KR20230081614A - 류코노스톡 메센테로이데스 cjlm119 균주 및 이의 배양물을 포함하는 식품용 발효 조성물 - Google Patents
류코노스톡 메센테로이데스 cjlm119 균주 및 이의 배양물을 포함하는 식품용 발효 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 출원은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJLM119 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 발효용 조성물로 발효되어, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 배양물, 이의 파쇄물, 이의 추출물, 또는 이로부터 유래하는 성분 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 면역 증강용 또는 장건강 개선용 조성물에 관한 것이다.
Description
본 출원은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJLM119 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 발효용 조성물로 발효되어, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 배양물, 이의 파쇄물, 이의 추출물, 또는 이로부터 유래하는 성분 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 면역 증강용 또는 장건강 개선용 조성물에 관한 것이다.
발효 식품은 특정 미생물의 성장과 효소의 작용을 통해 성분이 전환된 식품이나 음료를 의미한다. 유산균을 비롯한 유익균은 발효 과정 동안 식품 원료를 구성하는 화학 성분을 전환시켜 영양분의 생체이용률을 높이고, 생물학적 보존제로서 식품의 안전성을 강화시키며, 독성 물질 및 영양 저해 인자의 분해 및 생리활성 물질을 생산하는 것으로 보고되고 있다(Tamang JP, et al., Front Microbiol (2016), 7, 578.).
상기 유산균 중에서 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)는 채소류의 유산 발효에 관여하는 대표적인 유산균으로 알려져 있으며, 김치 등의 발효 채소류에서 발견된다.
본 출원의 하나의 목적은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJLM119 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는, 발효용 조성물을 제공하는 것이다.
본 출원의 다른 하나의 목적은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 면역 증강용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 출원의 또 하나의 목적은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 장건강 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 출원의 또 하나의 목적은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 면역 증강용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 출원의 또 하나의 목적은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 장건강 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 출원의 또 하나의 목적은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 조성물의 면역 증강 효과를 증진시키는 방법을 제공하는 것이다.
본 출원 또 하나의 목적은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 조성물의 장건강 개선 효과를 증진시키는 방법을 제공하는 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다. 또한, 본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 출원이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 출원의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 출원의 하나의 양태는, 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJLM119 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는, 발효용 조성물을 제공한다.
본 출원의 균주는 류코노스톡 속(Leuconostoc sp.) 균주일 수 있고, 구체적으로 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)일 수 있으며, 보다 구체적으로 수탁번호 KCTC 13043BP로 기탁된 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주(미국 공개번호 US 2019-0297908 A1)일 수 있다.
본 출원에서 용어, "배양물"은 본 출원의 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, "배양물"은 균주를 포함하고 있는 조성물로서, 본 발명에서 배양물은 균주와 동일한 목적으로 사용될 수 있다. 본 출원에 있어서, 상기 "배양물"은 "배양액", "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 혼용될 수 있다.
본 출원에서 용어, "배양"은 상기 미생물을 적당히 조절된 환경 조건에서 생육시키는 것을 의미한다. 본 출원의 배양과정은 당업계에 알려진 적당한 배지와 배양 조건에 따라 이루어질 수 있다. 이러한 배양 과정은 선택되는 균주에 따라 당업자가 용이하게 조정하여 사용할 수 있다. 구체적으로 상기 배양은 회분식, 연속식 및 유가식 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 배지에 포함되는 탄소원은 글루코즈, 수크로즈, 락토즈, 프락토즈, 말토즈, 전분, 셀룰로즈와 같은 당 및 탄수화물, 대두유, 해바라기유, 피마자유, 코코넛유등과 같은 오일 및 지방, 팔미트산, 스테아린산, 리놀레산과 같은 지방산, 글리세롤, 에탄올과 같은 알코올, 아세트산과 같은 유기산을 포함할 수 있으며, 이들 물질은 개별적으로 또는 혼합물로서 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 배지에 포함되는 질소원으로서 펩톤, 효모 추출물, 육즙, 맥아 추출물, 옥수수 침지액 및 대두밀과 같은 유기 질소원 및 요소, 황산암모늄, 염화암모늄, 인산암모늄, 탄산안모늄 및 질산암모늄과 같은 무기 질소원이 포함될 수 있으며, 이들 질소원은 단독 또는 조합되어 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 배지에 포함되는 인원으로서 인산이수소칼륨, 인산수소이칼륨 및 대응되는 소듐 함유염이 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 배지는 황산마그네슘 또는 황산철과 같은 금속염을 포함할 수 있고, 그 외에 아미노산, 비타민 및 적절한 전구체등이 포함될 수 있다. 이들 배지 또는 전구체는 배양물에 회분식 또는 연속식으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
배양 중에 수산화암모늄, 수산화칼륨, 암모니아, 인산 및 황산과 같은 화학물을 배양물에 적절한 방식으로 첨가하여, 배양물의 pH를 조정할 수 있다. 또한, 배양 중에는 지방산 폴리클리콜에스테르와 같은 소포제를 사용하여 기포생성을 억제할 수 있다. 또한 배양물의 호기 상태를 유지하기 위하여, 배양물 내로 산소 또는 산소 함유 기체를 주입하거나 혐기 및 미호기 상태를 유지하기 위해 기체의 주입없이 혹은 질소, 수소 또는 이산화탄소 가스를 주입할 수 있다.
상기 배양물은 본 출원의 균주를 10℃ 내지 40℃에서 6시간 내지 48시간 동안 배양하여 수득할 수 있고, 일 예로 20℃ 내지 40℃에서 12시간 내지 36시간, 또는 30℃ 내지 40℃에서 16시간 내지 24시간 동안 배양하여 수득할 수 있다.
본 출원의 배양물에는 생균 배양물(즉, 생균을 배지에서 배양한 결과물), 상기 생균 배양물에서 생균을 사균화한 배양물, 배양여액(즉, 상기 배양물에서 사균체 또는 생균체가 제거된 결과물), 이의 농축물 또는 동결건조물이 포함될 수 있다.
상기 배양여액은 배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다. 본 출원에 있어서, 상기 "배양여액"은 "상등액"과 혼용될 수 있다.
