntomas de artritis después de la inyección de PBS, la mayoria de los animales desarrollando inflamación a las 2-3 semanas. El grado de enfermedad fue evaluado en cada pata usando un calibre para medir el grosor de la pata, y luego asignando una puntuación clínica (0-3) a cada pata: 0=normal, 0.5=dedos inflamados, l=inflamación de pata leve, 2=inflamación de pata moderada, 2=inflamación de pata severa como se detalla abajo. Monitoreo de la enfermedad Los animales pueden empezar a mostrar signos de inflamación de pata justo después de la segunda inyección de colágeno, y algunos animales pueden incluso empezar a tener signos de inflamación de pata antes de la segunda inyección de colágeno. La mayoria de los animales desarrollan artritis a las 2-3 semanas de la inyección de refuerzo, pero algunos pueden requerir de un periodo de tiempo más largo. La incidencia a la enfermedad en este modelo es típicamente 95- 100% y 0-2 que no responden (determinada después de 6 semanas de observación) se observa típicamente en un estudio que usa 40 animales. Nótese que al empezar la inflamación, una ocurrencia transitoria común de pata grado bajo variable o inflamación de dedo puede ocurrir. Por esta razón, no se considera que un animal ha establecido la enfermedad hasta que una hinchazón de pata marcada y persistente se haya desarrollado . Todos los animales fueron observados diariamente para evaluar el estado de la enfermedad en sus patas, lo cual se hizo al asignar una puntuación clínica cualitativa a cada una de las patas. Cada dia, cada animal tiene sus cuatro patas calificadas de acuerdo con su estado de enfermedad clínica. Para determinar la puntuación clínica, la pata puede pensarse que tiene tres zonas, los dedos, la propia pata (mano o pie) y la muñeca o articulación del tobillo. El grado y severidad de la inflamación en relación a esta zona se indicó incluyendo la observación de todos los dedos para cualquier hinchazón de articulaciones, uñas dobladas o enrojecimiento, la denotación de cualquier evidencia de edema o enrojecimiento en cualquiera de las patas y la anotación en cualquier pérdida de demarcación anatómica fina de tendones o huesos, y la evaluación de la muñeca o el tobillo para cualquier edema o enrojecimiento, asi como la anotación de si la inflamación se extiende proximalmente hasta la pierna.

Una pata con una puntuación de 1, 2 ó 3 se basó primero en la impresión global de severidad, y segundo en qué tantas zonas estaban implicadas. La escala usada para la puntuación clínica se muestra abajo. Puntuación clínica: 0 = Normal 0.5 = Uno o más dedos implicados, pero sólo los dedos están inflamados 1 = inflamación leve que incluye la pata (una zona) y puede incluir el dedo o dedos 2 = inflamación moderada en la pata y puede incluir algunos de los dedos y/o la muñeca/tobillo (2 zonas) 3 = inflamación severa en la pata, muñeca/tobillo y alguna o parte de todos los dedos (3 zonas) La enfermedad establecida se define como una puntuación cualitativa de inflamación de pata que va de dos o más, que persiste durante la noche (dos dias seguidos) . Una vez que se estableció que la enfermedad está presente, la fecha se registra y se designa como el primer dia del animal por "enfermedad establecida". Se tomó sangre a lo largo del experimento para monitorear los niveles en suero de anticuerpos anticolágeno. Los animales fueron sometidos a eutanasia el dia 21, y la sangre se tomó del suero y para CBC's. De cada animal, una pata afectada se recogió en NBF al 10% para histología y una se congeló en nitrógeno liquido y se almacenó a -80°C para el análisis de ARNm. Asimismo, medio bazo, medio timo, medio nodulo linfático mesentérico, un lóbulo hepático y el riñon izquierdo se tomaron en ARN después para el análisis de ARN, y medio bazo, medio timo, medio nodulo linfático mesentérico, el higado restante y el riñon derecho se recogieron en 10% de NBF para histología. Se tomó suero y se congeló a -80°C para ensayos de inmunoglobulina y citocinas. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos cuando las puntuaciones y datos de medición de pata fueron analizados, aunque hubo una sugerencia de que un grupo de tratamiento que recibía IL-22RA hubiera podido tener un retraso en el inicio y progresión de la inflamación de la pata. No hubieron diferencias significativas entre los grupos para cambios en peso corporal, parámetros CBC o niveles de anticuerpo anticolágeno. Estos resultados iniciales indican que IL-22RA2 no afecta adversamente el peso corporal, glóbulos rojos o blancos o producción de anticuerpos, pero puede ser capaz de reducir inflamación. Investigaciones adicionales en dosificación, mecanismo de acción y eficacia están teniendo lugar (por ejemplo, ejemplo 10). B. Datos de ELISA anticolágeno en modelo CÍA de ratón Se tomaron muestras de suero los dias 0, 7, 14, 21 y 28 en relación a la fecha de ataque LPS (dia 0) a partir del modelo de murino de artritis inducida por colágeno (ejemplo 9A arriba) . Las muestras de suero se tamizaron mediante ELISA para los títulos de suero anti-colágeno . No hubieron efectos estadísticamente significativos del tratamiento con IL-22RA2 en grupos de tratamiento de lOOµ o lOµ a los niveles de anticuerpos anti-colágeno en comparación con los controles de PBS. A continuación se da una descripción de métodos y materiales para ELISA anti-colágeno. Los reactivos usados para los ELISAs anti-colágeno fueron placas de microtitulación de 96 pocilios Maxisorp (NUNC, Rochester, NY) , colágeno tipo II de pollo (Chondrex, Redmond, WA) Super Block (Pierce, Rockford, IL) antiratón de cabra conjugado a peroxidasa de rábano (HRP) IgG+A+M (H+L) (Zymed, South San Francisco, CA) y substrato de diclorhidrato de fenilendiamina (Pierce, Rockford, IL) . Los reguladores de pH usados en todos los ensayos fueron regulador de pH diluyente B ELISA (PBS + 0.1% BSA + 0.05% de Tween (Sigma, St. Louis, MO) ) , regulador de pH de lavado C de ELISA (PBS+0.05% de Tween) y regulador de pH de desarrollo NovoD (citrato de sodio?.063 M, ácido cítrico 0.037M), H202 (Sigma) y ÍN de H2S04 (VWR, Tukwilla, WA) . Aproximadamente 100 µL de sangre periférica se tomaron mediante sangrado retro-orbital en tubos separadores de suero (Becton Dickinson) . Se tomó suero mediante centrifugación (2-3 min, 16,000 x g, 4-6°C) y se almacenó a - °C hasta el análisis. Para determinar los niveles de anticuerpo Ig anti-colágeno, placas NUNC se recubrieron con 10 µg/mL de colágeno tipo II de pollo (Chondrex, Redmond WA) y se incubaron durante la noche a 4°C. Las placas fueron lavadas con ELISA C, bloqueadas (5 minutos a temperatura ambiente) con Super Block (Pierce, Rockford, IL) y lavados con ELISA C. Las muestras de suero diluidas (diluidas en ELISA B 5 veces de 1:5000 a 1:625,000) se añadieron a placas de ELISA por triplicado y las placas se incubaron durante la noche a 4°C. Después de la incubación, las placas se lavaron con ELISA C y se añadió IgFc anti-ratón de cabra marcado con peroxidasa (Zymed, 1:2000 en ELISA B) . Las placas fueron incubadas (temperatura ambiente, 90 minutos) , enjuagadas de nuevo usando ELISA C y la actividad HRP se desarrolló usando substrato de diclorhidrato de o-fenildiamina (10 mL NovoD + 1 tableta OPP + 10 µL H20, Pierce) . La reacción se detuvo con H2S04 ÍN . Las mediciones de densidad óptica relativa de muestra de suero a una dilución 1:25,000 se tomaron a 490 nm usando un Spectra MAX 190, y los datos se analizaron usando software ScoftMax Pro (Molecular Devices Corporation, Palo Alto, CA) . C . Análisis de IL-6 y SAA en modelo CÍA de ratón Las muestras de suero del dia 2 se cosecharon a partir de ratones CÍA (ejemplo 9A arriba) 4 horas después de la administración de 25 µg de LPS intraperitonealmente. Las muestras se tamizaron para IL-6 y concentraciones de suero amiloide A (SAA) mediante kits de ELISA comerciales comprados de Biosource International (Camarillo, CA) según las instrucciones del fabricante. Los niveles de IL-6 fueron 9651 +/- 1563 pg/ml, ,865 +/- 1478 pg/ml y 15,006 +/-2,099 pg/ml en los grupos de ratones sometidos a 100 µg IL-22RA2, 10 µ IL-22RA2 y control de PBS, respectivamente. La concentración de IL-6 en el grupo de ratones CÍA expuestos a la dosis de 100 µg de IL-22RA2 fue significativamente más baja en comparación con los ratones de control de PBS con p = 031. La s igni f ica t i vidad estadística se calculó usando PLSP de Fisher con un nivel de significado de 5% (ABACUS Concepts, INC., Berkeley, CA) . Además, las concentraciones de SAA fueron de 381 +/-40 µg/ml, 348 +/-37 µg/ml y 490 +/-50 µg/ml en los grupos de ratones a 100 µg IL-2RA2, 10 µg IL-22RA2 y grupos de control de PBS, respectivamente. La concentración de SAA en el grupo de ratones CÍA expuestos a la dosis de 10 µg de IL-22RA2 fue significativamente más baja en comparación con los ratones de control de PBS p = .0257. El significado estadístico se calculó usando PLSP de Fisher con un nivel de significado de 5% (ABACUS Concepts. INC., Berkeley, CA) .

Ejemplo 10 Anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA o anticuerpos monoclonales anti-IL-22 inhiben la severidad de enfermedad en un modelo CÍA de ratón El modelo de artritis inducida por colágeno (CÍA) es un modelo de ratón para artritis reumatoide que refleja en gran grado la enfermedad observada en humanos. (Moore, Methods Mol. Biol. 225:175-179, 2003: Waksman, Scand J. Im unol, 56, 12-34, 2002) . Los ratones son inmunizados con 2 dosis de colágeno emulsificado en CFA en la base de la cola. Esto da como resultado la hinchazón de las patas que se incrementa durante un periodo de tiempo y puede ser tanto calificado como medido visualmente usando calibres. Más aún, anticuerpos anti-colágeno en suero se correlacionan bien con la severidad de la enfermedad. Con base en datos que muestran que IL-22 e IL-22 inducen inflamación, anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA y anti-IL-22 son administrados a grupos de ratones inmunizados con colágeno, y los efectos de la enfermedad se evalúan. Una reducción en las puntuaciones de pata y grosor de pata después de la administración en los anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA o anticuerpos monoclonales anti-IL-22 sugiere que IL-20 e IL-22 promueven una respuesta inmune continua en un modelo para autoinmunidad y bloquean, inhiben, reducen, antagonizan o neutralizan su función y pueden inhibir trastornos autoinmunes. La inhibición de TNFa en suero y anticuerpos anticolágeno sugiere también que el bloqueo de IL-22RA podria ser benéfico en enfermedades autoinmunes. Asi, para determinar si anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA o anticuerpos monoclonales anti-IL-22 pueden tener un efecto en autoinmunidad, se prueban en un modelo de ratón para artritis reumatoide - artritis inducida por colágeno (CÍA) . Específicamente, a ratones PBA1J se les dan inyecciones de colágeno para inducir artritis tipo reumatoide. La inoculación el dia 0 es una inyección subcutánea en un homogenado que consistía en adyuvante de Freund completo (CFA) y colágeno tipo II (50-100 µl, preparado como 2 mg/ml de colágeno) . La inyección se aplica casi cerca de la base de la cola. El día 21, se administra una segunda inoculación, la única diferencia siendo que el homogenado se prepare usando adyuvante incompleto de Freund (IFA) , en lugar del CFA. Las puntuaciones de pata y grosores se miden diariamente. Los grupos de ratones reciben PBS, 20-200 µg de isotipos de control coincidiendo a anticuerpo monoclonal o 20-200 µg de anti-IL-22RA mAb o anti-IL-22 mAb i.p. 2X o 3X/semana durante 1-4 semanas iniciando en la segunda inyección de colágeno. Los ratones se monitorean diariamente hasta el dia 30. Los ratones son sacrificados el dia , se toma suero para análisis de anticuerpos anticolágeno y análisis de citocinas en suero (TNFa) . La inhibición de puntuaciones de pata, de grosor depata, TNFa en suero y anticuerpos anticolágeno en suero por administración de anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA o anti-IL-22 sugiere que el bloqueo de IL-22RA puede unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar IL-22, e inhibir una respuesta inmune continua en un modelo de autoinmunidad y puede inhibir enfermedades autoinmunes . Ejemplo 11 Expresión del receptor IL-22 , I -22RA, en el modelo de ratón de DSS RT-PCR cuantitativa se llevó a cabo para medir los niveles de expresión de IL-22RA en ratón en los colones de ratones con IBP inducida por PSS (ejemplo 8) . ARN se aisló de colon de ratón normal y de colon distales de ratones tratados con PSS a partir de los dias de tratamiento 2, 7 y 10. se llevó a cabo RT-PCR usando instrumento y protocolos Aplied Biosystems 7700 TaqMan. Brevemente, software "Primer Express" se usó para designar cebadores contra la secuencia IL-22RA de ratón (ZC39776 (SEQ IP NO:19) y ZC39777 (SEQ IP NO:20) ) y la sonda TaqMan marcada con FAM/TAMRA (ZC38752 (SEQ IP NO: 21)) de acuerdo con los lineamientos de Applied Biosystems. 25 ng de ARN se añadieron a cada reacción, junto con PE/Applied Biosystems TaqMan EZ RT-PCR Core Reagents y los cebadores y sonda mencionados arriba. Las reacciones de RT-PCR se corrieron por duplicado bajo las siguientes condiciones: 50°C durante 2 minutos, 60°C durante 30 minutos, 95°C durante 5 minutos, 40 ciclos de 94°C durante 20 segundos y 60°C durante 1 minuto. Los valores de expresión se compararon con una curva estándar de números de moléculas conocidos de un transcripto de ARN de IL-22RA de ratón sintético, la expresión se reporta como número absoluto de moléculas de IL-22RA de ratón por reacción. datos preliminares sugieren que la expresión de IL-22RA de ratón podria ser ligeramente subregulada en los colones distales de ratones del dia 7 y día 10 por IBP inducida por PSS cuando se compara con niveles de expresión en colon de ratón normal. Ejemplo 12 IL-22 e indicadores proinf lamatorios en modelos de endotoxemia leve: modelo de ratón de endotoxemia inducida por LPS A. Modelo de ratón de endotoxemia inducida por LPS: Evaluación de citocinas proinflamatorias y temperatura corporal en el modelo de ratón de endotoxemia inducida por LPS Se diseñó un experimento in vivo para examinar el efecto de IL-22RA2 (IL-22RA2) en un modelo LPS de ratón de endotoxemia leve. Para evaluar inicialmente el modelo, se midieron citocinas proinflamatorias a temperatura corporal para tomar datos de referencia para el modelo . Brevemente, ratones hembra Bal/c (CRL) de seis meses fueron inyectados con 25 µg de LPS (Sigma) en PBS estéril intraperitonealmente (IP) . Se tomaron muestras de suero a 0, 1, 4, 8, 16, 24, 48 y 72 horas de los grupos de 8 ratones para cada punto de tiempo. Las muestras de suero se evaluaron para niveles de citocina inflamatoria IL-lb, IL-6, TNFa, IL-10 y niveles de proteina A amiloide en suero (SAA) se midieron usando kits ELISA comerciales de Biosource International (Camarillo, CA) . Los niveles de TNFa alcanzaron un pico a 4,000 pg/ml y los niveles de IL-10 fueron 341 pg/ml a 1 hora después de la inyección de LPS. 4 Horas después de la inyección de LPS, IL-6, IL-lb e IL-10 fueron 6,100 pg/ml, 299 pg/ml y 299 pg/ml, respectivamente. Los niveles de SAA en suero fueron de 0.405 mg/ml 4 horas después de la inyección de LPS. Las concentraciones de SAA en suero continuaron incrementándose a 3.9 mg/ml 24 horas después de LPS. Sin embargo los niveles de SAA mayores que 1 a 2 mg/ml en suero son difíciles de medir en forma precisa o reproducible con el kit de ELISA existente debido a interacciones entre SAA y otros componentes del suero. Estos resultados indicaron que las citocinas proinflamatorias, además de IL-22 (ejemplo HB) , fueron de hecho producidas en este modelo. Asi, se establecieron los siguientes criterios como marcadores biológicos para el modelo LPS de endotoxemia media: modelos en suero de TNFa 1 hora después de LPS, niveles en suero de IL-6 4 horas después de LPS y niveles en suero de SAA 4 y 8 horas después de LPS. Las temperaturas corporales en grupos separado de animales se monitorearon mediante dispositivos de telemetría implantados quirúrgicamente durante el curso del experimento de 72 horas. Las temperaturas corporales en los ratones cayeron máximamente a 2°C de 37.07°C a 34.98°C 30 minutos después de la inyección de LPS. La inyección de 100 µg de proteina de fusión IL-22RA2-FC 30 minutos antes de la inyección de LPS produjo significativamente aproximadamente 50% de la inducción de SAA en el punto de tiempo de 4 horas y 8 horas, mientras que 10 ug IL-22RA2-FC n tuvieron un efecto significativo. Este cambio no es significativo en el nivel de TNF-alfa e IL-6, IL-22RA2-FC e IL-6. La inyección de IL-22RA-Fc redujo el conteo de neutrófilos en la circulación en el punto de tiempo de 1 hora. Mostró que la administración de IL-22RA2-Fc puede neutralizar la actividad de IL-22 en términos de inducción de SAA. B. Petección de la actividad de IL-22 en suero de ratón del modelo del ratón de endotoxemia inducida por LPS usando células BaF3/CRF2-4 /IL-22RA en ensayo de proliferación de azul Alamar Células BaF3/CRF2-4/IL-22RA, descritas en la presente, fueron centrifugadas y lavadas en PBS dos veces para asegurar la remoción del mIL-3, y luego centrifugadas una tercera vez y resuspendidas en el medio completo (RPMI 1640, 10% de FBS, 1% de GlutaMAX, 1% de piruvato de sodio) , pero con mIL-3 (en adelante referido como "medio libre de mIL-3") . Las células se contaron después en un hemocitómetro. Las célula se colocaron en un formato de 96 pocilios a 5,000 células por pocilio en un volumen de 100 µl usando el medio libre de mIL-3. El suero de los ratones de endotoxemia inducida por LPS del experimento descrito en el ejemplo HA arriba, fue diluido a 2% en medio libre de mIL-3 en la hilera superior de la placa y después se diluyó en serie 1:2 hacia debajo de las 7 hileras restantes en la placa de 96 pocilios, dejando un volumen de 100 µl en cada pocilio. Esto se añadió después a los 100 µl de células, para concentraciones de suero finales de 1%, 0.5%, 0.25%, 0.125%, 0.06%, 0.031%, 0.016% y 0.018% en un volumen de ensayo total de 200 µl . Las placas de ensayo se incubaron a 37°C, 5% de C02 durante 4 dias tiempo en el cual Alamar Blue (Accumed, Chicago, IL) fue añadido a 20 µl/pocillo. Las placas se incubaron de nuevo a 37°C, 5% de C02 durante 16 horas. El Alamar Blue da una lectura f luorométrica con base en el número de células vivas, y es entonces una medición directa de la proliferación celular en comparación con un control negativo. Las placas fueron leídas en el contador Wallac Victor 2 1420 Multilabel (Wallac, Turku, Finlandia) a 530 (excitación) y 590 (emisión) . Los resultados no mostraron proliferación significativa por arriba de los niveles de fondo en los puntos de tiempo de 0 hora, 1 hora, 8 hora y 16 horas. Muestras de suero del punto de tiempo de 4 horas mostraron un incremento de 4 veces a más de 10 veces en la proliferación por arriba del fondo, indicando la presencia de IL-22 en esas muestras . C . Modelo de ratón de endotoxemia inducida por LPS: Experimento para evaluar los efectos de IL-22RA2 Se probó la capacidad de tratamiento con IL-22RA2 para llevar a cabo indicadoresproinf lama torios inducidos con una sola dosis de IP de LPS de 25 µg . Todas las muestras se analizaron para SAA, IL-22 y conteos de neutrófilos circulantes. Subconjuntos de cada grupo se analizaron para niveles de citocinas particulares (muestras de una hora se tamizaron para TNF alfa, muestras de 4 horas se analizaron para IL-6) . Los animales fueron sacrificados en los puntos de tiempo indicados en la tabla 8 abajo y se tomaron sangre entera y suero y se hicieron alícuotas para análisi s . Setenta y dos ratones hembra C57BL/6N (CRL) se les dio una sola dosis intraperitoneal de IL-22RA2 como se describe en la tabla 8 abajo. Los ratones de control fueron C57BL/6N (CRL) . Treinta minutos más tarde, recibieron otra inyección intraperitoneal de 25 µg de LPS (Sigma) en 100 µL, para iniciar una cascada de endotoxemia. Los ratones en cada grupo fueron sacrificados en los puntos de tiempo correspondientes como se indica en la tabla 8, 50 µl de sangre entera fueron recogidos para medir los números totales de neutrófilos circulantes y el resto se centrifugaron para suero y se hicieron alícuotas para varios ensayos descritos en la presente.

Tabla 8 P. IL-22RA2-Fc4 neutraliza la inducción de SAA in vivo: ELISA de SAA demuestra que la expresión de SAA inducida or LPS en modelo de ratón de endotoxemia inducida por LPS es inhibida por la inyección de IL-22RA2-Fc4 Para evaluar si IL-22RA2 podria inhibir la inducción de SAA en el modelo de ratón de endotoxemia inducida por LPS, los ratones fueron inyectados con IL-22RA2, 30 minutos antes de la inyección de LPS, como se muesta en la tabla 8 en el experimento 11C ariba. Un estudio ELISA para determinar los niveles de SAA en las muestras de 4 horas y 8 horas se llevó a cabo usando el kit Mouse SAA Immunoasaay (BioSource International, California) siguiendo las direcciones del fabricante. En el punto de tiempo de 4 horas, los ratones tratados con 100 µg o 10 µg de IL-22RA2 mostró una reducción dependiente de dosis y estadísticamente significativa en los niveles de SAA en relación a los ratones inyectados con PBS. En el punto de tiempo de 8 horas, los ratones tratados con 100 µg, continuaron mostrando una reducción estadísticamente significativa en los modelos de SAA en relación a los ratones inyectados con PBS. Esto indica que lapresencia de IL-22RA2 es capaz de inhibir la inducción de SAA por LPS in vivo.

Ejemplo 13 Efectos in vivo del poliéptido IL-22 en la piel A. Acantosis inducida por IL-22 Ratones (hembra, C3H/HEJ, 8 semanas de edad; Jackson Labs, Bar Harbor, ME) se dividieron en tres grupos de seis animales y un grupo de 4. IL-22 producida por BHK humanas se administró mediante infusión constante por medio de bombas mini-osmóticas, dando como resultado concentraciones en suero en estado fijo y local proporcionales a la concentración del IL-22 contenido en la bomba. Bombas mino-?smóticas Alzet (modelo 2002; Alza corporation Palo Alto, CA) se cargaron bajo condiciones estériles con proteina IL-22 (A601F, 0.22 mL) diluida en solución salina de pH regulado con fosfato (pH 7.0) hasta una concentración dentro de la bomba de2 mg/ml de ratones de grupol, 0.2 mg/mL para ratones de grupo 2, 0.02 mg/ml para ratones del grupo 3 o 0 mg/mL (diluyente únicamente) para ratones del grupo 4. Las bombas se implantaron subcutáneamente en ratones a través de una incisión de 1 cm en la piel dorsal y la piel se cerró con cierres para heridas estériles. Estas bombas se diseñaron para suministrar sus contenidos a una velocidad de 0.5 µl por hora durante un periodo de 14 dias. Usando esta velocidad de infusión nominal, los niveles de dosis se calcularon como de 24 µg/dia, 2.4 µg/dia, 0.24 µg/día y 0 µg/día para grupos 1-4 respectivamente . Al final del periodo de 14 dias, los ratones fueron sometidos a eutanasia y una muestra cuadrada de aproximadamente 1 cm de la piel que rodea el área de la bomba se tomó de cada ratón. La piel se fijó en formalina regulada en pH neutra al 10%. Las muestras de piel fijadas en formalina se incrustaron en parafina, se procesaron rutinariamente, se seccionaron a 5 µm y se tiñeron con hematoxilina y eosina. Los tejidos se examinaron microscópicamente en forma ciega por un patólogo veterinario certificado por la mesa ACVP. Los cambios histológicos fueron anotados, y la severidad de acantosis (es decir, engrosamiento epidérmico) calificada de una manera subjetiva usando el siguiente sistema de calificación: 0-normal, 1-acantosis minima, 2-acantosis leve, 3-acantosis moderada y 4-acantosis severa. Además, la piel de grupos seleccionados se hizo imágenes con una cámara digital CoolSnap (Roper Scientific, Inc., San Piego, CA) y el grosor epidérmico se midió usando software de histomorfometria (Scion Image for Windows, v. 4.02, S cion Corp., Frederick, MP) . La administración de IL-22 a 2.4 y 24 µg/dia dio como resultado engrosamiento epidérmico como se muestra por la puntuación de acantosis promedio (véase s) consistentemente mayor que la observada en la piel del grupo de control. Más aún, los animales tratados con IL-22 tuvieron también infiltrados decélulas mononucleares en epidermis. Estos infiltrados no se observaron en los controles tratados con vehículo. Las puntuaciones de acantosis de grosor epidérmico y mediciones del grosor de piel (en unidades de pixeles genéricas) por los grupos se muestran en la tabla 9 abajo, como sigue: Tabla 9 Grupo # n= Bomba Acantosis Grosor promedio medido 1 6 24 µg de IL-22/dia 3.0 NP 2 6 2.4 µg de IL-22/dia 2.4 67.5 3 6 0.24 µg de IL- 2.2 ND 22/dia Infusión de PBS 45.6 B. Efecto de IL-22RA2 en acantosis inducida por IL- 22 Ratones (hembra, C3H/HEJ, 8 semanas de edad; Jackson Labs, Bar Harbor, ME) se dividieron en 8 grupos de ocho animales cada uno. Se administró IL-22 mediante infusión constante por medio de bombas miniosmóticas, como se describió en el ejemplo 12A. Bombas mini -osmót icas Alzet (modelo 2001; Alza Corporation Palo Alto, CA) se cargaron bajo condiciones estériles con proteina IL-22 (A#601F, 0.22 mL) diluida en solución salina de pH regulado con fosfato (pH 7.0) hasta una concentración dentro de la bomba de 0.22 mg/mL para ratones del grupo 1-2, 0.45 mg/mL para ratones de grupo 3-4, 0.9 mg/mL para ratones del grupo 5-6 o 0 mg/mL (diluyente solamente) para ratones del grupo 7-8. Estas bombas están diseñadas para suministrar sus contenidos a una velocidad de 0.5 µl pro hora durante un periodo de 14 dias. Usando esta velocidad de infusión nominal, los niveles de dosis se calcularon como de 10 µg/dia en los grupos 1-2, 5 µg/dia en los grupos 3-4, 2.5 µg/dia en grupos 5-6 y 0 µg/dia para grupos 7-8. Para cada par de grupos a un nivel de dosis dado de IL-22, uno de los grupos fue inyectado tres veces (dias 1, 3 y 5) con 0.1 mg de proteina IL-22RA2 Fc humana (descrita en la presente) mediante la ruta intraperitoneal. El otro grupo se inyectó de la misma manera con vehículo (PBS) . El dia 8 del estudio los ratones fueron sometidos a eutanasia y una muestra de piel cuadrada de aproximadamente 1 cm que rodeaba el área de la bomba se tomó para cada ratón. La piel se fijó en formalina de pH regulado neutro al 10%. Las muestras de piel fijadas en formalina se incrustaron en parafina, se procesaron rutinariamente, se cortaron a 5 µm y se tiñeron con hematoxilina y eosina. Los tejidos se examinaron microscópicamente en forma ciega por un patólogo veterinario certificado por la mesa ACVP. Este estudio se calificó de una manera diferente a la del ejemplo anterior. El número de capas en la epidermis, de la base estrata al granulo estrato, fue determinado. Con base en los resultados, las secciones fueron calificadas cmo sigue: 0-normal (2-3 capas) , 1 -engrosamiento leve (3-4 capas) , 2-engr osamient o moderado (4-6 capas) y 3 -engrosamiento severo (>6 capas) . La administración de IL-22 a 2.5, 5, 10 µg/dia dio como resultado engrosamiento epidérmico (véase tabla 10) . Más aún, los animales tratados con IL-22 tuvieron también infiltrados de células mononucleares en la epidermis. Estos infiltrados no se observaron en los controles tratados con vehículo. La administración concurrente de 100 µg de IL-22RA2 (3 inyecciones) redujo la cantidad de engrosamiento epidérmico en ratones tratados con 5 µg de IL-22/dia. Las puntuaciones de acantosis de grosor epidérmico por los grupos se muestran en la tabla 10, abajo, como sigue: Tabla 10 Engrosamiento epidérmico e infiltrados inmunes también se observaron en pieles psosriásicas humanas. El fenotipo de piel observado en la inyección subcutánea de IL-22 indicó más el papel potencial de IL-22 en la patogénesis de psoriasis. El hecho de que IL-22RA2-Fc pueda neutralizar el genotipo de piel inducido por IL-22 sugiere el uso potencial de otros antagonistas de IL-22 tales como un anticuerpo neutralizante ant?-IL-22 o receptor soluble para el tratamiento de psoriasis y otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-22.

