KR20190064695A - 커피 추출물을 유효성분으로 하는 피부 주름 개선 또는 예방용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 커피 추출물을 유효성분으로 하는 주름 개선용 조성물 및 주름 개선 효과가 우수한 커피 추출물 제조방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 주름 개선 또는 예방용 효과가 우수하고, 보습 효과가 뛰어날 뿐만 아니라, 식품으로 오랫동안 사용된 커피를 이용한 것이어서 내성이나 안전성과 관련된 문제가 발생되지 아니하므로, 상기 주름 개선 또는 예방용 조성물은 주름 개선용 화장품을 포함한 다양한 용도로 널리 사용될 수 있다.

Description

커피 추출물을 유효성분으로 하는 피부 주름 개선 또는 예방용 조성물{A ANTI-WRINKLE COSMETIC COMPOSITION COMPRISING COFFEE EXTRACT}

본 발명은 식물추출물, 구체적으로 커피 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 외부로부터 피부 안쪽의 다양한 기관을 보호하고 있는 인체를 구성하는 기관들 중 가장 큰 기관으로서, 내부의 수분 및 유용성 성분의 피부 밖으로의 유출을 막아주는 장벽기능, 온도조절기능, 배설기능, 호흡기능 등 다양한 생리적 역할을 감당하고 있다.

그러나, 나이가 들면 피부의 생리적 기능이 저하되고 피부의 두께가 얇아져 피부장벽으로서의 기능이 저하될 뿐만 아니라, 자외선, 대기오염, 냉난방 시설 등 외적 요인과 과도한 피로, 스트레스 및 연령에 따른 호르몬 변화 등 내적 요인에 의해 피부의 건성화가 이루어지게 되며, 이와 같은 피부 건성화는 역시 피부의 생리적 기능을 떨어뜨려 외부의 작은 자극원에 의해서도 피부자극 및 손상이 쉽게 일어나게 하는 원인이 된다.

통상적으로 성장기에는 내부 및 외부로부터의 노화 요인에 대하여 피부의 다양한 방어 시스템에 의해 쉽게 대응을 할 수 있으나, 연령이 높아짐에 따라 자외선 등의 원인으로 생성된 활성산소종에 의해 항산화 시스템이 파괴되고 이로 인해 방어능력이 현저하게 저하된다. 상기한 바와 같이, 방어능력이 저하된 경우, 피부에 산화적 스트레스가 가해지면, 지질과산화, 단백질 산화, 탄력섬유인 콜라겐과 엘라스틴의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합, 히알루론산 사슬의 절단, DNA 산화 등 생체 구성성분의 손상을 가져오게 된다. 상기한 생체 구성성분의 손상으로 인하여, 피부 주름의 초기증상인 피부의 처짐, 거칠어짐, 건조함 등이 유발되며, 결과적으로 피부 주름이 형성되게 된다.

과거에는 여성들이 사용하는 제품이라고 생각되던 화장품은 오늘날에는 단순한 아름다움의 표현 도구만이 아닌 생활용품으로 남녀노소를 불문하고 사용하고 있으며, 산업의 발전에 따라 화장품에 대한 고급화와 다양화의 요구가 증대됨에 따라, 특별한 효과나 효능을 기대하는 기능성 제품에 대한 관심도가 높아지고 있는 실정이다.

우리나라에서 현재 인정되고 있는 기능성 화장품은 피부의 미백에 도움을 주는 미백제품, 피부의 주름개선에 도움을 주는 주름개선 제품 및 피부를 곱게 태워주거나 자외선으로부터 피부를 보호하는데 도움을 주는 자외선 차단 제품이 있다.

일반적으로 이러한 기능성 화장품은 미용 효과뿐만 아니라 신체의 구조나 기능에 영향을 주고, 예방, 개선 및 치료 작용을 하는 화장품으로 해석되고 있다. 특히, 최근에는 화장품 전체 매출에서 기능성 화장품의 매출비중이 현저하게 증가하면서, 인체에 미치는 새로운 효능 성분을 모색하고, 이를 피부에 효율적으로 이용하고자 하는 연구가 활발히 이루어지고 있다.

