KR20160042987A - 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법 - Google Patents

산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 치료 유효량의 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자, 예를 들어 미오스타틴 항체 또는 ActRII 수용체 결합 분자, ActRII 수용체 항체, 예컨대 비마그루맙 항체를 사용하는 신규 요법에 의한 산발성 봉입체 근염 및 다른 근육 소모 장애의 치료에 관한 것이다.

Description

산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법 {METHODS OF TREATING SPORADIC INCLUSION BODY MYOSITIS}
본 개시내용은 2013년 8월 14일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 61/865861 및 2014년 4월 24일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 61/983567을 우선권 주장하며, 상기 가출원의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본 개시내용은, 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 액티빈 수용체 II (ActRII) 결합 분자, 예를 들어 미오스타틴 또는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 BYM338의 분야에 속한다. 특히, 본 개시내용은 산발성 봉입체 근염 (sIBM)의 치료, 및 치료 유효량의 ActRII 길항제, 예를 들어 액티빈 수용체 II (ActRII) 결합 분자, 예를 들어 항-액티빈 수용체 II (ActRII) 항체, 예컨대 BYM338 항체 (이는 또한 "비마그루맙"으로 공지되어 있음)를 사용하는 sIBM의 치료를 위한 신규 투약 요법에 관한 것이다.
산발성 봉입체 근염 (sIBM)은 매우 희귀한 질환이다. 현대 진단 기준에 기초한 상기 질환의 유병율은, 그에 관하여는 제한적인 역학 문헌이 존재하나, 모든 연령에서 백만명당 15-71명 및 50세 초과에서 백만명당 51명의 유병률 추정치로 산발성이다. 남성은 여성보다 대략 2:1로 보다 자주 이환된다. 유전적 및 환경적 요인 둘 다를 수반할 수 있는, 유병률에 있어서의 주목할만한 지역적 차이가 존재한다. sIBM의 주요 기저 병인은 공지되어 있지 않고, 가능한 속발성 퇴행성 및 염증성 특징의 증거에도 불구하고 임의의 공지된 치료에 대해 불행하게도 불응성이다 (Hohlfeld 2011).
비록 희귀하지만, sIBM은 >50세의 사람들에게 이환되는 특발성 염증성 근병증에 대한 가장 흔한 형태를 나타내고 (Dimachkie and Barohn 2013, Griggs 2006, Peng et al. 2000), 모든 염증성 근병증의 총 30%를 차지한다. 질환은 일반적으로 50세 이후에 발생하여 시간이 지남에 따라 진행되는 근위부 및 원위부 약화의 잠행성 및 비대칭 발병을 임상 특징으로 한다 (Needham et al. 2008). 주로 질환의 느린 진전, 및 미묘한 초기 증상을 인식하는데 있어서의 곤란, 및 생검 근육 병리상태 전문지식에 대한 필요를 비롯한 복잡한 진단 기준으로 인해 증상의 발병 후 5-8년까지도 진단이 종종 이루어지지 않는다. 하지 호소증상은 전형적으로 의자에서 기립하기 및 계단 오르내리기에 있어서의 곤란의 형태로 온다. 질환이 진행됨에 따라, 하지 약화는 잠재적 부상을 갖는 빈번한 낙상을 일으킨다. sIBM 환자에서의 낙상은 근위부 근육 약화의 결과로서 발생할 수 있지만, 원위부 하지 약화 (족하수)가 또한 발생하고, 이러한 낙상에 대해 원인이 되는 역할을 할 수 있다. 또한, 손 및 손가락 약화가 조기 발병되어 결국 일상 생활의 활동 (예를 들어, 쓰기, 식사하기, 목욕하기, 옷입기, 양치하기)에서의 독립성 보유 능력을 손상시킨다. 다른 중요한 증상 중에서, 연하곤란은 식도 및 인두 근육 수반으로 인해 환자의 적어도 40%에서 발생한다. 이것은 체중 감소 또는 흡인과 그에 따른 폐렴으로 이어질 수 있다 (Amato & Barohn 2009, Oh et al. 2008). 질환 진행은 비교적 느리지만 수그러들지 않고, 사실상 sIBM을 가진 모든 환자는 수년 내에 보조 장치, 예컨대 지팡이 또는 보행기를, 발병 약 10년쯤에는 휠체어를 필요로 한다 (Griggs et al. 1995, Dalakas 2006). sIBM의 비가역적 이환율은 임상 및 환자 커뮤니티에 의해 널리-인식되어 있다 (Hohlfeld 2011).
비교적 많은 수의 sIBM 환자에 대한 장기간 추적 연구는 sIBM의 중증 쇠약 성질을 확인시켜 주었다 (Benveniste et al. 2011, Cox et al. 2011). sIBM의 심각한 쇠약 성질은 sIBM에서 근육 강도, 기능적 상태 및 기대 수명의 진행성 저하에 초점을 맞추면서, 네덜란드에서 10-13년의 기간에 걸쳐 수행된 64명 환자의 국가 역학적 연구에 의해 확인되었다 (Cox et al. 2011). 공식적인 전향적 레지스트리는 아니지만, 저자는 81세의 기대 수명이 통상적이나, 일상 생활의 활동은 분명히 제한되었다는 것을 보고하였다. 추적에서, 추가의 추적에 동의한 15명의 생존 환자 모두가 휠체어를 사용하는 것으로 밝혀졌고, 그들 중 7명 (47%)은 완전히 휠체어에 의지하였다. 20년의 평균 질환 지속기간 후에, 3명의 환자는 요양원에서 살고 있었고, 12명의 환자는 개조된 집 (계단 리프트, 문턱 없음, 입식 의자)에서 살고 있었다. 거의 모든 환자가 그의 파트너 또는 다른 보호자로부터 일상 활동에 대해 상당한 도움을 필요로 하였다; 환자의 40%는 완전히 또는 심하게 의존성 (바르텔(Barthel) 지수 <10)이었고, 환자의 20%는 중등도로 의존성 (바르텔 지수 10-15)이었다. 3명의 환자 (6.5%)에서, "견딜 수 없는 고통 및 광범위한 약화로 인한 삶의 질의 심한 저하"로 인해 안락사가 요청되었고, 또 다른 3명 (6.5%)에서, 중증 장애초래 연하곤란, 악액질 및 탈수로 인해 연속적인 깊은 진정에 대한 요구가 허용되었다. 이들 네덜란드 환자 중 6명 (13%)에서 생애말기 돌봄(end-of-life care) 개입이 보고되었다는 사실은 이 질환의 말기 병기에서의 중증 장애 및 삶의 질 저하를 반영한다.
sIBM에서 근육 약화의 진행을 늦추거나 역전시키는 치료가 발견되지 않았기 때문에 sIBM의 치료에 대해 승인된 약물은 존재하지 않는다 (Greenberg 2009, Aggarwal and Oddis 2012). 더욱이, sIBM을 가진 환자는 코르티코스테로이드, 메토트렉세이트, 아자티오프린 또는 시클로포스파미드를 비롯한, 염증성 근병증을 치료하는데 전형적으로 사용되는 작용제에 대해 임상적으로 의미있는 반응을 입증하지 못했다 (Griggs 2006, Mann and Vencovsky 2011, Needham and Mastaglia 2007, Solorzano and Phillips 2011). 정맥내 이뮤노글로불린이 일부 기관에서 오프-라벨로 사용되지만, 이 병태에서 그의 장기간 유효성을 지지하는 증거는 존재하지 않는다. 유사한 전체 결론이 상이한 면역요법제, 예컨대 항-T 림프구 억제제, 항-TNF 약제 (에타네르셉트) 및 베타-인터페론 1A의 효능에 대해 도출될 수 있다. 옥산드롤론은 아직 탐구 단계에 있고, 그의 잠재적 이익에 대한 결론에 도달하기 전에 추가의 데이터가 요구된다. 따라서, 현재 sIBM을 가진 환자의 치료에 분명한 미충족 의료 필요가 존재한다.
근육 강도의 평균 저하율은 상이한 방법 및 점수에 기초하여 연간 3.5-5.4%이며, 개별 환자에 대한 잠재적 진행률은 훨씬 더 빠르다 (Hohlfeld 2011, Cox et al. 2011). sIBM이 극적인 골격근 위축을 야기하기 때문에, 근육에서의 위축 경로를 표적화하는 치료제, 예컨대 비마그루맙이 이 질환에서 효과적일 수 있다.
브리검 앤 우먼스 호스피탈(Brigham & Women's Hospital)의 스티븐 그린버그 박사(Dr. Steven Greenberg)의 실험실로부터의 예비 데이터는 ActRIIB 및 다른 수용체의 하류 신호전달 경로가 sIBM에서 부적절하게 활성화될 수 있다는 것을 시사하고, 추가로 ActRIIB 억제가 sIBM을 가진 환자를 도울 수 있다는 가설을 지지한다. 다발근염 또는 피부근염을 가진 12명의 환자 및 5명의 정상 대조군과 비교하여 sIBM을 가진 17명의 환자로부터의 데이터에 기초하여, sIBM을 가진 환자는 정상 대조군과 비교하여 평균 27배 증가로 우세한 인산화 SMAD (pSMAD) 신호전달 (이는 ActRIIB 수용체의 하류이고, TGFβ 신호전달을 위한 제2 메신저로서 작용함)을 가졌다 (Greenberg et al. 2013).
이것을 기반으로, 가설은 TGFβ 경로를 통한 부적절한 신호전달이 sIBM의 발병기전에 대한 원인이라는 것이다. 이 TGFβ 상향조절이 ActRIIB 수용체 또는 또 다른 TGFβ 수용체를 통해 발생하는지 여부는 알려져 있지 않지만, 비마그루맙에 의한 ActRIIB 억제가 근육 위축 신호전달 경로에 개입할 수 있고 sIBM을 가진 환자가 경험하는 약화 증상을 표적화할 수 있는지 여부를 시험하는 것이 합리적일 것으로 보였다.
더욱이, 워즈식 등(Wojcik et al.)에 의한 연구는 12명의 sIBM 환자로부터의 생검의 분석을 포함하였고, 미오스타틴/미오스타틴 전구체가 단독으로 또는 아밀로이드-β에 결합한 채로 sIBM의 발병기전에서 역할을 할 수 있다는 것을 시사한다 (Wojcik et al. 2005).
비마그루맙 (BYM338)은 천연 리간드인 미오스타틴 또는 액티빈보다 더 큰 친화도로 액티빈 수용체 유형 II (ActRII)에 경쟁적으로 결합하도록 개발된 모노클로날 항체이다. 비마그루맙은 ActRII의 리간드 결합 도메인에 결합하여, 그의 리간드 (이 중 하나는 미오스타틴 및 액티빈임)의 결합 및 후속 신호전달을 방지하는 완전 인간 항체 (변형된 IgG1, 234-235-Ala-Ala, λ2)이다. 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-β) 슈퍼패밀리의 구성원인 미오스타틴은 동물 및 인간에서 골격근 질량을 음성적으로 조절하는 분비 단백질이다. 미오스타틴 신호전달은 ActRII에서 발생하고, 그의 제안된 작용 메카니즘은 Smad 2/3 경로를 통해 단백질 합성 및 근세포 분화 및 증식을 억제하는 것이다. 미오스타틴 억제 또는 유전적 절제는 근육 질량 및 강도를 증가시킨다 (Lee et al. 2005; Lee and McPherron 2001; Whittemore et al. 2003).
BYM338은 인간 및 마우스 ActRIIB와 교차-반응성이고 인간, 시노몰구스, 마우스 및 래트 골격근 세포에 대해 효과적이다. BYM338은 정맥내 (i.v.) 및 피하 (s.c.) 투여 둘 다를 위해 제제화된다.
sIBM을 가진 14명의 환자 (11명 활성, 3명 위약)에 대한 연구 CBYM338X2205로부터의 데이터는 단일 용량의 BYM338 30 mg/kg i.v. 투여 후에 BYM338이 근육 부피 및 제지방 체질량 둘 다를 위약에 비해 통계적으로 유의하게 증가시켰음을 보여주었다. 투약 8주 후에, 우성 넓적다리 근육 부피 (TMV)에 있어서 기준선으로부터의 평균 변화는 BYM338을 지지하였다 (+ 6.5%; P=0.024). 비-우성 TMV 및 전신 제지방 질량 (DXA에 의해 측정됨)은 또한 BYM338을 지지하였다 (각각 +7.6% 및 +5.7%; P=0.009 및 P=0.014). 환자는 단일 투여 후에 24주 동안 추적되었고, 정량적 근육 시험 (QMT) 및 수동 근육 시험 둘 다에 의해 측정된 바와 같이 여러 근육 군에서 근육 강도의 수치상 증가를 입증하였다. 데이터는 또한, 6-분 보행 거리 시험 (6MWD)에서 위약과 비교하여 14.6%의 통계적으로 유의한 증가 (p=0.008)에 의해 제시된 바와 같이, 단일 BYM338 투여 16주 후에 신체 기능 및 이동성에서의 이익을 시사하였다.
진행성 근육 퇴행성 질환인 산발성 봉입체 근염을 가진 환자로부터의 데이터에 의해 예시된 바와 같이, 비마그루맙 (30 mg/kg)의 단일 주사에 의해 유도된 제지방 체질량의 급속한 증가 (기준선으로부터 >5%)는 신체 성능의 유의한 증가를 촉발할 수 있다 (도 1). 중요하게는, 근육 질량 증가에 따른 기능의 개선은, 완전히 성숙되어 증가된 수축 활성을 제공하도록 준비되기 전에 아마도 골격근의 구조적/기능적 재형성을 반영하는 지체 시간을 필요로 한다.
본 개시내용은 추가로 이들 바람직한 예비 단일 용량 설정을 연구하고, 상이한 용량의 비마그루맙을 사용한 장기간 치료가 보행 sIBM 환자에서 근육 질량, 근육 강도, 신체 기능 및 이동성의 변화에 어떻게 영향을 미치는지를 조사한다.
미오스타틴, ActRIIB 수용체 및 ActRIIB 수용체 항체
BYM338로도 공지된 비마그루맙은 주요한 천연 리간드인 미오스타틴보다 더 큰 친화도로 액티빈 수용체 유형 II B (ActRIIB)에 경쟁적으로 결합하도록 개발된 인간 모노클로날 항체이다. 비마그루맙은 전문이 본원에 참조로 포함된 WO2010/125003에 개시되어 있다. 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-β) 슈퍼패밀리의 구성원인 미오스타틴은 동물 및 인간에서 생활주기 전반에 걸쳐 골격근 질량을 음성적으로 조절하는 분비 단백질이다. 미오스타틴 신호전달은 ActRIIB에서 발생하고, 그의 제안된 작용 메카니즘은 Smad 2/3 경로를 통해 단백질 합성 및 근세포 분화 및 증식을 억제하는 것이다. 발달 중인 동물 및 인간에서의 미오스타틴의 부재는 근섬유의 수 및 크기가 증가된 과다근육 표현형을 유발한다. 산후 미오스타틴 수준의 감소는 기존 근섬유의 크기의 증가로 인해 골격근의 비대를 유발한다. 성인에서, 미오스타틴은 골격근에서 생성되고, 부분적으로는 잠재성 불활성 복합체로서 혈액에서 순환된다.
골격근 질량의 내인성 억제제로서의 미오스타틴의 역할과 일치하게, BYM338은 불사용 및 스테로이드-유발 위축의 전임상 뮤린 모델에서 및 건강한 시노몰구스 원숭이를 사용한 독성학 연구에서 골격근 질량을 극적으로 증가시켰다. 또한, 마우스 및 래트에서의 증가된 질량은 근육 강도 (힘 생성)의 상응하는 증가를 유발하였다. 비마그루맙은 마우스 및 시노몰구스 원숭이에게의 i.v. 및 s.c. 투여 이후에 표적 매개 약물 배치 (TMDD)된 일관된 IgG1 약동학 (PK) 프로파일을 보여주었고, 잘 허용되었다.
인간에서 최초의 6 용량 수준의 분석인 단일 상승 용량 연구는 비마그루맙의 0.1, 0.3, 1, 3, 10 및 30 mg/kg의 단일 i.v. 용량이 안전하고, 잘 허용되며, 모델링된 전임상 데이터로부터 예측가능한 PK 프로파일을 생성한다는 것을 시사한다. 4주에서 3-30 mg/kg의 용량은 위약에 비해 기준선으로부터 2.7-5.2%의 넓적다리 근육 부피의 측정가능한 증가를 유발한다.
비마그루맙의 잠재적 임상 적용은 근육 소모성 병태에서이다. 불사용, 악액질, 코르티코스테로이드 사용 및 근육감소증으로부터 유발되는 위축으로부터 근육 질량의 회복을 필요로 하는 임상 시나리오를 특히 주목한다. 산발성 봉입체 근염 (sIBM)은 이들 중 모두의 요소가 역할을 할 수 있는 임상 상황이다.
산발성 봉입체 근염 (sIBM)을 가진 환자 집단에 개입하는 것은 고도로 혁신적이고, 높은 미충족 의료 필요를 충족시킬 것이다. 사실상, 현재 sIBM을 치료하기 위한 치료 옵션은 존재하지 않는다. 이 목적은 본 개시내용 내에 제공된 용도, 방법 및 투약 요법에 의해 달성된다.
따라서, 본 개시내용의 제1 대상은 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRII 결합 분자일 수 있는 미오스타틴 길항제를 포함하는 조성물로 sIBM을 치료하는 방법 또는 상기 조성물의 sIBM을 치료하기 위한 용도에 관한 것이다. 미오스타틴 결합 분자는, 예를 들어 미오스타틴에 대한 길항제 항체일 수 있다. ActRII 결합 분자는, 예를 들어 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 BYM338로도 공지된 비마그루맙일 수 있다.
본원에 사용된 "미오스타틴 길항제"는 (예를 들어, 미오스타틴 수용체, 즉 ActRIIB에 대한 미오스타틴의 결합을 차단함으로써) 미오스타틴 기능, 발현 및/또는 신호전달을 길항 (예를 들어, 감소, 억제, 저하, 지연)시킬 수 있는 분자를 지칭한다. 길항제의 비제한적 예는 미오스타틴 결합 분자 및 ActRIIB 수용체 결합 분자를 포함한다. 개시된 방법, 요법, 키트, 과정, 용도 및 조성물의 일부 실시양태에서, 미오스타틴 길항제가 사용된다.
"미오스타틴 결합 분자"는 단독으로 또는 다른 분자와 회합되어 인간 미오스타틴 항원에 결합할 수 있는 임의의 분자를 의미한다. 결합 반응은, 관련되지 않은 특이성을 지니지만 이상적으로 동일한 이소형의 항체, 예를 들어 항-CD25 항체가 사용되는 음성 대조군 시험을 참조하여, 예를 들어 미오스타틴이 그의 수용체에 결합하는 것의 억제를 결정하기 위한 결합 검정, 경쟁 검정 또는 생물검정 또는 임의의 종류의 결합 검정을 비롯한 표준 방법 (정성 검정)에 의해 제시될 수 있다. 미오스타틴 결합 분자의 비제한적 예는 소분자, 미오스타틴 수용체 디코이, 및 B-세포 또는 하이브리도마에 의해 생산되는 것과 같은 미오스타틴에 결합하는 항체 및 키메라, CDR-이식 또는 인간 항체 또는 그의 임의의 단편, 예를 들어 F(ab')2 및 Fab 단편, 뿐만 아니라 단일 쇄 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 바람직하게는, 미오스타틴 결합 분자는 미오스타틴 기능, 발현 및/또는 신호전달을 길항 (예를 들어, 감소, 억제, 저하, 지연)시킨다. 개시된 방법, 요법, 키트, 과정, 용도 및 조성물의 일부 실시양태에서, 미오스타틴 결합 분자가 사용된다.
"ActRII 결합 분자"는 단독으로 또는 다른 분자와 회합되어 인간 ActRII 수용체 (ActRIIA 및/또는 ActRIIB)에 결합할 수 있는 임의의 분자를 의미한다. 결합 반응은, 관련되지 않은 특이성을 지니지만 이상적으로 동일한 이소형의 항체, 예를 들어 항-CD25 항체가 사용되는 음성 대조군 시험을 참조하여, 예를 들어 ActRII 수용체가 미오스타틴에 결합하는 것의 억제를 결정하기 위한 결합 검정, 경쟁 검정 또는 생물검정 또는 임의의 종류의 결합 검정을 비롯한 표준 방법 (정성 검정)에 의해 제시될 수 있다. ActRII 수용체 결합 분자의 비제한적 예는 소분자, 미오스타틴 디코이, 및 B-세포 또는 하이브리도마에 의해 생산되는 것과 같은 ActRII 수용체에 대한 항체, 및 키메라, CDR-이식 또는 인간 항체 또는 그의 임의의 단편, 예를 들어 F(ab')2 및 Fab 단편, 뿐만 아니라 단일 쇄 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 바람직하게는, ActRII 수용체 결합 분자는 미오스타틴 기능, 발현 및/또는 신호전달을 길항 (예를 들어, 감소, 억제, 저하, 지연)시킨다. 개시된 방법, 요법, 키트, 과정, 용도 및 조성물의 일부 실시양태에서, ActRIIB 수용체 결합 분자가 사용된다.
또 다른 실시양태에서, 조성물은 서열 181의 아미노산 19-134 (서열 182)로 이루어진 결합 도메인에, 또는 (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188); (b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186); (c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190); (d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189); (e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187); (f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191); (g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는 (h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)을 포함하거나 그로 이루어진 에피토프에 결합하는 항-ActRII 항체를 포함한다.
추가의 대안적 실시양태에서, 상기 언급된 조성물은 ActRIIA에 결합하는 경우보다 10배 이상 더 큰 친화도로 ActRIIB에 결합하는 항-ActRII 항체를 포함한다.
추가로, 본 개시내용은 항-ActRIIB 항체가 서열 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 것인 조성물에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 항-ActRII 항체가 (a) 서열 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71의 경쇄 가변 영역 CDR3, (b) 서열 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 72의 경쇄 가변 영역 CDR3, (c) 서열 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 73의 경쇄 가변 영역 CDR3, (d) 서열 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 74의 경쇄 가변 영역 CDR3, (e) 서열 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 75의 경쇄 가변 영역 CDR3, (f) 서열 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 76의 경쇄 가변 영역 CDR3, (g) 서열 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 77의 경쇄 가변 영역 CDR3, (h) 서열 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 78의 경쇄 가변 영역 CDR3, (i) 서열 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 79의 경쇄 가변 영역 CDR3, (j) 서열 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 80의 경쇄 가변 영역 CDR3, (k) 서열 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 81의 경쇄 가변 영역 CDR3, (l) 서열 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 82의 경쇄 가변 영역 CDR3, (m) 서열 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는 (n) 서열 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 84의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 것인 조성물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 상기 언급된 항-ActRII 항체는 (i) 서열 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열, (ii) 서열 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열, 또는 (iii) (a) 서열 99의 가변 중쇄 서열 및 서열 85의 가변 경쇄 서열; (b) 서열 100의 가변 중쇄 서열 및 서열 86의 가변 경쇄 서열; (c) 서열 101의 가변 중쇄 서열 및 서열 87의 가변 경쇄 서열; (d) 서열 102의 가변 중쇄 서열 및 서열 88의 가변 경쇄 서열; (e) 서열 103의 가변 중쇄 서열 및 서열 89의 가변 경쇄 서열; (f) 서열 104의 가변 중쇄 서열 및 서열 90의 가변 경쇄 서열; (g) 서열 105의 가변 중쇄 서열 및 서열 91의 가변 경쇄 서열; (h) 서열 106의 가변 중쇄 서열 및 서열 92의 가변 경쇄 서열; (i) 서열 107의 가변 중쇄 서열 및 서열 93의 가변 경쇄 서열; (j) 서열 108의 가변 중쇄 서열 및 서열 94의 가변 경쇄 서열; (k) 서열 109의 가변 중쇄 서열 및 서열 95의 가변 경쇄 서열; (l) 서열 110의 가변 중쇄 서열 및 서열 96의 가변 경쇄 서열; (m) 서열 111의 가변 중쇄 서열 및 서열 97의 가변 경쇄 서열; 또는 (n) 서열 112의 가변 중쇄 서열 및 서열 98의 가변 경쇄 서열을 포함한다.
특정 측면에서, 본 개시내용은 포함된 항-ActRII 항체가 (a) 서열 146의 중쇄 서열 및 서열 141의 경쇄 서열; (b) 서열 147의 중쇄 서열 및 서열 142의 경쇄 서열; (c) 서열 148의 중쇄 서열 및 서열 143의 경쇄 서열; (d) 서열 149의 중쇄 서열 및 서열 144의 경쇄 서열; (e) 서열 150의 중쇄 서열 및 서열 145의 경쇄 서열; (f) 서열 156의 중쇄 서열 및 서열 151의 경쇄 서열; (g) 서열 157의 중쇄 서열 및 서열 152의 경쇄 서열; (h) 서열 158의 중쇄 서열 및 서열 153의 경쇄 서열; (i) 서열 159의 중쇄 서열 및 서열 154의 경쇄 서열; 또는 (j) 서열 160의 중쇄 서열 및 서열 155의 경쇄 서열을 포함하는 것인 상기 기재된 조성물에 관한 것이다.
본 개시내용의 추가의 대상은 (i) 항-ActRII 항체가 상기 기재된 항체 중 하나를 교차-차단하거나 그에 의해 교차-차단되고/거나, (ii) Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖고/거나, (iii) 상기 기재된 항체 중 하나에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 것인 조성물에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 개시된 조성물은 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 코딩된 항-ActRII 항체를 포함한다.
도 1: 산발성 봉입체 근염 환자에서 기준선으로부터의 제지방 체질량 (LBM), 사두근 강도 (QMT) 및 6-분 보행 거리 (6MWD)의 비마그루맙-유도된 변화. LBM의 증가 (제8주에서 제16주)와 제16주에서 시작하여 근육 강도 및 신체 성능의 유의한 증가 사이의 시간-지체를 주목한다.
도 2: 연구 설계
정의
본 개시내용을 보다 용이하게 이해할 수 있도록, 특정 용어를 먼저 정의한다. 추가의 정의는 상세한 설명 전반에 걸쳐 기재되어 있다.
용어 "포함하는"은 "포괄하는"을 의미하고, 예를 들어 X를 "포함하는" 조성물은 X로만 독점적으로 이루어질 수 있거나 또는 추가의 것, 예를 들어 X + Y를 포함할 수 있다.
수치값 x에 관한 용어 "약"은 예를 들어 x±10%를 의미한다.
하기에서 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRII 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙을 사용한 치료의 가능한 효과를 평가하기 위한 가능한 전임상 치료 요법을 예시한다.
치료는 시노몰구스 원숭이를 사용하여 예시되지만, 기재된 실험은 원숭이로 제한되지 않고, 통상의 기술자는 다른 종, 특히 인간에 적합한 실험 또는 투약 요법을 설정하는 방법을 알고 있다: 항-ActRII 항체, 예를 들어 비마그루맙은 정맥내 주사에 의해 수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이에게 3개월 동안 1주 1회 투여될 수 있다. 32마리 시노몰구스 원숭이 (16마리/성별)는 4개의 치료군 중 하나 (3 내지 5마리 동물/성별/군)에 배정될 수 있고, 각 비히클 또는 ActRIIB 항체, 예를 들어 BYM338이 13주 동안 매주 1회 10, 30 또는 100 mg/kg으로 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있다 (총 14회 용량; 용량은 원숭이의 근육 비대 활성을 기초로 선택될 것이다).
용어 "ActRII", "ActRIIA" 및 "ActRIIB"는 액티빈 수용체를 지칭한다. 액티빈은 적어도 2종의 유형 I (I 및 IB) 및 2종의 유형 II "ActRII" (IIA 및 IIB, 일명 ACVR2A 및 ACVR2B) 수용체를 포함하는 수용체 세린 키나제의 이종이량체 복합체를 통해 신호를 전달한다. 이들 수용체는 모두 시스테인-풍부 영역을 갖는 리간드-결합 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 세린/트레오닌 특이성이 예상되는 세포질 도메인으로 구성된 막횡단 단백질이다. 유형 I 수용체는 신호전달에 필수적이고, 반면에 유형 II 수용체는 리간드에 결합하며 유형 I 수용체를 발현/동원하는데 요구된다. 유형 I 및 II 수용체는 리간드 결합 이후에 안정한 복합체를 형성하여 유형 II 수용체에 의한 유형 I 수용체의 인산화를 유발한다. 액티빈 수용체 II (ActRII)는 미오스타틴에 대한 수용체이다. 액티빈 수용체 II B (ActRIIB)는 미오스타틴에 대한 수용체이다. 액티빈 수용체 II A (ActRIIA)는 또한 미오스타틴에 대한 수용체이다. 용어 ActRIIB 또는 Act IIB 수용체는 서열 181에 정의된 바와 같은 인간 ActRIIB (AAC64515.1, GI:3769443)를 지칭한다. 연구 등급 폴리클로날 및 모노클로날 항-ActRIIB 항체는 R&D 시스템즈(R&D Systems)® (미국 미네소타주)에서 제조된 것과 같이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 물론, 항체를 다른 종으로부터의 ActRIIB에 대해 생성시켜 그러한 종의 병리학적 병태를 치료하는데 사용할 수 있다.
용어 "면역 반응"은 병원체가 침입한 인간 신체, 병원체에 의해 감염된 세포 또는 조직, 암성 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우에 정상 인간 세포 또는 조직에 대한 선택적인 손상, 그의 파괴 또는 그로부터의 제거를 유발하는, 예를 들어 림프구, 항원 제시 세포, 식세포, 과립구 및 상기 세포 또는 간에 의해 생산되는 가용성 거대분자 (예를 들어, 항체, 시토카인 및 보체)의 작용을 지칭한다.
