KR20200035944A - 약제학적 용도를 위해 에난티오머적으로 순수한 시스-이미다졸린 화합물을 제조하기 위한 합성 방법 - Google Patents

약제학적 용도를 위해 에난티오머적으로 순수한 시스-이미다졸린 화합물을 제조하기 위한 합성 방법 Download PDF

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브래들리 바케스
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유니티 바이오테크놀로지, 인크.
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Abstract

시스-이미다졸린 및 관련 구조의 키랄 분해를 통한 에난티오머 선택적 합성 방법이 개시되어 있다. 키랄산은 선택적 결정화에 의해 라세미 혼합물로부터 시스-이미다졸린의 에난티오머 전구체를 분리하는데 사용된다. 에난티오머 둘 다는 상보적 경로에 의해 원하는 시스-이미다졸린으로 고리화될 수 있다. 화합물은 99% 만큼 높은 에난티오머 과량으로 합성될 수 있으며, 암을 치료하거나 노화 세포를 사멸시키거나 노화-관련 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다.

Description

약제학적 용도를 위해 에난티오머적으로 순수한 시스-이미다졸린 화합물을 제조하기 위한 합성 방법
특정 시스-이미다졸린은 MDM2 및 MDMX의 길항제이다. 이들은 결함 또는 비활성 p53 종양 억제제 단백질을 갖는 세포에서 아폽토시스를 유발하거나 복원함으로써 암 화학요법제로서 유용성을 갖는다. 이것은, 예를 들어, 미국 특허 제6,734,302호; 제6,617,346호; 및 제7,705,007호 및 예비 승인된 공보 US 제2005/0282803 A1호, US 제2007/0129416 A1호; 및 US 제2013/0225603 A1호에 설명되어 있다. 시스-이미다졸린, 예컨대 뉴트린-3a (Nutlin-3a)는 또한 노화 세포를 사멸시키고 노화-관련 병태를 치료하기 위해 개발되고 있다: US 제2016/0339019 A1호.
문헌(Miyazaki et al., Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters 23 (2013) 728-732)은 디하이드록시이미다조티아졸 스캐폴드를 갖는 신규한 p53-MDM2 상호작용 저해제의 납 최적화에 대해 논의한다. 문헌(Yu et al., Int. J. Mol. Sci. 2014, 15, 15741-15753)은 설파미드 및 트리아졸 벤조디아제핀의 설계, 합성 및 생물학적 평가에 대해 논의한다. CN 제103923067 B호는 MDMX/MDM2 소분자 저해제, 그들의 제조 및 용도를 기술한다.
이들 시스-이미다졸린의 생물학적 활성은 전형적으로 단일 에난티오머에 존재한다. 단일-에난티오머 버젼의 적절하게-치환된 시스-이미다졸린의 몇가지 제조 방법들을 기술한다. 제WO2007/082805호 및 관련 특허에서, 화합물을 먼저 라세미 형태로 제조한 다음, 키랄-HPLC 전략을 사용하여 분리한다. US 제2012/0088915 A1호는 키랄 촉매가 주요 결합-형성 단계로 비대칭을 유도하기 위해 사용되는 대안적인 접근법을 기술한다.
그러나, 이들 접근법 중 어느 것도 상기 언급된 유형의 키랄적으로-순수한 시스-이미다졸린의 대규모 제조에 최적인 것은 아니다. 전형적인 키랄 HPLC-컬럼은 합성을 확장하기 위한 로딩 한계를 가져서 다중 정제 실행이 필요하여 합성에 필요한 시간이 증가하고 용매와 개질제의 사용을 급격히 증가한다. US 제2012/0088915 A1호에 기술된 촉매 자체는 다단계 합성 경로를 통해 제조되며; 최종 목표의 전체 합성은 상당한 수의 추가의 화학적 변환을 필요로 한다.
본 발명은 키랄 분해를 통한 시스-이미다졸린 및 관련 구조의 에난티오머 선택적 합성 방법을 제공한다. 키랄산은 선택적 결정화에 의해 라세미 혼합물로부터 시스-이미다졸린의 에난티오머 전구체를 분리하는데 사용된다. 에난티오머 둘 다는 상보적 경로에 의해 원하는 시스-이미다졸린으로 고리화될 수 있다. 화합물은 본 발명에 따라 99% 만큼 높은 에난티오머 과량으로 합성될 수 있다. 본 발명에 따라 제조된 시스-이미다졸린은 암을 치료하거나 노화 세포를 사멸시키거나 노화-관련 병태를 치료하는데 사용될 수 있다. 기술된 방법들은 용이하게 확장 가능하며, 임상 개발에 충분한 양의 물질의 제조에 적합하다.
본 발명은 시스-이미다졸린을 화학적으로 합성하는 방법을 포함한다. 화학식 A에 따른 전구체의 라세미 혼합물은 화학식 B에 따른 키랄 비라세미 방향족 산과 조합될 수 있다. 이어서, 반응 조건하에 키랄산과 회합하여 최소-가용성 결정질 또는 무정형 염을 생성하는 전구체의 입체이성질체는 다른 에난티오머로부터 분리되며, 이는 또한 키랄산과 회합될 수 있거나 또한 회합되지 않을 수 있다.
Figure pct00001
이것은 다음와 같이 예시된다:
Figure pct00002
본 발명은 A의 2개의 에난티오머 중 하나가 B의 단일 에난티오머와 상호작용하여 부분입체이성질체 염을 형성할 때 발생하는 물리화학적 성질의 차이를 이용한다. 차이를 이용하는 임의의 분리 공정이 사용될 수 있다: 예를 들어, 하나의 에난티오머는 결정 또는 염을 형성하지만 나머지 에난티오머는 그렇지 않은 조건하에 결정화 또는 염 형성.
A와 B의 반응 후에, 광학적으로-풍부한 A는, 예를 들어, 추가의 처리 전에 염기성 용액으로 염을 세척함으로써 유리 염기로 전환될 수 있다. 일부 경우에, 각 에난티오머는 동일한 표적 시스-이미다졸린을 생성하기 위해 개별적으로 그리고 별개 순서의 화학적 단계를 통해 처리될 수 있다. 이러한 접근법은 화학적으로 효율적인데, A의 에난티오머 둘 다가 생성물로 전환되기 때문이다.
4-[[(4S,5R)-4,5-비스(4-클로로페닐)-4,5-디하이드로-2-[4-메톡시-2-(1-메톡시에톡시)페닐]-1H-이미다졸-1-일]카보닐]-2-피페라지논 (뉴트린-3A)을 합성하는 것이 목적이라면, 이 접근법의 몇가지 뚜렷한 적용이 가능하다. R1은, 예를 들어, 3급-부틸옥시카보닐 (BOC), 벤질옥시카보닐 (Cbz), 9-플루오레닐메톡시카보닐 (Fmoc), 알릴옥시카보닐 (Alloc), 또는 또 다른 아민 보호기일 수 있다. 대안적으로, R1은 최종 생성물, 예를 들어,
Figure pct00003
로 최종적으로 혼입될 단편일 수 있다. R3은 페닐일 수 있으며, X1　및 X2는 클로라이드일 수 있으며, 키랄산 (화학식 B)은 D-만델산 또는 L-만델산일 수 있다.
후속적 합성 단계는 전형적으로 화학식 A의 2개의 질소 원자의 선택적 유도체화에 이어서 폐환 반응하여 이미다졸린 고리를 형성하는 것을 포함한다. 예를 들어, 뉴트린-3a를 제조하기 위해, 화학식 A를 질소 상에 아실화하여 (필요한 경우 탈보호 단계를 사용하여) 중간체 C를 제공하고, 이를 후속적으로 고리화시켜 최종 생성물을 제공한다:
Figure pct00004
본 발명의 합성 방법에 따라 제조된 시스-이미다졸린은 90%, 99% 이상만큼 높은, 높은 정도의 에난티오머 과량을 가질 수 있다. 이들은 단리된 세포 (예컨대, 암 또는 노화 세포)와 조합하고 시험 화합물이 세포에 미치는 영향을 결정함으로써 생물학적 활성에 대해 시험될 수 있다.
임의로, 합성은 중수소와 같은 동위원소 표지를 포함하는 하나 이상의 시약을 사용하는 것을 포함할 수 있다. 생성된 시스-이미다졸리딘은, 예를 들어, 시스-이미다졸리딘이 임상 치료의 일부로서 투여되는 대상체 또는 환자로부터 채취한 생물학적 샘플에서 시스-이미다졸리딘의 농도를 측정하기 위한 내부 표준으로서 사용될 수 있다.