상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간 동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.
상기 농축물은 상기 균주 배양액 자체, 또는 상기 배양액을 원심분리나 필터를 이용하여 여과한 후 수득된 상층액을 농축하여 수득될 수 있다.
상기 동결건조물은 상기 균주 배양액 자체, 또는 상기 배양액을 동결건조하여 수득될 수 있다.
본 출원의 발효용 조성물은 다양한 발효식품의 제조에 사용될 수 있으며, 구체적으로, 마늘, 고춧가루, 조미료 등의 양념소를 발효시키기 위한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 발효용 조성물로 발효시킬 경우 면역 증강 효과 및/또는 장건강 개선 효과를 갖는 식품을 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 다른 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 발효물을 포함하는, 면역 증강용 식품 조성물을 제공한다.
본 출원의 또 다른 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 발효물을 포함하는, 장건강 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 및 배양물은 전술한 바와 같다.
본 출원의 식품 조성물은 이전 양태의 발효용 조성물로 발효된 발효물을 포함하는 것일 수 있다. 일 예로, 상기 발효물은, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 발효물을 포함할 수 있다. 또는, 상기 발효물은, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 상기의 발효물을 추가로 발효한 발효물을 포함할 수 있다.
본 출원의 일 구현예에서, 본 출원의 식품 조성물은 이전 양태의 발효용 조성물로 발효된 마늘, 고춧가루, 질소원 등을 포함하는 것일 수 있다.
본 출원에서 사용된 용어, "발효"는 미생물을 이용한 유기물질의 효소적 또는 대사적 분해를 포함하는 모든 활성 또는 과정을 의미한다.
본 출원에서 용어, "발효물"은 미생물을 이용한 발효에 따른 효소적 또는 대사적 분해의 결과물을 의미한다. 일 예로, 상기 발효물은 액상일 수 있다. 또한, 상기 발효물은 발효의 결과물인 원액 또는 이의 상등액일 수 있다.
본 출원의 다른 일 구현예에서, 본 출원의 발효물은 생균체가 포함될 수 있다.
본 출원의 또 다른 일 구현예에서, 본 출원의 발효물은 추가적으로 발효를 더 진행할 수 있다. 일 예로, 본 출원의 발효물을 채소 등에 첨가하여 추가로 발효시키거나, 액상 조성물 등에 첨가하여 추가로 발효시킬 수 있다. 상기 채소의 예로는, 배추, 무 등을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 발효물은 본 출원의 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상으로 25℃ 내지 40℃에서 발효시킨 것일 수 있다. 본 출원의 발효는 본 출원의 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상으로 10 시간 내지 30 시간 동안 발효시킨 것일 수 있다.
일 예로, 본 출원의 발효시 온도는 25℃ 이상, 27℃ 이상, 28℃ 이상 및 29℃ 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 40℃ 이하, 35℃ 이하, 33℃ 이하 및 31℃ 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위에서 실시할 수 있다. 또한, 본 출원의 발효시 시간은 10 시간 이상, 12 시간 이상, 14 시간 이상, 16 시간 이상 및 18 시간 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 30 시간 이하, 28 시간 이하, 27 시간 이하, 26 시간 이하 및 25 시간 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위에서 실시할 수 있다.
본 출원의 발효물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있다. 일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 조성물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 다른 일 구현예로, 본 출원의 발효물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물에 본 출원의 균주 및/또는 이의 배양물을 첨가하여 발효한 것일 수 있다.
본 출원의 발효물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물 전체 중량에 대하여 본 출원의 균주 및/또는 이의 배양물을 0.5 내지 4 중량%로 첨가하여 발효한 것일 수 있다.
일 예로, 본 출원의 균주 및/또는 이의 배양물은 조성물 전체 중량에 대하여 1 중량% 이상, 1.2 중량% 이상, 1.6 중량% 이상 및 1.8 중량% 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 3.5 중량% 이하, 2.8 중량% 이하, 2.6 중량% 이하 및 2.2 중량% 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위로 포함될 수 있다.
본 출원의 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 마늘을 4 내지 10 중량%로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있다. 일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 조성물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 다른 일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 마늘을 4 내지 10 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
일 예로, 상기 마늘은 조성물 전체 중량에 대하여 4 중량% 이상, 5 중량% 이상, 6 중량% 이상 및 6.5 중량% 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 10 중량% 이하, 9 중량% 이하, 8 중량% 이하 및 7.5 중량% 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위로 포함될 수 있다.
상기 마늘은 다진 마늘, 추출물, 농축액 및 분말 등의 형태로 본 출원의 조성물에 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 시판 마늘 및 이를 다지거나, 추출물, 농축액 및 분말 등의 형태로 가공한 제품을 제한 없이 사용할 수 있다.
또 다른 일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 고춧가루를 0.5 내지 4 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
일 예로, 상기 고춧가루는 조성물 전체 중량에 대하여 0.5 중량% 이상, 1 중량% 이상, 1.2 중량% 이상, 1.6 중량% 이상 및 1.8 중량% 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 4 중량% 이하, 3.5 중량% 이하, 2.8 중량% 이하, 2.6 중량% 이하 및 2.2 중량% 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위로 포함될 수 있다.
상기 고춧가루는 고추를 건조한 다음 분쇄하거나, 동결건조하여 분말화한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 시판 고춧가루를 제한 없이 사용할 수 있다.
또 다른 일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 질소원을 0.1 내지 1.5 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
일 예로, 상기 질소원은 조성물 전체 중량에 대하여 0.3 중량% 이상, 0.6 중량% 이상, 0.9 중량% 이상 및 1.1 중량% 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 1.45 중량% 이하, 1.4 중량% 이하, 1.35 중량% 이하, 1.3 중량% 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위로 포함될 수 있다.
상기 질소원은 식용일 수 있다. 상기 질소원은 일 예로 조미료일 수 있고, 그 예로 TasteNrich®(CJ제일제당)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체적으로, 본 출원의 조성물은 마늘을 포함하는 것일 수 있다.
본 출원의 발효물은 탄소원 또는 소금 중 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있다.
일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 탄소원을 2 내지 4 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
일 예로, 상기 탄소원은 조성물 전체 중량에 대하여 2.2 중량% 이상, 2.4 중량% 이상, 2.6 중량% 이상 및 2.8 중량% 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 3.8 중량% 이하, 3.6 중량% 이하, 3.4 중량% 이하 및 3.2 중량% 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위로 포함될 수 있다.
상기 탄소원은 식용일 수 있다. 상기 탄소원은 일 예로 과당, 자당, 포도당 등일 수 있고, 그 예로 과당일 수 있고, 구체적으로 결정과당일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 소금을 0.1 내지 2 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
일 예로, 상기 소금은 조성물 전체 중량에 대하여 0.5 중량% 이상, 0.8 중량% 이상, 1 중량% 이상 및 1.2 중량% 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 1.9 중량% 이하, 1.8 중량% 이하, 1.7 중량% 이하 및 1.6 중량% 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위로 포함될 수 있다.
본 출원의 발효물은 생강을 추가로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있다.
일 구현예로, 본 출원의 발효 대상인 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 생강을 0.1 내지 1.5 중량%로 포함하는 것일 수 있다.
일 예로, 상기 생강은 조성물 전체 중량에 대하여 0.3 중량% 이상, 0.6 중량% 이상, 0.9 중량% 이상 및 1.1 중량% 이상에서 선택된 하나의 하한선 및/또는 1.45 중량% 이하, 1.4 중량% 이하, 1.35 중량% 이하, 1.3 중량% 이하에서 선택된 하나의 상한선으로 구성된 범위로 포함될 수 있다.
본 출원의 발효물은 물을 추가로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있다.
본 출원의 일 구현예에서, 상기 물은 본 출원의 발효 대상인 조성물에 포함되는 원료를 모두 혼합한 다음, 상기 조성물의 전체 중량이 100 중량%가 될 때까지 첨가하는 것일 수 있다.
본 출원의 발효물은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 배양물, 이의 파쇄물, 이의 추출물, 또는 이로부터 유래하는 성분 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다.
본 출원에서 용어, "파쇄물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액에 포함된 미생물의 세포벽을 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 파쇄하여 얻은 산물을 의미한다. 본 출원에 있어서, 상기 "파쇄물"은 "용해물"과 혼용되어 사용될 수 있다.
본 출원에서 용어, "추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액으로부터 미생물을 제거한 물질을 의미한다.
또한, 본 출원의 균주 유래의 성분으로는 예컨대, 균주 유래 대사물질 등이 포함될 수 있으며, 상기 균주 유래 대사물질 등을 함유하는 균체를 파쇄하여 얻은 세포질 분획물이 포함될 수 있다. 이외에 식품 조성물 내에 포함시키기 적합한 균주의 형태, 제제화 방법 및 균주 유래 성분의 분리 방법 등은 당업자에게 잘 알려져 있다.
전술한 바에 따른 본 출원의 일 구현예에서, 본 출원의 발효물은 김치소(김치양념)에 포함되는 성분들을 포함하여 발효시킨 것일 수 있다.
본 출원의 식품 조성물은 면역 증강 효과를 갖는 것일 수 있다.
본 출원에서 용어, "면역 증강"은 여러 가지 특이적 또는 비특이적 방법으로 면역 반응을 증가시키는 효과를 의미하며, 면역 조절 효과를 추가로 포함할 수 있다. 상기 면역 증강 효과는 예컨대, 대식세포의 활성을 높임에 따른 외부 병원균에 대한 방어, 사멸세포 제거 및 면역매개체 분비 증대 효과를 포함할 수 있고, 면역 조절 인자의 활성을 높여 면역 체계의 활성을 높이고 신생 혈관 생성 억제, 병원균에 대한 생육 억제력 증가 등으로 면역 관련 질병을 예방하는 효과 등을 포함할 수 있다.
구체적으로, 상기 면역 증강 효과는 상기 면역매개체 분비 증대 효과에 의해 이루어지는 것일 수 있다.
상기 면역매개체는 일 예로, Th1 타입 전염증성(pro-inflammatory) 사이토카인일 수 있고, 그 예로 TNF-α(Tumor necrosis factor-α), IL-6(Interleukin-6) 및 IL-1β 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 일 구현예에서, 본 출원의 조성물은 TNF-α 또는 IL-6의 발현을 증대시키는 것일 수 있다.
본 출원의 식품 조성물은 장건강 개선 효과를 갖는 것일 수 있다.
본 출원에서 용어, "장건강 개선"은 장내 유익균 및 유해균의 균총을 조절하여 장내 환경을 정상적인 상태로 유지할 수 있는 효과를 의미한다. 상기 장건강 개선 효과는 예컨대, 장내 유익균의 균총을 증진시키고 유해균의 균총을 억제하는 효과를 포함할 수 있고, 장의 밀착연접 장벽 기능을 강화시켜 장의 전반적인 기능을 개선 및 활성화시키는 효과를 포함할 수 있고, 장내 단쇄 지방산의 함량을 증가시키는 효과를 포함할 수 있으며, 장내 상피세포의 증식을 유도하는 효과 등을 포함할 수 있다. 본 출원에 있어서, 상기 "장건강 개선 효과"는 "정장 효과"와 혼용될 수 있다.
구체적으로, 상기 장건강 개선 효과는 상기 유해균 생장 억제 효과에 의해 장내 유익균의 균총이 증진되고 유해균의 균총이 억제됨으로써 이루어지는 것일 수 있다.
본 출원의 식품 조성물은 유해균의 생장을 억제시키는 효과를 갖는 것일 수 있다.
상기 유해균은 병원성 미생물일 수 있다.
상기 병원성 미생물은 감염시 특정 질환을 일으키는 것이라면 특별히 제한되지 않으나, 일 예로 에스케리키아 속(Escherichia sp.), 스타필로코커스 속(Staphylococcus sp.), 살모넬라 속(Salmonella sp.), 쉬겔라 속(Shigella sp.), 클렙시엘라(Klebsiella sp.), 엔테로박테리아세 속(Enterobacteriaceae sp.), 슈도모나스 속(Pseudomonas sp.), 모락셀라 속(Moraxella sp.), 헬리코박터 속(Helicobacter sp.), 스테노트로포모나스 속(Stenotrophomonas sp.), 리스테리아 속(Listeria sp.) 및 비브리오 속(Vibrio sp.) 미생물 등일 수 있고, 그 예로 대장균(Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella enteritidis), 살모넬라 타이피(Salmonella typhi), 쉬겔라 디센테리에(Shigella dysenteriae), 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae), 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 모락셀라 카타랄리스(Moraxella catarrhalis), 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori), 스테노트로포모나스 말토필리아(Stenotrophomonas maltophilia), 리스테리아 모노사이토젠(Listeria monocytogene), 비브리오 콜레라(Vibrio cholerae) 및 비브리오 벌리피쿠스(Vibrio vulnificus) 등일 수 있으며, 구체적으로 대장균 또는 스타필로코커스 아우레우스일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 식품 조성물은 이전 양태의 발효용 조성물로 발효된 발효물을 포함하는 것일 수 있다. 일 예로, 상기 발효물은, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 발효물을 포함할 수 있다. 또는, 상기 발효물은, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 상기의 발효물을 추가로 발효한 발효물을 포함할 수 있다. 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
일 예로, 상기 발효물은 액상일 수 있다. 또한, 상기 발효물은 발효의 결과물인 원액 또는 이의 상등액일 수 있다.
상기 발효물은 추가적으로 발효를 더 진행할 수 있다. 일 예로, 본 출원의 발효물을 채소 등에 첨가하여 추가로 발효시키거나, 액상 조성물 등에 첨가하여 추가로 발효시킬 수 있다. 상기 채소의 예로는, 배추, 무 등을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 발효물이 액상 발효물일 경우, 본 발명의 발효물은 상기의 액상 발효물 및/또는 상기의 액상 발효물을 추가로 발효한 발효물을 모두 포함할 수 있다. 이때, 추가로 발효한 발효물은 액상 또는 고체상 발효물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 식품 조성물은 식품 조성물 외에 식품 첨가제의 형태일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 출원의 식품 조성물은 식품 첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, "식품첨가물"로서의 적합여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안정청에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정할 수 있다.
상기 "식품첨가물공전"에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀롤로오스, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류 들을 들 수 있다.
본 출원의 식품으로는 과실음료, 채소류음료, 탄산음료, 두유류, 요구르트 등의 유산균음료, 혼합음료와 같은 음료; 김치, 김치소(김치양념), 발효 식품류; 빵, 떡류, 건과류, 캔디류, 초콜릿류, 츄잉껌, 쨈류와 같은 과자류 아이스크림류, 빙과류, 아이스크림 분말류와 같은 아이스크림 제품류; 우유류, 저지방 우유류, 유당분해 우유, 가공유류, 산양유, 발효유류, 버터유류, 농축유류, 유크림류, 버터유, 자연치즈, 가공치즈, 분유류, 유청류와 같은 유가공품류; 식육가공품, 알가공품, 햄버거와 같은 식육제품류; 어묵, 햄, 소세지, 베이컨 등의 어육가공품과 같은 어육제품류; 라면류, 건면류, 생면류, 유탕면류, 호화건먼류, 개량숙면류, 냉동면류, 파스타류와 같은 면류; 간장, 된장, 고추장, 춘장, 청국장, 혼합장, 식초, 소스류, 토마토케첩, 카레, 드레싱과 같은 조미식품; 등을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 외에 본 출원의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 출원의 식품 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 출원의 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 면역 증강용 건강기능식품을 제공한다.
본 출원의 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 장건강 개선용 건강기능식품을 제공한다.
상기 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 및 배양물은 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 본 출원의 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상으로 32℃ 내지 42℃에서 10시간 내지 30시간 동안 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 마늘을 5 내지 9 중량%로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 탄소원 또는 소금 중 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 배양물, 이의 파쇄물, 이의 추출물, 또는 이로부터 유래하는 성분 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원에서 용어, "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률에 따라 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미(제3조 제1호)하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것(동조 제2호)을 의미한다.
본 출원의 건강기능식품은 식품 첨가제의 형태일 수 있다.
본 출원의 건강기능식품을 식품 첨가제로 사용하는 경우, 상기 건강기능식품을 조성물로서 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품은 식품 첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물의 발효물을 포함하는, 면역 증강용 사료 조성물을 제공한다.
본 출원의 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물의 발효물을 포함하는, 장건강 개선용 사료 조성물을 제공한다.
상기 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 및 배양물은 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 본 출원의 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상으로 32℃ 내지 42℃에서 10시간 내지 30시간 동안 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 마늘을 5 내지 9 중량%로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 탄소원 또는 소금 중 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 배양물, 이의 파쇄물, 이의 추출물, 또는 이로부터 유래하는 성분 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 사료 조성물은 사료 조성물 외에 사료 첨가제 조성물의 형태일 수 있다.
본 출원의 조성물이 사료 첨가제로서 제조될 경우, 상기 조성물은 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립 형태로 제조될 수 있다. 상기 사료 첨가제는 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산등의 유기산이나 인산 나트륨, 인산 칼륨, 산성 피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나, 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 사료로서 제조될 경우, 상기 조성물은 통상의 사료 형태로 제제화될 수 있으며, 통상의 사료 성분을 함께 포함할 수 있다.
상기 사료 및 사료 첨가제는 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩, 및 해바라기를 주성분으로 하는 사료; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분 등을 더 포함할 수 있으며, 이외에도 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제 등을 더 포함할 수 있다.
상기 사료 첨가제는 동물에게 단독으로 투여하거나 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합하여 투여할 수도 있다. 또한, 상기 사료 첨가제는 탑드레싱으로서 또는 이들을 동물사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도의 경구제형으로 용이하게 동물에게 투여할 수 있다. 상기 사료 첨가제를 동물사료와 별도로 투여할 경우, 당해 기술분야에 잘 알려진 바와 같이 약제학적으로 허용 가능한 식용 담체와 조합하여, 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수전분, 락토오스, 수크로오스, 콩플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 사료 첨가제는 정제, 캡슐제, 산제, 트로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 사료 첨가제는 젤라틴 연질 캡슐제, 또는 시럽제나 현탁액, 에멀젼제, 또는 용액제의 제형일 수 있다.
또한, 상기 사료 및 사료 첨가제는 보조제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액 촉진제 등을 함유할 수 있다. 상기 사료 첨가제는 침주, 분무 또는 혼합하여 동물의 사료에 첨가하여 이용될 수 있다.
본 출원의 사료 또는 사료 첨가제는 포유류, 가금 및 어류를 포함하는 다수의 동물 식이에 적용할 수 있다.
상기 포유류로서 돼지, 소, 말, 양, 토끼, 염소, 설치동물 및 실험용 설치동물인 쥐, 햄스터, 기니피그 뿐만 아니라, 반려동물(예: 개, 고양이) 등에게 사용할 수 있으며, 상기 가금류로서 닭, 칠면조, 오리, 거위, 꿩, 및 메추라기 등에도 사용할 수 있고, 상기 어류로서 잉어, 붕어 및 송어 등에 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 출원의 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 면역 증강용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 출원의 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 장건강 개선용 조성물의 제조 방법을 제공한다.
상기 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 및 배양물은 전술한 바와 같다.
본 출원의 방법에 따라 제조된 조성물은 발효물일 수 있다.
본 출원의 발효물은 본 출원의 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상으로 32℃내지 42℃에서 10시간 내지 30시간 동안 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 마늘을 5 내지 9 중량%로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 탄소원 또는 소금 중 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 조성물을 발효시킨 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 발효물은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 배양물, 이의 파쇄물, 이의 추출물, 또는 이로부터 유래하는 성분 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 출원의 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 조성물의 면역 증강 효과를 증진시키는 방법을 제공한다.
본 출원 또 하나의 양태는 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 조성물의 장건강 개선 효과를 증진시키는 방법을 제공한다.
상기 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주, 배양물, 면역 증강, 장건강 개선은 이전 양태에서 전술한 바와 같다.
본 출원의 조성물은 면역 증강 효과 및 장건강 개선 효과를 갖는다.
도 1은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 2는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL(발효 조성물 A), 106 cfu/mL(발효 조성물 B) 및 5 x 105 cfu/mL(발효 조성물 C)로 포함된 발효 조성물 및 이의 상등액을 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 3은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 4는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 5는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 처리한 세포에서 TNF-α(Tumor necrosis factor-α) 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001).
도 6은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 처리한 세포에서 IL-6(Interleukin-6) 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001).
도 7은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL, 106 cfu/mL 및 5 x 105 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 TNF-α 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, **p<0.01).
도 8은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL, 106 cfu/mL 및 5 x 105 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 IL-6 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, **p<0.01).
도 9는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 TNF-α 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, ##p<0.01, #p<0.05).
도 10은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 TNF-α 발현량을 분석한 결과이다(**p<0.01, *p<0.05).
도 11은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 IL-6 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, ##p<0.01, #p<0.05).
도 12는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 IL-6 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, **p<0.01, *p<0.05).
도 13은 제조예 4의 발효 조성물의 유해균 성장 억제 효과를 비교한 결과이다. 용어: 발효 조성물, Fermentation; 발효 조성물 상등액, Metabolite.
도 2는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL(발효 조성물 A), 106 cfu/mL(발효 조성물 B) 및 5 x 105 cfu/mL(발효 조성물 C)로 포함된 발효 조성물 및 이의 상등액을 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 3은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 4는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 세포 독성을 확인한 결과이다.
도 5는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 처리한 세포에서 TNF-α(Tumor necrosis factor-α) 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001).
도 6은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 처리한 세포에서 IL-6(Interleukin-6) 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001).
도 7은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL, 106 cfu/mL 및 5 x 105 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 TNF-α 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, **p<0.01).
도 8은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL, 106 cfu/mL 및 5 x 105 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 IL-6 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, **p<0.01).
도 9는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 TNF-α 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, ##p<0.01, #p<0.05).
도 10은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 TNF-α 발현량을 분석한 결과이다(**p<0.01, *p<0.05).
도 11은 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 IL-6 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, ##p<0.01, #p<0.05).
도 12는 마우스 면역 세포인 J774A.1 세포에 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 후 IL-6 발현량을 분석한 결과이다(***p<0.001, **p<0.01, *p<0.05).
도 13은 제조예 4의 발효 조성물의 유해균 성장 억제 효과를 비교한 결과이다. 용어: 발효 조성물, Fermentation; 발효 조성물 상등액, Metabolite.
이하 본 출원을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 출원을 예시하기 위한 바람직한 실시양태에 불과한 것이며 따라서, 본 출원의 권리범위를 이에 한정하는 것으로 의도되지는 않는다. 한편, 본 명세서에 기재되지 않은 기술적인 사항들은 본 출원의 기술 분야 또는 유사 기술 분야에서 숙련된 통상의 기술자이면 충분히 이해하고 용이하게 실시할 수 있다. 또한, 본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 출원이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 출원의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
제조예: 발효 조성물 제조
먼저 하기 표 1에 따라 균주를 제외한 원료를 혼합하여 조성물을 각각 제조하였다. 조성물 제조시 마늘 7 중량%, 생강 1.2 중량%, 고춧가루 2 중량%, 탄소원(결정과당) 3 중량%, 소금 1.5 중량%, 질소원으로써 조미료(TasteNrich®, TNR, CJ제일제당) 1.2 중량%을 첨가한 후 혼합하였다. 그 다음, 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJLM119 균주(수탁번호 KCTC 13043BP, 미국 공개번호 US 2019-0297908 A1) 또는 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 3505를 2 중량%로 첨가하고 물을 100 중량%가 될때까지 첨가하여 혼합한 후, 30℃에서 20시간 동안 배양하여 발효시킴으로써 제조예 1~4의 발효 조성물 및 비교예 1~3을 제조하였다. 발효 후 각 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 균수는 2x108 cfu/mL 이었다.
발효 조성물의 상등액은 발효가 완료된 발효 조성물을 13,000 rpm, 5분간 원심분리하고 상등액에 대해 0.45μm syringe filter하여 균체를 제거함으로써 수득하였다. 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 균주는 일관되게 108 CFU/mL 이상 우점하였다.
원료 | 첨가량 (중량%) |
제조예 1 (발효후 마늘) |
제조예 2 (고춧 가루) |
제조예 3 (TNR) |
비교예 1 (모든 재료) |
비교예 2 (발효전 마늘) |
제조예 4 (마늘+고춧가루+조미료의 LM119 발효 조성물) |
비교예 3 (마늘+고춧가루+조미료의 KCTC 3505 발효 조성물) |
LM119 균주 | 2 | O | O | O | O | - | O | - |
KCTC 3505 균주 | 2 | - | - | - | - | - | - | O |
결정과당 | 3 | O | O | O | O | O | O | O |
소금 | 1.5 | O | O | O | O | O | O | O |
마늘 | 7 | O | - | - | - | O | O | O |
고춧가루 | 2 | - | O | - | - | O | O | O |
조미료(TNR) | 1.2 | - | - | O | - | O | O | O |
생강 | 1.2 | - | - | - | - | - | O | O |
물 | 나머지 | O | O | O | O | O | O | O |
총량(중량%) | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
실시예 1: 발효 조성물의 세포 독성 확인
각 발효 조성물에서 세포 독성이 나타나는지를 WST-1 어세이(Roche)를 통해 확인하였다. WST-1 어세이는 cell proliferation reagent WST-1 어세이 키트(Roche, USA)를 사용하여 제조사의 지침에 따라 수행하였다.
구체적으로, 동물세포로서 마우스 대식세포주인 J774A.1을 한국 세포주은행(KCLB)에서 분양받아 사용하였다. 세포는 열 비활성화된 10% 우태아혈정(fetal bovine serum, FBS), 1% L-글루타민, 페니실린 G(100 IU/mL), 그리고 스트렙토마이신(100mg/mL)이 첨가된 DMEM(Gibco, USA) 배지를 이용하여 5% CO2 존재 하에 37℃에서 배양하였다. 세포를 웰당 5 x 104 세포/웰(부피 150 μL)의 수가 되도록 96 웰-플레이트(Corning, USA)에 분주하였고 완전하게 단일층(monolayer)을 형성할 때까지 약 3시간 동안 배양하여 실험에 사용하였다.
1-1. 재료별 발효 조성물의 세포 독성
상기 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하고 96 웰-플레이트에 각각 100 μL씩 분주하였다. 또한, 대조군으로 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지[음성 대조군(음의 대조군)] 또는 LPS(Lipopolysaccharide) 1 μg/mL가 첨가되고 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지(양성 대조군)를 96 웰-플레이트에 각각 100 μL씩 분주하였다. 각 발효 조성물 또는 대조군 내 J774A.1 세포가 3.3 x 105 cells/mL가 되도록 시딩하였다. 상기 96-웰 플레이트를 5% CO2 존재 하에서 37℃에서 24 시간 동안 배양하였다.
배양 완료 후에 세포 상등액을 제거하고, WST-1을 DMEM에 10% 희석하여 각 웰에 100 μL씩 분주하고 5% CO2 존재 하에 37℃에서 1 시간 동안 배양하였다. 그 후 Spectrophotometer(BioTek, USA)을 이용하여 500nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 처리한 세포에서 모두 음성 대조군에 비해 세포 생존율이 증가하여, 세포 독성이 없는 것을 확인하였다(도 1).
1-2. 발효 조성물의 세포 독성
상기 제조예 4의 발효 조성물을 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하여 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL(발효 조성물 A), 106 cfu/mL(발효 조성물 B) 및 5 x 105 cfu/mL(발효 조성물 C)가 되도록 한 후, 이를 96 웰-플레이트에 100 μL씩 분주하였다. 상기 발효 조성물 A-C의 상등액을 동일 희석 배수로 항생제가 첨가되지 않은 DMEM에 희석한 후, 이를 96 웰-플레이트에 100 μL씩 분주하였다. 또한, 대조군으로 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지[음성 대조군(음의 대조군)] 또는 LPS 1 μg/mL가 첨가되고 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지(양성 대조군)를 96 웰-플레이트에 각각 100 μL씩 분주하였다. 각 발효 조성물, 이의 상등액 또는 대조군 내 J774A.1 세포가 3.3 x 105 cells/mL가 되도록 시딩하였다. 상기 96-웰 플레이트를 5% CO2 존재 하에서 37℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 Spectrophotometer을 이용하여 500nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL(발효 조성물 A), 106 cfu/mL(발효 조성물 B) 및 5 x 105 cfu/mL(발효 조성물 C)로 포함된 발효 조성물 및 이의 상등액을 처리한 세포에서 세포 생존율이 유지되어, 세포 독성이 없는 것을 확인하였다(도 2).
1-3. 발효 균주별 발효 조성물의 세포 독성
상기 제조예 4의 발효 조성물을 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하여 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL, 5.0 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL가 되도록 한 후, 이를 96 웰-플레이트에 100 μL씩 분주하였다. 상기 비교예 3을 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하여 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL, 5.0 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL가 되도록 한 후, 이를 96 웰-플레이트에 100 μL씩 분주하였다. 또한, 대조군으로 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지[음성 대조군(음의 대조군)] 또는 LPS 1 μg/mL가 첨가되고 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지(양성 대조군)를 96 웰-플레이트에 각각 100 μL씩 분주하였다. 각 발효 조성물 또는 대조군 내 J774A.1 세포가 3.3 x 105 cells/mL가 되도록 시딩하였다. 상기 96-웰 플레이트를 5% CO2 존재 하에서 37℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 Spectrophotometer을 이용하여 500nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 세포에서 모두 음성 대조군에 비해 세포 생존율이 증가하여, 세포 독성이 없는 것을 확인하였다(도 3).
또한, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 세포에서 모두 음성 대조군에 비해 세포 생존율이 증가하여, 세포 독성이 없는 것을 확인하였다(도 4).
실시예 2: 발효 조성물의 면역 증강 효과 확인
상기 제조예 1~4의 발효 조성물의 면역 증강 효과를 평가하기 위하여 Th1 타입 전염증성(pro-inflammatory) 사이토카인인 TNF-α(Tumor necrosis factor-α) 및 IL-6(Interleukin-6)의 분비능을 ELISA 어세이로 확인하였다.
2-1. 재료별 발효 조성물의 면역 증강 효과
상기 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하고 96 웰-플레이트에 각각 100 μL씩 분주하였다. 또한, 대조군으로 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지[음성 대조군(음의 대조군)] 또는 LPS 1 μg/mL가 첨가되고 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지(양성 대조군)를 96 웰-플레이트에 각각 100 μL씩 분주하였다. 각 발효 조성물 또는 대조군 내 J774A.1 세포가 3.3 x 105 cells/mL가 되도록 시딩하였다. 상기 96-웰 플레이트를 5% CO2 존재 하에서 37℃에서 24 시간 동안 배양하였다.
배양 완료 후에 배양액을 1,400 rpm, 10분간 원심분리하여 J774A.1 및 류코노스톡 메센테로이데스의 균체를 제거한 세포 상등액을 얻었다. ELISA 어세이는 Duoset ELISA ancillary reagent kit 2(R&D systems, cat DY008, USA)을 사용하여 수행하였다. 제조사의 지침에 따라 TNF-α 항체와 2차 항체인 비오티닐화(biotinylated)가 포함된 mouse TNF-α DuoSet ELISA 키트(R&D systems, cat number DY 406-05, USA)와, IL-6 항체와 2차 항체인 비오티닐화가 포함된 Mouse IL-6 DuoSet ELISA 키트(R&D systems, cat number DY 410-05, USA)를 사용하였다. ELISA 플레이트를 상온에서 TNF-α capture 항체(R&D systems, cat number 840143)와 IL-6의 capture 항체(R&D systems, cat number 840171)로 각각 24 시간 동안 코팅한 후, 세포 상등액 100 μL과 TNF-α 표준 용액(R&D systems, cat number 840145) 또는 IL-6 표준 용액(R&D systems, cat number 840173)을 반응 희석액(R&D systems, cat number DY995)에 희석하고 플레이트에 100 μL씩 첨가하여 상온에서 2 시간 동안 배양하였다. 그 후 배양액을 제거하고, 2차 항체인 비오티닐화 TNF-α 항체(R&D systems, cat number 840144)와 IL-6 항체(R&D systems, cat number 840172)를 첨가하여 상온에서 2 시간 동안 코팅하였다. 발색 반응은 streptavidin-conjugated horseradish peroxidase(R&D systems, cat number 893975)과 그 기질인 TMB(tetramethylbenzidine, R&D systems, cat number DY999)에 의해 유도되었다. 발색 반응이 진행된 후, 반응을 멈추기 위해 50 μL 정지용액(2N H2SO4)을 각 웰에 첨가하였다. 이 때 발색 반응은 파란색에서 노란색으로 변화되며, 발색 반응 종료 후 Spectrophotometer를 이용하여 470 nm(보정값 540nm)에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 제조예 1~3의 발효 조성물 및 비교예 1~2를 처리한 세포에서 모두 음성 대조군에 비해 TNF-α(도 5) 및 IL-6(도 6) 발현이 유의적으로 증가하였다(***p<0.001).
특히, 마늘을 포함하는 조성물을 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주로 발효한 제조예 1의 발효 조성물의 경우 다른 발효 조성물 대비 TNF-α 및 IL-6 발현이 현저히 증가되어 우수한 면역 증강 효과를 나타내는 것을 확인하였으며, 마늘을 포함하는 조성물을 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주로 발효하지 않은 비교예 2 대비 TNF-α 및 IL-6 발현이 현저히 향상되었다.
구체적으로, 도 5에 도시한 바와 같이 마늘을 포함하는 조성물을 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주로 발효하지 않은 비교예 2를 처리한 세포에서 IL-6의 발현이 다른 발효 조성물 및 대조군 대비 높으나, 이보다 마늘을 포함하는 조성물을 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주로 발효한 제조예 1을 처리한 세포에서 IL-6 발현이 약 2배 가량 증가되어, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주를 이용하여 발효한 발효 조성물이 면역 증강 효과가 현저히 우수함을 확인하였다.
2-2. 발효 조성물의 면역 증강 효과
상기 제조예 4의 발효 조성물을 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하여 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL, 106 cfu/mL 및 5 x 105 cfu/mL가 되도록 한 후, 이를 96 웰-플레이트에 100 μL씩 분주하였다. 각 발효 조성물 내 J774A.1 세포가 3.3 x 105 cells/mL가 되도록 시딩하였다. 상기 96-웰 플레이트를 5% CO2 존재 하에서 37℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 발색 반응 종료 후 Spectrophotometer를 이용하여 470 nm(보정값 540nm)에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL, 106 cfu/mL 및 5 x 105 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 세포에서 음성 대조군에 비해 TNF-α(도 7) 및 IL-6(도 8) 발현이 유의적으로 증가하거나, 음성 대조군과 유사하였다(***p<0.001, **p<0.01).
특히, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 5 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물 A의 경우 다른 발효 조성물 대비 TNF-α 및 IL-6 발현이 현저히 향상되어 우수한 면역 증강 효과를 나타내는 것을 확인하였다.
2-3. 발효 균주별 발효 조성물의 면역 증강 효과
상기 제조예 4의 발효 조성물을 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하여 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL, 5.0 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL가 되도록 한 후, 이를 96 웰-플레이트에 100 μL씩 분주하였다. 상기 비교예 3을 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 희석하여 발효 조성물 내 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL, 5.0 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL가 되도록 한 후, 이를 96 웰-플레이트에 100 μL씩 분주하였다. 또한, 대조군으로 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지[음성 대조군(음의 대조군)] 또는 LPS 1 μg/mL가 첨가되고 항생제가 첨가되지 않은 DMEM 배지(양성 대조군)를 96 웰-플레이트에 각각 100 μL씩 분주하였다. 각 발효 조성물 또는 대조군 내 J774A.1 세포가 3.3 x 105 cells/mL가 되도록 시딩하였다. 상기 96-웰 플레이트를 5% CO2 존재 하에서 37℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 실시예 2-1과 동일한 방법으로 발색 반응 종료 후 Spectrophotometer를 이용하여 470 nm(보정값 540nm)에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 세포에서 모두 음성 대조군에 비해 TNF-α(도 9) 및 IL-6(도 11) 발현이 유의적으로 증가하였다(***p<0.001). 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 3505 균주가 1.25 x 106 cfu/mL 및 6.25 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 세포에서는 TNF-α 발현이 LM119 발효 조성물(1.25 x 106 cfu/mL, 6.25 x 106 cfu/mL)에 비해 유의적으로 낮았으며, IL-6 발현이 LM119 발효 조성물(1.25 x 106 cfu/mL)에 비해 유의적으로 낮았다(도 9 및 도 11, ##p<0.01, #p<0.05).
또한, 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주가 1.25 x 106 cfu/mL, 2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL로 포함된 발효 조성물을 처리한 세포에서 모두 음성 대조군에 비해 TNF-α(도 10) 및 IL-6(도 12) 발현이 유의적으로 증가하였다(***p<0.001, **p<0.01, *p<0.05). 류코노스톡 메센테로이데스 KCTC 3505 균주가 2.5 x 106 cfu/mL 포함된 발효 조성물을 처리한 세포에서는 TNF-α 발현이 LM119 발효 조성물(2.5 x 106 cfu/mL)에 비해 유의적으로 낮았으며, IL-6 발현이 LM119 발효 조성물(2.5 x 106 cfu/mL 및 5.0 x 106 cfu/mL)에 비해 유의적으로 낮았다(도 10 및 도 12, ***p<0.001, **p<0.01, *p<0.05).
실시예 3: 재료별 발효 조성물의 유해균 성장 억제 효과 확인
상기 제조예 4의 발효 조성물의 유해균 성장 억제 효과를 확인하기 위하여 식중독 유발 균으로 알려진 병원성 미생물인 대장균(Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를 각각 BHI(Brain heart infusion) broth 배지(BD DIFCO)에 접종 후 37℃에서 24시간 동안 배양하여 종균을 확보하였다. 상기 제조예 4의 발효 조성물을 BHI broth 배지로 각각 0, 25, 40 및 50%(v/v) 농도가 되도록 희석한 배지를 준비하였다. 96 웰-플레이트에 상기 희석 배지를 각각 200 μl씩 분주하고, E. coli 및 S. aureus 균주를 각각 1 x 106 cells/well이 되도록 시딩하였다. 상기 96 웰-플레이트를 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, Spectrophotometer를 이용하여 OD600값을 측정하였다. 발효 조성물을 0%로 함유하는 배지에서의 OD600값과 발효 조성물을 25, 40 및 50%(v/v)로 포함하는 희석 배지에서의 OD600값을 비교하여, 발효 조성물의 농도별 유해균 성장 억제율(Inhibition ratio, %)을 확인하였다. 성장 억제율은 다음 식으로부터 산출하였으며, 균주 접종을 하지 않은 각 희석 배지의 OD600값을 Blank로 하였다.
그 결과, 제조예 1의 발효 조성물은 모든 농도에서 식중독 유발 균인 E. coli 및 S. aureus에 대해 90% 이상의 강한 성장 억제율을 나타내었다(도 13).
이상의 설명으로부터, 본 출원이 속하는 기술분야의 당업자는 본 출원이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 출원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 출원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (21)
- 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) CJLM119 균주 또는 이의 배양물 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는, 발효용 조성물.
- 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 면역 증강용 식품 조성물.
- 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 장건강 개선용 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 발효물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물을 발효시킨 것인, 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 마늘을 5 내지 9 중량%로 포함하는 조성물을 발효시킨 것인, 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 식품 조성물은 TNF-α 또는 IL-6의 발현을 증대시키는 것인, 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 식품 조성물은 유해균의 생장을 억제시키는 것인, 식품 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 유해균은 에스케리키아 속(Escherichia sp.), 스타필로코커스 속(Staphylococcus sp.), 살모넬라 속(Salmonella sp.), 쉬겔라 속(Shigella sp.), 클렙시엘라(Klebsiella sp.), 엔테로박테리아세 속(Enterobacteriaceae sp.), 슈도모나스 속(Pseudomonas sp.), 모락셀라 속(Moraxella sp.), 헬리코박터 속(Helicobacter sp.), 스테노트로포모나스 속(Stenotrophomonas sp.), 리스테리아 속(Listeria sp.) 및 비브리오 속(Vibrio sp.)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 발효물은 32℃ 내지 42℃에서 10시간 내지 30시간 동안 발효시킨 것인, 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 발효물은 탄소원 또는 소금 중 선택되는 어느 하나 이상을 추가로 포함하는 조성물을 발효시킨 것인, 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 발효물은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주의 배양물, 이의 파쇄물, 이의 추출물, 또는 이로부터 유래하는 성분 중 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것인, 식품 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 발효물은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 발효물; 또는 상기 발효물을 추가로 발효한 발효물을 포함하는 것인, 식품 조성물.
- 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 면역 증강용 건강기능식품.
- 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효한 발효물을 포함하는, 장건강 개선용 건강기능식품.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 발효물은 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 조성물을 발효시킨 것인, 건강기능식품.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 마늘을 5 내지 9 중량%로 포함하는 조성물을 발효시킨 것인, 건강기능식품.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 발효물은 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 발효된 발효물; 또는 상기 발효물을 추가로 발효한 발효물을 포함하는 것인, 건강기능식품.
- 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 조성물의 면역 증강 효과를 증진시키는 방법.
- 류코노스톡 메센테로이데스 CJLM119 균주 또는 이의 배양물로 조성물을 발효하는 단계를 포함하는, 조성물의 장건강 개선 효과를 증진시키는 방법.
- 제18항 또는 제19항에 있어서, 마늘, 고춧가루 및 질소원으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함하는 것인, 방법.
- 제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 조성물은 식품 조성물인 것인, 방법.
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