"신호전달 활성"은 세포의 한 부분으로부터 세포의 또 다른 부분으로의 신호의 전송을 유발하는 단백질-단백질 상호작용, 예컨대 수용체에 대한 성장 인자의 결합에 의해 일반적으로 개시되는 생화학적 인과 관계를 지칭한다. 일반적으로, 전송은 신호 전달을 야기하는 일련의 반응에서 하나 이상의 단백질 상의 하나 이상의 티로신, 세린 또는 트레오닌 잔기의 특이적 인산화를 수반한다. 끝에서 두번째 과정은 유전자 발현에서의 변화를 유발하는 핵 사건을 전형적으로 포함한다.
본원에서 지칭되는 용어 "항체"는 전체 항체 및 그의 임의의 항원 결합 단편 (즉 "항원-결합 부분") 또는 단일 쇄를 포함한다. 자연 발생 "항체"는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인, CL로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 보다 보존된 영역이 산재되어 있는 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 초가변 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 숙주 조직 또는 인자, 예를 들어 면역계의 다양한 세포 (예를 들어 이펙터 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1 성분 (Clq)에 대한 이뮤노글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
본원에 사용된 용어 항체의 "항원-결합 부분" (또는 간단히 "항원 부분")은 항원 (예를 들어, ActRIIB의 부분)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 전장 항체, 또는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 제시되었다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어 내에 포괄되는 결합 단편의 예는 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; 각각 동일한 항원에 결합하는, 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab)2 단편; VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (Ward et al., 1989 Nature 341:544-546); 및 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다.
추가로, Fv 단편의 2개의 도메인 VL 및 VH가 별개의 유전자에 의해 코딩되긴 하지만, 이들이 단일 단백질 쇄가 될 수 있게 하는 합성 펩티드 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 이들을 연결시킬 수 있고, 이에 따라 VL 영역과 VH 영역이 쌍을 형성하여 1가 분자 (단일 쇄 Fv (scFv)로 공지됨, 예를 들어 문헌 [Bird et al., 1988 Science 242:423-426; 및 Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883] 참조)를 형성한다. 이러한 단일 쇄 항체는 또한 항체의 "항원-결합 영역"이라는 용어 내에 포괄되는 것으로 의도된다. 이들 항체 단편은 통상의 기술자에게 공지된 통상의 기술을 사용하여 수득되고, 단편은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다.
본원에 사용된 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭한다 (예를 들어, ActRIIB에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 ActRIIB 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, ActRIIB에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원, 예컨대 다른 종으로부터의 ActRIIB 분자에 대한 교차-반응성을 가질 수 있다. 또한, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
용어 "교차-차단", "교차-차단된" 및 "교차-차단하는"은 표준 경쟁 결합 검정에서 항체 또는 다른 결합제가 ActRIIB, 특히 리간드 결합 도메인에 대한 다른 항체 또는 결합제의 결합을 방해하는 능력을 의미하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 단일 분자 조성의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 모노클로날 항체 조성물은 특정한 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 디스플레이한다.
본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역이 둘 다 인간 기원의 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 또한, 항체가 불변 영역를 함유하는 경우에, 불변 영역은 또한 그러한 인간 서열, 예를 들어 인간 배선 서열, 또는 인간 배선 서열의 돌연변이된 버전, 또는 예를 들어 문헌 [Knappik, et al. (2000. J Mol Biol 296, 57-86)]에 기재된 바와 같이 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래된 컨센서스 프레임워크 서열을 함유하는 항체로부터 유래된다. 본 개시내용의 인간 항체는 인간 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기 (예를 들어, 시험관내에서의 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내에서의 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 또 다른 포유동물 종, 예컨대 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 그라프팅된 항체를 포함하는 것으로 의도되는 것은 아니다.
용어 "인간 모노클로날 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역이 둘 다 인간 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는, 단일 결합 특이성을 디스플레이하는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 인간 모노클로날 항체는 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스진 및 경쇄 트랜스진을 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 비인간 동물, 예를 들어 트랜스제닉 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
본원에 사용된 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체, 예컨대 인간 이뮤노글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉 또는 트랜스크로모소말인 동물 (예를 들어, 마우스), 또는 이로부터 제조된 하이브리도마로부터 단리된 항체, 인간 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포, 예를 들어 트랜스펙토마로부터 단리된 항체, 재조합의 조합형 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 인간 이뮤노글로불린 유전자 서열의 전부 또는 일부를 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 것을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역이 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 실시양태에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내 돌연변이유발 (또는 인간 Ig 서열에 대해 트랜스제닉인 동물이 사용되는 경우에, 생체내 체세포 돌연변이유발)될 수 있고, 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 배선 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만, 생체내 인간 항체 배선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재할 수 없는 서열이다.
본원에 사용된 "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 제공되는 항체 부류 (예를 들어, IgM, IgE, IgG, 예컨대 IgG1 또는 IgG2)를 지칭한다.
어구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 본원에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 "ActRIIB 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는" 항체는 약 100 nM 이하, 약 10 nM 이하, 약 1 nM 이하의 KD로 인간 ActRIIB 폴리펩티드에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. "ActRIIB 이외의 항원과 교차-반응하는" 항체는 약 10 x 10-9 M 이하, 약 5 x 10-9 M 이하, 또는 약 2 x 10-9 M 이하의 KD로 상기 항원에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. "특정한 항원과 교차-반응하지 않는" 항체는 약 1.5 x 10-8 M 이상의 KD, 또는 약 5-10 x 10-8 M 또는 약 1 x 10-7 M 이상의 KD로 상기 항원에 결합하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 특정 실시양태에서, 항원과 교차-반응하지 않는 이러한 항체는 표준 결합 검정에서 이들 단백질에 대해 본질적으로 검출가능하지 않은 결합을 나타낸다. KD는 바이오센서 시스템, 예컨대 비아코어(Biacore)® 시스템 또는 용액 평형 적정을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "길항제 항체"는 미오스타틴 또는 다른 ActRIIB 리간드, 예컨대 액티빈 또는 GDF-11의 존재 하에 ActRIIB 유도된 신호전달 활성을 억제하는 항체, 및/또는 미오스타틴 또는 다른 ActRIIA 리간드, 예컨대 액티빈 또는 GDF-11의 존재 하에 ActRIIA 유도된 신호전달 활성을 억제하는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 이를 검출하기 위한 검정의 예는 미오스타틴 유도된 신호전달의 억제 (예를 들어 Smad 의존성 리포터 유전자 검정에 의함), 미오스타틴 유도된 Smad 인산화의 억제 (P-Smad ELISA) 및 미오스타틴 유도된 골격근 세포 분화 억제의 억제 (예를 들어 크레아틴 키나제 검정에 의함)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 Smad 의존성 리포터 유전자 검정에 의한 측정 시에 약 10 nM 이하, 약 1 nM 이하 또는 약 100 pM 이하의 IC50으로 미오스타틴 유도된 신호전달을 억제한다.
본원에 사용된, "효능작용 활성이 없는" 항체는 세포 기반 검정, 예컨대 미오스타틴 유도된 신호전달의 억제 (예를 들어 Smad 의존성 리포터 유전자 검정에 의함), 미오스타틴 유도된 Smad 인산화의 억제 (P-Smad ELISA) 및 미오스타틴 유도된 골격근 세포 분화의 억제의 억제 (예를 들어 크레아틴 키나제 검정에 의함)에서 미오스타틴의 부재 하에 ActRIIB 매개된 신호전달 활성을 유의하게 증가시키지 않는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 이러한 검정은 하기 실시예에 보다 상세하게 기재되어 있다.
본원에 사용된 용어 "Kassoc" 또는 "Ka"는 특정한 항체-항원 상호작용의 회합 속도를 지칭하는 것으로 의도되고, 반면에 본원에 사용된 용어 "Kdis" 또는 "Kd"는 특정한 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "KD"는 Ka에 대한 Kd의 비 (즉, Kd/Ka)로부터 수득되는 해리 상수를 지칭하는 것으로 의도되고, 몰 농도 (M)로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 관련 기술분야에 널리 확립된 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 항체의 KD를 결정하는 방법은 표면 플라즈몬 공명, 예컨대 비아코어®의 바이오센서 시스템 또는 용액 평형 적정 (SET)을 사용하는 것에 의한다 (문헌 [Friguet B et al. (1985) J. Immunol Methods; 77(2): 305-319, 및 Hanel C et al. (2005) Anal Biochem; 339(1): 182-184] 참조).
본원에 사용된 용어 "친화도"는 단일 항원 부위에서의 항체와 항원 사이의 상호작용의 강도를 지칭한다. 각각의 항원 부위 내에서, 항체 "아암"의 가변 영역은 다수의 부위에서 항원과 약한 비-공유 결합력을 통해 상호작용하고; 상호작용이 더 많을수록 친화도가 더 강해진다.
본원에 사용된 용어 "결합력"은 항체-항원 복합체의 전체 안정성 또는 강도에 대한 유익한 척도를 지칭한다. 이는 항체 에피토프 친화도; 항원과 항체 둘 다의 원자가; 및 상호작용 부분의 구조적 정렬의 3가지 주요 인자에 의해 제어된다. 궁극적으로, 이들 인자는 항체의 특이성, 즉 특정한 항체가 정확한 항원 에피토프에 결합할 가능성을 정의한다.
본원에 사용된 용어 "ADCC" 또는 "항체 의존성 세포 세포독성" 활성은 인간 B 세포 고갈 활성을 지칭한다. ADCC 활성은 통상의 기술자에게 공지되어 있는 인간 B 세포 고갈 검정에 의해 측정될 수 있다.
보다 높은 결합력의 프로브를 얻기 위해, 이량체 접합체 (FACS 마커에 커플링된 항체 단백질의 2개 분자)를 구축하여, FACS에 의해 저친화도 상호작용 (예를 들어, 배선 항체와의 것)이 보다 용이하게 검출되도록 할 수 있다. 또한, 항원 결합의 결합력을 증가시키는 또 다른 수단은 항-ActRIIB 항체의 본원에 기재된 임의의 구축물의 이량체, 삼량체 또는 다량체를 생성하는 것을 수반한다. 이러한 다량체는, 예를 들어 천연 C-대-N-말단 결합을 모방함으로써 또는 불변 영역을 통해 함께 유지되는 항체 이량체를 모방함으로써 개별 모듈들 사이의 공유 결합을 통해 생성될 수 있다. Fc/Fc 계면 내로 조작된 결합은 공유 또는 비-공유 결합일 수 있다. 또한, Fc 이외의 이량체화 또는 다량체화 파트너가 그러한 보다 고차의 구조를 생성하기 위해 ActRIIB 하이브리드에 사용될 수 있다. 예를 들어, 다량체화 도메인, 예컨대 WO2004/039841에 기재되어 있는 삼량체화 도메인 또는 WO98/18943에 기재된 오량체화 도메인을 사용하는 것이 가능하다.
본원에 사용된 용어 항체에 대한 "선택성"은 특정 표적 폴리펩티드에 결합하지만 밀접하게 관련된 폴리펩티드에는 결합하지 않는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 항체에 대한 "고 친화도"는 표적 항원에 대해 1nM 이하의 KD를 갖는 항체를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다.
용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "최적화된"은 뉴클레오티드 서열이 생산 세포 또는 유기체, 일반적으로 진핵 세포, 예를 들어 피키아(Pichia) 세포 또는 트리코더마(Trichoderma) 세포, 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO) 또는 인간 세포에서 바람직한 코돈을 사용하여 아미노산 서열을 코딩하도록 변경된 것을 의미한다. 최적화된 뉴클레오티드 서열은, 또한 "모" 서열로도 공지되어 있는 출발 뉴클레오티드 서열에 의해 본래 코딩되는 아미노산 서열을 완전하게 또는 가능한 한 많이 보유하도록 조작된다. 최적화된 서열은 본원에서 CHO 포유동물 세포에서 바람직한 코돈을 갖도록 조작되지만, 다른 진핵 세포에서의 이들 서열의 최적화된 발현이 또한 본원에서 고려된다. 최적화된 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열도 또한 최적화된 것으로 지칭된다.
개시내용의 상세한 설명
ActRII 수용체에 대한 항체, 예를 들어 비마그루맙은 미오스타틴이 수용체에 결합하는 것을 방지하여 sIBM 환자를 치료할 수 있는 것으로 발견되었다.
따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRII 결합 분자, 보다 바람직하게는 항-ActRII 항체, 예를 들어 비마그루맙, 또는 사용하기 위한 상기 항체의 항원-결합 부분을 포함하는 기능적 단백질을 포함하는 조성물을 제공한다. 한 실시양태에서, ActRIIB는 인간 ActRIIB이다. 인간 ActRIIB의 폴리펩티드 서열은 서열 181 (AAC64515.1, GI:3769443)에 제시된다. 한 실시양태에서, 항체 또는 기능적 단백질은 기원을 갖는 포유동물, 예컨대 인간 또는 낙타류로부터의 것이다. 따라서 개시된 조성물에 포함된 항체는 키메라, 인간 또는 인간화 항체일 수 있다. 특정한 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항-ActRIIB 항체는 표적 단백질 ActRIIB에 특이적이고 ActRIIB 또는 ActRIIB의 단편에 결합하는 항원-결합 영역을 가짐을 특징으로 한다.
개시된 조성물 및 요법은 또한 연령 관련 이동 장애, 암, 악액질, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 및 관절 치환술, 예를 들어 슬관절성형술 또는 고관절성형술, 또는 고관절 골절을 치료하는데 사용하기에 적합하다.
한 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 효능작용 활성이 없거나 낮은 ActRII 길항제이다. 또 다른 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체 또는 기능적 단편은 표적 단백질 ActRII에 결합하고, 미오스타틴의 ActRII에 대한 결합을 기저 수준으로 감소시킨다. 이러한 실시양태의 추가 측면에서, 개시된 조성물에 포함된 항체 또는 기능적 단편은 미오스타틴이 ActRII에 결합하는 것을 완전히 방지한다. 추가 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체 또는 기능적 단편은 Smad 활성화를 억제한다. 추가 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체 또는 기능적 단편은 Smad-의존성 경로를 통한 골격 분화의 액티빈 수용체 유형 IIB 매개된 미오스타틴-유도된 억제를 억제한다.
결합은 항체에 의한 길항작용 또는 효능작용인 활성을 측정하는데 사용될 수 있는 하나 이상의 검정에 의해 결정될 수 있다. 바람직하게는, 검정은 미오스타틴의 ActRIIB에 대한 결합의 억제 (ELISA에 의함); 미오스타틴 유도된 신호전달의 억제 (예를 들어 Smad 의존성 리포터 유전자 검정에 의함), 미오스타틴 유도된 Smad 인산화의 억제 (P-Smad ELISA) 및 골격근 세포 분화의 미오스타틴 유도된 억제의 억제 (예를 들어 크레아틴 키나제 검정에 의함)를 포함하는, ActRIIB에 대한 항체의 효과 중 적어도 하나를 측정한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 ActRIIB의 미오스타틴 결합 영역 (즉, 리간드 결합 도메인)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 이 리간드 결합 도메인은 서열 181의 아미노산 19-134로 이루어지고, 본원에서 서열 182로 배정되었다. 리간드 결합 도메인은 여러 하기 기재된 에피토프를 포함한다.
한 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 ActRIIB에 약 100nM 이하, 약 10nM 이하, 약 1nM 이하의 KD로 결합한다. 바람직하게는, 개시된 조성물에 포함된 항체는 ActRIIB에 100pM 이하 (즉 약 100pM, 약 50pM, 약 10pM, 약 2 pM, 약 1pM 또는 그 미만)의 친화도로 결합한다. 한 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 ActRIIB에 약 1 내지 약 10pM의 친화도로 결합한다.
한 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 ActRIIB 관련된 단백질과 교차-반응하지 않고, 특히 인간 ActRIIA (NP_001607.1, GI:4501897)와 교차-반응하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 ActRIIA와 교차-반응하고, 그들이 ActRIIA에 결합하는 경우와 동등한 친화도로, 또는 약 1, 2, 3, 4 또는 5배 더 큰 친화도로, 보다 바람직하게는 약 10배 더 큰 친화도로, 보다 더 바람직하게는 약 20-, 30- ,40- 또는 50배 더 큰 친화도로, 보다 더 바람직하게는 약 100배 더 큰 친화도로 ActRIIB에 결합한다.
한 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 100pM 이상 (즉 약 250pM, 약 500pM, 약 1nM, 약 5nM 또는 그 초과)의 친화도로 ActRIIA에 결합한다.
한 실시양태에서 개시된 조성물에 포함된 항체는 IgG2 이소형의 것이다.
또 다른 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 IgG1 이소형의 것이다. 추가 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 IgG1 이소형의 것이고, Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는다. 상기 변경된 이펙터 기능은 감소된 ADCC 및 CDC 활성일 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 변경된 이펙터 기능은 침묵화된 ADCC 및 CDC 활성이다.
또 다른 관련된 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 활성 또는 CDC 활성이 없는 완전 인간 또는 인간화 IgG1 항체이고, 서열 181의 아미노산 19-134로 이루어진 ActRIIB의 영역에 결합한다.
또 다른 관련된 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 감소된 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 활성 또는 CDC 활성을 갖는 완전 인간 또는 인간화 IgG1 항체이고, 서열 181의 아미노산 19-134로 이루어진 ActRIIB의 영역에 결합한다.
본 개시내용은 기계적 환기를 떼지 못하는 중환자에서 기계적 환기 해방까지의 시간을 감소시키는데 사용하기 위한 인간 또는 인간화 항-ActRIIB 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 개시된 조성물에 포함된 항체는 특정한 중쇄 및 경쇄 서열로부터 유래되고/거나 특정한 구조적 특징, 예컨대 특정한 아미노산 서열을 포함하는 CDR 영역을 포함한다. 본 개시내용은은 단리된 ActRIIB 항체, 이러한 항체의 제조 방법, 이러한 항체를 포함하는 면역접합체 및 다가 또는 다중특이적 분자, 및 상기 항체, 면역접합체 또는 이중특이적 분자를 함유하는 제약 조성물을 제공한다.
대안적 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 측면에 따라 사용하기 위한 미오스타틴 길항제를 포함하는 조성물에 관한 것이다:
1. 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 미오스타틴 길항제.
2. 제1 측면에 있어서, 상기 치료를 필요로 하는 환자에게 약 1-10 mg/kg의 용량으로 투여되는 미오스타틴 길항제.
3. 제1 측면 또는 제2 측면에 있어서, 약 1, 약 3 또는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 미오스타틴 길항제.
4. 제1 측면 내지 제3 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 정맥내로 투여되는 미오스타틴 길항제.
5. 제1 측면 내지 제4 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 4주마다 투여되는 미오스타틴 길항제.
6. 제1 측면 내지 제5 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 환자가 보행 환자인 미오스타틴 길항제.
7. 제1 측면 내지 제6 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 질환의 진행을 늦추거나 신체 기능 및 이동성을 개선시키는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
8. 제1 측면 내지 제6 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 연하곤란 또는 삼킴 곤란을 개선시키는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
9. 제1 측면 내지 제6 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 상지 강도를 개선시키는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
10. 제1 측면 내지 제6 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 낙상의 발생률을 감소시키거나 낙상을 예방하는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
11. 제1 측면 내지 제10 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 미오스타틴 수용체 결합 분자인 미오스타틴 길항제.
12. 제1 측면 내지 제11 측면 중 어느 한 측면에 있어서, ActRII 수용체 길항제인 미오스타틴 길항제.
13. 제1 측면 내지 제12 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항-ActRII 수용체 항체인 미오스타틴 길항제.
14. 제1 측면 내지 제13 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항-ActRII 수용체 항체가 비마그루맙인 미오스타틴 길항제.
15. 제13 측면 또는 제14 측면에 있어서, 서열 181의 아미노산 19-134 (서열 182)로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRII 항체인 미오스타틴 길항제.
16. 제13 측면 내지 제15 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항-ActRII 항체가
(a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하거나 그로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 것인 미오스타틴 길항제.
17. 제13 측면 내지 제16 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항-ActRIIB 항체가
a) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체; 및
b) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는, ActRIIB에 대한 길항제 항체
로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서 항체는 약 2 pM의 KD를 갖는 것인 미오스타틴 길항제.
18. 제13 측면 내지 제17 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 ActRIIA에 결합하는 경우보다 10배 이상 더 큰 친화도로 ActRIIB에 결합하는 것인 미오스타틴 길항제.
19. 제13 측면 내지 제18 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 서열 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
20. 제13 측면 내지 제19 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가
(a) 서열 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(b) 서열 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 72의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(c) 서열 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 73의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(d) 서열 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 74의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(e) 서열 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 75의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(f) 서열 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 76의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(g) 서열 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 77의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(h) 서열 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 78의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(i) 서열 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 79의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(j) 서열 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 80의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(k) 서열 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 81의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(l) 서열 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 82의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(m) 서열 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는
(n) 서열 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 84의 경쇄 가변 영역 CDR3
을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
21. 제13 측면 내지 제20 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 서열 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
22. 제13 측면 내지 제21 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 서열 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
23. 제13 측면 내지 제22 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가
(a) 서열 99의 가변 중쇄 서열 및 서열 85의 가변 경쇄 서열;
(b) 서열 100의 가변 중쇄 서열 및 서열 86의 가변 경쇄 서열;
(c) 서열 101의 가변 중쇄 서열 및 서열 87의 가변 경쇄 서열;
(d) 서열 102의 가변 중쇄 서열 및 서열 88의 가변 경쇄 서열;
(e) 서열 103의 가변 중쇄 서열 및 서열 89의 가변 경쇄 서열;
(f) 서열 104의 가변 중쇄 서열 및 서열 90의 가변 경쇄 서열;
(g) 서열 105의 가변 중쇄 서열 및 서열 91의 가변 경쇄 서열;
(h) 서열 106의 가변 중쇄 서열 및 서열 92의 가변 경쇄 서열;
(i) 서열 107의 가변 중쇄 서열 및 서열 93의 가변 경쇄 서열;
(j) 서열 108의 가변 중쇄 서열 및 서열 94의 가변 경쇄 서열;
(k) 서열 109의 가변 중쇄 서열 및 서열 95의 가변 경쇄 서열;
(l) 서열 110의 가변 중쇄 서열 및 서열 96의 가변 경쇄 서열;
(m) 서열 111의 가변 중쇄 서열 및 서열 97의 가변 경쇄 서열; 또는
(n) 서열 112의 가변 중쇄 서열 및 서열 98의 가변 경쇄 서열
을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
24. 제13 측면 내지 제23 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가
(a) 서열 146의 중쇄 서열 및 서열 141의 경쇄 서열;
(b) 서열 147의 중쇄 서열 및 서열 142의 경쇄 서열;
(c) 서열 148의 중쇄 서열 및 서열 143의 경쇄 서열;
(d) 서열 149의 중쇄 서열 및 서열 144의 경쇄 서열;
(e) 서열 150의 중쇄 서열 및 서열 145의 경쇄 서열;
(f) 서열 156의 중쇄 서열 및 서열 151의 경쇄 서열;
(g) 서열 157의 중쇄 서열 및 서열 152의 경쇄 서열;
(h) 서열 158의 중쇄 서열 및 서열 153의 경쇄 서열;
(i) 서열 159의 중쇄 서열 및 서열 154의 경쇄 서열; 또는
(j) 서열 160의 중쇄 서열 및 서열 155의 경쇄 서열
을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
25. 제13 측면 내지 제24 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가, 제10항의 적어도 하나의 항체가 ActRIIB에 결합하는 것을 교차-차단하거나 또는 ActRIIB에의 결합에 대해 제10항의 적어도 하나의 항체에 의해 교차-차단되는 것인 미오스타틴 길항제.
26. 제13 측면 내지 제25 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는 것인 미오스타틴 길항제.
27. 제13 측면 내지 제26 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 제15 측면 내지 제17 측면에 열거된 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 것인 미오스타틴 길항제.
28. 제13 측면 내지 제27 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 코딩된 것인 미오스타틴 길항제.
29. 4주마다 약 1-10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
30. 4주마다 약 1 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
31. 4주마다 약 3 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
32. 4주마다 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
33. 산발성 봉입체 근염의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 미오스타틴 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
34. 제33 측면에 있어서, 상기 미오스타틴 길항제를 약 1-10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
35. 제33 측면 또는 제34 측면에 있어서, 약 1, 약 3 또는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
36. 제33 측면 내지 제35 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 미오스타틴 길항제를 정맥내로 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
37. 제33 측면 내지 제36 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 미오스타틴 길항제를 4주마다 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
38. 제33 측면 내지 제37 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 환자가 보행 환자인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
39. 제33 측면 내지 제38 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 질환의 진행을 늦추거나 신체 기능 및 이동성을 개선시키는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
40. 제33 측면 내지 제38 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 연하곤란 또는 삼킴 곤란을 개선시키는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
41. 제33 측면 내지 제38 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 상지 강도를 개선시키는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
42. 제33 측면 내지 제38 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 낙상의 발생률을 감소시키거나 낙상을 예방하는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
43. 제33 측면 내지 제42 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 미오스타틴 길항제가 미오스타틴 수용체 결합 분자인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
44. 제33 측면 내지 제43 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 미오스타틴 길항제가 ActRII 수용체 길항제인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
45. 제33 측면 내지 제44 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 미오스타틴 길항제가 항-ActRII 수용체 항체인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
46. 제33 측면 내지 제45 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항-ActRII 수용체 항체가 비마그루맙인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
47. 제45 측면 또는 제46 측면에 있어서, 미오스타틴 길항제가 서열 181의 아미노산 19-134 (서열 182)로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRII 항체인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
48. 제45 측면 내지 제47 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항-ActRII 항체가
(a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하거나 그로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
49. 제45 측면 내지 제48 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항-ActRIIB 항체가
a) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체; 및
b) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는, ActRIIB에 대한 길항제 항체
로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서 항체는 약 2 pM의 KD를 갖는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
50. 제45 측면 내지 제49 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 ActRIIA에 결합하는 경우보다 10배 이상 더 큰 친화도로 ActRIIB에 결합하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
51. 제45 측면 내지 제50 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 서열 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
52. 제45 측면 내지 제51 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가
(a) 서열 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(b) 서열 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 72의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(c) 서열 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 73의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(d) 서열 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 74의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(e) 서열 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 75의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(f) 서열 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 76의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(g) 서열 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 77의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(h) 서열 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 78의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(i) 서열 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 79의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(j) 서열 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 80의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(k) 서열 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 81의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(l) 서열 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 82의 경쇄 가변 영역 CDR3,
(m) 서열 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는
(n) 서열 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 84의 경쇄 가변 영역 CDR3
을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
53. 제45 측면 내지 제52 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 서열 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
54. 제45 측면 내지 제53 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 서열 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
55. 제45 측면 내지 제54 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가
(a) 서열 99의 가변 중쇄 서열 및 서열 85의 가변 경쇄 서열;
(b) 서열 100의 가변 중쇄 서열 및 서열 86의 가변 경쇄 서열;
(c) 서열 101의 가변 중쇄 서열 및 서열 87의 가변 경쇄 서열;
(d) 서열 102의 가변 중쇄 서열 및 서열 88의 가변 경쇄 서열;
(e) 서열 103의 가변 중쇄 서열 및 서열 89의 가변 경쇄 서열;
(f) 서열 104의 가변 중쇄 서열 및 서열 90의 가변 경쇄 서열;
(g) 서열 105의 가변 중쇄 서열 및 서열 91의 가변 경쇄 서열;
(h) 서열 106의 가변 중쇄 서열 및 서열 92의 가변 경쇄 서열;
(i) 서열 107의 가변 중쇄 서열 및 서열 93의 가변 경쇄 서열;
(j) 서열 108의 가변 중쇄 서열 및 서열 94의 가변 경쇄 서열;
(k) 서열 109의 가변 중쇄 서열 및 서열 95의 가변 경쇄 서열;
(l) 서열 110의 가변 중쇄 서열 및 서열 96의 가변 경쇄 서열;
(m) 서열 111의 가변 중쇄 서열 및 서열 97의 가변 경쇄 서열; 또는
(n) 서열 112의 가변 중쇄 서열 및 서열 98의 가변 경쇄 서열
을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
56. 제45 측면 내지 제55 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가
(a) 서열 146의 중쇄 서열 및 서열 141의 경쇄 서열;
(b) 서열 147의 중쇄 서열 및 서열 142의 경쇄 서열;
(c) 서열 148의 중쇄 서열 및 서열 143의 경쇄 서열;
(d) 서열 149의 중쇄 서열 및 서열 144의 경쇄 서열;
(e) 서열 150의 중쇄 서열 및 서열 145의 경쇄 서열;
(f) 서열 156의 중쇄 서열 및 서열 151의 경쇄 서열;
(g) 서열 157의 중쇄 서열 및 서열 152의 경쇄 서열;
(h) 서열 158의 중쇄 서열 및 서열 153의 경쇄 서열;
(i) 서열 159의 중쇄 서열 및 서열 154의 경쇄 서열; 또는
(j) 서열 160의 중쇄 서열 및 서열 155의 경쇄 서열
을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
57. 제45 측면 내지 제56 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가, 제10 측면의 적어도 하나의 항체가 ActRIIB에 결합하는 것을 교차-차단하거나 또는 ActRIIB에의 결합에 대해 제10 측면의 적어도 하나의 항체에 의해 교차-차단되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
58. 제45 측면 내지 제57 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
59. 제45 측면 내지 제58 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 제46 측면 내지 제48 측면에 열거된 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
60. 제45 측면 내지 제59 측면 중 어느 한 측면에 있어서, 항체가 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 코딩된 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
61. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
62. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 1-10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
63. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 1 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
64. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 3 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
65. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
66. 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
67. 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 150 mg/ml의 비마그루맙을 포함하는 조성물.
68. 150 mg/ml의 비마그루맙을 포함하는 단위 투여 형태.
추가 측면에서 단위 투여 형태, 즉 바이알은 100-200 mg/ml의 비마그루맙, 바람직하게는 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160,165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200 mg/ml의 비마그루맙을 포함한다.