본 발명의 합성 방법에 따라 제조된 시스-이미다졸리딘은, 예를 들어, MDM2 또는 MDMX 수용체 매개 경로를 억제하는데 사용될 수 있다. 본 발명은 시스-이미다졸리딘을 갖는 세포 (예컨대, 암 세포 또는 노화 세포) 또는 세포 집단을 사멸시키거나 이의 성장을 억제하는 것을 포함한다.
본 발명의 합성 방법에 따라 제조된 시스-이미다졸리딘은 염으로서 제공될 수 있고/있거나 부형제와 조합되어 인간 투여에 적합한 약제학적 조성물을 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명은 임의의 방법에 따라 제조된 화합물 및 약제 학적으로 적합한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 본 발명은 의약에 또는 약제의 제조를 위한, 예를 들어 암 또는 노화-관련 병태를 치료하기 위한 임의의 방법에 따라 제조된 화합물을 포함한다.
본 발명의 다른 양상은 다음의 설명, 실시예, 첨부된 청구범위 및 첨부 도면으로부터 명백할 것이다.
도 1a, 1b, 1c 및 1d는 본 발명의 방법에 따라 예시적인 시스-이미다졸린인 뉴트린-3a를 생성하기 위한 합성 도식이다. 입체이성질체는 중간체의 아민 중 하나의 유도체화 전 또는 후에 키랄산으로 분할될 수 있다.
도 2a, 2b, 및 2c는 시스-이미다졸린 뉴트린-3a를 제조하기 위한 합성 방법의 상세한 개요를 제공한다. 입체이성질체가 분할되면, 이성질체는 유도체화되어 자체 합성 경로를 통해 표적 화합물을 생성할 수 있다.
도 3은 화합물 2로의 대체 경로를 도시한다.
도 4는 뉴트린-3a의 중수소화 형태를 생성하는데 사용되는 합성 도식이다.
현재의 시스-이미다졸리딘 제조 방법의 결점을 고려하여, MDM2 및 MDMX 매개 경로의 길항제로서 사용될 수 있는 뉴트린-3a와 같은 시스-이미다졸린의 합성에 대한 짧고 화학적으로-효율적이며 확장 가능한 접근법이 필요하다. 본원 개시내용은 주요 중간체를 제조하고 이들을 시스-이미다졸린 최종 생성물로 전환시키기 위한 효율적이고 유연한 접근법을 제공한다.
도 1a, 1b, 1c 및 1d는 본 발명의 합성 방법을 사용하여 뉴트린-3a를 생성하는 방법의 비제한적인 예를 제공한다. 도식은 다른 시스-이미다졸린을 제조하는데 적절하다면 일반화할 수 있다. 에틸렌 디아민에서 2개의 키랄 중심에 부착된 2개의 치환된 아릴기를 갖는 전구체가 제공된다. 2개의 아민 중 하나는 도 1a 및 1c에 도시된 바와 같이 아민 보호기로 보호되거나, 도 1b 및 1d에 도시된 바와 같이 표적 시스-이미다졸린, 뉴트린-3a로 유도체화된다. 라세미 혼합물은 필요에 따라 D- 또는 L-형 중 하나로 만델산과 같은 키랄 방향족 산을 사용하여 분리된다.
분리 후에, 합성은 A에서 2개의 아민기의 선택적 유도체화를 통해 계속되고, 이어서 폐환되어 중심 이미다졸린 구조를 형성한다. 키랄 분리된 전구체 A가 우레아로서 유도체화된 아민을 갖는 경우, 유리 아민은 아실화를 통해 아미드로 전환되고, 그 반대도 마찬가지이다. 키랄 분리된 전구체가 유리 아민 및 보호된 아민을 갖는 경우, 유리 아민은 먼저, 전구체의 절대 입체화학에 따라 우레아 또는 아미드로 전환된다. 이어서, 다른 아민은 탈보호되고 다른 시약을 사용하여 유도체화된다. 이어서, 시스-이미다졸린 고리를 폐환시켜 궁극적으로 표적 시스-이미다졸린, 뉴트린-3을 생성한다.
키랄 분할에 적합한 전구체
일반적으로, 본 발명은 다음 구조 및 도식에 따른 합성 방법을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 화학식 II 또는 화학식 IV에 따라 염을 제조하는 방법을 제공한다:
[화학식 II]
Figure pct00005
[화학식 IV]
Figure pct00006
상기 방법은 화학식 I에 따른 화합물:
Figure pct00007
을 염-형성 조건하에 키랄산 (H-A)과 접촉시켜 80% ee (에난티오머 과량) 이상으로 화학식 II 또는 화학식 IV의 화합물을 제조하는 단계를 포함하며, 여기서, A-는 키랄산의 공액 염기이며, 여기서:
R1은
Figure pct00008
로부터 선택되며; R20은 -OCH2R30, -OR30； C1-10　알킬; 및 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클로부터 선택되며, 여기서, R20에서 각각의 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클은 할로겐, -OR30, -SR30, -N(R30)2, -S(O)R30, -S(O)2R30-C(O)R30, -C(O)OR30, -OC(O)R30, -NO2, ＝O, ＝S, ＝N(R30), -P(O)(OR30)2, -OP(O)(OR30)2, -CN, C1-6　알킬, C2-6　알케닐, 및 C2-6　알키닐로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환되며;
R30은 각각의 경우에 수소; 및 C1-10　알킬, C2-10　알케닐, C2-10　알키닐, C3-15　헤테로사이클, 및 3 내지 10원 헤테로사이클 (이들 각각은 각각의 경우에 할로겐, -CN, -NO2, ＝O, ＝S, 및 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환된다)로부터 독립적으로 선택되며; R40　및 R41은 각각의 경우에 수소 및 C1-10　알킬로부터 독립적으로 선택되며
R3, R4, R5, R6, 및 R7은 각각의 경우에 수소, 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100, -C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2　및 -CN; C1-10　알킬, C2-10　알케닐, C2-10　알키닐 (이들 각각은 각각의 경우에 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100, -C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, ＝O, ＝S, ＝N(R100), -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2, -CN, C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환된다); 및 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클로부터 독립적으로 선택되며, 여기서, R3, R4, R5, R6, 및 R7에서 각각의 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클은 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100-C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, ＝O, ＝S, ＝N(R100), -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2, -CN, C1-6　알킬, C2-6　알케닐, 및 C2-6　알키닐로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환되며;
R8, R9, R10, R11, 및 R12는 각각의 경우에 수소, 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100, -C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2　및 -CN; C1-10　알킬, C2-10　알케닐, C2-10　알키닐 (이들 각각은 각각의 경우에 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100, -C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, ＝O, ＝S, ＝N(R100), -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2, -CN, C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환된다); 및 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클로부터 독립적으로 선택되며, 여기서, R8, R9, R10, R11, 및 R12에서 각각의 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클은 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S (O)2R100-C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, ＝O, ＝S, ＝N(R100), -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2, -CN, C1-6　알킬, C2-6　알케닐, 및 C2-6　알키닐로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환되며;
R100은 각각의 경우에 수소; 및 C1-10　알킬, C2-10　알케닐, C2-10　알키닐, C3-10　헤테로사이클, 및 3 내지 10원 헤테로사이클 (이들 각각은 각각의 경우에 할로겐, -CN, -NO2, ＝O, ＝S, 및 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환된다)로부터 독립적으로 선택된다.
R1이　
Figure pct00009
이고, R20이 임의로 치환된 포화 5 또는 6원 헤테로사이클인 경우, R1은
Figure pct00010
일 수 있다. R20이 할로겐, -OR30, -SR30, -N(R30)2, -C(O)R30, -C(O)OR30, -OC(O)R30, -NO2, ＝O, ＝S, -CN, C1-6　알킬, C2-6　알케닐, 및 C2-6　알키닐로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 C3-10　헤테로사이클인 경우, R1은
Figure pct00011
및　
Figure pct00012
로부터 선택될 수 있다. R20이 -OCH2R30, -OR30, 또는 임의로 치환된 C1-10　알킬인 경우, R1은
Figure pct00013
및
Figure pct00014
로부터 선택될 수 있다.
R1이　
Figure pct00015
인 경우, R20은 할로겐, -OR30, -SR30, -N(R30)2, -C(O)R30, -C(O)OR30, -OC(O)R30, -NO2, ＝O, ＝S, -CN, C1-6　알킬, C2-6　알케닐, 및 C2-6　알키닐로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된, 임의로 치환된 C3-10　헤테로사이클일 수 있다. R1이　
Figure pct00016
이고, R20이 임의로 치환된 페닐인 경우, R1은
Figure pct00017
및
Figure pct00018
로부터 선택될 수 있다.
