LU84843A1 - Amidines - Google Patents

Description

MÉMOIRE DESCRIPTIF

DÉPOSÉ A L’APPUI D'UNE DEMANDE DE

BREVET D’INVENTION

FORMÉE PAR

BRISTOL-MYERS COMPANY pour Amidines t

4P

<Mî

La présente invention concerne des analogues de la mitomycine qui contiennent un ou plusieurs radicaux amidino (classe 260, sous-classe 326.24). Ces composés sont des dérivés de la mitomycine C dans lesquels le radical 7-amino et/ou l'atome d'azote du radical carbamido font partie d'un radical amidino. Ces composés manifestent de 1'activité contre les tumeurs expérimentales chez les animaux.

Suivant la nomenclature systématique de Chemical Abstracts, la mitomycine C est appelée la [laE-dao^sy^Sao^Sboi) ]-6-amino-8-[ ( ( aminocarbonyl) oxy ) méthyl]-l,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8a-méthoxy-5-méthyl-azirinoC 21,3',3,4]-pyrrolo[1,2-a]indole-4,7-dione, la numération du système cyclique azirinopyrroloindole étant la suivante: Ί 4 1 _Ufi Z la·

Chemical Abstracts

Suivant une terminologie courante dans le domaine des mitomycines, ce système cyclique portant différents substituants caractéristiques des mitomycines est appelé mitosane.

JL „ J:8„o?‘nh„ 2 2

2 Z

*

Mitosane

Cette nomenclature convient pour des dérivés simples comme ceux portant des substituants sur l'atome d'azote du radical azirino et aux positions 7 et 9a, mais expose à quelques ambiguïtés et inconvénients. Aucun système de numération traditionnel ne fait la distinction entre l'atome d'azote du radical azirino et l'atome d'azote du radical carbamoyle en chaîne latérale qui portent - l'un et l'autre des substituants dans certains des com posés de l'invention. Pour cette raison, l'atome d'azote CD.mj - 2 - *| g du radical azirino est dit N et celui du radical carbamoyle est dit N^0 dans le système de nomenclature des mitosanes aux fins de l'invention. Lorsque les composés de l'invention sont identifiés par le terme "mitosane" ou par la formule de structure, leur configuration stéréochimique est celle de la mitomycine C.

La mitomycine C est un antibiotique produit par fermentation et actuellement utilisé notamment aux Etats-Unis d'Amérique pour le traitement de l'adénocarcinome dissiminé de l'estomac ou du pancréas dans des combinaisons éprouvées avec d'autres agents chimiothé-rapeutiques reconnus, de même que pour le traitement palliatif après l'échec d'une autre thérapeutique (Mutamycine^ Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, Physicians* Desk Reference 35e édition, 1981, pages 717 et 718). La mitomycine C et sa préparation par fermentation font l'objet du brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 3.660.578 fondé notamment sur une demande de brevet au Japon du 6 avril 1957.

Les structures des mitomycines A, B et C et de la porfiromycine ont été publiées par J.S. Webb et al. de la société Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J. Amer. Chem. Soc. 8£, 3185-3187 (1962). L'une des transformations chimiques effectuées * * * lors de cette etude de structure pour établir la relation entre la mitomycine A et la mitomycine C est la conversion de la première ou 7-9c(-diméthoxymitosane, par réaction avec l'ammoniac en la seconde ou 7-amino-9b(-méthoxymitosane. L'élimination du radical 7-méthoxy de la mitomycine A s'est révélée être une réaction d'un intérêt considérable pour préparer les dérivés antitumoraux de la mitomycine C. Les articles et brevets indiqués ci-après concernent tous la .conversion de la mitomycine A en une 7-(amino substitué)-mitomycine C antitumorale. Ces recherches visaient à préparer des CD.MJ - 3 - dérivés plus actifs, mais moins toxiques que la mitomycine C: Matsui et al. "The Journal of Antibiotics", XXI, 189-198 (1968). Kinoshita et al. "J. Med. Chem." 14, 103-109 (1971). Iyengar et al. "J.Med. Chem." 24, 975-981 (1981). Iyengar, Sami, Remers, et Bradner, Abstracts of Papers Annual Meeting of the American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, mars 1982,

Abstract No. MEDI 72.

Les brevets ci-après concernent la préparation de 7-(amino substitué)-mitosanes par réaction de la mitomycine A, de la mitomycine B ou d'un de leurs dérivés N^a-substitués avec une amine primaire ou secondaire: Cosulich et al. brevet EUA No.3.332.944 (25 juillet 1967); Matsui et al. brevet EUA No.3.420.846 (7 janvier 1969); Matsui et al. brevet EUA No.3.450.705 (17 juin 1969); Matsui et al. brevet EUA No.3.514.452 (26 mai 1970); Nakano et al. brevet EUA No. 4.231.936 (4 novembre 1980); Remers brevet EUA No.4.268.676 (19 mai 1981).

Différents dérivés delà mitomycine C portant un radical amino substitué en la position 7 ont aussi été obtenus par biosynthèse directe, en l'occurrence par addition de différentes amines primaires au bouillon de fermentation et par conduite de la fermentation de la manière habituelle pour produire une mitomycine (C.A. Claridge et al. Abst. of the Annual Metting of Amer. Soc. for Microbiology 1982. Abs. 028).

*£

La mitomycine C est la principale mitomycine obtenue par fermentation et constitue la forme commercialisée. La technique habituelle de conversion de la mitomycine C en mitomycine A convenant pour produire des analogues semi-synthétiques de la mitomycine C qui portent un radical amino substitué, telle qu'elle est exposée dans les mémoires précités,consiste à hy-drolyser la mitomycine C en le 7-hydroxymitosane correspondant, qui est un composé fort instable, puis à CD.MJ - 4 - méthyler celui-ci à l'aide de diazométhane, qui est une substance fort dangereuse à manipuler. Pour éviter de devoir méthyler à l'aide de diazométhane la 7-0-déméthyl-mitomycine A obtenue par hydrolyse de la mitomycine C, on a essayé aussi d'utiliser les 7-acyloxymitosanes (Kyowa Hakko Kogyo KK brevet japonais No. J5 6073-085, Farmdoc No. 56227 D/31).

La présente invention concerne un nouveau groupe de monoguanidino- ou mono- et bis-amidino-ana-logues de la mitomycine C dans lesquels l'atome d'azote du radical 7-amino et/ou l'atome d'azote du radical N^°carbamoyle de la mitomycine C font partie d'un radical amidino ou bien l'atome d'azote du radical 7-amino fait partie d'un radical guanidino. Les analogues correspondants de la mitomycine A portant un radical méthoxy en position 7 et le radical amidino en position N10 font également l'objet de l'invention. Les composés de l'invention répondent à la formule de structure suivante: 0 0 ch?oc-b I { * où A représente un radical amino, méthoxy, hydroxyle, (1-alcoyl inférieur-2(1H)-pyridinylidène)amino ou un radical de formule: R2 H R2 R2R5 3 4 I 3 · I 3 il R R N-C=N-, R -N-C=N-, R -N=C-N-, (ŒL) _ 2. ri q

a, ) n [ -R

- I I » 17 ou ‘7 H2N-C=N-, hn=c-n-, r' r CD.MJ - 5 - B représente un radical amino ou le radical amidino 34 ^ de formule R R N-C=N- et au moins l'un d'entre A et B représente l'un des radicaux spécifiés autres qu'amino, méthoxy ou hydroxyle, n représente 0, 1, 2 ou 3, RX représente un atome d'hydrogène ou radical alcoyle inférieur, alcanoyle inférieur, benzoyle ou benzoyle substitué dont le substituant est un radical alcoyle inférieur, alcoxy inférieur, halogéno, amino ou nitro, - 2 R représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle inférieur, phényle, (alcoyl inférieur)phényle, (alcoxy inférieur)phényle, halogénophényle, aminophé-nyle, nitrophényle, thiényle, furyle, cyano, di(alcoyl inférieur)amino, alcoxy inférieur ou alcoylthio inférieur , R représente un radical alcoyle inférieur, alcoxy inférieur ou constitue avec R^ et l'atome d'azote auquel ils sont unis un radical pyrrolidine, 2-, ou 3-(alcoyl .inférieur)pyrrolidine, pipéridine, 2-, 3- ou 4-(alcoyl inférieur)pipéridine, 2,6-di(alcoyl inférieur)-pipéridine, pipérazine, pipérazine 4-substituée (dont le substituant est un radical alcoyle ou carbalcoxy comptant chacun 1 à 8 atomes de carbone, phényle, méthyl-phényle, méthoxyphényle, halogénophényle, nitrophényle ou benzyle), azépine, 2-, 3-, 4- ou 5-(alcoyl inférieur)-azépine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-1-oxyde ou thiomorpholine-1,1-dioxyde , 4 , R représente un radical alcoyle inférieur ou con- 3 stitue avec R et l'atome d'azote auquel ils sont unis un radical pyrrolidine, 2- ou 3-(alcoyl inférieur)pyrrolidine , pipéridine, 2-, 3- ou 4-.(alcoyl inférieur)-pipéridine, 2,6-di(alcoyl inférieur)pipéridine, pipérazine, pipérazine 4-substituée (dont le substituant est un radical alcoyle ou carbalcoxy dont chacun compte CD.MJ - 6 - laß atomes de carbone, phényle, méthylphényle, métho-xyphényle, halogénophényle, nitrophényle ou benzyle), azépine, 2-, 3-, 4- ou 5-(alcoyl inférieur)azépine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-1-oxyde ou thio- morpholine-1,1-dioxyde, 5 R représente un radical ^g alcoyle autre que t-alcoyle, C^_^g alcanylef ^8 alcÿnyler ci_i8 ^alo-génoalcoyle, C^_^g ^ydroxyalcoyle, C^_g cycloalcoyle, aryle ou aralcoyle inférieur dont chacun compte jusqu'à 12 atomeis de carbone ou un radical hétéroalicycli-que ou hétéroaromatique de 3 à 8 chaînons dont au moins deux sont des atomes de carbone, 7 9 R et R représentent indépendamment des atomes d'hydrogène ou radicaux alcoyle inférieurs, étant entendu que chacun des radicaux alcoyle inférieur, alcanoyle inférieur et alcoxy inférieur précités compte 1 à 6 atomes de carbone.

Il est évident pour le spécialiste que certains des radicaux amidino donnent lieu à des formes tautomeres. Celles-ci sont également définies par les formules ci-dessus et font l'objet de l'invention.

Les substances de formule I ci-dessus ont une activité antitumorale chez les animaux d'expérience.

Elles sont utiles aussi comme intermédiaires pour la préparation d'autres composés manifestant cette activité. L'invention a aussi pour objet les procédés permettant de préparer les susbtances ci-dessus et de les transformer en autres composés utiles ayant une activité antitumorale chez les animaux d'expérience, comme décrit ci-après.

Le procédé de la présente invention mettant en oeuvre les substances ci-dessus comme intermédiaires pour la préparation d'autres composés ayant une activité antitumorale chez les animaux comprend la réaction d'un composé de formule I où A et/ou B représentent le radi- cal amidino indiqué avec une amine primaire conduisant à l'élimination du radical N^°-aminométhylène éventuel et à sa conversion en le radical NH2 que contiennent la mitomycine A et la mitomycine C. A quelques exceptions près, les amines primaires réagissent également à la position 7 en éliminant le radical amidino et en le remplaçant par le radical amino qu'elles apportent.

Ces procédés sont illustrés par les équations suivantes;

3 O 0 r2 R5-!*^ C

R3 I II $ I 3 ° H

1 >-c=N ^h2ocn= yk ch2o-cnh2 r4" Il X L«3 fi N cfOl ï I Ü-R1 « I_J>5-r1 1—u

formule II R m2. ^ formule III

R6NH J

Ψ R5NH2 / r3 r2 g g \ - C = N. y\ CH90-CNH9

IV

if formule IV

5 R représentant, le substituant porté par l'atome d'azote dans différentes 7-(amino-substitué) mitomy-cines C connues et nouvelles décrites ici et des amines primaires capables de déplacer le radical 7-amidino de formule II est choisi parmi les radicaux ^g alcoyle autres que t-alcoyle, C^_^g alcoxy, C^_^g alcényle, ^g alcynyle, C^_^g hal°génoalcoyle, c1_^g hydroxy-alcoyle, C^_g cycloalcoyle, aryle, aralcoyle inférieur CD.MJ - 8 - ou aralcoxy inférieur dont chacun compte jusqu'à 12 atomes de carbone et radicaux hétéroalicycliques et hétéroaromatiques comptant 3 à 8 chaînons dont au moins deux sont des atomes de carbone. représentant le substituant porté par l'azote des amines primaires capables d'attaquer uniquement le radical amidino N^° est le reste d'une amine aliphatique très faiblement basique ou d'une alcoylamine ou aralcoylamine à fort empêchement stérique. Des exemples en sont la trifluo-roéthylamine, la benzhydrylamine (ou aminodiphénylmétha-ne) et la t-butylamine.

Les composés de formule I sont obtenus par réaction de la mitomycine C, du 7-hydroxy-9a-méthoxy- la mitosane ou de.la mitomycine A ou bien d'un analogue N - substitué de l'un quelconque de ces composés avec un amide-acétal. Les composés de formule I dans lesquels A mais non B représente ce radical amidino peuvent être préparés aussi par réaction de la mitomycine C ou d'un de ses analogues N^3-substitués avec une base forte 7 pour la formation d'un anion en position N , puis par réaction de 1'anion avec un réactif capable d'engendrer le radical aminométhylène, comme un sel d'halogénométhy-lèneiminium.

