KR20210022004A - 항-메소텔린 작제물 및 이의 용도 - Google Patents

항-메소텔린 작제물 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210022004A
KR20210022004A KR1020207037392A KR20207037392A KR20210022004A KR 20210022004 A KR20210022004 A KR 20210022004A KR 1020207037392 A KR1020207037392 A KR 1020207037392A KR 20207037392 A KR20207037392 A KR 20207037392A KR 20210022004 A KR20210022004 A KR 20210022004A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
msln
sdab
Prior art date
Application number
KR1020207037392A
Other languages
English (en)
Inventor
지양 종
판 예
매튜 시겔
지안잉 후앙
Original Assignee
안위타 바이오사이언시스, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 안위타 바이오사이언시스, 인코포레이티드 filed Critical 안위타 바이오사이언시스, 인코포레이티드
Publication of KR20210022004A publication Critical patent/KR20210022004A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5418—IL-7
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5443—IL-15
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/036—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif targeting to the medium outside of the cell, e.g. type III secretion
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Abstract

본원은 항-메소텔린 작제물(예를 들면, 항-메소텔린 항체, 항-메소텔린 작제물을 포함하는 사이토킨 융합 단백질), 항-메소텔린 작제물을 제조하는 방법 및 이러한 작제물을 사용하는 방법(예컨대, 질환 또는 상태를 치료하는 방법)에 관한 것이다. 본원은 또한 항-메소텔린 제제 및 사이토킨(예를 들면, IL-21 또는 IL-15)를 투여함을 포함하여, 암을 치료하기 위한 조합 치료요법에 관한 것이다. 조합 치료요법은 또한 항-Her2 제제를 투여함을 추가로 포함한다.

Description

항-메소텔린 작제물 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 6월 18일자로 출원된 미국 가특허원 제62/686,481호, 및 2019년 2월 22일자로 출원된 미국 가특허원 제62/809,496호의 우선권 이익을 주장한다. 이러한 출원의 전체 내용은 모든 목적을 위해 참고로 본원에 포함된다.
출원 분야
본 출원은 항-메소텔린 작제물(anti-mesothelin construct)(예를 들면, 항-메소텔린 항체, 항-메소텔린 작제물을 포함하는 사이토킨 융합 단백질) 및 이러한 작제물을 사용하는 방법(예컨대, 질병의 치료 방법)에 관한 것이다. 본 출원은 또한 질환(예를 들면, 암)을 치료하기 위한 조합 치료요법에 관한 것이다.
출원의 배경
메소텔린은 복강, 늑막 및 심막 체강(body cavity)의 세포의 표면에 존재하는 당단백질이다. 이는 원래 사람 췌장 암 세포주 HPC-Y5로부터 정제되었으며 거핵구 효력 증가 능력을 가진 것으로 밝혀져서 거핵구 효력 증가 인자(megakaryocyte potentiating factor: MPF)로 명명되었다(Yamaguchi et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:805-808). 메소텔린 cDNA는 HPC-Y5 세포주로부터 제조된 라이브러리(library)로부터 클로닝(cloning)되었다(Kojima et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:21984-21990). cDNA는 또한 모노클로날 항체 K1을 사용하여 클로닝되었으며, 이는 중피종을 인식한다(Chang and Pastan (1996) Proc. NatL. A cad. Sci. USA 93:136-40). 구조적으로, 메소텔린은 세포 표면 상에 60 kDa 전구체 폴리펩타이드로서 발현되며, 이는 31 kDa 쉐드 구성성분(shed component)(MPF에 상응) 및 40 kDa의 막 결합 구성성분(Hassan et al. (2004) Clin. Cancer. Res. 10:3937-3942)으로 단백질분해적으로 프로세싱(processing)된다. 일반적인 중피 세포 상에 발현되는 것 외에도, 메소텔린은 수개 유형의 사람 종양, 예를 들면, 모든 중피종, 난소 및 췌장 암, 및 일부 위, 폐 및 자궁내막 암에서 과발현된다. 예를 들면, 메소텔린은 모든 난소 암(ovarian cancer)의 대략 70%, 유두근의 중증 선암종(papillary, serous adenocarcinomas)에서 대략 82%, 모든 췌장 선암종(pancreatic adenocarcinomas)에서 대략 83% 및 모든 도관의 췌장 선암종의 대략 86%에서 발현된다.
메소텔린은 난소 암 항원으로 이미 확인된 종양 세포의 표면에 존재하는 뮤신-유사 당단백질인, CA125(MUC 16으로 또한 공지됨)와 구체저으로 상호작용한다. 또한, 막-결합된 메소텔린에 대한 CA1 25의 결합은 이형 세포 부착(heterotypic cell adhesion)을 매개하며 CAl 25 및 메소텔린은 진전된 등급의 난소 선암종에서 동시-발현된다(Rump, A. et al. (2004) J.Bio.Chem. 279:9190-9198). 복막의 라이닝(lining) 내에서 메소텔린의 발현은 난소 암의 바람직한 전이 형성 부위와 관련되며 인에소텔린(inesothelin)-CA125 결합은 난소 종양의 복강 전이를 촉진하는 것으로 고려된다(Gubbels, J.A et.al. (2006) Mol, Cancer 5:50).
상기 내용의 관점에서, 메소텔린의 활성을 조절하기 위한 추가의 제제가 관심을 이끌고 있다.
출원의 간단한 요약
본 출원은 서열 번호: 12, 서열 번호: 15, 서열 번호: 18, 서열 번호: 21, 서열 번호: 24, 서열 번호: 27, 서열 번호: 30, 서열 번호: 33, 서열 번호: 36, 서열 번호: 39, 서열 번호: 42, 서열 번호: 45, 서열 번호: 48, 서열 번호: 51, 서열 번호: 54, 서열 번호: 57, 서열 번호: 60, 서열 번호: 63, 서열 번호: 75, 서열 번호: 78, 서열 번호: 81, 서열 번호: 84, 서열 번호: 87, 서열 번호: 90, 서열 번호: 93, 서열 번호: 96, 서열 번호: 99, 서열 번호: 102, 서열 번호: 105, 서열 번호: 108, 서열 번호: 111, 서열 번호: 114, 서열 번호: 117, 및 서열 번호: 120으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역(heavy chain complementarity determining region: HC-CDR) 1; b) 서열 번호: 13, 서열 번호: 16, 서열 번호: 19, 서열 번호: 22, 서열 번호: 25, 서열 번호: 28, 서열 번호: 31, 서열 번호: 34, 서열 번호: 37, 서열 번호: 40, 서열 번호: 43, 서열 번호: 46, 서열 번호: 49, 서열 번호: 52, 서열 번호: 55, 서열 번호: 58, 서열 번호: 61, 서열 번호: 64, 서열 번호: 76, 서열 번호: 79, 서열 번호: 82, 서열 번호: 85, 서열 번호: 88, 서열 번호: 91, 서열 번호: 94, 서열 번호: 97, 서열 번호: 100, 서열 번호: 103, 서열 번호: 106, 서열 번호: 109, 서열 번호: 112, 서열 번호: 115, 서열 번호: 118, 및 서열 번호: 121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 c) 서열 번호: 14, 서열 번호: 17, 서열 번호: 20, 서열 번호: 23, 서열 번호: 26, 서열 번호: 29, 서열 번호: 32, 서열 번호: 35, 서열 번호: 38, 서열 번호: 41, 서열 번호: 44, 서열 번호: 47, 서열 번호: 50, 서열 번호: 53, 서열 번호: 56, 서열 번호: 59, 서열 번호: 62, 서열 번호: 65, 서열 번호: 77, 서열 번호: 80, 서열 번호: 83, 서열 번호: 86, 서열 번호: 89, 서열 번호: 92, 서열 번호: 95, 서열 번호: 98, 서열 번호: 101, 서열 번호: 104, 서열 번호: 107, 서열 번호: 110, 서열 번호: 113, 서열 번호: 116, 서열 번호: 119, 및 서열 번호: 122로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항체 모이어티(moiety)를 포함하는 단리된 항-메소텔린(항-MSLN) 작제물을 제공한다.
본 출원은 1) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체(variant); 2) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 3) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 4) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 5) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 6) 서열 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 7) 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 8) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 9) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 10) 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 11) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 12) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 13) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 14) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 15) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 16) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 17) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 18) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 19) 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 20) 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 21) 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 22) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 23) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 24) 서열 번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 25) 서열 번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 95의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 26) 서열 번호: 96의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 97의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 27) 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 101의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 28) 서열 번호: 102의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개)이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 29) 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 30) 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 110의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 31) 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 112의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 113의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 32) 서열 번호: 114의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 33) 서열 번호: 117의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 또는 34) 서열 번호: 120의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 122의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개(예를 들면, 4, 3, 2, 1개) 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체를 포함하는 항-메소텔린(항-MSLN) 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항체 모이어티를 포함하는 단리된 항-메소텔린(항-MSLN) 작제물을 제공한다.
상기한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3은 표 10에 나타낸 바와 같은 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 및 항-MSLN-34 중 어느 것의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 각각의 아미노산 서열을 포함한다.
본 출원은 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 것에 나타낸 서열을 갖는 VH 쇄 영역 내의 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는, HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3 각각을 포함하는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항체 모이어티를 포함하는 단리된 항-메소텔린(항-MSLN) 작제물을 제공한다.
상술한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 단일-도메인(sdAb) 모이어티이다. 일부 구현예에서, 알부민에 결합하는 sdAb 모이어티는 카멜리드(camelid), 키메라(chimeric), 사람, 부분적으로 사람화된, 또는 완전히 사람화된 것이다.
상술한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80% 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 이의 변이체를 포함한다.
상술한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 VHH 도메인내의 약 3(예를 들면, 3, 2, 1)개의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체를 포함하는 VHH 도메인을 포함한다.
상술한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 감소된 푸코실화(fucosylation)를 갖는다.
상술한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 작제물은 반감기 연장 도메인을 추가로 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 반감기 연장 도메인은 Fc 도메인 또는 알부민-결합 도메인을 포함한다.
상술한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 작제물은 사이토킨을 추가로 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 IL-21 또는 IL-15이다. 일부 구현예에서, 반감기-연장 도메인은 Fc 도메인 또는 알부민-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 작제물은 항-MSLN 항체 모이어티와 사이토킨 사이의 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열 번호: 66 내지 74, 267 내지 282 및 307 내지 324 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 절단가능하지 않다. 일부 구현예에서, 링커는 절단가능하다.
상술한 작제물 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 작제물은 a) 반감기 연장 도메인; 및 b) 사이토킨을 추가로 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 IL-21 또는 IL-15이다. 일부 구현예에서, 작제물은 항-MSLN 항체 모이어티와 사이토킨 사이의 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열 번호: 66 내지 74, 267 내지 282 및 307 내지 324 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 절단가능하지 않다. 일부 구현예에서, 링커는 절단가능하다.
일부 구현예에서, 반감기-연장 도메인은 항-MSLN 항체 모이어티의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 반감기-연장 도메인은 항-MSLN 항체 모이어티의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 항-MSLN 항체 모이어티 또는 반감기-연장 도메인의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 항-MSLN 항체 모이어티 또는 반감기-연장 도메인의 C-말단에 융합된다.
본원은 또한 상술한 항-MSLN 작제물 중 어느 것을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.
본원은 또한 상술한 폴리뉴클레오타이드 중 어느 것을 포함하고, 임의로 폴리뉴클레오타이드와 작동적으로 연결된 프로모터를 추가로 포함하는 핵산 작제물을 제공한다.
본원은 또한 상술한 핵산 작제물 중 어느 것을 포함하는 벡터(vector)를 제공한다.
본원은 또한 상술한 폴리뉴클레오타이드, 핵산 작제물, 또는 벡터 중 어느 것을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본원은 또한 상술한 항-MSLN 작제물 또는 숙주 세포 중 어느 것을 포함하는 배양 배지를 제공한다.
본원은 또한 a) 항-MSLN 작제물, 폴리뉴클레오타이드, 핵산 작제물, 벡터, 숙주 세포, 또는 상술한 배양 배지 중 어느 것; 및 b) 설명서를 포함하는 키트(kit)를 제공한다.
본원은 또한 상술한 항-MSLN 작제물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본원은 또한 상술한 항-MSLN 작제물 중 어느 것을 개체(individual)에게 투여함을 포함하여, 개체에 대해 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공한다.
본원은 또한 메소텔린에 특이적으로 결합하는 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하는 항-MSLN 작제물을 투여함을 포함하여, 개체에 대해 질환 또는 상태를 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 항-MSLN 항체 모이어티는 감소된 푸코실화를 갖는다.
상술한 방법 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 질환 또는 상태는 암이다. 일부 구현예에서, 암은 메소텔린 양성 암이다. 일부 구현예에서, 암은 고형 암이다. 일부 구현예에서, 암은 위암, 폐암, 난소 암, 식도 암, 췌장 암, 자궁경부 암, 중피종, 및 유방 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 위암 또는 폐암이다.
상술한 방법 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 방법은 제2의 제제(agent)를 개체에게 투여함을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 사이토킨을 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 IL-21 또는 IL-15이다. 일부 구현예에서, IL-21 또는 IL-15는 반감기 연장 도메인을 포함하는 융합 단백질의 형태이다. 일부 구현예에서, IL-21은 서열 번호: 1의 C-말단에서 1 내지 11개 아미노산을 결여한 IL-21 변이체를 포함한다.
본원은 또한 개체에게 a) 항-메소텔린 제제; b) 항-Her2 제제; 및 c) IL-21을 투여함을 포함하여, 개체내에서 메소텔린 양성 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, IL-21 또는 IL-15는 반감기 연장 도메인을 포함하는 융합 단백질의 형태이다. 일부 구현예에서, IL-21은 서열 번호: 1의 C-말단에서 1 내지 11개 아미노산을 결여한 IL-21 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-Her2 제제는 헤르셉틴이다. 일부 구현예에서, 항-메소텔린 제제는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 것에 나타낸 서열을 갖는 VH 쇄 영역내에 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는, HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3 각각을 포함하는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항-메소텔린 항체 모이어티를 포함한다.
상술한 방법 중 어느 하나에 따른 일부 구현예에서, 개체는 사람이다.
도 1은 본원에 제공된 예시적인 IL-21 융합 단백질을 나타낸다.
도 2는 예시적인 IL-21 융합 단백질 발현 벡터의 조립체(assembly)를 나타내며 여기서 알부민 결합 분자는 항-HSA 항체이다.
도 3은 예시적인 IL-21 융합 단백질 발현 벡터의 조립체를 나타내며 여기서 알부민 결합 분자는 HSA에 결합하는 ABD이다.
도 4a 및 도 4b는 사람 또는 원숭이 메소텔린(MSLN)에 대한 항-MSLN 항체의 결합을 나타낸다.
도 5a 내지 도 5d는 암 세포주 NCI-H226, OVCAR3, NCI-N87 및 AsPC-1의 세포 표면에 대한 항-MSLN 항체-IgG1 Fc 융합 단백질의 용량-의존성 결합을 나타낸다.
도 6a는 단독으로 또는 항-메소텔린 항체 MORAb-009, R2G12, R3C7, 또는 R3D5와 함께 NK 세포로 치료한 후 남아있는 종양 세포 수를 나타낸다. 도 6b(NCI-H226), 도 6c(OVCAR3), 도 6d(NCI-N87) 및 도 6e(AsPC-1)는 4개의 사람 암 세포주에 대한 항-MSLN 항체 R2G12 및 R3C7의 NK 세포-매개된 항체 의존성 세포 세포독성 용량-반응 곡선을 나타낸다.
도 7은 단독으로 또는 항-메소텔린 항체 P303, P303F, 또는 MORAb-009와 함께 NK 세포로 치료한 후 남아있는 종양 세포 수를 나타낸다.
도 8a 내지 도 8c는 항-메소텔린 항체 P303, P303F, P197 및 P197F와 함께 NK 세포로 치료한지 48시간 후 N87 세포(도 8a), H226 세포(도 8b), 및 CT26/MSLN 세포(도 8c)의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 9a는 항-메소텔린 항체 MORAb, P303F, P303, P197F 또는 P197로 치료한 후 N87 종양을 지닌 SCID 마우스의 동물 모델에서 종양 용적의 변화를 나타낸다. 도 9b는 항-메소텔린 항체 P197로 치료한 후 N87 종양을 지닌 NSG 마우스의 동물 모델에서 종양 용적의 변화를 나타낸다. 도 9c는 항-메소텔린 항체 P303F로 치료한 후 CT26/MSLN 종양을 지닌 BALB/c 마우스의 동물 모델에서 종양 용적의 변화를 나타낸다.
도 10a는 항-HSA 항체 AWT-P367(즉, P367) 및 이의 사람화된 항-AWT-P494(즉, P494)와 사람, 원숭이 또는 마우스 알부민의 결합을 나타낸다. 도 10b는 AWT-P367 또는 AWT-494와 사람, 원숭이 또는 마우스 알부민의 결합의 KD를 나타낸다.
도 11은 단독으로 또는 도에 나타낸 바와 같은 연구 약물과 함께 NK 세포로 치료한 후 N87 세포의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 12는 단독으로, 또는 a) 헤르셉틴 단독, b) P303F 단독, c) 헤르셉틴 및 P303F, 또는 d) 헤르셉틴, P303F, 및 IL-21-항-HSA 융합 단백질 P394와 함께 NK 세포로 치료한 후 N87 세포의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 13은 a) P303F, b) P303F 및 재조합 사람 IL-21(즉, rhIL-21), c) P303F 및 P480, 또는 d) P303F 및 재조합 사람 IL-15(즉, rhIL-15)와 함께 NK 세포로 치료한 후 N87 세포의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 14는 a) P303F, b) P303F 및 재조합 사람 IL-21(즉, rhIL-21), c) P431/P435, 또는 d) P545/P435와 함께 NK 세포로 치료한 후 N87 세포의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 15는 a) P480, b) P597, 또는 c) rIL-15(상부 패널) 및 3개의 약물의 IC50(하부 패널)과 함께 NK 세포로 치료한 후 N87 세포의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 16은 a) 항-메소텔린 항체 P129(즉, R2G12) 및 P126(즉, 사람 IL-21-R2G12-IgG1 융합체), b) P129 및 IL-21, c) P129 및 P107(사람 IL-21-IgG1 융합체), d) P129 및 P325(사람 IL-21-R2D2 융합체), 또는 e) P129 및 P286/288(사람 IL-21-R3C7-IgG1-R2G12)과 함께 NK 세포로 치료한 후 H226 세포의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 17은 a) P197 및 P390; 또는 b) P197 및 P394와 함께 NK 세포로 치료한 후 N87 세포의 남아있는 세포 수를 나타낸다.
도 18은 a) 25 μg의 P394, b) 100 μg의 P303F, c) 100 μg의 P303F 및 25 μg의 P394, 또는 d) 100 μg의 P303F 및 5 μg의 P394로 치료한 후 N87 종양을 지닌 NSG 마우스의 동물 모델에서 종양 용적의 변화를 나타낸다.
도 19는 단독으로 또는 a) 25 μg의 P390, b) 5 μg의 P390, 또는 c) 2.5 μg의 rmIL-21과 함께 100 pg의 P303F로 치료한 후 N87 종양을 지닌 SCID 마우스의 동물 모델에서 종양 용적의 변화를 나타낸다.
출원의 상세한 설명
본 개시내용은 IL-21 또는 이의 변이체를 포함하는 신규 융합 단백질을 제공한다. 본원에 제공된 융합 단백질은 IL-21 또는 이의 변이체, 알부민 결합 분자, 및 항원(예컨대, 암 항원)에 결합하는 결합 분자를 포함하고, 여기서 IL-21 또는 이의 변이체는 제1의 링커를 통해 알부민 결합 분자에 연결되고, 여기서 알부민 결합 분자는 제2의 링커를 통해 결합 분자에 연결된다. 도 1은 본원에 제공된 예시적인 융합 단백질을 나타낸다.
본원에 개시된 융합 단백질은 많은 장점을 제공한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 본 융합 단백질 내 암 항원(예컨대, MSLN과 같은 고형 종양 암 항원)은 암 근접성으로 IL-21을 국소 전달하여, 오프-표적(off-target) 독성을 저하시키고 효능을 증가시킬 수 있다.
특정의 장점은 이의 3차 구조 및 전체적인 구조 설계로 인하여 본 융합 단백질에 의해 제공된다. 예를 들면, 일부 구현예에서, IL-21을, MMP 민감성 링커를 사용하여 둠으로써, 결합 분자가 암 항원 및 ABD(또는 항-HSA)를 표적화한 후, IL-21과 IL-21R의 상호작용은 이의 N-말단(3차 구조에서 C-말단에 근접함)이 이의 상호작용에 필요하므로 일시적으로 차단된다. IL-21이 암 항원에 결합하면, 암 세포는 IL-21과 ABD 또는 항-알부민 항체를 절단할, 다양한 MMP를 배출하는 것으로 알려져 있기 때문에 융합 단백질로부터 방출된다. MMP 민감성 링커는 전형적으로 보다 높은 MMP 활성을 가진 암이 활성 IL-21에 대해 보다 높은 노출을 갖도록 보증한다. 따라서, IL-21의 불필요한 독성 및 부작용을 피할 수 있다. 또한, 이러한 구현예에서, 말초 면역 세포 상의 IL-21과 IL-21Rα 사이의 상호작용을 방지함으로써, IL-21 융합 단백질의 암 전달 효능을 증가시킬 수 있다.
특정의 구현예에서, 본원에 제공된 융합 단백질 속에 알부민 결합 분자의 존재는 순환 반감기를 증가시켜 알부민 결합 분자가 없는 융합 단백질과 비교하여 보다 긴 시간에 걸쳐 암에 대해 보다 높은 약물 노출을 생성할 수 있다.
특정의 구현예에서, 비교적 작은 분자량을 지닌 sdAb는 본원에 제공된 융합 단백질에 사용되며, 이는 융합 단백질의 암 침투를 증가시키는 것을 도와서, 이것이 특정의 암, 에컨대, 고형 종양 암을 치료하는데 우수하게 적합하도록 할 수 있다.
본원은 항-메소텔린에 특이적으로 결합하는 단일 도메인 항체를 포함하는 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하는 항-메소텔린 작제물을 제공한다. 일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물(예를 들면, 단일 도메인 항-MSLN 항체)은 유리한 효과(예를 들면, 종양 세포의 사멸, 예를 들면, 개체내에서 종양의 치료)를 나타낸다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 단일 도메인 항-MSLN 항체이다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 항-MSLN 항체 모이어티 및 제2의 도메인을 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 제2의 도메인는 반감기 연장 도메인이다. 일부 구현예에서, 제2의 도메인은 사이토킨이다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 a) 본원에 기술된 바와 같은 항-MSLN 항체 모이어티, b) 제2의 도메인(예를 들면, 반감기 연장 도메인), 및 c) 제3의 도메인(예를 들면, 사이토킨)을 포함하는 융합 도메인을 포함한다.
본원은 또한 항-메소텔린 작제물, 예를 들면, 본원에 기술된 것들 중 어느 것을 개체에게 투여함으로써 질환 또는 상태(예를 들면, 암)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 방법은 제2의 제제, 예를 들면, 사이토킨을 투여함을 추가로 포함한다.
본원은 또한 a) 항-메소텔린 작제물, 예를 들면, 본원에 기술된 바와 같은 항-MSLN 작제물 중 어느 것, b) 사이토킨(예를 들면, IL-21); c) 항-Her2 제제를 투여함을 포함하여, 질환(예를 들면, 암, 예를 들면, 메소텔린 양성 암, 예를 들면, 위암)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 상술한 방법에 기술된 바와 같은 조합 치료요법은 상승효과를 나타낸다.
또한, 본 개시내용은 암 항원(예컨대, MSLN)을 표적화하는 신규 항체를 제공하며, 본원에 제공된 융합 단백질의 일부인 경우, 암에 대해 효율적인 IL-21 전달을 허용한다.
특정의 구현예에서, 본원에 제공된 IL-21 융합 단백질 속의 하나 이상의 암 항원을 표적화하는 다수의 항체를 가짐으로써 장점이 부여된다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 암 항원(예컨대, MSLN)의 상이한 도메인을 각각 표적화하는 2개의 sdAb는 암 세포 결합의 항원항체결합력(avidity)을 증가시킨다.
상기 언급한 및 다른 특성은 본원에 제공된 융합 단백질이 암 치료요법에 대해 유리한 후보물이 되도록 한다.
정의
본원에 기술되거나 언급된 기술 및 과정은 당해 분야의 기술자에 의해 통상의 방법론, 예를 들면, 문헌: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3d ed. 2001); Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 2003); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed. 2009); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar ed. 2010); 및 Antibody Engineering Vols 1 및 2 (Kontermann and Dubel eds., 2d ed. 2010)에 기술된 광범위하게 활용된 방법론을 사용하여 일반적으로 잘 이해되고/되거나 통상적으로 사용된 것을 포함한다.
본원에 달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 기술적 및 과학적 용어는 당해 분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이히하는 의미를 갖는다. 본 명세서의 해석 목적을 위해, 다음의 용어의 설명이 적용될 것이며 적절한 경우에는 언제나, 단수로 사용된 용어는 또한 복수를 포함할 것이고 이의 역도 포함한다. 나타낸 용어의 임의의 설명이 참고로 본원에 포함된 임의의 서류와 충돌하는 경우, 하기 나타낸 용어의 설명이 제어할 것이다.
용어 "결합 분자"는 표적 또는 항원 및, 임의로 결합 부위가 결합 단백질의 폴리펩타이드, 단편, 또는 에피토프에 대한 결합을 촉진하는 구조를 채택하도록 하는 스캐폴드(scaffold) 또는 골격 부위(예컨대, 하나 이상의 스캐폴드 또는 골격 영역)에 결합하는 부위(예컨대, 하나 이상의 결합 영역, 예를 들면, CDR)을 포함하는 단백질을 지칭한다. 본 개시내용의 맥락에서, 결합 분자는 예를 들어, 해리 상수(KD)가 ≤10-6 M인 경우, 항원에 대해 특이적으로 결합하거나 선택적으로 결합한다고 일컬어진다. 일부 구현예에서, 결합 분자는 항원에 대해 약 10-6 M 내지 약 10-12 M의 KD로 특이적으로 결합할 수 있다. 특정의 구현예에서, 결합 분자는 KD가 ≤ 10-7 M이거나 KD가 ≤ 10-8 M인 경우 고 친화성으로 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 일 구현예에서, 결합 분자는 OCTET®으로 측정하여 1 x 10-8 M 내지 10 x 10-8 M의 KD로 정제된 사람 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 일 구현예에서, 결합 분자는 OCTET®으로 측정하여 1 x 10-9 M 내지 10 x 10-9 M의 KD로 정제된 사람 항원에 특이적으로 결합할 수 있다. 여전히 다른 구현예에서, 결합 분자는 0.1 x 10-9 M 내지 10 x 10-9 M의 KD로 세포 상에 발현된 사람 항원에 특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 결합 분자는 약 0.1 x 10-9 M , 약 0.5 x 10-9 M, 약 1 x 10-9 M, 약 5 x 10-9 M, 약 10 x 10-9 M, 또는 이의 임의의 범위 또는 간격의 KD로 세포 상에 발현된 사람 항원에 특이적으로 결합한다. 용어 "결합 분자"는 항체 및 항체로부터 유래된 분자를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "결합 분자"는 완전한 모 항체(parental intact antibody)와 비교하여 항원에 대해 비교적 보다 낮는 친화성을 갖는 항체 단편(예컨대, 단일 도메인 항체)을 포함한다.
용어 "항체", "면역글로불린", 또는 "Ig"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 광범위한 의미로 사용되고 구체적으로, 예를 들면, 모노클로날 항체(효능제(agonist), 길항제, 중화 항체, 전체 길이 또는 완전한 모노클로날 항체 포함), 다중에피토프성(polyepitopic) 또는 단일에피토프성(monoepitopic) 특이성을 지닌 항체 조성물, 후술된 바와 같이, 적어도 2개의 완전한 항체, 단일 쇄 항체, 및 이의 단편으로부터 형성된, 폴리클로날 또는 1가 항체, 다가 항체, 다특이적 항체(예컨대, 이들이 목적한 생물학적 활성을 나타내는 한 이특이적 항체)를 포함한다. 항체는 사람, 사람화된, 키메라 및/또는 친화성 성숙될 수 있는 항체 뿐만 아니라 다른 종, 예를 들면, 마우스 및 토끼 등으로부터의 항체도 포함한다. 용어 "항체"는 특이적인 분자 항원에 결합할 수 있는 폴리펩타이드의 면역글로불린 부류내 B 세포의 폴리펩타이드 생성물을 포함하는 것으로 의도되며 폴리펩타이드 쇄의 2개의 동일한 쌍으로 구성되고, 여기서 각각의 쌍은 하나의 중쇄(약 50 내지 70 kDa) 및 하나의 경쇄(약 25 kDa)를 가지며, 각각의 쇄의 각각의 아미노-말단 부위는 약 100 내지 약 130개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 각각의 쇄의 각각의 카복시-말단 부위는 불변 영역(constant region)을 포함한다. 예컨대, 문헌: Antibody Engineering (Borrebaeck ed., 2d ed. 1995); 및 Kuby, Immunology (3d ed. 1997)을 참조한다. 구체적인 구현예에서, 특이적인 분자 항원은 폴리펩타이드 또는 에피토프(epitope)를 포함하는, 본원에 제공된 항체에 의해 결합될 수 있다. 항체는 또한 합성 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 카멜화된 항체 또는 이의 사람화된 변이체, 인트라보디(intrabody), 항-유전자형(anti-idiotypic)(항-Id) 항체, 및 상기 어느 것의 기능성 단편(예컨대, 항원-결합 단편)을 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 이는 이로부터 단편이 유래된 항체의 결합 활성 중 일부 또는 모두를 보유하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드의 부위를 지칭한다. 기능성 단편(예컨대, 항원-결합 단편)의 비-제한적 예는 단일-쇄 Fv(scFv)(예컨대, 일특이적, 이특이적 등), Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, 이황화물-연결된 Fv(dsFv), Fd 단편, Fv 단편, 디아보디(diabody), 트리아보디(triabody), 테트라보디(tetrabody), 및 미니보디(minibody)를 포함한다. 특히, 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부위, 예를 들면, 항원에 결합하는 항원-결합 부위(예컨대 항원의 하나 이상의 CDR)를 함유하는 항원-결합 도메인 또는 분자를 포함한다. 이러한 항체 단편은 예를 들면, 문헌: Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989); Mol. Biology 및 Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers ed., 1995); Huston et al., 1993, Cell Biophysics 22:189-224; Pluckthun and Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178:497-515; 및 Day, Advanced Immunochemistry (2d ed. 1990)을 포함한다. 본원에 제공된 항체는 면역글로붙린 분자의 임의의 부류(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA) 또는 임의의 서브클래스(subclass)(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)일 수 있다. 항체는 효능성 항체 또는 길항성 항체일 수 있다.
"항원"은 이에 대해 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 구조이다. 표적 항원은 폴리펩타이드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐(hapten), 또는 다른 천연적으로 존재하거나 합성인 화합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 폴리펩타이드이다. 특정의 구현예에서, 항원은 세포와 관련되며, 예를 들면, 세포, 예를 들면, 암 세포(예컨대, 고형 종양 암 세포) 상에 또는 속에 존재한다.
"완전한" 항체는 항원-결합 부위 뿐만 아니라 CL 및 적어도 중쇄 불변 영역, CH1, CH2 및 CH3도 포함하는 것이다. 불변 영역은 사람 불변 영역 또는 이의 아미노산 서열 변이체를 포함할 수 있다. 특정의 구현예에서, 완전한 항체는 하나 이상의 효과기(effector) 기능을 갖는다.
용어 "항원-결합 단편", "항원-결합 도메인", "항원-결합 영역", 및 유사한 용어는 결합 분자의 이러한 부위를 지칭하며, 이는 항원과 상호작용하여 항원(예컨대, CDR)에 대해 이의 특이성 및 친화성을 부여하는 아미노산 잔기를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "항원-결합 단편"은 "항체 단편"을 포함하며, 이는 완전한 항체의 부위, 예를 들면, 완전한 항체의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아보디 및 디-디아보디(참고: 예컨대, Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-48; Lu et al., 2005, J. Biol. Chem. 280:19665-72; Hudson et al., 2003, Nat. Med. 9:129-34; WO 93/11161; 및 미국 특허 제5,837,242호 및 제6,492,123호); 단일-쇄 항체 분자(참고: 예컨대, 미국 특허 제4,946,778호; 제5,260,203호; 제5,482,858호; 및 제5,476,786호); 이중 가변 도메인 항체(참고: 예컨대, 미국 특허 제7,612,181호); 단일 가변 도메인 항체(sdAb)(참고: 예컨대, Woolven et al., 1999, Immunogenetics 50: 98-101; 및 Streltsov et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49); 및 항체 단편으로부터 형성된 다특이적 항체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 "단일 도메인 항체" 또는 "sdAb"는 이의 상보성 결정 영역이 단일 도메인 폴리펩타이드의 부위인 항체를 지칭한다. 예는 중쇄 항체, 경쇄가 천연적으로 없는 항체, 통상의 4-쇄 항체로부터 유래된 단일 도메인 항체, 가공된 항체 및 항체로부터 유래된 것 이외의 단일 도메인 스캐폴드를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 단일 도메인 항체는 당해 분야의 임의의 것, 또는 임의의 미래의 단일 도메인 항체일 수 있다. 단일 도메인 항체는 마우스, 사람, 낙타, 라마(llama), 염소, 토끼, 소를 포함하나, 이에 한정되지 않는 임의의 종(species)으로부터 유래될 수 있다. 본 발명의 일 양태에 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 단일 도메인 항체는 경쇄가 없는 중쇄 항체로 공지된 단일 도메인 항체이다. 이러한 단일 도메인 항체는 예를 들면, 제WO 9404678호에 개시되어 있다. 명확성 이유로, 특정의 예에서, 경쇄가 천연적으로 없는 중쇄 항체로부터 유래된 이러한 가변 도메인은 4개의 쇄 면역글로불린의 통상의 VH로부터 이를 구별하기 위해 VHH 또는 나노보디로 본원에 공지되어 있다. 이러한 VHH 분자는 카멜리다에(Camelidae) 종에서, 예를 들면, 낙타, 단봉 낙타(dromedary), 알파카(alpaca) 및 구나나코(guanaco)에서 생성된 항체로부터 유래될 수 있다. 카멜리다에 외에 다른 종은 경쇄가 천연적으로 없는 중쇄 항체를 생산할 수 있으며; 이러한 VHH는 본 발명의 영역내에 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 도메인 항체는 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4의 구조를 갖는다.
용어 "결합하다" 또는 "결합하는"은 예를 들면, 복합체를 형성하는 것을 포함하는 분자 사이의 상호작용을 지칭한다. 상호작용은 예를 들면, 비-공유결합성 상호작용, 예를 들면 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용, 및/또는 반 데르 바알스 상호작용(van der Waals interaction)일 수 있다. 복합체는 또한 공유 결합 또는 비-공유결합성 결합, 상호작용, 또는 힘에 의해 함께 유지된 2개 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체 상의 단일 항원-결합 부위와 표적 분자, 예를 들면, 항원의 단일 에피토프 사이의 총 비-공유결합성 상호작용의 강도는 이러한 에피토프에 대한 항체 또는 작용성 단편의 친화성이다. 결합 분자(예컨대, 항체) 대 1가 항원의 해리 속도(dissociation)(koff) 대 결합 속도(association)(kon)의 비는 해리 상수 KD이며, 이는 친화성에 대해 역으로 비례한다. KD 값이 낮을 수록, 항체의 친화성은 더 높아진다. KD의 값은 항체 및 항원의 상이한 복합체에 따라 변하며 kon 및 koff 둘 다에 의존한다. 본원에 제공된 항체에 대한 해리 상수 KD는 본원에 제공된 임의의 방법 또는 당해 분야의 기술자에게 공지된 임의의 다른 방법을 사용하여 측정할 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화성은 항체와 항원 사이의 상호작용의 진정한 강도를 항상 반영하지는 않는다. 다수의, 반복된 항원성 결정인자, 예를 들면, 다가 항원을 함유하는 복합체 항원이 다수의 결합 부위를 함유하는 항체와 접촉하게 되면, 하나의 부위에서 항체와 항원의 상호작용은 제2 부위에서의 반응 가능성을 증가시킬 것이다. 다가의 항체와 항원 사이에 이러한 다수의 상호작용의 강도는 항원항체결합력으로 불린다.
본원에 기술된 결합 분자와 관련하여, "~에 결합한다", "~에 특이적으로 결합한다"와 같은 용어 및 유사한 용어는 또한 본원에서 상호교환적으로 사용되며 항원, 예를 들면, 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인의 결합 분자를 지칭한다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 관련 항원과 교차-반응성일 수 있다. 특정의 구현예에서, 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 다른 항원과 교차-반응하지 않는다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결함하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 예를 들면, 면역검정, Octet®, Biacore®, 또는 당해 분야의 기술자에게 공된 다른 기술에 의해 확인할 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 실험 기술, 예를 들면, 방사선면역검정(RIA) 및 효소 결합된 면역흡착성 검정(ELISA)을 사용하여 측정된 것으로서 임의의 교차-반응성 항원에 대해 보다 높은 친화성으로 항원에 결합하는 경우 항원에 결합하거나 특이적으로 결합한다. 전형적으로 구체적인 또는 선택적인 반응은 배경 신호(background signal) 또는 노이즈(noise)의 적어도 2배일 것이고 배경의 10배 이상일 수 있다. 예컨대, 결합 특이성과 관련한 논의에 대해 문헌: Fundamental Immunology 332-36 (Paul ed., 2d ed. 1989)을 참고한다. 특정의 구현예에서, "비-표적" 단백질에 대한 결합 분자 또는 항원 결합 도메인의 결합 정도는 형광성 활성화된 세포 분류(FACS) 분석 또는 RIA에 의해 측정된 바와 같이, 이의 특수한 표적 항원에 대한 결합 분자 또는 항원 결합 도메인의 결합의 10% 미만이다. 용어, 예를 들면, "특이적인 결합"과 관련하여, "~에 특이적으로 결합하다", 또는 "~에 대해 특이적인"은 비-특이적인 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적인 결합은 예를 들면, 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 측정함으로써 측정할 수 있으며, 이는 일반적으로 결합 활성을 가지지 않는 유사한 구조의 분자이다. 예를 들면, 특이적인 결합은 표적, 예를 들면, 과도한 비-표지된 표적과 유사한 대조군 분자와 경쟁함으로써 측정할 수 있다. 이러한 경우에, 특이적인 결합은 프로브(probe)에 대한 표지된 표적의 결합이 과도한 표지되지 않은 표적에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 나타낸다. 항원에 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 결합 분자가 예를 들면, 항원을 표적화하는데 있어서 진단 제제로서 유용하도록 하기에 충분한 친화성으로 항원과 결합할 수 있는 것을 포함한다. 특정의 구현예에서, 항원에 결합하는 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 1000 nM, 800 nM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수(KD)를 갖는다. 특정의 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 상이한 종(예컨대, 사람과 시노(cyno) 종 사이)으로부터의 항원 중에 보존된 항원의 에피토프에 결합한다.
"결합 친화성"은 일반적으로 분자의 단일 결합 부위(예컨대, 항체와 같은 결합 단백질)와 이의 결합 파트너(예컨대, 항원) 사이의 비공유결합성 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 것으로서, "결합 친화성"은 결합 쌍의 구성원(예컨대, 항체 및 항원) 사이에 1:1 상호작용을 반영하는 고유의 결합 친화성을 지칭한다. 이의 결합 파트너 Y에 대한 결합 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화성은 본원에 기술된 것과 같은 것을 포함하여, 당해 분야에 공지된 일반적인 방법으로 측정할 수 있다. 저 친화성 항체는 일반적으로 항원에 느리게 결합하며 용이하게 해리되는 경향이 있는 반면, 고-친화성 항체는 일반적으로 항원에 보다 신속하게 결합하고 보다 길게 결합을 유지하는 경향이 있다. 결합 친화성을 측정하는 다양한 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며, 이중 어느 것도 본 개시내용의 목적을 위해 사용할 수 있다. 구체적인 예시적 구현예는 다음을 포함한다. 일 구현예에서, "KD" 또는 "KD 값"은 당해 분야에 공지된 검정, 예를 들면, 결합 검정으로 측정할 수 있다. KD는 예를 들면, 목적한 항체와 이의 항원의 Fab 버젼을 사용하여 수행된 RIA에서 측정될 수 있다(Chen et al., 1999, J. Mol Biol 293:865-81). KD 또는 KD 값은 또한 바이오레이어 간섭계(biolayer interferometry: BLI) 또는 예를 들면 Octet®Red96 시스템을 사용하는 Octet®에 의해, 또는 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용하는 Biacore®에 의해 표면 플라스몬 공명(SPR) 검정을 사용함으로써 측정할 수 있다. "온-속도(on-rate)" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"은 또한 예를 들면, Octet®Red96, Biacore®TM-2000, 또는 Biacore®TM-3000 시스템을 사용하여 상술한 동일한 바이오레이어 간섭계(biolayer interferometry: BLI) 또는 표면 플라스몬 공명(SPR)으로 측정할 수 있다.
특정의 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 "키메라" 서열을 포함할 수 있으며 여기서 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특수한 종으로부터 유래되거나 특수한 항체 부류 또는 소부류에 속하는 항체내 상응하는 서열과 동일하거나 이와 상동성이지만, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 부류 또는 소 부류에 속하는 항체내 상응하는 서열 뿐만 아니라, 이들이 목적한 생물학적 활성을 나타내는 한, 이러한 항체의 단편과 동일하거나 상동성이다(참고: 미국 특허 제4,816,567호; 및 Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-55).
특정의 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 사람 면역글로불린(예컨대, 수용체 항체)을 포함하는 키메라 항체인 비사람(예컨대, 쥐) 항체의 "사람화된" 형태의 일부를 포함할 수 있으며 여기서 천연의 CDR 잔기는 비사람 종(예컨대, 공여체 항체), 예를 들면, 마우스, 랫트, 토끼, 또는 목적한 특이성, 친화성, 및 능력을 갖는 비사람 영장류의 상응하는 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된다. 일부 예에서, 사람 면역글로불린의 하나 이상의 FR 영역 잔기는 상응하는 비사람 잔기에 의해 대체된다. 또한, 사람화된 항체는 수용체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않은 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체의 성능을 추가로 개선시키기 위해 제조된다. 사람화된 항체 중쇄 또는 경쇄는 실질적으로 모든 적어도 하나 이상이 가변 영역을 포함할 수 있으며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR은 비사람 면역글로불린의 것에 상응하고 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 사람 면역글로불린 서열의 것이다. 특정의 구현예에서, 사람화된 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 사람 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 추가의 세부사항에 대해서는 문헌: Jones et al., 1986, Nature 321:522-25; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-29; Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-96; Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89; 미국 특허 제6,800,738호; 제6,719,971호; 제6,639,055호; 제6,407,213호; 및 제6,054,297호를 참고한다.
특정의 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 "완전한 사람 항체" 또는 "사람 항체"의 일부를 포함할 수 있으며 여기서 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용되고 사람 가변 영역 및, 예를 들면, 사람 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 구체적인 구현예에서, 용어는 사람 기원의 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. "완전한 사람" 항체는, 특정의 구현예에서, 또한 폴리펩타이드에 결합하고 사람 배선 면역글로불린 핵산 서열의 천연적으로 존재하는 체세포 변이체인 핵산 서열에 의해 암호화된 항체를 포함할 수 있다. 용어 "완전한 사람 항체"는 라밧(Rabat) 등의 문헌(참고: Rabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)에 기술된 바와 같은 사람 배선(germline) 면역글로불린에 상응하는 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. "사람 항체"는 사람에 의해 생산되고/되거나 사람 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 항체의 것에 상응하는 아미노산 서열을 지닌 것이다. 사람 항체의 이러한 정의는 구체적으로 비-사람 항원-결합 잔기를 포함하는 사람화된 항체는 배제한다. 사람 항체는 파아지-디스플레이 라이브러리(phage-display library)(Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581) 및 효모 디스플레이 라이브러리(Chao et al., 2006, Nature Protocols 1: 755-68)를 포함하는, 당해 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 또한 문헌: Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol. 147(1):86-95; 및 van Dijk and van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74에 기술된 방법이 사람 모노클로날 항체의 제조에 이용가능하다. 사람 항체는 변형되어 항원성 챌린지에 대한 반응시 이러한 항체를 생산하지만, 이의 내잉성 유전자자리(locus)가 망가진(disabled) 이식유전자 동물, 예컨대, 마우스에게 항원을 투여함으로써 제조할 수 있다(참고: 예컨대, Jakobovits, 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66; Bruggemann and Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58; 및 XENOMOUSETM 기술과 관련된 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호). 또한, 예를 들면, 사람 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 사람 항체에 관한 문헌: Li et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:3557-62을 참고한다.
특정의 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 "재조합 사람 항체"의 일부를 포함할 수 있으며, 여기서 어구는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창조되거나 단리된 사람 항체, 예를 들면, 숙주 세포내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 사람 면역글로불린 유전자에 대해 이식유전자성 및/또는 트랜스염색체성(transchromosomal)인 동물(예컨대, 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체(참고: 예컨대, Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) 또는 사람 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DN서열에 대해 스플라이싱함을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 창조되거나 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 사람 항체는 사람 배선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다(참고: Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). 그러나, 특정의 구현예에서, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는 사람 Ig 서열에 대해 이식유전자성인 동물이 사용되는 경우, 생체내(in vovo) 체세포 돌연변이유발)에 적용되므로 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 사람 배선 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 이와 관련되지만, 생체내 사람 항체 배선 레퍼토리 내에 천연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
특정의 구현예에서, 결합 분자 또는 항원 결합 도메인은 "모노클로날 항체"의 일부를 포함할 수 있으며, 여기서 본원에 사용된 바와 같은 용어는 실질적으로 상동성인 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 예컨대, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연적으로 존재하는 돌연변이를 제외하고는 동일한 집단을 포함하는 개개 항체를 지칭하며, 각각의 모노클로날 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 구체적인 구현예에서, 본원에 사용된 바와 같은 "모노클로날 항체"는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포에 의해 생산된 항체이다. 용어 "모노클로날"은 항체를 제조하기 위한 임의의 특수한 방법에 제한되지 않는다. 예를 들면, 본 개시내용에 유용한 모노클로날 항체는 문헌: Kohler et al., 1975, Nature 256:495에 최초 기술된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 세균 또는 진핵 동물 또는 식물 세포내에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조될 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제4,816,567호). "모노클로날 항체"는 또한 예를 들면, 문헌: Clackson et al., 1991, Nature 352:624-28 및 Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581-97에 기술된 기술을 사용하여 파아지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다. 클로날 세포주의 제조를 위한 다른 방법 및 이에 의해 발현된 모노클로날 항체는 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 예컨대, 문헌: Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 5th ed. 2002)을 참고한다.
