KR20190019164A - B형 간염 감염을 치료하기 위한 papd5 및 papd7 억제제 - Google Patents

B형 간염 감염을 치료하기 위한 papd5 및 papd7 억제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 동정하는 방법으로서, PAP 연관된 도메인 함유 5(PAPD5) 및/또는 PAP 연관된 도메인 함유 7(PAPD7)의 발현 및/또는 활성을 감소시키고/거나; (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물이 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정되는, 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제; 및 PAPD5의 억제제 및 PAPD7의 억제제를 포함하는, HBV 감염의 치료 또는 예방에서 동시 또는 순차 사용을 위한 조합 제제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 약학 조성물, 및 HBV 감염의 치료 중에 치료 성공을 모니터링하는 방법에 관한 것이다.

Description

B형 간염 감염을 치료하기 위한 PAPD5 및 PAPD7 억제제
본 발명은 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 동정하는 방법으로서, PAP 연관된 도메인 함유 5(PAPD5) 및/또는 PAP 연관된 도메인 함유 7(PAPD7)의 발현 및/또는 활성을 감소시키고/거나; (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물이 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정되는, 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제; 및 PAPD5의 억제제 및 PAPD7의 억제제를 포함하는, HBV 감염의 치료 또는 예방에서 동시 또는 순차 사용을 위한 조합 제제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 약학 조성물, 및 HBV 감염의 치료 중에 치료 성공을 모니터링하는 방법에 관한 것이다.
B형 간염 바이러스(HBV)는 감싸진, 부분적인 이중-가닥의 DNA 바이러스이다. 조밀한 3.2 kb HBV 게놈은 코어, 중합효소(Pol), 외피 및 X-단백질을 코딩하는 4개의 중첩된 오픈 리딩 프레임(ORF)으로 이루어진다. Pol ORF는 가장 길고 외피 ORF는 Pol ORF 내에 위치되는 반면, X 및 코어 ORF는 Pol ORF와 중첩된다. HBV의 생명주기는 2개의 주요 사건을 갖는다: 1) 이완 환형 DNA(RC DNA)로부터 폐환형 DNA(cccDNA)의 생성, 및 2) RC DNA를 생성하기 위한 전게놈 RNA(pgRNA)의 역 전사. 숙주 세포의 감염 전에, HBV 게놈은 RC DNA로서 비리온 내에 존재한다. HBV 비리온은 인간 간세포의 표면에 존재하는 음전하 프로테오글리칸에 비특이적으로 결합하고(문헌[Schulze, Hepatology, 46, (2007), 1759-68]), 간세포 나트륨-타우로콜레이트 동반 수송 폴리펩티드(NTCP) 수용체에 대한 HBV 표면 항원(HBsAg)의 특이적 결합을 통해 숙주 세포 내로 들어갈 수 있는 것으로 입증되었다(문헌[Yan, J Virol, 87, (2013), 7977-91]). 바이러스 감염의 제어는 바이러스의 초기 성장시 영향을 주는 감염 후 몇 분 내지 몇 시간 내에 반응시키고 만성적이고 지속적인 감염의 발달을 제한할 수 있는 숙주 내재 면역계의 엄격한 감시를 요구한다. IFN 및 뉴클레오시드(뉴클레오티드) 유사체에 기초한 현재 이용가능한 치료에도 불구하고, HBV 감염은 간경화증 및 간세포 암종의 높은 위험이 있는 약 3억 5천만명의 만성 보균자와 관련하여 세계적으로 중요한 건강 문제로 남아있다.
간세포 및/또는 간내 면역 세포에 의한 HBV 감염에 대응하여 항바이러스 사이토카인의 분비는 감염된 간의 바이러스 제거에서 중요한 역할을 한다. 그러나, 만성적으로 감염된 환자는 숙주 세포 인지 시스템 및 후속 항바이러스 반응에 대응하는 바이러스에 의해 채택된 다양한 탈출 전략으로 인해 약한 면역 반응만을 보인다.
많은 관찰은, 여러 HBV 바이러스 단백질이 바이러스 인지 신호 시스템을 방해하는 초기 숙주 세포 반응 및 후속 인터페론(IFN) 항바이러스 활성에 대응할 수 있음을 나타냈다. 특히, HBV 비어있는 서브바이러스 입자(SVP, HBsAg)의 과도한 분비는 만성적으로 감염된 환자(CHB)에서 관찰된 면역학적 내성 상태의 유지에 관여하는 것으로 생각된다. HBsAg 및 다른 바이러스 항원에 대한 지속적인 노출은 HBV-특이적 T 세포 결실 또는 점진적인 기능 장애를 야기할 수 있다(문헌[Kondo, Journal of Immunology (1993), 150, 4659-4671]; 문헌[Kondo, Journal of MediCal Virology (2004), 74, 425-433]; 문헌[Fisicaro, Gastroenterology, (2010), 138, 682-93]). 더욱이 HBsAg는 직접적인 상호작용에 의해 면역 세포, 예컨대 단핵구, 수지상 세포(DC) 및 천연 살해(NK) 세포의 기능을 억제하는 것으로 보고되었다(문헌[Op den Brouw, Immunology, (2009b), 126, 280-9]; 문헌[Woltman, PLoS One, (2011), 6, e15324]; 문헌[Shi, J Viral Hepat. (2012), 19, e26-33]; 문헌[Kondo, ISRN Gasteroenterology, (2013), Article ID 935295]).
HBsAg 정량화는 만성 B형 간염의 진단 및 치료 반응을 위한 유의미한 바이오마커이다. 그러나, HBsAg 손실 및 형질전환의 달성은 만성적으로 감염된 환자에서 드물게 관찰되지만 치료법의 궁극적인 목표 중 하나로 남아있다. 현재 치료법, 예컨대 뉴클레오시드(뉴클레오티드) 유사체는 HBV DNA 합성을 억제하는 분자이지만, HBsAg 수준을 감소시키는데 관여하지 않는다. 뉴클레오시드(뉴클레오티드) 유사체는, 심지어 장기간의 치료법과 함께, 자연적으로 관찰된 것과 필적할만한 약한 HBsAg 제거(-1% 내지 2%)만을 나타냈다(문헌[Janssen et al., Lancet, (2005), 365, 123-9]; 문헌[Marcellin et al., N. Engl. J. Med., (2004), 351, 1206-17]; 문헌[Buster et al., Hepatology, (2007), 46, 388-94]).
B형 간염 e-항원(HBV 외피 항원 또는 HBeAg로도 지칭됨)은 B형 간염 감염된 세포에 의해 분비되는 바이러스성 단백질이다. HBeAg는 만성 B형 간염 감염과 연관되고, 활성 바이러스 질병의 마커 및 환자의 전염력의 정도로 사용된다.
B형 간염 바이러스 프리코어(precore) 또는 HBeAg의 기능은 완전히 알려지지 않았다. 그러나, HBeAg는 바이러스 내구력에서 중요한 역할을 하는 것으로 널리 공지되어 있다. HBeAg는 면역조절 단백질로서 기능함으로써 HBV 만성을 촉진하는 것으로 여겨진다. 특히, HBeAg는 세포내 뉴클레오캡시드 단백질에 대한 숙주 면역 반응을 약화시키는 것으로 나타난 분비된 부속 단백질이다(문헌[Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141]). HBeAg는 HBV 내구력에 기여하는 면역 내성원으로서 작용하고, 가용성 HBeAg가 태반을 횡단함을 고려하면 아마도 자궁 내에서 기능할 것이다(문헌[Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141]). 또한, HBeAg는 i) 세포내 신호전달을 제어하는 세포 유전자; 및 ii) 바이러스 감염에 대한 선천적인 면역 반응을 줄이는 Toll-유사 수용체 2(TLR-2)를 하향조절한다(문헌[Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141]). HBeAg의 부재 하에, HBV 복제는 TLR2 경로의 상향조절과 연관된다(문헌[Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141]). 따라서, HBeAg는 숙주 면역 반응에 영향을 주는 바이러스/숙주 상호작용을 조절하는데 중요한 역할을 갖는다(문헌[Walsh, Virology, 2011, 411(1):132-141]). 따라서, HBeAg 양성 환자 집단에서 HBeAg의 감소는 HBV 특이적 면역기능장애의 반전을 야기할 수 있다(문헌[Milich, 1997, J. Viral. Hep. 4: 48-59]; 문헌[Milich, 1998, J. Immunol. 160: 2013-2021]). 또한, 분비된 HBeAg는 T 세포 내성의 유도에서 세포내 간염 코어 항원(HBcAg)보다 상당히 더 효율적이고, HBeAg와 HBcAg 사이의 분할 T 세포 내성 및 HBc/HBeAg-특이적 T 세포 내성의 클론 이질성은 천연 HBV 감염, 특히 프리코어-음성 만성 간염에 대해 상당한 관련성을 가질 수 있다(문헌[Chen, 2005, Journal of Virology, 79: 3016-3027]]).
따라서, HBsAg의 분비에 더해 HBeAg의 감소는 HBsAg 단독의 분비의 억제와 비교하여, 만성 HBV 감염의 발생의 개선된 억제를 야기할 수 있다. 또한, 만성으로의 급성 감염의 최고 전염 속도(80% 초과)가 HBeAg-양성 모체로부터의 모체-태아 및 신생아 HBV 전염의 경우에 보고되었다(문헌[Liaw, Lancet, 2009, 373: 582-592]; 문헌[Liaw, Dig. Dis. Sci., 2010, 55: 2727-2734]; 및 문헌[Hadziyannis, 2011, Journal of hepatology, 55: 183-191]). 따라서, 예측된 모체에서의 HBeAg의 감소는 환자의 전염력의 정도를 감소시킬 수 있을 뿐만 아니라 자식의 만성 HBV 감염의 발생을 억제할 수 있다.
따라서, HBV의 치료법에서, 바이러스 발현을 억제하기 위한, 특히 HBsAg 및 HBeAg의 분비를 억제하기 위한 충족되지 않은 의학적 요구가 존재한다(문헌[Wieland, S. F. & F. V. Chisari. J Virol, (2005), 79, 9369-80]; 문헌[Kumar et al. J Virol, (2011), 85, 987-95]; 문헌[Woltman et al. PLoS One, (2011), 6, e15324]; 문헌[Op den Brouw et al. Immunology, (2009b), 126, 280-9]).
국제 특허공개공보 제03/022987호는, 예를 들어 표 7A에서 C형 간염 양성 조직에서 상향조절된 1,298개의 유전자를 개시한다. 언급된 유전자 중 하나는 토포이소머라제-관련 기능 단백질 4(TRF4, AF089897)이다. AF089897은 또한 TRF4-2로 지칭되고, 서열번호 4의 위치 880 내지 2340과 아주 유사하다. PAPD5의 단편이 C형 간염 양성 세포에서 약간 상향조절된 관찰이 PAPD5의 억제가 효과적인 치료법을 대표한다는 임의의 표시를 제공하는 것은 아니다. 국제 특허공개공보 제03/022987 A2호는 PAPD5의 단편이 C형 간염 감염 중에 어떠한 중요한 역할도 하지 않음을 나타내는 어떠한 힌트도 개시하지 않는다. 또한, HCV 및 HBV는 상이한 병인론, 상이한 진행 및 상이한 약물치료를 갖는 2개의 완전히 상이한 질병을 야기하는 2개의 완전히 상이한 바이러스이다. 이것은 PAPD5 및 PAPD7 억제제 DHQ 및 THP가 C형 간염 바이러스(HCV), 또는 HBV 이외의 다른 바이러스(데이터는 제시되지 않음)에 대해 불활성인 본 발명자들의 관찰과 비슷하다.
국제 특허공개공보 제2010/040571호에서, PAPD5는 다른 유전자의 긴 목록에서 임의의 실질적인 증거의 제공 없이 대사성 및 종양성 질병에서 세포 증식에 잠재적인 역할을 갖는 것으로 시사되었다.
국제 특허공개공보 제2013/166264호에서, PAPD5는 다른 유전자의 긴 목록에서 임의의 실질적인 증거의 제공 없이 바이러스 복제의 증가에 잠재적인 역할을 갖는 것으로 시사되었다. 국제 특허공개공보 제2017/066712호에서, 텔로미어의 치료 및 진단에 관한 PAPD5의 하향조절이 기술되었다. 이러한 목적을 위한 5개의 shRNA 구조가 기술되었다.
본 발명자들이 알기로는, PAPD5 또는 PAPD7의 발현은 HBV 감염과 결코 연관되지 않았다.
발명의 목적
따라서, 본 발명의 근원적인 기술적인 문제는 HBV 감염의 치료 및/또는 예방을 위한 개선된 수단 및 방법의 동정 및 제공이다.
이러한 기술적 문제는 본원에 기술되고 청구범위에 특징지어진 양태의 제공에 의해 해결된다.
발명의 내용
본 발명의 한 양상은 (a) 시험 화합물을 (a1) PAPD5 폴리펩티드 및/또는 PAPD7 폴리펩티드; 또는 (a2) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포와 접촉시키는 단계; (b) 상기 시험 화합물의 존재 및 부재 하에 PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 측정하는 단계; 및 (c) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 화합물을, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정하는 단계를 포함하는, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 선별하는 방법, 특히 동정하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 추가 양상은 (a) 시험 화합물을 (i) PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드; 또는 (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포와 접촉시키는 단계; (b) 시험 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 결합하는지 여부를 측정하는 단계; (c) 시험 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지 여부를 측정하는 단계; 및 (d) PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물을, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정하는 단계를 포함하는, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물이다.
본 발명의 추가 양상은 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제로서, (a) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 소분자; 또는 (b) PAPD5 및/또는 PAPD7에 특이적으로 결합하는 항체인 억제제이다.
HBV의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 억제제는 화학식 I 또는 II의 화합물로부터 선택될 수 있다. 특히, 화학식 III 및 IV의 억제제가 본 발명에 유용하다.
도 1은 HBX129653/HBX129654 화학적 프로브 및 3개의 프레이(prey) 단편을 사용한 원-바이-원(1-by-1) 실험으로부터의 그림을 도시한다.
도 2는 HBX129653/HBX129654 화학적 프로브 및 PAPD5/7 전장 단백질을 사용하는 원-바이-원 실험으로부터의 그림을 도시한다.
도 3은 경쟁을 위해 HBX129653(DHQ) 및 MOL653/654를 사용하는 경쟁 검정으로부터의 그림을 도시한다.
도 4는 경쟁을 위해 HBX129654(THP) 및 MOL653/654를 사용하는 경쟁 검정으로부터의 그림을 도시한다.
도 5는 경쟁을 위해 HBX129653(DHQ) 및 INACT653/INACT654를 사용하는 경쟁 검정으로부터의 그림을 도시한다. MOL653은 양성 대조군으로서 포함되었다.
도 6은 경쟁을 위해 HBX129654(THP) 및 INACT653/INACT654를 사용하는 경쟁 검정으로부터의 그림을 도시한다. MOL653은 양성 대조군으로서 포함되었다.
도 7: (A) HBV-감염된 dHepaRG에서 PAPD5 및 PAPD7의 SiRNA 녹-다운(knock-down, KD)은 HBV 발현의 감소를 야기한다. 분화된 HepaRG 세포는 HBV에 의해 감염되었고, HBV 감염 전 1일 및 감염 후 4일에 PAPD5, PAPD7 또는 둘 다(각각 25 nM)에 대해 siRNA로 처리되었다. 상청액을 11일에 수확하였고, 상청액에서 분비된 HBsAg 및 HBeAg의 수준을 ELISA로 측정하였고, 비-처리된 대조군에 대해 정규화시켰다. 이어서, 유전자 발현의 세포 독성 및 억제를 측정하고, 또한 비-처리된 대조군에 대해 정규화시켰다. (B) 상청액에 분비된 HBsAg의 수준만을 측정한 것을 제외하고는, (A)에 기술된 바와 동일한 실험을 수행하였다.
PAPD5 및 PAPD7은 폴리머라제 β-유사 뉴클레오티딜 전달효소의 상과에 속하는 비-정규 poly-A 폴리머라제이다. 본 발명의 문맥에서, 놀랍게도, 시험 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7을 억제하는지 여부를 분석함으로써, HBV 감염의 치료적 개입에 유용한 화합물이 성공적으로 동정될 수 있는 것으로 나타났다. 즉, PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제는 HBV 감염을 억제하는 화합물의 효능에 대한 지시자인 것으로 하기 실시예에서 확인되었다. 하기 실시예는 하기 제시된 화학식 II의 다이하이드로퀴놀리진온 화합물(본원에서 DHQ로 지칭됨) 및 하기 제시된 화학식 IV의 테트라하이드로피리도피리미딘 화합물(본원에서 THP로 지칭됨)이 PAPD5 및 PAPD7 폴리펩티드에 결합함을 증명한다. 이러한 화합물은 HBV 감염 중에 HBV 표면 항원(HBsAg)의 생산 및 HBV RNA의 발현을 억제하는 능력을 갖는다(국제 특허공개공보 제2015/113990 A1호 및 국제 특허공개공보 제2016/177655호). 또한, 첨부된 실시예는 siRNA의 사용에 의한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제가 바이러스 발현, 특히 HBsAg 및 HBeAg의 분비 및 세포내 HBV mRNA의 생산의 억제를 야기한다. 이러한 결과는 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성(예컨대, 양)을 감소시킴으로써, HBV 감염(예컨대, 만성 HBV 감염)이 예방되거나 치료될 수 있음(즉, 개선되고/거나 억제될 수 있음)을 직접적으로 나타낸다. 따라서, 본 발명은 PAPD5 및/또는 PAPD7(예컨대, PAPD5 및 PAPD7)의 발현 및/또는 활성(예컨대, 발현)을 감소시키는 화합물이 HBV 감염을 예방하고/거나 치료하는(즉, 개선하고/거나 억제하는) 화합물로서 동정되는 선별 방법에 관한 것이다.
본 발명의 문맥에서, 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7에 길항작용(즉, 억제)을 하여 HBV 유전자 발현 및 복제의 억제를 야기하고, 이에 따라 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제함이 밝혀졌다. 이러한 화합물은 PAPD5 및/또는 PAPD7 발현 및/또는 활성의 10 내지 100%, 바람직하게는 20 내지 100%, 더욱 바람직하게는 30 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 40 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 50 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 60 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 70 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 80 내지 100%, 가장 바람직하게는 90 내지 100%의 감소를 야기할 수 있다.
본원에 제공된 선별 방법에서, 단계 (a)에서 PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포(즉, (ai))를 사용함으로써, PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현이 측정(즉, 분석/결정)됨이 예견된다. 단계 (a)에서 (ai) PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드(예컨대, 세포-부재 제제에서); 또는 (aii) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포를 사용함으로써, PAPD5 및/또는 PAPD7의 활성이 측정(즉, 분석/결정)될 수 있다.
본 발명의 한 양상에서, PAPD5 및/또는 PAPD7(예컨대, PAPD5, 바람직하게는 PAPD5 및 PAPD7)의 발현을 감소시키는 화합물은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는(즉, 치료하는) 화합물로서 동정된다. 본 발명의 다른 양상에서, PAPD5 및/또는 PAPD7(예컨대, PAPD5, 바람직하게는 PAPD5 및 PAPD7)의 활성을 감소시키는 화합물은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는(즉, 치료하는) 화합물로서 동정된다. 바람직하게는, PAPD5, 또는 분자 PAPD5 및 PAPD7 둘 다의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 화합물은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정된다. 가장 바람직하게는, 분자 PAPD5 및 PAPD7 둘 다의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 화합물은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정된다.
본 발명에 따라서, HBV 감염을 예방하고/거나 치료하는(즉, 개선하고/거나 억제하는) 화합물은 PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 화합물을 동정하기 위한 제1 사전-선택 단계를 수행함으로써 동정(즉, 선택)될 수 있다. 이어서, 제2 단계에서, PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 것으로 동정된 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지 여부가 평가될 수 있다. 따라서, 본 발명은 PAPD5 및/또는 PAPD7(예컨대, PAPD5 및 PAPD7)에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물이 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는(즉, 치료하는) 화합물로서 동정되는 추가 선별 방법에 관한 것이다.
따라서, 본 발명은 (a) 시험 화합물을 (ai) PAPD5 폴리펩티드 및/또는 PAPD7 폴리펩티드; 또는 (aii) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포와 접촉시키는 단계; (b) 상기 시험 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는지 여부를 측정하는 단계; (c) 상기 시험 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지 여부를 측정하는 단계; 및 (d) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물을 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정하는 단계를 포함하는, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 동정하는 방법에 관한 것이다.
따라서, 본 발명에 따라서, PAPD5 및/또는 PAPD7(예컨대, PAPD5, 바람직하게는 PAPD5 및 PAPD7)에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는(즉, 치료하는) 화합물로서 동정된다. 바람직하게는, (i) PAPD5에 결합하거나 분자 PAPD5 및 PAPD7 둘 다에 결합하고; (ii) HBV의 번식을 억제하는 화합물은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정된다. 가장 바람직하게는, 분자 PAPD5 및 PAPD7 둘 다에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정된다.
상기 기술된 선별 방법은 HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물의 동정을 야기한다. 바람직하게는, 상기 화합물은 HBV 감염을 개선하고/거나 억제한다(즉, 치료한다). 따라서, 본원에 제공된 선별 방법은 HBV 감염을 치료하는 화합물의 동정에 유용하다.
본 발명의 문맥에서, PAPD5는 PAPD5 폴리펩티드 또는 PAPD5 mRNA일 수 있다. 바람직하게는, 본원에 제공된 선별 방법의 문맥에서, PAPD5는 PAPD5 폴리펩티드이다. 본 발명의 한 양상은 본원에 제공된 선별 방법에 관한 것이고, 이때 상기 PAPD5 폴리펩티드는 (a) 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열; (b) (a)의 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 더 바람직하게는 98% 이상, 더욱 더 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐); (c) 서열번호 1 또는 2의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열; 또는 (d) (c)의 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 더 바람직하게는 98% 이상, 더욱 더 바람직하게는 99% 이상 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐)을 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩티드이다.
서열번호 1 또는 2(즉, PAPD5)의 효소적 활성 단편의 예는 서열번호 1 또는 2의 위치 145 내지 256의 뉴클레오티딜 전달효소 도메인, 또는 서열번호 1 또는 2의 위치 308 내지 368의 Cid1 poly-A 폴리머라제이다.
본 발명의 다른 양상은 PAPD5를 발현하는 세포가 PAPD5 mRNA를 함유하는 본원에 제공된 선별 방법에 관한 것으로서, 폴리뉴클레오티드는 (i) 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드; (ii) 서열번호 1 또는 2와 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함); (iii) 서열번호 1 또는 2의 효소적 활성 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; (iv) 서열번호 1 또는 2의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함); (v) 서열번호 4 또는 5를 포함하거나 이로 이루어진 뉴클레오티드 서열; 또는 (vi) 서열번호 4 또는 5와 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열(이때, 상기 서열로부터 발현된 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐); 또는 (vii) 가공(즉, 스플라이싱)될 때 (v) 또는 (vi)의 폴리뉴클레오티드를 야기하는 pre-mRNA를 포함하거나 이로 이루어진다.
바람직한 양태에서, PAPD5 mRNA는 서열번호 4 또는 5의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 그러나, PAPD5 mRNA는 또한 서열번호 4 또는 5와 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오티드일 수 있고, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩한다.
본 발명의 문맥에서, PAPD7은 PAPD7 폴리펩티드 또는 PAPD7 mRNA일 수 있다. 바람직하게는, 본원에 제공된 선별 방법의 문맥에서, PAPD7은 PAPD7 폴리펩티드이다. 본 발명의 한 양상은 본원에 제공된 선별 방법에 관한 것이고, PAPD7 폴리펩티드는 (a) 서열번호 3의 아미노산 서열; (b) (a)의 아미노산 서열과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐); (c) 서열번호 3의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열; 또는 (d) (c)의 아미노산 서열과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐)을 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩티드이다.
서열번호 3(즉, PAPD7)의 효소적 활성 단편의 예는 서열번호 3의 위치 15 내지 125의 뉴클레오티딜 전달효소 도메인; 또는 서열번호 3의 위치 178 내지 238의 Cid1 패밀리 poly-A 폴리머라제이다.
본 발명의 다른 양상은 본원에 제공된 선별 방법에 관한 것이고, 이때 PAPD7을 발현하는 세포는 PAPD7 mRNA를 함유하고, 폴리뉴클레오티드는 (i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드; (ii) 서열번호 3과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함); (iii) 서열번호 3의 효소적 활성 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는 (iv) 서열번호 3의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함); (v) 서열번호 6을 포함하거나 이로 이루어진 뉴클레오티드 서열; (vi) 서열번호 6과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열(이때, 상기 서열로부터 발현된 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐); 또는 (vii) 가공(즉, 스플라이싱)될 때 (v) 또는 (vi)의 폴리뉴클레오티드를 야기하는 pre-mRNA를 포함하거나 이로 이루어진다.
바람직한 양태에서, PAPD7 mRNA는 서열번호 6의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 그러나, PAPD7 mRNA는 또한 서열번호 6과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오티드일 수 있고, 이때 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩한다.
본 발명의 문맥에서, 상기 세포는 진핵생물 세포일 수 있다. 예를 들어, 상기 세포는 효모 세포 또는 척추동물 세포일 수 있다. 척추동물 세포는 어류, 조류, 파충류, 양서류, 유대류 및 포유류 세포를 포함한다. 바람직하게는, 세포는 포유류 세포, 가장 바람직하게는, 인간 세포이다. 포유류 세포는 또한 고양이, 개, 소, 말, 염소, 양, 돼지, 쥐, 예컨대 마우스 및 래트, 및 토끼 세포를 포함한다. 본원에 제공된 선별 방법에서, "세포"는 PAPD5 및/또는 PAPD7을 내인성으로 발현하거나 PAPD5 및/또는 PAPD7을 과발현할 수 있다. PAPD5 및/또는 PAPD7을 과발현하기 위하여, 세포는 발현 벡터 내에서 PAPD5 폴리펩티드 및/또는 PAPD7 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서, 세포는 PAPD5 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 PAPD7 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 본원에 제공된 선별 방법의 세포는 비-인간 동물, 예컨대 마우스, 래트, 토끼 또는 흰족제비에 포함될 수 있다.
PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 결합이 측정되는 상기 기술된 선별 방법에서, 화합물은, PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 특정 결합 친화도를 갖는 경우, PAPD5 폴리펩티드 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 결합하는 화합물로서 동정될 수 있다. 예를 들어, PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 화합물은 μM 범위, 또는, 바람직하게는, 100 nM 내지 1 pM의 범위의 해리 상수(Kd)를 가질 수 있다.
본 발명의 문맥에서, 시험 화합물이 PAPD5 폴리펩티드 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는지 여부, 즉 시험 화합물이 PAPAD5 및/또는 PAPD7에 독점적으로 또는 우세하게 결합하는지 여부가 측정(즉, 분석)될 수 있다. 예를 들어, 시험 화합물이 PAPD7에 특이적으로 결합하는지 여부가 측정될 수 있다. 바람직하게는, 시험 화합물이 PAPD5에 특이적으로 결합하는지 여부가 측정된다. 더욱 바람직하게는, 시험 화합물이 PAPD5 및 PAPD7 둘 다에 결합하는지 여부가 측정된다. 예를 들어, 시험 화합물이 PAPD5 및 PAPD7에 특이적으로 결합하는지 여부가 측정될 수 있다.
예를 들어, 본원에 제공된 선별 방법에서, PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 시험 화합물의 결합은, 효모 3 하이브리드 선별을 수행함으로써 측정될 수 있다. Y3H 시스템은 약물-단백질 상호작용의 검출을 위해 적용된 효모 2-하이브리드(Y2H) 시스템의 변형된 버전이다. 이것은 관심 약물과 효모 세포 내부의 DNA-결합 단백질에 고착될 수 있는 리간드의 커플링을 요구한다. 이때, 고착된 약물과 표적 단백질의 상호작용은 이들의 회합을 리포터 유전자의 전사적인 활성화와 연결시킴으로써 검출된다(예컨대, 문헌[Johnsson, Nature Chem Bio, 2011, 7: 375-383]; 및 문헌[Licitra, Proc Natl Acad Sci U S A, 1996, 12; 93(23):12817-21] 참고). 이러한 효모 3 하이브리드 선별에서, 불활성 유리 화합물은 표지된 시험 화합물에 대한 경쟁을 위해 사용될 수 있다.
PAPD5 및/또는 PAPD7로의 시험 화합물의 결합은 또한 비아코어(Biacore), 케모프로테오믹스(ChemoProteomics) 또는 마이크로스케일 써모포레시스(Microscale Thermophoresis)를 사용함으로써 측정될 수 있다.
HBV의 번식을 억제하는 화합물은 바이러스 RNA의 발현을 감소시키고/거나 바이러스 RNA(HBV RNA)로부터 유래하는 바이러스 DNA(HBV DNA)의 생산을 감소시키고/거나 신규한 바이러스 입자(HBV 입자)의 생산을 감소시키고/거나 HBsAg 및/또는 HBeAg의 생산 및/또는 분비를 생성하는 화합물일 수 있다. 따라서, 본 발명의 한 양상은 HBV의 번식을 억제하는 화합물이 HBsAg의 분비를 억제하고/거나 HBeAg의 분비를 억제하고/거나 세포내 HBV mRNA 또는 HBV DNA의 생산을 억제하는 본원에 제공된 선별 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, HBV의 번식을 억제하는 화합물은 HBsAg의 분비, HBeAg의 분비 및 세포내 HBV mRNA의 생산을 억제하는 화합물이다.
예를 들어, HBV의 번식을 억제하는 화합물은 바이러스 RNA(HBV RNA)의 발현, 바이러스 RNA로부터 유래하는 바이러스 DNA(HBV DNA)의 생산, 신규한 바이러스 입자(HBV 입자)의 생산, HBsAg 및/또는 HBeAg의 생산 및/또는 분비를, 비처리된 세포 또는 동물, 적절한 대조군으로 처리된 세포 또는 동물과 비교할 때, 10 내지 100%, 바람직하게는 20 내지 100%, 더욱 바람직하게는 30 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 40 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 50 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 60 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 70 내지 100%, 더욱 더 바람직하게는 80 내지 100%, 가장 바람직하게는 90 내지 100%만큼 감소시킬 수 있다.
본원에 제공된 선별 방법은 시험 화합물을 대조군과 비교하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 대조군은 불활성 시험 화합물일 수 있고, 이때 상기 불활성 시험 화합물은 (i) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 감소시키지 않고/거나; (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하지 않고 HBV의 번식을 억제하지 않는 화합물이다.
이러한 불활성 시험 화합물은 HBV에 대한 활성을 갖지 않고, 예컨대 HBsAg 및 HBeAg의 분비의 억제 및 세포내 HBV mRNA의 생산의 억제를 야기하지 않는다. 예를 들어, 불활성 시험 화합물은 HBsAg의 억제에서 3 μM 초과의 IC50 값을 가질 수 있다. 본원에 제공된 선별 방법에서, 불활성 시험 화합물은 하기 실시예에 정의된 화합물 "DHQ 화합물 - 불활성" 또는 화합물 "THP 화합물 - 불활성"일 수 있다. PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성이 측정된 선별 방법에서, 상기 (i)에 정의된 시험 화합물이 사용할 수 있다. 다르게는, PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 결합이 측정되는 선별 방법에서, 상기 (ii)에 정의된 시험 화합물이 사용할 수 있다. 불활성 화합물은, 예컨대 화학적 변형 및/또는 키랄 분리에 의해 활성 화합물로부터 고안될 수 있다.
본원에 제공된 선별 방법에서, 시험 화합물의 존재 및 부재 하의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 활성이, 예컨대 문헌[Rammelt, RNA, 2011, 17:1737-1746]에 기술된 바와 같이, mRNA의 시험관내 폴리아데닐화를 모니터링함으로써 측정될 수 있다. 간략하게, 리보-올리고뉴클레오티드 A15는 ATP(A), CTP(C), GTP(G), UTP(U), 또는 모든 4개의 dNTP의 존재 하에 대장균(Escherichia coli)에서 발현된 재조합 PAPD5 단백질과 함께 항온처리될 수 있다.
시험 화합물의 존재 및 부재 하의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현은, 예컨대 (q)PCR, 웨스턴 블롯 또는 매스스펙(MassSpec)을 사용하여 측정될 수 있다.
HBV의 번식의 억제는, 예컨대 시험 화합물이 HBsAg 및/또는 HBeA의 분비를 억제하고/거나 세포내 HBV mRNA의 생산을 억제하는 활성을 갖는지 여부를 측정함으로써 측정될 수 있다. HBsAg 및/또는 HBeAg의 분비의 억제는 ELISA, 예컨대 제조사의 설명에 따라 CLIA ELISA 키트(오토바이오 다이아그노스틱(Autobio Diagnostic))를 사용하여 측정될 수 있다. 세포내 HBV mRNA의 생산의 억제는 실시간 PCR에 의해, 예컨대 하기 실시예에 기술된 바와 같이 측정될 수 있다. 시험 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지 여부를 측정하기 위한 추가 방법은 RT-qPCR(예컨대 국제 특허공개공보 제2015/173208호에 기술된 바와 같음); 노던 블롯; 동일 반응계 혼성화 또는 면역-형광에 의해 HBV DNA의 분비를 측정하는 것이다.
본원에 제공된 선별 방법을 수행하기 위하여, 공중 이용가능한 또는 시판 중인 분자 라이브러리가 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 문맥에서, 상기 시험 화합물은 (i) 선별 라이브러리의 소분자; 또는 (ii) 파지 디스플레이 라이브러리의 펩티드, 항체 단편 라이브러리의 펩티드 또는 cDNA 라이브러리로부터 유래하는 펩티드일 수 있다.
예를 들어, 하이브제닉스 서비시스 에스에이에스(Hybrigenics Services SAS)의 cDHA 인간 간(HLV) 라이브러리 또는 cDNA 인간 태반(PLA) 라이브러리가 사용될 수 있다.
PAPD5 폴리펩티드 및/또는 PAPD7 폴리펩티드의 활성이 측정되는 본원에 제공된 선별 방법에서, PAPD5 및 PAPD7의 상기 활성은 바람직하게는 poly-A 폴리머라제 기능(즉, poly-A 폴리머라제 활성)이다. 폴리펩티드(예컨대, PAPD5 또는 PAPD7)의 poly-A 폴리머라제 기능/활성은, 예컨대 문헌[Rammelt, RNA, 2011, 17:1737-1746]에 기술된 바와 같이, 예컨대 mRNA의 시험관내 폴리아데닐화를 모니터링함으로써 측정될 수 있다. 이러한 방법은 또한 시험 화합물의 존재 및 부재 하에 PAPD5 및/또는 PAPD7의 poly-A 폴리머라제 기능을 측정하는데 사용될 수 있다.
하기 실시예는 PAPD5 및/또는 PDPD7 폴리펩티드를 억제함으로써, HBsAg 및 HBeAg의 분비 및 세포내 HBV mRNA의 생산을 효과적으로 억제할 수 있음을 증명한다. 이러한 데이터는 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제가 HBV 감염을 예방하고/거나 치료할 수 있음을 증명한다.
HBV 감염의 치료에서 특정 효능을 갖는 여러 화합물이 당해 분야에 기술되어 있다(예컨대, 국제 특허공개공보 제2015/113990 A1호 및 국제 특허공개공보 제2016/177655호 참조). 그러나, 본 발명의 문맥에서, 놀랍게도, 구조가 완전히 상이한 항-HBV 약품(예컨대, DHQ 및 THP)이 PAPD5 및 PAPD7에 놀랍게도 특이적으로 결합함이 밝혀졌다. 또한, 종래 기술은 또한 HBsAg 생산의 억제에서 덜 활성인 약품을 포괄한다. 이러한 약품은 하기 실시예에서 PAPD5 및 PAPD7에 대해 더 작은 결합 친화도를 갖는 것으로 나타났다(예컨대, "DHQ - 불활성" 참조). 실제로, 하기 실시예는 HBV 감염에 대한 화합물의 활성과 PAPD5 및 PAPD7에 대한 결합 친화도 사이의 명백한 상호관계를 증명한다. 따라서, PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 항-HBV의 선택적인 사용은 특히 높은 항-HBV 효능을 야기한다. 또한, 본 발명은 PAPD5, PAPD7, 또는 특히 PAPD5 및 PAPD7을 억제하는 화합물이 HBsAg 및 HBeAg의 분비의 억제 및 세포내 HBV mRNA의 생산에 관한 특별히 높은 활성을 가짐을 최초로 제시한다. HBsAg 및 HBeAg의 분비의 감소는 HBsAg 단독의 분비의 감소와 비교하여 더욱 효과적으로 만성 HBV 감염의 발생을 억제한다. 또한, HBsAg 및 HBeAg의 분비의 억제는 HBV 감염된 사람의 감염력을 감소시킨다. 또한, 예측된 모체에서 HBeAg의 감소는 또한 자식의 만성 HBV 감염의 발생을 감소시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은 예측치 않게 PAPD5 및/또는 PAPD7을 억제하는 화합물의 선택적인 사용이 HBsAg 및 HBeAg의 상당히 더욱 효과적인 감소에 관해 HBV 감염의 치료에서 개선된 치료 성공을 야기함을 증명한다.
따라서, 본 발명의 양상은 HBV 감염, 특히 만성 HBV 감염의 치료에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제의 용도이다. 추가 양태에서, 본 발명은 바이러스 항원 HBsAg 및 HBeAg의 감소에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제의 용도에 관한 것이다.
따라서, 본 발명은 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제에 관한 것이고, 이때 상기 억제제는 (i) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 소분자; (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 RNA 간섭(RNAi) 분자; (iii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 특이적으로 결합하는 항체; 또는 (iv) (a) 부위-특이적 DNA 뉴클레아제 또는 부위-특이적 DNA 뉴클레아제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 (b) 가이드 RNA 또는 가이드 RNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 게놈 편집 기계(genome editing machinery)이다.
본 발명의 억제제는 또한 PAPD5 및/또는 PAPD7 특이적 잠금 핵산(LNA) 분자일 수 있다.
본 발명의 억제제가 HBV 감염을 치료(예컨대, 개선)하기 위해 사용됨이 예견된다.
억제제는 PAPD7을 특이적으로 억제하는 분자일 수 있다. 바람직하게는, 억제제는 PAPD5를 특이적으로 억제하는 분자이다. 더욱 바람직하게는, 억제제는 PAPD5 및 PAPD7 둘 다를 억제한다. 따라서, 바람직하게는, 본 발명의 억제제는 PAPD5, 또는 PAPD5 및 PAPD7 둘 다를 억제한다. 가장 바람직하게는, 본 발명의 억제제는 PAPD5 및 PAPD7을 억제한다. 본 발명의 한 양상은 본 발명의 억제제가 PAPD5 및 PAPD7 둘 다를 억제하고 무약물 대조군과 비교하여(즉, 어떠한 약물도 투여되지 않은 새포 또는 대상과 비교하여) 50% 이상의 HBsAg 및/또는 HBeAg의 분비의 감소를 야기한다.
본 발명의 억제제는 HBsAg 및 HBeAg의 억제에서 3 μM 미만, 바람직하게는 2 μM 미만, 더욱 바람직하게는 1 μM 미만, 더욱 바람직하게는 0.1 μM 미만, 가장 바람직하게는 0.01 μM 미만의 IC50 값을 가질 수 있다.
부위-특이적 DNA 뉴클레아제(예컨대, Cas9 또는 Cpf1) 및 가이드 RNA를 사용하는 게놈 편집은 당업계에 통상적으로 공지되어 있고, 예컨대 문헌["CRISPR-Cas: A Laboratory Manual", 2016, edited by Jennifer Doudna, ISBN 978-1-621821-31-1]에 기술된다.
예를 들어, 상기 부위-특이적 DNA 뉴클레아제가 Cas9 뉴클레아제인 경우, 게놈 편집 기계는 바람직하게는 (i) 하나 이상의 표적 서열 특이적 CRISPR RNA(crRNA) 분자 및 하나 이상의 트랜스-활성화 crRNA(tracrRNA) 분자로 이루어진 하나 이상의 가이드 RNA; (ii) (i)의 RNA 분자를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; (iii) 하나 이상의 가이드 RNA(하나 이상의 표적 서열 특이적 crRNA 및 하나 이상의 tracrRNA를 포함하는 키메라 RNA 분자임); 또는 (iv) (iii)의 키메라 RNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다.
다른 예에서, 부위-특이적 DNA 뉴클레아제는 Cpf1 뉴클레아제이고, 게놈 편집 기계는 바람직하게는 (i) 표적 서열 특이적 CRISPR RNA(crRNA) 분자를 포함하는 하나 이상의 가이드 RNA; 또는 (ii) (i)의 RNA 분자를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다.
PAPD5 및/또는 PAPD7의 본원에 제공된 억제제는 또한 하나 이상의 사전-조립된 Cas9 단백질-가이드 RNA 리보뉴클레오단백질 복합체(RNP)를 포함하는 게놈 편집 기계일 수 있다.
본원에서, 가이드 RNA는 게놈 PAPD5 또는 PAPD7 DNA를 표적화시키도록 고안된다. 다르게는, PAPD5 및 PAPD7의 게놈 DNA가 표적화될 수 있도록 여러 가이드 RNA가 사용된다. PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제는 비-상동성 말단-연결(NHEJ)을 통해 구조이동 녹-아웃 돌연변이를 게놈 PAPD5 및/또는 PAPD7 DNA로 도입함으로써, 또는 상동-직접 수선(HDR)을 통해 게놈 PAPD5 및/또는 PAPD7 DNA를 변형시킴으로써, 달성될 수 있다. 이러한 기전이 유도될 수 있는 방법은 당업계에 통상적으로 공지되어 있고, 예컨대 문헌[Heidenreich, 2016, Nat Rev Neurosci 17 36-44]에 기술된다.
본 발명의 억제제는 천연 발생 분자, 예컨대 천연 발생 항체 또는 천연 발생 RNAi 분자일 수 있다. 그러나, 본 발명의 억제제는 또한 비-천연 발생 분자일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 억제제는 천연 발생 항체와 동일하지 않은 아미노산 서열을 갖는 항체일 수 있거나, 하나 이상의 비-천연 발생 아미노산 잔사, 예컨대 유사한 측쇄 작용기를 제공하는 합성 아미노산을 포함하는 항체일 수 있다. 예를 들어, 방향족 아미노산은 D- 또는 L-나프틸알라닌, D- 또는 L-페닐글리신, D- 또는 L-2-티엔일알라닌, D- 또는 L-1-, 2-, 3- 또는 4-피렌일알라닌, D- 또는 L-3-티엔일알라닌, D- 또는 L-(2-피리딘일)-알라닌, D- 또는 L-(3-피리딘일)-알라닌, D- 또는 L-(2-피란일)-알라닌, D- 또는 L-(4-이소프로필)-페닐글리신, D-(트라이플루오로메틸)-페닐글리신, D-(트라이플루오로메틸)-페닐알라닌, D-p-플루오로페닐알라닌, D- 또는 L-p-바이페닐알라닌 D- 또는 L-p-메톡시바이페닐알라닌, D- 또는 L-2-인돌(알킬)알라닌, 및 D- 또는 L-알킬알라닌(이때, 알킬 기는 치환된 또는 비치환된 메틸, 에틸, 프로필, 헥실, 부틸, 펜틸, 이소프로필, 이소-부틸 및 이소-펜틸로 이루어진 군으로부터 선택됨)으로 대체될 수 있다. 비-카복실레이트 아미노산은 포스포노- 또는 설페이트화된 아미노산에 의해 공지된 음전하를 갖도록 제조될 수 있고, 이는 비-제한적인 예로서 간주되어야 한다. 추가의 비-천연 아미노산은 알킬 기를 임의의 천연 아미노산과 조합함으로써 제조된 알킬화된 아미노산이다. 염기성 천연 아미노산, 예컨대 리신 및 아르기닌은 아민(NH2) 작용기에서 알킬 기로 치환될 수 있다. 비-천연 아미노산 상의 또 다른 치환은 아스파라긴 또는 글루타민의 니트릴 유도체(예컨대, CONH2 작용기 대신에 CN-잔기를 함유함), 및 메티오닌의 설폭사이드 유도체를 포함한다.
유사하게, 본 발명의 억제제는 천연 발생 RNAi 분자와 동일하지 않는 뉴클레오티드 서열을 갖는 RNAi 분자일 수 있거나, 하나 이상의 비-천연 발생 뉴클레오티드, 예컨대 올리고뉴클레오티드 티오포스페이트, 치환된 리보-올리고뉴클레오티드, LNA 분자, PNA 분자, GNA(글리콜 핵산) 분자, TNA(트레오스 핵산) 분자, 모폴리노 폴리뉴클레오티드, 또는 변형된 골격을 갖는 핵산, 예컨대 폴리실록산, 2'-O-(2-메톡시) 에틸-포스포로티오에이트, 또는 치환기를 갖는 핵산, 예컨대 메틸-, 티오-, 설페이트, 벤조일-, 페닐-, 아미노-, 프로필-, 클로로-, 및 메타노카바뉴클레오시드, 또는 이의 검출을 용이하게 하는 리포터 분자를 포함하는 RNAi 분자일 수 있다. 본 발명의 억제제는 또한 천연 발생 또는 비-천연 발생 소분자 또는 게놈 편집 기계일 수 있다.
본 발명의 문맥에서, 본원에 제공된 억제제는 (i) PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 결합할 수 있고/거나; (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 억제할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 억제제는 PAPD5 폴리펩티드에 결합하고 PAPD5 폴리펩티드의 활성을 억제할 수 있다. 다른 예에서, 본 발명의 억제제는 PAPD7 폴리펩티드에 결합하고 PAPD7 폴리펩티드의 활성을 억제한다. 바람직하게는, 억제제는 PAPD5 및 PAPD7 폴리펩티드 둘 다에 결합하고, PAPD5 및 PAPD7 폴리펩티드 둘 다의 활성을 억제한다. 본 발명의 억제제는 PAPD5 또는 PAPD7의 발현을 억제할 수 있거나; PAPD5 및 PAPD7 둘 다의 발현을 억제할 수 있다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 문맥에서, PAPD5 및/또는 PAPD7을 억제하는 화합물이 HBsAg 및 HBeAg의 분비 및 세포내 HBV mRNA의 생산의 억제에 관해 높은 활성을 갖는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 억제제는 HBsAg 및 HBeAg의 분비를 감소시킨다. HBsAg 분비의 감소에 기인하여, 본 발명의 억제제는 만성 HBV 감염의 발생을 억제한다. 특히, HBeAg 분비의 억제에 기인하여, 본 발명의 억제제는 HBsAg의 분비만을 감소시키는 화합물과 비교하여 만성 HBV 감염의 발생을 더욱 효율적으로 억제한다. 또한, 예측된 모체에서 HBeAg의 감소는 또한 자식의 만성 HBV 감염의 발생을 억제할 수 있다. 따라서, HBeAg 분비의 감소에 기인하여, 본 발명의 억제제는 만성 HBV 감염의 발생(예컨대, HBV 감염된 모체의 자식에서 만성 HBV 감염의 발생)을 억제하고, HBV 감염된 사람의 전염력을 감소시킨다. 따라서, 본 발명의 한 양상은 본원에 제공된 억제제에 관한 것이고, 이때 상기 억제제는 HBsAg 및 HBeAg의 분비를 감소시킨다. 이와 관련하여, 본 발명의 추가 양상은 본원에 제공된 억제제에 관한 것이고, 이때 상기 억제제는 만성 HBV 감염의 발생을 억제하고 HBV 감염된 사람의 전염력을 감소시킨다. 본 발명의 특정 양상에서, 본원에 제공된 억제제는 HBV 감염된 모체의 자식에서 만성 HBV 감염의 발생을 억제한다. 이러한 모체는 바람직하게는 HBeAg 양성이다.
본 발명의 억제제로 치료되는(또는 본 발명의 억제제를 예방적으로 수용하는) 대상은 바람직하게는 인간, 더욱 바람직하게는 HBsAg 양성 및/또는 HBeAg 양성인 인간 환자, 더욱 더 바람직하게는 HBsAg 양성 및 HBeAg 양성인 인간 환자이다. 상기 인간 환자는 예측된 모체, 예컨대 HBeAg 양성 및/또는 HBsAg 양성인 예측된 모체, 더욱 바람직하게는 HBeAg 양성 및 HBsAg 양성인 예측된 모체일 수 있다.
본 발명의 화합물
상기한 바와 같이, 본 발명의 억제제는 소분자일 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 억제제는 하기 화학식 I 또는 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체일 수 있다:
[화학식 I]
Figure pct00001
[상기 식에서,
R1은 수소, 할로겐, C1- 6알킬, C1- 6알킬아미노 또는 C1- 6알콕시이고,
R2는 수소; 할로겐; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알콕시; 시아노; C3-7사이클로알킬; 하이드록시; 또는 페닐-CxH2x-O-이고,
R3은 수소; 할로겐; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; 시아노; 피롤리딘일; 아미노; 페닐-CxH2x-N(C1-6알킬)-; C1-6알콕시카보닐피페라진일; 또는 R7-O-이고,
R7은 수소; 플루오로, 하이드록시 및 C2- 6알켄일로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나 비치환된 C1- 6알킬; C1- 6알콕시C1 - 6알킬; C1- 6알콕시C1-6알콕시C1-6알킬; 아미노C1-8알킬; C1-6알킬카보닐아미노C1-8알킬; C1-6알킬설폰일아미노C1-8알킬; C1-6알킬설판일C1-6알킬; C1-6알킬설폰일C1-6알킬; 시아노C1-6알킬; C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 시아노C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 페닐C1-6알킬; 피롤리딘일카보닐C1-6알킬; C2-6알킨일; 하이드록시C1-6알킬C2-6알킨일; 아미노C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알킬아미노C1-6알콕시C1-6알킬; 다이C1 - 6알킬아미노C1 - 6알콕시C1 - 6알킬; 카복시C1 - 6알킬; C1- 6알콕시카보닐아미노C1 -8알킬; 헤테로아릴C1 - 6알킬(이때, 헤테로아릴은 N-함유 일환형 헤테로아릴임); 또는 헤테로사이클로알킬C1 - 6알킬(이때, 헤테로사이클로알킬은 일환형 헤테로사이클로알킬임)이고,
R4는 수소, 할로겐, C1-6알킬, 시아노 또는 C1-6알콕시이되,
R1, R2, R3 및 R4는 동시에 수소가 아니고;
R5는 수소 또는 C1-6알킬이고;
R6은 수소; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; 플루오로 또는 C1-6알킬로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C3-7사이클로알킬; 또는 페닐-CxH2x-이고;
x는 1 내지 6이다];
[화학식 II]
Figure pct00002
[상기 식에서,
R1은 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로C1-6알킬, 하이드록시C1-6알킬, 니트로C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐C1-6알킬, 카복시C1-6알킬, 다이(C1-6알콕시카보닐)메틸렌일, 시아노C1-6알킬, C3-7사이클로알킬C1-6알킬, 페닐C1-6알킬, C1-6알킬설판일C1-6알킬, C1-6알킬설폰일C1-6알킬, 아미노C1-6알킬, C1-6알킬카보닐아미노C1-6알킬, C1-6알킬설폰일아미노C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐아미노C1-6알킬, 아미노카보닐C1-6알킬, 다이C1-6알킬아미노카보닐C1-6알킬, 일환형 헤테로사이클로알킬C1-6알킬 또는 이미다졸일C1-6알킬이고;
R2는 아릴 또는 헤테로아릴이고, 이때 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로겐, 할로C1-6알킬, 시아노, 니트로, 하이드록시, 할로C1-6알콕시, -O-CxH2x-R3, -O-CyH2y-NHR6, -NR9R10, -SO2-R11, -SO2-NR12R13, 카복시, C1-6알콕시카보닐, -C(=O)-NR12R13, 아릴, 헤테로아릴, 일환형 헤테로사이클로알킬 및 -O-일환형 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 치환되거나 비치환되고, 상기 일환형 헤테로사이클로알킬은 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, C1-6알킬카보닐, C1-6알킬설폰일 또는 C1-6알콕시카보닐로 치환되거나 비치환되고;
R3은 수소; C3-7사이클로알킬; 할로C3-7사이클로알킬; 하이드록시; 하이드록시C1-6알킬C3-7사이클로알킬; C1-6알콕시; 일환형 헤테로사이클로알킬; C1-6알킬, C1-6알킬카보닐, C1-6알킬설폰일, C3-7사이클로알킬 또는 C1-6알콕시카보닐로 치환된 일환형 헤테로사이클로알킬; -C(=O)-R4; C1- 6알킬설핀일; -SO2-R5; -C(NHR7)-C(=O)-R8; 카복시C1 -6알콕시; 또는 아미노카보닐C1-6알콕시이고;
R4는 하이드록시, C1-6알콕시, 아미노, C1-6알킬아미노, 다이C1-6알킬아미노, 테트라하이드로퓨란일아미노, 피롤리딘일 또는 모폴린일이고;
R5는 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 하이드록시, 아미노, C1-6알킬아미노 또는 다이C1-6알킬아미노이고;
R7은 수소 또는 C1-6알콕시카보닐이고;
R8은 하이드록시 또는 C1-6알콕시이고;
R6은 수소, C1-6알킬카보닐, 할로C1-6알킬카보닐, C1-6알콕시카보닐, C1-6알킬설폰일, C3-7사이클로알킬설폰일 또는 C1-6알콕시C1-6알킬설폰일이고;
R9 및 R10은 수소, C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, C1-6알킬카보닐, C1-6알킬설폰일, C3-7사이클로알킬카보닐 및 C3-7사이클로알킬설폰일로부터 독립적으로 선택되거나,
R9 및 R10은 이들이 부착된 질소와 함께 일환형 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
R11은 C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로C3-7사이클로알킬, 하이드록시C1-6알킬, C1-6알콕시C1-6알킬, 할로C1-6알콕시C1-6알킬, C3-7사이클로알킬C1-6알킬, 아미노C1-6알킬, C1-6알킬아미노C1-6알킬, 다이C1-6알킬아미노C1-6알킬, C1-6알킬카보닐아미노C1-6알킬, C1-6알킬설폰일아미노C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐아미노C1-6알킬, C1-6알킬설펜일C1-6알킬, C1-6알킬설판일C1-6알킬 또는 C1-6알킬설폰일C1-6알킬이고;
R12 및 R13은 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C3-7사이클로알킬 및 할로C3-7사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되거나,
R12 및 R13은 이들이 부착된 질소와 함께 일환형 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
U, W 및 Z는 CH 및 N으로부터 독립적으로 선택되고;
X 및 Y 중 하나는 N이고, 다른 하나는 CH 또는 N이다].
본 발명의 한 양상에서, 6-메틸-2-옥소-9-피롤리딘-1-일-6,7-다이하이드로벤조[a]퀴놀리진-3-카복실산, 9-플루오로-6-메틸-2-옥소-6,7-다이하이드로벤조[a]퀴놀리진-3-카복실산, 및 9,10-다이플루오로-6-메틸-2-옥소-6,7-다이하이드로벤조[a]퀴놀리진-3-카복실산은 화학식 I의 화합물로부터 제외된다.
본 발명의 한 특정 양태에서, 화학식 I 및 II의 화합물은 본 발명의 억제제로부터 제외된다. 따라서, 본 발명의 한 양태는 화학식 I 및 II의 화합물이 아닌 본 발명의 억제제에 관한 것이다.
상기한 바와 같이, 하기 실시예는 항-HBV 약품 DHQ(즉, 화학식 III의 화합물) 및 THP(즉, 화학식 IV의 화합물)가 PAPD5 및 PAPD7에 효과적으로 결합함을 증명한다. 따라서, 바람직하게는, 본 발명의 문맥에서, 본 발명의 억제제는 화학식 III 또는 IV의 화합물이다:
[화학식 III]
Figure pct00003
[화학식 IV]
Figure pct00004
.
또한, 하기 실시예에서, 연결기 및 앵커 리간드를 갖는 화학식 III 및 IV의 화합물의 유도체는 PAPD5 및 PAPD7에 대한 결합 친화도를 갖는 것으로 나타났다. 이러한 유도체는 각각 하기 화학식 V 및 VI으로 제시된다. 따라서, 본 발명의 한 양상에서, 본 발명의 억제제는 화학식 V 또는 VI의 화합물이다:
[화학식 V]
Figure pct00005
[화학식 VI]
Figure pct00006
.
본 발명의 문맥에서, 본 발명의 억제제는 화학식 I의 화합물일 수 있고, 이때 억제제는 하기 제1항 내지 제19항에 정의된 화합물 중 어느 한 화합물이다:
1. R1이 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 메틸아미노, 메톡시 또는 에톡시이고,
R2가 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 에틸, 트라이플루오로메틸, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 트라이플루오로메톡시, 시아노, 사이클로프로필, 하이드록시 또는 페닐메틸-O-이고,
R3이 수소, 브로모, 메틸, 프로필, 트라이플루오로메틸, 시아노, 페닐메틸-N(메틸)-, tert-부톡시카보닐피페라진일, 하이드록시, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 이소부톡시, 다이플루오로메틸메틸-O-, 다이플루오로메틸에틸-O-, 트라이플루오로메톡시, 트라이플루오로메틸메틸-O-, 트라이플루오로메틸에틸-O-, 에틸다이플루오로메틸-O-, 비닐다이플루오로메틸-O-, 프로파길-O-, 하이드록시메틸프로파길-O-, 메톡시에틸-O-, 메톡시프로필-O-, 메톡시부틸-O-, 에톡시에틸-O-, 메톡시에틸-O-에틸-O-, 아미노에틸-O-, 아미노펜틸-O-, 아미노헥실-O-, 아미노옥틸-O-, tert-부톡시카보닐아미노펜틸-O-, tert-부톡시카보닐아미노헥실-O-, tert-부톡시카보닐아미노옥틸-O-, 메틸카보닐아미노에틸-O-, 메틸카보닐아미노펜틸-O-, 메틸설폰일아미노에틸-O-, 메틸설폰일아미노펜틸-O-, 메틸설폰일에틸-O-, 메틸설폰일프로필-O-, 메틸설판일프로필-O-, 시아노프로필-O-, 시아노사이클로프로필메틸-O-, 사이클로프로필메틸-O-, 사이클로헥실에틸-O-, 하이드록시에틸-O-, 하이드록시프로필-O-, 하이드록시-다이메틸프로필-O-, 하이드록시-다이플루오로프로필-O-, 하이드록시부틸-O-, 하이드록시펜틸-O-, 하이드록시헥실-O-, 아미노에틸-O-프로필-O-, 에틸아미노-에틸-O-프로필-O-, 이미다졸일에틸-O-, 피라졸일프로필-O-, 트라이아졸일프로필-O-, 모폴린일에틸-O-, 모폴린일프로필-O-, (2-옥소-피롤리딘일)에틸-O-, (2-옥소-피롤리딘일)프로필-O-, 페닐메틸-O-, 페닐에틸-O-, 피롤리딘일에틸-O-, 피롤리딘일프로필-O-, 피롤리딘일카보닐메틸-O-, 테트라하이드로피란일메틸-O- 또는 카복시프로필-O-이고,
R4가 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸 또는 시아노이되,
R1, R2, R3 및 R4가 동시에 수소가 아니고;
R5가 수소 또는 메틸이고;
R6이 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메틸메틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 메틸사이클로프로필 또는 페닐메틸인,
화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
2. R1이 수소, 할로겐, C1-6알킬아미노 또는 C1-6알콕시이고,
R2가 수소, 할로겐, C1-6알킬, C1-6알콕시, C3-7사이클로알킬, 하이드록시 또는 페닐-CxH2x-O-이고,
R3이 수소; 할로겐; C1-6알킬; 시아노; 페닐-CxH2x-N(C1-6알킬)-; C1-6알콕시카보닐피페라진일; 또는 R7-O-이고,
R7이 수소; 플루오로, 하이드록시 및 C2- 6알켄일로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나 비치환된 C1- 6알킬; C1- 6알콕시C1 - 6알킬; C1- 6알콕시C1-6알콕시C1-6알킬; 아미노C1-8알킬; C1-6알킬카보닐아미노C1-8알킬; C1-6알킬설폰일아미노C1-8알킬; C1-6알킬설판일C1-6알킬; C1-6알킬설폰일C1-6알킬; 시아노C1-6알킬; C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 시아노C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 페닐C1-6알킬; 피롤리딘일카보닐C1-6알킬; C2-6알킨일; 하이드록시C1-6알킬C2-6알킨일; 아미노C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알킬아미노C1-6알콕시C1-6알킬; 카복시C1-6알킬; C1-6알콕시카보닐아미노C1-8알킬; 헤테로아릴C1-6알킬(이때, 헤테로아릴은 N-함유 일환형 헤테로아릴임); 또는 헤테로사이클로알킬C1-6알킬(이때, 헤테로사이클로알킬은 일환형 헤테로사이클로알킬임)이고,
R4가 수소, 할로겐, C1-6알킬 또는 시아노이되,
R1, R2, R3 및 R4가 동시에 수소가 아니고;
R5가 수소 또는 C1-6알킬이고;
R6이 수소; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; C3-7사이클로알킬; C1-6알킬C3-7사이클로알킬; 또는 페닐-CxH2x-이고;
x가 1 내지 6인,
화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
3. R1이 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸아미노, 메톡시 또는 에톡시이고,
R2가 수소, 플루오로, 클로로, 메틸, 에틸, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 사이클로프로필, 하이드록시 또는 페닐메틸-O-이고,
R3이 수소, 브로모, 메틸, 프로필, 시아노, 페닐메틸-N(메틸)-, tert-부톡시카보닐피페라진일, 하이드록시, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 이소부톡시, 다이플루오로메틸메틸-O-, 다이플루오로메틸에틸-O-, 트라이플루오로메틸메틸-O-, 에틸다이플루오로메틸-O-, 비닐다이플루오로메틸-O-, 프로파길-O-, 하이드록시메틸프로파길-O-, 메톡시에틸-O-, 메톡시프로필-O-, 메톡시부틸-O-, 에톡시에틸-O-, 메톡시에틸-O-에틸-O-, 아미노에틸-O-, 아미노펜틸-O-, 아미노헥실-O-, 아미노옥틸-O-, tert-부톡시카보닐아미노펜틸-O-, tert-부톡시카보닐아미노헥실-O-, tert-부톡시카보닐아미노옥틸-O-, 메틸카보닐아미노에틸-O-, 메틸카보닐아미노펜틸-O-, 메틸설폰일아미노에틸-O-, 메틸설폰일아미노펜틸-O-, 메틸설폰일에틸-O-, 메틸설폰일프로필-O-, 메틸설판일프로필-O-, 시아노프로필-O-, 시아노사이클로프로필메틸-O-, 사이클로프로필메틸-O-, 사이클로헥실에틸-O-, 하이드록시에틸-O-, 하이드록시프로필-O-, 하이드록시-다이메틸프로필-O-, 하이드록시-다이플루오로프로필-O-, 하이드록시부틸-O-, 하이드록시펜틸-O-, 하이드록시헥실-O-, 아미노에틸-O-프로필-O-, 에틸아미노-에틸-O-프로필-O-, 이미다졸일에틸-O-, 피라졸일프로필-O-, 트라이아졸일프로필-O-, 모폴린일에틸-O-, 모폴린일프로필-O-, (2-옥소-피롤리딘일)에틸-O-, (2-옥소-피롤리딘일)프로필-O-, 페닐메틸-O-, 페닐에틸-O-, 피롤리딘일에틸-O-, 피롤리딘일프로필-O-, 피롤리딘일카보닐메틸-O-, 테트라하이드로피란일메틸-O- 또는 카복시프로필-O-이고,
R4가 수소, 클로로, 브로모, 메틸 또는 시아노이되,
R1, R2, R3 및 R4가 동시에 수소가 아니고;
R5가 수소 또는 메틸이고;
R6이 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메틸메틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 메틸사이클로프로필 또는 페닐메틸인,
화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
4. 하기 화학식 IA의 화합물인 화학식 I 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체:
[화학식 IA]
Figure pct00007
상기 식에서,
R1은 수소, 할로겐 또는 C1-6알콕시이고;
R2는 수소, 할로겐, C1-6알킬, C1-6알콕시, C3-7사이클로알킬, 하이드록시 또는 페닐-CxH2x-O-이고;
R4는 수소 또는 할로겐이고;
R5는 수소 또는 C1-6알킬이고;
R6은 수소; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; C3-7사이클로알킬; C1-6알킬C3-7사이클로알킬; 또는 페닐-CxH2x-이고;
R7은 수소; 플루오로, 하이드록시 및 에텐일로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나 비치환된 C1- 6알킬; C1- 6알콕시C1 - 6알킬; C1- 6알콕시C1 -6알콕시C1-6알킬; 아미노C1 - 8알킬; C1- 6알킬카보닐아미노C1 - 8알킬; C1- 6알킬설폰일아미노C1-8알킬; C1-6알킬설판일C1-6알킬; C1-6알킬설폰일C1-6알킬; 시아노C1-6알킬; C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 시아노C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 페닐C1-6알킬; 피롤리딘일카보닐C1-6알킬; C2-6알킨일; 하이드록시C1-6알킬C2-6알킨일; 아미노C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알킬아미노C1-6알콕시C1-6알킬; 카복시C1-6알킬; C1-6알콕시카보닐아미노C1-8알킬; 헤테로아릴C1-6알킬(이때, 헤테로아릴은 N-함유 일환형 헤테로아릴임); 또는 헤테로사이클로알킬C1-6알킬(이때, 헤테로사이클로알킬은 일환형 헤테로사이클로알킬임)이고;
x는 1 내지 6이다.
5. R1이 수소, 플루오로, 클로로 또는 메톡시이고;
R2가 수소, 플루오로, 클로로, 메틸, 에틸, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 사이클로프로필, 하이드록시 또는 페닐메틸-O-이고;
R4가 수소 또는 클로로이고;
R5가 수소 또는 메틸이고;
R6이 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메틸메틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 메틸사이클로프로필 또는 페닐메틸이고;
R7이 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 다이플루오로메틸메틸, 다이플루오로메틸에틸, 트라이플루오로메틸메틸, 에틸다이플루오로메틸, 비닐다이플루오로메틸, 프로파길, 하이드록시메틸프로파길, 메톡시에틸, 메톡시프로필, 메톡시부틸, 에톡시에틸, 메톡시에틸-O-에틸, 아미노에틸, 아미노펜틸, 아미노헥실, 아미노옥틸, tert-부톡시카보닐아미노펜틸, tert-부톡시카보닐아미노헥실, tert-부톡시카보닐아미노옥틸, 메틸카보닐아미노에틸, 메틸카보닐아미노펜틸, 메틸설폰일아미노에틸, 메틸설폰일아미노펜틸, 메틸설폰일에틸, 메틸설폰일프로필, 메틸설판일프로필, 시아노프로필, 시아노사이클로프로필메틸, 사이클로프로필메틸, 사이클로헥실에틸, 하이드록시에틸, 하이드록시프로필, 하이드록시-다이메틸프로필, 하이드록시-다이플루오로프로필, 하이드록시부틸, 하이드록시펜틸, 하이드록시헥실, 아미노에틸-O-프로필, 에틸아미노-에틸-O-프로필-, 이미다졸일에틸, 피라졸일프로필, 트라이아졸일프로필, 모폴린일에틸, 모폴린일프로필, (2-옥소-피롤리딘일)에틸, (2-옥소-피롤리딘일)프로필, 페닐메틸, 페닐에틸, 피롤리딘일에틸, 피롤리딘일프로필, 피롤리딘일카보닐메틸, 테트라하이드로피란일메틸 또는 카복시프로필인,
제4항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
6. R1이 수소 또는 할로겐이고;
R2가 C1-6알킬, 할로겐 또는 C3-7사이클로알킬이고;
R4가 수소이고;
R5가 수소 또는 C1-6알킬이고;
R6이 C1-6알킬 또는 C1-6알킬C3-7사이클로알킬이고;
R7이 C1-6알킬, C1-6알콕시C1-6알킬 또는 페닐C1-6알킬인,
제4항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
7. R1이 수소, 플루오로 또는 클로로이고;
R2가 메틸, 에틸, 플루오로, 클로로 또는 사이클로프로필이고;
R4가 수소이고;
R5가 수소 또는 메틸이고;
R6이 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸 또는 메틸사이클로프로필이고;
R7이 메틸, 에틸, 메톡시에틸, 메톡시프로필 또는 페닐메틸인,
제6항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
8. R1이 수소이고;
R2가 C1-6알콕시이고;
R4가 수소 또는 할로겐이고;
R5가 수소 또는 C1-6알킬이고;
R6이 수소; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; C3-7사이클로알킬; C1-6알킬C3-7사이클로알킬; 또는 페닐-CxH2x-이고;
R7이 수소; 플루오로, 하이드록시 및 C2-6알켄일로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알콕시C1-6알콕시C1-6알킬; 아미노C1-8알킬; C1-6알킬카보닐아미노C1-8알킬; C1-6알킬설폰일아미노C1-8알킬; C1-6알킬설판일C1-6알킬; C1-6알킬설폰일C1-6알킬; 시아노C1-6알킬; 시아노C3-7사이클로알킬C1-6알킬; C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 페닐C1-6알킬; 피롤리딘일카보닐C1-6알킬; C2-6알킨일; 하이드록시C1-6알킬C2-6알킨일; 아미노C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알킬아미노C1-6알콕시C1-6알킬; 카복시C1-6알킬; C1-6알콕시카보닐아미노C1-8알킬; 이미다졸일C1-6알킬; 피라졸일C1-6알킬; 트라이아졸일C1-6알킬; 모폴린일C1-6알킬; (2-옥소-피롤리딘일)C1-6알킬; 피롤리딘일C1-6알킬; 또는 테트라하이드로피란일C1-6알킬이고;
x가 1 내지 6인,
제4항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
9. R1이 수소이고;
R2가 메톡시, 에톡시 또는 프로폭시이고;
R4가 수소 또는 클로로이고;
R5가 수소 또는 메틸이고;
R6이 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메틸메틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 메틸사이클로프로필 또는 페닐메틸이고;
R7이 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 다이플루오로메틸메틸, 다이플루오로메틸에틸, 트라이플루오로메틸메틸, 에틸다이플루오로메틸, 비닐다이플루오로메틸, 프로파길, 하이드록시메틸프로파길, 메톡시에틸, 메톡시프로필, 메톡시부틸, 에톡시에틸, 메톡시에틸-O-에틸, 아미노에틸, 아미노펜틸, 아미노헥실, 아미노옥틸, tert-부톡시카보닐아미노펜틸, tert-부톡시카보닐아미노헥실, tert-부톡시카보닐아미노옥틸, 메틸카보닐아미노에틸, 메틸카보닐아미노펜틸, 메틸설폰일아미노에틸, 메틸설폰일아미노펜틸, 메틸설폰일에틸, 메틸설폰일프로필, 메틸설판일프로필, 시아노프로필, 시아노사이클로프로필메틸, 사이클로프로필메틸, 사이클로헥실에틸, 하이드록시에틸, 하이드록시프로필, 하이드록시-다이메틸프로필, 하이드록시-다이플루오로프로필, 하이드록시부틸, 하이드록시펜틸, 하이드록시헥실, 아미노에틸-O-프로필, 에틸아미노-에틸-O-프로필-, 이미다졸일에틸, 피라졸일프로필, 트라이아졸일프로필, 모폴린일에틸, 모폴린일프로필, (2-옥소-피롤리딘일)에틸, (2-옥소-피롤리딘일)프로필, 페닐메틸, 페닐에틸, 피롤리딘일에틸, 피롤리딘일프로필, 피롤리딘일카보닐메틸, 테트라하이드로피란일메틸 또는 카복시프로필인,
제8항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
10. R1이 수소 또는 할로겐이고;
R2가 할로겐, C1-6알킬, C1-6알콕시 또는 C3-7사이클로알킬이고;
R4가 수소이고;
R5가 수소 또는 C1-6알킬이고;
R6이 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; C3-7사이클로알킬 또는 C1-6알킬C3-7사이클로알킬이고;
R7이 플루오로 및 하이드록시로 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나 비치환된 C1- 6알킬; C1- 6알콕시C1 - 6알킬; 아미노C1 - 8알킬; C1- 6알킬카보닐아미노C1 -8알킬; C1- 6알킬설폰일아미노C1 - 8알킬; C1- 6알킬설판일C1 - 6알킬; C1- 6알킬설폰일C1 -6알킬; C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 페닐C1-6알킬; C1-6알킬아미노C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알콕시카보닐아미노C1-8알킬; 모폴린일C1-6알킬 또는 테트라하이드로피란일C1-6알킬인,
제4항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
11. R1이 수소, 플루오로 또는 클로로이고;
R2가 플루오로, 클로로, 메틸, 에틸, 메톡시, 에톡시 또는 사이클로프로필이고;
R4가 수소이고;
R5가 수소 또는 메틸이고;
R6이 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 트라이플루오로메틸메틸, 사이클로부틸 또는 메틸사이클로프로필이고;
R7이 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 이소부틸, 사이클로프로필메틸, 다이플루오로메틸메틸, 다이플루오로에틸메틸, 다이플루오로메틸에틸, 트라이플루오로메틸메틸, 에틸다이플루오로메틸, 메톡시에틸, 메톡시프로필, 에톡시에틸, 아미노헥실, 아미노옥틸, tert-부톡시카보닐아미노펜틸, tert-부톡시카보닐아미노옥틸, 메틸카보닐아미노펜틸, 메틸설폰일아미노펜틸, 메틸설폰일프로필, 메틸설판일프로필, 하이드록시프로필, 하이드록시-다이메틸프로필, 하이드록시-다이플루오로프로필, 하이드록시부틸, 하이드록시펜틸, 하이드록시헥실, 에틸아미노-에틸-O-프로필-, 모폴린일에틸, 모폴린일프로필, 페닐메틸 또는 테트라하이드로피란일메틸인,
제10항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
12. R1이 수소인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
13. R2가 할로겐 또는 C1-6알콕시인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
14. R2가 클로로 또는 메톡시인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
15. R5가 수소인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
16. R6이 C1-6알킬 또는 C1-6알킬C3-7사이클로알킬인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
17. R6이 에틸, 이소프로필, tert-부틸 또는 메틸사이클로프로필인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
18. R7이 C1-6알콕시C1-6알킬, 하이드록시C1-6알킬 또는 아미노C1-6알킬인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
19. R7이 메톡시에틸, 메톡시프로필, 하이드록시다이메틸프로필, 하이드록시부틸, 하이드록시펜틸, 하이드록시헥실, 아미노부틸, 아미노펜틸 또는 아미노헥실인, 화학식 I, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 거울상 이성질체.
본 발명의 문맥에서 본 발명의 억제제는 또한 화학식 II의 화합물일 수 있고, 이때 억제제는 하기 제1항 내지 제20항에 정의된 화합물 중 어느 한 화합물이다:
1. R1이 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 하이드록시C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐C1-6알킬 또는 카복시C1-6알킬이고;
R2가 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로겐, 할로C1-6알킬, 시아노, 니트로, 하이드록시, 할로C1 - 6알콕시, 테트라하이드로퓨란일옥시, -O-CxH2x-R3, -O-CyH2y-NHR6, -SO2-R11, -SO2-NR12R13, 카복시, C1- 6알콕시카보닐 및 -C(=O)-NR12R13으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 기로 치환된 페닐; 할로겐, C1- 6알킬, 할로C1 - 6알콕시, 테트라하이드로피란일옥시, -O-CxH2x-R3 및 NR9R10으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일; 또는 C1- 6알킬 또는 다이C1 - 6알킬아미노로 치환된 피리미딘일이고;
R3이 수소, C3-7사이클로알킬, 할로C3-7사이클로알킬, 하이드록시, 하이드록시C1-6알킬C3-7사이클로알킬, C1-6알콕시, 옥세탄일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, 티에탄일, 1,1-다이옥소티엔일, 1,1-다이옥소티올란일, 모폴린일, 옥소피롤리딘일, 옥소모폴린일, 옥소피페라진일, C1-6알콕시카보닐옥소피페라진일, 옥소이미다졸리딘일, C1-6알킬피페라진일, C1-6알킬카보닐피페라진일, C1-6알킬설폰일피페라진일, C1-6알콕시카보닐피페라진일, 아제티딘일, C1-6알킬카보닐아제티딘일, C1-6알킬설폰일아제티딘일, C1-6알콕시카보닐아제티딘일, -C(=O)-R4, C1-6알킬설핀일, -SO2-R5, -C(NHR7)-C(=O)-R8, 카복시C1-6알콕시 또는 아미노카보닐C1-6알콕시이고;
R4가 하이드록시, C1-6알콕시, 아미노, C1-6알킬아미노, 다이C1-6알킬아미노, 테트라하이드로퓨란일아미노, 피롤리딘일 또는 모폴린일이고;
R5가 C1-6알킬, 하이드록시 또는 아미노이고;
R7이 수소 또는 C1-6알콕시카보닐이고;
R8이 하이드록시 또는 C1-6알콕시이고;
R6이 수소, C1-6알킬카보닐, 할로C1-6알킬카보닐, C1-6알콕시카보닐, C1-6알킬설폰일, C3-7사이클로알킬설폰일 또는 C1-6알콕시C1-6알킬설폰일이고;
R9 및 R10이 수소, C1-6알킬 및 C1-6알킬설폰일로부터 독립적으로 선택되거나,
R9 및 R10이 이들이 부착된 질소와 함께 피롤리딘일, 모폴린일, 피페리딘일, 피페라진일 또는 옥소피페라진일을 형성하고;
R11이 C1-6알킬 또는 C1-6알콕시C1-6알킬이고;
R12 및 R13이 수소, C1-6알킬 및 C1-6알콕시C1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
x가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
y가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 CH 또는 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
2. R1이 C1-6알킬이고;
R2가 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로겐, 할로C1-6알킬, 시아노, 하이드록시, 할로C1-6알콕시, 테트라하이드로퓨란일옥시, -O-CxH2x-R3, -O-CyH2y-NHR6, -SO2-R11, -SO2-NR12R13, 카복시, C1- 6알콕시카보닐 및 -C(=O)-NR12R13으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 기로 치환된 페닐; 할로겐, C1-6알킬, 할로C1-6알콕시, 테트라하이드로피란일옥시, -O-CxH2x-R3 및 NR9R10으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일; 또는 C1- 6알킬 또는 다이C1 - 6알킬아미노로 치환된 피리미딘일이고;
R3이 수소, C3-7사이클로알킬, 할로C3-7사이클로알킬, 하이드록시C1-6알킬C3-7사이클로알킬, 옥세탄일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, 티에탄일, 1,1-다이옥소티엔일, 1,1-다이옥소티올란일, 옥소피롤리딘일, 옥소모폴린일, 옥소피페라진일, C1-6알콕시카보닐옥소피페라진일, 옥소이미다졸리딘일, C1-6알킬피페라진일, C1-6알킬카보닐피페라진일, C1-6알킬설폰일피페라진일, C1-6알콕시카보닐피페라진일, 아제티딘일, C1-6알킬카보닐아제티딘일, C1-6알킬설폰일아제티딘일, C1-6알콕시카보닐아제티딘일, -C(=O)-R4, C1- 6알킬설핀일, -SO2-R5, -C(NHR7)-C(=O)-R8, 카복시C1 - 6알콕시 또는 아미노카보닐C1 - 6알콕시이고;
R4가 하이드록시, C1-6알콕시, 아미노, C1-6알킬아미노, 테트라하이드로퓨란일아미노 또는 모폴린일이고;
R5가 C1-6알킬, 하이드록시 또는 아미노이고;
R7이 수소 또는 C1-6알콕시카보닐이고;
R8이 하이드록시 또는 C1-6알콕시이고;
R6이 수소, C1-6알킬카보닐, 할로C1-6알킬카보닐, C1-6알콕시카보닐, C3-7사이클로알킬설폰일 또는 C1-6알콕시C1-6알킬설폰일이고;
R9 및 R10이 수소, C1- 6알킬 및 C1- 6알킬설폰일로부터 독립적으로 선택되거나,
R9 및 R10이 이들이 부착된 질소와 함께 피롤리딘일, 모폴린일, 피페라진일 또는 옥소피페라진일을 형성하고;
R11이 C1-6알콕시C1-6알킬이고;
R12 및 R13이 수소, C1-6알킬 및 C1-6알콕시C1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
x가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
y가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II 또는 제1항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
3. R1이 메틸인, 화학식 II, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
4. R1이 C1-6알킬이고;
R2가 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로겐, 할로C1-6알킬, 시아노, 하이드록시, 할로C1-6알콕시, 테트라하이드로퓨란일옥시, -O-CxH2x-R3, -O-CyH2y-NHR6, -SO2-R11, -SO2-NR12R13, 카복시, C1- 6알콕시카보닐 및 -C(=O)-NR12R13으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 기로 치환된 페닐이고;
R3이 수소, C3- 7사이클로알킬, 할로C3 - 7사이클로알킬, 하이드록시C1 - 6알킬C3 - 7사이클로알킬, 옥세탄일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, 티에탄일, 1,1-다이옥소티엔일, 1,1-다이옥소티올란일, 옥소피롤리딘일, 옥소모폴린일, 옥소피페라진일, C1-6알콕시카보닐옥소피페라진일, 옥소이미다졸리딘일, C1-6알킬피페라진일, C1-6알킬카보닐피페라진일, C1-6알킬설폰일피페라진일, C1-6알콕시카보닐피페라진일, 아제티딘일, C1-6알킬카보닐아제티딘일, C1-6알킬설폰일아제티딘일, C1-6알콕시카보닐아제티딘일, -C(=O)-R4, C1-6알킬설핀일, -SO2-R5 또는 -C(NHR7)-C(=O)-R8이고;
R4가 하이드록시, C1-6알콕시, 아미노, C1-6알킬아미노, 테트라하이드로퓨란일아미노 또는 모폴린일이고;
R5가 C1-6알킬, 하이드록시 또는 아미노이고;
R7이 수소 또는 C1-6알콕시카보닐이고;
R8이 하이드록시 또는 C1-6알콕시이고;
R6이 수소, C1-6알킬카보닐, 할로C1-6알킬카보닐, C1-6알콕시카보닐, C3-7사이클로알킬설폰일 또는 C1-6알콕시C1-6알킬설폰일이고;
R11이 C1-6알콕시C1-6알킬이고;
R12 및 R13이 수소, C1-6알킬 및 C1-6알콕시C1-6알킬로부터 독립적으로 선택되고;
x가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
y가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
U가 CH이고;
W가 CH치고;
Z가 N이고;
X가 N이고
Y가 N인,
화학식 II, 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
5. R1이 메틸이고;
R2가 메틸, 사이클로프로필, 플루오로, 클로로, 요오도, 트라이플루오로메틸, 시아노, 하이드록시, 메톡시, 다이플루오로에톡시, 다이플루오로메톡시, 트라이플루오로에톡시, 트라이플루오로메톡시, 사이클로프로필메톡시, 다이플루오로사이클로프로필메톡시, 하이드록시메틸사이클로프로필메톡시, 옥세탄일에톡시, 옥세탄일메톡시, 테트라하이드로퓨란일에톡시, 테트라하이드로퓨란일메톡시, 테트라하이드로피란일메톡시, 티에탄일메톡시, (1,1-다이옥소티엔일)메톡시, (1,1-다이옥소티올란일)메톡시, 옥소피롤리딘일프로폭시, 옥소모폴린일프로폭시, 옥소피페라진일프로폭시, (tert-부톡시카보닐옥소피페라진일)프로폭시, 옥소이미다졸리딘일프로폭시, 메틸피페라진일프로폭시, 아세틸피페라진일프로폭시, 메틸설폰일피페라진일프로폭시, (tert-부톡시카보닐피페라진일)프로폭시, 아제티딘일에톡시, 아세틸아제티딘일에톡시, 메틸설폰일아제티딘일에톡시, (tert-부톡시카보닐아제티딘일)에톡시, (tert-부톡시카보닐아제티딘일)메톡시, 카복시부톡시, 카복시에톡시, 카복시헥실옥시, 카복시메톡시, 카복시프로폭시, 메톡시카보닐부톡시, 에톡시카보닐헥실옥시, 아미노카보닐부톡시, 아미노카보닐헥실옥시, 아미노카보닐메톡시, 아미노카보닐프로폭시, 메틸아미노카보닐프로폭시, 테트라하이드로퓨란일아미노카보닐메톡시, 모폴린일카보닐메톡시, 메틸설핀일프로폭시, 메틸설폰일프로폭시, 설포프로폭시, 아미노설폰일프로폭시, 아미노-카복시-프로폭시, (tert-부톡시카보닐아미노)-카복시-프로폭시, (tert-부톡시카보닐아미노)-(메톡시카보닐)-프로폭시, 아미노프로폭시, 아미노펜톡시, 아미노헥실옥시, 아미노옥틸옥시, 메틸카보닐아미노프로폭시, 클로로프로필카보닐아미노프로폭시, (tert-부톡시카보닐아미노)헥실옥시, (tert-부톡시카보닐아미노)옥틸옥시, (tert-부톡시카보닐아미노)펜톡시, (tert-부톡시카보닐아미노)프로폭시, 사이클로프로필설폰일아미노프로폭시, 메톡시에틸설폰일아미노프로폭시, 메톡시프로필설폰일, 메톡시프로필아미노설폰일, N-메톡시프로필-N-메틸-아미노설폰일, 카복시, 메톡시카보닐, 메톡시프로필아미노카보닐, N-메톡시프로필-N- 메틸-아미노카보닐 및 테트라하이드로퓨란일옥시로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 기로 치환된 페닐이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II, 또는 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
6. R2가 할로겐, C1-6알콕시, 할로C1-6알콕시, C3-7사이클로알킬C1-6알콕시 및 할로C3-7사이클로알킬C1-6알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 페닐인, 화학식 II, 또는 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
7. R2가 플루오로, 클로로, 메톡시, 다이플루오로에톡시, 트라이플루오로에톡시, 사이클로프로필메톡시 및 다이플루오로사이클로프로필메톡시로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 페닐인, 화학식 II, 또는 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
8. R1이 C1-6알킬이고;
R2가 할로겐, 시아노, 할로C1 - 6알콕시, -O-CxH2x-R3 및 -O-CyH2y-NHR6으로부터 독립적으로 선택되는 2 또는 3개의 기로 치환된 페닐이고;
R3이 수소, C3-7사이클로알킬, 할로C3-7사이클로알킬, 옥세탄일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, C1-6알킬설폰일아제티딘일, 아미노카보닐 또는 C1-6알킬설폰일이고;
R6이 수소 또는 C1-6알콕시카보닐이고;
x가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
y가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II, 또는 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
9. R1이 메틸이고;
R2가 플루오로, 클로로, 시아노, 메톡시, 다이플루오로에톡시, 트라이플루오로에톡시, 사이클로프로필메톡시, 다이플루오로사이클로프로필메톡시, 메틸설폰일프로폭시, 아미노카보닐메톡시, 옥세탄일메톡시, 옥세탄일에톡시, 테트라하이드로퓨란일메톡시, 테트라하이드로피란일메톡시, 메틸설폰일아제티딘일에톡시, 아미노헥실옥시 및 (tert-부톡시카보닐아미노)프로폭시로부터 독립적으로 선택되는 2 또는 3개의 기로 치환된 페닐이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II, 또는 제1항 내지 제5항 및 제8항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
10. R1이 C1-6알킬이고;
R2가 할로겐, C1- 6알킬, 할로C1 - 6알콕시, 테트라하이드로피란일옥시, -O-CxH2x-R3 및 NR9R10으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일이고;
R3이 수소, C3-7사이클로알킬, 티에탄일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, 옥소모폴린일, 1,1-다이옥소-티에탄일, C1-6알킬카보닐아제티딘일, C1-6알킬설폰일아제티딘일, -C(=O)-R4, 카복시C1-6알콕시 또는 아미노카보닐C1-6알콕시이고;
R4가 하이드록시, C1-6알콕시 또는 아미노이고;
R9 및 R10이 수소, C1-6알킬 및 C1-6알킬설폰일로부터 독립적으로 선택되거나,
R9 및 R10이 이들이 부착된 질소와 함께 피롤리딘일, 모폴린일, 피페라진일 또는 옥소피페라진일을 형성하고;
x가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II, 또는 제1항 또는 제2항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
11. R1이 메틸이고;
R2가 플루오로, 클로로, 요오도, 메톡시, 메틸, 다이플루오로에톡시, 테트라하이드로피란일옥시, 사이클로프로필메톡시, 티에탄일메톡시, 테트라하이드로퓨란일메톡시, 테트라하이드로피란일메톡시, 옥소모폴린일프로폭시, (1,1-다이옥소-티에탄일)메톡시, 아세틸아제티딘일메톡시, 메틸설폰일아제티딘일메톡시, 카복시부톡시, 카복시헵틸옥시, 카복시헥실옥시, 카복시펜틸옥시, 카복시프로폭시, 메톡시카보닐헵틸옥시, 아미노카보닐부톡시, 아미노카보닐헵틸옥시, 아미노카보닐헥실옥시, 아미노카보닐메톡시, 아미노카보닐펜틸옥시, 아미노카보닐프로폭시, 카복시메톡시프로폭시, 아미노카보닐메톡시프로폭시, 아미노, 메틸아미노, 다이메틸아미노, 메틸설폰일아미노, 피롤리딘일, 모폴린일, 피페라진일 및 옥소피페라진일로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II, 또는 제1항 내지 제3항 및 제10항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
12. R2가 할로겐, C1-6알콕시, 할로C1-6알콕시, C1-6알킬아미노, 다이C1-6알킬아미노, 피롤리딘일 및 옥소피페라진일로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일인, 화학식 II, 또는 제1항 내지 제3항 및 제10항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
13. R2가 플루오로, 클로로, 메톡시, 다이플루오로에톡시, 메틸아미노, 다이메틸아미노, 피롤리딘일 및 옥소피페라진일로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일인, 화학식 II, 또는 제1항 내지 제3항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
14. R1이 C1-6알킬이고;
R2가 할로겐, 할로C1 - 6알콕시, -O-CxH2x-R3 및 NR9R10으로부터 독립적으로 선택되는 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일이고;
R3이 수소, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, 옥소모폴린일 또는 아미노카보닐이고;
R9 및 R10이 수소 및 C1-6알킬로부터 독립적으로 선택되거나,
R9 및 R10이 이들이 부착된 질소와 함께 피롤리딘일 또는 옥소피페라진일을 형성하고;
x가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II, 또는 제1항, 제2항 및 제10항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
15. R1이 메틸이고;
R2가 플루오로, 클로로, 메톡시, 다이플루오로에톡시, 테트라하이드로퓨란일메톡시, 테트라하이드로피란일메톡시, 옥소모폴린일프로폭시, 아미노카보닐헥실옥시, 메틸아미노, 다이메틸아미노, 피롤리딘일 및 옥소피페라진일로부터 독립적으로 선택되는 2 또는 3개의 기로 치환된 피리딘일이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 N이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II, 제1항 또는 제6항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
16. R1이 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 하이드록시C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐C1-6알킬 또는 카복시C1-6알킬이고;
R2가 할로겐, 니트로, C1- 6알킬설폰일, -O-CxH2x-R3 및 -O-CyH2y-NHR6으로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 페닐; 또는 할로겐, 할로C1 - 6알콕시, -O-CxH2x-R3 및 NR9R10으로부터 독립적으로 선택되는 2개의 기로 치환된 피리딘일이고;
R3이 수소, C3-7사이클로알킬, 하이드록시, C1-6알콕시, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, 모폴린일, -C(=O)-R4, -SO2-R5 또는 아미노카보닐C1-6알콕시이고;
R4가 하이드록시, C1-6알콕시, 아미노, 다이C1-6알킬아미노 또는 피롤리딘일이고;
R5가 C1-6알킬이고;
R6이 수소 또는 C1-6알킬설폰일이고;
R9 및 R10이 C1-6알킬이거나,
R9 및 R10이 이들이 부착된 질소와 함께 피롤리딘일, 모폴린일, 피페리딘일 또는 옥소피페라진일이고;
x가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
y가 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
U가 CH이고;
W가 CH이고;
Z가 CH이고;
X가 N이고;
Y가 N인,
화학식 II 또는 제1항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
17. R1이 C1-6알킬인, 화학식 II, 제1항 또는 제16항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
18. R1이 메틸인, 화학식 II, 또는 제1항, 제16항 및 제17항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
19. R2가 할로겐 및 C1-6알콕시로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 페닐; 또는 할로겐, 다이C1-6알킬아미노, 피롤리딘일 및 옥소피페라진일로부터 독립적으로 선택되는 2개의 기로 치환된 피리딘일인, 화학식 II, 또는 제1항 및 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
20. R2가 플루오로 및 메톡시로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 치환된 페닐; 또는 플루오로, 다이메틸아미노, 피롤리딘일 및 옥소피페라진일로부터 독립적으로 선택되는 2개의 기로 치환된 피리딘일인, 화학식 II, 또는 제1항 및 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체.
상기한 바와 같이, 본 발명의 억제제는 또한 PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 RNAi 분자일 수 있다. 상기 RNAi 분자는 siRNA 또는 shRNA일 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 억제제는 PAPD5를 향하는 siRNA일 수 있고, 이때 siRNA는 하기 siRNA 중 어느 하나이다:
PAPD5 siRNA 풀(pool)(L-010011-00-0010; 온-타겟플러스(ON-TARGETplus) 인간 PAPD5):
siRNA - 1 - J-010011-05 - 표적 서열: CAUCAAUGCUUUAUAUCGA(서열번호 10)
siRNA - 2 - J-010011-06 - 표적 서열: GGACGACACUUCAAUUAUU(서열번호 11)
siRNA - 3 - J-010011-07 - 표적 서열: GAUAAAGGAUGGUGGUUCA(서열번호 12)
siRNA - 4 - J-010011-08 - 표적 서열: GAAUAGACCUGAGCCUUCA(서열번호 13)
본 발명의 억제제는 또한 PAPD7을 향하는 siRNA일 수 있고, 상기 siRNA는 하기 siRNA 중 어느 하나이다:
PAPD7 siRNA 풀(L-009807-00-0005; 온-타겟플러스 인간 PAPD7):
siRNA - 1 - J-009807-05 - 표적 서열: GGAGUGACGUUGAUUCAGA(서열번호 14)
siRNA - 2 - J-009807-06 - 표적 서열: CGGAGUUCAUCAAGAAUUA(서열번호 15)
siRNA - 3 - J-009807-07 - 표적 서열: CGGAGUUCAUCAAGAAUUA(서열번호 16)
siRNA - 4 - J-009807-08 - 표적 서열: GCGAAUAGCCACAUGCAAU(서열번호 17)
상기에서, 적합한 siRNA의 표적 서열을 나타냈다. 상응하는 siRNA의 서열은 이들 표적 서열에 직접적으로 상보성이다.
본 발명의 문맥에서, PAPD5를 향하는 (a) siRNA가 PAPD5 및 PAPD7 둘 다의 발현을 억제하기 위하여 PAPD7을 향하는 (b) siRNA와 조합됨이 예견된다.
놀랍게도, 하기 실시예는 구조가 완전히 상이한 2개의 항-HBV 약품(즉, DHQ 및 THP)이 PAPD5 및 PAPD7에 대한 공유된 결합 부위를 갖거나 적어도 서로 매우 밀접하게 결합함을 증명한다. 특히, PAPD5 및 PAPD7 내의 선택된 상호작용 도메인(SID)이 동정되었다. SID는 동일한 기준 단백질에 부합하는 모든 프레이 단편에 의해 공유되는 아미노산 서열이다. 따라서, SID는 항-HBV 약품 DHQ 및 THP가 PAPD5 및 PAPD7에 결합하는 아미노산 영역에 상응한다. 따라서, 이들 영역에 대한 결합은 PAPD5 및 PAPD7의 활성의 억제를 야기하고, 이는 HBV의 번식의 억제를 야기한다. 따라서, 본 발명의 억제제는 PAPD5 및/또는 PAPD7의 하나 이상의 SID에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다. 따라서, 본 발명의 억제제는 서열번호 7 내지 9 중 어느 하나의 아미노산 신장부에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다. 본 발명의 억제제는 또한 서열번호 7 내지 9의 1개 초과의 아미노산 신장부에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다.
적용례
본 발명에 있어서, PAPD5 및 PAPD7의 조합된 억제가 HBV 번식 억제의 상승효과를 야기함이 놀랍게도 증명되었다. 하기 실시예는, PAPD5 발현만을 감소시키는 것이 약 50%의 HBsAg 및 HbeAg 분비 감소를 야기하고, 비슷하게 PAPD5 억제제를 사용하여 세포내 HBV mRNA가 감소됨을 증명한다. PAPD7의 발현만을 감소시키는 것이 15% 이하의 HBsAg 및 HBeAg 분비 감소를 야기한다. PAPD5 및 PAPD7의 동시적 녹-다운은 HBsAg 및 HBeAg 분비 감소의 상승효과를 야기하고, 이는 단일 녹-다운의 합보다 크다. 이론에 구애됨 없이, 이러한 상승효과는 PAPD5 및 PAPD7의 보상효과에 기인할 수 있는데, 이는 둘 다의 단백질이 높은 서열 상동성 및 동일한 효소 기능을 가지기 때문이다.
따라서, 본 발명의 한 양태는 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 PAPD5의 억제제 및 PAPD7의 억제제를 포함하는 조합 제제에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에서 동시에 또는 순차적으로 사용하기 위한 PAPD5의 억제제 및 PAPD7의 억제제를 포함하는 조합 제제에 관한 것이다. 본 발명에 있어서, 상기 조합 제제는 HBV 감염의 치료(예를 들어, 개선)를 위해 사용되는 것으로 예상된다. 본 발명의 억제제와 관련하여 본원에 개시된 정의는 필요한 부분만 약간 수정하여 본 발명의 조합 제제에 적용된다. 조합 제제는 PAPD5 억제제인 분자 및 PAPD7 억제제인 별개의 분자(예를 들어, 2개의 별개의 siRNA 분자 또는 2개의 별개의 소분자)를 포함할 수 있다. 이들 2개의 별개의 억제제는 하나의 단위체 내에, 예를 들어 하나의 환약 또는 물약병 내에 제형화될 수 있다. 다르게는, 이들 2개의 별개의 억제제는 별개의 단위체, 예를 들어 별개의 환약 또는 물약병으로 제형화될 수 있다. 2개의 별개의 억제제는 이들 2개의 억제제의 상승효과가 달성된다면 함께(즉, 동시에) 또는 별개로(즉, 순차적으로) 투여될 수 있다. 본 발명의 한 양상에서, 조합 제제는 약물 부재 대조군과 비교하여(즉, 약물을 투여받지 않은 세포 또는 개체와 비교하여) 50% 이상의 HBsAg 및 HbeAg 분비의 감소를 야기한다.
또한, 본 발명은 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 약학 조성물에 관한 것으로서, 상기 약학 조성물은 하기를 포함한다:
(i) 본 발명의 억제제, 또는 본 발명의 조합 제제; 및
(ii) 임의적으로, 약학적으로 허용되는 담체.
따라서, 본 발명은 HBV 감염의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 효과량의 본 발명의 억제제, 본 발명의 약학 조성물 또는 본 발명의 조합 제제를 HBV 감염의 치료가 필요한 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 억제제, 본 발명의 조합 제제 또는 본 발명의 약학 조성물은 병용 요법으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 억제제, 본 발명의 조합 제제 또는 본 발명의 약학 조성물은 다른 항-HBV 제제, 예컨대 인터페론 알파-2b, 인터페론 알파-2a 및 인터페론 알파콘-1(페길화되거나 페길화되지 않음), 리바피린, 라미부딘(3TC), 엔테카비르, 테노포비르, 텔비부딘(LdT), 아데포비르, 또는 최근에 생긴 다른 항-HBV 제제, 예컨대 HBV RNA 복제 억제제, HBsAg 분비 억제제, HBV 캡시드 억제제, 안티센스 올리고머(예를 들어, 국제 특허공개공보 제2012/145697호 및 국제 특허공개공보 제2014/179629호에 기술됨), siRNA(예를 들어, 국제 특허공개공보 제2005/014806호, 국제 특허공개공보 제2012/024170호, 국제 특허공개공보 제2012/2055362호, 국제 특허공개공보 제2013/003520호, 국제 특허공개공보 제2013/159109호, 국제 특허공개공보 제2017/027350호 및 국제 특허공개공보 제2017/015175호에 기술됨), HBV 치료 백신, HBV 예방 백신, HBV 항체 요법(단클론성 또는 다클론성), 또는 HBV의 치료 및/또는 예방을 위한 TLR 2, 3, 7, 8 또는 9 작용제와 병용될 수 있다.
하기 실시예는 PAPD5 및/또는 PAPD7의 하향조절이 HBV 감염된 세포에서 HBsAg 및 HbeAg의 생산 및 세포내 HBV mRNA의 생산의 감소에 동조함을 입증한다. 이러한 결과는, 예를 들어 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제에 의한 치료를 계속 진행하거나 수행했던 경우, PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성을 HBV 감염의 치료 동안 치료적 성과를 모니터링하는데 사용될 수 있음을 시사한다. 따라서, 본 발명은 HBV 감염의 치료 동안 치료적 성과를 모니터링하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 하기를 포함한다:
(a) 시험 개체로부터 수득한 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성을 분석하는 단계;
(b) 상기 양 및/또는 활성을 1명 이상의 기준 개체의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성에 해당하는 기준 데이터와 비교하는 단계; 및
(c) 상기 비교 단계 (b)를 기반으로 치료적 성과를 예측하는 단계.
본 발명의 모니터링 방법에서, 시험 개체는 HBV 감염에 대한 약제를 수용하거나 HBV 감염에 대한 약제를 수용했던 인간일 수 있다. 약제는 상기에 기술된 항-HBV 제제를 포함할 수 있다. 또한, 약제는 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제를 포함할 수 있다.
본 발명의 모니터링 방법에서, 기준 데이터는 1명 이상의 기준 개체의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성에 일치할 수 있다. 상기 샘플은 혈액 또는 간 생검일 수 있다.
본 발명의 한 양상은 본 발명의 모니터링 방법에 관한 것으로서, 이때 1명 이상의 기준 개체는 HBV 감염되었으나 HBV 감염에 대한 약제를 수용하지 않았고; 단계 (c)에서 기준 데이터와 비교한 시험 개체의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 감소된 양 및/또는 활성은 HBV 감염의 치료에서 치료적 성과를 시사한다. 예를 들어, 상기 PAPD5 및/또는 PAPD7의 감소된 양 및/또는 활성은, 시험 개체의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성이 1명 이상의 기준 개체의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성의 0 내지 90%임을 의미할 수 있다. 예를 들어, 상기 PAPD5 및/또는 PAPD7의 감소된 양 및/또는 활성은 1명 이상의 기준 개체의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성의 0 내지 80%, 바람직하게는 0 내지 70%, 더욱 바람직하게는 0 내지 60%, 더욱 더 바람직하게는 0 내지 50%, 더욱 더 바람직하게는 0 내지 40%, 더욱 더 바람직하게는 0 내지 30%, 더욱 더 바람직하게는 0 내지 20%, 가장 바람직하게는 0 내지 10%일 수 있다.
본 발명의 또 다른 양상은 본 발명의 모니터링 방법에 관한 것으로서, 이때 1명 이상의 기준 개체는 HBV 감염되거나 HBV 감염에 대한 약제를 수용했었고; 단계 (c)에서, 기준 데이터와 비교하여 시험 개체의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 동일하거나 비슷한 양 및/또는 활성은 HBV 감염의 치료에서 치료적 성과를 시사한다. 본 발명의 추가적 양상은 본 발명의 모니터링 방법에 관한 것으로서, 이때 1명 이상의 기준 개체는 HBV 감염되지 않고; 단계 (c)에서 기준 데이터와 비교하여 시험 개체의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 동일하거나 비슷한 양 및/또는 활성은 HBV 감염의 치료에서 치료적 성과를 시사한다. PAPD5 및/또는 PAPD7의 동일하거나 비슷한 양 및/또는 활성은 시험 개체의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성이 1명 이상의 기준 개체의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성의 90 내지 110%임을 의미할 수 있다. 예를 들어, 상기 PAPD5 및/또는 PAPD7의 동일하거나 비슷한 양 및/또는 활성은 1명 이상의 기준 개체의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성의 95 내지 105%일 수 있다.
또한, HBV 감염을 예방하고/거나 치료하는(예를 들어, 개선하는) 화합물을 동정하고/거나 특징규명하는데 사용될 수 있는, PAPD5 및/또는 PAPD7 발현이 증가되거나 감소되거나 부재하는 세포 또는 비-인간 동물(예를 들어, 마우스, 래트, 흰족제비 또는 토끼)이 본 발명에 포괄된다. 예를 들어, 상기 세포 또는 비-인간 동물은, 예를 들어 발현 벡터 내로 클로닝되고 외인성 프로모터에 작동적으로 연결되는 PAPD5 및/또는 PAPD7을 코딩하는 외인성 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 상기 세포 또는 비-인간 동물은 PAPD5 및/또는 PAPD7, 바람직하게는 PAPD5 및 PAPD7을 과발현할 수 있다. 다르게는, 상기 세포 또는 비-인간 동물은 PAPD5 및/또는 PAPD7의 녹-다운, 바람직하게는 PAPD5 및 PAPD7의 녹-다운을 가질 수 있다.
본 발명의 양태
따라서, 본 발명은 하기 항에 관한 것이다:
1. (a) 시험 화합물을 (a1) PAP 연관된 도메인 함유 5(PAPD5) 및/또는 PAP 연관된 도메인 함유 7(PAPD7); 또는 (a2) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 시험 화합물의 존재 및 부재 하에 PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 측정하는 단계; 및
(c) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 화합물을, B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정하는 단계
를 포함하는, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 동정하는 방법.
2. (a) 시험 화합물을 (a1) PAPD5 및/또는 PAPD7; 또는 (a2) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 시험 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는지 여부를 측정하는 단계;
(c) 상기 시험 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지 여부를 측정하는 단계; 및
(d) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물을, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정하는 단계
를 포함하는, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 동정하는 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, PAPD5가 PAPD5 폴리펩티드 또는 PAPD5 mRNA인, 방법.
4. 제3항에 있어서, PAPD5 폴리펩티드가
(i) 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열;
(ii) (a)의 아미노산 서열과 80% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐);
(iii) 서열번호 1 또는 2의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열; 또는
(iv) (c)의 아미노산 서열과 80% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐)
을 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩티드인, 방법.
5. 제3항에 있어서, PAPD5 mRNA가
(i) 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드;
(ii) 서열번호 1 또는 2와 80 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함);
(iii) 서열번호 1 또는 2의 효소적 활성 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는
(iv) 서열번호 1 또는 2의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열과 80 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함)
를 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오티드인, 방법.
6. 제1항 또는 제2항에 있어서, PAPD7이 PAPD7 폴리펩티드 또는 PAPD7 mRNA인, 방법.
7. 제6항에 있어서, PAPD7 폴리펩티드가
(i) 서열번호 3의 아미노산 서열;
(ii) (i)의 아미노산 서열과 80 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐);
(iii) 서열번호 3의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열; 또는
(iv) (iii)의 아미노산 서열과 80 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열(이때, 폴리펩티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 가짐)
을 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩티드인, 방법.
8. 제6항에 있어서, PAPD7 mRNA가
(i) 서열번호 3의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드;
(ii) 서열번호 3과 80 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함);
(iii) 서열번호 3의 효소적 활성 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열; 또는
(iv) 서열번호 3의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열과 80 이상% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드(이때, 폴리뉴클레오티드는 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는 폴리펩티드를 코딩함)
를 포함하거나 이로 이루어진 폴리뉴클레오티드인, 방법.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 진핵생물 세포인, 방법.
10. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, HBV의 번식을 억제하는 화합물이 HBV 표면 항원(HBsAg)의 분비를 억제하고/거나 HBV 외피 항원(HBeAg)의 분비를 억제하고/거나 세포내 HBV mRNA 또는 HBV DNA의 생산을 억제하는, 방법.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 시험 화합물을 대조군과 비교하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
12. 제11항에 있어서, 대조군에서, 불활성 시험 화합물이 사용되고, 상기 불활성 시험 화합물이 (i) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 감소시키지 않고/거나; (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하지 않고 HBV의 번식을 억제하지 않는 화합물인, 방법.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 시험 화합물이 (i) 선별 라이브러리의 소분자; 또는 (ii) 파지 디스플레이 라이브러리의 펩티드, 항체 단편 라이브러리의 펩티드, 또는 cDNA 라이브러리로부터 유래한 펩티드인, 방법.
14. 제1항 및 제3항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, PAPD5 및 PAPD7의 활성이 poly-A 폴리머라제 기능인, 방법.
15. (i) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 소분자;
(ii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 RNA 간섭(RNAi) 분자;
(iii) PAPD5 및/또는 PAPD7에 특이적으로 결합하는 항체; 또는
(iv) (a) 부위-특이적 DNA 뉴클레아제, 또는 부위-특이적 DNA 뉴클레아제를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 (b) 가이드 RNA, 또는 가이드 RNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 게놈 편집 기계인,
HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제.
16. 제15항에 있어서, (i) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하고/거나; (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 억제하는 억제제.
17. 제15항 또는 제16항에 있어서, HBsAg 및 HBeAg의 분비를 감소시키는 억제제.
18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 만성 HBV 감염의 발생을 억제하고/거나 HBV 감염된 사람의 전염력을 감소시키는 억제제.
19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 III 또는 IV의 화합물인 억제제:
[화학식 III]
Figure pct00008
[화학식 IV]
Figure pct00009
.
20. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, RNAi 분자, 예컨대 siRNA 또는 shRNA인, 억제제.
21. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 7 내지 9 중 어느 하나의 아미노산 신장부에 특이적으로 결합하는 항체인 억제제.
22. PAPD5의 억제제 및 PAPD7의 억제제를 포함하는, HBV 감염의 치료 및/또는 예방에서의 동시 또는 순차 사용을 위한 조합 제제.
23. (i) 제15항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 억제제; 또는 제22항에 따른 조합 제제; 및 (b) 임의적으로, 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 약학 조성물.
24. (a) 시험 대상으로부터 수득한 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성을 분석하는 단계;
(b) 상기 양 및/또는 활성을 하나 이상의 기준 대상의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성에 상응하는 기준 데이터와 비교하는 단계; 및
(c) 상기 비교 단계 (b)에 근거하여 치료 성공을 예측하는 단계
를 포함하는, HBV 감염의 치료 중에 치료 성공을 모니터링하는 방법.
25. 제24항에 있어서, 시험 대상이 HBV 감염에 대한 약물치료를 수용하거나 인간이거나 BV 감염에 대한 약물치료를 수용하는, 방법.
26. 제24항 또는 제25항에 있어서, 기준 데이터가 하나 이상의 기준 대상의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성에 상응하는, 방법.
27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 기준 대상이 HBV 감염을 갖지만, HBV 감염에 대한 약물치료를 수용하지 않았고; 단계 (c)에서, 기준 데이터와 비교되는 시험 대상의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 감소된 양 및/또는 활성이 HBV 감염의 치료에서 치료 성공을 나타내는 방법.
28. 제27항에 있어서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 감소된 양 및/또는 활성이, 시험 대상의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성이 하나 이상의 기준 대상의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성의 0 내지 90%임을 나타내는, 방법.
29. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 기준 대상이 HBV 감염을 갖고, HBV 감염에 대한 약물치료를 수용하였고; 단계 (c)에서, 기준 데이터와 비교되는 시험 대상의 PAPD5 및/또는 PAPD7을 동일하거나 유사한 양 및/또는 활성이 HBV 감염의 치료에서 치료 성공을 나타내는, 방법.
30. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 기준 대상이 HBV 감염을 갖지 않고; 단계 (c)에서, 기준 데이터와 비교되는 시험 대상의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 동일하거나 유사한 양 및/또는 활성이 HBV 감염의 치료에서 치료 성공을 나타내는, 방법.
31. 제29항 또는 제30항에 있어서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 동일하거나 유사한 양 및/또는 활성이, 시험 대상의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성이 하나 이상의 기준 대상의 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성의 90 내지 110%임을 의미하는, 방법.
제조
화학식 I의 화합물(즉, 화학식 I의 다이하이드로퀴놀리진온 화합물)을 국제 특허공개공보 제2015/113990 A1호에 기술된 바와 같이 합성할 수 있다. 간략하게, 화학식 I의 화합물을 하기 단계를 포함하는 방법에 따라 제조할 수 있다:
(a) 하기 화학식 a의 화합물의 가수분해:
[화학식 a]
Figure pct00010
; 또는
(b) 하기 화학식 b의 화합물의 가수분해:
[화학식 b]
Figure pct00011
상기 식에서,
R1 내지 R7 및 R9는 달리 지시되지 않는 한 화학식 I에 관해 상기 정의된 바와 같다.
단계 (a) 및 단계 (b)에서, 리튬 하이드록사이드 또는 나트륨 하이드록사이드와 같은 염기가, 예를 들어 사용될 수 있다.
화학식 II의 화합물(즉, 화학식 II의 테트라하이드로피리도피리미딘 화합물)을 국제 특허공개공보 제2016/177655호에 기술된 바와 같이 합성할 수 있다. 간략하게, 화학식 II의 화합물을 하기 단계 중 하나를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있다:
(a) 루이스산의 존재 하의 하기 화학식 A의 화합물과 하기 화학식 B의 화합물의 커플링:
[화학식 A]
Figure pct00012
[화학식 B]
R1M;
(b) 염기의 존재 하의 하기 화학식 C의 화합물과 하기 화학식 D의 화합물의 커플링:
[화학식 C]
Figure pct00013
[화학식 D]
NHR9R10;
(c) 화학식 E의 화합물과 화학식 F의 화합물의 커플링:
[화학식 E]
Figure pct00014
[화학식 F]
R2-L2 (F)
상기 식에서,
R1, R2, U, W, X, Y 및 Z는 화학식 II에 관해 상기 정의된 바와 같고;
M은 H, Mg, Zn 또는 Na이고;
L1은 F, Cl 또는 Br이고;
L2는 F, Cl 또는 Br이다.
단계 (a)에서, 루이스산은, 예를 들어 BF3·Et2O 또는 Sc(OTf)3일 수 있다.
단계 (b)에서, 염기는, 예를 들어 K2CO3 또는 DIEA일 수 있다.
단계 (c)에서, 반응은 염기의 존재 하에 수행될 수 있고, 염기는, 예를 들어 K2CO3 또는 DIEA일 수 있다. 반응은 또한 염기의 부재 하에 수행될 수 있다.
조성물
상기에 기술된 바와 같이, 본 발명은 HBV 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제; HBV 감염의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 PAPD5의 억제제 및 PAPD7의 억제제를 포함하는 조합 제제; 및 상기 억제제 또는 상기 조합 제제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물(즉, 약제)은 임의적으로, 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 상기 약학 조성물은 치료적으로 허용되는 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
전형적인 약학 조성물은 PAPD5 억제제 및/또는 PAPD7 억제제와 담체 또는 부형제와 혼합함으로써 제조된다. 적합한 담체 및 부형제는 당업자에게 주지되어 있고, 예를 들어 문헌[Ansel, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004]; 문헌[Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000]; 및 문헌[Rowe, Handbook of Pharmaceutical Excipients, Chicago, Pharmaceutical Press, 2005]에 상세히 기술되어 있다. 또한, 제형은 하나 이상의 완충제, 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 활택제, 유화제, 현탁제, 보존제, 산화방지제, 불투명화제, 유연제, 가공 보조제, 착색제, 감미제, 향료, 향미제, 희석제, 및 약물의 외관을 개선하거나 약학 제품(즉, 약제)의 제조를 보조하는 것으로 공지된 다른 첨가제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 주위 온도에서 적절한 pH에서 목적하는 정도의 순도를 갖는 PAPD5의 억제제 및/또는 PAPD7의 억제제를 생리학적으로 허용되는 담체(즉, 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성인 담체)와 혼합하여 본 발명의 약학 조성물을 적합한 투여 형태로 제형화할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 멸균 상태일 수 있다.
본 발명에 따른 화합물은 이의 약학적으로 허용되는 염의 형태로 존재할 수 있다. 용어 "약학적으로 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 효과 및 특성을 보유하는 통상적인 산-부가 염 또는 염기-부가 염을 지칭하고, 적합한 비독성 유기 또는 무기 산 또는 유기 또는 무기 염기로부터 형성된다. 산-부가 염은, 예를 들어 무기 산(예컨대, 염산, 브롬화 수소산, 요오드화 수소산, 황산, 설팜산, 인산 및 질산)으로부터 유도된 것, 및 유기 산(예컨대, p-톨루엔설폰산, 살리실산, 메탄설폰산, 옥살산, 석신산, 시트르산, 말산, 락트산, 퓨마르산 등)으로부터 유도된 것을 포함한다. 염기-부가 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨 및 4차 암모늄 수산화물, 예컨대 테트라메틸 암모늄 수산화물로부터 유도된 것을 포함한다. 약학 화합물을 염으로 화학적으로 변형시키는 것은 화합물의 개선된 물리적 및 화학적 안정성, 흡습성, 유동성 및 가용성을 수득하기 위해 약제사에게 주지된 기술이다. 이는, 예를 들어 문헌[Bastin, Organic Process Research & Development 2000, 4, 427-435] 또는 문헌[Ansel, In: Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 6th ed. (1995), pp. 196 and 1456-1457]에 기술되어 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 화합물의 약학적으로 허용되는 염은 나트륨 염일 수 있다.
하나 이상의 키랄 중심을 함유하는 화합물은 라세미체, 부분입체 이성질체성 혼합물, 또는 광학적으로 활성인 단일 이성질체로서 존재할 수 있다. 라세미체는 공지된 방법에 따라 거울상 이성질체로 분리될 수 있다. 특히, 결정화에 의해 분리될 수 있는 부분입체 이성질체성 염은 광학적으로 활성인 산, 예컨대 D- 또는 L-타르타르산, 만델산, 말산, 락트산 또는 캠퍼설폰산과의 반응에 의해 라세미 혼합물로부터 형성된다.
본 발명의 약학 조성물은 올바른 의료 행위에 일치하는 방식으로 제형화되고 투여되고 투약된다. 이러한 맥락에서, 고려 인자는 치료받을 특정 포유동물, 개별적 환자의 임상적 상태, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 환자의 나이 및 성별, 및 개업의에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 본원에서, "효과량"("(치료적) 효과 투여량"으로도 공지됨)은, 의학 박사 또는 임상의에 의해 모색된, 개체의 생물학적 또는 의료적 반응을 유도하는 화합물의 양을 의미한다. 본 발명의 억제제, 본 발명의 조합 제제 또는 본 발명의 약학 조성물의 "효과량"은 이러한 고려사항에 의해 좌우될 것이며, HBsAg 및/또는 HBeAg를 억제하는데 필요한 최소량이다. 예를 들어, 이러한 양은 수용자의 세포 또는 완전체로서 포유동물에 독성인 양보다 적을 수 있다.
예를 들어, PAPD5 억제제 및/또는 PAPD7 억제제가 화학식 I 또는 II의 화합물인 경우, 투약량 당 비경구적으로 투여되는 약학 효과량은 약 0.01 내지 100 mg/kg 환자 체중/일, 다르게는 약 0.01 내지 100 mg/kg 환자 체중/일의 범위일 수 있고, 사용된 화합물의 전형적인 초기 범위는 0.3 내지 15 mg/kg/일이다. 다른 예에서, PAPD5 억제제 및/또는 PAPD7 억제제가 화학식 I 또는 II의 화합물인 경우, 경구 탄위 투여 형태, 예컨대 정제 및 캡슐은, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 1,000 mg을 함유한다.
본 발명의 억제제, 본 발명의 조합 제제 또는 본 발명의 약학 조성물은 임의의 적합한 수단에 의해, 예컨대 경구, 국소(예컨대, 볼 및 설하), 직장, 질, 경피, 비경구, 피하, 복강내, 폐내, 피내, 척추강내 및 경막외 및 비내, 및, 필요에 따라 국소 치료를 위해, 병변내 투여에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다.
본 발명의 억제제, 본 발명의 조합 제제 또는 본 발명의 약학 조성물은 임의의 적절한 투여 형태, 예컨대 정제, 분말, 캡슐, 용액, 분산액, 현탁액, 시럽, 스프레이, 좌제, 겔, 에멀젼, 패치 등으로 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 약학 제제에 통상적인 성분, 예컨대 희석제, 담체, pH 변형제, 감미제, 벌크화제 및 추가 활성 약품을 함유할 수 있다.
본 발명의 억제제, 본 발명의 조합 제제 또는 본 발명의 약학 조성물은 HBV 감염의 예방 및/또는 치료에 유용하다. 이들은 바람직하게는 HBsAg 및/또는 HBeAg, 가장 바람직하게는 HBsAg 및 HBeAg의 분비를 억제한다.
정의
용어 "치료", "치료하는", "치료하다" 등은 일반적으로 목적하는 약리학적 효과 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 의미하는 것으로 본원에서 사용된다. 이러한 효과는 질병 및/또는 이러한 질병에 기인한 부작용을 부분적으로 또는 완전히 치료한다는 관점에서 치료 효과가 있다. 본원에 사용된 용어 "치료"는 개체에서 질병의 임의의 치료를 포괄하고 하기를 포함한다: (a) 질병의 억제, 즉, 이의 발생의 저지, 예컨대 HBsAg 및/또는 HBeAg의 증가의 억제; 또는 (b) 질병의 개선(즉, 완화), 즉, 질병의 퇴행, 예컨대 HBsAg 및/또는 HBeAg 생산의 퇴행의 유발. 따라서, HBV 감염을 개선하고/거나 억제하는 화합물은 HBV 감염을 치료하는 화합물이다. 바람직하게는, 본원에 사용된 용어 "치료"는 이미 나타난 장애, 예컨대 이미 규정되고 나타난 HBV 감염의 의료적 개입에 관한 것이다. 본원에서, 용어 "예방하는", "예방" 또는 "예방하다"는 예방적 치료, 즉, 질병을 치료하기보다는 예방하기 위한 목적의 조치 또는 절차에 관한 것이다. 예방은, 질병 또는 이의 증상을 부분적으로 또는 완전히 예방한다는 관점에서 목적하는 예방적인 약리학적 효과 및/또는 생리학적 효과를 수득함을 의미한다. 따라서, 본원에서 "HBV 감염을 예방하는"은 개체에서 발생하는 HBV 감염을 예방하는 것 및 HBV 감염의 증상의 발생을 예방하는 것을 포함한다.
본 발명의 목적을 위해, "개체"(또는 "환자")는 척추동물일 수 있다. 본 발명에 있어서, 용어 "개체"는 인간 및 다른 동물, 특히 포유동물, 및 다른 유기체를 포함한다. 따라서, 본원에 제공된 수단 및 방법은 인간 치료 및 수의학적 적용 모두에 적용가능하다. 따라서, 본원에서 개체는 동물, 예컨대 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 기니피그, 흰족제비, 고양이, 개, 닭, 양, 소 종, 말, 낙타 또는 영장류일 수 있다. 바람직하게는, 개체는 포유동물이다. 더욱 바람직하게는, 개체는 인간이다.
용어 "B형 간염 바이러스 감염" 또는 "HBV 감염"은 당업계에 통상적으로 공지되어 있고, B형 간염 바이러스(HBV)에 의해 야기되고 간에 영향을 미치는 전염병을 지칭한다. HBV 감염은 급성 또는 만성 감염일 수 있다. 일부 감염된 인간은 초기 감염 동안 증상이 없고, 일부는 구토, 황달 피부, 피로, 어두운색 오줌 및 복통과 함께 질병이 급성 발병한다(문헌["Hepatitis B Fact sheet N°204". who.int. July 2014. Retrieved 4 November 2014]). 흔히, 이러한 증상은 몇 주 동안 지속되고 사망을 야기할 수도 있다. 증상이 시작되기까지 30 내지 180일이 걸릴 수 있다. 출생 즈음에 감염된 개체에서, 90%가 만성 B형 간염 감염으로 발달하는 반면에, 5세 이후에 감염된 개체의 10% 미만이 만성 B형 간염 감염으로 발달한다(문헌["Hepatitis B FAQs for the Public - Transmission", U.S. Centers for Disease Control and Prevention (CDC), retrieved 2011-11-29]). 만성 질병을 앓는 대부분은 증상이 없지만; 간경변 및 간암이 궁극적으로 발생할 수 있다(문헌[Chang, 2007, Semin Fetal Neonatal Med, 12: 160-167]). 이들 합병증은 만성 질병을 앓는 개체의 15 내지 25%의 사망을 야기한다(문헌["Hepatitis B Fact sheet N°204". who.int. July 2014, retrieved 4 November 2014]). 본원에서, 용어 "HBV 감염"은 급성 및 만성 B형 간염 감염을 포함한다. 또한, 용어 "HBV 감염"은 초기 감염의 증상이 없는 단계, 증상이 있는 단계, 및 HBV 감염의 증상이 없는 만성 단계를 포함한다.
본원에서, 서열번호 1 또는 2(즉, PAPD5)의 효소적 활성 단편은, 서열번호 1 또는 2(즉, PAPD5)의 인접 아미노산 잔기의 스트레치를 포함하고 PAPD5의 생물학적 활성(즉, 기능), 특히 poly-A 폴리머라제 기능을 보유하는 폴리펩티드와 관련된다. 이에 따라, 본원에서, 서열번호 3(즉, PAPD7)의 효소적 활성 단편은 서열번호 3(즉, PAPD7)의 인접 아미노산 잔기의 스트레치를 포함하고 PAPD7의 생물학적 활성(즉, 기능), 특히 poly-A 폴리머라제 기능을 보유하는 폴리펩티드와 관련된다. PAPD5 및 PAPD7의 효소적 활성 단편에 대한 예는 뉴클레오티딜전달효소 도메인 및 Cid1 poly A 폴리머라제이다.
본원에서, 용어 "폴리펩티드"는 펩티드(아미드) 결합에 의해 연결된 아미노산 단량체를 포함하거나 이로 이루어진 모든 분자를 포함한다. 따라서, 용어 "폴리펩티드"는 모든 아미노산 서열, 예컨대 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드 및 단백질을 포함한다. 본원에 기술된 "폴리펩티드"는 천연 발생 폴리펩티드 또는 비-천연 발생 폴리펩티드일 수 있다. 비-천연 발생 폴리펩티드는 천연 발생 대응물과 비교하여 하나 이상의 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환, 아미노산 결실 또는 아미노산 부가)를 포함할 수 있다. 또한, 비-천연 발생 폴리펩티드는 벡터에 클로닝될 수 있고/거나 상기 폴리펩티드의 천연 프로모터가 아닌 프로모터에 작동적으로 연결될 수 있다. 상기 프로모터는 구성적으로 활성인 프로모터일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "아미노산" 또는 "잔기"는 천연 발생 아미노산 및 다른 아미노산(예를 들어, 비-천연 발생 아미노산, 핵산 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산, 합성 아미노산 등)의 L-이성질체 및 D-이성질체 모두를 포함한다. 천연 발생 아미노산의 예는 알라닌(Ala; A), 아르기닌(Arg; R), 아스파라긴(Asn; N), 아스파르트산(Asp; D), 시스테인(Cys; C), 글루타민(Gln; Q), 글루탐산(Glu; E), 글리신(Gly; G), 히스티딘(His; H), 이소류신(Ile; I), 류신(Leu; L), 라이신(Lys; K), 메티오닌(Met; M), 페닐알라닌(Phe; F), 프롤린(Pro; P), 세린(Ser; S), 트레오닌(Thr; T), 트립토판(Trp; W), 티로신(Tyr; Y), 발린(Val; V)이다. 번역-후 변형된 천연 발생 아미노산는 다이하이드로부티린(Dhb) 및 라비오닌(Lab)이다. 비-천연 발생 아미노산의 예는 상기에 기술되어 있다. 비-천연 발생 폴리펩티드는 폴리펩티드의 천연 발생의 아미노산 서열과 비교하여, 아미노산 서열에 공유결합 또는 비-공유결합으로 연결된, 하나 이상의 비-아미노산 치환기 또는 이종 아미노산 치환기(예를 들어, 리포터 분자 또는 또 다른 리간드)를 포함할 수 있다.
용어 "뉴클레오티드 서열" 또는 "폴리뉴클레오티드"는 당업계에 통상적으로 공지되어 있고, 천연 발생 분자, 예컨대 DNA 및 RNA, 뿐만 아니라 핵산 유사체, 예컨대 올리고뉴클레오티드 티오포스페이트, 치환된 리보-올리고뉴클레오티드, LNA 분자, PNA 분자, GNA(글리콜 핵산) 분자, TNA(트레오스 핵산) 분자, 모폴리노 폴리뉴클레오티드, 또는 변형된 주쇄, 예컨대 폴리실록산, 2'-O-(2-메톡시) 에틸-포스포로티오에이트를 갖는 핵산, 또는 치환기를 갖는 핵산, 예컨대 메틸-, 티오-, 설페이트, 벤조일-, 페닐-, 아미노-, 프로필-, 클로로- 및 메타노카바뉴클레오시드, 또는 이의 검출을 가능하게 하는 리포터 분자를 포함하거나 이로 이루어진 분자를 포함한다. 또한, 용어 "뉴클레오티드 서열"은 본 발명에 있어서 용어 "핵산 분자"와 동일하게 구성되고, 특히 DNA, RNA, PNA 또는 LNA, 또는 이들의 혼성체 또는 당업계에 공지된 임의의 이들의 변형을 지칭할 수 있다(예를 들어, 변형의 예에 대해 미국 특허공보 제5,525,711호, 미국 특허공보 제4,711,955호, 미국 특허공보 제5,792,608호 또는 유럽 특허공보 제302175호 참조). 본원에 기술되고 제공된 핵산 서열에 포함되는 핵산 잔기는 천연 발생 핵산 잔기 또는 인공 생산 핵산 잔기일 수 있다. 핵산 잔기의 예는 아데닌(A), 구아닌(G), 사이토신(C), 티민(T), 우라실(U), 잔틴(X) 및 하이포잔틴(HX)이다. 당업자에게 이해되는 바와 같이, 티민(T) 및 우라실(U)은 각각의 유형의 폴리뉴클레오티드에 따라 상호교환적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 당업자에게 공지된 바와 같이, DNA의 부분으로서 티민(T)은 상응하는 전사된 mRNA의 부분으로서 우라실(U)에 상응한다. 본원에 기술되고 제공된 폴리뉴클레오티드는 단일가닥 또는 이중가닥, 선형 또는 환형, 천연물 또는 합성물일 수 있다.
본원에 제공된 뉴클레오티드 서열은 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "벡터"는 플라스미드, 코스미드, 바이러스, 박테리오파지, 및 유전자 조작에 통상적으로 사용되는 다른 벡터를 포함한다. 바람직한 양태에서, 이들 벡터는 세포, 예컨대 포유류 세포 또는 효모 세포의 형질전환에 적합하다. 본원에서, 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 일반적으로, 발현 벡터는 문헌에 폭넓게 기술되었다. 이는 선별 마커 유전자 및 숙주에서 복제를 보장하는 복제-기점, 프로모터, 및 전사를 위한 종결 신호를 포함할 수 있다. 프로모터와 종결 신호 사이에, 하나 이상의 제한 부위 또는 다중연결기가 존재할 수 있고, 이는 목적하는 핵산 서열의 삽입을 발현할 수 있다. 본원에 제공된 뉴클레오티드 서열이 클로닝될 수 있는 벡터의 비제한적인 예는 아데노바이러스, 아데노-부속 바이러스(AAV), 렌티바이러스, HIV-기반 렌티바이러스, 비-바이러스 미니서클-벡터, 또는 박테리아 및 진핵생물 발현 시스템을 위한 다른 벡터이다.
본원에서, 용어 "화합물"은 임의의 분자, 예컨대 유기 분자, 예컨대 소분자, 폴리뉴클레오티드, 예컨대 RNAi 분자, 폴리펩티드, 예컨대 항체, 및 무기 화합물을 의미한다. 용어 "화합물"은 또한, 지질, 호르몬 유사체, 폴리펩티드 리간드, 효소, 수용체, 채널 및 항체 접합체를 포함한다. 예를 들어, 본원에서, 화합물은 PAPD5 및/또는 PAPD7에 대한 RNAi 분자, PAPD5 및/또는 PAPD7에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 소분자일 수 있다.
용어 "억제제"는 당업계에 공지되어 있고, 특정 단백질(예컨대, PAPD5 및/또는 PAPD7)의 생리학적 기능(즉, 활성)을 완전히 또는 부분적으로 예방하거나 감소시킬 수 있는 화합물/물질에 관한 것이다. 억제제는 또한 "길항제"로 공지되어 있다. 본 발명의 문맥에서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제는, 예컨대 PAPD5 및/또는 PAPD7로의 상기 화합물/물질의 결합시 각각 PAPD5 및/또는 PAPD7의 생리학적 활성을 예방하거나 감소시키거나 억제하거나 불활성화시킬 수 있다. PAPD5 및/또는 PAPD7로의 억제제/길항제의 결합은 PAPD5 및/또는 PAPD7의 효소적 기능(즉, poly-A 폴리머라제 기능)을 감소시킬 수 있거나, PAPD5 및/또는 PAPD7로의 내인성 활성화 분자의 결합을 방지할 수 있고, 이에 의해 이러한 단백질의 활성(즉, 기능)을 억제한다. 본 발명의 문맥에서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 "억제제"는 PAPD5 및/또는 PAPD7 유전자의 발현을 방해하거나 감소시킴으로써, 각각 PAPD5 및/또는 PAPD7의 활성/기능을 방해할 수 있다. 따라서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제는 PAPD5 및/또는 PAPD7의 감소된 기능성(즉, 활성)(이때, 상기 기능은 poly-A 폴리머라제 기능을 포함함)으로 반영되는 PAPD5 및/또는 PAPD7의 감소된 발현 수준(예컨대, PAPD5 및/또는 PAPD7 mRNA, 또는 PAPD5 및/또는 PAPD7 단백질의 감소된 수준)을 야기할 수 있다. 따라서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제는, 본 발명의 문맥에서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 수준을 감소시킬 수 있는 PAPD5 및/또는 PAPD7 발현의 전사 저해제를 포괄할 수도 있다. 따라서, PAPD5 및/또는 PAPD7의 활성의 감소(더욱 적은 발현의 결과일 수 있음)를 야기하는 모든 수단 및 방법은 본 발명에 따른 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제로서 사용된다.
본원에서, 용어 "RNA 간섭(RNAi) 분자"는 RNA 발현 또는 번역을 억제하는 임의의 분자를 지칭한다. 소간섭 RNA(siRNA)는, 전사 후에 상보성 mRNA를 결합함으로써 번역에서 이들의 저하 및 손실을 야기하는 이중가닥 RNA 분자이다. 작은 헤어핀 RNA(shRNA)는 헤어핀 구조를 갖는 인공 RNA 분자이고, 이는 발현시에 DICER 및 RNA-유도된 사일런싱 복합체(RISC)를 통해 mRNA를 감소시킬 수 있다. RNAi 분자는 관심 유전자의 RNA 서열을 기반으로 디자인될 수 있다. 상응하는 RNAi는 화학적으로 또는 시험관내 전사에 의해 합성될 수 있거나 벡터 또는 PCR 제품으로부터 발현될 수 있다.
용어 "소분자"는 저분자량(900 돌턴 미만)을 갖는 유기 화합물을 지칭한다. 소분자는 생물학적 과정을 조절하는데 도움을 줄 수 있고, 약 10-9 m의 크기를 가질 수 있다. 많은 약물은 소분자이다.
본원에서, 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되고, 목적하는 생물학적 활성(즉, PAPD5 및/또는 PAPD7에 특이적으로 결합함)을 나타내는 한, 구체적으로 온전한 단클론성 항체, 다클론성 항체, 2개 이상의 온전한 항체로부터 형성된 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포괄한다. 또한, 인간, 인간화된, 낙타화된 또는 CDR-이식된 항체가 포함된다. "항체 단편"은 온전한 항체의 부분을 포함한다. 용어 "항체 단편"는 항원-결합 부분, 즉 항원(예컨대, PAPD5 및/또는 PAPD7)에 결합하는 능력을 보유하는 "항원 결합 부위"(예컨대, 단편, 하위서열, 상보성 결정 영역(CDR))[예를 들어, (i) Fab 단편(VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편); (ii) F(ab')2 단편(힌지 영역에서 다이설파이드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편); (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(문헌[Ward; 1989; Nature 341; 544-546]); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하거나 다르게는 이들로 이루어짐]를 포함한다. 항체 단편 또는 유도체는 F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편 또는 단일 쇄 항체를 추가로 포함한다.
어구 "특이적으로 결합하는"은, 결합 분자를 지칭할 때, 표적 분자, 바람직하게는 PAPD5 및/또는 PAPD7에 대해 독점적으로 또는 우세하게 중간 또는 높은 결합 친화도를 갖는 결합 분자(예컨대, 항체)를 지칭한다. 어구 "특이적으로 결합하는"은 단백질 및 다른 생물의약품의 이종 집단의 존재 하에 표적(바람직하게는 PAPD5 및/또는 PAPD7 단백질)의 존재에 결정적인 결합 반응을 지칭한다. 따라서, 고안된 검정 조건 하에, 특정 결합 분자는 특정 표적(바람직하게는 PAPD5 및/또는 PAPD7 단백질)에 우선적으로 결합하고, 시험 샘플에 존재하는 다른 성분에 유의한 양으로 결합하지 않는다. 이러한 조건 하의 표적 단백질에 대한 특이적인 결합은 특정 표적 단백질에 대한 특이성을 위해 선택된 결합 분자를 필요로 할 수 있다. 다양한 검정 포맷이 특정 표적 단백질과 특이적으로 반응성인 결합 분자를 선택하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 고체-상 ELISA 면역검정, 면역침강, 비아코어 및 웨스턴 블롯이 PAPD5 및/또는 PAPD7 단백질과 특이적으로 반응하는 결합 분자를 동정하는데 사용될 수 있다. PAPD5 단백질은 가장 바람직하게는 서열번호 1 또는 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드이다. 그러나, PAPD5 단백질은 또한 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖고 기능성인 폴리펩티드일 수 있다(이때, 기능은 poly-A 폴리머라제 기능임). PAPD7 단백질은 가장 바람직하게는 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드이다. 그러나, PAPD7 단백질은 또한 서열번호 3의 아미노산 서열과 80 이상%, 바람직하게는 90 이상%, 더욱 바람직하게는 95 이상%, 더욱 더 바람직하게는 98 이상%, 더욱 더 바람직하게는 99 이상% 동일성을 갖고 기능성인 폴리펩티드일 수 있다(이때, 기능은 poly-A 폴리머라제 기능임). 전형적으로, 특이적인 또는 선택적인 반응은 2배 이상의 백그라운드 신호 또는 노이즈, 더욱 전형적으로 10배 초과의 백그라운드일 수 있다. 즉, 어구 "특이적으로 결합하는"은 단백질 및 다른 생물의약품의 이종 집단에서 표적 단백질(바람직하게는 PAPD5 및/또는 PAPD7)의 존재에 결정적인 결합 반응을 지칭한다. 전형적으로, 특정 표적(바람직하게는 PAPD5 및/또는 PAPD7)에 특이적으로 결합하는 항체는 적어도 약 1 x 106 M-1 또는 107 M-1, 바람직하게는 약 108 M-1 내지 109 M-1, 더욱 바람직하게는 약 1010 M-1 내지 1011 M-1 이상의 해리 상수(Ka)로 상기 표적에 결합한다. 또한, 특정 표적(바람직하게는 PAPD5 및/또는 PAPD7)에 특이적으로 결합하는 항체는 바람직하게는 소정 표적 또는 밀접하게 연관된 표적 이외의 비-특이적 표적(예컨대, BSA, 카세인)으로의 결합에 대한 친화도보다 2배 이상 큰 친화도로 상기 표적에 결합한다.
본 발명에 있어서, 용어 "동일성" 또는 "% 동일성"은 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열이 본원에 제공된 서열(예를 들어, 서열번호 1, 2 또는 3의 서열)에 대해 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 더욱 더 바람직하게는 98% 이상, 더욱 더 바람직하게는 99% 이상의 동일성을 가짐을 의미하되, 보다 높은 동일성 값은 낮은 것보다 바람직하다. 본 발명에 따라서, 용어 "동일성" 또는 "% 동일성"은, 2개 이상의 핵산 또는 아미노산 서열의 문맥에서, 비교 윈도우에 걸쳐, 또는 당업계에 공지된 서열 비교 알고리즘을 사용하여 측정된 고안된 영역에 걸쳐, 또는 수동 정렬 및 시각적 검사에 의해, 최대 대응도로 비교되고 정렬될 때, 동일하거나 동일한 특정 %의 아미노산 잔사 또는 뉴클레오티드를 갖는(예컨대, 서열번호 1, 2 또는 3의 아미노산 서열, 또는, 예컨대 서열번호 4, 5 또는 6의 뉴클레오티드 서열과 80 이상%, 90 이상%, 95 이상%, 98 이상% 또는 99 이상% 동일성을 갖는) 2개 이상의 서열을 지칭한다.
바람직하게는, 기술된 동일성은 길이가 약 50개 이상 아미노산, 바람직하게는 100개 이상 아미노산, 더욱 바람직하게는 400개 이상 아미노산, 더욱 바람직하게는 500개 이상 아미노산, 더욱 바람직하게는 600개 이상 아미노산, 가장 바람직하게는 모든 아미노산인 영역에 걸쳐 존재한다. 뉴클레오티드 서열의 경우, 기술된 동일성은 가장 바람직하게는 100개 이상의 뉴클레오티드, 바람직하게는 1,000개 이상의 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 2,000개 이상의 뉴클레오티드, 가장 바람직하게는 길이 내 모든 뉴클레오티드인 영역에 걸쳐 존재한다.
당업자는 당업계에 공지된 바와 같이, 예를 들어 CLUSTALW 컴퓨터 프로그램(문헌[Thompson, 1994, Nucl Acids Res, 2: 4673-4680]) 또는 FASTDB(문헌[Brutlag, 1990, Comp App Biosci, 6: 237-245])를 기반으로 한 알고리즘을 사용하여 서열 사이의 % 동일성을 결정하는 방법을 알 것이다. 또한, BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘(문헌[Altschul, 1997, Nucl Acids Res 25: 3389-3402]; 문헌[Altschul, 1993, J Mol Evol, 36: 290-300]; 문헌[Altschul, 1990, J Mol Biol 215: 403-410])이 당업자에게 입수가능하다. 예를 들어, BLAST 2.0(Basic Local Alignment Search Tool BLAST(문헌[Altschul, 1997, loc. cit.]; 문헌[Altschul, 1993, loc. cit.]; 문헌[Altschul, 1990, loc. cit.]))은 부분 서열 정렬을 탐구하는데 사용될 수 있다. 상기에 논의된 바와 같이, BLAST는 뉴클레오티드 및 아미노산 서열 모두의 정렬을 생성하여 서열 유사성을 결정한다. 정렬의 부분 성질 때문에, BLAST는 정확한 매치를 결정하고 유사한 서열을 동정하는데 특히 유용하다. BLAST(문헌[Altschul, 1997, loc. cit.]; 문헌[Altschul, 1993, loc. cit.]; 문헌[Altschul, 1990, loc. cit.])를 사용하는 유사한 컴퓨터 기술은, 뉴클레오티드 데이터 베이스(예컨대, GenBank 또는 EMBL)에서 동일하거나 관련된 분자를 탐구하는데 사용된다.
본원에서, 용어 "측정"은 또한 "분석" 또는 "결정"(즉, 검출 및/또는 정량화)을 의미한다. 예를 들어, 용어 "PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성의 측정"은 PAPD5 및/또는 PAPD7 발현 및/또는 활성의 양의 결정, 예를 들어, PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드(즉, 단백질)의 양의 결정을 의미한다. PAPD5 및/또는 PAPD7 단백질의 양 및/또는 활성의 측정(즉, 결정) 방법은 당업계에 공지되어 있고 상기에 기술되어 있다. 유사하게, 용어 "시험 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는지 여부를 측정하는"은 시험 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7, 예컨대 PAPD5 폴리펩티드(즉, 단백질) 및/또는 PAPD7 폴리펩티드(즉, 단백질)에 결합하는지 여부를 분석하거나 증명하는(즉, 검출하는) 것을 의미한다. 이에 따라, 용어 "시험 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지를 측정하는"은 시험 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지를 분석하거나 결정하는(즉, 검출하고/거나 정량화하는) 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "C1- 6알킬"은, 단독으로 또는 조합으로, 1 내지 6개, 특히 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 포화 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 1-부틸, 2-부틸, tert-부틸 등을 나타낸다. 구체적인 "C1-6알킬" 기는 메틸, 에틸, 이소프로필 및 tert-부틸이다.
용어 "C3-7사이클로알킬"은, 단독으로 또는 조합으로, 3 내지 7개의 탄소 원자, 특히 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 포화 탄소 고리, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 등을 지칭한다. 구체적인 "C3-7사이클로알킬" 기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실이다.
용어 "C2-6알켄일"은 2 내지 6개, 특히 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 불포화 직쇄 또는 분지쇄 알켄일 기, 예를 들어 비닐, 프로펜일, 알릴, 부텐일 등을 나타낸다. 구체적인 "C2-6알켄일" 기는 알릴 및 비닐이다.
용어 "C2-6알킨일"은 2 내지 6개, 특히 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 불포화 직쇄 또는 분지쇄 알킨일 기, 예를 들어 에틴일, 1-프로핀일, 프로파길, 부틴일 등을 나타낸다. 구체적인 "C2-6알킨일" 기는 에틴일 및 1-프로핀일이다.
용어 "CxH2x"는, 단독으로 또는 조합으로, 1 내지 6개, 특히 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 포화 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 나타낸다. 용어 "C1-6알콕시"는, 단독으로 또는 조합으로, "C1-6알킬"이 상기 정의된 바와 같은 기 C1-6알킬-O-; 예를 들어, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소-프로폭시, n-부톡시, 이소-부톡시, 2-부톡시, tert-부톡시, 펜톡시, 헥실옥시 등을 나타낸다. 구체적인 "C1-6알콕시" 기는 메톡시, 에톡시 및 프로폭시이다.
용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다.
용어 "할로C1-6알킬"은 C1-6알킬 기의 하나 이상의 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자, 특히 플루오로 원자로 대체된 C1-6알킬 기를 나타낸다. 할로C1-6알킬의 예는 모노플루오로-, 다이플루오로- 또는 트라이플루오로-메틸, -에틸 또는 -프로필, 예를 들어 3,3,3-트라이플루오로프로필, 3,3-다이플루오로프로필, 2-플루오로에틸, 2,2-다이플루오로에틸, 2,2,2-트라이플루오로에틸, 플루오로메틸, 다이플루오로메틸 또는 트라이플루오로메틸을 포함한다. 구체적인 "할로C1-6알킬" 기는 다이플루오로메틸 또는 트라이플루오로메틸이다.
용어 "할로C1-6알콕시"는 C1-6알콕시 기의 하나 이상의 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자, 특히 플루오로 원자로 대체된 C1-6알콕시 기를 나타낸다. 할로C1-6알콕실의 예는 모노플루오로-, 다이플루오로- 또는 트라이플루오로-메톡시, -에톡시 또는 -프로폭시, 예를 들어 플루오로프로폭시, 다이플루오로프로폭시, 트라이플루오로프로폭시, 플루오로에톡시, 다이플루오로에톡시, 트라이플루오로에톡시, 플루오로메톡시, 다이플루오로메톡시 또는 트라이플루오로메톡시를 포함한다. 구체적인 "할로C1-6알콕시" 기는 3-플루오로프로폭시, 3,3-다이플루오로프로폭시, 3,3,3-트라이플루오로프로폭시, 2-플루오로에톡시, 2,2-다이플루오로에톡시, 2,2,2-트라이플루오로에톡시, 플루오로메톡시, 다이플루오로메톡시 또는 트라이플루오로메톡시이다.
용어 "C3-7사이클로알킬"은, 단독으로 또는 조합으로, 3 내지 7개의 탄소 원자, 특히 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 포화 탄소 고리, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 등을 지칭한다. 구체적인 "C3-7사이클로알킬" 기는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실이다.
용어 "C1-6알콕시"는, 단독으로 또는 조합으로, "C1-6알킬"이 상기 정의된 바와 같은 기 C1-6알킬-O-; 예를 들어, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소-프로폭시, n-부톡시, 이소-부톡시, 2-부톡시, tert-부톡시 등을 나타낸다. 구체적인 "C1-6알콕시" 기는 메톡시 및 에톡시, 더욱 특히 메톡시이다.
용어 "할로C3-7사이클로알킬"은 C3-7사이클로알킬 기의 하나 이상의 수소 원자가 동일하거나 상이한 할로겐 원자, 특히 플루오로 원자로 대체된 C3-7사이클로알킬 기를 나타낸다. 할로C3-7사이클로알킬의 예는 모노플루오로- 또는 다이플루오로-사이클로프로필, -사이클로부틸, -사이클로펜틸 또는 -사이클로헥실, 예를 들어 플루오로사이클로프로필, 다이플루오로사이클로프로필, 플루오로사이클로부틸, 다이플루오로사이클로부틸, 플루오로사이클로펜틸, 다이플루오로사이클로펜틸, 플루오로사이클로헥실 또는 다이플루오로사이클로헥실을 포함한다. 구체적인 "할로C1-6알킬" 기는 다이플루오로사이클로프로필이다.
화학식 I에 관하여, 용어 "아미노"는, 단독으로 또는 조합으로, 1차(-NH2), 2차(-NH-) 또는 3차 아미노(
Figure pct00015
)를 지칭한다.
화학식 II에 관하여, 용어 "아미노"는 R' 및 R"가 독립적으로 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시, C3-7사이클로알킬, 헤테로C3-7사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴인, 화학식 -NR'R"의 기를 나타낸다. 다르게는, R' 및 R"는 이들이 부착된 질소와 함께 헤테로C3-7사이클로알킬을 형성할 수 있다.
용어 "카보닐"은, 단독으로 또는 조합으로, 기 -C(O)-를 지칭한다.
용어 "시아노"는, 단독으로 또는 조합으로, 기 -CN을 지칭한다.
용어 "C1-6알킬설핀일"은 C1-6알킬 기가 상기 정의된 바와 같은 기 -SO-C1-6알킬을 나타낸다. C1-6알킬설핀일의 예는 메틸설핀일 및 에틸설핀일을 포함한다.
용어 "C1-6알킬설폰일"은 C1-6알킬 기가 상기 정의된 바와 같은 기 -SO2-C1-6알킬을 나타낸다. C1-6알킬설폰일의 예는 메틸설폰일 및 에틸설폰일을 포함한다.
용어 "일환형 헤테로아릴"은 N, O 및 S로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 포함하고 나머지 고리 원자가 탄소인 5 내지 8개 고리 원자의 1가 방향족 헤테로환 단일-고리 시스템을 나타낸다. 일환형 헤테로아릴 잔기의 예는 피롤일, 퓨란일, 티엔일, 이미다졸일, 옥사졸일, 티아졸일, 트라이아졸일, 옥사다이아졸일, 티아다이아졸일, 테트라졸일, 피리딘일, 피란일, 피라졸일, 피리다진일, 피리미딘일, 트라이아진일, 아제핀일, 다이아제핀일, 이속사졸일, 이소티아졸일 등이다.
화학식 I에 관하여, 용어 "일환형 헤테로사이클로알킬"은 N, O 및 S로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 고리 헤테로원자를 포함하고 나머지 고리 원자가 탄소인 3 내지 7의 고리 원자의 1가 포화 또는 부분 불포환 일환형 고리 시스템을 지칭한다. 일환형 헤테로사이클로알킬의 예는 아지리딘일, 옥시란일, 아제티딘일, 옥세탄일, 피롤리딘일, 2-옥소-피롤리딘일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로-티엔일, 피라졸리딘일, 이미다졸리딘일, 옥사졸리딘일, 이속사졸리딘일, 티아졸리딘일, 피페리딘일, 테트라하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 피페라진일, 모폴린일, 티오모폴린일, 1,1-다이옥소-티오모폴린-4-일, 아제판일, 다이아제판일, 호모피페라진일 또는 옥사제판일이다. 구체적인 "일환형 헤테로사이클로알킬" 기는 모폴린일, 2-옥소-피롤리딘일, 피롤리딘일, 테트라하이드로피란일, 더욱 특히 피롤리딘-1-일, 2-옥소-피롤리딘-1-일, 테트라하이드로피란-4-일 및 모폴린-1-일이다.
화학식 II에 관하여, 용어 "일환형 헤테로사이클로알킬"은 N, O 및 S로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 고리 헤테로원자를 포함하고 나머지 고리 원자가 탄소인 4 내지 7의 고리 원자의 1가 포화 또는 부분 불포환 일환형 고리 시스템이다. 일환형 헤테로사이클로알킬의 예는 아지리딘일, 옥시란일, 아제티딘일, 옥세탄일, 피롤리딘일, 2-옥소-피롤리딘일, 테트라하이드로퓨란일, 티에탄일, 피라졸리딘일, 이미다졸리딘일, 옥사졸리딘일, 이속사졸리딘일, 티아졸리딘일, 피페리딘일, 테트라하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 피페라진일, 모폴린일, 2-옥소-모폴린일, 2-옥소-피페라진일, 티오모폴린일, 1,1-다이옥소-티오모폴린-4-일, 1,1-다이옥소티올란일, 1,1-다이옥소티엔일, 옥소이미다졸리딘일, 아제판일, 다이아제판일, 호모피페라진일 또는 옥사제판일이다. 구체적인 "일환형 헤테로사이클로알킬" 기는 아제티딘일, 옥세탄일, 티에탄일, 테트라하이드로퓨란일, 테트라하이드로피란일, 1,1-다이옥소티엔일, 1,1-다이옥소티올란일, 모폴린일, 피롤리딘일, 피페리딘일, 피페라진일, 옥소이미다졸리딘일, 2-옥소-피롤리딘일, 2-옥소-모폴린일 및 2-옥소-피페라진일이다. 더욱 구체적으로, "일환형 헤테로사이클로알킬" 기는 아제티딘일, 피롤리딘일, 모폴린일, 옥소모폴린일, 피페리딘일, 피페라진일 및 옥소피페라진일이다.
용어 "아릴"은 6 내지 10개의 탄소 고리 원자를 포함하는 1가 방향족 탄소환 일환형 또는 이환형 고리 시스템을 나타낸다. 아릴 잔기의 예는 페닐 및 나프틸을 포함하고, 구체적인 "아릴"은 페닐이다.
용어 "헤테로아릴"은 N, O 및 S로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로원자를 포함하고 나머지 고리 원자가 탄소인 5 내지 12개의 고리 원자의 1가 방향족 헤테로환 일환형 또는 이환형 고리 시스템을 나타낸다. 헤테로아릴 잔기의 예는 피롤일, 퓨란일, 티엔일, 이미다졸일, 옥사졸일, 티아졸일, 트라이아졸일, 옥사다이아졸일, 티아다이아졸일, 테트라졸일, 피리딘일, 피란일, 피라졸일, 피리다진일, 피리미딘일, 트라이아진일, 아제핀일, 다이아제핀일, 이속사졸일, 벤조퓨란일, 이소티아졸일, 벤조티엔일, 인돌일, 이소인돌일, 이소벤조퓨란일, 벤즈이미다졸일, 벤족사졸일, 벤조이속사졸일, 벤조티아졸일, 벤조이소티아졸일, 벤조옥사다이아졸일, 벤조티아다이아졸일, 벤조트라이아졸일, 퓨린일, 퀴놀린일, 이소퀴놀린일, 퀴나졸린일 또는 퀴녹살린일을 포함한다. 구체적인 "헤테로아릴"은 피리딘일 및 피리미딘일이다.
용어 "N-함유 일환형 헤테로아릴"은 하나 이상의 헤테로원자가 N인 일환형 헤테로아릴을 지칭한다. N-함유 일환형 헤테로아릴의 예는 피롤일, 이미다졸일, 옥사졸일, 티아졸일, 트라이아졸일, 옥사다이아졸일, 티아다이아졸일, 테트라졸일, 피리딘일, 피란일, 피라졸일, 피리다진일, 피리미딘일, 트라이아진일, 아제핀일, 다이아제핀일, 이속사졸일, 이소티아졸일 등이다. 구체적인 "N-함유 일환형 헤테로아릴" 기는 이미다졸일, 피라졸일 및 트라이아졸일, 더욱 특히 이미다졸-1-일, 피라졸-1-일 및 1,2,4-트라이아졸-1-일이다.
용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미한다. 할로겐은 특히 불소, 염소 또는 브롬이다.
용어 "하이드록시"는, 단독으로 또는 조합으로, 기 -OH를 지칭한다.
용어 "2-옥소-피롤리딘일"은, 단독으로 또는 조합으로, 기
Figure pct00016
를 지칭한다.
용어 "설폰일"은, 단독으로 또는 조합으로, 기 -S(O)2-를 지칭한다.
용어 "C1-6알킬아미노"는 아미노 기의 하나 이상의 수소 원자가 C1-6알킬 기로 대체된, 상기 정의된 아미노 기를 지칭한다.
용어 "C1-6알킬설폰일"은 "C1-6알킬"이 상기 정의된 바와 같은 기 C1-6알킬-S(O)2-를 지칭한다.
용어 "아미노카보닐"은 "아미노"가 상기 정의된 바와 같은 기 아미노-C(O)-를 지칭한다.
용어 "시아노C3-7사이클로알킬"은 C3-7사이클로알킬 기의 하나 이상의 수소 원자가 시아노 기로 대체된, 상기 정의된 C3-7사이클로알킬 기를 지칭한다.
용어 "피롤리딘일카보닐"은 기 피롤리딘일-C(O)-를 지칭한다.
용어 "거울상 이성질체"는 서로 포갤 수 없는 거울상인 화합물의 2개의 입체 이성질체를 나타낸다.
용어 "부분입체 이성질체"는 2개 이상의 키랄 중심을 갖고 이의 분자가 서로 거울상이 아닌 입체 이성질체를 나타낸다. 부분입체 이성질체는 상이한 무리적 특성, 예컨대 융점, 비등점, 스펙트럼 특성 및 반응성을 갖는다.
본 발명은 비제한적인 도면 및 실시예를 참조하여 추가로 설명된다.
실시예
실시예는 본 발명을 실증한다.
재료 및 방법
화합물 화학
2개의 화학물질 시리즈 DHQ 및 THP로부터의 각각의 하나의 화합물을 하이브리제닉스 서비시즈 에스에이에스(HYBRIGENICS SERVICES SAS)에 의해 수행되는 Y3H 선별에 적합하도록 합성하였다. 둘 다의 화합물은 PEG5 연결기를 포함하였고 트라이메토프림(Trimethoprim; TMP) 앵커 리간드로 태깅되었다(표 1).
[표 1]
TMP-태깅된 소분자 화합물 번호
Figure pct00017
Y3H ULTImate YChemH(상표) 선별
상기 2개의 화합물을 로슈(Roche)에 의해 하이브리제닉스 서비시즈 에스에이에스에 제공하고 침투성 및 독성에 대해 시험하였다. 이어서, 화합물을 하이브리제닉스의 cDNA 인간 태반 라이브러리(PLA)에 대해 선별하였다. 선별을 하이브리제닉스 ULTImate Y2H(상표)에 대해 개발된 최적화된 세포-대-세포 메이팅(mating) 프로토콜에 따라 상이한 화합물 농도에서 사용하여 수행하였다(표 2).
[표 2]
YChemH 선별 번호
Figure pct00018
Y3H ULTImate YChemH(상표) 의존성 검정
선별로부터 수득한 클론을 96-웰 포맷으로 수집하고, 선택성 조건 하에 성장에 대해 양성인 클론(HIS+)을 스폿 검정을 사용하여 의존성 검정에서 평가하였다. 태깅된 화합물의 존재 하에 선택적 배지 상에서 성장할 수 있는 클론만을 수집하고 처리(세포 용해, PCR, 유전자 서열결정)하고, 단백질 정렬에 대해 블라스트(Blast) 분석을 사용하여 맵핑하였다.
Y3H ULTImate YChemH(상표) 원-바이-원 확인 실험 - 프레이 단편
본 확인 단계에서, 하나의 동정된 단편 프레이 및 하나의 화학적 프로브(HBX129653, HBX129654) 각각을 원-바이-원 실험에서 시험하였다. 선별 라이브러리의 3개의 선택된 프레이로부터의 플라스미드를 효모 세포로부터 추출하고, 대장균에서 증폭시키고, YHGX13 효모 세포 내로 재-형질전환시켰다. 각각의 상호작용을 위해, 후크(hook) 및 프레이 구축물 모두를 발현하는 이배체의 효모 배양물의 DO1, 1/10, 1/100 및 1/1000을, 트립토판, 류신 및 히스티딘이 부재하고 화학적 프로브 및 FK506으로 보충된 선택적 배지 상에 스폿팅시켰다. 상호작용을 2회 시험하였다. 하나의 플레이트를 각 화학적 화합물 및 농도에 대해 사용하였다(DMSO, 5, 10 및 20 μM의 HBX129653, 5, 10 및 20 μM의 HBX129654, 5 μM의 HBX24786 트라이메토프림(TMP) 및 5 μM의 HBX129634(TMP-PEG5-OH)). 플레이트를 30℃에서 3일 동안 항온처리하였다.
Y3H ULTImate YChemH(상표) 원-바이-원 확인 실험 - 전장 단백질
전장 PAPD5var1(NM_001040284.2) 및 PAPD7varX1(XM_005248234.2)의 코딩 서열을 N-말단 코돈-최적화된 유전자 단편(높은 GC 함량을 제거하기 위함) 및 시판 중인 단백질의 C-말단 영역의 클론으로부터 재구성하고, 원래 pGADGH로부터 유래된, 플라스미드 pP7 내로 Gal4 활성화 도메인(AD)을 갖는 프레임으로 클로닝하였다(AD-Prey)(문헌[Bartel et al., 1993 in Cellular interactions in development: A practical approach. ed. Hartley, D.A., Oxford University Press, Oxford, pp. 153-179]). 구축물을 전체 삽입물의 서열결정에 의해 확인하였다. 각각의 프레이에 대해, 미니-메이팅(mini-mating)을 프레이 플라스미드로 형질전환된 YHGX13(Y187 ade2-101::loxP-kanMX-loxP, matα)과 DHFR 후크(다이하이드로폴레이트 리덕타제)로 형질전환된 YPT6AT 효모 세포(mata) 사이에 수행하여 이배체의 효모 배양물을 생산하였다. 각각의 상호작용을 위해, 후크 및 프레이 구축물 모두를 발현하는 이배체의 효모 배양물의 DO1, 1/10, 1/100 및 1/1000을, 트립토판, 류신 및 히스티딘이 부재하고 화학적 프로브 및 FK506으로 보충된 선택적 배지 상에 스폿팅시켰다. 상호작용을 2회 시험하였다. 하나의 플레이트를 각 화학적 화합물 및 농도에 대해 사용하였다(DMSO, 5, 10 및 20 μM의 HBX129653, 5, 10 및 20 μM의 HBX129654, 5 μM의 HBX24786 트라이메토프림(TMP) 및 5 μM의 HBX129634(TMP-PEG5-OH)). 플레이트를 30℃에서 3일 동안 항온처리하였다.
Y3H ULTImate YChemH (상표) - 유리 화합물과의 경쟁
경쟁 검정은, 일정한 농도의 화학적 프로브(HBX129653, HBX 129654) 및 증가하는 농도의 화학적 프로브의 모 화합물(MOL653, MOL654) 또는 이의 불활성 거울상 이성질체(INACT653, INACT654)를 사용하는 전술된 원-바이-원 확인을 기반으로 한다(표 3). 경쟁 검정을 유리 화합물의 8개의 농도(0, 0.25, 0.5, 1, 2, 5, 10 및 20 μM)에서 및 태깅된 Y3H-화합물의 일정한 농도(1 μM)에서 선택적 배지 상에서 수행하였다.
[표 3]
YChemH 경쟁 번호
Figure pct00019
HepaRG 세포 배양
HepaRG 세포(바이오프리딕스 인터내셔널(Biopredics International, 프랑스 렌 소재), 카탈로그 번호 HPR101)를 37℃에서 5% CO2를 함유하는 가습된 대기에서 윌리엄 E 배지(깁코(GIBCO)), 성장 배지 보충물(바이오프리딕스, 카탈로그 번호 ADD710), 1%(v/v) GlutaMAX-I(깁코 #32551) 및 1x Pen/Strep(깁코, #15140)으로 이루어진 완전 HepaRG 성장 배지에서 2주 동안 배양하였다. 분화를 개시하기 위해, 0.9%(v/v) DMSO(시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), D2650)를 융합성 세포에 대한 성장 배지에 첨가하였다. 1주일 후에, 배지를 완전 분화 배지(1.8%(v/v) DMSO로 보충된 HepaRG 성장 배지)로 대체하였고, 여기서 세포를 7일마다 분화 배지 리뉴얼에 의해 약 4주 동안 유지하였다. 분화된 HepaRG 세포(dHepaRG)는 담관-유사 세포의 단층으로 둘러싸인 간세포-유사 세포 섬을 나타냈다. HBV 감염 및 화합물 처리 전에, dHepaRG 세포를 100 μL의 완전 분화 배지에서 콜라겐 I 코팅된 96-웰 플레이트(깁코, 카탈로그 번호 A11428-03)에 60,000 세포/웰로 시딩하였다. 세포를, HBV 감염 전에 플레이팅 후에 약 1주일 동안 96-웰 플레이트에서 이들의 분화된 표현형을 회수하도록 하였다.
dHepaRG의 HBV 감염
dHepaRG 세포를, HBV 입자로 30의 MOI로 감염시켰다. HBV 입자를 HBV-생산 HepG2.2.15 세포로부터 생산하였다(문헌[Sells et al 1987 Proc Natl Acad Sci U S A 84, 1005-1009]). dHepaRG 배양 조건, 분화 및 HBV 감염은 이전에 기술되었다(문헌[Hantz, 2009, J. Gen. Virol., 2009, 90: 127-135]). 간략히, 4% PEG-8000 및 바이러스 스톡(20 내지 30 GE/세포)을 함유하는 완전 분화 배지(120 μL/웰)를 첨가하였다. 감염 1일 후, 세포를 포스페이트-완충된 염수로 3회 세척하고, 및 배지(완전 분화 배지)를 실험 동안 2일 마다 교체하였다.
HBV-감염된 HepaRG의 siRNA 처리
4개의 상이한 siRNA의 풀을 지이 다마콘(GE Dharmacon)으로부터 획득하였다(ON TARGETplus)(표 4).
[표 4]
siRNA 개요
Figure pct00020
HBV 세포로 감염시키기 1일 전 및 감염 4일 후에, 세포를 PAPD5, PAPD7 또는 둘 다에 대한 siRNA 풀, 또는 대조군으로서 비-표적화 siRNA로 처리하였다. siRNA를 제조업자의 프로토콜에 따라 DharmaFect 4(지이 다마콘; 카탈로그 번호 T-2004-01) 및 OPTI-MEM(써모 사이언티픽; 카탈로그 번호 51985034)을 사용하여 형질감염시켰다. 세포를 11일 동안 시험하였다.
HBV 항원 측정
HBV 항원 발현 및 분비에 대한 영향을 평가하기 위해, 상청액을 제11일에 수집하였다. HBV HBsAg 및 HBeAg 수준을 제조업자의 프로토콜에 따라 CLIA ELISA 키트(오토바이오 다이아그노스틱 #CL0310-2, #CL0312-2)를 사용하여 측정하였다. 간략히, 웰 당 25 μL의 상청액을 각각의 항체 코팅된 마이크로역가 플레이트에 옮기고 25 μL의 효소 접합체 시약을 첨가하였다. 플레이트를 60분 동안 진탕기 상에서 실온에서 항온처리한 후에, 웰을 자동 세척기를 사용하여 세척 완충제에 의해 5회 세척하였다. 25 μL의 기질 A 및 B를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 진탕기 상에서 10분 동안 실온에서 항온처리한 후에, 발광을 엔비전(Envision) 발광 판독기(퍼킨 엘머)를 사용하여 측정하였다.
세포 생존능
상청액 배지를 HBV 감염된 dHepaRG 세포로부터 제거한 후에, 세포를 셀티터글로 원 솔루션(CellTiterGlo One Solution)(프로메가(Promega))과 함께 항온처리하여 세포 생존능을 측정하였다.
세포내 mRNA에 대한 실시간 PCR
세포내 mRNA 단리를 위해, dHepaRG를 PBS(깁코)로 1회 세척하고 MagNA Pure "96 셀룰러 RNA 라지 볼륨 키트(96 Cellular RNA Large Volume Kit)"(로슈 #05467535001)를 사용하여 용해시켰다. 용해물을 -80℃에서 저장할 수 있다. 실시간 qPCR 반응을 위해, AB7900 HT 서열 검출 시스템(어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)), TaqMan(등록상표) 유전자 발현 마스터 믹스(써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific))를 사용하였다. HBV mRNA HBV 코어-특이적 프라이머(인테그레이티드 디엔에이 테크톨로지스(Integrated DNA Technologies))의 검출을 위해(표 5) 및 PAPD5 및 PAPD7의 감소를 측정하기 위해, siRNA의 존재 하에, 유전자-특이적 TaqMan(등록상표) 발현 검정 프로브(써모피셔 사이언티픽; PAPD5 카탈로그 번호 4331182; PAPD7 카탈로그 번호 4331182)를 사용하였다. 샘플을 b-액틴에 대한 TaqMan(등록상표) 발현 검정 프로브틴(써모피셔 사이언티픽; PAPD5 카탈로그 번호 4331182)를 사용하여 정규화시켰다.
[표 5]
HBV 코어 특이적 TaqMan 프로브
Figure pct00021
실시예 1: DHQ 및 THP는 PAPD5 및 PAPD7에 결합한다.
PAPD5 /7을 Y3H Ultimate YChemH 선별에서 DHQ 및 THP의 공동 상호작용 파트너로서 동정하였다.
단백질 PAPD5(변이체 1: NP_001035374; 변이체 2: NP_001035375) 및 PAPD7(XP_005248291) 모두를 재료 및 방법 섹션에 기술된 바와 같이 둘 다의 화합물(DHQ 및 THP)에 대한 Y3H 선별에서 수많은 단편에 의해 동정하였다. 동정된 단백질을 하이브리제닉스에 의해 A의 신뢰도 점수(스케일 A 내지 D)로 등급매겼다(표 6).
[표 6]
PAPD5/7에 대한 YChemH 선별 결과
Figure pct00022
PAPD5 /7과 DHQ 및 THP의 상호작용을 동정된 프레이 단편 및 추가 전장 단백질의 Y3H ULTImate YChemH 원-바이-원 확인을 사용하여 확인할 수 있다.
제1 확인 단계에서, 제1 선별에서 동정된 3개의 단편을 원-바이-원 확인 검정(재료 및 방법 섹션에 기술된 바와 같음)을 위해 선택하고 3개의 상이한 농도에서(5, 10 및 20 μM) 시험하였다(표 7).
[표 7]
확인 검정을 위해 선택된 상호작용성 단편
Figure pct00023
3개의 단편 모두는 이미 시험된 최저 농도에서 DHQ 및 THP에 대한 특이적 결합자로서 확인될 수 있었다(도 1).
제2 확인 단계에서, PAPD5 및 PAPD7에 대한 전장 단백질을 합성하고 DHQ 및 THP를 사용하는 원-바이-원 확인(재료 및 방법 섹션에 기술된 바와 같음)에 사용하였다(표 8).
[표 8]
원-바이-원 확인 검정에 사용된 전장 단백질 프레이에 대한 참조 번호
Figure pct00024
이들 전장 단백질과 DHQ 및 THP 화합물 사이의 상호작용은 시험된 최저 농도에서 확인되었고 화학적 프로브에 대해 특이적인 것으로 나타났다(도 2).
Y3H에서 PAPD5 /7과 DHQ 및 THP의 상호작용은 둘 다의 자유 활성 화합물에 의해 경쟁될 수 있으나 불활성 거울상 이성질체에 의해서는 아니다.
단백질 단편 및 전장 PAPD5 및 PAPD7에 대한 DHQ 및 THP의 결합을 확인 한 후에, 결합을, 불활성 또는 활성 유리 화합물을 사용하여 Y3H ULTImate YChenH 경쟁 실험(재료 및 방법 섹션에 기술된 바와 같음)에서 확인하였다(표 9). 불활성 거울상 이성질체의 존재 하에는 효모 성장 손실이 감소하지 않으나 모 활성 화합물의 존재 하에 효모 성장 손실이 감소하는 것은, 모 화합물이 화학적 프로브와 경쟁하고 단백질 표적과 상호작용함을 의미한다.
모든 시험된 화합물의 경우, 최고 농도(20 μM)에서 비-선택적 배지에 대한 독성을 제조업자의 프로토콜에 따라 셀티터-글로 발광성 세포 생존능 검정(프로메가)을 사용하여 시험하였다. 효모 성장이 영향을 받지 않았기 때문에 임의의 화합물에 대해 상기 농도에서 독성이 관찰되지 않았다(데이터는 표시되지 않음). 모든 활성 유리 모 화합물(각각 DHQ 및 THP, MOL653 및 MOL654)에 대해 경쟁이 관찰되되, 단편 상호작용에 대한 것보다 전장 단백질에 대한 결합의 경쟁을 위해 낮은 농도가 필요하였다(도 3 및 4). 성공적인 교차 경쟁은 PAPD5/7에 대한 DHQ 및 THP의 공유된 결합 사이드 또는 서로 아주 근접한 최소 결합을 시사한다.
[표 9]
경쟁 검정에 사용된 단백질 프레이에 대한 참조 번호
Figure pct00025
실시예 2: siRNA에 의해 PAPD5 및/또는 PAPD7을 억제하는 것은 HBV 감염의 효과적인 치료를 야기한다.
PAPD5/7에 대한 DHQ 및 THP의 결합과 HBV 유전자 발현에 대한 이들 2개의 단백질의 영향의 상관관계를 보여주기 위해, 자연적으로 HBV 감염된 dHepaRG에서 이들 단백질을 감소시키고 바이러스 파라미터에 대한 이러한 감소의 영향을 모니터링하는 RNAi 기술을 사용하였다. 이를 위해, 재료 및 방법 섹션에 기술된 바와 같이, HBV 감염된 dHepaRG 세포에서 PAPD5 및 PAPD7에 대한 siRNA 풀을 사용하였다(표 4 참조).
PAPD5의 감소는 분비된 HBsAg 및 HBeAg, 및 세포내 HBV mRNA에 의해 측정된 바이러스 발현의 억제를 야기하였다(재료 및 방법 섹션에 기술된 바와 같이 CLIA ELISA 및 실시간 PCR을 사용하여 측정함). PAPD5 mRNA의 감소가 HBV 유전자 발현을 극적으로 감소시키는 반면에, PAPD7의 억제는 HBV 발현에 대한 보통의 효과를 가졌다(도 7). 그러나, 향상된 상승작용성 항-HBV 활성이 PAPD7 및 PAPD5에 대한 siRNA가 조합되었을 때 관찰되었고(도 7), 이는 PAPD5의 부재 하에 PAPD7에 대한 상보적 역할을 시사한다.
실시예 3: DHQ 및 THP는 HBsAg 및 HBeAg를 효과적으로 감소시킨다.
HBV 감염에 대한 DHQ 및 THP, 및 이들의 변종의 효능을 HepG2.2.15 세포에서 판독한대로 HBsAg 및 HBeAg를 측정하였다.
HepG2.2.15 세포(문헌[Sells et al 1987 Proc Natl Acad Sci U S A 84, 1005-1009])를 DMEM+GluTaMax-1(깁코 카탈로그 번호 10569), 1% Pen Strep(깁코 카탈로그 번호15140), 10% FBS(클론테크(Clontech) 카탈로그 번호 631106) 및 제네티신 0.25 μg/mL(인비트로겐((Invitrogen) 10131035)에서 96 웰 플레이트(100 uLL 중에 15.000 세포/웰)에서 배양하였다. 상기 화합물을, 100 μM의 최고 농도를 갖는 DMSO에서의 3-배 연속 희석물 및 9개의 연속 희석물을 사용하여 시험하였다. 각각의 화합물을 4회 시험하였다. 세포를 3일 동안 항온처리하고, 상청액을 수집하고, HBsAg 및 HBeAg를 재료 및 방법 섹션에서 기술된 바와 같이 측정하였다.
HBsAg 및 HBeAg 분비의 감소에서 시험된 화합물의 IC50 값은 하기와 같다:
HBX129653 (DHQ - TMP): IC50 HBsAg 1.181 μM
HBX129654 (THP - TMP): IC50 HBsAg 0.299 μM
MOL653 (DHQ - 유리 - 활성): IC50 HBsAg 0.003 μM; IC50 HBeAg 0.007 μM
MOL654 (THP - 유리 - 활성): IC50 HBsAg 0.003 μM
INACT653 (DHQ - 유리 - 불활성): IC50 HBsAg 3.15 μM
INACT654 (THP - 유리 - 불활성): IC50 HBsAg >25 μM
SEQUENCE LISTING <110> F. Hoffmann-La Roche AG <120> PAPD5 and PAPD7 inhibitors for treating a hepatitis B infection <130> P33547-WO <140> PCT/EP2017/064981 <141> 2017-06-19 <150> EP16175045.0 <151> 2016-06-17 <160> 20 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 698 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Arg Pro Arg Pro Arg Ser Ala Pro Gly Lys Pro Arg Arg Arg Ser 1 5 10 15 Arg Ala Arg Leu Arg Ser Ser Arg Thr Pro Ser Gly Gly Ala Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ala Thr Gly Gly Ser Gly 35 40 45 Ser Ser Thr Gly Ser Pro Gly Gly Ala Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala 50 55 60 Pro Ala Gly Met Tyr Arg Ser Gly Glu Arg Leu Leu Gly Ser His Ala 65 70 75 80 Leu Pro Ala Glu Gln Arg Asp Phe Leu Pro Leu Glu Thr Thr Asn Asn 85 90 95 Asn Asn Asn His His Gln Pro Gly Ala Trp Ala Arg Arg Ala Gly Ser 100 105 110 Ser Ala Ser Ser Pro Pro Ser Ala Ser Ser Ser Pro His Pro Ser Ala 115 120 125 Ala Val Pro Ala Ala Asp Pro Ala Asp Ser Ala Ser Gly Ser Ser Asn 130 135 140 Lys Arg Lys Arg Asp Asn Lys Ala Ser Thr Tyr Gly Leu Asn Tyr Ser 145 150 155 160 Leu Leu Gln Pro Ser Gly Gly Arg Ala Ala Gly Gly Gly Arg Ala Asp 165 170 175 Gly Gly Gly Val Val Tyr Ser Gly Thr Pro Trp Lys Arg Arg Asn Tyr 180 185 190 Asn Gln Gly Val Val Gly Leu His Glu Glu Ile Ser Asp Phe Tyr Glu 195 200 205 Tyr Met Ser Pro Arg Pro Glu Glu Glu Lys Met Arg Met Glu Val Val 210 215 220 Asn Arg Ile Glu Ser Val Ile Lys Glu Leu Trp Pro Ser Ala Asp Val 225 230 235 240 Gln Ile Phe Gly Ser Phe Lys Thr Gly Leu Tyr Leu Pro Thr Ser Asp 245 250 255 Ile Asp Leu Val Val Phe Gly Lys Trp Glu Asn Leu Pro Leu Trp Thr 260 265 270 Leu Glu Glu Ala Leu Arg Lys His Lys Val Ala Asp Glu Asp Ser Val 275 280 285 Lys Val Leu Asp Lys Ala Thr Val Pro Ile Ile Lys Leu Thr Asp Ser 290 295 300 Phe Thr Glu Val Lys Val Asp Ile Ser Phe Asn Val Gln Asn Gly Val 305 310 315 320 Arg Ala Ala Asp Leu Ile Lys Asp Phe Thr Lys Lys Tyr Pro Val Leu 325 330 335 Pro Tyr Leu Val Leu Val Leu Lys Gln Phe Leu Leu Gln Arg Asp Leu 340 345 350 Asn Glu Val Phe Thr Gly Gly Ile Gly Ser Tyr Ser Leu Phe 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tacatgagga aataattgac ttttataact 780 tcatgtcccc ttgtcctgaa gaagcagcta tgagaagaga ggtggtgaaa cggatcgaaa 840 ctgtggtgaa agacctttgg ccgacggctg atgtacagat atttggcagc tttagtacag 900 gtctttatct tccaactagc gacatagacc tggtggtctt cgggaaatgg gagcgtcctc 960 ctttacagct gctggagcaa gccctgcgga agcacaacgt ggctgagccg tgttccatca 1020 aagtccttga caaggctacg gtaccaataa taaagctcac agatcaggag actgaagtga 1080 aagttgacat cagctttaac atggagacgg gcgtccgggc agcggagttc atcaagaatt 1140 acatgaagaa atattcattg ctgccttact tgattttagt attgaaacag ttccttctgc 1200 agagggacct gaatgaagtt tttacaggtg gaattagctc atacagccta attttaatgg 1260 ccattagctt tctacagttg catccaagaa ttgatgcccg gagagctgat gaaaaccttg 1320 gaatgcttct tgtagaattt tttgaactct atgggagaaa ttttaattac ttgaaaaccg 1380 gtattagaat caaagaagga ggtgcctata tcgccaaaga ggagatcatg aaagccatga 1440 ccagcgggta cagaccgtcg atgctgtgca ttgaggaccc cctgctgcca gggaatgacg 1500 ttggccggag ctcctatggc gccatgcagg tgaagcaggt cttcgattat gcctacatag 1560 tgctcagcca tgctgtgtca ccgctggcca ggtcctatcc aaacagagac gccgaaagta 1620 ctttaggaag aatcatcaaa gtaactcagg aggtgattga ctaccggagg tggatcaaag 1680 agaagtgggg cagcaaagcc cacccgtcgc caggcatgga cagcaggatc aagatcaaag 1740 agcgaatagc cacatgcaat ggggagcaga cgcagaaccg agagcccgag tctccctatg 1800 gccagcgctt gactttgtcg ctgtccagcc cccagctcct gtcttcaggc tcctcggcct 1860 cttctgtgtc ttcactttct gggagtgacg ttgattcaga cacaccgccc tgcacaacgc 1920 ccagtgttta ccagttcagt ctgcaagcgc cagctcctct catggccggc ttacccaccg 1980 ccttgccaat gcccagtggc aaacctcagc ccaccacttc cagaacactg atcatgacaa 2040 ccaacaatca gaccaggttt actatacctc caccgaccct aggggttgct cctgttcctt 2100 gcagacaagc tggtgtagaa ggaactgcgt ctttgaaagc cgtccaccac atgtcttccc 2160 cggccattcc ctcagcgtcc cccaacccgc tctcgagccc tcatctgtat cataagcagc 2220 acaacggcat gaaactgtcc atgaagggct ctcacggcca cacccaaggc ggcggctaca 2280 gctctgtggg tagcggaggt gtgcggcccc ctgtgggcaa caggggacac caccagtata 2340 accgcaccgg ctggaggagg aaaaaacaca cacacacacg ggacagtctg cccgtgagcc 2400 tcagcagata atggctcctg gctgcgtcag cctcccccac ccctctgcag actgccccgc 2460 ggcctcggcc accggcaggg gaaccgagac cagcaccccg cacgtcagcc gggctcgcgg 2520 cacgcccgcc gctgatcact ctgcatgttt cttcgtgtgg tggtcgcgtc catcttcaag 2580 aacagctcgt tgtgctcatc tgtgaagcct tattaaacgt ggacgttgtt ttctgccttc 2640 ccaggattct tccttcagtg ctgaggcagg tcgggctcag gaactgcagg gacgtgaaca 2700 tgcgcttgcg gtttgaggta gccgtgtctg ttccttcgcg gtttgctatt ttcatttcct 2760 gttcgtcaaa gcagcagagg agatcaaacc ccgttcgtgt gtctttcctc cacggataag 2820 cttgggaggt cattgtttta ctgccctcac attttgtttg aaatttcaga actgtttttc 2880 tatgtaaata ttgaaaactt atgatttgtg caataactca gatatttttt atttaatttc 2940 ctattttcac ataagttata tttaagggag gagggaattt tttttaaaca agcttaggtc 3000 ctttcccgag ctgcattttc taagttgggt catcgtgtcg gctggttgtc tgacgagcat 3060 cgttacaaac accatgatga ggggtttggg gttttatttt gatgtctttt cttttggtcg 3120 gaagtgagtg aaggagccag gtcgccctga aggttttcca aagggcttgg ctccagagcc 3180 acctggcaga ctgcccgtgg ccctgctgtc gggccccagg ccgttgtcct gctctgacca 3240 cagagtttta atgttttggt tttcacttct tttaaactgg acaacaaatc cagcatttca 3300 agtgccagaa gtataacttt ctaaggagag aagggttgtc acattataaa atctttagga 3360 aaatgtgaac tggaaaacgc ttcggtcagt tttagtgaca tagcctgtga tgatgggtct 3420 ggtgactatt attgcggacc gtggtaccca gttttaggaa tgtggagaaa ggaattctgt 3480 tgattccgtt gaggaatctg tagcgtatgc attcgttctg ttaagagcaa atctaggaga 3540 agtgcttcag ctgcccagtg cgccgtgggg agtgttttaa cggatcgtgt cgcaggagag 3600 cacagcccag cgttggggcc gggaccgctg gcgcccgacg tcggaagcat acaggtatac 3660 tatgcaagtg tattctgcca caacaaccac tgtctttgtt accttttttt gaacaagaat 3720 atatccatcc tgcctaaccc tgagtttttg gagcaccaca gttgtcctgg gagttggttg 3780 catcttgtag gccatctgac ttcctgtttt taaaacgggg gtctggtctt gctaaacact 3840 acaggtaggt tggtctttga agtccactag tggagaatgt caagacaaga tacttattac 3900 catgacatct gatgcatgtg cagcagtggg gagttctaga ttgatctctg aatgtgatcg 3960 acgcccagca aggacaagct ttaaaatgtc tgcggtctgc ccttttgaag caggactggc 4020 tcactctgtc attgggagct gtcagctgcg actgcaggtt ctctaggagg cattccagaa 4080 tagagtagca cactgtgtct gcagttctcg atgaccgaaa gttatcaaaa atatttaaaa 4140 tatttaaatt gtgaacctat tgataaagaa tatttataaa aactgatctg taggcctgta 4200 ctaatctcta cgcattagca atattgactg taaacccaca ttaaggaaac cactacgggt 4260 ctggcagtgc gtgtcccgtg gggtgtgcat tttaaaactc gattcataga cacaggtacc 4320 atgttccatt tccgtcatgg tgaagcaaat gaattggcct ggctaccact gtggtcgcgt 4380 gctacaggtt tgacaaaaag atatcatgtt tcgatttttt tgtgtgtgga caacaatatg 4440 gaagctaaaa ttgacatatt tttatgtaaa gtttttctat tctttgattt ttaataaact 4500 ttggaaacca g 4511 <210> 7 <211> 474 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Thr Tyr Gly Leu Asn Tyr Ser Leu Leu Gln Pro Ser Gly Gly Arg Ala 1 5 10 15 Ala Gly Gly Gly Arg Ala Asp Gly Gly Gly Val Val Tyr Ser Gly Thr 20 25 30 Pro Trp Lys Arg Arg Asn Tyr Asn Gln Gly Val Val Gly Leu His Glu 35 40 45 Glu Ile Ser Asp Phe Tyr Glu Tyr Met Ser Pro Arg Pro Glu Glu Glu 50 55 60 Lys Met Arg Met Glu Val Val Asn Arg Ile Glu Ser Val Ile Lys Glu 65 70 75 80 Leu Trp Pro Ser Ala Asp Val Gln Ile Phe Gly Ser Phe Lys Thr Gly 85 90 95 Leu Tyr Leu Pro Thr Ser Asp Ile Asp Leu Val Val Phe Gly Lys Trp 100 105 110 Glu Asn Leu Pro Leu Trp Thr Leu Glu Glu Ala Leu Arg Lys His Lys 115 120 125 Val Ala Asp Glu Asp Ser Val Lys Val Leu Asp Lys Ala Thr Val Pro 130 135 140 Ile Ile Lys Leu Thr Asp Ser Phe Thr Glu Val Lys Val Asp Ile Ser 145 150 155 160 Phe Asn Val Gln Asn Gly Val Arg Ala Ala Asp Leu Ile Lys Asp Phe 165 170 175 Thr Lys Lys Tyr Pro Val Leu Pro Tyr Leu Val Leu Val Leu Lys Gln 180 185 190 Phe Leu Leu Gln Arg Asp Leu Asn Glu Val Phe Thr Gly Gly Ile Gly 195 200 205 Ser Tyr Ser Leu Phe Leu Met Ala Val Ser Phe Leu Gln Leu His Pro 210 215 220 Arg Glu Asp Ala Cys Ile Pro Asn Thr Asn Tyr Gly Val Leu Leu Ile 225 230 235 240 Glu Phe Phe Glu Leu Tyr Gly Arg His Phe Asn Tyr Leu Lys Thr Gly 245 250 255 Ile Arg Ile Lys Asp Gly Gly Ser Tyr Val Ala Lys Asp Glu Val Gln 260 265 270 Lys Asn Met Leu Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Met Leu Tyr Ile Glu Asp 275 280 285 Pro Leu Gln Pro Gly Asn Asp Val Gly Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met 290 295 300 Gln Val Lys Gln Ala Phe Asp Tyr Ala Tyr Val Val Leu Ser His Ala 305 310 315 320 Val Ser Pro Ile Ala Lys Tyr Tyr Pro Asn Asn Glu Thr Glu Ser Ile 325 330 335 Leu Gly Arg Ile Ile Arg Val Thr Asp Glu Val Ala Thr Tyr Arg Asp 340 345 350 Trp Ile Ser Lys Gln Trp Gly Leu Lys Asn Arg Pro Glu Pro Ser Cys 355 360 365 Asn Gly Asn Gly Val Thr Leu Ile Val Asp Thr Gln Gln Leu Asp Lys 370 375 380 Cys Asn Asn Asn Leu Ser Glu Glu Asn Glu Ala Leu Gly Lys Cys Arg 385 390 395 400 Ser Lys Thr Ser Glu Ser Leu Ser Lys His Ser Ser Asn Ser Ser Ser 405 410 415 Gly Pro Val Ser Ser Ser Ser Ala Thr Gln Ser Ser Ser Ser Asp Val 420 425 430 Asp Ser Asp Ala Thr Pro Cys Lys Thr Pro Lys Gln Leu Leu Cys Arg 435 440 445 Pro Ser Thr Gly Asn Arg Val Gly Ser Gln Asp Val Ser Leu Glu Ser 450 455 460 Ser Gln Ala Val Gly Lys Met Gln Ser Thr 465 470 <210> 8 <211> 419 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Leu Leu Gln Pro Ser Gly Gly Arg Ala Ala Gly Gly Gly Arg Ala Asp 1 5 10 15 Gly Gly Gly Val Val Tyr Ser Gly Thr Pro Trp Lys Arg Arg Asn Tyr 20 25 30 Asn Gln Gly Val Val Gly Leu His Glu Glu Ile Ser Asp Phe Tyr Glu 35 40 45 Tyr Met Ser Pro Arg Pro Glu Glu Glu Lys Met Arg Met Glu Val Val 50 55 60 Asn Arg Ile Glu Ser Val Ile Lys Glu Leu Trp Pro Ser Ala Asp Val 65 70 75 80 Gln Ile Phe Gly Ser Phe Lys Thr Gly Leu Tyr Leu Pro Thr Ser Asp 85 90 95 Ile Asp Leu Val Val Phe Gly Lys Trp Glu Asn Leu Pro Leu Trp Thr 100 105 110 Leu Glu Glu Ala Leu Arg Lys His Lys Val Ala Asp Glu Asp Ser Val 115 120 125 Lys Val Leu Asp Lys Ala Thr Val Pro Ile Ile Lys Leu Thr Asp Ser 130 135 140 Phe Thr Glu Val Lys Val Asp Ile Ser Phe Asn Val Gln Asn Gly Val 145 150 155 160 Arg Ala Ala Asp Leu Ile Lys Asp Phe Thr Lys Lys Tyr Pro Val Leu 165 170 175 Pro Tyr Leu Val Leu Val Leu Lys Gln Phe Leu Leu Gln Arg Asp Leu 180 185 190 Asn Glu Val Phe Thr Gly Gly Ile Gly Ser Tyr Ser Leu Phe Leu Met 195 200 205 Ala Val Ser Phe Leu Gln Leu His Pro Arg Glu Asp Ala Cys Ile Pro 210 215 220 Asn Thr Asn Tyr Gly Val Leu Leu Ile Glu Phe Phe Glu Leu Tyr Gly 225 230 235 240 Arg His Phe Asn Tyr Leu Lys Thr Gly Ile Arg Ile Lys Asp Gly Gly 245 250 255 Ser Tyr Val Ala Lys Asp Glu Val Gln Lys Asn Met Leu Asp Gly Tyr 260 265 270 Arg Pro Ser Met Leu Tyr Ile Glu Asp Pro Leu Gln Pro Gly Asn Asp 275 280 285 Val Gly Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met Gln Val Lys Gln Ala Phe Asp 290 295 300 Tyr Ala Tyr Val Val Leu Ser His Ala Val Ser Pro Ile Ala Lys Tyr 305 310 315 320 Tyr Pro Asn Asn Glu Thr Glu Ser Ile Leu Gly Arg Ile Ile Arg Val 325 330 335 Thr Asp Glu Val Ala Thr Tyr Arg Asp Trp Ile Ser Lys Gln Trp Gly 340 345 350 Leu Lys Asn Arg Pro Glu Pro Ser Cys Asn Gly Pro Val Ser Ser Ser 355 360 365 Ser Ala Thr Gln Ser Ser Ser Ser Asp Val Asp Ser Asp Ala Thr Pro 370 375 380 Cys Lys Thr Pro Lys Gln Leu Leu Cys Arg Pro Ser Thr Gly Asn Arg 385 390 395 400 Val Gly Ser Gln Asp Val Ser Leu Glu Ser Ser Gln Ala Val Gly Lys 405 410 415 Met Gln Ser <210> 9 <211> 320 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Tyr Ser Pro Gly Ile Gln Gly Leu His Glu Glu Ile Ile Asp Phe Tyr 1 5 10 15 Asn Phe Met Ser Pro Cys Pro Glu Glu Ala Ala Met Arg Arg Glu Val 20 25 30 Val Lys Arg Ile Glu Thr Val Val Lys Asp Leu Trp Pro Thr Ala Asp 35 40 45 Val Gln Ile Phe Gly Ser Phe Ser Thr Gly Leu Tyr Leu Pro Thr Ser 50 55 60 Asp Ile Asp Leu Val Val Phe Gly Lys Trp Glu Arg Pro Pro Leu Gln 65 70 75 80 Leu Leu Glu Gln Ala Leu Arg Lys His Asn Val Ala Glu Pro Cys Ser 85 90 95 Ile Lys Val Leu Asp Lys Ala Thr Val Pro Ile Ile Lys Leu Thr Asp 100 105 110 Gln Glu Thr Glu Val Lys Val Asp Ile Ser Phe Asn Met Glu Thr Gly 115 120 125 Val Arg Ala Ala Glu Phe Ile Lys Asn Tyr Met Lys Lys Tyr Ser Leu 130 135 140 Leu Pro Tyr Leu Ile Leu Val Leu Lys Gln Phe Leu Leu Gln Arg Asp 145 150 155 160 Leu Asn Glu Val Phe Thr Gly Gly Ile Ser Ser Tyr Ser Leu Ile Leu 165 170 175 Met Ala Ile Ser Phe Leu Gln Leu His Pro Arg Ile Asp Ala Arg Arg 180 185 190 Ala Asp Glu Asn Leu Gly Met Leu Leu Val Glu Phe Phe Glu Leu Tyr 195 200 205 Gly Arg Asn Phe Asn Tyr Leu Lys Thr Gly Ile Arg Ile Lys Glu Gly 210 215 220 Gly Ala Tyr Ile Ala Lys Glu Glu Ile Met Lys Ala Met Thr Ser Gly 225 230 235 240 Tyr Arg Pro Ser Met Leu Cys Ile Glu Asp Pro Leu Leu Pro Gly Asn 245 250 255 Asp Val Gly Arg Ser Ser Tyr Gly Ala Met Gln Val Lys Gln Val Phe 260 265 270 Asp Tyr Ala Tyr Ile Val Leu Ser His Ala Val Ser Pro Leu Ala Arg 275 280 285 Ser Tyr Pro Asn Arg Asp Ala Glu Ser Thr Leu Gly Arg Ile Ile Lys 290 295 300 Val Thr Gln Glu Val Ile Asp Tyr Arg Arg Trp Ile Lys Glu Lys Trp 305 310 315 320 <210> 10 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> Human PAPD5 target RNA <400> 10 caucaaugcu uuauaucga 19 <210> 11 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> Human PAPD5 target RNA <400> 11 ggacgacacu ucaauuauu 19 <210> 12 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> Human PAPD5 RNA target sequence <400> 12 gauaaaggau ggugguuca 19 <210> 13 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> human PAPD5 Target mRNA sequence <400> 13 gaauagaccu gagccuuca 19 <210> 14 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> human PAPD7 target mRNA sequence <400> 14 ggagugacgu ugauucaga 19 <210> 15 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> human PAPD7 target mRNA sequence <400> 15 cggaguucau caagaauua 19 <210> 16 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> human PAPD7 target RNA sequence <400> 16 cggaguucau caagaauua 19 <210> 17 <211> 19 <212> RNA <213> artificial <220> <223> human PAPD7 target mRNA sequence <400> 17 gcgaauagcc acaugcaau 19 <210> 18 <211> 19 <212> DNA <213> artificial <220> <223> Primer <400> 18 ctgtgccttg ggtggcttt 19 <210> 19 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer <400> 19 aaggaaagaa gtcagaaggc aaaa 24 <210> 20 <211> 25 <212> DNA <213> artificial <220> <223> probe <400> 20 ttctttataa gggtcgatgt ccatg 25

Claims (16)

  1. (a) 시험 화합물을 (i) PAP 연관된 도메인 함유 5(PAPD5) 폴리펩티드 및/또는 PAP 연관된 도메인 함유 7(PAPD7) 폴리펩티드; 또는 (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포와 접촉시키는 단계;
    (b) 상기 시험 화합물의 존재 및 부재 하에 PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 측정하는 단계; 및
    (c) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 감소시키는 화합물을, B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정하는 단계
    를 포함하는, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 동정하는 방법.
  2. (a) 시험 화합물을 (i) PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드; 또는 (ii) PAPD5 및/또는 PAPD7을 발현하는 세포와 접촉시키는 단계;
    (b) 상기 시험 화합물이 PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 결합하는지 여부를 측정하는 단계;
    (c) 상기 시험 화합물이 HBV의 번식을 억제하는지 여부를 측정하는 단계; 및
    (d) PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 결합하고 HBV의 번식을 억제하는 화합물을, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물로서 동정하는 단계
    를 포함하는, HBV 감염을 예방하고/거나 개선하고/거나 억제하는 화합물을 동정하는 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    PAPD5 폴리펩티드가
    (a) 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열;
    (b) 폴리펩티드가 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는, (a)의 아미노산 서열과 80% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열;
    (c) 서열번호 1 또는 2의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열; 또는
    (d) 폴리펩티드가 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는, (c)의 아미노산 서열과 80% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열
    을 포함하거나 이로 이루어진, 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    PAPD7 폴리펩티드가
    (a) 서열번호 3의 아미노산 서열;
    (b) 폴리펩티드가 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는, (a)의 아미노산 서열과 80% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열;
    (c) 서열번호 3의 효소적 활성 단편의 아미노산 서열; 또는
    (d) 폴리펩티드가 poly-A 폴리머라제 기능을 갖는, (c)의 아미노산 서열과 80% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열
    을 포함하거나 이로 이루어진, 방법.
  5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    HBV의 번식을 억제하는 화합물이 HBV 표면 항원(HBsAg)의 분비를 억제하고/거나 HBV 외피 항원(HBeAg)의 분비를 억제하고/거나 세포내 HBV mRNA 또는 HBV DNA의 생산을 억제하는, 방법.
  6. 제1항 및 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    PAPD5 및 PAPD7의 활성이 poly-A 폴리머라제 기능인, 방법.
  7. HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 PAPD5 및/또는 PAPD7의 억제제로서,
    (a) PAPD5 및/또는 PAPD7에 결합하는 소분자; 또는 (b) PAPD5 및/또는 PAPD7에 특이적으로 결합하는 항체인 억제제.
  8. 제7항에 있어서,
    (a) PAPD5 및/또는 PAPD7 폴리펩티드에 결합하고/거나; (b) PAPD5 및/또는 PAPD7의 발현 및/또는 활성을 억제하는 억제제.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    HBsAg 및 HBeAg의 분비를 감소시키는 억제제.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    만성 HBV 감염의 발생을 억제하고/거나 HBV 감염된 사람의 전염력을 감소시키는 억제제.
  11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 화학식 I의 화합물인 억제제:
    [화학식 I]
    Figure pct00026

    상기 식에서,
    R1은 수소, 할로겐, C1-6알킬, C1-6알킬아미노 또는 C1-6알콕시이고,
    R2는 수소; 할로겐; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알콕시; 시아노; C3-7사이클로알킬; 하이드록시; 또는 페닐-CxH2x-O-이고,
    R3은 수소; 할로겐; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; 시아노; 피롤리딘일; 아미노; 페닐-CxH2x-N(C1-6알킬)-; C1-6알콕시카보닐-피페라진일; 또는 R7-O-이고,
    R7은 수소; 플루오로, 하이드록시 및 C2-6알켄일로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알콕시C1-6알콕시C1-6알킬; 아미노C1-8알킬; C1-6알킬카보닐아미노C1-8알킬; C1-6알킬설폰일아미노C1-8알킬; C1-6알킬설판일C1-6알킬; C1-6알킬설폰일C1-6알킬; 시아노C1-6알킬; C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 시아노C3-7사이클로알킬C1-6알킬; 페닐C1-6알킬; 피롤리딘일-카보닐C1-6알킬; C2-6알킨일; 하이드록시C1-6알킬C2-6알킨일; 아미노C1-6알콕시C1-6알킬; C1-6알킬아미노C1-6알콕시C1-6알킬; 다이C1-6알킬아미노C1-6알콕시C1-6알킬; 카복시C1-6알킬; C1-6알콕시카보닐아미노C1-8알킬; 헤테로아릴이 N-함유 일환형 헤테로아릴인 헤테로아릴C1-6알킬; 또는 헤테로사이클로알킬이 일환형 헤테로사이클로알킬인 헤테로사이클로알킬C1-6알킬이고,
    R4는 수소, 할로겐, C1- 6알킬, 시아노 또는 C1- 6알콕시이되,
    R1, R2, R3 및 R4는 동시에 수소가 아니고;
    R5는 수소 또는 C1-6알킬이고;
    R6은 수소; 플루오로로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C1-6알킬; 플루오로 또는 C1-6알킬로 1, 2 또는 3회 치환되거나 비치환된 C3-7사이클로알킬; 또는 페닐-CxH2x-이고;
    x는 1 내지 6이다.
  12. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 화학식 II의 화합물인 억제제:
    [화학식 II]
    Figure pct00027

    상기 식에서,
    R1은 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로C1-6알킬, 하이드록시C1-6알킬, 니트로C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐C1-6알킬, 카복시C1-6알킬, 다이(C1-6알콕시카보닐)메틸렌일, 시아노C1-6알킬, C3-7사이클로알킬C1-6알킬, 페닐C1-6알킬, C1-6알킬설판일C1-6알킬, C1-6알킬설폰일C1-6알킬, 아미노C1-6알킬, C1-6알킬카보닐아미노C1-6알킬, C1-6알킬설폰일아미노C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐아미노C1-6알킬, 아미노카보닐C1-6알킬, 다이C1-6알킬아미노카보닐C1-6알킬, 일환형 헤테로사이클로알킬C1-6알킬 또는 이미다졸일C1-6알킬이고;
    R2는 C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로겐, 할로C1-6알킬, 시아노, 니트로, 하이드록시, 할로C1 - 6알콕시, -O-CxH2x-R3, -O-CyH2y-NHR6, -NR9R10, -SO2-R11, -SO2-NR12R13, 카복시, C1- 6알콕시카보닐, -C(=O)-NR12R13, 아릴, 헤테로아릴, 일환형 헤테로사이클로알킬 및 -O-일환형 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 치환기로 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고, 이때 상기 일환형 헤테로사이클로알킬은 C1- 6알킬, C3- 7사이클로알킬, C1- 6알킬카보닐, C1- 6알킬설폰일 또는 C1-6알콕시카보닐로 치환되거나 비치환되고;
    R3은 수소; C3-7사이클로알킬; 할로C3-7사이클로알킬; 하이드록시; 하이드록시C1-6알킬C3-7사이클로알킬; C1-6알콕시; 일환형 헤테로사이클로알킬; C1-6알킬, C1-6알킬카보닐, C1- 6알킬설폰일, C3- 7사이클로알킬 또는 C1- 6알콕시카보닐로 치환된 일환형 헤테로사이클로알킬; -C(=O)-R4; C1- 6알킬설핀일; -SO2-R5; -C(NHR7)-C(=O)-R8; 카복시C1-6알콕시; 또는 아미노카보닐C1-6알콕시이고;
    R4는 하이드록시, C1- 6알콕시, 아미노, C1- 6알킬아미노, 다이C1 - 6알킬아미노, 테트라하이드로퓨란일아미노, 피롤리딘일 또는 모폴린일이고;
    R5는 C1- 6알킬, C3- 7사이클로알킬, 하이드록시, 아미노, C1- 6알킬아미노 또는 다이C1 -6알킬아미노이고;
    R7은 수소 또는 C1-6알콕시카보닐이고;
    R8은 하이드록시 또는 C1-6알콕시이고;
    R6은 수소, C1-6알킬카보닐, 할로C1-6알킬카보닐, C1-6알콕시카보닐, C1-6알킬설폰일, C3-7사이클로알킬설폰일 또는 C1-6알콕시C1-6알킬설폰일이고;
    R9 및 R10은 수소, C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, C1-6알킬카보닐, C1-6알킬설폰일, C3-7사이클로알킬카보닐 및 C3-7사이클로알킬설폰일로부터 독립적으로 선택되거나,
    R9 및 R10은 이들이 부착된 질소와 함께 일환형 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
    R11은 C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C3-7사이클로알킬, 할로C3-7사이클로알킬, 하이드록시C1-6알킬, C1-6알콕시C1-6알킬, 할로C1-6알콕시C1-6알킬, C3-7사이클로알킬C1-6알킬, 아미노C1-6알킬, C1-6알킬아미노C1-6알킬, 다이C1-6알킬아미노C1-6알킬, C1-6알킬카보닐아미노C1-6알킬, C1-6알킬설폰일아미노C1-6알킬, C1-6알콕시카보닐아미노C1-6알킬, C1-6알킬설펜일C1-6알킬, C1-6알킬설판일C1-6알킬 또는 C1-6알킬설폰일C1-6알킬이고;
    R12 및 R13은 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시C1-6알킬, 할로C1-6알킬, C3-7사이클로알킬 및 할로C3-7사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되거나,
    R12 및 R13은 이들이 부착된 질소와 함께 일환형 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
    x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
    y는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
    U, W 및 Z는 CH 및 N으로부터 독립적으로 선택되고;
    X 및 Y 중 하나는 N이고, 다른 하나는 CH 또는 N이다.
  13. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    서열번호 7, 8 및 9 중 어느 하나의 아미노산 신장부에 특이적으로 결합하는 항체인 억제제.
  14. PAPD5의 억제제 및 PAPD7의 억제제를 포함하는, HBV 감염의 치료 및/또는 예방에서의 동시 또는 순차 사용을 위한 조합 제제.
  15. (a) 제7항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 억제제; 또는 제14항에 따른 조합 제제; 및
    (b) 약학적으로 허용되는 담체
    를 포함하는, HBV 감염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 약학 조성물.
  16. (a) 시험 대상으로부터 수득한 샘플에서 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성을 분석하는 단계;
    (b) 상기 양 및/또는 활성을 하나 이상의 기준 대상의 PAPD5 및/또는 PAPD7의 양 및/또는 활성에 상응하는 기준 데이터와 비교하는 단계; 및
    (c) 상기 비교 단계 (b)에 근거하여 치료 성공을 예측하는 단계
    를 포함하는, HBV 감염의 치료 중에 치료 성공을 모니터링하는 방법.
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