Les composés préférés faisant l'objet de l'in-vention sont les analogues de la mitomycine C dans lesquels le radical 7-amino fait partie d'un radical amidino substitué ou non substitué. Ils manifestent une activité puissante contre les tumeurs expérimentales chez l'animal. Ces composés sont préparés par réaction de la mitomycine C avec un réactif capable de transformer le radical 7-amino en radical 7-amidino. Les réactifs préférés à cette fin sont les amides-acétals qui réagissent avec un bon rendement et dans des conditions modérées = avec la mitomycine C (exemples 1-5 et 18). D'autres réactifs formateurs d'amidine sont les halogénures CD.MJ - 9 -

X

« d1imidoyle (exemple 17), les sels d1halogénométhylène-iminium (exemple 15), les halogénures de 2-halogéno-l-alcoylpyridinium (exemple 16) et les iminoéthers ou iminothioéthers (exemples 13 et 14) qui réagissent avec la forme anionique de la mitomycine C résultant de la déprotonation du radical 7-amino par réaction avec une base forte. Les conditions pour la déprotonation de la mitomycine C reviennent à faire réagir la mitomycine C en solution dans le diméthylformamide avec environ 1,5 proportion molaire d'hydrure de sodium à la température ambiante. La réaction de la forme anionique résultante avec l'un des réactifs précités se fait de préférence avec 1 à 1,5 proportion molaire de celui-ci par rapport à la mitomycine C entre la température ambiante et environ -60°C. Les solvants organiques polaires aprotiques tels que le diméthylformamide, 1'hexaméthyl-phosphoramide, le diméthylsulfoxyde ou la pyridine sont utilisés comme milieux de réaction. Le procédé n'est toutefois pas limité à la formation de la mitomycine C anionique de cette seule façon, du fait que différentes variantes sont évidentes pour le spécialiste.

Le procédé préféré de préparation des composés de formule I où B ou bien A et?B représentent le 3 4 * radical amidino de formule R R N-C=N- consiste dans la réaction de la mitomycine C ou de la mitomycine A ou « d'un de leurs dérivés N^a-substitués avec un amide-acé- tal de formule: P1 2 f * 8

.^.N-C-OR formule V

R3 · 8 OR

3 4 8 2

oü R , R et R sont tels que définis ci-dessus et R

3 est un radical alcoyle inférieur ou cycloalcoyle comptant jusqu'à 6 atomes de carbone ou bien les deux ra-dicaux R sont unis en une chaîne alcoylène formant avec les deux atomes d'oxygène et l'atome de carbone intermédiaire une structure cyclique à 5 ou 6 chaînons.

La réaction de ces amides-acétals avec des amines primaires est classique et il est de la compétence du spécialiste d'effectuer la réaction avec la mitomycine C, la mitomycine A ou leurs dérivés Nla-alcoylés. On peut se référer à ce propos, par exemple, à H.E. Winberg brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 3.121.084 (11 février 1964) et à R.F. Abdulla et al. "The Chemistry of Formamide Acetals", Tetrahedron, volume 35 pages 1720-1724 (1979) .

La Demanderesse préfère exécuter la réaction dans un milieu de réaction anhydre liquide dans lequel le diluant est un liquide qui est compatible avec les conditions de réaction. De préférence, ce liquide est un hydrocarbure aliphatique halogène inférieur ou un alcanol inférieur ou plus avantageusement un mélange des deux. Le chloroforme et le méthanol de même que leurs mélanges conviennent éminemment. La réaction est exécutée à une température de 40 à 65°C pendant une durée suffisante pour qu'elle s'achève.

Lors de l'utilisation d'un grand excès (environ 60 fois) de l'acétal, le produit prépondérant est le produit bis-amidiné c'est-à-dire un composé de formule I où A et B représentent chacun le radical amidino. Le dérivé Nla-formylé apparaît parfois comme sous-pro-duit. Néanmoins, lorsque la quantité d'acétal est limitée (environ 10 fois) il se forme en plus du produit bis-,amidiné un produit mono-amidiné, à savoir un produit de formule I où A représente le radical amino et B représente le radical amidino. Les mélanges de ces produits de réaction sont séparés aisément par chromatographie comme décrit dans les exemples ci-après.

Divers amides-acétals commercialisés qui conviennent pour ce procédé sont mentionnés au tableau I repris de l'article précité de Abdulla et al., page 1685.

CD.MJ - 11 - !

TABLEAU I

Divers amides-acétals commercialisés

Acétal formule A (CH3)2NCH(OCH3)2 B (CHj-NCH(0CH„CH_)o 3 2 2 3 2 çh3 C (CH3)2NCH(OCH2-C-CH3)2 cn3 D (CH3)2NC(CH3)(OCH3)2

^O-CH

E (CH_)-NCH' I Z

32 -oJh2 /CH3 F (CHo)„NCH(0-CH 70 3 2 ^CB32 G (CH3)2NCH(OCH2CH2CH3)2 H (CH3>2NCH(0 O'- 2

Les composés de la formule I où R représente un radical cyano, di(alcoyl inférieur)amino, alcoxy inférieur ou alcoylthio inférieur sont obtenus par remplacement des amides-acétals dans le procédé ci-dessus par les orthocarbonates ci-après: ίΝ N (CH_ ) „

(CH-J-N-C-iOC-Hç),, (C-H-0 ) „C

3 2 2 5 2 2 5 2 ^n(ch3)2

formule VI formule VII

(C2H5£>)3C-N(CH3)2 (C2H5S) 3C-N(CH3)2

formule VIII formule IX

Ces réactifs peuvent être obtenus comme décrit pour celui de formule VI par Kantlehner et al., Liebigs Ann. Chem., 1981, 70-84 et pour ceux des formules VII, CD.MJ - 12 - VIII et IX par H. Meerwein, et al., Liebigs Ann. Chem.

641, 1 (1961).

Les dérivés amidinés de formule I cù repré-2 2 5

3 R 3 RR

sente R NHC=N-, ou R^N^-N- sont obtenus à partir de la forme anionique de la mitomycine C ou d'un de ses dérivés N -substitués comme décrit précédemment. Des sels d'halogénométhylèneiminium convenant pour le pro-» cédé de l'invention ont été décrits dans la littérature.

Des exemples en sont donnés par W. Kantlehner dans "Advances in Organic Chemistry", volume 9, partie 2,

Wiley Interscience, 1079, pages 81 et 82. Le tableau II ci-après est repris de l'article de Kantlehner.

Tableau II

Sels d'halogénométhylèneiminium r2-CJ>X 3 4

^ NR R

R2 R3 R4 X Y P.F.,°C

H CH3 CH3 Cl Cl 140-145 H CH3 CH3 Br Br 156-158 H CH3 CH3 I I 110 H -(CH„)c- Cl Cl 58-66 2 5 H CH-, C-H- Cl Cl huile 3 6 5 * CH3 CH3 CH3 Cl Cl 150-120 C2H5 CH3 CH3 Cl Cl 68-70 C2H5 -{CH2)5- Cl Cl 82-85 n-C3H7 CH3 CH3 Cl Cl 82-84 n-C-H_ C-H- C-H- Cl Cl 20 3 7 2 5 2 5 i-C,H_ C-H- C-H- Cl Cl 20 3 7 2 5 2 5 n-C .Hn CH- CH_ Cl Cl 50-55 4 9 3 3 -(CH2)3- CH3 Cl Cl 75-79 C-H.. CH- H Cl Cl 93-95 b b 6

CrHc CH- H Cl Br 115-117 6 5 3 C,Hc CH- D Cl Br 115-118 6 5 5 C-H- CH- CH0 Cl Cl 95-96 b 5 3 6

R2 R3 R4 X Y P.F./C

C6H5 -(CH-),.- Cl Cl 136-140 2 3

CgH5 -(CH2)4- Br Br3 64 C-H- -(CH,)c- Br Br ^ 97 6 5 » 2 5 3 C-Hj. -CH-(CH-) .-CH- Br Br0 125 6 b I 2 4 j b ch3 ch3 C-H- -CH - (CH- ) 0-CH- Br Br- 124 6 5 I 2 3 | 3 ch3 ch3

CgH5 CH3 CH3 Br Br 120 (déc.) C-H- -(CH-).- Br Br 178 (déc.) 6 b 2 4 C^-Hr- -(CH-)-- Br Br 195 (déc.) 6 5 2 6 C-H- -CH-(CH-).- Br Br 160 6 5 I 2 4 ch3

CgH5 -CH-(CH2)3-CH- Br Br --- ch3 ch3 C-Hr- -CH-(CH- ) , - Br Br 85-95 u5 I 2 4 n_C3H7 p-OCH--C-H . -(CH-)c- Cl Cl 85 c 3 6 4 2 5 P-NO--C-H. CH- CH- Cl Cl 90 (déc.) c 2 6 4 3 3 p-NO--CrH . -(CH-)-- Cl Cl 117-119 2 6 4 2 b Π Λ CH3 H Cl Cl 103-104 CH- H Cl Br 132-134 J (déc.) CH3 D Cl Cl 103-105 CH- D Cl Br 133-134 (déc.) C2H5 H Cl Cl 93-94 C-H- H Cl Br 151-152 2 b CH3 CH3 Cl Cl 181-182 C2H5 C2H5 Cl Cl 99-103

J

Lorsqu'un sel d'halogénométhylèneiminium tel qu'illustré au tableau II sert de réactif, il est parfois avantageux d'utiliser 1'amide correspondant comme solvant, c'est-à-dire 1'amide dont est issu le sel d'iminium. Lorsque les amides correspondants sont solides, 1'hexaméthylphosphoramide ou la pyri-dine conviennent aussi. Ceci est illustré dans les exemples 17 et 19.

Les chlorures d1imidoyle issus des formamides N-substitués conviennent également comme réactifs à cette fin. Leur préparation est connue, comme il ressort du tableau III repris de H. Ulrich dans "T.he Chemistry of Imidoyl Halides", Plenum Press, New York, 1968, pages 74-76. La réaction de ces composés avec les amines formant les amidines est également bien connue, comme décrit par S.R. Sandler et W. Karo dans "Organic Chemistry", volume 12-III, A.T. Blomquist et H. Wasserman, éditeurs, Academie Press New York, page 227.

Tableau III

Chlorures d*imidoyle 2 3

R -C=NR I

Cl R2 R3 P.Eb.°C/mm (P.F. , °C) CH3 C6H11 45-56/0,04 C,Hc (118-120) 6 5 2-CH_C,H . 60/0,1 3 6 4 2-FCßH4 70/0,25 2-ClC6H4 111-114/14 2-BrCgH4 142-143/12 C«.Hc C,H,, 43-44/0,02 ZD D il CHoCHo0Cl C_Hc 72-75/14

3 Z Z D

(CH0)„CH C,Hin 40-41/0,001 3 2 6 11 CD.MJ - 15 -

Tableau III (suite) 2 3 R R P.Eb. °C/mm (P.F., °C) 2 CH3C6H4 67-0,3 4-C«3C6H4 80-85/0,8 4-CH3OC6H4 93-94/0,25 n“C (C0Hj. )CH n-C.H„ 72-76/0,7 4 y z d 4 y (CH3)3C C6H11 104-106/20 C6H10C1 C2H5 102/3

CgH5 CH3 46-47/2 90-92/13 C2H5 47-48/1 1- C 3 H 7 52-54/1 n-C4H9 85-86/1 C_H,, 110-112/1 o ±1 (66-67) CH0C_Hc 128-130/1 2 6 5

CcHc 175-176/12 O 5 (40-41) 2,6-(CH3)2C6H3 153-156/1 2- CH^OC^H . 188-190/6 o D 4 4-CHo0C,H . 198-200/20 3 b 4 (61-63) 2,4-(0oN)„CcH_ (122-124) 2 2 6 3 2-CH-,CcH . C-Hr- 174-177/10 3 6 4 6 5 4-CH0C,H . C_Hc 141-144/1 3 6 4 6 5 (40-41) 4-ClC,H. CcHc (66-67) 6 4 6 5 4-BrCgH4 4-BrCgH4 (93-94) 4-CHo0C,H . CcH,- 183-185/3 3 6 4 6 5 (73-76) 4-0_NC,H . (40-42) 264 6 11

CcHc (137-138) b 5 4-02NCgH4 (132-134) CD.MJ - 16 -

Tableau III (suite) R2 R P.Eb. °C/mm (P.F., °C) 3'5-(02N)2C6H3 C6H11 (86"87) 2 4 6-(CH0),C,H, CcHc 164-165/1 3362 65 (60-62)

Les composés de formule I où A représente le R2 ✓ · radical amidmo non substitue sur l'azote, Η„Ν-0=Ν-,

‘ 2 5 Z

RR

ou HN=C-N- sont obtenus par réaction d'un imino éther amino-protégé avec la mitomycine C, un dérivé N -substitué de celle-ci ou un dérivé N a-alcoylé. inférieur de l'une ou l'autre forme anionique de la manière décrite ci-dessus. Le radical protecteur est ensuite éliminé de manière classique. Le formimidate d'iso-propyle dont le radical amino est protégé par le radi-ca -triméthylsilyléthoxycarbonyle est un réactif approprié (exemple 13).

ciœ2CH2CH2si ( ch3 ) 3 (CH3)2CH0CH=NH.HC1-(CH3)2CH0CH=NC02CH2CH2Si(CH3)3

Lorsque A représente un radical (1-alcoyl in- / férieur --2 (1H) -pyridinylidène ) amino ou le radical de ’ formule

--( CH„ ) OU (CH.J

Π2η r

J7 S"V

P

les procédés de préparation consistent à faire réagir la forme anionique de la mitomycine C avec des sels d'halogénométhylèneiminium cycliques ou halogénures 2 3 d'imidoyle cycliques où R et R de la formule 7 2 3 ? ? R -N-C=N- sont unis en un cycle. Des réactifs convenant pour la réaction avec la mitomycine C anionique sont l'iodure de 2-chloro-l-méthylpyridinium (exemple 16), le chlorure de 2-chloro-4,5-dihydro-l-méthyl-l(3H)-pyr- rolidinium (tableau II), le chlorure de N,N'-diméthyl- N,N’-triméthylènechloroformamidinium (exemple 28) et d'autres halogénures d1imidoyle cycliques issus de 2-azétidinones, de 2-pyrrolidinones, de 2-pipéridinones 7 9 et de 2-azepmones. A nouveau, lorsque R ou R dans , le produit final représente un atome d'hydrogène, le radical protecteur tel que ci-dessus est utilisé dans le sel d'halogénométhylèneiminium cyclique intermédiaire.