C . Efecto de receptores solubles IL-22RA, y anticuerpos anti-IL-22RA en acantosis inducida por IL-22 o IL-20 La actividad de los receptores solubles IL-22RA, o un anticuerpo contra IL-22RA, para inhibir la actividad in vivo de IL-22 o IL-20 se evalúa de una manera similar, usando el punto final histológico de acantosis causada por infusión subcutánea de proteina IL-22 o IL-20. En un ejemplo de este modelo ratones C3H/HEJ son implantados con bombas mini-osmóticas subcutáneas como se describió en los ejemplos 12 (A) y 12 (B) arriba. Durante el periodo de exposición a IL-22 o IL-20, los ratones son tratados por inyección con el anticuerpo monoclonal purificado contra IL-22 o similarmente inyectados con vehículo como control. Al final del periodo de infusión de IL-22, la piel puede ser muestreada del área de la bomba para análisis histológico. En forma similar a la del antagonista IL-22 del receptor soluble IL-22RA2, los receptores solubles IL-22RA antagonistas de IL-22RA o anticuerpos anti-IL-22RA de la presente invención se espera que muestren reducción en el engrosamiento epidérmico e infiltrados celulares inmunes causados por IL-22 o IL-20, y por consiguiente sean útiles como antagonistas de IL-22 o IL-20 como un terapéutico para psoriasis y otra enfermedad inflamatoria inducida por IL-22 o IL-20.

Ejemplo 14 IL-22 es sobre-regulado en muestras de piel psoriásica humana Muestras de ARN Muestras de piel normal asi como de piel de pacientes con psoriasis fueron obtenidas. Estas últimas incluían piel envuelta de psoriasis tipo placa estable y de piel no envuelta adyacente. El ARN se aisló de muestras de piel humana usando métodos convencionales. La integridad y calidad de las muestras de ARN se probó en el Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Waldbronn Alemania) . Cebadores y sondas para RT-PCR-cuantitativa RT-PCR cuantitativa en tiempo real usando el ABI PRISM 7700 Squence Detection System (PE Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) ha sido previamente descrita (véase, Heid, C.A. et al., Genome Research 6:986-994, 1996; Gibson, U.E.M. et al., Genome Research 6:995-1001, 1996; Sundaresan, S. et al., Endocrinology 139:4756-4764, 1998. Este método incorpora el uso de una sonda específica de genes que contiene tanto colorantes fluorescentes reporteros como extintores. Cuando la sonda está intacta la emisión de colorante reportero es negada debido a la cercana proximidad al colorante extintor. Durante la extensión por PCR usando cebadores hacia adelante y hacia atrás específicos de genes adicionales, las sonda es cortada por la actividad nucleolitica 5' a 3' de la ADN polimerasa r Tth que liberasa al colorante reportero de la sonda dando como resultado un incremento en la emisión fluorescente. Los cebadores y sondas usados para los análisis de RT-PCR cuantitativos en tiempo real de la expresión de IL-22 se diseñaron usando el software de diseño de cebadores Primer Express™ (PE Applied biosystems, Foster City, CA) . Los cebadorespara IL-22 humana se designaron que abarcaban una unión intron-exon para eliminar la amplificación de ADN genómico. El cebador hacia adelante, ZC42459 (SEQ ID NO:22) y el cebador hacia atrás ZC42458 (SEQ ID NO:23) se usaron en una reacción de PCR (abajo) a una concentración de 800 nM para sintetizar un producto de 72 pb. La sonda de IL-22 correspondiente, ZC42460 (SEQ ID NO: 24) se sintetizó y marcó en casa en ZymoGenetics . La sonda IL-22 se marcó en el extremo 5' con un colorante fluorescene reportero (6-carboxi-fluoresceina) (FAM) (PE Applied Biosystems) y el extremo 3' con un colorante fluorescente extintor ( 6-carboxi-tetrametil-rodamina) (TAMRA) (PE Applied biosystems) . C . RT-PCR cuantitativa en tiempo real Los niveles relativos de ARNm de IL-22 se determinaron anaizando muestras de ARN totales usando el kit EZ T-PCR Core Reagents (PE Applied Biosystems) . Transcripto IL-22 de corrida se hizo para generar una curva estándar usada para cuantificación. La curva consistía en diluciones en serie 10 veces que variaban de aproximadamente le8 a le3 copias totales de mensaje completo para IL-22 con cada punto de curva estándar analizado por triplicado. Las muestras de ARN totales de piel también se analizaron por triplicado para niveles de transcripto IL-22 humano y para niveles de hGUS como un control endógeno. En un volumen total de 25 µl, cada muestra de ARN se sometió a reacción TaqMan EZ RT-PCR (PE Applied biosystems) que contenia: aproximadamente 25 ng de ARN total en agua tratada con DEPC (libre de Dnasa/Rnasa) ; cebadores adecuados (aproximadamente 800 nM de ZC 42459 (SEQ ID NO:22) y ZC-42458 (SEQ ID NO:23); sonda adecuada (aproximadamente 100 nM de ZC 42460 (SEQ ID NO:24); regulador de pH IX TaqMan EZ; acetato de manganeso 3 mM; 300 µM cada uno de d-CTP, d-ATP y d-GTP y 600 µM de d-UTP; r Tth APN polimerasa (0.1 U/µl); y AmpErase UNG (0.01 U/µl). Las condiciones de ciclización térmica por PCR fueron las siguientes: Una etapa de tratamiento con UNG iniciando un ciclo a 50°C durante 2 minutos; seguida por una etapa de transcripción inversa (RT) de un ciclo a 60° durante 30 minutos; seguida por una desactivación de la etapa de UNG de un ciclo a 95°C durante 5 minutos; seguida por 40 ciclos de amplificación a 94°C durante 20 segundos y 60°C durante 1 minuto . Los niveles de ARN de IL-22 relativo se determinaron usando el método de curva estándar como el descrito por el fabricante, PE Biosystems (User Bulletin #2: ABI Prism 7700 Sequence Petection System, Relative Quantitation of Gene Expression, 11 de diciembre de 1997). Las mediciones de hGUS se usaron para normalizar los niveles de IL-22. Los datos se muestran en la tabal 11 abajo. Tabla 11 El ARNm de IL-22 fue indetectable en muestras de piel de pacientes normales o de áreas no implicadas. En contraste, hubo una dramática sobre-regulación para mensaje de IL-22 en piel implicada de pacientes con psoriasis. Estos datos soportan una fuerte asociación de enfermedad para IL-22 con psoriasis humana. La sobre-expresión de IL-22 fue mostrada en lesiones psoriáticas humanas, sugiriendo que IL-22 está implicada en psoriasis humana. Más aún, como se describe en la presente, la sobre-expresión de IL-22 en ratones transgénicos mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo psoriásico, y además la inyección de IL-22 en ratones normales mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicador de un fenotipo psoriásico que fue ablaido por antagonista reeptor soluble IL-22RA2. Estos datos i n vi vo sugieren además que el IL-22 pro- inf lamat or io está implicado en psoriasis. Así, los antagonistas contra la actividad IL-22, tales como los anticuerpos monoclonales ant i -humanos - IL-22 de la presente invención, asi como receptores solubles y anticuerpos contra los mismos, son útiles en el tratamiento terapéutico de enfermedades inflamatorias, particularmente como antagonistas para IL-22 en el tratamiento de psoriasis. Más aún, los antagonistas para la actividad de IL-22, tales como los anticuerpos monoclonales ant i-humano- I L-22 de la presente invención, asi como receptores solubles y anticuerpos contra los mismos, son útiles en el tratamiento terapéutico de otras enfermedades inflamatorias por ejemplo como antagonistas para IL-22 en el tratamiento de dermatisis atópica, IBP, colitis, endotoxemia, artritis, artritis reumatoide, y artritis psoriásica, enfermedad respiratoria del adulto (ARP), choque séptico, insuficiencia orgánica múltiple, lesión pulmonar inflamatoria tal como asma o bronquitis, neumonía bacteriana, psoriasis, eczema, dermatitis atópica y de contacto y enfermedad inflamatoria del intestino tales como colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn.

Ejemplo 15 IL-22 es subregulado en muestras de piel de dermatitis atópica humana Muestras de piel normal (n=4) asi como de piel de pacientes con dermatitis atópica (n=4) fueron obtenidas. Se aisló el ARN de las muestras de piel humana usando métodos convencionales. La integridad y calidad de las muestras de ARN se probó en el Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Waldbronn Alemania). Cebadores y Sondas para RT-PCR cuantitativa La RT-PCR cuantitativa en tiempo real usando el sistema ABI PRISM 7700 Squence Petection (PE Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) ha sido descrita anteriormente (véase, Heid, C.A. et al., Genome Research 6:986-994, 1996; Gibson, U.E.M. et al., Genome Research 6:995-1001, 1996; Sundaresan, S. et al., Endocrinology 139 : 4756-4764 , 1998. Este método incorpora el uso de una sonda especifica de genes que contiene colorantes fluorescentes tanto reporteros como extintores. Cuando la sonda está intacta la emisión del colorante reportero es negada debido a la cercana proximidad del colorante extintor. Purante la extensión por PCR usando cebadores hacia adelante y hacia atrás específicos de genes adicionales, las sonda es cortada por la actividad nucleolitica 5' a 3' de r Tth APN polimerasa que libera al colorante reportero de la sonda dando como resultado un incremento en la emisión de fluorescente . Los cebadores y sondas usados para los análisis de RT-PCR cuantitativos en tiempo real de la expresión de IL-22 fueron diseñaron usando el software de diseño de cebadores Primer Express™ (PE Applied biosystems, Foster City, CA) . Cebadores para IL-22 humana fueron designaron los cuales abarcaban una unión intron-exon para eliminar la amplificación de APN genómico. El cebador hacia adelante, ZC42459 (SEQ IP NO:22) y el cebador hacia atrás ZC42458 (SEQ IP NO:23) se usaron en una reacción de PCR (abajo) a una concentración de 800 nM para sintetizar un producto de 72 pb . La sonda de IL-22 correspondiente, ZC42460 (SEQ IP NO:24) se sintetizó y marcó en casa en ZymoGenetics . La sonda IL-22 se marcó en el extremo 5' con un colorante fluorescente reportero (6-carboxi-fluoresceína) (FAM) (PE Applied Biosystems) y en el extremo 3' con un colorante fluorescente extintor ( 6-carboxi-tetrametil-rodamina) (TAMRA) (PE Applied biosystems) . C . RT-PCR cuantitativa en tiempo real Los niveles relativos de ARNm de IL-22 se determinaron al analizar muestras de ARN totales usando el kit EZ T-PCR Core Reagents (PE Applied Biosystems) . El transcripto IL-22 de corrida se hizo para generar una curva estándar usada para la cuantificación. La curva consistía en diluciones en serie 10 veces que variaban de aproximadamente le8 a le3 copias totales de mensaje completo para IL-22 con cada punto de curva estándar analizado por triplicado. Las muestras de ARN totales de piel también se analizaron por triplicado para niveles de transcripto IL-22 humano y para niveles de hGUS como un control endógeno. En un volumen total de 25 µl, cada muestra de ARN se sometió a reacción TaqMan EZ RT-PCR (PE Applied biosystems) que contenia: aproximadamente 25 ng de ARN total en agua tratada con PEPC (libre de Pnasa/Rnasa) ; cebadores adecuados (aproximadamente 800 nM de ZC 42459 (SEQ IP NO:22) y ZC-42458 (SEQ IP NO:23); sonda adecuada (aproximadamente 100 nM de ZC 42460 (SEQ IP NO:24); regulador de pH IX TaqMan EZ; acetato de manganeso 3 mM; 300 µM cada uno de d-CTP, d-ATP y d-GTP y 600 µM de d-UTP; r Tth APN polimerasa (0.1 U/µl); y AmpErase UNG (0.01 U/µl). Las condiciones de ciclización térmica por PCR fueron las siguientes: Una etapa de tratamiento con UNG inicial de un ciclo a 50°C durante 2 minutos; seguida por una etapa de transcripción inversa (RT) de un ciclo a 60° durante 30 minutos; seguida por una desactivación de la etapa con UNG de un ciclo a 95°C durante 5 minutos; seguida por 40 ciclos de amplificación a 94°C durante 20 segundos y 60°C durante 1 minuto. Los niveles de ARN de IL-22 relativo se determinaron usando el método de curva estándar como el descrito por el fabricante, PE Biosystems (User Bulletin #2: ABI Prism 7700 Sequence Petection System, Relative Quantitation of Gene Expression, 11 de diciembre de 1997). ARN fue indetectable en muestras de piel de pacientes normales. En contraste, hubo una dramática sobre-regulación para el mensaje IL-22 en 3 de 4 muestras de piel de pacientes con dermatitis atópica (aproximadamente 400-2,300 copias). Estos datos soportan una fuerte asociación de enfermedad para IL-22 con dermatitis atópica humana. La sobre-expresión de IL-22 fue demostrada en pieles de dermatitis atópica humana, sugiriendo que IL-22 está implicada en la dermatitis atópica humana humana. Más aún, como se describe en la presente, la sobre-expresión de IL-22 en ratones transgénicos mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo dermatitis atópica, y además la inyección de IL-22 en ratones normales mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo de dermatitis atópica que fue eliminado por el antagonista receptor soluble IL-22RA2. Estos datos in vivo sugieren además que la IL-22 pro-inflamatorio está implicada en dermatitis atópica. Asi, los antagonistas contra la actividad IL-22, tales como los anticuerpos monoclonales anti-humanos-IL-22 de la presente invención, asi como receptores solubles y anticuerpos contra los mismos, son útiles en el tratamiento terapéutico de enfermedades inflamatorias, particularmente como antagonistas para IL-22 en el tratamiento de dermatitis atópica. Más aún, los antagonistas para la actividad de IL-22, tales como los anticuerpos monoclonales anti-humano-IL-22 de la presente invención, asi como receptores solubles y anticuerpos contra los mismos, son útiles en el tratamiento terapéutico de otras enfermedades inflamatorias por ejemplo como antagonistas para IL-22 en el tratamiento de dermatisis atópica, IBD, colitis, endotoxemia, artritis, artritis reumatoide, y artritis psoriásica, enfermedad respiratoria del adulto (ARD) , choque séptico, insuficiencia orgánica múltiple, lesión pulmonar inflamatoria tal como asma o bronquitis, neumonía bacteriana, dermatitis atópica, eczema, dermatitis atópica y de contacto y enfermedad inflamatoria del intestino tales como colitis ulcerativa y enfermedad de Croh. Ejemplo 16 Anticuerpos policlonales IL-22 humanos Se prepararon anticuerpos policlonales anti-IL-22 al imunizar dos ratones blancos de Nueva Zelanda hembra con el polipéptido IL-22 humano recombinante maduro purificado (residuos de aminoácido 22 (Ala) a 167 (He) de SEQ ID NO: 6), los residuos de células BHK (IL-22-BHK) . A los conejos se les dio a cada uno una inyección intraperitoneal (ip) inicial de 200 µg de proteina purificada en adyuvante de Freund completo seguida por inyecciones IP de refuerzo de 100 µg de péptido en adyuvante de Freund incompleto cada tres semanas. Siete a diez dias después de la administración de la segunda inyección de refuerzo (3 inyecciones totales) , los animales fueron sangrados y el suero fue colectado. Los animales fueron después reforzados y sangrados cada tres semanas. Los anticuerpos policlonales IL-22 específicos humanos fueron purificados por afinidad a partir del suero de conejo inmune usando una columna de proteina CNBr-SEPHAROSE 4B (Pharmacia LKB) que se preparó usando 10 mg de la IL-22-BHK humana de proteina recombinante purificada por antigenos específicos por gramo de CNBr-SEPHAROSE, seguido por 20X diálisis en PBS durante la noche. Los anticuerpos IL-22 específicos humanos se caracterizaron por ELISA usando 500 ng/ml de IL-22-BHK humano de proteína recombinante purificado como objetivo de anticuerpo. El limite inferior de detección (LLD) del anticuerpo purificado por afinidad anti-IL-22 humano de conejo es 280 pg/ml en su IL-22-BHK humana de antigeno recombinante purificada específica. Los anticuerpos policlonales IL-22-especificos humanos fueron caracterizados más por su capacidad para bloquear la actividad proliferativa de células ("ensayo de neutralización") de células IL-22-BHK en BaF3/CRF2-4/IL-22RA humanas recombinantes purificadas (ejemplo 2 y ejemplo 3). Un exceso molar de 50 X de los anticuerpos policlonales IL-22 específicos humanos fue suficiente para inhibir la proliferación celuar. Ejemplo 17 Anti-cuerpos monoclonales IL-22 humanos Se prepararon anticuerpos monoclonales al inmunizar 4 ratas Sprague-Dawley hembra (Charles River Laboratories, Wilmington, MA) , con el polipéptido IL-22 humano recombinante maduro purificado (residuos de aminoácido 22 (Ala) a 167 (He) de SEQ ID NO: 6), producido a partir de células BHK (IL- 22-BHK) . Se dio a cada una de las ratas una inyección intraperitoneal inicial (IP) de 100 µg de la proteina IL-22 recombinante humana purificada en adyuvante de Freund completo (Pierce, Rockford, IL) seguida por inyecciones IP de refuerzo de 50 µg de la proteína recombinante purificada en adyuvante de Freund incompleto cada dos semanas. Siete a diez días después de la administración de la tercera inyección de refuerzo los animales fueron sangrados y se recolectó el suero. Las muestras de sueros de rata especificas para IL-22 humano fueron caracterizadas por ELISA usando 500 ng/ml de IL-22-BHK humano biotilinado y 500 ng/ml de IL-22 de ratón biotilinado, muIL-22-E. coli biotinilado (R+D Systems, Minneapolis, MN) como objetivos de anticuerpo. Tres muestras de suero de rata tuvieron títulos para el IL-22-BHK humano biotilinado objetivo anticuerpo especifico a una dilución de 1 : 1E5 y para el anticuerpo especifico objetivo muIL-22-.E. coli biotinilado objetivo a una dilución de 1 : E . Esplenocitos y células de nodulo linfático fueron cosechados a partir de 2 ratas de altos títulos y fusionados a células de mieloma SP2/0 (ratón) usando PEG 1500 en dos procedimientos de fusión separados (relación de fusión 4:1, esplenocitos a células de mieloma, "Antibodies A Laboratory Manual, E. Harlow and D. Lañe, Cold Spring Harbor Press). Después de 10 dias de crecimiento después de la fusión, los grupos de hibridoma productores de anticuerpo especifico fueron identificados por ELISA usando el IL-22-BHK humano de proteina recombinante biotilinado y el muIL-22-£. coli de proteina recombinante biotilinado como objetivos de anticuerpo separados. Los grupos de hibridoma positivos en ambos protocolos de ELISA fueron analizados más para verificar su capacidad para bloquear o reducir la actividad proliferativa de células ("ensayo de neutralización") de muIL-22-.E. coli recombinante purificado en células BaF3/CRF2-4/IL-22RA (ejemplo 2 y ejemplo 3) . Los grupos de hibridoma que producían resultados positivos mediante ELISA únicamente o ELISA IL "ensayo de neutralización" se clonaron al menos dos veces mediante dilución limitante. Los anticuerpos monoclonales purificados a partir de medios de cultivo de tejidos fueron caracterizados por su utilidad en un ELISA para la determinación cuantitativa de IL-22 humano recombinante y nativo en muestras de suero humano y de ratón. Los dos anticuerpos seleccionados dieron como resultado un ensayo cuantitativo con un limite de detección más bajo de aproximadamente 1 mg/ml de huIL-22-£. coli recombinante en 100% de suero humano. Los anticuerpos monoclonales purificados a partir de medios de cultivo de tejido se caracterizaron por su capacidad para bloquear o reducir la actividad proliferativa de células "ensayo de neutralización" de huIL-22-£. coli o muIL-22-£. coli recombinante purificado en células BaF3/CRF2-4/IL-22RA (ejemplo 2 y ejemplo 3). Seis anticuerpos monoclonales "neutralizantes" fueron identificados de esta manera. Los hibridomas que expresaban los anticuerpos monoclonales neutralizantes para IL-22 humana descritos arriba fueron depositados en la Colección Americana de Cultivos de Tejidos (ATCC; Manassas VA) depositarla de patentes como depósitos originales bajo el tratado de Budapest y se les dieron los siguientes Nos de registro de ATCC: clon 266.16.1.4.4.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-5035); clon 266.5.1.2.2.3 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA- 5033); clon 267.17.1.1.4.1 (Designación de Depósito de patentes ATCC PTA-5038); clon 267.4.1.1.4.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-5037); clon 266.12.6.1.3.2.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-5034); clon 266.19.1.10.5.2 (Designación de Depósito de Patentes PTA- 5036); y clon 267.9.1.1.4.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-5353) . Ejemplo 18 Anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA Anticuerpos monoclonales se prepararon al inmunizar 4 ratas Lewis (Rockland Immunochemicals, Gilbertsville, PA) , con la proteina de fusión recombinante cortada y purificada, muIL-22RA-Fc (SEQ ID NO:4). A las ratas se les dio a cada na una inyección intraperitoneal (IP) inicial de 100 µg de la proteina de fusión recombinante purificada en adyuvante de Freund completo (Pierce, Rockford, IL) seguida por inyecciones IP de refuerzo de 50 µg de la proteína ecombinante purificada en adyuvante de Freund incompleto cada dos semanas durante 4 semanas. Después de las primeras cuatro semanas de inmunizaciones, inyecciones IP de refuerzo de 50 ug de la proteina recombinante purificada acoplada a la hemocianina de lapa en forma de cerradura de proteína portadora (KLH, Pierce, Rockford, IL) en Freund incompleto se administraron cada dos semanas durante cuatro semanas. Siete dias después de la administración de la cuarta inyección de refuerzo, los animales fueron sangrados y el suero fue recolectado . Las muestras de suero de rata muIL-22RA especificas fueron caracterizadas por ELISA usando 500 ng/ml de la proteina de fusión recombinante purificada muIL-22RA-Fc como el objetivo de anticuerpo especifico y una proteina de fusión no relacionada con un objetivo de anticuerpo no especifico. Los esplenocitos fueron cosechados a partir de una rata de títulos altos y se fusionaron a células de mieloma SP2/0 (ratón) en un protocolo de fusión mediado por PEG optimizado (Rockland Immunochemicals) . Después de 12 dias de crecimiento después de fusión, los grupos de hibridoma que producían anticuerpos fueron identificados por ELISA usando 500 ng/ml cada uno de la proteina de fusión recombinante purificada muIL-22RA-Fc-Bv como el anticuerpo objetivo especifico y una proteina de fusión no relacionada con un anticuerpo objetivo no especifico. Los grupos de hibridoma positivos para el objetivo de anticuerpo especifico sólo fueron analizados más para su capacidad para bloquear o reducir la actividad proliferativa de células ("ensayo de neutralización") de células muIL-22-E. coli en BaF3/CRF2-4/IL-22RA recombinantes purificadas (ejemplo 2 y ejemplo 3) y una capacidad para unirse por medio de análisis FACS a células BaF3/CRF2-4/IL-22RA (ejemplo 2 y ejemplo 3) como anticuerpo objetivo. Los grupos de hibridoma que producían un resultado positivo especifico en el ensayo de ELISA y resultados positivos ya sea en el FACS o "ensayo de neutralización" fueron clonados al menos dos veces mediante dilución limitante.

Los anticuerpos monoclonales en medios de cultivo de tejidos fueron caracterizados por su capacidad para bloquear o reducir la proliferación de células BaF3/CRF2-4/IL-22RA (ejemplo 2 y ejemplo 3), cultivadas en presencia de proteínas muIL-22-£. coli o huIL-22-BHK recombinantes purificadas. Catorce anticuerpos monoclonales "neutralizantes" han sido identificados y nueve anticuerpos monoclonales han sido clonados. Los hibridomas que expresaban los anticuerpos monoclonales neutralizantes contra IL-22 de ratón descritos arriba fueron depositados en la Colección Americana de Tipo de Tejido de Cultivos (ATCC; Manassas VA) depositarla de patentes como depósitos originales bajo el tratado de Budapest y se les dieron los siguientes Nos de registro de ATCC: clon R.2.1.1G11.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-6035); clon R.2.1.5F4.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-6024); clon R.2.1.5H8.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-6025); clon R2.1.12G7.1 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-6036) ; clon R.2.13C8.1 (Pesignación de Pepósito de Patentes ATCC PTA-5037); clon R.2.15E2.1 (Pesignación de Pepósito de Patentes ATCC PTA-6038); clon R.2.16C11.1 (Pesignación de Pepósito de Patentes ATCC PAT-6039); clon R.2.18C8.1 (Pesignación de Pepósito de Patentes ATCC PTA-6040); y clon R2.1.21G8.2 (Pesignación de Pepósito de Patentes ATCC PTA-6111) .

