KR20170068598A - 입양 세포 치료에서 복용을 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

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마크 제이 길버트
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주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
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Abstract

세포 치료를 위해 대상체에게 T세포와 같은, 세포를 다중 복용량으로 투여하기 위한 방법을 제공하고 있다. 또한 상기 방법에 사용하기 위한 조성물 및 제조 물품을 제공하고 있다. 세포는 일반적으로 키메라 수용체 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR) 같은 재조합 수용체 또는 T 세포 수용체 (TCRs)와 같은 다른 형질 전환 수용체를 발현한다, 방법은 일반적으로 세포의 첫번째 복용량 및 적어도 하나의 연속 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 다른 대상에 대한 복용량의 시점 및/또는 복용량의 크기는, 일부 구체예에 있어서 예를 들어, 대상체의 투여된 세포에 대한 증가된 노출에 기인하는 낮은 독성 또는 독성의 감소 및 개선된 효능과 같은 다양한 이점을 제공한다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 종양 또는 질병의 부담을 줄여주는 것과 같은 상대적으로 낮은 복용량이고, 그에 따라, 연속 또는 후속 복용량의 효능이 증가하고, 연속 복용은 병합 투여이다.

Description

입양 세포 치료에서 복용을 위한 방법 및 조성물{METHODS AND COMPOSITIONS FOR DOSING IN ADOPTIVE CELL THERAPY}
[관련 출원의 교차-참조]
[0001] 본 출원은 발명의 명칭이 "입양 세포 치료에서 복용을 위한 방법 및 조성물"인 2014년 10월 20일 출원된 미국 가출원 제62/006,279호, 발명의 명칭이 "입양 세포 치료에서 복용을 위한 방법 및 조성물"인 2015년 5월 15일 출원된 미국 가출원 제62/162,647호, 발명의 명칭이 "입양 세포 치료에서 복용을 위한 방법 및 조성물"인 2015년 5월 29일 출원된 미국 가출원 제62/168,710호, 및 발명의 명칭이 "입양 세포 치료에서 복용을 위한 방법 및 조성물"인 2015년 9월 8일 출원된 미국 가출원 제62/215,732호에 기초한 우선권을 주장하고, 상기 출원은 그 내용 전체가 본 발명에 참조로서 통합된다.
[서열목록의 참조 통합]
[0002] 본 발명은 전자 형식으로 서열목록을 제출한다. 서열목록은 2015년 10월 20일, 16 킬로바이트의 크기로 생성되었으며, 파일명은 735042001040seqlist.txt이다. 서열목록의 전자 형식 정보는 본 발명에 그 내용 전체가 참조로서 통합된다.
[분야]
[0003] 본 발명은 세포의 다중 복용량 투여를 포함하는 입양 세포 치료 및 방법, 조성물 및 이를 사용하기 위한 제조 물품에 관한 것이다. 세포는 일반적으로 키메라 수용체 즉, 키메라 항원 수용제 (CARs) 또는 T 세포 수용체 (TCRs)와 같은 다른 형질전환 수용체와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 복용량 시점 및 투여된 세포의 수를 포함하는 방법의 특징은 예를 들면, 투여된 세포에 대상체의 증가된 노출에 기인하여 낮은 독성 및/또는 개선된 효능과 같은 다양한 이점을 제공한다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 다른 방법으로 투여된 복용량과 비교하여 상대적으로 적은 수의 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 암 또는 질병 부담을 감소시킴으로써, 연속적 또는 후속 복용량의 효능을 개선시킨다. 일부 구체예에 있어서 연속적 복용량의 시점은 대상체에 의한 세포에 대한 독성의 위험 및/또는 숙주 면역 반응을 최소화하도록 설계됨으로써, 지속성 및 효능을 향상시킨다.
[0004] 키메라 항원 수용체 (CARs)와 같은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 사용하는 입양 세포치료를 위한 다양한 방법이 이용 가능하다. 예를 들어, 투여된 세포에 대한 대상체의 노출을 증가시킴으로써, 예를 들어, 투여된 세포의 팽창 및/또는 지속성을 개선시킴으써, 예를 들어, 독성 위험을 감소시키고 및/또는 효능을 증가시키기 위한 개선된 방법이 필요하다. 그러한 필요를 충족하는 방법, 조성물 및 제조 물품이 제공된다.
[요약]
[0005] 예를 들어, 대상체의 질병 및/또는 증상을 치료하기 위해, 입양 세포 치료에서 유전학적으로 조작된 (재조합) 세포 표면 수용체를 발현하는 세포를 대상체에게 투여하기 위한 방법이 제공된다. 방법은 일반적으로 그러한 세포에 다중 복용량을 투여하는 단계 및/또는 그러한 세포의 선행 (예를 들어, 첫번째) 복용량으로 이전에 치료된 대상체에 연속적인 복용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 복용량은 첫번째 복용량 또는 1 이상의 연속 복용량이다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 상대적으로 낮은 복용량 및/또는 복용량 조절 또는 복용량 감소이고, 이에 및/또는 연속적인 복용량은 통합 복용량이다. 또한, 이러한 방법에 사용하기 위한 세포, 조성물 및 제조 상품이 제공된다. 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체는 기능적 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CARs) 및 형질 전환 T 세포 수용체 (TCRs)와 같은 다른 재조합 항원 수용체와 같은 유전학적으로 가공된 항원 수용체이다. 또한, 수용체 중에는 리간드 또는 수용체 또는 다른 결합 파트너 및 CAR의 세포 내 신호전달 부분과 같은 세포 내 신호전달 부분에 특이적으로 결합하는 세포 외 부분을 함유하는 것과 같은 다른 재조합 키메라 수용체가 있다. 일부 구체예에 있어서 복용량은 상대적으로 낮은 첫번째 복용량을 포함한다.
[0006] 일부 구체예에 있어서, 방법들은 (a) 질병 또는 병태의 대상체에 재조합 수용체 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR))을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 세포를 함유함; 및 (b) 대상체에게 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 연속적 복용량을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 구체예에 있어서, 예를 들어, 통합 치료를 제공하기 위해, 방법은 단계 (a)에서와 같이 첫번째 복용량으로 이전에 투여된 대상체에게, 단계 (b)에서와 같은 연속적 복용량 또는 복용량들을 대상체에게 투여함으로써 수행된다.
[0007] 일부 구체예에 있어서, 방법은 (a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게 재조합 수용체 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR))를 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 체중 kg 당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 대상체의 m2 당 약 1 x 108 이하의 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 방법은 (b) 단계 (a)의 투여 개시 후 약 14일 이상 및 28일 미만인 시점에서 대상체에 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)를 발현하는 세포의 연속적인 복용량을 투여하는 단계를 더 포함한다.
[0008] 일부 구체예에 있어서, 단계 (b)의 투여의 시점에서 대상체에서 사이토킨 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치는 단계 (a)의 상기 투여 직전의 대상체에서의 약 10 배 미만, 약 25 배 미만 및/또는 약 50배 미만이다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 등급 3 또는 그 이상의 신경독성을 나타내지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여에 따른 대상체에서 신경독성의 CRS-관련 결과 또는 증상은 피크 수치에 도달 하고 단계 (a)의 투여에 따라 감소하기 시작하였다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포-매개 면역 반응을 나타내지 않는다.
[0009] 일부 구체예에 있어서, 방법은 추가의 연속 또는 후속 복용량의 투여를 더 포함하여, 예를 들어, 첫번째 및 순차적인 복용량에 대해 특정된 바와 같은 복용량량 및 투여 계획에 따라 첫번째 및 다중 연속 복용량이 투여되도록 한다. 일부 구체예에 있어서, 1 이상의 후속 복용량의 첫번째 복용량은 연속적 복용량의 투여 개시 이후 14일 이상의 시점에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째, 연속, 후속 복용량의 투여는 약 28일 또는 이내에 최소 3회 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 연속적 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 약 14일째에 투여되고, 추가의 연속 복용량 또는 후속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 28일째에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 추가적인 후속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 42일 및/또는 56일째에 투여된다.
[0010] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체에서 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양으로 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 질병 또는 병태를 근절하는데 필요한 양보다 적지만 그러한 질병 또는 병태의 부담 또는 부피의 감소를 초래할 수 있는 복용량과 같은 복용량 감소와 같은 저 복용량량이다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여는 대상체에 심각한 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 유발하지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여는 대상체에서 CRS를 유발하지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 치료적 데이터에 기초하여, 첫번째 복용량의 투여는 대다수의 대상체에게 심각한 CRS를 유발하지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여는 (1) 지속적인 발열 (적어도 3일 동안 적어로 38℃의 발열) 및 (2) C 반응성 단백질 (CRP)의 혈청 수준이 적어도 또는 약 20mg/dL의 조합을 포함하는 CRS를 유발하지 않고, 및/또는 2 이상의 승압기 사용을 필요로 하는 저혈압 또는 기계적 호흡을 필요로하는 호흡부전을 포함하는 CRS를 유발하지 않는다.
[0011] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여는 대상체에게 신경독성 등급 3 또는 그이상을 유발하지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 치료적 데이터에 기초하여, 첫번째 복용량의 투여는 대다수의 대상체에서 신경독성 등급 3 또는 그이상을 유발하지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 신경독성 및/또는 등급 3 또는 그이상의 신경독성의 치료적 위험과 관련된 증상으로는 혼동, 섬망, 표현 실어증, 둔감, 근경련, 기면, 정신증상 변화, 경련, 발작 유사 활성, 발작 (입양으로 뇌파검사[EEG]로 확인됨), 베타 아밀로이드 (Aβ) 수치의 상승, 글루타메이트 수치의 상승 및 산소 라디칼 수치의 상승을 포함한다.
[0012] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체에게 CRS 또는 심각한 CRS를 유발하는 복용량보다 낮다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 체중 kg 당 약 1 x 106 이하의 세포, 대상체의 체중 kg 당 약 1 x 105 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 또는 대상체의 m2 당 약 1 x 108 이하의 세포를 포함한다.
[0013] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 신경독성, 사이토카인-방출 증후군 (CRS), 대식세포 활성화 증후군 또는 종양 용해 증후군에 대한 치료적 위험이 첫번째 (또는 이전의) 복용량의 투여 후에 존재하지 않거나 경과하였거나 가라앉았을 때 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 CRS, 신경독성, 대식세포 활성화 증후군 또는 종양 용해 증후군을 입증하는 생화학적 판독이 첫번째 (또는 이전의) 복용량의 투여 후에 존재하지 않거나 경과하였거나 가라앉았을 때 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속적인 복용량은 대상체에서 사이토카인-방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성을 나타내는 혈장 수치가 첫번째 복용량의 상기 투여 직전의 대상체의 지표의 혈정 수치의 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만인때 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 대상체의 세포독성 및/또는 CRS-관련 결과 또는 CRS를 나타내는 혈장 요인이 피크 수치에 도달하고 상기 투여에 따라 감소하기 시작한 시점, 예를 들어, 연속 복용량의 투여 시간, CRS-관련 결과의 수치 또는 CRS를 나타내는 혈장 요인이 피크 수치의 50% 이하, 피크 수치의 20% 이하 또는 피크 수치의 5% 이하, 또는 첫번째 복용량의 투여 직전의 수치 또는 그 부근일때 투여된다.
[0014] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내지 않거나, 심각한 CRS를 나타내지 않거나, 신경독성을 나타내지 않거나, 심각한 신경독성을 나타내지 않거나, 또는 첫번째 복용량 투여 및/또는 연속 복용량의 투여에 따른 등급 3 보다 높은 신경독성을 나타내지 않는다.
[0015] CRS-관련 결과들 중에서는 발열, 저혈압, 저산소증, 신경장애 또는 인터페론 감마 (IFNγ), 과립구-대식세포 콜로니-자극요인 (GM-CSF), 종양 괴사 요인 알파 (TNFα), IL-6, IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프랙트알카인 (fracktalkine) 및 IL-5 및 C 반응성 단백질 (CRP) 가 있다. 예를 들어, 혈정 요인과 같은 CRS를 나타내는 요인 중에는 IFNγ, GM-CSF, TNFα, IL-6, IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프랙트알카인(fracktalkine) 및 IL-5과 같은 염증성 사이토카인 및 CRP가 있다.
[0016] 일부 관점에 있어서, 연속 복용량을 투여하는 시점은 추가로 대상체가 면역 반응을 나타내지 않는 것, 예를 들어 대상체가 상기 첫번째 (또는 이전의) 복용량의 세포에 의해 발현되는 수용체 (예를 들어, CAR)에 특이적인 검출 가능한 선택성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 것이다.
[0017] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량 투여, 예를 들어 첫번째 또는 이전의 복용량의 투여 개시와 연속 복용량의 투여 개시 (예를 들어, 연속 복용량의 투여 개시) 사이 시간은 약 4일보다 크고, 예를 들어 약 5, 6, 7, 8 또는 9일보다 크고, 예를 들어 약 20일 보다 크고, 예를 들어 약 9일 내지 약 35일 사이, 약 14일 내지 약 28일 사이, 15일 내지 27일 사이 또는 17일 내지 약 21일 사이; 및/또는 해당 날짜수 또는 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 또는 27일이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여 (예를 들어, 그것의 개시)는 첫번째 또는 이전의 복용량 (예를 들어, 그들의 개시)의 투여의 약 14일 초과 후 및 약 28일 미만 후이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여는 첫번째 복용량의 개시로부터 21일 후에 개시된다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및 연속 복용량 (예를 들어, 그들의 개시)의 투여 사이의 시간은 예를 들어, 15일 내지 27일, 예를 들어 약 21일과 같이, 약 14일 보다 크고 약 28일보다 작다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및 연속 복용량 (예를 들어, 그들의 개시) 투여 사이의 시간은 약 17일 이다.
[0018] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여 시점에, 대상체의 CRS를 나타내는 요소의 혈청 수치는 대상체에 상기 첫번째 복용량의 투여 바로 전보다 약 10배 작고, 약 25배 작고 및/또는 약 50배 작다; 및/또는 상기 첫번째 복용량의 투여에 따른 대상체의 CRS-관련 결과는 피크 수치에 도달하였고, (a) 단계의 투여에 따라 감소하기 시작한다; 및/또는 대상체는 상기 첫번째 복용량에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)에 대해 검출 가능한 체액성 또는 세포-매개 면역 반응을 나타내지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 단계 (b) 또는 연속 복용량의 투여 시점에서, CRS를 나타내는 상기 요소의 혈청 수치는 단계 (a) 또는 첫번째 복용량의 투여 직전의 수치의 10배 이하이다.
[0019] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 단계 (a)의 투여 전에 첫번째 복용량으로 세포에 의해 발현되는 수용체 (예를 들어, CAR)를 발현하는 세포의 복용량을 받지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)는 첫번째 복용량으로 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)에 존재하는 적어도 하나의 면역반응활성 항원결정부를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 세포에서 수용체는 첫번째 투여량으로 세포에 의해 발현되는 수용체 (예를 들어, CAR)에 동일하거나 실질적으로 동일하다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 수용체는 질병 또는 병태의 세포 또는 조직에 의해 발현되거나, 질병 또는 병태에 관련되는 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 세포에 의해 발현되는 수용체는 예를 들어, 동일 항원 결정부와 같은 동일 항원 및/또는 첫번째 복용량에서와 동일한 항원-결합 부위에 결합한다.
[0020] 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 종양이다. 일부 구체예에 있어서, 이것은 백혈병, 림프종과 같은, 암, 악성종양, 종양 또는 다른 증식하는 질병 또는 장애이고, 예를 들어, 만성 림프성 백혈병 (CLL), ALL, 비-호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 난치성 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 지연성 B 세포 림프종, B 세포 악성종양, 대장, 폐, 간, 유방, 전립선, 난소, 피부의 암세포, 흑색종, 뼈 및 뇌암, 난소암, 상피암, 신장세포암종, 췌장선암, 호지킨 림프종, 자궁경부 암종, 대장암, 교모세포종, 신경모세포종, 유잉 (Ewing) 육종, 수모세포종, 골육종, 활막 육종 및/또는 중피종이 있다. 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 백혈병 또는 림프종이다. 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 급성 림프성 백혈병이다. 일부 구체예에 있어서, 비-호지킨 림프종 (NHL)이다.
[0021] 일부 구체예에 있어서, 질병은 암이고 연속 복용량의 투여 개시 시점에서 대상체는 형태학적 질병을 나타내지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 질병은 백혈병 또는 림프종이고, 연속 복용량의 투여시점에서 대상체는 골수에서 5% 이상의 아세포를 나타내지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여시 대상체는 검출가능한 분자 질병 및/또는 최소 잔류 질병을 나타낸다.
[0022] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여는 예를 들어 단계 (a)의 투여에 따른, 상기 첫번째 복용량의 투여에 따른 질병의 부담을 나타내는 1 이상의 요인의 감소에 의해 지시되는 것과 같은 대상체의 질병 또는 병태 부담을 감소시킨다. 일부 구체예에 있어서, 단계 (b) 또는 연속 복용량의 투여시, 대상체는 재발 하지 않았으며 및/또는 질병의 부담을 나타내는 1 이상의 요인이 첫번째 투여후에 경험되는 초기 감소에 따라 증가하지 않았다. 일부 구체예에 있어서, 세포의 연속 복용량은 대상체의 질병 또는 병태의 부담이 줄어들기에 충분한 양으로 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여는 대상체의 질병 또는 병태 부담을 더욱 감소시킨다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여는 연속 복용량의 투여 개시 직전과 비교하여 대상체의 질병 또는 병태 부담을 감소시킨다. 일부 구체예에 있어서, 방법은 대안적인 복용 요법의 방법과 비교하여 질병 또는 병태 부담을 더 큰 정도로 및/또는 더 긴 기간동안 감소시키고, 여기서 대상체는 첫번째 복용량의 세포 및 연속 복용량의 단일 복용량으로 투여받는다. 부담의 감소 및/또는 추가적인 부담의 감소는 대상체내, 대상체의 장기, 대상체의 조직 또는 대상체 체액내의 질병의 예를 들어, 암세포와 같은 총 세포수의 감소를 포함한다. 감소는 유동세포계수법 또는 정량적 PCR에 의해 분자 검출의 감소, 종양의 질량 또는 부피 감소 및/또는 전이의 수 및/또는 정도의 감소를 포함할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 감소는 대상체의 생존에서의 개선을 포함하는데, 예를 들어, 생존기산 증가 또는 무사고, 무진행 또는 무재발 생존을 포함한다.
[0023] 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 첫번째 복용량의 투여 후에도 지속되고 및/또는 첫번째 복용량의 투여가 대상체의 질병 또는 병태를 퇴치하는데 충분하지 않다. 일부 구체예에 있어서, 상기 연속 복용량의 투여는 연속 복용량의 투여 개시 직전과 비교하여 대상체의 질병 또는 병태 부담의 감소를 초래한다.
[0024] 일부 구체예에 있어서, 방법은 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법과 비교하여 더 큰 정도로 및/또는 더 긴 기간동안 질병 또는 병태의 부담을 감소시키고, 여기서 대상체는 단계 (a) (또는 첫번째 복용량)의 세포 및 단계 (b) (또는 연속적 복용량)의 세포를 단일 용량으로 투여받는다. 일부 구체예에 있어서, 시간 경과에 따른 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR- 발현) 세포의 그래프 면적 (AUC) 및/또는 연속 복용량 (또는 단계 (b)의 개시)의 투여에 따른 대상체의 검출가능한 수용체 발현 세포의 지속시간은 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법을 통해 얻어지는 것 보다 더 크고, 여기서 대상체는 단계 (a) (또는 첫번째 복용량)의 세포 및 단계 (b) (또는 연속적 복용량)의 세포를 단일 용량으로 투여받는다. 일부 구체예에 있어서, 방법은 대상체의 혈액내의 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 최대 농도 또는 개수의 결과를 보이고, 이는 마이크로리터당 적어도 또는 약 10 수용체 발현 세포, 마이크로리터당 적어도 또는 약 100 수용체 발현 세포, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs) 총 개수의 적어도 50%, 적어도 약 1 x 10ㅋ 수용체 발현 세포 또는 DNA 마이크로그램당 재조합 수용체-인코딩 (예를 들어, CAR-인코딩) DNA의 적어도 5,000 카피 또는 DNA 마이크로그램당 재조합 수용체-인코딩 (예를 들어, CAR-인코딩) DNA의 적어도 10,000 카피이다. 일부 구체예에 있어서, 단계 (a) 또는 첫번째 복용량의 투여의 개시 후 90일째에, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포는 대상체의 혈액 또는 혈청에서 검출할수 있고, 예를 들어, 대상체의 혈액은 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 40%, 적어도 50%를 포함하거나, 적어도 마이크로리터당 적어도 10 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포 또는 적어도 1 x 104 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포를 포함한다.
[0025] 일부 구체예에 있어서, 단계 (a) 또는 첫번째 복용량의 투여 후 시간에 따른 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 혈액 농도 AUC는 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법을 통해 얻어지는 것보다 더 크고, 여기서 대상체는 단계 (a) 또는 첫번째 복용량의 세포 및 단계 (b) 또는 두번째 복용량의 세포를 단일 복용량으로 투여받는다.
[0026] 일부 구체예에 있어서, 단계 (b) 또는 연속 복용량의 투여후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일째에 대상체의 CRS-관련 결과는 검출 불가하거나 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법과 비교하여 감소되고, 여기서 대상체는 첫번째 복용량의 투여없이 단계 (b) 또는 연속 복용량의 세포를 투여받는다.
[0027] 일부 구체예에 있어서, 단계 (b) 또는 연속 복용량의 투여 후 대상페의 시간에 따른 CRS를 나타내는 요인의 혈청 수치에 대한 AUC는 대안적 복용 요법을 포함하는 방법에 따른 것 보다 더 낮고, 여기서 대상체는 첫번째 복용량의 투여 없이 단계 (b) 또는 연속 복용량의 세포가 투여된다.
[0028] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량의 투여 전에 종양을 표적으로 하는 치료제로 처리되었다. 일부 관점에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량 및/또는 연속적 복용량의 투여시에 상기 치료제에 난치성이거나 반응이 없다. 일부 구체예에 있어서, 단계 (a) 또는 첫번째 복용량의 투여 이후 및 단계 (b) 또는 연속 복용량의 상기 투여 이전, 또는 단계 (a) 또는 첫번째 복용량의 투여 이전에, 방법은 CRS를 나타내는 요인, 질병 부담을 나타내는 요인의 혈청 수치 및/또는 체액성 또는 세포 매개 면역 반응과 같은 대상체의 숙주 항-재조합 수용체 (예를 들어, 항-CAR) 면역 반응의 지표를 평가하는 단계를 더 포함한다. 그러한 일부 구체예에 있어서, 검출된 질병 부담을 나타내는 요인은 대상, 대상의 기관, 대상의 조직 또는 대상의 체액에서의 질병의 세포의 총 개수이거나, 유동세포계수법 또는 정량적 PCR에 의한 분자 검출, 고형 종양의 질량 또는 부피 또는 전이의 개수 또는 정도를 포함한다.
[0029] 일부 구체예에 있어서, 방법은 연속 복용량의 투여 전에 질병의 부담을 나타내는 요인을 평가하는 단계를 포함하고, 평가의 결과에 기초하여, 대상체에게 투여될 세포의 연속 복용량을 결정하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 만약 평가가 대상체가 형태학적 질병을 갖는다고 결정하면, 대상체는 첫번째 복용량의 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 수에 비하여 더 적거나 거의 비슷한 수의 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포를 포함하는 연속적 복용량을 투여받을 것이다. 일부 구체예에 있어서, 평가가 대상체가 최소한의 잔여 질병을 갖는다고 판단하면, 대상체는 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 수의 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포를 포함하는 연속 복용량을 투여받을 것이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 수와 거의 동일한 수의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포보다 더 적거나 약간 더 적거나 같거나 거의 같다. 다른 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 수보다 더 크다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 그러한 세포가 첫번째 복용량에 비해 증가된 수를 포함하고, 첫번째 복용량의 수와 비교하여 적어도 2배, 5배 또는 10배더 많은 수이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 수보다 적어도 또는 약 2배 또는 적어도 또는 약 10배 더 많다.
[0030] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량에서 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포는 첫번째 복용량 투여 후 및/또는 연속 복용량 투여후 대상체에서 증가한다. 일부 구체예에 있어서, 증가는 투여 직전과 비교하여 첫번째 복용량 및/또는 연속 복용량의 투여후 혈청 CRP 수치의 증가에 의해 입증된다. 일부 구체예에 있어서, 증가는 투여 직전과 비교하여 첫번째 복용량 및/또는 연속적 복용량 투여 후에 qPCR에 의해 측정된 혈청의 수용체 (예를 들어, CAR) 코딩 핵산의 수치 증가에 의해 입증된다. 일부 구체예에 있어서, 증가는 적어도 1, 2 또는 3배이다.
[0031] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및/또는 연속 복용량은 분할 복용량이 아니다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서는, 첫번째 복용량의 세포는 첫번째 복용량의 세포를 포함하는 단일 의약 조성물로 투여되고, 연속 복용량의 세포는 연속 복용량의 세포를 포함하는 단일 의약 조성물로 투여된다. 다른 구체예에 있어서, 예를 들어, 3일을 넘지 않는 기간에 걸쳐, 첫번째 복용량의 세포가 복수의 조성물로 투여되는 경우, 첫번째 및/또는 연속 복용량은 첫번째 복용량의 세포를 총괄하여 포함하는 분할 복용량이다; 및/또는 3일을 넘지 않는 기간에 걸쳐, 연속 복용량의 세포가 복수의 조성물로 투여되는 경우, 연속 복용량은 연속 복용량의 세포를 총괄하여 포함하는 분할 복용량이다.
[0032] 일부 구체예에 있어서, 방법은 재조합 수용체 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR))를 발현하는 세포의 연속 복용량을 CAR을 발현하는 세포의 첫번째 복용량으로 이미 투여된 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 세포의 연속 복용량은 첫번째 복용량의 개시후 적어도 또는 약 14일 이상 이후 및 약 28일 미만인 시점에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 수용체- (예를 들어, CAR-) 발현 세포의 수는 첫번째 복용량과 비교하여 증가된다.
[0033] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 0.5 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 3 x 106 세포/kg, 약 0.75 x 106 세포/kg 내지 2.5 x 106 세포/kg 또는 약 1 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg에 각각 포함된다.
[0034] 일부 구체예에 있어서, 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 2 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 6 x 106 세포/kg, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 5.0 x 106 세포/kg 또는 약 3.0 x 106 세포/kg 내지 약 4.0 x 106 세포/kg에 각각 포함된다.
[0035] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량으로 투여된 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 수는 대상체의 킬로그램당 1 x 106 또는 약 1 x 106 또는 1 x 106 이하이고, 및/또는 연속 복용량으로 투여된 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 수는 대상체의 킬로그램당 3 x 106 또는 약 3 x 106이다.
[0036] 일부 구체예에 있어서, 방법은 단계 (a) 투여 전 또는 첫번째 복용량의 전에 및/또는 단계 (b)의 투여 전 또는 연속 복용량 전에 화학요법 제제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 단계 (a)의 투여 이전에 이미 화학요법 제제로 치료되었다. 일부 구체예에 있어서, 화학요법 제제는 전치료 화학요법이거나 그를 포함하는데, 이는 첫번째 복용량 및/또는 연속 복용량 전에 대상체의 질병 또는 병태 부담을 줄여준다. 일부 구체예에 있어서, 화학요법 제제는 사이클로포스파미드, 플루다라빈 및/또는 그들의 조합이다. 일부 구체예에 있어서, 화학요법 제제의 투여는 첫번째 복용량 투여전에 화학요법 제제의 투여를 포함하고, 임의로 연속 복용량 투여전에는 포함하지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 화학요법 제제는 첫번째 복용량의 투여에 앞서 2 내지 5일간 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 화학요법 제제는 두번째 복용량의 투여에 앞서 2 내지 5일간 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 화학요법 제제는 첫번째 복용량의 투여에 앞서 2 내지 5일간 및 두번째 복용량의 투여에 앞서 2 내지 5일간 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 화학요법 제제는 대상체의 약 1g/m2 내지 대상체의 약 3g/m2의 복용량으로 투여된다.
[0037] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량의 투여전에 저온환원적 화학요법을 받았다. 일부 구체예에 있어서, 방법은 첫번째 복용량의 투여에 앞서 저온환원적 화학요법의 투여를 더 포함한다.
[0038] 또한 종양 또는 암과 같은, 개체의 질병 또는 병태를 치료하기 위한 세포 및 조성물의 용도 및 용도들을 위한 세포 및 조성물이 제공되고, 상기 세포는 대상체의 질병 또는 병태를 치료하기 위해 또는 이미 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포로 치료된 대상체의 질병 또는 병태 치료 의약을 생산하기 위해 재조합 수용체 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR)) 발현 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 사용 또는 의학적 사용을 위한 조성물 또는 세포는 이전 치료 후 14일 내지 28일동안 사용하기 위함이다. 일부 구체예에 있어서, 사용을 위한 조성물 또는 세포는 연속 복용량으로 투여하기 위해 이미 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포로 치료된 대상체의 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양으로 제제화 된다.
[0039] 그러한 의학 용도의 일부 구체예에 있어서, 조성물 또는 세포는 질병 또는 병태를 가지는 대상체에 수용체 (예를 들어, CAR)을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 것을 포함하는 사용이다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/ 대상체 m2을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 조성물 또는 세포는 첫번째 복용량의 투여 개시 후 적어도 약 14일 후 또는 그 이상 및 약 28일 이하의 시점에서 수용체 (예를 들어, CAR)을 발현하는 세포의 연속 복용량을 대상체에 투여하는 것을 포함하는 사용을 위한 것이다.
[0040] 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포는 이미 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포로 치료된 대상체의 질병을 치료하는 방법에서 사용되는 재조합 수용체 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR))을 발현하는 세포이다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 이전 치료후의 약 14일 내지 약 28일간 사용된다. 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포는 이미 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포로 치료된 대상체의 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양으로 연속적 복용량의 투여를 위해 제제화 된다.
[0041] 사용 또는 의학적 사용을 위한 그러한 조성물 또는 세포의 일부 구체예에 있어서, 대상체는 형태학적 질병을 나타내지 않고, 및/또는 대상체는 골수의 아세포의 5% 이상의 세포를 나타내지 않는다.
[0042] 일부 구체예에 있어서, 조성물 또는 세포는 질병 또는 병태를 갖는 대상체에 수용체 (예를 들어, CAR)를 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 방법에 사용된다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체 체중 킬로그램당 약 1 x 106을 넘지 않는 세포, 1 x 108 세포를 넘지 않는 및/또는 약 1 x 108 세포/대상체의 m2 를 넘지 않는 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 상기 투여 개시 후의 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 이하의 시점에 세포는 대상체에 수용체 (예를 들어, CAR)을 발현하는 세포의 연속 복용량으로 투여하는 것을 포함하는 방법에 사용된다.
[0043] 일부 구체예에 있어서, 사용되는 조성물 또는 세포는 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않거나 대상체에 CRS를 유발하지 않는 양으로 투여되도록 제제화 된다. 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포는 대상체에서 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유발하지 않는 양으로 투여되도록 제제화된다. 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포는 치료적 데이터에 기초하여, 그렇게 치료된 대부분의 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않는 양으로 투여되도록 제제화된다. 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포는 치료적 데이터에 기초하여, 그렇게 처지된 대부분의 대상체에서 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유발하지 않는 양으로 투여되도록 제제화된다.
[0044] 일부 구체예에 있어서, 대상체의 질병 또는 병태의 치료 의약의 제조를 위한 수용체 (예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR))를 발현하는 세포의 사용은 첫번째 및 연속적 복용량으로 대상체에 투여하기 위해 제제화 및/또는 포장된 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 치료는 첫번째 및 연속적 복용량으로 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함하고, 여기서 첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/ 대상체 m2 이하를 포함한다.
[0045] 사용 또는 의학적 사용을 위한 그러한 조성물 또는 세포의 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 투여의 개시 후의 적어도 또는 약 14일 이상 및 28일 이하의 시점에서 투여를 하기 위함이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 대상체에서 사이토카인 방출 증후군(CRS)을 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 첫번째 투여 직전의 대상체의 혈청 수치의 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 50배 미만인 시점에서 투여하기 위함이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 대상체가 등급 3 또는 이상의 신경독성을 나타내지 않는 시점에서 투여를 하기 위함이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 상기 첫번째 복용량의 상기 투여에 따라 대상체에서 CRS 관련 결과 또는 신경독성 증상이 피크 수치에 도달하고 첫번째 투여에 따라 감소하기 시작하는 시점에 투여하기 위함이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포 매개 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 투여를 하기 위함이다.
[0046] 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포는 첫번째 및 연속 복용량으로 대상체에 투여를 위해 제제화 및/또는 포장되고 및/또는 치료는 첫번째 및 연속 복용량으로 대상체에 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/대상체 m2 이하를 포함한다.
[0047] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및 연속 투여가 1 이상의 단위 복용량으로 투여되는 것을 포함하는 경우, 사용은 약 5 x 107 세포 내지 약 5 x 108 세포, 약 5 x 107 세포 내지 2.5 x 108 세포 또는 약 2.5 x 108 내지 4 x 108세포를 포함하는 단위투여량을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 약 5 x 107 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포, 약 2 x 108 이하의 세포, 약 2.5 x 108 이하의 세포, 약 3 x 108 이하의 세포 또는 약 4 x 108 이하의 세포를 포함하는 단위 복용량으로 제제화 된다.
[0048] 일부 구체예에 있어서, 세포 또는 용도는 첫번째 투여가 단일 단위 복용량으로 투여하는 것을 포함하는 경우를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 세포 또는 용도는 연속 투여가 2 이상 단위 복용량으로 투여하는 것을 포함하는 경우를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 세포 또는 용도는 연속 투여가 단일 단위 복용량으로 투여하는 것을 포함하는 경우를 포함한다.
[0049] 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포 조성물 또는 용도는 질병 또는 병태가 종양 또는 암인 경우를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 사용되는 세포 또는 조성물 또는 용도는 종양 또는 암이 백혈병 또는 림프종인 경우를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 조성물 또는 세포는 급성 림프구성 백혈병의 치료에 사용되기 위한것이다. 일부 구체예에 있어서, 조성물 또는 세포는 비-호지킨 림프종 (NHL)의 치료에 사용되기 위한 것이다.
[0050] 일부 구체예에 있어서, 세포, 조성물 또는 용도는 연속 복용량이 이전 복용량의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 수보다 적거나 비슷한 수의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 투여를 위해 제제화되는 경우를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 세포를 포함하는 조성물은 첫번째 복용량 또는 이전 복용량과 비교하여 증가된 수의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 투여를 위해 재재화 된다.
[0051] 또한 방법을 수행하기 위한 제조 물품이 제공된다. 일부 구체예에 있어서, 제조 물품은 대상체에 투여하기 위한 재조합 수용체 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 단위 복용량을 각각 포함하는 예를 들어, 밀봉가능한 용기와 같은 다수의 용기, 포장 물질 및/또는 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다.
[0052] 일부 구체예에 있어서, 단위 복용량은 첫번째 복용량의 크기와 같은, 방법에서 가장 낮은 복용량으로 주어진 세포의 양을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 단위 복용량은 약 1 x 108 이하의 세포, 약 5 x 107 이하의 세포, 대상체의 kg 당 약 1 x 106 이하의 세포 또는 대상체의 kg 당 약 5 x 105 이하의 세포를 포함한다.
[0053] 일부 구체예에 있어서, 라벨 또는 패키지 삽입물은 복수의 단위 복용량, 예를 들어 단위 복용량의 특정 개수 예를 들어, 첫번째 복용량의 투여에서 일 단위 복용량 및 일 또는 다수의 단위 복용량을 포함하는 연속 복용량을 대상체에게 투여하기 위한 지침을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 지침은 첫번째 투여를 수행하는 것을 명시하고, 상기 첫번째 투여는 대상체에 상기 단위 복용량의 하나를 전달하는 것을 포함하고, 연속 투여를 수행하는 것을 명시하고, 상기 연속 투여는 하나 또는 다수의 상기 단위 복용량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 이들은 연속 투여가 상기 첫번째 투여에 따라 약 15일 내지 약 27일 사이의 시간에 수행되어야 한다고 명시한다. 일부 구체예에 있어서, 지시는 대상체의 사이토카인-방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 이전의 복용량의 직전에 대상체의 상기 지표의 혈청 수치보다 약 10배 미만, 25배 미만 및/또는 50 배 미만으로 결정되는 시점 또는 피크 수치의 약 40%, 30%, 20% 또는 10% 미만과 같이 CRS 지표가 최고점에 도달하고 감소하고 있는 것 및/또는 대상체가 이전의 복용량의 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)에 특이적인 검출가능한 선택성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 것으로 결정된 이후의 시점에 연속 투여가 수행되어야 함을 명시한다. 일부 구체예에 있어서, 용기는 유연성 있는 세포 주입 백(bag)이거나 이를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 투여된 및/또는 용기에 있거나 단위 복용량의 세포는 자가 수송을 위한것이다. 따라서, 일부 구체예에 있어서, 세포는 투여될 대상으로부터 유래되었다. 일부 구체예에 있어서, 방법은 동종성 투여를 위한 것이다. 일부 구체예에 있어서, 라벨 및/또는 포장 재료는 대상체로부터 유래된 및/또는 대상체에 특이적으로 투여된 세포임을 나타내는 대상체에 특이적인 식별자를 더 포함한다.
[0054] 일부 구체예에 있어서, 세포는 일차 인간 면역 세포 (예를 들어 PBMCs)와 같은 일차 세포, T 세포 및/또는 NK세포이다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, T 세포는 대상체에게 자가 유래된 것이다.
발명의 상세한 설명
Ⅰ. 재조합 수용체를 발현하는 세포로 처리하는 방법
[0070] 다양한 종양을 포함하는 질병 또는 병태의 치료를 위한 세포 치료에 사용하기 위한 방법, 조성물 및 제조 상품이 제공된다. 방법은 질병 또는 병태에 관련된 분자를 인지하거나 및/또는 특이적으로 결합하도록 고안된 재조합 수용체를 발현하는 가공된 세포를 투여하는 것을 포함하고, 그러한 분자에 결합시 그러한 분자에 대한 면역반응과 같은 반응을 초래한다. 수용체는 키메라 수용체, 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 형질 전환 T 세포 수용체 (TCRs)를 포함하는 다른 형질전환 수용체를 포함할 수 있다.
[0071] 특히, 방법은 첫번째 복용량을 투여받은 대상체에 세포를 1 이상의 연속 복용량으로 투여하는 것을 포함하고 및/또는 첫번째 및 1이상의 연속 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 복용량은 일반적으로 특정 양으로 및 특정 시점 변수에 따라 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 방법은 일반적으로 첫번째 복용량의 세포를 투여하는 것을 포함하고, 그에 따라 질병의 부담이 완화되고, 이어서 세포의 연속 복용량에 따라, 첫번째 복용량에 대하여 시간의 창문 동안 투여되거나, 그러한 첫번째 복용량을 받은 대상체에 대한 연속 복용량의 투여이다. 첫번째 복용량은 종종 상대적으로 낮은 복용량이다. 일부 구체예에 있어서, 그 후에 예를 들어, 연속 복용량에 대한 시간의 창과 같거나 비슷한 범위내에 추가적인 연속 복용량은 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 투여된 세포의 수 및 다중 복용량의 시점은 대상체에 대한 독성의 가능성 또는 정도를 감소시키고, 대상체의 노출 및/또는 투여된 세포의 지속성을 개선시키고 및/또는 치료 효능을 개선시키는 것과 같은 1 이상의 결과를 개선시키도록 설계된다. 또한 세포를 포함하고, 그러한 복용 요법을 따르도록 설계된 제조 물품이 제공된다.
[0072] 일부 구체예에 있어서, 투여된 세포에 대한 대상체의 증가된 노출 (예를 들어, 증가된 세포의 수 또는 시간 경과에 따른 지속시간)이 효능 및 치료 결과를 개선시킬수 있음을 나타낸 본 발명의 관찰에 따른 방법이 제공된다. 여러 치료 시도에서 다양한 CD19 발현 암을 가지는 대상체에 다른 CD19-표적 CAR 발현 T 세포의 투여에 따라 수행된 예비 분석은 CAR 발현 세포에 대한 노출의 더 큰 정도 및/또는 더 긴 정도와 치료 결과 사이의 상관관계를 나타내었다. 그러한 결과에는 심각한 종양 부담이 있는 개체에게도, 환자 생존 및 완화가 포함되었다.
[0073] 그러나 재조합 면역 자극 세포의 높은 초기 복용량을 전달하는 것은 반드시 노출을 증가시키지 않는다. 특히, 높은 질병 부담 (및 따라서 항원의 양이 많음)과 관련하여, 다량의 복용량의 투여는 반드시 효능을 향상시키지는 않으며, 세포의 증가된 또는 급속 팽창을 유도하여 독성을 초래할 수 있다. 특정 보고서는 복용량과 독성 사이의 상관관계가 없음을 나타낸다. Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007) 참조. 다른 한편으로는, 특히 높은 질병 부담 측면에서, 높은 초기 복용량은 사이토카인 방출 증후군 (CRS)와 같은 독성 결과를 촉진할 수 있다. 더욱이, 높은 복용량이 반드시 투여된 세포의 증가된 지속성으로 해석되지는 않고, 따라서 반드시 시간에 따라 노출이 증가되지는 않는다. Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007)을 보라. 이와 같이, 종종 치료 시작 시점에 존재하는 높은 질병 부담 면에서 세포를 투여하는 것은 전달된 세포의 고갈로 이어질 수 있고, 따라서 치료적 효능이 감소된다. Davila & Brentjens, Hematol Oncol Clin North Am. 27(2):341-53 (2013)을 보라.
[0074] 특히 재발 후 및/또는 대상체가 세포 또는 재조합 수용체 발현에 특이적인 면역반응을 일으킨 경우 후속 복용량을 투여하는 것은 효과적이지 않을 수 있다. 세포 노출 및 독성 결과를 피하는 시간을 증가시키는 개선된 방법이 필요하다.
[0075] 제공된 방법은 독성결과 위험 및/또는 효능의 개선을 다루는데 목적을 두는 다른 접근들에 비해 이점을 제공한다. 그러한 많은 접근법들은 예를들어, 사이토카인 봉쇄 및 또는 투여된 세포의 기능을 제거하거나 손상시킬 수 있는 높은 복용량의 스테로이드 같은 제제의 전달과 같은 독성의 후속효과를 목적으로 하는데 초점을 두고 있다. 이러한 많은 다른 접근들은 또한 신경독성과 같은 다른 형태의 독성을 나타내지 않고, 이는 입양 세포 치료와 관련될 수 있다. 다른 한편, 상대적으로 높은 복용량의 세포 (예를 들어 CAR 발현 세포)를 투여하는 것은 위험을 감소시킬 수 있으나, 완전히 효과적이지 않을 수 있다. 예를 들어 초기 복용에 따른 재발 후, 세포의 후속 복용량의 전달 또한 완전히 만족스럽지 않았다. 그러한 복용량 접근은 첫번째 복용량에 대해 발생한 숙주 면역 반응에 기인한 후속 복용의 제한된 또는 비효율적인 반응을 초래할 수 있다.
[0076] 독성의 위험을 최소화하고, 효능을 최대화하기 위한 방법으로 세포치료의 연속 복용량의 투여를 포함하는 방법이 제공된다. 본 발명에서 관찰된 바와 같이, B 세포 암을 가지는 인간 대상체에 대한 CD19-표적 CAR T 세포의 다른 종류의 투여에 따라, 체중 킬로그램당 1 x 106 세포와 동일하거나 아래의 초기 복용량은 종양 부담을 줄이는데 효과적이었다. 이러한 낮은 복용량들은 높은 복용량과 비교하여 심각한 CRS, 신경독성 및 다른 음성 효과의 낮은 빈도와도 관련되어 있다. 일부 구체예에 있어서, 제공된 방법은 증가된 노출에 대한 연속 복용량에 따른 독성을 최소화 하는 동안 숙주 면역 반응의 효능의 장애를 피하도록 고안된 복용량 및 시간을 가지는 그러한 낮은 복용량의 안전한 초기 투여를 포함한다.
[0077] 일부 경우에, 특정 질병 또는 상황에서 원하거나 필요하다면, 제공된 방법은 세포의 첫번째 투여량보다 증가된 수로, 따라서 더 높은 복용량으로 투여되는 세포의 연속 투여를 포함한다. 본 발명에서 보이는 바와 같이, 일부 관점에 있어서, 보다 높은 복용량의 세포를 투여하는 것이 낮은 복용량에 비하여 유리하다. 일부 구체예에 있어서, 2.5 x 106 세포/kg 또는 그 이상의 복용량과 같은 높은 복용량의 세포의 투여는 대상, 특히 치료 전에 형태학적 질환을 나타내는 대상에서 증가된 전제 생존과 관련된다. 그러나, 일부 구체예에 있어서, 이들보다 높은 복용량은 독성 결과, 특히 신경 독성, 예를 들어 등급 3 신경독성 또는 그 보다 높은 등급과 같은 중증의 신경독성, 특히 치료 전에 형태학적 질환을 가진 대상과 관련될 수 있다. 경우에 따라, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포를 높은 복용량으로 투여하는 것에 따른 독성 결과는 질병 부담이 감소된, 분자적으로 검출 가능한 질병을 가지는 최소 잔류 질병을 가지는 대상체와 같은, 대상체를 치료할 때 관찰되지 않거나 큰 정도로 관찰되지 않는다. 일부 구체에에서, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 낮은 복용량을 첫번째로 투여하는 방법은 형태학적 질환 상태에서 최소한의 잔류 질환으로부터와 같은 대상체의 질병 부담을 감소시킬수 있으므로, 대상체에게 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 높은 복용량의 투여는 치료된 환자 대다수에서 독성 결과를 야기할 가능성이 적다. 일부 구체예에 있어서, 제공된 방법은 더 많은 수의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포로 투여 시 발생할 수 있는 치료 효능을 최대화 하면서, 보다 높은 복용량으로 투여하는 것과 관련된 독성의 문제점을 회피한다.
[0078] 일부 구체예에 있어서, 방법은 질병 관련 항원의 존재하에서 팽창하고 질병 부담을 감소시킬수 있지만 높은 복용량과 관련이 있는 독성 결과와 같은 정도의 독성 결과가 없는 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 초기 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 1 x 106 세포 (세포/kg) 또는 그 이하 또는 약 1 x 106 세포 미만의 투여량 (세포/kg), 0.5 x 106 세포/kg 또는 1 x 105 세포/kg이다. 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용량은 일부 구체예에 있어서 CRS 또는 신경 독성과 같이 질환 또는 증상 또는 대상체에서 독성 결과를 일으키지 않는 것으로 관찰된 세포의 양 또는 수이다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 상대적으로 적은 비율, 예를 들어 50, 40, 25, 20 또는 그 미만의 백분율의 대상체에서의 치료적 데이터에 기초한 그러한 결과와 관련된 세포의 양 또는 수이다.
[0079] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 투여량은 일반적으로 질병 부담을 감소시키는데 효과적일만큼 충분히 크다. 경우에 따라, 첫번째 복용량은 세포 복용량이 생체내에서 확장시키기고 질병을 줄이기에 충분하다면 질병 부담을 줄이기에 충분하다. 일부 구체예에 있어서, 그에 따라 첫번째 투여량의 세포는 심각한 불필요한 결과에 영향을 미치지 않으면서 질병 부담, 예를 들어 종양의 크기를 감소시키거나 줄인다. 경우에 따라, 첫번째 복용량은 형태학적 설정에서 최소 잔류 질환 및/ 또는 치료적 또는 완전한 차도에 이르기까지 질병을 감소시킴으로써 종양 부담을 감소시키는데 효과적인 세포의 양이다. 일부 관점에 있어서, 초기 복용량은 낮은 복용량이다. 일부 관점에 있어서, 예를 들어 비교적 낮은 질병 부담의 측면에서, 첫번째 복용량은 더 높을수있다.
[0080] 일부 관점에 있어서, 위험-적응 복용량 방식은 복용량 중 세포 또는 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 적절한 수 또는 양 또는 상대적인 수 또는 상대적인 양을 결정하는데 사용된다. 예를 들어, 일부 관점에 있어서, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 주입전에, 대상체의 질병 부담이 결정되고, 질병 부담에 기초하여, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 첫번째 복용량은 (예를 들어, 낮은 또는 높은 복용량)은 독성 최소화 및 효능 최대화할 수 있는 중에 선택되고, 예를 들어, 상기에서 기술한 관찰 및 재조합 수용체 발현 세포 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR 발현) 보다 높은 복용량이 심각한 신경 독성과 같은 독성 결과과 관련될 수 있는 본 발명의 다른 부분에 기초하고, 대상체에서 형태학적인 질병 부담을 가지고, 상대적으로 낮은 질병 부담을 가지는 대상체에서 반드시 관찰되지 않거나 큰 정도로 관찰되지 않는다. 예를 들어, 경우에 따라, 치료에 따른 CAR T-세포 확장이 더 커지는 것과 관련될 수 있고, 치료전 골수 종양 부담이 높은 대상체는 ICU 치료가 필요한 심각한 신경 독성이 발생할 위험이 더 높은 것으로 관찰되었다.
[0081] 일부 구체예에 있어서, 예를 들어, CAR-T 세포 주입과 같은 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 주입에 따른 독성결과에 민감하지 않거나, 덜 민감한 대상에서 효능을 최대화 하기 위해, (형태학적 질병을 나타내지 않거나 (즉, 비 형태학적 질병을 갖거나) 실질적인 형태학적 질병을 나타내지 않는 대상과 같은), 1 x 106 세포/kg, 2 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg 또는 1 x 107 세포/kg 와 같은 비교적 높은 복용량의 세포가 투여될 수 있다. 반대로, 일부 관점에 있어서, 형태학적 질병 또는 실질적인 형태학적 질병의 존재에 의한 것과 같이 상대적으로 높은 질병 부담을 갖는 것으로 판단되는 대상체는 형태학적 질병을 나타내지 않는 또는 실질적으로 형태학적 질병을 나타내지 않는 대상체에 투여된 것보다 더 적은, 약 1 x 106 세포/kg 이하이거나 같은 또는 약 0.5 x 106 세포/kg 이하이거나 같은 복용량과 같은 복용량의 세포를 투여할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 1 이상의 추가의 연속 복용량이 투여 될 수 있고, 이은 질병 부담에 관계없이 상기 한 바와 같은 질병 부담의 정도의 범위에 기초하여 투여되거나 또는 그렇지 않으면 질병 부담과 관계없는 고정 투여 량으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 골수에 존재하는 5 % 이상 또는 같은 정도의 아세포가 있다면, 대상체는 형태학적 질병 또는 실질적인 형태학적 질병 부담을 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 상대적으로 높은 질병 부담을 갖는 대상체는 골수 종양 부하를 가지며, 골수에서 약 10 % 또는 그 이상의 아세포를 나타내거나 또는 약 20 % 또는 그 이상의 아세포를 가진다.
[0082] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 치료 전에 질병 부담에 대해 평가되고, 개체가 5 % 미만의 골수 아세포를 나타내는 경우, 대상체는 1 x 106 세포/kg, 2 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg 또는 1 x 107 세포/kg 이상의 재조합 수용체 - 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은, CAR 발현) 복용량을 투여받을 수 있거나, 피험자가 5 % 또는 그보다 큰 골수 아세포를 나타내는 경우, 1x106 세포/kg 또는 0.5 x 106 세포 / kg이거나 그 이하의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR- 발현) 복용량을 투여 받을수있다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 치료 전에 질병 부담에 대해 평가되고, 개체가 10 % 미만의 골수 아세포를 나타내는 경우, 대상체는 1 x 106 세포/kg, 2 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg 또는 1 x 107 세포/kg 이상의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은, CAR 발현) 복용량을 투여받을 수 있거나, 피험자가 10 % 또는 그보다 큰 골수 아세포를 나타내는 경우, 1x106 세포/kg 또는 0.5 x 106 세포 / kg이거나 그 이하의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR 발현) 복용량을 투여 받을 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 치료 전에 질병 부담에 대해 평가되고, 개체가 20 % 미만의 골수 아세포를 나타내는 경우, 대상체는 1 x 106 세포/kg, 2 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg 또는 1 x 107 세포/kg 이상의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은, CAR 발현) 복용량을 투여받을 수 있거나, 피험자가 20 % 또는 그보다 큰 골수 아세포를 나타내는 경우, 1x106 세포/kg 또는 0.5 x 106 세포/kg이거나 그 이하의 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR- 발현) 복용량을 투여 받을수있다. 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR 발현)의 첫번째 복용 전에 질병 부담을 평가하고 위험 선택성 복용량을 선택한다. 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR 발현)의 1 이상의 연속 복용전에 질병 부담은 평가되고 위험-선택성 복용량이 선택된다.
[0083] 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 연속 복용량은 대상체의 질병 종양부담이 첫번째 복용량에 따라 감소하는 것과 같은 첫번째 또는 초기 세포 복용량의 투여 후 시간에 환자에게 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량 투여 전에 종양 부담이 모든 대상체에서 실제로 감소 될 필요는 없지만, 종양 부담은 치료적 데이터에 기초하여 치료 된 대상체에서 평균 감소되고, 그러한 첫번째 복용량으로 처리된 대상체는 첫번째 또는 초기 복용량으로 처리된 대상체의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상은 감소 된 종양 부담을 나타낸다. 일반적으로, 질병 부담이 첫번째 복용량으로 감소되거나 첫번째 복용량에 의해 감소 된 이후의 시점에서, 연속 복용량을 환자에게 투여함으로써, 그의 질병 또는 병태 또는 결과를 더욱 감소 및/또는 제거하거나 그의 확장 또는 진행을 방지한다. 연속 투여시에 질병 부담이 감소된 측면은 전달 된 세포가 고갈될 가능성을 줄이고 그렇게 함으로써 효능을 향상시킨다. 연속 복용량은 첫번째 복용량과 동일하거나, 낮거나, 또는 더 높을 수 있다. 　일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용 후에 다수의 연속 복용량이 투여된다.
[0084] 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 연속 복용량을 첫번째 복용량보다 높은 복용량으로 투여하여 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포는 연속 복용량에 의해 대상체에게 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 더 높은 복용량은 더 낮은 복용량 또는 세포 수의 투여에 따라 성취되는 것보다 종양 부담의 개선 또는 더 큰 감소 및/또는 전체 생존 시간의 개선 또는 더 큰 것과 같이 증가된 반응 또는 효능을 촉진 할 수 있는 것이다. 일부 구체예에 있어서, 세포의 첫번째 복용량의 투여가 대상체에서의 종양 부담을 감소시킬 수 있기 때문에, 보다 많은 수의 세포에서의 연속 복용량의 투여는 연속 복용량의 투여 후 대상체에서 그렇지 않으면 형태학적 질환을 가진 대상체에서 발생할 수 있는 CRS 및/또는 신경 독성을 회피하거나 최소화 할 수 있다.
[0085] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량을 투여하기 전에, 대상체는 분자 형태로 검출 가능한 질병 및/또는 최소 잔여 질병과 같은 비-형태학적 질병을 나타내는 대상체이다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 치료 전에 존재하는 질병 부담과 비교하여 질병 부담이 감소됨을 확인하기 위해 대상체를 첫번째 복용량의 투여 후 및 연속 복용량의 투여전의 질병 부담에 대해 평가할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 만약 대상체의 평가가 질병 부담이 감소되고 및/또는 대상체가 예를 들어, 분자적으로 검출가능한 질병 및/또는 최소한의 잔류 질병과 같은 비-형태학적 질병을 나타내는 것을 의미하는 경우, 제공되는 방법은 첫번째 또는 초기 복용량보다 큰 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 연속 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 대상체의 평가가 질병 부담이 줄어들지 않음 및/또는 대상체가 형태학적 질병을 나타냄을 의미하는 경우, 제공되는 방법은 첫번째 또는 초기 복용량과 같거나 적은 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 연속 복용량을 투여하는 것을 포함한다.
[0086] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및/또는 다른 하나와 관련된 연속 복용량의 시범은 원하지 않는 독성 결과의 위함을 감소하고 최대 효능을 촉진하도록 설계된다. 일부 구체예에 있어서, 동일한, 더 낮은 또는 더 높은 연속 복용량과 같은 연속 복용량은 질병 부담이 대상체에서 감소된 채로 남아있거나 치료적 데이터에 기초하여 평균적으로 대상체에서 감소된 시점에 투여되지만, CRS 및/또는 신경 독성의 위험은 낮게 유지된다. 일부 구체예에 있어서, 대상체에서 CRS 및/또는 신경독성이, 비-형태학적 질병으로의 질병 또는 종양 부담을 감소시키기 위해 예를 들어, CAR+ T 세포의 낮은 복용량 투여를 첫번째로 투여함으로써 예방, 최소화 또는 감소 될 수 있는 방법이 제공되고, 잔류 질병 또는 분자 검출이 가능한 질병 상채를 최소화하고 이어서 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 연속 복용량을 투여한다.
[0087] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 일반적으로 -CRS 또는 신경 독성, 대식세포 활성화 증후군 또는 종양 용해 증후군과 같은- 독성 결과 또는 증상 또는 생화학적 지표의 위험이 수용 가능한 수준 또는 그 이하인 첫번째 또는 이전의 복용량에 비례한 시점에 주어진다. 예를 들어, 연속 복용량은 독성 결과가 정점에 도달하고 초기 복용량에 따른 허용 수치 이하로 감소하거나 감소한 후에 투여될 수 있다. 따라서, 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 적어도 첫번째 또는 전의 복용량의 개시 후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 또는 27일 때 또는 첫번째 또는 전의 복용량의 개시 후 약 14 또는 15일 또는 21일 때 투여될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 적절한 시점은 독성 이벤트와 관련된 1 이상의 증후군 또는 결과의 존재를 모니터링 및/또는 평가하고 증후군 또는 결과가 허용가능한 수치이거나 그 이하임을 결정한 후에 연속 복용량을 전달함으로써 결정된다.
[0088] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 시점은 첫번째 복용량의 투여에 따라 장착된 숙주 면역 반응에 의한 후속 복용량의 투여 시 달리 유도될 수 있는 효능의 감소를 회피하는 정도이다. 일부 관점에 있어서, 연속 복용량은 그들이 발현하는 투여된 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응 예를 들어, 선택성 또는 특이성, 예를 들어, 체액성 또는 세포 매개성, 면역 반응의 발병 전 및/또는 그러한 반응이 예를 들어, 1 이상의 특정 검출 방법에 의해 감지될 수 있기 전에 투여된다. 연속 복용 또는 복용들은 숙주 선택성 면역 반응이 대포에 대해 검출되지 않거나, 확립되지 않거나 및/또는 특정 수치 또는 정도 또는 단계에 도달하지 않은 시점에 일반적으로 투여된다. 이와 관련하여, 방법들은 일반적으로 항형질전환 반응이 발생한 후 재발시에 후속 복용량을 제공하는 것과 비교하여 유리하다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 또는 이전의 복용량에 따라 약 28일 또는 35일 전 또는 이내 또는 첫번째 또는 이전 복용량의 개시에 따라 약 24, 25, 26 또는 27일 전에 투여된다.
[0089] 따라서, 일부 구체예에 있어서 제공되는 방법은 독성에 대한 위험의 창 이후 그러나 면역 반응의 탑재 전에, 첫번째 복용량에 따라 질병 부담의 감소 또는 완화 후에 1 이상의 연속 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 이 환경과 적절한 시기의 연속 투여는 표준 또는 연구 등급 분석 방법으로 측정 가능 여부와 관계없이 면역계 감시, 잔여 질병 세포의 확장 또는 전이를 안전하고 효과적으로 제공할 수 있다. 따라서, 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 질병 통합 복용량이다.
[0090] 특정 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양의 세포를 포함하고, 연속 복용량은 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 지표의 혈청 수치가 첫번째 복용량의 투여 직전의 대상체의 지표의 10배 또는 25배 이하인 시점 및/또는 C 대상체에서 RS 관련 결과가 피크 수치에 도달하고 첫번? 복용량의 투여에 따라 감소하기 시작하는 시점, 및 대상체가 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현되는 재조합 수용체에 특이적인 검출가능한 선택성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 투여된다.
[0091] 특정 구체예에 있어서는, 첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1x106 세포이거나 더 적은 세포, 1x108 세포이거나 더 적은 세포 및/또는 1x108 세포/대상체 m2이거나 더 적은 세포를 포함하고, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 개시 후 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 또는 전의 복용 후 약 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일 또는 28일째에 투여된다. 특정 실시예에서, 연속 복용량은 첫번째 또는 이전의 복용 후 약 17일 또는 약 21일째에 투여된다.
[0092] 따라서, 제공되는 방법은 특히 높은 질병 부담 측면에서 심각한 독성, 원하지 않는 결과 및/또는 낮은 효능을 일으키는 단일 복용량 투여에 비하여 이점을 제공한다. 이들은 또한 원하지 않는 부작용의 위험이 증가하는 초기 복용 후 너무 일찍 또는 예를 들어, 이전 복용량에 대한 면역 반응이 성립된 후 너무 늦게 후속 복용량을 투여하는 방법에 비하여 유리할 수 있다. 제공된 방법은 독성 결과를 줄이면서, 내구성 및 치료적 반응 및/또는 환자 생존을 개선하는 치료용 세포에 노출을 연장한다. 또한 이러한 방법에 사용하기 위한 복용량을 제공하는 조성물 및 제조 물품이 제공된다.
Ⅱ. 입양 세포 치료에서 세포의 투여
[0093] 제공되는 방법은 일반적으로 수용체에 의해 특이적으로 인지되는 질환 또는 증상을 가지는 대상체에 CAR과 같은 재조합 수용체를 나타내는 세포를 포함하거나 형질전환 TCR 같은 다른 항원 수용체를 발현하는 세포의 복수 복용량을 투여하는 것을 포함한다. 투여는 일반적으로 질병 또는 병태의 1 이상의 증후군의 개선 및 또는 치료 또는 질병 또는 병태 또는 이들의 증후군의 예방에 영향을 미친다.
[0094] 본 발명에 사용된 바와 같이, "대상체"는 인간 또는 다른 동물 및 전형적으로는 인간인 포유류 이다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량의 투여 전 및/또는 연속 복용량의 투여 전의 질병 또는 병태 예를 들어, 종양을 표적으로 하는 치료제로 치료되었다. 일부 관점에 있어서, 대상체는 다른 치료에에 난치성이거나 비반응성이다.
[0095] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 예를 들어 화학치료요법, 방사선 및/또는 조혈줄기세포이식 (HSCT) 예를 들어, 동종 HSCT를 포함하는 다른 치료적 중재에 따르는 지속성 있거나 재발하는 질병을 가진다. 일부 구체예에 있어서, 투여는 대상체가 다른 치료에 내성이 있음에도 불구하고 효과적으로 대상체를 치료한다.
[0096] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 다른 치료제에 반응성이고, 치료제로 치료하여 질병 부담을 감소시킨다. 일부 관점에 있어서, 대상체는 초기에는 치료제에 반응하지만, 시간이 지남에 따라 질병 또는 병태의 재발이 나타난다. 일부 구체에에서, 대상체는 재발하지 않았다. 이러한 일부 구체예에 있어서, 대상체는 재발의 위험이 높은 것 과 같은 재발 위험이 있는것으로 결정되므로, 예를 들어 재발의 가능성을 감소 시키거나 방지하기 위해 세포를 예방적으로 투여한다.
[0097] 일부 관점에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량의 투여전에 CAR을 발현하는 세포의 복용량을 받지 않았고 및/또는 CAR 또는 그러한 세포 또는 같은 분자 또는 항원을 표적으로하는 임의의 재조합 수용체를 발현하는 세포에 의해 발현되는 다른 수용체를 발현하는 세포의 복용량을 받지 않았다. 일부 관점에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량의 투여 전에 첫번째 복용량의 CAR을 발현하는 세포의 복용량을 받지 않았다.
[0098] 질병, 증상 및 장애 중에는 고형 종양을 포함하는 종양, 혈액 악성종양 및 흑색종을 포함하는 구소 및 전이 조양, 바이러스 또는 다른 병원체 예를 들어, HIV, HCV, HBV, CMV 및 기생출 질병 및 자가면역 및 염증성 질관이 있다. 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 종양, 암, 악정종양, 신생물 또는 다른 증식성 질환 또는 장애이다. 이러한 질병에는 백혈병, 림프종 예를 들어 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프구성 백혈명 (ALL), 비호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 난치성 여포성 림프종, 맨틀 세포 림프종, 둔감한 B 세포 림프종, B 세포 악성종양, 대상, 폐, 간, 유방, 전립선, 난소, 치수 암, 흑색종, 뼈 및 뇌암, 난소암, 상피암, 신장암, 췌장 선암, 호지킨 림프종, 자궁 경부암, 교모세포종, 신경 모세포종, 유잉 육종, 수모세포종, 골육종, 혈액 육종 및/또는 중피종을 포함하지만 이에 한하는 것은 아니다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 급성 림프구성 백혈병 (ALL)을 갖는다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 비호지킨성 림프종을 갖는다.
[0099] 일부 구체예에 있어서, 복용량의 크기 또는 시점은 대상체의 특정 질환 또는 증상의 함수로서 결정된다. 제공된 설명의 관점에 있어서 특정 질병에 대한 복용량의 트기 및 시점은 경험적으로 결정하는 것은 숙련된 기술자의 수준 내이다. 경우에 따라, 예를 들어 급성 림프구성 백혈명 (ALL)을 가지는 대상체에 비해 비호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 대상체는 재조합 수용체 발현 세포 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR 발현 세포)로의 치료에 비해 반응성이 적거나 부분적으로만 반응할 수 있다. 경우에 따라, NHL을 가지는 대상체에 투여된 더 낮은 복용량의 세포는 대상체의 질병 부담을 감소시키지 않을 수 있으며, 따라서 연속 복용량이 투여된 대상체에서 CRS 및/또는 신경독성과 같은 독성 결과의 위험을 증가시킨다. 일부 구체예에 있어서, NHL을 가지는 대상체가 첫번째 투여량으로 투여된 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현) 세포의 복용량과 같거나 적은 연속복용량으로 투여되어 연속 복용량의 투여에 따라 발생할 수 있는 독성 부작용의 위험을 최소화하거나 줄일 수 있는 방법이 제공된다.
[0100] 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 종양 또는 암이고, 대상체는 고형 종양 또는 질병 관련의 많은 수 또는 대량 예를 들어, 종양 또는 암세포와 같은 첫번째 복양량의 투여 전에 큰 종양 부담을 가진다. 일부 관점에 있어서, 대상체의 초기 종양 부담은 낮고 대상체는 거의 전이하지 않는다.
[0101] 일부 구체예에 있어서, 복용량의 크기 또는 시점은 대상체에서 종양 부담과 같은, 초기 질병 부담에 따라 결정된다. 예를 들어, 경우에 따라서는, 대상체가 일반적으로 분자성 검출이 가능한 질병 및/또는 최소 잔류 질병과 같은 질병 부담이 낮다는 관점에 있어서, 첫번째 복용량에서 비교적 적은 수의 세포가 투여되는 반면, 초기 복용량은 더 높을수 있다. 다른 경우에, 첫번째 복용량의 투여후 더 높은 질병 부담을 나타내는 대상체에서, 연속 복용량은 첫번째 복용량과 같거나 더 낮을 수 있다. 일부 구체에에서, 대상체는 본 발명에 개시된 바와 같은 방법, 예컨대 유동세포계수법 또는 qPCR 방법에 의한 골수 또는 분자 질화에서의 아세포를 평가하는 방법을 사용하여 질병 부담에 대해 평가된다.
[0102] 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 바이러스, 레트로 바이러스, 박테리아 및 원충 감염, 면역 결핍증, 거대세포바이러스 (CMV), 앱스타인-바 바이러스 (EBV), 아데노바이러스, BK 폴리오마바이러스와 같은 감염성 질병 또는 병태다. 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태는 관절염, 예를 들어, 류마티스성 관절염 (RA), Ⅰ형 당뇨병, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 염증성 장질환, 건선, 경피증, 자가면역 갑상선 질명, 그레이브 병, 그론 병, 다발성 경화증, 천식 및/또는 이식과 관련된 질병 또는 병태와 같은 자가면역 또는 염증성 질병 또는 병태다.
[0103] 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 장애와 관련된 항원은 고아성 티로신 키나아제 수용체 RORl, tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소테린, CEA 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, 0EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, FBP, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alpha, IL-13R-alpha2, kdr, 카파경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접착 분자, MAGE-A1, 메소테린, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 태아성 암항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 발암배아성 항원 (CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, CS-1, c-Met, GD-2, 및 MAGE A3, CE7, 윌름즈 종양 1 (WT-1), 사이클린 A1 (CCNA 1)과 같은 사이클린 및/또는 비오틴 화 분자 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에의해 발현되는 분자로 이루어지는 군 중에서 선택된다.
[0104] 본 발명에서 사용된, "치료" (및 "치료" 또는 "치료하는"과 같은 문법적 변형)은 질병 또는 병태 또는 장애 또는 증상, 결과의 불리한 효과 또는 그것을 이루는 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 의미한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질병의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질병 진행률 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 예후의 차도 또는 개선 등을 포함하나 이에 한하지 않는다. 이 용어는 질병의 완전한 완치 또는 모든 증상이나 결과에 대한 증상이나 효과의 완전한 제거를 의미하지는 않는다.
[0105] 본 발명에 사용된 바와 같이, "질병의 발달 지연"은 질병 (암과 같은)의 발달을 연기, 방해, 늦춤, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 이 지여은 치료될 질병 및/또는 개인의 병력에 다라 다양한 시간길이가 될 수 있다. 당해 기술 분야의 숙련된 기술자에게 명백한 바와 같이, 충분하거나 현저한 지연은 실제로 개체가 질병을 발병하지 않는다는 점에서, 예방을 포함할 수 있다. 예를 들어, 전이 발달과 같은 말기 암이 지연될 수 있다.
[0106] 본 발명에서 사용된 "예방"은 질병에 걸리기 쉽지만, 아직 질병으로 진단되지 않는 대상체에서 질병의 발생 또는 재발에 관한 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 제공된 세포 및 조성물은 질병의 발달을 지연시키거나 질환의 진행을 늦추는데 사용된다.
[0107] 본 발명에서 사용된 바와 같이, 기능 또는 활성을 "억제"시키는 것은 대상 조건 또는 매개 변수를 제외하고 다른 조건과 달리 또는 다른 조건과 비교하여 대안적으로 비교할 때 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 세포는 세포가 없는 경우 종양의 성장 속도와 비교하여 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
[0108] 투여의 관점에 있어서, 약제제제, 세포 또는 조성물과 같은 약제의 "유효량"은 치료 또는 예방의 결과와 같은 바람직한 결과를 얻기위해 필요한 복용량/양 및 필요한 시간 동안 유효량을 의미한다.
[0109] 약학적 제형 또는 세포와 같은 약제의 "치료적 유효량"은 질병, 증상 또는 장애의 치료 및/또는 치료의 약물동력학적 또는 약력학적 효과와 같은 목적하는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 복용량 및 필요한 기간동아의 유료량을 의미한다. 치료적 유효량은 질병의 상태, 대상체의 나이, 성별 및 체중 및 투여된 세포 모집단과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 제공되는 방법은 세포 및/또는 조성물을 효과적인 양으로 예를 들어, 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.
[0110] "예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과를 얻기 위해 필요한 복용량 및 기간 동안의 효과적인 양을 의미한다. 일반적으로 그러나 반드시 필요한 것은 아니지만, 질병의 초기 단계에서 예방적 복용량이 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다. 낮은 종양 부담과 관련하여, 일부 관점에 있어서의 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 높을 것이다.
[0111] 입양 세포 치료법에서 세포의 투여방법은 공지되어 있으며, 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 예를 들어, Gruenberg 등의 미국 특허 출원 공개 제2003/0170238호; 로젠버그 (Rosenberg)의 미국 특허번호 제4,690,915호; 로젠버그 (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8 (10) : 577-85] 에 개시되어 있다. 예를 들어, Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31 (10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438 (1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338를 참조하라.
[0112] 일부 구체예에 있어서, 세포 치료법 예를 들어, 입양 세포 치료법, 예를 들어 입양 T 세포 치료법은 자가 전달에 의해 수행되고, 세포는 세포를 분리시키고 또는 분리시키거나 그렇지 않으면 세포 치료법 또는 그러한 대상체로부터 유래된 시료로부터 수득할 수 있다. 따라서, 일부 관점에 있어서는, 세포는 치료를 필요로하는 대대상체 예를 들어, 환자로부터 유래하고, 세포는 분리되고 처리된 후에 동일한 대상체에게 투여된다.
[0113] 일부 구체예에 있어서, 세포 치료법 예를 들어, 입양 세포 치료법, 예를 들어 입양 T 세포 치료법은 동종이계의 전달에 의해 수행되며, 여기서 세포는 분리되고 및/또는 다른 한편으로는 예를 들어 첫번째 대상체 같이 궁극적으로 세포 치료를 받거나 받는 대상체로부터 준비되는 것이다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 동일한 종의 상이한 대상체 예를 들어, 두번째 대상체에게 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및 두번째 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및 두번째 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구체예에 있어서, 두번째 대상체는 첫번째 대상체와 동일한 HLA 클래스 도는 수퍼타입을 나타낸다.
[0114] 세포는 임의 적절한 방법, 예를 들어 정맥 또는 피하 주입, 안내 주입, 안구주위 주입, 망막하 주입, 유리체내 주입, 경격막 주입, 공막하 주입, 맥락막내 주입, 전안방내 주입, 서브콘젝트발 주입, 결막하 주입, 안각건하 주입, 교후부 주입, 안구 주위 주입, 또는 엉덩이 성관계 전달 과 같은 주입에 의한 정맥내 단일 주입으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 이들은 비경구, 폐내 및 비내 투여에의해 투여되고, 국소 치료를 위해 필요하다면 병내 투여로 투여된다. 비경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여가 포함된다. 일부 구체예에 있어서, 주어진 복용량은 세포의 단일 투여에 의해 투여된다.
[0115] 질병의 예방 및 치료를 위해, 적절한 복용량은 세포가 예방적 또는 치료목적 목적, 이전 치료법, 대상체의 치료적 기록 및 세포에 대한 반응 및 주치의의 재량으로 투여되는지 여부에 따라 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 결과에 의존한다. 조성물 및 세포는 일부 구체예에 있어서 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상체에게 적절하게 투여된다.
[0116] 일부 구체예에 있어서, 세포는 세포독성 또는 치료제와 같은 항체 또는 가공된 세포 또는 수용체 또는 제제와 같은 다른 치료적 중재와 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 조합치료의 일부로서 투여된다. 일부 구체예에 있어서의 세포는 1 이상의 추가적인 치료제와 함께 또는 다른 치료적 중재와 관련하여 동시에 또는 임의의ㅏ 순서로 순차적으로 공동-투여된다. 일부 관점에 있어서는, 세포는 1 이상의 추가 치료제의 효과를 증진시키는 세포집단과 시간이 충분히 가까운 다른 치료과 공동 투여되거나 또는 그 반대의 경우도 있다. 일부 구체예에 있어서, 세포들은 1 이상의 추가적 치료제 전에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 1 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 1 이상의 추가적 제제는 예를 들어 지속성을 향상시키는 IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다.
[0117] 일부 구체예에 있어서, 방법은 화학요법 제제, 예를 들어, 첫번째 또는 연속 복용량의 투여 전에 질병 부담을 감소시키기는 것과 같은 컨디셔닝 화학치료법 제제의 투여를 포함한다.
[0118] 면역 결핍 (예를 들어, 림프 결핍) 요법의 전처리 대상체는 입양 세포 치료법 (ACT)의 효과를 향상시킬 수 있다. 사이클로스포린과 플루다라빈의 조합을 포함하여 림프구 결핍 제제를 이용한 사전 조건화는 이전된 세포의 반응 및/또는 지속성을 향상시키는 것을 포함하여, 세포 치료에서 전달된 종양 침윤 림프구 (TIL) 세포의 효능을 향상 시키는데 효과적이었다. 　Dudley 등, 2002 Science, 298, 850-54; Rosenberg 등, Clin Cancer Res 2011, 17 (13): 4550-4557을 참조하라. 　마찬가지로, CAR + T 세포의 관점에 있어서, 몇몇 연구에서는 림프구 결핍 제제, 가장 일반적으로 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 벤다무스틴 또는 이들의 조합을 포함하였고, 때때로 저-복용량 방사선 조사를 동반하였다. Han et al. Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:47; Kochenderfer et al., Blood 2012; 119 : 2709-2720; Kalos 등, Sci Transl Med, 3 (95) : 95ra73; 임상 시험 연구 기록 번호 : NCT02315612; NCT01822652를 참조하라. 이러한 사전 조건화는 치료의 효능을 약화시킬 수 있는 다양한 결과 중 1 이상의 위험을 줄이려는 목적으로 수행 될 수 있다. T 세포, B 세포, NK 세포가 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15와 같은 사이토카인을 항상성 및 활성화시키기 위해 TIL과 경쟁하는 "사이토카인 싱크 (cytokine sink)"로 알려진 현상; 규제 T 세포, NK 세포 또는 면역계의 다른 세포에 의한 TIL 억제; 종양 미세 환경에서 음성 규제제의 영향을 포함한다. Muranski 등, Nat Clin Pract Oncol. 2006 년 12 월; 3 (12) : 668-681을 보라.
[0119] 따라서, 일부 구체예에 있어서, 방법은 사이클로포스파미드, 플루다라빈 또는 그들의 조합과 같은 림프구 결핍 제제 또는 화학 요법 제제와 같은 전처리 제제를 첫번째 또는 후속 복용 전에 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 대상체는 적어도 2 일전, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 또는 7 일 전에 첫번째 또는 후속 복용량까지 전처리 제제를 투여할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 대상체에게 7 일 전에, 예를 들어 6, 5, 4, 3 또는 2 일 전에 첫번째 또는 후속 복용량까지 전처리 제제를 투여한다.
[0120] 림프구 결핍 제제가 사이클로포스파미드를 포함하는 일부 구체예에 있어서, 대상체는 약 0.5 g/m2 내지 5 g/m2, 예컨대 약 1 g/m2 내지 4 g/m2, 1 g/m2 및 3 g/m2, 또는 2 g/m2 및 4 g/m2의 사이클로포스파미드를 투여받는다. 일부 관점에 있어서, 대상체에게는 2 g/m2의 사이클로포스파미드 또는 약 2 g/m2의 사이클로포스파미드가 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 약 20 mg/kg 내지 100 mg/kg 사이, 또는 약 40 mg/kg 내지 80 mg/kg 사이 또는 그 사이의 복용량의 사이클로포스파미드로 전처리된다. 일부 관점에 있어서, 대상체는 약 60 mg/kg의 사이클로포스파미드와 함께 또는 그와 함께 전처리된다.
[0121] 림프구 결핍 제제가 플루다라빈을 포함하는 일부 구체예에 있어서, 약 1 g/m2 내지 100 g/㎡ 사이, 예를 들어 약 10 g/m2 내지 75 g/m2 사이, 15 g/m2 및 50 g/m2, 20 g/m2 및 30 g/m2, 또는 24 g/m2 및 26 g/m2 또는 그 사이의 복용량으로 플루다라빈이 대상체에 투여된다. 어떤 경우에는 대상체에게 25 g/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 구체예에 있어서, 플루다라빈은 단일 복용량으로 투여 될 수 있거나 또는 매일, 1 일 간격으로 또는 3 일마다 제공되는 것과 같은 복수 복용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에는, 약제, 예컨대 플루다라빈은 약 1 내지 5회 사이, 또는 약 3 내지 5회 사이 또는 약 3 내지 5회 투여된다. 일부 구체 예에서, 그러한 복수 복용량은 같은 날, 예컨대 1 내지 5회 또는 3 내지 5회 1일 투여된다.
[0122] 일부 구체예에 있어서, 림프구 결핍 제제는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합과 같은 약제의 조성물을 포함한다. 따라서, 제제의 조합은 전술한 바와 같은 임의의 복용량 또는 투여 계획의 사이클로포스파미드 및 임의의 복용량 또는 투여 계획의 플루다라빈을 포함 할 수 있다. 예를 들어, 일부 관점에 있어서, 대상체게 첫번째 또는 후속 복용 전에 60 mg/kg (~ 2 g/m2)의 사이클로포스파미드 및 3 내지 5 회 복용량의 25 mg/m2 플루다라빈이 투여된다.
[0123] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 또는 연속 복용량의 주입 전에 전처리 제제의 투여는 치료 결과를 개선시킨다. 예를 들어, 일부 관점에 있어서, 사전 조건화는 첫번째 또는 후속 복용량으로 치료의 효능을 향상시키거나, 대상체에서 재조합 수용체 발현 세포 (예를 들어, CAR 발현 T 세포와 같은 CAR 발현 세포)의 지속성을 증가시킨다. 　일부 구체예에 있어서, 사전 조건화는 생존 및 첫번째 또는 후속 복용 후 소정 기간 후에 최소 잔류 또는 분자적으로 검출가능한 질환을 나타내지 않는 환자의 퍼센트와 같은 질병없는 생존을 증가시킨다.　일부 구체예에 있어서, 질병없는 생존 중앙값까지의 시간이 증가된다.
[0124] 일단 세포가 대상체 (예를 들어, 사람)에게 투여되면, 몇몇 관점에 있어서 가공된 세포 모집단의 생물학적 활성은 다수의 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 측정된다. 평가할 파라미터는 가공된 또는 자연의 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이적 결합, 예를 들어, 생체 내 이미징 또는 예를 들어, 생체 외 ELISA 또는 유동 세포 측정법에 의한 특이적 결합을 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 가공된 세포가 표적 세포를 파괴시키는 능력은 예를 들어 Kochenderfer 등, J.Immunotherapy, 32 (7)에 기재된 세포 독성 검정과 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정 될 수 있다: 689-702 (2009) 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). 특정 구체예에 있어서, 세포의 생물학적 활성은 또한 CD 107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 특정 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정될 수 있다. 일부 관점에 있어서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하의 감소와 같은 치료적 결과를 평가함으로써 측정된다.　일부 관점에 있어서, 독성 결과, 세포의 지속성 및/또는 팽창 및/또는 숙주 면역 반응의 존재 또는 부재가 평가된다.
[0125] 특정 구체예에 있어서, 가공된 세포는 그 치료 또는 예방 효능이 증가되도록 임의의 수의 방식으로 변형된다. 예를 들어, 집단에 의해 발현된 가공된 CAR 또는 TCR은 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 표적 모이어티에 접합될 수 있다. 화합물, 예를 들어, CAR 또는 TCR을 표적 모이어티에 접합시키는 실시방법은 당업계에 공지되어있다. 예를 들어, Wadwa 등, J. Drug Targeting 3 : 111 (1995) 및 미국 특허 제 5,087,616 호를 참조하라.
Ⅲ. 복용
[0126] 세포의 복수 복용량의 시점 및 크기는 일반적으로 예를 들어, 시간 경과에 따라 세포에 대상체의 증가된 노출을 제공함으로써 독성 결과의 위험을 감소시키거나 및/또는 효능을 개선시키도록 설계된다. 방법은 일반적으로 1 이상의 연속 복용량을 투여한 후, 첫번째 복용량을 상이한 복용량 사이의 특정 시간 프레임으로 투여하는 것을 포함한다.
[0127] 입양 세포 치료의 관점에 있어서, 주어진 "복용량"의 투여는 단일 조성물로서의 주어진 양 또는 수의 세포의 투여 및/또는 단일의 연속된 투여, 예컨대 단일 주사 또는 연속 주입으로서의 투여를 포함하며, 또한, 3일 이하의 특정 시간 동안 다수의 개별 조성물 또는 주입에 제공되는 분할 복용량으로서의 주어진 양 또는 세포 수의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 관점에 있어서, 첫번째 또는 연속 복용량은 단일 시점에서 주어지거나 개시되는 특정 수의 세포의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나 일부 관점에 있어서는, 첫번째 또는 연속 복용량을 하루에 3 번 또는 이틀 동안 또는 하루에 여러 번 주입하여 3 일을 넘지 않는 기간 동안 다중 주사 또는 주입으로 투여한다.
[0128] 따라서, 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용량의 세포는 단일 의약 조성물로 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 세포는 단일 의약 조성물로 투여된다.
[0129] 일부 구체 예에서, 첫번째 복용량의 세포는 첫번째 복용량의 세포를 총괄적으로 함유하는 복수의 조성물로 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 세포는 연속 복용량의 세포를 총괄적으로 함유하는 복수의 조성물로 투여된다. 일부 관점에 있어서, 연속적인 추가 복용량은 3일 이하의 기간에 걸쳐 복수의 조성물로 투여될 수 있다.
[0130] "분할 복용량"이란 용어는 분할되어 1 일 이상 투여되는 복용량을 의미한다. 이러한 유형의 복용은 본 방법에 의해 포함되며 단일 복용량으로 간주된다.
[0131] 따라서, 일부 관점에 있어서의 첫번째 복용량 및/또는 연속 복용량은 분할 복용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 복용량은 2일 또는 3일 이상 동안 대상체에게 투여될 수 있다. 분할 복용을 위한 예시적인 방법은 제1일에 복용량의 25 %를 투여하고 제2일째에 복용량의 나머지 75 %를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 33 %는 제1일에 투여될 수 있고 나머지 67 %는 제2일에 투여될 수 있다. 일부 관점에 있어서, 복용량의 10 %는 제1일에 투여되고, 복용량의 30 %는 제2일에 투여되고, 복용량의 60 %는 제3일에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 분할 복용량은 3일 이상 동안 퍼지지 않는다.
[0132] 첫번째 복용량과 같은 이전 복용량과 관련하여, "연속 복용량"이라는 용어는 이전의, 예를 들어 첫번째 복용량 전에 후의 동일한 대상체에게 투여되는 중간의 대상체에게 투여되는 임의의 중간 복용량없이 투여되는 복용량을 지칭한다. 그럼에도 불구하고, 이 용어는 단일 분할 복용량 내에 포함 된 일련의 주입 또는 주사로 제2, 제3 및/또는 기타의 주사 또는 주입을 포함하지 않는다. 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 1, 2 또는 3일 기간내에 제2주입은 본 발명에서 사용된 "연속" 복용량으로 간주되지 않는다. 마찬가지로, 분할 복용량 내에서 복수 복용량의 제2, 제3 및 기타 등은 "연속" 복용량의 의미에서 "중간" 복용량으로 간주되지 않는다. 따라서 달리 명시되지 않는 한, 첫번째 또는 이전 복용량의 개시 후, 3일 이상 일정 기간 투여된 복용량은 대상체가 첫번째 복용량에 따르는 세포의 제2 또는 후속 주사 또는 주입을 받았다 할지라도, 첫번째 또는 이전 복용량의 개시후 3일 이내에 제2 또는 후속 주사 또는 주입이 일어나는한, "연속" 복용량으로 간주된다.
[0133] 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 3일까지 기간 동안의 동일한 세포의 다수 투여는 단일 복용량으로 간주되고, 초기 투여 3일 이내의 세포 투여는 연속 복용량으로 간주되지 않고, 두번째 복용량이 첫번째에 "연속"인지 여부를 결정하기 위한 목적의 중간 복용량으로 간주되지 않는다.
[0134] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량과 첫번째 연속 복용량 사이의 시점에 관한 것과 동일한 타이밍 가이드라인을 사용하는 몇몇 관점에 있어서, 첫번째 또는 직전 복용량 투여 후 약 14일 초과 및 약 28일 미만, 예를 들어 약 21일 미만의 기간 내에 주어진 연속 복용량의 예를 들어, 첫번째 및 연속 복용량을 투여하는 것으로, 다수의 연속 투여가 제공된다. 추가적인 다수의 연속 복용 또는 복용량은 후속 복용량 또는 후속하는 연속 복용량으로 지칭된다
[0135] 본 발명에 사용된, "첫번째 복용량"은 연속 또는 후속 복용량의 투여 전에 주어지는 복용량의 시점을 설명하기 위해 사용된다. 이 용어는 반드시 대상체가 이전에 세포 치료제의 복용량을 받은 적이 없었거나 또는 대상체가 동일한 세포 또는 동일한 재조합 수용체를 발현하거나 동일한 항원을 표적으로하는 세포의 복용량을 받지 않았음을 의미하는 것은 아니다.
복용 양 또는 크기
[0136] 세포의 첫번째 및/또는 1 이상의 연속 복용량의 크기는 일반적으로 개선된 효능 및/또는 독성 위험 감소를 제공하도록 설계된다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 세포의 수는 약 0.5 x 106 세포/대상체의 체중 kg 및 3 x 106 세포/kg 사이, 약 0.75 x 106 세포/kg 내지 2.5 x 106 세포/kg 사이 또는 약 1 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg 사이이다.
[0137] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 낮은 복용량이다. 특정 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 다수의 세포, 다수의 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포, 다수의 T 세포 또는 다수의 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMC)를 대상체의 체중 킬로그램당 그러한 세포를 약 105 내지 약 106의 범위 각각에, 및/또는 그러한 세포의 수는 대상체의 체중 킬로그램당 그러한 세포의 약 105 또는 약 106 이하로 포함한다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램 당 약 1 x 105 이하, 약 2 x 105, 약 5 x 105 또는 약 1 x 106 또는 그와 같은 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상체 체중 킬로그램 당 약 1 x 105, 약 2 x 105, 약 5 x 105 또는 약 1 x 106 또는 그러한 세포를 포함하거나, 상기 값들 중 임의의 2개 사이의 범위내에 있다. 특정 구체예에 있어서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 구체예에 있어서, 세포의 수 및/또는 농도는 투여된 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵구 (PBMC)의 수 또는 농도를 지칭한다.
[0138] 일부 구체예에 있어서, 예를 들어 대상체가 사람인 경우, 첫번째 복용량은 약 1 x 108 총 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs), 예를 들어 약 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107 또는 1 x 108 또는 그 이하의 총 세포 수, 예를 들어 약 1 x 106 내지 1 x 108 그러한 세포들, 또는 상기 값들 중 임의의 2 개 사이의 범위를 포함한다.
[0139] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 대상의 m2 당 총 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs)보다 약 1 x 108 개 이하를 함유하고, 예를 들어, 대상의 m2 당 약 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107 또는 1 x 108과 같은 약 1 x 106 내지 1 x 108 범위의 그러한 대상체의 m2 당 세포 수, 또는 상기 값 중 임의의 2 개 사이의 범위이다.
[0140] 예를 들어, 대상체에서의 독성 및/또는 질병 부담의 위험이 낮다고 결정된 특정 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 1 x 106 세포/kg 보다 큰 복용량 또는 T 세포 또는 PBMC와 같은 1 x 108 이상의 세포를 포함하는 큰 복용량 또는 대상체의 m2 당 그러한 세포가 1x 108 이상인 상대적으로 높은 복용량이 될 수 있다.　일부 실시 양태에서, 대상체가 실질적인 형태학적 질병을 나타내지 않거나 형태학적 질환을 나타내지 않거나, 골수에서 20 % 미만의 아세포를 나타내거나, 골수에서 15 % 미만의 아세포를 나타내거나, 골수에서 10 % 미만의 아세포 또는 골수에서 5 % 미만의 아세포를 나타내는 경우 질병 부담이 낮다. 일부 구체예에 있어서, 대상체가 최소 잔류 질병 또는 분자적으로 검출 가능한 질병을 나타내는 등의 비-형태학적 질병을 나타내지만 골수에 있는 아세포의 5 % 이상을 나타내지 않는 것과 같은, 다른 곳에서 기술된 분야에서 공지된 바와 같은 형태학적 질환과 관련된 특징을 나타내지 않는 경우 질병 부담은 낮다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 세포, 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 수는 예를 들어, 대상체 체중 킬로그램 당 2 x 106, 3 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 1 x 109 또는 1 x 1010 세포 및/또는 대상체 또는 전체의 m2 당 1 x 108, 1 x 109, 또는 1 x 1010 세포, 또는 상기 두 값 사이의 범위와 같은 첫번째 복용량의 대상체 체중 킬로그램 당 약 1 x 106 이상이다.
[0141] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는 본 발명의 구체예 중 임의의 첫번째 복용량으로 투여 된 세포의 수와 동일하거나 유사하며, 예를 들어, 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 105, 약 2 x 105, 약 5 x 105, 또는 약 1 x 106 또는 그와 같은 세포이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 대상체의 체중 킬로그램 당 약 1 x 105, 약 2 x 105, 약 5 x 105 또는 약 1 x 106 또는 그와 같은 세포를 함유하며, 또는 상기 값들 중 임의의 2 개 사이의 범위 내의 값의 세포를 함유한다.
[0142] 세포 수와 관련하여, 일부 구체예에 있어서, 상기 값은 재조합 수용체 발현 (예를 들어, CAR 발현)세포의 수를 지칭하며; 다른 구체예에 있어서, 이들은 T 세포 또는 PBMC 또는 투여 된 총 세포의 수를 지칭한다.
[0143] 일부 관점에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량보다 크다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 대상체의 체중 킬로그램 당 약 1 x 106 개 이상의 세포, 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포, T 세포 및/또는 PBMC, 예를 들어, 대상체 체중 킬로그램 당 약 또는 적어도 약 2 x 106, 3 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 1 x 108 또는 1 x 109 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 세포의 수는 약 2 x 106 세포/대상체 체중 kg과 6 x 106 세포/kg 사이, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 5.0 x 106 세포/kg 사이이거나, 약 3.0 x 106 세포/kg 내지 약 4.0 x 106 세포/kg에 각각 포함이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량 또는 크기는 질병 부담 또는 이의 지표 및/또는 질병 또는 병태의 1 이상의 증상을 감소시키기에 충분하다. 일부 구체예에 있어서, 복용량은 예를 들어, 생존, 재발이 없는 생존 또는 무 사건 생존을 적어도 6개월 동안, 또는 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5년 동안 유도하기 위해 대상체의 생존을 개선시키는데 유효한 크기이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 대상체의 체중 당 투여되는 세포, 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포, T 세포 및/또는 PBMC 및/또는 그러한 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 수에 비하여 적어도 2배 이상이고, 5배, 10배, 50배, 또는 100배 또는 그 이상일 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 질병 부담, 종양 크기, 종양 부피, 종양 질량 및/또는 종양 하중 또는 벌크는 연속 복용 후에 첫번째 복용량 또는 연속 복용량의 투여 직전에 비하여 적어도 약 50, 60, 70, 80, 90 % 또는 그 이상 감소한다.
[0144] 다른 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 세포의 수보다 적다.
[0145] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량 후에 다중 연속 복용량은 투여되고, 그러한 추가적인 복용 또는 복용량은 연속 복용량의 투여 후에 투여된다. 일부 관점에 있어서, 대상체에게 추가적 복용량 (즉, 제3, 제4, 제5 등등)으로 투여된 세포의 수는 첫번째 복용량 및/또는 연속 복용량과 동일하거나 유사하다. 일부 구체예에 있어서, 추가적인 복용 또는 복용량은 이전 복용량보다 크다.
[0146] 일부 관점에 있어서, 첫번째 및/또는 연속 복용량의 크기는 예를 들어, 화학요법, 종양의 부하, 대량, 크기 또는 정도, 연장 또는 전이의 종류 단계 및/또는 독성결과를 나타내는 대상체의 가능성 또는 방형의 정도와 같은 대상체의 종양 부담, 예를 들어 CRS, 대식 세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응과 같은 이전 치료에 의한 대상체의 반응과 같은 1 이상의 표준에 기초하여 결정된다.
[0147] 일부 관점에 있어서, 첫번째 및/또는 연속 복용량의 크기는 대상체에서 질병 또는 병태의 부담에 의해 결정된다. 예를 들어, 일부 측면에서, 첫번째 복용량으로 투여 된 세포의 수는 첫번째 복용량 투여 직전에 대상체에 존재하는 종양 부하에 기초하여 결정된다. 일부 구체예에 있어서, 첫번째 및/또는 연속 복용량의 크기는 질병 부담과 반비례 관계에 있다. 일부 관점에 있어서, 큰 질병 부담과 관련하여, 대상체 적은 수의 세포, 예를 들어 대상의 체중 킬로그램 당 약 1 x 106 세포 미만으로 투여된다. 다른 구체예에 있어서, 보다 낮은 질병 부담과 관련하여, 대상체에게 대상체의 체중 킬로그램 당 약 1 x 106 보다 많은 세포, 예를 들어 약 2 x 106, 2.5 x 106 또는 3 x 106 세포/kg 보다 많은 수의 세포가 투여된다.
[0148] 일부 관점에 있어서, 연속 복용량으로 투여 된 세포의 수는 첫번째 복용량 투여 후 환자에게 존재하는 종양 부하에 기초하여 결정된다. 일부 구체예에 있어서, 예를 들어, 첫번째 복용량이 질병 부담을 감소시키거나 완화하거나 또는 특정 임계치 양 또는 수치 이하로, 예를 들어 독성 결과의 위험이 증가하는 경우, 연속 복용량이 높거나 큰 경우, 2.0 x 106, 2.5 x 106 또는 3.0 x 106 세포/kg 이상과 같은 체중 킬로그램 당 1 x 106 세포 (예를 들어, 전체 세포, 수용체 발현 세포, T 세포 또는 PBMC) 및/또는 첫 번째 용량보다 크다. 일부 구체예에 있어서, 치료 전에 형태학적 질환을 나타내고 분자 질환 (예를 들어, 최소 잔류 질환 (MRD))의 유무에 관계없는 완전한 완화 (예를 들어, 골수에서 5 % 미만의 아세포)를 보이는 경우, 예를 들어, 치료 후에 유동 세포 계수법 또는 정량적 PCR에 의해 검출되는 바와 같이 분자 적으로 검출 가능한 것과 같이 완화된 또는 감소된 질병 부담을 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 치료 전에 분자 질병을 나타내고 치료 후에 분자 질병을 나타내지 않으면 완화된 또는 감소된 질병부담을 나타낸다.
[0149] 다른 측면에서, 예를 들어 1 x 106보다 작고, 예를 들어, 첫번째 복용량이 종양 부담을 어느 정도 완화시키거나 또는 첫번째 복용량이 종양 부담의 검출 가능한 감소를 가져 오지 않는 제 1 투여 량과 같거나 더 낮은 것과 같이 연속 복용량으로 투여되는 세포의 수는 낮다. 경우에 따라서, 첫번째 복용량을 받은 후 대상체에서 종양 부담이 감소되지 않더라도, 연속 복용량이 높거나 클 수 있고 예를 들어, 체중 킬로그램 당 2.0 x 106, 2.5 x 106 또는 3.0 x 106 세포/kg 이상과 같은 1 x 106 세포 (예를 들어, 전체 세포, 수용체 발현 세포, T 세포 또는 PBMC) 및/또는 첫번째 복용량보다 크다.
[0150] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량은 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 중증 CRS (sCRS), 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 또는 그 이상 동안 적어도 약 38℃ 또는 적어도 또는 약 20 mg/dL의 CRP의 혈장 수준, 신경 독성 및/또는 신경 독성을 갖는 질환과 같은 독성 또는 독성의 결과의 가능성을 일으키지 않거나 완화하는 양의 세포를 포함한다. 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용량으로 투여된 세포의 수는 환자가 세포 투여 후 CRS, sCRS 및/또는 CRS-관련 결과와 같은 독성 또는 독성 결과를 나타낼 가능성에 기초하여 결정된다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 대상체에서의 독성 결과의 발전 가능성은 종양 부담에 기초하여 예측된다. 일부 구체예에 있어서, 방법은 복용량의 투여 전에 독성 결과 및/또는 질병 부담을 검출 또는 평가하는 것을 포함한다.
[0151] 일부 관점에 있어서, 연속 복용량으로 투여되는 세포의 수는 독성 또는 독성 결과의 수치, 예를 들어, 첫번째 복용량 투여 후 CRS 관련 결과에 기초하여 결정된다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량으로 투여되는 세포의 수는 낮고, 예를 들어, 체중 킬로그램 당 1 x 106 세포 미만, 예를 들어, 첫번째 복용량 투여 후 CRS 관련 결과와 같은 예를 들어, 대상체가 검출 가능한 수치의 독성 또는 독성 결과를 나타내는 경우, 첫번째 복용량과 같거나 더 낮을 수 있다.
[0152] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 예컨대 CRS 관련 지표 또는 독성의 다른 생화학적 지표가 첫번째 복용량의 투여 직전의 혈청 수치와 같은 기준선 또는 전처리 수치의 약 10배, 약 15배, 약 20배, 약 25배, 약 50배, 75배, 약 100배, 약 125배, 약 150배, 약 200배 또는 약 250배 또는 그 이상인 CRS-관련 결과와 같은 독성 또는 독성 결과를 나타내는 첫번째 복용량에 따른 시간에 연속 복용량을 투여하지 않는다.
[0153] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량에 따라, 독성 결과의 생화학적 지표 또는 다른 지표, 예를 들어, 첫번째 복용량의 투여 직전의 혈청 수치의 지표에 대해 약 10, 15, 20, 25, 50, 75 또는 100배 또는 그 이상과 같은 허용할수 있는 수치와 같은 주어진 수치 이상으로 CRS 지표의 혈청 수치가 증가하지 않고, 또는 허용가능한 수치 이상으로 증가하나, 허용가능한 수치로 또는 그 이하로 감소되면, 대상체에 연속 복용량이 투여된다. 일부 관점에 있어서, 지표가 첫번째 복용량의 투여의 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35일 이내 예를 들어 21일 이내의 및/또는 15-27일 이내, 21일 이내, 28일 이내 또는 35일 이내 복용량과 같은 허용가능한 수치 아래로 감소하면 연속 복용량은 투여되나, 지표의 수치가 그 기간내에 허용가능한 수치 아래로 감소하지 않으면 투여되지 않는다.
[0154] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 특정 질병 또는 병태를 가지는 대상체의 60, 70, 80, 90 또는 95%에서 이러한 현상이 일반적으로 가라앉거나 및/또는 덜 발생하기 쉬운 임계 창후와 같은, 첫번째 투여에 따라 사이토킨-방출 증후군 (CRS)의 발전에 의한 치료적 위험이 존재하지 않거나 지나가거나 가라앉으면 투여된다.
[0155] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량이 투여되는지 여부, 연속 복용량이 투여될 때 및/또는 연속 복용량의 투여된 세포의 수는 면역 반응의 존재, 부재 또는 정도 또는 대상체의 첫번째 복용량의 세포 또는 그에 의해 발현된 재조합 수용체에 대한 검출 가능한 면역 반응에 기초하여 결정되거나 결정된다. 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용량의 세포의 수용체를 발현하는 세포를 포함하는 연속 복용량은 검출가능한 숙주 선택성 면역 반응 또는 특정 수치, 단계 또는 정도로 설립되거나 도달하는 면역반응이 있는 대상체에게 투여되지 않을 것이다.
복용의 시간
[0156]일부 관점에 있어서, 연속 복용량의 시간은 첫번째 복용량의 개시로부터 연속 복용량의 개시까지 측정 된다. 다른 구체예에 있어서, 연속 복용량의 시간은 예를 들어 본 발명에 개시된 분할 복용량에 관하여, 복용량이 1일 이상, 예를 들어 2일 또는 3일 이상 복용되는 경우, 첫번째 복용량의 완료로부터 또는 첫번째 복용량 투여의 중간날부터 측정된다.
[0157] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 CRS를 나타내는 요인의 혈청 수치가 첫번째 복용량의 투여 직전의 대상체에서 상기 지표의 혈청 수치의 10배, 25배, 50 배 또는 100배 이하인 경우 대상체에게 투여된다.
[0158] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 CRS와 관련되거나 나타내는 혈청인자 또는 발열, 저산소증, 저혈압과 같은 치료적 신호 또는 증상 또는 첫번? 복용량의 투여에 따라 피크 수치에 도달하고 감소하기 시작하는 대상체의 신경학적 장애와 같은 CRS-관련 결과 후의 시점에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 투여에 따라 측정된 그러한 결과가 최고점 피크와 비교하여 감소하는 것이 관찰된 시점에 투여되거나, 수치가 투여 후에 도달한 결과의 최고 값 또는 수치에 따라 감소하거나 그 후의 시점에 투여된다.
[0159] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 CRS의 혈청 지표와 같은 독성 결과의 지표의 수치가 첫번째 복용량 직전의 지표의 수치에 25배 아래로 감소하는 때에 투여된다. 일부 관점에 있어서, 연속 복용량은 대상체가 CRS를 나타내지 않거나, 심각한 CRS를 나타내지 않는 때에 투여된다.
[0160] 일부 관점에 있어서, 연속 복용량은 환자의 질병의 부담이 첫번째 복용량 투여 직전의 질병의 부담과 비교하여 감소된 시점에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 만약 그들이 치료 전에 형태학적 질병을 나타내고 치료후에 분자 질환 (예를 들어, 검출할 수 있는, 예를 들어 유동세포계수법 또는 양적 PCR에 의해 검출되는 최소 잔류 질병 (MRD))의 유무와 관계없이 완전한 완화 (예를 들어, 골수에서 5% 미만의 아세포)를 나타내면 완화된 또는 감소된 질병 부담을 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 만약 그들이 치료전에 분자 질병을 나타내었고 치료 후에는 분자 질병을 나타내지 않는다면 완화된 또는 감소된 질병 부담을 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 질병부담 또는 대상체의 혈액, 다른 유체, 기관 또는 조직에서 질병 (예를 들어, 종양) 세포의 대량 또는 개수 또는 백분율과 같은 그들의 지표 또는 종양의 크기가 첫번째 복용량의 투여 후 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90% 또는 그 이상으로 감소되는 시점에 투여된다.
[0161] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 대상체의 질병 또는 병태가 첫번? 또는 전의 복용량에 대한 반응 감소에 따라 재발하지 않는 시점에 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 질병 부담의 감소는 대상체 또는 유체 또는 기관 또는 그들의 조직의 질병 세포의 하중 또는 수, 종양의 부피 또는 전이의 정도 또는 범위와 같은 1 이상 요인의 감소로 표시된다. 이러한 요인은 초기 치료 또는 투여에 따른 반응의 요인의 감소 후에 요인이 그 후에 증가하면 재발하는 것으로 간주된다. 일부 구체예에 있어서, 재발은 1 또는 1 이상의 요인 또는 일반적인 질병 부담에 있다. 일부 관점에 있어서, 현속 복용량은 대상체, 질병 부담 또는 그들의 요인이 첫번째 또는 이전의 투여에 따라 측정되거나 도달하는 최저 시점과 비교하여 재발하는 시점에 투여되나, 여전히 첫번째 복용량 직전의 시간에 비하여 더 낮다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 질병 부담 또는 이들을 나타내는 요인이 변화되지 않는 시점 예를 들어, 질병 부담이 증가하는 것을 방지하는 시점에 연속 복용량이 복용된다.
[0162] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 숙주 선택성 면역 반응이 검출되지 않거나, 성립되지 않거나, 특정 수치, 정도 또는 단계에 도달하지 않는 시점에 투여된다. 일부 관점에 있어서, 연속 복용량은 대상체의 기억 면역 반응이 일어나기 전에 투여된다.
[0163] 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용량의 투여 및 연속 복용량 사이의 시간은 약 9 내지 약 35일, 약 14 내지 약 28일 또는 15 내지 27일이다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 후에 약 14일 후 이상 및 약 28일 후 미만의 시점에 투여한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 투여후에 약 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일 또는 28일 또는 그 이하의 시점에 투여된다. 일부 관점에 있어서, 첫번째 및 연속 복용량 사이의 시간은 약 14일, 약 17일 또는 약 21일이다.
[0164] 일부 구체예에 있어서, 추가적 또는 후속 복용 또는 복용량, 예를 들어 추가적 연속 복용량은 연속 복용량의 투여 후에 투여된다. 일부 관점에 있어서, 추가적인 연속 복용 또는 복용량은 이전 연속 복용량과 같은 이전 복용량의 투여후에 적어도 약 14일 28일 미만인 때 투여된다. 일부 구체예에 있어서, 예시적은 복용 요법은 재조합 수용체 발현 세포 (예를 들어, CAR 발현 T 세포 같은, CAR 발현 세포)의 투여 계획을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 추가적 복용량은 이전 복용량 후에 약 14일 미만 예를 들어 이전 복용량 후에 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13일 미만인때 투여된다. 일부 구체에에서, 복용량은 이전 복용량 후 약 14일 미만인 때 투여되지 않고 및/또는 복용량은 이전 복용량 후에 약 28일 이상인 때 투여되지 않는다.
[0165] 임의의 구체예에 있어서, 일부의 경우의 방법은 첫번째 또는 이전 복용량 및 연속 복용량의 투여를 포함하고, 다른 경우에는 이미 첫번째 또는 이전 복용량을 받은 대상체에 연속 복용량의 투여를 포함하지만, 그 자체의 첫번? 또는 이전 복용량의 투여를 포함하지는 않는다. 따라서, 일부의 경우 방법은 재조합 발현 예를 들어, CAR 발현 세포의 감량 복용량과 같은 복용량을 이미 받은 대상체에 통합 연속 복용량의 투여에 의한 것과 같은 통합 치료의 투여를 포함한다. 일부 관점에 있어서, 수용체 발현 예를 들어, CAR 발현 세포의 이전 복용량은 대상체에서 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분하여, 연속 복용량의 세포 투여의 효능 및/또는 안정성은 첫번? 복용량을 받은 대상체 없이 연속 복용량을 투여하는 것에 비하여 향상된다.
[0166] 일부 구체예에 있어서, 질병 부담, 종양 크기, 종양 부피, 종양 질량 및/또는 종양 하중 또는 대량은 연속 복용에 따라 첫번째 복용량 또는 연속 복용량의 투여 직전과 비교하여 적어도 또는 약 50, 60, 70, 80, 90% 또는 그 이상까지 감소된다.
IV. 독성 및 독성 결과
[0167] 일부 구체예에 있어서, 예를 들어, 첫번째 복용량에 따른 총 세포의 수와 같거나 유사한 투여와 비교하여, 이미 첫번째 복용량을 받은 대상체가 없는 연속 복용량의 투여, 첫번째 복용량과 비교하여 다른 시점의 연속 복용량의 투여 및/또는 1 이상 복용량의 다른 양의 투여와 같은, 복용량의 시점 및 양은 독성 또는 결과 또는 그들의 증상을 감소시키거나 방지한다.
[0168] 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포의 치료와 같은, 선택성 T 세포 치료의 투여는 사이토카인 방출 증후군 및 신경 독성과 같은 독성 효과 또는 결과를 유도할수 있다. 일부 실시예에서, 그러한 효과 또는 결과는 관찰된 독성의 기초가 되는 순환하는 사이토카인의 높은 수준과 평행하다.
[0169] 일부 구체예에 있어서, 제공되는 방법은 예를 들어, 단일 복용량, 이전에 첫번째 복용량을 받은 대상체가 없는 연속 복용량의 투여, 첫번째 복용량의 다른 시점에서의 연속 복용량의 투여 및/또는 1 이상의 복용량의 다른 양의 투여의 총 세포수와 같거나 유사한 투여와 비교하여 사이토카인 방출 증후군의 지표이거나 이와 관련된 증상 또는 결과와 같은 더 낮은 정도의 독성, 독성결과 또는 증상, 독성 촉진 프로파인, 요인 또는 특성을 나타내는 특징을 유도하도록 설계된다.
[0170] 일부 관점에 있어서, 독성 결과는 사이토 카인 방출 증후군 (CRS) 또는 중증 CRS (sCRS)이거나 이와 관련되거나 이를 나타낸다. CRS 예를 들어, sCSR는 일부의 경우 입양 T 세포 치료 및 다른 생물학적 제제의 대상체에의 투여 후에 발생할 수 있다. Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); 및 Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78을 참조하라.
[0171] 전형적으로, CRS는 예를 들어, T 세포, B 세포, NK 세포, 단핵 세포 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과장된 전신 면역 반응에 의해 유발된다. 그러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 많은 양의 염증성 매개체를 방출할 수 있다. 사이토카인은 급성 여증성 반응을 유발하거나 미세 혈관 누출, 심부전 또는 사방을 초래할 수 있는 내피 기관 손상을 유발할 수 있다. 중증의, 생명을 위협하는 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전 또는 파종된 혈관내 응고로 이어질 수 있다. 다른 중증의, 생명의 위협하는 독성에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다.
[0172] CRS는 항 IL-6 치료, 예를 들어, 항 IL-6 항체, 예를 들어, 토실리주맙 또는 항생제와 같은 항-염증 요법을 사용하여 치료할 수있다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 첫번째 투여 후에 이러한 요법으로 치료되고, 연속 복용량은 CRS-관련 증상이 완화되거나 그러한 치료 후 허용 가능한 수준 미만으로 줄어들거나 또는 감소되는 경우에만 투여된다.
[0173] CRS의 결과, 징후 및 증상은 공지되어 있으며 본 발명에 개시된 것들을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 특정 복용량 요법 또는 투여가 소정의 CRS-관련 결과, 징후 또는 증상에 영향을 미치지 않거나 영향을 미치는 경우, 특정 결과, 징후 및 증상 및/또는 그들의 양 또는 정도가 특정될 수 있다.
[0174] CAR 발현 세포를 투여하는 관점에 있어서, CRS는 전형적으로 CAR을 발현하는 세포의 주입 후 6 내지 20일째에 발생한다. Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-7를 참조하라. 경우에 따라, CRS는 CAR T 세포 주입 후 6일 미만 또는 20일 이상인때 발생한다. CRS의 발병 및 시기는 주입시의 기준 사이토카인 수치 또는 종양 부담와 관련될 수 있다. 일반적으로, CRS는 인터페론 (IFN) -γ, 종양 괴사 인자 (TNF) -α 및/또는 인터루킨 (IL) -2의 혈청 수치 상승을 포함한다. CRS에서 빠르게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8 및 IL-10이다.
[0175] 일부 관점에 있어서, 예를 들어, 단일 복용량과 동일 또는 유사한 총 세포 수의 투여, 이전에 첫번째 복용량을 받은 대상체가 없는 연속 복용량의 투여, 첫번째 복용량과는 다른 시간에 연속 복용량의 투여 및/또는 1 이상의 복용량으로 상이한 양의 투여와 비교하여, 독성, 결과, 증상, 프로파일, 요인 또는 특성의 낮은 정도가 본 방법의 투약 요법에 의해 세포가 투여되는 대상에서 관찰된다. 예를 들어, 일부 구체 예에서, 첫번째 복용량을 대상체에게 투여한 후, 대상체는 대상체에 더 많은 수의 세포를 투여하는 것과 비교하여, 더 낮은 CRS-관련 결과의 정도 및/또는 더 낮은 CRS를 나타내는 염증성 사이토카인 또는 요인의 혈청 수치를 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 대상체에 연속 복용량의 투여 후, 첫번째 복용량을 받은 대상체가 아닌 대상체에세 연속 복용량을 투여하는 것과 비교하여, 또는 첫번째 및 연속 복용량을 단일 복용량으로 투여하는 것과 비교하여, 또는 특정된 시간 주기 이전 또는 이후의 시간에 연속 복용량은 투여하는 것에 비교하여, 대상체는 더 낮은 CRS-관련 결과의 정도 및/또는 더 낮은 염증성 사이토카인의 혈청 수치 또는 CRS를 나타내는 결과를 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 첫번? 복용량 투여 후 및/또는 연속 복용량 투여 후에 CRS 또는 심각한 CRS를 나타내지 않는다.
[0176] CRS와 관련된 예시적인 결과는 발열, 경직, 오한, 저혈압, 호흡 곤란, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 뇌증, ALT/AST 상승, 신부전, 심장 장애, 저산소증, 신경 장애 및 사망을 포함한다. 신경학적 합병증으로는 섬망, 발작 같은 활동, 혼란, 단어 찾기 어려움, 실어증 및/또는 둔감해지는 것이 포함된다. 다른 CRS-관련 결과에는 피로, 메스꺼움, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 장애 및 신부전이 있습니다. 　일부 관점에 있어서, CRS는 혈청-페리틴, d-다이머, 아미노기전이효소, 젖산탈수소효소 및 트리글리세라이드와 같은 1 이상의 요인의 증가, 또는 저섬유소원혈증 또는 간비종대와 관련이 있다.
[0177] 일부 구체예에 있어서, CRS와 관련된 결과는 다음 중 1 이상을 포함한다: 지속 온도, 예를 들어, 2일 이상, 예를 들어, 3일 이상, 예를 들어, 4일 이상 또는 적어도 3일 연속 동안의 특정 온도의 열, 예를 들어, 섭씨 38도 또는 섭씨 38도 이상; 약 섭씨 38도 이상의 열; 예를 들어, 2 이상의 사이토카인 (예를 들어, 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙트랄킨 및 IL-5 및/또는 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)로 이루어진 군중에서 적어도 2개)의 전처리 수치와 비교하여 75 또는 75 이상인 최대 배수의 변화 또는 최대 배수의 변화와 같은, 예를 들어, 그러한 싸이토카인 중 1 이상에서 약 250 이상 또는 그 이상인 사이토카인의 상승; 및/또는 (예를 들어, 1 이상의 정맥에 작용하는 혈압계에 의해 측정된 바와 같은) 저혈압과 같은 독성의 1 이상의 치료 징후; 저산소증 (예를 들어, 약 90 % 미만의 혈장 산소 (PO2) 수치); 및/또는 1 이상의 신경 질환 (정신 상태 변화, 혼란 및 발작을 포함하는).
[0178] 예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인 및 CRS와 관련된 다른 요인을 포함하는 1 이상의 요인의 증가된 또는 높은 혈청 수치를 포함한다. 예시적인 결과는 1 이상의 그러한 요인의 합성 또는 분비의 증가를 더 포함한다. 이러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 선천성 면역 세포 또는 B 세포와 같은 T 세포와 상호작용하는 세포에 의한 것 일수있다.
[0179] 일부 구체예에 있어서, CRS- 관련 혈청 요인 또는 CRS-관련 결과는 인터페론 감마 (IFN-γ), TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra 및/또는 케모카인, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 대식세포 염증성 단백질 (MIP) -1, 종양 괴사 인자 알파 (TNFα), IL-6, 및 IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프랙트랄카인 및/또는 IL-5 를 포함하는 염증성 사이토카인을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 요인 또는 결과는 C 반응성 단백질 (CRP)을 포함한다. CRS의 초기 및 쉽게 측정할 수 있는 위험 요인이 되는 것 외에도, CRP는 세포 확장을 위한 표식이다. 일부 구체예에 있어서, 15 mg/dL 이상과 같은 높은 수치의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖는다.　일부 구체예에 있어서, 높은 수치의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖지 않는다. 일부 구체예에 있어서, CRS의 측정은 CRP의 측정 및 CRS를 나타내는 또 다른 요인을 포함한다.
[0180] 일부 구체예에 있어서, 1 이상의 염증성 사이토카인 또는 케모카인이 CAR 치료 전, 동안 또는 후에 모니터링된다. 일부 관점에 있어서, 1 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, s IL-2R α, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF) 또는 대식세포 염증 단백질 (MIP)을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, IFN-γ, TNF-α 및 IL-6이 모니터링된다
[0181] 어떤 환자가 sCRS를 발병할 위험이 더 높을지를 예측하기 위해 CRS의 발병과 상관 관계가 있는 것으로 보이는 CRS 기준이 개발되었다 (Davilla 등, Science Translational Medicine. 2014; 6 (224): 224ra25 참조).
요인은 발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 7개의 사이토카인 (IFNγ, IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙트랄카인 및 GM-CSF)의 세트와 같은 염증성 사이토카인의 증가 된 혈청 수치를 포함하고, 이의 치료에 의해 유발된 상승이 전처리 종양 부담 및 sCRS 증상 모두와 매우 상관관계가 있다. CRS의 진단 및 관리에 관한 다른 지침이 공지되어 있다 (Lee et al., Blood. 2014; 124 (2) : 188-95 참조). 일부 구체예에 있어서, CRS 등급을 반영하는 기준은 하기 표 1에 기재되어 있다.
Figure pct00001
[0182] 본 발명에서 사용된 바와 같이, 대상체는 투여 후, 그의 세포 치료 또는 세포의 복용량의 투여에 반응하여 또는 그에 이차적으로 "중증 CRS"( "sCRS")를 발병하는 것으로 간주되고, 대상체는 다음을 나타낸다: 　(1) 최소 3일 동안 섭씨 38도 이상의 발열; (2) 다음 중 하나를 포함하는 사이토카인 상승, (a) 투여 직후의 수치과 비교하여 7개의 사이토카인의 다음 그룹 중 2 이상에 대한 최대 배수 변화가 75 이상인 것: 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙트랄카인 및 IL-5 및/또는 (b) 투여 직후의 수치와 비교된 7개의 사이토카인의 다음 그룹 중 1 이상에 대해 최소 250배의 최대 배수 변화: 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙트랄카인 및 IL-5; 및 (c) 저혈압 (1 이상의 정맥에 작용하는 혈압계가 필요한) 또는 저산소증 (PO2< 90%) 또는 1 이상의 신경 장애 (정신 상태 변화, 둔감 및/또는 발작)과 같은 독성의 1 이상의 치료적 징후. 일부 구체예에 있어서, 중증 CRS는 표 1에 기재된 바와 같이 3 이상의 등급을 갖는 CRS를 포함한다.
[0183] 일부 구체예에 있어서 CRS는 (1) 지속 발열 (3 일 동안 적어도 38 ℃의 발열) 및 (2) 적어도 또는 약 20 mg/ml의 CRP의 혈청 수치의 조합을 포함한다.
[0184] 일부 구체예에 있어서, CRS는 2 이상의 혈압상승제의 사용이 요구되는 저혈압 또는 기계적 호흡기를 요구하는 호흡 부전을 포함한다.
[0185] 다양한 결과를 측정하거나 검출하는 방법이 특정될 수 있다.
[0186] 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용량의 투여에 앞서, 첫번째 복용량의 투여 다음 및 연속 복용량의 투여 전 또는 연속 복용량의 투여 다음에, 대상체에서 CRS관련 결과가 평가된다. 일부 구체예에 있어서, 독성 결과의 수치, 예를 들어, CRS관련 결과, 예를 들어, CRS 지표의 혈청 수치는 ELISA에 의해 측정된다. 일부 구체예에 있어서, CRP의 발열 및/또는 수치는 측정 될수 있다. 일부 구체예에 있어서, 발열 및 CRP >15 mg/dL 를 갖는 대상체는 중증 CRS를 발병하는 고위험으로 간주될 수 있다.
[0187] 일부 구체예에 있어서, 독성 결과, 독성 또는 증상은 투여 후 특정 시점에서 측정된다. 일부 구체예에 있어서, 독성 결과, 예를 들어, CRS, 중증 CRS 및/또는 CRS 관련 결과 또는 혈청 수치, 또는 결과 또는 혈청 수치의 낮은 정도는 24 시간째에, 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일째에, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 일의 기간동안 측정된다. 일부 구체예에 있어서, CRP는 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9일째에 측정된다. 일부 구체예에 있어서, 사이토카인과 같은 요인 또는 다중 요인의 배수 변화는 치료전의 수치와 치료후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14, 또는 20 또는 21일째 사이의 배수 변화로 측정된다.
[0188] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여시에, CRS 관련 결과의 수치는 피크 레벨의 50%를 넘지 않으며, 피크 레벨의 40%를 넘지 않으며, 피크 레벨의 30%를 넘지 않으며, 피크 레벨의 20%를 넘지 않으며, 피크 레벨의 15%를 넘지 않으며, 피크 레벨의 10%를 넘지 않으며, 피크 레벨의 5%를 넘지 않으며, 또는 첫번째 복용량의 투여 직전의 수치이거나 비슷하거나 그 이하이고 및/또는 기준선 이거나 비슷하거나 그 이하이다.
[0189] 일부 관점에 있어서, 연속 복용량의 투여시에, CRS 관련 결과의 수치는 첫번째 복용량의 투여 직전 수치의 10배를 넘지 않는다.
[0190] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여 후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14일 째에 대상체의 CRS 관련 결과는 검출가능하지 않거나 첫번째 복용량을 투여받은바 없는 대상체가 연속 복용량을 투여받는 방법 및/또는 연속 복용량이 방법에 따라 특정된 첫번째 및 연속 복용량 사이 시간보다 일찍인 시점에 주어지는 방법에 비하여 감소된다.
[0191] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여 후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14일 째에 대상체의 CRS 관련 결과는 검출가능하지 않거나 대상체에 세포, T 세포, 재조합 수용체를 발현하는 세포 또는 PBMC수의 2배, 5배, 10배 또는 100배의 복용량을 투여한 후와 비교하여 감소된다.
[0192] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여 후 대상체의 시간에 따른 CRS를 나타내는 인자의 CRS 관련 결과 또는 혈청 수치에 대한 그래프 면적 (AUC)은 대상체가 첫번째 복용량을 투여받지 않고 연속 복용량을 투여받는 방법 및/또는 첫번째 및 연속 복용량의 세포를 단일 복용량으로 투여하는 방법 및/또는 방법에 의해 특정 된 첫번째 및 연속 복용량 사이의 시간보다 더 빠른 시간에 복용량이 주어지는 방법에 비하여 더 작다.
[0193] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 투여 후 대상체에서 CRS를 나타내는 인자의 CRS 관련 결과 또는 혈청 수치에 대한 그래프 면적 (AUC)은 세포, T 세포, 재조합 수용체를 발현하는 세포 또는 PBMC의 수의 2배, 5배, 10배 또는 100배의 복용량이 대상체에 투여된 후에 비하여 더 작다.
[0194] 일부 관점에 있어서, 독성 결과는 신경 독성이거나 이와 관련된다. 일부 구체예에 있어서, 신경 독성의 치료적 위험과 관련된 증상에는 혼란, 섬망, 표현 실어증, 둔감, 근육간대경련, 무기력, 정신 상태의 변화, 경련, 발작과 같은 활동, 발작 (입양으로 뇌전도 검사 [EEG]로 확인된), 베타 아밀로이드 (Aβ) 수치 상승, 글루타메이트 수치 상승 및 산소 라디칼 수치 상승이 포함된다. 일부 구체예에 있어서, 신경 독성은 중증도에 기초하여 등급화된다 (예를 들어, 등급 1-5를 사용함 (예를 들어 Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (2010 년 12 월)을 참조; National Cancer Institute-Common Toxicity Criteria 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)을 참조)).
[0195] 일부 경우, 신경학적 증상은 sCRS의 가장 초기 증상일 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 신경학적 증상은 세포 치료 주입 후 5 내지 7일 후에 시작되는 것으로 보인다. 일부 구체예에 있어서, 신경학적 변화의 기간은 3 내지 19일 범위 일 수있다. 경우에 따라, 신경학적 변화의 회복은 sCRS의 다른 증상이 해소된 후에 발생합니다. 일부 구체예에 있어서, 신경학적 변화의 시간 또는 분해 정도는 항-IL-6 및/또는 스테로이드(들)로 치료하는 것으로 촉진되지 않는다.
[0196] 본 발명에서 사용된 바와 같이, 만약, 투여 후에, 대상체가 자가-치료 (예를 들어, 입욕, 옷 입고 벗기, 먹이기, 화장실 사용, 약물 복용)를 제한하는 다음과 같은 증상을 나타낸다면, 대상체는 세포 치료법의 투여 또는 그의 세포 복용량에 반응하여 또는 이에 이차적으로 "중증 신경독성"을 나타내는 것으로 간주된다: 1) 말초 운동 신경의 염증 또는 퇴화를 포함하는 말초 운동 신경 병증의 증상; 2) 비정상적이고 불쾌한 감각, 신경통에 의한 감각 지각의 왜곡과 같은, 신경 또는 신경계를 따른 강한 통증 감각 및/또는 감각 이상과 같은, 자극이 없는 때의 따끔거림, 저림, 압력, 추위 및 보온의 비정상적인 피부 감각에 의한 감각 뉴런의 기능장애와 같은 말초 감각 신경의 염증 또는 퇴화, 감각이상을 포함하는 말초 감삭 신경 병증의 증상. 일부 구체예에 있어서, 중증 신경독성은 표 2에 기재된 바와 같이 등급 3 이상의 신경독성을 포함한다.
Figure pct00002
[0197] 일부 구체예에 있어서, 방법은 다른 방법과 비교하여 신경독성과 관련된 증상을 감소시킨다. 예를 들어, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 다른 방법으로 치료된 대상체와 비교하여 사지의 약화 또는 저림, 기억력, 시력 및/또는 인지력 상실, 통제할수 없는 강박관념 및/또는 강박 행동, 망상, 두통, 운동 통제의 상실을 포함하는 인지 및 행동 문제, 인지 저하 및 자율 신경계 기능 장애 및 성기능 장애와 같은 신경독성의 증상이 감소될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 말초 운동 신경병증, 말초 감각 신경병증, 감각장애, 신경통 또는 감각이상과 관련된 증상이 감소될 수 있다.
[0198] 일부 구체예에 있어서, 방법은 뉴런의 죽음과 같은 신경계 및/또는 뇌의 손상을 포함하는 신경독성과 관련된 결과를 감소시킨다. 일부 관점에 있어서, 방법은 베타 아밀로이드 (Aβ), 글루타메이트 및 산소 라디칼과 같은 신경독성과 관련된 인자의 수치을 감소시킨다.
[0199] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용후에 연속 복용량이 투여된 대상체는 첫번째 복용량의 부재하에 연속 복용량의 투여, 첫번째 및 두번째 복용량의 세포를 단일 복용량으로 투여 및/또는 방법에의해 특정된 첫번째 및 연속 복용량 사이의 시간보다 이른 시점에 연속 복용량의 투여에 비해 신경독성과 관련된 증상, 결과 또는 요인을 감소시킨다.
Ⅴ. 전달된 세포에 대한 숙주 면역 반응
[0200] 일부 구체예에 있어서, 1 이상의 복용량은 예를 들어, 연속 복용량(들)은 대상체의 형질전환 수용체 또는 세포에 대한 면역 반응 예를 들어, 적응성 또는 특정 면역 반응이 존재하지 않거나, 검출가능하지 않거나 또는 특정 수치 이상으로 검출가능하지 않은 때에 투여된다. 전이유전자에 대한 특정 면역 반응의 존재 또는 정도는 일반적으로 수용체, 예를 들어, 세포에 의해 발현된 CAR 또는 형질 전환 CAR의 면역원성 및/또는 대상체가 세포에 노출된 시간과 관련되어 있다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 면역 반응, 예를 들어 수용체에 대한 특이적인 체액성 및/또는 세포 매개 면역 반응이 대상체의 수용체 발현 세포에 대한 첫번째 노출 후 28일, 35일 또는 42일 전에 검출되지 않는다. 따라서, 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체 또는 세포에 대한 면역 반응, 적응성 또는 특이적 면역 반응, 검출가능한 면역 반응 및/또는 기억 반응이 대상체에서 발생하기 전에 연속 복용량이 투여된다. 이와 관련하여, 연속 복용량의 세포가 대상체내에서 확장 및/또는 지속되는 능력은 연속 복용량이 이전 또는 첫번째 복용량과 비교하여 나중에 주어진 다른 방법과 비교하여 개선되었다.
[0201] 방법은, 예를 들어 첫번째 또는 연속 복용량의 투여 후 및 연속 또는 다음 연속 복용량의 투여 전에, 그러한 면역 반응 또는 그의 지표의 존재 또는 부존재 또는 수치의 검출을 포함할 수 있다.
[0202] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량을 투여할 시기 및/또는 투여 여부의 결정은 대상체가 그러한 면역 반응 또는 검출가능한 그의 정보, 예를 들어 세포 또는 재조합 수용체 예를 들어 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 특이적인 검출가능한 특이적이거나 적응성 숙주 면역 반응을 나타내는지 여부 및/또는 그러한 반응이 특정 추시 이상으로 검출되는지 여부에 달려있다. 일부 구체예에 있어서, 그러한 반응이 검출되면, 대상체는 연속 복용량을 투여받지 않는다.
[0203] 일반적으로, 연속 복용량은 대상체가 특이적이거나 적응성있는, 예를 들어 체액성 또는 세포 매개성의 수용체, 예를 들어 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현되는 CAR에 대한 면역 반응을 나타내지 않거나, 그러한 반응 또는 그의 지표를 검출가능한 수치 또는 허용가능한 수치 이상으로 나타내지 않는 시점에 투여된다. 일부 관점엥서, 연속 복용량의 투여시, 대상체는 초기 복용량이 더 클때와 비교하여 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대한 감소된 체액성 또는 세포-매개성 면역 반응을 나타낸다.
[0204] 일부 구체예에 있어서, 숙주 면역 반응은 채액성 면역 반응이거나 이를 포함한다. 체액성 면역 반응은 대상체의 혈청, 다른 체액 및/또는 장기 또는 조직의 세포 또는 그에 의해 발현된 수용체에 특이적인 항체의 존재에 의해 나타낼 수 있다. 일부 구체예에 있어서, IgM 또는 IgG, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및/또는 IgG4와 같은 특정 아이소타입의 항체가 존재한다; 일부 구체예에 있어서는 IgE를 포함한다.
[0205] 일부 구체에에서, 면역 반응은 세포-매개 요소이거나 이를 포함한다. 세포 매개 반응은 재조합 수용체 또는 세포의 1 이상의 항원 결정부를 T 세포 수용체를 통해 특이적으로 인식하는 세포, 예를 들어 T 세포, 예를 들어 헬퍼 또는 세포독성 T 세포의 존재에 의해 나타낼 수 있다.
[0206] 일부 구체예에 있어서, 면역 반응은 초기 면역 반응이다; 일부 구체예에 있어서, 면역 반응은 기억 반응이다.
[0207] 상기 구체예 중 어느 하나에서, 검출 가능한 면역 반응은 특정 항원 및 세포에 대한 특이 적 면역 반응을 평가하기위한 다수의 공지 된 방법 중 임의의 방법에 의해 검출 가능한 양을 의미한다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 항원 결정부에의 결합과 같은, 세포상에 존재하는 항원에 특이적으로 결합하고 및/또는 이를 중화시키는 항체의 존재를 검출하기 위해 ELISpot, ELISA, 또는 세포-기반 항체 검출 방법, 예를 들어, 대상체의 혈청에 대한 유동세포계수법을 수행하여, 특정 유형의 면역 반응은 검출 가능하다. 일부의 그러한 분석에서, 검출 된 항체의 아이소타입이 결정되고, 응답 유형 및/또는 반응이 기억반응인지 여부를 나타낼 수 있다.
[0208] 일부 구체예에 있어서, 특이적인 면역 반응은 재조합 수용체의 항원 결정부에에 특이적으로 결합하고 이에 대한 세포독성을 유도하는 CD8+ T 세포의 검출을 위한 세포독성 T-림프구 (CTL) 분석법 및/또는 혼합된 림프구 반응, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하는 조사된 세포를 자극세포로 사용하는 것에 의해 검출될수 있다.
[0209] 일부 관점에 있어서, 검출가능한 면역 반응은 비코팅된 웰 또는 대조군 펩타이드로 코팅된 웰과 같은 대조군 시료의 수치보다 높거나 현저하게 높은 위의 방법에 의해 검출된 것이거나, 재조합 수용체 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 세포로 처리하기 전에 대상체로부터의 전처리 혈청 또는 혈액 시료에 기초하여 검출 된 수치이다.
[0210] 일부 관점에 있어서, 이러한 숙주 면역 반응 및/또는 그의 양, 정도 또는 범위의 존재 또는 부재는 예를 들어 첫번째 복용량 또는 연속 복용량의 투여 후에 검출되거나 측정된다.
[0211] 체액성 면역 반응은 결합 평가, 면역평가 및 세포 기반 평가를 포함하는 특정 항원 또는 세포에 특이적인 항체의 검출을 위한 다수의 공지된 평가 중 임의의 평가에 의해 검출될 수 있다. 평가에는 중화 항체 평가과 같이, 항원과의 결합시 특정 효과자 기능을 수행하는 능력과 같은, 항체의 특정 기능의 존재 또는 부존재를 평가하기 위해 고안된 것들이 포함될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 항원-특이적 항체, 예컨대 중화 항체와 같은 체액 성 면역 반응의 결과는 세포-기반 검정법, 예를 들어, 재조합 수용체 (및 대조군 세포)를 발현하는 세포로 대상체로부터의 전처리 및 사후 처리 세포를 배양하고 항원 특이적인 결합 및/또는 중화 결과와 같은 다른 결과, 예를 들어 유동세포계수법 또는 효소적 평가를 사용하여 검출된다. 일부 구체예에 있어서, ELISA 및/또는 ELISpot 분석은 CAR과 같은 재조합 수용체에 특이적인 항체 및 수용체의 일부를 나타내는 개별 펩타이드를 사용하는 것과 같은 공지된 기술을 사용하여 매핑된 항원 결정부를 검출 및 정량하는데 사용된다. 예를 들어, Jensen et al. Biol Blood Marrow Transplant. 2010 9월; 16(9): 1245-1256를 참조하라. 일부 구체예에 있어서, 검출된 항체의 아이소타입은, 예를 들어 특정 아이소타입, 예를 들어, 인간 아이소타입에 특이적인 검출 항체를 사용하여 평가된다.
[0212] 세포 및/또는 수용체에 대한 세포의 또는 세포 기반 면역 반응은 다수의 공지된 기술 중 임의의 것을 사용하여 검출 및/또는 측정될 수 있다. 이러한 기술은 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 및/또는 투여된 세포에서 항원 결정부에 특이적으로 결합하고 그에 따른 세포독성을 유도하는 CD8+ T 세포의 검출을 위한 세포독성 T 림프구 (CTL) 평가을 포함할 수 있다. 　일부 구체예에 있어서, 평가는 응답 세포로서 PBMC 또는 혈액 또는 다른 기관 또는 조직으로부터의 다른 숙주 유래 세포, 및 재조합 수용체를 발현하도록 유도된 세포, 예를 들어, 자극 세포로서 CAR을 발현하는 조사된 T 세포를 사용하는 것과 같은 혼합된 림프구 반응이다. 자극 세포는 일반적으로 자기유래성이며, 대상체에게 투여된 동일한 세포일 수 있으며, 조사될 수 있다. 대상 형질 도입 유전자를 발현하지 않는 비형질도입 세포 또는 세포는 대조군 시료의 자극 세포 대신에 음성 대조군으로서 사용될 수 있다. 마찬가지로, 전처리 시점 또는 다른 대상체로부터의 응답 세포 시료가 대조 시료에서 사용될 수 있다. 일부 관점에 있어서, 그러한 분석은 투여된 세포에서 또는 세포 내에서 존재하는 항원을 특이적으로 인식하거나 세포독성 반응을 유도하는 대상체에 존재하는 세포독성 T 세포를 검출하기 위해 크롬 방출 분석을 사용하여 항원 특이적 세포 용해와 같은 1 이상의 효과자 기능을 수행하는 숙주 세포의 능력을 평가한다. 일부 구체예에 있어서, PBMC와 같은 말초 혈액 세포는 세포의 투여 전후에 대상체로부터 얻어지고, 재조합 수용체를 발현하도록 변형된 자가 T 세포를 사용하는 세포 용해 분석과 같은 분석에서 각각 사용되며, 이는 일반적으로 조사된다. 특정 용해는 수용체 특이적 세포-매개 면역 반응의 존재를 나타낸다. 항원 결정부 맵핑은 재조합 수용체의 일부를 나타내는 펩타이드 패널을 사용하여 수행될 수 있다.
예를 들어, Riddell et al., Nature Medicine 2, 216-223 (1996); Lamers, Blood 2011 117 : 72-82. HLA 테트라머 결합 분석은 항원 특이적 T 세포의 열거에 사용될 수 있다. 일부 관점에 있어서, 림프구 증식 분석법 (lymphoproliferative assays, LPA) 및/또는 ELISA 및/또는 유동세포계수법에 의한 세포내 염색 및 평가와 같은 분비된 사이토카인을 평가하기 위한 분석법이 전이유전자 특이 CD4+ T 세포의 검출에 사용된다.
[0213] 일부 구체예에 있어서, 방법은 수용체에 대한 항체, 예를 들어 항CAR 항체의 수치를 유도하는 것을 방지하거나 감소시킨다. 예를 들어, 항수용체, 예를 들어 항CAR, 항체의 항체 역가는, 예를 들어, ELISA에 의한 대상체의 혈청에서 측정된 바와 같이 연속 복용량을 투여한 후에 연속 복용량이, 예를 들어 재발후와 같은 늦은 시점과 같은 첫번째 복용량의 투여에 비하여 다른 시간에 투여되는 방법에 비하여 감소된다. 따라서, 일부 구체예에 있어서, 방법은 숙주 면역 반응을 예방하거나 감소시킴으로써 그렇지 않으면 투여 된 세포의 팽창을 제거하거나 예방하여 투여된 세포에 대상체의 노출을 증가시킴으로써 효능을 향상시킨다.
VI. 질병 부담
[0214] 예를 들어, 1 이상의 복용량의 투여는 일반적으로 대상체에서 질병 또는 병태의 팽창 또는 부담을 감소시키거나 예방한다. 예를 들어, 질병 또는 병태가 종양인 경우, 방법은 일반적으로 종양 크기, 대량, 전이, 골수의 아세포 또는 분자적으로 검출 가능한 암의 백분율을 감소시키고 및/또는 예후 또는 생존 또는 종양 부담과 관련된 다른 증상을 개선시킨다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용량의 투여는 첫번째 또는 전의 복용 이후의 부담 및/또는 재발의 감소와 관련하여 시기가 결정된다.
[0215] 질병 부담은 대상체의 또는 종양의 장기 또는 조직 또는 예를 들어, 전이를 나타내는 다른 위치와 같은 대상의 장기, 조직 또는 체액의 질병의 세포의 총 수를 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 특정 혈액 악성 종양의 관점에 있어서 혈액 또는 골수에서 검출 및/또는 정량화될 수 있다. 질병 부담은, 일부 구체예에 있어서, 종양의 질량, 전이의 수 또는 범위 및/또는 골수에 존재하는 아세포의 백분율을 포함할 수 있다.
[0216] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 백혈병을 갖는다. 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수의 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 예를 들어, 광학 현미경으로 검출 된 바와 같이, 골수에서 5 % 이상의 아세포가 있는 경우, 대상체는 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 골수에 5 % 미만의 아세포가 존재하는 경우, 대상체는 완전한 또는 치료적 완화를 나타낸다.
[0217] 일부 구체예에 있어서, 대상체는 완전한 완화를 나타낼 수 있지만, 형태학적으로 검출할 수 없는 (광학 현미경 검사 기술에 의한) 잔류 백혈병 세포가 적은 비율로 존재한다. 대상체가 골수에서 5 % 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출가능한 암을 나타내는 경우, 대상체는 최소 잔류 질병 (MRD)을 나타낸다고 할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 분자적으로 검출가능한 암은 소수의 세포를 민감하게 검출할 수 있는 다양한 분자 기술 중 임의의 방법을 사용하여 평가할 수 있다. 일부 관점에 있어서, 이러한 기술은 독특한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 염색체 전위로 생성된 융합 전사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 유동세포계수법은 백혈병-특이적 면역표현형에 기초하여 암세포를 인지하는데 사용될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 암의 분자 검출은 100,000개의 정상 세포에서 1개의 백혈병 세포를 검출할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 대상체는 100,000 세포 중 1 이상의 백혈병 세포가 PCR 또는 유동세포계수법에 의해 검출되는 경우에 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 대상체의 질병 부담은 분자적으로 검출불가능하거나 MRD-이며, 어떤 경우에는, 백혈병 세포가 PCR 또는 유동세포계수법을 사용하여 대상체에서 검출될 수 없다.
[0218] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용의 방법 및/또는 투여는 첫번째 복용의 투여 직전의 질병 부담과 비교하여 질병 부담을 감소시킨다. 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용의 투여는 질병 부담, 예를 들어 종양 부담을 감소시킨다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용은 질병 부담에서 감소, 예를 들어, 추가 감소를 초래한다.
[0219] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용은 대상체에서 예를 들어, 종양 부담과 같은 질병 또는 병태의 부담을 줄이는데 효과적인 양의 세포를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 예를 들어, 질병 또는 병태가 종양인 경우, 첫번째 복용의 투여는 종양을 감소시키는 것이다. 본 발명에 사용된 바와 같이, "감량 복용"은 대상체의 질환 또는 증상의 부담, 예를 들어 종양 부담을 적어도 부분적으로 감소시키는데 효과적인 복용을 의미한다. 일부 관점에 있어서, 감량 복용은 질병이나 증상을 완전히 근절하지 못할 수도 있다.
[0220] 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용 및/또는 연속 복용의 투여는 질병 부담의 증가를 방지할 수 있으며, 이는 질병 부담을 변화시키지 않음으로써 입증될 수 있다.
[0221] 일부 관점에 있어서, 질병 또는 병태는 첫번째 복용의 투여 후에도 지속되고 및/또는 첫번째 복용의의 투여는 대사에에서 질병 또는 병태를 제거하기에 충분하지 않다.
[0222] 일부 관점에 있어서, 연속 복용의 투여는 첫번째 복용의 투여 직전의 시기 또는 연속 복용의 투여 직전의 시기의 질병 부담과 비교하여 질명 부담을 감소시킨다. 일부 관점에 있어서, 예를 들어 재발과 관련하여, 연속 복용의 투여는 첫번째 복용의 투여후 질병 부담의 피크 수치와 비교하여 질병 부담의 감소에 영향을 미친다.
[0223] 일부 구체예에 있어서, 대상체가 단일 복용량, 예를 들어, 단일의 큰 복용량의 세포, 예를 들어, 제공된 방법에서 총괄적으로, 대신에 단일 복용량으로, 첫번째 복용 및 연속 복용으로 투여된 세포의 총 수의 투여 또는 서로 약 14일 미만 또는 약 28일 이상 떨어진 다중 큰 복용량 또는 다중 복용량의 투여를 받는 것과 같은 대안적인 복용 요법을 사용하는 비교가능한 방법으로 관찰되는 감소와 비교하여, 방법은, 예를 들어, 종양 세포의 수, 종양의 크기, 환자 생존 기간 또는 사건없는 생존 기간과 같은 질병 또는 병태의 부담을 더 큰 정도 및/또는 더 오랜 기간 동안 감소시킨다.　　일부 구체예에 있어서, 질병 부담은 연속 복용 후에 더 큰 범위 또는 더 긴 기간 동안 감소된다. 제 1 투여 량을 투여하지 않은 환자에게 연속 투여 량을 투여함으로써 초래될 감소량에 비하여 감소된다.
[0224] 일부 구체예에 있어서, 대상체에서 질병 또는 병태의 부담이 검출, 평가 또는 측정된다. 질병 부담은 혈액 또는 혈청과 같은 개체 또는 개체의 기관, 조직 또는 체액에서 질병 또는 질병 관련 세포, 예를 들어 종양 세포의 총 수를 검출함으로써 일부 측면에서 검출될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 질병 부담, 예를 들어, 종양 부담은 고형 종양의 질량 및/또는 전이의 수 또는 범위를 측정함으로써 평가된다. 일부 관점에 있어서, 대상의 생존, 특정 기간 내의 생존, 생존 범위, 무사건 또는 무증상 생존의 기간 또는 지속 기간 또는 무재발 생존 여부가 평가된다. 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태의 증상이 평가된다. 일부 구체예에 있어서, 질병 또는 병태 부담의 측정이 특정된다.
[0225] 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용 투여 전, 첫번째 복용 투여 후 그러나 연속 복용 투여 전 및/또는 연속 복용 투여 후에 질병 부담이 측정되거나 검출된다. 다중 연속 복용과 관련하여, 일부 구체예에 있어서의 질병 부담은 임의의 연속 복용의 전후에, 또는 연속 복용의 투여 사이의 시간에 측정될 수 있다.
[0226] 일부 구체예에 있어서, 부담은 첫번째 복용의 투여 후 적어도 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 90 또는 100% 감소한다. 일부 관점에 있어서, 연속 복용의 투여는 연속 복용의 투여 직전 또는 전반적으로 첫번째 복용 직전과 비교하여 질병 부담, 예를 들어, 종양 부담의 추가 감소, 예를 들어, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 90 또는 100 %의 부담 감소를 초래한다. 일부 구체예에 있어서, 질병 부담, 종양 크기, 종양 부피, 종양 질량 및/또는 종양 하중 또는 대량은 첫번째 복용 또는 연속 복용의 투여 직전과 비교하여 연속 복용 후에 적어도 약 50, 60, 70, 80, 90 % 또는 그 이상만큼 감소된다.
[0227] 일부 구체예에 있어서, 방법에 의한 질병 부담의 완화는, 예를 들어 첫번째 또는 연속 복용의 투여, 예를 들어, 개시 후 1 개월, 2 개월, 3 개월 또는 3 개월 이상으로 평가 된 경우, 형태학적 완전한 차도의 유도를 포함한다. 일부 관점에 있어서, 최소 잔류 질환에 대한 분석, 예를 들어 다중파라미터 유동세포계수법에 의해 측정된 바와 같이, 음의 값이거나, 또는 최소 잔류 질병의 수치는 약 0.3 % 미만, 약 0.2 % 미만, 약 0.1 % 미만 또는 약 0.05 % 미만이다.
[0228] 일부 구체예에 있어서, 다른 방법에 비해 본 방법에 의해 대상체의 무사건 생존율 또는 전체 생존율이 향상된다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용 후 6 개월 째에 본 방법으로 치료 한 대상체의 무사건 생존율 또는 확률은 약 40 % 초과, 약 50 % 초과, 약 60 % 초과, 약 70 % 초과, 약 80 % 초과, 약 90 % 초과 또는 약 95 % 초과이다. 일부 관점에 있어서, 전체 생존율은 약 40 % 초과, 약 50 % 초과, 약 60 % 초과, 약 70 % 초과, 약 80 % 초과, 약 90 % 초과, 또는 약 95 % 초과이다. 일부 구체예에 있어서, 본 방법으로 치료된 대상체는 무사건 생존, 무재발 생존 또는 적어도 6 개월, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 년 생존을 나타낸다. 일부 구체예에 있어서, 약 6 개월보다 크거나 약 6 개월, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10년의 진행 시간과 같이 진행하는 시간이 개선된다.
[0229] 일부 구체예에 있어서, 다른 방법에 비해 본 방법에 의한 처리 후, 재발의 가능성이 줄어든다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용 후 6 개월째의 재발 확률은 약 80 % 미만, 약 70 % 미만, 약 60 % 미만, 약 50 % 미만, 약 40 % 미만, 약 30 % 미만, 약 20 % 미만, 또는 약 10 % 미만이다.
[0230] 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용 후 질병 부담의 감소, 예를 들어, 종양 감퇴는 연속 복용 후의 독성이나 독성 결과를 감소시킨다. 종양 부담의 감소에 따른 독성 결과는 본 발명에 기술된 바와 같이 평가될 수 있다.
[0231] 일부 관점에 있어서, 본 발명의 방법에 따른 결과인 질병 부담의 경감, 예를 들어, 종양 감퇴는 대상체에서 세포의 지속성을 향상시킨다. 예를 들어, 일부 관점에 있어서, 첫번째 복용의 투여는 연속 복용으로 투여된 세포가 첫번째 복용의 세포를 투여하지 않는 대상체에게 연속 복용을 투여하는 것과 같이, 다른 복용 요법에 의해 투여된 세포보다 오래 지속되도록 질병 부담을 감소시킨다.
VII. 세포 노출과 지속성
[0232] 일부 구체예에 있어서, 복용(들) 및/또는 그의 시점은 시간에 따른 그들의 팽창 및/또는 지속성을 촉진시킴으로써, 세포에 대한 대상체의 노출을 촉진시키도록 설계되었다.
[0233] 일부 구체예에 있어서, 제공된 방법은 투여된 세포에 대한 대상체의 노출을 증가시키고 (예를 들어, 증가된 세포 수 또는 시간 경과에 따른 지속 시간) 및/또는 입양 세포 치료의 효능 및 치료 결과를 개선한다. 일부 관점에 있어서, 본 방법은 재조합 수용체, 예를 들어, CAR 발현 세포를 발현하는 세포에 대한 보다 큰 및/또는 더 긴 정도의 노출이 다른 방법과 비교하여 치료 결과를 개선한다는 점에서 유리하다. 이러한 결과에는 심각한 종양 부담이있는 대상체에서도 환자 생존 및 완화가 포함될 수 있다.
[0234] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용, 예를 들어, 첫번째 낮은 복용의 투여는 세포의 높은 초기 복용의 투여에 비하여 대상체에서 세포에 대한 노출의 최대, 총 및/또는 지속시간을 증가시킨다. 일부 관점에 있어서, 고 질병 부담과 (및 따라서 더 많은 양의 항원)과 관련하여 첫번째 복용의 투여는 동일한 상황에서 보다 큰 복용의 투여와 비교하여 효능을 증가 시키며, 이는 세포의 팽창 및/또는 지속성을 막는다. 일부 구체예에 있어서, 높은 질병 부담과 관련하여 첫번째 복용량을 투여하는 것은 전달된 세포의 고갈을 감소시켜, 보다 높은 초기 복용량이 투여되는 것과 같은 다른 방법과 비교하여 치료적 효능을 증가시킨다.
[0235] 일부 구체예에 있어서, 첫번? 복용 후 및/또는 연속 복용 후 대상체에서 재조합 수용체를 발현하는 세포 (예를 들어, CAR 발현 세포)의 존재 및/또는 양이 검출된다. 일부 관점에 있어서, 정량적 PCR (qPCR)은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 기관 또는 조직 (예를 들어, 질병 부위)에서 재조합 수용체를 발현하는 세포 (예를 들어, CAR 발현 세포)의 양을 평가하는데 사용된다. 일부 관점에 있어서, 마이크로그램의 DNA 당 수용체, 예를 들어 CAR을 코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 카피, 또는 시료의, 예를 들어 혈액 또는 혈청의 마이크로리터당 수용체 발현, 예를 들어 CAR 발현 세포 수, 또는 시료의 마이크로리터 당 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수로 지속성은 정량화된다.
[0236] 일부 구체예에 있어서, 세포는 첫번째 복용의 투여 후 적어도 4, 14, 15, 27 또는 28일째에 개체에서 검출된다. 일부 관점에 있어서, 세포는 첫번째 또는 연속 복용의 투여 후, 3, 6, 또는 12, 18, 또는 24, 또는 30 또는 36 개월, 또는 1, 2, 3, 4, 5 년, 또는 그 이상으로 투여될 수 있다.
[0237] 일부 구체예에 있어서, 본 방법에 의한 대상체에서의 수용체, 예를 들어, CAR 발현 세포의 지속성은 예를 들어, CAR과 같은 수용체에 대한 대상체에 의한 면역 반응 증가의 특정 또는 후속 시간과 같은 시간보다 뒤의 시간과 같은 지정된 시간 창을 벗어난 시간에, 예를 들어 첫번째 복용 보다 많은 수의 세포를 함유하는, 단일 복용량의 투여, 단일 복용량으로서의 공통 복용량의 세포의 투여, 첫번째 복용량을 받은 대상체가 없는 연속 복용의 세포의 투여 및/또는 연속 복용의 투여를 포함하는 대체 방법으로 얻을 수 있는 것과 비교하면, 연속 복용 후 및/또는 첫번째 복용의 투여 후에 더 크다.
[0238] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용의 세포를 투여받은 대상체 없이 연속 복용의 세포의 투여를 포함하는 것 또는 대상체가 첫번째 및 연속 복용을 단일 복용량으로 총괄적으로 투여받는 경우와 같은 대안적인 복용 요법을 사용하는 방법을 통해 달성되는 것과 비교하여, 연속 복용의 투여 후에 대상체에서의 재조합 수용체 발현, 예를 들어, CAR 발현 세포의 지속성 및/또는 팽창 및/또는 존재는 더 크다.
[0239] 팽창 및 / 또는 지속성을 나타내는 노출, 예를 들어, 세포의 수는 대상체에 노출된 세포의 최대 수, 검출가능한 세포의 지속시간 또는 특성 수 또는 백분율 이상의 세포, 시간 경과에 따른 세포 수 그래프 면적 및/또는 이들의 조합 및 이들의 지표로서 표현될 수 있다. 이러한 결과는 특정 시료, 예를 들어 혈액 또는 혈청에서 핵산 또는 DNA의 총 양에 대한 재조합 수용체를 코딩하는 핵산의 카피수를 검출하기 위한 qPCR 및/또는 일반적으로 수용체에 특이적인 항체를 이용하여 수용체를 발현하는 세포를 검출하기 위한 유동세포계수법 같은 공지된 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 또한 세포 기반 평가는 결합할 수 있는 및/또는 중성화할 수 있는 및/또는 반응, 예를 들어 질병 또는 병태 또는 수용체에 의해 인식된 항원을 발현하는 세포에 대한 세포독성 반응을 유도할 수 있는 세포와 같은 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출하는데 사용될 수 있다.
[0240] 일부 관점에 있어서, 대상체의 세포에 대한 증가된 노출은 세포의 증가된 팽창을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포는 첫번째 복용량 투여 후 및/또는 연속 복용량 투여 후 대상체에서 팽창한다. 일부 관점에 있어서, 단일 복용량으로 세포 투여, 더 큰 첫번째 복용의 투여, 첫번째 복용의 투여가 없는 연속 복용의 투여와 같은 다른 방법 및/또는 예를 들어, 면역 반응이 연속 복용의 투여전에 발생하는 특정 시간의 창 또는 시점의 전 또는 후에 연속 복용이 투여되는 방법에 비하여 본 방법은 세포의 더 큰 팽창을 초래한다.
[0241] 일부 관점에 있어서, 방법은 예를 들어, 유동세포계수법에의해 측정된 바와 같은 투여된 세포의 생체 내 높은 증식을 초래한다. 일부 관점에 있어서, 세포의 높은 피크의 비율이 검출된다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 첫번째 또는 연속 투여 후의 피크 또는 최대 수치에서, 혈액 또는 대상체의 질병-부위 또는 그들의 백혈구 분율에서, 예를 들어, PBMC 분율 또는 T 세포 분율에서, 약 10% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상 또는 약 90% 이상의 세포는 재조합 수용체, 예를 들어, CAR을 발현한다.
[0242] 일부 구체예에 있어서, 본 방법은 대상체의 혈액 또는 혈정 또는 다른 체액 또는 기관 또는 조직에서, DNA의 마이크로그램당 수용체, 예를 들어 CAR를 코딩하는 핵산의 적어도 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10,000 또는 15,000 카피 또는 적어도 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 총 개수, 단핵 세포의 총 개수, T 세포의 총 개수 또는 마이크로리터의 총 개수당 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 또는 0.9 수용체 발현, 예를 들어 CAR 발현 세포의 최대 농도를 초래한다. 일부 구체예에 있어서, 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 혈액내 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60 % 의 총 PBMC 및/또는 첫번째 또는 연속 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, 또는 52 주째 또는 그러한 투여 후 1, 2, 3, 4, 또는 5년 또는 그 이상인 때의 수치로 검출된다.
[0243] 일부 관점에 있어서, 방법은 예를 들어, 대상체의 혈청에서, DNA의 마이크로그램당 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 코딩하는 핵산 카피의 적어도 2배, 적어도 4배, 적어도 10배 또는 적어도 20배 증가를 초래한다.
[0244] 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용의 투여후 또는 연속 복용의 투여 후 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60일 또는 그 이상인 때에, 첫번째 복용 또는 연속 복용의 투여 후 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 주 또는 그 이상인 때에, 예를 들어 qPCR 또는 유동세포계수법에 기초한 검출 방법과 같은 특정 방법으로, 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 혈액 또는 혈청에서 검출가능하다.
[0245] 일부 관점에 있어서, 마이크로리터당 적어도 약 1 x 102, 적어도 약 1 x 103, 적어도 약 1 x 104, 적어도 약 1 x 105 또는 적어도 약 1 x 106 또는 적어도 약 5 x 106 또는 적어도 약 1 x 107 또는 적어도 약 5 x 107 또는 적어도 약 1 x 108 재조합 수용체 발현, 예를 들어 CAR 발현 세포 및/또는 적어도 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400 또는 500 또는 1000 수용체 발현 세포, 예를 들어, 마이크로리터당 적어도 10이 혈액, 예를 들어 말초 혈액 또는 그들의 질병 부위와 같은 대상체 또는 이들의 유체, 조직 또는 부분에서 검출가능하거나 존재한다. 일부 구체예에 있어서, 대상체의 세포의 그러한 개수 또는 농도는 첫번째 복용의 투여 후 또는 연속 복용의 투여 후, 적어도 약 20일, 적어도 약 40일 또는 적어도 약 60일 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 약 2 또는 3년째에 검출가능하다. 이러한 세포 수는 유동세포계수법에 기초한 또는 정량적 PCR에 기초한 방법 및 공지된 방법을 사용하여 총 세포 개수의 외삽법으로 검출될 수 있다. 예를 들어, Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al. Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828을 참조하라.
[0246] 일부 관점에 있어서, 예를 들어, 첫번째 또는 연속 복용 세포의 투여 후 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 5 주 또는 적어도 약 6 주 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 약 2 또는 3 년인때에, 면역조직화학, PCR 및/또는 유동세포계수법에 의해서 측정된 재조합 수용체를 코딩하는 핵산 카피, 예를 들어 벡터 카피 개수는, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 다른 부분에서의 세포 100개당 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1 또는 적어도 10 이다. 일부 구체예에 있어서, 수용체 발현, 예를 들어 CAR 발현 세포의 첫번째 복용 또는 연속 복용의 투여 약 1주, 약 2주, 약 3주 또는 약 4주인때 또는 그러한 투여 후의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 2년 또는 3년인때의 게놈 DNA의 마이크로그램당 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 벡터의 카피 개수는 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000 또는 적어도 10,000 또는 적어도 15,000 또는 적어도 20,000이다.
[0247] 일부 관점에 있어서, 대상체, 그들의 혈액 및/또는 그들의 질병부위에서, 세포에 의해 발현된 수용체, 예를 들어 CAR은, 첫번째 복용 또는 연속 복용 또는 후속 연속 복용의 투여 개시 후 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년 또는 3년 이상인 때에 정량적 PCR (qPCR) 또는 유동세포계수법으로 검출 가능하다.
[0248] 일부 구체예에 있어서, 대상체의 유체, 조직 또는 기관, 예를 들어 혈액에서 첫번째 복용의 투여 후 시간에 따른 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 농도에 대한 그래프 면적 (AUC)은 대상체가 첫번째 복용 및 연속 복용의 세포를 단일 복용량으로 투여받는 대안적인 복용 요법에 따라 성취되는 것 보다 더 크다.
[0249] 일부 관점에 있어서, 대상체의 유체, 조직 또는 기관, 예를 들어 혈액에서 연속 복용의 투여 후 시간에 따른 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포의 농도에 대한 그래프 면적 (AUC)은 대상체가 첫번째 복용의 투여를 받지않고 연속 복용을 투여받는 또는 첫번째 및 두번째 복용량의 세포가 단일 복용량으로 투여되는 대안적인 복용 요법에 따라 성취되는 것 보다 더 크다.
VIII. 세포에 의해 발현되는 재조합 수용체
[0250] 세포는 일반적으로 기능적 비-TCR 항원 수용체와 같은 항원 수용체를 포함하는 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR), 및 형질전환 T 세포 수용체 (TCR)과 같은 다른 항원-결합 수용체를 발현한다. 또한 수용체들 사이에는 다른 키메라 수용체가 있다.
[0251] CAR을 포함하는 예시적인 항원 수용체 및 이러한 수용체를 조작하여 세포내로 도입시키는 방법은, 예를 들어 국제공개번호 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, 미국 특허출원공개번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허번호 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353, 및 8,479,118 및 유럽 특허출원번호 EP2537416 및/또는 문헌 Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle et al., Curr . Opin . Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75에 개시되어 있다. 일부 관점에 있어서, 항원 수용체는 CAR 포함하고, 이는 미국 특허번호 7,446,190에 개시되어 있고, 국제특허출원공개번호 WO/2014055668 A1에 개시되어 있다. CAR의 예로는 전술한 공보에 개시된 CAR을 포함하고, WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허번호 7,446,190, 미국 특허번호 8,389,282, Kochenderfer et al., 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; 및 Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177)에 개시되어 있다. 또한 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허번호 제7,446,190 및 미국 특허번호 제8,389,282가 있다.
[0252] 키메라 수용체 중에서는 키메라 항원 수용체 (CAR)이 있다. CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 항체 분자의 부분, 일반적으로 항체의 가변 중쇄 부분 (VH) 및/또는 가변 경쇄 부분 (VL), 예를 들어 scFv 항체 조각과 같은 세포외 항원 결합 영역을 포함한다.
[0253] 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 항체 부분은 스페이서를 더 포함하며, 이는 면역글로불린의 힌지 부분, 예를 들어 IgG4 힌지 부분 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 부분과 같은 불변 부분 또는 이의 변이체 또는 변형된 버전의 적어도 일부를 포함하거나 포함할 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 불변 부분 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG이다. 일부 관점에 있어서, 불변 부분의 부분은 항원-인식 성분, 예를 들어 scFv 및 막관통 영역 사이의 스페이서 부분으로 작용한다. 스페이서 부재시와 비교하여, 스페이서는 항원 결합 후 세포의 증가된 반응성을 제공하는 길이일 수 있다. 일부 예에서, 스페이서는 약 12 아미노산 길이이거나 12 아미노산 길이 이하이다. 예시적인 스페이서는 적어도 약 10 내지 229 아미노산, 약 10 내지 200 아미노산, 약 10 내지 175 아미노산, 약 10 내지 150 아미노산, 약 10 내지 125 아미노산, 약 10 내지 100 아미노산, 약 10 내지 75 아미노산, 약 10 내지 50 아미노산, 약 10 내지 40 아미노산, 약 10 내지 30 아미노산, 약 10 내지 20 아미노산, 약 10 내지 15 아미노산을 가지는 것을 포함하고, 나열된 범위 중 하나의 끝점 사이의 정수를 포함하는 아미노산을 가지는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 스페이서 부분은 약 12 아미노산 또는 이하, 약 119 아미노산 또는 이하 또는 약 229 아미노산 또는 이하를 갖는다. 예시적인 스페이서는 IgG4 힌지 만, CH2 및 CH3 영역에 연결된 IgG4 힌지 또는 CH3 영역에 연결된 IgG4 힌지를 포함한다. 예시적인 스페이서는 다음의 문헌의 개시를 포함하나 이에 한하지 않는다: Hudecek et al. (2013) Clin . Cancer Res., 19:3153, 국체 특허공개번호 WO2014031687, 미국 특허번호 8,822,647 또는 공개된 출원번호 US2014/0271635.
[0254] 일부 구체예에 있어서, 불변 부분 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 불변 부분 또는 부분이다. 일부 구체에에서, 스페이서는 서열 ESKYGPPCPPCP (서열 번호 1에 기재됨)을 가지고, 서열 번호 2에 기재된 서열로 코딩된다. 일부 구체예에 있어서, 스페이서는 서열 번호 4에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구체예에 있어서, 불변 부분 또는 부분은 IgD이다. 일부 구체 예에서, 스페이서는 서열 번호 5에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구체 예에서, 스페이서는 서열번호 1, 3, 4 또는 5중 어느 하나에 적어도 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
[0255] 이 항원 인식 영역은 일반적으로 CAR의 경우, TRC 복합체 같은 항원 수용체 복합체를 통한 활성화 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 모방하는 신호전달 부분과 같은 1 이상의 세포내 신호전달 성분에 연결된다. 따라서, 일부 구체예에 있어서, 항원-결합 성분 (예를 들어, 항체)는 1 이상의 막관통 및 세포내 신호전달 영역에 연결된다. 일부 구체예에 있어서, 막관통 영역은 세포외 영역에 융합된다. 하나의 구체예에 있어서, 수용체, 예를 들어 CAR의 영역 중의 하나와 자연으로 결합된 막관통 영역이 사용된다. 일부 경우에 있어서, 막관통 영역은 그러한 영역이 수용체 복합체의 다른 구성과의 상호작용을 최소화하기 위하여 동일하거나 다른 표면 막 단백의 막관통 영역에 결합하는 것을 피하기위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형된다.
[0256] 일부 구체예에 있어서 막관통 영역은 자연 또는 합성 공급원으로부터 유래된다. 공급원이 자연인 경우, 일부 관점에 있어서 영역은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래된다. 막관통 영역은 T 세포 수용체, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CDS, CD9, CD 16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 알파, 베타 또는 제타 사슬으로부터 유래된 (즉, 적어도 막관통 영역을 포함하는) 막관통 영역 및/또는 그들의 구조적, 예를 들어 막관통 특성의 실질적인 부분을 보유하는 것과 같은 이들의 기능적 변이체을 포함하는 막관통 영역을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 막관통 영역은 CD4, CD28 또는 CD8, 예를 들어, CD8α 또는 그들의 기능적 변이체로부터 유래한 막관통 영역이다. 일부 관점에 있어서, 합성 막관통 영역은 류신 및 발린 같은 소수성 잔기를 주로 포함한다. 일부 관점에 있어서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체는 합성 막관통 영역의 양 말단에서 발견될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 결합은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 영역에 의한 것이다.
[0257] 세포내 신호전달 영역 중에는 자연 항원 수용체를 통한 신호, 상호자극 수용체와 결합하는 그러한 수용체를 통한 신호 및/또는 상호자극 수용체만을 통하는 신호를 모방하거나 근사하는 것들이 있다. 일부 구체예에 있어서, 글리신 및 세린을 포함하는 것, 예를 들어 글리신-세린 이중체와 같은, 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커, 예를 들어, 2 내지 10 아미노산 길이의 링커가 존재하고, 링커는 막관통 영역 및 CAR의 세포질 신호전달 영역간의 연결을 형성한다.
[0258] 수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 1 이상의 세포내 신호전달 성분 또는 성분들을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 수용체는 T-세포 활성화 및 세포독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어 CD3 제타 사슬과 같은, TCR 복합체의 세포내 성분을 포함한다. 따라서, 일부 관점에 있어서, 항원-결합 부분은 1 이상의 세포 신호전달 단위체에 연결된다. 일부 구체예에 있어서, 세포 신호전달 단위체는 CD3 막관통 영역, CD3 세포내 신호전달 영역 및/또는 다른 CD 막관통 영역을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 수용체, 예를 들어 CAR은 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25, 또는 CD16과 같은 1 이상의 추가적 분자들의 부분을 더 포함한다. 예를 들어, 일부 관점에 있어서, CAR 또는 다른 키메라 수용체는 CD3-제타 (CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이의 키메라 분자를 포함한다.
[0259] 일부 구체예에 있어서, CAR 또는 다른 키메라 수용체의 연결시, 수용체의 세포질 영역 또는 세포내 신호전달 영역은 1 이상의 일반적인 효과자 기능 또는 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 가공된 T 세포의 반응을 활성화 한다. 예를 들어, 일부 상황에서, CAR은 사이토카인 또는 다른 요인의 분비와 같은, 세포용해활성 또는 T-헬퍼 활성과 같은 T 세포의 기능을 유도한다. 일부 구체예에 있어서, 세포내 신호전달 영역 도는 영역들은 T 세포 수용체 (TCR)의 세포질 서열 및 일부 관점에 있어서 자연인 상황에서 항원 수용체 참여 이후 그러한 수용체와 협력하여 신호 형질도입을 개시하는 보조-수용체의 세포질 서열도 포함한다.
[0260] 자연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호전달뿐만 아니라 보조-자극 신호를 필요로한다. 따라서, 일부 구체예에 있어서, 완전한 활성화를 촉진시키기 위해, 이차 또는 보조-자극 신호를 생성하기 위한 요소 또한 CAR에 포함된다.
[0261] T 세포 활성화는 일부 관점에 있어서, TCR 을 통해 항원-의존적 일차 활성화를 개시하는 것(일차 세포질 신호전달 서열)들과 2차 또는 보조-자극 신호를 제공하여 항원-비의존성 방식으로 작용하는 것들 (이차 세포질 신호전달 서열)인 두 종류의 세포질 신호전달 서열을 통해 매개되는 것으로 개시되어 있다. 일부 관점에 있어서, CAR은 그러한 신호전달 요소들 중 하나 또는 둘다를 포함한다.
[0262] 일부 관점에 있어서, CAR은 TCR 복합체의 일차 활성화를 조절하는 일차 세포질 신호전달 서열을 포함한다. 촉진하는 방식으로 작용하는 일차 세포질 신호전달 서열은 면역수용체 티로신계 활성화 모티프(motif) 또는 ITAM으로 알려진 신호전달 모티프를 포함할수 있다. 일차 세포질 신호전달 서열을 포함하는 ITAM의 예는 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CDS, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d로부터 유도된 것을 포함한다. 일부 구체예에서, CAR에서의 세포질 신호전달 분자는 세포질 신호전달 영역, 그들의 부분 또는 CD3 제타로부터 유도된 서열을 포함한다.
[0263] 일부 구체예에 있어서, CAR은 신호전달 영역 및/또는 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS와 같은 보조-신호전달 수용체의 막관통 부분을 포함한다. 일부 관점에 있어서, 동일한 CAR은 활성화 및 보조-촉진 요소를 모두 포함한다.
[0264] 일부 구체예에 있어서, 활성화 영역은 하나의 CAR내에 포함되는 반면, 보조자극 요소는 다른 항원을 인지하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구체예에 있어서, CAR은 둘다 동일한 세포에서 발현되는 활성화 또는 자극성 CAR, 보조자극성 CAR을 포함한다 (WO2014/055668 참조). 일부 관점에 있어서, 세포는 1 이상의 자극성 또는 활성화 CAR 및/또는 보조자극성 CAR을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 예를 들어, 목표 이탈 효과를 감소하기 위해서, 세포는 질병표적화 CAR을 통해 유도된 활성화 신호가 억제 CAR의 그의 리간드에의 결합에 의해 감소되거나 저해되는 질병 또는 병태와 관련된 및/또는 특이적인 하나이상의 다른 항원을 인지하는 CAR과 같은 억제 CAR (iCAR, Fedorov et al., Sci . Transl . Medicine, 5(215) (December, 2013)을 참조하라.)을 더 포함한다.
[0265] 일부 구체예에 있어서, CAR과 같은 재조합 수용체의 세포내 신호전달 요소는 CD3 제타 세포내 영역 및 보조자극 신호전달 영여릉 포함한다. 특정 구체예에 있어서, 세포내 신호전달 영역은 CD3 (예를 들어, CD3-제타) 세포내 영역으로 연결된 CD28 막관통 및 신호전달 영역을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 세포내 신호전달 영역은 CD3-제타 세포내 영역으로 연결된 키메라 CD28 및/또는 CD137 (4-1BB, TNFRSF9) 보조자극 영역을 포함한다.
[0266] 일부 구체예에 있어서, CAR은 세포질 부분에 1 이상의, 예를 들어, 2 이상의 보조 자극 영역 및 활성화 영역, 예를 들어, 일차 활성화 영역을 포함한다. 예시적인 CAR은 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포내 요소를 포함한다.
[0267] 일부 구체예에 있어서, CAR 또는 다른 항원 수용체는 세포 표면 마커와 같은 마커를 더 포함하는데, 마커는 절단된 EGFR (tEGFR)과 같은 세포 표면 수용체의 절단된 형태와 같은 수용체를 발현하는 세포의 형질도입 또는 가공을 확인하는데 사용될 수 있다. 일부 관점에 있어서, 마커는 CD34의 전체 또는 부분 (예를 들어, 절단된 형태), NGFR 또는 상피 성장 인자 수용체 (예를 들어, tEGFR)을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 마커를 코딩하는 핵산은 절단가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A와 같은 링커 서열을 코딩하는 폴리뉴틀레오타이드에 작용가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커는 입양으로, T2A 절단가능한 링커 서열과 같은 링커 서열에 연결된 절단된 EGFR (tEGFR)일수 있다. 절단된 EGFR (예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 서열번호 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 15에 상응한는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 14에 상응하는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
[0268] 일부 구체예에 있어서, 마커는 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않는 또는 T 세포 표면에서 자연적으로 발견되지 않는 분자, 예를 들어, 세포 표면 단백질이다.
[0269] 일부 구체예에 있어서, 분자는 비자기 분자, 예를 들어, 비자기 단백질이고 즉, 세포가 입양으로 이전되는 숙주의 면역계에서"자기"로 인식되지 않는 분자이다.
[0270] 일부 구체예에 있어서, 마커는 치료적 기능을 수행하지 않거나 및/또는 유전공학에있어 마커로서 사용(예를 들어, 성공적으로 조작된 세포를 선별하는 것)되는 것과 달리 효과를 생성하지 않는다. 다른 구체예에 있어서, 마커는 치료적 분자 또는 그렇지 않으면 입양 이전에 따른 세포의 반응을 향상 및/또는 완충시키기 위한 또는 리간드와 마주치기 위한 보조자극 또는 면역 체크포인트 분자와 같은 생체내에서 마주치게될 세포에 대한 리간드와 같은 일부 원하는 효과를 얻기 위한 분자일 수 있다.
[0271] 일부 경우에 있어서, CAR은 1 세대, 2 세대 및/또는 3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 관점에 있어서, 1 세대 CAR은 항원 결합시 CD3 사슬 유도 신호를 단독으로 제공하고; 일부 관점에 있어서, 2 세대 CAR은 CD28 또는 CD137같은 보조자극 수용체로부터 세포내 신호전달 영역을 포함하는 것과 같은 그러한 신호 및 보조신호를 제공하는 것이고; 일부 관점에 있어서, 3 세대 CAR은 다른 보조자극 수용체의 다중 보조자극 영역을 포함하는 것이다.
[0272] 일부 구체예에 있어서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 관점에 있어서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포내 신호전달 영역을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 항체 또는 단편은 scFv 및 ITAM을 함유하는 세포내 영역을 포함한다. 일부 관점에 있어서, 세포내 신호전달 영역은 CE3 제타 (CD3ζ)사슬의 제타 사슬의 신호전달 영역을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 키메라 항원 수용체는 세포외 영역에 연결된 막관통 영역 및 세포내 신호전달 영역을 포함한다. 일부 관점에 있어서, 막관통 영역은 CD28의 막관통 부분을 함유한다. 일부 구체예에 있어서. 키메라 항원 수용체는 T 세포 보조자극 분자의 세포내 영역을 함유한다. 세포외 영역 및 막관통 영역은 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 세포외 영역 및 막관통은 본 발명에 개시된 임의 것과 같은, 스페이서로 연결된다. 일부 구체예에 있어서, 수용체는 CD28 세포외 부분과 같은, 막관통 영역으로부터 유래된 분자의 세포외 부분을 함유한다. 일부 구체예에 있어서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 보조 자극 분자 또는 그들의 기능적 변이체로부터 유도된, 막관통 영역 및 세포내 신호전달 영역 사이와 같은 세포내 영역을 함유한다. 일부 관점에 있어서, T 세포 보조자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.
[0273] 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이들의 기능적 변이체의 막관통 부분을 함유하는 막관통 영역, CD28 또는 이들의 기능적 변이체의 신호전달 부분을 함유하는 세포내 신호전달 영역 및 CD3 제타 또는 이들의 기능적 변이체의 신호전달 부분을 함유한다. 일부 구체예에 있어서, CAR은 항체, 예를 들어 항체 단편, CD28 또는 이들의 기능적 변이체의 막관통 부분이거나 이를 함유하는 막관통 영역 및 4-1BB 또는 이들의 기능적 변이체의 신호전달 부분을 함유하는 세포내 신호전달 영역 및 CD3 제타 또는 이들의 기능적 변이체의 신호전달 부분을 함유한다. 이러한 일부 구체예에 있어서, 수용체는 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지와 같은 인간 Ig 분자와 같은 Ig 분자의 부분을 함유하는 힌지 전용 스페이서와 같은 스페이서를 더 포함한다.
[0274] 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 막관통 영역은 인간 CD28 (예를 들어, 등록번호 P01747.1) 또는 이들의 변이체의 막관통 영역이거나 이를 포함하고, 그러한 막관통 영역은 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 6에 상응하는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하고, 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체의 부분을 함유하는 막관통 영역은 서열번호 7에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 7에 상응하는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
[0275] 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포내 신호전달 요소는 자연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL 내지 GG 치환을 가지는 영역과 같은 세포내 보조자극 또는 그들의 부분을 함유한다. 예를 들어, 세포내 신호전달 영역은 서열번호 8 또는 9에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 8 또는 9에 상응하는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 세포내 영역은 4-1BB (예를 들어, 등록번호 Q07011.1)의 세포내 보조 자극 신호전달 영역 또는 그들의 기능적 변이체 또는 부분을 포함할 수 있고, 그와 같은 아미노산 서열은 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 10에 상응하는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열이다.
[0276] 일부 구체예에 있어서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포내 신호전달 영역은 인간 CD3ζ(등록번호 P20963.2) 또는 미국 특허번호 제7,446,190호 또는 미국 특허번호 제8,911,993호에 개시된 CD3제타 신호전달 영역의 아이소폼의 112AA 세포질 영역과 같은 인간 CD3 제타 자극 신호전달 영역 또는 이들의 기능적 변이체를 포함한다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 세포내 신호전달 영역은 서열번호 11, 12 또는 13에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 11, 12 또는 13에 상응하는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
[0277] 일부 관점에 있어서, 스페이서는 IgG4 또는 IgG1의 힌지와 같은IgG의 힌지 구역만을 함유하고, 그러한 서열번호 1에 제시된 힌지만이 스페이서이다. 다른 구체예에 있어서, 스페이서는 입양으로 CH2 및/또는 CH3에 연결된 Ig 힌지 (예를 들어, IgG4 유래 힌지) 이거나 이를 함유한다. 일부 구체예에 있어서, 스페이서는 Ig 힌지, 예를 들어 서열번호 3에 제시된 것과 같은 CH2 및 CH3 영역에 연결된 IgG4 힌지이다. 일부 구체예에 있어서, 스페이서는 글리신-세린이 풍부한 서열 또는 공지된 유연한 링커와 같은 다른 유연한 링커이거나 이를 포함한다.
[0278] 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, CAR은 scFvs를 포함하는 항체 단편과 같은 항체, 힌지 구역 및/또는 스페이서를 함유하는 Ig 힌지와 같은 중쇄 분자의 1 이상의 불변 구역과 같은 면역글로불린 분자의 부분을 함유하는 스페이서와 같은 스페이서, CD28 유래 막관통 영역의 전체 또는 부분을 함유하는 막관통 영역, CD28 유래 세포내 신호전달 영역 및 CD3 제타 신호전달 영역을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, CAR은 항체 또는 scFv와 같은 단편, 스페이서를 함유하는 임의의 Ig 힌지와 같은 스페이서, CD28 유래 막관통 영역, 4-1BB 유래 세포내 신호전달 영역 및 CD3 제타 유래 신호전달 영역을 포함한다.
[0279] 일부 구체예에 있어서, 그러한 CAR 구조체는 T2A 리보좀 생략 요소 및/또는 tEGFR 서열 (예를 들어, CAR의 후속)을 더 포함하고, 그러한 서열은 각각 서열번호 14 및/또는 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 14 또는 15에 상응하는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 동일성을 나타내는 아미노산 서열이다.
[0280] 용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용되고, 최소 길이에 제한받지 않는다. 제공된 수용체 및 다른 폴리펩타이드 (예를들어, 링커 또는 펩타이드)를 포함하는 폴리펩타이드는 자연 및/또는 비자연 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 용어는 또한 폴리펩타이드의 사후 발현 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화 및 인산화와 같은 변형을 포함한다. 일부 관점에 있어서, 폴리펩타이드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한, 자연 또는 자연 서열에 대한 변형을 포함할 수 있다. 이러한 변형은 부위 특이적 변이를 통해 의도적으로 일어나거나, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 결함을 통해 우연히 일어날 수 있다.
[0281] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용에 의해 세포의해 발현된 수용체, 예를 들어 CAR은 수용체(예를 들어, 첫번째 복용의 세포에 의해 발현된 CAR)로서 1 이상의 면역활성 항원 결정부를 함유한다. 일부 관점에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)은 첫번째 복용에 의해 발현된 수용체(예를 들어, CAR)과 동일하거나, 첫번째 복용량으로 투여된 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)과 실질적으로 동일하다.
[0282] 다양한 복용량으로 대상체에 투여된 세포에 의해 발현된 CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로 인지하거나 질병 또는 병태 또는 치료된 그들의 세포에서 발현된, 관련된 및/또는 특이적인 분자에 결합한다. 분자 (예를 들어, 항원)에 특이적으로 결합하면, 수용체는 일반적으로 ITAM-형질도입 신호와 같은 면역자극 신호를 세포내로 전달하여, 질병 또는 병태를 표적으로 하는 면역 반응을 자극한다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 첫번째 복용량의 세포는 질병 또는 병태의 세포 또는 조직 또는 질병 또는 병태와 관련된 세포 또는 조직에 의해 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.
[0283] 연속 복용의 세포에 의해 발현된 수용체 (예를 들어, CAR)는 일반적으로 특이적으로 첫번째 복용의 CAR과 동일한 항원에 결합하고, 종종 동일한 수용체이거나 첫번째 복용 세포내의 수용체에 극히 유사하다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용의세포상의 수용체는 첫번째 복용의 세포의 수용체와 동일하거나 큰 정도의 유사성을 갖는다.
[0284] 일부 구체예에 있어서, 연속 복용의 세포에 의해 발현된 CAR은 동일한 scFv, 동일한 신호전달 영역 및/또는 첫번째 복용의 세포에 의해 발현된 CAR과 동일한 연결부를 함유한다. 일부 구체예에 있어서, 이는 첫번째 복용과 동일한 보조자극, 자극, 막관통 및/또는 다른 영역을 더 함유한다. 일부 구체예에 있어서, 연속 복용의 CAR의 1 이상의 성분은 첫번째 복용의 CAR과 구별된다.
IX. 조작된 세포
[0285] 수용체를 발현하고 제공된 방법으로 투여된 세포들 중에는 조작된 세포가 있다.
[0286] 세포는 일반적으로 포유류의 세포와 같은 진핵세포이고, 전형적으로 인간 세포이다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프계 기관으로부터 유래되고, 선천적 면역력 또는 적응성 면역력의 세포 (예를 들어, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함하는 골수세포 또는 림프성 세포)와 같은 면역계의 세포이다. 다른 예시적인 세포는 유도된 다능성 줄기세포 (iPSC)를 포함하는 다분화능 및 다능성 줄기세포와 같은 줄기세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 대상체로부터 직접적으로 분리된 및/또는 대상체로부터 분리된 및 동결된 것과 같은 일차 세포이다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 기능, 활성화 정도, 성숙도, 분화의 잠재성, 팽창, 재순환, 배치 및/또는 지속 능력, 항원 특이성 항원 수용체의 종류, 특정 기관 또는 구획에서의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로파인 및/또는 분화의 정도에 따라 정의된 전체 T 세포 모집단, CD4+ 세포, CD8+세포 및 그들의 부분 모집단과 같은 1 이상의 T 세포 또는 다른 세포 종류의 부분집합을 포함한다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종 및/또는 자가유래일 수 있다. 방법들 중에는 기성 방법이 포함된다. 일부 관점에 있어서, 기성 기술과 같은, 유도된 다능성 줄기세포와 같은 세포들은 줄기세포와 같이 다능성 및/또는 다분화성 이다. 일부 구체예에 있어서, 방법들은 대상체로부터 세포를 분리하는 것, 준비하는 것, 가공하는 것, 배양하는 것 및/또는 그들을 조작하는 것 및 냉동보전 전후에 그들을 동일한 대상체에 재도입하는 것을 포함한다.
[0287] T 세포 및/또는 CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 아류형 및/또는 부분 모집단 중에는 미접촉 T 세포 (TN), 효과자 T 세포 (TEFF), 기억 T 세포 및 줄기세포 기억 T 세포 (TSCM), 중심 기억 T (TCM), 효과자 기억 T (TEM) 또는 말단에 분화된 효과자 기억 T 세포, 종양 침윤성 림프구 (TIL), 미성숙 T 세포, 성숙한 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포독성 T 세포, 점막 관련 불변 T (MAIT)세포, 자연에서 발생하고 적응성인 조절 T (Treg)세포, TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH19 세포, TH22 세포, 소포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T세포 및 델타/감마 T 세포와 같은 헬퍼 T 세포와 같은 그들의 아류형이 있다.
[0288] 일부 구체예에 있어서, 세포들은 자연살 (NK)세포이다. 일부 구체예에 있어서, 세포들은 단핵백혈구 또는 과립성백혈구 (예를 들어, 골수성 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구)이다.
[0289] 일부 구체예에 있어서, 세포는 유전 공학을 통해 도입된 1 이상의 핵산을 포함하고, 이에 따라 재조합 또는 유전적으로 조작된 핵산과 같은 생성물을 발현한다. 일부 구체예에 있어서, 핵산은 이종성이고, 즉, 일반적으로 세포에서 나타나지 않거나 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같은 세포로부터 수득된 시료 (예를 들어 일반적으로 조작되는 세포 및/또는 그러한 세포로부터 유래한 유기체로부터 찾을수 없음)에 나타나지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 자연적으로 발견되지 않는 핵산과 같이, 핵산은 자연적으로 발생하지 않고, 여러 개의 상이한 세포 유혈으로부터의 다양한 영역을 코딩하고 있는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함한다.
[0290] 유전 공학을 위한 벡터 및 방법
[0291] 재조합 수용체를 발현하는 유전적으로 조작된 세포를 생성하기 위한 방법, 조성물 및 키트가 제공된다. 레트로바이러스 형질도입, 형질주입 또는 형질 전환과 같은 유전적 조작은 일반적으로 세포내의 재조합 또는 조작된 성분을 코딩하는 핵산의 도입을 포함한다.
[0292] 일부 구체예에 있어서, 유전자 전이는 세포를 먼저 자극하는 것을 통하여 수행되고, 예를 들어, 활성화된 세포의 형질 도입 이후 사이토카인 또는 활성 마커의 발현으로 측정된 예를 들어, 증식, 생존 및/또는 활성과 같은 반응을 유도하는 자극제와 결합하는 것이 있고 치료적 적용에 충분한 수로 배양액이 팽창하는 것이 있다.
[0293] 일부 경우에 있어서, 자극인자 (예를 들어, 림포카인 또는 사이토카인)의 과발현은 대상체에게 독성일 수 있다. 따라서, 일부 경우에 있어서, 조작된 세포는 입양 면역치료법의 투여와 같이 생체내 음성 선택에 세포가 민감해지도록 하는 유전자 절편을 포함한다. 예를 들어, 일부 관점에 있어서, 세포는 그들이 투여받은 대상체의 생체내 조건의 변화의 결과로서 제거될 수 있도록 조작된다. 음성 선택이 가능한 표현형은 투여된 제제, 예를 들어 조성물에 민감성을 부여하는 유전자의 주입에 기인할수 있다. 음성 선택가능한 유전자는 간시클로비르 (ganciclovir) 감수성을 부여하는 단순헤르페스바이러스 유형 I 티미딘 키나아제 (HSV-I TK)유전자 (Wigler et al., Cell II :223, I977); 세포내 히포크산틴포스포리보실전이효소 (HPRT) 유전자, 세포내 아데닌 포스포리보실기전이효소 (APRT)유전자, 박테리아성 시토신 탈아미노효소 (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992))를 포함한다.
[0294] 일부 관점에 있어서, 세포는 사이토카인 또는 다른 인자의 발현을 촉진하기 위해 더 조작된다. 유전적으로 조작된 성분 (예를 들어, 항원 수용체, 예를 들어, CAR)을 도입하기 위한 다양한 방법은 잘 알려져 있고, 제공된 방법 및 조성물이 사용될 수 있다. 예시적인 방법은 수용체를 코딩하는 핵산의 전달을 위한 방법을 포함하고 이는 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스의 형질도입, 트랜스포존 및 전기천공법과 같은 바이러스를 통한 것을 포함한다.
[0295] 일부 구체예에 있어서, 재조합 핵산은 예를 들어, 유인원 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스, 아데노연관바이러스 (AAV)으로부터 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 이용하여 세포내로 전달된다. 일부 구체예에 있어서, 재조합 핵산은 감마-레트로바이러스성 벡터와 같은 재조합 렌티바이러스성 벡터 또는 레트로바이러스성 벡터를 이용하여 T 세포로 전달된다 (Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557를 참조).
[0296] 일부 구체예에 있어서, 레트로바이러스성 예를 들어, 몰로니 쥐 백혈병 바이러스(MoMLV), 척수증식 육종 바이러스 (MPSV), 쥐 배아 줄기세포 바이러스 (MESV), 쥐 줄기세포 바이러스(MSCV), 비장병소 형성 바이러스 (SFFV) 또는 아데노연관 바이러스 (AAV)로부터 유래된 벡터는 긴 말단 반복 서열(LTR)을 가진다. 대부분의 레트로바이러스성 벡터는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래된 것을 포함한다. 레트로바이러스는 전형적으로 인간을 포함한 여러 종의 숙주세포를 감염시킬수 있음을 의미하는 양친매성(amphotropic)이다. 하나의 구체예에 있어서, 발현될 유전자는 레트로바이러스 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 많은 예시적인 레트로바이러스 시스템이 설명되어 있다 (예를 들어, 미국 특허번호 제5,219,740; 6,207,453; 5,219,740호, Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; and Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109).
[0297] 렌티 바이러스성 형질도입 방법은 알려져 있다. 예시적인 방법은 예를 들어, Wang et al. (2012) J. Immunother . 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol . 506: 97-114; 및 Cavalieri et al. (2003) Blood.　 102(2): 497-505에 개시되어 있다.
[0298] 일부 구체예에 있어서, 재조합 핵산은 T 세포에 전기천공법을 통해 전달된다 (예를 들어, Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 and Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437). In some embodiments, recombinant nucleic acids are transferred into T cells via transposition (see, e.g., Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현하는 다른 방법들은 인산칼슘형질주입 (예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y. 에 개시된 바와 같은), 원형질체융합, 양이온성 리포좀매개 주입; 텅스텐 입자 촉진 미세입자 충격 (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 스트론튬 인산염 DNA 공동침전 (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))을 포함한다.
[0299] 재조합 생성물을 코딩하는 핵산의 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터는 예를 들어, 국제특허출원공개번호 WO2014055668 및 미국특허번호 제7,446,190에 개시되어 있다.
[0300] 추가적인 핵산 중에는, 예를 들어 도입을 위한 유전자는 치료의 효능을 개전하기 위한, 전달된 세포의 생존능력 및/또는 기능의 향상을 위한 것들이 있고; 생체내 생존 또는 현지화를 평가하기 위한 것과 같은 세포의 선별 및/또는 세포를 평가 하기 위한 유전적 마커를 제공하는 유전자; Lupton S. D. et al., Mol . and Cell Biol ., 11:6 (1991)에 개시된 것과 같이 예를 들어, 세포를 생체내에서 음성 선택에 민감하게하여 안정성을 향상시키기 위한 유전자; 및 Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); 또한 지배적인 양성 선별 마커와 음성 선별 마커의 융함으로부터 유래된 이중기능성의 선택가능한 융합 유전자의 사용을 개시하는 Lupton et al.에 의한 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 문헌을 참조하라. Riddell et al., 미국특허번호 제6,040,177, 컬럼 14-17을 참조하라.
조작을 위한 세포의 준비
[0301] 일부 구체예에 있어서, 조작된 세포의 준비는 1 이상의 배양 및/또는 준비단계를 포함한다. CAR과 같은 형질전환 수용체를 코딩하는 핵산의 도입을 위한 세포는 생물학적 시료, 예를 들어 대상체로부터 얻어지거나 유래하는 것과 같은 시료로부터 분리될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 세포가 분리된 대상체는 질병 또는 병태를 가지는 대상이거나, 세포 치료를 필요로 하는 대상이거나, 세포 치료가 투여될 대상이다. 일부 구체예에 있어서, 상기 대상체는 세포가 분리되고, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 치료와 같은 특정 치료적 개입이 요구되는 인간이다.
[0302] 따라서, 일부 구체예에 있어서 세포는 일차 세포 (예를 들어, 일차 사람세포)이다. 시료는 조직, 유체 및 대상체로부터 직접 취해진 다른 시료뿐만 아니라 분리, 원심분리, 유전공학 (예를 들어, 바이러스 벡터의 형질도입), 세척 및/또는 배양과 같은 1 이상의 가공단계로부터 얻어지는 시료를 포함한다. 생물학적 시료는 생물학적 공급원으로부터 직접 얻어지는 시료 또는 가공된 시료일 수 있다. 생물학적 시료는 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀과 같은 체액, 이로부터 유래된 가공된 시료를 포함하는 조직 및 기관 시료를 포함하나 이에 한하지 않는다.
[0303] 일부 관점에 있어서, 세포로부터 유래하거나 분리된 시료는 혈액 또는 혈액-유래 시료이거나 또는 분리반출법 또는 백혈구성분채집술 생성물 이거나 이로부터 유래한 것이다. 예시적인 시료는 전혈, 말초혈액단핵세포 (PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 내장 관련 림프성 조직, 점막관련 임파 조직, 비장, 다른 림프계 조직, 간, 폐, 위장, 장, 대장, 신장, 이자, 가슴, 뼈, 전립선, 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 다른 기관 및/또는 이로부터 유래된 세포를 포함한다. 시료는 세포 치료 (예를 들어, 입양 세포 치료) 측면에서, 자가유래 및 동종이계 공급원으로부터 얻어지는 시료를 포함한다.
[0304] 일부 구체예에 있어서, 세포는 세포계, 예를 들어, T 세포계로부터 얻어진다. 일부 구체에에 있어서 세포는 이종발생성의 공급원, 예를 들어, 쥐, 큰쥐, 영장류 및 돼지로부터 얻어진다.
[0305] 일부 구체예에 있어서, 세포의 분리는 1 이상의 준비 및/또는 비친화성에 기초한 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 실시예에 있어서, 세포는 1 이상의 시약의 존재하에 세척되고, 원심분리되고 및/또는 배양되고, 예를 들어, 원하지 않는 성분을 제거하고 원하는 성분을 풍부하게 하기 위해, 특정 시약에 민감한 세포를 용해시키거나 제거한다. 일부 실시예에 있어서, 세포는 밀도, 접착성, 크기, 특정구성요소에 대한 민감성 및/또는 저항성과 같은 1 이상의 특성에 기초하여 분리된다.
[0306] 일부 실시예에 있어서, 대상체의 순환하는 혈액으로부터 세포는 분리반출법 또는 백혈구성분채집술에 의하여 얻어진다. 시료는 일부 관점에 있어서, T 세포, 단구, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함하는 림프구를 함유하고, 일부 관점에 있어서는, 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
[0307] 일부 구체예에 있어서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는 세척되는데, 예를들어 혈장 부분을 제거하고 후속 가공 과정을 위해 세포를 적절한 완충액 또는 매질에 위치시키기 위함이다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 인산완충식염수 (PBS)로 세척된다. 일부 구체예에 있어서, 세척액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 이가 양이온 또는 그 전부가 부족하다. 일부 관점에 있어서, 세척단계는 제조자의 지시에 따라 반자동 "병류 (flow-through)"원심분리기 (예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)에 의해 수행된다. 일부 관점에 있어서, 세척 단계는 제조자의 지시에 따른 환류여과 (TFF)에 의해 수행된다. 일부 구체예에 있어서, 세포는 예를 들어, Ca++/Mg++ 없는 PBS와 같은 다양한 생체적합성 완충액에 세척후 재현탁된다.
[0308] 일부 구체예에 있어서, 방법은 적혈구를 융해시키고 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심분리를 하여 말초혈액으로부터 백혈구를 준비하는 것과 같은 밀도 기반 세포 분리 방법을 포함한다.
[0309] 일부 구체예에 있어서, 분리방법은 표면 마커 (예를 들어, 표면 단백질), 세포내 마커 또는 핵산과 같은 1 이상의 특정 분자의 세포내의 발현 또는 존재에 기반한 다른 세포 종류의 분리를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 그러한 마커에 기초한 공지된 임의의 분리 방법이 사용될 수 있다. 일부 구체예에 있어서, 분리는 친화도 또는 면역친화도에 기초한 분리이다. 예를 들어, 단리는 일부 관점에 있어서는 일반적으로 항체 또는 결합 파트너에 결합한 세포를 항체 또는 결합파트너에 결합하지 않은 세포로부터 세척 및 분리하는 단계를 거친 후, 예를 들어, 항체 또는 그러한 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너의 배양에 의한 세포의 발현 또는 1 이상의 마커의 발현 수준, 전형적으로는 세포 표면 마커에 기반한 세포 및 세포집단의 분리를 포함한다.
[0310] 그러한 분리 단계는 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 보유되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 보유되는 음성 선택에 기초할 수 있다. 일부 실시예에 있어서는, 두 분획은 추가 사용을 위해 보유된다. 일부 관점에 있어서, 음성 선택은 항체가 이종 집단에서 특이적으로 세포 유형을 식별하는 것이 가능하지 않을 때 특히 유용하고, 그러한 분리는 원하는 집단이외의 세포에 의해 발현된 마커에 기초하여 수행되는 것이 가장 좋다.
[0311] 분리는 특정 세포 모집단 또는 특정 마커를 발현하는 세포의 100% 농축 또는 제거를 초래할 필요는 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것과 같은, 특정 유형의 세포의 양성 선택 또는 세포의 풍부화는 그러한 세포의 수 또는 백분율의 증가를 의미하지만, 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 제거를 초래할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 그러한 세포의 수 도는 백분율의 감소를 의미하지만, 그러한 모든 세포의 완전한 제거를 초래할 필요는 없다.
[0312] 일부 실시예에 있어서, 하나의 단계로부터 양 또는 음으로 선택된 분획이 후속 양성 또는 음성 선택과 같은 다른 분리단계를 목적으로하는 다중 단게의 분리 단계는 수행된다. 일부 구체예에 있어서, 단일 분리 단계는 음성 선택을 위한 표적이 되는 마커에 각각 특이적인 복수의 항체 또는 결합 파트너가 있는 세포를 배양함으로써 다수의 마커를 동시에 발현하는 세포를 고갈시킬수 있다. 마찬가지로, 다수 세포 유형은 다양한 세포 유형에서 발현되는 다수의 항체 또는 결합 파트너를 가지는 세포를 배양함으로써 동시에 양성으로 선택될 수 있다.
[0313] 예를 들어, 일부 관점에서, 양성 또는 1 이상의 표면 마커를 높은 수준으로 발현하는 세포와 같은 T 세포의 특정 부분 모집단 (예를 들어, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및/또는 CD45RO+ T 세포)는 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 분리된다.
[0314] 예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는 CD3/CD28 접합 자성 비드 (예를 들어, DYNABEADS? M-450 CD3/CD28 T 세포 팽창기)를 이용하여 양성적으로 선택될 수 있다.
[0315] 일부 구체예에 있어서, 분리는 양성 선택에 의한 특정 세포집단의 농축 또는 음성 선택에 의한 특정 세포집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구체예에 있어서, 양성 또는 음성 선택은 양성 또는 음성 선택상 상대적으로 높은 수준 (마커하이(markerhigh))으로 발현되거나 발현되는 (마커+) 1 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 1 이상의 항체 또는 다른 결합제제가 있는 세포를 배양함으로써 수행된다.
[0316] 일부 구체예에 있어서, T 세포는 PBMC 시료로부터 B 세포, 단구 또는 CD14와 같은 다른 백혈구와 같은 비T 세포상에서 발현되는 마커의 음성 선택에 의해 분리된다. 일부 관점에 있어서는, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계는 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포독성 T 세포를 분리하는데 사용된다. 그러한 CD4+ 및 CD8+ 집단은 1 이상의 미분화, 기억 및/또는 이펙터 T 세포 부분 모집단에서 상대적으로 높은 정도로 발현된 또는 발현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 추가 분류될 수 있다.
[0317] 일부 구체예에 있어서, CD8+ 세포는 각 부분 모집단과 관련된 표면 항원에 양성 또는 음성 선택돠 같은 방법으로 미분화, 중심 기억, 이펙터 기억 및/또는 중심 기억 줄기세포포에 대해 더 농축되거나 소진된다. 일부 구체예에 있어서, 중심 기억 T (TCM) 세포에 대한 농축은 일부 관점에서는, 그러한 부분 모집단에서 특히 강건한, 투여 후의 긴 기간의 생존, 팽창 및/또는 접종을 개선하는 것과 같은 효능의 증가를 위해 수행된다. Terakuraet al. (2012) Blood.1:72-82; Wang et al. (2012) J Immunother . 35(9):689-701를 참조하라. 일부 구체예에 있어서, TCM-농축 CD8+ 세포 와 CD4+ T 세포의 결합은 효능은 추가로 강화시킨다.
[0318] 구체예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 부분 집합에 모두 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하는 것과 같이 CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획을 농축키거나 고갈시킬 수 있다.
[0319] 일부 구체예에 있어서, 중심 기억 T (TCM) 세포에 대한 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, 및/또는 CD 127의 양성 또는 높은 표면 발현에 기초하고; 일부 관점에서, CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 관점에 있어서, TCM 에 대해 농축된 CD8+ 집단의 분리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 양성 선택 또는 CD62L을 발현하는 세포에 대한 농축에 의해 수행된다. 하나의 관점에 있어서, 중심 기억 T (TCM) 세포의 농축은 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분핵부터 시작으로 수행되고, CD4 발현은 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성선택 및 a CD62L에 기초한 양성선택의 대상이다. 일부 관점에서 이러한 선택은 순차적으로 수행되고 다른 측면에서는 어느 순서로든 차례로 수행된다. 일부 관점에 있어서, CD8+ 세포 모집단 또는 부분 모집단을 준비하는데 사용된 동일한 CD4 발현에 기초한 선택 단계는 CD4+ 세포 모집단 또는 부분 모집단을 생성하는데 사용되며, CD4-기초한 분리로부터의 그러한 양성 및 음석 분획 모두가 입양으로 1 이상의 추가 양성 또는 음성 선택 단계 후의 방법의 후속 단계에서 사용되기 위해 보유된다.
[0320] 특정 실시예에 있어서, PBMC 시료 또는 다른 백혈구 시료는 CD4+ 세포의 선택에 적용되고, 여기서 양성 및 음성 분획은 모두 보유된다. 이어서, 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초한 음성선택 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중심 기억 T 세포의 마커 특성에 기초한 양성 선택을 에 적용되고, 여기서 양성 선택 및 음성 선택은 임의의 순서로 수행된다.
[0321] CD4+ T 헬퍼 세포는 미분화, 중심 기억 및 효과자 세포로 세포 표면 항원을 가지는 세포 집단을 인식함으로써 분류한다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 얻을수 있다. 일부 구체예에 있어서, 미분화 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구체예에 있어서, 중심 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구체예에 있어서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
[0322] 하나의 실시예에 있어서, 음성선택에 의한 CD4+ 에 대한 농축을 하기 위해, 단일클론 항체 혼합제는 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리를 하기 위해 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합한다. 예를 들어, 일부 구체예에 있어서, 세포 또는 세포 집단은 면역 자성 (또는 자기친화력) 분리 기술을 이용하여 분리되거나 단리된다 (Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒ Humana Press Inc., Totowa, NJ).
[0323] 일부 관점에 있어서, 분리될 세포의 시료 또는 조성물은 상자성 비드 (예를 들어, Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 같은 자기적으로 반응하는 입자 또는 미세입자와 같은 작고 자화가능한 또는 자기적으로 반응하는 물질로 배양된다. 자기 적으로 반응하는 물질, 예를 들어 입자는 일반적으로 세포, 세포 또는 분리되는 것이 바람직한 세포 집단에 존재하는 표면 마커와 같은 분자에 특이적으로 결합하는 항체와 같은 결합 파트너에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
[0324] 일부 구체 예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특정 결합 구성에 결합 된 자기적으로 반응하는 물질을 포함한다. 자기 분리법에 사용되는 많은 공지된 자기적으로 반응하는 물질이 있다. 적합한 자기 입자는 Molday, U.S. Pat. 미국 특허번호 제4,452,773호 및 유럽 특허명세서 EP 452342B에 기재된 것을 포함하고, 이들은 본 발명에 참조로 포함된다. Owen 미국 특허번호 제4,795,698호 및 Liberti et al., 미국 특허번호 제5,200,084호에 기재된 것과 같은 콜로이드 크기의 입자는 다른 예이다.
[0325] 배양은 일반적으로 항체 또는 결합 파트너, 또는 자성 입자 또는 비드에 부착 된 그러한 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 이차 항체 또는 다른 시약과 같은 분자가 만약 시료내의 세포에 존재한다면 세포 표면에 특이적으로 결합하는 조건하에서 수행된다.
[0326] 일부 관점에 있어서, 시료는 자기장 내에 배치되고, 자기적으로 반응하는 또는 자화가능한 입자들이 부착된 세포들은 자석에 끌려서 비표지된 세포들로부터 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 끌리는 세포는 유지됩니다; 음성 선택의 경우, 끌리지 않은 세포 (비표지된 세포)는 유지된다. 일부 관점에 있어서, 양성 및 음성 선택의 조합은 양성 및 음성 분획이 보유되고 추가 처리되거나 추가 분리 단계를 목적으로 하는 동일한 선택 단계동안에 수행된다.
[0327] 특정 구체예에 있어서, 자기적으로 반응하는 입자는 1차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘에서 코팅된다. 특정 구체예에 있어서, 자성 입자는 1 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구체예에 있어서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 2차 항체에 특이적인 세포 유형 또는 다른 결합 파트너 (예를 들어, 스트렙타비딘)으로 코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구체예에 있어서, 스트렙 타비딘으로 코팅된 자기 입자는 바이오티닐화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
[0328] 일부 구체예에 있어서, 자기적으로 반응하는 입자는 후속 배양된, 배양 및/또는 조작되는 세포에 부착된 채로 남게되며; 일부 관점에 있어서, 입자는 환자에게 투여하기 위해 세포에 부착된 채로 남는다. 일부 구체예에 있어서, 자화가능한 또는 자기적으로 반응하는 입자는 세포로부터 제거된다. 세포로부터 자화가능한 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어 경쟁하는 비표지된 항체 및 자화가능한 입자 또는 절단가능한 결합으로 접합된 항체를 사용하는 것을 포함한다. 일부 구체예에 있어서, 자화가능한 입자는 생분해성이다.
[0329] 일부 구체예에 있어서, 친화도에 기초한 선택은 자기 활성화 세포 분류 (MACS) (Miltenyi Biotech, Auburn, CA)를 통해 이루어진다. 자기 활성화 세포 분류 (MACS) 시스템은 자성 입자가 부착된 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 특정 구체예에 있어서, MACS는 비표적 종 및 표적 종을 외부 자기장의 인가 후에 순차적으로 용출시키는 모드로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 종이 용출되는 동안 제 위치에 유지된다. 이어서, 이 첫 번째 용출 단계가 완료된 후, 자기장에 갇히고 용출되는 것이 방지된 종은 용출 및 회수할 수 있는 방법으로부터 자유로워 진다. 특정 구체예에 있어서, 비표적 세포는 세포의 이종 집단으로부터 표지되고 고갈된다.
[0330] 특정 구체예에 있어서, 방법의 단리 또는 세포 준비, 분리, 가공, 배양, 배양 및/또는 제제화 단계 중 1 이상을 수행하는 시스템, 장치 또는 기구를 사용하여 단리 또는 분리가 수행된다. 일부 관점에 있어서, 예를 들어 에러, 사용자 조작 및/또는 오염을 최소화하기 위해 이들 단계들 각각을 시스템은 폐쇄, 무균 환경에서 수행하는데 사용된다. 하나의 실시예에 있어서, 시스템은 국제 특허출원공개번호 WO2009/072003 또는 US 20110003380 A1에 설명된 시스템이다.
[0331] 일부 구체예에 있어서, 시스템 또는 기구는 통합 또는 자체 내장 시스템에서, 및/또는 자동화된 또는 프로그램 가능한 방식으로 예를 들어, 단리, 가공, 공학 및 제제화 단계의 모두와 같은 1 이상의 단계를 수행한다. 일부 관점에 있어서, 시스템 또는 기구는 시스템 또는 기구와 통신하기 위한 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함하고, 이는 사용자가 가공, 간리, 조작 및 제제화 단계의 결과를 프로그램하고, 제어하고, 평가하는 것을 가능하게 하거나 가공, 간리, 조작 및 제제화 단계의 다양한 측면을 조정할 수 있게 한다.
[0332] 일부 관점에 있어서, 분리 및/또는 다른 단계는 ClinMACS 시스템 (Miltenyi Biotic)을 사용하여, 예를 들어 밀폐된 및 멸균 시스템에서 치료적 규모 수준의 세포의 자동화된 분리를 위해 수행된다. 요소에는 통합 마이크로컴퓨터, 자기 분리 장치, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 관점에서의 통합 컴퓨터는 계측기의 모든 요소를 제어하고 표준화된 순서로 반복적인 절차를 수행하도록 시스템에 지시한다. 일부 관점에서의 자기 분리 장치은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 컬럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 배관 세트 전체의 유속을 제어하며, 핀치 밸브와 함께, 시스템을 통한 완충액의 제어된 흐름과 세포의 지속적인 부유를 보장한다.
[0333] 일부 관점에서의 CliniMACS 시스템은 멸균, 비발열성 용액으로 공급되는 항체에 결합된 자화가능한 입자를 사용한다. 일부 구체예에 있어서, 자성 입자로 세포를 표지한 후, 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 준비 백을 튜빙 세트에 연결하고, 그다음 완충액을 함유하는 백과 세포 수집 백을 연결한다. 튜빙 세트는 사전-컬럼 (pre-column)과 분리 컬럼 (separation column)을 포함하는 사전 조립된 무균 튜빙으로 구성되어 있으며, 일회용으로 만 사용된다. 분리 프로그램을 시작하면, 시스템이 자동으로 세포 시료을 분리 컬럼에 적용한다. 표지 된 세포는 컬럼 내에 보유되는 반면, 표지되지 않은 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구체예에 있어서, 본 발명에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되지 않고 컬럼에 보유되지 않는다. 일부 구체예에 있어서, 본 발명에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 컬럼에 보유된다. 일부 구체예에 있어서, 본 발명에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장의 제거후 컬럼으로부터 용출되어 세포 수집 백 내에 수집된다.
[0334] 특정 구체예에 있어서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템 (Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 관점에서의 CliniMACS Prodigy 시스템은 원심분리에 의한 세포의 자동화 된 세척 및 분획화를 허용하는 세포 가공 구성을 갖추고 있다. CliniMACS Prodigy 시스템에는 공급 세포 제품의 거시적 층을 식별하여 최적의 세포 분획 종말점을 결정하는 탑재된 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어가 포함될 수도 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 세포 분화 및 팽창, 항원 탑재 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 수행하는 일체형 세포 배양 챔버를 포함할 수 있다. 입력 포트는 멸균 제거 및 매질의 보충을 허용할 수 있으며, 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터링 할 수 있다. 예를 들어, Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35 (9) : 651-660, Terakuraet al. (2012) Blood.1 : 72-82, Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9) : 689-701를 참조하라.
[0335] 일부 구체예에서, 본 발명에 기재된 세포 집단은 다수의 세포 표면 마커에 대해 염색 된 세포가 유체 흐름에서 운반되는 유동세포계수법을 통해 수집 및 농축 (또는 고갈)된다. 일부 구체예에서, 본 발명에 기재된 세포 집단은 예비 스케일 (FACS) 분류를 통해 수집 및 농축 (또는 고갈)된다. 특정 구체예에서, 본 발명에 기재된 세포 집단은 FACS에 기초한 검출 시스템 (예를 들어, WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin et al. (2008) J Biophoton. 1 (5): 355-376 참조)과 조합하여 마이크로전기기계 시스템 (MEMS) 칩의 사용에 의해 수집 및 농축된다. 두 경우 모두, 세포를 여러 마커로 표지하여, 잘 정의된 T 세포 부분 집단을 고순도로 분리할 수 있게 한다.
[0336] 일부 구체예에서, 항체 또는 결합 파트너는 1 이상의 검출가능한 마커로 표지되어 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체와의 결합에 기초할 수 있다. 일부 실시예에서, 1 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 예비 스케일 (FACS)을 포함하는 형광-활성 세포 분류 (FACS) 및/또는 예를 들어 유동세포계수 탐지와 조합한 마이크로전자기계 시스템 (MEMS) 칩과 같은 유체 흐름내에서 수행될 수 있다. 이러한 방법은 동시에 여러 마커를 기초로하여 양성 및 음성 선택을 허용한다.
[0337] 일부 구체예에서, 제조 방법은 단리, 배양 및/또는 조작 전후에 세포를 동결, 예컨대 냉동 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 동결 및 후속 해동 단계는 과립구 및 어느 정도의 세포 집단 내 단핵구를 제거한다. 일부 구체예에서, 세포는 예를 들어, 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 후에, 냉동 용액에 현탁된다. 일부 관점에서 임의의 다양한 공지된 동결 용액 및 파라미터가 사용될 수 있다. 일 실시예는 20 % DMSO 및 8 % 인간 혈청 알부민 (HSA) 또는 다른 적절한 세포 동결 매질을 함유하는 PBS를 사용하는 것을 포함한다. 그런 다음 DMSO와 HSA의 최종 농도가 각각 10 %와 4 %가 되도록 매질로 1:1로 희석한다. 이어서, 세포를 일반적으로 분당 1˚의 속도로 -80 ℃로 냉동시키고 액체 질소 저장 탱크의 증기 상에 저장한다.
[0338] 일부 구체예에서, 제공된 방법은 경작, 재배, 배양 및/또는 유전 공학 단계를 포함한다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 고갈된 세포 집단 및 배양 개시 조성물을 배양 및/또는 조작하는 방법이 제공된다.
[0309] 따라서, 일부 구체예에서, 세포 집단을 배양 개시 조성물에서 배양한다. 뱁양 및/또는 조작은 배양 또는 세포 배양을 위한 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜빙 세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 백 또는 기타 용기와 같은 배양 용기에서 수행될 수 있다.
[0340] 일부 구체예에서, 세포는 유전공학적으로 또는 유전공학과 관련하여 배양 및/또는 재배된다. 배양 단계는 배양, 재배, 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재하에 배양된다. 그러한 조건은 집단에서 세포의 증식, 팽창, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고 및/또는 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전공학을 위한 세포를 준비하는 것을 포함한다.
[0341] 조건은 특정 매질, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제 (예를 들어, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 사이토카인, 케모카인 등의 자극 인자), 항원 결합 파트너, 융합단백질, 재조합 용해성 수용체 및 세포를 활성화시키도록 고안된 임의의 다른 제제 중 1 이상을 포함 할 수있다.
[0342] 일부 구체예에서, 자극 조건 또는 제제는 TCR 복합체의 세포내 신호 전달 영역을 활성화시킬 수 있는 1 이상의 제제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 관점에서, 제제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 신호 전달 캐스케이드를 작동시키거나 개시시킨다. 이러한 제제는 예를 들어 비드와 같은 고체 지지체 및/또는 1 이상의 사이토카인에 결합된 TCR 성분 및/또는 보조자극 수용체에 특이적인 항체, 예를 들어 항CD3, 항CD28과 같은 항체를 포함할 수 있다. 입양으로, 확장 방법은 항CD3 및/또는 항CD28 항체를 배양 매질에 (예를 들어, 적어도 약 0.5 ng/ml의 농도로) 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 자극제는 IL-2 및/또는 IL-15, 예를 들어, 적어도 약 10 유닛/mL의 IL-2 농도를 포함한다.
[0343] 일부 관점에서, 배양은 Riddell et al., 미국 특허번호 제6,040,177호, Klebanoff et al., (2012) J Immunother. 35 (9): 651-660, Terakuraet al. (2012) Blood.1 : 72-82 및 / 또는 Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9) : 689-701에 개지된 것과 같은 기술에 따라 수행된다.
[0344] 일부 구체예에서, T- 세포는 비분할 말초 혈액 단핵구 (PBMC)와 같은 배양 개시 조성물 공급 세포에 첨가함으로써 확대된다 (예를 들어, 수득한 세포 집단은 확대되기 위한 초기 모집단에서 각 T 림프구에 대한 적어도 약 5, 10, 20 또는 40 이상의 PBMC 공급 세포를 포함함); 및 (예를 들어, T 세포의 수를 확대시키기에 충분한 시간 동안) 배양물을 배양한다. 일부 관점에서, 비분할 공급 세포는 감마 조사 PBMC 공급 세포를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, PBMC는 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600rad 범위의 감마선으로 조사된다. 일부 관점에서, 공급 세포는 T 세포 집단을 첨가하기 전에 배양 매질에 첨가된다.
[0345] 일부 구체예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 적어도 약 25 ℃, 일반적으로 약 30 ℃ 및 일반적으로 약 37 ℃를 포함한다. 입양으로, 배양은 공급 세포로서 비분할 EBV 형질전환 림프구성 세포 (LCL)를 첨가하는 것을 더 포함할 수있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rad의 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 관점에서의 LCL 공금 세포는 임의의 적합한 양, 예를 들어 약 10:1 이상의 LCL 공급 세포 대 초기 T 림프구의 비율로 제공된다.
[0346] 구체예에 있어서, 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포와 같은 항원 특이 적 T 세포는 항원으로 미분화 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극함으로써 수득된다.　예를 들어, 항원 특이적인 T 세포계 또는 클론은 T 세포를 감염된 대상체로부터 단리하고 생체외에서 동일한 항원으로 세포를 자극함으로써 거대세포바이러스 항원에 생성될 수 있다.
X. 성분 및 제제
[0347] 또한, 주어진 용량 또는 그들의 분획으로 투여하기 위한 세포의 수를 포함하는 단위 복용 형태 조성물과 같은, 의약 조성물 및 제제를 포함하는 투여를 위한 세포를 포함하는 조성물이 제공된다. 의약 조성물 및 제제는 일반적으로 1 이상의 임의의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 첨가제를 포함한다. 일부 구체예에서, 조성물은 1 이상의 부가적인 치료제를 포함한다.
[0348] 용어 "의약 제제"는 그안에 활성화 되도록하는 활성 성분의 생물학적 활성을 허용하도록 하는 그러한 형태인 준비를 의미하고, 이는 제제가 투여될 수 있는 대상체에 허용되지 않는 독성이 있는 추가적인 구성을 함유하지 않는다.
[0349] "약학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분 이외의, 의약 제제의 성분을 의미하며, 이는 환자에게 비독성이다. 약학적으로 허용가능한 담체는 완충제, 첨가제, 안정화제 또는 방부제를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
[0350] 일부 관점에서, 담체의 선택은 부분적으로 특정 세포에 의해 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다. 따라서, 다양한 적절한 제제가 있다. 예를 들어, 의약 조성물은 방부제를 함유할 수 있다. 적합한 방부제는 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 소듐 벤조에이트 및 벤즈알코늄 클로라이드를 포함할 수 있다. 일부 관점에서, 2 이상의 방부제의 혼합물이 사용된다. 방부제 또는 이들의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.0001 중량 % 내지 약 2 중량 %의 양으로 존재한다. 담체는 예를 들어 Remington 's Pharmaceutical Sciences 제 16 판, Osol, A. Ed. (1980)에 개시되어 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이며: 인산염, 시트르산 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르빈산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 방부제 (염화 옥타데실메틸벤질암모늄, 염화 헥사메토늄, 염화벤즈알코늄, 염화벤즈에토늄, 페놀 알콜, 부틸 알콜 또는 벤질 알콜, 메틸 또는 프로필 파라벤 같은 알킬 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 사이클로헥산올, 3-펜탄올 및 m-크레졸); 저 분자량 (약 10 잔기 미만) 폴리 펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린과 같은 단백질; 폴리 비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 포도당, 만노오스 또는 덱스트린을 비롯한 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염 형성 착이온; 금속 착물 (예를 들어, Zn- 단백질 복합체); 및 / 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
[0351] 일부 관점에서 완충제가 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는 예를 들어 시트르산, 시트르산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 관점에서, 2 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이들의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.001 중량 % 내지 약 4 중량 %의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물의 제조 방법은 공지되어 있다.　예시적인 방법은 예를 들어, Remington : The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (2005 년 5 월 1 일)에 보다 자세하게 설명되어 있다.
[0352] 제제는 수용액을 포함할 수있다. 제제 또는 조성물은 또한 세포로 치료되는 특정 징후, 질병 또는 병태에 유용한 1 이상의 활성 성분, 좋기로는 세포에 상보적인 활성을 가지며, 각각의 활성이 서로 악영향을 주지 않는다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합하여 적절하게 존재한다. 따라서, 일부 구체예에서, 의약 조성물은 화학요법 제제, 예컨대 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맵, 빈블라스틴 및/또는 빈크리스틴과 같은 다른 의약 활성 제제 또는 약물을 더 포함한다.
[0353] 일부 구체예에서의 의약 조성물은 질병 또는 병태를 치료하거나 예방하기에 유효한 양, 예를 들어 치료 유효량 또는 예방적 유효량으로 세포를 함유한다. 일부 구체예에서의 치료 또는 예방 효능은 치료된 대상체의 주기적 평가에 의해 모니터링된다. 원하는 복용량은 세포의 단일 환약 투여, 세포의 다량 환약 투여에 의해, 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
[0354] 일부 실시 양태에서, 조성물은 질병 또는 병태의 부담을 감소시키는데 효과적인 양으로 및/또는 대상체에서 CRS 또는 중증 CRS를 초래하지 않는 양으로 및/또는 여기에 설명된 방법의 다른 결과를 나타내는 양으로 세포를 포함한다.
[0355] 세포 및 조성물은 표준 투여 기술, 제제 및/또는 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 세포의 투여는 자가 또는 이종일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응 세포 또는 전구세포는 한 대상체에서 얻을 수 있으며, 동일한 대상체 또는 다른 호환 대상체에 투여할 수 있다. 말초혈액유래 면역반응 세포 또는 그 자손 (예를 들어, 생체내, 생체외 또는 시험관내 유래)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥내 주사 또는 비경구 투여를 포함하는 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물 (예를 들어, 유전자 변형 면역반응 세포를 함유하는 의약 조성물)을 투여하는 경우, 이는 일반적으로 단위 복용량의 주사 가능한 형태 (용액, 현탁액, 에멀젼)로 제형 화될 것이다.
[0356] 제제는 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 구강, 설하 또는 좌약 투여용 제제를 포함한다. 일부 구체예에서, 세포 집단은 비경구로 투여된다. 본 발명에에 사용된 용어 "비경구"는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 세포는 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 사용하여 대상체에게 투여된다.
[0357] 일부 구체예에서의 조성물은, 임의의 관점에서 선택된 pH로 완충될 수 있는 멸균 유체 제제, 예를 들어 등장성 수용액, 현탁액, 에멀전, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공된다. 액체 제제는 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조하기 쉽다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기에 다소 편리하다. 한편, 점성 조성물은 특정 조직와의 더 긴 접촉 시간을 제공하기 위해 적절한 점도 범위내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은 예를 들어 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수있는 담체를 포함할 수 있다.
[0358] 멸균 주사용 용액은 세포를 적합한 담체, 희석제 또는 멸균수, 생리 식염수, 포도당, 덱스트로스 등과 같은 첨가제와 같은 혼합물과 같은 용매에 혼입시킴으로써 제조될 수 있다. 조성물은 요구되는 투여 경로 및 제조 방법에 따라 습윤제, 분산제 또는 유화제 (예를 들어, 메틸셀룰로스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 강화 첨가제, 방부제, 향료 및/또는 색과 같은 보조 물질을 함유할 수 있다. 표준 원고는 일부 관점에서 적절한 제제를 준비하기 위해 참고될 수 있다.
[0359] 항균 방부제, 산화방지제, 킬레이트제 및 완충제를 비롯한 조성물의 안정성 및 무균성을 향상시키는 다양한 첨가제를 첨가할 수 있다. 미생물 작용의 예방은 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 및 소르브산과 같은 다양한 항균 및 항진균제에 의해 보장될 수 있다. 주사용 의약 형태의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 초래될 수 있다.
[0360] 생체내 투여에 사용되는 제제은 일반적으로 무균이다. 무균은 예를 들어 무균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
XII. 제조 제품
[0361] 입양 세포 치료를 위해 제공된 방법에 따라 대상체에게 세포를 투여하고, 세포 및 조성물의 저장 및 투여를 위한 키트 및 장치와 같은 제조 물품도 또한 제공된다.
[0362] 제조 물품은 1 이상의 용기, 전형적으로는 복수의 용기, 포장 재료 및 용기 또는 용기들 및/또는 포장에 또는 이들과 결합 된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함하며, 일반적으로 대상체에 세포를 투여하기 위한 지시를 포함한다.
[0363] 용기는 일반적으로 투여될 세포, 예를 들어 그들의 1 이상의 단위 복용량을 함유한다. 제조 물품은 전형적으로 세포의 단일 단위 복용량을 각각 함유하는 다수의 용기를 포함한다. 단위 복용량은 첫번째 복용으로 대상체에게 투여될 세포의 양 또는 수 또는 첫번째 또는 연속 복용으로 투여될 세포의 수 (또는 그 이상) 일 수 있다. 투여 방법과 관련하여 대상체에게 투여될 세포의 최저 복용량 또는 가능한 최소 복용량일 수 있다. 일부 구체예에서, 단위 복용량은 본 발명의 방법에 따라 특정 질환 또는 증상을 갖는 임의의 대상체 또는 임의의 대상체에게 단일 복용량으로 투여될 세포의 최소 수 또는 세포의 수이다. 예를 들어, 일부 관점에서의 단위 복용량은 상대적으로 낮은 체중 및/또는 상대적으로 낮은 질병 부담의 환자에게 투여될 수 있는 최소 세포 수를 포함할 수 있어, 하나의 경우 및 경우에 따라 1 이상의 단위 복용량은 첫번째 복용량을 받은 대상체예에게 투여되고, 1 또는 1 이상의 단위 복용량은 1 이상의 연속 복용량 (예를 들어, 제공된 방법에 따른)을 받은 대상체에게 투여된다.
일부 구체예에서, 단위 복용량중의 세포의 수는 첫번째 복용으로 특정 대상체 (그세포를 유래시킨 대상체)에게 투여하기를 원하는 재조합 수용체 발현 또는 CAR 발현 세포의 수 또는 세포의 수이다. 일부 구체에예서, 세포는 본 발명에서 제공하거나 필요로하는 방법으로 치료받기 위한 대상체로부터 유래한다.
[0364] 일부 구체에에서, 용기 각각은 개별적으로, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 수의 세포을 함유하는 단위 복용량의 세포를 포함한다. 따라서, 일부 구체예에서, 용기 각각은 동일하거나 대략 또는 실질적으로 동일한 수의 세포 또는 재조합 수용체 발현 세포의 수를 포함한다. 일부 구체예에서, 단위 복용량은 치료된 및/또는 세포가 유래된 대상체의 kg 당 조작된 세포, 총 세포, T 세포 또는 PBMC의 약 1 x 108 미만, 약 5 x 107 미만, 약 1 x 106 미만 또는 약 5 x 105 미만을 포함한다. 일부 구체예에서, 각각의 단위 복용량은 약 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107 또는 1 x 108의 조작된 세포, 전체 세포, T 세포 또는 PBMC를 함유한다.
[0365] 적합한 용기는 예를 들어, 병, 바이알, 주사기 및 주입 백과 같은 유연한 백을 포함한다. 특정 구체예에서, 용기는 백(bag)이다 (예를 들어, 유연한 플라스틱 또는 PVC 백 및/또는 IV 용액 백과 같은 대상체에 세포의 주입에 적합한 것과 같은 유연한 백). 일부 구체예에서의 백은 멸균될 수 있고 및/또는 살균 될 수있어서 세포 및 조성물의 무균 용액 및 전달을 제공한다. 일부 구체예에서, 용기, 예를 들어, 백은 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 또는 1000 ml 용량, 예를 들어 약 10 내지 약 100 또는 약 10 내지 약 500 mL 용량 일 수있다. 일부 구체예에서, 용기 (예를 들어, 백)은 물질 및/또는 물질로부터 만들어지고, 이 물질은 안정하고 및/또는 저온과 같은 1 이상의 다양한 온도에서 세포의 안정한 저장 및/또는 유지를 제공하고, 에를 들어 온도는 약 -20 ℃, -80 ℃, -120 ℃, 135 ℃ 또는 그 이하 및/또는 동결 보존에 적합한 온도 및/또는 세포를 해동하기에 적합한 온도 및 약 37 ℃ 또는 그와 같은 체온과 같은 다른 온도일 수 있고, 예를 들어, 치료 직전의 대상체의 위치 또는 치료 위치 (예를 들어, 병상)에서 해동을 가능하게 하는 온도이다.
[0366] 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성될 수 있다. 일부 구체예에서, 용기는 하나 이상의 포트, 예를 들어 면균 접근 포트를 가지고, 예를 들어 1 이상의 튜브에 튜빙 또는 캐뉼러를 연결하기 위한 포트, 예를 들어 정맥내 또는 다른 주입 및/또는 세포 배양 및/또는 저장 백 또는 다른 용기와 같은 다른 용기에서 및 용기로부터 전달하는 목적으로 연결을 위한 포트를 갖는다. 예시적인 용기는 주입 백, 정맥내 용액 백, 주사 바늘로 관통할 수 있는 마개를 포함하는 바이알을 포함한다.
[0367] 제조 물품은 사용을 위한 1 이상의 식별 정보 및/또는 지시의 1 이상의 조각의 패키지 삽입물 또는 라벨을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 정보 또는 지시는 내용물이 특정 증상 또는 질병을 치료하는 것에 사용될수 있ㅇ거나 사용되어야 함 및/또는 그에 대한 지침을 제공하는 것을 나타낸다. 라벨 또는 포장 삽입물은 제조 물품의 내용물이 질병 또는 병태를 치료하기 위해 사용되어야 함을 나타낼 수 있다. 일부 구체예에서, 라벨 또는 포장 삽입물을, 예를 들어 제공된 방법의 임의의 구체예에 따른 세포의 첫번째 및 연속 복용의 투여를 포함하는 방법을 통해, 예를 들어 세포가 유래된 대상체를 치료하기 위한 지침을 제공한다. 일부 구체예에서, 지침은 첫번째 복용에서 1 단위 복용량, 예를 들어 제조 물품내의 단일 개별 용기의 내용물, 특정 시점에서의 또는 특정 시간의 창 에서 의 1 이상의 연속 복용에 따른 및/또는 대상체내의 1 이상의 인자 또는 결과의 존재 또는 부재 또는 양 또는 정도의 검출후의 투여를 명시한다.
[0368] 일부 구체예에서, 지침은 첫번째 투여 및 연속 투여를 수행함으로써 대상체에게 복수의 단위 복용량을 투여하는 것을 명시한다. 일부 구체예에서, 첫번째 투여는 상기 단위 복용량 중 하나를 대상체에게 전달하는 것을 포함하고, 연속 투여는 하나 또는 복수의 상기 단위 복용량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
[0369] 일부 구체예에서, 지침은 연속 투여가, 예를 들어, 첫번째 투여 또는 이전 투여의 개시에 따른, 첫번째 투여 후, 약 15 내지 약 27 일 또는 약 9 내지 약 35 일, 예를 들면 약 21 일 또는 21 일에서 수행되어야 한다고 명시한다. 일부 구체예에서, 지침은 대상체에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타내는 인자의 혈청 수치가 상기 첫번째 투여 직전의 대상체에서 지표의 혈청수치의 약 10 배 미만, 약 24배 미만 및/또는 약 50배 미만인 및/또는 CRS의 지표가 피크에 도달하고 감소하는 중에 및/또는 대상체가 세포에 의해 발현되는 수용체 (예를 들어, CAR)에 특이적인 검출 가능한 적응성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 것으로 결정된 이후에 연속 복용이 투여되어야한다고 명시한다.
[0370] 일부 구체에에서, 표지 또는 포장 삽입물 또는 포장은 세포가 유래된 및/또는 투여될 대상의 특정 동일성을 나타내기위한 식별자를 포함한다. 자가 전달의 경우, 세포가 유도되는 대상체의 동일성은 세포가 투여될 대상체의 동일성과 동일합니다. 따라서, 식별 정보는 세포들이 세포가 원래 유래된 특정 환자에게 투여되어야 함을 명시할 수 있다. 이러한 정보는 포장 재료 및/또는 라벨에 바코드 또는 다른 코딩된 식별자의 형태로 존재할 수 있거나, 또는 대상체의 이름 및/또는 다른 식별 특징을 나타낼 수 있다.
[0371] 일부 구체예에서의 제조 물품은 1 이상의, 전형적으로는 복수의, 세포를 포함하는 조성물 (예를 들어, 세포가 형성하는 개별 단위 복용량)을 함유하는 용기를 포함할수 있고, 세포독성 또는 다른 치료 제제 (예를 들어, 세포에 동시 또는 임의의 순서로 순차적으로 조합하여 투여되는 것)와 같은 추가의 제제를 포함하는 그 안에 함유된 조성물을 가지는 1 이상의 추가적인 용기를 더 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 부가적으로, 제조 물품은 약학적으로 허용되는 완충제를 포함하는 다른 또는 동일한 용기를 추가로 포함할 수 있다. 그것은 다른 완충액, 희석제, 필터, 튜빙, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 재료를 더 포함할 수 있다.
[0372] 용어 "포장 삽입물"은 치료 제품의 상업용 포장에 통상적으로 포함된 지시를 나타내는데 사용되고, 이는 조짐, 사용법, 복용량, 투여, 병용 요법, 사용금지사유 및/또는 그러한 치료 제품의 용도로의 사용에 관한 경고에 관한 정보를 포함한다.
[0373] 달리 정의되지 않는 한, 여기에 사용된 모든 기술, 표기 및 다른 기술적 및 과학적 용어 또는 용어들은 청구된 주제가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 몇몇 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 본 발명에서 정의되며, 본 발명의 정의를 포함하는 것은 당해 기술 분야에서 일반적으로 이해되는 것 이상의 실질적인 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
[0374] 본 발명에서 사용되는, 단수 형태 "a", "an"및 "the"는 문맥이 달리 명시하지 않는 한 복수 대상을 포함한다. 예를 들어, "a"또는 "an"은 "적어도 하나"또는 "하나 이상"을 의미한다. 본 발명에 기재된 관점 및 변형은 관점 및 변형을 "포함하는" 및/또는 "본질적으로 이루어진다"를 포함하는 것으로 이해된다.
[0375] 본 개시 내용 전반에 걸쳐, 청구된 주제의 다양한 관점이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식에서의 설명은 편의상 및 간략화를 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성없는 제한으로 해석되어서는 안됨을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 설명은 가능한 모든 하위 범위 및 그 범위 내의 개별적인 수치를 구체적으로 개시 한 것으로 간주되어야한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 개재된 값 및 언급된 범위 내의 다른 명시된 또는 개재된 값은 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 작은 범위에 포함될 수 있으며, 기술된 범위 내에서 특별히 배제된 한계를 조건으로 청구 범위 내에 포함될 수 도있다. 언급된 범위가 하나의 한도 또는 한도 모두를 포함하는 경우, 포함된 한도 각각 또는 모두를 제외한 범위가 청구 대상에 또한 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
[0376] 본 명세서에서 사용된 용어 "약"은 이 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지 된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본 명세서에서 "약"의 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 그 자체로 지시하는 구체예를 포함한다 (그리고 설명한다). 예를 들어, "약 X"에 관한 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다.
[0377] 본 발명에 사용된 바와 같이, 조성물은 세포를 비롯한 2종 이상의 제품, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다.
[0378] 본 발명에서 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성"이라는 기재는 특정 마커, 전형적으로 표면 마커의 세포상 또는 세포내에서의 검출 가능한 존재를 나타낸다.
표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유동세포계수법, 예를 들어 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 염색함으로써 및 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 부재를 의미하고, 여기서 염색은 유동세포계수법으로 동일한 조건하 및/또는 마커에 대해 음서으로 알려진 세포에 대한 수치와 비교하여 실질적으로 더 높은 수치에서 아이소타입매치 대조군로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 위의 수치로 검출되지 않는다.
[0379] 본 발명에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "음성"이라는 설명은 특정 마커, 전형적으로 표면 마커의 세포상 또는 세포내에서 실질적으로 검출가능한 존재의 부재를 의미한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유동세포계수법, 예를 들어 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 염색함으로써 및 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 부재를 의미하고, 여기서 염색은 유동세포계수법으로 동일한 조건하 및/또는 마커에 대해 음서으로 알려진 세포에 대한 수치와 비교하여 실질적으로 유사한 수치에서 아이소타입매치 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 위의 수치로 검출되지 않는다.
[0379] 본 발명에 사용 된 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 증식시킬 수있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터뿐만 아니라 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 불린다.
[0381] 본 출원에 언급 된 특허 문헌, 과학 기사 및 데이터베이스를 포함하는 모든 간행물은 각각의 개별 간행물이 개별적으로 참고 문헌으로 인용된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 포함된다. 본 발명에 기재된 정의가 본 발명에 참고로 인용된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 공보에 기재된 정의와 상반되거나 그렇지 않으면 상반되는 경우, 본 발명에 기재된 정의는 본 발명에 참고로 인용된 정의에 우선한다.
[0382] 본 발명에서 사용된 섹션 표제는 단지 조직적인 목적을 위한 것이며 설명된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
XIII. 예시적인 구체예
[0383] 본 발명에 제공된 구체예 중에:
[0384] 1. 치료 방법으로서:
(a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체 체중의 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 대상체 m2 당 약 1 x 108 이하의 세포를 포함하며, 및;
(b) 상기 단계 (a)의 투여 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점에서 대상체에게 CAR을 발현하는 세포의 연속 복용량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
[0385] 2. 구체예1에 있어서, 단계 (b)의 투여의 시점에서:
(i) 대상체에서 사이토킨 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 인자의 혈청 수치는 단계 (a)의 상기 투여 직전의 대상체에서의 약 10 배 미만, 약 25 배 미만 및/또는 약 50배 미만이며; 및/또는
(ii) 대상체는 등급 3 또는 그 이상의 신경독성을 나타내지 않고; 및/또는
(iii) 상기 첫번째 복용량의 상기 투여에 따른 대상체에서 신경독성의 CRS-관련 결과 또는 증상은 피크 수치에 도달 하고 단계 (a)의 투여에 따라 감소하기 시작하였으며; 및/또는
(iv) 대상체는 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포-매개 면역 반응을 나타내지 않는 방법.
[0386] 3. 치료 방법으로서,
(a) 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체에서 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양의 세포를 포함하고; 및
(b) 하기 시점에서 대상체에게 CAR 발현 세포의 연속 복용량을 투여하는 단계:
(i) 신경독성, 사이토카인-방출 증후군 (CRS), 대식세포 활성화 증후군 또는 종양 용해 증후군에 대한 치료적 위험이 단계 (a)의 투여 후에 존재하지 않거나 경과하였거나 가라앉았을 때, (ii) CRS, 신경독성, 대식세포 활성화 증후군 또는 종양 용해 증후군을 입증하는 생화학적 판독이 상기 단계 (a)의 투여 후에 존재하지 않거나 경과하였거나 가라앉았을 때, (iii) 대상체에서 사이토카인-방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성을 나타내는 인자의 혈청 수치가 상기 단계 (a)의 투여 직전의 대상체의 지표의 혈정 수치의 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만인때; 및
대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현되는 CAR에 특이적인 검출 가능한 적응성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 것
을 포함하는 방법.
[0387] 4. 치료 방법으로서,
(a) 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체에서 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양의 세포를 포함하고; 및
(b) 대상체에서 신경독성 및/또는 CRS-관련 결과가 피크 수치에 도달 하고 상기 단계 (a)의 투여에 따라 감소하기 시작한 시점 및 대상체는 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포-매개 면역 반응을 나타내지 않는, CAR 발현 세포의 연속 복용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
[0388] 5. 구체예 3 또는 구체예 4에 있어서,
(i) 단계 (a)의 투여는 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않거나 대상체에 CRS를 유발하지 않고;
(ii) 단계 (a)의 투여는 대상체에서 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유발하지 않으며;
(iii) 치료적 데이터에 기초하여, 단계 (a)의 세포 복용량의 투여는 그렇게 치료된 대부분의 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않고;
(iv) 치료적 데이터에 기초하여, 단계 (a)의 세포 복용량의 투여는 그렇게 치료된 대부분의 대상체에서 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유발 하지 않는 방법.
[0389] 6. 구체예 3 내지 구체예 5 중 어느 하나에 있어서,
단계 (a)의 투여 개시와 단계 (b)의 투여 개시 사이의 시간은 약 9일 내지 약 35일 사이, 약 14일 내지 약 28일 사이, 15일 내지 27일 사이 또는 17일 내지 약 21일로, 각 포함하는; 및/또는 상기 첫번째 복용량은 대상체 체중의 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 대상체 m2 당 약 1 x 108 이하의 세포를 포함하는 방법.
[0390] 7. 구체예 2 내지 구체예 6 중 어느 하나에 있어서, CRS-관련 결과는 발열, 저혈압, 저산소증, 신경장애 또는 염증성 사이토카인 또는 C 반응성 단백질 (CRP)의 혈청 수치로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 방법.
[0391] 8. 구체예 2-6 중 어느 하나에 있어서, CRS를 나타내는 인자는 인터페론 감마 (IFNγ), 과립구-대식세포 콜로니-자극인자 (GM-CSF), 종양 괴사 인자 알파 (TNFα), IL-6, IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프랙트알카인 (fracktalkine) 및 IL-5로 이루어진 군으로부터 선택된 염증성 사이토카인 또는 CRP인 방법.
[0392] 9. 구체예 2-8 중 어느 하나에 있어서, 단계 (b)에서 투여 시기는: 상기 CRS-관련 결과의 상기 수치가 피크 수치의 50%이하이거나, 피크 수치의 20% 이하이거나, 피크 수치의 5% 이하이거나, 또는 단계 (a)의 투여 직전의 수치 또는 부근의 수치인 때; 또는 CRC를 나타내는 상기 요인의 상기 혈청 수치가 단계 (a) 투여 직전보다 10배 이하인 때인 방법.
[0393] 10. 구체예2-9 중 어느 하나에 있어서, 신경독성 및/또는 등급 3 또는 그 이상의 신경독성의 치료적 위험과 관련된 증상은 혼동, 섬망, 표현 실어증, 둔감, 근경련, 기면, 정신증상 변화, 경련, 발작 유사 활성, 발작 (선택적으로 뇌파검사[EEG]로 확인됨), 베타 아밀로이드 (Aβ) 수치의 상승, 글루타메이트 수치의 상승 및 산소 라디칼 수치의 상승으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
[0394] 11. 구체예 1-10 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 단계 (a)의 투여에 앞서 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR을 발현하는 세포의 복용량을 받지 않았던 것인 방법.
[0395] 12. 구체예 1-11 중 어느 하나에 있어서, 연속 복용량으로 세포에 의해 발현된 CAR은 첫번째 복용량으로 세포에 의해 발현된 CAR에 존재하는 적어도 하나의 면역반응활성 항원결정부를 포함하는 것인 방법.
[0396] 13. 구체예12에 있어서, 연속 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR은 첫번째 투여량으로 세포에 의해 발현되는 CAR과 동일하거나 첫번째 투여량으로 세포에 의해 발현되는 CAR과 실질적으로 동일한 것인 방법.
[0397] 14. 구체예 1-13 중 어느 하나에 있어서, 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR은 질병 또는 병태의 세포 또는 조직에 의해 발현되거나, 질병 또는 병태에 관련되는 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
[0398] 15. 구체예14에 있어서, 질병 또는 병태는 종양 또는 암인 것인 방법.
[0399] 16. 구체예15에 있어서, 상기 단계 (a)의 투여에 따른 질병 부담을 나타내는 1 이상의 요인의 감소에 의해 지시되는 것과 같이, 단계 (a)의 투여는 대상체의 질병 또는 병태 부담을 감소시키는 것인 방법.
[0400] 17. 구체예16에 있어서, 단계 (b)의 투여시, 대상체는 재발 하지 않았으며 및/또는 질병의 부담을 나타내는 1 이상의 요인이 상기 감소에 따라 증가하지 않는 방법.
[0401] 18. 구체예 1-17 중 어느 하나에 있어서, 세포의 연속 복용량은 대상체의 질병 도는 증상의 부담이 줄어들기에 충분한 양으로 세포를 포함하는 것인 방법.
[0402] 19. 구체예 16-18 중 어느 하나에 있어서, 단계 (b)의 투여는 대상체의 질병 또는 병태의 부담을 더욱 감소시키는 것인 방법.
[0403] 20. 구체예 1-19 중 어느 하나에 있어서, 상기 연속 복용량의 상기 투여는 연속 복용량의 투여 개시 직전과 비교하여 대상체의 질병 또는 병태 부담을 감소시키는 것인 방법.
[0404] 21. 구체예 1-20 중 어느 하나에 있어서, 방법은 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법과 비교하여 질병 또는 병태 부담을 더 큰 정도로 및/또는 더 긴 기간 동안 감소시키고, 여기서 대상체는 단계 (a)의 세포 및 단계 (b)의 세포를 단일 복용량으로 투여 받는 것인 방법.
[0405] 22. 구체예 16-22 중 어느 하나에 있어서,:
상기 부담의 감소 및/또는 추가적인 부담의 감소는 대상체, 대상체의 장기, 대상체의 조직 또는 대상체 체액내의 질병의 총 세포수의 감소, 종양의 질량 또는 부피의 감소 및/또는 전이의 수 및/또는 정도의 감소를 포함하는 것인 방법.
[0406] 23. 구체예 1-22 중 어느 하나에 있어서,:
질병은 암이고 단계 (b)의 투여 개시 시점에서 대상체는 형태학적 질환을 나타내지 않고; 및/또는
질병은 백혈병 또는 림프종이고, 단계 (b)의 투여 시점에서 대상체는 골수에서 5% 이상의 아세포를 나타내지 않는 방법.
[0407] 24. 구체예 1-23 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태는 첫번째 복용량의 투여 후에도 지속되고 및/또는 첫번째 복용량의 투여가 대상체의 질병 또는 병태를 퇴치하는데 충분하지 않는 방법.
[0408] 25. 구체예 1-24 중 어느 하나에 있어서, 단계 (b)의 투여시 대상체는 검출가능한 분자 질병 및/또는 최소 잔류 질병을 나타내는 것인 방법.
[0409] 26. 구체예 1-25 중 어느 하나에 있어서, (i) CAR 발현 세포의 최대 개수, (ii) 시간 경과에 따른 CAR 발현 세포의 그래프 면적 (AUC) 및/또는 (iii) 상기 단계 (b)의 투여에 따른 대상체의 검출가능한 CAR 발현 세포의 지속시간이 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법을 통해 얻어지는 것 보다 더 크고, 여기서 대상체는 단계 (a)의 세포 및 단계 (b) 의 세포를 단일 용량으로 투여받는 것인 방법.
[0410] 27. 구체예 1-26 중 어느 하나에 있어서,:
방법은 대상제의 혈액내의 CAR 발현 세포의 최대 농도 또는 개수가 적어도 또는 약 마이크로리터당 10 CAR 발현 세포, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs) 총 개수의 적어도 50%, 적어도 약 1 x 105 CAR 발현 세포 또는 DNA 마이크로그램당 CAR-인코딩 DNA의 적어도 5,000 카피; 및/또는
단계 (a)의 투여 개시 후 90일째, CAR 발현 세포는 대상체의 혈액 또는 혈청에서 탐지가능하고; 및/또는
단계 (a)의 투여 개시 후 90일째, 대상체의 혈액은 CAR 발현 세포의 적어도 20%, 마이크로리터당 적어도 10 CAR 발현 세포 또는 적어도 1 x 104 CAR 발현 세포를 포함하는 것인 방법.
[0411] 28. 구체예 1-27 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a) 투여 후 시간에 따른 CAR 발현 세포의 혈액 농도의 그래프 면적 (AUC)은 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법을 통해 얻어지는 것보다 더 크고, 여기서 대상체는 단계 (a)의 세포 및 단계 (b)의 세포를 단일 복용량으로 투여받는 것인 방법.
[0412] 29. 구체예 1-28 중 어느 하나에 있어서, 단계 (b) 투여 후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일째에 대상체의 CRS-관련 결과는 검출 불가하거나 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법과 비교하여 감소되고, 여기서 대상체는 첫번째 복용량의 투여없이 단계 (b) 세포를 투여받는 것인 방법.
[0413] 30. 구체예 1-29 중 어느 하나에 있어서, 단계 (b)의 투여 후 대상체의 시간에 따른 CRS를 나타내는 요인의 혈청 수치에 대한 그래프 면적 (AUC)는 대안적 복용 요법을 포함하는 방법에 따른 것과 비교하여 더 낮고, 여기서 대상체는 첫번째 복용량의 투여 없이 단계 (b) 의 세포를 투여받는 것인 방법.
[0414] 31. 구체예 15-30 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 상기 단계(a)의 투여 전에 종양 또는 암을 표적으로 하는 치료제로 처리되었고, 대상체는 단계(a)의 투여시 상기 치료제에 난치성이거나 반응이 없는 것인 방법.
[0415] 32. 구체예 1-31 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)의 투여 이후 및 단계 (b) 의 상기 투여 이전, 또는 단계 (a) 의 투여 이전에, 상기 대상체의 CRS를 나타내는 요인, 신경독성을 나타내는 요인, 질병 부담을 나타내는 요인의 혈청 수치 및/또는 숙주 항-CAR 면역 반응의 지표를 평가하는 단계를 더 포함하는 방법.
[0416] 33. 구체예 32에 있어서, 질병 부담을 나타내는 요인은 측정되고 대상체, 대상체의 기관, 대상체의 조직 또는 대상체의 체액에서의 질병의 총 세포 개수, 유동세포계수법 또는 정량적 PCR에 의한 분자 검출, 고형 종양의 질량 또는 부피 또는 전이의 개수 또는 정도를 포함하는 것인 방법,
[0417] 34. 구체예 32또는 구체예 33에 있어서:
i) 단계(b)의 투여 전에 질병의 부담을 나타내는 요인을 평가하는 단계
ii) 평가의 결과에 기초하여, 대상체에게 투여될 세포의 연속 복용량을 결정하는 단계
iii) 만약 평가가 대상체가 형태학적 질병을 갖는다고 결정하면, 대상체에게 첫번째 복용량의 CAR 발현 세포의 수에 비하여 더 적거나 거의 비슷한 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 연속적 복용량을 투여하는 단계; 및/또는 평가가 대상체가 최소한의 잔여 질병을 갖는다고 판단하면, 대상체에 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 연속 복용량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
[0418] 35. 구체예 1-33 중 어느 하나에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 CAR 발현 세포의 수와 비교하여 거의 동일한 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 것인 방법.
[0419] 36. 구체예 1-33 중 어느 하나에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 것인 방법.
[0420] 37. 치료 방법으로서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 연속 복용량을 CAR을 발현하는 세포의 첫번째 복용량으로 이미 투여된 대상체에게 투여하는 것을 포함하고:
세포의 연속 복용량은 첫번째 복용량의 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만인 시점에 투여되며; 및/또는
연속 복용량으로 투여된 CAR 발현 세포의 수는 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 방법.
[0421] 38. 구체예 1-37 중 어느 하나에 있어서, 첫번째 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 0.5 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 3 x 106 세포/kg, 약 0.75 x 106 세포/kg 내지 2.5 x 106 세포/kg 또는 약 1 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg에 각각 포함되는 것인 방법.
[0422] 39. 구체예 34, 36 또는 37에 있어서, 증가된 수는 첫번째 복용량의 수와 비교하여 적어도 2배, 5배 또는 10배 더 많은 수인 방법.
[0423] 40. 구체예 1-39 중 어느 하나에 있어서, CAR 발현 세포의 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 2 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 6 x 106 세포/kg, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 5.0 x 106 세포/kg 또는 약 3.0 x 106 세포/kg 내지 약 4.0 x 106 세포/kg에 각각 포함되는 방법.
[0424] 41. 구체예 1-40 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내지 않거나, 심각한 CRS를 나타내지 않거나, 신경독성을 나타내지 않거나, 심각한 신경독성을 나타내지 않거나, 또는 첫번째 복용량 투여 및/또는 연속 복용량의 투여에 따른 등급 3 보다 높은 신경독성을 나타내지 않는 방법.
[0425] 42. 구체예 1-41 중 어느 하나에 있어서, 첫번째 복용량에서 CAR 발현 세포는 첫번째 복용량 투여 후 및/또는 연속 복용량 투여 후 대상체에서 증가하는 방법.
[0426] 43. 구체예 42에 있어서, 증가는 (i) 투여 직전과 비교하여 첫번째 복용량 및/또는 연속 복용량의 투여 후 혈청 CRP 수치의 증가, 및/또는 (ii) 투여 직전과 비교하여 첫번째 복용량 및/또는 연속적 복용량 투여 후에 qPCR에 의해 측정된 CAR-인코딩 핵산의 수치 증가에 의해 입증되고, 여기서 상기 증가는 임의로 적어도 1, 2 또는 3배인 방법.
[0427] 44. 구체예 1-43 중 어느 하나에 있어서, 첫번째와 연속 복용 사이 시간은 15일 내지 27일인 방법.
[0428] 45. 구체예 44에 있어서, 첫번째와 연속 복용 사이 시간은 21일인 방법.
[0429] 46. 구체예 44에 있어서, 첫번째와 연속 복용 사이 시간은 17일인 방법.
[0430] 47. 구체예 1-46 중 어느 하나에 있어서, 첫번째 복용량의 세포는 첫번째 복용량의 세포를 포함하는 단일 의약 조성물로 투여되며 및/또는 연속 복용량의 세포는 연속 복용량의 세포를 포함하는 단일 의약 조성물로 투여되는 방법.
[0431] 48. 구체예 1-47 중 어느 하나에 있어서:
3일을 넘지 않는 기간에 걸쳐, 첫번째 복용량의 세포가 복수의 조성물로 투여되는 경우, 첫번째 복용량은 첫번째 복용량의 세포를 총괄하여 포함하는 분할 복용량이며; 및/또는
3일을 넘지 않는 기간에 걸쳐, 연속 복용량의 세포가 복수의 조성물로 투여되는 경우, 연속 복용량은 연속 복용량의 세포를 총괄하여 포함하는 분할 복용량인 방법.
[0432] 49. 구체예 1-48 중 어느 하나에 있어서, 방법은 단계 (a) 투여 전 및/또는 단계 (b)의 투여 전에 화학요법 제제를 투여하는 것을 더 포함하거나, 대상체는 첫번째 복용량의 투여 이전에 이미 화학요법 제제로 치료된 방법.
[0433] 50. 구체예 49에 있어서, 화학요법 제제는 사이클로포스파미드, 플루다라빈 및/또는 그들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것인 방법.
[0434] 51. 구체예 49-50 중 어느 하나에 있어서, 화학요법 제제의 투여는 단계 (a)의 투여 전에 화학요법 제제의 투여를 포함하고, 임의로 단계 (b)의 투여 전에는 포함하지 않는 방법.
[0435] 52. 구체예 49-51 중 어느 하나에 있어서, 화학요법 제제는 단계 (a)의 투여에 앞서 2 내지 5일간 투여되며 및/또는 단계 (b)의 투여에 앞서 2 내지 5일간 투여되는 것인 방법.
[0436] 53. 구체예 49-52 중 어느 하나에 있어서, 화학요법 제제는 대상체의 약 1 g/m2 내지 대상체의 약 100 g/m2, 대상체의 약 15 g/m2 내지 대상체의 약 50 g/m2, 대상체의 약 0.5 g/m2 내지 대상체의 약 5 g/m2 또는 대상체의 약 1 g/m2 내지 대상체의 약 3 g/m2의 복용량으로 투여되는 것인 방법.
[0437] 54. 구체예 1-53 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량의 투여 전에 저온환원적 화학요법을 받았거나 방법은 첫번째 복용량의 투여에 앞서 저온환원적 화학요법의 투여를 더 포함하는 것인 방법.
[0438] 55. 구체예 49-54 중 어느 하나에 있어서, 화학요법 제제는 전치료 화학요법을 포함하고, 이는 대상체의 질병 또는 병태 부담을 줄여주는 것인 방법.
[0439] 56. 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 연속 복용량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 통합 치료를 제공하는 방법으로:
상기 투여 이전에, 대상체는 대상제의 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양의 CAR 발현의 앞선 복용량을 투여받으며; 및
투여시에, 대상체내의 사이토카인-방출 증후군 (CRS)을 나타내는 요인의 혈청 수치는 상기 이전의 투여 직전의 대상체의 상기 지표의 혈청 수치의 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만이고, 대상체는 상기 이전 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 특이적인 검출가능한 적응성 숙주 면역 반응을 나타내지 않고; 및/또는 상기 이전 및 연속 복용량 사이의 시간은 약 14일 초과 및 약 28일 미만인 방법.
[0440] 57. 구체예 56에 있어서, CAR 발현 세포의 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 2 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 6 x 106 세포/kg, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 5.0 x 106 세포/kg 또는 약 3.0 x 106 세포/kg 내지 약 4.0 x 106 세포/kg에 각각 포함되는 것인 방법.
[0441] 58. 구체예 1-57 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태는 백혈병이거나 림프종인 방법.
[0442] 59. 구체예 1-58 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태는 급성 림프구성 백혈병인 방법.
[0443] 60. 구체예59에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수보다 많은 방법.
[0444] 61. 구체예 60에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수보다 적어도 또는 약 2배 또는 약 3배 많은 방법.
[0445] 62. 구체예 1-58 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태는 비-호지킨 림프종 (NHL)인 방법.
[0446] 63. 구체예 1-62 중 어느 하나에 있어서, 첫번째 복용량으로 투여된 CAR+ 세포의 수는 대상체의 킬로그램당 1 x 106이거나, 약 1 x 106이거나 또는 약 1 x 106 이하이며 및/또는 연속 복용량으로 투여된 CAR+ 세포의 수는 3 x 106이거나 약 3 x 106인 방법.
[0447] 64. 구체예 62에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수보다 더 적거나 약간 더 적거나 같거나 거의 같은 방법.
[0448] 65. 구체예 1-64 중 어느 하나에 있어서, 1 이상의 추가적인 후속 복용량을 투여하는 단계를 더 포함하는 방법으로, 여기서 상기 1 이상의 추가적인 후속 복용량의 첫번째 복용량은 연속 복용량의 투여 개시 후 적어도 14일 또는 14일 초과의 시점에 투여되는 방법.
[0449] 66. 구체예 65에 있어서, 첫번째, 연속 및 후속 복용량의 투여는 28일 또는 약 28일 이내에 약 3의 복용량으로 투여되는 것을 포함하는 것인 방법.
[0450] 67. 구체예 65 또는 구체예 66에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 약 14일째에 투여되고, 1 이상의 후속 복용량 중 하나는 첫번째 복용량의 투여 개시 후 28일째에 투여되고, 임의로 추가적인 후속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 42일 및/또는 56일째에 투여되는 것인 방법.
[0451] 68. 구체예 1-67 중 어느 하나에 있어서, 세포는 T 세포인 방법.
[0452] 69. 구체예 1-68 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체에게서 자가 유래된 것인 방법.
[0453] 70. 이미 CAR 발현 세포로 치료된 대상체의 질병 또는 병태 치료 의약을 생산하기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 조성물의 용도로서:
조성물은 이전 치료후 14일 내지 28일 간 사용하기 위함이고; 및/또는
조성물은 이미 CAR 발현 세포로 치료된 대상체의 질병 또는 병태의 부담을 줄이는데 충분한 양으로 연속 복용량의 투여를 위해 제제화된 것인 용도.
[0454] 71. 이미 CAR 발현 세포로 치료된 대상체의 질병을 치료하기 위해 사용되는 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포로서:
세포는 이전의 치료 후 14일 내지 28일간 사용하기 위함이고; 및
세포는 이미 이미 CAR 발현 세포로 치료된 대상체의 질병 또는 병태의 부담을 줄이는데 충분한 양으로 연속 복용량의 투여를 위해 제제화된 것인 세포.
[0455] 72. 구체예 70의 용도 또는 구체예 71의 세포로서, 대상체가 형태학적 질병을 나타내지 않고 및/또는 대상체가 골수내에 5% 초과의 아세포를 나타내지 않는 용도 또는 세포.
[0456] 73. 질병 또는 병태를 치료하는 방법에 사용되기 위한 의약을 생산하는데 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 용도로서, 상기 방법은 다음을 포함한다:
(a) 질병 또는 병태를 갖는 대상체에 CAR을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/대상체의 m2 이하의 세포를 포함하고; 및
(b) 상기 단계 (a)의 개시 후의 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점에 CAR을 발현하는 세포의 연속 복용량을 대상체에 투여하는 단계.
[0457] 74. 질병 또는 병태를 치료하는 방법에 사용되기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포로서, 상기 방법은 다음을 포함한다:
(a) 질병 또는 병태를 갖는 대상체에 CAR을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/대상체의 m2 이하의 세포를 포함하고; 및
(b) 상기 단계 (a)의 개시 후의 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점에 CAR을 발현하는 세포의 연속 복용량을 대상체에 투여하는 단계.
[0458] 75. 구체예 70-74 중 어느 하나에 있어서, 세포는 (i) 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않거나 대상체에 CRS를 유발하지 않는; (ii) 대상체에 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유잘하지 않는; 및/또는 (iii) 치료적 데이터에 기초하여, 그렇게 처치된 대부분의 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않는; 및/또는 (iv) 치료적 데이터에 기초하여, 그렇게 처치된 대부분의 대상체에서 등급 3 또는 그 이상의 신경독성을 유발하지 않는 양으로 투여하기 위해 제제화된 것인 방법 또는 세포.
[0459] 76. 대상체의 질병 또는 병태를 치료하기 위한 의약을 생산하기 위한 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 용도,
여기서 세포는 첫번째 및 연속적 복용량으로 대상체에 투여하기 위해 제제화 및/또는 포장되었고 및/또는 치료는 첫번째 및 연속적 복용량으로 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함하고:
첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/ 대상체 m2 이하를 포함하고, 및
연속 복용량은 i) (a) 첫번째 투여의 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점 및/또는 (b) (i) 대상체에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 첫번째 투여 직전의 대상체에서 보다 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만; (ii) 대상체가 등급 3 또는 이상의 신경독성을 나타내지 않는; (iii) 상기 첫번째 복용량의 상기 투여에 따라 대상체에서 CRS-관련 결과 또는 신경독성 증상이 피크 수치에 도달하고 첫번째 투여에 따라 감소하기 시작하는, 및/또는 (iv) 대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포 매개 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 투여하기 위한 연속 복용량이다.
[0460] 77. 대상체의 질병 또는 병태를 치료하는 용도를 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포,
여기서 세포는 첫번째 및 연속적 복용량으로 대상체에 투여하기 위해 제제화 및/또는 포장되었고 및/또는 치료는 첫번째 및 연속적 복용량으로 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함하고:
첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/대상체 m2 이하를 포함하고, 및
연속 복용량은 i) (a) 첫번째 투여의 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점 및/또는 (b) (i) 대상체에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 첫번째 투여 직전의 대상체에서 보다 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만; (ii) 대상체가 등급 3 또는 이상의 신경독성을 나타내지 않는; (iii) 상기 첫번째 복용량의 상기 투여에 따라 대상체에서 CRS-관련 결과 또는 신경독성 증상이 피크 수치에 도달하고 첫번째 투여에 따라 감소하기 시작하는, 및/또는 (iv) 대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포 매개 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 투여하기 위한 연속 복용량이다.
[0461] 78. 구체예 73-77 중 어느 하나에 있어서, 첫번째 및 연속 투여가 1 이상의 단위 투여량으로 세포를 투여하는 것을 포함하고, 각 단위 투여량은 약 5 x 107 세포 내지 약 5 x 108 세포, 약 5 x 107 세포 내지 2.5 x 108 세포 또는 약 2.5 x 108 내지 4 x 108세포를 포함하거나; 세포가 제제화된 단위 투여량은 약 5 x 107 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포, 약 2 x 108 이하의 세포, 약 2.5 x 108 이하의 세포, 약 3 x 108 이하의 세포 또는 약 4 x 108 이하의 세포를 포함하는 것인 세포의 용도.
[0462] 79. 구체예 78에 있어서, 첫번째 복용량은 단일 단위 투여량을 포함하는 것인 세포의 용도.
[0463] 80. 구체예 78 또는 구체예 79에 있어서, 연속 복용량은 2 이상의 단위 투여량을 포함하는 것인 세포의 용도.
[0464] 81. 구체예 78 또는 구체예 79에 있어서, 연속 복용량은 단일 단위 투여량을 포함하는 것인 세포의 용도.
[0465] 82. 구체예 68-81 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태는 종양 또는 암인 조성물 또는 세포의 용도.
[0466] 83. 구체예 82에 있어서, 종양 또는 암은 백혈병 또는 림프종인 조성물 또는 세포의 용도.
[0467] 84. 구체예 68-83 중 어느 하나에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량 또는 연속 복용량을 구성하는 증가된 수의 CAR 발현 세포를 투여하기 위해 제제화 된 것인 조성물 또는 세포의 용도.
[0468] 85. 구체예 68-83 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 급성 림프구성 백혈병을 치료하기 위해 사용되는 조성물 또는 세포의 용도.
[0469] 86. 구체예 68-86 중 어느 하나에 있어서, 연속 복용량이 이전 복용량의 CAR 발현 세포의 수보다 적거나 비슷한 수의 CAR 발현 세포의 투여를 위해 제제화되는 것인 조성물 또는 세포의 용도.
[0470] 87. 구체예 84 또는 구체예 86에 있어서, 조성물은 비-호지킨 림프종 (NHL)을 치료하기 위해 사용되는 것인 조성물 또는 세포의 용도.
[0471] 88. 다음을 포함하는 제조 물품:
대상체에 투여하기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 단위 복용량을 각각 포함하는 다수의 밀봉가능한 용기, 상기 단위 복용량은 대상체의 kg 당 약 1 x 108 세포, 약 1 x 108 이하의 세포, 약 5 x 107 세포, 약 5 x 107 이하의 세포, 약 1 x 106 세포 또는 약 1 x 106 이하의 세포를 포함하고;
포장 물질; 및
첫번째 투여 및 연속 투여를 수행하기 위해 대상체에게 다수의 상기 단위 복용량을 투여하기 위한 지침을 포함하는 라벨 또는 패키지 삽입물, 대상체에게 하나의 단위 복용량을 전달하는 것을 포함하는 상기 첫번째 투여 및 대상체에게 하나 또는 다수의 단위 복용량을 투여하는 것을 포함하는 상기 연속 투여.
[0472] 89. 구체예 88에 있어서, 지시는 상기 연속 투여가 상기 첫 투여후 약 14일 또는 15일 및 27일, 임의로는 약 17일 또는 약 21일의 시점에 수행되는 것을 명시하는 것인 제조 물품.
[0473] 90. 구체예 88 또는 구체예 89에 있어서, 지시는 상기 연속 투여가 대상체의 사이토카인-방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 첫번째 복용량의 직전에 대상체의 상기 지표의 혈청 수치보다 약 10배 미만, 25배 미만 및/또는 50 배 미만으로 결정되는 시점인 것을 명시하는 제조 물품.
[0474] 91. 구체예 88-90 중 어느 하나에 있어서, 지시는 상기 연속 투여가 CRS 지표가 최고점에 도달하고 감소하고 있는 것 및/또는 대상체가 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CRS에 대해 특이적인 검출가능한 적응성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 수행되어야 함을 명시하는 것인 제조 물품.
[0475] 92. 구체예 88-91 중 어느 하나에 있어서, 세포는 대상체로부터 유래된 것인 제조 물품.
[0476] 93. 구체예 88-92 중 어느 하나에 있어서, 상기 라벨 및/또는 상기 포장 재료는 대상체로부터 유래된 및/또는 대상체에 특이적으로 투여된 세포임을 나타내는 대상체에 특이적인 식별자를 더 포함하는 것인 제조 물품.
[0477] 94. 구체예 88-93 중 어느 하나에 있어서, 용기는 유연성 있는 세포 주입 백(bag)이거나 이를 포함하는 것인 제조 물품.
[0478] 95. 치료 방법으로서, 다음을 포함한다:
a) 종양이 있거나 종양이 있는 것으로 의심되는 대상체에서 질병 부담을 나타내는 인자를 평가하는 단계; 및
b) 평가 결과에 기초하여, 대상체에게 투여될 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 복용량을 결정하는 단계:
i) 만약 평가에서 대상체가 형태학적 질병을 갖지 않거나 실질적인 형태학적 질명을 갖지 않거나 한계 수준 또는 그 이상의 질병 부담을 가지지 않는 것으로 결정되면, 1 x 106 세포/kg 보다 큰 CAR 발현 세포의 복용량을 투여하고; 및
ii) 만약 평가에서 대상체가 형태학적 질병 또는 실질적인 형태학적 질병 또는 한계 수준 이상의 질병 부담을 가지고 있다고 결정되면, ii)과 비교하여 상대적으로 낮은 CAR 발현 세포의 복용량을 대상체에게 투여한다.
[0479] 96. 구체예 95에 있어:
대상체는 형태학적 질병 또는 실질적인 형태학적 질병 또는 한계 수준 이상의 질병 부담을 나타내지 않고, 약 2 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg, 4 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg, 6 x 106 세포/kg, 7 x 106 세포/kg, 8 x 106 세포/kg, 9 x 106 세포/kg, 1 x 107 세포/kg 또는 2 x 107 세포/kg 이상인 세포의 복용량을 투여받고; 및/또는
대상체는 형태학적 질병 또는 실질적인 형태학적 질병을 나타내고 한계 수준 이상의 질병 부담을 가지고 약 1 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg 미만인 세포의 복용량을 투여받는 방법.
[0480] 97. 구체예 95 또는 구체예 96에 있어서, 만약 골수에 약 5% 이상의 아세포가 존재하거나, 골수에 10% 또는 약 10% 이상의 아세포가 있거나, 골수에 15% 또는 약 15% 이상의 아세포가 있거나 또는 골수에 20% 또는 약 20% 이상의 아세포가 있는 경우, 대상체는 형태학적 질병 및/또는 실질적인 형태학적 질병 및/또는 한계 수준 또는 그 이상의 질병부담을 가지는 방법.
[0481] 98. 구체예 95-97 중 어느 하나에 있어서:
만약 대상체가 약 5% 미만의 아세포를 나타낸다면, 대상체에 약 1 x 106 세포/kg, 2 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg, 4 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg, 6 x 106 세포/kg, 7 x 106 세포/kg, 8 x 106 세포/kg, 9 x 106 세포/kg, 1 x 107 세포/kg 또는 2 x 107 세포/kg 이상의 세포의 복용량을 투여하고 및/또는 대상체가 5% 또는 약 5% 이상의 아세포를 나타낸다면, 대상체에 약 1 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg 이상의 세포의 복용량을 투여하고;
만약 대상체가 약 10% 미만의 아세포를 나타낸다면, 대상체에 약 1 x 106 세포/kg, 2 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg, 4 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg, 6 x 106 세포/kg, 7 x 106 세포/kg, 8 x 106 세포/kg, 9 x 106 세포/kg, 1 x 107 세포/kg 또는 2 x 107 세포/kg 이상의 세포의 복용량을 투여하고 및/또는 대상체가 10% 또는 약 10% 이상의 아세포를 나타낸다면, 대상체에 약 1 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg 이상의 세포의 복용량을 투여하고;
만약 대상체가 약 15% 미만의 아세포를 나타낸다면, 대상체에 약 1 x 106 세포/kg, 2 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg, 4 x 106 세포/kg, 5 x 106 세포/kg, 6 x 106 세포/kg, 7 x 106 세포/kg, 8 x 106 세포/kg, 9 x 106 세포/kg, 1 x 107 세포/kg 또는 2 x 107 세포/kg 이상의 세포의 복용량을 투여하고 및/또는 대상체가 10% 또는 약 10% 이상의 아세포를 나타낸다면, 대상체에 약 1 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg 이상의 세포의 복용량을 투여하는 방법.
[0482] 99. 구체예 95-98 중 어느 하나에 있어서, 종양은 백혈병 또는 림프종, 임의로는 B 세포 유래 백혈병 또는 림프종인 방법.
[0483] 100. 구체예 95-99 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 세포 복용량의 투여 후에 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내지 않는, 중증 CRS를 나타내지 않는, 신경독성을 나타내지 않는, 중증 신경독성을 나타내지 않는 또는 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않는 방법.
[0484] 101. 구체예 95-100 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)의 투여는 대상체에서 질병 또는 병태 부담의 완화를 초래하고, 완화는 상기 단계 (a)의 투여 후 질병 부담을 나타내는 1 이상의 요소의 감소로 인지되는 것인 방법.
[0485] 102. 구체예 95-101 중 어느 하나에 있어서, 대상체에 1 이상의 연속 복용을 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
[0055] 도 1A는 다양한 복용량의 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 형태학적 또는 분자 질병 (치료 개시 시점의 질병 부담)이 있는 대상체의 질병 반응을 나타낸 것이다. MRD-CR = 최소 잔류 질병이 없음, 완전한 완화; MRD+CR = 최소 잔류 질병의 존재, 완전한 완화; NR = 반응 없음.
[0056] 도 1B는 다양한 복용량의 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 형태학적 또는 분자 질병 (치료개시시의 질병 부담)을 가지는 대상체에 심각한 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 존재 (Y) 또는 부존재 (N)를 나타낸 것이다.
[0057] 도 1C는 다양한 복용량의 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 형태학적 또는 분자 질병 (치료개시시의 질병 부담)을 가지는 대상체의 심각한 신경 독성의 존재 (Y) 또는 부존재 (N)를 나타낸 것이다.
[0058] 도 2는 CAR 발현 T 세포의 첫번째 복용량의 투여 시점 (주입 = #1) (왼쪽 패널)에서 형태학적 또는 분자 질병을 가지는 대상체 및 CAR 발현 T 세포의 연속 복용량의 투여 시점 (주입 = #2) (오른쪽 패널)에서 형태학적 또는 분자 질병을 가지는 대상체의 피크 C 반응성 단백질 (CRP) 수치를 나타낸 것이다.
[0059] 도 3A는 실시예 8에 기재된 바와 같이 다양한 조건 (메체, K562-tCD19, K562-tROR1, aCD3/aCD28)하의 24 시간의 배양에 따른, 유동세포계수법에 의해 검출된, CD4 및 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) (상단 채널에 표시된 작동 기작) 양성 표면 발현을 위해 작동된 T 세포 모집단 상의 PD-1, PD-L1 및 PD-L2의 표면 발현을 묘사하고 있다.
[0060] 도 3B는 실시예 8에 기재된 바와 같이 다양한 조건 (매체, K562-tCD19, K562-tROR1, aCD3/aCD28)하의 24 시간의 배양에 따른, 유동세포계수법에 의해 검출된, CD4의 양성 표면 발현 및 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) 음성 표면 발현 (상단 채널에 표시된 작동 기작)을 위해 작동된 T 세포 모집단 상의 PD-1, PD-L1 및 PD-L2의 표면 발현을 묘사하고 있다.
[0061] 도 4A는 실시예 8에 기재된 바와 같이 다양한 조건 (매체, K562-tCD19, K562-tROR1, aCD3/aCD28)하의 24 시간의 배양에 따른, 유동세포계수법에 의해 검출된, CD8 및 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) (상단 채널에 표시된 작동 기작) 양성 표면 발현을 위해 작동된 T 세포 모집단 상의 PD-1, PD-L1 및 PD-L2의 표면 발현을 묘사하고 있다.
[0062] 도 4B는 실시예 8에 기재된 바와 같이 다양한 조건 (매체, K562-tCD19, K562-tROR1, aCD3/aCD28)하의 24 시간의 배양에 따른, 유동세포계수법에 의해 검출된, CD8의 양성 표면 발현 및 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR) 음성 표면 발현 (상단 채널에 표시된 작동 기작)을 위해 작동된 T 세포 모집단 상의 PD-1, PD-L1 및 PD-L2의 표면 발현을 묘사하고 있다.
[0063] 도 5A는 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 대상체에서 관찰된 신경 독성 정도 (등급 0-2, 등급 3, 등급 4-5)를 나타내고 있다. 말초 혈액 uL당 종양 부담 (골수 배아 백분율) 대 CAR 발현 T 세포 (CD8+/EGFR+, 상부 패널; 또는 CD4+/EGFR+, 하부 패널)의 수로 데이터를 표시하였다.
[0064] 도 5B는 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 대상체에서의 중환자실 (ICU)에서의 치료의 필요성을 나타내고 있다. 말초 혈액 uL당 종양 부담 (골수 배아 백분율) 대 CD8+/EGFR+ (상부 패널) 또는 CD4+/EGFR+ (하부 패널)세포의 수로 데이터를 표시하였다.
[0065] 도 6A는 주입 후 28 일 동안 2 x 10-5 또는 2 x 106 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 대상체의 말초 혈액의 uL 당 CD8+ CAR 발현 T 세포 (CD8+/EGFR+)의 수를 유동세포계수법으로 측정하여 나타내었다. 주입에 앞서, 대상체는 100 mg/m2의 에토포시드 (인플루엔자 아님)의 3 주입량이 포함되거나 포함되지 않은 2 g/m2의 사이클로포스파미드로 전처리되거나, 60 mg/kg (~2 g/m2) 사이클로포스파미드 및 25mg/m2 플루다라빈 (인플루엔자)의 3 내지 5 복용량으로 치료되었다.
[0066] 도 6B는 주입 후 28 일 동안 2 x 10-5 또는 2 x 106 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 대상체의 말초 혈액의 uL 당 CD4+ CAR 발현 T 세포 (CD4+/EGFR+)의 수를 유동세포계수법으로 측정하여 나타내었다. 주입에 앞서, 대상체는 100 mg/m2의 에토포시드 (인플루엔자 아님)의 3 주입량이 포함되거나 포함되지 않은 2 g/m2의 사이클로포스파미드로 전처리되거나, 60 mg/kg (~2 g/m2) 사이클로포스파미드 및 25mg/m2 플루다라빈 (인플루엔자)의 3 내지 5 복용량으로 치료되었다.
[0067] 도 6C는 2 x 105 또는 2 x 106 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 대상체에 대한 질병이 없는 생존 퍼센트 곡선을 나타내었다. 주입에 앞서, 대상체는 100 mg/m2의 에토포시드 (인플루엔자 아님)의 3 주입량이 포함되거나 포함되지 않은 2 g/m2의 사이클로포스파미드로 전처리되거나, 60 mg/kg (~2 g/m2) 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈 (인플루엔자)의 3 내지 5 복용량으로 치료되었다.
[0068] 도 7A는 주입 후 28 일 동안 2 x 107 CAR 발현 T 세포의 단일 주입으로 치료된 대상체의 말초 혈액의 uL 당 CD8+ CAR 발현 T 세포 (CD8+/EGFR+)의 수 (상부 패널) 및 백분율 (하부 패널)을 유동세포계수법으로 측정하여 나타내었다. 주입에 앞서, 대상체는 100-200 mg/m2의 에토포시드 (인플루엔자 아님)의 3 주입량이 포함되거나 포함되지 않은 2-4 g/m2의 사이클로포스파미드로 전처리되거나, 30-60 mg/kg (~1-2 g/m2) 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈 (인플루엔자)의 3 내지 5 복용량으로 치료되었다.
실시예
[0486] 다음의 실시예는 설명의 목적으로만 포함되면 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다.
실시예 1: CAR 발현 자가 T 세포의 첫번째 및 연속 복용량을 가지는 암 환자의 치료
[0487] 면역친화성에 기초한 농축으로 암을 가진 사람 대상체의 말초 혈액으로부터 T 세포를 단리하고 대상체의 암에 의해 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 코딩하는 바이러스 벡터로 세포를 배양하고 형질 도입시켰고, 이는 종양 관련 또는 종양 특이 항원이다.　세포는 개별적인 유연한 주입 백의 주입 매질에서 동결 보존되며, 각 백은 세포의 단일 단위 복용량을 함유하고, 이는 대상체의 체중 kg 당 약 1 x 106 세포 또는 대상의 체중 kg 당 약 5 x 105 세포이다. 세포를 주입하기 전에 -130℃ 이하의 온도로 유지한다.
[0488] 세포 피료의 개시전에, 혈액은 대상체로부터 수득되고, 임의로 종양 괴사 인자 알파 (TNFα), 인터페론 감마 (IFNγ) 및 IL-6과 같은 사이토킨 방출 증후군 (CRS)을 나타내는 1 이상의 혈청 인자는 ELISA에 의해 혈청에서 평가된다. 종양 부담은 치료가 시작되기 전에 임의로, PET 또는 CT 스캔과 같은 고형 종양의 크기 또는 질량의 측정에 의해 또는 골수 또는 말초 혈액에서와 같이 환자의 암과 관련된 세포의 수를 평가함으로써 평가된다.
[0489] 세포를 약 37 ℃로 가온하여 침상에서 해동시키고 대상체에 단일 주입에 의해 세포의 첫번째 복용량을 투여하였다. 첫번째 복용량의 양은 단일 단위 용량이다. 종양 부담이 낮은 것으로 판단되는 대상체의 경우, 첫번째 복용시 2 단위 복용량을 투여할 수 있다. 첫번째 복용량은 약 15 내지 30 분의 기간동안, 연속 주입에 의해 정맥내 (IV) 투여된다.
[0490] 첫번째 복용량의 투여 후, 대상체는 신체 검사를 받고, 발열, 저혈압, 저산소증, 신경 장애 또는 염증성 사이토카인 또는 C 반응성 단백질 (CRP)의 혈청 수치의 증가와 같은 독성 또는 독성 결과의 증상에 대해 모니터링한다. 임의로, 1 이상의 경우에서, 첫번째 복용의 투여후에, 환자로부터 혈액을 수득하고, CRS를 나타내는 혈청 인자의 수치을 ELISA로 평가한다. 혈청 인자의 수치은 첫번째 복용량을 투여하기 직전에 얻은 수치과 비교된다. 필요한 경우, CRS의 징후를 줄이기 위해 항 IL-6 또는 기타 CRS 요법을 시행한다.
[0491] 대상체에서의 항MAR 면역 반응의 존재 또는 부재는 임의로, 예를 들어 투여 개시 후 1, 2, 3 및/또는 4 주째에 첫번째의 복용의 투여 후에 검출되고, 예를 들어, ELISA, ELISPOT, 세포 기반 항체 분석 및/또는 혼합 림프구 반응에 의해 검출될 수 있다.
[0492] 첫번째 복용량에 의해 달성된 종양 부담의 감소 백분률은 첫번째 복용량의 투여 후 하나 이상의 경우에 임의로 측정되고, 고형 종양이 있는 환자에서 PET 및 CT 스캔과 같은 스캔에 의해 및/또는 예를 들어, 혈액 암을 가진 대상체에서 혈액 또는 종양 부위의 질병 양성 세포를 정량화하고 그 값들을 첫번째 복용 직전에 관찰된 값과 비교하는 방법으로 측정된다.
[0493] 연속 복용량이 투여된다. 일부 대상체에서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 21 일에 투여된다. 경우에 따라, CRS 관련 결과 또는 혈청 인자의 수치가 허용 수치 이하이고 첫번째 복용량 투여 후 21 일째에 대상체에서 항CAR 면역 반응이 검출되지 않는 경우에만 연속 복용이 투여된다. 다른 대상체에서, 연속 복용량은 첫번째 복용량 투여 후 3 일 이상인 때에 투여되고, 대상체가 CRS 또는 중증의 CRS가없는 것으로 간주되는 시점에 투여되거나, CRS를 나타내는 검사된 혈청 인자가 첫번째 복용량 투여 후 피크에서 관찰된 것의 20 % 미만이며, 대상체는 검출 가능한 항CAR 면역 반응을 갖지 않는 것으로 간주되는 때에 투여된다.
[0494] 연속 복용량의 크기는 환자 특이적이며, 종양 부담, 항CAR 면역 반응의 존재 및 CRS 관련 결과의 수치에 기초한다. 일부 환자에게는 1, 2, 3 또는 그 이상의 단위 복용량을 함유하는 연속 복용량이 투여된다. 연속 복용량은 약 15 내지 30 분에 걸쳐 연속 주입 IV에 의해 투여된다.
[0495] 첫번째 복용후에 시작되고 최대 수년간 지속되는, 대상체는 정기적으로 모니터링된다. 항CAR 면역 반응의 발달이 평가되고 종양 부담이 측정된다. 임의로, 후속 방문 동안, CAR 발현 세포는 유동세포계수법 및 정량적 중합 효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 투여된 세포의 생체내 증식 및 지속성을 측정하여 검출된다.
실시예 2: 치료 전 형태적 질병을 갖는 대상체에서 CAR-T 세포 치료의 신경 독성 평가
[04096] CD19+ B 세포 급성 림프성 백혈병 (ALL)을 갖는 대상체에게 항CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 투여하였다. CAR은 절단된 EGFR (EGFRt) 부분을 마커로 포함했다. 세포 투여전에, 환자들은 백혈구 제거술을 받고 화학요법으로 처리되었다.　자가 조직 CAR 발현 T 세포를 생성하기 위해, 항CD19 CAR을 코딩하는 바이러스 벡터로 활성화 및 형질 도입 된 개별 대상체로부터의 백혈구 시료로부터 면역친화성 기반 농축에 의해 T 세포를 단리하였다. 세포를 팽창시키고, 냉동시키고, 투여하기 전에 침상에서 해동시켰다.
[0497] 종양 부담은 치료전에 골수를 평가하여 평가하였고, 골수 아세포의 백분율울 결정하였다. 골수에서 적어도 5 %의 아세포을 갖는 피험자는 형태적 질환 (MD)를 갖는 것으로 간주되었다. 골수에 5% 미만의 아세포를 가지는 것을 포함하는 대상체는 아래에 정의된 것과 같은 완전 완화 (CR)을 나타내지만, 골수에서 분자적으로 검출가능한 (유동세포계수법에 의한) 질병을 보여주는 것은 최소 잔류 질병 (MRD)을 가지는 것으로 간주되었다. CAR 발현 T 세포는 약 또는 약 0.9 x 106 CAR+ 세포/kg 내지 약 5.6 x 106 CAR+ 세포/kg 범위의 다양한 복용량으로, 약 15-30 분에 걸쳐, 단일 정맥내 (IV) 연속 주입에 의해 환자에게 투여되었다. kg (도 1A-C 참조). 사이클로포스파미드는 세포 주입 2 내지 7 일 전에 전처리 화학요법 치료로 대상체에게 투여되었다.
[0498] 처리에 대한 반응을 평가하기 위해 CAR 발현 T 세포의 투여 후에 대상체의 질병 상태 (MRD 또는 MD)를 평가 하였다. 호중구 수 > 1,000 x 106/L, 혈소판 수 > 100,000 x 106/L 이고 헤모글로빈 > 10 g/dL인 정상 조혈이 회복된 경우 완전 완화 (CR)가 결정되었고; 전처리 골수 차이에서 <5 % 아세포; 및 최소 4 주 동안 백혈병에 대한 치료적 증거는 없었다. 치료 후, 대상체들도 신경 독성 (혼란, 실어증, 발작, 경련, 혼수 및/또는 정신 상태의 변화 등의 신경학적 합병증)을 평가하고 관찰하였으며, 심각도에 따라 등급이 매겨졌다 (등급 1-5 단계를 사용 (Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (2010 년 12 월), 3 급 (중증 증상), 4 (생명을 위협하는 증상) 또는 5 (사망)은 심각한 신경 독성으로 간주된다.). 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또한 결정되고 모니터링되었으며, 심각도에 따라 등급이 매겨졌다.
[0499] CAR 발현 T 세포의 다양한 용량으로 단일 주입 치료 전의 중증 CRS의 반응, 존재 및 중증 신경독성의 존재는 치료전 질병 부담에 기초하여 분리된 대상군에서 복용량과 비교하여 평가되었다. 결과를 도 1A-C에 나타내었다.
[0500] 도 1A에 나타낸 바와 같이, 치료 전의 질병 부담 (형태학적 또는 분자적으로 검출가능한 질병)에 상관없이, 시험된 모든 복용량에서 CAR 발현 T 세포로 처리 된 대다수의 대상체에서 완전 완화 (CR)가 관찰되었다. CRS는 치료전에 형태학적 질병이 있는것으로 분류된 대상체에서 주로 관찰되었다. 그러나, 도 1B에 도시된 결과는 이 그룹 내에서 CAR 발현 T 세포의 다양한 복용 수준을 받은 대상체에 대해 CRS의 존재가 관찰되었음을 보여준다.
[0501] 도 1C에 도시된 바와 같이, 중증 신경독성도 CRS에 대한 결과와는 대조적으로 치료전에 최소 잔류 질환으로 구성된 형태학적 질병을 가진 대상체에서 가장 빈번하게 관찰되었지만, 보다 높은 복용량을 받은 대상체에서만 신경독성이 관찰되었다. 이 연구에서 분석된 대상체는 약 3.5 x 106 세포/kg보다 낮은 CAR 발현 T 세포의 복용량을 투여받았지만, 치료후 중증 신경독성을 나타내지 않았다. 한 가지 예외를 제외하고, 치료전에 분자적으로 검출가능한 질병으로 분류된 대상채에서 중증 신경독성은 일반적으로 관찰되지 않았다. 따라서, 치료전에 투여된 T 세포의 저 복용량을 받은 및/또는 낮은 질병 부담을 갖는 대상체는 일반적으로 중증 신경독성을 나타내지 않았다.
[0502] 이러한 결과는 독성을 최소화하고 효능을 최대화하도록 하기 위해, 형태학적 질병을 가진 대상체를 포함하는 대상체에게 질병 부담을 줄이기 위해 CAR 발현 T 세포의 첫번째 저 복용량 (모든 또는 대부분의 대상체에서 질병을 퇴치하는데 반드시 충분하지 않을 수 있음)을 투여하는 것을 포함하는 복용 요법을 사용하는 것을 지지한다. 또한 결과는 특정 질환이나 상황에서 세포의 연속 또는 후속 투여 (종양 부하의 감소 이후에, 모든 또는 대부분의 대상체는 최소의 질병을 보일 것임)를 필요하거나 필요로하는 경우 (예를 들어, 증가된 반응 또는 효능을 증진시키기 위해), 중증 신경독성의 최소한의 위험이 유무에 관계 없이, 더 높은 복용량으로 연속 복용량이 수행될 수 있다는 결과를 지지한다.
실시예 3: CAR + 자가 T 세포의 최초 및 연속 복용후의 효능 및 독성 평가
[0503] 치료 효능 및 독성 효과는 CAR+ T 세포의 다회 복용량을 투여한 실시예 2에 기재된 연구에서 대상체의 부분집단에서 평가되였다. 하기 표 3은 다양한 다중 복용량을도 투여된 세포의 특정 복용량 및 각각의 경우, 첫번째 및 연속 복용간 경과 된 시간을 나타낸다. 또한, 표 3은 실시예 2에 기재된 기준에 기초하여, 각각의 복용량을 투여하기 전에 평가된 바와 같이, 각각의 대상체의 종양 부담 (골수에서 아세포의 %를 갖는 MRD 또는 MD; "질병 부담"으로 표시된 컬럼 아래에 기재)를 나타낸다. 표 3에는 또한 각 투여에 대한 반응에 대한 각 환자의 결과가 나열되어 있다 (투여 전의 질병 부담과 비교하여 치료에 대한 반응을 나타내는 투여후 종양 부하를 열거하는 "반응"란 아래에 있음), 실시예 2에 설명된 바와 같은 중증 CRS 및 중증 신경 독성의 존재 또는 부재 (Y/N)를 나타내었다.
TABLE 3: 첫번째 및 연속 CAR+ T 세포 복용량의 안전성 및 효능
첫번째 복용량 연속 복용량
ID 질병 부담 복용량x 10 6 /kg 중증 CRS 중증 신경독성 반응 복용사이의 기간 (일) 질병부담 복용량 x 10 6 /kg 중증 CRS 중증 신경독성 반응
1 MRD+ [2%] 1.74 N N MRD- CR 133 MRD+ [2%] 1.37 N N MRD-CR
2 6% 3.08 N N MRD- CR 86 MRD+
[3%]		 1.50 N N MRD-CR
2* 90% 4.27 N N 48% 23 56% 3.27 N N NR
4 MRD+ [4%] 0.47 N N MRD+ CR 203 MRD+ [3%] 3.84 N N MRD+
5 97% 2.99 N N NR 15 75% 3.80 N N NR
6 60% 3.48 N Y MRD- CR 414 MRD+ [2%] N/A N N MRD- CR
7 MRD+ 4.15 N Y MRD+ 103 MRD+ 4.53 N N MRD- CRi
8 85% 4.10 Y Y MRD- CR 104 15% 4.27 N Y MRD- CR
9 25% 1.79 N N MRD+ [2%] 79 87% 1.98 N N CR
*세번째 복용; 첫번째 및 두번째 복용에 따른 CR에서의 대상체
ID: 대상체 숫자
MRD: 최소 잔류 질환
CR: 완전 완화
Cri: 혈구 회복이 불완전한 완전 완화
NR: 반응 없음
N/A: 불가
N: 부재
Y: 존재
[0504] 표 3의 결과는 치료된 대다수의 대상체가 대상체의 종양 부담의 감소, 예를 들어, MRD+ 또는 경우에 따라 MRD-, 또는 MRD+ 내지 MRD- 로 5 % 초과의 아세포의 존재로부터 종양 부담의 감소에 의해 입증되는 바와 같이, 세포의 첫번째 복용량에 반응하였다는 것을 보여준다. 일부 대상체의 완전 완화 (CR)도 관찰되었다. 표 3에 나타낸 바와 같이, MRD의 존재에 대한 유동세포계수법으로부터 평가된 완전한 완화 또는 질병 감소에 의해 입증된 바와 같이 세포 연속 복용량의 투여후 대상체에 대해서도 종양 감소가 관찰되었다 (환자 ID 번호 1, 2, 7, 8 및 9 참조). 따라서, 이 결과는 세포의 연속 복용량의 투여가 또한 효과적이었음을 입증한다. 대부분의 대상체는 모든 용량에서 중증 CRS를 나타내지 않았다. 또한, 실시예 2와 일치하여, 보다 높은 복용량의 CAR 발현 세포를 투여받은 대상체 및 일반적으로 형태학적 질병을 가진 대상체에서만 투여 후 중증 신경독성이 발생하는 것이 관찰되었다.
[0505] 일부 경우, 표 3은 일부 대상체가 첫번째 복용량 (환자 ID 번호 5 및 ID 번호 2* 참조)에 대해 반응성 (NR)이 아니므로 질병 또는 종양 부담 수준의 감소가 달성되지 않았음을 입증한다. 또한, 결과는 이들 대상체중의 하나에서 연속적으로 높은 복용량을 받은 후 중증 신경 독성이 검출되지 않음으로써, 첫번째 복용량의 주입후 치료적 완화 성취의 실패는 연속하여 높은 복용량을 투여받는 대상체의 신경독성의 위험 또는 빈도를 증가시키지 않음을 나타낸다.
[0506] 일부 구체예에서, 대상체의 반응 또는 독성의 부족 (또는 상대적으로 낮은) 정도는 대상체가 CAR+ T 세포 치료에 잘 반응하지 않을수도 있음을 의미하지만, 또한 다른 주입에 따라 특정 독성 부작용의 위험이 없다는 것도 의미하고, 이는 다른 한편으로 후속 투여를 위해 더 높은 복용량을 피할 필요성을 의미한다. 따라서, 이들 결과는 첫번째 복용량과 비교하여 더 높은 복용량을 사용하여 수행되는 연속 투여에 따라 첫번째 낮는 복용량의 투여가 (예를 들어, 상대적으로 짧은 시간으로) 수행되는 복용 요법을 (예를 들어, 효능의 최대화 또는 개선이 요구되거나 필요로 한다면)지지한다. 여기서 나타나는 결과는 특정 대상체가 첫번째 복용량에 잘 반응하지 않더라도 (따라서 연속 복용시에 낮은 종양 부담을 가지지 않고), 중증 신경독성의 위험이 이러한 비반응 대상체에서 조차도 연속 복용의 투여시 낮다는 것을 보인다.
[0507] 첫번째 및 연속 복용량으로 투여된 세포의 효능을 추가로 평가하기 위해, 투여된 세포의 생물학적 활성을 C 반응성 단백질 (CRP)의 혈청 수치를 측정한 피크 수치에 기초하여 비교하였다. 혈청 내 CRP의 상승된 피크 수치을 주입후 T 세포 팽창의 증거로 취하였다. 결과는 도 2에 나타내었다. 결과는 T 세포의 첫번째 및 연속 복용량 모두 주입 후 세포 팽창의 증거를 보여준다. 따라서, 이러한 결과는, 대상체가 CAR+ T 세포의 첫번째 투여와 반대로 연속에 따른 감소된 CRS 및 신경독성을 나타내지만, 투여된 세포의 생물학적 활성 및 팽창 능력이 각 투여에서 비교될 수 있음을 보여준다.
[0508] 연구 대상체는 또한 신체 검사를 받았고, 표 4에 제시된 것들을 포함하여 다른 부작용 (AE)의 증상을 모니터 하였다. 대상체에서 CAR+ T 세포의 첫번째 및 연속 복용간의 차이를 평가하기 위해, 데이터를 비교했다. 첫번째 복용량의 주입 후 구급 치료 AE (TEAE)는 첫번째 복용량을 받은 후 30 일 이내에 발생하지만 연속 복용량을 받기 전에 발생하는 모든 AE로 정의되었다. 연속 복용의 주입후 TEAE는 연속 복용량을 받은 후 30 일 이내지만 모든 후속 투여 전의 AE로 정의하였다. 표 4는 동일한 TEAE에 대해 평가된 총 대상체 수와 비교하여, TEAE를 나타낸 대상체의 수와 그러한 TEAE를 나타내는 대상체의 백분율(괄호 안의)을 나타낸다. 결과는 부작용의 백분율이 첫번째 복용량 및 연속 복용량의 주입 후에 대등하다는 것을 보여준다.
TABLE 4: 부작용
부작용 #1 복용량 주입전 TEAE ( n=33) #2 복용량 주입전 TEAE
(n=11)
모두 30 (90.9) 8 (72.7)
열성 호중구 감소증 15 (45.5) 2 (18.2)
복통 3 (9.1) 1 (9.1)
구역질 8 (24.2) 1 (9.1)
오한 10 (30.3) 1 (9.1)
발연 12 (36.4) 3 (27.3)
사이토카인 방출 증후군 (CRS) 5 (15.2) 1 (9.1)
증가된 알라닌 아미노전이효소 3 (9.1) 1 (9.1)
증가된 아스파테이트 아미노전이효소 2 (6.1) 1 (9.1)
고혈당증 5 (15.2) 1 (9.1)
저인산혈증 14 (42.5) 1 (9.1)
저인산혈증 14 (42.5) 1 (9.1)
근육약화 3 (9.1) 1 (9.1)
경련 6 (18.2) 1 (9.1)
현기증 2 (6.1) 1 (9.1)
뇌증 9 (27.3) 1 (9.1)
피부염 0 (0.0) 1 (9.1)
저혈압 12 (36.4) 1 (9.1)
실시예 4: 상이한 대상체 집단의 전반적인 생존에 대한 CAR + T 세포 복용량의 영향
[0509] 대상체의 전체적인 치료에 대한 CAR+ T 세포 복용량의 영향을 추가로 평가하기 위해, 실시예 2에 기재된 연구에서 대상체의 전체 생존을 투여된 세포의 수 및 투여 시간에 따른 질병 상태에 기초하여 분리된 소그룹의 대상체간에 비교하였다. 제품 한도 생존은 환자가 연구에서 제외된 경우 발생하는 것과 같은 검열된 관찰로 Kaplan-Meier 추정치를 계산하여 결정되었습니다.
[0510] 2.5 x 106 CAR+ 세포/kg 미만의 복용량을 투여한 대상체 그룹의 모든 대상체 및 2.5 x 106 CAR+ T 세포/kg 초과의 복용량을 투여한 다른 대상체 그룹의 모든 대상체를 비교하였을 때, 결과가 더 높은 복용량이 투여된 대상체 그룹에 대한 전반적인 생존 이점을 나타내었다. 투여 당시의 형태학적 질병을 가진 대상체를 살펴보면, 더 높은 복용량으로 관찰된 전체 생존에 대한 관찰된 효과는 훨씬 더 컸다. 총체적으로, 본 발명에 제시된 결과는 연속 투여에서 더 높은 (첫번째 복용량과 비교하여) 복용량이 사용되는 복용요법을 지지하고, 이때 연속 복용량은 질병 부담이 평균적으로 환자에서 감소되어 존재하지만 CRS 및/또는 신경독성의 위험이 낮게 존재 할때 주어진다. 이 실시예에서의 결과는 더 높은 연속 복용량의 사용이 증가 된 효능을 촉진할 것이라는 결론을 지지한다. 더욱이, 지적된 바와 같이, 실시예 2에 제시된 결과는 후속 투여시 (대상자가 낮은 질병 부담을 가져야하거나 그렇지 않으면 독성의 위험이 없는 경우)에서보다 높은 복용량을 사용하면 독성 위험이 증가하지 않는다는 결론을 뒷받침한다.
실시예 5: 급성 림프구성 백혈병 (ALL) 치료를 위한 CAR + T 세포의 다중 복용량 요법
[0511] 실험적인 복용량 요법에서, CD19+ B 세포 급성 림프 구성 백혈병 (ALL)을 갖는 대상체를 첫번째 저 복용량의 세포 및 연속 고 복용량의 세포를 투여하는 것을 포함하는 CAR 발현 T 세포의 2 회 복용으로 치료하였다. 처리 전, 자가 CAR 발현 T 세포는 실시예 2에 기술된 바와 실질적으로 생성되었다. 대상체는 CAR 발현 T 세포의 첫번째 복용 전 2-5 일에 1.0-3.0 g/m2 사이클로포스파미드의 단일 정맥내 림프 구성 복용량을 포함하여 전처리 화학치료요법을 받았다. 첫번째 복용량은 1 x 106 세포/환자 체중 kg을 포함했다. CAR을 발현하는 세포의 연속 복용량 (약 3 x 106 세포/환자 체중 kg)을 첫번째 복용 후 14-28 일 후에 복용량으로 투여하였다.
[0512] 대상체는 골수, 말초 혈액 및 뇌척수액 (CSF) 검사, 질병 부담 (형태학적 및 분자적으로 검출가능한 질명의 존재 또는 부재 및 수치를 포함하는)을 평가하고 모니터링 하기 위해서 중추 신경계 (CNS) 증상, CRS 및 신경독성을 포함하는 부작용의 증거 및 생존 평가에 의해 포함되는 치료의 효능을 모니터링 되었다.
실시예 6: 급성 림프 구성 백혈병 (ALL)를 치료하기 위한 CAR + T 세포의 반복 투여 계획
[0513] 예시적인 복용량 요법에서, 재발성 또는 난치성 B 세포 급성 림프구성 백혈병 (ALL)을 갖는 대상체를 CAR 발현 T 세포의 반복 복용량으로 처리하고, 첫번째 28 일 이내에 세포를 3 회 이상 복용량으로 투여하는 것을 포함한다. 처리 전, 자가 CAR 발현 T 세포는 실시예 2에 기재된 바와 실질적으로 생성된다. 선택적으로, 대상체는 CAR 발현 세포의 첫번째 복용 전 2 일 이상 및 일반적으로 세포 투여하기전 5 일 또는 최대 7 일째에 투여되는 사이클로포스파미드 및/또는 플루다라빈 (CY/FLU)의 전처리 면역억제 화학요법을 받는다.
[0514] 대상체는 약 0.4 x 106 세포/kg 내지 약 1 x 106 세포/kg의 범위와 같이, 약 1 x 106 세포/환자 체중 kg 이하의 CAR 발현 세포의 첫번째 복용량을 받는다. 첫번째 복용량의 투여 후 14-28 일 이내에 및/또는 CAR에 대한 면역 반응의 발달 전에, 대상체에 2 회 고 복용량의 세포를 주입한다. 일부 구체예에서, CAR 발현 세포의 연속 복용량은 첫번째 복용 후 약 14일 후에 투여되고, 첫번째 복용의 복용량은 약 3 x 106 세포/환자 체중 kg과 같은, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 4.5 x 106 세포/kg 범위의 복용량과 같은 첫번째 복용량 보다 높은 복용량이고, 이는 첫번째 복용량이 첫번째 복용량 보다 높은 복용량으로 투여된 약 28일후에 투여된 세번째 복용량의 CAR 발현 세포에 따르며, 이 복용량의 범위는 약 3 x 106 세포/환자 체중 kg과 같은, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 4.5 x 106 세포/kg의 범위이다. 일부 구체예에서, 세포의 1 이상의 후속 복용량이 투여된다. 일부 구체예에서, CAR 발현 세포의 네번째 복용량은 첫번째 복용 보다 높은 첫번째 복용 후 약 42 일 내지 56 일 내에 투여되고, 여기서 복용량은 약 3 x 106 세포/kg과 같은 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 4.5 x 106 세포/kg의 범위 이다.
[0515] 대상체는 세포의 최종 복용 후 전체적인 완화율 (ORR)을 측정함으로써 피험자를 치료 유효성에 대해 모니터링 된다. 일부 구체예에서, 유효성은 치료 전에 질병의 형태학적 증거 (골수 세포의 5 % 이상은 아세포였다)를 가지는 대상체에서 모니터링된다. ORR은 대상체의 골수, 말초 혈액 및 뇌척수액 (CSF) 검사로 결정된 CR이 있는 것과 분완전 혈구회수 (CRi)가 있는 비율로서 결정될 뿐만 아니라 중추신경계 (CNS)의 물리적 검사 및 평가를 통해 결정된다.
실시예 7: 비호지킨 림프종 (NHL) 치료를 위한 림프구성 화학요법 전처리로 CAR+ T 세포의 다중 복용량 요법
[0516] CD19+ B 세포 비호지킨 림프종 (NHL)을 치료하기 위한 예시적인 복용량 요법에서, CAR 발현 T 세포의 다중 투여 요법을 사용하여 대상을 치료한다. 치료 전, 자가 CAR 발현 T 세포는 실시 예 2에 기재된 바와 실질적으로 생성된다. NHL을 가진 대상체는 2 회 이상 CAR 발현 T 세포로 처리한다. 대상체는 약 0.4 x 106 세포/kg 내지 약 1 x 106 세포/kg 범위와 같이 약 1 x 106 세포/환자 체중 kg 또는 그 이하의 CAR 발현 세포의 첫번째 복용량을 투여 받는다. 예시적인 복용 요법에서, CAR 발현 T 세포의 연속 복용량이 첫번째 복용후 14 내지 28 일에 투여된다.
[0517] 한 예시적인 복용 요법에서, NHL을 가진 대상체는 CAR 발현 T 세포의 첫번째 복용량과 동일하거나 더 낮은 복용량으로 CAR 발현의 연속 복용량, 예를 들어, 약 1 x 106 세포/환자 체중 kg, 예컨대 약 0.4 x 106 세포/kg 내지 약 1 x 106 세포/kg 범위일 수있다. 임의로, 이전 투여에서 투여된 복용량보다 적거나 같은 복용 량으로 이전 투여 14 내지 28 일 후에 추가 반복 복용량을 투여한다.
[0518] 하나의 예시적인 복용 요법에서, 연속 복용량를 받기 전에, 대상체에게 임의로 종양 부담을 모니터링한다. 형태학적 질병에서 MRD로의 종양 감소에 의해 입증된 바와 같이, 분자 완화가 발견되면, 대상체에게 첫번째 복용량보다 높은 복용량으로 CAR 발현 T 세포의 연속 복용량이 투여되고, 그 복용량은 약 3 x 106 세포/환자 체중 kg과 같은 약 2.5x106 세포/kg 내지 약 4.5 x 106 세포/kg의 범위이다. 분자 완화가 일어나지 않으면, 대상체에게 CAR 발현 T 세포의 첫번째 복용량과 같거나 더 낮은 복용량으로 CAR 발현 T 세포의 연속 복용량이 투여되고, 그 복용량은 약 0.4 x 106 세포/kg 내지 약 1 x 106 세포/kg의 범위와 같은 약 1 x 106 세포/환자 체중kg 또는 그 이하이다. 임의로, 추가 복용량은 이전 투여후 14 내지 28 일에 투여되며, 분자 완화가 일어난다면 더 높은 복용량이 투여되고, 분자 완화가 일어나지 않으면 더 낮은 복용량이 투여된다.
[0519] 하나의 예시적인 복용 요법에서, 첫번째 복용량을 투여하기 전에, 대상체는 사이클로포스파미드와 플루다라빈 (CY/FLU)의 면역결핍 전처리 화학요법을 받으며, 이는 CAR 발현 세포의 첫번째 복용 적어도 2 일 전에 투여되고 일반적으로 세포 투여 7 일전을 넘지 않는다. 전처리 치료 후, 대상체는 앞서 설명된 첫번째 복용량을 투여받고, 여기서 투여된 복용량은 약 0.4 x 106 세포/kg 내지 약 1 x 106 세포/㎏ 범위와 같은 약 1 x 106 세포/환자 체중 kg 또는 그 이하인 CAR 발현 T 세포의 복용량이다. 대상체는 첫번째 복용량 보다 높은 CAR 발현 T 세포의 연속 복용량을 투여받고, 여기서 투여된 복용량은 약 3 x 106 세포/환자 체중 kg과 같은 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 4.5 x 106 세포/kg의 범위이다.
임의로, 이전 투여 14 내지 28일 후에 추가적인 반복 복용량이 투여되고, 여기서 복용량은 약 3 x 106 세포/환자 체중 kg과 같은, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 4.5 x 106 세포/kg의 범위이다.
실시예 8: 키메라 항원 수용체 (CAR)를 통해 자극된 T 세포에서 PD1/PD-L1 발현의 평가
[0520] T 세포를 인간 대상체로부터의 백혈구 시료로부터 면역친화성에 기초한 농축에 의해 단리하고, 세포를 활성화시키고 인간 CD28 유래 세포내 신호전달 영역 및 인간 CD3 제타 유래 신호전달 영역을 함유하는 항 CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)를 코딩하는 바이러스 벡터로 형질도입시켰다. 생성된 단리된 조성물 (CAR 및 특정 T 세포 마커)에 대한 표면 발현을 유동세포계수법으로 평가하여, 모든 T 세포 중 및 T 세포 부분집합 중 CAR+ 세포의 백분율뿐만 아니라 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율을 조성물에서 결정하였다 (표 5 참조).
표 5: 형질전환된 T 세포에서 항 CD19 CAR 발현
CD3+CAR+ CD4+CAR+ CD8+CAR+ CD3+CD4+ CD3+CD8+
백분율
(평균) 		49.91 23.60 28.73 40.03 53.66
표준 편차 2.97 1.18 2.38 1.10 1.22
[0521] 이어서, 조성물을 다음과 같은 배양에 의해 상이한 시료로 세분하였다: 1) CAR이 특이적인 항원을 발현하는 K562 세포 (K562-tCD19 세포)(항원 특이적 공동배양); 2) 비관련 항원을 발현하는 K562 세포 (K562-ROR1 세포)(비특이적 공동배양 대조군); 또는 3) 플레이트 결합된 항CD3 항체 및 용해성 있는 항CD28 항체 (TCR 복합체를 통한 자극), 배양 3 일째에 적용 가능한 경우, 초기에는 플레이트 결합된 항CD3 및 용해성 있는 항CD28을 사용한다. (1)과 (2)의 경우, K562 세포 (불후의 골수성 백혈병 세포)를 조작하여 각각 CD19와 ROR1을 발현시키고, CAR 발현 T 세포와 1:1의 비율로 배양하였다.　각각의 조건에 대해, CAR 발현 T 세포를 24 시간 동안 자극시켰다. 자극되지 않은 시료 ("매질", K562 세포 또는 자극성 항체가 없음)을 추가 음성 대조군으로 사용하였다.
[0522] 배양 24 시간 후, PD1, PD-L1, PD-L2, T 세포 마커 및 각 시료의 세포상의 CAR (CAR의 설치류 가변 부위 부분을 검출하기 위해 염소 항마우스 ("GAM") 염색에 기초한)의 표면 발현을 평가하기 위해 유동세포계수법을 수행하였다. 살아있고, 전방 산란 및 측면 산란 프로파일이 일치하는 림프구가 있는 단일 세포를 분석하기 위해 게이트 되었다. PD1, PD-L1 및 PD-L2의 발현은 다양한 마커의 표면 발현에 기초한 게이트로 T 세포의 다양한 게이트 된 집단 (CD4+/ CAR+, CD4+/ CAR-, CD8+/ CAR+, 및 CD8+/ CAR-)에서 평가되었고, 음성 대조군 ("매질") 시료 값을 사용하여 적절한 게이팅을 결정한다.
[0523] 도 3A 및 4A에 나타난 바와 같이, CAR이 특이적인 항원을 발현하는 세포(K562-tCD19)와 함께 배양된 경우 CD4+/CAR+ 및 CD8+/CAR+ T 세포 모두에서 PD1 및 PD-L1 발현은 24 시간 이내에 증가하였다. 무관한 항원 세포 (K562-ROR1)을 발현하는 동일한 유형의 세포에서 CAR+ 세포가 배양되는 또는 TRC 복합체 (항CD3 및 항CD28 항체)를 통한 자극에 영향을 주기 위해 고안된 조건 하에서 CD4+ 또는 CD8+ 세포 집단이 배양되는 기간내에 PD1 및 PD-L1의 발현 증가는 관찰되지 않았다. PD-L2의 발현은 자극된 조건이 시험되는 시간내에 상향 조절되지 않았다.
[0524] 도 3B 및 4B에 나타난 바와 같이, CD19 발현 세포와 함께 배양된 세포에서 PD-1 및 PD-L1의 발현 증가는 주로 항CD19 CAR의 발현 때문인 것으로 관찰되었다. CAR ("CAR-")을 발현하지 않은 CD4+ 게이트 또는 CD8+ 게이트 T 세포 중 어느 것도 CD19 발현 세포와의 배양 후 PD-1 또는 PD-L1 표면 발현에서 실질적인 증가를 나타내지 않았다.
[0525] 인간 4-1BB 유래 세포내 신호전달 영역 및 인간 CD3 제타 유래 신호전달 영역을 함유하는 항 CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)로 유전적으로 조작된 T 세포의 존재하에서 유사한 결과가 얻어졌다. 따라서, 결과는 PD-1 및 PD-L1의 상향조절이 CD28 또는 4-1BB 보조자극 신호전달 영역을 함유하는 CAR 구조체로 형질도입된 T 세포에서 발생함을 보였다. 이러한 데이터는 키메라 항원 수용체를 통한 자극 후 24 시간 이내에 PD1 및 PD-L1의 표면 발현의 상향조절을 나타내지만, 정규 T 세포 항원 수용체 복합체 (CD3/CD28 항체)를 통한 신호를 모방하도록 고안된 조건하에서는 자극을 따르지 않았다.
[0526] 이들 데이터는 생체내에서 대상체에 투여시 CAR에 특이적인 항원에 대한 노출시 일부 관점에서는 PD-L1 및/또는 PD-1의 상향조절을 초래할 수 있고, 이는 내인성 TCR을 통한 동족항원과의 상호작용 후에 일어나는 것 보다 더 큰 정도로 및/또는 더 빨리 일어날수 있다는 결과를 추가적으로 지지한다.
[0527] 이러한 분자 및 다른 저해 마커의 상향 조절은 기능의 상실 및/또는 T 세포의 소진에 기여할 수 있고 예를 들어 세포에 장기 노출을 손상시킬수 있다. 세포의 반복 또는 연속 복용은 PD-1 및/또는 PD-L1과 같은 저해 분자를 발현하지 않거나, 대상체에 존재하는 세포와 비교하여 그들을 적은 수치로 발현하면서 세포를 전달하는데 사용될 수 있다. 따라서, 이들 데이터는 T 세포의 연속 복용량이 PD-L1 또는 PD-1가 표적 항원에 대한 노출후에 초기 복용의 세포에 의해 상향 조절 되거나 되는 것과 같은 초기 복용후 대상체에 투여되는 다중 복용 계획에 대해 추가 지지를 제공한다.
[0528] 일부 구체예에서, 연속 복용량에서, 저해 분자(들)은 그들이 있는 세포 (또는 그들이 있는 세포의 50, 40, 30, 20, 10, 또는 5 %이상)에서 발현되지 않거나 실질적으로 (또는 대조 세포 집단과 동일한 정도의 발현) 발현되지 않는다. 일부 구체예에서, PD-1 및 PD-L1과 같은 저해 분자를 발현하지 않거나 실질적으로 발현하지 않는 세포의 반복되는 복용량은 탄탄한 기능을 가지는 기능적 CAR 발현 T 세포 또는 CAR 발현 T 세포가 대상체에 존재하는 시간을 연장할 수 있다. 일부 구체예에서는, 1 이상의 연속 복용량의 투여에 의해서 유전적으로 조작된 T 세포군을 보충하는 것은 항원 수용체 (예를 들어, CAR) 발현 세포에 대한 더 큰 및/또는 더 긴 노출의 정도 및 치료 결과의 향상을 초래할 수 있다. 일부 구체예에서, 예를 들어 기준 집단과 비교하여 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 또는 80 % 더 높은 표면 발현의 정도와 같이, 대상체에 투여 직전의 첫번째 복용량의 조성물내의 세포와 비교하는 것과 같은 기준 수치 또는 집단과 비교하여 PD-L1 또는 PD-1이 상향 조정되는 시점에 연속 복용량은 투여된다.
실시예 9: 종양 부담에 기초한 대상체에서의 신경 독성의 평가
[0529] CD19+ B 세포 급성 림프구성 백혈병이 있는 대상체에게 항CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 자가 T 세포가 투여되었다. 치료 전에, 자가 CAR 발현 T 세포가 실시예 2에 개시된 바와 같이 실질적으로 생성되었다.
[0530] 세포독성은 CAR 발현 T 세포의 단일 IV 연속 주입을 받은 후에 환자 집단에서 관찰되었고, 복용량은 2 x 105 세포/kg (N=13), 2 x 106 세포/kg (N= 15) 또는 2 x 107 세포/kg (N= 2)이었다 (도 5A 및 5B 참조). 일부 경우에 있어서, 사이클로포스파미드(약 2 g/m2), 사이클로포스파미드(2 g/m2) 및 에토포시드(100 mg/m2, 매일 3회 투여) 또는 사이클로포스파미드 (60 mg/kg) 및 플루다라빈 (25 mg/m2, 매일 3 내지 5회 투여) 의 전처리 화학요법 치료가 주입 전에 대상체에게 투여되었다.
[0531] 치료된 대상체의 말초 혈액에 존재하는 CAR T 세포의 수는 EGFRt (CAR 특이적 마커) 및 CD4 또는 CD8의 표면 발현을 유동세포계수법을 수행하여 전치료로 결정되었다. 신경독성 또한 결정되고 모니터링 되었고, 앞서 설명된 중증도에 기초하여 등급을 매겼다.
[0532] 도 5A에 나타난 바와 같이, 본 연구에서 관찰된 치료된 대상체의 신경 독성의 정도는 치료 전의 상대적으로 높은 종양부담의 존재과 관련되어 있었다. 도 5A에 나타난 바와 같이, 등급 3 또는 더 높은 신경독성의 중증 증상이 존재하는 대상체는 또한 시간 평가에 따른 치료 후 말초 혈액에서 CD8+ 또는 CD4+ CAR T 세포의 더 많은 수를 나타내었고, 이는 종양 부담, CAR+ T 세포의 확장의 정도 및 신경독성과의 상관계를 나타낸다. 도 5B는 치료 후 중환자실 (ICU)이 필요하다고 결정된 대상체는 치료전에 상대적으로 높은 백분율의 골수 아세포을 가지는 대상체 중에 있다.
실시예 10: CAR+ T 세포의 위험 적응성 복용량
[0553] 실시예 9에 개시된 치료된 대상체중 5명의 대상체는 항CD19 CAR T 를 종양 부담에 기초하여 적용된 복용량으로 투여받았다.
[0534] 치료전에, 종양 부담은 골수에 존재하는 골수 아세포의 백분율을 평가함으로써 평가되었다. 골수에 20%를 초과하는 아세포 (> 20%)를 가지는 대상체는 20% 또는 그 미만의 아세포를 대상체에 투여된 복용량에 비하여 상대적으로 더 낮은 CAR T 세포 (2 x105 T 세포/kg)의 복용량을 투여하기 위해 선택되었다. 20% 또는 그 미만의 아세포 (≤ 20%)를 가지는 대상체는 상대적으로 높은 복용량 (2 x 106 CAR-T 세포/kg)을 투여하기 위해 선택되었다. CAR 발현 T 세포는 단일 정맥내 (IV) 연속 주입을 통하여 대상체에게 투여되었다.
[0535] 치료 후 0, 1, 3, 7, 10, 14, 21 및 28 일 째에, 치료된 대상체의 말초 혈액에 존재하는 CAR T 세포의 수는 EGFRt (CAR 특이 마커) 및 CD4 또는 CD8의 표면 발현의 위한 세포 시료의 유동세포계수법을 수행하여 결정되었다. 대상체는 또한 중환자실 (ICU) 치료가 요구되는 중증 독성 결과를 포함하는 독성이 모니터링되었다.
[0536] CAR T 세포는 모든 대상체에서 확장되는것으로 관찰되었다. 유사 치료를 받은, 그러나 투여된 복용량이 종양 부담에 기초하지 않는 대상체의 집단과 비교하면, 위험 적응성 복용은 심각한 독성의 발생을 감소키기는 결과를 나타내었다. 예를 들어, 투여된 복용량이 종양 부담에 기초하지 않은 대상체에서, 11명의 대상체 중 7병이 ICU 치료를 받을 것이 요구되었다. 이와 반대로, 위험 적응성 복용량이 사용된 다섯 명의 대상체중 아무도 ICU 치료가 요구하지 않았다.
실시예 11: B 세포 급성 림프구성 백혈병 (ALL)을 가지는 대상체에 CAR T 세포 투여 전 플루다라빈의 전처리
[0537] CD19+ B 세포 급성 림프구성 백혈병 (ALL)을 가지는 대상체는 항 CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 자가 T 세포의 2x106 세포/kg을 투여받았다. 치료전, 자가 CAR 발현 T 세포는 실시예 2에 개시된 바와 같이 실질적으로 생성되었다.
[0538] CAR 발현 T 세포의 투여 전에, 대상체는 1) 2 g/m2 사이클로포스파미드 (매일 3회의 100 mg/m2 에토포시드 투여에 관계 없이) (N=5, 플루다라빈 치료 군 아님) 또는 2) 60 mg/kg (~2 g/m2) 사이클로포스파미드 및 25 mg/m2 플루다라빈의 3 내지 5 복용량(N=10, 지정된 플루다라빈 치료 군)으로 치료되었다.
[0539] 치료 후 0, 1, 3, 7, 10, 14, 21 및 28일 째에, 치료된 대상체의 말초 혈액에 존재하는 CAR T 세포의 수는 EGFRt (CAR 특이 마커) 및 CD4 또는 CD8표면 발현을 위한 세포 시료에 유동세포계수법을 수행하여 결정되었다.
[0540] 도 6 A 및 6 B에서 나타난 바와 같이, 말초 혈액내의 CD8+ (도 6A) 또는 CD4+ (도 6B) CAR T 세포의 존재로 측정된 더 큰 정도의 CAR T 세포 팽창 및/또는 유지는 치료후 7 내지 28일 째에 CAR T 세포 투여전에 플루다라빈을 받지 않는 대상체와 비교하여 사이클로포스파미드/플루다라빈으로 전처리된 대상체에서 관찰되었다. 이 결과는 사이클로포스파미드/플루다라빈으로 전처리하는 것은 생체내 CAR T 세포 팽창에 영향을 미칠 수 있음을 타나낸다.
[0541] 도 6C에 나타난 바와 같이, 시간의 흐름에 따라 보여지는 질병이 없는 생존을 나타내는 환자의 더 큰 백분율이 사이클로포스파미드 및 플루다라빈 모두로 전치료를 받은 대상체간에 관찰되었다.
실시예 12: 비호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 대상체에 CAR T 세포 투여 전 플루다라빈으로의 전처리
[0542] 비호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 대상체는 항CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 자가 T 세포를 2x107 세포/kg로 투여받았다. 치료 전에, 자가 CAR 발현 T 세포는 실시예 2에 개시된 바와 같이 실질적으로 생성되었다.
[0543] CAR 발현 T 세포의 투여 전에, 대상체는 1) 사이클로포스파미드 2-4 g/m2 (매일 3회 에토포시드 100-200 mg/m2 투여와 관계없이) (N= 3, 지정된 비 플루다라빈 치료군) 또는 2) 사이클로포스파미드 30-60 mg/kg (~1-2 g/m2) 및 3 내지 5 복용량으로 플루다라빈 25 mg/m2 (N= 6, 지정된 Cy/Flu 치료군)으로 치료받았다.
[0544] 치료 후 0, 1, 3, 7, 10, 14, 21 및 28일 째에, 치료된 대상체의 말초 혈액에 존재하는 CAR T 세포 수는 EGFRt (CAR 특이 마커) 및 CD4 또는 CD8 표면 발현을 위한 세포 시료에 유동세포계수법을 수행하여 결정되었다.
[0545]결과는 도 7A 및 7B에 나타나 있고, 이는 CAR 발현 CD8+ 또는 CD4+ T 세포 각각을 μL당 총 세포수로 또는 시료내의 CD4+ 또는 CD8+ 세포 각각의 총 백분율로 나타낸 결과이다. 도 7A 및 7B에 나타난 바와 같이, CAR T세포 투여전에 플루다라빈을 투여받지 않은 대상체와 비교하여, CD8+ (도 7A) 또는 CD4+ (도 7B) CAR T 세포의 존재로부터 측정된 CAR T 세포 팽창 및/또는 지속성의 더 큰 정도는 사이클로포스파미드/플루다라빈으로 전처리된 대상체에서 치료후 3 내지 28일째에 관찰되었다.
[0546] 전체 완화 속도 (ORR)을 측정하여 대상체에서 치료 효능을 모니터링하였다. ORR은 완전 완화 (CR) 또는 부분 완화 (PR)를 가지는 대상체의 비율로 결정되었고 골수, 말초혈액 및 뇌척수액의 평가뿐만 아니라 신체검사 및 중심 신경계 (CNS) 증상의 평가를 통해 결정되었다.
[0547] 사이클로포스파미드/플루다라빈으로 전처리 된 대상체의 전체 완화 속도는 38 % CR 속도 및 23 % PR 속도 (CR = 5/13, PR = 3/13)를 포함하는 62 % (8/13)였고, 플루다라빈 전처리를 받지 않는 대상체는 8 % CR 속도 및 42% PR 속도 (CR = 1/12, PR = 5/12)을 포함하는 50 % (6/12)의 전체 완화 속도를 가졌다.
[0548] 본 발명은 예를 들어 본 발명의 다양한 관점을 설명하기 위해 제공되는 특정 개시된 구체예에 대한 범위를 제한하려는 것이 아니다. 개시된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본 발명의 설명 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본 개시의 진정한 범위 및 사상을 벗어나지 않고 실시될 수 있고, 본 개시물의 범위내에 포함되도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> Juno Therapeutics, Inc. GILBERT, Mark <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR DOSING IN ADOPTIVE CELL THERAPY <130> 735042001040 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/066,279 <151> 2014-10-20 <150> US 62/162,647 <151> 2015-05-15 <150> US 62/168,710 <151> 2015-05-29 <150> US 62/215,732 <151> 2015-09-28 <160> 15 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> spacer (IgG4hinge) (aa) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> spacer (IgG4hinge) (nt) <400> 2 Gly Ala Ala Thr Cys Thr Ala Ala Gly Thr Ala Cys Gly Gly Ala Cys 1 5 10 15 Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Cys Cys Thr Thr Gly 20 25 30 Cys Cys Cys Thr 35 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 65 70 75 80 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 85 90 95 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 100 105 110 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 115 <210> 4 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH2-CH3 spacer <400> 4 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 5 <211> 282 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgD-hinge-Fc <400> 5 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val 100 105 110 Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly 115 120 125 Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn 130 135 140 Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro 145 150 155 160 Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys 165 170 175 Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser 180 185 190 Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu 195 200 205 Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro 210 215 220 Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser 225 230 235 240 Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr 245 250 255 Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg 260 265 270 Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His 275 280 <210> 6 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (amino acids 153-179 of Accession No. P10747) <400> 6 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 7 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (amino acids 114-179 of Accession No. P10747) <400> 7 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 35 40 45 Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 50 55 60 Trp Val 65 <210> 8 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (amino acids 180-220 of P10747) <400> 8 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 9 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 (LL to GG) <400> 9 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 10 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 4-1BB (amino acids 214-255 of Q07011.1) <400> 10 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 11 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 11 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 12 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 12 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 13 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 14 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <223> T2A <400> 14 Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg 20 <210> 15 <211> 357 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <223> tEGFR <400> 15 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly 20 25 30 Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe 35 40 45 Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala 50 55 60 Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu 65 70 75 80 Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile 85 90 95 Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu 100 105 110 Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala 115 120 125 Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu 130 135 140 Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr 145 150 155 160 Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys 165 170 175 Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly 180 185 190 Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu 195 200 205 Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys 210 215 220 Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu 225 230 235 240 Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met 245 250 255 Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala 260 265 270 His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val 275 280 285 Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His 290 295 300 Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro 305 310 315 320 Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala 325 330 335 Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Phe Met 355

Claims (95)

  1. 치료 방법으로서:
    (a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체 체중의 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 대상체 m2 당 약 1 x 108 이하의 세포를 포함하며, 및;
    (b) 상기 단계 (a)의 투여 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점에서 대상체에게 CAR을 발현하는 세포의 연속 복용량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 단계 (b)의 투여의 시점에서:
    (i) 대상체에서 사이토킨 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치는 단계 (a)의 상기 투여 직전의 대상체에서의 약 10 배 미만, 약 25 배 미만 및/또는 약 50배 미만이며; 및/또는
    (ii) 대상체는 등급 3 또는 그 이상의 신경독성을 나타내지 않고; 및/또는
    (iii) 상기 첫번째 복용량의 상기 투여 후 대상체에서 신경독성의 CRS-관련 결과 또는 증상은 피크 수치에 도달하고 단계 (a)의 투여 후 감소하기 시작하였으며; 및/또는
    (iv) 대상체는 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포-매개 면역 반응을 나타내지 않는 것인 방법.
  3. 치료 방법으로서,
    (a) 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체에서 질병 또는 병태의 부담을 줄이기에 충분한 양의 세포를 포함하고; 및
    (b) 하기 시점에서 대상체에게 CAR 발현 세포의 연속 복용량을 투여하는 단계:
    (i) 신경독성, 사이토카인-방출 증후군 (CRS), 대식세포 활성화 증후군 또는 종양 용해 증후군에 대한 치료적 위험이 단계 (a)의 상기 투여 후에 존재하지 않거나 경과하였거나 가라앉았을 때, (ii) CRS, 신경독성, 대식세포 활성화 증후군 또는 종양 용해 증후군을 입증하는 생화학적 판독이 상기 단계 (a)의 투여 후에 존재하지 않거나 경과하였거나 가라앉았을 때, 및/또는 (iii) 대상체에서 사이토카인-방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성을 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 단계 (a)의 투여 직전의 대상체의 지표의 혈정 수치의 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만인때; 를 포함하되
    대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현되는 CAR에 특이적인 검출 가능한 선택성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 것인 방법.
  4. 치료 방법으로서,
    (a) 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체에서 질병 또는 증상의 부담을 줄이기에 충분한 양의 세포를 포함하고; 및
    (b) 상기 단계 (a)의 투여 후 대상체에서 신경독성 및/또는 CRS-관련 결과가 피크 수치에 도달한 다음 감소하기 시작하고 대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포-매개 면역 반응을 나타내지 않는 시점에서, CAR 발현 세포의 연속 복용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서,
    (i) 단계 (a)의 투여는 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않거나 대상체에 CRS를 유발하지 않고;
    (ii) 단계 (a)의 투여는 대상체에서 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유발하지 않으며;
    (iii) 치료적 데이터에 기초하여, 단계 (a)의 세포 복용량의 투여는 그렇게 치료된 대부분의 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않고;
    (iv) 치료적 데이터에 기초하여, 단계 (a)의 세포 복용량의 투여는 그렇게 치료된 대부분의 대상체에서 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유발 하지 않는 방법.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서,
    단계 (a)의 투여 개시와 단계 (b)의 투여 개시 사이의 시간은 약 9일 내지 약 35일 사이, 약 14일 내지 약 28일 사이, 15일 내지 27일 사이 또는 17일 내지 약 21일이고; 및/또는
    상기 첫번째 복용량은 대상체 체중의 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 대상체 m2 당 약 1 x 108 이하의 세포를 포함하는 방법.
  7. 제2항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, CRS-관련 결과는 발열, 저혈압, 저산소증, 신경장애 또는 염증성 사이토카인 또는 C 반응성 단백질 (CRP)의 혈청 수치로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 방법.
  8. 제2항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, CRS를 나타내는 요인은 인터페론 감마 (IFNγ), 과립구-대식세포 콜로니-자극요인 (GM-CSF), 종양 괴사 요인 알파 (TNFα), IL-6, IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프랙트알카인 (fracktalkine) 및 IL-5로 이루어진 군으로부터 선택된 염증성 사이토카인 또는 CRP인 방법.
  9. 제2항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 있어서, 단계 (b)에서 투여 시: 상기 CRS-관련 결과의 상기 수치가 피크 수치의 50% 이하이거나, 피크 수치의 20% 이하이거나, 피크 수치의 5% 이하이거나, 또는 단계 (a)의 투여 직전의 수치 또는 부근의 수치인 때; 또는 CRC를 나타내는 상기 요인의 상기 혈청 수치가 단계 (a) 투여 직전보다 10배 이하인 것인 방법.
  10. 제2항 내지 제9항 중 어느 하나의 항에 있어서, 신경독성 및/또는 등급 3 또는 그 이상의 신경독성의 치료적 위험과 관련된 증상은 혼동, 섬망, 표현 실어증, 둔감, 근경련, 기면, 정신증상 변화, 경련, 발작 유사 활성, 발작 (입양으로 뇌파검사[EEG]로 확인됨), 베타 아밀로이드 (Aβ) 수치의 상승, 글루타메이트 수치의 상승 및 산소 라디칼 수치의 상승으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 대상체는 단계 (a)의 투여에 앞서 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR을 발현하는 세포의 복용량을 제공받지 않았던 것인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 하나의 항에 있어서, 연속 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR은 첫번째 복용량으로 세포에 의해 발현된 CAR에 존재하는 적어도 하나의 면역반응활성 항원결정부를 포함하는 것인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 연속 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR은 첫번째 투여량의 세포에 의해 발현되는 CAR과 동일하거나 첫번째 투여량의 세포에 의해 발현되는 CAR과 실질적으로 동일한 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 하나의 항에 있어서, 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR은 질병 또는 병태의 세포 또는 조직에 의해 발현되거나, 질병 또는 병태에 관련되는 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 질병 또는 증상은 종양 또는 암인 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 단계 (a)의 투여 후 질병 부담을 나타내는 1 이상의 요인의 감소에 의해 지시되는 것과 같이, 단계 (a)의 투여는 대상체의 질병 또는 증상 부담을 감소시키는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 단계 (b)의 투여시, 대상체는 재발 하지 않았으며 및/또는 질병의 부담을 나타내는 1 이상의 요인이 상기 감소에 따라 증가하지 않은 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포의 연속 복용량은 대상체의 질병 또는 병태의 부담이 줄어들기에 충분한 양으로 세포를 포함하는 것인 방법.
  19. 제16항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 있어서, 단계 (b)의 투여는 대상체의 질병 또는 증상의 부담을 더욱 감소시키는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 연속 복용량의 상기 투여는 연속 복용량의 투여 개시 직전과 비교하여 대상체의 질병 또는 증상 부담을 감소시키는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 방법은 대상체에게 단계 (a)의 세포 및 단계 (b)의 세포를 단일 복용량으로 한꺼번에 투여하는 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법에 비해 질병 또는 증상 부담을 더 큰 정도로 및/또는 더 긴 기간 동안 감소시키는 것인 방법.
  22. 제16항 내지 제21항 중 어느 하나의 항에 있어서:
    상기 부담의 감소 및/또는 추가적인 부담의 감소는 대상체, 대상체의 장기, 대상체의 조직 또는 대상체 체액내의 질병의 총 세포수의 감소, 종양의 질량 또는 부피의 감소 및/또는 전이의 수 및/또는 정도의 감소를 포함하는 것인 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 하나의 항에 있어서:
    질병은 암이고 단계 (b)의 투여 개시 시점에서 대상체는 형태학적 질환을 나타내지 않고; 및/또는
    질병은 백혈병 또는 림프종이고, 단계 (b)의 투여 시점에서 대상체는 골수에서 5% 이상의 아세포를 나타내지 않는 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 하나의 항에 있어서, 질병 또는 증상은 첫번째 복용량의 투여 후에도 지속되고 및/또는 첫번째 복용량의 투여가 대상체의 질병 또는 증상을 퇴치하는데 충분하지 않는 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 하나의 항에 있어서, 단계 (b)의 투여시 대상체는 검출가능한 분자 질병 및/또는 최소 잔류 질병을 나타내는 것인 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 하나의 항에 있어서, (i) CAR 발현 세포의 최대 개수, (ii) 시간 경과에 따른 CAR 발현 세포의 그래프 면적 (AUC) 및/또는 (iii) 상기 단계 (b)의 투여에 따른 대상체의 검출가능한 CAR 발현 세포의 지속시간은, 대상체에게 단계 (a)의 세포 및 단계 (b)의 세포를 단일 복용량으로 한꺼번에 투여하는 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법을 통해 얻어지는 것 보다 더 큰 것인 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 하나의 항에 있어서:
    상기 방법에 의해 마이크로리터당 적어도 또는 약 10 CAR 발현 세포, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMCs) 총 개수의 적어도 50%, 적어도 약 1 x 105 CAR 발현 세포 또는 DNA 마이크로그램당 CAR-인코딩 DNA의 적어도 5,000 카피인, 대상체의 혈액내의 CAR 발현 세포의 최대 농도 또는 개수가 얻어지고; 및/또는
    단계 (a)의 투여 개시 후 90일째, CAR 발현 세포는 대상체의 혈액 또는 혈청에서 탐지가능하고; 및/또는
    단계 (a)의 투여 개시 후 90일째, 대상체의 혈액은 CAR 발현 세포의 적어도 20%, 마이크로리터당 적어도 10 CAR 발현 세포 또는 적어도 1 x 104 CAR 발현 세포를 포함하는 것인 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 하나의 항에 있어서, 단계 (a) 투여 후 시간에 따른 CAR 발현 세포의 혈액 농도의 그래프 면적 (AUC)은 대상체에게 단계 (a)의 세포 및 단계 (b)의 세포를 단일 복용량으로 한꺼번에 투여하는 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법을 통해 얻어지는 것보다 더 큰 것인 방법.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 하나의 항에 있어서, 단계 (b)의 투여 후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일째에 대상체의 CRS-관련 결과는 검출 불가하거나, 또는 대상체에게 첫번째 복용량의 투여없이 단계 (b) 세포를 투여하는 대안적인 복용 요법을 포함하는 방법에 비해 감소된 것인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 하나의 항에 있어서, 단계 (b)의 투여 후 대상체의 시간에 따른 CRS를 나타내는 요인의 혈청 수치에 대한 그래프 면적 (AUC)는, 대상체에게 첫번째 복용량의 투여 없이 단계 (b)의 세포를 투여하는 대안적 복용 요법을 포함하는 방법에 따른 것과 비교하여 더 낮은 것인 방법.
  31. 제15항 내지 제30항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상체는 상기 단계(a)의 투여 전에 종양 또는 암을 표적으로 하는 치료제로 처리되었고, 대상체는 단계(a)의 투여시 상기 치료제에 난치성이거나 반응이 없는 것인 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 하나의 항에 있어서, 단계 (a)의 투여 후 및 단계 (b)의 상기 투여 전, 또는 단계 (a)의 투여 전에, 상기 대상체의 CRS를 나타내는 요인, 신경독성을 나타내는 요인, 질병 부담을 나타내는 요인의 혈청 수치 및/또는 숙주 항 CAR 면역 반응의 지표를 평가하는 단계를 더 포함하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 질병 부담을 나타내는 요인이 측정되고 대상체, 대상체의 기관, 대상체의 조직 또는 대상체의 체액에서의 질병의 총 세포 개수, 유동세포계수법 또는 정량적 PCR에 의한 분자 검출, 고형 종양의 질량 또는 부피 또는 전이의 개수 또는 정도를 포함하는 것인 방법,
  34. 제32항 또는 제33항에 있어서:
    i) 단계(b)의 투여 전에 질병의 부담을 나타내는 요인을 평가하는 단계
    ii) 평가의 결과에 기초하여, 대상체에게 투여될 세포의 연속 복용량을 결정하는 단계
    iii) 만약 평가가 대상체가 형태학적 질병을 갖는다고 결정하면, 대상체에게 첫번째 복용량의 CAR 발현 세포의 수에 비하여 더 적거나 거의 비슷한 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 연속적 복용량을 투여하는 단계; 및/또는 평가가 대상체가 최소한의 잔여 질병을 갖는다고 판단하면, 대상체에 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 연속 복용량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  35. 제1항 내지 제33항 중 어느 하나의 항에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 CAR 발현 세포의 수와 비교하여 거의 동일한 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 것인 방법.
  36. 제1항 내지 제33항 중 어느 하나의 항에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 수의 CAR 발현 세포를 포함하는 것인 방법.
  37. 치료 방법으로서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 연속 복용량을, CAR을 발현하는 세포의 첫번째 복용량이 이미 투여된 대상체에게 투여하는 것을 포함하고:
    세포의 연속 복용량은 첫번째 복용량의 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만인 시점에 투여되며; 및/또는
    연속 복용량으로 투여된 CAR 발현 세포의 수는 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 방법.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 하나의 항에 있어서, 첫번째 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 0.5 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 3 x 106 세포/kg, 약 0.75 x 106 세포/kg 내지 2.5 x 106 세포/kg 또는 약 1 x 106 세포/kg 내지 2 x 106 세포/kg에 각각 포함되는 것인 방법.
  39. 제34항, 제36항 또는 제37항에 있어서, 증가된 수는 첫번째 복용량의 수와 비교하여 적어도 2배, 5배 또는 10배 더 많은 수인 방법.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR 발현 세포의 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 2 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 6 x 106 세포/kg, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 5.0 x 106 세포/kg 또는 약 3.0 x 106 세포/kg 내지 약 4.0 x 106 세포/kg에 각각 포함되는 방법.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상체는 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내지 않거나, 심각한 CRS를 나타내지 않거나, 신경독성을 나타내지 않거나, 심각한 신경독성을 나타내지 않거나, 또는 첫번째 복용량 투여 및/또는 연속 복용량의 투여에 따른 등급 3 보다 높은 신경독성을 나타내지 않는 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 하나의 항에 있어서, 첫번째 복용량에서 CAR 발현 세포는 첫번째 복용량 투여 후 및/또는 연속 복용량 투여 후 대상체에서 증가하는 방법.
  43. 제42항에 있어서, 증가는 (i) 투여 직전과 비교하여 첫번째 복용량 및/또는 연속 복용량의 투여 후 혈청 CRP 수치의 증가, 및/또는 (ii) 투여 직전과 비교하여 첫번째 복용량 및/또는 연속적 복용량 투여 후에 qPCR에 의해 측정된 CAR-인코딩 핵산의 수치 증가에 의해 입증되고, 여기서 상기 증가는 임의로 적어도 1, 2 또는 3배인 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 하나의 항에 있어서, 첫번째와 연속 복용 사이 시간은 15일 내지 27일인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 첫번째와 연속 복용 사이 시간은 약 21일인 방법.
  46. 제44항에 있어서, 첫번째와 연속 복용 사이 시간은 약 17일인 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 하나의 항에 있어서, 첫번째 복용량의 세포는 첫번째 복용량의 세포를 포함하는 단일 의약 조성물로 투여되며 및/또는 연속 복용량의 세포는 연속 복용량의 세포를 포함하는 단일 의약 조성물로 투여되는 방법.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 하나의 항에 있어서:
    첫번째 복용량은 분할(split) 복용량, 즉 3일 이내의 기간 동안 첫번째 복용량의 세포의 총합을 복수개의 조성물로서 나누어 투여하는 분할 복용량이고,
    연속 복용량은 분할 복용량, 즉 3일 이내의 기간 동안 연속 복용량의 세포의 총합을 복수개의 조성물로서 나누어 투여하는 분할 복용량인 것인 방법.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 하나의 항에 있어서, 방법은 단계 (a) 투여 전 및/또는 단계 (b)의 투여 전에 화학요법 제제를 투여하는 것을 더 포함하거나, 대상체는 첫번째 복용량의 투여 이전에 이미 화학요법 제제로 치료된 것인 방법.
  50. 제49항에 있어서, 화학요법 제제는 사이클로포스파미드, 플루다라빈 및/또는 그들의 조합으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것인 방법.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서, 화학요법 제제의 투여는 단계 (a)의 투여 전에 화학요법 제제의 투여를 포함하고, 임의로 단계 (b)의 투여 전에는 포함하지 않는 방법.
  52. 제49항 내지 제51항 중 어느 하나의 항에 있어서, 화학요법 제제는 단계 (a)의 투여에 앞서 2 내지 5일간 투여되며 및/또는 단계 (b)의 투여에 앞서 2 내지 5일간 투여되는 것인 방법.
  53. 제49항 내지 제52항 중 어느 하나의 항에 있어서, 화학요법 제제는 대상체의 약 1g/m2 내지 대상체의 약 3g/m2의 복용량으로 투여되는 것인 방법.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상체는 첫번째 복용량의 투여 전에 저온환원적 화학요법을 받은바 있거나 또는 상기 방법은 첫번째 복용량의 투여에 앞서 저온환원적 화학요법의 투여를 더 포함하는 것인 방법.
  55. 제49항 내지 제54항 중 어느 하나의 항에 있어서, 화학요법 제제는 대상체의 질병 또는 증상 부담을 줄여주는 전치료 화학요법(conditioning chemotherapy)을 포함하는 것인 방법.
  56. 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 연속 복용량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 통합 치료를 제공하는 방법으로:
    상기 투여 전에, 대상체는 대상제의 질병 또는 증상의 부담을 줄이기에 충분한 양의 CAR 발현 선행 복용량을 투여받은 바 있고; 및
    투여시에, 대상체내의 사이토카인-방출 증후군 (CRS)을 나타내는 요인의 혈청 수치는 상기 선행 복용량 투여 직전의 대상체의 상기 지표의 혈청 수치의 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만이고, 대상체는 상기 선행 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 특이적인 검출가능한 선택성 숙주 면역 반응을 나타내지 않으며; 및/또는 상기 선행 및 연속 복용량 사이의 시간은 약 14일 초과 및 약 28일 미만인 방법.
  57. 제56항에 있어서, CAR 발현 세포의 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는 약 2 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 6 x 106 세포/kg, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 5.0 x 106 세포/kg 또는 약 3.0 x 106 세포/kg 내지 약 4.0 x 106 세포/kg인 것인 방법.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 하나의 항에 있어서, 질병 또는 증상은 백혈병이거나 림프종인 방법.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 하나의 항에 있어서, 질병 또는 증상은 급성 림프구성 백혈병인 방법.
  60. 제59항에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수보다 많은 방법.
  61. 제60항에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수보다 적어도 또는 약 2배 또는 약 3배 많은 방법.
  62. 제1항 내지 제58항 중 어느 하나의 항에 있어서, 질병 또는 증상은 비-호지킨 림프종 (NHL)인 방법.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 하나의 항에 있어서, 첫번째 복용량으로 투여된 CAR+ 세포의 수는 대상체의 킬로그램당 1 x 106이거나, 약 1 x 106이거나 또는 약 1 x 106 이하이며 및/또는 연속 복용량으로 투여된 CAR+ 세포의 수는 3 x 106이거나 약 3 x 106인 방법.
  64. 제62항에 있어서, 연속 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수는 첫번째 복용량으로 투여된 킬로그램당 CAR+ 세포의 수보다 더 적거나 약간 더 적거나 같거나 거의 같은 방법.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 하나의 항에 있어서, 1 이상의 추가적인 후속 복용량을 투여하는 단계를 더 포함하는 방법으로, 여기서 상기 1 이상의 추가적인 후속 복용량의 첫번째 복용량은 연속 복용량의 투여 개시 후 적어도 14일 또는 14일 초과의 시점에 투여되는 방법.
  66. 제65항에 있어서, 첫번째, 연속 및 후속 복용량의 투여는 적어도 3가지 복용량을 28일 또는 약 28일 이내에 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  67. 제65항 또는 제66항에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 약 14일째에 투여되고, 1 이상의 추가적인 후속 복용량 중 하나는 첫번째 복용량의 투여 개시 후 28일째에 투여되되, 임의로 추가적인 후속 복용량은 첫번째 복용량의 투여 개시 후 42일 및/또는 56일째에 투여되는 것인 방법.
  68. 제1항 내지 제67항에 있어서, 세포는 T 세포인 방법.
  69. 제1항 내지 제68항에 있어서, T 세포는 대상체에게서 자가 유래된 것인 방법.
  70. CAR 발현 세포에 의해 선행 치료된 대상체의 질병 또는 병태의 치료용 의약을 생산하기 위한, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 조성물의 용도로서:
    조성물은 상기 선행 치료후 14일 내지 28일 간 사용하기 위함이고; 및/또는
    조성물은 CAR 발현 세포에 의해 상기 선행 치료된 대상체의 질병 또는 증상의 부담을 줄이는데 충분한 양으로 연속 복용량의 투여를 위해 제제화된 것인 용도.
  71. CAR 발현 세포에 의해 선행 치료된 대상체의 질병을 치료하기 위해 사용되는 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포를 포함하는 조성물로서:
    세포는 상기 선행 치료 후 14일 내지 28일간 사용하기 위함이고; 및
    세포는 CAR 발현 세포에 의해 상기 선행 치료된 대상체의 질병 또는 증상의 부담을 줄이는데 충분한 양으로 연속 복용량의 투여를 위해 제제화된 것인 조성물.
  72. 제70항의 용도 또는 제71항의 조성물로서, 상기 선행 치료의 CAR 발현 세포의 복용량은 연속 복용량 사용 이전에 대상체의 종양 부담을 줄였고 및/또는 대상체가 형태학적 질병을 나타내지 않고 및/또는 대상체가 골수내에 5% 초과의 아세포를 나타내지 않는 용도 또는 조성물.
  73. 질병 또는 병태의 치료 방법에 사용되기 위한 의약을 생산하는데 있어서의 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포의 용도로서, 상기 방법은 다음 단계, 즉:
    (a) 질병 또는 증상을 갖는 대상체에 CAR을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/대상체의 m2 이하의 세포를 포함하고; 및
    (b) 상기 단계 (a)의 개시 후의 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점에 CAR을 발현하는 세포의 연속 복용량을 대상체에 투여하는 단계
    를 포함하는 것인 용도.
  74. 질병 또는 증상을 치료하는 방법에 사용되기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포를 포함하는 조성물로서, 상기 방법은 다음 단계, 즉:
    (a) 질병 또는 증상을 갖는 대상체에 CAR을 발현하는 세포의 첫번째 복용량을 투여하는 단계, 상기 첫번째 복용량은 대상체 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/대상체의 m2 이하의 세포를 포함하고; 및
    (b) 상기 단계 (a)의 개시 후의 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점에 CAR을 발현하는 세포의 연속 복용량을 대상체에 투여하는 단계
    를 포함하는 것인 조성물.
  75. 제70항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 세포는 (i) 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않거나 대상체에 CRS를 유발하지 않는 양; (ii) 대상체에 등급 3 또는 이상의 신경독성을 유발하지 않는 양; 및/또는 (iii) 치료적 데이터에 기초하여, 그렇게 처치된 대부분의 대상체에서 심각한 CRS를 유발하지 않는양; 및/또는 (iv) 치료적 데이터에 기초하여, 그렇게 처치된 대부분의 대상체에서 등급 3 또는 그 이상의 신경독성을 유발하지 않는 양으로 투여하기 위해 제제화된 것인 방법 또는 조성물.
  76. 대상체의 질병 또는 증상을 치료하기 위한 의약을 생산하기 위한 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포의 용도로서, 여기서 세포는 첫번째 및 연속적 복용량으로 대상체에 투여하기 위해 제제화 및/또는 포장되고 및/또는 치료는 첫번째 및 연속적 복용량으로 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함하되:
    첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/ 대상체 m2 이하를 포함하고, 및
    연속 복용량은 다음, 즉:
    i) (a) 첫번째 투여의 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점 및/또는 (b) (i) 대상체에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 첫번째 투여 직전의 대상체에서 보다 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만인 시점; (ii) 대상체가 등급 3 또는 이상의 신경독성을 나타내지 않는; (iii) 상기 첫번째 복용량의 상기 투여에 따라 대상체에서 CRS-관련 결과 또는 신경독성 증상이 피크 수치에 도달하고 첫번째 투여에 따라 감소하기 시작하는 시점, 및/또는 (iv) 대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포 매개 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 투여하기 위한 연속 복용량; 및
    ii) 첫번째 복용량의 CAR 발현 세포수와 동일한 CAR 발현 세포수를 포함하거나 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 수의 CAR 발현 세포수를 포함하는 연속 복용량
    중에서 선택되는 것인 용도.
  77. 대상체의 질병 또는 증상 치료하는데 사용되기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)을 발현하는 세포를 포함하는 조성물로서, 여기서 세포는 첫번째 및 연속적 복용량으로 대상체에 투여하기 위해 제제화 및/또는 포장되고 및/또는 치료는 첫번째 및 연속적 복용량으로 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함하되:
    첫번째 복용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 1 x 106 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포 및/또는 약 1 x 108 세포/ 대상체 m2 이하를 포함하고, 및
    연속 복용량은 다음, 즉:
    i) (a) 첫번째 투여의 개시 후 적어도 또는 약 14일 이상 및 약 28일 미만의 시점 및/또는 (b) (i) 대상체에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 첫번째 투여 직전의 대상체에서 보다 약 10배 미만, 약 25배 미만 및/또는 약 50배 미만인 시점; (ii) 대상체가 등급 3 또는 이상의 신경독성을 나타내지 않는 시점; (iii) 상기 첫번째 복용량의 상기 투여에 따라 대상체에서 CRS-관련 결과 또는 신경독성 증상이 피크 수치에 도달하고 첫번째 투여에 따라 감소하기 시작하는 시점, 및/또는 (iv) 대상체가 상기 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CAR에 대해 검출가능한 체액성 또는 세포 매개 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 투여하기 위한 연속 복용량; 및
    ii) 첫번째 복용량의 CAR 발현 세포수와 동일한 CAR 발현 세포수를 포함하거나 첫번째 복용량과 비교하여 증가된 수의 CAR 발현 세포수를 포함하는 연속 복용량
    중에서 선택되는 것인 조성물.
  78. 제76항 또는 제77항에 있어서, 증가된 수는 첫번째 복용량의 수와 비교하여 적어도 2배, 5배 또는 10배 더 많은 수인 용도 또는 조성물.
  79. 제76항 내지 제78항 중 어느 하나의 항에 있어서, CAR 발현 세포의 연속 복용량으로 투여된 세포의 수는: 약 2 x 106 세포/대상체 체중 kg 내지 6 x 106 세포/kg, 약 2.5 x 106 세포/kg 내지 약 5.0 x 106 세포/kg 또는 약 3.0 x 106 세포/kg 내지 약 4.0 x 106 세포/kg;
    약 1.5 x 108 세포 내지 4.5 x 108 세포, 약 1.5 x 108 세포 내지 약 3.5 x 108 세포 또는 약 2 x 108 세포 내지 약 3 x 108 세포;
    약 1.5 x 108 세포/m2 내지 4.5 x 108 세포/m2, 약 1.5 x 108 세포/m2 내지 약 3.5 x 108 세포/m2 또는 약 2 x 108 세포/m2 내지 약 3 x 108 세포/m2 인 것인 조성물의 용도.
  80. 제73항 내지 제79항 중 어느 하나의 항에 있어서, 첫번째 및 연속 투여는 1 이상의 단위 복용량으로 세포를 투여하는 것을 포함하되, 각 단위 복용량은 약 5 x 107 세포 내지 약 5 x 108 세포, 약 5 x 107 세포 내지 2.5 x 108 세포 또는 약 2.5 x 108 내지 4 x 108세포를 포함하고 또는; 세포는 약 5 x 107 이하의 세포, 약 1 x 108 이하의 세포, 약 2 x 108 이하의 세포, 약 2.5 x 108 이하의 세포, 약 3 x 108 이하의 세포 또는 약 4 x 108 이하의 세포를 포함하는 단위 복용량으로 제제화되는 것인, 용도 또는 조성물.
  81. 제80항에 있어서, 첫번째 및/또는 연속 복용량은 단일 단위 복용량을 포함하는 것인 용도 또는 조성물.
  82. 제80항 또는 제81항에 있어서, 첫번째 및/또는 연속 복용량은 2 이상의 단위 복용량을 포함하는 것인 용도 또는 조성물.
  83. 제68항 내지 제82항에 있어서, 질병 또는 증상은 종양 또는 암인 조성물의 용도.
  84. 제83항에 있어서, 종양 또는 암은 백혈병 또는 림프종인 용도 또는 조성물.
  85. 제68항 내지 제84항 중 어느 하나의 항에 있어서, 연속 복용량은 첫번째 복용량 또는 선행 복용량에 비해 증가된 수의 CAR 발현 세포를 투여하기 위해 제제화된 것인 용도 또는 조성물.
  86. 제85항에 있어서, 조성물은 급성 림프구성 백혈병을 치료하기 위해 사용되는 용도 또는 조성물.
  87. 제68항 내지 제86항 중 어느 하나의 항에 있어서, 연속 복용량은 선행 복용량의 CAR 발현 세포의 수보다 적거나 대략 동일한 수의 CAR 발현 세포의 투여를 위해 제제화되는 것인 용도 또는 조성물.
  88. 제85항 또는 제87항에 있어서, 조성물은 비-호지킨 림프종 (NHL)을 치료하기 위해 사용되는 것인 용도 또는 조성물.
  89. 하기를 포함하는 제조 물품:
    대상체에 투여하기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 단위 복용량을 각각 포함하는 다수의 밀봉가능한 용기로서, 상기 단위 복용량은 대상체의 kg 당 약 1 x 108 세포, 약 1 x 108 이하의 세포, 약 5 x 107 세포, 약 5 x 107 이하의 세포, 약 1 x 106 세포 또는 약 1 x 106 이하의 세포를 포함하는 것인 용기;
    포장 재료; 및
    첫번째 투여 및 연속 투여의 수행에 의해 대상체에게 다수의 상기 단위 복용량을 투여하기 위한 지침을 포함하는 라벨 또는 패키지 삽입물로서, 상기 첫번째 투여는 대상체에게 하나의 단위 복용량을 전달하는 것을 포함하고 상기 연속 투여는 대상체에게 하나 또는 다수의 단위 복용량을 투여하는 것을 포함하는 것인 라벨 또는 패키지 삽입물.
  90. 제89항에 있어서, 상기 지침은 상기 연속 투여가 상기 첫번째 투여 후 약 14일 내지 27일 또는 15일 내지 27일, 임의로 약 제17일 또는 약 제21일의 시점에 수행될 것을 지시하는 것인 제조 물품.
  91. 제89항 또는 제90항에 있어서, 상기 지침은 상기 연속 투여가 대상체의 사이토카인-방출 증후군 (CRS)를 나타내는 요인의 혈청 수치가 상기 첫번째 복용량의 직전에 대상체의 상기 지표의 혈청 수치보다 약 10배 미만, 25배 미만 및/또는 50 배 미만으로 결정되는 시점에 수행될 것을 지시하는 것인 제조 물품.
  92. 제89항 내지 제91항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 지침은 상기 연속 투여가, CRS 지표가 최고점에 도달한 다음 감소하는 시점 및/또는 대상체가 첫번째 복용량의 세포에 의해 발현된 CRS에 대해 특이적인 검출가능한 선택성 숙주 면역 반응을 나타내지 않는 시점에 수행될 것을 지시하는 것인 제조 물품.
  93. 제89항 내지 제92항 중 어느 하나의 항에 있어서, 세포는 대상체로부터 유래된 것인 제조 물품.
  94. 제89항 내지 제93항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 라벨 및/또는 상기 포장 재료는 세포가 대상체로부터 유래된 것이거나 및/또는 대상체에 특이적으로 투여되어야 하는 세포임을 나타내는, 대상체에 특이적인 식별자를 더 포함하는 것인 제조 물품.
  95. 제89항 내지 제94항 중 어느 하나의 항에 있어서, 용기는 유연성 있는 세포 주입 백(bag)이거나 이를 포함하는 것인 제조 물품.
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