Les composés de formule I où A ou bien A et B

o . R2 ^ 3 4e représentent un radical amidino de formule R R N-C=N- réagissent avec les amines primaires de formule R^NH_ 5 ^ où R est choisi parmi les radicaux C2._18 alcoYle au~ très que t-alcoyle, c^_^g alcényle, c^_^g alcynyle,

Cl-18 haloalcoyle, C^_^g hydroxyalcoyle, C^_g cycloal-coyle, aryle ou aralcoyle inférieur dont chacun compte jusqu'à 12 atomes de carbone et les radicaux hétéro-alicycliques ou hétéroaromatiques comptant 3 à 8 chaînons dont au moins deux sont des atomes de carbone.

La seule limitation pesant sur le choix de l'amine % primaire, autre que l'absence de radicaux fonctionnels incompatibles avec les conditions de réaction, est que l'atome d'azote de la fonction amine est uni àun atome de carbone qui porte au moins un atome d'hydrogène et moins de deux radicaux aryle. Un composé organique liquide anhydre sert de milieu de réaction et tout composé de ce genre convient pour autant qu'il soit compatible avec les conditions de réaction et ne participe pas de façon nuisible à la réaction. Un excès moléculaire de l'amine primaire est généralement utilisé.

Une température de réaction d'environ -15°C à +50°C

CD.MJ - 18 - est préférée. Le produit de la réaction est un 7-(amino substitué)-9o(-méthoxymitosane à savoir un dérivé de mitomycine C portant un substituant tel que défini à propos de R' sur le radical 7-amino. Ces composés sont connus comme ayant une activité notable contre les tumeurs expérimentales chez les animaux.

Certaines amines primaires de formule R^NH2 se sont révélées impropres à déplacer le radical 7-ami- dino par le procédé décrit dans le paragraphe ci-dessus.

6 R° représente un radical alcoyle, cycloalcoyle, cyclo-alcoylalcoyle, aralcoyle ou hétéroalicyclique de 4 à 18 atomes de carbone dont l'atome de carbone portant le radical amino est un atome de carbone tertiaire ou un atome de carbone secondaire portant deux radicaux aryle. Certaines autres amines aliphatiques faiblement basiques, comme la trifluoroéthylamine ne permettent pas non plus de déplacer le radical 7-amidino. Ces amines sont utiles pour transformer un composé de formule I où A et B représentent chacun le radical ami- 34 R2 dino de formule RJR4N-C=N- en un composé de formule I où seul A représente ce radical amidino. Ces amines, bien qu’elles n'aient pas la possibilité de déplacer le radical 7-amidino, ont toutefois la capacité de ’ scinder le radical amidino B en un radical NH2 pour donner naissance à la fonction carbamido caractéristique des mitosanes non substitués. L'amine elle-même convient comme milieu de réaction ou bien un système solvant du type défini dans le paragraphe précédent peut être mis en oeuvre. Ce procédé est exécuté de préférence à une température de 20 à 60°C.

Les points de fusion sont déterminés à l'aide d'un appareil à point de fusion en capillaire Thomas-Hoover et ne sont pas corrigés. Les températures sont exprimées en degrés Celcius. Les spectres de résonance magnétique nucléaire du proton (RMN) sont relevés à l'aide d'un spectromètre \7arian XL100, dans la pyridine d,. sauf indication contraire. Les spectres infrarouges o (IR) sont relevés à l'aide d'un spectrophotomètre Beckman 4240 sur l'échantillon mélangé à du bromure de potassium pastillé, les grandeurs étant les"^max en cm-^. Les spectres UV et visibles sont enregistrés à l'aide d'un spectrophotomètre Varian-Cary 219.

La chromatographie en couche mince (CCM) est effectuée sur des plaques pré-enduites de 0,25 mm de gel de silice qui sont observées en lumière UV. La chromatographie rapide est exécutée sur de la silice de Woelm (32 à 63yum). Les solvants sont évaporés sous pression réduite au-dessous de 50°C.

EXEMPLE 1 -Composé V

7-[ (Diméthylamino ) méthylènelamino-N"^-(diméthylamino)- méthylène-9a-méthoxymitosane

Composé VI

7-[(Diméthylamino)méthylène]amino-N10-(diméthylamino)-méthylène-N'*"a-formyl-9a-méthoxymitosane 0 £ nh2 yl /H2oi2 c,W>

3 0 NH I

1-^ (CH30)2CHN(CH3)2

Mitomycine C ψ 0

0 »I

(ch3)2nch=n ïï ^ch2ocn=chn(ch3)2 I I L·’™! CH3-^Sf^ N 'y.

Ö |_I KH

V

rn m.t - 20 - 0 ? (CH3)2NCH=N>v CH2OCN=CHN (CH^ ) 7 | π>’ CHiTT N >'

0 |_ _}lCHO

VI

On ajoute au total 9,6 ml (fractions de 2,4 ml à 0, 18, 21 et 23 heures) de diméthylacétal de N,N-dimé-thylformamide à une suspension de 500 mg (1,50 millimole· ) de mitomycine C dans 25 ml de chloroforme et on agite la suspension à environ 50° pendant 41 heures. Après évaporation du solvant et des réactifs en excès sous pression réduite, on obtient un résidu vert foncé; la CCM (chlorure de méthylène/méthanol 20*1) révèle l'absence de la mitomycine C et la présence de deux nouveaux constituants verts (Rf = 0,16 et 0,22). On isole le constituant majeur (Rf = 0,16) par chromatographie rapide avec élution au moyen de chlorure de méthylène /méthanol 20:1 pour obtenir un solide vert (340 mg, 51,5%) donnant, par dissolution dans l'éther diéthylique, puis addition d'hexane^ le composé V qui est une poudre amorphe vert foncé.

RMN (pyridine d, δ); 2,18 (s, 3H), 2,70 (si, lHi , 2,76 (s, 3H) , 2,82 (s, 3H), 2,86 (s, 6H), 3,22 (s, 3H), 3,30 (si, 1H), 3,60 (d, J=12Hz), 4,12 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4,43 (d, 1H, J=12Hz), 4,90 (si, 1H), 5,10 (t, 1H, J=10 Hz), 5,52 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 7,85 (s, 1H), 8,64 (s, 1H) .

IR(KBr)V cm-1: 3300, 2930, 1675, 1620, 1545, 1230, 1060. maX

UV(Ho0)X ,nm: 390 et 244 2 m 3.x

Analyse pour ('21H28N6°5: calculé C, 56,71; H, 6,08; N, 18,90% trouvé C, 56,20; H, 6,28; N, 17,88% οη.Μ,τ _ 21 -

On isole le constituant mineur (Rf = 0,22) (180 mg, 25,35%) sous la forme d'un solide amorphe par précipitation à partir de l'éther diéthylique et de l'hexane et on l'identifie comme étant le composé VI.

RMN (pyridine dj-,if ); 2,20 (s, 3H), 2,60-3,00 (3 sin-gulets, 12H),3,2 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 4,04 (d, 1H, J=4Hz), 4,16 (dd, 1H, J=12, 4Hz), 4,60 (d, 1H, J=13Hz), 4,86(t, 1H, J=12Hz), 4,90 (s, 1H), 5,48 (dd, 1H, J=12, 4Hz), 7,90 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 9,06 (s, 1H).

IR(KBr)~L? cm“1: 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540, 1250, 1060.

UV(Ho0),A nm: 390 et 244 z max

Analyse pour C^H^NgO,.: calculé C, 55,89; H, 5,93; N, 17,78% trouvé C, 55,41; H, 5,96; N, 16,99% L'examen par CCM des solutions des composés V et VI dans l'acétate d'éthyle ou dans le diméthylacétal de N,N-diméthylformamideimises à reposer à la température ambiante pendant plus de 10 heures révèle que le composé VI (Rf = 0,22) se convertit en composé V (Rf = 0,16) pour donner une solution fortement enrichie en ce dernier .

On exécute les exemples 2 à 7 suivant le mode opératoire de l'exemple 1 avec les différences indiquées ci-après afin d'obtenir différents autres composés conformes à l'invention.

EXEMPLE 2 -Composé VII

7-[(Diisopropylamino)méthylène]amino-N10-(diisopropyl-amino)-méthylène-9a-méthoxymitosane

On chauffe sous agitation pendant 15 heures à 53e une suspension de mitomycine C (200 mg, 0,6 millimole) dans du diéthylacétal de N,N-diisopropylforma-mide (3 ml). On verse le mélange de réaction dans 50 ml d'eau et on l'extrait à l'acétate d'éthyle (3 x 30 ml).

CD.MJ - 22 -

On sèche les extraits organiques combinés (Na2S04) et on les évapore pour obtenir un sirop vert foncé dont la CCM (chlorure de méthylène/méthanol 10:1) révèle la présence d'un constituant majeur à Rf = 0,43 en présence d'impuretés plus mobiles (Rf = 0,45 - 0,50). On isole le constituant majeur VII sous la forme d'un solide vert foncé (156 mg, 46,8%) par deux chromatogra-phies rapides avec élution à l'aide de chlorure de méthylène/méthanol 20:1.

RMN (CDC13,£): 1,10-1,50 (5 s, 24H, 1,94 (s, 3H), 2,78 (dd, 1H, J=4, 2Hz) , 3,05 (d, 1H, J=4Hz), 3,22 (s, 3H), 3'60 (m, 5H), 3,75 (dd, 1H, J=10, 4Hz) , 4,24 (d, 1H, J=12 Hz), 4,56 (t, 1H, J=10 Hz), 4,88 (dd, 1H, J=10, 4Hz) , 7,83 (S, 1H) , 8,67 (s, 1H).

IR (KBr), cm-1: 3320, 2990, 2940, 1680, 1630, 1600, 1550, 1235, 1060.

UV(MeOH)λ , nm: 246 et 393 max '

Analyse pour C29H44N5°5: calculé C, 62,55; H, 7,91; N, 15,10% trouvé C, 62,03; H, 7,80; N, 14,60%

EXEMPLE 3 -Composé XIV

7-[(Diméthylamino)méthylène]amino-Nx -(diméthylamino)-méthylène-9a-méthoxy-N -méthylmitosane

Dans le présent exemple, on part de porfiro-mycine (N -méthyl mitomycine C) en quantité de 130 mg, (0,37 millimole) pour la réaction avec 0,8 ml (1,5 millimole) de diméthylacétal de N,N-diméthylformamide dans 10 ml de chloroforme et 2 ml de méthanol comme solvant pour la réaction d'une durée de 50 minutes à 50” . On isole le composé XIV sous forme d'un sirop après évaporation des solvants et on le purifie par chromatographie rapide sur 20 g de gel de silice qu'on élue avec du chlorure de méthylène/méthanol (20:1).

RMN (pyridine d5,6); 2,22 (si, 4H), 2,28 (s, 3H), 2,70 CD.MJ - 23 - (d, 1H, J=4Hz), 2,80 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,90 (s, 6H), 3,20 (s, 3H), 3,52 (dd, 1H, J=2, 12Hz), 4,10 (dd, 1H, J=4, 11Hz), 4,38 (d, 1H, J=12 Hz), 4,92 (t, 1H, J=llHz), 4,96 (si, 1H), 5,46 (dd, 1H, J=4, 11Hz), 7,86 (s, 1H), 8,70 (s, 1H).

CCM avec du chlorure de méthylène/méthanol 9:1, Rf = 0,53. IR (KBrWmax, cm“1: 2930, 1680, 1620, 1545, 1230, 1115. UV(MeOH) \ max, nm: 386 et 243.

Analyse pour C^^NgO,.: calculé C, 57,60; H, 6,55; N, 18,33% trouvé C, 57,11; H, 6,11; N, 17,99%

On obtient de la sorte, sous forme de sous-produit ^le composé XV ou 7-amino-Nx -diméthylaminométhylè-ne-9a-méthoxy-N10-méthylmitosane avec un rendement de 30% CCM, Rf = 0,40 (chlorure de méthylène/méthanol 9:1). RMN (pyridine d,S ): 2,02 (s, 3H), 2,16 (dd, 1H, J=2, 5Hz), 2,25 (s, 3H), 2,66 (d, 1H, J=5Hz), 2,76 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 3,18 (s, 3H), 3,51 (dd, 1H, J=2, 12Hz), 4,08 (dd, 1H, J=4, 10Hz), 4,50 (d, 1H, J=10Hz), 4,90 (t, 1H, J=10 Hz), 5,05 (si), 5,43 (dd, 1H, J=4, 10Hz), 8,70 (s, 1H).

IR (KBr)^ , cm“1: 3430, 3330, 3270, 2940, 2960, 1690, 1625, 1553, 1230, 1125.

UV(MeOH)λ , nm: 358, 244 et 216.

max ' '

Analyse pour ci9H25N5°5 calculé C; 56,53; H, 6,20; N, 17,38% trouvé C, 54,68; H, 6,13; N, 16,59% EXEMPLE 4 -

Composé IX

9a-Méthoxy-7-[(1-pipéridinylamino)méthylènelamino-N1^-(1-pipéridinylméthylène)mitosane

On fait réagir 3 ml de N-(diéthoxyméthyl)-pipéridine et 200 mg de mitomycine C à 60° pendant 2,5 heures en solution dans du chloroforme (3 ml).

On obtient avec un rendement de 27,6% le produit dont CD.MJ - 24 - la CCM indique un Rf de 0,20 (chlorure de méthylène/ méthanol 20:1).

RMN (pyridine d,S ): 1,38 (si, 12H) , 2,20 (s, 3H), 2.80 (si, 1H), 3,24 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 5H), 3,40- 3.80 (m, 5H), 4,13 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 4,45 (d, 1H, J=12 Hz), 4,90 (si, 2H), 5,12 (t, 1H, J=l0Hz), 5,56 (dd, 1H, J=10 4Hz) , 7,87 (s, 1H), 8,70 (s, 1H).

IR(KBr)^ , cm-1: 3300, 2950, 2870, 1680, 1630, 1610, 1550, 1200, 1070.

. UV(Ho0)X , nm: 394 et 246.

2 max

Analyse pour C27H36N6°5 calculé C, 61,79; H, 6,87; N, 16,02% trouvé C, 61,01; H, 6,85; N, 15,34%

On obtient comme constituant majeur le dérivé N^a-formylé du composé ci-dessus,qui est le composé VIII ou N^a-formyl-9a-méthoxy-7-[(l-pipéridinylamino)-méthylène]amino-Nf0-(l-pipéridinylméthylène)mitosane, avec un rendement de 43% et dont la CCM indique un Rf de 0,25 (chlorure de méthylène/méthanol 20:1).