69. 용액으로 희석된 하나 이상의 바이알로부터 적절한 양의 비마그루맙을 포함하는 주입 백.
용액은 바람직하게는 덱스트로스 용액이다.
일부 추가 실시양태에서, 미오스타틴 길항제, 바람직하게는 AcRII 길항제 또는 항-ActRII 항체, 예컨대 비마그루맙은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여된다.
본 개시내용의 다양한 측면이 하기의 서브섹션에 추가로 상세하게 기재되어 있다. 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 및 RIA를 비롯한, 다양한 종의 ActRII에 대한 항체의 결합 능력을 평가하기 위한 표준 검정이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 적합한 검정은 실시예에 상세하게 기재되어 있다. 항체의 결합 친화도는 또한 관련 기술분야에 공지된 표준 검정, 예컨대 비아코어 분석 또는 용액 평형 적정에 의해 평가될 수 있다. 비아코어와 같은 표준 플라즈몬 공명을 기반으로 하는 기술은 결합 동역학을 결정할 수 있어서 결합 친화도의 계산이 가능하다. ActRIIB의 기능적 특성 (예를 들어 수용체 결합, 인간 B 세포 증식 또는 IgG 생산의 방지 또는 유도)에 대한 항체의 효과를 평가하기 위한 검정이 실시예에 보다 상세하게 기재되어 있다.
따라서, 관련 기술분야에 공지된 및 본원에 기재된 방법론에 따라 결정 시에 이들 ActRII의 기능적 특성 (예를 들어, 생화학, 면역화학, 세포성, 생리학적 또는 다른 생물학적 활성 등) 중 하나 이상을 "억제하는" 항체는 항체의 부재 하에 (또는 예를 들어 비관련 특이성의 대조군 항체가 존재할 때) 관찰되는 것에 비해 특정한 활성이 통계적으로 유의하게 감소되는 것과 관련되는 것으로 이해될 것이다. ActRII 활성을 억제하는 항체는 측정된 파라미터의 적어도 10%만큼, 적어도 50%, 80% 또는 90%만큼의 통계적으로 유의한 감소를 일으키고, 특정 실시양태에서 본 개시내용의 항체는 ActRIIB 기능적 활성의 95%, 98% 또는 99% 초과를 억제할 수 있다.
항체 또는 다른 결합제가 ActRII에 대한 또 다른 항체 또는 결합 분자의 결합을 방해할 수 있는 능력 또는 정도, 및 이로써 본 개시내용에 따라 교차-차단하는 것으로 언급될 수 있는지의 여부는 표준 경쟁 결합 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 한 적합한 검정은 표면 플라즈몬 공명 기술을 사용하여 상호작용의 정도를 측정할 수 있는 비아코어 기술 (예를 들어 비아코어 기기 (비아코어, 스웨덴 웁살라 소재)를 사용함)의 사용을 수반한다. 교차-차단을 측정하기 위한 또 다른 검정은 ELISA-기반 접근법을 사용한다. 추가의 검정은 ActRIIB 발현 세포에의 결합에 대한 다양한 항체의 경쟁이 시험되는 FACS 분석을 사용한다 (예컨대 실시예에 기재됨).
본 개시내용에 따르면, 본 개시내용에 따른 교차-차단 항체 또는 다른 결합제는 기재된 비아코어 교차-차단 검정에서 항체 또는 결합제의 조합물 (혼합물)의 기록된 결합이 조합된 2개의 항체 또는 결합제의 최대 이론적 결합 (상기에서 정의함)의 80% 내지 0.1% (예를 들어 80% 내지 4%), 구체적으로 최대 이론적 결합의 75% 내지 0.1% (예를 들어 75% 내지 4%), 보다 구체적으로 70% 내지 0.1% (예를 들어 70% 내지 4%), 보다 구체적으로 최대 이론적 결합의 65% 내지 0.1% (예를 들어 65% 내지 4%)이도록 ActRII에 결합한다.
시험 항체가 양성 대조군 웰 (즉 동일한 항-ActRIIB 항체 및 ActRIIB, 그러나 "시험" 교차-차단 항체는 아님)과 비교하였을 때 ActRIIB에 대한 항-ActRII 항체 결합을 60% 내지 100%, 구체적으로 70% 내지 100%, 보다 구체적으로 80% 내지 100% 감소시킬 수 있다면, 항체는 ELISA 검정에서 본 개시내용의 항-ActRIIB 항체를 교차-차단하는 것으로 정의된다. 본원에 인용된 교차-차단 항체의 예는 MOR08159 및 MOR08213 (WO2010/125003에 개시됨)이다. 따라서, 본 개시내용은 ActRIIB에의 결합에 대해 MOR08159 또는 MOR08213을 교차-차단하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
재조합 항체
본 개시내용 내에 사용된 조성물에 포함되는 항체, 예를 들어 ActRII에 대한 길항제 항체, 예컨대 비마그루맙은 실시예에 기재된 바와 같이 단리되고 구조적으로 특성화된 인간 재조합 항체를 포함한다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 VH 아미노산 서열은 서열 99-112에 제시된다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 VL 아미노산 서열은 각각 서열 85-98에 제시된다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 바람직한 전장 중쇄 아미노산 서열의 예는 서열 146-150 및 156-160에 제시된다. 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 바람직한 전장 경쇄 아미노산 서열의 예는 각각 서열 141-145 및 151-155에 제시된다. 본 발명의 조성물에 포함된 다른 항체는 CDR 영역에서 아미노산 결실, 삽입 또는 치환에 의해 돌연변이되었지만 상기 기재된 서열로 나타내어지는 CDR 영역과 적어도 60, 70, 80, 90, 95, 97 또는 99 퍼센트 동일성을 갖는 아미노산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 기재된 서열로 나타내어지는 CDR 영역과 비교하였을 때 CDR 영역에서 아미노산 결실, 삽입 또는 치환에 의해 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 돌연변이된 돌연변이체 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 가변 중쇄 모 뉴클레오티드 서열은 서열 127-140에 제시된다. 가변 경쇄 모 뉴클레오티드 서열은 서열 113-126에 제시된다. 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화된 전장 경쇄 뉴클레오티드 서열은 서열 161-165 및 171-175에 제시된다. 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화된 전장 중쇄 뉴클레오티드 서열은 서열 166-170 및 176-180에 제시된다. 본 발명의 조성물에 포함된 다른 항체는 돌연변이되었지만 상기 기재된 서열에 대해 적어도 60 이상 (즉 80, 90, 95, 97, 99 또는 그 초과) 퍼센트 동일성을 갖는 핵산에 의해 코딩된 아미노산을 포함하거나 또는 상기 핵산에 의해 코딩된다. 일부 실시양태에서는, 상기 기재된 서열로 나타내어지는 가변 영역과 비교하였을 때 가변 영역에서 아미노산 결실, 삽입 또는 치환에 의해 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이 돌연변이된 돌연변이체 아미노산 서열을 포함한다.
각각의 이들 항체가 동일한 에피토프에 결합하고 동일한 모 항체로부터의 자손이기 때문에, VH, VL, 전장 경쇄 및 전장 중쇄 서열 (뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열)은 "혼합 및 매칭"되어 본 개시내용의 다른 항-ActRIIB 결합 분자를 생성할 수 있다. 이러한 "혼합 및 매칭"된 항체의 ActRIIB 결합은 상기 및 실시예에 기재된 결합 검정 (예를 들어 ELISA)을 사용하여 시험될 수 있다. 이들 쇄가 혼합 및 매칭되는 경우에, 특정한 VH/VL 쌍형성으로부터의 VH 서열은 구조적으로 유사한 VH 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정한 전장 중쇄 / 전장 경쇄 쌍형성으로부터의 전장 중쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 중쇄 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정한 VH/VL 쌍형성으로부터의 VL 서열은 구조적으로 유사한 VL 서열로 대체되어야 한다. 마찬가지로, 특정한 전장 중쇄 / 전장 경쇄 쌍형성으로부터의 전장 경쇄 서열은 구조적으로 유사한 전장 경쇄 서열로 대체되어야 한다. 따라서, 한 측면에서, 본 개시내용은 서열 99-112로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열 85-98로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 갖는 재조합 항-ActRII 항체 또는 그의 항원 결합 영역을 포함하는 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은
(i) 서열 99-112로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 전장 중쇄 및 서열 85-98로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 전장 경쇄를 갖는 단리된 재조합 항-ActRII 항체, 또는
(ii) 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질
을 포함하는 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은
(i) 포유동물의 세포에서의 발현을 위해 최적화된 서열 127-140으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 전장 중쇄 및 포유동물의 세포에서의 발현을 위해 최적화된 서열 113-126으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 전장 경쇄를 갖는 단리된 재조합 항-ActRII 항체, 또는
(ii) 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질
을 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물에 포함된 항체의 VH CDR1의 아미노산 서열의 예는 서열 1-14에 제시된다. 항체의 VH CDR2의 아미노산 서열은 서열 15-28에 제시된다. 항체의 VH CDR3의 아미노산 서열은 서열 29-42에 제시된다. 항체의 VL CDR1의 아미노산 서열은 서열 43-56에 제시된다. 항체의 VL CDR2의 아미노산 서열은 서열 57-70에 제시된다. 항체의 VL CDR3의 아미노산 서열은 서열 71-84에 제시된다. CDR 영역은 카바트(Kabat) 시스템을 사용하여 설명된다 (Kabat, E. A., et al., 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). CDR 영역을 결정하는 대안적 방법은 코티아(Chothia)에 의해 고안된 방법을 사용한다 (Chothia et al. 1989, Nature, 342:877-883). 코티아 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기반으로 한다. 그러나, 코티아에 의해 사용된 넘버링 시스템의 변화로 인해 (예를 들어, http://www.biochem.ucl.ac.uk/~martin/abs/GeneralInfo.html 및 http://www.bioinf.org.uk/abs/ 참조), 이 시스템은 현재 덜 흔하게 사용된다. CDR을 정의하기 위한 다른 시스템이 존재하며, 이들 두 웹사이트에 또한 언급되어 있다.
각각의 이들 항체가 ActRII에 결합할 수 있고, 항원-결합 특이성이 주로 CDR1, 2 및 3 영역에 의해 제공되면, VH CDR1, 2 및 3 서열 및 VL CDR1, 2 및 3 서열은 "혼합 및 매칭"될 수 있으며 (즉, 상이한 항체로부터의 CDR이 혼합 및 매칭될 수 있음), VH CDR1, 2 및 3 및 VL CDR1, 2 및 3을 함유하는 각각의 항체는 본 개시내용의 다른 항-ActRII 결합 분자를 생성한다. 이러한 "혼합 및 매칭"된 항체의 ActRIIB 결합은 상기 및 실시예에 기재된 결합 검정 (예를 들어 ELISA)을 사용하여 시험될 수 있다. VH CDR 서열이 혼합 및 매칭되는 경우에, 특정한 VH 서열로부터의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 마찬가지로, VL CDR 서열이 혼합 및 매칭되는 경우에, 특정한 VL 서열로부터의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열은 구조적으로 유사한 CDR 서열(들)로 대체되어야 한다. 하나 이상의 VH 및/또는 VL CDR 영역 서열을 모노클로날 항체에 대해 본원에 제시된 CDR 서열로부터의 구조적으로 유사한 서열로 치환함으로써 신규한 VH 및 VL 서열이 생성될 수 있다는 것은 통상의 기술자에게 자명할 것이다.
개시된 조성물에 포함된 항-ActRII 항체 또는 그의 항원 결합 영역은 서열 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 갖는다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 72의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 73의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 74의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 75의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 76의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 77의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 78의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 79의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 80의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 81의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 82의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 83의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 서열 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 84의 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 서열 85의 가변 중쇄 서열 및 서열 99의 가변 경쇄 서열; (b) 서열 86의 가변 중쇄 서열 및 서열 100의 가변 경쇄 서열; (c) 서열 87의 가변 중쇄 서열 및 서열 101의 가변 경쇄 서열; (d) 서열 88의 가변 중쇄 서열 및 서열 102의 가변 경쇄 서열; (e) 서열 89의 가변 중쇄 서열 및 서열 103의 가변 경쇄 서열; (f) 서열 90의 가변 중쇄 서열 및 서열 104의 가변 경쇄 서열; (g) 서열 91의 가변 중쇄 서열 및 서열 105의 가변 경쇄 서열; (h) 서열 92의 가변 중쇄 서열 및 서열 106의 가변 경쇄 서열; (i) 서열 93의 가변 중쇄 서열 및 서열 107의 가변 경쇄 서열; (j) 서열 94의 가변 중쇄 서열 및 서열 108의 가변 경쇄 서열; (k) 서열 95의 가변 중쇄 서열 및 서열 109의 가변 경쇄 서열; (l) 서열 96의 가변 중쇄 서열 및 서열 110의 가변 경쇄 서열; (m) 서열 97의 가변 중쇄 서열 및 서열 111의 가변 경쇄 서열; 또는 (n) 서열 98의 가변 중쇄 서열 및 서열 112의 가변 경쇄 서열을 포함하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 서열 146의 중쇄 서열 및 서열 141의 경쇄 서열; (b) 서열 147의 중쇄 서열 및 서열 142의 경쇄 서열; (c) 서열 148의 중쇄 서열 및 서열 143의 경쇄 서열; (d) 서열 149의 중쇄 서열 및 서열 144의 경쇄 서열; (e) 서열 150의 중쇄 서열 및 서열 145의 경쇄 서열; (f) 서열 156의 중쇄 서열 및 서열 151의 경쇄 서열; (g) 서열 157의 중쇄 서열 및 서열 152의 경쇄 서열; (h) 서열 158의 중쇄 서열 및 서열 153의 경쇄 서열; (i) 서열 159의 중쇄 서열 및 서열 154의 경쇄 서열; 또는 (j) 서열 160의 중쇄 서열 및 서열 155의 경쇄 서열을 포함하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본원에 사용된 인간 항체는 항체의 가변 영역 또는 전장 쇄가 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자를 사용한 시스템으로부터 수득된 경우에 특정한 배선 서열"의 산물"이거나 "그로부터 유래된" 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 전장 중쇄 또는 경쇄를 포함한다. 이러한 시스템은 인간 이뮤노글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 마우스를 관심 항원으로 면역화하거나, 또는 파지 상에 디스플레이된 인간 이뮤노글로불린 유전자 라이브러리를 관심 항원으로 스크리닝하는 것을 포함한다. 인간 배선 이뮤노글로불린 서열"의 산물"이거나 "그로부터 유래된" 인간 항체는 인간 항체의 아미노산 서열을 인간 배선 이뮤노글로불린의 아미노산 서열과 비교하고, 인간 항체의 서열에 가장 근접한 (즉, 가장 큰 % 동일성) 서열인 인간 배선 이뮤노글로불린 서열을 선택함으로써 확인될 수 있다. 특정한 인간 배선 이뮤노글로불린 서열"의 산물"이거나 "그로부터 유래된" 인간 항체는 배선 서열과 비교 시에, 예를 들어 자연 발생 체세포 돌연변이, 또는 부위-지정 돌연변이의 의도적인 도입으로 인한 아미노산 차이를 함유할 수 있다. 그러나, 선택된 인간 항체는 전형적으로, 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열에 대한 아미노산 서열 동일성이 적어도 90%이고, 다른 종의 배선 이뮤노글로불린 아미노산 서열 (예를 들어, 뮤린 배선 서열)과 비교하였을 때 인간 항체를 인간의 것으로 확인시켜 주는 아미노산 잔기를 함유한다. 특정 경우에, 인간 항체는 배선 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열에 대한 아미노산 서열 동일성이 적어도 80%, 90%, 또는 적어도 95%, 또는 심지어 적어도 96%, 97%, 98%, 또는 99%일 수 있다. 전형적으로, 특정한 인간 배선 서열로부터 유래된 인간 항체는 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열과 10개 이하의 아미노산 차이를 디스플레이할 것이다. 특정 경우에, 인간 항체는 배선 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열과 5개 이하 또는 심지어 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산 차이를 디스플레이할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체는 pBW522 또는 pBW524 (2009년 8월 18일자로 독일 D-38124 브라운슈바이크 인호펜스트라쎄 7B 소재의 DSMZ에 각각 기탁 번호 DSM22873 및 DSM22874 하에 기탁됨)에 의해 코딩된 것이다.
상동 항체
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 본원에 기재된 항체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열에 상동인 전장 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열; 전장 중쇄 및 경쇄 뉴클레오티드 서열, 가변 영역 중쇄 및 경쇄 뉴클레오티드 서열, 또는 가변 영역 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 갖고, 여기서 항체는 본 개시내용의 항-ActRIIB 항체의 목적하는 기능적 특성을 보유한다.
예를 들어, 본 개시내용은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열 99-112로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 또는 적어도 90% (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열 85-98로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 또는 적어도 90% (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단리된 재조합 항-ActRIIB 항체 (또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질)를 포함하는 조성물을 제공하고; 대안적으로 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열 99-112로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5개 이하의 아미노산, 또는 4개 이하의 아미노산, 또는 3개 이하의 아미노산, 또는 2개 이하 또는 1개 이하의 아미노산 변화를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열 85-98로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5개 이하의 아미노산, 또는 4개 이하의 아미노산, 또는 3개 이하의 아미노산, 또는 2개 이하 또는 1개 이하의 아미노산 변화를 포함하는 것인 재조합 항-ActRIIB 항체 (또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질)를 포함하고, 항체는 하기 기능적 특성: (i) 시험관내 또는 생체내에서 미오스타틴 결합을 억제함, (ii) Smad-의존성 경로를 통한 근육 분화의 억제를 감소시킴 및/또는 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않음, 특히 RBC의 무변화 중 적어도 하나를 나타낸다. 이와 관련하여, 용어 "변화"는 삽입, 결실 및/또는 치환을 지칭한다.
추가의 예에서, 본 개시내용은 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 포함하며, 여기서 전장 중쇄는 서열 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 또는 적어도 90% (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 전장 경쇄는 서열 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 또는 적어도 90% (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 단리된 재조합 항-ActRII 항체 (또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질)를 포함하는 조성물을 제공하고; 대안적으로 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5개 이하의 아미노산, 또는 4개 이하의 아미노산, 또는 3개 이하의 아미노산, 또는 2개 이하 또는 1개 이하의 아미노산 변화를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5개 이하의 아미노산, 또는 4개 이하의 아미노산, 또는 3개 이하의 아미노산, 또는 2개 이하 또는 1개 이하의 아미노산 변화를 포함하는 것인 재조합 항-ActRII 항체 (또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질)를 포함하고, 항체는 하기 기능적 특성: (i) 시험관내 또는 생체내에서 미오스타틴 결합을 억제함, (ii) Smad-의존성 경로를 통한 근육 분화의 억제를 감소시킴 및/또는 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않음, 특히 RBC의 무변화 중 적어도 하나를 나타낸다. 바람직하게는 이러한 항체는 ActRIIB 및/또는 ActRIIA의 리간드 결합 도메인에 결합한다. 이와 관련하여, 용어 "변화"는 삽입, 결실 및/또는 치환을 지칭한다.
또 다른 예에서, 본 개시내용은 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 포함하며, 여기서 전장 중쇄는 서열 166-170 및 176-180으로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 80% 또는 적어도 90% (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99%) 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되고; 전장 경쇄는 서열 161-165 및 171-175로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 80% 또는 적어도 90% (바람직하게는 적어도 95, 97 또는 99%) 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 것인 단리된 재조합 항-ActRII 항체 (또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질)를 포함하는 조성물을 제공하고; 대안적으로 조성물은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열 166-170 및 176-180으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5개 이하의 아미노산, 또는 4개 이하의 아미노산, 또는 3개 이하의 아미노산, 또는 2개 이하 또는 1개 이하의 아미노산 변화를 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열 161-165 및 171-175로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 비교하여 5개 이하의 아미노산, 또는 4개 이하의 아미노산, 또는 3개 이하의 아미노산, 또는 2개 이하 또는 1개 이하의 아미노산 변화를 포함하는 것인 재조합 항-ActRIIB 항체 (또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질)를 포함하고, 항체는 하기 기능적 특성: (i) 시험관내 또는 생체내에서 미오스타틴 결합을 억제함, (ii) Smad-의존성 경로를 통한 근육 분화의 억제를 감소시킴 및/또는 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않음, 특히 RBC의 무변화 중 적어도 하나를 나타낸다. 바람직하게는 이러한 항체는 ActRIIB의 리간드 결합 도메인에 결합한다. 이와 관련하여, 용어 "변화"는 삽입, 결실 및/또는 치환을 지칭한다.
다양한 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 상기 논의된 기능적 특성 중 1개 이상, 2개 이상 또는 3개를 나타낼 수 있다. 항체는, 예를 들어 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다. 바람직하게는 항체는 완전 인간 IgG1 항체이다.
다른 실시양태에서, VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 상기 제시된 서열에 대해 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있다. 다른 실시양태에서, VH 및/또는 VL 아미노산 서열은 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산 위치에서의 아미노산 치환을 제외하고 동일할 수 있다. 각각 서열 99-112 및 서열 85-98의 VH 및 VL 영역에 대해 높은 (즉, 80% 이상) 동일성을 갖는 VH 및 VL 영역을 갖는 항체는, 각각 핵산 분자 서열 127-140 및 113-126을 돌연변이유발 (예를 들어 부위-지정 또는 PCR-매개 돌연변이유발)시킨 후, 코딩된 변경된 항체를 본원에 기재된 기능적 검정을 사용하여 보유 기능 (즉, 상기 기재된 기능)에 대해 시험함으로써 수득될 수 있다.
다른 실시양태에서, 전장 중쇄 및/또는 전장 경쇄 아미노산 서열은 상기 기재된 서열에 대해 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있거나, 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산 위치에서의 아미노산 변화를 제외하고 동일할 수 있다. 각각 서열 146-150 및 156-160 중 임의의 전장 중쇄 및 서열 141-145 및 151-155 중 임의의 전장 경쇄에 대해 높은 (즉, 적어도 80% 이상) 동일성을 갖는 전장 중쇄 및 전장 경쇄를 갖는 항체는, 각각 핵산 분자 서열 166-170 및 176-180 및 서열 161-165 및 171-175를 돌연변이유발 (예를 들어 부위-지정 또는 PCR-매개 돌연변이유발)시킨 후, 코딩된 변경된 항체를 본원에 기재된 기능적 검정을 사용하여 보유 기능 (즉, 상기 기재된 기능)에 대해 시험함으로써 수득될 수 있다.
다른 실시양태에서, 전장 중쇄 및/또는 전장 경쇄 뉴클레오티드 서열은 상기 기재된 서열에 대해 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있다.
다른 실시양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄 뉴클레오티드 서열의 가변 영역은 상기 기재된 서열에 대해 적어도 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일할 수 있거나, 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산 위치에서의 아미노산 변화를 제외하고 동일할 수 있다.
본원에 사용된, 2개의 서열들 사이의 퍼센트 동일성은, 2개 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하면서 그 서열들이 공유하는 동일한 위치의 수에 대한 함수이다 (즉, % 동일성 = 동일한 위치의 수/위치의 총수 x 100). 2개의 서열 사이의 서열의 비교 및 퍼센트 동일성의 결정은 하기 기재된 바와 같은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행될 수 있다.
2개의 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 사용하여 ALIGN 프로그램 (버전 2.0) 내로 혼입된, 문헌 [E. Meyers and W. Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17, 1988)]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 2개의 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 블로썸(Blossom) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 갭 가중치 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5 또는 6을 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지의 갭 프로그램 (http://www.gcg.com에서 이용가능함)에 혼입된, 문헌 [Needleman and Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453, 1970)]의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
보존적 변형을 갖는 항체
특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 가지며, 여기서 이들 CDR 서열 중 하나 이상은 본원에 기재된 항체를 기반으로 하여 특정된 아미노산 서열을 갖거나 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 변이체 서열 또는 그의 보존적 변형을 갖고, 항체는 본 개시내용의 항-ActRIIB 항체의 목적하는 기능적 특성을 보유한다. 따라서, 본 개시내용은 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역으로 이루어진 단리된 재조합 항-ActRIIB 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질을 포함하는 조성물로서, 여기서 중쇄 가변 영역 CDR1 아미노산 서열은 서열 1-14 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 그의 변이체 서열 및 그의 보존적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 중쇄 가변 영역 CDR2 아미노산 서열은 서열 15-28 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 그의 변이체 서열 및 그의 보존적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 중쇄 가변 영역 CDR3 아미노산 서열은 서열 29-42 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 그의 변이체 서열 및 그의 보존적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 경쇄 가변 영역 CDR1 아미노산 서열은 서열 43-56 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 그의 변이체 서열 및 그의 보존적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 경쇄 가변 영역 CDR2 아미노산 서열은 서열 57-70 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 그의 변이체 서열 및 그의 보존적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택되고; CDR3 아미노산 서열의 경쇄 가변 영역은 서열 71-84 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 그의 변이체 서열 및 그의 보존적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물을 제공한다. 바람직하게는 항체는 하기 기능적 특성: (i) 시험관내 또는 생체내에서 미오스타틴 결합을 억제함, (ii) Smad-의존성 경로를 통한 근육 분화의 억제를 감소시킴 및/또는 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않음, 특히 RBC의 무변화 중 적어도 하나를 나타낸다.
다양한 실시양태에서, 항체는 상기 열거된 기능적 특성 중 하나 또는 둘 다를 나타낼 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다.
다른 실시양태에서, 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화된 본 발명의 조성물에 포함된 항체는 전장 중쇄 서열 및 전장 경쇄 서열을 가지며, 여기서 이들 서열 중 하나 이상은 본원에 기재된 항체를 기반으로 하여 특정된 아미노산 서열 또는 그의 보존적 변형을 갖고, 항체는 본 개시내용의 항-ActRIIB 항체의 목적하는 기능적 특성을 보유한다. 따라서, 본 개시내용은 전장 중쇄 및 전장 경쇄로 이루어진, 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화된 단리된 모노클로날 항-ActRII 항체를 포함하는 조성물로서, 여기서 전장 중쇄는 서열 146-150 및 156-160의 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 변이체 서열 및 그의 보존적 변형을 갖고; 전장 경쇄는 서열 141-145 및 151-155의 군으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 변화를 포함하는 변이체 서열 및 그의 보존적 변형을 갖고; 항체는 하기 기능적 특성: (i) 시험관내 또는 생체내에서 미오스타틴 결합을 억제함, (ii) Smad-의존성 경로를 통한 근육 분화의 억제를 감소시킴 및/또는 (iii) 혈액학적 변화를 유도하지 않음, 특히 RBC의 무변화 중 적어도 하나를 나타내는 것인 조성물을 제공한다.
다양한 실시양태에서, 항체는 상기 열거된 기능적 특성 중 하나 또는 둘 다를 나타낼 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들어 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의하게 영향을 미치지 않거나 또는 그를 유의하게 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭하도록 의도된다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 변형은 관련 기술분야에 공지된 표준 기술, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 본 개시내용의 항체 내로 도입될 수 있다.
보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 관련 기술분야에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함한다. 따라서, 본 개시내용의 항체의 CDR 영역 내의 1개 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있고, 변경된 항체는 본원에 기재된 기능적 검정을 사용하여 보유 기능에 대해 시험될 수 있다.
개시된 조성물에 포함된 항-ActRII 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 다양한 특이적 항-ActRII 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 미오스타틴이 ActRIIA 및 ActRIIB에 결합하는 것을 차단할 수 있는, 실시예에 기재된 모든 항체는 ActRIIA 및 ActRIIB에서의 에피토프 중 하나에 고친화도로 결합하며, 상기 에피토프는 서열 181의 아미노산 19-134 사이에 포함되어 있다.
따라서, 추가의 항체는 표준 ActRIIB 결합 검정에서 본 개시내용의 다른 항체와 교차-경쟁하는 (예를 들어, 통계적으로 유의한 방식으로 결합을 경쟁적으로 억제하는) 그의 능력을 기반으로 하여 확인될 수 있다. 인간 ActRIIB에 대한 본 발명의 조성물에 포함된 항체의 결합을 억제하는 시험 항체의 능력은, 시험 항체가 인간 ActRIIB에의 결합에 대해 상기 항체와 경쟁할 수 있다는 것을 입증하고; 이러한 항체는 비-제한적인 이론에 따르면 그가 경쟁하는 항체와 인간 ActRIIB 상의 동일한 또는 관련된 (예를 들어, 구조적으로 유사하거나 또는 공간적으로 근접한) 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 조성물에 포함된 항체와 동일한 인간 ActRIIA 상의 에피토프 및 ActRIIA에 결합하는 항체는 인간 재조합 항체이다. 이러한 인간 재조합 항체는 실시예에 기재된 바와 같이 제조되고 단리될 수 있다.
따라서, 본 개시내용은 서열 85에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 99에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하고/거나 상기 항체와 결합에 대해 경쟁하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 86에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 100에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 87에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 101에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 88에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 102에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 89에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 103에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 90에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 104에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 91에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 105에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 92에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 106에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 93에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 107에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 94에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 108에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 95에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 109에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 96에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 110에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 97에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 111에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 서열 98에 언급된 가변 중쇄 서열 및 서열 112에 언급된 가변 경쇄 서열을 갖는 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
보다 상세한 에피토프 맵핑 실험에 따라, 본 발명의 조성물의 바람직한 항체의 결합 영역이 보다 분명히 정의되었다.
따라서, 본 개시내용은 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188)을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190)를 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189)을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187)을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191)을 포함하거나 그로 이루어진 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192)을 포함하거나 그로 이루어진 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)을 포함하거나 그로 이루어진 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 이들 서열로 이루어진 에피토프 또는 이들 에피토프 영역의 조합을 포함하는 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
따라서, 본 개시내용은 또한 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)을 포함하거나 그로 이루어진 에피토프에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 제공한다.