특히, 최근 인구고령화 추세에 따른 노인 인구의 증가 현상 및 경제 발전에 따른 삶의 질의 향상에 따라, 노화에 자연스럽게 수반된다고 하였던 피부의 주름 등을 억제 또는 제어할 수 있는 제품에 대한 요구가 증가하고 있다. 특히, 노인 인구의 사회활동 기회의 증가로 인하여, 노령 인구의 미용에 대한 관심이 증대되는 한편, 자외선 등과 같은 피부에 대한 자극 및 노화 촉진의 요인이 증대되고 있어서, 피부의 주름개선 및 예방과 관련된 기능성 화장품에 대한 수요 및 사용량이 현저하게 증가하고 있는 실정이다.

상기 피부의 주름개선과 관련하여, 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태 즉, 피부외관에 주름살이 형성되는 원인은 자연적 노화에 의한 주름의 생성과 자외선 노출(광노화)에 의한 주름의 생성으로 크게 나눌 수 있는 데, 두 가지 원인에 의한 주름 형성 메커니즘은 아직까지 정확하게 밝혀져 있지 않은 상태이다. 상기 주름과 밀접하게 관련된 피부노화 또한 크게 두 가지로 구분되는데, 자연적 노화 즉, 시간의 흐름에 따른 생리적 노화(chronological aging)와 자외선 노출을 포함하여 바람, 온도, 습도, 담배연기 및 공해 등과 같은 외재적 요인에 의한 노화(extrinsic aging)가 있다.

상기 두 가지 주름의 원인 즉, 자연적 노화와 광노화에 의한 피부변화와 관련되어 발견되는 공통적인 현상은 진피 내의 주 구성단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형 및 진피의 기질인 히알루론산의 감소에 의한 피부 탄력 감소이다. 특히, 지금까지의 연구결과에 의하면 상기 진피 내 주 단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형이 주름의 생성 및 피부의 탄력저하에 직접적으로 관여하는 것으로 알려져 있다.

상기 콜라겐은 세포 외 기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분으로, 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포 외 간질에 존재한다. 또한, 생체 단백질 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선구조를 가지고 있다. 콜라겐은 피부, 건(tendon), 뼈 및 치아의 유기 물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부의 진피에 그 포함량이 높다. 대부분의 다른 체 구조물에서는 섬유상 봉입체로서 존재한다.

상기 콜라겐의 주된 기능으로는 피부에 강도와 장력을 부여하여 피부의 기계적 견고성 확보, 결합조직의 저항력 유도, 조직의 결합, 세포 접착의 지탱, 세포 분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유 시)의 유도 등으로 알려져 있다. 또한, 콜라겐은 상처 치유에 있어서 중요한 역할을 담당하며, 손상된 상피에서 콜라겐의 합성을 촉진시켜서 상처를 신속하게 흉터 없이 회복시킬 수 있는 것으로 알려져 있다.

특히, 진피층의 90%를 차지하고 있는 콜라겐의 감소는 피부의 노화와 매우 밀접한 관계를 가진다고 보고되어 있다. 보다 구체적으로, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화의 진행이나 자외선 조사는 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(matrix metalloproteinase, MMP)의 발현을 촉진시키며, 이러한 콜라게나제에 의한 콜라겐 분해로 인하여 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다.

또한, 지금까지 알려진 피부 노화 억제제로는 피부 노화 억제 기전에 따라 종류가 다양하다. 대표적인 예로는 콜라겐 생성 촉진제, 엘라스틴 활성화제, 히알루론산 생성 증가제, 자유라디칼 소거제, 세포 증식제, 광노화 억제제, 각질세포 증식억제제, 보습제, 유해 활성산소 생성방지제, 세포 재생물질 등이 있다.

또한, 피부 주름을 개선시키기 위한 방법으로 콜라겐을 포함시킨 화장품 또는 연고 등과 같은 피부 외용제 조성물을 사용하는 방법이 제시되었다. 이는 콜라겐의 주름 개선 및 피부 회복 효과를 이용하기 위하여 제시된 것이나, 고분자 물질인 콜라겐의 경피 흡수가 어려워 보습작용 또는 상처치유 효과를 기대할 수 없으므로 본질적인 피부기능 개선 및 상처치유의 기능을 나타낼 수 없다는 문제점이 지적되었다.

