KR102121944B1 - 해죽순 추출물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 해죽순 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 자외선 등 스트레스 자극으로 인한 피부상의 홍반을 동반한 손상을 억제 또는 개선하는 효과가 있고, 피부 내 콜라겐의 분해 및 감소를 억제할 뿐만 아니라, 자외선에 의한 피부 상피조직의 두께 증가를 억제함으로써, 피부노화를 억제 또는 개선의 효과를 나타낸다. 이에 본 발명의 해죽순 추출물은 의약용, 의약부외용, 화장료용, 향장소재용, 기능성 바이오 소재용 및 기능성 식품소재용 등으로의 이용이 기대된다.

Description

해죽순 추출물을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising extract of bud of Nypa fruiticans}

본 발명은 해죽순 추출물을 포함하는 피부노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물 등에 관한 것이다.

노화는 모든 생명체가 겪는 반응으로, 수명 및 생존과 직결되어 있는 요소이다. 노화에 관련된 가장 기본적이고, 근원적인 원인으로는 free radical에 따른 산화적 스트레스에 의한 세포 손상이다. 세포 내에는 다양한 활성산소(ROS, reactive oxygen species)이 존재하며, 이를 억제하기 위해 SOD (superoxide dismutase)의 효소들이 작용하여 세포의 산화적 스트레스, 장기적으로는 세포의 노화를 방지한다.

최근 연구 결과로, 2013년 Harvard Medical School의 David A. Sinclair 연구팀의 연구결과에 따르면, NAD⁺는 NADPH의 효소반응을 증대시키고, 세포 수준에서의 에너지 대사 효율을 증대시켜 노화에 관련된 주요인자인 SIRT1의 활성을 증대시키는 등 노화에 대한 새로운 연구 방향을 제시하고 있다(Cell 155, 16241638, 2013).

한편, 피부노화는 다른 신체 조직과는 달리 외부 환경에 직접적으로 영향을 받는 특성이 있다. 특히 시각적으로 노화가 일어난 정도는 주름이나 피부의 탄력 등으로 평가될 수 있고, 현대인의 사회활동에 외적인 요소가 크게 작용하므로 이에 대한 관심이 고조되고 있다. 또한, 피부의 노화 반응은 일반적으로 자연노화에 의한 세포단위의 노화뿐만 아니라 자외선에 의한 광노화(photoageing)에 의하여 발생할 수 있으며, 피부노화의 결과로는 주름생성 및 피부의 탄력성 감소 등 외관상 부정적인 결과를 야기한다.

자외선(Ultraviolet: UV)은 태양으로부터 방출되는 비교적 짧은 파장을 갖는 빛으로서, UVA, UVB, UVC로 구분되며, UVA 및 UVB는 파장이 짧아 표피를 쉽게 통과하여 진피층까지 도달해서 모두 흡수되고. 특히 UVB는 표피와 진피에서 활성산소의 생성을 유도함으로써 세포의 DNA, 단백질, 지질 등에 손상이나 변성을 초래하여 만성적인 광노화(photoaging)을 야기한다.

또한, 표피와 진피층에서 흡수된 자외선은 정상적인 피부각질세포(keratinocyte)를 일광화상세포(sunburn cell)로 변형시키며, 피부주름, 반점, 염증, 및 색소 침착 등의 피부노화뿐만 아니라, 홍반 등의 각종 피부질환을 유발한다.

즉, 광노화는 상술한 자외선에 의해 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 손상되어 피부세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 자외선은 직접적으로 피부의 결합조직인 콜라겐, 엘라스틴, 및 피브로넥틴 등이 절단시키고, MMPs (matrix metalloproteinases)의 활성을 증가시켜 콜라겐 분해를 야기하여 피부 탄력에 지장을 주고 광노화의 주요 현상인 깊은 주름을 형성하게 된다.

