KR20210102941A - 키메라 항원 수용체 및 car-t 세포 및 사용 방법 - Google Patents

키메라 항원 수용체 및 car-t 세포 및 사용 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20210102941A
KR20210102941A KR1020217021608A KR20217021608A KR20210102941A KR 20210102941 A KR20210102941 A KR 20210102941A KR 1020217021608 A KR1020217021608 A KR 1020217021608A KR 20217021608 A KR20217021608 A KR 20217021608A KR 20210102941 A KR20210102941 A KR 20210102941A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
nos
cell
antigen
chain variable
Prior art date
Application number
KR1020217021608A
Other languages
English (en)
Inventor
조나단 벨크
아리안 페레즈
루벤 알바레즈 로드리게즈
스튜어트 에이. 시버스
Original Assignee
카이트 파마 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 카이트 파마 인코포레이티드 filed Critical 카이트 파마 인코포레이티드
Publication of KR20210102941A publication Critical patent/KR20210102941A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464424—CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/27—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by targeting or presenting multiple antigens
    • A61K2239/29—Multispecific CARs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본원에 개시된 항원 결합 모티프 중 하나 이상을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)가 제공된다. 본 개시내용의 측면은 항원 결합 모티프 중 하나 이상을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. CD20에 결합하는 결합 모티프 및 임의로 CD19에 결합하는 결합 모티프를 포함하는 항체 및 항원 결합 시스템 및 그의 생산 및 사용 방법이 제공된다. 본 개시내용의 항체 및 항원 결합 시스템은 항-CD20 결합 모티프 및 항-CD19 결합 모티프를 포함하는 CAR을 포함한다. 본 개시내용의 항-CD20/항-CD19 항원 결합 시스템이거나 이를 포함하는 조성물, 예컨대 항체 및 CAR이 제공되고, 이를 포함하는 세포 요법은, 예를 들어 암의 치료에 유용하다.

Description

키메라 항원 수용체 및 CAR-T 세포 및 사용 방법
관련 출원에 대한 상호-참조
본 출원은 2018년 12월 12일에 출원된 미국 가출원 번호 62/778,893의 우선권 이익을 주장하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
인간 암은 그의 속성상 정상 세포가 유전적 또는 후성적 전환을 겪어 비정상적 암 세포가 된 것으로 구성된다. 그렇게 함으로써, 암 세포는 정상 세포에 의해 발현되는 것과 구별되는 단백질 및 다른 항원을 발현하기 시작한다. 이들 이상 종양 항원은 신체의 선천성 면역계가 암 세포를 특이적으로 표적화하고 사멸시키는데 사용될 수 있다. 그러나, 암 세포는 면역 세포, 예컨대 T 및 B 림프구가 성공적으로 암 세포를 표적화하는 것을 방해하는 다양한 메카니즘을 사용한다.
현행 요법인 T 세포 요법은 환자에서 암 세포를 표적화하고 사멸시키기 위해 풍부화된 또는 변형된 인간 T 세포에 의존한다. T 세포가 특정한 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 능력을 증가시키기 위해, T 세포를 특정한 표적 암 세포로 지시하는 구축물을 발현하도록 T 세포를 조작하는 방법이 개발되어 왔다. 특정한 종양 항원과 상호작용할 수 있는 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 조작된 T 세포 수용체 (TCR)는 T 세포가 특정한 종양 항원을 발현하는 암 세포를 표적화하고 사멸시키는 것을 가능하게 한다. 암 세포를 표적화하고 사멸시키기 위한 CAR 및 TCR에 대한 필요가 존재한다.
적어도 제1 측면에서, 본 개시내용은 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-CD20 결합 모티프는 서열식별번호(SEQ ID NO): 1, 23, 45, 67, 89, 111, 133, 155, 177 및 199로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 중쇄 가변 영역 (HCVR)의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)의 서열 및 서열식별번호: 12, 34, 56, 78, 100, 122, 144, 166, 188 및 210으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 3개의 경쇄 CDR (LCDR)의 서열을 포함하는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD20 결합 모티프는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 (i) HCDR1은 서열식별번호: 3-5, 25-27, 47-49, 69-71, 91-93, 113-115, 135-137, 157-159, 179-181 및 201-203 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (ii) HCDR2는 서열식별번호: 6-8, 28-30, 50-52, 72-74, 94-96, 116-118, 138-140, 160-162, 182-184 및 204-206 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (iii) HCDR3은 서열식별번호: 9-11, 31-33, 53-55, 75-77, 97-99, 119-121, 141-143, 163-165, 185-187 및 207-209 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (iv) LCDR1은 서열식별번호: 14-16, 36-38, 58-60, 80-82, 102-104, 124-126, 146-148, 168-170, 190-192 및 212-214 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (v) LCDR2는 서열식별번호: 17-19, 39-41, 61-63, 83-85, 105-107, 127-129, 149-151, 171-173, 193-195 및 215-217 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (vi) LCDR3은 서열식별번호: 20-22, 42-44, 64-66, 86-88, 108-110, 130-132, 152-154, 174-176, 196-198 및 218-220 중 어느 하나에 따른 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, HCDR은 (i) 서열식별번호: 3-5 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 6-8 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 9-11 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (ii) 서열식별번호: 25-27 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 28-30 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 31-33 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (iii) 서열식별번호: 47-49 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 50-52 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 53-55 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (iv) 서열식별번호: 69-71 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 72-74 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 75-77 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (v) 서열식별번호: 91-93 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 94-96 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 97-99 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (vi) 서열식별번호: 113-115 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 116-118 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 119-121 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (vii) 서열식별번호: 135-137 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 138-140 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 141-143 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (viii) 서열식별번호: 157-159 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 160-162 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 163-165 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (ix) 서열식별번호: 179-181 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 182-184 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 185-187 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 또는 (x) 서열식별번호: 201-203 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 204-206 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 207-209 중 어느 하나에 따른 HCDR3을 포함하고; LCDR은 (i) 서열식별번호: 14-16 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 17-19 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 20-22 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ii) 서열식별번호: 36-38 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 39-41 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 42-44 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iii) 서열식별번호: 58-60 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 61-63 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 64-66 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iv) 서열식별번호: 80-82 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 83-85 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 86-88 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (v) 서열식별번호: 102-104 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 105-107 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 108-110 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vi) 서열식별번호: 124-126 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 127-129 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 130-132 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vii) 서열식별번호: 146-148 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 149-151 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 152-154 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (viii) 서열식별번호: 168-170 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 171-173 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 174-176 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ix) 서열식별번호: 190-192 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 193-195 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 196-198 중 어느 하나에 따른 LCDR3; 또는 (x) 서열식별번호: 212-214 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 215-217 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 218-220 중 어느 하나에 따른 LCDR3을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 HCDR 및 LCDR은 (i) 서열식별번호: 3-5 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 6-8 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 9-11 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 14-16 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 17-19 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 20-22 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ii) 서열식별번호: 25-27 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 28-30 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 31-33 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 36-38 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 39-41 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 42-44 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iii) 서열식별번호: 47-49 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 50-52 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 53-55 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 58-60 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 61-63 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 64-66 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iv) 서열식별번호: 69-71 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 72-74 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 75-77 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 80-82 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 83-85 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 86-88 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (v) 서열식별번호: 91-93 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 94-96 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 97-99 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 102-104 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 105-107 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 108-110 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vi) 서열식별번호: 113-115 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 116-118 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 119-121 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 124-126 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 127-129 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 130-132 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vii) 서열식별번호: 135-137 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 138-140 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 141-143 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 146-148 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 149-151 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 152-154 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (viii) 서열식별번호: 157-159 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 160-162 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 163-165 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 168-170 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 171-173 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 174-176 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ix) 서열식별번호: 179-181 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 182-184 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 185-187 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 190-192 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 193-195 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 196-198 중 어느 하나에 따른 LCDR3; 또는 (x) 서열식별번호: 201-203 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 204-206 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 207-209 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 212-214 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 215-217 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 218-220 중 어느 하나에 따른 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 (i) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 111, 서열식별번호: 133, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 177 또는 서열식별번호: 199에 대해 적어도 80% 동일하고; (ii) 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 122, 서열식별번호: 144, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 188 또는 서열식별번호: 210에 대해 적어도 80% 동일하다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 (i) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 1에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 12에 대해 적어도 80% 동일하거나; (ii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 23에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 34에 대해 적어도 80% 동일하거나; (iii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 45에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 56에 대해 적어도 80% 동일하거나; (iv) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 67에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 78에 대해 적어도 80% 동일하거나; (v) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 89에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 100에 대해 적어도 80% 동일하거나; (vi) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 111에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 122에 대해 적어도 80% 동일하거나; (vii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 133에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 144에 대해 적어도 80% 동일하거나; (viii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 155에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 166에 대해 적어도 80% 동일하거나; (ix) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 177에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 188에 대해 적어도 80% 동일하거나; 또는 (x) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 199에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 210에 대해 적어도 80% 동일하다.
3개의 HCDR 및 3개의 LCDR을 포함하는 본 개시내용의 일부 실시양태에서, 3개의 HCDR 및 3개의 LCDR은 단일 폴리펩티드에 포함된다. 3개의 HCDR 및 3개의 LCDR을 포함하는 본 개시내용의 일부 실시양태에서, 3개의 HCDR은 제1 폴리펩티드에 포함되고, 3개의 LCDR은 제2 폴리펩티드에 포함된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 항체 중쇄이고, 제2 폴리펩티드는 항체 경쇄이다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 (i) 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), B 세포 수용체, CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD40, CD56, CD79, CD78, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, IgM, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-IIR알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, VEGFR2, EphA3 (EPH 수용체 A3), BAFFR (B-세포 활성화 인자 수용체) 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 결합 모티프; 및/또는 (ii) B-세포에 특징적인 항원 (임의로 여기서 B-세포에 특징적인 항원은 CD19 또는 CD20이 아님)에 결합하는 결합 모티프를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항-CD19 결합 모티프를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD19 결합 모티프는 3개의 HCDR을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고; 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고; 항-CD19 결합 모티프의 HCDR 및 LCDR은 서열식별번호: 223-225 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 226-228 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 229-231 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 234-236 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 237-239 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 240-242 중 어느 하나에 따른 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD19 결합 모티프는 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 항-CD19 결합 모티프의 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 221에 대해 적어도 80% 동일하고, 항-CD19 결합 모티프의 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 232에 대해 적어도 80% 동일하다. 일부 실시양태에서, 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 단일 폴리펩티드에 포함된다. 일부 실시양태에서, 항-CD20 결합 모티프의 3개의 HCDR, 항-CD20 결합 모티프의 3개의 LCDR, 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 함께 단일 폴리펩티드에 포함된다.
다양한 실시양태에서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 키메라 항원 수용체이거나 또는 그에 포함된다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 키메라 항원 수용체이거나 또는 그에 포함되는 단일 폴리펩티드이며, 상기 키메라 항원 수용체는 이중특이적 키메라 항원 수용체이다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 4-1BB/CD137, T 세포 수용체의 알파 쇄, T 세포 수용체의 베타 쇄, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD8 알파, CD9, CD16, CD19, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154 또는 T 세포 수용체의 제타 쇄 또는 그의 임의의 조합의 막횡단 도메인인 막횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, (i) 항-CD20 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD20 결합 모티프의 3개의 LCDR은 제1 폴리펩티드에 존재하고; (ii) 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 함께 제2의 상이한 폴리펩티드에 포함된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 제1 키메라 항원 수용체이거나 또는 그에 포함된다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 제2 키메라 항원 수용체이거나 또는 그에 포함된다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 적어도 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 및/또는 이러한 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다. 본 개시내용은 세포를 본 개시내용의 적어도 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산으로 형질감염 또는 형질도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법을 추가로 포함한다. 추가로, 본원에 제공된 항원 결합 시스템, 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하거나 발현하는 세포이며, 임의로 여기서 세포는 면역 세포이고, 임의로 여기서 세포는 T 세포인 세포가 본원에 제공된다.
본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 개시내용의 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하거나 포함하는 1개 이상의 세포를 포함하는 세포 요법 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 추가로 포함한다. 또한, 대상체에게 본 개시내용의 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하거나 포함하는 1개 이상의 세포를 포함하는 세포 요법 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도하거나 또는 대상체를 암에 대해 면역화시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 세포는 CAR-T 세포이다. 다양한 실시양태에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 골수성 백혈병, B 세포 전림프구성 백혈병, B 세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 호지킨병, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (무증상 골수종 (무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종 포함) 포함), POEMS 증후군 (크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; 및 PEP 증후군으로도 공지됨), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T 세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T 세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 외투 세포 림프종 (MCL), 형질전환된 여포성 림프종 (TFL), 원발성 종격 B 세포 림프종 (PMBCL), 다발성 골수종, 모발상 세포 림프종/백혈병 또는 그의 조합이다. 일부 실시양태에서, 세포 요법은 동종 세포 요법 또는 자가 세포 요법이다.
본 개시내용의 적어도 한 측면은 서열식별번호: 1, 23, 45, 67, 89, 111, 133, 155, 177 및 199로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 서열 중 어느 하나 내에 함유된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR) 및 서열식별번호: 12, 34, 56, 78, 100, 122, 144, 166, 188 및 210으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 서열 중 어느 하나 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR)을 포함하는 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 도메인은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)을 포함하고, 제2 도메인은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함하며, 여기서 (i) HCDR1은 서열식별번호: 3-5, 25-27, 47-49, 69-71, 91-93, 113-115, 135-137, 157-159, 179-181 및 201-203 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (ii) HCDR2는 서열식별번호: 6-8, 28-30, 50-52, 72-74, 94-96, 116-118, 138-140, 160-162, 182-184 및 204-206 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (iii) HCDR3은 서열식별번호: 9-11, 31-33, 53-55, 75-77, 97-99, 119-121, 141-143, 163-165, 185-187 및 207-209 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (iv) LCDR1은 서열식별번호: 14-16, 36-38, 58-60, 80-82, 102-104, 124-126, 146-148, 168-170, 190-192 및 212-214 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (v) LCDR2는 서열식별번호: 17-19, 39-41, 61-63, 83-85, 105-107, 127-129, 149-151, 171-173, 193-195 및 215-217 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고; (vi) LCDR3은 서열식별번호: 20-22, 42-44, 64-66, 86-88, 108-110, 130-132, 152-154, 174-176, 196-198 및 218-220 중 어느 하나에 따른 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, HCDR은 (i) 서열식별번호: 3-5 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 6-8 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 9-11 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (ii) 서열식별번호: 25-27 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 28-30 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 31-33 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (iii) 서열식별번호: 47-49 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 50-52 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 53-55 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (iv) 서열식별번호: 69-71 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 72-74 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 75-77 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (v) 서열식별번호: 91-93 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 94-96 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 97-99 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (vi) 서열식별번호: 113-115 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 116-118 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 119-121 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (vii) 서열식별번호: 135-137 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 138-140 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 141-143 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (viii) 서열식별번호: 157-159 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 160-162 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 163-165 중 어느 하나에 따른 HCDR3; (ix) 서열식별번호: 179-181 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 182-184 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 185-187 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 또는 (x) 서열식별번호: 201-203 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 204-206 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 207-209 중 어느 하나에 따른 HCDR3을 포함하고; LCDR은 (i) 서열식별번호: 14-16 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 17-19 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 20-22 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ii) 서열식별번호: 36-38 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 39-41 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 42-44 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iii) 서열식별번호: 58-60 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 61-63 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 64-66 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iv) 서열식별번호: 80-82 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 83-85 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 86-88 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (v) 서열식별번호: 102-104 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 105-107 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 108-110 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vi) 서열식별번호: 124-126 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 127-129 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 130-132 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vii) 서열식별번호: 146-148 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 149-151 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 152-154 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (viii) 서열식별번호: 168-170 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 171-173 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 174-176 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ix) 서열식별번호: 190-192 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 193-195 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 196-198 중 어느 하나에 따른 LCDR3; 또는 (x) 서열식별번호: 212-214 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 215-217 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 218-220 중 어느 하나에 따른 LCDR3을 포함한다.
일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 3개의 HCDR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고; 3개의 LCDR은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고; HCDR 및 LCDR은 (i) 서열식별번호: 3-5 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 6-8 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 9-11 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 14-16 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 17-19 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 20-22 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ii) 서열식별번호: 25-27 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 28-30 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 31-33 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 36-38 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 39-41 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 42-44 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iii) 서열식별번호: 47-49 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 50-52 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 53-55 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 58-60 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 61-63 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 64-66 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (iv) 서열식별번호: 69-71 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 72-74 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 75-77 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 80-82 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 83-85 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 86-88 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (v) 서열식별번호: 91-93 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 94-96 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 97-99 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 102-104 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 105-107 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 108-110 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vi) 서열식별번호: 113-115 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 116-118 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 119-121 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 124-126 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 127-129 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 130-132 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (vii) 서열식별번호: 135-137 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 138-140 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 141-143 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 146-148 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 149-151 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 152-154 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (viii) 서열식별번호: 157-159 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 160-162 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 163-165 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 168-170 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 171-173 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 174-176 중 어느 하나에 따른 LCDR3; (ix) 서열식별번호: 179-181 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 182-184 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 185-187 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 190-192 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 193-195 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 196-198 중 어느 하나에 따른 LCDR3; 또는 (x) 서열식별번호: 201-203 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 204-206 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 207-209 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 212-214 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 215-217 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 218-220 중 어느 하나에 따른 LCDR3을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 (i) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 111, 서열식별번호: 133, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 177 또는 서열식별번호: 199에 대해 적어도 80% 동일하고; (ii) 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 122, 서열식별번호: 144, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 188 또는 서열식별번호: 210에 대해 적어도 80% 동일하다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 (i) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 1에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 12에 대해 적어도 80% 동일하거나; (ii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 23에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 34에 대해 적어도 80% 동일하거나; (iii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 45에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 56에 대해 적어도 80% 동일하거나; (iv) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 67에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 78에 대해 적어도 80% 동일하거나; (v) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 89에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 100에 대해 적어도 80% 동일하거나; (vi) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 111에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 122에 대해 적어도 80% 동일하거나; (vii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 133에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 144에 대해 적어도 80% 동일하거나; (viii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 155에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 166에 대해 적어도 80% 동일하거나; (ix) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 177에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 188에 대해 적어도 80% 동일하거나; 또는 (x) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 199에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 210에 대해 적어도 80% 동일하다.
3개의 HCDR 및 3개의 LCDR을 포함하는 일부 실시양태에서, 3개의 HCDR 및 3개의 LCDR은 단일 폴리펩티드에 포함된다. 3개의 HCDR 및 3개의 LCDR을 포함하는 일부 실시양태에서, 3개의 HCDR은 제1 폴리펩티드에 포함되고, 3개의 LCDR은 제2 폴리펩티드에 포함된다. 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드는 항체 중쇄이고, 제2 폴리펩티드는 항체 경쇄이다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 (i) 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), B 세포 수용체, CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD40, CD56, CD79, CD78, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, IgM, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-IIR알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, VEGFR2, EphA3 (EPH 수용체 A3), BAFFR (B-세포 활성화 인자 수용체) 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 결합 모티프; 및/또는 (ii) B-세포에 특징적인 항원 (임의로 여기서 B-세포에 특징적인 항원은 CD19 또는 CD20이 아님)에 특이적으로 결합하는 결합 모티프를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 항-CD19 결합 모티프를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 제40항의 키메라 항원 수용체는, 여기서 항-CD19 결합 모티프가 3개의 HCDR을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고; 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고; 항-CD19 결합 모티프의 HCDR 및 LCDR은 서열식별번호: 223-225 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 226-228 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 229-231 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 234-236 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 237-239 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 240-242 중 어느 하나에 따른 LCDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD19 결합 모티프는 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 항-CD19 결합 모티프의 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 221에 대해 적어도 80% 동일하고, 항-CD19 결합 모티프의 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 232에 대해 적어도 80% 동일하다. 일부 실시양태에서, 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 단일 폴리펩티드에 포함된다.
일부 실시양태에서, 항-CD20 결합 모티프의 3개의 HCDR, 항-CD20 결합 모티프의 3개의 LCDR, 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 함께 단일 폴리펩티드에 포함된다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 4-1BB/CD137, T 세포 수용체의 알파 쇄, T 세포 수용체의 베타 쇄, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD8 알파, CD9, CD16, CD19, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154 또는 T 세포 수용체의 제타 쇄 또는 그의 임의의 조합의 막횡단 도메인인 막횡단 도메인을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 제1 키메라 항원 수용체, 및 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), B 세포 수용체, CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD40, CD56, CD79, CD78, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, IgM, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-IIR알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, VEGFR2, EphA3 (EPH 수용체 A3), BAFFR (B-세포 활성화 인자 수용체) 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 결합 모티프; 및/또는 B-세포에 특징적인 항원 (임의로 여기서 B-세포에 특징적인 항원은 CD19 또는 CD20이 아님)에 특이적으로 결합하는 결합 모티프를 포함하는 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 비시스트론 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 키메라 항원 수용체는 항-CD19 결합 모티프를 포함한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 적어도 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 및/또는 이러한 핵산을 포함하는 벡터를 추가로 제공한다. 본 개시내용은 또한 세포를 본 개시내용의 핵산으로 형질감염 또는 형질도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 키메라 항원 수용체를 코딩하거나 발현하는 세포이며, 임의로 여기서 세포는 면역 세포이고, 임의로 여기서 세포는 T 세포인 세포를 포함한다.
본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 개시내용의 키메라 항원 수용체를 코딩하거나 포함하는 1개 이상의 세포를 포함하는 세포 요법 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 본 개시내용은 대상체에게 본 개시내용의 키메라 항원 수용체를 코딩하거나 포함하는 1개 이상의 세포를 포함하는 세포 요법 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도하거나 또는 대상체를 암에 대해 면역화시키는 방법을 추가로 제공한다. 다양한 실시양태에서, 세포는 CAR-T 세포이다. 다양한 실시양태에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 골수성 백혈병, B 세포 전림프구성 백혈병, B 세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 호지킨병, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (무증상 골수종 (무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종 포함) 포함), POEMS 증후군 (크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; 및 PEP 증후군으로도 공지됨), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T 세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T 세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 외투 세포 림프종 (MCL), 형질전환된 여포성 림프종 (TFL), 원발성 종격 B 세포 림프종 (PMBCL), 다발성 골수종, 모발상 세포 림프종/백혈병 또는 그의 조합이다. 일부 실시양태에서, 세포 요법은 동종 세포 요법 또는 자가 세포 요법이다.
적어도 한 측면에서, 본 개시내용은 항-CD20 결합 모티프 및 CD19 결합 모티프를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함하며, 여기서 항-CD20 결합 모티프는 서열식별번호: 1, 23, 45, 67, 89, 111, 133, 155, 177, 199, 12, 34, 56, 78, 100, 122, 144, 166, 188 및 210으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD19 결합 모티프는 서열식별번호: 221 및 232로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD20 결합 모티프는 서열식별번호: 1, 23, 45, 67, 89, 111, 133, 155, 177, 199, 12, 34, 56, 78, 100, 122, 144, 166, 188 및 210으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; CD19 결합 모티프는 서열식별번호: 221 및 232로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-CD20 결합 모티프 및 CD19 결합 모티프는 하나의 폴리펩티드에 포함된다. 일부 실시양태에서, 항-CD20 결합 모티프 및 CD19 결합 모티프는 상이한 폴리펩티드에 포함된다.
적어도 한 측면에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 1, 23, 45, 67, 89, 111, 133, 155, 177, 199, 12, 34, 56, 78, 100, 122, 144, 166, 188 및 210으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 적어도 한 측면에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 1, 23, 45, 67, 89, 111, 133, 155, 177, 199, 12, 34, 56, 78, 100, 122, 144, 166, 188 및 210으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 CD19 결합 모티프를 추가로 포함한다.
본 개시내용은 신규 항원 결합 분자 및 그를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 신규 폴리펩티드에 관한 것이다. 본 개시내용의 일부 측면은 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 (또는 그의 CDR) 중 적어도 하나를 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 (예를 들어, 바이러스 벡터) 및 이러한 벡터를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시내용은 이러한 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다. 본 개시내용은 추가적으로 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하고/거나 이러한 바이러스 벡터로 형질도입된 조작된 세포 (예를 들어, T 세포) 및 이러한 조작된 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시내용은 복수의 조작된 T 세포를 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 제공한다. 본 개시내용은 이러한 조작된 T 세포 및 조성물을 제조하는 방법 및 이러한 조작된 T 세포 및 조성물의 (예를 들어, 흑색종을 치료하는데 있어서의) 용도를 제공한다. 또한, 본 개시내용은 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 폴리펩티드를 포함하는 세포를 투여하는 것을 포함하는, 종양에 대한 면역을 유도하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 다른 측면은 CAR을 포함하는 세포 및 암을 앓고 있는 환자의 치료를 위한 T 세포 요법에서의 그의 용도에 관한 것이다.
본원에 기재된 임의의 측면 또는 실시양태는 본원에 개시된 바와 같은 임의의 다른 측면 또는 실시양태와 조합될 수 있다. 본 개시내용이 그의 상세한 설명과 함께 기재되어 있지만, 상기 기재는 첨부된 청구범위의 범주에 의해 정의된 본 개시내용의 범주를 제한하려는 것이 아닌 예시하기 위한 것으로 의도된다. 다른 측면, 이점 및 변형이 하기 청구범위의 범주 내에 속한다. 본원에 언급된 특허 및 과학 문헌은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 이용가능한 지식을 확립한다. 본원에 인용된 모든 미국 특허 및 공개 또는 비공개 미국 특허 출원은 참조로 포함된다. 본원에 인용된 모든 공개 외국 특허 및 특허 출원은 본원에 참조로 포함된다. 본원에 인용된 모든 다른 공개 참고문헌, 사전, 문서, 원고 및 과학 문헌은 본원에 참조로 포함된다. 본 개시내용의 다른 특색 및 이점은 실시예를 포함하는 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 분명할 것이다.
정의
본 개시내용을 보다 용이하게 이해하기 위해, 특정 용어가 먼저 하기에 정의된다. 하기 용어 및 다른 용어에 대한 추가의 정의는 본 명세서 전체에 걸쳐 제시되어 있다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다.
구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 명백하지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "또는"은 "또는"과 "및" 둘 다를 포함하고 포괄하는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "및/또는"은 2개의 명시된 특색 또는 성분 각각을 함께 또는 따로 구체적으로 개시하는 것으로 여겨져야 한다. 따라서, 본원의 "A 및/또는 B"와 같은 어구에 사용된 용어 "및/또는"은 A 및 B; A 또는 B; A (단독); 및 B (단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 어구에 사용된 용어 "및/또는"은 각각의 하기 측면: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독)를 포괄하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 용어 "예를 들어" 및 "즉"은 단지 예로서 사용되고, 제한하는 것으로 의도되지 않으며, 명세서에서 명시적으로 열거된 항목들만을 지칭하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
용어 "이상", "적어도", "초과" 등, 예를 들어 "적어도 하나"는 언급된 값의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 초과를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한, 임의의 더 큰 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
반대로, 용어 "이하"는 언급된 값 미만의 각각의 값을 포함한다. 예를 들어, "100개 이하의 뉴클레오티드"는 100, 99, 98, 97, 96, 95, 94, 93, 92, 91, 90, 89, 88, 87, 86, 85, 84, 83, 82, 81, 80, 79, 78, 77, 76, 75, 74, 73, 72, 71, 70, 69, 68, 67, 66, 65, 64, 63, 62, 61, 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 및 0개의 뉴클레오티드를 포함한다. 또한, 임의의 더 적은 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
용어 "복수", "적어도 2", "2 이상", "적어도 제2" 등은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 또는 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 또는 그 초과를 포함하나 이에 제한되지는 않는 것으로 이해된다. 또한, 임의의 더 큰 수 또는 그 사이의 분율도 포함된다.
명세서 전체에 걸쳐 단어 "포함하는" 또는 변형어, 예컨대 "포함한다" 또는 "포함하는"은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 포함하지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 배제하지는 않는다는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 측면이 언어 "포함하는"을 사용하여 본원에 기재된 어느 경우에서나, "로 이루어진" 및/또는 "로 본질적으로 이루어진"의 용어로 기재된 다른 유사한 측면이 또한 제공되는 것으로 이해된다.
구체적으로 언급되거나 문맥으로부터 입증되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "약"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정된 바와 같은 특정한 값 또는 조성에 대한 허용 오차 범위 내의 값 또는 조성을 지칭하며, 이는 부분적으로 값 또는 조성이 측정 또는 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 한계에 좌우될 것이다. 예를 들어, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 관련 기술분야에서 실시할 때마다 1 또는 1 초과의 표준 편차 내에 있다는 것을 의미할 수 있다. "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 최대 10%의 범위 (즉, ±10%)를 의미할 수 있다. 따라서, "약"은 언급된 값보다 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01% 또는 0.001% 더 큰 또는 더 적은 값 내인 것으로 이해될 수 있다. 예를 들어, 약 5 mg은 4.5 mg과 5.5 mg 사이의 임의의 양을 포함할 수 있다. 추가로, 특히 생물학적 시스템 또는 과정에 관하여, 상기 용어는 값의 한 자릿수 이하 또는 5배 이하를 의미할 수 있다. 특정한 값 또는 조성이 본 개시내용에 제공되는 경우에, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"의 의미는 그러한 특정한 값 또는 조성에 대한 허용 오차 범위 내에 있는 것으로 가정되어야 한다.
본원에 기재된 바와 같이, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비 범위 또는 정수 범위는, 달리 나타내지 않는 한, 언급된 범위 내의 임의의 정수 값 및 적절한 경우에, 그의 분율 (예컨대 정수의 1/10 및 1/100)을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본원에 사용된 단위, 접두어 및 기호는 시스템 인터내셔날 드 유니테스 (SI) 허용 형태를 사용하여 제공된다. 수치 범위는 그 범위를 규정하는 수를 포함한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용과 관련되는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, 문헌 [Juo, "The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology", 2nd ed., (2001), CRC Press; "The Dictionary of Cell & Molecular Biology", 5th ed., (2013), Academic Press; 및 "The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology", Cammack et al. eds., 2nd ed, (2006), Oxford University Press]은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 본 개시내용에 사용된 많은 용어에 대한 일반적 사전을 제공한다.
"투여하는"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용하여 대상체에게 작용제를 물리적으로 도입하는 것을 지칭한다. 본원에 개시된 제제에 대한 예시적인 투여 경로는, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로를 포함한다. 어구 "비경구 투여"는 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 림프내, 병변내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입, 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제제는 비-비경구 경로를 통해, 예를 들어 경구로 투여된다. 다른 비-비경구 경로는 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예를 들어 비강내, 질, 직장, 설하 또는 국소 투여 경로를 포함한다. 투여는 또한, 예를 들어 1회, 복수회 및/또는 1회 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
용어 "항체" (Ab)는, 비제한적으로 항원에 특이적으로 결합하는 당단백질 이뮤노글로불린을 포함한다. 일반적으로, 항체는 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L), 또는 그의 항원-결합 분자를 포함할 수 있다. 각각의 H 쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 불변 도메인, CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 지칭되는 보다 보존된 영역이 사이에 삽입되어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 지칭되는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. Ab의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 전형적 보체계의 제1 성분 (C1q)을 포함한 숙주 조직 또는 인자에 대한 이뮤노글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 일반적으로, 인간 항체는 통상적으로 "Y-형상" 구조로 지칭되는 것으로 서로 회합되는 2개의 동일한 중쇄 (H) 폴리펩티드 (각각 약 50 kD) 및 2개의 동일한 경쇄 (L) 폴리펩티드 (각각 약 25 kD)로 구성된 대략 150 kD 사량체 작용제이다. 중쇄 및 경쇄는 단일 디술피드 결합에 의해 서로 연관 또는 연결되고; 2개의 다른 디술피드 결합은 중쇄 힌지 영역을 서로 연결하여, 이량체가 서로 연결되고 사량체가 형성되도록 한다. 자연-생산된 항체는 또한, 예를 들어 CH2 도메인 상에서 글리코실화된다.
용어 "인간 항체"는 인간 이뮤노글로불린 서열 또는 그와 구별하기 어려운 서열로부터 생성, 조립 또는 유래된 가변 및 불변 도메인 서열을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 일부 실시양태에서, 항체 (또는 항체 성분)는 그의 아미노산 서열이 인간 배선 이뮤노글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 잔기 또는 요소 (예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 도입되거나 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 변이)를 포함하더라도 "인간"인 것으로 간주될 수 있다. 용어 "인간화"는 인간 배선 코딩된 서열과 보다 유사하도록 변형된, 비-인간 종 (예를 들어, 마우스)의 가변 도메인으로부터 유래된 서열을 갖는 가변 도메인을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 일부 실시양태에서, "인간화" 항체는 실질적으로 인간 프레임워크 도메인의 아미노산 서열을 갖는 1개 이상의 프레임워크 도메인 및 실질적으로 비-인간 항체의 것과 같은 아미노산 서열을 갖는 1개 이상의 상보성 결정 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 한 부분, 일반적으로 인간 이뮤노글로불린 불변 도메인의 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 인간 중쇄 불변 도메인의 CH1, 힌지, CH2, CH3 및 임의로 CH4 영역을 포함할 수 있다.
항체는, 예를 들어 모노클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 단일특이적 항체, 다중특이적 항체 (이중특이적 항체 포함), 인간 항체, 조작된 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 이뮤노글로불린, 합성 항체, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍, 인트라바디, 항체 융합체 (때때로 본원에서 "항체 접합체"로 지칭됨), 이종접합체 항체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일 쇄 항체 또는 단일-쇄 Fv (scFv), 낙타화 항체, 아피바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, 디술피드-연결된 Fv (sdFv), 항-이디오타입 (항-Id) 항체 (예를 들어, 항-항-Id 항체 포함), 미니바디, 도메인 항체, 합성 항체 (때때로 본원에서 "항체 모방체"로 지칭됨), 및 상기 중 임의의 것의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 폴리클로날 항체 집단을 지칭한다. 항체는 또한, 예를 들어 Fab' 단편, Fd' 단편, Fd 단편, 단리된 CDR, 단일 쇄 Fv, 폴리펩티드-Fc 융합체, 단일 도메인 항체 (예를 들어, 상어 단일 도메인 항체, 예컨대 IgNAR 또는 그의 단편), 낙타류 항체, 단일 쇄 또는 탠덤 디아바디 (탠드Ab(TandAb)®), 안티칼린(Anticalin)®, 나노바디(Nanobody)®, 미니바디, BiTE®, 안키린 반복 단백질 또는 DARPIN®, 아비머(Avimer)®, DART, TCR-유사 항체, 애드넥틴(Adnectin)®, 아필린(Affilin)®, 트랜스-바디(Trans-body)®, 아피바디(Affibody)®, 트라이머X(TrimerX)®, 마이크로프로테인, 피노머(Fynomer)®, 센티린(Centyrin)® 및 칼비토르(KALBITOR)®를 포함할 수 있다.
이뮤노글로불린은 IgA, 분비형 IgA, IgG, IgE 및 IgM을 포함하나 이에 제한되지는 않는 통상적으로 공지된 이소형 중 임의의 것으로부터 유래될 수 있다. IgG 하위부류는 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코딩되는 Ab 부류 또는 하위부류 (예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다. 용어 "항체"는, 예로서, 자연 발생 및 비-자연 발생 Ab 둘 다; 모노클로날 및 폴리클로날 Ab; 키메라 및 인간화 Ab; 인간 또는 비인간 Ab; 완전 합성 Ab; 및 단일 쇄 Ab를 포함한다. 비인간 Ab는 인간에서 그의 면역원성을 감소시키기 위해 재조합 방법에 의해 인간화될 수 있다. 명백하게 언급되지 않는 한 및 문맥상 달리 나타내지 않는 한, 용어 "항체"는 또한 임의의 상기 언급된 이뮤노글로불린의 항원 결합 단편 또는 항원-결합 부분을 포함하고, 1가 및 2가 단편 또는 부분 및 단일 쇄 Ab를 포함한다.
"항원 결합 분자", "항원 결합 부분" 또는 "항체 단편"은 분자가 유래된 항체의 항원 결합 부분 (예를 들어, CDR)을 포함하는 임의의 분자를 지칭한다. 항원 결합 분자는 항원 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, dAb, 선형 항체, scFv 항체, 및 항원 결합 분자로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 펩티바디 (즉, 펩티드 결합 도메인을 포함하는 Fc 융합 분자)는 적합한 항원 결합 분자의 또 다른 예이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 종양 세포 상의 항원에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 과다증식성 질환에 수반되는 세포 상의 항원 또는 바이러스 또는 박테리아 항원에 결합한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 BCMA, CLL-1 또는 FLT3에 결합한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 분자는 CD19, CD20 또는 둘 다에 결합한다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 분자는 그의 상보성 결정 영역 (CDR) 중 1개 이상을 포함한, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 단편이다. 추가 실시양태에서, 항원 결합 분자는 단일 쇄 가변 단편 (scFv)이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 아비머를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
일부 경우에, CDR은 참조 항체 (예를 들어, 본 개시내용의 항체)에서 발견되는 것 및/또는 본 개시내용에 제공된 CDR의 서열과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, CDR은 참조 CDR (예를 들어, 본 개시내용에 제공된 CDR)과 비교하여 서열이 동일하거나 또는 1, 2, 3, 4 또는 5개 (예를 들어 1-5개)의 아미노산 치환을 함유한다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, CDR은 참조 CDR과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 서열 동일성을 나타낸다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, CDR은 참조 CDR과 적어도 96%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 나타낸다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, CDR은 CDR 내의 1개의 아미노산이 참조 CDR과 비교하여 결실, 부가 또는 치환되는 한편 CDR이 참조 CDR과 그 외 다른 것은 동일한 아미노산 서열을 갖는다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 일부 실시양태에서, CDR은 CDR 내의 2, 3, 4 또는 5개 (예를 들어, 2-5개)의 아미노산이 참조 CDR과 비교하여 결실, 부가 또는 치환되는 한편 CDR이 참조 CDR과 그 외 다른 것은 동일한 아미노산 서열을 갖는다는 점에서 참조 CDR과 실질적으로 동일하다. 다양한 실시양태에서, 항원 결합 단편은 참조 항체와 동일한 항원에 결합한다.
항원 결합 단편은 임의의 수단에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 무손상 항체의 단편화에 의해 효소적으로 또는 화학적으로 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 재조합적으로 (즉, 조작된 핵산 서열의 발현에 의해) 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 전체적으로 또는 부분적으로 합성적으로 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 단편은 적어도 약 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190개 아미노산 또는 그 초과; 일부 실시양태에서 적어도 약 200개 아미노산 (예를 들어, 50-100, 50-150, 50-200 또는 100-200개 아미노산)의 길이를 가질 수 있다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 상호교환가능하게 사용되고, 관련 기술분야에서 통상적이다. 가변 영역은 전형적으로 항체의 부분, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 부분, 전형적으로 성숙 중쇄에서 약 아미노-말단 110 내지 120개 아미노산 및 성숙 경쇄에서 약 90 내지 115개 아미노산을 지칭하며, 이는 항체마다 서열이 광범위하게 상이하고, 특정한 항체의 그의 특정한 항원에 대한 결합 및 특이성에 사용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 영역에 집중되는 반면, 가변 도메인 내의 보다 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 어떠한 특정한 메카니즘 또는 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 경쇄 및 중쇄의 CDR이 주로 항체의 항원과의 상호작용 및 특이성을 담당하는 것으로 여겨진다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역 (FR)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 가변 영역은 영장류 (예를 들어, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류 (예를 들어, 비-인간 영장류) 프레임워크 영역 (FR)을 포함한다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 경쇄 가변 영역을 지칭하는데 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 중쇄 가변 영역을 지칭하는데 상호교환가능하게 사용된다.
CDR의 수많은 정의가 통상적으로 사용되고 있다: 카바트 넘버링, 코티아 넘버링, AbM 넘버링 또는 접촉 넘버링. AbM 정의는 옥스포드 몰레큘라의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용되는 2개 사이의 절충안이다. 접촉 정의는 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석에 기초한다.
표 1. CDR 넘버링
Figure pct00001
용어 "카바트 넘버링" 등의 용어는 관련 기술분야에서 인식되고, 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 내의 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 지칭한다. 특정 측면에서, 항체의 CDR은 카바트 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). 카바트 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 중쇄 분자 내의 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35 (이는 임의로 35 다음에 1 또는 2개의 추가의 아미노산 (카바트 넘버링 스킴에서 35A 및 35B로 지칭됨)을 포함할 수 있음) (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65 (CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 존재한다. 카바트 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 경쇄 분자 내의 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34 (CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56 (CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97 (CDR3)에 존재한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 CDR은 카바트 넘버링 스킴에 따라 결정되었다.
특정 측면에서, 항체의 CDR은 이뮤노글로불린 구조적 루프의 위치를 지칭하는 코티아 넘버링 스킴에 따라 결정될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82]; 및 미국 특허 번호 7,709,226 참조). 전형적으로, 카바트 넘버링 규정을 사용하는 경우에, 코티아 CDR-H1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33 또는 34에 존재하고, 코티아 CDR-H2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56에 존재하고, 코티아 CDR-H3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102에 존재하는 한편 코티아 CDR-L1 루프는 경쇄 아미노산 24 내지 34에 존재하고, 코티아 CDR-L2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하고, 코티아 CDR-L3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97에 존재한다. 코티아 CDR-HI 루프의 말단은 카바트 넘버링 규정을 사용하여 넘버링하는 경우에, 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 달라진다 (이는 카바트 넘버링 스킴이 H35A 및 H35B에 삽입을 두기 때문이고; 35A도 존재하지 않고 35B도 존재하지 않으면, 루프는 32에서 종결되고; 35A만이 존재하면, 루프는 33에서 종결되고; 35A와 35B 둘 다가 존재하면, 루프는 34에서 종결됨). 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 CDR은 코티아 넘버링 스킴에 따라 결정되었다.
용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호교환가능하고, 관련 기술분야에서 통상적인 의미를 갖는다. 불변 영역은 항체 부분, 예를 들어 항체의 항원에 대한 결합에 직접 수반되지는 않지만 다양한 이펙터 기능, 예컨대 Fc 수용체와의 상호작용을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카르복실 말단 부분이다. 이뮤노글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 이뮤노글로불린 가변 도메인에 비해 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는다.
용어 "중쇄"는 항체와 관련하여 사용되는 경우에 IgG의 하위부류, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여, 각각 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 부류를 생성하는, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초한 임의의 별개의 유형, 예를 들어 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ) 및 뮤 (μ)를 지칭할 수 있다.
용어 "경쇄"는 항체와 관련하여 사용되는 경우에 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초한 임의의 별개의 유형, 예를 들어 카파 (κ) 또는 람다 (λ)를 지칭할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 구체적 실시양태에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
"결합 친화도"는 일반적으로, 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비-공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원 (예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (KD)로 나타내어질 수 있다. 친화도는 평형 해리 상수 (KD) 및 평형 회합 상수 (KA)를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 관련 기술분야에 공지된 다수의 방식으로 측정 및/또는 표현될 수 있다. KD는 koff/kon의 지수로부터 계산되는 반면, KA는 kon/koff의 지수로부터 계산된다. kon은, 예를 들어 항원에 대한 항체의 회합률 상수를 지칭하고, koff는, 예를 들어 항원에 대한 항체의 해리를 지칭한다. kon 및 koff는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술, 예컨대 비아코어(BIACORE)® 또는 키넥사(KinExA)에 의해 결정될 수 있다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 관련 기술분야에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄 (예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 분자의 CDR(들) 내 또는 프레임워크 영역(들) 내의 1개 이상의 아미노산 잔기는 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 일반적으로, 2개의 서열은 일반적으로 이들이 상응하는 위치에 보존적 아미노산 치환을 함유하는 경우에 "실질적으로 유사한" 것으로 간주된다. 예를 들어, 특정 아미노산은 일반적으로 "소수성" 또는 "친수성" 아미노산으로 및/또는 "극성" 또는 "비-극성" 측쇄를 갖는 것으로 분류된다. 한 아미노산의 동일한 유형의 또 다른 아미노산으로의 치환은 보존적 치환으로 간주될 수 있다. 예시적인 아미노산 카테고리화가 하기 표 2 및 3에 요약되어 있다:
표 2
Figure pct00002
표 3
Figure pct00003
용어 "이종"은 자연 발생 서열 이외의 다른 임의의 공급원으로부터의 것을 의미한다. 예를 들어, 서열식별번호: 232의 아미노산 서열을 갖는 공동자극 단백질, 예를 들어 상응하는 인간 공동자극 단백질의 일부로서 포함된 이종 서열은 자연 발생이 아닌, 즉 야생형 인간 공동자극 단백질과 정렬되지 않는 아미노산이다. 예를 들어, 이종 뉴클레오티드 서열은 야생형 인간 공동자극 단백질-코딩 서열의 것 이외의 다른 뉴클레오티드 서열을 지칭한다.
"에피토프"는 관련 기술분야의 용어이고, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국재화된 영역을 지칭한다. 에피토프는, 예를 들어 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나 (선형 또는 인접 에피토프), 또는 에피토프는, 예를 들어 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들의 2개 이상의 비-인접 영역으로부터 함께 모일 수 있다 (입체형태적, 비-선형, 불연속 또는 비-인접 에피토프). 특정 실시양태에서, 항체가 결합하는 에피토프는, 예를 들어 NMR 분광분석법, X선 회절 결정학 연구, ELISA 검정, 질량 분광측정법과 커플링된 수소/중수소 교환 (예를 들어, 액체 크로마토그래피 전기분무 질량 분광측정법), 어레이-기반 올리고-펩티드 스캐닝 검정 및/또는 돌연변이유발 맵핑 (예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. X선 결정학을 위해, 결정화는 관련 기술분야에 공지된 방법 중 임의의 것을 사용하여 달성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303]). 항체:항원 결정은 널리 공지된 X선 회절 기술을 사용하여 연구될 수 있고, 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 X-PLOR (예일 대학교, 1992년, 몰레큘라 시뮬레이션스, 인크.(Molecular Simulations, Inc.)에 의해 배포됨; 예를 들어 문헌 [Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.]; 미국 2004/0014194 참조), 및 BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323)을 사용하여 정밀화될 수 있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 기술을 포함한 돌연변이유발 기술의 설명에 대해 문헌 [Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 및 Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085]을 참조한다.
항원 결합 분자, 항체 또는 그의 항원 결합 분자는 항원과 제1 결합 분자, 항체 또는 그의 항원 결합 분자 사이의 상호작용이 참조 결합 분자, 참조 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 항원과 상호작용하는 능력을 차단, 제한, 억제 또는 달리 감소시키는 경우에 참조 항체 또는 그의 항원 결합 분자와 "교차-경쟁"한다. 교차 경쟁은 완전할 수 있고, 예를 들어 결합 분자의 항원에 대한 결합이 참조 결합 분자가 항원에 결합하는 능력을 완전히 차단하거나, 또는 교차 경쟁은 부분적일 수 있고, 예를 들어 결합 분자의 항원에 대한 결합이 참조 결합 분자가 항원에 결합하는 능력을 감소시킨다. 특정 실시양태에서, 참조 항원 결합 분자와 교차-경쟁하는 항원 결합 분자는 참조 항원 결합 분자와 동일한 또는 중첩되는 에피토프에 결합한다. 다른 실시양태에서, 참조 항원 결합 분자와 교차-경쟁하는 항원 결합 분자는 참조 항원 결합 분자와 상이한 에피토프에 결합한다. 수많은 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어 고체 상 직접 또는 간접 방사선면역검정 (RIA); 고체 상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA); 샌드위치 경쟁 검정 (Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253); 고체 상 직접 비오틴-아비딘 EIA (Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619); 고체 상 직접 표지된 검정, 고체 상 직접 표지된 샌드위치 검정 (Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press); I-125 표지를 사용하는 고체 상 직접 표지 RIA (Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15); 고체 상 직접 비오틴-아비딘 EIA (Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552); 및 직접 표지된 RIA (Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)를 사용하여 하나의 항원 결합 분자가 또 다른 것과 경쟁하는지 여부를 결정할 수 있다.
용어 "결합"은 일반적으로 2개 이상의 개체 사이의 또는 중에서의 비-공유 회합을 지칭한다. 직접 결합은 개체 또는 모이어티 사이의 물리적 접촉을 수반한다. "간접" 결합은 1개 이상의 중간 개체와의 물리적 접촉에 의한 물리적 상호작용을 수반한다. 2개 이상의 개체 사이의 결합은 임의의 다양한 맥락에서, 예를 들어 상호작용하는 개체 또는 모이어티가 단리되어 또는 보다 복잡한 시스템의 맥락에서 (예를 들어, 담체 개체와 공유적으로 또는 달리 회합되어 있는 동안 및/또는 생물학적 시스템, 예컨대 세포에서) 연구되는 경우에 평가될 수 있다.
용어 "면역특이적으로 결합한다", "면역특이적으로 인식한다", "특이적으로 결합한다" 및 "특이적으로 인식한다"는 항체의 맥락에서 유사한 용어이고, 항원 (예를 들어, 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는 분자를 지칭하며, 이러한 결합은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해된다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 일반적으로, 예를 들어 면역검정, 비아코어®, 키넥사 3000 기기 (사피다인 인스트루먼츠(Sapidyne Instruments), 아이다호주 보이스) 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 검정에 의해 결정시 보다 낮은 친화도로 다른 펩티드 또는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 분자가 또 다른 항원에 결합하는 경우의 KA보다 적어도 2 log, 2.5 log, 3 log, 4 log 또는 그 초과인 KA로 항원에 결합한다. 결합은 결합 모티프, 항체 또는 항원 결합 시스템과 표적이 아닌 (즉, 비-표적) 개체와의 회합과 비교하여 결합 모티프, 항체 또는 항원 결합 시스템과 결합 모티프, 항체 또는 항원 결합 시스템의 표적과의 우선적 회합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합 모티프, 항체 또는 항원 결합 시스템과 표적 사이의 결합이 결합 모티프, 항체 또는 항원 결합 시스템과 비-표적의 결합과 비교하여 2배 초과, 5배 초과, 10배 초과, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 초과인 경우에, 결합 모티프, 항체 또는 항원 결합 시스템은 표적에 선택적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 결합 모티프, 항체 또는 항원 결합 시스템은 결합 친화도가 약 10-5 M 미만, 약 10-6 M 미만, 약 10-7 M 미만, 약 10-8 M 미만 또는 약 10-9 M 미만인 경우에 표적에 선택적으로 결합한다.
또 다른 실시양태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 약 1 x 10-7 M의 해리 상수 (Kd)로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 Kd가 약 1 x 10-9 M 내지 약 5 x 10-9 M인 경우에 "고친화도"로 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 Kd가 1 x 10-10 M 내지 약 5 x 10-10 M인 경우에 "매우 고친화도"로 항원에 특이적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 분자는 10-9 M의 Kd를 갖는다. 한 실시양태에서, 오프-레이트는 약 1 x 10-5미만이다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 약 1 x 10-7 M 내지 약 1 x 10-13 M의 Kd로 인간 BCMA에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 약 1 x 10-10 M 내지 약 5 x 10-10 M의 Kd로 인간 BCMA에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자는 약 1 x 10-7 M 내지 약 1 x 10-13 M의 Kd로 인간 CD19, CD20 또는 둘 다에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자는 약 1 x 10-10 M 내지 약 5 x 10-10 M의 Kd로 인간 CD19, CD20 또는 둘 다에 결합한다.
구체적 실시양태에서, 표적 인간 항원, 예를 들어 인간 BCMA 또는 인간 CLL-1에, 또 다른 종의 표적 항원, 예를 들어 비-인간 BCMA 또는 비-인간 CLL-1에 대한 것보다 더 높은 친화도로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 CD19, 인간 CD20 또는 둘 다에, 또 다른 종의 하나 또는 둘 다의 표적 항원, 예를 들어 비-인간 CD19, 비-인간 CD20 또는 둘 다에 대한 것보다 더 높은 친화도로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, 표적 인간 항원, 예를 들어 인간 BCMA 또는 인간 CLL-1에, 예를 들어 방사선면역검정, 표면 플라즈몬 공명 또는 동역학적 배제 검정에 의해 측정시, 또 다른 종의 표적 항원에 대한 것보다 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 그 초과의 친화도로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, 인간 CD19, 인간 CD20 또는 둘 다에, 예를 들어 방사선면역검정, 표면 플라즈몬 공명 또는 동역학적 배제 검정에 의해 측정시, 또 다른 종의 하나 또는 둘 다의 표적 항원에 대한 것보다 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 그 초과의 친화도로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 분자가 본원에 제공된다. 구체적 실시양태에서, 표적 인간 항원에 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 분자는, 예를 들어 방사선면역검정, 표면 플라즈몬 공명 또는 동역학적 배제 검정에 의해 측정시, 항체 또는 그의 항원 결합 분자의 인간 항원에 대한 결합의 10%, 15% 또는 20% 미만으로 또 다른 종의 표적 항원에 결합할 것이다.
