KR20240014600A - 심장질환 예방 및 치료 방법 - Google Patents
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Abstract
본 개시는 치료적 유효량의 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 ActRII 수용체 결합 분자, 예를 들어, 비마그루맙 항체와 같은 ActRII 수용체 항체를 사용하여 심장 질환을 예방 및/또는 치료하기 위한 신규 용도 및 방법에 관한 것이다.
Description
본 출원은 2017 년 3 월 24 일자로 출원된 미국 가출원 제 62/476,054 호에 대한 우선권을 주장한다.
본 개시는 액티빈 수용체 타입 II(ActRII) 길항제 분야, 예를 들어, 인간 ActII 수용체에 대한 액티빈, 성장분화인자 (GDF), 골형태형성단백질 (BMP) 및 미오스타틴의 결합을 길항할 수 있는 분자, 예를 들어, ActRIIA 및/또는 ActRIIB에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 (bimagrumab)과 관련된다. 특히, 이는, 치료적 유효량의 ActRII 수용체 길항제를 대상 (subject)에게 투여함으로써, 심박출계수 감소 심부전 (HFrEF, heart failure with reduced ejection fraction) 및 심박출계수 보존 심부전 (HFpEF, heart failure with preserved ejection fraction)을 포함하는 심부전을 예방 및/또는 치료하는 것 또는 이러한 증상과 관련된, 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증, 독성 및 감염정 제제 및 유전적 또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)과 같은, 구조적 및/또는 기능적 심장 이상을 치료하는 것에 관한 것이다. 주목할 점은, 이들 증상은 빈번하게 공존하지만 단독으로 발생할 수 있는 임상적 증후군을 포함하며, 종종 수축기 및/또는 이완기 심부전, 좌측 및/또는 우측 심부전, 및 울혈성 심부전이라 지칭된다.
액티빈 타입 IIB 수용체(ActRIIB)는 형질전환 성장 인자 베타(TGF-β) 수퍼패밀리의 다양한 구성원에 대한 신호전달 수용체이다. 이러한 패밀리의 구성원으로 액티빈 A, 노드(nodal), BMP2, BMP6, BMP7, BMP9, GDF5, GDF8 (미오스타틴) 및 GDF11을 포함하며, 이들 모두는 근육의 부정적인 조절에 관여한다 (Akpan et al., 2009).
미오스타틴 (GDF8)은 액티빈 수용체 타입 II (주로 ActRIIB를 통해)를 통해 작용하고, 제안된 신호전달은 단백질 합성의 억제 및 근세포 분화 및 증식에 관여하는 SMAD 2/3 경로를 통한 것이다. 미오스타틴 억제 또는 유전자 제거는 근육 질량 및 강도를 증가시킨다 (Lee et al 2005, Lee and McPherron 2001, Whittemore et al 2003).
BYM338로도 알려진 비마그루맙(Bimagrumab)은 미오스타틴 또는 액티빈, 그의 천연 리간드보다 더 큰 친화도로 액티빈 수용체 유형 타입 IIB (ActRII)에 경쟁적으로 결합하도록 개발된 모노클로날 항체이다. 비마그루맙은 WO2010/125003에 개시되어 있으며, 이는 명시된 바와 같이 본원에 참조로 포함된다. 비마그루맙은 ActRIIA 및 B의 리간드 결합 도메인에 결합하는 완전한 인간 항체 (변형된 IgG1, 234-235-Ala-Ala, λ2)이며, 이에 의해 골격근 성장의 천연 억제제로서 작용하는 미오스타틴 및 액티빈을 포함하는 리간드의 결합 및 후속 신호 전달을 방지한다. 비마그루맙은 인간 및 마우스 ActRIIB와 교차-반응하고, 인간, 시노몰구스(cynomolgus), 마우스 및 래트 골격근 세포에 효과적이다. ActRIIB는 골격근, 지방 조직 및 심장을 포함한 다양한 기관에 널리 분포되어 있다 (Rebbapragada et al., 2003).
심부전(Heart failure)은 심장 기능에서의 손상이 신체의 대사 요구를 충족시키기 위해 불충분한 전신 관류 (systemic perfusion)를 초래하는 임상 증후군 (clinical syndrome)이다. 심부전(heart failure)은 2 가지 주요 타입:(1) 심박출계수 감소 심부전 (HFrEF, heart failure with reduced ejection fraction)("수축기 심부전"이라고도 함) 및 (2) 심박출계수 보존 심부전 (HFpEF, heart failure with preserved ejection fraction)("이완기 심부전" 이라고도 함)을 갖는 심부전을 포함한다. HFrEF에서, 감소된 심장 수축성 (reduced cardiac contractility)은 심박출량 (cardiac output)을 손상시키고 전신 저관류를 유발하는 주요 메커니즘이다. HFpEF에서, 휴지기 심장 수축성 (resting cardiac contractility)은 전체적으로 보존된다. 심장 리저브 (cardiac reserves) 및 이완기 기능을 포함하는 심장 기능의 다수의 다른 결함들은 심장의 기능적 성능을 손상시켜 임상적 심부전의 유사한 표현형 (phenotypes)을 초래한다. 다양한 증상이 심장을 손상시키거나 약화시켜, 예를 들어, 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원 (infectious agents), 유전성 또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)을 포함하는 심부전으로 이어질 수 있다.
당뇨병, 노화, 고혈압, 허혈성 심장질환, 관상동맥 심장질환, 심장판막질환 및 유전성 및 특발성 심근증과 같은 병인 (etiologies)으로부터의 심부전은 세계적으로 이환율 및 사망률의 주된 원인이다. 점점 널리 퍼지는 이러한 질병 프로세스에 이용할 수 있는 약리학적 치료제 제한되어 있다. 심부전 관리 표준은 이러한 질환의 복잡한 병리생리학에 관련된 다양한 메카니즘을 타겟으로 하는 다수의 약물 요법을 포함한다. 유감스럽게도, 지침에 따라 치료를 해도 이러한 환자에 대한 예후는 5-년 사망률이 50 %에 이를 정도로 열악하다. 진행성 수축기 심부전에서, 환자는 종종 혈류동태 (hemodynamic), 신장성 (nephrogenic) 및 부정맥성 (arrhythmogenic) 부작용으로 인해 일반적인 경구 약물 요법을 견딜 수 없거나 그러한 요법으로부터 충분한 완화를 달성하지 못할 수 있다. 이들 환자의 경우, IV 이노트로프 (inotropes), 기계적 지지 장치 및 심장 이식과 같은 진보된 치료요법은 매우 제한적이고 비싸며 심각한 위험과 관련이있다.
본 개시 이전에, 액티빈 타입 II 수용체 (ActRIIA/B)의 표적화된 억제는 심부전 또는 심부전을 초래할 수 있는 상기 언급된 증상에 대한 예방 또는 치료요법으로서 조사되지 않았다. 본원에 개시된 바와 같이, BYM338의 뮤린화된 버전 (항체의 인간 Fc 영역이 마우스 Fc로 대체됨)인 CDD866과 같은 ActRIIA/B 수용체 길항제의 전신 투여는 횡 대동맥 수축 (TAC, transverse aortic constriction)을 겪은 마우스에서 심장 기능에 상당한 유익한 효과를 갖는다는 증거가 있다. TAC는 압력 과부하로 인한 심장비대 및 심부전에 일반적으로 사용되는 실험 모델이다. Rockman et al., 1991에 의해 처음 검증된 뮤린 (murine) TAC 모델은 인간의 심혈관 질환을 모방하고 심장 비대 반응 및 심부전 발생과 관련된 기본 신호전달 과정을 이해하는 데 유용한 도구로 광범위하게 사용되었다 (deAlmeida et al. 2010). 본원에 개시된 바와 같이, CDD866은 TAC-매개 심장 기능 장애를 예방할 뿐만 아니라 약물 투여 1-2 주 이내에 확립된 심부전 후 심장 기능을 회복시킬 수 있다. 또한 골격근의 성장을 증가시키며, 이는 종종 심부전의 진행 형태에서 위축이 되고, TAC의 병리적 스트레스/손상을 받지 않는 대조군 마우스에서 최소의 심장 효과를 유도한다.
본원에는 심장판막질환, 허혈성심장질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy ), 독성 또는 감염원 및 유전성 및/또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)과 같은 증상에 의해 유발되거나 이와 관련된 심부전을 포함하는 심부전 치료 및/또는 예방용 ActRII 수용체 길항제가 개시된다. 또한 상기 언급된 증상과 관련된 구조적 및 또는 기능성 심장 이상 치료용 ActRII 수용체 길항제가 개시된다. 또한 상기 언급된 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상을 치료하기 위해 이러한 ActRII 길항제를 사용하는 방법이 제공된다.
심부전 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 ActRII 수용체 길항제가 본원에 개시된다. 심부전은 예를 들어 대동맥 협착증과 같은 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원, 및 유전성 또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)과 같은 다양한 증상에 의해 유발되거나 이와 관련될 수 있다. 심박출계수 감소 심부전 (heart failure with reduced ejection fraction) 및 심박출계수 보존 심부전 (heart failure with preserved ejection fraction) 둘 다 여기에 포함된다.
또한 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원, 및 유전성 또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)과 같은 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상을 치료하는데 사용하기 위한 ActRII 수용체 길항제가 본원에 개시된다. 일부 경우에, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy)은 임신 후기 또는 산후 6개월 동안 발생한다. 스트레스 심근증은 종종 폐경 후 나이 많은 여성에서 발생한다. 심장판막질환의 예는 대동맥 협착증이며, 이는 연약증상 및/또는 근육 감소증을 동반할 수 있다. 스트레스 심근증은 심리적, 병리적 또는 신체적 스트레스 후에 발생할 수 있다.
심부전을 치료 및/또는 예방하는 방법이 본원에 개시된다. 상기 방법은 심부전이 있거나 또는 심부전이 발생할 위험이 있는 대상 (subject)에게 치료적 유효량의 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 비마그루맙을 투여하는 것을 포함한다. 심박출계수 감소 심부전 (HFrEF) 및 심박출계수 보존 심부전 (HFpEF)이 여기에 포함된다. 심부전은 예를 들어 뇌나트륨이뇨펩티드 (brain natriuretic peptide) 측정 및 양성인 경우 심장 초음파 검사, 심초음파 검사 (echocardiography)와 같은 이미징 등 잘 알려진 방법을 사용하여 환자에서 진단될 수 있다.
대상 (subject)이 심장판막질환, 관상동맥질환 (이전의 심근 경색 포함), 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy) 및 유전성 또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)과 같은 증상이 있는 경우, 대상(subject)은 심부전을 일으킬 위험이 있다.
또한, 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원, 및 유전성 또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)과 같은 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상을 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 상기 방법은 그러한 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상을 갖는 대상에게 유효량의 ActRII 수용체 길항제를 투여하는 단계를 포함한다.
본원에 기술된 방법 또는 용도에 사용하기 위한 ActRII 수용체 길항제의 예는 ActRII 수용체 결합 분자이며, 이는 ActRII-상호 작용 리간드, 예컨대 미오스타틴, GDF11 및 Activin A의 ActRII로의 접근을 차단할 수 있다.
ActRII 수용체 결합 분자는 ActRIIA 및/또는 ActRIIB 수용체에 결합할 수 있다. ActRII 결합 분자의 예는 ActRIIA 및/또는 ActRIIB 수용체에 결합하는 항체, 예를 들어 항-ActRII 수용체 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 항-ActRII 수용체 항체는 비마그루맙으로도 알려진 BYM338이다.
본원에 기술된 방법에 사용하기 위한 ActRII 수용체 길항제의 추가의 예는 ActRIIA 또는 ActRIIB 수용체의 세포외 도메인의 가용성 형태이며, 이는 미오스타틴, GDF11 및 Activin A와 같은 ActRII-상호 작용 리간드에 결합할 수 있다.
이러한 "수용체 (receptory-body)"는 그들의 리간드를 경쟁시켜 세포-결합 (cell-bound) ActRII 수용체의 기능을 억제한다.
본원에 개시된 용도 또는 방법에 사용되기 위한 ActRII 수용체 길항제가 본원에 개시되며, 여기서 ActRII 수용체 길항제는 서열번호 181의 아미노산 19-134 (서열번호 182)로 구성된 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRII 수용체 항체이다.
본원에 개시된 용도 또는 방법에 사용되기 위한 ActRII 수용체 길항제가 본원에 개시되며, 여기서 항-ActRII 수용체 항체는 다음을 포함하거나 다음으로 구성된 ActRIIB의 에피토프에 결합한다:
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR).
본원에 기술된 용도 또는 방법에 사용하기 위한 추가의 항-ActRIIB 항체는 다음을 포함한다:
예를 들어, a) 다음을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체:
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR); 및
b) 다음을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 ActRIIB에 대한 길항제 항체:
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR), 여기서, 상기 항체는 약 2 pM의 KD를 갖는다.
일 실시양태에서, 본원에 기술된 용도 또는 방법에 사용하기 위한 ActRII 수용체 길항제는 ActRIIA에 결합하는 것보다 약 10 배 또는 그 이상의 친화도로 ActRIIB에 결합하는 항체이다.
본원에 기재된 용도 또는 방법에서 ActRII 수용체 길항제는 다음을 포함하는 항체일 수 있다: 서열번호 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3.
본원에 기재된 용도 또는 방법에서 ActRII 수용체 길항제는 다음을 포함하는 항체일 수 있다:
(a) 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(b) 서열번호 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 72의 경쇄 가변 영역 CDR3;
(c) 서열번호 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 73의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(d) 서열번호 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 74의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(e) 서열번호 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 75의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(f) 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 76의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(g) 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 77의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(h) 서열번호 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 78의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(i) 서열번호 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 79의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(j) 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 80의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(k) 서열번호 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(l) 서열번호 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 82의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(m) 서열번호 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는
(n) 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 84의 경쇄 가변 영역 CDR3.
다른 실시양태에서, 본원에 기재된 용도 또는 방법에서 ActRII 수용체 길항제는 서열번호 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95 % 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다.
본원에 기재된 용도 또는 방법에서 ActRII 수용체 길항제는 서열번호 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열에 대해 적어도95 % 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다.
본원에 기재된 용도 또는 방법에서 ActRII 수용체 길항제는 다음을 포함하는 항체일 수 있다:
(a) 서열번호 99의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 85의 가변 경쇄 서열;
(b) 서열번호 100의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 86의 가변 경쇄 서열;
(c) 서열번호 101의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 87의 가변 경쇄 서열;
(d) 서열번호 102의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 88의 가변 경쇄 서열;
(e) 서열번호 103의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 89의 가변 경쇄 서열;
(f) 서열번호 104의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 90의 가변 경쇄 서열;
(g) 서열번호 105의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 91의 가변 경쇄 서열;
(h) 서열번호 106의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 92의 가변 경쇄 서열;
(i) 서열번호 107의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 93의 가변 경쇄 서열;
(j) 서열번호 108의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 94의 가변 경쇄 서열;
(k) 서열번호 109의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 95의 가변 경쇄 서열;
(l) 서열번호 110의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 96의 가변 경쇄 서열;
(m) 서열번호 111의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 97의 가변 경쇄 서열; 또는
(n) 서열번호 112의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 98의 가변 경쇄 서열.
본원에 기재된 용도 또는 방법에서 ActRII 수용체 길항제는 다음을 포함하는 항체일 수 있다:
(a) 서열번호 146의 중쇄 서열 및 서열번호 141의 경쇄 서열;
(b) 서열번호 147의 중쇄 서열 및 서열번호 142의 경쇄 서열;
(c) 서열번호 148의 중쇄 서열 및 서열번호 143의 경쇄 서열;
(d) 서열번호 149의 중쇄 서열 및 서열번호 144의 경쇄 서열;
(e) 서열번호 150의 중쇄 서열 및 서열번호 145의 경쇄 서열;
(f) 서열번호 156의 중쇄 서열 및 서열번호 151의 경쇄 서열;
(g) 서열번호 157의 중쇄 서열 및 서열번호 152의 경쇄 서열;
(h) 서열번호 158의 중쇄 서열 및 서열번호 153의 경쇄 서열;
(i) 서열번호 159의 중쇄 서열 및 서열번호 154의 경쇄 서열; 또는
(j) 서열번호 160의 중쇄 서열 및 서열번호 155의 경쇄 서열.
또한, 본원에 기재된 용도 또는 방법에서, ActRII 수용체 길항제가 교차-차단하거나 전술한 하나 이상의 항체에 의해 교차-차단되는 항-ActRII 수용체 항체인 것이 개시된다.
본원에 기재된 용도 또는 방법에서 ActRII 수용체 길항제는 Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는 항-ActRII 수용체 항체일 수 있다.
본원에 기재된 용도 또는 방법에서 항체의 예는 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 암호화된 항-ActRII 수용체 항체이다.
본원에 제시된 실시예는 CDD866을 사용하는데, 이는 항체의 인간 Fc 영역이 마우스 Fc로 대 된 BYM338의 뮤린화된 버전이다.
그러나, 본원에 기재된 용도 또는 방법에서 바람직한 항체는 완전 (fully) 인간 항체인 비마그루맙 (BYM338)이다 (변형된 IgG1, 234-235-Ala-Ala, λ2).
"ActRII 결합 분자"는, 단독으로 또는 다른 분자와 함께, 인간 ActRII 수용체 (ActRIIA 및/또는 ActRIIB)에 결합될 수 있는 임의의 분자를 의미한다.
결합 반응(binding reaction)은 다음을 포함하는 표준 방법 (정성 분석)에 보여질 수 있다: 예를 들어, 비특이적(unrelated specificity)이지만 이상적으로는 동일한 이소타입 항체, 예를 들어 항-CD25 항체가 사용되는 음성 대조군 시험과 관련하여, 미오스타틴에 대한 ActRII 수용체 결합의 억제를 결정하기 위한 결합 어세이, 경쟁 에세이 또는 바이오어세이 또는 임의의 결합 어세이. ActRII 수용체 결합 분자의 비제한적 예는 다음을 포함한다: 앱타머와 같은 소분자, 또는 수용체 결합하도록 설계된 다른 핵산 분자, 리간드 디코이, 및 B 세포에 의해 생산된 ActRII 수용체에 대한 항체, 하이브리도마 및 키메릭, CDR-그라프팅 또는 인간 항체 또는 이의 임의의 단편, 예를 들어, F(ab')2 및 Fab 단편 및 단일 사슬 또는 단일 도메인 항체. 바람직하게는 ActRII 수용체 결합 분자는 ActRII 수용체에 대한 천연 리간드의 결합을 길항 (예를 들어, 감소, 억제, 감소, 지연)시킨다. 개시된 방법, 요법, 키트, 공정, 용도 및 조성물의 일부 실싱양태에서, ActRIIB 수용체 결합 분자가 사용된다.
다른 실시양태에서, 조성물은 서열번호 181의 아미노산 19-134 (서열번호 182)로 이루어진 결합 도메인, 또는 다음을 포함하거나 다음으로 구성된 에피토프에 결합하는 항-ActRII 수용체 항체를 포함한다: (a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188); (b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186); (c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190); (d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189); (e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187); (f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191); (g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는 (h) 서열번호 181 의 아미노산 78-83 (WLDDFN)및 서열번호 181 의 아미노산 52-56 (EQDKR).
또한 다른 대안적 실시 양태에서, 상기 언급된 조성물은 ActRIIA에 결합하는 것보다 10 배 이상의 친화도로 ActRIIB에 결합하는 항-ActRII 수용체 항체를 포함한다.
또한, 본 개시는 항-ActRIIB 항체가 다음을 포함하는 조성물에 관한 것이다: 서열번호 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3.
특정 실시양태에서, 본 개시는 항-ActRII 수용체 항체가 다음을 포함하는 조성물을 제공한다: (a) 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71의 경쇄 가변 영역 CDR3, (b) 서열번호 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 72의 경쇄 가변 영역 CDR3, (c) 서열번호 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 73의 경쇄 가변 영역 CDR3, (d) 서열번호 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 74의 경쇄 가변 영역 CDR3, (e) 서열번호 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 75의 경쇄 가변 영역 CDR3, (f) 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 76의 경쇄 가변 영역 CDR3, (g) 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 77의 경쇄 가변 영역 CDR3, (h) 서열번호 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 78의 경쇄 가변 영역 CDR3, (i) 서열번호 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 79의 경쇄 가변 영역 CDR3, (j) 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 80의 경쇄 가변 영역 CDR3, (k) 서열번호 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역 CDR3, (l) 서열번호 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 82의 경쇄 가변 영역 CDR3, (m) 서열번호 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는 (n) 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 84의 경쇄 가변 영역 CDR3.
또 다른 실시양태에서, 상기 언급된 항-ActRII 수용체 항체는 다음을 포함한다:
(i) 서열번호 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열에 대해 적어도 95 % 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열, (ii) 서열번호 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열에 대해 적어도 95 % 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열 또는 (iii) (a) 서열번호 99의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 85의 가변 경쇄 서열; (b) 서열번호 100의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 86의 가변 경쇄 서열; (c) 서열번호 101의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 87의 가변 경쇄 서열; (d) 서열 102의 가변 중쇄 서열 및 서열 88의 가변 경쇄 서열; (e) 서열 103의 가변 중쇄 서열 및 서열 89의 가변 경쇄 서열; (f) 서열번호 104의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 90의 가변 경쇄 서열; (g) 서열번호 105의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 91의 가변 경쇄 서열; (h) 서열번호 106의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 92의 가변 경쇄 서열; (i) 서열번호 107의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 93의 가변 경쇄 서열; (j) 서열번호 108의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 94의 가변 경쇄 서열; (k) 서열번호 109의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 95의 가변 경쇄 서열; (l) 서열번호 110의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 96의 가변 경쇄 서열; (m) 서열번호 111의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 97의 가변 경쇄 서열; 또는 (n) 서열번호 112의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 98의 가변 경쇄 서열.
특정 측면에서, 본 개시는 다음을 포함하는 항-ActRII 수용체 항체를 포함하는 상기 기재된 조성물에 관한 것이다: (a) 서열번호 146의 중쇄 서열 및 서열번호 141의 경쇄 서열; (b) 서열번호 147의 중쇄 서열 및 서열번호 142의 경쇄 서열; (c) 서열번호 148의 중쇄 서열 및 서열번호 143의 경쇄 서열; (d) 서열번호 149의 중쇄 서열 및 서열번호 144의 경쇄 서열; (e) 서열번호 150의 중쇄 서열 및 서열번호 145의 경쇄 서열; (f) 서열번호 156의 중쇄 서열 및 서열번호 151의 경쇄 서열; (g) 서열번호 157의 중쇄 서열 및 서열번호 152의 경쇄 서열; (h) 서열번호 158의 중쇄 서열 및 서열번호 153의 경쇄 서열; (i) 서열번호 159의 중쇄 서열 및 서열번호 154의 경쇄 서열; 또는 (j) 서열번호 160의 중쇄 서열 및 서열번호 155의 경쇄 서열.
본 개시 내용의 추가의 주제는 조성물에 관한 것으로, 여기서 (i) 항-ActRII 수용체 항체는 교차-차단하거나 상기 기재된 항체 중 하나에 의해 교차-차단되고, (ii) Fc 영역의 돌연변이를 통해 이펙터 기능이 변경되고 및/또는 (iii) 상기 기재된 항체 중 하나에 의해 인식되는 에피토프에 결합한다.
또 다른 대안적 실시양태에서, 상기 언급된 조성물은 ActRIIA에 결합하는 것보다 10 배 이상의 친화도로 ActRIIB에 결합하는 항-ActRII 수용체 항체를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 개시된 조성물은 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 인코딩된 항-ActRII 수용체 항체를 포함한다.
도 1A는 80주 동안 주간 CDD866 또는 대조군 Ab 주사로 처리된 야생형 C57BL/6 마우스에서 측정된 CDD866 혈장 수준을 그래프로 도시한 것이다.
도 1B는 심장 중량/경골 길이 비율 (HW/TL)을 그래프로 도시한 것이다. (대조군 마우스, 이소타입 Ab (n = 3) 회색 막대 및 실험군 마우스 CDD866 Ab (n = 3) * p<0.05, 검은색 막대). 이는 CDD866이 성체 (adult) 야생형 C57BL/6 마우스에서 심장 질량을 유의하게 증가시키지 않음을 나타낸다.
도 1C는 대조군 (이소타입 Ab, 회색 막대) 및 실험군 마우스 (CDD866 Ab [n = 3]. * p<0.05, 검은색 막대) 둘 다의 마우스에서 섬유증 %를 나타내는 막대 그래프이다. CDD866은 심근섬유증을 감소시키지만, 성체 야생형 C57BL/6 마우스의 기준선에서 % 섬유증이 현저하게 낮았다.
도 1D는 심근세포 크기를 강조하는, PAS 염색된 심근의 대표적인 현미경 사진을 보여준다.
도 1E는 CDD866이 야생형 동물에서 심근세포 크기를 유의하게 증가시키지 않는 결과를 그래프로 도시한 것이다. 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 회색 = 대조군, 이소타입 Ab (n = 3). 검은색 = 실험군, CDD866 Ab (n = 3). * p<0.05
도 2A는 FS (fractional shortening)에 의해 측정된 수축기 기능이 TAC (horizontal bar)에 의해 예상대로 감소하지만, TAC (diagonal bar)에 노출된 CDD866 처리 된 동물에서는 유지되는 것을 보여준다. SHAM + 이소타입 Ab (n = 7), 검은색 막대; SHAM + CDD866 Ab (n = 7), 회색 막대; TAC + 이소타입 Ab (n = 10), 수평선 막대; TAC + CDD866 Ab (n = 10), 사선 막대. #p <0.01.
도 2B는 SHAM 또는 TAC 수술 11주 후의 대표적인 심초음파 (echocardiographic) 이미지를 나타내고 CDD866으로 처리된 TAC 동물에서 수축기 기능의 보존을 입증한다.
도 2C는 상이한 처리 그룹에서 마우스에 대한 폐 중량/경골 길이 비 (LW/TL)를 그래프로 도시한 것이다. SHAM + 이소타입 Ab (n = 7), 검은색 막대; SHAM + CDD866 Ab (n = 7), 회색 막대; TAC + 이소타입 Ab (n = 10), 수평선 막대; TAC + CDD866 Ab (n = 10), 사선 막대. * p<0.01. CDD866 처리 동물에서 폐 무게가 감소하고, 폐울혈 (pulmonary congestion)이 적음을 나타내는 경향이 있다 (마우스 모델에서 심부전의 대리 검사(surrogate)).
도 2D는 CDD866 처리에 의한 1차 평가지표(primary endpoint)(생존 또는 % FS <20 %)의 현저한 감소를 그래프로 도시한 것이다.
도 3A는 상이한 처리 그룹에 대한 혈장 CDD866 수준을 그래프로 도시한 것이다: TAC + 이소타입; TAC + CDD866; 샴 (Sham) + 이소타입; 및 샴 (Sham) + CDD866.
도 3B는 TAC에 의해 심장의 FSTL3 (follistatin-like 3) 발현이 증가하는 것을 나타내는 막대 그래프이며, 이는 심장 손상 모델에서 심장 ActRII-A/B 신호전달이 증가됨을 나타낸다. CDD866 처리는 심장의 FSTL3 발현을 감소시키며, 이는 그것이 심장에서 TAC-유도된 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단함을 나타낸다. 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7). 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7). 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10). 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10). * p<0.05. # p<0.01.
도 3C는 병리학적 심장 비대 유전자의 상대적 mRNA 발현이 CDD866 처리에 의해 감소함을 그래프로 도시한 것이다. ANP (심방나트륨이뇨펩티드 (atrial natriuretic peptide)); BNP (뇌나트륨 이뇨펩티드 (brain natriuretic peptide)); aMHC (알파 미오신 중쇄 (alpha myosin heavy chain)); bMHC (베타 미오신 중쇄 (beta myosin heavy chain)). 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7). 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7). 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10). 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10). * p<0.05. # p<0.01.
