KR102370418B1

KR102370418B1 - 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물

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Publication number: KR102370418B1
Application number: KR1020210126317A
Authority: KR
Inventors: 이성진; 이광형; 배은영; 박경용; 강태훈; 신재윤; 조은경
Original assignee: 주식회사 차메디텍
Priority date: 2021-09-24
Filing date: 2021-09-24
Publication date: 2022-03-04

Abstract

본 발명은 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구기자 추출물로부터 분리한 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물 중 하나 또는 둘을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
[화학식 1]

[화학식 2]

본 발명에 따르면, 구기자 추출물에 대한 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선하는 효능을 검증하고, 구기자 추출물로부터 분리정제된 화합물에 대한 효능을 검증함을 통해, 매우 뛰어난 항아토피 활성을 가질 뿐만 아니라, 천연물 추출물 또는 이에 포함되어 있는 화합물로서 아토피성 피부염 예방 및 개선 효과를 갖는 기능성 화장료 조성물의 원료로 사용될 경우 독성과 부작용이 없으며 장기적으로 사용 가능한 효과가 있다.

Description

구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물{A functional cosmetic composition that prevents and improves atopic dermatitis containing a compound separated from the gojiberry extract as an active ingredient}

본 발명은 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구기자 추출물로부터 분리정제된 화합물에 대한 효능을 검증하여 독성과 부작용이 없고 장기적으로 사용 가능한 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근 사회경제적 성장에 따른 산업화, 도시화로 인한 생활환경의 변화와 대기오염 등으로 인해 알레르기 질환의 악화요인이 증가하여 면역체계 이상에 의해 발생하는 염증, 알레르기 및 아토피성 피부염 등의 알레르기 질환이 증가하고 있다.

아토피성 피부염은 피부에 발생하는 만성 알레르기 염증성 질환으로 우리나라 유아 및 어린이의 20%이상 고통받고 있으며, 치료를 위한 시간적, 경제적 및 정신적 부담으로 인하여 삶의 질을 현저히 떨어뜨리는 질환으로 분류되고 있다. 또한, 아토피 환자의 50% 이상이 천식, 75% 이상이 알레르기성 비염으로 진행되는 등 천식, 알레르기 비염 및 식품 알레르기와도 연관이 많아 아토피성 피부염에 대한 심각성이 대두되고 있다.

아토피성 피부염은 항원에 대한 이상적 피부반응으로 세균감염에 의해 악화된다고 알려져 있으며, 피부장벽 손상(microbiome, physical, chemical, immunological barrier), TSLP 발현, Th1/Th2 불균형, 각질형성세포(keratinocyte), 비만 세포(mast cell), 수지상 세포(dendritic cell) 등의 세포과다활성 등 다양한 면역반응에 총체적으로 문제가 생기는 질환이다. 따라서, 아토피성 피부염의 치료에는 다양한 악화인자를 억제하는 복합적 치료가 필요한 상황이다.

특히, 아토피성 피부염은 만성적인 피부의 염증성 질환으로 환경오염, 과도한 항생제 사용, 스트레스 등으로 인하여 환자가 급증하고 있다. 아토피 환자수는 고혈압, 당뇨병보다 많으며 매년 환자 수가 급증하고 있지만, 병원을 찾지 않고 단순 보습제, 민간요법 등으로 치료하는 이들을 감안하면 최고 800만 명에 이른다.

아토피성 피부염 치료제는 스테로이드나 타크로리무스(tacrolimus) 같은 비특이적 면역억제제이거나 항생제, 항히스타민제 같은 증상완화제로 근본적인 치료제가 없으며 항생제와 스테로이드는 장기복용시의 부작용으로 인하여 국민이 선택할 수 있는 치료법이 제한되어 있다. 또한, 아토피성 피부염은 예방적인 차원에서 복용 및 사용할 수 있는 소재의 개발이 전무하며, 아토피의 특성상 장기사용이 필요하므로, 독성과 부작용이 없고 장기적으로 사용 가능한 예방 및 개선용 소재의 개발이 필요하다.

한편, 구기자는 구기자 나무의 열매(Lycii fructus)를 말하고, 뿌리의 껍질은 지골피, 잎은 구기엽, 어린순은 청정초라고 한다. 동의보감에 의하면 구기자는 자양, 강장, 보혈, 지갈 등에 효능이 있다고 하며, 본초강목에 의하면 구기자는 독성이 없고, 구기자 복용시 근골이 단단해지고 더위와 추위를 타지 않으며 가슴의 염증과 갈증을 수반하는 당뇨병이나 신경이 마비되는 질병에 좋고 폐와 신장의 기능을 촉진시켜 시력을 좋아지게 하는 것으로 기록되어 있다. 구기자는 betain, cholin, physalien, rutin, β-sitosterol, zeazanthin 등 다양한 기능성 성분을 함유하고 있으며, 항산화, 항균, 항암, 면역증진, 간 기능개선 및 혈중 콜레스테롤 저하 효과 등 다양한 생리활성을 나타낸다.

종래 기술로는 국내등록특허 제10-1310980호에 구기자나무가지의 유기용매 추출물의 클로로포름 분획물 또는 에틸아세테이트 분획물 중에서 선택되는 어느 하나를 유효성분으로 함유하는 피부 항산화 및 주름 개선용 화장료 조성물이 개시되어 있다. 그러나, 상기 종래기술은 피부 항산화 및 주름 개선용 효과를 갖는 추출물을 제공하는 것에 국한되어 있을 뿐이다.

따라서, 구기자 추출물 또는 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖도록, 구기자 추출물에 대한 항아토피 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선하는 효능을 검증하고, 구기자 추출물로부터 분리정제된 화합물에 대한 효능을 검증하여 독성과 부작용이 없고 장기적으로 사용 가능한 천연물 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선용 기능성 화장료 소재의 개발이 필요하다.

KR

10-1310980

B1(2013. 09. 13.)

본 발명은 상기 종래기술이 갖는 문제점을 해결하기 위해서 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물을 제공함에 그 목적이 있다.

또 다른 목적으로는 구기자 추출물에 대한 아토피성 피부염 동물 모델을 통해 아토피성 피부염의 증상을 개선하는 효능을 검증하고, 구기자 추출물로부터 분리정제된 화합물에 대한 효능을 검증함을 통해, 독성과 부작용이 없고 장기적으로 사용 가능한 천연물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선용 기능성 화장료 조성물을 제공함에 그 목적이 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물은 구기자 추출물로부터 분리한 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물 중 하나 또는 둘을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

[화학식 1]

[화학식 2]

또한, 상기 구기자 추출물은 세척하고 수분함량이 5% 이하가 되도록 건조하여 50~100mesh의 크기로 분쇄한 구기자 100중량부에 30% 에탄올 500~700중량부를 혼합하고, 60~80℃에서 2~4시간 동안 2~4회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 추출한 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 구기자 추출물로부터 분리한 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물은 구기자 추출물의 에틸아세테이트 분획물로부터 분리정제되는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 구기자 추출물로부터 분리한 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물은 사이토카인(cytokine)인 CCL17 및 CCL22의 분비를 억제하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 에센스, 영양에센스, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 크림, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 아이크림, 핸드크림, 팩, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스프레이, 파운데이션, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 한다.

도 1은 본 발명에 따른 구기자 추출물의 제조시 용매 추출조건에 따른 효능 평가를 나타낸 도면이다.
도 2는 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 화합물(scopolectin)의 분리정제공정을 나타낸 도면이다.
도 3은 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리정제한 화합물(scopolectin)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 도면이다.
도 4는 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리정제한 화합물(scopolectin)의 NMR 스펙트럼을 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리정제한 화합물(betain)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명에 따른 구기자 추출물을 DNCB 유도 아토피 마우스 모델에 경구투여하여 귀 두께 측정 및 귀 조직을 염색하여 표피와 진피의 두께를 측정한 도면이다.
도 7은 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리정제한 화합물의 TNF-α/INF-γ 자극에 의해 분비되는 CCL17 및 CCL22 억제 효과를 나타낸 도면이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면을 참조하여 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다.

먼저, 본 발명에 따른 구기자 추출물은 구기자를 에탄올(주정)로 추출하여 제조한 것으로서, 세포독성이 없고, DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene) 유도 아토피 동물모델을 통해, 아토피성 피부염 마우스 모델의 귀 두께 감소 효능이 검증되어 아토피성 피부염 예방 및 개선효과가 있음을 확인하였다.

본 발명의 구기자 추출물은 세척하고 수분함량이 5% 이하가 되도록 건조하여 50~100mesh의 크기로 분쇄한 구기자 100중량부에 30% 에탄올 500~700중량부를 혼합하고, 60~80℃에서 2~4시간 동안 2~4회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 추출한다.

여기서, 추출용매로 30% 에탄올을 사용하는 것은 추출용매로 물 또는 30, 50, 70 및 100% 에탄올을 사용하여 구기자 추출물을 제조하고, 이에 따른 용매 추출조건에 따른 효능을 측정해 본 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, 세포독성이 없고 농도 의존적으로 30% 에탄올에서 가장 우수한 효과를 보였기 때문이다. 따라서, 본 발명에서는 추출용매로 30% 에탄올을 사용하여 추출물을 제조한다.

도 2은 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 화합물(scopolectin)의 분리정제공정을 나타낸 도면이고, 도 3은 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리정제한 화합물(scopolectin)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 도면이며, 도 4는 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리정제한 화합물(scopolectin)의 NMR 스펙트럼을 나타낸 도면이다.

본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리한 화합물은 TNF-α/INF-γ 자극에 의해 분비되는 CCL17 및 CCL22에 대해 농도 의존적으로 분비를 억제하는 효과가 있음을 하기의 실험 2 및 도 7을 통해 확인하였다.

본 발명의 구기자 추출물로부터 분리한 화합물은 상기의 방법으로 제조된 구기자 추출물을 물에 현탁시킨 후, 에틸아세테이트를 이용하여 용매분획하고 감압농축하여 분획물을 제조한 후, 상기 분획물을 메탄올을 사용하여 중압액체 크로마토그래피(MPLC)를 실시하여, 이 중 3번째 fraction과 4번째 fraction을 고성능액체 크로마토그래피(HPLC)를 통하여 화학식 1의 화합물을 분리정제하였다.

여기서, 분리정제된 화학식 1의 화합물은 ¹H-, ¹³C-NMR, MS 스펙트럼과 기존에 보고된 문헌을 비교한 결과, scopolectin(스코폴레틴)으로 구조 동정되었다.

Amorphous solid; ¹H-NMR (500 MHz, CD₃OD) δ 3.90 (3H, s, 6-OMe), 6.19 (1H, d, J = 9.5 Hz, H-3), 6.76 (1H, s, H-8), 7.10 (1H, s, H-5), 7.84 (1H, d, J = 10 Hz, H-4); ¹³C-NMR (125 MHz, CD₃OD) δ 56.8 (6-OMe), 103.9 (C-8), 109.9 (C-5), 112.5 (C-10), 112.6 (C-3), 146.1 (C-4), 147.1 (C-6), 151.4 (C-7), 152.9 (C-9), 164.1 (C-2).

[화학식 1]

도 5는 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리정제한 화합물(Betain)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 도면이다.

본 발명의 구기자 추출물로부터 분리한 화합물은 상기의 방법으로 제조된 구기자 추출물을 물에 현탁시킨 후, 에틸아세테이트를 이용하여 용매분획하고 감압농축하여 분획물을 제조한 후, 상기 분획물을 메탄올을 사용하여 중압액체 크로마토그래피(MPLC) 및 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통하여 화학식 2의 화합물을 분리정제하였다.

여기서, 분리정제된 화학식 2의 화합물은 HPLC 크로마토그램과 기존에 보고된 문헌을 비교한 결과, betain(베타인)으로 구조 동정되었다.

[화학식 2]

또한, 전체 조성물에 대하여, 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 0.1~10중량%를 유효성분으로 포함하는 것이 바람직하다.

이는 최소한의 효과를 달성할 수 있도록 조성물의 함량은 상기 최소치 이상인 것이 바람직하며, 또한 과량 첨가에 따른 사용감 저하 및 각종 제형에의 적용가능성을 고려하여 조성물의 함량은 상기 최대치 이하인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 에센스, 영양에센스, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 크림, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 아이크림, 핸드크림, 팩, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스프레이, 파운데이션, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산에스테르가 사용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세린, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분과 담체 성분 이외에, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 포함할 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 포함할 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 포함할 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 포함할 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 포함할 수 있지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제, 정제수 등을 포함할 수 있다.

유지 성분으로는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물유지 등을 포함할 수 있다.

에스테르계 유지로는 트리2-에틸헥산글리세릴, 2-에틸헥산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 포함할 수 있다.

탄화 수소계 유지로는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 포함할 수 있다.

실리콘계 유지로는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 포함할 수 있다.

불소계 유지로는 퍼플루오로폴리에테르 등을 포함할 수 있다.

동물 또는 식물 유지로는 아보카도유, 아몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지, 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 포함할 수 있다.

보습제로는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 포함할 수 있다.

수용성 저분자 보습제로는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 포함할 수 있다.

지용성 저분자 보습제로는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 포함할 수수 있다.

수용성 고분자로는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 포함할 수 있다.

지용성 고분자로는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 포함할 수 있다.

에몰리엔트제로는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 포함할 수 있다.

계면 활성제로는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면활성제 등을 포함할 수 있다.

비이온성 계면 활성제로는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌) 솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP(폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 포함할 수 있다.

음이온성 계면 활성제로는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 포함할 수 있다.

양이온성 계면 활성제로는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제4급 암모늄염 등을 포함할 수 있다.

양성 계면 활성제로는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면활성제 등을 포함할 수 있다.

유기 및 무기 안료로는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트 오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 포함할 수 있다.

유기 분체로는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 포함할 수 있다.

자외선 흡수제로는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 포함할 수 있다.

살균제로는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 포함할 수 있다.

산화 방지제로는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 포함할 수 있다.

pH 조정제로는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨 등을 포함할 수 있다.

알코올로는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 포함할 수 있다.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 권리범위를 제한하는 것이 아님은 통상의 기술자에게 있어서 명백한 사실이다. 즉, 본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 통상의 기술자에 의하여 쉽게 실시될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.

실시예 1 : 본 발명에 따른 구기자 추출물 제조

세척하고 수분함량이 5% 이하가 되도록 건조하여 50mesh의 크기로 분쇄한 구기자 100중량부에 추출용매 500중량부를 혼합하고 70℃에서 4시간 동안 3회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 추출하여 제조한다.

이때, 추출용매로는 물, 30, 50, 70 및 100% 에탄올을 사용하여 구기자 추출물을 제조하고, 상기 추출용매에 따른 효능평가를 측정하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타난 바와 같이, 추출용매로 물, 30, 50, 70 및 100% 에탄올을 사용하여 제조된 구기자 추출물 중, 세포독성이 없고 농도 의존적으로 30% 에탄올에서 가장 우수한 효과를 보였다. 따라서, 본 발명에서는 30% 에탄올을 사용하여 제조한 구기자 추출물을 이용하여 하기의 실험을 진행하였다.

실시예 2 : 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 화합물(scopolectin)의 분리정제

도 2에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 구기자 추출물을 물에 현탁시킨 후, 에틸아세테이트를 이용하여 용매분획하고 감압농축하여 분획물을 제조한 후, 상기 분획물을 메탄올을 사용하여 MPLC 컬럼 크로마토그래피를 실시하여, 이 중 3번째 fraction과 4번째 fraction으로부터 HPLC를 통하여 화합물(scopolectin)을 분리정제하였다(도 3 및 도 4). 이때, 분리정제 조건은 표 1 및 표 2에 나타내었다.

실시예 3 : 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 화합물(betain)의 분리정제

실시예 1의 구기자 추출물을 물에 현탁시킨 후, 에틸아세테이트를 이용하여 용매분획하고 감압농축하여 분획물을 제조한 후, 상기 분획물을 메탄올을 사용하여 중압액체 크로마토그래피(MPLC) 및 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통하여 화합물(betain)을 분리정제하였다(도 5). 이때, 분리정제 조건은 표 3에 나타내었다.

실험 1 : 본 발명에 따른 구기자 추출물을 이용한 아토피성 피부염 마우스 모델의 귀 두께 및 조직학적 실험

마우스의 귀에 AOO(acetone/olive oil, 1:3)에 녹인 DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene, 1%)를 매주 3일 마우스 귀의 앞뒷면에 10μL씩 도포하여 아토피성 피부염을 유도한 동물모델을 이용하여 실험하였으며, 4주간 실시하였다. 이후, 본 발명의 구기자 추출물을 경구 투여 후 아토피 피부염 유도 마우스의 귀 두께 감소 효과를 실험하였다(1: 음성대조군 (비처리군); 2: 양성대조군 (1% DNCB); 3: 구기자 30% 주정 추출물(100, 300 mg/kg) or Dexamethasone (1 mg/kg)).

또한, 귀 조직을 실온에서 10% 포름알데히드로 고정시키고, 고정된 조직을 파리핀에 묻고 5μm 조각으로 절개하였다. 표피와 진피의 두께를 관찰하기 위해 절편을 헤마톡실린과 에오신(H&E)으로 염색하였다. 표피와 진피의 두께는 200배로 측정되었다. 그 결과는 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타난 바와 같이, 아토피성 피부염 마우스 모델을 이용하여 실험한 결과, DNCB에 의해 유도된 아토피 피부염 마우스 모델은 도포한 DNCB에 의해 마우스의 귀 두께가 증가하였으나, 본 발명의 구기자 추출물 경구 투여군에서는 아토피성 피부염에 의한 귀 두께가 감소하였다. 또한, 귀 조직을 H&E 염색 후 표피와 진피의 두께를 확인한 결과, 대조군과 비교하여 구기자 추출물 경구 투여군에서 농도 의존적으로 감소된 것을 확인하였다.

실험 2 : 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리한 화합물을 이용한 아토피성 피부염에 의한 CCL17 및 CCL22 억제 효과

본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리한 화합물의 항아토피 효능은 keratinocyte인 HaCaT 세포를 이용하였다. HaCaT 세포는 자극물질인 INF-γ와 TNF-α 복합물질을 50ng/mL 처리 후, scopolectin(스코폴레틴)과 betain(베타인)을 동량으로 혼합하여 1, 10, 100μM 농도로 처리하였다. 상등액은 ELISA를 수행하여 아토피 질환의 대표적인 인자로 알려진 CCL17과 CCL22를 분석하였다. 그 결과는 도 7에 나타내었다.

도 7에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 구기자 추출물로부터 분리한 화합물인 scopolectin(스코폴레틴)과 betain(베타인)은 INF-γ와 TNF-α 자극에 의해 분비되는 사이토카인인 CCL17 및 CCL22의 분비를 농도 의존적으로 억제하는 활성을 확인하였다.

Claims

아토피성 피부염에 의한 사이토카인(cytokine)인 CCL17 및 CCL22의 분비를 억제하는 기능성 화장료 조성물에 있어서,
구기자 추출물로부터 분리한 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물 중 하나 또는 둘을 0.1~10중량% 유효성분으로 함유하되,
상기 구기자 추출물은,
세척하고 수분함량이 5% 이하가 되도록 건조하여 50~100mesh의 크기로 분쇄한 구기자 100중량부에 30% 에탄올 500~700중량부를 혼합하고, 60~80℃에서 2~4시간 동안 2~4회 반복추출하여 여과한 후, 회전증발농축기로 농축하고 동결건조시켜 추출하며,
상기 구기자 추출물로부터 분리한 화학식 1 또는 화학식 2의 화합물은 상기 구기자 추출물을 물에 현탁시킨 후, 에틸아세테이트를 이용하여 용매분획하고 감압농축하여 분획물을 제조한 후, 상기 분획물을 메탄올을 사용하여 중압액체 크로마토그래피(MPLC) 및 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통하여 분리정제되는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물.

[화학식 1]

[화학식 2]
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제1항에 있어서,
상기 조성물은,
유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 에센스, 영양에센스, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 크림, 마사지 크림, 영양크림, 모이스처크림, 아이크림, 핸드크림, 팩, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스프레이, 파운데이션, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 아토피성 피부염 예방 및 개선효과를 갖는 기능성 화장료 조성물.