KR20190095403A - 브루톤 티로신 키나제의 이미다조피라진 저해제 - Google Patents

브루톤 티로신 키나제의 이미다조피라진 저해제 Download PDF

Info

Publication number
KR20190095403A
KR20190095403A KR1020197020718A KR20197020718A KR20190095403A KR 20190095403 A KR20190095403 A KR 20190095403A KR 1020197020718 A KR1020197020718 A KR 1020197020718A KR 20197020718 A KR20197020718 A KR 20197020718A KR 20190095403 A KR20190095403 A KR 20190095403A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cancer
disease
compound
disorder
tumor
Prior art date
Application number
KR1020197020718A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102559851B1 (ko
Inventor
테리 포돌
제리 에바츠
알라드 캅테인
Original Assignee
아세르타 파마. 비.브이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 아세르타 파마. 비.브이. filed Critical 아세르타 파마. 비.브이.
Publication of KR20190095403A publication Critical patent/KR20190095403A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102559851B1 publication Critical patent/KR102559851B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders

Abstract

일부 구체예에서, 본발명은 식 (I) 및 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 이들 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 치료법에서의 그의 용도에 관한 것이다. 특히, 일부 구체예에서, 본발명은 식 (I) 및 (II)의 화합물, 그의 약제학적 조성물, 및 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애의 치료에서의 상기 화합물 및 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