RMN (pyridine d^,S ): 1,38 (si, 12H),2,23 (s, 3H), 3,00-3,40 (m, 4H), 3,23 (s, 3H), 3,40-3,90 (m, 6H), 4,07 (d, 1H, J=4Hz), 4,18 (dd, 1H, J=ll, 4Hz), 4,63 (d, 1H), 4,90 (t, 1H, J=llHz), 4,94 (si, 1H), 5,54 (dd, 1H, J=ll, 4Hz), 7,94 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,08 (s, 1H).

IR(KBr)^ , cm-1: 2490, 2860, 1698, 1630, 1600, 1540, 1250, 1060.

UV(Ho0)λ , nm: 394 et 247.

2 max

Analyse pour C28H36N6°6 calculé C, 60,08; H, 6,52; N, 15,21% trouvé C, 59,99; H, 6,17; N, 15,07%

EXEMPLE 5 -Composé X

9a-Méthoxy-7-[(1-morpholino)méthylènelamino-N^-t1-mor-pholinométhylène)mitosane

On chauffe à environ 53° pendant 42 heures CD.MJ - 25 - une suspension agitée de mitomycine C (200 mg, 0,6 millimole) dans du chloroforme (10 ml) et de la N-diétho-xyméthylmorpholine (4 ml). On concentre le mélange de réaction en un sirop sous vide poussé. On effectue une séparation par chromatographie rapide sommaire (chlorurede méthylène/méthanol 25:1) pour isoler les composés de couleur verte de l'excès des réactifs. On dissout l'ensemble des composés verts dans 20 ml d'acétate d'éthyle et on lave la solution à l'eau (3 x 20 ml).

, On extrait le mélange des eaux de lavage à nouveau à l'acétate d'éthyle (3 x 15 ml). Après combinaison de toutes les fractions dans l'acétate d'éthyle, on sèche celles-ci (Na2S04) et on les évapore pour obtenir un sirop vert foncé dont la CCM (chlorure de méthylène/ méthanol 10:1) révèle un constituant vert défini à Rf = 0,33, outre différentes impuretés vertes (Rf = 0,35 à 0,40). Par chromatographie rapide, on isole le composé de Rf = 0,33 (130 mg, 56,8%) qui est un solide amorphe vert foncé identifié comme étant le composé X.

RMN (CDC13,6 ): 1,91 (s, 3H), 2,80 (si, 1H), 3,13 (d, 1H, J=2Hz), 3,22 (s, 3H), 3,30-3,94 (m, 18H), 4,20 (d, 1H, J=12Hz), 4,40 (si, 1H), 4,54 (t, 1H, J=10Hz), 4,88 (dd, 1H, J=10Hz, 4Hz), 7,74 (s, 1H), 8,51 (s, 1H). IR(KBr)^ , cm-1: 3300, 2970, 2920, 1680, 1625, 1550, 1235, 1070.

ϋν(ΜθΟΗ)λ , nm: 386 et 244. max '

Analyse pour C25H32N6°7: calculé C, 56,78; H, 6,06; N, 15,90% trouvé C, 53,07; H, 6,03; N, 15,37%

EXEMPLE 6 -Composé XVI

7-Amino-N10-diméthylarninométhylène-9a-méthoxymitosane On dissout de la mitomycine C (200 mg, 0,6 millimole) dans 10 ml de chloroforme et on ajoute 2 ml de méthanol et 0,64 ml de diméthylacétal de N,N-dimé- thylformamide (4,8 millimoles), puis on agite la solution à environ 50° pendant 50 minutes. La CCM (chlorure de méthylène:méthanol 90:10) révèle une trace de mitomycine C qui n'a pas réagi (Rf = 0,22) et deux nouveaux constituants (Rf = 0,42 et 0,33 respectivement).

On concentre la solution sous pression réduite en un sirop qu'on soumet à la chromatographie rapide (25 g .de gel de silice) avec élution au chlorure de méthylène/ méthanol (20:1).

On isole le constituant le plus mobile (Rf = 0,42) sous la forme d'un solide vert (50 mg, 22,5%) qu'on identifie par son spectre RMN (pyridine d^) comme étant le composé V.

On isole le constituant majeur bleu (Rf = 0,33) sous la forme d'un solide amorphe (148 mg, 63,3%) qu'on caractérise comme étant le composé XVI. On prépare un échantillon analytique par précipitation à partir de chlorure de méthylène et de n-pentane.

RMN (pyridine d5, <5 ): 2,02 (s, 3H), 2,76 (si, 4H), 2,86 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 3,28 (d, 1H, J=4Hz), 3,62 (dd, 1H, J=2, 13Hz), 3,94 (si), 4,14 (dd, 1H, J=4, 12Hz) , 4,56 (d, 1H, J=13Hz), 5,12 (t,lH, J=lOHz), 5,52 (dd, 1H, J=4, 10Hz).

IR(KBr)Vmax, cm-1: 3430, 3320, 3280, 2930, 1675, 1615, 1650, 1230, 1115.

UV(H_0)λ , nm: 364, 244 et 219.

2 max' '

Analyse pour ci8H23N5°5 calculé C, 55,48; H, 5,91; N, 17,98% trouvé C, 54,70; H, 6,14; N, 17,95% EXEMPLE 7 -

Composé XVII

7,9a-Diméthoxy-Nl°-diméthylaminométhylènemitosane

On remplace la mitomycine C de l'exemple 1 par la mitomycine A (170 mg) qu'on fait réagir avec le diméthylacetal de N,N-diméthylformamide (0,6 ml) en solution dans le chloroforme/méthanol (10:1) à 50° pendant 1 heure. On obtient avec un rendement de 48% le composé recherché dont la CCM indique un Rf de 0,50 (chlorure de méthylène/méthanol 9:1).

RMN (pyridine d5,6 ): 1,83 (s, 3H), 2,76 (si, 4H), 2,86 (s, 3H), 3,22 (s, 3H), 3,28 (d, 1H), 3,56 (dd, 1H, J=2, 13Hz), 4,02 (s, 3H), 4,10 (dd, 1H, J=4, 10Hz) , 4,24 (d, J=13Hz), 5,10 (t, 1H, J=10Hz), 5,50 (dd, 1H, J=4, 10Hz), 8,67 (s, 1H).

IR (KBrW , cm-1: 3300, 2930, 1675, 1655, 1625, 1500, 1235, 1120.

UV (H„0)X , nm: 530, 316 et 244.

2 ' max' '

Analyse pour ^igH24N4°6 calculé C, 56,39; H, 5,94; N, 13,85% trouvé C, 56,51; H, 5,92; N, 13,71%

On obtient avec un rendement de 16,5% le dé-rivé N -formylé du composé XVII, c'est-à-dire le composé XVIII ou 7,9a-diméthoxy-N^°-diméthylaminométhylène-N^a-formylmitosane, dont la CCM indique un Rf de 0,61 (chlorure de méthylène/méthanol 9:1).

RMN (pyridine d,6 ): 1,88 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 2,85 (s, 3H), 3,54 (d, 1H), 3,62 (si, 1H), 4,05 (s, 3H) , 4,05 (si, 1H), ,4,14 (dd, 1H,,J = 4, l2fiz), 4,40 (d, 1H,.J=13Hz), 4,86 (t, 1H, J=12Hz), 5,42 (dd, 1H, J=4, 12Hz) , 8,66 (s, 1H), 9,08 (s, 1H).

EXEMPLE 8 -Composé XIX

7-(Diméthylaminométhylène)amino-9a-méthoxymitosane

On ajoute de 1'aminodiphénylméthane (2,2 ml, 10,8 millimoles) à 600 mg de composé V (1,35 millimole) en solution dans du méthanol (10 ml) et on agite la solution à 54° pendant 4 heures. On observe l'avancement de la réaction par CCM (chlorure de méthylène/méthanol 90:10). Au terme des 4 heures, le composé de départ (Rf =0,35) a disparu et une nouvelle zone verte importante (Rf = 0,29) est apparue. On concentre la CD.MJ - 28 - solution sous pression réduite et on soumet le sirop résultant à la chromatographie rapide (25 g de gel de silice) avec élution à l'aide de chlorure de méthylène/ méthanol 20:1. On rassemble les fractions contenant le composé vert (Rf = 0,29), on les sèche (Na2S0^) et on les concentre. On isole le composé XIX sous la forme d'un solide amorphe (215 mg, 41%).

RMN (pyridine d,8 ): 2,18 (s, 3h), 2,70 (si, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 3,08 (si, 1H), 3,24 (s, 3H), 3,56 (Si, 1H, J=12Hz), 4,00 (dd, 1H), 4,44 (d, 1H, J=12Hz), 5,06 (t, 1H, J=l0Hz), 5,56 (dd, 1H, J=10, 4Hz) , 7,58 (si, 2H) , 7,88 (s, 1H) .

IR ( KBr )"\? , cm-1: 3300-3450, 2960-2910, 1715, 1620, 1535, 1050.

U.V (Ho0)λ , nm: 390 et 226.

2 max '

Analyse pour C]_gH23N5°5 calculé C, 55,48; H, 5,91; N, 17,98% trouvé C, 54,83; H, 5,67; N, 16,90%

En remplaçant le composé V dans l'exemple 8 comme composé de départ par le dérivé N -formylé ou composé VI et en exécutant la réaction pendant 20 heures à la température ambiante, on obtient le composé XIX en substance de la même façon et avec le même rendement .

*

EXEMPLE 9 -Composé XX

7-(Diméthylaminométhylène)amino-9a-méthoxy-N a-méthyl-mitosane

On dissout 1 g du composé XIV (2,18 millimoles) dans du méthanol (20 ml) et on ajoute de l'amino-diphénylméthane (3,5 ml, 17,18 millimoles), puis on agite la solution résultante pendant 5 heures à la température ambiante et pendant 5 heures à 40° . La CCM (Ci^C^MeOH 90:10) du mélange de réaction révèle que la majeure partie du composé- de départ (Rf = 0,55) CD.MJ - 29 - a été consommée et qu'il s'est formé une nouvelle zone verte importante(Rf = 0,48). La poursuite des opérations comme dans l'exemple 8 conduit au composé XX qui est un solide amorphe (350 mg). On achève la purification par chromatographie rapide (7 g de gel de silice) avec élution au moyen de chlorure de méthylène/ méthanol (250 ml, 96/4 v/v) et par précipitation du solide résultant (Rf = 0,48) à partir de chlorure de méthylène (5 ml) et d'hexane (50 ml) pour isoler le composé XX analytiquement pur (314 mg, 35,7%) qui est un solide.

RMN (CDCl3,<f ): 1,93 (s, 3H) , 2,26 (si, 1H), 2,26 (s, 3H), 3,06 (s, 3H), 3,08 (si, 1H), 3,10 (s, 3H) , 3,20 (s, 3H), 3,46 (dl, 1H, J=12, 1Hz) , 3,58 (dd, 1H, J=4, 10Hz) , 4,17 (d, 1H, J=12Hz) , 4,38 (t, 1H, J=10Hz), 4,68 (m, 2H), 4,76 (dd, 1H, J=4, 10Hz), 7,72 (s, 1H).

IR (KBr)^ , cm-1: 3440, 3350, 3190, 3020, 2940, 2910, 1725, 1630, 1550, 1055.

UV (MeOH)Λ , nm: 386 et 231. max

Analyse pour calculé C, 56,53; H, 6,20; N, 17,36% trouvé C, 53,90; H, 5,13; Ni; 15,81%

EXEMPLE 10 -Composé XI

7-(n-Propyl)amino-9a-méthoxymitosane , On dissout 330 mg du composé V (0,74 milli mole) dans du méthanol anhydre (10 ml) et on y ajoute de la n-propylamine (1,0 ml). On agite le mélange de réaction pendant 6 heures à la température ambiante et pendant 16 heures à environ 0-4°. On évapore le solvant et les réactifs en excès sous pression réduite et on soumet le résidu à une chromatographie rapide sur gel de silice. On reprécipite le constituant bleu (Rf = 0,40),obtenu par élution au chlorure de méthylène/ méthanol 30:1,à partir du chlorure de méthylène au moy CD.MJ - 30 - en d'hexane pour obtenir le composé XI gui est une poudre grise amorphe (125 mg, 44,5¾).

RMN (pyridine d_5,6 ) : 0,80 (t, 3H) , 1,42 (m, 2H) , 2,11 (s, 3H), 2,74 (si, 1H), 3,12 (si, 1H), 3,22 (s, 3H), 3,36 (q, 2H), 3,60 (d, 1H, J=12Hz), 3,96 (dd, 1H, J=llHz, 4Hz), 4,54 (d, 1H, J=12Hz), 5,00 (m, 3H), 5,36 (dd, 1H, J=ll, 4Hz), 6,90 (t, 1H).

IR(KBr)^ , cm-1: 3440, 3300, 2960, 2940, 1715, 1630, 1600, 1550, 1510, 1220, 1060.

ϋν(Η„0)λ , nm: 372 et 222 6 m 3.x

Analyse pour C]_gH24N4°5 calculé C, 57,40; H, 6,38; N, 14,88¾ trouvé C, 57,28; H, 6,41; N, 14,08¾

EXEMPLE 11 -Composé XII

7-( 2-Hydroxyéthyl)amino-9a-méthoxymitosane

On dissout 330 mg du composé V (0,74 millimole) dans du méthanol anhydre (5 ml) et on ajoute de 11éthanolamine (2 ml). On agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant 2 heures, puis on le dilue avec de l'eau (50 ml) et on l'extrait à l'acétate d'éthyle (5 x 60 ml). On sèche le mélange des extraits dans l'acétate d'éthyle (Na2SO^) et on le concentre en , un résidu pourpre bleuâtre donnant, par chromatographie sur colonne avec élution au moyen de 10¾ de méthanol * dans le chlorure de méthylène et par concentration des fractions rassemblées contenant le composé XII, 105 mg (37¾) du composé XII.qui est un solide amorphe.