본 연구에서 사용한 해죽순은 천남성과에 속하는 식물로서, 미네랄의 보고인 청정 갯벌에서 자라는 일종의 야자수이다. 솟아나는 어린 순의 잘린 모습이 우리나라 죽순과 닮아서 해죽순이라고 부르며 미얀마, 인도네시아, 필리핀 등 동남아시아에서 재배되고 전통적으로 치아 염증에 사용되어 왔다. 또한, 해죽순은 최근에 한국에 수입이 되어 차(茶), 볶음, 무침, 조림 등에 다양하게 이용이 되고 있다. 기존의 연구에 따르면 해죽순은 다량의 페놀산과 플라보노이드를 함유하고 있고, 100 g 당 폴리페놀 함량은 인삼의 63배, 생마늘의 225배 이상으로 알려져 있다. 그에 따라 항산화 효과 및 콜레스테롤 억제 효과 등이 탁월하다 보고되어 있다. 이에 본 발명자들은 상기 해죽숙의 활용 방안을 위해 예의 연구하던 중, 해죽순의 추출물에 피부노화 억제에 관련된 효과가 있음을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명자들은 해죽순 추출물로부터 피부노화 억제 또는 개선 관련 효과 및 홍반 억제 또는 개선 관련 효과를 확인하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 해죽순 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 해죽순 추출물을 유효성분으로 포함하는 홍반 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 해죽순 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일구현예로서, 상기 조성물은 피부 상피조직의 두께 증가를 억제하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 피부노화는 자외선에 의한 광노화(Photoaging)인 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 조성물은 엘라스틴 분해 효소의 활성을 억제하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 조성물은 피부 내 콜라겐의 분해 및 감소를 억제하는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 해죽순 추출물을 유효성분으로 포함하는 홍반 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일구현예로서, 상기 홍반은 자외선 조사에 의해 유발된 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 해죽순 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 90 중량%로 포함되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 해죽순 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 탄소수 3 내지 6의 다가알코올, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 용매로 추출하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 해죽순 추출물은 열수 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 및 초임계 추출로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 추출방법에 의해 추출된 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 조성물은 천연물인 해죽순 추출물을 유효성분으로 포함하는 것으로 부작용이 없는 장점을 가지고 있다.

또한, 본 발명의 해죽순 추출물은 자외선 등 스트레스 자극으로 인한 피부상의 홍반을 동반한 손상을 억제 또는 개선하는 효과가 있고, 피부 내 콜라겐의 분해 및 감소를 억제할 뿐만 아니라, 자외선에 의한 피부 상피조직의 두께 증가를 억제함으로써, 피부노화를 억제 또는 개선의 효과가 있다.

이에 본 발명의 해죽순 추출물은 의약용, 의약부외용, 화장료용, 향장소재용, 기능성 바이오 소재용 및 기능성 식품소재용 등 다양한 방면으로 이용이 가능하다.

도 1은 해죽순 추출물의 elastase 억제 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 HaCaT 세포에서 해죽순 추출물의 농도별 독성을 MTT assay를 이용하여 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 자외선을 조사한 HaCaT 세포의 생존률이 해죽순 추출물 처리에 따라 개선되는 것을 MTT assay를 이용하여 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 자외선 조사에 따른 HaCaT 세포 내의 활성산소 생성량을 ROS assay를 이용하여 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 자외선 조사에 따른 HaCaT 세포 내의 콜라겐 함량 변화를 sircol collagen assay kit를 이용하여 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 자외선을 조사한 HaCaT 세포의 시간의 흐름에 따른 세포이동을 관찰한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 자외선을 조사한 BALB/C mice의 등쪽 피부에 해죽순 추출물을 처리함에 따라 피부노화가 개선된 것을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 자외선을 조사한 BALB/C mice의 등쪽 피부에 해죽순 추출물을 처리함에 따라 홍반 증상이 개선된 것을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 자외선을 조사한 BALB/C mice의 등쪽 피부의 두께 변화를 측정한 결과를 나타낸 것이다.