브루톤 티로신 키나제의 이미다조피라진 저해제
일부 구체예에서, 본발명은 식 (I) 및 (II)의 화합물, 이들 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 및 치료법에서의 그의 용도에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 본발명은 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애의 치료에서의 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다.
브루톤 티로신 키나제 (BTK)는 B 세포 및 골수성 세포에서 발현되는 Tec 패밀리 비-수용체 단백질 키나제이다. BTK가 자가면역 질환에서 자가항체의 생산 조절에서 핵심 역할을 한다는 것이 연구 결과에 의해 뒷받침된다. 또한, BTK의 저해는 Davis, et al., Nature, 2010, 463, 88-94에 기술된 바와 같이 만성적 유효 BCR 신호전달로 인해 특히 B 세포 림프종에 관련되는 것으로 보인다.
많은 고체 종양에서, 지지적 미세 환경 (종양 덩어리의 대부분을 차지할 수 있는)은 종양 생존을 가능하게 하는 동적 힘이다. 종양 미세 환경은 Swartz, et al., Cancer Res., 2012, 72, 2473에 기술된 바와 같이 "성장과 침윤을 지원하고, 종양을 숙주 면역으로부터 보호하고, 종양 성장을 지원하고, 치료적 내성을 지원하고, 주요 전이가 자라기 위한 니치를 제공하는, 세포, 가용성 인자, 신호전달 분자, 세포외 매트릭스, 및 신생물 전환을 촉진하는 기계적 신호의 복합 혼합물"로서 일반적으로 정의된다. 비록 종양은 T 세포에 의해 인식되어야 하는 항원을 발현시키지만, 면역계에 의한 종양 클리어런스는 미세 환경에 의한 면역 억제로 인해 드물다. 예를 들어 화학요법으로 종양 세포 자체를 처리하는 것은 또한 미세환경의 보호적 효과를 극복하기에 불충분한 것으로 입증되었다. 따라서, 미세환경의 역할을 고려한 고체 종양의 더욱 효과적인 치료를 위한 새로운 접근법이 시급하게 요구된다.
발명의 요약
한 양상에서, BTK 저해제는 다음 구조를 갖는 식 (I)의 화합물:
Figure pct00001
(I)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
다른 양상에서, BTK 저해제는 다음 구조를 갖는 식 (II)의 화합물:
Figure pct00002
(II)
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
역시 다른 양상에서, 본발명은 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애의 치료에서의 식 (I) 또는 (II)의 화합물의 용도에 관한 것이다.
상기 요약과 다음의 본발명의 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽었을 때 더욱 잘 이해될 것이다.
도 1은 식 (I)의 화합물의 1H-13C 2/3-결합 상관관계 NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 2은 BTK IMAP 어세이에서 예비-배양 시간 (0, 30, 또는 60 min) 및 ATP 농도 (5, 25, 또는 100 μM)의 변화에 따른 식 (I)의 화합물의 활성을 도시한다.
도 3은 LanthaScreen 어세이를 사용하여 BTK 와일드 타입 (BTK-WT) 및 BTK 돌연변이 Cys481Ser (BTK-C481S)에 대한 시간 경과에 따른 식 (I)의 화합물의 겉보기 IC50을 도시한다.
도 4은 Ramos B 세포 내 BTK 표적 점유율에 대한 식 (I)의 화합물의 용량 반응을 도시한다.
도 5은 아칼라부루티닙의 1차 대사 경로를 도시한다.
도 6은 아칼라부루티닙으로부터 M27로의 주요 산화 대사 경로를 도시한다.
도 7은 아칼라부루티닙으로부터 M23 로의 대사 경로를 도시한다.
도 8A 및 도 8B는 함께 사람에서의 아칼라부루티닙의 생물학적 전환 경로를 도시한다.
도 9은 아칼라부루티닙 및 M27이 BTK의 공유결합 저해제임을 도시한다. 왼쪽 도면은 시간 경과에 따른 공유결합으로 인한 BTK-WT에 대한, 시간 경과에 따른 효능 증가를 나타낸다. 오른쪽 도면은 BTK-C481S 로의 화합물의 가역적 결합 (친화성)을 나타내고 시간 경과에 따라 변하지 않는다. BTK-WT 및 BTK-C481S 사이의 효능 차이는 공유결합의 효과를 나타낸다.
도 10은 Ramos 세포 내 아칼라부루티닙 및 M27의 BTK 표적 점유율 (BTK TO)을 도시한다.
도 11은 M27의 단일 용량 (1 μM)에서 KINOMEscan 프로파일링 (DiscoveRx scanMAX)을 도시한다.
도 12은 식 (III)으로부터 식 (II)의 화합물로의 대사 경로를 도시한다.
본발명의 바람직한 구체예가 나타내어지고 여기서 기술되지만, 그러한 구체예는 단지 예시로서 제공되고 본발명의 범위를 제한하는 의도가 아니다. 본발명의 기술된 구체예에 대한 다양한 대안이 본발명의 실시에서 사용될 수 있다.
다르게 정의되지 않는다면, 여기서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본발명이 속하는 업계에서의 숙련가에 의해 통상 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 여기서 언급된 모든 특허 및 공보는 그 전체가 참고로서 포함된다.
용어 "약제학적으로 허용가능한 염"은 본 업계에서 공지된 다양한 유기 및 무기 반대 이온으로부터 유래된 염을 지칭한다. 약제학적으로 허용가능한 산 부가 염은 무기 산 및 유기 산으로 형성될 수 있다. 염이 유래될 수 있는 무기 산은, 예를 들어, 염산, 하이드로브롬산, 황산, 질산 및 인산을 포함한다. 염이 유래될 수 있는 유기 산은, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산 및 살리실산을 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기로 형성될 수 있다. 염이 유래될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어, 소듐, 포타슘, 리튬, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간 및 알루미늄을 포함한다. 염이 유래될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어, 1차, 2차, 및 3차 아민, 자연 발생적 치환된 아민을 포함하는 치환된 아민, 시클릭 아민 및 염기성 이온 교환 수지를 포함한다. 특이적 예시는 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 및 에탄올아민을 포함한다. 선택되는 구체예에서, 약제학적으로 허용가능한 염기 부가 염은 암모늄, 포타슘, 소듐, 칼슘, 및 마그네슘 염으로부터 선택된다.
"약제학적으로 허용가능한 담체" 또는 "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 어느 및 모든 용매, 분산 매체, 코팅제, 항생제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수지연제를 포함하는 의도이다. 약제학적으로 활성인 물질에 대한 그러한 매체 및 물질의 사용은 본 업계에서 널리 공지되어 있다. 활성 성분과 부적합성인 종래 매체 또는 물질을 제외하고, 본발명의 치료적 조성물에서의 그의 사용이 고려된다.
예를 들어, 물리적 또는 화학적 특성 가령 분자량 또는 화학식을 기술하기 위해 범위가 여기서 사용된 때, 범위의 모든 조합 및 하위조합 및 거기서의 특이적 구체예가 포함된다고 의도된다. 수 또는 수치 범위를 언급할 때 용어 "약"의 사용은 언급된 수 또는 수치 범위가 실험적 편차 내 (또는 통계적 실험 오차 내)의 근사치이고 따라서 수 또는 수치 범위는 예를 들어, 언급된 수 또는 수치 범위의 1% 및 15% 사이에서 변할 수 있다. 용어 "포함하는" (및 관련 용어 가령 "포함하는" 또는 "포함하는" 또는 "갖는" 또는 "포함하는")은 구체예 가령, 예를 들어, 기술된 특징으로 "이루어진" 또는 "본질적으로 이루어진" 물질의 조성물, 방법 또는 공정의 구체예를 포함한다.
화합물
제 1 구체예에서 또한 M27로서 명명된 식 (I)의 화합물:
Figure pct00003
(I),
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 또는
식 (II)의 화합물:
Figure pct00004
(II),
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공된다.
한 구체예에서, BTK 저해제는 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물이다: 4-(8-아미노-3-(4-(부트-2-인아미노)부타노일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일)-N-(피리딘-2-일)벤즈아미드 및 4-(8-아미노-3-(4-(부트-2-인아미노)부타노일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일)-2-메톡시-N-(피리딘-2-일)벤즈아미드.
한 구체예에서, 상기 화합물은 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
한 구체예에서, 상기 화합물은 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
식 (I) 및 (II)의 화합물 및 염은 용매화된 형태 및 비용매화된 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어, 용매화된 형태는 수화된 형태, 가령 반-수화물, 1-수화물, 2-수화물, 3-수화물 또는 그의 대안적 양일 수 있다.
식 (I) 및 (II)의 화합물 및 염은 유사하게 예를 들어, 식 (I) 및 (II)의 화합물의 다형체, 슈도다형체, 용매화물, 수화물, 비용매화된 다형체 (수화물을 포함하는), 종래의 다형체, 및 비정질 형태, 그리고 그의 혼합물을 포함하는, 식 (I) 및 (II)의 화합물의 결정성 및 비정질 형태를 포함한다. "결정성 형태" 및 "다형체"는, 특정의 결정성 또는 비정질 형태가 언급되지 않는다면, 예를 들어, 다형체, 슈도다형체, 용매화물, 수화물, 비용매화된 다형체 (수화물을 포함하는), 종래의 다형체, 및 비정질 형태, 그리고 그의 혼합물을 포함하는, 화합물의 모든 결정성 및 비정질 형태를 포함한다고 의도된다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 분리된 형태이다.
"분리된 형태"인 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 식 (II), 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 다른 성분, 예를 들어 살아 있는 생명체 내에서 발견되는 유기 성분이 실질적으로 없는 것이다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 HPLC에 의해 측정된 적어도 90% 순도의 높은 순도를 갖는다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 순도 HPLC에 의해 측정된 적어도 95%의 높은 순도를 갖는다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 HPLC에 의해 측정된 적어도 96% 순도의 높은 순도를 갖는다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 HPLC에 의해 측정된 적어도 97% 순도의 높은 순도를 갖는다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 HPLC에 의해 측정된 적어도 98% 순도의 높은 순도를 갖는다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 HPLC에 의해 측정된 적어도 99% 순도의 높은 순도를 갖는다.
한 구체예에서 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 상기 화합물은 HPLC에 의해 측정된 100% 순도를 갖는다.
한 구체예에서 생체외 생성된 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공된다.
"생체외"는 살아 있는 생명체, 예를 들어 암 또는 다른 질환에 대해 치료받는 사람 환자의 외부을 의미한다.
한 구체예에서 유기 합성에 의해 생성된 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공된다. 예를 들어 HPLC에 의해 측정된 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 및 99% 이상의 순도인 상대적 순수 형태로 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제조하기 위한 유기 합성 경로가 이용가능하다. 본질적으로 100% 순수한 화합물을 제공하기 위해 재결정화 및 다른 정제 방법이 수행될 수 있다. 그러한 합성 방법 및 정제 기술은 본 업계에서 공지되어 있고 다음 실시예에서 비-제한적으로 설명된다.
"유기 합성"은 생성물을 얻기 위한 실험실 또는 제조 세팅에서의 합성 반응의 실행을 의미한다.
한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 실질적으로 순수한 형태로 제공된다. 실질적으로 순수한은 상기 화합물이 FDA 허가용으로 충분히 순수하고 오염물 또는 다른 물질이 본질적으로 없거나 또는 대안적으로 안전성, 효과, 안정성 및 다른 바람직한 특성에 관해 화합물의 특성에 나쁜 또는 허용불가한 영향을 미치지 않는 불순물 수준임을 의미한다.
약제학적 조성물
선택된 구체예에서, 본발명은 고체 종양암, 림프종 및 백혈병을 치료하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다.
약제학적 조성물은 유효 성분으로서 식 (I) 또는 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료적으로 효과적인 양을 제공하도록 대표적으로 제제화된다. 필요시, 약제학적 조성물은 그의 약제학적으로 허용가능한 염 및/또는 배위 착염, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제, 불활성 고체 희석제 및 충전재를 포함하는 담체, 살균 수성 용액 및 다양한 유기 용매를 포함하는 희석제, 투과촉진제, 가용화제 및 보조제를 함유한다.
필요시, 다른 물질이 제제 내로 혼합될 수 있거나 또는 두 성분이 모두 별도로 또는 동일 시간에서의 조합 사용을 위해 별도의 제제 내로 제제화될 수 있다.
선택된 구체예에서, 본발명의 약제학적 조성물 내에 제공된 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 각각의 농도는 독립적으로, 예를 들어, 약제학적 조성물의 총 질량 또는 부피에 대해 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v 또는 v/v 미만이다.
선택된 구체예에서, 본발명의 약제학적 조성물 내에 제공된 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 각각의 농도는 독립적으로 약제학적 조성물의 총 질량 또는 부피에 대해 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19.75%, 19.50%, 19.25% 19%, 18.75%, 18.50%, 18.25% 18%, 17.75%, 17.50%, 17.25% 17%, 16.75%, 16.50%, 16.25% 16%, 15.75%, 15.50%, 15.25% 15%, 14.75%, 14.50%, 14.25% 14%, 13.75%, 13.50%, 13.25% 13%, 12.75%, 12.50%, 12.25% 12%, 11.75%, 11.50%, 11.25% 11%, 10.75%, 10.50%, 10.25% 10%, 9.75%, 9.50%, 9.25% 9%, 8.75%, 8.50%, 8.25% 8%, 7.75%, 7.50%, 7.25% 7%, 6.75%, 6.50%, 6.25% 6%, 5.75%, 5.50%, 5.25% 5%, 4.75%, 4.50%, 4.25%, 4%, 3.75%, 3.50%, 3.25%, 3%, 2.75%, 2.50%, 2.25%, 2%, 1.75%, 1.50%, 125%, 1%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 0.1%, 0.09%, 0.08%, 0.07%, 0.06%, 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02%, 0.01%, 0.009%, 0.008%, 0.007%, 0.006%, 0.005%, 0.004%, 0.003%, 0.002%, 0.001%, 0.0009%, 0.0008%, 0.0007%, 0.0006%, 0.0005%, 0.0004%, 0.0003%, 0.0002% 또는 0.0001% w/w, w/v, 또는 v/v 초과이다.