종래의 문제점을 해결하기 위해 제시된 것으로, 자유 라디칼의 형성이나 반응을 억제하는 비타민 C, 비타민 E 또는 카로티노이드와 같은 항산화제에 의해 주름의 형성을 예방하는 방법, 레티놀과 같이 진피 내의 콜라겐 생합성을 증가시키는 방법, 콜라겐을 피부내로 주입하는 방법 또는 보툴리눔 독소를 피부에 주사하는 방법 등이 제시되었다.

그러나, 상기 비타민 C, 비타민 E, 카로티노이드 및 레티놀은 모두 상온에서 쉽게 부서진다는 단점이 있고, 상기 레티놀은 처리농도가 높아지면 피부에 부작용을 나타내는 단점이 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 콜라겐이나 보툴리눔 독소의 경우 피부적용시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나 효과가 미미하여 실질적으로 피부 기능 개선 또는 상처 치유의 효과를 기대할 수 없다는 단점이 지적되어 왔다.

따라서, 이제까지의 주름 개선을 위해 사용된 화장품 기능성 원료 보다 효능이 뛰어나고 좀 더 안전한 주름 개선용 화장품의 유효성분 일 예로, 엘라스타제 저해 또는 콜라겐 분해 저해에 대한 연구의 필요성이 증대되고 있다.

KR 10-2011-0029800A KR 10-1683623B KR 10-1783728B

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 개선하기 위한 것으로, 특히 본 발명은 피부 주름 개선에 효과적이면서도 부작용이 거의 없는 천연 물질을 함유하는 피부 주름 개선 또는 예방용 조성물의 유효성분 및 그 최적 함량을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 커피 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 또는 예방용 조성물을 제공한다.

상기 커피 추출물은 메탄올 수용액을 추출용매로 추출한 것일 수 있다.

구체적으로, 상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.

상기 주름 개선 또는 예방용 조성물은 화장품으로 사용될 수 있으며, 이러한 점에서 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물일 수 있다.

다른 측면에서, 본 발명은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 커피 추출물을 유효성분으로 포함하는 보습용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 커피 추출물은 메탄올 수용액을 추출용매로 추출한 것일 수 있다.

구체적으로, 상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 커피 추출물의 제조방법에 의하여 제조된 것일 수 있다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 커피 추출물은 주름개선 효과와 관련하여 엘라스타제 저해 활성이 우수할 뿐만 아니라, 보습 효과도 우수하고, 오랫동안 식용으로 사용되어온 커피와 가장 안전한 용매인 물을 이용한 것이므로 부작용 등의 문제가 발생되지 아니하고, 안전성도 인정되며, 친환경적이라는 장점이 있으므로, 본 발명의 조성물은 피부 주름 개선 및 보습에 의한 피부 노화 개선 관련 다양한 용도에 응용될 수 있을 것이다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, 커피 추출물의 함량에 따른 주름 개선 효과를 나타낸 것으로, 가로축은 추출물의 함량을 나타낸 것이고, 세로축은 엘라스타제 저해 활성에 대한 실험결과를 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 화장료 조성물이란 인체를 청결 및 미화하여 매력을 더하고 용모를 밝게 변화시키거나 피부 및 모발의 건강을 유지 또는 증진하기 위하여 인체에 사용되는 조성물로 세정제(detergents) 및 화장제(cosmetics)를 포함하는 개념이다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 유효성분이란 주름 개선 또는 예방용 조성물이나 보습용 조성물, 구체적으로 화장료 조성물에 있어서 피부주름 개선 또는 예방 효과나 보습 효과를 제공하는 성분을 의미한다.

본 명세서에 있어서 특별한 언급이 없는 한, 예방이란 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환이나 특정 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 개선이란 본 발명의 조성물의 투여로 특정 질환이나 특정 증상을 호전 또는 이롭게 변경시키는 모든 개선 행위를 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 개체란 본 발명의 조성물을 투여하여 통풍을 포함한 특정 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 투여란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 약학적으로 허용되는이란 생리학적으로 허용되고 동물, 바람직하게는 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 의미한다.

본 발명의 발명자들은 부작용이나 내성 등의 안정성에 대한 문제가 없는 천연물질 유래의 주름 개선 활성을 갖는 물질을 연구하던 중, 식품으로 사용되는 여러 식물 중에서 커피 유래 추출물이 주름 개선 효과, 구체적으로 엘라스타제 저해 효과와 보습 효과가 우수한 것을 확인하였고, 상기 커피 추출물을 유효성분으로 하는 주름 개선 또는 예방용 조성물에 대해 추가적인 연구를 진행하여, 주름 개선 또는 예방용 조성물 내에 유효성분으로 포함되는 커피 추출물은 추출용매의 측면에서 수용매 즉, 물로 1차적으로 추출한 커피박을 대상으로 추출하는 경우, 에탄올 추출을 수행한 후, 60% 메탄올 수용액으로 크로마토그래피를 수행하여 수득한 추출물이 엘라스타제 저해 효과가 가장 우수하다는 것을 확인하여, 이를 바탕으로 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

본 발명은 커피 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 또는 예방용 조성물에 관한 것이다. 상기 커피 추출물은 메탄올 수용액, 구체적으로 60% 메탄올 수용액을 추출용매로 추출한 것일 수 있다. 상기 주름 개선 또는 예방용 조성물은 화장품 용도로 사용될 수 있다.

이러한 측면에서, 상기 주름 개선 또는 예방용 조성물은 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물일 수 있다.

상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃, 바람직하게는 110 내지 130 ℃의 물로 1시간 내지 10시간, 바람직하게는 3시간 내지 5시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 3,000 X g 내지 7,000 X g 및 3 ℃ 내지 5 ℃의 조건에서 10분 내지 60분 동안 원심분한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것일 수 있다.

상기 커피는 꼭두서닛과(Rubiaceae family)에 속하며 5세기경에 에티오피아에서 처음으로 재배되었고, 15세기에 이르러 이슬람을 비롯한 여러 나라에 전파되기 시작하여 이제는 전 세계적으로 가장 많이 소비되는 음료 중의 하나가 되었다.

구체적으로, 상기 커피는 세계에는 60여 종의 커피 종이 있으며, 일 예로, 아라비카종 커피(Coffea arabica), 로버스타종 커피(Coffea robusta), 카네포라종 커피(Coffea canephora) 또는 이베리카종 커피(Coffea iberica)일 수 있으며, 바람직하게는 로버스타종 커피(Coffea robusta)일 수 있다.

상기 커피는 커피나무 열매 또는 상기 커피나무 열매의 씨를 볶아서 만든 것으로서, 커피나무 열매가 붉게 익으면 과육이 벌어지면서 푸른빛을 띤 생두가 나오는데, 이것을 말려서 볶은 뒤 가루를 내어 사용한다. 상기 커피를 추출한 음료로서의 커피의 맛은 쓴맛, 신맛, 단맛 또는 떫은 맛 등 다양한데, 쓴맛은 카페인, 떫은맛은 탄닌, 신맛은 지방산, 단맛은 당질에서 비롯된다.

상기 커피는 수분, 단백질, 탄닌 또는 카페인 등 다양한 성분을 함유하고 있어 인체에 여러 생리적 영향을 미치는데, 그 주요 성분은 카페인으로 상기 카페인은 부신 피질 호르몬 분비를 활성화시켜 순환기 계통의 운동을 늘리고 이뇨작용을 유발하며, 기관지 확장, 위장관 운동성을 증가시키는 등의 효과를 나타낸다.

또한, 중추신경 흥분제로 작용하는데, 두 잔 정도의 커피는 업무 수행 능력의 향상을 가져오고 피로를 줄이며, 공격 성향 등을 줄인다고 알려져 있다.

상기 커피의 다양한 생리활성은 많은 연구를 통해 알려져 있으며, 그 중 항산화에 대한 연구로는 다양한 음료에서 페놀 화합물의 함량을 측정한 결과 레드와인 보다 커피의 페놀 함량이 높은 것으로 나타났으며, 바이러스 감염의 해로운 활동을 막는 효과와 LDL의 산화에 대한 감수성을 줄임으로써 LDL-콜레스테롤과 MDA(Malondialdehyde)를 줄인다는 보고가 있다.

우리나라의 경우에 2008년 한 해 동안 약 11만톤, 금액으로는 3억 3천만 불의 커피가 수입되었으며, 이는 성인 한 사람이 연간 288잔에 해당하는 커피를 마셨음을 의미한다. 이렇게 증가된 커피 소비의 증가와 커피의 생활화가 확대되면서 가정이나 커피전문점 등에서 원두커피를 추출할 때와 각종 인스턴트커피를 제조하는 과정에서 발생되는 커피 부산물 즉, 커피박의 양이 증가되고 있다.

상기 커피 부산물은 미세한 기공이 많아 냄새와 습기를 강하고 빠르게 흡수하는 성질이 있어서 탈취제로도 주로 사용되고, 탄소알갱이가 많은 다공질에 질소, 나트륨, 인 등 영양분이 남아 있어 비료로 사용되고 있으나, 폐기되는 커피 부산물에 비해서 재활용되는 커피 부산물의 양은 미미하여, 많은 양의 커피 부산물이 폐기되고 있다.

상기 커피는 바람직하게는 커피 원두일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 커피 생두일 수 있다.

본 명세서에 있어서, 커피 원두는 가공하지 않은 커피 열매 자체를 의미하며, 커피 생두는 열로 가열(roasting)하지 않고, 분쇄하지도 않은 것을 의미한다.

상기 커피 추출물은 추출용매로 추출한 용매 추출물, 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획한 분획물 또는 상기 분획물에 크로마토그래피를 수행하여 수득한 정제물일 수 있다.

상기 추출용매는 천연물 추출에 사용될 수 있는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나일 수 있다. 상기 유기용매는 메탄올, 에탄올 등의 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지형 알코올, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매와 핵산 또는 디클로로메탄의 비극성용매, 탄소수 3내지 5의 케톤 등의 중성용매 또는 이들의 혼합용매일 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 알코올 수용액, 더욱 바람직하게는 60% 메탄올 수용액일 수 있다.

본 발명의 커피 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있다. 보다 구체적으로는, 상기 커피 추출물의 제조는 커피 생두에 추출용매, 바람직하게는 메탄올 수용액을 가하고 추출하는 방법으로 수행하였다. 상기 용매를 이용한 추출법은 크로마토그래피 추출법, 열수추출법, 냉침추출법, 온침추출법, 가압추출법, 환류추출법 또는 초음파 분쇄 추출법, 바람직하게는 크로마토그래피 추출법 일 수 있다.

또한, 상기 커피 추출물의 분획물의 제조는 상기 추출법으로 제조한 추출물 즉, 조추출물 또는 조추출액에 분획용매를 가한 후에 분획용매의 극성에 따라 분획물을 수득하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 층분리에 의한 분획법은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography, TLC), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography, HPLC) 등의 다양한 크로마토 그래피를 이용하여 수행할 수 있다.

구체적으로, 상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것일 수 있다.

더욱 구체적으로, 상기 커피 추출물은 커피 생두에 물을 첨가한 후, 100 내지 140 ℃, 바람직하게는 110 내지 130 ℃의 물로 1시간 내지 10시간, 바람직하게는 3시간 내지 5시간 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 3,000 X g 내지 7,000 X g 바람직하게는 5,000 X g 및 3 ℃ 내지 5 ℃, 바람직하게는 4 ℃의 조건에서 10분 내지 60분, 바람직하게는 30분 동안 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 상온, 구체적으로 10 내지 20 ℃의 조건에서 20시간 내지 30시간, 바람직하게는 24시간 동안 방치하여 에탄올 추출물을 제조하는 에탄올 추출 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 50% 내지 70% 메탄올 수용액, 바람직하게는 60% 메탄올 수용액을 용출 용매로 사용하여 용출액을 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것일 수 있다.

또한, 상기 추출물은 추출, 분획과정 또는 정제과정을 수행한 이후, 감압 여과 과정을 수행하거나 추가로 농축 및/또는 동결건조를 수행하여 농축하거나 용매를 제거할 수 있다. 따라서, 본 발명에서의 커피 추출물은 통상적 방법으로 건조된 추출물의 건조물과 통상적 방법으로 농축된 추출물의 농축물, 상기 추출물, 건조물 또는 농축물의 희석액을 포함하는 의미로 사용된다. 상기 수득한 커피 추출물은 사용 시까지 급속 냉동 냉동고(deep freezer)에 보관할 수 있다.