"키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"은 항원 결합시 결합 모티프 및 면역 세포 (예를 들어 T 세포, 예컨대 나이브 T 세포, 중심 기억 T 세포, 이펙터 기억 T 세포 또는 그의 조합)를 활성화시키는 수단을 포함하도록 조작된 분자를 지칭한다. CAR은 인공 T 세포 수용체, 키메라 T 세포 수용체 또는 키메라 면역수용체로도 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, CAR은 결합 모티프, 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 1개 이상의 공동-자극 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 키메라 항원 수용체를 발현하도록 유전자 조작된 T 세포는 CAR T 세포로 지칭될 수 있다. "세포외 도메인" (또는 "ECD")은 폴리펩티드가 세포 막에 존재하는 경우에 세포외 공간에서 세포 막의 외부에 존재하는 것으로 이해되는 폴리펩티드의 부분을 지칭한다.
"항원"은 면역 반응을 촉발하거나 또는 항체 또는 항원 결합 분자가 결합할 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 면역 반응은 항체 생산, 또는 특이적 면역학적-적격 세포의 활성화, 또는 둘 다를 수반할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 실질적으로 모든 단백질 또는 펩티드를 포함한 임의의 거대분자가 항원으로서의 역할을 할 수 있다는 것을 용이하게 이해할 것이다. 항원은 내인성으로 발현될 수 있고, 즉 게놈 DNA에 의해 발현될 수 있거나, 또는 재조합적으로 발현될 수 있다. 항원은 특정 조직, 예컨대 암 세포에 특이적일 수 있거나, 또는 광범위하게 발현될 수 있다. 추가로, 보다 큰 분자의 단편이 항원으로서 작용할 수 있다. 한 실시양태에서, 항원은 종양 항원이다. 하나의 특정한 실시양태에서, 항원은 CD19 또는 CD20의 모두 또는 단편이다. "표적"은 결합 모티프, 항원 결합 시스템 또는 결합제, 예를 들어 항체에 의해 결합되는 임의의 분자이다. 일부 실시양태에서, 표적은 본 개시내용의 항원 또는 에피토프이다.
용어 "중화"는 리간드에 결합하여 그러한 리간드의 생물학적 효과를 방지하거나 감소시키는 항원 결합 분자, scFv, 항체 또는 그의 단편을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체 또는 그의 단편은 리간드 상의 결합 부위를 직접 차단하거나 또는 달리 간접 수단 (리간드의 구조적 또는 에너지적 변경)을 통해 리간드의 결합 능력을 변경시킨다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 분자, scFv, 항체 또는 그의 단편은 그것이 결합하는 단백질이 생물학적 기능을 수행하는 것을 방지한다.
용어 "자가"는 나중에 재-도입될 동일한 개체로부터 유래된 임의의 물질을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 기재된 조작된 자가 세포 요법 (eACT™) 방법은 환자로부터 림프구를 수집한 다음, 이를 예를 들어 CAR 구축물을 발현하도록 조작한 후, 동일한 환자에게 다시 투여하는 것을 수반한다.
용어 "동종"은 한 개체로부터 유래된 다음 동일한 종의 또 다른 개체에게 도입되는 임의의 물질, 예를 들어 동종 T 세포 이식을 지칭한다.
용어 "형질도입" 및 "형질도입된"은 외래 DNA가 바이러스 벡터를 통해 세포 내로 도입되는 과정을 지칭한다 (문헌 [Jones et al., "Genetics: principles and analysis," Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)] 참조). 일부 실시양태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터, DNA 벡터, RNA 벡터, 아데노바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 엡스타인 바르 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터, 아데노바이러스 연관 벡터, 렌티바이러스 벡터 또는 그의 임의의 조합이다.
"형질전환"은 외인성 DNA가 숙주 세포 내로 도입되는 임의의 과정을 지칭한다. 형질전환은 다양한 방법을 사용하여 천연 또는 인공 조건 하에 이루어질 수 있다. 형질전환은 외래 핵산 서열을 원핵 또는 진핵 숙주 세포 내로 삽입하기 위한 임의의 공지된 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 일부 형질전환 방법론은 형질전환될 숙주 세포 및/또는 삽입될 핵산에 기초하여 선택된다. 형질전환 방법은 바이러스 감염, 전기천공 및 리포펙션을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, "형질전환된" 세포는, 삽입된 DNA가 자율 복제 플라스미드로서 또는 숙주 염색체의 일부로서 복제할 수 있다는 점에서, 안정하게 형질전환된다. 일부 실시양태에서, 형질전환된 세포는 도입된 핵산을 발현할 수 있다.
용어 "벡터"는 제공된 핵산 서열을 포함하거나 혼입시키도록 변형된 수용자 핵산 분자를 지칭한다. 한 유형의 벡터는 추가의 DNA가 라이게이션될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 분자를 지칭하는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가의 DNA 절편은 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입된 숙주 세포에서 자율 복제할 수 있다 (예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터 (예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로의 도입시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있고, 이에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 삽입된 유전자의 발현을 지시하는 서열을 포함한다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 지칭될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))] (이는 임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함됨)에서 발견되는 바와 같은 표준 기술이 벡터의 조작에 사용될 수 있다.
"암"은 신체 내 비정상적 세포의 비제어된 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 군을 지칭한다. 비조절된 세포 분열 및 성장은 이웃 조직을 침습하는 악성 종양의 형성을 유발하고, 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 원위 부분으로 전이할 수 있다. "암" 또는 "암 조직"은 종양을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 방법에 의해 치료될 수 있는 암의 예는 면역계의 암, 예컨대 림프종, 백혈병, 골수종 및 다른 백혈구 악성종양을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 방법은, 예를 들어 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 고환암, 자궁암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 다발성 골수종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (NHL), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 형질전환 여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 만성 또는 급성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 소아기 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피양암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 것을 포함한 환경적으로 유발된 암, 다른 B 세포 악성종양 및 상기 암의 조합으로부터 유래된 종양의 종양 크기를 감소시키는데 사용될 수 있다. 하나의 특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 특정한 암은 화학- 또는 방사선 요법에 반응성일 수 있거나 또는 암은 불응성일 수 있다. 불응성 암은 외과적 개입으로 수정될 수 없는 암을 지칭하고, 이러한 암은 처음부터 화학- 또는 방사선 요법에 비반응성이거나 또는 암이 시간 경과에 따라 비반응성이게 된다. 암은 2차 이상의 전신 요법 후의 재발성 또는 불응성 대 B-세포 림프종, 예컨대 상세불명의 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 2차 이상의 전신 요법 후의 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종 및 여포성 림프종으로부터 발생하는 DLBCL을 추가로 포함한다.
본원에 사용된 "항종양 효과"는 종양 부피의 감소, 종양 세포 수의 감소, 종양 세포 증식의 감소, 전이 수의 감소, 전체 또는 무진행 생존의 증가, 기대 수명의 증가, 또는 종양과 연관된 다양한 생리학적 증상의 호전으로서 나타날 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. 항종양 효과는 또한 종양 발생의 예방, 예를 들어 백신을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 "시토카인"은 특이적 항원과의 접촉에 반응하여 한 세포가 방출하는 비-항체 단백질을 지칭하며, 여기서 시토카인은 제2 세포와 상호작용하여 제2 세포에서의 반응을 매개한다. 시토카인은 세포에 의해 내인성으로 발현될 수 있거나, 또는 대상체에게 투여될 수 있다. 시토카인은 대식세포, B 세포, T 세포 및 비만 세포를 포함한 면역 세포에 의해 방출되어 면역 반응을 전파할 수 있다. 시토카인은 수용자 세포에서 다양한 반응울 유도할 수 있다. 시토카인은 항상성 시토카인, 케모카인, 염증유발 시토카인, 이펙터 및 급성기 단백질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인터류킨 (IL) 7 및 IL-15를 포함한 항상성 시토카인은 면역 세포 생존 및 증식을 촉진하고, 염증유발 시토카인은 염증 반응을 촉진할 수 있다. 항상성 시토카인의 예는 IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12p40, IL-12p70, IL-15 및 인터페론 (IFN) 감마를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 염증유발 시토카인의 예는 IL-1a, IL-1b, IL-6, IL-13, IL-17a, 종양 괴사 인자 (TNF)-알파, TNF-베타, 섬유모세포 성장 인자 (FGF) 2, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자 (GM-CSF), 가용성 세포간 부착 분자 1 (sICAM-1), 가용성 혈관 부착 분자 1 (sVCAM-1), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), VEGF-C, VEGF-D 및 태반 성장 인자 (PLGF)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이펙터의 예는 그랜자임 A, 그랜자임 B, 가용성 Fas 리간드 (sFasL) 및 퍼포린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 급성기-단백질의 예는 C-반응성 단백질 (CRP) 및 혈청 아밀로이드 A (SAA)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"케모카인"은 세포 화학주성 또는 지향성 이동을 매개하는 시토카인 유형이다. 케모카인의 예는 IL-8, IL-16, 에오탁신, 에오탁신-3, 대식세포-유래 케모카인 (MDC 또는 CCL22), 단핵구 화학주성 단백질 1 (MCP-1 또는 CCL2), MCP-4, 대식세포 염증성 단백질 1α (MIP-1α, MIP-1a), MIP-1β (MIP-1b), 감마-유도된 단백질 10 (IP-10), 및 흉선 및 활성화 조절 케모카인 (TARC 또는 CCL17)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
치료제, 예를 들어 조작된 CAR T 세포의 "치료 유효량", "유효 용량", "유효량" 또는 "치료 유효 투여량"은 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합되어 사용되는 경우에, 대상체를 질환 발병으로부터 보호하거나, 또는 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 또는 지속기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 방지에 의해 입증되는 질환 퇴행을 촉진하는 임의의 양이다. 질환 퇴행을 촉진시키는 치료제의 능력은 숙련된 진료의에게 공지된 다양한 방법을 사용하여, 예컨대 임상 시험 동안 인간 대상체에게서, 인간에서의 효능을 예측해 주는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관내 검정에서 작용제의 활성을 검정함으로써 평가될 수 있다.
용어 "림프구"는 자연 킬러 (NK) 세포, T 세포 또는 B 세포를 포함한다. NK 세포는 선천성 면역계의 주요 성분을 나타내는 세포독성 (세포 독성) 림프구 유형이다. NK 세포는 종양 및 바이러스에 감염된 세포를 거부한다. 이는 아폽토시스 또는 프로그램화된 세포 사멸의 과정을 통해 작동한다. 이들은 세포를 사멸시키기 위해 활성화를 요구하지 않기 때문에 "자연 킬러"로 지칭된다. T-세포는 세포-매개-면역 (어떠한 항체도 수반되지 않음)에서 주요 역할을 한다. 그의 T-세포 수용체 (TCR)가 이들을 다른 림프구 유형과 구별한다. 면역계의 특수 기관인 흉선은 T 세포의 성숙을 주로 담당한다. 6가지 유형의 T-세포, 즉 헬퍼 T-세포 (예를 들어, CD4+ 세포), 세포독성 T-세포 (TC, 세포독성 T 림프구, CTL, T-킬러 세포, 세포용해 T 세포, CD8+ T-세포 또는 킬러 T 세포로도 공지됨), 기억 T-세포 ((i) 줄기 기억 TSCM 세포, 예컨대 나이브 세포는 CD45RO-, CCR7+, CD45RA+, CD62L+ (L-셀렉틴), CD27+, CD28+ 및 IL-7Rα+이지만, 이들은 또한 다량의 CD95, IL-2Rβ, CXCR3 및 LFA-1을 발현하고, 기억 세포에 특징적인 수많은 기능적 속성을 나타냄; (ii) 중심 기억 TCM 세포는 L-셀렉틴 및 CCR7을 발현하고, 이들은 IL-2를 분비하지만, IFNγ 또는 IL-4는 분비하지 않음, 및 (iii) 그러나, 이펙터 기억 TEM 세포는 L-셀렉틴 또는 CCR7을 발현하지 않지만, 이펙터 시토카인, 예컨대 IFNγ 및 IL-4를 생산함), 조절 T-세포 (Treg, 억제 T 세포 또는 CD4+CD25+ 조절 T 세포), 자연 킬러 T-세포 (NKT) 및 감마 델타 T-세포가 존재한다. 다른 한편으로, B-세포는 체액성 면역 (항체가 수반됨)에서 주요한 역할을 한다. 이는 항체 및 항원을 만들고, 항원-제시 세포 (APC)의 역할을 수행하며, 항원 상호작용에 의한 활성화 후에 기억 B-세포로 변한다. 포유동물에서, 미성숙 B-세포는 그의 명칭이 유래된 골수에서 형성된다.
"링커" (L) 또는 "링커 도메인" 또는 "링커 영역"은 본 발명의 CAR의 임의의 도메인/영역을 함께 연결하는, 약 1 내지 100개 아미노산 길이인 올리고- 또는 폴리펩티드 영역을 지칭한다. 링커는 인접한 단백질 도메인이 서로에 대해 자유롭게 이동하도록 글리신 및 세린과 같은 가요성 잔기로 구성될 수 있다. 2개의 인접한 도메인이 서로 입체적으로 간섭하지 않도록 보장하는 것이 바람직한 경우에 보다 긴 링커가 사용될 수 있다. 링커는 절단가능 또는 비-절단가능할 수 있다. 절단가능한 링커의 예는 2A 링커 (예를 들어 T2A), 2A-유사 링커 또는 그의 기능적 등가물 및 그의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커는 피코르나바이러스 2A-유사 링커, 돼지 테스코바이러스 (P2A)의 CHYSEL 서열, 바이러스 (T2A) 또는 그의 조합, 변이체 및 기능적 등가물을 포함한다. 다른 실시양태에서, 링커 서열은 Asp-Val/Ile-Glu-X-Asn-Pro-Gly.(2A)-Pro.(2B) 모티프 (서열식별번호: 314)를 포함할 수 있으며, 이는 2A 글리신과 2B 프롤린 사이의 절단을 유발한다. 다른 링커는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이고, 본 발명의 대안적 실시양태와 관련하여 사용될 수 있다. 예로서, 일부 예에서, 링커는 상이한 항원 결합 시스템, 예컨대 비시스트론 CAR의 2종의 CAR을 연결 또는 연관시키는데 사용될 수 있다. 링커는 상이한 요소를 서로 연결하는 다중-요소 작용제의 부분일 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 2개 이상의 기능적 또는 구조적 도메인을 포함하고, 이러한 도메인들 사이에 이들을 서로 연결하는 아미노산의 스트레치를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커 요소를 포함하는 폴리펩티드는 일반적 형태 S1-L-S2의 전체 구조를 가지며, 여기서 S1 및 S2는 동일하거나 상이할 수 있고, 링커에 의해 서로 연결된 2개의 도메인을 나타낸다. 링커는 본 개시내용의 CAR의 임의의 도메인/영역을 함께 연결 또는 연관시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100개 또는 그 초과의 아미노산 길이 (예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 20, 1 내지 30, 1 내지 40, 1 내지 50, 1 내지 60, 1 내지 70, 1 내지 80, 1 내지 90, 1 내지 100, 10 내지 20, 10 내지 30, 10 내지 40, 10 내지 50, 10 내지 60, 10 내지 70, 10 내지 80, 10 내지 90 또는 10 내지 100개의 아미노산 길이)이다. 일부 실시양태에서, 링커는 강성 3차원 구조를 채택하지 않는 경향이 있고, 대신 폴리펩티드에 가요성을 제공하는 것을 특징으로 한다.
"단일 쇄 가변 단편", "단일-쇄 항체 가변 단편" 또는 "scFv" 항체는 링커 펩티드에 의해 연결된 중쇄 및 경쇄의 가변 영역만을 포함하는 항체 형태를 지칭한다.
용어 "유전자 조작된" 또는 "조작된"은 코딩 또는 비-코딩 영역 또는 그의 부분을 결실시키거나 또는 코딩 영역 또는 그의 부분을 삽입하는 것을 포함하나 이에 제한되지 않는 세포의 게놈을 변형시키는 방법을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변형되는 세포는 림프구, 예를 들어 T 세포이며, 이는 환자 또는 공여자로부터 수득될 수 있다. 세포는 세포의 게놈 내로 혼입되는 외인성 구축물, 예컨대, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하도록 변형될 수 있다. 조작은 일반적으로 인간의 손에 의한 조작을 포함한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 자연에서 그 순서로 함께 연관 또는 연결되지 않는 2개 이상의 서열이 인간의 손에 의해 조작되어 조작된 폴리뉴클레오티드로 서로 직접 연관 또는 연결되는 경우에 "조작된" 것으로 간주된다. 분자 생물학 기술에 의한 세포의 조작과 관련하여, 세포 또는 유기체는 그의 유전자 정보가 변경되도록 조작된 경우에 (예를 들어, 이전에 존재하지 않았던 새로운 유전자 물질이, 예를 들어 형질전환, 체세포 혼성화, 형질감염, 형질도입 또는 다른 메카니즘에 의해 도입되었거나, 또는 이전에 존재하는 유전자 물질이, 예를 들어 치환 또는 결실 돌연변이에 의해 또는 다른 프로토콜에 의해 변경 또는 제거된 경우에) "조작된" 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 결합제는 변형된 림프구, 예를 들어 T 세포이며, 이는 환자 또는 공여자로부터 수득될 수 있다. 조작된 세포는 세포의 게놈 내로 혼입되는 외인성 구축물, 예컨대, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하도록 변형될 수 있다. 조작된 폴리뉴클레오티드 또는 결합제의 자손은 실제 조작이 선행 개체에 대해 수행되더라도 일반적으로 "조작된" 것으로 지칭된다. 일부 실시양태에서, "조작된"은 설계되고 생산된 개체를 지칭한다. 용어 "설계된"은 (i) 구조가 인간의 손에 의해 선택되거나 또는 선택되었고/거나; (ii) 인간의 손을 요구하는 과정에 의해 생산되고/거나; (iii) 천연 물질 및 다른 공지된 작용제와 구별되는 작용제를 지칭한다. "T 세포 수용체" 또는 "TCR"은 T-세포의 표면 상에 존재하는 항원-인식 분자를 지칭한다. 정상 T-세포 발생 동안, 4종의 TCR 유전자, α, β, γ 및 δ 각각은 재배열되어 고도로 다양한 TCR 단백질을 생성할 수 있다.
"면역 반응"은 침입 병원체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 암성 또는 다른 비정상적 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우에는 정상 인간 세포 또는 조직을 선택적으로 표적화하고/거나, 이들에 결합하고/거나, 이들에 손상을 가하고/거나, 이들을 파괴시키고/거나, 이들을 척추동물의 신체로부터 제거하는, 면역계 세포 (예를 들어, T 림프구, B 림프구, 자연 킬러 (NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 및 호중구) 및 이들 중 임의의 세포 또는 간에 의해 생산된 가용성 거대분자 (Ab, 시토카인 및 보체 포함)의 작용을 지칭한다.
용어 "면역요법"은 면역 반응을 유도하거나, 증진시키거나, 억제하거나 또는 달리 변형시키는 것을 포함한 방법에 의한, 질환을 앓거나 또는 질환에 걸릴 위험이 있거나 질환의 재발을 앓을 위험이 있는 대상체의 치료를 지칭한다. 면역요법의 예는 T 세포 요법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. T 세포 요법은 입양 T 세포 요법, 종양-침윤 림프구 (TIL) 면역요법, 자가 세포 요법, 조작된 자가 세포 요법 (eACT™) 및 동종 T 세포 이식을 포함할 수 있다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 조건화 방법이 임의의 이식된 T 세포 요법의 유효성을 증진시킬 것임을 인식할 것이다. T 세포 요법의 예는 미국 특허 공개 번호 2014/0154228 및 2002/0006409, 미국 특허 번호 5,728,388 및 국제 공개 번호 WO 2008/081035에 기재되어 있다.
면역요법의 T 세포는 관련 기술분야에 공지된 임의의 공급원으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, T 세포는 조혈 줄기 세포 집단으로부터 시험관내 분화될 수 있거나, 또는 T 세포는 대상체로부터 수득될 수 있다. T 세포는, 예를 들어 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직 및 종양으로부터 수득될 수 있다. 추가로, T 세포는 관련 기술분야에서 이용가능한 1종 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수의 기술, 예컨대 피콜(FICOLL)™ 분리 및/또는 분리반출술을 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. T 세포 요법을 위해 T 세포를 단리하는 추가의 방법은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748에 개시되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
"eACT™"로 약칭될 수 있고 입양 세포 전달로도 공지되어 있는 용어 "조작된 자가 세포 요법"은 환자 자신의 T 세포를 수집하고, 후속적으로 1종 이상의 특이적 종양 세포 또는 악성종양의 세포 표면에서 발현된 1종 이상의 항원을 인식하고 표적화하도록 이를 유전자 변경시키는 방법이다. T 세포는, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 발현하도록 조작될 수 있다. CAR 양성 (+) T 세포는 적어도 1개의 공동자극 도메인 및 적어도 1개의 활성화 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 부분에 연결된, 특정한 종양 항원에 대한 특이성을 갖는 세포외 단일 쇄 가변 단편 (scFv)을 발현하도록 조작된다. 공동자극 도메인은, 예를 들어 서열식별번호: 232의 아미노산 서열을 갖는 자연-발생 공동자극 도메인 또는 그의 변이체, 예를 들어 말단절단된 힌지 도메인 ("THD")을 갖는 변이체로부터 유래될 수 있고, 활성화 도메인은, 예를 들어 CD3-제타로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, CAR은 2, 3, 4개 또는 그 초과의 공동자극 도메인을 갖도록 설계된다. CAR scFv는, 예를 들어 모든 정상 B 세포, 및 NHL, CLL 및 비-T 세포 ALL을 포함하나 이에 제한되지는 않는 B 세포 악성종양을 포함한, B 세포 계통의 세포에 의해 발현되는 막횡단 단백질인 CD19를 표적화하도록 설계될 수 있다. 일부 실시양태에서, CAR은 공동자극 도메인이 개별 폴리펩티드 쇄로서 발현되도록 조작된다. 예시적인 CAR T 세포 요법 및 구축물은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748, 2014/0227237, 2014/0099309 및 2014/0050708에 기재되어 있고, 이들 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다. "입양 세포 요법" 또는 "ACT"는 항종양 활성을 갖는 면역 세포를 대상체, 예를 들어 암 환자 내로 전달하는 것을 수반한다. 일부 실시양태에서, ACT는 항종양 활성을 갖는 림프구 (예를 들어, 조작된 림프구)의 사용을 수반하는 치료 접근법이다.
"환자"는 암 (예를 들어, 림프종 또는 백혈병)을 앓는 임의의 인간을 포함한다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "시험관내"는 다세포 유기체 내에서보다는 인공 환경에서, 예를 들어 시험 튜브, 반응 용기, 세포 배양물 등에서 발생하는 사건을 지칭한다. 용어 "시험관내 세포"는 생체외 배양되는 임의의 세포를 지칭한다. 특히, 시험관내 세포는 T 세포를 포함할 수 있다. 용어 "생체내"는 다세포 유기체, 예컨대 인간 또는 비-인간 동물 내에서 발생하는 사건을 지칭한다.
"항원-특이적 표적화 영역" (ASTR)은 특이적 항원을 표적화하는 CAR의 영역을 지칭한다. 본 발명의 CAR은 적어도 2종의 상이한 항원을 표적화하는 적어도 2개의 표적화 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, CAR은 적어도 3종 이상의 상이한 항원을 표적화하는 3개 이상의 표적화 영역을 포함한다. CAR 상의 표적화 영역은 세포외이다. 일부 실시양태에서, 항원-특이적 표적화 영역은 항체 또는 그의 기능적 등가물 또는 그의 단편 또는 그의 유도체를 포함하고, 각각의 표적화 영역은 상이한 항원을 표적화한다. 표적화 영역은 각각 표적 항원에 특이적인 전장 중쇄, Fab 단편, 단일 쇄 Fv (scFv) 단편, 2가 단일 쇄 항체 또는 디아바디를 포함할 수 있다. 그러나, 수많은 대안, 예컨대 연관된 시토카인 (이는 시토카인 수용체를 보유하는 세포의 인식으로 이어짐), 아피바디, 자연 발생 수용체로부터의 리간드 결합 도메인, 수용체 (예를 들어 종양 세포 상)에 대한 가용성 단백질/펩티드 리간드, 펩티드, 및 면역 반응을 촉발하는 백신이 존재하며, 이들은 각각 본 발명의 다양한 실시양태에서 사용될 수 있다. 실제로, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 주어진 항원에 고친화도로 결합하는 거의 모든 분자가 항원-특이적 표적화 영역으로서 사용될 수 있다.
"항원 제시 세포" 또는 "APC"는 항원을 프로세싱하여 T-세포에 제시하는 세포를 지칭한다. 예시적인 APC는 수지상 세포, 대식세포, B 세포, 특정 활성화된 상피 세포, 및 TCR 자극 및 적절한 T 세포 공동자극이 가능한 다른 세포 유형을 포함한다.
용어 "펩티드", "폴리펩티드" 및 "단백질"은 상호교환가능하게 사용되고, 펩티드 결합에 의해 공유 연결된 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 지칭한다. 단백질 또는 펩티드는 적어도 2개의 아미노산을 함유하고, 단백질 또는 펩티드 서열을 구성할 수 있는 아미노산의 최대 수에 대한 어떠한 제한도 존재하지 않는다. 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩티드 또는 단백질을 포함한다. 본원에 사용된 상기 용어는, 예를 들어 관련 기술분야에서 통상적으로 펩티드, 올리고펩티드 및 올리고머로도 지칭되는 단쇄, 및 관련 기술분야에서 일반적으로 많은 유형이 존재하는 단백질로 지칭되는 장쇄 둘 다를 지칭한다. "폴리펩티드"는 특히, 예를 들어 생물학적 활성 단편, 실질적으로 상동인 폴리펩티드, 올리고펩티드, 동종이량체, 이종이량체, 폴리펩티드의 변이체, 변형된 폴리펩티드, 유도체, 유사체, 융합 단백질을 포함한다. 폴리펩티드는 천연 펩티드, 재조합 펩티드, 합성 펩티드 또는 그의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 "자극"은 자극 분자와 그의 동족 리간드의 결합에 의해 유도되는 1차 반응을 지칭하며, 여기서 결합은 신호 전달 사건을 매개한다. "자극 분자"는 항원 제시 세포 상에 존재하는 동족 자극 리간드와 특이적으로 결합하는 T 세포 상의 분자, 예를 들어 T 세포 수용체 (TCR)/CD3 복합체이다. "자극 리간드"는 항원 제시 세포 (예를 들어, APC, 수지상 세포, B-세포 등) 상에 존재하는 경우에 T 세포 상의 자극 분자와 특이적으로 결합함으로써, 활성화, 면역 반응의 개시, 증식 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T 세포에 의한 1차 반응을 매개할 수 있는 리간드이다. 자극 리간드는 항-CD3 항체 (예컨대 OKT3), 펩티드가 로딩된 MHC 부류 I 분자, 초효능제 항-CD2 항체 및 초효능제 항-CD28 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "공동자극 신호"는 1차 신호, 예컨대 TCR/CD3 라이게이션과 조합되어, T 세포 반응, 예컨대 비제한적으로 증식 및/또는 핵심 분자의 상향조절 또는 하향조절로 이어지는 신호를 지칭한다.
본원에 사용된 "공동자극 리간드"는 T 세포 상의 동족 공동-자극 분자에 특이적으로 결합하는 항원 제시 세포 상의 분자를 포함한다. 공동자극 리간드의 결합은 증식, 활성화, 분화 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T 세포 반응을 매개하는 신호를 제공한다. 공동자극 리간드는 자극 분자에 의해, 예를 들어 T 세포 수용체 (TCR)/CD3 복합체와 펩티드가 로딩된 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자의 결합에 의해 제공되는 1차 신호에 추가로 신호를 유도한다. 공동-자극 리간드는 3/TR6, 4-1BB 리간드, 톨 리간드 수용체에 결합하는 효능제 또는 항체, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), CD30 리간드, CD40, CD7, CD70, CD83, 포진 바이러스 진입 매개체 (HVEM), 인간 백혈구 항원 G (HLA-G), ILT4, 이뮤노글로불린-유사 전사체 (ILT) 3, 유도성 공동자극 리간드 (ICOS-L), 세포간 부착 분자 (ICAM), B7-H3과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프독소 베타 수용체, MHC 부류 I 쇄-관련 단백질 A (MICA), MHC 부류 I 쇄-관련 단백질 B (MICB), OX40 리간드, PD-L2 또는 프로그램화된 사멸 (PD) L1을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 공동-자극 리간드는, 비제한적으로 T 세포 상에 존재하는 공동-자극 분자, 예컨대 비제한적으로 4-1BB, B7-H3, CD2, CD27, CD28, CD30, CD40, CD7, ICOS, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1), 자연 킬러 세포 수용체 C (NKG2C), OX40, PD-1, 또는 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14 (TNFSF14 또는 LIGHT)와 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
"공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합함으로써 T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대 비제한적으로 증식을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너이다. "공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합함으로써 T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대 비제한적으로 증식을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너이다. 공동자극 분자는 4-1BB/CD137, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD 33, CD 45, CD100 (SEMA4D), CD103, CD134, CD137, CD154, CD16, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD22, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 (알파; 베타; 델타; 엡실론; 감마; 제타), CD30, CD37, CD4, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD5, CD64, CD69, CD7, CD80, CD83 리간드, CD84, CD86, CD8알파, CD8베타, CD9, CD96 (Tactile), CDl-la, CDl-lb, CDl-lc, CDl-ld, CDS, CEACAM1, CRT AM, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, ICOS, Ig 알파 (CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, LIGHT, LIGHT (종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1 (CDl la/CD18), MHC 부류 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX40, PAG/Cbp, PD-1, PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자, SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF, TNFr, TNFR2, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물 또는 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
용어 "감소시키는" 및 "저하시키는"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 원래의 것보다 더 낮은 임의의 변화를 나타낸다. "감소시키는" 및 "저하시키는"은 이전-측정치와 이후-측정치 사이의 비교가 요구되는 상대적 용어이다. "감소시키는" 및 "저하시키는"은 완전한 고갈을 포함한다.
용어 "개선시키다", "증가시키다", "억제하다" 및 "감소시키다"는 기준선 또는 다른 참조 측정치에 비교한 값을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 적절한 참조 측정치는 작용제 또는 치료가 부재하되 (예를 들어, 그 전 및/또는 그 후) 다른 것은 대등한 조건 하에, 또는 적절한 대등한 참조 작용제의 존재 하에 특정 시스템에서의 (예를 들어, 단일 개체에서의) 측정치를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 적절한 참조 측정치는 관련 작용제 또는 치료의 존재 하에 대등한 방식으로 반응하는 것으로 공지되거나 예상되는 대등한 시스템에서의 측정치를 포함할 수 있다.
대상체의 "치료" 또는 "치료하는"은 증상, 합병증 또는 상태의 발병, 진행, 발달, 중증도 또는 재발, 또는 질환과 연관된 생화학적 지표를 역전시키거나, 완화시키거나, 호전시키거나, 억제하거나, 느리게 하거나 또는 방지할 목적으로 대상체에 대해 수행되는 임의의 유형의 개입 또는 과정 또는 대상체에 대한 활성제의 투여를 지칭한다. 한 실시양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 부분 완화를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 완전 완화를 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료는 관련 질환, 장애 및/또는 상태의 징후를 나타내지 않는 대상체 및/또는 질환, 장애 및/또는 상태의 초기 징후만을 나타내는 대상체의 치료일 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 치료는 관련 질환, 장애 및/또는 상태의 1종 이상의 확립된 징후를 나타내는 대상체의 치료일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료는 관련 질환, 장애 및/또는 상태를 앓고 있는 것으로 진단된 대상체의 치료일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료는 관련 질환, 장애 및/또는 상태의 발달의 증가된 위험과 통계적으로 상관관계가 있는 1종 이상의 감수성 인자를 갖는 것으로 공지된 대상체의 치료일 수 있다.
용어 "작용제"는, 예를 들어 폴리펩티드, 핵산, 사카라이드, 지질, 소분자, 금속, 세포 또는 유기체 (예를 들어, 그의 분획 또는 추출물) 또는 그의 성분일 수 있는 임의의 부류의 분자 또는 개체 또는 복수의 분자 또는 개체를 지칭할 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용제는 단리된 형태 또는 순수한 형태로 이용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용제는 조물질 형태 또는 불순한 형태로 이용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용제는, 예를 들어 그 안에 존재하는 구성원을 확인하거나 특징화하기 위해 스크리닝될 수 있는 집단, 수집물 또는 라이브러리로서 제공될 수 있다.
2개의 사건 또는 개체는 하나의 존재, 수준 및/또는 형태가 다른 것의 경우와 상관관계가 있는 경우에 서로 "연관"된다. 예를 들어, 개체 (예를 들어, 폴리펩티드, 유전자 시그너쳐, 대사 생성물, 미생물 등)는 그의 존재, 수준 및/또는 형태가 질환, 장애 또는 상태 (예를 들어, 관련 집단에 걸친)의 발생률 및/또는 그에 대한 감수성과 상관관계가 있는 경우에, 이러한 질환, 장애 또는 상태와 연관된 것으로 간주된다. 예를 들어, 2개 이상의 개체는, 이들이 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하여 이들이 서로 물리적으로 근접한 (예를 들어, 결합한) 채로 존재하고/거나 유지되는 경우에 서로 물리적으로 "회합"된다. 추가의 예에서, 서로 물리적으로 회합된 2개 이상의 개체는 서로 공유 연결 또는 연관되거나, 또는 예를 들어 수소 결합, 반 데르 발스 상호작용, 소수성 상호작용, 자성 및 그의 조합에 의해 비-공유 회합된다.
용어 "동일성"은 중합체 분자, 예를 들어 핵산 분자 (예를 들어, DNA 분자 및/또는 RNA 분자) 및/또는 폴리펩티드 분자 사이의 전체 관련성을 지칭한다. 2개의 제공된 폴리펩티드 서열 사이의 퍼센트 동일성의 계산 방법은 공지되어 있다. 2개의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 퍼센트 동일성의 계산은, 예를 들어 최적 비교 목적을 위해 2개의 서열을 정렬함으로써 수행될 수 있다 (예를 들어, 갭이 최적 정렬을 위해 제1 및 제2 서열 중 하나 또는 둘 다에 도입될 수 있고, 동일하지 않은 서열은 비교 목적을 위해 무시될 수 있음). 이어서, 상응하는 위치에서의 뉴클레오티드 또는 아미노산이 비교된다. 제1 서열 내의 한 위치가 제2 서열 내의 상응하는 위치와 동일한 잔기 (예를 들어, 뉴클레오티드 또는 아미노산)에 의해 점유되는 경우에, 분자는 그 위치에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 퍼센트 동일성은, 임의로 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있을 수 있는 갭의 수 및 각각의 갭의 길이를 고려하여, 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다. 서열의 비교 또는 정렬 및 2개의 서열 사이의 퍼센트 동일성의 결정은 수학적 알고리즘, 예컨대 BLAST (베이직 로컬 얼라인먼트 서치 툴)를 사용하여 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 중합체 분자는 그의 서열이 적어도 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 경우에 서로 "상동"인 것으로 간주된다.
퍼센트 동일성을 계산하기 위해, 비교될 서열은 전형적으로 서열 사이의 최대 매치를 제공하는 방식으로 정렬된다. 퍼센트 동일성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 컴퓨터 프로그램의 한 예는 GCG 프로그램 패키지이며, 이는 GAP (Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387; 위스콘신주 매디슨 소재 위스콘신 대학교 제네틱스 컴퓨터 그룹)를 포함한다. 컴퓨터 알고리즘 GAP는 퍼센트 서열 동일성이 결정될 2개의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 정렬하는데 사용된다. 서열은 그의 각각의 아미노산 또는 뉴클레오티드의 최적 매칭 (알고리즘에 의한 결정시 "매칭된 폭")을 위해 정렬된다. 특정 실시양태에서, 표준 비교 행렬 (PAM 250 비교 행렬에 대해 문헌 [Dayhoff et al., 1978, Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352]; BLOSUM 62 비교 행렬에 대해 문헌 [Henikoff et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919] 참조)이 또한 알고리즘에 의해 사용된다. 상업적 컴퓨터 프로그램, 예컨대 뉴클레오티드 서열의 경우 BLASTN 및 아미노산 서열의 경우 BLASTP, 갭 도입 BLAST 및 PSI-BLAST에서 이용가능한 것을 포함하는 다른 알고리즘이 또한 아미노산 또는 핵산 서열의 비교를 위해 이용가능하다. 예시적인 이러한 프로그램은 문헌 [Altschul, et al., Basic local alignment search tool, J. Mol. Biol., 215(3): 403-410, 1990; Altschul, et al., Methods in Enzymology; Altschul, et al., "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs," Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997; Baxevanis, et al., Bioinformatics : A Practical Guide to the Analysis of Genes and Proteins, Wiley, 1998; 및 Misener, et al., (eds.), Bioinformatics Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 132), Humana Press, 1999]에 기재되어 있다. 유사한 서열을 확인하는 것에 추가로, 상기 언급된 프로그램은 일반적으로 유사성 정도의 지표를 제공한다. 일부 실시양태에서, 2개의 서열은 그의 상응하는 잔기의 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 그 초과가 잔기의 관련 스트레치에 걸쳐 (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 유사하고/거나 동일한 경우에 실질적으로 유사한 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 관련 스트레치는 완전한 서열이다. 일부 실시양태에서, 관련 스트레치는 적어도 10, 적어도 15, 적어도 20, 적어도 25, 적어도 30, 적어도 35, 적어도 40, 적어도 45, 적어도 50, 적어도 55, 적어도 60, 적어도 65, 적어도 70, 적어도 75, 적어도 80, 적어도 85, 적어도 90, 적어도 95, 적어도 100, 적어도 125, 적어도 150, 적어도 175, 적어도 200, 적어도 225, 적어도 250, 적어도 275, 적어도 300, 적어도 325, 적어도 350, 적어도 375, 적어도 400, 적어도 425, 적어도 450, 적어도 475, 적어도 500개 또는 그 초과의 잔기이다. 상당한 서열 유사성을 갖는 서열은 서로의 상동체일 수 있다.
"조합 요법"은 대상체가 2종 이상의 치료 요법 (예를 들어, 2종 이상의 치료 모이어티)에 동시에 노출되는 상황을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 2종 이상의 요법은 동시에 투여될 수 있고; 일부 실시양태에서, 이러한 요법은 순차적으로 투여될 수 있고 (예를 들어, 제1 요법의 모든 "용량"이 제2 요법의 임의의 용량의 투여 전에 투여됨); 일부 실시양태에서, 이러한 작용제는 중첩 투여 요법으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조합 요법의 "투여"는 다른 작용제(들) 또는 양식(들)을 조합으로 받는 대상체에게 하나 이상의 작용제(들) 또는 양식(들)을 투여하는 것을 수반할 수 있다. 명확화를 위해, 조합 요법은 개별 작용제가 단일 조성물로 함께 (또는 심지어 반드시 동시에) 투여될 것을 요구하지 않으며, 일부 실시양태에서, 2종 이상의 작용제 또는 그의 활성 모이어티는 조합 조성물로 또는 심지어 조합 화합물로 (예를 들어, 단일 화학적 복합체 또는 공유 개체의 일부로서) 함께 투여될 수 있다.
"에 상응하는"은 적절한 참조 분자 또는 조성물과의 비교를 통해 분자 또는 조성물 내의 구조적 요소의 위치/동일성을 지정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 중합체 내의 단량체 잔기 (예를 들어, 폴리펩티드 내의 아미노산 잔기 또는 폴리뉴클레오티드 내의 핵산 잔기)는 적절한 참조 중합체 내의 잔기에 "상응하는" 것으로서 확인될 수 있다. 예를 들어, 단순화의 목적으로, 폴리펩티드 내의 잔기는 참조 관련 폴리펩티드에 기초한 정규 넘버링 시스템을 사용하여 지정될 수 있어, 예를 들어 위치 100에서의 잔기에 "상응하는" 아미노산은 실제로 참조 폴리펩티드 내의 위치 100에서 발견되는 잔기에 상응한다면 아미노산 쇄 내의 100번째 아미노산일 필요는 없다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라 폴리펩티드 및/또는 핵산 내의 "상응하는" 잔기를 확인하기 위해 이용될 수 있는 소프트웨어 프로그램, 예컨대, 예를 들어 BLAST, CS-BLAST, CUDASW++, DIAMOND, FASTA, GGSEARCH/GLSEARCH, Genoogle, HMMER, HHpred/HHsearch, IDF, Infernal, KLAST, USEARCH, parasail, PSI-BLAST, PSI-Search, ScalaBLAST, Sequilab, SAM, SSEARCH, SWAPHI, SWAPHI-LS, SWIMM 또는 SWIPE를 포함하는 다양한 서열 정렬 전략이 이용가능하다.
용어 "도메인"은 개체의 부분을 지칭한다. 일부 실시양태에서, "도메인"은, 예를 들어 도메인이 그의 모 개체의 나머지로부터 물리적으로 분리되는 경우에, 구조적 및/또는 기능적 특색을 실질적으로 또는 완전히 보유하도록, 개체의 구조적 및/또는 기능적 특색과 회합된다. 일부 실시양태에서, 도메인은, (모) 개체로부터 분리되고 상이한 (수용자) 개체와 연관 또는 연결된 경우에, 예를 들어 모 개체에서 특징으로 하는 하나 이상의 구조적 및/또는 기능적 특색을 실질적으로 보유하고/거나 이를 수용자 개체에게 부여하는 개체의 부분을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 도메인은 분자 (예를 들어, 소분자, 탄수화물, 지질, 핵산 또는 폴리펩티드)의 부분이다. 일부 실시양태에서, 도메인은 폴리펩티드의 섹션이고; 일부 이러한 실시양태에서, 도메인은 구조적 요소 (예를 들어, 아미노산 서열 또는 서열 모티프, α-나선 특징부, β-시트 특징부, 코일드-코일 특징부, 랜덤 코일 특징부 등) 및/또는 기능적 특색 (예를 들어, 결합 활성, 효소적 활성, 폴딩 활성, 신호전달 활성 등)을 특징으로 한다.
용어 "투여 형태"는 대상체에게 투여하기 위한 활성제 (예를 들어, 항원 결합 시스템 또는 항체)의 물리적 이산 단위를 지칭하기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 각각의 이러한 단위는 미리 결정된 양의 활성제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 이러한 양은 관련 집단에게 투여되는 경우에 목적하는 또는 유익한 결과와 상관관계가 있는 것으로 결정된 투여 요법에 따른 투여에 적절한 단위 투여량 (또는 그의 전체 분획)이다. 대상체에게 투여되는 치료 조성물 또는 치료제의 총량은 1인 이상의 의료 진료의에 의해 결정되고, 1종 초과의 투여 형태의 투여를 수반할 수 있다.
용어 "투여 요법"은 대상체에게 개별적으로 투여되는 1회 이상의 단위 용량의 세트를 지칭하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 주어진 치료제는 권장 투여 요법을 가지며, 이는 1회 이상의 용량을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 각각 다른 용량과 시간상 분리된 복수의 용량을 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 복수의 용량을 포함하고, 연속 용량은 동일한 길이의 기간에 의해 서로 분리되고; 일부 실시양태에서, 투여 요법은 복수의 용량을 포함하고, 연속 용량은 적어도 2가지 상이한 길이의 기간에 의해 서로 분리된다. 일부 실시양태에서, 투여 요법 내의 모든 용량은 동일한 단위 투여량이다. 일부 실시양태에서, 투여 요법 내의 상이한 용량은 상이한 양이다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 제1 투여량으로의 제1 투여, 이어서 제1 투여량과는 상이한 제2 투여량으로의 1회 이상의 추가의 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여 요법은 목적하는 또는 유익한 결과를 달성하도록 주기적으로 조정된다.
"이펙터 기능"은 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용의 생물학적 결과를 지칭한다. 이펙터 기능은, 비제한적으로 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC), 항체-의존성 세포-매개 식세포작용 (ADCP) 및 보체-매개 세포독성 (CMC)을 포함한다. 이펙터 기능은 항원 결합 의존성, 항원 결합 비의존성 또는 둘 다일 수 있다. ADCC는 면역 이펙터 세포에 의한 항체-결합된 표적 세포의 용해를 지칭한다. 어떠한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, ADCC는 일반적으로 항체-코팅된 표적 세포 (예를 들어, 그의 표면 상에서 항체가 결합되는 항원을 발현하는 세포)를 인식하고 후속적으로 사멸시키는 Fc 수용체 (FcR)-보유 이펙터 세포를 수반하는 것으로 이해된다. ADCC를 매개하는 이펙터 세포는 자연 킬러 (NK) 세포, 대식세포, 호중구, 호산구 중 1종 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는 면역 세포를 포함할 수 있다.
"이펙터 세포"는 1종 이상의 Fc 수용체를 발현하고 1종 이상의 이펙터 기능을 매개하는 면역계의 세포를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 이펙터 세포는, 비제한적으로 단핵구, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호산구, 비만 세포, 혈소판, 거대 과립 림프구, 랑게르한스 세포, 자연 킬러 (NK) 세포, T-림프구 및 B-림프구 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 이펙터 세포는, 비제한적으로 인간, 마우스, 래트, 토끼 및 원숭이를 포함하는 임의의 유기체의 것일 수 있다.
용어 "부형제"는, 예를 들어 목적하는 점조도 또는 안정화 효과를 제공하거나 이에 기여하기 위해 조성물에 포함될 수 있는 작용제를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 적합한 부형제는, 예를 들어 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 물질 또는 개체의 "단편" 또는 "부분"은 전체, 예를 들어 물리적 개체 또는 추상적 개체의 별개의 부분을 포함하는 구조를 갖는다. 일부 실시양태에서, 단편은 전체에서 발견되는 1종 이상의 모이어티가 결여되어 있다. 일부 실시양태에서, 단편은 전체에서 발견되는 특징적인 구조적 요소, 도메인 또는 모이어티로 이루어지거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중합체 단편은 전체 중합체에서 발견되는 것과 같은 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500개 또는 그 초과의 단량체 단위 (예를 들어, 잔기)를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 중합체 단편은 전체 중합체에서 발견되는 단량체 단위 (예를 들어, 잔기)의 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 25%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과 (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%)를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 전체 물질 또는 개체는 일부 실시양태에서 단편의 "모체"로 지칭될 수 있다.
용어 "융합 폴리펩티드" 또는 "융합 단백질"은 일반적으로 적어도 2개의 절편을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 일반적으로, 적어도 2개의 이러한 절편을 함유하는 폴리펩티드는, 2개의 절편이 (1) 자연에서 동일한 펩티드에 포함되지 않고/거나, (2) 이전에 단일 폴리펩티드로 서로 연관 또는 연결되지 않고/거나, (3) 인간의 손의 작용을 통해 서로 연관 또는 연결된 모이어티인 경우에, 융합 폴리펩티드인 것으로 간주된다.
용어 "유전자 생성물" 또는 "발현 생성물"은 일반적으로 유전자로부터 전사된 RNA (프로세싱-전 및/또는 -후), 또는 유전자로부터 전사된 RNA에 의해 코딩된 폴리펩티드 (변형-전 및/또는 -후)를 지칭한다.
용어 "단리된"은 (1) 보다 이른 시간에 회합되어 있었거나 또는 그렇지 않으면 물질이 회합될 적어도 일부 성분으로부터 분리되었고/거나 (2) 제한된 또는 한정된 양 또는 농도의 1종 이상의 공지된 또는 비공지된 오염물을 포함하는 조성물에 존재하는 물질을 지칭한다. 단리된 물질은, 일부 실시양태에서, 물질이 보다 이른 시간에 회합되어 있었던 다른 비-물질 성분, 예를 들어 물질이 이전에 회합되었거나 또는 그렇지 않으면 회합될 다른 성분 또는 오염물의 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 99% 초과 (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%)로부터 분리될 수 있다. 특정 경우에, 물질이 제한된 또는 감소된 양 또는 농도의 동일 또는 유사 유형의 분자를 포함하는 조성물에 존재하는 경우에, 그것은 단리된다. 예를 들어, 특정 경우에, 핵산, DNA 또는 RNA 물질이 제한된 또는 감소된 양 또는 농도의 비-물질 핵산, DNA 또는 RNA 분자를 포함하는 조성물에 존재하는 경우에, 그것은 단리된다. 예를 들어, 특정 경우에, 폴리펩티드 물질이 제한된 또는 감소된 양 또는 농도의 비-물질 폴리펩티드 분자를 포함하는 조성물에 존재하는 경우에, 그것은 단리된다. 특정 실시양태에서, 양은, 예를 들어 조성물 중에 존재하는 목적하는 물질의 양에 대해 측정된 양일 수 있다. 특정 실시양태에서, 제한된 양은 조성물 중 물질의 양의 100% 이하, 예를 들어 조성물 중 물질의 양의 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이하 (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%)인 양일 수 있다. 특정 경우에, 조성물은 선택된 물질에 관하여 순수하거나 실질적으로 순수하다. 일부 실시양태에서, 단리된 물질은 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 99% 초과로 (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 순수하다. 물질은 다른 성분 또는 오염물이 실질적으로 없는 경우에 "순수"하다. 일부 실시양태에서, 물질은 특정 다른 성분, 예컨대, 예를 들어 1종 이상의 담체 또는 부형제 (예를 들어, 완충제, 용매, 물 등)와 조합된 후에도 여전히 "단리된" 또는 심지어 "순수한" 것으로 간주될 수 있고; 이러한 실시양태에서, 물질의 퍼센트 단리 또는 순도는 이러한 담체 또는 부형제를 포함하지 않고 계산된다.
"핵산"은 뉴클레오티드의 임의의 중합체 쇄를 지칭한다. 핵산은 DNA, RNA 또는 그의 조합일 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산은 1개 이상의 천연 핵산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 1개 이상의 핵산 유사체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 천연 공급원으로부터의 1개 이상의 단리, 상보적 주형에 기초한 중합에 의한 효소 합성 (생체내 또는 시험관내), 재조합 세포 또는 시스템 내에서의 재생산 및 화학적 합성에 의해 제조된다. 일부 실시양태에서, 핵산은 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 20, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000개 또는 그 초과의 잔기 길이 (예를 들어, 20 내지 100, 20 내지 500, 20 내지 1000, 20 내지 2000 또는 20 내지 5000개 또는 그 초과의 잔기)이다. 일부 실시양태에서, 핵산은 부분적으로 또는 전체적으로 단일 가닥이고; 일부 실시양태에서, 핵산은 부분적으로 또는 전체적으로 이중 가닥이다. 일부 실시양태에서, 핵산은, 폴리펩티드를 코딩하거나 또는 폴리펩티드를 코딩하는 서열의 상보체인 적어도 1개의 요소를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 갖는다.
"작동가능하게 연결된"은 기재된 성분이 그의 의도된 방식으로 기능하도록 허용하는 관계에 있는 병렬배치를 지칭한다. 예를 들어, 기능적 요소에 "작동가능하게 연결된" 제어 요소는 기능적 요소의 발현 및/또는 활성이 제어 요소와 상용성인 조건 하에 달성되는 방식으로 회합된다.
용어 "제약상 허용되는"은 수용자에게 투여되는 경우에 그의 수용자에게 유해하지 않거나 또는 그의 수용자에 대한 이익이 임의의 유해 효과를 능가하는 분자 또는 조성물을 지칭한다. 본원에 개시된 바와 같은 조성물을 제제화하는데 사용되는 담체, 희석제 또는 부형제에 관하여, 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제는 조성물의 다른 성분과 상용성이어야 하고, 그의 수용자에게 유해하지 않아야 하거나 또는 수용자에 대한 이익이 임의의 유해 효과를 능가하여야 한다. 용어 "제약상 허용되는 담체"는 신체의 한 부분으로부터 또 다른 부분으로 (예를 들어, 한 기관으로부터 또 다른 기관으로) 작용제를 운반 또는 수송하는데 수반되는 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제 또는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 제약 조성물에 존재하는 각각의 담체는 제제의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 유해하지 않거나 또는 수용자에 대한 이익이 임의의 유해 효과를 능가해야 한다는 의미에서 "허용되는" 것이어야 한다. 제약상 허용되는 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말화 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩 오일, 목화씨 오일, 홍화 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 알긴산; 발열원-무함유 물; 등장성 염수; 링거액; 에틸 알콜; pH 완충 용액; 폴리에스테르, 폴리카르보네이트 및/또는 폴리무수물; 및 제약 제제에 사용되는 다른 비-독성 상용성 물질을 포함한다.