선택된 구체예에서, 본발명의 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 각각의 농도는 독립적으로 약제학적 조성물의 총 질량 또는 부피에 대해 대략 0.0001% 내지 대략 50%, 대략 0.001% 내지 대략 40%, 대략 0.01% 내지 대략 30%, 대략 0.02% 내지 대략 29%, 대략 0.03% 내지 대략 28%, 대략 0.04% 내지 대략 27%, 대략 0.05% 내지 대략 26%, 대략 0.06% 내지 대략 25%, 대략 0.07% 내지 대략 24%, 대략 0.08% 내지 대략 23%, 대략 0.09% 내지 대략 22%, 대략 0.1% 내지 대략 21%, 대략 0.2% 내지 대략 20%, 대략 0.3% 내지 대략 19%, 대략 0.4% 내지 대략 18%, 대략 0.5% 내지 대략 17%, 대략 0.6% 내지 대략 16%, 대략 0.7% 내지 대략 15%, 대략 0.8% 내지 대략 14%, 대략 0.9% 내지 대략 12% 또는 대략 1% 내지 대략 10% w/w, w/v 또는 v/v 범위 내이다.
선택된 구체예에서, 본발명의 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 각각의 농도는 독립적으로 약제학적 조성물의 총 질량 또는 부피에 대해 대략 0.001% 내지 대략 10%, 대략 0.01% 내지 대략 5%, 대략 0.02% 내지 대략 4.5%, 대략 0.03% 내지 대략 4%, 대략 0.04% 내지 대략 3.5%, 대략 0.05% 내지 대략 3%, 대략 0.06% 내지 대략 2.5%, 대략 0.07% 내지 대략 2%, 대략 0.08% 내지 대략 1.5%, 대략 0.09% 내지 대략 1%, 대략 0.1% 내지 대략 0.9% w/w, w/v 또는 v/v 범위 내이다.
선택된 구체예에서, 본발명의 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 각각의 양은 독립적으로 3.0 g, 2.5 g, 2.0 g, 1.5 g, 1.0 g, 0.95 g, 0.9 g, 0.85 g, 0.8 g, 0.75 g, 0.7 g, 0.65 g, 0.6 g, 0.55 g, 0.5 g, 0.45 g, 0.4 g, 0.35 g, 0.3 g, 0.25 g, 0.2 g, 0.15 g, 0.1 g, 0.09 g, 0.08 g, 0.07 g, 0.06 g, 0.05 g, 0.04 g, 0.03 g, 0.02 g, 0.01 g, 0.009 g, 0.008 g, 0.007 g, 0.006 g, 0.005 g, 0.004 g, 0.003 g, 0.002 g, 0.001 g, 0.0009 g, 0.0008 g, 0.0007 g, 0.0006 g, 0.0005 g, 0.0004 g, 0.0003 g, 0.0002 g 또는 0.0001 g 이하이다.
선택된 구체예에서, 본발명의 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 각각의 양은 독립적으로 0.0001 g, 0.0002 g, 0.0003 g, 0.0004 g, 0.0005 g, 0.0006 g, 0.0007 g, 0.0008 g, 0.0009 g, 0.001 g, 0.0015 g, 0.002 g, 0.0025 g, 0.003 g, 0.0035 g, 0.004 g, 0.0045 g, 0.005 g, 0.0055 g, 0.006 g, 0.0065 g, 0.007 g, 0.0075 g, 0.008 g, 0.0085 g, 0.009 g, 0.0095 g, 0.01 g, 0.015 g, 0.02 g, 0.025 g, 0.03 g, 0.035 g, 0.04 g, 0.045 g, 0.05 g, 0.055 g, 0.06 g, 0.065 g, 0.07 g, 0.075 g, 0.08 g, 0.085 g, 0.09 g, 0.095 g, 0.1 g, 0.15 g, 0.2 g, 0.25 g, 0.3 g, 0.35 g, 0.4 g, 0.45 g, 0.5 g, 0.55 g, 0.6 g, 0.65 g, 0.7 g, 0.75 g, 0.8 g, 0.85 g, 0.9 g, 0.95 g, 1 g, 1.5 g, 2 g, 2.5, 또는 3 g 초과이다.
본발명에 따르는 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 각각은 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 예를 들어, 성인의 치료에서, 투여량은 독립적으로 일일 0.01 내지 1000 mg, 0.5 내지 100 mg, 1 내지 50 mg, 범위이고 일일 5 내지 40 mg은 사용될 수 있는 투여량의 예시이다. 정확한 투여량은 투여 경로, 상기 화합물이 투여되는 형태, 치료될 개체의 성별과 나이, 치료될 개체의 체중, 및 담당 의사의 선호성과 경험에 의존할 것이다.
비-제한적 약제학적 조성물 및 이를 제조하기 위한 방법이 아래에 기술된다.
투여량 및 투여 계획
투여될 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 양은 치료될 포유동물, 장애 또는 병태의 경중도, 투여 속도, 화합물 특성 및 처방하는 의사의 판단에 의존할 것이다. 그러나, 효과적인 투여량은 단일 또는 분할된 용량으로 일일 kg 체중 당 약 0.001 내지 약 100 mg 범위 내, 가령 약 1 내지 약 35 mg/kg/일이다. 70 kg 사람에 대해, 이는 약 0.05 내지 7 g/일, 가령 약 0.05 내지 약 2.5 g/일에 달한다. 어떤 경우 상기 범위의 하한 보다 아래의 투여량 수준이 충분 이상일 수 있고, 다른 경우 예를 들어, 하루 전체를 통해 투여용의 몇 개의 작은 양으로 큰 양을 분할함으로써, 더 큰 양이 사용될 수 있다.
선택된 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 단일 용량으로 투여된다. 대표적으로, 그러한 투여는 약물을 신속히 도입하기 위해 주사, 예를 들어 정맥내 주사에 의한다. 그러나, 다른 경로가 적절하게 사용될 수 있다. 급성 병태의 치료를 위해 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 단일 용량이 또한 사용될 수 있다.
선택된 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 다중 용량으로 투여된다. 투여는 약 일일 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회 또는 6회 초과일 수 있다. 투여는 월 1회, 매2주당 1회, 주 1회, 2일당 1회일 수 있다. 다른 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 약 일일 1회 내지 약 일일 6회 투여된다. 다른 구체예에서 식 (I) 또는 (II)의 화합물의 투여는 약 7 일 미만 동안 계속된다. 역시 다른 구체예에서 투여는 약 6, 10, 14, 28 일, 2 개월, 6개월 또는 1년 초과 동안 계속된다. 어떤 경우, 필요시 연속 투여가 달성되고 유지된다.
본발명의 물질의 투여는 필요한 대로 계속될 수 있다. 선택된 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 또는 28 일 초과 동안 투여된다. 어떤 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 28, 14, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1 일 미만 동안 투여된다. 선택된 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 예를 들어, 만성적 효과의 치료를 위해, 지속적으로 만성적으로 투여된다.
식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 조합의 효과적인 양은 관절내 주사, 정맥내, 복강내, 비경구, 근육내, 피하, 경구, 외용적으로, 또는 흡입제로서, 직장, 구강, 비강내 및 경피 경로를 포함하는, 유사한 유용성을 갖는 허용되는 물질 투여 모드에 의해 단일 또는 다중 용량으로 투여될 수 있다.
시험관 내 연구에 기초하여, 아칼라부루티닙은 주로 CYP3A 효소에 의해, 및 더 적은 정도로, 글루타치온 공액화 및 아미드 가수분해에 의해 대사된다. 식 (I)의 화합물은 아칼라부루티닙의 노출보다 대략 2- 내지 3-배 높은 기하학적 평균 노출 (AUC)을 가지면서, 혈장 내 주요 대사체로서 확인되었다. 주요 대사체는 생화학적 어세이에서 BTK 저해에 대해 아칼라부루티닙보다는 대략 50% 덜 유효하다.
아칼라부루티닙 및 주요 대사체는 BTK 유효 부위에서 시스테인 잔기와 공유결합을 형성하고, BTK의 효소적 활성 저해를 유도한다. 시스테인 잔기와의 아칼라부루티닙 결합은 신속히 및 비가역적으로 일어나고 정상 상태에서 높은 표적 점유율을 제공한다. 개체가 100 mg 아칼라부루티닙의 단일 경구 투여량을 투여받은 임상 연구에 기초하여, 아칼라부루티닙 및 주요 대사체의 중간 말단 제거 반감기 (t1/2)는 각각 0.9 (범위: 0.6 내지 2.8) 시간 및 6.9 시간이었다. 아칼라부루티닙 평균 겉보기 경구 클리어런스 (CL/F)는 집단 약물동력학 분석에 기초하여 환자와 건강한 개체 사이에서 유사한 약물동력학을 가지면서 159 L/hr였다.
더 오랜 기간 동안 이용가능한 주요 대사체가 더 천천히 청소될수록, 더 빨리 청소된 아칼라부루티닙의 혈장 수준이 감소하고, 투여 간격에 걸쳐 새로 합성된 BTK 효소를 저해하고 효과적인 BTK 표적 점유율의 더 높은 수준을 유지함으로써 부가적 장점을 제공하는 것이 가능하다.
아칼라부루티닙은 CYP3A4/5, CYP2C8 및 CYP2C9의 약한 저해제이고, CYP1A2, CYP2B6, CYP2C19, 및 CYP2D6를 저해하지 않는다. 아칼라부루티닙은 CYP1A2, CYP2B6 및 CYP3A4의 약한 유도자이다. 주요 대사체는 CYP2C8, CYP2C9 및 CYP2C19의 약한 저해제이고, CYP1A2, CYP2B6, CYP2D6 및 CYP3A4/5를 저해하지 않는다. 주요 대사체는 CYP3A4의 약한 유도자이다.
치료 방법
한 구체예에서, 본발명은 포유동물에게 식 (I) 또는 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료적으로 효과적인 양을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 BTK-매개된 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예에서, 본발명은 포유동물에게 식 (I) 또는 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료적으로 효과적인 양을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
일부 구체예에서, 본발명은, 포유동물에서 방광암, 두경부암, 췌장 관세포암 (PDA), 췌장암, 결장암, 유방암, 유방암, 섬유육종, 중피종, 신장 세포암, 폐암, 흉선종, 전립선암, 결장직장암, 난소암, 급성 골수성 백혈병, 흉선암, 뇌암, 편평상피 세포암, 피부암, 안암, 망막아종, 흑색종, 안구내 흑색종, 구강 및 구강인두암, 위암, 위암, 경부암, 뇌, 목, 신장암, 신장암, 간암, 난소암, 전립선암, 결장직장암, 식도암, 고환암, 부인과암, 갑상선암, 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)-관련 암 (예를 들어, 림프종 및 카포시 육종), 바이러스-유도성암, 교아종, 식도 종양, 혈액학적 신생물, 원발성 중추신경계 림프종, 비-소-세포 폐 암 (NSCLC), 만성적 골수성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 식도 종양, 난포 중심 림프종, 두경부 종양, 간염 C 바이러스 감염, 간세포암, 호지킨병, 전이성 대장암, 다발성 골수종, 비-호지킨성 림프종, 난소 종양, 췌장 종양, 신장 세포암, 소-세포 폐암, 또는 단계 IV 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 과증식성 장애를 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로 치료하는 방법에 관한 것이다. 선택된 구체예에서, 본발명은 장애 가령, 비제한적으로 암 가령 급성 골수성 백혈병, 흉선, 뇌, 폐, 편평상피 세포, 피부, 안, 망막아종, 안구내 흑색종, 구강 및 구강인두, 방광, 위, 위, 췌장, 방광, 유방, 경부, 뇌, 목, 신장, 신장, 간, 난소, 전립선, 결장직장, 식도, 고환, 부인과, 갑상선, CNS, PNS, AIDS-관련 (예를 들어, 림프종 및 카포시 육종) 또는 바이러스-유도성 암을 포함하는 과증식성 장애를 BTK 저해제로 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 상기 약제학적 조성물은 비-암성 과증식성 장애 가령 피부의 양성 과형성 (예를 들어, 건선), 재발협착증, 또는 전립선 (예를 들어, 양성 전립선 비대증 (BPH))의 치료를 위한 것이다. 특정의 구체예에서, 과증식성 장애의 치료 방법은 본발명의 화합물 (예를 들어 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염)을 포유동물에게 투여하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 다른 BTK 저해제와 포유동물에게 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 아칼라부루티닙과 동시에 포유동물에게 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되는 유일한 BTK 저해제이다.
일부 구체예에서, 본발명은 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로 포유동물에서 염증성, 면역, 또는 자가면역 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. 특정의 구체예에서 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여된다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 다른 BTK 저해제와 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 아칼라부루티닙과 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되는 유일한 BTK 저해제이다. 선택된 구체예에서, 본발명은 또한 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다, 여기서 상기 질환은 종양 혈관형성, 만성적 염증성 질환, 류마티스성 관절염, 아테롬성 동맥 경화증, 염증성 장 질환, 피부 질환 가령 건선, 습진, 및 경피증, 타입 1 당뇨병, 타입 2 당뇨병, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 노인성 시력 감퇴, 혈관종, 신경교종 및 흑색종, 궤양성 대장염, 아토피성 피부염, 낭염, 척추관절염, 포도막염, 베체트병, 류마티스성 다발근육통증, 거대-세포 동맥염, 유육종증, 카와사키병, 소아 특발성 관절염, 화농성한선염, 쇼그렌 증후군, 건선성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 루프스, 루프스 신염, 사람 백혈구 항원 (HLA) 관련 질환, 자기항체, 면역요법, Addison 병, 자가면역 다내분비성 증후군 타입 1 (APS-1), 자가면역 다내분비성 증후군 타입 2 (APS-2), Grave 병, Hashimoto 갑상선염, 다내분비성 자가면역, 의원성 자가면역, 특발성 부갑상선 기능 저하, 백반, 및 루프스 신염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
"직접 투여하는 것"은 전구체 분자의 투여에 의한 간접 투여라기보다는, 식 (I), 또는 식 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 환자에게 직접 투여됨을 의미한다. 온혈 동물에의 식 (I) 또는 식 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 투여가 일반적 의미에서 언급된 구체예에서, 여기서 상기 화합물 또는 염이 직접 투여되는 추가의 구체예가 제공된다.