Los hibridomas que expresaban los anticuerpos monoclonales neutralizantes contra IL-22RA humano serán depositados en la Colección Americana de Tejido de Cultivos de tipo (ATCC; Manassas VA) depositarla de patentes como los depósitos originales bajo el tratado de Budapest y se les han dado los siguientes Nos. de registro de ATCC: 280.46.3.4 (Pesignación de Pepósito de Patentes ATCC PTA-6284); clon 281.73.49.1.1 (Pesignación de Pepósito de Patentes ATCC PTA- 6285); clon 283.4.1.2 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-6287); clon 283.52.5.4 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-6311); y clon 283.108.2.3 (Designación de Depósito de Patentes ATCC PTA-6286) . Ejemplo 19 Afinidad de unión de dos anticuerpos monoclonales rata-anti- MS-IL-22RA Anticuerpo especifico de IgG-Fc gama de rata anticabra (Jackson) se inmobilizó sobre un chip CM5 Biacore. El ensayo fue optimizado para unir cada mAb sobre la superficie de captura anti-rata y luego una serie de concentración de IL-22RA se inyectó a través del mAb para ver la asociación (Ka) y disociación (Kd) . Después de pruebas preliminares, la unión no especifica se observó entre la proeina de fusión y la superficie de captura sobre el chip. Un frasco de IL-22RA que tenia el marcador Fc4 cortado por trombina fue adquirido y probado subsecuentemente para no mostrar efectos de fondo.

Después de cada corrida, la superficie fue regenerada de nuevo al anticuerpo anti-rata con dos inyecciones de HCl 20 mM. Los datos se generaron para cada MAb y software de evaluación (BIAevaluation Software versión 3.2 Pharma BIAcore, Uppsala, Suecia) se usó para evaluar la cinética del anticuerpo anti-IL-22RA a la proteina IL-22RA, como se muestra en la tabla 12 abajo: Tabla 12 **Se muestran las constantes de velocidad de asociación (Ka) y disociación (Kd) de equilibrio para cada anticuerpo monclonal anti-IL-22RA y los valores están en limites de máquina. Chi2 se refiere a la suma del cuadrado de los residuos entre las curvas de unión y las curvas de ajuste de evaluación. Entre más cerca del 0, mayor confianza en los datos. Como se muestra por la tabla 12, ambos anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA se unieron fuertemente a la proteina IL-22RA, como lo evidencia la unión en concentración pico-molar al IL-22RA (marcador Fc4 cortado con trombina) . Estos datos se muestran con adecuada confianza con base en los valores Chi2 bajos y muestra que el mAb clon R2.1.5F4.1 tiene afinidad de unión liberamente más fuerte para el receptor IL-22RA. Ejemplo 20 Análisis inmunohistoquimico de la expresión de proteinas IL- 22 in vivo en muestras de tejido A. Resumen El análisis inmunohistoquimico (IHC) de la expresión y localización de proteina IL-22 se logró usando anticuerpo monoclonal anti-humano IL-22 (anti-hIL-22 ) (Mab 266.19.1.10.5.2) en las siguientes muestras de tejido: un Human multi-Normal Grid y Tumor Grid; pancreatitis humana, muestras de enfermedad pulmonar y renal; muestras de piel de psoriasis humana; INS IL-22 TG (expresado del promotor de insulina de rata) y páncreas de ratón WT; muIL-22-EuLCK TG y WT; muestra de piel de ratón WT; y DSS (WT e IL-22 KO) muestra de colon de ratón. Además, el patrón de tinción del anticuerpo monoclonal anti-hIL-22 MAB 266.19.1.10.5.2 (ejemplo 17) vs anticuerpo policlonal (anti-hIL-22 de conejo) (ejemplo 16) fue comparado. Los anticuerpos monoclonales IL-22 anti-humanos de rata MAb 266.16.1.4.4.1, y MAb 266.19.1.10.5.2 (ejemplo 17) se probaron y mostraron teñir la mayoria de células IL-22/BHK humanas (>50%) pero también algunas células BHK/IL-22 de ratón (1-5%) y se usaron para investigar la distribución tisular y la expresión de IL-22 tanto en pacientes humanos como en muestras de modelos animales y se usaron para comparar el patrón de tinción con anticuerpo de conejo policlonal para confirmar los resultados. B . Materiales y métodos Células fijadas en formalina e incrustadas en parafina y tejidos de fuentes humanas y modelos animales de ratón se seccionaron a 5 µm. Las células incluían células BHK que expresaban IL-22 ya sea humano o de ratón y tipo silvestre como control positivo y control negativo, respectivamente. Los tejidos humanos incluyeron un portaobjetos de control de varios tejidos (NormalGrid™; Biomeda, Foster City, CA) con 50 secciones de varios tejidos humanos normales (por ejemplo, cerebro, glándula pituitaria, glándula adrenal, mama, riñon, corazón, estómago, intestino delgado, intestino grueso, higado fetal, higado, piel, páncreas, pulmón, anginas, ovarios, testículos, próstata, útero, placenta, tiroides y bazo); un portaobjetos de control de multitejidos (TumorGrid™; biomeda, Foster City, CA) con 50 secciones de varios tumores humanos (por ejemplo adeno Ca de pulmón, adeno Ca de higado, adeno Ca de riñon, adeno Ca de colon, adeno Ca de mama, adeno Ca de tiroides, adeno Ca de estómago, adeno Ca de próstata, adeno Ca de páncreas, adeno Ca de ovario, linfoma, melanoma, sarcoma, sarcoma epitelioide, MFH sarcoma, rhabdo sarcoma, carcinoide, Ca no diferenciado, mesotelioma, teretoma y semimoma) ; carcinoma pulmonar de CHTN (Cooperation Human Tissue Network, Cleveland, Ohio) ; páncreas normal, áncreas con pancreatitis crónica, pulmón con inflamación perivascular crónica, riñones ya sea con glomerulosclerosis multifocal, glomerulonefritis mesangioproliferativa o fibrosis intersticial de glomérulos escleróticos de NDRI (National Disease Research Interchange, Philadelphia, PA) ; y muestras de piel psoriásica humana. Los tejidos de ratón incluyeron cólones de modelo de animal de enfermedad inflamatoria del intestino (modelo DSS descrito en la presente, ratas hembra Swiss Webster) y de modelo de animal de colitis IL-20 WT y KO (ratones DSS, tipo silvestre e IL-20 (ratones hembra suprimidos (IL-20) tratados ya sea con vehículo o 4% de DSS en agua para beber durante 7 dias; y muestras de piel de modelos animales transgénicos (TG) que incluían control de mIL-22-EuLCK TG y mIL-22-INS y animales TG. Una sección por bloque/portaobjetos fue teñida con hematoxilina y eosina (H&E) para la examinación histológica y la sección subsecuente fueron teñidas inmunohistoquimicamente para la expresión y localización de proteina IL-22. Para inmunohistoquimica, las secciones de células y tejidos fueron puestas en portaobjetos de microscopio ChemMate™ Capillary Gap Plus (BioTek, Winooski, Vermont), secadas a 60°C en horno durante 60 minutos y desparafinadas usando condiciones estándares de 3 x 5 minutos en xileno, 4 minutos en 100% de EtOH, 3 minutos en 100% de EtOH y 2 minutos en EtOH al 95%. Las secciones de tejido fueron después sujetas a proceso de recuperación de epitopes inducidos por enzimas de 20 minutos a 37°C con pepsina (NeoMarkers Fremont CA) seguidos por una etapa de bloqueo con avidina/biotina llevada a cabo de acuerdo con las instrucciones de los fabricantes (Zymed, South San Francisco, CA) . TechMate 500™ Automated Immunostainer y protocolo inmunohistoquímico de inmunoperoxidasa (IP) con sistema de detección de complejo avidina-biotina (Ventana Biotek Systems, Tucson, AZ) se emplearon para la tinción. El TechMate 500™ Automated Immunostainer empleó el principio de acción capilar y el protocolo IP utilizó un tipo de inmunotinción referido como técnica de "emparedado". Las secciones fueron prebloqueadas con 5% de cabra normal (Vector, Burlingame CA) en BS durante 10 minutos seguidas por IX de reguldor de pH de lavado (Signet, Dedham MA) y luego incubadas con anticuerpo primario contra IL-22 (MAB 266.19.1.10.5.2) (ejemplo 17), purificadas con PAS a 2.04 mg/ml) diluidas a 1:800 durante 30 minutos a temperatura ambiente seguidas por lavado con regulador de pH 5X. El anticuerpo primario se diluyó en regulador de pH de dilución de anticuerpos TechMate 500™ (Ventana) . IgG anti-rata de cabra biotinilada (Vector) diluida a 1:200 más 5% de suero de cabra normal y 2.5% de leche deshidratada descremada en PBS se usó como los anticuerpos de enlace secundarios durante 25 minutos a temperatura ambiente seguidos por IX de lavado con regulador de pH 1 y IX de lavado con regulador de pH 2 y 3 (Signet) . Las secciones de tejido fueron después sujetas a 3X7 minutos de bloqueo con 3% de peróxido de hidrógeno (HP) (Ventana) seguido por 3X de lavado con regulador de pH 2 y 3. El marcado con inmunoperoxidasa se llevó a cabo con un kit de DAB de peróxidos (Ventana) , incubando con complejo de avidina-biotina (ABC) durante 30 minutos seguido por lavado con 5X regulador de pH 2 y 3 y diaminobencidina (DAB) durante 4x 4 minutos seguida por 2x de regulador de pH lavado 2 y 3 y lavado con agua IX (Signet, Cat. No. 2340) . Los tejidos fueron después contra teñidos con verde de metilo (Kako, Cat. No. S1962) durante 10 minutos seguidos por lavado con regulador de pH 2 y 3 2X y lavado con agua 3X. El control incluía sueros primarios no inmunes usando control de isotipo de anticuerpo primario de rata (Zymed) para reemplazar el anticuerpo primario. La inmunotinción se observó usando un microscopio Olympus BH-2 y las imágenes se capturaron por una cámara digital CoolSNAP HQ (Roper Scientific, Tucson, AZ) .