이러한 측면에서, 상기 주름 개선 또는 예방용 조성물의 유효성분인 상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조된 것일 수 있다.

상기한 바와 같이, 엘라스타제를 저해할 수 있는 경우, 주름 예방 또는 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 실험을 통하여 확인한 결과, 다른 추출조건에 비하여 세포독성도 적고, 주름 개선 효과도 우수하며, 보습 활성도 우수한 것으로 확인되었고, 식품으로 오랫동안 사용되어 온 커피를 이용하여 제조된 물질이 유효성분이므로 부작용도 문제되지 않고, 안전하다는 점에서, 본 발명의 화장료 조성물은 항노화 활성 또는 주름 개선 활성이 요구되는 피부에 적용될 수 있다

따라서, 상기 엘라스타제를 저해할 수 있는 본 발명의 주름 개선 또는 예방용 조성물은 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물로 응용될 수 있다.

본 발명의 제조방법에 의해 제조된 상기 커피 추출물은 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것일 수 있다.

더 구체적으로, 상기 커피 추출물은 커피 생두에 물을 첨가한 후, 110 내지 130 ℃의 조건에서 3시간 내지 5시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 5,000 X g 및 4 ℃의 조건에서 30분 동안 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 10 내지 20 ℃의 조건에서 24시간 동안 방치하여 에탄올 추출물을 제조하는 에탄올 추출 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액을 용출 용매로 사용하여 용출액을 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것일 수 있다.

상기 커피 추출물은 멜라닌 생성과 관련된 엘라스타제 저해 활성이 우수할 뿐만 아니라, 무엇보다 오랫동안 식용으로 사용되어온 커피와 물을 이용하는 것이므로 부작용이나 독성 등의 안전성이 문제되지 아니하고, 추출수율도 우수하므로, 상기 주름 개선 또는 예방용 조성물은 여러 측면에서 우수한 상품성을 갖는다.

이런 측면에서 본 발명은 커피 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물일 수 있다. 상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조된 것일 수 있다.

상기 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물의 유효성분인 커피 추출물은 엘라스타제 저해 활성이 우수하고 안전성이 인정되어, 주름 개선 효과를 갖는 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 상기 유효성분을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

상기 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당류, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 더욱 포함할 수 있다.

상기 수용성 비타민은 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산 또는 비타민 C이거나, 이들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등) 또는 이들의 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)일 수 있다. 상기 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득될 수 있다.

상기 유용성 비타민은 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(D-알파 토코페롤, D-알파 토코페롤, D-알파 토코페롤) 등일 수 있고, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산-알파 토코페롤, 니코틴산-알파 토코페롤비타민 E, D-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등)일 수 있다. 상기 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득될 수 있다.

상기 고분자 펩티드는 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴 또는 케라틴 등일 수 있다. 상기 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득된 후, 정제과정을 거쳐 취득할 수 있으며, 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수도 있다.

상기 고분자 다당류는 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨 또는 콘드로이틴 황산 등일 수 있고, 그들의 염(나트륨염 등)등 일 수 있다. 상기 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

상기 스핑고 지질은 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질일 수 있다. 상기 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 수득될 수 있다.

상기 해초 엑기스는 본 발명의 효과를 유지할 수 있고, 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함될 수 있으며, 구체적으로 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등일 수 있고, 상기 해초 엑기스에는 상기 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 포함된다. 상기 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 수득될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에는 통상 화장료에 배합되는 다른 성분이 더욱 포함될 수 있다. 보다 상세하게, 상기 통상 화장료에 배합되는 다른 성분은 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기안료 및 무기안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제 또는 정제수 등일 수 있다.

상기 유지 성분은 구체적으로 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지 또는 식물 유지 등일 수 있다.

상기 에스테르계 유지는 일 예로, 트리-2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리-2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라-2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실,올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴, 카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산 콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산 피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 1,2-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 1,2-스테알로일히드록시스테아르산 스테아릴 또는 1,2-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등일 수 있다.