조작 및 변형된 항체
본 발명의 조성물에 포함된 항체는 추가로, 변형된 항체를 조작하기 위해 출발 물질로서 본원에 제시된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상을 갖는 항체를 사용하여 제조될 수 있고, 변형된 항체는 출발 항체로부터 변경된 특성을 가질 수 있다. 항체는 하나 또는 둘 다의 가변 영역 (즉, VH 및/또는 VL) 내의, 예를 들어 하나 이상의 CDR 영역 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 내의 하나 이상의 잔기를 변형시킴으로써 조작될 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 항체는, 예를 들어 항체의 이펙터 기능(들)을 변경시키기 위해 불변 영역(들) 내의 잔기를 변형시킴으로써 조작될 수 있다.
수행될 수 있는 가변 영역 조작의 한 유형은 CDR 그라프팅이다. 항체는 주로 6개의 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역 (CDR)에 위치하는 아미노산 잔기를 통해 표적 항원과 상호작용한다. 이러한 이유로, CDR 내의 아미노산 서열은 개별 항체 사이에서 CDR 외부의 서열보다 더 다양하다. CDR 서열은 대부분의 항체-항원 상호작용을 담당하기 때문에, 상이한 특성을 갖는 상이한 항체로부터의 프레임워크 서열 상에 그라프팅된 특정 자연 발생 항체로부터의 CDR 서열을 포함하는 발현 벡터를 구축함으로써 특정 자연 발생 항체의 특성을 모방한 재조합 항체를 발현시키는 것이 가능하다 (예를 들어, 문헌 [Riechmann, L. et al., 1998 Nature 332:323-327; Jones, P. et al., 1986 Nature 321:522-525; Queen, C. et al., 1989 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:10029-10033]; 미국 특허 번호 5,225,539 (Winter), 및 미국 특허 번호 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 (Queen et al.) 참조).
따라서, 본 개시내용의 또 다른 실시양태는 각각 서열 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 서열; 서열 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 서열; 서열 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 각각 서열 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 서열; 서열 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 서열; 및 서열 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 모노클로날 항-ActRII 항체, 또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 따라서, 이러한 항체는 모노클로날 항체의 VH 및 VL CDR 서열을 함유하지만, 이들 항체로부터의 다양한 프레임워크 서열을 함유할 수 있다.
이러한 프레임워크 서열은 배선 항체 유전자 서열을 포함하는 공공 DNA 데이터베이스 또는 공개된 참고문헌으로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자에 대한 배선 DNA 서열은 "VBase" 인간 배선 서열 데이터베이스 (인터넷 www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase에서 이용가능함), 뿐만 아니라 문헌 [Kabat, E. A., et al., [상기 문헌]; Tomlinson, I. M., et al., 1992 J. fol. Biol. 227:776-798; 및 Cox, J. P. L. et al., 1994 Eur. J Immunol. 24:827-836]에서 찾아볼 수 있다. 본 개시내용의 항체에 사용하기 위한 프레임워크 서열의 예는 본 개시내용의 선택된 항체에 의해 사용되는 프레임워크 서열, 예를 들어 본 개시내용의 모노클로날 항체에 의해 사용되는 컨센서스 서열 및/또는 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 것이다. VH CDR1, 2 및 3 서열, 및 VL CDR1, 2 및 3 서열은 프레임워크 서열이 유래되는 배선 이뮤노글로불린 유전자에서 발견되는 것과 동일한 서열을 갖는 프레임워크 영역 상에 그라프팅될 수 있거나, 또는 CDR 서열은 배선 서열과 비교하여 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 프레임워크 영역 상에 그라프팅될 수 있다. 예를 들어, 특정 경우에 프레임워크 영역 내의 잔기를 돌연변이시켜 항체의 항원 결합 능력을 유지 또는 증강시키는 것이 유익한 것으로 밝혀졌다 (예를 들어 미국 특허 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 (Queen et al.) 참조).
또 다른 유형의 가변 영역 변형은 VH 및/또는 VL CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시켜 관심 항체의 하나 이상의 결합 특성 (예를 들어, 친화도)을 개선하는 것이다 ("친화도 성숙"으로 공지되어 있음). 부위-지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개 돌연변이유발은 돌연변이(들)를 도입하기 위해 수행될 수 있고, 항체 결합에 대한 효과 또는 다른 관심 기능적 특성은 본원에 기재되고 실시예에 제공된 바와 같은 시험관내 또는 생체내 검정에서 평가될 수 있다. 보존적 변형 (상기 논의된 바와 같음)이 도입될 수 있다. 돌연변이는 아미노산 치환, 부가 또는 결실일 수 있다. 또한, 전형적으로 CDR 영역 내에서 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 잔기가 변경된다.
따라서, 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열 1-14, 또는 서열 1-14와 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 VH CDR1 영역; 서열 15-28, 또는 서열 15-28과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 VH CDR2 영역; 서열 29-42, 또는 서열 29-42와 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 VH CDR3 영역을 갖는 중쇄 가변 영역; 서열 43-56, 또는 서열 43-56과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 VL CDR1 영역; 서열 52-70, 또는 서열 52-70과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 VL CDR2 영역; 및 서열 71-84, 또는 서열 71-84와 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는 아미노산 서열을 갖는 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 VL CDR3 영역으로 이루어진 단리된 항-ActRII 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 포함하는 기능적 단백질을 제공한다.
낙타류 항체
신세계 구성원, 예컨대 라마 종 (라마 파코스(Lama paccos), 라마 글라마(Lama glama) 및 라마 비쿠그나(Lama vicugna))을 비롯한 낙타류 및 단봉낙타류 패밀리 (카멜루스 박트리아누스(Camelus bactrianus) 및 카멜루스 드로마데리우스(Camelus dromaderius))의 구성원으로부터 수득된 항체 단백질을 인간 대상체에 대해 크기, 구조적 복잡성 및 항원성에 관하여 특성화하였다. 자연에서 발견되는 바와 같은 이 패밀리의 포유동물로부터의 특정 IgG 항체에는 경쇄가 없으므로, 다른 동물로부터의 항체의 경우 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 갖는 전형적인 4쇄 4차 구조와 구조적으로 상이하다 (WO94/04678 참조).
VHH로서 확인된 소형 단일 가변 도메인인 낙타류 항체의 영역은 표적에 대한 높은 친화도를 갖는 소형 단백질을 산출하도록 유전자 조작함으로써 수득될 수 있으며, 그에 따라 "낙타류 나노바디"로서 공지된 저분자량 항체-유래 단백질이 생성된다 (US5,759,808; 문헌 [Stijlemans, B. et al., 2004 J Biol Chem 279: 1256-1261; Dumoulin, M. et al., 2003 Nature 424: 783-788; Pleschberger, M. et al. 2003 Bioconjugate Chem 14: 440-448; Cortez-Retamozo, V. et al. 2002 Int J Cancer 89: 456-62; 및 Lauwereys, M. et al. 1998 EMBO J 17: 3512-3520] 참조). 낙타류 항체 및 항체 단편의 조작된 라이브러리는, 예를 들어 아블링스(Ablynx) (벨기에 겐트)로부터 상업적으로 입수가능하다. 비-인간 기원의 다른 항체처럼, 낙타류 항체의 아미노산 서열을 재조합적으로 변경시켜 인간 서열과 보다 밀접하게 유사한 서열을 수득할 수 있으며, 즉 나노바디를 "인간화"시킬 수 있다. 따라서, 인간에 대한 낙타류 항체의 천연의 낮은 항원성을 추가로 감소시킬 수 있다.
낙타류 나노바디는 분자량이 인간 IgG 분자의 대략 1/10이고, 상기 단백질은 단지 수 나노미터의 물리적 직경을 갖는다. 작은 크기로 인한 결과 중 하나는 보다 큰 항체 단백질의 경우에 기능적으로 보이지 않는 항원 부위에 결합하는 낙타류 나노바디의 능력이고, 즉 낙타류 나노바디는 전형적인 면역학적 기술을 사용하여 달리 알 수 없는 항원을 검출하는 시약으로서 및 가능한 치료제로서 유용하다. 따라서, 작은 크기로 인한 또 다른 결과는 낙타류 나노바디가 표적 단백질의 홈 또는 좁은 틈새 내의 특이적 부위에 결합한 결과로서 억제할 수 있기 때문에, 전형적인 항체의 기능보다 전형적인 저분자량 약물의 기능과 보다 밀접하게 유사한 능력을 제공할 수 있다는 것이다.
저분자량 및 조밀한 크기는 추가로, 낙타류 나노바디가 극도로 열안정성이고, 극한 pH 및 단백질분해적 소화에 대해 안정하며, 낮은 항원성이도록 한다. 또 다른 결과는 낙타류 나노바디가 순환계로부터 조직 내로 용이하게 이동하고, 심지어는 혈액-뇌 장벽을 횡단하며, 신경 조직에 영향을 미치는 장애를 치료할 수 있다는 것이다. 나노바디는 추가로, 혈뇌 장벽을 가로질러 약물 수송을 용이하게 할 수 있다 (US2004/0161738 참조). 인간에 대한 낮은 항원성과 조합된 이들 특징은 큰 치료 잠재력을 나타낸다. 추가로, 이들 분자는 원핵 세포, 예컨대 이. 콜라이(E. coli) 내에서 완전히 발현될 수 있고, 박테리오파지와의 융합 단백질로서 발현되며, 기능적이다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 개시내용은 ActRIIB에 대한 고친화도를 갖는 낙타류 항체 또는 나노바디를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본원의 특정 실시양태에서, 낙타류 항체 또는 나노바디는 낙타류 동물에서 자연적으로 생산되며, 즉 다른 항체에 대해 본원에 기재된 기술을 사용하여 ActRIIB 또는 그의 펩티드 단편으로 면역화시킨 후의 낙타류에 의해 생산된다. 대안적으로, 항-ActRIIB 낙타류 나노바디는 조작되며, 즉 예를 들어 본원 실시예에 기재된 바와 같이 표적으로서 ActRIIB를 사용하는 패닝 절차를 사용하여 적절하게 돌연변이시킨 낙타류 나노바디 단백질을 디스플레이하는 파지의 라이브러리로부터의 선택에 의해 생산된다. 조작된 나노바디는 수용자 대상체 내에서의 반감기가 45분 내지 2주가 되도록 유전자 조작함으로써 추가로 맞춤화될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 낙타류 항체 또는 나노바디는, 예를 들어 WO94/04678에 기재된 바와 같이 본 개시내용의 인간 항체의 중쇄 또는 경쇄의 CDR 서열을 나노바디 또는 단일 도메인 항체 프레임워크 서열로 그라프팅함으로써 수득된다.
비-항체 스캐폴드
공지된 비-이뮤노글로불린 프레임워크 또는 스캐폴드는 애드넥틴(Adnectin) (피브로넥틴) (컴파운드 테라퓨틱스, 인크.(Compound Therapeutics, Inc.), 매사추세츠주 월섬), 안키린 (몰레큘라 파트너스 아게(Molecular Partners AG), 스위스 취리히), 도메인 항체 (도만티스, 리미티드(Domantis, Ltd), 매사추세츠주 캠브리지) 및 아블링스 엔브이 (벨기에 츠뷔나아르드), 리포칼린 (안티칼린(Anticalin)) (피에리스 프로테오랩 아게(Pieris Proteolab AG), 독일 프라이징), 소형 모듈화 면역-제약 (트루비온 파마슈티칼스 인크.(Trubion Pharmaceuticals Inc.), 워싱턴주 시애틀), 맥시바디 (아비디아, 인크.(Avidia, Inc.), 캘리포니아주 마운틴 뷰), 단백질 A (아피바디 아게(Affibody AG), 스웨덴) 및 아필린(affilin) (감마-결정질 또는 유비퀴틴) (실 프로테인스 게엠베하(Scil Proteins GmbH), 독일 할레), 단백질 에피토프 모방체 (폴리포르 리미티드(Polyphor Ltd), 스위스 알슈빌)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
(i) 피브로넥틴 스캐폴드
피브로넥틴 스캐폴드는 바람직하게는 피브로넥틴 유형 III 도메인 (예를 들어, 피브로넥틴 유형 III의 제10 모듈 (10 Fn3 도메인))에 기반한다. 피브로넥틴 유형 III 도메인은 단백질의 코어를 형성하도록 그 자체가 서로에 대해 패킹된 2개의 베타 시트 사이에 분포된 7 또는 8개의 베타 가닥을 갖고, 베타 가닥을 서로 연결하고 용매 노출되는 루프 (CDR과 유사)를 추가로 함유한다. 베타 시트 샌드위치의 각각의 가장자리에 적어도 3개의 이러한 루프가 존재하며, 여기서 가장자리는 베타 가닥의 방향과 수직인 단백질의 경계이다 (US 6,818,418).
이들 피브로넥틴-기반 스캐폴드는 이뮤노글로불린이 아니지만, 전반적인 폴드는 낙타 및 라마 IgG 내의 전체 항원 인식 단위를 포함하는 중쇄의 가변 영역인 최소의 기능적 항체 단편의 것과 밀접한 관련이 있다. 이 구조로 인해, 비-이뮤노글로불린 항체는 속성 및 친화도가 항체의 것들과 유사한 항원 결합 특성을 모방한다. 이들 스캐폴드는 생체내 항체의 친화도 성숙 과정과 유사한 시험관내 루프 무작위화 및 셔플링 전략에 사용될 수 있다. 이들 피브로넥틴-기반 분자는 분자의 루프 영역이 표준 클로닝 기술을 사용하여 본 개시내용의 CDR로 대체될 수 있는 스캐폴드로서 사용될 수 있다.
(ii) 안키린 - 분자 파트너
본 기술은 상이한 표적에 대한 결합에 사용될 수 있는 가변 영역을 보유하기 위해 스캐폴드로서 안키린 유래 반복 모듈을 갖는 단백질을 사용하는 것을 기반으로 한다. 안키린 반복 모듈은 2개의 역평행 α-헬릭스 및 β-턴으로 이루어진 33개 아미노산의 폴리펩티드이다. 가변 영역의 결합은 리보솜 디스플레이를 사용함으로써 대부분 최적화된다.
(iii) 맥시바디/아비머 - 아비디아(Avidia)
아비머는 천연 A-도메인 함유 단백질, 예컨대 LRP-1로부터 유래된다. 이들 도메인은 본래 단백질-단백질 상호작용을 위해 사용되고, 인간에서는 250종 초과의 단백질이 구조적으로 A-도메인을 기반으로 한다. 아비머는 아미노산 링커를 통해 연결된 다수의 상이한 "A-도메인" 단량체 (2-10개)로 이루어진다. 예를 들어 US2004/0175756; US2005/0053973; US2005/0048512; 및 US2006/0008844에 기재되어 있는 방법론을 사용하여 표적 항원에 결합할 수 있는 아비머를 생성할 수 있다.
(vi) 단백질 A - 아피바디
아피바디® 친화성 리간드는 단백질 A의 IgG-결합 도메인 중 하나의 스캐폴드를 기반으로 하는 3개-헬릭스 다발로 구성된 소형의 단순 단백질이다. 단백질 A는 박테리아 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)로부터의 표면 단백질이다. 이 스캐폴드 도메인은 58개 아미노산으로 이루어지며, 이 중 13개는 무작위화되어 다수의 리간드 변이체를 갖는 아피바디® 라이브러리를 생성한다 (예를 들어, US 5,831,012 참조). 아피바디® 분자는 항체를 모방하고, 150 kDa인 항체의 분자량과 비교하여 이는 6 kDa의 분자량을 갖는다. 아피바디® 분자는 그의 작은 크기에도 불구하고 그의 결합 부위가 항체의 것과 유사하다.
(v) 안티칼린 - 피에리스
안티칼린®은 피에리스 프로테오랩 아게(Pieris ProteoLab AG) 사에 의해 개발된 제품이다. 이는 화학적으로 감수성 또는 불용성 화합물의 생리학적 수송 또는 저장에 통상적으로 수반되는 소형 강건한 단백질의 광범위한 군인 리포칼린으로부터 유래된다. 여러 천연 리포칼린이 인간 조직 또는 체액에서 발생한다.
단백질 아키텍처는 초가변 루프가 경질 프레임워크의 상부에 존재하는 이뮤노글로불린을 연상시킨다. 그러나, 항체 또는 그의 재조합 단편과 대조적으로, 리포칼린은 160 내지 180개 아미노산 잔기를 갖는 단일 폴리펩티드 쇄로 구성되어, 단일 이뮤노글로불린 도메인보다 단지 약간 더 크다.
결합 포켓을 구성하는 4개의 루프 세트는 현저한 구조적 가소성을 나타내고 다양한 측쇄를 허용한다. 따라서, 상이한 형상의 규정된 표적 분자를 높은 친화도 및 특이성으로 인식하도록 하기 위해 결합 부위를 독점적 방법으로 재성형할 수 있다.
리포칼린 패밀리의 한 단백질인 피에리스 브라시카에(Pieris brassicae)의 빌린-결합 단백질 (BBP)은 4개 루프 세트를 돌연변이유발시키는 것에 의해 안티칼린을 개발하는데 사용되어 왔다. "안티칼린"이 기재된 특허 출원의 한 예는 WO1999/16873이다.
(vi) 아필린 - 실 프로테인스
아필린™ 분자는 단백질 및 소분자에 대한 특이적 친화도를 위해 설계된 소형 비-이뮤노글로불린 단백질이다. 신규 아필린™ 분자는 각각 상이한 인간 유래의 스캐폴드 단백질을 기반으로 하는 2개의 라이브러리로부터 매우 신속하게 선택될 수 있다.
아필린™ 분자는 이뮤노글로불린 단백질과 어떠한 구조적 상동성도 나타내지 않는다. 실 프로테인스는 2개의 아필린™ 스캐폴드를 사용하며, 그 중 하나는 인간의 구조적 눈 렌즈 단백질인 감마 결정질이고 다른 것은 "유비퀴틴" 슈퍼패밀리 단백질이다. 인간 스캐폴드는 둘 다 매우 소형이고, 고온 안정성을 나타내며, pH 변화 및 변성제에 거의 내성이다. 이 높은 안정성은 주로 단백질의 확장된 베타 시트 구조로 인한 것이다. 감마 결정질 유래 단백질의 예는 WO2001/004144에 기재되어 있고, "유비퀴틴-유사" 단백질의 예는 WO2004/106368에 기재되어 있다.
(vii) 단백질 에피토프 모방체 (PEM)
PEM은 단백질-단백질 상호작용에 수반되는 주요 2차 구조인 단백질의 베타-헤어핀 2차 구조를 모방하는 중간-크기의 시클릭 펩티드-유사 분자 (MW 1-2kDa)이다.
대안적 프레임워크 또는 스캐폴드 내로의 항원-결합 도메인 그라프팅
생성된 폴리펩티드가 ActRIIB에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 결합 영역을 포함하는 한, 다양한 항체/이뮤노글로불린 프레임워크 또는 스캐폴드를 사용할 수 있다. 이러한 프레임워크 또는 스캐폴드는 인간 이뮤노글로불린의 5개의 주요 이디오타입 또는 그의 단편을 포함하고 (예컨대 본원의 다른 곳에 개시된 것과 같음), 바람직하게는 인간화 측면을 갖는 다른 동물 종의 이뮤노글로불린을 포함한다. 이와 관련하여, 낙타류에서 확인된 것과 같은 단일 중쇄 항체가 특히 관심대상이다. 신규 프레임워크, 스캐폴드 및 단편이 통상의 기술자에 의해 계속해서 발견되고 개발되고 있다.
한 측면에서, 본 개시내용의 조성물은 개시된 항체의 CDR이 그라프팅될 수 있는 비-이뮤노글로불린 스캐폴드를 사용한 비-이뮤노글로불린 기반 항체를 포함할 수 있다. 공지된 또는 향후의 비-이뮤노글로불린 프레임워크 및 스캐폴드는 서열 181의 표적 단백질 (바람직하게는, 서열 182에 제시된 바와 같은 그의 리간드 결합 도메인)에 특이적인 결합 영역을 포함한다. 이러한 화합물은 "표적-특이적 결합 영역을 포함하는 폴리펩티드"로서 본원에 공지된다. 비-이뮤노글로불린 프레임워크의 예는 하기 섹션 (낙타류 항체 및 비-항체 스캐폴드)에서 추가로 기재되어 있다.
프레임워크 또는 Fc 조작
본 개시내용의 조성물에 포함된 조작된 항체는 예를 들어 항체의 특성을 개선시키기 위해 VH 및/또는 VL 내의 프레임워크 잔기에 변형이 이루어진 것들을 포함한다. 전형적으로 이러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어진다. 예를 들어, 한가지 접근법은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 배선 서열로 "복귀돌연변이"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이가 일어난 항체는 항체가 유래된 배선 서열과는 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 배선 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열을 그의 배선 배위로 되돌리기 위해, 예를 들어 부위-지정 돌연변이유발 또는 PCR-매개 돌연변이유발에 의해 체세포 돌연변이를 배선 서열로 "복귀돌연변이"시킬 수 있다. 이러한 "복귀돌연변이"시킨 항체는 또한 본 개시내용의 조성물에 포함될 수 있다.
또 다른 유형의 프레임워크 변형은 프레임워크 영역 내의, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T-세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시키는 것을 포함한다. 이러한 접근법은 또한 "탈면역화"로 지칭되며, US2003/0153043에 추가로 상세하게 기재되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형에 추가로 또는 대안적으로, 본 개시내용의 항체는 전형적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성, 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원-의존성 세포성 세포독성을 변경시키기 위하여 Fc 영역 내에 변형을 포함하도록 조작될 수 있다. 추가로, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체를 화학적으로 변형시킬 수 있거나 (예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티를 항체에 부착시킬 수 있음), 또는 그의 글리코실화를 변경시켜 항체의 하나 이상의 기능적 특성이 다시 변경되도록 변형시킬 수 있다. 각각의 이들 실시양태가 하기에 추가로 상세하게 기재되어 있다. Fc 영역에서 잔기의 넘버링은 카바트의 EU 인덱스의 것이다.
한 실시양태에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역 내 시스테인 잔기의 수가 변경되도록, 예를 들어 증가 또는 감소되도록 변형된다. 이러한 접근법은 US5,677,425에 추가로 기재되어 있다. CH1의 힌지 영역 내의 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하거나 또는 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키도록 변경된다.
또 다른 실시양태에서, 항체의 생물학적 반감기를 감소시키기 위해 항체의 Fc 힌지 영역이 돌연변이된다. 보다 구체적으로, 하나 이상의 아미노산 돌연변이가 Fc-힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 계면 영역 내로 도입되어, 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 스타필로코실 단백질 A (SpA) 결합에 비해 손상된 SpA 결합을 갖게 된다. 이러한 접근법은 US 6,165,745에 추가로 상세하게 기재되어 있다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 그의 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근법이 가능하다. 예를 들어, US6,277,375에 기재되어 있는 바와 같이, 다음 돌연변이 중 하나 이상을 도입할 수 있다: T252L, T254S, T256F. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, US5,869,046 및 US6,121,022에 기재되어 있는 바와 같이, IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 2개 루프로부터 유래된 샐비지 수용체 결합 에피토프를 함유하도록 항체의 CH1 또는 CL 영역 내를 변경시킬 수 있다.
또 다른 실시양태에서, Fc 영역은 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 변경되어 항체의 이펙터 기능을 변경한다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산이 상이한 아미노산 잔기로 대체되어, 항체가 이펙터 리간드에 대해 변경된 친화도를 갖지만 모 항체의 항원-결합 능력은 보유하도록 할 수 있다. 친화도가 변경된 이펙터 리간드는, 예를 들어 Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이러한 접근법은 US5,624,821 및 US5,648,260 (둘 다 Winter et al.)에 추가로 상세하게 기재되어 있다. 특히, 잔기 234 및 235를 돌연변이시킬 수 있다. 특히, 이들 돌연변이는 알라닌으로 이루어질 수 있다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체는 아미노산 234 및 235 중 하나 또는 둘 다에서 Fc 영역 내의 돌연변이를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 아미노산 234 및 235 중 하나 또는 둘 다는 알라닌으로 치환될 수 있다. 아미노산 234 및 235 둘 다의 알라닌으로의 치환은 ADCC 활성을 감소시킨다.
또 다른 실시양태에서, 기재된 항체의 아미노산 잔기로부터 선택된 하나 이상의 아미노산이 상이한 아미노산 잔기로 대체되어, 항체가 변경된 C1q 결합 및/또는 감소 또는 폐지된 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 갖도록 할 수 있다. 이러한 접근법은 US6,194,551에 추가로 상세하게 기재되어 있다.
또 다른 실시양태에서, 기재된 항체의 하나 이상의 아미노산 잔기가 변경되어 보체를 고정하는 항체의 능력을 변경한다. 이러한 접근법은 WO94/29351에 추가로 상세하게 기재되어 있다.
또 다른 실시양태에서, 기재된 항체의 Fc 영역은 하나 이상의 아미노산을 변형시킴으로써 항체 의존성 세포 세포독성 (ADCC)을 매개하는 항체의 능력을 증가시키고/거나 Fcγ 수용체에 대한 항체의 친화도를 증가시키도록 변형된다. 이러한 접근법은 WO00/42072에 추가로 상세하게 기재되어 있다. 추가로, 인간 IgG1 상의 FcγRI, FcγRII, FcγRIII 및 FcRn에 대한 결합 부위가 맵핑되었고, 개선된 결합을 갖는 변이체가 기재되어 있다 (문헌 [Shields, R.L. et al., 2001 J. Biol. Chen. 276:6591-6604] 참조).
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체의 글리코실화가 변형된다. 예를 들어, 비글리코실화 항체를 제조할 수 있다 (즉, 항체에 글리코실화가 결핍됨). 글리코실화는 예를 들어 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어 항체 서열 내의 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경시킴으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위의 제거를 유발하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어져, 그에 의해 그 부위에서 글리코실화를 제거할 수 있다. 이러한 비-글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 번호 5,714,350 및 6,350,861 (Co et al.)에 추가로 상세하게 기재되어 있다.
추가로 또는 대안적으로, 변경된 글리코실화 유형을 갖는 항체, 예컨대 감소된 양의 푸코실 잔기를 갖는 저푸코실화 항체 또는 증가된 양분성 GlcNac 구조를 갖는 항체가 사용될 수 있다. 이러한 변경된 글리코실화 패턴은 항체의 ADCC 능력을 증가시키는 것으로 입증되었다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어 변경된 글리코실화 기구를 갖는 숙주 세포 내에서 항체를 발현시킴으로써 달성될 수 있다. 변경된 글리코실화 기구를 갖는 세포는 관련 기술분야에 기재되어 있으며, 개시된 재조합 항체를 발현시켜 변경된 글리코실화를 갖는 항체를 생산하는 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 예를 들어, EP 1,176,195 (Hang et al.)는, 푸코실 트랜스퍼라제를 코딩하는, 기능적으로 파괴된 FUT8 유전자를 갖는 세포주로서, 이러한 세포주에서 발현된 항체가 저푸코실화를 나타낸다는 것을 기재하고 있다. 따라서, 한 실시양태에서 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체는 저푸코실화 패턴을 나타내는 세포주, 예를 들어 푸코실트랜스퍼라제를 코딩하는 FUT8 유전자의 결핍 발현을 갖는 포유동물 세포주에서의 재조합 발현에 의해 생산된다. WO03/035835는 Asn(297)-연결된 탄수화물에 푸코스를 부착시키는 능력이 감소된 변이체 CHO 세포주, Lecl3 세포로서, 또한 이로 인해 상기 숙주 세포에서 발현된 항체에서 저푸코실화가 유발된다는 것을 기재하고 있다 (또한, 문헌 [Shields, R.L. et al., 2002 J. Biol. Chem. 277:26733-26740] 참조). WO99/54342는 당단백질-변형 글리코실 트랜스퍼라제 (예를 들어 베타(1,4)-N 아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III (GnTIII))를 발현하도록 조작된 세포주로서, 조작된 세포주에서 발현된 항체는 증가된 양분성 GlcNac 구조를 나타내어 항체의 ADCC 활성의 증가를 유발한다는 것을 기재하고 있다 (또한, 문헌 [Umana et al., 1999 Nat. Biotech. 17:176-180] 참조). 대안적으로, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체는 포유동물-유사 글리코실화 패턴으로 조작되고, 글리코실화 패턴으로서 푸코스 결핍 항체를 생산할 수 있는 효모 또는 사상 진균에서 생산될 수 있다 (예를 들어, EP1297172B1 참조).
본원에서 본 개시내용에 의해 고려되는 항체의 또 다른 변형은 PEG화이다. 예를 들어, 항체의 생물학적 (예를 들어, 혈청) 반감기를 증가시키기 위해, 항체를 PEG화할 수 있다. 항체를 PEG화하기 위해, 항체 또는 그의 단편을 전형적으로 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 기가 항체 또는 항체 단편에 부착되는 조건 하에 PEG, 예컨대 PEG의 반응성 에스테르 또는 알데히드 유도체와 반응시킨다. PEG화는 반응성 PEG 분자 (또는 유사한 반응성 수용성 중합체)와의 아실화 반응 또는 알킬화 반응에 의해 수행될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "폴리에틸렌 글리콜"은 다른 단백질을 유도체화하기 위해 사용되는 임의의 형태의 PEG, 예컨대 모노 (C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜-말레이미드를 포괄하는 것으로 의도된다. 특정 실시양태에서, 사용되는 PEG화되는 항체는 비-글리코실화된 항체이다. 단백질을 PEG화하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 개시된 항체에 적용될 수 있다 (예를 들어, EP0154316 및 EP0401384 참조).
본 개시내용에 의해 고려되는 항체의 또 다른 변형은 생성되는 분자의 반감기를 증가시키기 위한, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민 또는 그의 단편에 대한, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체의 적어도 항원-결합 영역의 접합 또는 단백질 융합이다 (예를 들어 EP0322094 참조).