본 발명자들은 해죽순의 활용방안을 찾기 위해 예의 연구하던 중, 해죽순 추출물을 대상으로 피부노화 관련 전임상적 평가방법을 수행한 결과, 해죽순 추출물이 피부노화 억제 활성 중에서도 특히 피부 탄력 증진의 효과를 가진다는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 해죽순 추출물을 포함하는 피부 노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 조성물에서 해죽순 추출물은 0.01 내지 90 중량%로 포함되는 것일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 해죽순 (Bud of Nypa fruiticans: NFB)은 최근 한국에 수입이 되어 쉽게 접할 수 있으나, 해죽순 추출물이 피부노화 억제에 효과가 있다는 사실은 어디에도 공지되어 있지 않다. 상기 해죽순 추출물은 해죽순 전체를 건조한 후 추출할 수 있으며, 상기 해죽순 추출물은 피부에 도포하는 것으로도 높은 피부노화 억제 활성을 나타내므로, 다양한 제재에 활용이 가능할 것으로 사료된다.

본 발명에 있어서, 상기 피부노화는 외부환경에서 주는 피부에 유해한 각종 스트레스 자극에 의한 피부노화를 포함하며, 바람직하게는 자외선에 의한 광노화(Photoaging)인 것을 특징으로 한다. 상기 용어 ‘광노화(Photoaging)’는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 이 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질 단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등을 통해 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다.

본 발명에 있어서, 상기 해죽순 추출물은 종래에 사용되어진 어떠한 용매로도 추출될 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 탄소수 3 내지 6의 다가알코올, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 용매로 추출하는 것일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 50% 에탄올을 용매로 추출되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 추출용매를 이용한 추출방법으로는 통상적인 식물의 추출방법 예를 들면, 열수 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 초임계 추출 등의 방법을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 분쇄 또는 파쇄에 의한 분말을 상기한 추출용매 중에 침적하여 50 ~ 100℃ 온도로 24 ~ 72시간 동안 추출할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 해죽순 추출물은 추가적으로 종래의 계통적 분획방법에 의해 분획화될 수 있으며, 바람직하게는 저극성 유기용매로, 더욱 바람직하게는 헥산, 메틸렌 클로라이드, 에틸아세테이트, 및 n-부탄올로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 분획화 하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 상기 해죽순 추출물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축한 엑스 형태 또는 동결 건조하여 동결건조물 형태로 사용할 수 있다.

본 발명자들은 피부노화 억제물질을 스크리닝하던 중, 수 종의 천연물, 특히 해죽순 추출물에 피부노화를 야기하는 효소 억제 활성 및 피부각질세포 등에서 노화억제 활성이 있음을 확인하여 이를 생물학적인 활성을 평가하기 위하여 자외선 유도 모델에 의한 피부노화에 따른 개선 활성을 시험하였다. 본 발명의 실시예에서 이용된 해죽순은 증류수(DW), 100% 에탄올, 또는 50% 에탄올을 용매로 하여, 24시간 동안 추출한 것을 진공 동결건조하여 분말로 만들어 사용하였다(실시예 1 참조).

본 발명에 있어서, 상기 피부노화 억제 또는 개선은 피부상의 탄력 저하 등을 개선함으로써 피부노화를 억제 또는 개선시키는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 실시예 2 및 도 1에서는, 해죽순 추출물의 elastase 억제 활성이 높게 나타났으며, 특히 해죽순 50% 에탄올 추출물 30 μg/mL 의 농도에서 약 76%의 억제 활성을 확인하였다(실시예 2 참조).

따라서, 본 발명의 해죽순 추출물은 물 또는 에탄올 추출물 일 수 있으며, 바람직하게는 50% 에탄올 추출물 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

천연물인 상기 해죽순의 독성을 사람 유래의 피부각질세포(Human Keratinocyte)인 HaCaT 세포 배양을 통하여 평가한 결과 100 μg/mL 이하의 농도에서 독성이 없었는 바, 향장소재로의 사용 시 부작용이 없음을 확인하였다(실시예 3.1 참조).