도 3D는 CDD866 처리에 의해 TAC-유도된 심부전에서 병리학적 심장 섬유증 유전자의 상대적인 mRNA 발현이 감소됨을 나타내는 막대 그래프이다. COL1 (콜라겐 타입 1 (collagen type 1)); CTGF (결합조직 성장인자 (connective tissue growth factor)). 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7). 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7). 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10). 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10). * p<0.05. # p<0.01.
도 4A는 TAC 후 수축기 기능을 발달시킨 후, 주간(weekly) CDD866 주사로 처리된(치료된) 마우스에서 측정된 CDD866 혈장 수준을 그래프로 보여주는 것이다.
도 4B는 FSTL3 (폴리스타틴-유사 3), 액티빈-A, MSTN (미오스타틴) ACVR2A (액티빈 A 수용체 타입 2A) 및 ACVR2B (액티빈 A 수용체 타입 2B)에 대한 상대적 mRNA 발현 수준을 나타내는 막대 그래프이다. 이 그래프는 CDD866을 사용한 치료 접근법이 심장의 FSTL3 발현을 감소시킬 수 있으며, CDD866이 심장에서 TAC-유도 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단할 수 있음을 나타낸다.
도 4C는 CDD866이 치료 후 1 주일 만에 점진적인 개선으로 TAC-유도된 심부전에서 수축기 기능 장애를 역전시키는 것을 보여주는, 주(weeks) 단위에 대한 % 구획 단축률 (fractional shortening)이 도시된 그래프이다.
도 4D는 CDD866이 뮤린 (murine) 모델에서 심부전에 대한 대리 마커(surrogate marker)인 폐 중량 대 경골 길이 비율을 감소시킨다는 것을 그래프로 도시한 것이다. 회색 = TAC + 이소타입 Ab. 검은색 = TAC + CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01. LW/TL (폐 중량/경골 길이 비율).
도 5A는 TAC 후의 벽 두께 변화를 주(weeks)에 대하여 나타내는 그래프이고, 이는 CDD866 처리에 의해 벽 두께가 점진적으로 증가함을 보여준다. 화살표는 CDD866 개시 (initiation)를 나타낸다.
도 5B는 CDD866 처리 동물 대 이소타입에서의 심장 성장의 차이를 나타내는 치료 과정 동안 심실 중간 부분의 연속 에코 이미지 (serial echo images)를 보여준다. Cdd866-매개 심장 성장은 진행성 수축기 기능 장애와 관련된 편심 리모델링 (eccentric remodeling)을 방지한다.
도 5C는 TAC + 이소타입 Ab (회색 막대) 및 TAC + CDD866 Ab (검은색 막대) 처리된 마우스 모두에 대해 심장 중량/경골 길이 비율 (HW/TL)이 도시된 그래프로서, CDD866이 TAC 모델에서 심장 질량을 증가시키는 것을 나타낸다 . * p<0.05. # p<0.01.
도 5D는 심근세포 크기를 강조한 PAS-염색된 현미경 사진이다: TAC + 이소타입 Ab 및 TAC + CDD866 Ab 처리된 마우스.
도 5E는 TAC + 이소타입 Ab (회색) 및 TAC + CDD866 Ab (검은색) 처리된 마우스로부터의 심근세포 단면적을 도시하고 있으며, 이는 CDD866이 TAC에서 심근세포 성장을 증가시킴을 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01.
도 6A는 CDD866 처리에 의한 병리학적 비대 감소와 관련된 유전자의 mRNA 발현을 보여주는 그래프이다. ANP (심방나트륨이뇨펩티드); BNP (뇌나트륨이뇨펩티드); αMHC (알파 미오신 중쇄); βMHC (베타 미오신 중쇄). TAC + 이소타입 Ab (회색); TAC + CDD866 Ab (검은색)가 표시된다. * p<0.05. # p<0.01.
도 6B는 몇 주에 걸친 시간에 대한 마우스의 구획 단축률 (fractional shortening), 벽 두께 및 체중을 도시한다. 화살표 = 단일 용량의 타이밍; 파선 = CDD866 처리가 없는 예상 궤적 (anticipated trajectory). 플롯은 심장 성장 및 체중에 대한 CDD866의 효과가 빠르게 발생하고 일시적이고 가역적임을 보여준다. 또한 CDD866의 단일 용량의 효과는 1-2 주 기간 내에 발생하며 6 주 이상 지속된다.
도 6C는 CDD866으로 처리된 TAC’d 마우스에서 심장 섬유증의 감소를 나타내는, 메이슨 트리크롬 (masson trichrome) 염색된 심근의 현미경 사진 (청색 = 섬유증; 적색 = 근육)을 보여준다.
도 6D는 TAC + 이소타입 Ab (회색) 및 TAC + CDD866 Ab (검은색)에 의한 % 섬유증을 나타내는 막대 그래프이며, 이는 CDD866 처리에 의한 심근 섬유증 감소 경향을 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01.
도 7A는 p-SMAD3 및 GAPDH 항체로 탐침된 비복근 (gastrocnemius) 샘플의 웨스턴 블롯이다. TAC 후 확인된 심장 기능 이상 및 이후 8 주 동안 CDD866 (TT-2 내지 TT-10) 또는 이소타입 대조군 Ab (TT-11 내지 TT-20)로 처리된 C57BL/6 마우스로부터 샘플을 수집하였다. 이 도면은 전체적으로 CDD866이 TAC-매개 심부전의 뮤린 모델의 골격근에서 ActRII-A/B 시그널링을 감소시킨다는 것을 입증한다. C2C12 세포에서의 MSTN 자극을 분석을 위한 양성 대조군으로 사용하였다.
도 7B는 기준선으로부터 마우스의 체중 변화율 (%)이 치료 이후 주 (weeks)에 대하여 측정된 그래프이다. 다이아몬드 데이터 포인트 (적색)는 TAC + 이소타입 Ab를 나타낸다. 스퀘어 데이터 포인트 (청색)는 TAC + CDD866 Ab를 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01. CDD866은 근육량 증가를 통해 전체 체중을 점진적으로 증가시킨다.
도 7C는 다양한 골격근 그룹에 대한 근육 질량의 제어로부터의 % 변화를 그래프로 도시한 것이다; EDL (장지전근 (extensor digitorum longus)), 비복근 (gastrocnemius) 및 경골 (tibialis). 적색은 TAC + 이소타입 Ab를 나타낸다. 청색은 TAC + CDD866 Ab를 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01. CDD866은 3 개의 골격근 그룹의 질량을 전체적으로 증가시킨다.
도 7D는 % 섬유 분포가 일련의 조직학적 섹션 (serial histologic sections)에 대해 플롯팅된 그래프이고, 이는 CDD866가 골격근 세포 크기를 증가시킨다는 것을 나타낸다. 적색은 TAC + 이소타입 Ab 처리를 나타낸다. 청색은 TAC + CDD866 Ab 처리를 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01.
도 7E는 섬유 분포가 일련의 조직학적 섹션 (serial histologic sections)에 대해 플롯팅된 그래프이고, 이는 CDD866이 골격근에서 다중 섬유 타입 스위칭 을 유도함을 나타낸다. 적색은 TAC + 이소타입 Ab 처리를 나타낸다. 청색은 TAC + CDD866 Ab 처리를 나타낸다.
도 8A는 αMHC 유전자 (확장성 심근증의 뮤린 모델)에서 미스센스 돌연변이 (F764L)를 갖는 마우스에서의 시간에 대한 % 구획 단축률 (FS)의 변화를 도시한 그래프이다. 12 주간의 CDD866 치료는 수축기 기능이 완만하게 증가되는 경향을 보였다. 회색 = 이소타입 Ab. 검은색 = CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01.
도 8B는 CDD866 (검은색) 또는 이소타입 Ab (회색)로 처리된 마우스로부터 수득한 심장 조직에서 ActRII 경로와 관련된 다양한 유전자의 상대적인 mRNA 발현 수준을 나타내는 막대 그래프이다. CDD866에 의한 심장 FSTL3 발현 감소 경향이 있으며, 이는 심장에서 ActRII 수용체 시그널링의 억제를 시사한다. * p<0.05. # p<0.01.
도 8C는 이소타입 Ab 또는 CDD866 Ab로 처리된 마우스에서 병리학적 비대와 관련된 유전자의 상대적 mRNA 발현 수준을 나타내는 막대 그래프이다. * p<0.05. # p<0.01. 회색 = 이소타입 Ab. 검은색 = CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01. ANP (심방나트륨이뇨펩티드); BNP (뇌나트륨이뇨 펩티드); αMHC (알파 미오신 중쇄); βMHC (베타 미오신 중쇄). 병리학적 비대 유전자 발현 프로파일에는 유의한 차이가 없다.
도 1B는 심장 중량/경골 길이 비율 (HW/TL)을 그래프로 도시한 것이다. (대조군 마우스, 이소타입 Ab (n = 3) 회색 막대 및 실험군 마우스 CDD866 Ab (n = 3) * p<0.05, 검은색 막대). 이는 CDD866이 성체 (adult) 야생형 C57BL/6 마우스에서 심장 질량을 유의하게 증가시키지 않음을 나타낸다.
도 1C는 대조군 (이소타입 Ab, 회색 막대) 및 실험군 마우스 (CDD866 Ab [n = 3]. * p<0.05, 검은색 막대) 둘 다의 마우스에서 섬유증 %를 나타내는 막대 그래프이다. CDD866은 심근섬유증을 감소시키지만, 성체 야생형 C57BL/6 마우스의 기준선에서 % 섬유증이 현저하게 낮았다.
도 1D는 심근세포 크기를 강조하는, PAS 염색된 심근의 대표적인 현미경 사진을 보여준다.
도 1E는 CDD866이 야생형 동물에서 심근세포 크기를 유의하게 증가시키지 않는 결과를 그래프로 도시한 것이다. 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 회색 = 대조군, 이소타입 Ab (n = 3). 검은색 = 실험군, CDD866 Ab (n = 3). * p<0.05
도 2A는 FS (fractional shortening)에 의해 측정된 수축기 기능이 TAC (horizontal bar)에 의해 예상대로 감소하지만, TAC (diagonal bar)에 노출된 CDD866 처리 된 동물에서는 유지되는 것을 보여준다. SHAM + 이소타입 Ab (n = 7), 검은색 막대; SHAM + CDD866 Ab (n = 7), 회색 막대; TAC + 이소타입 Ab (n = 10), 수평선 막대; TAC + CDD866 Ab (n = 10), 사선 막대. #p <0.01.
도 2B는 SHAM 또는 TAC 수술 11주 후의 대표적인 심초음파 (echocardiographic) 이미지를 나타내고 CDD866으로 처리된 TAC 동물에서 수축기 기능의 보존을 입증한다.
도 2C는 상이한 처리 그룹에서 마우스에 대한 폐 중량/경골 길이 비 (LW/TL)를 그래프로 도시한 것이다. SHAM + 이소타입 Ab (n = 7), 검은색 막대; SHAM + CDD866 Ab (n = 7), 회색 막대; TAC + 이소타입 Ab (n = 10), 수평선 막대; TAC + CDD866 Ab (n = 10), 사선 막대. * p<0.01. CDD866 처리 동물에서 폐 무게가 감소하고, 폐울혈 (pulmonary congestion)이 적음을 나타내는 경향이 있다 (마우스 모델에서 심부전의 대리 검사(surrogate)).
도 2D는 CDD866 처리에 의한 1차 평가지표(primary endpoint)(생존 또는 % FS <20 %)의 현저한 감소를 그래프로 도시한 것이다.
도 3A는 상이한 처리 그룹에 대한 혈장 CDD866 수준을 그래프로 도시한 것이다: TAC + 이소타입; TAC + CDD866; 샴 (Sham) + 이소타입; 및 샴 (Sham) + CDD866.
도 3B는 TAC에 의해 심장의 FSTL3 (follistatin-like 3) 발현이 증가하는 것을 나타내는 막대 그래프이며, 이는 심장 손상 모델에서 심장 ActRII-A/B 신호전달이 증가됨을 나타낸다. CDD866 처리는 심장의 FSTL3 발현을 감소시키며, 이는 그것이 심장에서 TAC-유도된 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단함을 나타낸다. 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7). 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7). 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10). 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10). * p<0.05. # p<0.01.
도 3C는 병리학적 심장 비대 유전자의 상대적 mRNA 발현이 CDD866 처리에 의해 감소함을 그래프로 도시한 것이다. ANP (심방나트륨이뇨펩티드 (atrial natriuretic peptide)); BNP (뇌나트륨 이뇨펩티드 (brain natriuretic peptide)); aMHC (알파 미오신 중쇄 (alpha myosin heavy chain)); bMHC (베타 미오신 중쇄 (beta myosin heavy chain)). 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7). 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7). 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10). 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10). * p<0.05. # p<0.01.
도 3D는 CDD866 처리에 의해 TAC-유도된 심부전에서 병리학적 심장 섬유증 유전자의 상대적인 mRNA 발현이 감소됨을 나타내는 막대 그래프이다. COL1 (콜라겐 타입 1 (collagen type 1)); CTGF (결합조직 성장인자 (connective tissue growth factor)). 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7). 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7). 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10). 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10). * p<0.05. # p<0.01.
도 4A는 TAC 후 수축기 기능을 발달시킨 후, 주간(weekly) CDD866 주사로 처리된(치료된) 마우스에서 측정된 CDD866 혈장 수준을 그래프로 보여주는 것이다.
도 4B는 FSTL3 (폴리스타틴-유사 3), 액티빈-A, MSTN (미오스타틴) ACVR2A (액티빈 A 수용체 타입 2A) 및 ACVR2B (액티빈 A 수용체 타입 2B)에 대한 상대적 mRNA 발현 수준을 나타내는 막대 그래프이다. 이 그래프는 CDD866을 사용한 치료 접근법이 심장의 FSTL3 발현을 감소시킬 수 있으며, CDD866이 심장에서 TAC-유도 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단할 수 있음을 나타낸다.
도 4C는 CDD866이 치료 후 1 주일 만에 점진적인 개선으로 TAC-유도된 심부전에서 수축기 기능 장애를 역전시키는 것을 보여주는, 주(weeks) 단위에 대한 % 구획 단축률 (fractional shortening)이 도시된 그래프이다.
도 4D는 CDD866이 뮤린 (murine) 모델에서 심부전에 대한 대리 마커(surrogate marker)인 폐 중량 대 경골 길이 비율을 감소시킨다는 것을 그래프로 도시한 것이다. 회색 = TAC + 이소타입 Ab. 검은색 = TAC + CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01. LW/TL (폐 중량/경골 길이 비율).
도 5A는 TAC 후의 벽 두께 변화를 주(weeks)에 대하여 나타내는 그래프이고, 이는 CDD866 처리에 의해 벽 두께가 점진적으로 증가함을 보여준다. 화살표는 CDD866 개시 (initiation)를 나타낸다.
도 5B는 CDD866 처리 동물 대 이소타입에서의 심장 성장의 차이를 나타내는 치료 과정 동안 심실 중간 부분의 연속 에코 이미지 (serial echo images)를 보여준다. Cdd866-매개 심장 성장은 진행성 수축기 기능 장애와 관련된 편심 리모델링 (eccentric remodeling)을 방지한다.
도 5C는 TAC + 이소타입 Ab (회색 막대) 및 TAC + CDD866 Ab (검은색 막대) 처리된 마우스 모두에 대해 심장 중량/경골 길이 비율 (HW/TL)이 도시된 그래프로서, CDD866이 TAC 모델에서 심장 질량을 증가시키는 것을 나타낸다 . * p<0.05. # p<0.01.
도 5D는 심근세포 크기를 강조한 PAS-염색된 현미경 사진이다: TAC + 이소타입 Ab 및 TAC + CDD866 Ab 처리된 마우스.
도 5E는 TAC + 이소타입 Ab (회색) 및 TAC + CDD866 Ab (검은색) 처리된 마우스로부터의 심근세포 단면적을 도시하고 있으며, 이는 CDD866이 TAC에서 심근세포 성장을 증가시킴을 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01.
도 6A는 CDD866 처리에 의한 병리학적 비대 감소와 관련된 유전자의 mRNA 발현을 보여주는 그래프이다. ANP (심방나트륨이뇨펩티드); BNP (뇌나트륨이뇨펩티드); αMHC (알파 미오신 중쇄); βMHC (베타 미오신 중쇄). TAC + 이소타입 Ab (회색); TAC + CDD866 Ab (검은색)가 표시된다. * p<0.05. # p<0.01.
도 6B는 몇 주에 걸친 시간에 대한 마우스의 구획 단축률 (fractional shortening), 벽 두께 및 체중을 도시한다. 화살표 = 단일 용량의 타이밍; 파선 = CDD866 처리가 없는 예상 궤적 (anticipated trajectory). 플롯은 심장 성장 및 체중에 대한 CDD866의 효과가 빠르게 발생하고 일시적이고 가역적임을 보여준다. 또한 CDD866의 단일 용량의 효과는 1-2 주 기간 내에 발생하며 6 주 이상 지속된다.
도 6C는 CDD866으로 처리된 TAC’d 마우스에서 심장 섬유증의 감소를 나타내는, 메이슨 트리크롬 (masson trichrome) 염색된 심근의 현미경 사진 (청색 = 섬유증; 적색 = 근육)을 보여준다.
도 6D는 TAC + 이소타입 Ab (회색) 및 TAC + CDD866 Ab (검은색)에 의한 % 섬유증을 나타내는 막대 그래프이며, 이는 CDD866 처리에 의한 심근 섬유증 감소 경향을 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01.
도 7A는 p-SMAD3 및 GAPDH 항체로 탐침된 비복근 (gastrocnemius) 샘플의 웨스턴 블롯이다. TAC 후 확인된 심장 기능 이상 및 이후 8 주 동안 CDD866 (TT-2 내지 TT-10) 또는 이소타입 대조군 Ab (TT-11 내지 TT-20)로 처리된 C57BL/6 마우스로부터 샘플을 수집하였다. 이 도면은 전체적으로 CDD866이 TAC-매개 심부전의 뮤린 모델의 골격근에서 ActRII-A/B 시그널링을 감소시킨다는 것을 입증한다. C2C12 세포에서의 MSTN 자극을 분석을 위한 양성 대조군으로 사용하였다.
도 7B는 기준선으로부터 마우스의 체중 변화율 (%)이 치료 이후 주 (weeks)에 대하여 측정된 그래프이다. 다이아몬드 데이터 포인트 (적색)는 TAC + 이소타입 Ab를 나타낸다. 스퀘어 데이터 포인트 (청색)는 TAC + CDD866 Ab를 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01. CDD866은 근육량 증가를 통해 전체 체중을 점진적으로 증가시킨다.
도 7C는 다양한 골격근 그룹에 대한 근육 질량의 제어로부터의 % 변화를 그래프로 도시한 것이다; EDL (장지전근 (extensor digitorum longus)), 비복근 (gastrocnemius) 및 경골 (tibialis). 적색은 TAC + 이소타입 Ab를 나타낸다. 청색은 TAC + CDD866 Ab를 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01. CDD866은 3 개의 골격근 그룹의 질량을 전체적으로 증가시킨다.
도 7D는 % 섬유 분포가 일련의 조직학적 섹션 (serial histologic sections)에 대해 플롯팅된 그래프이고, 이는 CDD866가 골격근 세포 크기를 증가시킨다는 것을 나타낸다. 적색은 TAC + 이소타입 Ab 처리를 나타낸다. 청색은 TAC + CDD866 Ab 처리를 나타낸다. * p<0.05. # p<0.01.
도 7E는 섬유 분포가 일련의 조직학적 섹션 (serial histologic sections)에 대해 플롯팅된 그래프이고, 이는 CDD866이 골격근에서 다중 섬유 타입 스위칭 을 유도함을 나타낸다. 적색은 TAC + 이소타입 Ab 처리를 나타낸다. 청색은 TAC + CDD866 Ab 처리를 나타낸다.
도 8A는 αMHC 유전자 (확장성 심근증의 뮤린 모델)에서 미스센스 돌연변이 (F764L)를 갖는 마우스에서의 시간에 대한 % 구획 단축률 (FS)의 변화를 도시한 그래프이다. 12 주간의 CDD866 치료는 수축기 기능이 완만하게 증가되는 경향을 보였다. 회색 = 이소타입 Ab. 검은색 = CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01.
도 8B는 CDD866 (검은색) 또는 이소타입 Ab (회색)로 처리된 마우스로부터 수득한 심장 조직에서 ActRII 경로와 관련된 다양한 유전자의 상대적인 mRNA 발현 수준을 나타내는 막대 그래프이다. CDD866에 의한 심장 FSTL3 발현 감소 경향이 있으며, 이는 심장에서 ActRII 수용체 시그널링의 억제를 시사한다. * p<0.05. # p<0.01.
도 8C는 이소타입 Ab 또는 CDD866 Ab로 처리된 마우스에서 병리학적 비대와 관련된 유전자의 상대적 mRNA 발현 수준을 나타내는 막대 그래프이다. * p<0.05. # p<0.01. 회색 = 이소타입 Ab. 검은색 = CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01. ANP (심방나트륨이뇨펩티드); BNP (뇌나트륨이뇨 펩티드); αMHC (알파 미오신 중쇄); βMHC (베타 미오신 중쇄). 병리학적 비대 유전자 발현 프로파일에는 유의한 차이가 없다.
정의
본 개시가보다 용이하게 이해 될 수 있도록, 특정 용어가 먼저 정의된다. 추가적인 정의는 상세한 설명 전체에 걸쳐 제시되어 있다.
용어 "포함하는 (comprising)"은 "포함하는 (including)"을 의미한다. 예를 들어 X를 "포함하는 (comprising)" 조성물은 X로만 구성되거나 추가의 무언가를 포함할 수 있다. 예를 들어 X + Y.
수치 x와 관련하여 용어 "약 (about)"은, 예를 들어, x + 10 %를 의미한다.
다음은 ActRII 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙에 의한 치료의 가능한 효과를 평가하기 위해 가능한 전임상 치료 요법을 예시한다.
치료는 압력 과부하-유발된 (pressure overload-induced) 심장 비대 및 심부전에 대해 일반적으로 사용되는 실험 모델인 횡대동맥 수축 (TAC, transverse aortic constriction)을 받은 마우스를 사용하여 예시된다. 당업자는 다른 종, 특히 인간에 적합한 실험 또는 투약 요법을 설정하는 방법을 알고 있다. 영장류에 대한 연구의 경우, 항-ActRII 수용체 항체, 예를 들어 비마그루맙은 정맥 주사로 수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이 (cynomolgus monkeys)에게 일주일에 한 번 최대 3 개월 동안 투여될 수 있다. 32 마리의 시노몰구스 원숭이 (16/성(sex))는 4 개의 치료 그룹 (3 내지 5 마리 동물/성(sex)/그룹) 중 하나에 할당될 수 있으며, 비히클 또는 ActRIIB 항체, 예를 들어 BYM338의 정맥 내 주사는 13 주 동안 매주 1 회 10, 30, 또는 100 mg/kg으로 투여될 수 있다(총 14회 용량 (doses); 용량은 심장 질환 증상(symptomotology)에 기초하여 선택되어야 한다).
용어 "ActRIIA"및 "ActRIIB"는 액티빈 수용체를 지칭한다. 액티빈은 적어도 2 종의 타입 I (I 및 IB) 및 2 종의 타입 II (IIA 및 IIB, 일명 ACVR2A 및 ACVR2B) 수용체를 포함하는 수용체 세린 키나아제의 이종이합체 복합체 (heterodimeric complex )를 통해 신호를 보낸다. 이러한 수용체들은 시스테인이 풍부한 영역을 갖는 리간드-결합 세포 외 도메인, 막관통 도메인, 및 세린/트레오닌 특이성 (specificity)이 예측된 세포질 도메인으로 구성된 막관통 단백질이다. 타입 I 수용체는 시그널링에 필수적이고, 타입 II 수용체는 리간드 결합 및 타입 I 수용체의 발현/채용(recruitment)에 필요하다. 타입 I 및 II 수용체는 리간드 결합 후 안정한 복합체를 형성하여 타입 II 수용체에 의한 타입 I 수용체의 인산화를 가져온다. 액티빈 수용체 II B (ActRIIB)는 미오 스타틴에 대한 수용체이다. 액티빈 수용체 II A (Act RIIA)는 또한 미오스타틴에 대한 수용체이다. 용어 ActRIIB 또는 Act IIB 수용체는 서열번호 181 (AAC64515.1, GI : 3769443)에 정의된 바와 같이 인간 ActRIIB를 지칭한다. 연구 등급 폴리클로날 및 모노클로날 항-ActRIIB 항체는 R&D Systems®(MN, USA)에 의해 제조된 것과 같이 당업계에 공지되어 있다. 물론, 다른 종의 ActRIIB에 대해 항체를 발생시켜 해당 종의 병리학적 상태를 치료할 수 있다.
용어 "면역 반응 (immune response)"은 병원체 (invading pathogens)가 침입한 인체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 또는, 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우 정상 인간 세포 또는 조직의 인체에 대한 선택적 손상, 파괴 또는 제거를 초래하는 상기 세포 또는 간 (예, 항체, 사이토카인 및 보체)에서 생성된 예를 들어 림프구, 항원 제시 세포, 식세포, 과립구 및 가용성 거대 분자의 작용을 지칭한다.
"시그널링 활성 (signaling activity)"은 성장인자를 수용체에 결합시키는 것과 같은 단백질-단백질 상호 작용에 의해 일반적으로 개시되는, 세포의 한 부분으로부터 다른 부분으로 신호를 전달하는, 생화학적 인과 관계를 지칭한다. 일반적으로, 트랜스미션은 신호 전달을 유발하는 일련의 반응에서 하나 이상의 단백질 상의 하나 이상의 티로신, 세린 또는 트레오닌 잔기의 특이적 인산화를 포함한다. 끝에서 두 번째 과정 (penultimate processes)은 일반적으로 유전자 발현의 변화를 초래하는 핵 이벤트 (nuclear events)를 포함한다.
본원에 언급된 용어 "항체 (antibody)"는 전체 항체 및 이의 임의의 항원 결합 단편 (즉, "항원-결합 부분") 또는 이의 단일 사슬을 포함한다. 자연 발생 "항체"는 디설파이드 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2 개의 중쇄 (H) 및 2 개의 경쇄 (L)를 포함하는 당 단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본 명세서에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3의 3 개의 도메인으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본 명세서에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임 워크 영역 (FR)으로 지칭되는, 더 보존된 영역에 산재된, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 지칭되는, 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카르복시-말단까지 다음의 순서로 배열된 3 개의 CDR 및 4 개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호 작용하는 결합 도메인을 포함한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전적 보체 시스템 (classical complement system)의 제 1 성분 (Clq)을 포함하여, 면역 글로불린의 숙주 조직 (host tissues) 또는 인자에 대한 결합을 매개할 수 있다.
본원에 사용된 항체의 "항원-결합 부분"(또는 간단히 "항원 부분")은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 전장 또는 하나 이상의 단편 (예를 들어, ActRIIB의 부분)을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 나타났다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어 내에 포함되는 결합 단편의 예는 Fab 단편, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편; 힌지 영역에서 디설파이드 (disulfide) 브릿지에 의해 연결된, 동일한 항원에 각각 결합하는 2 개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab)2 단편; VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; 항체의 단일 아암 (single arm)의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편; VH 도메인으로 구성된 dAb 단편 (Ward et al., 1989 Nature 341 : 544-546); 및 분리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다.
또한, Fv 단편의 2 개의 도메인, VL 및 VH는 별개의 유전자 (separate genes)에 의해 코딩되지만, 재조합 방법을 사용하여, VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 사슬로 만들어질 수 있는 합성 링커에 의해 결합될 수 있다 (단일 사슬 Fv (scFv)로 알려짐; 예를 들어 Bird et al., 1988 Science 242 : 423-426; 및 Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85 : 5879-5883 참조). 이러한 단일 사슬 항체는 또한 항체의 "항원-결합 영역"이라는 용어 내에 포함되는 것으로 의도된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 단편은 온전한 (intact) 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.
