KR950700075A - 항-이알비비(erbB)-2 모노클로날항체의 조합물 및 그 사용방법 - Google Patents

항-이알비비(erbB)-2 모노클로날항체의 조합물 및 그 사용방법

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Abstract

본 발명은 악성세포가 gp185 erbB-2를 과다형질발현시키는 인체악성질환을 예방 및 치료할 수 있는 2개 이상의 모노클로날항체의 조합물에 관한 것이다. 조합물의 모노클로날항체는 erbB-2의 gp185 형질발현생성물의 다른 에피토프를 인식한다. 따라서, 항체들은 서로 교차반응하지 않는다. 조합물은 erbB-2 유전자의 형질전환생성물을 감소시키는 것이 바람직하다. 다른 실시예에서, 조합물은 gp185형질발현생성물의 티로신 포스토릴화를 본질적으로 증가시키지 않는다.

Description

항-이알비비(erbB)-2 모노클로날항체의 조합물 및 그 사용방법.
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1A도는 모노클로날항체 #21 및 #23의 특이성을 도시하는 것이다. 준용합성 SK-Br-3 단일층을 355-Cys(1000 Ci/mmol)로 대사적으로 표지화하였다. 총세포단백질을 10㎍의 지정된 항체를 사용하여 면역침전시켰다. 면역착물을 단백질 G아가로스(Genex;미합중국, 메릴랜드, 개덜스버그 소재)에 의해 회수하여 8-16% 트리스-글리신겔상에서 SDS-PAGE에 의해 분석하였다. 겔을 강화스크린을 사용하여 -70℃에서 하룻밤동안 필름에 노출시켰다.
제1B도는 위장세포주 N87와 N87 마우스 이종 이식편으로부터의 종양에서 gp185 erbB-2 형질발현을 고 및 저 gp185 erbB-2 과다형질발현인자와 비교하였다. 세포 또는 종양을 0.125M 트리스-HCI, 4% SDS, 0.002% 브로모페놀 블루 및 15% 글리세롤을 함유하는 샘플완충액에 용해시켰다. 단백질농도를 측정한 후 5%-메르캅토에탄올을 첨가하였다. 샘플(총단백질 10㎍)을 3분 동안 끓이고, 8-16% 트리스-글리신 겔상에서 SDS-PAGE에 의해 분별하여 니트로셀룰로스로 옮겼다. gp185 erbB-2의 검출은 모노클로날항체를 사용하여 단백질의 C-말단부에 대해 수행하였다.
제1C도는 N87(위장), SK-Br-3(유방) 및 SK-OV-3(난소)세포주와 인체태반의 erbB-2 유전자를 서던블롯분석한 것이다. 세포주 및 인체태반조직으로 부터 구아니딘 티오시아네이트 및 세슘구배원심분리를 이용하여 DNA를 추출하였다. DNA(15㎍)를 제한효소 Hin DⅢ에 의해 분해하고, 니트로셀룰로스로 옮겨 전술한 바와같은 방사성 erbb-2 cDNA프로브(26)에 의해 프로빙하였다. cDNA프로브는 erbB-2 단백질 암호화영역 전체에 해당한다.
제2도는 단일층 MTT성장분석에 있어서, 이체 N87 위장종양세포의 성장에 대한 Ab#21 및 Ab#23의 영향을 나타내는 것이다. 10,000세포/웰의 단일세포현탁액을 인슐린(5㎍/ml), 인체트랜스페린(10㎍/ml), 17--에스트라디올(10nM), 나트륨 셀레나이트(5nM) 및 10mM Hepes가 보충된 RPMI-1640으로 구성되는, 화학적으로 규명된 배지에 평판배양하였다. 지정된 농도의 PBS, AB#21, Ab#23 또는 Ab#21과 Ab#23의 조합물을 첨가하였다. 평판을 37℃에서 5% CO2의 습한 분위기하에서 성장시켰다. 7일 후, 50㎕의 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드(0.1mg)를 첨가하고 37℃에서 4시간동안 항온처리하였다. 이어서 90%의 배지를 제거하고 결정들을 0.175ml DMSO에 용해시켰다. 분자장치 Vmax역학적 미세평판해독기를 사용하여 540nm에서 광밀도를 측정하였다. 결과는, 표시된 표준편차를 가진, 8개의 웰의 평균이다. 사용된 조건하에서, 세포의 수는 MTT감소에 정비례한다.
제3A도는 BNX마우스에서 N87 종양 이종이식편의 성장에 대한 AB#21( ), Ab#23( ), Ab#21과 Ab#23의 조합물( )에 의한 치료효과를 나타낸다. 종양세포(5×106마우스)를 BNX(베이지(b), 누드(n), 크시드(x)) 마우스의 옆구리에 피하주사 하였다. 1일후에 치료를 개시하였으며, 4개의 시험군(군당 3마리의 마우스로 구성)을 구성하여 각각 3주동안 1주일에 2회씩 PBS( ), 200㎍의 정제된 Ab#21(o), 200㎍의 정제된 Ab#23( ), 또는 100㎍의 정제된 Ab#21과 100㎍의 정제된 Ab#23의 혼합물( )을 0.2㎖씩 복강내주사 하였다. 종양성장을 평균상대종양부피로서 기록한다(s,e,m.±15%). 실험을 2회 반복하여 동일한 결과를 얻었다. 제3B도는 작은 종양이 형성된 후의 치료효과를 나타낸다. 세포투여후 1일 대신에 4일 후에 치료를 개시한 것을 제외하고는 상기한 것과 동일한 치료프로토콜을 사용하여 세포를 주사하였다. 동물보호는 통상의 지침에 따랐다.