C . Resultados Lineas de células de control positivas y negativas: MAB 266.19.1.10.5.2, un anticuerpo monoclonal anti-hIL-22, demostró tinción positiva tanto en células BHK que expresaban IL-22 humana (+++) como en células BHK que expresaban IL-22 de murino ( + ) , y ninguna tinción en las células BHK tipo silvestre (-) . Todas las lineas de células BHK (+) y negativas teñidas con control negativo de isotipo de rata para reemplazar el anticuerpo primario no mostraron tinción, (-) lo cual indicó que el anticuerpo es especifico para ligando IL-22. El anticuerpo tuvo inmunoreactividad cruzada con IL-22 tanto humano como de ratón. Tejidos Humanos: Human multi-Normal Grid y Tumor Grid; muestras de enfermedad de páncreas, pulmón y renal; muestras de piel de psoriasis humanas se examinaron. Estos tejidos humanos incluían 1). Cerebro, glándula pituitaria, glándula adrenal, mamas, riñon, corazón, estómago, intestino delgado, intestino grueso, higado fetal, higado, piel, páncreas, pulmón, anginas, ovario, útero, testículos, placenta, tiroides y bazo en los portaobjetos de control de varios tejidos (NormalGrid™) /tej idos humanos normales; 2) adeno Ca de pulmón, adeno Ca de higado, adeno Ca de riñon, adeno Ca de tiroides, adeno Ca de estómago, adeno Ca de próstata, adeno Ca de páncreas, adeno Ca de ovario, linfoma, melanoma, sarcoma, ewings, sarcoma epitelioide, sarcoma MFH, sarcoma Rhabdo, carcinoide, Ca no diferenciado, mesotelioma, teratoma y seminoma, en los portaobjetos de control de varios tejidos (TumorGrid™) tejidos anormales humanos/tumor; 3) Páncreas normal, páncreas con pancreatitis crónica, pulmón con inflamación perivascular crónica, Ca de pulmón, riñon con glomerulonefritis esclerosis multifocal, riñon con glomerulonefritis mesangioproliferativa, riñon con fibrosis intersticial glomerulótica esclerótica de CHTN y/o NDRI; 4). Tejidos de ratón: páncreas de ratón TG y WT de IL-22 INS se examinaron. Las células dispersas a lo largo de las isletas en el páncreas INS IL-22 TG demostró fuerte tinción positiva (+++) con Mab MAB 266.19.1.10.5.2 y páncreas WT no mostró tinción (-) . Comparación de anticuerpos monoclonales y_ policlonales . El anticuerpo policlonal anti-IL-22 (ejemplo 16) mostró ser sensible, mientras que el anticuerpo monoclonal MAB 266.19.1.10.5.2 fue especifico. El anticuerpo monoclonal mostró tinción positiva en células BHK que expresaban IL-22 humana (+++) , en células BHK que expresaban IL-22 de murino (+) , en varias muestras de tejido humano y de ratón ( + ) y en las isletas de ratones INS mIL-22 TG (+++) . Un porcentaje más grande de las isletas de los transgénicos (contra tipos silvestres) contenia tinción positiva. La tinción en las isletas transgénicas fue distribuida generalmente a lo largo de la isleta (+++) mientras que las isletas tipo silvestre se limitó generalmente a la periferia de la isleta (+) . Sin embargo, este anticuerpo también mostró tinción no especifica en las células de control negativas WT BHK (+ ) . MAB 266.19.1.10.5.2 mostró tinción positiva en células BHK que expresaban IL-22 humana (+++) , en células BHK que expresaban IL-22 de murino ( + ), y en las isletas de ratones INC mIL-22 TG (+++) . La tinción en las isletas transgénicas se distribuyó generalmente a lo largo de la isleta (+++) mientras que las isletas tipo silvestre demostraron una tinción (-) . Ejemplo 21 IL-20 es sobre-regulada en muestras de piel psoriásica humana A. Muestras de ARN Muestras de piel normal asi como piel de pacientes con psoriasis se obtuvieron. Estas últimas incluían piel envuelta de psoriasis y piel no envuelta adyacente. Se aisló el ARN de muestras de piel humana usando métodos convencionales. La integridad y calidad de las muestras de ARN se probó en el Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Waldrbronn Alemania) . B . Cebadores y sondas para RT-PCR cuantitativa RT-PCR cuantitativa en tiempo real usando el ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (PE Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) ha sido descrita previamente (Véase, Heid, C.A. et al., Genome Research 6:986-994, 1996; Gibson, U.E.M. et al., Genome Research 6:995-1001, 1996; Sundaresan, S. et al., Endocrinology 139:4756-4764, 1998. Este método incorpora el uso de una sonda especifica de genes que contiene colorantes fluorescentes tanto reporteros como extintores. Cuando la sonda está intacta la emisión de colorante reportero es negada debido a la cercana proximidad del colorante extintor. Durante la extensión por PCR usando cebadores hacia adelante y hacia atrás específicos de genes adicionales, las sonda es cortada por la actividad nucleolitica 5' a 3' de la rtht del ADN polimerasa que libera el colorante reportero de la sonda dando como resultado un incremento en la emisión de fluorescente. Los cebadores de sondas usados para los análisis de RT-PCR cuantitativos en tiempo real de la expresión de IL-20 se diseñaron usando el software de diseño de cebadores Primer Express™ (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) . El cebador hacia adelante, ZC40541 (SEQ ID NO:25) y el cebador hacia atrás, ZC 40542 (SEQ ID NO:26) se usaron en una reacción de PCR (abajo) a una concentración de 800 nM para sintetizar un producto de 71 pares de bases. La IL-22 correspondiente TaqMan® probé, ZC, 40544 (SEQ ID NO: 27) se sintetizó y se marcó por PE Applied Biosystems. La sonda IL-22 se marcó en el extremo 5' con un colorante fluorescente reportero ( 6-carboxi-fluoresceina) (FAM) (PE Applied Biosystems) y en el extreo 3' con un colorante fluorescente extintor ( 6-carboxi-tetrametil-rodamina) (TAMRA) (PE Applied Biosysems) . C. RT-PCR cuantitativa en tiempo real Los niveles relativos de ARNm de IL-22 se determinaron al analizar muestras de ARN totales usando el kit TaqMan EZ RT-PCR Core Reagents (PE Applied Biosystems) . Transcripto de IL-22 de corrida se hizo para generar una curva estándar usadapara cuantificación. La curva consistía en diluciones en serie de 10 veces que varian de aproximadamente le8 a le3 copias totales de mensaje total para IL-22 con cada unto de curva estándar analizada por triplicado. Las muestras de ARN totales de piel también se analizaron por triplicado para niveles de transcripto IL-22 humano y para niveles de hGUS como un control endógeno. En un volumen total de 25 µl, cada muestra de ARN se sometió a la reacción TaqMan EZ RT-PCR (PE Applied Biosystems) que contenia: aproximadamente 25 ng de ARN total en agua trtada con DEPC (libre de Dnasa/Rnasa) ; cebadores adecuados (aproximadamente 100 Nm ZC40542 (SEQ ID NO: 26); sonda adecuada (aproximadamente 100 nM ZC 40544 (SEQ ID NO:27); IX TaqMan EZ Buffer; 3 mM de acetato de manganeso; 300 µM cada no de d-CTP, d-ATP y 600 µM de d-UTP; r Tth ADN polimerasa (0.1 U/µl); y AmpErase UNG (0.01 U/µl). Las condiciones de ciclización térmica PCR fueron las siguientes: una etapa de tratamiento con UNG inicial de un ciclo a 50°C durante 2 minutos; seguida por una etapa de transcripción inversa (RT) de un ciclo a 60°C durante 30 minutos; seguida por una desactivación de la etapa UNG de un ciclo a 95°C durante 5 minutos; seguida por 40 ciclos de amplificación a 94°C durante 20 segundos y 60°C durante 1 minuto. Los niveles de ARN de IL-22 relativos se determinaron usando el método de curva Estándar como el descrito or el fabricante, PE Biosystems (User Bulletin #2: ABI Prism 7700 Sequence Detection System, Relative Quantitation of Gene Expression, 11 de diciembre de 1997). Se usaron las mediciones de hGUS para normalizar los niveles de IL-22. Los datos se muestran en la tabla 13 abajo. Tabla 13 Aunque el ARNm de IL-22 fue detectado en muestras de piel de pacientes normales de áreas no implicadas, hubo una sobre-regulación para el mensaje de IL-20 en piel implicada de pacientes de psoriasis. Las subunidades receptoras para IL-22, incluyendo IL-22RA (IL-22RA), e IL-20RB fueron expresadas en piel normal y enferma humana. Estos datos soportan una fuerte asociación de enfermedad para IL-20 con psoriasis humana. La sobre-expresión de IL-20 fue mostrada en lesiones psoriásicas humanas, sugiriendo que IL-22 esté implicada en soriasis humana. Más aún, como se describió en la presente, la sobre-expresión de IL-20 en ratones transgénicos mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadoras de un fenotipo psoriásico. Estos datos in vivo sugieren además que IL-20 está implicado en psoriasis. De esta manera, los antagonistas contra la actividad de IL-20, tales como los anticuerpos monoclonales anti-humano-IL-22RA de la presente invención, asi como receptores solubles y anticuerpos contra los mismos, y anticuerpos neutralizantes y monoclonales anti-IL-20, son útiles terapéuticamente como antagonistas contra IL-20 en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, tales como psoriasis, asi como otras indicaciones como las descritas en la presente. Ejemplo 22 IL-20 es sobre-regulado en muestras de piel con dermatitis atópica humana C. Muestras de ARN Muestras de piel normal asi como de piel de pacientes con dermatitis atópica fueron obtenidas. El ARN se aisló de muestras de piel humana usando métodos convencionales. La integridad y calidad de las muestras de ARN se probó en el Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Waldbronn Alemania) . D. Cebadores y sondas para RT-PCR cuantitativa La RT-PCR cuantitativa en tiempo real usando el ABI PRISM 7700 Sequence Detection System (PE Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA) ha sido descrita previamente (Véase, Heid, C.A. et al . , Genome Research 6:986-994, 1996; Gibson, U.E.M. et al . , Genome Research _6:995-1001; Sundaresan, S et al . , Endocrinology 139:4756-4764, 1998. Este método incorpora el uso de una sonda especifica de genes que contiene colorantes fluorescentes tanto reporteros como extintores. Cuando la sonda está intacta la emisión del colorante reportero es negada debido a la cercana proximidad del colorante extintor. Durante la expresión por PCR usando cebadores hacia adelante y hacia atrás específicos de genes adicionales, la sonda es cortada por la actividad nucleolitica 5' a 3' de la rTthADN Polimerasa que libera el colorante reportero de la sonda dando como resultado un incremento en la emisión fluorescente. Los cebadores y sondas usados para los análisis de RT-PCR cuantitativa en tiempo real de la expresión de IL-20 fueron diseñados usando el software de diseño de cebadores Primer Express™ (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) . El cebador hacia adelante, ZC40541 (SEQ ID NO: 25) y el cebador hacia atrás, ZC 40542 (SEQ ID NO:26) se usaron en una reacción de PCR (abajo) a una concentración de 800 nM para sintetizar un producto de 71 pb. La sonda IL-20 TaqMan® correspondiente, ZC 40544 (SEQ ID NO:27) fue sintetizada y marcada por PE Applies Biosystems. La sonda IL-20 fue marcada en el extremo 5' con un colorante fluorescente reportero ( 6-carboxi-fluoresceina) (FAM) (PE Applied Biosystems) y en el extremo 3' con un colorante fluorescente extintor ( 6-carboxi-tetrametil-rodamina) (TAMRA) (PE Applied Biosystems) . C. RT-PCR cuantitativa en tiempo real Se determinaron los niveles relativos de ARNm de IL-20 al analizar muestras de ARN totales usando el TaqMan EZ RT-PCR Core Reagents Kit (PE Applied Biosystems) . Transcripto de IL-20 de escorrentia se hizo para generar una curva estándar usada para cuantificación. La curva consistía en diluciones en serie de 10 veces que variaban de aproximadamente le8 a le3 copias totales de mensaje completo para IL-20 con cada punto de la curva estándar analizado por triplicado. Las muestras de ADN total de piel fueron también analizadas por triplicado para niveles de transcripto de IL-20 humano y para niveles de hGUS como un control endógeno. En un volumen total de 25 µl, cada muestra de ARN fue sometida a reacción de EZ RT-PCR TaqMan (PE Applied Biosystems) que contenia: aproximadamente 25 ng de ARN total en agua tratada con DEPC (libre de Dnasa/Rnasa) ; cebadores adecuados (aproximadamente 800 nM de ZC40451 (SEQ ID NO: 25) y ZC40542 (SEQ ID NO:26); sonda adecuada (aproximadamente 100 nM de ZC40544 (SEQ ID NO: 17); IX de regulador de pH TaqMan EZ; 3 mM de acetato de manganeso; 300 µM cada uno de d-CTP, d-ATP y d-GTP y 600 µM de d-UTP; rTthADN Polimerasa (0.1 U/µl) y AmpErase UNG (0.01 U/µl). Las condiciones de cilclización térmica para PCR fueron las siguientes: una etapa de tratamiento con UNG inicial de un ciclo a 50°C durante 2 minutos; seguida por una etapa de transcripción inversa (RT) de un ciclo a 60°C durante 30 minutos: seguida por una etapa de desactivación de UNG de un ciclo a 95°C durante 5 minutos; seguida por 40 ciclos de amplificación a 94°C durante 20 segundo y 60°C durante un minuto. Los niveles de ARN de IL-20 relativos fueron determinados usando el Método de Curva Estándar como el descrito por el fabricante, PE Biosystems (Boletín de Usuario #2: ABI Prism 7700 Sequence Detection System, Relative Quantitation of Gene Expression, Diciembre 11, 1997). Las mediciones de hGUS fueron usadas para normalizar los niveles de IL-20. ARNm de IL-20 fue detectable a un bajo nivel (alrededor de 800 copias) en muestras de piel. En contraste, hubo sobre-regulación para mensaje de IL-20 en pieles de pacientes con dermatitis atópica (aproximadamente 8600 copias). Las subunidades receptoras para IL-20, incluyendo IL-20RA) , IL-22RS e IL-20RB son expresadas en piel humana normal y enferma. Estos datos soportan una fuerte asociación de la enfermedad para IL-20 a dermatitis atópica humana. La sobreexpresión de IL-20 fue demostrada en pieles con dermatitis atópica humana, sugiriendo que IL-20 está implicado en dermatitis atópica humana. Más aún, como se describe en la presente, la sobreexpresión de IL-20 en ratones transgénicos mostró engrosamiento epidérmico e implicación de células inmunes indicadora de un fenotipo de dermatitis atópica. Estos datos in vivo sugieren además que IL-20 está implicado en dermatitis atópica. De esta manera, antagonistas para la actividad de IL-20, tales como los anticuerpos monoclonales anti-humano-IL-22RA de la presente invención, asi como receptores solubles y anticuerpos contra los mismos, y anticuerpos anti-IL-20 neutralizantes y monclonales, son útiles terapéuticamente como antagonistas para IL-20 en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, tales como dermatitis atópica, asi como para otras indicaciones como las descritas en la presente. Ejemplo 23 Sobre-regulación de IL-8 por IL-20 Queratinocitos neonatales epidérmicos humanos normales (NHEK) (de Clonetics) en pasaje 2 fueron colocados en placas y cultivados hasta confluencia en placas de cultivo de tejidos de 12 pocilios. KGM (medio de crecimiento de queratinocitos) fue comprado de Clonetics. Cuando las células alcanzaron la confluencia, se lavaron con medio KGM menos factores de crecimiento = KBM (medio a base de queratinocitos). Las células fueron privadas de suero en KBM durante 72 horas antes de la adición de compuestos de prueba. Trombina a 1 U . I . /mL y tripsina a 23 nM se usaron como controles positivos. Un mL de medio/pocilio fue añadido. Se usó KBM solo como el control negativo. IL-20 fue reconstituido en medio KBM y añadido a concentraciones variables, de 2.5 µg/ml hasta 618 ng/mL en un primer experimento y de 2.5 µg/mL hasta 3 ng/mL en un segundo experimento. Las células fueron incubadas a 3 °C, 5% de C02 durante 48 horas. Los sobrenadantes fueron removidos y congelados a -80°C durante varios dias antes de ensayar para niveles de IL-8 y GM-CSF. El kit de inmunoensayo de IL-8 humana # D8050 (RandD Systems, Inc.) y kit de inmunoensayo de GM-CSF humano # HSGMO (RandD Systems, Inc.) fueron usados para determinar la producción de citocinas siguiendo las instrucciones del fabricante. Los resultados indicaron que la expresión de IL-8 y GM-CSF fue inducida por IL-20. Ejemplo 24 Sobre-reguladión de citocinas inflamatorias por IL-20 La linea de células de queratinocitos humanos, HaCaT se cultivó a 37°C hasta varios dias de post-confluencia en matraces de cultivo de tejido T-75. En este punto, medio de crecimiento normal (DMEM + 10% de FBS) fue removido y reemplazado con medio libre de suero. Las células fueron después incubadas durante dos dias a 37°C. Después se removió el DMEM y cuatro matraces de células por tratamiento fueron tratados con una de cada una de las siguientes condiciones durante cuatro horas a 37°C: IL-1 alfa recombinante humana (rh) a 5 ng/mL, rh IL-1 alfa a 20 ng/mL, rh IL-1 alfa a 5 ng/mL + IL-20 a 1 µg/mL, IL-20 a 1 µg/mL o rh IL-10 alfa a 10 ng/mL. Después del tratamiento con citocina, se removió el medio y las células fueron Usadas usando una solución de tiocianato de guanidinio. ARN total fue aislado del lisado de células mediante una centrífuga nocturna en una gradiente de cloruro de cesio. Al día siguiente, la pella de ARN fue suspendida en una solución de TE/SDS y precipitada en etanol. El ARN fue después cuantificado usando un espectrofotómetro, seguido por un tratamiento con DNasa según la Sección V.B. del cDNA Expresión Arrays User Manual Atlas™ de Clontech (versión PT3140-1/PR9X390, publicado el 11/5/99)... La calidad de las muestras de ARN se verificó mediante cálculos de pureza con base en lecturas spec, y por visualización en gel de agarosa. La contaminación genómica de las muestras de ARN fue descartada mediante el análisis de PCR del gen de beta- actina . Se siguieron los protocolos de Clontech para enriquecimiento con polyA+, síntesis con sonda e hibridación a disposiciones Atlas™ (véase arriba, más Puré Total RNA Labeling System User Manual Atlas™, PT3231-1/PR96157 , publicado el 6/22/99) . Brevemente, polyA + ARN fue aislado de 50 mg de ARN total usando esferas magnéticas recubiertas con estreptavidina (por Clontech, Palo Alto, CA) y un separador de partículas magnéticas. PolyA + ARN fue luego marcado con alfa32 P-dATP via RT-PCR. Los cebadores CDS de Clontech específicos para los 268 genes en la disposición de citocina/receptor humanos Atlas™ (Cat. #7744-1) fueron usados en la reacción. La sonda marcada fue aislada usando cromatografia en columna y se contó en fluido de centelleo. Las disposiciones Atlas™ fueron pre-hibridadas con Clontech ExpressHyb plus 100 mg/mL de APN de esperma de salmón desnaturalizado con calor durante al menos treinta minutos a 68 °C con agitación continua. Las membranas fueron después hibridadas con 1.9 x 106 de CPM/mL (un total de 1.14 x 107 de CPM) durante la noche a 68°C con agitación continua. Al dia siguiente, las membranas fueron lavadas durante treinta minutos x 4 en 2X de SCC, 1% de SPS a 68°C, más durante treinta minutos x 1 en 0. IX de SSC, 0.5% de SPS a 68 °C, seguidas por un lavado final a temperatura ambiente durante cinco minutos en 2X de SSC. Las membranas de la disposición se colocaron después en bolsas de plástico Kodak y se expusieron a una pantalla de imágenes de fósforo durante la noche a temperatura ambiente. Al dia siguiente, las pantallas de fósforo fueron escaneadas en un formador de imágenes de fósforo y analizadas usando software 1.0 Atlaslmage™ de Clontech. Genes sobre-regulados por IL-20: 1. Factor de necrosis tumoral (TNF) fue sobre-regulado 1.9-2.4 veces por IL-20. 2. Factores de crecimiento placentario 1 y 2 (PLGF) fueron sobre-regulados 1.9-2.0 veces por IL-20. 3. Receptor de factor de coagulación II fue sobre-regulado 2.0-2.5 veces por IL-20. 4. Receptor de calcitonina fue sobre-regulado 2.2-2.3 veces por IL-20. 5. Proteina TSG-6 de unión a hialuronato inducible por TNF fue sobre-regulada 2.1-2.2 veces por IL-20. 6. Precursor del receptor 1 de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , receptor de tirosina-proteina cinasa (FLT-1) (SFLT) fue sobre-regulado 2.1-2.7 veces por IL-20. 7. MRP-8 (proteina de unión a calcio en macrófagos MIF - relacionada) fue sobre-regulada 2.9-4.2 veces por IL-20. 8. MRP-14 (proteina de unión a calcio en macrófagos MIF - relacionada) fue sobre-regulada 3.0-3.8 veces por IL-20. 9. Relaxina H2 fue sobre-regulada 3.14 veces por IL-20. 10. Receptor III de factor de crecimiento de transformación beta (TGFß) de 300 kDa fue sobre-regulado 2.4-3.6 veces por IL-20. Genes que muestran sinergia con tratamiento con IL-20 + IL-1 1. La proteina 2a morfogénica de hueso fue sobre-regulada 1.8 veces con tratamiento con IL-20 solo, 2.5 veces con tratamiento con IL-1 sola y 8.2 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas. 2. MRP-8 fue sobre-regulada 2.9 veces con tratamiento con IL-20 sola, 10.7 veces con tratamiento con IL-1 sola y 18.0 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas . 3. La proteina de diferenciación de eritroides (EDF) fue sobre-regulada 1.9 veces con tratamiento con IL-20 sola, 9.7 veces con tratamiento con IL-1 sola y 19.0 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas. 4. MRP-14 (proteina de unión a calcio en macrófagos, MIF relacionada) fue sobre-regulada 3.0 veces con tratamiento con IL-20 sola, 12.2 veces con tratamiento con IL-1 sola y 20.3 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas . 5. Factor de crecimiento tipo EGF de unión a heparina fue sobre-regulado 2.0 veces con tratamiento con IL-20 sola, 14 veces con tratamiento con IL-1 sola y 25.0 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas. 6. La proteina tipo beta-tromboglobulina fue sobre-regulada 1.5 veces con tratamiento con IL-20 sola, 15 veces con tratamiento con IL-1 sola y 27 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas. 7. Factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF) fue sobre-regulado 1.7 veces con tratamiento con IL-20 sola, 25 veces con tratamiento con IL-1 sola y 48 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas. 8. Factor quimiotáctico y activador de monocitos MCAF fue sobre-regulado 1.3 veces con tratamiento con IL-20 sola, 32 veces con tratamiento con IL-1 sola y 56 veces con tratamiento con ambas IL-20 e IL-1 juntas. Ejemplo 25 Fenotipo transgénico de IL-20 IL-20 tanto humana como de ratón fueron sobreexpresadas en ratones transgénicos usando una variedad de promotores. El promotor de albúmina de ratón especifico de higado, que dirige la expresión de IL-20 humana, se usó inicialmente en un intento por lograr niveles circulantes de proteina. Estudios subsecuentes fueron llevados a cabo usando el promotor de queratina 14 (K 14), el cual dirige principalmente la expresión a la epidermis y otros epitelios escamosos estratificados; el promotor de metalotioneína 1 de ratón, el cual da un amplio patrón de expresión y el promotor de EµLCK, el cual conduce la expresión en células del linaje linfoide. Resultados similares se obtuvieron en todos los cuatro casos, posiblemente debido a que estos promotores todos dan origen a niveles circulantes de IL-20. En todos los casos, crias transgénicas que expresaban el transgen de IL-20 fueron más pequeños que sus compañeros de carnada no transgénicos, tenian una apariencia brillosa con piel apretada y arrugada y murieron dentro de los primeros cinco dias después del nacimiento. Las crías tenían leche en sus estómagos indicando que eran capaces de mamar. Estos ratones tenian hinchadas las extremidades, cola, regiones de las fosas nasales y de la boca, y tenían dificultad para moverse. Además, los ratones eran débiles, carecían de tejido adiposo visible y tenían desarrollo de orejas y dedos retrasado. Bajos niveles de expresión en higado (menos de 100 moléculas de ARNm/célula) fueron suficiente tanto para la letalidad neonatal como anormalidades en la piel. Los ratones transgénicos sin un fenotipo visible o no expresaron el transgen, no lo expresaron a niveles detectables o fueron mosaico. El análisis histológico de la piel de los ratones transgénicos IL-20 mostró una epidermis engrosada, hiperqueratosis y un estrato córneo compacto en comparación con los compañeros de carnada no transgénicos. Se observaron ocasionalmente cortezas (costras) serocelulares . El análisis microscópico electrónico (EM) de piel de ratones transgénicos mostró inclusiones lipoides intramitocondriales, granulos de queratohialina moteados y relativamente pocos tonofilamentos similares a los observados en piel psoriásica humana y en modelos de enfermedad en piel de ratón. Además, muchos de los ratones transgénicos tuvieron linfocitos tímicos apoptósicos. No se detectaron otras anormalidades mediante análisis histopatológico. Estos resultados histológicos y de EM soportan y extienden las grandes alteraciones en piel observadas . Ejemplo 26 Construcción de vector de expresión para la expresión de IL- 22 A-muFc humana soluble Se preparó una fusión receptor de IL-22RA humano soluble-muFc (indicada como IL-22RA-C (mG2a) que contenia el dominio extracelular de IL-22RA fusionado a la región Fc de la cadena pesada gamma 2a de murino (mG2a) . Se construyó un plásmido de expresión que contenia IL-22RA-C (mG2a) mediante recombinación homologa usando dos fragmentos de ADN separados y el vector de expresión pZMP40. Fragmentos de la secuencia de polinucleótidos de IL-22RA (SEQ ID NO: 1) y mG2a SEQ ID NO: 39 fueron generados mediante amplificación por PCR usando los siguientes cebadores: (a) cebadores de IL-22RA ZC45,593 (SEQ ID NO:28) y ZC45,592 (SEQ ID NO:29) y (b) cebadores de mG2a ZC45,591 (SEQ ID NO:30) y ZC45,594 (SEQ ID NO:31). El primer fragmento contenia la región de codificación del dominio extracelular de IL-22RA, el cual se hizo usando un polinucleótido IL-22RA (por ejemplo, SEQ ID N0:1) como la plantilla. El primer fragmento incluía una superposición 5' con una secuencia del vector pZMP40 parcial, el segmento IL-22RA y una superposición 3' que contenia una secuencia enlazadora y secuencia de mG2a parcial. Condiciones de PCR: 1 ciclo, 94°C, 5 minutos, 35 ciclos, 94°C, 1 minuto, seguidos por 55°C, 2 minutos, seguidos por 72°C, 3 minutos; 1 ciclo, 72°C, 10 minutos. El segundo fragmento incluía una superposición 5' con una secuencia enlazadora y secuencia de IL-22RA parcial, el segmento mG2a y una superposición 3' que contenia una secuencia del vector pZMP40 parcial. La región Fc de la cadena pesada gamma 2a de murino (mG2a) (SEQ ID NO: 39) se generó de un clon de ADNc de la cadena pesada gamma 2a de Ig de murino. La mG2a contiene los dominios de pivote, CH2 y CH3 de la región constante de la cadena pesada gamma 2a de inmunoglobulina de murino. Condiciones de PCR: 1 ciclo, 94°C, 5 minutos, 35 ciclos, 94°C, 1 minuto, seguidos por 55°C, 2 minutos, seguidos por 72°C, 3 minutos; 1 ciclo, 72°C, minutos. Las mezclas de reacción de PCR fueron realizadas en un gel de agarosa al 1% y una banda que correspondía a los tamaños de los insertos fue extraída con gel usando un QIAquick™ Gel Extraction Kit (Qiagen) . El plásmido pZMP40, el cual fue cortado con BglII, se suó en una recombinación de tres vias con ambos fragmentos del inserto de PCR. El plásmido pZMP40 es un vector de expresión de mamífero que contiene un cásete de expresión que tiene al promotor de MPSV, y varios sitios de restricción para la inserción de secuencias de codificación; un origen de replicación en E . coli ; una unidad de expresión de marcador seleccionable de mamífero que comprende un promotor de SV40, potenciador y origen de replicación, un gen DHFR y el terminador de SV40; y secuencias URA3 y CEN-ARS requeridas para la selección y replicación en S . cerevisiae . El plásmido pZMP40 fue construido a partir de pZMP21 (depositado en la Colección Americana de Tipos de Cultivos, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, y designado No. PTA-5266) por adición de varios sitios de enzima de restricción al polienlazador . Cien microlitros de células de levadura competente ( S . cerevisiae) fueron combinados independientemente con 10 µl del ADN de inserto y 100 ng de vector pZMP40 cortado, y la mezcla se transfirió a una cuveta de electroporación de 0.2 cm. La mezcla levadura/ADN fue electropulsada usando ajustes de suministro de energía (BioRad laboratories, Hercules, CA) de 0.75 kV (5 kV(cm), ao ohmios y 25 µF. Seiscientos microlitros de sorbitol 1.2 M fueron añadidos a la cuveta, y la levadura se puso en placas en una alícuota de 100 µl y 300 µl sobre dos placas URA-D e incubada a 30°C. Después de aproximadamente 72 horas, los transformantes de levadura Ura+ de una sola placa fueron resuspendidos en 1 ml de H20 y centrifugados brevemente para granular las células de levadura. La pella o granulo de células fue resuspendida en 0.5 ml de regulador de pH de lisis (2% de Tritón X-100, 1% de SDS, 100 mM de NaCl, 10 mM de Tris, pH 8.0, 1 mM de EDTA). Los quinientos microlitros de la mezcla de lisis se añadieron a un tubo Eppendorf que contenia 250 µl de esferas de vidrio lavadas con ácido y 300 µl de fenol-cloroformo, fue vortexeada durante 3 minutos y centrifugada durante 5 minutos en una centrifuga Eppendorf a velocidad máxima. Trescientos microlitros de la fase acuosa se transfirieron a un tubo fresco, y el ADN fue precipitado con 600 µl de etanol (EtOH) y 30 µl de acetato de sodio 3M, seguidos por centrifugación durante 30 minutos a velocidad máxima. El tubo fue decantado y la pella se lavó con 1 mL de etanol al 70%. El tubo fue decantado y la pella de ADN fue resuspendida en 30 µl de TE. La transformación de células huésped de E. coli (DH12S) electrocompetentes se hizo usando 5 µl de la preparación de ADN de levadura y 50 µl de células. Las células fueron electropulsadas a 2.0 kV, 25 µF y 400 ohmios. Después de la electroporación, se añadieron 1 ml de SOC (2% de Bacto™ Tryptone (Difco, Detroit, MI), 0.5% de extracto de levadura (Difco), 10 mM de NaCl, 2.5 nM de KCl, 10 mM de MGC12, 10 mM de MgS04, 20 mM de glucosa) y luego las células se plaquearon en una alícuota de 50 µl y 200 µl sobre dos placas de LB AMP (caldo LB (Lennox) , 1.8% de Bacto™ Agar (Difco) , 100 mg/L de ampicilina) . Los insertos de tres clones para la construcción se sometieron a análisis de secuencia y un clon por cada construcción, que contenia la secuencia correcta, fue seleccionado. ADN plasmidico de escala más grande se aisló usando un kit disponible comercialmente (QIAGEN Plasmid Mega Kit, Qiagen Valencia, CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Ejemplo 27 Expresión y purificación de polipéptido IL-22 A-muFc soluble humano Tres juegos de 200 µg de la construcción IL-22RA- C(mG2a) (ejemplo 22) fueron digeridos cada uno con 200 unidades de Pvu I a 37°C durante tres horas y luego se precipitaron con IPA y se centrifugaron en un tubo de microfuga de 1.5 mL . El sobrenadante fue decantado de la pella, y la pella se lavó con 1 mL de etanol al 70% y se dejó incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. El tubo fue centrifugado en una microfuga durante 10 minutos a 14,000 RPM y el sobrenadante se decantó fuera de la pella. La pella fue después resuspendida en 750 µl de medio PF-CHO en un ambiente estéril, y se le dejó incubar a 60°C durante 30 minutos. Células SE6 APFDXBH fueron centrifugadas en cada uno de tres tubos y fueron resuspendidas usando la solución de medio de ADN. Las mezclas ADN/células se pusieron en una cuveta con un espacio de 0.4 cm y se electroporaron usando los siguientes parámetros: 950 µF, alta capacitancia, y 300 V. Los contenidos de las cuvetas se removieron después, se agruparon y se diluyeron a 25 mLs con medio PF-CHO y se colocaron en un matraz de agitación de 125 mL . El matraz se puso en una incubadora sobre un agitador a 37 °C, 6% de C02 y agitación a 120 RPM. La linea de células se sometió a selección con nutrientes seguida por amplificación por etapas hasta 100 nM de metotrexato (MTX) , luego hasta 500 nM de MTX y finalmente hasta 1 µM de MTX. La amplificación por etapas fue seguida por una clasificación de células CD8. La clasificación de células CD8 se logró al tomar un fondo amplificado de MTX de 1 µM estable y tiñendo aproximadamente 5E6 células con un anticuerpo monoclonal FITC anti-CD8 (BD PharMingen, cat# 30324X) usando la concentración recomendada por el fabricante. Las células teñidas se procesaron y clasificaron en un citómetro de flujo FACS Vantage (BD) . La parte superior de 5% de células se colectaron y cultivaron. La expresión fue confirmada mediante western blot, y la linea de células fue escalada ascendentemente y le siguió la purificación de proteínas usando métodos normales. Ejemplo 28 Neutralización de huIL-22RA por suero de ratones inmunizados con huL22RA-mG2a A. Ensayo de neutralización a base de células para probar la inhibición de IL-20 y/o IL-22. La linea de células pre-B dependiente de factor BaF3 co-transfectada con IL-22RA e IL-20RB (pDIRSl) (células BAF/IL-22RA/IL-20RB; ejemplo 38) se usó para evaluar el potencial de neutralización de anticuerpos anti-IL-22RA al antagonizar IL-20 en el receptor de IL-22RA/IL-20RB . En forma similar, BaF3 co-transfectadas con IL-22RA e IL-10RB (CRF2-4) (células BAF/IL-22RA/CRF2-4 ; ejemplo 2) se usó para evaluar el potencial de neutralización de anticuerpos anti- IL-22RA al antagonizar IL-22 en el receptor de IL-22RA/IL-10RB. La proliferación en la presencia de IL-20 o IL-22 en su linea de células de expresión de receptor respectiva, y la inhibición de esta proliferación en presencia de los anticuerpos antagonistas, se evaluó usando un ensayo de azul Alamar como el descrito en el ejemplo 3. La inhibición de la proliferación de estas células es indicadora de actividad neutralizante en este ensayo. B . Anti-IL-22RA en suero neutraliza tanto IL-20 como IL-22 en ensayo de neutralización a base de células Usando el ensayo descrito en el ejemplo 28A, suero de ratones con gen suprimido IL-22RA inmunizados con huIL-22RA-muG2a (ejemplo 30 (A) (1)) se añadió como una dilución en serie a 1%, 0.5%, 0.25%, 0.13%, 0.06%, 0.03%, 0.02% y 0%. Las placas de ensayo fueron incubadas a 37 °C, 5% de C02 durante cuatro días tiempo en el cual Azul Alamar (Accumed, Chicago, IL) se añadió a 20 µl/pocillo. Las placas fueron centrifugadas de nuevo a 37°C, 5% de C02 durante 16 horas. El Azul Alamar da una lectura fluorométrica a base del número de células vivas, y es entonces una medición directa de la proliferación celular en comparación con un control negativo. Las placas fueron leídas en el Wallac Victor 2 1420 Multilabel Counter (Wallac, Turku, Finlandia) a longitudes de onda de 530 (Excitación) y 590 (Emisión) . Los resultados mostraron que suero de todos los siete animales inmunizados pudieron neutralizar la señalización tanto de huIL-22 como de huIL20 a través de huIL-22RA. Por ejemplo, a la concentración de 1%, suero de animales vivos (16517, 16518, 16519, 16520 y 16527) neutralizó completamente la proliferación inducida por huIL-22, con la inhibición de proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas. Más aún, a la concentración de 1%, suero de otros dos animales (16471 y 16701) inhibió alrededor de 90% de la proliferación inducida por huIL-22, con la inhibición de proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas. En forma similar, a la concentraciones de 1% y 0.5%, suero de animales vivos (16517, 16518, 16519, 16520 y 16527) neutralizó completamente la proliferación inducida por huIL-20, con la inhibición de proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas. Más aún, a la concentración de 1%, suero del animal 16701 neutralizó completamente la proliferación inducida por huIL-20, con la inhibición de proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas. A la concentración de 1%, suero del animal 16471 neutralizó alrededor de 95% de la proliferación inducida por huIL-20, con la inhibición de proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas. Asi, suero de todos los siete animales fue capaz de neutralizar la proliferación inducida ya sea por IL-20 o IL-22 a través del receptor huIL-22RA. Estos resultados demostraron además que los anticuerpos contra IL-22RA pudieron de hecho antagonizar la actividad de los ligandos pro-inflamatorios IL-20 e IL-22 a bajas concentraciones. Estos resultados proporcionaron evidencia adicional de que bloquear efectivamente la actividad de IL-22RA al unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-20 o IL-22 (individualmente o juntos), por ejemplo mediante la neutralización del anticuerpo monoclonal contra IL-22RA de la presente invención, podría ser adecuado para reducir los efectos de IL-20 e IL-22 (solos o juntos) in vivo y podría reducir la inflamación inducida por IL-20 y/o IL-22, tal como aquella observada en efectos en piel inducidos por IL-20, así como efectos en piel inducidos por IL-22, por ejemplo en psoriasis, IBD, colitis u otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-20 y/o IL-22, incluyendo IBD, artritis, asma, artritis psoriásica, colitis, condiciones dérmicas inflamatorias y dermatitis atópica. Ejemplo 29 Generación de células P815/hUL-22RA e inmunización de ratones A. Generación de células P815/hIL-22RA e inyección en ratones para la generación de anticuerpos anti-hIL-22RA Células WT P815 (ATCC No. TIB-64) fueron transfectados con un vector plásmidico que contenia la secuencia de ADNc de hIL-22RA (por ejemplo, SEQ ID NO:l) y un marcador resistente a puromicina, usando Reactivo Fugene de acuerdo con el protocolo del fabricante (Roche, Indianápolis, IN) . Las células fueron puestas bajo selección con puromicina 48 horas después de la transfección. Los transfectantes resistentes a puromicina fueron clonados por dilución limitativa, y se tamizaron para su nivel de expresión de superficie de células hIL-22RA mediante citometria de flujo, usando IL-22 humana biotinilada (huIL-22-biotina) . Brevemente, las células fueron incubadas con 5 ug/ml de huIL-22-biotina durante 30 minutos sobre hielo y luego se lavaron. La unión de huIL-22-biotina a las células fue después detectada usando estreptavidina marcada con PE a 1:500. Las células fueron analizadas en un citómetro de flujo Facscan usando software Cellquest (Becton Dickinson, San José, CA) . El clon de células P815/IL-22RA seleccionado fue cultivado y luego cosechado para inyección. Se colectaron células, se lavaron tres veces en PBS, se contaron, resuspendieron a lxlO8 células por mililitro, y se irradiaron con 10,000 rads . La suspensión de células fue transferida después a una jeringa de 1 ml, e inyectada por la ruta intraperitoneal en ratones DBA/2. Los ratones fueron reforzados de una manera idéntica tres semanas más tarde y los sueros se tamizaron para unión a linea de células transfectantes hlL-22RA. Brevemente, los sueros se diluyeron 1:100 en regulador de pH FACS (HBSS, 2% de BSA, 0.2% de NaN3) , y luego se incubaron con células de riñon humano 293 bloqueadas con Fc que sobre-expresaban hIL-22RA. La unión de anticuerpos anti-IL-22RA a las células se detectó después usando IgG de cabra-anti-ratón conjugada a fluoresceina diluida a 1:200 (Southern Biotech, Birmingham, AL) . Las células fueron analizadas como se describió previamente. Los ratones fueron reforzados de nuevo un total de tres veces más y los sueros fueron tamizados como se describió. Se seleccionaron dos ratones para fusión a hibridoma, usando métodos estándares en la técnica para la generación de anticuerpos monoclonales (ejemplo 25), con base en el nivel de su unión de suero a los transfectantes hIL-22RA. El método anterior se usa también para la generación de células P815 que expresan receptores IL-22RA heterodiméricos, tales como IL-22RA/CRF2-4 (células P815/IL-22RA/CRF2-4) , IL-22RA/pDIRSl (células P815/IL-22RA/pDIRSl ) o IL-22RA/CRF2-4/pDIRSl (células P815/IL-22RA/CRF2-4 /pDIRSl) por ejemplo para inmunizar ratones para la generación de anticuerpos monoclonales contra IL-22RA y receptores heterodiméricos que comprenden IL-22RA. Ejemplo 30 Generación de anticuerpos monoclonales IL-22RA anti-humanos (IL-22RA) A. Inmunización para la generación de anticuerpos anti-IL-22RA: (1) Uso de IL-22RA-muFc soluble ratones con gen suprimido IL-22RA de seis a doce semanas de edad (ejemplo 26) fueron inmunizados mediante inyección intraperitoneal con 25-50 ug de proteina IL-22RA-muFc humana soluble (ejemplo 23) mezclada 1:1 (v:v) con adyuvante Ribi (Sigma) en un programa bisemanal. Siete a diez dias después de la tercera inmunización, se tomaron muestras de sangre mediante sangrado retroorbital, el suero se cosechó y se evaluó para su capacidad en inhibir la unión de IL-22RA o tanto de IL-20 como IL-22 a IL-22RA en ensayos de neutralización (por ejemplo, descritos en la presente) y para teñir células 293 transfectadas con IL-22RA versus no transfectadas en un ensayo de tinción FACS. Los ratones continuaron siendo inmunizados y muestras de sangre se tomaron y se evaluaron como se describió arriba hasta que los títulos de neutralización alcanzaran una planicie. En ese momento, los ratones con los títulos de neutralización más altos fueron inyectados intravascularmente con 25-50 ug de proteina IL-22RA-Fc soluble en PBS. Tres dias más tarde, el bazo y nodulos linfáticos de estos ratones fueron cosechados y usados para la generación de hibridomas, por ejemplo usando células de mieloma de ratón ( P3-X63-Ag8.653.3.12.11) u otras líneas de células adecuadas en la técnica, usando métodos estándares conocidos en la técnica (por ejemplo, véase Kearney, J.F. et al . , J. Immunol . 123: 1548-50, 1979 y Lañe, R.D. J immunol Methods 81:223-8, 1985). (2) Uso de transfectantes P815 que expresan al receptor IL-22RA ratones DBA/2 hembra de seis a diez semanas son inmunizados mediante inyección intraperitoneal de 1 x 105 células P815 vivas y transfectadas, por ejemplo células P815/IL-22RA, células P815/IL-22RA/CRF2-4 , P815/IL-22RA/pDIRSl o células P815/IL-22RA/CRF2-4/pDIRSl (ejemplo 24) (por ejemplo, 0.5 ml a una densidad de células de 2 x 105 células/ml) . Antes de la inyección, las células se mantienen en la fase de crecimiento exponencial. Para inyección las células son cosechadas, lavadas tres veces con PBS y luego resuspendidas en PBS hasta una densidad de 2 x 105 células/ml. En este modelo, los ratones desarrollan un tumor de ascites dentro de 2-3 semanas y progresa hasta la muerte a las 4-6 semanas a menos que se haya montado una respuesta inmune al antigeno objetivo transfectado. A las tres semanas los ratones sin hinchazón abdominal aparente (indicativa de ascites) son re-inmunizados como arriba a intervalos de 2-3 semanas. Siete a diez dias después de la segunda inmunización, se toman muestras de sangre mediante sangrado retroorbital, el suero se cosecha y se evalúa para su capacidad para inhibir la unión de IL-22 o tanto de IL-20 como de IL-22 a IL-22RA en ensayos de neutralización (por ejemplo, descritos en la presente) y para teñir células 293 transfectadas con IL-22RA versus no transfectadas en un ensayo de tinción FACS. Los ratones continuaron siendo inmunizados y muestras de sangre se tomaron y se evaluaron como se describió arriba hasta que los títulos de neutralización alcanzaran una planicie. En ese momento, los ratones con los títulos de neutralización más altos fueron inyectados intravascularmente con 1 x 505 células P815 viva y transfectadas. Cuatro dias más tarde, el bazo y nodulos linfáticos de estos ratones fueron cosechados y usados para la generación de hibridomas, por ejemplo usando células de mieloma de ratón ( P3-X63-Ag8.653.3.12.11 ) u otras lineas de células adecuadas en la técnica, usando métodos estándares conocidos en la técnica (por ejemplo, véase Kearney, J.F. et al . , citado arriba y Lañe, R.D., citado arriba). Una alternativa para el esquema de inmunización anterior con células P815 vivas y transfectadas incluye la inyección intraperitoneal de 1-5 x 105 células transfectadas e irradiadas cada 2-3 semanas. En este enfoque, ningún animal desarrolla y muere de ascites. En lugar de ello, los animales se monitorean para una respuesta inmune neutralizante a IL-22RA en su suero como se delineó arriba, iniciando con un sangrado después de la segunda inmunización. Una vez que los títulos de neutralización han alcanzado un nivel máximo, a los ratones con los títulos más altos se les da una inyección intraperitoneal y de pre-infusión de 5 x 106 células irradiadas y cuatro dias más tarde, el bazo y nodulos linfáticos de estos ratones son cosechados y usados para generación de hibridomas, por ejemplo usando células de mieloma de ratón ( P3-X63-Ag8.653.3.12.11 ) u otras lineas de células adecuadas en la técnica, usando métodos estándares conocidos en la técnica (por ejemplo, véase Kearney, J.F. et al . , citado arriba y Lañe, R.D. citado arriba). B . Tamizado de las fusiones a hibridoma para anticuerpos que se unen a IL-22RA e inhiben la unión de IL-22 a IL-22RA: Se llevaron a cabo dos tamices primarios diferentes en los sobrenadantes de hibridomas 8-10 dias después de la infusión. Para el primer ensayo, los anticuerpos en sobrenadantes fueron probados para su capacidad de unirse a proteina IL-22RA-muFc humana soluble unida en placa mediante ELISA usando reactivos de segunda etapa de cadena ligera anti-lambda y kappa anti-ratón de cabra conjugados a HRP para identificar anticuerpos de ratón unidos. Para demostrar la especificidad para la porción IL-22RA de la proteina IL-22RA-muFc, sobrenadantes positivos en el ensayo inicial fueron evaluados en una proteina irrelevante fusionada a la misma región Fc de murino (mG2a) . Los anticuerpos en esos sobrenadantes que se unieron a IL-22RA-muFc y no la proteina de fusión que contenia muFc irrelevante fueron considerados como siendo específicos para IL-22RA. Para el segundo ensayo, anticuerpos en todos los sobrenadantes de hibridomas fueron evaluados mediante ELISA para su capacidad para inhibir la unión de IL-22 humana biotinilada a IL-22RA-muFc unido a placa. Todos los sobrenadantes que contenían anticuerpos que se unieron específicamente a IL-22RA, ya sea que inhibieran la unión de IL-22 a IL-22RA p no en el ensayo de ELISA, fueron probados subsecuentemente para su capacidad para inhibir la unión (yefecto pro-proliferativo concomitante) de IL-20 o IL-22 a células baf3 transfectadas con IL-22RA/IL-20RB e IL-22RA/CRF2-4. Todos los sobrenadantes que fueron positivos a neutralización ya sea en el ensayo de inhibición de IL-22 o ensayos de inhibición tanto de IL-20 como de IL-22 fueron evaluados subsecuentemente para su capacidad para teñir células Baf3 transfectadas con IL-22RA versus no transfectadas mediante análisis FACS. Este análisis fue diseñado para confirmar que la inhibición de la unión de IL-22 a IL-22RA/CRF2-4 , o la unión de IL-20 a IL-22RA/IL-20RB, fue de hecho debido a un anticuerpo que se une específicamente al receptor de IL-22RA. Además, ya que el análisis FACS se llevó a cabo con un reactivo de segunda etapa de anti-IgG, resultados positivos para FACS especifica indican que el anticuerpo neutralizante fue probablemente el de la clase IgG. Por estos medios, se identificó un pocilio maestro que unió IL-22RA en el ELISA unido a placa, inhibió la unión de IL-22 a IL-22RA en el ensayo de inhibición a base de ELISA, bloqueó la interacción de IL-20 e IL-22 con células Baf3 transfectadas con IL-22RA/IL-20RB e IL-22RA/CRF2-4 (ejemplo 28), respectivamente, y fue fuertemente positivo para la tinción tanto de células Baf3 transfectadas con IL-22RA/IL-20RB como con IL-22RA/CRF2-4 con un reactivo de segunda etapa de IgG anti-ratón. D. Clonación de hibridomas productores de anticuerpo especifico anti-IL-22RA: Un hibridoma que producía un anticuerpo monoclonal anti-IL-22RA que neutralizó en forma cruzada la unión de IL-20 e IL-22 respectivamente a células BaF3 transfectadas adecuadamente fue clonado por un enfoque de dilución de baja densidad estándar (menos de una célula por pocilio) . Aproximadamente 5-7 dias después de la colocación en placas, los clones fueron tamizados por ELISA en IL-22RA-muFc humana unida a placa seguidos por una prueba adicional de células positivas mediante ELISA en proteina de fusión que contenia muFc irrelevante como se describió arriba. Los clones seleccionados, cuyos sobrenadantes se unieron a IL-22RA-muFc y no a la proteina de fusión que contenia muFc irrelevante, fueron confirmados más para actividad de anticuerpo especifica al repetir ambos ensayos de neutralización asi como el análisis FACS. Todos los clones positivos a anticuerpo IL-22RA seleccionados fueron clonados un minimo de dos veces para ayudar a asegurar la clonalidad y para evaluar la estabilidad de producción de anticuerpos. Rondas adicionales de clonación se llevaron a cabo y se tamizaron como se describió hasta que, preferiblemente, al menos 95% de los clones resultantes fueran positivos para la producción de anticuerpos anti-IL-22RA neutralizantes. E. Caracterización bioquímica de la molécula reconocida por anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA: La confirmación bioquímica de que la molécula objetivo, IL-22RA, reconocida por los anticuerpos anti-IL- 22RA putativos es de hecho IL-22RA, se llevó a cabo mediante inmunoprecipitación estándar seguida por análisis SDS-PAGE o procedimientos de western blotting, ambos empleando preparaciones de membrana solubles a partir de células Baf3 transfectadas con IL-22RA versus no transfectadas. Más aún, preparaciones de membrana solubles de lineas de células no transfectadas que expresan IL-22RA se usan y muestran que los anticuerpos monoclonales reconocen la cadena receptora nativa asi como la transfectada. Como alternativa, los anticuerpos monoclonales se prueban para su capacidad para inmunoprecipitar o western blot específicamente la proteina IL-22RA-muFc soluble. Ejemplo 31 Neutralización de huIL-22RA por suero de ratones inyectados con células P815 transfectadas con huL-22RA Usando el ensayo de neutralización a base de células descrito en el ejemplo 28, suero de ratones inyectados con células P815 transfectadas con huIL-22RA viva (ejemplo 30. A.2) fue añadido como una dilución en serie a 1%, 0.5%, 0.25%, 0.13%, 0.06%, 0.03%, 0.02% y 0%. Las placas de ensayo fueron incubadas a 37 °C, 5% de C0 durante cuatro dias tiempo en el cual Azul Alamar (Accumed, Chicago, IL) se añadió a 20 µl/pocillo. Las placas fueron incubadas de nuevo a 37°C, 5% de C02 durante 16 horas. Los resultados mostraron que suero de cuatro de los animales pudieron neutralizar la señalización tanto de huIL-22 como de huIL-20 a través de huIL-22RA. A la concentración de 1%, suero de seis animales (7125, 7127, 7128, 7118, 7124 y 7117) neutralizó entre 50% y 80% de la proliferación inducida por huIL-22, con la inhibición de proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas.