대표적인 4-쇄 항체 단위는 2개의 동일한 경(L)쇄 및 2개의 동일한 중(H) 쇄로 구성된 헤테로사량체성 당단백질이다. IgG의 경우에, 4-쇄 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤(dalton)이다. 각각의 L 쇄는 1개의 공유결합성 이황화물 결합에 의해 H 쇄에 연결되지만, 2개의 H 쇄는 H 쇄 동형에 따라 하나 이상의 이황화물 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L 쇄는 또한 일정하게 떨아진 쇄간 이황화물 브릿지(disulfide bridge)를 갖는다. 각각의 H 쇄는 N-말단에서, α 및 γ 쇄 각각에 대해 가변 도메인(VH)에 이어서 3개의 불변 도메인(CH) 및 μ 및 ε 동형에 대해 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 쇄는 N-말단에서, 이의 다른 말단에 가변 도메인(VL)에 이어서 불변 도메인(CL)을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄(CH1)의 처음 불변 도메인과 정렬된다. 특수한 아미노산 잔기는 경쇄 도메인과 중쇄 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 여겨진다. VH 및 VL이 함께 쌍화(pairing)하는 것은 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는 예를 들면, 문헌: Basic and Clinical Immunology 71 (Stites et al. eds., 8th ed. 1994); 및 Immunobiology (Janeway et al. eds., 5th ed. 2001)를 참고한다.
용어 "Fab" 또는 "Fab 영역"은 항원에 결합하는 항체 영역을 지칭한다. 통상의 IgG는 일반적으로 2개의 Fab 영역을 포함하며, 각각은 Y-유형의 IgG 구조의 2개의 아암(arm) 중 하나에 잔류한다. 각각의 Fab 영역은 전형적으로 각각의 중쇄 및 경쇄의 하나의 가변 영역 및 하나의 불변 영역으로 구성된다. 보다 구체적으로, Fab 영역내 중쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VH 및 CH1 영역이고, Fab 영역내 경쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VL 및 CL 영역이다. Fab 영역내 VH, CH1, VL, 및 CL은 다양한 방식으로 배열되어 본 개시내용에 따른 항원 결합능을 부여한다. 예를 들면, VH 및 CH1 영역은 하나의 폴리펩타이드 상에 존재할 수 있고, VL 및 CL 영역은 통상의 IgG의 Fab 영역과 유사하게, 별도의 폴리펩타이드 상에 존재할 수 있다. 대안적으로, VH, CH1, VL 및 CL 영역은 모두 동일한 폴리펩타이드 상에 존재할 수 있고 하기 단락에 보다 상세히 기술된 바와 같이 상이한 순서로 배향될 수 있다.
용어 "가변 영역", "가변 도메인", "V 영역", 또는 "V 도메인"은 경쇄 또는 중쇄의 아미노 말단에 일반적으로 위치하며 중쇄내에서 약 120 내지 130개 아미노산의 길이 및 경쇄 내에 약 100 내지 110개 아미노산의 길이를 갖고 이의 특수한 항원에 대한 각각의 특수한 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다. 중쇄의 가변 영역은 "VH"로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 "VL"로서 지칭될 수 있다. 용어 "가변"은 가변 영역의 특정의 분절(segment)이 항체내 서열에서 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 영역은 항원 결합을 매개하며 이의 특수한 항원에 대한 특수한 항체의 특이성을 정의한다. 그러나, 가변성은 가변 영역의 110개 아미노산 전장(span)에 걸쳐 균일하게 분포하지 않는다. 대신에, V 영역은 각각 약 9 내지 12개 아미노산 길이인 "초가변 영역"으로 불리는 보다 큰 가변능(예컨대, 극도의 가변능)의 보다 짧은 영역에 의해 분리된 약 15 내지 30개 아미노산의 골격 영역(FR)으로 불리는 거의 가변성이 아닌(예컨대, 비교적 불변인) 스트레치(stretch)로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 영역은 3개의 초가변 영역에 의해 연결된, β 시이트 구조(sheet configuration)를 주로 채택하는 4개의 FR을 포함하며, 이는 루프 연결을 형성하고, 일부 경우에, β 시이트 구조의 일부를 형성한다. 각각의 쇄내 초가변 영역은 FR에 의해 매우 근접하게 함께 유지되며, 다른 쇄로부터의 초가변영역과 함께, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다(참고: 예컨대, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th ed. 1991)). 불변 영역은 항원에 대한 항체의 결합시 직접 관련되지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예를 들면, 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)에 있어서 항체의 관여 및 보체 의존성 세포독성(CDC)을 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체 사이에서 서열이 매우 상이하다. 구체적인 구현예에서, 가변 영역은 사람 가변 영역이다.
용어 "라밧(Rabat)에 따른 가변 영역 잔기 번호매김" 또는 "라밧에서와 같은 아미노산 위치 번호매김", 및 이의 변형은 라밧 등의 문헌(상기 참고)에서 항체의 순응도의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 대해 사용된 번호매김 시스템을 지칭한다. 이러한 번호매김 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축, 또는 FR 또는 CDR 내로의 삽입에 상응하는 보다 적거나 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인은 52번 잔기 이후 단일 아미노산 삽입물(라밧에 따른 잔기 52a) 및 82번 잔기 이후 3개의 삽입된 잔기(예컨대, 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 라밧 번호매김은 항체의 서열과 "표준" 라밧 번호매김된 서열의 상동성 영역에서 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 측정할 수 있다. 카밧 번호매김 시스템은 일반적으로 가변 도메인내 잔기(경쇄의 대략 1 내지 107번 잔기 및 중쇄의 1 내지 113번 잔기)를 지칭하는 경우 사용된다(예를 들면, 카밧 등, 상기 참조). "EU 번호매김 시스템" 또는 "EU 지표"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역(예컨대, 카밧 등의 문헌(상기 참고)에 보고된 EE† 지표)내 잔기를 지칭하는 경우에 사용된다. "카밧에서와 같은 EE† 지표"는 사람 IgG 1 EE† 항체의 잔기 번호매김을 지칭한다. 다른 번호매김 시스템은 예를 들면, AbM, 초티아(Chothia), 컨택트(Contact), IMGT, 및 AHon에 의해 기술되어 왔다.
용어 "중쇄"는 항체를 참고하여 사용된 경우 약 50 내지 70 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부위는 약 120 내지 130개 이상의 가변 영역을 포함하고, 카복시-말단 부위는 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 기반으로, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ), 및 뮤(μ)로 지칭된 5개의 명확한 유형(예컨대, 동형) 중 하나일 수 있다. 명백한 중쇄는 크기가 상이한데: α, δ, 및 γ는 대락 450개의 아미노산을 함유하는 반면, μ 및 ε는 대략 550개의 아미노산을 함유한다. 경쇄와 조합되는 경우, 이러한 명백한 유형의 중쇄는 IgG의 4개의 소 부류, 즉, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하는, 항체의 5개의 잘 공지된 부류(예컨대, 동형)인, IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 각각을 생성한다.
용어 "경쇄"는 항체를 참고로 사용되는 경우 약 25 kDa의 폴리펩타이드 쇄를 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부위는 약 100 내지 약 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카복시-말단 부위는 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 211 내지 217개 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 카파(κ) 또는 람다(λ)로서 지칭된, 2개의 명백한 유형이 존재한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "초가변 영역", "HVR", "상보성 결정 영역", 및 "CDR"은 상호교환적으로 사용된다. "CDR"은 면역글로불린(Ig 또는 항체) VH β-시이트 골격의 비-골격 영역내 3개의 초가변 영역 중 하나, 또는 항체 VL β-시이트 골격의 비-골격 영역내 3개의 초가변 영역(L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은 골격 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다.
CDR 영역은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있고 잘 공지된 번호매김 시스템에 의해 정의된다. 예를 들면, 카밧 상보성 결정 영역(CDR)은 서열 가변성을 기반으로 하며 가장 일반적으로 사용된다(참고: 예컨대, Kabat et al., 상기 참고). 초티아(Chothia)는 대신 구조적 루프의 위치를 지칭한다(참고: 예컨대, Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17). 초티아 CDR-H1 루프의 말단은, 카밧 번호매김 협약을 사용하여 번호매김한 경우, 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다(이는 카밧 번호매김 계획이 H35A 및 H35B에서 삽입물을 두기 때문이며; 35A 또는 35B가 존재하지 않는 경우, 루프는 32번에서 끝나고; 35A 만이 존재하는 경우, 루프는 33번에서 끝나고; 35A 및 35B 둘 다가 존재하는 경우, 루프는 34번에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 카밧 CDR과 초티아 구조적 루프 사이에서 절충물(compromise)을 나타내며 옥스포드 분자 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody modeling software)에 의해 사용된다(참고: 예컨대, Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann and Dubel eds., 2d ed. 2010)). "접촉" 초가변 영역은 이용가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 개발되어 광범위하게 채택된 다른 보편적인 번호매김 시스템은 ImMunoGeneTics (IMGT) Information System®(Lafranc et al., 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77)이다. IMGT은 사람 및 다른 척추동물의 면역글로불린(IG), T-세포 수용체(TCR), 및 주요 조직접합성 복합체(MHC)내에서 구체화되는 통합 정보 시스템이다. 여기서, CDR은 아미노산 서열 및 경쇄 또는 중쇄 내 위치 둘 다의 측면에서 지칭된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조내 CDR의 "위치"는 종들 사이에서 보존되어 있고 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열을 조정하는 번호매김 시스템을 사용함으로써 루프로 불린 구조 내에 존재하고, CDR 및 골격 잔기는 용이하게 확인된다. 이러한 정보는 하나의 종의 면역글로불린으로부터 전형적으로 사람 항체로부터의 수용체 골격내로 CDR 잔기의 이식 및 대체시 사용될 수 있다. 추가의 번호매김 시스템(additional numbering system: AHon)은 문헌: Honegger 및 Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70에 의해 개발되었다. 예를 들면, 카밧 번호매김 및 IMGT 유일한 번호매김 시스템(IMGT unique numbering system)을 포함하는, 번호매김 시스템 사이의 대응성은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있다(참고: 예컨대, Kabat, 상기 참고; Chothia and Lesk, 상기 참고; Martin, 상기 참고; Lefranc et al., 상기 참고). 이러한 초가변 영역 또는 CDR 각각으로부터의 잔기는 하기 나타낸다.
[표 1]
Figure pct00001
주어진 CDR의 경계부는 확인을 위해 사용된 계획에 따라 변할 수 있다. 따라서, 달리 정의하지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예를 들면, 가변 영역의 용어 "CDR" 및 "상보성 결정 영역" 뿐만 아니라 항체 또는 이의 영역의 개개의 CDR(예컨대, "CDR-H1, CDR-H2)은 상기 본원에 기술된 임의의 공지된 계획에 의해 정의된 바와 같은 상보성 결정 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 예에서, 특수한 CDR 또는 CDRs, 예를 들면, 카밧, 초티아, 또는 컨택트 방법에 의해 정의된 바와 같은 CDR의 확인을 위한 계획이 구체화되어 있다. 다른 경우에, CDR의 특수한 아미노산 서열이 주어진다.
초가변 영역은 다음과 같은 "연장된 초가변 영역"을 포함할 수 있다: VL 내에서 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2), 및 89-97 또는 89-96(L3), 및 VH 내에서 26-35 또는 26-35A(H1), 50-65 또는 49-65(H2), 및 93-102, 94-102, 또는 95-102(H3).
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관련되지 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 효과기 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카복시 말단 부위를 지칭한다. 이러한 용어는 항원 결합 부위를 함유하는, 면역글로불린의 다른 부위인, 가변 영역과 관련된 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부위를 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2, 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
용어 "골격" 또는 "FR"은 CDR을 플랭킹(flanking)하는 가변 영역 잔기를 지칭한다. FR 잔기는 예를 들면, 키메라, 사람화된, 사람, 도메인 항체, 디아보디, 선형 항체, 및 이특이적 항체 속에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 예를 들면, 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역, 및 변이체 Fc 영역을 포함하는, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계부가 변할 수 있다고 해도, 사람 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 위치 Cys226에서, 또는 Pro230로부터의 아미노산 잔기로부터 이의 카복실-말단까지의 스트레치(stretch)로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 번호매김 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들면, 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 암호화하는 핵산을 재조합적으로 가공함으로써 제거할 수 있다. 따라서, 완전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 존재하거나 존재하지 않는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. "기능적 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 "효과기 기능"을 지닌다. 예시적인 "효과기 기능"은 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식세포작용; 세포 표면 수용체(예컨대, B 세포 수용체)의 하향조절(downregulation) 등을 포함한다. 이러한 효과기 기능은 결합 영역 또는 결합 도메인(예컨대, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 조합될 Fc 영역을 필요로 하며 당해 분야의 기술자에게 공지된 다양한 검정을 사용하여 평가할 수 있다. "변이체 Fc 영역"은 적어도 하나의 아미노산 변형(예컨대, 치환, 첨가, 또는 결실)에 의해 천연 서열 Fc 서열의 것과는 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 특정의 구현예에서, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역과 비교하여 천연 서열 Fc 영역내에 또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역 내에 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들면, 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 또는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩타이드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 또는 이와 적어도 약 90% 상동성, 예를 들면, 이와 적어도 약 95% 상동성을 지닐 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "에피토프"는 당해 분야의 용어이며 이에 대해 결합 분자(예컨대, 항체)가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국재화된 영역을 지칭한다. 에피토프는 선형 에피토프 또는 구조적, 비-선형 또는 불연속 에피토프일 수 있다. 폴리펩타이드 항원의 경우, 예를 들어, 에피토프는 폴리펩타이드의 연속 아미노산("선형" 에피토프)일 수 있거나 에피토프는 폴리펩타이드의 2개 이상의 비-연속 영역으로부터의 아미노산("구조적", "비-선형" 또는 "불연속" 에피토프)을 포함할 수 있다. 일반적으로, 선형 에피토프가 2차, 3차, 4차 구조에 의존할 수 있거나 의존하지 않을 수 있음은 당해 분야의 기술자에게 명백해질 것이다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 결합 분자는 이들이 천연의 3차원 단백질 구조로 폴딩되는 것에 상관없이 아미노산의 그룹에 결합한다. 다른 구현예에서, 결합 분자는 에피토프가 특수한 구조(예컨대, 굽힘(bend), 트위스트(twist), 회전(turn) 또는 폴드(fold))를 나타내어 에피토프를 인식하여 결합하도록 하는 아미노산 잔기를 필요로 한다.
본원에 확인된 폴리펩타이드 및 항체 서열과 관련하여 "아미노산 서열 동일성 퍼센트(%)" 또는 "상동성"은 서열 동일성의 부분으로서 임의의 보존적 치환을 고려하는 서열을 정렬한 후, 비교되는 폴리펩타이드내 아미노산 잔기와 동일한 후보물 서열내 아미노산 잔기의 퍼센트로서 정의된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 결정하는 목적을 위한 정렬은 예를 들면, BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR), 또는 MUSCLE 소프트웨어와 같은 공공 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여, 당해 분야의 기술 내에 있는 다양한 방식으로 달성할 수 있다. 당해 분야의 기술자는 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대의 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는, 정렬을 측정하기에 적절한 매개변수를 측정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, 아미노산 동일성 % 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 MUSCLE(Edgar, R.C., Nucleic Acids Research 32(5):1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics 5(1):113, 2004)을 사용하여 생성시킨다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "사이토킨"은 임의의 단백질 또는 펩타이드, 이의 유사체 또는 기능성 단편을 의미하는 것으로 이해되며, 이는 포유동물에서 예비선택된 세포형, 예를 들면, 암 세포 또는 바이러스 감염된 세포에 대한 세포파괴성 면역 반응을 자극시키거나 유도할 수 있다. 따라서, 다양한 사이토킨을 이러한 적용에 혼입시킬 수 있는 것으로 고려된다. 유용한 사이토킨은 예를 들면, 종양 괴사 인자(TNF), 인터루킨(IL), 림포킨(Ls), 콜로니 자극 인자(CSF), 종 변이체를 포함하는 인터페론(IFN), 이러한 세포파괴성 면역 반응을 자극시키거나 유도시킬 수 있는 이의 트렁케이트된 유사체(truncated analog)를 포함한다. 유용한 종양 괴사 인자는, 예를 들면, TNFα를 포함한다. 유용한 림포킨은 예를 들면, LT를 포함한다. 유용한 콜로니 자극 인자는 예를 들면, GM-CSF 및 M-CSF를 포함한다. 유용한 인터루킨은 예를 들면, IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, IL22, 및 IL-33을 포함한다. 유용한 인터루킨은 예를 들면, IFN-α, IFN-α 및 IFN-γ를 포함한다. 용어 "사이토킨"은 또한 변형을 포함하고 임의의 이의 바람직한 기능 중 적어도 유의적인 일부(예를 들면, 적어도 약 50%)를 유지하는 야생형 사이토킨(예를 들면, IL-21, IL-7, IL-15 등)의 임의의 변이체를 포함하는 것으로 이해된다.
용어 "폴리펩타이드" 및 "펩타이드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭한다. 중합체는 직쇄 또는 측쇄일 수 있으며, 이는 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 이는 비-아미노산에 의해 차단될 수 있다. 용어는 또한 천연적으로 또는 개입(intervention), 예를 들면, 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 포스포릴화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 또한 예를 들면, 비천연 아미노산을 포함하나, 이에 한정되지 않는 아미노산의 하나 이상의 유사체 뿐만 아니라 당해 분야에 공지된 다른 변형도 함유하는 폴리펩타이드가 정의 내에 포함된다. 본 개시내용의 폴리펩타이드는 항체 또는 면역글로불린 상과(superfamily)의 다른 구성원을 기반으로 할 수 있기 때문에, 특정의 구현예에서, "폴리펩타이드"는 단일 쇄로서 또는 2개 이상의 관련된 쇄로서 발생할 수 있음이 이해된다.
용어 "벡터"는 예를 들면, 숙주 세포내로 핵산 서열을 도입시키기 위하여, 본원에 기술된 바와 같은 결합 분자(예컨대, 항체)를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는, 핵산 서열을 수반하거나 포함시키기 위해 사용되는 물질을 지칭한다. 사용에 적용될 수 있는 벡터는 예를 들면, 발현 벡터, 플라스미드, 파아지 벡터, 바이러스 벡터, 에피소옴, 및 인공 염색체를 포함하며, 이는 숙주 세포의 염색체내로의 안정한 통합을 위해 작동될 수 있는 마커 또는 선택 서열을 포함할 수 있다. 또한, 벡터는 하나 이상의 선택가능한 마커 유전자 및 적절한 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 포함될 수 있는 선택가능한 마커 유전자는 예를 들면, 항생제 또는 독소, 상보성 영양요구성 결함(auxotrophic deficiency)에 대해 내성을 제공하거나, 천연 배지 속에 존재하는 않는 중요한 영양분을 공급한다. 발현 조절 서열은 구성적 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서(transcription enhancer), 전사 종결인자 등을 포함할 수 있으며, 이는 당해 분야에 공지되어 있다. 2개 이상의 핵산 분자는 동시-발현되어야 하며(예컨대, 항체 중쇄 및 경쇄 둘 다 또는 항체 VH 및 VL), 핵산 분자 둘 다는 예를 들면, 단일 발현 벡터내로 또는 별도의 발현 벡터내에 삽입될 수 있다. 단일 벡터 발현을 위해, 암호화 핵산은 하나의 일반적인 발현 조절 서열에 작동적으로 연결될 수 있거나 상이한 발현 조절 서열, 예를 들면, 하나의 유도성 프로모터 및 하나의 구성적 프로모터에 연결될 수 있다. 숙주 세포내로의 핵산 분자의 도입은 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 확인할 수 있다. 이러한 방법은 예를 들면, 핵산 분석, 예를 들면, 노던 블롯(Northern blot) 또는 mRNA의 폴리머라제 쇄 반응(PCR) 증폭, 유전자 생성물의 발현을 위한 면역블롯팅(immunoblotting), 또는 도입된 핵산 서열 또는 이의 상응하는 유전자 생성물의 발현을 시험하기 위한 다른 적합한 분석 방법을 포함한다. 핵산 분자가 충분한 양으로 발현되어 목적한 생성물을 생산하는 것은 당해 분야의 기술자에 의해 이해되며 발현 수준을 최적화하여 당해 분야에 잘 공지된 방법을 사용하여 충분한 발현을 수득할 수 있음은 또한 이해된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "숙주"는 동물, 예를 들면, 포유동물(예컨대, 사람)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 형질감염될 수 있는 특수한 대상 세포 및 이러한 세포의 후대세포 또는 잠재적인 후대세포를 지칭한다. 이러한 세포의 후대세포는 숙주 세포 게놈내로 핵산 분자의 연속적인 생성 또는 통합시 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경 영향에 기인한 핵산 분자로 형질감염된 모 세포와 동일하지 않을 수 있다.
"단리된" 항체(또는 작제물)는 이의 생산 환경(예컨대, 천연 또는 재조합)의 구성성분으로부터 확인되고/되거나, 분리되고/되거나 회수된 것이다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩타이드는 이의 생산 환경으로부터의 모든 다른 구성성분과의 회합이 없다. 이의 생산 환경의 오염 구성성분, 예를 들어, 재조합 형질감염된 세포로부터 생성된 것은 항체에 대한 조사, 진단 또는 치료학적 사용을 전형적으로 방해할 수 있는 물질이며, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함한다. 바람직한 구현예에서 폴리펩타이드는 (1) 예를 들면 로우리 방법(Lowry method)으로 측정하여, 95 중량% 이상의 항체, 및 일부 구현예에서 99 중량% 이상의 항체로; (2) 스피닝 컵 배열결정장치(spinning cup sequenator)의 사용으로 N-말단 또는 내부 아미노산 잔기의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도로; 또는 (3) 꼬마지에 블루(Coomassive Blue) 또는, 바람직하게는 은 염색(silver stain)을 사용한 환원 조건 또는 비-환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의해 상동성까지 정제될 것이다. 단리된 항체(또는 작제물)은 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 구성성분이 존재하지 않을 것이므로 재조합 세포내 제자리에서(in situ) 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 폴리펩타이드, 항체, 또는 작제물은 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
"단리된 핵산"은 다른 게놈 DN서열로부터 실질적으로 분리된 핵산, 예를 들면, RNA, DNA, 또는 혼합된 핵산 뿐만 아니라 천연적으로 천연 서열을 동반하는, 단백질 또는 복합체, 예를 들면, 리보소옴 및 폴리머라제이다. "단리된" 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원 속에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 더욱이, "단리된" 핵산 분자, 예를 들어, cDNA 분자는 재조합 기술에 의해 생산된 경우 실질적으로 다른 세포 물질, 또는 배양 배지를 함유하지 않을 수 있거나, 화학적으로 합성되는 경우 화학적 전구체 또는 다른 화학물질을 함유하지 않는다. 구체적인 구현예에서, 본원에 기술된 바와 같은 항체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자는 단리되거나 정제된다. 이러한 용어는 천연적으로 존재하는 환경으로부터 제거된 핵산 서열을 포함하고, 재조합 또는 클로닝된 DNA 단리체 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다. 실질적으로 순수한 분자는 분자의 단리된 형태를 포함할 수 있다.
본원에서 상호교환적으로 사용된 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오타이드의 중합체를 지칭하며 DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오타이드는 데옥시리보뉴클레오타이드, 리보뉴클레오타이드, 변형된 뉴클레오타이드 또는 염기, 및/또는 이의 유사체, 또는 염기, 및/또는 이의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해서 또는 합성 반응에 의해서 중합체내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들면, 메틸화된 뉴클레오타이드 및 이의 유사체를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "올리고뉴클레오타이드"는 일반적으로, 그러나 필수적으로, 길이가 약 200개 뉴클레오타이드 이하인, 짧은, 일반적으로 단일-가닥의 합성 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 용어 "올리고뉴클레오타이드" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 상호 배타적이지 않다. 폴리뉴클레오타이드에 대한 상기 설명은 올리고뉴클레오타이드에 대해 동등하게 및 충분히 적용가능하다. 본 개시내용의 결합 분자를 생산하는 세포는 모 하이브리도마 세포 뿐만 아니라 항체를 암호화하는 핵산이 도입된 세균 및 진핵 숙주 세포를 포함할 수 있다. 달리 정의하지 않는 한, 본원에 개시된 임의의 단일-가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 좌측 말단은 5' 말단이고; 이중 가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 좌측 방향은 5' 방향으로 지칭된다. 초기의 RNA 전사체의 5' 내지 3' 첨가 방향은 전사 방향으로 지칭되고; RNA 전사체의 5' 말단에 대해 5'인 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 쇄 상의 서열 영역은 "상부 서열"로 지칭되며; RNA 전사체의 3' 말단에 대해 3'인 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "하부 서열"로 지칭된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용되는"은 연방 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나, 미국 약전, 유럽 약전, 또는 동물, 및 보다 특히 사람에서 사용하기 위해 다른 일반적으로 인지된 약전에 나타나 있음을 의미한다.
"부형제"는 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물, 또는 비히클(vehicle), 예를 들면, 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 용매, 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 부형제는 예를 들면, 캡슐화 물질 또는 첨가제, 예를 들면, 흡수 가속화제, 항산화제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 희석제, 붕해제, 유화제, 연장제, 충전제, 풍미제, 보습제, 윤활제, 향료, 보존제, 추진제, 방출제, 멸균제, 감미제, 가용화제, 습윤제 및 이의 혼합물을 포함한다. 용어 "부형제"는 또한 희석제, 보조제(adjuvant)(예컨대, 프루언트 보조제(Freunds' adjuvant)(완전 또는 불완전) 또는 비히클을 지칭할 수 있다.
일부 구현예에서, 부형제는 약제학적으로 허용되는 부형제이다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 예는 완충제, 예를 들면, 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 항산화제, 예를 들면, 아스코르브산; 저 분자량(예컨대, 약 10개 이하의 아미노산 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예를 들면, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들면, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 다른 탄수화물, 예를 들면, 글루코즈, 만노즈, 또는 덱스트린; 킬레이팅제, 예를 들면, EDTA; 당 알코올, 예를 들면, 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온(salt-forming counterion), 예를 들면, 나트륨; 및/또는 비이온성 표면활성제, 예를 들면, TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 및 PLURONICS™을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 다른 예는 문헌: Remington and Gennaro, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1990)에 기술되어 있다.
일 구현예에서, 각각의 구성성분은 약제학적 제형의 다른 성분과 상용성(compatible)인 면에서 "약제학적으로 허용되는"이고, 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응, 면역원성, 또는 다른 문제 또는 합병증없이 사람 및 동물의 조직 또는 기관과 접촉시 사용하기에 적합하고, 합리적인 이점/위험비(benefit/risk ratio)와 상응한다. 예컨대, 문헌: Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.; Rowe et al., Eds.; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009; Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.; Ash and Ash Eds.; Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.; Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009을 참고한다. 일부 구현예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 사용된 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유동물에 대해 무독성이다. 일부 구현예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 수성 pH 완충된 용액이다.
일부 구현예에서, 부형제는 멸균 액체, 예를 들면, 물 및 오일, 예를 들면, 석유, 동물, 식물, 또는 합성 기원의 것, 예를 들면, 땅콩 오일, 대두 오일, 광 오일, 참께 오일 등이다. 물은 조성물(예컨대, 약제학적 조성물)이 정맥내로 투여되는 경우 예시적인 부형제이다. 염수 용액 및 수성 덱스트로즈 및 글리세롤 덱스트로즈 및 글리세롤 용액은 또한 특히 주사가능한 용액의 경우, 액체 부형제로서 사용될 수 있다. 부형제는 또한 전분, 글루코즈, 락토즈, 슈크로즈, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루(flour), 백악(chalk), 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지 분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함할 수 있다. 조성물은, 바람직한 경우 또한 소량의 습윤 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 조성물은 액제, 현탁제, 유제, 정제, 환제, 캅셀제, 산제, 지연된 방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 제형을 포함하는 경구 조성물은 표준 부형제, 예를 들면, 약제학적 등급의 만니톨, 락토즈, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로즈, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다.
약제학적 화합물을 포함하는 조성물은 적합한 양의 부형제와 함께 예를 들면, 단리되거나 정제된 형태의 결합 분자(예컨대, 항체)를 함유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 목적한 결과를 생성하기에 충분한 본원에 제공된 결합 분자(예컨대, 항체) 또는 약제학적 조성물의 양을 지칭한다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 특정의 구현예에서, 대상체는 포유동물, 예를 들면, 비-영장류(예컨대, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 랫트 등) 또는 영장류(예컨대, 원숭이 및 사람)이다. 구체적인 구현예에서, 대상체는 사람이다. 일 구현예에서, 대상체는 포유동물, 예컨대, 상태 또는 장애로 진단된 사람이다. 다른 구현예에서, 대상체는 상태 또는 장애로 진행될 위험이 있는 포유동물, 예컨대, 사람이다.
"투여하다" 또는 "투여"는 점막, 피내, 정맥내, 근육내 전달, 및/또는 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 물리적 전달의 임의의 다른 방법에 의해서와 같이, 물질이 신체 외부에 존재하므로 이를 환자내로 주사하거나 달리 물리적으로 전달하는 작용을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 하나 이상의 치료요법의 투여로부터 생성되는 질환 또는 상태의 진행, 중증도, 및/또는 기간 동안의 감소 또는 완화를 지칭한다. 치료하는 것은 직면한 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 감소, 완화 및/또는 경감이 있어 환자가 여전히 직면한 장애로 피해를 입을 수 있음에도 불구하고, 개선이 환자에서 관찰되는지를 평가함으로써 측정될 수 있다. 용어 "치료하는"은 질환의 관리 및 완화 둘 다를 포함한다. 용어 "관리하다", "관리하는" 및 "관리"는 질환의 치유를 필수적으로 야기하지 않는 치료요법으로부터 대상체가 유도하는 유리한 효과를 지칭한다.
용어 "예방하다", "예방하는", 및 "예방"은 질환, 장애, 상태, 또는 관련 증상(들)(예컨대, 암)의 발병(또는 재발) 경향성을 감소시킴을 지칭한다.
용어 "암" 또는 "암 세포"는 본원에서 정상의 조직 또는 조직 세포로부터 이를 차별화하는 특성을 지닌 신생물에서 발견된 조직 또는 세포를 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 이러한 특성 중에는 퇴화(anaplasia)의 정도, 형태의 불규칙성, 세포 윤곽의 불명확성, 핵 크기, 핵 또는 세포질의 구조의 변화, 다른 표현형적 변화, 암성 또는 예비-암성 상태의 지표인 세포 단백질의 존재, 유사분열의 증가된 수, 및 전이 능력을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. "암"에 관한 단어는 암종, 육종, 종양, 상피종, 백혈병, 림프종, 폴립(polyp), 및 경성암(scirrus), 형질전환, 신생물 등을 포함한다.
용어 "약" 및 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 9% 이내, 8% 이내, 7% 이내, 6% 이내, 5% 이내, 4% 이내, 3% 이내, 2% 이내, 1% 이내, 또는 미만을 의미한다.
본 개시내용 및 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 내용이 달리 명확하게 나타내지 않는 한, 복수 형을 포함한다.
구현예가 본원에서 용어 "포함하는"과 함께 기술된 경우에는 언제나, "~로 이루어진" 및/또는 "~로 필수적으로 이루어진"의 측면에서 기술된 다른 유사한 구현예가 또한 제공됨이 이해된다. 구현예가 어구 "~로 필수적으로 이루어진"과 함께 본원에 기술된 경우에는 언제나, 다르게는 "~로 이루어진"의 측면에서 기술된 다른 유사한 구현예가 또한 제공됨이 이해된다.
"A와 B 사이에" 또는 "A-B 사이"와 같이 어구에 사용된 용어 "사이"는 A 및 B 둘 다를 포함하는 범위를 지칭한다.
본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 A 및 B 둘 다; A 또는 B; A(단독); 및 B(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 유사하게, "A, B, 및/또는 C"와 같은 어구에 사용된 바와 같은 용어 "및/또는"은 다음의 구현예 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B, 및 C; A, B, 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
IL-21 융합 단백질
IL-21 및 이의 변이체
본원에 제공된 IL-21 융합 단백질 내 IL-21 단백질은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 사람 야생형 IL-21 단백질일 수 있다(하기 참조).
Figure pct00002
일부 구현예에서, IL-21 변이체는 본원에 제공된 IL-21 융합 단백질 내에 존재할 수 있다. 변이는 사람 야생형 IL-21 단백질과 비교하여 아미노산 서열내에 변화를 야기하는 IL-21 폴리펩타이드를 암호화하는 하나 이상의 코돈(codon)의 치환, 결실, 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 유사한 구조 및/또는 화학적 특성을 가진 다른 아미노산으로 대체한, 예를 들면, 루이신을 세린으로 대체한 결과, 예컨대, 보존적 아미노산 대체의 결과일 수 있다. 당해 분야의 기술자에게 공지된 표준 기술, 예를 들면, 부위-지시된 돌연변이유발 및 아미노산 치환을 생성하는 PCR-매개된 돌연변이유발을 사용하여 본원에 제공된 분자를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열내에 돌연변이를 도입할 수 있다. 삽입 또는 결실은 임의로 약 1 내지 10개의 아미노산의 범위일 수 있다. 특정의 구현예에서, 치환, 결실, 또는 삽입은 원래의 분자에 대해 25개 이하의 아미노산 치환, 20개 이하의 아미노산 치환, 15개 이하의 아미노산 치환, 10개 이하의 아미노산 치환, 5개 이하의 아미노산 치환, 4개 이하의 아미노산 치환, 3개 이하의 아미노산 치환, 또는 2개 이하의 아미노산 치환을 포함한다. 구체적인 구현예에서, 치환은 하나 이상의 예측된 비-필수 아미노산 잔기로 제조된 보존적 아미노산 치환이다. 허용된 변화는 서열내에 아미노산의 삽입, 결실 또는 치환을 전신계적으로 제조하고 수득되는 변이체를 전체 길이 또는 성숙한 천연 서열에 의해 나타낸 활성에 대해 시험함으로써 측정할 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 하나의 잔기 또는 다수의 잔기로부터의 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합체 뿐만 아니라 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입도 포함한다.
"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 전하(charge)를 지닌 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 전하를 지닌 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당해 분야에 정의되어 있다. 이러한 계열은 염기성 측쇄를 지닌 아미노산(예컨대, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않는 극성 측쇄(예컨대, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예컨대, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄(예컨대, 트레오닌, 발린, 이소루이신) 및 방향족 측쇄(예컨대, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함한다. 대안적으로, 돌연변이는 예를 들면, 포화 돌연변이유발에 의해, 암호화 서열 중 모두 또는 일부를 따라 무작위로 도입시킬 수 있으며, 수득되는 돌연변이체는 생물학적 활성(예컨대, IL-21 수용체 또는 IL-21R에 대한 결합)에 대해 스크리닝(screening)할 수 있다. 돌연변이유발 후, 암호화된 단백질을 발현시키고 단백질의 활성을 측정할 수 있다.
보존적(예컨대, 유사한 특성 및/또는 측쇄를 지닌 아미노산 그룹 내에서) 치환은 IL-21 단백질의 특성을 유지하거나 유의적으로 변화시키지 않도록 만들 수 있다. 아미노산은 이의 측쇄의 특성에서의 유사성에 따라 그룹화될 수 있다(참고: 예컨대, Lehninger, Biochemistry 73-75 (2d ed. 1975)): (1) 비-극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) 하전되지 않은 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) 산성: Asp (D), Glu (E); 및 (4) basic: Lys (K), Arg (R), His(H).
대안적으로, 천연적으로 존재하는 잔기는 다음의 일반적인 측쇄 특성을 기반으로 그룹으로 분할될 수 있다: (1) 소수성: 노르루이신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성의 소수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
따라서, 일 구현예에서, 본원에 제공된 IL-21 변이체는 본원에 기술된 서열 번호: 1을 가진 IL-21의 아미노산 서열에 대해 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
변이는 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들면, 올리고뉴클레오타이드-매개된(부위-지시된) 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝, 및 PCR 돌연변이유발을 사용하여 이룰 수 있다. 부위-지시된 돌연변이유발(참고: 예컨대, Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7; 및 Zoller et al., 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500), 카세트 돌연변이유발(참고: 예컨대, Wells et al., 1985, Gene 34:315-23), 또는 다른 공지된 기술을 클로닝된 DNA에서 수행하여 폴리펩타이드를 생산할 수 있다.
일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 2개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124과 S133 사이의 임의의 3개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 4개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 5개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 6개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 7개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 8개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 9개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 C-말단에서 S124와 S133 사이의 임의의 10개의 아미노산을 결여한다.
일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 11개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 10개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 9개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 8개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 7개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 6개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 5개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 4개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 3개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 2개의 아미노산을 결여한다. 일부 구현예에서, IL-21 변이체는 서열 번호: 1의 C-말단에서 1개의 아미노산을 결여한다.
구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 IL-21 변이체는 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 가지며, 이는 C-말단에서 10개의 아미노산을 결여하고 서열 번호: 1의 Q1 내지 L123의 서열을 나타낸다.
알부민 결합 분자
알부민(예컨대, 사람 혈청 알부민 또는 HSA)을 사용하여 생물학적 약물의 혈청 반감기를 증가시켰다. 참고: Dennis et al., The Journal of Biological Cheminstry, 2002, 277 (38): 35035-35043; Adams et al., MABS, 2016, 8(7): 1336-1346. 예를 들면, 사람 혈청 알부민(HSA)이 활용되었다. HSA는 혈액 속에서 가장 풍부한 단백질이며, 조직 속에 광범위하게 분포하고 비-급성 기능(non-acute function)을 갖는다. 이는 19일과 같은 반감기를 갖는다. 따라서, 일부 구현예에서, 알부민(예컨대, HSA)을 본원에서 사용하여 다른 장점 중에서 본원에 제공된 융합 단백질의 반감기를 증가시킬 수 있다. 알부민은 수일 동안 사용될 수 있다. 하나의 예시적인 접근법은 본원에 제공된 융합 단백질 속에 알부민 도메인(예컨대, HSA)을 유전적으로 또는 화학적으로 직접 포함시키는 것이다. 다른 예시적인 접근법은 알부민 결합 도메인(ABD) 또는 항-알부민 항체를 사용하는 것이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 융합 단백질은 알부민 결합 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 알부민 결합 분자는 알부민 결합 도메인(ABD)이다. 일부 구현예에서, ABD는 사람 혈청 알부민(HSA)에 결합할 수 있다. 다른 구현예에서, ABD는 마우스 혈청 알부민(MSA)에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 1000nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 900nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 800nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 700nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 600nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 500nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 400nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 300nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 200nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 50nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 1 내지 25nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 0.1 내지 1nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, ABD는 HSA에 10 내지 800nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, ABD는 HSA에 20 내지 500nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, ABD는 HSA에 50 내지 300nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, ABD는 HSA에 100 내지 200nM의 KD로 결합한다.
일부 구체적인 구현예에서, ABD는 LAEAKVLANRELDKYGVSDYYKNLINNAKTVEGVKALIDEILAALP(서열 번호: 3)의 아미노산 서열을 가지며, 이는 HSA에 대해 약 1.2 nM의 KD를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열 번호: 3의 ABD보다 HSA에 대해 비교적 더 낮은 친화성을 갖는 ABD가 바람직하다. 따라서, HSA에 대해 보다 낮은 친화성을 갖는 서열 번호: 3의 변이체가 본 개시내용에 포함된다.
변이는 아미노산 서열내 변화를 야기하는 서열 번호: 3의 ABD 폴리펩타이드를 암호화하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 유사하거나 상이한 구조적 및/또는 화학적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 대체한 결과일 수 있다. 당해 분야의 기술자에게 공지된 표준 기술, 예를 들면, 부위-지시된 돌연변이유발 및 아미노산 치환을 생성하는 PCR-매개된 돌연변이유발을 사용하여 본원에 제공된 분자를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 내에 돌연변이를 도입할 수 있다. 삽입 또는 결실은 임의로 약 1 내지 15개의 아미노산의 범위일 수 있다. 특정의 구현예에서, 치환, 결실, 또는 삽입은 서열 번호: 3의 원래의 분자에 대해 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 허용된 변이는 서열 내 아미노산의 삽입, 결실, 또는 치환을 질서정연하게 이루고 수득되는 변이체를 활성에 대해 시험함으로써 측정할 수 있으며 일부 구현예에서, HSA에 대해 보다 낮은 친화성을 갖는 변이체를 선택한다. 특정의 이러한 유형의 변이체는 하기 실시예 1에서 표 7에 예시되어 있다.
일부 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 4의 아미노산 서열을 갖는다. 다른 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 5의 아미노산 서열을 갖는다. 다른 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 6의 아미노산 서열을 갖는다. 여전히 다른 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 갖는다. 여전히 다른 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 갖는다. 여전히 다른 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 갖는다. 여전히 다른 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 갖는다. 여전히 다른 구체적인 구현예에서, ABD는 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명에 따라서, 알부민 결합 분자는 또한 항-알부민 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-알부민 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항-HSA 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
HSA의 약간의 동형(isoform)이 하기 표 2에 나타나 있다(참고: UniProtKB - P02768 (ALBU_사람))
[표 2]
Figure pct00003
본원에 제공된 항-HSA 항체는 임의의 이러한 동형 또는 이의 단편에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-HSA 항체는 서열 번호: 260 또는 이의 단편에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-HSA 항체는 서열 번호: 261 또는 이의 단편에 결합한다. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 항-HSA 항체는 서열 번호: 262 또는 이의 단편에 결합한다.
본원에 제공된 항-HSA 항체는 합성 항체, 모노클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 다특이적 항체(이-특이적 항체 포함), 사람 항체, 사람화된 항체, 키메라 항체, 인트라보디(intrabody), 단일-쇄 Fv(scFv)(예컨대, 일특이적, 이특이적 등을 포함), 카멜화된(camelized) 항체 또는 이의 사람화된 버젼, Fab 단편, F(ab') 단편, 이황화물-연결된 Fv(sdFv), 항-유전자형(idiotypic) (항-Id) 항체, 및 상기 어느 것의 에피토프-결합 단편일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
특히, 본원에 제공된 항-HSA 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부위, 즉, HSA에 대해 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 본원에 제공된 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 소부류일 수 있다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 항-HSA 항체는 IgG 항체, 예를 들면, IgG1 항체이다.
HSA의 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체 단편을 포함하는 항체의 변이체 및 유도체가 또한 본 개시내용에 포함된다. 예시적인 단편은 Fab 단편(항원-결합 도메인을 함유하고 이황화물 결합에 의해 브릿지된 경쇄 및 중쇄의 부분을 포함한다); Fab'(Fab 및 힌지(hinge) 영역을 통해 중쇄의 추가의 일부를 포함하는 단일의 항-결합 도메인을 포함하는 항체 단편); F(ab')2(중쇄의 힌지 영역내에 쇄간 이황화물 결합에 의해 결합된 2개의 Fab' 분자; Fab' 분자는 동일하거나 상이한 에피토프에 대해 지시할 수 있다); 이특이적인 Fab(2개의 항원 결합 도메인을 갖는 Fab 분자, 이들 각각은 상이한 에피토프에 대해 지시될 수 있다); sFv(10 내지 25개 아미노산의 쇄에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변적인, 항원-결합 결정 영역)로서 또한 공지된, 가변 영역을 포함하는 단일 쇄 Fab 쇄; 이황화물-연결된 Fv, 또는 dsFv(이황화물 결합에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변성, 항원-결합 결정 영역); 카멜화된 VH(VH 계면에서 일부 아미노산이 천연적으로 존재하는 낙타 항체의 중쇄 내에서 발견되는 항체의 단일 중쇄의 가변성, 항원-결합 결정 영역); 이특이적 sFv(2개의 항원-결합 도메인을 갖는 sFv 또는 dsFv 분자로서, 이들 각각은 상이한 에피토프에 대해 지시될 수 있다); 디아보디(제1의 sFv의 VH 도메인이 제2의 sFv의 VL 도메인과 함게 조립되고 제1의 sFv의 VL 도메인이 제2의 sFv의 VH 도메인과 함께 조립되는 경우 형성된 이량체화된 sFv; 디아보디의 2개의 항원-결합 영역은 동일하거나 상이한 에피토프에 대해 지시될 수 있다); 및 트리아보디(디아보디와 유사한 방식으로 형성되지만, 여기서 3개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체 내에 생성된 삼량체화된 sFv; 3개의 항원 결합 도메인은 동일하거나 상이한 에피토프를 향해 지시될 수 있다)를 포함한다. 항체의 유도체는 또한 항체 조합 부위의 하나 이상의 CDR 서열을 포함한다. CDR 서열은 2개 이상의 CDR 서열이 존재하는 경우 스캐폴드 상에서 함께 연결될 수 있다. 특정의 구현예에서, 본원에 제공된 항-HSA 항체는 단일-쇄 Fv("scFv")를 포함한다. scFv는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체-단편이고, 여기서 이러한 도메인은 단일 폴리펩타이드 쇄내에 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩타이드는 scFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 형성하도록 하는 VH와 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해서는 문헌: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)를 참고한다.
특정의 환경에서, 전체 항체보다는 항-HSA 항체 단편을 사용하는 장점이 존재한다. 단편의 보다 작은 크기는 신속한 청소(clearance)를 허용하며, 세포, 조직, 또는 기관에 대해 개선된 접근을 이끌 수 있다. 특정 항체 단편의 검토를 위해서는, 문헌: Hudson et al., 2003, Nature Med. 9:129-34을 참고한다.
다양한 기술이 항체 단편의 생산을 위해 개발되었다. 전통적으로, 이러한 단편은 완전한 항체의 단백질분해적 소화를 통해 유래되었다(참고: 예컨대, Morimoto et al., 1992, J. Biochem. Biophys. Methods 24:107-17; 및 Brennan et al., 1985, Science 229:81-83). 그러나, 이러한 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생산될 수 있다. Fab, Fv, 및 scFv 항체 단편은 모두 이. 콜라이(E. coli) 또는 효모 세포내에서 발현되어 분비될 수 있으므로 다량의 이러한 단편의 용이한 생산을 허용한다. 항체 단편은 상기 논의한 항체 파아지 라이브러리(phage library)로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 이. 콜라이로부터 직접 회수될 수 있고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-67). 다른 접근법에 따라서, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 구조(savage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체내 반감기를 지닌 Fab 및 F(ab')2 단편은 예를 들면, 미국 특허 제5,869,046호에 기술되어 있다. 항체 단편을 생산하기 위한 다른 기술은 숙련된 기술자에게 명백할 것이다. 특정의 구현예에서, 항체는 단일 쇄 Fv 단편(scFv)이다(참고: 예컨대, 제WO 93/16185호; 미국 특허 제5,571,894 및 제5,587,458호). Fv 및 scFv는 불변 영역이 없는 완전한 조합 부위를 가지므로; 이들은 생체내 사용 동안 감소된 비특이적 결합에 적합할 수 있다. scFv 융합 단백질은 작제되어 scFv의 아미노 또는 카복시 말단에 효과기 단백질의 융합체를 생성할 수 있다(참고: 예컨대, Borrebaeck ed., 상기 참고). 항체 단편은 또한 예를 들면, 상기 인용된 참고문헌에 기술된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 이러한 선형 항체는 일특이적 또는 다-특이적, 예를 들면, 이특이적일 수 있다. 구체적인 구현예에서, 항체 단편은 단일 도메인 항체이다.
본원에 제공된 항-HSA 항체는 조류 및 포유동물(예컨대, 사람, 쥐, 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니아 피그(guinea pig), 낙타, 말, 또는 닭)를 포함하는 임의의 동물 기원일 수 있다. 특정의 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 사람 또는 사람화된 모노클로날 항체이다. 본원에 사용된 바와 같이, "사람" 항체는 사람 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하며, 사람 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 사람 유전자로부터 항체를 발현하는 마우스로부터 단리된 항체를 포함한다.