일부 구체예에서, 본발명은 류마티스성 관절염 (RA), 소아 RA, 소아 특발성 관절염, 골관절염, 건선성 관절염, 심상성 건선, 수포창, 수포성류천포창, 골관절염, 감염성 관절염, 진행성 만성적 관절염, 류마티스성 다발근육통증, 변형성 관절염, 외상성 관절염, 통풍성 관절염, Reiter 증후군, 다발연골염, 급성 활액막염, 강직성 척추염, 척추염, Sjogren 증후군 (SS), 전신성 루프스 낭창 (SLE), 원반모양 루프스 낭창 (원반모양 LE), 비대성 LE, 루프스 신염 (LN), 항인지질증, 피부근염, 다발근육염, 자가면역 혈액학적 장애, 혈소판감소증, 특발성 혈소판감소증 자반, 혈전성 혈소판감소증 자반, 자가면역 (냉) 응집소 질환, 자가면역 용혈성 빈혈, 저온글로불린혈증, 재생 불량성빈혈, 호중구감소증, 자가면역 맥관염, Behcet 병, 항-호중구 세포질항체 (ANCA)-관련 맥관염, 경피증, 전신성 경화증, 중증 근무력증, 다발성 경화증 (MS), 만성적 국소 뇌염, Guillian-Barre 증후군, 만성적 피로 증후군, 만성 피로 증후군, 시속척수염, 자가면역 포도막염, 결막염, 각결막염, Grave 병, 갑상선 관련 갑상선 안병증, 만성적 갑상선염, 현미경적 다발성혈관염을 동반한 육아종증, Wegener 육아종증, 자가면역 위염, 자가면역 염증성 장 질환, 궤양성 대장염, 크론병, 이식편 대 숙주 질환, 특발성 스프루, 자가면역 간염, 유효 간염 (급성 및 만성적), 특발성 폐성 섬유증, 기관지염, 폐성 간질성 섬유증, 만성적 염증성 폐성 질환, 유육종증, 특발성 막 신증, IgA 신증, 사구체경화증, 사구체신염 (신증 증후군을 동반하거나 동반하지 않는), 췌장염 및 타입 1 또는 타입 2 당뇨병로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 염증성, 면역, 또는 자가면역 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구체예에서, 본발명은 당뇨병성 망막증, 거대 세포 동맥염, 카와사키병, 염증성 장 질환, 과민성 장 질환, 특발성 스프루, 장질환, 대상포진후신경통, 류마티스성 다발근육통증, 원발 쓸개관 간경화, 중증 근무력증, 염증성 통증, 악액질, 치주질환, 중이염, 진폐증, 단핵증, 폐기종, 폐성 섬유증, 규폐증, 만성적 염증성 폐성 질환, 만성적 폐색성 폐성 질환, 폐성 부전증, 폐성 간질성 섬유증, 휘플병, 피부의 양성 과형성 (예를 들어, 건선), 감염에 의한 근육통, 감염 후 2차 악액질, 만성 피로 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 육아종증, 현미경적 다발성혈관염을 동반한 육아종증, 화농성한선염, 노인성 시력 감퇴, 및 아밀로이드증로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 염증성, 면역, 또는 자가면역 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구체예에서, 본발명은 염증성, 면역, 또는 자가면역 장애를 치료하는 방법을 제공한다, 여기서 염증성, 면역, 또는 자가면역 장애는 BTK-매개된 신호가 피부 내에서 염증성 세포의 모집, 활성화 및/또는 증식 및 염증성 매개자 및 항미생물 펩티드의 생산에 관여하는 피부병이다. 일부 구체예에서, 본발명은 피부병을 치료하는 방법을 제공하고 여기서 피부병은 전신성 질환의 피부 발현으로부터 유도되고 여기서 감작, 림프구 모집, 국소 또는 림프절 항원 제시 세포에 의한 림프구 스큐잉, 피부-상주성 또는 피부-귀소성 림프구의 활성화, 선천성면역 감각, 케라티노사이트 항미생물 반응, 상주성 또는 침윤성 골수성 수지상 세포, 형질 세포양 수지상 세포, 대식세포, 비만 세포, 호중구, 및/또는 Langerhans 세포의 활성화는 피부 병변의 발명을 유도한다. 일부 구체예에서, 본발명은 심상성 건선, 물방울 건선, 홍색피부 건선, 건선성 손톱, 고리모양 농포성 건선, 농포성 건선, 역 건선, 건선성 관절염, 점액루성각피증, 유사건선, 결절성홍반, 수장족저 한선염, 아토피성 피부염, 아토피성 습진, 지루성 습진, 지루성 피부염, 발한이상, 주사비, 피부성 루프스 낭창, 급성 피부성 루프스 낭창, 아급성 피부성 루프스 낭창, 원반모양 루프스 낭창, 비대 루프스 낭창, 루프스 신염 (LN), 루프스 낭창 지방층염, 다형홍반, 발바닥 무사마귀, 사마귀 루프스 낭창, 백반, 원형 탈모, 결절성양진, 편평태선, 색소성양진, 심상성 수포창, 수포성류천포창, 수포창 낭창, 결절성 수포창, 홍색피부 유육종증, 육아종피부염, 경피증, 전신성 경화증, 전신성 경화증의 피부성 발현, 미만성 피부성 비만세포증, 홍색피부 비만세포증, 환상육아종, 귓바퀴결절연골피부염, 접촉성 피부염, 약물 분출, 선형 IgA 수포성피부병, 호산성 피부염, 모공성각화증, 림프종양 구진, 만성 두창양 태성양 비강진 (PLEVA), 만성 태선모양잔비늘증 (PLC), 발열성 궤양괴사성 무카-하베르만병 (FUMHD), 만성적 두드러기, 류마티스성 호중구성 피부염, 냉각 글로블린 자반, 및 글로불린과잉혈 자반로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 피부병을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구체예에서, 본발명은 과증식성 장애를 치료하는 방법을 제공한다, 여기서 과증식성 장애는 골용해, 골파괴 공정, 골 리모델링 공정의 뷸균형, 또는 골 밀도 손실에서 용골 세포, 비만 세포, 및 골수성 세포 내 BTK 신호전달이 수반되는, 골의 만성적 자가면역 및 염증성 장애이다. 자가면역 성분을 종종 함께 가지는 이러한 특성의 질환은 골관절염, 전이로 인한 골 손실, 용골성 병소, 골다공증, 강직성 척추염, 척추관절염, 미만성 특발성 골격성 과골화증, 통풍성 관절염, 및 다발성 골수종과 관련된 골 장애를 포함한다. 일부 구체예에서, 본발명은 과증식성 장애를 치료하는 방법을 제공한다, 여기서 과증식성 장애는 골관절염, 전이로 인한 골 손실, 용골성 병소, 골다공증, 강직성 척추염, 척추관절염, 미만성 특발성 골격성 과골화증, 통풍성 관절염, 및 다발성 골수종과 관련된 골 장애로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 본발명은 활성화된 B 세포가 IgE 항체 및 비만 세포 탈과립화 이후 FcεR의 결합을 생성하여 프로-염증성 인자의 방출 및 국소 조직 반응의 급성 활성화 그리고 내피 세포, 신경수용체 및 장기 기능을 지배하는 다른 근위 구조에 대한 만성적 변화를 유도하는 알레르기 및 아토피성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 그러한 병태는 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 습진, 아토피성 습진, 심상성 수포창, 수포성수포창, 결정성 양진, Stevens-Johnson 증후군, 천식, 기도 과민증, 기관지 경련, 기관지염, 반응성 천식, 만성적 폐색성 폐성 질환, 타입 1 과민증, 타입 2 과민증, 알레르기성 비염, 알레르기성 결막염, 및 기도에 대한 다른 염증성 또는 폐색성 질환을 포함한다. 치료 또는 예방될 수 있는 비염은 특히 음식, 음식 첨가제, 곤충 독, 먼지 진드기, 꽃가루, 동물 재료, 금속 및 특정 약물에 대한 알레르기를 포함한다.
구체예에서, 본발명은 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것 단계를 포함하는 이식편-대-숙주 질환 (GVHD)을 치료하는 방법을 제공한다, 여기서 GVHD는 줄기 세포 이식편과 관련된 GVHD, 골수 이식편과 관련된 GVHD, 흉선 GVHD, 피부 GVHD, 위장관 GVHD, 간 GVHD, 급성 GVHD, 및 만성적 GVHD로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정의 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에 직접 투여된다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 다른 BTK 저해제와 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 아칼라부루티닙과 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되는 유일한 BTK 저해제이다.
한 구체예에서, 약제는 활성화 신호를 전달하고, 활성화된 내피 세포 상 인테그린을 인식하고, 또는 사이토킨 및/또는 케모킨 생성 세포 내로 즉석에서 분출 또는 발달시키기 위해 BTK 신호전달을 필요로 하는, 소교세포 활성화, 대식세포 모집 및 활성화, 골수성 세포를 포함하는 염증성 세포의 침윤을 수반하는 신경변성 질환을 저해한다. 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염에 의한 BTK의 저해는 단백질의 독성 응집과 관련된 신경변성 질환, 가령 베타 아밀로이드 침착물 (아밀로이드 플라크)의 축적, 신경원섬유엉킴, 타우 응집 및 과-인신화, 세포질내 봉입체, 세포질내 이중 나선 필라멘트, 폴리글루코산 봉입체, Papp-Lantos 체, 유비퀴틴-함유 봉입체, 및 단백질 분해의 불충분한 제어 및/또는 잘못 접힌 단백질의 배치 불능이 신경퇴행을 유도하는 장애를 저해함에 의해 질환 활성 또는 질환 진행을 저해한다. 그러한 질환은 돌발성 및 가족성 알츠하이머병, 약한 인지 손상, 뇌성 아밀로이드 혈관증, 레비소체 치매, 알츠하이머병의 레비소체 변형, Down 증후군, Huntington 병, 선상체흑질변성증, 다발성 시스템 위축 (MSA-P, MSA-C, Shy-Drager 증후군), 돌발성 또는 유전성 근위축성 측삭 경화증 (ALS 또는 Lou Gehrig 질환), 원발성 측색 경화증, 소아 원발성 측색 경화증, 신경변성 타우병증, 돌발성 또는 유전성 시누클레인병증, 신경세포 핵내 봉입체 질환, Parkinson 병, 크로모좀 17 (FTDP-17)과 관련된 파킨슨병을 동반한 전측두엽 치매를 포함한다.
구체예에서, 본발명은, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로, 포유동물에서 신경변성 장애를 치료하는 방법에 관한 것이고 여기서 교질 세포, 골수성 세포, Schwann 세포, 희돌기교세포 및 CNS 내 상주하는 다른 골수성-유래 세포 타입에서의 염증성 과정의 저해는 BTK 와의 그의 공유결합 상호작용 및 BTK 경로를 통한 신호전달의 저해를 통해 달성된다. 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 투여는 트리누클레오티드 반복 장애 (폴리글루타민 질환), Huntington 질환, 척수소뇌실조증 타입 1, 2, 3 (Machado-Joseph 질환), 6, 7, 및 17; 척수 및 연수 근위축, DRPLA(Dentatorubral pallidoluysian atrophy), 신경세로이드리포푸스신증, 전측두엽 치매 (Pick 병, 원발성 진행성 실어증, 및 의미적 치매), 피질기저 퇴행 및 진행성 핵상 마비로 인한 미스-폴딩된 및/또는 축적된 세포내 단백질에 대한 면역 인식 및 염증성 반응을 저해함에 의해 신경퇴행을 예방 또는 감소시킨다. 특정의 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에 직접 투여된다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 다른 BTK 저해제와 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 아칼라부루티닙과 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되는 유일한 BTK 저해제이다.
다른 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 투여는 포유동물에서 BTK를 저해하고 이에 의해 돌발성 또는 유전성 프리온 질환, 프리온-장애 가령 Creutzfeldt-Jakob 질환, 쿠루병, Gerstmann-Straussler-Scheinker 증후군, 및 올리브다리뇌소뇌위축, 돌발성 치명적 불면증, 치명적 가족성 불면증을 유도하는 장애로 인한 염증-매개된 신경세포 죽음 및 다른 신경염증성 효과를 경감하기 위해 사용될 수 있다. 가족성 프리온 장애의 경우, 포유동물에서 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 투여는 임상적 질환 발현 발생을 방지 및/또는 지연시키고, 또한 질환 증상을 감소시키고 임상 징후의 온셋 이후 질환 진행을 지연시키기 위해 또한 사용될 수 있다. 특정의 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에 직접 투여된다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 다른 BTK 저해제와 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 아칼라부루티닙과 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되는 유일한 BTK 저해제이다.
구체예에서, 본발명은, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로, 중추 및/또는 말초 신경계 내 자가면역 매개된 신경변성 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다. BTK 매개된 자기항체 생산의 저해를 통해, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 조직 내 상주하는 골수성 유래 세포의 활성화를 감소시키고 통과세포외배출, 혈관외유출손상 및 순환 골수성 세포 침윤를 저해하고, 이에 의해 염증을 감소시킬 수 있다. 또한, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 사용한 치료는 내피-소교세포 계면 및 간질성 공간에서의 염증성 과정의 활성화를 감소시킬 수 있고, 여기서 1) 소교세포 및 내피 세포 사이의 누화 변경, 2) 순환 또는 침윤성 T 세포에 대한 B 림프구 및 그의 동족 항원 제시의 활성화를 저해, 및 3) 사이토킨 및/또는 케모킨 생산을 감소시킴에 의해, 자가면역 신경증에서 림프양 응집물이 관찰되었다. 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염과의 공유결합 상호작용에 의한 BTK 저해의 이들 효과는 B 세포 활성화, 사이토킨 활성화, 및 APC 기능의 저해에 의해, 그리고 침윤성 단핵구, 활성화된 소교세포, 및 희돌기교세포를 포함하는 전문적 APCs의 발생 및 돌연변이 상태의 변경에 의해, 자가면역 T 세포의 회백색 물질 및 백색 물질로의 침윤을 감소시킨다고 생각된다. 따라서, 공유결합 BTK 저해제 가령 식 (I) 및 (II)의 화합물을 사용한 자가면역-매개된 신경변성 장애에 대한 치료 방법은 선천성면역 과정를 저해하고 그리고 항체 생산 및 자가면역 T 세포의 활성화를 감소시킴에 의해 질환 진행을 저해할 수 있다. 본발명은 시속척수염 (Devic 증후군), Guillain-Barre 증후군, 다발성 경화증, 임상적으로 분리된 증후군, 재발-경감 다발성 경화증, 악성 다발성 경화증, 1차 진행성 다발성 경화증, 시속척수염 스펙트럼 질환, 발로씨 동심성경화증, Marburg 다발성 경화증, 미만성 수초 탈락성 경화증, 만성적 국소 뇌염, Rasmussen 뇌염, 강직인간 증후군, 중증 근무력증, 항-MAG IgM 단클론감마글로불린병과 관련된 다발성신경병증을 포함하는 동물 모델에서의 실험적 자가면역 뇌병증 및 사람 신경증의 진행을 지연시키거나 차도를 유도할 수 있다. 특정의 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에 직접 투여된다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 다른 BTK 저해제와 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 아칼라부루티닙과 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되는 유일한 BTK 저해제이다.
다른 구체예에서, 본발명은, Bannworth 증후군 (Lyme 질환), 만성적 뇌척수염 (Lyme 질환); 대상포진후신경통; HTLV-1 관련 척수 장애; 진행성 다초점 백색질뇌증; 만성적 피로 증후군 (CFS), 만성 피로 증후군 (SEID), 근육통성 뇌척수염 (ME), 후-바이러스 피로 증후군 (PVFS), 만성적 피로 면역 기능 장애 증후군 (CFIDS); Meniere 병 (어지러움- 내이 내임파액 조절), Guillain-Barre 증후군, 근위축성 측삭 경화증, 진행성 구마비, 유아 진행성 구마비 (또는 소아 진행성 구마비), Bell 마비, 전정 신경염, 급성 산재성 뇌척수염, 재발성 또는 다상 산재성 뇌척수염, 및 만성적 뇌척수염을 포함하는, 포유동물에서의 감염으로부터 또는 후-감염 신경염증으로부터 발생하는 다발성신경증을 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로 치료하는 방법에 관한 것이다. 특정의 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에 직접 투여된다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 다른 BTK 저해제와 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되지만, 포유동물에게 아칼라부루티닙과 동시에 투여되지 않는다. 한 구체예에서, 식 (I) 또는 (II)의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 직접 투여되는 유일한 BTK 저해제이다. 한 구체예에서, 포유동물은 사람이다.