본 발명에 있어서, 상기 피부노화 억제 또는 개선은 해죽순 추출물의 독성이 나타나지 않는 선에서 피부노화를 억제 또는 개선시키는 것을 의도하는 것이다. 본 발명의 실시예 3.1 및 도 2에서는, 추출물의 세포 독성을 알아보고자 세포 생존률이 80% 이하로 떨어지는 경우 독성이 있는 것으로 간주하여 MTT assay를 진행한 결과 100 μg/mL의 농도를 제외한 모든 농도에서는 독성이 나타나지 않았음을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 해죽순 추출물을 포함하는 조성물은 해죽순 추출물을 0.01 내지 99 μg/mL의 농도로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 70 μg/mL, 더욱 바람직하게는 10 내지 50 μg/mL의 농도로 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 피부노화는 자외선에 의한 세포 생존률의 감소를 억제함으로써 피부노화를 억제 또는 개선시키는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 실시예 3.2 및 도 3에서는, 30 mJ/cm² 의 자외선 조사에 따라 HaCaT 세포의 생존률을 알아보았다. 자외선 비조사군과 비교 하였을 때 자외선 조사군에서 세포의 생존은 약 76%로 감소하였지만, 해죽순 추출물의 처리에 의해 세포 생존률이 현저하게 증가한 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 상기 피부노화는 자외선에 의한 활성산소의 증가를 억제함으로써 피부노화를 억제 또는 개선시키는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 실시예 3.3 및 도 4에서는, 자외선 비조사구 및 조사구를 비교한 결과, 자외선 조사구에서 활성산소의 생성이 현저히 증가 하였다. 반면에, 해죽순 추출물의 처리에 의해 활성산소의 생성이 현저하게 감소한 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 상기 피부노화는 피부 내 콜라겐의 분해 및 감소를 억제함으로써 피부노화를 억제 또는 개선시키는 것을 의미하는 것이다. 상기 피부노화의 억제 또는 개선은 피부 탄력 증진과 주름 형성 억제의 의미를 포함한다. 본 발명의 실시예 3.4 및 도 5에서는, 자외선 조사에 의해 감소하였던 콜라겐의 함량이 해죽순 추출물의 처리에 따라 증가하는 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서 상기 피부노화는 세포이동(cell migration)의 감소를 억제 시킴으로써 피부노화를 억제 또는 개선시키는 것을 포함한다. 이때, 상기 피부노화는 표피가 손상된 경우 이의 회복 및 재생의 의미를 포함한다. 본 발명의 실시예 3.5 및 도 6에서는, 자외선 비조사군에 비해 자외선 조사군에서 세포이동이 감소 되었으며, 해죽순 추출물의 처리는 이러한 증상을 억제한 것으로 확인되었다. 특히, 해죽순 50% 에탄올 추출물 10 μg/mL의 농도에서 세포 이동률이 높게 나타났다.

한편, 본 발명자들은 해죽순 추출물의 처리에 따라 자외선 조사에 의해 야기되는 홍반이 개선됨을 확인하였는바, 해죽순 추출물은 홍반의 예방 또는 개선의 용도에 이용될 수 있다.

보다 구체적으로, 본 발명의 실시예 4.1 및 도 7에서는, BALB/C mice 모델에서 자외선 비조사구에 비해 자외선 조사군에서 피부의 홍반이나 주름 형성이 증가된 것을 볼 수 있으나, 해죽순 추출물의 처리에 따라 mice 등쪽 피부에 홍반 및 주름이 형성되는 증상이 완화되는 것을 확인할 수 있었다.

본 발명에 있어서 상기 피부노화는 피부의 홍반지수를 낮춤으로써 피부노화를 억제 또는 개선 시키는 것을 의미하는 것이다. 본 발명의 실시예 4.2 및 도 8에서는, BALB/C mice 모델에서 색차계를 이용하여 홍반지수를 측정하였으며, 자외선 조사에 의해 증가된 mice의 등쪽 피부의 홍반지수가 해죽순 추출물의 처리에 따라 다시 낮아진 것을 확인할 수 있었다.

본 발명에 있어서 상기 피부노화는 자외선 조사에 의해 피부 두께가 증가하는 것을 억제함으로써 피부노화를 억제 또는 개선시키는 것을 의미하는 것이다. 본 발명의 실시예 4.3 및 도 9에서는, BALB/C mice 모델에서 자외선 비조사구에 비해 자외선 조사군에서 피부의 두께가 증가하였으나, 해죽순 추출물의 처리는 이러한 상피조직의 두께 증가를 감소시켜 주었다.

한편, 본 발명에서 ‘홍반(erythema)’이란 자외선 노출 등의 자극에 의해 피부 내 혈관이 확장되거나 혈류량이 증가하여 피부가 붉게 변하는 피부질환을 의미한다. 일반적으로 30일 내외로 자연스럽게 소실되지만, 지속적인 자극에 의해 색소 침착이 남으면 치료가 쉽지 아니하고, 정상피부와 달리 각질층이 발달하게 되어 가렵고 따끔거리는 증세를 나타낼 수 있어 홍반의 예방과 초기 치료가 중요하다.

본 발명에서 “예방”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 피부 내 혈관 확장 또는 혈류량 증가에 의해 피부가 붉게 변하는 피부질환의 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 피부가 붉게 변하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

상기로부터, 본 발명은 해죽순 추출물을 포함하는, 피부노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물 및 홍반 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이며, 상기 화장료 조성물의 제형은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 또는 바디클렌저의 형태일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 및 스핑고 지질로 이루어진 군으로부터 선택되는 조성물을 더 포함할 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장품에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01-5% 중량퍼센트, 보다 바람직하게는 0.01-3% 중량퍼센트로 배합된다.

본 발명의 제형이 로션, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기 해죽순 추출물은 홍반을 개선하는 효과를 보인 바, 화장료 조성물로 제공되는 경우 특히 자외선 조사에 의해 유발되는 홍반을 개선시키며, 상기 홍반 외에도, 광감성 선천적 가변성피부 (poikilodermal), 일광편평태선, 일광 육아종, 파종상 표재성 일광 한공각화증, 수포성 피부염, 일광 두드러기, 또는 기미 등에도 개선 효과를 보일 수 있다.

또한, 본 발명은 해죽순 추출물을 유효성분으로 포함하여 홍반의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있으며, 상기 조성물을 홍반의 예방 또는 치료가 필요한 개체에 투여하여 홍반을 예방 또는 치료하는 방법을 제공할 수 있다.

상기 ‘개체’는 자외선에 의해 피하 혈관의 확장과 혈류량에 증가에 따라 발생하는 홍반의 치료가 필요한 포유류라면 제한되지 아니하나, 바람직하게는 인간일 수 있고, 상기 ‘투여’의 방법은 특별히 제한되지 아니하나 피부에 본 발명의 해죽순 추출물을 포함하는 조성물을 도포하는 방법일 수 있다. 또한, 상기 ‘치료’란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 홍반 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 약학적 조성물의 제형은 특별히 제한되지 아니하나, 피부 외용제로 제공됨이 바람직하다.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ]

실시예 1. 해죽순 추출물의 제조

해죽순 추출물을 제조하기 위하여, 2016년 8월 자연맘 사이트에서 구매한 차용 해죽순을 건조시켜 사용하였다. 구체적으로 상기 건조된 해죽순을 10 중량%, 증류수, 50% 에탄올, 또는 100% 에탄올을 90 중량%로 하여, 시험용 bottle 또는 삼각플라스크에 넣은 후 진탕배양기(shaking incubator)에서 56℃ 조건으로 24시간 추출하여, 각각 해죽순 증류수 추출물(NFB D.W), 해죽순 50% 에탄올 추출물(NFB 50% EtOH). 해죽순 100% 에탄올 추출물(NFB 100% EtOH)을 제조하였다.

상기 해죽순 추출물은 Whatman 여과지로 여과하여 고형분을 제외한 액상형태의 시료를 얻었고, 상기 시료를 진공동결건조기(IlShin TFD series, Seoul)를 이용하여 수분을 모두 제거함으로써, 분말 형태의 시료를 제작하였고, 상기 분말 시료의 무게를 측정하여 실험에 사용하였다.

실시예 2. 엘라스틴 분해 효소인 elastase 억제를 통한 해죽순 추출물의 주름 예방 효과 확인

엘라스틴(elastin)은 콜라겐과 함께 결합조직에 존재하고, 고무와 같은 탄력성과 신축성을 가지는 탄성 섬유 단백질로서 조직의 유연성 및 신축성에 관여하고 있다. 따라서 elastin은 피부의 탄력유지 및 주름방지에 중요한 역할을 하고 있다. 이에 해죽순 추출물이 엘라스틴을 분해하는 효소인 elastase를 억제하여 주름 예방 효과 있음을 검증하기 위해 Elastase Inhition Assay 실험을 진행하였다. 구체적으로 96 well plate에 상기 실시예 1에서 제조한 해죽순 추출물 2μL를 넣고 0.78 mM N-Succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide 100μL, 0.04 U/mL elastase 100μL를 첨가하여 spectrophotometer를 이용하여 405 nm 파장에서 1분 간격으로 25번 측정하였다. Positive control으로는 EGCG(Epigallocatechin gallate)을 이용하였다.

그 결과, 도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 해죽순 증류수 추출물, 50% 에탄올 추출물, 및 100% 에탄올 추출물은 농도가 증가함에 따라 elastase 억제 활성이 높게 나타났으며, 이는 positive control인 EGCG보다 더 낮은 농도에서 더 높은 elastase 억제 활성을 나타내었다. 특히, 해죽순 50% 에탄올 추출물이 증류수 추출물과 100% 에탄올 추출물 보다 모든 농도에서 더 높은 elatstase 억제 활성을 나타내었다.

상기 결과로부터, 해죽순 추출물은 용매에 무관하게 elastase 억제 활성을 통해 피부 탄력을 증진시킬 수 있으나, 50% 에탄올 추출물의 경우 그 효과가 가장 뛰어남을 알 수 있는바, 이하 실험에서는 해죽순 50% 에탄올 추출물을 이용하였다.

실시예 3. 자외선 조사에 의한 HaCaT 세포에서 피부노화 현상 측정 및 해죽순 추출물에 의한 이의 개선 효과 평가

3.1. 해죽순 추출물의 세포 독성 평가

자외선 조사에 따른 HaCaT 세포의 생존률 측정에 앞서, 본 실시예 3.1에서는 세포에 대한 해죽순 추출물의 독성을 알아 보고자 MTT assay를 진행하였다. 사람유래의 피부각질세포 (Human Keratinocyte)인 HaCaT 세포을 이용하였으며, 배양은 DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium)에 10% FBS (fetal bovine serum)와 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 배지를 사용하였다. 구체적으로 96 well plate에 1×10⁵ cells/mL의 세포를 배양한 후 상기 실시예 1에서 제조한 해죽순 추출물을 처리하여 24시간 동안 배양한 다음, MTT 시약을 각 well에 첨가하고 1 시간 동안 배양한 후, DMSO와 반응을 시켜 595 nm에서 흡광도를 측정하였다. MTT assay에서 세포의 생존률이 80% 이하가 되면 시험물질에 독성이 존재한다고 가정하였다.

그 결과, 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 100μg/mL의 농도를 제외한 모든 농도에서 독성이 나타나지 않았다.

3.2. 해죽순 추출물 처리에 따라 자외선 조사로 인한 세포 사멸 감소 효과 확인

자외선은 피부노화를 일으키는 주요 요인으로서 자외선에 노출되면 피부세포 내의 산화적 스트레스에 의한 노화가 일어난다. 이에 본 실시예 3.2에서는 HaCaT 세포에 30 mJ/cm² 의 UV-B를 조사하여 세포노화를 유도하고, HaCaT 세포의 생존률을 측정함으로써 해죽순 추출물의 상기 노화억제 활성을 평가하였다. 상기 UV-B는 UV lamp (BIO-LINK-CROSSLINKER) 제품을 이용하여 조사하였다.

그 결과, 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 자외선 조사군에서 세포의 생존률은 자외선 비조사군과 비교하여 약 76%로 감소하였지만, 해죽순 추출물의 처리에 의해 세포 생존률이 현저히 증가하였다.