R1이　
Figure pct00019
인 경우, R20은 할로겐, -OR30, -SR30, -N(R30)2, -C(O)R30, -C(O)OR30, -OC(O)R30, -NO2, ＝O, ＝S, -CN, C1-6　알킬, C2-6　알케닐, 및 C2-6　알키닐로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환된, 임의로 치환된 C3-10　헤테로사이클일 수 있다. R20이 임의로 치환된 페닐인 경우, R1은
Figure pct00020
및
Figure pct00021
로부터 선택될 수 있다.
이의 에난티오머로부터 키랄 전구체를 분할하기에 적합한 키랄산
화학식 II 또는 IV의 라세미 혼합물을 분할하기 위해, 두 입체이성질체 중 하나와 함께 염 또는 결정을 우선적으로 형성하는 키랄산과 조합된다. 염은 잔류 액체로부터 분리되어 하나의 입체이성질체를 다른 입체이성질체로부터 분리한다. 이어서, 분할된 키랄 전구체 중 하나 또는 둘 다를 사용하여 원하는 시스-이미다졸린을 생성할 수 있다.
키랄산은 시판중인 광학적으로 순수한 시약으로부터 선택될 수 있다. 이는 화학식 III 또는 화학식 V로 나타낼 수 있다:
[화학식 III]
Figure pct00022
[화학식 V]
Figure pct00023
상기 화학식 III 및 V에서,
R200은 수소; 및 C1-10　알킬, C2-10　알케닐, C2-10　알키닐, C3-10　헤테로사이클, 및 3 내지 10원 헤테로사이클 (이들 각각은 각각의 경우에 할로겐, -CN, -NO2, ＝O, ＝S, 및 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환된다)로부터 선택되며;
R201, R202, R203, R204, 및 R205은 각각의 경우에 수소, 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100, -C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2　및 -CN; C1-10　알킬, C2-10　알케닐, C2-10　알키닐 (이들 각각은 각각의 경우에 할로겐, -OR100, -SR00, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100, -C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, ＝O, ＝S, ＝N(R100), -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2, -CN, C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환된다); 및 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클로부터 독립적으로 선택되며, 여기서, R8, R9, R10, R11, 및 R12에서　각각의 C3-10　헤테로사이클 및 3 내지 10원 헤테로사이클은 할로겐, -OR100, -SR100, -N(R100)2, -S(O)R100, -S(O)2R100-C(O)R100, -C(O)OR100, -OC(O)R100, -NO2, ＝O, ＝S, ＝N(R100), -P(O)(OR100)2, -OP(O)(OR100)2, -CN, C1-6　알킬, C2-6　알케닐, 및 C2-6　알키닐로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 독립적으로 임의로 치환된다.
예를 들어, 키랄산은 하기일 수 있다:
Figure pct00024
생물학적 활성 시험
MDM2의 작용제로서 작용하는 능력에 대해 분자 수준에서 화합물을 스크리닝할 수 있으며, 이에 의해 p53 활성을 촉진시키고 상처분해 (senolysis)를 유발한다. 실시예 C는 이 목적을 위한 검정의 예시를 제공한다.
세포 집단에서 표적 세포를 사멸시키거나 이의 표현형을 변화시키는 능력에 대해 화합물을 스크리닝할 수도 있다. 배양된 세포를 화합물과 접촉시키고, 세포의 세포독성 또는 억제 정도를 측정한다. 표적 세포를 사멸시키거나 억제하는 화합물의 능력은 대조군 세포 유형에 대한 화합물의 효과와 비교될 수 있다. 표적 세포가 암 세포인 경우, 대조군 세포는 동일한 조직 기원의 비암성 세포이거나, 또는 전형적으로 화합물이 투여되는 환경에 있는 정상 세포일 수 있다. 세포가 노화 세포인 경우, 대조군 세포는 저밀도로 자유롭게 분할되는 세포 및/또는 고밀도에서 정지 상태에 있는 정상 세포일 수 있다. 실시예 D는 인간 폐 섬유아세포 IMR90 세포주를 사용하는 예시를 제공한다. 암 세포 및 다른 유형의 표적 세포를 사멸시키거나 억제하는 세포의 능력을 시험하기 위한 유사한 프로토콜이 이용 가능하다.
화합물은 또한 노화 세포에 의해 야기되거나 매개되는 것으로 여겨지는 질환 및 다른 병태 과정을 개선시키는 능력에 대해 시험될 수 있다. US 제2016/0339019 A1호를 참조한다.
순도
시스-이미다졸린이 본 발명에 따라 제조되는 경우, 높은 정도의 에난티오머 순도로 제조될 수 있다. 예를 들어, 사용된 화합물 및 방법에 따라, 화학식 II 또는 화학식 IV의 화합물은 적어도 80%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%의 에난티오머 과량 (ee)으로 제조될 수 있다. 에난티오머 과량은 원하는 에난티오머 순도 (enantiopurity)를 달성하기 위해 조악한 염의 재결정화를 통해 풍부해질 수 있다. 에난티오선택성에 사용되는 라세미 혼합물 및 키랄산의 양은 특정 라세미 혼합물 및 키랄산의 성질에 좌우될 것이다. 일반적으로, 라세미 혼합물은 키랄산과 약 3:1 내지 약 0.5:1, 또는 약 3:1 내지 약 1:1의 몰 비로 접촉된다. 결정화 용매, 온도 및 기타 조건의 신중한 선택은 에난티오-풍부 공정 (enantio-enrichment process)을 용이하게 할 것이다.
중수소의 혼입 및 생물학적 분석에서의 사용
임의로, 본 발명의 합성 방법은, 예를 들어, 안정한 동위원소로 표지 된 시스-이미다졸린을 생성하는데 사용될 수 있다. 시약의 신중한 선택을 통해, 동위원소 표지는 위치-제어된 방식으로 표적 시스-이미다졸린의 여러 부위로 혼입될 수 있다. 본원 개시내용의 실시예 B는 중수소화된 2-이소프로폭시-4-메톡시벤조산에 의해 7개 중수소 원자가 혼입된 예시를 제공한다.
그러한 표지된 화합물은, 예를 들어, 정량 검정에서 내부 표준으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 혈장 샘플에서 뉴트린-3a 농도를 측정하기 위해, 혈장에 소정량의 [D7] 뉴트린-3a를 섞은 다음, 아세토니트릴을 첨가하여 단백질을 침전시킨다. 상등액은 추출된 뉴트린-3a (측정될 원래 샘플에서 뉴트린-3a와 [D7] 뉴트린-3a 내부 표준 둘 다를 포함함)를 함유한다. 상등액은 탠덤 질량 분석기를 갖춘 초고압 액체 크로마토그래피 (UHPLC/MS/MS)로 분석된다. 뉴트린-3a 피크 면적 대 [D7] 뉴트린-3a 피크 면적의 비와 보정 샘플의 이론 농도는 원래 혈장 샘플을 다시 계산할 수 있는 회귀 모델에 적합하다.
약제학적 조성물의 제조 및 이들의 용도
본 발명의 합성 방법에 따라 제조된 시스-이미다졸린은, 예를 들어, 하나 이상의 적합한 부형제와 조합하고/하거나 투여를 용이하게 하기 위해 장치에 배치함으로써 약제학적 조성물 또는 약제로 제형화될 수 있다. 그러한 약제를 제조하는데 적합한 물질 및 방법은, 예를 들어, 문헌[최신판 Remington: The Science and Practice of Pharmacy (currently in the 22 nd edition)] 및 기타 표준 참고 자료에서 발견할 수 있다. 그러한 약제 또는 조성물은 임상 의학에서의 사용에 관한 정보와 함께 패키징되거나 그러한 정보를 동반할 수 있다. 상황에 따라, 본 발명의 약제 및 약제학적 조성물은 암과 같은 병태 또는 노화 세포에 의해 야기되거나 매개되는 병태의 증상을 치료 또는 완화시키기 위해 이를 필요로 하는 환자에게 투여하기에 적합할 수 있다.