Además, a la concentración de 1%, suero de cuatro animales (7125, 7127, 7118 y 7117) neutralizó entre 40% y 70% de la proliferación inducida por huIL20, con la inhibición de la proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas. Estos resultados demostraron además que los anticuerpos contra IL-22RA podrían de hecho antagonizar la actividad de los ligandos pro-inflamatorios, IL-20 e IL-22 a bajas concentraciones. Estos resultados proporcionaron evidencia adicional de que bloquear efectivamente la actividad de IL-22RA al unirse, bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL-20 o IL-22 (individualmente o juntos), por ejemplo mediante la neutralización del anticuerpo monoclonal contra IL-22RA de la presente invención, podria ser adecuado para reducir los efectos de IL-20 e IL-22 (solos o juntos) in vivo y podria reducir la inflamación inducida por IL-20 y/o IL-22, tal como aquella observada en efectos en piel inducidos por IL-20, asi como efectos en piel inducidos por IL-22, por ejemplo en psoriasis, IBD, colitis u otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-20 y/o IL-22, incluyendo IBD, artritis, asma, artritis psoriásica, colitis, condiciones dérmicas inflamatorias y dermatitis atópica. Ejemplo 32 Generación de ratones con gen suprimido IL-22RA A. Generación de ratones que portan modificaciones genéticas 1. Generación de ratones transgénicos que expresan IL-20 de murino con un brillo neonato a) Construcción para expresar IL-20 de murino a partir del promotor K14 Para poder investigar la función biológica de IL-20 in vivo, se hizo una construcción transgénica, en la cual IL-20 de murino fue conducida por el promotor K14 humano (véase también, ejemplo 21). Se diseñaron oligonucleótidos para generar un fragmento de PCR que contenia una secuencia Kozak de consenso y la región de codificación de IL-20 de murino. Estos oligonucleótidos fueron diseñados con un sitio Fscl en el extremo 5' y un sitio AscI en el extremo 3' para facilitar su clonación en pRSK14, un vector transgénico estándar, que contenia un promotor especifico de keratinocitos y células epiteliales humanas. Se llevaron a cabo reacciones de PCR con aproximadamente 200 mg de plantilla de IL-20 de murino (SEQ ID NO: 33) y se diseñaron oligonucleótidos para amplificar la longitud completa de la IL-20 (SEQ ID NO:34). Las condiciones de reacción de PCR fueron determinadas usando métodos conocidos en la técnica. Los productos de PCR fueron separados mediante electroforesis en gel de agarosa y purificados usando el kit de extracción en gel QiaQuick™ (Qiagen) . El fragmento de ADN de tamaño adecuado y aislado fue digerido con Fsel y AscI (Boerihinger-Mannheim) , se precipitó con etanol y se ligó en pRSK14, digerido previamente con Fsel y Ascl. El plásmido pRSK14, diseñado para expresar un gen de interés en queratinocitos y células epiteliales en ratones, contiene un cásete de expresión flanqueado por aproximadamente 3 Kb de promotor K14 humano especifico de queratina. Alrededor de un microlitro de reacción de ligación fue electroporado en células competentes DH10B ElectroMax™ (GIBCO BRL, Gaithersburg, MD) de acuerdo con la dirección del fabricante y se plaquearon sobre placas LB que contenían 100 µg/ml de ampicilina, y se incubaron durante la noche. Las colonias se recogieron y cultivaron en medio LB que contenía 100 µg/ml de ampicilina. Miniprep DNA fue preparada de las colonias recogidas y tamizado para el inserto IL-20 de murino mediante Fscl y AscI de digestión de restricción, combinada y subsecuentemente sometida a electroforesis en gel de agarosa. La construcción TG con insertos de ADNc correctos se confirmó mediante análisis de secuencia. Maxipreps de la pRSK14-IL-20 de murino correcta fueron llevadas a cabo. b) Generación y caracterización de ratones transgénicos K14 IL-20 Un fragmento Notl de aproximadamente 4 Kb de largo fue asilado del vector transgénico (TG) que contenia secuencias de flanqueo 5' y 3' del promotor K14 especifico de queratina, IL-20 de ratón (SEQ ID NO: 33); polipéptido mostrado en SEQ ID NO:34), el intrón Gormon, ADNc de IL-20 y las secuencias de señal polyA de hormona de crecimiento humana. Se usó para microinyección en oocitos de murino B6C3fl fertilizados (Taconic, Germantown, NY) . La microinyección y producción de ratones transgénicos se llevaron a cabo como se describe en Hogan, B et al . , Manipula tíng the Mouse Embryo, 2da ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY, 1994. Se usó una reacción de RT-PCR TaqMan™ para cuantificar la expresión de ARN TG usando cebadores de PCR específicos para la porción de señal polyA de hormona de crecimiento humana del transgen.

Todas las construcciones TG que expresan IL-20 exhiben un alto Índice de mortalidad prenatal, y las crias TG que nacieron exhiben típicamente un fenotipo "brilloso" . La apariencia brillosa de las crias neonatas pareció estar asociada con un endurecimiento de la piel, como si se estuvieran secando, dando como resultado una reducción de cuidado adecuado. Sus movimientos se volvieron rígidos en general. Histopatológicamente, las crias brillosas tienen una epidermis engrosada y la capa de queratina estaba compactada . La mayoria de estas crias iniciales brillosas murieron dentro de los primeros cinco dias, y las crias supervivientes y destetadas en general no expresaban el transgen (por análisis de transcripto) , o eran quiméricas (por baja transmisión del transgen a la progenie) . Una linea que expresaba IL-20 de murino , conducida por el promotor K14 , fue establecida . El nivel de expresión en la piel y el timo fue baj o, y todos los neonatos nacieron con un fenotipo brilloso . En general esta línea tuvo 20% de progenie TG , indicando que 50-60% de las crias transgénicas mueren in útero . ( En una copulación hemicigótica 50 % de la progenie debe ser TG) . 2 . Generación de ratones con expresión de IL- 22RA eliminada : ratones con gen suprimido IL-22RA a ) . Generación de construcción con gen suprimido ( KO) para IL-22RA de murino Para estudiar más la función biológica de IL-22RA in vivo, se creó una cepa de ratón con gen suprimido (KO) para eliminar la expresión de IL-22RA. Primero, sondas de ADNc de IL-22RA de ratón se usaron para tamizar una biblioteca BAC genómica 129/SvJ de ratón. Clones que contenían locus genómico de IL-22RA fueron identificados y caracterizados. El polinucleótido de IL-22RA de murino se muestra en SEQ ID NO: 41 y el polipéptido en SEQ ID NO: 42. Para crear una construcción con gen suprimido para la eliminación de IL-22RA, se hizo un vector con gen suprimido usando la técnica de clonación ET (Zhang et al . , 1998. A new logic for DNA engineering using recombination in E. coli. Nat. Genet. Vol. 20:123-8). Brevemente, el vector KO contiene un brazo 5' de 1.8 kb (brazo corto), un marcador seleccionable IRES-LacZ/MClneo y un brazo 3' de 10 Kb (brazo largo) del gen IL-22RA. En el vector KO, los exones 2, 3 y 4 así como los intrones 2 y 3 de la secuencia genómica de IL-22RA fueron reemplazados por el marcador seleccionable IRES-LacZ/MClneo para que una supresión de aproximadamente 4.4 Kb se generara mediante recombinación homologa en células ES. Después de la linearización del vector KO por la enzima de restricción Pmel, fue electroporado en células 129/SvJ ES. La selección de eventos de recombinación homologa, asi como la identificación de clones ES recombinantes se llevaron a cabo como se describe en Robertson, E.J., et al . , Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practial Approach, 2a ed., IRL Press Limited, Oxford, 1987. b) . Creación y análisis de ratones con expresión de IL-22RA eliminada Clones PE positivos, en los cuales ocurre la supresión de los exones 2-4 e intrones 2-3 del locus genómico, fueron expandidos. Fueron inyectados en blastocistos de ratones C57B1/6J . Después de una breve reexpansión de los blastocistos inyectados, fueron introducidos en madres adoptivas pseudo-preñadas para generar quimeras. La inyección de blastocistos, crianza de las quimeras y subsecuente transmisión de linea germinal de IL-22RA mutada se llevaron a cabo como se describe en Robertson, E.J., et al . , Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practial Approach, 2a ed., IRL Press Limited, Oxford, 1987. Los ratones mutantes KO fueron identificados mediante estrategia de genotipificación por PCR. Tres cebadores de PCR, ZC22901 (SEQ ID NO:35), ZC45039 (SEQ ID NO:36), ZC38573 (SEQ ID NO:37) se usaron en una reacción de PCR multiplex para detectar alelo tipo silvestre y alelo mutante. El alelo tipo silvestre (WT) produce un fragmento de ADN de 229 pb de largo, mientras que el alelo mutante genera un fragmento de ADN de 371 pb de largo. El apareo de ratones hemicigóticos produce una relación normal de progenie homocigótica (HOM) , heterocigótica (Het) y tipo silvestre (WT) , asi como una proporción de sexos normal. La inspección de los ratones a través de un PhysioScreen (colectando peso corporal, peso tisular, conteo hemático completo (CBC) , química clínica, observación general e histopatologia) no reveló diferencias aparentes entre animales HOM, Het y WT . B . IL-22RA fue necesario para SAA inducido por IL-22RA: ELISA de SAA que muestra que la expresión de SAA inducida por IL-22RA estuvo ausente en ratones con gen suprimido IL-22RA: Para evaluar si IL-22RA era necesaria para la inducción de SAA en ratones inyectados con IL-22, IL-22RA, ratones KO fueron inyectados con 5 ug de IL-22 y sangrados durante 16 horas más tarde. Un ELISA para determinar los niveles de SAA en las muestras de suero se llevó a cabo usando el kit de inmunoensayo de SAA en ratón (BioSource International, California) siguiendo las direcciones del fabricante, con el suero diluido 1:1000. Cuatro de los cinco ratones WT mostraron niveles elevados de SAA en respuesta a la inyección de IL-22, mientras que cuatro de cinco ratones HOM IL-22RA KO mostraron niveles básales de SAA. Ambos ratones Het IL-22RA KO probados tuvieron niveles elevados de SAA, pero menores que los niveles de SAA en los ratones WT elevados. Esto indica que IL-22RA fue necesaria para la inducción de SAA por IL-22.

Estos resultados proporcionaron evidencia de que bloquear efectivamente la actividad de IL-22RA, por ejemplo por medio de una supresión génica IL-22RA o similarmente por medio de un anticuerpo monoclonal neutralizante contra IL-22RA de la presente invención, podria de manera similar reducir la inflamación inducida por IL-22, por ejemplo en psoriasis, IBD, colitis, endotoxemia u otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-22. C . IL-22RA fue necesaria para el engrosamiento epitelial inducido por IL-22: La administración de proteína pura IL-22 mediante mini-bomba osmótica implantada subcutánea no causa engrosamiento de la epidermis en ratones IL-22R KO Para evaluar si IL-22RA era necesaria para el engrosamiento epitelial inducido por IL-22, se administró IL-22 subcutáneamente a ratones KO IL-22RA HOM y WT mediante mini-bombas osmóticas. Las bombas suministraron IL-22 a una velocidad de 18.4 µL al dia durante siete dias. Cuatro ratones IL-22RA KO HOM y seis WT recibieron proteina IL-22, mientras que tres HOM y uno WT recibieron PBS. Muestras de suero de ratones tratados con IL-22 fueron probadas en ensayo de proliferación de BaF3 para confirmar la presencia de IL-22. Las células BaF3 transfectadas con IL-22RA y CRF2-4 requieren la presencia ya sea de IL-22 o IL3 de murino para proliferar. Estas células fueron centrifugadas y lavadas en el medio completo, sin mlL-3 (medio RPMI (JRH Bioscience Inc., Lenexa, KS) suplementado con 10% de suero de becerro fetal inactivado con calor, 2 mM de L-glutaMax.1™ (Gibco BRL), 1 mM de piruvato de sodio (Gibco BRL) y antibióticos PSN (Gibco BRL) ) (en adelante referido como "medio libre de mIL-3") . Las células fueron centrifugadas y lavadas tres veces para asegurar la remoción de mIL-3. Las células fueron después contadas en un hemacitómetro y plaqueadas en un formato de 96 pocilios a 5000 células por pocilio en un volumen final de 200 ul por pocilio usando el medio libre de mIL-3. Suero de ratón estuvo presente en los pocilios a 1%, 0.5%, 0.25% o 0.125%. Las placas de ensayo fueron incubadas a 37 °C, 5% de C02 durante tres dias tiempo en el cual Azul Alamar (Accumed, Chicago, IL) fue añadido a 20 µl/pocillo. Las placas fueron incubadas de nuevo a 37 °C, 5% de C02 durante 24 horas. El Azul Alamar da una lectura fluorométrica a base del número de células vivas, y es entonces una medición directa de la proliferación celular en comparación con un control negativo. Las placas fueron incubadas de nuevo a 37 °C, 5% de C02 durante 24 horas. Las placas fueron leídas en el Wallac Victor 2 1420 Multilabel Counter (Wallac, Turku, Finlandia) a longitudes de onda de 530 (Excitación) y 590 (Emisión) . Los resultados mostraron que ninguno de los animales inyectados con PBS tuvo actividad de IL-22, mientras 1 de 1 animales Het, 2 de 4 animales HOM y 3 de 6 animales WT tuvieron actividad de IL-22 detectable. La proliferación inducida por este suero fue bloqueada por la presencia de 1 ug/ml de IL-22BP, probando que fue especifica para IL-22. Muestras de piel de ratones con gen suprimido (KO) IL-22RA HOM y Het y ratones de control WT tratados con IL-22 y no tratados fueron fijadas por inmersión en 10% de formalina de pH regulado. Los tejidos fueron recortados e incrustados en parafina, procesados rutinariamente, seccionados a 5 µm (microtomo Jung 2065 Supercut, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania) y teñidos con H y E. Los tejidos teñidos fueron evaluados bajo un microscopio de luz (Nikon Eclipse E600, Nikon Inc., Melville, NY) por un patólogo veterinario certificado por la mesa ACVP. Cada muestra de piel fue evaluada en una escala de 0 (ninguna) a 4 (severa) para severidad de inflamación en el tejido que bordeaba el sitio de implantación de la bomba en la hipodermis, en una escala de 0 (ninguna) a 3 (difusa) para grado de engrosamiento epidérmico (acantosis), y el número de capas epiteliales fue contado en la parte más gruesa de la epidermis. No se encontraron diferencias entre los ratones HOM y los ratones WT a lo que se les habia dado PBS. Los resultados de estos dos grupos fueron agrupados en un grupo de PBS. La desviación media y estándar se determinaron para cada grupo de tratamiento y se muestran en la tabla 14 abajo.