본원에 사용된 "단리된 항체 (isolated antibody)"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 의미한다 (예를 들어, ActRIIB에 특이 적으로 결합하는 단리된 항체에는 ActRIIB 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, ActRIIB에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 종으로부터의 ActRIIB 분자와 같은 다른 항원에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다. 더욱이, 단리된 항체에는 다른 세포 물질 및/또는 화학 물질이 실질적으로 없을 수 있다.
용어 "교차-차단하다 (cross-block)", "교차-차단된 (cross-blocked)" 및 "교차-차단 (cross-blocking)"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되어, 표준 경쟁적 결합 어세이에서, ActRIIB, 특히 리간드 결합 도메인에 대한 다른 항체 또는 결합제의 결합을 방해하는 항체 또는 다른 결합제의 능력을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체 (monoclonal antibody)" 또는 "모노클로날항체 조성물 (monoclonal antibody composition)"은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제조를 지칭한다. 모노클로날 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "인간 항체 (human antibody)"는 프레임워크 영역 및 CDR 영역 둘 다가 인간 기원의 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 또한, 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 불변 영역은 또한 이러한 인간 서열, 예를 들어 인간 생식계열 서열 (human germline sequences), 또는 인간 생식계열 서열의 돌연변이된 버전 또는 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래된 컨센서스 프레임워크 서열을 포함하는 항체 (예를 들어 문헌 [Knappik, et al. (2000. J Mol Biol 296, 57-86에 기재됨)로부터 유래된다.
본 개시 내용의 인간 항체는 인간 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관 내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발 (mutagenesis) 또는 생체 내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 다른 포유 동물 종, 예컨대 마우스의 생식계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 그래프팅된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
용어 "인간 모노클로날 항체 (human monoclonal antibody)"는 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다가 인간 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 지칭한다. 일 실시양태에서, 인간 모노클로날 항체는 불멸화된 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스진 및 경쇄 트랜스진을 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 비인간 동물 (transgenic nonhuman animal), 예를 들어 트랜스제닉 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성된다.
본원에 사용된 용어 "재조합 인간 항체 (recombinant human antibody)"는 재조합 면역 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체, 예를 들어 인간 면역글로불린 유전자 또는 이로부터 제조된 하이브리도마에 대해 트랜스제닉 또는 트랜스염색체 (transchromosomal)인 동물 (예를 들어 마우스)로부터 단리된 항체, 인간 항체를 발현하도록 형질 전환된 숙주 세포로부터 단리된 항체, 예를 들어 트랜스펙토마 (transfectoma), 재조합, 조합 (combinatorial) 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 인간 면역글로불린 유전자의 전부 또는 일부, 서열을 다른 DNA 서열에 접합(스플라이싱)시키는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역이 인간 생식 계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 실시양태에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관 내 돌연변이유발(mutagenesis) (또는, 인간 Ig 서열에 대해 유전자이식된 동물이 사용될 때, 생체 내 체세포 돌연변이유발)이 될 수 있고, 이에 따라 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식 계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되어 있지만, 생체 내에서 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
본원에 사용된 "이소타입 (isotype)"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 제공되는 항체 클래스 (예를 들어, IgM, IgE, IgG, 예컨대 IgG1 또는 IgG2)를 지칭한다.
문구 "항원을 인식하는 항체 (an antibody recognizing an antigen)" 및 "항원에 특이적인 항체"는 본원에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체 (an antibody which binds specifically to an antigen)"와 상호 교환적으로 사용된다.
본원에서 사용된 "ActRIIB 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 (specifically binds to ActRIIB polypeptide)" 항체는 약 100nM 이하, 약 10nM 이하, 또는 약 1nM 이하의 KD로 인간 ActRIIB 폴리펩티드에 결합하는 항체를 의미한다. "ActRIIB 이외의 항원과 교차-반응하는 (cross-reacts with an antigen other than ActRIIB)" 항체는 약 10 x 10-9 M 이하, 약 5 x 10-9 M 이하, 또는 약 2 x 10-9 M 이하의 KD로 그 항원에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. "특정 항원과 교차 반응하지 않는 (does not cross-react with a particular antigen)" 항체는 약 1.5 x 10-8 M 이상의 KD , 또는 약 5-10 x 10-8 M, 또는 약 1 x 10-7 M 이상의 KD로 그 항원에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 특정 실시양태에서, 항원과 교차 반응하지 않는 이러한 항체는 표준 결합 어세이에서 이러한 단백질들에 대해 본질적으로 검출할 수 없는 결합을 나타낸다. KD는 바이오센서 시스템, 예를 들어 Biacore® 시스템, 또는 용액 평형 적정 (Solution Equilibrium Titration)을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "길항제 항체 (antagonist antibody)"는 미오스타틴 또는 다른 ActRIIB 리간드, 예를 들어 액티빈 또는 GDF-11의 존재 하에 ActRIIB 유도 (induced) 시그널링 활성을 억제하는 항체 및/또는 미오스타틴 또는 다른 ActRIIB 리간드, 예를 들어 액티빈 또는 GDF-11의 존재 하에 ActRIIA 유도 시그널링 활성을 억제하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 이를 검출하는 분석의 예는 미오스타틴 유도 시그널링의 억제 (예를 들어, Smad 의존적 리포터 유전자 어세이에 의해), 미오스타틴 유도 Smad 인산화 억제 (P-Smad ELISA) 및 미오스타틴 억제로 인한 골격근 세포 분화 억제 (inhibition of myostatin induced inhibition of skeletal muscle cell differentiation) (예를 들어, 크레아틴 키나아제 어세이에 의한)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 약 10nM 이하, 약 1nM 이하, 또는 약 100pM 이하의 IC50에서의 Smad 의존성 리포터 유전자 어세이에서 측정된 미오스타틴 유도 시그널링을 억제한다.
본원에 사용된 "작용 활성이 없는 (no agonistic activity)" 항체는 세포-기반 어세이에서 미오스타틴의 부재 하에 ActRIIB 매개 시그널링을 유의하게 증가시키지 않는 항체이다. (예를 들어 미오스타틴 유도 시그널링의 억제 (예를 들어 Smad 의존적 리포터 유전자 어세이에 의해), 미오스타틴 유도 Smad 인산화 ((P-Smad ELISA) 및 미오스타틴 억제로 인한 골격근 세포 분화 억제 (예를 들어, 크레아틴 키나아제 어세이에 의해).
본원에 사용된 용어 "Kassoc" 또는 "Ka"는 특정 항체-항원 상호 작용의 결합 속도 (association rate)를 지칭하는 것으로 의도되고, 본원에 사용된 용어 "Kdis"또는 "Kd"는 특정 항체-항원 상호 작용의 해리 속도 (dissociation rate)를 지칭하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "KD"는 해리 상수를 지칭하는 것으로 의도되고, 이는 Kd 대 Ka의 비 (즉, Kd/Ka)로부터 수득되고 몰 농도 (M)로 표시된다. 항체에 대한 KD 값은 당업계에 잘 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 항체의 KD를 결정하는 방법은 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance), 예를 들어 Biacore®의 바이오센서 시스템 또는 용액 평형 적정 (Solution Equilibrium Titration, SET)을 사용하는 것이다 (Friguet B 등 (1985) J. Immunol Methods; 77 (2) : 305-319 및 Hanel C 등 (2005) Anal Biochem; 339 (1) : 182-184 참조).
본원에 사용된 용어 "친화도 (Affinity)"는 단일 항원 부위에서 항체와 항원 사이의 상호 작용의 강도를 지칭한다. 각각의 항원성 부위 내에서, 항체 "아암 (arm)"의 가변 영역은 약한 비공유력 (non-covalent forces)을 통해 수많은 부위에서 항원과 상호 작용하고; 상호 작용이 많을수록 친화도가 강해진다.
본원에 사용된 용어 "결합활성 (Avidity)"은 항체-항원 복합체의 전체적 안정성 또는 강도의 설명적 측정치 (informative measure)를 지칭한다. 그것은 3 가지 주요 인자에 의해 제어된다: 항체 에피토프 친화도; 항원 및 항체의 원자가; 및 상호 작용 부분의 구조적 배열. 궁극적으로 이들 인자는 항체의 특이성, 즉 특정 항체가 정확한 항원 에피토프에 결합할 가능성을 정의한다.
본원에 사용된 용어 "ADCC"또는 "항체 의존성 세포 독성 (antibody dependent cellular cytotoxicity)" 활성은 인간 B 세포 고갈 활성 (depleting activity)을 지칭한다. ADCC 활성은 당업계에 공지된 인간 B 세포 고갈 어세이에 의해 측정될 수 있다.
더 높은 결합성 프로브를 얻기 위해, 이합체 컨쥬게이트 (FACS 마커에 커플 링된 항체 단백질의 2 개의 분자)가 구성될 수 있으며, 이에 따라 FACS에 의해 낮은 친화도 (친화성) 상호 작용 (예를 들어 생식계열 항체)을 보다 쉽게 검출할 수 있다. 또한, 항원 결합의 결합능력을 증가시키는 다른 수단은 항-ActRIIB 항체의 본원에 기재된 임의의 컨스트럭의 이합체, 삼합체 또는 다합체를 생성하는 것과 관련된다. 이러한 다합체는 개별 모듈 사이의 공유 결합을 통해, 예를 들어 천연 C-N- (C-to-N-) 말단 결합을 모방하거나 그것의 불변 영역을 통해 함께 유지되는 항체 이합체를 모방함으로써 생성될 수 있다. Fc/Fc 인터페이스로 조작된 (engineered) 결합은 공유 또는 비공유일 수 있다. 또한, Fc 이외의 이합체화 또는 다합체화 파트너는 ActRIIB 하이브리드에서 이러한 고차 구조를 생성하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, WO2004/039841에 기재된 삼합체화 도메인 또는 WO98/18943에 기재된 펜타머라이징 (pentamerizing) 도메인과 같은 다합체화 도메인 (multimerizing domains)을 사용하는 것이 가능하다.
본원에 사용된 항체에 대한 "선택성 (selectivity)"이라는 용어는 특정 표적 폴리펩티드에 결합하지만 근연 (closely related) 폴리펩티드에는 결합하지 않는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 항체에 대한 용어 "고친화도 (high affinity)"는 표적 항원에 대한 KD가 1nM 또는 그 이하인 항체를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "대상 (subject)"은 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다.
"비인간 동물 (nonhuman animal)"이라는 용어는 모든 척추 동물, 예를 들어 포유류 및 비포유류, 예를 들어 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 생쥐, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "최적화된 (optimized)"은 생산 세포 (production cell) 또는 유기체, 일반적으로 진핵 세포, 예를 들어 피키아 (Pichia) 세포, 트리코더마 (Trichoderma) 세포, 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO, Chinese Hamster Ovary cell) 또는 인간 세포에서 바람직한 코돈을 사용하여 아미노산 서열을 인코딩하도록 뉴클레오티드 서열이 변경되었음을 의미한다. 최적화된 뉴클레오티드 서열은 출발 뉴클레오타이드 서열에 의해 원래 (originally) 코딩된 아미노산 서열을 완전히 또는 가능한 많이 보유하도록 조작되며, 이는 "부모 (parental)" 서열이라고도 한다. 본원에서 최적화된 서열은 CHO 포유 동물 세포에서 바람직한 코돈을 갖도록 조작되었지만, 다른 진핵 세포에서 이들 서열의 최적화된 발현이 또한 본원에서 고려된다. 최적화된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된(인코딩된) 아미노산 서열은 또한 최적화된 것으로 지칭된다.
본 발명의 상세한 설명
ActRII 수용체에 대한 항체, 예를 들어 비마그루맙은 이들 수용체를 통해 스그널링을 감소시킬 수 있으며, 심장 질환을 예방 및/또는 치료할 수 있는 것으로 확인되었다.
따라서, 일 측면에서, 본 개시 (발명)는 ActRIIA 또는 ActRIIB 결합 분자, 예를 들어 비마그루맙 또는 상기 항체의 항원-결합 부분을 포함하는 기능성 단백질을 포함하는 조성물을 제공한다. 결합 분자는 ActRIIB 결합 분자, 예를 들어 인간 ActRIIB 일 수있다. 인간 ActRIIB의 폴리펩티드 서열은 서열번호 181 (AAC64515.1, GI : 3769443)에 기재되어 있다. 일 실시양태에서, 항체 또는 기능성 단백질은 인간 또는 카멜리드 (camelid)와 같은 기원을 갖는 포유 동물로부터 유래된다. 따라서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 키메릭 (chimeric), 인간 또는 인간화된 항체일 수 있다. 특정 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항-ActRIIB 항체는 표적 단백질 ActRIIB에 특이적이고 ActRIIB 또는 ActRIIB의 단편에 결합하는 항원-결합 영역을 갖는 것을 특징으로 한다.
일 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 작용 활성 (agonistic activity)이 없거나 낮은 ActRII 길항제이다. 또 다른 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체 또는 기능적 단편은 표적 단백질 ActRII에 결합하고, 미오스타틴의 ActRII에 대한 결합을 기저 수준 (basal level)으로 감소시킨다. 실시양태의 추가 측면에서, 개시된 조성물에 포함된 항체 또는 기능적 단편은 미오스타틴이 ActRII에 결합하는 것을 완전히 방지한다. 추가의 구체 예에서, 개시된 조성물에 포함 된 항체 또는 기능적 단편은 Smad 활성화를 억제한다. 추가의 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체 또는 기능적 단편은 Smad- 의존적 경로를 통한 골격 분화의 액티빈 수용체 타입 IIB 매개 미오스타틴-유도 억제 (activin receptor type IIB mediated myostatin-induced inhibition)를 억제한다. 결합은 항체에 의한 안타고니즘 (antagonism) 또는 아고니즘 (agonism)인 활성을 측정하는데 사용될 수 있는 하나 이상의 어세이에 의해 결정될 수 있다. 바람직하게는, 다음을 포함하는 ActRIIB에 대한 항체의 효과 중 적어도 하나를 측정한다:
바람직하게는, 분석은 다음을 포함하는 ActRIIB에 대한 항체의 효과 중 적어도 하나를 측정한다: ELISA에 의한 ActRIIB에 대한 미오스타틴 결합의 억제, 미오스타틴 유도 시그널링의 억제 (예를 들어, Smad 의존적 리포터 유전자 분석에 의한), 미오스타틴에 의한 Smad 인산화의 억제 (P-Smad ELISA) 및 미오스타틴의 억제로 인한 골격근 세포 분화 억제 (예를 들어 크레아틴 키나아제 분석에 의해).
일 실시양태에서, 본 개시 내용은 ActRIIB의 미오스타틴 결합 영역 (즉, 리간드 결합 도메인)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 이 리간드 결합 도메인은 서열번호 181의 아미노산 19 내지 134로 구성되며 본원에는 서열번호 182로 지정되어있다. 리간드 비딩 도메인 (ligand biding domain)은 하기에 기재된 몇 가지 에피토프를 포함한다.
일 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 약 100nM 이하, 약 10nM 이하, 약 1nM 이하의 KD로 ActRIIB에 결합한다. 바람직하게는, 개시된 조성물에 포함된 항체는 100pM 이하 (즉, 약 100pM, 약 50pM, 약 10pM, 약 2pM, 약 1pM 또는 그 이하)의 친화도로 ActRIIB에 결합한다. 일 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 약 1 내지 약 10pM의 친화도로 ActRIIB에 결합한다.
일 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 ActRIIB 관련 단백질과 교차-반응하지 않으며, 특히 인간 ActRIIA와 교차-반응하지 않는다 (NP_001607.1, GI : 4501897). 다른 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 Act RIIA와 교차 반응하고, ActRIIA에 결합하는 것과 동등한 친화도로 ActRIIB에 결합하거나 또는 ActRIIA에 결합하는 것보다 약 1, 2, 3, 4 또는 5-배 큰 친화도, 더욱 바람직하게는 약 10-배, 더욱더 바람직하게는 약 20-, 30-, 40- 또는 50-배, 더욱더 바람직하게는 약 100-배의 친화도로 ActRIIB에 결합한다.
일 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 100pM 이상의 친화도로 ActRIIA에 결합한다 (즉, 약 250pM, 약 500pM, 약 1nM, 약 5nM 또는 그 이상).
일 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 IgG2 이소타입이다.
다른 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 IgG1 이소타입이다. 추가의 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 IgG1 이소타입이고 Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는다. 상기 변경된 이펙터 기능은 감소된 (reduced) ADCC 및 CDC 활성일 수 있다. 일 실시양태에서, 상기 변경된 효과기 기능은 침묵된 (silenced) ADCC 및 CDC 활성이다.
다른 관련 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 항체 의존성 세포 독성 (antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC)) 활성 또는 CDC 활성이 없는 완전 (fully) 인간 또는 인간화된 IgG1 항체이고, 서열번호 181의 아미노산 19-134로 이루어진 ActRIIB의 영역에 결합한다.
다른 관련 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 감소된 항체 의존성 세포 독성 (ADCC) 활성 또는 CDC 활성을 갖는 완전 인간 또는 인간화된 IgG1 항체이고, 서열번호 181의 아미노산 19-134로 이루어진 ActRIIB 영역에 결합한다.
본 발명은 또한 전술한 심장 질환으로서 심장 질환의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 인간 또는 인간화된(humanized) 항-ActRIIB 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 특정 중쇄 및 경쇄 서열로부터 유래되고/되거나 특정 아미노산 서열을 포함하는 CDR 영역과 같은 특정 구조적 특징을 포함한다. 본 개시 내용은 단리된 ActRIIB 항체, 이러한 항체의 제조 방법, 면역접합체 (immunoconjugates) 및 이러한 항체를 포함하는 다가 또는 다중특이적 분자 및 항체, 면역 접합체 또는 이중 특이적 분자를 포함하는 약학조성물을 제공한다.
대안적인 실시양태에서, 본 발명은 다음 측면(aspect)에 관한 것이다:
1. 심장판막질환, 고혈압, 관상동맥질환, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원 및 다른 형태의 유전성 또는 특발성 심근증 (idiopathic cardiomyopathies)과 관련되거나 이에 의해 유발된 심부전을 포함하는 심부전 치료/또는 예방에 사용하기 위한, ActRII 수용체 길항제.
2. 측면(양상) 1에 있어서, 상기 ActRII 길항제는 이를 필요로 하는 환자에게 약 3-10 mg/kg의 용량으로 투여되는 것인, ActRII 수용체 길항제.
3. 측면 2에 있어서, 상기 미오스타틴 길항제는 약 3 또는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 것인, ActRII 수용체 길항제.
대안적으로, ActRII 수용체 길항제는 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여된다.
4. 측면 1 내지 3에 있어서, 상기 ActRII 수용체 길항제가 정맥 내 또는 피하 투여되는 것인, ActRII 수용체 길항제.
5. 측면 1-4 중 어느 하나에 있어서, 상기 ActRII 수용체 길항제는 4 주마다 투여되는 것인, ActRII 수용체 길항제.
대안적으로, ActRII 수용체 길항제는 8 주마다 투여될 수 있다.
6. 측면 1-5 중 어느 하나에 있어서, 상기 ActRII 수용체 길항제가 3 개월 이상 동안 투여되는 것인, ActRII 수용체 길항제.
7. 측면 1-6 중 어느 하나에 있어서, 상기 ActRII 수용체 길항제가 최대 12 개월 동안 투여되는 것인 ActRII 수용체 길항제.
바람직하게는 ActRII 수용체 길항제는 적어도 또는 최대 3 개월, 4 개월, 5 일, 6 일, 7 일, 8 일, 9 일, 10 일, 11 개월 또는 12 개월 동안 투여된다.
8. 심부전을 치료 및/또는 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 ActRII 수용체 길항제를 심부전이 있거나 심부전이 발생할 위험이 있는 대상 (subject)에게 투여하는 것을 포함하는 것인, 방법.
많은 경우에, 심부전은 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원에 대한 노출 및 다른 형태의 유전성 또는 특발성 심근증 (idiopathic cardiomyopathies)에 의해 유발되거나 관련될 수 있다. 심부전이 발생할 위험이 있는 환자는 이러한 증상 중 하나 이상을 가질 수 있다.
9. 심장판막질환, 고혈압, 관상동맥질환, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원, 및 다른 형태의 유전성 또는 특발성 심근증 (idiopathic cardiomyopathies)으로 이루어진 군에서 선택되는 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 ActRII 수용체 길항제를 상기 증상과 관련된 상기 구조적 및/또는 기능성 심장 이상이 있는 대상 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
10. 측면 8 또는 9에 있어서, ActRII 수용체 길항제를 이를 필요로하는 환자에게 약 3-10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
11. 측면 8 또는 9에 있어서, ActRII 수용체 길항제를 이를 필요로하는 환자에게 약 3 또는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
12. 측면 8 또는 9에 있어서, ActRII 수용체 길항제를 정맥 내 또는 피하 투여하는 것을 포함하는 방법.
13. 측면 8 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 4 주마다 ActRII 수용체 길항제를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
14. 측면 8 내지 13 중 어느 하나에 있어서, ActRII 수용체 길항제를 3 개월 이상 동안 투여하는 단계를 포함하는 방법.
15. 측면 14에 있어서, ActRII 수용체 길항제를 최대 12개월 까지 투여하는 것을 포함하는 방법.
16. 측면 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, ActRII 수용체 길항제가 항-ActRII 수용체 항체인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법.
17. 측면 1-16 중 어느 하나에 있어서, 항-ActRII 수용체 항체가 비마그루 맙인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법.
18. 측면 17에 있어서, ActRII 수용체 길항제가 서열번호 181의 아미노산 19-134 (서열번호 182)로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRII 수용체 항체인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법.
19. 측면 16-18 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-ActRII 수용체 항체는 다음을 포함하거나 다음으로 구성된 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법:
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR).
20. 측면 16-19 중 어느 하나에 있어서, 항-ActRIIB 항체가 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 ActRII 수용체 길항제:
a) 다음을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체:
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR);
및 b) 다음을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 ActRIIB에 대한 길항제 항체:
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
*(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR) (여기서, 항체는 약 2 pM의 KD를 가짐).
21. 측면 16-20 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체가 ActRIIA에 결합하는 것보다 10 배 이상의 친화도로 ActRIIB에 결합하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법.
22. 측면 16-21 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체가 서열번호 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법.
23. 측면 16-22 중 어느 하나에 있어서, 항체가 다음을 포함하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법:
(a) 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(b) 서열번호 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 72의 경쇄 가변 영역 CDR3;
(c) 서열번호 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 73의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(d) 서열번호 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 74의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(e) 서열번호 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 75의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(f) 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 76의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(g) 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 77의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(h) 서열번호 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 78의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(i) 서열 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 79의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(j) 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 80의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(k) 서열번호 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(l) 서열번호 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 82의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(m) 서열번호 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는
(n) 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 84의 경쇄 가변 영역 CDR3.
24. 측면 16-23 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는 서열번호 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 적어도 95 % 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법.
25. 측면 16-24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체는 서열번호 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95 % 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법.
26. 측면 16-25 중 어느 하나에 있어서, 항체가 다음을 포함하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법:
(a) 서열번호 99의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 85의 가변 경쇄 서열;
(b) 서열번호 100의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 86의 가변 경쇄 서열;
(c) 서열번호 101의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 87의 가변 경쇄 서열;
(d) 서열번호 102의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 88의 가변 경쇄 서열;
(e) 서열번호 103의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 89의 가변 경쇄 서열;
(f) 서열번호 104의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 90의 가변 경쇄 서열;
(g) 서열번호 105의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 91의 가변 경쇄 서열;
(h) 서열번호 106의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 92의 가변 경쇄 서열;
(i) 서열번호 107의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 93의 가변 경쇄 서열;
(j) 서열번호 108의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 94의 가변 경쇄 서열;
(k) 서열번호 109의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 95의 가변 경쇄 서열;
(l) 서열번호 110의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 96의 가변 경쇄 서열;
(m) 서열번호 111의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 97의 가변 경쇄 서열; 또는
(n) 서열번호 112의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 98의 가변 경쇄 서열.
27. 측면 16-26 중 어느 하나에 있어서, 항체가 다음을 포함하는 것인, ActRII 수용체 길항제 또는 방법:
(a) 서열번호 146의 중쇄 서열 및 서열번호 141의 경쇄 서열;
(b) 서열번호 147의 중쇄 서열 및 서열번호 142의 경쇄 서열;
(c) 서열번호 148의 중쇄 서열 및 서열번호 143의 경쇄 서열;
(d) 서열번호 149의 중쇄 서열 및 서열번호 144의 경쇄 서열;
(e) 서열번호 150의 중쇄 서열 및 서열번호 145의 경쇄 서열;
(f) 서열번호 156의 중쇄 서열 및 서열번호 151의 경쇄 서열;
(g) 서열번호 157의 중쇄 서열 및 서열번호 152의 경쇄 서열;
(h) 서열번호 158의 중쇄 서열 및 서열번호 153의 경쇄 서열;
(i) 서열번호 159의 중쇄 서열 및 서열번호 154의 경쇄 서열; 또는
(j) 서열번호 160의 중쇄 서열 및 서열번호 155의 경쇄 서열.
28. 측면 16-27 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 ActRIIB와의 결합으로부터 교차-차단하거나 측면 27의 적어도 하나의 항체에 의해 교차-차단되는 것인, ActRII 수용체 길항제.
29. 측면 16-28 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는 것인, ActRII 수용체 길항제.
30. 측면 16-29 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 측면 26-27에 열거된 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 것인, ActRII 수용체 길항제.
31. 측면 16-30 중 어느 하나에 있어서, 항체가 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 인코딩되는 것인, ActRII 수용체 길항제.
32. 심부전 치료 및/또는 예방 또는 심장판막질환, 고혈압, 관상동맥질환, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원, 및 다른 형태의 유전성 또는 특발성 심근증 (idiopathic cardiomyopathies)으로 이루어진 군에서 선택되는 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상을 치료하기 위한 비마그루맙으로서, 여기서 비마그루맙은 4 주마다 약 3-10 mg/kg 체중으로 정맥 내 투여되는 것인, 비마그루맙.
33. 심부전 치료 및/또는 예방 또는 심장판막질환, 고혈압, 관상동맥질환, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 독성 또는 감염원, 및 다른 형태의 유전성 또는 특발성 심근증 (idiopathic cardiomyopathies)으로 이루어진 군에서 선택되는 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상 치료에 사용하기 위한 150 mg/ml의 비마그루맙을 포함하는 조성물.
34. 150 mg/ml의 비마그루맙을 포함하는 단일 투여 형태 (unitary dosage form).
추가의 실시양태에서, 단일 투여 형태, 즉 바이알은 100-200 mg/ml의 비마그루맙, 바람직하게는 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160,165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200 mg/ml의 비마그루맙을 포함한다.
35. 용액으로 희석된 하나 이상의 바이알로부터의 적절한 양의 비마그루맙을 포함하는 인퓨전 백 (infusion bag).
용액은 바람직하게는 덱스트로스 용액이다.
일부 추가 실시양태에서, 비마그루맙과 같은 ActRII 수용체 길항제 또는 항-ActRII 수용체 항체는 약 1, 2, 3, 4, 5, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/kg의 용량으로 투여된다.
심부전 치료 및/또는 예방용 및 심장판막질환, 고혈압, 관상동맥질환, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증 (peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증 (stress cardiomyopathy), 및 다른 형태의 유전성 또는 특발성 확장성 심근증 (idiopathic dilated cardiomyopathies)으로 이루어진 군에서 선택되는 증상과 관련된 구조적 및/또는 기능적 심장 이상 치료용 의약의 제조를 위한 ActRII 수용체 길항제가 본원에 개시된다.
추가의 실시양태에서, 본 명세서에 개시된 모든 측면은 다른 것과 함께 조합하여 사용될 수 있다.
본 개시의 다양한 측면은 다음 하위 섹션에서 더 상세히 설명된다. 다양한 종의 ActRII에 대한 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 표준 어세이는, 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 및 RIA를 포함하여 당업계에 공지되어 있다. 항체의 결합 친화도는 당업계에 공지된 표준 어세이, 예컨대 비아코어 (Biacore) 분석 또는 용액 평형 적정법 (Solution Equilibrium Titration)에 의해 평가될 수 있다. 비아코어 (Biacore)와 같은 표면 플라즈몬 공명 기반 기술은 결합 친화도를 계산할 수있는 결합 동역학 (binding kinetics)을 결정할 수 있다.