정의
용어 "시스-이미다졸린"은 본 개시내용을 통해 본 발명의 합성 방법의 표적 화합물을 지칭하기 위해 사용된다. 상기 용어는 편의상 및 예로서 사용되며, 명시적으로 언급되거나 달리 요구되는 것을 넘어서는 청구된 발명에 대한 어떠한 제한도 부여하지 않는다. 가능한 정도로, 본 개시내용에 사용되는 시스-이미다졸린이란 용어는, 필요한 부분만 약간 수정하여 (mutatis mutandis) 보다 일반적인 용어 "화합물" 또는 "구조"로 대체될 수 있다. 명시적으로 언급되거나 달리 요구되지 않는 한, 본 개시내용에서 임의의 화합물의 사용은 대안으로서 또는 도시된 구조에 추가로 공액 염기 또는 산 (임의로 염 형태)의 사용을 포함한다.
"노화 세포"는 일반적으로, 전형적으로 복제하지만 노화 또는 세포 상태의 변화를 야기하는 다른 사건의 결과로 더 이상 복제할 수 없는 세포 유형으로부터 유래된 것으로 생각된다. 그것은 대사적으로 활성을 유지하며 통상적으로 노화 관련 분비 표현형 (SASP)을 채택한다. 노화 세포의 핵은 종종 노화를 강화시키는 염색질 변형을 갖는 노화-관련 헤테로크로마틴 병소 및 DNA 세그먼트에 의해 특징지워진다. 명시적으로 언급되거나 요구되지 않은 본 개시내용에서 청구된 것의 실시에 대한 어떠한 제한도 암시하지 않고, 본 발명은 노화 세포가 조직 손상이나 노화와 관련된 특정 병태를 유발하거나 매개한다는 가설을 전제로 한다. 본 발명의 양상을 실시하기 위해, 노화 세포는 p16, 노화-관련 β-갈락토시다제, 및 리포푸신으로부터 선택된 적어도 하나의 마커; 종종 이들 마커들 중 둘 이상, 및 임의로 인터루킨 6과 같은 SASP의 다른 마커를 발현하는 것으로 동정될 수 있다.
"노화 관련" 질환, 장애 또는 병태는 하나 이상의 증상 또는 징후에 의해 나타나는 생리학적 병태이며, 상기 병태를 갖는 대상체는 그러한 증상 또는 징후의 감소를 필요로 하거나 이로부터 이익을 얻을 수 있을 것이다. 상기 병태는 65세 이상의 사람들에게서 주로 발생하거나 노화 세포에 의해 유발되거나 매개되는 경우 노화와 관련이 있다. 본 발명에 따른 시스-이미다졸린을 사용하여 잠재적으로 치료 또는 관리될 수 있는 노화 관련 장애의 목록은 골관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않는 US 제2016/0339019 A1호 (Laberge et al.) 및/또는 WO 제2017/008060호 (Lopez-Dominguez et al.)에 기술된 병태를 포함한다.
본 개시내용에 언급된 "키랄 방향족 산"은 방향족 아미노산의 2개의 가능한 에난티오머 중 하나이다. 두 에난티오머 중 어느 것도 명시적으로 지칭, 도시 또는 달리 요구되지 않는 경우, 용어는 교대로 하나 또는 다른 에난티오머를 지칭하지만 둘 다를 함께 지칭하지는 않는다.
본 발명의 화합물은 그러한 다른 형태의 화합물이 배제되지 않는 한, 도시된 화합물 및/또는 결정질 및 무정형 형태, 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물 및 다형체를 임의의 조합으로 포함한다.
"전구체" 또는 "중간체"는 합성되거나 구매되거나 또는 달리 획득되는 구조로, 시스-이미다졸린과 같은 원하는 표적 화합물을 생성하기 위해 반응 혼합물의 구조 및/또는 개별 성분을 변화시키는 하나 이상의 화학 반응 단계 및/또는 개별 단계를 거칠 수 있다.
"보호기"는 후속 화학 반응에서 화학선택성을 얻기 위해 작용기의 화학적 변형에 의해 분자에 도입된다. 대표적인 제거 가능한 아민 보호기는 카보벤질옥시 (Cbz), p-메톡시벤질 카보닐 (Moz 또는 MeOZ), 3급-부틸옥시카보닐 (BOC), 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 (FMOC), 알릴옥시카보닐 (Alloc), 벤조일 (Bz), p-메톡시벤질 (PMB), 3,4-디메톡시벤질 (DMPM), p-메톡시페닐 (PMP), 및 토실 (Ts)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
용어 "에난티오머 과량" 또는 "ee"는 키랄 물질의 순도를 지칭한다. 특히, 에난티오머 과량은, 물질이 다른 에난티오머보다 하나의 에난티오머를 다량으로 함유하는 정도를 반영한다. 라세미 혼합물은 0%의 ee를 갖는 반면, 단일 순수한 에난티오머는 100%의 ee를 갖는다.
용어 "염" 또는 "약제학적으로 허용되는 염"은 지칭된 화합물의 약학적으로 적합한 유기 및/또는 무기 반대 이온으로부터 유도된 염을 지칭한다.
알킬, 알케닐, 또는 알키닐과 같은 화학적 모이어티와 함께 사용될 때 용어 "Cx-y"는 사슬에 x 내지 y개 탄소를 함유하는 기를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 용어 "Cx-y알킬"은 트리플루오로메틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸 등과 같은 할로알킬기를 포함하여, 사슬에 x 내지 y개 탄소를 함유하는 직쇄 알킬 및 분지쇄 알킬기를 포함하는 치환 또는 비치환된 포화 탄화수소기를 지칭한다. 용어 "Cx-y알케닐" 및 "Cx-y알키닐"은 상기 기술된 알킬과 길이 및 가능한 치환이 유사하지만 각각 적어도 하나의 이중 또는 삼중 결합을 함유하는 치환 또는 비치환된 불포화 지방족기를 지칭한다.
용어 "헤테로사이클"은 고리의 각 원자가 탄소인 포화, 불포화 또는 방향족 고리를 지칭한다. 헤테로사이클은 3 내지 10원 모노사이클릭 고리, 6 내지 12원 바이사이클릭 고리, 및 6 내지 12원 브릿지된 고리를 포함한다. 바이사이클릭 카보사이클의 각 고리는 포화, 불포화, 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, 방향족 고리, 예를 들어, 페닐은 포화 또는 불포화 고리, 예를 들어, 사이클로헥산, 사이클로펜탄 또는 사이클로헥센에 융합될 수 있다. 원자가가 허용하는 바와 같이, 포화, 불포화 및 방향족 바이사이클릭 고리의 임의의 조합이 카보사이클릭의 정의에 포함된다. 예시적인 헤테로사이클은 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 아다만틸, 페닐, 인다닐, 및 나프틸을 포함한다.
용어 "헤테로사이클"은 하나 이상의 헤테로 원자를 포함하는 포화, 불포화 또는 방향족 고리를 지칭한다. 예시적인 헤테로 원자는 N, O, Si, P, B, 및 S 원자를 포함한다. 헤테로사이클은 3 내지 10원 모노사이클릭 고리, 6 내지 12원 바이사이클릭 고리, 및 6 내지 12원 브릿지된 고리를 포함한다. 바이사이클릭 헤테로사이클의 각 고리는 포화, 불포화 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있으며, 여기서 고리 중 적어도 하나는 헤테로 원자를 포함한다. 예를 들어, 방향족 고리, 예를 들어, 피리딜은 포화 또는 불포화 고리, 예를 들어, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 모르폴린, 피페리딘 또는 사이클로헥산에 융합될 수 있다.
용어 "헤테로아릴"은 방향족 단일 고리 구조, 바람직하게는 5 내지 7원 고리, 보다 바람직하게는 5 내지 6원 고리를 포함하며, 그들의 고리 구조는 적어도 하나의 헤테로 원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로 원자, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로 원자를 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 또한 2개 이상의 탄소가 2개의 인접 고리에 공통인 2개 이상의 사이클릭 고리를 갖는 폴리사이클릭 고리 시스템을 포함하며, 여기서, 고리 중 적어도 하나는 헤테로방향족이며, 예를 들어 다른 사이클릭 고리는 방향족 또는 비방향족 카보사이클릭 또는 헤테로사이클릭일 수 있다. 헤테로아릴기는, 예를 들어, 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 및 피리미딘 등을 포함한다.
탄소-탄소 이중 결합 또는 탄소-질소 이중 결하을 갖는 화학 물질은 Z형 또는 E형 (또는 시스형 또는 트랜스형)으로 존재할 수 있다. 또한, 일부 화학 물질은 다양한 토토머 형태로 존재할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 언급된 화학 물질은 모든 Z-, E- 및 토토머 형태를 포함하도록 의도된다.