Claims (12)

  1. erbB-2의 gp185 형질발현생성물의 다른 에피토프를 인식하는 2개 이상의 다른 모노클로날항체를 포함하며, 악성세포가 erb-2를 과다항질발현하는 인체악성질환을 치료 또는 예방하기 위한 항체조합물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조합물이 제1 및 제2의 다른 모노클로날항체를 포함하고, erbB-2 유전자의 형질발현생성물을 감소시키는 항체조합물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 조합물이 gp185 형질발현생성물의 티로신 포스토릴화를 본질적으로 증가시키지 않는 항체조합물.
  4. 제2항에 있어서, 상기 항체조합물의 항체들중 1개 이상이 면역독소분자에 결합된 항체조합물.
  5. 악성세포가 erbB-2를 과다형질발현시키는 인체악성질환에 걸린 환자에게, erbB-2의 gp185 형질발현생성물의 다른 에피토프를 인식하는 2개 이상의 다른 모노크로날항체의 조합물 유효량을 투여하는 것을 포함하여 상기 환자를 치료하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 조합물이 제1 및 제2의 다른 모노클로날항체를 포함하고, erbB-2 유전자의 형질발현생성물을 감소시키는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 조합물이 gp185 형질발현생성물의 티로신 포스토릴화를 본질적으로 증가시키지 않는 방법.
  8. 제6항에 있어서, 싱기 유효량이 종양부위에서 1㎍/ml의 농도를 제공하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 유효량이 종양부위에서 10㎍/ml의 농도를 제공하는 방법.
  10. 제6항에 있어서, 상기 유효량이 환자제출 kg당 0.1mg 내지 약 10mg의 용량인 방법.
  11. 제6항에 있어서, 상기 조합물의 항체중 1개 이상이 면역독소분자에 결합된 방법.
  12. 하기(a) 및 (b)를 포함하며, 악성세포가 erbB-2를 과다형질발현하는 인체악성질환을 예방 또는 치료할 수 있는 조성물; (a) erbB-2의 gp185 형질발현생성물의 다른 에피토프를 인식하는 2개 이상의 다른 모노클로날항체를 포함하는, 유효량의 항체조합물; 및 (b) 약학적으로 허용가능한 담체.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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