용어 "제약 조성물"은 활성제가 1종 이상의 제약상 허용되는 담체와 함께 제제화된 조성물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 활성제는 관련 대상체 또는 집단에게 투여되는 경우에 미리 결정된 치료 효과를 달성할 통계적으로 유의한 확률을 나타내는 치료 요법에서의 투여에 적절한 단위 용량으로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 고체 또는 액체 형태로의 투여를 위해 제제화될 수 있으며, 비제한적으로 하기에 적합화된 형태를 포함한다: 경구 투여, 예를 들어 드렌치 (수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 정제, 예를 들어 협측, 설하 및 전신 흡수를 위해 표적화된 것, 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; 비경구 투여, 예를 들어 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사, 예를 들어 멸균 용액 또는 현탁액 또는 지속-방출 제제; 국소 적용, 예를 들어 크림, 연고, 또는 피부, 폐 또는 구강에 적용되는 제어-방출 패치 또는 스프레이; 질내 또는 직장내, 예를 들어 페사리, 크림 또는 폼; 설하; 안구; 경피; 또는 비강, 폐 및 다른 점막 표면.
용어 "참조"는 비교가 수행되는 표준 또는 대조군을 기재한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 관심 작용제, 동물, 개체, 집단, 샘플, 서열 또는 값이 작용제, 동물, 개체, 집단, 샘플, 서열 또는 값의 참조 또는 대조군과 비교된다. 일부 실시양태에서, 참조 또는 대조군은 관심 시험, 측정 또는 결정과 실질적으로 동시에 시험, 측정 및/또는 결정된다. 일부 실시양태에서, 참조 또는 대조군은 임의로 유형 매체로 구현된 과거 참조 또는 대조군이다. 일반적으로, 참조 또는 대조군은 평가 중인 것과 대등한 조건 또는 상황 하에 결정되거나 특징화된다. 충분한 유사성이 존재하는 경우에 선택된 참조 또는 대조군에 대한 의존 및/또는 비교가 정당화된다.
"조절 T 세포" ("Treg", "Treg 세포" 또는 "Tregs")는 특정 면역 활성, 예를 들어 자가면역, 알레르기 및 감염에 대한 반응의 제어에 참여하는 CD4+ T 림프구의 계통을 지칭한다. 조절 T 세포는 T 세포 집단의 활성을 조절할 수 있고, 또한 특정 선천성 면역계 세포 유형에 영향을 미칠 수 있다. Treg는 바이오마커 CD4, CD25 및 Foxp3의 발현 및 CD127의 낮은 발현에 의해 확인될 수 있다. 자연 발생 Treg 세포는 정상적으로 말초 CD4+ T 림프구의 약 5-10%를 구성한다. 그러나, 종양 미세환경 내의 Treg 세포 (즉, 종양-침윤 Treg 세포)인 Treg 세포는 총 CD4+ T 림프구 집단의 많게는 20-30%를 구성할 수 있다.
용어 "샘플"은 일반적으로 관심 공급원으로부터 수득되거나 유래된 물질의 분취물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 관심 공급원은 생물학적 또는 환경적 공급원이다. 일부 실시양태에서, 관심 공급원은 세포 또는 유기체, 예컨대 세포 집단, 조직 또는 동물 (예를 들어, 인간)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 관심 공급원은 생물학적 조직 또는 유체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 조직 또는 유체는 양수, 방수, 복수, 담즙, 골수, 혈액, 모유, 뇌척수액, 귀지, 유미, 침, 사정액, 내림프, 삼출물, 분변, 위산, 위액, 림프, 점액, 심막액, 외림프, 복막액, 흉막액, 고름, 레움, 타액, 피지, 정액, 혈청, 태지, 객담, 활액, 땀, 눈물, 소변, 질 분비물, 유리체액, 구토 및/또는 그의 조합 또는 성분(들)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 유체는 세포내 유체, 세포외 유체, 혈관내 유체 (혈장), 간질액, 림프액 및/또는 세포횡단 유체를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 유체는 식물 삼출물을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 조직 또는 샘플은, 예를 들어 흡인, 생검 (예를 들어, 미세 바늘 또는 조직 생검), 스왑 (예를 들어, 경구, 비강, 피부 또는 질 스왑), 스크레이핑, 수술, 세정 또는 세척 (예를 들어, 기관지폐포, 관, 비강, 안구, 경구, 자궁, 질 또는 다른 세정 또는 세척)에 의해 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 개체로부터 수득된 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 샘플은 임의의 적절한 수단에 의해 관심 공급원으로부터 직접적으로 수득된 "1차 샘플"이다. 일부 실시양태에서, 문맥으로부터 명확할 바와 같이, 용어 "샘플"은 1차 샘플을 가공함으로써 (예를 들어, 그의 1종 이상의 성분을 제거함으로써 및/또는 그에 1종 이상의 작용제를 첨가함으로써) 수득된 제제를 지칭한다. 이러한 "가공된 샘플"은, 예를 들어 샘플로부터 추출되거나 또는 1차 샘플을 1종 이상의 기술, 예컨대 핵산의 증폭 또는 역전사, 특정 성분의 단리 및/또는 정제 등에 적용함으로써 수득된 핵산 또는 단백질을 포함할 수 있다.
용어 "암의 병기"는 암의 진행 수준의 정성적 또는 정량적 평가를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 암의 병기를 결정하는데 사용되는 기준은, 비제한적으로 암이 신체 내에 위치하는 곳, 종양 크기, 암이 림프절로 확산되었는지의 여부, 암이 신체의 1곳 이상의 상이한 부분으로 확산되었는지의 여부 등 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 소위 TNM 시스템을 사용하여 병기결정될 수 있으며, 이에 따르면 T는 통상적으로 원발성 종양으로 불리는 주요 종양의 크기 및 정도를 지칭하고; N은 암을 갖는 근처 림프절의 수를 지칭하고; M은 암이 전이되었는지의 여부를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 암은 0기 (비정상적 세포가 근처 조직으로 확산되지 않고 존재함, 상피내 암종 또는 CIS로도 불림; CIS는 암이 될 수도 있지만 암은 아님), I-III기 (암이 존재함; 수가 높을수록, 종양이 더 크고, 근처 조직으로 더 많이 확산됨), 또는 IV기 (암이 신체의 원위 부분으로 확산됨)로 지칭될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 상피내; 국재화 (암이 시작되는 장소로 제한되고, 확산되었다는 징후가 없음); 국소 (암이 근처 림프절, 조직 또는 기관으로 확산되었음): 원위 (암이 신체의 원위 부분으로 확산되었음); 및 미지 (병기를 결정하기에 충분한 정보가 없음)로 이루어진 군으로부터 선택된 병기에 배정될 수 있다.
어구 "치료제"는 유기체에게 투여되는 경우에 목적하는 약리학적 효과를 도출하는 임의의 작용제를 지칭할 수 있다. 일부 실시양태에서, 작용제는 적절한 집단에 걸쳐 통계적으로 유의한 효과를 나타내는 경우에 치료제인 것으로 간주된다. 일부 실시양태에서, 적절한 집단은 모델 유기체 또는 인간 대상체의 집단일 수 있다. 일부 실시양태에서, 적절한 집단은 바이오마커의 존재 또는 부재에 따라 다양한 기준, 예컨대 특정 연령 군, 성별, 유전적 배경, 기존 임상 상태 등에 의해 정의될 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 질환, 장애 및/또는 상태의 1종 이상의 증상 또는 특색의 완화, 호전, 경감, 억제, 예방, 그의 발병 지연, 그의 중증도 감소 및/또는 그의 발생률 감소에 사용될 수 있는 물질이다. 일부 실시양태에서, 치료제는 인간에 대한 투여용으로 시판될 수 있기 전에 정부 기관에 의해 승인되었거나 또는 승인될 것이 요구되는 작용제이다. 일부 실시양태에서, 치료제는 인간에게 투여하기 위해 의료 처방이 요구되는 작용제이다.
본 개시내용의 다양한 측면이 하기의 하위섹션에서 추가로 상세하게 기재된다. 본 개시내용은 적어도 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 항원 결합 시스템 및 결합제를 제공한다. 특히, 본 개시내용은 암의 치료 및/또는 면역 반응의 개시 또는 조정에 유용한 방법 및 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 항-CD20 결합 모티프 및 제2 항원 또는 에피토프에 대한 제2 결합 모티프를 포함한다는 점에서 이중-표적화인 항원 결합 시스템 및 결합제를 포함한다. 일부 경우에, 제2 결합 모티프는 CD19와 선택적으로 결합한다. 다양한 실시양태에서, 1종 이상의 결합 모티프는 scFv이다. 예시적인 결합 모티프 아미노산 서열 및 이를 코딩하는 핵산 서열이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 키메라 항원 수용체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 이중특이적 또는 비시스트론 키메라 항원 수용체이다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제는 조작된 T 세포 수용체이다.
본 개시내용의 다양한 실시양태는 본원에 제공된 결합 모티프 또는 항원 결합 시스템을 코딩하는 벡터, 예를 들어 항-CD20/항-CD19 항원 결합 시스템, 예컨대 이중특이적 또는 비시스트론 항-CD20/항-CD19 키메라 항원 수용체를 코딩하는 벡터를 제공한다. 본 개시내용의 다양한 실시양태는 본원에 제공된 항원 결합 시스템 또는 결합 모티프를 코딩하거나 발현하는 세포, 예를 들어 항-CD20/항-CD19 키메라 항원 수용체, 예컨대 이중특이적 또는 비시스트론 항-CD20/항-CD19 키메라 항원 수용체를 코딩하거나 발현하도록 조작된 T 세포인 결합제를 제공한다. 본 개시내용은, 예를 들어 통합된 유전자, 예를 들어 관심 뉴클레오티드 서열 (예를 들어, 이러한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 구성적 발현 구축물 및/또는 유도성 발현 구축물)로 유전자 변형된 면역 세포인 결합제를 포함하는 결합제를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 종양을 갖는 대상체에게 본원에 기재된 결합제 요법 및/또는 본원에 기재된 단백질 치료제를 투여하는 것을 포함하는, 종양을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 1종 이상의 추가의 요법 (예를 들어, 제2 결합제 (예를 들어, CAR-T 세포, CAR-NK 세포, TCR-T 세포, TIL 세포, 동종 NK 세포 및 자가 NK 세포), 항체-약물 접합체, 항체, 이중특이적 항체, T 세포-결속 이중특이적 항체, 조작된 항체 및/또는 본원에 기재된 폴리펩티드)의 투여를 추가로 포함한다.
본 개시내용의 다른 특색, 목적 및 이점은 하기 상세한 설명에서 분명하다. 그러나, 상세한 설명은 본 개시내용의 실시양태를 나타내지만, 제한이 아니라 단지 예시로서 주어지는 것으로 이해되어야 한다.
본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 기재된 항체에서 발견되는 바와 같은 항원-결합 서열을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 기재된 항원 결합 단편을 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 본 개시내용에서 CD20에 대한 언급은 인간 CD20에 관한 것으로 인지되어야 한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 적어도 1개의 중쇄 CDR (HCDR), 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 1개의 HCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 2개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 2개의 HCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 3개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 3개의 HCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 적어도 1개의 경쇄 CDR (LCDR), 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 1개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 2개의 LCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 2개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 3개의 LCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 3개의 LCDR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 적어도 1개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 1개의 HCDR 및 본원에 제공된 적어도 1개의 LCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 1개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 1개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 1개의 HCDR 및 예를 들어 표 4-13 중 HCDR(들)과 동일한 표로부터 유래된 본원에 제공된 1개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 2개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 2개의 HCDR 및 본원에 제공된 2개의 LCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 2개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 2개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 적어도 2개의 HCDR 및 본원에 제공된, 예를 들어 표 4-13 중 HCDR(들)과 동일한 표로부터 유래된 2개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 3개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 3개의 HCDR 및 본원에 제공된 3개의 LCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 3개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 제공된 3개의 HCDR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 3개의 HCDR 및 표 4-13 중 HCDR(들)과 동일한 표로부터 유래된 3개의 LCDR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 프레임워크 영역 (중쇄 FR), 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 2개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 중쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 2개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 1개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된, 예를 들어 표 4-13 중 중쇄 FR(들)과 동일한 표로부터 유래된 경쇄 가변 도메인의 1개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 2개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 2개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 2개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된, 예를 들어 표 4-13 중 중쇄 FR(들)과 동일한 표로부터 유래된 경쇄 가변 도메인의 2개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR 및 표 4-13 중 중쇄 FR(들)과 동일한 표로부터 유래된 3개의 경쇄 FR을 포함한다.
표 4-13에 제공된 예시적인 항체 서열은, 예를 들어 사량체 항체, 단일특이적 항체, 이중특이적 항체, 항원 결합 단편 또는 결합 모티프를 포함하는 임의의 항체 포맷에서 사용하기에 적합하다. 표 4-13에 제공된 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 및 그의 부분은 결합 모티프에 포함될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인인 중쇄 가변 도메인의 상응하는 FR(들)에 대해, 함께 또는 각각 개별적으로 적어도 75% (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%, 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일성을 갖는 1, 2 또는 3개의 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인인 경쇄 가변 도메인의 상응하는 FR(들)에 대해, 함께 또는 각각 개별적으로 적어도 75% (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%) 동일성을 갖는 1, 2 또는 3개의 FR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 각각 표 4-13에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 중쇄 가변 도메인을 포함하며, 상기 중쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 각각 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 상기 경쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 중쇄 가변 도메인 및 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 1개의 중쇄 가변 도메인 및 표 4-13 중 어느 하나에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 1개의 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 표 4-13 중 동일한 표로부터 임의로 유래된다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 각각 표 4-13에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 중쇄 가변 도메인 및 각각 표 4-13에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 다양한 실시양태에서, (i) 각각의 중쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있거나; (ii) 각각의 경쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있거나; (iii) 적어도 1개의 중쇄 가변 도메인 및 적어도 1개의 경쇄 가변 도메인은 표 4-13 중 동일한 표로부터 유래될 수 있거나; 또는 (iv) 2개의 중쇄 가변 도메인 및 2개의 경쇄 가변 도메인은 모두 표 4-13 중 동일한 표로부터 유래된다. 각각의 표 4-13은 (i) 예시적인 항체의 중쇄 가변 도메인; (ii) 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 DNA 서열; (iii) IMGT, 카바트 및 코티아 넘버링에 따른 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 가변 도메인 CDR; (iv) 예시적인 항체의 경쇄 가변 도메인; (v) 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 DNA 서열; 및 (vi) IMGT, 카바트 및 코티아 넘버링에 따른 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 가변 도메인 CDR을 포함하는 예시적인 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 서열을 나타낸다. 각각의 표에 제공된 정보는 프레임워크 아미노산 서열, 뿐만 아니라 각각의 CDR 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 상응하는 FR 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다.
다양한 실시양태에서, 결합 모티프는 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 (예를 들어, 표 4-13 중 어느 하나의 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성, 예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성을 가짐), 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인 (예를 들어, 표 4-13 중 어느 하나의 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성, 예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성을 가짐), 및 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 247에 따른 링커 및/또는 서열식별번호: 307-313 중 어느 하나에 따른 링커; 예를 들어 문헌 [Whitlow et al. Protein Eng. 1993 Nov;6(8):989-95.] 참조)를 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 결합 모티프는 리더 서열, 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 (예를 들어, 표 4-13 중 어느 하나의 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성, 예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성을 가짐), 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인 (예를 들어, 표 4-13 중 어느 하나의 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성, 예를 들어, 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성을 가짐), 및 링커를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 및 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 결합 모티프의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열이 제공되는 경우에, 2개의 가변 도메인을 연결하는 링커는 본 개시내용에 비추어 서열로부터 분명할 것이다. 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 및 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인을 포함하는 결합 모티프의 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열이 제공되는 경우에, 리더 서열은 본 개시내용에 비추어 분명할 것이다. 의심을 피하기 위해, 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 임의의 배향, 예를 들어 중쇄 가변 도메인이 경쇄 가변 도메인의 C 말단이거나 또는 중쇄 가변 도메인이 경쇄 가변 도메인의 N 말단인 배향으로 존재할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 결합 모티프는 1개 이상의 추가의 링커에 인접한 서열식별번호: 247에 따른 링커 및/또는 서열식별번호: 307-313 중 어느 하나에 따른 링커를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인, 및 서열식별번호: 247에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 링커를 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 서열식별번호: 247에 따른 링커 및/또는 서열식별번호: 307-313 중 어느 하나에 따른 링커를 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인, 및 서열식별번호: 245에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 리더 서열을 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 서열식별번호: 245에 따른 CSF2RA 리더 서열을 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프는 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 링커 및 본 개시내용의 리더 서열을 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 항-CD19 결합 모티프 및 그의 성분을 코딩하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 246 및 248에서 확인된다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 결합 모티프는 표 53의 서열 (서열식별번호: 251-260) 중 어느 하나에 따른 서열을 갖는다.
본원에 제공된 예시적인 항체, 예컨대, 예를 들어 Ab1에 기초한 본 개시내용의 결합제는 나타낸 예시적인 항체에 따른 중쇄 가변 도메인 및 나타낸 예시적인 항체에 따른 경쇄 가변 도메인을 포함하는 임의의 단편 또는 포맷으로 제공될 수 있다.
표 4: 예시적인 항체 서열 1 (Ab1)
Figure pct00004
Figure pct00005
표 5: 예시적인 항체 서열 2 (Ab2)
Figure pct00006
Figure pct00007
표 6: 예시적인 항체 서열 3 (Ab3)
Figure pct00008
Figure pct00009
표 7: 예시적인 항체 서열 4 (Ab4)
Figure pct00010
Figure pct00011
표 8: 예시적인 항체 서열 5 (Ab5)
Figure pct00012
Figure pct00013
표 9: 예시적인 항체 서열 6 (Ab6)
Figure pct00014
Figure pct00015
표 10: 예시적인 항체 서열 7 (Ab7)
Figure pct00016
Figure pct00017
표 11: 예시적인 항체 서열 8 (Ab8)
Figure pct00018
Figure pct00019
표 12: 예시적인 항체 서열 9 (Ab9)
Figure pct00020
Figure pct00021
표 13: 예시적인 항체 서열 10 (Ab10)
Figure pct00022
Figure pct00023
본 개시내용은 항-CD20 결합 모티프 및 제2 표적 항원 또는 에피토프, 예를 들어 CD20이 아닌 항원 (예를 들어, CD19)에 결합하는 제2 결합 모티프를 포함하는 항체 및 항원 결합 시스템을 포함한다. 이중-표적화 항원 결합 시스템은 이중특이적 CAR 및 비시스트론 CAR을 포함한다. 많은 항원 결합 모티프가 공지되어 있다. 다양한 실시양태에서, 제2 표적 항원은 CD19이다. 본 명세서는, 비제한적으로 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD56, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-IIR알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, VEGFR2 또는 그의 조합인 제2 항원을 포함하는 다양한 제2 표적 항원을 포함한다. 따라서, 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템 또는 항체는 항-CD20 결합 모티프인 제1 결합 모티프 및 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD56, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-IIR알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, VEGFR2, EphA3 (EPH 수용체 A3), BAFFR (B-세포 활성화 인자 수용체) 또는 그의 조합인 제2 항원에 결합하는 제2 결합 모티프를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 항원은 B-세포 또는 그의 하위세트에 특징적인 항원이고, 임의로 여기서 제2 항원은 CD19 또는 CD20이 아니다. 이들 제2 항원을 표적화하는 결합 모티프의 예는 공지되어 있고/거나 본원에 제공된다.
일부 경우에, 항-CD20 결합 모티프 (예를 들어, 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 포함함) 및 항-CD19 결합 모티프 (예를 들어, 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 포함함)를 포함하는 항원 결합 시스템, 예컨대 이중특이적 CAR에서, 항-CD20 결합 모티프 (또는 그의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인)는 항-CD19 결합 모티프보다 (또는 그의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인보다) 키메라 항원 수용체의 C-말단에 더 가깝다. 일부 경우에, 항-CD20 결합 모티프 (예를 들어, 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 포함함) 및 항-CD19 결합 모티프 (예를 들어, 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 포함함)를 포함하는 항원 결합 시스템, 예컨대 이중특이적 CAR에서, 항-CD20 결합 모티프 (또는 그의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인)는 항-CD19 결합 모티프보다 (또는 그의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인보다) 작용제의 N-말단에 더 가깝다.
CD19 (분화 클러스터 19, B-림프구 항원 CD19, B-림프구 표면 항원 B4, B4, CVID3, 분화 항원 CD19로도 공지됨)는 인간에서 CD19 유전자에 의해 코딩되는 단백질이다. 달리 나타내지 않는 한, 본 개시내용에서 CD19에 대한 언급은 인간 CD19에 관한 것임이 인지되어야 한다. 이는 B 세포의 표면에서 발견된다. CD19 발현은 B 세포의 특징이기 때문에, 이는 항원으로서, 예를 들어 B 세포 및 B 세포로부터 발생하는 암 세포, 예를 들어 B-세포 림프종을 인식하는데 유용할 수 있다. 항-CD19 항체는, 예를 들어, 몇몇 비제한적 예를 제공하자면, 말초 혈액 및 비장 내의 B 림프구, B 세포 만성 림프구성 백혈병 (B-CLL) 세포, 전림프구성 백혈병 (PLL) 세포, 모발상 세포 백혈병 (HCL) 세포, 공통 급성 림프모구성 백혈병 (CALL) 세포, 프리-B 급성 림프모구성 백혈병 (프리-B-ALL) 세포 및 NULL-급성 림프모구성 백혈병 (NULL-ALL) 세포 상에서 발현된 CD19에 결합할 수 있다. 항-CD19 결합 모티프를 포함하는 항원 결합 시스템을 포함하는 예시적인 제약 제품은 제약 제품 예스카르타(YESCARTA)®이다. 예스카르타®는 상세불명의 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종, 고등급 B-세포 림프종 및 여포성 림프종으로부터 발생하는 DLBCL을 포함하는, 2차 이상의 전신 요법 후의 재발성 또는 불응성 대 B-세포 림프종을 갖는 성인 환자의 치료에 대해 지시된 CD19-지정 유전자 변형된 자가 T 세포 면역요법제이다 (예스카르타® FDA-승인 패키지 삽입물 참조, 이의 전문은 면역요법에 관련된 방법 및 조성물에 관하여 본원에 참조로 포함됨). 항-CD19 결합 모티프를 포함하는 항원 결합 시스템을 포함하는 또 다른 예시적인 제약 제품은 제약 제품 킴리아(KYMRIAH)®이다. 킴리아®는 (1) 불응성 또는 2회 이상의 재발성인 B-세포 전구체 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)을 갖는 25세 이하의 환자; 및 (2) 상세불명의 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL), 고등급 B-세포 림프종 및 여포성 림프종으로부터 발생하는 DLBCL을 포함하는, 2차 이상의 전신 요법 후의 재발성 또는 불응성 (r/r) 대 B-세포 림프종을 갖는 성인 환자의 치료에 대해 지시된 CD19-지정 유전자 변형된 자가 T-세포 면역요법이다 (킴리아® FDA-승인 패키지 삽입물 참조, 이의 전문은 면역요법에 관련된 방법 및 조성물에 관하여 본원에 참조로 포함됨).
예스카르타® 및 킴리아® 둘 다는 항-인간 CD19 항체로부터 유래된 항체 결합 도메인을 포함한다. 많은 항-CD19 항체는 CD19 유전자의 엑손 4에서 코딩된 CD19의 에피토프에 결합하는 것으로 여겨진다. 다른 항-CD19 결합 모티프는 CD19의 상이한 에피토프 또는 상이한 친화도를 갖는 동일한 에피토프를 인식할 수 있다. 항원 결합 시스템은, 예를 들어 SJ25C1로부터 유래된 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다. CD19 항체, 클론 SJ25C1은 NALM1 및 NALM16 세포로 면역화된 BALB/c 마우스로부터 단리된 비장 세포와 Sp2/0 마우스 골수종 세포의 혼성화로부터 유래되었다. SJ25C1 항원 결합 도메인은 다른 임상시험용 CD19-표적화 키메라 항원 수용체 (CAR) T-세포 요법에 사용되었다.
본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 기재된 항체에서 발견되는 바와 같은 항원-결합 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 항원 결합 단편을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 적어도 1개의 HCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 1개의 HCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 2개의 HCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 2개의 HCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 3개의 HCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 3개의 HCDR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 적어도 1개의 LCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 1개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 2개의 LCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 2개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 3개의 LCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 3개의 LCDR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 적어도 1개의 HCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 1개의 HCDR 및 본원에 제공된 적어도 1개의 LCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 1개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 2개의 HCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 2개의 HCDR 및 본원에 제공된 2개의 LCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 적어도 2개의 LCDR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 제공된 3개의 HCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 3개의 HCDR 및 본원에 제공된 3개의 LCDR, 예를 들어 표 14에 개시된 3개의 LCDR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 프레임워크 영역 (중쇄 FR), 예를 들어 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 2개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 중쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 2개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 1개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 2개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 2개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인의 적어도 2개의 경쇄 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본원에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인의 3개의 중쇄 FR 및 본원에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR, 예를 들어 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인의 3개의 경쇄 FR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인인 중쇄 가변 도메인의 상응하는 FR(들)에 대해, 함께 또는 각각 개별적으로 적어도 75% 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 1, 2 또는 3개의 FR을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인인 경쇄 가변 도메인의 상응하는 FR(들)에 대해, 함께 또는 각각 개별적으로 적어도 75% 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 1, 2 또는 3개의 FR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 각각 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 중쇄 가변 도메인을 포함하며, 상기 중쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 각각 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 상기 경쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 중쇄 가변 도메인 및 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 적어도 1개의 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 각각 표 14에 개시된 중쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 중쇄 가변 도메인 및 각각 표 14에 개시된 경쇄 가변 도메인에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 2개의 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 다양한 실시양태에서, (i) 각각의 중쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있거나; 또는 (ii) 각각의 경쇄 가변 도메인은 동일하거나 상이할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인, 및 서열식별번호: 247에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 링커를 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 서열식별번호: 247에 따른 링커 및/또는 서열식별번호: 307-313 중 어느 하나에 따른 링커를 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인, 및 서열식별번호: 245에 대해 적어도 75% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100% 동일성; 예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 동일성)을 갖는 리더 서열을 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 서열식별번호: 245에 따른 CSF2RA 리더 서열을 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프는 본 개시내용의 중쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 경쇄 가변 도메인, 본 개시내용의 링커 및 본 개시내용의 리더 서열을 포함하는 결합 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 결합 모티프는 서열식별번호: 243에 제시된 서열을 갖는다. 항-CD19 결합 모티프 및 그의 성분을 코딩하는 예시적인 뉴클레오티드 서열은 서열식별번호: 244, 246 및 248에서 확인된다. 다양한 실시양태에서, 결합 모티프는 1개 이상의 추가의 링커에 인접한 서열식별번호: 247에 따른 링커 및/또는 서열식별번호: 307-313 중 어느 하나에 따른 링커를 포함할 수 있다.
표 14: 예시적인 항-CD19 항체 서열 (Ab11)
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
항원 결합 시스템은, 예로서 이중특이적 및 비시스트론 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함한다. 본 개시내용은, 특히 CD20 및 제2 표적 항원, 예를 들어 CD19 둘 다를 표적화하는 항원 결합 시스템을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 이중특이적 항원 결합 시스템을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 비시스트론 항원 결합 시스템 (예를 들어, 제1 CAR 및 제2 CAR을 포함하는 시스템, 제1 및 제2 CAR은 동일한 세포에서 발현됨)을 포함한다. 비시스트론 CAR은 상이한 표적에 결합하고 단일 벡터에 의해 코딩되는 2종의 CAR을 포함할 수 있다. 비시스트론 CAR은 항-CD19 결합 모티프를 포함하는 제1 CAR 및 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 제2 CAR을 포함할 수 있다. 다양한 CAR 프레임워크와 연관된 결합 모티프는 상호교환가능하고, 본 실시예에 제공된 특색의 조합은 예시적이며, 제한적이지 않다. 일부 실시양태에서, 비시스트론 CAR의 제1 CAR 및 제2 CAR (예를 들어, 항-CD20 CAR 및 항-CD19 CAR)은 개별 유전자에 의해 코딩되고/거나 개별 mRNA 분자로서 발현된다. 일부 실시양태에서, 비시스트론 CAR의 제1 CAR 및 제2 CAR (예를 들어, 항-CD20 CAR 및 항-CD19 CAR)은 단일 유전자에 의해 코딩되고/거나 단일 mRNA 분자에서 함께 발현되며, 여기서 발현된 단백질은 제1 CAR, 절단가능한 링커 도메인 및 제2 CAR을 포함한다. 비시스트론 CAR의 제1 및 제2 CAR은 일반적으로 면역 세포에서, 예를 들어 CAR-T 세포에서 함께 발현되어, 개별 CAR-T 세포가 각각의 표적 항원 (예를 들어, 각각의 CD20 및 CD19)을 표적화하는 CAR을 발현하도록 한다.
다양한 실시양태에서, 비시스트론 CAR 벡터는 리보솜 스킵 서열 또는 내부 리보솜 진입 부위를 이용한다. 리보솜 스킵 서열에 의해 분리된 2개의 독립적인 CAR 분자를 코딩하는 단일 벡터는 비시스트론 CAR을 발현할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 비시스트론 CAR은 제1 CAR 및 제2 CAR을 포함하며, 여기서 제1 CAR 및 제2 CAR의 서열은 결합 모티프에 대해서만 상이하다. 다양한 실시양태에서, 비시스트론 CAR은 제1 CAR 및 제2 CAR을 포함하며, 여기서 제1 CAR 및 제2 CAR의 서열은 중쇄 가변 도메인 서열 및/또는 경쇄 가변 도메인 서열에 대해서만 상이하다. 따라서, 일부 실시양태에서, 비시스트론 CAR의 제1 CAR 및 제2 CAR은 그의 1종 이상의 성분 중 임의의 또는 모든 것에 대해 동일하거나 상이한 서열, 예를 들어 동일하거나 상이한 공동자극 도메인을 가질 수 있다. 예를 들어, 비시스트론 CAR의 제1 CAR 및 제2 CAR 중 하나 또는 둘 다는 본원에 제공된 공동자극 도메인, 예컨대 CD28, 41BB, OX40 또는 ICOS 공동자극 도메인을 포함할 수 있다.
비시스트론 CAR의 CAR은 결합 모티프, 힌지, 막횡단 도메인, 및 공동자극 도메인 및 활성화 도메인을 포함하는 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 결합 모티프는 본 개시내용의 항-CD19 또는 항-CD20 결합 모티프일 수 있다. 힌지 및 막횡단 도메인은 힌지 도메인 및 막횡단 도메인을 포함하는 28T (CD28) 도메인 또는 CD8K 도메인일 수 있다. 공동자극 도메인은 CD28 또는 41BB 공동자극 도메인일 수 있다. 활성화 도메인은 CD3z 활성화 도메인일 수 있다.
일부 실시양태에서, 제1 결합 모티프 및 제2 결합 모티프 (예를 들어, 별개의 항-CD20 및 항-CD19 결합 모티프)는 둘 다 단일 이중특이적 CAR에 포함된다. 이러한 이중특이적 CAR에서, CAR 분자 자체는 1종 초과의 항원을 인식하도록 조작될 수 있다. 탠덤 이중특이적 CAR에서, 제1 및 제2 결합 모티프는 세포외이고, 막-근위 결합 모티프 및 막-원위 결합 모티프로서 특징화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-CD20 결합 모티프는 막-근위이고, 항-CD19 결합 모티프는 막-원위이다. 다른 실시양태에서, 항-CD19 결합 모티프는 막-원위이고, 항-CD20 결합 모티프는 막 근위이다.
키메라 항원 수용체 (CAR)는 선택된 항원을 표적화하도록 T 세포 (예를 들어, 환자 또는 공여자 T 세포)를 지시 또는 재지시할 수 있는 조작된 수용체이다. CAR은 항원을 인식하고, 그 항원에 결합되었을 때, 면역 세포를 활성화시켜 그 항원을 보유하는 세포를 공격하고 파괴하도록 조작될 수 있다. 이들 항원이 종양 세포 상에 존재하는 경우에, CAR을 발현하는 면역 세포는 종양 세포를 표적화하고 사멸시킬 수 있다. CAR은 일반적으로 항원 결합을 매개하는 세포외 결합 모티프 (예를 들어, 항-CD20 및/또는 항-CD19 결합 모티프), 항원 결합 시스템이 세포 표면 또는 세포 막에 존재하는 경우에 세포 막에 걸치거나 또는 걸치는 것으로 이해되는 막횡단 도메인, 및 세포내 (또는 세포질) 신호전달 도메인을 포함한다.
적어도 하나의 비제한적 관점에 따르면, 적어도 3 "세대"의 CAR 조성물이 존재하였다. 제1 세대의 CAR에서, 결합 모티프 (예를 들어, 단일 쇄 단편 가변, 결합 모티프)는 힌지 도메인 및 1개 이상의 스페이서를 임의로 포함하는 막횡단 도메인을 통해 신호전달 도메인 (예를 들어, CD3ζ)에 연관 또는 연결된다. 제2 세대의 CAR에서, 공동자극 도메인 (CM1, 예컨대 CD28, 4-1BB 또는 OX-40)은 신호전달 도메인 (예를 들어, CD3ζ)과 함께 도입된다. 제3 세대의 CAR에서, 제2 공동자극 도메인 (CM2)이 포함된다.
TCR은 α-쇄 및 β-쇄로 구성된 이종이량체이다. TCR 신호전달은 면역 시냅스를 생성하는 신호전달 단백질의 동원을 요구한다. 추가로, 형질 막에서의 TCR 국재화는 T 세포에서 발현되는 CD3 복합체에 좌우된다. 조작된 단일 쇄 TCR은, 예를 들어 CAR 구축물의 막횡단 및 신호전달 도메인, 방법 및 공지되어 있는 구축물 (예를 들어, sTCR 및 TCR-CAR 분자, 예를 들어 TCRβ 쇄와 CD28 TM 및 CD28 및 CD3ζ 신호전달 모듈의 융합체)을 사용하여 생성될 수 있다. 본 개시내용의 항-CD20 및/또는 항-CD19 항원 결합 시스템은 CD20 및/또는 CD19에 결합하는 1개 이상의 항원 결합 모티프를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템은 공동자극 도메인 및/또는 세포외 도메인 (예를 들어, "힌지" 또는 "스페이서" 영역) 및/또는 막횡단 도메인 및/또는 세포내 (신호전달) 도메인 및/또는 CD3-제타 또는 CD3-엡실론 활성화 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD20 및/또는 항-CD19 항원 결합 시스템은 적어도 인간 CD20에 결합하는 결합 모티프, 공동자극 도메인, 세포외 도메인, 막횡단 도메인 및 CD3-제타 또는 CD3-엡실론 활성화 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 리더 펩티드 (P), 결합 모티프 (B), 공동자극 단백질의 세포외 도메인 (E), 막횡단 도메인 (T), 공동자극 도메인 (C), 제2 공동자극 도메인 (C') 및 활성화 도메인 (A) 중 1개 이상 또는 모두를 포함하는 항원 결합 시스템을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 항원 결합 시스템은 하기에 따라 구성된다: B E T A. 일부 경우에, 항원 결합 시스템은 하기에 따라 구성된다: P B E T A. 일부 경우에, 항원 결합 시스템은 하기에 따라 구성된다: B E T C A. 일부 경우에, 항원 결합 시스템은 하기에 따라 구성된다: P B E T C A. 일부 경우에, 항원 결합 시스템은 하기에 따라 구성된다: B E T C C' A. 일부 경우에, 항원 결합 시스템은 하기에 따라 구성된다: P B E T C C' A. 일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템은 VH 및 VL을 포함하며, 임의로 여기서 CAR은 하기에 따라 구성된다: P-VH-VL-E-T-C-A 또는 P-VL-VH-E-T-C-A. 일부 실시양태에서, VH 및 VL은 링커 (L)에 의해 연결되며, 임의로 여기서 CAR은 N-말단에서 C-말단으로 하기에 따라 구성된다: P-VH-L-VL-E-T-C-A 또는 P-VH-L-VL-E-T-C-A.
1개 이상의 항원 결합 모티프는 항원 결합 시스템의 표적(들)을 결정한다. 항원 결합 시스템의 결합 모티프는 임의의 결합 모티프, 예를 들어 본 개시내용에 의해 제공된 항체, 예를 들어 본 개시내용의 결합 모티프를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합 모티프는 항-CD20 결합 모티프 및/또는 항-CD19 결합 모티프를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합 모티프는 항-CD20 결합 모티프 및/또는 항-CD19 결합 모티프를 포함할 수 있다.
결합 모티프는, 적어도 부분적으로 다른 CAR 성분과 함께 단일 쇄의 일부로서 발현되도록 조작될 수 있기 때문에, 키메라 항원 수용체에 사용된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 7,741,465 및 6,319,494, 뿐만 아니라 문헌 [Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136, Krause et al., J. Exp. Med., Volume 188, No. 4, 1998 (619-626); Finney et al., Journal of Immunology, 1998, 161: 2791-2797]을 참조하며, 이들 각각은 CAR 내의 결합 모티프 도메인에 관하여 본원에 참조로 포함된다. 결합 모티프 또는 scFv는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 단일 쇄 항원 결합 단편이며, 이러한 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 함께 연관 또는 연결된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 7,741,465 및 6,319,494, 뿐만 아니라 문헌 [Eshhar et al., Cancer Immunol Immunotherapy (1997) 45: 131-136]을 참조하며, 이들 각각은 결합 모티프 도메인에 관하여 본원에 참조로 포함된다. 모 항체로부터 유래된 경우에, 결합 모티프는 모 항체의 표적 항원에의 결합의 일부를 보유하거나, 모두를 보유하거나, 이를 본질적으로 보유할 수 있다.
힌지는 결합 모티프와 막횡단 도메인 사이에 위치한 항원 결합 시스템의 세포외 도메인일 수 있다. 힌지는 또한 세포외 도메인 또는 "스페이서"로 지칭될 수 있다. 힌지는 수용체 발현, 활성 및/또는 안정성에 기여할 수 있다. 일부 실시양태에서, 힌지 도메인은 결합 모티프와 막횡단 도메인 사이에 위치한다. 힌지는 또한 표적화 항원에 접근하기 위한 가요성을 제공할 수 있다. 힌지는 이뮤노글로불린-유사 힌지 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 이뮤노글로불린-유사 힌지 도메인이거나, 그로부터의 것이거나 또는 그로부터 유래된 (예를 들어, 그의 모두 또는 단편을 포함하는) 힌지를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 힌지 도메인은 이뮤노글로불린으로부터의 것이거나 또는 그로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 힌지 도메인은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE 또는 IgM 또는 그의 단편의 힌지로부터 선택된다.
힌지는 천연 공급원으로부터 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 CD2, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD4, CD7, CD8.알파., CD8.베타., CD11a (ITGAL), CD11b (ITGAM), CD11c (ITGAX), CD11d (ITGAD), CD18 (ITGB2), CD19 (B4), CD27 (TNFRSF7), CD28, CD28T, CD29 (ITGB1), CD30 (TNFRSF8), CD40 (TNFRSF5), CD48 (SLAMF2), CD49a (ITGA1), CD49d (ITGA4), CD49f (ITGA6), CD66a (CEACAM1), CD66b (CEACAM8), CD66c (CEACAM6), CD66d (CEACAM3), CD66e (CEACAM5), CD69 (CLEC2), CD79A (B-세포 항원 수용체 복합체-연관 알파 쇄), CD79B (B-세포 항원 수용체 복합체-연관 베타 쇄), CD84 (SLAMF5), CD96 (Tactile), CD100 (SEMA4D), CD103 (ITGAE), CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD158A (KIR2DL1), CD158B1 (KIR2DL2), CD158B2 (KIR2DL3), CD158C (KIR3DP1), CD158D (KIRDL4), CD158F1 (KIR2DL5A), CD158F2 (KIR2DL5B), CD158K (KIR3DL2), CD160 (BY55), CD162 (SELPLG), CD226 (DNAM1), CD229 (SLAMF3), CD244 (SLAMF4), CD247 (CD3-제타), CD258 (LIGHT), CD268 (BAFFR), CD270 (TNFSF14), CD272 (BTLA), CD276 (B7-H3), CD279 (PD-1), CD314 (NKG2D), CD319 (SLAMF7), CD335 (NK-p46), CD336 (NK-p44), CD337 (NK-p30), CD352 (SLAMF6), CD353 (SLAMF8), CD355 (CRTAM), CD357 (TNFRSF18), 유도성 T 세포 공동-자극제 (ICOS), LFA-1 (CD11a/CD18), NKG2C, DAP-10, ICAM-1, NKp80 (KLRF1), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, LFA-1, SLAMF9, LAT, GADS (GrpL), SLP-76 (LCP2), PAG1/CBP, CD83 리간드, Fc 감마 수용체, MHC 부류 1 분자, MHC 부류 2 분자, TNF 수용체 단백질, 이뮤노글로불린 단백질, 시토카인 수용체, 인테그린, 활성화 NK 세포 수용체, 또는 톨 리간드 수용체, 또는 그의 단편 또는 조합이거나, 그로부터의 것이거나 또는 그로부터 유래된 (예를 들어, 그의 모두 또는 단편을 포함하는) 힌지를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CAR은 CD28 힌지를 포함하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 CD8 알파의 힌지이거나, 그로부터의 것이거나 또는 그로부터 유래된 (예를 들어, 그의 모두 또는 단편을 포함하는) 힌지를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 힌지는 CD28의 힌지이거나, 그로부터의 것이거나 또는 그로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 힌지는 CD8 알파의 힌지의 단편 또는 CD28의 힌지의 단편이거나, 그로부터의 것이거나 또는 그로부터 유래되며, 여기서 단편은 전체보다 더 적은 임의의 것이다. 일부 실시양태에서, CD8 알파 힌지의 단편 또는 CD28 힌지의 단편은 CD8 알파 힌지 또는 CD28 힌지의 N-말단 또는 C-말단 또는 둘 다에서의 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 적어도 18, 적어도 19 또는 적어도 20개의 아미노산을 제외한 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 힌지 서열은 표 54에 제공된 것 (서열식별번호: 261-269)을 포함한다.
이들 힌지 도메인의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열은 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 힌지 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 공지된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 힌지 도메인의 폴리펩티드 서열은 공지된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 폴리펩티드 서열을 포함한다.
일반적으로, "막횡단 도메인" (예를 들어, 항원 결합 시스템의 것)은 세포 표면 또는 세포 막에서의 분자로 존재하는 (예를 들어, 세포 막의 한 부분 또는 모두에 걸쳐 있는) 경우에 막에 존재하는 속성을 갖는 도메인을 지칭한다. 본 개시내용의 항원 결합 시스템에 대한 공동자극 도메인은 막횡단 도메인 및/또는 세포내 신호전달 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 막횡단 도메인 내의 모든 아미노산이 막에 존재하도록 요구되지는 않는다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 단백질의 지정된 스트레치 또는 부분이 실질적으로 막에 위치하는 것을 특징으로 한다. 아미노산 또는 핵산 서열은 단백질 세포하 국재화 (예를 들어, 막횡단 국재화)를 예측하기 위해 다양한 알고리즘을 사용하여 분석될 수 있다. 프로그램 psort (PSORT.org) 및 Prosite (prosite.expasy.org)는 이러한 프로그램의 예이다.
본원에 기재된 항원 결합 시스템에 포함된 막횡단 도메인의 유형은 임의의 유형에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 결합 모티프 및/또는 세포내 도메인과 자연 회합되는 막횡단 도메인이 선택된다. 일부 경우에, 막횡단 도메인은, 예를 들어 이러한 도메인이 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인에 결합하는 것을 피하여 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 1개 이상의 아미노산의 변형 (예를 들어, 결실, 삽입 및/또는 치환)을 포함한다.
막횡단 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막횡단 단백질로부터 유래될 수 있다. 예시적인 막횡단 도메인은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD28, CD3 엡실론, CD3 델타, CD3 감마, CD45, CD4, CD5, CD7, CD8, CD8 알파, CD8베타, CD9, CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CD16, CD22, CD27, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, TNFSFR25, CD154, 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 이뮤노글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD276 (B7-H3), CD29, CD30, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD84, CD96 (Tactile), CDS, CEACAM1, CRT AM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT, LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1; CD1-1a/CD18), MHC 부류 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Ly108), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물 또는 조합으로부터 유래될 수 있다 (예를 들어, 그의 막횡단 도메인을 적어도 포함할 수 있음). 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 합성일 수 있다 (또한, 예를 들어 우세하게 소수성 잔기, 예컨대 류신 및 발린을 포함할 수 있음). 일부 실시양태에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체는 합성 막횡단 도메인의 각각의 말단에 포함된다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인은 세포질 도메인에 직접 연관 또는 연결된다. 일부 실시양태에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커 (예를 들어, 2 내지 10개 아미노산 길이)는 막횡단 도메인과 세포내 도메인 사이에 연결을 형성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커는 글리신-세린 이중체이다.
본원에 제공된 막횡단 도메인의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열은 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 공지된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막횡단 도메인의 폴리펩티드 서열은 공지된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 폴리펩티드 서열을 포함한다. 임의로, 짧은 스페이서는 CAR의 임의의 또는 일부 세포외, 막횡단 및 세포내 도메인 사이에 연결을 형성할 수 있다.
세포내 도메인 (또는 세포질 도메인)은 결합 모티프에 대한 표적 항원의 결합시, 예를 들어 1종 이상의 면역 세포 이펙터 기능 (예를 들어, 천연 면역 세포 이펙터 기능)을 활성화시키는 세포내 신호를 유발 및/또는 매개하는 1개 이상의 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포내 도메인의 신호전달 도메인은 면역 세포의 정상 이펙터 기능 중 적어도 1종의 활성화를 매개한다. T 세포의 이펙터 기능은, 예를 들어 시토카인의 분비를 포함하는 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포내 도메인의 신호전달 도메인은 T 세포 활성화, 증식, 생존 및/또는 다른 T 세포 기능을 매개한다. 세포내 도메인은 활성화 도메인인 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 세포내 도메인은 공동자극 신호전달 도메인인 신호전달 도메인을 포함할 수 있다.
면역 세포에 대한 항원의 결합시 신호를 전달할 수 있는 세포내 신호전달 도메인은 공지되어 있고, 이들 중 임의의 것이 본 개시내용의 항원 결합 시스템에 포함될 수 있다. 예를 들어, T 세포 수용체 (TCR)의 세포질 서열은 항원에 대한 TCR 결합 후에 신호 전달을 개시하는 것으로 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Brownlie et al., Nature Rev. Immunol. 13:257-269 (2013)] 참조).
일부 실시양태에서, 신호전달 도메인 및/또는 활성화 도메인은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함한다. 세포질 신호전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 제타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d로부터 유래된 것을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Love et al., Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2:a002485 (2010); Smith-Garvin et al., Annu. Rev. Immunol. 27:591-619 (2009)] 참조).
특정 실시양태에서, 적합한 신호전달 도메인은, 비제한적으로 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 이뮤노글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공동자극제 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT, LTBR, Ly9 (CD229), Ly108, 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1; CD1-1a/CD18), MHC 부류 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A, SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1 또는 VLA-6, 또는 그의 단편, 말단절단물 또는 조합을 포함한다.
CAR은, 예를 들어 신호전달 효력을 증가시키기 위해 공동자극 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 미국 특허 번호 7,741,465 및 6,319,494, 뿐만 아니라 문헌 [Krause et al. and Finney et al. (상기 문헌), Song et al., Blood 119:696-706 (2012); Kalos et al., Sci Transl. Med. 3:95 (2011); Porter et al., N. Engl. J. Med. 365:725-33 (2011), 및 Gross et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 56:59-83 (2016)]을 참조한다. TCR 단독을 통해 생성된 신호는 T 세포의 완전한 활성화에 불충분할 수 있고, 2차 또는 공동-자극 신호는 활성화를 증가시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인은 1종 이상의 면역 세포 이펙터 기능 (예를 들어, 본원에 기재된 천연 면역 세포 이펙터 기능)을 활성화시키는 1개 이상의 추가의 신호전달 도메인 (예를 들어, 공동자극 신호전달 도메인)을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 공동자극 신호전달 도메인의 한 부분은, 이러한 부분이 이펙터 기능 신호를 전달하는 한, 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 세포질 도메인은 T 세포 보조-수용체 (또는 그의 단편)의 1개 이상의 세포질 서열을 포함한다. 이러한 T 세포 보조-수용체의 비제한적 예는 CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1), MYD88, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83과 결합하는 리간드를 포함한다. 예시적인 공동자극 단백질은 T 세포 상에서 자연적으로 발견되는 공동자극 단백질의 아미노산 서열을 가지며, 이 공동자극 단백질의 완전한 천연 아미노산 서열은 NCBI 참조 서열: NP_006130.1에 기재되어 있다. 특정 경우에, CAR은 하기 제시된 바와 같은 서열식별번호: 270에 따른 서열에 의해 코딩된 41BB 공동자극 도메인을 포함한다:
서열식별번호: 270
AGATTCAGCGTTGTGAAGAGAGGCCGGAAGAAGCTGCTGTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGAGACCTGTGCAGACCACACAGGAGGAAGACGGCTGCAGCTGTAGATTCCCCGAGGAAGAGGAGGGCGGCTGTGAGCTGAGAGTTAAGTTCAGCAGGAGCGCCGACGCCCCTGCCTACCAGCAAGGACAGAATCAACTGTACAACGAGCTGAACCTGGGCAGACGGGAGGAATACGATGTGCTGGACAAGAGGAGAGGCAGAGACCCCGAGATGGGCGGCAAACCTAGAAGAAAGAACCCCCAGGAGGGCCTGTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGCATGAAGGGCGAAAGAAGAAGAGGCAAGGGCCACGACGGCCTCTACCAGGGCTTAAGCACAGCTACAAAGGACACCTACGACGCCCTGCACATGCAGGCCCTGCCCCCTAGATGATTAATTAAatcgat
본원에 제공된 신호전달 도메인의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열은 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 공지된 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 신호전달 도메인의 폴리펩티드 서열은 공지된 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 폴리펩티드 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 예를 들어 항원 결합 시스템 활성으로부터 초래되는 유해 사건을 최소화 또는 축소시키기 위해, 항원 결합 시스템 활성을 조정하는 (예를 들어, 감소시키는) 메카니즘이 바람직하다. 면역 세포에 유도성 "온" 또는 "촉진" 스위치를 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 적합한 기술은 세포가 본 개시내용의 CAR 구축물로 형질도입되기 전에, 그 후에 또는 그와 동시에, 유도성 카스파제-9 (미국 출원 2011/0286980) 또는 티미딘 키나제를 사용하는 것을 포함한다. 자살 유전자 및/또는 "온" 스위치를 도입하는 추가의 방법은 TALEN, 아연 핑거, RNAi, siRNA, shRNA, 안티센스 기술 및 다른 기술을 포함한다.
본 개시내용에 따르면, 온-오프 또는 다른 유형의 제어 스위치 기술이 본원에 포함될 수 있다. 이들 기술은, 예를 들어 특정 세포에서 FKBP/라파로그 이량체화 시스템을 이용하는 문헌 [Wu et al., Science 2014 350 (6258)] (이의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 바와 같이, 이량체화 도메인 및 이러한 도메인 이량체화의 임의적인 활성화제의 사용을 포함할 수 있다. 추가의 이량체화 기술은, 예를 들어 문헌 [Fegan et al. Chem. Rev. 2010, 110, 3315-3336], 뿐만 아니라 미국 특허 번호 5,830,462; 5,834,266; 5,869,337; 및 6,165,787 (이들 각각의 내용은 또한 이량체화 기술에 관하여 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 추가의 이량체화 쌍은 시클로스포린-A/시클로필린 수용체, 에스트로겐/에스트로겐 수용체 (임의로 타목시펜, 4-히드록시타목시펜 또는 엔독시펜 사용), 글루코코르티코이드/글루코코르티코이드 수용체, 테트라시클린/테트라시클린 수용체, 및/또는 비타민 D/비타민 D 수용체를 포함할 수 있다. 이량체화 기술의 추가의 예는, 예를 들어 WO 2014/127261, WO 2015/090229, US 2014/0286987, US 2015/0266973, US 2016/0046700, 미국 특허 번호 8,486,693, US 2014/0171649 및 US 2012/0130076에서 찾아볼 수 있으며, 이들의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 추가로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 시스템은 리더 펩티드 (본원에서 "신호 펩티드" 또는 "리더 서열"로도 지칭됨)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 리더 펩티드는 아미노산 서열 MEWTWVFLFLLSVTAGVHS (서열식별번호: 249), MALPVTALLLPLALLLHAARP (서열식별번호: 250) 또는 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP (서열식별번호: 295)에 대해 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 100% (예를 들어, 85-90%, 85-95%, 85-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
CAR의 성분은 등가 성분에 대한 생명공학의 상용 기술을 사용하여 교환 또는 "스와핑"될 수 있다. 단지 몇몇 비-제한적이고 부분적인 예를 제공하자면, 본 개시내용의 CAR은 본원에 제공된 힌지 및 본원에 제공된 공동자극 도메인과 조합하여 본원에 제공된 바와 같은 결합 모티프를 포함할 수 있다. 특정 예에서, 본 개시내용의 CAR은 본원에 제공된 힌지 및 본원에 제공된 공동자극 도메인과 조합하여 본원에 제공된 바와 같은 결합 모티프와 함께 본원에 제공된 바와 같은 리더 서열을 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 261-269 중 어느 하나에 따른 힌지와 조합된 (예를 들어, 그에 인접하게 융합된), 임의로 서열식별번호: 270에 따른 41BB 공동자극 도메인과 추가로 조합된 (예를 들어, 그에 인접하게 융합된) 서열식별번호: 251-260 중 어느 하나에 따른 결합 모티프를 제공한다. 그의 몇몇 비제한적 예가 서열식별번호: 271-290에 제공된다.