3.3. 해죽순 추출물 처리에 따라 자외선 조사로 인한 활성산소 생성 억제 효과 확인

자외선에 의해 생성되는 세포 내의 활성산소는 피부노화에 가장 중요한 요인으로 간주되고 있다. 이에 본 실시예 3.3 에서는 HaCaT 세포에 자외선을 조사하여 활성산소의 생성 정도를 ROS assay를 이용하여 측정하였다.

그 결과, 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 해죽순 추출물의 처리에 따라 활성산소의 생성은 감소하였으며, 특히 고농도의 해죽순 추출물을 처리할 수록 자외선 조사에 의한 활성산소의 생성이 현저히 감소하였다. 또한, 고농도의 해죽순 추출물의 처리한 세포에서는 자외선 비조사군에 비해서도 활성산소의 생성이 적게 나타났다.

3.4. 해죽순 추출물 처리에 따라 자외선 조사로 인한 콜라겐 감소 억제 효과 확인

자외선에 노출되면 피부세포 내의 산화적 스트레스에 의한 노화가 일어날 뿐만 아니라, 피부 탄력에 관여하는 콜라겐의 분해에 의한 노화도 함께 일어난다. 따라서 피부노화가 실질적으로 이루어지는지 세포 내 콜라겐 양을 확인함으로써 평가할 수 있다. 이에 본 실시예 3.4에서는 HaCaT 세포에 각각 140 mJ/cm² 과 210 mJ/cm² 의 자외선 조사하고, Sircol collagen assay kit (Biocolor life science)을 이용하여 HaCaT 세포 내의 콜라겐 양을 분석하였다.

그 결과, 도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 자외선 조사에 의해서 감소되었던 콜라겐의 함량이 해죽순 추출물 처리에 의해서 다시 증가하는 양상을 보였다.

3.5. 해죽순 추출물 처리에 따라 세포 이동 증가 효과 확인

피부에 상처를 입는 경우 세포이동(cell migration) 현상이 나타나는데, 이는 상처를 입은 피부표피의 기저세포가 상처를 막기 위함이다. 이에 본 실시예 3.5에서는 HaCaT 세포에 100 mJ/cm² 의 자외선을 조사하고 시간이 흐름에 따라 세포이동의 정도를 wound healing asssay를 이용하여 측정하였다.

그 결과, 도 6에서 확인할 수 있는 바와 같이, 자외선 비조사군과 비교하여 자외선 조사군에서 자외선 조사에 의해 세포 이동률이 감소 되었으며, 해죽순 추출물의 처리는 이러한 증상을 감소시켜 세포 이동률을 현저히 증가시켜주었다. 특히, 해죽순 50% 에탄올 추출물 10 μg/mL의 농도에서 세포 이동률이 높게 나타났다.

실시예 4. Mice 모델에서 해죽순 추출물 처리에 따라 자외선 조사에 의한 피부노화 및 홍반 개선 효과 확인

4.1. Mice 모델 내 등쪽 피부 표면 확인

자외선 조사에 따라 피부에 주름이 생기거나 피부가 붉어지는 것은 피부 광노화 증상에 포함된다. 이에 본 실시예 4.1에서는 BALB/C mice에 자외선 조사하여 피부 광노화를 유도하고, 특히 광노화가 유도된 mice 모델의 등쪽 피부에 해죽순 추출물의 처리에 따라 상기 광노화 증상이 개선되었는지 여부를 사진을 찍어서 확인하였다.

그 결과, 도 7에서 확인할 수 있는 바와 같이, 자외선 비조사군(Vehicle UV(-))과 비교하여 자외선 조사한 mice의 피부가 주름이 많고 붉은색을 띠어 홍반이 유도되었음을 알 수 있었다. 한편 해죽순 추출물을 처리한 mice의 피부는 붉은색이 감소되어 홍반이 개선됨을 확인할 수 있었으며, 자외선에 의해 형성된 주름이 개선됨을 육안으로 확인할 수 있었다.

4.2. Mice 모델 내 홍반 지수 측정

본 실시예 4.2에서는 BALB/C mice에 자외선 조사하여 홍반을 유도하고 해죽순 추출물의 처리에 따라 상기 유도된 홍반이 개선되었는지 여부를 색차계를 이용하여 확인하였다.