일부 구체예에서, 과증식성 장애는 방광암, 편평상피 세포암, 두경부암, 췌장 관세포암 (PDA), 췌장암, 결장암, 유방암, 유방암, 섬유육종, 중피종, 신장 세포암, 폐암, 흉선종, 전립선암, 결장직장암, 난소암, 급성 골수성 백혈병, 흉선암, 뇌암, 편평상피 세포암, 피부암, 안암, 망막아종, 흑색종, 안구내 흑색종, 구강암, 구강인두암, 위암, 위암, 경부암, 신장암, 신장암, 간암, 난소암, 전립선암, 결장직장암, 식도암, 고환암, 부인과암, 갑상선암, 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)-관련 암 (예를 들어, 림프종 및 카포시 육종), 바이러스-유도성 암 가령 경부 암 (사람 유두종바이러스), B-세포 림프세포증식성 질환, 비인두 암 (Epstein-Barr 바이러스), 카포시 육종 및 1차 유출 림프종 (카포시 육종 허프스바이러스), 간세포 암 (간염 B 및 간염 C 바이러스), 및 T-세포 백혈병 (인간 T-세포 백혈병 바이러스-1), 교아종, 식도 종양, 두경부 종양, 전이성 대장암, 두경부 편평상피 세포암, 난소 종양, 췌장 종양, 신장 세포암, 혈액학적 신생물, 소-세포 폐암, 비-소-세포 폐암, 단계 IV 흑색종, 및 신경교종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 고체 종양 암이다.
일부 구체예에서, 과증식성 장애는 만성적 림프구 백혈병 (CLL), 소 림프구 백혈병 (SLL), 비-호지킨성 림프종 (NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 맨틀 세포 림프종 (MCL), 호지킨성 림프종, B 세포 급성 림프아구 백혈병 (B-ALL), Burkitt 림프종, 발덴스트룀 거대글로불린혈증 (WM), Burkitt 림프종, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 또는 골수섬유증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 B 세포 혈액학적 약성 종양이다. 구체예에서, 본발명은 포유동물에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이고, 여기서 암은 만성적 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, DLBCL (활성화된 B-세포 (ABC) 및 종자중심B-세포 (GCB) 서브타입을 포함하는), 난포 중심 림프종, 호지킨병, 다발성 골수종, 무통 비-호지킨성 림프종, 및 성숙 B-세포 ALL이다.
일부 구체예에서, 과증식성 장애는 CLL의 서브타입이다. CLL의 많은 서브타입이 확인되었다. CLL은 백혈구 세포 내에서 면역 글로불린 중쇄 가변 영역(IgVH) 돌연변이 상태에 대해 종종 분류된다. R. N. Damle, et al., Blood 1999, 94, 1840-47; T. J. Hamblin, et al., Blood 1999, 94, 1848-54. IgVH 돌연변이를 갖는 환자는 IgVH 돌연변이가 없는 환자보다 일반적으로 더 길게 생존한다. CLL을 확인하기 위해 ZAP70 발현 (양성 또는 음성)이 또한 사용된다. L. Z. Rassenti, et al., N. Engl. J. Med. 2004, 351, 893-901. CLL을 확인하기 위해 예를 들어 파이로씨퀀씽에 의한, CpG3에서의 ZAP-70의 메틸화가 또한 사용된다. R. Claus, et al., J. Clin. Oncol. 2012, 30, 2483-91; J. A. Woyach, et al., Blood 2014, 123, 1810-17. CLL은 또한 Binet 또는 Rai 기준 하에서 질환 단계에 의해 분류된다. J. L. Binet, et al., Cancer 1977, 40, 855-64; K. R. Rai, T. Han, Hematol. Oncol. Clin. North Am. 1990, 4, 447-56. 다른 통상의 돌연변이, 가령 11q 결실, 13q 결실, 및 17p 결실이 널리-공지된 기술 가령 형광 즉석 하이브리드화 (FISH)를 사용하여 평가될 수 있다. 구체예에서, 본발명은 사람에서의 CLL을 치료하는 방법에 관한 것이다, 여기서 CLL은 IgVH 돌연변이 음성 CLL, ZAP-70 양성 CLL, CpG3에서 ZAP-70 메틸화 CLL, CD38 양성 CLL, 17p13.1 (17p) 결실에 의해 확인되는 만성적 림프구 백혈병, 및 11q22.3 (11q) 결실에 의해 확인되는 CLL로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 과증식성 장애는 Richter 변형을 격은 CLL이다. Richter 증후군으로도 또한 공지된 Richter 변형을 평가하는 방법은, P. Jain 및 S. O'Brien, Oncology, 2012, 26, 1146-52에 기술되어 있다. Richter 변형은 환자의 5-10%에서 관찰되는 CLL의 서브타입이다. Richter 변형은 CLL로부터의 진행성 림프종의 발병을 수반하고 일반적으로 나쁜 예후를 가진다.
일부 구체예에서, 과증식성 장애는 환자에서 CLL 또는 SLL이고, 여기서 환자는 림프구 증가증에 민감하다. 구체예에서, 본발명은 환자에서 CLL 또는 SLL을 치료하는 방법에 관한 것이다, 여기서 환자는 바이러스 감염, 박테리아 감염, 원생동물 감염, 또는 비장 절제 후 상태로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 장애에 의해 유발된 림프구 증가증을 나타낸다. 구체예에서, 상기 구체예 중 어느 것에서의 바이러스 감염은 감염성 단핵증, 간염, 및 거대세포바이러스로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 구체예에서, 상기 구체예 중 어느 것에서의 바이러스 감염은 백일해, 결핵, 및 브루셀라병로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
일부 구체예에서, 과증식성 장애는 골수증식성 장애 (MPDs), 골수증식성 신생물, 진성다혈구증 (PV), 본태성혈소판혈증 (ET), 원발성 골수섬유증 (PMF), 골수이형성 증후군, 만성적 골수성 백혈병 (BCR-ABL1-양성), 만성적 호중구성 백혈병, 만성적 호산성 백혈병, 또는 비만세포증로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
한 구체예에서 치료법에서의 사용을 위한 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공된다.
한 구체예에서 약제의 제조에서의 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
한 구체예에서 생체외 제조되는 약제의 제조에서의 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
약제가 일반적 의미로 언급된 구체예에서, 약제가 생체외 제조되는 추가의 구체예가 존재한다.
한 구체예에서 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애 포유동물에서의 치료에서의 사용을 위한 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (II)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공된다.
한 구체예에서, BTK에 의해 매개된 질환의 치료에서의 사용을 위한 식 (I)의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이 제공되고, 여기서 질환은 과증식성 질환이다. 과증식성 질환은 여기서 언급된 어느 과증식성 질환일 수 있다.
실시예
여기에 포함된 구체예를 다음 실시예와 관련하여 이제 기술한다. 이들 실시예는 단지 예시적 목적으로 제공되고 여기에 포함된 개시물은 어떤 식으로도 이들 실시예에 제한되는 것으로서 간주되어서는 안되고, 여기서 제공된 교시의 결과로서 명백해지는 어떠한 및 모든 변형을 포함한다고 간주되어야만 한다. 실시예에 기술된 시약은 상업적으로 이용가능하거나 문헌에 기술된 절차에 따라서 제조될 수 있다.
실시예 1 - 분석 방법
본발명에 포함된 화합물을 확인하기 위해 다음 액체 크로마토그래피 (LC) 및 질량 분광계 (MS) 방법이 사용될 수 있다.
방법 A
LC-MS 분광계 (Agilent)
검출기: DAD (210, 254 및 280 nm)
질량 검출기: API-ES (10-2000 amu, pos./neg. 이온 mode)
용리제 (이동상): A: MilliQ-물 내 0.1% 포름산, B: 아세토니트릴
칼럼: Waters XTerra C18 MS, 50x4.6 mm ID, 2.5 μm
유속: 0.5 mL/min
구배 용리 프로그램:
시간 (min) A (%) B (%)
0.0 90 10
7.0 10 90
7.1 0 100
10.0 90 10
방법 B:
HPLC: Gilson 분석 HPLC 시스템
칼럼: Phenomenex Luna C18(2) (100 x 2.00 mm, 5 μm)
검출기: UV/Vis (210/240 nm)
유속: 1 mL/min
용리제 (이동상): A: 아세토니트릴, B: 아세토니트릴 / MilliQ-물 = 1/9 (v/v), C: MilliQ-물 내 0,1% TFA.
구배 용리 프로그램:
시간 (min) A (%) B (%) C (%)
0.00 0 97 3
11.90 97 0 3
14.40 97 0 3
15.40 0 97 3
실시예 2 - 식 (I)의 화합물의 합성.
Figure pct00005
4-[8-아미노-3-(피롤리딘-2-일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-N-피리딘-2-일벤즈아미드의 제조.
이 화합물을 본질적으로 WO2013/010868에 기술된 방법에 따라서 제조하였다.
4-[8-아미노-3-(3,4-디하이드로-2H-피롤-5-일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-N-피리딘-2-일벤즈아미드의 제조.
4-[8-아미노-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-N-(2-피리딜)벤즈아미드 (1.13 g, 2.83 mmol)을 DCM (50 mL) 내에 현탁시켰다. N-클로로숙신이미드 (416 mg, 3.11 mmol)을 부가하고 혼합물을 21℃에서 교반하였다. 10 min 후, 반응 혼합물은 투명한 옅은 황색 용액이었다. 트리에틸아민 (868 μL, 6.23 mmol)을 부가하고 혼합물을 계속 21℃에서 교반하였다. 15 min 교반 후, 백색 침전물이 형성되었다. 침전물을 필터 상에서 수집하고, 아세토니트릴 (20 mL)로 세척하고 공기-건조시켰다. 이에 의해 표제 화합물을 백색 고체로서 얻었다 (800 mg, 70%). MS (ESI+) m/z 398.2 (M+H)+; 1H NMR (400 Mhz, DMSO-d6, 300K): δ = 7.72 (1H, d, J = 5.0 Hz), 6.98 (1H, d, J = 5.0 Hz), 4.45 (1H, t, J = 6.9 Hz), 2.99 (1H, br s), 2.77 - 2.90 (2H, m), 2.09 - 2.20 (1H, m), 1.99 - 2.09 (1H, m), 1.78 - 1.89 (1H, m), 1.66 - 1.78 (1H, m).
4-(8-아미노-3-(4-(부트-2-인아미노)부타노일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일)-N-(피리딘-2-일)벤즈아미드의 제조.
4-[8-아미노-3-(3,4-디하이드로-2H-피롤-5-일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-N-(2-피리딜)벤즈아미드 (167 mg, 1.69 mmol)을 메탄올 (26.8 mL) 내에 분산시켰다. 교반하면서, 농축 염산 (12 M, 670 μL, 8.04 mmol)을 부가하였다. 30 min 후, 백색 침전물이 형성되었다. 모든 용매를 증발시키고, 톨루엔 (10 mL)으로 헹구고 다시 증발시켰다. 얻어진 백색 고체를 아세톤 (70 mL) 내에 분산시키고, 트리에틸아민 (705 μL, 5.06 mmol)을 부가하였다. 아세톤 (2 mL) 내 부티오닐 클로라이드 (207.4 mg, 2.02 mmol)의 용액을 한방울씩 부가하고, 백색 고체를 서서히 용해시켰다. 휘발물을 진공에서 제거하고 잔사를 클로로포름 (200 mL) 내에 취하고, 물 (200 mL) 및 식염수로 세척하였다. 수상을 클로로포름 (2 X 50 mL)으로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 회전 증발에 의해 농축시켜서 657 mg의 옅은 황색 고체를 얻었다. 크루드 생성물을 DCM 내 2-5% MeOH (10% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는)로 용리하면서 실리카겔 (90 g) 상에서 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 순수한 생성물 분획을 모으고 진공에서 농축시켜, 228 mg (27%)의 옅은 황색 고체를 얻었다. LC-MS (방법 A) Rt: 3.76 min; m/z 482.1 (M+H)+; HPLC (방법 B) Rt: 5.79 min; 순도 99.8%; 1H NMR (400 Mhz, DMSO-d6, 300K): δ = 10.91 (1H, s), 8.72 (1H, d, J = 4.8 Hz), 8.54 (1H, t, J = 6.0 Hz), 8.42 (1H, d, J = 4.9 Hz), 8.22 (3H, t, J = 8.5 Hz), 7.87 (1H, dt, J1 = 1.9 Hz), 7.82 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.51 (1H, d, J = 4.8 Hz), 7.19 (1H, dd, J1 = 0.9 Hz, J2 = 4.8 Hz), 6.47 (2H, s), 3.11 - 3.26 (4H, m), 1.93 (3H, s), 1.83 (2H, m).
실시예 3 - 식 (II)의 화합물의 합성.
Figure pct00006
디클로로메탄 (250 mL) 내 4-브로모-2-메톡시-벤조산 (15.3 g, 66.2 mmol)의 용액에 피리딘-2-아민 (6.9 g, 72.8 mmol) 및 DIPEA (34.6 mL, 198.7 mmol)을 부가하였다. HATU (32.7 g, 86.1 mmol)을 부가하고 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물 (200 mL)을 부가하고 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축하였다. DCM (50 mL)을 부가하고 용액을 주말에 걸쳐 결정화하도록 방치하였다. 고체를 여과제거하고, 디에틸 에테르 (10 mL)로 2회 세척하고 감압 하에서 건조시켜 4-브로모-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드 (14.4 g, 66.8%)를 옅은 갈색 결정으로서 얻었다. LC-MS (방법 A) Rt: 6.05 min; m/z 307.0 + 309.0 (1:1) (M+H)+.
1,4-디옥산 (175 mL) 내 4-브로모-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드 (14.4 g, 46.9 mmol)의 용액에 bis(피나콜라타)디보론 (14.3 g, 56.3 mmol) 및 포타슘 아세테이트 (9.2 g, 93.8 mmol)을 부가하였다. PdCl2(dppf). DCM (1.9 g, 2.3 mmol)을 부가하고 혼합물을 100 oC에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (150 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트 (150 mL)로 2회 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 플래시 칼럼 크로마토그래피 (헵탄 내 0 내지 50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 감압 하에서 농축시켰다. 잔사를 헵탄 (150 mL) 내에 현탁시키고 30 분 동안 교반하였다. 고체를 여과제거하고 헵탄 (15 mL)으로 2회 세척하고, 2-메톡시-N-(2-피리딜)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤즈아미드 (10.4 g, 62.6%)를 백색 고체로서 얻었다. LC-MS (방법 A) Rt: 6.86 min; m/z 355.2 (M+H)+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 300 K): δ = 10.51 (1H, s), 8.36 (1H, m), 8.26 (1H, d, J = 8.4 Hz), 7.89 (1H, d, J =7.6 Hz), 7.85 (1H, m), 7.41 (1H, dd, J1 = 7.6 Hz, J2 = 0.9 Hz), 7.38 (1H, s), 7.17 (1H, m), 4.01 (3H, s), 1.33 (12H, s).
Figure pct00007
1-브로모-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]이미다조[1,5-a]피라진-8-아민의 제조.