비시스트론 CAR은 제1 및 제2 CAR 사이에 절단가능한 링커를 포함하는 단일 폴리펩티드로서 발현되는 제1 CAR 서열 및 제2 CAR 서열을 포함할 수 있다. 예시적인 절단가능한 링커는 푸린-GSG-T2A이다 (예를 들어, 문헌 [Chng et al. MAbs. 2015 Mar-Apr; 7(2): 403-412] (이는 절단가능한 링커에 관하여 본원에 참조로 포함됨) 참조; 또한 문헌 [Guedan et al. Mol Ther Methods Clin Dev. 2019 Mar 15; 12: 145-156] (이는 비시스트론 CAR 설계에 관하여 본원에 참조로 포함됨) 참조). 비시스트론 CAR 구조의 단지 하나의 비제한적 예를 제공하자면, 비시스트론 CAR은 (a) (i) 신호 펩티드 (예를 들어, CSF2RA 신호 펩티드); (ii) 항-CD19 경쇄 가변 도메인; (iii) 링커 (예를 들어, G4S 링커 또는 그의 복수); (iv) 항-CD19 중쇄 가변 도메인; (v) 스페이서 또는 힌지 (예를 들어, CD28T 스페이서); (vi) 막횡단 도메인 (예를 들어, CD28 막횡단 도메인); (vii) 공동자극 도메인 (예를 들어, CD28 공동자극 도메인); (viii) 자극 도메인 (예를 들어, CD3z 자극 도메인)을 포함하는 제1 CAR; (b) 절단가능한 링커 (예를 들어, 푸린 GSG-T2A 링커); 및 (c) (i) 신호 펩티드 (예를 들어, CD8a 신호 펩티드); (ii) 본 개시내용의 항-CD20 중쇄 가변 도메인; (iii) 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 247에 따른 링커 및/또는 서열식별번호: 307-313 중 어느 하나에 따른 링커); (iv) 본 개시내용의 항-CD20 경쇄 가변 도메인; (v) 스페이서 또는 힌지 (예를 들어, CD8a 스페이서); (vi) 막횡단 도메인 (예를 들어, CD8 막횡단 도메인); (vii) 공동자극 도메인 (예를 들어, 41bb 공동자극 도메인); 및 (viii) 자극 도메인 (예를 들어, CD3z 자극 도메인)을 포함하는 제2 CAR을 포함할 수 있다. 따라서, 비제한적으로 예시적인 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR은 서열식별번호: 291 및 292에 제시된 뉴클레오티드 및 아미노산 서열을 갖거나 포함할 수 있다.
이중특이적 CAR은 본 개시내용의 제1 결합 모티프 및 항-CD19 결합 모티프인 제2 결합 모티프를 포함하는 단일 폴리펩티드일 수 있다. 비제한적 예시적인 실시양태에서, 이중특이적 CAR은 (i) 리더 (예를 들어, CSF2RA 신호 펩티드), (ii) 본 개시내용의 항-CD20 경쇄 가변 도메인; (iii) 링커; (iv) 항-CD20 중쇄 가변 도메인; (v) 링커 (예를 들어, 말단절단된 링커); (vi) 항-CD19 경쇄 가변 도메인; (vii) 링커; (viii) 항-CD19 중쇄 가변 도메인; (ix) 세포외 도메인 (예를 들어, CD28T 힌지 또는 IgG4 힌지); (x) 막횡단 도메인 (예를 들어, CD28 막횡단 도메인); (xi) 세포내 영역 (예를 들어, CD28 세포내 공동자극 도메인 및/또는 41bb 공동자극 도메인); 및 자극 도메인 (예를 들어, CD3z 자극 도메인)을 포함할 수 있다. 따라서, 비제한적으로 예시적인 항-CD20/항-CD19 이중특이적 CAR은 서열식별번호: 293-306에 제시된 뉴클레오티드 및 아미노산 서열을 갖거나 포함할 수 있다.
비제한적으로 힌지, 스페이서, 막횡단 도메인, 공동자극 도메인, 자극 도메인, 결합 모티프 및 각각의 변이체의 서열을 포함하는 다양한 CAR 서열, 성분 및/또는 프레임워크가 공지되어 있고, 예를 들어 중쇄 가변 도메인 서열 또는 CDR 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열 또는 CDR 서열이 제공되는 경우에 목적하는 결합 및 성분 또는 아키텍처를 갖는 CAR이 용이하게 구축될 수 있다.
본 개시내용은 특히 CD20 및 제2 표적 항원, 예를 들어 CD19에 결합하는 이중특이적 항체를 제공한다. 이중특이적 항체는 제1 표적 항원에 결합하는 제1 결합 모티프 및 제2 표적 항원에 결합하는 제2 결합 모티프를 갖는 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프 및 본 개시내용의 항-CD19 결합 모티프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이중특이적 항체는 본 개시내용의 항-CD20 중쇄 가변 도메인 및 본 개시내용의 항-CD20 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD20 결합 모티프, 뿐만 아니라 항-CD19 중쇄 가변 도메인 및 항-CD19 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항-CD19 결합 모티프를 포함한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 항체가 치료제 또는 검출가능한 모이어티와 회합된 접합체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 치료제는 본원에 제공된 바와 같은 항암제이다. 특정 실시양태에서, 제공된 접합체는 1개 이상의 검출가능한 모이어티를 포함하며, 즉 1개 이상의 이러한 모이어티로 "표지"된다. 일부 이러한 실시양태에서, 본 개시내용의 접합체는 진단 또는 영상화 용도, 예를 들어 암을 진단 또는 영상화하는데 유용하다. 임의의 매우 다양한 검출가능한 모이어티가 본원에 기재된 표지된 항체 접합체에 사용될 수 있다. 적합한 검출가능한 모이어티는, 비제한적으로 다양한 리간드, 방사성핵종; 형광 염료; 화학발광제 (예컨대, 예를 들어 아크리디늄 에스테르, 안정화된 디옥세탄 등); 생물발광제; 스펙트럼 분해가능한 무기 형광 반도체 나노결정 (즉, 양자점); 마이크로입자; 금속 나노입자 (예를 들어, 금, 은, 구리, 백금 등); 나노클러스터; 상자성 금속 이온; 효소; 비색 표지 (예컨대, 예를 들어 염료, 콜로이드성 금 등); 비오틴; 디옥시게닌; 합텐; 및 항혈청 또는 모노클로날 항체가 이용가능한 단백질을 포함한다.
본 개시내용은 본원에 제공된 항-CD20 결합 모티프 및/또는 항-CD19 결합 모티프를 코딩하는 핵산을 포함한다. 본 개시내용은, 비제한적으로 결합 모티프 (예를 들어, 항-CD20 결합 모티프 및 항-CD19 결합 모티프)를 코딩하는 핵산을 포함하는, 본원에 제공된 항체를 코딩하는 핵산을 포함한다. 본 개시내용은, 비제한적으로 비시스트론 및 이중특이적 키메라 항원 수용체 (예를 들어, CD20 및 CD19에 결합하는 비시스트론 및 이중특이적 키메라 항원 수용체)를 코딩하는 핵산을 포함하는, 본원에 제공된 항원 결합 시스템을 코딩하는 핵산을 포함한다. 서열식별번호: 2의 핵산 서열은 서열식별번호: 1 및 3-11 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 13의 핵산 서열은 서열식별번호: 12 및 14-22 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 24의 핵산 서열은 서열식별번호: 23 및 25-33 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 35의 핵산 서열은 서열식별번호: 34 및 36-44 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 46의 핵산 서열은 서열식별번호: 45 및 47-55 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 57의 핵산 서열은 서열식별번호: 56 및 58-66 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 68의 핵산 서열은 서열식별번호: 67 및 69-77 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 79의 핵산 서열은 서열식별번호: 78 및 80-88 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 90의 핵산 서열은 서열식별번호: 89 및 91-99 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 101의 핵산 서열은 서열식별번호: 100 및 102-110 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 112의 핵산 서열은 서열식별번호: 111 및 113-121 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 123의 핵산 서열은 서열식별번호: 122 및 124-132 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 134의 핵산 서열은 서열식별번호: 133 및 135-143 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 145의 핵산 서열은 서열식별번호: 144 및 146-154 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 156의 핵산 서열은 서열식별번호: 155 및 157-165 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 167의 핵산 서열은 서열식별번호: 166 및 168-176 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 178의 핵산 서열은 서열식별번호: 177 및 179-187 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 189의 핵산 서열은 서열식별번호: 188 및 190-198 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 200의 핵산 서열은 서열식별번호: 199 및 201-209 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 211의 핵산 서열은 서열식별번호: 210 및 212-220 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 본 개시내용은 본원에 제공된 항-CD19 결합 모티프를 코딩하는 핵산을 포함한다. 서열식별번호: 222의 핵산 서열은 서열식별번호: 221 및 223-231 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다. 서열식별번호: 233의 핵산 서열은 서열식별번호: 232 및 234-242 각각에 상응하고 이를 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함하고 제공한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 핵산을 포함하고/거나 본 개시내용의 폴리펩티드를 코딩하는 벡터를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 항-CD20 결합 모티프 및/또는 항-CD19 결합 모티프를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용은, 비제한적으로 결합 모티프 분자 (예를 들어, 항-CD20 결합 모티프 또는 항-CD19 결합 모티프)를 코딩하는 핵산을 포함하는, 본원에 제공된 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용은, 비제한적으로 비시스트론 또는 이중특이적 키메라 항원 수용체 (예를 들어, CD20 및 CD19에 결합하는 비시스트론 및 이중특이적 키메라 항원 수용체)를 코딩하는 핵산을 포함하는, 본원에 제공된 1종 이상의 항원 결합 시스템을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다.
임의의 벡터가 본 개시내용에 적합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 실시양태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터, DNA 벡터, 뮤린 백혈병 바이러스 벡터, SFG 벡터, 플라스미드, RNA 벡터, 아데노바이러스 벡터, 바큘로바이러스 벡터, 엡스타인 바르 바이러스 벡터, 파포바바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 단순 포진 바이러스 벡터, 아데노바이러스 연관 벡터 (AAV), 렌티바이러스 벡터 또는 그의 임의의 조합이다. 적합한 예시적인 벡터는, 예를 들어 pGAR, pBABE-puro, pBABE-neo largeTcDNA, pBABE-hygro-hTERT, pMKO.1 GFP, MSCV-IRES-GFP, pMSCV PIG (퓨로 IRES GFP 공 플라스미드), pMSCV-loxp-dsRed-loxp-eGFP-Puro-WPRE, MSCV IRES 루시페라제, pMIG, MDH1-PGK-GFP_2.0, TtRMPVIR, pMSCV-IRES-mCherry FP, pRetroX GFP T2A Cre, pRXTN, pLncEXP 및 pLXIN-Luc를 포함한다.
재조합 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터일 수 있다. 적합한 벡터는 증식 및 확장을 위해 또는 발현을 위해 또는 둘 다를 위해 설계된 것, 예컨대 플라스미드 및 바이러스를 포함한다. 예를 들어, 벡터는 pUC 시리즈 (퍼멘타스 라이프 사이언시스(Fermentas Life Sciences), 메릴랜드주 글렌 버니), p블루스크립트 시리즈 (스트라타진(Stratagene), 캘리포니아주 라호야), pET 시리즈 (노바젠(Novagen), 위스콘신주 매디슨), pGEX 시리즈 (파마시아 바이오테크(Pharmacia Biotech), 스웨덴 웁살라), 및 pEX 시리즈 (클론테크(Clontech), 캘리포니아주 팔로 알토)로부터 선택될 수 있다. 박테리오파지 벡터, 예컨대 λGT10, λGT11, λZapII (스트라타진), λEMBL4 및 λNM1149가 또한 사용될 수 있다. 본 개시내용과 관련하여 유용한 식물 발현 벡터의 예는 pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 및 pBIN19 (클론테크)를 포함한다. 본 개시내용과 관련하여 유용한 동물 발현 벡터의 예는 pcDNA, pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo (클론테크)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 시스템을 코딩하는 핵산 및 본원에 기재된 유도성 발현 구축물 둘 다를 포함하는 비시스트론 IRES 벡터 (예를 들어, 클론테크로부터의 것)가 사용된다.
일부 실시양태에서, 재조합 발현 벡터는 바이러스 벡터이다. 적합한 바이러스 벡터는, 비제한적으로 레트로바이러스 벡터, 알파바이러스, 백시니아, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 헤르페스 바이러스 및 계두 바이러스 벡터를 포함하고, 바람직하게는 면역 세포 (예를 들어, T 세포)를 형질전환시키는 천연의 또는 조작된 능력을 갖는다.
재조합 발현 벡터는, 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 2001; 및 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994]에 기재된 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 원형 또는 선형인 발현 벡터의 구축물은 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 기능적인 복제 시스템을 함유하도록 제조될 수 있다. 복제 시스템은, 예를 들어 ColEl, 2μ 플라스미드, λ, SV40, 소 유두종 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다.
재조합 발현 벡터는 형질전환된 또는 형질감염된 숙주의 선택을 가능하게 하는 1종 이상의 마커 유전자를 포함할 수 있다. 마커 유전자는 살생물제 내성, 예를 들어 항생제, 중금속 등에 대한 내성, 원영양성을 제공하는 영양요구성 숙주에서의 상보성 등을 포함한다. 재조합 발현 벡터에 적합한 마커 유전자는, 예를 들어 네오마이신/G418 내성 유전자, 퓨로마이신 내성 유전자, 히그로마이신 내성 유전자, 히스티디놀 내성 유전자, 테트라시클린 내성 유전자 및 암피실린 내성 유전자를 포함한다.
본 개시내용과 관련하여 유용한 벡터는 "네이키드" 핵산 벡터 (즉, 이들을 캡슐화하는 단백질, 당 및/또는 지질이 거의 또는 전혀 없는 벡터), 또는 다른 분자와 복합체화된 벡터일 수 있다. 벡터와 적합하게 조합될 수 있는 다른 분자는, 비제한적으로 바이러스 코트, 양이온성 지질, 리포솜, 폴리아민, 금 입자, 및 표적화 모이어티, 예컨대 세포 분자를 표적화하는 리간드, 수용체 또는 항체를 포함한다.
벡터 DNA는 통상적인 형질전환, 형질감염 또는 형질도입 기술을 통해 세포, 예를 들어 면역 세포 내로 도입될 수 있다. 용어 "형질전환" 및 "형질감염"은 외래 핵산 (예를 들어, DNA)을 세포 내로 도입하기 위한 다양한 관련 기술분야-인식 기술, 예컨대 인산칼슘 또는 염화칼슘 공동-침전, DEAE-덱스트란-매개 형질감염, 리포펙션, 유전자 총, 나노입자-매개 전달 또는 전기천공을 포괄한다. 형질도입은, 예를 들어 비제한적으로 레트로바이러스, 렌티바이러스 및 AAV를 포함하는 본원에 개시된 벡터에 의한 벡터의 세포로의 바이러스 전달을 포함한다.
본 개시내용은 본 개시내용의 적어도 1종의 벡터 또는 핵산을 포함하거나, 발현하거나, 또는 이를 포함하거나 발현하도록 조작된 (예를 들어, 형질전환 또는 형질도입된) 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 세포를 적어도 1종의 항원 결합 시스템을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 형질도입하는 것을 포함한다. 본 개시내용은 본 개시내용의 1종 이상의 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 1종의 벡터를 포함하거나 또는 이를 포함하도록 형질전환된 세포를 포함한다. 본 개시내용은 본원에 제공된 항-CD20 결합 모티프 및/또는 항-CD19 결합 모티프를 코딩하는 적어도 1종의 벡터를 포함하거나 또는 이를 포함하도록 형질전환된 세포를 포함한다. 본 개시내용은, 비제한적으로 결합 모티프 분자 (예를 들어, 항-CD20 결합 모티프 또는 항-CD19 결합 모티프)를 포함하는 본원에 제공된 항체를 코딩하는 적어도 1종의 벡터를 포함하거나 또는 이를 포함하도록 형질전환된 세포를 포함한다. 본 개시내용은, 비제한적으로 비시스트론 또는 이중특이적 키메라 항원 수용체 (예를 들어, CD20 및 CD19에 결합하는 비시스트론 또는 이중특이적 키메라 항원 수용체)를 포함하는 본원에 제공된 1종 이상의 항원 결합 시스템을 코딩하는 적어도 1종의 벡터를 포함하거나 또는 이를 포함하도록 형질전환된 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 2종의 벡터로 공동-형질감염 또는 공동-형질도입되며, 각각의 벡터는 상이한 CAR을 코딩하고, 2종의 상이한 CAR은 함께 비시스트론 CAR이다. 함께 비시스트론 CAR인 2종의 상이한 CAR을 코딩하는 2종의 상이한 벡터로의 세포의 형질감염 또는 형질도입은, 단일 세포 집단에 대해 동시에, 각각의 집단이 2종의 벡터 중 1종만으로 형질도입된 2종의 상이한 세포 집단에 대해 동시에, 또는 각각 2종의 벡터 중 1종만으로 형질도입된 2종의 상이한 세포 집단에 대해 독립적으로 수행될 수 있다.
본 개시내용은 본 개시내용의 1종 이상의 폴리펩티드를 포함하는 세포를 포함한다. 본 개시내용은 본원에 제공된 항-CD20 결합 모티프 및/또는 항-CD19 결합 모티프를 포함하는 (예를 들어, 발현하는) 세포를 포함한다. 본 개시내용은, 비제한적으로 결합 모티프 (예를 들어, 항-CD20 결합 모티프 또는 항-CD19 결합 모티프)를 포함하는 본원에 제공된 항체를 포함하는 (예를 들어, 발현하는) 세포를 포함한다. 본 개시내용은, 비제한적으로 비시스트론 또는 이중특이적 키메라 항원 수용체 (예를 들어, CD20 및 CD19에 결합하는 비시스트론 및 이중특이적 키메라 항원 수용체)를 포함하는 본원에 제공된 1종 이상의 항원 결합 시스템을 포함하는 (예를 들어, 발현하는) 세포를 포함한다.
다른 측면에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 세포가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 scfv 중 1 또는 2종을 포함하는 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포, 예를 들어 시험관내 세포에 관한 것이다. 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 scfv 중 1 또는 2종을 포함하는 CAR 또는 TCR에 의해 코딩된 폴리펩티드를 포함하는 세포, 예를 들어 시험관내 세포에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 하기 제시된 아미노산 서열 또는 그의 임의의 조합을 포함한다.
서열식별번호: 232 (항-CD19 scFv 경쇄):
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT
서열식별번호: 221 (항-CD19 scFv 중쇄):
EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS
서열식별번호: 56 (항-CD20 경쇄):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLADPFTFGGGTKVEIK
서열식별번호: 45 (항-CD20 중쇄):
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARETDYSSGMGYGMDVWGQGTTVTVSS
서열식별번호: 56 (항-CD20 scFv 2 경쇄):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSLADPFTFGGGTKVEIK
서열식별번호: 155 (항-CD20 scFv 2 중쇄):
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSRYVWSWIRQPPGKGLEWIGEIDSSGKTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYDSSDSYYYSYDYGMDVWGQGTTVTVSS
서열식별번호: 144 (항-CD20 scFv 3 경쇄):
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASSRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSYSFPWTFGGGTKVEIK
서열식별번호: 177 (항-CD20 scFv 3 중쇄):
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYAWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHRGFTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVRYDSSDSYYYSYDYGMDVWGQGTTVTVSS
서열식별번호: 78 (항-CD20 scFv 4 경쇄):
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYRFPPTFGQGTKVEIK
서열식별번호: 67 (항-CD20 scFv 4 중쇄):
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFKEYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYSGHTYYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGPHYDDWSGFIIWFDPWGQGTLVTVSS
임의의 세포가 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 폴리펩티드에 대한 숙주 세포로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 원핵 세포, 진균 세포, 효모 세포 또는 보다 고등의 진핵 세포, 예컨대 포유동물 세포일 수 있다. 적합한 원핵 세포는, 비제한적으로 유박테리아, 예컨대 그람-음성 또는 그람-양성 유기체, 예를 들어 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae), 예컨대 에스케리키아(Escherichia), 예를 들어 이. 콜라이(E. coli); 엔테로박터(Enterobacter); 에르위니아(Erwinia); 클레브시엘라(Klebsiella); 프로테우스(Proteus); 살모넬라(Salmonella), 예를 들어 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium); 세라티아(Serratia), 예를 들어 세라티아 마르세스칸스(Serratia marcescans) 및 시겔라(Shigella); 바실루스(Bacilli), 예컨대 비. 서브틸리스(B. subtilis) 및 비. 리케니포르미스(B. licheniformis); 슈도모나스(Pseudomonas), 예컨대 피. 아에루기노사(P. aeruginosa); 및 스트렙토미세스(Streptomyces)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 인간 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, B 세포, 종양 침윤 림프구 (TIL), TCR 발현 세포, 자연 킬러 (NK) 세포, 수지상 세포, 과립구, 선천성 림프성 세포, 거핵구, 단핵구, 대식세포, 혈소판, 흉선세포 및 골수 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 면역 세포는 NK 세포이다. 특정 실시양태에서, T 세포는 종양-침윤 림프구 (TIL), 자가 T 세포, 조작된 자가 T 세포 (eACT™), 동종 T 세포, 이종 T 세포 또는 그의 임의의 조합이다.
키메라 항원 수용체 (CAR 또는 CAR-T) 및 조작된 T 세포 수용체 (TCR)는 면역 세포, 예를 들어 T 세포 내로 용이하게 삽입되고 그에 의해 발현되어 결합제를 생산할 수 있다. 특정 실시양태에서, 세포 (예를 들어, 면역 세포, 예컨대 T 세포)는 공여자 대상체로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓는 인간 환자이다. 다른 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓지 않는 인간 환자이다. 일부 실시양태에서, 조작된 세포는 대상체에 대해 자가이다. 일부 실시양태에서, 조작된 세포는 대상체에 대해 동종이다.
본 개시내용의 세포는 관련 기술분야에 공지된 임의의 공급원을 통해 수득될 수 있다. 예를 들어, T 세포는 조혈 줄기 세포 집단으로부터 시험관내 분화될 수 있거나, 또는 T 세포는 대상체로부터 수득될 수 있다. T 세포는, 예를 들어 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직, 및 종양으로부터 수득될 수 있다. 추가로, T 세포는 관련 기술분야에서 이용가능한 1종 이상의 T 세포주로부터 유래될 수 있다. T 세포는 또한 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수의 기술, 예컨대 피콜™ 분리 및/또는 분리반출술을 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분리반출술에 의해 수집된 세포는 혈장 분획을 제거하기 위해 세척되고, 후속 처리를 위해 적절한 완충제 또는 배지 중에 놓인다. 일부 실시양태에서, 세포는 PBS로 세척된다. 인지될 바와 같이, 세척 단계는, 예컨대 반자동화 관통 원심분리, 예를 들어 코베(Cobe)™ 2991 세포 처리기, 백스터 시토메이트(Baxter CytoMate)™ 등을 사용함으로써 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세척된 세포는 1종 이상의 생체적합성 완충제, 또는 완충제의 존재 또는 부재 하의 다른 염수 용액 중에 재현탁된다. 특정 실시양태에서, 분리반출술 샘플의 바람직하지 않은 성분은 제거된다. T 세포 요법을 위해 T 세포를 단리하는 추가의 방법은 미국 특허 공개 번호 2013/0287748에 개시되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
특정 실시양태에서, 적혈구를 용해시키고 단핵구를 고갈시킴으로써, 예를 들어 퍼콜(PERCOLL)™ 구배를 통한 원심분리를 사용함으로써 PBMC로부터 T 세포가 단리된다. 일부 실시양태에서, T 세포의 특정 하위집단, 예컨대 CD4+, CD8+, CD28+, CD45RA+ 및 CD45RO+ T 세포는 관련 기술분야에 공지된 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리된다. 예를 들어, 음성 선택에 의한 T 세포 집단의 풍부화는 음성 선택된 세포에 고유한 표면 마커로 지시된 항체의 조합에 의해 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 음성 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커로 지시된 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역부착 또는 유동 세포측정법을 통한 세포 분류 및/또는 선택이 사용될 수 있다. 예를 들어, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 풍부화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로 CD8, CD11b, CD14, CD16, CD20 및 HLA-DR에 대한 항체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용에서 사용하기 위한 관심 세포 집단을 단리하는데 유동 세포측정법 및 세포 분류가 사용된다.
일부 실시양태에서, PBMC는 본원에 기재된 바와 같은 방법을 사용하는 면역 세포 (예컨대 CAR 또는 TCR)에 의한 유전자 변형에 직접적으로 사용된다. 특정 실시양태에서, PBMC의 단리 후, T 림프구가 추가로 단리되고, 세포독성 및 헬퍼 T 림프구 둘 다가 유전자 변형 및/또는 확장 전 또는 그 후에 나이브, 기억 및 이펙터 T 세포 하위집단으로 분류된다.
일부 실시양태에서, CD8+ 세포는 이들 유형의 CD8+ 세포 각각과 연관된 세포 표면 항원을 확인함으로써 나이브, 중심 기억 및 이펙터 세포로 추가로 분류된다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포의 표현형 마커의 발현은 CCR7, CD3, CD28, CD45RO, CD62L 및 CD127을 포함하고, 그랜자임 B에 대해 음성이다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포는 CD8+, CD45RO+ 및 CD62L+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 이펙터 T 세포는 CCR7, CD28, CD62L 및 CD127에 대해 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 대해 양성이다. 특정 실시양태에서, CD4+ T 세포는 하위집단으로 추가로 분류된다. 예를 들어, CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인함으로써 나이브, 중심 기억 및 이펙터 세포로 분류될 수 있다.
일부 실시양태에서, 면역 세포, 예를 들어 T 세포는 공지된 방법을 사용하여 단리 후 유전자 변형되거나, 또는 면역 세포는 유전자 변형 전에 시험관내 활성화 및 확장된다 (또는 전구세포의 경우에 분화됨). 또 다른 실시양태에서, 면역 세포, 예를 들어 T 세포는 본원에 기재된 키메라 항원 수용체에 의해 유전자 변형되고 (예를 들어, CAR을 코딩하는 1개 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 바이러스 벡터에 의해 형질도입되고), 이어서 시험관내 활성화 및/또는 확장된다. T 세포를 활성화 및 확장시키는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 미국 특허 번호 6,905,874; 6,867,041; 및 6,797,514; 및 PCT 공개 번호 WO 2012/079000 (이들의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 일반적으로, 이러한 방법은 적절한 시토카인, 예컨대 IL-2를 함유하는 배양 배지 중에서 PBMC 또는 단리된 T 세포를, 일반적으로 비드 또는 다른 표면에 부착된 자극제 및 공동자극제, 예컨대 항-CD3 및 항-CD28 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 동일한 비드에 부착된 항-CD3 및 항-CD28 항체는 "대용" 항원 제시 세포 (APC)로서의 역할을 한다. 한 예는 인간 T 세포의 생리학적 활성화를 위한 CD3/CD28 활성화제/자극제 시스템인 디나비즈(Dynabeads)® 시스템이다. 다른 실시양태에서, T 세포는 미국 특허 번호 6,040,177 및 5,827,642 및 PCT 공개 번호 WO 2012/129514 (이들의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 것과 같은 방법을 사용하여 피더 세포 및 적절한 항체 및 시토카인으로 활성화되고 자극되어 증식한다.
본 개시내용의 다양한 측면에서, 본 개시내용의 벡터 또는 폴리펩티드 (예를 들어, 본 개시내용의 항-CD20 결합 모티프 및/또는 항-CD20/항-CD19 항원 결합 시스템)를 포함하거나, 발현하거나, 코딩하거나 또는 코딩하도록 형질전환된 세포는 결합제이다. 결합제 또는 결합제의 집단은 결합제 (예를 들어, 암에 대한 치료로서 유용한 세포를 포함하는 조성물)로서 (예를 들어, 그의 활성제로서) 사용될 수 있다.
본 개시내용은, 예를 들어 세포를 본 개시내용의 벡터 또는 핵산으로 형질전환 (예를 들어, 형질도입)시킴으로써 본원에 개시된 바와 같은 항체 작용제를 생산하는 방법 및 과정을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체 작용제를 생산하는 방법 또는 과정은 세포를 본원에 제공된 적어도 1종의 항원 결합 시스템을 코딩하는 핵산 (예를 들어, 벡터 내에 존재하는 핵산)으로 형질전환 (예를 들어, 형질도입)시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 본원에 기재된 항체 작용제는 면역 세포, 예를 들어 입양 세포 요법에 유용하거나 또는 그에 사용될 수 있는 세포로부터 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합제는 TIL, T-세포, CD8+ 세포, CD4+ 세포, NK-세포, 감마-델타 T-세포, 조절 T-세포 또는 말초 혈액 단핵 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 유형으로부터 생산된다. "종양-침윤 림프구" 또는 TIL은 혈류를 떠나 종양 내로 이동한 백혈구를 지칭한다. 림프구는 B 세포, T 세포 및 자연 킬러 세포를 포함하는 3개의 군으로 나뉠 수 있다. "T-세포"는 CD4+ 헬퍼 세포, CD8+ 세포독성 T-세포 및 감마-델타 T 세포를 포함하는 CD3+ 세포를 지칭한다.
특정 실시양태에서, 결합제는 세포, 예를 들어 면역 세포를 본원에 기재된 항원 결합 시스템 및/또는 발현 구축물을 코딩하는 핵산 (예를 들어, (i) 항원 결합 시스템을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 재조합 발현 벡터 및 유도성 발현 구축물을 포함하는 제2 재조합 발현 벡터, (ii) 항원 결합 시스템을 코딩하는 핵산 및 유도성 발현 구축물 둘 다를 포함하는 단일 재조합 발현 벡터; 또는 (iii) 구성적 발현 구축물을 포함하는 재조합 발현 벡터)으로 유전자 변형 (예를 들어, 형질전환)시킴으로써 생산된다. 재조합 발현 벡터는, 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, 합성되거나 또는 부분적으로 천연 공급원으로부터 수득될 수 있으며, 천연, 비-천연 또는 변경된 뉴클레오티드를 함유할 수 있는, 비제한적으로 DNA 및 RNA를 포함하는 임의의 유형의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 재조합 발현 벡터는 자연-발생 또는 비-자연-발생 뉴클레오티드간 연결 또는 둘 다의 유형의 연결을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 세포를 본원에 개시된 바와 같은 항원 결합 시스템을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 형질도입하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 세포를 항원 결합 시스템을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 형질도입하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자로부터 수득된다 (예를 들어, 자가 T 세포 요법을 위함). 다른 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자가 아닌 대상체로부터 수득된다. 예시적인 측면에서, 대상체는 백혈구분리반출술을 받을 수 있으며, 여기서 백혈구는 관심 세포, 예를 들어 T 세포를 선택 및/또는 단리하기 위해 생체외에서 수집, 풍부화 또는 고갈된다. 이들 T 세포 단리물은 본 개시내용의 1종 이상의 CAR 구축물이 도입되어 본 개시내용의 CAR T 세포를 생성할 수 있도록 방법에 의해 확장되고 처리될 수 있다.
일부 실시양태에서, 결합제를 수득하기 위해, 면역 세포가 대상체로부터 수득되고, 본원에 기재된 유도성 발현 구축물 또는 구성적 발현 구축물, 예를 들어 본원에 기재된 유도성 발현 구축물 또는 구성적 발현 구축물을 포함하는 발현 벡터로 형질전환, 예를 들어 형질도입된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 결합제는 면역 세포가 수득된 동일한 대상체 내로 투여되는 자가 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 또 다른 대상체 내로 동종 전달되는 결합제를 수득하기 위해, 면역 세포가 대상체로부터 수득되고, 본원에 기재된 유도성 발현 구축물 또는 구성적 발현 구축물, 예를 들어 본원에 기재된 유도성 발현 구축물 또는 구성적 발현 구축물을 포함하는 발현 벡터로 형질전환, 예를 들어 형질도입된다.
특정 실시양태에서, T 세포는 공여자 대상체로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓는 인간 환자이다. 다른 실시양태에서, 공여자 대상체는 암 또는 종양을 앓지 않는 인간 환자이다.
본 개시내용의 다양한 조성물은 임의의 수단에 의해 생산될 수 있는 조작된 세포 집단을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 항원 결합 시스템을 발현하도록 조작된 인간 세포 집단을 제공한다. 일부 실시양태에서, 이러한 집단은 결합제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 집단은 배양된 집단을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 집단은 일부 실시양태에서 배양된 집단의 투여를 받을 수 있는 단일 인간 공급원으로부터의 세포의 배양된 집단이다. 본원에 개시된 바와 같이, 결합제는 본원에 제공된 바와 같은 임의의 단일 세포 또는 세포 집단, 예를 들어 조작된 세포 집단을 포함할 수 있다.
본 개시내용의 다른 측면은 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드, 본원에 기재된 벡터, 본원에 기재된 폴리펩티드 또는 본원에 기재된 시험관내 세포를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 담체, 희석제, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 부형제를 포함한다. 한 실시양태에서, 조성물은 본원에 기재된 항원 결합 분자를 포함하는 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 TCD를 포함하는 CAR 또는 TCR을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 조성물은 본원에 개시된 scfv 중 1 또는 2종을 포함하는 CAR 또는 TCR을 포함하는 T 세포를 포함한다.
다른 실시양태에서, 조성물은 비경구 전달을 위해, 흡입을 위해, 또는 소화관을 통한, 예컨대 경구로의 전달을 위해 선택된다. 이러한 제약상 허용되는 조성물의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다. 특정 실시양태에서, 완충제가 사용되어 조성물을 생리학적 pH 또는 약간 더 낮은 pH에서, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에서 유지한다. 특정 실시양태에서, 비경구 투여가 고려되는 경우에, 조성물은 제약상 허용되는 비히클 중, 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 본원에 기재된 조성물을 포함하는 발열원-무함유의 비경구로 허용되는 수용액의 형태로 존재한다. 특정 실시양태에서, 비경구 주사를 위한 비히클은 멸균 증류수이며, 여기서 본원에 기재된 조성물은, 적어도 1종의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 적절하게 보존된 멸균 등장성 용액으로서 제제화된다. 특정 실시양태에서, 제제는 생성물의 제어 또는 지속 방출을 제공하는 중합체 화합물 (예컨대 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포솜을 사용하여 목적하는 분자를 제제화하는 것을 수반하고, 이어서 이는 데포 주사를 통해 전달된다. 특정 실시양태에서, 이식형 약물 전달 장치가 목적하는 분자를 도입하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용 중 1종 이상, 예를 들어 본 개시내용의 항원 결합 시스템, 이들을 코딩하는 핵산, 및/또는 이들을 포함하고/거나 발현하는 세포(들) 또는 그의 집단을 포함하고/거나 전달하는 제약 조성물을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 바와 같은 1개 이상의 세포, 예를 들어 본원에 제공된 폴리펩티드를 코딩하거나 발현하는 결합제, 예를 들어 항-CD20/항-CD19 CAR을 포함하고/거나 전달하는 제약 조성물 (즉, "결합제 제약 조성물")을 제공한다. 결합제 제약 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 1개 또는 복수의 세포를 1종 이상의 제약상 또는 생리학상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 조합하여 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 완충제, 예컨대 중성 완충 염수, 포스페이트 완충 염수 등; 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란, 만니톨; 단백질; 폴리펩티드 또는 아미노산, 예컨대 글리신; 항산화제; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA 또는 글루타티온; 아주반트 (예를 들어, 수산화알루미늄); 및 보존제를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 결합제 제약 조성물은 본원에 제시된 임의의 실시양태에 따른 투여를 위해 제제화될 수 있으며, 투여의 적어도 1종의 비제한적 예는 정맥내 투여이다. 조성물은 정맥내, 종양내, 동맥내, 근육내, 복강내, 척수강내, 경막외 및/또는 피하 투여 경로를 위해 제제화될 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 비경구 투여 경로를 위해 제제화된다. 비경구 투여에 적합한 조성물은, 예를 들어 조성물이 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는, 항산화제, 완충제, 정박테리아제 및 용질을 함유할 수 있는 수성 또는 비수성의 등장성 멸균 주사 용액일 수 있다. 수성 또는 비수성 멸균 현탁액은 1종 이상의 현탁화제, 가용화제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 함유할 수 있다. 본 개시내용의 결합제 제약 조성물은 치료 (또는 예방)될 질환에 적절한 방식으로 투여될 수 있다.
주사용 멸균 조성물은 비히클로서 주사용 증류수를 사용하여 통상적인 제약 실시에 따라 제제화될 수 있다. 예를 들어, 생리 염수, 또는 글루코스 및 다른 보충제, 예컨대 D-소르비톨, D-만노스, D-만니톨 및 염화나트륨을 함유하는 등장성 용액이 주사용 수용액으로서, 임의로 적합한 가용화제, 예를 들어 알콜, 예컨대 에탄올 및 폴리알콜, 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜, 및 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 80™, HCO-50 등과 조합되어 사용될 수 있다.
유성 액체의 비제한적 예는 참깨 오일 및 대두 오일을 포함하고, 이는 가용화제로서 벤질 벤조에이트 또는 벤질 알콜과 조합될 수 있다. 포함될 수 있는 다른 항목은 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제 또는 아세트산나트륨 완충제, 수딩제, 예컨대 프로카인 히드로클로라이드, 안정화제, 예컨대 벤질 알콜 또는 페놀, 및 항산화제이다. 제제화된 주사제는 적합한 앰플에 포장될 수 있다.
한 실시양태에서, 결합제 제약 조성물은 검출가능한 수준의 오염물, 예를 들어 내독소, 미코플라스마, 복제 적격 렌티바이러스 (RCL), p24, VSV-G 핵산, HIV gag, 잔류 항-CD3/항-CD28 코팅된 비드, 마우스 항체, 풀링된 인간 혈청, 소 혈청 알부민, 소 혈청, 배양 배지 성분, 벡터 패키징 세포 또는 플라스미드 성분, 박테리아 및 진균이 실질적으로 없다. 한 실시양태에서, 박테리아는 알칼리게네스 파에칼리스(Alcaligenes faecalis), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 헤모필루스 인플루엔자에(Haemophilus influenzae), 네이세리아 메닌기티데스(Neisseria meningitides), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 뉴모니아(Streptococcus pneumonia) 및/또는 스트렙토코쿠스 피오게네스(Streptococcus pyogenes) 군 A로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종이다.
다양한 실시양태에서, 본원에 제공된 세포 (예를 들어, 결합제, 예를 들어 조작된 T 세포 또는 조작된 NK 세포)는 결합제 제약 조성물로부터 활성화 및/또는 확장되고/거나 그를 생산할 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가의 단계는 대상체에 대한 투여 전에 수행될 수 있다. 예를 들어, 결합제는 대상체에 대한 투여 전에, 면역 세포를 본원에 기재된 유도성 발현 구축물 또는 구성적 발현 구축물 (예를 들어, 유도성 발현 구축물 또는 구성적 발현 구축물을 포함하는 발현 벡터)과 접촉 (예를 들어, 형질도입 또는 형질감염)시킨 후에 시험관내에서 확장될 수 있다. 시험관내 확장은 대상체에 대한 투여 전 1일 이상, 예를 들어 2일 이상, 3일 이상, 4일 이상, 6일 이상 또는 8일 이상 동안 진행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 시험관내 확장은 대상체에 대한 투여 전 21일 이하, 예를 들어 18일 이하, 16일 이하, 14일 이하, 10일 이하, 7일 이하 또는 5일 이하 동안 진행될 수 있다. 예를 들어, 시험관내 확장은 대상체에 대한 투여 전 1-7일, 2-10일, 3-5일 또는 8-14일 동안 진행될 수 있다. 예를 들어, 결합제 (예를 들어, 조작된 T 세포 또는 조작된 NK 세포)를 포함하는 결합제 제약 조성물은 목적하는 투여량, 예를 들어 104 내지 109개 세포/kg 체중 (예를 들어, 105 내지 106개 세포/kg 체중)의 투여량으로 투여하기 위해 제제화될 수 있다. 본 개시내용의 특정 실시양태는 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 제약 조성물, 예컨대, 예를 들어 본원에 기재된 결합제 (예를 들어, 본 개시내용의 조작된 세포 집단), 본원에 기재된 단백질 치료제, 결합제를 포함하는 조성물 및/또는 단백질 치료제를 포함하는 조성물을, 예를 들어 적절한 투여 요법으로 투여되는 경우에 대상체를 치료하는데 효과적인 양으로 투여하는 방법을 포함한다.
일부 실시양태에서, 결합제는 대상체에 대해 자가이고, 대상체는 면역학적으로 나이브이거나, 면역화되어 있거나, 이환되어 있거나, 또는 대상체로부터의 면역 세포의 단리 전 또 다른 상태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 시험관내 확장 동안, 결합제는 항원 (예를 들어, TCR 항원)으로 자극될 수 있다. 항원-자극된 확장은 임의로 림프구 증식을 비-특이적으로 자극하는 조건, 예컨대, 예를 들어 항-CD3 항체, 항-Tac 항체, 항-CD28 항체 또는 피토헤마글루티닌 (PHA) 하의 확장으로 보충될 수 있다. 확장된 결합제는 대상체에게 직접 투여될 수 있거나 또는 향후 사용을 위해, 즉 대상체에 대한 후속 투여를 위해 동결될 수 있다.
일부 실시양태에서, 결합제는 암 환자 내로의 주입 전에 인터류킨-2 (IL-2)로 생체외 처리되고, 암 환자는 주입 후에 IL-2로 치료된다. 추가로, 일부 실시양태에서, 암 환자는 결합제의 투여 전에 예비 림프구고갈--면역계의 일시적 절제--를 겪을 수 있다. IL-2 처리와 예비 림프구고갈의 조합은 결합제의 지속성을 증진시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합제는 시토카인을 코딩하는 핵산으로 형질도입 또는 형질감염되며, 이러한 핵산은 시토카인의 구성적 발현, 조절가능한 발현 또는 시간적으로-제어된 발현을 제공하도록 조작될 수 있다. 적합한 시토카인은, 예를 들어 수축기 동안 T 림프구의 생존을 증진시키는 작용을 하는 시토카인을 포함하며, 이는 기억 T 림프구의 형성 및 생존을 용이하게 할 수 있다.
특정 실시양태에서, 결합제는 또 다른 치료제, 예컨대 암 치료제의 투여 전에, 그와 실질적으로 동시에 또는 그 후에 투여된다. 암 치료제는, 예를 들어 화학요법제, 생물학적 작용제 또는 방사선 치료일 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합제를 받는 대상체는 면역 세포의 고갈을 유발하기에 충분한 치료, 예컨대 림프구고갈 화학요법 또는 방사선 요법을 투여받지 않는다.
일부 실시양태에서 대상체에게 투여되는 투여량은 실시양태, 사용되는 조성물, 투여 방법 및 치료될 부위 및 대상체에 따라 달라질 수 있다. 그러나, 용량은 치료 반응을 제공하기에 충분해야 한다. 임상의는 의학적 상태를 치료 또는 예방하기 위해 인간 또는 다른 대상체에게 투여될 조성물의 치료 유효량을 결정할 수 있다. 치료상 유효하기 위해 요구되는 조성물의 정확한 양은 수많은 인자, 예를 들어, 예컨대 결합제의 활성 및 투여 경로에 좌우될 수 있다.
적합한 수의 결합제 세포가 대상체에게 투여될 수 있다. 본원에 기재된 단일 결합제 세포는 확장되어 치료 이익을 제공할 수 있으며, 일부 실시양태에서, 102개 이상, 예를 들어 103개 이상, 104개 이상, 105개 이상 또는 108개 이상의 결합제 세포가 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 1012개 이하, 예를 들어 1011개 이하, 109개 이하, 107개 이하 또는 105개 이하의 결합제 세포가 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 102-105개, 104-107개, 103-109개 또는 105-1010개의 결합제 세포가 투여된다. 결합제 제약 조성물은, 예를 들어 104 내지 109개 세포/kg 체중 (예를 들어, 105 내지 106개 세포/kg 체중)의 투여량으로 투여될 수 있다. 결합제 제약 조성물은, 예를 들어 약 2 X 106개 세포/kg, 약 3 X 106개 세포/kg, 약 4 X 106개 세포/kg, 약 5 X 106개 세포/kg, 약 6 X 106개 세포/kg, 약 7 X 106개 세포/kg, 약 8 X 106개 세포/kg, 약 9 X 106개 세포/kg, 약 1 X 107개 세포/kg, 약 2 X 107개 세포/kg, 약 3 X 107개 세포/kg, 약 4 X 107개 세포/kg, 약 5 X 107개 세포/kg, 약 6 X 107개 세포/kg, 약 7 X 107개 세포/kg, 약 8 X 107개 세포/kg 또는 약 9 X 107개 세포/kg의 투여량으로 투여될 수 있다.
본원에 기재된 결합제의 용량은 포유동물에게 한 번에 투여될 수 있거나, 또는 필요에 따라 적합한 기간에 걸쳐, 예를 들어 매일, 반-매주, 매주, 격주, 반-매월, 격월, 반-매년 또는 매년 기준으로 투여되는 일련의 하위용량으로 투여될 수 있다. 유효량의 결합제를 포함하는 투여 단위는 단일 1일 용량으로 투여될 수 있거나, 또는 총 1일 투여량은 필요에 따라 매일 투여되는 2, 3, 4회 또는 그 초과의 분할 용량으로 투여될 수 있다.
적합한 투여 수단은 의료 진료의에 의해 선택될 수 있다. 투여 경로는 비경구, 예를 들어 주사에 의한 투여, 경비 투여, 경폐 투여 또는 경피 투여일 수 있다. 투여는 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사에 의한 전신 또는 국부 투여일 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 비경구 전달, 흡입, 또는 소화관을 통한, 예컨대 경구 전달을 위해 선택된다. 용량 및 투여 방법은 대상체의 체중, 연령, 상태 등에 따라 달라질 수 있고, 적합하게 선택될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 결합제는 제약 조성물 내로 혼입될 수 있다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 제약 조성물은 공지된 방법 (예컨대 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1985)]에 기재된 바와 같은 방법)에 의해 제제화될 수 있다. 다양한 경우에, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하도록 제제화될 수 있다. 제약상 허용되는 담체의 예는, 비제한적으로 생리학상 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 제약상 허용되는 염, 예를 들어 산 부가염 또는 염기 부가염을 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 결합제를 포함하는 조성물, 예를 들어 주사용 멸균 제제는 비히클로서 주사용 증류수를 사용하여 통상적인 제약 실시에 따라 제제화될 수 있다. 예를 들어, 생리 염수, 또는 글루코스 및 다른 보충제, 예컨대 D-소르비톨, D-만노스, D-만니톨 및 염화나트륨을 함유하는 등장성 용액이 주사용 수용액으로서, 임의로 적합한 가용화제, 예를 들어 알콜, 예컨대 에탄올 및 폴리알콜, 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜, 및 비이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 80™, HCO-50 등과 조합되어 사용될 수 있다. 본원에 개시된 바와 같이, 결합제를 포함하는 제약 조성물은 임의의 형태일 수 있다. 이러한 형태는, 예를 들어 액체, 반고체 및 고체 투여 형태, 예컨대 액체 용액 (예를 들어, 주사가능한 및 주입가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환제, 분말, 리포솜 및 좌제를 포함한다.
임의의 형태의 선택 또는 사용은, 부분적으로, 의도된 투여 방식 및 치료 용도에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 전신 또는 국부 전달을 위해 의도된 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 주사가능한 또는 주입가능한 용액의 형태일 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 비경구 방식 (예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사)에 의한 투여를 위해 제제화될 수 있다. 비경구 투여는 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 다른 투여 방식을 지칭하고, 비제한적으로 정맥내, 비강내, 안내, 폐, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 폐내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외, 뇌내, 두개내, 경동맥내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
투여 경로는 비경구, 예를 들어 주사에 의한 투여, 경비 투여, 경폐 투여 또는 경피 투여일 수 있다. 투여는 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사에 의한 전신 또는 국부 투여일 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 제약 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포솜, 또는 고농도에서 안정한 저장에 적합한 다른 정렬된 구조로서 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능한 용액은 요구량의 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물을 상기 열거된 성분 중 하나 또는 그의 조합과 함께 적절한 용매 중에 혼입시킨 후, 필요에 따라 필터 멸균함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물을 염기성 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터의 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 제조 방법은 그의 이전에 멸균-여과된 용액으로부터 본 개시내용의 결합제 플러스 임의의 추가의 목적하는 성분 (하기 참조)을 포함하는 조성물의 분말을 생성하는 진공 건조 및 동결-건조를 포함한다. 용액의 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물에 흡수를 지연시키는 시약, 예를 들어 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 포함시킴으로써 이루어질 수 있다.
본 개시내용의 결합제를 포함하는 제약 조성물은 물 또는 또 다른 제약상 허용되는 액체 중 멸균 용액 또는 현탁액을 포함하는 주사가능한 제제의 형태로 비경구로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 제약 조성물은 치료 분자를 제약상 허용되는 비히클 또는 매질, 예컨대 멸균수 및 생리 염수, 식물성 오일, 유화제, 현탁화제, 계면활성제, 안정화제, 향미 부형제, 희석제, 비히클, 보존제, 결합제와 적합하게 합하고, 이어서 일반적으로 허용되는 제약 실시에 요구되는 단위 투여 형태로 혼합함으로써 제제화될 수 있다. 제약 제제에 포함된 활성 성분의 양은 지정된 범위 내의 적합한 용량이 제공되도록 하는 양이다. 유성 액체의 비제한적 예는 참깨 오일 및 대두 오일을 포함하고, 이는 가용화제로서 벤질 벤조에이트 또는 벤질 알콜과 조합될 수 있다. 포함될 수 있는 다른 항목은 완충제, 예컨대 포스페이트 완충제 또는 아세트산나트륨 완충제, 수딩제, 예컨대 프로카인 히드로클로라이드, 안정화제, 예컨대 벤질 알콜 또는 페놀, 및 항산화제이다. 제제화된 주사제는 적합한 앰플에 포장될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 0℃ 미만의 온도 (예를 들어, -20℃ 또는 -80℃)에서의 저장을 위해 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 2-8℃ (예를 들어, 4℃)에서 최대 2년 (예를 들어, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 1년, 1/2년 또는 2년) 동안 저장하기 위해 제제화될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 2-8℃ (예를 들어, 4℃)에서 적어도 1년 동안 저장시 안정하다.