또 다른 가능성은 생성되는 분자의 반감기를 증가시키기 위한, 혈청 단백질, 예컨대 인간 혈청 알부민에 결합할 수 있는 단백질에 대한, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체의 적어도 항원-결합 영역의 융합이다 (예를 들어 EP0486525 참조).
변경된 항체를 조작하는 방법
상기 논의된 바와 같이, 본원에 제시된 CDR 서열, VH 및 VL 서열 또는 전장 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는 항-ActRIIB 항체를 사용하여, CDR 서열, 전장 중쇄 및/또는 경쇄 서열, VH 및/또는 VL 서열, 또는 그에 부착된 불변 영역(들)을 변형시킴으로써 새로운 항-ActRIIB 항체를 생성할 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 또 다른 측면에서, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항-ActRIIB 항체의 구조적 특징은 인간 ActRIIB에 대한 결합과 같은 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체의 적어도 하나의 기능적 특성을 보유할 뿐만 아니라 ActRIIB의 하나 이상의 기능적 특성 (예를 들어, Smad 활성화의 억제)을 억제하는 구조적으로 관련된 항-ActRIIB 항체를 생성하기 위해 사용된다.
예를 들어, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체의 하나 이상의 CDR 영역 또는 그의 돌연변이는 공지된 프레임워크 영역 및/또는 다른 CDR과 재조합적으로 조합되어, 상기 논의된 바와 같은 본 개시내용의 조성물에 포함된 추가의 재조합적으로-조작된 항-ActRIIB 항체를 생성할 수 있다. 다른 유형의 변형은 이전 섹션에 기재된 것들을 포함한다. 조작 방법을 위한 출발 물질은 본원에 제공된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상 또는 그의 하나 이상의 CDR 영역이다. 조작된 항체를 생성하기 위해, 본원에 제공된 VH 및/또는 VL 서열 중 하나 이상 또는 그의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는 항체를 실제로 제조할 (즉, 단백질로서 발현시킬) 필요는 없다. 오히려, 서열(들) 내에 함유된 정보를 출발 물질로서 사용하여, 원래의 서열(들)로부터 유래된 "제2 세대" 서열(들)을 생성한 다음, "제2 세대" 서열(들)을 단백질로서 제조 및 발현시킨다.
변경된 항체 서열은 또한 서열 29-42 및 서열 71-84로 이루어진 군 중에서 선택된 고정된 CDR3 서열 또는 US2005/0255552에 기재된 바와 같은 최소 필수 결합 결정기, 및 CDR1 및 CDR2 서열 상의 다양성을 갖는 항체 라이브러리를 스크리닝함으로써 제조될 수 있다. 스크리닝은 항체 라이브러리로부터 항체를 스크리닝하는데 적절한 임의의 스크리닝 기술, 예컨대 파지 디스플레이 기술에 따라 수행될 수 있다.
표준 분자 생물학 기술을 사용하여, 변경된 항체 서열을 제조하고 발현시킬 수 있다. 변경된 항체 서열(들)에 의해 코딩된 항체는 본원에 기재된 항-ActRIIB 항체의 하나, 일부 또는 모든 기능적 특성을 보유하는 것이며, 상기 기능적 특성은 인간 ActRIIB에 대한 특이적 결합 및 Smad 활성화의 억제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
변경된 항체는 상기 논의된 기능적 특성 중 하나 이상, 둘 이상 또는 셋 이상을 나타낼 수 있다.
변경된 항체의 기능적 특성은 관련 기술분야에서 이용가능하고/하거나 본원에 기재된 표준 검정, 예컨대 실시예에 기재된 것들 (예를 들어, ELISA)을 사용하여 평가될 수 있다.
돌연변이는 항-ActRIIB 항체 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 또는 선택적으로 도입할 수 있고, 이로써 생성되는 변형된 항-ActRIIB 항체를 대상으로 하여 결합 활성 및/또는 본원에 기재된 바와 같은 다른 기능적 특성에 대해 스크리닝할 수 있다. 돌연변이 방법은 관련 기술분야에 기재되어 있다. 예를 들어, WO02/092780은 포화 돌연변이유발, 합성 라이게이션 조립, 또는 이들의 조합을 사용하여 항체 돌연변이를 생성시키고 스크리닝하는 방법을 기재한다. 대안적으로, WO03/074679는 항체의 물리화학적 특성을 최적화하기 위해 컴퓨터 스크리닝 방법을 사용하는 방법이 기재한다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 항체를 코딩하는 핵산 분자
포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화된 전장 경쇄 뉴클레오티드 서열의 예는 서열 161-165 및 171-175에 제시되어 있다. 포유동물 세포에서의 발현을 위해 최적화된 전장 중쇄 뉴클레오티드 서열의 예는 서열 166-170 및 176-180에 제시되어 있다.
핵산은 전세포, 세포 용해물에 존재할 수 있거나, 또는 부분적으로 정제되거나 실질적으로 순수한 형태의 핵산일 수 있다. 핵산은 표준 기술, 예를 들어 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 관련 기술분야에 널리 공지된 다른 기술에 의해 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포성 핵산 또는 단백질로부터 정제된 경우에 "단리"되거나 "실질적으로 순수한" 상태이다. 문헌 [F. Ausubel, et al., ed. 1987 Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York]을 참조한다. 핵산은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 하이브리도마 (예를 들어, 이하에서 추가로 기재된 바와 같이 인간 이뮤노글로불린 유전자를 보유하는 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현되는 항체의 경우에, 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 수득할 수 있다. 이뮤노글로불린 유전자 라이브러리로부터 수득한 항체 (예를 들어, 파지 디스플레이 기술을 사용)의 경우에는, 항체를 코딩하는 핵산을 라이브러리의 구성원인 다양한 파지 클론으로부터 회수할 수 있다.
VH 및 VL 절편을 코딩하는 DNA 단편이 수득되면, 이들 DNA 단편을 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작하여, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 쇄 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환시킬 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH-코딩 DNA 단편은 또 다른 DNA 분자에, 또는 또 다른 단백질, 예컨대 항체 불변 영역 또는 가요성 링커를 코딩하는 단편에 작동가능하게 연결된다. 이러한 문맥에서 사용된 용어 "작동가능하게 연결된"은 2개의 DNA 단편이 기능적 방식으로, 예를 들어 2개의 DNA 단편에 의해 코딩되는 아미노산 서열이 인-프레임으로 유지되도록, 또는 단백질이 목적하는 프로모터의 제어 하에 발현되도록 연결된 것을 의미하는 것으로 의도된다.
VH 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 VH-코딩 DNA를 중쇄 불변 영역 (CH1, CH2 및 CH3)을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Kabat, E. A., et al. [상기 문헌]] 참조), 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1 이소형 중에서 선택될 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우에, VH-코딩 DNA는 중쇄 CH1 불변 영역만을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 VL-코딩 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장 경쇄 유전자 (뿐만 아니라 Fab 경쇄 유전자)로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Kabat, E. A., et al. [상기 문헌]] 참조), 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-코딩 DNA 단편을 가요성 링커, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3을 코딩하는 또 다른 단편에 작동가능하게 연결시켜, VH 및 VL 서열이 인접 단일쇄 단백질로서 발현될 수 있도록 하며, VL 영역과 VH 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다 (예를 들어, 문헌 [Bird et al., 1988 Science 242:423-426; Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., 1990 Nature 348:552-554] 참조).
모노클로날 항체의 생성
모노클로날 항체 (mAb)는 통상적인 모노클로날 항체 방법론, 예를 들어 문헌 [Kohler and Milstein (1975 Nature 256: 495)]의 표준 체세포 혼성화 기술을 비롯한 다양한 기술에 의해 생산될 수 있다. 모노클로날 항체를 생산하는 많은 기술, 예를 들어 B 림프구의 바이러스성 또는 종양원성 형질전환을 이용할 수 있다.
하이브리도마를 제조하기 위한 동물 시스템은 뮤린 시스템이다. 마우스에서 하이브리도마를 생산하는 것은 널리 확립된 절차이다. 면역화 프로토콜, 및 융합을 위한 면역화된 비장세포의 단리를 위한 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 융합 파트너 (예를 들어 뮤린 골수종 세포) 및 융합 절차가 또한 공지되어 있다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 키메라 또는 인간화 항체는 상기 기재된 바와 같이 제조된 뮤린 모노클로날 항체의 서열을 기반으로 하여 제조될 수 있다. 표준 분자 생물학 기술을 사용하여, 중쇄 및 경쇄 이뮤노글로불린을 코딩하는 DNA를 관심 뮤린 하이브리도마로부터 수득하고 이것을 조작하여 비-뮤린 (예를 들어, 인간) 이뮤노글로불린 서열을 함유하게 할 수 있다. 예를 들어, 키메라 항체를 생성하기 위해, 뮤린 가변 영역을 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 인간 불변 영역에 연결시킬 수 있다 (예를 들어, US4,816,567 참조). 인간화 항체를 생성하기 위해, 뮤린 CDR 영역을 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 인간 프레임워크 내에 삽입할 수 있다 (예를 들어 미국 특허 번호 5225539; 5530101; 5585089; 5693762 및 6180370 참조).
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체는 인간 모노클로날 항체이다. ActRIIB에 대해 지시된 이러한 인간 모노클로날 항체는 마우스 면역계보다는 인간 면역계의 일부를 보유하는 트랜스제닉 또는 트랜스크로모소믹 마우스를 사용하여 생성할 수 있다. 이들 트랜스제닉 및 트랜스크로모소믹 마우스는 본원에서 각각 HuMAb 마우스 및 KM 마우스로 지칭되는 마우스를 포함하며, 본원에서 "인간 Ig 마우스"로 총칭된다.
HuMAb 마우스® (메다렉스, 인크.(Medarex, Inc.))는 내인성 μ 및 κ 쇄 유전자좌를 불활성화시키는 표적화된 돌연변이와 함께, 재배열되지 않은 인간 중쇄 (μ 및 γ) 및 κ 경쇄 이뮤노글로불린 서열을 코딩하는 인간 이뮤노글로불린 유전자 미니유전자좌를 함유한다 (예를 들어, 문헌 [Lonberg, et al., 1994 Nature 368(6474): 856-859] 참조). 따라서, 상기 마우스는 마우스 IgM 또는 κ의 감소된 발현을 나타내고, 면역화에 대한 반응 시에 도입된 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스진에서 부류 전환 및 체세포 돌연변이가 일어나 고친화도 인간 IgGκ 모노클로날을 생성한다 (Lonberg, N. et al., 1994 [상기 문헌]; 문헌 [Lonberg, N., 1994 Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D., 1995 Intern. Rev. Immunol.13: 65-93, 및 Harding, F. and Lonberg, N., 1995 Ann. N. Y. Acad. Sci. 764:536-546]에서 검토됨). HuMAb 마우스의 제조 및 사용, 및 이러한 마우스에 의해 운반되는 게놈 변형은 문헌 [Taylor, L. et al., 1992 Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. et al., 1993 International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:3720-3724; Choi et al., 1993 Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al., 1993 EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et al., 1994 J. Immunol. 152:2912-2920; Taylor, L. et al., 1994 International Immunology 579-591; 및 Fishwild, D. et al., 1996 Nature Biotechnology 14: 845-851]에 추가로 기재되어 있고, 상기 모든 문헌의 내용은 그 전문이 본원에 구체적으로 참조로 포함된다. 추가로, 미국 특허 번호 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,789,650; 5,877,397; 5,661,016; 5,814,318; 5,874,299; 5,770,429; 및 5,545,807; 뿐만 아니라 WO92/103918, WO93/12227, WO94/25585, WO97/113852, WO98/24884; WO99/45962; 및 WO01/14424를 참조한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물에 포함된 인간 항체는 트랜스진 및 트랜스크로모솜 상에 인간 이뮤노글로불린 서열을 보유하는 마우스, 예컨대 인간 중쇄 트랜스진 및 인간 경쇄 트랜스크로모솜을 보유하는 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 마우스는 본원에서 "KM 마우스"로 지칭되고, WO02/43478에 상세하게 기재되어 있다.
추가로, 인간 이뮤노글로불린 유전자를 발현하는 대안적 트랜스제닉 동물 시스템이 관련 기술분야에서 이용가능하며, 본 개시내용의 항-ActRIIB 항체를 생성시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 제노마우스(Xenomouse) (아브게닉스, 인크.(Abgenix, Inc.))로 지칭되는 대안적 트랜스제닉 시스템이 사용될 수 있다. 이러한 마우스는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,939,598; 6,075,181; 6,114,598; 6, 150,584 및 6,162,963에 기재되어 있다.
또한, 인간 이뮤노글로불린 유전자를 발현하는 대안적 트랜스크로모소믹 동물 시스템이 관련 기술분야에서 이용가능하며, 본 개시내용의 항-ActRIIB 항체를 생성시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, "TC 마우스"로 지칭되는, 인간 중쇄 트랜스크로모솜 및 인간 경쇄 트랜스크로모솜 둘 다를 보유하는 마우스가 사용될 수 있고; 이러한 마우스는 문헌 [Tomizuka et al., 2000 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727]에 기재되어 있다. 또한, 인간 중쇄 및 경쇄 트랜스크로모솜을 보유하는 소가 관련 기술분야에 기재되어 있으며 (Kuroiwa et al., 2002 Nature Biotechnology 20:889-894), 이는 항-ActRIIB 항체를 생성시키는데 사용될 수 있다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 인간 재조합 항체는 인간 이뮤노글로불린 유전자의 라이브러리를 스크리닝하기 위한 파지 디스플레이 방법을 사용하여 또한 제조될 수 있다. 인간 항체를 단리하기 위한 이러한 파지 디스플레이 방법은 관련 기술분야에 확립되어 있거나 또는 하기 실시예에 기재되어 있다. 예를 들어 미국 특허 번호 5,223,409; 5,403,484; 5,571,698; 5,427,908; 5,580,717; 5,969,108; 6,172,197; 5,885,793; 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915 및 6,593,081을 참조한다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 인간 모노클로날 항체는 또한 면역화 시에 인간 항체 반응이 생성될 수 있도록 인간 면역 세포가 재구성된 SCID 마우스를 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 마우스는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,476,996 및 5,698,767에 기재되어 있다.
인간 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마의 생성
본 개시내용의 조성물에 포함된 인간 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마를 생성하기 위해, 면역화된 마우스로부터의 비장세포 및/또는 림프절 세포를 단리하여, 적절한 불멸화 세포주, 예컨대 마우스 골수종 세포주에 융합시킬 수 있다. 생성되는 하이브리도마를 항원-특이적 항체의 생산에 대해 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, 면역화된 마우스로부터의 비장 림프구의 단세포 현탁액을, 50% PEG를 함유하는 P3X63-Ag8.653 비분비성 마우스 골수종 세포 (ATCC, CRL 1580) 수의 1/6과 융합시킬 수 있다. 세포를 편평 바닥 마이크로타이터 플레이트에 대략 2 x 145로 플레이팅한 후, 20% 태아 클론 혈청, 18% "653" 조건화 배지, 5% 오리겐 (IGEN), 4 mM L-글루타민, 1 mM 피루브산나트륨, 5 mM HEPES, 0.055 mM 2-메르캅토에탄올, 50 유닛/ml 페니실린, 50 mg/ml 스트렙토마이신, 50 mg/ml 겐타마이신 및 1X HAT (시그마(Sigma); HAT는 융합 24시간 후에 첨가)를 함유하는 선택 배지에서 2주 인큐베이이션한다. 대략 2주 후에, HAT를 HT로 대체시킨 배지에서 세포를 배양할 수 있다. 이어서, 개별 웰을 인간 모노클로날 IgM 및 IgG 항체에 대해 ELISA에 의해 스크리닝할 수 있다. 일단 광범위한 하이브리도마 성장이 일어나면, 배지를 통상적으로 10-14일 후에 관찰할 수 있다. 항체 분비성 하이브리도마를 재플레이팅하고, 다시 스크리닝하고, 인간 IgG에 대해 여전히 양성인 경우에는, 모노클로날 항체를 제한 희석함으로써 적어도 2회 서브클로닝할 수 있다. 이어서, 안정한 서브클론을 시험관내에서 배양하여 조직 배양 배지 중에 특성화를 위한 소량의 항체를 생성할 수 있다.
인간 모노클로날 항체를 정제하기 위해, 선택된 하이브리도마를 모노크로날 항체 정제를 위해 2-리터의 스피너-플라스크에서 성장시킬 수 있다. 상청액을 여과하고, 농축시킨 후에, 단백질 A-세파로스 (파마시아(Pharmacia))로 친화성 크로마토그래피할 수 있다. 용리된 IgG를 겔 전기영동 및 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 점검하여 순도를 보장할 수 있다. 완충 용액을 PBS 내로 교환하고, 흡광 계수 1.43을 사용하여 OD280에 의해 농도를 결정할 수 있다. 모노클로날 항체를 분취하고, -80℃에서 저장할 수 있다.
모노클로날 항체를 생산하는 트랜스펙토마의 생성
본 개시내용의 조성물에 포함된 항체는 또한, 예를 들어 관련 기술분야에 널리 공지된 바와 같은 재조합 DNA 기술 및 유전자 형질감염 방법의 조합을 사용하여 숙주 세포 트랜스펙토마에서 생산할 수 있다 (예를 들어, [Morrison, S. (1985) Science 229:1202]).
예를 들어, 항체 또는 그의 항체 단편을 발현시키기 위해, 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 DNA를 표준 분자 생물학 기술 (예를 들어, 관심 항체를 발현하는 하이브리도마를 사용하는 cDNA 클로닝 또는 PCR 증폭)에 의해 수득할 수 있고, 유전자가 전사 및 번역 제어 서열에 작동가능하게 연결되도록 DNA를 발현 벡터 내로 삽입할 수 있다. 이러한 문맥에서, 용어 "작동가능하게 연결된"은 벡터 내의 전사 및 번역 제어 서열이 항체 유전자의 전사 및 번역을 조절하는 그의 의도된 기능을 수행하도록, 항체 유전자가 벡터 내로 라이게이션된 것을 의미하는 것으로 의도된다. 발현 벡터 및 발현 제어 서열은 사용되는 발현 숙주 세포와 상용성이도록 선택된다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터 내로 삽입될 수 있거나, 또는 보다 전형적으로는, 유전자 둘 다가 동일한 발현 벡터 내로 삽입된다. 항체 유전자를 표준 방법 (예를 들어, 항체 유전자 단편 및 벡터 상의 상보적 제한 부위의 라이게이션, 또는 제한 부위가 존재하지 않는 경우에 평활 말단 라이게이션)에 의해 발현 벡터 내로 삽입한다. 본원에 기재된 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 사용하여, 이들을 목적하는 이소형의 중쇄 불변 및 경쇄 불변 영역을 이미 코딩하는 발현 벡터로 삽입하여 VH 절편이 벡터 내 CH 절편(들)에 작동가능하게 연결되게 하고 VL 절편이 벡터 내 CL 절편에 작동가능하게 연결되게 함으로써 임의의 항체 이소형의 전장 항체 유전자를 생성할 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포로부터 항체 쇄의 분비를 용이하게 하는 신호 펩티드를 코딩할 수 있다. 항체 쇄 유전자는 신호 펩티드가 인 프레임으로 항체 쇄 유전자의 아미노 말단에 연결되도록 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 신호 펩티드는 이뮤노글로불린 신호 펩티드 또는 이종 신호 펩티드 (즉, 비-이뮤노글로불린 단백질로부터의 신호 펩티드)일 수 있다.
항체 쇄 유전자에 더하여, 본 개시내용의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서의 항체 쇄 유전자의 발현을 제어하는 조절 서열을 보유한다. 용어 "조절 서열"은 항체 쇄 유전자의 전사 또는 번역을 제어하는 프로모터, 인핸서 및 다른 발현 제어 요소 (예를 들어 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 조절 서열은 예를 들어 문헌 [Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 1990]에 기재되어 있다. 통상의 기술자는 조절 서열의 선택을 비롯하여 발현 벡터의 설계가 형질전환시킬 숙주 세포의 선택, 목적하는 단백질의 발현 수준 등과 같은 인자에 좌우될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 포유동물 숙주 세포 발현을 위한 조절 서열은 포유동물 세포 내 높은 수준의 단백질 발현을 지시하는 바이러스 요소, 예컨대 시토메갈로바이러스 (CMV), 원숭이 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스 (예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터 (AdMLP)) 및 폴리오마로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 대안적으로, 비바이러스 조절 서열, 예컨대 유비퀴틴 프로모터 또는 P-글로빈 프로모터가 사용될 수 있다. 또한, 상이한 공급원으로부터의 서열로 구성된 조절 요소, 예컨대 SRa 프로모터 시스템은 SV40 초기 프로모터 및 제1형 인간 T 세포 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부로부터의 서열을 함유한다 (Takebe, Y. et al., 1988 Mol. Cell. Biol. 8:466-472).
항체 쇄 유전자 및 조절 서열에 더하여, 재조합 발현 벡터는 추가의 서열, 예컨대 숙주 세포에서의 벡터의 복제를 조절하는 서열 (예를 들어 복제 기점) 및 선택 마커 유전자를 보유할 수 있다. 선택 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,399,216, 4,634,665 및 5,179,017 참조). 예를 들어, 전형적으로 선택 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에서 약물, 예컨대 G418, 히그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다. 선택 마커 유전자는 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 유전자 (메토트렉세이트 선택/증폭과 함께 dhfr- 숙주 세포에서 사용하기 위함) 및 neo 유전자 (G418 선택을 위함)를 포함한다.
경쇄 및 중쇄의 발현을 위해, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 발현 벡터(들)를 표준 기술에 의해 숙주 세포 내로 형질감염시킨다. 다양한 형태의 용어 "형질감염"은 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내로 외인성 DNA를 도입하는데 통상적으로 사용되는 폭넓게 다양한 기술, 예를 들어 전기천공, 칼슘-포스페이트 침전, DEAE-덱스트란 형질감염 등을 포괄하는 것으로 의도된다. 본 개시내용의 항체를 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 발현시키는 것은 이론적으로 가능하다. 항체를 진핵 세포, 특히 포유동물 숙주 세포에서 발현시키는 것이 논의되는데, 이는 이러한 진핵 세포, 특히 포유동물 세포가 원핵 세포보다 더, 적절하게 폴딩되고 면역학적으로 활성인 항체를 조립하고 분비시킬 가능성이 있기 때문이다. 항체 유전자의 원핵 발현은 높은 수율의 활성 항체의 생산에 효과적이지 않은 것으로 보고되어 있다 (Boss, M. A. and Wood, C. R., 1985 Immunology Today 6:12-13).
본 개시내용의 조성물에 포함된 재조합 항체를 발현시키기 위한 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO 세포) (예를 들어 문헌 [R.J. Kaufman and P.A. Sharp, 1982 Mol. Biol. 159:601-621]에 기재된 바와 같은 DH FR 선택 마커와 함께 사용되는, 문헌 [Urlaub and Chasin, 1980 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기재된 dhfr-CHO 세포 포함), NSO 골수종 세포, COS 세포 및 SP2 세포를 포함한다. 한 실시양태에서, 숙주 세포는 CHO K1PD 세포이다. 특히, NSO 골수종 세포와 함께 사용하는 경우에, 또 다른 발현 시스템은 WO87/04462, WO89/01036 및 EP 338,841에 제시된 GS 유전자 발현 시스템이다. 본 개시내용의 조성물에 포함된 재조합 항체를 발현시키기 위한 포유동물 숙주 세포는, 예를 들어 US6,946,292B2에 기재된 바와 같은 FUT8 유전자 발현이 결핍된 포유동물 세포주를 포함한다. 항체 유전자를 코딩하는 재조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포 내로 도입되는 경우에, 항체는 숙주 세포에서의 항체 발현 또는 숙주 세포가 성장하는 배양 배지 내로의 항체 분비를 허용하기에 충분한 시간 기간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생산된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 배양 배지로부터 회수할 수 있다.
면역접합체
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 치료 모이어티, 예컨대 세포독소, 약물 (예를 들어, 면역억제제) 또는 방사성독소에 접합된 항-ActRIIB 항체 또는 그의 단편을 포함하는 조성물을 특징으로 한다. 이러한 접합체는 본원에서 "면역접합체"로 지칭된다. 하나 이상의 세포독소를 포함하는 면역접합체는 "면역독소"로 지칭된다. 세포독소 또는 세포독성제는 세포에게 해로운 (예를 들어, 사멸시키는) 임의의 작용제를 포함한다.
세포독소는 관련 기술분야에서 이용가능한 링커 기술을 사용하여 본 개시내용의 항체에 접합시킬 수 있다. 세포독소를 항체에 접합시키는데 사용된 링커 유형의 예는 히드라존, 티오에테르, 에스테르, 디술피드 및 펩티드-함유 링커를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어 리소솜 구획 내의 낮은 pH에 의한 절단에 감수성이거나 또는 프로테아제, 예컨대 종양 조직에서 우세하게 발현되는 프로테아제, 예컨대 카텝신 (예를 들어, 카텝신 B, C, D)에 의한 절단에 감수성인 링커가 선택될 수 있다.
세포독소의 유형, 링커, 및 치료제를 항체에 접합시키는 방법에 관한 추가의 논의에 대해서는, 또한 문헌 [Saito, G. et al., 2003 Adv. Drug Deliv. Rev. 55:199-215; Trail, P.A. et al., 2003 Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Payne, G. 2003 Cancer Cell 3:207-212; Allen, T.M., 2002 Nat. Rev. Cancer 2:750-763; Pastan, I. and Kreitman, R. J., 2002 Curr. Opin. Investig. Drugs 3:1089-1091; Senter, P.D. and Springer, C.J., 2001 Adv. Drug Deliv. Rev. 53:247-264]를 참조한다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 항체는 또한 방사성 동위원소에 접합되어 방사성면역접합체로도 지칭되는 세포독성 방사성제약을 생성할 수 있다. 진단상 또는 치료상 사용하기 위해 항체에 접합될 수 있는 방사성 동위원소의 예는 아이오딘131, 인듐111, 이트륨90 및 루테튬177을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 방사성면역접합체의 제조 방법은 관련 기술분야에 확립되어 있다. 제발린(Zevalin)™ (DEC 파마슈티칼스(DEC Pharmaceuticals)) 및 벡사르(Bexxar)™ (코릭사 파마슈티칼스(Corixa Pharmaceuticals))를 비롯한 방사성면역접합체의 예가 상업적으로 입수가능하고, 본 개시내용의 항체를 사용하여 방사성면역접합체를 제조하는데 유사한 방법이 사용될 수 있다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 항체 접합체를 사용하여 주어진 생물학적 반응을 변형시킬 수 있고, 약물 모이어티는 전형적인 화학적 치료제로 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 약물 모이어티는 목적하는 생물학적 활성을 보유하는 단백질 또는 폴리펩티드일 수 있다. 이러한 단백질은, 예를 들어 효소적으로 활성인 독소, 또는 그의 활성 단편, 예컨대 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 또는 디프테리아 독소; 단백질, 예컨대 종양 괴사 인자 또는 인터페론-γ; 또는 생물학적 반응 변형제, 예컨대, 예를 들어 림포카인, 인터류킨-1 ("IL-1"), 인터류킨-2 ("IL-2"), 인터류킨-6 ("IL-6"), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 ("GM-CSF"), 과립구 콜로니 자극 인자 ("G-CSF"), 또는 다른 성장 인자를 포함할 수 있다.
이러한 치료 모이어티를 항체에 접합시키는 기술은 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), 및 Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Inmunol. Rev., 62:119-58 (1982)]을 참조한다.
이중특이적 분자
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 항-ActRIIB 항체 또는 그의 단편을 포함하는 이중특이적 또는 다중특이적 분자를 포함하는 조성물을 특징으로 한다. 본 개시내용의 조성물에 포함된 항체 또는 그의 항원-결합 영역은 유도체화되거나 또는 또 다른 기능적 분자, 예를 들어 또 다른 펩티드 또는 단백질 (예를 들어 수용체에 대한 또 다른 항체 또는 리간드)에 연결되어, 적어도 2개의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자에 결합하는 이중특이적 분자를 생성할 수 있다. 본 개시내용의 항체는 실제로 유도체화되거나 또는 1종 초과의 다른 기능적 분자에 연결되어 2종 초과의 상이한 결합 부위 및/또는 표적 분자에 결합하는 다중-특이적 분자를 생성할 수 있고; 이러한 다중-특이적 분자도 또한 본원에 사용된 용어 "이중특이적 분자"에 포괄되는 것으로 의도된다. 본 개시내용의 이중특이적 분자를 생성하기 위해, 본 개시내용의 항체는 1종 이상의 다른 결합 분자, 예컨대 또 다른 항체, 항체 단편, 펩티드 또는 결합 모방체에 이중특이적 분자가 생성되도록 기능적으로 연결 (예컨대 화학적 커플링, 유전적 융합, 비공유 회합 또는 기타에 의함)될 수 있다.
따라서, 본 개시내용은 ActRIIB에 대한 적어도 하나의 제1 결합 특이성, 및 제2 표적 에피토프에 대한 제2 결합 특이성을 포함하는 이중특이적 분자를 포함하는 조성물을 포함한다. 예를 들어, 제2 표적 에피토프는 제1 표적 에피토프와 상이한, ActRIIB의 또 다른 에피토프일 수 있다.
추가로, 이중특이적 분자가 다중특이적인 조성물의 경우에, 상기 분자는 제1 및 제2 표적 에피토프에 더하여 제3 결합 특이성을 추가로 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 개시된 조성물의 이중특이적 분자는 결합 특이체로서 적어도 하나의 항체, 또는 예를 들어 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 또는 단일 쇄 Fv를 비롯한 그의 항체 단편을 포함한다. 항체는 또한 US4,946,778 (Ladner et al.)에 기재된 바와 같은 경쇄 또는 중쇄 이량체, 또는 그의 임의의 최소 단편, 예컨대 Fv 또는 단일 쇄 구축물일 수 있으며, 상기 문헌의 내용은 본원에 명백하게 포함된다.
이중특이적 분자에 사용될 수 있는 다른 항체는 뮤린, 키메라 및 인간화 모노클로날 항체이다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 이중특이적 분자는 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 구성성분 결합 특이체를 접합시킴으로써 제조할 수 있다. 예를 들어, 이중특이적 분자의 각 결합 특이체를 개별적으로 생성한 다음 서로 접합시킬 수 있다. 결합 특이체가 단백질 또는 펩티드인 경우에, 공유 접합을 위해 다양한 커플링제 또는 가교제를 사용할 수 있다. 가교제의 예는 단백질 A, 카르보디이미드, N-숙신이미딜-S-아세틸-티오아세테이트 (SATA), 5,5'-디티오비스(2-니트로벤조산) (DTNB), o-페닐렌디말레이미드 (oPDM), N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 (SPDP) 및 술포숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 시클로헥산-l-카르복실레이트 (술포-SMCC)를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Karpovsky et al., 1984 J. Exp. Med. 160:1686; Liu, MA et al., 1985 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648] 참조). 다른 방법은 문헌 [Paulus, 1985 Behring Ins. Mitt. No. 78,118-132; Brennan et al., 1985 Science 229:81-83, 및 Glennie et al., 1987 J. Immunol. 139: 2367-2375]에 기재된 것을 포함한다. 접합제는 둘 다 피어스 케미칼 캄파니(Pierce Chemical Co.) (일리노이주 록포드)로부터 입수가능한 SATA 및 술포-SMCC이다.
결합 특이체가 항체인 경우에, 이는 2개 중쇄의 C-말단 힌지 영역의 술프히드릴 결합에 의해 접합될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 힌지 영역은 접합 전에 홀수, 예를 들어 1개의 술프히드릴 잔기를 함유하도록 변형된다.
대안적으로, 결합 특이체가 둘 다 동일한 벡터 내에서 코딩되어 동일한 숙주 세포에서 발현 및 조립될 수 있다. 이 방법은 이중특이적 분자가 mAb x mAb, mAb x Fab, Fab x F(ab')2 또는 리간드 x Fab 융합 단백질인 경우에 특히 유용하다. 본 개시내용의 조성물에 포함된 이중특이적 분자는 1개의 단일 쇄 항체 및 결합 결정기를 포함하는 단일 쇄 분자, 또는 2개의 결합 결정기를 포함하는 단일 쇄 이중특이적 분자일 수 있다. 이중특이적 분자는 적어도 2개의 단일 쇄 분자를 포함할 수 있다. 이중특이적 분자의 제조 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 5,260,203; 5,455,030; 4,881,175; 5,132,405; 5,091,513; 5,476,786; 5,013,653; 5,258,498; 및 5,482,858에 기재되어 있다.
이중특이적 분자의 그의 특이적 표적에 대한 결합은, 예를 들어 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA), 방사성면역검정 (RIA), FACS 분석, 생물검정 (예를 들어 성장 억제) 또는 웨스턴 블롯 검정에 의해 확인할 수 있다. 이들 검정 각각은 일반적으로 특히 관심있는 단백질-항체 복합체에 특이적인 표지된 시약 (예를 들어 항체)을 사용함으로써 상기 복합체의 존재를 검출한다.
다가 항체
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 ActRIIB에 결합하는 개시된 항체의 적어도 2개의 동일 또는 상이한 항원 결합 부분을 포함하는 다가 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 다가 항체는 항체의 적어도 2개, 3개 또는 4개의 항원-결합 부분을 제공한다. 항원-결합 부분은 단백질 융합 또는 공유 또는 비 공유 연결을 통해 함께 연결될 수 있다. 대안적으로, 연결 방법이 이중특이적 분자에 대해 기재되어 있다. 다양한 실시양태에서, 조성물은 1가, 2가 또는 다가일 수 있고/거나 (예를 들어, 1개, 2개 또는 여러 항원에 결합할 수 있음), 단일특이적, 이중특이적 또는 다중특이적일 수 있다 (예를 들어, 1개, 2개 또는 여러 상이한 항원에 결합할 수 있는 결합 영역(들)을 가짐). 조성물은 이들의 임의의 조합, 예를 들어 1가 및 단일특이적의 조합 (1개의 항원 또는 에피토프에 결합하는 1개의 결합 영역을 가짐); 또는 2가 및 이중특이적의 조합 (각각이 상이한 에피토프 또는 항원에 결합하는 2개의 결합 영역을 가짐); 또는 2가 및 단일특이적의 조합 (각각이 동일한 에피토프 또는 항원에 결합하는 2개의 결합 영역을 가짐); 또는 다가 및 단일특이적의 조합 (모두가 동일한 항원 또는 에피토프에 결합하는 여러 결합 영역을 가짐); 또는 다가 및 다중특이적의 조합 (여러 다양한 항원 또는 에피토프에 결합하는 여러 결합 영역을 가짐)일 수 있다.
제약 조성물
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 제약상 허용되는 담체와 함께 제제화된, 상기 기재된 항체/모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 부분(들) 중 하나 또는 그의 조합을 함유하는 조성물, 예를 들어 제약 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 (예를 들어 2개 이상의 상이한) 기재된 항체 또는 면역접합체 또는 이중특이적 분자의 중 하나 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 제약 조성물은 표적 항원 상의 상이한 에피토프에 결합하거나 또는 보체 활성을 갖는 항체의 조합을 포함할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물은 또한 조합 요법으로, 즉 다른 작용제와 조합하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법은 본 개시내용의 항-ActRII 항체를, 적어도 하나의 다른 근육 질량/강도 증가제, 예를 들어 IGF-1, IGF-2 또는 IGF-1 또는 IGF-2의 변이체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRIIB에 결합하지만 그것을 활성화시키지는 않는 미오스타틴 디코이 단백질, 베타 2 효능제, 그렐린 효능제, SARM, GH 효능제/모방체 또는 폴리스타틴과 조합하여 포함할 수 있다. 조합 요법에 사용될 수 있는 치료제의 예는 하기 본 개시내용의 항체의 용도에 대한 섹션에서 매우 상세하게 기재되어 있다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체"는 생리학상 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척수 또는 표피 투여에 적합하여야 한다 (예를 들어, 주사 또는 주입에 의함). 투여 경로에 따라, 활성 화합물, 즉 항체, 면역접합체 또는 이중특이적 분자는 상기 화합물을 불활성화시킬 수 있는 산 및 다른 자연적인 조건의 작용으로부터 상기 화합물을 보호하는 물질로 코팅될 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물은 하나 이상의 제약상 허용되는 염을 포함할 수 있다. "제약상 허용되는 염"은 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하며 임의의 원치않는 독성 효과는 제공하지 않는 염을 지칭한다 (예를 들어, 문헌 [Berge, S.M., et al., 1977 J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참조). 이러한 염의 예는 산 부가염 및 염기 부가염을 포함한다. 산 부가염은 비독성 무기 산, 예컨대 염산, 질산, 인산, 황산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 인산 등으로부터 유래된 염, 뿐만 아니라 비독성 유기 산, 예컨대 지방족 모노- 및 디-카르복실산, 페닐-치환된 알칸산, 히드록시 알칸산, 방향족 산, 지방족 및 방향족 술폰산 등으로부터 유래된 염을 포함한다. 염기 부가염은 알칼리 토금속, 예컨대 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등으로부터 유래된 염, 뿐만 아니라 비독성 유기 아민, 예컨대 N,N'-디벤질에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 프로카인 등으로부터 유래된 염을 포함한다.
본 개시내용의 제약 조성물은 또한 제약상 허용되는 항산화제를 포함할 수 있다. 제약상 허용되는 항산화제의 예는 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 중황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨 등; 유용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 포함한다.
본 개시내용의 제약 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 미생물 존재의 방지는 상기 문헌의 멸균 절차, 및 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시키는 것 둘 다에 의해 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물 내에 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 주사가능한 제약 형태의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시키는 것에 의해 이루어질 수 있다.
제약상 허용되는 담체는 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 제약 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 용도는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 임의의 통상의 매질 또는 작용제가 활성 화합물과 비상용성이 아닌 한, 본 개시내용의 제약 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 보충 활성 화합물이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다.
치료 조성물은 전형적으로 멸균되고 제조 및 저장 조건 하에 안정하여야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 리포솜, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제제화될 수 있다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅제, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 다수의 경우에서, 조성물 중에 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 포함시킬 수 있다. 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시키는 것에 의해 이루어질 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은 필요량의 활성 화합물을, 필요에 따라 상기 열거된 작용제들 중 하나 또는 그의 조합과 함께 적절한 용매 중에 혼입시킨 후에, 멸균 마이크로여과를 수행하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것 중 요구되는 다른 작용제를 함유하는 멸균 비히클 내에 혼입시켜 제조한다. 멸균 주사가능한 용액을 제조하기 위한 멸균 분말의 경우에, 제조 방법은 사전에 멸균-여과된 용액으로부터 활성제와 임의의 추가의 목적하는 작용제의 분말을 수득하는 진공 건조 및 냉동-건조 (동결건조)이다.
담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성제의 양은 치료되는 대상체, 및 특정 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 담체 물질과 조합되어 단일 투여 형태를 생성할 수 있는 활성제의 양은 일반적으로 치료 효과를 나타내는 조성물의 양일 것이다. 일반적으로, 이러한 양은 100%를 기준으로, 제약상 허용되는 담체와 조합되는 활성제 약 0.01% 내지 약 99%, 약 0.1% 내지 약 70%, 또는 약 1% 내지 약 30%의 범위일 것이다.
투여 요법은 최적의 목적하는 반응 (예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 여러 분할 용량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 또는 치료 상황의 위급성에 의해 나타난 바와 같이 용량이 비례적으로 감소되거나 또는 증가될 수 있다. 비경구 조성물은 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제제화하는 것이 특히 유리하다. 본원에 사용된 바와 같은 투여 단위 형태는 치료할 대상체에 대한 단위 투여량으로서 적합화된 물리적 이산 단위를 지칭하고; 각각의 단위는 필요한 제약 담체와 함께 목적하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 함유한다. 본 개시내용의 투여 단위 형태에 관한 상세사항은, 활성 화합물의 독특한 특징 및 달성하고자 하는 특정한 치료 효과, 및 개체에서의 감수성 치료를 위해 이러한 활성 화합물을 배합하는 분야에 내재된 제한에 의해 지시되고 이에 직접 좌우된다.
본 개시내용에 따라 사용하기 위한 조성물에 포함되는 항체의 투여를 위해, 항체 투여량은 숙주 체중의 약 0.0001 내지 약 100 mg/kg, 및 보다 통상적으로는 약 0.01 내지 약 30 mg/kg의 범위이다. 예를 들어 투여량은 바람직하게는 4주마다 1회로 약 1-10 mg/kg의 범위 내의 약 1 mg/kg 체중, 약 3 mg/kg 체중, 약 5 mg/kg 체중 또는 약 10 mg/kg 체중, 예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mg/kg 체중이다. 이러한 투여는 바람직하게는 정맥내로 수행된다. 대안적으로, 투여는 피하로 수행된다.
본 개시내용의 항-ActRII 항체, 예를 들어 비마그루맙을 위한 투여 요법은 약 1 mg/kg 체중 또는 약 3 mg/kg 체중 또는 약 10 mg/kg 체중을 4주마다 1회 정맥내 투여하는 것을 포함한다.
바람직하게는 본 개시내용의 조성물은 산발성 봉입체 근염의 치료에 사용하기 위한 것이다.
한 구체적 실시양태에서 산발성 봉입체 근염을 앓고 있는 환자의 신체 기능 및 이동성이 개선된다.
한 구체적 실시양태에서 산발성 봉입체 근염을 앓고 있는 환자의 삼킴 곤란 또는 연하곤란이 개선된다.
한 구체적 실시양태에서 산발성 봉입체 근염을 앓고 있는 환자의 사지 강도가 개선된다.
한 구체적 실시양태에서 산발성 봉입체 근염을 앓고 있는 환자의 낙상의 발생률 또는 낙상의 위험이 감소된다.
일부 방법에서, 결합 특이성이 상이한 2종 이상의 모노클로날 항체가 본 개시내용의 조성물에 포함되고 따라서 동시에 투여되며, 이러한 경우에 투여되는 각각의 항체의 투여량은 나타낸 범위 내에 속한다. 항체는 통상적으로 다수회 투여된다. 단일 투여량들 사이의 간격은, 예를 들어 매주, 매월, 3개월마다, 6개월마다 또는 매년일 수 있다. 또한, 환자에서 표적 항원에 대한 항체의 혈액 수준을 측정함으로써 간격이 나타낸 바와 같이 불규칙적일 수 있다. 일부 방법에서, 투여량은 약 1 - 약 1000 μg/ml, 및 일부 방법에서 약 25 - 약 300 μg/ml의 혈장 항체 농도를 달성하도록 조정된다. 예를 들어, 본 개시내용의 ActRII 항체는 항-마이오스타틴 항체와 공-투여될 수 있다.
투여량 및 빈도는 환자에서의 항체의 반감기에 따라 달라진다. 일반적으로, 인간 항체가 가장 긴 반감기를 나타내고, 그 다음으로 인간화 항체, 키메라 항체 및 비인간 항체이다. 투여량 및 투여 빈도는 치료가 예방적인지 또는 치료적인지에 따라 달라질 수 있다. 예방적 적용에서, 비교적 낮은 투여량이 비교적 덜 빈번한 간격으로 장기간에 걸쳐 투여된다. 일부 환자는 그의 여생 동안 계속 치료를 받는다. 치료적 적용에서, 질환의 진행이 감소되거나 종결될 때까지 또는 환자가 질환 증상의 부분적 또는 완전한 개선을 나타낼 때까지, 비교적 짧은 간격으로의 비교적 높은 투여량이 때때로 요구된다. 그 후, 환자에게 예방 요법을 투여할 수 있다.
본 개시내용의 조성물에 포함된 항-ActRII 항체의 "치료 유효 투여량"의 투여는 질환 증상의 중증도를 감소시키거나, 질환 증상이 없는 기간의 빈도와 지속 기간을 증가시키거나, 또는 질환 고통으로 인한 장애 또는 무능력을 방지, 즉 근육 질량 및/또는 강도를 증가시킬 수 있다.
활성 화합물은 이식물, 경피 패치 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 비롯하여 신속 방출에 대해 화합물을 보호할 담체, 예컨대 제어 방출 제제와 함께 제조될 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제제의 제조를 위한 많은 방법이 특허를 받았거나 또는 일반적으로 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978]을 참조한다.
치료 조성물은 관련 기술분야에 공지된 의료 장치로 투여될 수 있다.
본 개시내용의 용도 및 방법
본 개시내용의 조성물 및 개시된 항체는 산발성 봉입체 근염의 치료에 대해 또는 산발성 봉입체 근염에 의해 이환된 환자의 병태의 개선에 대해 또는 산발성 봉입체 근염과 연관된 증상의 감소에 대해 영향을 미치기 때문에 치료 유용성을 갖는다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는 인간 및 비-인간 동물을 포함하는 것으로 의도된다. 비-인간 동물은 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 고양이, 소, 말, 닭, 양서류 및 파충류를 포함한다.
따라서, 본 개시내용은 또한 본 개시내용의 조성물 또는 개시된 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRII 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRII에 대한 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338이 ActRII의 기능을 억제하고, 즉 길항시키고, 그에 의해 산발성 봉입체 근염의 완화를 유발하는 것인 치료 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 산발성 봉입체 근염을 앓고 있는 환자에게 치료 유효량의 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRIIB 결합 분자, 바람직하게는 ActRIIB 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRIIB에 대한 길항제 항체, 예를 들어 BYM338 또는 개시된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
개시된 치료 방법에 사용될 수 있는 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRIIB 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRIIB에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338의 예는 상기에 상세하게 개시되거나 또는 기재된 것들이다. 특정 실시양태에서, ActRII 항체 (예를 들어, 비마그루맙 또는 BYM338)는 본원에 개시된 본 발명의 조성물에 포함된다.
본 개시내용은 또한 산발성 봉입체 근염을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRIIB 결합 분자, 바람직하게는 ActRIIB 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 BYM338의 용도에 관한 것이다.
추가 실시양태에서, 환자는 이전 치료에 반응하지 않은 환자일 수 있다. 예를 들어, 환자는 IGF-1, IGF-2 또는 IGF-1 또는 IGF-2의 변이체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRIIB에 결합하지만 그것을 활성화시키지는 않는 미오스타틴 디코이 단백질, 베타 2 효능제, 그렐린 효능제, SARM, GH 효능제/모방체 또는 폴리스타틴을 사용한 치료에 반응하지 않을 수 있다. 치료에 대한 환자의 반응을 측정하는 간단한 방법은 환자가 알려진 높이의 계단을 얼마의 시간에 걸쳐서 오르는지를 측정하고, 치료 전 및 후 둘 다의 결과를 비교하는 것일 수 있다.
미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRII 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338은 유일한 활성제로서, 또는 예를 들어 다른 약물, 예를 들어 IGF-1, IGF-2 또는 IGF-1 또는 IGF-2의 변이체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRIIB에 결합하지만 그것을 활성화시키지는 않는 미오스타틴 디코이 단백질, 베타 2 효능제, 그렐린 효능제, SARM, GH 효능제/모방체 또는 폴리스타틴에 대한 아주반트로서 또는 그와 조합하여 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 길항제는 WO2007/146689에 개시된 바와 같은 IGF-1 모방체와 조합하여 사용될 수 있다.
상기에 따라, 본 개시내용은 하기 추가 측면을 제공한다:
치료 유효량의 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRII 결합 분자, 바람직하게는 ActRII 결합 분자, 보다 바람직하게는 ActRII에 대한 길항제 항체, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338, 및 IGF-1, IGF-2 또는 IGF-1 또는 IGF-2의 변이체, 항-미오스타틴 항체, 미오스타틴 프로펩티드, ActRII에 결합하지만 그것을 활성화시키지는 않는 미오스타틴 디코이 단백질, 베타 2 효능제, 그렐린 효능제, SARM, GH 효능제/모방체 또는 폴리스타틴인 적어도 1종의 제2 약물 물질을, 예를 들어 병용하여 또는 순차적으로 공-투여하는 것을 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 방법 또는 용도.
키트
본 발명은 또한 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 (예를 들어, 미오스타틴 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 예를 들어 비마그루맙 또는 BYM338) 또는 미오스타틴 수용체 (즉, ActRIIB 수용체) 결합 분자 (예를 들어, 항-ActRIIB 항체 또는 그의 항원 결합 단편) (예를 들어, 액체 또는 동결건조 형태) 또는 미오스타틴 길항제 (상기 기재됨)를 포함하는 제약 조성물을 포함할 수 있는 키트를 포괄한다. 추가로, 이러한 키트는 미오스타틴 길항제를 투여하기 위한 수단 (예를 들어, 시린지 및 바이알, 사전충전된 시린지, 사전충전된 펜) 및 사용 지침서를 포함할 수 있다. 이들 키트는, 예를 들어 동봉된 미오스타틴 길항제, 예를 들어 BYM338과 조합하여 전달하기 위한 추가의 치료제 (상기 기재됨)를 함유할 수 있다.
어구 "투여하기 위한 수단"은 사전충전된 시린지, 바이알 및 시린지, 주사 펜, 자동주사기, i.v. 점적 백, 펌프 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 약물을 환자에게 전신 투여하기 위한 임의의 이용가능한 도구를 나타내기 위해 사용된다. 이러한 물품에 의해, 환자가 약물을 자기-투여 (즉, 그 자신에게 약물을 투여)할 수 있거나 또는 의사가 약물을 투여할 수 있다.
키트의 각각의 성분은 통상적으로 개별 용기 내에 동봉되어 있고, 다양한 용기들 모두는 사용 지침서와 함께 단일 패키지 내에 있다.
서열
<표 1> 서열 목록
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 일부 실시양태는 미오스타틴 길항제, 예를 들어 미오스타틴 결합 분자 또는 ActRIIB 결합 분자를 사용한다. 추가 실시양태에서, ActRIIB 결합 분자는 ActRIIB에 대한 길항제 항체이다.
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 일부 실시양태에서, 항-ActRIIB 항체는
a) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체; 및
b) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
(b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
(c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
(d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
(e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
(f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
(g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
(h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는, ActRIIB에 대한 길항제 항체
로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서 항체는 약 2 pM의 KD를 갖는다.
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 일부 실시양태에서, ActRIIB에 대한 길항제 항체는 인간 항체이다.
개시된 방법, 치료, 요법, 용도 및 키트의 일부 실시양태에서, 항체는 비마그루맙 또는 BYM338이다.
본 개시내용의 하나 이상의 실시양태의 세부사항은 상기 수반된 상세한 설명에 기재되어 있다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질은 여기에 기재되어 있다. 본 개시내용의 다른 특징, 목적 및 이점은 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다. 명세서 및 첨부된 청구범위에서, 단수 형태는 문맥에서 달리 명백히 설명되지 않는 한, 복수 지시대상을 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 언급된 모든 특허 및 공보는 참조로 포함된다. 하기 실시예는 본 개시내용의 바람직한 실시양태를 보다 충분히 예시하기 위해 제시된다. 이들 실시예는 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 바와 같은, 개시된 특허 내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예
일반적 방법론
ActRIIB 항체, 그의 특성화 및 그와 관련된 방법, 예컨대 (i) 기능적 검정, (ii) 리포터 유전자 검정 (RGA), (iii) HEK293T/17 세포주의 배양, (iv) 미오스타틴-유도된 루시페라제 리포터 유전자 검정, (v) 특이성 ELISA, (vi) ActRIIB/Fc-미오스타틴 결합 상호작용 ELISA, (vii) hActRIIB- 및 hActRIIA-발현 세포에 대한 FACS 적정, (viii) 1차 인간 골격근 세포에 대한 결합, (ix) 표면 플라즈몬 공명 (비아코어)을 사용하여 선택된 항-인간 ActRIIB Fab의 친화도 결정, (x) CK 검정, (xi) 동물 모델, (xii) 치료 프로토콜, (xiii) 통계적 분석, (xiiii) 패닝, (xv) 항체 확인 및 특성화, (xvi) 제1 친화도 성숙으로부터 유래된 항체의 최적화, (xvii) 친화도 성숙 Fab의 IgG2 전환 (제1 성숙), (xviiii) 제2 친화도 성숙, (xx) IgG2 전환 및 IgG2의 특성화 (제2 성숙), (xxi) 생체내 뮤린 연구에서의 항-ActRIIB 항체의 특성화, (xxii) SET에 의한 친화도의 확인, (xxiii) 교차-차단 연구 및 (xxiv) 에피토프 맵핑 상세설명 및 기술이 WO 2010/125003에 개시되었다.
연구 설계
이것은 다기관, 무작위화, 이중-맹검, 위약-대조, 중추적 4개 부문 용량-설정 IIb/III상 시험이다. 총 대략 240명의 산발성 봉입체 근염 (sIBM)을 가진 대상체를 4개 시험 부문 (A, B, C 또는 D) 중 하나에 1:1:1:1 비로 무작위화한다 (도 2).
기준선 6분 보행 거리가 ≥400 미터인 환자의 최대 20%를 무작위화할 것이다.
각 대상체에 대해, 연구는 5일까지의 기준선 방문을 포함하는 최대 28일 스크리닝 기간, 52주 치료 기간, 다양한 0-52주 유지 치료 기간 및 28일 무치료 추적 기간으로 이루어진다.
연구는 4개의 연구기를 포함한다:
1. 스크리닝기: 28일까지의 지속기간 (제-28일에서 제-1일)을 가지며, 그 동안 연구 적격성이 확인될 것이고, 적용가능한 경우, 대상체에게 허용되지 않는 의약을 점차 줄인다. 스크리닝기는 스크리닝 방문 및 기준선 방문으로 이루어진다. 대상체는 이 기 동안 어떠한 연구 의약도 투여받지 않는다.
스크리닝 방문: 방문은 무작위화로부터 28 내지 6일 전에 일어날 수 있다 (제-28일에서 제-6일). 임의의 연구 특정 절차를 실시하기 전에 사전 동의를 획득하여야 한다. 포함/제외 기준을 충족하는 대상체는 신체 검사, ECG, 활력 징후, 표준 임상 실험실 평가 (혈액학, 혈액 화학, 요분석)를 포함하는 안전성 평가를 겪을 것이다.
기준선 방문: 연구 약물 투여 개시 전에 모든 필요한 평가를 이 5일 시간프레임 (제-5일에서 제-1일) 동안 수행할 것이다. 스크리닝 방문 시에 안전성 요건 및 포함/배제 기준을 충족한 대상체는 기준선 평가를 위한 현장으로 돌아가도록 요청받을 것이다. 기준선 평가 (6MWD 포함)를 점검하고 환자가 다시 연구에 적격인 것으로 확인되면, 환자는 무작위화하기 위해 제1일의 현장으로 돌아가도록 요청받을 것이다.
2. 치료기: 치료 기간은 제1일 내지 제52주로 정의된다 (용량 투여전). 제1일 방문 시에, 대상체를 다음 4개의 병행 치료 부문 중 하나로 무작위화할 것이다:
부문 A: 4주마다 BYM338 10 mg/kg i.v. 주입
부문 B: 4주마다 BYM338 3 mg/kg i.v. 주입
부문 C: 4주마다 BYM338 1 mg/kg i.v. 주입
부문 D: 4주마다 i.v. 주입으로 투여되는 위약
연구 부문에 따라 대상체는 13회 용량의 BYM338 또는 매칭 위약을 4주마다 정맥내 주입으로 투여받을 것이다. 제1 연구 약물 투여는 제1일에 일어날 것이고, 모든 기준선 안전성 평가 결과는 투약 전에 이용가능하여야 한다. 제52주를 포함한 모든 후속 방문을 위해, 모든 평가를 약물 투여 전에 수행하여야 한다. 이 치료기를 위한 최종 용량 투여는 제48주 방문 시에 일어날 것이다. 대상체는 안전성, 약역학, 약동학, 바이오마커 및 효능 평가를 위해 4주마다 현장으로 돌아갈 것이다.
모든 대상체는, 이 치료기가 계속되는 마지막 대상체가 그의 제48주 투여를 완료하였으면, 제52주에 그의 치료 종료 평가를 수행한 다음에 유지 치료기로 이동할 것이다.
이 치료기가 계속되는 마지막 대상체가 그의 제48주 투여를 완료하였으면, 다른 대상체는 연구 약물을 투여받지 않을 것이고:
ㆍ 아직 이 치료기를 완료하지 않은 대상체는 그의 마지막 연구 약물 투여로부터 대략 28일 후에 치료 종료 (EOT) 방문을 완료하여야 한다.
ㆍ EOT 방문을 완료한 후에, 이들 대상체는 무치료 추적 기간으로 바로 들어갈 것이다 (이들은 유지 치료기에 들어가는데 적격이 아닐 것이다).
ㆍ 이미 유지기에 들어간 대상체에 대해, 하기를 참조한다.
3. 유지 치료기: 이 기는 환자 등록의 지속기간으로 정의될 것이지만, 최대 52주의 지속기간으로 제한될 것이다 (이 경우에 등록 기간은 52주를 초과한다). 따라서, 0 내지 52주까지 다양한 지속기간 하에, 유지 치료 기간은 용량 투여후 제52주에서 최대 제104주까지로 정의된다.
이 유지 치료기 동안, 대상체는 무작위화에 배정된 치료 부문을 계속할 것이다. 제52주에서 주어진 용량은 유지 치료 기간의 제1 용량이고, 제100주까지 4주마다 BYM338 또는 위약의 용량이 이어진다. 대상체는 안전성 및 효능 평가를 위해 4주마다 현장으로 돌아갈 것이다.
제104주 방문은 유지 치료 종료 (EOMT) 방문이다. EOMT 방문은 모든 방문 평가가 완료될 때 완료된 것으로 간주되고, 방문은 대화형 응답 기술 (IRT)에 등록되었다.
제52주를 넘은 모든 대상체에 대한 치료 지속기간은 치료기가 계속되는 마지막 대상체가 그의 제48주 용량을 투여받는 날까지 결정될 것이지만, 52주로 제한될 것이다 (즉, 2년의 연구에서 최대 총 치료 지속기간).
마지막 대상체가 그의 제48주 용량을 투여받았다면, 어떠한 다른 대상체도 연구 약물을 투여받지 않을 것이고:
ㆍ 유지 치료기의 모든 대상체는 그의 마지막 연구 약물 투여로부터 대략 28일 후에 유지 치료 종료 (EOMT) 방문을 완료하여야 한다.
ㆍ EOMT 방문을 완료한 후에, 모든 대상체는 무치료 추적 기간에 들어갈 것이다.
4. 치료후 추적기: 28일의 지속기간 하에, 대상체는 이 기 동안 어떠한 연구 의약도 투여받지 않는다. 추적 종료 (EOF) 방문은 각 대상체의 치료기 (치료기 또는 유지기)의 완료 4주 후 및 마지막 연구 약물 투여 8주 후에 일어날 것이다. EOF 방문은 그들이 전체 연구를 계획된 대로 완료하는지 또는 조기에 중단하는지의 여부에 관계없이 모든 대상체에 대해 완료되어야 한다. 이 연구를 완료한 대상체는 sIBM 환자에서 BYM338의 추가의 장기 효능 및 안전성 데이터를 수집하기 위해 개방-표지 연구에 들어가는데 적격일 수 있다.
연구 설계의 개요는 도 3-1에 제시되어 있고, 반면에 유지 치료기의 다양한 치료 지속기간은 도 3-2에 나타나 있다. 상세한 방문 및 평가 스케줄은 표 6-1 및 표 6-2에서 찾아볼 수 있다.