용어 "치환된"은 구조의 하나 이상의 탄소 상의 수소를 대체하는 치환기를 갖는 모이어티를 지칭한다. "치환" 또는 "로 치환된"은 그러한 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용 원자가에 따르고, 치환이, 예를 들어 재배열, 고리화 및 제거에 의한 것과 같은 자발적으로 전환을 거치지 않는 안정한 화합물을 초래하는 암시적 단서를 포함하는 것으로 이해될 것이다.
용어 "치환된"은 유기 화합물의 모든 허용 가능한 치환기를 포함한다. 허용 가능한 치환기는 유기 화합물의 비환식 및 환식의 분지형 및 비분지형 카보사이클릭 및 헤테로사이클릭, 방향족 및 비방향족 치환기를 포함한다. 질소와 같은 헤테로 원자는 헤테로 원자의 원자가를 만족시키는 유기 화합물의 수소 치환기 및/또는 임의의 허용 가능한 치환기를 가질 수 있다. 치환기는, 예를 들어, 할로겐, 하이드록실, 카보닐 (예컨대, 카복실, 알콕시카보닐, 포밀 또는 아실), 티오카보닐 (예컨대, 티오에스테르, 티오아세테이트, 또는 티오포르메이트), 알콕실, 포스포릴, 포스페이트, 포스포네이트, 포스피네이트, 아미노, 아미도, 아미딘, 이민, 시아노, 니트로, 아지도, 설프하이드릴, 알키티오, 설페이트, 설포네이트, 설파모일, 설폰아미도, 설포닐, 헤테로사이클릴, 아르알킬, 카보사이클, 헤테로사이클, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 방향족 및 헤테로방향족 모이어티를 포함할 수 있다.
치환기는, 예를 들어, 할로겐, 하이드록시, 옥소 (＝O), 티옥소 (＝S), 시아노 (-CN), 니트로 (-NO2), 이미노 (＝N-H), 옥시모 (＝N-OH), 하이드라지노 (＝N-NH2), -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa　(여기서, t는 1 또는 2이다), -Rb-S(O)tRa　(여기서, t는 1 또는 2이다), -Rb-S(O)tORa　(여기서, t는 1 또는 2이다), 및 -Rb-S(O)tN(Ra)2　(여기서, t는 1 또는 2이다); 및 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 아르알킬, 아르알케닐, 아르알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 헤테로아릴, 및 헤테로아릴알킬 (이들 중 임의의 것은 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록시, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 옥소 (＝O), 티옥소 (＝S), 시아노 (-CN), 니트로 (-NO　2), 이미노 (＝N-H), 옥시모 (＝N-OH), 하이드라진 (＝N-NH2), -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa　(여기서, t는 1 또는 2이다), -Rb-S(O)tRa　(여기서, t는 1 또는 2이다), -Rb-S(O)tORa　(여기서, t는 1 또는 2이다) 및 -Rb-S(O)tN(Ra)2　(여기서, t는 1 또는 2이다)로 임의로 치환될 수 있다)을 포함할 수 있으며; 여기서, 각각의 Ra는 수소, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 헤테로아릴, 또는 헤테로아릴알킬로부터 독립적으로 선택되며, 여기서, 각각의 Ra는 원자가를 허용하며 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 옥소 (＝O), 티옥소 (＝S), 시아노 (-CN), 니트로 (-NO2), 이미노 (＝N-H), 옥시모 (＝N-OH), 하이드라진 (＝N-NH2), -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa　(여기서, t는 1 또는 2이다), -Rb-S(O)tRa　(여기서, t는 1 또는 2이다), -Rb-S(O)tORa　(여기서, t는 1 또는 2이다) 및 -Rb-S(O)tN(Ra)2　(여기서, t는 1 또는 2이다)로 임의로 치환될 수 있으며; 여기서, 각각의 Rb는 직접 결합 또는 직쇄 또는 분지형 알킬렌, 알케닐렌, 또는 알키닐렌 사슬이며, 각각의 Rc는 직쇄 또는 분지형 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키닐렌 사슬이다.
적절한 경우, 치환기 자체가 치환될 수 있다. "비치환된"으로 구체적으로 언급되지 않는 한, 화학적 모이어티에 대한 언급은 치환된 변형을 포함한다. 예를 들어, "헤테로아릴" 기 또는 모이어티에 대한 언급은 치환 및 비치환된 변형 둘 다를 암시적으로 포함한다.
본 개시내용에 사용된 다른 용어들은 본 발명이 실시되는 당업자에 의해 이해될 수 있는 일반적인 의미를 갖는다.
실시예
실시예 A: 예시적인 시스-이미다졸린의 제조
도 2a, 2b, 및 2c는 실행 중인 본 발명의 비제한적 예시로서 시스-이미다졸린 뉴트린-3a에 대한 합성 도식을 보여준다. 도 3은 화합물 2에 대한 대안적인 경로를 보여준다. 사용된 절차는 다음과 같았다:
프로토콜 1: 1,2-비스(4-클로로페닐)에탄-1,2-디아민 (화합물 11)의 합성
문헌(Wein, M. et al. Cancer Res. Clin. Oncol. 1988, 114, 347-58)의 방법을 변형시켜, 4-클로로벤즈알데하이드 (2.90 g, 20.6 mmol) (화합물 10)와 CH3CO2NH4　(349 mg, 4.5 mmol)의 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc/H2O (150 mL/150 mL)에 부어넣었다. 두 상을 분리하고, 유기 상을 5% NaOH (150 mL)로 세척하였다. EtOAc 상을 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 (50 mL)로 세척하고, 여과하여 N-[1,2-비스(4-클로로페닐)-2-[(E)-(4-클로로페닐)메틸렌아미노]에틸]-4-클로로-벤즈아미드 (2.61 g, 93% 수율)를 백색 고체로서 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.
N-[1,2-비스(4-클로로페닐)-2-[(E)-(4-클로로페닐)메틸렌아미노]에틸]-4-클로로-벤즈아미드 (2.61 g, 4.8 mmol)를 50% H2SO4　(30 mL)에 현탁시켰다. 반응 혼합물을 180℃에서 3시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각될 때, 혼합물을 빙수 (20 mL)로 희석하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (3×50 mL)로 추출하였다. 수성 상을 NH4OH (진한)로 염기화하고, Et2O (3×50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (2×20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 11 (553 mg, 41% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00025
프로토콜 2: 3급-부틸-2-아미노-1,2-비스(4-클로로페닐)에틸)카바메이트(화합물 12)의 합성
DCM (20 mL) 중 화합물 11 (1.01 g, 3.6 mmol)의 용액에 Boc2O (765 mg, 3.5 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 2시간 동안 교반한 다음, 물 (15 mL)로 켄칭하였다. 두 상을 분리하고, 수성 상을 DCM (15 mL×2)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기 상을 물 (15 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고 농축시켜 화합물 12 (1.32 g, 96% 수율)를 백색 고체로서 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.
Figure pct00026
프로토콜 3: 화학적 분할 ― 화합물 1 및 화합물 4의 합성
THF (52 mL) 중 화합물 12 (2.61 g, 6.9 mmol)의 용액에 D-만델산 (546 mg, 3.6 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 30분 동안 교반한 다음, 실온에서 1시간 동안 그리고 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 여과 후에, 여과 케이크를 수집하고 (1.14 g, 89% ee) THF (22 mL)로부터 추가로 결정화하여 화합물 4-염 (918 mg, >99% ee)을 백색 결정으로서 수득하였으며, 이를 포화 수성 Na2CO3으로부터 유리시켜 화합물 4 (610 mg, 수율 23%)를 백색 고체로서 수득하였다. 여액을 농축시키고, 잔류물을 EtOAc/포화 수성 Na2CO3　(50 mL/50 mL)의 혼합물에 부어넣었다. 생성된 두 상을 분리하고, 유기 상을 수집하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물 (1.46 g, 3.8 mmol, 50% ee)을 THF (30 mL)에 용해시킨 다음, L-만델산 (400 mg, 2.6 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 가열한 다음, 실온에서 2시간 동안 그리고 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 수집하고 (1.04 g, 91% ee) THF (20 mL)로부터 추가로 결정화하여 화합물 1-염 (660 mg, >99% ee)을 백색 결정으로서 수득하였으며, 이를 포화 수성 Na2CO3으로부터 다시 유리시켜 화합물 1 (415 mg, 수율 16%)을 백색 고체로서 수득하였다.