일부 경우에, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 제약 조성물은 용액으로서 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은, 예를 들어 적합한 농도 및 2-8℃ (예를 들어, 4℃)에서의 저장에 적합한 완충 용액으로서 제제화될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 결합제를 포함하는 제약 조성물은 이뮤노리포솜 조성물로 제제화될 수 있다. 순환 시간이 증진된 리포솜은, 예를 들어 미국 특허 번호 5,013,556에 개시되어 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 이식물 및 마이크로캡슐화 전달 시스템을 포함하는 제어 방출 제제와 같이, 급속 방출에 대해 조성물을 보호할 담체와 함께 제제화될 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제제의 제조를 위한 많은 방법이 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [J. R. Robinson (1978) "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems," Marcel Dekker, Inc., New York]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 포유동물, 예컨대 인간에 대한 폐내 투여 (예를 들어, 흡입기 또는 네뷸라이저를 통한 투여)에 적합한 조성물로 제제화될 수 있다. 이러한 조성물을 제제화하는 방법은 공지되어 있다. 건조 분말 흡입기 제제 및 제제의 투여에 적합한 시스템이 또한 공지되어 있다. 폐 투여는 경구 및/또는 비강 투여일 수 있다. 폐 전달을 위한 제약 장치의 예는 계량 용량 흡입기, 건조 분말 흡입기 (DPI) 및 네뷸라이저를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 건조 분말 흡입기에 의해 대상체의 폐에 투여될 수 있다. 이들 흡입기는 분산가능하고 안정한 건조 분말 제제를 폐에 전달하는 추진제-무함유 장치이다. 건조 분말 흡입기는 공지되어 있고, 비제한적으로 다음을 포함한다: 터보할러(TURBOHALER)® (아스트라제네카(AstraZeneca); 영국 런던), 에어(AIR)® 흡입기 (알케르메스(ALKERMES)®; 매사추세츠주 캠브리지); 로타할러(ROTAHALER)® (글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline); 영국 런던); 및 이클립스(ECLIPSE)™ (사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis); 프랑스 파리). 또한, 예를 들어 PCT 공개 번호 WO 04/026380, WO 04/024156 및 WO 01/78693을 참조한다. DPI 장치는 인슐린 및 성장 호르몬과 같은 폴리펩티드의 폐 투여에 사용되어 왔다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 계량 용량 흡입기에 의해 폐내로 투여될 수 있다. 이들 흡입기는 별개의 용량의 분자를 폐에 전달하기 위해 추진제에 의존한다. 추가의 장치 및 폐내 투여 방법은, 예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 20050271660 및 20090110679에 제시되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 눈에 전달하기 위해, 예를 들어 제약상 허용되는 용액, 현탁액 또는 연고의 형태로 제제화될 수 있다. 눈을 치료하는데 사용하기 위한 제제는, 예를 들어 추가의 성분, 예컨대, 비제한적으로 보존제, 완충제, 장성 작용제, 항산화제 및 안정화제, 비이온성 습윤제 또는 정화제 및 점도-증가제를 함유하는 멸균 수용액의 형태일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 제제는 치료를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, AMD를 앓는 대상체)의 눈에 통상적인 방법에 의해, 예를 들어 점적제의 형태로, 또는 1종 이상의 조성물을 함유하는 치료 용액으로 눈을 씻김으로써 국소로 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 눈의 유리체강 내로 약물을 도입하기 위한 다양한 장치가 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 투여에 적절할 수 있다. 예를 들어, 미국 공개 번호 2002/0026176은 공막을 통해 삽입되어 유리체강 내로 돌출하도록 함으로써 제약 작용제를 유리체강 내로 전달할 수 있는 제약-함유 플러그를 기재한다. 또 다른 예에서, 미국 특허 번호 5,443,505는 눈의 내부로의 약물의 지속 방출을 위한 맥락막상 공간 또는 무혈관 영역 내로의 도입을 위한 이식형 장치를 기재한다. 미국 특허 번호 5,773,019 및 6,001,386은 각각 눈의 공막 표면에 부착가능한 이식형 약물 전달 장치를 개시한다. 눈에 치료제를 전달하기 위한 추가의 방법 및 장치 (예를 들어, 경공막 패치 및 콘택트 렌즈를 통한 전달)는, 예를 들어 문헌 [Ambati and Adamis (2002) Prog Retin Eye Res 21(2):145-151; Ranta and Urtti (2006) Adv Drug Delivery Rev 58(11):1164-1181; Barocas and Balachandran (2008) Expert Opin Drug Delivery 5(1):1-10(10); Gulsen and Chauhan (2004) Invest Opthalmol Vis Sci 45:2342-2347; Kim et al. (2007) Ophthalmic Res 39:244-254]; 및 PCT 공개 번호 WO 04/073551에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
다양한 실시양태에서, 피하 투여는 장치, 예컨대 시린지, 사전충전 시린지, 자가-주사기 (예를 들어, 일회용 또는 재사용가능), 펜 주사기, 패치 주사기, 착용가능한 주사기, 피하 주입 세트가 구비된 보행용 시린지 주입 펌프, 또는 피하 주사를 위해 결합제 약물과 조합하기 위한 다른 장치에 의해 달성될 수 있다.
본 개시내용의 주사 시스템은 미국 특허 번호 5,308,341에 기재된 바와 같은 전달 펜을 사용할 수 있다. 펜 장치는 당뇨병 환자에 대한 인슐린의 자기-전달에 통상적으로 사용된다. 이러한 장치는 적어도 1개의 주사 바늘 (예를 들어, 약 5 내지 8 mm 길이의 31 게이지 바늘)을 포함할 수 있고, 일반적으로 치료 용액의 1회 이상의 치료 단위 용량으로 사전-충전되며, 가능한 한 적은 통증으로 대상체에게 용액을 신속하게 전달하는데 유용하다. 1종의 의약 전달 펜은 치료 또는 다른 의약의 바이알이 수용될 수 있는 바이알 홀더를 포함한다. 펜은 전적으로 기계적인 장치일 수 있거나, 또는 사용자 내로 주사되는 의약의 투여량을 정확하게 설정 및/또는 표시하기 위해 전자 회로와 조합될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,192,891을 참조한다. 일부 실시양태에서, 펜 장치의 바늘은 일회용이고, 키트는 1개 이상의 일회용 교체 바늘을 포함한다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 본원에서 특색으로 하는 조성물 중 어느 하나의 전달에 적합한 펜 장치는 또한, 예를 들어 미국 특허 번호 6,277,099; 6,200,296; 및 6,146,361에 기재되어 있으며, 이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 미세바늘-기반 펜 장치는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,556,615에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 또한, 스칸디나비안 헬스 리미티드(Scandinavian Health Ltd.)에 의해 제조된 프리시젼 펜 인젝터 (PPI) 장치 몰리(MOLLY)™를 참조한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 혈관계를 통한 그의 의도된 표적 조직 또는 부위로의 결합제의 수송에 의존하지 않는 국부 투여에 의해 대상체에게 전달될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 주사 또는 이식에 의해 또는 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물을 함유하는 장치의 주사 또는 이식에 의해 전달될 수 있다. 특정 실시양태에서, 표적 조직 또는 부위 부근에서의 국부 투여 후, 본 개시내용의 결합제 또는 그의 1종 이상의 성분을 포함하는 조성물은 투여 부위가 아닌 의도된 표적 조직 또는 부위로 확산될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 관절에, 예를 들어 관절에 직접 (예를 들어, 관절 공간 내로) 또는 관절 부근에 국부로 투여될 수 있다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물이 국부로 투여될 수 있는 관절내 관절의 예는, 예를 들어 엉덩이, 무릎, 팔꿈치, 손목, 흉쇄, 측두하악, 수근, 족근, 발목, 및 관절염성 상태에 적용되는 임의의 다른 관절을 포함한다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 또한 윤활낭, 예컨대, 예를 들어 견봉, 이두요골, 외척요골(cubitoradial), 삼각근, 슬개하, 좌골 및 임의의 다른 윤활낭에 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 단위 투여 형태로 존재하며, 이러한 단위 투여 형태는 자기-투여에 적합할 수 있다. 이러한 단위 투여 형태는 용기, 일반적으로, 예를 들어 바이알, 카트리지, 사전충전 시린지 또는 일회용 펜 내에 제공될 수 있다. 미국 특허 번호 6,302,855에 기재된 투여 장치와 같은 투여기가 또한, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 주사 시스템과 함께 사용될 수 있다.
제약 용액은 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 포함할 수 있다. 이러한 유효량은, 부분적으로, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 투여된 조성물의 효과, 또는 1종 초과의 작용제가 사용되는 경우, 본 개시내용의 결합제 및 1종 이상의 추가의 활성제를 포함하는 조성물의 조합 효과에 기초하여 용이하게 결정될 수 있다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 치료 유효량은 또한 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응, 예를 들어 적어도 1종의 상태 파라미터의 호전, 예를 들어 보체-매개 장애의 적어도 1종의 증상의 호전을 도출하는 조성물 (및 1종 이상의 추가의 활성제)의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 치료 유효량은 장애 및/또는 장애의 증상 중 어느 하나를 억제 (그의 중증도를 경감 또는 그의 발생을 제거) 및/또는 예방할 수 있다. 치료 유효량은 또한 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 임의의 독성 또는 유해 효과를 치료상 유익한 효과가 능가하는 양이다.
본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물은 고정 용량으로서 또는 킬로그램당 밀리그램 (mg/kg) 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 용량은 또한 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물 내의 항원-결합 분자 중 1종 이상에 대한 항체의 생산 또는 다른 숙주 면역 반응을 감소시키거나 피하도록 선택될 수 있다. 결코 제한적인 것으로 의도되지는 않지만, 결합제, 예컨대 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 예시적인 투여량은, 예를 들어 1-1000 mg/kg, 1-100 mg/kg, 0.5-50 mg/kg, 0.1-100 mg/kg, 0.5-25 mg/kg, 1-20 mg/kg 및 1-10 mg/kg을 포함한다. 본 개시내용의 결합제를 포함하는 조성물의 예시적인 투여량은, 비제한적으로 0.1 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4 mg/kg, 8 mg/kg 또는 20 mg/kg을 포함한다.
본 개시내용의 결합제를 포함하는 임의의 조성물의 적합한 인간 용량은, 예를 들어 I상 용량 증량 연구에서 추가로 평가될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [van Gurp et al. (2008) Am J Transplantation 8(8):1711-1718; Hanouska et al. (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1):523-531; 및 Hetherington et al. (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500]을 참조한다.
다양한 실시양태에서, 제약 조성물은 본 개시내용의 핵산, 예를 들어 벡터를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 핵산을 포함하는 제약 조성물을 제제화하는 방법은, 예를 들어 시리즈 교재 [Drugs and the Pharmaceutical Sciences: a Series of Textbooks and Monographs (Dekker, N.Y.)]에 공지되어 있다. 예를 들어, 비경구, 피내 또는 피하 적용에 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 성분을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 염수 용액, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항박테리아제, 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대 염산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는, 예를 들어 앰플, 일회용 시린지, 또는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 1회 초과 용량의 바이알에 봉입될 수 있다.
주사에 적합한 본 개시내용의 핵산을 포함하는 제약 조성물은 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함할 수 있다. 정맥내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리 염수, 정박테리아수, 크레모포르 EL.TM. (바스프(BASF), 뉴저지주 파시파니) 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS)를 포함할 수 있다. 담체는, 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 그의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.
멸균성, 안정성, 점도 및 효과적인 치료 용도와 관련된 다른 인자가 고려될 수 있다. 유동성을 유지하는 한 방법은, 예를 들어 레시틴과 같은 코팅의 사용, 요구되는 입자 크기의 유지, 또는 계면활성제의 사용을 포함한다. 일부 경우에, 조성물 내에 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 염화나트륨을 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 일부 경우에, 본 개시내용의 핵산을 포함하는 주사가능한 조성물의 연장된 흡수는 조성물에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 이루어질 수 있다.
멸균 주사가능한 용액은 성분, 예컨대 항박테리아제 및 항진균제 (예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등) 중 1종 또는 그의 조합을 혼입시킴으로써 및/또는 여과 멸균에 의해 제조될 수 있다. 일부 경우에, 분산액은 활성 분자를 염기성 분산 매질 및 항박테리아제 또는 항진균제를 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 제조 방법은 그의 이전에 멸균-여과된 용액으로부터의 진공 건조 및 동결-건조를 포함한다.
본 개시내용의 핵산을 포함하는 경구 조성물은 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함할 수 있다. 경구 치료 투여의 목적을 위해, 본 개시내용의 핵산은 부형제와 혼입되고, 예를 들어 정제, 트로키 또는 캡슐, 예를 들어 젤라틴 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 본 개시내용의 핵산을 포함하는 경구 조성물은 또한 구강세정제로서 사용하기 위해 유체 담체를 사용하여 제조될 수 있다. 제약상 상용성인 결합제 및/또는 아주반트 물질이 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 환제, 캡슐, 트로키 등은 하기 성분 또는 유사한 성질의 분자 중 임의의 것을 함유할 수 있다: 결합제, 예컨대 미세결정질 셀룰로스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대 전분 또는 락토스, 붕해제, 예컨대 알긴산, 프리모겔(Primogel)® 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘 또는 스테로테스(Sterotes)®; 활택제, 예컨대 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린; 또는 향미제, 예컨대 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향미제.
일부 실시양태에서, 핵산은 핵산 작용제의 투여에 적합한 임의의 방법, 예컨대 DNA 백신에 의해 투여될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어 유전자 총, 바이오 주사기 및 피부 패치, 뿐만 아니라 무바늘 방법, 예컨대 미국 특허 번호 6,194,389에 개시된 마이크로-입자 DNA 백신 기술, 및 미국 특허 번호 6,168,587에 개시된 바와 같은 분말-형태 백신으로의 포유동물 경피 무바늘 백신접종을 포함한다. 추가적으로, 예를 들어 문헌 [Hamajima et al., (1998) Clin. Immunol. Immunopathol. 88(2), 205-10]에 기재된 바와 같이, 비강내 전달이 가능하다. 리포솜 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,472,375에 기재된 바와 같음). 특정 경우에, 마이크로캡슐화가 사용될 수 있다. 추가로, 생분해성 표적화가능한 마이크로입자 전달 시스템이 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,471,996에 기재된 바와 같음).
본 개시내용의 핵산을 포함하는 조성물은 아주반트, 희석제, 결합제, 안정화제, 완충제, 염, 친지성 용매, 보존제, 그의 혼합물과 같은 성분, 또는 핵산을 포함하는 치료 조성물에 포함시키기 위한 임의의 성분을 포함할 수 있다. 핵산 조성물은, 예를 들어 염수, 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등, 포스페이트 완충 염수 용액, 물 및 에멀젼, 예컨대 오일/물 또는 물/오일 에멀젼, 및 제약 투여와 상용성인 다양한 유형의 습윤제를 포함할 수 있다. 보충 활성 분자가 또한 본 개시내용의 핵산을 포함하는 조성물 내로 혼입될 수 있다. 본 개시내용의 핵산을 포함하는 조성물은 안정화제 및 보존제 및 본원에 기재된 담체 중 임의의 것을 포함할 수 있으며, 단 이들은 생체내에서 사용하기에 허용되어야 한다는 임의적인 추가의 조건을 갖는다. 추가의 담체, 안정화제 및 아주반트의 예에 대해서는, 문헌 [Martin REMINGTON'S PHARM. SCI., 15th Ed. (Mack Publ. Co., Easton (1975) and Williams & Williams, (1995)] 및 ["PHYSICIAN'S DESK REFERENCE," 52nd ed., Medical Economics, Montvale, N.J. (1998)]을 참조한다.
본원에 기재된 방법은 본 개시내용의 핵산을 포함하는 제약 조성물의 제조 및 사용을 포함한다. 본 개시내용의 핵산을 포함하는 제약 조성물은 일반적으로 그의 의도된 투여 경로와 상용성이도록 제제화된다. 투여 경로의 예는 비경구, 예를 들어 정맥내, 두개내, 피내, 피하, 경구 (예를 들어, 흡입), 경피 (국소), 경점막 및 직장 투여를 포함한다.
핵산 조성물은 완충제 또는 pH 조정제를 포함할 수 있다. 완충제는 유기 산 또는 염기로부터 제조된 염일 수 있다. 본 개시내용의 완충제는 유기 산 염, 예컨대 시트르산, 아스코르브산, 글루콘산, 탄산, 타르타르산, 숙신산, 아세트산 또는 프탈산의 염, 트리스, 트로메타민 히드로클로라이드 및 포스페이트 완충제를 포함한다. 추가의 담체는 중합체 부형제 또는 첨가제, 예컨대 폴리비닐피롤리돈, 피콜 (중합체 당), 덱스트레이트 (예를 들어, 시클로덱스트린, 예컨대 2-히드록시프로필-□-시클로덱스트린), 폴리에틸렌 글리콜, 향미제, 항미생물제, 감미제, 항산화제, 대전방지제, 계면활성제 (예를 들어, 폴리소르베이트, 예컨대 트윈(TWEEN) 20® 및 트윈 80®), 지질 (예를 들어, 인지질, 지방산), 스테로이드 (예를 들어, 콜레스테롤), 및 킬레이트화제 (예를 들어, EDTA)를 포함한다.
본 개시내용의 핵산이 벡터인 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 유전자 형질도입 및/또는 유전자 요법을 위한 조성물, 예를 들어 바이러스 입자, 예를 들어 AAV 입자 및/또는 레트로바이러스 입자, 예컨대 렌티바이러스 입자를 포함하는 조성물을 포함한다. 바이러스 역가와 관련하여 사용된 용어 "게놈 입자 (gp)" 또는 "게놈 당량"은 감염성 또는 기능성과 무관하게 재조합 바이러스 게놈, 예를 들어 재조합 AAV DNA 게놈을 함유하는 비리온의 수를 지칭한다. 벡터 제제 내의 게놈 입자의 수가 측정될 수 있다. 바이러스 역가와 관련하여 사용된 용어 "감염 단위 (IU)", "감염성 입자" 또는 "복제 단위"는 복제 중심 검정으로도 공지된 감염성 중심 검정에 의해 측정될 수 있는 바와 같은, 예를 들어 재조합 AAV 벡터 입자의 감염성 및 복제-적격 재조합 바이러스의 수를 지칭한다. 바이러스 역가와 관련하여 사용된 용어 "형질도입 단위 (TU)"는 기능적 트랜스진 생성물의 생산을 유발하는 감염성 재조합 벡터 입자, 예를 들어 재조합 AAV 벡터 입자의 수를 지칭한다.
일부 실시양태에서, 조성물은, 예를 들어 용량당 2x106 내지 2x1012개, 2x107 내지 2x1011개 또는 2x108 내지 2x1011개의 DNA-함유 바이러스 입자를 포함한다. 특정 실시양태에서, 단위 투여 형태의 벡터의 농도 또는 역가는, 예를 들어 적어도 (a) 1x1012개 입자/mL, 2x1012개 입자/mL, 3x1012개 입자/mL, 4x1012개 입자/mL, 5x1012개 입자/mL, 6x1012개 입자/mL, 7x1012개 입자/mL, 8x1012개 입자/mL, 9x1012개 입자/mL, 10x1012개 입자/mL, 15x1012개 입자/mL, 20x1012개 입자/mL, 25x1012개 입자/mL, 또는 50x1012개 입자/mL; (b) 1x109 TU/mL, 2x109 TU/mL, 3x109 TU/mL, 4x109 TU/mL, 5x109 TU/mL, 6x109 TU/mL, 7x109 TU/mL, 8x109 TU/mL, 9x109 TU/mL, 10x109 TU/mL, 15x109 TU/mL, 20x109 TU/mL, 25 또는 50x109 TU/mL; 또는 (c) 1x1010 IU/mL, 2x1010 IU/mL, 3x1010 IU/mL, 4x1010 IU/mL, 5x1010 IU/mL, 6x1010 IU/mL, 7x1010 IU/mL, 8x1010 IU/mL, 9x1010 IU/mL, 10x1010 IU/mL, 15x1010 IU/mL, 20x1010 IU/mL, 25x1010 IU/mL, 또는 50x1010 IU/mL이다. 이러한 실시양태는 본 개시내용에 의해 포괄되는 단위 투여량을 제한하지 않고, 본 개시내용의 핵산을 포함하는 다양한 조성물과 함께 사용될 수 있는 다양한 척도의 투여량을 제한하지 않는다. 예를 들어, 입자 투여량, 농도 또는 양은 킬로그램 대상체당 벡터 게놈 (Vg/Kg) 또는 Vg/용량의 면에서 측정되고/거나 표현될 수 있다. 입자 투여량, 농도 또는 양을 측정 및/또는 표현하는 바람직한 수단은 다양한 인자, 예를 들어 투여 경로에 따라 달라질 수 있다.
본 개시내용은 CD20 및 또 다른 항원, 예를 들어 CD19를 동시에 표적화하는 기술을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 면역 반응을 개시 및/또는 조정하기 위한 기술을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 암 (예를 들어, 표면-발현된 CD20을 갖는 세포(들)를 특징으로 하는 암)을 치료하기 위한 기술을 제공한다.
본 명세서는 암을 치료 또는 예방하기 위한 본원에 제공된 결합제 제약 조성물의 용도를 포함한다. 본 개시내용의 또 다른 측면은 악성종양의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 결합제 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 예를 들어 여기서 세포는 본원에 제공된 적어도 1종의 항원 결합 시스템을 포함하는 것인, 악성종양을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 제약 유효량의 본 개시내용의 결합제 제약 조성물의 투여를 포함하는 본 개시내용의 방법은 대상체에서 암을 치료하거나, 종양의 크기를 감소시키거나, 종양 세포를 사멸시키거나, 종양 세포 증식을 방지하거나, 종양의 성장을 방지하거나, 환자로부터 종양을 제거하거나, 종양의 재발을 방지하거나, 종양 전이를 방지하거나, 환자에서 완화를 유도하거나, 또는 그의 임의의 조합을 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 완전 반응을 유도한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 부분 반응을 유도한다. 특정 실시양태에서 결합제 제약 조성물은 본원에 제공된 세포, 예를 들어 본 개시내용의 적어도 1종의 CAR을 포함하거나 발현하는 세포이거나, 그를 포함하거나, 그를 활성제로서 포함하거나, 또는 그를 단독 활성제로서 포함한다. 일부 실시양태에서, 결합제 제약 조성물은 항-CD20 CAR 및 항-CD19 CAR을 포함하는 비시스트론 CAR 시스템을 포함하거나, 또는 결합제 제약 조성물은 본 개시내용의 이중특이적 항-CD20/항-CD19 CAR을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암에 대한 면역을 유도하거나 또는 대상체에게 이러한 면역을 제공하기 위한 본원에 제공된 결합제 제약 조성물의 용도를 포함한다. 본 개시내용은 대상체에게 본원에 제공된 결합제 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 암을 예방하는 방법을 추가로 포함한다. 본 개시내용은 대상체에게 본원에 제공된 결합제 제약 조성물을 투여함으로써 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서 결합제 제약 조성물은 본원에 제공된 세포, 예를 들어 본 개시내용의 적어도 1종의 CAR을 포함하거나 발현하는 세포이거나, 그를 포함하거나, 그를 활성제로서 포함하거나, 또는 그를 단독 활성제로서 포함한다. 일부 실시양태에서, 결합제 제약 조성물은 항-CD20 CAR 및 항-CD19 CAR을 포함하는 비시스트론 CAR 시스템을 포함하거나, 또는 결합제 제약 조성물은 본 개시내용의 이중특이적 항-CD20/항-CD19 CAR을 포함한다.
특정 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법은 대상체에게 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드, 벡터, 항체 또는 항원 결합 시스템을 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 방법은 항원 결합 시스템 또는 항체 (예를 들어, 항원 결합 시스템)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 항원 결합 시스템 또는 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 대상체에게 항원 결합 시스템 또는 항체를 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 세포를 적합한 조건 하에 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드로 형질도입하는 것을 포함하는, CAR 또는 TCR을 발현하는 세포를 제조하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 방법은 세포를 본원에 개시된 바와 같은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 형질도입하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 세포를 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 형질도입하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 결합제 제약 조성물이 본 개시내용의 항원-결합제 (예를 들어, 항원 결합 시스템)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터로 형질감염 또는 형질도입된 T 세포를 포함하는 것인 T 세포 요법을 제공한다. 일부 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자로부터 수득된다 (예를 들어, 자가 T 세포 요법을 위함). 다른 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자가 아닌 대상체로부터 수득된다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 T 세포 요법은 자가 세포 요법 (eACT™)이다. 이러한 실시양태에 따르면, 방법은 환자로부터 혈액 세포를 수집하는 것을 포함할 수 있다. 이어서, 단리된 혈액 세포 (예를 들어, T 세포)는 본 개시내용의 항원 결합 시스템을 발현하도록 조작될 수 있다. 특정 실시양태에서, 결합제는 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 결합제는 환자에서 암을 치료하거나 또는 치료하도록 의도된다. 예를 들어, 한 실시양태에서 결합제는 종양의 크기를 감소시킨다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 세포는 인간 대상체로부터 새로 단리된 세포, 세포 배양물로부터 새로 단리된 세포, 또는 저장, 예를 들어 동결된 세포일 수 있다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 대상체에게 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드, 본원에 기재된 벡터 또는 본원에 기재된 CAR 또는 TCR을 포함하는 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 종양에 대한 면역을 유도하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 방법은 대상체에게 본원에 개시된 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 대상체에게 본원에 개시된 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 포함하는 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 대상체에게 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 CAR 또는 TCR을 포함하는 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 본 출원의 조작된 면역 세포의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 면역 반응은 T 세포-매개 면역 반응이다. 일부 실시양태에서, T 세포-매개 면역 반응은 1개 이상의 표적 세포에 대해 지시된다. 일부 실시양태에서, 조작된 면역 세포는 CAR 또는 TCR을 포함하며, 여기서 CAR 또는 TCR은 본 개시내용에 기재된 THD를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 종양 세포이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 악성종양의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 적어도 1종의 면역 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 면역 세포는 적어도 1종의 CAR 또는 TCR을 포함하고, 여기서 CAR 또는 TCR은 본원에 개시된 scfv 중 1 또는 2종을 포함하는 것인, 악성종양을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드, 벡터, CAR 또는 TCR, 세포 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 방법은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 CAR 또는 TCR을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 방법은 CAR 또는 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포, 또는 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법은 T 세포 요법을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 T 세포 요법은 조작된 자가 세포 요법 (eACT™)이다. 이러한 실시양태에 따르면, 방법은 환자로부터 혈액 세포를 수집하는 것을 포함할 수 있다. 이어서, 단리된 혈액 세포 (예를 들어, T 세포)는 본 개시내용의 CAR 또는 TCR을 발현하도록 조작될 수 있다. 특정한 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 환자에서 종양 또는 암을 치료한다. 한 실시양태에서 CAR T 세포 또는 TCR T 세포는 종양 또는 암의 크기를 감소시킨다.
일부 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자로부터 수득된다 (예를 들어, 자가 T 세포 요법을 위함). 다른 실시양태에서, T 세포 요법에 사용하기 위한 공여자 T 세포는 환자가 아닌 대상체로부터 수득된다.
T 세포는 치료 유효량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, T 세포의 치료 유효량은 적어도 약 104개 세포, 적어도 약 105개 세포, 적어도 약 106개 세포, 적어도 약 107개 세포, 적어도 약 108개 세포, 적어도 약 109개 또는 적어도 약 1010개일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, T 세포의 치료 유효량은 약 104개 세포, 약 105개 세포, 약 106개 세포, 약 107개 세포 또는 약 108개 세포일 수 있다. 하나의 특정한 실시양태에서, CAR T 세포 또는 TCR T 세포의 치료 유효량은 약 2 X 106개 세포/kg, 약 3 X 106개 세포/kg, 약 4 X 106개 세포/kg, 약 5 X 106개 세포/kg, 약 6 X 106개 세포/kg, 약 7 X 106개 세포/kg, 약 8 X 106개 세포/kg, 약 9 X 106개 세포/kg, 약 1 X 107개 세포/kg, 약 2 X 107개 세포/kg, 약 3 X 107개 세포/kg, 약 4 X 107개 세포/kg, 약 5 X 107개 세포/kg, 약 6 X 107개 세포/kg, 약 7 X 107개 세포/kg, 약 8 X 107개 세포/kg 또는 약 9 X 107개 세포/kg이다.
본 개시내용의 방법은 대상체에서 암을 치료하거나, 종양의 크기를 감소시키거나, 종양 세포를 사멸시키거나, 종양 세포 증식을 방지하거나, 종양의 성장을 방지하거나, 환자로부터 종양을 제거하거나, 종양의 재발을 방지하거나, 종양 전이를 방지하거나, 환자에서 완화를 유도하거나 또는 그의 임의의 조합을 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 완전 반응을 유도한다. 다른 실시양태에서, 방법은 부분 반응을 유도한다.
특정 실시양태에서, 암은, 예를 들어 세포의 표면 상에 CD19를 발현하는 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 암은, 예를 들어 세포의 표면 상에 CD20을 발현하는 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 암은 각각 개별적으로, 예를 들어 세포의 표면 상에 CD19 및 CD20 둘 다를 발현하는 세포를 포함한다.
치료될 수 있는 암은 혈관화되지 않거나, 실질적으로 혈관화되지 않거나, 또는 혈관화되는 종양을 포함한다. 암은 또한 고형 또는 비-고형 종양을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 혈액암이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈구 암이다. 다른 실시양태에서, 암은 형질 세포 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 백혈병, 림프종 또는 골수종이다. 특정 실시양태에서, 암은 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 림프성 백혈병 (ALL), 및 혈구포식성 림프조직구증식증 (HLH), B 세포 전림프구성 백혈병, B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 만성 또는 급성 육아종성 질환, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종, 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 식혈세포성 증후군 (대식세포 활성화 증후군 (MAS), 호지킨병, 대세포 육아종, 백혈구 부착 결핍, 악성 림프증식성 조건, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군 (MDS), 골수성 질환, 예컨대, 비제한적으로 급성 골수성 백혈병 (AML), 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (예를 들어, 무증상 골수종 (무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (예를 들어, 형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종)), POEMS 증후군 (크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; PEP 증후군), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T-세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 또는 그의 조합이다. 한 실시양태에서, 암은 골수종이다. 하나의 특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 또 다른 실시양태에서, 암은 백혈병이다. 한 실시양태에서, 암은 급성 골수성 백혈병이다.
다양한 예에서, 암을 치료하기 위해 본원에 제공된 결합제 제약 조성물을 사용하는 방법은 자가 세포 요법이다. 다양한 경우에, 암을 치료하기 위해 본원에 제공된 결합제 제약 조성물을 사용하는 방법은 동종 세포 요법이다.
본원에 제공된 결합제 제약 조성물을 사용하는 특정 방법은 대상체로부터 혈액 세포를 수집하는 것을 포함한다. 이어서, 단리된 대상체 혈액 세포 (예를 들어, T 세포)는, 예를 들어 본 개시내용의 항원 결합 시스템을 발현하도록 조작될 수 있다. 일부 실시양태에서, 결합제는 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 결합제는 대상체에서 암을 치료한다. 한 실시양태에서, 결합제는 종양의 크기를 감소시킨다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용에서 사용하기 위한 본원에 제공된 세포 요법은 본원에 제공된 세포 요법이 아닌 1종 이상의 추가의 치료제 또는 요법의 투여를 추가로 포함하는 치료 과정에서 대상체에게 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 제공된 결합제를 받고/거나 필요로 하는 대상체에게 항암제를 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 위한 조합 요법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 결합제의 투여는 추가의 항암 요법을 포함하는 치료 요법을 이전에 받았거나, 받도록 스케줄링되었거나 또는 그 과정 중에 있는 대상체에게 이루어질 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 본원에 제공된 결합제와 조합되어 투여되는 추가의 작용제 또는 요법은 본원에 제공된 결합제와 동시에, 본원에 제공된 결합제와 동일한 날에 또는 본원에 제공된 결합제와 동일한 주에 투여될 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 본원에 제공된 결합제와 조합되어 투여되는 추가의 작용제 또는 요법은 본원에 제공된 결합제 및 추가의 작용제 또는 요법의 투여가 본원에 제공된 결합제의 투여 전 또는 후 1시간 이상, 그 전 또는 후 1일 이상, 그 전 또는 후 1주 이상, 또는 그 전 또는 후 1개월 이상만큼 분리되도록 투여될 수 있다. 다양한 실시양태에서, 1종 이상의 추가의 작용제의 투여 빈도는 본원에 제공된 결합제의 투여 빈도와 동일하거나, 유사하거나 또는 상이할 수 있다.
본원에 제공된 결합제와 조합되어 사용되는 작용제 또는 요법은 본원에 제공된 결합제와 함께 단일 치료 조성물 또는 용량으로, 개별 조성물의 형태로 본원에 제공된 결합제와 동시에, 또는 본원에 제공된 결합제의 투여와 시간적으로 구별되는 방식으로 투여될 수 있다. 본원에 제공된 결합제가 추가의 작용제와 조합되어 사용되는 경우에, 본원에 제공된 결합제는 추가의 작용제와 공동-제제화될 수 있거나 또는 본원에 제공된 결합제는 추가의 작용제 제제와 개별적으로 제제화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 선택된 화학요법제는 림프구고갈 (사전조건화) 화학요법제이다. 유익한 사전조건화 치료 요법은, 상관관계가 있는 유익한 바이오마커와 함께, 미국 특허 가출원 62/262,143 및 62/167,750에 기재되어 있으며, 이들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이들은, 예를 들어 T 세포 요법을 필요로 하는 환자에게 명시된 유익한 용량의 시클로포스파미드 (200 mg/m2/일 내지 2000 mg/m2/일) 및 명시된 용량의 플루다라빈 (20 mg/m2/일 내지 900 mg/m2/일)을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자를 조건화하는 방법을 기재한다. 하나의 이러한 용량 요법은 환자에게 치료 유효량의 조작된 T 세포를 투여하기 전 3일 동안 환자에게 약 500 mg/m2/일의 시클로포스파미드 및 약 60 mg/m2/일의 플루다라빈을 매일 투여하는 것을 포함하는, 환자를 치료하는 것을 수반한다. 다른 실시양태에서, 항원 결합 분자, 형질도입된 (또는 달리 조작된) 세포 (예컨대 CAR 또는 TCR), 및 화학요법제는 각각 대상체에서 질환 또는 상태를 치료하는데 효과적인 양으로 투여된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 CAR- 및/또는 TCR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 임의의 수의 화학요법제와 함께 투여될 수 있다. 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)™); 알킬 술포네이트, 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민 레주메; 질소 머스타드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제, 예컨대 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아미신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)™, 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb)) 및 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®, 롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rorer)); 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노산, 유도체 예컨대 탈그레틴(Targretin)™ (벡사로텐), 판레틴(Panretin)™, (알리트레티노인); 온탁(ONTAK)™ (데니류킨 디프티톡스); 에스페라미신; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 CAR- 및/또는 TCR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐, 예컨대, 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (파레스톤); 및 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체와 함께 투여될 수 있다. CHOP, 즉 시클로포스파미드 (시톡산®), 독소루비신 (히드록시독소루비신), 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin)®) 및 프레드니손을 포함하나 이에 제한되지는 않는 화학요법제의 조합이 또한 적절한 경우에 투여된다.
일부 실시양태에서, 화학요법제는 조작된 세포 또는 핵산의 투여와 동시에 또는 투여 후 1주 내에 투여된다. 다른 실시양태에서, 화학요법제는 조작된 세포 또는 핵산을 투여하고 1 내지 4주 또는 1주 내지 1개월, 1주 내지 2개월, 1주 내지 3개월, 1주 내지 6개월, 1주 내지 9개월, 또는 1주 내지 12개월 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 세포 또는 핵산을 투여하기 적어도 1개월 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 방법은 2종 이상의 화학요법제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
다양한 추가의 치료제가 본원에 기재된 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 잠재적으로 유용한 추가의 치료제는 PD-1 억제제, 예컨대 니볼루맙 (옵디보(OPDIVO)®), 펨브롤리주맙 (키트루다(KEYTRUDA)®), 펨브롤리주맙, 피딜리주맙 (큐어테크(CureTech)) 및 아테졸리주맙 (로슈(Roche))을 포함한다. 본 개시내용과 조합하여 사용하기에 적합한 추가의 치료제는 이브루티닙 (임브루비카(IMBRUVICA)®), 오파투무맙 (아르제라(ARZERRA)®), 리툭시맙 (리툭산(RITUXAN)®), 베바시주맙 (아바스틴(AVASTIN)®), 트라스투주맙 (헤르셉틴(HERCEPTIN)®), 트라스투주맙 엠탄신 (카드실라(KADCYLA)®), 이마티닙 (글리벡(GLEEVEC)®), 세툭시맙 (에르비툭스(ERBITUX)®), 파니투무맙 (벡티빅스(VECTIBIX)®), 카투막소맙, 이브리투모맙, 오파투무맙, 토시투모맙, 브렌툭시맙, 알렘투주맙, 겜투주맙, 에를로티닙, 게피티닙, 반데타닙, 아파티닙, 라파티닙, 네라티닙, 악시티닙, 마시티닙, 파조파닙, 수니티닙, 소라페닙, 토세라닙, 레스타우르티닙, 악시티닙, 세디라닙, 렌바티닙, 닌테다닙, 파조파닙, 레고라페닙, 세막사닙, 소라페닙, 수니티닙, 티보자닙, 토세라닙, 반데타닙, 엔트렉티닙, 카보잔티닙, 이마티닙, 다사티닙, 닐로티닙, 포나티닙, 라도티닙, 보수티닙, 레스타우르티닙, 룩솔리티닙, 파크리티닙, 코비메티닙, 셀루메티닙, 트라메티닙, 비니메티닙, 알렉티닙, 세리티닙, 크리조티닙, 아플리베르셉트, 아디포티드, 데니류킨 디프티톡스, mTOR 억제제, 예컨대 에베롤리무스 및 템시롤리무스, 헤지호그 억제제, 예컨대 소니데깁 및 비스모데깁, CDK 억제제, 예컨대 CDK 억제제 (팔보시클립)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
추가의 실시양태에서, CAR- 및/또는 TCR-함유 면역을 포함하는 조성물은 항염증제와 함께 투여된다. 항염증제 또는 약물은 스테로이드 및 글루코코르티코이드 (베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론 포함), 비스테로이드성 항염증 약물 (NSAID), 예컨대 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 메토트렉세이트, 술파살라진, 레플루노미드, 항-TNF 의약, 시클로포스파미드 및 미코페놀레이트를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 소듐, Cox-2 억제제 및 시알릴레이트를 포함한다. 예시적인 진통제는 아세트아미노펜, 옥시코돈, 프로폭시펜 히드로클로라이드의 트라마돌을 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 또는 프레드니손을 포함한다. 예시적인 생물학적 반응 조절제는 세포 표면 마커 (예를 들어, CD4, CD5 등)에 대해 지시된 분자, 시토카인 억제제, 예컨대 TNF 길항제 (예를 들어, 에타네르셉트 (엔브렐(ENBREL)®), 아달리무맙 (휴미라(HUMIRA)®) 및 인플릭시맙 (레미케이드(REMICADE)®), 케모카인 억제제 및 부착 분자 억제제를 포함한다. 생물학적 반응 조절제는 모노클로날 항체뿐만 아니라 분자의 재조합 형태를 포함한다. 예시적인 DMARD는 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 메토트렉세이트, 페니실라민, 레플루노미드, 술파살라진, 히드록시클로로퀸, 금 (경구 (아우라노핀) 및 근육내), 및 미노시클린을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 시토카인과 함께 투여된다. "시토카인"은 세포간 매개체로서 또 다른 세포에 대해 작용하는 한 세포 집단에 의해 방출된 단백질을 지칭하는 것으로 의도된다. 시토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 시토카인에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬, 예컨대 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH) 및 황체형성 호르몬 (LH); 간 성장 인자 (HGF); 섬유모세포 성장 인자 (FGF); 프로락틴; 태반 락토겐; 뮐러-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-연관 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴 (TPO); 신경 성장 인자 (NGF), 예컨대 NGF-베타; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGF), 예컨대 TGF-알파 및 TGF-베타; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도 인자; 인터페론, 예컨대 인터페론-알파, 베타 및 -감마; 콜로니 자극 인자 (CSF), 예컨대 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); 인터류킨 (IL), 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-15, 종양 괴사 인자, 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타; 및 LIF 및 kit 리간드 (KL)를 포함한 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본원에 사용된 용어 시토카인은 천연 공급원으로부터의 또는 재조합 세포 배양으로부터의 단백질, 및 천연 서열 시토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용에 사용하기 위한 본원에 제공된 결합제는 항염증제의 투여를 추가로 포함하는 치료 과정에서 대상체에게 투여될 수 있다. 항염증제는, 비제한적으로 스테로이드 및 글루코코르티코이드 (베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론 포함), 아스피린을 포함하는 비스테로이드성 항염증 약물 (NSAID), 이부프로펜, 나프록센, 메토트렉세이트, 술파살라진, 레플루노미드, 항-TNF 의약, 시클로포스파미드 및 미코페놀레이트를 포함할 수 있다. 예시적인 NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 소듐, Cox-2 억제제 및 시알릴레이트를 포함한다. 예시적인 진통제는 아세트아미노펜, 옥시코돈, 프로폭시펜 히드로클로라이드의 트라마돌을 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 또는 프레드니손을 포함한다. 예시적인 생물학적 반응 조절제는 세포 표면 마커 (예를 들어, CD4, CD5 등)에 대해 지시된 분자, 시토카인 억제제, 예컨대 TNF 길항제 (예를 들어, 에타네르셉트 (엔브렐®), 아달리무맙 (휴미라®) 및 인플릭시맙 (레미케이드®), 케모카인 억제제 및 부착 분자 억제제를 포함한다. 생물학적 반응 조절제는 모노클로날 항체뿐만 아니라 분자의 재조합 형태를 포함한다. 예시적인 DMARD는 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 메토트렉세이트, 페니실라민, 레플루노미드, 술파살라진, 히드록시클로로퀸, 금 (경구 (아우라노핀) 및 근육내), 및 미노시클린을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용에 사용하기 위한 본원에 제공된 결합제는 CHOP의 투여를 추가로 포함하는 치료 과정에서 대상체에게 투여될 수 있다. CHOP는 DNA에 결합하고 가교의 형성을 유발함으로써 그를 손상시키는 알킬화제인 (C)시클로포스파미드; DNA 염기 사이에 그 자체로 삽입되어 DNA를 손상시키는 삽입제인 (H)히드록시다우노루비신 (독소루비신 또는 아드리아마이신으로도 불림); 단백질 튜불린에 결합함으로써 세포가 복제되는 것을 방지하는 (O)온코빈 (빈크리스틴); 및 코르티코스테로이드인 (P)프레드니손 또는 (P)프레드니솔론으로 이루어진다.
추가의 예시적인 실시양태. 본 개시내용은, 비제한적으로 하기 예시적인 실시양태를 포함한다:
실시양태 1. (i) 항원 결합 분자, (ii) 공동자극 도메인 및 (iii) 활성화 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드이며, 여기서 공동자극 도메인은 세포외 도메인, 막횡단 도메인 및 세포내 도메인을 포함하고, 여기서 세포외 도메인은 (i) 서열식별번호: 232, 221, 56, 45, 155, 144, 177, 78 및 67에 기재된 구축물 중 임의의 것의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열로 본질적으로 이루어지거나 또는 이로 이루어진 항원 결합 분자를 포함하는 것인 단리된 폴리뉴클레오티드.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 막횡단 도메인이 4-1BB/CD137, T 세포 수용체의 알파 쇄, T 세포 수용체의 베타 쇄, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD8 알파, CD9, CD16, CD19, CD22, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154 또는 T 세포 수용체의 제타 쇄 또는 그의 임의의 조합의 막횡단 도메인인 폴리뉴클레오티드.
실시양태 3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 세포내 도메인이 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD100 (SEMA4D), CD103, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8알파, CD8베타, CD96 (Tactile), CDl la, CDl lb, CDl lc, CDl ld, CDS, CEACAM1, CRT AM, 시토카인 수용체, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파 (CD79a), IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, 이뮤노글로불린-유사 단백질, 유도성 T 세포 공동자극제 (ICOS), 인테그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT (종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), 림프구 기능-연관 항원-1 (LFA-1 (CDl la/CD18), MHC 부류 I 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 프로그램화된 사멸-1 (PD-1), PSGL1, SELPLG (CD162), 신호전달 림프구성 활성화 분자 (SLAM 단백질), SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, 톨 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1 또는 VLA-6 또는 그의 조합의 신호전달 영역을 포함하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시양태 4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 항원 결합 분자 중 적어도 1종이 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD56, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-IIR알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1 또는 VEGFR2 또는 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 폴리뉴클레오티드.
실시양태 5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 232, 221, 56, 45, 155, 144, 177, 78 및 67에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
실시양태 6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드.
실시양태 7. 서열식별번호: 232, 221, 56, 45, 155, 144, 177, 78 및 67에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
실시양태 8. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
실시양태 9. 실시양태 7에 있어서, 아데노바이러스 벡터, 아데노바이러스-연관 벡터, DNA 벡터, 렌티바이러스 벡터, 플라스미드, 레트로바이러스 벡터 또는 RNA 벡터 또는 그의 임의의 조합인 벡터.
실시양태 10. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 제6항 또는 제7항의 폴리펩티드, 제8항 또는 제9항의 벡터 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 세포.
실시양태 11. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 제6항 또는 제7항의 폴리펩티드, 제8항 또는 제9항의 벡터, 제10항의 세포 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 조성물.
실시양태 12. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드, 실시양태 6 또는 7의 폴리펩티드, 제8항 또는 제9항의 벡터 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 세포를 제조하는 방법.
실시양태 13. 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드, 실시양태 6 또는 7의 폴리펩티드, 실시양태 8 또는 9의 벡터, 실시양태 10의 세포, 실시양태 11의 조성물 또는 그의 임의의 조합을 투여하는 것을 포함하는, 종양에 대한 면역을 유도하는 방법.
실시양태 14. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 실시양태 6 또는 7의 폴리펩티드, 실시양태 8 또는 9의 벡터, 실시양태 11의 세포 또는 실시양태 12의 조성물의 용도.
실시양태 15. 실시양태 15에 있어서, 암이 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 골수성 백혈병, B 세포 전림프구성 백혈병, B-세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 호지킨병, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (무증상 골수종 (무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종 포함) 포함), POEMS 증후군 (크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; 및 PEP 증후군으로도 공지됨), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T-세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T-세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 또는 그의 조합인 용도.
본 명세서에서 언급된 모든 공개문헌, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 공개문헌, 특허 또는 특허 출원이 참조로 포함되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 나타내어진 것과 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다. 그러나, 본원에서 참고문헌의 인용은 이러한 참고문헌이 본 개시내용에 대한 선행 기술임을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다. 참조로 포함된 참고문헌에 제공된 임의의 정의 또는 용어가 본원에 제공된 용어 및 논의와 상이한 경우, 본 발명의 용어 및 정의가 우선한다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌의 내용은 명백하게 본원에 참조로 포함된다.
실시예
실시예 1
본 실시예는 예시적인 생산된 항-CD20 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 및 그의 조합을 제공한다. 예시적인 항-CD20 중쇄 가변 도메인 및 항-CD20 경쇄 가변 도메인의 CDR 서열 및 이에 따른 HCDR 및 LCDR의 예시적인 조합이 또한 하기 표 4-13에 제공된다. 표 4-13은 예시적인 가변 도메인을 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 포함한다 (따라서 또한 예시적인 가변 도메인의 확인된 CDR을 코딩하는 예시적인 핵산 서열을 제공함).
본 개시내용의 예시적인 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인에 의한 세포 결합을 결정하기 위해, 정제된 IgG를 유동 세포측정법에 의해 10 nM의 농도에서 세포 결합에 대해 특징화하였다. 항체를 CD20을 과다발현하는 CHO-S 세포, Raji 및 Namalwa CD20+ 세포주; 및 EoL-1 및 CHO-S CD20- 세포주와 함께 인큐베이션하였다. FITC-LC를 사용하여 IgG를 검출하였다. 음성 대조군 대비 결합의 비를 각각의 항체에 대해 계산하였다. 선택된 항-CD20 항체에 의한 예시적인 세포 결합이 표 15에 제공된다.
표 15
Figure pct00027
실시예 2
본 실시예는 비시스트론 및 이중특이적 CAR을 제공한다. 비시스트론 및 이중특이적 CAR은 2종의 결합 모티프를 포함한다 (각각 2종의 CAR 분자 내에 또는 단일 CAR 분자 상에). 제1 결합 모티프는 CD20에 결합하고, 제2 결합 모티프는 CD19에 결합한다. CD19에 결합하고/거나 CD19에 결합하는 결합 모티프, 항체 및 항원 결합 시스템을 구축하는데 유용한 항체 서열은 공지되어 있다. 본 실시예는 표 14에 제시된, 본원에서 항체 Ab11로 지칭되는 항-CD19 결합제의 항체 서열을 사용한다.
본 실시예의 이중특이적 CAR은 하기 도메인을 포함하도록 생성되었다: 제1 결합 모티프, 제2 결합 모티프, 힌지, 막횡단 도메인, 및 공동자극 도메인 및 활성화 도메인을 포함하는 세포내 도메인. 본 실시예에서, 각각의 이중특이적 CAR은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 제1 결합 모티프를 포함하였으며, 이러한 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 실시예 1의 예시적인 항체 서열의 단일 세트로부터의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인이다 (즉, 둘 다는 Ab1-Ab10에 상응하는 표 4-13 중 동일한 표로부터의 것임). 따라서, 결합 모티프는 공급원 항체 또는 공급원 표를 참조하여 확인될 수 있고, 상응하는 표에 제시된 바와 같은 공급원 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 결합 모티프를 지칭한다. 본 실시예에서, 각각의 이중특이적 CAR은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하는 제2 결합 모티프를 포함하였으며, 이러한 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 항체 Ab11의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 (즉, 서열식별번호: 221 및 232)이다. 본 실시예의 이중특이적 CAR은 힌지 도메인 및 막횡단 도메인을 포함하는 28T (CD28) 도메인을 포함하였다. 본 실시예의 이중특이적 CAR은 CD28 공동자극 도메인을 포함하였다. 본 실시예의 이중특이적 CAR은 CD3z 활성화 도메인을 포함하였다.
본 실시예는 Bic-2, Bic-8, Bic-9 및 Bic-14로 확인되는 4종의 비시스트론 CAR을 포함한다. 각각의 4종의 비시스트론 CAR은 하기 표 16에 제시된 바와 같은 실시예 1의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 쌍을 포함하는 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 제1 CAR 구축물 및 항-CD19 결합 모티프를 포함하는 제2 CAR 구축물을 포함하였다.
표 16: 비시스트론 CAR의 항-CD20 결합 모티프 서열
Figure pct00028
실시예 3
CD4+ 및 CD8+ T 세포를 건강한 공여자로부터의 분리반출술 물질로부터 양성 선택에 의해 단리하고, 항-CD20 1가 또는 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR T-세포 생성물을 생성하는데 사용하였다. T 세포를 결합된-항-CD3 및 가용성 CD28 항체로 활성화시키고, CAR 구축물을 코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였다. 대조군으로서, 비-형질도입 (NTD) T 세포를 병행하여 동일한 공여자 T 세포로부터 생성하였다. 수거일 (제조 제8일-제10일)에, CAR T-세포 생성물을 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하여 형질도입 효율을 평가하고, 공동-배양 검정에 사용하였다. 1가 CAR을 코딩하는 벡터 및 비시스트론 CAR을 코딩하는 벡터를 사용한 T 세포의 형질도입 효율을 모니터링하였다.
1가 CAR을 코딩하는 벡터의 T 세포 형질도입 효율을 결정하기 위해, CAR-T 생성물을 고정가능한 생존성 염료의 존재 하에 항체의 패널 (항-CD3, 항-CD4, 항-CD8 및 항-링커 항체)로 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하여 생존 CAR-양성 세포의 백분율을 평가하였다 (항-링커 항체에 관하여 본원에 참조로 포함된 WO/US2017/041534 참조). 항-링커 항체는 항-CD20 CAR의 결합 모티프의 중쇄와 경쇄 사이의 링커에 결합하는 항체이고, 형질도입 효율을 측정하는데 사용된다. 대조군은 비-형질도입 세포 (NTD), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포 및 대조군 항-CD20 결합제 (Ab12 결합 모티프)로 형질도입된 세포를 포함하였다.
비시스트론 CAR을 코딩하는 벡터의 T 세포 형질도입 효율을 결정하기 위해, CAR-T 생성물을 고정가능한 생존성 염료의 존재 하에 항체의 패널 (항-CD3, 항-CD4, 항-CD8, 항-이디오타입 및 항-링커 항체를 포함함)로 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하여 생존 CAR-양성 세포의 백분율을 평가하였다. 항-이디오타입 항체는 Ab11 항-CD19 결합 모티프의 결합 모티프에 결합한다. 따라서, 항-이디오타입 항체는 항-CD19 CAR에 결합한다. 이는 항-CD19 CAR의 형질도입 효율을 측정하는데 사용된다. 항-링커 항체는 항-CD20 CAR의 형질도입 효율을 측정하는데 사용된다. 대조군은 비-형질도입 세포 (NTD), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포 및 대조군 항-CD20/항-CD19 이중특이적 CAR (Ab13/Ab14 이중특이적; Ab11/Ab12 이중특이적)로 형질도입된 세포를 포함하였다.