연구 설계의 근거
sIBM을 가진 환자에서 BYM338 30 mg/kg의 단일 용량 투여에 대한 예비 임상 데이터가 이용가능하다. sIBM을 가진 환자에서 BYM338의 다중 용량 데이터 및 다른 용량에 대한 데이터는 아직 이용가능하지 않다. 용량-범위설정 연구는 표적화된 환자 집단에서 효능, 약역학, 약동학 및 중요 안전성 데이터에 기초하여 하여 상이한 BYM338 용량을 연구하도록 제안된다. 이 연구의 설계는 이들 필요성을 다루며, 특히 대상체 안전성 및 제지방 체질량, 근육 강도, 근육 기능 및 이동성에 대한 BYM338의 효과에 초점을 맞춘다. 이 시험의 1차 종점은 제52주에 6-분 보행 거리 시험을 통해 신체 기능 및 이동성의 변화를 측정한다.
이 이중-맹검, 위약-대조 연구는 4주마다 투여되는 용량 1 mg/kg, 3 mg/kg 및 10 mg/kg BYM338 사이의 용량 범위설정 평가를 가능하게 하도록 설계된다. 현재, sIBM에 대한 승인된 치료는 없다. 또한, sIBM 환자가 질환 진행의 꾸준한 과정을 역전시키도록 돕는 약리학적 요법은 이용가능하지 않다 (Greenberg 2009, Aggarwal and Oddis 2012). pSMAD를 통한 TGFβ 신호전달 활성화의 상승된 발현의 발견은 미오스타틴 과다발현이 sIBM의 병리생리학의 중요한 부분일 수 있고 따라서 BYM338이 이 질환에서 유익할 수 있다는 것을 시사한다.
sIBM의 치료에 대해 승인된 약물 및 현재 표준 치료가 존재하지 않는다는 것을 고려하여, 위약-대조군이 제안된다. 위약-대조 시험은 약물에 의해 야기된 부작용을 기저 질환 또는 "배경 잡음"으로부터 유발되는 부작용과 구별하기 위한 최대 능력을 제공한다. 위약-대조 시험은 또한 연구 요법의 효능을 입증하고 용량-반응 관계를 입증하기 위한 최적 세팅을 제공하며, 대상체 또는 연구자 예상으로부터 나온 개선의 양을 감소시킴으로써 실제 약물 효과를 검출하기 위한 연구 능력을 증가시킬 수 있다. sIBM은 BYM338에 대한 제1 적응증이고, BYM338을 사용한 단지 제한된 인간 데이터만이 지금까지 이용가능하기 때문에, sIBM 환자에서 BYM338의 부작용 프로파일을 구별할 수 있는 것은 특히 중요하다.
3개의 비-위약 부문 중 임의의 부문에 무작위화된 대상체는 4주마다 적어도 13회 용량의 BYM338을 투여받을 것이다. 52주를 넘은 연구 약물 치료 지속기간은 이 연구에서의 최소 52주의 총 치료 지속기간 및 최대 104주로 대상체마다 다를 것이고, 이어서 모든 경우에서 4주 무치료 추적 기간이 이어져, 이 집단에서 장기 효능 및 안전성의 평가를 가능하게 할 것이다. 이 연구는 6분 보행 시험에 의해 측정되는 바와 같이 치료 효과의 개시에 관한 데이터를 모으도록 설계된다. 시험은 또한 삶의 질에 대한 sIBM (이 질환으로부터 유발될 수 있는 삼킴 곤란을 포함)의 영향의 측정을 포함한다.
맹검은 데이터베이스가 신뢰할 만한 효능 및 안전성 조치를 보장하도록 잠길 때까지 유지된다. 이상적으로는, 다양한 BYM338 용량의 효능을 평가하는데 있어서의 변동성을 피하기 위해 표준 연습 프로그램이 모든 대상체에 의해 수행될 것이다. sIBM 집단 내 신체 기능의 폭넓은 변화 (즉, 비대칭적 신경근육 병리상태)로 인해, 대상체는 각 방문 시에 대상체의 능력 및 약화의 중증도를 평가할 자격이 있는 물리 치료사에 의해 맞춤화된 대상체-특이적 운동 권장사항이 제공될 것이다. 대상체는 현장 물리 치료사에 의해 그에 대해 안전한 것으로 결정된 신체 활동을 시작하도록 장려될 것이다. 제안된 가정-기반 연습 프로그램을 설명하는 비디오는 대상체에 대한 운동 권장사항의 개발을 보조하도록 물리 치료사에게 제공될 것이다. 물리 치료사는 그/그녀가 비디오의 복사본이 대상체에 의해 사용되는 것이 적절하다고 판단되면 그것을 대상체에게 제공하도록 선택할 수 있다. 연습 프로그램 단독의 효과는 위약군에서 정의되도록 남아있고, 활성 약물을 투여받는 군과 상승작용할 수 있다.
연구 집단은 스크리닝 시에 sIBM 진단 기준 (제안된 의료 연구 협의회(Medical Research Council) 기준으로부터 조정됨 - 부록 1을 참조)을 충족하는 보행 sIBM 환자로 이루어질 것이다. 적격 대상체는 sIBM 진단 기준 ([Hilton-Jones et al. 2010]으로부터 조정된 [Hohlfeld 2011])에 따라 병리학적으로 정의되거나 임상적으로 정의된 sIBM 진단을 가질 것이 요구된다.
기준선에서 6MWD ≥ 400 m인 환자는, 많은 간행물이 건강한 지원자 및 다양한 질환 병태에 있는 환자에서 정상이하 신체 기능 및 이동성의 마커로서 400 m의 역치를 주장한 바와 같이 연구 샘플 크기의 20% 이하를 나타낼 것이다 (Chetta et al. 2006, Troosters et al. 1999, Simonsick et al. 2008, Chang et al. 2004, Enright et al. 2003, Enright et al. 1998, Kruis et al. 2010, Morley et al. 2011, Kommuri et al. 2010, Villalba et al. 2007).
3.3 용량/요법, 투여 경로 및 치료 지속기간의 근거
제안된 용량은 진행중인 연구 CBYM338X2205로부터 최근에 이용가능한 치료중 결과의 고려사항을 비롯한, 이용가능한 임상 데이터로부터 만들어진 추론을 기반으로 선택되었다.
14명 환자 (11명 활성, 3명 위약)에 대한 연구 CBYM338X2205로부터의 데이터는 단일 용량의 BYM338 30 mg/kg i.v.의 투여가 위약과 비교하여, MRI를 통한 넓적다리 근육 부피 (TMV), 뿐만 아니라 DXA를 통한 총 및 부속 LBM에 있어서, 기준으로부터의 유의한 증가를 보였음을 입증하였다. 추가로, 이 용량은 또한 약물 투여 16주 후에 정량적 근육 시험 및 6-분 보행 거리 시험에 따라 지속된 강도 및 기능적 성능 및 이동성 개선을 유도하였다. 단일 30 mg/kg 용량이 적어도 8주 지속기간의 효과를 보여준 바와 같이, 10 mg/kg을 사용한 반복 치료는 유사한 효능을 달성할 수 있다. 따라서, 10 mg/kg은 이 연구에서 가장 높은 용량으로서 선택되었다. 그러나, 최소의 효과적인 용량은 확인되도록 남아있다.
이 연구에서, 장기 반복 투약의 효능은 BYM338의 용량-반응 관계를 이해하기 위한 목적으로 연구될 것이다. 이 연구를 위해 선택된 BYM338의 모든 용량 (10, 3 및 1 mg/kg i.v.)을 시험하였으며, 정상적인 건강한 지원자에서 잘 용인되는 것으로 밝혀졌다.
상기 용량에 대한 목적은 10, 3 또는 1 mg/kg i.v.의 반복 용량이 환자에게 추가의 근육 구조 및 기능적 이익을 제공할 수 있을지의 여부 및 보다 낮은 용량이 보다 적은 부작용, 예컨대 여드름 또는 불수의근 수축으로 상기 이익을 제공할 수 있을지의 여부를 평가하는 것이다.
건강한 지원자 (CBYM338X2101 및 CBYM338X2102)에서, 넓적다리 근육 MRI 부피는 10 mg/kg 및 30 mg/kg의 단일 용량에 대해 필적하게 증가하였지만, 30 mg/kg의 효과가 보다 오랫동안 지속했다. 3회 반복 매월 용량의 BYM338을 사용하여, 비록 3 mg/kg이 10 mg/kg의 지속기간의 대략 절반 동안 완전한 수용체 점유를 야기하는 것으로 생각되나, 3 mg/kg 및 10 mg/kg에서 건강한 성인에서의 TMV의 필적하는 증가가 존재하였다. 10 mg/kg은, 비록 30 mg/kg 용량보다 더 빈번하게 주어지나, 아마도 보다 낮은 Cmax로 인해 30 mg/kg보다 더 적은 부작용을 가질지의 여부는 아직 분명하지 않다.
요약하면 3 mg/kg 및 10 mg/kg q4는 건강한 지원자에서 TMV를 증가시키는데 효과적이었으며, 따라서 sIBM 환자에서와 마찬가지로 효과적일 것으로 예상된다.
보다 낮은 용량인 1 mg/kg은 단일 용량이 건강한 지원자에게 투여된 후 2주 넘어서까지 TMV의 지속적인 증가를 입증하지는 않았다. 그러나, sIBM을 가진 환자가 BYM338에 대한 증가된 감수성을 가질 수 있고 이 용량이 다수회 투여되는 경우에 효과적임을 증명할 수 있다는 전제에 대해 시험되고 있는 중이다.
2010년에 신경근육 질환의 국제 전문가 회의에서 비롯된 합의문에서는 sIBM의 치료 시험이 질환에 대한 치료의 효과를 적절하게 평가하기 위해 6개월의 기간을 초과하여야 한다고 권장하고 있다 (Hilton-Jones et al. 2010). EMA 및 FDA 둘 다는 sIBM 시험에 대한 12-개월 지속기간이 적절하다는 것에 동의하였고, 따라서 모든 대상체는 적어도 52주의 치료를 받을 것이다. 무작위화로부터 최대 3년까지의 추가의 데이터가 이 집단에서 장기 안전성 및 효능을 평가하기 위해 생성되고 있다.
최단 가능한 지속기간 동안 대상체에서 위약을 유지하는 것이 바람직하지만, 현재 sIBM에 대한 승인된 치료 및 표준 치료는 존재하지 않는다. 또한, sIBM은 BYM338 사용 등록이 계획된 제1 적응증인 것을 고려하여, 그리고 sIBM은 만성 치료를 요구할 것으로 예상되기 때문에, 충분한 장기 안전성 데이터를 갖는 견고한 데이터베이스를 개발하는 것이 중요하다. 따라서, 추가의 유지 기간을 수반하는 1년 위약-대조 연구를 (2년까지의 총 치료 지속기간 동안) 수행하는 것이 타당하다. 질환 활성의 규칙적 평가는 임의의 치료군에서 질환의 악화를 경험하고 있는 대상체가 언제든지 그들 자신의 바램으로 또는 연구자의 조언을 기반으로 연구에서 나갈 수 있다는 것을 보장한다. 효능 및 안전성이 연구의 결과를 기반으로 하여 결정되자마자, 모든 대상체는 활성 약물을 사용한 별개의 개방 표지 확장 연구에 참여하도록 초대될 것임을 주목하여야 한다. 따라서, 대상체는 52주 안전성 및 효능이 결정된 후에 위약을 유지하지 않을 것이다. 비록 현재 이용가능한 데이터는 sIBM 집단에서 BYM338의 확실한 효능을 입증하는 것이 불충분하지만, 이 연구는 이 데이터를 수집하여 연구 결론 시에 sIBM 집단에서의 BYM338의 효능 및 안전성 둘 다에 대한 정보를 제공하도록 설계된다.
비교자의 선택에 대한 근거
sIBM의 치료에 대해 승인된 약물이 존재하지 않는다는 것을 고려하여, 위약-대조군이 제안된다. 위약-대조 시험은 또한 약물에 의해 야기된 부작용을 기저 질환 또는 "배경 잡음"으로부터 유발되는 부작용과 구별하기 위한 최대 능력을 제공한다. 위약-대조 시험은 또한 연구 요법의 효능을 입증하고 용량-반응 관계를 입증하기 위한 최적 세팅을 제공하며, 대상체 또는 연구자 예상으로부터 나온 개선의 양을 감소시킴으로써 실제 약물 효과를 검출하기 위한 연구 능력을 증가시킬 수 있다.
위험 및 이익
완료된 I상 연구로부터의 안전성 데이터는 임의의 특정한 안전성 위험 또는 문제 또는 임의의 특정한 패턴의 주요 사례 무리를 강조하지 않는다. 전체 위험 이익 평가의 관점에서, BYM338을 사용한 현재 연구 설계 및 그의 시험-관련 위험 (주입, 채혈, 영상화 동안의 방사선에 대한 노출)이 정당화된다.
지금까지 213명의 환자 및 건강한 지원자가 비마그루맙을 사용한 연구에 등록되었으며, 여기서 150명은 활성 약물을 0.1 내지 30 mg/kg의 단일 및 다중 용량의 범위에 이르는 용량으로 i.v. 투여받았다. 초기 단계 임상 데이터는 건강한 지원자 및 환자에서 BYM338에 대한 바람직한 이익-위험 프로파일을 지지한다.
건강한 지원자 및 노인 환자에서의 제1 연구로부터의 예비 데이터는 얼굴 상에 퍼진 여드름 및 등과 가슴 상에 덜 빈번하게 퍼진 여드름이 30 mg/kg의 단일 용량을 투여받은 일부 성인에서 존재할 수 있다는 관찰을 나타낸다. BYM338과 피부 반응성 사이의 가능한 기계론적 연관성은 불분명한 채로 남아 있다.
정상적인 건강한 지원자 및 단일 30 mg/kg i.v. 용량의 BYM338로 치료된 sIBM을 가진 환자의 대략 20% - 48%에서, '근육 움찔수축'으로 지칭되는 불수의근 수축이 보고되었다. 보고된 근육 움찔수축은 중등도의 강도이고, 일시적이고, 짧은 지속기간을 갖고, 자기-제한적이며, 의학적 치료를 요구하지 않았다. 움찔수축이 근육의 노화 및 위축에서 이론적으로 보다 확연할 수 있지만, 이것은 78세까지의 sIBM 환자에서는 관찰되지 않았다. 움찔수축의 생물학적 설명은 내부 및 외부 자원 둘 다를 사용하는 BYM338 프로젝트 팀에 의해 추구되고 있다.
래트의 전임상 연구는 골격근 질량의 실질적인 증가에 대한 보상으로 간주되는 현저한 심장 비대를 입증하였다. 원숭이 연구에서 불일치하게 보일지라도, 암컷 원숭이에서 좌심실 챔버 크기 및 중요하게는 전반적 좌심실 수축기 기능에 대한 어떠한 효과도 없이 관찰된 심실 근육 질량의 증가는 BYM338의 직접 효과보다는 오히려 보상 효과를 지지한다. 심장 비대가 골격근 질량의 작은 증가가 있는 환자에서 BYM338 치료로 일어날 수 있는지의 여부는 분명하지 않다. 심장초음파검사 및 EKG 홀터(Holter) 모니터 데이터는 30 mg/kg까지 (30 mg/kg 포함)의 단일 및 다중 투여 후에 위약과 비교하였을 때, 후벽 두께, 심실중격 두께, 좌심실 확장기 직경, 좌심실 질량 또는 심장 전도에 있어서의 유의한 변화에 대한 어떠한 증거도 제시하지 않았다. ECG 및 심전도검사는 이 잠재적 위험을 모니터링하기 위해 연구 CBYM338B2203에서 수행될 것이다.
4- 및 13-주 독성 연구에서의 BYM338의 1, 10 및 100 mg/kg의 매주 용량은 래트의 자궁, 질 및 난소에서 가역 변화를 유발하였고, 시노몰구스 원숭이의 난소에 대해서는 훨썬 더 적은 정도로 가역 변화를 유발하였다. 100 mg/kg 매주 제공 시에, BYM338은 최기형성의 증거로 래트에서 발달상 독성인 것으로 나타났다. 이들 발견이 기관발생에 있어서 BYM338의 약리학 및 액티빈의 역할을 기반으로 하여 예상되지 않는 것은 아니다 (Xia and Schneyer 2009). 비-가임 폐경후 및 폐경전 여성에서 BYM338의 용량의 증가와 함께 FSH 수준의 억제가 확인되었고, 진행중인 연구 및 향후 연구에서의 데이터를 밀접하게 모니터링하기 위한 계획이 준비되어 있다. 폐경후 여성에서 감소된 FSH의 임상 의미는 알려져 있지 않으며; 폐경전 여성에서 이러한 감소는 월경 주기, 생식력을 방해할 수 있고, 잠재적으로는 추가의 치료를 요구할 수 있는 신체 내 낮은 에스트로겐의 증상 (예를 들어 안면 홍조, 질 건조증, 가속된 뼈 손실)을 야기할 수 있는 것으로 예상된다. 단지, 비-가임 여성만이 모든 건강한 지원자 연구에서 동원되었다. 폐경전인 대상체의 경우에, 2가지 형태의 고도로 효과적인 피임을 사용하는데 동의한 가임 여성 (WOCBP)을 서면 동의한 날로부터 등록시키기 위한 이 연구 계획은 마지막 연구 약물 투여 후 6개월 내내 제공된다. 임신 시험은 스크리닝시에, 연구 기간 전체에 걸쳐 및 마지막 방문 30일 후에 투여될 것이다.
체중은 BYM338 치료로 증가할 수 있지만, 증가는 주로 LBM에 일어날 것이며, 체지방 질량은 안정하거나 감소될 것으로 예상된다.
약물을 중화하고 그의 효능을 약화시킬 수 있는 항-약물 항체를 BYM338에 대하여 개발할 수 있는 것이 가능하다. 그러나, IB 버전 4.0의 공개 일자로, 단일 용량 연구로부터 평가된 샘플에서 중화 항체는 관찰되지 않았다. 다중 용량 연구 및 다른 단일 용량 연구에 대한 분석이 계획된다.
주입 관련 반응은 모노클로날 항체로 일어날 수 있다. 과민 반응은 열, 오한, 두드러기, 호흡곤란, 두통, 근육통 및/또는 저혈압으로서 표출될 수 있다. 아나필락시스를 유발하는 심각한 주입 반응은 모노클로날 항체 요법에서 드문 사례이다. 중증 과민 반응이 일어난 경우에, BYM338의 투여를 중단하고 적절한 요법을 개시하여야 한다.
임의의 다른 연구 약물에서와 같이, 심각하고 예측하지 못한 것일 수 있는, BYM338에 대한 알 수 없는 위험이 존재한다.
집단
연구 집단은 유럽 신경근육 센터(European Neuromuscular Center)의 2010 정의에 따라 sIBM의 병리학적으로 정의되거나 임상적으로 정의된 진단을 가진 보행 (즉, 스크리닝 및 기준선에서 휠체어에 의지하거나 침대에 누워있지 않는) 남성 및 여성 환자로 이루어질 것이다. 전세계 대략 30개 센터에서 총 240명 환자를 무작위화하는 것을 목표로 한다.
포함 기준
이 연구에 포함시키기에 적격인 환자는 스크리닝 및 기준선 방문에서 하기 기준 모두를 충족하여야 한다:
35세 내지 85세 (35세 및 85세 포함)의 남성 및 여성 환자
병리상태 보고의 평가를 비롯하여 sIBM 진단 기준 (제안된 2010 MRC 기준으로부터 조정됨)에 따라 병리학적으로 정의되거나 임상적으로 정의된 산발성 봉입체 근염으로 진단됨.
6MWD 점수 >1 미터에 의해 정의된 바와 같이, 스크리닝 및 기준선 방문 둘 다에서 휠체어에 의지하지 않아야 함 (휠체어의 간헐적 사용은 허용됨).
연구자와 잘 통신할 수 있음.
연구 요건 및 절차를 따른다는 약속과 함께 연구의 전체 지속기간 동안 참여할 의향.
배제 기준
스크리닝 및 기준선 방문에서 하기 기준 중 임의의 것을 충족하는 환자는 이 연구에 포함시키기에 적격이 아니다.
1. 등록 시에 또는 등록 30일 내에 또는 등록의 5회 절반에 (어느 경우든 보다 긴 시간), 또는 지역 규제를 기반으로 한 연구 시험에의 참여에 대한 임의의 다른 제한에 의해 필요로 하는 경우 보다 긴 시간에, 다른 연구 약물의 사용. 이 연구 동안 또 다른 임상 시험에 대한 현재 또는 계획된 참여. 약물 요법을 수반하지 않는 관찰 또는 등록 연구에의 참여는 허용됨;
2. 연구 의약에 대한 알레르기 반응 또는 아나필락시스성 반응의 이력, 또는 연구 의약의 임의의 성분에 대한 과민증의 이력. 생물제제에 대한 과민증의 이력;
3. 적어도 0.8 g 단백질/kg/일로 정의된 적절한 단백질 흡수를 배제하는 이유, 및 위장관으로부터의 단백질 또는 에너지의 흡수장애를 야기하는 것으로 알려진 질환, 예컨대 염증성 장 질환, 복강 질환, 단장 증후군, 췌장 기능부전;
4. 다발근염 또는 피부근염, 류마티스성 다발근육통, 섬유근육통, 유의한 치매/알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 졸중, 뇌성 마비, 간질, 다발성 경화증, 척수 손상, 근육 이영양증, 중증 근무력증, 및 척추의 퇴행성 관절 질환과 관련된 약화를 비롯한, 이동성을 유의하게 제한하는 유의한 하퇴 근육 또는 관절통 또는 근육 약화를 야기하는 임의의 비-sIBM 병태 또는 다른 신경학적 (선천성 또는 후천성) 또는 신경근육 질환. 주: 이들의 이전 오진은 배제하지 않음. 골관절염과 같은 병태를 가진 환자는 그의 통증으로 인해 연구 절차를 수행할 수 없는 것이 아니라면 참여할 수 있음;
5. 중증 만성 폐쇄성 폐 질환 (예측된 FEV1 < 50% 또는 의료 연구 협의회 호흡곤란 척도(Medical Research Council Dyspnea Scale)의 기능적 호흡곤란 ≥ 등급 3), 진행성 기관 부전, 만성 신장 질환 (MDRD 방정식을 사용하여 추정된 GFR < 30 mL/분), 갑상선기능항진증, 류마티스 관절염을 비롯한, 악액질 또는 근육 위축과 연관되거나 또는 호흡 기능의 결과로서 이동성을 제한하는 임의의 활성 만성 비-sIBM 병태;
6. 제어되지 않은 갑상선기능저하증. 스크리닝 전 지난 6주간 호르몬 대체 요법의 용량을 변화시킨 갑상선기능저하 환자는 연구에 적격이 아님;
7. 제어되지 않은 당뇨병 (즉, HbA1C ≥9. 0 mmol/l) 및/또는 임의의 다른 제어되지 않은 내분비 질환;
8. 지난 60일간 최근에 공여된 혈액을 받거나 또는 지난 2주간 혈장 공여를 받은 잠재적 대상체;
9. 마지막 6개월간 고관절 골절의 이력 또는 마지막 6개월간 고관절 또는 슬관절 인공삽입물을 위한 수술을 겪음;
10. 스크리닝 전 30일 내에 (스크리닝 방문), 연구자의 견해에서 하지 기능 또는 연구에 참여하기 위한 환자의 능력에 영향을 미치는 급성 질병을 경험함;
11. 콜롬비아 자살 중증도 평가 척도(Columbia Suicide Severity Rating Scale (CSSRS))의 자살 관념(Suicidal Ideation) 섹션의 항목 4 또는 항목 5에 대해, 이러한 관념이 지난 6개월 내에 일어났다면 "예"로 점수화하거나, 또는 "비-자살 자해 행동(Non-Suicidal Self-Injurious Behavior)"을 제외한 자살 행동(Suicidal Behavior) 섹션의 임의의 항목에 대해, 이러한 행동이 지난 2년 내에 일어났다면 "예'로 점수화함;
12. 임신 또는 수유 (젖먹이) 여성 (여기서 임신은 수정 후 및 임신 종결까지의 여성의 상태로 정의되며, 양성 hCG 실험실 시험에 의해 확인됨).
13. 생리학상 임신이 될 수 있는 모든 여성으로서 정의된 가임 여성 (투약 동안 및 마지막 BYM338 투여 후 6개월 동안 그들이 고도로 효과적인 피임 방법을 사용하지 않는다면);
고도로 효과적인 피임 방법은 다음을 포함한다:
1. 절대 금욕 (이것이 대상체의 바람직한 평소 생활방식에 따르는 경우). 주기적 금욕 (예를 들어, 캘린더, 배란, 증상체온법, 배란후 방법) 및 금단은 피임의 허용되는 방법이 아님.
2. 여성 불임수술 (자궁절제술과 함께 또는 없이 외과적 양측 난소절제술을 받음) 또는 연구 치료를 수행하기 적어도 6주 전에 난관 결찰. 난소절제술 단독의 경우에, 여성의 생식 상태가 추적 호르몬 수준 평가에 의해 확인된 경우에만.
3. 남성 불임수술 (스크리닝 적어도 6개월 전). 연구에서 여성 대상체의 경우에, 정관절제된 남성 파트너가 그 대상체에 대한 유일한 파트너이어야 함.
4. 하기 방법 중 어느 둘의 조합 (a+b 또는 a+c 또는 b+c):
a. 경구, 주사 또는 이식된 호르몬 피임 방법 또는 필적할만한 효능을 갖는 (실패율 <1%) 다른 형태의 호르몬 피임, 예를 들어 호르몬 질 링 또는 경피 호르몬 피임의 사용.
b. 자궁내 장치 (IUD) 또는 자궁내 시스템 (IUS)의 설치.
c. 차단 피임 방법: 살정자성 발포체/겔/필름/크림/질 좌제가 포함된 콘돔 또는 밀폐형 캡 (칸막이 또는 경추형/아치형 캡).
경구 피임의 사용의 경우에, 여성은 연구 치료를 수행하기 전 최소 3개월 동안 동일한 환제에 대해 안정하였어야 한다.
여성이 적절한 임상 프로파일 (예를 들어 연령 적절한, 혈관운동 증상의 이력)과 함께 12개월의 자연 (자발성) 무월경이 있었거나 또는 적어도 6주 전에 외과적 양측 난소절제술 (자궁절제술과 함께 또는 없이) 또는 난관 결찰을 받았다면, 이들은 폐경후이고 가임이 아닌 것으로 간주된다. 난소절제술 단독의 경우에, 여성의 생식 상태가 추적 호르몬 수준 평가에 의해 확인된 경우에만 그 여성이 가임이 아닌 것으로 간주된다.
14. 무작위화 후 12개월 내에 임의의 예상되는 스케줄의 입원환자 수술;
15. 스크리닝에서 25-OH-비타민 D 수준 <9.2 ng/mL 또는 <23 nmol/mL로 정의된 중증 비타민 D 결핍;
16. 유의한 정신 장애, 임상적으로 명백한 말초 혈관 질환 또는 장애, 또는 임의의 효능 평가에 영향을 미칠 수 있는 전신 장애 (예를 들어 당뇨병성 신경병증, 만성 피로 증후군, 정신분열증, 양극성 장애, 중증 우울증, 간헐성 파행);
17. 말초 정맥 접근의 결핍;
18. 뉴욕 심장 학회(New York Heart Association) 클래스 III 및 IV로서 분류된 공지된 심부전 또는 만성 저혈압 (수축기 혈압 <100 mmHg)의 이력;
19. 스크리닝에서 수축기 혈압 >180 또는 <90 mm Hg 또는 확장기 혈압 >100 또는 <50 mmHg, 또는 악성 고혈압;
20. 스크리닝 180일 내에 불안정형 협심증, 심근경색, 관상 동맥 우회로 이식 수술 또는 경피 관상동맥 개입 (예컨대 혈관성형술 또는 스텐트 설치술)의 이력;
21. 스크리닝 또는 반복된 평가의 기준선에서 남성의 경우에 연장된 QT 증후군 또는 QTcF > 450 msec (프리데리시아 보정(Fridericia Correction)) 및 여성의 경우에 > 470 msec;
22. 의학적 또는 장치 요법에도 불구하고 휴식 시에 제어되지 않은 심실 반응 (평균 심박수 >100 비트/분 [bpm])을 갖는 임의의 현재 심실상성 부정맥, 또는 의학적 또는 장치 요법에도 불구하고 자발성 또는 유도된 지속성 심실성 빈맥 (30초 동안 심박수 >100 bpm)의 임의의 이력, 또는 소생된 심장 정지 또는 자동화된 내부 심장율동전환기-제세동기의 존재의 임의의 이력을 비롯한 임상적으로 유의한 이상을 나타내는 ECG;
23. 유의한 응고병증, 혈소판 수 75,000개/mm3 미만, 헤모글로빈 11.0 g/dL 미만;
24. 비정상적 간 기능 검사, 예컨대 SGOT (AST), SGPT (ALT), 알칼리성 포스파타제 또는 혈청 빌리루빈 (길버트병 제외)에 의해 나타내어지는 바와 같은 간 질환 또는 간 손상.
연구자는 하기 기준에 의해 안내되어야 한다:
ㆍ 임의의 단일 트랜스아미나제는 정상 상한치 (ULN)의 3배를 초과하지 않을 수 있다. 3 x ULN까지 (3 x ULN 포함) 평가된 단일 파라미터는 가능한 한 곧, 그리고 모든 경우에서 적어도 무작위화 전에, 임의의 실험실 오류를 배제하기 위해 재점검되어야 한다.