그 결과, 도 8에서 확인할 수 있는 바와 같이, 자외선 비조사군(Vehicle UV(-))과 비교하여 자외선 조사군(Vehicle UV(+))의 홍반지수가 높으며, 해죽순 추출물의 처리는 홍반지수를 낮추어 주었다.

4.3. Mice 모델 내 피부두께 변화 확인

자외선이 노출된 피부는 다양한 염증 반응이 발생하여 그 두께가 두꺼워 진다. 이에 본 실시예 4.3에서는 자외선 조사에 따라 두꺼워진 BALB/C mice 피부에 해죽순 추출물의 처리하여 피부 상피조직의 두께 변화를 Digimatic IDC Thickness Gage (0-10mm)를 사용하여 확인하였다.

그 결과, 도 9에서 확인할 수 있는 바와 같이, 자외선 비조사군과 비교하여 자외선 조사군의 피부 상피조직이 두껍게 확인되었으며, positive control인 EGCG 처리가 피부두께 변화에 유의한 영향을 미치지 못한 반면, 해죽순 추출물의 처리는 피부 상피조직의 두께를 유의하게 감소시킴을 확인하였다.

< 제형예 1> 토너제의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 추출물을 함유하는 토너제를 하기의 표 1에 나타낸 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.

성 분	함량 (중량 %)
실시예 1	1.0
글리세린	3.0
부틸렌 글리콜	2.0
폴리옥시에칠렌(60) 경화 피마자유	0.5
폴리솔페비트80	0.5
에탄올	10.0
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

< 제형예 2> 로션제의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 추출물을 함유하는 로션제를 하기의 표 2에 나타낸 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.

성 분	함량 (중량 %)
실시예 1	1.0
글리세린	7.0
부틸렌글라이콜	3.0
글리세릴스테아레이트/피이지-100스테아레이트	1.0
폴리솔페비트60	0.5
소르비탄세스퀴올리에이트	0.5
스쿠알란	3.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0
쉬어버터	2.0
스테아릴 알코올	0.5
스테아린산	0.5
카르복실비닐폴리머	0.2
아르기닌	0.2
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

< 제형예 3> 크림제의 제조

상기 실시예 1에서 얻은 추출물을 함유하는 크림제를 하기의 표 3에 나타낸 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.

성 분	함량 (중량 %)
실시예 1	1.0
글리세릴스테아레이트/피이지-100스테아레이트	2.0
폴리솔베이트60	0.5
소르비탄 스테아레이트	0.5
피토스쿠알란	5.0
호호바 오일	3.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	10.0
알로에 버터	3.0
밀납	1.0
스테아릴 알코올	0.5
베헤릴 알코올	0.5
스테아린산	0.5
글리세린	7.0
부틸렌 글리콜	5.0
카르복시 비닐폴리머	0.2
아르기닌	0.3
디메치콘	0.5
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

상기 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따른 해죽순 추출물 및 해죽순 발효추출물은 자외선에 의한 피부노화 억제 또는 개선 활성 및 홍반 억제 또는 개선 활성이 뛰어나므로 화장품 및 약학적 소재 등의 용도로 유용하게 이용될 수 있다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가지는 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (12)

1. 해죽순 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 자외선으로 인한 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 조성물은 피부 상피조직의 두께 증가를 억제하는 것을 특징으로 하는, 자외선으로 인한 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 조성물은 엘라스틴 분해 효소의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 자외선으로 인한 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 조성물은 피부 내 콜라겐의 분해 및 감소를 억제하는 것을 특징으로 하는, 자외선으로 인한 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
5. 제 1 항에 있어서,
   상기 해죽순 에탄올 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 90 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는, 자외선으로 인한 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
6. 삭제
7. 삭제
8. 해죽순 에탄올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 자외선으로 인한 홍반 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
9. 삭제
10. 제 8 항에 있어서,
    상기 해죽순 에탄올 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 90 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는, 자외선으로 인한 홍반 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
11. 삭제
12. 삭제

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