따라서, 당업계에 공지되고 본원에 기술된 방법론에 따라 결정된 바와 같은 하나 이상의 이들 ActRII 기능적 특성 (예를 들어, 생화학적, 면역화학적, 세포 성, 생리학적 또는 다른 생물학적 활성 등)을 "억제"하는 항체는 항체 부재 시 (예를 들어, 또는 관련성이 없는 특이성을 갖는 대조군 항체가 존재하는 경우) 보이는 것과 비교하여 특정 활성의 통계적으로 유의한 감소와 관련이 있는 것으로 이해될 것이다. 측정된 파라미터의 적어도 10 %, 적어도 50 %, 80 % 또는 90 % 만큼의 통계적 유의한 감소와 같은 ActRII 활성 효과를 억제하는 항체, 및 본원에 개시된 특정 실시양태에서의 항체는 ActRIIB 기능적 활성의 95%, 98% 또는 99% 이상을 억제할 수 있다.
항체 또는 다른 결합제가 다른 항체 또는 결합 분자의 ActRII에 대한 결합을 방해할 수 있는 능력 또는 정도, 및 본 개시 내용에 따라 교차-차단될 수 있는지의 여부는 표준 경쟁 결합 어세이를 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 적절한 어세이는 표면 플라즈몬 공명 기술을 사용하여 상호 작용의 정도를 측정할 수 있는 비아코어 (Biacore) 기술 (예를 들어, BIAcore 기기 (Biacore, Uppsala, Sweden)를 사용함으로써)의 사용과 관련된다. 교차-차단을 측정하기 위한 다른 분석법은 ELISA-기반 접근법을 사용한다. 추가 어세이는 FACS 분석을 사용하며, 여기서 ActRIIB 발현 세포에 결합하기 위한 다양한 항체의 경쟁이 테스트된다.
본 개시에 따르면, 본 개시에 따른 교차-차단 항체 또는 다른 결합제는 항체 또는 결합제의 조합 (혼합물)의 기록된 결합이 조합된 두 항체 또는 결합제의 최대 이론적 결합의 80 % 내지 0.1 % (예를 들어, 80 % 내지 4 %), 구체적으로 최대 이론적 결합의 75 % 내지 0.1 % (예를 들어, 75 % 내지 4 %), 보다 구체적으로 70 % 내지 0.1 % (예를 들어, 70 % 내지 4 %), 및 보다 구체적으로는 최대 이론적 결합의 (상기 정의된 바와 같이) 65 % 내지 0.1 % (예를 들어 65 % 내지 4 %)이 되도록 기재된 BIAcore 교차-차단 어세이에서 ActRII에 결합한다.
양성 대조군 웰 (즉, 동일한 항-ActRIIB 항체 및 ActRIIB이지만 "테스트" 교차-차단 항체 없음)과 비교할 때, 테스트 항체가 60 % 내지 100 %, 구체적으로 70 내지 60 %, 더욱 구체적으로 80 % 내지 100 %의 ActRIIB에 결합하는 항-ActRII 수용체 항체의 감소를 야기할 수 있는 경우, 항체는 ELISA 어세이에서 본 개시 내용의 항-ActRIIB 항체를 교차-차단하는 것으로 정의된다. 본원에 인용된 교차-차단 항체의 예는 MOR08159 및 MOR08213 (WO2010/125003에 개시됨)이다. 따라서, 본 개시는 ActRIIB와의 결합을 위해 MOR08159 또는 MOR08213을 교차 차단하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
재조합 항체
본원에 사용된 조성물에 포함된 항체, 예를 들어, ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙은 본원에 기재된 바와 같이 단리되고 구조적으로 특성화 된 인간 재조합 항체를 포함한다. 본 발명의 조성물에 포함 된 항체의 VH 아미노산 서열은 서열번호 99-112에 제시되어 있다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 VL 아미노산 서열은 각각 서열 85-98에 제시되어 있다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 바람직한 전장 중쇄 아미노산 서열의 예는 서열번호 146-150 및 156-160에 제시되어 있다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 바람직한 전장 경쇄 아미노산 서열의 예는 각각 서열번호 141-145 및 151-155에 제시되어 있다. 본 발명의 조성물에 포함된 다른 항체는 아미노산 결실, 삽입 또는 치환에 의해 돌연변이되었지만 전술한 서열에 도시된 (depicted) CDR 영역을 갖는 CDR 영역에서 적어도 60, 70, 80, 90, 95, 97 또는 99 %의 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 전술한 서열에 도시된 CDR 영역과 비교할 때, CDR 영역에서 아미노산 결실, 삽입 또는 치환에 의해 1, 2, 3, 4 또는 5 개 이하의 아미노산이 돌연변이된 돌연변이 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 가변 중쇄 부모 (parental) 뉴클레오티드 서열은 서열번호 127-140에 제시되어 있다. 가변 경쇄 부모 뉴클레오티드 서열은 서열번호 113-126에 제시되어있다. 포유 동물 세포에서의 발현에 최적화된 전장 경쇄 뉴클레오티드 서열은 서열번호 161-165 및 171-175에 제시되어 있다. 포유 동물 세포에서의 발현에 최적화된 전장 중쇄 뉴클레오티드 서열은 서열번호 166-170 및 176-180에 제시되어 있다. 본 발명의 조성물에 포함된 다른 항체는 아미노산을 포함하거나 돌연변이된 핵산에 의해 인코딩되지만 상기 기재된 서열과 적어도 60 또는 그 이상 (즉, 80, 90, 95, 97, 99 또는 그 이상) 퍼센트 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 전술한 서열에 도시된 가변 영역과 비교할 때, 가변 영역에서의 아미노산 결실, 삽입 또는 치환에 의해 1, 2, 3, 4 또는 5 개 이하의 아미노산이 돌연변이된 돌연변이 아미노산 서열을 포함한다.
이들 항체 각각은 동일한 에피토프에 결합하고 동일한 부모 항체로부터의 자손이기 때문에, VH, VL, 전장 경쇄 및 전장 중쇄 서열 (뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열)은 본 개시의 다른 항-ActRIIB 결합 분자를 생성하기 위하여 "혼합 (mixed) 및 매칭 (matched)"될 수 있다. 이러한 "혼합 및 매칭된" 항체의 ActRIIB 결합은 상기 기재된 결합 어세이 및 공지된 방법, 예컨대 ELISAs와 같은 방법을 사용하여 테스트될 수 있다. 이들 사슬이 혼합 및 매칭될 때, 특정 VH/VL 쌍 (pairing)으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍으로부터의 전장 중쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 중쇄 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 VH/VL 쌍으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정 전장 중쇄/전장 경쇄 쌍으로부터의 전장 경쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 경쇄 서열로 대체되어야 한다. 따라서, 일 측면에서, 본 개시는 다음을 갖는 재조합 항-ActRII 수용체 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 조성물을 제공한다: 서열번호 99-112로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 85-98로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역.
다른 측면에서, 본 개시는 다음을 포함하는 조성물을 제공한다:
(i) 다음을 갖는 단리된 재조합 항-ActRII 수용체 항체: 서열번호 99-112로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 전장 중쇄; 및 서열번호 85-98로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 전장 경쇄; 또는
(ii) 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질.
다른 측면에서, 본 개시는 다음을 포함하는 조성물을 제공한다:
(i) 다음을 갖는 단리된 재조합 항-ActRII 수용체 항체: 서열번호 127-140으로 이루어진 군에서 선택된 포유 동물의 세포에서 발현을 위해 최적화된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 전장 중쇄, 및 서열번호 113-126으로 이루어진 군에서 선택된 포유 동물의 세포에서 발현을 위해 최적화된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된 전장 경쇄, 또는
(ii) 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질.
본 발명의 조성물에 포함된 항체의 VH CDR1의 아미노산 서열의 예는 서열번호 1-14에 제시되어 있다. 항체의 VH CDR2의 아미노산 서열은 서열 15-28에 제시되어 있다. 항체의 VH CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 29-42에 제시되어 있다. 항체의 VL CDR1의 아미노산 서열은 서열 43-56에 제시되어 있다. 항체의 VL CDR2의 아미노산 서열은 서열 57-70에 제시되어 있다. 항체의 VL CDR3의 아미노산 서열은 서열 71-84에 제시되어 있다. CDR 영역은 Kabat 시스템 (Kabat, E. A., et al., 1991 Immunological Interests of Proteins, Fifth Edition, UH.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)을 사용하여 기술된다. CDR 영역을 결정하는 대안적인 방법은 Chothia가 고안한 방법을 사용한다 (Chothia et al. 1989, Nature, 342 : 877-883). Chothia 정의는 구조 루프 영역 (structural loop regions)의 위치를 기반으로 한다. 그러나 Chothia에서 사용하는 넘버링 시스템이 변경 되었기 때문에 (예: http://www.biochem.ucl.ac.uk/~martin/abs/GeneralInfo.html 및 http://www.bioinf.org.uk/abs/ 참조), 이 시스템은 이제 덜 일반적으로 사용된다. CDR을 정의하기 위한 다른 시스템이 존재하며 이러한 두 웹 사이트에도 언급되어 있다.
이들 항체 각각이 ActRII에 결합할 수 있고 항원-결합 특이성이 CDR1, 2 및 3 영역에 의해 주로 제공되는 것을 고려하면, VH CDR1, 2 및 3 서열 및 VL CDR1, 2 및 3 서열은 "혼합 및 매칭" 될 수 있다 (즉, 상이한 항체로부터의 CDR이 혼합 및 매칭될 수 있으며, VH CDR1, 2 및 3 및 VL CDR1, 2 및 3을 함유하는 각각의 항체는 본 개시의 다른 항-ActRII 결합 분자를 생성한다.) 이러한 "혼합 및 매칭된" 항체의 ActRIIB 결합은 상기 및 실시예 기재된 결합 어세이(예를 들어, ELISA)에를 사용하여 테스트될 수 있다. VH CDR 서열이 혼합및 매칭될 때, 특정 VH 서열로부터의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 마찬가지로, VL CDR 서열이 혼합 및 매칭될 때, 특정 VL 서열로부터의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 모노클로날 항체에 대해 본원에 제시된 CDR 서열로부터 구조적으로 유사한 서열로 하나 이상의 VH 및/또는 VL CDR 영역 서열을 치환함으로써 신규 VH 및 VL 서열을 생성 할 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다.
개시된 조성물에 포함된 항-ActRII 수용체 항체, 또는 이의 항원 결합 영역은 다음을 갖는다: 서열번호 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다:
서열번호 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 72의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 73의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 74의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 75의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 76의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 77의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 78의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 79의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 80의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 82의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 83의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 다음을 포함한다: 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 84의 경쇄 가변 영역 CDR3.
일 실시 양태에서, 본 개시는 다음을 포함하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다: (a) 서열번호 85의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 99의 가변 경쇄 서열; (b) 서열번호 86의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 100의 가변 경쇄 서열; (c) 서열번호 87의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 101의 가변 경쇄 서열; (d) 서열번호 88의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 102의 가변 경쇄 서열; (e) 서열번호 89의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 103의 가변 경쇄 서열; (f) 서열번호 90의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 104의 가변 경쇄 서열; (g) 서열번호 91의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 105의 가변 경쇄 서열; (h) 서열번호 92의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 106의 가변 경쇄 서열; (i) 서열번호 93의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 107의 가변 경쇄 서열; (j) 서열번호 94의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 108의 가변 경쇄 서열; (k) 서열번호 95의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 109의 가변 경쇄 서열; (l) 서열번호 96의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 110의 가변 경쇄 서열; (m) 서열번호 97의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 111의 가변 경쇄 서열; 또는 (n) 서열번호 98의 가변 중쇄 서열 및 서열번호 112의 가변 경쇄 서열.
일 실시양태에서, 본 개시는 다음을 포함하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다: (a) 서열번호 146의 중쇄 서열 및 서열번호 141의 경쇄 서열; (b) 서열번호 147의 중쇄 서열 및 서열번호 142의 경쇄 서열; (c) 서열번호 148의 중쇄 서열 및 서열번호 143의 경쇄 서열; (d) 서열번호 149의 중쇄 서열 및 서열번호 144의 경쇄 서열; (e) 서열번호 150의 중쇄 서열 및 서열번호 145의 경쇄 서열; (f) 서열번호 156의 중쇄 서열 및 서열번호 151의 경쇄 서열; (g) 서열번호 157의 중쇄 서열 및 서열번호 152의 경쇄 서열; (h) 서열번호 158의 중쇄 서열 및 서열번호 153의 경쇄 서열; (i) 서열번호 159의 중쇄 서열 및 서열번호 154의 경쇄 서열; 또는 (j) 서열번호 160의 중쇄 서열 및 서열번호 155의 경쇄 서열.
본원에 사용된 바와 같이, 인간 항체는, 항체의 가변 영역 또는 전장 쇄가 인간 생식계열 면역 글로불린 유전자를 사용하는 시스템으로부터 수득되는 경우, 특정 생식계열의 "생성물 (the product of)" 또는 "유래물 (derived from)"인 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 전장 중쇄 또는 경쇄를 포함한다. 이러한 시스템은 인간 면역 글로불린 유전자를 보유하는 형질 전환 마우스를 목적(interest) 항원으로 면역화하거나 파지 상에 표시된 인간 면역 글로불린 유전자 라이브러리를 목적 항원으로 스크리닝하는 것을 포함한다. 인간 생식계열 면역 글로불린 서열의 "생성물" 또는 "유래물"인 인간 항체는 인간 항체의 아미노산 서열을 인간 생식계열 면역 글로불린의 아미노산 서열과 비교하고 인간 항체의 서열에 가장 근접한 (즉, 최대 % 동일성) 인간 생식계열 면역 글로불린을 선택함으로써 식별될 수 있다.
특정 인간 생식계열 면역 글로불린 서열의 "생성물" 또는 "유래물"인 인간 항체는, 예를 들어 자연 발생 체세포 돌연변이 또는 부위-지향적 의도적 도입(intentional introduction of site-directed) 돌연변이 때문에, 생식계열 서열과 비교하여 아미노산 차이를 포함할 수 있다. 그러나, 선택된 인간 항체는 전형적으로 인간 생식계열 면역 글로불린 유전자에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 아미노산 서열에서 적어도 90 % 동일하고 다른 종의 생식계열 면역 글로불린 아미노산 (예를 들어, 뮤린(murine) 생식선 서열)과 비교할 때 인간 항체를 인간인 것으로 식별하는 아미노산 잔기를 함유한다. 특정 경우에, 인간 항체는 생식계열 면역 글로불린 유전자에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 아미노산 서열에서 적어도 80 %, 90 % 또는 95 %, 또는 심지어 ㅈ적어도 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 % 동일할 수 있다. 전형적으로, 특정 인간 생식계열 서열로부터 유래된 인간 항체는 인간 생식 계열 면역 글로불린 유전자에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 10 개 이하의 아미노산 차이를 나타낼 것이다. 특정 경우에, 인간 항체는 생식계열 면역 글로불린 유전자에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 5 개 이하, 또는 4 개, 3 개, 2 개 또는 1 개 이하의 아미노산 차이를 나타낼 수 있다.일 실시양태에서, 본 개시의 조성물에 포함 된 항체는 pBW522 또는 pBW524에 의해 인코딩된 항체이다 (각각 기탁번호 DSM22873 및 DSM22874로 2009.8.18에 기탁됨 (DSMZ, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Braunschweig, Germany)).
상동 항체 (homologous antibodies)
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 전장 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열; 전장 중쇄 및 경쇄 뉴클레오티드 서열, 가변 영역 중쇄 및 경쇄 뉴클레오티드 서열, 또는 가변 영역 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 가지며, 이는 본원에 기재된 항체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열에 상동성이고, 상기 항체는 본 개시의 항--ActRIIB 항체의 원하는 기능성 특성을 보유한다.
예를 들어, 본 개시는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 재조합 항-ActRIIB 항체 (또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질)를 포함하는 조성물을 제공하고, 여기서: 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 99-112로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80 %, 또는 적어도 90 % (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99 %) 동일한 아미노산 서열을 포함한다; 경쇄 가변 영역은 서열번호 85로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80 %, 또는 적어도 90 % (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99 %) 동일한 아미노산 서열을 포함한다; 대안적으로, 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 재조합 항-ActRIIB 항체 (또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질)를 포함하고, 여기서: 중쇄 가변 영역은 서열번호 99-112로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5 개 이하의 아미노산, 또는 4 개 이하의 아미노산, 또는 3 개 이하의 아미노산, 또는 2 개 이하의 또는 1 개 이하의 아미노산 변화를 포함한다; 경쇄 가변 영역은 서열번호 85-98로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5 개 이하의 아미노산, 또는4 개 이하의 아미노산, 또는 3 개 이하의 아미노산, 또는 2 개 이하 또는 1 개 이하의 아미노산 변화를 포함하고, 항체는 다음의 기능성 특성 중 적어도 하나를 나타낸다: (i) 시험관 내 또는 생체 내에서 미오스타틴 결합을 억제하고, (ii) Smad-의존적 경로를 통한 근육 분화 억제를 감소시키고/시키거나 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않으며, 특히 RBC의 변화가 없다. 이와 관련하여, 용어 "변화 (change)"는 삽입, 결실 및/또는 치환을 지칭한다.
추가의 예에서, 본 개시는 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 포함하는 단리 재조합 항-ActRII 수용체 항체 (또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질)를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서: 전장 중쇄는 서열번호 146-150 및 156-160으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 80 %, 또는 적어도 90 % (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99 %) 동일한 아미노산 서열을 포함한다; 전장 경쇄는 서열번호 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80 %, 또는 적어도 90 % (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99 %) 동일한 아미노산 서열을 포함한다; 대안적으로, 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 재조합 항-ActRII 수용체 항체 (또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질)를 포함하고, 여기서: 중쇄 가변 영역은 서열번호 146-150 및 156-160으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열과 비교하여 5 개 이하의 아미노산 또는 4 개 이하의 아미노산, 또는 3 개 이하의 아미노산, 또는 2 개 이하의 또는 1 개 이하의 아미노산 변화를 포함한다; 경쇄 가변 영역은 서열번호 141-145 및 151-155로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5 개 이하의 아미노산, 4 개 이하의 아미노산, 또는 3 개 이하의 아미노산, 또는 2 개 이하 또는 1 개 이하의 아미노산 변화를 포함하고, 항체는 다음의 기능적 특성 중 적어도 하나를 나타낸다: (i) 시험관 내 또는 생체 내에서 미오스타틴 결합을 억제하고, (ii) Smad- 의존적 경로를 통한 근육 분화 억제를 감소시키고/시키거나 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않으며, 특히 RBC의 변화가 없다. 바람직하게는 이러한 항체는 ActRIIB 및/또는 ActRIIA의 리간드 결합 도메인에 결합한다. 이와 관련하여, 용어 "변화"는 삽입, 결실 및/또는 치환을 지칭한다.
다른 예에서, 본 개시 (disclosure)는 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 포함하는 단리된 재조합 항-ActRII 수용체 항체 (또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질)를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서: 전장 중쇄는 서열번호 166-170 및 176-180으로 이루어진 군에서 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 80 %, 또는 적어도 90 % (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99 %) 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩(암호화)된다; 전장 경쇄는 서열번호 161-165 및 171-175로 이루어진 군에서 선택된 뉴클레오티드 서열과 적어도 80 %, 또는 적어도 90 % (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99 %) 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩(암호화)된다; 대안적으로, 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 재조합 항-ActRIIB 항체 (또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질)를 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 166-170 및 176-180으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5 개 이하의 아미노산, 또는 4 개 이하의 아미노산, 또는 3 개 이하의 아미노산, 또는 2 개 이하 또는 1 개 이하의 아미노산 변화를 포함한다; 경쇄 가변 영역은 서열번호 161-165 및 171-175로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5 개 이하의 아미노산, 4 개 이하의 아미노산, 또는 3 개 이하의 아미노산, 또는 2 개 이하 또는 1 개 이하의 아미노산 변화를 포함하고, 항체는 다음의 기능적 특성 중 적어도 하나를 나타낸다: (i) 시험관 내 또는 생체 내에서 미오 스타틴 결합을 억제하고, (ii) Smad- 의존적 경로를 통한 근육 분화 억제를 감소시키고/시키거나 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않으며, 특히 RBC의 변화가 없다. 바람직하게는 이러한 항체는 ActRIIB의 리간드 결합 도메인에 결합한다. 이와 관련하여, 용어 "변화"는 삽입, 결실 및/또는 치환을 지칭한다.
다양한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 상기 논의된 기능적 특성 중 하나 또는 그 이상, 둘 또는 그 이상 또는 세 가지를 나타낼 수 있다. 항체는 예를 들어 인간 항체, 인간화 (humanized) 항체 또는 키메릭 (chimeric) 항체일 수 있다. 바람직하게는 항체는 완전 (fully) 인간 IgG1 항체이다.
다른 실시양태에서, VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 상기 제시된 서열과 적어도 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 % 동일할 수 있다. 다른 실시양태에서, VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 1, 2, 3, 4 또는 5 개 이하의 아미노산 위치에서의 아미노산 치환을 제외하고 동일할 수 있다.
서열번호 99-112 및 서열번호 85-98의 VH 및 VL 영역 각각에 높은 (즉, 80 % 또는 그 이상) 동일성을 갖는 VH 및 VL 영역을 갖는 항체는 핵산 분자 서열번호 127-140 및 113-126 각각의 돌연변이유발 (예를 들어, 부위-지향적 (site-directed) 또는 PCR-매개 돌연변이 유발)에 의해 수득될 수 있고, 이어서 본원에 기술된 기능적 어세이를 이용하여 보유 기능 (즉, 상기 제시된 기능)에 대해 인코딩된 변경된 항체의 테스트가 수행된다.
다른 실시 양태에서, 전장 중쇄 및/또는 전장 경쇄 아미노산 서열은 상기 제시된 서열과 적어도 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 % 동일할 수 있고 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개 이하의 아미노산 위치에서의 아미노산 변화를 제외하고는 동일할 수 있다. 서열번호 146-150 및 156-160 중 어느 하나의 전장 중쇄 및 서열번호 141-145 및 151-155 중 어느 하나의 전장 경쇄 각각에 높은 (즉, 적어도 80 % 또는 그 이상) 동일성을 갖는 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 갖는 항체는 핵산 분자 서열번호 166-170 및 176-180 및 서열번호 161-165 및 171-175 각각의 돌연변이유발 (예를 들어, 부위-지향적 (site-directed) 또는 PCR-매개 돌연변이 유발)에 의해 수득될 수 있고, 이어서 본원에 기술된 기능적 어세이를 이용하여 보유 기능 (즉, 상기 제시된 기능)에 대해 인코딩된 변경된 항체의 테스트가 수행된다.
다른 실시양태에서, 전장 중쇄 및/또는 전장 경쇄 뉴클레오티드 서열은 상기 제시된 서열과 적어도 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 % 동일할 수 있다.
다른 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄 뉴클레오티드 서열의 가변 영역은 상기 제시된 서열과 적어도 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 % 동일하거나 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개 이하의 아미노산 위치에서 아미노산 변화를 제외하고 동일할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 두 서열 사이의 퍼센트 동일성은, 간격 (gap)의 수를 고려한, 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수 (즉, 동일성 % = 동일 위치의 #/총 위치 # x 100), 및 각각의 갭의 길이의 함수이며, 이는 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있다. 서열의 비교 및 두 서열 사이의 퍼센트 동일성의 결정은 후술하는 바와 같이 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 두 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)에 통합된 E. Meyers 및 W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4 : 11-17, 1988)의 알고리즘을 사용하여, PAM120 중량 잔기 표 (weight residue table), 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 사용하여 결정될 수 있다.
보존적 변형 (conservative modifications)을 갖는 항체
특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가지며, 여기서 이들 CDR 서열 중 하나 이상은 본원에 기재된 항체 또는 이의 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 또는 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열을 기초로 특정된 (specified) 아미노산 서열을 가지며, 항체는 본 개시의 항-ActRIIB 항체의 원하는 (desired) 기능적 특성을 보유한다.
따라서, 본 개시는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역으로 구성되는 단리된 재조합 항-ActRIIB 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질을 포함하는 조성물을 제공한다. 여기서: 중쇄 가변 영역 CDR1 아미노산 서열은 서열번호 1-14로 이루어진 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 및 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된다; 중쇄 가변 영역 CDR2 아미노산 서열은 서열번호 15 내지 28로 이루어진 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 및 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된다; 중쇄 가변 영역 CDR3 아미노산 서열은 서열번호 29-42로 이루어진 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 및 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된다; 경쇄 가변 영역 CDR1 아미노산 서열은 서열번호 43-56으로 이루어진 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 및 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된다; 경쇄 가변 영역 CDR2 아미노산 서열은 서열번호 57-70로 이루어진 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 및 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된다; CDR3 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역은 서열번호 71-84로 이루어진 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화, 및 이의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된다; 바람직하게는 항체는 다음의 기능적 특성 중 적어도 하나를 나타낸다: (i) 시험관 내 또는 생체 내에서 미오스타틴 결합을 억제하고, (ii) Smad- 의존적 경로를 통한 근육 분화 억제를 감소시키고/시키거나 (iii) 혈액학적 변화를 유발하지 않고, 특히 RBC에는 변화가 없다.
다양한 실시양태에서, 항체는 상기 열거된 기능적 특성 중 하나 또는 둘 모두를 나타낼 수 있다. 이러한 항체는 예를 들어 인간 항체, 인간화(인간화된) 항체 또는 키메릭 항체일 수 있다.
다른 실시양태에서, 포유 동물 세포에서의 발현에 최적화된 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 전장 중쇄 서열 및 전장 경쇄 서열을 가지며, 이들 서열 중 하나 이상은 본원에 기재된 항체 또는 이의 보존적 변형에 기초한 특정 (specified) 아미노산 서열을 가지며, 여기서 항체는 본 개시의 항-ActRIIB 항체의 원하는 기능적 특성을 보유한다.
따라서, 본 개시는 전장 중쇄 및 전장 경쇄로 이루어진, 포유 동물 세포에서의 발현에 최적화된 단리된 모노클로날 항-ActRII 수용체 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 여기서, 전장 중쇄는 서열 146-150 및 156-160의 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 및 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된 아미소노산 서열을 가지며; 전장 경쇄는 서열번호 141-145 및 151-155의 군 또는 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 변화 및 그의 보존적 변형을 포함하는 이의 변이체 서열로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다; 항체는 다음의 기능적 특성 중 적어도 하나를 나타낸다: (i) 시험관 내 또는 생체 내에서 미오스타틴 결합을 억제하고, (ii) Smad-의존적 경로를 통한 근육 분화 억제를 감소시키고/시키거나 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않으며, 특히 RBC에서 변화가 없다.
다양한 실시양태에서, 항체는 상기 열거된 기능적 특성 중 하나 또는 둘 모두를 나타낼 수 있다. 이러한 항체는 예를 들어 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메릭 항체일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "보존적 서열 변형 (conservative sequence modifications)"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의하게 영향을 미치거나 변경하지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 첨가 및 결실을 포함한다. 변형은 부위-지정(site-directed) 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발과 같은 당업계에 공지된 표준 기술에 의해 본 개시 내용의 항체에 도입될 수 있다.
보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당업계에 정의되어 있다. 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 (예 : 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예 : 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 (uncharged) 않은 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예 : 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예 : 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄를 갖는 아미노산 (예 : 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예 : 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, 본 개시의 항체의 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본원에 기재된 기능 어세이를 사용하여 보유 기능에 대해 테스트될 수 있다.