ㆍ 총 빌리루빈 농도가 1.5 x ULN을 초과하여 증가한다면, 총 빌리루빈은 직접 및 간접 반응 빌리루빈으로 구별되어야 한다. 어느 경우에서든, 혈청 빌리루빈은 1.6 mg/dL (27 μmol/L)의 값을 초과하여서는 안된다;
14. 중증 급성 또는 만성 간 질환 (보상성 또는 비보상성)의 공지된 이력 또는 존재, 공지된 담낭 또는 담관 질환, 급성 또는 만성 췌장염, 신부전, 또는 간독성 잠재력을 갖는 의약을 사용한 만성 치료;
15. 국부 재발 또는 전이의 증거가 존재하는지의 여부와 관계없이 지난 5년 내에 치료되거나 치료되지 않은 임의의 기관계의 악성종양 (명확하게 치료된 피부의 국부화 기저 세포 암종 또는 편평 세포 암종 이외)의 이력. 스크리닝 전 1년 넘게 명확하게 치료된 자궁경부의 상피내 암종을 갖는 참여자는 연구에 들어갈 수 있음;
16. 무작위화 전 지난 6개월 내에 VEGF 억제제 (베바시주맙)를 비롯한, 금지된 전신 치료의 사용, 또는 무작위화 전 지난 3개월 내에 안드로겐 보충제 (OTC DHEA 포함), GnRH 유사체, 항안드로겐, 항에스트로겐 (타목시펜), 공지된 안드로젠성 성분 (예를 들어 NETA)을 갖는 프로게스틴, 재조합 인간 성장 호르몬, 경구 베타 효능제, 인슐린, 메게스트롤 아세테이트, 또는 드로나비놀을 비롯한, 근육 질량에 영향을 미치는 것으로 공지된 임의의 요법의 사용;
17. 무작위화 전 적어도 90일 동안 프레드니손 등가물 10 mg 이상의 1일 용량으로 진행중인 만성 코르티코스테로이드 사용 또는 전신 코르티코스테로이드 사용 이력;
18. 무작위화 전 지난 6개월 내에 진행중인 면역억제 요법 또는 항체 면역억제 요법 (리툭시맙 또는 i.v. 이뮤노글로불린, TNF-알파 억제제), 또는 무작위화 전 지난 3개월 (90일) 내에 자가면역 질환에 대한 비-항체 요법 (예를 들어 시클로스포린, 메토트렉세이트, 타크롤리무스, 시클로포스파미드, 아자티오프린);
19. 현재 활성 알콜 또는 약물 남용, 또는 무작위화 전 마지막 24주 내에 알콜 또는 약물 남용의 이력;
20. 무작위화 전 8주 내에 임의의 종류의 공지된 활성 감염 (손발톱 바닥의 진균 감염을 제외) 또는 입원이나 항감염제를 i.v.로 사용한 치료를 요구하는 임의의 주요 감염 에피소드;
21. 임의의 만성 활성 감염 (예를 들어, HIV, B형 또는 C형 간염, 결핵 등). 잠재성 결핵 감염에 대한 화학예방을 받는 환자는 연구에 적격임;
22. 환자는 스크리닝 동안에, 연구자의 견해에서 참여를 방해할 수 있거나, 결과를 혼동시킬 수 있거나, BYM338을 투여하는 경우에 환자에게 임의의 추가의 위험을 제시할 수 있는 임의의 의학적 병태 또는 실험실 결과를 가짐;
23. 기준선 6분 보행 거리가 ≥400 미터인 환자의 최대 20%가 무작위화될 것임.
연구 집단이 모든 적격 환자를 대표하도록 보장하기 위해 연구자에 의해 어떠한 추가의 배제 기준도 적용될 수 없다.
치료
프로토콜 요청된 치료
1. 연구 치료
노파르티스는 하기 연구 약물을 공급할 것이다:
ㆍ BYM338: 고무 마개 및 알루미늄 플립-오프 캡이 있는 무색 유리 바이알에 제공되는, 바이알 내의 150 mg 액체.
ㆍ 위약: 고무 마개 및 알루미늄 플립-오프 캡이 있는 무색 유리 바이알에 제공됨.
주: 맹검, 개방-표지 연구를 유지하기 위해, 치료는 비맹검 약사/지명자에 의해 준비될 것이고, 단지 맹검 연구 인력에 의해서만 투여될 것이다.
2. 추가의 연구 치료
연구 치료 이외의 추가의 치료는 이 시험에 요구되지 않는다.
그러나, 대상체는 국부 가이드라인에 따라 및 치료하는 의사의 안내 하에 충분한 기본적 칼슘 및 비타민 D 치료를 받을 수 있다.
치료 부문
이것은 4개 부문 연구이다. sIBM을 가진 240명 대상체는 제1일에 하기 4개 부문 중 하나에 1:1:1:1의 비로 무작위화될 것이다:
ㆍ 부문 A: 4주마다 10 mg/kg의 BYM338 i.v. 주입 (n=60)
ㆍ 부문 B: 4주마다 3 mg/kg의 BYM338 i.v. 주입 (n=60)
ㆍ 부문 C: 4주마다 1 mg/kg의 BYM338 i.v. 주입 (n=60)
ㆍ 부문 D: 4주마다 i.v. 주입으로 투여되는 위약 (n=60)
연구 부문에 따라 대상체는 최소 13회 용량의 BYM338 또는 매칭 위약을 4주마다 정맥내 주입으로 투여받을 것이다. 제1 투여는 제1일에 일어날 것이고, 치료기 동안 최종 용량 투여는 제48주 방문에 일어날 것이며, 이는 최소 52주의 치료 지속기간을 정의한다. 유지 치료기에 들어간 대상체는 그의 제1일 치료 부문 무작위화 배정에 따라 4주마다 BYM338 또는 매칭 위약을 i.v. 주입으로 투여받을 것이다. 모든 대상체는, 마지막 대상체가 제48주 치료 용량에 도달할 때까지 계속 연구 의약을 투여받을 것이기 때문에, 최종 연구 약물 투여는 가변적이다. 그러나, 이 연구에서 개별 대상체에 대한 최대 총 치료 지속기간은 2년 (104주)으로 제한될 것이다; 이 최대 치료 지속기간 경우에서, 최종 연구 약물 투여는 제100주 방문에서 일어날 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> METHODS OF TREATING SPORADIC INCLUSION BODY MYOSITIS <130> 55872 <150> US 61/865861 <151> 2013-08-14 <150> US 61/983567 <151> 2014-04-24 <160> 194 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDR <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDR <400> 2 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDR <400> 3 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDR <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDR <400> 5 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDR <400> 6 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> CDR <400> 7 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser 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tcttataatt atgtgaattg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc ggtacttttg ctggtggttc ttattatggt 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtt cttggccag 339 <210> 126 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> VL <400> 126 gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60 tcgtgtacgg gtactagcag cgatgttggt tcttataatt atgtgaattg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc ggtacttttg ctggtggttc ttattatggt 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtt cttggccag 339 <210> 127 <211> 345 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> VH <400> 127 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg 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cagccccgtg 480 aaggccggcg tggagaccac cacccccagc aagcagagca acaacaagta cgccgccagc 540 agctacctga gcctgacccc cgagcagtgg aagagccaca ggtcctacag ctgccaggtg 600 acccacgagg gcagcaccgt ggaaaagacc gtggccccaa ccgagtgcag c 651 <210> 162 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> light chain <400> 162 cagagcgccc tgacccagcc cgccagcgtg tccggcagcc caggccagtc tatcacaatc 60 agctgcaccg gcacctccag cgacgtgggc agctacaact acgtgaactg gtatcagcag 120 caccccggca aggcccccaa gctgatgatc tacggcgtga gcaagaggcc cagcggcgtg 180 tccaacaggt tcagcggcag caagagcggc aacaccgcca gcctgacaat cagtgggctg 240 caggctgagg acgaggccga ctactactgc ggcacctttg ccggcggatc atactacggc 300 gtgttcggcg gagggaccaa gctgaccgtg ctgggccagc ctaaggctgc ccccagcgtg 360 accctgttcc cccccagcag cgaggagctg caggccaaca aggccaccct ggtgtgcctg 420 atcagcgact tctacccagg cgccgtgacc gtggcctgga aggccgacag cagccccgtg 480 aaggccggcg tggagaccac cacccccagc aagcagagca acaacaagta cgccgccagc 540 agctacctga gcctgacccc cgagcagtgg aagagccaca ggtcctacag ctgccaggtg 600 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gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcagc ccaaggctgc cccctcggtc 360 actctgttcc cgccctcctc tgaggagctt caagccaaca aggccacact ggtgtgtctc 420 ataagtgact tctacccggg agccgtgaca gtggcctgga aggcagatag cagccccgtc 480 aaggcgggag tggagaccac cacaccctcc aaacaaagca acaacaagta cgcggccagc 540 agctatctga gcctgacgcc tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600 acgcatgaag ggagcaccgt ggagaagaca gtggccccta cagaatgttc a 651 <210> 174 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> light chain <400> 174 cagagcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60 tcgtgtacgg gtactagcag cgatgttggt tcttataatt atgtgaattg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tatggtgttt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc ggtacttttg ctggtggttc ttattatggt 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcagc ccaaggctgc cccctcggtc 360 actctgttcc cgccctcctc tgaggagctt caagccaaca aggccacact ggtgtgtctc 420 ataagtgact 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tgagcagtgg aagtcccaca gaagctacag ctgccaggtc 600 acgcatgaag ggagcaccgt ggagaagaca gtggccccta cagaatgttc a 651 <210> 176 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> heavy chain <400> 176 caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggcgccag cgtcaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agcagctaca tcaactgggt ccgccaggct 120 cctgggcagg gactggagtg gatgggcacc atcaaccccg tgtccggcag caccagctac 180 gcccagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca ccagcatcag caccgcctac 240 atggagctgt ccaggctgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcgc caggggcggc 300 tggttcgact actggggcca gggcaccctg gtgaccgtgt cctcagctag caccaagggc 360 cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420 ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag ccagtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540 tccagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600 gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agaggaagtg ctgcgtggag 660 tgccccccct gcccagcccc cccagtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720 cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgagg acccagaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840 gccaagacca agcccagaga ggaacagttt aacagcacct tcagggtggt gtccgtgctg 900 accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt ctccaacaag 960 ggcctgccag cccccatcga gaaaaccatc agcaagacca agggccagcc acgggagccc 1020 caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080 tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140 cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200 tacagcaagc tgacagtgga caagagcagg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260 gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320 aag 1323 <210> 177 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> heavy chain <400> 177 caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggcgccag cgtcaaggtg 60 tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agcagctaca tcaactgggt gcgccaggct 120 ccagggcagg gactggagtg gatgggccag atcaacgccg ccagcggcat gaccagatac 180 gcccagaagt tccagggcag agtcacaatg accagggaca cctctatcag caccgcctac 240 atggagctgt ccaggctgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcgc caggggcggc 300 tggttcgact actggggcca gggcaccctg gtgaccgtgt cctcagctag caccaagggc 360 cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420 ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag ccagtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540 tccagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600 gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agaggaagtg ctgcgtggag 660 tgccccccct gcccagcccc cccagtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720 cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgagg acccagaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840 gccaagacca agcccagaga ggaacagttt aacagcacct tcagggtggt gtccgtgctg 900 accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt ctccaacaag 960 ggcctgccag cccccatcga gaaaaccatc agcaagacca agggccagcc acgggagccc 1020 caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080 tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140 cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200 tacagcaagc tgacagtgga caagagcagg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260 gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320 aag 1323 <210> 178 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> heavy chain <400> 178 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat attaatgctg ctgctggtat tactctttat 180 gctcagaagt ttcagggtcg ggtcaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240 atggaactga gccgcctgcg tagcgatgat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtggt 300 tggtttgatt attggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcttc caccaagggc 360 cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420 ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggagcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600 gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agcggaagtg ctgcgtggag 660 tgccccccct gccctgcccc tcctgtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720 cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgagg accccgaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840 gccaagacca agccccggga ggaacagttc aacagcacct tccgggtggt gtccgtgctg 900 accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagaataca agtgcaaggt gtccaacaag 960 ggcctgcctg cccccatcga gaaaaccatc agcaagacaa agggccagcc cagggaaccc 1020 caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080 tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140 cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200 tacagcaagc tgacagtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260 gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320 aaa 1323 <210> 179 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> heavy chain <400> 179 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcggt attaatcctc ctgctggtac tacttcttat 180 gctcagaagt ttcagggtcg ggtcaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240 atggaactga gccgcctgcg tagcgatgat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtggt 300 tggtttgatt attggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcttc caccaagggc 360 cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420 ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggagcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600 gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agcggaagtg ctgcgtggag 660 tgccccccct gccctgcccc tcctgtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720 cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgagg accccgaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840 gccaagacca agccccggga ggaacagttc aacagcacct tccgggtggt gtccgtgctg 900 accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagaataca agtgcaaggt gtccaacaag 960 ggcctgcctg cccccatcga gaaaaccatc agcaagacaa agggccagcc cagggaaccc 1020 caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080 tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140 cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200 tacagcaagc tgacagtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260 gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320 aaa 1323 <210> 180 <211> 1323 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> heavy chain <400> 180 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggata tacctttact tcttcttata ttaattgggt ccgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcaat attaatcctg ctactggtca tgctgattat 180 gctcagaagt ttcagggtcg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240 atggaactga gccgcctgcg tagcgatgat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtggt 300 tggtttgatt attggggcca aggcaccctg gtgacggtta gctcagcttc caccaagggc 360 cccagcgtgt tccccctggc cccctgcagc agaagcacca gcgagagcac agccgccctg 420 ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag cccgtgaccg tgagctggaa cagcggagcc 480 ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg 540 agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgtg 600 gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaccgtgg agcggaagtg ctgcgtggag 660 tgccccccct gccctgcccc tcctgtggcc ggaccctccg tgttcctgtt cccccccaag 720 cccaaggaca ccctgatgat cagccggacc cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg 780 agccacgagg accccgaggt gcagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac 840 gccaagacca agccccggga ggaacagttc aacagcacct tccgggtggt gtccgtgctg 900 accgtggtgc accaggactg gctgaacggc aaagaataca agtgcaaggt gtccaacaag 960 ggcctgcctg cccccatcga gaaaaccatc agcaagacaa agggccagcc cagggaaccc 1020 caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag gaaatgacca agaaccaggt gtccctgacc 1080 tgtctggtga agggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caacggccag 1140 cccgagaaca actacaagac cacccccccc atgctggaca gcgacggcag cttcttcctg 1200 tacagcaagc tgacagtgga caagagccgg tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc 1260 gtgatgcacg aggccctgca caaccactac acccagaaga gcctgagcct gtcccccggc 1320 aaa 1323 <210> 181 <211> 512 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 181 Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr 20 25 30 Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg 35 40 45 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg 50 55 60 Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp 65 70 75 80 Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn 85 90 95 Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg 100 105 110 Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro 115 120 125 Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu 130 135 140 Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr 145 150 155 160 Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro 165 170 175 Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu 180 185 190 Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln 195 200 205 Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys 210 215 220 Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys 225 230 235 240 His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn 245 250 255 Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser 260 265 270 Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys 275 280 285 His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp 290 295 300 Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg 305 310 315 320 Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val 325 330 335 Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro 340 345 350 Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu 355 360 365 Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile 370 375 380 Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys 385 390 395 400 Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu 405 410 415 Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val 420 425 430 His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro 435 440 445 Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Ala Cys Trp Asp His Asp 450 455 460 Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu 465 470 475 480 Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu 485 490 495 Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile 500 505 510 <210> 182 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 182 Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala 1 5 10 15 Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu 20 25 30 Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser 35 40 45 Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe 50 55 60 Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln 65 70 75 80 Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr 85 90 95 His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro 100 105 110 Thr Ala Pro Thr 115 <210> 183 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 183 Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Ser Trp Leu Asp Asp Phe Asn Ser 1 5 10 15 <210> 184 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 184 Val Lys Lys Gly Ser Trp Leu Asp Asp Phe Asn Ser Tyr Asp Arg 1 5 10 15 <210> 185 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 185 Gly Ser Trp Leu Asp Asp Phe Asn Ser Tyr Asp Arg Gln Glu Ser 1 5 10 15 <210> 186 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 186 Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys 1 5 <210> 187 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 187 Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu 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Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Phe Ala Gly Gly 85 90 95 Ser Tyr Tyr Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gln Pro Lys Ser Thr Pro Thr Leu Thr Val Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Glu Leu Lys Glu Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asn Phe 130 135 140 Ser Pro Ser Gly Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asn Gly Thr Pro Ile 145 150 155 160 Thr Gln Gly Val Asp Thr Ser Asn Pro Thr Lys Glu Gly Asn Lys Phe 165 170 175 Met Ala Ser Ser Phe Leu His Leu Thr Ser Asp Gln Trp Arg Ser His 180 185 190 Asn Ser Phe Thr Cys Gln Val Thr His Glu Gly Asp Thr Val Glu Lys 195 200 205 Ser Leu Ser Pro Ala Glu Cys Leu 210 215 <210> 194 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Heavy Chain <400> 194 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Asn Pro Val Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser 145 150 155 160 Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu 165 170 175 Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser 180 185 190 Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val 195 200 205 Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln 260 265 270 Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln 275 280 285 Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu 290 295 300 Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro 340 345 350 Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr 355 360 365 Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys 370 375 380 Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val 405 410 415 Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn 420 425 430 His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 435 440 445

Claims (69)

  1. 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 미오스타틴 길항제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 치료를 필요로 하는 환자에게 약 1-10 mg/kg의 용량으로 투여되는 미오스타틴 길항제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 약 1, 약 3 또는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여되는 미오스타틴 길항제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 정맥내로 투여되는 미오스타틴 길항제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 4주마다 투여되는 미오스타틴 길항제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 보행 환자인 미오스타틴 길항제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 질환의 진행을 늦추거나 신체 기능 및 이동성을 개선시키는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 연하곤란 또는 삼킴 곤란을 개선시키는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 상지 강도를 개선시키는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 낙상의 발생률을 감소시키거나 낙상을 예방하는 것을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 미오스타틴 수용체 결합 분자인 미오스타틴 길항제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, ActRII 수용체 길항제인 미오스타틴 길항제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ActRII 수용체 항체인 미오스타틴 길항제.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ActRII 수용체 항체가 비마그루맙인 미오스타틴 길항제.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 서열 181의 아미노산 19-134 (서열 182)로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRII 항체인 미오스타틴 길항제.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ActRII 항체가
    (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
    (b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
    (c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
    (d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
    (e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
    (f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
    (g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
    (h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
    을 포함하거나 그로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 것인 미오스타틴 길항제.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ActRIIB 항체가
    a) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
    (b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
    (c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
    (d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
    (e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
    (f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
    (g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
    (h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
    을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체; 및
    b) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
    (b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
    (c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
    (d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
    (e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
    (f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
    (g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
    (h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
    을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는, ActRIIB에 대한 길항제 항체
    로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서 항체는 약 2 pM의 KD를 갖는 것인 미오스타틴 길항제.
  18. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 ActRIIA에 결합하는 경우보다 10배 이상 더 큰 친화도로 ActRIIB에 결합하는 것인 미오스타틴 길항제.
  19. 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  20. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (b) 서열 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 72의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (c) 서열 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 73의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (d) 서열 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 74의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (e) 서열 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 75의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (f) 서열 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 76의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (g) 서열 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 77의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (h) 서열 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 78의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (i) 서열 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 79의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (j) 서열 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 80의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (k) 서열 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 81의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (l) 서열 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 82의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (m) 서열 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는
    (n) 서열 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 84의 경쇄 가변 영역 CDR3
    을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  22. 제13항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  23. 제13항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열 99의 가변 중쇄 서열 및 서열 85의 가변 경쇄 서열;
    (b) 서열 100의 가변 중쇄 서열 및 서열 86의 가변 경쇄 서열;
    (c) 서열 101의 가변 중쇄 서열 및 서열 87의 가변 경쇄 서열;
    (d) 서열 102의 가변 중쇄 서열 및 서열 88의 가변 경쇄 서열;
    (e) 서열 103의 가변 중쇄 서열 및 서열 89의 가변 경쇄 서열;
    (f) 서열 104의 가변 중쇄 서열 및 서열 90의 가변 경쇄 서열;
    (g) 서열 105의 가변 중쇄 서열 및 서열 91의 가변 경쇄 서열;
    (h) 서열 106의 가변 중쇄 서열 및 서열 92의 가변 경쇄 서열;
    (i) 서열 107의 가변 중쇄 서열 및 서열 93의 가변 경쇄 서열;
    (j) 서열 108의 가변 중쇄 서열 및 서열 94의 가변 경쇄 서열;
    (k) 서열 109의 가변 중쇄 서열 및 서열 95의 가변 경쇄 서열;
    (l) 서열 110의 가변 중쇄 서열 및 서열 96의 가변 경쇄 서열;
    (m) 서열 111의 가변 중쇄 서열 및 서열 97의 가변 경쇄 서열; 또는
    (n) 서열 112의 가변 중쇄 서열 및 서열 98의 가변 경쇄 서열
    을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  24. 제13항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열 146의 중쇄 서열 및 서열 141의 경쇄 서열;
    (b) 서열 147의 중쇄 서열 및 서열 142의 경쇄 서열;
    (c) 서열 148의 중쇄 서열 및 서열 143의 경쇄 서열;
    (d) 서열 149의 중쇄 서열 및 서열 144의 경쇄 서열;
    (e) 서열 150의 중쇄 서열 및 서열 145의 경쇄 서열;
    (f) 서열 156의 중쇄 서열 및 서열 151의 경쇄 서열;
    (g) 서열 157의 중쇄 서열 및 서열 152의 경쇄 서열;
    (h) 서열 158의 중쇄 서열 및 서열 153의 경쇄 서열;
    (i) 서열 159의 중쇄 서열 및 서열 154의 경쇄 서열; 또는
    (j) 서열 160의 중쇄 서열 및 서열 155의 경쇄 서열
    을 포함하는 것인 미오스타틴 길항제.
  25. 제13항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가, 제10항의 적어도 하나의 항체가 ActRIIB에 결합하는 것을 교차-차단하거나 또는 ActRIIB에의 결합에 대해 제10항의 적어도 하나의 항체에 의해 교차-차단되는 것인 미오스타틴 길항제.
  26. 제13항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는 것인 미오스타틴 길항제.
  27. 제13항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 제15항 내지 제17항에 열거된 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 것인 미오스타틴 길항제.
  28. 제13항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 코딩된 것인 미오스타틴 길항제.
  29. 4주마다 약 1-10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
  30. 4주마다 약 1 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
  31. 4주마다 약 3 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
  32. 4주마다 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
  33. 산발성 봉입체 근염의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 미오스타틴 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 미오스타틴 길항제를 약 1-10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 약 1, 약 3 또는 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미오스타틴 길항제를 정맥내로 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미오스타틴 길항제를 4주마다 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  38. 제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 보행 환자인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  39. 제33항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 질환의 진행을 늦추거나 신체 기능 및 이동성을 개선시키는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  40. 제33항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 연하곤란/삼킴 곤란을 개선시키는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  41. 제33항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 상지 강도를 개선시키는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  42. 제33항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 것이 낙상의 발생률을 감소시키거나 낙상을 예방하는 것을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  43. 제33항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 미오스타틴 길항제가 미오스타틴 수용체 결합 분자인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  44. 제33항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 미오스타틴 길항제가 ActRII 수용체 길항제인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  45. 제33항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 미오스타틴 길항제가 항-ActRII 수용체 항체인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  46. 제33항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ActRII 수용체 항체가 비마그루맙인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서, 미오스타틴 길항제가 서열 181의 아미노산 19-134 (서열 182)로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRII 항체인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  48. 제45항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ActRII 항체가
    (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
    (b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
    (c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
    (d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
    (e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
    (f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
    (g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
    (h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
    을 포함하거나 그로 이루어진 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  49. 제45항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 항-ActRIIB 항체가
    a) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
    (b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
    (c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
    (d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
    (e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
    (f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
    (g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
    (h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
    을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는 항-ActRIIB 항체; 및
    b) (a) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN - 서열 188);
    (b) 서열 181의 아미노산 76-84 (GCWLDDFNC - 서열 186);
    (c) 서열 181의 아미노산 75-85 (KGCWLDDFNCY - 서열 190);
    (d) 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR - 서열 189);
    (e) 서열 181의 아미노산 49-63 (CEGEQDKRLHCYASW - 서열 187);
    (f) 서열 181의 아미노산 29-41 (CIYYNANWELERT - 서열 191);
    (g) 서열 181의 아미노산 100-110 (YFCCCEGNFCN - 서열 192); 또는
    (h) 서열 181의 아미노산 78-83 (WLDDFN) 및 서열 181의 아미노산 52-56 (EQDKR)
    을 포함하는 ActRIIB의 에피토프에 결합하는, ActRIIB에 대한 길항제 항체
    로 이루어진 군으로부터 선택되며, 여기서 항체는 약 2 pM의 KD를 갖는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  50. 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 ActRIIA에 결합하는 경우보다 10배 이상 더 큰 친화도로 ActRIIB에 결합하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  51. 제45항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 1-14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15-28로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29-42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43-56으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57-70으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71-84로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 CDR3을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  52. 제45항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열 1의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 15의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 29의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 43의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 57의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 71의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (b) 서열 2의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 16의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 30의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 44의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 58의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 72의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (c) 서열 3의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 17의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 31의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 45의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 59의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 73의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (d) 서열 4의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 18의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 32의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 46의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 60의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 74의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (e) 서열 5의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 19의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 33의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 47의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 61의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 75의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (f) 서열 6의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 20의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 34의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 48의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 62의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 76의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (g) 서열 7의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 21의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 35의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 49의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 63의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 77의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (h) 서열 8의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 22의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 36의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 50의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 64의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 78의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (i) 서열 9의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 23의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 37의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 51의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 65의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 79의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (j) 서열 10의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 24의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 38의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 52의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 66의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 80의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (k) 서열 11의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 25의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 39의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 53의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 67의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 81의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (l) 서열 12의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 26의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 40의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 54의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 68의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 82의 경쇄 가변 영역 CDR3,
    (m) 서열 13의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 27의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 41의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 55의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 69의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 83의 경쇄 가변 영역 CDR3, 또는
    (n) 서열 14의 중쇄 가변 영역 CDR1; 서열 28의 중쇄 가변 영역 CDR2; 서열 42의 중쇄 가변 영역 CDR3; 서열 56의 경쇄 가변 영역 CDR1; 서열 70의 경쇄 가변 영역 CDR2; 및 서열 84의 경쇄 가변 영역 CDR3
    을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  53. 제45항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 146-150 및 156-160으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  54. 제45항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열 141-145 및 151-155로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 전장 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  55. 제45항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열 99의 가변 중쇄 서열 및 서열 85의 가변 경쇄 서열;
    (b) 서열 100의 가변 중쇄 서열 및 서열 86의 가변 경쇄 서열;
    (c) 서열 101의 가변 중쇄 서열 및 서열 87의 가변 경쇄 서열;
    (d) 서열 102의 가변 중쇄 서열 및 서열 88의 가변 경쇄 서열;
    (e) 서열 103의 가변 중쇄 서열 및 서열 89의 가변 경쇄 서열;
    (f) 서열 104의 가변 중쇄 서열 및 서열 90의 가변 경쇄 서열;
    (g) 서열 105의 가변 중쇄 서열 및 서열 91의 가변 경쇄 서열;
    (h) 서열 106의 가변 중쇄 서열 및 서열 92의 가변 경쇄 서열;
    (i) 서열 107의 가변 중쇄 서열 및 서열 93의 가변 경쇄 서열;
    (j) 서열 108의 가변 중쇄 서열 및 서열 94의 가변 경쇄 서열;
    (k) 서열 109의 가변 중쇄 서열 및 서열 95의 가변 경쇄 서열;
    (l) 서열 110의 가변 중쇄 서열 및 서열 96의 가변 경쇄 서열;
    (m) 서열 111의 가변 중쇄 서열 및 서열 97의 가변 경쇄 서열; 또는
    (n) 서열 112의 가변 중쇄 서열 및 서열 98의 가변 경쇄 서열
    을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  56. 제45항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가
    (a) 서열 146의 중쇄 서열 및 서열 141의 경쇄 서열;
    (b) 서열 147의 중쇄 서열 및 서열 142의 경쇄 서열;
    (c) 서열 148의 중쇄 서열 및 서열 143의 경쇄 서열;
    (d) 서열 149의 중쇄 서열 및 서열 144의 경쇄 서열;
    (e) 서열 150의 중쇄 서열 및 서열 145의 경쇄 서열;
    (f) 서열 156의 중쇄 서열 및 서열 151의 경쇄 서열;
    (g) 서열 157의 중쇄 서열 및 서열 152의 경쇄 서열;
    (h) 서열 158의 중쇄 서열 및 서열 153의 경쇄 서열;
    (i) 서열 159의 중쇄 서열 및 서열 154의 경쇄 서열; 또는
    (j) 서열 160의 중쇄 서열 및 서열 155의 경쇄 서열
    을 포함하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  57. 제45항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가, 제10 측면의 적어도 하나의 항체가 ActRIIB에 결합하는 것을 교차-차단하거나 또는 ActRIIB에의 결합에 대해 제10 측면의 적어도 하나의 항체에 의해 교차-차단되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  58. 제45항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 Fc 영역의 돌연변이를 통해 변경된 이펙터 기능을 갖는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  59. 제45항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물에 포함된 항체가 제46항 내지 제48항에 열거된 항체에 의해 인식되는 에피토프에 결합하는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  60. 제45항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 pBW522 (DSM22873) 또는 pBW524 (DSM22874)에 의해 코딩된 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  61. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하는, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  62. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 1-10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  63. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 1 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  64. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 3 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  65. 비마그루맙을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 비마그루맙은 4주마다 약 10 mg/kg 체중의 용량으로 정맥내로 투여되는 것인, 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법.
  66. 산발성 봉입체 근염을 치료하는데 사용하기 위한 비마그루맙.
  67. 산발성 봉입체 근염을 치료하는 방법에 사용하기 위한, 150 mg/ml의 비마그루맙을 포함하는 조성물.
  68. 150 mg/ml의 비마그루맙을 포함하는 단위 투여 형태.
  69. 용액으로 희석된 하나 이상의 바이알로부터 적절한 양의 비마그루맙을 포함하는 주입 백.
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