상기 탄화 수소계 유지는 일 예로 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스 또는 와셀린 등일 수 있다.

상기 실리콘계 유지는 일 예로 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유 또는 아미노 변성 실리콘유 등일 수 있다.

상기 불소계 유지는 퍼플루오로폴리에테르 등일 수 있다.

상기 동물 유지 또는 식물 유지는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유,소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지, 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린 또는 경화피마자유 등일 수 있다.

상기 계면활성제는 구체적으로 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제 또는 양성 계면활성제일 수 있다.

상기 음이온성 계면 활성제는 일 예로, 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염 또는 퍼플루오로알킬인산에스테르 등일 수 있다.

상기 양이온성 계면 활성제는 일 예로, 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드 또는 라놀린 유도체 제4급 암모늄염 등일 수 있다.

상기 양성 계면 활성제는 일 예로, 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형 또는 아미드아민형의 양성 계면 활성제 등일 수 있다.

상기 안료는 유기안료, 무기안료 및 이들의 복합 안료 등일 수 있다.

상기 무기안료는 일 예로 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체 등일 수 있다.

상기 유기안료는 일 예로 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트 오렌지 및 이들의 복합체 등일 수 있다.

상기 유기 분체는 일 예로 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산 아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 사불화에틸렌 등일 수 있다.

상기 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등으로 제조될 수 있다.

구체적으로, 상기 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로 플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 주름 개선 효과 및 보습 효과가 우수한 커피 추출물 제조방법에 관한 것이다.

상기 주름 효과 및 보습 효과가 우수한 커피 추출물 제조방법은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.

더 구체적으로, 상기 주름 효과 및 보습 효과가 우수한 커피 추출물 제조방법은 커피 생두에 물을 첨가한 후, 110 내지 130 ℃의 조건에서 3시간 내지 5시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 5,000 X g 및 4 ℃의 조건에서 30분 동안 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 10 내지 20 ℃의 조건에서 24시간 동안 방치하여 에탄올 추출물을 제조하는 에탄올 추출 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액을 용출 용매로 사용하여 용출액을 수득하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

모든 실험결과는 최소한 3회 이상 반복하여 평균치로 표시하였고, 각 군과의 비교는 ANOVA test를 이용하여 각각 p<0.05인 경우를 유의성 있는 것으로 판정하였다.

[ 실시예 . 커피 추출물의 최적 주름 개선 효과 확인]

제조예 .커피 추출물의 제조

본 실험에서 사용된 커피 추출물은 다음과 같은 방법으로 제조하였다.

본 실험에 사용한 커피(Coffea robusta)는 로스팅 하지 않은 커피 생두(green coffee bean)를 캄보디아(Kingdom of Cambodia)에서 수입한 것을 2015년 경남 김해시 소재의 더 길 원두커피에서 구입하여 사용하였다.

상기 동결 보관된 커피 생두 1.0 kg에 10 L(1 : 10, w/v%)의 증류수를 넣어 고압멸균기를 이용하여 121℃ 4시간 동안 고압추출하였다. 상기 고압추출을 수행한 커피 생두를 분쇄기(blender)를 이용하여 파쇄한 후, 5,000 x g 및 4℃의 조건에서 30 분 동안 원심분리하여 상층액을 분리하여 상등액을 수득하였다.

상기 상등액에 100% 에탄올을 1 : 3(상등액 : 100% 에탄올)의 비율로 에탄올을 첨가한 다음 상온에서 24시간 동안 방치(incubation)하여 추출한 후, 10,000 x g 및 4℃의 조건에서 30 분 동안 원심분리하여 상등액을 수드갛는 방법으로 농축하였다. 상기 농축액을 Sep-Pak C18 cartridge(20 mL, Waters)에 주입한 후, 10%(v/v) 메탄올 수용액(RM10), 60%(v/v) 메탄올 수용액(RM60) 및 100%(v/v) 메탄올 수용액(RM100)을 순차적으로 사용하여 물질을 용출시켰으며, 이에 대해 엘라스타제 저해 활성을 확인하여, 가장 효과가 우수한 60% 메탄올 수용액으로 용출한 용출액을 시료로 사용하기 위하여, 동결 건조한 후 실험에 사용하였다.