RMN (pyridine d^,S ): 2,14 (s, 3H), 2,81 (si, 1H), 3,18 (d, 1H, H=4Hz), 3,24 (s, 3H), 3,65 (dd, 1H, J=2, 12Hz), 3,70-4,20 (m, 5H), 4,52 (d, 1H, J=l3Hz), 4,96 (t, 1H, J=12Hz), 7,38 (t, 1H), 7,58 (si).

IR(KBr)^? , cm“1: 3300-3500, 2930, 1710, 1630, 1600, 1540, 1510, 1200, 1055.

υν(Η.0)λ , nm: 371 et 221.

2 max ' ΓΤ) M.T — "31 —

Analyse pour cx7H22^4°6 calculé C, 53,92; H, 5,82; N, 14,80% trouvé C, 51,30; H, 5,88; N, 14,80%

EXEMPLE 12 -Composé XIII

7-[ 2-Benzylthioéthyl]amino-9a-méthoxymitosane

On dissout 200 mg du composé V (0,45 millimole) dans du méthanol (2 ml) et on ajoute du S-benzyl-2-aminoéthanethiol (0,5 ml), puis on agite la solution à la température ambiante pendant 16 heures. On soumet le résidu que donne l'évaporation du solvant sous pression réduite à la chromatographie rapide (40 g de gel de silice) avec élution au moyen de 6% de méthanol dans le chlorure de méthylène (400 ml). On isole le constituant bleu (Rf environ 0,5 dans le méthanol à 10% dans le chlorure de méthylène) sous la forme d'un solide amorphe (65 mg, 29,8%). Les données spectroscopiques (RMN, IR, UV et masse) sont compatibles avec la structure attribuée.

Analyse pour C24H28N4°5S

calculé C, 59,49; H, 5,82; N, 11,56% trouvé C, 59,72; H, 5,94; N, 11,08% EXEMPLE 13 - 0 OCONH,

Ji j 2

Préparation de N --χ'

Nrix [ι i L·00^ CHîiî ï > '0 I_ (A) On ajoute lentement de la diisopropyléthylamine (2,1 millimoles) à 0° en atmosphère d'azote à une solution de chlorhydrate de formimidate d'isopropyle (1 millimole) dans le diméthylformamide (DMF). A la solution résultante, on ajoute goutte à goutte à 0e du chloroformiate de-triméthylsilyléthyle. La solu- rn.M.T - 32 - tion limpide résultante est la solution A.

(B) On ajoute une solution de mitomycine C (1 millimole) dans 5 ml de DMF à une suspension d'hydrure de sodium (1,5 millimole) dans 3 ml de DMF. On agite la suspension à la température ambiante pendant 20 minutes et on la refroidit à environ -40 à -50° avant d'ajouter la solution A ci-dessus. On conserve la solution à -40e pendant 1 heure, puis on la laisse se réchauffer jusqu'à la température ambiante. Après repos à la - température ambiante pendant environ 6 à 18 heures, on dilue le mélange de réaction avec du chlorure de méthylène et on le filtre. On soumet le résidu solide que donne l'évaporation du filtrat à la chromatographie sur du gel de silice pour isoler le composé recherché dont la fonction amidino est protégée.

(C) On élimine le radical protecteur de la fonction amidino de l'intermédiaire ci-dessus suivant le procédé décrit par Carpino et Tsao (J. Chem. Soc. Chem. Comm.

358 (1978)) de manière à obtenir l'amidine non substituée recherchée.

EXEMPLE 14 - - 0 0C0NH- H\_ I !

Préparation de y— ^ v/V_' HNCH3 U ï t^°ch3 ï |_]> (A) On ajoute lentement de la diisopropyléthylamine (21 millimoles) à 0° en atmosphère d'azote à une solution de chlorhydrate de formimidate d'isopropyle (1 millimole) dans du DMF (2 ml). On ajoute de l'iodure de méthyle à 0° à la solution résultante. La solution obtenue est la solution B.

(B) On répète les opérations de l'exemple 13(B) en remplaçant la solution A par la solution B afin d'obtenir ΓΤ)-Μ.Τ _ il _ le composé recherché.

EXEMPLE 15 - 0 *—oconh2 OCH3

CH

Mitomycine C

N(\^3)2 Î ' °C0NH2 (1) NaH H ^ fl II V/^3 ____DMF_ JJ II /V.

(Y) , Γ® © | ' NH

(CH3)2N=CHC1C1 II \ \

composé XIX

On prépare une solution 0,5 M de chlorure de N ,N-diméthylchlorométhylèneiminium en ajoutant goutte à goutte du chlorure d'oxalyle (1,57 g, 12,5 millimoles) à 0e à une solution de DMF (915 mg, 12,5 millimoles) - dans 25 ml de chloroforme, puis en agitant le mélange pendant 30 minutes à la température ambiante. Séparé-' ment, on ajoute une solution de mitomycine C (334 mg, 1 millimole) dans 5 ml de DMF à une suspension de NaH (36 mg, 1,5 millimole) dans 3 ml de DMF. On agite la solution à la température ambiante pendant 20 minutes et on la refroidit à environ -40 à -50° , puis on y ajoute la solution ci-dessus de chlorure de N,N-diméthyl-chlorométhylèneiminium (3 ml, 1,5 millimole). On ajoute un supplément de NaH (18 mg, 0,75 millimole) après 10 minutes d'agitation à -40° . On conserve la solution à -40° pendant 1 heure, puis on la dilue au chlorure de méthylène et on la filtre. On soumet le résidu que donne l'évaporation du filtrat à la CCM sur gel de silice (élution avec 10% de méthanol dans le chlorure de méthylène) . L'extraction de la bande verte principale donne 78 mg (43% sur base de la mitomycine C recueillie) d'un solide amorphe dont le spectre RMN et la CCM sont identiques à ceux du composé XIX obtenu dans l'exemple 8. L'extraction de la bande pourpre donne 150 mg de mitomycine C.

EXEMPLE 16 - 7-(l-Méthyl-2-(H)-pyridinylidène)amino-9a-méthoxymitosane 0 fé-oconh2

H2N

N I '**

Δ jj V I NH

Μ o ,^°conh2 ^ i “AV"3 ici " “V-0=· ^N Cl 3

+ I

CH3 Ο n ajoute 4 ml de DMF à un mélange de mitomycine C (242 mg, 0,725 millimole) et de NaH (43,5 mg, 1,81 millimole). Après 15 minutes d'agitation, on ajoute de l'io-dure de 2-chloro-l-méthylpyridinium (370 mg, 1,45 millimole) à la température ambiante. On agite la solution pendant 1,5 heure et on la dilue ensuite avec de l'acétate d'éthyle, puis on la filtre. On soumet le résidu que donne l'évaporation du filtrat à la CCM sur gel de silice (élution avec 5% de méthanol dans le chlorure de méthylène). Le produit mineur (12 mg) est le composé XIX (exemple 8). On purifie le produit majeur (75 mg) par CCM sur gel de silice (10% de méthanol dans le chlorure de méthylène) pour recueillir 6 mg (2%) du composé recherché.

RMN (pyridine dg,S ) 2,11 (s, 3H), 2,76 (si, 1H), 3,20 (m, 1H), 3,26 (s, 3H), 3,49 (s, 3H),3,63 (dd, 1H, J=13, 1Hz), 4,01 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,51 (d, 1H, J=13 Hz), 5,10 (t, 1H, J = ÎO Hz), 5,43 (dd, 1H, J=10, 4Hz), 5,99 (dt, 1H, J=9, 2 Hz), 6,09 (dd, 1H, J=9, 1 Hz), 6,95 (dd, 1H, J=9, 7, 2 Hz), 7,32 (dd, 1H, J=7,l Hz). EXEMPLE 17 - 7-E (Méthylaminométhylène) amino]~9a-méthoxymitosane

Pl /— oconh2 H2NN/\/\ 0CH3

cb/|J

♦ CH3NH Q ^-OCONH2 ... Vx“’ (2) CH3N=CHC1 ch3^\/^n f ~nh

On ajoute de l'hydrure de sodium (12 mg, 0,5 CD.MJ _ _ millimole) en atmosphère d'azote à une solution de mitomycine C (167 mg, 0,5 millimole) dans 2 ml d'he-xaméthylphosphoramide. On ajoute à cette solution du chlorure de N-méthylformimidoyle (19mg, 0,25 millimole), N.H. Bosshard et H. Zollinger, Helv. Chim. Acta, 42, 1659 (1959). On agite la solution à la température ambiante pendant 10 minutes, puis on y ajoute de l'hy-drure de sodium (6 mg, 0,25 millimole) et du chlorure de N-méthylformimidoyle (9,5 mg, 0,13 millimole). Après 6 à 12 heures d'agitation, on dilue la solution à l'acétate d'éthyle et on la filtre. Par évaporation du solvant et purification chromatographique du résidu, on obtient le composé recherché.

EXEMPLE 18 -Composé XXI

9a-Méthoxy-7-(1-morpholinométhylène)aminomitosane 8 T"' Ο Χ)π<·.

\ / CH, N

°—' 3 S |_[m

On ajoute de la 4-diéthoxyméthylmorpholine (12,5 ml) à de la mitomycine C (600 mg, 1,8 millimole) en suspension dans du chloroforme (30 ml) et on chauffe la suspension résultante à 58° pendant 48 heures. Au terme des 48 heures, la CCM (20% de méthanol dans le chlorure de méthylène) révèle que la réaction n'est pas achevée. On concentre la solution sous pression réduite pour obtenir un sirop auquel on ajoute de l'eau (100 ml). Après 20 minutes d'agitation, on extrait la solution vert foncé au chlorure de méthylène (5x50 ml.) et on sèche les extraits combinés qu'on concentre en un sirop. On ajoute de 1'aminodiphénylméthane (6,5 ml) au sirop dans du méthanol (20 ml) et on agite la solu- CD.MJ - 37 - tion résultante à 30-35° pendant 18 heures. La CCM (20% de méthanol dans le chlorure de méthylène) révèle une zone majeure importante et une zone pourpre plus lente mineure. On concentre la solution sous pression réduite et on purifie le sirop résultant par chromatographie rapide pour obtenir le composé recherché qui est un solide amorphe vert foncé (75 mg, 10%). On obtient un échantillon analytique par précipitation à partir d'une solution dans'le chlorure de méthylène * au moyen de n-hexane.

RMN (pyridine d^,ό ): 2,16 (s, 3H), 2,76 (dd, 1H, J=5 et 1Hz) , 3,16 (d, 1H, J=5 Hz), 3,24 (s, 3H), 3,28-3,80 (m, 10H), 4,02 (dd, 1H, J=10 et 4Hz), 4,40 (d, 1H, J=12Hz), 5,06 (t, 1H, J=lOHz), 5,46 (dd, 1H, J=10 et 4Hz), 7,90 (s, 1H) IR(KBr)"0 , cm-1: 3360, 3280, 2960, 2920, 1720, 1600, 1520, 1230, 1050 UVtMeOHi’X : 384 et 234 max

Analyse pour C2c^25N506 calculé C, 55,64; H, 5,80; N, 16,23% trouvé C, 55,07; H, 5,55; N, 15,88% EXEMPLE 19 - ' 7-(1-Pyrrolidinylméthylène)amino-9a-méthoxymitosane 8 /—oconh2

¥v\A .00H3 (1) NaH

CH3 II © Θ ο Γ N ^HCl Cl k/ ο '- Ν\___ 0 i-OCONH2 / Χ/χ/χ -OCH- —* Η Yτχ.

CH3NSV^>Nfc N [ '"ΝΗ

On prépare une solution 0,5 molaire de chlorure de pyrrolidinylchlorométhylèneiminium en ajoutant goutte à goutte du chlorure d'oxalyle (3,17 g, 25 millimoles) à 0° à une solution de 1-formylpyrrolidine (2,48 g, 25 millimoles) dans 50 ml de chloroforme et en agitant le mélange pendant 30 minutes à la température ambiante. On ajoute séparément de l'hydrure de sodium (24 mg, 1 millimole) en atmosphère d'azote à une solution de mitomycine C (334 mg, 1 millimole) dans 3 ml de 1-formyl-pyrrolidine. Après 20 minutes d'agitation à la température ambiante, on refroidit la solution à environ -40 à -50e et on y ajoute la solution du sel d'iminium préparé ci-dessus (1 ml, 0,5 millimole). On ajoute à ce mélange alternativement, à intervalles de 10 minutes, 12 mg (0,5 millimole) de NaH, 0,5 ml (0,25 millimole) de la solution du sel d'iminium, 6 mg (0,25 millimole) de NaH, 0,25 ml (0,125 millimole) de la solution du sel d'iminium et enfin 3 mg (0,125 millimole) de NaH et 0,125 ml (0,063 millimole) de la solution du sel d'iminium. Après 30 minutes d'agitation à -30° , on réchauffe le mélange jusqu'à la température ambiante. On le dilue à l'acétate d'éthyle et on sépare par filtration le sel inorganique. On soumet le résidu que donne l'évaporation du solvant à la CCM sur gel de silice (10% de mé-thanol dans le chlorure de méthylène). Par extraction de la bande verte, on obtient 120 mg (15%) du composé recherché.

RMN (pyridine d^,6 ) 1,58 (m, 4H), 2,29 (s, 3H), 2,73 CD.MJ - 39 - (m, 1H), 3,06-3,50 (m, 8H), 3,59 (dd, 1H, J=13, 1Hz), 4,03 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 4,44 (d, 1H, J=12 Hz), 5,05 (t, 1H, J=10 Hz), 5,45 (dd, 1H, J=10, 4 Hz), 8,04 (s, 1H) .

IR (KBr)Ύ? , cm-1: 3420, 3280, 2960-2870, 1715, 1625, 1560, 1300, 1055.

EXEMPLE 20 - ^ 7-[N-Méthyl-N-(méthylamino)méthyl]amino-9a-méthoxymi- tosane 0 I! 0 /-OCNH- CH3 η f * HN-3

J! IL (D NaH

CH ^ \ N (^) CH3N=CHC1 > H CH- fi

Il ?. /~°°®2 ch3n=c-n Uv 3 N NH2 0 *

On répète le mode opératoire de l'exemple 17 en remplaçant la mitomycine C par une quantité moléculaire égale de 9a-méthoxy-7-(N-méthylamino)mitosane (Matsui et al., The Journal of Antibiotics, XXI, 189-198 (1968)).

EXEMPLE 21 -Composé XXIII

7-[l-(Diméthylamino) éthylidène]amino-N’*"^-[l-(diméthyl-amino)éthylidène]-9-méthoxymitosane ο Λ. _/ch3

Oi3v Ο Ο -\ )=Ν fi I Xn(CH3>2 ο I_Ι^ΝΠ

On prépare une suspension de 600 mg de mitomy-. eine C (1,79 millimole) dans 2 ml de méthanol et on y ajoute 3 ml de diméthylacétal de N,N-diméthylacétamide. On chauffe la suspension à 75-80° pendant 2 heures sous agitation. A ce moment, la CCM (chlorure de mé-thylène/méthanol 10:1) révèle que presque toute la mitomycine C a été consommée par la. réaction. Le produit apparaît sous la forme d'une zone verte. On chasse le solvant et les constituants volatils par évaporation du mélange de réaction à siccité sous pression réduite pour obtenir un résidu qu'on dissout dans du chlorure de méthylène et qu'on verse sur une colonne de gel de silice (40 g) qu'on développe avec 1% de méthanol dans du chlorure de méthylène (200 ml), 2% de méthanol dans du chlorure de méthylène (200 ml) et 5% de méthano] .dans du chlorure de méthylène (400 ml).

On combine les fractions contenant la zone verte où . se trouve le produit et on les concentre en un solide amorphe d'un poids de 110 mg (rendement de 13%). On dissout ce solide dans 2 ml d'acétone et on l'en reprécipite par addition d'hexane. On recueille le produit par filtration.

Analyse pour c 2^ 32^ (P 5 calculé C, 58,46; H, 6,83; N, 17,79% trouvé C, 58,89; H, 6,89; N, 17,64% UV (MeOH)^max. nm: 235, 364 IR (KBr)^ , cm-1: 3440, 3295, 2925, 1770, 1660, CD.MJ - 41 - 1620, 1580, 1550, 1300, 1055.

Le spectre RMN de dans la pyridine d,. est compatible avec la structure du composé recherché.

EXEMPLE 22 Composé XXIV

7-[l-(Diméthylamino)éthylidèneamino]-9a-méthoxymitosane CH^ I 0 0 yc==N\À ^.CH2odNH2 o>

On ajoute une solution de ÎOO mg (0,21 millimole) du composé XXIII dans 2 ml de chloroforme à 2 ml d’ami-nodiphénylméthane et on chauffe la solution pendant quelques heures à 55-60° . A ce moment, il subsiste des traces du composé XXIII dans le mélange de réaction qu'on concentre néanmoins en un résidu qu'on chromatographie sur de l'alumine neutre qu'on élue avec un gradient en commençant par le chlorure de méthylène et en terminant par le méthanol/chlorure de méthylène 2,5:1. On isole la zone verte principale sous la forme d'un solide amorphe vert d'un poids de 25 mg (29,4%). s On purifie le composé par dissolution dans l'acétone et addition d'hexane à la solution acétonique jusqu'à précipitation. On recueille par filtration le produit qu'on sèche.

Analyse pour C 25^3^ ^5 calculé C, 56,58; H, 6,20; N, 17,37% trouvé C, 55,71; H, 6,34; N, 15,23% UV (H20)^max. nm: 374, 230 (épaulement) IR (KBr)O , cm-1: 3420, 3350, 3280, 2920, 1710, 1610, max 1540, 1300, 1050·

Le spectre RMN de 1H dans la pyridine d_5 est compatible avec la structure.

EXEMPLE 23 -Composé XXV

7-[ (l-Méthyl-2-pyrrolidinylidène)amino]-N10-[(1-méthyl-2-pyrrolidinylidène)amino]-9a-méthoxymitosane \ JL_- -“Λ-Ο

On chauffe à 55° pendant 5 heures 1,5 g de 2,2-diméthoxy-l-méthylpyrrolidine (10,3 millimoles) (H. Eilingsfeld et al. Angew. Chem., 72, 836 (1960)), et 280 mg de mitomycine C (0,34 millimole) dans 20 ml de méthanol. On examine le mélange de réaction par chromatographie en couche mince sur plaque a l'alumine avec du chlorure dë méthylène/méthanol 97:3 comme solvant. La CCM révèle une tache verte principale correspondant au produit et une tache bleue mineure correspondant à la mitomycine C de départ. On chasse le solvant par distillation sous vide à 40° et on dissout le résidu dans du chlorure de méthylène, puis on verse la solution sur une colonne de 4,5 cm contenant 150 g d'alumine. On effectue l'élution avec 50 ml de chlorure de méthylène, puis 600 ml de méthanol à 1% dans le chlorure de méthylène. On élimine les impuretés importantes, mais sans isoler de fractions pures. On concentre l'éluat combiné par distillation à 20° en un résidu huileux qui semble contenir une certaine quantité de 2,2-diméthoxy-l-méthylpyrrolidine. On chromatographie la substance à nouveau sur une colonne d'alumine (25 g) au moyen de 200 ml de chlorure de méthylène, puis de 100 ml de méthanol à \% dans le chlorure de méthylène. On élimine ainsi la 2,2-diméthoxy-l- méthylpyrrolidine pour obtenir un certain nombre de fractions contenant des impuretés mineures et quelques fractions pures confirmées par CCM (une seule tache verte) apportant le produit désiré, rendement 53 mg.

Analyse pour C 25H &0 0,85 f^O

calculé C, 58,66; H, 6,64; N, 16,42% trouvé C, 58,63; H, 6,46; N, 16,50% Λ UV (MeOH) max. nm: 354, 239 IR (KBr)"v7 , cm“1: 3300, 3220, 2940, 1660, 1620, ΓΠ8.Χ 1550, 1290, 1055

Le spectre RMN de 1H dans la pyridine d,- est compatible avec la structure du composé.

EXEMPLE 24 - 7-[(l-Méthyl-2-pyrrolidinylidène)amino]-9a-méthoxymi-tosane 0 ° \ >= N II ,ΟΗ,οώίΗ, l3 Yjrt-3

CH3yiI N

H I NH

0 I_L^-

On chauffe au reflux pendant 48 heures une solution de 80 mg (0,16 millimole) du composé XXV et de 0,48 ml de n-butylamine dans 15 ml de chloroforme.

La CCM (méthanol/chlorure de méthylène, 2% sur alumine) révèle une tache verte principale, une petite tache bleue plus avancée et une petite tache rouge plus en retard qui sont dues au composé de départ. On verse la solution de réaction sur une colonne contenant 50 g d'alumine qu'on élue avec 200 ml de méthanol à 1% dans le chlorure de méthylène, puis 400 ml de méthanol à 2% dans le chlorure de méthylène. On combine les frac CD.MJ - 44 - tions contenant un seul constituant vert principal révélé par la CCM et on les concentre en un résidu qui est le produit recherché d'un poids de 24 mg.

RMN (pyridine d^, S) 1,72 (q, 2H), 2,04 (s, 3H), 2,16 (q, 2H), 2,72 (si, 1H), 2,84 (s, 3H), 3,12 (m, 3H), 3,24 (s, 3H), 3,60 (dd, 1H, J=14, 2 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=12, 6 Hz), 4,40 (d, 1H, J=14 Hz), 5,04 (t, 1H, J=14 Hz), 5,38 (dd, 1H, J=12, 6 Hz), 7,48 (si, 2H).

EXEMPLE 25 -Composé XXVI

7-[(Méthoxyamino)méthylène]amino-9a-méthoxymitosane „ 0C0NHo O I 2

/=vJL J

CH30NH Y|| T/^3 CH3 (1 T" y i_[jn

On prépare une solution de 660 mg du composé XIX (1,7 millimole) dans 10 ml de méthanol et on y ajoute 170 mg de chlorhydrate de méthoxyamine (2,0 millimoles). On agite la solution à 10° pendant 3 heures et à la température ambiante pendant 2 heures. La CCM ne révèle qu'une trace du composé XIX qui n'a pas réagi. > Il se forme au repos un précipité noir qu'on recueille et qu'on lave à l'acétone pour obtenir 380 mg du produit recherché (57%).

Analyse pour C 1^211^ 5° 6 calculé C, 52,19; H, 5,40; N, 17,90% trouvé C, 51,64; H, 5,40; N, 17,83% UV (MeOH)^· max. nm: 376, 242 IR (KBr)^ cm-1: 3440, 3250, 3140, 2920, 1730, 1645, 1615, 1560, 1450, 1320, 1050.

Le spectre RMN de 1H dans la pyridine d^ est CD.MJ - 45 - compatible avec la structure du composé annoncé ou celle de son tautomère en C-7, à savoir

H H

CH3ON^r” N 1

EXEMPLE 26 -Composé XXVII

7-[(Benzyloxyamino)méthylène]amino-9a-méthoxymitosane „ 0 OCCNH„

\ 0 J

c6h5ch2onh ji U0CH3 CH3 TT f

Il nh ο I-

On prépare une solution de 100 mg du composé XIX (0,26 millimole) dans 2 ml de méthanol contenant 0,5 ml de triéthylamine et on y ajoute 400 mg (2,5 millimoles) de chlorhydrate de 0-benzylhydroxylamine. On laisse la réaction progresser pendant 2,5 heures à la température ambiante. La CCM (chlorure de méthy-lène/méthanol 10:1) révèle une zone brun orange principale devant la zone verte,qui est celle correspondant au composé XIX. On concentre le mélange de réaction en un résidu qu’on soumet à la chromatographie rapide sur du gel de silice (20 g) au moyen de chlorure de méthylène/méthanol 20:1 pour l’élution. On recueille la zone brune principale apportant le produit désiré qu’on collecte sous la forme d’un solide amorphe d’un poids de 80 mg (rendement de 65,6%).

Analyse pour c 23^25^ 5° 6 calculé C, 59,10; H, 5,35; N, 14,97% trouvé C, 58,43; H, 5,48; N, 14,62% UV (MeOH)^max. nm: 376, 245 , 209 IR (KBr)^ , cm-1: 3460, 3300, 2945, 2920, 1745, 1720, max' ,ιιιιι CD.MJ - 46 - 1570, 1275, 1220, 1060.

Le spectre RMN de dans la pyridine d^ est compatible avec la structure du composé annoncé ou celle de son tautomère en C-7, à savoir H H f >-N-{

CcHr-CHo0N 6 5 2

On récupère 10 mg de composé XIX qui n'a pas réagi.

EXEMPLE 27 -Composé XXVIII

7-(l,3-Diméthyl-2-imidazolinylidène)-9a-méthoxymitosane CH- 0

I 3 II

N O CH-OCNH- )= 001)3

CH3 N |~NH

On dissout 0,34 g de mitomycine C (1 millimole) dans 5 ml de 1,3-diméthyl-2-imidazolidone et on y ajoute à la température ambiante 0,1 g d'hydrure de sodium (à 50% dans l'huile, 2,08 millimoles). On conserve le mélange pendant 20 minutes à la température ambiante, puis on le refroidit au bain de glace et de sel (-15°

On conserve le mélange pendant 10 minutes à cette température, puis on y ajoute 0,65 g (2 millimoles) de chlorure de 2-chloro-l,3-diméthyl-4,5-dihydro-(3H)-imi-dazoliminium. On maintient le mélange à -15° pendant 1 heure, puis on le dilue à l'acétate d'éthyle et on le chromatographie sur une colonne d'alumine. On élue la colonne au chlorure de méthylène, puis au chlorure de méthylène contenant 2% en volume de méthanol. On recueille une fraction de couleur verte consistant en CD.MJ - 47 - le produit recherché qu'on purifie davantage par chromatographie sur alumine qu'on élue avec du chlorure de méthylène contenant 10% en volume de méthanol, production 20 mg (5%).

Analyse pour C 2(β 2^sl ^0 5·1-1/4 H20 calculé C, 53,03; H, 6,34; N, 18,55% trouvé C, 52,68; H, 6,21; N, 18,15% RMN (pyridine-d5,â ) 2,32 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,59 (s, 3H), 2,74 (m, 1H), 3,03-3,32 (m, 5H), 3,26 (s, 3H), 3,66 (dl, 1H, J=12 Hz), 4,02 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,75 (d, 1H, J=12 Hz), 5,09 (tl, 1H, J=ll Hz), 5,44 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz).

IR (KBr) 3400, 3280, 2930, 1700, 1610, 1480, 1330, 1055 cm"·*·.

UV (MeOH,^max) 600, 375, 252 (épaulement) , 222 nm. EXEMPLE 28 -Composé XXIX

7 -(1,3-Diméthyltétrahydropyrimidinylidène)amino-9a-méthoxymitosane ch3 f II ..--¾0°¾

On ajoute de l'hydrure de sodium (dispersion à 50% dans l'huile, 200 mg, 4,2 millimoles) en atmosphère d'azote à une solution de mitomycine C (680 mg, 2 millimoles) dans 8 ml de 1,3-diméthyl-3,4,5,6-tétra-hydro(1Η,3H)-2-pyrimidinone. On conserve le mélange pendant 20 minutes à la température ambiante, puis on le refroidit à -25e . On y ajoute 0,73 g de chlorure de 2-chloro-l,3-diméthyl-2,3,4,5-tétrahydro- pyrimidinium (4 millimoles) et on conserve le nouveau mélange à -25° pendant 3 heures. On le dilue ensuite avec de l'acétate d'éthyle et 2 ml de méthanol. On verse le mélange sans autre traitement sur une colonne sèche d'alumine chromatographique qu'on élue d'abord avec du chlorure de méthylène, puis avec 2% de méthanol dans du chlorure de méthylène pour obtenir O, 35 g du composé recherché (rendement de 39,5%), P. F. 138-140° .

Analyse pour c 2iH 27^ 6° 5‘H2° calculé C, 54,65; H, 6,33; N, 18,21% trouvé C, 54,78; H, 6,18; N, 18,21% RMN (pyridine-^ ,<$ ) 1,80 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,52 (s, 3H), 2,64 (s, 3H), 2,76 (m, 1H), 2,90-3,30 (m, 5H), 3,26 (s, 3H), 3,74 (d, 1H, J=12Hz), 4,05 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 4,97 (d, 1H, J=12 Hz), 5,09 (t, 1H, J=ll Hz), 5,41 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz).