특정의 구현예에서, 항-HSA 항체는 완전한 사람 항체, 예를 들면, 암 항원에 면역특이적으로 결합하는 완전한 사람 항체이다. 이러한 완전한 사람 항체는 완전한 마우스(또는 다른 완전하거나 부분적인 비-사람 종 항체), 사람화된 항체, 또는 키메라 항체보다 원치않는 또는 필요로 하지 않는 부작용, 예를 들면, 대상체에게 투여되는 경우 완전하지 않은 사람 항체에 대해 지시된 면역 반응의 발달을 최소화시키는데 유리할 수 있다.
본원에 제공된 항-HSA 항체는 일특이적, 이특이적, 삼특이적 또는 보다 큰 다특이성일 수 있다. 다특이적 항체는 폴리펩타이드의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나 폴리펩타이드 뿐만 아니라 이종 에피토프, 예를 들면, 이종 폴리펩타이드 또는 고체 지지체 물질 둘 다에 대해 특이적일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 폴리펩타이드의 주어진 에피토프에 대해 일특이적이며 다른 에피토프에 면역특이적으로 결합하지 않는다.
본원에 제공된 항-HSA 항체는 모노클로날 항체일 수 있거나 모노클로날 항체로부터 유래될 수 있다. 모노클로날 항체는 문헌: Kohler et al., 1975, Nature 256:495-97에 최초로 기술된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제4,816,567호).
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예를 들어, 햄스터는 상술한 바와 같이 면역화되어 면역화를 위해 사용된 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유발시킨다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 면역화 후, 림프구를 단리한 다음 적합한 융합제, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포주와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성시킨다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 59-103 (1986)).
이렇게 제조된 하이브리도마 세포를 씨딩하고 특정의 구현예에서, 융합되지 않은 모 골수종 세포(융합체 파트너로서 또한 지칭됨)의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에 씨딩(seeding)하고 성장시킨다. 예를 들면, 모 골수종 세포는 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)를 결여하고 있으면, 하이브리도마용 선택성 배양 배지는 전형적으로 하이포크산틴, 아미노프테린, 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 것이며, 이는 HGPRT-결핍성 세포의 성장을 방지한다.
예시적인 융합체 파트너 골수종 세포는 효율적으로 융합되어 선택된 항체-생산 세포에 의해 항체의 안정한 고-수준의 생산을 뒷받침하는 것이며, 융합되지 않은 모 세포에 대해 선택하는 선택성 배지에 대해 민감성이다. 예시적인 골수종 세포주는 쥐 골수종 주, 예를 들면, SP-2 및 유도체, 예를 들면, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)(버지니아주 마나사스 소재)로부터의 X63-Ag8-653 세포, 및 설크 인스티튜트 세포 분배 기관(Salk Institute Cell Distribution Center)(캘리포니아주 샌 디에고 소재)로부터 이용가능한 MOPC-21 및 MPC-1로부터 유래된 것이다. 사람 골수종 및 마우스-사람 이종골수종 세포주가 또한 사람 모노클로날 항체의 생산을 위해 기술되어 있다(Kozbor, 1984, Immunol. 133:3001-05; 및 Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (1987)).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지는 항원에 대해 지시된 모노클로날 항체의 생산을 위해 검정된다. 하이브리도마 세포에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성은 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 검정, 예를 들면, RIA 또는 ELISA에 의해 측정된다. 모노클로날 항체의 결합 친화성은 예를 들면, 문헌: Munson et al., 1980, Anal. Biochem. 107:220-39에 기술된 스태챠드 분석(Scatchard analysis)에 의해 측정될 수 있다.
목적한 특이성, 친화성 및/또는 활성의 항-HSA 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인되면, 클론을 제한 희석 과정으로 아클로닝(subcloning)하고 표준 방법(Goding, 상기 참조)에 의해 성장시킬 수 있다. 이러한 목적의 적합한 배양 배지는 예를 들면, DMEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는 예를 들면, 세포를 마우스내로 복강내(i.p.) 주사함으로써, 동물 내에서 복수 종양(ascites tumor)으로서 생체내에서 성장시킬 수 있다.
아클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 배양 배지, 복수액, 또는 혈청으로부터 통상의 항체 정제 과정, 예를 들면, 친화성 크로마토그래피(예컨대, 단백질 A 또는 단백질 G-세파로즈 사용) 또는 이온-교환 크로마타그래피, 하이드록시아파파이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 등에 의해 적합하게 분리된다.
모노클로날 항체를 암호화하는 DNA는 통상의 과정(예컨대, 쥐 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용함으로써)을 사용하여 용이하게 단리되고 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 공급원으로서 제공될 수 있다. 일단 단리되면, DNA는 발현 벡터내에 위치할 수 있으며, 이는 이후 숙주 세포, 예를 들면, 이. 콜라이(E. coli) 세포, 시미안(simian) COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 항체 단백질을 달리 생산하지 않는 골수종 세포내로 형질감염되어, 재조합 숙주 세포 내에서 모노클로날 항체의 합성을 수득할 수 있다. 항체를 암호화하는 DNA의 세균내 재조합 발현시 참고 문헌은 Skerra et al., 1993, Curr. Opinion in Immunol. 5:256-62 및 Pluckthun, 1992, Immunol. Revs. 130:151-88을 포함한다.
추가의 구현예에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은 예를 들면, Antibody Phage Display: Methods and Protocols(O'Brien and Aitken eds., 2002)에 기술된 기술을 사용하여 생성된 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 파아지 디스플레이 방법에서, 기능적 항체 도메인은 이를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 수반하는 파아지 입자의 표면에 나타난다. 본원에 기술된 항체를 제조하는데 사용될 수 있는 파아지 디스플레이 방법의 예는 문헌: Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic et al., 1997, Gene 187:9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; PCT 특허원 제PCT/GB91/O1 134호; 국제 공보 제WO 90/02809호, 제WO 91/10737호, 제WO 92/01047호, 제WO 92/18619호, 제WO 93/1 1236호, 제WO 95/15982호, 제WO 95/20401호, 및 제WO97/13844호; 및 미국 특허 제5,698,426호, 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,580,717호, 제5,427,908호, 제5,750,753호, 제5,821,047호, 제5,571,698호, 제5,427,908호, 제5,516,637호, 제5,780,225호, 제5,658,727호, 제5,733,743호 및 제5,969,108호에 개시된 것을 포함한다.
원칙적으로, 합성 항체 클론은 파아지 코트(coat) 단백질에 융합된 항체 가변 영역(Fv)의 다양한 단편을 나타내는 파아지를 함유하는 파아지 라이브러리를 스크리닝함으로써 선택된다. 이러한 파아지 라이브러리는 목적한 항원에 대해 스크리닝된다. 목적한 항원에 결합할 수 있는 Fv 단편을 발현하는 클론은 항원에 흡착되므로 라이브러리에서 비-결합 클론으로부터 분리된다. 이후에 결합 클론은 항원으로부터 용출되며 항원 흡착/용출의 추가의 주기에 의해 추가로 농축될 수 있다.
가변 도메인은 파아지 상에서 단일-쇄 Fv(scFv) 단편(여기서 VH 및 VL은 짧은 가요성 펩타이드(flexible peptide)를 통해 공유결합으로 연결되어 있다)으로서, 또는 Fab 단편(여기서 이들은 불변 도메인에 각각 융합되어 예를 들면, 문헌: Winter et al., 1994, Ann. Rev. Immunol. 12:433-55에 기술된 바와 같이, 비-공유결합적으로 상호작용한다)으로서 기능적으로 나타낼 수 있다.
VH 및 VL 유전자의 레퍼토리(repertoires)는 PCR에 의해 별도로 클로닝되어 파아지 라이브러리내에서 무작위로 재조합되며, 이는 이후 문헌(Winter et al., 상기 참조)에 기술된 바와 같이 항원-결합 클론에 대해 조사될 수 있다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 작제할 필요없이 면역원에 대해 고-친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 천연의 레퍼토리는 클로닝되어 문헌: Griffiths et al., 1993, EMBO J 12:725-34에 기술된 바와 같이 어떠한 면역화없이 광범위한 비-자가 및 또한 자가 항원에 대한 사람 항체의 단일 공급원을 제공할 수 있다. 최종적으로, 줄기 세포로부터 재정렬되지 않은 V-유전자 분절을 클로닝하고 고가변성 CDR3 영역을 암호화하고 예를 들면, 문헌: Hoogenboom and Winter, 1992, J. Mol. Biol. 227:381-88에 기술된 바와 같이 시험관 내에서 재정렬을 달성하기 위한 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용함으로써 나이브 라이브러리(naive library)를 또한 합성적으로 제조할 수 있다.
라이브러리의 스크리닝은 당해 분야에 공지된 다양한 기술에 의해 달성할 수 있다. 예를 들면, HSA 폴리펩타이드 또는 이의 단편을 사용하여 흡착 플레이트의 웰(well)을 코팅시키거나, 흡착 플레이트에 고정되거나 세포 분류에 사용된 숙주 세포 상에서 발현시키거나, 스트렙타비딘-코팅된 비드(bead)를 사용한 포획을 위해 바이오틴에 접합시키거나, 패닝 디스플레이 라이브러리(panning display library)를 위한 임의의 다른 방법에서 사용할 수 있다. 느린 해리 역학(dissociation kinetics)(예컨대, 양호한 결합 친화성)을 지닌 항체의 선택은 문헌: Bass et al., 1990, Proteins 8:309-14 및 제WO 92/09690호에 기술된 바와 같은 긴 세척 및 1가 파아지 디스플레이를 사용하고, 문헌: Marks et al., 1992, Biotechnol. 10:779-83에 기술된 바와 같이 항원의 낮은 코팅 밀도를 사용함으로써 촉진시킬 수 있다.
항체는 적합한 항원 스크리닝 과정을 설계하여 목적한 파아지 클론에 대해 선택한 다음 VH 및/또는 VL 서열(예컨대, Fv 서열), 또는 VH 및 VL 서열로부터, 목적한 파아지 클론 및 문헌(Kabat et al., 상기 참고)에 기술된 적합한 불변 영역(예컨대, Fc) 서열로부터의 다양한 CDR 서열을 사용하여 전체 길이의 항체 클론을 작제함으로써 수득할 수 있다.
본원에 기술된 항-HSA 항체는, 또한 예를 들면, 키메라 항체를 포함할 수 있다. 키메라 항체는 항체의 상이한 부위가 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래된 분자이다. 예를 들면, 키메라 항체는 사람 항체의 불변 영역에 융합된 마우스 또는 랫트 모노클로날 항체의 가변 영역을 함유할 수 있다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예컨대, 문헌: Morrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202; 및 미국 특허 제5,807,715호, 제4,816,567호, 제4,816,397호, 및 제6,331,415호를 참고한다.
본원에 기술된 것과 같은 기술을 사용하여 생산된 항-HSA 항체 또는 항원-결합 단편은 잘 공지된 표준 기술을 사용하여 단리할 수 있다. 예를 들면, 항체 또는 항원-결합 단편은 예컨대, 배양 배지, 복수액, 혈청, 세포 분해물, 합성 반응 물질 등으로부터 통상의 면역글로불린 정제 과정, 예를 들면, 단백질 A-세파로즈, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피에 의해 적합하게 분리할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "단리된" 또는 "정제된" 항체는 이로부터 항체가 유래되는 세포 또는 조직 공급원으로부터 세포 물질 또는 다른 단백질을 실질적으로 포함하지 않거나, 화학적으로 합성되는 경우 화학적 전구체 또는 다른 화학물질을 실질적으로 포함하지 않는다.
일부 보다 구체적인 구현예에서, 항-알부민 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 HSA에 결합하는 sdAb이다. 일부 구현예에서, sdAb는 VHH 단일 도메인 항체이다.
일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 1000nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 900nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 800nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 700nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 600nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 500nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 400nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 300nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 200nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 50nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 1 내지 25nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 0.1 내지 1nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, sdAb는 HSA에 10 내지 800nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 HSA에 20 내지 500nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, sdAb는 HSA에 50 내지 300nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, sdAb는 HSA에 100 내지 200nM의 KD로 결합한다.
암 항원 결합 분자
일부 구현예에서, 본원에 제공된 융합 단백질속의 항원에 결합하는 결합 분자는 암 항원에 결합할 수 있으며, 이에 의해 IL-21 또는 이의 변이체를 암 세포, 예컨대, 고형 종양 암 세포에 대해 지시하거나 전달하는 것을 촉진시킨다.
일부 구현예에서, 결합 분자는 암 세포에서 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 이이 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 암 세포는 고형 종양 암 세포이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 암 세포 상에 발현된 폴리펩타이드, 폴리펩타이드 단편, 또는 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있다. 일 구현예에서, 항체는 사람 암 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 암 항원의 세포외 도메인(ECD)에 결합한다. 특정의 구현예에서, 항체는 암 항원의 ECD에서 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 암 항원은 고형 종양 암 세포 상에 발현된다.
본원에 제공된 암 항원에 결합하는 항체는 합성 항체, 모노클로날 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 다특이적 항체(이-특이적인 항체를 포함함), 사람 항체, 사람화된 항체, 키메라 항체, 인트라보디(intrabody), 단일-쇄 Fv(scFv)(예컨대, 일특이적, 이특이적 등을 포함함), 카멜화된 항체 또는 이의 사람화된 변이체, Fab 단편, F(ab') 단편, 이황화물-연결된 Fvs(sdFv), 항-유전자형(항-Id) 항체, 및 임의의 상기 중 에피토프-결합 단편일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
특히, 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자, 즉, 암 항원(예컨대, 고형 종양 암 항원)에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 본원에 제공된 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 소부류일 수 있다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 IgG 항체, 예를 들면, IgG1 항체이다.
암 항원의 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체 단편을 포함하는 항체의 변이체 및 유도체가 또한 본 개시내용에 포함된다. 예시적인 단편은 Fab 단편; Fab'; F(ab')2; 이특이적 Fab; 또한 sFv로 공지된 가변 영역을 포함하는 단일 쇄 Fab 쇄; 이황화물-연결된 Fv, 또는 dsFv; 카멜화된 VH; 이특이적 sFv; 디아보디; 및 트리아보디를 포함한다. 항체의 유도체는 또한 항체 조합 부위의 하나 이상의 CDR 서열을 포함한다. CDR 서열은 2개 이상의 CDR 서열이 존재하는 경우 스캐폴드 상에서 함께 연결될 수 있다. 특정의 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 단일-쇄 Fv("scFv")를 포함한다. 상기 단락에 간단히 기술된 바와 같이 항체 단편의 생산을 위한 다양한 기술이 개발되어 왔다.
일부 구현예에서, 암 항원에 결합하는 단일 가변 도메인 항체(sdAb)가 바람직하다. 특정 유형의 유기체, 낙타과 및 연골 어류는 이의 면역계의 일부로서 Fc 등가 도메인 구조에 탑재된 고 친화성 V-유사 도메인을 지닌다(Woolven et al., 1999, Immunogenetics 50: 98-101; 및 Streltsov et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49). V-유사 도메인(낙타과에서 VhH 및 상어에서 V-NAR로 불림)은 전형적으로 긴 표면 루프를 나타내며, 이는 표적 항원의 강(cavity)의 침투를 허용한다. 이는 또한 소수성 표면 패치(patch)를 차폐시킴으로써 단리된 VH 도메인을 안정화시킨다.
이러한 VhH 및 V-NAR 도메인을 사용하여 sdAb를 가공하였다. 사람 V 도메인 변이체는 파아지 라이브러리로부터의 선택 및 안정한, 고 결합 VL- 및 VH-유래된 도메인을 생성하는 다른 접근법을 사용하여 설계하였다. 구체적인 구현예에서, 암 항원에 결합하는 항체는 sdAb이다. 일 구현예에서, sdAb는 VHH 단일 도메인 항체이다.
본원에 제공된 항체는 조류 및 포유동물(예컨대, 사람, 쥐(murine), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니아 피그, 낙타, 말, 또는 닭)을 포함하는 임의의 동물 기원으로부터의 것일 수 있다. 특정의 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 사람 또는 사람화된 모노클로날 항체이다. 본원에 사용된 바와 같이, "사람" 항체는 사람 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고 사람 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 사람 유전자로부터 항체를 발현하는 마우스로부터 단리된 항체를 포함한다.
특정의 구현예에서, 항체는 완전한 사람 항체, 예를 들면, 암 항원에 면역특이적으로 결합하는 완전한 사람 항체이다. 이러한 완전한 사람 항체는 전체 마우스(또는 다른 전체 또는 부분적인 비-사람 종 항체), 사람화된 항체, 또는 키메라 항체에 걸쳐 원치않거나 필요하지 않은 부작용, 예를 들면, 대상체에게 투여된 경우 완전하지 않은 사람 항체에 대해 지시된 면역 반응의 발달을 최소화시킬 수 있다.
본원에 제공된 항체는 일특이적, 이특이적, 삼특이적, 또는 보다 큰 다특이성일 수 있다. 다특이적 항체는 폴리펩타이드의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나 폴리펩타이드 뿐만 아니라 이종 에피토프, 예를 들면 이종 폴리펩타이드 또는 고체 지지체 물질 둘 다에 대해 특이적일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 폴리펩타이드의 주어진 에피토프에 대해 일특이적이며 다른 에피토프에 면역특이적으로 결합하지 않는다.
본원에 제공된 암 항원에 결합하는 항체는 모노클로날 항체일 수 있거나 모노클로날 항체로부터 유래될 수 있다. 모노클로날 항체는 문헌: Kohler et al., 1975, Nature 256:495-97에 최초로 기술된 하이브리도마 방법을 사용하에 제조할 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조할 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제4,816,567호). 모노클로날 항체의 생산은 상기 단락에 간략하게 기술되어 있다.
본원에 기술된 항체는 또한 예를 들면, 키메라 항체를 포함할 수 있다. 본원에 기술된 것과 같은 기술을 사용하여 생산된 항체 또는 항원-결합 단편은 잘 공지된 표준 기술을 사용하여 단리할 수 있다.
특정의 구현예에서, 본원에 제공된 IL-21 융합 단백질내 항원 결합 분자는 링커에 의해 연결된 다수의 항체를 포함하며, 각각의 항체(예컨대, sdAb)는 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 분자는 2개의 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 분자는 2개의 sdAb를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 분자는 항원의 상이한 에피토프에 각각 결합하는 2개의 sdAb를 포함한다.
일부 보다 구체적인 구현예에서, 항원 결합 분자는 MSLN의 상이한 에피토프에 각각 결합하는 2개의 sdAb를 포함한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, MSLN의 aa 296 내지 aa 359(N-말단)을 표적화하는 1개의 sdAb 및 NSLN의 aa 538 내지 aa 622(C-말단)을 표적화하는 1개의 sdAb를 본원에 제공된 IL-21 융합 단백질에서 사용된다. 특정의 장점은 IL-21 융합 단백질내 암 항원의 특이적인 기능성 도메인을 표적화하는 하나 이상의 항체를 가짐으로써 제공될 수 있다. sdAb를 지닌 MSLN의 N-말단을 표적화하는 것은 MSLN-MUC16 상호작용을 파괴하며 암 세포 전이를 감소시킨다. sdAb를 지닌 MSLN의 C-말단을 표적화하는 것은 암 세포 표면으로부터 MSLN의 쉐딩(shedding)을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 암 항원은 메소텔린(MSLN)이다. 일부 구현예에서, 결합 분자는 본원에 기술된 것과 같이, MSLN에 결합하는 sdAb이다.
항-메소텔린 (항-MSLN) 작제물
본원은 메소텔린에 특이적으로 결합하는 항-메소텔린 작제물을 제공한다. 항-메소텔린은 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항체 모이어티를 작제한다. 일부 구현예에서, 항-MSLN VH는 서열 번호: 283의 서열을 포함하는 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-MSLN VH는 서열 번호: 284의 서열을 포함하는 항원에 결합한다.
일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물은 본원에 기술된 바와 같은 단일 도메인 항-메소텔린 항체를 포함하는 항-MSLN 항체 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항-MSLN 작제물은 N-말단으로부터 C-말단까지 a) 항-MSLN 항체 모이어티, b) 제2의 도메인의 순서로 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항-MSLN 작제물은 N-말단으로부터 C-말단까지 a) 제2의 도메인, b) 항-MSLN 항체 모이어티의 순서로 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 항-MSLN 작제물은 N-말단으로부터 C-말단까지 a) 항-MSLN 항체 모이어티, b) 제2의 도메인, c) 제3의 도메인의 순서로 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항-MSLN 작제물은 N-말단으로부터 C-말단까지 a) 제2의 도메인, b) 항-MSLN 항체 모이어티, c) 제3의 도메인의 순서로 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 항-MSLN 작제물은 N-말단으로부터 C-말단까지 a) 제2의 도메인, b) 제3의 도메인, c) 항-MSLN 항체 모이어티의 순서로 포함한다.
일부 구현예에서, 제2의 도메인 또는 제3의 도메인은 반감기 연장 도메인이다. 일부 구현예에서, 제2의 도메인 또는 제3의 도메인은 사이토킨이다.
일부 구현예에서, 작제물은 반감기 연장 도메인(예를 들면, Fc 도메인 또는 알부민-결합 도메인)을 추가로 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 작제물은 사이토킨(예를 들면, IL-21, IL-15)을 추가로 포함하는 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 작제물은 a) 반감기 연장 도메인; 및 b) 사이토킨을 추가로 포함하는 융합 단백질이다. 예시적인 융합 단백질이 본원에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 반감기-연장 도메인은 항-MSLN 항체 모이어티의 N- 또는 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 항-MSLN 항체 모이어티 또는 반감기-연장 도메인의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 반감기-연장 도메인은 사이토킨의 N- 또는 C-말단에 융합된다.
일부 구현예에서, 작제물은 항-MSLN 항체 모이어티와 제2의 도메인 또는 제3의 도메인(예를 들면, 사이토킨) 사이에 링커를 포함한다. 예시적인 링커가 본원에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 링커는 서열 번호: 66 내지 74 및 267 내지 282 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 절단불가능하다. 일부 구현예에서, 링커는 절단가능하다.
일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 331 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 331 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80%(예를 들면, 약 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.
메소텔린(MSLN)에 결합하는 단일 도메인 항체
본원은 메소텔린에 특이적으로 결합하는 단일 도메인 항체를 제공한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 사람 MSLN에 결합한다. 사람 MSLN의 몇몇의 동형이 하기 표 3에 나타나 있다(참고: UniProtKB - Q13421 (MSLN_HUMAN)). 서열 번호: 264의 동형 2는 주요 사람 MSLN 동형이다.
[표 3]
Figure pct00004
Figure pct00005
본원에 제공된 항-MSLN 항체(예컨대, sdAb)는 상기 표에 나타낸 임의의 동형 또는 이의 임의의 단편에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 항체는 서열 번호: 263 또는 이의 단편에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 항체는 서열 번호: 264 또는 이의 단편에 결합한다. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 항체는 서열 번호: 265 또는 이의 단편에 결합한다. 여전히 다른 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 항체는 서열 번호: 266 또는 이의 단편에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 항체는 서열 번호: 283에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 항체는 서열 번호: 284에 결합한다.
따라서, 일 양태에서, 다음의 구조를 포함하는 메토텔린(MSLN)에 결합하는 단일 도메인 항체(sdAb)가 본원에 제공된다: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, 여기서 CDR 서열은 하기 표 4 및 표 10에서의 것에 대해 선택된다.
보다 구체적으로, 다음의 구조를 포함하는 메소텔린(MSLN)에 결합하는 단일 도메인 항체(sdAb)가 본원에 제공된다: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4, 여기서: (i) CDR1은 서열 번호: 12, 서열 번호: 15, 서열 번호: 18, 서열 번호: 21, 서열 번호: 24, 서열 번호: 27, 서열 번호: 30, 서열 번호: 33, 서열 번호: 36, 서열 번호: 39, 서열 번호: 42, 서열 번호: 45, 서열 번호: 48, 서열 번호: 51, 서열 번호: 54, 서열 번호: 57, 서열 번호: 60, 서열 번호: 63, 서열 번호: 75, 서열 번호: 78, 서열 번호: 81, 서열 번호: 84, 서열 번호: 87, 서열 번호: 90, 서열 번호: 93, 서열 번호: 96, 서열 번호: 99, 서열 번호: 102, 서열 번호: 105, 서열 번호: 108, 서열 번호: 111, 서열 번호: 114, 서열 번호: 117, 및 서열 번호: 120으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖고/갖거나; (ii) CDR2는 서열 번호: 13, 서열 번호: 16, 서열 번호: 19, 서열 번호: 22, 서열 번호: 25, 서열 번호: 28, 서열 번호: 31, 서열 번호: 34, 서열 번호: 37, 서열 번호: 40, 서열 번호: 43, 서열 번호: 46, 서열 번호: 49, 서열 번호: 52, 서열 번호: 55, 서열 번호: 58, 서열 번호: 61, 서열 번호: 64, 서열 번호: 76, 서열 번호: 79, 서열 번호: 82, 서열 번호: 85, 서열 번호: 88, 서열 번호: 91, 서열 번호: 94, 서열 번호: 97, 서열 번호: 100, 서열 번호: 103, 서열 번호: 106, 서열 번호: 109, 서열 번호: 112, 서열 번호: 115, 서열 번호: 118, 및 서열 번호: 121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖고/갖거나; (iii) CDR3은 서열 번호: 14, 서열 번호: 17, 서열 번호: 20, 서열 번호: 23, 서열 번호: 26, 서열 번호: 29, 서열 번호: 32, 서열 번호: 35, 서열 번호: 38, 서열 번호: 41, 서열 번호: 44, 서열 번호: 47, 서열 번호: 50, 서열 번호: 53, 서열 번호: 56, 서열 번호: 59, 서열 번호: 62, 서열 번호: 65, 서열 번호: 77, 서열 번호: 80, 서열 번호: 83, 서열 번호: 86, 서열 번호: 89, 서열 번호: 92, 서열 번호: 95, 서열 번호: 98, 서열 번호: 101, 서열 번호: 104, 서열 번호: 107, 서열 번호: 110, 서열 번호: 113, 서열 번호: 116, 서열 번호: 119, 및 서열 번호: 122로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 표 9에 나타낸 바와 같은 항체 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 및 항-MSLN-34 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3를 포함하는 VH를 포함하는 메소텔린(항-MSLN sdAb)에 결합하는 단일 도메인 항체가 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 12의 것이고, CDR2는 서열 번호: 13의 것이고, CDR3은 서열 번호: 14의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 15의 것이고, CDR2는 서열 번호: 16의 것이고, CDR3은 서열 번호: 17의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 18의 것이고, CDR2는 서열 번호: 19의 것이고, CDR3은 서열 번호: 20의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 21의 것이고, CDR2는 서열 번호: 22의 것이고, CDR3은 서열 번호: 23의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 24의 것이고, CDR2는 서열 번호: 25의 것이고, CDR3는 서열 번호: 26의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 27의 것이고, CDR2는 서열 번호: 28의 것이고, CDR3은 서열 번호: 29의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 30의 것이고, CDR2는 서열 번호: 31의 것이고, CDR3은 서열 번호: 32의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 33의 것이고, CDR2는 서열 번호: 34의 것이고, CDR3은 서열 번호: 35의 것이다.
일부 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 36의 것이고, CDR2는 서열 번호: 37의 것이고, CDR3은 서열 번호: 38의 것이다.
다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 39의 것이고, CDR2는 서열 번호: 40의 것이고, CDR3은 서열 번호: 41의 것이다.
다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 42의 것이고, CDR2는 서열 번호: 43의 것이고, CDR3은 서열 번호: 44의 것이다.
다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 45의 것이고, CDR2는 서열 번호: 46의 것이고, CDR3은 서열 번호: 47의 것이다.
다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 48의 것이고, CDR2는 서열 번호: 49의 것이고, CDR3은 서열 번호: 50의 것이다.
다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 51의 것이고, CDR2는 서열 번호: 52의 것이고, CDR3은 서열 번호: 53의 것이다.
다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 54의 것이고, CDR2는 서열 번호: 55의 것이고, CDR3은 서열 번호: 56의 것이다.
다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 57의 것이고, CDR2는 서열 번호: 58의 것이고, CDR3은 서열 번호: 59의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 60의 것이고, CDR2는 서열 번호: 61의 것이고, CDR3은 서열 번호: 62의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 63의 것이고, CDR2는 서열 번호: 64의 것이고, CDR3은 서열 번호: 65의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 75의 것이고, CDR2는 서열 번호: 76의 것이고, CDR3은 서열 번호: 77의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 78의 것이고, CDR2는 서열 번호: 79의 것이고, CDR3은 서열 번호: 80의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 81의 것이고, CDR2는 서열 번호: 82의 것이고, CDR3은 서열 번호: 83의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 84의 것이고, CDR2는 서열 번호: 85의 것이고, CDR3은 서열 번호: 86의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 87의 것이고, CDR2는 서열 번호: 88의 것이고, CDR3은 서열 번호: 89의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 90의 것이고, CDR2는 서열 번호: 91의 것이고, CDR3은 서열 번호: 92의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 93의 것이고, CDR2는 서열 번호: 94의 것이고, CDR3은 서열 번호: 95의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 96의 것이고, CDR2는 서열 번호: 97의 것이고, CDR3은 서열 번호: 98의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 99의 것이고, CDR2는 서열 번호: 100의 것이고, CDR3은 서열 번호: 101의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 102의 것이고, CDR2는 서열 번호: 103의 것이고, CDR3은 서열 번호: 104의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 105의 것이고, CDR2는 서열 번호: 106의 것이고, CDR3은 서열 번호: 107의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 108의 것이고, CDR2는 서열 번호: 109의 것이고, CDR3은 서열 번호: 110의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 111의 것이고, CDR2는 서열 번호: 112의 것이고, CDR3은 서열 번호: 113의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 114의 것이고, CDR2는 서열 번호: 115의 것이고, CDR3은 서열 번호: 116의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 117의 것이고, CDR2는 서열 번호: 118의 것이고, CDR3은 서열 번호: 119의 것이다.
여전히 다른 구현예에서, CDR1은 서열 번호: 120의 것이고, CDR2는 서열 번호: 121의 것이고, CDR3은 서열 번호: 122의 것이다.
[표 4]
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
일부 구현예에서, 표 9에 나타낸 바와 같은 항체 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 및 항-MSLN-34 중 어느 하나로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 포함하는 메소텔린(항-MSLN sdAb)에 결합하는 단일 도메인 항체가 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-1으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3를 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템(numbering system)에 따라 측정할 수 있다. 상술한 바와 같이, CDR 영역은 당해 분야의 기술자에게 잘 공지되어 있으며 잘 공지된 번호매김 시스템에 의해 정의되었다. 각각의 이러한 초가변 영역 또는 CDR로부터의 잔기는 상기 표 1에 나타나 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 12의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 13의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 14의 CDR3를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 12의 CDR1 및 서열 번호: 13의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 12의 CDR1 및 서열 번호: 14의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 13의 CDR2 및 서열 번호: 14의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 12의 CDR1, 서열 번호: 13의 CDR2, 및 서열 번호: 14의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-2로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 15의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 16의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 17의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 15의 CDR1 및 서열 번호: 16의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 15의 CDR1 및 서열 번호: 17의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 16의 CDR2 및 서열 번호: 17의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 15의 CDR1, 서열 번호: 16의 CDR2, 및 서열 번호: 17의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-3으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 18의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 19의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 20의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 18의 CDR1 및 서열 번호: 19의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 18의 CDR1 및 서열 번호: 20의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 19의 CDR2 및 서열 번호: 20의 CDR2를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 18의 CDR1, 서열 번호: 19의 CDR2 및 서열 번호: 20의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-4로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 21의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 22의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 23의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 21의 CDR1 및 서열 번호: 23의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 22의 CDR2 및 서열 번호: 23의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 21의 CDR1, 서열 번호: 22의 CDR2, 및 서열 번호: 23의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-5로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 24의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 25의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 26의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 24의 CDR1 및 서열 번호: 25의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 24의 CDR1 및 서열 번호: 26의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 25의 CDR2 및 서열 번호: 26의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 24의 CDR1, 서열 번호: 25의 CDR2, 및 서열 번호: 26의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-6로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 27의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 28의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 29의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 27의 CDR1 및 서열 번호: 28의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 27의 CDR1 및 서열 번호: 29의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 28의 CDR2 및 서열 번호: 29의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 27의 CDR1, 서열 번호: 28의 CDR2, 및 서열 번호: 29의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-7로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 30의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 31의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 32의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 30의 CDR1 및 서열 번호: 31의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 30의 CDR1 및 서열 번호: 32의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 31의 CDR2 및 서열 번호: 32의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 30의 CDR1, 서열 번호: 31의 CDR2, 및 서열 번호: 32의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-8로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 33의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 34의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 35의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 33의 CDR1 및 서열 번호: 34의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 33의 CDR1 및 서열 번호: 35의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 34의 CDR2 및 서열 번호: 35의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 33의 CDR1, 서열 번호: 34의 CDR2, 및 서열 번호: 35의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-9로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 36의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 37의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 38의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 36의 CDR1 및 서열 번호: 37의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 36의 CDR1 및 서열 번호: 38의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 37의 CDR2 및 서열 번호: 38의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 36의 CDR1, 서열 번호: 38의 CDR2, 및 서열 번호: 38의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-10으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 39의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 40의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 41의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 39의 CDR1 및 서열 번호: 40의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 39의 CDR1 및 서열 번호: 41의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 40의 CDR2 및 서열 번호: 41의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 39의 CDR1, 서열 번호: 40의 CDR2, 및 서열 번호: 41의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-11로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 42의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 43의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 44의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 42의 CDR1 및 서열 번호: 43의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 42의 CDR1 및 서열 번호: 44의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 43의 CDR2 및 서열 번호: 44의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 42의 CDR1, 서열 번호: 43의 CDR2, 및 서열 번호: 44의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-12로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 45의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 46의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 47의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 45의 CDR1 및 서열 번호: 46의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 45의 CDR1 및 서열 번호: 47의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 46의 CDR2 및 서열 번호: 47의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 45의 CDR1, 서열 번호: 46의 CDR2, 및 서열 번호: 47의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-13으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 48의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 49의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 50의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 48의 CDR1 및 서열 번호: 49의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 48의 CDR1 및 서열 번호: 50의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 49의 CDR2 및 서열 번호: 50의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 48의 CDR1, 서열 번호: 49의 CDR2, 및 서열 번호: 50의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-14로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 51의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 52의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 53의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 51의 CDR1 및 서열 번호: 52의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 51의 CDR1 및 서열 번호: 53의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 52의 CDR2 및 서열 번호: 53의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 51의 CDR1, 서열 번호: 52의 CDR2, 및 서열 번호: 53의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-15로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 54의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 55의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 56의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 54의 CDR1 및 서열 번호: 55의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 54의 CDR1 및 서열 번호: 56의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 55의 CDR2 및 서열 번호: 56의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 54의 CDR1, 서열 번호: 55의 CDR2, 및 서열 번호: 56의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-16으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 57의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 58의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 59의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 57의 CDR1 및 서열 번호: 58의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 57의 CDR1 및 서열 번호: 59의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 58의 CDR2 및 서열 번호: 59의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 57의 CDR1, 서열 번호: 58의 CDR2, 및 서열 번호: 59의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-17로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 60의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 61의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 62의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 60의 CDR1 및 서열 번호: 61의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 60의 CDR1 및 서열 번호: 62의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 61의 CDR2 및 서열 번호: 62의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 60의 CDR1, 서열 번호: 61의 CDR2, 및 서열 번호: 62의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-18로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 63의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 64의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 65의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 63의 CDR1 및 서열 번호: 64의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 63의 CDR1 및 서열 번호: 65의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 64의 CDR2 및 서열 번호: 65의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 63의 CDR1, 서열 번호: 64의 CDR2, 및 서열 번호: 65의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-19로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 75의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 76의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 77의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 75의 CDR1 및 서열 번호: 76의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 75의 CDR1 및 서열 번호: 77의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 76의 CDR2 및 서열 번호: 77의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 75의 CDR1, 서열 번호: 76의 CDR2, 및 서열 번호: 77의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-20으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 78의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 79의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 80의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 78의 CDR1 및 서열 번호: 79의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 78의 CDR1 및 서열 번호: 80의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 79의 CDR2 및 서열 번호: 80의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 78의 CDR1, 서열 번호: 79의 CDR2, 및 서열 번호: 80의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-21로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 81의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 82의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 83의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 81의 CDR1 및 서열 번호: 82의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 81의 CDR1 및 서열 번호: 83의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 82의 CDR2 및 서열 번호: 83의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 81의 CDR1, 서열 번호: 82의 CDR2, 및 서열 번호: 83의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-12로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 84의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 85의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 86의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 84의 CDR1 및 서열 번호: 85의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 84의 CDR1 및 서열 번호: 86의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 85의 CDR2 및 서열 번호: 86의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 84의 CDR1, 서열 번호: 85의 CDR2, 및 서열 번호: 86의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-23으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 87의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 88의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 89의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 87의 CDR1 및 서열 번호: 88의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 87의 CDR1 및 서열 번호: 89의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 88의 CDR2 및 서열 번호: 89의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 87의 CDR1, 서열 번호: 88의 CDR2, 및 서열 번호: 89의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-24로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 90의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 91의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 92의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 90의 CDR1 및 서열 번호: 91의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 90의 CDR1 및 서열 번호: 92의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 91의 CDR2 및 서열 번호: 92의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 90의 CDR1, 서열 번호: 91의 CDR2, 및 서열 번호: 92의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-25로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 93의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 94의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 95의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 93의 CDR1 및 서열 번호: 94의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 93의 CDR1 및 서열 번호: 95의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 94의 CDR2 및 서열 번호: 95의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 93의 CDR1, 서열 번호: 94의 CDR2, 및 서열 번호: 95의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-26로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 96의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 97의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 98의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 96의 CDR1 및 서열 번호: 97의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 96의 CDR1 및 서열 번호: 98의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 97의 CDR2 및 서열 번호: 98의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 96의 CDR1, 서열 번호: 97의 CDR2, 및 서열 번호: 98의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-27로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 99의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 100의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 101의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 99의 CDR1 및 서열 번호: 100의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 99의 CDR1 및 서열 번호: 101의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 100의 CDR2 및 서열 번호: 101의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 99의 CDR1, 서열 번호: 100의 CDR2, 및 서열 번호: 101의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-28로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 102의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 103의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 104의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 102의 CDR1 및 서열 번호: 103의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 102의 CDR1 및 서열 번호: 104의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 103의 CDR2 및 서열 번호: 104의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 102의 CDR1, 서열 번호: 103의 CDR2, 및 서열 번호: 104의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-29로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 105의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 106의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 107의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 105의 CDR1 및 서열 번호: 106의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호:105의 CDR1 및 서열 번호: 107의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 106의 CDR2 및 서열 번호: 107의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 105의 CDR1, 서열 번호: 106의 CDR2, 및 서열 번호: 107의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-30으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 108의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 109의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 110의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 108의 CDR1 및 서열 번호: 109의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 108의 CDR1 및 서열 번호: 110의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 109의 CDR2 및 서열 번호: 110의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 108의 CDR1, 서열 번호: 109의 CDR2, 및 서열 번호: 110의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-31로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 111의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 112의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 113의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 111의 CDR1 및 서열 번호: 112의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 111의 CDR1 및 서열 번호: 113의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 112의 CDR2 및 서열 번호: 113의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 111의 CDR1, 서열 번호: 112의 CDR2, 및 서열 번호: 113의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-32로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 114의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 115의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 116의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 114의 CDR1 및 서열 번호: 115의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 114의 CDR1 및 서열 번호: 116의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 115의 CDR2 및 서열 번호: 116의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 114의 CDR1, 서열 번호: 115의 CDR2, 및 서열 번호: 116의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-33으로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 117의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 118의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 119의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 117의 CDR1 및 서열 번호: 118의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 117의 CDR1 및 서열 번호: 119의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 118의 CDR2 및 서열 번호: 119의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 117의 CDR1, 서열 번호: 118의 CDR2, 및 서열 번호: 119의 CDR3을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN sdAb는 항-MSLN-34로부터의 하나 이상의 CDR 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 CDR1의 아미노산 서열을 갖는 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR2의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 CDR1 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 갖는다. CDR 서열은 잘 공지된 번호매김 시스템에 따라 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, CDR은 라밧 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 AbM 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 번호매김에 따른다. 다른 구현예에서, CDR은 컨택트 번호매김에 따른다. 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 번호매김에 따른다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 120의 CDR1을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 121의 CDR2를 갖는다. 다른 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 122의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 120의 CDR1 및 서열 번호: 121의 CDR2를 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 120의 CDR1 및 서열 번호: 122의 CDR3을 갖는다. 일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 121의 CDR2 및 서열 번호: 122의 CDR3을 갖는다. 구체적인 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 120의 CDR1, 서열 번호: 121의 CDR2, 및 서열 번호: 122의 CDR3을 갖는다.
본원에 제공된 MSLN에 결합하는 다양한 sdAb의 일부 구현예에서, sdAb는 표 9에 나타낸 바와 같은 항체 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 및 항-MSLN-34의 하나 이상의 FR 서열을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3, 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 123에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 124에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 125에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 126에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 127에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 128에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 129에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 130에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 131에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 132에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 133에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 134에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 135에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 136에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 137에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 138에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 190에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 139에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 140에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 141에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 142에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 143에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 144에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 145에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 146에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 147에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 148에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 149에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 150에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 151에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 152에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 153에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 154에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 155에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1의 아미노산 서열을 갖는 FR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR2의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR2 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR3 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR3의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR3 및 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR2, FR3 및 FR4를 포함한다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 서열 번호: 156에 나타낸 바와 같은 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 아미노산 서열을 갖는 FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 sdAb는 표 11에서의 하나 이상의 사람화된 FR 서열을 포함하는 사람화된 sdAb이다. 본원에 제공된 사람화된 sdAb의 보다 상세한 설명은 하기 제공한다.
본원에 기술된 골격 영역은 CDR 번호매김 시스템의 경계를 기반으로 측정된다. 다시 말해서, CDR이 예컨대, 라밧, IMGT, 또는 초티아에 의해 측정된 경우, 골격 영역은 N-말단으로터 C-말단까지 다음의 포맷으로 가변 영역내 CDR을 둘러싸는 아미노산 잔기이다: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. 예를 들면, FR1은 예컨대, 카밧 번호매김 시스템, IMGT 번호매김 시스템, 또는 초티아 번호매김 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1 아미노산 잔기에 대해 N-말단의 아미노산 잔기로 정의되고, FR2는 예컨대, 라밧 번호매김 시스템, IMGT 번호매김 시스템, 또는 초티아 번호매김 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR1과 CDR2 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로 정의되고, FR3은 예컨대, 라밧 번호매김 시스템, IMGT 번호매김 시스템, 또는 초티아 번호매김 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR2와 CDR3 아미노산 잔기 사이의 아미노산 잔기로 정의되고, FR4는 예컨대, 라밧 번호매김 시스템, IMGT 번호매김 시스템, 또는 초티아 번호매김 시스템에 의해 정의된 바와 같은 CDR3에 대해 C-말단의 아미노산 잔기로 정의된다.
특정의 보다 구체적인 구현예에서, sdAb는 하기 실시예의 표 9에 나타낸 바와 같은 VH(또는 VHH) 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 124의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 125의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 126의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 127의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 128의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 129의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 130의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 131의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 132의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 135의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 136의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 137의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 138의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 139의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 140의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 150의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 151의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 152의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 서열 번호: 156의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 0.01 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 0.1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 90nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 80nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 70nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 60nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 50nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 40nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 30nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 20nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 1 내지 10nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 0.1 내지 1nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 0.01 내지 1nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, sdAb는 MSLN에 0.01 내지 0.1nM의 KD로 결합한다.
일부 구현예에서, 암 항원에 결합하는 결합 분자는 암 세포 상에 발현된 항원에 각각 결합하는 2개의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 암 세포는 고형 종양 암 세포이다. 일부 구현예에서, 2개의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 2개의 sdAb이다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb는 VhH 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN의 2개의 상이한 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 하나의 에피토프는 MSLN의 N-말단 상에 존재하고 다른 에피토프는 MSLN의 C-말단 상에 존재한다.
일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 0.01 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 0.1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 90nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 80nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 80nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 70nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 60nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 50nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 40nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 30nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 20nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 10nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 0.1 내지 1nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 sdAb 각각은 MSLN에 0.01 내지 0.1nM의 KD로 결합한다.
다른 구현예에서, 2개의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 제3의 링커(linker)에 의해 연결된다.
여전히 다른 양태에서, 상술한 MSLN에 결합하는 단일 도메인 항체 중 하나와 경쟁하는 항체가 본원에 제공된다. 이러한 항체는 또한 상기 언급한 단일 도메인 항체 중 하나와 동일한 에피토프, 또는 오버래핑(overlapping) 에피토프에 결합할 수 있다. 상술한 항체와 동일한 에피토프와 경쟁하거나 결합하는 항체 및 단편은 유사한 기능적 특성을 나타내는 것으로 예측된다. 예시된 항원-결합 단백질 및 단편은 표 5 및 7의 것을 포함하는, 본원에 제공된 VH 영역, 및 CDR을 지닌 것을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 표 9에 나타낸 바와 같은 항체 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 및 항-MSLN-34 중 어느 하나에 대해 특정의 동일성 퍼센트를 지닌 아미노산 서열을 포함한다.
2개의 서열(예컨대, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 사이의 동일성 퍼센트(percent identity)의 측정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다. 2개의 서열의 비교를 위해 사용된 수학적 알고리즘의 비-제한적 예는 문헌: Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877에서와 같이 변형된 문헌: Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 문헌: Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램으로 혼입된다. BLAST 뉴클레오타이드 조사는 NBLAST 뉴클레오타이드 프로그램 매개변수 세트, 예컨대, 점수 = 100인 경우, 단어길이 = 12를 사용하여 수행함으로써 본원에 기술된 핵산 분자에 대해 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 조사는 XBLAST 프로그램 매개변수 세트, 예컨대, 점수 50에 대해, 단어길이 = 3을 사용하여 수행함으로써 본원에 기술된 단백질 분자에 대해 상동성인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭이 있는(gapped) 정렬을 수득하기 위해, 갭이 있는 BLAST를 문헌: Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389 3402에 기술된 바와 같이 활용할 수 있다. 대안적으로, PSI BLAST를 사용하여 분자 사이의 명확한 관계를 검출하는 반복된 조사를 수행할 수 있다(상기와 동일). BLAST, 갭이 있는 BLAST, 및 PSI Blast 프로그램을 활용하는 경우, 각각의 프로그램(예컨대, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수(default parameter)를 사용할 수 있다(참고: 예컨대, 월드 와이드 웹(www), ncbi.nlm.nih.gov 상의 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information: NCBI). 서열의 비교를 위해 활용된 수학적 알고리즘의 또 다른 바람직한 비 제한적 예는 문헌: Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11 17의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 부분인 ALIGN 프로그램(버젼 2.0) 내로 혼입된다. 아미노산 서열을 비교하기 위햐 ALIGN 프로그램을 활용하는 경우, PAM120 중량 잔기 표(weight residue table), 12의 갭 길이 패널티(gap length panalty), 및 4의 갭 패널티를 사용할 수 있다.