대안적으로, 이들 2개의 분할 단계의 순서를 반대로 하여 화합물 1-염을 화합물 12 및 L-만델산으로부터 결정질 고체로서 수득할 수 있으며； 이어서 잔류물을 D-만델산으로 처리하여 화합물 4-염을 백색 결정질 생성물로서 회수하였다.
프로토콜 4: N-[(1S,2R)-2-아미노-1,2-비스(4-클로로페닐)에틸]-2-이소프로폭시-4-메톡시-벤즈아미드 (화합물 2)의 합성
DCM (15 mL) 중 2-이소프로폭시-4-메톡시-벤조산 (194 mg, 923 μmol)의 용액에 0℃에서 DIPEA (238 mg, 1.84 mmol) 및 HATU (1.05 g, 2.76 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 화합물 1 (351 mg, 921 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 DCM (30 mL×3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH = 501)로 정제하여 Boc-화합물 2 (321 mg, 61% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00027
DCM (8 mL) 중 Boc-화합물 2 (460 mg, 802 μmol)의 용액에 HCO2H (1.00 g, 8.77 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 물 (50 mL)에 부어넣고, 생성된 혼합물을 pH 9로 조정하였다. 이어서, 이 혼합물을 DCM (15 mL×2)으로 추출하고, 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4　상에서 건조시키고 농축시켜 화합물 2 (350 mg, 92% 수율)를 황색 오일로서 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다. 　LCMS　(ESI) m/z ＝ 실측치 472.9 [M+H]+.
프로토콜 5: 2-이소프로폭시-4-메톡시벤조일 클로라이드 (화합물 6)의 합성
DCM (15 mL) 중 2-이소프로폭시-4-메톡시-벤조산 (400 mg, 1.90 mmol)의 용액에 옥살산 디클로라이드 (483 mg, 3.81 mmol)를 0℃에서 첨가한 후, 한 방울의 DMF를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 과량의 용매를 제거하여 조악한 화합물 6을 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다
프로토콜 6: 시스-N-(2-아미노-1,2-비스(4-클로로페닐)에틸)-2-이소프로폭시-4-메톡시벤즈아미드 (화합물 7)의 합성
DCM (20 mL) 중 시스-1,2-비스(4-클로로페닐)에탄-1,2-디아민 (440 mg, 1.56 mmol) 및 Et3N (253 mg, 2.51 mmol)의 혼합물에 화합물 6을 0℃에서 첨가하고, 상기에서 제조하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 과량의 용매를 농축하여 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc:헥산 = 2:1)로 정제하여 화합물 7 (512 mg, 65% 수율)을 수득하였다.
Figure pct00028
프로토콜 7: 화합물 2 및 화합물 2-이성질체의 합성
D-만델산 (78 mg, 512.65 μmol)을 THF (10 mL) 중 화합물 7 (504 mg, 1.06 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하였다. 여과 케이크 (98 mg, ee 80%)를 MTBE/THF (3 mL/5 mL)로부터 재결정화하여 화합물 2-염 (25 mg, >99% ee)을 수득하였으며, 이를 K2CO3에 의해 유리시켜 유리-염기 화합물 2를 수득하였다. 여액을 농축시킨 다음, 수성 K2CO3　(30 mL)으로 유리시켜 화합물 7 (442 mg, 934 μmol)을 수득하였다. 이 물질을 THF (4 mL)에 용해시키고, L-만델산 (68 mg, 447 μmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하였다. 여과 케이크 (148 mg, ee 91%)를 MTBE/THF (8 mL/2 mL)로부터 재결정화하여 화합물 2-이성질체-염 (38 mg, >99% ee)을 수득하였으며, 이를 또한 K2CO3에 의해 유리시켜 유리-염기 화합물 2-이성질체를 수득하였다.
프로토콜 8: N-((1R,2S)-1,2-비스(4-클로로페닐)-2-(2-이소프로폭시-4-메톡시벤즈아미도)에틸)-3-옥소피페라진-1-카복스아미드 (화합물 3)의 합성
DCM (8 mL) 중 화합물 2 (100 mg, 211 μmol)의 용액에 CDI (68 mg, 419 μmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 피페라진-2-온 (42 mg, 420 μmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (10 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고 농축시켜 화합물 3 (83 mg, 66% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure pct00029
프로토콜 9: N-((1R,2S)-2-아미노-1,2-비스(4-클로로페닐)에틸)-3-옥소피페라진-1-카복스아미드 (화합물 5)의 합성
DCM (10 mL) 중 화합물 4 (152 mg, 399 μmol)의 용액에 CDI (130 mg, 801 μmol)를 0℃에서 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 피페라진-2-온 (80 mg, 799 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 동일한 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (10 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 분취용-TLC (DCM:MeOH = 12:1)로 정제하여 Boc-화합물 5 (130 mg, 64% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.　
Figure pct00030
DCM (5 mL) 중 Boc-화합물 5 (80 mg, 158 umol)의 용액에 TFA (360 mg, 3.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 물에 부어넣고, 생성된 혼합물을 pH 9로 조정하였다. 이어서, 혼합물을 DCM (15 mL×2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4　상에서 건조시키고 농축시켜 화합물 5 (59 mg, 93% 수율)를 황색 오일로서 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.　
Figure pct00031
프로토콜 10: N-((1R,2S)-1,2-비스(4-클로로페닐)-2-(2-이소프로폭시-4-메톡시벤즈아미도)에틸)-3-옥소피페라진-1-카복스아미드 (화합물 3)의 합성
DCM (5 mL) 중 화합물 5 (59 mg, 147 μmol)의 용액에 트리에틸아민 (60 mg, 593 μmol) 및 DCM (5 mL) 중 2-이소프로폭시-4-메톡시-벤조일 클로라이드 (51 mg, 219 μmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 DCM (10 mL×3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 분취용-TLC (DCM:MeOH = 12:1)로 정제하여 화합물 3 (62 mg, 70% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.　
Figure pct00032
프로토콜 11: 4-[[(4S,5R)-4,5-비스(4-클로로페닐)-4,5-디하이드로-2-[4-메톡시-2-(1-메톡시에톡시)페닐]-1H-이미다졸-1-일]카보닐]-2-피페라지논 ((-)-뉴트린-3a)의 합성
DCM (6 mL) 중 Ph3PO (120 mg, 432 μmol)의 용액에 Tf2O (240 mg, 850 μmol)를 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. DCM (2 mL) 중 화합물 3 (130 mg, 217 μmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 분취용-TLC (DCM:MeOH = 11:1)로 정제하여 (-)-뉴트린-3a (83 mg, 62% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.　
Figure pct00033
프로토콜 12: (-)-뉴트린-3a 대체 합성 방법
화합물 3 (29 mg, 48.37 μmol)의 용액 및 THF (1 mL)에 0℃에서 2-플루오로피리딘 (23 mg, 236.89 mmol) 및 Tf2O (33 mg, 117.86 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 밤새 교반한 다음, 농축시켰다. 잔류물을 분취용-HPLC로 정제하여 (-)-뉴트린-3a (6 mg, 18% 수율)를 수득하였다.
실시예 B: 중수소의 혼입
도 4는 중수소로 표지된 뉴트린-3a를 생성하는데 사용된 합성 도식이다. 사용된 절차는 다음과 같았다.
프로토콜 1: 메틸 4-메톡시-2-((프로판-2-일-d7)옥시)벤조에이트 (1)의 합성
DMF (10 mL) 중 메틸 2-하이드록시-4-메톡시-벤조에이트 (199 mg, 1.09 mmol)의 용액에 K2CO3　(301 mg, 2.18 mmol) 및 [D7] 2-요오도-프로판 (195 mg, 1.10 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 밤새 교반한 다음, 물 (30 mL)에 부어넣었다. 생성된 혼합물을 EtOAc (40 mL×3)로 추출하고, 합한 유기 상을 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르:EtOAc = 20:1)로 정제하여 화합물 1 (226 mg, 수율 90%)을 수득하였다.
Figure pct00034
프로토콜 2: 4-메톡시-2-((프로판-2-일-d7)옥시)벤조산 (2)의 합성
THF/H2O (5 mL/5 mL) 중 화합물 1 (211 mg, 912.24 umol)의 용액에 LiOH (66 mg, 2.75 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 밤새 교반한 다음, pH 3-4로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (40 mL×3)로 추출하고, 합한 유기 상을 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켜 화합물 2 (168 mg, 85% 수율)를 수득하였으며, 이는 다음 단계에서 직접 사용되었다.
프로토콜 3: 3급-부틸((1R,2S)-1,2-비스(4-클로로페닐)-2-(4-메톡시-2-((프로판-2-일-d7)옥시)벤즈아미도)에틸)카바메이트 (3)의 합성
DCM (15 mL) 중 화합물 2 (156 mg, 715.97 umol)의 용액에 DIPEA (185 mg, 1.43 mmol) 및 HATU (518 mg, 2.15 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 이 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 3급-부틸((1R,2S)-2-아미노-1,2-비스(4-클로로페닐)에틸)카바메이트(273 mg, 715.97 umol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 물 (30 mL)로 세척하였다. 물 상을 DCM (30 mL×3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH = 50:1)로 정제하여 화합물 3 (321 mg, 77% 수율)을 수득하였다.
Figure pct00035
프로토콜 4: N-((1S,2R)-2-아미노-1,2-비스(4-클로로페닐)에틸)-4-메톡시-2-((프로판-2-일-d7)옥시)벤즈아미드 (4)의 합성
DCM (7 mL) 중 화합물 3 (385 mg, 699.34 umol)의 용액에 TFA (3 mL)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 수성 Na2CO3　(20 mL)에 부어넣었다. 생성된 혼합물을 DCM (30 mL×3)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4　상에서 건조시키고 농축시켜 화합물 4 (301 mg, 96% 수율)를 수득하였으며, 이는 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용되었다.
프로토콜 5: N-((1R,2S)-1,2-비스(4-클로로페닐)-2-(4-메톡시-2-((프로판-2-일-d7)옥시)벤즈-아미도)에틸)-3-옥소피페라진-1-카복스아미드 (5)의 합성
DCM (10 mL) 중 화합물 4 (315 mg, 706.29 umol)의 용액에 CDI (153 mg, 1.06 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 피페라진-2-온 (85 mg, 848.98 umol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시킨 다음, 분취용-TLC로 직접 정제하여 화합물 5 (318 mg, 74% 수율)를 수득하였다.
Figure pct00036
프로토콜 6: [D 7 ] 뉴트린-3a의 합성
DCM (10 mL) 중 트리페닐포스핀 옥사이드 (130 mg, 496.18 umol)의 용액에 Tf2O (140 mg, 496.45 umol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 화합물 5 (301 mg, 496.25 umol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 물 (15 mL)에 부어넣었다. 생성된 혼합물을 DCM (20 mL×3)으로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4　상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 분취용-HPLC로 건조시켜 [D 7 ] 뉴트린-3a (151 mg, 52% 수율)를 수득하였다.
Figure pct00037
실시예 C: MDM2 억제 측정
MDM2 (마우스 이중 소형 2 동족체, E3 유비퀴딘-단백질 리가제로도 공지되어 있음)는 p53 종양 억제제의 음성 조절제이다. MDM2 억제는 p53 활성을 촉진시켜 세놀리틱 (senolytic) 활성을 부여한다. MDM2에 대한 작용제로서 작용하는 화합물의 능력은 p53에 대한 영향을 모니터링함으로써 세포에서 간접적으로 측정될 수 있다.
p53 루시퍼라제 리포터 RKO 안정 세포주는 Signosis Inc. (Santa Clara CA)로부터 얻을 수 있었다. p53 루시퍼라제 세포주에서, 루시퍼라제 활성은 구체적으로 p53의 활성과 관련이 있다. 세포주는 G418 발현 벡터와 함께 p418 루시퍼라제 리포터 벡터의 형질 감염에 이어 G418 선택에 의해 확립되었다.
검정은 다음과 같이 수행된다. 리포터 세포주로부터의 세포를 후보 화합물로 24시간 동안 처리한다. 이어서, 배지를 제거하고, 세포를 PBS로 세척하고, 20 μL의 용해 완충액을 각 웰에 첨가한다. 플레이트 리더 교반기 (plate reader agitator)를 사용하여 10초 동안 세포를 진탕시킨다. 루시퍼라제 완충액을 제조하고, 웰에 첨가한다. 이어서, VictorTM 멀티라벤 플레이트 리더 (PerkinElmer, San Jose Ca)를 사용하여 p53 활성을 판독한다.
실시예 D: 세놀리틱 활성 측정
인간 섬유아세포 IMR90 세포는 CCL-186이란 명칭으로 ATCC® (American Type Culture Collection)로부터 얻을 수 있다. 세포는 3% O2, 10% CO2, 및 ~95% 습도의 분위기에서 FBS 및 Pen/Strep을 함유하는 DMEM에서 < 75% 컨플루언시에서 유지된다. 세포를 3개의 그룹으로 나눈다: 조사된 세포 (사용 전 조사 후 14일 동안 배양됨), 증식하는 정상 세포 (사용 전 1일 동안 저밀도로 배양됨), 및 정지 세포 (사용 전 4일 동안 고밀도로 배양됨).
0일 째에, 조사된 세포는 다음과 같이 제조한다. IMR90 세포를 세척하고, 50,000 세포/mL의 밀도로 T175 플라스크에 넣고, 10-15 Gy로 조사한다. 조사 후, 세포를 96-웰 플레이트에서 100 μL로 분주한다. 1, 3, 6, 10, 및 13일 째에, 각 웰의 배지를 흡인하고, 새로운 배지로 교체한다.
10일 째에, 정지 건강한 세포는 다음과 같이 제조한다. IMR90 세포를 세척하고, 3 mL의 TrypLE 트립신-함유 시약 (Thermofisher Scientific, Waltham, Massachusetts)과 합하고, 세포가 둥근 모양을 하여 (rounded up) 플레이트로부터 분리되기 시작할 때까지 5분 동안 배양한다. 세포를 50,000 세포/mL의 농도로 배지에 분산시키고 계수하고 제조한다. 100 μL의 세포를 96-웰 플레이트의 각 웰에 분주한다. 배지를 13일 째에 변경한다.
13일 째에, 증식하는 건강한 세포 집단은 다음과 같이 제조한다. 건강한 IMR90 세포를 세척하고, 3 mL의 TrypLE와 합하고, 세포가 둥근 모양을 하여 플레이트로부터 분리되기 시작할 때까지 5분 동안 배양한다. 세포를 25,000 세포/mL의 농도로 배지에 분산시키고 계수하고 제조한다. 100 μL의 세포를 96-웰 플레이트의 각 웰에 분주한다.
14일 째에, 시험 Bcl-2 저해제 또는 MDM2 저해제는 다음과 같이 세포와 조합된다. 각 시험 화합물의 DMSO 희석 시리즈는 96-웰 PCR 플레이트에서 최종 원하는 농도의 200배로 제조된다. 사용 직전에, DMSO 스톡은 예열된 완전 배지로 1:200으로 희석된다. 각 웰의 세포로부터 배지를 흡인하고, 100 μL/웰의 화합물 함유 배지를 첨가한다.
본 발명에 따라 제조된 시스-이미다졸린의 세놀리틱 활성을 시험하기 위해, 화합물을 세포와 6일 동알 배양하여 17일 째에 배양 배지를 신선한 배지 및 동일한 화합물 농도로 교체하였다. 001967과 같은 Bcl-2 저해제를 세포로 3일 동안 배양한다. 검정 시스템은 열 안정성 루시퍼라제의 성질을 사용하여 세포 용해 동안 방출된 내인성 ATPase를 동시에 억제하면서 안정한 발광 신호를 생성하는 반응 조건을 가능하게 한다. 배양 기간의 말미에, 100 μL의 세포역가-Glo® 시약 (Promega Corp., Madison, Wisconsin)을 각 웰에 첨가한다. 세포 플레이트를 오비탈 진탕기 상에 30초 동안 배치하고, 발광을 측정한다.
마찬가지로, 본 발명에 따라 제조된 시스-이미다졸린의 암 세포 사멸 능력은 세포가 시험 화합물과 접촉하는 세포 용해 활성에서 결정될 수 있다. 암 세포에 대한 효과는 동일한 조직 기원의 비-암 세포에 대한 효과와 비교된다.
참조로 포함
본 개시내용에 제공된 예시적인 절차는 명시적으로 언급되지 않는 한 청구된 발명을 제한하지 않는다. 양립할 수 있는 정도로, 본 발명의 합성 방법은 미국 특허 제6,734,302호; 제6,617,346호; 및 제7,705,007호 및 예비 승인된 공보 US 제2005/0282803 A1호; US 제2007/0129416 A1호; 및 US 제2013/0225603 A1호에 개시된 임의의 구조를 생성하는데 사용될 수 있다.