개시된 조성물에 포함된 항-
ActRII
수용체 항체와 동일한
에피토프에
결합하는 항체
다른 실시양태에서, 본 개시 내용은 본원에 기재된 다양한 특이적 항-ActRII 수용체 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. ActRIIA 및 ActRIIB에 대한 미오스타틴 결합을 차단할 수 있는 실시예에 기재된 모든 항체는 ActRIIA 및 ActRIIB의 에피토프 중 하나에 높은 친화도로 결합하며, 상기 에피토프는 서열번호 181의 아미노산 19-134 사이에 포함된다.
따라서, 표준 ActRIIB 결합 어세이에서 본 개시의 다른 항체와 교차-경쟁할 수 있는 능력 (예를 들어, 통계적으로 유의미한 방식으로의 결합을 경쟁적으로 억제하는 것)에 기초하여 추가의 항체를 확인할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 인간 ActRIIB에 대한 결합을 억제하는 테스트 항체의 능력은 테스트 항체가 인간 ActRIIB에 결합하기 위해 상기 항체와 경쟁할 수 있음을 입증한다; 이러한 항체는 비(non)-제한적 이론에 따라, 경쟁하는 항체와 인간 ActRIIB 상의 동일하거나 관련된 (예를 들어, 구조적으로 유사하거나 공간적으로 근위인) 에피토프에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체와 인간 ActRIIA 및 ActRIIA 상의 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 인간 재조합 항체이다. 이러한 인간 재조합 항체는 실시예에 기재된 바와 같이 제조 및 단리될 수 있다. 따라서, 본 개시는 서열번호 85에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 99에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체 및/또는 서열번호 85에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 99에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체와 결합에 대해 경쟁하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 86에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 100에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 87에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 101에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 88에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 102에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 89에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 103에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 90에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 104에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 91에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 105에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 92에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 106에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 93에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 107에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 94에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 108에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 95에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 109에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 96에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 110에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 97에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 111에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 서열번호 98에 기재된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 112에 기재된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
보다 상세한 에피토프 맵핑 실험 후에, 본 발명의 조성물의 바람직한 항체의 결합 영역이 보다 명확하게 정의되었다.
따라서, 본 개시는 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188)을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 서열번호 181의 아미노산 76 내지 84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 서열번호 181의 아미노산 75 내지 85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시는 내용은 또한 서열번호 181의 아미노산 52 내지 56 (EQDKR - 서열번호 189)을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 서열번호 181의 아미노산 49 내지 63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187)을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시는 또한 서열번호 181의 아미노산 29 내지 41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191)을 포함하거나 이로 구성된 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다 .
본 개시는 또한 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192)을 포함하거나 이로 구성된 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다 .
본 개시는 또한 이들 서열로 구성된 에피토프 또는 이들 에피토프 영역의 조합을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시는 또한 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN)을 포함하거나 이로 구성된 에피토프에 결합하는 항체 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)을 포함하는 조성물을 제공한다.
조작(engineered) 및 변형된(modified) 항체
본 발명의 조성물에 포함된 항체는 변형된 항체를 조작하기 위한 출발 물질로서 본원에 제시된 하나 이상의 VH 및/또는 VL 서열을 갖는 항체를 사용하여 제조 될 수 있으며, 변형된 항체는 출발 항체로부터 변경된 특성을 가질 수 있다. 항체는 가변 영역 (즉, VH 및/또는 VL) 중 하나 또는 둘 다, 예를 들어 하나 이상의 CDR 영역 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 내에서 하나 이상의 잔기를 변형시킴으로써 조작될 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 항체는 예를 들어 항체의 이펙터 기능(들)을 변경하기 위해 불변 영역(들) 내의 잔기를 변형시킴으로써 조작될 수 있다. 수행될 수 있는 가변 영역 조작의 한 유형은 CDR 그래프팅이다. 항체는 6 개의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역 (CDR)에 위치한 아미노산 잔기를 통해 주로 표적 항원과 상호 작용한다. 이러한 이유로, CDR 내의 아미노산 서열은 CDR 외부의 서열보다 개별 항체 사이에서 더 다양하다. CDR 서열은 대부분의 항체-항원 상호 작용을 담당하기 때문에, 상이한 성질을 갖는 상이한 항체의 프레임워크 서열 상에 이식된 특이적 자연 발생 항체로부터의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 구축함으로써 특이적 자연 발생 항체의 성질을 모방하는 재조합 항체를 발현시키는 것이 가능하다 (예를 들어, Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332:323-327; Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522-525; Queen, C. et al., 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:10029-10033; U.S. 특허 No. 5,225,539 to Winter, 및 U.S. Patent Nos. 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 to Queen et al. 참조).
따라서, 본 개시의 다른 실시양태는 서열번호 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR1; 서열번호 15-28로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR2; 서열번호 29-42로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR3;을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 43-56으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 서열; 서열번호 57-70으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 서열; 및 서열번호 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 CDR3 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 모노클로날 항-ActRII 수용체 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 따라서, 이러한 항체는 모노클로날 항체의 VH 및 VL CDR 서열을 함유하지만, 이들 항체와 상이한 프레임워크 서열을 함유할 수 있다.
이러한 프레임워크 서열은 공개 DNA 데이터베이스 또는 생식계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공개된 레퍼런스로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 생식계열 DNA 서열은 "VBase"인간 생식 계열 서열 데이터베이스 (www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase의 인터넷에서 이용 가능) 뿐만 아니라 Kabat, E. A., et al., [supra]; Tomlinson, I. M., et al., 1992 J. fol. Biol. 227:776-798; 및 Cox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836에서도 찾을 수 있다. 본 개시의 항체에 사용하기 위한 프레임워크 서열의 예는 본 개시의 선택된 항체에 의해 사용되는 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 것들, 예를 들어 본 개시의 모노클로날 항체에 의해 사용되는 컨센서스 서열 및/또는 프레임워크 서열이다. VH CDR1, 2 및 3 서열, 및 VL CDR1, 2 및 3 서열은 프레임워크 서열이 유래하는 생식계열 면역 글로불린 유전자에서 발견된 것과 동일한 서열을 갖는 프레임워크 영역 상에 그래프팅될 수 있거나, 또는 CDR 서열은 생식계열 서열과 비교하여 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 프레임워크 영역 상에 그래프팅될 수 있다. 예를 들어, 특정 경우에는 프레임워크 영역 내의 잔기를 돌연변이시켜 항체의 항원 결합 능력을 유지 또는 향상시키는 것이 유리하다는 것이 밝혀졌다 (Queen 등의 U.S. 특허 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 참조).
다른 유형의 가변 영역 변형은 VH 및/또는 VL CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시켜 "친화도 성숙 (affinity maturation)"으로 알려진, 목적 (interest) 항체의 하나 이상의 결합 특성 (예를 들어, 친화도)을 개선시키는 것이다. 부위-지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개 돌연변이유발은 돌연변이를 도입하기 위해 수행될 수 있으며, 항체 결합, 또는 목적하는 다른 기능적 특성에 대한 효과는 본원에 기술되고 실시예에서 제공되는 바와 같이 시험관 내 또는 생체 내 어세이에서 평가될 수 있다. 보전적 (conservative) 변형 (상기 논의된 바와 같이)이 도입될 수 있다. 돌연변이는 아미노산 치환, 첨가 또는 결실일 수 있다. 더욱이, CDR 영역 내에서 전형적으로 1, 2, 3, 4 또는 5 개 이하의 잔기가 변경된다.
따라서, 다른 실시양태에서, 본 개시는 다음을 갖는 중쇄 가변 영역으로 구성되는 단리된 항-ActRII 모노클로날 항체, 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 기능성 단백질을 제공한다:
서열번호 1-14를 갖는 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 1-14와 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 갖는 아미노산 서열로 이루어진 VH CDR1 영역; 서열번호 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 15-28과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 갖는 아미노산 서열로 이루어진 VH CDR2 영역; 서열번호 29-42로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 29-42와 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3 영역; 서열번호 43-56으로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 43-56과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1 영역; 서열번호 52-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열번호 52-70과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 영역; 및 서열번호 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열, 및 서열번호 71-84와 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5 개의 아미노산 치환, 결실 또는 첨가를 갖는 VL CDR3 영역.
카멜리드
항체 (
Camelid
antibodies)
라마 종 (llama species) (Lama paccos, Lama glama 및 Lama vicugna)과 같은 새로운 세계 구성원 (new world members)을 포함하여 낙타 및 단봉낙타과 (Camelus bactrianus 및 Camelus dromaderius)의 구성원에서 얻은 항체 단백질은 인간 대상체의 크기, 구조적 복잡성 및 항원성과 관련하여 특성화되었다. 자연에서 발견되는 이러한 포유 동물 과(family)로부터의 특정 IgG 항체는 경쇄가 결여되어 있고, 따라서 다른 동물로부터의 항체에 대해 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄를 갖는 전형적인 4 쇄 4 급 구조 (four chain quaternary structure)와 구조적으로 구별된다 (WO94/04678 참조).
VHH로 식별된 작은 단일 가변 도메인 카멜리드 항체의 영역은 표적에 대해 높은 친화도를 갖는 작은 단백질을 생성하기 위해 유전적 조작에 의해 얻어질 수 있으며, "카멜리드 나노바디"로 알려진 저분자량 항체 유래 단백질을 생성한다 (US5,759,808; Stijlemans, B. et al., 2004 J Biol Chem 279: 1256-1261; Dumoulin, M. et al., 2003 Nature 424: 783-788; Pleschberger, M. et al. 2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448; Cortez-Retamozo, V. et al. 2002 Int J Cancer 89: 456-62; 및 Lauwereys, M. et al. 1998 EMBO J 17: 3512-3520 참조). 카멜리드 항체 및 항체 단편의 조작된 라이브러리는 예를 들어 Ablynx (Ghent, Belgium)에서 시판되고 있다.
비-인간 기원의 다른 항체와 마찬가지로, 카멜리드 항체의 아미노산 서열은 재조합적으로 변경되어 인간 서열과 더욱 유사한 서열을 얻을 수 있다, 즉 나노바디가 "인간화 (humanized)"될 수 있다. 따라서, 인간에 대한 카멜리드 항체의 자연적 낮은 항원성은 추가로 감소될 수 있다.
카멜리드 나노 바디는 인간 IgG 분자의 약 10 분의 1의 분자량을 가지며, 단백질은 단지 수 나노미터의 물리적 직경을 갖는다. 작은 크기의 하나의 결과 (one consequence of the small size)는 카멜리드 나노바디가 더 큰 항체 단백질에 기능적으로 보이지 않는 항원성 부위에 결합하는 능력이다. 즉, 카멜리드 나노바디는 고전적인 면역학적 기술을 사용하여 시약이 다르게 인코딩된 항원을 검출하는데 유용하고 가능한 치료제로서 유용하다. 따라서, 작은 크기의 또 다른 결과는 카멜리드 나노바디가 표적 단백질의 홈 또는 좁은 틈에서 특정 부위에 결합한 결과 억제할 수 있고, 따라서 고전적 항체보다 고전적 저분자 약물과 더 유사한 용량 (capacity)으로 작용할 수 있다는 것이다.
저분자량 및 컴팩트한 크기는 또한 극도로 열안정성이 뛰어나고 극도의 pH 및 단백질 분해에 안정적이며 항원성이 약한 카멜리드 나노바디를 생성한다. 또 다른 결과는 카멜리드 나노바디가 순환계에서 조직으로 쉽게 이동하고 심지어 혈액 뇌 장벽을 통과하여 신경 조직에 영향을 미치는 장애를 치료할 수 있다는 것이다. 나노바디는 혈액 뇌 장벽을 통한 약물 수송을 추가로 촉진할 수 있다 (US2004/0161738 참조). 인간에 대한 낮은 항원성과 결부된 이러한 특징은 큰 치료 가능성을 나타낸다. 또한, 이들 분자는 대장균과 같은 원핵 세포에서 완전히 발현될 수 있으며 박테리오파지를 갖는 융합 단백질로서 발현되고 기능적이다.
따라서, 일 실시양태에서, 본 개시는 ActRIIB에 대한 높은 친화성도를 갖는 카멜리드 항체 또는 나노바디를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본원의 특정 실시양태에서, 카멜리드 항체 또는 나노바디는 카멜리드 동물에서 자연적으로 생성된다. 즉 다른 항체에 대해 본원에 기재된 기술을 사용하여, ActRIIB 또는 이의 펩티드 단편으로 면역화한 후 카멜리드에 의해 생성된다. 대안적으로, 항-ActRIIB 카멜리드 나노바디는 조작(engineered)된다, 즉, 본원의 실시예에 기재된 바와 같이 ActRIIB를 표적으로 하는 패닝 절차를 사용하여 적절히 돌연변이된 카멜리드 나노바디 단백질을 표시하는 예를 들어 파지 라이브러리로부터 선택함으로써 제조된다. 조작된 나노 바디는 수용체 대상 (recipient subject)에서 45 분 내지 2주의 반감기를 갖도록 유전적으로 조작함으로써 추가로 맞춤화될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 예를 들어 WO94/04678에 기재된 바와 같이, 본 개시 의 인간 항체의 중쇄 또는 경쇄의 CDR 서열을 나노 바디 또는 단일 도메인 항체 프레임워크 서열에 그래프팅함으로써 카멜리드 항체 또는 나노바디가 수득된다.
비-항체
스캐폴드
(non-antibody scaffold)
공지된 비-면역 글로불린 프레임워크 또는 스캐 폴드는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다: 애드넥틴 (피브로넥틴) (Compound Therapeutics, Inc., Waltham, MA), 안키린 (Molecular Partners AG, Zurich, Switzerland), 도메인 항체 (Domantis, Ltd (Cambridge, MA) 및 에이블링스 nv (Ablynx nv) (Bezwijnaarde, Belgium), 리포칼린 (안티칼린) (Pieris Proteolab AG, Freising, Germany), 소형 모듈형 면역-약제 (Trubion Pharmaceuticals Inc., Seattle, WA), 맥시바디 (maxybodies) (Avidia, Inc. (Mountain View, CA)), 단백질 A (Affibody AG, Sweden) 및 아필린 (감마-크리스탈린 또는 유비퀴틴) (Scil Proteins GmbH, Halle, Germany), 단백질 에피토프 모방체 (PPolyphor Ltd, Allschwil, Switzerland).
(i)
피브로넥틴
스캐폴드
피브로넥틴 스캐폴드는 바람직하게는 피브로넥틴 III 형 도메인 (예를 들어, 피브로넥틴 III 형의 10 번째 모듈 (10 Fn3 도메인))을 기본으로 한다.피브로넥틴 III 형 도메인은 7 개의 또는 8 개의 베타 가닥을 가지며, 이는 2 개의 베타 시트 사이에 분포되어 있으며, 이들은 스스로 단백질의 코어를 형성하기 위해 서로에 대해 패킹되고, 베타 가닥을 서로 연결하고 용매에 노출된 루프 (CDR과 유사)를 추가로 함유한다. 베타 시트 샌드위치의 각 엣지(가장자리)에는 적어도 3 개의 이러한 루프가 있으며, 여기서 엣지는 베타 가닥의 방향에 수직인 단백질의 경계이다 (US 6,818,418).
이들 피브로넥틴-기반 스캐 폴드는 면역 글로불린은 아니지만, 전체 폴드는 낙타 및 라마 (llam) IgG에서 전체 항원 인식 단위를 포함하는 가장 작은 기능성 항체 단편, 중쇄의 가변 영역의 그것과 밀접하게 관련되어 있다. 이러한 구조로 인해, 비-면역글로불린 항체는 본질적으로 항체의 특성 및 친화도와 유사한 항원 결합 특성을 모방한다. 이들 스캐폴드는 생체 내에서 항체의 친화도 성숙의 프로세스와 유사한 시험관 내 루프 무작위화 및 셔플링 전략에 사용될 수 있다. 이들 피브로넥틴-계 분자는 표준 클로닝 기술을 사용하여 분자의 루프 영역이 본 개시의 CDR로 대체 될 수있는 스캐폴드로서 사용될 수 있다.
(ii) 안키린 - 분자 파트너
이 기술은 다양한 표적에 결합하기 위해 사용될 수 있는 가변 영역을 보유하기 위한 스캐폴드로서 안키린 유래 반복 모듈을 갖는 단백질을 사용하는 것을 기초로 한다. 안키린 반복 모듈은 2 개의 역평행 α-나선 및 β-턴으로 구성된 33 개의 아미노산 폴리펩티드이다. 가변 영역의 결합은 대부분 리보솜 디스플레이를 사용하여 최적화된다.
(iii) 맥시바디 / 아비머 ( Maxybodies / Avimers ) - 아비디아 ( Avidia )
아비머는 LRP-1과 같은 천연 A-도메인 함유 단백질로부터 유래된다. 이들 도메인은 본질적으로 단백질-단백질 상호 작용을 위해 사용되고 인간에서 250 개 이상의 단백질에서 구조적으로 A-도메인을 기반으로 한다. 아비머는 아미노산 링커를 통해 연결된 다수의 상이한 "A-도메인"단량체 (2-10)로 구성된다. 예를 들어 US2004/0175756; US2005/0053973; US2005/0048512; 및 US2006/0008844에 기재된 방법론을 사용하여 표적 항원에 결합할 수 있는 아비머가 생성될 수 있다.
(vi) 단백질 A -
Affibody
Affibody® 친화성 리간드는 단백질 A의 IgG 결합 도메인 중 하나의 스캐폴드에 기반한 3-나선 다발 (번들)로 구성된 작고 간단한 단백질이다. 단백질 A는 박테리아 스태필로코쿠스 아우레우스의 표면 단백질이다. 이 스캐폴드 도메인은 58 개의 아미노산으로 구성되며,이 중 13 개는 무작위 화되어 다수의 리간드 변이체를 갖는 Affibody® 라이브러리를 생성한다 (예를 들어 US 5,831,012 참조). Affibody® 분자는 항체를 모방하며, 150 kD인 항체의 분자량과 비교하여 분자량은 6 kDa이며, 작은 크기에도 불구하고, Affibody® 분자의 결합 부위는 항체의 결합 부위와 유사하다.
(v)
안티칼린
-
피에리스
(
Anticalins
-
Pieris
)
Anticalins®는 Pieris ProteoLab AG 회사가 개발한 제품이다. 이들은 일반적으로 화학적으로 민감하거나 불용성인 화합물의 생리학적 수송 또는 저장에 관여하는 작고 강력한 단백질의 광범위한 그룹인 리포칼린으로부터 유래된다. 몇 가지 천연 리포칼린은 인간 조직 또는 체액에서 발생한다. 단백질 구조는 면역 글로불린을 연상시키며, 단단한 프레임워크 위에 초가변 루프가 있다. 그러나, 항체 또는 이들의 재조합 단편과 달리, 리포칼린은 160 내지 180 개의 아미노산 잔기를 갖는 단일 폴리펩티드 쇄로 구성되며, 단일 면역글로불린 도메인보다 단지 약간 크다. 바인딩 포켓을 구성하는 4 개의 루프 세트는 뚜렷한 구조적 가소성을 나타내며 다양한 사이드 체인을 견뎌낸다. 따라서, 결합 부위는 높은 친화도 및 특이도로 상이한 형상의 규정된 표적 분자를 인식하기 위해 독점적 공정으로 재성형될 수 있다.
리포칼린 패밀리의 하나의 단백질, Pieris brassicae의 빌린-결합 단백질 (bilin-binding protein, BBP)은 4 개의 루프 세트를 돌연변이시켜 안티칼린을 개발하는데 사용되어 왔다. "안티칼린"을 기술하는 특허 출원의 한 예는 WO1999/16873이다.
(vi)
아필린(Affilin) -
Scil
단백질 (
Scil
Proteins)
AFFILIN ™ 분자는 단백질 및 소분자에 대한 특이적 친화도를 위해 설계된 작은 비-면역 글로불린 단백질이다. 새로운 AFFILIN ™ 분자는 각각 다른 인간 유래 스캐폴드 단백질을 기반으로 하는 두 개의 라이브러리에서 매우 빠르게 선택될 수 있다. AFFILIN ™ 분자는 면역 글로불린 단백질에 대해 어떠한 구조적 상동성을 나타내지 않는다. Scil 단백질은 두 개의 AFFILIN ™ 스캐폴드를 사용한다. 그 중 하나는 감마 결정질, 인간 구조 아이 렌즈 단백질 (human structural eye lens protein), 다른 하나는 "유비퀴틴" 수퍼 패밀리 단백질이다. 두(both) 인간 스캐폴드는 매우 작고, 고온 안정성을 나타내고, pH 변화 및 변성제에 거의 내성이 있다. 이러한 높은 안정성은 주로 단백질의 확장된 베타 시트 구조에 기인한다. 감마 결정 유래 단백질의 예는 WO2001/004144에 기재되어 있고 "유비퀴틴-유사" 단백질의 예는 WO2004/106368에 기재되어 있다.
(vii) 단백질
에피토프
모방체
(
PEM
)
PEM은 단백질-단백질 상호 작용에 관여하는 주요 이차 구조인 단백질의 베타-헤어핀 이차 구조를 모방한 중간 크기의 시클릭 펩티드 유사 분자 (MW 1-2kDa)이다.
항원 결합 도메인을 대체
프레임워크
또는
스캐폴드로
그래프팅
생성된 폴리펩티드가 ActRIIB에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 결합 영역을 포함하는 한, 다양한 항체/면역 글로불린 프레임 워크 또는 스캐 폴드가 사용될 수 있다. 이러한 프레임워크 또는 스캐폴드는 인간 면역 글로불린 또는 이의 단편 (본원의 다른 곳에 개시된 것과 같은)의 5 가지 주요 이디오타입 (idiotypes)을 포함하고, 바람직하게는 인간화 측면 (humanized aspects)을 갖는 다른 동물 종의 면역 글로블린을 포함한다. 카멜리드에서 확인된 것과 같은 단일 중쇄 항체가 이와 관련하여 특히 관심이 있다. 신규 프레임워크, 스캐폴드 및 단편은 당업자에 의해 계속 발견되고 개발된다.
일 측면에서, 본 개시의 조성물은 개시된 항체의 CDR 이 그래프팅될 수 있는 비-면역 글로불린 스캐폴드를 사용하는 비-면역 글로불린계 항체를 포함할 수 있다. 서열번호 181의 표적 단백질에 특이적인 결합 영역 (바람직하게는, 서열번호 182에 나타낸 바와 같이 이의 리간드 결합 도메인)을 포함하는 한, 공지된 또는 퓨처 (future) 비-면역 글로불린 프레임워크 및 스캐폴드가 사용될 수 있다. 이러한 화합물은 본원에서 "표적-특이적 결합 영역을 포함하는 폴리펩티드"로 알려져 있다. 비-면역 글로불린 프레임워크의 예는 아래 섹션에 추가로 설명되어 있다 (카멜리드 항체 및 비-항체 스캐폴드).
프레임워크
또는
Fc
조작
본 개시 내용의 조성물에 포함된 조작된 항체는 VH 및/또는 VL 내의 프레임 워크 잔기에 변형 예를 들어 항체의 특성을 개선하기 위해 변형이 이루어진 것을 포함한다. 전형적으로, 이러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키도록 만들어진다. 예를 들어, 하나의 접근법은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 "역 돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 겪은 항체는 항체가 유래된 생식계열 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 생식계열 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열을 이의 생식계열 구성으로 복귀시키기 위해, 체세포 돌연변이는 예를 들어 부위-지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 생식계열 서열로 "역 돌연변이"될 수 있다. 이러한 "역 돌연변이된" 항체는 또한 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다.
다른 유형의 프레임워크 변형은 프레임워크 영역 내, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내에서 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T-세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적 면역원성을 감소시키는 것과 관련된다. 이러한 접근법은 "탈면역화 (deimmunization)"라고도 하며 US2003/0153043에 더욱 상세히 설명되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 수행된 변형에 추가로 또는 대안으로, 본 개시의 항체는 Fc 영역 내에서 변형을 포함하여, 전형적으로 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원-의존성 세포 독성과 같은 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경시키도록 조작될 수 있다. 또한, 본 개시의 조성물에 포함된 항체는 화학적으로 변형되거나 (예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음), 글리코실화를 변경하도록, 다시 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경하도록 변형될 수 있다. 이들 실시예 각각은 아래에 더 상세히 설명된다. Fc 영역에서 잔기의 넘버링은 Kabat의 EU 인덱스의 넘버링이다.
일 실시양태에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역에서 시스테인 잔기의 수가 변경되도록, 예를 들어 증가 또는 감소되도록 변형된다. 이 접근법은 US5,677,425에 기술되어 있다. CH1의 힌지 영역에서 시스테인 잔기의 수는 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 조립(어셈블리)을 용이하게 하거나 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키도록 변경된다.
다른 실시양태에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 돌연변이되어 항체의 생물학적 반감기를 감소시킨다. 보다 구체적으로, 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 인터페이스 영역으로 도입되어 항체가, 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합과 관련하여, 스타필로코실 (Staphylococcyl) 단백질 A (SpA) 결합을 손상시킨다. 이 접근법은 US 6,165,745에 더 상세하게 설명되어 있다.
다른 실시양태에서, 항체는 그의 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근이 가능하다. 예를 들어, US6,277,375에 기재된 바와 같은 T252L, T254S, T256F 중 하나 이상의 돌연변이가 도입될 수 있다. 또는 생물학적 반감기를 증가시키기 위하여, US5,869,046 및 US6,121,022에 기재된 바와 같이, 항체는 CH1 또는 CL 영역 내에서 IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2 개의 루프로부터 취한 샐비지(salvage) 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 변경될 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, Fc 영역은 항체의 이펙터 기능을 변경시키기 위해 하나 이상의 아미노산 잔기를 다른 아미노산 잔기로 대체하는 것에 의해 변경된다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산을 상이한 아미노산 잔기로 대체하여 항체가 이펙터 리간드에 대해 변경된 친화도를 갖지만 부모 (parent) 항체의 항원-결합 능력을 보유하도록 할 수 있다. 친화도가 변경된 이펙터 리간드는 예를 들어 Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이 접근법은 Winter 등의 US 5,624,821 및 US 5,648,260에 더욱 상세하게 설명되어 있다. 특히, 잔기 234 및 235는 돌연변이될 수 있다.
특히, 이들 돌연변이는 알라닌에 대한 것일 수 있다. 따라서 일 실시 양태에서, 본 개시의 조성물에 포함된 항체는 아미노산 234 및 235 중 하나 또는 둘 다에서 Fc 영역에 돌연변이를 갖는다. 다른 실시양태에서, 아미노산 234 및 235 중 하나 또는 둘다는 알라닌으로 치환될 수 있다. 알라닌에 대한 아미노산 234 및 235 둘 다의 치환은 ADCC 활성을 감소시킨다.
다른 실시양태에서, 기재된 항체의 아미노산 잔기로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은 상이한 아미노산 잔기로 대체되어 항체가 C1q 결합을 변경시키고/시키거나 보체 의존성 세포 독성 (CDC)을 감소시키거나 없앨 수 있다. 이 접근법은 US6,194,551에 더 상세히 설명되어 있다.
다른 실시양태에서, 기재된 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경되어 보체를 고정시키는 항체의 능력을 변경시킨다. 이 접근법은 WO94/29351에 더 기술되어 있다.
또 다른 실시양태에서, 기재된 항체의 Fc 영역은 항체 의존성 세포의 세포 독성 (ADCC)을 매개하는 항체의 능력을 증가시키고/시키거나 하나 이상의 아미노산을 변형시킴으로써 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화도를 증가시키도록 변형된다. 이 접근법은 WO00/42072에 더 기술되어 있다. 더욱이, FcγR1, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 대한 인간 IgG1의 결합 부위가 맵핑되었고 개선된 결합을 갖는 변이체가 기재되어 있다 (Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chen. 276:6591-6604 참조).
또 다른 실시양태에서, 본 개시 내용의 조성물에 포함된 항체의 글리코실화가 변형된다. 예를 들어, 당화 항체 (glycoslated antibody)가 제조될 수 있다 (즉, 항체는 글리코실화 (glycosylation)가 결여되어 있다). 글리코실화는 예를 들어 항원에 대한 항체의 친화도를을 증가시키기 위해 변경 될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은 다음에 의해 달성될 수 있다; 예를 들어, 항체 서열 내에서 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경하는 것. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위를 제거하여 그 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 당화 (aglycosylation)는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수있다. 이러한 접근법은 Co 등의 U.S. 특허 제 5,714,350 호 및 제 6,350,861 호에 더욱 상세하게 기술되어 있다.