표 17A: 항-CD20 1가 CAR의 형질도입 효율
Figure pct00029
표 17B: 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR의 형질도입 효율
Figure pct00030
실시예 4
본 실시예는 특히 CAR-T 세포를 CAR-T 표적 항원을 발현하는 세포와 공동-배양하는 예시적인 방법을 제공한다. 배양물에서 T 세포의 추적을 용이하게 하기 위해, CAR-T 세포를 셀트레이스(CellTrace)™ 바이올렛 (CTV) 시약으로 제조업체의 지침에 따라 표지하고, 후속적으로 R-10% 배지로 세척하였다. CAR-T 표적 항원을 발현하는 세포 ("표적 세포")의 추적을 용이하게 하기 위해, 표적 세포가 루시페라제를 발현하도록 조작하였다. 루시페라제-발현 표적 세포는 Nalm6 및 Raji를 포함하였으며, 이들 둘 다는 CD19 및 CD20 항원 둘 다를 발현한다. 추가로, CD19 또는 CD20을 발현하지 않는 Nalm6 및 Raji 세포 (녹아웃 세포 또는 KO)를 제조하였다. 이들 CD19KO 및 CD20KO 세포를 Nalm6 및 Raji 모 세포로부터 클론 선택하였으며, 이들은 각각 CD20을 발현하지만 CD19는 발현하지 않거나 또는 CD19를 발현하지만 CD20은 발현하지 않는다. CD19KO 및 CD20KO 계통을 생성하고, 대조군으로서 사용하여 비시스트론 항-CD20/항-CD19 CAR을 발현하는 세포의 각각의 CAR의 항원 결합을 기능적으로 평가하였다.
루시페라제-발현 표적 세포를 CTV 표지된 CAR-T 세포와 함께 다양한 비로 R-10% 배지 내에 플레이팅하였다 (공동-배양의 제0일). 비는 이펙터 (CAR-T) 세포 대 표적 세포 (이펙터:표적 또는 E:T)의 비로 지칭될 수 있다. 세포를 목적하는 비로 플레이팅하기 위해, CAR-T 세포를 2 내지 3배 연속 희석하면서 웰당 표적 세포의 수를 25,000개 세포로 일정하게 유지하였다. 공동-배양물을 37℃에서 16시간 (h) 또는 4일 동안 인큐베이션하고, 기능적 평가를 하기 기재된 바와 같이 수행하였다.
실시예 5
본 실시예에서, T 세포를 실시예 4에 기재된 바와 같이 표적 세포와 공동-배양하였다. T-세포 매개 세포독성을 단독으로 플레이팅된 표적 세포에 의해 방출된 신호와 비교하여 공동-배양 웰에서 표적 루시페라제 신호의 감소의 함수로서 측정하였다. 공동-배양 개시 후 제4일에, D-루시페린 기질을 0.14 mg/mL의 최종 농도로 공동-배양 웰에 첨가하고, 플레이트를 암실 내 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 발광 신호를 바리오스칸(VarioSkan)™ 룩스 또는 바리오스칸® 플래쉬 다중모드 마이크로플레이트 판독기에서 직후에 판독하였다. T 세포-매개 세포독성을 하기와 같이 계산하였다: % 세포독성 = [1 - (관심 샘플/표적 단독 대조군)의 루시페라제 신호] * 100.
대조군은 음성 대조군으로서 비-형질도입 (NTD) T 세포 (즉, CAR을 발현하지 않는 T 세포), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포, 대조군 항-CD20 결합제로 형질도입된 세포, 대조군 항-CD20/항-CD19 이중특이적 CAR (Ab13/Ab14 이중특이적; Ab15/Ab16 이중특이적)로 형질도입된 세포를 포함하였다.
표 18: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Nalm6 야생형 세포)
Figure pct00031
표 19: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Raji 야생형 세포)
Figure pct00032
표 20: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Nalm6 야생형 세포)
Figure pct00033
표 21: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Raji 야생형 세포)
Figure pct00034
표 22: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Nalm6 CD19KO 세포)
Figure pct00035
표 23: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Nalm6 CD20KO 세포)
Figure pct00036
표 24: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Raji CD19KO 세포)
Figure pct00037
표 25: 4일 후 공동-배양물 중 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T의 퍼센트 세포독성 (Raji CD20KO 세포)
Figure pct00038
실시예 6
본 실시예에서, T 세포를 실시예 4에 기재된 바와 같이 표적 세포와 공동-배양하였다. 공동-배양 16시간 후, 상청액을 수집하고, 메소 스케일 디스커버리 V-플렉스 염증유발 패널 1 인간 키트를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 시토카인 수준에 대해 분석하였다. 항원-발현 표적 세포와 1:1 E:T 비로 플레이팅된 T-세포 생성물의 공동-배양물로부터의 상청액을 항원 결속에 의해 매개된 인터페론 감마 (IFN-γ), IL-2, 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α) 및 IL-10 분비의 수준에 대해 분석하였다. 모든 샘플을 검출 범위 내에 있도록 희석하였다. 각각의 시토카인의 수준을 pg/mL로 보고하고, 각각의 검정의 정량 하한치 및 정량 상한치를 보고하였다.
대조군은 음성 대조군으로서 비-형질도입 (NTD) T 세포 (즉, CAR을 발현하지 않는 T 세포), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포, 대조군 항-CD20 결합제로 형질도입된 세포, 대조군 이중특이적 항원 결합 시스템 (Ab13/Ab14 이중특이적)으로 형질도입된 세포 및 이중특이적 항원 결합 시스템 (Ab15/Ab16 이중특이적)으로 형질도입된 세포를 포함하였다.
표 26: 항-CD20 CAR-T와 Nalm6 야생형 세포의 16시간 공동-배양 시의 시토카인 생산 (pg/mL)
Figure pct00039
표 27: 항-CD20 CAR-T와 Raji 야생형 세포의 16시간 공동-배양 시의 시토카인 생산 (pg/mL)
Figure pct00040
Figure pct00041
표 28: 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T와 Nalm6 야생형 세포의 16시간 공동-배양 시의 시토카인 생산 (pg/mL)
Figure pct00042
표 29: 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T와 Raji 야생형 세포의 16시간 공동-배양 시의 시토카인 생산 (pg/mL)
Figure pct00043
표 30: 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T와 Nalm6 CD19KO 세포의 16시간 공동-배양 시의 시토카인 생산 (pg/mL)
Figure pct00044
표 31: 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T와 Nalm6 CD20KO 세포의 16시간 공동-배양 시의 시토카인 생산 (pg/mL)
Figure pct00045
실시예 7
T 세포를 실시예 4에 기재된 바와 같이 표적 세포와 공동-배양하였다. 16시간 공동-배양 후, 항원-양성 표적 세포와 함께 명시된 E:T 비로 플레이팅된 T-세포 생성물을 수거하고, 항체-형광단의 패널로 염색하여 T 세포 (CD3, CD4, CD8) 및 4-1BB, 활성화 마커를 확인하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 고정가능한 생존성 염료는 생존 세포의 분석을 가능하게 하였다. 사건을 살아있는 세포 (생존성 염료-음성), 림프구 (전방 산란 [FSC]-면적 대 측방 산란 [SSC]-면적 플롯 사용), 단일 세포 (FSC-면적 대 FSC-높이 플롯 사용), 및 이어서 T 세포 (CD3+) 상에서 체계적으로 게이팅하였다. 이어서, T 세포를 활성화 수준 (즉, 4-1BB+ 세포의 백분율)에 대해 분석하였고; NTD 대조군 T 세포에 의해 발현된 수준에 기초하여 4-1BB 게이팅 한계값을 설정하였다.
대조군은 음성 대조군으로서 비-형질도입 (NTD) T 세포 (즉, CAR을 발현하지 않는 T 세포), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포, 대조군 항-CD20 결합제로 형질도입된 세포, 대조군 이중특이적 항원 결합 시스템 (Ab13/Ab14 이중특이적)으로 형질도입된 세포 및 이중특이적 항원 결합 시스템으로 형질도입된 세포를 포함하였다.
표 32: Nalm6 야생형 및 Raji 야생형 세포와의 16시간 공동-배양 시의 항-CD20 CAR-T 세포의 활성화
Figure pct00046
표 33: Nalm6 야생형, Nalm6 CD20KO 및 Nalm6 CD19KO 세포와의 16시간 공동-배양 시의 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T 세포의 활성화
Figure pct00047
실시예 8
T 세포를 실시예 4에 기재된 바와 같이 표적 세포와 공동-배양하였다. T-세포 생성물의 증식 능력을 항원-발현 표적 세포에 반응한 NTD 대조군 T 세포와 비교하여 CTV 염료의 세포 분열-유도된 희석물의 유동 세포측정 분석에 의해 결정하였다. 공동-배양 개시 후 제4일에, 항원-발현 표적 세포와 3:1 E:T 비로 플레이팅된 T-세포 생성물을 수거하고, 생존 T 세포를 확인하기 위한 고정가능한 생존성 염료의 존재 하에 항체-형광단의 패널로 염색하고 (CD3, CD4, CD8), 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 증식 세포의 백분율뿐만 아니라 CTV 신호의 평균 형광 강도 (MFI)가 보고된다. CTV의 MFI의 감소는 생성물이 겪은 세포 분열의 라운드의 수에 비례한다 (즉, CTV MFI가 낮을수록, 세포가 겪은 증식이 더 많음).
대조군은 음성 대조군으로서 비-형질도입 (NTD) T 세포 (즉, CAR을 발현하지 않는 T 세포), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포, 대조군 항-CD20 결합제로 형질도입된 세포, 대조군 이중특이적 항원 결합 시스템 (Ab13/Ab14 이중특이적)으로 형질도입된 세포 및 Ab11/Ab12 이중특이적 항원 결합 시스템으로 형질도입된 세포를 포함하였다.
표 34: Nalm6 야생형 및 Raji 야생형 세포와의 4일 공동-배양 시의 항-CD20 CAR-T 세포의 형광
Figure pct00048
표 34: Nalm6 야생형 및 Raji 야생형 세포와의 4일 공동-배양 시의 항-CD20 CAR-T 세포의 퍼센트 증식
Figure pct00049
표 35: Nalm6 야생형, Nalm6 CD19KO, Raji 야생형 및 Raji CD19KO 세포와의 4일 공동-배양 시의 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T 세포의 형광
Figure pct00050
표 36: Nalm6 야생형, Nalm6 CD19KO, Raji 야생형 및 Raji CD19KO 세포와의 4일 공동-배양 시의 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR-T 세포의 퍼센트 증식
Figure pct00051
실시예 9
본 실시예는 항-CD20 항원 결합 시스템에 사용하기 위한 힌지와 관련된 데이터를 제공한다. 본 실시예의 CAR T 세포는 1가 항-CD20 CAR을 포함한다. 본 실시예는 NSG 마우스에서 파종성 루시페라제-발현 Raji 인간 B-세포 림프종 모델에 대해 CAR-T 구축물을 시험한다. 매주 혈액 샘플을 CAR-T 지속성에 대해 모니터링하였다. 생물발광 영상화 (BLI) 및 생존 종점에 기초하여 반응을 평가하였다. 분석을 위해 제7일, 제13일, 제20일, 제27일, 제34일 및 제41일에 전혈을 채취하였다. 제5일, 제12일, 제19일, 제26일, 제33일 및 제47일에 BLI를 수행하였다. 제55일에 연구를 종결하였다.
본 연구의 CAR-T 세포가 하기 표 37에 제시되며, 표 37의 각각의 CAR-T 세포 유형을 6마리의 마우스에게 투여하였다. 표 37은 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. 모든 CAR-T 세포를 2E+07개 세포/mL의 용량으로 정맥내로 투여하였다 (QDx1). 모든 마우스는 또한 36μg 투여량의 인간 IL-2를 받았다 ((Q12Hx2)QDx3). 인간 IL-2는 CAR-T 지속성 및 생존을 촉진한다. 표 37의 군 4, 5 및 7-10으로서 확인된 CAR T 세포의 구축물은 41BB 공동자극 도메인을 포함하였다. 표 37의 군 6으로서 확인된 CAR T 세포는 CD28 공동자극 도메인을 포함하였다.
표 37
Figure pct00052
모든 CAR-T 세포 처리는 연구 마우스에 의해 잘 허용되었다. 각각의 군 내에서, 처리 관련 체중 변화, 처리 관련 사망, 중앙 종양 성장 지연, 대조군과 비교한 중앙 종양 부담 (%T/C), 부분 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% PR), 완전 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% CR), 무종양 생존자의 퍼센트 (% TFS) 및 증가된 수명의 퍼센트를 포함하는 다수의 측정기준을 모니터링하였다. 결과가 하기 표 38에 제시되며, 데이터는 제55일에 실험을 종결하기까지의 모니터링을 반영한다는 것을 주목한다.
표 38
Figure pct00053
실시예 10
본 실시예는 항-CD19 CAR 및 항-CD20 CAR을 포함하는 비시스트론 CAR을 포함하는 CAR-T 세포의 항종양 효능에 관한 데이터를 제공하며, 항-CD20 CAR은 다양한 항-CD20 결합 모티프 및/또는 힌지를 포함한다.
비시스트론 항-CD20/항-CD19 CAR-T 세포를 NSG 마우스에서 파종성 루시페라제-발현 Raji CD19KO B 세포 림프종 종양에 대해 시험하였다. 매주 혈액 샘플을 CAR-T 지속성에 대해 모니터링하였다. 생물발광 영상화 (BLI) 및 생존 종점에 기초하여 반응을 평가하였다. 분석을 위해 제7일, 제13일, 제20일, 제27일, 제34일 및 제41일에 전혈을 채취하였다. 제5일, 제12일, 제19일, 제26일, 제33일, 제40일 및 제48일에 BLI를 수행하였다. 제55일에 연구를 종결하였다. 하기 표 39의 행 5-14에 제시된 바와 같은 이러한 연구의 CAR-T 세포는 표 39에 나타낸 바와 같은 항-CD20 CAR 및 항-CD19 CAR (28T (CD28) 힌지 및 CD28 공동자극 도메인을 포함하는 Ab11 CAR)을 포함하는 비시스트론 CAR-T 세포이다. 표 39는 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. CAR-T 세포를 6마리의 마우스에게 투여하였다 (4마리의 마우스가 비-형질도입 T 세포를 받은 것 제외 (표 39의 행 2)). 모든 CAR-T 세포를 1E+07개 세포/mL (행 2-7, 9, 11 및 13) 또는 4E+06개 (행 8, 10, 12 및 14)의 용량으로 정맥내로 투여하였다 (QDx1). 모든 마우스는 또한 36μg 투여량의 인간 IL-2를 받았다 ((Q12Hx2)QDx3).
표 39
Figure pct00054
처리 관련 체중 변화, 처리 관련 사망, 중앙 종양 성장 지연, 대조군과 비교한 중앙 종양 부담 (%T/C), 부분 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% PR), 완전 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% CR), 무종양 생존자의 퍼센트 (% TFS) 및 증가된 수명의 퍼센트 (ILS %)를 포함하는 다수의 측정기준을 모니터링하였다. 결과가 하기 표 40에 제시되며, 데이터는 제55일에 실험을 종결하기까지의 모니터링을 반영한다는 것을 주목한다.
모든 CAR-T 세포 처리는 연구 마우스에 의해 잘 허용되었다. 시험된 모든 CAR-T 세포 처리는 항종양 반응을 도출하였다. 모든 처리 요법은 >30.2일의 중앙 종양 성장 지연 및 >226.7%의 수명 증가 (ILS)를 유발하였다. 모든 처리 요법은 제19일에 0%의 중앙 %T/C를 유발하였으며, 비-형질도입 (NTD) 세포로의 처리는 예외였다 (24%).
표 40
Figure pct00055
실시예 11
본 실시예는 항-CD19 결합 모티프 및 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 이중특이적 CAR을 포함하는 CAR-T 세포의 항종양 효능에 관한 데이터를 제공한다. 이중특이적 항-CD20/항-CD19 CAR-T 세포를 NSG 마우스에서 파종성 루시페라제-발현 Raji B 세포 림프종 종양에 대해 시험하였다. 매주 혈액 샘플을 CAR-T 지속성에 대해 모니터링하였다. 생물발광 영상화 (BLI) 및 생존 종점에 기초하여 반응을 평가하였다. 분석을 위해 제7일, 제13일, 제20일, 제27일, 제32일 및 제41일에 전혈을 채취하였다. 제5일, 제12일, 제19일, 제26일, 제33일, 제40일 및 제47일에 BLI를 수행하였다. 제54일에 연구를 종결하였다.
하기 표 41의 행 4-8에 제시된 바와 같은 이러한 연구의 CAR-T 세포는 항-CD19 결합 모티프 및 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 이중특이적 CAR-T 세포이며, 여기서 항-CD19 결합 모티프는 Ab11이다. 표 41은 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. CAR-T 세포를 표 41에 제시된 용량으로 및 그에 제시된 수의 마우스에게 투여하였다. 모든 CAR-T 세포를 정맥내로 투여하였다 (QDx1). 모든 마우스는 또한 36μg 투여량의 인간 IL-2를 받았다 ((Q12Hx2)QDx3).
표 41
Figure pct00056
처리 관련 체중 변화, 처리 관련 사망, 중앙 종양 성장 지연, 대조군과 비교한 중앙 종양 부담 (%T/C), 부분 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% PR), 완전 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% CR), 무종양 생존자의 퍼센트 (% TFS) 및 증가된 수명의 퍼센트 (ILS %)를 포함하는 다수의 측정기준을 모니터링하였다. 결과가 하기 표 42에 제시된다. 항종양 효능이 관찰되었다.
표 42
Figure pct00057
실시예 12
본 실시예는 (i) 항-CD19 CAR 및 항-CD20 CAR을 포함하는 비시스트론 CAR을 포함하는 CAR-T 세포; 및 (ii) 항-CD19 결합 모티프 및 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 이중특이적 CAR의 항종양 효능에 관한 데이터를 제공한다. 비시스트론 및 이중특이적 항-CD20/항-CD19 CAR-T 세포를 NSG 마우스에서 파종성 루시페라제-발현 Raji B 세포 림프종 종양에 대해 시험하였다. 매주 혈액 샘플을 CAR-T 지속성에 대해 모니터링하였다. 생물발광 영상화 (BLI) 및 생존 종점에 기초하여 반응을 평가하였다. 분석을 위해 제7일, 제13일, 제20일, 제27일, 제34일 및 제40일에 전혈을 채취하였다. 제5일, 제12일, 제19일, 제26일, 제33일 및 제40일에 BLI를 수행하였다. 제48일에 연구를 종결하였다.
하기 표 43에 제시된 바와 같은 이러한 연구의 CAR-T 세포는 항-CD20 결합 모티프 및 항-CD19 결합 모티프 (Ab11)를 포함하는 비시스트론 또는 이중특이적 CAR-T 세포이다. 표 43은 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. CAR-T 세포를 6.0E+06개의 용량으로 투여하였으며, 각각의 CAR-T 세포 유형을 6마리의 마우스에게 투여하였다. 모든 CAR-T 세포를 정맥내로 투여하였다 (QDx1). 모든 마우스는 또한 36μg 투여량의 인간 IL-2를 복강내로 받았다 ((Q12Hx2)QDx3).
표 43
Figure pct00058
처리 관련 체중 변화, 처리 관련 사망, 중앙 종양 성장 지연, 대조군과 비교한 중앙 종양 부담 (%T/C), 부분 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% PR), 완전 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% CR), 무종양 생존자의 퍼센트 (% TFS) 및 증가된 수명의 퍼센트 (ILS %)를 포함하는 다수의 측정기준을 모니터링하였다. 결과가 하기 표 44에 제시되며, 데이터는 제48일에 실험을 종결하기까지의 모니터링을 반영한다는 것을 주목한다.
모든 처리는 허용되었다. 비-형질도입 세포 및 LG 세포를 제외한 모든 처리 요법은 적어도 21일의 중앙 종양 성장 지연, >223%의 수명 증가 (ILS), 제12일에 대략 0%의 중앙 %T/C를 유발하였고, 다수는 부분 및/또는 완전 종양 퇴행을 유발하였다.
표 44
Figure pct00059
실시예 13
본 실시예는 1가 항-CD20 CAR을 포함하는 CAR-T 세포의 항종양 효능에 관한 데이터를 제공한다. 항-CD20 CAR-T 세포를 NSG 마우스에서 파종성 루시페라제-발현 Raji B 세포 림프종 종양 (CD19 WT)에 대해 시험하였다. 매주 혈액 샘플을 CAR-T 지속성에 대해 모니터링하였다. 생물발광 영상화 (BLI) 및 생존 종점에 기초하여 반응을 평가하였다. 제5일, 제12일, 제21일, 제28일, 제33일, 제40일 및 제47일에 BLI를 수행하였다. 제55일에 연구를 종결하였다. 하기 표 45에 제시된 바와 같은 이러한 연구의 CAR-T 세포를 표 45에 제시된 투여량으로 및 그에 제시된 수의 마우스에게 투여하였다. 표 45는 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. 모든 CAR-T 세포를 정맥내로 투여하였다 (QDx1). 모든 마우스는 36μg 투여량의 인간 IL-2를 받았다 ((Q12Hx2)QDx3).
표 45
Figure pct00060
처리 관련 체중 변화, 처리 관련 사망, 중앙 종양 성장 지연, 대조군과 비교한 중앙 종양 부담 (%T/C), 부분 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% PR), 완전 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% CR), 무종양 생존자의 퍼센트 (% TFS) 및 증가된 수명의 퍼센트 (ILS %)를 포함하는 다수의 측정기준을 모니터링하였다. 결과가 하기 표 46에 제시된다.
표 46
Figure pct00061
실시예 14
본 실시예는 항-CD19 CAR 및 항-CD20 CAR을 포함하는 비시스트론 CAR을 포함하는 CAR-T 세포의 항종양 효능 및 1가 항-CD20 CAR을 포함하는 CAR-T 세포의 항종양 효능에 관한 데이터를 제공한다. CAR-T 세포를 NSG 마우스에서 파종성 루시페라제-발현 Raji B 세포 림프종 종양에 대해 시험하였다. 매주 혈액 샘플을 CAR-T 지속성에 대해 모니터링하였다. 생물발광 영상화 (BLI) 및 생존 종점에 기초하여 반응을 평가하였다. 제5일, 제12일, 제19일, 제26일, 제33일 및 제40일에 BLI를 수행하였다.
본 연구의 CAR-T 세포가 하기 표 47에 제시된다. 표 47은 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. 군 1-10은 대조군 및 단일특이적 CAR-T 세포만을 포함하는 한편, 군 11-16은 비시스트론 CAR-T 세포를 포함한다. 비시스트론 CAR-T 세포는 표 39에 나타낸 바와 같은 항-CD20 CAR 및 항-CD19 CAR (Ab11 CAR)을 포함한다. 표 47에 제시된 각각의 조건은 6마리의 마우스를 포함하였다. 모든 CAR-T 세포를 나타낸 용량으로 정맥내로 투여하였다 (QDx1). 모든 마우스는 또한 36μg 투여량의 복강내 인간 IL-2를 받았다 ((Q12Hx2)QDx3).
표 47
Figure pct00062
처리 관련 체중 변화, 처리 관련 사망, 중앙 종양 성장 지연, 대조군과 비교한 중앙 종양 부담 (%T/C), 부분 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% PR), 완전 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% CR), 무종양 생존자의 퍼센트 (% TFS) 및 증가된 수명의 퍼센트 (ILS %)를 포함하는 다수의 측정기준을 모니터링하였다. 결과가 하기 표 48에 제시된다. 모든 CAR-T 세포 처리는 연구 마우스에 의해 잘 허용되었다.
표 48
Figure pct00063
실시예 15
본 실시예는 항-CD19 CAR 및 항-CD20 CAR을 포함하는 비시스트론 CAR을 포함하는 CAR-T 세포의 항종양 효능 및 1가 항-CD20 CAR을 포함하는 CAR-T 세포의 항종양 효능에 관한 데이터를 제공한다. CAR-T 세포를 NSG 마우스에서 루시페라제-발현 NALM6 인간 급성 림프모구성 백혈병 모델에 대해 시험하였다. 혈액 샘플을 CAR-T 지속성에 대해 모니터링하였다. 생물발광 영상화 (BLI) 및 생존 종점에 기초하여 반응을 평가하였다. 분석을 위해 제4일, 제11일, 제20일, 제25일, 제32일 및 제39일에 전혈을 채취하였다. 제3일, 제10일, 제18일, 제24일, 제31일, 제38일 및 제45일에 BLI를 수행하였다. 제48일에 연구를 종결하였다.
본 연구의 CAR-T 세포가 하기 표 49에 제시된다. 표 49는 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. 군 1-8은 대조군 및 단일특이적 CAR-T 세포만을 포함하는 한편, 군 9-12는 비시스트론 CAR-T 세포를 포함한다. 비시스트론 CAR-T 세포는 표 49에 나타낸 바와 같은 항-CD20 CAR 및 항-CD19 CAR (Ab11 CAR)을 포함한다. 표 49에 제시된 각각의 조건은 6마리의 마우스를 포함하였다. 모든 CAR-T 세포를 나타낸 용량으로 정맥내로 투여하였다 (QDx1).
표 49
Figure pct00064
처리 관련 체중 변화, 처리 관련 사망, 중앙 종양 성장 지연, 대조군과 비교한 중앙 종양 부담 (%T/C), 부분 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% PR), 완전 종양 퇴행을 나타내는 동물의 퍼센트 (% CR), 무종양 생존자의 퍼센트 (% TFS) 및 증가된 수명의 퍼센트 (ILS %)를 포함하는 다수의 측정기준을 모니터링하였다. 결과가 하기 표 50에 제시된다. 모든 CAR-T 세포 처리는 연구 마우스에 의해 허용되었다.
표 50
Figure pct00065
실시예 16
본 실시예는 CAR의 성분으로서 사용하기 위한 서열에 관한 데이터를 제공한다. 4종의 항-CD20 결합 모티프를 4종의 힌지 (CD8 힌지 (8k), 말단절단된 CD28 힌지 (28T), G4S 링커를 갖는 말단절단된 CD28 힌지; 및 IgG4 힌지 (I4))와 조합하여 시험하였다. 모든 이중특이적 및 비시스트론 CAR은 Ab11 항-CD19 결합 모티프를 포함한다. CD4+ 및 CD8+ T 세포를 건강한 공여자로부터의 분리반출술 물질로부터 양성 선택에 의해 단리하고, 항-CD20 1가 또는 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR T-세포 생성물을 생성하는데 사용하였다. T 세포를 결합된-항-CD3 및 가용성 CD28 항체로 활성화시키고, CAR 구축물을 코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였다. 대조군으로서, 비-형질도입 (NTD) T 세포를 병행하여 동일한 공여자 T 세포로부터 생성하였다. 수거일 (제조 제8일-제10일)에, CAR T-세포 생성물을 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하여 형질도입 효율을 평가하고, 공동-배양 검정에 사용하였다. 1가 CAR을 코딩하는 벡터 및 비시스트론 CAR을 코딩하는 벡터를 사용한 T 세포의 형질도입 효율을 모니터링하였다.
1가 CAR을 코딩하는 벡터의 T 세포 형질도입 효율을 결정하기 위해, CAR-T 생성물을 고정가능한 생존성 염료의 존재 하에 항체의 패널 (항-CD3, 항-CD4, 항-CD8 및 항-링커)로 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하여 생존 CAR-양성 세포의 백분율을 평가하였다. 항-링커 항체는 항-CD20 CAR의 결합 모티프의 중쇄와 경쇄 사이의 링커에 결합하는 항체이고, 형질도입 효율을 측정하는데 사용된다. 대조군은 비-형질도입 세포 (NTD), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포 및 대조군 항-CD20 결합제 (Ab12 결합 모티프)로 형질도입된 세포를 포함하였다.
비시스트론 CAR을 코딩하는 벡터의 T 세포 형질도입 효율을 결정하기 위해, CAR-T 생성물을 고정가능한 생존성 염료의 존재 하에 항체의 패널 (항-CD3, 항-CD4, 항-CD8, 항-이디오타입 및 항-링커를 포함함)로 염색하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하여 생존 CAR-양성 세포의 백분율을 평가하였다. 항-이디오타입 항체는 Ab11 항-CD19 결합 모티프의 결합 모티프에 결합한다. 따라서, 항-이디오타입 항체는 항-CD19 CAR에 결합한다. 이는 항-CD19 CAR의 형질도입 효율을 측정하는데 사용된다. 항-링커 항체는 항-CD20 CAR의 형질도입 효율을 측정하는데 사용된다. 대조군은 비-형질도입 세포 (NTD), 대조군 항-CD19 결합제를 포함하는 레트로바이러스로 형질도입된 세포 및 대조군 항-CD20/항-CD19 이중특이적 CAR (Ab13/Ab14 이중특이적; Ab11/Ab12 이중특이적)로 형질도입된 세포를 포함하였다.
배양물에서 T 세포의 추적을 용이하게 하기 위해, CAR-T 세포를 셀트레이스™ 바이올렛 (CTV) 시약으로 제조업체의 지침에 따라 표지하고, 후속적으로 R-10% 배지로 세척하였다. CAR-T 표적 항원을 발현하는 세포 ("표적 세포")의 추적을 용이하게 하기 위해, 표적 세포가 루시페라제를 발현하도록 조작하였다. 루시페라제-발현 표적 세포는 Nalm6 및 Raji를 포함하였으며, 이들 둘 다는 CD19 및 CD20 항원 둘 다를 발현한다. 추가로, CD19 또는 CD20을 발현하지 않는 Nalm6 및 Raji 세포 (녹아웃 세포 또는 KO)를 제조하였다. 이들 CD19KO 및 CD20KO 세포를 Nalm6 및 Raji 모 세포로부터 클론 선택하였으며, 이들은 각각 CD20을 발현하지만 CD19는 발현하지 않거나 또는 CD19를 발현하지만 CD20은 발현하지 않는다. CD19KO 및 CD20KO 계통을 생성하고, 대조군으로서 사용하여 비시스트론 항-CD20/항-CD19 CAR을 발현하는 세포의 각각의 CAR의 항원 결합을 기능적으로 평가하였다.
루시페라제-발현 표적 세포를 CTV 표지된 CAR-T 세포와 함께 다양한 비로 R-10% 배지 내에 플레이팅하였다 (공동-배양의 제0일). 비는 이펙터 (CAR-T) 세포 대 표적 세포 (이펙터:표적 또는 E:T)의 비로 지칭될 수 있다. 세포를 목적하는 비로 플레이팅하기 위해, CAR-T 세포를 2 내지 3배 연속 희석하면서 웰당 표적 세포의 수를 25,000개 세포로 일정하게 유지하였다. 공동-배양물을 37℃에서 16시간 (h) 또는 4일 동안 인큐베이션하고, 기능적 평가를 하기 기재된 바와 같이 수행하였다.
T-세포 매개 세포독성을 단독으로 플레이팅된 표적 세포에 의해 방출된 신호와 비교하여 공동-배양 웰에서 표적 루시페라제 신호의 감소의 함수로서 측정하였다. 공동-배양 개시 후 제4일에, D-루시페린 기질을 0.14 mg/mL의 최종 농도로 공동-배양 웰에 첨가하고, 플레이트를 암실 내 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 발광 신호를 바리오스칸™ 룩스 (LUX) 또는 바리오스칸® 플래쉬 다중모드 마이크로플레이트 판독기에서 직후에 판독하였다. T 세포-매개 세포독성을 하기와 같이 계산하였다: % 세포독성 = [1 - (관심 샘플/표적 단독 대조군)의 루시페라제 신호] * 100.
시토카인 생산을 공동-배양 16시간 후에 측정하였으며, 이 때 상청액을 수집하고, 메소 스케일 디스커버리 V-플렉스 염증유발 패널 1 인간 키트를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 시토카인 수준에 대해 분석하였다. 항원-발현 표적 세포와 1:1 E:T 비로 플레이팅된 T-세포 생성물의 공동-배양물로부터의 상청액을 항원 결속에 의해 매개된 인터페론 감마 (IFN-γ), IL-2, 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α) 및 IL-10 분비의 수준에 대해 분석하였다. 모든 샘플을 검출 범위 내에 있도록 희석하였다. 각각의 시토카인의 수준을 pg/mL로 보고하고, 각각의 검정의 정량 하한치 및 정량 상한치를 보고하였다.
16시간 공동-배양 후 T 세포 활성화를 결정하기 위해, 항원-양성 표적 세포와 함께 명시된 E:T 비로 플레이팅된 T-세포 생성물을 수거하고, 항체-형광단의 패널로 염색하여 T 세포 (CD3, CD4, CD8) 및 4-1BB, 활성화 마커를 확인하고, 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 고정가능한 생존성 염료는 생존 세포의 분석을 가능하게 하였다. 사건을 살아있는 세포 (생존성 염료-음성), 림프구 (전방 산란 [FSC]-면적 대 측방 산란 [SSC]-면적 플롯 사용), 단일 세포 (FSC-면적 대 FSC-높이 플롯 사용), 및 이어서 T 세포 (CD3+) 상에서 체계적으로 게이팅하였다. 이어서, T 세포를 활성화 수준 (즉, 4-1BB+ 세포의 백분율)에 대해 분석하였고; NTD 대조군 T 세포에 의해 발현된 수준에 기초하여 4-1BB 게이팅 한계값을 설정하였다.
T-세포 생성물의 증식 능력을 항원-발현 표적 세포에 반응한 NTD 대조군 T 세포와 비교하여 CTV 염료의 세포 분열-유도된 희석물의 유동 세포측정 분석에 의해 결정하였다. 공동-배양 개시 후 제4일에, 항원-발현 표적 세포와 3:1 E:T 비로 플레이팅된 T-세포 생성물을 수거하고, 생존 T 세포를 확인하기 위한 고정가능한 생존성 염료의 존재 하에 항체-형광단의 패널로 염색하고 (CD3, CD4, CD8), 유동 세포측정법에 의해 분석하였다. 증식 세포의 백분율뿐만 아니라 CTV 신호의 평균 형광 강도 (MFI)가 보고된다. CTV의 MFI의 감소는 생성물이 겪은 세포 분열의 라운드의 수에 비례한다.
본 실시예에서 사용된 CAR-T 세포는 하기 표 51에서 확인된 CAR을 포함하였다. 표 51은 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. 형질도입 효율이 표 52에 제시된다. Nalm6 (CD19+; CD20low), Nalm6 CD19KO (CD19-; CD20+), Raji (CD19+, CD20+) 및 Raji CD19KO (CD19-, CD20+)에서의 제4일 세포독성이 표 53A-53D에 제시된다. Nalm6 CD19KO 표적 세포에서의 1:3 E:T 비로의 공동-배양 14시간 후 시토카인 생산이 pg/mL로 측정되어 표 54A-54D에 제시된다 (조건당 2회 반복). 공동-배양 16시간 후 41BB의 상향조절에 의해 측정된 T 세포 활성화 (41BB+ 살아있는 T 세포 퍼센트)가 표 55A-D에 제시된다 (조건당 2회 반복). 공동-배양 4일 후 T 세포의 증식이 표 56에 제시된다 (퍼센트 증식성 CD3+, 조건당 2회 반복).
표 51
Figure pct00066
Figure pct00067
표 52
Figure pct00068
표 53A
Figure pct00069
표 53B
Figure pct00070
표 53C
Figure pct00071
표 53D
Figure pct00072
표 54A
Figure pct00073
표 54B
Figure pct00074
표 54C
Figure pct00075
표 54D
Figure pct00076
표 55A
Figure pct00077
표 55B
Figure pct00078
표 55C
Figure pct00079
표 55D
Figure pct00080
표 56
Figure pct00081
실시예 17
항-CD20 1가 CAR에서 힌지의 비교를 수행하였다. 상기 실시예에 제시된 방법을 사용하여 본 실시예에 제시된 데이터를 수득하였다. 본 실시예에서 사용된 CAR-T 세포는 하기 표 57에서 확인된 CAR을 포함하였다. 표 57은 본 실시예의 후속 표에 언급된 실험 조건 또는 군을 제공한다. 실시예는 본 실시예에서 결합 모티프 A, 결합 모티프 B, 결합 모티프 C 및 결합 모티프 D로서 확인된 4종의 항-CD20 결합 모티프를 이용하였다. 시험된 힌지는 말단절단된 CD28 힌지 (28T), CD8 힌지 (8k) 및 IgG4 힌지 (I4)를 포함한다.
형질도입 효율이 표 58에 제시된다. Raji (CD19+, CD20high), Raji CD20KO (CD19+, CD20-), Namalwa (CD19+, CD20low) 및 Nalm6 (CD19+, CD20low)에서의 제4일 세포독성이 표 59 및 60에 제시된다. 1:1 E:T 비로의 공동-배양 14시간 후 시토카인 생산이 표 61A-D에 제시된다. 공동-배양 16시간 후 41BB의 상향조절에 의해 측정된 T 세포 활성화가 각각 표 62 및 63에서 E:T 1:1 또는 1:4로 제시된다. 공동-배양 4일 후 T 세포의 증식이 각각 표 64 및 65에서 E:T 1:1 또는 1:4로 제시된다.
표 57
Figure pct00082
표 58
Figure pct00083
표 59
Figure pct00084
표 60
Figure pct00085
표 61A
Figure pct00086
표 61B
Figure pct00087
표 61C
Figure pct00088
표 61D
Figure pct00089
표 62
Figure pct00090
표 63
Figure pct00091
표 64
Figure pct00092
표 65
Figure pct00093
실시예 18
표 66: 예시적인 결합 모티프 서열
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
실시예 19
표 67: 예시적인 힌지 서열
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
실시예 20
표 68: 결합 모티프, 힌지 및 41BB 공동자극 도메인을 코딩하는 예시적인 뉴클레오티드 서열
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
Figure pct00107
Figure pct00108
Figure pct00109
Figure pct00110
Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
Figure pct00114
Figure pct00115
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
Figure pct00119
Figure pct00120
Figure pct00121
Figure pct00122
실시예 21
표 69: 서열식별번호: 291 및 292에 제시된 예시적인 항-CD20/항-CD19 비시스트론 CAR 뉴클레오티드 및 아미노산 서열.