Tabla 14 Los resultados mostraron una tendencia hacia grosor epitelial y acantosis incrementadas en ratones WT tratados con IL-22 y menos grosor epitelial y acantosis en ratones IL- 22RA HOM cuando fueron expuestos a IL-22 . Estos resultados proporcionan evidencia de que bloquear efectivamente la actividad de IL-22RA, por ejemplo por medio de una supresión génica IL-22RA o similarmente por medio de un anticuerpo monoclonal neutralizante contra IL-22RA de la presente invención, podria de manera similar reducir la inflamación inducida por IL-22, por ejemplo en psoriasis, IBD, colitis, endotoxemia u otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-22. D . IL-22RA fue necesaria para el brillo inducido por IL-20 de piel de crías neonatas : La retrocruza de ratones transgénicos que expresan IL-20 de murino con ratones IL-22RA KO produce crías que no brillan Para evaluar si IL-22RA era necesaria para el brillo inducido por IL-20 de crías TG neonatas , el transgen K14 muIL-20 fue cruzado en la linea IL-22RA KO, y los neonatos fueron observados para el fenotipo brilloso. Sesenta y nueve crias han nacido con una relación de genotipo Mendeliana. Todos los TG sobre un fondo Het KO fueron brillosos, mientras que ninguno de los no TG, ni los TG en el fondo HOM KO fueron brillosos. Se llevó a cabo un ensayo de proliferación con azul alamar usando células BaF3 que expresaban IL-22RA e IL-20RB para evaluar la presencia de IL-20 en el suero de ratón. Estas células proliferarán en respuesta ya sea a IL-20 o IL3 de murino. El procedimiento fue el mismo que el descrito en la sección C arriba. Los resultados del ensayo demostraron que todos los ratones TG tuvieron actividad de IL-20 comparable, y al mismo nivel que IL-20 TG en el fondo de C57BL/6N. La ausencia de cualquier fenotipo de neonato brilloso indicó que el fenotipo de neonato brilloso era dependiente de la presencia de IL-22RA. El ensayo de proliferación mostró que todos los ratones tenian actividad IL-20 comparable, y al mismo nivel que IL-20 TG en el fondo de C57BL/6N. La ausencia de cualquier fenotipo de neonato brilloso indicó que el fenotipo de neonato brilloso era dependiente de la presencia de IL-22RA. El dia tres posparto, las crías de carnadas que contenían K14 muIL-20 TG en el fondo de IL-22RA KO fueron humanamente eutanizadas y el cuerpo completo fue fijado por inmersión en formalina regulada en pH al 10%. Los tejidos fijos fueron recortados cortes transversales del tórax y abdomen, incrustados en parafina, procesados rutinariamente, seccionados a 5 um (microtomo Jung 2065 Supercut, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania) y teñidos con H y E. Los tejidos teñidos fueron evaluados bajo un microscopio de luz (Nikon Eclipse E600, Nikon Inc., Melville, NY) en forma ciega por un patólogo veterinario certificado por la mesa ACVP. Las anormalidades en el tejido fueron anotadas y el número de capas epiteliales en la epidermis del tórax anterior dorsal fue contado. Los tejidos de tres ratones IL-20 TG sobre fondo HOM IL-22RA KO (IL-20 TG/IL-22RA KO HOM) y tres no TG sobre fondo IL-22RA HOM KO (no TG/IL-22RA KO HOM) fueron examinados microscópicamente y se encontró que no contenían anormalidades. También se examinaron los tejidos de dos ratones IL-20 TG sobre fondo Het IL-22RA KO (IL-20 TG/IL-22RA KO Het) . Los números de capas epiteliales en la epidermis fueron similares en todos los animales. Sin embargo, la epidermis de los dos ratones IL-20TG/IL-22RA KO Het fue hipereosinofílica en comparación con los demás animales y exhibió pérdida de granularidad en el estrato granuloso. Ninguna otra anormalidad fue notada en la piel u otros tejidos de ninguno de los ratones. Estos resultados proporcionan evidencia de que bloquear efectivamente la actividad de IL-22RA, por ejemplo por medio de una supresión génica IL-22RA o similarmente por medio de un anticuerpo monoclonal neutralizante contra IL-22RA de la presente invención, podria de manera similar reducir los efectos en la piel inducidos por IL-20, así como los efectos en la piel inducidos por IL-22, por ejemplo en psoriasis, IBD, colitis u otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-20 y/o IL-22, incluyendo IBD, artritis, asma, artritis psoriásica, colitis, condiciones dérmicas inflamatorias y dermatitis atópica. Ejemplo 33 Análisis de imágenes histomorfométricas de ratones con gen suprimido IL-22RA Una linea de ratones transgénicos (TG) kl4 IL-20 ha sido establecida, y los neonatos TG exhiben un fenotipo brilloso. El transgen es expresado por el promotor kl4, el cual dirige la expresión a las células productoras de queratina en la piel. También se ha establecido una linea de ratones con gen suprimido (KO) IL-22RA, y no se han observado cambios significativos en los ratones no atacados. Las dos líneas fueron cruzadas y se recogieron los neonatos que tenian los siguientes cuatro genotipos diferentes: (1) TG/-HOM: que expresaba el transgen kl4 IL-20 m en un fondo que no expresaba IL-22RA; (2) TG/-Het: que expresaba el transgen kl4 IL-20 m en un fondo que expresaba algo de IL-22RA de una copia del gen IL-22RA; (3) WT/HOM: que no expresaba el transgen kl4 IL-20 m en un fondo que no expresaba IL-22RA y (4) WT/-Het: que no expresaba el transgen kl4 IL-20 m en un fondo que expresaba algo de IL-22RA de una copia del gen IL-22RA. Treinta y cuatro crías neonatas de estos diferentes genotipos fueron sometidas a eutanasia el día 3, aproximadamente 48 horas posparto (tabla 15): Tabla 15 TG=transgénico; WT=tipo silvestre; HOM=homocigótico; Het=heterocigótico y n=número de crias. Cada cria fue cortada transversalmente en tres secciones (tórax craneal, tórax caudal y abdomen) a través del cuerpo y la cabeza fue descartada. Los especímenes de tejido, 4.0-5.0 mm de grosor, fueron fijados en formalina regulada en pH neutra al 10%, procesados en bloques de parafina y teñidos con hematoxilina y eosina (H y E) para examen histológico de rutina y análisis de imágenes histomorfométrico . La epidermis del área dorsal de la médula espinal en cada muestra de tejido se seleccionó para análisis de imágenes histomorfométrico usando un microscopio Olympus BH-2, una videocámara (Dage-MTI, Michigan City, IN) y software BioQuant True Color Windows 98 (R&M Biometrics, Inc.

Nashville, TN 37209) con el siguiente ajuste: Parámetro : ampl. 10X, descentrado Z 0; Disposi ción : longitud (µm) ; Medida : modo manual y aditivo. El grosor (µm) de la epidermis y estrato córneo o capa cornificada de cada muestra de piel fueron medidos individualmente 10 veces, con un intervalo de aproximadamente 0.1 mm entre cada medición, en cada campo microscópico de lOx y el valor promedio, SD y SEM fueron obtenidos por cálculo en Excel. Todas las secciones fueron clasificadas aleatoriamente y medidas en una forma ciega. Después de la medición, las secciones fueron liberadas de ceguera y los resultados igualados a grupos de tratamiento. Los resultados finales por grupo de tratamiento se clasificaron como sigue: 1. Grosor epidérmico promedio (µm) en tórax craneal, tórax caudal y abdomen, y luego sub-clasificados como (a) Grosor epidérmico promedio en tórax craneal; (b) Grosor epidérmico promedio en tórax caudal y (c) Grosor epidérmico promedio en abdomen. 2. Grosor promedio de estrato córneo (µm) en tórax craneal, tórax caudal y abdomen, y luego sub-clasificados como (a) Grosor promedio de estrato córneo en tórax craneal; (b) Grosor promedio de estrato córneo en tórax caudal y (c) Grosor promedio de estrato córneo en abdomen. 3. Grosor promedio de epidermis más estrato córneo en tórax craneal, tórax caudal y abdomen. Los datos resultantes fueron analizados usando software GraphPad InStat (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA 92121). Se aplicó el análisis de variación de una via (ANOVA) para examinar el significado estadístico de diferencias en valores promedio del grupo 1 al grupo 4. Se usó la Prueba de Comparaciones Múltiples de Tukey-Kramer para la determinación de las diferencias estadísticas en valores promedio entre dos grupos (*P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001; ****p<0.0001 ) . Las observaciones de P<0.05 se consideraron significativas. (1) Resultados histomorfométricos (a) Grosor epidérmico promedio (µm) en tórax craneal, tórax caudal y abdomen El grosor epidérmico se incrementó significativamente en crias transgénicas IL-20 que carecían de una copia del gen IL-22RA (TG/-Het) versus las crias transgénicas IL-20 sin expresión de IL-22RA (TG/-HOM, P=0.001***) y contra los compañeros de carnada (WT/HOM, P=0.00H** y (WT/Het, P=0.001***), respectivamente (tabla 16) . Las crias TG/-Het mostraron grosor incrementado de epidermis no queratinizada posiblemente debido a hipertrofia de queratinocitos. Este incremento podría implicar todas las tres capas no queratinizadas (basal, espinosa y granular) pero más comúnmente afectó la capa de células espinosas. La epidermis de la cria TG/-Het se incrementó aproximadamente 25% en grosor y la espinosa se hizo prominente. Mientras que la epidermis de las crias TG/-HOM fue ligeramente más gruesa que la de los controles (WT/HOM y WT/Het) y las estadísticas no indicaron diferencia significativa alguna entre los grupos (P>0.05) El grosor epidérmico en tórax craneal, tórax caudal y abdomen también fueron comparados. La epidermis normalmente delgada del abdomen es más gruesa que el tórax caudal, y el tórax caudal es más grueso que el tórax craneal (tabla 16) . Tabla 16 Los resul tados represen tan valores promedio + SEM. N=número de secciones medidas . El epitelio escamoso de la piel en el tórax craneal de las crias TG/-Het mostró incremento en grosor acompañado por hipertrofia de las células epidérmicas (queratinocitos); sin embargo no hubo alguna diferencia estadística en comparación con otros grupos, el TG/-HOM, WT/HOM y WT/Het (P=0.1565, tabla 17) . Esto parece resultar ya sea del artefacto histológico, por ejemplo, variabilidad de sección en sección, la arquitectura natural de la epidermis o no hubo mucho efecto en la piel delgada en el tórax craneal. Nota: el procedimiento de histología o sección tisular del tórax craneal podria descalificar para análisis histomorfométrico para obtener significación estadística.

Tabla 17 Los resul tados represen tan valores promedio + SEM.

N=número de secciones medidas . El IL-20 (TG/-) con una copia del gen IL-22RA (Het) mostró valor promedio incrementado del grosor epidérmico en comparación con el TG/-HOM (P<0.05*), WT/HOM (P<0.001***) y WT/Het (P<0.01*), respectivamente (tabla 18). Las estadísticas indicaron extremadamente significativas entre los grupos (****P<0.0001) . La epidermis de TG/-Het se incrementó aproximadamente 29% que aquella de WT/Het. El fenotipo de las crias IL-20 (TG/-) con ausencia de IL-22RA (HOM) en parte simuló aquél de las crias que carecían de una copia del gen IL-22RA (Het) asociado con epidermis más gruesa que la de los compañeros de carnada de control (WT/HOM y WT/Het) , sin embargo, no demostró diferencia estadística cuando se comparó con los controles (P>0.05). La epidermis de TG/-HOM se incrementó aproximadamente 14% que aquella de WT/HOM. A diferencia de las crías IL-20 TG/-, las crías deficientes en receptor IL-22Ram (WT/HOM y WT/Het) demostraron grosor epidérmico relativamente más delgado. Notablemente, el resultado histomorfométrico de grosor epidérmico en tórax caudal fue un descubrimiento consistente correlacionado con el grosor epidérmico promedio en el tórax craneal, tórax caudal y abdomen (tabla 15) , lo cual indicó que el procedimiento histológico y sección tisular del tórax caudal llevaron a cabo la mejor calidad para análisis de imágenes histomorfométrico . Tabla 18 TG/-HOM TG/-Het WT/HOM WT/Het (N=10) (N=10) (N=9) (N=5) Media 35.91±1.37 43.79±2.35 30.83±1.86 30.94+2.83 Los resultados representan valores promedio ± SEM. N= número de secciones medidas. Los resultados del grosor epidérmico promedio en abdomen (Tabla 19) fueron similares a los del tórax caudal (Tabla 18) excepto que los TG/-HOM no mostraron diferencias en comparación con los compañeros de camada de control (WT/HOM y WT/Het, P>0.05). Hubieron algunas variaciones en las secciones de tejido y también dos secciones faltaban, es decir, sin que la epidermis cubriera el área dorsal en el grupo TG/-HOM. Tabla 19 TG/-H0M TG/-Het WT/HOM WT/Het (N=8) (N=10) (N=9) (N=5) Media 32.35±1.44 46.33±3.10 35.81±1.90 32.16±2.97 Los resultados representan valores promedio ± SEM.

N= número de secciones medidas . (b) Grosor promedio (µm) de estrato córneo en tórax craneal, tórax caudal y abdomen A pesar del grosor epidérmico incrementado en las crias transgénicas IL-20 (TG/-) en un fondo que no expresaba IL-22RA (HOM) o expresaba sólo una copia del gen (Het) , una reducción predominante del estrato córneo o grosor en capa cornificada se observó en las pieles TG/-HOM y TG/-Het en comparación con las crias de control (WT/HOM y WT/Het) y las estadísticas indicaron extremadamente significativo entre los grupos ( . < 0.0001 * * * * , Tabla 20) . Las crías TG/-Het mostraron aproximadamente 36%, 50% y 49% de cantidades reducidas de queratina sobre la superficie de la epidermis contra las TG/-H0M (P.<0.01**) , WT/HOM (P.<0.001***) y WT/Het ( P. <0.001*** ) , respectivamente. Las crias TG/-HOM mostraron aproximadamente 22% de reducción significativa en el grosor de estrato córneo en comparación con su control (WT/HOM P<0.05*) y sólo 17% de reducción con WT/Het que no reveló significado estadístico ( P< 0.05 ) . El grosor de estrato córneo en las crias de control, WT/HOM y WT/Het fue aproximadamente el mismo. Aparentemente, el grosor de estrato córneo en el tórax caudal es más grueso que en el abdomen y el abdomen es más grueso que en el tórax craneal.

Tabla 20 TG/-HOM TG/-Het WT/HOM WT/Het (N=8) (N=10) (N=9) (N=5) Media 33.26±2.69 21.41+1.27 42.54±2.01 40.31±3.82 Los resul tados representan valores promedio ± SEM. N= número de secciones medidas . El grosor promedio del estrato córneo en el tórax craneal (Tabla 21) simuló aquel en el tórax craneal, tórax caudal y abdomen (Tabla 20) , sin embargo, una reducción significativa del estrato córneo sólo se encontró en TG/-Het vs. TG/-H0M (P<0.05*) y vs . WT/HOM (P<0.01**), respectivamente. La desviación estándar y error estándar de la media fueron altas lo cual podria deberse a una sección pobre, muestras de piel faltantes, arquitectura de naturaleza de la epidermis o no habia demasiado efecto en el tórax craneal. Nota: el procedimiento de histología o sección de tejido del tórax craneal podria descalificar para análisis histomorfométrico para obtener asi resultado de calidad. Tabla 21 TG/-H0M TG/-Het WT/HOM WT/Het (N=28) (N=30) (N=26) (N=14) Media 34.96±3.53 18.14±3.99 40.47±4.38 32.9618.11 Los resul tados represen tan valores promedio ± SEM.

N= número de secciones medidas . El resultado del grosor promedio del estrato córneo en el tórax caudal (Tabla 22) fue similar al de tórax craneal, tórax caudal y abdomen pero con tres excepciones: (1) TG/-HOM vs. TG/-Het y TG/-HOM vs . WT/HOM no mostraron diferencias estadísticas (P<0.05*); (2) TG/-HOM vs . WT/Het mostraron diferencia estadística (P<0.01**); (3) el estrato córneo en los WT/Het se engrosó notablemente lo cual podría ser la consecuencia de un artefacto de procesamiento de tejidos, por ejemplo, la queratina se hinchó o expandió cuando se le puso en solución hipotónica o se dejó en un baño de agua demasiado tiempo. Tabla 22 TG/-H0M TG/-Het WT/HOM WT/Het (?=10) (?=10) (?=8) (?=4) Media 35.64±3.4 24.2211.54 44.3513.51 53.7717.21 Los resul tados represen tan valores promedio ± SEM. N= número de secciones medidas . Sólo los TG/-H0M vs . WT/HOM y TG/-Het vs . WT/HOM mostraron diferencia estadística significativa, P<0.05* y P<0.001***, respectivamente (Tabla 23). Las crias TG/-desplegaron una reducción en el grosor de estrato córneo en el abdomen en comparación con sus compañeros de camada de control (WT/HOM y WT/Het) .

Tabla 23 TG/-HOM TG/-Het WT/HOM WT/Het (N=8) (N=10) (N=9) (N=4) Media 28.8414.36 21.8611.30 42.4513.15 33.2513.96 Los resultados representan valores promedio ± SEM. N= número de secciones medidas . (c) Grosor promedio (µm) de epidermis más estrato córneo en tórax craneal, tórax caudal y abdomen Las crías TG/-Het desplegaron un incremento significativo en el grosor epidérmico y una reducción significativa en el grosor de estrato córneo en comparación con los compañeros de camada de control (WT/HOM y WT/Het) y las crias TG/-H0M produjeron un resultado similar pero con un efecto mínimo (Tabla 24) . Tabla 24 TG/-HOM TG/-Het WT/HOM WT/Het (N=10) (N=10) (N=9) (N=4) estrato córneo 32.58 41.05 31.31 30.83 Epidermis 33.26 21.41 42.54 40.31 Los resultados representan valores promedio. N= número de crias. (d) Señalización de IL-20 a través de tanto IL-20RA como de IL-22RA La epidermis es un epitelio de renovación continua y estratificado que depende de un equilibrio entre la proliferación, diferenciación y muerte celular para la homeostasis. En epidermis normal, una capa basal mitóticamente activa da origen a queratinocitos que se diferencian terminalmente que emigran hacia fuera y son finalmente liberados de la superficie de la piel como escamas enucleadas, la capa de queratina o cornificada localizada en el estrato córneo. Aunque se sabe que muchas proteínas funcionan en mantener la homeostasis epidérmica, la coordinación molecular de estos eventos se entiende de manera deficiente. IL-22 es una proteina de interacción con receptor nueva y señaliza a través de ya sea los receptores IL-20RA o IL-22RA (IL-22RA) expresados en una capa de piel asociada con la proliferación de queratinocitos. Los neonatos transgénicos IL-20 despliegan un fenotipo de piel engrosada y brillante anormal. La deficiencia de IL-22RAm (HOM) en ratones no mostró respuesta al tratamiento con IL-22, mientras que ratones tipo silvestre con el gen IL-22RA y tratados con IL-22 demostraron un incremento significativo en el grosor epidérmico (P<0.001***, véase los resultados en análisis de imagen histomorfométrico IL-22RAm KO/IL-22, PID 59.2) . Para investigar si la ausencia de IL-22RA tiene un efecto en el fenotipo brilloso observado en los neonatos K14 IL-20m TG, ratones transgénicos que expresaban ectópicamente IL-20 fueron apareados con ratones deficientes en IL-22RA homocigóticos (HOM) o IL-22RA heterocigóticos (Het) . Un análisis de imagen cuantitativo del grosor epidérmico se llevó a cabo previamente en menos crias en el tórax caudal de este estudio (es decir, 19 crias, 1 sección por cria, par aun total de 19 secciones) pero no se obtuvo alguna significatividad estadística debido al número limitado de animales estudiados y a la variación dentro de los grupos. El propósito del presente estudio era cuantificar histomorfométricamente más muestras de piel en tórax craneal, tórax caudal y abdomen de cada cria del mismo estudio (es decir, 34 crias, 3 secciones por cria, para un total de 102 secciones) para explorar la biología de IL-20 y obtener resultados cuantitativos confiables. Para un análisis de imagen efectivo, nos aseguramos de que la orientación de la piel en el bloque de parafina fuera consistente y que las muestras de piel se midieran desde las mismas ubicaciones respectivas en todos los individuos y grupos de crias. Dos tipos de mediciones se llevaron a cabo: (1) el grosor de la epidermis se midió 10 veces por campo microscópico lOx en cada muestra de piel, cada una en el lado dorsal de la espina dorsal, para investigar el papel de IL-20 en mediar la proliferación y diferenciación de queratinocitos; (2) el grosor de la capa cornificada o el estrato córneo se midió de la misma manera para correlacionar los resultados con la apariencia de piel brillosa en los neonatos IL-20 TG.

El análisis de imagen histomorfométrico del grosor epidérmico reveló que los neonatos TG/-Het que expresaban al transgen kl4 IL-20m en un fondo que expresaba algo de IL-22RA de una copia del gen IL-22RA desplegaron epidermis engrosada y los neonatos TG/-HOM, que expresaban el transgen IL-20m de kl4 en un fondo que no expresaba IL-22RA no tuvieron cambio significativo. El grosor epidérmico se incrementó significativamente en crías transgénicas IL-20 que carecían de una copia del gen IL-22RA (TG/-Het) contra las crias transgénicas IL-20 que carecían de una copia de los genes IL-22RA (TG/-H0M, P<0.001***) y contra los compañeros de camada de control (WT/HOM, P<0.001*** y WT/Het, P<0.001***). Las crias TG/-Het mostraron grosor incrementado de la epidermis no queratinizada principalmente debido a hipertrofia y a los queratinocitos en la capa pilosa. La epidermis de la cria TG/-Het se incrementó aproximadamente 25% en grosor, mientras que la epidermis de las crias TG/-HOM sólo fue ligeramente más gruesa, incrementada aproximadamente 4-5%, que los controles (WT/HOM y WT/Het) y las estadísticas no indicaron diferencias significativas entre los TG/-HOM y su control WT/HOM (P<0.05) . Los resultados histomorfométricos del estrato córneo demostraron que a pesar del engrosamiento epidérmico en los neonatos TG/-Het, una reducción predominante de queratina o grosor de capa cornificada se observó en pieles TG/-HOM y TG/-Het en comparación con los compañeros de camada (WT/HOM y WT/Het) y las estadísticas indicaron extremadamente significativas entre los grupos ( P<0.0001**** ) . Las crias TG/-Het mostraron aproximadamente 36%, 50% y 49% de cantidades reducidas de queratina sobre la superficie de la epidermis contra las TG/-HOM (P.<0.01**), WT/HOM (P.<0.001***) y WT/Het (P. <0.001*** ) , respectivamente. Las crias TG/-HOM mostraron aproximadamente 22% de reducción significativa en el grosor de estrato córneo en comparación con su control (WT/HOM P<0.05*) y sólo 17% de reducción contra el WT/Het (P<0.05). El grosor del estrato córneo en las crias de control, WT/HOM y WT/Het fue aproximadamente el mismo. La reducción en el grosor promedio en el estrato córneo en los neonatos TG/-HOM y TG/-Het pareció correlacionar el descubrimiento general en saco, en el cual a nivel general los neonatos IL-20 (TG) /IL-22RA (Het) parecen tener brillo reducido (por ejemplo, con menos queratina), llamado un lustre, mientras que los neonatos IL-20 (TG) /IL-22RA (HOM) no brillan (por ejemplo, con más queratina) . Histológicamente, la queratina en el estrato córneo en las crias TG/- pareció ser más compacta que en las crias WT . Juntas, la epidermis engrosada asociada con queratinocitos hipertróficos y la capa delgada de estrato córneo en los neonatos transgénicos IL-20 podrían explicar porqué desplegaron un fenotipo de piel brillosa.

La hipertrofia incrementada y diferenciación terminal alterada de los queratinocitos se observaron en los neonatos transgénicos IL-20 con una supresión dirigida de una copia del gen IL-22RA (Het) . La piel exhibió hipertrofia en queratinocitos pero falla completamente en diferenciarse, carece de queratina o el estrato córneo. Los neonatos transgénicos IL-20 con ruptura de dos copias de los genes IL-22RA (HOM) presentaron un fenotipo que simulaba al de la piel TG/-Het pero mostraron menos o minimo efecto (figura 12-15). Parece que la ausencia de IL-22RA (HOM) tiene un efecto parcial en el fenotipo brillos observado en los neonatos K14 IL-20m TG y la ausencia de IL-22RA (Het) tiene mínimo o ningún efecto en el fenotipo brilloso. En otras palabras, la señalización de IL-20, una proteina de interacción con receptor nueva que señaliza a través del receptor ya sea IL-20RA o IL-22RA (IL-22RA) probablemente no es obstruida por la expresión deficiente de una copia del gen IL-22RA (Het) sino que es parcialmente obstruida por la expresión deficiente de dos copias del gen IL-22RA (HOM) . Estos resultados proporcionan evidencia de que el bloqueo efectivo de la actividad IL-22RA, por ejemplo, por medio de una supresión del gen IL-22RA o similarmente por medio de un anticuerpo monoclonal neutralizante contra IL-22RA de la presente invención, similarmente reducirían los efectos de piel inducidos por IL-20, asi como los efectos en piel inducidos por IL-22, por ejemplo, en psoriasis, IBD, colitis u otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-20 y/o IL-22. Ejemplo 34 Efecto de IL-22 en ratones suprimidos con IL-22RA Treinta y seis ratones incluyendo 23 IL-22RA KO (HOM) y 13 controles (WT) fueron tratados ya sea con IL-22 o PBS administrado simultáneamente por implante de una minibomba con tubo o una minibomba sola (Tabla 25) : Tabla 25 HOM/PBS HOM/IL-22 WT/PBS WT/IL-22 (Grupo 1) (Grupo 2) (Grupo 3) (Grupo 4) Macho n=3 n=10 n=3 n=8 Hembra n=0 n=10 n=0 n=2 Total n=3 n=20 n=3 n=100 Una muestra de piel, de 1.5-2.5 cm de largo y 4.0-5.0 mm de grosor, del sitio de bombeo de cada animal se obtuvo para examen histológico de rutina y análisis de imagen histomorfométrico. Todos los especímenes de tejido se fijaron en formalina regulada en pH neutra al 10% y procesada en bloques de parafina. Seis secciones segméntales, 5 µm de grosor y 10 µm de intervalo entre secciones adyacentes con el epitelio cubriendo la superficie completa, de cada muestra de piel por animal se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E) .

El análisis de imagen histomorfométrico de muestras de piel se llevó a cabo usando un microscopio Olympus BH-2, una cámara de video (Dage-MTI, Ciudad de Michigan, IN) y software BioQuant True Color para Windows 98 (R&M Biometrics, Inc. Nashville, TN 37209) con el siguiente ajuste: parámetro: ampliación 10X, Z desplazamiento 0; Disposición: longitud (µm) ; medición: modo manual y aditivo. El grosor (µm) de la epidermis se midió 5 veces encada campo microscópico lOx de un total de 4 campos capturados desde el centro 0.4cm de cada sección de piel (por ejemplo, un campo microscópico de lOx = O.lcm y cuatro campos microscópicos lOx = 0.4cm). El total de 6 secciones de cada animal se midieron y el valor medio, SD y SEM se obtuvieron mediante cálculo con Excel. Todas las acciones fueron clasificadas aleatoriamente y medidas en una forma ciega. Después de la medición, las secciones fueron desmezcladas, y los resultados se igualaron a los grupos de tratamiento. Los resultados finales por grupo de tratamiento se clasificaron como sigue: 1. Grosor epidérmico de ratones macho y hembra HOM y WT . 2. Grosor epidérmico de ratones macho HOM y WT . Los datos resultantes se analizaron usando el software GraphPad InStat (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA 92121). El análisis de variación de una via (ANOVA) se aplicó para examinar el significado estadístico de las diferencias en valores promedio del grupo 1 al grupo 4. La prueba de comparaciones múltiples de Tukey-Kramer y la prueba T no apareada se aplicaron para analizar el significado en valores promedio entre dos grupos. Observaciones de P<0.05 se consideraron significantes. III . Resultados histomorfométricos (1) grosor epidérmico (µm) de ratones macho y hembra HOM y WT El grosor epidérmico se incrementó significativamente en las pieles de ratón WT tratadas con IL-22 (WT/IL-22) contra los controles WT/PBS (P<0.0001). La piel de los ratones IL-22RAm KO tratada con IL-22 (HOM/IL-22) mostró valor medio incrementado del grosor epidérmico en comparación con los controles HOM/PBS, sin embargo las estadísticas no indicaron diferencias significativa entre los dos grupos (P<0.05). La reducción predominante del grosor epidérmico se observó en los ratones IL-22RA KO en comparación con los ratones WT (por ejemplo, HOM/IL-22 vs . WT/IL-22: P<0.001) (Tabla 26). Tabla 26 HOM/PBS HOM/IL-22 WT/PBS WT/IL-22 (N=3) (N=19) (N=3) (N=10) Media 14.1510.99 19.011.03 23.3415.4' 43.0811.85 Los resul tados representan valores promedio ± SEM. N= número de secciones medidas . (2) Grosor epidérmico (µm) de ratones machos HOM y WT El grosor epidérmico se incrementó aproximadamente 2 veces en las pieles de ratón macho WT tratadas con IL-22 (WT/IL-22) cuando se compararon con los controles macho WT/PBS (P<0.0001), sin embargo, la epidermis de los ratones macho IL-22RAm KO tratada con IL-22 (HOM/IL-22) sólo mostró un ligero incremento en comparación con los controles macho HOM/PBS (P<0.05) . Notoriamente, los ratones IL-22RAm KO exhibieron una reducción marcada del grosor epidérmico cuando se les comparó con su control, el ratón macho WT (por ejemplo, HOM/PBS vs . WT/PBS: P<0.05; HOM/IL-22 vs WT/IL-22: P<0.001) (Tabla 27). Tabla 27 HOM/PBS HOM/IL-22 WT/PBS WT/IL-22 (N=3) (N=9) (N=3) (N=8) Media 14.1510.19 15.8610.75 23.3415.49 41.41+1.71 Los resultados representan valores promedio ± SEM. (3) Grosor epidérmico (µm) de ratones HOM y WT, macho contra hembra La epidermis de los ratones hembra se encontró más gruesa que aquella de los ratones macho (por ejemplo, HOM/ IL-22 /macho vs . HOM/ IL-22 /hembra : P<0.01; WT/IL-22/macho vs WT / IL-22 /hembra : P<0.05) (Tabla 28) .