추가로 또는 대안적으로, 변형된 유형의 글리코실화를 갖는 항체, 예컨대 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저 푸코실화 항체 또는 증가된 이등분화isecting) GlcNac 구조를 갖는 항체가 사용될 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어 변경된 글리코실화 기구(machinery)를 갖는 숙주 세포에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다.
변경된 글리코실화 기구를 갖는 세포는 당업계에 기술되어 있으며, 개시된 재조합 항체를 발현시켜 변경된 글리코실화를 갖는 항체를 생성하는 숙주 세포로서 사용될 수있다. 예를 들어, Hang 등의 EP 1,176,195는 예를 들어, EP 1,176,195는 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자를 갖는 세포주를 기술하고, 이는 푸코실 트랜스퍼라제를 암호화하여, 그러한 세포주에서 발현된 항체가 저 후코실화 (hypofucosylation)를 나타내도록 한다. 따라서, 일 실시양태에서, 본 개시의 조성물에 포함된 항체는 저 푸코실화 패턴을 나타내는 세포주, 예를 들어 푸코실트랜스퍼라제를 코딩하는 FUT8 유전자의 발현이 결핍된 포유 동물 세포주에서의 재조합 발현에 의해 생성된다. WO03/035835는 Asn (297) - 연결 탄수화물에 푸코스를 부착시키는 능력이 감소되고 또한 숙주 세포에서 발현된 항체의 저 푸코실화를 초래하는 변이 CHO 세포주, Lecl3 세포를 기술한다 (또한 Shields, R.L. et al., 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740 참조). WO99/54342는 조작된 세포주에서 발현된 항체가 발현되도록 당단백질-개질 글리코실 전이효소 (예를 들어, 베타 (1,4)-N 아세틸글루코사미닐 트랜스퍼라제 III (GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주를 기술한다 (et al., 1999 Nat. Biotech. 17 : 176-180 참조). 조작된 세포주에서 발현된 항체가 증가된 이등분화 GlcNac 구조를 나타내어 항체의 ADCC 활성을 증가시키도록 하기 위해 당단백질-개질 글리코실 전이효소 (예를 들어, 베타 (1,4)-N 아세틸글루코사미닐 트랜스퍼라제 III (GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주를 기술한다 (또한 Umana et al., 1999 Nat. Biotech. 17:176-180 참조). 대안적으로, 본 개시의 조성물에 포함된 항체는 포유 동물-유사 글리코실화 패턴을 위해 조작되고 글리코실화 패턴으로서 푸코스가 결여된 항체를 생성할 수 있는 효모 또는 사상진균 (filamentous fungus)에서 생성될 수 있다 (예를 들어 EP1297172B1 참조).
본 개시에 의해 고려되는 본원의 항체의 다른 변형은 페길화 (pegylation)이다. 항체는 예를 들어 항체의 생물학적 (예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시키기 위해 페길화될 수 있다. 항체, 항체 또는 이의 단편을 페길레이트시키기 위해, 하나 이상의 PEG 기(group)가 항체 또는 항체 단편에 부착되는 조건 하에서, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 예컨대 반응성 에스테르 또는 PEG의 알데히드 유도체와 전형적으로 반응한다.
페길화는 반응성 PEG 분자 (또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응에 의해 수행될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 모노 (C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌글리콜-말레이미드 (maleimide)와 같은 다른 단백질을 유도체화하는데 사용된 임의의 형태의 PEG를 포함하는 것으로 의도된다. 특정 실시양태에서, 페길화되는데 사용된 항체는 당화 (aglycosylated) 항체이다. 단백질 페길화 방법은 당업계에 공지되어 있고 개시된 항체에 적용될 수 있다 (예를 들어, EP0154316 및 EP0401384 참조).
본 개시에 의해 고려되는 항체의 다른 변형은 생성된 분자의 반감기를 증가시키기 위해 본 개시의 조성물에 포함된 항체의 적어도 항원-결합 영역의 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민 또는 이의 단편에 대한 접합체 (컨쥬게이트) 또는 단백질 융합체이다 (예를 들어, EP0322094 참조).
또 다른 가능성은 생성된 분자의 반감기를 증가시키기 위해 본 개시의 조성물에 포함된 항체의 항원-결합 영역을 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민과 결합할 수 있는 단백질에 융합시키는 것이다 (예를 들어, EP0486525).
변형된 항체를 조작하는 방법
상기 논의된 바와 같이, 본원에 제시된 CDR 서열, VH 및 VL 서열 또는 전장 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는 항-ActRIIB 항체는 CDR 서열을 전장 중쇄 및/또는 경쇄 서열, VH 및/또는 VL 서열, 또는 이에 부착 된 불변 영역 (들)로 변형시킴으로써 새로운 항-ActRIIB 항체를 생성하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 개시의 다른 측면에서, 본 개시의 조성물에 포함된 항-ActRIIB 항체의 구조적 특징은 예를 들어 인간 ActRIIB에의 결합과 같은 본 개시의 조성물에 포함된 항체의 적어도 하나의 기능적 특성을 보유하지만, ActRIIB의 적어도 하나의 기능적 특성을 억제 (예를 들어, Smad 활성화 억제)하는 구조적으로 관련된 항-ActRIIB 항체를 생성하는데 사용된다.
예를 들어, 본 개시의 조성물에 포함된 항체의 하나 이상의 CDR 영역 또는 이의 돌연변이는 공지된 프레임워크 영역 및/또는 다른 CDR과 재조합적으로 조합되어, 상기에서 논의된 바와 같이, 본 개시의 조성물 포함된 추가의 재조합적으로-조작된, 본 개시의 조성물 포함된 항-ActRIIB 항체를 생성할 수 있다. 다른 유형의 변형에는 이전 섹션에서 설명한 것들이 포함된다. 조작 방법의 출발 물질은 본원에 제공된 하나 이상의 VH 및/또는 VL 서열, 또는 이의 하나 이상의 CDR 영역이다. 조작된 항체를 생성하기 위해, 본원에 제공된 하나 이상의 VH 및/또는 VL 서열 또는 이의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는 항체를 실제로 제조 (즉, 단백질로 잘현)할 필요는 없다. 오히려, 서열(들)에 포함된 정보는 출발 물질로서 사용되어 원래 (original) 서열(들)로부터 유래된 "제 2 세대" 서열(들)을 생성한 후 "제 2 세대"서열(들)이 단백질로서 제조되고 발현된다.
변형된 항체 서열은 또한 서열번호 29-42 및 서열번호 71-84로 이루어진 군 중에서 선택된 고정 (fixed) CDR3 서열, 또는 US2005/0255552에 기재된 최소 필수 결합 결정 인자 및 CDR1 및 CDR2 서열에 대한 다양성을 갖는 항체 라이브러리를 스크리닝함으로써 제조될 수 있다.
표준 분자 생물학 기술을 사용하여 변경된 항체 서열을 제조하고 발현시킬 수 있다. 변경된 항체 서열(들)에 의해 인코딩된 항체는 본원에 기재된 항-ActRIIB 항체의 기능적 특성 중 하나, 일부 또는 전부를 보유하는 것이며, 이의 기능적 특성은 인간 ActRIIB에 특이적으로 결합하고 Smad 활성화의 억제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
변경된 항체는 상기 논의된 기능적 특성 중 하나 또는 그 이상, 둘 또는 그이상, 또는 3 개 또는 그 이상을 나타낼 수 있다.
변형된 항체의 기능적 특성은 당업계에서 이용가능하거나 및/또는 본원에 기재된 표준 어세이, 예를 들어 실시예에 기재된 표준 어세이 (예를 들어, ELISA)를 사용하여 평가될 수 있다.
돌연변이는 항-ActRIIB 항체 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 또는 선택적으로 도입될 수 있고, 생성되는 변형된 항-ActRIIB 항체는 본원에 기재된 결합 활성 및/또는 다른 기능적 특성에 대해 스크리닝될 수 있다. 돌연변이 방법이 관련 기술분야에 기술되어 있다. 예를 들어, WO02/092780은 포화 돌연변이유발, 합성 결찰 어셈블리 또는 이들의 조합을 사용하여 항체 돌연변이를 생성 및 스크리닝하는 방법을 기술한다. 대안적으로, WO03/074679는 컴퓨터 스크리닝 방법을 사용하여 항체의 물리 화학적 특성을 최적화하는 방법을 기술한다.
본 개시(발명)의 조성물에 포함된 항체를 코딩하는 핵산 분자
포유 동물 세포에서의 발현에 최적화된 전장 경쇄 뉴클레오티드 서열의 예는 서열번호 161-165 및 171-175에 제시되어 있다. 포유 동물 세포에서의 발현에 최적화된 전장 중쇄 뉴클레오티드 서열의 예는 서열번호 166-170 및 176-180에 제시되어 있다.
핵산은 전체 (whole) 세포, 세포 용해물에 존재할 수 있거나, 부분적으로 정제되거나 실질적으로 순수한 형태의 핵산일 수 있다.
핵산은, 알칼리/SDS 처리, CsCl 밴딩, 컬럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 기타 당업계에 공지된 다른 기술을 포함하는 표준 기술에 의해, 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포 핵산 또는 단백질로부터 정제될 때 단리되거나 ("isolated"), 실질적으로 순수하게 렌더링된다 ("rendered substantially pure"). F. Ausubel, et al., ed. 1987 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York 참조. 핵산은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 얻을 수 있다. 하이브리도마 (예를 들어, 하기 추가로 기재된 인간 면역 글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 하이브리도마에 의해 만들어진 항체의 경쇄 및 중쇄를 인코딩하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 수득될 수 있다. 면역 글로불린 유전자 라이브러리 (예를 들어, 파지 디스플레이 기술을 사용하여)로부터 수득된 항체의 경우, 항체를 인코딩하는 핵산은 라이브러리의 구성원 인 다양한 파지 클론으로부터 리커버(recover)될 수 있다.
VH 및 VL 세그먼트를 인코딩하는 DNA 단편이 수득되면, 이러한 DNA 단편은 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작되어, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환시킬 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH- 인코딩 DNA 단편은 다른 DNA 분자, 또는 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 다른 단백질을 인코딩하는 단편에 작동 가능하게 연결된다. 이와 관련하여 사용되는 용어 "작동 가능하게 연결된 (operatively linked)"은 2 개의 DNA 단편이 기능적인 방식으로 결합되는 것, 예를 들어 2 개의 DNA 단편에 의해 인코딩된 아미노산 서열이 프레임 내에 유지되거나 또는 단백질이 원하는 프로모터의 제어 하에 발현되도록 하는 것을 의미하는 것으로 의도된다.
VH 영역을 인코딩하는 단리된 DNA는 VH-인코딩 DNA를 중쇄 불변 영역 (CH1, CH2 및 CH3)을 인코딩하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당 업계에 공지되어 있고 (예를 들어, Kabat, E. A., et al. [supra]) 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1 이소 타입 중에서 선택될 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-인코딩 DNA는 중쇄 CH1 불변 영역만을 인코딩하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 인코딩하는 단리된 DNA는 VL-인코딩 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 인코딩하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자 (및 Fab 경쇄 유전자로)로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있고 (예를 들어, Kabat, E. A., et al. [supra] 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 (kappa) 또는 람다 (lambda) 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH 및 VL 서열이 가요성 링커에 의해 연결된 VL 및 VH 영역을 갖는 연속 단일-쇄 단백질로서 발현될 수 있도록, VH- 및 VL- 코딩 DNA 단편은 가요성 링커를 인코딩하는, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser) 3을 인코딩하는 다른 단편에 작동 가능하게 연결된다 (예, Bird et al., 1988 Science 242:423-426; Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., 1990 Nature 348:552-554 참조) .
모노클로날
항체의 생성
모노클로날 항체 (mAbs)는 종래의 모노클로날 항체 방법론, 예를 들어 Kohler 및lstein의 표준 체세포 혼성화 기술 (1975 Nature 256 : 495)을 비롯한 다양한 기술에 의해 생성될 수 있다. 모노클로날 항체를 생산하기 위한 많은 기술이, 예를 들어 B 림프구의 바이러스성 또는 발암성 형질 전환에 사용될 수 있다.
하이브리도마를 제조하기 위한 동물 시스템은 뮤린 (murine) 시스템이다. 마우스에서의 하이브리도마 생산은 잘 확립된 절차이다. 융합을 위한 면역화된 비장 세포의 분리를 위한 면역화 프로토콜 및 기술은 당업계에 공지되어있다. 융합 파트너 (예 : 뮤린 골수종 세포) 및 융합 절차도 공지되어 있다.
본 발명의 조성물에 포함된 키메릭 항체 또는 인간화 항체는, 상술 한 바와 같이, 뮤린(설치류)의 모노클로날 항체의 서열에 기초할 수 있다.
중쇄 및 경쇄 면역 글로불린을 인코딩하는 DNA는 목적하는 뮤린 하이브리도마 (the murine hybridoma of interest)로부터 수득될 수 있고, 표준 생물학 기술을 이용하여 비(non)-뮤린 (예 : 인간) 면역 글로불린 서열이 포함되도록 조작될 수 있다. 예를 들어, 키메릭 항체를 생성하기 위해, 뮤린 가변 영역은 당업계에 공지 된 방법을 이용하여 인간의 불변 영역에 연결될 수 있다 (예를 들어 US4,816,567 참조). 인간화 (humanized) 항체를 생성하기 위해, 뮤린 CDR 영역은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 인간의 프레임워크 내에 삽입될 수 있다 (예를 들어 U.S. 특허 번호 5225539; 5530101; 5585089; 5693762 및 6180370 참조).
특정 실시양태에서, 본 개시의 조성물에 포함된 항체는 인간 모노클로날 항체이다. ActRIIB에 대해 디렉팅된 이러한 인간 모노클로날 항체는 마우스 시스템 보다는 인간 면역 시스템의 일부를 보유하는 트랜스제닉 또는 트랜스염색체 (transchromosomic) 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 이들 트랜스제닉 및 트랜스염색체 마우스는 본원에서 각각 HuMAb 마우스 및 KM 마우스로 지칭되는 마우스를 포함하고, 본 명세서에서 총칭하여 "인간 Ig 마우스"로 지칭된다.
HuMAb 마우스 ® (Medarex, Inc.)는 재배열되지 않은 인간 중쇄 (μ 및 γ) 및 ĸ 경쇄 면역 글로불린 서열을 인코딩하는 인간 면역 글로불린 유전자 미니로시 (miniloci)와 내인성 μ 및 ĸ 쇄 유전자좌(loci)를 비활성화시키는 표적화된 돌연변이를 포함한다 (예 : Lonberg, et al., 1994 Nature 368(6474): 856-859) 참조). 따라서, 마우스는 마우스 IgM 또는 ĸ의 감소된 발현을 나타내며, 면역에 반응하여, 도입된 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스진 (transgene)은 고친화도 인간 IgGĸ 모노클로날을 생성하기 위하여 클래스 스위칭 및 체세포 돌연변이를 겪는다 (Lonberg, N. et al., 1994 [supra]; reviewed in Lonberg, N., 1994 Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D., 1995 Intern. Rev. Immunol.13: 65-93, 및 Harding, F. and Lonberg, N., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764:536-546). .
HuMAn 마우스의 제조 및 사용, 및 이러한 마우스에 의해 운반되는 게놈 변형은 Taylor, L. et al., 1992 Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et al., 1993 International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:3720-3724; Choi et al., 1993 Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al., 1993 EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al., 1994 J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al., 1994 International Immunology 579-591; 및 Fishwild, D. et al., 1996 Nature Biotechnology 14: 845-851에 추가로 기재되어 있으며, 이들의 내용은 그 전문이 본원에 구체적으로 참조로서 포함된다. 추가로, U.S. 특허 번호 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,789,650; 5,877,397; 5,661,016; 5,814,318; 5,874,299; 5,770,429; 및5,545,807; 및 WO92/103918, WO93/12227, WO94/25585, WO97/113852, WO98/24884; WO99/45962; 및 WO01/14424를 참조한다.
다른 실시양태에서, 본 개시의 조성물에 포함된 인간 항체는 트랜스진 및 트랜스염색체 상에서 인간 면역 글로불린 서열을 보유하는 마우스, 예컨대 인간 중쇄 트랜스진 및 인간 경쇄 트랜스 염색체를 보유하는 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 본원에서 "KM 마우스"로 지칭되는 이러한 마우스는 WO02/43478에 상세하게 기술되어 있다.
또한, 인간 면역 글로불린 유전자를 발현하는 대안의 트랜스제닉 동물 시스템이 당업계에서 이용 가능하고 본 개시의 항-ActRIIB 항체를 발생시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 제노마우스 (Xenomouse) (Abgenix, Inc.)로 지칭되는 대안적인 트랜스제닉 시스템이 사용될 수 있다. 이러한 마우스는 예를 들어 U.S 특허 번호 5,939,598; 6,075,181; 6,114,598; 6,150,584 및 6,162,963에 기재되어 있다.
또한, 인간 면역 글로불린 유전자를 발현하는 대안적인 트랜스염색체 동물 시스템이 당업계에서 이용 가능하고 본 개시의 항-ActRIIB 항체를 생성(발생)시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, "TC 마우스"로 지칭되는 인간 중쇄 트랜스염색체 및 인간 경쇄 트랜 염색체 둘 다를 보유하는 마우스가 사용될 수 있으며; 이러한 마우스는 Tomizuka et al., 2000 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727에 기재되어 있다. 또한, 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스염색체를 가지고 있는 소 (cow)가 당업계에 기술되어 있고 (Kuroiwa et al., 2002 Nature Biotechnology 20:889-894) 항 ActRIIB 항체를 생성시키는데 사용될 수 있다.
본 개시의 조성물에 포함된 인간 재조합 항체는 또한 인간 면역 글로불린 유전자의 라이브러리를 스크리닝하기 위한 파지 디스플레이 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 인간 항체를 단리하기 위한 이러한 파지 디스플레이 방법은 당업계에 확립되어 있거나 하기 실시예에 기재되어 있다. 예를 들어 다음을 참조한다: U.S. 특허 번호 5,223,409; 5,403,484; 5,571,698; 5,427,908; 5,580,717; 5,969,108; 6,172,197; 5,885,793; 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915 및 6,593,081.
본 개시의 조성물에 포함된 인간 모노클로날 항체는 또한 면역화시 인간 항체 반응이 생성될 수 있도록 인간 면역 세포가 재구성된 SCID 마우스를 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 마우스는 예를 들어 U.S. 특허 번호 5,476,996 및 5,698,767에 기재되어 있다.
인간
모노클로날
항체를 생산하는
하이브리도마의
생성
본 개시 내용의 조성물에 포함된 인간 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리 도마를 생성하기 위해, 면역화된 마우스로부터의 비장 세포 및/또는 림프절 세포를 단리하고 마우스 골수종 세포주와 같은 적절한 불멸화 세포주에 융합시킬 수 있다. 생성된 하이브리도마는 항원-특이적 항체의 생산에 대해 스크리닝될 수 있다.
예를 들어, 면역화된 마우스로부터의 비장 림프구의 단일 세포 현탁액은 50 % PEG와 함께 P3X63-Ag8.653 비분비 (nonsecreting) 마우스 골수종 세포 (ATCC, CRL 1580) 수의 1/6에 융합될 수 있다. 세포를 플랫 바텀 마이크로타이터 플레이트에 대략 2 x 145로 플레이팅한 후, 20 % 태아 클론 혈청, 18 % "653" 조건 배지, 5 % 오리겐 (origen) (IGEN), 4mM L-글루타민, 1mM 피루브산 나트륨, 5mM HEPES, 0:055 mM 2-머캅토에탄올, 50 유닛/ml 페니실린, 50 mg/ml 스트렙토마이신, 50 mg/ml 젠타 마이신 및 1X HAT (Sigma; HAT는 융합 24 시간 후에 첨가됨)를 함유하는 선택적 배지에서 2주 인큐베이션하였다.
대략 2 주 후, HAT가 HT로 대체된 배지에서 세포를 배양할 수 있다. 이어서, 각각의 웰은 인간 모노클로날 IgM 및 IgG 항체에 대해 ELISA로 스크리닝될 수 있다. 광범위한 하이브리도마 성장이 발생하면, 배지는 보통 10-14 일 후에 관찰될 수 있다. 항체 분비 하이브리도마를 리플레이팅하고 다시 스크리닝할 수 있으며, 여전히 인간 IgG에 대해 양성인 경우, 제한 희석 (limiting dilution)에 의해 모노클로날 항체를 2 회 이상 서브클로닝할 수 있다. 이어서, 특성화 (characterization)를 위해 조직 배양 배지에서 소량의 항체를 생성하기 위하여, 안정적인 서브클론을 시험관 내에서 배양할 수 있다. 인간 모노클로날 항체를 정제하기 위해, 선택된 하이브리도마는 모노클로날 항체 정제를 위해 2-리터 스피너-플라스크에서 성장될 수 있다. 단백질 A-세파로오스 (Pharmacia)로 친화성 크로마토그래피 전에 상청액 (supernatant)은 여과되고 농축될 수 있다. 용리된 IgG는 순도를 보장하기 위하여 겔 전기영동 및 고성능 액체 크로마토그래피로 확인될 수 있다. 완충 용액은 PBS로 교환될 수 있고, 농도는 1.43 소멸 계수를 사용하여 OD280에 의해 결정될 수 있다. 모노클로날 항체는 분취되고 -80 ℃에서 저장될 수 있다.
모노클로날
항체를 생산하는
트랜스펙토마
(
transfectoma
) 생성
본 개시의 조성물에 포함된 항체는 또한, 예를 들어 당업계에 공지된 재조합 DNA 기술 및 유전자 형질감염 방법의 조합을 사용하여, 숙주 세포 트랜스펙토마에서 생성될 수 있다 (예 : Morrison, S. (1985) Science 229 : 1202). 예를 들어, 항체 또는 이의 항체 단편을 발현하기 위해, 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA는 표준 분자 생물학 기술 (예를 들어, 목적하는 항체를 발현하는 하이브리도마를 사용한 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝)에 의해 수득될 수 있고, 유전자는 전사 및 번역 제어 서열에 작동 가능하게 연결되도록 DNA를 발현 벡터에 삽입될 수 있다. 이와 관련하여, 용어 "작동 가능하게 연결된"은 벡터 내에서 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 의도된 기능을 제공하도록 항체 유전자가 벡터에 결찰되는 것을 의미하는 것으로 의도된다. 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용된 발현 숙주 세포와 호환되도록 선택된다.항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터에 삽입될 수 있거나,보다 전형적으로, 두 유전자는 동일한 발현 벡터에 삽입된다. 항체 유전자는 표준 방법에 의해 발현 벡터에 삽입된다 (예를 들어, 항체 유전자 단편 및 벡터 상의 상보적 제한 부위의 결찰 또는 제한 부위가 없는 경우 블런트 말단 결찰 (blunt end ligation)). 본원에 기재된 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 VH 세그먼트는 벡터 내의 CH 세그먼트(들)에 작동 가능하게 연결되고 VL 세그먼트는 벡터 내의 CL 세그먼트에 작동 가능하게 연결되도록 원하는 이소타입의 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 인코딩한 발현 벡터에 삽입함으로써 임의의 항체 이소 타입의 전장 항체 유전자를 생성하는데 사용될 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 사슬의 분비를 용이하게 하는 신호 펩티드를 인코딩할 수 있다. 항체 사슬 유전자는 신호 펩티드가 프레임에서 항체 사슬 유전자의 아미노 말단에 연결되도록 벡터 내로 클로닝될 수있다. 신호 펩티드는 면역 글로불린 신호 펩티드 또는 이종 신호 펩티드 (즉, 비-면역 글로불린 단백질로부터의 신호 펩티드)일 수 있다.
항체 사슬 유전자 이외에도, 본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 항체 사슬 유전자의 발현을 제어하는 조절 서열을 보유한다. "조절 서열 (regulatory sequence)"이라는 용어는 프로모터, 인핸서 및 항체 사슬 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 다른 발현 조절 요소 (예를 들어, 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 조절 서열은 예를 들어 Goeddel에 기재되어 있 다 (Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 1990). 조절 서열의 선택을 포함하여, 발현 벡터의 디자인은 형질 전환될 숙주 세포의 선택, 원하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 인자에 의존할 수 있다는 것을 당업자는 이해할 것이다. 포유 동물 숙주 세포 발현에 대한 조절 서열은 포유 동물 세포에서 고수준의 단백질 발현을 지시하는 바이러스 요소, 예컨대 사이토메갈로바이러스 (cytomegalovirus, CMV), 시미안 바이러스 40 (Simian Virus 40, SV40), 아데노바이러스 (예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터) (AdMLP)) 및 폴리오마 (polyoma)를 포함한다. 대안적으로, 비바이러스 조절 서열, 예컨대 유비퀴틴 프로모터 또는 P-글로빈 프로모터가 사용될 수 있다. 또한, 조절 요소는 SV40 초기 프로모터 및 인간 T 세포 백혈병 바이러스 타입 1의 긴말단반복순서 (long terminal repeat)로부터의 서열을 포함하는 상이한 공급원, 예를 들어 SRa 프로모터 시스템으로부터의 서열로 구성된다 (Takebe, Y. et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8:466-472).
항체 사슬 유전자 및 조절 서열 이외에도, 재조합 발현 벡터는 추가의 서열, 예를 들어 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열 (예를 들어, 복제 기점) 및 선별 (selectable) 마커 유전자를 보유할 수 있다. 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선별을 용이하게 한다 (예를 들어, U.S. 특허 번호 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 참조). 예를 들어, 전형적으로 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 약물, 예컨대 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다. 선별 마커 유전자는 다이하이드로폴레이트 리덕타아제 (dihydrofolate reductase, DHFR) 유전자 (메토트렉세이트 선택/증폭을 갖는 dhfr-호스트 세포에 사용하기 위한) 및 네오 (neo) 유전자 (G418 선택을 위한)를 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 발현 벡터(들)는 표준 기술에 의해 숙주 세포로 형질감염된다. 용어 "형질감염 (transfection)"의 다양한 형태는 외인성 DNA를 원핵 생물 또는 진핵 생물 숙주 세포 내로의 도입에 일반적으로 사용되는 광범위한 기술, 예를 들어 전기천공, 인산 칼슘 침전, DEAE-덱스트란 트랜스펙션 등을 포함하도록 의도된다. 이론적으로는 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 본 개시의 항체를 발현하는 것이 가능하다. 진핵 세포, 특히 포유 동물 숙주 세포에서의 항체의 발현은 이러한 진핵 세포, 특히 포유 동물 세포가 원핵 세포보다 적절하게 접히고 (folded) 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비할 가능성이 높기 때문에 논의된다. 항체 유전자의 원핵 생물 발현은 고수율의 활성 항체의 생산에 효과적이지 않은 것으로 보고되었다 (Boss, M. A. 및 Wood, C. R., 1985 Immunology Today 6:12-13).
본 개시의 조성물에 포함된 재조합 항체를 발현시키기 위한 포유 동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (Chinese Hamster Ovary, CHO 세포) (dhfr-CHO 세포 포함, Urlaub 및 Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220 used with a DH FR selectable marker, e.g. as described in R.J. Kaufman 및 P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621에 기재됨). NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 일 실시양태에서, 숙주 세포는 CHO K1PD 세포이다. 특히, NSO 골수종 세포와 함께 사용하기 위한 다른 발현 시스템은 WO87/04462, WO89/01036 및 EP 338,841에 제시된 GS 유전자 발현 시스템이다. 본 개시의 조성물에 포함된 재조합 항체를 발현시키기 위한 포유 동물 숙주 세포는, 예를 들어 US6,946,292B2에 기재된 바와 같이, FUT8 유전자 발현이 결핍된 포유 동물 세포주를 포함한다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터가 포유 동물 숙주 세포 내로 도입 될 때, 숙주 세포에서 항체의 발현 또는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지 내로의 항체의 분비를 허용하기에 충분한 시간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 항체가 생성된다. 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 항체를 회수할 수 있다.