2개의 서열 사이의 동일성 퍼센트는 갭을 허용하거나 허용하지 않으면서, 상술한 것과 유사한 기술을 사용하여 측정할 수 있다. 동일성 퍼센트를 계산하는데 있어서, 전형적으로 정확한 일치만이 계산된다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 123의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 124의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 125의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 126의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 127의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 128의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 129의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 130의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 131의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 132의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 133의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 134의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 135의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 136의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 137의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 138의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 139의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 140의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 141의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 142의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 143의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 144의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 145의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 146의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 147의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 148의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 149의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 150의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 151의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 152의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 153의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 154의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 155의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 156의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 123의 골격 영역(framework region)의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-1의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 124의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-2의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 125의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-3의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 126의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-4의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 127의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-5의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 128의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-6의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 129의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-7의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 130의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-8의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 131의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-9의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 132의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-10의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 133의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-11의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 134의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-12의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 135의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-13의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 136의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-14의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 137의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-15의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 138의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-16의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 139의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-17의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 140의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-18의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 141의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-19의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 142의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-20의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 143의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-21의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 144의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-22의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 145의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-23의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 146의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-24의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 147의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-25의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 148의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-26의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 149의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-27의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 150의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-28의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 151의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-29의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 152의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-30의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 153의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-31의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 154의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-32의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 155의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-33의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
특정의 구현예에서, 본원에 기술된 항체 또는 항원-결합 이의 단편은 서열 번호: 156의 골격 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 VH 골격 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하고, 여기서 항체는 MSLN에 면역특이적으로 결합한다. 구체적인 구현예에서, 이러한 항체는 항체 항-MSLN-34의 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)과 동일한 CDR(예컨대, VH CDR 1 내지 3)을 포함한다.
사람화된 단일 도메인 항체
본원에 기술된 단일 도메인 항체는 사람화된 단일 도메인 항체를 포함할 수 있다.
사람화된 항체는 CDR-그래프팅(grafting)(유럽 특허 제EP 239,400호; 국제 공보 제WO 91/09967호; 및 미국 특허 제5,225,539호, 제5,530,101호, 및 제5,585,089호), 베니어링(veneering) 또는 재표면화(resurfacing)(유럽 특허 제EP 592,106호 및 제EP 519,596호; Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814; 및 Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973), 쇄 셔플링(chain shuffling)(미국 특허 제5,565,332호), 및 예컨대, 미국 특허 제6,407,213호, 미국 특허 제5,766,886호, 제WO 9317105호, Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996), Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s- 5977s (1995), Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995), Sandhu JS, Gene 150(2):409-10 (1994), 및 Pedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994)에 개시된 기술을 포함하나, 이에 한정되지 않는 당해 분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산할 수 있다. 또한 미국 특허 공보 제US 2005/0042664 A1호(2005년 2월 24일)를 참고하고, 이들 각각은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 MSLN, 예를 들면, 사람 MSLN에 결합하는 사람화된 항체일 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 사람화된 항체는 표 4 및 표 10에 나타낸 바와 같은 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 비-사람 항체를 사람화하기 위한 다양한 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, 사람화된 항체는 비-사람인 공급원으로부터 이에 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 이러한 비-사람 아미노산 잔기는 "도입(import)" 잔기로 흔히 지칭되며, 이는 전형적으로 "도입" 가변 도메인으로부터 취해진다. 사람화는 예를 들면, 사람 항체의 상응하는 서열에 대한 초가변 영역 서열을 치환시킴으로써 문헌: Jones et al., 1986, Nature 321:522-25; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-27; 및 Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-36의 방법에 따라 수행할 수 있다.
일부 경우에, 사람화된 항체는 CDR 그래프팅에 의해 작제되며, 여기서 모(parent) 비-사람 항체의 CDR의 아미노산 서열은 사람 항체 골격 상에 그래프팅된다. 예를 들면, 파들란(Padlan) 등은 CDR내 잔기의 약 1/3 만이 항원과 실제로 접촉함을 측정하였으며, 이를 "특이성 결정 잔기" 또는 SDR로 명명하였다(Padlan et al., 1995, FASEB J. 9:133-39). SDR 그래프팅의 기술에서, SDR 잔기 만이 사람 항체 골격에 그래프팅된다(참고: 예컨대, Kashmiri et al., 2005, Methods 36:25-34).
사람화된 항체를 제조하는데 사용될 사람 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키는데 중요할 수 있다. 예를 들면, 소위 "베스트-핏(best-fit)" 방법에 따라서, 비-사람 항체의 가변 도메인의 서열을 공지된 가변-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝된다. 비-사람 항체의 서열과 가장 근접한 사람 서열은 사람화된 항체에 대한 사람 골격으로서 선택될 수 있다(Sims et al., 1993, J. Immunol. 151:2296-308; 및 Chothia et al., 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17). 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특수한 소그룹의 모든 사람 항체의 컨센수스 서열(consensus sequence)로부터 유래된 특수한 골격을 사용한다. 동일한 골격은 몇가지 상이한 사람화된 항체에 대해 사용될 수 있다(Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89; 및 Presta et al., 1993, J. Immunol. 151:2623-32). 일부 경우에, 골격은 가장 풍부한 사람 소부류, Vl6 소그룹 I(VL6I) 및 VH 소그룹 III(VHIII)의 컨센수스 서열(consensus sequence)로부터 유래된다. 다른 방법에서, 사람 배선(germline) 유전자는 골격 영역의 공급원으로서 사용된다.
초사람화(superhumanization)로 불리는, CDR의 비교를 기반으로 한 대안적인 페러다임에서, FR 상동성은 무관하다. 방법은 비-사람 서열과 기능적 사람 배선 유전자 레퍼토리의 비교로 이루어진다. 이후에 쥐 서열에 대해 동일하거나 근접하게 관련된 표준 구조(canonical structure)를 암호화하는 유전자를 선택한다. 다음에, 비-사람 항체를 지닌 표준 구조를 공유하는 유전자 내에서, CDR내에 최고의 상동성을 지닌 것을 FR 공여체로서 선택한다. 최종적으로, 비-사람 CDR은 이러한 FR로 그래프팅된다(참고: 예컨대, Tan et al., 2002, J. Immunol. 169:1119-25).
항체가 항원에 대한 이의 친화성 및 다른 유리한 생물학적 특성을 보유하면서 사람화된 항체가 또한 일반적으로 바람직하다. 이러한 목표를 달성하기 위해, 하나의 방법에 따라서, 사람화된 항체를 모 서열 및 모 서열과 사람화된 서열의 3차원 모델을 사용하여 다양한 개념의 사람화된 생성물을 분석하는 공정에 의해 제조한다. 3차원 면역글로불린 모델이 일반적으로 이용가능하며 당해 분야의 기술자에게 친숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 구성적 구조를 나열하고 나타내는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이는 예를 들면, WAM(Whitelegg and Rees, 2000, Protein Eng. 13:819-24), Modeller(Sali and Blundell, 1993, J. Mol. Biol. 234:779-815), 및 Swiss PDB Viewer(Guex and Peitsch, 1997, Electrophoresis 18:2714-23)를 포함한다. 이러한 디스플레이의 점검은 후보 면역글로불린 서열의 기능화시 잔기의 예상되는 역활의 분석, 예컨대, 이의 항원에 결합하기 위한 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이러한 방식으로, FR 잔기를 선택하여 수용체로부터 합하여 서열을 도입함으로써 목적한 항체 특성, 예를 들면, 표적 항원(들)에 대해 증가된 친화성을 달성할 수 있다. 일반적으로, 초가변 영역 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는데 있어서 직접적으로 및 가장 실질적으로 관련된다.
항체 사람화를 위한 다른 방법은 사람 스트링 함량(Human String Content: HSC)으로 명명된 항체 사람화(humanness)의 미터법을 기반으로 한다. 이러한 방법은 마우스 서열을 사람 배선 유전자의 레퍼토리와 비교하며, 차이를 HSC로 점수매긴다. 이후에, 다수의 다양한 사람화된 변이체를 생성하기 위한 전반적인 동일성 척도를 사용하기 보다는 이의 HSC를 최대화함으로써 표적 서열을 사람화한다(Lazar et al., 2007, Mol. Immunol. 44:1986-98).
상술한 방법 외에, 실증적 방법을 사용하여 사람화된 항체를 생성시키고 선택할 수 있다. 이러한 방법은 사람화된 변이체의 큰 라이브러리의 생성 및 많은 기술 또는 고 처리량 스크리닝 기술을 사용한 가장 우수한 클론의 선택을 기반으로 한다. 항체 변이체는 파아지, 리보소옴, 및 효모 디스플레이 라이브러리로부터 뿐만 아니라 세균 콜로니 스크리닝에 의해 단리할 수 있다(참고: 예컨대, Hoogenboom, 2005, Nat. Biotechnol. 23:1105-16; Dufner et al., 2006, Trends Biotechnol. 24:523-29; Feldhaus et al., 2003, Nat. Biotechnol. 21:163-70; 및 Schlapschy et al., 2004, Protein Eng. Des. Sel. 17:847-60).
FR 라이브러리 접근법에서, 잔기 변이체의 수집은 그래프팅된 CDR을 가장 잘 뒷받침하는 FR을 선택하기 위해 라이브러리를 스크리닝함으로써 FR 내 특정 위치에서 도입된다. 치환될 잔기는 CCR 구조에 잠재적으로 기여하는 것으로 확인된 "베르니어(Vernier)" 잔기(참고: 예컨대, Foote and Winter, 1992, J. Mol. Biol. 224:487-99), 또는 베카(Beca)(1997, J. Biol. Chem. 272:10678-84) 등에 의해 확인된 표적 잔기의 보다 제한된 세트로부터의 일부 또는 모두를 포함할 수 있다.
FR 셔플링(shuffling)에서, 전체 FR은 선택된 잔기 변이체의 조합 라이브러리를 창조하는 대신 비-사람 CDR과 조합된다(참고: 예컨대, Dall'Acqua et al., 2005, Methods 36:43-60). 1-단계 FR 셔플링 공정을 사용할 수 있다. 이러한 공정은 수득되는 항체가 향상된 발현, 증가된 친화성, 및 열 안정성을 포함하는 개선된 생화학적 및 물리화학적 특성을 나타내었으므로, 효율적인 것으로 밝혀졌다(참고: 예컨대, Damschroder et al., 2007, Mol. Immunol. 44:3049-60).
"사람 가공(human engineering)" 방법은 필수적인 최소의 특이성 결정인자(MSD)의 확인을 기반으로 하고 비-사람 단편의 사람 FR 라이브러리 내로의 순차적인 대체 및 결합의 평가를 기반으로 한다. 이러한 방법론은 전형적으로 에피토프 보유 및 확실한 사람 V-분절 CDR을 지닌 다수의 소부류로부터 항체의 확인을 야기한다.
"사람 가공" 방법은 항체의 아미노산 서열에 대해 구체적인 변화를 만들어 비-사람 항체 또는 항체 단편을 변경시킴으로써 그럼에도 원래의 비-사람 항체의 목적한 결합 특성을 보유하는 사람에서 감소된 면역원성을 지닌 변형된 항체를 생산함을 포함한다. 일반적으로, 이러한 기술은 비-사람 항체의 아미노산 잔기를 "저 위험", "중간 위험", 또는 "고 위험" 잔기로 분류함을 포함한다. 분류는 치환이 생성되는 항체의 폴딩(folding)에 영향을 미칠 위험에 대해 특수한 치환을 제조하는 예측된 이점(예컨대, 사람에서 면역원성)을 평가하는 전반적인 위험/보상 계산을 사용하여 수행한다. 비-사람 항체 서열의 주어진 위치(예컨대, 저 위험 또는 중간 위험)에서 치환될 특수한 사람 아미노산 잔기는 비-사람 항체의 가변 영역으로부터의 아미노산 서열을 구체적인 또는 컨센수스 사람 항체 서열의 상응하는 영역과 정렬시킴으로써 선택할 수 있다. 비-사람 서열 내 저 위험 또는 중간 위험 위치에서의 아미노산 잔기는 정렬에 따라 사람 서열 내 상응하는 잔기에 대해 치환될 수 있다. 사람 가공된 단백질을 제조하기 위한 기술은 문헌: Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7:805-14; 미국 특허 제5,766,886호; 제5,770,196호; 제5,821,123호; 및 제5,869,619호; 및 PCT 공보 제WO 93/11794호에 보다 상세히 기술되어 있다.
복합 사람 항체는 예를 들면, Composite Human antibody™ Technology(Antitope Ltd., 영국 캠브릿지 소재)를 사용하여 생성할 수 있다. 복합 사람 항체를 생성시키기 위해, 가변 영역 서열을 T 세포 에피토프를 피하는 방식으로 다수의 사람 항체 가변 영역 서열의 단편으로부터 설계함으로써, 수득되는 항체의 면역원성을 최소화시킨다.
탈면역화된 항체는 T-세포 에피토프가 제거된 항체이다. 탈면역화된 항체를 제조하는 방법은 기술되어 있다. 예컨대, 문헌: Jones et al., Methods Mol Biol. 2009;525:405-23, xiv, 및 De Groot et al., Cell. Immunol. 244:148-153(2006)를 참고한다. 탈면역화된 항체는 T-세포 에피토프-고갈된(depleted) 가변 영역 및 사람 불변 영역을 포함한다. 요약하면, 항체의 가변 영역을 클로닝하고 T 세포 증식 검정에서 항체의 가변 영역으로부터 유래된 오버래핑 펩타이드를 시험함으로써 T-세포 에피토프를 후속적으로 확인한다. T 세포 에피토프는 인 실리코(in silico) 방법을 통해 확인함으로써 사람 MHC 제II 부류에 대한 펩타이드 결합을 확인한다. 돌연변이를 가변 영역 내에 도입하여 사람 MHC 제II 부류에 대한 결합을 제거(abrogate)한다. 이후에 돌연변이된 가변 영역을 활용하여 탈면역화된 항체를 생성한다.
구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 단일 도메인 항체는 하기 실시예 3에 기술된 방법에 따라 생성된 사람화된 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 도메인 항체는 하기 실시예 3에서 표 11에 나타낸 하나 이상의 FR 서열을 포함하는 사람화된 단일 도메인 항체이다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-1의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 157의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 158의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 159의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 157의 FR1 및 서열 번호: 158의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 157의 FR1 및 서열 번호: 159의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 157의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 158의 FR2 및 서열 번호: 159의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 158의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 159의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호:157의 FR1, 서열 번호: 158의 FR2 및 서열 번호: 159의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 157의 FR1, 서열 번호: 158의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 157의 FR1, 서열 번호: 159의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 158의 FR2, 서열 번호: 159의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 157의 FR1, 서열 번호: 158의 FR2, 서열 번호: 159의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 12의 CDR1, 서열 번호: 13의 CDR2, 서열 번호: 14의 CDR3, 서열 번호: 157의 FR1, 서열 번호: 158의 FR2, 서열 번호: 159의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-2의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 162의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 163의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1 및 서열 번호: 162의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1 및 서열 번호: 163의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 162의 FR2 및 서열 번호: 163의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 162의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 163의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1, 서열 번호: 162의 FR2 및 서열 번호: 163의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1, 서열 번호: 162의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1, 서열 번호: 163의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 162의 FR2, 서열 번호: 163의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 161의 FR1, 서열 번호: 162의 FR2, 서열 번호: 163의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 15의 CDR1, 서열 번호: 16의 CDR2, 서열 번호: 17의 CDR3, 서열 번호: 161의 FR1, 서열 번호: 162의 FR2, 서열 번호: 163의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-3의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 165의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 166의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1 및 서열 번호: 165의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1 및 서열 번호: 166의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 165의 FR2 및 서열 번호: 166의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 165의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 166의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1, 서열 번호: 165의 FR2 및 서열 번호: 166의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1, 서열 번호: 165의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1, 서열 번호: 166의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 165의 FR2, 서열 번호: 166의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 164의 FR1, 서열 번호: 165의 FR2, 서열 번호: 166의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 18의 CDR1, 서열 번호: 19의 CDR2, 서열 번호: 20의 CDR3, 서열 번호: 164의 FR1, 서열 번호: 165의 FR2, 서열 번호: 166의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-4의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 168의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 169의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1 및 서열 번호: 168의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1 및 서열 번호: 169의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 168의 FR2 및 서열 번호: 169의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 168의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 169의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1, 서열 번호: 168의 FR2 및 서열 번호: 169의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1, 서열 번호: 168의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1, 서열 번호: 169의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 168의 FR2, 서열 번호: 169의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 167의 FR1, 서열 번호: 168의 FR2, 서열 번호: 169의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 21의 CDR1, 서열 번호: 22의 CDR2, 서열 번호: 23의 CDR3, 서열 번호: 167의 FR1, 서열 번호: 168의 FR2, 서열 번호: 169의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-5의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 171의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 172의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1 및 서열 번호: 171의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1 및 서열 번호: 172의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 171의 FR2 및 서열 번호: 172의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 171의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 172의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1, 서열 번호: 171의 FR2 및 서열 번호: 172의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1, 서열 번호: 171의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1, 서열 번호: 172의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 171의 FR2, 서열 번호: 172의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 170의 FR1, 서열 번호: 171의 FR2, 서열 번호: 172의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 24의 CDR1, 서열 번호: 25의 CDR2, 서열 번호: 26의 CDR3, 서열 번호: 170의 FR1, 서열 번호: 171의 FR2, 서열 번호: 172의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-6의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 174의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 175의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1 및 서열 번호: 174의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1 및 서열 번호: 175의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 174의 FR2 및 서열 번호: 175의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 174의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 175의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1, 서열 번호: 174의 FR2 및 서열 번호: 175의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1, 서열 번호: 174의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1, 서열 번호: 175의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 174의 FR2, 서열 번호: 175의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 173의 FR1, 서열 번호: 174의 FR2, 서열 번호: 175의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 27의 CDR1, 서열 번호: 28의 CDR2, 서열 번호: 29의 CDR3, 서열 번호: 173의 FR1, 서열 번호: 174의 FR2, 서열 번호: 175의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-7의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 177의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 178의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1 및 서열 번호: 177의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1 및 서열 번호: 178의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 177의 FR2 및 서열 번호: 178의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 177의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 178의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1, 서열 번호: 177의 FR2 및 서열 번호: 178의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1, 서열 번호: 177의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1, 서열 번호: 178의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 177의 FR2, 서열 번호: 178의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 176의 FR1, 서열 번호: 177의 FR2, 서열 번호: 178의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 30의 CDR1, 서열 번호: 31의 CDR2, 서열 번호: 32의 CDR3, 서열 번호: 176의 FR1, 서열 번호: 177의 FR2, 서열 번호: 178의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-8의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 180의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 181의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1 및 서열 번호: 180의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1 및 서열 번호: 181의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 180의 FR2 및 서열 번호: 181의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 180의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 181의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1, 서열 번호: 180의 FR2 및 서열 번호: 181의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1, 서열 번호: 180의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1, 서열 번호: 181의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 180의 FR2, 서열 번호: 181의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 179의 FR1, 서열 번호: 180의 FR2, 서열 번호: 181의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 33의 CDR1, 서열 번호: 34의 CDR2, 서열 번호: 35의 CDR3, 서열 번호: 179의 FR1, 서열 번호: 180의 FR2, 서열 번호: 181의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-9의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 183의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 184의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1 및 서열 번호: 183의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1 및 서열 번호: 184의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 183의 FR2 및 서열 번호: 184의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 183의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 184의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1, 서열 번호: 183의 FR2 및 서열 번호: 184의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1, 서열 번호: 183의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1, 서열 번호: 184의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 183의 FR2, 서열 번호: 184의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 182의 FR1, 서열 번호: 183의 FR2, 서열 번호: 184의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 36의 CDR1, 서열 번호: 37의 CDR2, 서열 번호: 38의 CDR3, 서열 번호: 182의 FR1, 서열 번호: 183의 FR2, 서열 번호: 184의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-10의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 186의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 187의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1 및 서열 번호: 186의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1 및 서열 번호: 187의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 186의 FR2 및 서열 번호: 187의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 186의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 187의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1, 서열 번호: 186의 FR2 및 서열 번호: 187의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1, 서열 번호: 186의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1, 서열 번호: 187의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 186의 FR2, 서열 번호: 187의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 185의 FR1, 서열 번호: 186의 FR2, 서열 번호: 187의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 39의 CDR1, 서열 번호: 40의 CDR2, 서열 번호: 41의 CDR3, 서열 번호: 185의 FR1, 서열 번호: 186의 FR2, 서열 번호: 187의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-11의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 189의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 190의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1 및 서열 번호: 189의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1 및 서열 번호: 190의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 189의 FR2 및 서열 번호: 190의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 189의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 190의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1, 서열 번호: 189의 FR2 및 서열 번호: 190의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1, 서열 번호: 189의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1, 서열 번호: 190의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 189의 FR2, 서열 번호: 190의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 188의 FR1, 서열 번호: 189의 FR2, 서열 번호: 190의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 42의 CDR1, 서열 번호: 43의 CDR2, 서열 번호: 44의 CDR3, 서열 번호: 188의 FR1, 서열 번호: 189의 FR2, 서열 번호: 190의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-12의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 192의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 193의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1 및 서열 번호: 192의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1 및 서열 번호: 193의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 192의 FR2 및 서열 번호: 193의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 192의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 193의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1, 서열 번호: 192의 FR2 및 서열 번호: 193의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1, 서열 번호: 192의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1, 서열 번호: 193의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 192의 FR2, 서열 번호: 193의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 191의 FR1, 서열 번호: 192의 FR2, 서열 번호: 193의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 45의 CDR1, 서열 번호: 46의 CDR2, 서열 번호: 47의 CDR3, 서열 번호: 191의 FR1, 서열 번호: 192의 FR2, 서열 번호: 193의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-13의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 195의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 196의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1 및 서열 번호: 195의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1 및 서열 번호: 196의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 195의 FR2 및 서열 번호: 196의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 195의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 196의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1, 서열 번호: 195의 FR2 및 서열 번호: 196의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1, 서열 번호: 195의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1, 서열 번호: 196의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 195의 FR2, 서열 번호: 196의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 194의 FR1, 서열 번호: 195의 FR2, 서열 번호: 196의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 48의 CDR1, 서열 번호: 49의 CDR2, 서열 번호: 50의 CDR3, 서열 번호: 194의 FR1, 서열 번호: 195의 FR2, 서열 번호: 196의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-14의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 198의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 199의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1 및 서열 번호: 198의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1 및 서열 번호: 199의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 198의 FR2 및 서열 번호: 199의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 198의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 199의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1, 서열 번호: 198의 FR2 및 서열 번호: 199의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1, 서열 번호: 198의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1, 서열 번호: 199의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 198의 FR2, 서열 번호: 199의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 197의 FR1, 서열 번호: 198의 FR2, 서열 번호: 199의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 51의 CDR1, 서열 번호: 52의 CDR2, 서열 번호: 53의 CDR3, 서열 번호: 197의 FR1, 서열 번호: 198의 FR2, 서열 번호: 199의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-15의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 201의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 202의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1 및 서열 번호: 201의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1 및 서열 번호: 202의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 201의 FR2 및 서열 번호: 202의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 201의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 202의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1, 서열 번호: 201의 FR2 및 서열 번호: 202의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1, 서열 번호: 201의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1, 서열 번호: 202의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 201의 FR2, 서열 번호: 202의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 200의 FR1, 서열 번호: 201의 FR2, 서열 번호: 202의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 54의 CDR1, 서열 번호: 55의 CDR2, 서열 번호: 56의 CDR3, 서열 번호: 200의 FR1, 서열 번호: 201의 FR2, 서열 번호: 202의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-16의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 204의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 205의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1 및 서열 번호: 204의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1 및 서열 번호: 205의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 204의 FR2 및 서열 번호: 205의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 204의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 205의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1, 서열 번호: 204의 FR2 및 서열 번호: 205의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1, 서열 번호: 204의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1, 서열 번호: 205의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 204의 FR2, 서열 번호: 205의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 203의 FR1, 서열 번호: 204의 FR2, 서열 번호: 205의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 57의 CDR1, 서열 번호: 58의 CDR2, 서열 번호: 59의 CDR3, 서열 번호: 203의 FR1, 서열 번호: 204의 FR2, 서열 번호: 205의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-17의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 207의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 208의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1 및 서열 번호: 207의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1 및 서열 번호: 208의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 207의 FR2 및 서열 번호: 208의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 207의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 208의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1, 서열 번호: 207의 FR2 및 서열 번호: 208의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1, 서열 번호: 207의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1, 서열 번호: 208의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 207의 FR2, 서열 번호: 208의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 206의 FR1, 서열 번호: 207의 FR2, 서열 번호: 208의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 60의 CDR1, 서열 번호: 61의 CDR2, 서열 번호: 62의 CDR3, 서열 번호: 206의 FR1, 서열 번호: 207의 FR2, 서열 번호: 208의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-18의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 210의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 211의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1 및 서열 번호: 210의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1 및 서열 번호: 211의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 210의 FR2 및 서열 번호: 211의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 210의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 211의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1, 서열 번호: 210의 FR2 및 서열 번호: 211의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1, 서열 번호: 210의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1, 서열 번호: 211의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 210의 FR2, 서열 번호: 211의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 209의 FR1, 서열 번호: 210의 FR2, 서열 번호: 211의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 63의 CDR1, 서열 번호: 64의 CDR2, 서열 번호: 65의 CDR3, 서열 번호: 209의 FR1, 서열 번호: 210의 FR2, 서열 번호: 211의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-19의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 213의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 214의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1 및 서열 번호: 213의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1 및 서열 번호: 214의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 213의 FR2 및 서열 번호: 214의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 213의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 214의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1, 서열 번호: 213의 FR2 및 서열 번호: 214의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1, 서열 번호: 213의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1, 서열 번호: 214의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 213의 FR2, 서열 번호: 214의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 212의 FR1, 서열 번호: 213의 FR2, 서열 번호: 214의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 75의 CDR1, 서열 번호: 76의 CDR2, 서열 번호: 77의 CDR3, 서열 번호: 212의 FR1, 서열 번호: 213의 FR2, 서열 번호: 214의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-20의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 216의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 217의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1 및 서열 번호: 216의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1 및 서열 번호: 217의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 216의 FR2 및 서열 번호: 217의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 216의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 217의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1, 서열 번호: 216의 FR2 및 서열 번호: 217의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1, 서열 번호: 216의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1, 서열 번호: 217의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 216의 FR2, 서열 번호: 217의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 215의 FR1, 서열 번호: 216의 FR2, 서열 번호: 217의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 78의 CDR, 서열 번호: 79의 CDR2, 서열 번호: 80의 CDR3, 서열 번호: 215의 FR1, 서열 번호: 216의 FR2, 서열 번호: 217의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-21의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 219의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 220의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1 및 서열 번호: 219의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1 및 서열 번호: 220의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 219의 FR2 및 서열 번호: 220의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 219의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 220의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1, 서열 번호: 219의 FR2 및 서열 번호: 220의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1, 서열 번호: 219의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1, 서열 번호: 220의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 219의 FR2, 서열 번호: 220의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 218의 FR1, 서열 번호: 219의 FR2, 서열 번호: 220의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 81의 CDR1, 서열 번호: 82의 CDR2, 서열 번호: 83의 CDR3, 서열 번호: 218의 FR1, 서열 번호: 219의 FR2, 서열 번호: 220의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-22의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 222의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 223의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1 및 서열 번호: 222의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1 및 서열 번호: 223의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 222의 FR2 및 서열 번호: 223의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 222의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 223의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1, 서열 번호: 222의 FR2 및 서열 번호: 223의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1, 서열 번호: 222의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1, 서열 번호: 223의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 222의 FR2, 서열 번호: 223의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 221의 FR1, 서열 번호: 222의 FR2, 서열 번호: 223의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 84의 CDR1, 서열 번호: 85의 CDR2, 서열 번호: 86의 CDR3, 서열 번호: 221의 FR1, 서열 번호: 222의 FR2, 서열 번호: 223의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-23의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 225의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 226의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1 및 서열 번호: 225의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1 및 서열 번호: 226의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 225의 FR2 및 서열 번호: 226의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 225의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 226의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1, 서열 번호: 225의 FR2 및 서열 번호: 226의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1, 서열 번호: 225의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1, 서열 번호: 226의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 225의 FR2, 서열 번호: 226의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 224의 FR1, 서열 번호: 225의 FR2, 서열 번호: 226의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 87의 CDR1, 서열 번호: 88의 CDR2, 서열 번호: 89의 CDR3, 서열 번호: 224의 FR1, 서열 번호: 225의 FR2, 서열 번호: 226의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-24의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 228의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 229의 FR3. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1 및 서열 번호: 228의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1 및 서열 번호: 229의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 228의 FR2 및 서열 번호: 229의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 228의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 229의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1, 서열 번호: 228의 FR2 및 서열 번호: 229의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1, 서열 번호: 228의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1, 서열 번호: 229의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 228의 FR2, 서열 번호: 229의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 227의 FR1, 서열 번호: 228의 FR2, 서열 번호: 229의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 90의 CDR1, 서열 번호: 91의 CDR2, 서열 번호: 92의 CDR3, 서열 번호: 227의 FR1, 서열 번호: 228의 FR2, 서열 번호: 229의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-25의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 231의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 232의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1 및 서열 번호: 231의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1 및 서열 번호: 232의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 231의 FR2 및 서열 번호: 232의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 231의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 232의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1, 서열 번호: 231의 FR2 및 서열 번호: 232의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1, 서열 번호: 231의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1, 서열 번호: 232의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 231의 FR2, 서열 번호: 232의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 230의 FR1, 서열 번호: 231의 FR2, 서열 번호: 232의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 93의 CDR1, 서열 번호: 94의 CDR2, 서열 번호: 95의 CDR3, 서열 번호: 230의 FR1, 서열 번호: 231의 FR2, 서열 번호: 232의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-26의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 234의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 235의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1 및 서열 번호: 234의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1 및 서열 번호: 235의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 234의 FR2 및 서열 번호: 235의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 234의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 235의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1, 서열 번호: 234의 FR2 및 서열 번호: 235의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1, 서열 번호: 234의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1, 서열 번호: 235의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 234의 FR2, 서열 번호: 235의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 233의 FR1, 서열 번호: 234의 FR2, 서열 번호: 235의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 96의 CDR1, 서열 번호: 97의 CDR2, 서열 번호: 98의 CDR3, 서열 번호: 233의 FR1, 서열 번호: 234의 FR2, 서열 번호: 235의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-27의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 237의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 238의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1 및 서열 번호: 237의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1 및 서열 번호: 238의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 237의 FR2 및 서열 번호: 238의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 237의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 238의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1, 서열 번호: 237의 FR2 및 서열 번호: 238의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1, 서열 번호: 237의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1, 서열 번호: 238의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 237의 FR2, 서열 번호: 238의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 236의 FR1, 서열 번호: 237의 FR2, 서열 번호: 238의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 99의 CDR1, 서열 번호: 100의 CDR2, 서열 번호: 101의 CDR3, 서열 번호: 236의 FR1, 서열 번호: 237의 FR2, 서열 번호: 238의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-28의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 240의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 241의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1 및 서열 번호: 240의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1 및 서열 번호: 241의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 240의 FR2 및 서열 번호: 241의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 240의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 241의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1, 서열 번호: 240의 FR2 및 서열 번호: 241의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1, 서열 번호: 240의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1, 서열 번호: 241의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 240의 FR2, 서열 번호: 241의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 239의 FR1, 서열 번호: 240의 FR2, 서열 번호: 241의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 102의 CDR1, 서열 번호: 103의 CDR2, 서열 번호: 104의 CDR3, 서열 번호: 239의 FR1, 서열 번호: 240의 FR2, 서열 번호: 241의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-29의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 243의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 244의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1 및 서열 번호: 243의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1 및 서열 번호: 244의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 243의 FR2 및 서열 번호: 244의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 243의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 244의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1, 서열 번호: 243의 FR2 및 서열 번호: 244의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1, 서열 번호: 243의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1, 서열 번호: 244의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 243의 FR2, 서열 번호: 244의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 242의 FR1, 서열 번호: 243의 FR2, 서열 번호: 244의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 105의 CDR1, 서열 번호: 106의 CDR2, 서열 번호: 107의 CDR3, 서열 번호: 242의 FR1, 서열 번호: 243의 FR2, 서열 번호: 244의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-30의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 246의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 247의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1 및 서열 번호: 246의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1 및 서열 번호: 247의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 246의 FR2 및 서열 번호: 247의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 246의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 247의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1, 서열 번호: 246의 FR2 및 서열 번호: 247의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1, 서열 번호: 246의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1, 서열 번호: 247의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 246의 FR2, 서열 번호: 247의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 245의 FR1, 서열 번호: 246의 FR2, 서열 번호: 247의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 108의 CDR1, 서열 번호: 109의 CDR2, 서열 번호: 110의 CDR3, 서열 번호: 245의 FR1, 서열 번호: 246의 FR2, 서열 번호: 247의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-31의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 249의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 250의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1 및 서열 번호: 249의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1 및 서열 번호: 250의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 249의 FR2 및 서열 번호: 250의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 249의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 250의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1, 서열 번호: 249의 FR2 및 서열 번호: 250의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1, 서열 번호: 249의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1, 서열 번호: 250의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 249의 FR2, 서열 번호: 250의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 248의 FR1, 서열 번호: 249의 FR2, 서열 번호: 250의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 111의 CDR1, 서열 번호: 112의 CDR2, 서열 번호: 113의 CDR, 서열 번호: 248의 FR1, 서열 번호: 249의 FR2, 서열 번호: 250의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-32의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 252의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 253의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1 및 서열 번호: 252의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1 및 서열 번호: 253의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 252의 FR2 및 서열 번호: 253의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 252의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 253의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1, 서열 번호: 252의 FR2 및 서열 번호: 253의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1, 서열 번호: 252의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1, 서열 번호: 253의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 252의 FR2, 서열 번호: 253의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 251의 FR1, 서열 번호: 252의 FR2, 서열 번호: 253의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 114의 CDR1, 서열 번호: 115의 CDR2, 서열 번호: 116의 CDR3, 서열 번호: 251의 FR1, 서열 번호: 252의 FR2, 서열 번호: 253의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-33의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 255의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 256의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1 및 서열 번호: 255의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1 및 서열 번호: 256의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 255의 FR2 및 서열 번호: 256의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 255의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 256의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1, 서열 번호: 255의 FR2 및 서열 번호: 256의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1, 서열 번호: 255의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1, 서열 번호: 256의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 255의 FR2, 서열 번호: 256의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 254의 FR1, 서열 번호: 255의 FR2, 서열 번호: 256의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 117의 CDR1, 서열 번호: 118의 CDR2, 서열 번호: 119의 CDR, 서열 번호: 254의 FR1, 서열 번호: 255의 FR2, 서열 번호: 256의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, sdAb는 사람화된 항-MSLN-34의 하나 이상의 FR 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 258의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 259의 FR3을 갖는다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1 및 서열 번호: 258의 FR2를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1 및 서열 번호: 259의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 258의 FR2 및 서열 번호: 259의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 258의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 259의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1, 서열 번호: 258의 FR2 및 서열 번호: 259의 FR3을 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1, 서열 번호: 258의 FR2 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1, 서열 번호: 259의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 258의 FR2, 서열 번호: 259의 FR3 및 서열 번호: 160의 FR3를 갖는다. 구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 257의 FR1, 서열 번호: 258의 FR2, 서열 번호: 259의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
구체적인 구현예에서, 사람화된 sdAb는 서열 번호: 120의 CDR1, 서열 번호: 121의 CDR2, 서열 번호: 122의 CDR3, 서열 번호: 257의 FR1, 서열 번호: 258의 FR2, 서열 번호: 259의 FR3, 및 서열 번호: 160의 FR4를 갖는다.
일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 0.01 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 0.1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 90nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 80nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 70nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 60nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 50nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 40nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 30nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 20nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 1 내지 10nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 0.1 내지 1nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 0.01 내지 1nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 사람화된 sdAb는 MSLN에 0.01 내지 0.1nM의 KD로 결합한다.
일부 구현예에서, 암 항원에 결합하는 결합 분자는 다중 사람화된 sdAb, 예를 들면, 링커에 의해 연결된 MSLN에 결합하는 2개의 sdAb를 포함한다.
일부 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 0.01 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 0.1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 100nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 90nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 80nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 70nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 60nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 50nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 40nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 30nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 20nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 1 내지 10nM의 KD로 결합한다. 다른 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 0.1 내지 1nM의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개의 사람화된 sdAb 각각은 MSLN에 0.01 내지 0.1nM의 KD로 결합한다.
단일 도메인 항체 변이체
일부 구현예에서, 본원에 기재된 MSLN에 결합한 단일 도메인 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들면, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성, 예를 들면, 특이성, 열안정성, 발현 수준, 효과기 기능(effector function), 글리코실화, 감소된 면역원성, 또는 용해도를 최적화시키는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 항-MSLN 항체 이외에, 항-MSLN 항체 변이체가 제조될 수 있음이 고려된다. 예를 들면, 항-MSLN 항체 변이체는 암호화 DNA 내로 적절한 뉴클레오타이드 변화를 도입하고/하거나 목적한 항체 또는 폴리펩타이드의 합성에 의해 제조할 수 있다. 이러한 아미노산 변화를 인식하는 당해 분야의 기술자는 항-MSLN 항체의 해독 후 공정을 변경시킬 수 있는데, 예를 들면, 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변경시키거나 막 앵커링(membrane anchoring) 특성을 변경시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 도메인 항체는 예를 들면, 임의의 유형의 분자를 항체에 공유결합으로 부착시킴으로서 화학적으로 변형된다. 항체 유도체는 예를 들면, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 포스포릴화, 아미드화, 공지된 보호/차단 그룹에 의한 유도체화, 단백질분해적 절단, 세포 리간드 또는 다른 당백질에 대한 연결 등에 의해 화학적으로 변형된 항체를 포함할 수 있다. 임의의 다수의 화학적 변형은 특수한 화학적 절단, 아세틸화, 제형, 투니카마이신의 대사적 합성 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는 공지된 기술에 의해 수행할 수 있다. 또한, 항체는 하나 이상의 비-전통적인 아미노산을 함유할 수 있다.
변이는 원래의 항체 또는 폴리펩타이드와 비교하여 아미노산 서열 내에 변화를 야기하는 단일 도메인 항체 또는 폴리펩타이드를 암호화하는 하나 이상의 코돈(codon)의 치환, 결실, 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 유사한 구조적 및/또는 화학적 특성을 가진 다른 아미노산으로의 대체, 예를 들면, 루이신(leucine)의 세린으로의 대체, 예컨대, 보존적 아미노산 대체의 결과일 수 있다. 당해 분야의 기술자에게 공지된 표준 기술, 예를 들면, 부위-지시된 돌연변이유발 및 아미노산 치환을 야기하는 PCR-매개된 돌연변이유발을 사용하여 본원에 제공된 분자를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 내에 돌연변이를 도입할 수 있다. 삽입 또는 결실은 임의로 약 1 내지 5개의 아미노산의 범위일 수 있다. 특정의 구현예에서, 치환, 결실, 또는 삽입은 원래의 분자에 대해 25개 미만의 아미노산 치환, 20 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 구체적인 구현예에서, 치환은 하나 이상의 예측된 비-필수 아미노산 잔기에서 이루어진 보존적 아미노산 치환이다. 허용된 변화는 서열 내 아미노산의 삽입, 결실, 또는 치환을 전신계적으로 제조하고 모 항-MSLN 항체에 의해 나타난 활성에 대해 수득되는 변이체를 시험함으로써 측정할 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1개의 잔기로부터 다수의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드의 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합체 뿐만 아니라 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 지닌 항체를 포함한다.
보존적 아미노산 치환에 의해 생성된 항체가 본 개시내용에 포함된다. 보존적 아미노산 치환에서, 아미노산 잔기는 유사한 전하(charge)를 지닌 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된다. 상술한 바와 같이, 유사한 전하를 지닌 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 당해 분야에 정의되어 있다. 이러한 계열은 염기성 측쇄(예컨대, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 측쇄(예컨대, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예컨대, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된(branched) 측쇄(예컨대, 트레오닌, 발린, 이소루이신) 및 방향족 측쇄(예컨대, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 지닌 아미노산을 포함한다. 대안적으로, 돌연변이를 예를 들면, 포화 돌연변이유발에 의해 암호화 서열 모두 또는 일부를 따라 무작위로 도입시킬 수 있고, 수득되는 돌연변이체는 생물학적 활성에 대해 스크리닝하여 활성을 보유한 돌연변이체를 확인할 수 있다. 돌연변이유발에 이어서, 암호화된 단백질을 발현시키고 단백질의 활성을 측정할 수 있다. 보존적(예컨대, 유사한 특성 및/또는 측쇄를 지닌 아미노산 그룹내) 치환을 이루어서 특성을 유지하거나 유의적으로 변화시키지 않을 수 있다.
아미노산은 이의 측쇄의 특성에 있어서 유사성에 따라 그룹화할 수 있다(참고: 예컨대, Lehninger, Biochemistry 73-75 (2d ed. 1975)): (1) 비-극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) 하전되지 않은 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) 산성: Asp (D), Glu (E); 및 (4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His(H). 대안적으로, 천연적으로 존재하는 잔기는 일반적인 측쇄 특성을 기반으로 그룹으로 분할될 수 있다: (1) 소수성: 노르루이신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
예를 들면, 항-MSLN 항체의 적절한 구조를 유지하는데 관련되지 않은 임의의 시스테인 잔기를 예를 들면, 다른 아미노산, 예를 들면, 알라닌 또는 세린으로 또한 치환시켜 분자의 산화 안정성을 개선시키고 비정상적인 가교결합을 방지할 수 있다.
변이는 올리고뉴클레오타이드-매개된(부위-지시된) 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝, 및 PCR 돌연변이유발과 같은 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 수행할 수 있다. 부위-지시된 돌연변이유발(참고: 예컨대, Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7; 및 Zoller et al., 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500), 카세트 돌연변이유발(참고: 예컨대, Wells et al., 1985, Gene 34:315-23), 또는 다른 공지된 기술을 클로닝된 DNA 상에서 수행하여 항-MSLN 항체 변이체 DNA를 생산할 수 있다.
시험관내 친화성 성숙(maturation)
일부 구현예에서, 모 항체와 비교하여 친화성, 안정성, 또는 발현 수준과 같은 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 시험관내 친화성 성숙에 의해 제조할 수 있다. 천연 표현형과 유사하게, 시험관내 친화성 성숙은 돌연변이 및 선택의 원리를 기반으로 한다. 항체의 라이브러리는 유기체(예컨대, 파아지, 세균, 효모, 또는 포유동물 세포)의 표면에서 또는 이의 암호화 mRNA 또는 DNA와 함께 공유결합적으로 또는 비-공유결합적으로 나타난다. 나타낸 항체의 친화성 선택은 항체를 암호화하는 유전 정보를 수반하는 유기체 또는 복합체의 단리를 허용한다. 디스플레이(display) 방법, 예를 들면, 파아지 디스플레이를 사용한 2 또는 3 라운드(round)의 돌연변이 및 선택은 저 나노몰 범위의 친화성을 지닌 항체 단편을 생성한다. 친화성 성숙된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화성을 가질 수 있다.
파아지 디스플레이는 항체의 디스플레이 및 선택을 위한 광범위한 방법이다. 항체는 박테리오파아지 코트 단백질(bacteriophage coat protein)에 대한 융합체로서 Fd 또는 M13 박테리오파아지의 표면에 디스플레이된다. 선택은 항원에 노출시켜 파아디-디스플레이된 항체가 이의 표적에 결합하도록 함을 포함하며, 이러한 공정은 "팬닝(panning)"으로 불린다. 항원에 결합된 파아지를 회수하고 세균을 감염시키는데 사용하여 추가 라운드의 선택을 위한 파아지를 생산한다. 검토를 위해, 예를 들면, 문헌: Hoogenboom, 2002, Methods. Mol. Biol. 178:1-37; 및 Bradbury 및 Marks, 2004, J. Immunol. Methods 290:29-49를 참고한다.
효모 디스플레이 시스템(참고: 예컨대, Boder et al., 1997, Nat. Biotech. 15:553?57; 및 Chao et al., 2006, Nat. Protocols 1:755-68)에서, 항체는 효모 아글루티닌 단백질 Aga2p의 부착 소단위(subunit)에 융합될 수 있으며, 이는 Agalp에 이황화물 결합을 통해 효모 세포벽에 부착한다. Aga2p를 통한 단백질의 디스플레이는 단백질이 세포 표면으로부터 떨어지도록 투사하여, 효모 세포 벽 상에서 다른 분자와의 잔배적인 상호작용을 최소화시킨다. 자기적 분리 및 유동 세포분석법을 사용하여 라이브러리를 스크리닝함으로써 개선된 친화성 또는 안정성을 지닌 항체에 대해 선택한다. 목적한 가용성 항원에 대한 결합은 효모를 바이오티닐화된 항원 및 형광단에 접합된 스트렙타비딘과 같은 제2의 시약으로 표지(labeling)함으로써 측정한다. 항체의 표면 발현에서의 변화는 헤마글루티닌 또는 scFv를 플랭킹(flanking)하는 c-Myc 에피토프 태그(tag)의 면역형광성 표지화를 통해 측정할 수 있다. 발현은 디스플레이된 단백질의 안정성과 관련있는 것으로 밝혀졌으므로, 항체를 개선된 안정성 뿐만 아니라 친화성에 대해 선택할 수 있다(참고: 예컨대, Shusta et al., 1999, J. Mol. Biol. 292:949-56). 효모 디스플레이에 대한 추가의 장점은 디스플레이된 단백질이 진핵 효모 세포의 소포체 내에서 폴딩(folding)됨으로써, 소포체 챠페론(chaperon) 및 품질-제어 기구(quality-control machinery)의 장점을 취한다는 것이다. 성숙이 완료되면, 항체 친화성은 효모의 표면에 디스플레이되면서 편리하게 "적정(titrating)"되어, 각각의 클론의 발현 및 정제에 대한 필요성을 제거한다. 효모 표면 디스플레이의 이론적 한계는 다른 디스플레이 방법의 것보다 잠재적으로 더 작은 기능성 라이브러리 크기이지만; 최근 접근법에서는 효모 세포의 교배 시스템(mating system)을 사용하여 크기가 1014인 것으로 평가된 조합적 다양성을 창조한다(참고: 예컨대, 미국 특허 공보 제2003/0186374호; 및 Blaise et al., 2004, Gene 342:211-18).
리보소옴 디스플레이에서, 항체-리보소옴-mRNA(ARM) 복합체는 세포-유리된 시스템에서 선택을 위해 생성된다. 항체의 특수한 라이브러리를 암호화하는 DNA 라이브러리를 종결 코돈을 결여하고 있는 스페이서 서열에 유전적으로 융합시킨다. 이러한 스페이서 서열은, 해독되는 경우 여전히 펩티딜 tRNA에 부착되어 리보소옴 터널(tunnel)을 점유하므로, 목적한 단백질이 리보소옴 밖으로 돌출되어 폴딩되도록 한다. mRNA, 리보소옴, 및 단백질의 수득되는 복합체는 표면-결합된 리간드에 결합하여, 리간드와의 친화성 포획을 통해 항체 및 이의 암호화 mRNA의 동시 단리를 허용한다. 리보소옴-결합된 mRNA는 이후에 cDNA로 다시 역 전사되며, 이는 이후에 돌연변이유발을 겪고 다음 라운드의 선택에서 사용될 수 있다(참고: 예컨대, Fukuda et al., 2006, Nucleic Acids Res. 34:e127). mRNA 디스플레이에서, 항체와 mRNA 사이의 공유결합성 결합은 어댑터(adaptor) 분자로서 푸로마이신을 사용하여 확립된다(Wilson et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:3750-55).
이러한 방법은 전체적으로 시험관 내에서 수행되므로, 이는 다른 선택 기술보다 2개의 주요 장점을 제공한다. 첫째로, 라이브러리의 다양성은 세균 세포의 형질전환 효율에 의해서 뿐만 아니라, 시험 튜브 속에 존재하는 리보소옴 및 상이한 mRNA 분자의 수에 의해서도 제한되지 않는다. 둘째로, 무작위 돌연변이를 각각의 선택 라운드 후에, 예를 들면, 라이브러리가 임의의 다양화 단계 후 형질전화되어야 하는 것이 아니므로, 비-교정 폴리머라제(non-proofreading polymerase)에 의해 용이하게 도입시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 포유동물 디스플레이 시스템을 사용할 수 있다.
또한 다양성을 표적화된 방식으로 또는 무작위 도입을 통해 항체 라이브러리의 CDR내로 도입시킬 수 있다. 전자의 접근법은 항체의 CDR 모두를 고 수준 또는 저 수준의 돌연변이유발을 통해 순차적으로 표적화시키거나 체세포 초돌연변이(somatic hypermutation)의 단리된 핫 스폿(hot spot)(참고: 예컨대, Ho et al., 2005, J. Biol. Chem. 280:607-17) 또는 실험 기반 또는 구조적 이유로 친화성에 영향을 미치는 것으로 추측된 잔기를 표적화함을 포함한다. 다양성은 또한 DNA 셔플링(DNA shuffling) 또는 유사한 기술을 통해 천연적으로 다양한 영역의 대체로 도입시킬 수 있다(참고: 예컨대, Lu et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:43496-507; 미국 특허 제5,565,332호 및 제6,989,250호). 골격-영역 잔기내로 연장하는 초가변성 루프를 표적화하는 대안적인 기술(참고: 예컨대, Bond et al., 2005, J. Mol. Biol. 348:699-709)은 CDR에서 루프 결실 및 삽입을 사용하거나 하이브리드화-기반 다양화(diversification)를 사용한다(참고: 예컨대, 미국 특허 공보 제2004/0005709호). CDR에서 다양성을 생성하는 추가의 방법은 예를 들면, 미국 특허 제7,985,840호에 개시되어 있다. 항체 라이브러리 및/또는 항체 친화성 성숙을 생성하는데 사용될 수 있는 추가의 방법은 예컨대, 미국 특허 제8,685,897호 및 제8,603,930호, 및 미국 공개 공보 제2014/0170705호, 제2014/0094392호, 제2012/0028301호, 제2011/0183855호, 및 제2009/0075378호에 개시되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다.
라이브러리의 스크리닝은 당해 분야에 공지된 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, 항-MSLN 항체는 고체 지지체, 컬럼, 핀, 또는 셀룰로즈/폴리(비닐리덴 플루오라이드) 막/다른 필터 상에 고정되고, 흡착 플레이트에 고정된 숙주 세포 상에서 발현되거나 세포 분류에 사용되거나, 스트렙타비딘-코팅된 비스를 사용한 포획을 위해 바이오틴에 접합되거나 디스플레이 라이브러리를 팬닝(panning)하기 위한 임의의 다른 방법에서 사용될 수 있다.
시험관내 친화성 성숙 방법의 검토를 위해서는, 예컨대, 문헌: Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnology 23:1105-16; Quiroz 및 Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51; 및 이들 문헌에서의 참고 문헌을 참고한다.
항-MSLN 단일 도메인 항체의 변형
항-MSLN 항체의 공유결합성 변형은 본 개시내용의 영역 내에 포함된다. 공유결합성 변형은 항-MSLN 항체의 표적화된 아미노산 잔기를 항-MSLN 항체의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도화제와 반응시킴을 포함한다. 다른 변형은 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기 각각으로의 탈아미드화(deamidation), 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 그룹의 포스포릴화, 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 그룹의 메틸화(참고: 예컨대, Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties 79-86 (1983)), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카복실 그룹의 아미드화를 포함한다.
본 개시내용의 영역 내에 포함된 항-MSLN 항체의 공유결합성 변형의 다른 유형은 항체 또는 폴리펩타이드의 천연 글리코실화 패턴을 변경시키는 단계(참고: 예컨대, Beck et al., 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501; 및 Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80), 및 항체를 다양한 비단백질성 중합체, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나에 예를 들면, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 또는 제4,179,337호에 나타낸 방식으로 연결시키는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 항-MSLN 항체를 또한 변형시켜 다른, 이종 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열, 예를 들면, 에피토프 태그(참고:예컨대, Terpe, 2003, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60:523-33) 또는 IgG 분자의 Fc 영역(참고: Aruffo, Antibody Fusion Proteins 221-42 (Chamow and Ashkenazi eds., 1999))에 융합된 항-MSLN 항체를 포함하는 키메라 분자를 형성할 수 있다.
MSLN 항원 및 이종 폴리펩타이드에 결합하는 본원에 제공된 항체를 포함하는 융합 단백질이 또한 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 이에 대해 항체가 융합된 이종 폴리펩타이드는 항체를 세포 표면-발현된 MSLN을 가진 세포에 대해 표적화하는데 유용하다.
MSLN 항원에 결합하는 항체의 패널(panel)이 또한 본원에 제공된다. 구체적인 구현예에서, 항체의 패널은 상이한 결합 속도(association rate), 상이한 해리 속도(dissociation rate), MSLN 항원에 대한 상이한 친화성, 및/또는 MSLN 항원에 대한 상이한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 패널은 약 10개, 약 25개, 약 50개, 약 75개, 약 100개, 약 125개, 약 150개, 약 175개, 약 200개, 약 250개, 약 300개, 약 350개, 약 400개, 약 450개, 약 500개, 약 550개, 약 600개, 약 650개, 약 700개, 약 750개, 약 800개, 약 850개, 약 900개, 약 950개, 또는 약 1000개 이상의 항체를 포함하거나 이로 이루어진다. 항체의 패널은 예를 들면, 96-웰(well) 또는 384-웰 플레이트 속에서 ELISA와 같은 검정을 위해 사용될 수 있다.
항-MSLN 단일 도메인 항체의 제조
본원에 제공된 항-MSLN 단일 도메인 항체는 항-항-MSLN 항체-암호화 핵산을 함유하는 벡터로 형질전환되거나 형질감염된 세포를 배양함으로써 생산할 수 있다. 본 개시내용의 항체의 폴리펩타이드 구성성분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 표준 재조합 기술을 사용하여 수득할 수 있다. 목적한 폴리뉴클레오타이드 서열을 단리하고 항체 생산 세포, 예를 들면, 하이브리도마 세포로부터 서열분석할 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오타이드는 뉴클레오타이드 합성기 또는 PCR 기술을 사용하여 합성할 수 있다. 일단 수득되면, 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 숙주 세포 내에서 이종 폴리뉴클레오타이드를 복제하고 발현할 수 있는 재조합 벡터내로 삽입한다. 당해 분야에서 이용가능하고 공지된 많은 벡터를 본 개시내용의 목적을 위해 사용할 수 있다. 적절한 벡터의 선택은 벡터내로 삽입될 핵산의 크기 및 벡터로 형질전환될 특수한 숙주 세포에 주로 의존한다. 본 개시내용의 항체를 발현하는데 적합한 숙주 세포는 원핵세포, 예를 들면, 아르카에박테리아(Archaebacteria) 및 유박테리아(Eubacteria), 예를 들면, 그램-음성 또는 그램-양성 유기체, 진핵세포 미생물, 예를 들면, 섬유상 진균(filamentous fungi) 또는 효모, 척추동물 세포, 예를 들면, 곤충 또는 식물 세포, 및 척추동물 세포, 예를 들면, 포유동물 숙주 세포주를 포함한다. 숙주 세포는 상술한 발현 벡터로 형질전환시키고 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나, 목적한 서열을 암호화하는 유전자를 증폭시키기에 적적하게 변형된 통상의 영양 배지 속에서 배양한다. 숙주 세포에 의해 생산된 항체는 당해 분야에 공지된 바와 같은 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 정제한다.
벡터 작제, 발현, 및 정제를 포함하는 항체 생산 방법은 문헌: Pluckthun et al., Antibody Engineering: Producing antibodies in Escherichia coli: From PCR to fermentation 203-52 (McCafferty et al. eds., 1996); Kwong and Rader, E. coli Expression and Purification of Fab Antibody Fragment, in Current Protocols in Protein Science (2009); Tachibana and Takekoshi, Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli, in Antibody Expression and Production (Al-Rubeai ed., 2011); 및 Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed., 2009)에 추가로 기술되어 있다.
물론, 당해 분야에 잘 공지된 대안적인 방법을 사용하여 항-MSLN 항체를 제조하는 것도 고려된다. 예를 들면, 적절한 아미노산 서열, 또는 이의 일부를 고체-상 기술을 사용하여 직접적인 펩타이드 합성에 의해 생산할 수 있다(참고: 예컨대, Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis (1969); 및 Merrifield, 1963, J. Am. Chem. Soc. 85:2149-54). 시험관내 단백질 합성은 수동 기술을 사용하거나 자동화에 의해 수행할 수 있다. 항- MSLN 항체의 다양한 부위는 별도로 화학적으로 합성할 수 있으며 목적한 항-MSLN 항체를 생산하기 위한 화학적 또는 효소적 방법을 사용하여 조합할 수 있다. 대안적으로, 항체는 예를 들면, 미국 특허 제5,545,807호 및 제5,827,690호에 개시된 바와 같이, 항체를 발현하도록 가공된 유전자이식 동물의 세포 또는 체액, 예를 들면, 젖으로부터 정제할 수 있다.
면역접합체
본 개시내용은 또한 하나 이상의 비-항체 제제에 합성 링커에 의해 공유결합으로 결합된 본 개시내용의 항-MSLN 항체 중 어느 하나를 포함하는 접합체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 예컨대, 진단 또는 검출가능한 분자에 접합되거나 재조합적으로 융합된다. 접합되거나 재조합적으로 융합된 항체는 예를 들면, MSLN-매개된 질환의 발병, 발달, 진행, 및/또는 중증도를 모니터링하거나 진단하는데 유용할 수 있다.
이러한 진단 및 검출은 예를 들면, 항체를 검출가능한 물질, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 다양한 효소, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제; 보철 그룹, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 스트렙타비딘/바이오틴 또는 아비딘/바이오틴; 형광성 물질, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드, 또는 피코에리트린; 발광성 물질, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는, 루미놀; 생물발광성 물질, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 루시페라제, 루시페린, 또는 아에쿠오린(aequorin): 화학발광성 물질, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 아크리디늄계 화합물 또는 HALOTAG; 방사활성 물질, 예를 들면, 그러나 이에 한정되지 않는 요오드(131I, 125I, 123I, 및 121I,), 탄소(14C), 황(35S), 3중수소(3H), 인듐(115In, 113In, 112In, 및 111In), 테크네튬(99Tc), 탈륨(201Ti), 갈륨(68Ga 및 67Ga), 팔라듐(103Pd), 몰리브데늄(99Mo), 제논(133Xe), 불소(18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, 또는 117Sn; 다양한 양전자 방출 단층촬영(positron emission tomography)을 사용하는 양전자 방출 금속; 및 비-방사활성 상자성 금속 이온에 커플링(coupling)시킴으로써 달성할 수 있다.
이종 단백질 또는 폴리펩타이드(또는 이의 단편, 예를 들면, 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 또는 약 100개의 아미노산의 폴리펩타이드)에 재조합적으로 융합되거나 화학적으로 접합되어 융합 단백질을 생성하는 항체 뿐만 아니라 이의 용도가 또한 본원에 제공된다. 특히, 본원에 제공된 항체의 항원-결합 단편(예컨대, CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3) 및 이종 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드를 포함하는 융합 단백질이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 항체가 융합되는 이종 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드는 항체를 특수한 세포형, 예를 들면, MSLN을 발현하는 세포에 대해 표적화시키는데 유용하다. 예를 들면, 특수한 세포형에 의해 발현된 세포 표면 수용체에 결합하는 항체는 본원에 제공된 변형된 항체에 융합되거나 접합될 수 있다.
더욱이, 본원에 제공된 항체는 마커 또는 "태그" 서열, 예를 들면, 펩타이드에 융합시켜 정제를 촉진시킬 수 있다. 구체적인 구현예에서, 마커 또는 태그 아미노산 서열은 헥사-히스티딘 펩타이드, 예를 들면, 다른 것들 중에서 pQE 벡터(참고: 예컨대, QIAGEN, Inc.)에 제공된 태그이며, 이들 중 많은 것이 상업적으로 이용가능하다. 예를 들면, 문헌: Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24에 기술된 바와 같이, 헥사-히스티딘이 융합 단백질의 편리한 정제를 위해 제공된다. 정제에 유용한 다른 펩타이드 태그는 헤마글루티닌("HA") 태그를 포함하나, 이에 한정되지 않으며, 이는 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프(Wilson et al., 1984, Cell 37:767-78), 및 "플래그(FLAG)" 태그에 상응한다.
항체에 모이어티(폴리펩타이드 포함)를 융합시키거나 접합시키는 방법은 공지되어 있다(참고: 예컨대, Arnon et al., Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56 (Reisfeld et al. eds., 1985); Hellstrom et al., Antibody for Drug Delivery, in Controlled Drug Delivery 623-53 (Robinson et al. eds., 2d ed. 1987); Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies: Biological 및 Clinical Applications 475-506 (Pinchera et al. eds., 1985); Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16 (Baldwin et al. eds., 1985); Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58; 미국 특허 제5,336,603호; 제5,622,929호; 제5,359,046호; 제5,349,053호; 제5,447,851호; 제5,723,125호; 제5,783,181호; 제5,908,626호; 제5,844,095호; 및 제5,112,946호; 제EP 307,434호; 제EP 367,166호; 제EP 394,827호; PCT 공보 제WO 91/06570호, 제WO 96/04388호, 제WO 96/22024호, 제WO 97/34631호, 및 제WO 99/04813호; Ashkenazi et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-39; Traunecker et al., 1988, Nature, 331:84-86; Zheng et al., 1995, J. Immunol. 154:5590-600; 및 Vil et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:11337-41).
융합 단백질은 예를 들면, 유전자-셔플링, 모티프-셔플링(motif-shuffling), 엑손-셔플링(exon-shuffling), 및/또는 코돈-셔플링(총괄적으로 "DNA 셔플링"으로 지칭함)의 기술을 통해 생성시킬 수 있다. DNA 셔플링을 사용하여 본원에 제공된 바와 같은 항-MSLN 항체의 활성, 예를 들면, 고 친화성 및 보다 낮은 해리 속도를 지닌 항체를 변경시킬 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제5,605,793호; 제5,811,238호; 제5,830,721호; 제5,834,252호; 및 제5,837,458호; Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76; 및 Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-13). 항체, 또는 암호화된 항체는 오류발생이 쉬운 PCR(error-prone PCR), 무작위 뉴클레오타이드 삽입, 또는 다른 방법에 의해 재조합 전에 무작위 돌연변이유발에 적용시킴으로써 변경시킬 수 있다. 본원에 제공된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 이종 분자의 하나 이상의 구성성분, 모티프, 단면, 부분, 도메인, 단편 등과 조합시킬 수 있다.
본원에 제공된 항체(예컨대, sdAb)를 또한 제2의 항체에 접합시켜 예를 들면, 미국 특허 제4,676,980호에 기술된 바와 같은 항체 이종접합체를 형성시킬 수 있다.
본원에 제공된 바와 같은 MSLN에 결합하는 항체를 또한 고체 지지체에 부착시킬 수 있으며, 이는 표적 항원의 면역검정 또는 정제에 특히 유용하다. 이러한 고체 지지체는 유리, 셀룰로즈, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 또는 폴리프로필렌을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
링커는 세포 내에서 접합된 제제의 방출을 촉진하는 "절단가능한 링커"일 수 있으나, 비-절단가능한 링커 또한 본원에서 고려된다. 본 개시내용의 접합체에서 사용하기 위한 링커는 산 불안전성 링커(예컨대, 하이드라존 링커), 이황화물-함유 링커, 펩티다제-민감성 링커(예컨대, 아미노산, 예를 들면, 발린을 포함하는 펩타이드 링커 및/또는 시트룰린, 예를 들면, 시트룰린-발린 또는 페닐알라닌-라이신), 광분해성 링커, 디메틸 링커(참고: 예컨대, Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-31; 및 미국 특허 제5,208,020호), 티오에테르 링커, 또는 다중약물 수송인자(multidrug transporter)-매개된 내성을 회피하도록 설계된 친수성 링커(참고: 예컨대, Kovtun et al., 2010, Cancer Res. 70:2528-37)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
항체와 제제의 접합체는 다양한 이기능성 단백질 커플링제, 예를 들면, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 SVSB(석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)를 사용하여 제조할 수 있다. 본 개시내용은 또한 항체와 제제의 접합체가 당해 분야에 개시된 임의의 적합한 방법을 사용하여 제조될 수 있음을 고려한다(참고: 예컨대, Bioconjugate Techniques (Hermanson ed., 2d ed. 2008)).
항체 및 제제에 대한 통상의 접합 전략은 Lys 잔기의 ε-아미노 그룹 또는 Cys 잔기의 티올 그룹을 포함하는 무작위 접합 화학을 기반으로 하였으며, 이는 이종 접합체를 생성한다. 최근 개발된 기술은 항체에 대한 부위-특이적인 접합을 허용하여, 동종 로딩(homogeneous loading)을 생성하고 변경된 항원-결합 또는 약물동력학을 지닌 접합 소집단을 피한다. 이는 반응성 티올 그룹을 제공하고 면역글로불린 폴딩 및 조립을 파괴하지 않거나 항원 결합을 변경하는 중쇄 및 경쇄 상의 위치에서의 시스테인 치환을 포함하는 "티오맵(thiomab)"의 가공을 포함한다(참고: 예컨대, Junutula et al., 2008, J. Immunol. Meth. 332: 41-52; 및 Junutula et al., 2008, Nature Biotechnol. 26:925-32). 다른 방법에서, 셀레노시스테인은 말단으로부터 셀레노시스테인 삽입까지 정지 코돈 UGA를 기록하고, 다른 천연 아미노산의 존재하에서 친핵성 셀레놀 그룹에서 부위 특이적인 공유결합성 접합을 허용함으로써 항체 서열내로 동시해독적으로 삽입된다(참고: 예컨대, Hofer et al., 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105:12451-56; 및 Hofer et al., 2009, Biochemistry 48(50):12047-57).
항-메소텔린 Fc 융합 단백질
항-MSLN 작제물(예를 들면, 단리된 항-MSLN 작제물)은 일부 구현예에서 Fc 단편(예를 들면, IgG1 Fc 단편)에 접합된 본원에 기술된 바와 같은 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하는 Fc 융합 단백질(이후에 "항-MSLN-Fc 융합 단백질"로 지칭함)이다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 항체 모이어티는 링커(예를 들면, 펩타이드 링커)를 통해 Fc 단편에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-MSLN-Fc 융합 단백질은 Fc 단편을 포함하는 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-MSLN-Fc 융합 단백질은 전체 길이의 항체이다. "항-MSLN 항체 모이어티 단락"에 기술된 임의의 항-MSLN 항체 모이어티를 항-MSLN Fc 융합 단백질에서 사용할 수 있다.
Fc 단편
용어 "Fc 영역", "Fc 도메인" 또는 "Fc"는 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 비-항원 결합 영역을 지칭한다. 말단은 천연의 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 사람 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226으로부터 중쇄의 카복실-말단으로 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 라이신(Lys447)은 Fc 영역의 구조 또는 안전성에 영향을 미치지 않으면서 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본원에서 달리 규정하지 않는 한, IgG 또는 Fc 영역내 아미노산 잔기의 번호매김은 문헌: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991에 기술된 바와 같이, EU 지표로도 불리는, 항체에 대한 EU 번호매김 시스템에 따른다.
일부 구현예에서, Fc 단편은 힌지 영역(Cys226에서 출발), IgG CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 면역글로불린 IgG 중쇄 불변 영역을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "힌지 영역" 또는 "힌지 서열"은 링커와 CH2 도메인 사이에 위치한 아미노산 서열을 지칭한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 힌지 영역을 포함하는 Fc 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 이량체화를 촉진시키는, 천연의 IgG1 힌지 영역에서 발견된 서열인, 아미노산 서열 CPPCP(서열 번호: 345)를 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 Fc 단편은 힌지 영역에서 출발하여 IgG 중쇄의 C-말단까지 연장된다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 힌지 영역을 포함하지 않는 Fc 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 융합 단백질은 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM로부터의 Fc 단편, 및 이의 조합 및 하이브리드로 이루어진 그룹으로부터 선택된 Fc 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 사람 IgG로부터 유래된다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 사람 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 조합 또는 하이브리드 IgG의 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG4 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단평은 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. IgG4 Fc는 IgG1 Fc보다 효과기 활성을 덜 나타내는 것으로 알려져 있으므로 일부 적용을 위해 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 마우스 면역글로불린으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, IgG CH2 도메인은 Ala231에서 출발한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 Gly341에서 출발한다. 사람 IgG의 C-말단 Lys 잔기는 임의로 부재할 수 있음이 이해된다. Fc의 목적한 구조 및/또는 안정성에 영향을 미치지 않고 Fc 영역의 보존적 아미노산 치환이 본 발명의 영역 내에서 고려됨이 또한 이해된다.
또한, 후술된 임의의 Fc 변이체, 또는 이의 조합을 포함하는 항-MSLN-Fc 융합 단백질이 고려된다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 변경되거나 또한 달리 변화됨으로써 향상된 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC) 또는 보체 의존성 세포독성(CDC) 효과기 기능을 갖는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, Fc 단편의 각각의 쇄는 동일한 실체에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-MSLN-Fc 융합 단백질은 본원에 기술된 2개의 동일한 항-MSLN 항체 모이어티(메소텔린을 특이적으로 인식함)을 포함하며, 각각은 Fc 단편의 하나의 쇄와 융합된다. 일부 구현예에서, Fc 단편의 2개의 쇄는 동일하다. 일부 구현예에서, Fc 단편을 포함하는 항-MSLN-Fc 융합 단백질(항체를 포함하는 항-MSLN-Fc 융합 단백질을 포함함)은 단독이량체이다.
일부 구현예에서, Fc 단편의 각각의 쇄는 상이한 실체에 융합된다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 2개의 상이한 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하며, 각각은 Fc 단편의 하나의 쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 2개의 항-MSLN 항체 모이어티는 상이하지만 둘 다 메소텔린을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항-MSLN-Fc 융합 단백질은 1가이며, 즉, 하나의 항-MSLN 항체 모이어티 만이 Fc 단편의 하나의 쇄에 융합되고, Fc 단편의 제2의 쇄는 항-MSLN 항체 모이어티에 융합되지 않는다. 일부 구현예에서, Fc 단편을 포함하는 항-MSLN-Fc 융합 단백질(항체를 포함하는 항-MSLN-Fc 융합 단백질을 포함함)은 이종이량체이다.
항-MSLN-Fc 융합 단백질 내 동일하지 않은 폴리펩타이드의 이종이량체화는 놉-인투-홀 기술(knob-into-hole technology)에 의한 이종이량체화를 포함하나, 이에 한정되지 않는 당해 분야에 공지된 방법에 의해 촉진될 수 있다. 놉-인투-홀 기술의 구조 및 조립 방법은 예컨대, 이의 전문이 본원에 참고로 포함된 제US5,821,333호, 제US7,642,228호, 제US 201 1/0287009호 및 제PCT/US2012/059810호에서 찾을 수 있다. 이러한 기술은 작은 아미노산 잔기를 하나의 Fc 중 CH3 도메인 내에서 큰 아미노산 잔기로 대체함으로서 "놉(knob)"(또는 돌기(protuberance))를 도입하고, 하나 이상의 큰 아미노산 잔기를 작은 아미노산 잔기로 대체함으로써 다른 Fc의 CH3 도메인내에 "홀"(또는 강(cavity))"을 도입시킴으로써 개발되었다. 일부 구현예에서, 융합 단백질내 Fc 단편의 하나의 쇄는 놉을 포함하고, Fc 단편의 제2의 쇄는 홀을 포함한다.
놉의 형성을 위한 바람직한 잔기는 일반적으로 천연적으로 존재하는 아미노산 잔기이며 바람직하게는 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 타이로신(Y) 및 트립토판(W)으로부터 선택된다. 트립토판 및 타이로신이 가장 바람직하다. 일 구현예에서, 놉의 형성을 위한 원래의 잔기는 작은 측쇄 용적, 예를 들면, 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌 또는 발린을 갖는다. 놉을 형성시키기 위한 CH3 도메인내 예시적인 아미노산 치한은 제한없이 T366W, T366Y 또는 F405W 치환을 포함한다.
홀의 형성을 위한 바람직한 잔기는 일반적으로 천연적으로 존재하는 아미노산 잔기이며 바람직하게는 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T) 및 발린(V)으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 홀의 형성을 위한 원래의 잔기는 타이로신, 아르기닌, 페닐알라닌 또는 트립토판과 같이 큰 측쇄 용적을 갖는다. 홀을 생성시키기 위한 CH3 도메인내 예시적인 아미노산 치환은 제한없이 T366S, L368A, F405A, Y407A, Y407T 및 Y407V 치환을 포함한다. 특정의 구현예에서, 놉은 T366W 치환을 포함하고, 홀은 T366S/L368A/Y 407V 치환을 포함한다. 이종이량체화를 촉진시키는 당해 분야에 공지된 Fc 영역에 대한 다른 변형이 또한 고려되고 본원에 포함되는 것이 이해된다.
본원에 기술된 임의의 변이체(예컨대, Fc 변이체, 효과기 기능 변이체, 글리코실화 변이체, 시스테인 가공된 변이체), 또는 이의 조합을 포함하는 다른 항-MSLN Fc 융합 단백질 변이체(예를 들면, 단리된 항-MSLN-Fc 융합 단백질의 변이체, 예컨대, 전체 길이의 항-MSLN 항체 변이체)가 고려된다. 항-MSLN Fc 융합 단백질(예컨대, 전체 길이의 항-MSLN 항체)에 대해 모든 적용가능한 변이에 대해서는 "항-MSLN 변이체" 단락을 참고한다.
환원된 푸코실화
일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물은 a) 항-메소텔린 항체 모이어티, 및 b) 항-메소텔린 항체 모이어티에 융합된 Fc 단편를 포함하고, 여기서 Fc 단편은 환원된 푸코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, Fc는 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 및 이의 조합 및 하이브리드화로부터의 Fc 단편으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 사람 IgG로부터 유래된다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 사람 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 조합 또는 하이브리드 IgG의 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 상응하는 야생형 Fc 단편보다 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 미만의 푸코실화를 갖는다.
일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물은 a) i) 항-메소텔린 항체 모이어티, ii) 항-메소텔린 항체 모이어티에 융합된 Fc 단편을 포함하는 항-메소텔린 항체, 및 b) 항-메소텔린 항체에 융합된 사이토킨(예를 들면, IL-21 및 반감기 연장 도메인(예컨대, 알부민에 결합하는 항체)를 포함하는 사이토킨 융합 단백질)을 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 항-메소텔린 항체 모이어티의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 링커(예를 들면, 펩타이드 링커)를 통해 항-메소텔린 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 펩타이드 링커는 안정한 링커이며, 이는 프로테아제, 예를 들면, 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)에 의해 절단되지 않는 안정한 링커이다.
다-특이적 항-메소텔린 작제물
항-메소텔린 작제물은 일부 구현예에서 본원에 기술된 항-메소텔린 항체 모이어티 중 임의의 하나에 따른 항-메소텔린 항체 모이어티, 및 제2의 항원을 특이적으로 인식하는 제2의 결합 모이어티(예를 들면, 제2의 항체 모이어티)를 포함하는 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-메소텔린 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 다-특이적 항-메소텔린 분자는 항-메소텔린 항체 모이어티 및 제2의 항원을 특이적으로 인식하는 제2의 항체 모이어티를 포함한다.
다-특이적 분자는 적어도 2개의 상이한 항원 또는 에피토프(예컨대, 이특이적 항체는 2개의 항원 또는 에피토프렝 대해 결합 특이성을 갖는다)에 대해 결합 특이성을 갖는 분자이다. 2개 이상의 원자가 및/또는 특이성을 지닌 다-특이적 분자가 또한 고려된다. 예를 들면, 삼특이적 항체를 제조할 수 있다(Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)). 당해 분야의 기술자는 본원에 기술된 개개의 다-특이적 분자의 적절한 특징을 선택하여 다른 것과 조합함으로써 본원의 다-특이적 항-메소텔린 분자를 형성할 수 있다.
일부 구현예에서, 다-특이적 항-메소텔린 작제물은, 예를 들면, 디아보디(Db), 단일-쇄 디아보디(scDb), 탄뎀 scDb(Tandab), 선형 이량체성 scDb(LD-scDb), 환형 이량체성 scDb(CD-scDb), 디-디아보디(di-diabody), 탄뎀 scFv, 탄뎀 디-scFv(예컨대, 이특이적 T 세포 인게이저(engager)), 탄뎀 트리-scFv, 트리(아)보디, 이특이적 Fab2, 디-미니항체, 테트라보디, scFv-Fc-scFv 융합체, 이중-친화성 재표적화(DART) 항체, 이중 가변 도메인(DVD) 항체, IgG-scFab, scFab-ds-scFv, Fv2-Fc, IgG-scFv 융합체, 독(dock) 및 록(lock)(DNL) 항체, 놉-인투 홀(KiH) 항체(KiH technology에 의해 제조된 이특이적 IgG), 듀오보디(DuoBody)(Duobody technology에 의해 제조된 이특이적 IgG), 헤테로다량체성 항체, 또는 이종접합체 항체이다. 일부 구현예에서, 다-특이적 항-메소텔린 분자는 탄뎀 scFv(예컨대, 탄뎀 디-scFv, 예를 들면, 이특이적 T 세포 인게이저)이다.
제2의 항원
일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 항-MSLN 항체 모이어티 및 제2의 항원을 특이적으로 인식하는 제2의 항체 모이어티(예컨대, scFv)를 포함하는 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2의 항원은 또한 메소텔린이지만 항-MSLN 항체 모이어티에 의해 인식된 것과 비교하여 상이한 에피토프를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2의 항원은 메소텔린이 아니다. 일부 구현예에서, 제2의 항원은 종양 항원이다. 일부 구현예에서, 제2의 항원은 CD3(예컨대, 사람 CD3)이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 작제물을 가공하여 효과기 세포(예를 들면, 세포독성 T 세포)를 종양 부위에 지시함으로써 종양 세포의 사멸(예컨대, 세포독성 분해 또는 식세포작용)을 촉진할 수 있다. 일부 구현예에서, 종양 세포독성은 LDH 세포독성 검정을 사용하여 시험할 수 있다. 일부 구현예에서, 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자는 효과기 세포(예컨대, T 세포, NK 세포, CAR-T 세포, caTCR-T 세포)를 면역억제 환경 속에서 표적 세포에 효과적으로 지시할 수 있다.
예시적인 효과기 세포는 제한없이 T 세포, B 세포, 천연 킬러(NK) 세포, 수지 세포(DC), 대식구, 단핵구, 호중구, 천연 킬러 T(NKT) 세포, 항체-의존성 세포독성 세포, 키메라 항원 수용체(CAR) 효과기 세포(예컨대, CAR-T), 키메라 항체-T 세포 수용체(TCR) 작제물(caTCR) 효과기 세포(참고: 하기 caTCR 단락) 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 효과기 세포는 T 세포(예컨대, 세포독성 T 세포, 헬퍼 T 세포, 또는 NKT 세포)이다. 일부 구현예에서, 효과기 세포는 세포독성 T 세포이다. 일부 구현예에서, 효과기 세포는 동종이계이다. 일부 구현예에서, 효과기 세포는 자가유래(autologous)이다.
유도성 발현
일부 구현예에서, 다특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 탄템 디-scFv T 세포 인게이저)의 발현은 유도성이다. 일부 구현예에서, 효과기 세포(예컨대, T 세포, CAR-T 세포, caTCR T 세포)는 유도성 프로모터, 예를 들면, 본원에 기술된 임의의 유도성 프로모터에 작동적으로 연결된 다특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 이특이적 T 세포 인게이저)를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다(예컨대, "핵산" 단락을 참고함). 일부 구현예에서, 효과기 세포(예컨대, T 세포, CAR-T 세포, caTCR T 세포) 내에서 다특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 탄뎀 디-scFv T 세포 인게이저)의 발현은 효과기 세포(예컨대, TCR, CAR, caTCR) 상에서 신호전달 수용체를 통한 신호전달시 유도성이다. 일부 이러한 구현예에서, CAR-T 세포는 CAR을 통해 신호전달에 대해 반응성인 프로모터 또는 조절 성분에 작동적으로 연결된 다-특이적인(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 탄뎀 디-scFv T 세포 인게이저)를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, caTCR-T 세포는 caTCR을 통해 신호전달에 대해 반응성인 프로모터 또는 조절 성분에 작동적으로 연결된 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 탄뎀 디-scFv T 세포 인게이저)를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 탄뎀 디-scFv T 세포 인게이저)를 암호화하는 핵산 서열은 활성화된 T-세포(NFAT)-유래된 프로모터의 핵-인자에 작동적으로 연결된다. 일부 구현예에서, NFAT-유래된 프로모터는 NFAT-유래된 최소의 프로모터이다(참고: 예를 들면 Durand, D. et. al., Molec. Cell. Biol. 8, 1715-1724 (1988); Clipstone, NA, Crabtree, GR. Nature. 1992 357(6380): 695-7; Chmielewski, M., et al. Cancer research 71.17 (2011): 5697-5706; 및 Zhang, L., et al. Molecular therapy 19.4 (2011): 751-759). 전사 인자의 NFAT 계열은 T 세포 활성화의 중요한 조절인자이다. 일부 구현예에서, 다-특이적(이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 탄뎀 디-scFv T 세포 인게이저)를 암호화하는 핵산 서열은 IL-2 프로모터에 작동적으로 연결된다.
키메라 항원 수용체(CAR) 및 CAR 효과기 세포
항-MSLN 작제물은 일부 구현예에서 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하는 CAR(또한 본원에서 "항-MSLN CAR"로 지칭됨)이다. 본원에 기술된 항-MSLN 항체 모이어티 중 임의의 하나는 항-MSLN CAR에서 사용될 수 있다. 또한 항-MSLN 항체 모이어티(또한 본원에서 "항-MSLN CAR 효과기 세포", 예컨대, "항-MSLN CAR T 세포"로 지칭됨)를 포함하는 CAR을 포함하는 CAR 효과기 세포(예컨대, T 세포)가 제공된다. 일부 구현예에서, 항-MSLN CAR은 세포 표면-결합된 MSLN을 특이적으로 인식하는 항-MSLN 항체 모이어티를 포함한다.
항-MSLN CAR은 a) MSLN에 특이적으로 결합하는 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하는 세포외 도메인, 및 b) 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 막관통 도메인(transmembrane domain)은 세포외 도메인과 세포내 도메인 사이에 존재할 수 있다.
항-MSLN CAR의 세포외 도메인과 막관통 도메인 사이, 또는 항-MSLN CAR의 세포내 도메인과 막관통 도메인 사이에, 스페이서 도메인이 존재할 수 있다. 스페이서 도메인은 막관통 도메인을 폴리펩타이드 쇄내 세포외 도메인 또는 세포내 도메인에 막관통 도메인을 연결시키는 기능을 하는 임의의 올리고- 또는 폴리펩타이드일 수 있다. 스페이서 도메인은 약 300개 이하의 아미노산, 예를 들면 약 10 내지 약 100개, 또는 약 25 내지 약 50개의 아미노산을 포함할 수 있다.
막관통 도메인은 천연으로부터 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 임의의 막-결합되거나 막관통 단백질로부터 유래될 수 있다. 본 발명에서 특수한 용도의 막관통 영역은 T-세포 수용체의 α, β, δ, 또는 γ 쇄, CD28, CD3ε, CD3ζ, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, 또는 CD154로부터 유래(즉, 적어도 이의 막관통 영역(들)을 포함)될 수 있다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 합성일 수 있으며, 이 경우 이는 주로 소수성 잔기, 예를 들면, 루이신 및 발린을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플렛(triplet)이 합성 막관통 도메인의 각각의 말단에서 발견될 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들면, 길이가 약 2 내지 약 10개(예를 들면, 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 중 어느 것) 아미노산의 길이를 갖는 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커는 항-MSLN CAR의 막관통 도메인과 세포내 신호전달 도메인 사이에 연결을 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 글리신-세린 더블렛(doublet)이다.
일부 구현예에서, 항-MSLN CAR의 세포내 도메인내 서열 중 하나와 천연적으로 관련된 막관통 도메인이 사용된다(예컨대, 항-MSLN CAR 세포내 도메인이 CD28 공-자극성 서열을 포함하는 경우, 항-MSLN CAR의 막관통 도메인은 CD28 막관통 도메인으롭터 유래된다). 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형되어 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 이러한 도메인의 결합을 피함으로써 수용체 복합체의 다른 막과의 상호작용을 최소화시킬 수 있다.
항-MSLN CAR의 세포내 신호전달 도메인은 항-MSLN CAR이 위치하는 면역 세포의 정상의 효과기 기능 중 적어도 하나의 활성화에 관연한다. T 세포의 효과기 기능은, 예를 들면, 세포분해 활성 또는 헬퍼 활성, 예를 들면, 사이토킨의 분비일 수 있다. 따라서, 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 효과기 기능 신호를 형질도입하고 세포를 구체화된 기능을 수행하도록 지시하는 단백질의 부위를 지칭한다. 일반적으로 전체 세포내 신호전달 도메인을 사용할 수 있지만, 많은 경우에, 전체 쇄를 사용하는 것은 필수적이지 않다. 세포내 신호전달 도메인의 트렁케이트된 부위(truncated portion)가 사용되는 한, 트렁케이트된 부위는 이것이 효과기 기능 신호를 형질도입하는 한, 완전한 쇄 대신에 사용될 수 있다. 따라서, 용어 "세포내 신호전달 신호전달 서열"은 효과기 기능 신호를 형질도입하는데 충분한 세포내 신호전달 도메인의 임의의 트렁케이트된 부위를 포함함을 의미한다.
본 발명의 항-MSLN CAR에 사용하기 위한 세포내 신호전달 도메인의 예는 TCR의 세포질성 서열 및 항원 수용체 맞물림(engagement) 후 협력하여 신호 형질도입을 개시하도록 작용하는 공-수용체 뿐만 아니라 이러한 서열의 유도체 또는 변이체 및 동일한 기능성 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다.
TCR 단독을 통해 생성된 신호는 T의 완전한 활성화에 불충분하며 제2 또는 공-자극성 신호 또한 요구됨이 알려져 있다. 따라서, T 세포 활성화는 세포내 신호전달 서열: TCR을 통한 항원-의존성 주요 활성화를 개시하는 것 및 제2 또는 공-자극성 신호(공-자극성 신호전달 서열)를 제공하는 항원-독립적인 방식으로 작용하는 것의 2개의 명백한 부류에 의해 매개되는 것으로 일컬어질 수 있다.
주요 신호전달 서열은 자극성 방식으로, 또는 억제성 방식으로 TCR 복합체의 주요 활성화를 조절한다. 자극성 방식으로 작용하는 주요 신호전달 서열은 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호전달 모티프를 함유할 수 있다. 항-MSLN CAR 작제물은 일부 구현예에서 하나 이상의 ITAM을 포함한다.
본 발명에서 특수하게 사용된 주요 신호전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는 TCR^, FcRy, FcRP, CD3y, CD35, CD3e, CD5, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터 유래된 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-MSLN CAR은
Figure pct00009
로부터 유래된 주요 신호전달 서열을 포함한다. 예를 들면, CAR의 세포내 신호전달 도메인은 자체적으로
Figure pct00010
세포내 신호전달 서열을 포함하거나 본 발명의 항-MSLN CAR과 관련하여 유용한 임의의 다른 세포내 신호전달 서열(들)과 조합된다. 예를 들면, 항-MSLN CAR의 세포내 도메인은
Figure pct00011
세포내 신호전달 서열 및 공자극성 신호전달 서열을 포함할 수 있다. 공자극성 신호전달 서열은 예를 들면, CD27, CD28, 4-1BB(CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함하는 공자극성 분자의 세포내 도메인의 일부일 수 있다.
일부 구현예에서, 항-MSLN CAR의 세포내 신호전달 도메인은
Figure pct00012
의 세포내 신호전달 서열 및 CD28의 세포내 신호전달 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-MSLN CAR의 세포내 신호전달 도메인은
Figure pct00013
의 세포내 신호전달 서열 및 및 4-1BB의 세포내 신호전달 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-MSLN CAR의 세포내 신호전달 도메인은
Figure pct00014
의 세포내 신호전달 서열 및 CD28 및 4-1BB의 세포내 신호전달 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, a) 임의의 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301에 나타낸 서열을 갖는 VH 쇄 영역내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, a HC-CDR2, 및 HC-CDR3 각각을 포함하는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는, MSLN에 특이적으로 결합하는 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하는 세포외 도메인; b) 막관통 도메인, 및 c) 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 항-MSLN CAR이 제공된다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 면역 세포를 활성화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 신호전달 도메인은 주요 신호전달 서열 및 공-자극성 신호전달 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 주요 신호전달 서열은
Figure pct00015
세포내 신호전달 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 공-자극성 신호전달 서열은 CD28 세포내 신호전달 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 도메인은
Figure pct00016
세포내 신호전달 서열 및 CD28 세포내 신호전달 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 하나와 적어도 약 80%(예를 들면, 약 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%) 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함한다.
또한 항-MSLN CAR을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 효과기 세포내로 도입시키는 단계를 포함하는, 항-MSLN CAR을 발현하는 효과기 세포를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 벡터를 효과기 세포내로 도입시키는 단계는 효과기 세포를 벡터로 형질도입함을 포함한다. 일부 구현예에서, 벡터를 효과기 세포내로 도입시키는 단계는 효과기 세포를 벡터로 형질감염시킴을 포함한다. 효과기 세포 내로 벡터의 형질도입 또는 형질감염은 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행할 수 있다.
일부 구현예에서, 유도성 프로모터에 작동적으로 연결된 본원에 기술된 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자(예컨대, 항-MSLN×CD3 이특이적 T 세포 인게이저)를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 항-MSLN CAR 효과기 세포(예를 들면, 림프구, 예컨대, T 세포)가 제공된다. 일부 구현예에서, 항-MSLN CAR 효과기 세포내 다-특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 작제물의 발현은 항-MSLN CAR를 통한 신호전달시 유도성이다. 일부 구현예에서, 다특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 작제물을 암호화하는 핵산은 NFAT-유래된 프로모터에 작동적으로 연결된다. 일부 구현예에서, NFAT-유래된 프로모터는 NFAT-유래된 최소의 프로모터이다. 일부 구현예에서, 다특이적(예컨대, 이특이적) 항-MSLN 분자를 암호화하는 핵산은 IL-2 프로모터에 작동적으로 연결된다.
링커
일부 구현예에서, 융합 단백질 또는 항-메소텔린 작제물은 2개의 도메인 사이(예를 들면, 항-메소텔린 항체 모이어티와 제2의 도메인, 예를 들면, 사이토킨, Fc 도메인 등 사이)에 링커를 포함한다. 링커는 "제1의 링커" 또는 "제2의 링커"로서 후술된 임의의 링커일 수 있다.
일부 구현예에서, IL-21을 포함하는 융합 단백질은 IL-21 또는 이의 변이체와 알부민 결합 분자 사이에 제1의 링커 및 알부민 결합 분자와 항원에 결합하는 결합 분자 사이에 제2의 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1의 링커 및/또는 제2의 링커는 독립적으로 강성 링커(rigid linker) 또는 가요성 링커(flexible linker)일 수 있다.
일부 구현예에서, 링커(예컨대, 제1의 링커, 제2의 링커)는 비-펩타이드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커(예컨대, 제1의 링커, 제2의 링커)는 펩타이드 링커이다.
비-펩타이드 링커
본원에 기술된 링커 중 임의의 하나 또는 모두는 구성성분 또는 단편이 이의 각각의 활성을 보유하는 한 2개의 분자에 결합할 수 있는데, 예컨대, 표적 메소텔린에 결합하거나, FcR, 또는 ADCC/CDC에 결합할 수 있다. 이러한 연결은 많은 화학적 메카니즘, 예를 들면, 공유결합, 친화성 결합, 삽입(intercalation), 배위 결합 및 복합체화(complexation)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 결합은 공유결합성 결합이다. 공유결합성 결합은 존재하는 측쇄의 직접적인 농축에 의해 또는 외부 브릿지 분자(bridging molecule)의 혼입에 의해 달성할 수 있다. 많은 2가 또는 다가 연결제는 단백질 분자, 예를 들면, Fc 단편을 본 발명의 항-메소텔린 항체 모이어티에 커플링시키는데 유용하다. 예를 들면, 대표적인 커플링제는 유기 화합물, 예를 들면, 티오에스테르, 카보디이미드, 석신이미드 에스테르, 디이소시아네이트, 글루타르알데하이드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민을 포함할 수 있다. 이러한 목록은 당해 분야에 공지된 완전한 다양한 부류의 커플링제인 것으로 의도되지 않으며, 오히려 보다 일반적인 커플링제의 예이다(참고: Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); 및 Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)).
본원에 적용될 수 있는 링커는 MBS (M-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르)의 용도를 기술하는 문헌(참고: 예를 들면, Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984)에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 본원에 사용된 비-펩타이드 링커는 다음을 포함한다: (i) EDC(1-에틸-3-(3-디메틸아미노-프로필)카보디이미드 하이드로클로라이드; (ii) SMPT(4-석신이미딜옥시카보닐-알파-(2-피리딜-디티오)-톨루엔(Pierce Chem. Co., 제품 번호 (21558G); (iii) SPDP(석신이미딜-6 [3-(2-피리딜디티오)프로피온아미도]헥사노에이트(Pierce Chem. Co., 제품 번호 #21651G); (iv) 설포-LC-SPDP(설포석신이미딜 6 [3-(2-피리딜디티오)-프로피온아미드]헥사노에이트(Pierce Chem. Co. 제품 번호 #2165-G); 및 (v) EDC에 접합된 설포-NHS (N-하이드록시설포-석신이미드: Pierce Chem. Co., 제품 번호 #24510).
상술된 링커는 상이한 속성(attribute)을 가짐으로써 상이한 물리-화학적 특성을 지닌 항-메소텔린 작제물을 이끄는 구성성분을 함유한다. 예를 들면, 알킬 카복실레이트의 설포-NHS 에스테르는 방향족 카복실레이트의 설포-NHS 에스테르보다 더 안정하다. NHS-에스테르 함유 링커는 설포-NHS 에스테르보다 덜 가용성이다. 또한, 링커 SMPT는 구조적으로 장애된 디설파이드 결합을 함유하며, 증가된 안정성을 지닌 융합 단백질을 형성할 수 있다. 이황화물 연결은 시험관내에서 절단되어, 이용가능한 융합 단백질을 거의 생성하지 않으므로, 이황화물 연결은 일반적으로 다른 연결보다 덜 안정하다. 특히, 설포-NHS는 카보디이미드 커플링의 안정성을 향상시킬 수 있다. 설포-NHS와 함께 사용되는 경우 카보디이미드 커플링(예를 들면, EDC)는 카보디이미드 커플링 반응 단독보다 가수분해에 대해 더 내성인 에스테르를 형성한다.
펩타이드 링커
본원에 기술된 링커 중 임의의 하나 또는 모두는 펩타이드 링커일 수 있다. 펩타이드 링커는 천연적으로 존재하는 서열, 또는 비-천연적으로 존재하는 서열을 가질 수 있다. 예를 들면, 중쇄 만의 항체의 힌지 영역으로부터 유래된 서열을 일커로서 사용할 수 있다. 예를 들면, 제WO1996/34103호를 참고한다. 일부 구현예에서, 펩타이드 링커는 천연의 IgG1 힌지 영역에서 발견된 서열인, CPPCP(서열 번호: 345)의 아미노산 서열을 포함한다.
펩타이드 링커는 임의의 적합한 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드 링커는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100개 이상의 아미노산(aa) 길이 중 어느 것이다. 일부 구현예에서, 펩타이드 링커는 약 100, 75, 50, 40, 35, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5개 이하의 아미노산 길이 중 어느 것이다. 일부 구현예에서, 펩타이드 링커의 길이는 약 1 aa 내지 약 10 aa, 약 1 aa 내지 약 20 aa, 약 1 aa 내지 약 30 aa, 약 5 aa 내지 약 15 aa, 약 10 aa 내지 약 25 aa, 약 5 aa 내지 약 30 aa, 약 10 aa 내지 약 30 aa, 약 30 aa 내지 약 50 aa, 약 50 aa 내지 약 100 aa, 또는 약 1 aa 내지 약 100 aa 중 어느 것이다.
이러한 펩타이드 링커의 필수적인 기술적 특징은 상기 펩타이드 링커가 어떠한 중합화 활성도 포함하지 않는다는 것이다. 제2 구조의 촉진의 부재를 포함하는, 펩타이드 링커의 특성은 당해 분야에 공지되어 있으며 예컨대, 문헌: Dall'Acqua et al. (Biochem. (1998) 37, 9266-9273), Cheadle et al. (Mol Immunol (1992) 29, 21-30) 및 Raag and Whitlow (FASEB (1995) 9(1), 73-80)에 기술되어 있다. "펩타이드 링커"의 내용에서 특히 바람직한 아미노산은 Gly이다. 또한, 어떠한 제2 구조로 촉진하지 않는 펩타이드 링커가 바람직하다. 서로에 대한 분자의 연결은 예컨대, 유전 가공(genetic engineering)에 의해 제공될 수 있다. 융합되고 작동적으로 연결된 항체 작제물을 제조하고 이들을 포유동물 세포 또는 세균 속에서 발현시키는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다(예컨대, 제WO 99/54440호, Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y. 1989 및 1994 또는 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 2001).
일부 구현예에서, 펩타이드 링커는 안정한 링커이며, 이는 프로테아제, 예를 들면, 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP)에 의해 절단될 수 없다.
일부 구현예에서, 펩타이드 링커는 강성 3차원 구조를 채택하지 않고, 오히려 폴리펩타이드(예컨대, 제1 및/또는 제2의 구성성분)에 대해 가요성을 제공하는, 예를 들면, 항-메소텔린 항체 모이어티와 Fc 단편 사이에 가요성을 제공하는 경향이 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드 링커는 가요성 링커이다. 예시적인 가요성 링커는 글리신 중합체 (G)n, 글리신-세린 중합체(예를 들면, (GS)n(서열 번호: 337), (GSGGS)n(서열 번호: 338), (GGGGS)n(서열 번호: 339), 및 (GGGS)n(서열 번호: 340)을 포함함, 여기서 n은 적어도 하나의 정수이다), 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체, 및 당해 분야에 공지된 다른 가요성 링커를 포함한다. 글리신 및 글리신-세린 중합체는 비교적 구조화되지 않으므로, 구성성분들 사이에 중성 테써(tether)로서 제공할 수 있다. 글리신은 심지어 알라닌보다 유의적으로 더 phi-psi 공간을 접근하며, 보다 긴 측쇄를 지닌 잔기보다 훨씬 덜 제한된다(참고: Scheraga, Rev. Computational Chem. 11 173-142 (1992)). 통상의 기술자는 항-메소텔린 작제물의 설계가 모든 또는 부분적으로 가요성인 링커플 포함할 수 있고, 이러한 링커는 가요성 링커 부위 뿐만 아니라 거의 덜 가요성인 구조를 부여하여 목적한 융합 단백질 구조를 제공하는 하나 이상의 부위를 포함할 수 있음을 인식할 것이다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 임의의 항-MSLN 작제물 중 2개의 도메인(예를 들면, 항-MSLN 항체 모이어티 및 반감기-연장 도메인 또는 사이토킨)을 항-MSLN 작제물이 가능하도록 하는 충분한 길이의 링커에 의해 함께 연결시켜 표적 MSLN 및 다른 목적한 항원을 표적화하는 결합을 허용하는 방식으로 폴딩시킨다. 일부 구현예에서, 링커는 SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA(서열 번호: 341)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 (GGGGS)n 서열(서열 번호: 339)이거나 이를 포함하며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 이상과 동일하다. 일부 구현예에서, 링커는 TSGGGGS(서열 번호: 342)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 GEGTSTGSGGSGGSGGAD(서열 번호: 343)의 아미노산 서열을 포함한다.
천연 링커는 이의 기능을 발휘할 제2 구조, 예를 들면, 나선, β-가닥, 코일(coil)/벤드(bend) 및 회전(turn)이다. α-나선 구조내 링커는 단백질 도메인을 효율적으로 분리함으로써 이의 선호하지 않는 상호작용을 감소시키는, 강성 공간으로서 제공될 수 있다. Pro가 풍부한 서열을 지닌 비-나선 링커는 링커 강성을 증가시키고 도메인간 방해를 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물 내 2개의 도메인(예를 들면, 항-MSLN 항체 모이어티 및 반감기-연장 도메인 또는 사이토킨)은 A(EAAAK)4A(서열 번호: 344)의 아미노산 서열과 α-나선 링커에 의해 함께 연결된다.
특정의 구현예에서, 제1의 링커는 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP) 민감성 링커이다. 특정의 구현예에서, 제2의 링커는 MMP 민감성 링커이다. 특정의 구현예에서, 제1의 및 제2의 링커 둘 다는 MMP 민감성 링커이다.
특정의 구현예에서, MMP 민감성 링커는 MMP(예컨대, MMP-7, MMP-9, 또는 MMP-13)에 의해 절단가능한 링커이다. 종양 세포외 매트릭스(ECM), 종양 세포, 및 종양 혈관화에서 가장 풍부한 MMP는 종양 진행 및 전이와 밀접하게 관련되어 있다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 MMP-7에 대해 민감성이다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 MMP-9에 대해 민감성이다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 MMP-13에 대해 민감성이다. 일부 구현예에서, 제2의 링커는 MMP-7에 대해 민감성이다. 일부 구현예에서, 제2의 링커는 MMP-9에 대해 민감성이다. 일부 구현예에서, 제2의 링커는 MMP-13에 대해 민감성이다.
일부 구현예에서, MMP 절단가능한 링커는 다음의 구조를 갖는 부위로 이루어지거나 이를 포함한다:
P5-P4-Pro-P2-P1-P1'-P2'-P3'-P4'.
일부 구현예에서, P5는 Pro 이외의 임의의 아미노산 및 바람직하게는 작은 지방족 측쇄를 지닌 아미노산일 수 있다.
일부 구현예에서, P4는 Pro 이외의 임의의 아미노산 및 바람직하게는 Gly일 수 있다.
일부 구현예에서, P2는 Gln, Ala, Ser, Arg, 및 Lys로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, P1은 Ser, Thr, 및 Gly로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, P1'는 Leu 또는 Ile, 또는 임의의 소수성 아미노산, 예를 들면, Phe, Ala, Val, 또는 Met일 수 있다.
일부 구현예에서, P2'는 소수성 측쇄를 지닌 아미노산일 수 있다.
일부 구현예에서, P3'는 작은 지방족 측쇄 및 바람직하게는 Gly를 지닌 아미노산일 수 있다.
일부 구현예에서, P4'는 소수성 측쇄를 지닌 아미노산 바람직하게는 Gln일 수 있다.
일부 구현예에서, P5는 Pro 이외의 임의의 아미노산 및 바람직하게는 작은 지방족 측쇄를 지닌 아미노산이고; P4는 Pro 이외의 임의의 아미노산 및 바람직하게는 Gly이고; P2는 Gln, Ala, Ser, Arg, 및 Lys으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; P1은 Ser, Thr, 및 Gly로 이루어진 그룹으로부터 선택되고; P1'는 Leu 또는 Ile이거나, 임의의 소수성 아미노산, 예를 들면, Phe, Ala, Val, 또는 Met이고; P2'는 소수성 측쇄를 지닌 아미노산이고; P3'는 작은 지방족 측쇄를 지닌 아미노산 및 바람직하게는 Gly이고; P4'는 소수성 측쇄를 지닌 아미노산 및 바람직하게는 Gln이다.
일부 구현예에서, 제1의 링커 및/또는 제2의 링커는 하기 표 5로부터 선택된 서열을 포함한다.
[표 5]
Figure pct00017
일부 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 267의 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 268의 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 269의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 270의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 271의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 272의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 273의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 274의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 275의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 276의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 277의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 278의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 279의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 280의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 281의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 282의 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 267의 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 268의 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 269의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 270의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 271의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 272의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 273의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 274의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 275의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 276의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 277의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 278의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 279의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 280의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 281의 서열을 포함한다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 282의 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1의 링커 및 제2의 링커는 하기 실시예의 표 8에 나타낸 바와 같이 서열 번호: 66, 서열 번호: 67, 서열 번호: 68, 서열 번호: 69, 서열 번호: 70, 서열 번호: 71, 서열 번호: 72, 서열 번호: 73 및 서열 번호: 74로 이루어진 그룹으로부터 각각 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 66의 것이다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 67의 것이다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 68의 것이다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 69의 것이다. 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 70의 것이다. 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 71의 것이다. 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 72의 것이다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 73의 것이다. 여전히 다른 구현예에서, 제1의 링커는 서열 번호: 74의 것이다.
일부 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 66의 것이다. 일부 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 67의 것이다. 일부 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 68의 것이다. 일부 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 69의 것이다. 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 70의 것이다. 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 71의 것이다. 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 72의 것이다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 73의 것이다. 여전히 다른 구현예에서, 제2의 링커는 서열 번호: 74의 것이다.
본원에 제공된 특정의 IL-21 융합 단백질에서, 항원에 결합하는 결합 분자는 2개 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원에 결합하는 결합 분자는 2개의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 2개의 항체 또는 항원 결합 단편은 제3의 링커로 연결된다. 예를 들면, 하기 실시예에 기술된 바와 같이, IL-21-αHSA-항-MSLN의 항-MSLN 기능적 모듈(MSLN에 결합하는 결합 분자)은 메소텔린의 상이한 도메인을 표적화하는 2개의 단일 도메인 항체(sdAb), 및 제3의 링커에 의해 연결된 2개의 sdAb를 포함한다.
일부 구현예에서, 제3의 링커는 MMP 민감성 링커이다.
일부 구현예에서, 제3의 링커는 하기 표 8에 나타낸 바와 같은 서열 번호: 66, 서열 번호: 67, 서열 번호: 68, 서열 번호: 69, 및 서열 번호: 70으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제3의 링커는 서열 번호: 66의 것이다. 일부 구현예에서, 제3의 링커는 서열 번호: 67의 것이다. 일부 구현예에서, 제3의 링커는 서열 번호: 68의 것이다. 다른 구현예에서, 제3의 링커는 서열 번호: 69의 것이다. 다른 구현예에서, 제3의 링커는 서열 번호: 70의 것이다.
일부 구현예에서, 제1의 링커는 S123 내지 S132에서 IL-21 또는 이의 변이체의 C-말단에 연결된다. 다른 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 123 내지 132내 아미노산에서 IL-21 또는 이의 변이체에 연결된다. 다른 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 C-말단의 마지막 10개의 아미노산에서 IL-21 또는 이의 변이체에 연결된다.
일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체에서 아미노산 123에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체에서 아미노산 124에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 125에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 126에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 127에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 128에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 129에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 130에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 131에 연결된다. 일 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 132에 연결된다.
다른 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 123에 연결된다.
일부 구현예에서, 제1의 링커는 Q1 내지 D4에서 IL-21 또는 이의 변이체의 N-말단에 연결된다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 1에 연결된다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 2에 연결된다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 3에 연결된다. 일부 구현예에서, 제1의 링커는 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 4에 연결된다.
일부 구현예에서, 제2의 링커는 알부민 결합 분자의 C-말단에 연결된다. 다른 구현예에서, 제2의 링커는 알부민 결합 분자의 N-말단에 연결된다.
일부 구현예에서, 제2의 링커는 항원에 결합하는 결합 분자의 N-말단에 연결된다. 일부 구현예에서, 제2의 링커는 항원에 결합하는 결합 분자의 C-말단에 연결된다.
폴리뉴클레오타이드
특정의 구현예에서, 본 개시내용은 본원에 기술된 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 용어 "폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드"는 폴리펩타이드에 대한 암호화 서열 만을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 뿐만 아니라 추가의 암호화 및/또는 비-암호화 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오타이드는 RNA의 형태 또는 DNA의 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 게놈성 DNA, 및 합성 DNA를 포함하고; 이중 가닥 또는 단일 가닥일 수 있으며, 단일 가닥인 경우 암호화 가닥 또는 및 비-암호화(항-센스) 가닥일 수 있다.
특정의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 예를 들면, 숙주 세포로부터의 폴리펩타이드의 발현 및 분비를 보조하는 폴리뉴클레오타이드에 대해 동일한 판독 프레임으로 융합된 폴리펩타이드의 암호화 서열(예컨대, 폴리펩타이드의 수송을 제어하기 위한 분비 서열로서 기능하는 리더 서열)을 포함한다. 폴리펩타이드는 숙주 세포에 의해 절단된 리더 서열을 가짐으로써 폴리펩타이드의 "성숙한" 형태를 형성할 수 있다.
특정의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 마커 또는 태그(tag) 서열과 동일한 판독 프레임으로 융합된 폴리펩타이드에 대한 암호화 서열을 포함한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 마커 서열은 세균 숙주의 경우에 마커에 융합된 폴리펩타이드의 효율적인 정제를 허용하는 벡터에 의해 공급된 헥사-히스티딘 태그이다. 일부 구현예에서, 마커는 다른 친화성 태그와 함께 사용된다.
본 개시내용은 또한 본원에 기술된 폴리뉴클레오타이드의 변이체에 관한 것이며, 여기서 변이체는, 예를 들면, 폴리펩타이드의 단편, 유사체, 및/또는 유도체를 암호화한다. 특정의 구현예에서, 본 개시내용은 본원에 기술된 결합 분자를 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 대해 적어도 약 80% 동일하고, 적어도 약 85% 동일하고, 적어도 약 90% 동일하고, 적어도 약 95% 동일하고, 일부 구현예에서, 적어도 약 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은, 어구 "참고 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도, 예를 들면, 95% "동일한" 폴리뉴클레오타이드"는 폴리뉴클레오타이드 서열이 참고 뉴클레오타이드 서열의 각각의 100개 뉴클레오타이드당 5개 이하의 점 돌연변이를 포함한다는 것을 제외하고는, 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열이 참고 서열과 동임함을 의미함을 의도한다. 다시 말해서, 참고 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드를 수득하기 위하여, 참고 서열내 뉴클레오타이드의 5% 이하는 결실되거나 다른 뉴클레오타이드로 치환되거나, 참고 서열내 총 뉴클레오타이드의 5% 이하의 뉴클레오타이드의 수가 참고 서열내로 삽입될 수 있다. 참고 서열의 이러한 돌연변이는 참고 뉴클레오타이드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치 또는 참고 서열 내 뉴클레오타이드 중에 개별적으로 또는 참고 서열내 하나 이상의 연속된 그룹내에 산재된, 이러한 말단 위치 사이의 어느 곳에 존재할 수 있다.
폴리뉴클레오타이드 변이체는 암호화 영역, 비-암호화 영역, 또는 둘 다 내에 변경을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 사일런트 치환(silent substitution), 첨가, 또는 결실을 생산하지만, 암호화된 폴리펩타이드의 특성 또는 활성을 변경시키지 않는 변경을 함유한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 폴리펩타이드의 아미노산 서열에 대해 변화를 야기하지 않는(유전 코드의 축퇴로 인하여) 사일런트 치환을 포함한다. 폴리뉴클레오타이드 변이체는 다양한 이유, 예를 들면, 특수한 숙주에 대한 코돈 발현(즉, 이. 콜라이(E. coli)와 같은 세균 숙주에 의해 선호된 것에 대한 사람 mRNA내 변화 코돈)을 최적화시키기 위해, 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 서열의 비-암호화 또는 암호화 영역내 적어도 하나의 사일런트 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 암호화된 폴리펩타이드의 발현(또는 발현 수준)을 조절하거나 변경시키기 위해 생산된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 암호화된 폴리펩타이드의 발현을 증가시키기 위해 생산된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 암호화된 폴리펩타이드의 발현을 감소시키기 위해 생산된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 모 폴리뉴클레오타이드 서열과 비교하여 암호화된 폴리펩타이드의 증가된 발현을 갖는다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 변이체는 모 폴리뉴클레오타이드 서열과 비교하여 암호화된 폴리펩타이드의 감소된 발현을 갖는다.
특정의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 단리된다. 특정의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 실질적으로 순수하다.
본원에 기술된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터 및 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 발현 벡터는 폴리뉴클레오타이드 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 폴리뉴클레오타이드 분자를 포함하는 발현 벡터를 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 폴리뉴클레오타이드 분자를 포함하는 하나 이상의 발현 벡터를 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 폴리뉴클레오타이드 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드 분자를 포함한다. 본원에 제공된 벡터의 작제물은 하기 실시예에 예시되어 있다.
항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 제조하는 방법
여전히 다른 양태에서, 본원에 제공된 다양한 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 제조하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질의 재조합 발현은 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 발현 벡터의 작제물 필요로 할 수 있다. 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 수득되면, 결합 분자의 생산을 위한 벡터를 당해 분야에 잘 공지된 기술을 사용하여 재조합 DNA 기술로 생산할 수 있다. 따라서, 암호화 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 발현시킴으로서 단백질을 제조하는 방법이 본원에 기술되어 있다. 당해 분야의 기술자에게 잘 공지된 방법은 암호화 서열 및 적절한 전사 및 해독 제어 신호를 함유하는 발현 벡터를 작제하는데 사용된다. 이러한 방법은, 예를 들면, 시험관내 재조합 DNA 기술, 합성 기술, 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 또한 프로모터에 작동적으로 연결된, 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질, 또는 이의 단편, 또는 CDR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 복제가능한 벡터가 제공된다.
발현 벡터는 통상의 기술에 의해 숙주 세포로 형질감염된 다음 형질감염된 세포는 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 생산하기 위한 통상의 기술에 의해 배양된다. 따라서, 이종 프로모터에 작동적으로 연결된 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질 또는 이의 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 숙주 세포가 또한 본원에 제공된다.
다양한 숙주-발현 벡터 시스템을 활용하여 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 발현시킬 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제5,807,715호). 이러한 숙주-발현 시스템은 이에 의해 목적한 암호화 서열이 생산되고 후속적으로 정제되지만, 적절한 뉴클레오타이드 암호화 서열로 형질전환되거나 형질감염되는 경우 반응계내에서 본원에 제공된 융합 단백질을 발현할 수 있는 세포를 나타낼 수도 있다. 이는 미생물, 예를 들면, 암호화 서열을 함유하는 재조합 박테리오파아지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 세균(예컨대, 이. 콜라이 및 비. 서브틸리스(B, subtilis)); 암호화 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질감염된 효모(예컨대, 사카로마이세스 피치아(Saccharomyces Pichia)); 암호화 서열을 함유하는 재조합 바이러스 벡터(예컨대, 바큘로바이러스(baculovirus)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현 벡터(예컨대, 콜리플라워 모자익 바이러스(예컨대, (cauliflower mosaic virus), CaMV, 담배 모자익 바이러스(tobacco mosaic virus), TMV)로 감염되거나 암호화 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예컨대, Ti 플라스미드)로 형질감염된 식물 세포 시스템; 또는 포유동물 세포의 게놈으로부터(예컨대, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유동물 바이러스(예컨대, 아데노바이러스 레이트 프로모터(adenovirus late promoter); 박시니아 바이러스 7.5K 프로모터)으로부터 유래된 프로모터를 함유하는 재조합 발현 작제물을 지닌 포유동물 세포 시스템(예컨대, COS, CHO, BHK, 293, NS0, 및 3T3 세포)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 세균 세포, 예를 들어, 특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위한 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 또는 진핵 세포를 재조합 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질의 발현을 위해 사용할 수 있다. 예를 들면, 포유동물 세포, 예를 들면, 사람 사이토메갈로바이러스로부터의 주요 인터미디에이트 얼리 유전자 프로모터 성분(major intermediate early gene promoter element)과 같은 벡터와 함께 차이니즈 햄스터 난소 세포(Chinese hamster ovary cell)(CHO)는 항체 또는 이의 변이체를 위한 효과적인 발현 시스템이다(Foecking et al., 1986, Gene 45:101; 및 Cockett et al., 1990, Bio/Technology 8:2). 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질은 CHO 세포에서 생산된다. 구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 발현은 구성적 프로모터, 유도성 프로모터 또는 조직 특이적인 프로모터에 의해 조절된다.
세균 시스템에서, 다수의 발현 벡터를 발현되는 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질에 대해 의도된 용도에 따라 유리하게 선택할 수 있다. 예를 들면, 다량의 이러한 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질이 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질의 약제학적 조성물의 생성을 위해 생산될 경우, 용이하게 정제되는 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질 생성물의 고 수준의 발현을 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터는 암호화 서열이 lac Z 암호화 영역과 프레임내에서 벡터내로 개별적으로 연결됨으로써 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질이 생산되도록 하는 이. 콜라이 발현 벡터 pUR278(Ruther et al., 1983, EMBO 12:1791); pIN 벡터(Inouye & Inouye, 1985, Nucleic Acids Res. 13:3101-3109; Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24:5503-5509) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. pGEX 벡터를 또한 사용하여 외부 폴리펩타이드를 글루타티온 5-트랜스퍼라제(GST)를 지닌 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질로서 발현시킬 수 있다. 일반적으로, 이러한 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질은 가용성이며 흡착 및 매트릭스 글루타티온 아가로즈 비드에 대한 결합에 이은 유리 글루타티온의 존재하에서의 용출에 의해 분해된 세포로부터 용이하게 정제할 수 있다. pGEX 벡터는 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계됨으로서 클로닝된 표적 유전자 생성물이 GST 모이어티로부터 방출되로록 할 수 있다.
곤충 시스템에서, 오토그라파 칼리포니카 핵 다면체형성 바이러스(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus)(AcNPV)는 외부 유전자를 발현시키기 위한 벡터로서 사용된다. 바이러스는 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포 내에서 성장한다. 암호화 서열은 바이러스의 비-필수 영역(예를 들면, 폴리헤드론 영역)을 클로닝할 수 있으며 AcNPV 프로모터(예를 들면, 폴리헤드린 프로모터)의 제어 하에 놓일 수 있다.
포유동물 숙주 세포에서, 다수의 바이러스-기반 발현 시스템을 활용할 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우, 목적한 암호화 서열을 아데노바이러스 전사/해독 제어 복합체, 예컨대, 레이트 프로모터 및 3부 리더 서열(tripartite leader sequence)에 연결될 수 있다. 이러한 키메라 유전자는 이후 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈 내에 삽입시킬 수 있다. 바이러스 게놈의 비-필수 영역(예컨대, 영역 El 또는 E3)은 감염된 숙주 내에서 생존할 수 있고 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 발현시킬 수 있는 재조합 바이러스를 생성할 것이다(예컨대, 참고: Logan & Shenk, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8 1:355-359). 특이적인 개시 신호가 또한 삽입된 암호화 서열의 효율적인 해독을 위해 요구될 수 있다. 이러한 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접한 서열을 포함한다. 또한, 개시 코돈은 목적한 암호화서열의 판독 프레임과 함께 존재함으로써 전체 삽입체의 해독을 보증하여야 한다. 이러한 외인성 해독 제어 신호 및 개시 코돈은 천연 및 합성 둘 다의 다양한 기원일 수 있다. 발현의 효율은 적절한 전사 인핸서 성분, 전사 터미네이터 등을 포함시켜 향상시킬 수 있다(참고: 예컨대, Bittner et al., 1987, Methods in Enzymol. 153:51-544).
또한, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나, 목적한 구체적인 양식으로 유전자 생성물을 변형시키고 가공하는 숙주 세포 균주를 선택할 수 있다. 단백질 생성물의 이러한 변형(예컨대, 글리코실화) 및 공정(예컨대, 절단)은 단백질의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 생성물의 해독 후 가공 및 변형에 대해 특징적이고 특이적인 메카니즘을 갖는다. 적절한 세포주 또는 숙주 시스템을 선택함으로써 발현된 외부 단백질의 정확한 변형 및 가공을 보증할 수 있다. 이러한 목적을 위해, 주요 전사체의 적절한 프로세싱, 글리코실화, 및 유전자 생성물의 포스포릴화를 위한 세포 기관을 지닌 진핵 숙주 세포를 사용할 수 있다. 이러한 포유동물 숙주 세포는 CHO, VERY, BHK, Hela, COS, MDCK, 293, 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(임의의 면역글로불린 쇄를 내인성으로 생산하지 않는 쥐 골수 세포주), CRL7O3O 및 HsS78Bst 세포를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
재조합 단백질의 장기간의, 고-수율 생산을 위해, 안정한 발현을 활용할 수 있다. 예를 들면, 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 안정하게 발현하는 세포주를 가공할 수 있다. 바이러스 복제 기원을 함유하는 발현 벡터를 사용하기 보다는, 숙주 세포를 적절한 발현 제어 성분(예컨대, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 터미네이터, 폴리아데닐화 부위 등), 및 선택가능한 마커에 의해 제어된 DNA로 형질전환시킬 수 있다. 외부 DNA의 도입 후, 가공된 세포는 농축 배지 속에서 1 내지 2일 동안 성장하도록 한 다음 선택성 배지에 대해 스위치(switch)된다. 재조합 플라스미드내 선택가능한 마커는 선택에 대해 내성을 부여하고 세포가 플라스미드를 이의 염색체내로 안정하게 통합되어 성장하여 궁극적으로 클로닝되고 세포주로 확장될 수 있는 초점(focus)을 형성하도록 한다. 이러한 방법은 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 발현하는 세포주를 가공하기 위해 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 가공된 세포주는 결합 분자와 직접 또는 간접적으로 상호작용하는 조성물을 스크리닝하고 평가는데 특히 유용할 수 있다.
헤르페스 단성 바이러스(herpes simplex virus) 티미딘 키나제(Wigler et al., 1977, Cell 11:223), 하이포크산틴구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Szybalska & Szybalski, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202), 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(Lowy et al., 1980, Cell 22:8-17) 유전자를 포함하나, 이에 한정되지 않는 다수의 선택 시스템을 tk-, hgprt- 또는 aprt-세포 각각에서 사용할 수 있다. 또한, 항대사산물 내성을 다음의 유전자에 대한 선택의 기준으로서 사용할 수 있다: 메토트렉세이트에 대해 내성을 부여하는 dhfr (Wigler et al., 1980, Natl. Acad. Sci. USA 77:357; O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527); 마이코페놀산에 대해 내성을 부여하는 gpt (Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2072); 아미노글리코시드 G-418에 대해 내성을 부여하는 neo (Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95; Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596; Mulligan, 1993, Science 260:926-932; 및 Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; May, 1993, TIB TECH 11(5):l55-2 15); 및 하이그로마이신에 대해 내성을 부여하는 hygro (Santerre et al., 1984, Gene 30:147). 재조합 DNA 기술 분야에 일반적으로 공지된 방법을 통상적으로 적용하여 목적한 재조합체 클론을 선택할 수 있으며, 이러한 방법은 예를 들면, 문헌: Ausubel et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expresion, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); 및 in Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1에 기술되어 있고, 이들 문헌은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가시킬 수 있다(검토를 위해서는, 문헌: Bebbington and Hentschel, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian 세포in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)을 참고한다). 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 발현하는 벡터 시스템내 마커가 증폭가능한 경우, 숙주 세포의 배양물 속에 존재하는 억제제의 수준에 있어서의 증가는 마커 유전자의 카피의 수를 증가시킬 것이다. 증폭된 영역은 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질 유전자와 관련되므로, 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질의 유전자 생산 또한 증가될 것이다(Crouse et al., 1983, Mol. Cell. Biol. 3:257).
숙주 세포는 본원에 제공된 다수의 발현 벡터로 동시-형질감염시킬 수 있다. 벡터는 각각의 암호화 폴리펩타이드의 동등한 발현을 가능하도록 하는 동일한 선택가능한 마커를 함유할 수 있다. 대안적으로, 다수의 폴리펩타이드를 암호화하고, 이를 발현시킬 수 있는 단일 벡터를 사용할 수 있다. 암호화 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질이 재조합 발현에 의해 생산되면, 이는 폴리펩타이드(예컨대, 면역글로불린 분자)의 정제를 위해 당해 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들면, 크로마토그래피(예컨대, 이온 교환, 친화성, 특히 단백질 A 이후 특정 항원에 대한 친화성에 의해, 크기 컬럼 크로마토그래피, 및 카파 선택 친화성 크로마토그래피), 원심분리, 차등적 용해도에 의해, 또는 단백질의 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제할 수 있다. 또한, 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질 분자를 본원에 기술되거나 또한 정제를 촉진시키기 위해 당해 분야에 공지된 이종 폴리펩타이드 서열에 융합시킬 수 있다.
하기 실시예는 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 제조하는 방법을 예시한다.
약제학적 조성물
일 양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 적어도 하나의 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 치료학적 유효량의 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물은 목적한 정도의 순도를 갖는 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질과 수용액 또는 동결건조되거나 다른 건조된 형태의 임의의 생리학적으로 허용되는 부형제(참고: 예컨대, Remington, Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed. 1980))와 혼합함으로써 저장용으로 제조된다.
본 개시내용의 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질은 표적 세포/조직에 전달하기 위한 임의의 적합한 형태로, 예컨대, 미세캅셀 또는 거대유제(macroemulsion)의 형태(Remington, supra; Park et al., 2005, Molecules 10:146-61; Malik et al., 2007, Curr. Drug. Deliv. 4:141-51)로, 지연된 방출 제형(Putney and Burke, 1998, Nature Biotechnol. 16:153-57)의 형태로, 또는 리포좀(Maclean et al., 1997, Int. J. Oncol. 11:325-32; Kontermann, 2006, Curr. Opin. Mol. Ther. 8:39-45)내에 제형화될 수 있다.
본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질은 또한 예를 들면, 코아세르베이션 기술(coacervation technique) 또는 계면 중합, 예를 들면, 하이드록시메틸셀룰로즈 또는 젤라틴-미세캅셀 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 미세캅셀에 각각의해, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들면, 리포좀, 알부민 미세구, 미세유액, 나노-입자, 및 나노캅셀) 또는 거대유액 속에서 제조할 수 있다. 이러한 기술은 예를 들면, 문헌: Remington, 상기 참고에 개시되어 있다.
다양한 조성물 및 전달 시스템이 공지되어 있으며 리포좀, 미세입자, 미세캅셀, 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 발현할 수 있는 재조합 세포 내에 캡슐화(encapsulation), 수용체-매개된 세포내이입(receptor-mediated endocytosis)(참고: 예컨대, Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-32), 레트로바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 작제 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는, 본원에 기술된 바와 같은 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질과 함께 사용될 수 있다. 다른 구현예에서, 조성물은 제어된 방출 또는 지연된 방출 시스템으로 제공될 수 있다. 일 구현예에서, 펌프를 사용하여 제어되거나 지연된 방출을 달성할 수 있다(참고: 예컨대, Langer, 상기 참고; Sefton, 1987, Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201-40; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507-16; and Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:569-74). 다른 구현예에서, 중합체성 물질을 사용하여 본원에 제공된 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 기술된 바와 같은 융합 단백질) 또는 조성물의 제어된 또는 지연된 방출을 달성할 수 있다(참고: 예컨대, Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., 1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61-126; Levy et al., 1985, Science 228:190-92; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351-56; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105-12; 미국 특허 제5,679,377호; 제5,916,597호; 제5,912,015호; 제5,989,463호; 및 제5,128,326호; PCT 공보 제WO 99/15154호 및 제WO 99/20253호). 지연된 방출 제형에 사용된 중합체의 예는 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드(PLG), 다가무수물(polyanhydride), 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락타이드(PLA), 폴리(락타이드-코-글리콜리드)(PLGA), 및 폴리오르토에스테르를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 일 구현예에서, 지연된 방출 제형에 사용된 중합체는 불활성이고, 누출가능한 불순물을 포함하지 않으며, 저장시 안정하고, 멸균성이며, 생분해가능하다.
여전히 다른 구현예에서, 제어되거나 지연된 방출 시스템을 특수한 표적 조직, 예를 들면, 비강 통로 또는 폐에 근접하게 위치함으로서 전신 용량의 분획만을 요구할 수 있다(참고: 예컨대, Goodson, Medical Applications of Controlled Release Vol. 2, 115-38 (1984)). 제어된 방출 시스템은 예를 들면, 문헌: Langer, 1990, Science 249:1527-33에 논의되어 있다. 당해 분야의 기술자에게 공지된 임의의 기술을 사용하여 본원에 기술된 바와 같은 하나 이상의 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함하는 지연된 방출 제형을 생산할 수 있다(참고: 예컨대, 미국 특허 제4,526,938호, PCT 공보 제WO 91/05548호 및 제WO 96/20698호, Ning et al., 1996, Radiotherapy & Oncology 39:179-89; Song et al., 1995, PDA J. of Pharma. Sci. & Tech. 50:372-97; Cleek et al., 1997, Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-54; 및 Lam et al., 1997, Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-60).
사용 방법
구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함하는 질환 또는 상태의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 조성물이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 질환 또는 상태의 예방에 사용하기 위한 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물은 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함한다. 일 구현예에서, 질환 또는 상태의 치료시 사용하기 위한 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물은 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함한다. 일부 구현예에서, 질환 또는 상태는 암이다. 일부 구현예에서, 암은 고형 종양 암이다. 특정의 구현예에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가진다. 다른 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가질 위험이 있다. 일부 구현예에서, 투여는 질환 또는 상태의 예방, 관리, 치료 또는 완화를 야기한다.
일 구현예에서, 질환 또는 상태의 증상의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물은 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함한다. 일 구현예에서, 질환 또는 상태의 증상의 예방시 사용하기 위한 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물은 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함한다. 일 구현예에서, 질환 또는 상태의 증상의 치료시 사용하기 위한 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물은 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함한다. 일 구현예에서, 질환은 암이다. 특정의 구현예에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가진다. 다른 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가질 위험이 있다. 일부 구현예에서, 투여는 질환 또는 상태의 증상의 예방 또는 치료를 야기한다.
다른 구현예에서, 유효량의 본원에 제공된 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환 또는 상태의 예방 및/또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 유효량의 본원에 제공된 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환 또는 상태를 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 유효량의 본원에 제공된 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환 또는 상태를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 질환 또는 상태는 암이다. 특정의 구현예에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가진다. 다른 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가질 위험이 있다. 일부 구현예에서, 투여는 질환 또는 상태의 증상의 예방 또는 치료를 야기한다.
다른 구현예에서, 유효량의 본원에 제공된 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환 또는 상태의 증상을 예방 및/또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 유효량의 본원에 제공된 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환 또는 상태의 증상을 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 유효량의 본원에 제공된 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질을 투여함을 포함하여, 대상체에서 질환 또는 상태의 증상을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 질환 또는 상태는 암이다. 특정의 구현예에서, 대상체는 이를 필요로 하는 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가진다. 다른 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태를 가질 위험이 있다. 일부 구현예에서, 투여는 질환 또는 상태의 증상의 예방 또는 치료를 야기한다.
또한 유효량의 본원에 제공된 항-메소텔린 작제물 또는 융합 단백질, 또는 본원에 제공된 항-MSLN 작제물 또는 융합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여함으로써 질환 또는 상태를 예방 및/또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일 양태에서, 융합 단백질은 실질적으로 정제된다(즉, 이의 효과를 제한하거나 목적하지 않은 부작용을 생산하는 물질을 실질적으로 함유하지 않는다). 치료요법을 투여받은 대상체는 포유동물, 예를 들면, 비-영장류(예컨대, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 랫트 등) 또는 영장류(예컨대, 원숭이, 예를 들면, 시노몰구스 원숭이, 또는 사람)일 수 있다. 일 구현예에서, 대상체는 사람이다. 다른 구현예에서, 대상체는 질환 또는 상태, 예컨대, 고형 종양 암을 포함하는 암를 지닌 사람이다.
또한, 메소텔린에 특이적으로 결합하는 항-MSLN 항체 모이어티를 포함하는 항-메소텔린 작제물의 유효량을 대상체에 투여함으로써 질환 또는 상태를 예방 및/또는 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 항-MSLN 항체 모이어티는 감소된 푸코실화를 갖는다.
질환 또는 상태
본원에 기술된 방법을 사용하여 질환 또는 상태를 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 질환 또는 상태는 암이다. 일부 구현예에서, 암은 메소텔린 양성 암이다. 일부 구현예에서, 암은 고형 암이다. 일부 구현예에서, 암은 위암, 폐암(예를 들면, 비-소세포 폐암), 난소 암(예를 들면, 상피 난소 암), 식도 암, 췌장 암, 경부 암, 중피종(예를 들면, 악성 중피종, 악성 상피 흉막 중피종, 진전된 재발성 상피성 중피종), 위장 암, 내막 암, 도관의 췌장 선암, 및 유방 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
병용 치료요법
일부 구현예에서, 본원에 기술된 방법은 제2의 제제를 투여함을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제2의 제제는 사이토킨을 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 IL-21 또는 IL-15이다. 일부 구현예에서, IL-21 또는 IL-15는 반감기 연장 도메인을 포함하는 융합 단백질의 형태이다. 일부 구현예에서, 반감기-연장 도메인은 Fc 도메인 또는 알부민 결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물 및 사이토킨은 동시에 투여된다.
일부 구현예에서, 개인에게 a) 항-메소텔린 제제; b) 항-Her2 제제; 및 c) IL-21을 투여함을 포함하여, 개인에서 위암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, IL-21은 반감기 연장 도메인을 포함하는 융합 단백질의 형태이다. 일부 구현예에서, 항-Her2 제제는 헤르셉틴이다. 일부 구현예에서, 항-메소텔린 제제는 본원에 기술된 바와 같은 항-메소텔린 작제물을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-메소텔린 제제는 서열 번호: 123 내지 156 및 285 내지 301 중 어느 하나에 나타낸 서열을 갖는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH) 쇄 영역 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 각각 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3을 포함하는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항-메소텔린 항체 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물, 항-Her2 제제 및 IL-21은 동시에 투여된다.
투여 요법
항-메소텔린 작제물 및/또는 제2의 제제는 임의의 적합한 투여량 및 투여 경로를 사용하여 개인에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물 및/또는 제2의 제제는 개인에게 비경구적으로 투여된다. 투여 경로는 공지되고 허용된 방법에 따라, 예를 들면, 단일 또는 다수의 거환(bolus) 또는 주입물에 의해, 기간에 걸쳐 적합한 방식으로, 예컨대, 주사 또는 주입물로, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 병변내, 관절내, 종양내 또는 경구 경로에 의한다.
일부 구현예에서, 항-메소텔린 작제물 및 제2의 제제는 개체(individual)에게 동시에(simultaneously), 함께(concurrently) 또는 연속적으로 투여된다.
적절한 투여량 또는 투여 경로의 결정은 통상의 기술자의 기술내에 있다. 동물 실험은 사람 진단 적용에 효과적인 용량의 결정을 위한 신뢰가능한 안내를 제공한다. 효과적인 용량의 종간 조정(interspecies scaling)은 문헌: Mordenti, J. and Chappell, W. "The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics," In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds, Pergamon Press, New York 1989, pp. 42-46에 놓여진 원리에 따라 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 주당 약 1회 내지 주당 약 2회의 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 주당 적어도 약 1회의 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 주당 약 2회 이하의 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물은 각각의 투여 주기 동안 적어도 약 1주, 2주, 3주, 4주 또는 5주 동안 투여된다.
일부 구현예에서, 사람에게로 각각의 투여를 위한 항-MSLN 작제물의 양은 마우스의 경우 약 5mg/kg의 투여량과 동일한 양이다. 일부 구현예에서, 사람에게로 각각의 투여를 위한 항-MSLN 작제물의 양은 마우스의 경우 약 100 μg의 투여량과 동일한 양이다. 문헌: Nair, A. B., & Jacob, S. (2016). A simple practice guide for dose conversion between animals and human. Journal of basic and clinical pharmacy, 7(2), 27을 참고한다.
일부 구현예에서, 제2의 제제는 사이토킨(예를 들면, 사이토킨 융합 단백질, 예를 들면, IL-21-항-HSA 융합 단백질)을 포함한다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 주당 약 2회의 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 각각의 투여 주기 동안 적어도 약 1주, 2주, 또는 2주 반 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 사람에게로 각각의 투여를 위한 사이토킨의 양은 마우스의 경우 약 5 μg 내지 약 25 μg의 투여량과 동일한 양이다.
일부 구현예에서, 제2의 제제는 항-Her2 제제(예를 들면, 헤르셉틴)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-Her2 제제는 주당 약 2회의 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 사이토킨은 각각의 치료 주기 동안 적어도 약 1주, 2주, 또는 2주 반 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 사람에게로 각각의 투여를 위한 사이토킨의 양은 마우스의 경우 약 20 μg의 투여량과 동일한 양이다.
다양한 전달 시스템이 공지되어 있으며 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된 융합 단백질)을 투여하기 위해 사용될 수 있으며, 리포좀내 캅셀화, 미세입자, 미세캅셀, 융합 단백질을 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개된 세포내이입(참고: 예컨대, Wu and Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)), 레트로바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 작제 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된 융합 단백질), 또는 약제학적 조성물을 투여하는 방법은 비경구 투여(예컨대, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하), 경막외, 및 점막(예컨대, 비강내 및 경구 경로)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 구체적인 구현예에서, 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된 융합 단백질), 또는 약제학적 조성물은 비강내, 근육내, 정맥내, 또는 피하로 투여된다. 예방제 또는 치료제, 또는 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들면, 주입 또는 거환 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 라이닝(lining)(예컨대, 경구 점막, 비강내 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며, 다른 생물학적으로 활성인 제제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신계 또는 국소일 수 있다. 또한, 흡입기 또는 분무기(nebulizer), 및 에어로졸화제를 지닌 제형의 사용에 의한 폐 투여를 또한 사용할 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제6,019,968호, 제5,985,320호, 제5,985,309호, 제5,934,272호, 제5,874,064호, 제5,855,913호, 제5,290,540호, 및 제4,880,078호; 및 PCT 공보 제WO 92/19244호, 제WO 97/32572호, 제WO 97/44013호, 제WO 98/31346호, 및 제WO 99/66903호를 참고하며, 이들 각각은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 예방제 또는 치료제, 또는 약제학적 조성물을 치료가 필요한 부위에 국소 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 예를 들면, 및 이에 제한되지 않는 국소 주입, 국소 투여(예컨대, 비강내 스프레이)에 의해, 주사에 의해, 또는 이식체(implant)의 수단으로 달성할 수 있으며, 상기 이식체는 다공성, 비-다공성, 또는 젤라틴성 물질, 예를 들면, 시알라스틱 막(sialastic membrane), 또는 섬유일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 융합 단백질을 투여하는 경우, 융합 단백질이 흡수되지 않는 물질을 사용하기 위해 주의를 기울여야만 한다.
다른 구현예에서, 본원에 제공된 예방제 또는 치료제, 또는 조성물은 소포(vescicle), 특히, 리포좀(참고: Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein 및 Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353- 365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327; 또한 동일한 저서 참고)으로 전달될 수 있다.
다른 구현예에서, 본원에 제공된 예방제 또는 치료제, 또는 조성물은 제어된 방출 또는 지연된 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 일 구현예에서, 펌프를 사용하여 제어되거나 지연된 방출을 달성할 수 있다(참고: Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574). 다른 구현예에서, 중합체 물질을 사용하여 본원에 제공된 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된 항체) 또는 조성물(참고: 예컨대, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger 및 Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; see also Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105); 미국 특허 제5,679,377호; 미국 특허 제5,916,597호; 미국 특허 제5,912,015호; 미국 특허 제5,989,463호; 미국 특허 제5,128,326호; PCT 공보 제WO 99/15154호; 및 PCT 공보 제WO 99/20253호)의 제어된 또는 지연된 방출을 달성할 수 있다. 지연된 방출 제형에 사용된 중합체의 예는 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드(PLG), 다가무수물, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락타이드(PLA), 폴리(락타이드-코-글리콜리드)(PLGA), 및 폴리오르토에스테르를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 구현예에서, 지연된 방출 제형에 사용된 중합체는 불활성의, 누출가능한 불순물을 함유하지 않고, 저장시 안정하며, 멸균성이고, 생분해성이다. 여전히 다른 구현예에서, 제어된 또는 지연된 방출 시스템을 치료제에 근접하게, 즉, 비강 통로 또는 폐에 위치시킴으로써, 전신계 용량의 분획만을 필요로할 수 있다(참고: 예컨대, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)). 제어된 방출 시스템은 랭거(Langer)의 검토(1990, Science 249:1527-1533)에 논의되어 있다. 당해 분야의 기술자에게 공지된 임의의 기술을 사용하여 본원에 제공된 하나 이상의 융합 단백질을 포함하는 지연된 방출 제형을 생산할 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제4,526,938호, PCT 공보 제WO 91/05548호, PCT 공보 제WO 96/20698호, Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel", Radiotherapy & Oncology 39:179- 189, Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions", PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application", Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, 및 Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery", Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760을 참고하며, 이들 각각은 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 조성물이 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된 융합 단백질)를 암호화하는 핵산인 경우, 핵산을 생체내에서 투여하여 이를 적절한 핵산 발현 벡터의 부분으로써 작제하고 이를 투여하여 이것이 예컨대, 레트로바이러스 벡터(참고: 미국 특허 제4,980,286호)에 의해, 또는 직접적인 주사에 의해, 또는 미세입자 충격(microparticle bombardment)(예컨대, 유전자 총(gene gun); Biolistic, Dupont)의 사용에 의해, 또는 지질 또는 세포 표면 수용체 또는 형질감염제로 코팅함에 의해, 또는 이를 핵 내로 들어가는 것으로 알려진 호메오박스(homeobox)-유사 펩타이드에 연결하여 투여함에 의해, 세포 내에 존재하도록 함으로써 이의 암호화된 예방제 또는 치료제의 발현을 촉진시킬 수 있다(참고: 예컨대, Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868). 대안적으로, 핵산을 세포내로 도입시키고 동종 재조합에 의해 발현에 대해 숙주 세포 DNA 내에 혼입시킬 수 있다.
구체적인 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 본원에 제공된 1개, 2개 또는 그 이상의 융합 단백질을 포함한다. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 본원에 제공된 1개, 2개 이상의 융합 단백질 및 본원에 제공된 융합 단백질 이외의 예방제 또는 치료제를 포함한다. 일 구현예에서, 제제는 질환 또는 상태의 예방, 관리, 치료 및/또는 완화를 위해 유용한 것으로 알려져 있거나 사용되었거나 현재 사용 중에 있다. 예방제 또는 치료제 외에도, 본원에 제공된 조성물은 또한 부형제를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 조성물은 단위 투여형의 제조에 사용될 수 있는 약제학적 조성물(예컨대, 대상체 또는 환자에게 투여하기에 적합한 조성물)의 제조에 유용한 거대한 약물 조성물을 포함한다. 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 약제학적 조성물이다. 이러한 조성물은 예방학적 또는 치료학적 유효량의 하나 이상의 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된 융합 단백질 또는 다른 예방제 또는 치료제), 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 약제학적 조성물은 대상체에 대한 투여 경로에 적합하도록 제형화될 수 있다.
구체적인 구현예에서, 용어 "부형제"는 또한 희석제, 보조제(예컨대, 프루언드 보조제(Freunds' adjuvant)(완전 또는 불완전) 또는 비히클을 지칭할 수 있다. 약제학적 부형제는 멸균 액체, 예를 들면, 물 및 오일, 예를 들면, 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 것, 예를 들면, 땅콩 오일, 대두 오일, 광 오일, 참깨 오일 등일 수 있다. 물은 약제학적 조성물이 정맥내 투여되는 경우 예시적인 부형제이다. 염수 용액 및 수성 덱스트로즈 및 글리세롤 용액을 또한 특히 주사가능한 용액을 위한 액체 부형제로서 사용할 수 있다. 적합한 약제학적 부형제는 전분, 글루코즈, 락토즈, 슈크로즈, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 탈지 분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은, 필요한 경우, 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 이러한 조성물은 액제, 현탁제, 유제, 정제, 환제, 캅셀제, 산제, 지연된-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 경구 제형은 표준 부형제, 예를 들면, 약제학적 등급의 만니톨, 락토즈, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로즈, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 적합한 약제학적 부형제의 예는 문헌: Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA에 기술되어 있다. 이러한 조성물은 예방학적으로 또는 치료학적으로 유효한 양의 본원에 제공된 융합 단백질, 예를 들면, 정제된 형태를, 적합한 양의 부형제와 함께 함유함으로써 환자에게 적절히 투여하기 위한 형태를 제공할 것이다. 제형은 투여 방식에 적합하여야 한다.
구현예에서, 조성물은 사람에게 정맥내 투여하기 위해 채택된 약제학적 조성물로서 통상의 과정에 따라 제형화된다. 전형적으로, 정맥내 투여용 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 속의 용액이다. 필요한 경우, 조성물은 또한 가용화제 및 국소 마취제, 예를 들면, 주사 부위에 통증을 감소시키기 위한 리그노캄(lignocamne)을 함유할 수 있다. 이러한 조성물은, 그러나, 정맥이외의 다른 경로로도 투여될 수 있다.
일반적으로, 본원에 제공된 조성물의 성분은 별도로 공급되거나 단위 투여형으로, 예를 들면, 무수 동결건조된 분말 또는 밀봉된 용기, 예를 들면, 활성제의 양을 나타내는 앰플 또는 사셰(sachette) 속의 무수 농축물로서 함께 혼합된다. 조성물이 주입에 의해 투여되는 경우, 이는 멸균 약제학적 등급의 물 또는 염수를 함유하는 주입 병으로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균 수 또는 염수의 앰플을 제공하여 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록 할 수 있다.
본원에 제공된 융합 단백질은 밀봉된 용기, 예를 들면, 항체의 양을 나타내는 앰플 또는 사셰 속에 패키지될 수 있따. 일 구현예에서, 융합 단백질은 밀봉된 용기 속에 무수 멸균된 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서 공급되며 예컨대, 물 또는 염수와 함께 대상체에게 투여하기에 적절한 농도로 재구성된다. 동결건조된 융합 단백질은 이의 원래의 용기 속에 2 내지 8℃에서 보관될 수 있으며 융합 단백질은 재구성된 후 12시간 내, 예를 들면, 6시간 내, 5시간 내, 3시간 내, 또는 1시간 내에 투여될 수 있다. 대안적인 구현예에서, 본원에 제공된 융합 단백질은 항체의 양 및 농도를 나타내는 밀봉된 용기 속에 액체형으로 공급된다.
본원에 제공된 조성물은 중성 또는 염 형태로 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 음이온과 함께 형성된 것, 예를 들면, 염화수소산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등, 및 양이온과 함께 형성된 것, 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래된 것을 포함한다.
질환 또는 상태의 예방 및/또는 치료에 효과적일 본원에 제공된 예방제 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된 융합 단백질), 또는 조성물의 양은 표준 임상 기술에 의해 측정할 수 있다. 또한, 시험관내 검정을 임의로 사용하여 최적은 투여량 범위를 확인하는 것을 도울 수 있다. 제형에 사용될 정확한 용량은 또한 투여 경로, 질환 또는 상태의 중증도에 의존할 것이며, 숙련가의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다.
유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 추론할 수 있다.
특정의 구현예에서, 환자에 대한 본원에 제공된 융합 단백질의 용량에 대한 투여 경로는 비강내, 근육내, 정맥내, 또는 이의 조합이지만, 본원에 기술된 다른 경로가 또한 허용가능하다. 각각의 용량은 동일한 투여 경로에 의해 투여될 수 있거나 투여되지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 융합 단백질은 동시에 또는 본원에 제공된 동일하거나 상이한 융합 단백질의 다른 용량에 대해 후속적으로 다수의 투여 경로를 통해 투여될 수 있다.
특정의 구현예에서, 본원에 제공된 융합 단백질은 대상체에게 예방학적으로 또는 치료학적으로 투여된다. 본원에 제공된 융합 단백질은 대상체에게 예방학적으로 또는 치료학적으로 투여되어 질환 또는 이의 증상을 예방, 경감 또는 완화시킬 수 있다.
간결성을 위해, 특정의 약어가 본원에 사용된다. 하나의 예는 아미노산 잔기를 나타내는 단일 문자 약어이다. 아미노산 및 이의 상응하는 3 문자 및 단일 문자 약어는 다음과 같다:
Figure pct00018
본 발명은 일반적으로 다수의 구현예를 설명하기 위해 단정적인 언어를 사용하여 본원에 개시되어 있다. 본 발명은 또한 특수한 주제가 배제된 구현예, 예를 들면, 물질 또는 재료, 방법 단계 및 조건, 프로토콜, 과정, 검정 또는 분석을 완전히 또는 부분적으로 포함한다. 따라서, 본 발명이 본 발명에 표현하지 않은 것의 측면에서 본원에 표현되어 있지 않다고 해도, 본 발명에 표현하에 포함되지 않은 양태가 본원에 개시되어 있다.
본 발명의 다수의 구현예가 기술되어 있다. 그럼에도 불구하고, 다양한 변형이 본 발명의 취지 및 영역으로부터 벗어나지 않고 이루어질 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 다음의 실시예는 다음의 실시예는 청구범위에 기술된 본 발명의 영역을 나타내지만 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
제조 물품 및 키트(kit)
본 발명의 일부 구현예에서, 항-MSLN 작제물을 개체내로 투여하기 위한, 개체내에서 질환 또는 상태(예를 들면, 암, 예를 들면, 메소텔린-양성 암)의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 이와 관련된 표지 또는 패키지를 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들면, 병, 바이알(vial), 주사기 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예를 들면, 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 일반적으로, 용기는 본원에 기술된 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 조성물을 보유하며, 멸균 접근 포트(steril access port)를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 피하주사기 주사 침에 의해 뚫릴 수 있는 스토퍼(stopper)를 가진 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있다). 조성물 속의 적어도 하나의 활성제는 본원에 기술된 항-MSLN 작제물이다. 표지 또는 패키지 삽입물은 조성물이 특수한 상태를 치료하는데 사용됨을 나타낸다. 표지 또는 패키지 삽입물은 또한 항-MSLN 작제물을 환자에게 투여하기 위한 설명서를 포함할 것이다. 본원에 기술된 조합 치료요법을 포함하는 제조 물품 및 키트가 또한 고려된다.
패키지 삽입물은 이러한 치료학적 생성물의 용도에 관한 처방, 용도, 투여량, 투여, 사용금지사유 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 치료학적 제품의 시판 패키지 속에 통상적으로 포함된 설명서를 지칭한다. 일부 구현예에서, 패키지 삽입물은 조성물이 질환 또는 상태(예를 들면, 암, 예를 들면, 메소텔린-양성 암)을 치료하는데 사용됨을 나타낸다.
또한, 제조 물품은 약제학적으로 허용되는 완충제, 예를 들면, 주사용 제균수(bacteriostatic water for injection)(BWFI), 인산염-완충된 염수, 링커 용액 및 덱스트로즈 용액을 포함하는 제2의 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 또한 상업적 및 사용자 관점으로부터 바람직한 다른 물질, 예를 들면, 다른 완충제, 희석제, 여과제, 침, 및 주사기를 추가로 포함할 수 있다.
다양한 목적, 예컨대, 본원에 기술된 질환 또는 상태(예를 들면, 암, 예를 들면, 메소텔린-양성 암)의 치료를 위해, 항-MSLN 작제물을 개체에게, 임의로 제조 물품과 함께 투여하기 위한 키트가 제공된다. 본 발명의 키트는 항-MSLN 작제물 조성물(또는 단위 투여형 및/또는 제조 물품)을 포함하는 하나 이상의 용기를 포함하고, 일부 구현예에서, 본원에 기술된 방법 중 어느 것에 따라 사용하기 위한 다른 제제(예를 들면, 본원에 기술된 제제) 및/또는 설명서를 추가로 포함한다. 키트는 또한 치료에 적합한 개인의 선택을 위한 설명서를 포함할 수 있다. 본 발명의 키트에 공급된 설명서는 전형적으로 표지 또는 패키지 삽입물(예컨대, 키트내에 포함된 종이 시이트) 상의 서면 설명서이지만, 기계-판독가능한 설명서(예컨대, 자기 또는 광학적 저장 디스크에 수반된 설명서)가 또한 허용가능하다.
예를 들면, 일부 구현예에서, 키트는 항-MSLN 작제물을 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 a) 항-MSLN 작제물을 포함하는 조성물, 및 b) 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 a) 항-MSLN 작제물을 포함하는 조성물, 및 b) 치료를 위해 개체에게 항-MSLN 작제물을 투여하기 위한 설명서를 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 a) 항-MSLN 작제물을 포함하는 조성물, b) 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 적어도 하나의 다른 제제, 및 항-MSLN 작제물 조성물 및 다른 제제(들)을 치료하기 위해 개체에게 투여하기 위한 설명서를 포함한다. 항-MSLN 작제물 및 다른 제제(들)은 별개의 용기 또는 단일 용기 속에 존재할 수 있다. 예를 들면, 키트는 하나의 명백한 조성물 또는 2개 이상의 조성물을 포함할 수 있으며 여기서 하나의 조성물은 항-MSLN 작제물을 포함하고 다른 조성물은 다른 제제를 포함한다.
본 발명의 키트는 적합한 패키지(packaging) 속에 존재한다. 적합한 패키지는 바이알, 병, 자(jar), 가요성 패키지(예컨대, 밀봉된 마일러(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 키트는 임의로 추가의 구성성분, 예를 들면, 완충제 및 해석가능한 정보를 제공할 수 있다. 따라서 본원은 제조 물품을 또한 제공하며, 이는 바이알(예를 들면, 밀봉된 바이알), 병, 자, 가요성 패키지 등을 포함한다.
항-MSLN 작제물 조성물의 사용에 관한 설명서는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투여량, 투여 스케쥴, 및 투여 경로에 대한 정보를 포함한다. 용기는 단위 용량, 거대 패키지(예컨대, 다중-용량 피키지) 또는 소-단위 용량일 수 있다. 예를 들면, 본원에 개시된 바와 같은 항-MSLN 작제물의 충분한 투여량을 함유함으로써 연장된 기간, 예를 들면, 1주, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 3개월 4개월, 5개월, 7개월, 8개월, 9개월 이상의 어느 것 동안 개체의 효과적인 치료를 제공하는 키트를 제공할 수 있다. 키트는 또한 항-MSLN 작제물 및 약제학적 조성물의 다수의 단위 용량 및 사용 설명서를 포함할 수 있고 조제실, 예를 들면, 병원 조제실 및 화합 조제실에서 저장 및 사용하기에 적합한 양으로 패키지될 수 있다.
당해 분야의 기술자는 수개의 일부 구현예가 본원의 영역 및 취지내에서 가능함을 인식할 것이다. 본 발명을 이제 다음의 비-제한 실시예를 참고로 보다 상세히 기술할 것이다. 다음의 실시예는 본 발명을 추가로 나타내지만, 물론 이의 영역을 어떠한 방식으로도 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
예시적인 구현예
1. (a) 인터루킨 21(IL-21) 또는 이의 변이체; (b) 알부민 결합 분자; 및 (c) 항원에 결합하는 결합 분자를 포함하는 융합 단백질로서, 여기서 IL-21 또는 이의 변이체는 제1의 링커를 통해 알부민 결합 분자에 연결되며, 여기서 알부민 결합 분자는 제2의 링커를 통해 결합 분자에 연결된다.
2. 제1항에 있어서, IL-21 또는 이의 변이체가 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
3. 제1항에 있어서, IL-21 또는 이의 변이체가 서열 번호: 1 내에 하나 이상의 결실을 포함하는 융합 단백질.
4. 제1항에 있어서, IL-21 또는 이의 변이체가 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
5. 제1항에 있어서, IL-21 또는 이의 변이체가 서열 번호: 1에 대해 80% 이상의 동일성을 지닌 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
6. 제1항에 있어서, IL-21 또는 이의 변이체가 서열 번호: 1에 대해 90% 이상의 동일성을 지닌 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
7. 제1항에 있어서, IL-21 또는 이의 변이체가 서열 번호: 1에 대해 95% 이상의 동일성을 지닌 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 알부민 결합 분자가 알부민 결합 도메인(ABD)인 융합 단백질.
9. 제8항에 있어서, ABD가 사람 혈청 알부민(HSA)에 결합하는 융합 단백질.
10. 제8항에 있어서, ABD가 마우스 혈청 알부민(MSA)에 결합하는 융합 단백질.
11. 제8항에 있어서, ABD가 1 내지 1000nM의 KD를 지닌 HSA에 결합하는 융합 단백질.
12. 제8항에 있어서, ABD가 10 내지 500nM의 KD를 지닌 HSA에 결합하는 융합 단백질.
13. 제8항에 있어서, ABD가 20 내지 200nM의 KD를 지닌 HSA에 결합하는 융합 단백질.
14. 제8항에 있어서, ABD가 50 내지 100nM의 KD를 지닌 HSA에 결합하는 융합 단백질.
15. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
16. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
17. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
18. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
19. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
20. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
21. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
22. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
23. 제8항에 있어서, ABD가 서열 번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
24. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 알부민 결합 분자가 항-알부민 항체 또는 항원 결합 이의 단편인 융합 단백질.
25. 제24항에 있어서, 항-알부민 항체 또는 항원 결합 이의 단편이 HSA에 결합하는 sdAb인 융합 단백질.
26. 제25항에 있어서, sdAb가 VhH 단일 도메인 항체인 융합 단백질.
27. 제25항 또는 제26항에 있어서, sdAb가 1 내지 1000nM의 KD로 HSA에 결합하는 융합 단백질.
28. 제25항 또는 제26항에 있어서, sdAb가 10 내지 500nM의 KD로 HSA에 결합하는 융합 단백질.
29. 제25항 또는 제26항에 있어서, sdAb가 20 내지 200nM의 KD로 HSA에 결합하는 융합 단백질.
30. 제25항 또는 제26항에 있어서, sdAb가 50 내지 100nM의 KD로 HSA에 결합하는 융합 단백질.
31. 제1항에 있어서, 결합 분자가 암 세포 상에서 발현된 항원에 결합하는 항체 또는 항원 결합 이의 단편이고, 여기서 암 세포가 임의로 고형 종양 암 세포인 융합 단백질.
32. 제31항에 있어서, 결합 분자가 sdAb인 융합 단백질.
33. 제32에 있어서, sdAb가 VHH 단일 도메인 항체인 융합 단백질.
34. 제33항에 있어서, sdAb가 메소텔린(MSLN)에 결합하는 융합 단백질.
35. 제34항에 있어서, sdAb가 (i) 서열 번호: 12, 서열 번호: 15, 서열 번호: 18, 서열 번호: 21, 서열 번호: 24, 서열 번호: 27, 서열 번호: 30, 서열 번호: 33, 서열 번호: 36, 서열 번호: 39, 서열 번호: 42, 서열 번호: 45, 서열 번호: 48, 서열 번호: 51, 서열 번호: 54, 서열 번호: 57, 서열 번호: 60, 서열 번호: 63, 서열 번호: 75, 서열 번호: 78, 서열 번호: 81, 서열 번호: 84, 서열 번호: 87, 서열 번호: 90, 서열 번호: 93, 서열 번호: 96, 서열 번호: 99, 서열 번호: 102, 서열 번호: 105, 서열 번호: 108, 서열 번호: 111, 서열 번호: 114, 서열 번호: 117, 및 서열 번호: 120로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 1(CDR1); (ii) 서열 번호: 13, 서열 번호: 16, 서열 번호: 19, 서열 번호: 22, 서열 번호: 25, 서열 번호: 28, 서열 번호: 31, 서열 번호: 34, 서열 번호: 37, 서열 번호: 40, 서열 번호: 43, 서열 번호: 46, 서열 번호: 49, 서열 번호: 52, 서열 번호: 55, 서열 번호: 58, 서열 번호: 61, 서열 번호: 64, 서열 번호: 76, 서열 번호: 79, 서열 번호: 82, 서열 번호: 85, 서열 번호: 88, 서열 번호: 91, 서열 번호: 94, 서열 번호: 97, 서열 번호: 100, 서열 번호: 103, 서열 번호: 106, 서열 번호: 109, 서열 번호: 112, 서열 번호: 115, 서열 번호: 118, 및 서열 번호: 121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 2(CDR2); 및 (iii) 서열 번호: 14, 서열 번호: 17, 서열 번호: 20, 서열 번호: 23, 서열 번호: 26, 서열 번호: 29, 서열 번호: 32, 서열 번호: 35, 서열 번호: 38, 서열 번호: 41, 서열 번호: 44, 서열 번호: 47, 서열 번호: 50, 서열 번호: 53, 서열 번호: 56, 서열 번호: 59, 서열 번호: 62, 서열 번호: 65, 서열 번호: 77, 서열 번호: 80, 서열 번호: 83, 서열 번호: 86, 서열 번호: 89, 서열 번호: 92, 서열 번호: 95, 서열 번호: 98, 서열 번호: 101, 서열 번호: 104, 서열 번호: 107, 서열 번호: 110, 서열 번호: 113, 서열 번호: 116, 서열 번호: 119, 및 서열 번호: 122로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 상보성 결정 영역 3(CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 융합 단백질.
36. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 12의 CDR1, 서열 번호: 13의 CDR2, 및 서열 번호: 14의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
37. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 15의 CDR1, 서열 번호: 16의 CDR2, 및 서열 번호: 17의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
38. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 18의 CDR1, 서열 번호: 19의 CDR2, 및 서열 번호: 20의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
39. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 21의 CDR1, 서열 번호: 22의 CDR2, 및 서열 번호: 23의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
40. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 24의 CDR1, 서열 번호: 25의 CDR2, 및 서열 번호: 26의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
41. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 27의 CDR1, 서열 번호: 28의 CDR2, 및 서열 번호: 29의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
42. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 30의 CDR1, 서열 번호: 31의 CDR2, 및 서열 번호: 32의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
43. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 33의 CDR1, 서열 번호: 34의 CDR2, 및 서열 번호: 35의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
44. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 36의 CDR1, 서열 번호: 37의 CDR2, 및 서열 번호: 38의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
45. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 39의 CDR1, 서열 번호: 40의 CDR2, 및 서열 번호: 41의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
46. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 42의 CDR1, 서열 번호: 43의 CDR2, 및 서열 번호: 44의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
47. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 45의 CDR1, 서열 번호: 46의 CDR2, 및 서열 번호: 47의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
48. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 48의 CDR1, 서열 번호: 49의 CDR2, 및 서열 번호: 50의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
49. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 51의 CDR1, 서열 번호: 52의 CDR2, 및 서열 번호: 53의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
50. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 54의 CDR1, 서열 번호: 55의 CDR2, 및 서열 번호: 56의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
51. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 57의 CDR1, 서열 번호: 58의 CDR2, 및 서열 번호: 59의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
52. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 60의 CDR1, 서열 번호: 61의 CDR2, 및 서열 번호: 62의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
53. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 63의 CDR1, 서열 번호: 64의 CDR2, 및 서열 번호: 65의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
54. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 75의 CDR1, 서열 번호: 76의 CDR2, 및 서열 번호: 77의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
55. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 78의 CDR1, 서열 번호: 79의 CDR2, 및 서열 번호: 80의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
56. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 81의 CDR1, 서열 번호: 82의 CDR2, 및 서열 번호: 83의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
57. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 84의 CDR1, 서열 번호: 85의 CDR2, 및 서열 번호: 86의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
58. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 87의 CDR1, 서열 번호: 88의 CDR2, 및 서열 번호: 89의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
59. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 90의 CDR1, 서열 번호: 91의 CDR2, 및 서열 번호: 92의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
60. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 93의 CDR1, 서열 번호: 94의 CDR2, 및 서열 번호: 95의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
61. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 96의 CDR1, 서열 번호: 97의 CDR2, 및 서열 번호: 98의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
62. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 99의 CDR1, 서열 번호: 100의 CDR2, 및 서열 번호: 101의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
63. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 102의 CDR1, 서열 번호: 103의 CDR2, 및 서열 번호: 104의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
64. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 105의 CDR1, 서열 번호: 106의 CDR2, 및 서열 번호: 107의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
65. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 108의 CDR1, 서열 번호: 109의 CDR2, 및 서열 번호: 110의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
66. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 111의 CDR1, 서열 번호: 112의 CDR2, 및 서열 번호: 113의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
67. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 114의 CDR1, 서열 번호: 115의 CDR2, 및 서열 번호: 116의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
68. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 117의 CDR1, 서열 번호: 118의 CDR2, 및 서열 번호: 119의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
69. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 120의 CDR1, 서열 번호: 121의 CDR2, 및 서열 번호: 122의 CDR3을 포함하는 VH를 포함하는 융합 단백질.
70. 제34항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, sdAb가 표 9에 나타낸 바와 같은 항체 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 또는 항-MSLN-34의 하나 이상의 FR 서열을 추가로 포함하는 융합 단백질.
71. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 123의 아미노산을 포함하는 융합 단백질.
72. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 124의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
73. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
74. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
75. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
76. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 128의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
77. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 129의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
78. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 130의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
79. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
80. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 132의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
81. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
82. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
83. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 135의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
84. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
85. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 137의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
86. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 138의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
87. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 139의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
88. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 140의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
89. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 141의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
90. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 142의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
91. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 143의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
92. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 144의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
93. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
94. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 146의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
95. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 147의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
96. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 148의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
97. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 149의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
98. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 150의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
99. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 151의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
100. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 152의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
101. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
102. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
103. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
104. 제34항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 156의 아미노산 서열을 포함하는 융합 단백질.
105. 제34항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, sdAb가 표 11에 나타낸 바와 같은 하나 이상의 사람화된 FR 서열을 추가로 포함하는 융합 단백질.
106. 제105항에 있어서, sdAb가 MSLN에 1 내지 100nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
107. 제105항에 있어서, sdAb가 MSLN에 1 내지 80nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
108. 제105항에 있어서, sdAb가 MSLN에 1 내지 70nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
109. 제105항에 있어서, sdAb가 MSLN에 1 내지 60nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
110. 제105항에 있어서, sdAb가 MSLN에 1 내지 50nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
111. 제1항에 있어서, 결합 분자가 암 세포 상에 발현된 항원에 대해 각각 결합하는 2개의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 융합 단백질로서, 여기서 암 세포가 임의로 고형 종양 암 세포이고, 여기서 2개의 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제3의 링커에 의해 연결된 융합 단백질.
112. 제111항에 있어서, 2개의 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 2개의 sdAb인 융합 단백질.
113. 제112항에 있어서, 2개의 sdAb가 VHH 단일 도메인 항체인 융합 단백질.
114. 제112항에 있어서, 2개의 sdAb가 MSLN의 2개의 상이한 에피토프에 결합하는 융합 단백질.
115. 제114항에 있어서, 하나의 에피토프가 MSLN의 N-말단 상에 존재하고 다른 에피토프가 MSLN의 C-말단 상에 존재하는 융합 단백질.
116. 제112항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 sdAb가 MSLN에 0.1 내지 100nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
117. 제112항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 sdAb가 MSLN에 1 내지 100nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
118. 제112항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 sdAb가 MSLN에 1 내지 80nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
119. 제112항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 sdAb가 MSLN에 1 내지 70nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
120. 제112항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 sdAb가 MSLN에 1 내지 60nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
121. 제112항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 sdAb가 MSLN에 1 내지 50nM의 KD로 결합하는 융합 단백질.
122. 제1항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 제1의 링커 및 제2의 링커가 서열 번호: 66, 서열 번호: 67, 서열 번호: 68, 서열 번호: 69, 서열 번호: 70, 서열 번호: 71, 서열 번호: 72, 서열 번호: 73 및 서열 번호: 74로 이루어진 그룹으로부터 각각 독립적으로 선택된 융합 단백질.
123. 제121항에 있어서, 제3의 링커가 서열 번호: 66, 서열 번호: 67, 서열 번호: 68, 서열 번호: 69, 및 서열 번호: 70으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 융합 단백질.
124. 제1항에 있어서, 제1의 링커가 IL-21 또는 이의 변이체의 C-말단에 연결된 융합 단백질.
125. 제1항에 있어서, 제1의 링커가 IL-21 또는 이의 변이체의 아미노산 123 내지 132 내 아미노산에서 IL-21 또는 이의 변이체에 연결된 융합 단백질.
126. 제1항에 있어서, 제1의 링커가 IL-21 또는 이의 변이체의 C-말단의 마지막 10개의 아미노산 중 하나에서 IL-21 또는 이의 변이체에 연결된 융합 단백질.
127. 제1항 또는 제4항에 있어서, 제1의 링커가 IL-21 또는 이의 변이체의 L123에 연결된 융합 단백질.
128. 제1항에 있어서, 제1의 링커가 Q1 내지 D4에서 IL-21 또는 이의 변이체의 N-말단에 연결된 융합 단백질.
129. 제1항 내지 제128항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
130. 치료학적 유효량의 제1항 내지 제128항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질을 대상체에게 투여함을 포함하는, 암의 치료 방법.
131. 제130항에 있어서, 암이 고형 종양 암인 방법.
132. 제131항에 있어서, 대상체가 사람 대상체인 방법.
133. 제1항 내지 제128항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
134. 제133항에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
135. 제133항에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포.
136. 제134항에 따른 벡터를 포함하는 세포.
137. 제135항 또는 제136항에 따른 세포를 배양하여 융합 단백질을 발현시킴을 포함하는, 융합 단백질의 제조 방법.
138. 다음의 구조를 포함하는 메소텔린(MSLN)에 결합하는 단일 도메인 항체:
FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4,
여기서 (i) CDR1은 서열 번호: 12, 서열 번호: 15, 서열 번호: 18, 서열 번호: 21, 서열 번호: 24, 서열 번호: 27, 서열 번호: 30, 서열 번호: 33, 서열 번호: 36, 서열 번호: 39, 서열 번호: 42, 서열 번호: 45, 서열 번호: 48, 서열 번호: 51, 서열 번호: 54, 서열 번호: 57, 서열 번호: 60, 서열 번호: 63, 서열 번호: 75, 서열 번호: 78, 서열 번호: 81, 서열 번호: 84, 서열 번호: 87, 서열 번호: 90, 서열 번호: 93, 서열 번호: 96, 서열 번호: 99, 서열 번호: 102, 서열 번호: 105, 서열 번호: 108, 서열 번호: 111, 서열 번호: 114, 서열 번호: 117, 및 서열 번호: 120으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; (ii) CDR2는 서열 번호: 13, 서열 번호: 16, 서열 번호: 19, 서열 번호: 22, 서열 번호: 25, 서열 번호: 28, 서열 번호: 31, 서열 번호: 34, 서열 번호: 37, 서열 번호: 40, 서열 번호: 43, 서열 번호: 46, 서열 번호: 49, 서열 번호: 52, 서열 번호: 55, 서열 번호: 58, 서열 번호: 61, 서열 번호: 64, 서열 번호: 76, 서열 번호: 79, 서열 번호: 82, 서열 번호: 85, 서열 번호: 88, 서열 번호: 91, 서열 번호: 94, 서열 번호: 97, 서열 번호: 100, 서열 번호: 103, 서열 번호: 106, 서열 번호: 109, 서열 번호: 112, 서열 번호: 115, 서열 번호: 118, 및 서열 번호: 121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; (iii) CDR3은 서열 번호: 14, 서열 번호: 17, 서열 번호: 20, 서열 번호: 23, 서열 번호: 26, 서열 번호: 29, 서열 번호: 32, 서열 번호: 35, 서열 번호: 38, 서열 번호: 41, 서열 번호: 44, 서열 번호: 47, 서열 번호: 50, 서열 번호: 53, 서열 번호: 56, 서열 번호: 59, 서열 번호: 62, 서열 번호: 65, 서열 번호: 77, 서열 번호: 80, 서열 번호: 83, 서열 번호: 86, 서열 번호: 89, 서열 번호: 92, 서열 번호: 95, 서열 번호: 98, 서열 번호: 101, 서열 번호: 104, 서열 번호: 107, 서열 번호: 110, 서열 번호: 113, 서열 번호: 116, 서열 번호: 119, 및 서열 번호: 122로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산을 포함한다.
139. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 12의 것이고, CDR2가 서열 번호: 13의 것이고, CDR3이 서열 번호: 14의 것인 단일 도메인 항체.
140. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 15의 것이고, CDR2가 서열 번호: 16의 것이고, CDR3이 서열 번호: 17의 것인 단일 도메인 항체.
141. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 18의 것이고, CDR2가 서열 번호: 19의 것이고, CDR3이 서열 번호: 20의 것인 단일 도메인 항체.
142. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 21의 것이고, CDR2가 서열 번호: 22의 것이고, CDR3이 서열 번호: 23의 것인 단일 도메인 항체.
143. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 24의 것이고, CDR2가 서열 번호: 25의 것이고, CDR3이 서열 번호: 26의 것인 단일 도메인 항체.
144. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 27의 것이고, CDR2가 서열 번호: 28의 것이고, CDR3이 서열 번호: 29의 것인 단일 도메인 항체.
145. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 30의 것이고, CDR2가 서열 번호: 31의 것이고, CDR3이 서열 번호: 32의 것인 단일 도메인 항체.
146. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 33의 것이고, CDR2가 서열 번호: 34의 것이고, CDR3이 서열 번호: 35의 것인 단일 도메인 항체.
147. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 36의 것이고, CDR2가 서열 번호: 37의 것이고, CDR3이 서열 번호: 38의 것인 단일 도메인 항체.
148. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 39의 것이고, CDR2가 서열 번호: 40의 것이고, CDR3이 서열 번호: 41의 것인 단일 도메인 항체.
149. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 42의 것이고, CDR2가 서열 번호: 43의 것이고, CDR3이 서열 번호: 44의 것인 단일 도메인 항체.
150. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 45의 것이고, CDR2가 서열 번호: 46의 것이고, CDR3이 서열 번호: 47의 것인 단일 도메인 항체.
151. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 48의 것이고, CDR2가 서열 번호: 49의 것이고, CDR3이 서열 번호: 50의 것인 단일 도메인 항체.
152. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 51의 것이고, CDR2가 서열 번호: 52의 것이고, CDR3이 서열 번호: 53의 것인 단일 도메인 항체.
153. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 54의 것이고, CDR2가 서열 번호: 55의 것이고, CDR3이 서열 번호: 56의 것인 단일 도메인 항체.
154. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 57의 것이고, CDR2가 서열 번호: 58의 것이고, CDR3이 서열 번호: 59의 것인 단일 도메인 항체.
155. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 60의 것이고, CDR2가 서열 번호: 61의 것이고, CDR3이 서열 번호: 62의 것인 단일 도메인 항체.
156. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 63의 것이고, CDR2가 서열 번호: 64의 것이고, CDR3이 서열 번호: 65의 것인 단일 도메인 항체.
157. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 75의 것이고, CDR2가 서열 번호: 76의 것이고, CDR3이 서열 번호: 77의 것인 단일 도메인 항체.
158. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 78의 것이고, CDR2가 서열 번호: 79의 것이고, CDR3이 서열 번호: 80의 것인 단일 도메인 항체.
159. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 81의 것이고, CDR2가 서열 번호: 82의 것이고, CDR3이 서열 번호: 83의 것인 단일 도메인 항체.
160. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 84의 것이고, CDR2가 서열 번호: 85의 것이고, CDR3이 서열 번호: 86의 것인 단일 도메인 항체.
161. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 87의 것이고, CDR2가 서열 번호: 88의 것이고, CDR3이 서열 번호: 89의 것인 단일 도메인 항체.
162. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 90의 것이고, CDR2가 서열 번호: 91의 것이고, CDR3이 서열 번호: 92의 것인 단일 도메인 항체.
163. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 93의 것이고, CDR2가 서열 번호: 94의 것이고, CDR3이 서열 번호: 95의 것인 단일 도메인 항체.
164. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 96의 것이고, CDR2가 서열 번호: 97의 것이고, CDR3이 서열 번호: 98의 것인 단일 도메인 항체.
165. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 99의 것이고, CDR2가 서열 번호: 100의 것이고, CDR3이 서열 번호: 101의 것인 단일 도메인 항체.
166. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 102의 것이고, CDR2가 서열 번호: 103의 것이고, CDR3이 서열 번호: 104의 것인 단일 도메인 항체.
167. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 105의 것이고, CDR2가 서열 번호: 106의 것이고, CDR3이 서열 번호: 107의 것인 단일 도메인 항체.
168. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 108의 것이고, CDR2가 서열 번호: 109의 것이고, CDR3이 서열 번호: 110의 것인 단일 도메인 항체.
169. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 111의 것이고, CDR2가 서열 번호: 112의 것이고, CDR3이 서열 번호: 113의 것인 단일 도메인 항체.
170. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 114의 것이고, CDR2가 서열 번호: 115의 것이고, CDR3이 서열 번호: 116의 것인 단일 도메인 항체.
171. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 117의 것이고, CDR2가 서열 번호: 118의 것이고, CDR3이 서열 번호: 119의 것인 단일 도메인 항체.
172. 제138항에 있어서, CDR1이 서열 번호: 120의 것이고, CDR2가 서열 번호: 121의 것이고, CDR3이 서열 번호: 122의 것인 단일 도메인 항체.
173. 제138항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, sdAb가 표 9에 나타낸 바와 같은 항체 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 또는 항-MSLN-34의 하나 이상의 FR 서열을 추가로 포함하는 단일 도메인 항체.
174. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 123의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
175. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 124의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
176. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
177. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
178. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 127의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
179. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 128의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
180. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 129의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
181. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 130의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
182. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
183. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 132의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
184. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 133의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
185. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 134의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
186. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 135의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
187. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 136의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
188. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 137의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
189. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 138의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
190. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 139의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
191. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 140의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
192. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 141의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
193. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 142의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
194. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 143의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
195. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 144의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
196. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 145의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
197. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 146의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
198. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 147의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
199. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 148의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
200. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 149의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
201. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 150의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
202. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 151의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
203. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 152의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
204. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 153의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
205. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 154의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
206. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 155의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
207. 제138항에 있어서, sdAb가 서열 번호: 156의 아미노산 서열을 포함하는 단일 도메인 항체.
208. 제138항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, sdAb가 표 11에 나타낸 바와 같은 하나 이상의 사람화된 FR 서열을 추가로 포함하는 단일 도메인 항체.
실시예
다음은 연구에 사용된 다양한 방법 및 물질의 설명이며, 본 발명의 제조 및 사용의 완전한 개시내용 및 설명을 제공하기 위해 제안되어 있으며, 본 발명자가 그의 발명으로 고려하거나 또는 본 발명자가 하기 실험이 수행되었음을 나타내기 위해 의도된 것의 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않으며 수행될 수 있는 실험 전부이다. 현재 시제로 쓰여진 예시적인 설명은 필수적으로 수행된 것이 아니라, 이러한 설명은 본 발명의 교시와 관련된 데이타 등을 생성하기 위해 수행될 수 있음이 이해되어야 한다. 사용된 숫자(예컨대, 양, 퍼센트 등)와 관련하여 정확성을 보증하기 위한 노력이 이루어졌지만, 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 한다.
실시예 1: 예시적인 IL-21 융합 단백질
본 실시예는 본원에 제공된 특정의 예시적인 IL-21 융합 단백질을 나타낸다. 본 실시예에 기술된 예시적인 IL-21 융합 단백질은 본 발명의 전체 영역을 나타내는 것으로 의도되지 않는다.
IL-21-(HSA 결합 분자)-(항-MSLN)는 본원에서 1) IL-21 또는 이의 변이체, 예컨대, 트렁케이트된(truncated) IL-21; 2) 사람 혈청 알부민(HSA)에 결합하는 펩타이드(예컨대, ABD 또는 sdAb); 3) 종양 항원 메소텔린(MSLN)을 표적화하는 하나 이상의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 4) IL-21의 C-말단 및 αHSA의 N-말단을 연결하는 4 내지 20개 아미노산으로 구성된 제1의 링커(L1); 및 5) αHSA의 C-말단 및 항-MSLN의 N-말단을 연결하는 4 내지 20개의 아미노산으로 구성된 제2의 링커(l2)를 포함하는, 특정의 예시적인 IL-융합 단백질을 나타내기 위해 사용된다.
IL-21은 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 가질 수 있다(참고: 하기 표 6). 대안적으로, IL-21은 서열 번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 트렁케이트된 사람 IL-21일 수 있다(참고: 하기 표 6).
[표 6]
Figure pct00019
하기 표 7은 HSA 결합 펩타이드(서열 번호: 3 내지 서열 번호: 11)에 대한 약간의 선택사항을 나타낸다.
[표 7]
Figure pct00020
이러한 예시적인 융합 단백질에서, 융합 단백질의 항-MSLN 부위를 실시예 2에 기술된 34개의 항-MSLN sdAb 및 이의 사람화된 버젼 중 어느 것으로부터 선택할 수 있다.
L1 및 L2 링커 각각은 하기 표 8에 나타낸 링커 뿐만 아니라, 표 5에 나타낸 절단가능한 링커 목록으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
[표 8]
Figure pct00021
Figure pct00022
특정의 예시적인 IL-21 융합 단백질에서, 항-MSLN 기능성 모듈(module)은 메소텔린의 상이한 도메인을 표적화하는 2개의 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하고, 2개의 sdAb는 4 내지 20개의 아미노산(L3)으로 구성된 제3의 링커에 의해 연결되어 있다. L3 링커는 상기 표 8에서 서열 번호: 66 내지 70으로부터 선택될 수 있다.
본 실시예의 예시적인 IL-21 융합 단백질의 설계는 상술한 IL-21 융합 단백질의 다양한 구성성분의 모든 가능한 조합을 고려한다.
실시예 2: 항-MSLN 단일 도메인 항체의 생성
2개의 상이한 항원 펩타이드를 사용하여 라마(llama)를 면역화시켜 항-MSLN 단일 도메인 항체(VHH 항체)를 생산하였다. 제1의 항원 펩타이드(MSLN 항원 1)는 세포막 고정된(anchored) MSLN을 나타낸다. 제2의 항원 펩타이드(MSLN 항원 2)는 세포막 고정된 MSLN의 C-말단을 나타낸다. 이러한 2개의 펩타이드의 서열은 다음과 같다:
MSLN 항원 1(MSLN 절단된 형태)
Figure pct00023
MSLN 항원 2(MSLN C-말단)
Figure pct00024
면역화 후, 말초 단핵 세포(PBMC)를 RNA 추출로부터 단리하였다. VHH 항체 파아지 디스플레이 라이브러리를 항체 유전자를 암호화하는 mRNA/cDNA로 작제하였다. 작제된 파아지 디스플레이 라이브러리를 항원과의 다수 라운드의 친화성 결합을 통해 스크리닝하였다. 양성 클론을 ELISA를 통해 확인하였다. 양성 클론의 항체 유전자를 서열분석하고 CHO 세포 발현을 위해 UCOE 벡터(EMD Millipore) 내로 클로닝하였다.
하기 표 9는 상술한 방법에 따라 생성된 34개의 예시적인 신규한 항-MSLN 단일 도메인(VHH) 항체(즉, 항-MSLN-1 내지 항-MSLN-34)를 나타낸다. 이러한 34개의 예시적인 신규 VHH 항체의 CDR 서열을 하기 표 10에 나타낸다. 34개의 항체 중에서, 31개의 항체(항-MSLN-1 내지 항-MSLN-31)를 제1의 MSLN 항원(MSLN 항원 1)을 사용하여 생성하고, 3개의 항체(항-MSLN-32 내지 항-MSLN-34)를 제2의 MSLN 항원(MSLN 항원 2)을 사용하여 생성하였다.
[표 9]
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
[표 10]
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
임의의 상술한 sdAb를 본원에 제공된 IL-21 융합 단백질에서 사용할 수 있다.
실시예 3: 사람화된 항-MSLN SINGLE 도메인 항체의 생성
상기 34개의 sdAb의 각각의 라마(llama) 서열을 IMGT 데이타 베이스에 대해 블라스트(blast)하여 가장 잘 일치한 사람 IGHV3 배선(germ line)을 확인하였다. 다수의 배선이 유사한 상동성을 갖는 경우, FR2의 52번 위치에서의 아미노산의 유사성(IGMT 번호매김 시스템)을 사용하여 어느 배선이 사람화 스캐폴드로서 채택되는지를 결정하였다. 선택된 배선으로부터의 FR1 및 FR3을 이후 "사람화된" FR1 및 FR3로서 채택한다. FR2의 경우, 42번 및 52번 위치를 제외한 사람 서열 대부분이며, 여기서 각각의 라마 서열은 보유되었다.
하기 표 11은 34개의 항체 각각에 대한 예시적인 사람 FR 영역 서열을 나타낸다.
[표 11]
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
임의의 이러한 사람화된 항-MSLN sdAb를 본원에 제공된 임의의 항-메소텔린 작제물(예를 들면, 임의의 IL-21 융합 단백질)에서 사용할 수 있다. 표 12는 예시적인 항-MSLN 작제물의 서열을 나타낸다.
[표 12]
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
실시예 4: IL-21 융합 단백질의 분자
올리고뉴클레오타이드 합성
예시적인 올리고뉴클레오타이드 합성 과정을 하기 기술한다. 사람 IL-21 전체 길이(서열 번호: 1), 트렁케이트된 사람 IL-21(서열 번호: 2), G148-ABD-wt(서열 번호: 3), 저 면역원성 G148-ABD 변이체(서열 번호: 4 내지 11), HSA를 표적화하는 사람화된 sdAb, 및 MSLN을 표적화하는 사람화된 sdAb(예컨대, 표 12에 나타낸 것)는 암호화하는 cDNA 서열을 NgoMIV 제한 효소 부위 및 5'에 첨가된 코작 서열(Kozak sequence) 및 3'에 첨가괸 SalI 제한 효소 부위를 지닌 GeneArt 유전자 합성(ThermoFisher Scientific) 또는 gBlocks 유전자 단편(Integrated DNA Technologies)을 사용한 유전자 합성으로 수득하였다. 이러한 유전자의 코돈 용도를 차이니즈 햄스터 난소(Chinese hamster ovary)(CHO) 세포내에서 발현에 대해 최적화하였다. 합성된 올리고뉴클레오타이드를 UCOE 발현 벡터 CET1019-AS-Puro(CS221284, Millipore Sigma)내에 NgoMIV/SalI 분해-연결 방법에 의해 삽입하였다.
IL-21 융합 단백질 발현 벡터의 작제
IL-21 융합 단백질 발현 벡터의 작제를 여기에 예시한다. IL-21의 C-말단을 펩타이드 링커(L1)를 통해 알부민 결합 도메인의 N-말단 또는 알부민 결합 sdAb(αHSA)에 융합시키고, 알부민 결합 도메인 또는 알부민 결합 sdAb의 C-말단을 제2의 펩타이드 링커(L2)를 통해 메소텔린 결합 sdAb(항-MSLN)과 융합시켰다. 이러한 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 서열을 함께 Gibson Assembly(Synthetic Genomics) 또는 유사한 시험관내 재조합 방법에 의해 균일하게 조립할 수 있다. 깁슨 조립 반응(Gibson Assembly reaction)을 위해 이의 이웃하는 단편에 대해 오버랩핑 서열을 지닌 DNA 단편을 생산하기 위해, L1 또는 L2 링커 펩타이드를 암호화하는 20 내지 40개의 염기쌍(bp) 오버랩핑 서열 또는 CET1019-AS-Puro 벡터 서열을 프라이머의 5' 말단에서 도입하였다(참고: 도 2, 단계 1). 증폭 후, PCR 생성물을 정제하고 퓨어링크 겔 추출 키트(PureLink Gel Extraction Kit)(ThermoFisher Scientific)를 사용하여 겔 추출에 의해 수거하였다. 목적한 유전자-링커-벡터 조합의 정제된 DNA 단편을 혼합하고 Gibson Assembly Master Mix(New England BioLabs) 또는 NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix(New England BioLabs)에 의해 제조업자의 프로토콜에 따라 함께 조립하였다(참고: 도 2, 단계 2).
유사하게, 도 3은 알부민 결합 분자가 ABD인 경우 본원에 제공된 예시적인 IL-21 융합 단백질의 작제를 나타낸다.
6His 태그를 임의로 항-MSLN sdAb의 C-말단에 융합시킬 수 있다. 이러한 경우에, 6His를 암호화하는 DNA 서열을 항-MSLN의 증폭을 위한 역방향 프라이머(reverse primer) 및 CET1019 AS-puro 벡터 골격의 증폭을 위한 정방향 프라이머(forward primer)를 설계하기 위한 오버랩핑 서열로서 사용하였다.
조립 반응 후, 2 μl의 조립 생성물을 제조업자의 프로토콜에 따라 NEB 5-알파 적격(competent) 이. 콜라이 세포(New England BioLabs)의 형질전환을 위해 사용하였다. Amp 선택 플레이트로부터의 콜로니를 PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit(ThermoFisher Scientific) 및 DNA 서열 분석 확인(ELIM Biopharmaceuticals)을 사용하여 후속적인 미니-프렙(mini-prep)을 위해 집어올렸다.