본 명세서에서 언급된 모든 공보, 특허 및 특허 출원은 각 개별 공보, 특허 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참조로 포함된 것으로 표시되는 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.
본 발명은 특정 실시예 및 예시를 참조하여 설명되었지만, 통상적인 개발 및 최적화의 문제로서 그리고 당업자의 범위 내에서 특정 상황 또는 의도된 용도에 적응하도록 변경이 이루어질 수 있고 등가물이 대체될 수 있으며, 이로써 청구 대상의 범위로부터 벗어나지 않으면서 본 발명의 이점을 달성할 수 있다.

Claims (30)

  1. 시스-이미다졸린을 화학적으로 합성하는 방법으로서,
    (a) 화학식 (A)에 따른 전구체의 라세미 혼합물을, 상기 전구체의 하나의 에난티오머는 키랄 방향족 산과 회합되지만 나머지 에난티오머는 회합되지 않는 조건하에, 화학식 (B)에 따른 키랄 방향족 산과 조합하는 단계:
    (b) 상기 키랄 방향족 산과 회합된 에난티오머를 나머지 에난티오머로부터 분리하는 단계; 이어서
    (c) 상기 시스-이미다졸린이 적어도 90%의 에난티오머 과량 (ee)을 갖도록 단계 (b)에서 분리된 에난티오머로부터 상기 시스-이미다졸린을 형성하는 단계를 포함하는, 방법:　
    화학식 A
    Figure pct00038

    화학식 B
    Figure pct00039

    상기 화학식 A 및 B에서,
    X1　및 X2는 둘 다는 할로겐이며, R1은 -C(＝O)-R2　또는 아민 보호기이며, R2는 임의로 치환된 카보사이클 또는 헤테로사이클기이며, R3은 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴기이다.
  2. 청구항 1에 있어서, R1은 3급-부틸옥시카보닐 (BOC) 또는 또 다른 아민 보호기인, 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, R1은 아민 보호기이며, 단계 (c)는 단계 (b)에서 분리된 2개의 에난티오머 중 하나에 대해 하기 절차를 수행하는 것를 포함하는, 방법:
    (1) 1급 아민을 아실화하는 단계:
    (2) 단계 (1)의 생성물로부터 R1을 제거하여 제2의 1급 아민을 형성하는 단계;
    (3) 상기 제2의 1급 아민을 아실화하는 단계: 및
    (4) 폐환 반응에 의해 단계 (3)의 생성물로부터 상기 시스-이미다졸린을 형성하는 단계.
  4. 청구항 1에 있어서, R1은　
    Figure pct00040
    인, 방법.
  5. 청구항 1에 있어서, 단계 (c)는 단계 (b)에서 선택된 에난티오머 중 하나에 대해 하기 절차를 수행하는 것을 포함하는, 방법:
    (1) 상기 1급 아민을 아실화하는 단계: 이어서
    (2) 폐환 반응에 의해 단계 (1)의 생성물로부터 상기 시스-이미다졸린을 형성하는 단계.
  6. 청구항 1에 있어서, R1은　
    Figure pct00041
    인, 방법.
  7. 청구항 6에 있어서, 단계 (c)는 단계 (b)에서 선택된 에난티오머 중 하나에 대해 하기 절차를 수행하는 것을 포함하는, 방법:
    (1) 상기 1급 아민을 아실화하는 단계: 이어서
    (2) 폐환 반응에 의해 단계 (1)의 생성물로부터 상기 시스-이미다졸린을 형성하는 단계.
  8. 청구항 1에 있어서, R3은 페닐이며, X1　및 X2는 클로라이드인, 방법.
  9. 청구항 1에 있어서, 화학식 B에 따른 상기 키랄 방향족 산은 D-만델산 또는 L-만델산인, 방법.
  10. 청구항 1에 있어서, 단계 (b)는 하기를 포함하는, 방법:
    (1) 단계 (A)에 의해 형성된 반응 혼합물로부터 염을 형성하는 단계로서, 상기 염은 키랄 방향족 산과 회합된 상기 에난티오머를 함유하는, 단계: 및
    (2) 상기 반응 혼합물로부터 염을 제거하는 단계.
  11. 청구항 9에 있어서, 단계 (b)는 상기 키랄 방향족 산을 단계 (2) 후에 상기 반응 혼합물에 첨가하여 염의 제2 배치를 형성하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  12. 청구항 1에 있어서, 이에 의해 합성된 상기 시스-이미다졸린은 4-[[(4S,5R)-4,5-비스(4-클로로페닐)-4,5-디하이드로-2-[4-메톡시-2-(1-메톡시에톡시)페닐]-1H-이미다졸-1-일]카보닐]-2-피페라지논 (뉴트린-3a)인, 방법.
  13. 청구항 1에 있어서, 단계 (b)에서 분리된 분자로부터 제조된 상기 시스-이미다졸린은 적어도 98%의 에난티오머 과량 (ee)을 갖는, 방법.
  14. 4-[[(4S,5R)-4,5-비스(4-클로로페닐)-4,5-디하이드로-2-[4-메톡시-2-(1-메톡시에톡시)페닐]-1H-이미다졸-1-일]카보닐]-2-피페라지논 (뉴트린-3a)을 화학적으로 합성하는 방법으로서,
    (a) 화학식 A에 따른 전구체의 라세미 혼합물을, 상기 전구체의 하나의 에난티오머를 함유하지만 나머지는 함유하지 않는 염이 형성되는 조건하에, 키랄산과 조합하는 단계;
    (b) 상기 염에 존재하는 상기 에난티오머를 회수하는 단계; 및
    (c) 단계 (b)에서 회수된 상기 에난티오머에 대해 추가 반응을 수행하여 상기 시스-이미다졸린을 형성하는 단계를 포함하는, 방법:
    [화학식 A]
    　
    Figure pct00042
    　
    상기 화학식 A에서, X1　및 X2는 둘 다 클로라이드이며, R1은 -C(＝O)-R2　또는 아민 보호기이며, R2는 임의로 치환된 카보사이클 또는 헤테로사이클기이다.
  15. 청구항 14에 있어서, R1은 3급-부틸옥시카보닐 (BOC) 또는 또 다른 아민 보호기인, 방법.
  16. 청구항 14에 있어서, R1은　
    Figure pct00043
    또는
    Figure pct00044
    인, 방법.
  17. 청구항 14에 있어서, 상기 키랄산은 HOOC-CH(OH)-R3이며, 여기서 R3은 치환된 또 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴기인, 방법.
  18. 청구항 14에 있어서, 상기 키랄산은 D- 또는 L-만델산인, 방법.
  19. 청구항 14에 있어서, 단계 (c)는 단계 (b)로부터 얻어진 에난티오머를　
    Figure pct00045
    　 또는
    Figure pct00046
    및 카보닐디이미다졸 (CDI)과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  20. 청구항 14에 있어서, 단계 (b)에서 분리된 분자로부터 제조된 상기 시스-이미다졸린은 적어도 90%의 에난티오머 과량 (ee)을 갖는, 방법.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 시스-이미다졸린을 포함하는, 노화 관련 질환 치료용 약제학적 조성물.
  22. 노화 관련 질환 치료용 약제의 제조에서 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 시스-이미다졸린의 용도.
  23. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 유효량의 시스-이미다졸린을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 노화 관련 질환 치료를 필요로 하는 대상체에서 노화 관련 질환을 치료하는 방법.
  24. 세포를 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따른 시스-이미다졸린과 접촉시키는 단계를 포함하여, 노화 세포를 사멸시키는 방법.
  25. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 시스-이미다졸린을 포함하는 암 치료용 약제학적 조성물.
  26. 암 치료용 약제의 제조에서 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 시스-이미다졸린의 용도.
  27. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 유효량의 시스-이미다졸린을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여, 암 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  28. 세포를 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 시스-이미다 졸린과 접촉시키는 단계를 포함하여, 암 세포를 사멸시키는 방법.
  29. p53 결합 단백질을 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 따라 제조된 시스-이미다졸린과 접촉시키는 단계를 포함하여, MDM2 및 MDMX로부터 선택된 p53 결합 단백질을 억제하는 방법.
  30. 청구항 21 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시스-이미다졸린은 4-[[(4S,5R)-4,5-비스(4-클로로페닐)-4,5-디하이드로-2-[4-메톡시-2-(1-메톡시에톡시)페닐]-1H-이미다졸-1-일]카보닐]-2-피페라지논 (뉴트린-3a)인, 조성물, 용도 또는 방법.
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