면역 접합체 (
Immunoconjugates
)
다른 측면에서, 본 개시는 치료 모이어티, 예컨대 세포 독소, 약물 (예를 들어, 면역 억제제) 또는 방사선 독소에 접합된 항-ActRIIB 항체 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 특징으로 한다. 이러한 접합체는 본원에서 "면역 접합체"로 지칭된다. 하나 이상의 세포 독소를 포함하는 면역 접합체는 "면역 독소 (immunotoxins)"로 지칭된다. 세포 독소 또는 세포 독성제는 세포에 유해한 (예를 들어, 사멸) 임의의 제제를 포함한다.
세포 독소는 당업계에서 이용 가능한 링커 기술을 사용하여 본 개시의 항체에 접합될 수 있다. 세포 독소를 항체에 접합시키는데 사용된 링커 유형의 예는 히드라존, 티오에테르, 에스테르, 이황화물 및 펩티드 함유 링커를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 리소좀 구획 내에서 낮은 pH에 의한 절단에 취약하거나, 카텝신과 같은 종양 조직에서 우선적으로 발현되는 프로테아제 (예를 들어, 카텝신 B, C, D)와 같은 링커가 선택될 수 있다.
치료제를 항체에 접합시키는 세포 독소, 링커 및 방법의 유형에 대한 자세한 내용은 Saito, G. et al., 2003 Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199-215; Trail, P.A. et al., 2003 Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Payne, G. 2003 Cancer Cell 3:207-212; Allen, T.M., 2002 Nat. Rev. Cancer 2:750-763; Pastan, I. and Kreitman, R. J., 2002 Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091; Senter, P.D. and Springer, C.J., 2001 Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264를 참조한다.
본 개시의 조성물에 포함된 항체는 또한 방사성 동위 원소로도 지칭되는 세포 독성 방사성 약제를 생성하기 위해 방사성 동위 원소에 접합될 수 있다. 진단적으로 또는 치료적으로 사용하기 위해 항체에 접합될 수있는 방사성 동위 원소의 예는 요오드 131, 인듐 111, 이트륨 90 및 루테튬 177을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 방사성 면역 접합체를 제조하는 방법은 관련 기술 분야에 확립되어 있다. ZevalinTM (DEC Pharmaceuticals) 및 BexxarTM (Corixa Pharmaceuticals)를 포함하는 방사성 면역 접합체의 예는 시판되고 있으며, 유사한 방법을 사용하여 본 발명의 항체를 사용하여 방사성 면역 접합체를 제조할 수 있다.
본 개시의 조성물에 포함된 항체 접합체는 주어진 생물학적 반응을 변형시키기 위해 사용될 수 있으며, 약물 모이어티는 고전적인 화학 치료제로 제한되는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 약물 모이어티는 원하는 생물학적 활성을 갖는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 이러한 단백질은 예를 들어 효소 활성 독소 또는 이의 활성 단편, 예컨대 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소 또는 디프테리아 독소; 종양 괴사 인자 또는 인터페론-γ와 같은 단백질; 또는, 예를 들어, 림포카인, 인터루킨-1 ("IL-1"), 인터루킨-2 ("IL-2"), 인터루킨-6 ("IL-6"), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 ("GM-CSF"), 과립구 콜로니 자극 인자 ("G-CSF") 또는 다른 성장 인자를 포함할 수 있다.
이러한 치료 모이어티를 항체에 접합시키는 기술은 잘 알려져 있으며, 예를 들어. Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), 및 Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Inmunol. Rev., 62:119-58 (1982)를 참조한다.
이중특이적
(
bispecific
) 분자
다른 측면에서, 본 개시는, 본 개시의 항-ActRIIB 항체 또는 이의 단편을 포함하는 이중특이적 또는 다중특이적 분자를 포함하는 조성물을 특징으로 한다. 본 개시의 조성물에 포함된 항체, 또는 이의 항원-결합 영역은 적어도 2 개의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자에 결합하는 이중특이적 분자를 생성하기 위하여 유도체화되거나 다른 기능성 분자, 예를 들어 다른 펩티드 또는 단백질 (예를 들어, 수용체에 대한 다른 항체 또는 리간드)에 연결될 수 있다. 본 개시의 항체는 실제로 2 개 이상의 상이한 결합 부위 및/또는 표적 분자에 결합하는 다중-특이적 분자를 생성하기 위해 유도체화되거나 하나 이상의 다른 기능성 분자에 연결될 수 있고; 이러한 다중-특이적 분자는 또한 본원에 사용된 용어 "이중특이적 분자 (bispecific molecule)"에 의해 포함되도록 의도된다. 본 개시의 이중특이적 분자를 생성하기 위해, 본 개시의 항체는 이중특이적 분자가 생성되도록 하나 이상의 다른 결합 분자, 예를 들어 다른 항체, 항체 단편, 펩티드 또는 결합 모방체에 기능적으로 연결 (예를 들어, 화학적 결합, 유전자 융합, 비공유 회합에 의해 연결)될 수 있다.
따라서, 본 개시는 ActRIIB에 대한 적어도 하나의 제 1 결합 특이성 및 제 2 표적 에피토프에 대한 제 2 결합 특이성을 포함하는 이중특이적 분자를 포함하는 조성물을 포함한다. 예를 들어, 제 2 표적 에피토프는 제 1 표적 에피토프와 상이한 ActRIIB의 다른 에피토프일 수 있다.
또한, 이중특이적 분자가 다중특이적인 조성물의 경우, 분자는 제 1 및 제 2 표적 에피토프 이외에 제 3 결합 특이성을 추가로 포함할 수 있다.
일 실시양태에서, 개시된 조성물의 이중특이적 분자는 결합 특이성으로서 적어도 하나의 항체 또는 그의 항체 단편, 예를 들어 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 단일 사슬 Fv을 포함한다. 항체는 또한 경쇄 또는 중쇄 이합체, 또는 이의 임의의 최소 단편, 예를 들어 Fv 또는 Lavner et al. US4,946,778에 기재된 단일 사슬 컨스트럭일 수 있으며, 그 내용은 명백히 참조로 포함된다.
이중특이적 분자에 사용될 수 있는 다른 항체는 뮤린, 키메릭 및 인간화(인간화된) 모노클로날 항체이다.
본 개시의 조성물에 포함된 이중특이적 분자는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 구성성분 결합 특이성을 컨쥬게이션함으로써 제조될 수 있다. 예를 들어, 이중특이성 분자의 각각의 결합 특이성은 개별적으로 생성된 후 서로 접합될 수 있다. 결합 특이성이 단백질 또는 펩티드인 경우, 공유 접합을 위해 다양한 커플링제 또는 가교제가 사용될 수 있다.
가교제의 예는 단백질 A, 카르보디이미드, N-숙신이미딜-S-아세틸-티오아세테이트 (SATA), 5,5'-디티오비스(2-니트로벤조산) (DTNB), o-페닐렌디말레이미드 (oPDM), N-숙신 이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 (SPDP) 및 설포석신이미딜 4-(N-말레이 미도메틸) 시클로헥산-1-카르복실레이트 (설포-SMCC)을 포함한다 (예를 들어 Karpovsky et al., 1984 J. Exp. Med. 160:1686; Liu, MA et al., 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648 참조). 다른 방법으로는 Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132; Brennan et al., 1985 Science 229:81-83), 및 Glennie et al., 1987 J. Immunol. 139: 2367-2375에 기재된 방법이 있다. 컨쥬게이팅제는 SATA 및 설포-SMCC 이고, 둘 다 Pierce Chemical Co. (Rockford, IL)로부터 입수 가능하다.
결합 특이성이 항체인 경우, 이들은 2 개의 중쇄의 C-말단 힌지 영역의 설프 하이드릴 결합 (sulfhydryl bonding)에 의해 접합될 수 있다. 특히 실시양태에서, 힌지 영역은 접합 전에 홀수의 설프하이드릴 잔기, 예를 들어 1 개를 함유하도록 변형된다.
대안적으로, 두 결합 특이성은 동일한 벡터에서 인코딩되고 동일한 숙주 세포에서 발현되고 조립될 수 있다. 이 방법은 이중특이적 분자가 mAb x mAb, mAb x Fab, Fab x F(ab')2 또는 리간드 x Fab 융합 단백질인 경우에 특히 유용하다. 본 개시의 조성물에 포함된 이중특이적 분자는 하나의 단일 사슬 항체 및 결합 결정 인자를 포함하는 단일 사슬 분자, 또는 2 개의 결합 결정 인자를 포함하는 단일 사슬 이중특이적 분자일 수 있다. 이중특이적 분자는 적어도 2 개의 단일 사슬 분자를 포함할 수 있다. 이중특이적 분자의 제조방법은 예를 들어 U.S 특허 번호 5,260,203; 5,455,030; 4,881,175; 5,132,405; 5,091,513; 5,476,786; 5,013,653; 5,258,498; 및 5,482,858에 기재되어 있다.
이중특이적 분자의 이들의 특정 표적에 대한 결합은 예를 들어 효소-결합 면역 흡착 어세이 (ELISA), 방사선 면역 어세이 (RIA), FACS 어세이, 바이오어세이 (예 : 성장 억제) 또는 웨스턴 블롯 어세이에 의해 확인될 수 있다. 이들 어세이 각각은 일반적으로 목적하는 복합체 (the complex of interest)에 특이적인 표지된 시약 (예를 들어, 항체)을 사용함으로써 특히 목적하는 단백질-항체 복합체의 존재를 검출한다.
다가 항체
다른 측면에서, 본 발명은 ActRIIB에 결합하는 개시된 항체의 적어도 두 개의 동일하거나 상이한 항원-결합 부분을 포함하는 다가 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일 실시양태에서, 다가 항체는 항체의 적어도 2, 3 또는 4 개의 항원-결합 부분을 제공한다. 항원-결합 부분은 단백질 융합 또는 공유 또는 비공유 연결을 통해 함께 연결될 수 있다.
대안적으로, 이중특이적 분자에 대한 연결 방법이 기술되었다..
다양한 실시양태에서, 조성물은 1가, 2가 또는 다가 (예를 들어, 1, 2 또는 다수의 항원에 결합할 수 있음) 및/또는 단일-특이적, 이중-특이적, 또는 다중-특이적 (예를 들어, 하나, 둘 또는 여러 다른 항원에 결합할 수 있는 영역을 가짐)일 수 있다. 조성물은 이들의 임의의 조합, 예를 들어 1가 및 단일-특이적 (하나의 항원 또는 에피토프에 결합하는 하나의 결합 영역을 가짐); 또는 2가 및 이중-특이적 (각각 상이한 에피토프 또는 항원에 결합하는 2 개의 결합 영역을 가짐); 또는 2가 및 단일-특이적 (각각 동일한 에피토프 또는 항원에 결합하는 2 개의 결합 영역을 가짐); 또는 다가 및 단일-특이적 (모두 동일한 항원 또는 에피토프에 결합하는 몇몇 결합 영역을 가짐); 또는 다가 및 다중-특이적 (여러 상이한 항원 또는 에피토프에 결합하는 여러 결합 영역을 가짐)일 수 있다.
약학 조성물
다른 측면에서, 본 개시는 조성물, 예를 들어 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화된 상기 기재된 항체/모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 부분(들) 중 하나 또는 조합을 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 기재된 항체, 또는 면역 접합체 또는 이중 특이적 분자의 하나 또는 조합 (예를 들어, 둘 또는 그 이상이 상이한)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 약학 조성물은 표적 항원상의 상이한 에피토프에 결합하거나 상보적 활성을 갖는 항체의 조합을 포함할 수 있다.
본 개시의 약학 조성물은 또한 병용 요법 (combination therapy)으로, 즉 다른 제제와 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 병용 요법은 하나 이상의 다른 근육 질량/강도 증가제, 예를 들어 IGF-1, IGF-2 또는 IGF-1 또는 IGF-2의 변이체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRIIB에 결합하지만 이를 활성화시키지 않는 미오스타틴 디코이 (decoy) 단백질, 베타 2 아고니스트 (작용제), 그렐린 (ghrelin) 아고니스트, SARM, GH 아고니스트/모방제 또는 폴리스타틴과 조합된 본 발명의 항-ActRII 수용체 항체를 포함할 수 있다. 병용 요법에 사용될 수 있는 치료제의 예는 하기 본 개시의 항체의 사용에 관한 섹션에 보다 상세히 기재되어 있다.
본원에 사용된 "약학적으로 허용되는 담체 (pharmaceutically acceptable carrier)"는 생리학적으로 호환 가능한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 담체는 정맥 내, 근육 내, 피하, 비경구, 척추 또는 표피 투여 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의해), 바람직하게는 정맥 내 주사 또는 주입에 적합해야 한다. 투여 경로에 따라, 활성 화합물, 즉 항체, 면역 접합체 또는 이중특이적 분자는 화합물을 불활성화시킬 수 있는 산 및 다른 자연 조건의 작용으로부터 화합물을 보호하기 위한 물질로 코팅될 수 있다.
본 개시의 약학 조성물은 하나 또는 그 이상의 약학저으로 허용되는 염을 포함할 수 있다. "약학적으로 허용되는 염"은 부모 (parent) 화합물의 원하는 생물학적 활성을 유지하고 바람직하지 않은 독성 효과를 부여하지 않는 염을 지칭한다 (예를 들어, Berge, SM, et al., 1977 J. Pharm. Sci. 66 : 1- 19 참조). 이러한 염의 예에는 산 부가 염 및 염기 부가 염이 포함된다. 산 부가 염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화 수소산, 요오드화 수소산, 아인산 등과 같은 비독성 무기산, 및 지방족 모노- 및 디-카복실산, 페닐-치환된 알칸산, 하이드록시 알칸산, 방향족산, 지방족 및 방향족 설폰산 등과 같은 비독성 유기산으로부터 유도된 것들을 포함한다. 염기 부가 염은 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등과 같은 알칼리 토금속, 및 N,N'-디벤질에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 프로카인 등과 같은 비독성 유기 아민으로부터 유도되는 것들을 포함한다.
본 개시의 약학 조성물은 또한 약학적으로 허용되는 항산화제를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 항산화제의 예는 다음을 포함한다: 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 소듐 바이설페이트, 소듐 메타바이설파이트, 소듐설파이트 등; 지용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 금속 킬레이트제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등.
본 개시의 약학 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은), 및 이들의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사 가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올리에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅 물질을 사용함으로써, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지함으로써, 및 계면 활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 미생물의 존재는 상기 멸균 절차 및 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴으로써 방지될 수 있다. 등장화제, 예컨대 슈가, 염화나트륨 등을 조성물에 포함시키는 것이 바람직 할 수 있다. 또한, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴과 같은 흡수를 지연시키는 제제를 포함시킴으로써 주사 가능한 제약 형태의 흡수를 지연(연장)시킬 수 있다.
약학적으로 허용가능한 담체는 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제조용 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 약학적 활성 물질을 위한 이러한 매질 (media) 및 제제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성 화합물과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 본 개시의 약학 조성물에서의 이의 사용이 고려된다. 보충 활성 화합물이 또한 조성물에 혼입될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로 제조 및 저장 조건 하에서 멸균되고 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로 에멀젼, 리포좀 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬 구조 (ordered structure)로 제형화될 수 있다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지 및 계면 활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우에, 조성물에 등장화제, 예를 들어 슈가, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨이 포함될 수 있다. 주사 가능한 조성물의 장기간 흡수 (prolonged absorption)는 조성물에 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함시킴으로써 주사 가능한 조성물의 흡수를 지연(연장)시킬 수 있다.
멸균 주사용 용액은 필요에 따라 상기 열거된 제제 중 하나 또는 조합과 함께 적절한 용매에 필요한 양의 활성 화합물을 혼입한 후 멸균 미세 여과에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터 필요한 다른 제제를 함유하는 멸균 비히클에 혼입함으로써 제조된다. 무균 주사용 용액의 제조를 위한 무균 분말의 경우, 제조 방법은, 이전에 멸균-여과된 용액으로부터 활성제의 분말 및 임의의 추가의 원하는 제제를 생산하는 진공 건조 및 동결 건조 (freeze-drying(lyophilization))이다.
단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수있는 활성제의 양은 치료되는 대상 (subject) 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수있는 활성제의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 100 % 중에서, 이 양은 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약 0.01 % 내지 약 99 %의 활성제, 약 0.1 % 내지 약 70 %의 , 또는 약 1 % 내지 약 30 %의 활성제 범위일 것이다.
투약 요법은 최적의 원하는 반응 (예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스 (bolus)가 투여될 수 있거나, 여러 분할 용량이 시간에 따라 투여될 수 있거나, 용량이 치료 상황의 긴급성에 의해 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 투여 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위 형태로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 투여 단위 형태는 치료될 대상 (subject)을 위한 단일 투여 량으로 적합한 물리적 이산 단위 (discrete unit)을 지칭하고; 각각의 단위는 필요한 약학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 개시의 투여 단위 형태에 대한 설명서(specification)는 활성 화합물의 고유한 특성 및 달성될 특정 치료 효과 및 개인의 감수성 (sensitivity)의 치료를위해 이러한 활성 화합물을 배합하는 기술에 내재된 한계에 의해 지시되고 이에 직접적으로 의존한다.
조성물을 포함하는 항체의 투여에 있어서, 항체 투여량은 호스트 (host) 체중에 대해, 약 0.0001 내지 약 100 mg/kg, 보다 일반적으로는 약 0.01 내지 약 30 mg/kg의 범위이다. 예를 들어, 투여량은 약 1-10 mg/kg, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/kg 체중 범위 내에서 약 1 mg/kg 체중, 약 3 mg/kg 체중, 약 5 mg/kg 체중 또는 약 10 mg/kg 체중이다. 투여량은 필요에 따라 반복되며 주당 약 1 회 내지 약 10 주마다 1 회, 예를 들어 4 내지 8 주에 1 회 범위일 수 있다. 그러나, 상태에 따라, 예를 들어, 응급실에서 심장 질환의 급성 악화를 갖는 환자에게 ActII 수용체 길항제의 1 회 주사가 제공되는 펄스 요법이 이용될 수 있다.
투여는 바람직하게는 정맥 내로 수행된다. 본 개시의 항-ActRII 수용체 항체, 예를 들어 비마그루맙에 대한 투여 요법은 정맥 내 투여에 의해 4주마다 1회, 약 1 ㎎/㎏ 체중 또는 3 ㎎/㎏ 체중 또는 10 ㎎/㎏ 체중을 포함한다. 일부 방법에서, 상이한 결합 특이성을 갖는 2 개 또는 그 이상의 모노클로날 항체가 본 발명의 조성물에 포함되므로, 동시에 투여되며, 이 경우에 투여되는 각 항체의 용량은 지시된 범위 내에 속한다. 항체는 일반적으로 여러 번 투여된다. 단일 용량 사이의 간격은 예를 들어 매주, 매월, 3 개월마다, 6 개월마다 또는 매년일 수 있다. 환자에서 표적 항원에 대한 항체의 혈액 수준 측정에 의해 지시된 바와 같이 간격이 또한 불규칙할 수 있다. 일부 방법에서, 투여량은 약 1 내지 약 1000 ㎍/ml 및 일부 방법에서 약 25 내지 약 300 ㎍/ml의 혈장 항체 농도를 달성하도록 조정된다. 예를 들어, 본 개시 내용의 ActRII 수용체 항체는 항-미오스타틴 항체와 공동-투여될 수 있다.
투여량 및 빈도는 환자에서 항체의 반감기에 따라 달라진다. 일반적으로, 인간 항체는 가장 긴 반감기를 나타내고, 이어서 인간화(인간화된) 항체, 키메릭 항체 및 비인간 항체이다. 투여량 및 투여 빈도는 치료가 예방적인지 또는 치료적인지에 따라 달라질 수있다. 예방적 적용에서, 비교적 적은 용량이 장기간에 걸쳐 비교적 드문 간격으로 투여된다.
일부 환자는 평생 동안 치료를 계속 받는다. 치료적 적용에서, 질병의 진행이 감소되거나 종결될 때까지 또는 환자가 질병 증상의 부분적 또는 완전한 개선을 보일 때까지 비교적 짧은 간격으로 비교적 높은 투여량이 때때로 요구된다. 그 후, 환자에게 예방 요법이 투여될 수 있다.
본 개시의 조성물에 포함된 항-ActRII 수용체 항체의 "치료적 유효 투여량 (therapeutically effective dosage)"의 투여는 질환 증상의 중증도 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속 기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방, 즉 심장 기능의 증가를 가져올 수 있다.
활성 화합물은 임플란트, 경피 패치 및 마이크로 캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제형과 같은 급속 방출로부터 화합물을 보호할 담체로 제조될 수있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제형의 제조를 위한 많은 방법은 특허를 받았거나 당업자에게 일반적으로 알려져 있다. 예를 들어 Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.을 참조한다.
치료 조성물은 당업계에 공지된 의료 장치로 투여될 수 있다.
본 개시의 용도 및 방법
본 개시의 조성물 및 개시된 항체는 심장 질환의 치료 또는 심장 질환의 영향을 받는 환자의 상태의 개선 또는 심장 질환과 관련된 증상의 감소에 영향을 주기 때문에 치료적 유용성을 갖는다.
본원에 사용된 용어 "대상 (subject)" 또는 "개체 (individual)"는 인간 및 비인간 동물을 포함하도록 의도된다. 비인간 동물에는 모든 척추 동물, 예를 들어 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 생쥐, 소, 말, 닭, 양서류 및 파충류와 같은 포유 동물 및 비 포유 동물을 포함한다.
따라서, 본 개시는 또한 본 개시의 조성물 또는 개시된 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 ActRII 결합 분자, 더욱 바람직하게는 ActRII에 대한 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338이 ActRII의 기능을 억제, 즉 길항시키는 치료 방법에 관한 것이다. 이에 따라 다양한 유형의 심장 질환이 개선된다. 본 개시는 치료적 유효량의 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 바람직하게는 ActRIIB 결합 분자, 더욱 바람직하게는 ActRIIB에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338 또는 개시된 조성물을 환자에세 투여하는 것을 포함하는 심장 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
개시된 치료 방법에 사용될 수 있는 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRIIB에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338의 예는 상기에 상세히 개시되거나 기재된 것들이다. 특정 실시양태에서, ActRII 수용체 항체 (예를 들어, 비마그루맙 또는 BYM338)는 본원에 개시된 본 발명의 조성물에 포함된다.
본 개시는 또한 전술한 바와 같이 다양한 형태의 심장 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 ActRIIA 또는 ActRIIB 수용체 결합 분자, 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 BYM338의 용도에 관한 것이다.
ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338은 단독 활성제로서 또는 예를 들어 다른 약물에 대한 보조제로서 또는 다른 약물과 조합하여, 예를 들어 IGF-1, IGF-2 또는 IGF-1 또는 IGF-2의 변이체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRIIB에 결합하지만 활성화시키지 않는 미오스타틴 디코이 단백질, 베타 2 작용제(아고니스트), 그렐린 작용제, SARM, GH 작용제/모방제 또는 폴리스타틴과 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 길항제는 WO2007/146689에 개시된 바와 같은 IGF-1 모방체와 조합하여 사용될 수 있다.
전술한 내용에 따르면, 본 개시의 또 다른 측면에서, 공동 투여, 예를 들어 동시에 또는 순차적으로, 치료적 유효량의 ActRII 수용체 길항제, 바람직하게는 ActRII 결합 분자, 더욱 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338, 및 적어도 하나의 제 2 약물 물질의 공동투여를 포함하는 상기 정의된 방법 또는 용도를 제공한다. 상기 제 2 약물 물질은 IGF-1, IGF-2 또는 IGF-1 또는 IGF-2의 변이체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRII에 결합하지만 활성화시키지 않는 미오스타틴 디코이 단백질, 베타 2 작용제, 그렐린 작용제, SARM, GH 작용제/모방제 또는 폴리스타틴이다.
키트
본 발명은 또한 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 ActRII 수용체 결합 분자 (예를 들어, ActRII 수용체 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어, 비마그루 맙 또는 BYM338) 또는 ActRII 수용체 (즉, ActRIIB 수용체) 결합 분자 (예를 들어, 항-ActRIIB 항체 또는 이의항원 결합 단편) (예를 들어, 액체 또는 동결 건조 된 형태) 또는 ActRII 수용체 길항제 (상기 기재됨)를 포함하는 약학적 조성물을 를 포함할 수 있는 키트를 포함한다.
추가로, 이러한 키트는 ActRII 길항제를 투여하기 위한 수단 (예를 들어, 주사기 및 바이알, 미리 채워진 주사기, 미리 채워진 펜) 및 사용 설명서를 포함할 수있다. 이들 키트는, 예를 들어 동봉된 ActRII 길항제, 예를 들어 BYM338과 조합하여 전달하기 위한, 추가의 치료제 (상기 기술됨)를 함유할 수 있다.
문구 "투여 수단"은 약물을 환자에게 전신 투여하기 위한 이용 가능한 도구를 나타내기 위해 사용되며, 프리-필드 시린지, 바이알 및 시린지, 주입 (injection) 펜, 자동주입기, i.v. 드립 및 백, 펌프 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 그러한 아이템으로, 환자가 약물을 스스로 투여할 수 있거나 (즉, 스스로 약물을 투여할 수 있음) 의사가 약물을 투여할 수 있다.
키트의 각 구성 요소는 일반적으로 개별 용기 안에 들어 있으며 다양한 용기는 모두 사용 지침서와 함께 단일 패키지 내에 있다.
서열
표 1: 서열목록
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 실시양태는 ActRII 수용체 길항제, 예를 들어 ActRIIB 결합 분자를 사용한다. 추가의 실시양태에서, ActRIIB 결합 분자는 ActRIIB에 대한 길항제 항체이다.
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 일부 실시양태에서, 항-ActRIIB 항체는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다 :
a) 다음을 포함하는 ctRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체:
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR); 및
b) 다음을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 ActRIIB에 대한 길항제 항체 :
(a) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열번호 188);
(b) 서열번호 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열번호 186);
(c) 서열번호 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열번호 190);
(d) 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열번호 189);
(e) 서열번호 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열번호 187);
(f) 서열번호 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열번호 191);
(g) 서열번호 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열번호 192); 또는
(h) 서열번호 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열번호 181의 아미노산 52-56 (EQDKR) (여기서, 항체는 약 2 pM의 KD를 가짐).
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 일부 실시양태에서, ActRIIB에 대한 길항제 항체는 인간 항체이다.
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 일부 실시양태에서, 항체는 비마그루맙 또는 BYM338이다.
본 개시의 하나 이상의 실시양태의 세부 사항은 상기 설명에 제시되어 있다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있다. 본 개시의 다른 특징, 목적 및 이점은 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다. 명세서 및 첨부된 청구범위에서, 단수 형태는 문맥 상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시가 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 인용된 모든 특허 및 공보는 참조로 포함된다. 하기 실시예는 본 발명을 완전하게 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
실시예
일반적인 방법론
ActRIIB 항체, 그들의 특성 및 하기와 관련된 방법에 대한 세부 사항 및 기술은 WO 2010/125003에 개시되어 있다: (i) 기능 분석, (ii) 리포터 유전자 분석 (RGA), (iii) HEK293T/17 세포주의 배양, (iv) 미오스타틴-유도된 루시퍼라제 리포터 유전자 분석, (v) SPECIFICITY ELISA, (vi) ActRIIB/Fc-미오스타틴 바인딩 상호 작용 ELISA, (Ⅶ) hActRIIB- 및 hActRIIA 발현 세포에서의 FACS 적정, (Ⅷ) 원발성 인간 골격근 세포에 대한 결합, (ix) 표면 플라스몬 공명을 이용한 선택된 항-인간 ActRIIB Fab의 친화도 측정 (Biacore), (x) CK 어세이, (xi) 동물 모델, (xii) 치료 프로토콜, (xiii) 통계 분석, (xiiii) 패닝, (xv) 항체 식별 및 특성 분석, (xvi) 제 1 친화도 성숙에서 파생된 항체의 최적화, (xvii) 친화도 성숙 된 Fab의 IgG2 전환 (1 차 성숙), (xviiii) 2 차 친화도 성숙, (xx) IgG2의 IgG2 전환 및 특성화 (2 차 성숙), (xxi) 생체 내 뮤린 연구에서 항-ActRIIB 항체의 특성화, (xxii) SET에 의한 친화도 확인, (xxiii) 교차 차단 연구 및 (xxiv) 에피토프 맵핑.