실시예 5: IL-21 융합 단백질의 발현 및 정제
IL-21 융합 단백질을 암호화하는 DNA 서열을 ExpiCHO 세포내에 일시적으로 발현시킨다. 요약하면, -1일째에, CHO 세포를 125 ml의 칸막이가 없는 플라스크내 25 ml의 일시적인 형질감염 배지(BalanCD® Transfectory™ CHO, Irvine Scientific, # 91147), 및 4 mM 글루타민 속에서 3 내지 4 x 10e6 세포/ml로 씨딩(seeding)한다. 0일째에, 22.5 ug의 플라스미드 DNA를 1.5 ml의 일시적인 형질감염 배지 속에서 112.5 ug의 PEI와 혼합하고 실온에서 7분 동안 항온처리한다. 이후에, 혼합물을 세포에 서서히 가하였다. 세포에 1일째에 1) 0.5mM 발프로산(50ul 내지 25ml), 2) 10% 후-TF 보충물(Irvine Scientific #91148), 3) 1.5ml의 글루코즈 스톡(200 g/L), 및 4) 50g/L TC 효모분해물(Yeastolyte)이 들어있는 5% IS 공급물을 1회 공급한다. CHO 세포를 친화성 컬럼 위에서 정제를 위해 8일째에 수거한다.
실시예 6: 시험관내 NK 세포 증식 검정
사람 NK 세포를 음성 선택 키트-키트 II(모든 비드는 독일 베르기슈 글라트바흐(Gladbach) 소재의 Miltenyi Biotech로부터 구입함)를 사용하여 단리한다. 정제는 수동으로 또는 AutoMACS(Miltenyi)를 사용하여 수행한다. 세포의 순도는 항상 형광성-활성화된 세포 분류(FACS)로 제어하며 90% 이상이다. 단리된 NK 세포를 본원에 제공된 융합 단백질, 예를 들면, 실시예 1에서 상술한 것으로 처리한다. NK 세포의 증식은 FACS 분석을 사용하여 CD69 신호로 모니터링한다.
실시예 7: 시험관내 세포독성 검정
사람 폐암종 세포 A549를 신선하게 단리된 사람 PBMC와 혼합하고 0, 5, 10, 및 50 ng/mL의 정제된 IL-21 융합 단백질과 함께 항온처리한다. MMP 절단가능한 링커가 사용된 경우에, 평행한 세트를 IL-21을 활성화시키기 위해 첨가된 MMP9와 함께 설정한다. 혼합된 배양물을 72 시간 동안 항온처리하고 MTS 방법을 사용하여 연구에서 분해된 표적 세포의 퍼센트를 측정한다.
실시예 8: 생체내 효능 연구
Neu 마우스에 0일째에 A549 암 세포를 이식한다. 종양이 대략 50 내지 100 mm3까지 성장한 후, 마우스를 무작위처리하고 본원에 제공된 IL-융합 단백질 및 대조군(예컨대, PBS 중 동형 대조군 항체)을 격일마다 처리한다. 본원에 제공된 IL-21 융합 단백질을 노출시켜 동일한 용량에서 보다 우수한 효능을 나타내며 IL-21 조합 연구(IL-21 및 제2 제제와의 조합 치료 연구)와 비교하는 경우 훨씬 더 낮은 용량에서 유사한 효능을 달성하는 것으로 예측된다.
종양 크기 및 체중을 투여 전에 기본선에서 측정한다. 종양 크기 및 체중을 치료 후 2주 동안 주당 3회 측정한다. 말기 혈액 샘플을 PK/PD 분석을 위해 수집한다.
실시예 9: 사람 또는 원숭이 메소텔린(MSLN)에 대한 항-MSLN 항체의 결합
Octet RED96(ForteBio)을 사용하여 상호작용을 특성화하였다. 요약하면, 항-MSLN-hgG1 Fc 융합 단백질을 단백질 A 바이오센서 위에 로딩(loading)하고 사람 또는 원숭이 MSLN 속에 100 nM, 50 nM 또는 25 nM 농도에서 침지시켰다. 주요 실험 데이타를 전역 맞춤(global fitting)으로 분석하여 KD를 측정하였다. 원래의 라마 항체와 비교하여(도 4a), 사람화된 항-MSLN 항체(즉, 사람화된 R3C7, 사람화된 R2G12, 및 사람화된 R3D5)는 사람 및 원숭이 MSLN 둘 다에 대한 결합 친화성을 보유하였다(도 4b).
실시예 10: 세포 표면에 대한 항-MSLN 항체의 결합
메소텔린을 발현하는 것으로 공지된 4개의 암 세포주, NCI-H226, OVCAR3, NCI-N87 및 AsPC-1을 항-MSLN 항체 R2G12, R3C7 또는 대조군 항체 MORAb-009와 함께 20분 동안 4℃에서 항온처리하였다. 세척한 후, 세포를 제2의 항체(항-사람 IgG, Life Technologies)에 접합된 Alexa Fluor 488과 함께 20분 동안 4℃에서 항온처리하였다. 세포를 세척한 다음 세포의 형광성 강도를 유동 세포분석법으로 정량화하였다. 형광성 강도 값을 도 5에 나타낸 바와 같이 상이한 농도의 항체에 대해 플롯팅(plotting)하였다. 항-메소텔린 항체 모두는 유사한 효능으로 세포 표면 메소텔린에 결합한다.
실시예 11: 항-메소텔린 항체의 세포독성
부분 A.
NCI-H226 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 5,000개의 NCI-H226 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트 내에서 배양 배지에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막(buffy coat)으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 치료와 함께 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37℃, 5% CO2에서 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데히드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색하였다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 작은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다(MORAb-009 - 참고 항-메소텔린 항체; 실시예 2에 나타낸 바와 같은 R2G12, R3C7, R3D5, 항-메소텔린 항체).
도 5a에 나타낸 바와 같이, R2G12, R3C7 및 R3D5는 대조군 항체 MORAb-009와 비교하여 보다 우수한 항체 의존성 세포 세포독성을 야기하였다. 더욱이, R3C7 및 R2G12는 3 ng/ml의 용량에서 R3D5와 비교하여 보다 우수한 ADCC를 나타내었다.
부분 B.
NCI-H226, OVCAR3, NCI-N87 및 AsPC-1 세포를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트 속의 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 나타낸 처리와 함께 암 세포에 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37℃, 5% CO2에서 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색하였다. 남아있는 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 계수함으로써 계산하였다. 보다 작은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다.
도 6b 내지 도 6e에 나타낸 바와 같이, R2G12 및 R3C7은 모든 4개의 암 세포주에 대해 항체 의존성 세포 세포독성을 유발하였다.
NCI-N87 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트 내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 나타낸 처리와 함께 암 세포에 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37C, 5% CO2에서 항온처리한 다음 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색하였다. 나머지 암 세포의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 각각의 웰에 남아있는 암 세포 핵의 수를 계수함으로써 계산하였다. 보다 낮은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다(MORAb-009 - 참고 항-메소텔린 항체; 실시예 2에서 논의된 바와 같은 P303(즉, R3C7), 항-메소텔린 항체; P303F(즉, R3C7F), 감소된 푸코즈를 지닌 R303).
도 7에 나타낸 바와 같이, P303 및 P303F는 참고 항체 MORAb-009와 비교하여 보다 우수한 ADCC 활성을 생성하였다. 더욱이, 감소된 푸코즈를 지닌 P303F는 P303과 비교하여 보다 우수한 ADCC를 생성하였다.
부분 D.
NCI-N87 및 NCI-H226 사람 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 사람 메소텔린 단백질을 발현시키기 위해 안정하게 형질감염시킨 CT26/MSLN 마우스 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87, 5,000 NCI-H226 및 5,000 CT26/MSLN 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트 내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 처리와 함께 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37℃, 5% CO2 속에서 항온처리한 다음 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색하였다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 낙은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다. (P303(즉, R3C7) 및 P197(즉, R2G12) - 실시예 2에 논의된 바와 같은 항-메소텔린 항체; P303F(즉, R3C7F) 및 P197F(즉, R2G12F) - 각각 감소된 푸코즈를 지닌 R303 및 P197).
도 8a 내지 8c에 나타낸 바와 같이, 항체 생산 동안 푸코실화를 억제함으로서 항체 푸코즈 함량을 감소시키는 것은 항체 R3C7 및 R2G12에 대한 항-메소텔린 항체 ADCC 활성을 향상시켰다. 구체적으로, P303F(R3C7F)는 CT26/MSLN 세포주를 사용하는 경우 가장 우수한 ADCC 활성을 나타내었다.
실시예 12: 암 치료용 항-메소텔린 항체
부분 A.
NCI-N87 세포를 배양하고 10% FBS + 글루타맥스 + Pen/Strep이 보충된 RPMI 배지 속에 유지시켰다. 세포를 트립신처리하고, 배지로 세척하고, 계수하였다. 이후에, 세포를 PBS로 세척하고, 3x106개의 세포(100 ul의 PBS 중)를 마취된 SCID 마우스(Taconic)에게 18-게이지 침을 사용하여 피하 주사하였다. 스톡 연구 약물(MORAb-009, P303F, P303, P197F 및 P197)을 투여일에 PBS 속에서 적절한 농도로 희석시키고, 동물에게 100 ul의 PBS 중 5 mg/kg의 각각의 연구 약물을 총 5회 용량으로 주당 2회 복강내(IP) 투여하였다. 종양 측정(길이(L) 및 너비(W))을 주당 2회 디지탈 캘리퍼스(digital calipers)를 사용하여 수집하고, 종양 용적을 계산하였다(LxWxW)/2.
도 9a에 나타낸 바와 같이, 모든 항-메소텔린 항체는 PBS 대조군 그룹과 비교하여 SCID 마우스 모델에서 종양 성장을 감소시켰다. P303F(R3C7F) 처리는 MORAb-009, P197, P197F 및 P303보다 더 우수한 종양 성장 억제를 생성하였다.
부분 B.
NCI-N87 세포를 배양하고 10% FBS + 글루타맥스 + Pen/Strep이 보충된 RPMI 배지 속에 유지시켰다. 세포를 트립신처리하고, 배지로 세척하고, 계수하였다. 이후에, 세포를 PBS로 세척하고, 3x106개의 세포(100 ul의 PBS 중)를 마취된 NSG 마우스(Jackson)내로 23-게이지 침을 사용하여 피하 주사하였다. 6일 후에, 10x106개의 사람 PBMC를 마우스 당 100 ul의 PBS 속에서 꼬리 정맥내로 주사하였다. 스톡 연구 약물 P197을 투여일에 PBS 속에서 적절한 농도로 희석시키고, 동물에게 5 mg/kg(100 ul)의 연구 약물을 IP로 총 5회 용량에 대해 주당 2회 투여하였다. 종양 측정(길이(L) 및 너비(W))을 주당 2회 디지탈 캘리퍼스를 사용하여 수집하고, 종양 용적을 계산하였다(LxWxW)/2.
도 9b에 나타낸 바와 같이, 항-메소텔린 항체 P197(R2G12)은 사람화된 면역계를 지닌 NSG 마우스에서 종양 성장을 감소시킨다.
부분 C.
사람 메소텔린(CT26/MSLN)으로 형질감염시킨 CT26 마우스 세포를 배양하고 10% FBS + 글루타맥스 + Pen/Strep이 보충된 RPMI 배지 속에 유지시켰다. 세포를 트립신처리하고, 배지로 세척하고, 계수하였다. 이후에, 세포를 PBS로 세척하고, 1x106개의 세포(100 ul의 PBS 중)를 마취된 BALB/c 마우스에게 23-게이지 침을 사용하여 피하 주사하였다. 스톡 연구 약물을 투여일에 PBS 속에 적절한 농도로 희석시키고, 동물에게 5 mg/kg(100 ul)의 연구 약물을 총 5회 용량에 대해 주당 2회 IP 투여하였다. 종양 측정(길이(L) 및 너비(W))을 디지탈 캘리퍼스를 사용하여 주당 2회 수집하고, 종양 용적을 계산하였다(LxWxW)/2.
도 9c에 나타낸 바와 같이, 감소된 푸코실화 P303F(R3C7F)를 지닌 항-메소텔린 항체는 동계 CT26 마우스 모델에서 PBS 대조군에 비해 종양 성장을 감소시킨다.
실시예 13. 항-HSA 항체
알부민은 사람 혈청 속에서 가장 풍부한 단백질이며 3주의 반감기를 갖는다. 혈청 알부민의 긴 반감기는 신생아(neonatal) Fc 수용체(FcRn)로부터의 보호에 크게 기여한다. 혈청 알부민을 체액 상 세포흡수작용(fluid phase pinocytosis)으로 명명된 공정을 통해 체세포에 의해 흡수시킬 수 있다. 세포흡수성 소낭(pinocytotic vesicle)은 이입소체 구획(endosomal compartment)과 후속적으로 융합하며, 여기서 pH는 4.5 내지 6.5의 범위이다. 소낭 속의 단백질이 이의 수용체로부터 방출되는 경우, 이는 라이소좀 붕해를 위해 추가로 분류시킬 수 있다. 혈청 알부민과 FcRn 사이의 결합만이 산성 pH(<6.5)에서 발생하여, FcRn가 알부민을 엔도소옴(endosome)으로부터 구조하여 이를 혈청으로 다시 재순화시키도록 한다(Grevys et al., 2018). 따라서, 알부민 의존성 반감기 연장 모이어티로서, 항-HSA 항체는 중성 및 산성 pH에서 이의 결합 친화성을 유지시킬 필요가 있다.
예시적인 항-HSA 항체(P367)는 사람 및 원숭이 혈청 알부민과 pH 7.4 및 pH 5.5에서 상호작용한다. 결합을 Octet RED96(ForteBio)을 사용하여 측정하고 KD를 전역 맞춤으로 Octet Data Analysis HT 소프트웨어를 사용하여 측정하였다. P367-hgG1 Fc 융합 단백질을 단백질 A 바이오센서에 로딩하고 사람 또는 원숭이 혈청 알부민 속에 pH 7.4(좌측 그래프) 또는 pH 5.5(우측 그래프)에서 침지시켰다. 표 13은 pH 5.5 및 pH 7.4 둘 다에서 P367의 계산된 KD를 나타낸다. P367은 pH 5.5에서 사람 혈청 알부민에 대한 결합 친화성에 있어서의 증가를 나타낸다.
[표 13]
Figure pct00047
Octet RED96(ForteBio)을 사용하여 사람 원숭이 또는 마우스 알부민에 대한 항-HSA 항체 AWT-P367 또는 이의 사람화된 버젼 AWT-P494 사이의 상호작용을 특성화하였다. 요약하면, AWT-P367 또는 AWT-P494를 AHC 바이오센서 위에 로딩하고, 사람, 원숭이 또는 마우스 속에 200 nM 농도에서 침지시켰다. 주요 실험 데이타를 전역 맞춤으로 분석하여 KD를 측정하였다. 도 10a 및 도 10b에 나타낸 바와 같이, 사람화된 항-HSA 항체 AWT-P494의 결합 친화성은 이의 원래의 클론 AWT-P367과 유사하다.
예시적인 항-알부민 항체의 서열을 하기 표 14에 나타낸다.
[표 14]
Figure pct00048
실시예 14: 암 세포를 억제하기 위한 항-메소텔린 항체, 사이토킨, 또는 사이토킨 융합 단백질
NCI-N87 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트 속의 배양 배지에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 치료와 함께 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37C, 5% CO2에서 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색하였다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 적은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타낸다.(P303 - R3C7 항-MSLN 항체, 감소된 푸코실화를 지닌 P303F - R3C7 항-메소텔린 항체, P394 - 사람 IL-21-항-HSA, P390 - 마우스 IL-21-항-HSA, P431/435 - 사람 IL-21-항-HSA-IgG1-R3C7, P479-항-HSA-사람-IL-15 RA Sushi/IL-15, P480- 항-HSA-사람-IL-15 RA Sushi/IL-15, rhIL-21 -재조합 사람 IL-21, rhΣL-15 - 재조합 사람 IL-15)
도 11에 나타낸 바와 같이, rhIL-21, mIL-21(P390) 및 hIL-21(P394) 항-HSA 융합 단백질은 P303 단독과 비교하여 항-MSLN 항체 P303(R3C7)와 조합되는 경우 NK 세포 ADCC 활성을 유사한 정도로 향상시켰다. 더욱이, rhΣL-15 및 hIL-15/IL-15RA 항-HSA 융합 단백질(P479 및 P480)은 P303 단독과 비교하여 항-MSLN 항체 P303(R3C7)과 조합되는 경우 NK 세포 ADCC 활성을 유사한 정도로 향상시켰다. 사이토킨-항-HSA 융합 단백질은 등가의 재조합 사이토킨과 비교하여 완전한 ADCC 활성을 유지하였다.
실시예 15: 암 세포를 억제하기 위한 단독 또는 헤르셉틴과 조합된 항-메소텔린 항체
NCI-N87 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 처리와 함께 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37℃, 5% CO2 속에서 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색시켰다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 적은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다.(감소된 푸코실화를 지닌 P303F - 항-메소텔린 항체, P380 - 사람 IL-33-항-HSA, P394 - 사람 IL-21-항-HSA)
도 12에 나타낸 바와 같이, P303F(R3C7 항-메소텔린 항체)는 NK 세포 ADCC에서 헤르셉틴보다 더 강력하였으며 P303F 및 헤르셉틴의 조합은 P303F 단독과 유사하였다. P303F 및 헤르셉틴에 대한 P394(사람 IL-21-항-HSA)의 첨가는 유의적으로 개선된 ADCC 기능 및 증진된 효능을 생성하였다.
실시예 16: 암 세포를 억제하기 위한 단독 또는 사이토킨 융합 단백질과 조합된 항-메소텔린 항체
NCI-N87 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 처리와 함께 가하였다. 플레이트를 24시간 동안 37℃, 5% CO2 속에 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색시켰다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 적은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다.(감소된 푸코실화를 지닌 P303F - 항-메소텔린 항체, R3C7 - P480- 항-HSA-사람-IL-15 RA Sushi/IL-15, rhΣL-21 -재조합 사람 IL-21, rhIL-15 - 재조합 사람 IL-15)
도 13에 나타낸 바와 같이, rhIL-15 및 IL-15-항-HSA(P480)는 항-MSLN 항체 P303F와 조합되는 경우 P303F 및 P303F과 rhIL-21보다 더 우수하게 NK 세포 ADCC 활성을 향상시켰으며, 여기서 rhΣL-2L P480(IL-15/IL-15R sushi-항-HSA)은 rhΣL-15와 비교하여 유사한 효능 및 크기로 NK 매개된 ADCC를 향상시켰으며 이는 완전한 IL-15 활성이 항체 융합 단백질에서 유지되었음을 시사한다.
실시예 17: 암 세포를 억제하기 위한 사이토킨 융합 단백질
NCI-N87 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 처리와 함께 가하였다. 플레이트를 24시간 동안 37℃, 5% CO2 속에 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색시켰다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 적은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다.(P303F - 감소된 푸코실화를 지닌 항-메소텔린 IgG1 항체 R3C7, P431/P435 - 사람 IL-21-항-HSA-IgG1-R3C7, P545/P435 - 사람 IL-21-항-HSA-절단가능한 링커-IgG1-R3CF7, rhTL-21 -재조합 사람 IL-21)
도 14에 나타낸 바와 같이, IL-21-항-HSA-IgG1-R3C7F 융합 단백질은, P431/P435(사람 IL-21-항-HSA-IgG1-R3C7)가 감소된 푸코실화를 가지지 않는다는 것을 제외하고는, P303F + rhIL-21과 비교하여 유사한 NK 세포 ADCC 활성을 갖는다.
실시예 18: 암 세포를 억제하기 위한 IL-15-항-HSA 융합 단백질
NCI-N87 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 처리와 함께 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37℃, 5% CO2 속에 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색시켰다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 적은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다.(P303 - 항-메소텔린 항체 R3C7, P480 - 항-HSA-사람-IL-15 RA Sushi/IL-15, P597- 항-HSA-사람-IL-15 RA Sushi-펩타이드 링커-IL-15, rhIL-15 -재조합 사람 IL-15)
도 15에 나타낸 바와 같이, IL-15R sushi와 IL-15 사이의 펩타이드 링커를 지닌 항-HSA 융합 단백질 P597는, IL-15R sushi와 IL-15 사이에 링커가 없는 항-HSA 융합 단백질인, P480과 비교하여 ADCC 활성을 개선시켰다. P597의 ADCC 효능은 rhIL-15와 유사하였으며, 완전한 IL-15 활성이 융합 단백질 내에 보유되었음을 시사한다.
실시예 19: 암 세포를 억제하기 위한 IL-21 융합 단백질
NCI-N87 및 H226 암 세포주를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 처리와 함께 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37℃, 5% CO2 속에 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색시켰다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 적은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다.(P129 - 항-메소텔린 항체 R2G12, P126 - 사람 IL-21-R2G12-IgG1 융합체, P107 - 사람 IL-21-IgG1 융합체, P325 - 사람 IL-21-R2D2 융합체, P286/288 - 사람 IL-21-R3C7-IgG1-R2G12 융합체.)
도 16에 나타낸 바와 같이, 보다 낮은 농도의 IL-21-Fc 융합 단백질(P107, P126, P288/286)은 항-MSLN 항체 P129(즉, R2G12)와 조합되는 경우 NK 세포 ADCC 활성을 향상시켰다. 그러나, 보다 높은 농도(>100nM)에서, IL-21-Fc 융합 단백질(P107, P126, P288/286)은 항-MSLN 항체 P129(R2G12)와 조합되는 경우 NK 세포 ADCC 활성을 억제하였다. 이러한 억제는 Fc 도메인(P325)를 지니지 않는 IL-21 또는 IL-21 융합 단백질의 경우 관찰되지 않았다.
실시예 20: 암 세포를 억제하기 위해 항-메소텔린 항체와 조합된 IL-21-항-HSA 융합 단백질
NCI-N87 암 세포를 10% 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI-1640 속에 유지시켰다. 0일째에, 10,000개의 NCI-N87 세포/웰을 96-웰 평편 바닥 플레이트내 배양 배지 속에 플레이팅하였다. 1일째에, NK 세포를 사람 연막으로부터 RosetteSep NK 단리 키트(Stemcell Technologies)를 사용하여 단리하고, 100,000개의 NK 세포/웰을 암 세포에 나타낸 처리와 함께 가하였다. 플레이트를 48시간 동안 37℃, 5% CO2 속에 항온처리한 다음, 세포를 4% 파라포름알데하이드로 고정시키고 핵을 Sytox Orange로 염색시켰다. 나머지 암 세포의 수를 각각의 웰 속에 남아있는 암 세포 핵의 수를 Cytation 1(Biotek)을 사용하여 계수함으로써 계산하였다. 보다 적은 세포 수는 보다 우수한 NK 매개된 세포 사멸을 나타내었다.(P197- 항-메소텔린 항체 R2G12, P390 - 마우스 IL-21-항-HSA, P394 - 사람 IL-21-항-HSA)
도 17에 나타낸 바와 같이, 마우스 및 사람 IL-21-항-HSA 융합 단백질(P390 및 P394) 둘 모두는 항-MSLN 항체 P197(R2G12)과 조합되는 경우 잠재적으로 NK 세포 ADCC 활성을 향상시킨다.
실시예 21: 암을 치료하는데 있어서 항-메소텔린 항체 및/또는 IL-21-항-HSA 융합 단백질
NCI-N87 세포를 배양하고 10% FBS + 글루타맥스 + Pen/Strep이 보충된 RPMI 배지 속에 유지시켰다. 세포를 트립신처리하고, 배지로 세척하고, 계수하였다. 이후에 세포를 PBS로 세척하고, 3x106개의 세포(100 ul의 PBS 중)를 마취된 NSG 마우스(Jackson) 내로 23-게이지 침을 사용하여 피하 주사하였다. 6일 후, 10x106개의 사람 PBMC를 마우스당 100 ul의 PBS 속에서 꼬리 정맥내로 주사하였다. 스톡 연구 약물을 투여일에 PBS 속에서 적절한 농도로 희석시키고, 동물에게 100 ug의 P303F(항-메소텔린 항체), 25 ug의 P394(사람 IL-21-항-HSA) 또는 100 ug의 P303F와 25 ug 또는 5 ug의 P394의 조합을 총 5회 용량에 대해 주당 2회 복강내(IP) 투여하였다. 종양 측정(길이(L) 및 너비(W))을 주당 2회 디지탈 캘리퍼스로 수집하고, 종양 용적을 계산하였다(LxWxW)/2.
도 18에 나타낸 바와 같이, P303F는 대조군에 비하여 종양 성장을 감소시킨다. P394를 단독으로 또는 P303F와 함께 제공받은 모든 마우스는 PBS 대조군 또는 P303F 단독과 비교하여 종양 성장을 유의적으로 감소시켰다.
실시예 22: 암을 치료하는데 있어서 항-메소텔린 항체 및/또는 IL-21-항-HSA 융합 단백질
NCI-N87 세포를 배양하고 10% FBS + 글루타맥스 + Pen/Strep이 보충된 RPMI 배지 속에 유지시켰다. 세포를 트립신처리하고, 배지로 세척하고, 계수하였다. 이후에, 세포를 PBS로 세척하고, 3x106개의 세포(100 ul의 PBS 중)를 마취된 SCID 마우스(Taconic) 내로 18-게이지 침을 사용하여 피하 주사하였다. 스톡 연구 약물을 투여일에 PBS 속에 적절한 농도로 희석시키고, 동물에게 100 ug의 P303F(항-메소텔린 항체) 또는 P303F를 25 ug의 P390(마우스 IL-21-항-HSA), 5 ug의 P390, 또는 2.5 ug의 재조합 마우스 IL-21(5 ug의 P390 용량에 대해 등가의 몰 농도)과 함께 복강내 투여하였다. 종양 측정(길이(L) 및 너비(W))을 디지탈 캘리퍼스를 사용하여 주당 2회 수집하고, 종양 용적을 계산하였다(LxWxW)/2.
도 19에 나타낸 바와 같이, P303F 및 25 ug 또는 5 ug의 P390의 조합은 PBS 대조군, P303F 단독치료요법 및 rmIL-21과 조합된 P303F와 비교하여 유의적으로 감소된 종양 성장을 생성하였다. P303F과 2.5 ug의 rmIL-21은 P303F와 유사한 종양 성장을 나타내었으며, 이는 재조합 IL-21이 이러한 용량에서 효능이 없음을 시사한다. P303F와 5 ug의 P390의 조합은 P303F와 2.5 ug의 rmIL-21과 비교하여 유의적으로 감소된 종양 성장을 나타내며, 이는 재조합 사이토킨과 비교하여 반감기 연장된 IL-21의 개선된 효능을 강조한다.

Claims (45)

  1. a) 서열 번호: 12, 서열 번호: 15, 서열 번호: 18, 서열 번호: 21, 서열 번호: 24, 서열 번호: 27, 서열 번호: 30, 서열 번호: 33, 서열 번호: 36, 서열 번호: 39, 서열 번호: 42, 서열 번호: 45, 서열 번호: 48, 서열 번호: 51, 서열 번호: 54, 서열 번호: 57, 서열 번호: 60, 서열 번호: 63, 서열 번호: 75, 서열 번호: 78, 서열 번호: 81, 서열 번호: 84, 서열 번호: 87, 서열 번호: 90, 서열 번호: 93, 서열 번호: 96, 서열 번호: 99, 서열 번호: 102, 서열 번호: 105, 서열 번호: 108, 서열 번호: 111, 서열 번호: 114, 서열 번호: 117, 및 서열 번호: 120으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역(heavy chain complementarity determining region)(HC-CDR) 1;
    b) 서열 번호: 13, 서열 번호: 16, 서열 번호: 19, 서열 번호: 22, 서열 번호: 25, 서열 번호: 28, 서열 번호: 31, 서열 번호: 34, 서열 번호: 37, 서열 번호: 40, 서열 번호: 43, 서열 번호: 46, 서열 번호: 49, 서열 번호: 52, 서열 번호: 55, 서열 번호: 58, 서열 번호: 61, 서열 번호: 64, 서열 번호: 76, 서열 번호: 79, 서열 번호: 82, 서열 번호: 85, 서열 번호: 88, 서열 번호: 91, 서열 번호: 94, 서열 번호: 97, 서열 번호: 100, 서열 번호: 103, 서열 번호: 106, 서열 번호: 109, 서열 번호: 112, 서열 번호: 115, 서열 번호: 118, 및 서열 번호: 121로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및
    c) 서열 번호: 14, 서열 번호: 17, 서열 번호: 20, 서열 번호: 23, 서열 번호: 26, 서열 번호: 29, 서열 번호: 32, 서열 번호: 35, 서열 번호: 38, 서열 번호: 41, 서열 번호: 44, 서열 번호: 47, 서열 번호: 50, 서열 번호: 53, 서열 번호: 56, 서열 번호: 59, 서열 번호: 62, 서열 번호: 65, 서열 번호: 77, 서열 번호: 80, 서열 번호: 83, 서열 번호: 86, 서열 번호: 89, 서열 번호: 92, 서열 번호: 95, 서열 번호: 98, 서열 번호: 101, 서열 번호: 104, 서열 번호: 107, 서열 번호: 110, 서열 번호: 113, 서열 번호: 116, 서열 번호: 119, 및 서열 번호: 122로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3를 포함하는 항-메소텔린(항-MSLN) 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항체 모이어티(moiety)를 포함하는 단리된 항-메소텔린(항-MSLN) 작제물.
  2. 1) 서열 번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    2) 서열 번호: 15의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 17의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    3) 서열 번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    4) 서열 번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    5) 서열 번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체(variant);
    6) 서열 번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    7) 서열 번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    8) 서열 번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    9) 서열 번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    10) 서열 번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    11) 서열 번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    12) 서열 번호: 45의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 46의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 47의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    13) 서열 번호: 48의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    14) 서열 번호: 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    15) 서열 번호: 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 55의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    16) 서열 번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 59의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    17) 서열 번호: 60의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 62의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    18) 서열 번호: 63의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 64의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    19) 서열 번호: 75의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 76의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    20) 서열 번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    21) 서열 번호: 81의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    22) 서열 번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    23) 서열 번호: 87의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 88의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    24) 서열 번호: 90의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    25) 서열 번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 95의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    26) 서열 번호: 96의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 97의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    27) 서열 번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 100의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 101의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    28) 서열 번호: 102의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 103의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 104의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    29) 서열 번호: 105의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 107의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    30) 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 109의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 110의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    31) 서열 번호: 111의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 112의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 113의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    32) 서열 번호: 114의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 115의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 116의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체;
    33) 서열 번호: 117의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 118의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 119의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체; 또는
    34) 서열 번호: 120의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열 번호: 121의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 서열 번호: 122의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 5개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이체를 포함하는 항-메소텔린(항-MSLN) 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항체 모이어티를 포함하는 단리된 항-메소텔린(항-MSLN) 작제물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3이 표 10에 나타낸 바와 같은 항-MSLN-1, 항-MSLN-2, 항-MSLN-3, 항-MSLN-4, 항-MSLN-5, 항-MSLN-6, 항-MSLN-7, 항-MSLN-8, 항-MSLN-9, 항-MSLN-10, 항-MSLN-11, 항-MSLN-12, 항-MSLN-13, 항-MSLN-14, 항-MSLN-15, 항-MSLN-16, 항-MSLN-17, 항-MSLN-18, 항-MSLN-19, 항-MSLN-20, 항-MSLN-21, 항-MSLN-22, 항-MSLN-23, 항-MSLN-24, 항-MSLN-25, 항-MSLN-26, 항-MSLN-27, 항-MSLN-28, 항-MSLN-29, 항-MSLN-30, 항-MSLN-31, 항-MSLN-32, 항-MSLN-33, 및 항-MSLN-34 중 어느 것의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 각각의 아미노산 서열을 포함하는 항-MSLN 작제물.
  4. 서열 번호: 123 내지 156 및 서열 번호: 285 내지 301 중 어느 것에 나타낸 서열을 갖는 VH 쇄 영역내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3 각각을 포함하는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항체 모이어티를 포함하는 단리된 항-메소텔린(항-MSLN) 작제물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티가 단일-도메인(sdAb) 모이어티인 항-MSLN 작제물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 모이어티가 서열 번호: 123 내지 156 및 서열 번호: 285 내지 301 중 어느 하나, 또는 서열 번호: 123 내지 156 및 서열 번호: 285 내지 301 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80% 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 이의 변이체를 포함하는 항-MSLN 작제물.
  7. 제6항에 있어서, 항체 모이어티가 서열 번호: 123 내지 156 및 서열 번호: 285 내지 301 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VHH 도메인, 또는 VhH 도메인내 약 3개 이하의 아미노산을 포함하는 이의 변이체를 포함하는 항-MSLN 작제물.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 메소텔린에 결합하는 sdAb 모이어티가 낙타과(camelid), 키메라, 사람, 부분 사람화 또는 완전히 사람화된 항-MSLN 작제물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 작제물이 반감기 연장 도메인을 추가로 포함하는 융합 단백질인 항-MSLN 작제물.
  10. 제9항에 있어서, 반감기-연장 도메인이 Fc 도메인을 포함하는 항-MSLN 작제물.
  11. 제10항에 있어서, Fc 도메인이 사람 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4를 포함하는 항-MSLN 작제물.
  12. 제11항에 있어서, Fc 도메인이 사람 IgG1을 포함하는 항-MSLN 작제물.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, Fc 도메인이 감소된 푸코실화(fucosylation)를 갖는 항-MSLN 작제물.
  14. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 융합 단백질이 서열 번호: 302 내지 306 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 Fc 도메인에 융합된 항-MSLN VHH 도메인을 포함하는 항-MSLN 작제물.
  15. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 반감기-연장 도메인이 항-MSLN 항체 모이어티의 N-말단에 융합된 항-MSLN 작제물.
  16. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 반감기-연장 도메인이 항-MSLN 항체 모이어티의 C-말단에 융합된 항-MSLN 작제물.
  17. 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 작제물이 항-MSLN 항체 모이어티와 반감기-연장 도메인 사이에 제1의 링커(linker)를 포함하는 항-MSLN 작제물.
  18. 제17항에 있어서, 제1의 링커가 서열 번호: 66 내지 74, 267 내지 282 및 307 내지 324 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 항-MSLN 작제물.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 링커가 절단불가능한 항-MSLN 작제물.
  20. 제17항 또는 제18항에 있어서, 링커가 절단가능한 항-MSLN 작제물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 항-MSLN 작제물이 사이토킨을 추가로 포함하는 융합 단백질인 항-MSLN 작제물.
  22. 제21항에 있어서, 사이토킨이 IL-21, IL-15, IL-15Rα에 결합된 IL-15, 또는 IL-33인 항-MSLN 작제물.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 사이토킨이 항-MSLN 항체 모이어티 또는 반감기-연장 도메인의 N-말단에 융합된 항-MSLN 작제물.
  24. 제21항 또는 제22항에 있어서, 사이토킨이 항-MSLN 항체 모이어티 또는 반감기-연장 도메인의 C-말단에 융합된 항-MSLN 작제물.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 작제물이 서열 번호: 123 내지 156 및 서열 번호: 285 내지 331 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 123 내지 156 및 서열 번호: 285 내지 331 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하는 항-MSLN 작제물.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 항-MSLN 작제물을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드.
  27. a) 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따른 항-MSLN 작제물, 또는 제25항에 따른 폴리뉴클레오타이드, 및
    b) 설명서를 포함하는 키트(kit).
  28. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 항-MSLN 작제물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  29. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 항-MSLN 작제물 또는 제28항에 따른 약제학적 조성물을 개체(individual)에게 투여함을 포함하여, 개체에서 질환 또는 상태를 치료하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 방법이 개체내로 제2의 제제(agent)를 투여함을 추가로 포함하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 제2의 제제가 사이토킨을 포함하는 방법.
  32. 개체에게 a) 항-메소텔린 제제; b) 사이토킨을 포함하는 제2의 제제를 투여함을 포함하여, 개체에서 질환 또는 상태를 치료하는 방법.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 사이토킨이 IL-21, IL-15 또는, IL-15Rα에 결합된 IL-15, 및 IL-33으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  34. 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 사이토킨이 사이토킨에 융합된 반감기 연장 도메인을 추가로 포함하는 사이토킨 융합 단백질인 방법.
  35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 개체내로 항-Her2 제제를 투여함을 추가로 포함하는 방법.
  36. 제29항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 질환 또는 상태가 암인 방법.
  37. 제36항에 있어서, 암이 메소텔린 양성 암인 방법.
  38. 제36항 또는 제37항에 있어서, 암이 고형 암인 방법.
  39. 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 위암, 폐암, 난소 암, 식도 암, 췌장 암, 자궁경부 암, 중피종(mesothelioma) 및 유방 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 암이 위암 또는 폐암인 방법.
  41. 제31항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 사이토킨이 IL-21인 방법.
  42. 제41항에 있어서, IL-21이 서열 번호: 1의 C-말단에서 1 내지 11개의 아미노산을 결여한 IL-21 변이체를 포함하는 방법.
  43. 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항-Her2 제제가 헤르셉틴인 방법.
  44. 제29항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 항-메소텔린 제제가:
    서열 번호: 123 내지 156 및 서열 번호: 285 내지 301 중 어느 것에 나타낸 서열을 갖는 VH 쇄 영역내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3 각각을 포함하는 항-MSLN 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 항-메소텔린 항체 모이어티를 포함하는 방법.
  45. 제29항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 사람인 방법.
KR1020207037392A 2018-06-18 2019-06-17 항-메소텔린 작제물 및 이의 용도 KR20210022004A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862686481P 2018-06-18 2018-06-18
US62/686,481 2018-06-18
US201962809496P 2019-02-22 2019-02-22
US62/809,496 2019-02-22
PCT/US2019/037557 WO2019246003A1 (en) 2018-06-18 2019-06-17 Anti-mesothelin constructs and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210022004A true KR20210022004A (ko) 2021-03-02

Family

ID=68984126

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207037392A KR20210022004A (ko) 2018-06-18 2019-06-17 항-메소텔린 작제물 및 이의 용도
KR1020207037393A KR20210021486A (ko) 2018-06-18 2019-06-17 사이토카인 융합 단백질 및 이의 용도

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207037393A KR20210021486A (ko) 2018-06-18 2019-06-17 사이토카인 융합 단백질 및 이의 용도

Country Status (8)

Country Link
US (2) US20210230242A1 (ko)
EP (2) EP3807321A4 (ko)
JP (2) JP2021529516A (ko)
KR (2) KR20210022004A (ko)
CN (2) CN113166266A (ko)
CA (2) CA3102036A1 (ko)
TW (2) TW202017589A (ko)
WO (2) WO2019246004A1 (ko)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
JP7090347B2 (ja) 2017-05-12 2022-06-24 ハープーン セラピューティクス，インク． メソテリン結合タンパク質
EP3661954B1 (en) 2017-08-03 2022-02-09 Amgen Inc. Interleukin-21 muteins and methods of treatment
CR20200195A (es) 2017-10-13 2020-08-14 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas de unión a antigenos de maduraciòn de celulas b
CR20210319A (es) 2018-01-12 2021-07-27 Amgen Inc ANTICUERPOS ANTI-PD-1 Y MÉTODOS DE TRATAMIENTO (Div. 2020-330)
EP3807321A4 (en) * 2018-06-18 2022-03-02 Anwita Biosciences, Inc. ANTI-MESOTHELIN CONSTRUCTS AND USES THEREOF
US10815311B2 (en) 2018-09-25 2020-10-27 Harpoon Therapeutics, Inc. DLL3 binding proteins and methods of use
CN113508134A (zh) * 2019-02-22 2021-10-15 安维达生物科技公司 白蛋白结合抗体及其用途
US11692020B2 (en) 2019-11-20 2023-07-04 Anwita Biosciences, Inc. Cytokine fusion proteins, and their pharmaceutical compositions and therapeutic applications
US11897930B2 (en) 2020-04-28 2024-02-13 Anwita Biosciences, Inc. Interleukin-2 polypeptides and fusion proteins thereof, and their pharmaceutical compositions and therapeutic applications
CN111518221B (zh) * 2020-07-03 2020-11-27 苏州普乐康医药科技有限公司 一种重组il-15融合蛋白及其应用
EP4171611A1 (en) * 2020-07-30 2023-05-03 Anwita Biosciences, Inc. Interleukin-22 fusion proteins, and their pharmaceutical compositions and therapeutic applications
CN116583294A (zh) * 2020-09-25 2023-08-11 芝加哥大学 抗炎细胞因子及其使用方法
CA3205466A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-23 Bioardis, Llc Mesothelin binding molecules and uses thereof
CA3206835A1 (en) * 2020-12-28 2022-07-07 Zhejiang Nanomab Technology Center Co. Ltd. Mesothelin binding molecule and application thereof
CN114685667B (zh) * 2020-12-28 2024-04-12 浙江纳米抗体技术中心有限公司 间皮素结合分子及其应用
WO2022184148A1 (zh) * 2021-03-03 2022-09-09 上海君实生物医药科技股份有限公司 Il-21-抗白蛋白单域抗体融合蛋白药物组合物及其用途
JP2024509258A (ja) * 2021-03-09 2024-02-29 ハープーン セラピューティクス，インク． 免疫細胞会合タンパク質と免疫調節薬を用いる併用療法
WO2023009975A2 (en) * 2021-07-24 2023-02-02 Anwita Biosciences, Inc. Fusion proteins comprising suppression of tumorigenicity 2 or interleukin-33, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications
CN116134139A (zh) * 2021-09-09 2023-05-16 深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司 一种转基因免疫效应细胞及其应用
CN115838424A (zh) * 2021-09-22 2023-03-24 上海康岱生物医药技术股份有限公司 靶向tigit的单克隆抗体
WO2023160721A1 (en) * 2022-02-28 2023-08-31 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Heterodimeric polypeptide complexes comprising il-15 variants and uses thereof
WO2024051796A1 (en) * 2022-09-09 2024-03-14 Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. Albumin binding proteins, fusion proteins and uses thereof

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120133403A (ko) * 2004-06-01 2012-12-10 도만티스 리미티드 증강된 혈청 반감기를 가지는 이특이성 융합 항체
US7592426B2 (en) * 2005-03-10 2009-09-22 Morphotek, Inc. Anti-mesothelin antibodies
CA2700860C (en) * 2007-10-01 2016-07-19 Jonathan A. Terrett Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
AR076284A1 (es) * 2009-04-29 2011-06-01 Bayer Schering Pharma Ag Inmunoconjugados de antimesotelina y usos de los mismos
TW201138808A (en) * 2010-05-03 2011-11-16 Bristol Myers Squibb Co Serum albumin binding molecules
CN107098972A (zh) * 2010-12-20 2017-08-29 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗间皮素抗体和免疫偶联物
WO2013063419A2 (en) * 2011-10-28 2013-05-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania A fully human, anti-mesothelin specific chimeric immune receptor for redirected mesothelin-expressing cell targeting
PL2802606T3 (pl) * 2012-01-10 2018-09-28 Biogen Ma Inc. Udoskonalenie transportu cząsteczek terapeutycznych przez barierę krew-mózg
AU2013324049B2 (en) * 2012-09-27 2017-09-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Mesothelin antibodies and methods for eliciting potent antitumor activity
WO2014182532A1 (en) * 2013-05-07 2014-11-13 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Mesothelin-specific immunocytokine and use thereof
BR112016004355A2 (pt) * 2013-08-30 2017-10-17 Aprilbio Co Ltd constructo de fusão de parte efetora de fab anti-soroalbumina e método de preparação do mesmo
CN105198999A (zh) * 2014-05-27 2015-12-30 上海生物制品研究所有限责任公司 一种融合蛋白、其制备方法及其应用
ES2791953T3 (es) * 2014-06-06 2020-11-06 Us Health Receptores de antígeno quimérico dirigidos a mesotelina y usos de los mismos
JP6769948B2 (ja) * 2014-07-17 2020-10-14 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 移植拒絶の予防及び自己免疫疾患の治療に使用するための単離されたインターロイキン−３４ポリペプチド
DK3180018T3 (da) * 2014-08-12 2019-10-28 Massachusetts Inst Technology Synergistisk tumorbehandling med IL-2 og integrinbindende Fc-fusionsprotein
CA2961636A1 (en) * 2014-09-17 2016-03-24 Boris ENGELS Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
PT3233910T (pt) * 2014-12-19 2020-03-17 Ablynx Nv Dímeros de nanocorpos ligados a cisteína
EP3064507A1 (en) * 2015-03-06 2016-09-07 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Fusion proteins comprising a binding protein and an interleukin-15 polypeptide having a reduced affinity for IL15ra and therapeutic uses thereof
ES2889906T3 (es) * 2015-05-21 2022-01-14 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas de unión triespecíficas y usos médicos
EP3302528A1 (en) * 2015-05-29 2018-04-11 Armo Biosciences, Inc. Methods of using interleukin-10 for treating diseases and disorders
BR112018003339A8 (pt) * 2015-08-21 2022-10-18 Carsgen Therapeutics Ltd Anticorpos antimesotelina completamente humanos e células imunoefetoras que direcionam mesotelina
US11186641B2 (en) * 2016-03-17 2021-11-30 Oslo Universitetssykehus Hf Fusion proteins targeting tumour associated macrophages for treating cancer
CN107840891A (zh) * 2016-09-19 2018-03-27 上海吉倍生物技术有限公司 高亲和力的抗msln抗体及其应用
US20220204582A1 (en) * 2016-12-02 2022-06-30 University Of Southern California Synthetic immune receptors and methods of use thereof
AU2018220516A1 (en) * 2017-02-16 2019-09-19 Sonnet BioTherapeutics, Inc. Albumin binding domain fusion proteins
EP3807321A4 (en) * 2018-06-18 2022-03-02 Anwita Biosciences, Inc. ANTI-MESOTHELIN CONSTRUCTS AND USES THEREOF
CN113508134A (zh) * 2019-02-22 2021-10-15 安维达生物科技公司 白蛋白结合抗体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN113166266A (zh) 2021-07-23
CN112368015A (zh) 2021-02-12
CA3102036A1 (en) 2019-12-26
JP2021527706A (ja) 2021-10-14
TW202015721A (zh) 2020-05-01
EP3807321A4 (en) 2022-03-02
US20210340272A1 (en) 2021-11-04
EP3807321A1 (en) 2021-04-21
WO2019246004A1 (en) 2019-12-26
EP3806889A4 (en) 2022-07-13
EP3806889A1 (en) 2021-04-21
CA3101642A1 (en) 2019-12-26
WO2019246003A1 (en) 2019-12-26
KR20210021486A (ko) 2021-02-26
TW202017589A (zh) 2020-05-16
JP2021529516A (ja) 2021-11-04
US20210230242A1 (en) 2021-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210022004A (ko) 항-메소텔린 작제물 및 이의 용도
US20230272076A1 (en) PD-1 Binding Proteins and Methods of Use Thereof
US20210163595A1 (en) Methods of treating vitiligo using pd-1 binding antibodies
KR20190141658A (ko) Pd-1 결합 단백질을 포함하는 제제 및 이의 제조 방법
KR20210076918A (ko) 4-1bb 및 종양-관련 항원에 결합하는 항체 작제물 및 이의 용도
US10633458B2 (en) Cell engaging binding molecules
CA3214963A1 (en) Materials and methods for immune effector cells redirection
TW202317632A (zh) 已活化肝臟星狀細胞（ｈｓｃ）之耗竭及其用途
WO2019197979A1 (en) Cell engaging binding molecules
WO2023050826A1 (en) Immunoconjugates containing tnf-alpha and related methods and compositions thereof
US20220267456A1 (en) Materials and methods for targeting regulatory t cells for enhancing immune surveillance
CN117500836A (zh) 用于免疫效应细胞重定向的材料和方法
WO2024013727A1 (en) Material and methods for improved bioengineered pairing of antigen-binding variable regions
CN118043079A (en) Immunoconjugate molecules and methods and compositions relating thereto
CN117177998A (zh) 用于靶向调节性t细胞以增强免疫监视的材料和方法