Tabla 28 HOM/IL-22 HOM/IL-22 WT/IL-22 WT/IL-22 [Macho, N=9! [Hembra, N=9) (Macho, N=8; [Hembra, N=2! Media 15.86+0.75 21.8511.3 41.4111.71 49.7514.82 Los resultados representan valores promedio ± SEM. (4 ) Grosor epidérmico (µm) de ratones HOM, bomba IL-22 vs . bomba IL-22 con tubo La epidermis de ratones IL-22RAm KO (HOM) con bomba IL-22 y tubo se encontró significativamente más gruesa que la de los ratones IL-22RAm KO (HOM) sólo con bomba (P<0.0001, por prueba T no apareada) (Tabla 29) . Tabla 29 HOM c/bomba IL-22 HOM c/bomba IL-22 con tubo (M=8 & F=2, N=10) (M=2 & F=8, N=10) Media 15.8510.65 23.3011.36 Los resultados representan valores promedio ± SEM. M: macho; F: hembra; N= número de secciones medidas . IV: Discusión Tomados juntos, el propósito de este estudio es caracterizar los efectos epidérmicos de las pieles tratadas con H33 de ratones tanto IL-22RAm KO como WT y se refiere a estos descubrimientos en indicaciones clínicas. Un análisis de imagen cuantitativa se llevó a cabo para determinar el grosor epidérmico en las secciones de piel teñidas H y E. Las muestras de piel de cada animal fueron medidas hi stomor fornétr icamente 120 veces (es decir, 20 veces/cada sección X 6 secciones segméntales de cada ratón = 120 mediciones) y el grosor epidérmico promedio se obtuvo mediante cálculo con Excel. El estudio his tomorforné t rico demostró que IL-22 dio como resultado un incremento significativo en el grosor epidérmico especialmente en los ratones WT con presencia del receptor IL-22RA (P<0.0001 por ANOVA, considerado extremadamente significativo) y mostró menos o mínimos efectos en los ratones IL-22RAm KO (HOM) con ausencia del receptor IL-22RA (P<0.05) . El grosor epidérmico en los ratones WT tratados con IL-22 se incrementó aproximadamente 43% al de aquellos tratados con PBS (por ejemplo, WT/PBS P<0.001), mientras que los ratones IL-22RAm KO (HOM) tratados con IL-22 sólo mostraron 26% de incremento en el grosor epidérmico en comparación con los (HOM/PBS, P<0.05) de control. Los ratones IL-22RAm KO exhibieron epidermis más delgada cuando se les comparó con los ratones WT ( P< 0.001 ) . En general, los efectos biológicos de IL-22 en piel de ratón sugieren que este factor podria estar implicado en la regu l ac i ón de cre c imi ent o y pro l i f e ra c i ón epi dé rmi ca . Ejemplo 35 Farmacocinética de un anticuerpo monoclonal anti-humano IL-20 (clon) El anticuerpo monoclonal de prueba, mAb IL-20 antihumano ( clon#262.7.1.3.2.4 ) fue proporcionado en alícuotas de 3 x 3 mL a una concentración de 1.08 mg/mL (determinada por absorbancia UV a 280 nM) y se almacenó a -80°C hasta ser usado. El vehículo fue IX PBS (50 mM de NaP04, 109mM de NaCl), pH 7.3. El mAb fue descongelado a temperatura ambiente antes de usar y alícuotas de 1 y 2 fueron usadas como las provistas para los grupos de dosificación de 100 µg IV y SC, respectivamente. La mitad de la alícuota 3 se diluyó 1:2 en IX PBS para el grupo de dosis SC de 50 µg y la segunda mitad de la alícuota 3 se diluyó 1:10 en IX PBS para el grupo de dosis SC de 10 µg. Ratones SCID hembra (n=96) fueron recibidos de Charles River Labs. Los animales se revisaron para verificar su salud cuando llegaron y se alojaron por grupos (3 animales por jaula) . Los ratones tenian 12 semanas de edad con un peso corporal promedio de 22 g al inicio del estudio . A. Protocolo de dosificación Los ratones SCID hembras (n=24/grupo de dosis) se pusieron aleatoriamente en cuatro grupos de dosificación (véase Tabla 30) . Al grupo 1 se le administró el mAb anti-huIL-20 mediante inyección IV de aproximadamente 93 µL en una vena de la cola y a los grupos 2, 3 y 4 se les administró el mAb por medio de inyección SC de aproximadamente 93 µL en el pescue zo . B . Toma de muestras Antes de la recolección de sangre, los ratones fueron completamente anestesiados con halotano o isofluorano. Se tomaron muestras de sangre mediante punción cardiaca para todos los puntos de tiempo excepto el punto de tiempo de 168 hr (tomado por medio de sangrado ocular y los mismos animales fueron sangrados nuevamente en el punto de tiempo 504 hr mediante punción cardiaca) . La sangre se colectó en tubos separadores de suero y se le dejó coagular durante 15 minutos. Las muestras se centrifugaron subsecuentemente durante 3 minutos a 14,000 rpm. Después de la centrifugación alícuotas de 125-150 µL fueron colocadas en tubos eppendorf marcados y almacenadas inmediatamente a -80°C hasta el análisis (Tabla 30) .

Tabla 30 *Los mismos animales se usaron para los puntos de tiempo de 168 y 504 hrs. C . Cuantificación de las concentraciones de mAb anti-huIL-20 en suero mediante ELISA Se desarrolló un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) y se calificó para analizar muestras de suero de ratón de animales dosificados con mAb anti-IL-20 267.7.1.3.2.4 durantes los estudios de farmacocinética. Este ensayo fue diseñado para sacar ventaja de un anticuerpo secundario disponible comercialmente y detección colorimétrica usando TMB. Las diluciones usadas para la curva estándar se modificaron para mejorar la definición de la porción lineal de la curva estándar. Una curva estándar en la escala de 100 ng/mL a 0.231 ng/mL con diluciones dos veces permitió la cuantificación de las muestras de suero de ratón. Las muestras de QC fueron diluidas a 1:100, 1:1000 y 1:10000 en 10% de suero de ratón SCID y se volvieron a calcular a partir de la curva estándar. D. Análisis de farmacocinética Los datos de concentración de suero contra el tiempo fueron descargados en software WinNonlin Proffessional 4.0 (Pharsight, Inc.; Cary, NC) para el análisis de farmacocinética. El análisis sin compartimientos se usó para eliminar parámetros farmacocinéticos con base en los datos medios en cada punto de tiempo. E. Resultados Las concentraciones de mAb IL-20 anti-humano en suero después de la administración de 100 µg IV y 100, 50 y 10 µg SC se muestran en la Tabla 31: Tabla 31 LTR : menos que reportable Después de la administración IV, el perfil de concentración de mAb contra el tiempo demostró una declinación biexponencia 1. Después de la administración de SC, el mAb pareció tener una lenta fase de absorción, con eliminación limitada por velocidad de absorción. Los parámetros de farmacocinética en suero con base en los datos promedio en cada punto de tiempo se muestran en la Tabla 32: Tabla 32 ND: no determinable debido a la falta de da tos en la fase de eliminación terminal del perfil de concentración contra tiempo . Después de la administración IV los mAb demostraron una eliminación muy baja (Cl = 0.002 mL/hr) y larga vida media de eliminación (T?/2/ ?z « 21 dias) . Los mAb demostraron un volumen en estado fijo de distribución (V?C = 1.3 mL) que es menor que el volumen en sangre en un ratón (~ 1.7 mL) , sugiriendo que el mAb no se distribuyó sustancialmente fuera del compartimiento vascular. La concentración máxima calculada de nuevo (C0) fue más alta que la esperada con base en la dosis inyectada y el volumen de sangre en el ratón. Esto, junto con la pequeña Vsc, sugiere que los mAb pueden estar confinados, en gran parte, en la fracción de suero de la sangre.

Después de la administración SC, los valores Cma? se incrementaron linealmente con la dosis. En la dosis SC de 100 µg, en los mAb tuvieron una t1/2, ?z de aproximadamente 25 días con eliminación y un volumen aparente de distribución similar al aquel después de la dosificación IV. La biodisponibilidad fue de 86%. A las dos dosis SC más bajas, la mayoría de los parámetros farmacocinéticos no pudieron ser calculados debido a la falta de fase de eliminación terminal mesurable, incluso a pesar de que las muestras se tomaron a 504 horas. La absorción de los mAb después de la dosificación con SC parece alcanzar un estado fijo con eliminación a lo largo de la duración del estudio. Ejemplo 36 Antagonistas de IL-20 e IL-22 en modelo de colitis y psoriasis CD4+CD45RBhi (CD25~) A. Sumario La transferencia de células CD4+CD45RBhl o CD4+CD25-T en ratones SCID singeneicos da como resultado colitis en los ratones. La co-transferencia de células T reguladoras (CD4+CD25+ o CD4+CD45RB10) inhibe esta colitis. Después de la transferencia de células CD4+CD25-T en ratones, si los ratones son inyectados además con enterotoxina B estafilocócica (SEB) , los ratones no sólo desarrollan colitis, sino también psoriasis. Anticuerpos contra IL-22RA, IL-20, IL-22, IL-20R y/o IL-22R o receptores IL-22RA solubles se administran de los dias 0-21 y después de la transferencia y síntomas de células para colitis y psoriasis se monitorean. La inhibición de la puntuación psoriásica o colitis (histología) indica que IL-21 puede inhibir estas enfermedades autoinmunes. B. Diseño del estudio Bazos y nodulos linfáticos inguinales son aislados de ratones B10.D2. Suspensiones de células individuales se forman y se cuentan. Usando el sistema Miltenyi Bead, las células CD25+ son clasificadas mediante selección positiva. Las células son teñidas con CD25-PE (BD Pharmingen) a una dilución de 1:100 e incubadas durante 15 minutos. El exceso de anticuerpo se lava y las células se incuban con 10 µL de esferas anti-PE/106 células durante 20 minutos. Las celias son lavadas con PBS y pasadas sobre una columna LS (Miltenyi Biotech) . Las células que pasan a través de la columna (CD25-) son retenidas para análisis adicional. Un coctel de enriquecimiento CD4 (Stem Cell Technologies) se añade (1:100) a estas células CD25- y se incuba durante 15 minutos. Las células son lavadas con PBS. Una dilución de 1:10 del tetrámero anti-biotina se añade a las células durante 15 minutos seguida por un coloide magnético (60 uL/106 células) durante 15 minutos (todos de Stem Cell Technologies). Las células se pasan a través de una columna de selección negativa (0.5", Stem Cell Technologies). Las células que pasan a través son las células CD4+CD25-. La pureza se analiza usando citometria de flujo. 0.4 x 106 células se inyectan i.v. en ratones SCID CB-17 naives en un volumen total de 200 µl. Los ratones son inyectados i.p. con 10 µg de SEB al dia siguiente (di) . Los síntomas de psoriasis y colitis son seguidos de 2-5 semanas. Los ratones son calificados para enfermedad de psoriasis bajo los siguientes criterios. 0 - sin lesiones, 1 - lesiones leves en el cuello, 2- lesiones severas en el cuello y espalda (tronco) , 3- lesiones muy severas en el cuello, espalda y la panza de los ratones. El engrosamiento de las orejas se mide también como una medida de severidad de la enfermedad. Los grupos de ratones son inyectados i.p. con PBS, 100 µg de anticuerpo de control o 10-100 µg de anticuerpos contra IL-22RA, IL-20, IL-22, IL-20R o IL-22R, o IL-22RA soluble de los dias 1-30 bajo un régimen de dosificación diferente (3X/semana o 2X/semana) . C . Resultados y conclusión La inhibición de síntomas psoriásicos y de colitis en ratones tratados con anticuerpo indica que la inhibición de la función de IL-20 y/o IL-22 puede inhibir síntomas autoinmunes en este modelo para psoriasis y colitis. Ejemplo 37 Antagonistas de IL-20 e IL-22 en modelo de psoriasis de transplante de SCID-hu Piel de psoriasis humana injertada en ratones SCID puede mantener su característica psoriásicas clínicas, microscópicas de luz e inmunohistoquimicas durante varias semanas. Este modelo proporciona un sistema para evaluar terapias destinadas a reestablecer el tejido lesional a un fenotipo normal. Una vez que la piel humana es injertada exitosamente, anticuerpos contra IL-22RA, IL-20, IL-22, IL-20R o IL-22R, o receptores IL-20 o IL-22 solubles pueden administrarse durante varias semanas, y el grosor epidérmico puede analizarse para evaluar el efecto de estos antagonistas en psoriasis. B . Diseño del estudio Biopsias de punción de 6 mm con grosor completo que consistían de la epidermis completa y varios milímetros de dermis se obtienen de voluntarios adultos saludables y pieles lesiónales psoriásicas. Cuatro a seis biopsias se obtienen de cada donador. Una biopsia por punción de cada donador se transplanta a la superficie dorsal de ratones SCID receptores (CB-17, Taonic) . Los animales se mantienen en un ambiente libre de patógenos. El tratamiento es iniciado después de un injerto exitoso (2-3 semanas después del transplante) como sigue: una biopsia para control negativo (PBS o isotipo mAb), una biopsia para control positivo (Ciclosporina A) y 2-3 biopsias para tratamiento con anticuerpo monoclonal anti-IL-22RA humano, anti-IL-20 humano, anti-IL humano o receptores solubles para IL-20 o IL-22 (inyección intraperitoneal, tres veces a la semana durante 2-4 semanas en un programa L-M-V) . C . Análisis cuantitativo Se harán regularmente observaciones y evaluaciones clínicas a lo largo de los experimentos, y serán registradas. La severidad de las lesiones psoriásicas se evalúa para escamosidad, induración y eritemia de una forma ciega. Los parámetros pueden calificarse usando la escala de tres puntos: 0 = falta completa de implicación cutánea; 1 = implicación ligera; 2 = implicación moderada; 3 = implicación severa. Al final del periodo de dosificación cada animal es sometido a eutanasia y los tejidos se recogen para histología e IHC. (1) parte del tejido se fija en 10% de formalina y se tiñe con hematoxilina y eosina. El área epidérmica se mide como una función de cambios en el grosor epidérmico por longitud unitaria usando software de imagen NIH. Varias áreas de cada transplante se cuantifican para proporcionar un alto valor n y área epidérmica media. (2) el número de células mononucleares inflamatorias por campo de alta energía (0.103 x 0.135 mm) en la dermis superior; (3) el grado de paraqueratosis se gradúa en una escala arbitraria de 0 a 3 , en donde 0 no es paraqueratosis, 1 es paraqueratosis en menos de un tercio de la sección, 2 era paraqueratosis en más de un tercio pero menos de dos tercios de la sección, un 3 es paraqueratosis en más de dos tercios de la sección. (4) El resto del tejido será teñido para Ki67 (marcador de queratinocitos en proliferación) , para evaluar el número de queratinocitos en ciclización Ki67 por longitud en mililitros de la sección. La severidad de psoriasis reducida medida por el grosor epidérmico, indica que la neutralización de la función de IL-20 e IL-22 puede ser efectiva en este modelo de psoriasis. Para cuantificar la severidad de psoriasis reducida, se mide el grosor epidérmico, el número de células inflamatorias en la dermis superior, los números de queratinocitos de ciclización Ki67 y los grados de paraqueratosis. Todos los cuatro parámetros reducidos significativamente para los grupos de control comparados con los ratones de control, indican el uso terapéutico potencial de antagonistas de IL-20 e IL-22. Ejemplo 38 Tamizado para la actividad antagonista de IL-20 usando células BaF3/lL-22RA/lL-20RB utilizando un ensayo de proliferación con azul alamar La linea de células pre-B dependiente de factor BaF3 fue co-transfectada con IL-22RA e IL-20RB (véase método en el Ejemplo 3) y se trató con IL-20 a varias concentraciones. La proliferación fue evaluada usando un ensayo de azul de alamar como el descrito en el Ejemplo 3. IL-20 estimuló la proliferación de una manera dependiente de dosis a concentraciones esperadas para una citocina, demostrando que IL-20 se une y activa el receptor IL-22RA/IL- 20RB heterodimérico a concentraciones esperadas para una citocina. Los controles negativos que contenían BaF3 no transfectadas no proliferaron. Para poder determinar si anticuerpos anti-IL-22RA eran capaces de antagonizar la actividad IL-20, el ensayo descrito arriba se lleva a cabo usando anticuerpos anti-IL- 22RA como un antagonista para la actividad de IL-20. Cuando IL-20 se combina con este antagonista, la respuesta a IL-20 es bajada a niveles de fondo. Que la presencia de un antagonista que elimine o reduzca los efectos proliferativos de IL-20 demuestra que es un antagonista de ligando IL-20.

Este ensayo se puede usar para probar otros antagonistas de la actividad de IL-20 descritos en la presente, tales como polipéptidos antagonistas que comprendan un receptor IL-22RA soluble Ejemplo 39 Neutralización de la actividad de IL-20 e IL-22 por anticuerpo monoclonal anti-huL22RA Usando el ensayo de neutralización a base de células descrito en el Ejemplo 28, un anticuerpo monoclonal anti-huL22RA de ratón purificado (Ejemplo 30 (D)) fue añadido como una dilución en serie, por ejemplo, a 10 µg/mL, 5 µg/mL, 2.5 µg/mL, 1.25 µg/mL, 625 ng/mL, 313 ng/mL, 156 ng/mL y 78 ng/mL. Las placas de ensayo se incubaron a 37 °C, 5% de C02 durante 4 dias tiempo en el cual Alamar Blue (Accumed, Chicago, IL) fue añadido a 20 µl/pocillo. Las placas fueron incubadas de nuevo a 37 °C, 5% de C02 durante 16 horas. Los resultados mostraron que el anticuerpo monoclonal anti-huL22RA purificado puede neutralizar la señalización tanto de huIL-22 como de huIL-20 a través de huIL-22RA. A la concentración de 10 µg/mL, el anticuerpo neutralizó completamente la proliferación inducida por huIL-22 o huIL-20, con la inhibición de proliferación reduciéndose de una forma dependiente de dosis a las concentraciones más bajas. Un anticuerpo monoclonal de ratón de control negativo coincidido con isotipo, probado a las concentraciones descritas arriba, no proporcionó alguna inhibición de proliferación de ninguna citocina. Estos resultados demuestran además que los anticuerpos monoclonales contra IL-22RA podrían de hecho antagonizar la actividad de los ligandos pro-inflamatorios, IL-20 e IL-22 a bajas concentraciones . Estos resultados proporcionaron evidencia adicional de que el bloqueo efectivo de la actividad de IL-22RA, por ejemplo por medio de un anticuerpo monoclonal neutralizante contra IL-22RA de la presente invención, podria ser adecuado para bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar los efectos de IL-20 e IL-22 (solo o junto) in vivo y pueden reducir la inflamación reducida por IL-20 y/o IL-22, tal como aquella observada en efectos en piel inducidos por IL-20, asi como efectos en piel inducidos por IL-22, por ejemplo, psoriasis, IBD, colitis u otras enfermedades inflamatorias inducidas por IL-20 y/o IL-22 incluyendo IBD, artritis, asma, artritis psoriásica, colitis, condiciones inflamatorias de la piel y dermatitis atópica. Ejemplo 40 Tratamiento de ratones transgénicos IL-20 e IL-22 preñados con anticuerpo monoclonal anti-IL-22RA neutralizante Para probar el anticuerpo monoclonal (mAb) anti-IL-22RA anti-ratón de rata para actividad neutralizante in vivo, ratones Tg IL-22 y transgénicos (Tg) IL-20 preñados se inyectan intraperitonealmente con un mAb IL-22RA anti-ratón. Las crias recién nacidas se evalúan después para la presencia o ausencia del fenotipo de piel "brillosa" que normalmente caracteriza estas cepas de ratones. Específicamente, ratones Tg IL-20 macho (los cuales se generan usando la queratina-14 ) o Tg IL-22 (usando el promotor de insulina) se crían hasta hembras C57BL/6N en estro y las hembras criadas son identificadas por la presencia de un tapón vaginal al dia siguiente. Cada hembra preñada se separa en una jaula separada y se monitorea diariamente. Los grupos de tratamiento incluyen al menos 4 hembras preñadas cada una, para permitir un análisis estadísticamente significativo de ambas crias Tg y no Tg. Con base en la experiencia anterior con estos ratones Tg, una camada normalmente proporciona entre alrededor de 6 a 8 crias por camada, de las cuales de entre 2 a 3 son Tg+. Siete a nueve dias después de que los ratones son criados (etapa embrionaria 7-9; e7-9) , las hembras son inyectadas intraperitonealmente con 250-500 µg del anticuerpo monoclonal IL-22RA anti-ratón de rata (isotipo IgG2a de rata) en un volumen de 200-250 µl de PBS. Agujas cortas se usan a un ángulo de inyección somero para evitar inyectar directamente el útero. Las hembras preñadas se inyectan de esta manera 3 veces a la semana (Lunes, Miércoles y Viernes) durante dos semanas (hasta el nacimiento) para poder tener acceso exitosamente a los embriones en desarrollo. Los grupos de control (de no menos de 4 hembras peñadas cada uno) incluyen lo siguiente: anticuerpo monoclonal igg2a de rata de control de isotipo, anticuerpo monoclonal IL-22 antihumano/ratón (isotipo IgGl de rata) y un anticuerpo monoclonal de IgGl de rata de control de isotipo. Como un control para la neutralización de IL-20 de murino, las hembras preñadas se inyectan ya sea con una proteina de fusión IL-20R-Fc4 soluble que puede unirse y neutralizar IL- 20 tanto humana como de murino o una proteina de control Fc4. De los dias 1 a 2 después del nacimiento, las crias se monitorean estrechamente para la aparición del fenotipo de piel brillosa. El dia 2, las crías son sometidas a eutanasia y una porción de la cola se recoge para el aislamiento de ADN para determinar el genotipo (Tg o no Tg) de cada cria. Las muestras de piel se recogen para análisis histológico para evaluar asi si las crias exhiben las capas celulares epidérmicas engrosadas que normalmente caracterizan a estos ratones Tg. Sangre del tronco también se toma de las crias (y un sangrado ocular de las madres un dia después del nacimiento) para cuantificar, mediante ELISA, los niveles de anticuerpo monoclonal anti-IL-22RA en el suero de cada ratón. Debido a que estos anticuerpos monoclonales son potentes inhibidores de IL-20 y/o IL-22 ín vivo, las crias Tg tienen piel normal (es decir, sin engrosamiento epidérmico o apariencia "brillosa"). Ejemplo 41 Antagonistas de IL-20 e IL-22 en modelo de psoriasis en cultivo de órganos Piel de placa psoriásica humana puede mantenerse en cultivo de órganos, y las características histológicas anormales de la piel lesionada se mantienen en ausencia de factores de crecimiento exógenos. Anticuerpos contra IL-22RA, IL-20, IL-22, IL20R y/o IL22R, o receptores IL-20 o IL-22 solubles pueden administrarse, y las características histológicas de una piel lesionada psoriásica pueden reducirse . B . Diseño del estudio Biopsias de punción de 2 mm de grosor completo que consistían de la epidermis completa y varios milímetros de dermis se obtienen de ya sea voluntarios adultos saludables o de piel lesionada psoriásica. Inmediatamente después de la biopsia, el tejido se sumerge en medio de cultivo que consiste en Keratinocyte Basal Médium (KBM) (Clonetics Inc, Walkersville, MD) . El medio de cultivo se complementa con CaC12 para llevar la concentración final de Ca2+ a 1.4 mM (Varani et al, 1993, 1994). Las biopsias son después incubadas en pocilios de una caja de 96 pocilios que contiene 200 µl de KBM complementado con Ca2+ con o sin tratamientos adicionales de anticuerpos contra IL-20, IL-22, IL-22RA humano o receptores solubles de IL-20 o IL-22. Los cultivos se incuban a 3 °C en una atmósfera de 95% de aire y 5% de C02 durante 8 dias. C . Análisis cuantitativo Al final del periodo de incubación, el tejido se fija en 10% de formalina regulada en pH y se examina histológicamente después de teñir con hematoxilina y eosina. La apariencia de tejido psoriásica expuesto a los anticuerpos o receptores solubles puede ser simulada más estrechamente que aquella de tejidos normales, incluyendo la siguiente observación: las células epiteliales básales de forma irregular e inicialmente desorganizadas desarrollaron una apariencia más columnar con polaridad restablecida; regresaron los rebordes de la red epidérmicos, con menos áreas de expansión celular epitelial en el espacio dérmico y hubo menos degeneración general de las capas epidérmicas superiores. El modelo de cultivo de órganos proporciona un medio rápido y sensible para determinar si un compuesto particular tiene potencial como un agente anti-hiperproliferativo . La característica histológica normal puede ser reducida en presencia de un antagonista de IL-20, IL-22, sugiriendo la efectividad de este agente en el tratamiento de psoriasis. Ejemplo 42 Mapeo de regiones mIL-22RA (zCytoRllm) que se unen a anticuerpos monoclonales neutralizantes R2.1.5F4.1 y R2.1.15E2.1 A. Epítopes en IL-22RA de murino en los que se unen los anticuerpos monoclonales neutralizantes Los siguientes experimentos descritos abajo se enfocaron a identificar una región o regiones en la secuencia de aminoácidos de la proteina receptora soluble IL-22RA de murino (SEQ ID NO: 62) que eran importantes para la actividad el receptor, o para la unión de antagonista o anticuerpo neutralizante. La proteina IL-22RA-Fc de murino, la cual fue cortada previamente con trombina para remover el Fc, fue después cortada C-terminalmente a los residuos de metionina en la secuencia por incubación con bromuro de cianógeno (CNBr) . Los péptidos generados por CNBr fueron fraccionados y las fracciones se probaron para actividad de unión como se detecta por ELISA y reactividad mediante análisis Western usando anticuerpos • monoclonales con propiedades neutralizantes, clones R2.1.5F4.1 y R2.1.15E2.1. Después del corte con CNBr, los siguientes péptidos fueron generados potencialmente a partir de mIL-22RA de longitud completa no reducido (Tabla 33). Bajo condiciones no reductoras, las cisteinas son enlazadas por disulfuro, lo cual puede dar como resultado un enlace interno en el péptido 1 y un enlace entre los péptidos 3 y 5. Los residuos en negritas están implicados potencialmente en la unión de ligando que corresponde con los residuos IL-22RA humanos implicados potencialmente en la unión a ligando en SEQ ID N0:2 o SEQ ID N0:3, como se describe en el Ejemplo 42B. Específicamente, SEQ ID NO: 48 corresponde a los residuos de aminoácido 16 (His) a 83 (Met) de SEQ ID NO:42; SEQ ID NO:49 corresponde a los residuos de aminoácido 84 (Glu) a 109 (Met) de SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:50 corresponde a los residuos de aminoácido 110 (Thr) a 137 (Met) de SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:51 corresponde a los residuos de aminoácido 138 (Leu) a 177 (Met) de SEQ ID NO:42, y SEQ ID NO:52 que corresponde a los residuos de aminoácido 163 (His) a 208 (Pro) de SEQ ID NO:42 ó 163 (His) a 212 (Arg) de SEQ ID NO: 62.

Tabla 33 Corte con CNBr y aislamiento de fracciones péptidas Cincuenta microgramos de mIL-22RA se liofilizaron y reconstituyeron en 180 µL de ácido fórmico (70%) . Se le añadió 1 µL de CNBr 5 M disuelto en acetonitrilo. La muestra se mezcló y se dejó reaccionar durante 18 horas a temperatura ambiente en la oscuridad. 150 µL de la mezcla de reacción se fraccionaron mediante HPLC de fase inversa equipada con una columna Zorbax SB300-C8 analítica. Los picos fueron separados usando una gradiente que empezaba a 25% de acetonitrilo (0.085% de TFA) y 75% de agua (0.1% de TFA) y concluía a 95% de acetonitrilo (0.085% de TFA) y 5% de agua (0.1% de TFA). El análisis UV mostró tres picos principales y dos picos menores, los cuales fueron recogidos. Cada fracción se dividió a la mitad; una porción se sometió a ELISA, la otra porción fue liofilizada y reconstituida en 150 µL de solución salina de pH regulado con fosfato (PBS) . El análisis UV de las fracciones PBS confirmó la recuperación de todos los picos recabados de la columna analítica. Las fracciones de PBS se sometieron para análisis Western. 2. ELISA Las fracciones de HPLC que contenían secuencias de péptidos de IL-22RA cortado con CNBr fueron diluidas hasta una concentración igual calculada usando regulador de pH a HPLC (90% de acetonitrilo, 10% de H20, 0.09% de ácido trifluoroacético) . Las muestras fueron cargadas en placas de microtitulación de 96 pocilios en 4 pocilios cada una a 100 µL/pocillo y se les dejó secar durante la noche a temperatura ambiente en una cubierta ahumada. Las placas se lavaron con regulador de pH C de ELISA (PBS, 0.05% de Tween-20), y luego se bloquearon con regulador de pH B para ELISA (PBS, 0.1% de BSA, 0.05% de Tween-20) durante 2 horas a 37°C. Dos anticuerpos monoclonales (mAb) contra IL-22RA (Clon R2.1.5F4.1 y Clon R2.1.15E2.1) fueron diluidos a 2 µg/mL en ELISA B. Cada mAb fue añadido cada muestra de secuencia de péptidos a 100 µl/pocillo y las placas fueron incubadas durante 60 minutos a 37°C. Las placas fueron lavadas para remover anticuerpo no unido, y un anticuerpo secundario (IgG anti-rata de cabra conjugado a peroxidasa de rábano (Jackson)) se diluyó a 1 µg/mL en regulador de pH ELISA B y se añadió a todos los pocilios a 110 µL/pocillo. Las placas fueron incubadas durante 1 hora a 37°C. Los pocilios se lavaron con regulador de pH ELISA C, y luego se incubaron con TMB 1 Component HRP MicroweH Substrate (BioFx) durante 5 minutos. La reacción se detuvo mediante la adición de 450 nm de Stop Reagent for TMB MicroweH (BioFx) y las placas se leyeron a una absorbancia de 450 nm en un contador de placa para ELISA Dynatech (Molecular Devices) . Los resultados indican que mAb R2.1.5F4.1 reaccionó con la fracción de HPLC #4 de la reacción de mIL-22RA CNBr, lo cual también produjo una banda en los experimentos de Western blotting. 3. Western blotting Las fracciones de HPLC que contenían secuencias de péptidos de IL-22RA cortado con CNBr fueron liofilizadas durante la noche a temperatura ambiente, y reconstituidas en PBS. Las muestras fueron después mezcladas con regulador de pH de muestra no reductor (Invitrogen) y hervidas durante 10 minutos. Las muestras se cargaron y electroforesaron mediante SDS-PAGE en 4-12% de geles Bis-Tris (Invitrogen) usando IX de regulador de pH de corrida MES-SDS (Invitrogen) y transferidas a nitrocelulosa (0.2 µm; Bio-Rad) en 20% de regulador de pH de transferencia de metanol, todo a temperatura ambiente. Los filtros se dejaron secar durante la noche a temperatura ambiente. Los filtros se bloquearon con 10% de leche deshidratada desgrasada en regulador de pH A (50 mM de Tris, pH 7.4, 5mM de EDTA, 0.05% de Igepal CA-630, 150 mM de NaCl, 0.25% de gelatina) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se diluyó un anticuerpo monoclonal (mAb) contra IL-22RA (Clon R2.1.5F4.1) a 2 µg/mL en regulador de pH A que contenia 2.5% de leche deshidratada desgrasada. Los blots se incubaron en este anticuerpo primario durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación, los blots se lavaron tres veces en regulador de pH A y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente con una dilución 1:5000 de anticuerpo secundario (peroxidasa de IgG-rábano anti-rata de cabra; Jackson, Inc.) en regulador de pH A con 2.5% de leche deshidratada descremada. Los blots fueron después lavados, revelados con un substrato quimioluminiscente (Substrato de Western Blotting Lumi-Light; Roche) , y expuestos usando un formador de imágenes luminiscentes (Mannheim Boehringer Lumi-Imager) . Usando una exposición de 30 minutos, el gel no reductor mostró bandas muy fuertes para las fracciones #4 y #5 junto con una banda débil para la fracción #3. La fracción #4 también dio positivo en la ELISA. Secuenciación N-terminal de la fracción activa #4 De las cinco fracciones de péptido CNBr colectadas de la columna de fase inversa analítica, la fracción #4 mostró actividad en el ELISA y también fue positiva mediante Western Blotting. Para identificar los péptidos presentes en la fracción activa #4, la muestra se sometió a degradación de Edman usando métodos bien conocidos. Tres términos N fueron identificados de la fracción activa que fueron consistentes con los péptidos 2 (SEQ ID NO:49), 3 (SEQ ID NO:50) y 5 (SEQ ID NO: 52). Estos resultados indicaron que los anticuerpos se unieron a los péptidos 2 (SEQ ID NO: 49), 3 (SEQ ID NO: 50) y 5 (SEQ ID NO:52) . Tabla 34 Discusión Cinco fracciones fueron aisladas de una mezcla de péptidos mIL-22RA cortados con CNBr. De éstas, sólo la fracción #4 fue activa en un ELISA y positiva por Western. La degradación de EDMAN identificó tres términos N consistentes con los péptidos CNBr 2 (SEQ ID NO: 49), 3 (SEQ ID NO:50) y 5 (SEQ ID NO:52) en la fracción #4. Dentro de estas regiones, seis residuos están potencialmente implicados en la unión a ligando. Estos residuos son Y93, R112, K210 y E211 de SEQ ID NO: 42, los cuales corresponden también a los residuos Y78, R97, K195 y E196 de SEQ ID NO: 62. Los residuos Y60 y F164 de SEQ ID NO: 42 también están implicados en la unión a ligando. B. Epitopes en IL-22RA humano en los que se unen los anticuerpos monoclonales neutralizantes Los experimentos descritos abajo están enfocados a identificar una región o regiones en el dominio extracelular para la secuencia de aminoácidos de proteina IL-22RA humana (SEQ ID NO: 2) que son importantes para la actividad receptora, o para la unión antagonista o unión a anticuerpo neutralizante. Una proteina IL-22RA receptora soluble humana (por ejemplo, que comprende SEQ ID N0:3, tal como, IL-22RA-Fc cortada con trombina para remover el Fc) es luego cortada C-terminalmente a los residuos de metionina en la secuencia por incubación con bromuro de cianógeno (CNBr) , u otro agente conocido en la técnica que corte la proteina humana en fragmentos definidos. Los péptidos generados por CNBr fueron fraccionados y las fracciones resultantes se prueban para actividad de unión como se detecta por ELISA y reactividad mediante análisis Western usando anticuerpos monoclonales con propiedades neutralizantes. Cuatro cisteinas se predice que son enlazadas por disulfuro con un patrón de enlace de Cys71-Cys79 y Cys204-Cys217 de SEQ ID NO:2. Después del corte con CNBr, los siguientes péptidos se generan potencialmente a partir de IL-22RA humana de longitud completa no reducida: péptido 6 (SEQ ID NO:56), péptido 7 (SEQ ID NO:57); péptido 8 (SEQ ID NO:58); péptido 9 (SEQ ID NO:59); péptido 10 (SEQ ID NO:60); y péptido 11 (SEQ ID N0:61) (Tabla 35) . Las cisteinas son enlazadas por disulfuro, lo cual da como resultado un posible enlace entre los péptidos 7 (SEQ ID NO:57) y 10 (SEQ ID NO:60. Específicamente, SEQ ID NO.56 corresponde a los residuos de aminoácido 1 (Pro) a 92 (Met) de SEQ ID N0:3; SEQ ID NO:57 corresponde a los residuos de aminoácido 93 (Thr) a 120 (Met) de SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:58 corresponde a los residuos de aminoácido 121 (He) a 160 (Met) de SEQ ID NO:3, SEQ ID NO: 59 corresponde a los residuos de aminoácido 161 (His) a 185 (Met) de SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:60 corresponde a los residuos de aminoácido, 186 (He) a 199 (Met) de SEQ ID NO:3 y SEQ ID NO: 61 corresponde a los residuos de aminoácido 200 (Cys) a 211 (Thr) de SEQ ID NO:3.

Tabla 33 Número de péptido De A Secuencia Péptido 6 CNBr 1 92 Pro Glu Asp Pro Ser Asp Leu Leu Gln His Val Lys Phe Gln Ser Ser Asn Phe Glu Asn He Leu Thr Trp Asp Ser Gly Pro Glu Gly Thr Pro Asp Thr Val Tyr Ser He Glu Tyr Lys Thr Tyr Gly Glu Arg Asp Trp Val Ala Lys Lys Gly Cys Gln Arg He Thr Arg Lys Ser Cys Asn Leu Thr Val Glu Thr Gly Asn Leu Thr Glu Leu Tyr Tyr Ala Arg Val Thr Ala Val Ser Ala Gly Gly Arg Ser Ala Thr Lys Met (SEQ ID NO: 56) Péptido 7 CNBr 93 120 Thr Asp Arg Phe Ser Ser Leu Gln His Thr Thr Leu Lys Pro Pro Asp Val Thr Cys He Ser Lys Val Arg Ser He Gln Met (SEQ ID NO:57) Péptido 8 CNBr 121 160 He Val His Pro Thr Pro Thr Pro He Arg Ala Gly Asp Gly His Arg Leu Thr Leu Glu Asp He Phe His Asp Leu Phe Tyr His Leu Glu Leu Gln Val Asn Arg Thr Tyr Gin Met (SEQ ID NO: 58) Péptido 9 CNBr 161 185 His Leu Gly Gly Lys Gln Arg Glu Tyr Glu Phe Phe Gly Leu Thr Pro Asp Thr Glu Phe Leu Gly Thr He Met (SEQ ID NO: 59) Péptido 10 CNBr 186 199 He Cys Val Pro Thr Trp Ala Lys Glu Ser Ala Pro Tyr Met (SEQ ID NO: 60) Péptido 11 CNBr 200 211 Cys Arg Val Lys Thr Leu Pro Asp Arg Thr Trp Thr (SEQ ID NO: 61) 4. Corte con CNBr y aislamiento de fracciones de péptidos Western y ELISA y secuenciación N-terminal Aproximadamente 50 µg de IL-22RA humana se liofilizan y se reconstituyen, fraccionan, recogen y analizan usando análisis Western y ELISA como se describió en el Ejemplo 42A, para identificar fracciones que contengan anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA y aquellos que se unan a IL-22RA como se muestra por el análisis ELISA y Western. Las fracciones de péptido CNBr que son recogidas de la columna de fase inversa analítica, son luego probadas para actividad en el ELISA y se confirman como positivas mediante Western blotting. Para las fracciones positivas, los péptidos se identifican mediante degradación de Edman usando métodos bien conocidos. Discusión El péptido CNBr de ratón #5 (SEQ ID NO: 52) corresponde a los péptidos CNBr humanos #9 y #10 (SEQ ID NO: 59 y SED ID NO: 60); péptido CNBr de ratón #2 (SEQ ED NO:49) corresponde a CNBr humano #6 (SEQ ID NO:56); y péptido CNBr de ratón #3 (SEQ ED NO: 50) corresponde a CNBr humano #7 (SEQ ID NO: 57) . De las fracciones que son aisladas de una mezcla de péptidos IL-22RA humanos cortado con CNBr, seis residuos dentro de las regiones posibles están implicados potencialmente en la unión a ligando: los residuos de SEQ ID NO: 2 (y residuos correspondientes de SEQ ID NO: 3) que son importantes para la unión receptor-ligando comprenden Tyr-60 y Phe-164, Tyr-93, Arg- 112, Lys-210 y Glu-211 de SEQ ID NO: 2 y (y residuos correspondientes SEQ ID NO: 3) . Más aún, residuos de SEQ ID NO: 2 (y residuos correspondientes SEQ ID NO: 3) que son importantes para la unión receptor-ligando directa comprenden Tyr-60 y Phe-164 de SEQ ID NO: 2 (y residuos correspondientes SEQ ID NO: 3), y los residuos secundarios comprenden los residuos Tyr-93, Arg-112, Lys-210 y Glu-211 de SEQ ID NO: 2 y (y residuos correspondientes SEQ ID NO:3) . A partir de lo anterior, se apreciará que, aunque se han descrito en la presente por motivo de ilustración modalidades especificas de la invención, pueden hacerse varias modificaciones sin alejarse del espíritu y alcance de la invención. En consecuencia, la invención no está limitada excepto por las reivindicaciones anexas. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (73)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método para producir un anticuerpo contra un polipéptido, caracterizado porque comprende: inocular un animal con un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: (a) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 1 (Pro), al aminoácido número 6 (Asp) ; (b) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 26 (Ser), al aminoácido número 32 (Pro); (c) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys), al aminoácido número 47 (Asp) ; (d) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N0:2 del aminoácido número 49 (Val), al aminoácido número 62 (Cys); (e) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 62 (Cys); (f) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 84 (Ala) al aminoácido número 97 (Ser); (g) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 103 (Thr) al aminoácido número 108 (Asp) ; (h) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 130 (Arg) al aminoácido número 135 (His); (i) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO : 3 del aminoácido número 164 (Gly) al aminoácido número 166 (Lys); (j) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 175 (Tyr), al aminoácido número 179 (Glu); (k) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 193 (Lys) al aminoácido número 196 (Ala) ; (1) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 203 (Lys) al aminoácido número 209 (Thr) y (m) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y (n) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; y en donde el polipéptido desarrolla una respuesta inmune en el animal para producir el anticuerpo y aislar el anticuerpo del animal y en donde el anticuerpo se une específicamente a un polipéptido IL-22RA (SEQ ID N0:2 o SEQ ID N0:3); y reduce la actividad ya sea de IL-20 (SEQ ID NO: 8) o IL-22 (SEQ ID NO: 6) .
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo producido por el método reduce la actividad pro-inflamatoria ya sea de IL-20 (SEQ ID N0:8) o IL-22 (SEQ ID N0:6).
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo producido por el método neutraliza la interacción ya sea de IL-20 (SEQ ID NO: 8) o IL-22 (SEQ ID NO:6) con IL-22RA (SEQ ID N0:2).
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la neutralización por el anticuerpo se mide al mostrar neutralización ya sea de IL-20 (SEQ ID NO: 8) o IL-22 (SEQ ID NO: 6) en un ensayo de neutralización in vi tro a base de células.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo producido por el método reduce la actividad pro-inflamatoria tanto de IL-20 (SEQ ID NO:8) como de IL-22 (SEQ ID NO:6).
6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo producido por el método neutraliza la interacción tanto de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL-22 (SEQ ID N0:6) con IL-22RA (SEQ ID NO:2).
7. 7. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la neutralización por el anticuerpo se mide al mostrar neutralización tanto de IL-20 (SEQ ID NO: 8) como de IL-22 (SEQ ID NO: 6) en un ensayo de neutralización in vi tro a base de células.
8. 8. Un anticuerpo producido por el método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se une a un polipéptido de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3.
9. 9. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo o (e) un anticuerpo monoclonal humano.
10. 10. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminescente, marcador péptido, partícula magnética o toxina.
11. 11. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque comprende además PEGilación.
12. 12. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo o (e) un anticuerpo monoclonal humano.
13. 13. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminescente, marcador péptido, partícula magnética o toxina.
14. 14. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque comprende además PEGilación.
15. 15. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo caracterizado porque se une a un polipéptido que comprende una secuencia de residuos de aminoácido como la mostrada en SEQ ID NO: 3 y reduce la actividad pro-inflamatoria ya sea de IL- 20 (SEQ ID N0:8) o IL-22 (SEQ ID N0:6).
16. 16. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque reduce la actividad pro-inflamatoria tanto de IL-20 (SEQ ID N0:8) como de IL-22 (SEQ ID NO:6).
17. 17. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo o (e) un anticuerpo monoclonal humano .
18. 18. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminescente, marcador péptido, partícula magnética o toxina.
19. 19. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque comprende además PEGilación.
20. 20. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque es (a) un anticuerpo policlonal, (b) un anticuerpo monoclonal de murino, (c) un anticuerpo humanizado derivado de (b) , (d) un fragmento de anticuerpo o (e) un anticuerpo monoclonal humano.
21. 21. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminescente, marcador péptido, partícula magnética o toxina.
22. 22. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque comprende además PEGilación.
23. 23. Un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducida ya sea por IL-22 o IL-20, caracterizado porque comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 3, suficiente para reducir la proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo.
24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides.
25. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque las células linfoides son macrófagos o células T.
26. 26. Un método para reducir inflamación inducida por IL-22 o IL-20, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 3 suficiente para reducir inflamación.
27. 27. Un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducida por IL-22 e IL-20, caracterizado porque comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende una cantidad del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 5 suficiente para reducir proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo.
28. 28. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides.
29. 29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque las células linfoides son macrófagos o células T.
30. 30. Un método para reducir inflamación inducida por IL-22 e IL-20, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 5 suficiente para reducir inflamación.
31. 31. Un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducida por IL-22 e IL-20, caracterizado porque comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende una cantidad del anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15 suficiente para reducir la proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo o fragmento de anticuerpo.
32. 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides.
33. 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque las células linfoides son macrófagos o células T.
34. 34. Un método para reducir inflamación inducida por IL-22 e IL-20, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición del anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15 suficiente para reducir inflamación.
35. 35. Un método para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas inducida por IL-22 e IL-20, caracterizado porque comprende cultivar médula ósea o células de sangre periférica con una composición que comprende una cantidad del anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 16 suficiente para reducir proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o células de sangre periférica en comparación con médula ósea o células de sangre periférica cultivadas en ausencia del anticuerpo.
36. 36. El método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque las células hematopoyéticas y células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides.
37. 37. El método de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque las células linfoides son macrófagos o células T.
38. 38. Un método para reducir inflamación inducida por IL-22 e IL-20, caracterizado porque comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición del anticuerpo o fragmento de anticuerpo de conformidad con la reivindicación 16, suficiente para reducir inflamación.
39. 39. Un método para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación, caracterizado porque comprende: (1) determinar un nivel de proteína amiloide A en suero; (2) administrar una composición que comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 3 en un vehículo farmacéutico aceptable; (3) determinar un nivel post administración de proteina amiloide A en suero; (4) comparar el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa (1) con el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa (3), en donde una falta de incremento o una reducción en el nivel de proteina amiloide A en suero es indicador de suprimir una respuesta inflamatoria.
40. 40. Un método para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación, caracterizado porque comprende : (1) determinar un nivel de proteina amiloide A en suero; (2) administrar una composición que comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 5 en un vehículo farmacéutico aceptable; (3) determinar un nivel post administración de proteína amiloide A en suero; (4) comparar el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa (1) con el nivel de proteína amiloide A en suero en la etapa (3), en donde una falta de incremento o una reducción en el nivel de proteina amiloide A en suero es indicador de suprimir una respuesta inflamatoria.
41. 41. Un método para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación, caracterizado porque comprende: (1) determinar un nivel de proteina amiloide A en suero; (2) administrar una composición que comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 15 en un vehículo farmacéutico aceptable; (3) determinar un nivel post administración de proteina amiloide A en suero; (4) comparar el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa (1) con el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa (3) , en donde una falta de incremento o una reducción en el nivel de proteina amiloide A en suero es indicador de suprimir una respuesta inflamatoria.
42. 42. Un método para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación, caracterizado porque comprende: (1) determinar un nivel de proteína amiloide A en suero; (2) administrar una composición que comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 16 en un vehículo farmacéutico aceptable; (3) determinar un nivel post administración de proteina amiloide A en suero; (4) comparar el nivel de proteína amiloide A en suero en la etapa (1) con el nivel de proteina amiloide A en suero en la etapa (3), en donde una falta de incremento o una reducción en el nivel de proteina amiloide A en suero es indicador de suprimir una respuesta inflamatoria.
43. 43. Un método para tratar un mamífero afligido con una enfermedad inflamatoria en la cual IL-22 o IL-20 juega un papel, caracterizado porque comprende: administrar un antagonista de IL-22 o IL-20 al mamífero de tal forma que se reduzca la inflamación, en donde el antagonista comprende (i) un anticuerpo, fragmento de anticuerpo, o polipéptido de unión que se une específicamente a un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) o (ii) un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) y en donde se reduce la actividad inflamatoria ya sea de IL-22 (SEQ ID N0:6) o IL-20 (SEQ ID N0:8).
44. 44. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica.
45. 45. El método de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica que comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis.
46. 46. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda.
47. 47. El método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda que comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o enfermedad infecciosa.
48. 48. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminescente, marcador péptido, partícula magnética o toxina.
49. 49. Un método para tratar un mamífero afligido con una enfermedad inflamatoria en la cual IL-22 e IL-20 juegan un papel, caracterizado porque comprende: administrar un antagonista tanto de IL-22 como de IL-20 al mamífero para que se reduzca la inflamación, caracterizado porque el antagonista comprende (i) un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión que se une específicamente un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) o (ii) un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO: 3) y en donde se reduce la actividad inflamatoria tanto de IL-22 (SEQ ID NO:6) como de IL-20 (SEQ ID N0:8).
50. 50. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica.
51. 51. El método de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica que comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis.
52. 52. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda.
53. 53. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda que comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o enfermedad infecciosa.
54. 54. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminescente, marcador péptido, partícula magnética o toxina.
55. 55. Un anticuerpo caracterizado porque comprende un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un epitope antigénico de IL-22RA humano (SEQ ID NO: 3) seleccionado del grupo que consiste en: (a) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:3 del aminoácido número 1 (Pro), al aminoácido número 6 (Asp) ; (b) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 26 (Ser), al aminoácido número 32 (Pro); (c) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys), al aminoácido número 47 (Asp) ; (d) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID N0:2 del aminoácido número 49 (Val), al aminoácido número 62 (Cys) ; (e) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 41 (Lys) al aminoácido número 62 (Cys); (f) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 84 (Ala) al aminoácido número 97 (Ser); (g) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 103 (Thr) al aminoácido número 108 (Asp) ; (h) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 130 (Arg) al aminoácido número 135 (His); (i) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 164 (Gly) al aminoácido número 166 (Lys); (j) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 175 (Tyr), al aminoácido número 179 (Glu); (k) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 193 (Lys) al aminoácido número 196 (Ala) ; (1) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 del aminoácido número 203 (Lys) al aminoácido número 209 (Thr) y (m) un epítope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 y (n) un epitope que consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4 y en donde el anticuerpo reduce o neutraliza la actividad ya sea de IL-22 (SEQ ID NO: 6) o IL-20 humanos (SEQ ID NO:8) .
56. 56. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque reduce o neutraliza la actividad tanto de IL-22 (SEQ ID NO: 6) como de IL-20 humanos (SEQ ID NO: 8) .
57. 57. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste en: (a) un anticuerpo monoclonal de murino, (b) un anticuerpo humanizado derivado de (a), (c) un fragmento de anticuerpo y (d) un anticuerpo monoclonal humano .
58. 58. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado porque comprende además PEGilación.
59. 59. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste en: (a) un anticuerpo monoclonal de murino, (b) un anticuerpo humanizado derivado de (a), (c) un fragmento de anticuerpo y (d) un anticuerpo monoclonal humano .
60. 60. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque comprende además PEGilación.
61. 61. Un método para tratar una condición patológica en un sujeto asociada con actividad de IL-22RA, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 55, tratando de esta manera la condición patológica.
62. 62. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque la condición patológica es una condición inflamatoria crónica.
63. 63. El método de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado porque la condición inflamatoria crónica comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis.
64. 64. El método de conformidad con la reivindicación 61, caracterizado porque al condición patológica es una condición inflamatoria aguda.
65. 65. El método de conformidad con la reivindicación 64, caracterizado porque la condición inflamatoria aguda comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o enfermedad infecciosa.
66. 66. Un método para tratar un mamífero afligido con una enfermedad inflamatoria en la cual IL-22RA juega un papel, caracterizado porque comprende: administrar un antagonista de IL-22RA al mamífero para que se reduzca la inflamación, en donde el antagonista comprende un anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión que se une específicamente un polipéptido o fragmento de polipéptido de IL-22RA (SEQ ID NO:3) y en donde se reduce la actividad inflamatoria.
67. 67. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica.
68. 68. El método de conformidad con la reivindicación 67, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica que comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis.
69. 69. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda.
70. 70. El método de conformidad con la reivindicación 69, caracterizado porque la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda que comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o enfermedad infecciosa.
71. 71. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además un radionúclido, enzima, substrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminescente, marcador péptido, partícula magnética o toxina.
72. 72. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o polipéptido de unión comprende además PEGylación.
73. 73. Un método para reducir inflamación caracterizado porque comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad de una composición del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 55 suficiente para reducir inflamación .