마우스에서의 TAC (횡대동맥 수축) 실험 모델은 압력 과부하로 인한 심장 비대 및 심부전을 위해 일반적으로 사용되는 실험 모델이며, 예를 들어 Rockman et al. (1991) 및 deAlmeida et al. (2010)에 기재되어 있으며, 이는 완전히 제시된 것처럼 본원에 참조로 포함된다.
실시예 1: TAC 예방 연구
재료 및 방법:
이 연구는 CDD866이 심부전의 확립된 횡 대동맥 협착 (TAC) 뮤린 모델에서 심장 기능 장애의 발생을 예방하는지 여부를 테스트한다.
16 주령 수컷 C57BL/6 마우스의 다음 4 개 그룹 (n = 7-10/그룹)이 연구의 일부이다.
1. SHAM + 이소타입 Ab
2. SHAM + CDD866 Ab
3. TAC + 이소타입 Ab
4. TAC + CDD866 Ab
항체를 1 주일에 1 회 피하 (SQ) 20mg/kg으로 투여하고, 희생 전 < 24시간에 마지막 용량을 투여하였다.
심초음파 검사는 2 주마다 수행된다.
1 차 평가 변수 (Primary endpoint): 11 주 TAC 후 사전 정의된 평가 변수 또는 FS (% fractional shortening) <20 %
결과 :
도 1A-1E에 나타낸 바와 같이, CDD866 Ab 처리는 야생형 C57BL/6 마우스에서 최소의 심장 효과를 갖는다. 구체적으로,도 1A에 도시 된 바와 같이, CDD866의 측정된 혈장 수준은 약물이 적절하게 투여되었음을 확인시켜 준다. CDD866은 심장 질량을 크게 증가시키지 않았다 (도 1B). CDD866은 심근 섬유증을 감소시키지만 (도 1C), 건강한 야생형 대조군의 기준선에서 섬유질 %는 현저히 낮았다. PAS 염색 된 심근의 대표적인 현미경 사진 (도 1D)은 심근 세포 크기를 강조한다. 도 1E는 CDD866이 야생형 동물에서 심근 세포 크기를 유의하게 증가시키지 않는 결과를 그래프로 도시한다. 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 회색 = 대조군, 이소 타입 Ab (n = 3). 검은색 = 실험군, CDD866 Ab (n = 3). * p<0.05
도 2A-2D에서 나타내는 바와 같이, CDD866 처리는 마우스에서 TAC-유도된 심부전을 예방한다. 도 2A는 수축기 기능 (% FS로 측정)이 TAC (수평선 막대)에 의해 예상대로 감소하지만 TAC (사선 막대)에 노출된 CDD866 처리된 동물에서는 보존된 상태를 그래프로 도시한다. 도 2B는 CDD866으로 처리된 TAC 동물에서 수축기 기능의 보존을 나타내는 SHAM 또는 TAC 수술 11 주 후의 대표적인 심초음파 이미지이다. CDD866 처리 동물에서 폐 무게 감소 경향이 있고 이는 폐울혈이 적다는 것을 나타낸다 (마우스 모델에서의 심부전의 대리 검사(써로게이트) (도 2C). CDD866 처리에서 일차 평가 변수 (생존 또는 % FS <20 %)가 크게 감소하였다 (도 2D) 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7) 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7) 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10) * p<0.05 # p<0.01 (검은색은 SHAM + 이소타입 그룹과의 비교를 나타내고 적색은 TAC + 이소타입 그룹과의 비교를 나타낸다.
도 3A-3D에 도시된 바와 같이, CDD866 Ab는 심부전의 TAC 모델에서 심장 ActRII-A/B 시그널링 효과적으로 차단한다. 도 3A에서, 측정된 CDD866 혈장 수준은 약물이 적절하게 투여되었음을 나타낸다. TAC와 함께 심장 폴리스타틴-유사 3 (FSTL3) 발현이 증가하여, 심장 손상 모델에서 심장 ActRII-A/B 시그널링이 증가함을 나타낸다. CDD866 처리에 의해 심장 FSTL3 발현이 감소되었고, 이는 심장에서 TAC-유도 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단함을 나타낸다 (도 3B). CDD866 처리에 의해 병리학적 심장 비대 유전자의 발현이 감소된다 (도 3C).
도 3D에 도시된 바와 같이, TAC-유도된 심부전에서의 병리학적 심장 섬유증 프로파일은 CDD866 처리에 의해 감소된다.
데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 검은색 = SHAM + 이소타입 Ab (n = 7). 회색 = SHAM + CDD866 Ab (n = 7). 수평선 막대 = TAC + 이소타입 Ab (n = 10). 사선 막대 = TAC + CDD866 Ab (n = 10). * p <0.05. # p <0.01 (검은색은 SHAM + 이소타입 그룹과의 비교를, 적색은 TAC + 이소타입 그룹과의 비교를 나타낸다.
요약하면, (i) CDD866은 야생형 대조군에서 심장 성장/기능에 최소한의 영향을 미친다; (ii) CDD866은 TAC-유발 심부전의 발생을 효과적으로 예방하고, (iii) CDD866은 심부전의 TAC 모델에서 전반적인 생존을 개선시킨다.
실시예 2: TAC 치료 연구
재료 및 방법:
이 연구는 CDD866이 TAC에 노출된 동물에서 확립된 심장 기능 장애를 역전 (reversing) 시킴으로써 심부전으로부터 동물을 구할 수 있는지 여부를 시험한다.
16 주령 수컷 C57BL/6 마우스의 다음 2 개 그룹 (n = 10 / 그룹)이 연구되었다:
TAC + 이소타입 Ab
TAC + CDD866 Ab
항체 처리는 % 구획 단축률 > 4 표준 편차 감소 후에만 시작된다.
항체에 SQ, 20mg/kg/k x 8 주 투여 (희생 전 < 24시간에 마지막 용량을 투여함)
심초음파 검사는 2 주마다 수행된다.
1 차 평가 변수 : 8 주 처리의 미리-지정된 (pre-specified) 평가 변수 또는 % FS <25 %
결과:
도 4A-4D에 도시된 바와 같이, CDD866 처리는 심장 기능을 회복시키고 TAC- 유도된 심부전으로부터 동물을 구제한다. 측정된 CDD866 혈장 수준은 약물이 수축기 기능에서 적절하게 투여되었음을 나타낸다 (그림 4A). 도 4B는 CDD866 처리에 의해 심장 FSTL3 발현이 감소한다는 발견을 그래프로 도시하며, 이는 그것이 심장에서 TAC-유도 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단함을 나타낸다. CDD866은 TAC-유도된 심부전에서 수축기 기능 이상을 역전시키고 치료 후 1 주일에 점진적으로 개선된 것으로 보여진다 (도 4C). CDD866은 또한 뮤린 모델에서 심부전의 대리 표지 (surrogate marker)인 폐 중량을 감소시킨다 (그림 4D). 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 회색 = TAC + 이소타입 Ab. 검은색 = TAC + CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01.
CDD866 처리는 TAC 모델에서 심장 성장을 유도한다. 도 5A는 그래프로 도시 한 바와 같이, CDD866 처리에 의해 벽 두께가 점진적으로 증가한다 (검은색 화살표는 Rx 개시를 나타낸다). 도 5B는 CDD866 처리 동물 대 이소타입에서의 심장 성장의 차이를 나타내는 치료 과정 동안 심실 중간 부분의 연속 에코 이미지를 보여준다. 도 5C에 도시된 바와 같이, CDD866은 TAC 모델에서 심장 질량 (cardiac mass) 을 증가시킨다. 도 5D는 심근 세포 크기를 강조하는 PAS-염색된 심근의 현미경 사진을 보여준다. CDD866은 또한 TAC에서 심근 세포 성장을 증가시킨다 (도 5E). 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 회색 = TAC + 이소타입 Ab. 검은색 = TAC + CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01.
결과는 CDD866이 심부전을 예방하는 생리학적 심장 성장을 유도함을 나타낸다. 도 6A는 CDD866 처리에 의해 병리학적 비대와 관련된 유전자의 발현이 감소함을 그래프로 도시한다. 도 6b에 도시된 바와 같이, 심장 성장 및 체중에 대한 CDD866의 효과는 일시적이고 가역적이다. 단일 용량 (single dose)의 CDD866에 의해 유도된 심장 기능의 개선은 적어도 6 주 동안 지속된다 (도 6B 화살표 = 단일 용량의 타이밍; 점선 = CDD866 처리가없는 예상 궤적). 도 6C는 메이슨 트리크롬 (masson trichrome) 염색된 심근의 현미경 사진 (청색 = 섬유증; 적색 = 근육)을 보여준다. 도 6D에 도시된 바와 같이 CDD866 처리로 심근 섬유증이 감소하는 경향이 있다. 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 회색 = TAC + 이소타입 Ab. 검은색 = TAC + CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01.
도 7A-7E에 도시된 바와 같이, CDD866은 TAC-매개 심부전에서 골격근 성장을 유도한다. CDD866은 골격근에서 p-SMAD3 발현을 감소시키고, 이는 CDD866이 이 심부전 모델에서 골격근의 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단함을 나타낸다 (도 7A). CDD866은 전체 체중을 점진적으로 증가시킨다; 근육량 증가를 통해 가능하다 (도 7B). 도 7C는 CDD866이 다양한 골격근 그룹 (EDL, gss, TC)의 전체 질량을 증가시킨다는 것을 보여준다. 골격근세포 크기는 또한 CDD866에 의해 증가된다 (도 7D). 골격근에서의 섬유 타입 스위칭도 CDD866에 의해 유도된다 (도 7E). 적색 = TAC + 이소타입 Ab. 청색 = TAC + CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01.
요약하면, CDD866은 TAC에 의해 유도된 기존의 수축기 기능 장애를 효과적으로 역전 (reverses) 시킨다. CDD866은 심장 성장을 증가시키고 심근 섬유증, 심부전을 예방하는 생리학적 심장 비대를 나타내는 데이터를 감소시킨다.
CDD866은 심부전의 TAC 모델에서 골격근 성장을 증가시킨다. 이는 CDD866의 진행성 심부전에서의 심장 악액질 개선 용도를 나타낸다.
실시예 3: MHCF764L 시점 연구
재료 및 방법:
이 연구는 CDD866이 확장성 심근병증 (dilated cardiomyopathy)(MHCF764L)의 유전자 모델에서 심장 기능을 개선할 수 있는지 여부를 테스트한다.
14-24 주령 수컷 MHC F764L +/- 돌연변이 마우스의 2 개 그룹이 연구되었다:
이소타입 Ab (n = 3)
CDD866 Ab (n = 3)
*항체는 SQ, 20mg/kg/wk x 12 주에 투여된다 (희생 전 < 24시간에 마지막 용량을 투여)
심초음파 검사는 2 주마다 (q2wk) 수행됩니다.
1 차 평가 변수 : 12 주 처리의 미리-지정된 평가 변수 또는 % FS <20 %
결과:
CDD866은 유전적 확장성 심근병증 (genetic dilated cardiomyopathy) 모델에서 최소의 심장 효과를 갖는다 (기준선에서는 완만한 심장 표현형임에도 불구하고).
도 8A에 그래프로 도시된 바와 같이, CDD866은 MHCF74L 마우스에서 약간 증가된 수축기 기능의 경향을 유도한다.
도 8B는 CDD866 처리에 의한 심장 FSTL3 발현 감소 경향을 도시하며, 이는 그것이 심장에서 ActRII-A/B 시그널링을 효과적으로 차단하고 있음을 나타낸다. 도 8C에 도시된 바와 같이, 병리적 비대 유전자 발현 프로파일에서 유의미한 차이는 관찰되지 않았다. 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시된다. 회색 = 이소타입 Ab. 검은색 = CDD866 Ab. * p<0.05. # p<0.01.
요약하면, CDD866 처리로 수축기 기능의 약간의 증가가 관찰된다. 심부전의 유전자 발현 프로파일에서 유의미한 차이가 검출되지 않았다.
참고문헌
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<223> VH
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<223> VH
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<212> DNA
<213> Artificial
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> VH
<400> 127
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<210> 128
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> VH
<400> 128
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atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtggt 300
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<210> 129
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> VH
<400> 129
caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60
agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120
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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 160
<211> 441
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Ala Thr Gly His Ala Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 161
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
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<212> DNA
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<400> 164
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
<400> 165
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<212> DNA
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<220>
<223> heavy chain
<400> 166
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<210> 167
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<212> DNA
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<223> heavy chain
<400> 167
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<211> 1335
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 168
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<211> 1335
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 169
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<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 170
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<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
<400> 171
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<213> Artificial
<220>
<223> light chain
<400> 172
cagagcgccc tgacccagcc cgccagcgtg tccggcagcc caggccagtc tatcacaatc 60
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caggctgagg acgaggccga ctactactgc ggcacctttg ccggcggatc atactacggc 300
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
<400> 173
cagagcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60
tcgtgtacgg gtactagcag cgatgttggt tcttataatt atgtgaattg gtaccagcag 120
catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180
agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240
caagcggaag acgaagcgga ttattattgc ggtacttttg ctggtggttc ttattatggt 300
gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcagc ccaaggctgc cccctcggtc 360
actctgttcc cgccctcctc tgaggagctt caagccaaca aggccacact ggtgtgtctc 420
ataagtgact tctacccggg agccgtgaca gtggcctgga aggcagatag cagccccgtc 480
aaggcgggag tggagaccac cacaccctcc aaacaaagca acaacaagta cgcggccagc 540
agctatctga gcctgacgcc tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600
acgcatgaag ggagcaccgt ggagaagaca gtggccccta cagaatgttc a 651
<210> 174
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
<400> 174
cagagcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60
tcgtgtacgg gtactagcag cgatgttggt tcttataatt atgtgaattg gtaccagcag 120
catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180
agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240
caagcggaag acgaagcgga ttattattgc ggtacttttg ctggtggttc ttattatggt 300
gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcagc ccaaggctgc cccctcggtc 360
actctgttcc cgccctcctc tgaggagctt caagccaaca aggccacact ggtgtgtctc 420
ataagtgact tctacccggg agccgtgaca gtggcctgga aggcagatag cagccccgtc 480
aaggcgggag tggagaccac cacaccctcc aaacaaagca acaacaagta cgcggccagc 540
agctatctga gcctgacgcc tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600
acgcatgaag ggagcaccgt ggagaagaca gtggccccta cagaatgttc a 651
<210> 175
<211> 651
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> light chain
<400> 175
cagagcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60
tcgtgtacgg gtactagcag cgatgttggt tcttataatt atgtgaattg gtaccagcag 120
catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180
agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240
caagcggaag acgaagcgga ttattattgc ggtacttttg ctggtggttc ttattatggt 300
gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcagc ccaaggctgc cccctcggtc 360
actctgttcc cgccctcctc tgaggagctt caagccaaca aggccacact ggtgtgtctc 420
ataagtgact tctacccggg agccgtgaca gtggcctgga aggcagatag cagccccgtc 480
aaggcgggag tggagaccac cacaccctcc aaacaaagca acaacaagta cgcggccagc 540
agctatctga gcctgacgcc tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600
acgcatgaag ggagcaccgt ggagaagaca gtggccccta cagaatgttc a 651
<210> 176
<211> 1323
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 176
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggcgccag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agcagctaca tcaactgggt ccgccaggct 120
cctgggcagg gactggagtg gatgggcacc atcaaccccg tgtccggcag caccagctac 180
gcccagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca ccagcatcag caccgcctac 240
atggagctgt ccaggctgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcgc caggggcggc 300
tggttcgact actggggcca gggcaccctg gtgaccgtgt cctcagctag caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag ccagtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
tccagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600
gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agaggaagtg ctgcgtggag 660
tgccccccct gcccagcccc cccagtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720
cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgagg acccagaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840
gccaagacca agcccagaga ggaacagttt aacagcacct tcagggtggt gtccgtgctg 900
accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt ctccaacaag 960
ggcctgccag cccccatcga gaaaaccatc agcaagacca agggccagcc acgggagccc 1020
caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080
tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140
cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200
tacagcaagc tgacagtgga caagagcagg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320
aag 1323
<210> 177
<211> 1323
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 177
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggcgccag cgtcaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agcagctaca tcaactgggt gcgccaggct 120
ccagggcagg gactggagtg gatgggccag atcaacgccg ccagcggcat gaccagatac 180
gcccagaagt tccagggcag agtcacaatg accagggaca cctctatcag caccgcctac 240
atggagctgt ccaggctgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcgc caggggcggc 300
tggttcgact actggggcca gggcaccctg gtgaccgtgt cctcagctag caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag ccagtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
tccagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600
gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agaggaagtg ctgcgtggag 660
tgccccccct gcccagcccc cccagtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720
cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgagg acccagaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840
gccaagacca agcccagaga ggaacagttt aacagcacct tcagggtggt gtccgtgctg 900
accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt ctccaacaag 960
ggcctgccag cccccatcga gaaaaccatc agcaagacca agggccagcc acgggagccc 1020
caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080
tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140
cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200
tacagcaagc tgacagtgga caagagcagg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320
aag 1323
<210> 178
<211> 1323
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 178
caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60
agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120
cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat attaatgctg ctgctggtat tactctttat 180
gctcagaagt ttcagggtcg ggtcaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240
atggaactga gccgcctgcg tagcgatgat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtggt 300
tggtttgatt attggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcttc caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggagcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600
gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agcggaagtg ctgcgtggag 660
tgccccccct gccctgcccc tcctgtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720
cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgagg accccgaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840
gccaagacca agccccggga ggaacagttc aacagcacct tccgggtggt gtccgtgctg 900
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ggcctgcctg cccccatcga gaaaaccatc agcaagacaa agggccagcc cagggaaccc 1020
caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080
tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140
cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200
tacagcaagc tgacagtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320
aaa 1323
<210> 179
<211> 1323
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 179
caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60
agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120
cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggt attaatcctc ctgctggtac tacttcttat 180
gctcagaagt ttcagggtcg ggtcaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240
atggaactga gccgcctgcg tagcgatgat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtggt 300
tggtttgatt attggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcttc caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggagcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600
gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agcggaagtg ctgcgtggag 660
tgccccccct gccctgcccc tcctgtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720
cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgagg accccgaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840
gccaagacca agccccggga ggaacagttc aacagcacct tccgggtggt gtccgtgctg 900
accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagaataca agtgcaaggt gtccaacaag 960
ggcctgcctg cccccatcga gaaaaccatc agcaagacaa agggccagcc cagggaaccc 1020
caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080
tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140
cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200
tacagcaagc tgacagtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320
aaa 1323
<210> 180
<211> 1323
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> heavy chain
<400> 180
caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60
agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120
cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat attaatcctg ctactggtca tgctgattat 180
gctcagaagt ttcagggtcg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240
atggaactga gccgcctgcg tagcgatgat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtggt 300
tggtttgatt attggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcttc caccaagggc 360
cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420
ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggagcc 480
ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540
agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600
gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agcggaagtg ctgcgtggag 660
tgccccccct gccctgcccc tcctgtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720
cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgagg accccgaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840
gccaagacca agccccggga ggaacagttc aacagcacct tccgggtggt gtccgtgctg 900
accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagaataca agtgcaaggt gtccaacaag 960
ggcctgcctg cccccatcga gaaaaccatc agcaagacaa agggccagcc cagggaaccc 1020
caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080
tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140
cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200
tacagcaagc tgacagtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260
gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320
aaa 1323
<210> 181
<211> 512
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 181
Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys
1 5 10 15
Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr
20 25 30
Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg
35 40 45
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg
50 55 60
Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp
65 70 75 80
Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn
85 90 95
Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg
100 105 110
Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro
115 120 125
Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu
130 135 140
Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr
145 150 155 160
Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro
165 170 175
Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu
180 185 190
Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln
195 200 205
Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys
210 215 220
Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys
225 230 235 240
His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn
245 250 255
Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser
260 265 270
Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys
275 280 285
His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp
290 295 300
Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg
305 310 315 320
Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val
325 330 335
Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro
340 345 350
Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu
355 360 365
Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile
370 375 380
Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys
385 390 395 400
Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu
405 410 415
Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val
420 425 430
His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro
435 440 445
Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Ala Cys Trp Asp His Asp
450 455 460
Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu
465 470 475 480
Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu
485 490 495
Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile
500 505 510
<210> 182
<211> 116
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 182
Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala
1 5 10 15
Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu
20 25 30
Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser
35 40 45
Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe
50 55 60
Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln
65 70 75 80
Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr
85 90 95
His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro
100 105 110
Thr Ala Pro Thr
115
<210> 183
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 183
Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Ser Trp Leu Asp Asp Phe Asn Ser
1 5 10 15
<210> 184
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 184
Val Lys Lys Gly Ser Trp Leu Asp Asp Phe Asn Ser Tyr Asp Arg
1 5 10 15
<210> 185
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 185
Gly Ser Trp Leu Asp Asp Phe Asn Ser Tyr Asp Arg Gln Glu Ser
1 5 10 15
<210> 186
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 186
Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys
1 5
<210> 187
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 187
Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp
1 5 10 15
<210> 188
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 188
Trp Leu Asp Asp Phe Asn
1 5
<210> 189
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 189
Glu Gln Asp Lys Arg
1 5
<210> 190
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 190
Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr
1 5 10
<210> 191
<211> 13
<212> PRT
<213> Human
<400> 191
Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr
1 5 10
<210> 192
<211> 11
<212> PRT
<213> Human
<400> 192
Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn
1 5 10
<210> 193
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Light Chain
<400> 193
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Phe Ala Gly Gly
85 90 95
Ser Tyr Tyr Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ser Thr Pro Thr Leu Thr Val Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Lys Glu Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asn Phe
130 135 140
Ser Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asn Gly Thr Pro Ile
145 150 155 160
Thr Gln Gly Val Asp Thr Ser Asn Pro Thr Lys Glu Gly Asn Lys Phe
165 170 175
Met Ala Ser Ser Phe Leu His Leu Thr Ser Asp Gln Trp Arg Ser His
180 185 190
Asn Ser Phe Thr Cys Gln Val Thr His Glu Gly Asp Thr Val Glu Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Pro Ala Glu Cys Leu
210 215
<210> 194
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> Heavy Chain
<400> 194
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Asn Pro Val Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser
145 150 155 160
Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu
165 170 175
Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser
180 185 190
Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln
260 265 270
Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln
275 280 285
Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu
290 295 300
Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro
340 345 350
Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr
355 360 365
Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys
370 375 380
Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val
405 410 415
Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn
420 425 430
His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
435 440 445
Claims (17)
- 심부전을 치료 및/또는 예방하는 데 사용하기 위한 항-ActRII 수용체 항체로서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는:
(a) 서열번호 99의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 85의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(b) 서열번호 100의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 86의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(c) 서열번호 101의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 87의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(d) 서열번호 102의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 88의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(e) 서열번호 103의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 89의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(f) 서열번호 104의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 90의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(g) 서열번호 105의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 91의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(h) 서열번호 106의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 92의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(i) 서열번호 107의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 93의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(j) 서열번호 108의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 94의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(k) 서열번호 109의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 95의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(l) 서열번호 110의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 96의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(m) 서열번호 111의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 97의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열; 또는
(n) 서열번호 112의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 98의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
을 포함하는, 항-ActRII 수용체 항체. - 구조적 및/또는 기능적 심장 이상(cardiac abnormality)을 치료 및/또는 예방하는 데 사용하기 위한 항-ActRII 수용체 항체로서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는:
(a) 서열번호 99의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 85의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(b) 서열번호 100의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 86의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(c) 서열번호 101의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 87의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(d) 서열번호 102의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 88의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(e) 서열번호 103의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 89의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(f) 서열번호 104의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 90의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(g) 서열번호 105의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 91의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(h) 서열번호 106의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 92의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(i) 서열번호 107의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 93의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(j) 서열번호 108의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 94의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(k) 서열번호 109의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 95의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(l) 서열번호 110의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 96의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(m) 서열번호 111의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 97의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열; 또는
(n) 서열번호 112의 가변 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 98의 가변 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
을 포함하는, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항에 있어서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는:
(a) 서열번호 146의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 141의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(b) 서열번호 147의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 142의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(c) 서열번호 148의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 143의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(d) 서열번호 149의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 144의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(e) 서열번호 150의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 145의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(f) 서열번호 156의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 151의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(g) 서열번호 157의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 152의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(h) 서열번호 158의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 153의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(i) 서열번호 159의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 154의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열; 또는
(j) 서열번호 160의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 155의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
을 포함하는, 항-ActRII 수용체 항체. - 제2항에 있어서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는:
(a) 서열번호 146의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 141의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(b) 서열번호 147의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 142의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(c) 서열번호 148의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 143의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(d) 서열번호 149의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 144의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(e) 서열번호 150의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 145의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(f) 서열번호 156의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 151의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(g) 서열번호 157의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 152의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(h) 서열번호 158의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 153의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
(i) 서열번호 159의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 154의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열; 또는
(j) 서열번호 160의 중쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열, 및 서열번호 155의 경쇄 서열, 또는 이에 대해 80% 이상의 서열 동일성을 포함하는 서열;
을 포함하는, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는:
(a) 서열번호 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 71의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(b) 서열번호 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 72의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(c) 서열번호 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 73의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(d) 서열번호 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 74의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(e) 서열번호 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 75의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(f) 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 76의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(g) 서열번호 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 77의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(h) 서열번호 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 78의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(i) 서열번호 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 79의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(j) 서열번호 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 80의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(k) 서열번호 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 81의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(l) 서열번호 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 82의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(m) 서열번호 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는
(n) 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열번호 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열번호 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열번호 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열번호 84의 경쇄 가변 영역 CDR3,
을 포함하는, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는 비마그루맙(bimagrumab)인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는 약 3 mg/kg 또는 약 10 mg/kg의 용량으로 투여되는 것인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는 4주 마다 투여되는 것인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-ActRII 수용체 항체는 수축기 기능을 향상시키는, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항에 있어서,
상기 심부전은 심박출계수 감소 심부전(heart failure with reduced ejection fraction)인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항에 있어서,
상기 심부전은 심박출계수 보존 심부전(heart failure with preserved ejection fraction)인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제1항에 있어서,
상기 심부전은 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증(peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증(stress cardiomyopathy). 유전성 심근증 및 특발성 확장성 심근증(idiopathic dilated cardiomyopathies)으로 구성된 군에서 선택되는 증상(condition)과 관련된 것인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제2항에 있어서,
상기 구조적 및/또는 기능적 심장 이상은 심장판막질환, 관상동맥질환, 고혈압, 당뇨병, 노화, 부정맥, 출산기 심근증(peripartum cardiomyopathy), 스트레스 심근증(stress cardiomyopathy). 유전성 심근증 및 특발성 확장성 심근증(idiopathic dilated cardiomyopathies)으로 구성된 군에서 선택되는 증상(condition)과 관련된 것인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제12항 또는 제13항에 있어서,
상기 심장판막질환은 대동맥판막 협착증(aortic stenosis)인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제14항에 있어서,
상기 대동맥판막 협착증은 연약증상(frailty) 및/또는 근육감소증 (sarcopenia)을 동반하는 것인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제12항 또는 제13항에 있어서,
상기 출산기 심근증은 임신 후기 또는 산후(post-partum) 6 개월 이내에 발생하는 것인, 항-ActRII 수용체 항체. - 제12항 또는 제13항에 있어서,
상기 스트레스 심근증은 심리적, 병리적 또는 물리적 스트레스 후에 발생하는 것인, 항-ActRII 수용체 항체.
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