실시예 . 커피 추출물의 주름 개선 효과 확인

상기 실시예 1에서 수득한 커피 추출물에 의한 주름 개선 효과를 엘라스타제 저해 활성을 통해 측정하였다.

구체적으로, 상기 실시예 1에서 수득한 커피 추출물에 의한 주름 개선 효과는 엘라스타제에 대한 저해활성을 통해 확인하였다.

구체적으로, 상기 엘라스타제 저해 활성은 N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide과 porcine pancreatic elastase를 사용하였다. 우선, 50 mM Tris-HCl buffer(pH 8.6)를 넣어 반응조건을 만든 다음, 각 농도 별로 제조한 시료 100㎕, porcine pancreatic elastase 20 ㎕(2,500 U/mL)에 특이적인 기질인 8.8 mM STANA (N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide) 20 ㎕를 혼합하여 25℃에서 15분 동안 반응 시켰다.

상기 반응시킨 후, 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 ELISA Multiscan Reader (Thermo scientific, Finland)을 이용하여 410 nm에서 흡광도 측정하였다. Positive control로는 Urosolic acid(Sigma-Aldirch, St-Louis, MO, USA)를 사용하였고, 엘라스타제 저해 활성은 하기 계산식을 이용하여 시료의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율을 통해 계산하였다. 상기 계산 결과를 도 1에 나타내었다.

[계산식]

Elastase inhibition ratio(%) = [(실시예 - Blank) / 대조군(Control)] × 100

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 제조예에서 제조된 커피 추출물의 엘라스타제 저해 효과는, 상기 커피 추출물을 200 ㎍/mL의 농도를 처리한 결과, 10.9 ± 1.1%, 100 ㎍/mL의 농도를 처리한 결과, 10.3 ± 1.36%, 50 ㎍/mL의 농도를 처리한 결과, 5.5 ± 1.87% 및 25 ㎍/mL의 농도를 처리한 결과, 5.1 ± 0.99%의 활성을 나타낸 것으로 확인하였다.

Claims (7)

1. 커피 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선 또는 예방용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 커피 추출물은 메탄올 수용액을 추출용매로 추출한 것을 특징으로 하는 주름 개선 또는 예방용 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것을 특징으로 하는 주름 개선 또는 예방용 조성물.
4. 커피 추출물을 유효성분으로 포함하는 보습용 화장료 조성물.
5. 제4항에 있어서,
   상기 커피 추출물은 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계; 상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 제조한 것을 특징으로 하는 보습용 화장료 조성물.
6. 커피 생두를 100 내지 140 ℃의 물로 1시간 내지 10시간 동안 고압추출하는 단계;
   상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계;
   상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 20시간 내지 30시간 동안 추출하는 단계; 및
   상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액으로 분리하는 단계
   를 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선 효과 및 보습 효과가 우수한 커피 추출물 제조방법.
7. 제6항에 있어서,
   상기 커피 주름 개선 효과 및 보습 효과가 우수한 커피 추출물 제조방법은
   커피 생두에 물을 첨가한 후, 110 내지 130 ℃의 조건에서 3시간 내지 5시간 동안 고압추출하는 단계;
   상기 고압추출을 수행한 원두를 파쇄한 후, 상기 파쇄물을 5,000 X g 및 4 ℃의 조건에서 30분 동안 원심분리한 다음 상등액을 수득하는 상등액 수득 단계; 상기 상등액에 에탄올을 첨가한 후, 10 내지 20 ℃의 조건에서 10시간 내지 40시간, 바람직하게는 24시간 동안 방치하여 에탄올 추출물을 제조하는 에탄올 추출 단계;
   및 상기 에탄올 추출액을 C-18 카트리지(Sep-Pak C18 cartridge) 컬럼크로마토그래피에 주입한 후, 60% 메탄올 수용액을 용출 용매로 사용하여 용출액을 수득하는 단계
   를 포함하는 방법으로 수행하는 것을 특징으로 하는 주름 개선 효과 및 보습 효과가 우수한 커피 추출물 제조방법.

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