Figure pct00123
Figure pct00124
실시예 22
표 70: 예시적인 항-CD20/항-CD19 이중특이적 CAR 및 그의 성분
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
실시예 23
표 71: 예시적인 링커
Figure pct00128
다수의 실시양태가 기재되었지만, 본 개시내용 및 실시예는 본원에 기재된 조성물 및 방법을 이용하거나 또는 이에 포괄되는 다른 실시양태를 제공할 수 있다는 것이 분명하다. 따라서, 범주는 예로서 제시된 실시양태에 의해서라기 보다는 본 개시내용 및 첨부된 청구범위로부터 이해될 수 있는 것에 의해 정의되어야 하는 것으로 인지될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> KITE PHARMA, INC. ADIMAB, LLC <120> CHIMERIC ANTIGEN AND T CELL RECEPTORS AND METHODS OF USE <130> K-1074 <140> <141> <150> 62/778,893 <151> 2018-12-12 <160> 314 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Gly Ser Trp Tyr Ser Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 2 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcgaccata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gcggtgtact actgcgccag aggtggagga 300 agttggtaca gcaactggtt cgacccatgg ggacagggta caatggtcac cgtctcctca 360 <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 5 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 5 Gly Gly Ser Phe Ser Gly 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Ile Asp His Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 7 Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 8 Asp His Ser Gly Ser 1 5 <210> 9 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 9 Ala Arg Gly Gly Gly Ser Trp Tyr Ser Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Gly Gly Gly Ser Trp Tyr Ser Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 11 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 11 Gly Gly Gly Ser Trp Tyr Ser Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 12 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 12 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Arg Ser Leu Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 13 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 13 gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgat gcctccagtt tggaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gatgattttg caacttatta ctgccagcag gaccgaagtc tccctcctac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 14 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 15 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 16 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 17 Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 18 Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 19 Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 20 Gln Gln Asp Arg Ser Leu Pro Pro Thr 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 21 Gln Gln Asp Arg Ser Leu Pro Pro Thr 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 22 Gln Gln Asp Arg Ser Leu Pro Pro Thr 1 5 <210> 23 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 23 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Ile 20 25 30 His Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asp Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Leu Gly Gln Glu Ser Ala Thr Tyr Leu Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 24 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 24 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggtatccact ggaactggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggac atcgacacaa gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatcc gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagtt ctgtgaccgc cgcagacacg gcggtgtact actgcgccag attgggacag 300 gagtcagcca cctatctcgg aatggacgta tggggccagg gaacaactgt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Gly Gly Ser Phe Ser Gly Ile His 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Gly Ile His Trp Asn 1 5 <210> 27 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Gly Gly Ser Phe Ser Gly 1 5 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Ile Asp Thr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Asp Ile Asp Thr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Asp Thr Ser Gly Ser 1 5 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Ala Arg Leu Gly Gln Glu Ser Ala Thr Tyr Leu Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 32 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Leu Gly Gln Glu Ser Ala Thr Tyr Leu Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 33 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Leu Gly Gln Glu Ser Ala Thr Tyr Leu Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 34 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 34 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Leu Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 35 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 35 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagct ctacacctac 300 cctttcactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339 <210> 36 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 37 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 38 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 39 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 40 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 41 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 42 Gln Gln Leu Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 43 Gln Gln Leu Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 44 Gln Gln Leu Tyr Thr Tyr Pro Phe Thr 1 5 <210> 45 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 45 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 46 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 46 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagttctgt gaccgccgca gacacggcgg tgtactactg cgccagagag 300 actgactaca gcagcggaat gggatacgga atggacgtat ggggccaggg aacaactgtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 47 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr 1 5 10 <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 48 Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly 1 5 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 49 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser 1 5 <210> 50 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 50 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 51 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 52 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 52 Tyr Tyr Ser Gly Ser 1 5 <210> 53 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Ala Arg Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 54 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 55 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 55 Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 56 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 56 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 57 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 57 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgccagcaa agcctcgccg accctttcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 58 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 58 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 59 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 59 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 60 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 60 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 61 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 61 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 62 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 62 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 63 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 63 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 64 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 64 Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 65 Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 66 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 66 Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 67 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 67 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Lys Glu Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Pro His Tyr Asp Asp Trp Ser Gly Phe Ile Ile Trp Phe 100 105 110 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 68 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 68 caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggtta cacctttaaa gaatatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acagtggtca cacatactat 180 gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240 atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagggcct 300 cactacgacg actggagcgg atttatcata tggttcgacc catggggaca gggtacattg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 69 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 69 Gly Tyr Thr Phe Lys Glu Tyr Gly 1 5 <210> 70 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 70 Glu Tyr Gly Ile Ser 1 5 <210> 71 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 71 Gly Tyr Thr Phe Lys Glu 1 5 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 72 Ile Ser Ala Tyr Ser Gly His Thr 1 5 <210> 73 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 73 Trp Ile Ser Ala Tyr Ser Gly His Thr Tyr Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 <210> 74 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 74 Ser Ala Tyr Ser Gly 1 5 <210> 75 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 75 Ala Arg Gly Pro His Tyr Asp Asp Trp Ser Gly Phe Ile Ile Trp Phe 1 5 10 15 Asp Pro <210> 76 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 76 Gly Pro His Tyr Asp Asp Trp Ser Gly Phe Ile Ile Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 77 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 77 Gly Pro His Tyr Asp Asp Trp Ser Gly Phe Ile Ile Trp Phe Asp Pro 1 5 10 15 <210> 78 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 78 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Arg Phe Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 79 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 79 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccttca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacaggt ttcctcctac ctttggccaa 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 80 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 80 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 81 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 82 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 82 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 83 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 83 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 84 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 84 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 85 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 85 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 86 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 86 Gln Gln Ser Tyr Arg Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 87 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 87 Gln Gln Ser Tyr Arg Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 88 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 88 Gln Gln Ser Tyr Arg Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 89 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 89 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Pro 20 25 30 Asp His Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 90 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 90 caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtcccgacc actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggtccatct acgccagtgg gagcaccttc 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgcg gacacggcgg tgtactactg cgccagagag 300 actgactaca gcagcggaat gggatacgga atggacgtat ggggccaggg aacaactgtc 360 accgtctcct ca 372 <210> 91 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 91 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Pro Asp His Tyr 1 5 10 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 92 Ser Pro Asp His Tyr Trp Gly 1 5 <210> 93 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 93 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Pro Asp 1 5 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 94 Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 95 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 95 Ser Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 96 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 96 Tyr Ala Ser Gly Ser 1 5 <210> 97 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 97 Ala Arg Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 98 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 98 Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 99 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 99 Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 100 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 100 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 101 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 101 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattaac agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgccagcaa agcctcgccg accctttcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 102 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 102 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 103 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 103 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 104 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 105 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 105 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 106 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 106 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 107 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 107 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 108 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 108 Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 109 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 109 Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 110 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 110 Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr 1 5 <210> 111 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 111 Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asp Thr Glu 20 25 30 Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Leu Ile Tyr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Tyr Ser Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Thr Gly Tyr Ser Arg Trp Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 112 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 112 cagatcacct tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg 60 acctgcacct tctctgggtt ctcactcgac actgaaggag tgggtgtggg ctggatccgt 120 cagcccccag gaaaggccct ggagtggctt gcactcattt atttcaatga tcaaaagcgc 180 tacagcccat ctctgaagag caggctcacc atcaccaagg acacctccaa aaaccaggtg 240 gtccttacaa tgaccaacat ggaccctgtg gacacggcgg tgtactactg cgccagagac 300 acgggataca gccgatggta ctacggcatg gatgtatggg gccagggaac aactgtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 113 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 113 Gly Phe Ser Leu Asp Thr Glu Gly Val Gly 1 5 10 <210> 114 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 114 Thr Glu Gly Val Gly Val Gly 1 5 <210> 115 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 115 Gly Phe Ser Leu Asp Thr Glu Gly 1 5 <210> 116 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 116 Ile Tyr Phe Asn Asp Gln Lys 1 5 <210> 117 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 117 Leu Ile Tyr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 118 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 118 Tyr Phe Asn Asp Gln 1 5 <210> 119 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 119 Ala Arg Asp Thr Gly Tyr Ser Arg Trp Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 120 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 120 Asp Thr Gly Tyr Ser Arg Trp Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 121 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 121 Asp Thr Gly Tyr Ser Arg Trp Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 122 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 122 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Ala Tyr Pro Ile 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 123 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 123 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gcatacgcct accctatcac ttttggcgga 300 gggaccaagg ttgagatcaa a 321 <210> 124 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 124 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 125 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 125 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 126 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 126 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 127 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 127 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 128 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 128 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 129 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 129 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 130 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 130 Gln Gln Ala Tyr Ala Tyr Pro Ile Thr 1 5 <210> 131 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 131 Gln Gln Ala Tyr Ala Tyr Pro Ile Thr 1 5 <210> 132 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 132 Gln Gln Ala Tyr Ala Tyr Pro Ile Thr 1 5 <210> 133 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 133 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Glu Lys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Leu Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 134 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 134 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcgaa aaatactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atctaccata gtggactcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gcggtgtact actgcgccag ggtcagatac 300 gacagcagcg actcctacta ctatagctac gattatggaa tggacgtatg gggccaggga 360 acaactgtca ccgtctcctc a 381 <210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 135 Gly Gly Ser Phe Glu Lys Tyr Tyr 1 5 <210> 136 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 136 Lys Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 137 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 137 Gly Gly Ser Phe Glu Lys 1 5 <210> 138 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 138 Ile Tyr His Ser Gly Leu Thr 1 5 <210> 139 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 139 Glu Ile Tyr His Ser Gly Leu Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 140 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 140 Tyr His Ser Gly Leu 1 5 <210> 141 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 141 Ala Arg Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp 1 5 10 15 Tyr Gly Met Asp Val 20 <210> 142 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 142 Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 143 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 143 Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 144 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 144 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 145 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 145 gacatcgtgc tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctagccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagtc ctactccttc 300 ccttggactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339 <210> 146 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 146 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 147 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 147 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 148 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 148 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 149 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 149 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 150 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 150 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 151 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 151 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 152 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 152 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 153 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 153 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 154 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 154 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 155 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 155 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Val Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp Ser Ser Gly Lys Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 156 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 156 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt cgatacgtat ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcgactcca gtggaaaaac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gcggtgtact actgcgccag ggtcagatac 300 gacagcagcg actcctacta ctatagctac gattatggaa tggacgtatg gggccaggga 360 acaactgtca ccgtctcctc a 381 <210> 157 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 157 Gly Gly Ser Phe Ser Arg Tyr Val 1 5 <210> 158 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 158 Arg Tyr Val Trp Ser 1 5 <210> 159 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 159 Gly Gly Ser Phe Ser Arg 1 5 <210> 160 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 160 Ile Asp Ser Ser Gly Lys Thr 1 5 <210> 161 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 161 Glu Ile Asp Ser Ser Gly Lys Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 162 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 162 Asp Ser Ser Gly Lys 1 5 <210> 163 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 163 Ala Arg Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp 1 5 10 15 Tyr Gly Met Asp Val 20 <210> 164 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 164 Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 165 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 165 Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 166 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 166 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 167 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 167 gacatcgtgc tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctagccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagtc ctactccttc 300 ccttggactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339 <210> 168 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 168 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 169 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 169 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 170 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 170 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 171 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 171 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 172 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 172 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 173 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 173 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 174 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 174 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 175 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 175 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 176 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 177 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 177 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp His Arg Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 178 <211> 381 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 178 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttctcc ggttacgcat ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcgaccatc gaggattcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gcggtgtact actgcgccag ggtcagatac 300 gacagcagcg actcctacta ctatagctac gattatggaa tggacgtatg gggccaggga 360 acaactgtca ccgtctcctc a 381 <210> 179 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 179 Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Ala 1 5 <210> 180 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 180 Gly Tyr Ala Trp Ser 1 5 <210> 181 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 181 Gly Gly Ser Phe Ser Gly 1 5 <210> 182 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 182 Ile Asp His Arg Gly Phe Thr 1 5 <210> 183 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 183 Glu Ile Asp His Arg Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 184 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 184 Asp His Arg Gly Phe 1 5 <210> 185 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 185 Ala Arg Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp 1 5 10 15 Tyr Gly Met Asp Val 20 <210> 186 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 186 Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 187 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 187 Val Arg Tyr Asp Ser Ser Asp Ser Tyr Tyr Tyr Ser Tyr Asp Tyr Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 188 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 188 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 189 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 189 gacatcgtgc tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctagccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagtc ctactccttc 300 ccttggactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339 <210> 190 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 190 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 191 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 191 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 192 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 192 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 193 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 193 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 194 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 194 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 195 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 195 Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser 1 5 <210> 196 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 196 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 197 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 197 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 198 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 198 Gln Gln Ser Tyr Ser Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 199 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 199 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Gln Lys Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp Thr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Gly Arg Tyr Ser Tyr Gly Tyr Tyr Ile Thr Ala Phe Asp Ile 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 200 <211> 369 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 200 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttccaa aaatactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcgacacca gtggattcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gcggtgtact actgcgccag agtgggaagg 300 tacagctacg gatactatat caccgcattc gacatatggg gtcagggtac aactgtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 201 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 201 Gly Gly Ser Phe Gln Lys Tyr Tyr 1 5 <210> 202 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 202 Lys Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 203 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 203 Gly Gly Ser Phe Gln Lys 1 5 <210> 204 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 204 Ile Asp Thr Ser Gly Phe Thr 1 5 <210> 205 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 205 Glu Ile Asp Thr Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 206 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 206 Asp Thr Ser Gly Phe 1 5 <210> 207 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 207 Ala Arg Val Gly Arg Tyr Ser Tyr Gly Tyr Tyr Ile Thr Ala Phe Asp 1 5 10 15 Ile <210> 208 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 208 Val Gly Arg Tyr Ser Tyr Gly Tyr Tyr Ile Thr Ala Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 209 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 209 Val Gly Arg Tyr Ser Tyr Gly Tyr Tyr Ile Thr Ala Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 210 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 210 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 His Tyr Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 211 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 211 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca ctactccttc 300 cctttcactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339 <210> 212 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 212 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 213 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 213 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 214 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 214 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 215 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 215 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 216 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 216 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 217 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 217 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 218 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 218 Gln Gln His Tyr Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 219 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 219 Gln Gln His Tyr Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 220 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 220 Gln Gln His Tyr Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 221 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 221 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 222 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 222 gaggtgaaac tgcaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccgtc 60 acatgcactg tctcaggggt ctcattaccc gactatggtg taagctggat tcgccagcct 120 ccacgaaagg gtctggagtg gctgggagta atatggggta gtgaaaccac atactataat 180 tcagctctca aatccagact gaccatcatc aaggacaact ccaagagcca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatttact actgtgccaa acattattac 300 tacggtggta gctatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360 <210> 223 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 223 Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly 1 5 <210> 224 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 224 Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 225 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 225 Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 1 5 <210> 226 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 226 Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr 1 5 <210> 227 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 227 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 228 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 228 Trp Gly Ser Glu Thr 1 5 <210> 229 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 229 Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 230 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 230 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 231 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 231 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 232 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 232 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 100 105 <210> 233 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 233 gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300 gggactaagt tggaaataac a 321 <210> 234 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 234 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 235 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 235 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 236 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 236 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 237 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 237 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 238 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 238 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 239 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 239 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 240 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 240 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 241 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 241 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 242 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 242 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 243 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 243 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 130 135 140 Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 145 150 155 160 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 165 170 175 Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 195 200 205 Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 210 215 220 Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 244 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 244 gacatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60 atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gatggaactg ttaaactcct gatctaccat acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattagcaa cctggagcaa 240 gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttccgtacac gttcggaggg 300 gggactaagt tggaaataac aggctccacc tctggatccg gcaagcccgg atctggcgag 360 ggatccacca agggcgaggt gaaactgcag gagtcaggac ctggcctggt ggcgccctca 420 cagagcctgt ccgtcacatg cactgtctca ggggtctcat tacccgacta tggtgtaagc 480 tggattcgcc agcctccacg aaagggtctg gagtggctgg gagtaatatg gggtagtgaa 540 accacatact ataattcagc tctcaaatcc agactgacca tcatcaagga caactccaag 600 agccaagttt tcttaaaaat gaacagtctg caaactgatg acacagccat ttactactgt 660 gccaaacatt attactacgg tggtagctat gctatggact actggggtca aggaacctca 720 gtcaccgtct cctca 735 <210> 245 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 245 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro 20 <210> 246 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 246 atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60 atccca 66 <210> 247 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 247 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly <210> 248 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 248 ggctccacct ctggatccgg caagcccgga tctggcgagg gatccaccaa gggc 54 <210> 249 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 249 Met Glu Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 1 5 10 15 Val His Ser <210> 250 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 250 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala Ala Arg Pro 20 <210> 251 <211> 813 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 251 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg ctattactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc tggaaaagga ttagaatgga tcggcgagat agaccacagc 240 gggagcacaa actacaaccc cagcctgaaa tcgcgggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag gcggaggctc ctggtacagc aactggttcg atccttgggg ccaaggcacc 420 atggtgaccg tttccagcgg ctctacaagc ggcagcggga aacctggttc tggagagggc 480 agcacaaagg gcgacatcca gatgacacag agccccagca cccttagcgc ctctgtggga 540 gatagggtta ccattacctg cagggcttcc cagagcatca gcagctggct ggcatggtat 600 caacagaagc ctggcaaggc tcccaagctg ctcatctatg acgcctccag cctggaaagc 660 ggggttccct ccagatttag cggctcaggc tccggaacag agttcaccct taccatctct 720 agcctgcaac ccgacgactt cgctacttat tactgtcaac aagacagaag cttgcccccc 780 acattcggcg gagggaccaa ggttgagatc aag 813 <210> 252 <211> 834 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 252 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg catccactgg 180 aactggatcc ggcagcctcc tggcaaaggc cttgaatgga tcggcgatat cgacaccagc 240 ggctccacca actacaaccc cagcctgaaa tcgagggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagac tgggccagga aagcgctacc taccttggca tggatgtgtg ggggcagggc 420 accaccgtta ctgttagctc tggctcaaca agcggcagcg gcaagcctgg ctcaggagaa 480 ggaagcacaa agggcgacat tgtaatgact cagagccccg acagcctggc cgttagctta 540 ggcgaaaggg ctacaatcaa ttgcaagagc agccagagcg ttctgtacag cagcaacaac 600 aagaactacc tcgcatggta tcaacagaag ccaggccagc ctcccaagct gctcatctac 660 tgggcttcca ccagagagag cggggttccc gatagattct ccggctccgg ttctggaaca 720 gatttcacgc tcacaatcag cagcttacag gccgaggatg tggctgtcta ctattgtcag 780 cagttgtaca cctacccctt cacattcggc ggaggcacca aggttgagat caag 834 <210> 253 <211> 825 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 253 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca gcttcagctc caagagagcg gacctggctt agtgaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcaccgtt tctggcggaa gcatcagcag ctccagctat 180 tactggggat ggatcaggca gccccctggc aagggtttag aatggatcgg ctcgatatat 240 tactccggca gcacctacta taaccccagc ttgaagagcc gggttaccat ttctgtggac 300 acatcaaaga accagttcag cctgaagctg agctctgtga ctgccgccga cacagctgtg 360 tactactgtg ccagagagac agactactcc agcggcatgg gctacggcat ggatgtgtgg 420 ggacaaggaa ccaccgttac tgtgagcagc ggttccacca gcggctcagg caagcctggc 480 tcaggagaag gaagcaccaa gggggatata cagatgacac agagcccctc cagcctgtcc 540 gccagcgttg gcgatcgtgt aacgatcacc tgccgggcct ctcagagcat caactcctac 600 ctcaattggt atcaacagaa gccaggcaag gcccccaaat tactcatcta cgccgccagc 660 agcttacaga gcggggttcc ctctagattc tccggctccg gttctggaac agatttcacc 720 ctcactatct ccagcttgca gcccgaggat ttcgccactt attactgtca gcagagcctg 780 gccgacccct tcacattcgg cggaggcaca aaggttgaga tcaag 825 <210> 254 <211> 828 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 254 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagctt gtgcagagcg gagctgaagt taagaagcct 120 ggcgcctctg tgaaggttag ctgcaaggcc agcggctaca cattcaagga atatggcatc 180 tcctgggtta ggcaggctcc cggccaaggc ttagaatgga tgggctggat ctccgcctac 240 tccggccaca cctactacgc ccagaagctt cagggcaggg ttaccatgac caccgacacc 300 agcacctcta ccgcctatat ggagctgagg agcctgagat cggacgacac agctgtgtat 360 tactgcgcca gaggccccca ctacgacgac tggtctggat ttatcatctg gttcgacccc 420 tgggggcagg gcaccctggt cacagtttct tctggctcca ccagcggaag cggcaagcca 480 ggctcaggcg aaggatctac aaaaggcgac atccaaatga cacagagccc cagcagcttg 540 agcgcctccg ttggcgacag agttacaatc acctgcaggg cctctcagag catcagcagc 600 tatttgaatt ggtatcaaca gaagccagga aaggccccta agctgctcat ctacgctgcc 660 agctcgctcc aatctggcgt tcctagcaga tttagcggct ccggcagcgg cacagacttt 720 actcttacca ttagctccct gcagcccgag gacttcgcta cctactattg ccagcaaagc 780 tacagattcc ctcccacctt tggccagggc acaaaggttg agatcaag 828 <210> 255 <211> 825 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 255 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caagagagcg gacctggctt agtgaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcaccgtt tctggcggaa gcatcagctc tcccgaccat 180 tactggggat ggatcaggca gccccctggc aagggtttgg aatggatcgg cagcatctac 240 gccagcggca gcacattcta caacccctcg ctcaaaagca gggttactat ttctgtggac 300 acaagcaaaa atcagttcag cctgaagctg agctctgtga ctgccgccga cacagctgtg 360 tactactgtg ccagagagac agactactcc agcgggatgg gctacggcat ggatgtgtgg 420 ggacaaggaa ccaccgttac tgtgagcagc ggctccacaa gcggctcagg caagcctggc 480 tcaggagaag gaagcaccaa gggggacatt caaatgaccc aaagcccctc cagcctgtcc 540 gccagcgttg gcgatagggt taccattacc tgcagggcca gccaaagcat caactcctac 600 ctaaattggt atcaacagaa gccaggcaag gcccccaaac tactcattta cgccgccagc 660 agcttacaga gcggggttcc ctctagattc tccggcagcg gttctggaac agatttcact 720 ctcacaatat cttcgctgca gcccgaggat ttcgctacct actattgcca gcaatccctg 780 gccgacccct tcacattcgg cggaggcaca aaggttgaga tcaag 825 <210> 256 <211> 822 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 256 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca gatcacatta aaagagagcg gacctacact ggtgaagccc 120 acccaaacgc ttaccctcac ctgcaccttt agcgggttca gcctggacac agagggcgtt 180 ggcgttggat ggatcaggca gcctcctggc aaagccctcg aatggcttgc cctcatctac 240 ttcaacgacc agaagagata cagcccctcc ttaaaatctc ggctcacaat caccaaagac 300 acaagcaaaa atcaggttgt gctcaccatg accaacatgg accctgtgga caccgctgtg 360 tactactgtg ccagagacac cggctacagc agatggtact acgggatgga cgtttggggc 420 caaggcacca ctgtgaccgt ttccagcggc tctacaagcg gcagcgggaa acctggttct 480 ggagagggca gcacaaaggg cgacatccag atgacgcaat cccccagctc tgtgagcgcc 540 tctgtgggag acagagttac aatcacatgc cgggcctccc agggcatcag ctcttggctg 600 gcatggtatc aacagaagcc tggcaaggct cccaagctgc tcatctatgc cgcctcctcc 660 ttacaatctg gagttccctc caggttcagc gggagcggct caggaacaga cttcaccctt 720 accatctcta gcctgcaacc cgaggacttc gctacttatt actgtcagca ggcctacgcc 780 taccccatca cattcggcgg aggaacaaag gttgagatca ag 822 <210> 257 <211> 852 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 257 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcgagaa atactactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc cggcaaaggc ttagaatgga tcggcgagat ttatcacagc 240 gggctcacca actacaaccc cagcctgaaa tctcgagtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttagatacga cagcagcgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttact gtctcctctg gatctaccag cggcagcggc 480 aagcctggat ctggcgaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggctg tgtctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcttggtatc aacagaagcc tggccagccc 660 cctaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tcggtttagc 720 ggctccggct caggaaccga tttcaccctc actatctcca gcctccaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca ag 852 <210> 258 <211> 852 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 258 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagccg ctatgtgtgg 180 agctggatcc ggcagcctcc tggcaaaggc cttgaatgga tcggagagat agacagcagc 240 ggcaagacca actacaaccc cagcctgaaa tcacgcgtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttagatacga cagctccgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttaca gttagctctg gaagcaccag cggctccggc 480 aagcctggat ctggtgaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggctg tgtctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcatggtatc aacagaagcc tggccagcct 660 cccaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tcgctttagc 720 ggcagcggtt ctggcaccga tttcactctt acaatcagca gcttacaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca ag 852 <210> 259 <211> 852 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 259 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg ctacgcttgg 180 agctggatta gacagcctcc tggcaaagga ctagaatgga tcggagagat cgaccacaga 240 ggcttcacca actacaaccc cagcctgaaa tccagagtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccaggg ttagatacga cagcagcgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttacg gttagctctg gatctaccag cggcagcggc 480 aagcctggct caggagaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggccg tttctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcatggtatc aacagaagcc aggccagcct 660 cccaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tagattttcg 720 ggatcaggct ccggcaccga tttcactctt acgatcagca gcttacaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca ag 852 <210> 260 <211> 840 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 260 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttccagaa atactactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc cggcaaaggc ttagaatgga tcggagagat agacaccagc 240 ggcttcacca actacaaccc cagcctgaaa tctagggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttggcagata cagctacggc tactacatca ccgccttcga catttggggc 420 caaggcacca ctgtgaccgt ttccagcgga agcactagcg gcagcgggaa acctggttct 480 ggagagggct caaccaaggg cgacatcgtg atgacacaga gccccgactc tctggctgtg 540 tccctgggag agagagccac catcaactgc aagagcagcc agagcgttct gtacagcagc 600 aacaacaaga actacctggc atggtatcaa cagaagcctg gccagccccc taagctgctc 660 atctactggg cttccaccag agaatcaggc gttccagaca ggttctccgg ctcgggttca 720 ggcacagact tcacccttac catctcttcc ctgcaggccg aagatgtggc cgtttactac 780 tgtcagcagc actacagctt ccctttcaca ttcggcggag gcaccaaggt tgagatcaag 840 <210> 261 <211> 258 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 261 gcagctgctt tcgtgcctgt gttcctgcct gctaagccca ccaccactcc tgctccaaga 60 cctcctaccc ccgctcctac aatcgccagc caacctctga gcctgagacc ggaggcatgc 120 agacctgcgg cagggggagc agttcacaca agaggcttgg acttcgcttg cgacatctac 180 atctgggccc ctctggccgg cacatgcgga gttcttcttc ttagcctggt gatcaccctg 240 tactgcaacc acagaaac 258 <210> 262 <211> 180 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 262 gctgctgcat tggataatga aaaatcgaac ggcacaatca ttcatgtgaa gggcaaacac 60 ctgtgtccca gccccttgtt cccaggacct agcaagcctt tttgggttct cgtggtggtg 120 ggcggcgttc tggcttgcta ctctctactt gtaactgtcg catttattat attctgggtt 180 <210> 263 <211> 186 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 263 ggaggaggag gatctctgga taacgagaaa agcaacggga ccatcattca tgtgaaggga 60 aaacatctgt gtcccagccc cttgttcccc ggacctagca agccgttttg ggttctcgtg 120 gtggtgggcg gcgttctggc ttgctactct ctgcttgtga ccgttgcctt cattatcttc 180 tgggtt 186 <210> 264 <211> 201 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 264 ggaggaggag gatctggtgg aggaggttct ctggacaatg agaaatcaaa tggaacgatc 60 atccatgtga aggggaagca cctctgcccc tctcccctgt ttcctggtcc tagcaagccc 120 ttctgggttt tggtggtcgt gggcggcgtt ctggcttgct acagcctgtt agtgaccgtt 180 gcatttatca tattttgggt t 201 <210> 265 <211> 201 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 265 ggaggaggag gatctggtgg aggaggttct ctggacaatg agaaatcgaa tgggacaatc 60 atccatgtga aggggaagca cctgagcccc tctcccctgt ttcctggtcc tagcaagccc 120 ttctgggttt tggtggtcgt gggcggcgtt ctggccgttt acagcctgtt agtgaccgtt 180 gcttttatca tattttgggt t 201 <210> 266 <211> 201 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 266 ggaggaggag gatctggtgg aggaggttct ctggacaatg aaaagagcaa tggcacaatc 60 atccatgtga aggggaagca cctgaacggc tccgccctgt ttcctggtcc tagcaagcca 120 ttttgggttc tcgtggtggt gggcggcgtt ctggccgttt acagcctgtt agtgaccgtt 180 gcgttcataa tcttctgggt t 201 <210> 267 <211> 216 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 267 ggaggaggag gatctggtgg aggaggttct ggaggaggcg gctctctcga caacgaaaag 60 agcaatggca ccattattca cgttaaaggc aagcatctgt gcccctcccc cctgttcccc 120 ggaccttcaa aacctttttg ggttctcgtg gtggtgggcg gcgttctggc ctgctattct 180 ttgctggtaa ctgtagcctt cattatcttc tgggtt 216 <210> 268 <211> 771 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 268 gagagcaagt acggacctcc ttgtcctcca tgtcctgctc ccgagttcga gggcggacct 60 tcagtgttcc tgttcccccc taaacccaag gatactctta tgatcagccg gacccccgag 120 gtcacctgtg tggtggtaga tgttagccag gaggatcccg aggtgcagtt caactggtac 180 gtcgacggcg tcgaggtaca caacgccaag accaagccta gggaggagca gttccagtcc 240 acctataggg tcgtgagcgt gcttaccgtg ctgcaccagg actggttgaa cggcaaggag 300 tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctc cccagcagca tcgagaagac cattagcaag 360 gcaaagggac agcccaggga gccccaggtg tacacattac ctccttccca ggaagagatg 420 accaagaacc aggtgtcgct tacctgcctg gtcaagggct tctacccctc cgacattgca 480 gttgaatggg agtcaaacgg ccagccggag aacaattaca agaccacccc cccagtcttg 540 gacagcgacg gctctttctt cctctactcg cggcttactg tagataaaag tcgttggcag 600 gagggaaacg tgttcagctg ctctgtgatg cacgaggccc tccataacca ctacacccag 660 aagagcctct ccctgtctct gggcaagatg ttctgggtgc tggtcgtggt gggcggagtt 720 cttgcttgct actccctgct cgtgaccgtc gctttcatta tattctgggt c 771 <210> 269 <211> 795 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 269 gagagaaagt gttgtgttga gtgtcctcct tgtcctccct gccctgctcc cgagttactt 60 ggcggacctt cagtgttcct gttccccccc aagcccaagg atactctcat gatcagccgg 120 acccccgagg tcacctgtgt ggtggtagat gttagccacg aggaccctga ggtcaagttc 180 aactggtacg tcgacggcgt cgaggtgcac aacgccaaga ccaagcctcg tgaagaacag 240 taccagtcca cctacagagt tgtgagcgtg cttaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 300 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgtccaac aaggccctcc ccgctcccat cgagaagaca 360 atcagcaagg ccaagccctg tccagcccct gagctcttag gaggacctag cgttttcctt 420 ttccctccca agcctaagga cactcttatg atctccagaa caccagaggt tacctgcgtc 480 gtggtggacg tgtcccatga ggacccagaa gtcaaattca attggtatgt agatggggtc 540 gaggtccaca acgctaagac aaagccccgc gaggagcagt acaactctac ctacagggtc 600 gtgtccgtgc tcacagtgct gcatcaggat tggctcaacg ggaaggagta taagtgcaaa 660 gtgtccaata aggcccttcc cgcccctatc gagaaaacca tctctaaggc caaattctgg 720 gtgctggtgg ttgtgggcgg cgtgcttgct tgttactccc tgctggtcac tgtagctttc 780 atcatatttt gggtg 795 <210> 270 <211> 494 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 270 agattcagcg ttgtgaagag aggccggaag aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc 60 atgagacctg tgcagaccac acaggaggaa gacggctgca gctgtagatt ccccgaggaa 120 gaggagggcg gctgtgagct gagagttaag ttcagcagga gcgccgacgc ccctgcctac 180 cagcaaggac agaatcaact gtacaacgag ctgaacctgg gcagacggga ggaatacgat 240 gtgctggaca agaggagagg cagagacccc gagatgggcg gcaaacctag aagaaagaac 300 ccccaggagg gcctgtataa cgagctccag aaggacaaga tggccgaggc ctacagcgag 360 atcggcatga agggcgaaag aagaagaggc aagggccacg acggcctcta ccagggctta 420 agcacagcta caaaggacac ctacgacgcc ctgcacatgc aggccctgcc ccctagatga 480 ttaattaaat cgat 494 <210> 271 <211> 1577 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 271 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca gcttcagctc caagagagcg gacctggctt agtgaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcaccgtt tctggcggaa gcatcagcag ctccagctat 180 tactggggat ggatcaggca gccccctggc aagggtttag aatggatcgg ctcgatatat 240 tactccggca gcacctacta taaccccagc ttgaagagcc gggttaccat ttctgtggac 300 acatcaaaga accagttcag cctgaagctg agctctgtga ctgccgccga cacagctgtg 360 tactactgtg ccagagagac agactactcc agcggcatgg gctacggcat ggatgtgtgg 420 ggacaaggaa ccaccgttac tgtgagcagc ggttccacca gcggctcagg caagcctggc 480 tcaggagaag gaagcaccaa gggggatata cagatgacac agagcccctc cagcctgtcc 540 gccagcgttg gcgatcgtgt aacgatcacc tgccgggcct ctcagagcat caactcctac 600 ctcaattggt atcaacagaa gccaggcaag gcccccaaat tactcatcta cgccgccagc 660 agcttacaga gcggggttcc ctctagattc tccggctccg gttctggaac agatttcacc 720 ctcactatct ccagcttgca gcccgaggat ttcgccactt attactgtca gcagagcctg 780 gccgacccct tcacattcgg cggaggcaca aaggttgaga tcaaggcagc tgctttcgtg 840 cctgtgttcc tgcctgctaa gcccaccacc actcctgctc caagacctcc tacccccgct 900 cctacaatcg ccagccaacc tctgagcctg agaccggagg catgcagacc tgcggcaggg 960 ggagcagttc acacaagagg cttggacttc gcttgcgaca tctacatctg ggcccctctg 1020 gccggcacat gcggagttct tcttcttagc ctggtgatca ccctgtactg caaccacaga 1080 aacagattca gcgttgtgaa gagaggccgg aagaagctgc tgtacatctt caagcagccc 1140 ttcatgagac ctgtgcagac cacacaggag gaagacggct gcagctgtag attccccgag 1200 gaagaggagg gcggctgtga gctgagagtt aagttcagca ggagcgccga cgcccctgcc 1260 taccagcaag gacagaatca actgtacaac gagctgaacc tgggcagacg ggaggaatac 1320 gatgtgctgg acaagaggag aggcagagac cccgagatgg gcggcaaacc tagaagaaag 1380 aacccccagg agggcctgta taacgagctc cagaaggaca agatggccga ggcctacagc 1440 gagatcggca tgaagggcga aagaagaaga ggcaagggcc acgacggcct ctaccagggc 1500 ttaagcacag ctacaaagga cacctacgac gccctgcaca tgcaggccct gccccctaga 1560 tgattaatta aatcgat 1577 <210> 272 <211> 1577 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 272 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caagagagcg gacctggctt agtgaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcaccgtt tctggcggaa gcatcagctc tcccgaccat 180 tactggggat ggatcaggca gccccctggc aagggtttgg aatggatcgg cagcatctac 240 gccagcggca gcacattcta caacccctcg ctcaaaagca gggttactat ttctgtggac 300 acaagcaaaa atcagttcag cctgaagctg agctctgtga ctgccgccga cacagctgtg 360 tactactgtg ccagagagac agactactcc agcgggatgg gctacggcat ggatgtgtgg 420 ggacaaggaa ccaccgttac tgtgagcagc ggctccacaa gcggctcagg caagcctggc 480 tcaggagaag gaagcaccaa gggggacatt caaatgaccc aaagcccctc cagcctgtcc 540 gccagcgttg gcgatagggt taccattacc tgcagggcca gccaaagcat caactcctac 600 ctaaattggt atcaacagaa gccaggcaag gcccccaaac tactcattta cgccgccagc 660 agcttacaga gcggggttcc ctctagattc tccggcagcg gttctggaac agatttcact 720 ctcacaatat cttcgctgca gcccgaggat ttcgctacct actattgcca gcaatccctg 780 gccgacccct tcacattcgg cggaggcaca aaggttgaga tcaaggcagc tgctttcgtg 840 cctgtgttcc tgcctgctaa gcccaccacc actcctgctc caagacctcc tacccccgct 900 cctacaatcg ccagccaacc tctgagcctg agaccggagg catgcagacc tgcggcaggg 960 ggagcagttc acacaagagg cttggacttc gcttgcgaca tctacatctg ggcccctctg 1020 gccggcacat gcggagttct tcttcttagc ctggtgatca ccctgtactg caaccacaga 1080 aacagattca gcgttgtgaa gagaggccgg aagaagctgc tgtacatctt caagcagccc 1140 ttcatgagac ctgtgcagac cacacaggag gaagacggct gcagctgtag attccccgag 1200 gaagaggagg gcggctgtga gctgagagtt aagttcagca ggagcgccga cgcccctgcc 1260 taccagcaag gacagaatca actgtacaac gagctgaacc tgggcagacg ggaggaatac 1320 gatgtgctgg acaagaggag aggcagagac cccgagatgg gcggcaaacc tagaagaaag 1380 aacccccagg agggcctgta taacgagctc cagaaggaca agatggccga ggcctacagc 1440 gagatcggca tgaagggcga aagaagaaga ggcaagggcc acgacggcct ctaccagggc 1500 ttaagcacag ctacaaagga cacctacgac gccctgcaca tgcaggccct gccccctaga 1560 tgattaatta aatcgat 1577 <210> 273 <211> 1574 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 273 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca gatcacatta aaagagagcg gacctacact ggtgaagccc 120 acccaaacgc ttaccctcac ctgcaccttt agcgggttca gcctggacac agagggcgtt 180 ggcgttggat ggatcaggca gcctcctggc aaagccctcg aatggcttgc cctcatctac 240 ttcaacgacc agaagagata cagcccctcc ttaaaatctc ggctcacaat caccaaagac 300 acaagcaaaa atcaggttgt gctcaccatg accaacatgg accctgtgga caccgctgtg 360 tactactgtg ccagagacac cggctacagc agatggtact acgggatgga cgtttggggc 420 caaggcacca ctgtgaccgt ttccagcggc tctacaagcg gcagcgggaa acctggttct 480 ggagagggca gcacaaaggg cgacatccag atgacgcaat cccccagctc tgtgagcgcc 540 tctgtgggag acagagttac aatcacatgc cgggcctccc agggcatcag ctcttggctg 600 gcatggtatc aacagaagcc tggcaaggct cccaagctgc tcatctatgc cgcctcctcc 660 ttacaatctg gagttccctc caggttcagc gggagcggct caggaacaga cttcaccctt 720 accatctcta gcctgcaacc cgaggacttc gctacttatt actgtcagca ggcctacgcc 780 taccccatca cattcggcgg aggaacaaag gttgagatca aggcagctgc tttcgtgcct 840 gtgttcctgc ctgctaagcc caccaccact cctgctccaa gacctcctac ccccgctcct 900 acaatcgcca gccaacctct gagcctgaga ccggaggcat gcagacctgc ggcaggggga 960 gcagttcaca caagaggctt ggacttcgct tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc 1020 ggcacatgcg gagttcttct tcttagcctg gtgatcaccc tgtactgcaa ccacagaaac 1080 agattcagcg ttgtgaagag aggccggaag aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc 1140 atgagacctg tgcagaccac acaggaggaa gacggctgca gctgtagatt ccccgaggaa 1200 gaggagggcg gctgtgagct gagagttaag ttcagcagga gcgccgacgc ccctgcctac 1260 cagcaaggac agaatcaact gtacaacgag ctgaacctgg gcagacggga ggaatacgat 1320 gtgctggaca agaggagagg cagagacccc gagatgggcg gcaaacctag aagaaagaac 1380 ccccaggagg gcctgtataa cgagctccag aaggacaaga tggccgaggc ctacagcgag 1440 atcggcatga agggcgaaag aagaagaggc aagggccacg acggcctcta ccagggctta 1500 agcacagcta caaaggacac ctacgacgcc ctgcacatgc aggccctgcc ccctagatga 1560 ttaattaaat cgat 1574 <210> 274 <211> 1592 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 274 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttccagaa atactactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc cggcaaaggc ttagaatgga tcggagagat agacaccagc 240 ggcttcacca actacaaccc cagcctgaaa tctagggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttggcagata cagctacggc tactacatca ccgccttcga catttggggc 420 caaggcacca ctgtgaccgt ttccagcgga agcactagcg gcagcgggaa acctggttct 480 ggagagggct caaccaaggg cgacatcgtg atgacacaga gccccgactc tctggctgtg 540 tccctgggag agagagccac catcaactgc aagagcagcc agagcgttct gtacagcagc 600 aacaacaaga actacctggc atggtatcaa cagaagcctg gccagccccc taagctgctc 660 atctactggg cttccaccag agaatcaggc gttccagaca ggttctccgg ctcgggttca 720 ggcacagact tcacccttac catctcttcc ctgcaggccg aagatgtggc cgtttactac 780 tgtcagcagc actacagctt ccctttcaca ttcggcggag gcaccaaggt tgagatcaag 840 gcagctgctt tcgtgcctgt gttcctgcct gctaagccca ccaccactcc tgctccaaga 900 cctcctaccc ccgctcctac aatcgccagc caacctctga gcctgagacc ggaggcatgc 960 agacctgcgg cagggggagc agttcacaca agaggcttgg acttcgcttg cgacatctac 1020 atctgggccc ctctggccgg cacatgcgga gttcttcttc ttagcctggt gatcaccctg 1080 tactgcaacc acagaaacag attcagcgtt gtgaagagag gccggaagaa gctgctgtac 1140 atcttcaagc agcccttcat gagacctgtg cagaccacac aggaggaaga cggctgcagc 1200 tgtagattcc ccgaggaaga ggagggcggc tgtgagctga gagttaagtt cagcaggagc 1260 gccgacgccc ctgcctacca gcaaggacag aatcaactgt acaacgagct gaacctgggc 1320 agacgggagg aatacgatgt gctggacaag aggagaggca gagaccccga gatgggcggc 1380 aaacctagaa gaaagaaccc ccaggagggc ctgtataacg agctccagaa ggacaagatg 1440 gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag ggcgaaagaa gaagaggcaa gggccacgac 1500 ggcctctacc agggcttaag cacagctaca aaggacacct acgacgccct gcacatgcag 1560 gccctgcccc ctagatgatt aattaaatcg at 1592 <210> 275 <211> 1604 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 275 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcgagaa atactactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc cggcaaaggc ttagaatgga tcggcgagat ttatcacagc 240 gggctcacca actacaaccc cagcctgaaa tctcgagtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttagatacga cagcagcgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttact gtctcctctg gatctaccag cggcagcggc 480 aagcctggat ctggcgaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggctg tgtctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcttggtatc aacagaagcc tggccagccc 660 cctaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tcggtttagc 720 ggctccggct caggaaccga tttcaccctc actatctcca gcctccaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca aggcagctgc tttcgtgcct gtgttcctgc ctgctaagcc caccaccact 900 cctgctccaa gacctcctac ccccgctcct acaatcgcca gccaacctct gagcctgaga 960 ccggaggcat gcagacctgc ggcaggggga gcagttcaca caagaggctt ggacttcgct 1020 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacatgcg gagttcttct tcttagcctg 1080 gtgatcaccc tgtactgcaa ccacagaaac agattcagcg ttgtgaagag aggccggaag 1140 aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc atgagacctg tgcagaccac acaggaggaa 1200 gacggctgca gctgtagatt ccccgaggaa gaggagggcg gctgtgagct gagagttaag 1260 ttcagcagga gcgccgacgc ccctgcctac cagcaaggac agaatcaact gtacaacgag 1320 ctgaacctgg gcagacggga ggaatacgat gtgctggaca agaggagagg cagagacccc 1380 gagatgggcg gcaaacctag aagaaagaac ccccaggagg gcctgtataa cgagctccag 1440 aaggacaaga tggccgaggc ctacagcgag atcggcatga agggcgaaag aagaagaggc 1500 aagggccacg acggcctcta ccagggctta agcacagcta caaaggacac ctacgacgcc 1560 ctgcacatgc aggccctgcc ccctagatga ttaattaaat cgat 1604 <210> 276 <211> 1604 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 276 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagccg ctatgtgtgg 180 agctggatcc ggcagcctcc tggcaaaggc cttgaatgga tcggagagat agacagcagc 240 ggcaagacca actacaaccc cagcctgaaa tcacgcgtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttagatacga cagctccgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttaca gttagctctg gaagcaccag cggctccggc 480 aagcctggat ctggtgaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggctg tgtctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcatggtatc aacagaagcc tggccagcct 660 cccaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tcgctttagc 720 ggcagcggtt ctggcaccga tttcactctt acaatcagca gcttacaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca aggcagctgc tttcgtgcct gtgttcctgc ctgctaagcc caccaccact 900 cctgctccaa gacctcctac ccccgctcct acaatcgcca gccaacctct gagcctgaga 960 ccggaggcat gcagacctgc ggcaggggga gcagttcaca caagaggctt ggacttcgct 1020 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacatgcg gagttcttct tcttagcctg 1080 gtgatcaccc tgtactgcaa ccacagaaac agattcagcg ttgtgaagag aggccggaag 1140 aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc atgagacctg tgcagaccac acaggaggaa 1200 gacggctgca gctgtagatt ccccgaggaa gaggagggcg gctgtgagct gagagttaag 1260 ttcagcagga gcgccgacgc ccctgcctac cagcaaggac agaatcaact gtacaacgag 1320 ctgaacctgg gcagacggga ggaatacgat gtgctggaca agaggagagg cagagacccc 1380 gagatgggcg gcaaacctag aagaaagaac ccccaggagg gcctgtataa cgagctccag 1440 aaggacaaga tggccgaggc ctacagcgag atcggcatga agggcgaaag aagaagaggc 1500 aagggccacg acggcctcta ccagggctta agcacagcta caaaggacac ctacgacgcc 1560 ctgcacatgc aggccctgcc ccctagatga ttaattaaat cgat 1604 <210> 277 <211> 1604 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 277 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg ctacgcttgg 180 agctggatta gacagcctcc tggcaaagga ctagaatgga tcggagagat cgaccacaga 240 ggcttcacca actacaaccc cagcctgaaa tccagagtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccaggg ttagatacga cagcagcgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttacg gttagctctg gatctaccag cggcagcggc 480 aagcctggct caggagaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggccg tttctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcatggtatc aacagaagcc aggccagcct 660 cccaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tagattttcg 720 ggatcaggct ccggcaccga tttcactctt acgatcagca gcttacaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca aggcagctgc tttcgtgcct gtgttcctgc ctgctaagcc caccaccact 900 cctgctccaa gacctcctac ccccgctcct acaatcgcca gccaacctct gagcctgaga 960 ccggaggcat gcagacctgc ggcaggggga gcagttcaca caagaggctt ggacttcgct 1020 tgcgacatct acatctgggc ccctctggcc ggcacatgcg gagttcttct tcttagcctg 1080 gtgatcaccc tgtactgcaa ccacagaaac agattcagcg ttgtgaagag aggccggaag 1140 aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc atgagacctg tgcagaccac acaggaggaa 1200 gacggctgca gctgtagatt ccccgaggaa gaggagggcg gctgtgagct gagagttaag 1260 ttcagcagga gcgccgacgc ccctgcctac cagcaaggac agaatcaact gtacaacgag 1320 ctgaacctgg gcagacggga ggaatacgat gtgctggaca agaggagagg cagagacccc 1380 gagatgggcg gcaaacctag aagaaagaac ccccaggagg gcctgtataa cgagctccag 1440 aaggacaaga tggccgaggc ctacagcgag atcggcatga agggcgaaag aagaagaggc 1500 aagggccacg acggcctcta ccagggctta agcacagcta caaaggacac ctacgacgcc 1560 ctgcacatgc aggccctgcc ccctagatga ttaattaaat cgat 1604 <210> 278 <211> 1565 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 278 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg ctattactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc tggaaaagga ttagaatgga tcggcgagat agaccacagc 240 gggagcacaa actacaaccc cagcctgaaa tcgcgggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag gcggaggctc ctggtacagc aactggttcg atccttgggg ccaaggcacc 420 atggtgaccg tttccagcgg ctctacaagc ggcagcggga aacctggttc tggagagggc 480 agcacaaagg gcgacatcca gatgacacag agccccagca cccttagcgc ctctgtggga 540 gatagggtta ccattacctg cagggcttcc cagagcatca gcagctggct ggcatggtat 600 caacagaagc ctggcaaggc tcccaagctg ctcatctatg acgcctccag cctggaaagc 660 ggggttccct ccagatttag cggctcaggc tccggaacag agttcaccct taccatctct 720 agcctgcaac ccgacgactt cgctacttat tactgtcaac aagacagaag cttgcccccc 780 acattcggcg gagggaccaa ggttgagatc aaggcagctg ctttcgtgcc tgtgttcctg 840 cctgctaagc ccaccaccac tcctgctcca agacctccta cccccgctcc tacaatcgcc 900 agccaacctc tgagcctgag accggaggca tgcagacctg cggcaggggg agcagttcac 960 acaagaggct tggacttcgc ttgcgacatc tacatctggg cccctctggc cggcacatgc 1020 ggagttcttc ttcttagcct ggtgatcacc ctgtactgca accacagaaa cagattcagc 1080 gttgtgaaga gaggccggaa gaagctgctg tacatcttca agcagccctt catgagacct 1140 gtgcagacca cacaggagga agacggctgc agctgtagat tccccgagga agaggagggc 1200 ggctgtgagc tgagagttaa gttcagcagg agcgccgacg cccctgccta ccagcaagga 1260 cagaatcaac tgtacaacga gctgaacctg ggcagacggg aggaatacga tgtgctggac 1320 aagaggagag gcagagaccc cgagatgggc ggcaaaccta gaagaaagaa cccccaggag 1380 ggcctgtata acgagctcca gaaggacaag atggccgagg cctacagcga gatcggcatg 1440 aagggcgaaa gaagaagagg caagggccac gacggcctct accagggctt aagcacagct 1500 acaaaggaca cctacgacgc cctgcacatg caggccctgc cccctagatg attaattaaa 1560 tcgat 1565 <210> 279 <211> 1580 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 279 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagctt gtgcagagcg gagctgaagt taagaagcct 120 ggcgcctctg tgaaggttag ctgcaaggcc agcggctaca cattcaagga atatggcatc 180 tcctgggtta ggcaggctcc cggccaaggc ttagaatgga tgggctggat ctccgcctac 240 tccggccaca cctactacgc ccagaagctt cagggcaggg ttaccatgac caccgacacc 300 agcacctcta ccgcctatat ggagctgagg agcctgagat cggacgacac agctgtgtat 360 tactgcgcca gaggccccca ctacgacgac tggtctggat ttatcatctg gttcgacccc 420 tgggggcagg gcaccctggt cacagtttct tctggctcca ccagcggaag cggcaagcca 480 ggctcaggcg aaggatctac aaaaggcgac atccaaatga cacagagccc cagcagcttg 540 agcgcctccg ttggcgacag agttacaatc acctgcaggg cctctcagag catcagcagc 600 tatttgaatt ggtatcaaca gaagccagga aaggccccta agctgctcat ctacgctgcc 660 agctcgctcc aatctggcgt tcctagcaga tttagcggct ccggcagcgg cacagacttt 720 actcttacca ttagctccct gcagcccgag gacttcgcta cctactattg ccagcaaagc 780 tacagattcc ctcccacctt tggccagggc acaaaggttg agatcaaggc agctgctttc 840 gtgcctgtgt tcctgcctgc taagcccacc accactcctg ctccaagacc tcctaccccc 900 gctcctacaa tcgccagcca acctctgagc ctgagaccgg aggcatgcag acctgcggca 960 gggggagcag ttcacacaag aggcttggac ttcgcttgcg acatctacat ctgggcccct 1020 ctggccggca catgcggagt tcttcttctt agcctggtga tcaccctgta ctgcaaccac 1080 agaaacagat tcagcgttgt gaagagaggc cggaagaagc tgctgtacat cttcaagcag 1140 cccttcatga gacctgtgca gaccacacag gaggaagacg gctgcagctg tagattcccc 1200 gaggaagagg agggcggctg tgagctgaga gttaagttca gcaggagcgc cgacgcccct 1260 gcctaccagc aaggacagaa tcaactgtac aacgagctga acctgggcag acgggaggaa 1320 tacgatgtgc tggacaagag gagaggcaga gaccccgaga tgggcggcaa acctagaaga 1380 aagaaccccc aggagggcct gtataacgag ctccagaagg acaagatggc cgaggcctac 1440 agcgagatcg gcatgaaggg cgaaagaaga agaggcaagg gccacgacgg cctctaccag 1500 ggcttaagca cagctacaaa ggacacctac gacgccctgc acatgcaggc cctgccccct 1560 agatgattaa ttaaatcgat 1580 <210> 280 <211> 1586 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 280 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg catccactgg 180 aactggatcc ggcagcctcc tggcaaaggc cttgaatgga tcggcgatat cgacaccagc 240 ggctccacca actacaaccc cagcctgaaa tcgagggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagac tgggccagga aagcgctacc taccttggca tggatgtgtg ggggcagggc 420 accaccgtta ctgttagctc tggctcaaca agcggcagcg gcaagcctgg ctcaggagaa 480 ggaagcacaa agggcgacat tgtaatgact cagagccccg acagcctggc cgttagctta 540 ggcgaaaggg ctacaatcaa ttgcaagagc agccagagcg ttctgtacag cagcaacaac 600 aagaactacc tcgcatggta tcaacagaag ccaggccagc ctcccaagct gctcatctac 660 tgggcttcca ccagagagag cggggttccc gatagattct ccggctccgg ttctggaaca 720 gatttcacgc tcacaatcag cagcttacag gccgaggatg tggctgtcta ctattgtcag 780 cagttgtaca cctacccctt cacattcggc ggaggcacca aggttgagat caaggcagct 840 gctttcgtgc ctgtgttcct gcctgctaag cccaccacca ctcctgctcc aagacctcct 900 acccccgctc ctacaatcgc cagccaacct ctgagcctga gaccggaggc atgcagacct 960 gcggcagggg gagcagttca cacaagaggc ttggacttcg cttgcgacat ctacatctgg 1020 gcccctctgg ccggcacatg cggagttctt cttcttagcc tggtgatcac cctgtactgc 1080 aaccacagaa acagattcag cgttgtgaag agaggccgga agaagctgct gtacatcttc 1140 aagcagccct tcatgagacc tgtgcagacc acacaggagg aagacggctg cagctgtaga 1200 ttccccgagg aagaggaggg cggctgtgag ctgagagtta agttcagcag gagcgccgac 1260 gcccctgcct accagcaagg acagaatcaa ctgtacaacg agctgaacct gggcagacgg 1320 gaggaatacg atgtgctgga caagaggaga ggcagagacc ccgagatggg cggcaaacct 1380 agaagaaaga acccccagga gggcctgtat aacgagctcc agaaggacaa gatggccgag 1440 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgaa agaagaagag gcaagggcca cgacggcctc 1500 taccagggct taagcacagc tacaaaggac acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1560 ccccctagat gattaattaa atcgat 1586 <210> 281 <211> 1499 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 281 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca gcttcagctc caagagagcg gacctggctt agtgaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcaccgtt tctggcggaa gcatcagcag ctccagctat 180 tactggggat ggatcaggca gccccctggc aagggtttag aatggatcgg ctcgatatat 240 tactccggca gcacctacta taaccccagc ttgaagagcc gggttaccat ttctgtggac 300 acatcaaaga accagttcag cctgaagctg agctctgtga ctgccgccga cacagctgtg 360 tactactgtg ccagagagac agactactcc agcggcatgg gctacggcat ggatgtgtgg 420 ggacaaggaa ccaccgttac tgtgagcagc ggttccacca gcggctcagg caagcctggc 480 tcaggagaag gaagcaccaa gggggatata cagatgacac agagcccctc cagcctgtcc 540 gccagcgttg gcgatcgtgt aacgatcacc tgccgggcct ctcagagcat caactcctac 600 ctcaattggt atcaacagaa gccaggcaag gcccccaaat tactcatcta cgccgccagc 660 agcttacaga gcggggttcc ctctagattc tccggctccg gttctggaac agatttcacc 720 ctcactatct ccagcttgca gcccgaggat ttcgccactt attactgtca gcagagcctg 780 gccgacccct tcacattcgg cggaggcaca aaggttgaga tcaaggctgc tgcattggat 840 aatgaaaaat cgaacggcac aatcattcat gtgaagggca aacacctgtg tcccagcccc 900 ttgttcccag gacctagcaa gcctttttgg gttctcgtgg tggtgggcgg cgttctggct 960 tgctactctc tacttgtaac tgtcgcattt attatattct gggttagatt cagcgttgtg 1020 aagagaggcc ggaagaagct gctgtacatc ttcaagcagc ccttcatgag acctgtgcag 1080 accacacagg aggaagacgg ctgcagctgt agattccccg aggaagagga gggcggctgt 1140 gagctgagag ttaagttcag caggagcgcc gacgcccctg cctaccagca aggacagaat 1200 caactgtaca acgagctgaa cctgggcaga cgggaggaat acgatgtgct ggacaagagg 1260 agaggcagag accccgagat gggcggcaaa cctagaagaa agaaccccca ggagggcctg 1320 tataacgagc tccagaagga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg catgaagggc 1380 gaaagaagaa gaggcaaggg ccacgacggc ctctaccagg gcttaagcac agctacaaag 1440 gacacctacg acgccctgca catgcaggcc ctgcccccta gatgattaat taaatcgat 1499 <210> 282 <211> 1499 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 282 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caagagagcg gacctggctt agtgaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcaccgtt tctggcggaa gcatcagctc tcccgaccat 180 tactggggat ggatcaggca gccccctggc aagggtttgg aatggatcgg cagcatctac 240 gccagcggca gcacattcta caacccctcg ctcaaaagca gggttactat ttctgtggac 300 acaagcaaaa atcagttcag cctgaagctg agctctgtga ctgccgccga cacagctgtg 360 tactactgtg ccagagagac agactactcc agcgggatgg gctacggcat ggatgtgtgg 420 ggacaaggaa ccaccgttac tgtgagcagc ggctccacaa gcggctcagg caagcctggc 480 tcaggagaag gaagcaccaa gggggacatt caaatgaccc aaagcccctc cagcctgtcc 540 gccagcgttg gcgatagggt taccattacc tgcagggcca gccaaagcat caactcctac 600 ctaaattggt atcaacagaa gccaggcaag gcccccaaac tactcattta cgccgccagc 660 agcttacaga gcggggttcc ctctagattc tccggcagcg gttctggaac agatttcact 720 ctcacaatat cttcgctgca gcccgaggat ttcgctacct actattgcca gcaatccctg 780 gccgacccct tcacattcgg cggaggcaca aaggttgaga tcaaggctgc tgcattggat 840 aatgaaaaat cgaacggcac aatcattcat gtgaagggca aacacctgtg tcccagcccc 900 ttgttcccag gacctagcaa gcctttttgg gttctcgtgg tggtgggcgg cgttctggct 960 tgctactctc tacttgtaac tgtcgcattt attatattct gggttagatt cagcgttgtg 1020 aagagaggcc ggaagaagct gctgtacatc ttcaagcagc ccttcatgag acctgtgcag 1080 accacacagg aggaagacgg ctgcagctgt agattccccg aggaagagga gggcggctgt 1140 gagctgagag ttaagttcag caggagcgcc gacgcccctg cctaccagca aggacagaat 1200 caactgtaca acgagctgaa cctgggcaga cgggaggaat acgatgtgct ggacaagagg 1260 agaggcagag accccgagat gggcggcaaa cctagaagaa agaaccccca ggagggcctg 1320 tataacgagc tccagaagga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg catgaagggc 1380 gaaagaagaa gaggcaaggg ccacgacggc ctctaccagg gcttaagcac agctacaaag 1440 gacacctacg acgccctgca catgcaggcc ctgcccccta gatgattaat taaatcgat 1499 <210> 283 <211> 1496 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 283 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca gatcacatta aaagagagcg gacctacact ggtgaagccc 120 acccaaacgc ttaccctcac ctgcaccttt agcgggttca gcctggacac agagggcgtt 180 ggcgttggat ggatcaggca gcctcctggc aaagccctcg aatggcttgc cctcatctac 240 ttcaacgacc agaagagata cagcccctcc ttaaaatctc ggctcacaat caccaaagac 300 acaagcaaaa atcaggttgt gctcaccatg accaacatgg accctgtgga caccgctgtg 360 tactactgtg ccagagacac cggctacagc agatggtact acgggatgga cgtttggggc 420 caaggcacca ctgtgaccgt ttccagcggc tctacaagcg gcagcgggaa acctggttct 480 ggagagggca gcacaaaggg cgacatccag atgacgcaat cccccagctc tgtgagcgcc 540 tctgtgggag acagagttac aatcacatgc cgggcctccc agggcatcag ctcttggctg 600 gcatggtatc aacagaagcc tggcaaggct cccaagctgc tcatctatgc cgcctcctcc 660 ttacaatctg gagttccctc caggttcagc gggagcggct caggaacaga cttcaccctt 720 accatctcta gcctgcaacc cgaggacttc gctacttatt actgtcagca ggcctacgcc 780 taccccatca cattcggcgg aggaacaaag gttgagatca aggctgctgc attggataat 840 gaaaaatcga acggcacaat cattcatgtg aagggcaaac acctgtgtcc cagccccttg 900 ttcccaggac ctagcaagcc tttttgggtt ctcgtggtgg tgggcggcgt tctggcttgc 960 tactctctac ttgtaactgt cgcatttatt atattctggg ttagattcag cgttgtgaag 1020 agaggccgga agaagctgct gtacatcttc aagcagccct tcatgagacc tgtgcagacc 1080 acacaggagg aagacggctg cagctgtaga ttccccgagg aagaggaggg cggctgtgag 1140 ctgagagtta agttcagcag gagcgccgac gcccctgcct accagcaagg acagaatcaa 1200 ctgtacaacg agctgaacct gggcagacgg gaggaatacg atgtgctgga caagaggaga 1260 ggcagagacc ccgagatggg cggcaaacct agaagaaaga acccccagga gggcctgtat 1320 aacgagctcc agaaggacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggcat gaagggcgaa 1380 agaagaagag gcaagggcca cgacggcctc taccagggct taagcacagc tacaaaggac 1440 acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg ccccctagat gattaattaa atcgat 1496 <210> 284 <211> 1514 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 284 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttccagaa atactactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc cggcaaaggc ttagaatgga tcggagagat agacaccagc 240 ggcttcacca actacaaccc cagcctgaaa tctagggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttggcagata cagctacggc tactacatca ccgccttcga catttggggc 420 caaggcacca ctgtgaccgt ttccagcgga agcactagcg gcagcgggaa acctggttct 480 ggagagggct caaccaaggg cgacatcgtg atgacacaga gccccgactc tctggctgtg 540 tccctgggag agagagccac catcaactgc aagagcagcc agagcgttct gtacagcagc 600 aacaacaaga actacctggc atggtatcaa cagaagcctg gccagccccc taagctgctc 660 atctactggg cttccaccag agaatcaggc gttccagaca ggttctccgg ctcgggttca 720 ggcacagact tcacccttac catctcttcc ctgcaggccg aagatgtggc cgtttactac 780 tgtcagcagc actacagctt ccctttcaca ttcggcggag gcaccaaggt tgagatcaag 840 gctgctgcat tggataatga aaaatcgaac ggcacaatca ttcatgtgaa gggcaaacac 900 ctgtgtccca gccccttgtt cccaggacct agcaagcctt tttgggttct cgtggtggtg 960 ggcggcgttc tggcttgcta ctctctactt gtaactgtcg catttattat attctgggtt 1020 agattcagcg ttgtgaagag aggccggaag aagctgctgt acatcttcaa gcagcccttc 1080 atgagacctg tgcagaccac acaggaggaa gacggctgca gctgtagatt ccccgaggaa 1140 gaggagggcg gctgtgagct gagagttaag ttcagcagga gcgccgacgc ccctgcctac 1200 cagcaaggac agaatcaact gtacaacgag ctgaacctgg gcagacggga ggaatacgat 1260 gtgctggaca agaggagagg cagagacccc gagatgggcg gcaaacctag aagaaagaac 1320 ccccaggagg gcctgtataa cgagctccag aaggacaaga tggccgaggc ctacagcgag 1380 atcggcatga agggcgaaag aagaagaggc aagggccacg acggcctcta ccagggctta 1440 agcacagcta caaaggacac ctacgacgcc ctgcacatgc aggccctgcc ccctagatga 1500 ttaattaaat cgat 1514 <210> 285 <211> 1526 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 285 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcgagaa atactactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc cggcaaaggc ttagaatgga tcggcgagat ttatcacagc 240 gggctcacca actacaaccc cagcctgaaa tctcgagtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttagatacga cagcagcgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttact gtctcctctg gatctaccag cggcagcggc 480 aagcctggat ctggcgaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggctg tgtctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcttggtatc aacagaagcc tggccagccc 660 cctaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tcggtttagc 720 ggctccggct caggaaccga tttcaccctc actatctcca gcctccaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca aggctgctgc attggataat gaaaaatcga acggcacaat cattcatgtg 900 aagggcaaac acctgtgtcc cagccccttg ttcccaggac ctagcaagcc tttttgggtt 960 ctcgtggtgg tgggcggcgt tctggcttgc tactctctac ttgtaactgt cgcatttatt 1020 atattctggg ttagattcag cgttgtgaag agaggccgga agaagctgct gtacatcttc 1080 aagcagccct tcatgagacc tgtgcagacc acacaggagg aagacggctg cagctgtaga 1140 ttccccgagg aagaggaggg cggctgtgag ctgagagtta agttcagcag gagcgccgac 1200 gcccctgcct accagcaagg acagaatcaa ctgtacaacg agctgaacct gggcagacgg 1260 gaggaatacg atgtgctgga caagaggaga ggcagagacc ccgagatggg cggcaaacct 1320 agaagaaaga acccccagga gggcctgtat aacgagctcc agaaggacaa gatggccgag 1380 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgaa agaagaagag gcaagggcca cgacggcctc 1440 taccagggct taagcacagc tacaaaggac acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1500 ccccctagat gattaattaa atcgat 1526 <210> 286 <211> 1526 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 286 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagccg ctatgtgtgg 180 agctggatcc ggcagcctcc tggcaaaggc cttgaatgga tcggagagat agacagcagc 240 ggcaagacca actacaaccc cagcctgaaa tcacgcgtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag ttagatacga cagctccgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttaca gttagctctg gaagcaccag cggctccggc 480 aagcctggat ctggtgaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggctg tgtctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcatggtatc aacagaagcc tggccagcct 660 cccaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tcgctttagc 720 ggcagcggtt ctggcaccga tttcactctt acaatcagca gcttacaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca aggctgctgc attggataat gaaaaatcga acggcacaat cattcatgtg 900 aagggcaaac acctgtgtcc cagccccttg ttcccaggac ctagcaagcc tttttgggtt 960 ctcgtggtgg tgggcggcgt tctggcttgc tactctctac ttgtaactgt cgcatttatt 1020 atattctggg ttagattcag cgttgtgaag agaggccgga agaagctgct gtacatcttc 1080 aagcagccct tcatgagacc tgtgcagacc acacaggagg aagacggctg cagctgtaga 1140 ttccccgagg aagaggaggg cggctgtgag ctgagagtta agttcagcag gagcgccgac 1200 gcccctgcct accagcaagg acagaatcaa ctgtacaacg agctgaacct gggcagacgg 1260 gaggaatacg atgtgctgga caagaggaga ggcagagacc ccgagatggg cggcaaacct 1320 agaagaaaga acccccagga gggcctgtat aacgagctcc agaaggacaa gatggccgag 1380 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgaa agaagaagag gcaagggcca cgacggcctc 1440 taccagggct taagcacagc tacaaaggac acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1500 ccccctagat gattaattaa atcgat 1526 <210> 287 <211> 1526 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 287 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagtta caacaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg ctacgcttgg 180 agctggatta gacagcctcc tggcaaagga ctagaatgga tcggagagat cgaccacaga 240 ggcttcacca actacaaccc cagcctgaaa tccagagtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccaggg ttagatacga cagcagcgac agctattact acagctatga ctacggcatg 420 gatgtgtggg ggcagggcac caccgttacg gttagctctg gatctaccag cggcagcggc 480 aagcctggct caggagaagg aagcacaaag ggcgacattg tgctcaccca gagccccgac 540 agcctggccg tttctttagg cgaaagggct accatcaact gcaagagcag ccagagcgtt 600 ctgtacagca gcaacaacaa gaactacctt gcatggtatc aacagaagcc aggccagcct 660 cccaagctgc tcatctactg ggcctctagc agagagagcg gggttcccga tagattttcg 720 ggatcaggct ccggcaccga tttcactctt acgatcagca gcttacaggc cgaggatgtg 780 gctgtctact attgtcagca gagctatagc ttcccctgga cattcggcgg aggcaccaag 840 gttgagatca aggctgctgc attggataat gaaaaatcga acggcacaat cattcatgtg 900 aagggcaaac acctgtgtcc cagccccttg ttcccaggac ctagcaagcc tttttgggtt 960 ctcgtggtgg tgggcggcgt tctggcttgc tactctctac ttgtaactgt cgcatttatt 1020 atattctggg ttagattcag cgttgtgaag agaggccgga agaagctgct gtacatcttc 1080 aagcagccct tcatgagacc tgtgcagacc acacaggagg aagacggctg cagctgtaga 1140 ttccccgagg aagaggaggg cggctgtgag ctgagagtta agttcagcag gagcgccgac 1200 gcccctgcct accagcaagg acagaatcaa ctgtacaacg agctgaacct gggcagacgg 1260 gaggaatacg atgtgctgga caagaggaga ggcagagacc ccgagatggg cggcaaacct 1320 agaagaaaga acccccagga gggcctgtat aacgagctcc agaaggacaa gatggccgag 1380 gcctacagcg agatcggcat gaagggcgaa agaagaagag gcaagggcca cgacggcctc 1440 taccagggct taagcacagc tacaaaggac acctacgacg ccctgcacat gcaggccctg 1500 ccccctagat gattaattaa atcgat 1526 <210> 288 <211> 1487 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 288 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg ctattactgg 180 agctggatcc ggcagcctcc tggaaaagga ttagaatgga tcggcgagat agaccacagc 240 gggagcacaa actacaaccc cagcctgaaa tcgcgggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagag gcggaggctc ctggtacagc aactggttcg atccttgggg ccaaggcacc 420 atggtgaccg tttccagcgg ctctacaagc ggcagcggga aacctggttc tggagagggc 480 agcacaaagg gcgacatcca gatgacacag agccccagca cccttagcgc ctctgtggga 540 gatagggtta ccattacctg cagggcttcc cagagcatca gcagctggct ggcatggtat 600 caacagaagc ctggcaaggc tcccaagctg ctcatctatg acgcctccag cctggaaagc 660 ggggttccct ccagatttag cggctcaggc tccggaacag agttcaccct taccatctct 720 agcctgcaac ccgacgactt cgctacttat tactgtcaac aagacagaag cttgcccccc 780 acattcggcg gagggaccaa ggttgagatc aaggctgctg cattggataa tgaaaaatcg 840 aacggcacaa tcattcatgt gaagggcaaa cacctgtgtc ccagcccctt gttcccagga 900 cctagcaagc ctttttgggt tctcgtggtg gtgggcggcg ttctggcttg ctactctcta 960 cttgtaactg tcgcatttat tatattctgg gttagattca gcgttgtgaa gagaggccgg 1020 aagaagctgc tgtacatctt caagcagccc ttcatgagac ctgtgcagac cacacaggag 1080 gaagacggct gcagctgtag attccccgag gaagaggagg gcggctgtga gctgagagtt 1140 aagttcagca ggagcgccga cgcccctgcc taccagcaag gacagaatca actgtacaac 1200 gagctgaacc tgggcagacg ggaggaatac gatgtgctgg acaagaggag aggcagagac 1260 cccgagatgg gcggcaaacc tagaagaaag aacccccagg agggcctgta taacgagctc 1320 cagaaggaca agatggccga ggcctacagc gagatcggca tgaagggcga aagaagaaga 1380 ggcaagggcc acgacggcct ctaccagggc ttaagcacag ctacaaagga cacctacgac 1440 gccctgcaca tgcaggccct gccccctaga tgattaatta aatcgat 1487 <210> 289 <211> 1502 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 289 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagctt gtgcagagcg gagctgaagt taagaagcct 120 ggcgcctctg tgaaggttag ctgcaaggcc agcggctaca cattcaagga atatggcatc 180 tcctgggtta ggcaggctcc cggccaaggc ttagaatgga tgggctggat ctccgcctac 240 tccggccaca cctactacgc ccagaagctt cagggcaggg ttaccatgac caccgacacc 300 agcacctcta ccgcctatat ggagctgagg agcctgagat cggacgacac agctgtgtat 360 tactgcgcca gaggccccca ctacgacgac tggtctggat ttatcatctg gttcgacccc 420 tgggggcagg gcaccctggt cacagtttct tctggctcca ccagcggaag cggcaagcca 480 ggctcaggcg aaggatctac aaaaggcgac atccaaatga cacagagccc cagcagcttg 540 agcgcctccg ttggcgacag agttacaatc acctgcaggg cctctcagag catcagcagc 600 tatttgaatt ggtatcaaca gaagccagga aaggccccta agctgctcat ctacgctgcc 660 agctcgctcc aatctggcgt tcctagcaga tttagcggct ccggcagcgg cacagacttt 720 actcttacca ttagctccct gcagcccgag gacttcgcta cctactattg ccagcaaagc 780 tacagattcc ctcccacctt tggccagggc acaaaggttg agatcaaggc tgctgcattg 840 gataatgaaa aatcgaacgg cacaatcatt catgtgaagg gcaaacacct gtgtcccagc 900 cccttgttcc caggacctag caagcctttt tgggttctcg tggtggtggg cggcgttctg 960 gcttgctact ctctacttgt aactgtcgca tttattatat tctgggttag attcagcgtt 1020 gtgaagagag gccggaagaa gctgctgtac atcttcaagc agcccttcat gagacctgtg 1080 cagaccacac aggaggaaga cggctgcagc tgtagattcc ccgaggaaga ggagggcggc 1140 tgtgagctga gagttaagtt cagcaggagc gccgacgccc ctgcctacca gcaaggacag 1200 aatcaactgt acaacgagct gaacctgggc agacgggagg aatacgatgt gctggacaag 1260 aggagaggca gagaccccga gatgggcggc aaacctagaa gaaagaaccc ccaggagggc 1320 ctgtataacg agctccagaa ggacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggcatgaag 1380 ggcgaaagaa gaagaggcaa gggccacgac ggcctctacc agggcttaag cacagctaca 1440 aaggacacct acgacgccct gcacatgcag gccctgcccc ctagatgatt aattaaatcg 1500 at 1502 <210> 290 <211> 1508 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 290 ggtacccccg ggcccatggc tcttcctgtg acagctcttc tgctgcccct ggccctgctt 60 ctgcatgctg ctagacctca ggttcagttg cagcaatggg gagctggcct gttaaagccc 120 agcgaaaccc tgtccctcac ctgcgctgtg tatggcggaa gcttcagcgg catccactgg 180 aactggatcc ggcagcctcc tggcaaaggc cttgaatgga tcggcgatat cgacaccagc 240 ggctccacca actacaaccc cagcctgaaa tcgagggtta caatctctgt ggacacaagc 300 aagaatcagt tctccctgaa gctgagcagc gttactgccg ccgacacagc tgtgtactat 360 tgcgccagac tgggccagga aagcgctacc taccttggca tggatgtgtg ggggcagggc 420 accaccgtta ctgttagctc tggctcaaca agcggcagcg gcaagcctgg ctcaggagaa 480 ggaagcacaa agggcgacat tgtaatgact cagagccccg acagcctggc cgttagctta 540 ggcgaaaggg ctacaatcaa ttgcaagagc agccagagcg ttctgtacag cagcaacaac 600 aagaactacc tcgcatggta tcaacagaag ccaggccagc ctcccaagct gctcatctac 660 tgggcttcca ccagagagag cggggttccc gatagattct ccggctccgg ttctggaaca 720 gatttcacgc tcacaatcag cagcttacag gccgaggatg tggctgtcta ctattgtcag 780 cagttgtaca cctacccctt cacattcggc ggaggcacca aggttgagat caaggctgct 840 gcattggata atgaaaaatc gaacggcaca atcattcatg tgaagggcaa acacctgtgt 900 cccagcccct tgttcccagg acctagcaag cctttttggg ttctcgtggt ggtgggcggc 960 gttctggctt gctactctct acttgtaact gtcgcattta ttatattctg ggttagattc 1020 agcgttgtga agagaggccg gaagaagctg ctgtacatct tcaagcagcc cttcatgaga 1080 cctgtgcaga ccacacagga ggaagacggc tgcagctgta gattccccga ggaagaggag 1140 ggcggctgtg agctgagagt taagttcagc aggagcgccg acgcccctgc ctaccagcaa 1200 ggacagaatc aactgtacaa cgagctgaac ctgggcagac gggaggaata cgatgtgctg 1260 gacaagagga gaggcagaga ccccgagatg ggcggcaaac ctagaagaaa gaacccccag 1320 gagggcctgt ataacgagct ccagaaggac aagatggccg aggcctacag cgagatcggc 1380 atgaagggcg aaagaagaag aggcaagggc cacgacggcc tctaccaggg cttaagcaca 1440 gctacaaagg acacctacga cgccctgcac atgcaggccc tgccccctag atgattaatt 1500 aaatcgat 1508 <210> 291 <211> 3057 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 291 atgctgctgc tggtgacatc tctgctgctt tgcgagctgc cccaccctgc cttcctgctt 60 atccccgaca ttcagatgac ccagaccacc agcagcctga gcgccagctt aggagataga 120 gttaccatca gctgcagagc cagccaggac atcagcaaat acctgaactg gtatcagcag 180 aagcccgacg gcactgtgaa actgcttatt taccacacct ccagactgca cagcggcgtt 240 cccagcagat tctctggcag cggatctgga accgactaca gcctcaccat ctccaacctg 300 gagcaggagg acatcgccac ctacttctgc cagcagggca acacactgcc ctacaccttc 360 ggaggaggaa ccaagctgga gatcaccggg ggaggaggct ctggaggcgg cggatcagga 420 ggagggggat ctgaggttaa gctgcaggag agcggccctg gcctggtggc tcctagccaa 480 tctttatctg tgacctgcac tgtgtccggc gttagcctgc ccgattatgg cgtttcctgg 540 atcagacagc cccccagaaa gggcctggaa tggctgggcg ttatctgggg cagcgagacc 600 acatactaca acagcgccct gaagagcaga cttacgatta tcaaggacaa cagcaagagc 660 caggttttcc tgaagatgaa cagcctgcag accgacgaca ccgccatcta ctactgcgct 720 aagcactact actacggcgg cagctacgcc atggactact ggggccaggg aacaagcgtt 780 accgttagca gcgctgctgc actggacaac gagaagagca acggcaccat catccacgtt 840 aagggcaagc acctgtgccc cagccctctg ttccctggac cttctaagcc tttctgggtt 900 ctggtggtgg tcggcggcgt tttagcctgt tacagccttc tggtgactgt ggccttcatc 960 atcttttggg ttagaagcaa gagaagcaga ctgctccaca gcgactacat gaacatgacc 1020 cccagacggc ctggccccac cagaaagcat taccagccct acgctcctcc cagagacttc 1080 gccgcctaca ggagcagagt taaattcagc agatccgccg atgcccccgc ttaccaacag 1140 ggacaaaacc agctgtacaa tgagctcaac ctggggagaa gagaagaata cgacgttctg 1200 gataagagaa ggggcagaga tcccgaaatg gggggcaagc ccagacgcaa gaaccctcag 1260 gaggggcttt acaacgaact gcagaaggat aagatggctg aggcttactc ggagattggg 1320 atgaaggggg agagaaggcg gggcaaggga cacgatggct tataccaggg gctgagcacc 1380 gccaccaagg acacatacga cgctcttcat atgcaggctc tgcccccaag aagggctaag 1440 agatctggct ctggcgaggg cagaggcagc ttgcttacat gtggcgatgt ggaggagaac 1500 cccgggccca tggctcttcc tgtgacagct cttctgctgc ccctggccct gcttctgcat 1560 gctgctagac ctcagcttca gctccaagag agcggacctg gcttagtgaa gcccagcgaa 1620 accctgtccc tcacctgcac cgtttctggc ggaagcatca gcagctccag ctattactgg 1680 ggatggatca ggcagccccc tggcaagggt ttagaatgga tcggctcgat atattactcc 1740 ggcagcacct actataaccc cagcttgaag agccgggtta ccatttctgt ggacacatca 1800 aagaaccagt tcagcctgaa gctgagctct gtgactgccg ccgacacagc tgtgtactac 1860 tgtgccagag agacagacta ctccagcggc atgggctacg gcatggatgt gtggggacaa 1920 ggaaccaccg ttactgtgag cagcggttcc accagcggct caggcaagcc tggctcagga 1980 gaaggaagca ccaaggggga tatacagatg acacagagcc cctccagcct gtccgccagc 2040 gttggcgatc gtgtaacgat cacctgccgg gcctctcaga gcatcaactc ctacctcaat 2100 tggtatcaac agaagccagg caaggccccc aaattactca tctacgccgc cagcagctta 2160 cagagcgggg ttccctctag attctccggc tccggttctg gaacagattt caccctcact 2220 atctccagct tgcagcccga ggatttcgcc acttattact gtcagcagag cctggccgac 2280 cccttcacat tcggcggagg cacaaaggtt gagatcaagg cagctgcttt cgtgcctgtg 2340 ttcctgcctg ctaagcccac caccactcct gctccaagac ctcctacccc cgctcctaca 2400 atcgccagcc aacctctgag cctgagaccg gaggcatgca gacctgcggc agggggagca 2460 gttcacacaa gaggcttgga cttcgcttgc gacatctaca tctgggcccc tctggccggc 2520 acatgcggag ttcttcttct tagcctggtg atcaccctgt actgcaacca cagaaacaga 2580 ttcagcgttg tgaagagagg ccggaagaag ctgctgtaca tcttcaagca gcccttcatg 2640 agacctgtgc agaccacaca ggaggaagac ggctgcagct gtagattccc cgaggaagag 2700 gagggcggct gtgagctgag agttaagttc agcaggagcg ccgacgcccc tgcctaccag 2760 caaggacaga atcaactgta caacgagctg aacctgggca gacgggagga atacgatgtg 2820 ctggacaaga ggagaggcag agaccccgag atgggcggca aacctagaag aaagaacccc 2880 caggagggcc tgtataacga gctccagaag gacaagatgg ccgaggccta cagcgagatc 2940 ggcatgaagg gcgaaagaag aagaggcaag ggccacgacg gcctctacca gggcttaagc 3000 acagctacaa aggacaccta cgacgccctg cacatgcagg ccctgccccc tagatga 3057 <210> 292 <211> 1018 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 292 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly 50 55 60 Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln 100 105 110 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 115 120 125 Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 145 150 155 160 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 165 170 175 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 180 185 190 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 195 200 205 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 210 215 220 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 225 230 235 240 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 245 250 255 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys 260 265 270 Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser 275 280 285 Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val 290 295 300 Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile 305 310 315 320 Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr 325 330 335 Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln 340 345 350 Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys 355 360 365 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 370 375 380 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 385 390 395 400 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 405 410 415 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 420 425 430 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 435 440 445 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 450 455 460 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg Arg Ala Lys 465 470 475 480 Arg Ser Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 485 490 495 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu 500 505 510 Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu His Ala Ala Arg Pro Gln Leu Gln Leu 515 520 525 Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu 530 535 540 Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp 545 550 555 560 Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ser 565 570 575 Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg 580 585 590 Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu 595 600 605 Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu 610 615 620 Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 625 630 635 640 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys 645 650 655 Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln 660 665 670 Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr 675 680 685 Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln 690 695 700 Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu 705 710 715 720 Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 725 730 735 Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr 740 745 750 Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr 755 760 765 Lys Val Glu Ile Lys Ala Ala Ala Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala 770 775 780 Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr 785 790 795 800 Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala 805 810 815 Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile 820 825 830 Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser 835 840 845 Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Phe Ser Val Val 850 855 860 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 865 870 875 880 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 885 890 895 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg 900 905 910 Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn 915 920 925 Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg 930 935 940 Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro 945 950 955 960 Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala 965 970 975 Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His 980 985 990 Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp 995 1000 1005 Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 1010 1015 <210> 293 <211> 2202 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 293 atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60 atcccagaca tccagatgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgccgggc aagtcagagc attaacagct atttaaattg gtatcagcag 180 aaaccaggga aagcccctaa gctcctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagtctg 300 caacctgaag attttgcaac ttactactgc cagcaaagcc tcgccgaccc tttcactttt 360 ggcggaggga ccaaggttga gatcaaaggg gggggtggaa gtgggaagcc tggcagcggc 420 gagggcggca gtcagctgca gctgcaggag tcgggcccag gactggtgaa gccttcggag 480 accctgtccc tcacctgcac tgtctctggt ggctccatca gcagtagtag ttactactgg 540 ggctggatcc gccagccccc agggaagggg ctggagtgga ttgggagtat ctattatagt 600 gggagcacct actacaaccc gtccctcaag agtcgagtca ccatatccgt agacacgtcc 660 aagaaccagt tctccctgaa gctgagttct gtgaccgccg cagacacggc ggtgtactac 720 tgcgccagag agactgacta cagcagcgga atgggatacg gaatggacgt atggggccag 780 ggaacaactg tcaccgtctc ctcaggcggt ggcggcagtg ggaagcctgg cagcgatatt 840 caaatgaccc agtccccgtc ctccctgagt gcctccgtcg gtgaccgtgt tacgattacc 900 tgccgtgcga gccaagacat ctctaaatac ctgaactggt atcagcaaaa accggatcag 960 gcaccgaaac tgctgatcaa acatacctca cgtctgcact cgggtgtgcc gagccgcttt 1020 agtggttccg gctcaggtac cgattacacc ctgacgatca gctctctgca gccggaagac 1080 tttgccacgt attactgcca gcaaggtaat accctgccgt atacgttcgg ccaaggtacc 1140 aaactggaaa tcaaaggggg gggtggaagt gggggcggtg gcagcggcgg tggcggcagt 1200 gaagtgcagc tggttgaaag cggtggtggt ctggttcaac cgggtcgttc cctgcgtctg 1260 tcatgtacgg cgagtggtgt ctccctgccg gactatggcg tgtcctggat tcgtcagccg 1320 ccgggtaaag gcctggaatg gattggtgtc atctggggca gtgaaaccac gtattacaac 1380 tcggccctga aaagccgttt caccatctct cgcgataaca gtaaaaatac gctgtacctg 1440 cagatgaata gcctgcgcgc ggaagacacc gccgtttact actgcgcaaa acattactac 1500 tacggtggca gctatgctat ggattactgg ggtcaaggca cgctggtcac cgtttcgtca 1560 gccgctgccc tagacaatga gaagagcaat ggaaccatta tccatgtgaa agggaaacac 1620 ctttgtccaa gtcccctatt tcccggacct tctaagccct tttgggtgct ggtggtggtt 1680 gggggagtcc tggcttgcta tagcttgcta gtaacagtgg cctttattat tttctgggtg 1740 aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 1800 gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 1860 tccagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt accagcaggg ccagaaccag 1920 ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagagacgt 1980 ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac 2040 aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag 2100 cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac 2160 acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgat ga 2202 <210> 294 <211> 733 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 294 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Ser Leu Ala Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser 130 135 140 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 145 150 155 160 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 165 170 175 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 180 185 190 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 195 200 205 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 210 215 220 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Ala Arg Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp 245 250 255 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly 260 265 270 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 275 280 285 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 290 295 300 Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln 305 310 315 320 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Lys His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val 325 330 335 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 340 345 350 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 355 360 365 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 370 375 380 Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 385 390 395 400 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 405 410 415 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 420 425 430 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 435 440 445 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 450 455 460 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 465 470 475 480 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 485 490 495 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 500 505 510 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys 515 520 525 Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser 530 535 540 Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val 545 550 555 560 Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile 565 570 575 Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr 580 585 590 Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln 595 600 605 Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys 610 615 620 Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln 625 630 635 640 Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu 645 650 655 Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg 660 665 670 Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met 675 680 685 Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly 690 695 700 Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp 705 710 715 720 Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 725 730 <210> 295 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 295 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro 20 <210> 296 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 296 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Ala Asp Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 297 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 297 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 298 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 298 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Glu Thr Asp Tyr Ser Ser Gly Met Gly Tyr Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 299 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 299 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser 1 5 10 <210> 300 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 300 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Lys His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 301 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 301 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 302 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 302 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 303 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 303 Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys 1 5 10 15 His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro 20 25 30 <210> 304 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 304 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 305 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 305 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 306 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 306 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 307 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 307 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 308 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 308 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 309 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 309 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 310 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 310 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 311 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 311 Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser 1 5 10 15 Pro Ser <210> 312 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(50) <223> This sequence may encompass 1-10 "Pro Ala Pro Ala Pro" repeating units <400> 312 Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala Pro Ala Pro Pro 1 5 10 15 Ala Pro Ala Pro Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala 20 25 30 Pro Ala Pro Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala Pro Ala Pro Pro Ala Pro 35 40 45 Ala Pro 50 <210> 313 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(50) <223> This sequence may encompass 1-10 "Glu Ala Ala Ala Lys" repeating units <400> 313 Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu 1 5 10 15 Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala 20 25 30 Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala 35 40 45 Ala Lys 50 <210> 314 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Val or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Any amino acid <400> 314 Asp Xaa Glu Xaa Asn Pro Gly Pro 1 5

Claims (29)

  1. 항-CD20 결합 모티프를 포함하는 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 항-CD20 결합 모티프는 서열식별번호: 1, 23, 45, 67, 89, 111, 133, 155, 177 및 199로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 중 어느 하나의 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)의 서열 및 서열식별번호: 12, 34, 56, 78, 100, 122, 144, 166, 188 및 210으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR)의 3개의 경쇄 CDR (LCDR)의 서열을 포함하는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 항-CD20 결합 모티프가 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서
    (i) HCDR1은 서열식별번호: 3-5, 25-27, 47-49, 69-71, 91-93, 113-115, 135-137, 157-159, 179-181 및 201-203 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고;
    (ii) HCDR2는 서열식별번호: 6-8, 28-30, 50-52, 72-74, 94-96, 116-118, 138-140, 160-162, 182-184 및 204-206 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고;
    (iii) HCDR3은 서열식별번호: 9-11, 31-33, 53-55, 75-77, 97-99, 119-121, 141-143, 163-165, 185-187 및 207-209 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고;
    (iv) LCDR1은 서열식별번호: 14-16, 36-38, 58-60, 80-82, 102-104, 124-126, 146-148, 168-170, 190-192 및 212-214 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고;
    (v) LCDR2는 서열식별번호: 17-19, 39-41, 61-63, 83-85, 105-107, 127-129, 149-151, 171-173, 193-195 및 215-217 중 어느 하나에 따른 서열을 갖고;
    (vi) LCDR3은 서열식별번호: 20-22, 42-44, 64-66, 86-88, 108-110, 130-132, 152-154, 174-176, 196-198 및 218-220 중 어느 하나에 따른 서열을 갖는 것인
    항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, HCDR이
    (i) 서열식별번호: 3-5 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 6-8 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 9-11 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (ii) 서열식별번호: 25-27 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 28-30 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 31-33 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (iii) 서열식별번호: 47-49 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 50-52 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 53-55 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (iv) 서열식별번호: 69-71 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 72-74 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 75-77 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (v) 서열식별번호: 91-93 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 94-96 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 97-99 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (vi) 서열식별번호: 113-115 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 116-118 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 119-121 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (vii) 서열식별번호: 135-137 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 138-140 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 141-143 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (viii) 서열식별번호: 157-159 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 160-162 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 163-165 중 어느 하나에 따른 HCDR3;
    (ix) 서열식별번호: 179-181 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 182-184 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 185-187 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 또는
    (x) 서열식별번호: 201-203 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 204-206 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 207-209 중 어느 하나에 따른 HCDR3
    을 포함하고;
    LCDR이
    (i) 서열식별번호: 14-16 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 17-19 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 20-22 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (ii) 서열식별번호: 36-38 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 39-41 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 42-44 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (iii) 서열식별번호: 58-60 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 61-63 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 64-66 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (iv) 서열식별번호: 80-82 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 83-85 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 86-88 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (v) 서열식별번호: 102-104 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 105-107 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 108-110 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (vi) 서열식별번호: 124-126 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 127-129 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 130-132 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (vii) 서열식별번호: 146-148 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 149-151 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 152-154 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (viii) 서열식별번호: 168-170 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 171-173 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 174-176 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (ix) 서열식별번호: 190-192 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 193-195 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 196-198 중 어느 하나에 따른 LCDR3; 또는
    (x) 서열식별번호: 212-214 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 215-217 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 218-220 중 어느 하나에 따른 LCDR3
    을 포함하는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR)을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR)을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서
    HCDR 및 LCDR은
    (i) 서열식별번호: 3-5 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 6-8 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 9-11 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 14-16 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 17-19 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 20-22 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (ii) 서열식별번호: 25-27 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 28-30 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 31-33 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 36-38 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 39-41 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 42-44 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (iii) 서열식별번호: 47-49 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 50-52 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 53-55 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 58-60 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 61-63 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 64-66 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (iv) 서열식별번호: 69-71 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 72-74 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 75-77 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 80-82 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 83-85 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 86-88 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (v) 서열식별번호: 91-93 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 94-96 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 97-99 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 102-104 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 105-107 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 108-110 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (vi) 서열식별번호: 113-115 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 116-118 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 119-121 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 124-126 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 127-129 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 130-132 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (vii) 서열식별번호: 135-137 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 138-140 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 141-143 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 146-148 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 149-151 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 152-154 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (viii) 서열식별번호: 157-159 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 160-162 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 163-165 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 168-170 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 171-173 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 174-176 중 어느 하나에 따른 LCDR3;
    (ix) 서열식별번호: 179-181 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 182-184 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 185-187 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 190-192 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 193-195 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 196-198 중 어느 하나에 따른 LCDR3; 또는
    (x) 서열식별번호: 201-203 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 204-206 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 207-209 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 212-214 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 215-217 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 218-220 중 어느 하나에 따른 LCDR3
    을 포함하는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서
    (i) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 45, 서열식별번호: 67, 서열식별번호: 89, 서열식별번호: 111, 서열식별번호: 133, 서열식별번호: 155, 서열식별번호: 177 또는 서열식별번호: 199에 대해 적어도 80% 동일하고;
    (ii) 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 34, 서열식별번호: 56, 서열식별번호: 78, 서열식별번호: 100, 서열식별번호: 122, 서열식별번호: 144, 서열식별번호: 166, 서열식별번호: 188 또는 서열식별번호: 210에 대해 적어도 80% 동일한 것인
    항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  6. 제5항에 있어서, 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서
    (i) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 1에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 12에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (ii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 23에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 34에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (iii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 45에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 56에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (iv) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 67에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 78에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (v) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 89에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 100에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (vi) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 111에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 122에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (vii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 133에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 144에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (viii) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 155에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 166에 대해 적어도 80% 동일하거나;
    (ix) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 177에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 188에 대해 적어도 80% 동일하거나; 또는
    (x) 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 199에 대해 적어도 80% 동일하고, 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 210에 대해 적어도 80% 동일한 것인
    항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 3개의 HCDR 및 3개의 LCDR이 단일 폴리펩티드에 포함되는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 3개의 HCDR이 제1 폴리펩티드에 포함되고, 3개의 LCDR이 제2 폴리펩티드에 포함되는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  9. 제8항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 항체 중쇄이고, 제2 폴리펩티드가 항체 경쇄인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 5T4, 알파태아단백질, B 세포 성숙 항원 (BCMA), B 세포 수용체, CA-125, 암배아성 항원, CD19, CD20, CD22, CD23, CD30, CD33, CD40, CD56, CD79, CD78, CD123, CD138, c-Met, CSPG4, IgM, C-유형 렉틴-유사 분자 1 (CLL-1), EGFRvIII, 상피 종양 항원, ERBB2, FLT3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HER2/Neu, HERV-K, HIV-1 외피 당단백질 gp41, HIV-1 외피 당단백질 gp120, IL-IIR알파, 카파 쇄, 람다 쇄, 흑색종-연관 항원, 메소텔린, MUC-1, 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 전립선-특이적 항원, ROR1, VEGFR2, EphA3 (EPH 수용체 A3), BAFFR (B-세포 활성화 인자 수용체) 및 그의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 결합 모티프; 및/또는
    (ii) B-세포에 특징적인 항원, 임의로 CD19 또는 CD20이 아닌, B-세포에 특징적인 항원에 특이적으로 결합하는 결합 모티프
    를 추가로 포함하는 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD19 결합 모티프를 추가로 포함하는 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  12. 제11항에 있어서, 항-CD19 결합 모티프가 3개의 HCDR을 포함하는 제1 도메인 및 3개의 LCDR을 포함하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서
    항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR은 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하고;
    항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR은 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
    항-CD19 결합 모티프의 HCDR 및 LCDR은 서열식별번호: 223-225 중 어느 것에 따른 HCDR1; 서열식별번호: 226-228 중 어느 것에 따른 HCDR2; 서열식별번호: 229-231 중 어느 하나에 따른 HCDR3; 서열식별번호: 234-236 중 어느 것에 따른 LCDR1; 서열식별번호: 237-239 중 어느 것에 따른 LCDR2; 서열식별번호: 240-242 중 어느 하나에 따른 LCDR3을 포함하는 것인
    항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  13. 제12항에 있어서, 항-CD19 결합 모티프가 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 여기서 항-CD19 결합 모티프의 중쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 221에 대해 적어도 80% 동일하고, 항-CD19 결합 모티프의 경쇄 가변 도메인은 서열식별번호: 232에 대해 적어도 80% 동일한 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR이 단일 폴리펩티드에 포함되는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD20 결합 모티프의 3개의 HCDR, 항-CD20 결합 모티프의 3개의 LCDR, 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR이 함께 단일 폴리펩티드에 포함되는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체이거나 또는 그에 포함되는 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  17. 제16항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 4-1BB/CD137, T 세포 수용체의 알파 쇄, T 세포 수용체의 베타 쇄, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD8 알파, CD9, CD16, CD19, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154 또는 T 세포 수용체의 제타 쇄 또는 그의 임의의 조합의 막횡단 도메인인 막횡단 도메인을 포함하는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  18. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 항-CD20 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD20 결합 모티프의 3개의 LCDR이 제1 폴리펩티드에 존재하고, (ii) 항-CD19 결합 모티프의 3개의 HCDR 및 항-CD19 결합 모티프의 3개의 LCDR이 함께 제2의 상이한 폴리펩티드에 포함되는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  19. 제18항에 있어서, 제1 폴리펩티드가 제1 키메라 항원 수용체이거나 또는 그에 포함되는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 제2 폴리펩티드가 제2 키메라 항원 수용체이거나 또는 그에 포함되는 것인 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산.
  22. 제21항의 핵산을 포함하는 벡터.
  23. 세포를 제21항에 따른 핵산 또는 제22항에 따른 벡터로 형질감염 또는 형질도입하는 것을 포함하는, 조작된 세포를 생성하는 방법.
  24. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하거나 발현하는 세포이며, 임의로 여기서 세포는 면역 세포이고, 임의로 여기서 세포는 T 세포인 세포.
  25. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하거나 포함하는 1개 이상의 세포를 포함하는 세포 요법 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  26. 대상체에게 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항원 결합 시스템, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하거나 포함하는 1개 이상의 세포를 포함하는 세포 요법 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 유도하거나 또는 대상체를 암에 대해 면역화시키는 방법.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 세포가 CAR-T 세포인 방법.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 급성 림프모구성 백혈병 (ALL) (비 T 세포 ALL 포함), 급성 골수성 백혈병, B 세포 전림프구성 백혈병, B 세포 급성 림프성 백혈병 ("BALL"), 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 골수성 백혈병, 만성 또는 급성 백혈병, 미만성 대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 모발상 세포 백혈병, 호지킨병, 악성 림프증식성 상태, MALT 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 의미 불명의 모노클로날 감마글로불린병증 (MGUS), 다발성 골수종, 골수이형성증 및 골수이형성 증후군, 비-호지킨 림프종 (NHL), 형질 세포 증식성 장애 (무증상 골수종 (무증상 다발성 골수종 또는 무통성 골수종), 형질모구성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 신생물, 형질세포종 (형질 세포 이혼화증; 고립 골수종; 고립 형질세포종; 수질외 형질세포종; 및 다발성 형질세포종 포함) 포함), POEMS 증후군 (크로우-푸카세 증후군; 다카츠키병; 및 PEP 증후군으로도 공지됨), 원발성 종격 대 B 세포 림프종 (PMBC), 소세포- 또는 대세포-여포성 림프종, 비장 변연부 림프종 (SMZL), 전신 아밀로이드 경쇄 아밀로이드증, T 세포 급성 림프성 백혈병 ("TALL"), T 세포 림프종, 형질전환된 여포성 림프종 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 외투 세포 림프종 (MCL), 형질전환된 여포성 림프종 (TFL), 원발성 종격 B 세포 림프종 (PMBCL), 다발성 골수종, 모발상 세포 림프종/백혈병 또는 그의 조합인 방법.
  29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 요법이 동종 세포 요법 또는 자가 세포 요법인 방법.
KR1020217021608A 2018-12-12 2019-12-11 키메라 항원 수용체 및 car-t 세포 및 사용 방법 KR20210102941A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862778893P 2018-12-12 2018-12-12
US62/778,893 2018-12-12
PCT/US2019/065776 WO2020123691A2 (en) 2018-12-12 2019-12-11 Chimeric antigen and t cell receptors and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210102941A true KR20210102941A (ko) 2021-08-20

Family

ID=69165582

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217021608A KR20210102941A (ko) 2018-12-12 2019-12-11 키메라 항원 수용체 및 car-t 세포 및 사용 방법

Country Status (14)

Country Link
US (2) US11793834B2 (ko)
EP (1) EP3893899A2 (ko)
JP (2) JP7386382B2 (ko)
KR (1) KR20210102941A (ko)
CN (1) CN113412117A (ko)
AR (1) AR117685A1 (ko)
AU (2) AU2019397033B2 (ko)
BR (1) BR112021012172A2 (ko)
CA (2) CA3177829A1 (ko)
IL (1) IL283734A (ko)
MX (1) MX2021006968A (ko)
SG (1) SG11202106302WA (ko)
TW (2) TW202140567A (ko)
WO (1) WO2020123691A2 (ko)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3710471A1 (en) * 2017-11-16 2020-09-23 Kite Pharma, Inc. Modified chimeric antigen receptors and methods of use
CN113402612A (zh) * 2020-03-17 2021-09-17 西比曼生物科技（香港）有限公司 靶向cd19和cd20的联合嵌合抗原受体及其应用
WO2022089656A1 (zh) * 2020-11-02 2022-05-05 上海医药集团生物治疗技术有限公司 两个或多个靶点嵌合抗原受体基因工程载体及其应用
KR20230122618A (ko) 2020-12-21 2023-08-22 알로젠 테라퓨틱스 인코포레이티드 프로테아제 활성화 cd45-게이트 car
MX2023008809A (es) 2021-01-29 2023-08-04 Allogene Therapeutics Inc ATENUACIÓN O INACTIVACIÓN DE UNO O MÁS DE TAP2, NLRC5, ß2M, TRAC, RFX5, RFXAP Y RFXANK PARA MITIGAR EL RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS T DE PRODUCTOS CELULARES ALOGÉNICOS.
WO2022183160A1 (en) * 2021-02-25 2022-09-01 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute Inc. Methods for treating cd83-expressing cancer
IL305571A (en) 2021-03-11 2023-10-01 Kite Pharma Inc Improving the function of immune system cells
EP4362958A1 (en) * 2021-06-30 2024-05-08 New York Genome Center, Inc. Methods and compositions for improved immunotherapies
WO2023009989A1 (en) 2021-07-26 2023-02-02 Kite Pharma, Inc. Split chimeric antigen receptors and methods of use
WO2023014922A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
WO2023049867A1 (en) * 2021-09-24 2023-03-30 Seeker Biologics, Inc. Orai1 multispecific antibodies and methods of use
WO2024006925A2 (en) * 2022-07-01 2024-01-04 Nkarta, Inc. Dosing regimens for cd19-directed cancer immunotherapy
US20240042030A1 (en) 2022-07-29 2024-02-08 Allogene Therapeutics, Inc. Engineered cells with reduced gene expression to mitigate immune cell recognition
WO2024092145A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 Kite Pharma, Inc. Expedited administration of engineered lymphocytes

Family Cites Families (109)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5132405A (en) 1987-05-21 1992-07-21 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5728388A (en) 1989-10-03 1998-03-17 Terman; David S. Method of cancer treatment
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
DK0500799T3 (da) 1989-11-16 1998-09-14 Univ Duke Partikel-medieret transformation af animalske vævsceller
EP0814159B1 (en) 1990-08-29 2005-07-27 GenPharm International, Inc. Transgenic mice capable of producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6319494B1 (en) 1990-12-14 2001-11-20 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
US8211422B2 (en) 1992-03-18 2012-07-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
IL104570A0 (en) 1992-03-18 1993-05-13 Yeda Res & Dev Chimeric genes and cells transformed therewith
US5830462A (en) 1993-02-12 1998-11-03 President & Fellows Of Harvard College Regulated transcription of targeted genes and other biological events
US5834266A (en) 1993-02-12 1998-11-10 President & Fellows Of Harvard College Regulated apoptosis
US5869337A (en) 1993-02-12 1999-02-09 President And Fellows Of Harvard College Regulated transcription of targeted genes and other biological events
TW404844B (en) 1993-04-08 2000-09-11 Oxford Biosciences Ltd Needleless syringe
US5308341A (en) 1993-09-28 1994-05-03 Becton, Dickinson And Company Method of testing the dose accuracy of a medication delivery device
US5443505A (en) 1993-11-15 1995-08-22 Oculex Pharmaceuticals, Inc. Biocompatible ocular implants
US20030036654A1 (en) 1994-08-18 2003-02-20 Holt Dennis A. Synthetic multimerizing agents
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US5773019A (en) 1995-09-27 1998-06-30 The University Of Kentucky Research Foundation Implantable controlled release device to deliver drugs directly to an internal portion of the body
US6146361A (en) 1996-09-26 2000-11-14 Becton Dickinson And Company Medication delivery pen having a 31 gauge needle
US6042820A (en) 1996-12-20 2000-03-28 Connaught Laboratories Limited Biodegradable copolymer containing α-hydroxy acid and α-amino acid units
US6472375B1 (en) 1998-04-16 2002-10-29 John Wayne Cancer Institute DNA vaccine and methods for its use
US6302855B1 (en) 1998-05-20 2001-10-16 Novo Nordisk A/S Medical apparatus for use by a patient for medical self treatment of diabetes
AU2472400A (en) 1998-10-20 2000-05-08 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
US6192891B1 (en) 1999-04-26 2001-02-27 Becton Dickinson And Company Integrated system including medication delivery pen, blood monitoring device, and lancer
US6277099B1 (en) 1999-08-06 2001-08-21 Becton, Dickinson And Company Medication delivery pen
US6406699B1 (en) 1999-10-05 2002-06-18 Gary W. Wood Composition and method of cancer antigen immunotherapy
AU2001243288B2 (en) 2000-02-24 2005-11-24 Life Technologies Corporation Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
PE20011227A1 (es) 2000-04-17 2002-01-07 Chiesi Farma Spa Formulaciones farmaceuticas para inhaladores de polvo seco en la forma de aglomerados duros
ATE404140T1 (de) 2000-08-30 2008-08-15 Univ Johns Hopkins Vorrichtung zur intraokularen wirkstoffverabreichung
AU2002368077B2 (en) 2001-07-12 2010-03-04 Jefferson Foote Super humanized antibodies
CA2460063C (en) 2001-09-12 2010-07-20 Becton, Dickinson And Company Microneedle-based pen device for drug delivery and method for using same
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
US20050271660A1 (en) 2002-09-06 2005-12-08 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Nebulization of monoclonal antibodies for treating pulmonary diseases
US20040102469A1 (en) 2002-09-13 2004-05-27 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Method for reducing the mortality rate
GB0222023D0 (en) 2002-09-21 2002-10-30 Aventis Pharma Ltd Inhaler
US20060167435A1 (en) 2003-02-18 2006-07-27 Adamis Anthony P Transscleral drug delivery device and related methods
US20130266551A1 (en) 2003-11-05 2013-10-10 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Chimeric receptors with 4-1bb stimulatory signaling domain
US7435596B2 (en) 2004-11-04 2008-10-14 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified cell line and method for expansion of NK cell
US20110129412A1 (en) * 2005-06-02 2011-06-02 Astrazeneca Ab Antibodies Directed to CD20 and Uses Thereof
WO2007002223A2 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
WO2007137300A2 (en) 2006-05-23 2007-11-29 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Modified dendritic cells having enhanced survival and immunogenicity and related compositions and methods
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
GB0700058D0 (en) 2007-01-03 2007-02-07 Scancell Aps Anti-tumor vaccine based on normal cells
EP2173380A4 (en) 2007-07-13 2011-08-31 Abbott Biotech Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa HEMMER
WO2009091826A2 (en) 2008-01-14 2009-07-23 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods related to a human cd19-specific chimeric antigen receptor (h-car)
EA201190132A1 (ru) 2009-02-23 2013-01-30 Гленмарк Фармасьютикалс С.А. Гуманизированные антитела, связывающиеся с cd19, и их применение
JP5934099B2 (ja) 2009-10-01 2016-06-15 アメリカ合衆国 抗血管内皮増殖因子受容体−２キメラ抗原受容体及び癌の治療のためのその使用
WO2011146862A1 (en) 2010-05-21 2011-11-24 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for inducing selective apoptosis
EP3467101A3 (en) 2010-09-08 2019-06-19 Baylor College of Medicine Immunotherapy of brain tumor using geneticially engineered gd2-specific t cells
PL3214091T3 (pl) 2010-12-09 2019-03-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Zastosowanie komórek T modyfikowanych chimerycznymi receptorami antygenowymi do leczenia nowotworów
EA201391059A1 (ru) 2011-01-18 2014-05-30 Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания Композиции для лечения рака и способы их применения
AU2012209103B2 (en) 2011-01-26 2015-12-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods and compositions for the synthesis of multimerizing agents
NZ743310A (en) 2011-03-23 2022-11-25 Fred Hutchinson Cancer Center Method and compositions for cellular immunotherapy
SI2694549T1 (sl) 2011-04-08 2018-12-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Himerni antigenski receptorji varianta III receptorja anti-epidermalnega rastnega faktorja in uporaba le-tega za zdravljenje raka
WO2012145384A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Beta-2 microglobulin-deficient cells
EP2532740A1 (en) 2011-06-11 2012-12-12 Michael Schmück Antigen-specific CD4+ and CD8+ central-memory T cell preparations for adoptive T cell therapy
EP2756521A4 (en) 2011-09-16 2015-04-22 Univ Pennsylvania RNA-MANIPULATED T-CELLS FOR THE TREATMENT OF CANCER
AU2013221672B2 (en) * 2012-02-13 2017-11-09 Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof
KR102229945B1 (ko) 2012-04-11 2021-03-18 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 B-세포 성숙 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체
US20150202286A1 (en) 2012-07-13 2015-07-23 The Children's Hospital of Philadelphai Toxicity Management for Anti-Tumor Activity of CARs
US10117896B2 (en) 2012-10-05 2018-11-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors
PT3300745T (pt) 2013-02-15 2019-11-27 Univ California Recetor de antigénio quimérico e métodos de utilização do mesmo
AU2014236726A1 (en) 2013-03-14 2015-09-17 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for controlling T cell proliferation
TWI654206B (zh) 2013-03-16 2019-03-21 諾華公司 使用人類化抗－ｃｄ１９嵌合抗原受體治療癌症
EP3789487A1 (en) 2013-04-03 2021-03-10 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Effective generation of tumor-targeted t-cells derived from pluripotent stem cells
CA2912375C (en) 2013-05-13 2023-03-14 Cellectis Methods for engineering highly active t cell for immunotherapy
WO2014186469A2 (en) 2013-05-14 2014-11-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Human application of engineered chimeric antigen receptor (car) t-cells
EP3027204B1 (en) 2013-07-29 2022-01-05 2seventy bio, Inc. Multipartite signaling proteins and uses thereof
EP3858378A1 (en) 2013-11-21 2021-08-04 Autolus Limited Cell
US20160376375A1 (en) 2013-11-27 2016-12-29 Baylor College Of Medicine CSGP4 - Specific Chimeric Antigen Receptor for Cancer
US10287354B2 (en) 2013-12-20 2019-05-14 Novartis Ag Regulatable chimeric antigen receptor
DK3105335T3 (da) 2014-02-14 2020-01-13 Univ Texas Kimære antigenreceptorer og fremgangsmåder til fremstilling heraf
CA2937750A1 (en) 2014-02-14 2015-08-20 Bellicum Pharmaceuticals, Inc. Methods for activating t cells using an inducible chimeric polypeptide
CN103820393B (zh) 2014-02-24 2016-09-07 西比曼生物科技（上海）有限公司 工程化cd20靶向性的nkt细胞及其制备方法和应用
US20170335281A1 (en) 2014-03-15 2017-11-23 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
US9906718B2 (en) 2014-04-30 2018-02-27 Luminit Llc Biomimetic integrated optical sensor (BIOS) system
CA2951045A1 (en) 2014-06-02 2015-12-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Chimeric antigen receptors targeting cd-19
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
US20160081314A1 (en) 2014-09-19 2016-03-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric Antigen Receptors
EP3215168B1 (en) 2014-10-31 2023-08-02 The Trustees of the University of Pennsylvania Altering gene expression in modified t cells and uses thereof
CA2969704C (en) 2014-12-05 2023-05-02 City Of Hope Cs1 targeted chimeric antigen receptor-modified t cells
CA3008162A1 (en) * 2014-12-15 2016-06-23 The Regents Of The University Of California Bispecific or-gate chimeric antigen receptor responsive to cd19 and cd20
SG11201708191XA (en) 2015-04-08 2017-11-29 Novartis Ag Cd20 therapies, cd22 therapies, and combination therapies with a cd19 chimeric antigen receptor (car) - expressing cell
WO2016201389A2 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
US11655452B2 (en) 2015-06-25 2023-05-23 Icell Gene Therapeutics Inc. Chimeric antigen receptors (CARs), compositions and methods of use thereof
US10493139B2 (en) 2015-07-24 2019-12-03 Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. Humanized anti-CD19 antibody and use thereof with chimeric antigen receptor
WO2017015783A1 (en) 2015-07-24 2017-02-02 Shanghai Sidansai Biotechnology Co., Ltd Humanized anti-cd19 antibody and use thereof
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
IL297018A (en) 2015-12-18 2022-12-01 Sangamo Therapeutics Inc Directed cleavage of cell mhc receptor
ES2893840T3 (es) 2016-03-18 2022-02-10 Hutchinson Fred Cancer Res Composiciones y métodos para la inmunoterapia con CD20
KR102437015B1 (ko) 2016-04-15 2022-08-29 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 유전자이식 t 세포 및 키메라 항원 수용체 t 세포 조성물 및 관련 방법
WO2017189959A1 (en) * 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
CN110225927B (zh) 2016-10-07 2024-01-12 诺华股份有限公司 用于治疗癌症的嵌合抗原受体
US11174306B2 (en) 2016-10-19 2021-11-16 The Scripps Research Institute Chimeric antigen receptor effector cell switches with humanized targeting moieties and/or optimized chimeric antigen receptor interacting domains and uses thereof
CN106701827A (zh) 2016-12-05 2017-05-24 刘晓明 表达cd19和cd20抗体基因嵌合抗原受体t细胞的转化及扩增培养与保存方法
CN108395481B (zh) 2017-02-08 2021-02-05 西比曼生物科技（香港）有限公司 一种靶向cd20的car的构建及其工程化t细胞的活性鉴定
CN108395482B (zh) 2017-02-08 2021-02-05 西比曼生物科技（香港）有限公司 一种靶向cd20抗原嵌合抗原受体的构建及其工程化t细胞的活性鉴定
AU2018227583B2 (en) 2017-03-03 2023-06-01 Obsidian Therapeutics, Inc. CD19 compositions and methods for immunotherapy
US11980640B2 (en) 2017-05-15 2024-05-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bicistronic chimeric antigen receptors and their uses
AU2018309735A1 (en) * 2017-07-31 2020-02-20 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD19/CD20 immunotherapy
AU2018351046A1 (en) 2017-10-18 2020-04-30 Kite Pharma, Inc. Methods of administering chimeric antigen receptor immunotherapy

Also Published As

Publication number Publication date
US20200246382A1 (en) 2020-08-06
BR112021012172A2 (pt) 2021-08-31
WO2020123691A3 (en) 2020-07-23
JP2022513778A (ja) 2022-02-09
TW202140567A (zh) 2021-11-01
AU2023233053A1 (en) 2023-10-05
CN113412117A (zh) 2021-09-17
AU2019397033A1 (en) 2021-07-22
TW202039563A (zh) 2020-11-01
US20240115611A1 (en) 2024-04-11
IL283734A (en) 2021-07-29
SG11202106302WA (en) 2021-07-29
AR117685A1 (es) 2021-08-25
US11793834B2 (en) 2023-10-24
CA3177829A1 (en) 2020-06-18
JP2023169138A (ja) 2023-11-29
WO2020123691A2 (en) 2020-06-18
EP3893899A2 (en) 2021-10-20
JP7386382B2 (ja) 2023-11-27
AU2019397033B2 (en) 2023-06-29
MX2021006968A (es) 2021-10-13
CA3122762A1 (en) 2020-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11793834B2 (en) Chimeric antigen and T cell receptors and methods of use
AU2017240667C1 (en) Chimeric antigen and T cell receptors and methods of use
KR102363742B1 (ko) Cd19에 대한 인간화 항원-결합 도메인 및 사용 방법
TWI707950B (zh) 結合分子和使用彼之方法
KR20230100748A (ko) 키메라 항원 수용체 및 pd-1 억제제의 조합 요법
EP3583129A1 (en) Cd70 binding molecules and methods of use thereof
US20230060292A1 (en) Split chimeric antigen receptors and methods of use
JP2024069310A (ja) キメラ受容体及びその使用方法
OA19499A (en) Chimeric antigen and T cell receptors and methods of use.

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal