KR20220045303A - 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스 bla-9 균주, 이를 이용한 화합물 k의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법, 이에 따른 발효 홍삼 추출물 및 이를 포함하는 건강기능식품 조성물 - Google Patents
사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스 bla-9 균주, 이를 이용한 화합물 k의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법, 이에 따른 발효 홍삼 추출물 및 이를 포함하는 건강기능식품 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주, 이를 이용한 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법, 이에 따른 발효 홍삼 추출물 및 이를 포함하는 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)는 우수한 진세노사이드 생물전환능을 갖는다. 홍삼 추출물에 상기 균주를 접종하고 발효시키는 경우, 진세노사이드 F2 및 화합물 K의 함량이 높은 발효 홍삼 추출물을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 의하면 화합물 K의 생산 효율이 현저히 증대되어, 화합물 K의 함량이 더욱 증대된 발효 홍삼 추출물을 얻을 수 있다.
본 발명의 발효 홍삼 추출물은 체내 흡수가 용이한 화합물 K를 다량 함유하고 있으므로, 건강기능식품 또는 식품 소재로 매우 유용하다.
본 발명의 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)는 우수한 진세노사이드 생물전환능을 갖는다. 홍삼 추출물에 상기 균주를 접종하고 발효시키는 경우, 진세노사이드 F2 및 화합물 K의 함량이 높은 발효 홍삼 추출물을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 의하면 화합물 K의 생산 효율이 현저히 증대되어, 화합물 K의 함량이 더욱 증대된 발효 홍삼 추출물을 얻을 수 있다.
본 발명의 발효 홍삼 추출물은 체내 흡수가 용이한 화합물 K를 다량 함유하고 있으므로, 건강기능식품 또는 식품 소재로 매우 유용하다.
Description
본 발명은 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주, 이를 이용한 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법, 이에 따른 발효 홍삼 추출물 및 이를 포함하는 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
인삼은 두릅나무과 인삼속 식물의 뿌리를 말한다. 재배산지에 따라 고려인삼(한반도), 미국삼(미국 및 캐나다), 전칠삼(중국), 죽절삼(일본) 등의 명칭으로 불리우며, 인삼의 원형을 유지하는 1차 가공방법에 따라 수삼, 홍삼, 백삼, 당삼 및 봉밀삼 등으로 구분된다.
고려인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 과거부터 우리나라를 비롯하여 중국, 일본 등에서 주로 건강증진을 위한 목적으로 널리 사용하여 왔다. 인삼의 유효성분들은 인삼의 종류, 뿌리 부위, 수확 년생, 수확 시기, 제조방법에 따라 현저한 차이가 있는 것으로 알려져 있는데, 인삼의 연근별로는 일반적으로 저년근에는 당 함량이 많고 고년근에서는 사포닌 함량이 많은 것으로 알려져 있다. 또한, 수삼을 그대로 건조시킨 백삼과 증기로 쪄서 건조시킨 홍삼 간에는 조사포닌 함량이나 진세노사이드의 종류에서 차이를 보이는 것으로 알려져 있다.
건강기능식품에서 말하는 '홍삼'은 인삼을 원재료로 사용하여, 말리지 않은 수삼을 증기 또는 기타 방법으로 쪄서 익혀 말린 것이다. 이를 분말화하거나 물이나 주정으로 추출하고 농축 또는 발효하여 식용에 적합하도록 만들어야 하며, 진세노사이드 Rg1과 Rb1의 합이 0.8 ㎎/g 내지 34 ㎎/g이 되도록 관리하여야 한다.
인삼 및 홍삼의 효능 성분으로 알려진 것은 사포닌(saponin)이다. 인삼 및 홍삼의 사포닌은 배당체의 일종으로 다른 식물에서 발견되는 사포닌과는 다른 특이한 화학구조로 되어 있으며, 그 효능도 크게 차이가 난다. 인삼 및 홍삼의 사포닌은 타 식물계 사포닌과 구분하기 위해 인삼(ginseng) 배당체(glycoside)라는 의미로 '진세노사이드(Ginsenoside)'라고 부른다.
인삼 및 홍삼의 유효성분인 진세노사이드는 트리터페노이드(triterpenoid)의 담마렌(dammarane) 골격에 글루코오스(glucose), 아라비노오스(arabinose), 자일로오스(xylose) 및 람노오스(rhamnose) 등의 당이 하나 또는 여러 개가 결합된 배당체(glycoside)로 현재 약 100 여종 이상 분리되었으며(J Ginseng Res 41 (2017), 435-443), 고분자 진세노사이드인 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re 및 Rg1을 포함한 6 종 진세노사이드가 총 진세노사이드의 90%를 차지하고 있다.
고분자 진세노사이드가 가수분해 되어 생성된 소량의 저분자 진세노사이드 중 하나인 화합물 K(C-K: compound K, 20-O-β-D-glucopyranosyl 20(S)-protopanasadiol)는 기본 골격인 아글리콘(aglycon)의 C-20 번에 하나의 글루코오스가 결합되어 있는 PPD계 저분자 진세노사이드의 하나로 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc가 장내 미생물에 의해 전환된 전환산물이다(Akoa et al., 1998, Akao et al., 1998, Hasegawa et al.,1997; Bae et al., 2000).
상기 화합물 K의 화학 구조는 하기 화학식 1에 나타내었다.
[화학식 1]
Akao 등(1998)의 연구에 의하면 진세노사이드 Rb1을 랫(rat)에 투여했을 때 플라즈마에서 화합물 K가 진세노사이드 Rb1 투여 후 24시간 동안 검출되었으며, 위에서는 거의 대사 되지 않았음이 보고되었고, Karikura 등(1991)이 랫(rat)의 위에서 진세노사이드 Rb2의 대사산물을 조사한 바에 의하면 과산화물의 생성을 제외하고 진세노사이드 Rb2의 대사는 거의 이루어지지 않는 것을 볼 때, 진세노사이드는 위 등의 소화기관에서는 거의 대사가 이루어지지 않고 장내 미생물에 의해서 대사되는 것으로 판단된다. 또한, 김동현 교수의 연구에 따르면 한국인 98명의 장내 미생물을 이용하여 진세노사이드 Rb1의 전환능력을 확인한 결과 20%는 진세노사이드 대사 능력이 없거나 현저히 낮고, 약 60% 정도만이 진세노사이드 전환 가능한 미생물을 가지고 있어 많은 사람들이 진세노사이드를 효율적으로 대사하지 못하는 것으로 보고되었다. 이러한 보고는 개인별 장내 미생물 구성의 차이 및 장내 미생물의 효소활성의 차이로 인삼이나 홍삼을 복용한다 하더라도 개인에 따라 효능의 차이가 있으며 이 차이를 줄이고자 발효홍삼 섭취를 권장한다.
종래에는 전통적인 홍삼제조의 단위공정인 증자, 건조, 정형 등의 방법만을 사용하여 제품을 제조하였으나, 최근 홍삼의 발효방법에 따라 효능이 달라짐이 발견되면서 새로운 제조방법이 나타났으며, 주로 열처리, 산도처리, 효소처리 및 미생물을 이용하는 방법들이 다양하게 연구되고 있다.
그 중에서도 화합물 K의 제조방법으로 장내 미생물인 비피도박테리움(Bifidobacterium), 곰팡이 또는 각종 미생물에 의한 생산이 공지되어있으나, 상기 방법은 혐기성 조건에서의 배양 및 오랜 배양시간이 요구되며 생성 수율이 극히 낮을 뿐 아니라 부산물이 생성되어 생산적인 면에서 수율이 낮고 식용의 어려움이 있어, 식용 효소 및 유산균을 이용한 발효를 통해 특정 저분자 진세노사이드인 화합물 K를 다량 함유하는 발효홍삼의 제조방법에 대한 연구 및 개발이 요구되어 진다.
본 발명자들은 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼을 개발하고자 연구하는 과정에서, 진세노사이드 생물전환능이 우수한 효소 및 유산균을 선별하였고, 상기 선별된 효소 및 균주를 이용하여 순차적으로 발효시킨 발효 홍삼에서 화합물 K의 함량이 크게 증대될 뿐만 아니라 진세노사이드 지표가 우수한 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 해결하고자 하는 과제는 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 화합물 K의 함량이 증대되고, 진세노사이드 지표가 우수한 발효 홍삼 추출물의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 과제는 상기 방법에 따라 제조되어, 화합물 K 함량이 증대되고, 진세노사이드 지표가 우수한 발효 홍삼 추출물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 과제는 상기 발효 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)을 제공한다.
또한, 본 발명은 (1) 홍삼 추출물을 제조하는 단계; (2) 상기 홍삼 추출물에 셀룰라아제, β-글루코시다아제 및 헤미셀룰라아제의 복합 효소를 첨가하여 효소 반응시키는 단계; 및 (3) 상기 효소 처리한 홍삼 추출물에 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)를 접종한 후 발효시키는 단계;를 포함하는, 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 홍삼 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 홍삼 추출물은 고형분 함량이 3 내지 50 중량%일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 (2) 단계의 복합 효소는 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger) 유래의 효소일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 (2) 단계의 복합 효소는 스미자임 AC(Sumizyme AC)일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 (2) 단계의 복합 효소는 상기 홍삼 추출물 100 중량부에 대하여 0.5 내지 50 중량부로 첨가될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, (2) 단계의 효소 반응은 50 내지 65 ℃, pH 3.5 내지 5.0에서 5 내지 60 시간 동안 수행될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 본 발명은 상기 (2) 단계와 (3) 단계의 사이에 효소 불활성 단계를 수행하지 않을 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, (3) 단계의 발효는 30 내지 50 ℃에서 5 내지 60 시간 동안 수행될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 발효 홍삼 추출물은 Rb1, Rg1 및 Rg3의 총합이 적어도 7.0 mg/g 이상이고, F2의 함량이 적어도 5 mg/g 이상이며, 화합물 K의 함량이 적어도 4.0 mg/g 이상일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량(mg/g)을 효소 처리 전의 홍삼 추출물에 포함된 Rb1의 함량(mg/g)으로 나눈 값인 화합물 K의 생산 효율이 적어도 0.2 이상일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 방법에 따라 제조되어, Rb1, Rg1 및 Rg3의 총합이 적어도 7.0 mg/g 이상이고, F2의 함량이 적어도 5 mg/g 이상이며, 화합물 K의 함량이 적어도 4.0 mg/g 이상인 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 추출물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 발효 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)는 우수한 진세노사이드 생물전환능을 갖는다. 홍삼 추출물에 상기 균주를 접종하고 발효시키는 경우, 진세노사이드 F2 및 화합물 K의 함량이 높은 발효 홍삼 추출물을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 제조 방법에 의하면 화합물 K의 생산 효율이 현저히 증대되어, 화합물 K의 함량이 더욱 증대되고 진세노사이드 지표가 우수한 발효 홍삼 추출물을 얻을 수 있다.
본 발명의 발효 홍삼 추출물은 체내 흡수가 용이한 화합물 K를 다량 함유하고 있고 진세노사이드 지표가 우수하므로, 건강기능식품 또는 식품 소재로 매우 유용하다.
도 1은 본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주의 16S rRNA 유전자 서열을 분석하여 나타낸 분자계통도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 홍삼 추출물의 제조방법을 나타내는 순서도이다.
도 3은 생물전환에 의해 PPD-타입 진세노사이드가 화합물 K(CK)로 변환되는 과정을 간단하게 나타내는 모식도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 발효 홍삼 추출물의 제조방법을 나타내는 순서도이다.
도 3은 생물전환에 의해 PPD-타입 진세노사이드가 화합물 K(CK)로 변환되는 과정을 간단하게 나타내는 모식도이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 명세서에서, "진세노사이드 지표"는 ① 화합물 K의 함량, ② Rg1, Rb1 및 Rg3의 합계(Rg1+Rb1+Rg3), ③ 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 생물전환 전의 홍삼 추출물에 포함된 Rb1의 함량으로 나눈 값인 화합물 K의 생산 효율(CK/발효 전 Rb1), ④ 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 Rb1의 함량으로 나눈 값(CK/Rb1), ⑤ 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 Rg3의 함량으로 나눈 값(CK/Rg3), ⑥ 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 Rg1, Rb1 및 Rg3의 합으로 나눈 값(CK/(Rg1+Rb1+Rg3)), 및 ⑦ 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 Rg1, Rb1, Rg3 및 화합물 K의 합으로 나눈 값(CK/(Rg1+Rb1+Rg3+CK))으로 표시할 수 있으며, 이것은 화합물 K의 생산효율 및/또는 발효 홍삼 추출물의 품질을 나타내는 지표가 될 수 있다. 상기 지표들이 일정 수준을 초과하는 본 발명의 발효 홍삼 추출물은 Rg1, Rb1 및 Rg3를 합한 값이 크면서 화합물 K의 함량이 높으므로, 발효 홍삼 추출물의 품질이 매우 우수하다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명은 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)을 제공한다.
하기 실시예를 통해 본사((주)비티씨) 연구소에서 보관중인 김치 유래 유산균인 BLA-9 균주를 미생물 동정 및 분류를 위한 16S rRNA 염기서열을 분석한 결과, 서열번호 1의 핵산서열을 갖는 것으로 나타났다. 상기 균주의 핵산 서열을 분석한 결과 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus)에 속하는 균주인 것으로 조사되었고, 상기 균주의 핵산서열을 마크로젠에 의뢰하여 상동성(homology)을 확인해 본 결과, 락토바실러스 애시도필러스 HE793099.1 표준균주와 99% 동일함을 확인할 수 있었다(도 1). 상기 서열번호 1의 핵산서열에 있어서, 'n'은 'a', 'g', 'c', 't 또는 u' 또는 '불명 또는 기타'의 염기를 의미한다.
따라서, 서열번호 1의 16S rRNA 염기서열을 갖는 본 발명의 미생물을 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주로 명명하였으며, 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2020년 9월 21일자로 기탁하였다(기탁번호: KCTC18848P).
본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주는 사포닌에 대해 생물전환능을 가지며, 특히 사포닌을 진세노사이드로 전환시키고, 고분자 진세노사이드를 인체 내에서 소화 흡수율이 증대된 화합물 K로 전환시키므로, 발효 홍삼의 제조에 매우 유용하다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 (1) 홍삼 추출물을 제조하는 단계; (2) 상기 홍삼 추출물에 셀룰라아제, β-글루코시다아제 및 헤미셀룰라아제의 복합 효소를 첨가하여 효소 반응시키는 단계; 및 (3) 상기 효소 처리한 홍삼 추출물에 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)를 접종한 후 발효시키는 단계;를 포함하는, 화합물 K의 함량이 증가된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 제조방법에서, 상기 "효소 처리한 홍삼 추출물"은 (2) 단계의 "홍삼 추출물"을 기질로 하고, 상기 복합 효소와의 반응에 의해 얻은 산물이다. 또한, 상기 "발효 홍삼 추출물"은 (3) 단계의 "효소 처리한 홍삼 추출물"을 기질로 하고, 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9를 접종하고 발효하여 얻은 산물이다.
본 명세서에서는 기재의 편의상 본 발명의 방법이 홍삼에 적용되는 것으로 기재하고 있다. 그러나, 본 발명은 홍삼뿐만 아니라 다양한 형태로 가공된 모든 인삼(예컨대, 수삼, 백삼 및 미삼)에도 적용될 수 있으며, 이들이 본 발명의 범위에 포함된다는 것은 당업자에게 명확하다.
본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 홍삼은 인삼을 원재료로 사용하여 제조하되, 말리지 않은 수삼을 장시간 증기 또는 기타 방법으로 쪄서 수분 15% 이하로 건조하여 가공한 것으로, 4년근 또는 6년근의 홍삼근 및/또는 홍미삼일 수 있고, 바람직하게는 홍삼근과 홍미삼이 50~90 : 10~50의 중량비, 바람직하게는 70~80 : 20~30의 중량비로 구성된 6년근 홍삼일 수 있다.
본 발명에 일 실시예에 의하면, 상기 홍삼은 홍삼을 분쇄시킨 홍삼 분말일 수 있는데, 홍삼 분말을 사용하는 것이 표면적이 넓어져 홍삼의 유효물질이 추출되는데 용이하므로 바람직하다.
상기 홍삼은 추출용매와 1 : 1 내지 20, 바람직하게는 1 : 2 내지 15의 중량비, 더욱 바람직하게는 1 : 3 내지 10의 중량비로 혼합하여 20 내지 100 ℃에서 1 내지 15시간, 바람직하게는 2 내지 10시간 동안 교반하며 단회 또는 복수회로 추출한 후 감압농축을 수행하여 추출물을 제조할 수 있다. 상기 홍삼과 추출용매의 중량비가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 추출물에 홍삼의 유효성분이 적은 양으로 추출될 수 있다. 또한, 상기 홍삼 추출물은 고형분 함량이 0.1 내지 70 중량%, 바람직하게는 1 내지 60 중량%, 더욱 바람직하게는 3 내지 50 중량%, 더욱 바람직하게는 2 내지 20 중량%, 더욱 바람직하게는 3 내지 10 중량% 더욱 바람직하게는 3 내지 8 중량%가 되도록 농축하는 것이 바람직하다.
본 발명에서, 상기 홍삼 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것일 수 있다. 상기 저급알코올로는 30 내지 80%의 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 프로판올을 들 수 있다.
상기 추출용매로는 특별히 한정하는 것은 아니지만 30 내지 80%, 바람직하게는 40 내지 80%의 에탄올 수용액으로 추출된 추출물이 홍삼 유효성분의 추출에 바람직하게 작용한다.
본 발명의 홍삼 추출물은 조사포닌 함량이 고형분 기준으로 30 내지 300 mg/g, 바람직하게는 50 내지 250 mg/g, 더욱 바람직하게는 70 내지 200 mg/g, 더욱 바람직하게는 100 내지 130 mg/g, 더욱 바람직하게는 105 내지 120 mg/g, 더욱 바람직하게는 108 내지 110 mg/g일 수 있다.
본 명세서에서 홍삼을 언급하면서 사용되는 용어 "추출물"은 추출용매를 처리하여 얻은 조추출물뿐만 아니라 홍삼 추출물의 가공물도 포함한다. 예를 들어, 홍삼 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
진세노사이드의 90 ％ 이상을 차지하는 고분자(major) 진세노사이드는 큰 크기로 인하여 생체 내에서의 흡수율이 매우 낮다. 따라서 진세노사이드의 약효를 증대시키기 위해서 고분자 진세노사이드를 상대적으로 흡수도 잘 되고 약효도 더 뛰어난 저분자(minor) 진세노사이드로 전환시키는 과정이 필요하다. 즉, 고분자 진세노사이드는 생체 내에서 효과적으로 생리적 활성을 나타내기 위하여 글루코스(glucose)를 제거하는 전환과정이 요구된다.
이를 위하여, 본 발명자들은 사포닌에 대해 생물전환능이 우수한 효소 및 유산균을 선별하였고, 상기 선별한 효소 및 유산균을 이용하여 상기 홍삼 추출물 내 고분자 진세노사이드를 저분자 진세노사이드로 전환시킴으로써 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
상기 (2) 단계에서 홍삼 추출물에 처리하기 위한 효소는 셀룰라아제, β-글루코시다아제 및 헤미셀룰라아제의 복합 효소일 수 있다. 상기 (2) 단계의 복합 효소는 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger) 유래의 효소일 수 있고, 구체적으로는 아스퍼질러스 나이거의 배양물로부터 얻어질 수 있다.
상기 (2) 단계의 복합 효소는 스미자임 AC(제조사: ShinNippon, 효소종류: 셀룰라아제, β-글루코시다아제 및 헤미셀룰라아제의 복합 효소, 효소생산 미생물: 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger))인 것이 바람직하다. 상기 스미자임 AC 효소는 사포닌을 사포닌 대사산물로 전환시키는 효과가 우수하고, 본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주와 함께 사용하였을 때 진세노사이드 생물전환율이 상승할 뿐만 아니라 관능적으로도 우수한 효과를 나타낸다.
상기 복합 효소는 상기 홍삼 추출물 100 중량부에 대하여 0.01 내지 70 중량부, 바람직하게는 0.1 내지 60 중량부, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 50 중량부, 더욱 바람직하게는 1 내지 40 중량부, 더욱 바람직하게는 5 내지 30 중량부, 더욱 바람직하게는 10 내지 25 중량부, 더욱 바람직하게는 15 내지 25 중량부로 첨가되는 것이 바람직하다.
상기 홍삼 추출물에 대한 복합효소의 비율이 상기 범위를 벗어나는 경우에는 효소가 실활될 우려가 있다.
또한, 상기 효소 반응은 15 내지 70 ℃, 바람직하게는 30 내지 67 ℃, 더욱 바람직하게는 40 내지 65 ℃, 더욱 바람직하게는 50 내지 65 ℃, pH 2 내지 7, 바람직하게는 pH 2.5 내지 6, 더욱 바람직하게는 pH 3.5 내지 5에서 5분 내지 120 시간, 바람직하게는 1 내지 90 시간, 더욱 바람직하게는 5 내지 60 시간, 더욱 바람직하게는 20 내지 48 시간, 더욱 바람직하게는 20 내지 30 시간 동안 수행될 수 있다.
상기 효소 반응을 수행함에 있어서, 상기 반응 온도 및/또는 pH가 상기 범위를 벗어나는 경우에는 효소의 활성이 저해될 우려가 있다.
또한, 상기 효소 반응을 수행함에 있어서, 상기 반응 시간이 상기 범위를 벗어나는 경우에는 반응 시간 대비 사포닌 대사산물로의 전환율이 현저히 낮아질 수 있다.
상기 효소의 첨가량, 반응온도 및 반응시간이 홍삼 추출물의 진세노사이드 전환을 위한 최적의 조건이다.
본 발명의 발효 홍삼 추출물의 제조방법은 상기 (2) 단계의 효소 처리 후 효소 불활성 단계를 수행하지 않지 않을 수 있다. 본 발명의 제조방법은 (2) 단계의 효소 처리 후 불활성 단계를 수행하지 않아 효소 활성을 유지하고 있는 상태에서 (3) 단계의 균주 발효단계를 수행함으로써 홍삼 추출물 내 진세노사이드의 생물전환을 최대화할 수 있다.
상기 (3) 단계에서 홍삼 추출물을 발효시키기 위한 균주는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)일 수 있다.
상기 (2) 단계에서 효소 처리한 홍삼 추출물에 상기 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주를 접종한 후 10 내지 70 ℃, 바람직하게는 20 내지 60 ℃, 더욱 바람직하게는 30 내지 50 ℃, 30 내지 40 ℃, 더욱 바람직하게는 34 내지 39 ℃, 더욱 바람직하게는 36 내지 38 ℃에서 30분 내지 120 시간, 바람직하게는 2 내지 90 시간, 더욱 바람직하게는 5 내지 60 시간, 더욱 바람직하게는 12 내지 48 시간, 더욱 바람직하게는 18 내지 32 시간 동안 발효시킨다.
상기 균주의 반응온도 및 반응시간이 홍삼 추출물 내 진세노사이드의 화합물 K로의 전환을 위한 최적의 조건이다.
상기 발효 홍삼 추출물은 85 내지 95 ℃에서 10 내지 30분 동안 가열하여 상기 효소 및 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주를 불활성화시킨다.
상기와 같이 효소 및 균주를 불활성화시키는 이유는 최종적으로 원하는 화합물 K가 프로토파낙사디올(protopanaxadiol; PPD)로 전환되는 것을 막기 위함이다.
이와 같이 제조된 본 발명의 발효 홍삼 추출물은 Rb1, Rg1 및 Rg3의 총합이 적어도 7.0 mg/g 이상, 바람직하게는 7.0 내지 15.0 mg/g, 더욱 바람직하게는 9.0 내지 13.0 mg/g이고, F2의 함량이 적어도 5.0 mg/g 이상, 바람직하게는 5.0 내지 10.0 mg/g, 더욱 바람직하게는 6.0 내지 8.0 mg/g이며, 화합물 K의 함량이 적어도 4.0 mg/g 이상, 바람직하게는 4.0 내지 7.0 mg/g, 더욱 바람직하게는 4.5 내지 6.5 mg/g일 수 있다.
상기 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량(mg/g)을 효소 처리 전의 홍삼 추출물에 포함된 Rb1의 함량(mg/g)으로 나눈 값인 화합물 K의 생산 효율이 적어도 0.2 이상, 바람직하게는 0.2 내지 0.4, 더욱 바람직하게는 0.2 내지 0.3일 수 있다.
본 발명의 가장 큰 특징은, 홍삼 추출물에 혼합효소로서 스미자임 AC를 처리한 후에 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주로 발효시킴으로써 진세노사이드의 화합물 K로의 전환율, 즉 화합물 K의 생산효율이 현저히 증대되도록 하는 것이다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 상기 방법에 따라 제조되어, Rb1, Rg1 및 Rg3의 총합이 적어도 7.0 mg/g 이상, 바람직하게는 7.0 내지 15.0 mg/g, 더욱 바람직하게는 9.0 내지 13.0 mg/g이고, F2의 함량이 적어도 5.0 mg/g 이상, 바람직하게는 5.0 내지 10.0 mg/g, 더욱 바람직하게는 6.0 내지 8.0 mg/g이며, 화합물 K의 함량이 적어도 4.0 mg/g 이상, 바람직하게는 4.0 내지 7.0 mg/g, 더욱 바람직하게는 4.5 내지 6.5 mg/g인 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 추출물을 제공한다.
상기 홍삼 추출물 내 유효성분 함량과 관련하여, "건강기능식품의 기준 및 규격"(식약처 고시 제2016-143호, 2016.12.21.)의 홍삼 항목, 지표성분 함량부를 보면, "진세노사이드 Rg1, Rb1 및 Rg3를 합하여 2.5-34 mg/g 함유"가 기준치라고 기재되어 있다. 또 동 문서의 "최종제품의 요건" 항목을 보면 기능적으로 "면역력 증진, 피로개선, 혈소판 응집억제를 통한 혈액흐름/기억력 개선, 항산화, 갱년기 여성의 건강에 도움을 줄 수 있음"의 요건을 충족해야 한다고 기재되어 있다.또한, 상기 문서의 세부항목을 살펴보면, "면역력 증진과 피로 개선"에 도움을 주기 위해서는 지표성분(Rg1+Rb1+Rg3)의 함량이 3-80 mg/g, "혈소판 응집억제를 통한 혈액흐름/기억력 개선, 항산화"에 도움을 주려면 지표성분 합계가 2.4-80 mg/g이어야 한다고 기재되어 있다.
하기 실시예를 통해 확인할 수 있듯이, 홍삼 추출물을 효소 처리 및/또는 발효하는 경우 진세노사이드가 화합물 K로 전환되면서 상기 지표성분의 합계가 낮아지게 되는데, 본 발명의 발효 홍삼 추출물은 화합물 K의 함량이 적어도 4.0 mg/g 이상이면서도 상기 지표성분의 합계(Rg1, Rb1 및 Rg3)가 적어도 7.0 mg/g 이상이므로, 매우 우수한 진세노사이드 조성을 갖는다.
또한, 본 발명의 또 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 상기 발효 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물을 제공한다. 상기 건강기능식품 조성물에서 상기 발효 홍삼 추출물에 대한 내용은 전술한 바와 같다.
상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료의 형태로 제공될 수 있으며, 상기 건강기능식품 조성물은 상기 유효성분 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를 들어 예방, 개선 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일 양태에 따르면, 상기 발효 홍삼 추출물은 0.001 내지 80 중량%, 바람직하게는 0.001 내지 70 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 60 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 30 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%로 포함될 수 있다.
상기 건강식품 조성물에 함유된 상기 유효성분의 유효용량은 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류, 섭취자의 연령, 체중, 일반 건강상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로, 섭취 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하겠으나, 다음 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예>
실시예 1: 균주의 분리 및 동정
1-1: 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주의 분리 및 동정
상기 균주는 김치 유래 유산균으로서, 김치 조성물을 멸균된 생리식염수에 희석하여 그 상등액을 십진법으로 희석해가며 5% 말피를 포함하는 BL 평판배지에 도말하였다. 유산균 구별배지인 BL 평판배지에서 유산간균 특유의 환을 포함하는 집락을 취하여 단일균주를 분리하였고 본 균주를 계대하여 실험에 사용하였다.
상기 균주는 MRS 액체배지, 평판배지에 접종한 것을 37℃ 항온 배양기에서 배양하여 사용하였다.
상기 균주는 베타-글루코시다아제(β-glucosidase) 활성, 진세노사이드 전환능 및 홍삼 추출물에서의 성장능을 분석한 후 최고의 전환능 및 성장능을 보이는 1종의 유산균을 최종 선발하였다. 먼저, 상기 97 종의 유산균 각각을 MRS 액체배지에 0.1 중량%로 접종한 후 37 ℃에서 24 시간 동안 진탕 배양하여 유산균 배양물을 수득하였다.
그리고, 베타-글루코시다아제 활성을 갖는 유산균을 선발하기 위하여 상기 97 종의 유산균 배양물(균체포함) 0.2 ㎖ 각각에 최종 농도가 10 mM가 되도록 파라-니트로페닐-β-D-글루코피라노시드(pNPG:para-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside, SIGMA社, 미국) 용액 0.2 ㎖를 첨가한 후 37 ℃에서 1 시간 동안 반응시켰다. 이후, 1.6 ㎖의 0.5 M 탄산나트륨(Na2CO3)을 첨가하여 반응을 종료하고, 420 nm에서 흡광도를 측정하여 OD420 값이 0.5 이상인 균주 16종을 선발하였다. 그리고, 미리 작성하여 둔 표준 곡선에 대입하여 생성되는 파라-니트로-페놀(pNP: para-nitro-phenol)의 양을 측정하여 상대적인 글루코오스 생산량을 확인하였다. 활성은 U(unit)로 표시하며, 1 U는 상기 조건에서 pNPG를 분해하여 1분 당 1 mmol의 pNP를 생성하는데 사용된 효소의 양으로 정의하였다. 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
| 유산균 | β-글루코시다아제 활성(U/mL) |
| BLA-1 | 1.49 |
| BLA-2 | 1.47 |
| BLA-3 | 1.00 |
| BLA-4 | 0.98 |
| BLA-5 | 0.81 |
| BLA-6 | 3.25 |
| BLA-7 | 3.18 |
| BLA-8 | 3.51 |
| BLA-9 | 4.20 |
| BLA-10 | 3.12 |
| BLA-11 | 1.33 |
| BLA-12 | 3.21 |
| BLA-13 | 3.27 |
| BLA-14 | 3.25 |
| BLA-15 | 3.00 |
| BLA-16 | 3.23 |
상기 표 1의 균주들 중에서, β-글루코시다아제 활성(U/mL)이 3.0 이상인 균주 10 종(BLA-6, BLA-7, BLA-8, BLA-9, BLA-10, BLA-12, BLA-13, BLA-14, BLA-15, BLA-16)을 선별하였고, 상기 선별된 10 종의 균주들을 대상으로 진세노사이드 Rb1의 전환능을 측정하기 위하여 1 중량%의 진세노사이드 Rb1 수용액 1 ㎖에 1 ㎖의 상기 16종의 유산균 배양물 각각을 첨가한 후 37 ℃에서 200 rpm으로 교반하면서 24 시간 동안 반응하여 TLC에 점적 및 전개한 후 진세노사이드 전환능을 보인 BLA-6, BLA-9, BLA-12, BLA-13, BLA-15 균주를 선별하였다.
상기 선발된 5 종의 균주를 5 중량%의 홍삼 추출물에 접종한 후 37 ℃에서 48 시간 동안 배양한 후 성장능을 관찰하여 하기 표 2에 나타내었다.
| 유산균 | 생균수(cfu/mL) |
| BLA-6 | 5.4 × 106 |
| BLA-9 | 2.1 × 108 |
| BLA-12 | 7.2 × 107 |
| BLA-13 | 1.9 × 106 |
| BLA-15 | 8.3 × 107 |
상기 표 2를 살펴보면, 상기 균주들 중에서 BLA-9가 홍삼 추출물에서 최고의 성장능을 나타내는 것을 확인할 수 있다. 이에 따라, 상기 BLA-9를 최종 선별하였다.
1-2: 균주의 동정
상기 BLA-9 균주의 분자생물학적 특징을 조사하기 위해 각 균주 배양액으로부터 염색체 DNA를 분리한 후, 상기 염색체 DNA는 미생물 동정을 위하여 16s rRNA gene의 전체 염기서열 분석을 수행하고자 하였다.
이를 위하여, 상기 1-1의 선별된 균주 BLA-9를 MRS 배지에서 배양한 후 DNA를 분리하였다. 16 rDNA 부위는 PCR(polymerase chain reaction)을 이용하여 증폭시켰다. 상기 PCR 증폭을 위한 프라이머 서열은 5`- AGAGTTTGATCMTGGCTCAG - 3`(순방향)과 5`- GGTTACCTTGTTACGACTTC-3`(역방향)을 사용하였다. PCR 반응을 위하여 추출한 게놈 DNA 50 ng, 각 dNTPs 100 μM, 프라이머 각 0.2 μM, 1×enzyme buffer, Taq polymerase 2 unit를 넣고 증류수로 전체 50 μl 부피가 되도록 추가하였다. 증폭반응은 초기 94 ℃에서 90초 동안 변성한 후, 28 사이클로 94 ℃에서 30초, 42 ℃에서 60초, 72 ℃에서 60초 실시하였고, 추가로 72 ℃에서 5분 연장하였다. PCR 산물은 1.5% 아가로스 겔(agarose gel)에서 분리한 후, 용출하였다. 상기 PCR 산물인 BLA-9 균주의 염색체 DNA를 이용하여 (주)코스모진텍에 의뢰하여 16S rRNA 염기서열 분석을 수행하였고, 상기 염기서열 분석 결과, 본 발명의 BLA-9 균주는 락토바실러스 애시도필러스에 속하는 균주인 것으로 조사되었고, 서열번호 1의 염기서열을 갖는 것으로 나타났다(도 1 참조). 또한, 상기 염기서열을 BLAST Search를 통하여 분석한 결과 기존에 데이터베이스(Data Base)에 올려져 있는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 균주들과 약 99%의 상동성을 나타내었으며, 서열번호 1과 100% 상동성을 갖는 균주는 기존에 존재하지 않는 것을 확인하였다.
따라서 본 발명자들은 이들 균주를 2020년 9월 21일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁하여 수탁번호 KCTC18848P를 부여받았다.
시험예 1: 균주의 특성
1-1: 균의 형태
실시예에서 분리 및 동정한 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주를 BL 한천평판배지에서 37℃, 48시간 동안 혐기 배양한 후 균의 형태를 관찰한 결과는 다음과 같다.
1) 세포의 형상 : 곤봉형, Y자형 등 다양
2) 그람염색 : 양성
1-2: 집락의 형태
실시예에서 분리 및 동정한 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주를 BL 한천평판배지에서 37℃, 48시간 동안 혐기 배양한 후 집락의 형태를 관찰한 결과는 다음과 같다.
1) 형상 : 원형
2) 크기 : 1~3mm
3) 색조 : 유백색
1-3: 생리학적 성질
실시예에서 분리 및 동정한 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주의 생리학적 성질은 다음과 같다.
1) 생육온도
생육범위 : 25~45℃
최적온도 : 37~41℃
2) 생육 pH
생육범위 : pH 2.0~8.0
최적 pH : pH 6.5~7.0
3) 산소의 영향 : 편성 혐기성
4) 카탈라아제 : -
5) 암모니아 생성 : -
6) 유응고성 : -
7) 리트머스 밀크 환원 : -
8) 유래아 분해효소 : -
9) 베타-갈락토오스 분해효소 : +
10) 알파-글루코오스 분해효소 : +
11) 당이용성
| 당류 | 이용성 | 당류 | 이용성 |
| 자일로오스 | - | 에스쿨린 | - |
| 아라비노오스 | - | 살리신 | - |
| 리보오스 | - | 셀로비오스 | - |
| 아토니톨 | - | 말토오스 | + |
| 갈락토오스 | + | 락토오스 | - |
| D-글루코오스 | + | 멜리비오스 | - |
| D-프럭토오스 | + | 사카로오스 | + |
| D-만노오스 | - | 트레할로오스 | - |
| 만니톨 | - | 이눌린 | - |
| 솔비톨 | - | 멜레지토오스 | - |
| 알파메틸-D-만노사이드 | - | 라피노오스 | - |
| 알파메틸-D-글루코사이드 | - | 스타치 | - |
| N-아세틸글루코사이드 | + | 베타-젠티오비오스 | - |
| 아미그달린 | - | D-트라노오스 | - |
| 아부틴 | - | D-타가토오스 | - |
실시예 2: 발효 홍삼 추출물의 제조
(1) 홍삼 추출물의 제조
풍기인삼농협에서 구입한 것으로, 홍삼근과 홍미삼이 75 : 25의 중량비로 구성된 6년근 홍삼을 분쇄하여 홍삼 분말을 제조하였다.
상기 홍삼 분말을 50 중량% 에탄올 수용액과 1 : 8의 중량비로 혼합하고 80 ℃에서 8 시간 동안 교반하며 추출한 후 여과하였고, 상기 여과물을 고형분 함량이 5 중량%가 되도록 감압농축하여 홍삼 추출물을 제조하였다. 이와 같이 제조된 홍삼 추출물은 조사포닌 함량이 고형분 기준으로 109.2 mg/g이었다.
(2) 효소 처리 단계
상기 홍삼 추출물 100 중량부에 스미자임 AC(Sumizyme AC, 제조사: ShinNippon, 효소종류: 셀룰라아제, β-글루코시다아제 및 헤미셀룰라아제, 효소생산 미생물: 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger)) 20 중량부를 첨가한 후 50 ℃, pH 4에서 24 시간 동안 효소 처리하였다. 이후, 상기 효소 처리한 홍삼 추출물을 2 시간 동안 상온에서 방냉하였다.
(3) 발효 단계
먼저, 본 발명의 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주를 MRS 배지에 0.1 중량%로 접종한 후 37 ℃에서 24 시간 동안 진탕 배양하여 균주 배양물(6.2×109 cfu/mL)을 수득하였다.
상기 효소 처리한 홍삼 추출물에 상기 균주 배양물을 0.5 %(v/v)로 접종한 후 37 ℃에서 24 시간 동안 발효시켰다. 얻어진 발효물을 90 ℃에서 15분 동안 가열하여 상기 발효물 내의 효소 및 균주를 불활성화시킴으로써 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
비교예 1: 발효 홍삼 추출물의 제조 - 발효 생략
실시예 2와 동일한 방법으로 실시하되, (3) 단계의 발효 단계를 생략하고 발효 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
비교예 2: 발효 홍삼 추출물의 제조 - 효소 처리 생략
실시예 2와 동일한 방법으로 실시하되, (2) 단계의 효소 처리 단계를 생략하고 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
비교예 3: 발효 홍삼 추출물의 제조 - 선 발효 후 효소 처리
실시예 2와 동일한 방법으로 실시하되, (3) 단계의 발효 단계를 먼저 실시한 후에 (2) 단계의 효소 처리를 수행하여 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
비교예 4: 발효 홍삼 추출물의 제조 - 락토바실러스 가세리 KCTC3163 이용
한국특허공개공보 제10-2010-0054428호(특허문헌 1, 한국식품연구원, "인삼 또는 인삼추출물로부터 유산균인 락토바실러스 가세리 KCTC3163 발효에 의한 당항상성 개선용 추출물 및 그의 제조방법")의 적용예 1-4를 참고하여 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
구체적으로, 홍삼 추출물 분말에 증류수를 가하여 현탁시킨 후 락토바실러스 가세리 KCTC3163 균주를 접종하여 발효시킴으로써 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
비교예 5: 발효 홍삼 추출물의 제조 - 싸이톨라제 PCL5, 스미자임 AC 및 라피다제 C80Max 혼합효소 및 락토바실러스 사케이 HY7802 이용
한국특허등록공보 제10-1409761호(특허문헌 2, 주식회사 한국야구르트, "효소전환과 유산균 발효를 이용한 화합물 Ｋ의 함량이 강화된 발효홍삼 농축액의 제조방법 및 그 제조방법에 의해 제조된 발효홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 제품")의 실시예 6을 참고하여 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
구체적으로, 홍삼 추출물에 싸이톨라제 PCL5, 스미자임 AC 및 라피다제 C80Max 혼합효소를 첨가하고 반응시킨 후, 락토바실러스 사케이 HY7802를 접종하고 발효시킴으로써 발효 홍삼 추출물을 제조하였다.
상기 실시예 및 비교예에서 이용되는 원재료, 및 처리수단으로서의 효소 종류 및 균주 종류를 하기 표 4에 간단히 정리하여 나타내었다.
| 구분 | 원재료(기질) | 처리수단 | |
| 효소 | 균주 | ||
| 실시예 | 홍삼 추출물 | 스미자임 AC | 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 |
| 비교예 1 | 홍삼 추출물 | 스미자임 AC | - |
| 비교예 2 | 홍삼 추출물 | - | 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 |
| 비교예 3 | 홍삼 추출물 | 스미자임 AC | 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 |
| 비교예 4 | 홍삼 추출물 | - | 락토바실러스 가세리 KCTC3163 |
| 비교예 5 | 홍삼 추출물 | 싸이톨라제 PCL5+스미자임AC+라피다제 C80Max | 락토바실러스 사케이 HY7802 |
시험예 2: 효소 종류 및 효소 처리 시간에 따른 효소 처리 홍삼 추출물의 진세노사이드의 변화
효소 종류 및 효소 처리 시간에 따른 진세노사이드의 변화를 확인하고자, 상기 실시예의 (1) 단계와 같이 제조한 홍삼 추출물 100 중량부에 혼합효소인 스미자임 AC(실시예), 로하먼트 CL(Rohament CL, 제조사: AB Enzymes) 및 플란타아제 TCL(Plantase TCL, 제조사: Bision Biochem)을 각각 20 중량부를 첨가한 후 50 ℃에서 효소 처리 시간(0.5, 1, 2, 4, 8, 16, 24 및 48 시간)을 달리하면서 효소 처리 홍삼 추출물을 제조하였다. 이후, 각 효소 처리 홍삼 추출물의 진세노사이드(Rg1, Rg3, Rd, F2, CK) 함량 변화를 측정한 후 하기 표 5에 나타내었다. 이때, 대조군은 효소 처리 및 발효 과정이 없는 홍삼 추출물이다.
상기 진세노사이드 함량을 측정하기 위하여, 시험용액 조제 시에는 실시예 2에서 제조한 효소처리 홍삼추출물 450 mg을 칭량하여 20 mL 부피플라스크에 넣고, 메탄올을 채운 후, 30분간 초음파 처리하였다. 그 후 볼텍싱한 후 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 하였다.
구체적으로, 진세노사이드 (Rg1, Rg3, Rd, F2, CK) 함량은 다음과 같이 확인하였다. 분석기기로 HPLC 1260 Series (Agilent)를 사용하였으며 분석 컬럼은 Discovery C18, 5 μm, 250 x 4.0 I.D mm (Supelco)를 사용하였다. 각 진세노사이드 표준물질 16 mg을 칭량하고 메탄올을 가하여 20 mL로 정용한 것을 표준원액으로 하였고, 본 표준원액을 적절한 농도로 희석하여 직선성 구간의 표준용액을 제조하였다.
| 구분 | 시간(h) | 진세노사이드 함량(mg/g) | |||||
| Rg1 | Rg3(S) | Rb1 | Rd | F2 | CK | ||
| 대조군 | 0 | 5.38 | 1.99 | 18.67 | 2.83 | N.D. | N.D. |
| Sumizyme | 0.5 | 4.37 | 1.73 | 14.93 | 2.89 | N.D. | 0.84 |
| 1 | 4.36 | 1.71 | 13.96 | 2.34 | 0.02 | 0.78 | |
| 2 | 4.33 | 1.66 | 11.80 | 3.34 | 0.23 | 0.73 | |
| 4 | 4.18 | 1.58 | 7.50 | 5.70 | 1.02 | 0.62 | |
| 8 | 4.27 | 1.53 | 2.75 | 6.98 | 4.18 | 0.55 | |
| 16 | 4.09 | 1.29 | 0.52 | 3.45 | 7.93 | 0.71 | |
| 24 | 3.86 | 1.00 | 0.24 | 2.31 | 7.37 | 0.59 | |
| 48 | 3.18 | 0.72 | N.D. | N.D. | 5.78 | 0.90 | |
| Rohament | 0.5 | 5.32 | 2.05 | 16.66 | 3.24 | N.D. | N.D. |
| 1 | 5.21 | 1.96 | 18.01 | 2.24 | N.D. | N.D. | |
| 2 | 5.25 | 2.03 | 17.54 | 3.01 | N.D. | N.D. | |
| 4 | 4.94 | 1.95 | 14.26 | 7.28 | N.D. | N.D. | |
| 8 | 4.80 | 2.00 | 9.61 | 12.26 | N.D. | N.D. | |
| 16 | 4.47 | 2.07 | 4.81 | 17.97 | N.D. | N.D. | |
| 24 | 4.19 | 1.95 | 3.06 | 18.59 | N.D. | N.D. | |
| 48 | 3.59 | 2.05 | 1.08 | 20.74 | N.D. | N.D. | |
| Plantase | 0.5 | 4.67 | 1.73 | 16.17 | 3.47 | N.D. | N.D. |
| 1 | 4.67 | 1.70 | 16.21 | 3.16 | N.D. | N.D. | |
| 2 | 4.68 | 1.74 | 16.51 | 4.07 | N.D. | N.D. | |
| 4 | 4.57 | 1.70 | 15.98 | 7.94 | N.D. | N.D. | |
| 8 | 4.41 | 1.69 | 14.88 | 9.73 | N.D. | N.D. | |
| 16 | 4.28 | 1.74 | 13.48 | 10.30 | N.D. | N.D. | |
| 24 | 4.17 | 1.77 | 12.55 | 12.50 | N.D. | N.D. | |
| 48 | 3.53 | 1.80 | 8.55 | 15.08 | 0.17 | 0.09 | |
도 5는 생물전환에 의해 PPD-타입 진세노사이드가 화합물 K(CK)로 전환되는 과정을 간단하게 나타내는 모식도이다.
상기 표 5를 살펴보면, 로하먼트 CL 및 플란타아제 TCL을 처리한 홍삼 추출물의 경우 Rd로부터 F2 및 화합물 K로의 전환이 이루어지지 않은 반면, 수미자임 AC를 처리한 홍삼 추출물의 경우 F2 및 화합물 K로의 전환이 적절하게 이루어진 것을 확인할 수 있다.
시험예 3: 효소 첨가량 및 효소 처리 시간에 따른 효소 처리 홍삼 추출물의 진세노사이드의 변화
효소 첨가량 및 효소 처리 시간에 따른 진세노사이드의 변화를 확인하고자, 상기 실시예의 (1) 단계와 같이 제조한 홍삼 추출물 100 중량부에 혼합효소인 스미자임 AC(실시예)을 각각 1.0, 2.0, 4.0, 5.0 중량부를 첨가한 후 50 ℃에서 효소 처리 시간(4, 8, 15, 24, 32 및 48 시간)을 달리하면서 효소 처리 홍삼 추출물을 제조하였다. 이후, 각 효소 처리 홍삼 추출물의 진세노사이드(F2, CK) 함량 변화를 측정한 후 하기 표 6에 나타내었다. 이때, 대조군은 효소 처리 및 발효 과정이 없는 홍삼 추출물이다.
| 효소처리 시간(hr) | 1 중량부 | 2 중량부 | 4 중량부 | 5 중량부 | ||||
| F2 | CK | F2 | CK | F2 | CK | F2 | CK | |
| 대조군 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 |
| 4 | 2.45 | 0.19 | 5.05 | 0.00 | 6.75 | 0.21 | 6.55 | 0.00 |
| 8 | 3.41 | 0.00 | 5.55 | 0.47 | 5.82 | 0.75 | 5.76 | 1.07 |
| 15 | 4.86 | 0.91 | 8.69 | 1.77 | 6.71 | 1.98 | 3.77 | 1.37 |
| 24 | 5.04 | 1.13 | 8.98 | 2.12 | 5.85 | 1.87 | 5.12 | 1.87 |
| 32 | 5.41 | 1.47 | 8.84 | 2.30 | 5.60 | 1.90 | 4.74 | 1.91 |
| 48 | 5.76 | 1.68 | 8.61 | 3.50 | 5.11 | 2.10 | 5.06 | 2.06 |
상기 표 6을 살펴보면, 홍삼 추출물 100 중량부에 대하여 효소를 2 중량부로 첨가하여 반응시킨 효소 처리 홍삼 추출물의 F2 및 화합물 K의 함량이 높은 것을 확인할 수 있다.
시험예 4: 효소 첨가량에 따른 발효 홍삼 추출물의 진세노사이드의 변화
효소 첨가량에 따른 발효 전후의 발효 홍삼 추출물의 진세노사이드의 변화를 확인하고자, 상기 실시예의 발효 홍삼 추출물에 있어서, (2) 단계에서 효소 첨가량(효소 1 중량부, 2 중량부, 5 중량부)을 달리하여 제조한 효소처리 홍삼 추출물, 및 (3) 단계에서 얻은 효소처리 후 발효하여 제조한 발효 홍삼 추출물 각각의 진세노사이드 함량을 측정한 후 하기 표 7에 나타내었다. 이때, (2) 단계에서의 효소는 24 시간 동안 처리하였고, (3) 단계에서의 발효는 8 시간 동안 수행하였다.
| 구분 | 진세노사이드 함량(mg/g) | ||||||
| Rg1 | Rg3(S) | Rb1 | Rd | F2 | CK | ||
| 대조군 | 8.22 | 0.82 | 17.77 | 1.84 | N.D. | N.D. | |
| 1 중량부 | 효소처리 | 6.36 | 0.38 | 0.40 | 3.35 | 5.61 | 1.68 |
| 효소처리 후 발효 | 5.01 | N.D. | 0.48 | 1.33 | 6.63 | 1.84 | |
| 2 중량부 | 효소처리 | 5.09 | 0.93 | 0.86 | 1.82 | 10.63 | 2.90 |
| 효소처리 후 발효 | 4.38 | 1.68 | 3.56 | 1.52 | 11.42 | 3.75 | |
| 5 중량부 | 효소처리 | 3.11 | 0.73 | 0.74 | 0.60 | 5.23 | 1.74 |
| 효소처리 후 발효 | 4.49 | 1.42 | 3.04 | 1.43 | 5.90 | 2.79 | |
상기 표 7을 살펴보면, 효소를 2 중량부로 첨가하여 제조한 발효 홍삼 추출물의 진세노사이드 함량, 특히 Rb1, F2 및 화합물 K의 함량이 가장 높은 것을 확인하였다.
시험예 5: 효소 처리 시간 및 발효 시간 변화에 따른 발효 홍삼 추출물의 진세노사이드의 변화
효소 처리 시간 및 발효 시간 변화에 따른 발효 홍삼 추출물의 진세노사이드의 변화를 확인하고자 하였다.
이를 위하여, 상기 실시예의 발효 홍삼 추출물에 있어서, (2) 단계에서 효소 처리 시간(20 시간, 24 시간 및 48 시간)을 달리하여 얻은 효소처리 홍삼 추출물, 및 (3) 단계에서 발효 시간(2 시간, 12 시간, 18 시간 및 24 시간)을 달리하여 얻은 효소처리 후 발효하여 얻은 발효 홍삼 추출물 각각의 진세노사이드 함량을 측정한 후 하기 표 8에 나타내었다.
| 구분 | 진세노사이드 함량(mg/g) | |||||||
| Rg1 | Rg3(S) | Rb1 | Rd | F2 | CK | Rg1+Rb1+Rg3 | ||
| 대조군 | 8.57 | 0.85 | 18.97 | 1.99 | 0.00 | 0.00 | 28.39 | |
| 효소처리 | 20 h | 6.06 | 0.04 | 1.07 | 2.41 | 9.94 | 1.77 | 7.17 |
| 24 h | 5.08 | 0.74 | 0.65 | 1.00 | 9.76 | 2.40 | 6.46 | |
| 48 h | 3.03 | 0.47 | 0.08 | N.D. | 9.25 | 3.42 | 3.58 | |
| 효소처리 후 발효 | 2 h | 4.45 | 1.30 | 2.91 | N.D. | 9.32 | 3.86 | 8.66 |
| 12 h | 4.57 | 1.38 | 3.22 | N.D. | 9.31 | 3.98 | 9.17 | |
| 18 h | 3.51 | 1.43 | 3.73 | N.D. | 6.93 | 4.13 | 8.67 | |
| 24 h | 3.77 | 1.70 | 4.63 | N.D. | 7.54 | 4.41 | 10.09 | |
상기 표 8을 살펴보면, 효소처리 후 발효를 한 발효 홍삼 추출물이 효소처리만 한 것에 비해 F2 및 CK의 함량이 증대된 것을 확인할 수 있다.
한편, Rb1의 함량은 효소처리 후 감소하였지만, 상기 효소처리 후 발효를 하는 경우 그 함량이 크게 증가하는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 본 발명의 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주로 발효함으로써 홍삼 추출물 내의 고배당체가 글루코시데이즈 활성을 통해 Rb1으로 전환되었기 때문인 것으로 유추된다. 이에 따라, 발효 시간이 증가함에 따라 Rb1의 함량도 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다.
시험예 6: 진세노사이드 함량의 비교
상기 실시예 및 비교예의 발효 홍삼 추출물의 진세노사이드 함량을 측정한 후 하기 표 9에 나타내었다.
| 구분 | 진세노사이드 함량(mg/g) | |||||||
| Rg1 | Rg3(S) | Rb1 | Rd | F2 | CK | Rg1+Rb1+Rg3 | ||
| 실시예 | 전 | 8.57 | 0.85 | 18.97 | 1.99 | 0.00 | 0.00 | 28.39 |
| 효소처리 후 | 4.45 | 1.30 | 2.91 | - | 9.32 | 2.57 | 8.66 | |
| 발효 후 | 3.40 | 1.55 | 4.70 | - | 6.55 | 4.50 | 9.65 | |
| 비교예 1 | 전 | 8.57 | 0.85 | 18.97 | 1.99 | 0.00 | 0.00 | 28.39 |
| 후 | 6.06 | 0.04 | 1.07 | 2.41 | 9.94 | 1.77 | 7.17 | |
| 비교예 2 | 전 | 5.87 | 0.59 | 17.57 | - | - | - | 24.04 |
| 후 | 0.18 | 7.70 | 1.15 | - | - | - | 9.03 | |
| 비교예 3 | 전 | 5.87 | 0.59 | 17.57 | - | - | - | 24.04 |
| 후 | 0.17 | 8.95 | 1.61 | - | - | - | 10.73 | |
| 비교예 4 | 전(%) | 11.60 | - | 12.70 | - | - | 0.00 | - |
| 후(%) | 14.60 | - | 2.40 | - | - | 0.50 | - | |
| 비교예 5 | 전 | 8.00 | - | 45.8 | - | - | - | 53.8 |
| 후 | - | - | - | - | - | 1.86 | - | |
상기 표 9를 살펴보면, 실시예의 발효 홍삼 추출물은 진세노사이드 지표(Rb1, Rg1 및 Rg3)의 합계가 9.65 mg/g이고, F2의 함량이 6.55 mg/g이며, 화합물 K의 함량이 4.50 mg/g이므로, 진세노사이드 조성이 매우 이상적이다.
또한, 상기 실시예 및 비교예의 발효 홍삼 추출물의 진세노사이드 함량을 발효 홍삼 효능 지표로 계산하여 하기 표 10에 나타내었다.
| 구분 | 진세노사이드 함량(mg/g) | 진세노사이드 지표 | ||||||
| CK | Rg1+Rb1+Rg3 | CK/발효전 Rb1 | CK/Rb1 | CK/Rg3 | CK/(Rg1+Rb1+Rg3) | CK/(Rg1+Rb1+Rg3+CK) | ||
| 실시예 | 전 | 0.00 | 28.39 | - | - | - | 0.00 | 0.00 |
| 효소처리 후 | 2.57 | 8.66 | 0.14 | 0.88 | 1.98 | 0.30 | 0.23 | |
| 발효 후 | 4.50 | 9.65 | 0.24 | 0.96 | 2.90 | 0.47 | 0.32 | |
| 비교예 1 | 전 | 0.00 | 28.39 | - | - | - | 0.00 | 0.00 |
| 효소처리 후 | 1.77 | 7.17 | 0.03 | 0.11 | 44.25 | 0.11 | 0.10 | |
| 비교예 2 | 전 | 0.00 | 24.04 | - | - | - | - | - |
| 발효 후 | 0.00 | 9.03 | - | - | - | - | - | |
| 비교예 3 | 전 | 0.00 | 24.04 | - | - | - | - | - |
| 발효 후 효소처리 | 0.00 | 6.73 | - | - | - | - | - | |
| 비교예 4 | 전(%) | 0.00 | - | - | - | - | - | - |
| 후(%) | 0.50 | 17.00 | 0.04 | 0.21 | - | 0.03 | 0.03 | |
| 비교예 5 | 전 | - | - | - | - | - | - | - |
| 후 | 1.86 | - | 0.04 | - | - | - | - | |
상기 표 10을 살펴보면, 실시예의 발효 홍삼 추출물은 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 효소 처리 전의 홍삼 추출물에 포함된 Rb1의 함량으로 나눈 값인 화합물 K의 생산 효율(CK/발효 전 Rb1)이 0.237이고, 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 Rb1의 함량으로 나눈 값(CK/발효 후 Rb1)이 0.96에 달하며, 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 Rg3의 함량으로 나눈 값(CK/Rg3)이 2.9이므로, 화합물 K의 생산 효율이 매우 우수하다.
반면, 특허문헌 1을 참고한 비교예 4의 발효 홍삼 추출물은 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 효소 처리 전의 홍삼 추출물에 포함된 Rb1의 함량으로 나눈 값인 화합물 K의 생산 효율이 0.04에 불과하고, 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 Rb1의 함량으로 나눈 값이 0.21에 불과하여, 화합물 K의 생산 효율이 실시예에 비해 현저히 낮은 것을 확인하였다.
또한, 특허문헌 2를 참고한 비교예 5의 발효 홍삼 추출물은 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량을 효소 처리 전의 홍삼 추출물에 포함된 Rb1의 함량으로 나눈 값인 화합물 K의 생산 효율이 0.04에 불과하여, 화합물 K의 생산 효율이 실시예에 비해 현저히 낮은 것을 확인하였다.
이상의 결과들로부터, 본 발명의 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스 BLA-9 균주를 이용하는 발효 홍삼 추출물의 제조방법에 따르면 종래 방법으로 제조한 발효 홍삼 추출물에 비해 화합물 K의 생산 효율이 현저히 우수하고, 진세노사이드 지표가 우수한 것을 구체적으로 확인하였다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.
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ginseng extracts having increased content of ginsenoside compound
K using the same, fermented red ginseng extracts using thereby
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ccagtggtgg tggtggggga aagaatggca agtcgaacgc gttggcccaa ttgattgatg 60
gtgcttgcac ctgattgatt ttggtcgcca acgagtggcg gacgggtgag taacacgtag 120
gtaacctgcc cagaagcggg ggacaacatt tggaaacaga tgctaatacc gcataacagc 180
gttgttcgca tgaacaacgc ttaaaagatg gcttctcgct atcacttctg gatggacctg 240
cggtgcatta gcttgttggt ggggtaacgg cctaccaagg cgatgatgca tagccgagtt 300
gagagactga tcggccacaa tgggactgag acacggccca tactcctacg ggaggcagca 360
gtagggaatc ttccacaatg ggcgcaagcc tgatggagca acaccgcgtg agtgaagaag 420
ggtttcggct cgtaaagctc tgttgttaaa gaagaacacg tatgagagta actgttcata 480
cgttgacggt atttaaccag aaagtcacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac 540
gtaggtggca agcgttatcc ggatttattg ggcgtaaaga gagtgcaggc ggttttctaa 600
gtctgatgtg aaagcyttcg gcttaaccgg agaagtgcat cggaaactgg ataacttgag 660
tgcagaagag ggtagtggaa ctccatgtgt agcggtggaa tgcgtagata tatggaagaa 720
caccagtggc gaaggcggct acctggtctg caactgacgc tgagactcga aagcatgggt 780
agcgaacagg attagatacc ctggtagtcc atgccgtaaa cgatgagtgc taggtgttgg 840
agggtttccg cccttcagtg ccggagctaa cgcattaagc actccgcctg gggagtacga 900
ccgcaaggtt gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt 960
ttaattcgaa gctacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atcttgcgcc aaccctagag 1020
atagggcgtt tccttcggga acgcaatgac aggtggtgca tggtcgtcgt cagctcgtgt 1080
cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tgttactagt tgccagcatt 1140
aagttgggca ctctagtgag actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gacgacgtca 1200
gatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta caatggacgg tacaacgagt 1260
cgcgaactcg cgagggcaag caaatctctt aaaaccgttc tcagttcgga ctgcaggctg 1320
caactcgcct gcacgaagtc ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc cgcggtgaat 1380
acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccatga gagtttgtaa tgcccaaagc 1440
cggtggggta accttttaga aggagccgtc ctaaggcagg gcagatgacn nnnnnnnnnn 1500
ngtaacaagn nnnnnnnnnn ngaacctgnn nnnngatcac ctcctttcta 1550
Claims (14)
- 사포닌에 대해 생물전환능을 갖는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P).
- (1) 홍삼 추출물을 제조하는 단계;
(2) 상기 홍삼 추출물에 셀룰라아제, β-글루코시다아제 및 헤미셀룰라아제의 복합 효소를 첨가하여 효소 반응시키는 단계; 및
(3) 상기 효소 처리한 홍삼 추출물에 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) BLA-9 균주(기탁번호: KCTC18848P)를 접종한 후 발효시키는 단계;를 포함하는, 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(1) 단계의 홍삼 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(1) 단계에서 제조된 홍삼 추출물은 고형분 함량이 3 내지 50 중량%인 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(2) 단계의 복합 효소는 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger) 유래의 효소인 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(2) 단계의 복합 효소는 스미자임 AC(Sumizyme AC)인 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(2) 단계의 복합 효소는 상기 홍삼 추출물 100 중량부에 대하여 0.5 내지 50 중량부로 첨가되는 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(2) 단계의 효소 반응은 50 내지 65 ℃, pH 3.5 내지 5.0에서 5 내지 60 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(2) 단계와 (3) 단계의 사이에 효소 불활성 단계를 수행하지 않는 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
(3) 단계의 발효는 30 내지 50 ℃에서 5 내지 60 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
상기 발효 홍삼 추출물은 Rb1, Rg1 및 Rg3의 총합이 적어도 7.0 mg/g 이상이고, F2의 함량이 적어도 5.0 mg/g 이상이며, 화합물 K의 함량이 적어도 4.0 mg/g 이상인 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항에 있어서,
상기 발효 후 발효 홍삼 추출물에 포함된 화합물 K의 함량(mg/g)을 효소 처리 전의 홍삼 추출물에 포함된 Rb1의 함량(mg/g)으로 나눈 값인 화합물 K의 생산 효율이 적어도 0.2 이상인 것을 특징으로 하는 화합물 K의 함량이 증대된 발효 홍삼 추출물의 제조 방법. - 제2항 내지 제12항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조되어, Rb1, Rg1 및 Rg3의 총합이 적어도 7.0 mg/g 이상이고, F2의 함량이 적어도 5.0 mg/g 이상이며, 화합물 K의 함량이 적어도 4.0 mg/g 이상인 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 추출물.
- 제13항의 발효 홍삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물.
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-
2020
- 2020-10-05 KR KR1020200127839A patent/KR102466825B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Curr Top Lact Acid Bact Probiotics. 2019, 5(1):1-12. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR102466825B1 (ko) | 2022-11-16 |
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