IR (KBr) 3430, 3280, 2930, 1710, 1570, 1480, 1450, 1350, 1050 cm"^.

UV (MeOH, ^ max) 635, 377, 264 (épaulement), 223 nm. EXEMPLE 29 -Composé XXX

7-(Tétraméthyldiaminométhylène)amino-9a-méthoxymitosane <CH3>2\_n S °conh2 <ch3>2n/ n

CH% N "nH

I x>-

On mélange 425 mg de mitomycine C (1,42 milli- c- mole) avec 85,3 mg d'hydrure de sodium en dispersion à 50% dans de l'huile et on y ajoute 4 ml de diméthyl-formamide. On agite le mélange à la température ambiante en atmosphère d'argon pendant 10 minutes, puis on le CD.MJ - 49 - refroidit à -35° . On ajoute 289 mg de chlorure de tétraméthylchloroformamidinium (2,13 millimoles) et on laisse le mélange se réchauffer jusqu'à 5° en 2 heures. On ajoute ensuite de la carboglace pilée au mélange pour arrêter la réaction et on chasse le solvant par distillation sous pression réduite. On chromatographie le résidu sur une colonne de 100 g . d'alumine qu'on élue avec du méthanol à 3% en volume dans du chlorure de méthylène. On purifie le composé • davantage par CCM sur alumine (5% de méthanol en vo lume dans du chlorure de méthylène) pour obtenir deux fractions de 17 mg et de 76 mg. On recristallise cette dernière dans 1'acétone-éther pour obtenir le produit recherché, P.F. 193-195° , (rendement 12%).

Analyse pour C 2 2^ 6° 5 calculé C, 55,54; H, 6,53; N, 19,43% trouvé C, 54,92; H, 6,53; N, 19,29% RMN (pyridine-d,- ,S ) 2,26 (s, 3H) , 2,59 (s, 6H) , 2,68 (s, 6H), 2,75 (m, 1H), 3,15 (d, 1H , J=4 Hz), 3,26 (s, 3H), 3,65 (d, 1H, J=12 Hz), 4,00 (dd, 1H, J=ll, 5 Hz), 4,62 (d, 1H, J=12 Hz), 5,04 (t, 1H, J=ll Hz), 4,38 (dd, 1H, J=ll, 5 Hz).

IR (KBr) 3430, 3280, 2920, 1710, 1610, 1495, 1335, 1055 cm-·*'.

UV (MeOH,^max) 610, 380, 260, 220 nm.

EXEMPLE 30 -Composé XXXI

7-(1-Pipéridinylméthylène)amino-9a-mél^ioxymitosane

H 0 II

\ π ..,CH OCNH

o/C"NÂ>c CD.MJ - 50 -

On prépare une solution 0,5 M de chlorure de pipéridinylchlorométhylèneiminium en ajoutant goutte à goutte du chlorure d'oxalyle (380 mg, 3 millimoles) à 6 ml de chloroforme contenant 0,34 g (3 millimoles) de 1-formylpipéridine. On ajoute séparément de l'hy-drure de sodium (96 mg) (dispersion à 50% dans l'huile, 2 millimoles) en atmosphère d'azote à une solution de mitomycine C (334 mg, 1 millimole) dans 3 ml de 1-formylpipéridine. Après 15 minutes d'agitation à la tem-. pérature ambiante, on refroidit la solution à -25e

et on y ajoute la solution d'iminium préparée précédemment (4 ml, 2 millimoles). On conserve le mélange de réaction à -25° pendant 1 heure et on arrête la réaction par addition de glace carbonique. Après addition de méthanol (1 ml), on absorbe le produit sur de l'alumine neutre. On dépose l'alumine chargée sur une colonne de 30 g d'alumine. On élue la colonne d'abord avec du chlorure de méthylène,puis avec 2% en volume de méthanol dans du chlorure de méthylène pour obtenir 360 mg (84%) du composé recherché, P.F.68-70° . Analyse pour C 2jH ^0 ^.1-1/4 ^O

calculé C, 55,80; H, 6,58; N, 15,49% trouvé C, 55,57; H, 6,21; N, 15,91% RMN (pyridine-d,.,S ) 1,42 (si, 6H), 2,19 (s, 3H), 2,72 (m, 1H), 3,06-3,30 (m, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,48-3,70 , (m, 2H) , 3,57 (d, 1H, J=13 Hz), 4,01 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz).

4,43 (d, 1H, J=13 Hz), 5,02 (tl, 1H, 3=11 Hz), 5,55 (dd, 1H, J=ll, 4 Hz), 7,86 (s, 1H).

IR (KBr) 3440, 3350, 3300, 2935, 2835, 1710, 1615, 1520, 1445, 1305, 1250, 1200, 1055 cm-1.

UV (MeOH,^max) 590, 389, 262 (épaulement ) , 234, 212 (épaulement) nm.

EXEMPLE 31 - 7-Hydroxy-N'*’^-diméthylaminométhylène-9a-méthoxymitosane CD.MJ - 51 - ο Λ ?

Ο N=C

Ο I vNMe

». A J

=,Λ^:ι

On ajoute du diméthylacétal de diméthylforma-mide (1 ml) à une solution de 7-hydroxy-9a-méthoxymi-tosane (20 mg) dans du chlorure de méthylène (3 ml) et on agite la solution à environ 65e pendant 30 minutes. On observe l'avancement de la réaction par CCM (chlorure de méthylène/méthanol 10:1). On recueille le produit en concentrant le mélange sous pression réduite et en chromatographiant le résidu sur du gel de silice pour isoler le composé recherché.

Le tableau IV rassemble les résultats d'épreuves de laboratoire effectuées sur des souris CDF^ femelles auxquelles on a implanté intrapéritonéalement un inoculum de tumeur de 106 cellules d'ascite de la leucémie P-388 de la souris et auxquelles on a administré différentes doses d'un composé expérimental de la formule I ou bien de mitomycine C. Les composés sont administrés par injection intrapéritonéale. Pour chaque » dose, on prend des groupes de six souris auxquelles on administre une seule dose du composé une seule fois par jour. Pour chaque série d'expériences, on prend un groupe de dix souris témoins recevant de la solution physiologique salée. Le témoin positif est formé par les groupes de souris recevant de la mitomycine C. On applique un programme de 30 jours et on détermine la survie moyenne en jours dans chaque groupe de souris, de même que le nombre de souris survivantes au terme des 30 jours. On pèse les souris avant le traitement CD. m.t - *>? - et à nouveau au sixième jour. On évalue la toxicité du principe actif d'après l'évolution de la perte de poids. On choisit des souris d'un poids de 20 g et on considère comme n'étant pas excessive une perte de poids atteignant 2g. On exprime les résultats sous la forme % T/t qui est le rapport du temps moyen de survie dans le groupe traité au temps moyen de survie dans le groupe témoin recevant la solution physiologique salée, que multiplie 100. Habituellement, les animaux recevant la solution physiologique salée meurent dans les neuf jours. Ln’effet maximum" au tableau ci-après est indiqué en % T/t et la dose assurant cet effet est précisée. Les valeurs entre parenthèses sont celles obtenues avec la mitomycine C au cours de la même expérience sur le témoin positif. Il est donc possible d'estimer la toxicité des composés de l'invention par comparaison avec celle de la mitomycine C. On considère qu'un effet minimum en termes de % T/t est de 125. La dose effective minimale mentionnée au tableau ci-après est la dose assurant un % T/t d'environ 125. Les deux valeurs précisées dans chaque cas dans la colonne intitulée "changement moyen de poids" sont respectivement le changement moyen de poids par souris à la dose efficace maximale et à la dose efficace minimale.

TABLEAU IV

Inhibition de la leucémie P-388 de la souris

Composé Effet maximum_ Dose effi- Changement (exemple % τ/t Dose cace mini- moyen ^ n°) mole de poids V (1) 311 (244) 6,4 (3,2) <0,2 -1,9, -0,2 183 (272) 6,4 (3,2) 0,1 -1,0, 40,3 ; VI (1) 233 (244) 6,4 (3,2) <0,2 -0,1, +0,1 VII (2) 141 (224) 25,6 (3,2) 0,8 -1,2, 40,2 IX (4) 165 (224) 12,8 (3,2) 0,2 -0,7, 40,8 X (5) 300 (224) 12,8 (3,2) 0,2 -2,1, néant XIII (12) 161 (211) 12,8 (3,2) 3,2 -0,3, 40,2 XIV (3) 233 (272) 12,8 (3,2) 0,2 -3,8, 40,7 XV (3) 144 (272) 25,6 (3,2) 6,4 -1,4, +0,2 XVI (6) 144 (272) 6,4 (3,2) 3,2 -0,4, -0,3 XVII (7) 144 (272) 0,8 (3,2) 0,02 -0,2, -0,3 XVIII (7) 167 (272) 6,4 (3,2) 0,05 -1,0, 40,3 XIX (8) 333 (294) 1,6 (3,2) <0,2 -1,9, +1,6 200 (239) 0,8 (3,2) <0,2 -2,7, -1,8 XX (9) 333 (294) 3,2 (3,2) <0,2 -2,7, +3,2 XXI (18) 189 (183) 1,6 (3,2) 0,025 -0,5, -0,1 XXXI (30) 150 (144) 6,4 (4,8) 1,6 -1,6, -2,3 267 (267) 3,2 (4,8) _ < 1,6 -2,3, -1,7 XXX (29) 206 (263) 3,2 (4,8) < 3,2 -1,7, -1,7 XXVI (25) 183 (239) 0,4 (3,2) < 0,025 -3,1, -2,3 CD-Μ,Τ - 54 - TABLEAU IV (suite)

Inhibition de la leucémie P-388 de la souris

Composé /E-f-ppi-h tnav-imnm Dose effi- Changement (exemple 1 cace mini- moyen- n°) ^ Dose mole de poids1 XXVII (26) 144 (239) 0,2 (3,2) 0,025 -1,3, -0,9 XXIII (21) 194 (319) 12,8 (3,2) 0,2 -1,2, 40,2 XXIV (22) 313 (319) 6,4 (3,2) <0,1 -2,8, 40,3 XXV (23) 188 (331) 25,6 (4,8) 0,4 -2,2, 40,1 XXVIII(27) 119 (313) 3,2 (3,2) 3,2 4-2,2, 4-2,2 XXIX (28) 331 (319) 25,6 (3,2) 0,4 -2,8, 40,6 en mg/kg de poids du corps 2 en g par souris, aux jours 1 et 6 aux doses efficaces maximale et minimale

Les composés XIX et XX sont exceptionnellement intéressants parce que leur activité l'emporte nettement sur celle de la mitomycine C tant par l'effet maximum que par la puissance en mg (importance des doses assurant des effets équivalents). Ce sont chacun des composés de formule I où A représente le radical amidino indiqué et B représente -NH_,c'est-à-dire 2 7 des dérivés de la mitomycine C substituée en N par 34 ?1 un radical aminomethylene de la formule R R N-C= CD.MJ - 55 - 3 4 où R , R et R sont tels que definis ci-dessus.

Les bis-amidines de formule I faisant l'objet de l'invention où A et B représentent chacun un tel radical amidino sont également d'un intérêt sensible par leur activité contre les tumeurs. On peut se référer à ce propos aux données précisées dans le tableau pour les composés V, VI, VII, IX, X et XIV qui ont cette particularité de structure.

Le tableau V rassemble les résultats d'épreuves contre le mélanome B16 entretenu chez la souris. On utilise des souris BDF^ auxquelles on a inoculé intra-péritonéalement: un implant de la tumeur. Le programme est d'une durée de 60 jours. On prend des groupes de dix souris pour chaque dose et on détermine le temps de survie moyen dans chaque groupe. Les animaux témoins inoculés comme les animaux d'épreuve et recevant le véhicule de l'injection sans principe actif ont un temps de survie moyen de 21 jours. On évalue l'efficacité par la comparaison du temps de survie à celui des témoins (%.T/t) et on détermine pour chaque composé la dose efficace maximale et la dose efficace mininmle. La dose efficace minimale est celle donnant un % T/t de 125. Pour chaque dose, on administre aux animaux le composé expérimental aux jours 1, 5 et 9 par voie intrapéritonéale. On évalue la toxicité par mesure du changement moyen de poids au jour indiqué, à la dose efficace maximale et à la dose efficace minimale.

Une perte de poids de 2 g pour une souris de 20 g n'est pas excessive.

TABLEAU V

Inhibition du mélanome B16 Changement Composé n° Effet maximum |Dose ef£i_ , (exemple) % T/t Dose cace mini- · ^ ____mole__ v (1) > 298 (256)* 0,8 (3,2)* <0,2 -K),5, -0,2 (5) X (5) > 295 (198 ) 2,0 ( 3,0) <2,0 -0,4,--0,4(6) XXI (18) >295 (198) 0,4 (3,0) <0,2 -0,2, -1,8 (6) XX (9) 262 (198) 0,8 (3,0) <0,2 -2,6, -1,6 (6) XIX (8) >235 (165) 1,2 (3,0) <0,5 40,6, 40,8 (5) * Les valeurs entre parenthèses sont celles des témoins recevant la mitomycine C.

On essaye le composé XXX (exemple 29) et le composé XXIX (exemple 28) sur le mélanome B16 de la souris après implantation sous-cutanée de la tumeur et par administration intraveineuse du principe actif. On détermine comme précédemment le temps de survie au cours d'un traitement de 40 jours. On note le changement de poids au 12e jour. La dose efficace maximale du composé XXX est de 1 mg par kg et assure un % T/t de 156 avec un gain de poids de 1,5 g. On utilise des groupes de six animaux dont trois animaux survivent pendant les 40 jours avec cette dose. La dose efficace min imaJe est de 0,25 mg/kg, pour laquelle le changement de poids au 12e jour est de 1,0 g. La dose efficace maximale du composé XXIX est de 8 mg/kg avec un % T/t de 177 et un changement de poids de -0,6. La dose efficace minimale est de 4 mg/kg avec un changement de poids de 4-0,8. Au cours de la même expérience, la dose efficace maximale de mitomycine C est de 3 mg/kg avec un % T/t de 195 et un changement de poids de -0,5. La dose efficace minimale de mitomycine C n'a pas été CD.MJ - 57 - déterminée.

Au cours d'une étude toxicologique rapide sur des groupes de cinq souris mâles BDF^ par dose recevant une dose intrapéritonéale unique du composé XIX, on n'observe pas de diminution sensible du nombre des lymphocytes à la dose efficace optimale de ce composé (1,6 mg/kg i.p.). A cette dose, il n'y a pas d'augmentation sensible de l'azote urique sanguin ni de la phosphotransférase glutamique du sérum, ce qui révèle - l'absence d'effet sur la fonction rénale ou hépatique ou la suppression de l'activité lymphocytaire.

En raison de l'activité remarquable manifestée contre les tumeurs expérimentales chez les animaux et d'une toxicité plus faible que celle de la mitomycine C, l'invention a aussi pour objet l'administration des composés de formule I pour inhiber les tumeurs chez les mammifères. A cette fin, les composés peuvent être administrés par voie systémique en quantité sensiblement non toxique ,mais efficace contre les tumeurs à un animal porteur d'une tumeur.

Claims (48)

1. Composé de formule: O O A. CH,OC—b I | Lra3 -YQy où A représente un radical amino, méthoxy, hydroxyle, (1-alcoyl inférieur-2(1H)-pyridinylidène)amino ou un radical de formule: 2 2 2 5 R HR RR

2. Composé suivant la revendication 1, dans la formule duquel A et B représentent chacun ^ndépendam- 3 4 * ment le radical amidino de formule R R N-C=N-.

3. Composé suivant la revendication 2, dans 1 2 la formule duquel R et R représentent chacun un atome 3 4, d'hydrogène et R et R représentent chacun un radical méthyle.

3. I 3 I I 3 I I R R N-C=N-, R -N-C=N-, R -N=C-N-, (CH„) i n q α, ) n f Ά R - I II 17 ou »7 H2N-C=N-, HN=C-N-, R R B représente un radical amino ou le radical amidino 34 f de formule R R N-C=N- et au moins l'un d'entre A et B représente l'un des radicaux spécifiés autres qu'amino, méthoxy ou hydroxyle, n représente O, 1, 2 ou 3, R·*" représente un atome d'hydrogène ou radical alcoyle inférieur, alcanoÿle inférieur, benzoyle ou benzoyle substitué dont le substituant est un radical alcoyle inférieur, alcoxy inférieur, halogéno, amino ou nitro, 2 R représente un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle inférieur, phényle, (alcoyl inférieur)phényle, (alcoxy inférieur)phényle, halogénophényle, aminophé-nyle, nitrophényle , thiényle, furyle, cyano, di(alcoyl inférieur)amino, alcoxy inférieur ou alcoylthio inférieur, 3 R représente un radical alcoyle inférieur, alcoxy inférieur ou constitue avec R^ et l'atome d'azote auquel ils sont unis un radical pyrrolidine, 2-, ou 3-{alcoyl.inférieur)pyrrolidine, pipéridine, 2-, 3- ou 4-(alcoyl inférieur)pipéridine, 2,6-di(alcoyl inférieur)-pipéridine, pipérazine, pipérazine -4-substituée (dont le substituant est un radical alcoyle ou carbalcoxy = comptant chacun 1 à 8 atomes de carbone, phényle, méthyl- phényle , méthoxyphényle , halogénophényle, nitrophényle ou benzyle), azépine, 2-, 3-, 4- ou 5-(alcoyl inférieur)-azépine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-1-oxyde ou thiomorpholine-1,1-dioxyde, R^ représente un radical alcoyle inférieur ou con-3 stitue avec R et l'atome d'azote auquel ils sont unis un radical pyrrolidine, 2- ou 3-(alcoyl inférieur)pyrrolidine , pipéridine, 2-, 3- ou 4-1alcoyl inférieur)-pipéridine, 2,6-di(alcoyl inférieur)pipéridine, pipérazine, pipérazine 4-substituée (dont le substituant est un radical alcoyle ou carbalcoxy dont chacun compte 1 à 8 atomes de carbone, phényle, méthylphényle, méthoxyphényle, halogénophényle, nitrophényle ou benzyle), azépine, 2-, 3-, 4- ou 5-(alcoyl inférieur)azépine, morpholine, thiomorpholine, thiomorpholine-l-oxyde ou thiomorpholine-1 ,1-dioxyde , R^ représente un radical C^_^g alcoyle autre que t-alcoyle, alcényle, C^_^g aicÿnyle» C3_xg ^al°_ génoalcoyle , C^^g hydroxyalcoyle, C4_g cycloalcoyle, aryle ou aralcoyle inférieur dont chacun compte jusqu'à 12 atomeis de carbone ou un radical hétéroalicycli-que ou hétéroaromatique de 3 à 8 chaînons dont au moins deux sont des atomes de carbone, 79, R et R représentent indépendamment des atomes d'hydrogène ou radicaux alcoyle inférieurs, étant entendu que chacun des radicaux alcoyle inférieur, alcanoyle inférieur, et alcoxy inférieur précités compte 1 à 6 atomes de carbone.

4. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[(diméthylamino)méthylène]amino-N^-(diméthylamino) méthylène-9a-méthoxymitosane.

5. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[(diméthylamino)méthylène]amino-N10-(diméthylamino) méthylène-N^a-formyl-9a~méthoxymitosane.

6. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[ (diisopropylamino)méthylène]amino-N'LO-(diisopro-pylamino)méthylène-9a-méthoxymitosane.

7. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[(diméthylamino)méthylène]amino-Nx -(diméthylami-no)méthylène-9a-méthoxy-Nla-méthylmitosane.

8. Composé suivant la revendication 2, dans 12, la formule duquel R et R représentent chacun un atome d'hydrogène et R^ et R^ constituent avec l'atome d'azote ' auquel ils sont unis le radical pipéridine.

9. Composé suivant la revendication 1, qui est le Nia-formyl-9a-méthoxy-7-(1-pipéridinylméthylène)-amino-N^-C 1-pipéridinylméthylène ) mitosane.

10. Composé suivant la revendication 1, qui est le 9a-méthoxy-7- ( 1-pipéridinylméthylène ) -amino-N·1·0- (1-pipéridinylméthylène)mitosane.

11. Composé suivant la revendication 2, dans la 12, formule duquel R et R représentent chacun un atome 3 4 d'hydrogène et R et R constituent avec l'atome d'azote auquel ils sont unis le radical morpholine.

12. Composé suivant la revendication 1 qui est le 9a-méthoxy-7-(l-morpholinométhylène ) -amino-N'1'0-(1-morpholino-méthylène)mitosane.

13. Composé suivant la revendication 1, dans la formule duquel A représente un radical amino et B K 3 4 * représente le radical amidino de formule R R N-C=N-.

14. Composé suivant la revendication 13, dans 3 4 la formule duquel RJ et R4 représentent chacun un radical méthyle.

15. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-amino-N^-diméthylaminométhylène-9a-méthoxy-N'La-méthylmitosane.

16. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-amino-N^-diméthylaminométhylène-9a-méthoxy-mitosane.

17. Composé suivant la revendication 1, dans la formule duquel A représente un radical méthoxy et

18. Composé suivant la revendication 17, dans 3 4, la formule duquel R et R représentent chacun un radical méthyle.

19. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7,9a-diméthoxy-N^°-diméthylaminométhylènemitosane.

20. Composé suivant la revendication l,qui est le 7,9a-diméthoxy-N10-diméthylaminométhylène-N10-formylmitosane.

21. Composé suivant la revendication 1, dans la formule duquel A représente l'un des radicaux amidino indiqués et B représente un radical amino.

22. Composé suivant la revendication 21, dans la formule duquel A représente le radical amidino de r2 34. 3 4 formule R R -C=N- et, R et R représentent chacun un radical méthyle.

23. Composé suivant la revendication 1, qui cn.M.T _ fi? _ est le 7-(diméthylaminométhylène)amino-9a-méthoxymito- sane.

24. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-(diméthylaminométhylène)amino-9a-méthoxy-N 3-méthylmitosane.

25. Procédé de préparation d'un composé suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé choisi parmi la mitomycine C, la * , , , la mitomycine A et un dérivé N -alcoylé inférieur de l'une ou de l'autre avec un amide-acétal de formule R3 ** I 8 , N-C-OR *4' Î,R8 2 3 4 ou R, R et R sont tels que définis dans la revendi-cation 1 et les R représentent chacun indépendamment un radical alcoyle inférieur ou cycloalcoyle comptant jusqu'à 6 atomes de carbone ou bien constituent ensemble un radical alcoylène formant avec les atomes d'azote attachés et l'atome de carbone intermédiaire une structure cyclique de 5 bu 6 chaînons, en solution dans un milieu de réaction organique liquide anhydre et compatible avec la réaction à une température de 40 à 65°C jusqu'à formation d'un produit de réaction dans lequel B ou bien A et B dans la formule de la revendication 1 représentent le radical amidino de formule , A R2 R R N-C=N-.

26. Procédé suivant la revendication 25, caractérisé en ce que le milieu de réaction organique liquide comprend un hydrocarbure aliphatique halogéné inférieur et on utilise plus de deux proportions moléculaires de 1'amide-acétal par rapport à la mitomycine C pour obtenir un composé dans lequel A et B représentent chacun ce radical amidino.

27. Procédé suivant la revendication 26, carac- CD.MJ - 63 - térisé en ce que le milieu de réaction est le chloro -forme.

28. Procédé suivant la revendication 26, caractérisé en ce que le milieu de réaction est un mélange d'un hydrocarbure aliphatique halogéné inférieur et d'un alcanol inférieur.

29. Procédé suivant la revendication 28, caractérisé en ce que le milieu de réaction est un mélange de chloroforme et de méthanol.

30. Procédé de préparation d'un 7-(amino substitué)^ a-méthoxymitosane, caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé suivant la revendication 1 dans la formule duquel B ou bien A et B représentent le radical _ . r2 3 4 1 amidmo de formule R R N-C=N- avec une amine primaire aliphatique, alicyclique, aromatique, hétéroaromatique ou hétéroalicyclique dans laquelle 1'atome de carbone portant le radical amino porte au moins un atome d'hydrogène et moins de deux radicaux aryle dans un milieu de réaction organique liquide anhydre compatible avec la réaction à une température d'environ -15°C à +50°C.

31. Procédé, caractérisé en ce qu'on fait réagir un premier composé suivant la revendication 1 dans la formule duquel A et B représentent chacun le radical 3 4 ?2 · amidino de formule R R N-C=N- avec plus d’une proportion moléculaire d'une amine choisie entre l'aminodi-phénylméthane, la trifluoroéthylamine et la t-butylami-ne à une température de 20 à 60°C jusqu'à conversion du premier composé suivant la revendication 1 en un second composé suivant la revendication 1 dans la formule duquel A représente ce radical amidino et B représente un radical amino.

32. Procédé suivant la revendication 30 ou 31, caractérisé en ce qu'on utilise un milieu de réaction organique liquide anhydre compatible avec la réaction qui comprend du méthanol, du chloroforme, du chlorure de méthylène ou un autre halogénoalcane inférieur .

33. Procédé de préparation d'un composé suivant la revendication 1, dans la formule duquel B représente -NH2, et A représente un radical (1-alcoyl inférieur - 2(1H)-pyridinylidène)amino ou un radical de ' formule : 2 2 2 R H R R 3 4 * 3 1 1 1 R K N-C=N-, R°N-C=N-, H2N-C=N-, - ( CH„) , 2 n f V 9 Ά · - »7 N- R 1 2 3 4 5 7 * et R , R , R , R , R3, R et n sont chacun tels que définis dans la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait réagir une solution,dans le diméthylformamide (ou un autre solvant compatible), de mitomycine C avec 1,0 à 1,5 proportion moléculaire d'hydrure de sodium pour „ produire une forme anionique de la mitomycine C et on ’ fait réagir cette forme anionique avec un réactif élec- trophile capable de former ce radical amidino et choisi entre un iminoéther, un iminothioéther, un ha- logénure d'halogénométhylèneiminium et un iminohalogé- nure salin.

34. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-(l-méthyl-2(H)-pyridinylidène)amino-9a-métho-xymitosane.

34 R2 B représente le radical amidino de formule R^R^N-CsN-.

35. Composé suivant la revendication 1, qui est le 9a-méthoxy-7-(l-morpholinométhylène)-aminomi-tosane. en m.t _ _

36. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-(l-pyrrolidinylméthylène)amino-9a~méthoxymito-sane.

37. Procédé pour inhiber une tumeur chez un mammifère, caractérisé en ce qu'on administre par voie systémique au mammifère porteur d'une tumeur un con-posé suivant la revendication 1 en une dose antitumorale efficace sensiblement non toxique.

38. Le 7-[2-benzylthioéthyl]amino-9a-méthoxy- , mitosane.

39. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[l-(diméthylamino)éthylidène]amino-N'*"°-[l-(di-méthylamino)éthylidène]-9a-méthoxymitosane.

40. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[l-(diméthylamino)éthylidèneamino]-9a-méthoxy-mitosane.

41. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-C(l-méthyl-2-pyrrolidinylidène)amino]-N^°- [(l-méthyl-2-pyrrolidinylidène)amino]-9a-méthoxymitosane.

42. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[(l-méthyl-2-pyrrolidinylidène)amino]-9a-métho-xymitosane.

43. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[(méthoxyamino)méthylène]amino-9a-méthoxymito- » sane.

44. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-[(benzyloxyamino)méthylène]amino-9a-méthoxymi-tosane.

45. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-(l,3-diméthyl-2~imidazolidylidène)-9a-méthoxy-mitosane.

46. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7 - (1,3-diméthyltétrahydropyrimidinylidène)-amino-9a-méthoxymitosane.

47. Composé suivant la revendication 1, qui Λ··η MT C. C. est le 7-(tétraméthyldiaminométhylène)amino-9a-méthoxy- mitosane.

48. Composé suivant la revendication 1, qui est le 7-(1-pipéridinylméthylène)amino-9a-méthoxymito-sane. * * v a Èf \