KR870006185A - 트롬빈 억제제의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음

Description

트롬빈 억제제의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 및 2도는 각각 플라스미드 pML 300 및 pML 305의 작제를 보여주는 도식적 그림이다.
제3도는 trp 프로모터를 함유하는 플라스미드 pHRi 148의 작제를 도시한 것이다.

Claims (29)

  1. 각각 진핵 발현 조절 서열, 판독프레임의 상부 및 판독프레임 중에 존재하는 시그널 펩타이드를 코드화하는 제 1 DNA 서열과 성숙 데설페이토히루딘을 코드화하는 제 2 DNA 서열로 이루어진 DNA 단편(이 DNA 단편은 상기 발현 조절 서열의 전사 조절하에 있다), 및 진핵 전사 종결 시그널을 함유하는 서열로 이루어진 하나이상의 DNA 삽입물을 갖는 하이브리드 벡터로 형질전환된 진핵 숙주 유기체를 적절한 영양 조건하에서 배양하고, 배양 배지로부터 히루딘 활성을 갖는 단백질을 분리하고, 필요한 경우, 임의로 세포 내부로부터 세포 연관된, 히루딘 활성을 갖는 추가의 단백질을 분리시키고, 필요한 경우, 생성된 히루딘 활성을 갖는 단백질을 히루딘 활성을 갖는 상이한 단백질로 전환시킴을 특징으로 하여, 히루딘 활성을 갖는 단백질을 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제 2 DNA 서열이 데설페이토히루딘 변종 HV 1을 코드활함을 특징으로하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제 2 DNA 서열이 데설페이토히루딘 변종 HV 2을 코드활함을 특징으로하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제 2 DNA 서열이 데스-(Val)2-데설페이토히루딘을 코드화함을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 제 2 DNA 서열이 데설페이토히루딘 변종 PA를 코드화함을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 숙주가 포유동물 세포라인 및 효모로 이루어진 그룹중에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 숙주가 효모임을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 발현 조절 서열이, 포유동물 숙주에서 사용하기 위해, 바이러스로부터 유도됨을 특징으로 하는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 발현 조절 서열이, 효모 숙주에서 사용하기 위해, 효모의 제놈 DNA로부터 유도됨을 특징으로 하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 발현 조절 서열이 효모 GAPDH 및 PHO5 유전자의 프로모터들로 이루어진 그룹중에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.
  11. 제9항에 있어서, 발현 조절 서열이 상부에는 하나의 효모 유전자의 활성화 서열 및 하부에는 다른 효모 유전자의 작용성 TATA 박스를 포함하는 프로모터 성분을 함유하는 하이브리드 프로모터임을 특징으로 하는 방법.
  12. 제9항에 있어서, 발현 조절 서열이 상부에는 PHO5 유전자의 활성화 부위(들) 및 하부에는 효모 GAPDH 유전자의 TATA 박스를 포함하는 프로모터 성분을 함유하는 하이브리드 프로모터임을 특징으로 하는 방법.
  13. 제1항에 있어서, 시그널 펩타이드를 코드화하는 DNA 서열이 효모 인버타제, a-인자, α-인자, 페로몬 펩티디아제, "킬러 독소" 및 억제 가능한 산 포스파타제(PH05)유전자의시그널 서열 및 아스퍼질러스 아와모리(Aspergillus awamori)로 부터으 글리코아밀라아제 시그널 서열로 이루어진 그룹중에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 시그널 펩타이드를 코드화하는 DNA 서열이 효모 PHO5 및 인버타제 유전자의 시그널 서열들로 이루어진 그룹중에서 선택됨을 특징으로 하는 방법.
  15. 제1항에 있어서, 진핵 전사 종결 시그널을 함유하는 서열이 사용된 발현 조절 서열에 자연적으로 연결된 유전자의 서열임을 특징으로 하는 방법.
  16. 제1항에 있어서, 각각 PHO5 프로모터, 판독 프레임의 상부 및 판독 프레임 중에 존재하는 PHO5 시그널 서열과 성숙 데설페이토히루딘을 코드화하는 DNA 서열로 이루어진 DNA 단편(이 DNA 단편은 PH05 프로모터의 전사 조절하에 있다), 및 PHO5 유전자의 3′플랭킹 서열로 이루어진 하나 이상의 DNA 삽입물을 갖는 하이브리드 벡터로 형질전환된 효모가 사용됨을 특징으로 하는 방법.
  17. 제1항에 있어서, 각각 GAPDH 프로모터, 판독 프레임의 상부 및 판독 프레임 중에 존재하는 PHO5 시그널 서열과 성숙 데설페이토히루딘을 코드화하는 DNA 서열로 이루어진 DNA 단편(이 DNA 단편은 GAPDH 프로모터의 전사 조절하에 있다), 및 PHO5 유전자의 3′플랭킹 서열로 이루어진 하나 이상의 DNA 삽입물을 갖는 하이브리드 벡터로 형질전환된 효모가 사용됨을 특징으로 하는 방법.
  18. 제1항에 있어서, 각각 상부에는 효모 PHO5 유전자의 활성화 부위(들) 및 하부에는 효모 GAPDH 유전자의 TATA 박스를 포함하는 프로모터 성분을 함유하는 하이브리드 프로모터, 판독 프레임의 상부 및 판독 프레임 중에 존재하는 PHO5 시그널 서열과 성숙 데설페이토히루딘을 코드화하는 DNA 서열로 이루어진 DNA 단편(이 DNA 단편은 하이브리드 프로모터의 전사 조절하에 있다), 및 PHO5 유전자의 3′플랭킹 서열로 이루어진 하나이상의 DNA 삽입물을 갖는 하이브리드 벡터로 형질전환된 효모가 사용됨을 특징으로 하는 방법.
  19. 제1항에 있어서, 각각 PHO5 프로모터, 판독 프레임의 상부 및 판독 프레임 중에 존재하는 인버타제 시그널 서열과 성숙 데설페이토히루딘을 코드화하는 DNA 서열로 이루어진 DNA 단편(이 DNA 단편은 PHO5 프로모터의 전자 조절하에 있다), 및 PHO5 유전자의 3′플랭킹 서열로 이루어진 하나이상의 DNA 삽입물을 갖는 하이브리드 벡터로 형질전환된 효모가 사용됨을 특징으로 하는 방법.
  20. 제1항에 있어서, 상기 하이브리드 벡터가 하나의 DNA 삽입물로 이루어짐을 특징으로 하는 방법.
  21. 제1항에 있어서, 상기 하이브리드 벡터가 2 내지 4개의 DNA 삽입물로 이루어짐을 특징으로 하는 방법.
  22. 제1항에 있어서, 상기 하이브리드 벡터가 2개의 DNA 삽입물을 직렬로 함유함을 특징으로 하는 방법.
  23. 제1항에 있어서, 하기 서열을 갖는 데스-(Leu64, GlN65)-데설페이토히루딘 변종 HV 1을 제조하는 방법.
  24. 제1항에 있어서, 하기 서열을 갖는 데스-(GlN65)-데설페이토히루딘 변종 HV 1을 제조하는 방법.
  25. 제1항에 있어서, 하기 서열을 갖는 데설페이토히루딘 변종 HV 1을 제조하는 방법.
  26. 제1항에 있어서, 하기 서열을 갖는 데설페이토히루딘 변종 HV 2을 제조하는 방법.
  27. 제1항에 있어서, 하기 서열을 갖는 데설페이토히루딘 변종 PA를 제조하는 방법.
  28. 제1항에 있어서, 데스-(Val)2-데설페이토히루딘을 제조하는 방법.
  29. 제1항에 있어서, 수득된 데설페이토히루딘 화합물을 황산염 및 티로신 설포트란스퍼라제와 반응시켜 상응하는 히루딘 화합물을 수득함을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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