자기 교반기를 구비한 2000 mL 둥근 바닥 플라스크를 37% 수소 클로라이드 (660 mL, 7971 mmol)로 충전하였다. 벤질 (2S)-2-(8-아미노-1-브로모-이미다조[1,5-a]피라진-3-일)피롤리딘-1-카복실레이트 황산 (205 g, 399 mmol)을 한방울씩 부가하고 (대략 30 min) 및 반응 혼합물을 8 시간 동안 50 ℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 8 h에 걸쳐 냉각하도록 방치하였다. 반응 혼합물을 MTBE (3 X 1200 mL)로 세척하였다. 20-30 ℃ (MTBE 층이 나타남)에서 온도를 유지하면서 물 내33% 소듐 하이드록사이드 (~600 mL)을 대략 14의 pH에 도달할 때까지 수상에 한방울씩 부가하였다. 부가 후, 수상을 1 hr 동안 교반하고, 디클로로메탄 (2 X 1500 mL)으로 추출하였다. 활성 탄소 (10 g)을 조합시킨 DCM 층에 부가하고 혼합물을 40 ℃에서 1 hr 동안 교반하였다. 고체를 디칼리트 상에서 여과에 의해 제거하고 여액을 감압 하에서 농축시켜 1-브로모-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]이미다조[1,5-a]피라진-8-아민 (112.3 g, 397.9 mmol, 99.8% 수율)를 회색 고체로서 얻었다. LC-MS (방법 A) Rt: 0.673 min; m/z 282.0 + 284.0 (1:1) (M+H)+; 1H NMR (400 Mhz, DMSO-d6, 300K): δ = 7.72 (1H, d, J = 5.0 Hz), 6.98 (1H, d, J = 5.0 Hz), 4.45 (1H, t, J = 6.9 Hz), 2.99 (1H, br s), 2.77 - 2.90 (2H, m), 2.09 - 2.20 (1H, m), 1.99 - 2.09 (1H, m), 1.78 - 1.89 (1H, m), 1.66 - 1.78 (1H, m).
4-[8-아미노-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드의 제조.
1-브로모-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]이미다조[1,5-a]피라진-8-아민 (112.3 g, 398.03 mmol), 2-메톡시-N-(2-피리딜)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤즈아미드 (148.04 g, 417.93 mmol) 및 포타슘 아이오다이드 (19.82 g, 119.41 mmol)을 3-목 3L 플라스크 내로 로딩하였다. 2-부탄올 (550 mL) 및 물 (880 mL)을 부가하고 얻어진 현탁액을 질소 가스를 발포시키면서 교반하였다. 트리에틸 아민 (165.97 mL, 1194.1 mmol)을 부가하고, 현탁액을 천천히 용해시켰다. Bis(tert-부틸디실코헥실포스핀)디클로로 팔라듐(II) (Pd-166, 1.37 g, 1.99 mmol)을 부가하고 반응 혼합물을 다시 10 분 동안 탈산소화시키고 82 ℃에서 밤새 교반하여 갈색 현탁액을 얻었다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각하도록 방치하였다. 혼합물을 이후 40 ℃까지 가열하고 물 (1800 mL)을 부가하고, 부가 후 다시 실온까지 냉각하도록 방치하였다. 혼합물을 여과하고 케이크를 물 (500 mL) 및 헵탄 (300 mL)으로 세척하였다. 고체를 헵탄 (500 mL) 내에 현탁시키고 공-증발시켰다. 고체를 다시 헵탄 (500 ml)과 공-증발시키고 감압 하에서 50 ℃에서 밤새 건조시켜 4-[8-아미노-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드 (142.11 g, 330.9 mmol, 83.1% 수율)를 옅은 황색 고체로서 얻었다. LC-MS (방법 A) Rt: 2.885 min; m/z 430.1 (M+H)+; HPLC (방법 B) Rt: 1.483 min; 순도 98.1%; 1H NMR (400 Mhz, DMSO-d6, 300K): δ = 10.49 (1H, s), 8.37 (1H, m), 8.30 (1H, d, J = 8.3 Hz), 8.04 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.87 (1H, dt, J1 = 1.9 Hz, J2 = 7.8 Hz), 7.79 (1H, d, J = 5.0 Hz), 7.43 (1H, s), 7.39 (1H, dd, J1 = 1.4 Hz, J2 = 8.0 Hz), 7.18 (1H, dd, J1 = 1.0 Hz, J2 = 8.0 HzHz), 7.09 (1H, d, J = 4.9 Hz), 6.20 (2H, s), 4.55 (1H, t, J = 7.5 Hz), 4.07 (3H, s), 2.90 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.25 (1H, m), 2.12 (1H, m), 1.89 (1H, m), 1.78 (1H, m).
4-[8-아미노-3-(3,4-디하이드로-2H-피롤-5-일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드의 제조.
4-[8-아미노-3-[(2S)-피롤리딘-2-일]이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드 (250 mg, 0.58 mmol)을 넣고 DCM (20 mL) 내 부분적으로 용해시켰다. N-클로로숙신이미드 (85.1 mg, 0.64 mmol)을 부가하고 혼합물을 21℃에서 교반하였다. 10min 후 반응 혼합물은 투명한 황색 용액이었다. 트리에틸아민 (177.1 μL, 1.27 mmol)을 부가하고 혼합물을 계속 21℃에서 교반하였다. 30min 교반 후 침전물이 형성되었다. 침전물을 원심분리를 사용하여 분리하고, 표제 화합물을 회색 고체로서 얻었다 (187.7 mg, 75.8%). HPLC (클로로 중간체) (방법 B) Rt: 5.596 min.
4-[8-아미노-3-(4-아미노부타노일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드 트리하이드로클로라이드의 제조
4-[8-아미노-3-(3,4-디하이드로-2H-피롤-5-일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드 (187.7 mg, 0.44 mmol)을 메탄올 (8 mL) 내에 취했다. 농축 염산 (174.5 μL, 2.09 mmol)을 부가하였다. 혼합물을 1.5h 동안 교반하였다. 고체를 여과에 의해 얻고, 정량적 수율 (269 mg)로 옅은 황색 고체로서 표제 화합물을 얻었다. HPLC (방법 B) Rt: 3.790 min.
4-(8-아미노-3-(4-(부트-2-인아미노)부타노일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일)-2-메톡시-N-(피리딘-2-일)벤즈아미드의 제조.
4-[8-아미노-3-(4-아미노부타노일)이미다조[1,5-a]피라진-1-일]-2-메톡시-N-(2-피리딜)벤즈아미드 트리하이드로클로라이드 (250 mg, 0.451 mmol)을 아세톤 (2 mL)과 함께인 DCM (14 mL) 내에 현탁시켰다. HATU (289.7 mg, 0.762 mmol), 트리에틸아민 (254.7 μL, 1.833 mmol) 및 2-부티논산 (64.1 mg, 0.762 mmol)을 부가하였다. 혼합물을 밤새 21℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 크루드 생성물을 플래시 크로마토그래피 (DCM 내 0-7% 메탄올)를 사용하여 정제하였다. 생성물 분획을 조합시키고 진공에서 농축시켰다. 잔사를 메탄올 (2 mL) 내에 현탁시키고 용매를 원심분리를 사용하여 제거하였다. 고체를 디에틸에테르 (2 mL)로 세척하고 진공에서 건조시켜 표제 화합물을 회색 고체로서 얻었다 (76.2 mg, 33.1%). LC-MS (방법 A) Rt: 4.300 min; m/z 512.2 (M+H)+; HPLC (방법 B) Rt: 6.499 min; 순도 98.8%; 1H NMR (400 Mhz, DMSO-d6, 300K): δ = 10.51 (1H, s), 8.73 (1H, d, J = 4.8 Hz), 8.55 (1H, t, J = 6.3 Hz), 8.38 (1H, m), 8.30 (1H, d, J = 8.5 Hz), 8.06 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.88 (1H, dt, J1 = 1.9 Hz, J2 = 4.3 Hz), 7.52 (1H, d, J = 4.8 Hz), 7.50 (1H, d, J = 1.3 Hz), 7.44 (1H, dd, J1 = 1.5 Hz, J2 = 8.0 Hz), 7.19 (1H, m), 6.55 (2H, s), 4.08 (3H, s), 3.20 (2H, t, J = 7.2 Hz), 3.16 (2H, q, J = 6.0 Hz), 1.93 (3H, s), 1.83 (2H, t, J = 7.9 Hz).
실시예 4 - BTK 및 BTK 내 Cys481로서 동일 위치에서 시스테인을 갖는 다른 키나제의 키나제 활성의 측정
키나제 방법 식 I
IC50 (nM)		 식 II
IC50 (nM)
BTK IMAP 5.0 ± 1.0 9.3
TEC LanthaScreen 345 ± 34
ITK IMAP > 10,000 > 10,000
TXK Z'-LYTE 567 ± 174 59
BMX Z'-LYTE 15 ± 2
EGFFR Z'-LYTE > 10,000
ERBB2 Z'-LYTE 552 ± 166
ERBB4 Z'-LYTE 343 ± 23
BLK Z'-LYTE 6170 ± 3348
JAK3 Z'-LYTE > 10,000
BTK 효소 활성을, 아래에 요약된 바와 같이 IMAP (고정화된 금속 이온 친화성-기초 형광 편광) 어세이를 사용하여 측정한다.
BTK 효소 (His-BTK (Millipore catalog# 14-552))를 KR 버퍼 (10 mM 트리스-HCl, 10 mM MgCl2, 0.01% Tween-20, 0.05% NaN3, 1 mM DTT, 2 mM MnCl2, pH 7.2) 내 0.4 U/mL로 희석한다.
시험 화합물의 2 mM 내지 63.2 nM의 일련의 log10 희석액을 100% DMSO 내에서 제조한다. DMSO 내 희석액을 이후 KR-버퍼 내에서 50-배 희석한다. 어세이에서의 최종 화합물 농도 범위는 10 μM 내지 0.316 nM 범위였다.
어세이는 다음과 같이 수행한다: KR 버퍼 내 5 μL시험 화합물/웰 (어세이에서의 최종 DMSO 농도는 1%)을 5 μl의 0.4 U/mL BTK 효소/웰 (어세이에서의 최종 농도는 0.1 U/mL)과 혼합한다. 시험 화합물 및 BTK 효소는 KR-버퍼 내 5 μL의 200 nM 형광 표지된 기질 펩티드 /웰 (Blk/Lyntide 기질, 예를 들어 #R7188/#R7233, Molecular Devices) 부가 이전에 실온에서 60 분 예비-배양시킨다. 어세이에서 최종 펩티드 기질 농도는 50 nM이다. 키나제 어세이는 5 μL의 KR-버퍼 내 20 μM ATP /웰 (BTK IMAP 어세이에서 최종 ATP 농도는 5 μM ATP, Km ATP이다) 부가에 의해 개시한다. 2 시간 동안 실온에서 배양 이후 효소 반응은 40 μL/웰 IMAP Progressive Binding Solution (1:600 Progressive Binding Solution와 함께 75% 1× 버퍼 A 및 25% 1× 버퍼 B를 사용하는 공급자 (Molecular Devices) 프로토콜에 따라서) 부가에 의해 중단시킨다. 암소에서 실온에서 60 min 배양 후 FP 신호를 판독한다. 비드에 대한 인산화 기질 펩티드의 결합으로 인한 회전에서의 차이를 결정하기 위해 수평 및 수직 필터를 사용하여 535 nm에서의 형광을 측정한다. ATP를 갖는 및 ATP가 없는 대조구의 판독치 차이 (ΔmPi)의 퍼센트로서 값을 계산한다. IC50 값을 Dotmatics에서의 실험 결과의 커브 피팅에 의해 결정한다. 결과를 표 1에서 보고한다.
ITK 효소 활성을 아래에 요약된 바와 같이 IMAP (고정화된 금속 이온 친화성-기초 형광 편광) 어세이를 사용하여 측정한다.
ITK 효소 (Millipore #14-660M )를 KR 버퍼 (10 mM 트리스-HCl, 10 mM MgCl2, 0.01% Tween-20, 0.1% NaN3, 1 mM DTT, 2 mM MnCl2, pH 7.5) 내0.2 U/mL로 희석한다
시험 화합물의 2 mM 내지 63.2 nM의 일련의 log10 희석액을 100% DMSO 내에서 제조한다. DMSO 내 희석액을 이후 KR-버퍼 내에서 50-배 희석한다. 어세이에서의 최종 화합물 농도 범위는 10 μm 내지 0.316 nM 범위였다.
어세이는 다음과 같이 수행한다: KR 버퍼 내 5 μL시험 화합물/웰 (어세이에서의 최종 DMSO 농도는 1%)을 5 μL의 /웰 0.2 U/mL ITK 효소 (어세이에서의 최종 농도는 0.05 U/mL (8.4 nM))와 혼합한다. 시험 화합물 및 ITK 효소를 KR-버퍼 내 5 μL의 200 nM 형광 표지된 기질 펩티드 /웰 (Blk/Lyntide 기질 #R8124, Molecular Devices) 부가 이전에 60 분 실온에서 예비-배양시킨다. 어세이에서 최종 펩티드 기질 농도는 50 nM이다. 5 μL의 KR-버퍼 내 20 μM ATP /웰 (ITK IMAP 어세이에서 최종 ATP 농도는 5 μM ATP, Km ATP이다)의 부가에 의해 키나제 어세이를 개시한다. 실온에서 2 시간 동안 배양 이후 40 μL IMAP Progressive Binding Solution /웰 (800× 희석된 비드 (Progressive Binding Solution, Molecular Devices #R8124)와 함께 60% 1× 버퍼 A 및 40% 1× 버퍼 B를 사용하여 공급자 (Molecular Devices) 프로토콜에 따라서) 부가에 의해 효소 반응을 중단시킨다. 암소에서 실온에서 60 min 배양 후 FP 신호를 판독한다. 비드에 대한 인산화 기질 펩티드의 결합으로 인한 회전에서의 차이를 결정하기 위해 수평 및 수직 필터를 사용하여 535 nm에서의 형광을 측정한다. ATP를 갖는 및 ATP가 없는 대조구의 판독치 차이 (ΔmPi)의 퍼센트로서 값을 계산한다. IC50 값을 Dotmatics에서의 실험 결과의 커브 피팅에 의해 결정한다.
TEC 효소 활성을 아래에 요약된 바와 같이 ThermoFisher로부터의 LanthaScreen 어세이를 사용하여 측정한다.
TEC 효소 (LifeTech #PV3269) 및 Eu-항-HIS 항체 (Invitrogen #PV5596)를 혼합하고 키나제 버퍼 (50 mM Hepes pH 7.5 + 10 mM MgCl2 + 1 mM EGTA + 0.01% Brij-35) 내에서 3 및 6 nM, 각각으로 희석한다. 효소 및 항체에 대한 어세이에서의 최종 농도는 각각 1 및 2 nM이다.
트레이서 (Kinase Tracer 178, Invitrogen #PV5593)를 키나제 버퍼 내에서 3 nM로 희석한다. 어세이에서의 최종 농도는 1 nM이다.
시험 화합물의 1 mM 내지 3.16 nM의 일련의 log10 희석액을 100% DMSO 내에서 제조한다. DMSO 내 희석액을 이후 키나제 버퍼 (50 mM Hepes pH 7.5 + 10 mM MgCl2 + 1 mM EGTA + 0.01% Brij-35) 내에서 33-배 희석한다.
어세이는 다음과 같이 수행한다: 5 μL의 /웰 TEC 효소 및 EU-항-His 항체 희석액을 키나제 버퍼 내에서 5 μL 트레이서 희석액 /웰 및 5 μL의 화합물 희석액 /웰과 혼합한다. 어세이에서의 최종 화합물 농도는 10 μM 내지 0.316 nM 범위이고, 어세이에서 1% DMSO 최종 농도이다. 실온에서 2h 배양 이후 615 nm 및 665 nm에서의 TR-FRET 신호를 판독한다. 트레이서가 있는 및 없는 대조구의 판독치 차이 (S/N)의 퍼센트로서 표현되는 값을 계산하기 위해 비 665/615을 사용한다. IC50 값을 Dotmatics에서의 실험 결과의 커브 피팅에 의해 결정한다.
BMX, TXK, EGFR, ERBB2, ERBB4, JAK3, BLK 키나제 활성을 Thermo Fisher에서 Z'-LYTE 어세이를 사용하여 측정한다. 10-점 용량 반응 (어세이에서의 최종 농도는 희석 단계 당 3-배 희석으로10 μM 내지 0.5 nM 범위였다)을 ATP 부가에 의한 키나제 반응 개시 이전에 키나제를 사용하여 시험 화합물의 1h 배양으로 생성시켰다. 어세이에서의 ATP 농도는 상이한 키나제에 대한 Km ATP였다. IC50 값을 Thermo Fisher에서 실험 결과의 커브 피팅에 의해 결정한다.
실시예 5 - 화합물의 공유결합을 연구하기 위한 ATP 경쟁을 사용한 BTK IMAP
ATP 경쟁을 사용한BTK 효소 활성을 IMAP (고정화된 금속 이온 친화성-기초 형광 편광) 어세이를 사용하여 측정하였다.
BTK 효소 (Millipore)을 키나제 반응 (KR) 버퍼 (10 mM 트리스-HCl, 10 mM MgCl2, 0.01% Tween-20, 0.1% NaN3, 1 mM DTT, 2 mM MnCl2, pH 7.5) 내에서 각각 16 nM로 희석한다.
시험 화합물의 1 mM 내지 31.6 nM의 일련의 log10 희석액을 100% DMSO 내에서 제조하였다. DMSO 내 희석액을 이후 KR-버퍼 내에서25-배 희석한다. 최종 화합물 농도는 10 μM 내지 0.316 nM 범위였다.
어세이는 다음과 같이 수행한다: KR 버퍼 내 5 μL시험 화합물/웰 (어세이에서의 최종 DMSO 농도는 1%)을 5 μl BTK 또는 ITK 효소/웰 (어세이에서의 최종 농도는 BTK 및 ITK에 대해 각각 4 및 8 nM)와 혼합하였다. KR-버퍼 내 5 μL의 200 nM Fluorescein 표지된 기질 펩티드 (Blk/Lyntide 기질, Molecular Devices) /웰 부가 이전에 시험 화합물 및 키나제 효소를 0, 30, 또는 60 min 예비-배양시킨다. 어세이에서 최종 펩티드 기질 농도는 50 nM였다. 키나제 어세이를 KR-버퍼 내에서 5 μL의 20, 100, 또는 400 μM ATP (최종 ATP 농도는5, 25, 또는 100 μM ATP) /웰 부가에 의해 개시하였다. 실온에서 2h 배양 이후 효소 반응을 800x 희석 비드와 함께 60% 1x 버퍼 A 및 40% 1x 버퍼 B를 사용하여 제품 설명서에 따라서 40 μL IMAP Progressive Binding Solution (Molecular Devices) /웰 부가에 의해 중단시킨다. 암소에서 실온에서 60 min 배양 후 FP 신호를 판독한다. 비드에 대한 인산화 기질 펩티드의 결합으로 인한 회전에서의 차이를 결정하기 위해 수평 및 수직 필터를 사용하여 535 nm에서의 형광을 측정하였다. ATP를 갖는 및 ATP가 없는 대조구의 판독치 차이 (ΔmPi)의 퍼센트로서 값을 계산한다. IC50 값을 Dotmatics를 사용하여 실험 결과의 커브 피팅에 의해 결정한다.
표준 IMAP 어세이는 대사체 M27가 BTK 저해제임을 나타내었지만, M27이 공유결합 저해제인지를 결정하기 위해 추가 시험이 필요했다. 가변적 예비-배양 시간 (0, 30, 및 60 분) 및 ATP 농도 (5, 25 및 100 μM)를 사용하여 BTK IMAP ATP 경쟁 어세이에서 M27을 시험했다. 표 2 및 도 2에서의 결과는 M27가 BTK의 공유결합 저해제임을 확인한다. 예비-배양 시간 증가는 M27에 대한 효능 변동을 유발하였다. 추가로, M27와 함께 BTK의 예비-배양 이후 ATP 경쟁의 손실이 있고, 이는 공유결합된 화합물에 대해 대표적인 결과이다.
ATP, μM IC50 (nM)
M27
0 분 30 분 60 분
5 27.3 12.6 6.9
25 72.4 18.1 9.5
100 101.0 23.7 10.8
실시예 6 - 화합물의 공유결합을 연구하기 위한 BTK-WT 및 BTK-C481S LanthaScreen
BTK 와일드 타입 (BTK-WT) 및 BTK Cys481Ser 돌연변이 (BTK-C481S)에 대한 저해 활성을 제조자 프로토콜에 따라서 ThermoFisher로부터의 LanthaScreen 어세이 기술을 사용하여 측정하였다.
BTK-WT 또는 BTK-C481S (Genscript)을 혼합하고 키나제 버퍼 (50 mM Hepes pH 7.5 + 10 mM MgCl2 + 1 mM EGTA + 0.01% Brij-35) 내 Eu-항-GST 항체 (Invitrogen)로 각각 15 및 6 nM로 희석하였다. 효소 및 항체에 대한 어세이에서의 최종 농도는 각각 5 및 2 nM이다.
트레이서 (Kinase Tracer 236, Invitrogen)를 키나제 버퍼 내에서 90 nM로 희석한다. 어세이에서의 최종 농도는 30 nM이다.
시험 화합물의 1 mM 내지 3.16 nM의 일련의 log10 희석액을 100% DMSO 내에서 제조한다. DMSO 내 희석액을 이후 키나제 버퍼 (50 mM Hepes pH 7.5 + 10 mM MgCl2 + 1 mM EGTA + 0.01% Brij-35) 내에서 33-배 희석한다.
어세이는 다음과 같이 수행한다: 5 μL BTK-WT 또는 BTK-C481S 효소 및 EU-항-GST 항체 희석액 /웰을 키나제 버퍼 내에서 5 μL/웰 트레이서 희석액 및 5 μL의 /웰 화합물 희석액과 혼합한다. 어세이에서의 최종 화합물 농도는 어세이에서 1% DMSO 최종 농도로 10 μM 내지 0.316 nM 범위였다. 혼합물을 실온에서 암소에서 및 상이한 배양 시간 (5 min, 10 min, 20 min, 30 min, 40 min, 60 min, 90 min, 120 min, 180 min 및 300 min)에서 배양하고 TR-FRET 신호를 615 nm 및 665 nm에서 판독한다. 트레이서가 있는 및 없는 대조구의 판독치 차이 (S/N)의 퍼센트로서 표현되는 값을 계산하기 위해 비 665/615을 사용한다. 각각의 시간점에 대한 IC50 값을 Dotmatics에서의 실험 결과의 커브 피팅에 의해 결정한다.
M27의 공유결합 저해를 확인하기 위해, 제조자 프로토콜에 따라서 ThermoFisher로부터의 LanthaScreen 어세이 기술을 사용하여 M27의 저해 활성을 BTK-WT 및 BTK Cys481Ser 돌연변이 (BTK C481S)에 대해 연구하였다. BTK 및 BTK-C481S와 함께 화합물 배양 이후 상이한 시점에서 IC50 측정을 수행하였다. 도 9에 도시된 결과는 BTK에의 M27의 공유결합을 확증한다. BTK-WT 및 BTK-C481S 사이의 효능 차이는 BTK에의 상기 화합물의 공유결합의 효과를 나타낸다. BTK-C481S를 사용하여 관찰된 IC50은 가역적 저해 효능을 반영하고 시간 경과로 변하지 않거나 거의 변하지 않는다. BTK-WT로 관찰된 효능 증가는 BTK의 ATP 포켓에서 C481에 공유결합하는 M27의 능력으로부터 유래한다. 공유결합에서의 동력학은 BTK에 대한 상기 화합물의 친화성 및 친전자체의 반응성에 의해 결정된다.
BTK-WT에 대한 LanthaScreen 어세이로부터 M27에 대한 데이터를 사용하여, 저해 상수는 부모 및 대사체에 대해 계산될 수 있다. 저해 상수를 더욱 정확하게 결정하기 위해, 배양 시작 이후 부가적 더 빠른 시점을 포함하는 LanthaScreen 실험을 반복한다. 이들 실험 결과는 표 3에 요약된다. Ki 및 kinact 변수는 어세이에서 사용된 트레이서에 대해 측정된 Km = 102 nM로, Krippendorff et al (J Biomol Screen. 2009, 14(8):913-23)의 방법에 따라서, 시간 경과에 따른 IC50 값으로부터 유래되었다.
화합물 Ki (nM) kinact (s-1) Kinact / Ki (s-1*M-1)*
M27 188 ± 9 0.0031 ± 0.0003 1.65E+04 ± 7.77E+02
실시예 7 - Ramos B 세포에서의 BTK 표적 점유율
Ramos B 세포 (ATCC, cat no. CRL-1923)을 900 μL DMEMF12 + 10% FBS + 2 mM L-Glut아민 + Pen/Strep의 총 부피에서 웰 당 2x106 세포에서 24-웰 배양 플래이트 내에서 플래이팅하였다. 5-7% CO2 및 37℃에서 1h 세포를 휴식하도록 방치한다.
시험 화합물의 10 mM 내지 316 nM의 일련의 log10 희석액을 100% DMSO 내에서 제조한다, 이후 배지 내로 100-배 희석한다.
각각의 웰에 대해, 100 μL을 이후 900 μL Ramos B 세포를 함유하는 웰 플래이트로 옮겼다. 어세이에서의 최종 화합물 농도 범위는0.1% 최종 DMSO 농도에서 10 μM 내지 0.316 nM이고, 5-7% CO2 및 37℃에서 2h 동안 배양하였다. 이후, 아래에 요약된 바와 같이 BTK 표적 점유 ELISA를 사용하여 BTK의 표적 점유율의 측정을 위해 세포를 수집하였다.
Ramos B 세포 샘플 내 약물-결합 BTK의 퍼센트를 다음과 같이 ELISA 기초 방법에 의해 결정하였다: OptiPlate 96-웰 플래이트 (Perkin Elmer)을 125 ng/웰 항-BTK Ab (BD Biosciences)로 코팅하고 BSA (Sigma-Aldrich)로 봉쇄하였다. Ramos B 세포를 함유하는 샘플을 50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 250 mM 수크로스, 5 mM MgCl2, 1 mM 디티오트레이톨 (DTT), 0.05% 디기토닌, 및 프로테아제 저해제 칵테일 (Sigma-Aldrich)를 함유하는 얼음 냉각 용해 버퍼 내에서 분해하였다. 세포 용해물을 이후 완전 BTK 점유를 유도하는 포화 농도인 1 μM 아칼라부루티닙의 존재 또는 부재 하에서 1h 동안 배양하였다. BTK 표적 점유 ELISA에서 웰 당 사용된 세포 용해물의 최종 양은 2x105 Ramos B 세포를 나타낸다. 과량의 아칼라부루티닙과 함께 배양되지 않은 세포 용해물의 신호와의 차이는 BTK 없음 (BTK 저해제에 의해 점유되지 않음)을 나타낸다. 샘플을 식 (II) (100 nM)의 비오틴 태그 화합물과 함께 1h 동안 배양하였다. 이 프로브는 BTK 내 ATP 포켓이 공유결합 BTK 저해제에 의해 점유되지 않는 때 ATP 포켓 내에서 Cys481에 공유결합할 것이다. 각각의 샘플을 이후 제조된 Opti플래이트에 이중으로 부가하고 주변 온도에서 2h 배양하였다. 플래이트를 4 시간 PBS + 0.05% Tween20로 세척하였다. 스트렙타비딘-HRP (Invitrogen; ELISA 등급)을 100 μL/웰 (120 ng/mL)에서 부가하고 1 시간 동안 실온에서 배양하였다. 플래이트을 PBS + 0.05% Tween20로 3 시간 세척하고 이후 PBS (Tween 20 없이)로 2 시간 세척하였다. 100 μL SuperSignal ELISA Femto Substrate (ThermoFisher Scientific) /웰을 부가하고 이후 화학 발광을 1 분 후 측정하였다 (EnVision® 플래이트 판독기; PerkinElmer). 각각의 샘플에 대한 BTK 점유율의 퍼센트를 비히클 대조구에 대해 계산한다. 외인성 아칼라부루티닙이 없는 비히클 대조구로부터의 신호는 100% BTK 없음 (또는 0% BTK 점유된)을 나타내고, 반면 외인성 아칼라부루티닙을 갖는 비히클 대조구로부터의 신호는 0% BTK 없음 (또는 100% 점유된 BTK)을 나타낸다. 1 μM 아칼라부루티닙을 갖는 각각 세포 용해물의 배양은 BTK 없음과 관련없는 배경 신호에 대한 보정을 위해 사용되었다:
% BTK 없는 샘플 X = (샘플 X - 샘플 X+약물[1uM]) / (1 일 예비용량 - 1 일 예비용량+약물[1uM]) x 100%
% 점유된 BTK = 100% - % BTK 없음
세포 내 BTK에의 M27의 결합을 Ramos (Burkitt 림프종) 세포주를 사용하여 수행하였다. Ramos 세포를 M27의 용량 범위와 함께 배양하고 BTK 표적 점유율을 ELISA에 의해 결정하였다. 결과를 도 10 및 표 4에 나타낸다. 이들 데이터는 BTK 표적 점유 ELISA의 설정에 기초하여 M27가 Ramos 세포 내에서 BTK에 공유결합함을 또한 확인하고, 가역적 저해제는 어세이 동안 세척제거되었을 것이다.
파라미터 M27
IC50 (nM)
BTK 표적 점유율 39
실시예 8 - 사람 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) CD69 어세이 및 In WB 어세이.
전혈을 헤파린-코팅된 Vacutainer 튜브(BD Biosciences, San Jose, CA) 내에서 수집하고 Ficoll-Hypaque (Pharmacia, Uppsala, Sweden)를 사용하여 PBMCs의 분리를 위해 사용하였다. 분리된 PBMCs을 이후의 사용시까지 90%FCS/10% DMSO 내에 동결보존하였다.
저온 저장된 세포를 37℃ 수조 내에서 녹이고, RPMI/1% FCS로 희석하고, 2 시간 세척하고, 이후 96 웰 플래이트 내에서 RPMI/10% FCS 내 웰 당 2 × 105 세포에서 플래이팅하였다.
시험 화합물의 10 mM 내지 316 nM의 일련의 log10 희석액을 100% DMSO 내에서 제조한다, 이후 RPMI/1% FCS 내로 100-배 희석하였다. 각각의 웰에 대해, 10 μL을 이후 90μL의 PBMC 세포를 함유하는 깊은 웰 플래이트로 옮겼다. 어세이에서의 최종 화합물 농도 범위는 10 μM 내지 0.316 nM 범위였다, 최종 DMSO 농도는 0.1%였다. 염소 F(ab')2 항-IgM (Southern Biotech, #2022-14, 어세이에서 최종 농도 5 μg/mL)로 18 시간 동안 자극 이전에 PBMCs를 이후 시험 화합물의 존재 또는 부존재 하에서 37℃에서 2 h 동안 배양하였다.
항-IgM로 자극 이후, PBMCs을 항-CD69-FITC, 항-CD19-BV421 (BD Biosciences #555530 및 #562440, 각각) 및 7AAD (Life Technologies #A1310)와 함께 30 min 동안 얼음 상에서 배양하였다. 유동 세포 분석법을 수행하고 CD19+ 게이트 라이프 B 세포 내 CD69-FITC 채널로부터 형광 값을 얻었다. GraphPad Prism를 사용하여 실험 결과의 커브 피팅에 의해 EC50 값을 결정한다.
PBMC 어세이: 동결보존된 PBMC을 녹이고, 세척하고, 96-웰 플래이트 내 RPMI+10% FBS 내 2 X 105 세포/웰에서 현탁시켰다. 시험 화합물을 ½ log 용량 적정 (최종 농도는 10 μM 내지 0.316 nM)를 사용하여 부가하고 37℃, 5% CO2에서 2h 배양 동안 배양하였다. 어세이에서의 최종 DMSO 농도는 0.1%였다. 실험의 세척 부분에 대해, PBMCs을 회전침전시키고 세포 펠릿을 시험 화합물 없이 배지 내에 재현탁시켰다. 이를 2회 반복하였다. 세척물 없이 또는 이와 함께인 PBMCs에, 염소 항-사람 IgM F(ab')2 항체 (Southern Biotech)을 부가하고 (최종 농도 5 μg/mL) 및 세포를 추가로 18 h 동안 배양하였다. 세포를 이후30 분 동안 4℃에서 CD69-FITC 및 CD19-BV421 항체 (BD Biosciences)로 염색하였다. 비결합 항체를 세척제거 후, 가시화 수단으로서 7-AAD을 부가하고, 이후 FACSVerse 장비 (BD Biosciences)를 사용하여 유동 세포 분석법을 수행하였다. FCSExpress 분석 소프트웨어(De Novo Software)를 사용하여 CD19+ B 림프구 게이트로부터 CD69-양성 세포의 퍼센트를 얻었다. Dotmatics를 사용하여 실험 결과의 커브 피팅에 의해 EC50 값을 결정한다.
WB 어세이: 45 μL 혈액을 1:1 RPMI+1% FBS 내에 희석하고 상기한 바와 같이 시험 화합물과 함께 배양하였다. 혈액 세포를 10 μg/mL 마우스 항-사람 항-IgD 항체 (BD Biosciences, 어세이에서 최종 농도는 10 μg/mL)로 자극하고 18h 동안 배양하였다. 세포를15 분 동안 실온에서 CD69-FITC, CD86-PE, 및 CD19-BV421 (BD Biosciences)로 염색하고, 이후 FACS Lysing 용액 (BD Biosciences)으로 RBCs 용해를 수행하였다. 세포를 1mL/웰 PBS + 0.5% BSA로 3 시간 세척하고, 이후 유동 혈구계산 분석을 수행하였다. FCSExpress 분석 소프트웨어 (De Novo Software)를 사용하여 CD19+ B 림프구 게이트로부터 CD69에 대한 중간 형광 강도 값을 얻었다. Dotmatics를 사용하여 실험 결과의 커브 피팅에 의해 EC50 값을 결정한다.
1차 B 세포 내 BTK 저해제의 효능은 저해제 존재 하에서 BCR-활성화 후 기능적 변화를 평가하는 어세이에서 평가될 수 있다. 신호전달 단백질에 대한 특이적 인산화 에피토프의 저해 및 BCR 활성화 가령 세포 표면 상 CD86 (B7-2) 및 CD69의 증가된 발현의 더욱 원위 측정은 유동 세포 분석법 (Report R2013003A 참조)에 의해 측정될 수 있다. 이 연구에서, CD69 발현에 대한 M27의 효과를 평가하였다. 사람 PBMC 제제 및 WB에서의 CD69 상향-조절의 결과가 표 5에 요약되어 있다.
어세이 M27
EC50 (nM)		 식 (II) EC50 (nM)
hPBMC: 항-IgM-유도성 CD69 26 ± 16 19 ± 6
hWB: 항-IgD-유도성 CD69 64 ± 6 137 ± 36
데이터 (표 5)는 M27가 BTK의 공유결합 저해제이고, M27가 Ramos B 세포 내에서 BTK에 공유결합하고 완전히 점유한다는 사실을 확인시켜준다.
실시예 9: M27의 키놈 프로파일링
모든 가능한 키나제에 대해 1 μM의 단일 용량에서 DiscoveRx에서 M27를 사용한 키나제 프로파일링을 수행하였다 (KINOMEscan). 전체적인 키나제 선택성 점수가 표 6에 있다. 결과는 1 μM에서 M27에 대한 전체적인 키나제 선택성 프로파일을 나타낸다. 키나제는 1 μM에서 M27에 대해 >65% 저해되었고 DiscoveRx에서 용량 반응을 보였다. 이 실험으로부터 결정된 Kd 값을 표 7에 나열한다. M27은 TXK를 제외하고 키나제의 거의 동일한 세트에 대해 IC50 값 <1 μM를 가졌지만, BRK (PTK6)에 대해 부가적 저해를 가졌다.
M27에 대한 KINOMEscan (DiscoveRx scanMAX) 프로파일링으로부터의 선택성 점수 결과
키나제 선택성 점수
M27
S(35) 0.013
S(10) 0.005
S(1) 0
표 7: 1 μM에서 M27에 대해 >65% 저해를 갖는 키나제의 Kd 값 (NT = 비시험됨)
키나제 Kd (nM)
M27
BTK 29
BMX 190
BRK (PTK6) 150
ERBB2 120
ERBB4 970
LIMK1 400
MEK5 69
TEC 40
TXK 1100

Claims (13)

  1. 다음 구조를 갖는 식 (I) 또는 식 (II)의 화합물:
    Figure pct00008
    ,
    Figure pct00009

    (I) (II)
    또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  2. 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애의 치료에서의 사용을 위한 제 1항의 화합물.
  3. 이를 필요로 하는 환자에서의 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애의 치료용 약제의 제조을 위한 제 1항의 화합물의 용도.
  4. 제 4항에 있어서, 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애는 방광암, 두경부암, 췌장 관세포암 (PDA), 췌장암, 결장암, 유방암, 유방암, 섬유육종, 중피종, 신장 세포암, 폐암, 흉선종, 전립선암, 결장직장암, 난소암, 급성 골수성 백혈병, 흉선암, 뇌암, 편평상피 세포암, 피부암, 안암, 망막아종, 흑색종, 안구내 흑색종, 구강 및 구강인두암, 위암, 위암, 경부암, 뇌, 목, 신장암, 신장암, 간암, 난소암, 전립선암, 결장직장암, 식도암, 고환암, 부인과암, 갑상선암, 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)-관련 림프종, 카포시 육종, 바이러스-유도성암, 교아종, 식도 종양, 혈액학적 신생물, 비-소-세포 폐암, 만성적 골수성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 식도 종양, 난포 중심 림프종, 두경부 종양, 간염 C 바이러스 감염, 간세포암, 호지킨성 림프종, 전이성 대장암, 다발성 골수종, 비-호지킨성 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 난소 종양, 췌장 종양, 신장 세포암, 소-세포 폐암, 단계 IV 흑색종, 종양 혈관형성, 만성적 염증성 질환, 류마티스성 관절염, 아테롬성 동맥 경화증, 염증성 장 질환, 건선, 습진, 경피증, 당뇨병, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 노인성 시력 감퇴, 혈관종, 신경교종, 흑색종, 궤양성 대장염, 아토피성 피부염, 낭염, 척추관절염, 포도막염, 베체트병, 류마티스성 다발근육통증, 거대-세포 동맥염, 유육종증, 카와사키병, 소아 특발성 관절염, 한선성 농피증, 쇼그렌 증후군, 건선성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 루프스, 및 루프스 신염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 용도.
  5. 제 1항의 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서의 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애를 치료하는 방법.
  6. 제 5항에 있어서, 과증식성 장애는 방광암, 두경부암, 췌장 관세포암 (PDA), 췌장암, 결장암, 유방암, 유방암, 섬유육종, 중피종, 신장 세포암, 폐암, 흉선종, 전립선암, 결장직장암, 난소암, 급성 골수성 백혈병, 흉선암, 뇌암, 편평상피 세포암, 피부암, 안암, 망막아종, 흑색종, 안구내 흑색종, 구강 및 구강인두암, 위암, 위암, 경부암, 뇌, 목, 신장암, 신장암, 간암, 난소암, 전립선암, 결장직장암, 식도암, 고환암, 부인과암, 갑상선암, 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)-관련 림프종, 카포시 육종, 바이러스-유도성암, 교아종, 식도 종양, 혈액학적 신생물, 비-소-세포 폐암, 만성적 골수성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 식도 종양, 난포 중심 림프종, 두경부 종양, 간염 C 바이러스 감염, 간세포암, 호지킨병, 전이성 대장암, 다발성 골수종, 비-호지킨성 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 난소 종양, 췌장 종양, 신장 세포암, 소-세포 폐암, 및 단계 IV 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애는 종양 혈관형성, 만성적 염증성 질환, 류마티스성 관절염, 아테롬성 동맥 경화증, 염증성 장 질환, 피부 질환 가령 건선, 습진, 및 경피증, 타입 1 당뇨병, 타입 2 당뇨병, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 노인성 시력 감퇴, 혈관종, 신경교종 및 흑색종, 궤양성 대장염, 아토피성 피부염, 낭염, 척추관절염, 포도막염, 베체트병, 류마티스성 다발근육통증, 거대-세포 동맥염, 유육종증, 카와사키병, 소아 특발성 관절염, 화농성한선염, 쇼그렌 증후군, 건선성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 루프스, 루프스 신염, 사람 백혈구 항원 (HLA) 관련 질환, 자기항체, 면역요법, Addison 병, 자가면역 다내분비성 증후군 타입 1 (APS-1), 자가면역 다내분비성 증후군 타입 2 (APS-2), Grave 병, Hashimoto 갑상선염, 다내분비성 자가면역, 의원성 자가면역, 특발성 부갑상선 기능 저하, 백반, 및 루프스 신염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  8. 제 1항의 화합물의 치료적으로 효과적인 양을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서의 고체 종양 암을 치료하는 방법, 여기서 치료적으로 효과적인 양은 고체 종양 암 세포와, 대식세포, 단핵구, 비만 세포, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 조절 T 세포, 자연 킬러 세포, 골수성-유래 억제자 세포, 조절 B 세포, 호중구, 수지상 세포, 및 섬유아세포로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 미세환경 사이의 신호전달을 저해하기에 효과적인 방법.
  9. 제 8항에 있어서, 고체 종양 암은 췌장암, 유방암, 난소암, 흑색종, 폐암, 두경부암, 및 결장직장 암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  10. 제 1항의 화합물 및 적어도 한 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  11. 제 10항에 있어서, 이를 필요로 하는 환자에서의 과증식성 장애, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애의 치료에서의 사용을 위한 약제학적 조성물.
  12. 제 11항에 있어서, 과증식성 장애는 방광암, 두경부암, 췌장 관세포암 (PDA), 췌장암, 결장암, 유방암, 유방암, 섬유육종, 중피종, 신장 세포암, 폐암, 흉선종, 전립선암, 결장직장암, 난소암, 급성 골수성 백혈병, 흉선암, 뇌암, 편평상피 세포암, 피부암, 안암, 망막아종, 흑색종, 안구내 흑색종, 구강 및 구강인두암, 위암, 위암, 경부암, 뇌, 목, 신장암, 신장암, 간암, 난소암, 전립선암, 결장직장암, 식도암, 고환암, 부인과암, 갑상선암, 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)-관련 림프종, 카포시 육종, 바이러스-유도성암, 교아종, 식도 종양, 혈액학적 신생물, 비-소-세포 폐암, 만성적 골수성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 식도 종양, 난포 중심 림프종, 두경부 종양, 간염 C 바이러스 감염, 간세포암, 호지킨병, 전이성 대장암, 다발성 골수종, 비-호지킨성 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, 난소 종양, 췌장 종양, 신장 세포암, 소-세포 폐암, 및 단계 IV 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
  13. 제 12항에 있어서, 염증성 장애, 면역 장애, 또는 자가면역 장애는 종양 혈관형성, 만성적 염증성 질환, 류마티스성 관절염, 아테롬성 동맥 경화증, 염증성 장 질환, 피부 질환 가령 건선, 습진, 및 경피증, 타입 1 당뇨병, 타입 2 당뇨병, 당뇨병성 망막증, 미숙아 망막증, 노인성 시력 감퇴, 혈관종, 신경교종 및 흑색종, 궤양성 대장염, 아토피성 피부염, 낭염, 척추관절염, 포도막염, 베체트병, 류마티스성 다발근육통증, 거대-세포 동맥염, 유육종증, 카와사키병, 소아 특발성 관절염, 화농성한선염, 쇼그렌 증후군, 건선성 관절염, 소아 류마티스성 관절염, 강직성 척추염, 크론병, 루프스, 루프스 신염, 사람 백혈구 항원 (HLA) 관련 질환, 자기항체, 면역요법, Addison 병, 자가면역 다내분비성 증후군 타입 1 (APS-1), 자가면역 다내분비성 증후군 타입 2 (APS-2), Grave 병, Hashimoto 갑상선염, 다내분비성 자가면역, 의원성 자가면역, 특발성 부갑상선 기능 저하, 백반, 및 루프스 신염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
KR1020197020718A 2016-12-21 2017-12-21 브루톤 티로신 키나제의 이미다조피라진 저해제 KR102559851B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662437633P 2016-12-21 2016-12-21
US62/437,633 2016-12-21
US201762569028P 2017-10-06 2017-10-06
US62/569,028 2017-10-06
PCT/IB2017/058319 WO2018116259A1 (en) 2016-12-21 2017-12-21 Imidazopyrazine inhibitors of bruton's tyrosine kinase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190095403A true KR20190095403A (ko) 2019-08-14
KR102559851B1 KR102559851B1 (ko) 2023-07-25

Family

ID=60972291

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197020718A KR102559851B1 (ko) 2016-12-21 2017-12-21 브루톤 티로신 키나제의 이미다조피라진 저해제

Country Status (15)

Country Link
US (1) US10858364B2 (ko)
EP (1) EP3558968B1 (ko)
JP (1) JP7022131B2 (ko)
KR (1) KR102559851B1 (ko)
CN (1) CN110291080B (ko)
AU (1) AU2017383236B2 (ko)
BR (1) BR112019012604A2 (ko)
CA (1) CA3046578A1 (ko)
CL (1) CL2019001674A1 (ko)
ES (1) ES2856248T3 (ko)
IL (1) IL267374B (ko)
MX (1) MX2019007156A (ko)
SA (1) SA519402217B1 (ko)
WO (1) WO2018116259A1 (ko)
ZA (1) ZA201903932B (ko)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2928164T3 (es) 2015-10-19 2022-11-15 Incyte Corp Compuestos heterocíclicos como inmunomoduladores
MX2018006207A (es) 2015-11-19 2018-09-05 Incyte Corp Compuestos heterociclicos como inmunomoduladores.
EA201891494A1 (ru) 2015-12-22 2019-01-31 Инсайт Корпорейшн Гетероциклические соединения в качестве иммуномодуляторов
EP3452476B1 (en) 2016-05-06 2021-12-15 Incyte Corporation Heterocyclic compounds as immunomodulators
ES2905980T3 (es) 2016-05-26 2022-04-12 Incyte Corp Compuestos heterocíclicos como inmunomoduladores
HUE060256T2 (hu) 2016-06-20 2023-02-28 Incyte Corp Heterociklusos vegyületek mint immunmodulátorok
US20180016260A1 (en) 2016-07-14 2018-01-18 Incyte Corporation Heterocyclic compounds as immunomodulators
WO2018044783A1 (en) 2016-08-29 2018-03-08 Incyte Corporation Heterocyclic compounds as immunomodulators
TWI795381B (zh) 2016-12-21 2023-03-11 比利時商健生藥品公司 作為ｍａｌｔ１抑制劑之吡唑衍生物
WO2018119236A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 Incyte Corporation Triazolo[1,5-a]pyridine derivatives as immunomodulators
EP3558973B1 (en) 2016-12-22 2021-09-15 Incyte Corporation Pyridine derivatives as immunomodulators
KR20190111025A (ko) 2016-12-22 2019-10-01 인사이트 코포레이션 면역조절제로서의 벤조옥사졸 유도체
HRP20230090T1 (hr) 2018-03-30 2023-03-17 Incyte Corporation Heterociklički spojevi kao imunomodulatori
SG11202011165TA (en) 2018-05-11 2020-12-30 Incyte Corp Tetrahydro-imidazo[4,5-c]pyridine derivatives as pd-l1 immunomodulators
ES2966457T3 (es) 2018-06-18 2024-04-22 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de pirazol como inhibidores de MALT1
MX2022001671A (es) 2019-08-09 2022-05-13 Incyte Corp Sales de un inhibidor de pd-1/pd-l1.
EP4037773A1 (en) 2019-09-30 2022-08-10 Incyte Corporation Pyrido[3,2-d]pyrimidine compounds as immunomodulators
AU2020385113A1 (en) 2019-11-11 2022-05-19 Incyte Corporation Salts and crystalline forms of a PD-1/PD-L1 inhibitor
US11760756B2 (en) 2020-11-06 2023-09-19 Incyte Corporation Crystalline form of a PD-1/PD-L1 inhibitor
JP2023548859A (ja) 2020-11-06 2023-11-21 インサイト・コーポレイション Ｐｄ－１／ｐｄ－ｌ１阻害剤ならびにその塩及び結晶形態を作製するためのプロセス
WO2022099018A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Incyte Corporation Process of preparing a pd-1/pd-l1 inhibitor
CN114807038B (zh) * 2022-02-11 2023-11-10 四川大学华西第二医院 一种小鼠淋巴瘤相关成纤维细胞肿瘤细胞HXLyAF-KT及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120034613A (ko) * 2009-04-16 2012-04-12 센트로 내셔널 드 인베스티가시오네스 온콜로지카스 (씨엔아이오) 키나아제 억제제로서 사용을 위한 이미다조피라진
WO2015110923A2 (en) * 2014-01-21 2015-07-30 Acerta Pharma B.V. Methods of treating chronic lymphocytic leukemia and small lymphocytic leukemia usng a btk inhibitor
WO2016196776A2 (en) * 2015-06-02 2016-12-08 Pharmacyclics Llc. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101315610B1 (ko) * 2006-09-22 2013-10-10 파마시클릭스, 인코포레이티드 브루톤 티로신 키나제 억제제
EP2548877A1 (en) * 2011-07-19 2013-01-23 MSD Oss B.V. 4-(5-Membered fused pyridinyl)benzamides as BTK-inhibitors
JP2014522860A (ja) * 2011-07-19 2014-09-08 メルク・シャープ・アンド・ドーム・ベー・フェー Ｂｔｋ阻害剤としての４−イミダゾピリダジン−１−イル−ベンズアミドおよび４−イミダゾトリアジン−１−イル−ベンズアミド
ES2950569T3 (es) * 2011-07-19 2023-10-11 Merck Sharp & Dohme (S)-4-(8-amino-3-(1-(but-2-inoil)pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-1-il)-2-metoxi-n-(piridin-2-il)benzamida como inhibidor de la Btk
EP3076974A1 (en) * 2013-12-05 2016-10-12 Acerta Pharma B.V. Therapeutic combination of a pi3k inhibitor and a btk inhibitor
TW201618774A (zh) * 2014-08-11 2016-06-01 艾森塔製藥公司 使用ｂｔｋ抑制劑透過調變腫瘤微環境來治療實體腫瘤及其他疾病之方法
WO2016106623A1 (en) * 2014-12-31 2016-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Benzamide imidazopyrazine btk inhibitors
WO2016106627A1 (en) * 2014-12-31 2016-07-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Btk inhibitors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120034613A (ko) * 2009-04-16 2012-04-12 센트로 내셔널 드 인베스티가시오네스 온콜로지카스 (씨엔아이오) 키나아제 억제제로서 사용을 위한 이미다조피라진
WO2015110923A2 (en) * 2014-01-21 2015-07-30 Acerta Pharma B.V. Methods of treating chronic lymphocytic leukemia and small lymphocytic leukemia usng a btk inhibitor
WO2016196776A2 (en) * 2015-06-02 2016-12-08 Pharmacyclics Llc. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase

Also Published As

Publication number Publication date
EP3558968A1 (en) 2019-10-30
US10858364B2 (en) 2020-12-08
IL267374B (en) 2021-07-29
CN110291080A (zh) 2019-09-27
WO2018116259A1 (en) 2018-06-28
EP3558968B1 (en) 2021-02-03
AU2017383236B2 (en) 2022-02-10
JP7022131B2 (ja) 2022-02-17
US20190345164A1 (en) 2019-11-14
MX2019007156A (es) 2019-09-05
ES2856248T3 (es) 2021-09-27
IL267374A (en) 2019-08-29
KR102559851B1 (ko) 2023-07-25
BR112019012604A2 (pt) 2019-11-26
AU2017383236A1 (en) 2019-06-27
CN110291080B (zh) 2022-07-08
SA519402217B1 (ar) 2022-04-19
JP2020514264A (ja) 2020-05-21
ZA201903932B (en) 2021-01-27
CA3046578A1 (en) 2018-06-28
CL2019001674A1 (es) 2019-11-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102559851B1 (ko) 브루톤 티로신 키나제의 이미다조피라진 저해제
JP7265275B2 (ja) Ｓｈｐ２阻害剤およびその使用
JP6617130B2 (ja) Ｂｔｋ阻害剤としての４−イミダゾピリダジン−１−イル−ベンズアミドおよび４−イミダゾトリアジン−１−イル−ベンズアミド
JP2019508467A (ja) 癌治療用の２−シアノイソインドリン誘導体
EP3630749B1 (en) 2-quinolone derived inhibitors of bcl6
CA3150689A1 (en) Heterocyclic compounds as kinase inhibitors
JP2016525135A (ja) ＢＥＴタンパク質およびポロ様キナーゼの二重阻害薬としての置換されたジヒドロピリド［３，４−ｂ］ピラジノン類
JP2019524716A (ja) バニン１酵素の阻害薬としての新規のピリミジンカルボキサミド
WO2015180642A1 (en) Certain protein kinase inhibitors
AU2013344049A1 (en) ALK kinase inhibitors
KR20140063700A (ko) 키나제 억제제로서의 피라졸로[4,3-c]피리딘 유도체
EP3993802A1 (en) Heterocyclic compounds as kinase inhibitors
TW202340209A (zh) 用於治療癌症之環狀2-胺基-3-氰基噻吩及衍生物
KR20060127947A (ko) 증식성 질환의 치료에 유용한 피롤로 피리미딘 유도체
WO2022236256A1 (en) Heterocyclic compounds as kinase inhibitors
CN117729921A (zh) 作为pd1/pd-l1抑制剂的化合物及其方法
WO2017070135A1 (en) Prodrugs of 2-(4-(3-((4-amino-7-cyano-imidazo[2,1-f][1,2,4]triazin-2-yl)amino)phenyl)piperaz in-1-yl)propanamide derivatives as ck2 inhibitors for the treatment of cancer
EP4087845A1 (en) Btk inhibitors
EA037031B1 (ru) Имидазопиразиновые ингибиторы тирозинкиназы брутона
WO2023110936A1 (en) Reversible macrocyclic kinase inhibitors
CN113164481A (zh) 环烷-1,3-二胺衍生物
NZ711699A (en) P2x7 modulators
NZ711699B2 (en) P2x7 modulators

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant